特表 2024-521897 治療用オリゴヌクレオチドを中枢神経系に送達するための組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-06-04

(54)【発明の名称】治療用オリゴヌクレオチドを中枢神経系に送達するための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7105 20060101AFI20240528BHJP

   C12Q 1/68 20180101ALI20240528BHJP

   C12Q 1/02 20060101ALI20240528BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20240528BHJP

   C12N 15/00 20060101ALI20240528BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240528BHJP

   A61K 31/7125 20060101ALI20240528BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20240528BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 25/14 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 25/08 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240528BHJP

【ＦＩ】

A61K31/7105

C12Q1/68

C12Q1/02

C12N15/113 Z

C12N15/00 100Z

A61K48/00

A61P25/00

A61K31/7125

A61K9/08

A61K9/10

A61P25/14

A61P25/16

A61P25/28

A61P25/08

A61P29/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023574349

(86)(22)【出願日】2022-06-02

(85)【翻訳文提出日】2024-01-18

(86)【国際出願番号】 US2022032014

(87)【国際公開番号】W WO2022256565

(87)【国際公開日】2022-12-08

(31)【優先権主張番号】63/195,993

(32)【優先日】2021-06-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523364450

【氏名又は名称】アタランタ セラピューティクス，インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002572

【氏名又は名称】弁理士法人平木国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ハスラー，マシュー

(72)【発明者】

【氏名】キンバーガー，ガース，エー．

(72)【発明者】

【氏名】ゴディンホ，ブルーノ，ミゲル ダ クルス

【テーマコード（参考）】

4B063

4C076

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4B063QA20

4B063QQ02

4B063QQ52

4B063QS40

4B063QX10

4C076AA12

4C076AA22

4C076BB11

4C076CC01

4C076FF67

4C084AA13

4C084MA17

4C084MA23

4C084MA66

4C084NA07

4C084NA14

4C084ZA02

4C084ZA06

4C084ZA08

4C084ZA15

4C084ZA16

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086GA13

4C086MA02

4C086MA05

4C086MA17

4C086MA23

4C086MA66

4C086NA07

4C086NA14

4C086ZA02

4C086ZA06

4C086ZA08

4C086ZA15

4C086ZA16

(57)【要約】

本開示は、複数の二価カチオン（例えば、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、もしくはＺｎ^２＋、またはそれらの組み合わせ）によって部分的または完全に飽和した、複数のカチオン結合部位を有する一本鎖または二本鎖の治療用オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｇＲＮＡ、及びＡＳＯ）を提供する。治療用オリゴヌクレオチドは、それらを含む医薬組成物として、ヌクレオシド修飾及びヌクレオシド間結合修飾の特異的パターンを含み得る。ｓｉＲＮＡ分子は、二分岐、三分岐、または四分岐ｓｉＲＮＡ分子などの分岐ｓｉＲＮＡ分子であってもよい。開示されたｓｉＲＮＡ分子は、５’リン安定化部分及び／または疎水性部分をさらに特徴とし得る。さらに、本開示は、疾患を有すると特定された対象などの対象の中枢神経系に、本開示のｓｉＲＮＡ分子を送達するための方法を提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子を対象に送達する方法であって、１つ以上の二価カチオンを含む塩の形態で、前記ｓｉＲＮＡ分子を前記対象の中枢神経系に投与することを含む、前記方法。

【請求項2】

前記ｓｉＲＮＡ分子が、前記１つ以上の二価カチオンによって部分的または完全に飽和した複数のカチオン結合部位を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記１つ以上の二価カチオンによる前記カチオン結合部位の飽和度が、１０％～１００％であり、任意選択で、前記１つ以上の二価カチオンによる前記カチオン結合部位の前記飽和度が、２０％～１００％、３０％～１００％、４０％～１００％、５０％～１００％、６０％～１００％、７０％～１００％、８０％～１００％、または９０％～１００％である、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記カチオン結合部位が、ヌクレオシド間結合内に位置し、任意選択で、前記ヌクレオシド間結合がホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

前記１つ以上の二価カチオンが、３０ピコメートル～１５０ピコメートルのイオン半径を特徴とし、任意選択で、前記１つ以上の二価カチオンが、３０ピコメートル～１４０ピコメートル、４０ピコメートル～１３０ピコメートル、５０ピコメートル～１２０ピコメートル、６０ピコメートル～１１０ピコメートル、６０ピコメートル～１００ピコメートル、または６０ピコメートル～９０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

前記１つ以上の二価カチオンが、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、もしくはＺｎ^２＋、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記１つ以上の二価カチオンが、Ｂａ^２＋を含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記１つ以上の二価カチオンが、Ｂｅ^２＋を含む、請求項６または７に記載の方法。

【請求項9】

前記１つ以上の二価カチオンが、Ｃａ^２＋を含む、請求項６～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記１つ以上の二価カチオンが、Ｃｕ^２＋を含む、請求項６～９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

前記１つ以上の二価カチオンが、Ｍｇ^２＋を含む、請求項６～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

前記１つ以上の二価カチオンが、Ｍｎ^２＋を含む、請求項６～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記１つ以上の二価カチオンが、Ｎｉ^２＋を含む、請求項６～１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記１つ以上の二価カチオンが、Ｚｎ^２＋を含む、請求項６～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

前記１つ以上の二価カチオンが、Ｃａ^２＋及びＭｇ^２＋を含み、任意選択で、Ｃａ^２＋のＭｇ^２＋に対する比が、１：１００～１００：１である、請求項６～１４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項16】

前記Ｃａ^２＋及びＭｇ^２＋が、１：１のモル比で存在する、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記１つ以上の二価カチオンが、硬いルイス酸を含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

前記１つ以上の二価カチオンが、前記ｓｉＲＮＡ分子のカチオン結合部位から水を置き換える、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記ｓｉＲＮＡ分子が非分岐である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項20】

前記ｓｉＲＮＡ分子が分岐している、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

前記ｓｉＲＮＡ分子が二分岐、三分岐、または四分岐である、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記ｓｉＲＮＡ分子が二分岐である、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記ｓｉＲＮＡ分子が、アンチセンス鎖と、前記アンチセンス鎖に対して相補性を有するセンス鎖とを含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

前記アンチセンス鎖及びセンス鎖が、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドと２’－フルオロリボヌクレオシドを交互で含む、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記アンチセンス鎖が、５’－３’方向に、以下の式：
Ｚ－（（Ａ－Ｐ－）_ｎ（Ｂ－Ｐ－）_ｍ）_ｑ
を有し；
式中、Ｚは、５’リン安定化部分であり；
各Ａは独立して、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｂは独立して、２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｐは、独立して、ホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合から選択されるヌクレオシド間結合であり；
ｎは、１～５の整数であり；
ｍは、１～５の整数であり；
ｑは、１～３０の間の整数である、請求項２３または２４に記載の方法。

【請求項26】

前記アンチセンス鎖が、式Ｉで表される構造を含み、式Ｉは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ’－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式Ｉ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、請求項２３または２４に記載の方法。

【請求項27】

前記アンチセンス鎖が、式Ａ１で表される構造を含み、式Ａ１は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ１；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

前記アンチセンス鎖が、式ＩＩで表される構造を含み、式ＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、請求項２３または２４に記載の方法。

【請求項29】

前記アンチセンス鎖が、式Ａ２で表される構造を含み、式Ａ２は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ２；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記センス鎖が、式ＩＩＩで表される構造を含み、式ＩＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ｅ－（Ａ’）_ｍ－Ｆ
式ＩＩＩ；
式中、Ｅは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
Ｆは、式（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｃ、（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｃ、（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ、または（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｄで表され；
Ａ’、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＩＩで定義されたとおりであり；
ｍは、１～７の整数である、請求項２３～２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

前記センス鎖が、式Ｓ１で表される構造を含み、式Ｓ１は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ１；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記センス鎖が、式Ｓ２で表される構造を含み、式Ｓ２は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ
式Ｓ２；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項３０に記載の方法。

【請求項33】

前記センス鎖が、式Ｓ３で表される構造を含み、式Ｓ３は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ
式Ｓ３；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項３０に記載の方法。

【請求項34】

前記センス鎖が、式Ｓ４で表される構造を含み、式Ｓ４は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ
式Ｓ４；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項３０に記載の方法。

【請求項35】

前記アンチセンス鎖が、式ＩＶで表される構造を含み、式ＩＶは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｂ－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＶ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、請求項２３、２４、及び３０～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

前記アンチセンス鎖が、式Ａ３で表される構造を含み、式Ａ３は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ３；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記センス鎖が、式Ｖで表される構造を含み、式Ｖは、５’－３’方向に以下であり、
Ｅ－（Ａ’）_ｍ－Ｃ－Ｐ^２－Ｆ
式Ｖ；
式中、Ｅは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
Ｆは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｃ、Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｃ、Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ、またはＤ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｄで表され；
Ａ’、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＩＶで定義されたとおりであり；
ｍは、１～７の整数である、請求項２３～２９、３５、及び３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

前記センス鎖が、式Ｓ５で表される構造を含み、式Ｓ５は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ５；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記センス鎖が、式Ｓ６で表される構造を含み、式Ｓ６は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ
式Ｓ６；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項３７に記載の方法。

【請求項40】

前記センス鎖が、式Ｓ７で表される構造を含み、式Ｓ７は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ
式Ｓ７；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項３７に記載の方法。

【請求項41】

前記センス鎖が、式Ｓ８で表される構造を含み、式Ｓ８は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ
式Ｓ８；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項３７に記載の方法。

【請求項42】

前記アンチセンス鎖が、式ＶＩで表される構造を含み、式ＶＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ_ｊ－Ｅ－Ｂ_ｋ－Ｅ－Ｆ－Ｇ_ｌ－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ’
式ＶＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｅは、式Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２で表され；
Ｆは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１で表され；
各Ｇは、式Ｃ－Ｐ^１で表され；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数であり；
ｌは、１～７の整数である、請求項２３、２４、３０～３４、及び３７～４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

前記アンチセンス鎖が、式Ａ４で表される構造を含み、式Ａ４は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ４；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記センス鎖が、式ＶＩＩで表される構造を含み、式ＶＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ｈ－Ｂ_ｍ－Ｉ_ｎ－Ａ’－Ｂ_ｏ－Ｈ－Ｃ
式ＶＩＩ；
式中、各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｈは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
各Ｉは、式（Ｄ－Ｐ^２）で表され；
Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＶＩで定義されたとおりであり；
ｍは１～７の整数であり；
ｎは１～７の整数であり；
ｏは１～７の整数である、請求項２３～２９、３５、３６、４２、及び４３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

前記センス鎖が、式Ｓ９で表される構造を含み、式Ｓ９は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ９；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記アンチセンス鎖が、前記アンチセンス鎖の５’末端に５’リン安定化部分をさらに含む、請求項２３～４５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項47】

前記センス鎖が、前記センス鎖の５’末端に５’リン安定化部分をさらに含む、請求項２３～４６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項48】

前記５’リン安定化部分が、式ＩＸ～ＸＶＩのいずれか１つで表され、

【化1】

式中、Ｎｕｃは、アデニン、ウラシル、グアニン、チミン、及びシトシンからなる群から選択される核酸塩基を表し、Ｒは、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、フェニル、ベンジル、ヒドロキシ、または水素を表す、請求項２５、４６、及び４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

前記５’－リン安定化部分が、式ＸＶＩに表される（Ｅ）－ビニルホスホネートである、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記リボヌクレオシドのうちの少なくとも５０％が２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり、任意選択で、前記リボヌクレオシドのうちの少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上が２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドである、請求項２４～４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

前記アンチセンス鎖の長さが、１０ヌクレオチド～３０ヌクレオチドの間である、請求項２３～５０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

前記センス鎖の長さが、１２ヌクレオチド～３０ヌクレオチドの間である、請求項２３～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項53】

前記ｓｉＲＮＡ分子を、水溶液の形態で、または懸濁液の形態で投与する、請求項１～５２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項54】

前記ｓｉＲＮＡ分子を、前記対象の脳脊髄液に直接、前記対象の脊髄に直接、及び／または前記対象の脳実質に直接投与し、任意選択で、（ｉ）前記脳に投与される前記ｓｉＲＮＡ分子を、皮質、小脳、大脳基底核、または他の脳構造に特異的に投与する、及び／または（ｉｉ）前記大脳基底核に投与される前記ｓｉＲＮＡ分子を、尾状核、被殻、視床、淡蒼球、または黒質に特異的に投与する、請求項１～５３に記載の方法。

【請求項55】

前記ｓｉＲＮＡ分子を、髄腔内、脳室内、線条体内に、またはカテーテル挿入を介して大槽内注射によって投与する、請求項１～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項56】

前記対象が、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、純粋自律神経不全、レビー小体嚥下障害、偶発的レビー小体病（ＩＬＢＤ）、遺伝性レビー小体病、オリーブ橋小脳萎縮症（ＯＰＣＡ）、線条体黒質変性症、シャイ・ドレーガー症候群、てんかんもしくはてんかん障害、プリオン病、または疼痛障害を有すると診断される、請求項１～５５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項57】

前記アンチセンス鎖が、ＡＢＣＡ７、ＡＢＩ３、ＡＤＡＭ１０、ＡＰＯＣ１、ＡＰＯＥ、ＡＸＬ、ＢＩＮ１、Ｃ１ＱＡ、Ｃ３、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＣＡＳＳ４、ＣＣＬ５、ＣＤ２ＡＰ、ＣＤ３３、ＣＤ６８、ＣＬＰＴＭ１、ＣＬＵ、ＣＲ１、ＣＳＦ１、ＣＳＴ７、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＤ、ＣＴＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１３、ＤＳＧ２、ＥＣＨＤＣ３、ＥＰＨＡ１、ＦＡＢＰ５、ＦＥＲＭＴ２、ＦＴＨ１、ＧＮＡＳ、ＧＲＮ、ＨＢＥＧＦ、ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＨＬＡ－ＤＲＢ５、ＨＴＴ、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＧＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＮＰＰ５Ｄ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＫＣＮＴ１、ＬＩＬＲＢ４、ＬＰＬ、ＭＡＰＴ、ＭＥＦ２Ｃ、ＭＭＰ１２、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＭＳ４Ａ６Ａ、ＭＳＨ３、ＮＬＲＰ３、ＮＭＥ８、ＮＯＳ２、ＰＩＣＡＬＭ、ＰＩＬＲＡ、ＰＬＣＧ２、ＰＲＮＰ、ＰＴＫ２Ｂ、ＳＣＩＭＰ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＬＣ２４Ａ４、ＳＮＣＡ、ＳＯＲＬ１、ＳＰＩ１、ＳＰＰ１、ＳＰＰＬ２Ａ、ＴＢＫ１、ＴＮＦ、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭＬ２、ＴＹＲＯＢＰ、及びＺＣＷＰＷ１、からなる群から選択される遺伝子に対応するｍＲＮＡ転写産物の一部とハイブリダイズするのに十分な相補性を有する、請求項２３～５６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項58】

前記遺伝子が、ＨＴＴ、ＭＡＰＴ、ＳＮＣＡ、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＡＰＯＥ、ＳＣＮ９Ａ、ＫＣＮＴ１、ＰＲＮＰ、及びＭＳＨ３からなる群から選択される、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

前記対象がヒトである、請求項１～５８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項60】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、負電荷を有する１つ以上の原子を含み、前記二価カチオンが２つの正電荷を含み、負電荷の正電荷に対する比が０．７５～７．５であり、任意選択で、前記負電荷の正電荷に対する比が、１．０～２．０である、請求項１～５９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項61】

ｉ． 前記負電荷の正電荷に対する比が０．７５～６．５であり、任意選択で、負電荷の正電荷に対する前記比が、０．７５～５．５、０．７５～４．５、０．７５～３．５、０．７５～２．５、０．７５～１．５、もしくは０．７５～１；または
ｉｉ． 前記負電荷の正電荷に対する比が、１～７．５、１．５～７．５、２．５～７．５、３．５～７．５、４．５～７．５、５．５～７．５、もしくは６．５～７．５である、
請求項６０に記載の方法。

【請求項62】

ｓｉＲＮＡ分子の、前記１つ以上の二価カチオンに対するモル比が、１：１０～１：１００である、請求項１～６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

ｓｉＲＮＡ分子の前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、１：１０～１：５０であり、任意選択で、ｓｉＲＮＡ分子の、前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、１：１８～１：３８であり、任意選択で、ｓｉＲＮＡ分子の、前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、１：２０～１：２５であり、任意選択で、ｓｉＲＮＡ分子の、前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、約１：２０であり、任意選択で、ｓｉＲＮＡ分子の、前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、約１：２５である、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記１つ以上の二価カチオンの濃度が、１０ｍＭ～１５０ｍＭである、請求項１～６３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項65】

前記１つ以上の二価カチオンの前記濃度が、２０ｍＭ～１５０ｍＭであり、任意選択で、前記１つ以上の二価カチオンの前記濃度が、２０ｍＭ～１００ｍＭ、２５ｍＭ～１５０ｍＭ、２５ｍＭ～１００ｍＭ、３０ｍＭ～９０ｍＭ、３５ｍＭ～８５ｍＭ、３５ｍＭ～７５ｍＭ、４０ｍＭ～７０ｍＭ、４０ｍＭ～６５ｍＭ、４０ｍＭ～６０ｍＭ、または４０ｍＭ～５０ｍＭである、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

１つ以上の二価カチオンを含む塩として製剤化されたｓｉＲＮＡ分子。

【請求項67】

請求項６６に記載のｓｉＲＮＡ分子であって、前記１つ以上の二価カチオンによって部分的または完全に飽和した複数のカチオン結合部位を含む、前記ｓｉＲＮＡ分子。

【請求項68】

前記１つ以上の二価カチオンによる前記カチオン結合部位の飽和度が、１０％～１００％であり、任意選択で、前記１つ以上の二価カチオンによる前記カチオン結合部位の前記飽和度が、２０％～１００％、３０％～１００％、４０％～１００％、５０％～１００％、６０％～１００％、７０％～１００％、８０％～１００％、または９０％～１００％である、請求項６７に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項69】

前記カチオン結合部位が、ヌクレオシド間結合内に位置し、任意選択で、前記ヌクレオシド間結合がホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合から選択される、請求項６６～６８のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項70】

前記１つ以上の二価カチオンが、３０ピコメートル～１５０ピコメートルのイオン半径を特徴とし、任意選択で、前記１つ以上の二価カチオンが、３０ピコメートル～１４０ピコメートル、４０ピコメートル～１３０ピコメートル、５０ピコメートル～１２０ピコメートル、６０ピコメートル～１１０ピコメートル、６０ピコメートル～１００ピコメートル、または６０ピコメートル～９０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、請求項６６～６９のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項71】

前記１つ以上の二価カチオンが、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、もしくはＺｎ^２＋、またはそれらの組み合わせを含む、請求項６６～７０のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項72】

前記１つ以上の二価カチオンが、硬いルイス酸を含む、請求項６６～７１のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項73】

前記１つ以上の二価カチオンが、前記ｓｉＲＮＡ分子のカチオン結合部位から水を置き換える、請求項６６～７２のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項74】

前記ｓｉＲＮＡ分子が非分岐である、請求項６６～７３のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項75】

前記ｓｉＲＮＡ分子が分岐している、請求項６６～７３のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項76】

前記ｓｉＲＮＡ分子が二分岐、三分岐、または四分岐であり、任意選択で、前記ｓｉＲＮＡ分子が二分岐である、請求項７５に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項77】

前記ｓｉＲＮＡ分子が、アンチセンス鎖と、前記アンチセンス鎖に対して相補性を有するセンス鎖とを含み、任意選択で、前記アンチセンス鎖及びセンス鎖が、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドと２’－フルオロリボヌクレオシドを交互で含む、請求項６６～７６のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項78】

前記アンチセンス鎖が、５’－３’方向に、以下の式：
Ｚ－（（Ａ－Ｐ－）_ｎ（Ｂ－Ｐ－）_ｍ）_ｑ；
を有し、
式中、Ｚは、５’リン安定化部分であり；
各Ａは独立して、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｂは独立して、２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｐは、独立して、ホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合から選択されるヌクレオシド間結合であり；
ｎは、１～５の整数であり；
ｍは、１～５の整数であり；
ｑは、１～３０の間の整数である、請求項７７に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項79】

前記アンチセンス鎖が、式Ｉで表される構造を含み、式Ｉは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ’－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式Ｉ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、請求項７７に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項80】

前記アンチセンス鎖が、式Ａ１で表される構造を含み、式Ａ１は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ１；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項７９に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項81】

前記アンチセンス鎖が、式ＩＩで表される構造を含み、式ＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、請求項７７に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項82】

前記アンチセンス鎖が、式Ａ２で表される構造を含み、式Ａ２は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ２；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項８１に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項83】

前記センス鎖が、式ＩＩＩで表される構造を含み、式ＩＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ｅ－（Ａ’）_ｍ－Ｆ
式ＩＩＩ；
式中、Ｅは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
Ｆは、式（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｃ、（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｃ、（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ、または（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｄで表され；
Ａ’、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＩＩで定義されたとおりであり；
ｍは、１～７の整数である、請求項７７～８２のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項84】

前記センス鎖が、式Ｓ１で表される構造を含み、式Ｓ１は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ１；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項８３に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項85】

前記センス鎖が、式Ｓ２で表される構造を含み、式Ｓ２は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ
式Ｓ２；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項８３に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項86】

前記センス鎖が、式Ｓ３で表される構造を含み、式Ｓ３は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ
式Ｓ３；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項８３に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項87】

前記センス鎖が、式Ｓ４で表される構造を含み、式Ｓ４は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ
式Ｓ４；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項８３に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項88】

前記アンチセンス鎖が、式ＩＶで表される構造を含み、式ＩＶは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｂ－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＶ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、請求項７７及び８３～８７のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項89】

前記アンチセンス鎖が、式Ａ３で表される構造を含み、式Ａ３は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ３；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項８８に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項90】

前記センス鎖が、式Ｖで表される構造を含み、式Ｖは、５’－３’方向に以下であり、
Ｅ－（Ａ’）_ｍ－Ｃ－Ｐ^２－Ｆ
式Ｖ；
式中、Ｅは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
Ｆは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｃ、Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｃ、Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ、またはＤ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｄで表され；
Ａ’、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＩＶで定義されたとおりであり；
ｍは、１～７の整数である、請求項７７～８２、８８、及び８９のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項91】

前記センス鎖が、式Ｓ５で表される構造を含み、式Ｓ５は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ５；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項９０に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項92】

前記センス鎖が、式Ｓ６で表される構造を含み、式Ｓ６は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ
式Ｓ６；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項９０に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項93】

前記センス鎖が、式Ｓ７で表される構造を含み、式Ｓ７は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ
式Ｓ７；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項９０に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項94】

前記センス鎖が、式Ｓ８で表される構造を含み、式Ｓ８は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ
式Ｓ８；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項９０に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項95】

前記アンチセンス鎖が、式ＶＩで表される構造を含み、式ＶＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ_ｊ－Ｅ－Ｂ_ｋ－Ｅ－Ｆ－Ｇ_ｌ－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ’
式ＶＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｅは、式Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２で表され；
Ｆは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１で表され；
各Ｇは、式Ｃ－Ｐ^１で表され；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数であり；
ｌは、１～７の整数である、請求項７７、８３～８７、及び９０～９４のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項96】

前記アンチセンス鎖が、式Ａ４で表される構造を含み、式Ａ４は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ４；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項９５に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項97】

前記センス鎖が、式ＶＩＩで表される構造を含み、式ＶＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ｈ－Ｂ_ｍ－Ｉ_ｎ－Ａ’－Ｂ_ｏ－Ｈ－Ｃ
式ＶＩＩ；
式中、各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｈは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
各Ｉは、式（Ｄ－Ｐ^２）で表され；
Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＶＩで定義されたとおりであり；
ｍは１～７の整数であり；
ｎは１～７の整数であり；
ｏは１～７の整数である、請求項７７～８２、８８、８９、９５、及び９６のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項98】

前記センス鎖が、式Ｓ９で表される構造を含み、式Ｓ９は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ９；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、請求項９７に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項99】

前記アンチセンス鎖が、前記アンチセンス鎖の５’末端に５’リン安定化部分をさらに含む、請求項７７～９８のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項100】

前記センス鎖が、前記センス鎖の５’末端に５’リン安定化部分をさらに含む、請求項７７～９９のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項101】

前記５’リン安定化部分が、式ＩＸ～ＸＶＩのいずれか１つで表され、

【化2】

式中、Ｎｕｃは、アデニン、ウラシル、グアニン、チミン、及びシトシンからなる群から選択される核酸塩基を表し、Ｒは、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、フェニル、ベンジル、ヒドロキシ、または水素を表す、請求項９９または１００に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項102】

前記アンチセンス鎖が、ＡＢＣＡ７、ＡＢＩ３、ＡＤＡＭ１０、ＡＰＯＣ１、ＡＰＯＥ、ＡＸＬ、ＢＩＮ１、Ｃ１ＱＡ、Ｃ３、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＣＡＳＳ４、ＣＣＬ５、ＣＤ２ＡＰ、ＣＤ３３、ＣＤ６８、ＣＬＰＴＭ１、ＣＬＵ、ＣＲ１、ＣＳＦ１、ＣＳＴ７、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＤ、ＣＴＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１３、ＤＳＧ２、ＥＣＨＤＣ３、ＥＰＨＡ１、ＦＡＢＰ５、ＦＥＲＭＴ２、ＦＴＨ１、ＧＮＡＳ、ＧＲＮ、ＨＢＥＧＦ、ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＨＬＡ－ＤＲＢ５、ＨＴＴ、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＧＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＮＰＰ５Ｄ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＫＣＮＴ１、ＬＩＬＲＢ４、ＬＰＬ、ＭＡＰＴ、ＭＥＦ２Ｃ、ＭＭＰ１２、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＭＳ４Ａ６Ａ、ＭＳＨ３、ＮＬＲＰ３、ＮＭＥ８、ＮＯＳ２、ＰＩＣＡＬＭ、ＰＩＬＲＡ、ＰＬＣＧ２、ＰＲＮＰ、ＰＴＫ２Ｂ、ＳＣＩＭＰ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＬＣ２４Ａ４、ＳＮＣＡ、ＳＯＲＬ１、ＳＰＩ１、ＳＰＰ１、ＳＰＰＬ２Ａ、ＴＢＫ１、ＴＮＦ、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭＬ２、ＴＹＲＯＢＰ、及びＺＣＷＰＷ１、からなる群から選択される遺伝子に対応するｍＲＮＡ転写産物の一部とハイブリダイズするのに十分な相補性を有する、請求項６６～１０１のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項103】

前記遺伝子が、ＨＴＴ、ＭＡＰＴ、ＳＮＣＡ、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＡＰＯＥ、ＳＣＮ９Ａ、ＫＣＮＴ１、ＰＲＮＰ、及びＭＳＨ３からなる群から選択される、請求項１０２に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項104】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、負電荷を有する１つ以上の原子を含み、前記二価カチオンが２つの正電荷を含み、負電荷の正電荷に対する比が０．７５～７．５であり、任意選択で、前記負電荷の正電荷に対する比が、１．０～２．０である、請求項６６～１０３のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項105】

ｉ． 前記負電荷の正電荷に対する比が０．７５～６．５であり、任意選択で、前記負電荷の正電荷に対する比が、０．７５～５．５、０．７５～４．５、０．７５～３．５、０．７５～２．５、０．７５～１．５、もしくは０．７５～１であり；または
ｉｉ． 前記負電荷の正電荷に対する比が、１～７．５、１．５～７．５、２．５～７．５、３．５～７．５、４．５～７．５、５．５～７．５、もしくは６．５～７．５である、
請求項１０４に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項106】

ｓｉＲＮＡ分子の、前記１つ以上の二価カチオンに対するモル比が、１：１０～１：１００である、請求項６６～１０５のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項107】

ｓｉＲＮＡ分子の前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、１：１０～１：５０であり、任意選択で、ｓｉＲＮＡ分子の、前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、１：１８～１：３８であり、任意選択で、ｓｉＲＮＡ分子の、前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、１：２０～１：２５であり、任意選択で、ｓｉＲＮＡ分子の、前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、約１：２０であり、任意選択で、ｓｉＲＮＡ分子の、前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、約１：２５である、請求項１０６に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項108】

前記１つ以上の二価カチオンの濃度が、１０ｍＭ～１５０ｍＭである、請求項６６～１０７のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項109】

前記１つ以上の二価カチオンの前記濃度が、２０ｍＭ～１５０ｍＭであり、任意選択で、前記１つ以上の二価カチオンの前記濃度が、２０ｍＭ～１００ｍＭ、２５ｍＭ～１５０ｍＭ、２５ｍＭ～１００ｍＭ、３０ｍＭ～９０ｍＭ、３５ｍＭ～８５ｍＭ、３５ｍＭ～７５ｍＭ、４０ｍＭ～７０ｍＭ、４０ｍＭ～６５ｍＭ、４０ｍＭ～６０ｍＭ、または４０ｍＭ～５０ｍＭである、請求項１０８に記載のｓｉＲＮＡ分子。

【請求項110】

１つ以上の二価カチオンを含む塩として製剤化された治療用オリゴヌクレオチドであって、
ｉ）前記１つ以上の二価カチオンが、Ｍｇ^２＋、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、もしくはＺｎ^２＋、またはそれらの組み合わせを含み、任意選択で、前記１つ以上の二価カチオンが、Ｍｇ^２＋を含み；及び／または
ｉｉ）前記治療用オリゴヌクレオチドが、負電荷を有する１つ以上の原子を含み、前記二価カチオンが２つの正電荷を含み、負電荷の正電荷に対する比が０．７５～７．５であり、任意選択で、前記負電荷の正電荷に対する比が、１．０～２．０であり；及び／または
ｉｉｉ）治療用オリゴヌクレオチドの、前記１つ以上の二価カチオンに対するモル比が、１：１０～１：１００であり；及び／または
ｉｖ）前記１つ以上の二価カチオンの濃度が、１０ｍＭ～１５０ｍＭである、
前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項111】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、前記１つ以上の二価カチオンによって部分的または完全に飽和した複数のカチオン結合部位を含む、請求項１１０に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項112】

前記１つ以上の二価カチオンによる前記カチオン結合部位の飽和度が、１０％～１００％であり、任意選択で、前記１つ以上の二価カチオンによる前記カチオン結合部位の前記飽和度が、２０％～１００％、３０％～１００％、４０％～１００％、５０％～１００％、６０％～１００％、７０％～１００％、８０％～１００％、または９０％～１００％である、請求項１１１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項113】

前記カチオン結合部位が、ヌクレオシド間結合内に位置し、任意選択で、前記ヌクレオシド間結合がホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合から選択される、請求項１１０～１１２のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項114】

前記１つ以上の二価カチオンが、３０ピコメートル～１５０ピコメートルのイオン半径を特徴とし、任意選択で、前記１つ以上の二価カチオンが、３０ピコメートル～１４０ピコメートル、４０ピコメートル～１３０ピコメートル、５０ピコメートル～１２０ピコメートル、６０ピコメートル～１１０ピコメートル、６０ピコメートル～１００ピコメートル、または６０ピコメートル～９０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、請求項１１０～１１３のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項115】

前記１つ以上の二価カチオンが、Ｍｇ^２＋を含む、請求項１１０～１１４のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項116】

前記１つ以上の二価カチオンが、硬いルイス酸を含む、請求項１１０～１１５のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項117】

前記１つ以上の二価カチオンが、前記ｓｉＲＮＡ分子のカチオン結合部位から水を置き換える、請求項１１０～１１６のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項118】

請求項１１０～１１７のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドと２’－フルオロリボヌクレオシドを交互で含む、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項119】

請求項１１０～１１８のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、５’－３’方向に、以下の式：
Ｚ－（（Ａ－Ｐ－）_ｎ（Ｂ－Ｐ－）_ｍ）_ｑ；
を有し
式中、Ｚは、５’リン安定化部分であり；
各Ａは独立して、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｂは独立して、２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｐは、独立して、ホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合から選択されるヌクレオシド間結合であり；
ｎは、１～５の整数であり；
ｍは、１～５の整数であり；
ｑは、１～３０の間の整数である、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項120】

請求項１１０～１１８のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、式Ｉで表される構造を含み、式Ｉは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ’－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式Ｉ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項121】

請求項１２０に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、式Ａ１で表される構造を含み、式Ａ１は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ１；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項122】

請求項１１０～１１８のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、式ＩＩで表される構造を含み、式ＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項123】

請求項１２２に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、式Ａ２で表される構造を含み、式Ａ２は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ２；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項124】

請求項１１０～１１８のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、式ＩＶで表される構造を含み、式ＩＶは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｂ－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＶ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項125】

請求項１２４に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、式Ａ３で表される構造を含み、式Ａ３は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ３；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項126】

請求項１１０～１１８のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、式ＶＩで表される構造を含み、式ＶＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ_ｊ－Ｅ－Ｂ_ｋ－Ｅ－Ｆ－Ｇ_ｌ－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ’
式ＶＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｅは、式Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２で表され；
Ｆは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１で表され；
各Ｇは、式Ｃ－Ｐ^１で表され；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数であり；
ｌは、１～７の整数である、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項127】

請求項１２６に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、式Ａ４で表される構造を含み、式Ａ４は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ４；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項128】

請求項１１０～１２７のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、前記治療用オリゴヌクレオチドの５’末端に５’リン安定化部分をさらに含む、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項129】

前記５’リン安定化部分が、式ＩＸ～ＸＶＩのいずれか１つで表され、

【化3】

式中、Ｎｕｃは、アデニン、ウラシル、グアニン、チミン、及びシトシンからなる群から選択される核酸塩基を表し、Ｒは、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、フェニル、ベンジル、ヒドロキシ、または水素を表す、請求項１２８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項130】

請求項１１０～１２９のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、ＡＢＣＡ７、ＡＢＩ３、ＡＤＡＭ１０、ＡＰＯＣ１、ＡＰＯＥ、ＡＸＬ、ＢＩＮ１、Ｃ１ＱＡ、Ｃ３、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＣＡＳＳ４、ＣＣＬ５、ＣＤ２ＡＰ、ＣＤ３３、ＣＤ６８、ＣＬＰＴＭ１、ＣＬＵ、ＣＲ１、ＣＳＦ１、ＣＳＴ７、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＤ、ＣＴＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１３、ＤＳＧ２、ＥＣＨＤＣ３、ＥＰＨＡ１、ＦＡＢＰ５、ＦＥＲＭＴ２、ＦＴＨ１、ＧＮＡＳ、ＧＲＮ、ＨＢＥＧＦ、ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＨＬＡ－ＤＲＢ５、ＨＴＴ、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＧＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＮＰＰ５Ｄ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＫＣＮＴ１、ＬＩＬＲＢ４、ＬＰＬ、ＭＡＰＴ、ＭＥＦ２Ｃ、ＭＭＰ１２、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＭＳ４Ａ６Ａ、ＭＳＨ３、ＮＬＲＰ３、ＮＭＥ８、ＮＯＳ２、ＰＩＣＡＬＭ、ＰＩＬＲＡ、ＰＬＣＧ２、ＰＲＮＰ、ＰＴＫ２Ｂ、ＳＣＩＭＰ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＬＣ２４Ａ４、ＳＮＣＡ、ＳＯＲＬ１、ＳＰＩ１、ＳＰＰ１、ＳＰＰＬ２Ａ、ＴＢＫ１、ＴＮＦ、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭＬ２、ＴＹＲＯＢＰ、及びＺＣＷＰＷ１、からなる群から選択される遺伝子に対応するｍＲＮＡ転写産物の一部とハイブリダイズするのに十分な相補性を有する、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項131】

前記遺伝子が、ＨＴＴ、ＭＡＰＴ、ＳＮＣＡ、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＡＰＯＥ、ＳＣＮ９Ａ、ＫＣＮＴ１、ＰＲＮＰ、及びＭＳＨ３からなる群から選択される、請求項１３０に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項132】

請求項１１０～１３１のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、負電荷を有する１つ以上の原子を含み、前記二価カチオンが２つの正電荷を含み、負電荷の正電荷に対する比が０．７５～７．５であり、任意選択で、前記負電荷の正電荷に対する比が、１．０～２．０である、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項133】

ｉ． 前記負電荷の正電荷に対する比が０．７５～６．５であり、任意選択で、前記負電荷の正電荷に対する比が、０．７５～５．５、０．７５～４．５、０．７５～３．５、０．７５～２．５、０．７５～１．５、もしくは０．７５～１であり；
または
ｉｉ． 前記負電荷の正電荷に対する比が、１～７．５、１．５～７．５、２．５～７．５、３．５～７．５、４．５～７．５、５．５～７．５、もしくは６．５～７．５である、
請求項１３２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項134】

請求項１１０～１３３のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、治療用オリゴヌクレオチドの、前記１つ以上の二価カチオンに対するモル比が、１：１０～１：１００である、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項135】

請求項１３４に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、治療用オリゴヌクレオチドの、前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、１：１０～１：５０であり、任意選択で、治療用オリゴヌクレオチドの前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、１：１８～１：３８であり、任意選択で、治療用オリゴヌクレオチドの前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、１：２０～１：２５であり、任意選択で、治療用オリゴヌクレオチドの、前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、約１：２０であり、任意選択で、治療用オリゴヌクレオチドの、前記１つ以上の二価カチオンに対する前記モル比が、約１：２５である、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項136】

前記１つ以上の二価カチオンの濃度が、１０ｍＭ～１５０ｍＭである、請求項１１０～１３５のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項137】

前記１つ以上の二価カチオンの前記濃度が、２０ｍＭ～１５０ｍＭであり、任意選択で、前記１つ以上の二価カチオンの前記濃度が、２０ｍＭ～１００ｍＭ、２５ｍＭ～１５０ｍＭ、２５ｍＭ～１００ｍＭ、３０ｍＭ～９０ｍＭ、３５ｍＭ～８５ｍＭ、３５ｍＭ～７５ｍＭ、４０ｍＭ～７０ｍＭ、４０ｍＭ～６５ｍＭ、４０ｍＭ～６０ｍＭ、または４０ｍＭ～５０ｍＭである、請求項１３６に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項138】

請求項１１０～１３７のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項139】

請求項１１０～１３７のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、干渉ＲＮＡ分子であり、任意選択で、前記干渉ＲＮＡ分子が、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡである、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項140】

請求項１３９に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、ｓｉＲＮＡである、前記治療用オリゴヌクレオチド。

【請求項141】

請求項６６～１０９のいずれか１項に記載のｓｉＲＮＡ分子及び添付文書を含むキットであって、任意選択で、前記添付文書が、前記キットの使用者に、ヒト対象の中枢神経系に前記ｓｉＲＮＡ分子を投与するように指示する、前記キット。

【請求項142】

請求項１１０～１４０のいずれか１項に記載の治療用オリゴヌクレオチド及び添付文書を含むキットであって、任意選択で、前記添付文書が、前記キットの使用者に、ヒト対象の中枢神経系に前記ＡＳＯを投与するように指示する、前記キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、１つ以上の二価カチオンにイオン結合する干渉ＲＮＡ分子（例えば、短い干渉ＲＮＡ分子）、ならびに１つ以上の遺伝子の調節を必要とする対象の中枢神経系にそれを送達する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

多くの種において、二本鎖ＲＮＡの導入は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）による強力かつ特異的な遺伝子サイレンシングを誘導する。この現象は、植物及び動物の両方で生じ、ウイルス防御及びトランスポゾンサイレンシング機構において役割を有する。例えば、一般に標的遺伝子よりもはるかに短い、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、遺伝子サイレンシングに有効であることが示されており、したがって、遺伝子をサイレンシングして、遺伝経路及び生化学経路の活性を疾患状態から正常で健康な状態に回復させるための治療剤として有用である。しかし、ｓｉＲＮＡなどの干渉ＲＮＡ分子の、対象への、特に対象の中枢神経系への送達は、とりわけ、発作、振戦、及び活動亢進運動行動を含む毒性副作用のリスクを伴う。それを必要とする対象への投与の際に低減された毒性をもたらす干渉ＲＮＡ分子の必要性が依然として存在する。

【発明の概要】

【0003】

本開示は、二価カチオン（例えば二価金属カチオン）で部分的または完全に飽和した複数のカチオン結合部位を含有する干渉ＲＮＡ分子を提供する。例えば、本開示の干渉ＲＮＡ分子は、１つ以上のホスホジエステルヌクレオシド間結合及び／またはその類似体、例としてホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含有することができ、ここで、オキシアニオン部分は、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、またはＺｎ^２＋などの２価の金属カチオンとのイオン結合によって静電的に中和されている。干渉ＲＮＡ分子を対象（例えば、ヒトなどの哺乳類対象）に投与する前に、干渉ＲＮＡ分子（例えば、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ））に１つ以上の二価カチオンを組み込むことによって、特に対象の中枢神経系において、そうでない場合に干渉ＲＮＡ分子の投与によって引き起こされる場合がある毒性副作用が強力に抑制されることが、現在発見されている。

【0004】

本開示の組成物及び方法を使用して、干渉ＲＮＡ分子（例えば、ｓｉＲＮＡ）などの治療用オリゴヌクレオチドを、イオン結合によって１つ以上の二価カチオンを組み込むことによって製剤化することができる。これは、治療用オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡなどの干渉ＲＮＡ分子）を含有する水溶液または懸濁液を、目的の二価カチオンを含有する水溶液または懸濁液で滴定することによって達成することができる。次に、二価カチオンで部分的または完全に飽和したカチオン結合部位を有する、その後の治療用オリゴヌクレオチドを、例えば水溶液または懸濁液の形態で対象に投与して、所望の遺伝子の発現を調節することができる。有利には、対象は、同じであるが１つ以上の二価カチオンを欠いている治療用オリゴヌクレオチドを投与される対象で観察されるよりも、頻度が低く及び／または規模が小さい副作用を経験する場合がある。

【0005】

第１の態様では、本開示は、１つ以上の二価カチオンを含有する塩の形態で、対象（例えば、ヒトなどの哺乳類対象）に、治療用オリゴヌクレオチド（例えば、とりわけ、本明細書に記載のｓｉＲＮＡまたはアンチセンスオリゴヌクレオチド）を投与することによって、治療用オリゴヌクレオチドを対象に送達する方法を提供する。治療用オリゴヌクレオチドは、１つ以上の二価カチオンによって部分的または完全に飽和した複数のカチオン結合部位を含み得る。

【0006】

いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは、水溶液の形態で、または懸濁液の形態で対象に投与する。治療用オリゴヌクレオチドは、対象に全身的に、または対象の中枢神経系（ＣＮＳ）に直接投与することができる。例えば、治療用オリゴヌクレオチドは、対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）、脊髄、脳実質、皮質、小脳、大脳基底核、尾状核、被殻、視床、淡蒼球、黒質、または別の脳構造に投与することができる。いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは、髄腔内、脳室内、線条体内に、またはカテーテル挿入を介して大槽内注射によって投与する。いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは、髄腔内に投与する。いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは、脳室内に投与する。

【0007】

第２の態様では、本開示は、１つ以上の二価カチオンを含有する塩として製剤化された治療用オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ）を提供する。治療用オリゴヌクレオチドは、１つ以上の二価カチオンによって部分的または完全に飽和した複数のカチオン結合部位を含有し得る。

【0008】

本開示の前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度は、約１０％～約１００％（例えば、約２０％～約１００％、約３０％～約１００％、約４０％～約１００％、約５０％～約１００％、約６０％～約１００％、約７０％～約１００％、約８０％～約１００％、または約９０％～約１００％）である。

【0009】

いくつかの実施形態では、カチオン結合部位は、ホスホジエステル結合及び／またはホスホロチオエート結合などのヌクレオシド間結合内に位置する。例えば、カチオン結合部位は、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合内のオキシアニオン部分であってもよい。

【0010】

いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンは、約３０ピコメートル～約１５０ピコメートル（例えば、約３０ピコメートル～約１４０ピコメートル、約４０ピコメートル～約１３０ピコメートル、約５０ピコメートル～約１２０ピコメートル、約６０ピコメートル～約１１０ピコメートル、約６０ピコメートル～約１００ピコメートル、または約６０ピコメートル～約９０ピコメートル）の範囲のイオン半径を有するとして特徴付けられる。

【0011】

いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンには、硬いルイス酸が含まれる。いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンには、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、もしくはＺｎ^２＋、またはそれらの組み合わせが含まれる。

【0012】

いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンには、Ｂａ^２＋が含まれる。いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンには、Ｂｅ^２＋が含まれる。いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンには、Ｃａ^２＋が含まれる。いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンには、Ｃｕ^２＋が含まれる。いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンには、Ｍｇ^２＋が含まれる。いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンには、Ｍｎ^２＋が含まれる。いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンには、Ｎｉ^２＋が含まれる。いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンには、Ｚｎ^２＋が含まれる。

【0013】

いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンには、Ｃａ^２＋及びＭｇ^２＋が含まれ、任意選択で、Ｃａ^２＋のＭｇ^２＋に対する比は、１：１００～１００：１（例えば、１：７５、１：５０、１：２５、１：１０、１：５、１：１、５：１、１０：１、２５：１、５０：１、７５：１、または１００：１）である。いくつかの実施形態では、Ｃａ^２＋及びＭｇ^２＋は、１：１の比で存在する。

【0014】

いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンは、治療用オリゴヌクレオチドのカチオン結合部位から水を置き換える。

【0015】

いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ＣＲＩＳＰＲガイドＲＮＡ、またはＲＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは、干渉ＲＮＡ分子である。いくつかの実施形態では、干渉ＲＮＡ分子は、ｓｉＲＮＡである。ｓｉＲＮＡは、分岐ｓｉＲＮＡ、例として二分岐ｓｉＲＮＡ分子、三分岐ｓｉＲＮＡ分子、または四分岐ｓｉＲＮＡ分子であってもよい。

【0016】

いくつかの実施形態では、二分岐ｓｉＲＮＡ分子は、式Ｉ～ＩＩＩのいずれか１つで表される：

【化1】

式中、各ＲＮＡは、独立してｓｉＲＮＡ分子であり、Ｌは、リンカーであり、各Ｘは、独立して分岐点部分を表す。

【0017】

いくつかの実施形態では、二分岐ｓｉＲＮＡ分子は式Ｉで表される。いくつかの実施形態では、二分岐ｓｉＲＮＡ分子は式ＩＩで表される。いくつかの実施形態では、二分岐ｓｉＲＮＡ分子は式ＩＩＩで表される。

【0018】

いくつかの実施形態では、三分岐ｓｉＲＮＡ分子は、式ＩＶ～ＶＩＩのいずれか１つで表される：

【化2】

式中、各ＲＮＡは、独立してｓｉＲＮＡ分子であり、Ｌは、リンカーであり、各Ｘは、独立して分岐点部分を表す。

【0019】

いくつかの実施形態では、三分岐ｓｉＲＮＡ分子は式ＩＶで表される。いくつかの実施形態では、三分岐ｓｉＲＮＡ分子は式Ｖで表される。いくつかの実施形態では、三分岐ｓｉＲＮＡ分子は式ＶＩで表される。いくつかの実施形態では、三分岐ｓｉＲＮＡ分子は式ＶＩＩで表される。

【0020】

いくつかの実施形態では、四分岐ｓｉＲＮＡ分子は、式ＶＩＩＩ～ＸＩＩのいずれか１つで表される：

【化3】

式中、各ＲＮＡは、独立してｓｉＲＮＡ分子であり、Ｌは、リンカーであり、各Ｘは、独立して分岐点部分を表す。

【0021】

いくつかの実施形態では、四分岐ｓｉＲＮＡ分子は式ＶＩＩＩで表される。いくつかの実施形態では、四分岐ｓｉＲＮＡ分子は式ＩＸで表される。いくつかの実施形態では、四分岐ｓｉＲＮＡ分子は式Ｘで表される。いくつかの実施形態では、四分岐ｓｉＲＮＡ分子は式ＸＩで表される。いくつかの実施形態では、四分岐ｓｉＲＮＡ分子は式ＸＩＩで表される。

【0022】

いくつかの実施形態では、リンカーは、エチレングリコール（例えば、トリエチレングリコール（ＴｒＥＧ）またはテトラエチレングリコール（ＴＥＧ）などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ））、アルキル、炭水化物、ブロックコポリマー、ペプチド、ＲＮＡ、及びＤＮＡのうちの１つ以上の連続サブユニットからなる群から選択される。

【0023】

いくつかの実施形態では、リンカーはエチレングリコールオリゴマーである。いくつかの実施形態では、リンカーはアルキルオリゴマーである。いくつかの実施形態では、リンカーは炭水化物オリゴマーである。いくつかの実施形態では、リンカーはブロックコポリマーである。いくつかの実施形態では、リンカーはペプチドオリゴマーである。いくつかの実施形態では、リンカーはＲＮＡオリゴマーである。いくつかの実施形態では、リンカーはＤＮＡオリゴマーである。

【0024】

いくつかの実施形態では、エチレングリコールオリゴマーはＰＥＧである。いくつかの実施形態では、ＰＥＧはＴｒＥＧである。いくつかの実施形態では、ＰＥＧはＴＥＧである。

【0025】

いくつかの実施形態では、オリゴマーまたはコポリマーは、２～２０の連続サブユニット（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の連続サブユニット）を含有する。

【0026】

いくつかの実施形態では、リンカーは、共有結合形成部分により１つ以上（例えば、１、２、３、４、またはそれ以上）のｓｉＲＮＡ分子を結合させる。

【0027】

いくつかの実施形態では、共有結合形成部分は、アルキル、エステル、アミド、カルバメート、ホスホネート、ホスフェート、ホスホロチオエート、ホスホロアミデート、トリアゾール、尿素、及びホルムアセタールからなる群から選択される。

【0028】

いくつかの実施形態では、リンカーは式Ｌ１の構造を含む。

【化4】

【0029】

いくつかの実施形態では、リンカーは式Ｌ２の構造を含む。

【化5】

【0030】

いくつかの実施形態では、リンカーは式Ｌ３の構造を含む。

【化6】

【0031】

いくつかの実施形態では、リンカーは式Ｌ４の構造を含む。

【化7】

【0032】

いくつかの実施形態では、リンカーは式Ｌ５の構造を含む。

【化8】

【0033】

いくつかの実施形態では、リンカーは式Ｌ６の構造を含む。

【化9】

【0034】

いくつかの実施形態では、リンカーは式Ｌ７の構造を含む。

【化10】

【0035】

いくつかの実施形態では、リンカーは式Ｌ８の構造を含む。

【化11】

【0036】

いくつかの実施形態では、リンカーは式Ｌ９の構造を含む。

【化12】

【0037】

いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖と、アンチセンス鎖に対して相補性を有するセンス鎖とを含むか、または治療用オリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖のみを含むＡＳＯである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖及びセンス鎖は、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドと２’－フルオロリボヌクレオシドを交互でさらに含む。

【0038】

いくつかの実施形態では、干渉ＲＮＡアンチセンス鎖は、５’－３’方向に、以下の化学式で表される領域を含み：
Ｚ－（（Ａ－Ｐ－）_ｎ（Ｂ－Ｐ－）_ｍ）_ｑ；
式中、Ｚは、５’リン安定化部分であり；各Ａは独立して、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；各Ｂは独立して、２’－フルオロ－リボヌクレオシドであり；各Ｐは、独立して、ホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合から選択されるヌクレオシド間結合であり；ｎは、１～５の整数（例えば、１、２、３、４、または５）であり；ｍは、１～５の整数（例えば、１、２、３、４、または５）であり；ｑは１～３０の間の整数（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０）である。

【0039】

いくつかの実施形態では、干渉ＲＮＡアンチセンス鎖は、式Ｉで表される構造を含み、式Ｉは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ’－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式Ｉ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である。

【0040】

式Ｉのいくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、式Ａ１で表される構造を含み、式Ａ１は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ１；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0041】

いくつかの実施形態では、干渉ＲＮＡアンチセンス鎖は、式ＩＩで表される構造を含み、式ＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である。

【0042】

式ＩＩのいくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、式Ａ２で表される構造を含み、式Ａ２は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ２；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0043】

いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドセンス鎖は、式ＩＩＩによって表される構造を含み、式ＩＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ｅ－（Ａ’）_ｍ－Ｆ
式ＩＩＩ；
式中、Ｅは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
Ｆは、式（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｃ、（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｃ、（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ、または（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｄで表され；
Ａ’、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＩＩで定義されたとおりであり；
ｍは、１～７の整数である。

【0044】

式ＩＩＩのいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ１で表される構造を含み、式Ｓ１は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ１；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0045】

式ＩＩＩのいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ２で表される構造を含み、式Ｓ２は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ
式Ｓ２；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0046】

式ＩＩＩのいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ３で表される構造を含み、式Ｓ３は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ
式Ｓ３；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0047】

式ＩＩＩのいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ４で表される構造を含み、式Ｓ４は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ
式Ｓ４；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0048】

いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドアンチセンス鎖は、式ＩＶによって表される構造を含み、式ＩＶは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｂ－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＶ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である。

【0049】

式ＩＶのいくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、式Ａ３で表される構造を含み、式Ａ３は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ３；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0050】

いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドセンス鎖は、式Ｖによって表される構造を含み、式Ｖは、５’－３’方向に以下であり、
Ｅ－（Ａ’）_ｍ－Ｃ－Ｐ^２－Ｆ
式Ｖ；
式中、Ｅは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
Ｆは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｃ、Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｃ、Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ、またはＤ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｄで表され；
Ａ’、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＩＶで定義されたとおりであり；
ｍは、１～７の整数である。

【0051】

式Ｖのいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ５で表される構造を含み、式Ｓ５は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ５；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0052】

式Ｖのいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ６で表される構造を含み、式Ｓ６は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ
式Ｓ６；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0053】

式Ｖのいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ７で表される構造を含み、式Ｓ７は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ
式Ｓ７；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0054】

式Ｖのいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ８で表される構造を含み、式Ｓ８は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ
式Ｓ８；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0055】

いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドアンチセンス鎖は、式ＶＩによって表される構造を含み、式ＶＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ_ｊ－Ｅ－Ｂ_ｋ－Ｅ－Ｆ－Ｇ_ｌ－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ’
式ＶＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｅは、式Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２で表され；
Ｆは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１で表され；
各Ｇは、式Ｃ－Ｐ^１で表され；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数であり；
ｌは、１～７の整数である。

【0056】

式ＶＩのいくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、式Ａ４で表される構造を含み、式Ａ４は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ４；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0057】

いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドセンス鎖は、式ＶＩＩによって表される構造を含み、式ＶＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ｈ－Ｂ_ｍ－Ｉ_ｎ－Ａ’－Ｂ_ｏ－Ｈ－Ｃ
式ＶＩＩ；
式中、各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｈは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
各Ｉは、式（Ｄ－Ｐ^２）で表され；
Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＶＩで定義されたとおりであり；
ｍは１～７の整数であり；
ｎは１～７の整数であり；
は１～７の整数である。

【0058】

式ＶＩＩのいくつかの実施形態では、センス鎖は、式ｓ９で表される構造を含み、式Ｓ９は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ９；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0059】

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖の５’末端に５’リン安定化部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、センス鎖の５’末端に５’リン安定化部分をさらに含む。

【0060】

いくつかの実施形態では、５’リン安定化部分は、式ＩＸ～ＸＶＩのいずれか１つで表される：

【化13】

式中、Ｎｕｃは、核酸塩基、例としてアデニン、ウラシル、グアニン、チミン、またはシトシンを表し、Ｒは、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、もしくは任意選択で置換されたアルキニル（例えば、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルキニル）、フェニル、ベンジル、ヒドロキシ、または水素を表す。

【0061】

いくつかの実施形態では、５’リン安定化部分は、式ＸＶＩに表される（Ｅ）－ビニルホスホネートである。

【0062】

いくつかの実施形態では、ｎは、１～４である。いくつかの実施形態では、ｎは、１～３である。いくつかの実施形態では、ｎは、１～２である。いくつかの実施形態では、ｎは１である。

【0063】

いくつかの実施形態では、ｍは、１～４である。いくつかの実施形態では、ｍは、１～３である。いくつかの実施形態では、ｍは、１～２である。いくつかの実施形態では、ｍは１である。

【0064】

いくつかの実施形態では、ｎ及びｍは、それぞれ１である。

【0065】

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖中のリボヌクレオチドの５０％以上が、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオチドである（例えば、アンチセンス鎖中のリボヌクレオチドの５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％が、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオチドであってもよい）。

【0066】

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖中のリボヌクレオチドの６０％以上が、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオチドである（例えば、アンチセンス鎖中のリボヌクレオチドの６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％が、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオチドであってもよい）。

【0067】

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖中のリボヌクレオチドの７０％以上が、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオチドである（例えば、アンチセンス鎖中のリボヌクレオチドの７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％が、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオチドであってもよい）。

【0068】

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖中のリボヌクレオチドの８０％以上が、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオチドである（例えば、アンチセンス鎖中のリボヌクレオチドの８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％が、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオチドであってもよい）。

【0069】

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖中のリボヌクレオチドの９０％以上が、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオチドである（例えば、アンチセンス鎖中のリボヌクレオチドの９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％が、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオチドであってもよい）。

【0070】

いくつかの実施形態では、ヌクレオシド間結合の１０％以下が、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合である。いくつかの実施形態では、ヌクレオシド間結合の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％が、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合である。いくつかの実施形態では、ヌクレオシド間結合の１００％が、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合である。

【0071】

いくつかの実施形態では、９つのヌクレオシド間結合が、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合である。

【0072】

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは１０ヌクレオチド～３０ヌクレオチドの間（例えば、１０ヌクレオチド、１１ヌクレオチド、１２ヌクレオチド、１３ヌクレオチド、１４ヌクレオチド、１５ヌクレオチド、１６ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、１８ヌクレオチド、１９ヌクレオチド、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、２３ヌクレオチド、２４ヌクレオチド、２５ヌクレオチド、２６ヌクレオチド、２７ヌクレオチド、２８ヌクレオチド、２９ヌクレオチド、もしくは３０ヌクレオチド）、１５～２５ヌクレオチドの間（例えば、１５ヌクレオチド、１６ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、１８ヌクレオチド、１９ヌクレオチド、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、２３ヌクレオチド、２４ヌクレオチド、もしくは２５ヌクレオチド）、または１８～２３ヌクレオチドの間（例えば、１８ヌクレオチド、１９ヌクレオチド、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、もしくは２３ヌクレオチド）である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは、２０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは、２１ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは、２２ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは、２３ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは、２４ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは、２５ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは、２６ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは、２７ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは、２８ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは、２９ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは、３０ヌクレオチドである。

【0073】

いくつかの実施形態では、分岐化合物のｓｉＲＮＡ分子は、リンカー（例えば、テトラエチレングリコールなどのエチレングリコールオリゴマー）を介して互いに接合する。いくつかの実施形態では、分岐化合物のｓｉＲＮＡ分子は、一方のｓｉＲＮＡ分子のセンス鎖と他方のｓｉＲＮＡ分子のセンス鎖との間のリンカーを介して互いに接合する。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、一方のｓｉＲＮＡ分子のアンチセンス鎖と他方のｓｉＲＮＡ分子のアンチセンス鎖との間のリンカーを介して接合する。いくつかの実施形態では、分岐化合物のｓｉＲＮＡ分子は、一方のｓｉＲＮＡ分子のセンス鎖と他方のｓｉＲＮＡ分子のアンチセンス鎖との間のリンカーを介して互いに接合する。

【0074】

いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは１２ヌクレオチド～３０ヌクレオチドの間（例えば、１２ヌクレオチド、１３ヌクレオチド、１４ヌクレオチド、１５ヌクレオチド、１６ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、１８ヌクレオチド、１９ヌクレオチド、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、２３ヌクレオチド、２４ヌクレオチド、２５ヌクレオチド、２６ヌクレオチド、２７ヌクレオチド、２８ヌクレオチド、２９ヌクレオチド、もしくは３０ヌクレオチド）、または１４～１８ヌクレオチドの間（例えば、１４ヌクレオチド、１５ヌクレオチド、１６ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、もしく１８ヌクレオチド）である。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、１５ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、１６ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、１７ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、１８ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、１９ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、２０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、２１ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、２２ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、２３ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、２４ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、２５ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、２６ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、２７ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、２８ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、２９ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは、３０ヌクレオチドである。

【0075】

いくつかの実施形態では、４つのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。

【0076】

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２０ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２１ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２１ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２１ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２１ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２１ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２１ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２１ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２０ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２１ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２０ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２２ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２０ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２２ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２３ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２４ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２４ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２４ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２４ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２４ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２４ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２４ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２０ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２４ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２４ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２２ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２４ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２３ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２４ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２０ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２２ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２３ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１７ヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２０ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２２ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２３ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２０ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２２ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２３ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７クレオチドの長さであり、センス鎖は、２７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２０ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２２ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２３ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２０ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２２ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２３ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２０ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２２ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２３ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２５ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２７ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２８ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、２９ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、３０ヌクレオチドの長さである。

【0077】

いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドを対象に投与すると、対象における遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームのサイレンシングが生じる。遺伝子のサイレンシングは、参照対象で観察される発現及び／または活性のレベルに対する、発現及び／または活性の増加が疾患状態に関連する、遺伝子の正の調節因子をサイレンシングすることによって起こり得る。遺伝子のサイレンシングは、参照対象で観察される発現及び／または活性のレベルに対する、発現及び／または活性の低下が疾患状態に関連する、遺伝子の負の調節因子をサイレンシングすることによって起こり得る。遺伝子のサイレンシングは、参照対象における遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームの発現に対する、遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームの過剰発現が疾患状態に関連する、特異的遺伝子または特異的遺伝子のスプライスアイソフォームをサイレンシングすることによって起こり得る。

【0078】

いくつかの実施形態では、遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームは、対象の中枢神経系において転写的に発現される。

【0079】

いくつかの実施形態では、遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームのサイレンシングを使用して、中枢神経系の疾患と診断された対象を治療する。

【0080】

いくつかの実施形態では、遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームのサイレンシングを使用して、神経変性疾患、神経精神疾患、または他の神経障害と診断された対象を治療する。

【0081】

いくつかの実施形態では、疾患は、ハンチントン病である。いくつかの実施形態では、疾患は、パーキンソン病である。いくつかの実施形態では、疾患は、アルツハイマー病である。いくつかの実施形態では、疾患は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である。いくつかの実施形態では、疾患は、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）である。いくつかの実施形態では、疾患は、純粋自律神経不全である。いくつかの実施形態では、疾患は、レビー小体型嚥下障害である。いくつかの実施形態では、疾患は、偶発的レビー小体病（ＩＬＢＤ）である。いくつかの実施形態では、疾患は、遺伝性レビー小体病である。いくつかの実施形態では、疾患は、オリーブ橋小脳萎縮症（ＯＰＣＡ）である。いくつかの実施形態では、疾患は、線条体黒質変性症である。いくつかの実施形態では、疾患は、シャイ・ドレーガー症候群である。いくつかの実施形態では、疾患は、てんかんまたはてんかん障害である。いくつかの実施形態では、疾患は、プリオン病である。いくつかの実施形態では、疾患は、疼痛または疼痛障害である。

【0082】

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、ＡＢＣＡ７、ＡＢＩ３、ＡＤＡＭ１０、ＡＰＯＣ１、ＡＰＯＥ、ＡＸＬ、ＢＩＮ１、Ｃ１ＱＡ、Ｃ３、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＣＡＳＳ４、ＣＣＬ５、ＣＤ２ＡＰ、ＣＤ３３、ＣＤ６８、ＣＬＰＴＭ１、ＣＬＵ、ＣＲ１、ＣＳＦ１、ＣＳＴ７、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＤ、ＣＴＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１３、ＤＳＧ２、ＥＣＨＤＣ３、ＥＰＨＡ１、ＦＡＢＰ５、ＦＥＲＭＴ２、ＦＴＨ１、ＧＮＡＳ、ＧＲＮ、ＨＢＥＧＦ、ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＨＬＡ－ＤＲＢ５、ＨＴＴ、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＧＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＮＰＰ５Ｄ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＫＣＮＴ１、ＬＩＬＲＢ４、ＬＰＬ、ＭＡＰＴ、ＭＥＦ２Ｃ、ＭＭＰ１２、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＭＳ４Ａ６Ａ、ＭＳＨ３、ＮＬＲＰ３、ＮＭＥ８、ＮＯＳ２、ＰＩＣＡＬＭ、ＰＩＬＲＡ、ＰＬＣＧ２、ＰＲＮＰ、ＰＴＫ２Ｂ、ＳＣＩＭＰ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＬＣ２４Ａ４、ＳＮＣＡ、ＳＯＲＬ１、ＳＰＩ１、ＳＰＰ１、ＳＰＰＬ２Ａ、ＴＢＫ１、ＴＮＦ、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭＬ２、ＴＹＲＯＢＰ、及びＺＣＷＰＷ１、からなる群から選択される遺伝子の一部とハイブリダイズするのに十分な相補性を有する。いくつかの実施形態では、遺伝子は、ＨＴＴ、ＭＡＰＴ、ＳＮＣＡ、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＡＰＯＥ、ＳＣＮ９Ａ、ＫＣＮＴ１、ＰＲＮＰ、及びＭＳＨ３からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、遺伝子はＨＴＴである。いくつかの実施形態では、遺伝子はＭＡＰＴである。いくつかの実施形態では、遺伝子はＳＮＣＡである。いくつかの実施形態では、遺伝子はＣ９ＯＲＦ７２である。いくつかの実施形態では、遺伝子はＡＰＯＥである。いくつかの実施形態では、遺伝子はＳＣＮ９Ａである。いくつかの実施形態では、遺伝子はＫＣＮＴ１である。いくつかの実施形態では、遺伝子はＰＲＮＰである。いくつかの実施形態では、遺伝子はＭＳＨ３である。

【0083】

いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

【0084】

いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは、負電荷を有する１つ以上の原子を含み、二価カチオンは２つの正電荷を含む。いくつかの実施形態では、負電荷の正電荷に対する比は０．７５～７．５（例えば、０．７６、０．７７、０．７８、０．７９、０．８０、０．８１、０．８２、０．８３、０．８４、０．８５、０．８６、０．８７、０．８８、０．８９、０．９０、０．９１、０．９２、０．９３、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、または７．５）である。いくつかの実施形態では、負電荷の正電荷に対する比は１．０～２．０（例えば、１．０～１．９、１．０～１．８、１．０～１．７、１．０～１．６、１．０～１．５、１．０～１．４、１．０～１．３、１．０～１．２、１．０～１．１、１．１～２．０、１．２～２．０、１．３～２．０、１．４～２．０、１．５～２．０、１．６～２．０、１．７～２．０、１．８～２．０、または１．９～２．０）である。いくつかの実施形態では、負電荷の正電荷に対する比は０．７５～６．５（例えば、０．７５～５．５、０．７５～４．５、０．７５～３．５、０．７５～２．５、０．７５～１．５、または０．７５～１）である。いくつかの実施形態では、負電荷の正電荷に対する比は１～７．５（例えば、１．５～７．５、２．５～７．５、３．５～７．５、４．５～７．５、５．５～７．５、または６．５～７．５）である。いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドの二価カチオンに対するモル比は、１：１０～１：１００（例えば、１：１０～１：５０、１：１８～１：３８、１：２０～１：２５、１：２５、または１：２０）である。いくつかの実施形態では、１つ以上の二価カチオンの濃度は、１０ｍＭ～１５０ｍＭ（例えば、２０ｍＭ～１５０ｍＭ、２０ｍＭ～１００ｍＭ、２５ｍＭ～１５０ｍＭ、２５ｍＭ～１００ｍＭ、３０ｍＭ～９０ｍＭ、３５ｍＭ～８５ｍＭ、３５ｍＭ～７５ｍＭ、４０ｍＭ～７０ｍＭ、４０ｍＭ～６５ｍＭ、４０ｍＭ～６０ｍＭ、または４０ｍＭ～５０ｍＭ）である。

【0085】

第３の態様では、本開示は、１つ以上の二価カチオンを含む塩として製剤化されたｓｉＲＮＡ分子を合成する方法であって、１つ以上の二価カチオンの存在下でアンチセンス鎖及びセンス鎖を加熱することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、加熱することは、少なくとも９０℃まで加熱することを含む。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、本開示の前述の態様または実施形態のいずれかのｓｉＲＮＡ分子である。

【0086】

第４の態様では、本開示は、１つ以上の二価カチオンを含む塩として製剤化されたｓｉＲＮＡ分子を合成する方法であって、ハイブリダイズしたｓｉＲＮＡ二本鎖を、１つ以上の二価カチオンの存在下で加熱せずにインキュベートすることを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、本開示の前述の態様または実施形態のいずれかのｓｉＲＮＡ分子である。

【0087】

第５の態様では、本開示は、第３または第４の態様の方法によって合成されたｓｉＲＮＡ分子を提供する。

【0088】

別の態様では、本開示は、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤と組み合わせて、本開示の先の態様の治療用オリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物を提供する。

【0089】

さらなる態様では、本開示は、本開示の第２の態様の治療用オリゴヌクレオチドまたは前述の態様の医薬組成物を含むキットを提供する。キットはまた、キットの使用者に、本開示の前述の第１の態様またはその任意の実施形態の方法など、本明細書に記載の方法を実行するように指示する添付文書を含んでもよい。

【図面の簡単な説明】

【0090】

【図1】図１Ａは、実験手順の毒性を監視しスコアリングするための本明細書に記載の方法が従う、ＦＶＢ／ＮＪ、Ｆマウスへの片側ＩＣＶ注射の実験概要である。ＩＣＶ注射は、５μｌまたは１０μｌのいずれかの量で行い、１０ｎｍｏｌまたは２０ｎｍｏｌのいずれかのｓｉＲＮＡを０．５μｌ／分の流速で投与した。図１Ｂは、実験ＩＣＶ手順後の、マウスにおけるＥｖＡＤＩＮＴ－Ａスコアの散布図である。各ＩＣＶ注射の実験条件には、以下の４つのイオン条件：Ａ）Ｍｇ２^＋；Ｂ）Ｃａ２^＋；Ｃ）Ｍｇ２^＋及びＣａ２^＋；またはＤ）ＰＢＳのみ（対照）のうちの１つの存在下でハイブリダイズした二本鎖ｓｉＲＮＡの送達が含まれる。スコアが高いほど、実験条件の毒性がより高いと考えられる。

【図2A】種々の二価カチオンの存在下での本開示のジ－ｓｉＲＮＡ分子によるｍＲＮＡノックダウンを示す棒グラフである。試験した各条件（ＰＢＳのみ、Ｍｇ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡ、Ｃａ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡ、Ｍｇ^２＋及びＣａ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡ、ならびにＰＢＳを伴うジ－ｓｉＲＮＡ）を、脳の４つの異なる部分でのノックダウンについて評価した。各条件についての４つの棒は、左から右に、前頭皮質、運動皮質、線条体、及び海馬を表す。

【図2B】本開示のジ－ｓｉＲＮＡ分子による目的の遺伝子の用量依存的ノックダウンを示す棒グラフである。ｘ軸では、「対照」は未処置対照を指し、「ＰＢＳ」はＰＢＳを伴うジ－ｓｉＲＮＡを指し、「Ｍｇ」はＭｇ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡを指し、「Ｃａ」はＣａ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡを指す。

【図2C】種々の二価カチオンの存在下での本開示のジ－ｓｉＲＮＡ分子の組織分布を示す散布図である。試験した各条件（ＰＢＳのみ、Ｍｇ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡ、Ｃａ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡ、Ｍｇ^２＋及びＣａ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡ、及びＰＢＳを伴うジ－ｓｉＲＮＡ）を、脳の４つの異なる部分での取り込みについて評価した。ｙ軸は、ＰＮＡハイブリダイゼーションアッセイで測定した、タンパク質１ｍｇあたりのオリゴヌクレオチドのｆｍｏｌを表す。試験した各条件（ＰＢＳのみ、Ｍｇ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡ、Ｃａ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡ、Ｍｇ^２＋及びＣａ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡ、及びＰＢＳを伴うジ－ｓｉＲＮＡ）を、４つの異なる脳領域での取り込みについて評価した。左から右に、試験した各条件について、点は、それぞれ前頭皮質、運動皮質、線条体、及び海馬を示す。

【図3A】様々な濃度のＭｇ^２＋の存在下で、２０ｎｍｏｌのｓｉＲＮＡ分子で処置した、またはＰＢＳ中のＭｇ^２＋の対照条件で処置したマウスにおけるＥｖＡＤＩＮＴ－Ａスコアの散布図である。スコアが高いほど、実験条件の毒性がより高いと考えられた。図３Ａにおいて、「添加」は、ｓｉＲＮＡ二本鎖のハイブリダイゼーション後にＭｇ^２＋がｓｉＲＮＡに添加されたことを示し、「Ｒｅ－ｈｙｂ」は、ｓｉＲＮＡ分子を加熱してこれを再ハイブリダイズさせる前にＭｇ^２＋が添加されたことを示す。Ｍｇの各濃度について、重量オスモル濃度、ｐＨ、及びＭｇに対するｓｉＲＮＡの比を下に示す。

【図3B】様々な濃度のＣａ^２＋の存在下で、２０ｎｍｏｌのｓｉＲＮＡ分子で処置したマウスにおけるＥｖＡＤＩＮＴ－Ａスコアの散布図である。スコアが高いほど、実験条件の毒性がより高いと考えられた。

【図3C】様々な濃度のＭｇ^２＋／Ｃａ^２＋の存在下で、２０ｎｍｏｌのｓｉＲＮＡ分子で処置したマウスにおけるＥｖＡＤＩＮＴ－Ａスコアの散布図である。スコアが高いほど、実験条件の毒性がより高いと考えられた。

【図3D】一定比のＭｇ^２＋の存在下で、様々な濃度のｓｉＲＮＡ分子で処置した、またはカチオンを伴わないＰＢＳ中のｓｉＲＮＡの対照条件で処置したマウスにおけるＥｖＡＤＩＮＴ－Ａスコアの散布図である。スコアが高いほど、実験条件の毒性がより高いと考えられた。各実験条件について、重量オスモル濃度及びｐＨを下に示す。

【0091】

定義
本明細書において別途定義されない限り、本明細書において使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。いずれかの潜在的な曖昧さがある場合、本明細書で提供される定義が、任意の辞書または外部の定義よりも優先される。文脈によって別段の要求がない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。「または」の使用は、特に明記しない限り、「及び／または」を意味する。「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定的ではない。

【0092】

本明細書で使用する「核酸」という用語は、それぞれリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドの鎖からなるＲＮＡまたはＤＮＡ分子を指す。

【0093】

本明細書中で使用される場合、「キャリア核酸」という用語は、治療用核酸と配列相補性を有し、治療用核酸とハイブリダイズする核酸分子（例えば、リボ核酸）を指す。本明細書で使用される場合、「３’末端」という用語は、リボース環の３’炭素にヒドロキシル基または修飾ヒドロキシル基を含有する核酸の末端を指す。

【0094】

本明細書で使用される場合、「ヌクレオシド」という用語は、複素環式塩基及びその糖からなる分子を指す。

【0095】

本明細書で使用される場合、「ヌクレオチド」という用語は、その３’または５’糖ヒドロキシル基にリン酸基を有するヌクレオシドを指す。リン酸基変異体の例としては、飽和アルキルホスホネート、不飽和アルケニルホスホネート、ホスホロチオエート、及びホスホラミダイトが挙げられるが、これらに限定されない。

【0096】

本明細書で使用される場合、「ｓｉＲＮＡ」という用語は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路を誘導する小さな干渉ＲＮＡ二本鎖を指す。ｓｉＲＮＡ分子は、様々な長さであってもよく（一般に、１０～３０塩基対）、それらの標的ｍＲＮＡに対して様々な程度の相補性を含有し得る。「ｓｉＲＮＡ」という用語は、２つの別個の鎖の二本鎖、及び任意選択で二本鎖領域を含むヘアピン構造を形成する一本鎖を含む。

【0097】

本明細書で使用される場合、「アンチセンス鎖」という用語は、標的遺伝子に対してある程度の相補性を含有するｓｉＲＮＡ二本鎖の鎖を指す。

【0098】

本明細書で使用される場合、「センス鎖」という用語は、アンチセンス鎖に対する相補性を含有するｓｉＲＮＡ二本鎖の鎖を指す。

【0099】

本明細書で使用される場合、「二価カチオン」という用語は、価数２＋の正に荷電したイオン（すなわち、カチオン）を指す。二価カチオンの例としては、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、またはＺｎ^２＋が挙げられる。正電荷のため、二価カチオンは、典型的には、負に荷電した原子（例えば、単位または部分的な負電荷を担持するリン酸基またはホスホロチオエート基からのオキシアニオン）とイオン結合を形成する。

【0100】

本明細書で使用される場合、「イオン半径（ｒａｄｉｕｓ）」及び「複数のイオン半径（ｒａｄｉｉ）」という用語は、イオン性結晶構造の形態で測定された場合の、１つ以上の単原子イオン（例えば、二価カチオン）の半径を指す。イオン半径は、典型的には、ピコメートルまたはオングストロームの単位で測定する。

【0101】

本明細書で使用される場合、「塩」という用語は、アニオン性成分（例えば、単位または部分的な負電荷を担持するリン酸基もしくはホスホロチオエート基からのオキシアニオン）とカチオン性成分（例えば、二価のカチオン）との間のイオン性会合を含有する任意の化合物を指す。塩は、種々の物理的形態を有する。例えば、塩は、固体、結晶性、イオン性化合物であってもよく、または塩の成分イオンが混和性である溶媒（例えば、水または別の極性、プロトン性溶媒）に塩が溶解している溶液の形態であってもよい。塩はまた、懸濁液、例として（ｉ）目的の塩及び第１の溶媒を含有する均質溶液と、（ｉｉ）第１の溶媒と完全には混和性でない第２の溶媒とを接触させることによって形成される懸濁液中に存在することもできる。懸濁液の例は、目的の塩を含有する水溶液を、１つ以上の非極性官能基を含有する有機溶媒など、水と完全には混和性ではない溶媒と接触させることによって形成される懸濁液である。本開示の文脈において、「塩」には、１つ以上の二価カチオン（例えば、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、もしくはＺｎ^２＋、またはそれらの組み合わせ）によって飽和した複数のカチオン結合部位を含有するオリゴヌクレオチドが含まれる。

【0102】

「治療用オリゴヌクレオチド」という用語は、（ｉ）目的のタンパク質または核酸（例えば、ＲＮＡ）産物をコードする目的の遺伝子に導入されると、タンパク質または核酸産物の発現を減少させるか、または別様に調節するオリゴヌクレオチドを指す。治療用オリゴヌクレオチドの例は、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれている、Ｔｉｊｓｔｅｒｍａｎ ａｎｄ Ｐｌａｓｔｅｒｋ，Ｃｅｌｌ １１７（１）：１－３（２００４）に記載されているように、例えばＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）により目的の遺伝子の発現を減弱させるものである。治療用オリゴヌクレオチドの追加の例は、目的の遺伝子座またはＲＮＡ転写産物にアニーリングすることによって遺伝子発現を調節するもの、ならびに：（ｉ）転写または翻訳を調節する（例えば、阻害する）、（ｉｉ）細胞の内因性スプライシング機構を妨害することにより、エクソンスキッピングまたはインクルージョンを調節（例えば、誘導）する、及び／または（ｉｉｉ）当技術分野で公知である、または本明細書に記載されているＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質技術（例えば、ｇＲＮＡ）によって、遺伝子編集または塩基編集を促進する、ものである。本開示の治療用オリゴヌクレオチドは、一本鎖もしくは二本鎖で、単量体であるか、または分岐していてもよい。治療用オリゴヌクレオチドの具体例は、小さな干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、及びＣＲＩＳＰＲガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）分子である。本開示の文脈において、治療用オリゴヌクレオチドは、１つ以上の付加部分（例えば、抗体または他のタンパク質）に結合していなくても、または結合（例えば、コンジュゲート）していてもよい。

【0103】

「干渉ＲＮＡ分子」という用語は、標的ＲＮＡ転写産物の内因性機能を抑制する、小さな干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、または短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）などのＲＮＡ分子を指す。

【0104】

本明細書で使用される場合、「発現する」及び「発現」という用語は、以下の事象のうちの１つ以上を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の生成（例えば、転写による）；（２）ＲＮＡ転写産物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／または３’末端プロセシングによる）；ならびに（３）ＲＮＡのポリペプチドまたはタンパク質への翻訳。タンパク質産物をコードする遺伝子の文脈において、「遺伝子発現」などの用語は、「タンパク質発現」などの用語と交換可能に使用される。患者における目的の遺伝子またはタンパク質の発現は、例えば以下：対応するタンパク質をコードするｍＲＮＡの量または濃度の増加（例えば、本明細書に記載の、または定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）及びＲＮＡｓｅｑ技術などの当技術分野で公知のＲＮＡ検出手順を使用して評価される）、対応するタンパク質の量または濃度の増加（例えば、本明細書に記載される、またはとりわけ酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）などの当技術分野で公知のタンパク質検出方法を使用して評価される）、及び／または患者から得られた試料中の対応するタンパク質の活性の増加（例えば、酵素の場合、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知の酵素活性アッセイを使用して評価される）を検出することによって明らかになる。本明細書で使用される場合、細胞内または細胞が存在する培地中で上記の事象の１つ以上またはすべてを検出することができる場合、細胞は目的の遺伝子またはタンパク質を「発現」していると考えられる。例えば、目的の遺伝子またはタンパク質は、以下、（ｉ）細胞または細胞集団による、ｍＲＮＡ鋳型などの対応するＲＮＡ転写産物の産生（例えば、本明細書に記載のＲＮＡ検出手順を使用する）；（ｉｉ）ＲＮＡ転写産物のプロセシング（例えば、本明細書に記載のＲＮＡ検出手順を使用するような、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／または３’末端プロセシングによる）；ならびに（ｉｉｉ）ＲＮＡ鋳型のタンパク質産物への翻訳（例えば、本明細書に記載のタンパク質検出手順を使用する）；及び／または（ｉｖ）タンパク質産物の翻訳後修飾（例えば、本明細書に記載のタンパク質検出手順を使用する）を検出することができれば、細胞または細胞集団によって「発現」していると考えられる。

【0105】

本明細書で使用される場合、ｓｉＲＮＡの設計との関連において「標的」、「標的化する」、及び「標的化された」という用語は、ｍＲＮＡからタンパク質産物への翻訳が減少する様式で、アンチセンス鎖を目的のｍＲＮＡ転写産物内の領域にアニーリングするようにアンチセンス鎖を生成することを指す。

【0106】

「カチオン結合部位」という用語は、部分的な負電荷または単位負電荷（例えば、ホスフェートまたはホスホロチオエートのオキシアニオン）のいずれかを担持し、カチオン（例えば、二価カチオン）とイオン性会合を形成することができる、治療用オリゴヌクレオチド中の置換基を指す。

【0107】

「飽和度」という用語は、特定のカチオン種（例えば、二価カチオン）によってイオン結合するカチオン結合部位の相対的割合を指す。

【0108】

「硬いルイス酸」という用語は、小さいイオン半径、高い正電荷密度、水を置換する強力な能力、及び高エネルギー最低空分子軌道（ＬＵＭＯ）を特徴とする化学酸を指す。

【0109】

本明細書で使用される場合、「化学修飾ヌクレオチド」、「ヌクレオチド類似体」、「改変ヌクレオチド」及び「修飾ヌクレオチド」という用語は、天然に存在しないリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドを含む、非標準的なヌクレオチドを指す。例示的なヌクレオチド類似体は、ヌクレオチドの特定の化学的特性を変化させながらも、ヌクレオチド類似体が意図した機能を実行する能力を保持するように、任意の位置で修飾される。

【0110】

本明細書で使用される場合、「代謝的に安定化された」という用語は、対象に投与されるＲＮＡ分子の代謝速度を低下させるために化学修飾されたリボヌクレオチドを含むＲＮＡ分子を指す。例示的な修飾には、２’－ヒドロキシから２’－Ｏ－メトキシまたは２’－フルオロへ、及びホスホジエステルからホスホロチオエートへ、が含まれる。

【0111】

本明細書で使用される場合、「ホスホロチオエート」という用語は、リン酸基の酸素のうちの１つ以上を硫黄で置換することによって修飾されるヌクレオチドのリン酸基を指す。

【0112】

本明細書で使用される場合、「アンタゴｍｉＲ」という用語は、ｍｉＲＮＡ活性の阻害剤として機能し得る核酸を指す。

【0113】

本明細書で使用される場合、「ギャップマー」という用語は、ＲＮアーゼＨ切断を誘導するのに十分な長さのデオキシヌクレオチドモノマーの中央ブロックを含有するキメラアンチセンス核酸を指す。デオキシヌクレオチドブロックは、リボヌクレオチドモノマーまたは修飾を含有するリボヌクレオチドモノマーによって隣接される。

【0114】

本明細書で使用される場合、「ｍｉｘｍｅｒ」という用語は、ロックされた核酸（ＬＮＡ）とＤＮＡとの混合物を含有する核酸を指す。

【0115】

本明細書で使用される場合、「ガイドＲＮＡ」という用語は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集システムで使用されるプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列のすぐ上流または１塩基対上流のゲノム中の特定の配列に対して配列相補性を有する核酸を指す。あるいは、「ガイドＲＮＡ」は、特定のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）配列に対して配列相補性を有する（例えば、アンチセンスである）核酸を指してもよい。この文脈において、ガイドＲＮＡはまた、ガイドＲＮＡがハイブリダイズするｍＲＮＡの配列と同一または実質的に同一である、等しいまたはより短い長さの「パッセンジャーＲＮＡ」配列に対する配列相補性を有し得る。

【0116】

本明細書で使用される場合、「エチレングリコール鎖」という用語は、式（（ＣＨ_２ＯＨ）_２）を有する炭素鎖を指す。

【0117】

本明細書で使用される場合、「アルキル」は、飽和炭化水素基を指す。アルキル基は、非環式であっても環式であってもよく、置換されていない場合、Ｃ及びＨのみを含有する。特定の数の炭素を有するアルキル残基に名前を付ける場合、その数の炭素を有する全ての幾何学的異性体が、包含され、記載されることが意図される；したがって、例えば、「ブチル」は、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、及びイソ－ブチルを含むことを意味する。アルキルの例としては、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチルなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、アルキルは置換され得る。アルキル基に導入され得る好適な置換基には、とりわけ、例えば、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、及びハロが含まれる。

【0118】

本明細書で使用される場合、「アルケニル」は、少なくとも１つのオレフィン不飽和部位を有する（すなわち、式Ｃ＝Ｃの少なくとも１つの部分を有する）非環式または環式不飽和炭化水素基を指す。アルケニル基は、置換されていない場合、Ｃ及びＨのみを含有する。特定の数の炭素を有するアルケニル残基に名前を付ける場合、その数の炭素を有する全ての幾何学的異性体が、包含され、記載されることが意図される；したがって、例えば、「ブテニル」は、ｎ－ブテニル、ｓｅｃ－ブテニル、及びイソ－ブテニルを含むことを意味する。アルケニルの例としては、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－ＣＨ_２－ＣＨ＝ＣＨ_２、及び－ＣＨ_２－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ＝ＣＨ_２が挙げられる。いくつかの実施形態では、アルケニルは置換され得る。アルケニル基に導入され得る好適な置換基には、とりわけ、例えば、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、及びハロが含まれる。

【0119】

本明細書で使用される場合、「アルキニル」は、少なくとも１つのアセチレン不飽和部位を有する（すなわち、式Ｃ≡Ｃの少なくとも１つの部分を有する）非環式または環式不飽和炭化水素基を指す。アルキニル基は、置換されていない場合、Ｃ及びＨのみを含有する。特定の数の炭素を有するアルキニル残基に名前を付ける場合、その数の炭素を有する全ての幾何学的異性体が、包含され、記載されることが意図される；したがって、例えば、「ペンチニル」は、ｎ－ペンチニル、ｓｅｃ－ペンチニル、及びイソ－ペンチニルを含むことを意味する。アルキニルの例としては、－Ｃ≡ＣＨ及び－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ_３が挙げられる。いくつかの実施形態では、アルキニルは置換され得る。アルキニル基に導入され得る好適な置換基には、とりわけ、例えば、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、及びハロが含まれる。

【0120】

本明細書で使用される場合、「フェニル」という用語は、環の炭素原子から１つの水素原子が除去された単環式アレーンを示す。フェニル基は、非置換であるか、または１つ以上の好適な置換基で置換することができ、置換基は、フェニル基のＨを置換する。

【0121】

本明細書で使用される場合、「ベンジル」という用語は、トルエンのメチル基に結合した水素原子が除去されたときに得られる一価のラジカルを指す。ベンジルは、一般に、フェニル－ＣＨ_２－の式を有する。ベンジル基は、非置換であるか、または１つ以上の好適な置換基で置換することができる。例えば、置換基は、フェニル成分のＨ及び／またはメチレン（－ＣＨ_２－）成分のＨを置き換えてもよい。

【0122】

本明細書で使用される場合、「アミド」という用語は、アミノカルボニル官能基に結合したアルキル、アルケニル、アルキニル、または芳香族基を指す。

【0123】

本明細書で使用される場合、「ヌクレオシド間」及び「ヌクレオチド間」という用語は、それぞれヌクレオシドとヌクレオチドの間の結合を指す。

【0124】

本明細書で使用される場合、「トリアゾール」という用語は、２つの炭素及び３つの窒素の５員環を有し、その位置が変化して複数の異性体をもたらし得る、式（Ｃ_２Ｈ_３Ｎ_３）を有する複素環式化合物を指す。

【0125】

本明細書で使用される場合、「末端基」という用語は、炭素鎖または核酸が終わる基を指す。

【0126】

本明細書で使用される場合、「アミノ酸」は、アミン及びカルボキシル官能基ならびアミノ酸に特異的な側鎖を含有する分子を指す。

【0127】

いくつかの実施形態では、アミノ酸は、タンパク質原性アミノ酸の群から選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、Ｌ－アミノ酸またはＤ－アミノ酸である。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、合成アミノ酸（例えば、ベータ－アミノ酸）である。

【0128】

本明細書で使用される場合、「親油性アミノ酸」という用語は、疎水性部分（例えば、アルキル鎖または芳香族環）を含むアミノ酸を指す。

【0129】

本明細書で使用される場合、「送達標的」という用語は、分岐したオリゴヌクレオチド組成物を送達することが所望される臓器または体の一部を指す。

【0130】

本明細書で使用される場合、「Ｘ～Ｙの間」という用語は、ＸとＹの値を含む。例えば、「Ｘ～Ｙの間」は、Ｘの値とＹの値との間の値の範囲、ならびにＸの値とＹの値を指す。

【0131】

本明細書で使用される場合、「分岐ｓｉＲＮＡ」という用語は、互いに共有結合した２つ以上の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子を含有する化合物を指す。一例として、分岐ｓｉＲＮＡ分子は、「二分岐」であってもよく、本明細書において「ジ－ｓｉＲＮＡ」とも称され、ここで、このｓｉＲＮＡ分子は、例えばリンカーを介して互いに共有結合する２つのｓｉＲＮＡ分子を含む。分岐ｓｉＲＮＡ分子は、「三分岐」であってもよく、本明細書において「トリｓｉＲＮＡ」とも称され、ここで、このｓｉＲＮＡ分子は、例えばリンカーを介して互いに共有結合する３つのｓｉＲＮＡ分子を含む。分岐ｓｉＲＮＡ分子は、「四分岐」であってもよく、本明細書において「テトラｓｉＲＮＡ」とも称され、ここで、このｓｉＲＮＡ分子は、例えばリンカーを介して互いに共有結合する４つのｓｉＲＮＡ分子を含む。

【0132】

本明細書で使用される場合、「分岐点部分」という用語は、ｓｉＲＮＡ分子のアンチセンス鎖またはセンス鎖の５’末端または３’末端に共有結合し得る、本開示の分岐ｓｉＲＮＡ構造の化学部分を指し、これは、追加の一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡ分子の結合を支持することができる。開示された方法及び組成物と併せて使用するのに好適な分岐点部分の非限定的な例としては、例えば、ホスホロアミダイト、トシル化ソルケタール、１，３－ジアミノプロパノール、ペンタエリスリトール、及び米国特許第１０，４７８，５０３号に記載されている分岐点部分のいずれか１つが挙げられる。

【0133】

本明細書で使用される場合、「５’リン安定化部分」という用語は、ホスフェートならびに修飾ホスフェート（例えば、ホスホロチオエート、ホスホジエステル、ホスホネート）を含む末端リン酸基を指す。ホスフェート部分は、いずれかの末端に位置し得るが、５’末端ヌクレオシドにおいて好ましい。一態様では、末端ホスフェートは、式－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）ＯＨを有し、非修飾である。別の態様では、末端ホスフェートは、Ｏ及びＯＨ基のうちの１つ以上が、Ｈ、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｒ’）、またはＲ’がＨであるアルキル、アミノ保護基、または非置換もしくは置換アルキルで置換されるように修飾される。いくつかの実施形態では、５’及びまたは３’末端基は、各々独立して、非修飾（ジホスフェートもしくはトリホスフェート）または修飾された１～３個のホスフェート部分を含むことができる。

【0134】

例えば、ホスホジエステル及びホスホロチオエートを含む、本明細書に提供されるある特定のヌクレオチド間結合は、生理学的ｐＨで－１の形式電荷を含み、この形式電荷は、カチオン性部分、例えば、ナトリウムもしくはカリウムなどのアルカリ金属、カルシウムもしくはマグネシウムなどのアルカリ土類金属、またはアンモニウムもしくはグアニジニウムイオン、または複数の二価カチオン（例えば、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、Ｚｎ^２＋、もしくはそれらの組み合わせ）、によって平衡されることが理解される。

【0135】

ヌクレオチドのリン酸基はまた、例えば、リン酸基の１つ以上の酸素を硫黄（例えば、ホスホロチオエート）で置換することによって、またはヌクレオチドがその意図される機能を実行可能にする他の置換を作成することにより、修飾されてもよく、例えば、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．１０：１１７－２１，２０００；Ｒｕｓｃｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．１０：３３３－４５，２０００；Ｓｔｅｉｎ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．１１：３１７－２５，２００１；Ｖｏｒｏｂｊｅｖ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．１１：７７－８５，２００１；及びＵＳ５，６８４，１４３に記載されている。

【0136】

本明細書で使用される場合、「相補的な」という用語は、正規のワトソン・クリック塩基対を形成する２つのヌクレオチドを指す。誤解を避けるために記すと、本開示との関連において、ワトソン・クリック塩基対は、アデニン－チミン、アデニン－ウラシル、及びシトシン－グアニン塩基対を含む。この文脈において、適切なワトソン・クリック塩基対は「一致」と呼ばれる一方で、対形成していないそれぞれのヌクレオチド、及び、不適切に対形成したヌクレオチドは、「ミスマッチ」と呼ばれる。核酸配列相補性割合を測定する目的のアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、またはＭｅｇａｌｉｇｎソフトウェアなどの、一般に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当業者の能力の範囲内の様々な方法で達成することができる。

【0137】

参照ポリヌクレオチド配列に対する「配列相補性パーセント（％）」とは、必要に応じて、最大の配列相補性パーセントを達成するために、配列をアラインメントさせ、ギャップを導入した後に、参照ポリヌクレオチド配列中の核酸に相補的である候補配列中の核酸のパーセンテージとして定義される。２つのヌクレオチドが、標準的なワトソン・クリック塩基対を形成する場合に、所与のヌクレオチドは、本明細書に記載する参照ヌクレオチドに「相補性」であると考えられる。誤解を避けるために記すと、本開示との関連において、ワトソン・クリック塩基対は、アデニン－チミン、アデニン－ウラシル、及びシトシン－グアニン塩基対を含む。この文脈において、適切なワトソン・クリック塩基対は「一致」と呼ばれる一方で、対形成していないそれぞれのヌクレオチド、及び、不適切に対形成したヌクレオチドは、「ミスマッチ」と呼ばれる。核酸配列相補性パーセントを測定する目的のアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、またはＭｅｇａｌｉｇｎソフトウェアなどの、一般に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当業者の能力の範囲内の種々の方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大相補性を達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含め、配列をアラインメントするのに適切なパラメータを決定することができる。実例として、所与の核酸配列Ａの、所与の核酸配列Ｂに対する配列相補性パーセント（これはあるいは、所与の核酸配列Ｂに対してある特定の相補性パーセントを有する、所与の核酸配列Ａと呼ぶことができる）は、以下のとおり計算される：
１００×（分数Ｘ／Ｙ）
式中、Ｘは、Ａ及びＢのプログラムアラインメントにおける（例えば、ＢＬＡＳＴ等のコンピュータソフトウェアによって実行される）アラインメントにおける相補的塩基対の数であり、Ｙは、Ｂにおける核酸の総数である。核酸配列Ａの長さが、核酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡの配列相補性のパーセントは、Ａに対するＢの配列相補性のパーセントと等しくないことが理解される。本明細書で使用される場合、クエリ核酸配列が参照核酸配列に対する１００％の配列相補性を有する場合、クエリ核酸配列は、参照核酸配列に対して「完全に相補的」であると考えられる。

【0138】

参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列に対する「配列同一性パーセント（％）」とは、必要に応じて、最大の配列同一性パーセントを達成するために、配列をアラインメントさせ、ギャップを導入した後に、参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列中の核酸またはアミノ酸と同一である候補配列中の核酸またはアミノ酸のパーセンテージとして定義される。核酸またはアミノ酸配列同一性パーセントを測定する目的のアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、またはＭｅｇａｌｉｇｎソフトウェアなどの、一般に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当業者の能力の範囲内の種々の方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大アラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含め、配列をアラインメントするのに適切なパラメータを決定することができる。例えば、配列同一性パーセント値は、配列比較コンピュータプログラムＢＬＡＳＴを使用して生成することができる。実例として、所与の核酸またはアミノ酸配列Ａの、所与の核酸またはアミノ酸配列Ｂに対する（ｔｏ）、対する（ｗｉｔｈ）、もしくは対する（ａｇａｉｎｓｔ）配列同一性パーセント（これはあるいは、所与の核酸またはアミノ酸配列Ｂに対して（ｔｏ）、対して（ｗｉｔｈ）、もしくは対して（ａｇａｉｎｓｔ）ある特定の配列同一性パーセントを有する、所与の核酸またはアミノ酸配列Ａと呼ぶことができる）は、以下のとおり計算される：
１００×（分数Ｘ／Ｙ）
式中、Ｘは、配列アライメントプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ）により、Ａ及びＢのプログラムアラインメントおいて完全な一致としてスコア付けされたヌクレオチドまたはアミノ酸の数であり、Ｙは、Ｂにおける核酸の総数である。核酸またはアミノ酸配列Ａの長さが、核酸またはアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡの配列同一性パーセントは、Ａに対するＢの配列同一性パーセントと等しくないことが理解される。

【0139】

本明細書で使用される「ハイブリダイズするのに十分な相補性」という用語は、標的領域に対して１つ以上のヌクレオチドミスマッチがあるが、指定された条件下で依然として標的領域にハイブリダイズできる、標的領域または核酸配列またはその一部に対して完全に相補的（例えば、１００％相補的）である必要はない核酸配列またはその一部を指す。例えば、核酸は、例えば、９５％相補的、９０％相補的、８５％相補的、８０％相補的、７５％相補的、７０％相補的、６５％相補的、６０％相補的、５５％相補的、５０％相補的、またはそれ以下、であるが、それでもその全長にわたってハイブリダイズするのに十分な塩基対を標的と形成する。

【0140】

核酸の「ハイブリダイゼーション」または「アニーリング」は、ポリヌクレオチド塩基対内の１つ以上のヌクレオシド残基が１つ以上の相補的ヌクレオシドと対合して安定な二本鎖を形成する場合に達成される。塩基対合は通常、水素結合事象によって引き起こされる。ハイブリダイゼーションとしては、天然及び／または修飾核酸塩基から形成されるワトソン・クリック塩基対が挙げられる。ハイブリダイゼーションは、ゆらぎ塩基対（グアノシン・ウラシル、ヒポキサンチン・ウラシル、ヒポキサンチン・アデニン、及びヒポキサンチン・シトシン）及びフーグスティーン型塩基対などの非ワトソン・クリック塩基対も含む場合がある。ハイブリダイゼーションを受けるために、核酸は、１００％相補的である必要はない。例えば、一方の核酸は、別の核酸に対して、例えば、９５％相補的、９０％相補的、８５％相補的、８０％相補的、７５％相補的、７０％相補的、６５％相補的、６０％相補的、５５％相補的、５０％相補的、またはそれ以下、であるが、それでも２つの核酸はハイブリダイズするのに十分な塩基対を互いに形成することができる。

【0141】

一方の核酸の別の核酸へのアニーリング／ハイブリダイゼーションの際に形成される「安定な二本鎖」は、過酷な洗浄により変性されない二本鎖構造である。例示的な、過酷な洗浄条件は、当技術分野において公知であり、二本鎖の個々の鎖の融解温度より約５℃低い温度、及び、０．２Ｍ未満（０．２Ｍ、０．１９Ｍ、０．１８Ｍ、０．１７Ｍ、０．１６Ｍ、０．１５Ｍ、０．１４Ｍ、０．１３Ｍ、０．１２Ｍ、０．１１Ｍ、０．１Ｍ、０．０９Ｍ、０．０８Ｍ、０．０７Ｍ、０．０６Ｍ、０．０５Ｍ、０．０４Ｍ、０．０３Ｍ、０．０２Ｍ、０．０１Ｍ、またはそれ以下）の一価の塩濃度（例えばＮａＣｌ濃度）といった、一価の塩の濃度の低さを含む。

【0142】

「遺伝子サイレンシング」という用語は、転写に影響を与えるプロセス及び／または転写後機構に影響を与えるプロセスを通じて媒介され得る、遺伝子発現、例えば、導入遺伝子、異種遺伝子及び／または内因性遺伝子発現の抑制を指す。いくつかの実施形態では、遺伝子サイレンシングは、ＲＮＡｉ分子が、ＲＮＡ干渉を介して配列特異的な方法で目的の遺伝子から転写されたｍＲＮＡの阻害または分解を開始し、それによって遺伝子の産物の翻訳を妨げるときに生じる。

【0143】

本明細書で使用される場合、「過剰活性疾患駆動遺伝子」という用語は、対象（例えば、ヒト）における疾患状態に寄与する、またはそれを引き起こす、増加した活性及び／または発現を有する遺伝子を指す。疾患状態は、過剰活性疾患駆動遺伝子によって直接的に、または中間遺伝子（複数可）によって引き起こされるか、または悪化する場合がある。

【0144】

「負の調節因子」という用語は、本明細書で使用される場合、別の遺伝子または遺伝子のセットの発現及び／または活性を負に調節（例えば、軽減または阻害）する遺伝子を指す（例えば、調節不全の遺伝子または調節不全の遺伝子経路）。

【0145】

「正の調節因子」という用語は、本明細書で使用される場合、別の遺伝子または遺伝子のセットの発現及び／または活性を正に調節（例えば、増加または飽和）する遺伝子を指す（例えば、調節不全の遺伝子または調節不全の遺伝子経路）。

【0146】

本明細書で使用される「ホスフェート部分」という用語は、ホスフェート及び修飾ホスフェートを含む末端リン酸基を指す。ホスフェート部分は、いずれかの末端に位置し得るが、５’末端ヌクレオシドにおいて好ましい。一態様では、末端ホスフェートは、式－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）ＯＨを有し、非修飾である。別の態様では、末端ホスフェートは、Ｏ及びＯＨ基のうちの１つ以上が、Ｈ、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｒ’）、またはＲ’がＨであるアルキル、アミノ保護基、または非置換もしくは置換アルキルで置換されるように修飾される。いくつかの実施形態では、５’及びまたは３’末端基は、各々独立して、非修飾（ジホスフェートもしくはトリホスフェート）または修飾された１～３個のホスフェート部分を含むことができる。

【0147】

本開示の文脈において、「オリゴヌクレオチド」という用語は、リボ核酸（ＲＮＡ）またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはそれらの模倣体のオリゴマーまたはポリマーを指す。この用語は、天然に存在する核酸塩基、糖及び共有結合ヌクレオシド間（骨格）結合からなるオリゴヌクレオチド、ならびに同様に機能する天然に存在しない（例えば修飾された）部分を有するオリゴヌクレオチドを含む。そのような修飾または置換オリゴヌクレオチドは、例えば、増強された細胞取り込み、核酸標的に対する増強された親和性、及びヌクレアーゼの存在下での増加した安定性などの望ましい特性のために、天然形態よりも好ましいことが多い。

【0148】

本明細書で使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は交換可能に使用され、対象者からの試料（複数可）の当技術分野で公知の臨床検査（複数可）を伴う場合または伴わない場合で、資格のある専門家（例えば、医師もしくは看護師）によって決定される、疾患、障害、もしくは病態に罹患している、またはそのリスクにさらされている哺乳動物（例えば、ヒト）などの生物を指す。

【0149】

本明細書で使用される場合、「参照対象」という用語は、本開示の組成物で治療される対象と同じかまたは類似の、例えば、年齢、性別、地理的領域、及び／または教育レベルの健康な対照対象を指す。健康な参照対象は、調節不全の遺伝子の発現または調節不全の遺伝子経路に関連する疾患に罹患していない対象である。さらに、健康な参照対象は、遺伝子の発現及び／または活性の変化（例えば、増加または減少）に関連する疾患に罹患していない対象である。

【0150】

本明細書で使用される場合、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療される（ｔｒｅａｔｅｄ）」、及び「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、治療的処置及び予防的もしくは防止的手段の両方を意味し、その目的は、望ましくない生理学的状態、障害、もしくは疾患を予防もしくは減速（軽減）すること、または有益もしくは所望の臨床結果を得ることである。有益または所望の臨床結果としては、症状の軽減；病態、障害、もしくは疾患の程度の低下；病態、障害、もしくは疾患の安定化（すなわち、悪化しない）；発症の遅延、または病態、障害、もしくは疾患の進行の遅延；検出可能であるか検出不能であるかにかかわらず、病態、障害、もしくは疾患の状態の改善または寛解（部分的または全体にかかわらず）；患者によって必ずしも識別可能ではない、少なくとも１つの測定可能な身体パラメータの改善；または病態、障害、もしくは疾患の増強または改善が挙げられるが、これらに限定されない。治療には、過剰なレベルの副作用を伴わずに、臨床的に有意な応答を引き出すことが含まれる。「治療」はまた、治療を受けていなかった場合に予測される生存期間と比較して、生存期間を延長することも含む。

【0151】

本明細書で使用される場合、「プリオン病」という用語は、その病因にその生物のプリオンタンパク質が関与する、生物における任意の疾患または病態を指す。プリオン病としては、クロイツフェルト・ヤコブ病、致死性家族性不眠症、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、クールー病、スクレイピー、牛海綿状脳症、及び慢性消耗病が挙げられるが、これらに限定されない。一般に、プリオン病は、ＰＲＮＰによってコードされるプリオンタンパク質の細胞アイソフォーム（ＰｒＰ^Ｃ）のミスフォールディングによって引き起こされる。ミスフォールドタンパク質（ＰｒＰ^ＳＣ）が、疾患の引き金となる。この疾患は、ＰｒＰ^Ｃのミスフォールディングを誘導するＰｒＰ^ＳＣによって伝播する可能性がある。

【0152】

本明細書で使用される場合、「てんかん」という用語は、前頭葉てんかん、後頭葉てんかん、内側側頭葉てんかん、頭頂葉てんかん、乳児期良性ミオクローヌスてんかん、若年性ミオクローヌスてんかん、小児欠神てんかん、若年性欠神てんかん、小児期の全身性強直間代発作を伴うてんかん、点頭てんかん、レノックス・ガストー症候群、ウェスト症候群、睡眠関連運動亢進てんかん、進行性ミオクローヌスてんかん、熱性けいれん、徐波睡眠中に棘徐波が続くてんかん、ランドウ・クレフナー症候群、ラスムッセン症候群、先天性代謝異常に起因するてんかん、移動性局所発作を伴う乳児期てんかん、常染色体優性夜間前頭葉てんかん、太田原症候群、初期ミオクロニー脳症、局所性てんかん、及び／または多焦点性てんかん、を含むがこれらに限定されない、様々なタイプのてんかん症候群のいずれかを指す。

【0153】

本明細書で使用する場合、「疼痛」という用語は、本明細書に列挙する、とりわけ神経因性疼痛及び侵害受容性疼痛を含む、あらゆる形態の慢性及び急性疼痛を含む。

【0154】

本明細書で使用される場合、「利益」及び「応答」という用語は、疾患の治療のための療法を受けている対象との関連で互換的に使用される。例えば、本開示のｓｉＲＮＡ分子またはｓｉＲＮＡ組成物を投与された対象との関連における臨床的利益には、限定されないが、対象が経験する疾患の症状の期間及び／または頻度の減少、及び／または疾患に関連する表現型の減少、及び／または野生型転写産物、変異体転写産物、バリアント転写産物、もしくは過剰発現転写産物、及び／または標的遺伝子の転写産物のスプライスアイソフォームの減少、が含まれる。

【0155】

本明細書で使用される場合、「抗体」（Ａｂ）という用語は、特定の抗原に特異的に結合する、または免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子を指し、ポリクローナル、モノクローナル、遺伝子操作された、及び別様に修飾された形態の抗体を含み、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重－、三重－、及び四重－特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディ）、ならびに抗体の抗原結合断片、例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ、Ｆｖ、組換えＩｇＧ（ｒｌｇＧ）断片、及びｓｃＦｖ断片など、を含むがこれらに限定されない。さらに、別段の指示がない限り、「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、標的タンパク質に特異的に結合することができる無傷分子、ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片など）の両方を含むことを意味する。Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片は、無傷抗体のＦｃ断片を欠いており、動物の循環からより迅速に除去され、無傷抗体よりも非特異的組織結合が少ない場合がある（参照により本明細書に組み込まれる、Ｗａｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２４：３１６，１９８３を参照のこと）。

【0156】

本明細書で使用される「抗原結合断片」という用語は、標的抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって実行することができる。抗体断片は、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓｃＦｖ、ＳＭＩＰ、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、またはドメイン抗体であり得る。抗体の「抗原結合断片」という用語に包含される結合断片の例には、以下が含まれるが、これらに限定されない：（ｉ）Ｆａｂ断片、すなわちＶ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｌ、及びＣ_Ｈ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２断片、すなわちヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈドメイン及びＣ_Ｈ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶ_Ｌドメイン及びＶ_ＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含むｄＡｂ；（ｖｉ）Ｖ_ＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６，１９８９）；（ｖｉｉ）Ｖ_ＨドメインまたはＶ_ＬドメインからなるｄＡｂ；（ｖｉｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；ならびに（ｉｘ）任意選択で合成リンカーによって接合することができる２つ以上の単離されたＣＤＲの組み合わせ。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、すなわちＶ_Ｌ及びＶ_Ｈは別個の遺伝子によってコードされているが、これらは、組換え法を使用して、Ｖ_ＬとＶ_Ｈを、Ｖ_Ｌ領域とＶ_Ｈ領域が対になって一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖として作製することができるリンカーによって接合することができる（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６，１９８８及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３，１９８８を参照のこと）。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来の技術を使用して得ることができ、その断片は、無傷抗体と同じ様式で有用性についてスクリーニングすることができる。抗原結合断片は、組換えＤＮＡ技術、無傷の免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって、またはいくつかの実施形態では、当技術分野で公知の化学ペプチド合成手順によって、生成することができる。

【発明を実施するための形態】

【0157】

詳細な説明
本開示は、治療用オリゴヌクレオチド分子を、１つ以上の二価カチオン（例えば、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、Ｚｎ^２＋、もしくはそれらの組み合わせ）を含有する塩の形態で、対象の中枢神経系に投与するための組成物及び方法を提供する。治療用オリゴヌクレオチド分子は、ヌクレアーゼ酵素に対する耐性、毒性プロファイル、及び物理化学的特性（例えば、熱安定性）を改善するために、特異的パターンの化学修飾（例えば、２’リボース修飾もしくはヌクレオシド間結合修飾）を有し、既存のカチオン結合部位を飽和させる複数の二価カチオン（例えば、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、Ｚｎ^２＋、もしくはそれらの組み合わせ）を伴って、治療用オリゴヌクレオチドの毒性プロファイルをさらに改善することができる。加えて、本開示は、二分岐、三分岐、及び四分岐ｓｉＲＮＡ構造などの、分岐した短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）構造を特徴とする。

【0158】

治療用オリゴヌクレオチド分子の合成方法
本開示のｓｉＲＮＡ分子は、以下でさらに論じられるように、当技術分野で公知の標準的な方法、例えば、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．から市販されているような自動ＤＮＡ合成装置の使用によって合成することができる。

【0159】

ｓｉＲＮＡ剤は、液相有機合成または固相有機合成、またはその両方を使用して調製することができる。有機合成は、非天然ヌクレオチドまたは修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを容易に調製することができるという利点がある。本開示のｓｉＲＮＡ分子は、液相有機合成または固相有機合成、またはその両方を使用して調製することができる。

【0160】

さらに、本明細書に開示される任意のｓｉＲＮＡ剤について、連結ヌクレオシドを体系的に付加または除去して、より長いまたはより短い配列を生成することによって、さらなる最適化を達成できることが企図される。さらになお、そのような最適化された配列は、分子をさらに最適化する（例えば、血清安定性もしくは循環半減期の増加、熱安定性の増大、膜貫通送達の強化、及び／または特定の位置もしくは細胞型への標的化）ために、当技術分野で公知である及び／または本明細書で論じられるような、例えば、代替ヌクレオシド、代替糖部分、及び／または代替ヌクレオシド間結合を含む、本明細書に記載されるような、または当技術分野で公知であるような、修飾ヌクレオシド及び／または修飾ヌクレオシド間結合の導入によって調整することができる。

【0161】

本開示の治療用オリゴヌクレオチド分子（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｇＲＮＡ、またはＡＳＯ）の組成物は、１つ以上の二価カチオン（例えば、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、もしくはＺｎ^２＋、またはそれらの組み合わせ）によって飽和した複数のカチオン結合部位を含むように調製することができる。組成物は、例えば、二価カチオンの存在下で治療用オリゴヌクレオチド分子をハイブリダイズさせることによって調製することができる。あるいは、組成物は、二価カチオンなしで治療用オリゴヌクレオチド分子をハイブリダイズさせ、その後ハイブリダイゼーション後に二価カチオンを加えることによって調製することができる。２つ以上の二価カチオンの場合、二価カチオンは同時にまたは連続的に加えることができる。例えば、治療用オリゴヌクレオチド分子は、２つの二価カチオンの存在下でハイブリダイズさせることができる。あるいは、治療用オリゴヌクレオチド分子は、１つの二価カチオンの存在下でハイブリダイズすることができ、ハイブリダイゼーション後に第２の二価カチオンを加える。さらなる代替として、治療用オリゴヌクレオチド分子は、二価カチオンなしでハイブリダイズすることができ、その後、２つの二価カチオンを加える。

【0162】

二価カチオン
本開示の治療用オリゴヌクレオチド分子は、１つ以上の二価カチオン（例えば、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、もしくはＺｎ^２＋、またはそれらの組み合わせ）によって飽和した複数のカチオン結合部位（例えば、電子密度の高い部位）を含み得る。正電荷のため、二価カチオンは、典型的には、負に荷電した原子（例えば、単位または部分的な負電荷を担持するリン酸基またはホスホロチオエート基からのオキシアニオン）と反応性である。本開示は、治療用オリゴヌクレオチド分子上のカチオン結合部位の二価カチオンによる飽和によって、対象のＣＮＳに投与された場合に毒性が有意に低減するという新規な証拠を提供する。

【0163】

１つ以上の二価カチオンは、結晶格子の形態で測定した場合、約３０ピコメートル～約１５０ピコメートル（例えば、約３０ピコメートル～約１４０ピコメートル、約４０ピコメートル～約１３０ピコメートル、約５０ピコメートル～約１２０ピコメートル、約６０ピコメートル～約１１０ピコメートル、約６０ピコメートル～約１００ピコメートル、または約６０ピコメートル～約９０ピコメートル）のイオン半径を有することができる。Ｒ．Ｄ．Ｓｈａｎｎｏｎ，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ Ａ．３２：７５１－７６７，１９７６により開示された二価カチオンの計算された結晶半径は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0164】

治療用オリゴヌクレオチド分子の１つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度は、約１０％～約１００％（例えば、約２０％～約１００％、約３０％～約１００％、約４０％～約１００％、約５０％～約１００％、約６０％～約１００％、約７０％～約１００％、約８０％～約１００％、または約９０％～約１００％）の範囲であり得る。

【0165】

いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチド分子のアンチセンス鎖は、１０～３０ヌクレオチドの長さを有し得、合計１０～３０個の二価カチオンにイオン結合し得る。例えば、治療用オリゴヌクレオチド分子中のアンチセンス鎖ヌクレオチドの二価カチオンに対するモル比は、１：３～３：１（例えば、１：３、１．１：３、１．２：３、１．３：３、１．４：３、１．５：３、１．６：３、１．７：３、１．８：３、１．９：３、２：３、２．１：３、２．２：３、２．３：３、２．４：３、２．５：３、２．６：３、２．７：３、２．８：３、２．９：３、１：１、３：２．９、３：２．８、３：２．７、３：２．６、３：２．５、３：２．４、３：２．３、３：２．２、３：２．１、３：２、３：１．９、３：１．８、３：１．７、３：１．６、３：１．５、３：１．４、３：１．３、３：１．２、３：１．１、または３：１）の範囲であり得る。

【0166】

いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチド分子のセンス鎖は、１０～３０ヌクレオチドの長さを有し得、合計１０～３０個の二価カチオンにイオン結合し得る。例えば、治療用オリゴヌクレオチド分子中のセンス鎖ヌクレオチドの二価カチオンに対するモル比は、１：３～３：１（例えば、１：３、１．１：３、１．２：３、１．３：３、１．４：３、１．５：３、１．６：３、１．７：３、１．８：３、１．９：３、２：３、２．１：３、２．２：３、２．３：３、２．４：３、２．５：３、２．６：３、２．７：３、２．８：３、２．９：３、１：１、３：２．９、３：２．８、３：２．７、３：２．６、３：２．５、３：２．４、３：２．３、３：２．２、３：２．１、３：２、３：１．９、３：１．８、３：１．７、３：１．６、３：１．５、３：１．４、３：１．３、３：１．２、３：１．１、または３：１）の範囲であり得る。

【0167】

本開示の治療用オリゴヌクレオチド分子は、特定のモル比で１つ以上の二価カチオンと組み合わせることができる。治療用オリゴヌクレオチド分子の二価カチオンに対する特定のモル比は、二価カチオンによって達成される毒性の利益に関連し得る。例えば、治療用オリゴヌクレオチド分子の二価カチオンに対するモル比は、１：１０～１：５０（例えば、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９、１：２０、１：２１、１：２２、１：２３、１：２４、１：２５、１：２６、１：２７、１：２８、１：２９、１：３０、１：３１、１：３２、１：３３、１：３４、１：３５、１：３６、１：３７、１：３８、１：３９、１：４０、１：４１、１：４２、１：４３、１：４４、１：４５、１：４６、１：４７、１：４８、１：４９、または１：５０）の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチド分子の二価カチオンに対するモル比は、１：１８～１：３８（例えば、１：１８、１：１９、１：２０、１：２１、１：２２、１：２３、１：２４、１：２５、１：２６、１：２７、１：２８、１：２９、１：３０、１：３１、１：３２、１：３３、１：３４、１：３５、１：３６、１：３７、または１：３８）の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチド分子の二価カチオンに対するモル比は、１：２０～１：２５（（例えば、１：２０、１：２１、１：２２、１：２３、１：２４、または１：２５）の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドの二価カチオンに対するモル比は、１：２０であり得る。いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドの二価カチオンに対するモル比は、１：２５であり得る。

【0168】

本開示の治療用オリゴヌクレオチドは、特定の濃度または濃度範囲で存在する１つ以上の二価カチオンと組み合わせることができる。二価カチオンの濃度は、二価カチオンによって達成される毒性の利益に関連し得る。例えば、二価カチオンの濃度は、２０ｍＭ～１５０ｍＭ（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、または１５０ｍＭ）であり得る。いくつかの実施形態では、二価カチオンの濃度は、２０ｍＭ～１００ｍＭ（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００ｍＭ）である。いくつかの実施形態では、二価カチオンの濃度は、３５ｍＭ～７５ｍＭ（例えば、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５ｍＭ）である。いくつかの実施形態では、二価カチオンの濃度は、４０ｍＭ～７０ｍＭ（例えば、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、または７０ｍＭ）であり得る。

【0169】

治療用オリゴヌクレオチドは、負電荷を有する１つ以上の原子を含むことができ、二価カチオンは正電荷を含むことができる。いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチド及び二価カチオンは、組成物内に負電荷の正電荷に対する特定の比が存在するような量で存在する。負電荷対正電荷比を決定する方法は、当技術分野において公知である（例えば、Ｆｕｒｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．，３７：２６８５－２６９１，２０１６、その開示は参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、負電荷の正電荷に対する比は０．７５～７．５（例えば、０．７６、０．７７、０．７８、０．７９、０．８０、０．８１、０．８２、０．８３、０．８４、０．８５、０．８６、０．８７、０．８８、０．８９、０．９０、０．９１、０．９２、０．９３、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、または７．５）である。いくつかの実施形態では、負電荷の正電荷に対する比は１．０～２．０（例えば、１．０～１．９、１．０～１．８、１．０～１．７、１．０～１．６、１．０～１．５、１．０～１．４、１．０～１．３、１．０～１．２、１．０～１．１、１．１～２．０、１．２～２．０、１．３～２．０、１．４～２．０、１．５～２．０、１．６～２．０、１．７～２．０、１．８～２．０、または１．９～２．０）である。いくつかの実施形態では、負電荷の正電荷に対する比は０．７５～６．５（例えば、０．７５～５．５、０．７５～４．５、０．７５～３．５、０．７５～２．５、０．７５～１．５、または０．７５～１）である。いくつかの実施形態では、負電荷の正電荷に対する比は１～７．５（例えば、１．５～７．５、２．５～７．５、３．５～７．５、４．５～７．５、５．５～７．５、または６．５～７．５）である。

【0170】

治療用オリゴヌクレオチド
本開示の治療用オリゴヌクレオチドは、一本鎖（ｓｓ）または二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ構造の形態であってもよい。本開示の分野において、前記ＲＮＡ構造は、ｓｉＲＮＡ、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ＣＲＩＳＰＲガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、またはオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を指すことができる。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、二分岐、三分岐、または四分岐分子であり得る。本開示の治療用オリゴヌクレオチドは、１つ以上のホスホジエステルヌクレオシド間結合及び／またはその類似体、例としてホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含有することができ、ここで、オキシアニオン部分は、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、またはＺｎ^２＋などの２価の金属カチオンとのイオン結合によって静電的に中和されている。

【0171】

ｓｉＲＮＡ構造
本開示のｓｉＲＮＡ分子は、一本鎖（ｓｓ）または二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ構造の形態であってもよい。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、二分岐、三分岐、または四分岐分子であり得る。さらに、本開示のｓｉＲＮＡ分子は、１つ以上のホスホジエステルヌクレオシド間結合及び／またはその類似体、例としてホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含有することができる。本開示のｓｉＲＮＡ分子は、２’糖修飾を有する化学修飾ヌクレオシドをさらに含有し得る。

【0172】

最も単純なｓｉＲＮＡは、ｓｓ－構造またはｄｓ－構造を含むリボ核酸で構成され、第１の鎖（すなわち、アンチセンス鎖）によって形成され、ｄｓ－ｓｉＲＮＡの場合は第２の鎖（すなわち、センス鎖）によって形成される。第１の鎖は、標的核酸に対して少なくとも部分的に相補的な一連の連続したヌクレオチドを含む。第２の鎖はまた、連続したヌクレオチドの伸長を含み、第２の伸長は、標的核酸に少なくとも部分的に同一である。第１の鎖と前述の第２の鎖とは、互いにハイブリダイズして二本鎖構造を形成し得る。ハイブリダイゼーションは、典型的には、ワトソン・クリック塩基対形成によって生じる。

【0173】

第１及び第２の鎖の配列に応じて、ハイブリダイゼーションまたは塩基対合は、必ずしも完全または完全ではなく、これは、第１及び第２の鎖が、ミスマッチのために１００％に塩基対合していないことを意味する。１つ以上のミスマッチは、必ずしもｓｉＲＮＡのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）活性に影響を与えることなく、二本鎖内にも存在し得る。

【0174】

第１の鎖は、標的核酸に本質的に相補的な連続したヌクレオチドの伸長を含む。典型的には、標的核酸配列は、干渉リボ核酸の作用様式に従って、ｓｓ－ＲＮＡ、好ましくは、ｍＲＮＡである。そのようなハイブリダイゼーションは、ワトソン・クリック塩基対合を通して最も可能性が高いが、必ずしもそれに限定されない。第１の鎖が、標的核酸配列に対する連続したヌクレオチドの相補的な伸長を有する程度は、８０％～１００％、例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の相補性であり得る。

【0175】

本明細書に記載のｓｉＲＮＡは、核酸塩基、リン酸骨格、リボースコア、５’及び３’末端、ならびに分岐に対する修飾を採用してもよく、ここで、ｓｉＲＮＡの複数の鎖は、共有結合し得る。

【0176】

治療用オリゴヌクレオチドの長さ
本発明の範囲内では、当技術分野で公知であり、これまでに未知であった任意の長さを本発明のために採用できる。本明細書に記載される場合、本開示の治療用オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の潜在的な長さは、１０～３０ヌクレオチドの間（例えば、１０ヌクレオチド、１１ヌクレオチド、１２ヌクレオチド、１３ヌクレオチド、１４ヌクレオチド、１５ヌクレオチド、１６ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、１８ヌクレオチド、１９ヌクレオチド、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、２３ヌクレオチド、２４ヌクレオチド、２５ヌクレオチド、２６ヌクレオチド、２７ヌクレオチド、２８ヌクレオチド、２９ヌクレオチド、もしくは３０ヌクレオチド）、１５～２５ヌクレオチドの間（例えば、１５ヌクレオチド、１６ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、１８ヌクレオチド、１９ヌクレオチド、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、２３ヌクレオチド、２４ヌクレオチド、もしくは２５ヌクレオチド）、または１８～２３ヌクレオチドの間（例えば、１８ヌクレオチド、１９ヌクレオチド、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、もしくは２３ヌクレオチド）である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２１ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２４ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２７ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２８ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２９ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチドである。

【0177】

いくつかの実施形態では、本開示の治療用オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、１２～３０ヌクレオチドの間（例えば、１２ヌクレオチド、１３ヌクレオチド、１４ヌクレオチド、１５ヌクレオチド、１６ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、１８ヌクレオチド、１９ヌクレオチド、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、２３ヌクレオチド、２４ヌクレオチド、２５ヌクレオチド、２６ヌクレオチド、２７ヌクレオチド、２８ヌクレオチド、２９ヌクレオチド、もしくは３０ヌクレオチド）、または１４～２３ヌクレオチドの間（例えば、１４ヌクレオチド、１５ヌクレオチド、１６ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、１８ヌクレオチド、１９ヌクレオチド、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、もしくは２３ヌクレオチド）である。いくつかの実施形態では、センス鎖は、１５ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、１６ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、１７ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、１８ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、１９ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、２０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、２１ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、２２ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、２３ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、２４ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、２５ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、２６ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、２７ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、２８ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、２９ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、３０ヌクレオチドである。

【0178】

２’糖修飾
本開示は、２’糖修飾を有する少なくとも１つ（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、またはそれ以上）のヌクレオシドを含むｓｓ－及びｄｓ－ＲＮＡ干渉分子組成物（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｇＲＮＡまたはＡＳＯ）を含む。可能な２’－修飾は、ＯＨ；Ｆ；Ｏ－、Ｓ－、もしくはＮ－アルキル；Ｏ－、Ｓ－、もしくはＮ－アルケニル；Ｏ－、Ｓ－、もしくはＮ－アルキニル；またはＯ－アルキル－Ｏ－アルキルの全ての可能な配向を含み、アルキル、アルケニル、及びアルキニルは、置換または非置換のＣ１～Ｃ１０アルキルまたはＣ２～Ｃ１０アルケニル及びアルキニルであり得る。いくつかの実施形態では、修飾は、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）修飾を含む。いくつかの実施形態は、Ｏ［（ＣＨ_２）_ｎＯ］_ｍＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＨ_２、及びＯ（ＣＨ_２）_ｎＯＮ［（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３］_２を使用し、ｎ及びｍは、１～約１０である。他の潜在的な糖置換基としては、Ｃ１～Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル、アラルキル、Ｏ－アルカリルまたはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ_３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＳＯＣＨ_３、ＳＯ_２ＣＨ_３、ＯＮＯ_２、ＮＯ_２、Ｎ_３、ＮＨ_２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、オリゴヌクレオチドの薬物動力学的特性を改善するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動力学的特性を改善するための基、及び類似する特性を有する他の置換基が挙げられる。いくつかの実施形態では、修飾は、２’－メトキシエトキシ（２′－Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）または２’－ＭＯＥとしても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、修飾は、２’－ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわち、２’－ＤＭＡＯＥとしても知られるＯ（ＣＨ_２）_２ＯＮ（ＣＨ_３）_２基、及び２’－ジメチルアミノエトキシエトキシ（当技術分野では２’－Ｏ－ジメチルアミノ－エトキシ－エチルまたは２’－ＤＭＡＥＯＥとしても知られる）、すなわち、２′－Ｏ－ＣＨ_２ＯＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２を含む。他の潜在的な糖置換基としては、例えば、アミノプロポキシ（－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２）、アリル（－ＣＨ_２－ＣＨ＝ＣＨ_２）、－Ｏ－アリル（－Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ＝ＣＨ_２）、及びフルオロ（Ｆ）が挙げられる。２’－糖置換基は、アラビノ（上）位またはリボ（下）位にあり得る。いくつかの実施形態では、２’－アラビノ修飾は、２’－Ｆである。治療用オリゴヌクレオチドの他の位置で、特に、３’末端ヌクレオシドまたは２’－５’結合オリゴヌクレオチドにおける糖の３’位と、５’末端ヌクレオチドの５’位で同様の修飾が行われてもよい。オリゴヌクレオチドはまた、ペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル部分等の糖模倣体を有してもよい。

【0179】

核酸塩基修飾
治療用オリゴヌクレオチドはまた、核酸塩基（当技術分野では単に「塩基」または「複素環式塩基部分」と称されることが多い）を含むヌクレオシドまたは他の代用もしくは模倣モノマーサブユニットを含み得る。核酸塩基は、広範囲に修飾または置換された別の部分であり、そのような修飾及びまたは置換された核酸塩基は、本開示に従うことができる。本明細書で使用される場合、「非修飾の」または「天然の」核酸塩基は、プリン塩基のアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を含む本明細書で複素環式塩基部分とも呼ばれる修飾核酸塩基には、他の合成及び天然核酸塩基、例えば、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、６－メチル、ならびにアデニン及びグアニンの他のアルキル誘導体、２－プロピル、ならびにアデニン及びグアニンの他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン及び２－チオシトシン、５－ハロウラシル及びシトシン、５－プロピニル（－Ｃ＝Ｃ－ＣＨ３）ウラシル及びシトシン、ならびにピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６－アゾウラシル、シトシン及びチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシル、及び他の８－置換アデニン及びグアニン、５－ハロ、特に、５－ブロモ、５－トリフルオロメチル、及び他の５－置換ウラシル及びシトシン、７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、２－Ｆ－アデニン、２－アミノ－アデニン、８－アザグアニン及び８－アザアデニン、７－デアザグアニン及び７－デアザグアニン及び３－デアザグアニン及び３－デアザグアニン、が含まれる。核酸塩基には、プリンまたはピリミジン塩基が他の複素環、例えば、７－デアザ－アデニン、７－デアザグアノシン、２－アミノピリジン、及び２－ピリドンで置き換えられているものも含まれ得る。さらなる核酸塩基としては、ＵＳ３，６８７，８０８に開示されているもの、Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．，ｅｄ．Ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９０，ｐｐ．８５８－８５９に開示されているもの；Ｅｎｇｌｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ ３０：６１３，１９９１に開示されているもの；及びＳａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ １６，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．ｅｄ．，１９９３，ｐｐ．２８９－３０２に開示されているものが挙げられる。本開示の治療用オリゴヌクレオチドは、１つ以上の複素環式塩基部分の代わりに多環式複素環式化合物を含むこともできる。多くの三環式複素環式化合物が以前に報告されている。これらの化合物は、修飾鎖の標的鎖への結合特性を増加させるためにアンチセンス用途で定型的に使用される。

【0180】

第２の鎖におけるグアノシンとの３つの水素結合を行う代表的なシトシン類似体には、１，３－ジアザフェノキサジン－２－オン（Ｋｕｒｃｈａｖｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１６：１８３７－４６，１９９７）、１，３－ジアザフェノチアジン－２－オン（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１７：３８７３－４，１９９５）、及び６，７，８，９－テトラフルオロ－１，３－ジアザフェノキサジン－２－オン（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，３９：８３８５－８，１９９８）が含まれる。オリゴヌクレオチドに組み込まれたこれらの塩基修飾は、相補的グアニンとハイブリダイゼーションすることが示され、後者はまた、延長されたスタッキング相互作用によってアデニンとハイブリダイゼーションし、らせんの熱安定性を向上させることが示された（ＵＳ１０／１５５，９２０及びＵＳ１０／０１３，２９５も参照のこと、この両方は参照によりその全てが本明細書に組み込まれる）。さらなるらせん安定化特性は、シトシン類似体／置換体が、剛性の１，３－ジアザフェノキサジン－２－オン足場に結合したアミノエトキシ部分を有する場合に観察されている（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２０：８５３１－２，１９９８）。

【0181】

ヌクレオシド間結合修飾
本開示の設計における別の変数は、治療用オリゴヌクレオチドのリン酸骨格を構成するヌクレオシド間結合である。天然ＲＮＡリン酸骨格を本明細書で採用してもよいが、その誘導体を使用して、治療用オリゴヌクレオチドの望ましい特性を向上させてもよい。限定するものではないが、本開示で特に重要なのは、治療用オリゴヌクレオチドの一部または全体を加水分解から保護することである。加水分解速度を低下させる修飾の一例は、ホスホロチオエートである。骨格の任意の部分または全体は、リン酸置換（例えば、ホスホロチオエート、ホスホジエステルなど）を含有し得る。例えば、ヌクレオシド間結合は、０～１００％の間のホスホロチオエート、例えば、０～１００％、１０～１００％、２０～１００％、３０～１００％、４０～１００％、５０～１００％、６０～１００％、７０～１００％、８０～１００％、９０～１００％、０～９０％、０～８０％、０～７０％、０～６０％、０～５０％、０～４０％、０～３０％、０～２０％、０～１０％、１０～９０％、２０～８０％、３０～７０％、４０％～６０％、１０～４０％、２０～５０％、３０～６０％、４０～７０％、５０～８０％、または６０～９０％の間のホスホロチオエート結合であり得る。同様に、ヌクレオシド間結合は、０～１００％の間のホスホジエステル結合、例えば、０～１００％、１０～１００％、２０～１００％、３０～１００％、４０～１００％、５０～１００％、６０～１００％、７０～１００％、８０～１００％、９０～１００％、０～９０％、０～８０％、０～７０％、０～６０％、０～５０％、０～４０％、０～３０％、０～２０％、０～１０％、１０～９０％、２０～８０％、３０～７０％、４０％～６０％、１０～４０％、２０～５０％、３０～６０％、４０～７０％、５０～８０％、または６０～９０％の間のホスホジエステル結合であり得る。

【0182】

本発明で有用ないくつかの潜在的な治療用オリゴヌクレオチドの具体的な例としては、修飾された、例えば、天然に存在しないヌクレオシド間結合を含有するオリゴヌクレオチドが挙げられる。本明細書で定義されるように、修飾ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドは、リン原子を保持するヌクレオシド間結合及びリン原子を有しないヌクレオシド間結合を含む。本明細書の目的のために、また当技術分野で時々言及されるように、ヌクレオシド間骨格にリン原子を有していない修飾オリゴヌクレオチドもオリゴヌクレオシドと考えることができる。好ましいリン含有修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。いくつかの実施形態では、その中にリン原子を含む修飾オリゴヌクレオチド骨格は、例えば、ホスホロチオエート、ホスホジオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチル及び３’－アルキレンホスホネートを含む他のアルキルホスホネート、５’－アルキレンホスホネート、ホスフィネート、３’－アミノホスホラミデート及びアミノアルキルホスホラミデートを含むホスホラミデート、チノホスホラミデート、チノアルキルホスホネート、チノアルキルホスホトリエステル、セレノホスフェート、通常の３’－５’結合を有するボラノホスフェート、これらの２’－５’結合類似体、ならびに１つ以上のヌクレオチド間結合が３’－３’、５’－５’、または２’－２’結合である反転した極性を有するもの、を含む。リン含有結合の調製を記載する例示的な米国特許としては、限定されるものではないが、米国特許第３，６８７，８０８号；同第４，４６９，８６３号；同第４，４７６，３０１号；同第５，０２３，２４３号；同第５，１７７，１９５号；同第５，１８８，８９７号；同第５，２６４，４２３号；同第５，２７６，０１９号；同第５，２７８，３０２号；同第５，２８６，７１７号；同第５，３２１，１３１号；同第５，３９９，６７６号；同第５，４０５，９３９号；同第５，４５３，４９６号；同第５，４５５，２３３号；同第５，４６６，６７７号；同第５，４７６，９２５号；同第５，５１９，１２６号；同第５，５３６，８２１号；同第５，５４１，３１６号；同第５，５５０，１１１号；同第５，５６３，２５３号；同第５，５７１，７９９号；同第５，５８７，３６１号；同第５，６２５，０５０号；同第６，０２８，１８８号；同第６，１２４，４４５号；同第６，１６０，１０９号；同第６，１６９，１７０号；同第６，１７２，２０９号；同第６，２３９，２６５号；同第６，２７７，６０３号；同第６，３２６，１９９号；同第６，３４６，６１４号；同第６，４４４，４２３号；同第６，５３１，５９０号；同第６，５３４，６３９号；同第６，６０８，０３５号；同第６，６８３，１６７号；同第６，８５８，７１５号；同第６，８６７，２９４号；同第６，８７８，８０５号；同第７，０１５，３１５号；同第７，０４１，８１６号；同第７，２７３，９３３号；同第７，３２１，０２９号；及び米国特許第ＲＥ３９４６４号、が挙げられ、それらのそれぞれの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0183】

いくつかの実施形態では、その中にリン原子を含まない修飾オリゴヌクレオチド骨格は、短鎖アルキルまたはシクロアルキルヌクレオシド間結合、混合ヘテロ原子及びアルキル、もしくはシクロアルキルヌクレオシド間結合、または１つ以上の短鎖ヘテロ原子または複素環式ヌクレオシド間結合によって形成される骨格を有する。これらには、モルホリノ結合（ヌクレオシドの糖部分から部分的に形成される）；シロキサン骨格；スルフィド、スルホキシド及びスルホン骨格；ホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格；リボアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファメート骨格；メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ骨格；スルホンネート及びスルホンアミド骨格；アミド骨格；ならびにＮ、Ｏ、Ｓ及びＣＨ_２成分部分を混合した他の骨格を有するものが含まれる。非リン骨格の調製を教示する米国特許の非限定的な例としては、限定されるものではないが、米国特許第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５，４４４号、同第５，２１４，１３４号、同第５，２１６，１４１号、同第５，２３５，０３３号、同第５，２６４，５６２号、同第５，２６４，５６４号、同第５，４０５，９３８号、同第５，４３４，２５７号、同第５，４６６，６７７号、同第５，４７０，９６７号、同第５，４８９，６７７号、同第５，５４１，３０７号、同第５，５６１，２２５号、同第５，５９６，０８６号、同第５，６０２，２４０号、同第５，６０８，０４６号、同第５，６１０，２８９号、同第５，６１８，７０４号、同第５，６２３，０７０号、同第５，６６３，３１２号、同第５，６３３，３６０号、同第５，６７７，４３７号、及び同第５，６７７，４３９号、が挙げられ、それらのそれぞれの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0184】

ｓｉＲＮＡ分子の修飾パターン
本開示の治療用オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ分子）は、このセクションに記載されるものなど、種々のパターンの化学修飾残基を有し得る。本開示で使用されるヌクレオシドは、核酸塩基及び糖における一連の修飾を許容する。一本鎖または二本鎖の完全な治療用オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ分子）は、それぞれがＲＮＡ鎖に１回以上現れる、１、２、３、４、５、またはそれ以上の異なるヌクレオシドを有してもよい。ヌクレオシドは、反復パターンで現れてもよく（例えば、２つの修飾ヌクレオシドの間で交互に現れてもよく）、または第２のタイプのヌクレオシドの置換を有する１つのタイプのヌクレオシドの鎖であってもよい。同様に、ヌクレオシド間結合は、反復パターンで一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡに現れる（例えば、２つのヌクレオシド間結合の間で交互になる）１つ以上のタイプであってもよく、または第２のタイプのヌクレオシド間結合の置換を有する１つのタイプのヌクレオシド間結合の鎖であってもよい。本開示の治療用オリゴヌクレオチドは、様々な置換パターンを許容することができるが、以下に、いくつかの好ましいパターンを例示し、ここで、Ａ及びＢは２つのタイプのヌクレオシドを表し、Ｔ及びＰは２つのタイプのヌクレオシド間結合を表す。

【0185】

パターン１：
Ａ－Ｔ－Ｂ－Ｔ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ｂ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ
Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ
パターン２：
Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ｂ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ
Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ
パターン３：
Ａ－Ｔ－Ｂ－Ｔ－Ａ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ｂ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ
Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ
パターン４：
Ａ－Ｔ－Ｂ－Ｔ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ｂ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ
Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ
パターン５：
Ａ－Ｔ－Ｂ－Ｔ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ｂ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ｂ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ
Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ｂ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｐ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｔ

【0186】

いくつかの実施形態では、Ｔはホスホロチオエートを表し、Ｐはホスホジエステルを表す。

【0187】

いくつかの実施形態では、本開示のｓｉＲＮＡ分子は、その開示内容全体が本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／１６１３８８号及び同第ＷＯ２０２０／０４１７６９号に記載されているｓｉＲＮＡヌクレオチド修飾パターン及び／またはヌクレオシド間結合修飾パターンのいずれか１つを特徴とする。

【0188】

以下のセクションでは、本開示のｓｉＲＮＡ分子を組み込むことができる例示的な足場のさらなるセットを提供する。

【0189】

本開示のいくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、式Ｉによって表される領域を含むアンチセンス鎖を含有してもよく、式Ｉは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ’－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式Ｉ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；ｊは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）であり；ｋは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）である。いくつかの実施形態では、ｊは、４である。いくつかの実施形態では、ｋは、４である。いくつかの実施形態では、ｊは、４であり、ｋは、４である。アンチセンスは、標的核酸配列に対して相補的（例えば、完全または部分的に相補的）である。

【0190】

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、式Ａ１で表される構造を含み、式Ａ１は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ１；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0191】

本開示のいくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、式ＩＩによって表される領域を含むアンチセンス鎖を含有してもよく、式ＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；ｊは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）であり；ｋは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）である。いくつかの実施形態では、ｊは、４である。いくつかの実施形態では、ｋは、４である。いくつかの実施形態では、ｊは、４であり、ｋは、４である。アンチセンスは、標的核酸配列に対して相補的（例えば、完全または部分的に相補的）である。

【0192】

本開示のいくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、式Ａ２で表される構造を含み、式Ａ２は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ２；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0193】

本開示のいくつかの実施形態では、センス鎖は、式ＩＩＩで表される構造を含み、式ＩＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ｅ－（Ａ’）_ｍ－Ｆ
式ＩＩＩ；
式中、Ｅは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；Ｆは、式（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｃ、（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｃ、（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ、または（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｄで表され；Ａ’、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式Ｉで定義されたとおりであり；ｍは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）である。いくつかの実施形態では、ｍは４である。センス鎖は、アンチセンス鎖に対して相補的（例えば、完全または部分的に相補的）である。

【0194】

本開示のいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ１で表される構造を含み、式Ｓ１は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ１；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0195】

本開示のいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ２で表される構造を含み、式Ｓ２は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ
式Ｓ２；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0196】

本開示のいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ３で表される構造を含み、式Ｓ３は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ
式Ｓ３；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0197】

本開示のいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ４で表される構造を含み、式Ｓ４は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ
式Ｓ４；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0198】

本開示のいくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、式ＩＶによって表される領域を含むアンチセンス鎖を含有してもよく、式ＩＶは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｂ－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＶ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；Ｂは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；ｊは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）であり；ｋは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）である。いくつかの実施形態では、ｊは、６である。いくつかの実施形態では、ｋは、４である。いくつかの実施形態では、ｊは、６であり、ｋは、４である。アンチセンス鎖は、標的核酸に対して相補的（例えば、完全または部分的に相補的）である。

【0199】

本開示のいくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、式Ａ３で表される構造を含み、式Ａ３は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ３；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0200】

本開示のいくつかの実施形態では、本開示のｓｉＲＮＡは、式Ｖによって表されるセンス鎖を有してもよく、式Ｖは、５’－３’方向に以下であり、
Ｅ－（Ａ’）_ｍ－Ｃ－Ｐ^２－Ｆ
式Ｖ；
式中、Ｅは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；Ｆは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｃ、Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｃ、Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ、またはＤ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｄで表され；Ａ’、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＩＶで定義されたとおりであり；ｍは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）である。いくつかの実施形態では、ｍは５である。センス鎖は、アンチセンス鎖に対して相補的（例えば、完全または部分的に相補的）である。

【0201】

本開示のいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ５で表される構造を含み、式Ｓ５は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ５；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0202】

本開示のいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ６で表される構造を含み、式Ｓ６は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ
式Ｓ６；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0203】

本開示のいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ７で表される構造を含み、式Ｓ７は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ
式Ｓ７；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0204】

本開示のいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ８で表される構造を含み、式Ｓ８は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ
式Ｓ８；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0205】

本開示のいくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、式ＶＩによって表される領域を含むアンチセンス鎖を含有してもよく、式ＶＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ_ｊ－Ｅ－Ｂ_ｋ－Ｅ－Ｆ－Ｇ_ｌ－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ’
式ＶＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；各Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２で表され；各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；各Ｅは、式Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２で表され；Ｆは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１で表され；各Ｇは、式Ｃ－Ｐ^１で表され；各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；ｊは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）であり；ｋは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）であり；ｌは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）である。いくつかの実施形態では、ｊは、３である。いくつかの実施形態では、ｋは、６である。いくつかの実施形態では、ｌは、２である。いくつかの実施形態では、ｊは、３であり、ｋは、６であり、ｌは、２である。センス鎖は、標的核酸に対して相補的（例えば、完全または部分的に相補的）である。

【0206】

本開示のいくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、式Ａ４で表される構造を含み、式Ａ４は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ４；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0207】

本開示のいくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、式ＶＩＩによって表される領域を含むセンス鎖を含有してもよく、式ＶＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ｈ－Ｂ_ｍ－Ｉ_ｎ－Ａ’－Ｂ_ｏ－Ｈ－Ｃ
式ＶＩＩ；
式中、各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；各Ｈは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；各Ｉは、式（Ｄ－Ｐ^２）で表され；Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＶＩで定義されたとおりであり；ｍは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）であり；ｎは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）であり；ｏは、１～７の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、または７）である。いくつかの実施形態では、ｍは３である。いくつかの実施形態では、ｎは３である。いくつかの実施形態では、ｏは３である。いくつかの実施形態では、ｍは３であり、ｎは３であり、ｏは３である。センス鎖は、アンチセンス鎖に対して相補的（例えば、完全または部分的に相補的）である。

【0208】

本開示のいくつかの実施形態では、センス鎖は、式Ｓ９で表される構造を含み、式Ｓ９は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ９；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。

【0209】

本開示のいくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、式ＶＩＩＩによって表される領域を含むアンチセンス鎖を含有してもよく：
Ｚ－（（Ａ－Ｐ－）_ｎ（Ｂ－Ｐ－）_ｍ）_ｑ；
式ＶＩＩＩ
式中、Ｚは、５’リン安定化部分であり；各Ａは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；各Ｂは、２’－フルオロ－リボヌクレオシドであり；各Ｐは、独立して、ホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合から選択されるヌクレオシド間結合であり；ｎは、１～５の整数（例えば、１、２、３、４、または５）であり；ｍは、１～５の整数（例えば、１、２、３、４、または５）であり；ｑは１～３０の間の整数（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０）である。

【0210】

５’リン安定化部分
本開示の治療用オリゴヌクレオチドを分解からさらに保護するために、５’－リン安定化部分を採用することができる。５’－リン安定化部分は、５’－ホスフェートを置き換えて、ホスフェートの加水分解を防止する。５’－ホスフェートの加水分解は、遺伝子サイレンシングの必要なステップであるＲＩＳＣへの結合を防止する。ＲＩＳＣへの結合を妨げないホスフェートの任意の置換が本開示において企図される。いくつかの実施形態では、５’－ホスフェートの置換は、インビボの加水分解に対しても安定である。各干渉ＲＮＡ鎖は、独立して、任意選択で、任意の好適な５’－リン安定化部分を採用してもよい。

【化14】

【0211】

いくつかの例示的なエンドキャップを、式ＩＸ～ＸＶＩに実証する。式ＩＸ～ＸＶＩ中のＮｕｃは、本明細書に記載の核酸塩基または核酸塩基誘導体または置換体を表す。式ＩＸ～ＸＶＩ中のＸは、本明細書に記載の２’－修飾を表す。いくつかの実施形態は、式ＸＩＶのようなヒドロキシ、式ＸＶのようなホスフェート、式ＸＶＩ及びＸＩＸのようなビニルホスホネート、式ＸＶＩＩ、ＸＩＸ、及びＸＸＩのような５’－メチル置換ホスフェート、または式ＸＸのようなメチレンホスホネートを採用する。式ＸＶＩに示すように、５’－リン安定化部分としてのビニル５’－ビニルホスホネート。

【0212】

疎水性部分
本開示は、１つ以上の疎水性部分が結合した治療用オリゴヌクレオチドをさらに提供する。疎水性部分は、本開示の治療用オリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端に共有結合していてもよい。本開示の治療用オリゴヌクレオチドとともに使用するのに好適な疎水性部分の非限定的な例としては、コレステロール、ビタミンＤ、トコフェロール、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ドコヘキサエン酸、ドコサン酸、ＰＣ－ドコサン酸、エイコサペンタエン酸、リトコール酸、または前述の疎水性部分とＰＣとの任意の組み合わせを挙げてもよい。

【0213】

干渉ＲＮＡ分岐
本開示の治療用オリゴヌクレオチドは、分岐していてもよい。例えば、本開示のｓｉＲＮＡ分子は、本明細書に記載されるような、いくつかの分岐パターンのうちの１つを有し得る。

【0214】

本開示によれば、本明細書に開示されるｓｉＲＮＡ分子は、分岐ｓｉＲＮＡ分子であってもよい。ｓｉＲＮＡ分子は、分岐していなくてもよく、またはリンカーを介して接続された二分岐、三分岐、または四分岐であってもよい。各主な分岐は、２、３、４、５、６、７、または８個の別々のＲＮＡ一本鎖または二本鎖を可能にするように、さらに分岐されてよい。リンカー上の分岐点は、同じ原子に由来してもよく、またはリンカーに沿って別々の原子に由来してもよい。いくつかの例示的な実施形態を表１に列挙する。

【表1】

【0215】

いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、分岐ｓｉＲＮＡ分子である。いくつかの実施形態では、分岐ｓｉＲＮＡ分子は、二分岐、三分岐、または四分岐である。いくつかの実施形態では、二分岐ｓｉＲＮＡ分子は、式Ｉ～ＩＩＩのいずれか１つで表され、式中、各ＲＮＡは、独立してｓｉＲＮＡ分子であり、Ｌは、リンカーであり、各Ｘは、独立して分岐点部分（例えば、ホスホロアミダイト、トシル化ソルケタール、１，３－ジアミノプロパノール、ペンタエリスリトール、またはＵＳ１０，４７８，５０３に記載されている分岐点部分のいずれか１つ）を表す。

【0216】

いくつかの実施形態では、三分岐ｓｉＲＮＡ分子は、式ＩＶ～ＶＩＩのいずれか１つで表され、式中、各ＲＮＡは独立してｓｉＲＮＡ分子であり、Ｌは、リンカーであり、各Ｘは、独立して分岐点部分を表す。

【0217】

いくつかの実施形態では、四分岐ｓｉＲＮＡ分子は、式ＶＩＩＩ～ＸＩＩのいずれか１つで表され、式中、各ＲＮＡは独立してｓｉＲＮＡ分子であり、Ｌは、リンカーであり、各Ｘは、独立して分岐点部分を表す。

【0218】

リンカー
本明細書に記載のｓｉＲＮＡの複数の鎖は、リンカーによって共有結合され得る。この分岐の効果により、とりわけ細胞透過性が改善され、ＣＮＳ内の細胞（例えば、ニューロンまたはグリア細胞）へのより良好なアクセスが可能になる。本発明のｓｉＲＮＡと不適合ではない任意のリンカー部分が採用され得る。リンカーとしては、２～１０のサブユニット（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のサブユニット）のエチレングリコール鎖、アルキル鎖、炭水化物鎖、ブロックコポリマー、ペプチド、ＲＮＡ、ＤＮＡ、及び他のものが挙げられる。いくつかの実施形態では、リンカーの炭素原子または酸素原子は任意に窒素原子で置換され、ヒドロキシル置換基を有するか、またはオキソ置換基を有する。いくつかの実施形態では、リンカーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーである。開示される組成物及び方法に使用するのに好適なＰＥＧリンカーとしては、直鎖または非直鎖ＰＥＧリンカーが挙げられる。非直鎖ＰＥＧリンカーの例としては、分岐ＰＥＧ、直鎖フォークＰＥＧ、または分岐フォークＰＥＧが挙げられる。

【0219】

種々の重量のＰＥＧリンカーを、開示された組成物及び方法に使用してもよい。例えば、ＰＥＧリンカーは、５～５００ダルトンの間の重量を有し得る。いくつかの実施形態では、５００～１，０００ダルトンの間の重量を有するＰＥＧリンカーが使用され得る。いくつかの実施形態では、１，０００～１０，０００ダルトンの間の重量を有するＰＥＧリンカーが使用され得る。いくつかの実施形態では、２００～２０，０００ダルトンの間の重量を有するＰＥＧリンカーが使用され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、ｓｉＲＮＡのセンス鎖に共有結合している。いくつかの実施形態では、リンカーは、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖に共有結合している。いくつかの実施形態では、ＰＥＧリンカーは、トリエチレングリコール（ＴｒＥＧ）リンカーである。いくつかの実施形態では、ＰＥＧリンカーは、テトラエチレンリンカー（ＴＥＧ）である。

【0220】

いくつかの実施形態では、リンカーはアルキル鎖リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはＲＮＡリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはＤＮＡリンカーである。

【0221】

リンカーは、２、３、４、または５個の独自のｓｉＲＮＡ鎖を共有結合し得る。リンカーは、ｓｉＲＮＡオリゴマーの任意の部分に共有結合し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、各ｓｉＲＮＡ鎖のヌクレオシドの３’末端に結合する。いくつかの実施形態では、リンカーは、各ｓｉＲＮＡ鎖のヌクレオシドの５’末端に結合する。いくつかの実施形態では、リンカーは、共有結合形成部分を介して、ｓｉＲＮＡ鎖（例えば、センス鎖またはアンチセンス鎖）のヌクレオシドに結合する。いくつかの実施形態では、共有結合形成部分は、アルキル、エステル、アミド、カーボネート、カルバメート、トリアゾール、尿素、ホルムアセタール、ホスホネート、ホスフェート、及びホスフェート誘導体（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロアミデートなど）からなる群から選択される。

【0222】

いくつかの実施形態では、リンカーは、式Ｌ１の構造を有する。

【化15】

【0223】

いくつかの実施形態では、リンカーは、式Ｌ２の構造を有する。

【化16】

【0224】

いくつかの実施形態では、リンカーは、式Ｌ３の構造を有する。

【化17】

【0225】

いくつかの実施形態では、リンカーは、式Ｌ４の構造を有する。

【化18】

【0226】

いくつかの実施形態では、リンカーは、式Ｌ５の構造を有する。

【化19】

【0227】

いくつかの実施形態では、リンカーは、式Ｌ６の構造を有する。

【化20】

【0228】

いくつかの実施形態では、リンカーは、以下に示されるように、式Ｌ７の構造を有する。

【化21】

【0229】

いくつかの実施形態では、リンカーは、式Ｌ８の構造を有する。

【化22】

【0230】

いくつかの実施形態では、リンカーは、式Ｌ９の構造を有する。

【化23】

【0231】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される分岐ｓｉＲＮＡ分子のうちの１つ以上に使用するためのリンカーの選択は、例えば、本開示の１つ以上の分岐ｓｉＲＮＡ分子について望ましい疎水性が達成されるように、リンカーの疎水性に基づいてもよい。例えば、アルキル鎖を含有するリンカーを使用して、より少ない疎水性リンカーまたは親水性リンカーを有する分岐ｓｉＲＮＡ分子と比較して、分岐ｓｉＲＮＡ分子の疎水性を増加させてもよい。

【0232】

本明細書に開示されるｓｉＲＮＡ剤は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（ｅｄｒｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，２０００に記載されているような、当技術分野で十分に確立された方法によって合成及び／または修飾することができる。

【0233】

治療の方法
本開示は、遺伝子サイレンシングを必要とする対象を治療する方法を提供する。遺伝子サイレンシングは、欠陥のあるまたは過剰活性の遺伝子をサイレンシングするために、発現が低下した遺伝子の負の調節因子をサイレンシングするために、疾患駆動遺伝子の活性を増加させる経路（複数可）における活性化役割を有する野生型遺伝子をサイレンシングするために、選択的にノックダウンされたときに、遺伝子（複数可）の総発現を上昇させ得る遺伝子（複数可）のスプライスアイソフォームをサイレンシングするために、とりわけ、目的が疾患状態から健康な状態に向かって遺伝的及び生化学的経路活性を回復させることである限り、実行されてもよい。この方法は、任意の適切な投与経路（例えば、線条体内、脳室内、髄腔内注射、またはカテーテル挿入による大槽内注射による）によって、対象（例えば、ヒト）のＣＮＳに本開示の治療用オリゴヌクレオチドまたはそれを含有する医薬組成物を送達することを含み得る。活性化合物は、任意の好適な用量で投与することができる。患者に投与される本開示の組成物の実際の投与量は、体重、病態の重症度、事前または同時の治療介入、患者の特発性疾患、及び投与経路などの身体的及び生理学的要因によって決定され得る。投与量及び投与経路に応じて、好ましい投与量及び／または有効量の投与回数は、対象の応答に応じて変化し得る。投与を担当する施術医は、いずれにしても、組成物中の活性成分（複数可）の濃度及び個々の対象に適切な用量（複数可）を決定するであろう。投与は、１日あたり任意の好適な回数、必要な期間にわたって行うことができる。対象は、併存疾患の有無にかかわらず、成人または小児ヒトであってもよい。

【0234】

適応症
遺伝子サイレンシングを必要としている対象は、ＣＮＳ（例えば、ミクログリア細胞）に見られる遺伝子のサイレンシングを必要としている場合がある。遺伝子は、特定の疾患または障害に関連している場合がある。例えば、この遺伝子は、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、純粋自律神経不全、レビー小体嚥下障害、偶発的レビー小体病（ＩＬＢＤ）、遺伝性レビー小体病、オリーブ橋小脳萎縮症（ＯＰＣＡ）、線条体黒質変性症、シャイ・ドレーガー症候群、てんかんもしくはてんかん障害、プリオン病、または疼痛もしくは疼痛障害、と関連している場合がある。

【0235】

標的遺伝子
本明細書に記載の遺伝子サイレンシングの方法は、欠陥のあるまたは過剰活性の遺伝子をサイレンシングするために、発現が低下した遺伝子の負の調節因子をサイレンシングするために、疾患駆動遺伝子の活性を増加させる経路（複数可）における活性化役割を有する野生型遺伝子をサイレンシングするために、選択的にノックダウンされたときに、遺伝子（複数可）の総発現を上昇させ得る遺伝子（複数可）スプライスアイソフォームをサイレンシングするために、とりわけ、目的が疾患状態から健康な状態に向かって遺伝的及び生化学的経路活性を回復させることである限り、実行されてもよい。

【0236】

疾患または障害は、以下の遺伝子：ＡＢＣＡ７、ＡＢＩ３、ＡＤＡＭ１０、ＡＰＯＣ１、ＡＰＯＥ、ＡＸＬ、ＢＩＮ１、Ｃ１ＱＡ、Ｃ３、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＣＡＳＳ４、ＣＣＬ５、ＣＤ２ＡＰ、ＣＤ３３、ＣＤ６８、ＣＬＰＴＭ１、ＣＬＵ、ＣＲ１、ＣＳＦ１、ＣＳＴ７、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＤ、ＣＴＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１３、ＤＳＧ２、ＥＣＨＤＣ３、ＥＰＨＡ１、ＦＡＢＰ５、ＦＥＲＭＴ２、ＦＴＨ１、ＧＮＡＳ、ＧＲＮ、ＨＢＥＧＦ、ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＨＬＡ－ＤＲＢ５、ＨＴＴ、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＧＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＮＰＰ５Ｄ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＫＣＮＴ１、ＬＩＬＲＢ４、ＬＰＬ、ＭＡＰＴ、ＭＥＦ２Ｃ、ＭＭＰ１２、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＭＳ４Ａ６Ａ、ＭＳＨ３、ＮＬＲＰ３、ＮＭＥ８、ＮＯＳ２、ＰＩＣＡＬＭ、ＰＩＬＲＡ、ＰＬＣＧ２、ＰＲＮＰ、ＰＴＫ２Ｂ、ＳＣＩＭＰ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＬＣ２４Ａ４、ＳＮＣＡ、ＳＯＲＬ１、ＳＰＩ１、ＳＰＰ１、ＳＰＰＬ２Ａ、ＴＢＫ１、ＴＮＦ、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭＬ２、ＴＹＲＯＢＰ、及びＺＣＷＰＷ１のいずれかに関連している場合がある。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、以下の遺伝子：ＡＰＯＥ、ＢＩＮ１、Ｃ１ＱＡ、Ｃ３、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＣＣＬ５、ＣＤ３３、ＣＬＵ／ＡＰＯＪ、ＣＲ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１３、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＮＰＰ５Ｄ、ＩＴＧＡＭ、ＭＥＦ２Ｃ、ＭＭＰ１２、ＮＬＲＰ３、ＮＯＳ２、ＰＩＬＲＡ、ＰＬＣＧ２、ＰＴＫ２Ｂ、ＳＬＣ２４Ａ４、ＴＢＫ１、及びＴＮＦのいずれかに関連している。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、以下の遺伝子：ＨＴＴ、ＭＡＰＴ、ＳＮＣＡ、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＡＰＯＥ、ＳＣＮ９Ａ、ＫＣＮＴ１、ＰＲＮＰ、及びＭＳＨ３のいずれかに関連している。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＨＴＴ遺伝子に関連している。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＭＡＰＴ遺伝子に関連している。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＳＮＣＡ遺伝子に関連している。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、Ｃ９ＯＲＦ７２遺伝子に関連している。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＡＰＯＥ遺伝子に関連している。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＳＣＮ９Ａ遺伝子に関連している。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＫＣＮＴ１遺伝子に関連している。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＰＲＮＰ遺伝子に関連している。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＭＳＨ３遺伝子に関連している。

【0237】

重量オスモル濃度
本開示の治療用オリゴヌクレオチドの投与は、対象の重量オスモル濃度（例えば、脳脊髄液（ＣＳＦ））に影響を与える場合がある。本開示の治療用オリゴヌクレオチドで治療されている対象のＣＳＦ重量オスモル濃度は、例えば、２５０～４５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ重量オスモル濃度は、２５０～３５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである。対象のＣＳＦ重量オスモル濃度は、二価カチオンの濃度によって影響を受ける場合がある。対象の治療を監督する人は、対象のＣＳＦ重量オスモル濃度を監視し、それに応じて投与量を調整することが可能な場合がある。例えば、正常より高い重量オスモル濃度を示す対象では用量を減らすことができる。

【0238】

あるいは、治療用オリゴヌクレオチドを含有する組成物中のナトリウムイオンの濃度を変更することができる。例えば、治療用オリゴヌクレオチドの液体製剤では、二価カチオンの毒性の利益に負の影響を与えることなく、ナトリウム濃度を調節して、結果として生じる重量オスモル濃度を増減させることができる。製剤中のナトリウムレベルを低下させることにより、本開示の治療用オリゴヌクレオチドによる治療を受けている対象における正常な生理学的重量オスモル濃度レベルの維持が可能となり得る。

【0239】

医薬組成物
本開示の治療用オリゴヌクレオチドは、インビボでの投与に好適な生物学的に適合する形態で対象に投与するための医薬組成物に製剤化することができる。したがって、本開示は、好適な希釈剤、担体、または賦形剤と混合した本開示の治療用オリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物を提供する。治療用オリゴヌクレオチドは、例えば、対象のＣＮＳに直接投与することができる（例えば、線条体内、脳室内、髄腔内注射、またはカテーテル挿入による大槽内注射によって）。

【0240】

好適な製剤を選択及び調製するための従来の手順及び成分は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｊ．Ｐ．Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ．Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，２０１２，２２^ｎｄ ｅｄ．及びＴｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ，２０１５，ＵＳＰ ３８ ＮＦ ３３）に記載されている。

【0241】

通常の保存条件及び使用条件下で、医薬組成物は、例えば、微生物の増殖を防止するための保存剤を含有してもよい。医薬組成物には、滅菌水溶液、滅菌分散液、または、例えば、滅菌溶液もしくは滅菌分散液を即時調製するための粉末を含めてもよい。全ての場合において、形態は、当技術分野で公知の技術を使用して滅菌することができ、治療を必要とする対象に容易に投与できる程度まで流動化することができる。

【0242】

医薬組成物は、対象、例えば、ヒト対象に、単独で、または薬学的に許容される担体と組み合わせて、投与されてもよく、本明細書で示される場合、その割合は、化合物の溶解性及び／または化学的性質、選択される投与経路、及び標準的な薬学的実務によって決定されてもよい。

【0243】

投薬レジメン
当技術分野の通常の技能を有する医師は、それを必要とする哺乳類対象（例えば、ヒト）に投与するための有効量の治療用オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｇＲＮＡまたはＡＳＯ）を、容易に決定することができる。例えば、医師であれば、本開示の治療用オリゴヌクレオチドのうちの１つの用量を、所望の治療効果を達成するのに必要とされるレベルよりも低いレベルで処方し始め、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加させていくことができる。あるいは、医師は、高用量で本開示の治療用オリゴヌクレオチドのうちの１つを投与することによって治療レジメンを開始し、その後、治療効果（例えば、標的遺伝子配列の発現の減少）が達成されるまで漸進的に低用量を投与してもよい。一般に、本開示の治療用オリゴヌクレオチドのうちの１つの好適な１日用量は、治療効果をもたらすのに有効な最低用量の治療用オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ）の量である。本開示のｓｓ－またはｄｓ－治療用オリゴヌクレオチドは、例えば髄腔内、脳室内、線条体内の注射によって、またはカテーテル挿入による大槽内注射（例えば尾状核または被殻への注射）によって投与することができる。本開示の治療用オリゴヌクレオチドの１日用量は、単回用量として、または、日、週、月、もしくは年を通して適切な間隔で別々に投与される２回、３回、４回、５回、６回、またはそれより多い用量として、任意選択で、単位投与形態で、投与してもよい。本開示の治療用オリゴヌクレオチドを単独で投与することは可能であるが、賦形剤、担体、及び任意選択で追加の治療剤と組み合わせて医薬製剤として投与することもできる。

【0244】

投与経路
本開示の方法は、治療用組成物によって許容される任意の投与経路を企図する。方法のいくつかの実施形態は、髄腔内、脳室内、線条体内、実質内への注射、またはカテーテル挿入による大槽内注射によるものを含む。

【0245】

髄腔内注射は、脊柱またはくも膜下腔への直接注射である。脊柱のＣＳＦに直接注入することにより、本開示の治療用オリゴヌクレオチドは、脊柱内の細胞（例えば、ニューロン及びグリア細胞）に直接アクセスを有し、血液脳関門を迂回して脳内の細胞にアクセスする経路を有する。

【0246】

脳室内（ＩＣＶ）注射は、脳室のＣＳＦに直接注射する方法である。髄腔内注射と同様に、ＩＣＶは、血液脳関門を迂回する注射方法である。ＩＣＶを使用することにより、治療剤が血中で分解される危険性なしに、脳及び脊柱の細胞へアクセスできるという利点が得られる。

【0247】

線条体内注射は、線条体（ｓｔｒｉａｔｕｍ、または、ｃｏｒｐｕｓ ｓｔｒｉａｔｕｍ）への直接注射である。線条体は、脳の皮質下大脳基底核の領域である。線条体への注射は、血液脳関門及び血流への注射の薬物動態学的課題を迂回し、脳の細胞への直接アクセスを可能にする。

【0248】

実質内投与は、実質（例えば、脳実質）への直接注射である。脳実質への注射は、血液脳関門を迂回しながら、疾患または障害の影響を受けた脳領域に直接注射することを可能にする。

【0249】

カテーテル挿入による大槽内注射は、大槽内への直接注射である。大槽は、小脳と延髄の背側面の間に位置する脳の領域である。大槽に注射すると、小脳、脳幹、及び脊髄の細胞に、より直接的に送達される。

【0250】

本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、治療組成物は、全身投与、例えば、静脈内、筋肉内、または皮下投与によって対象に送達することができる。

【0251】

静脈内（ＩＶ）注射は、対象の血流に直接注射する方法である。ＩＶ投与は、ボーラス投与の形態であっても、持続注入によるものであってもよく、または治療組成物によって許容される他の任意の方法であってもよい。

【0252】

筋肉内（ＩＭ）注射は、三角筋または臀筋などの、対象の筋肉への注射である。ＩＭによって、治療用組成物の迅速な吸収が可能になることがある。

【0253】

皮下注射は、皮下組織への注射である。皮下に送達される組成物の吸収は、ＩＶまたはＩＭ注射よりも遅い場合があり、これは、継続的吸収を必要とする組成物にとって有益であり得る。

【実施例】

【0254】

以下の実施例は、本明細書に記載する組成物及び方法をどのように使用し、製造し、評価し得るかについての説明を当業者に提供するために提示し、純粋に本開示を例示することを意図するものであり、発明者らが自身の開示と見なすものの範囲を限定することを意図しない。

【0255】

以下の実施例及び本開示全体の他の場所で使用されるように、「ＤＩＯ」及び「ジ－ｓｉＲＮＡ」という用語は、その用語が本明細書で定義されるように、二分岐ｓｉＲＮＡ分子を指す。以下の実施例で使用される場合、「遺伝子Ａ」、「遺伝子Ｂ」、「遺伝子Ｃ」、及び「遺伝子Ｄ」はすべて、異なる遺伝子標的を指す。

【0256】

実施例１．中枢神経系へのＲＮＡ送達を妨害する毒性作用の軽減
導入
多くの種において、二本鎖ＲＮＡの導入は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）による強力かつ特異的な遺伝子サイレンシングを誘導する。この現象は、植物及び動物の両方で生じ、ウイルス防御及びトランスポゾンサイレンシング機構において役割を有する。例えば、一般に標的遺伝子よりもはるかに短い、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、遺伝子サイレンシングに有効であることが示されており、したがって、遺伝子をサイレンシングして、遺伝経路及び生化学経路の活性を疾患状態から正常で健康な状態に回復させるための治療剤として有用である。しかし、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）などの治療用オリゴヌクレオチドの、対象への、特に対象の中枢神経系への送達は、とりわけ、発作、振戦、及び活動亢進運動行動を含む毒性副作用のリスクを伴う。それを必要とする対象に投与すると、毒性の低減をもたらす治療用オリゴヌクレオチドの必要性が依然として存在する。

【0257】

方法
二本鎖ｓｉＲＮＡを、以下の４つのイオン条件：Ａ）Ｍｇ２^＋；Ｂ）Ｃａ２^＋；Ｃ）Ｍｇ２^＋及びＣａ２^＋；またはＤ）ＰＢＳのみ（対照）のうちの１つの存在下でハイブリダイズした。次に、イオン結合によりコンディショニングした各ｓｉＲＮＡを、８～１０匹のＦＶＢ／ＮＪ、Ｆマウスに脳室内（ＩＣＶ）注射により、２つの異なる投与量（１０ｎｍｏｌ－ＤＩＯまたは２０ｎｍｏｌ－ＤＩＯ）にて、最終体積１０μｌで注射した（図１Ａ）。注射は、０．５μｌ／分の流速で行った。ＩＣＶ注射の対照（ＰＢＳのみ－ｓｉＲＮＡなし）も含まれていた。すべての動物における急性毒性（例えば、発作、死亡）を次の２４～４８時間監視した。急性ＣＮＳ毒性の重症度は、ＥｖＡＤＩＮＴスコアリングアッセイを使用することによって定量した（表２）。スコアが高いほど、実験条件の毒性がより高いと考えられた。

【表2】

【0258】

結果
Ｍｇ２^＋の存在下でハイブリダイズしたｓｉＲＮＡのＩＣＶ注射（条件Ａ）によって、１０または２０ｎｍｏｌ－ＤＩＯを注射したマウスでは急性毒性が示されず、それぞれ１００％の生存率となった（図１Ｂ及び表３）。Ｃａ２^＋の存在下でハイブリダイズしたｓｉＲＮＡのＩＣＶ注射（条件Ｂ）によって、１０及び２０ｎｍｏｌ－ＤＩＯを注射したマウスではある程度の毒性が示され、それぞれ９０％及び１００％の生存率となった（図１Ｂ及び表３）。Ｍｇ２^＋とＣａ２^＋の両方の存在下でハイブリダイズしたｓｉＲＮＡのＩＣＶ注射（条件Ｃ）によって、１０及び２０ｎｍｏｌ－ＤＩＯを注射したマウスでは急性毒性が示されず、それぞれ１００％の生存率となった（図１Ｂ及び表３）。二価カチオンの存在なしでハイブリダイズしたｓｉＲＮＡのＩＣＶ注射（条件Ｄ）、またはＰＢＳのみ（ｓｉＲＮＡなし）では、はるかに劇的なレベルの急性毒性が示され、それぞれ３０％の生存率となった（図１Ｂ及び表３）。

【表3】

【0259】

結論
ＣＮＳへの治療用オリゴヌクレオチドの送達は現在、急性かつ致死的な毒性作用によって困難にさらされている；しかし、二価カチオンを含む治療用オリゴヌクレオチドを送達すると、急性ＣＮＳ毒性が大幅に軽減される。

【0260】

実施例２．治療用オリゴヌクレオチドのイオンコンディショニングは活性を損なわない
遺伝子サイレンシング
実施例１に記載したｓｉＲＮＡ分子を、対照と比較して目的の遺伝子（遺伝子Ａ）をサイレンシングする能力について評価した。マウスを、１０ｎｍｏｌ用量のジ－ｓｉＲＮＡで処置し、３週間後に標的遺伝子のノックダウンについて評価した。図２Ａは、二価カチオンを伴わないＰＢＳ中のジ－ｓｉＲＮＡ分子と比較した場合、Ｍｇ^２＋、Ｃａ^２＋、またはＭｇ^２＋とＣａ^２＋の両方の存在下でハイブリダイズしたジ－ｓｉＲＮＡ分子によって、標的遺伝子のサイレンシングがもたらされることを実証している。

【0261】

さらなる例では、マウスを、様々な用量（０．１、０．５、及び２．５ｎｍｏｌ）のジ－ｓｉＲＮＡ分子で処置し、２週間後に対照と比較して遺伝子Ａをサイレンシングする能力について評価した。標的遺伝子の発現は、４つの脳領域（前頭皮質、運動皮質、線条体、海馬）のそれぞれにおいて、４つの条件（未処置対照、ＰＢＳを伴うジ－ｓｉＲＮＡ、Ｍｇ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡ、及びＣａ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡ）下で試験した。用量依存的遺伝子サイレンシングは、分析されたすべての脳領域において、ジ－ｓｉＲＮＡで処置された３つの群すべてで観察された。同様のサイレンシングが、各用量レベルで３つのコンディショニング群（ＰＢＳ単独、Ｍｇ^２＋、またはＣａ^２＋を伴うジ－ｓｉＲＮＡ）のすべてで観察され、イオンコンディショニングによる活性への影響がないことが示唆された。図２Ｂは、この実験の結果を示す。

【0262】

組織分布
実施例１に記載したｓｉＲＮＡ分子を、対照と比較して脳のある特定の領域におけるそれらの分布について評価した。マウスを、１０ｎｍｏｌ用量のジ－ｓｉＲＮＡで処置し、３週間後にＰＮＡハイブリダイゼーションアッセイによるｓｉＲＮＡ定量について評価した。図２Ｃは、二価カチオンを伴わないＰＢＳ中のジ－ｓｉＲＮＡ分子と比較した場合、Ｍｇ^２＋、Ｃａ^２＋、またはＭｇ^２＋とＣａ^２＋の両方の存在下でハイブリダイズしたジ－ｓｉＲＮＡ分子が、前頭皮質、運動皮質、線条体、及び海馬に効果的に取り込まれることを実証している。

【0263】

実施例３．二価カチオンの存在下でのジ－ｓｉＲＮＡ分子のハイブリダイゼーションは、生存促進効果を有する。
二価カチオンをジ－ｓｉＲＮＡ分子に導入する方法を検討した。以下の２つの条件を試験した：
ｉ） １００ｍＭ ＮａＣｌの存在下で９５℃まで４分間加熱し、その後５０ｍＭ Ｍｇ^２＋または５０ｍＭ Ｃａ^２＋のいずれかの存在下で、室温にて１５分間インキュベートすることによるｓｉＲＮＡ分子のハイブリダイゼーション
ｉｉ） １００ｍＭ ＮａＣｌ及びａ）５０ｍＭ Ｍｇ^２＋またはｂ）５０ｍＭ Ｃａ^２＋のいずれかの存在下で、９５℃まで４分間加熱することによるｓｉＲＮＡ分子のハイブリダイゼーション

【0264】

遺伝子Ａを標的とするジ－ｓｉＲＮＡを、これらの条件下で調製し、マウスに投与し、毒性について評価した。これらの実験の結果を、以下の表４にまとめる。まとめると、これらの結果は、上記項目ｉｉ）（二価カチオンの存在下での加熱及びハイブリダイゼーション）の生存促進効果を示す。

【表4】

【0265】

実施例４．イオンコンディショニングの生存促進効果はイオン濃度と相関がある
洗浄プロトコルの効果
遺伝子Ａを標的とする本開示のジ－ｓｉＲＮＡ分子を、５０ｍＭ Ｍｇ^２＋の存在下でハイブリダイズさせた。ジ－ｓｉＲＮＡ分子を、３つの群に分割し、それぞれを異なる洗浄プロトコルに供した：
１） ３ｋＤａアミコン、２×４ｍＬ水、１×４ｍＬ ＰＢＳで洗浄
２） １０ｋＤａアミコン、２×４ｍＬ水、１×４ｍＬ ＰＢＳで洗浄
３） １０ｋＤａアミコン、４×１４ｍＬ水、１×１４ｍＬ ＰＢＳで洗浄

【0266】

各試料中のＭｇ濃度を計算し、実施例１に記載のプロトコルに従って各試料をマウスに注射した。最も強力な洗浄プロトコルを受けた試料には、最低濃度のＭｇ^２＋が含まれており、その結果、これは動物にとって最も有毒であった。表５に、この実験の結果をまとめている。まとめると、これらのデータは、Ｍｇ^２＋の存在が、毒性の利益にとって重要であり、イオンの濃度と相関していることを示している。

【表5】

【0267】

有効Ｍｇ^２＋濃度の決定
遺伝子Ａを標的とする本開示のジ－ｓｉＲＮＡ分子を調べて、イオンの有効濃度の範囲枠を決定した。マウスに２０ｎｍｏｌ用量のジ－ｓｉＲＮＡ分子を注射し、Ｍｇの量を変化させた。イオンの各濃度について、ハイブリダイゼーションプロトコル（ハイブリダイゼーション後のイオンの添加、または実施例３に記載のイオンの存在下でのハイブリダイゼーション）の効果も調べた。ｓｉＲＮＡを含まずに、ＰＢＳ中のさまざまな濃度のＭｇで処置したマウスの対照群も含めた。条件は、表６に記載されているＥｖＡＤＩＮＴスコアリングプロトコルを使用して評価した。スコアが高いほど、実験条件の毒性がより高いと考えられた。

【表6】

【0268】

これらの実験の結果を図３Ａに示す。これらの結果は、理想的なＭｇ^２＋濃度が約４０～約７０ｍＭである臨界領域が定義され得ることを示している。

【0269】

有効Ｃａ^２＋濃度の決定
遺伝子Ａを標的とする本開示のジ－ｓｉＲＮＡ分子を調べて、イオンの有効濃度の範囲枠を決定した。マウスに２０ｎｍｏｌ用量のジ－ｓｉＲＮＡ分子を注射し、Ｃａ^２＋の量を変化させた。条件は、表６に記載されているＥｖＡＤＩＮＴスコアリングプロトコルを使用して評価した。スコアが高いほど、実験条件の毒性がより高いと考えられた。結果は図３Ｂに示されており、Ｃａ^２＋の有効濃度の範囲枠は２５～１００ｍＭの間にある。

【0270】

Ｃａ^２＋とＭｇ^２＋混合物の有効濃度の決定
遺伝子Ａを標的とする本開示のジ－ｓｉＲＮＡ分子を調べて、イオンの有効濃度の範囲枠を決定した。マウスに２０ｎｍｏｌ用量のジ－ｓｉＲＮＡ分子を注射し、１：１ Ｃａ^２＋／Ｍｇ^２＋混合物の量を変化させた。条件は、表６に記載されているＥｖＡＤＩＮＴスコアリングプロトコルを使用して評価した。スコアが高いほど、実験条件の毒性がより高いと考えられた。結果は図３Ｃに示されており、Ｃａ^２＋の有効濃度の範囲枠は２５～１００ｍＭの間にある。

【0271】

オリゴヌクレオチドの濃度及び重量オスモル濃度の変化
表６のＥｖＡＤＩＮＴ－Ａスコアリングシステムを使用して、ジ－ｓｉＲＮＡ分子の濃度を変化させながら実験を繰り返した。ｓｉＲＮＡのＭｇ^２＋に対するモル比は一定に保った。ある実験では、Ｎａ^＋の濃度を低下させて注射液の重量オスモル濃度を低下させた。この実験の結果を図３Ｄに示す。この実験は、二価カチオンを加えない場合、ｓｉＲＮＡ分子は２０ｎｍｏｌの用量では十分に許容されないことを示している。しかし、Ｍｇ^２＋を加えると、２０ｎｍｏｌが許容された。ｓｉＲＮＡのＭｇ^２＋に対するモル比を一定に保った場合、ｓｉＲＮＡの濃度は、増加しながら、依然として十分に許容されていた。さらに、Ｎａ^＋の濃度を低下させて、毒性に悪影響を与えることなく重量オスモル濃度を低下させることに成功した。

【0272】

実施例５．イオンコンディショニングは、投与方法に関係なく、ラットにおけるジ－ｓｉＲＮＡ分子の忍容性を改善する
８週齢の雌Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットを、遺伝子Ａを標的とする本開示のジ－ｓｉＲＮＡ分子を用いて、流速５μＬ／分で片側脳室内直接脳注射（ＩＣＶ）または髄腔内注射（ＩＴ）のいずれかによって処置した。表７では、二価カチオンを伴わないｓｉＲＮＡ分子で処置したラットの結果をまとめ、表８では、１：２５の比率で二価カチオンを伴うｓｉＲＮＡ分子で処置したラットの結果をまとめる。表７及び表８から明らかなように、Ｍｇ^２＋を加えると、イオンコンディショニングによりｓｉＲＮＡ分子の忍容性が大幅に改善され、その利益は投与方法に関係なく観察される。

【表7】

【表8】

【0273】

実施例６．イオンコンディショニングによりアンチセンスオリゴヌクレオチド及びモノｓｉＲＮＡ分子の忍容性を改善する
上記の実施例で試験したジ－ｓｉＲＮＡ分子に加えて、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド及びモノ－ｓｉＲＮＡの忍容性に対する１つ以上の二価カチオンの添加の影響も検討した。

【0274】

アンチセンスオリゴヌクレオチド
Ｍａｌａｔ－１を標的とする本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチド２０または４０ｎｍｏｌを、様々な濃度のＭｇ^２＋とともに片側ＩＣＶ注射によりマウスに投与した。Ｍａｌａｔ－１を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｃａ^２＋との塩として製剤化すると毒性がわずかに低下することが以前に示されている（Ｍｏａｚａｍｉ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＲｘｉｖ．２０２１）。各条件を、発作及び／または死亡を示した動物の数について評価した。このアッセイの結果を、以下の表９に示す。結果から明らかなように、二価カチオンを加えると、特に２０ｎｍｏｌのＡＳＯを投与した場合、毒性が減少した。

【表9】

【0275】

モノ－ｓｉＲＮＡ
遺伝子Ａを標的とする本開示のモノ－ｓｉＲＮＡ ４０ｎｍｏｌを、様々な濃度のＭｇ^２＋とともに片側ＩＣＶ注射によりマウスに投与した。各条件を、発作及び／または死亡を示した動物の数について評価した。このアッセイの結果を、以下の表１０に示す。結果から明らかなように、二価カチオンを加えると、毒性が顕著に減少した。

【表10】

【0276】

実施例７．イオンコンディショニングは、配列または遺伝子標的に関係なく、オリゴヌクレオチドの忍容性を改善する
異なる配列を有し、異なる遺伝子を標的とする３つのジ－ｓｉＲＮＡ分子を、その毒性について、二価カチオンを含む及び含まない場合で種々の条件下にて試験した。

【0277】

ジ－ｓｉＲＮＡ Ｂ及びジ－ｓｉＲＮＡ Ｃ
本開示の２つの別個のジ－ｓｉＲＮＡ分子、ジ－ｓｉＲＮＡ Ｂ（遺伝子Ｂを標的とする）及びジ－ｓｉＲＮＡ Ｃ（遺伝子Ｃを標的とする）２０ｎｍｏｌを、様々な濃度のＭｇ^２＋とともに片側ＩＣＶ注射によりマウスに投与した。ジ－ｓｉＲＮＡ Ａ及びジ－ｓｉＲＮＡ Ｂのそれぞれは、異なる核酸塩基配列を有し、互いに、また前述のいずれかの実施例で述べたジ－ｓｉＲＮＡ分子とは異なる遺伝子を標的とする。試験した各条件を、発作及び／または死亡を示した動物の数について評価した。このアッセイの結果を、以下の表１１に示す。これらの結果は、治療用オリゴヌクレオチドへの二価カチオンの添加が、核酸塩基配列または標的遺伝子に関係なく、毒性の利益があることを実証している。

【表11】

【0278】

ジ－ｓｉＲＮＡ Ｄ
様々な用量の本開示のジ－ｓｉＲＮＡ分子、ジ－ｓｉＲＮＡ Ｄ（遺伝子Ｄを標的とする）を、様々な濃度のＭｇ^２＋とともにマウスに投与した。ジ－ｓｉＲＮＡ Ｄは、ジ－ｓｉＲＮＡ Ｂ、ジ－ｓｉＲＮＡ Ｃ、または前述の実施例で言及されたジ－ｓｉＲＮＡ分子のいずれかとは異なる核酸塩基配列を有し、異なる遺伝子を標的とする。試験した各条件を、発作及び／または死亡を示した動物の数について評価した。このアッセイの結果を、以下の表１２に示す。これらの結果は、治療用オリゴヌクレオチドへの二価カチオンの添加が、核酸塩基配列または標的遺伝子に関係なく、毒性の利益があることを実証している。

【表12】

【0279】

実施例８．遺伝子サイレンシングが必要な患者を治療する方法
中枢神経系の細胞における遺伝子サイレンシングを必要とする対象は、塩として製剤化された治療用オリゴヌクレオチドの投与量で、医師によって決定された頻度で治療される。例えば、医師であれば、本開示の治療用オリゴヌクレオチドのうちの１つ（例えば、ｓｉＲＮＡ）の用量を、所望の治療効果を達成するのに必要とされるレベルよりも低いレベルで処方し始め、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加させていくことができる。あるいは、医師は、高用量で本開示の治療用オリゴヌクレオチドのうちの１つを投与することによって治療レジメンを開始し、その後、治療効果（例えば、標的遺伝子配列の発現の減少）が達成されるまで漸進的に用量を低下させて投与してもよい。一般に、本開示の治療用オリゴヌクレオチドのうちの１つ（例えば、ｓｉＲＮＡ）の好適な１日用量は、治療効果をもたらすのに有効な最低用量の量である。本開示のｓｓ－またはｄｓ－治療用オリゴヌクレオチドは、例えば髄腔内、脳室内、線条体内の注射によって、またはカテーテル挿入を介して大槽内注射（例えば尾状核または被殻への注射）によって投与することができる。本開示の治療用オリゴヌクレオチドのうちの１つの治療組成物の１日用量は、単回用量として、または、日、週、月、もしくは年を通して適切な間隔で別々に投与される２回、３回、４回、５回、６回、またはそれより多い用量として、任意選択で、単位投与形態で、投与してもよい。本開示の治療用オリゴヌクレオチドのいずれかを単独で投与することは可能であるが、賦形剤、担体、及び任意選択で追加の治療剤と組み合わせて医薬製剤として投与することもできる。投与量及び頻度は、対象の身長、体重、年齢、性別、及びその他の疾患に基づいて決定する。

【0280】

治療用オリゴヌクレオチドは、疾患及び対象との適合性を考慮して医師によって選択される。一本鎖または二本鎖の治療用オリゴヌクレオチド（例えば、分岐ｓｉＲＮＡ）は、選択に利用可能である。選択された治療用オリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖を有し、標的となる患者及び疾患に最適な配列及びＲＮＡ修飾（例えば、天然及び非天然ヌクレオシド間結合、修飾糖、５’リン安定化部分、及びイオン結合二価カチオン）を有するセンス鎖を有し得る。

【0281】

治療用オリゴヌクレオチドは、患者及び病態に最適な経路により（例えば、髄腔内、脳室内、線条体内に、またはカテーテル挿入を介して大槽内注射によって）、対象が最大耐用量に達するまで、または疾患の症状が十分に改善されるまで、患者が耐えられる速度で送達される。

【0282】

特定の実施形態
本発明の例示的な実施形態を、以下に列挙する。以下に列挙する実施形態は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない；むしろ、以下は本開示の有用性の例として提示される。

【0283】

Ｅ１．治療用オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ、ＡＳＯ、ｍｉＲＮＡ、ｇＲＮＡなど）を対象に送達する方法であって、１つ以上の二価カチオンを含む塩の形態で治療用オリゴヌクレオチドを投与すること、を含み、任意選択で、治療用オリゴヌクレオチドが干渉ＲＮＡ分子（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡ）である、方法。

【0284】

Ｅ２．治療用オリゴヌクレオチドが、１つ以上の二価カチオンによって部分的または完全に飽和した複数のカチオン結合部位を含む、Ｅ１のいずれか１つの方法。

【0285】

Ｅ３． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約１０％～約１００％である、Ｅ１～Ｅ２のいずれか１つに記載の方法。

【0286】

Ｅ４． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約２０％～約１００％である、Ｅ３に記載の方法。

【0287】

Ｅ５． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約３０％～約１００％である、Ｅ４に記載の方法。

【0288】

Ｅ６． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約４０％～約１００％である、Ｅ５に記載の方法。

【0289】

Ｅ７． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約５０％～約１００％である、Ｅ６に記載の方法。

【0290】

Ｅ８． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約６０％～約１００％である、Ｅ７に記載の方法。

【0291】

Ｅ９． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約７０％～約１００％である、Ｅ８に記載の方法。

【0292】

Ｅ１０． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約８０％～約１００％である、Ｅ９に記載の方法。

【0293】

Ｅ１１． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約９０％～約１００％である、Ｅ１０に記載の方法。

【0294】

Ｅ１２．カチオン結合部位が、ヌクレオシド間結合内に位置し、任意選択で、ヌクレオシド間結合がホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合から選択される、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１つに記載の方法。

【0295】

Ｅ１３． １つ以上の二価カチオンが、約３０ピコメートル～約１５０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ１～Ｅ１２のいずれか１つに記載の方法。

【0296】

Ｅ１４． １つ以上の二価カチオンが、約３０ピコメートル～約１４０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ１３に記載の方法。

【0297】

Ｅ１５． １つ以上の二価カチオンが、約４０ピコメートル～約１３０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ１４に記載の方法。

【0298】

Ｅ１６． １つ以上の二価カチオンが、約５０ピコメートル～約１２０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ１５に記載の方法。

【0299】

Ｅ１７． １つ以上の二価カチオンが、約６０ピコメートル～約１１０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ１６に記載の方法。

【0300】

Ｅ１８． １つ以上の二価カチオンが、約６０ピコメートル～約１００ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ１～Ｅ１２のいずれか１つに記載の方法。

【0301】

Ｅ１９． １つ以上の二価カチオンが、約６０ピコメートル～約９０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ１８に記載の方法。

【0302】

Ｅ２０． １つ以上の二価カチオンが、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、もしくはＺｎ^２＋、またはそれらの組み合わせを含む、Ｅ１～Ｅ１２のいずれか１つに記載の方法。

【0303】

Ｅ２１． １つ以上の二価カチオンが、Ｂａ^２＋を含む、Ｅ２０に記載の方法。

【0304】

Ｅ２２． １つ以上の二価カチオンが、Ｂｅ^２＋を含む、Ｅ２０またはＥ２１に記載の方法。

【0305】

Ｅ２３． １つ以上の二価カチオンが、Ｃａ^２＋を含む、Ｅ２０～Ｅ２２のいずれか１つに記載の方法。

【0306】

Ｅ２４． １つ以上の二価カチオンが、Ｃｕ^２＋を含む、Ｅ２０～Ｅ２３のいずれか１つに記載の方法。

【0307】

Ｅ２５． １つ以上の二価カチオンが、Ｍｇ^２＋を含む、Ｅ２０～Ｅ２４のいずれか１つに記載の方法。

【0308】

Ｅ２６． １つ以上の二価カチオンが、Ｍｎ^２＋を含む、Ｅ２０～Ｅ２５のいずれか１つに記載の方法。

【0309】

Ｅ２７． １つ以上の二価カチオンが、Ｎｉ^２＋を含む、Ｅ２０～Ｅ２６のいずれか１つに記載の方法。

【0310】

Ｅ２８． １つ以上の二価カチオンが、Ｚｎ^２＋を含む、Ｅ２０～Ｅ２７のいずれか１つに記載の方法。

【0311】

Ｅ２９． １つ以上の二価カチオンが、Ｃａ^２＋及びＭｇ^２＋を含む、Ｅ２０～Ｅ２８のいずれか１つに記載の方法。

【0312】

Ｅ３０．Ｃａ^２＋及びＭｇ^２＋が、１：１の比で存在する、Ｅ２９に記載の方法。

【0313】

Ｅ３１． １つ以上の二価カチオンが、硬いルイス酸を含む、Ｅ１～Ｅ３０のいずれか１つに記載の方法。

【0314】

Ｅ３２． １つ以上の二価カチオンが、治療用オリゴヌクレオチドのカチオン結合部位から水を置き換える、Ｅ１～Ｅ３１のいずれか１つに記載の方法。

【0315】

Ｅ３３．治療用オリゴヌクレオチドが、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ＣＲＩＳＰＲガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、またはＲＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である、Ｅ１～Ｅ３２のいずれか１つに記載の方法。

【0316】

Ｅ３４．治療用オリゴヌクレオチドが、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子である、Ｅ１～Ｅ３３のいずれか１つに記載の方法。

【0317】

Ｅ３５．治療用オリゴヌクレオチドが、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である、Ｅ１～Ｅ３３のいずれか１つに記載の方法。

【0318】

Ｅ３６．ｓｉＲＮＡ分子が分岐しており、任意選択で、ｓｉＲＮＡ分子が二分岐、三分岐、または四分岐である、Ｅ３５に記載の方法。

【0319】

Ｅ３７．ｓｉＲＮＡ分子が、二分岐である、Ｅ３６に記載の方法。

【0320】

Ｅ３８．ｓｉＲＮＡ分子が、三分岐である、Ｅ３６に記載の方法。

【0321】

Ｅ３９．ｓｉＲＮＡ分子が、四分岐である、Ｅ３６に記載の方法。

【0322】

Ｅ４０．二分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式Ｉ～ＩＩＩのいずれか１つで表され、

【化24】

式中、各ＲＮＡは、独立してｓｉＲＮＡ分子であり、Ｌは、リンカーであり、各Ｘは、独立して分岐点部分を表す、Ｅ３６またはＥ３７に記載の方法。

【0323】

Ｅ４１．二分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式Ｉで表される、Ｅ４０に記載の方法。

【0324】

Ｅ４２．二分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＩＩで表される、Ｅ４０に記載の方法。

【0325】

Ｅ４３．二分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＩＩＩで表される、Ｅ４０に記載の方法。

【0326】

Ｅ４４．三分岐ｓｉＲＮＡ分子は、式ＩＶ～ＶＩＩのいずれか１つで表され、

【化25】

式中、各ＲＮＡは、独立してｓｉＲＮＡ分子であり、Ｌは、リンカーであり、各Ｘは、独立して分岐点部分を表す、Ｅ３６またはＥ３８に記載の方法。

【0327】

Ｅ４５．三分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＩＶで表される、Ｅ４４に記載の方法。

【0328】

Ｅ４６．三分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式Ｖで表される、Ｅ４４に記載の方法。

【0329】

Ｅ４７．三分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＶＩで表される、Ｅ４４に記載の方法。

【0330】

Ｅ４８．三分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＶＩＩで表される、Ｅ４４に記載の方法。

【0331】

Ｅ４９．四分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＶＩＩＩ～ＸＩＩのいずれか１つで表され、

【化26】

式中、各ＲＮＡは、独立してｓｉＲＮＡ分子であり、Ｌは、リンカーであり、各Ｘは、独立して分岐点部分を表す、Ｅ３６またはＥ３９に記載の方法。

【0332】

Ｅ５０．四分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＶＩＩＩで表される、Ｅ４９に記載の方法。

【0333】

Ｅ５１．四分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＩＸで表される、Ｅ４９に記載の方法。

【0334】

Ｅ５２．四分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式Ｘで表される、Ｅ４９に記載の方法。

【0335】

Ｅ５３．四分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＸＩで表される、Ｅ４９に記載の方法。

【0336】

Ｅ５４．四分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＸＩＩで表される、Ｅ４９に記載の方法。

【0337】

Ｅ５５．リンカーが、エチレングリコール（例えば、トリエチレングリコール（ＴｒＥＧ）またはテトラエチレングリコール（ＴＥＧ）などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ））、アルキル、炭水化物、ブロックコポリマー、ペプチド、ＲＮＡ、及びＤＮＡのうちの１つ以上の連続サブユニット、からなる群から選択される、Ｅ４０～Ｅ５４のいずれか１つに記載の方法。

【0338】

Ｅ５６．リンカーが、エチレングリコールオリゴマーである、Ｅ５５に記載の方法。

【0339】

Ｅ５７．エチレングリコールオリゴマーが、ＰＥＧである、Ｅ５６に記載の方法。

【0340】

Ｅ５８．ＰＥＧが、ＴｒＥＧである、Ｅ５７に記載の方法。

【0341】

Ｅ５９．ＰＥＧが、ＴＥＧである、Ｅ５７に記載の方法。

【0342】

Ｅ６０．リンカーが、アルキルオリゴマーである、Ｅ５５に記載の方法。

【0343】

Ｅ６１．リンカーが、炭水化物オリゴマーである、Ｅ５５に記載の方法。

【0344】

Ｅ６２．リンカーが、ブロックコポリマーである、Ｅ５５に記載の方法。

【0345】

Ｅ６３．リンカーが、ペプチドオリゴマーである、Ｅ５５に記載の方法。

【0346】

Ｅ６４．リンカーが、ＲＮＡオリゴマーである、Ｅ５５に記載の方法。

【0347】

Ｅ６５．リンカーが、ＤＮＡオリゴマーである、Ｅ５５に記載の方法。

【0348】

Ｅ６６．オリゴマーまたはコポリマーが、２～２０の連続サブユニットを含有する、Ｅ５５～Ｅ６５のいずれか１つに記載の方法。

【0349】

Ｅ６７．オリゴマーまたはコポリマーが、４～１８の連続サブユニットを含有する、Ｅ６６に記載の方法。

【0350】

Ｅ６８．オリゴマーまたはコポリマーが、６～１６の連続サブユニットを含有する、Ｅ６７に記載の方法。

【0351】

Ｅ６９．オリゴマーまたはコポリマーが、８～１４の連続サブユニットを含有する、Ｅ６８に記載の方法。

【0352】

Ｅ７０．オリゴマーまたはコポリマーが、１０～１２の連続サブユニットを含有する、Ｅ６９に記載の方法。

【0353】

Ｅ７１．リンカーが、共有結合形成部分により１つ以上（例えば、１、２、またはそれ以上）のｓｉＲＮＡ分子を結合させ、任意選択で、共有結合形成部分は、アルキル、エステル、アミド、カルバメート、ホスホネート、ホスフェート、ホスホロチオエート、ホスホロアミデート、トリアゾール、尿素、及びホルムアセタールからなる群から選択される、Ｅ５５に記載の方法。

【0354】

Ｅ７２．リンカーが、式Ｌ１の構造を含む、Ｅ５５に記載の方法。

【化27】

【0355】

Ｅ７３．リンカーが、式Ｌ２の構造を含む、Ｅ５５に記載の方法。

【化28】

【0356】

Ｅ７４．リンカーが、式Ｌ３の構造を含む、Ｅ５５に記載の方法。

【化29】

【0357】

Ｅ７５．リンカーが、式Ｌ４の構造を含む、Ｅ５５に記載の方法。

【化30】

【0358】

Ｅ７６．リンカーが、式Ｌ５の構造を含む、Ｅ５５に記載の方法。

【化31】

【0359】

Ｅ７７．リンカーが、式Ｌ６の構造を含む、Ｅ５５に記載の方法。

【化32】

【0360】

Ｅ７８．リンカーが、式Ｌ７の構造を含む、Ｅ５５に記載の方法。

【化33】

【0361】

Ｅ７９．リンカーが、式Ｌ８の構造を含む、Ｅ５５に記載の方法。

【化34】

【0362】

Ｅ８０．リンカーが、式Ｌ９の構造を含む、Ｅ５５に記載の方法。

【化35】

【0363】

Ｅ８１．
ａ． 治療用オリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖と、アンチセンス鎖に対して相補性を有するセンス鎖とを含むか、または
ｂ． 治療用オリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖のみを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドである、
Ｅ１～Ｅ８０のいずれか１つに記載の方法。

【0364】

Ｅ８２．アンチセンス鎖及びセンス鎖が、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドと２’－フルオロリボヌクレオシドを交互で含む、Ｅ８１に記載の方法。

【0365】

Ｅ８３．アンチセンス鎖が、５’－３’方向に、以下の式：
Ｚ－（（Ａ－Ｐ－）_ｎ（Ｂ－Ｐ－）_ｍ）_ｑ；
式ＸＩＩＩ
を有し、
式中、Ｚは、５’リン安定化部分であり；
各Ａは独立して、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｂは独立して、２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｐは、独立して、ホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合から選択されるヌクレオシド間結合であり；
ｎは、１～５の整数であり；
ｍは１～５の整数であり；
ｑは、１～３０の間の整数である、Ｅ８１またはＥ８２に記載の方法。

【0366】

Ｅ８４．ｎが、１～４である、Ｅ８３に記載の方法。

【0367】

Ｅ８５．ｎが、１～３である、Ｅ８３に記載の方法。

【0368】

Ｅ８６．ｎが、１～２である、Ｅ８３に記載の方法。

【0369】

Ｅ８７．ｎが、１である、Ｅ８３に記載の方法。

【0370】

Ｅ８８．ｎが、２である、Ｅ８３に記載の方法。

【0371】

Ｅ８９．ｎが、３である、Ｅ８３に記載の方法。

【0372】

Ｅ９０．ｎが、４である、Ｅ８３に記載の方法。

【0373】

Ｅ９１．ｎが、５である、Ｅ８３に記載の方法。

【0374】

Ｅ９２．ｍが、１～４である、Ｅ８３～Ｅ９１のいずれか１つに記載の方法。

【0375】

Ｅ９３．ｍが、１～３である、Ｅ９２に記載の方法。

【0376】

Ｅ９４．ｍが、１～２である、Ｅ９２に記載の方法。

【0377】

Ｅ９５．ｍが、１である、Ｅ９２に記載の方法。

【0378】

Ｅ９６．ｍが、２である、Ｅ９２に記載の方法。

【0379】

Ｅ９７．ｍが、３である、Ｅ９２に記載の方法。

【0380】

Ｅ９８．ｍが、４である、Ｅ９２に記載の方法。

【0381】

Ｅ９９．ｍが、５である、Ｅ９２に記載の方法。

【0382】

Ｅ１００．アンチセンス鎖が、式Ｉで表される構造を含み、式Ｉは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ’－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式Ｉ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、Ｅ８１に記載の方法。

【0383】

Ｅ１０１．アンチセンス鎖が、式Ａ１で表される構造を含み、式Ａ１は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ１；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ１００に記載の方法。

【0384】

Ｅ１０２．アンチセンス鎖が、式ＩＩで表される構造を含み、式ＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、Ｅ１００に記載の方法。

【0385】

Ｅ１０３．アンチセンス鎖が、式Ａ２で表される構造を含み、式Ａ２は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ２；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ１０２に記載の方法。

【0386】

Ｅ１０４．センス鎖が、式ＩＩＩで表される構造を含み、式ＩＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ｅ－（Ａ’）_ｍ－Ｆ
式ＩＩＩ；
式中、Ｅは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
Ｆは、式（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｃ、（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｃ、（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ、または（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｄで表され；
Ａ’、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＩＩで定義されたとおりであり；
ｍは、１～７の整数である、Ｅ８１～１０３のいずれか１つに記載の方法。

【0387】

Ｅ１０５．センス鎖が、式Ｓ１で表される構造を含み、式Ｓ１は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ１；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ１０４に記載の方法。

【0388】

Ｅ１０６．センス鎖が、式Ｓ２で表される構造を含み、式Ｓ２は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ
式Ｓ２；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ１０４に記載の方法。

【0389】

Ｅ１０７．センス鎖が、式Ｓ３で表される構造を含み、式Ｓ３は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ
式Ｓ３；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ１０４に記載の方法。

【0390】

Ｅ１０８．センス鎖が、式Ｓ４で表される構造を含み、式Ｓ４は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ
式Ｓ４；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ１０４に記載の方法。

【0391】

Ｅ１０９．アンチセンス鎖が、式ＩＶで表される構造を含み、式ＩＶは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｂ－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＶ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、Ｅ８１、Ｅ８２、及びＥ１０４～Ｅ１０８のいずれか１つに記載の方法。

【0392】

Ｅ１１０．アンチセンス鎖が、式Ａ３で表される構造を含み、式Ａ３は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ３；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ１０９に記載の方法。

【0393】

Ｅ１１１．センス鎖が、式Ｖで表される構造を含み、式Ｖは、５’－３’方向に以下であり、
Ｅ－（Ａ’）_ｍ－Ｃ－Ｐ^２－Ｆ
式Ｖ；
式中、Ｅは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
Ｆは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｃ、Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｃ、Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ、またはＤ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｄで表され；
Ａ’、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＩＶで定義されたとおりであり；
ｍは、１～７の整数である、Ｅ８１～Ｅ１０３、Ｅ１０９、Ｅ１１０のいずれか１つに記載の方法。

【0394】

Ｅ１１２．センス鎖が、式Ｓ５で表される構造を含み、式Ｓ５は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ５；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ１１１に記載の方法。

【0395】

Ｅ１１３．センス鎖が、式Ｓ６で表される構造を含み、式Ｓ６は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ
式Ｓ６；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ１１１に記載の方法。

【0396】

Ｅ１１４．センス鎖が、式Ｓ７で表される構造を含み、式Ｓ７は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ
式Ｓ７；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ１１１に記載の方法。

【0397】

Ｅ１１５．センス鎖が、式Ｓ８で表される構造を含み、式Ｓ８は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ
式Ｓ８；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ１１１に記載の方法。

【0398】

Ｅ１１６．アンチセンス鎖が、式ＶＩで表される構造を含み、式ＶＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ_ｊ－Ｅ－Ｂ_ｋ－Ｅ－Ｆ－Ｇ_ｌ－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ’
式ＶＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｅは、式Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２で表され；
Ｆは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１で表され；
各Ｇは、式Ｃ－Ｐ^１で表され；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数であり；
ｌは、１～７の整数である、Ｅ８１、Ｅ８２、Ｅ１０４～Ｅ１０８、及びＥ１１１～Ｅ１１４のいずれか１つに記載の方法。

【0399】

Ｅ１１７．アンチセンス鎖が、式Ａ４で表される構造を含み、式Ａ４は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ４；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ１１６に記載の方法。

【0400】

Ｅ１１８．センス鎖が、式ＶＩＩで表される構造を含み、式ＶＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ｈ－Ｂ_ｍ－Ｉ_ｎ－Ａ’－Ｂ_ｏ－Ｈ－Ｃ
式ＶＩＩ；
式中、各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｈは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
各Ｉは、式（Ｄ－Ｐ^２）で表され；
Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＶＩで定義されたとおりであり；
ｍは１～７の整数であり；
ｎは１～７の整数であり；
ｏは１～７の整数である、Ｅ８１～Ｅ１０３、Ｅ１０９、Ｅ１１０、Ｅ１１６、及びＥ１１７のいずれか１つに記載の方法。

【0401】

Ｅ１１９．センス鎖が、式Ｓ９で表される構造を含み、式Ｓ９は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ９；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ１１８に記載の方法。

【0402】

Ｅ１２０．アンチセンス鎖が、アンチセンス鎖の５’末端に５’リン安定化部分をさらに含む、Ｅ８１～Ｅ１１９のいずれか１つに記載の方法。

【0403】

Ｅ１２１．センス鎖が、センス鎖の５’末端に５’リン安定化部分をさらに含む、Ｅ８１～Ｅ１２０のいずれか１つに記載の方法。

【0404】

Ｅ１２２． ５’リン安定化部分が、式ＩＸ～ＸＶＩのいずれか１つで表され、

【化36】

式中、Ｎｕｃは、アデニン、ウラシル、グアニン、チミン、及びシトシンからなる群から選択される核酸塩基を表し、Ｒは、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、フェニル、ベンジル、ヒドロキシ、または水素を表す、Ｅ８１～Ｅ９７、Ｅ１２０、及びＥ１２１のいずれか１つに記載の方法。

【0405】

Ｅ１２３． ５’－リン安定化部分が、式ＸＶＩに表される（Ｅ）－ビニルホスホネートである、Ｅ１２２に記載の方法。

【0406】

Ｅ１２４．リボヌクレオシドのうちの少なくとも５０％が２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドである、Ｅ８２～Ｅ１２３のいずれか１つに記載の方法。

【0407】

Ｅ１２５．リボヌクレオシドのうちの少なくとも６０％が２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドである、Ｅ８２～Ｅ１２４のいずれか１つに記載の方法。

【0408】

Ｅ１２６．リボヌクレオシドのうちの少なくとも７０％が２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドである、Ｅ８２～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。

【0409】

Ｅ１２７．リボヌクレオシドのうちの少なくとも８０％が２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドである、Ｅ８２～Ｅ１２６のいずれか１つに記載の方法。

【0410】

Ｅ１２８．リボヌクレオシドのうちの少なくとも９０％が２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドである、Ｅ８２～Ｅ１２７のいずれか１つに記載の方法。

【0411】

Ｅ１２９．アンチセンス鎖の長さが、１０ヌクレオチド～３０ヌクレオチドの間である、Ｅ８１～Ｅ１２８のいずれか１つに記載の方法。

【0412】

Ｅ１３０．アンチセンス鎖の長さが、１５ヌクレオチド～２５ヌクレオチドの間である、Ｅ８１～Ｅ１２９のいずれか１つに記載の方法。

【0413】

Ｅ１３１．アンチセンス鎖の長さが、２０ヌクレオチドである、Ｅ１３０に記載の方法。

【0414】

Ｅ１３２．アンチセンス鎖の長さが、２１ヌクレオチドである、Ｅ１３０に記載の方法。

【0415】

Ｅ１３３．アンチセンス鎖の長さが、２２ヌクレオチドである、Ｅ１３０に記載の方法。

【0416】

Ｅ１３４．アンチセンス鎖の長さが、２３ヌクレオチドである、Ｅ１３０に記載の方法。

【0417】

Ｅ１３５．アンチセンス鎖の長さが、２４ヌクレオチドである、Ｅ１３０に記載の方法。

【0418】

Ｅ１３６．アンチセンス鎖の長さが、２５ヌクレオチドである、Ｅ１３０に記載の方法。

【0419】

Ｅ１３７．アンチセンス鎖の長さが、２６ヌクレオチドである、Ｅ１２９に記載の方法。

【0420】

Ｅ１３８．アンチセンス鎖の長さが、２７ヌクレオチドである、Ｅ１２９に記載の方法。

【0421】

Ｅ１３９．アンチセンス鎖の長さが、２８ヌクレオチドである、Ｅ１２９に記載の方法。

【0422】

Ｅ１４０．アンチセンス鎖の長さが、２９ヌクレオチドである、Ｅ１２９に記載の方法。

【0423】

Ｅ１４１．アンチセンス鎖の長さが、３０ヌクレオチドである、Ｅ１２９に記載の方法。

【0424】

Ｅ１４２．センス鎖の長さが、１２ヌクレオチド～３０ヌクレオチドの間である、Ｅ８１～Ｅ１４１のいずれか１つに記載の方法。

【0425】

Ｅ１４３．センス鎖の長さが、１４ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0426】

Ｅ１４４．センス鎖の長さが、１５ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0427】

Ｅ１４５．センス鎖の長さが、１６ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0428】

Ｅ１４６．センス鎖の長さが、１７ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0429】

Ｅ１４７．センス鎖の長さが、１８ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0430】

Ｅ１４８．センス鎖の長さが、１９ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0431】

Ｅ１４９．センス鎖の長さが、２０ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0432】

Ｅ１５０．センス鎖の長さが、２１ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0433】

Ｅ１５１．センス鎖の長さが、２２ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0434】

Ｅ１５２．センス鎖の長さが、２３ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0435】

Ｅ１５３．センス鎖の長さが、２４ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0436】

Ｅ１５４．センス鎖の長さが、２５ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0437】

Ｅ１５５．センス鎖の長さが、２６ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0438】

Ｅ１５６．センス鎖の長さが、２７ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0439】

Ｅ１５７．センス鎖の長さが、２８ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0440】

Ｅ１５８．センス鎖の長さが、２９ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0441】

Ｅ１５９．センス鎖の長さが、３０ヌクレオチドである、Ｅ１４２に記載の方法。

【0442】

Ｅ１６０．治療用オリゴヌクレオチドを、水溶液の形態で、または懸濁液の形態で投与する、Ｅ１～Ｅ１５９のいずれか１つに記載の方法。

【0443】

Ｅ１６１．治療用オリゴヌクレオチドを、循環系に（例えば、全身的に）投与する、Ｅ１～Ｅ１６０のいずれか１つに記載の方法。

【0444】

Ｅ１６２．治療用オリゴヌクレオチドを、中枢神経系に投与する、Ｅ１～Ｅ１６０のいずれか１つに記載の方法。

【0445】

Ｅ１６３．治療用オリゴヌクレオチドを、対象の脳脊髄液に直接投与し、任意選択で、治療用オリゴヌクレオチドを、髄腔内、脳室内、線条体内に、またはカテーテル挿入を介して大槽内注射によって投与する、Ｅ１～Ｅ１６０のいずれか１つに記載の方法。

【0446】

Ｅ１６４．治療用オリゴヌクレオチドを、対象の脊髄に直接投与し、任意選択で、治療用オリゴヌクレオチドを、髄腔内、脳室内、線条体内に、またはカテーテル挿入により大槽内注射によって投与する、Ｅ１～Ｅ１６０のいずれか１つに記載の方法。

【0447】

Ｅ１６５．治療用オリゴヌクレオチドを、対象の脳実質に直接投与する、Ｅ１～Ｅ１６０のいずれか１つに記載の方法。

【0448】

Ｅ１６６．脳に投与される治療用オリゴヌクレオチドを、皮質、小脳、大脳基底核、または他の脳構造に特異的に投与する、Ｅ１６５に記載の方法。

【0449】

Ｅ１６７．大脳基底核に投与される治療用オリゴヌクレオチドを、尾状核、被殻、視床、淡蒼球、または黒質に特異的に投与する、Ｅ１６６に記載の方法。

【0450】

Ｅ１６８．治療用オリゴヌクレオチドを、髄腔内、脳室内、線条体内に、またはカテーテル挿入を介して大槽内注射によって投与する、Ｅ１～Ｅ１６０のいずれか１つに記載の方法。

【0451】

Ｅ１６９．治療用オリゴヌクレオチドを、髄腔内に投与する、Ｅ１６８に記載の方法。

【0452】

Ｅ１７０．治療用オリゴヌクレオチドを、脳室内に投与する、Ｅ１６８に記載の方法。

【0453】

Ｅ１７１．治療用オリゴヌクレオチドを対象に投与すると、対象における遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームのサイレンシングが生じる、Ｅ１～Ｅ１７０のいずれか１つに記載の方法。

【0454】

Ｅ１７２．遺伝子のサイレンシングが、参照対象で観察される発現及び／または活性のレベルに対する、発現及び／または活性の増加が疾患状態に関連する、遺伝子の正の調節因子をサイレンシングすることを含む、Ｅ１７１に記載の方法。

【0455】

Ｅ１７３．遺伝子のサイレンシングが、参照対象で観察される発現及び／または活性のレベルに対する、発現及び／または活性の低下が疾患状態に関連する、遺伝子の負の調節因子をサイレンシングすることを含む、Ｅ１７１に記載の方法。

【0456】

Ｅ１７４．遺伝子のサイレンシングが、参照対象における遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームの発現に対する、遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームの過剰発現が疾患状態に関連する、遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームをサイレンシングすることを含む、Ｅ１７１～Ｅ１７３のいずれか１つに記載の方法。

【0457】

Ｅ１７５．遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームが、対象の中枢神経系において転写的に発現している、Ｅ１７１～Ｅ１７４のいずれか１つに記載の方法。

【0458】

Ｅ１７６．遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームのサイレンシングを使用して、中枢神経系の疾患と診断された対象を治療する、Ｅ１７１～Ｅ１７５のいずれか１つに記載の方法。

【0459】

Ｅ１７７．疾患が、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、純粋自律神経不全、レビー小体嚥下障害、偶発的レビー小体病（ＩＬＢＤ）、遺伝性レビー小体病、オリーブ橋小脳萎縮症（ＯＰＣＡ）、線条体黒質変性症、シャイ・ドレーガー症候群、てんかんもしくはてんかん症候群、プリオン病、または疼痛障害である、Ｅ１７６に記載の方法。

【0460】

Ｅ１７８．アンチセンス鎖が、ＡＢＣＡ７、ＡＢＩ３、ＡＤＡＭ１０、ＡＰＯＣ１、ＡＰＯＥ、ＡＸＬ、ＢＩＮ１、Ｃ１ＱＡ、Ｃ３、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＣＡＳＳ４、ＣＣＬ５、ＣＤ２ＡＰ、ＣＤ３３、ＣＤ６８、ＣＬＰＴＭ１、ＣＬＵ、ＣＲ１、ＣＳＦ１、ＣＳＴ７、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＤ、ＣＴＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１３、ＤＳＧ２、ＥＣＨＤＣ３、ＥＰＨＡ１、ＦＡＢＰ５、ＦＥＲＭＴ２、ＦＴＨ１、ＧＮＡＳ、ＧＲＮ、ＨＢＥＧＦ、ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＨＬＡ－ＤＲＢ５、ＨＴＴ、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＧＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＮＰＰ５Ｄ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＫＣＮＴ１、ＬＩＬＲＢ４、ＬＰＬ、ＭＡＰＴ、ＭＥＦ２Ｃ、ＭＭＰ１２、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＭＳ４Ａ６Ａ、ＭＳＨ３、ＮＬＲＰ３、ＮＭＥ８、ＮＯＳ２、ＰＩＣＡＬＭ、ＰＩＬＲＡ、ＰＬＣＧ２、ＰＲＮＰ、ＰＴＫ２Ｂ、ＳＣＩＭＰ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＬＣ２４Ａ４、ＳＮＣＡ、ＳＯＲＬ１、ＳＰＩ１、ＳＰＰ１、ＳＰＰＬ２Ａ、ＴＢＫ１、ＴＮＦ、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭＬ２、ＴＹＲＯＢＰ、及びＺＣＷＰＷ１、からなる群から選択される遺伝子の一部とハイブリダイズするのに十分な相補性を有する、Ｅ８１～Ｅ１７７のいずれか１つに記載の方法。

【0461】

Ｅ１７９．遺伝子が、ＨＴＴ、ＭＡＰＴ、ＳＮＣＡ、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＡＰＯＥ、ＳＣＮ９Ａ、ＫＣＮＴ１、ＰＲＮＰ、及びＭＳＨ３からなる群から選択される、Ｅ１７８に記載の方法。

【0462】

Ｅ１８０．遺伝子が、ＨＴＴである、Ｅ１７９に記載の方法。

【0463】

Ｅ１８１．遺伝子が、ＭＡＰＴである、Ｅ１７９に記載の方法。

【0464】

Ｅ１８２．遺伝子が、ＳＮＣＡである、Ｅ１７９に記載の方法。

【0465】

Ｅ１８３．遺伝子が、Ｃ９ＯＲＦ７２である、Ｅ１７９に記載の方法。

【0466】

Ｅ１８４．遺伝子が、ＡＰＯＥである、Ｅ１７９に記載の方法。

【0467】

Ｅ１８５．遺伝子が、ＳＣＮ９Ａである、Ｅ１７９に記載の方法。

【0468】

Ｅ１８６．遺伝子が、ＫＣＮＴ１である、Ｅ１７９に記載の方法。

【0469】

Ｅ１８７．遺伝子が、ＰＲＮＰである、Ｅ１７９に記載の方法。

【0470】

Ｅ１８８．遺伝子が、ＭＳＨ３である、Ｅ１７９に記載の方法。

【0471】

Ｅ１８９．対象が、ヒトである、Ｅ１～Ｅ１８８のいずれか１つに記載の方法。

【0472】

Ｅ１９０．治療用オリゴヌクレオチドの、１つ以上の二価カチオンに対するモル比が、１：１０～１：１００である、Ｅ１～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の方法。

【0473】

Ｅ１９１．治療用オリゴヌクレオチドの、１つ以上の二価カチオンに対するモル比が、１：１０～１：５０である、Ｅ１９０に記載の方法。

【0474】

Ｅ１９２．治療用オリゴヌクレオチドの、１つ以上の二価カチオンに対するモル比が、１：１８～１：３８である、Ｅ１９１に記載の方法。

【0475】

Ｅ１９３．治療用オリゴヌクレオチドの、１つ以上の二価カチオンに対するモル比が、１：２０～１：２５であり、任意選択で、治療用オリゴヌクレオチドの、１つ以上の二価カチオンに対するモル比が、１：２０である、Ｅ１９２に記載の方法。

【0476】

Ｅ１９４．治療用オリゴヌクレオチドの、１つ以上の二価カチオンに対するモル比が、１：２５である、Ｅ１９３に記載の方法。

【0477】

Ｅ１９５． １つ以上の二価カチオンの濃度が、１０ｍＭ～１５０ｍＭである、Ｅ１～Ｅ１９４のいずれか１つに記載の方法。

【0478】

Ｅ１９６． １つ以上の二価カチオンの濃度が、２０ｍＭ～１５０ｍＭである、Ｅ１９５に記載の方法。

【0479】

Ｅ１９７． １つ以上の二価カチオンの濃度が、２０ｍＭ～１００ｍＭである、Ｅ１９６に記載の方法。

【0480】

Ｅ１９８． １つ以上の二価カチオンの濃度が、２５ｍＭ～１５０ｍＭである、Ｅ１９６に記載の方法。

【0481】

Ｅ１９９． １つ以上の二価カチオンの濃度が、２５ｍＭ～１００ｍＭである、Ｅ１９８に記載の方法。

【0482】

Ｅ２００． １つ以上の二価カチオンの濃度が、３０ｍＭ～９０ｍＭである、Ｅ１９９に記載の方法。

【0483】

Ｅ２０１． １つ以上の二価カチオンの濃度が、３５ｍＭ～８０ｍＭである、Ｅ２００に記載の方法。

【0484】

Ｅ２０２． １つ以上の二価カチオンの濃度が、３５ｍＭ～７５ｍＭである、Ｅ２０１に記載の方法。

【0485】

Ｅ２０３． １つ以上の二価カチオンの濃度が、４０ｍＭ～７０ｍＭである、Ｅ２０２に記載の方法。

【0486】

Ｅ２０４． １つ以上の二価カチオンの濃度が、４０ｍＭ～６５ｍＭである、Ｅ２０３に記載の方法。

【0487】

Ｅ２０５． １つ以上の二価カチオンの濃度が、４０ｍＭ～６０ｍＭである、Ｅ２０４に記載の方法。

【0488】

Ｅ２０６． １つ以上の二価カチオンの濃度が、４０ｍＭ～５０ｍＭである、Ｅ２０５に記載の方法。

【0489】

Ｅ２０７．治療用オリゴヌクレオチドが、負電荷を有する１つ以上の原子を含み、二価カチオンは２つの正電荷を含み、負電荷の正電荷に対する比が０．７５～７．５であり、任意選択で、負電荷の正電荷に対する比が、１．０～２．０である、Ｅ１～Ｅ２０６のいずれか１つに記載の方法。

【0490】

Ｅ２０８．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～６．５である、Ｅ２０７に記載の方法。

【0491】

Ｅ２０９．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～５．５である、Ｅ２０８に記載の方法。

【0492】

Ｅ２１０．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～４．５である、Ｅ２０９に記載の方法。

【0493】

Ｅ２１１．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～３．５である、Ｅ２１０に記載の方法。

【0494】

Ｅ２１２．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～２．５である、Ｅ２１１に記載の方法。

【0495】

Ｅ２１３．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～１．５である、Ｅ２１２に記載の方法。

【0496】

Ｅ２１４．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～１である、Ｅ２１３に記載の方法。

【0497】

Ｅ２１５．負電荷の正電荷に対する比が１～７．５である、Ｅ２０８に記載の方法。

【0498】

Ｅ２１６．負電荷の正電荷に対する比が１．５～７．５である、Ｅ２１５に記載の方法。

【0499】

Ｅ２１７．負電荷の正電荷に対する比が２．５～７．５である、Ｅ２１６に記載の方法。

【0500】

Ｅ２１８．負電荷の正電荷に対する比が３．５～７．５である、Ｅ２１７に記載の方法。

【0501】

Ｅ２１９．負電荷の正電荷に対する比が４．５～７．５である、Ｅ２１８に記載の方法。

【0502】

Ｅ２２０．負電荷の正電荷に対する比が５．５～７．５である、Ｅ２１９に記載の方法。

【0503】

Ｅ２２１．負電荷の正電荷に対する比が６．５～７．５である、Ｅ２２０に記載の方法。

【0504】

Ｅ２２２． １つ以上の二価カチオンを含む塩として製剤化された治療用オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｇＲＮＡ、ＡＳＯ）であって、任意選択で、干渉ＲＮＡ分子（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である、治療用オリゴヌクレオチド。

【0505】

Ｅ２２３． Ｅ２２２に記載の治療用オリゴヌクレオチドであって、ｓｉＲＮＡ分子である、治療用オリゴヌクレオチド。

【0506】

Ｅ２２４．ｓｉＲＮＡ分子が、１つ以上の二価カチオンによって部分的または完全に飽和した複数のカチオン結合部位を含む、Ｅ２２２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0507】

Ｅ２２５． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約１０％～約１００％である、Ｅ２２４に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0508】

Ｅ２２６． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約２０％～約１００％である、Ｅ２２５に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0509】

Ｅ２２７． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約３０％～約１００％である、Ｅ２２６に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0510】

Ｅ２２８． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約４０％～約１００％である、Ｅ２２７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0511】

Ｅ２２９． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約５０％～約１００％である、Ｅ２２８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0512】

Ｅ２３０． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約６０％～約１００％である、Ｅ２２９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0513】

Ｅ２３１． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約７０％～約１００％である、Ｅ２３０に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0514】

Ｅ２３２． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約８０％～約１００％である、Ｅ２３１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0515】

Ｅ２３３． １つ以上の二価カチオンによるカチオン結合部位の飽和度が、約９０％～約１００％である、Ｅ２３２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0516】

Ｅ２３４．カチオン結合部位が、ヌクレオシド間結合内に位置し、任意選択で、ヌクレオシド間結合がホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合から選択される、Ｅ２２４～Ｅ２３３のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0517】

Ｅ２３５． １つ以上の二価カチオンが、約３０ピコメートル～約１５０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ２２２～Ｅ２３４のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0518】

Ｅ２３６． １つ以上の二価カチオンが、約３０ピコメートル～約１４０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ２３５に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0519】

Ｅ２３７． １つ以上の二価カチオンが、約４０ピコメートル～約１３０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ２３６に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0520】

Ｅ２３８． １つ以上の二価カチオンが、約５０ピコメートル～約１２０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ２３７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0521】

Ｅ２３９． １つ以上の二価カチオンが、約６０ピコメートル～約１１０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ２３８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0522】

Ｅ２４０． １つ以上の二価カチオンが、約６０ピコメートル～約１００ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ２３９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0523】

Ｅ２４１． １つ以上の二価カチオンが、約６０ピコメートル～約９０ピコメートルのイオン半径を特徴とする、Ｅ２４０に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0524】

Ｅ２４２． １つ以上の二価カチオンが、Ｂａ^２＋、Ｂｅ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、Ｚｎ^２＋、またはそれらの組み合わせを含む、Ｅ２２２～Ｅ２３４のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0525】

Ｅ２４３． １つ以上の二価カチオンが、Ｂａ^２＋を含む、Ｅ２４２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0526】

Ｅ２４４． １つ以上の二価カチオンが、Ｂｅ^２＋を含む、Ｅ２４２またはＥ２４３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0527】

Ｅ２４５． １つ以上の二価カチオンが、Ｃａ^２＋を含む、Ｅ２４２～Ｅ２４４のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0528】

Ｅ２４６． １つ以上の二価カチオンが、Ｃｕ^２＋を含む、Ｅ２４２～Ｅ２４５のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0529】

Ｅ２４７． １つ以上の二価カチオンが、Ｍｇ^２＋を含む、Ｅ２４２～Ｅ２４６のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0530】

Ｅ２４８． １つ以上の二価カチオンが、Ｍｎ^２＋を含む、Ｅ２４２～Ｅ２４７のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0531】

Ｅ２４９． １つ以上の二価カチオンが、Ｎｉ^２＋を含む、Ｅ２４２～Ｅ２４８のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0532】

Ｅ２５０． １つ以上の二価カチオンが、Ｚｎ^２＋を含む、Ｅ２４２～Ｅ２４９のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0533】

Ｅ２５１． １つ以上の二価カチオンが、Ｃａ^２＋及びＭｇ^２＋を含む、Ｅ２４２～Ｅ２５０のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0534】

Ｅ２５２． １つ以上の二価カチオンが、硬いルイス酸を含む、Ｅ２２２～Ｅ２５１のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0535】

Ｅ２５３． １つ以上の二価カチオンが、ｓｉＲＮＡ分子のカチオン結合部位から水を置き換える、Ｅ２２２～Ｅ２５２のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0536】

Ｅ２５４．ｓｉＲＮＡ分子が分岐しており、任意選択で、ｓｉＲＮＡ分子が二分岐、三分岐、または四分岐である、Ｅ２２２～Ｅ２５３のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0537】

Ｅ２５５．ｓｉＲＮＡ分子が、二分岐である、Ｅ２５４に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0538】

Ｅ２５６．ｓｉＲＮＡ分子が、三分岐である、Ｅ２５４に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0539】

Ｅ２５７．ｓｉＲＮＡ分子が、四分岐である、Ｅ２５４に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0540】

Ｅ２５８．二分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式Ｉ～ＩＩＩのいずれか１つで表され、

【化37】

式中、各ＲＮＡは、独立してｓｉＲＮＡ分子であり、Ｌは、リンカーであり、各Ｘは、独立して分岐点部分を表す、Ｅ２５４またはＥ２５５に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0541】

Ｅ２５９．二分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式Ｉで表される、Ｅ２５８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0542】

Ｅ２６０．二分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＩＩで表される、Ｅ２５８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0543】

Ｅ２６１．二分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＩＩＩで表される、Ｅ２５８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0544】

Ｅ２６２．三分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＩＶ～ＶＩＩのいずれか１つで表され、

【化38】

式中、各ＲＮＡは、独立してｓｉＲＮＡ分子であり、Ｌは、リンカーであり、各Ｘは、独立して分岐点部分を表す、Ｅ２５４またはＥ２５６に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0545】

Ｅ２６３．三分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＩＶで表される、Ｅ２６２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0546】

Ｅ２６４．三分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式Ｖで表される、Ｅ２６２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0547】

Ｅ２６５．三分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＶＩで表される、Ｅ２６２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0548】

Ｅ２６６．三分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＶＩＩで表される、Ｅ２６２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0549】

Ｅ２６７．四分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＶＩＩＩ～ＸＩＩのいずれか１つで表され、

【化39】

式中、各ＲＮＡは、独立してｓｉＲＮＡ分子であり、Ｌは、リンカーであり、各Ｘは、独立して分岐点部分を表す、Ｅ２５４またはＥ２５７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0550】

Ｅ２６８．四分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＶＩＩＩで表される、Ｅ２６７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0551】

Ｅ２６９．四分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＩＸで表される、Ｅ２６７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0552】

Ｅ２７０．四分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式Ｘで表される、Ｅ２６７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0553】

Ｅ２７１．四分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＸＩで表される、Ｅ２６７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0554】

Ｅ２７２．四分岐ｓｉＲＮＡ分子が、式ＸＩＩで表される、Ｅ２６７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0555】

Ｅ２７３．リンカーが、エチレングリコール（例えば、トリエチレングリコール（ＴｒＥＧ）またはテトラエチレングリコール（ＴＥＧ）などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ））、アルキル、炭水化物、ブロックコポリマー、ペプチド、ＲＮＡ、及びＤＮＡのうちの１つ以上の連続サブユニット、からなる群から選択される、Ｅ２５８～Ｅ２７２のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0556】

Ｅ２７４．リンカーが、エチレングリコールオリゴマーである、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0557】

Ｅ２７５．エチレングリコールオリゴマーが、ＰＥＧである、Ｅ２７４に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0558】

Ｅ２７６．ＰＥＧが、ＴｒＥＧである、Ｅ２７５に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0559】

Ｅ２７７．ＰＥＧが、ＴＥＧである、Ｅ２７６に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0560】

Ｅ２７８．リンカーが、アルキルオリゴマーである、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0561】

Ｅ２７９．リンカーが、炭水化物オリゴマーである、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0562】

Ｅ２８０．リンカーが、ブロックコポリマーである、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0563】

Ｅ２８１．リンカーが、ペプチドオリゴマーである、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0564】

Ｅ２８２．リンカーが、ＲＮＡオリゴマーである、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0565】

Ｅ２８３．リンカーが、ＤＮＡオリゴマーである、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0566】

Ｅ２８４．オリゴマーまたはコポリマーが、２～２０の連続サブユニットを含有する、Ｅ２７３～Ｅ２８３のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0567】

Ｅ２８５．オリゴマーまたはコポリマーが、４～１８の連続サブユニットを含有する、Ｅ２８４に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0568】

Ｅ２８６．オリゴマーまたはコポリマーが、６～１６の連続サブユニットを含有する、Ｅ２８４に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0569】

Ｅ２８７．オリゴマーまたはコポリマーが、８～１４の連続サブユニットを含有する、Ｅ２８６に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0570】

Ｅ２８８．オリゴマーまたはコポリマーが、１０～１２の連続サブユニットを含有する、Ｅ２８７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0571】

Ｅ２８９．リンカーが、共有結合形成部分により１つ以上（例えば、１、２、またはそれ以上）のｓｉＲＮＡ分子を結合させる、Ｅ２４３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0572】

Ｅ２９０．共有結合形成部分が、アルキル、エステル、アミド、カルバメート、ホスホネート、ホスフェート、ホスホロチオエート、ホスホロアミデート、トリアゾール、尿素、及びホルムアセタールからなる群から選択される、Ｅ２８９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0573】

Ｅ２９１．リンカーが、式Ｌ１の構造を含む、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【化40】

【0574】

Ｅ２９２．リンカーが、式Ｌ２の構造を含む、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【化41】

【0575】

Ｅ２９３．リンカーが、式Ｌ３の構造を含む、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【化42】

【0576】

Ｅ２９４．リンカーが、式Ｌ４の構造を含む、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【化43】

【0577】

Ｅ２９５．リンカーが、式Ｌ５の構造を含む、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【化44】

【0578】

Ｅ２９６．リンカーが、式Ｌ６の構造を含む、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【化45】

【0579】

Ｅ２９７．リンカーが、式Ｌ７の構造を含む、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【化46】

【0580】

Ｅ２９８．リンカーが、式Ｌ８の構造を含む、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【化47】

【0581】

Ｅ２９９．リンカーが、式Ｌ９の構造を含む、Ｅ２７３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【化48】

【0582】

Ｅ３００．ｓｉＲＮＡ分子が、アンチセンス鎖と、アンチセンス鎖に対して相補性を有するセンス鎖とを含む、Ｅ２２２～Ｅ２９９のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0583】

Ｅ３０１．アンチセンス鎖及びセンス鎖が、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドと２’－フルオロリボヌクレオシドを交互で含む、Ｅ３００に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0584】

Ｅ３０２．アンチセンス鎖が、５’－３’方向に、以下の式：
Ｚ－（（Ａ－Ｐ－）_ｎ（Ｂ－Ｐ－）_ｍ）_ｑ；
式ＸＩＩＩ
を有し、
式中、Ｚは、５’リン安定化部分であり；
各Ａは独立して、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｂは独立して、２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｐは、独立して、ホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合から選択されるヌクレオシド間結合であり；
ｎは、１～５の整数であり；
ｍは１～５の整数であり；
ｑは、１～３０の間の整数である、Ｅ３００またはＥ３０１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0585】

Ｅ３０３．ｎが、１～４である、Ｅ３０２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0586】

Ｅ３０４．ｎが、１～３である、Ｅ３０２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0587】

Ｅ３０５．ｎが、１～２である、Ｅ３０２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0588】

Ｅ３０６．ｎが、１である、Ｅ３０２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0589】

Ｅ３０７．ｎが、２である、Ｅ３０２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0590】

Ｅ３０８．ｎが、３である、Ｅ３０２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0591】

Ｅ３０９．ｎが、４である、Ｅ３０２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0592】

Ｅ３１０．ｎが、５である、Ｅ３０２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0593】

Ｅ３１１．ｍが、１～４である、Ｅ３０２～Ｅ３１０のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0594】

Ｅ３１２．ｍが、１～３である、Ｅ３１１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0595】

Ｅ３１３．ｍが、１～２である、Ｅ３１１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0596】

Ｅ３１４．ｍが、１である、Ｅ３１１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0597】

Ｅ３１５．ｍが、２である、Ｅ３１１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0598】

Ｅ３１６．ｍが、３である、Ｅ３１１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0599】

Ｅ３１７．ｍが、４である、Ｅ３１１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0600】

Ｅ３１８．ｍが、５である、Ｅ３１１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0601】

Ｅ３１９．アンチセンス鎖が、式Ｉで表される構造を含み、式Ｉは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ’－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式Ｉ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、Ｅ３００またはＥ３０１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0602】

Ｅ３２０．アンチセンス鎖が、式Ａ１で表される構造を含み、式Ａ１は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ１；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ３１９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0603】

Ｅ３２１．アンチセンス鎖が、式ＩＩで表される構造を含み、式ＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^１－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）リボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－フルオロ（２’－Ｆ）リボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、Ｅ３１９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0604】

Ｅ３２２．アンチセンス鎖が、式Ａ２で表される構造を含み、式Ａ２は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ２；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ３２１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0605】

Ｅ３２３．センス鎖が、式ＩＩＩで表される構造を含み、式ＩＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ｅ－（Ａ’）_ｍ－Ｆ
式ＩＩＩ；
式中、Ｅは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
Ｆは、式（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｃ、（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｃ、（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ、または（Ｃ－Ｐ^２）_３－Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｄで表され；
Ａ’、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＩＩで定義されたとおりであり；
ｍは、１～７の整数である、Ｅ３００～Ｅ３２２のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0606】

Ｅ３２４．センス鎖が、式Ｓ１で表される構造を含み、式Ｓ１は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ１；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ３２３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0607】

Ｅ３２５．センス鎖が、式Ｓ２で表される構造を含み、式Ｓ２は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ
式Ｓ２；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ３２３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0608】

Ｅ３２６．センス鎖が、式Ｓ３で表される構造を含み、式Ｓ３は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ
式Ｓ３；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ３２３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0609】

Ｅ３２７．センス鎖が、式Ｓ４で表される構造を含み、式Ｓ４は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ
式Ｓ４；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ３２３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0610】

Ｅ３２８．アンチセンス鎖が、式ＩＶで表される構造を含み、式ＩＶは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－（Ａ’）_ｊ－Ｃ－Ｐ^２－Ｂ－（Ｃ－Ｐ^１）_ｋ－Ｃ’
式ＩＶ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
Ｂは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数である、Ｅ３００、Ｅ３０１、及びＥ３２３～Ｅ３２７のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド

【0611】

Ｅ３２９．アンチセンス鎖が、式Ａ３で表される構造を含み、式Ａ３は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ａ３；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ３２８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0612】

Ｅ３３０．センス鎖が、式Ｖで表される構造を含み、式Ｖは、５’－３’方向に以下であり、
Ｅ－（Ａ’）_ｍ－Ｃ－Ｐ^２－Ｆ
式Ｖ；
式中、Ｅは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
Ｆは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｃ、Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｃ、Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１－Ｄ、またはＤ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２－Ｄで表され；
Ａ’、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＩＶで定義されたとおりであり；
ｍは、１～７の整数である、Ｅ３００～Ｅ２９２、Ｅ３２８、及びＥ３２９のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0613】

Ｅ３３１．センス鎖が、式Ｓ５で表される構造を含み、式Ｓ５は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ５；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ３３０に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0614】

Ｅ３３２．センス鎖が、式Ｓ６で表される構造を含み、式Ｓ６は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ
式Ｓ６；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ３３０に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0615】

Ｅ３３３．センス鎖が、式Ｓ７で表される構造を含み、式Ｓ７は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ
式Ｓ７；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ３３０に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0616】

Ｅ３３４．センス鎖が、式Ｓ８で表される構造を含み、式Ｓ８は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ
式Ｓ８；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ３３０に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0617】

Ｅ３３５．アンチセンス鎖が、式ＶＩで表される構造を含み、式ＶＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｂ_ｊ－Ｅ－Ｂ_ｋ－Ｅ－Ｆ－Ｇ_ｌ－Ｄ－Ｐ^１－Ｃ’
式ＶＩ；
式中、Ａは、式Ｃ－Ｐ^１－Ｄ－Ｐ^１で表され；
各Ｂは、式Ｃ－Ｐ^２で表され；
各Ｃは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドであり；
各Ｃ’は、独立して、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドまたは２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｄは、２’－Ｆリボヌクレオシドであり；
各Ｅは、式Ｄ－Ｐ^２－Ｃ－Ｐ^２で表され；
Ｆは、式Ｄ－Ｐ^１－Ｃ－Ｐ^１で表され；
各Ｇは、式Ｃ－Ｐ^１で表され；
各Ｐ^１は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；
各Ｐ^２は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり；
ｊは１～７の整数であり；
ｋは１～７の整数であり；
ｌは、１～７の整数である、Ｅ３００、Ｅ３０１、Ｅ２３～Ｅ３２７、及びＥ３３０～Ｅ３３４のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0618】

Ｅ３３６．アンチセンス鎖が、式Ａ４で表される構造を含み、式Ａ４は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｂ－Ｓ－Ａ
式Ａ４；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ３３５に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0619】

Ｅ３３７．センス鎖が、式ＶＩＩで表される構造を含み、式ＶＩＩは、５’－３’方向に以下であり、
Ｈ－Ｂ_ｍ－Ｉ_ｎ－Ａ’－Ｂ_ｏ－Ｈ－Ｃ
式ＶＩＩ；
式中、各Ａ’は、式Ｃ－Ｐ^２－Ｄ－Ｐ^２で表され；
各Ｈは、式（Ｃ－Ｐ^１）_２で表され；
各Ｉは、式（Ｄ－Ｐ^２）で表され；
Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｐ^１、及びＰ^２は、式ＶＩで定義されたとおりであり；
ｍは１～７の整数であり；
ｎは１～７の整数であり；
は１～７の整数である、Ｅ３００～Ｅ３２２、Ｅ３２８、Ｅ３２９、Ｅ３３５、及びＥ３３６のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0620】

Ｅ３３８．センス鎖が、式Ｓ９で表される構造を含み、式Ｓ９は、５’－３’方向に以下であり、
Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ｂ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｏ－Ａ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ａ
式Ｓ９；
式中、Ａは、２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドを表し、Ｂは、２’－Ｆリボヌクレオシドを表し、Ｏは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、Ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す、Ｅ３３７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0621】

Ｅ３３９．アンチセンス鎖が、アンチセンス鎖の５’末端に５’リン安定化部分をさらに含む、Ｅ３００～Ｅ３３８のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0622】

Ｅ３４０．センス鎖が、センス鎖の５’末端に５’リン安定化部分をさらに含む、Ｅ３００～Ｅ３３９のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0623】

Ｅ３４１． ５’リン安定化部分が、式ＩＸ～ＸＶＩのいずれか１つで表され、

【化49】

式中、Ｎｕｃは、アデニン、ウラシル、グアニン、チミン、及びシトシンからなる群から選択される核酸塩基を表し、Ｒは、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、フェニル、ベンジル、ヒドロキシ、または水素を表す、Ｅ３０２～Ｅ３１８、Ｅ３３８、及びＥ３３９のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0624】

Ｅ３４２． ５’－リン安定化部分が、式ＸＶＩに表される（Ｅ）－ビニルホスホネートである、Ｅ３４１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0625】

Ｅ３４３．リボヌクレオシドのうちの少なくとも５０％が２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドである、Ｅ３０１～Ｅ３４２のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0626】

Ｅ３４４．リボヌクレオシドのうちの少なくとも６０％が２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドである、Ｅ３０１～Ｅ３４３のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0627】

Ｅ３４５．リボヌクレオシドのうちの少なくとも７０％が２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドである、Ｅ３０１～Ｅ３４４のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0628】

Ｅ３４６．リボヌクレオシドのうちの少なくとも８０％が２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドである、Ｅ３０１～Ｅ３４５のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0629】

Ｅ３４７．リボヌクレオシドのうちの少なくとも９０％が２’－Ｏ－Ｍｅリボヌクレオシドである、Ｅ３０１～Ｅ３４６のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0630】

Ｅ３４８．アンチセンス鎖の長さが、１０ヌクレオチド～３０ヌクレオチドの間である、Ｅ３００～Ｅ３４７のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0631】

Ｅ３４９．アンチセンス鎖の長さが、１５ヌクレオチド～２５ヌクレオチドの間である、Ｅ３００～Ｅ３４８のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0632】

Ｅ３５０．アンチセンス鎖の長さが、２０ヌクレオチドである、Ｅ３４９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0633】

Ｅ３５１．アンチセンス鎖の長さが、２１ヌクレオチドである、Ｅ３４９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0634】

Ｅ３５２．アンチセンス鎖の長さが、２２ヌクレオチドである、Ｅ３４９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0635】

Ｅ３５３．アンチセンス鎖の長さが、２３ヌクレオチドである、Ｅ３４９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0636】

Ｅ３５４．アンチセンス鎖の長さが、２４ヌクレオチドである、Ｅ３４９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0637】

Ｅ３５５．アンチセンス鎖の長さが、２５ヌクレオチドである、Ｅ３４９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0638】

Ｅ３５６．アンチセンス鎖の長さが、２６ヌクレオチドである、Ｅ３４８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0639】

Ｅ３５７．アンチセンス鎖の長さが、２７ヌクレオチドである、Ｅ３４８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0640】

Ｅ３５８．アンチセンス鎖の長さが、２８ヌクレオチドである、Ｅ３４８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0641】

Ｅ３５９．アンチセンス鎖の長さが、２９ヌクレオチドである、Ｅ３４８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0642】

Ｅ３６０．アンチセンス鎖の長さが、３０ヌクレオチドである、Ｅ３４８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0643】

Ｅ３６１．センス鎖の長さが、１２ヌクレオチド～３０ヌクレオチドの間である、Ｅ３００～Ｅ３６０のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0644】

Ｅ３６２．センス鎖の長さが、１４ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0645】

Ｅ３６３．センス鎖の長さが、１５ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0646】

Ｅ３６４．センス鎖の長さが、１６ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0647】

Ｅ３６５．センス鎖の長さが、１７ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0648】

Ｅ３６６．センス鎖の長さが、１８ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0649】

Ｅ３６７．センス鎖の長さが、１９ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0650】

Ｅ３６８．センス鎖の長さが、２０ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0651】

Ｅ３６９．センス鎖の長さが、２１ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0652】

Ｅ３７０．センス鎖の長さが、２２ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0653】

Ｅ３７１．センス鎖の長さが、２３ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0654】

Ｅ３７２．センス鎖の長さが、２４ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0655】

Ｅ３７３．センス鎖の長さが、２５ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0656】

Ｅ３７４．センス鎖の長さが、２６ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0657】

Ｅ３７５．センス鎖の長さが、２７ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0658】

Ｅ３７６．センス鎖の長さが、２８ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0659】

Ｅ３７７．センス鎖の長さが、２９ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0660】

Ｅ３７８．センス鎖の長さが、３０ヌクレオチドである、Ｅ３６１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0661】

Ｅ３７９．ｓｉＲＮＡ分子を、水溶液の形態で、または懸濁液の形態で対象の中枢神経系に投与する、Ｅ２２２～Ｅ３７８のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0662】

Ｅ３８０．ｓｉＲＮＡ分子を対象に投与すると、対象における遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームのサイレンシングが生じる、Ｅ２２２～Ｅ３７９のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0663】

Ｅ３８１．遺伝子のサイレンシングが、参照対象で観察される発現及び／または活性のレベルに対する、発現及び／または活性の増加が疾患状態に関連する、遺伝子の正の調節因子をサイレンシングすることを含む、Ｅ３８０に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0664】

Ｅ３８２．遺伝子のサイレンシングが、参照対象で観察される発現及び／または活性のレベルに対する、発現及び／または活性の低下が疾患状態に関連する、遺伝子の負の調節因子をサイレンシングすることを含む、Ｅ３８０に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0665】

Ｅ３８３．遺伝子のサイレンシングが、参照対象における遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームの発現に対する、遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームの過剰発現が疾患状態に関連する、遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームをサイレンシングすることを含む、Ｅ３８０～Ｅ３８２のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0666】

Ｅ３８４．遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームが、対象の中枢神経系において転写的に発現している、Ｅ３８０～Ｅ３８３のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0667】

Ｅ３８５．遺伝子または遺伝子のスプライスアイソフォームのサイレンシングを使用して、中枢神経系の疾患と診断された対象を治療する、Ｅ３８０～Ｅ３８４のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0668】

Ｅ３８６．疾患が、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、純粋自律神経不全、レビー小体嚥下障害、偶発的レビー小体病（ＩＬＢＤ）、遺伝性レビー小体病、オリーブ橋小脳萎縮症（ＯＰＣＡ）、線条体黒質変性症、シャイ・ドレーガー症候群、てんかんもしくはてんかん障害、プリオン病、または疼痛障害である、Ｅ３８５に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0669】

Ｅ３８７．アンチセンス鎖が、ＡＢＣＡ７、ＡＢＩ３、ＡＤＡＭ１０、ＡＰＯＣ１、ＡＰＯＥ、ＡＸＬ、ＢＩＮ１、Ｃ１ＱＡ、Ｃ３、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＣＡＳＳ４、ＣＣＬ５、ＣＤ２ＡＰ、ＣＤ３３、ＣＤ６８、ＣＬＰＴＭ１、ＣＬＵ、ＣＲ１、ＣＳＦ１、ＣＳＴ７、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＤ、ＣＴＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１３、ＤＳＧ２、ＥＣＨＤＣ３、ＥＰＨＡ１、ＦＡＢＰ５、ＦＥＲＭＴ２、ＦＴＨ１、ＧＮＡＳ、ＧＲＮ、ＨＢＥＧＦ、ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＨＬＡ－ＤＲＢ５、ＨＴＴ、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＧＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＮＰＰ５Ｄ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＫＣＮＴ１、ＬＩＬＲＢ４、ＬＰＬ、ＭＡＰＴ、ＭＥＦ２Ｃ、ＭＭＰ１２、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＭＳ４Ａ６Ａ、ＭＳＨ３、ＮＬＲＰ３、ＮＭＥ８、ＮＯＳ２、ＰＩＣＡＬＭ、ＰＩＬＲＡ、ＰＬＣＧ２、ＰＲＮＰ、ＰＴＫ２Ｂ、ＳＣＩＭＰ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＬＣ２４Ａ４、ＳＮＣＡ、ＳＯＲＬ１、ＳＰＩ１、ＳＰＰ１、ＳＰＰＬ２Ａ、ＴＢＫ１、ＴＮＦ、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭＬ２、ＴＹＲＯＢＰ、及びＺＣＷＰＷ１、からなる群から選択される遺伝子の一部とハイブリダイズするのに十分な相補性を有する、Ｅ３００～Ｅ３８６のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0670】

Ｅ３８８．遺伝子が、ＨＴＴ、ＭＡＰＴ、ＳＮＣＡ、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＡＰＯＥ、ＳＣＮ９Ａ、ＫＣＮＴ１、ＰＲＮＰ、及びＭＳＨ３からなる群から選択される、Ｅ３８７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0671】

Ｅ３８９．遺伝子が、ＨＴＴである、Ｅ３８８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0672】

Ｅ３９０．遺伝子が、ＭＡＰＴである、Ｅ３８８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0673】

Ｅ３９１．遺伝子が、ＳＮＣＡである、Ｅ３８８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0674】

Ｅ３９２．遺伝子が、Ｃ９ＯＲＦ７２である、Ｅ３８８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0675】

Ｅ３９３．遺伝子が、ＡＰＯＥである、Ｅ３８８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0676】

Ｅ３９４．遺伝子が、ＳＣＮ９Ａである、Ｅ３８８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0677】

Ｅ３９５．遺伝子が、ＫＣＮＴ１である、Ｅ３８８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0678】

Ｅ３９６．遺伝子が、ＰＲＮＰである、Ｅ３８８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0679】

Ｅ３９７．遺伝子が、ＭＳＨ３である、Ｅ３８８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0680】

Ｅ３９８．対象が、ヒトである、Ｅ２２２～Ｅ３９７のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0681】

Ｅ３９９．治療用オリゴヌクレオチドの二価カチオンに対するモル比が、１：１０～１：１００（例えば、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、または１：１００）である、Ｅ２２２～Ｅ３９８のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0682】

Ｅ４００．治療用オリゴヌクレオチドの二価カチオンに対するモル比が、１：１０～１：５０である、Ｅ３９９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0683】

Ｅ４０１．治療用オリゴヌクレオチドの二価カチオンに対するモル比が、１：１８～１：３８である、Ｅ４００に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0684】

Ｅ４０２．治療用オリゴヌクレオチドの二価カチオンに対するモル比が、１：２０～１：２５であり、任意選択で、治療用オリゴヌクレオチドの二価カチオンに対するモル比が、１：２０である、Ｅ４０１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0685】

Ｅ４０３．治療用オリゴヌクレオチドの二価カチオンに対するモル比が、１：２５である、Ｅ４０２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0686】

Ｅ４０４． １つ以上の二価カチオンの濃度が、１０ｍＭ～１５０ｍＭである、Ｅ２２２～Ｅ４０３のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0687】

Ｅ４０５． １つ以上の二価カチオンの濃度が、２０ｍＭ～１５０ｍＭである、Ｅ４０４に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0688】

Ｅ４０６． １つ以上の二価カチオンの濃度が、２０ｍＭ～１００ｍＭである、Ｅ４０５に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0689】

Ｅ４０７． １つ以上の二価カチオンの濃度が、２５ｍＭ～１５０ｍＭである、Ｅ４０５に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0690】

Ｅ４０８． １つ以上の二価カチオンの濃度が、２５ｍＭ～１００ｍＭである、Ｅ４０７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0691】

Ｅ４０９． １つ以上の二価カチオンの濃度が、３０ｍＭ～９０ｍＭである、Ｅ４０８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0692】

Ｅ４１０． １つ以上の二価カチオンの濃度が、３５ｍＭ～８５ｍＭである、Ｅ４０９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0693】

Ｅ４１１． １つ以上の二価カチオンの濃度が、３５ｍＭ～７５ｍＭである、Ｅ４１０に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0694】

Ｅ４１２． １つ以上の二価カチオンの濃度が、４０ｍＭ～７０ｍＭである、Ｅ４１１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0695】

Ｅ４１３． １つ以上の二価カチオンの濃度が、４０ｍＭ～６５ｍＭである、Ｅ４１２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0696】

Ｅ４１４． １つ以上の二価カチオンの濃度が、４０ｍＭ～６０ｍＭである、Ｅ４１３に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0697】

Ｅ４１５． １つ以上の二価カチオンの濃度が、４０ｍＭ～５０ｍＭである、Ｅ４１４に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0698】

Ｅ４１６．治療用オリゴヌクレオチドが、負電荷を有する１つ以上の原子を含み、二価カチオンが２つの正電荷を含み、負電荷の正電荷に対する比が０．７５～７．５であり、任意選択で、負電荷の正電荷に対する比が、１．０～２．０である、Ｅ２２２～Ｅ３９８のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0699】

Ｅ４１７．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～６．５である、Ｅ４１６に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0700】

Ｅ４１８．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～５．５である、Ｅ４１７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0701】

Ｅ４１９．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～４．５である、Ｅ４１８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0702】

Ｅ４２０．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～３．５である、Ｅ４１９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0703】

Ｅ４２１．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～２．５である、Ｅ４２０に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0704】

Ｅ４２２．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～１．５である、Ｅ４２１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0705】

Ｅ４２３．負電荷の正電荷に対する比が０．７５～１である、Ｅ４２２に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0706】

Ｅ４２４．負電荷の正電荷に対する比が１～７．５である、Ｅ４１６に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0707】

Ｅ４２５．負電荷の正電荷に対する比が１．５～７．５である、Ｅ４２４に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0708】

Ｅ４２６．負電荷の正電荷に対する比が２．５～７．５である、Ｅ４２５に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0709】

Ｅ４２７．負電荷の正電荷に対する比が３．５～７．５である、Ｅ４２６に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0710】

Ｅ４２８．負電荷の正電荷に対する比が４．５～７．５である、Ｅ４２７に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0711】

Ｅ４２９．負電荷の正電荷に対する比が５．５～７．５である、Ｅ４２８に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0712】

Ｅ４３０．負電荷の正電荷に対する比が６．５～７．５である、Ｅ４２９に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0713】

Ｅ４３１． １つ以上の二価カチオンを含む塩として製剤化された治療用オリゴヌクレオチドを合成する方法であって、１つ以上の二価カチオンの存在下でアンチセンス鎖及びセンス鎖を加熱することを含む、方法。

【0714】

Ｅ４３２．加熱することが、少なくとも９０℃まで加熱することを含む、Ｅ４３１に記載の治療用オリゴヌクレオチド。

【0715】

Ｅ４３３． １つ以上の二価カチオンを含む塩として製剤化された治療用オリゴヌクレオチドを調製する方法であって、ハイブリダイズしたｓｉＲＮＡ二本鎖を、１つ以上の二価カチオンの存在下で加熱せずにインキュベートすることを含む、方法。

【0716】

Ｅ４３４．治療用オリゴヌクレオチドが、Ｅ２２２～Ｅ４００のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチドである、Ｅ４３１～Ｅ４３３のいずれか１つに記載の方法。

【0717】

Ｅ４３５． Ｅ４３１～Ｅ４３４のいずれか１つに記載の方法により合成された、治療用オリゴヌクレオチド。

【0718】

Ｅ４３６． Ｅ２２２～Ｅ４３０及びＥ４３５のいずれか１つに記載の治療用オリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤とを含む、医薬組成物。

【0719】

Ｅ４３７．塩が水溶液として製剤化される、Ｅ４３６に記載の医薬組成物。

【0720】

Ｅ４３８．塩が懸濁液として製剤化される、Ｅ４３６に記載の医薬組成物。

【0721】

Ｅ４３９． Ｅ２２２～Ｅ４３０及びＥ４３５のいずれか１つに記載の分岐ｓｉＲＮＡ分子、またはＥ４３６～Ｅ４３８のいずれか１つに記載の医薬組成物、及び添付文書を含む、キットであって、添付文書は、キットの使用者に、Ｅ１～Ｅ２２１のいずれか１つに記載の方法を実行するように指示する、キット。

【0722】

他の実施形態
記載される開示内容の種々の修飾及び変形は、本開示の範囲及び趣旨から逸脱することなく、当業者には明らかであろう。本開示は、具体的な実施形態と組み合わせて記載されてきたが、特許請求の範囲の開示が、このような具体的な実施形態に不当に限定されるべきではないことが理解されるべきである。実際に、当業者にとって自明な本開示を実施するために記載された態様の種々の修飾は、本開示の範囲内であることが意図される。他の実施形態は、特許請求の範囲に見出される。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【国際調査報告】