特表 2024-521904 抗ＴＲＥＭ－１抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-06-04

(54)【発明の名称】抗ＴＲＥＭ－１抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240528BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240528BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240528BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240528BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 5/14 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20240528BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20240528BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240528BHJP

   A61K 38/02 20060101ALI20240528BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20240528BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C07K16/28

C07K19/00

C12N15/62 Z

C07K16/46

A61P29/00

A61P37/06

A61P9/00

A61P35/00

A61P31/00

A61P31/04

A61P31/12

A61P1/04

A61P43/00 105

A61P11/00

A61P1/16

A61P29/00 101

A61P19/02

A61P17/06

A61P37/02

A61P13/12

A61P3/10

A61P5/14

A61P25/00

A61P17/00

A61P37/08

A61P11/06

A61K39/395 N

A61K38/02

C12P21/08

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023574424

(86)(22)【出願日】2022-06-02

(85)【翻訳文提出日】2024-01-30

(86)【国際出願番号】 EP2022065140

(87)【国際公開番号】W WO2022253991

(87)【国際公開日】2022-12-08

(31)【優先権主張番号】21305743.3

(32)【優先日】2021-06-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】521127963

【氏名又は名称】イノトレム

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】デライブ，マーク

(72)【発明者】

【氏名】ガラウド，ジーン―ジャック

(72)【発明者】

【氏名】ブーフェンザー，アミール

(72)【発明者】

【氏名】メイレファー，マリン

(72)【発明者】

【氏名】ヴォイゾン―クリストフ，ジュリー

(72)【発明者】

【氏名】カラスコ，ケビン

【テーマコード（参考）】

4B064

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4C084AA01

4C084AA02

4C084BA03

4C084BA41

4C084MA13

4C084MA17

4C084MA23

4C084MA24

4C084MA43

4C084MA52

4C084MA55

4C084MA59

4C084MA60

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA011

4C084ZA012

4C084ZA361

4C084ZA362

4C084ZA591

4C084ZA592

4C084ZA621

4C084ZA622

4C084ZA681

4C084ZA682

4C084ZA751

4C084ZA752

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZA891

4C084ZA892

4C084ZA961

4C084ZA962

4C084ZB071

4C084ZB072

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZB111

4C084ZB112

4C084ZB131

4C084ZB132

4C084ZB151

4C084ZB152

4C084ZB211

4C084ZB212

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB311

4C084ZB312

4C084ZB331

4C084ZB332

4C084ZB351

4C084ZB352

4C084ZC061

4C084ZC062

4C084ZC351

4C084ZC352

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085CC23

4C085EE01

4C085GG01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG08

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA40

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、新規抗ＴＲＥＭ－１（骨髄細胞上で発現されるトリガー受容体－１）抗体及びその抗原結合断片、上記抗体及びその抗原結合断片を含む融合タンパク質、並びにその治療用途に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

単離された抗ＴＲＥＭ－１（骨髄細胞上で発現されるトリガー受容体－１（Triggering Receptor Expressed on Myeloid cells-1））抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ）前記単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片の重鎖の可変領域（ＶＨ）は、以下の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）:
Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＶＸ_４Ｇ（配列番号２）（ここで、Ｘ_１は、Ａｓｎ（Ｎ）又はＧｌｙ（Ｇ）であり、Ｘ_２は、Ａｓｎ（Ｎ）又はＡｒｇ（Ｒ）であり、Ｘ_３は、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、又はＳｅｒ（Ｓ）であり、Ｘ_４は、Ｇｌｎ（Ｑ）又はＬｙｓ（Ｋ）である）；および
Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）（ここで、Ｘ_５は、Ｔｙｒ（Ｙ）又はＡｒｇ（Ｒ）であり、Ｘ_６は、Ｓｅｒ（Ｓ）又はＧｌｙ（Ｇ）である）；
を含み、
ｂ）前記単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片の軽鎖の可変領域（ＶＬ）は、以下の３つのＣＤＲ:
Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＸ_７ＳＶＸ_８ＮＹＧＩＳＦＸ_９Ｎ（配列番号４）（ここで、Ｘ_７は、Ｇｌｕ（Ｅ）又はＧｌｎ（Ｑ）であり、Ｘ_８は、Ａｓｐ（Ｄ）又はＳｅｒ（Ｓ）であり、Ｘ_９は、Ｍｅｔ（Ｍ）又はＬｅｕ（Ｌ）である）；
Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４（配列番号５）（ここで、Ｘ_１０は、Ｓｅｒ（Ｓ）又はＧｌｕ（Ｅ）であり、Ｘ_１１は、Ａｓｎ（Ｎ）又はＴｙｒ（Ｙ）であり、Ｘ_１２は、Ｇｌｎ（Ｑ）又はＡｒｇ（Ｒ）であり、Ｘ_１３は、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ａｌａ（Ａ）、又はＬｙｓ（Ｋ）であり、Ｘ_１４は、Ｓｅｒ（Ｓ）又はＡｒｇ（Ｒ）である）；および
Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＸ_１５Ｘ_１６Ｘ_１７ＰＸ_１８Ｔ（配列番号６）（ここで、Ｘ_１５は、Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、又はＳｅｒ（Ｓ）であり、Ｘ_１６は、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｈｉｓ（Ｈ）、又はＡｓｎ（Ｎ）であり、Ｘ_１７は、Ｖａｌ（Ｖ）又はＰｈｅ（Ｆ）であり、Ｘ_１８は、Ｔｒｐ（Ｗ）又はＴｙｒ（Ｙ）である）；
を含む、
単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片。

【請求項2】

以下のＣＤＲ：
Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＤＰＫＶＫＧ（配列番号７）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号９）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＲＨＶＰＹＴ（配列番号１１）；又は
Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＳＰＫＶＱＧ（配列番号１２）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＹＱＫＲ（配列番号１５）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＦＰＷＴ（配列番号１６）；又は
Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ（配列番号１７）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；又は
Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号１９）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＱＧＲ（配列番号２０）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；又は
Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ（配列番号１７）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＡＲ（配列番号２１）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；又は
Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号２２）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号２３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号２４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号２５）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＫＥＶＰＷＴ（配列番号２６）
を含む、請求項１に記載の単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片。

【請求項3】

配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、及び配列番号３２のいずれか１つに記載される配列、又は配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、及び配列番号３２のいずれか１つと少なくとも８０％の同一性を有する配列、を有する重鎖の可変領域（ＶＨ）を含む、請求項１又は２に記載の単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片。

【請求項4】

配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８のいずれか１つに記載される配列、又は配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８のいずれか１つと少なくとも８０％の同一性を有する配列、を有する軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片。

【請求項5】

配列番号２７に記載される配列、又は配列番号２７と少なくとも８０％の同一性を有する配列、を有する重鎖の可変領域（ＶＨ）と、配列番号３３に記載される配列、又は配列番号３３と少なくとも８０％の同一性を有する配列、を有する軽鎖の可変領域（ＶＬ）と、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片。

【請求項6】

前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片。

【請求項7】

前記抗体が、ヒト化抗体又はヒト抗体である、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片。

【請求項8】

一価であり、好ましくは抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆｖ、又はｓｃＦｖである、請求項１～７のいずれか一項に記載の単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片。

【請求項9】

請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片を含む、融合タンパク質。

【請求項10】

請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片、又は請求項９に記載の融合タンパク質、をコードする核酸。

【請求項11】

請求項１～８のいずれか一項に記載の単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片又は請求項９に記載の融合タンパク質と、少なくとも１種の医薬的に許容し得る賦形剤と、を含む医薬組成物。

【請求項12】

医薬としての使用のための、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片、請求項９に記載の融合タンパク質、又は請求項１１に記載の医薬組成物。

【請求項13】

炎症性疾患又は自己免疫疾患；心血管疾患；癌、特に固形癌；及び感染症、特に細菌感染症又はウイルス感染症から選択される疾患の治療における使用のための、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片、請求項９に記載の融合タンパク質、又は請求項１１に記載の医薬組成物。

【請求項14】

前記炎症性疾患又は自己免疫疾患が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、線維症、肺線維症、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝炎、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、血管炎、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、敗血症性ショック、Ｉ型糖尿病、バセドウ病、多発性硬化症、自己免疫性心筋炎、川崎病、冠動脈疾患、慢性閉塞性肺疾患、間質性肺疾患、自己免疫性甲状腺炎、強皮症、全身性硬化症、変形性関節症、アトピー性皮膚炎、白斑、移植片対宿主病、シェーグレン症候群、自己免疫性腎炎、グッドパスチャー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、アレルギー、及び喘息から選択される、請求項１３に記載の使用のための単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片、融合タンパク質、又は医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

発明の分野
本発明は、炎症の分野に関し、新規抗ヒトＴＲＥＭ－１（骨髄細胞上で発現されるトリガー受容体－１（Triggering Receptor Expressed on Myeloid cells-1））抗体及びその抗原結合断片を開示する。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
ＣＤ３５４としても知られることもある、ＴＲＥＭ－１（骨髄細胞上で発現されるトリガー受容体－１）は、単球、マクロファージ、好中球、血小板、及び樹状細胞などの自然免疫細胞の大部分により、並びに内皮細胞により発現される免疫受容体である。ヒトＴＲＥＭ遺伝子クラスターは、染色体６ｐ２１．１上に位置し、ＴＲＥＭ１～５及びＴＬＴ－１（ＴＲＥＭ様転写産物－１）の６つの異なるタンパク質をコードする。ＴＲＥＭ－１は、３つの別々のドメイン：Ｉｇ様構造（主にリガンド結合に関与する）、膜貫通部分、及びＤＮＡＸ活性化タンパク質１２すなわちＤＡＰ１２と呼ばれるアダプタータンパク質と結合する短い細胞質尾部、を含むＩｇスーパーファミリーに属する膜結合糖タンパク質受容体である。そのリガンドの結合時に、ＴＲＥＭ－１はしたがって、ＤＡＰ１２の助けを借りて下流のシグナル伝達経路を活性化する。

【0003】

例えばＴａｍｍａｒｏら（Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１７ Ｓｅｐ；１７７：８１－９５に記載されているように、ＴＲＥＭ－１の関与は、ＺＡＰ７０（ゼータ鎖関連タンパク質キナーゼ７０）及びＳＹＫ（脾臓チロシンキナーゼ）を含むシグナル伝達経路を誘導し、後者は、Ｃｂｌ（Ｃａｓｉｔａｓ Ｂ系統リンパ腫）、ＳＯＳ（セブンレスの息子）、及びＧＲＢ２（成長因子受容体結合タンパク質－２）などのアダプター分子のその後の動員とチロシンリン酸化を促進し、それは、ＰＩ３Ｋ、ＰＬＣ－γ（ホスホリパーゼ－Ｃ－ガンマ）、ＥＲＫ－１、ＥＲＫ－２及びｐ３８ ＭＡＰＫを介する下流のシグナル伝達をもたらす。これらの経路の活性化は、Ｃａ^２＋動員、アクチン細胞骨格の再構成、及びＮＦ－ｋＢなどの転写因子の活性化を誘導する。最終的に、ＴＲＥＭ－１の活性化は特に、急速な好中球の脱顆粒と酸化バーストと共に、炎症性サイトカインとケモカインの発現及び分泌をもたらす。

【0004】

ＴＲＥＭ－１の機能は、盛んな免疫応答を誘導するために、病原体認識受容体（ＰＲＲ）との相乗効果により、炎症を開始するのではなく、増強することである。Ｎｏｄ様受容体（ＮＬＲ）及びＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を含むＰＲＲの関与はそのため、ＴＲＥＭ－１発現の上方制御及び／又は細胞膜でのその動員とクラスタリングを誘導し、それは、その二量体化及び多量体化をもたらす。上記ＮＬＲ及び／又はＴＬＲは、ＤＡＭＰ（危険関連分子パターン（Ｄａｎｇｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐａｔｔｅｒｎｓ））又はＰＡＭＰ（病原体関連分子パターン（Ｐａｔｈｏｇｅｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐａｔｔｅｒｎｓ））によって活性化され得る。特に、上記ＮＬＲ及びＴＬＲの活性化は、ＤＡＭＰ及び／又はアラーミンとの相互作用による無菌の炎症状態下で生じるか、又はＰＡＭＰとの相互作用による感染状態下で生じ得る。ＴＲＥＭ－１はそのため、それが感染により誘導される（感染性炎症）か又はそうでない（無菌性炎症）かにかかわらず、炎症を増強することにおいて役割を果たす。したがって、ＴＲＥＭ－１とそのシグナル伝達経路は、敗血症及び敗血症性ショックなどの感染によって引き起こされる炎症又は過剰炎症において役割を果たすが、アテローム性動脈硬化症、虚血再灌流誘発性組織損傷、大腸炎、線維症及び癌を含む、いくつかの非感染性急性及び慢性炎症性疾患の病態にも寄与する。

【0005】

注目すべきことに、炎症を開始するのではなく増強することに関するその重要性のため、ＴＲＥＭ－１の阻害は、自然免疫反応のＴＲＥＭ－１依存性増強ループを遮断し、かつ炎症応答を完全に無効にするのではなく、炎症を弱めると予想される。ＴＲＥＭ－１を特異的に結合し阻害できる分子を特定することは、感染性炎症性疾患の治療並びに非感染性の急性及び慢性炎症性疾患の治療に特に関連し得る。現在臨床試験中のＴＬＴ－１ペプチドＬＲ１２を含む阻害性ペプチドなどの、いくつかのＴＲＥＭ－１阻害剤はすでに説明されている（ＷＯ２０１１／１２４６８５）。しかし、これまでのところ、治療用として承認されているＴＲＥＭ－１阻害剤はない。

【0006】

したがって、感染性炎症であろうと無菌性炎症であろうと、炎症を弱めるために使用され得る新規ＴＲＥＭ－１阻害剤が依然として必要である。

【発明の概要】

【0007】

本発明は、新規抗ヒトＴＲＥＭ－１抗体及びその抗原結合断片に関する。実施例の節で例示されるように、本明細書に記載の新規抗ヒトＴＲＥＭ－１抗体及びその抗原結合断片は、ヒトＴＲＥＭ－１を結合し阻害できる。特に、それらは、エンドトキシン血症の動物モデルで誘発される炎症反応を弱めることができる。注目すべきことに、本明細書に記載される新規抗ヒトＴＲＥＭ－１抗体及びその抗原結合断片は、それにより活性化される刺激シグナルに関係なく、ＴＲＥＭ－１シグナル伝達経路を阻害できる。それらはしたがって、ＴＲＥＭ－１リガンド複合体で直接活性化されるか、又は例えば、ＰＧＮによるＴＬＲ２又はＬＰＳによるＴＬＲ４などの様々なＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の刺激を介して間接的に活性化される、ＴＲＥＭ－１シグナル伝達経路を阻害できる。

【0008】

概要
本発明は、単離された抗ＴＲＥＭ－１（骨髄細胞上で発現されるトリガー受容体－１）抗体又はその抗原結合断片に関し、
ａ）上記単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片の重鎖の可変領域（ＶＨ）は、以下の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）:
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＶＸ_４Ｇ（配列番号２）、ここで、Ｘ_１はＡｓｎ（Ｎ）又はＧｌｙ（Ｇ）であり、Ｘ_２はＡｓｎ（Ｎ）又はＡｒｇ（Ｒ）であり、Ｘ_３はＡｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、又はＳｅｒ（Ｓ）であり、Ｘ_４はＧｌｎ（Ｑ）又はＬｙｓ（Ｋ）であり；かつ
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）、ここで、Ｘ_５はＴｙｒ（Ｙ）又はＡｒｇ（Ｒ）であり、Ｘ_６はＳｅｒ（Ｓ）又はＧｌｙ（Ｇ）である
を含み；
ｂ）上記単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片の軽鎖の可変領域（ＶＬ）は、以下の３つのＣＤＲ:
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＸ_７ＳＶＸ_８ＮＹＧＩＳＦＸ_９Ｎ（配列番号４）、ここで、Ｘ_７はＧｌｕ（Ｅ）又はＧｌｎ （Ｑ）であり、Ｘ_８はＡｓｐ（Ｄ）又はＳｅｒ（Ｓ）であり、Ｘ_９はＭｅｔ（Ｍ）又はＬｅｕ（Ｌ）であり；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４（配列番号５）、ここで、Ｘ_１０はＳｅｒ（Ｓ）又はＧｌｕ（Ｅ）であり、Ｘ_１１はＡｓｎ（Ｎ）又はＴｙｒ（Ｙ）であり、Ｘ_１２はＧｌｎ（Ｑ）又はＡｒｇ（Ｒ）であり、Ｘ_１３はＧｌｙ（Ｇ）、Ａｌａ（Ａ）、又はＬｙｓ（Ｋ）であり、Ｘ_１４はＳｅｒ（Ｓ）又はＡｒｇ（Ｒ）であり；かつ
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＸ_１５Ｘ_１６Ｘ_１７ＰＸ_１８Ｔ（配列番号６）、ここで、Ｘ_１５はＬｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、又はＳｅｒ（Ｓ）であり、Ｘ_１６はＧｌｕ（Ｅ）、Ｈｉｓ（Ｈ）、又はＡｓｎ（Ｎ）であり、Ｘ_１７はＶａｌ（Ｖ）又はＰｈｅ（Ｆ）であり、Ｘ_１８はＴｒｐ（Ｗ）又はＴｙｒ（Ｙ）である
を含む。

【0009】

一実施形態において、単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＤＰＫＶＫＧ（配列番号７）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号９）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＲＨＶＰＹＴ（配列番号１１）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＳＰＫＶＱＧ（配列番号１２）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＹＱＫＲ（配列番号１５）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＦＰＷＴ（配列番号１６）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ（配列番号１７）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号１９）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＱＧＲ（配列番号２０）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ（配列番号１７）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＡＲ（配列番号２１）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号２２）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号２３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号２４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号２５）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＫＥＶＰＷＴ（配列番号２６）
を含む。

【0010】

一実施形態において、単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、及び配列番号３２のいずれか１つに記載の配列、又は配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、及び配列番号３２のいずれか１つと少なくとも８０％の同一性を有する配列を有する重鎖の可変領域（ＶＨ）を含む。

【0011】

一実施形態において、単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８のいずれか１つに記載の配列、又は配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８のいずれか１つと少なくとも８０％の同一性を有する配列を有する軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む。

【0012】

一実施形態において、単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７に記載の配列、又は配列番号２７と少なくとも８０％の同一性を有する配列を有する重鎖の可変領域（ＶＨ）、及び配列番号３３に記載の配列、又は配列番号３３と少なくとも８０％の同一性を有する配列を有する軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む。

【0013】

一実施形態において、単離された抗ＴＲＥＭ１抗体は、モノクローナル抗体である。一実施形態において、単離された抗ＴＲＥＭ１抗体は、ヒト化抗体又はヒト抗体である。一実施形態において、単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片は、一価であり、好ましくは抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆｖ、又はｓｃＦｖである。

【0014】

本発明の別の目的は、上記抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片を含む融合タンパク質である。

【0015】

本発明の別の目的は、上記抗ＴＲＥＭ－１抗体もしくは抗原結合断片、又は上記融合タンパク質をコードする核酸である。

【0016】

本発明の別の目的は、上記単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体もしくはその抗原結合断片、又は上記融合タンパク質、及び少なくとも１種の医薬的に許容し得る賦形剤を含む医薬組成物である。

【0017】

本発明の別の目的は、医薬としての使用のための、上記単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片、上記融合タンパク質、又は上記医薬組成物である。

【0018】

本発明の別の目的は、炎症性疾患又は自己免疫疾患；心血管疾患；癌、特に固形癌；及び感染症、特に細菌感染症又はウイルス感染症から選択される疾患の治療における使用のための、上記単離された抗ＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片、上記融合タンパク質、又は上記医薬組成物である。一実施形態において、上記炎症性疾患又は自己免疫疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、線維症、肺線維症、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝炎、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、血管炎、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、敗血症性ショック、Ｉ型糖尿病、バセドウ病、多発性硬化症、自己免疫性心筋炎、川崎病、冠動脈疾患、慢性閉塞性肺疾患、間質性肺疾患、自己免疫性甲状腺炎、強皮症、全身性硬化症、変形性関節症、アトピー性皮膚炎、白斑、移植片対宿主病、シェーグレン症候群、自己免疫性腎炎、グッドパスチャー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、アレルギー、及び喘息から選択される。

【発明を実施するための形態】

【0019】

定義
本発明において、以下の用語は、以下の意味を有する：

【0020】

「Ａｂ」は、抗体（又は抗体（複数））を指し、「ｍＡｂ」は、モノクローナル抗体（又はモノクローナル抗体（複数））を指す。

【0021】

数字の前の「約」は、上記数字の値の±１０％以下を包含する。用語「約」が指す値自体も、具体的に、かつ好ましく開示されることが理解されるべきである。

【0022】

「親和性」は、抗体－抗原複合体の強度を規定するために使用される。親和性は、抗体上でのエピトープと抗原結合部位の相互作用の強度を評価する。それは、親和性定数Ｋ_Ａ又は解離定数Ｋ_Ｄにより表され得る。

【0023】

本明細書で使用される「抗体」及び「免疫グロブリン又はＩｇ」は、互換的に使用されてよく、関連する特異的免疫反応性を有するか否かにかかわらず、２つの重鎖（Ｈ鎖）と２つの軽鎖（Ｌ鎖）の組み合わせを有するタンパク質を指す。「抗体」は、目的の抗原（例えば、ヒトＴＲＥＭ－１）に対して有意な既知の特異的免疫反応活性を有するような集合体を指す。用語「抗ｈＴＲＥＭ－１抗体」は、本明細書において、ヒトＴＲＥＭ－１タンパク質に対し免疫学的特異性を示す抗体を指すために使用される。本明細書の他の箇所で説明されるように、ヒトＴＲＥＭ－１（ｈＴＲＥＭ－１）に対する「特異性」は、例えば、サルＴＲＥＭ－１などのｈＴＲＥＭ－１のオルソログとの交差反応性を排除しない。上述したように、抗体及び免疫グロブリンは、それらの間の鎖間共有結合の有無にかかわらず、軽鎖及び重鎖を含む。脊椎動物系における基本的な免疫グロブリン構造は、比較的よく理解されている。「免疫グロブリン」という総称は、生化学的に区別できる免疫グロブリンの５つの別々のクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ、を含む。本明細書における開示は一般に免疫グロブリンのＩｇＧクラスを対象とするが、５つのクラス全てが、本発明の範囲内である。ＩｇＧ免疫グロブリンは、約２３ｋＤａの分子量を有する２つの同一の軽鎖と、約５３～７０ｋＤａの分子量を有する２つの同一の重鎖を含む。４本の鎖は、「Ｙ」構造でジスルフィド結合により結合され、軽鎖が、「Ｙ」字の口から始まり可変領域を通って続く重鎖に腕木のように付く。免疫グロブリンの軽鎖は、カッパ（κ）又はラムダ（λ）のいずれかとして分類される。各重鎖クラスは、κ又はλ軽鎖のいずれかと結合され得る。一般に、軽鎖と重鎖は互いに共有結合され、２つの重鎖の「テール」領域は、免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞又は遺伝子改変宿主細胞のいずれかによって生成されるときに、共有ジスルフィド結合又は非共有結合により互いに結合される。重鎖では、アミノ酸配列は、Ｙ構造の二股末端のＮ末端から各鎖の下部のＣ末端へと続く。当業者なら、重鎖が、ガンマ（γ）、ミュー（μ）、アルファ（α）、デルタ（δ）又はイプシロン（ε）に分類され、その中のいくつかのサブクラス（例えば、γ１～γ４）があることを理解するであろう。それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ又はＩｇＥとして抗体の「クラス」を決定するのは、この鎖の性質である。免疫グロブリンサブクラス又は「アイソタイプ」（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１など）は、十分に特徴付けられており、機能的特殊化を付与することが知られている。これらのクラス及びアイソタイプの各々の改変されたバージョンは、本開示の観点から当業者に容易に認識され、したがって、本発明の範囲内である。本明細書に示されるように、抗体の可変領域は、抗体が抗原上のエピトープを選択的に認識し、かつ特異的に結合することを可能にする。すなわち、抗体の軽鎖可変領域又はドメイン（ＶＬ）と重鎖可変領域又はドメイン（ＶＨ）が組み合わさって、３次元抗原結合部位を規定する可変領域を形成する。この第４級の抗体構造は、「Ｙ」の各アームの末端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、各ＶＨ及びＶＬ上の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって定義される。

【0024】

本明細書で使用されるように、用語「（抗体の）抗原結合断片」を含む、用語「抗体断片」は、インタクトな抗体の少なくとも一部、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合領域又は可変領域を指し、それは、抗原のエピトープと特異的に相互作用する（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布により）能力を保持する。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＨドメインとＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、線状抗体、ｓｄＡｂ（ＶＬ又はＶＨのいずれか）などの単一ドメイン抗体、ラクダ科ＶＨＨドメイン、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片などの抗体断片から形成される多重特異的抗体、及び単離されたＣＤＲ又は抗体の他のエピトープ結合断片が挙げられるが、これらに限定されない。抗原結合断片はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ及びビス－ｓｃＦｖ中に組み込まれ得る。抗原結合断片は、フィブロネクチンＩＩＩ型などのポリペプチドに基づく足場中に移植され得る。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる、２つの同一の抗原結合断片と、呼称が結晶化しやすい能力を反映する、残りの「Ｆｃ」断片を生成する。Ｆａｂ断片は、Ｈ鎖の可変領域（ＶＨ）及びＨ鎖の最初の定常ドメイン（ＣＨ１）と共に、Ｌ鎖全体からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、すなわち、それは、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、二価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィドで連結されるＦａｂ断片におおまかに対応しかつ依然として抗原と架橋できる、単一の大きなＦ（ａｂ’）_２断片を生じる。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１以上のシステインを含む、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に追加の少数の残基を有することによりＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を保有するＦａｂ’の本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片はもともと、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片のペアとして生成された。抗体断片の他の化学的カップリングも知られている。

【0025】

「抗原」又は「Ａｇ」は、免疫応答を誘発する分子を指す。この免疫応答は、抗体生成、及び／又は特定の免疫学的コンピテント細胞の活性化のいずれか、又はその両方を含み得る。

【0026】

本明細書で使用されるように、用語「結合断片」および、特に、用語「抗原結合断片」は、抗体全体よりも少ないアミノ酸残基を含む、本発明による抗体の一部又は領域を指す。「結合断片」は、抗原を結合し、かつ／又は抗原結合についてそこからそれが得られた抗体全体と競合する。抗体結合断片は、限定されることなく、一本鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ）'_２、Ｆｄ、脱フコシル化抗体、ダイアボディ、トリアボディ及びテトラボディを包含する。

【0027】

「ＣＤＲ」又は「相補性決定領域」は、重鎖と軽鎖の両方のポリペプチドの可変領域内に見出される非連続の抗原結合部位を意味する。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔら（１９９１）、「免疫学的関心対象のタンパク質の配列」第５版、公衆衛生サービス、国立衛生研究所（Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）、Ｂｅｔｈｅｓｄａ,ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら，（１９９７）ＪＭＢ ２７３，９２７－９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番スキーム）によって記載されているもの、又はそれらの組み合わせを含む多くの周知のスキームのいずれかを使用して決定できる。より最近では、普遍的な付番体系であるＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）情報システム（商標登録）（Ｌｅｆｒａｎｃら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２７：２０９－２１２ １９９９）が、開発され、広く採用されている。ＩＭＧＴは、ヒト及び他の脊椎動物の免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＲ）及び主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）に特化した統合情報システムである。本明細書では、ＣＤＲは、アミノ酸配列及び軽鎖又は重鎖内の位置の両方の観点から言及される（例えば、_ＶＨ－ＣＤＲ１、_ＶＨ－ＣＤＲ２、_ＶＨ－ＣＤＲ３、_ＶＬ－ＣＤＲ１、_ＶＬ－ＣＤＲ２、_ＶＬ－ＣＤＲ３）。免疫グロブリン可変領域（又は可変ドメイン）の構造内のＣＤＲの「位置」は種間で保存されかつループと呼ばれる構造に存在するので、構造的特徴に従って可変領域配列を整列する付番体系を用いることにより、ＣＤＲ及びフレームワーク残基を容易に特定できる。この情報は、ある種の免疫グロブリン由来のＣＤＲ残基を、典型的にはヒト抗体由来のアクセプターフレームワーク中に移植する及び置換する際に用いることができる。Ｋａｂａｔ付番体系とＩＭＧＴ固有付番体系の間の対応関係もまた、当業者には周知である（例えば、Ｌｅｆｒａｎｃら前掲）。

【0028】

「エピトープ」は、それに抗体又はその抗原結合断片が結合する、タンパク質又は複数のタンパク質上に位置するアミノ酸の特異的配置を指す。エピトープはしばしば、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面グループ化からなり、特異的な３次元構造特性と特異的な電荷特性を有する。エピトープは、直線的（又は連続的）又は構造的であり得、すなわち、必ずしも連続していなくてもよい抗原の様々な領域中のアミノ酸の２以上の配列を含み得る。

【0029】

「フレームワーク領域」又は「ＦＲ領域」又は「非ＣＤＲ領域」は、可変領域の一部であるが、ＣＤＲの一部ではない（例えば、ＣＤＲのＫａｂａｔ定義又はＣＤＲのＩＭＧＴ（登録商標）付番定義を使用して）、アミノ酸残基を含む。したがって、可変領域フレームワークは、長さが約１００～１２０アミノ酸であるが、ＣＤＲの外側のアミノ酸のみを含む。重鎖可変領域（ＶＨ）の具体例について、およびＫａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａにより定義されるＣＤＲについて：
－ＦＲ１は、Ｃｈｏｔｈｉａ／ＡｂＭの定義によるアミノ酸１～２５を包含する可変領域のドメイン、又はＫａｂａｔの定義による５残基後のドメインに対応し得る；
－ＦＲ２は、アミノ酸３６～４９を包含する可変領域のドメインに対応し得る；
－ＦＲ３は、アミノ酸６７～９８を包含する可変領域のドメインに対応し得る；かつ
－ＦＲ４は、アミノ酸１０４～１１０から可変領域の末端の可変領域のドメインに対応し得る。
軽鎖のフレームワーク領域は同様に、軽鎖可変領域（ＶＬ）の各ＣＤＲによって分離される。天然に存在する抗体では、各単量体抗体に存在する６つのＣＤＲは、抗体が水性環境下で３次元構造をとるときに抗原結合部位を形成するように特異的に配置されるアミノ酸の、短い、連続しない配列である。上述したように、重鎖及び軽鎖可変領域（又はドメイン）の残りは、アミノ酸配列において分子間のばらつきをそれほど示さず、フレームワーク領域に対応する。フレームワーク領域は主に、βシート構造をとり、ＣＤＲは、βシート構造を連結し、かつ場合によってはその一部を形成する、ループを形成する。そのため、これらのフレームワーク領域は、鎖間の非共有結合相互作用により正しい向きで６つのＣＤＲを配置することを提供する足場を形成するように作用する。配置されたＣＤＲにより形成される抗原結合部位は、免疫反応性抗原上のエピトープと相補的な表面を定義する。この相補的な表面は、免疫反応性抗原エピトープへの抗体の非共有結合を促進する。上述したように、ＣＤＲの位置は、当業者により容易に特定できる。

【0030】

「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ部分」、及び「Ｆｃ領域」は、互換的に使用されてよく、抗体重鎖のＣ末端断片、例えば、ヒトガンマ重鎖のアミノ酸（ａａ）約２３０～ａａ約４５０、又は他の種類の抗体重鎖（例えば、ヒト抗体についてはα、δ、ε及びμ）、又はその天然に存在するアロタイプ中のその対応する配列を指す。

【0031】

本明細書で使用されるように、「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位及び抗原結合部位を含有する最小の抗体断片を指す。この断片は、緊密な非共有的会合での１つのＶＨと１つのＶＬの二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みから、抗原結合に寄与しかつ抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（重鎖と軽鎖から各々３つのループ）が生じる。しかし、単一可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりも低い親和性でではあるが、抗原を認識し結合する能力を有する。

【0032】

「重鎖領域」は、免疫グロブリン重鎖の定常ドメインに由来するアミノ酸配列を含む。重鎖領域を含むタンパク質は、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域（例えば、上部、中部、及び／又は下部のヒンジドメイン）、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、又はそれらの変異型もしくは断片の少なくとも１つを含む。特定の実施形態において、本発明による抗体又はその抗原結合断片は、免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域（例えば、ヒンジ部分、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメイン）を含んでよい。特定の実施形態において、本発明による抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも定常ドメインの領域（例えば、ＣＨ２ドメインの全部又は一部）を欠く。特定の実施形態において、定常ドメインの少なくとも１つ、好ましくは全ては、ヒト免疫グロブリン重鎖に由来する。例えば、一実施形態において、重鎖領域は、完全なヒトヒンジドメインを含む。特定の実施形態において、重鎖領域は、完全なヒトＦｃ領域（例えば、ヒト免疫グロブリン由来のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン配列）を含む。特定の実施形態において、重鎖領域の構成要素の定常ドメインは、異なる免疫グロブリン分子に由来する。例えば、タンパク質の重鎖領域は、ＩｇＧ１分子に由来するＣＨ２ドメイン及びＩｇＧ３又はＩｇＧ４分子に由来するヒンジ領域を含んでよい。特定の実施形態において、定常ドメインは、異なる免疫グロブリン分子の領域を含むキメラドメインである。例えば、ヒンジは、ＩｇＧ１分子由来の第１の領域及びＩｇＧ３又はＩｇＧ４分子由来の第２の領域を含んでよい。特定の実施形態において、重鎖領域の定常ドメインは、それらが天然に存在する（野生型）免疫グロブリン分子からのアミノ酸配列において様々であるように修飾されてよい。すなわち、本発明による抗体又はその抗原結合断片は、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２又はＣＨ３）の１以上に対し及び／又は軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）に対し変更又は修飾を含んでよい。例示的修飾は、１以上のドメイン中の１以上のアミノ酸の付加、欠失又は置換を含む。

【0033】

「ヒンジ領域」は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに結合する重鎖分子の領域を含む。このヒンジ領域は、約２５残基を含み、柔軟であり、そのため２つのＮ末端抗原結合領域が独立して動くことを可能にする。ヒンジ領域は、３つの別々のドメイン：上部、中部、及び下部のヒンジドメイン、に細分化できる（Ｒｏｕｘら，１９９８．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（８）：４０８３－９０）。

【0034】

「同一性」又は「同一の」は、２以上のポリペプチドの配列間の関係において本発明で使用される場合、２以上のアミノ酸残基の文字列間の一致数によって決定される、ポリペプチド間の配列関連性の程度を指す。「同一性」は、特定の数学的モデル又はコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によって対処されるギャップアライメント（存在する場合）を有する２以上の配列のより小さい配列間の一致の割合を評価する。関連するポリペプチドの同一性は、公知の方法によって容易に計算できる。このような方法は、計算分子生物学（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，（編）．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，（編），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３；配列データのコンピューター解析（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ），パート１，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，及びＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，（編），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；分子生物学の配列解析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ），ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ.，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７；配列解析プライマー（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ），Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．及びＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ.，（編），Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１；並びにＣａｒｉｌｌｏら，ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．４８，１０７３（１９８８）に記載されるものを含むが、これらに限定されない。同一性を決定するための好ましい方法は、試験される配列間で最大の一致が得られるように設計される。同一性を決定する方法は、公的に利用可能であるコンピュータプログラムに記載されている。２つの配列間の同一性を決定するための好ましいコンピュータプログラム方法は、ＧＡＰを含むＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．＼２，３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ.），ＢＬＡＳＴＰ，ＢＬＡＳＴＮ，及びＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０（１９９０））を含む。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、米国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ））及び他の情報源（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌら ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０（１９９０））から公的に利用可能である。よく知られているスミス・ウォーターマン・アルゴリズムもまた、同一性の決定に使用されてよい。

【0035】

「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団に含まれる個々の抗体は、少量で存在し得る天然の変異の可能性を除き同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。さらに、異なる決定基（エピトープ）に向けられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に向けられる。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが他の抗体に混入されずに合成され得るという点で、有利である。修飾語「モノクローナル」は、任意の特定の方法による抗体の生成を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明によるモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、Ｋｏｈｌｅｒら，１９７５．Ｎａｔｕｒｅ．２５６（５５１７）：４９５－７により最初に記載されたハイブリドーマ法により調製されるか、又は細菌、真核動物又は植物細胞における組換えＤＮＡ法を使用して作製され得る（米国特許第４，８１６，５６７号）。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら，１９９１．Ｎａｔｕｒｅ．３５２（６３３６）：６２４－８及びＭａｒｋｓら，１９９１．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２２２（３）：５８１－９７に記載の技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離され得る。

【0036】

「一本鎖抗体」は、本明細書で使用されるように、（１）一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）；（２）付随する重鎖部分なしに、１つの軽鎖可変領域のみを含む一本鎖タンパク質、又は軽鎖可変領域（ＶＬ）の３つのＣＤＲを含むその断片；及び（３）付随する軽鎖部分なしに、１つの重鎖可変領域（ＶＨ）のみを含む一本鎖タンパク質、又は重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含むその断片、を限定なしに含む、連続するアミノ酸残基の途切れない１つの配列を含むか、又はそれからなる一次構造を有するタンパク質である、任意の抗体又はその断片を指す。

【0037】

「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略される、「一本鎖Ｆｖ」は、単一のアミノ酸鎖へと連結されたＶＨ及びＶＬを含む抗体断片を指す。好ましくは、ｓｃＦｖアミノ酸配列は、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨとＶＬの間のペプチドリンカーをさらに含む。

【0038】

「対象」は、哺乳動物、好ましくはヒトを指す。本発明によれば、対象は、哺乳動物、好ましくはヒトである。

【0039】

「治療的有効量」又は「治療的有効用量」は、治療を必要とする対象に重大な否定的又は有害な副作用を引き起こすことなく、疾患の症状又は徴候の１以上を予防する、低減する、緩和する又は減速（軽減）することを目的とした、本明細書に記載の抗ｈＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片の量又は用量又は濃度を指す。

【0040】

「治療」又は「処置」は、治療的処置、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）（又は予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ））処置、又は治療的処置と予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）（又は予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ））処置の両方を指し、その目的は、疾患の症状又は徴候の１以上を予防する、低減する、緩和する、及び／又は減速（軽減）することである。

【0041】

「ＴＲＥＭ－１」は、「骨髄細胞上で発現されるトリガー受容体－１（ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌ－１）」を指し、ＣＤ３５４としても知られることもある。前述したように、ＴＲＥＭ－１は、３つの別々のドメイン：Ｉｇ様構造（主にリガンド結合に関与する）、膜貫通部分、及び短い細胞質尾部、を含む膜結合型免疫受容体である。特に断りのない限り、ヒトＴＲＥＭ－１タンパク質は、２０００年１０月１日に最終修正されたＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＮＰ９９－１及び２００５年１１月２２日に最終修正されたＵｎｉＰｒｏｔＫＢアクセッション番号Ｑ３８Ｌ１５－１に対応する配列番号４３に記載のアミノ酸配列を有する。いくつかの転写産物が、ヒトＴＲＥＭ－１について知られている。ＴＲＥＭ１－２０１（転写産物ＩＤ ｅｎｓｅｍｂｌ ＥＮＳＴ０００００２４４７０９．８）と一般に呼ばれる転写産物は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列をコードする。ＴＲＥＭ１－２０２と一般に呼ばれる転写産物は、ＴＲＥＭ－１アイソフォーム２（ｅｎｓｅｍｂｌ転写産物ＩＤ ＥＮＳＴ０００００３３４４７５．１０）としても知られ、配列番号４４に記載のアミノ酸配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＮＰ９９－２に対応する）をコードする。ＴＲＥＭ１－２０７と一般に呼ばれる転写産物は、ＴＲＥＭ－１アイソフォーム３（ｅｎｓｅｍｂｌ転写産物ＩＤ ＥＮＳＴ０００００５９１６２０．１）としても知られ、配列番号４５に記載のアミノ酸配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＮＰ９９－３）をコードする。ＴＲＥＭ１－２０４（ｅｎｓｅｍｂｌ転写産物ＩＤ ＥＮＳＴ０００００５８９６１４．５）と一般に呼ばれる転写産物は、配列番号４６に記載のアミノ酸配列（２０１３年１月９日に最終修正されたＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｋ７ＥＫＭ５－１に対応する）をコードする。

【0042】

「ｈＴＲＥＭ－１」は、ヒトＴＲＥＭ－１を指す。

【0043】

「可変の」は、ＶＨ及びＶＬの特定領域が、抗体間で配列が大きく異なり、かつその標的抗原に対する各特定の抗体の結合及び特異性に使用される、という事実を指す。しかし、この可変性は、抗体の可変ドメイン全体に均等に分布されない。それは、抗原結合部位の一部を形成するＶＬとＶＨの各々において「超可変ループ」と呼ばれる３つのセグメント中に集中される。６つの超可変ループはそれぞれ、本明細書上記で定義される、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」の一部を含み得る。

【0044】

「ＶＨ」は、抗体の重鎖の可変領域（又はドメイン）を指す。

【0045】

「ＶＬ」は、抗体の軽鎖の可変領域（又はドメイン）を指す。

【0046】

詳細な説明
本発明は、ヒトの骨髄細胞上で発現されるトリガー受容体－１（Ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｏｎ Ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ－１）（ヒトＴＲＥＭ－１又はｈＴＲＥＭ－１）に結合する、単離された抗体、又はその抗原結合断片に関する。本発明はそのため、単離された抗ヒトＴＲＥＭ－１（又は抗ｈＴＲＥＭ－１）抗体又はその抗原結合断片に関する。

【0047】

一実施形態によれば、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、ｈＴＲＥＭ－１に特異的に結合する。言い換えると、一実施形態によれば、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、ｈＴＲＥＭ－１に特異的である。

【0048】

抗体又はその抗原結合断片は、それが上記抗原（例えば、ＴＲＥＭ－１、特にｈＴＲＥＭ－１）と検出可能なレベルで、好ましくは約１０^３Ｍ^－１以上、好ましくは約５×１０^３Ｍ^－１、１０^４Ｍ^－１、５×１０^４Ｍ^－１、又は１０^５Ｍ^－１以上の親和性定数（ｋ_ａ）で、反応する場合、抗原に「特異的である」、「免疫特異的である」又は「特異的に結合する」と言われる。その同族抗原に対する抗体又はその抗原結合断片の親和性はまた一般に、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）として表される。そのため、抗体又はその抗原結合断片は、それが上記抗原（例えば、ＴＲＥＭ－１、特にｈＴＲＥＭ－１）と検出可能なレベルで、好ましくは１０^－６Ｍ以下、好ましくは１０^－７Ｍ、５×１０^－８Ｍ、１０^－８Ｍ、５×１０^－９Ｍ、１０^－９Ｍ、又は５×１０^－１０Ｍ以下のＫ_Ｄ、又はそれより低いＫ_Ｄで、反応する場合、抗原に「免疫特異的である」、「特異的である」又は「特異的に結合する」と言われる。

【0049】

抗体又はその抗原結合断片の親和性は、従来の技術、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，１９４９．Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．５１：６６０－６７２により記載されたものを使用して容易に決定できる。抗原、細胞又は組織に対する抗体又はその抗原結合断片の結合特性は一般に、例えば、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学（ＩＨＣ）及び／又は蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などの免疫蛍光ベースのアッセイを含む免疫検出方法を使用して、又は表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）を使用する）により決定され及び評価され得る。

【0050】

一実施形態において、単離された抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、約１０×１０^－９Ｍ以下の、好ましくは約９×１０^－９Ｍ、８×１０^－９Ｍ、７×１０^－９Ｍ、６×１０^－９Ｍ、５×１０^－９Ｍ、４×１０^－９Ｍ、３×１０^－９Ｍ、２×１０^－９Ｍ、又は１０^－９Ｍ以下の、ｈＴＲＥＭ－１への結合についてのＫ_Ｄを示す。一実施形態において、単離された抗－ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、約１０^－９Ｍ以下の、好ましくは約９×１０^－１０Ｍ、８×１０^－１０Ｍ、７×１０^－１０Ｍ、６×１０^－１０Ｍ、又は５×１０^－１０Ｍ以下の、ｈＴＲＥＭ－１への結合についてのＫ_Ｄを示す。一実施形態において、ｈＴＲＥＭ－１への結合についての単離された抗－ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片のＫ_Ｄは、約１．１０^－１０Ｍ～約１０．１０^－９Ｍの、好ましくは約３．１０^－１０Ｍ～約８．１０^－９Ｍの範囲である。

【0051】

一実施形態によれば、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、
－２０００年１０月１日に最終修正されたＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＮＰ９９－１及び２００５年１１月２２日に最終修正されたＵｎｉＰｒｏｔＫＢアクセッション番号Ｑ３８Ｌ１５－１に対応し；かつまたＴＲＥＭ１－２０１（転写産物ＩＤ ｅｎｓｅｍｂｌ ＥＮＳＴ０００００２４４７０９．８）と一般に呼ばれる転写産物によってコードされるアミノ酸配列に対応する、配列番号４３；
－ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＮＰ９９－２に対応し；かつまたＴＲＥＭ１－２０２と一般に呼ばれ、ＴＲＥＭ－１アイソフォーム２（ｅｎｓｅｍｂｌ転写産物ＩＤ ＥＮＳＴ０００００３３４４７５．１０）としても知られる転写産物によってコードされるアミノ酸配列に対応する、配列番号４４；
－ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＮＰ９９－３に対応し；かつまたＴＲＥＭ１－２０７と一般に呼ばれ、ＴＲＥＭ－１アイソフォーム３（ｅｎｓｅｍｂｌ転写産物ＩＤ ＥＮＳＴ０００００５９１６２０．１）としても知られる転写産物によってコードされるアミノ酸配列に対応する、配列番号４５；または
－２０１３年１月９日に最終修正されたＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｋ７ＥＫＭ５－１に対応し；かつまたＴＲＥＭ１－２０４（ｅｎｓｅｍｂｌ転写産物ＩＤ ＥＮＳＴ０００００５８９６１４．５）と一般に呼ばれる転写産物に対応する、配列番号４６
の少なくとも１つに記載のアミノ酸配列を有するヒトＴＲＥＭ－１を結合する。

【0052】

一実施形態において、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を有するｈＴＲＥＭ－１、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を有するｈＴＲＥＭ－１、配列番号４５に記載のアミノ酸配列を有するｈＴＲＥＭ－１、及び／又は配列番号４６に記載のアミノ酸配列を有するｈＴＲＥＭ－１を結合する。一実施形態において、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を有するｈＴＲＥＭ－１を結合する。

【0053】

実施形態によれば、単離された抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、ｈＴＲＥＭ－１を阻害できる。

【0054】

本明細書で使用されるように、「ｈＴＲＥＭ－１を阻害できる」は、単離された抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片が、ＴＲＥＭ－１、特にｈＴＲＥＭ－１の機能及び／又は活性を阻害できることを意味する。そのため、一実施形態において、単離された抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、ＴＲＥＭ－１シグナル伝達経路の活性化を阻害できる。一実施形態において、単離された抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、ＴＲＥＭ－１のクラスタリングを阻害できる。一実施形態において、単離された抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、ＴＲＥＭ－１の二量体化を阻害できる。一実施形態において、単離された抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、ＴＲＥＭ－１上のリガンド結合を阻害できる。

【0055】

一実施形態において、単離された抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、それによりＴＲＥＭ－１が活性化される刺激シグナルに関係なく、ＴＲＥＭ－１、特にｈＴＲＥＭ－１の機能及び／又は活性を阻害できる。一実施形態において、単離された抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、リガンド依存的に（例えば、ＰＧＬＹＲＰ１を用いて）及び／又はリガンド非依存的に（例えば、ＴＬＲを介して）活性化されたＴＲＥＭ－１、特にｈＴＲＥＭ－１の機能及び／又は活性を阻害できる。ＴＲＥＭ－１、特にｈＴＲＥＭ－１を活性化するための刺激方法は、当技術分野で周知であり、例えば、ＴＲＥＭ－１を発現する細胞（例えば、好中球など）とＴＲＥＭ－１リガンド複合体（例えば、ペプチドグリカンと複合体化されたＰＧＬＹＲＰ１（ペプチドグリカン認識タンパク質１））のインキュベーションによる直接的な活性化；並びにＴＲＥＭ－１を発現する細胞（例えば、好中球など）とペプチドグリカン（ＰＧＮ）、リポ多糖類（ＬＰＳ）、又は熱殺菌されたもしくは熱不活化された細菌（例えば、熱殺菌された大腸菌もしくは熱殺菌された枯草菌など）のインキュベーションによるＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）（ＴＬＲ２及び／又はＴＬＲ４など）の活性化による間接的な活性化を含む。そのため、一実施形態において、単離された抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、ＴＲＥＭ－１リガンド複合体（例えば、ＰＧＮと複合体化されたＰＧＬＹＲＰ１）による、ＰＧＮ刺激による、ＬＰＳ刺激による、又は熱殺菌されたもしくは熱不活化された細菌（例えば、熱殺菌された大腸菌もしくは熱殺菌された枯草菌など）によるいずれかでのＴＲＥＭ－１の活性化後に、ＴＲＥＭ－１、特にｈＴＲＥＭ－１の機能及び／又は活性を阻害できる。

【0056】

ＴＲＥＭ－１阻害を評価するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、本明細書下記の実施例の節に記載されるアッセイを含む。

【0057】

ＴＲＥＭ－１阻害を評価するためのアッセイは、例えば、リポ多糖類（ＬＰＳ）の存在下で、又はペプチドグリカン（ＰＧＮ）のみの存在下で、又はペプチドグリカンと複合体化されたＰＧＬＹＲＰ１（ペプチドグリカン認識タンパク質１）（いわゆるＰＰｘ又はＰＰ複合体）の存在下で、又は大腸菌もしくは枯草菌などの熱殺菌されたもしくは熱不活化された細菌の存在下でのインキュベーションにより、ＴＲＥＭ－１シグナル伝達経路を活性化するように刺激された好中球による活性酸素種（ＲＯＳ）生成のインビトロ評価を含む。一実施形態において、ＴＲＥＭ－１を結合できかつ、ＬＰＳ刺激された好中球、ＰＧＮ刺激された好中球、ＰＰ刺激された好中球、又は熱殺菌されたもしくは熱不活性化された細菌刺激好中球によるＲＯＳ生成を阻害できる化合物はそのため、ＴＲＥＭ－１を阻害できる。

【0058】

ＴＲＥＭ－１阻害を評価するためのアッセイはまた、例えば、ＬＰＳの存在下で、又はＰＧＮのみの存在下で、又はＰＰ複合体の存在下で、又は大腸菌もしくは枯草菌などの熱殺菌された又は熱不活化された細菌の存在下でのインキュベーションにより、ＴＲＥＭ－１シグナル伝達経路を活性化するように刺激された霊長類もしくはヒトの細胞又はｈＴＲＥＭ－１ノックインマウス初代細胞（例えば、ヒトもしくはカニクイザルもしくはｈＴＲＥＭ－１ノックインマウスの好中球、単球、又は全血試料）によるｐｒｏ炎症性サイトカイン／ケモカイン（単球化学誘引性タンパク質１（ＭＣＰ１）としても知られるサイトカインケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）、インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－８（ＩＬ－８）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）としても知られるインターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ－１０）、及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－αもしくはＴＮＦａ）など）の発現及び／又は分泌のインビトロ評価も含む。一実施形態において、ＴＲＥＭ－１を結合できかつ、ＬＰＳ刺激された、ＰＧＮ刺激された、ＰＰ刺激された、又は熱殺菌されたもしくは熱不活性化された細菌に刺激された好中球又は全血によるｐｒｏ炎症性サイトカイン／ケモカインの発現及び／又は分泌を阻害できる化合物はそのため、ＴＲＥＭ－１を阻害できる。

【0059】

ＴＲＥＭ－１阻害を評価するためのアッセイはまた、例えば、ＬＰＳの存在下で、又はＰＧＮのみの存在下で、又はＰＰ複合体の存在下で、又は大腸菌もしくは枯草菌などの熱殺菌された又は熱不活化された細菌の存在下でのインキュベーションによる、ＴＲＥＭ－１シグナル伝達経路を活性化するように刺激されたヒト単球細胞株（例えば、ＴＨＰ－１細胞株）又はヒト骨髄単球細胞株（例えば、Ｕ９３７細胞株）によるｐｒｏ炎症性サイトカイン／ケモカイン（ＭＣＰ１としても知られるＣＣＬ２、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＸＣＬ１０としても知られるＩＰ－１０、及びＴＮＦ－α又はＴＮＦａなど）の発現及び／又は分泌のインビトロ評価を含む。一実施形態において、ＴＲＥＭ－１を結合できかつ、ＬＰＳ刺激された、ＰＧＮ刺激された、ＰＰ刺激された、又は熱殺菌されたもしくは熱不活性化された細菌刺激ヒト単球細胞株又はヒト骨髄単球細胞株によるｐｒｏ炎症性サイトカイン／ケモカインの発現及び／又は分泌を阻害できる化合物はそのため、ＴＲＥＭ－１を阻害できる。

【0060】

ＴＲＥＭ－１阻害を評価するためのアッセイはまた、マウスモデルにおけるｐｒｏ炎症性サイトカイン／ケモカイン（ＭＣＰ１としても知られるＣＣＬ２、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＸＣＬ１０としても知られるＩＰ－１０、及びＴＮＦ－α又はＴＮＦａなど）の発現及び／又は分泌のインビボ評価を含む。関連するマウスモデルの例としては、エンドトキシン血症がＬＰＳによって誘導されたトランスジェニックＢＲＧＳＦマウス、エンドトキシン血症がＬＰＳによって誘導されたｈＴＲＥＭ－１ノックインマウス、全身性炎症応答がＰＧＮによって誘導されたｈＴＲＥＭ－１ノックインマウス、及び、例えば、局所炎症応答を誘導するためにＬＰＳ又はＰＧＮで処置されたｈＴＲＥＭ－１ノックインマウスが挙げられる。一実施形態において、上記のマウスモデルにおいてＴＲＥＭ－１を結合できかつ、ｐｒｏ炎症性サイトカイン／ケモカインの発現及び／又は分泌を阻害できる化合物はそのため、ＴＲＥＭ－１を阻害できる。

【0061】

一実施形態において、本明細書に記載の抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、単離された抗体、又はその抗原結合断片である。

【0062】

本明細書で使用されるように、「単離された抗体又はその抗原結合断片」中でのような、「単離された」は、異なる抗原特異性を有する他のタンパク質又は抗体を実質的に含まない抗体、又はその抗原結合断片（例えば、ｈＴＲＥＭ－１を特異的に結合し、かつｈＴＲＥＭ－１以外の抗原を特異的に結合するタンパク質又は抗体を実質的に含まない単離された抗体、又はその抗原結合断片）を指すことを意図する。ｈＴＲＥＭ－１を特異的に結合する単離された抗体、又はその抗原結合断片は、しかし、他の属又は種からのＴＲＥＭ－１分子などの、他の関連抗原に対する交差反応性を有してよい。さらに、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、他の細胞物質及び／又は化学物質、特に、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質成分もしくは非タンパク質成分を含むがこれらに限定されない、抗体又はその抗原結合断片の治療的使用を妨げるであろうもの、を実質的に含まないであろう。

【0063】

一実施形態において、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、精製される。

【0064】

一実施形態において、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、抗体又は抗原結合断片の８０重量％、８５重量％、９０重量％、９１重量％、９２重量％、９３重量％、９４重量％、９５％重量％、９６％重量％、９８％重量％、又は９９重量％を超える純度、好ましくは９０重量％、９６％重量％、９７％重量％、９８％重量％、又は９９重量％を超える純度を得るために精製される。一実施形態において、純度は、分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される。

【0065】

一実施形態において、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、タンパク質１ｍｇあたり０．５、０．４、０．３、０．２、又は０．１ＥＵ未満の、好ましくはタンパク質１ｍｇあたり０．１ＥＵ未満のエンドトキシンレベルを得るために精製される。

【0066】

一実施形態において、上述したように、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、ｈＴＲＥＭ－１及びｈＴＲＥＭ－１の少なくとも１つのオルソログを結合する。そのため、一実施形態において、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、ｈＴＲＥＭ－１及び別の属又は種からの少なくとも１つのＴＲＥＭ－１を結合する。言い換えると、一実施形態において、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、他の関連抗原に対し交差反応性を示す（交差反応する）。一実施形態において、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、ｈＴＲＥＭ－１及びサルＴＲＥＭ－１（特に、カニクイザルのサルＴＲＥＭ－１（cynomolgus monkey TREM-1）又は略してカニクイザルＴＲＥＭ－１（cynomolgus TREM-1））を結合する。

【0067】

一実施形態において、単離された抗ｈＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片は、全抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、二量体一本鎖抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃサイレント抗体又は抗原結合断片（すなわち、Ｆｃサイレントを含む抗体又は抗原結合断片）、デフコシル化Ｆｃ（デフコシル化抗体）、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディなどの改変されたＦｃを有する抗体又は抗原結合断片を含むか、又はそれらからなる群から選択される分子である。

【0068】

抗体の抗原結合断片は、標準的な方法を使用して取得できる。例えば、Ｆａｂ又はＦ（ａｂ’）_２断片は、従来の技術に従って、単離された抗体のプロテアーゼ消化によって生成され得る。あるいは、Ｆａｂ断片などの抗体の抗原結合断片は、組換えタンパク質として発現され得る。

【0069】

一実施形態において、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、モノクローナルである。別の実施形態において、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、ポリクローナルである。

【0070】

一実施形態において、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、一価である。別の実施形態において、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、二価である。

【0071】

一価抗原結合抗体断片の例としては、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆｖ断片が挙げられる。一実施形態において、抗原結合抗体断片はそのため、Ｆａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖを含むか、又はそれらからなる群から選択される分子である。一実施形態において、単離された抗体、又はその抗原結合断片は、Ｆａｂである。

【0072】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、完全にヒトの又は実質的にヒトの重鎖定常領域（本明細書ではＣ_Ｈと略す）及び／又は軽鎖定常領域（本明細書ではＣ_Ｌと略す）を含む。一実施形態において、定常領域は、ヒト由来のものである。

【0073】

用語「実質的にヒトの」は、ヒト化された抗体又はキメラ抗体又はその抗原結合断片の定常領域のコンテキストにおいて、ヒト定常領域のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する定常領域を指す。

【0074】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、完全な又は実質的に完全なマウスのＣ_Ｈ及び／又はＣ_Ｌを含む。一実施形態において、定常領域はマウス由来のものである。

【0075】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、マウス抗体又はその抗原結合断片である。

【0076】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、キメラ抗体又はその抗原結合断片である。

【0077】

「キメラ抗体」は、本明細書で使用されるように、それと自然界では天然に連結されない第２のアミノ酸配列に連結された第１のアミノ酸配列を含む抗体又はその抗原結合断片を指す。アミノ酸配列は通常、キメラの（又は融合の）タンパク質で一緒にされる別々のタンパク質に存在するか、又は同じタンパク質に通常存在するが、キメラの（又は融合の）タンパク質において新たな配置で配置され得る。キメラタンパク質は、例えば、化学合成により、又はペプチド領域が所望の関係でコードされるポリヌクレオチドを作製すること及び翻訳することにより作製され得る。用語「キメラ抗体」は、本明細書において、
（ａ）定常領域、又はその一部が、可変領域が異なるもしくは変更されたクラス、エフェクター機能及び／又は種の定常領域、又はキメラ抗体に新たな特性を付与する全く異なる分子、例えば、酵素、タンパク質、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などに連結されるように変更される、置換されるもしく交換されるか；又は
（ｂ）可変領域又はその一部が、異なるもしくは変更された抗原特異性を有する可変領域もしくはその一部と；あるいは別の種又は別の抗体クラスもしくはサブクラスからの対応する配列と変更される、置換される又は交換される
抗体及びその抗原結合断片を包含する。

【0078】

一実施形態において、本発明による抗体又はその抗原結合断片は、脱免疫化された抗体又はその抗原結合断片である。

【0079】

脱免疫化は、本明細書に記載されるようにｈＴＲＥＭ－１を結合し阻害する能力を妨げることなく、抗体又はその抗原結合断片の免疫原性を低下させることを目的とする。抗体、又はその抗原結合断片を脱免疫化するための方法は、当技術分野で周知である。このような方法は特に、抗体、又はその抗原結合断片のアミノ酸配列に存在するヒトＴ細胞エピトープ配列内の主要なアミノ酸を置換すること、したがってＨＬＡ（ヒト白血球抗原）への抗体又はその抗原結合断片の結合及びその後のＴ細胞応答の誘発を防止することを含む。

【0080】

一実施形態において、本発明による抗体又はその抗原結合断片は、ヒト化された抗体又はその抗原結合断片である。

【0081】

「ヒト化抗体」は、本明細書で使用されるように、非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を含有するキメラ抗体又はその抗原結合断片を指す。これは、例えば、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に見出されるアミノ酸を取り込むために非ヒト抗体アミノ酸配列を変更することにより、ヒト細胞により作られる抗体により似るように変更された可変領域及び定常領域を有する、非ヒト細胞により作られる抗体を含む。本発明によるヒト化抗体又はその抗原結合断片は、例えばＣＤＲにおいて、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムなもしくは部位特異的な変異誘発により又はインビボでの体細胞変異により導入された変異）を含んでよい。用語「ヒト化抗体」はまた、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列がヒトのフレームワーク配列に移植されている、抗体及びその抗原結合断片も含む。言い換えると、用語「ヒト化抗体」は、レシピエントのヒト抗体のＣＤＲがドナーの非ヒト抗体からのＣＤＲで置換される抗体又はその抗原結合断片を指し得る。ヒト化抗体又はその抗原結合断片はまた、フレームワーク配列中のドナー起源の残基を含んでもよい。ヒト化抗体又はその抗原結合断片はまた、ヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。ヒト化抗体又はその抗原結合断片はまた、レシピエント抗体中にも移入されたＣＤＲもしくはフレームワーク配列中にも見出されない残基を含んでもよい。

【0082】

「ヒト化抗体」は、元の抗体又はドナー抗体（ドナー非ヒト抗体など）と同様の抗原特異性を保持し得る。しかし、ヒト化の特定の方法を用いると、抗体の結合の親和性及び／又は特異性が増強され得る。

【0083】

本発明による抗体又はその抗原結合断片をヒト化するための方法は、当技術分野で周知である。例えば、ヒト化抗体及びその抗原結合断片は、ヒト抗体レパートリーを発現するように操作されたトランスジェニック動物（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｚら，１９９３．Ｎａｔｕｒｅ．３６２（６４１７）：２５５－８）を免疫化に用いることによる、又はファージディスプレイ法を用いた抗体レパートリーの選択によるなどの、様々な技術に従って生成され得る。このような技術は、当業者に公知であり、本願に開示されるように、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片から始めて実施できる。

【0084】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、ＩｇＧクラスに由来する。

【0085】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ１サブクラスに由来する。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片はそのため、ＩｇＧ１抗体、好ましくは、ヒトＩｇＧ１抗体又はキメラヒトＩｇＧ１抗体である。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ４サブクラスに由来する。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片はそのため、ＩｇＧ４抗体、好ましくはヒトＩｇＧ４抗体又はキメラヒトＩｇＧ４抗体である。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ２サブクラスに由来する。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片はそのため、ＩｇＧ２抗体、好ましくはヒトＩｇＧ２抗体又はキメラヒトＩｇＧ２抗体である。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ３サブクラスに由来する。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片はそのため、ＩｇＧ３抗体、好ましくはヒトＩｇＧ３抗体又はキメラヒトＩｇＧ３抗体である。

【0086】

本明細書で使用されるように、所与の配列を参照して、語句「異なるアミノ酸により置換される[...]のアミノ酸を有すると特徴づけられる」は、保存的アミノ酸修飾の、上記配列における、発生を指す。

【0087】

本明細書で使用されるように、表現「保存的アミノ酸修飾」は、そのアミノ酸配列を含有する抗体又はその抗原結合断片の結合特性に顕著に影響を与えない又は結合特性を変えない、修飾を指す。そのような保存的修飾は、アミノ酸の置換、付加及び欠失を含む。修飾は、部位特異的変異誘発及びＰＣＲ媒介変異誘発などの、当技術分野で公知の標準的な技術により抗体又はその抗原結合断片に導入できる。

【0088】

保存的アミノ酸置換は典型的には、あるアミノ酸残基が類似の物理化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸残基で置換されたものである。指定された可変領域及びＣＤＲ配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５個の又はそれより多いアミノ酸の挿入、欠失及び／又は置換を含み得る。置換が行われる場合、好ましい置換は、保存的修飾である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、荷電していない極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。そのため、本発明による抗体もしくはその抗原結合断片のＣＤＲ及び／又は可変領域内の１以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基と置き換えることができ、変更された抗体は、本明細書に記載されるアッセイを使用して保持される機能（すなわち、本明細書に記載の特性、例えば、ｈＴＲＥＭ－１への結合など）について試験され得る。一実施形態において、本発明による抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲ及び／又は可変領域内の一連のアミノ酸は、側鎖ファミリーメンバーの順序及び／又は組成が異なる構造的に類似した一連のものと置き換えることができる。

【0089】

本発明では、特に断りのない限り、相補性決定領域（ＣＤＲ）の位置は、Ｋａｂａｔ命名法を使用して決定される。

【0090】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの、より好ましくは３つの以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＶＸ_４Ｇ（配列番号２）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであるか；又はＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＦＸ_４Ｇ（配列番号３９）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであり；かつ／又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）、Ｘ_５はＹ又はＲであり、Ｘ_６はＳ又はＧである
を含む、重鎖の可変領域（重鎖可変領域又はＶＨとも呼ばれる）を含む。

【0091】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの、より好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＶＸ_４Ｇ（配列番号２）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであり；かつ／又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）、Ｘ_５はＹ又はＲであり、Ｘ_６はＳ又はＧである
を含む、ＶＨを含む。

【0092】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの、より好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＦＸ_４Ｇ（配列番号３９）、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであり；かつ／又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）、Ｘ_５はＹ又はＲであり、Ｘ_６はＳ又はＧである
を含む、ＶＨを含む。

【0093】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＶＸ_４Ｇ（配列番号２）、
ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであるか；又はＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＦＸ_４Ｇ（配列番号３９）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであり；かつ
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）、Ｘ_５はＹ又はＲであり、Ｘ_６はＳ又はＧである
を含む、ＶＨを含む。

【0094】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＶＸ_４Ｇ（配列番号２）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであり；かつ
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）、Ｘ_５はＹ又はＲであり、Ｘ_６はＳ又はＧである
を含む、ＶＨを含む。

【0095】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＦＸ_４Ｇ（配列番号３９）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであり；かつ
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）、Ｘ_５はＹ又はＲであり、Ｘ_６はＳ又はＧである
を含む、ＶＨを含む。

【0096】

上記の配列番号２に記載の配列を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ２の例は、限定されないが、ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＤＰＫＶＫＧ（配列番号７）、ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＳＰＫＶＱＧ（配列番号１２）、ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ（配列番号１７）、ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号１９）、及びＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号２２）を含む。そのため、一実施形態において、上記の配列番号２に記載の配列を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ２は、ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＤＰＫＶＫＧ（配列番号７）、ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＳＰＫＶＱＧ（配列番号１２）、ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ（配列番号１７）、ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号１９）、及びＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号２２）を含むか、又はそれらからなる群から選択される。

【0097】

上記の配列番号３９に記載の配列を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ２の例は、限定されないが、ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号４０）を含む。そのため、一実施形態において、上記の配列番号３９に記載の配列を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ２は、ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号４０）である。

【0098】

上記の配列番号３に記載の配列を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ３の例は、限定されないが、ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）、ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、及びＨＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号２３）を含む。そのため、一実施形態において、上記の配列番号３に記載の配列を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ３は、ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）、ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、及びＨＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号２３）を含むか、又はそれらからなる群から選択される。

【0099】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）の、好ましくは３つの以下のＣＤＲ
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＤＰＫＶＫＧ（配列番号７）；及び／又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）
を含む、ＶＨを含む。

【0100】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）の、好ましくは３つの以下のＣＤＲ
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＳＰＫＶＱＧ（配列番号１２）；及び／又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）
を含む、ＶＨを含む。

【0101】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）の、好ましくは３つの以下のＣＤＲ
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ（配列番号１７）；及び／又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）
を含む、ＶＨを含む。

【0102】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）の、好ましくは３つの以下のＣＤＲ
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号１９）；及び／又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）
を含む、ＶＨを含む。

【0103】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）の、好ましくは３つの以下のＣＤＲ
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号２２）；及び／又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号２３）
を含む、ＶＨを含む。

【0104】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）、好ましくは３つの以下のＣＤＲ
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号４０）；及び／又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号２３）
を含む、ＶＨを含む。

【0105】

一実施形態において、本明細書上記の配列番号１～３、７、８、１２、１３、１７、１９、２２、２３、３９及び４０のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及び／又はＶ_Ｈ－ＣＤＲ３のいずれかは、異なるアミノ酸により
置換されている１個、２個、３個の又はそれより多いアミノ酸（複数可）を有すると特徴づけられ得る。一実施形態において、配列番号１～３、７、８、１２、１３、１７、１９、２２、２３、３９及び４０を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及び／又はＶ_Ｈ－ＣＤＲ３のいずれかは、対応する配列番号に列挙された特定のＣＤＲ又はＣＤＲのセットと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけられ得る。言い換えると、一実施形態において、本明細書上記のＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及び／又はＶ_Ｈ－ＣＤＲ３は、配列番号１～３、７、８、１２、１３、１７、１９、２２、２３、３９及び４０のいずれか１つに記載の対応するアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有する。

【0106】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの、より好ましくは３つの以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＸ_７ＳＶＸ_８ＮＹＧＩＳＦＸ_９Ｎ（配列番号４）、ここで、Ｘ_７はＥ又はＧであり、Ｘ_８はＤ又はＳであり、Ｘ_９はＭ又はＬであり；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４（配列番号５）、ここで、Ｘ_１０はＳ又はＥであり、Ｘ_１１はＮ又はＹであり、Ｘ_１２はＱ又はＲであり、Ｘ_１３はＧ、Ａ、又はＫであり、Ｘ_１４はＳ又はＲであり；かつ／又は
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＸ_１５Ｘ_１６Ｘ_１７ＰＸ_１８Ｔ（配列番号６）、ここで、Ｘ_１５はＫ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ_１６はＥ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ_１７はＶ又はＦであり、Ｘ_１８はＷ又はＹである
を含む、軽鎖の可変領域（軽鎖可変領域又はＶＬともいう）を含む。

【0107】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＸ_７ＳＶＸ_８ＮＹＧＩＳＦＸ_９Ｎ（配列番号４）、ここで、Ｘ_７はＥ又はＧであり、Ｘ_８はＤ又はＳであり、Ｘ_９はＭ又はＬであり；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４（配列番号５）、ここで、Ｘ_１０はＳ又はＥであり、Ｘ_１１はＮ又はＹであり、Ｘ_１２はＱ又はＲであり、Ｘ_１３はＧ、Ａ、又はＫであり、Ｘ_１４はＳ又はＲであり；かつ
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＸ_１５Ｘ_１６Ｘ_１７ＰＸ_１８Ｔ（配列番号６）、ここで、Ｘ_１５はＫ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ_１６はＥ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ_１７はＶ又はＦであり、Ｘ_１８はＷ又はＹである
を含む、ＶＬを含む

【0108】

本明細書上記の配列番号４に記載の配列を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１の例は、限定されないが、ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号９）、ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、及びＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号２４)を含む。そのため、一実施形態において、上記の配列番号４に記載の配列を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１は、ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号９）、ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、及びＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号２４)を含むか、又はそれらからなる群から選択される。

【0109】

本明細書上記の配列番号５に記載の配列を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ２の例は、限定されないが、ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）、ＡＡＳＹＱＫＲ（配列番号１５）、ＡＡＥＹＱＧＲ（配列番号２０）、ＡＡＥＹＲＡＲ（配列番号２１）、及びＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号２５）を含む。そのため、一実施形態において、本明細書上記の配列番号５に記載の配列を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ２は、ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）、ＡＡＳＹＱＫＲ（配列番号１５）、ＡＡＥＹＱＧＲ（配列番号２０）、ＡＡＥＹＲＡＲ（配列番号２１）、及びＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号２５）を含むか、又はそれらからなる群から選択される。

【0110】

本明細書上記の配列番号６に記載の配列を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ３の例は、限定されないが、ＱＱＳＲＨＶＰＹＴ（配列番号１１）、ＱＱＳＳＮＦＰＷＴ（配列番号１６）、ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）、及びＱＱＳＫＥＶＰＷＴ（配列番号２６)を含む。そのため、一実施形態において、本明細書上記の配列番号６に記載の配列を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ３は、ＱＱＳＲＨＶＰＹＴ（配列番号１１）、ＱＱＳＳＮＦＰＷＴ（配列番号１６）、ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）、及びＱＱＳＫＥＶＰＷＴ（配列番号２６)を含むか、又はそれらからなる群から選択される。

【0111】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）の、好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号９）；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）；及び／又は
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＲＨＶＰＹＴ（配列番号１１）；
を含む、ＶＬを含む。

【0112】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）の、好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＹＱＫＲ（配列番号１５）及び／又は
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＦＰＷＴ（配列番号１６）；
を含む、ＶＬを含む。

【0113】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）の、好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）；及び／又は
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；
を含む、ＶＬを含む。

【0114】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）の、好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＱＧＲ（配列番号２０）；及び／又は
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；
を含む、ＶＬを含む。

【0115】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）の、好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＡＲ（配列番号２１）；及び／又は
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；
を含む、ＶＬを含む。

【0116】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）の、好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号２４)；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号２５）；及び／又は
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＫＥＶＰＷＴ（配列番号２６)；
を含む、ＶＬを含む。

【0117】

一実施形態において、本明細書上記の配列番号４～６、９～１１、１４～１６、１８、２０、２１及び２４～２５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及び／又はＶ_Ｌ－ＣＤＲ３のいずれかは、異なるアミノ酸により置換されている１個、２個、３個の又はそれより多いアミノ酸（複数可）を有すると特徴づけられ得る。一実施形態において、配列番号４～６、９～１１、１４～１６、１８、２０、２１及び２４～２５を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及び／又はＶ_Ｌ－ＣＤＲ３のいずれかは、対応する配列番号に列挙された特定のＣＤＲ又はＣＤＲのセットと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけられ得る。言い換えると、一実施形態において、本明細書上記のＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及び／又はＶ_Ｌ－ＣＤＲ３は、配列番号４～６、９～１１、１４～１６、１８、２０、２１及び２４～２５のいずれか１つに記載の対応するアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有する。

【0118】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの、より好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＶＸ_４Ｇ（配列番号２）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであるか；又はＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＦＸ_４Ｇ（配列番号３９）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであり；かつ／又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）、Ｘ_５はＹ又はＲであり、Ｘ_６はＳ又はＧである
を含む、重鎖の可変領域（ＶＨ）；及び
少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの、より好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＸ_７ＳＶＸ_８ＮＹＧＩＳＦＸ_９Ｎ（配列番号４）、ここで、Ｘ_７はＥ又はＧであり、Ｘ_８はＤ又はＳであり、Ｘ_９はＭ又はＬであり；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４（配列番号５）、ここで、Ｘ_１０はＳ又はＥであり、Ｘ_１１はＮ又はＹであり、Ｘ_１２はＱ又はＲであり、Ｘ_１３はＧ、Ａ、又はＫであり、Ｘ_１４はＳ又はＲであり；かつ／又は
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＸ_１５Ｘ_１６Ｘ_１７ＰＸ_１８Ｔ（配列番号６）、ここで、Ｘ_１５はＫ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ_１６はＥ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ_１７はＶ又はＦであり、Ｘ_１８はＷ又はＹである
を含む、軽鎖の可変領域（ＶＬ）
を含む。

【0119】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの、より好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＶＸ_４Ｇ（配列番号２）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであり；かつ／又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）、Ｘ_５はＹ又はＲであり、Ｘ_６はＳ又はＧである
を含む、ＶＨ；及び
少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの、より好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＸ_７ＳＶＸ_８ＮＹＧＩＳＦＸ_９Ｎ（配列番号４）、ここで、Ｘ_７はＥ又はＧであり、Ｘ_８はＤ又はＳであり、Ｘ_９はＭ又はＬであり；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４（配列番号５）、ここで、Ｘ_１０はＳ又はＥであり、Ｘ_１１はＮ又はＹであり、Ｘ_１２はＱ又はＲであり、Ｘ_１３はＧ、Ａ、又はＫであり、Ｘ_１４はＳ又はＲであり；かつ／又は
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＸ_１５Ｘ_１６Ｘ_１７ＰＸ_１８Ｔ（配列番号６）、ここで、Ｘ_１５はＫ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ_１６はＥ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ_１７はＶ又はＦであり、Ｘ_１８はＷ又はＹである
を含む、ＶＬ
を含む。

【0120】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの、より好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＦＸ_４Ｇ（配列番号３９）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであり；かつ／又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）、Ｘ_５はＹ又はＲであり、Ｘ_６はＳ又はＧである
を含む、ＶＨ；及び
少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの、より好ましくは３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＸ_７ＳＶＸ_８ＮＹＧＩＳＦＸ_９Ｎ（配列番号４）、ここで、Ｘ_７はＥ又はＧであり、Ｘ_８はＤ又はＳであり、Ｘ_９はＭ又はＬであり；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４（配列番号５）、ここで、Ｘ_１０はＳ又はＥであり、Ｘ_１１はＮ又はＹであり、Ｘ_１２はＱ又はＲであり、Ｘ_１３はＧ、Ａ、又はＫであり、Ｘ_１４はＳ又はＲであり；かつ／又は
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＸ_１５Ｘ_１６Ｘ_１７ＰＸ_１８Ｔ（配列番号６）、ここで、Ｘ_１５はＫ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ_１６はＥ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ_１７はＶ又はＦであり、Ｘ_１８はＷ又はＹである
を含む、ＶＬ
を含む。

【0121】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＶＸ_４Ｇ（配列番号２）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであるか；又はＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＦＸ_４Ｇ（配列番号３９）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであり；かつ
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）、Ｘ_５はＹ又はＲであり、Ｘ_６はＳ又はＧである
を含む、ＶＨ；及び
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＸ_７ＳＶＸ_８ＮＹＧＩＳＦＸ_９Ｎ（配列番号４）、ここで、Ｘ_７はＥ又はＧであり、Ｘ_８はＤ又はＳであり、Ｘ_９はＭ又はＬであり；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４（配列番号５）、ここで、Ｘ_１０はＳ又はＥであり、Ｘ_１１はＮ又はＹであり、Ｘ_１２はＱ又はＲであり、Ｘ_１３はＧ、Ａ、又はＫであり、Ｘ_１４はＳ又はＲであり；かつ
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＸ_１５Ｘ_１６Ｘ_１７ＰＸ_１８Ｔ（配列番号６）、ここで、Ｘ_１５はＫ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ_１６はＥ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ_１７はＶ又はＦであり、Ｘ_１８はＷ又はＹである
を含む、ＶＬ
を含む。

【0122】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＶＸ_４Ｇ（配列番号２）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであり；かつ
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）、Ｘ_５はＹ又はＲであり、Ｘ_６はＳ又はＧである
を含む、ＶＨ；及び
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＸ_７ＳＶＸ_８ＮＹＧＩＳＦＸ_９Ｎ（配列番号４）、ここで、Ｘ_７はＥ又はＧであり、Ｘ_８はＤ又はＳであり、Ｘ_９はＭ又はＬであり；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４（配列番号５）、ここで、Ｘ_１０はＳ又はＥであり、Ｘ_１１はＮ又はＹであり、Ｘ_１２はＱ又はＲであり、Ｘ_１３はＧ、Ａ、又はＫであり、Ｘ_１４はＳ又はＲであり；かつ
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＸ_１５Ｘ_１６Ｘ_１７ＰＸ_１８Ｔ（配列番号６）、ここで、Ｘ_１５はＫ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ_１６はＥ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ_１７はＶ又はＦであり、Ｘ_１８はＷ又はＹである
を含む、ＶＬ
を含む。

【0123】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＦＸ_４Ｇ（配列番号３９）、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫであり；かつ
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ（配列番号３）、Ｘ_５はＹ又はＲであり、Ｘ_６はＳ又はＧである
を含む、ＶＨ；及び
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＸ_７ＳＶＸ_８ＮＹＧＩＳＦＸ_９Ｎ（配列番号４）、ここで、Ｘ_７はＥ又はＧであり、Ｘ_８はＤ又はＳであり、Ｘ_９はＭ又はＬであり；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４（配列番号５）、ここで、Ｘ_１０はＳ又はＥであり、Ｘ_１１はＮ又はＹであり、Ｘ_１２はＱ又はＲであり、Ｘ_１３はＧ、Ａ、又はＫであり、Ｘ_１４はＳ又はＲであり；かつ
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＸ_１５Ｘ_１６Ｘ_１７ＰＸ_１８Ｔ（配列番号６）、ここで、Ｘ_１５はＫ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ_１６はＥ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ_１７はＶ又はＦであり、Ｘ_１８はＷ又はＹである
を含む、ＶＬ
を含む。

【0124】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＤＰＫＶＫＧ（配列番号７）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号９）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＲＨＶＰＹＴ（配列番号１１）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＳＰＫＶＱＧ（配列番号１２）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＹＱＫＲ（配列番号１５）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＦＰＷＴ（配列番号１６）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ（配列番号１７）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号１９）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＱＧＲ（配列番号２０）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ（配列番号１７）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＡＲ（配列番号２１）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号２２）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号２３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号２４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号２５）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＫＥＶＰＷＴ（配列番号２６）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号４０）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号２３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号２４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号２５）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＫＥＶＰＷＴ（配列番号２６）
を含む。

【0125】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＤＰＫＶＫＧ（配列番号７）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号９）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＲＨＶＰＹＴ（配列番号１１）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＳＰＫＶＱＧ（配列番号１２）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＹＱＫＲ（配列番号１５）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＦＰＷＴ（配列番号１６）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ（配列番号１７）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号１９）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＱＧＲ（配列番号２０）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ（配列番号１７）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＡＲ（配列番号２１）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）；又は
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号２２）、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号２３）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号２４）、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号２５）、及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＫＥＶＰＷＴ（配列番号２６）
を含む。

【0126】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＤＰＫＶＫＧ（配列番号７）；及び
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）
を含む、ＶＨ；並びに
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号９）；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）；及び
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＲＨＶＰＹＴ（配列番号１１）
を含む、ＶＬ
を含む。

【0127】

一実施形態において、配列番号１、７、８を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及び／もしくはＶ_Ｈ－ＣＤＲ３のいずれか並びに／又は配列番号９～１１を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及び／もしくはＶ_Ｌ－ＣＤＲ３のいずれかは、対応する配列番号に列挙された特定のＣＤＲ又はＣＤＲのセットと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけられ得る。言い換えると、一実施形態において、本明細書上記のＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及び／又はＶ_Ｌ－ＣＤＲ３は、配列番号１、７、８及び９～１１に記載の対応するアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有する。

【0128】

配列番号１、７、８を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号９～１１を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗体の例は、ＩＮＯ－１０－３である。配列番号１、７、８を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号９～１１を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆ３（又はＦ３）である。

【0129】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＳＰＫＶＱＧ（配列番号１２）；及び
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）
を含む、ＶＨ；並びに
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＹＱＫＲ（配列番号１５）及び
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＦＰＷＴ（配列番号１６）
を含む、ＶＬ
を含む。

【0130】

一実施形態において、配列番号１、１２、１３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及び／もしくはＶ_Ｈ－ＣＤＲ３のいずれか並びに／又は配列番号１４～１６を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３のいずれかは、対応する配列番号に列挙された特定のＣＤＲ又はＣＤＲのセットと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけられ得る。言い換えると、一実施形態において、本明細書上記のＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及び／又はＶ_Ｌ－ＣＤＲ３は、配列番号１、１２、１３及び１４～１６に記載の対応するアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有する。

【0131】

配列番号１、１２、１３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号１４～１６を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗体の例は、ＩＮＯ－１０－２である。配列番号１、１２、１３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号１４～１６を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆ２（又はＦ２）である。

【0132】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ（配列番号１７）；及び
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）
を含む、ＶＨ；並びに
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＧＲ（配列番号１０）；及び
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）
を含む、ＶＬ
を含む。

【0133】

一実施形態において、配列番号１、１７、１３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及び／もしくはＶ_Ｈ－ＣＤＲ３のいずれか並びに／又は配列番号１４、１０、１８を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３のいずれかは、対応する配列番号に列挙された特定のＣＤＲ又はＣＤＲのセットと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけられ得る。言い換えると、一実施形態において、本明細書上記のＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及び／又はＶ_Ｌ－ＣＤＲ３は、配列番号１、１７、１３、１４、１０、及び１８に記載の対応するアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有する。

【0134】

配列番号１、１７、１３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号１４、１０、１８を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗体の例は、ＩＮＯ－１０－４である。配列番号１、１７、１３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号１４、１０、１８を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆ４（又はＦ４）である。

【0135】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号１９）；及び
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＧＴＭＤＹ（配列番号８）
を含む、ＶＨ；並びに
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＱＧＲ（配列番号２０）；及び
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）
を含む、ＶＬ
を含む。

【0136】

一実施形態において、配列番号１、１９、８を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及び／もしくはＶ_Ｈ－ＣＤＲ３のいずれか並びに／又は配列番号１４、２０、１８を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３のいずれかは、対応する配列番号に列挙された特定のＣＤＲ又はＣＤＲのセットと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけられ得る。言い換えると、一実施形態において、本明細書上記のＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及び／又はＶ_Ｌ－ＣＤＲ３は、配列番号１、１９、８、１４、２０、及び１８に記載の対応するアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有する。

【0137】

配列番号１、１９、８を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号１４、２０、１８を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗体の例は、ＩＮＯ－１０－５である。配列番号１、１９、８を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号１４、２０、１８を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆ５（又はＦ５）である。

【0138】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ（配列番号１７）；及び
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ（配列番号１３）
を含む、ＶＨ；並びに
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ（配列番号１４）；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＥＹＲＡＲ（配列番号２１）；及び
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ（配列番号１８）
を含む、ＶＬ
を含む。

【0139】

一実施形態において、配列番号１、１７、１３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及び／もしくはＶ_Ｈ－ＣＤＲ３のいずれか並びに／又は配列番号１４、２１、１８を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３のいずれかは、対応する配列番号に列挙された特定のＣＤＲ又はＣＤＲのセットと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけられ得る。言い換えると、一実施形態において、本明細書上記のＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及び／又はＶ_Ｌ－ＣＤＲ３は、配列番号１、１７、１３、１４、２１、及び１８に記載の対応するアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有する。

【0140】

配列番号１、１７、１３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号１４、２１、１８を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗体の例は、ＩＮＯ－１０－６である。配列番号１、１７、１３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号１４、２１、１８を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆ６（又はＦ６）である。

【0141】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＶＱＧ（配列番号２２）；及び
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号２３）
を含む、ＶＨ；並びに
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号２４）；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号２５）；及び
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＫＥＶＰＷＴ（配列番号２６）
を含む、ＶＬ
を含む。

【0142】

一実施形態において、配列番号１、２２、２３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及び／もしくはＶ_Ｈ－ＣＤＲ３のいずれか並びに／又は配列番号２４～２６を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３のいずれかは、対応する配列番号に列挙された特定のＣＤＲ又はＣＤＲのセットと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけられ得る。言い換えると、一実施形態において、本明細書上記のＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及び／又はＶ_Ｌ－ＣＤＲ３は、配列番号１、２２、２３及び２４～２６に記載の対応するアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有する。

【0143】

配列番号１、２２、２３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号２４～２６を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗体の例は、ＩＮＯ－１０－１である。配列番号１、２２、２３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号２４～２６を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆ１（又はＦ１）である。

【0144】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ１：ＮＴＹＩＨ（配列番号１）；
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号４０）；及び
－Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３：ＨＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号２３）
を含む、ＶＨ；並びに
３つの以下のＣＤＲ：
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号２４）；
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２：ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号２５）；及び
－Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ３：ＱＱＳＫＥＶＰＷＴ（配列番号２６）
を含む、ＶＬ
を含む。

【0145】

一実施形態において、配列番号１、４０、２３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及び／もしくはＶ_Ｈ－ＣＤＲ３のいずれか並びに／又は配列番号２４～２６を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３のいずれかは、対応する配列番号に列挙された特定のＣＤＲ又はＣＤＲのセットと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけられ得る。言い換えると、一実施形態において、本明細書上記のＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ３、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及び／又はＶ_Ｌ－ＣＤＲ３は、配列番号１、４０、２３及び２４～２６に記載の対応するアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有する。

【0146】

配列番号１、４０、２３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号２４～２６を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗体の例は、ＩＮＯ－１０である。配列番号１、４０、２３を有するＶ_Ｈ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｈ－ＣＤＲ３を含むＶＨ並びに配列番号２４～２６を有するＶ_Ｌ－ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ－ＣＤＲ２及びＶ_Ｌ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆである。

【0147】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、及び配列番号４１を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列を含むか、又はそれらからなる重鎖の可変領域（ＶＨ）を含む。

【0148】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号４１を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列、及び配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、又は配列番号４１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、又はそれらからなるＶＨを含む。

【0149】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、異なるアミノ酸により置換された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５個の又はそれより多いアミノ酸（複数可）を有する配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、及び配列番号４１を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなるＶＨを含む。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、異なるアミノ酸で置換された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５個の又はそれより多いアミノ酸（複数可）を有する配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、及び配列番号４１を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなるＶＨを含み、上記アミノ酸置換（複数可）は、３つのＣＤＲのいずれかにおいて生じない。

【0150】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、及び／又は配列番号４１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有するＶＨを含む。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、及び／又は配列番号４１のフレームワーク領域（すなわち、非ＣＤＲ領域）のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。

【0151】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、及び配列番号３２を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなるＶＨを含む。

【0152】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列、及び配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、又は配列番号３２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、又はそれらからなるＶＨを含む。

【0153】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、異なるアミノ酸により置換された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５個の又はそれより多いアミノ酸（複数可）を有する配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、及び配列番号３２を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなるＶＨを含む。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、異なるアミノ酸で置換された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５個の又はそれより多いアミノ酸（複数可）を有する配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、及び配列番号３２を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなるＶＨを含み、上記アミノ酸置換（複数可）は、３つのＣＤＲのいずれかにおいて生じない。

【0154】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、及び／又は配列番号３２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有するＶＨを含む。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、及び／又は配列番号３２のフレームワーク領域（すなわち、非ＣＤＲ領域）のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。

【0155】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号４２を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなる軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む。

【0156】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号４２を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列、及び配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、もしくは配列番号４２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、又はそれらからなるＶＬを含む。

【0157】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、異なるアミノ酸により置換された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５個の又はそれより多いアミノ酸（複数可）を有する配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号４２を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなるＶＬを含む。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、異なるアミノ酸により置換された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５個の又はそれより多いアミノ酸（複数可）を有する配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号４２を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなるＶＬを含み、上記アミノ酸置換（複数可）は、３つのＣＤＲのいずれかにおいて生じない。

【0158】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、及び／又は配列番号４２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有するＶＬを含む。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、及び／又は配列番号４２のフレームワーク領域（すなわち、非ＣＤＲ領域）のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。

【0159】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなるＶＬを含む。

【0160】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列、及び配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、又は配列番号３８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、又はそれらからなるＶＬを含む。

【0161】

一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、異なるアミノ酸により置換された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５個の又はそれより多いアミノ酸（複数可）を有する配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなるＶＬを含む。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、異なるアミノ酸により置換された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５個の又はそれより多いアミノ酸（複数可）を有する配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなるＶＬを含み、上記アミノ酸置換（複数可）は、３つのＣＤＲのいずれかにおいて生じない。
一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び／又は配列番号３８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するアミノ酸配列を有するＶＬを含む。一実施形態において、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び／又は配列番号３８のフレームワーク領域（すなわち、非ＣＤＲ領域）のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。

【0162】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号４１を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列、及び配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、又は配列番号４１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、又はそれらからなる重鎖の可変領域（ＶＨ）；並びに
－配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号４２を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列、及び配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、もしくは配列番号４２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、又はそれらからなる軽鎖の可変領域（ＶＬ）
を含む。

【0163】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、及び配列番号４１を含むか、もしくはそれらからなる群から選択される配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、もしくは配列番号４１のフレームワーク領域（すなわち、非ＣＤＲ領域）と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＨ；並びに
－配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号４２を含むか、もしくはそれからなる群から選択される配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、もしくは配列番号４２のフレームワーク領域（すなわち、非ＣＤＲ領域）と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＬ
を含む。

【0164】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２を含むか、又はそれからなる群から選択される配列、及び配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、又は配列番号３２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、又はそれらからなるＶＨ；並びに
－配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列、及び配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、又は配列番号３８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、又はそれらからなるＶＬ
を含む。

【0165】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、及び配列番号３２を含むか、もしくはそれらからなる群から選択される配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、もしくは配列番号３２のフレームワーク領域（すなわち、非ＣＤＲ領域）と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＨ；並びに
－配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８を含むか、もしくはそれからなる配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、もしくは配列番号３８のフレームワーク領域（すなわち、非ＣＤＲ領域）と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＬ
を含む。

【0166】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号２７、もしくは配列番号２７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号２７のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＨ；並びに
－配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号４２を含むか、もしくはそれからなる群から選択される配列、及び配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、もしくは配列番号４２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むかもしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、もしくは配列番号４２のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＬ
を含む。

【0167】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、及び配列番号３２、配列番号４１を含むか、もしくはそれらからなる群から選択される配列、及び配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、及び配列番号３２、もしくは配列番号４１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、もしくは配列番号４１のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＨ；並びに
－配列番号３３、もしくは配列番号３３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３３のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＬ
を含む。

【0168】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号２７、もしくは配列番号２７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号２７のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＨ；並びに配列番号３３、もしくは配列番号３３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３３のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＬ；又は
－配列番号２８、もしくは配列番号２８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号２８のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＨ；並びに配列番号３４、もしくは配列番号３４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３４のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＬ；又は
－配列番号２９、もしくは配列番号２９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号２９のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＨ；並びに配列番号３５、もしくは配列番号３５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３５のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＬ；又は
－配列番号３０、もしくは配列番号３０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号３０のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＨ；並びに配列番号３６、もしくは配列番号３６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上の同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３６のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＬ；又は
－配列番号３１、もしくは配列番号３１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号３１のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＨ；並びに配列番号３７、もしくは配列番号３７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３７のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＬ；又は
－配列番号３２、もしくは配列番号３２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号３２のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＨ；並びに配列番号３８、もしくは配列番号３８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３８のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＬ；又は
－配列番号４１、もしくは配列番号４１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号４１のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＨ；並びに配列番号４２、もしくは配列番号４２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号４２のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するＶＬ
を含む。

【0169】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号２７、もしくは配列番号２７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号２７のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＨ；並びに
－配列番号３３、もしくは配列番号３３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３３のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＬ
を含む。

【0170】

このような抗体の例は、ＩＮＯ－１０－３（又はＭＡＢ３）である。このような抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆ３（又はＦ３）である。

【0171】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号２８、もしくは配列番号２８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号２８のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＨ；並びに
－配列番号３４、もしくは配列番号３４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３４のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＬ
を含む。

【0172】

このような抗体の例は、ＩＮＯ－１０－２（又はＭＡＢ２）である。このような抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆ２（又はＦ２）である。

【0173】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号２９、もしくは配列番号２９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号２９のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＨ；並びに
－配列番号３５、もしくは配列番号３５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３５のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＬ
を含む。

【0174】

このような抗体の例は、ＩＮＯ－１０－４（又はＭＡＢ４）である。このような抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆ４（又はＦ４）である。

【0175】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号３０、もしくは配列番号３０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号３０のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＨ；並びに
－配列番号３６、もしくは配列番号３６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３６のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＬ
を含む。

【0176】

このような抗体の例は、ＩＮＯ－１０－５（又はＭＡＢ５）である。このような抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆ５（又はＦ５）である。

【0177】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号３１、もしくは配列番号３１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号３１のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＨ；並びに
－配列番号３７、もしくは配列番号３７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３７のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＬ
を含む。

【0178】

このような抗体の例は、ＩＮＯ－１０－６（又はＭＡＢ６）である。このような抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆ６（又はＦ６）である。

【0179】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号３２、もしくは配列番号３２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号３２のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＨ；並びに
－配列番号３８、もしくは配列番号３８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号３８のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＬ
を含む。

【0180】

このような抗体の例は、ＩＮＯ－１０－１（又はＭＡＢ１）である。このような抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆ１（又はＦ１）である。

【0181】

一実施形態によれば、抗ｈＴＲＥＭ－１抗体、又はその抗原結合断片は、
－配列番号４１、もしくは配列番号４１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＨ、又は配列番号４１のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＨ；並びに
－配列番号４２、もしくは配列番号４２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、もしくはそれからなるＶＬ、又は配列番号４２のフレームワーク領域と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きな同一性を共有するフレームワーク領域の配列を有するか、含むか、又はそれからなるＶＬ
を含む。

【0182】

このような抗体の例は、ＩＮＯ－１０である。このような抗原結合抗体断片の例は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０－Ｆである。

【0183】

本発明はさらに、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片を含む融合タンパク質に関する。例えば、融合タンパク質は、天然の半減期の長いタンパク質又はタンパク質ドメイン（例えば、ヒト血清アルブミン）を含んでよい。

【0184】

一実施形態において、融合タンパク質は、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片及びＨＳＡ（ヒト血清アルブミン）を含む。一実施形態において、ＨＳＡは、配列番号５９の配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態において、ＨＳＡは、配列番号６０の配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態において、ＨＳＡはそのため、任意でリンカーを介して、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片に融合（又は結合）される。

【0185】

一実施形態において、ＨＳＡは、５個以下のアミノ酸からなるリンカー（例えば、３、４又は５個のアミノ酸からなるリンカー）などの短いリンカーを介して、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片に融合される（又は結合される）。一実施形態において、ＨＳＡは、１０個以上のアミノ酸からなるリンカー（例えば、１２、１３、１４、１５、又は１６個のアミノ酸からなるリンカー）などの長いリンカーを介して、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片に融合される（又は結合される）。

【0186】

一実施形態において、ＨＳＡは、抗体又はその抗原結合断片の重鎖に融合（又は結合）される。一実施形態において、ＨＳＡは、抗体又はその抗原結合断片の切り詰められた重鎖のＣＨ１ドメインに融合される（又は結合される）。一実施形態において、ＨＳＡは、抗体又はその抗原結合断片の重鎖（又は切り詰められた重鎖）のＣ末端で融合される（又は結合される）。一実施形態において、ＨＳＡは、抗体又はその抗原結合断片の軽鎖に融合される（又は結合される）。一実施形態において、ＨＳＡは、抗体又はその抗原結合断片の軽鎖のＮ末端で融合される（又は結合される）。

【0187】

一実施形態において、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片は、例えば、生体内の、例えば、血清中の半減期を増加させるために修飾される。抗体を修飾するための方法は、当技術分野で周知であり、限定されないが、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの、反復される化学部分へのコンジュゲーション、ヒト血清アルブミンへのコンジュゲーションなどを含む。

【0188】

本発明の別の目的物は、本発明による抗体又はその抗原結合断片をコードする単離された核酸である。本発明の別の目的物は、本明細書に記載の融合タンパク質をコードする単離された核酸である。

【0189】

本明細書で使用される「単離された核酸」は、他の核酸配列、特に他のゲノムＤＮＡ配列、並びに天然配列に自然に付随するリボソーム及びポリメラーゼなどのタンパク質又は複合体から実質的に分離された核酸を指すことを意図する。この用語は、その天然環境から除去された核酸配列を包含し、組換え型のもしくはクローン化されたＤＮＡ又はＲＮＡ単離物、並びに化学的に合成された類似体又は異種系により生物学的に合成された類似体を含む。実質的に純粋な核酸は、単離された形態の核酸を含む。

【0190】

もちろん、これは、最初に単離された状態の核酸を指し、人間の手により単離された核酸に後で付加された遺伝子又は配列を排除しない。

【0191】

一実施形態において、単離された核酸は、精製される。

【0192】

一実施形態において、単離された核酸は、（ｉ）吸光度法又は蛍光法によって（例えば、２６０及び２８０ｎｍでの吸光度の比（Ａ２６０／２８０)を測定することなどにより）測定される、核酸の８０重量％、８５重量％、９０重量％、９１重量％、９２重量％、９３重量％、９４重量％、９５重量％又はそれより多く、及び最も好ましくは９６重量％、９７重量％、９８重量％又は９９重量％；又は（ｉｉ）アガロースゲル電気泳動とエチジウムブロマイド、ＳＹＢＲグリーン、ゲルグリーン（ＧｅｌＧｒｅｅｎ）などのインターカレート剤の使用により示されるような均質性、へと精製される。

【0193】

一実施形態において、核酸は、本発明による抗体又はその抗原結合断片の少なくとも重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする。一実施形態において、核酸は、本発明による抗体又はその抗原結合断片の可変領域及び定常領域をコードし得る。一実施形態において、核酸は、別々の核酸上又は同じ核酸分子上に本発明による抗体又はその抗原結合断片の重鎖及び軽鎖をコードし得る。

【0194】

一実施形態において、本発明による核酸は、本発明による抗体又はその抗原結合断片のＶＨをコードする配列を含むか、又はそれからなる。

【0195】

一実施形態において、本発明による核酸は、本発明による抗体又はその抗原結合断片のＶＨをコードする配列を含むか、又はそれからなり、上記配列は、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、及び配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、又は配列番号５２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きい同一性を共有する配列を含むか、又はそれらからなる群から選択される。

【0196】

一実施形態において、本発明による核酸は、本発明による抗体又はその抗原結合断片のＶＬをコードする配列を含むか、又はそれからなる。

【0197】

一実施形態において、本発明による核酸は、本発明による抗体又はその抗原結合断片のＶＬをコードする配列を含むか、又はそれからなり、上記配列は、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、及び配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、又は配列番号５８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きい同一性を共有する配列を含むか、又はそれらからなる群から選択される。

【0198】

一実施形態において、本発明による核酸は、
－本発明による抗体又はその抗原結合断片のＶＨをコードする配列；及び
－本発明による抗体又はその抗原結合断片のＶＬをコードする配列
を含むか、又はそれらからなる。

【0199】

一実施形態において、本発明による核酸は、
－配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、及び配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、又は配列番号５２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きい同一性を共有する配列を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列；並びに
－配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、及び配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、又は配列番号５８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の又はそれより大きい同一性を共有する配列を含むか、又はそれらからなる群から選択される配列
を含むか、又はそれらからなる。

【0200】

一実施形態において、本発明による核酸は、
－配列番号４７に記載の核酸配列、又は配列番号４７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きい同一性を共有する核酸配列を含むか、又はそれらからなるＶＨをコードする配列；並びに
－配列番号５３に記載の核酸配列、又は配列番号５３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きい同一性を共有する核酸配列を含むか、又はそれらからなるＶＬをコードする配列
を含むか、又はそれらからなる。一実施形態において、上記核酸は、ＩＮＯ－１０－３抗体又はＩＮＯ－１０－Ｆ３（又はＦ３）Ｆａｂ断片のＶＨ及びＶＬをコードする。

【0201】

一実施形態において、本発明による核酸は、
－配列番号４８に記載の核酸配列、又は配列番号４８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きい同一性を共有する核酸配列を含むか、又はそれらからなるＶＨをコードする配列；並びに
－配列番号５４に記載の核酸配列、又は配列番号５４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きい同一性を共有する核酸配列を含むか、又はそれらからなるＶＬをコードする配列
を含むか、又はそれらからなる。一実施形態において、上記核酸は、ＩＮＯ－１０－２抗体又はＩＮＯ－１０－Ｆ２（又はＦ２）Ｆａｂ断片のＶＨ及びＶＬをコードする。

【0202】

一実施形態において、本発明による核酸は、
－配列番号４９に記載の核酸配列、又は配列番号４９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きい同一性を共有する核酸配列を含むか、又はそれらからなるＶＨをコードする配列；並びに
－配列番号５５に記載の核酸配列、又は配列番号５５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きい同一性を共有する核酸配列を含むか、又はそれらからなるＶＬをコードする配列
を含むか、又はそれらからなる。一実施形態において、上記核酸は、ＩＮＯ－１０－４抗体又はＩＮＯ－１０－Ｆ４（又はＦ４）Ｆａｂ断片のＶＨ及びＶＬをコードする。

【0203】

一実施形態において、本発明による核酸は、
－配列番号５０に記載の核酸配列、又は配列番号５０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きい同一性を共有する核酸配列を含むか、又はそれらからなるＶＨをコードする配列；並びに
－配列番号５６に記載の核酸配列、又は配列番号５６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きい同一性を共有する核酸配列を含むか、又はそれらからなるＶＬをコードする配列
を含むか、又はそれらからなる。一実施形態において、上記核酸は、ＩＮＯ－１０－５抗体又はＩＮＯ－１０－Ｆ５（又はＦ５）Ｆａｂ断片のＶＨ及びＶＬをコードする。

【0204】

一実施形態において、本発明による核酸は、
－配列番号５１に記載の核酸配列、又は配列番号５１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きい同一性を共有する核酸配列を含むか、又はそれらからなるＶＨをコードする配列；並びに
－配列番号５７に記載の核酸配列、又は配列番号５７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きい同一性を共有する核酸配列を含むか、又はそれらからなるＶＬをコードする配列
を含むか、又はそれらからなる。一実施形態において、上記核酸は、ＩＮＯ－１０－６抗体又はＩＮＯ－１０－Ｆ６（又はＦ６）Ｆａｂ断片のＶＨ及びＶＬをコードする。

【0205】

一実施形態において、本発明による核酸は、
－配列番号５２に記載の核酸配列、又は配列番号５２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きい同一性を共有する核酸配列を含むか、又はそれらからなるＶＨをコードする配列；並びに
－配列番号５８に記載の核酸配列、又は配列番号５８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のもしくはそれより大きい同一性を共有する核酸配列を含むか、又はそれらからなるＶＬをコードする配列
を含むか、又はそれらからなる。一実施形態において、上記核酸は、ＩＮＯ－１０－１抗体又はＩＮＯ－１０－Ｆ１（又はＦ１）Ｆａｂ断片のＶＨ及びＶＬをコードする。

【0206】

典型的には、本発明による核酸は、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子であり、それらは、例えばプラスミド、コスミド、エピソーム、人工染色体、ファージ又はウイルスベクターなどの、任意の適切なベクターに含まれ得る。

【0207】

そのため、本発明の別の目的物は、本発明による抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を含む、例えば、発現ベクターなどの、ベクターである。本発明の別の目的物は、本発明による融合タンパク質をコードする核酸を含む、例えば、発現ベクターなどの、ベクターである。

【0208】

用語「ベクター」、「クローニングベクター」及び「発現ベクター」は、宿主細胞を形質転換しかつ、抗体又はその抗原結合断片をコードする導入された配列の発現（例えば、転写及び翻訳）を促進するように、それによりＤＮＡ又はＲＮＡ配列（例えば、外来遺伝子）が宿主細胞中に導入され得る、運搬体を意味する。このようなベクターは、対象への投与時に上記抗体又はその抗原結合断片の発現を生じさせるか指示するための、プロモーター、エンハンサー、ターミネーターなどの調節エレメントを含んでよい。動物細胞の発現ベクターに用いられるプロモーター及びエンハンサーの例としては、ＳＶ４０の早期プロモーター及びエンハンサー、モロニーマウス白血病ウイルスのＬＴＲプロモーター及びエンハンサー、免疫グロブリンＨ鎖のプロモーター及びエンハンサーなどが挙げられるが、これらに限定されない。動物細胞のための任意の発現ベクターが、本明細書に記載の抗ｈＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片をコードする遺伝子が挿入され発現される限り、用いられてよい。適切なベクターの例としては、ｐＡＧＥ１０７、ｐＡＧＥ１０３、ｐＨＳＧ２７４、ｐＫＣＲ、ｐＳＧ１ベータｄ２－４などが挙げられる。プラスミドの他の例としては、複製起点を含む複製プラスミド、又は例えば、ｐＵＣ、ｐｃＤＮＡ、ｐＢＲなどの組込みプラスミドが挙げられる。ウイルスベクターの他の例としては、アデノウイルス、レトロウイルス、ヘルペスウイルス及びＡＡＶベクターが挙げられる。このような組換えウイルスは、パッケージング細胞をトランスフェクトすることによる、又はヘルパープラスミドもしくはウイルスによる一過性トランスフェクションによるなどの、当技術分野で公知の技術により生成され得る。ウイルスパッケージング細胞の典型的な例としては、ＰＡ３１７細胞、ＰｓｉＣＲＩＰ細胞、ＧＰｅｎｖ＋細胞、２９３細胞が挙げられる。

【0209】

一実施形態において、本発明によるベクター又は発現ベクターは、調節エレメントに作用可能に連結された、本発明による抗体又はその抗原結合断片の重鎖可変ドメインをコードする配列を含む。一実施形態において、本発明によるベクター又は発現ベクターは、調節エレメントに作用可能に連結された本発明による抗体又はその抗原結合断片の軽鎖可変ドメインをコードする配列を含む。

【0210】

一実施形態において、本発明による発現ベクターは、モノシストロニックである。「モノシストロニック」は、単一の核酸が単一の発現ベクターで発現されることを意味する。一実施形態において、本発明による発現ベクターは、ポリシストロニックである。「ポリシストロニック」は、少なくとも２以上の核酸が単一の発現ベクターで発現されることを意味する。

【0211】

本発明の別の目的物は、上記ベクターを含む単離された宿主細胞である。上記宿主細胞は、本明細書に記載の抗ｈＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片の組換え生成に使用され得る。

【0212】

実施形態において、宿主細胞は、原核生物細胞、又は真核生物細胞、例えば、酵母又は哺乳類細胞などであり得る。哺乳類細胞の例としては、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系統；ヒト胚性腎臓株（２９３又は２９３Ｔ細胞サブ）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４）；マウス骨髄腫細胞ＳＰ２／０－ＡＧ１４（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １５８１；ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８２８７）又はＮＳＯ（ＨＰＡ培養コレクション番号８５１１０５０３)；サルの腎臓細胞（ＣＶｌ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；並びにＤＳＭのＰＥＲＣ－６細胞株が挙げられるが、これらに限定されない。これらの宿主細胞の各々における使用に適する発現ベクターもまた、当技術分野で一般的に公知である。

【0213】

用語「宿主細胞」は一般に、培養細胞株を指すことに留意されたい。その中に本発明による抗ｈＴＲＥＭ－１抗体もしくはその抗原結合断片をコードするベクター又は発現ベクターが導入されるヒト全体は、「宿主細胞」の定義から明示的に除外される。

【0214】

本発明の別の目的は、本明細書に記載の単離された抗ｈＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片を生成する及び精製する方法である。

【0215】

一実施形態において、本方法は、
－コンピテント宿主細胞中に上記の組換え核酸もしくはベクターをインビトロ又はエクスビボで導入すること；
－抗ｈＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片の発現に適する条件下で、本発明による核酸又は発現ベクターで形質転換された宿主細胞をインビトロ又はエクスビボで培養すること；
－任意で、上記抗ｈＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片を発現する及び／又は分泌する細胞を選択すること；並びに
－発現した抗ｈＴＲＥＭ－１抗体又はその抗原結合断片を回収すること
を含む。

【0216】

この組換えプロセスは、当技術分野で周知であり、インビトロ、エクスビボ及び／又はインビボ治療用途を意図されるモノクローナル抗体を含む、抗体又はその抗原結合断片の大規模生成に使用できる。

【0217】

実施形態において、発現された抗体又はその抗原結合断片は、さらに精製される。本発明による抗体又はその抗原結合断片を精製する方法は、当技術分野で周知であり、限定されないが、抗ＣＨ１抗体、タンパク質Ａ－セファロース、ゲル電気泳動、クロマトグラフィー、特にアフィニティークロマトグラフィー、の使用を含む。

【0218】

本発明の別の目的物は、本発明による抗体又はその抗原結合断片を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる組成物である。

【0219】

本発明の別の目的物は、本発明による少なくとも１種の融合タンパク質を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる組成物である。

【0220】

本発明のさらなる目的物は、本発明による抗体もしくはその抗原結合断片、もしくは融合タンパク質をコードする少なくとも１種の核酸、又はそのような核酸を含む少なくとも１種のベクターを含むか、本質的にそれらからなる、又はそれらからなる組成物である。

【0221】

本発明の別の目的物は、本発明による少なくとも１種の抗体又はその抗原結合断片、及び少なくとも１種の医薬的に許容し得る賦形剤を含むか、本質的にそれらからなる、又はそれらからなる医薬組成物である。

【0222】

本発明の別の目的物は、本発明による少なくとも１種の融合タンパク質、及び少なくとも１種の医薬的に許容し得る賦形剤を含むか、本質的にそれらからなる、又はそれらからなる医薬組成物である。

【0223】

本発明のさらなる目的物は、本発明による抗ｈＴＲＥＭ－１抗体もしくはその抗原結合断片、もしくは融合タンパク質をコードする少なくとも１種の核酸、又はそのような核酸を含む少なくとも１種のベクター、及び少なくとも１種の医薬的に許容し得る賦形剤を含む、本質的にそれらからなる、又はそれらからなる医薬組成物である。

【0224】

本明細書で使用されるように、組成物又は医薬組成物に関して「本質的にそれからなる」は、少なくとも１種の抗体又はその抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、又はベクターが、上記組成物又は医薬組成物内で生物活性を有する唯一の治療剤又は薬剤であることを意味する。

【0225】

用語「医薬的に許容し得る賦形剤」又は「医薬的に許容し得る担体」は、任意の及び全ての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。上記賦形剤又は担体は、対象、好ましくはヒトに投与した場合に、有害な、アレルギー性の又は他の予期せぬ反応を生じない。医薬的に許容し得る賦形剤又は担体は、無毒の固体、半固体又は液体の充填剤、希釈剤、封入材料又はあらゆる種類の製剤補助剤を指す。ヒト投与のために、調製物は、ＦＤＡ（米国食品医薬品局）又はＥＭＡ（欧州医薬品庁）などの、規制当局が要求する無菌性、発熱性、及び一般的な安全性と純度の基準を満たす必要がある。

【0226】

組成物又は医薬組成物において使用され得る医薬的に許容し得る賦形剤又は担体は、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素ニナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリエチレングリコール、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、ポリエチレングリコール及びウール脂肪を含むが、これらに限定されない。

【0227】

一実施形態において、本発明による医薬組成物は、対象への注射に適合された製剤のための医薬的に許容し得るビヒクルを含む。これらは、特に等張性で、無菌の生理食塩水（リン酸一ナトリウム又はリン酸二ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム又は塩化マグネシウムなど、もしくはそのような塩の混合物）、又は乾燥された、特に凍結乾燥された組成物であり、これらは、状況に応じて、滅菌水又は生理食塩水の添加時に、注射可能な溶液の構成を可能にする。

【0228】

本発明の別の目的物は、本発明による少なくとも１種の抗体又はその抗原結合断片を含むか、本質的にそれらからなる、又はそれらからなる医薬である。

【0229】

本発明の別の目的物は、本発明による少なくとも１種の融合タンパク質を含むか、本質的にそれからなる、又はそれからなる医薬である。

【0230】

本発明のさらなる目的物は、本発明による抗体又はもしくはその抗原結合断片、もしくは融合タンパク質をコードする少なくとも１種の核酸、又はそのような核酸を含む少なくとも１種のベクターを含むか、本質的にそれらからなる、又はそれらからなる医薬である。

【0231】

本発明の別の目的物は、本発明による少なくとも１種の抗体、もしくはその抗原結合断片、又は融合タンパク質、並びに、任意に、使用説明書を含むキットである。

【0232】

「キット」は、本発明による少なくとも１種の抗体、もしくはその抗原結合断片、もしくは融合タンパク質を含む任意の製造物（例えば、パッケージ又は容器）を意図する。キットは、本明細書に記載の方法を実施するためのユニットとして宣伝され、配布され、又は販売されてよい。

【0233】

本発明の別の目的物は、医薬としての使用のための本発明による抗体又はその抗原結合断片である。

【0234】

本発明の別の目的物は、医薬としての使用のための本発明による融合タンパク質である。

【0235】

本発明のさらなる目的物は、医薬としての使用のための、本発明による抗体もしくはその抗原結合断片、もしくは融合タンパク質をコードする核酸、又はそのような核酸を含むベクターである。

【0236】

本発明のさらなる目的物は、医薬としての使用のための、本明細書に記載の組成物、医薬組成物又は医薬である。

【0237】

それを必要とする対象における使用のために、組成物、医薬組成物又は医薬は、対象への投与用に製剤化されるであろう。本発明による組成物、医薬組成物又は医薬は、非経口で、注射により、注入により、吸入スプレーにより、経口で、直腸で、経鼻で、局所で、又は植込みリザーバーを介して投与され得る。本明細書で使用される投与という用語はそのため、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病巣内、及び頭蓋内注射又は注入技術を含む。

【0238】

注入に適合する形態の例としては、溶液、例えば、滅菌水溶液、ゲル、分散液、エマルジョン、懸濁液、使用前の液体添加時に溶液又は懸濁液を調製するための使用に適する固体形態、例えば、粉末、リポソーム形態などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0239】

一実施形態において、本発明による抗体又はその抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、医薬組成物又は医薬は、治療的有効量又は治療的有効用量でのそれを必要とする対象への投与のためである。

【0240】

本発明による抗体又はその抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、発現ベクター、組成物、医薬組成物又は医薬の１日当たりの総使用量は健全な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されることが、理解されるであろう。任意の特定の対象に対する具体的な治療的有効量又は治療的有効用量は、治療される疾患及び疾患の重症度；採用される抗体又はその抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、医薬組成物又は医薬の活性；対象の年齢、体重、一般的な健康状態、性別及び食事；採用される特異的な抗体又はその抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、発現ベクター、組成物、医薬組成物又は医薬の投与の時間、投与の経路、及び排出の速度；治療の期間；採用される特異的な抗体又はその抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、医薬組成物又は医薬と組み合わせて又は同時に使用される薬物などの医療技術分野で周知の要因を含む、様々な要因によって異なる。例えば、所望の治療効果を達成するために必要とされるレベルよりも低いレベルで治療薬の投与を開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加させることは、十分に当業者の範囲内である。各治療に必要とされる総用量は、複数回投与により又は単回投与で投与され得る。

【0241】

一実施形態において、抗体、その抗原結合断片、又は融合タンパク質の投与に使用される投薬計画又は投与量は、様々なパラメータの関数として、特に使用される投与様式、関連する病理学、又は所望の治療の期間の関数として適合され得る。例えば、抗体、その抗原結合断片、又は融合タンパク質の投与を、所望の治療効果を達成するために必要とされるレベルよりも低いレベルで開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加させることは、十分に当業者の範囲内である。抗体、抗原結合断片、又は融合タンパク質の１日投与量は、成人１日あたり０．０１～１０００ｍｇの広い範囲にわたり変化し得る。組成物、医薬組成物又は医薬は、治療される対象への投与量の対症療法的調整のために、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、２５０、及び５００ｍｇの治療剤を含有し得る。組成物、医薬組成物、又は医薬は典型的には例えば、約０．０１ｍｇ～約５００ｍｇの治療剤を含んでよい。治療剤の治療的有効量は例えば、１日当たり０．０００２ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の投与量レベルで供給されてよい。例えば、本明細書の上で記載される組成物、医薬組成物又は医薬中に存在する抗体、その抗原結合断片、又は融合タンパク質は、例えば、１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ又は１００ｍｇ／ｍＬの濃度などの、１ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で供給され得る。一実施形態において、抗体、その抗原結合断片、又は融合タンパク質は、１００ｍｇ（１０ｍＬ）又は５００ｍｇ（５０ｍＬ）の単回使用バイアルのいずれかで、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度にて供給される。これらの投与量は例示的であること、および最適な投与量は臨床試験において決定されなければならない組成物、医薬組成物、又は医薬中の特定の抗体、その抗原結合断片、又は融合タンパク質の親和性及び忍容性を考慮して適合され得ることが、理解されるであろう。

【0242】

本発明は、それを必要とする対象における炎症性疾患又は自己免疫疾患；心血管疾患；癌、特に固形癌；及び感染症、特に細菌感染症又はウイルス感染症から選択される疾患を治療するための（又はそれを治療することにおける使用のための又はその治療における使用のための）本明細書に記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、又は融合タンパク質に関する。

【0243】

本発明はまた、それを必要とする対象における炎症性疾患又は自己免疫疾患；心血管疾患；癌、特に固形癌；及び感染症、特に細菌感染症又はウイルス感染症から選択される疾患を治療するための（又はそれを治療することにおける使用のための又はその治療における使用のための）本明細書に記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、もしくは融合タンパク質をコードする核酸、又は本明細書に記載の上記核酸を含むベクターに関する。

【0244】

本発明は、それを必要とする対象における炎症性疾患又は自己免疫疾患；心血管疾患；癌、特に固形癌；及び感染症、特に細菌感染症又はウイルス感染症から選択される疾患を治療するための（又はそれを治療することにおける使用のための又はその治療における使用のための）本明細書に記載の組成物、医薬組成物、又は医薬に関する。

【0245】

本発明は、それを必要とする対象における炎症性疾患又は自己免疫疾患；心血管疾患；癌、特に固形癌；及び感染症、特に細菌感染症又はウイルス感染症から選択される疾患を治療するための方法に関し、上記方法は、本明細書に記載の少なくとも１種の単離された抗体、又はその抗原結合断片、又は融合タンパク質を対象に投与することを含む。

【0246】

本発明は、それを必要とする対象における炎症性疾患又は自己免疫疾患；心血管疾患；癌、特に固形癌；及び感染症、特に細菌感染症又はウイルス感染症から選択される疾患を治療するための方法に関し、上記方法は、本明細書に記載の抗体、又はその抗原結合断片、又は融合タンパク質をコードする少なくとも１種の核酸又は本明細書に記載の上記核酸を含む少なくとも１種のベクターを対象に投与することを含む。

【0247】

本発明は、それを必要とする対象における炎症性疾患又は自己免疫疾患；心血管疾患；癌、特に固形癌；及び感染症、特に細菌感染症又はウイルス感染症から選択される疾患を治療するための方法に関し、上記方法は、本明細書に記載の組成物、医薬組成物又は医薬を対象に投与することを含む。

【0248】

本発明は、それを必要とする対象における炎症性疾患又は自己免疫疾患；心血管疾患；癌、特に固形癌；及び感染症、特に細菌感染症又はウイルス感染症から選択される疾患を治療するための（又はそれを治療することにおける使用のための又はその治療における使用のための）医薬組成物に関し、上記医薬組成物は、
－本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片；
－本明細書に記載の融合タンパク質；
－本明細書に記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、又は融合タンパク質をコードする核酸；又は
－そのような核酸を含むベクター；
及び任意に少なくとも１種の医薬的に許容し得る賦形剤
の少なくとも１つを含む。

【0249】

本発明はさらに、それを必要とする対象における、炎症性疾患又は自己免疫疾患；心血管疾患；癌、特に固形癌；及び感染症、特に細菌感染症又はウイルス感染症から選択される疾患を治療するための医薬の製造のための、本明細書に記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、又は融合タンパク質の使用に関する。

【0250】

本発明はさらに、それを必要とする対象における、炎症性疾患又は自己免疫疾患；心血管疾患；癌、特に固形癌；及び感染症、特に細菌感染症又はウイルス感染症から選択される疾患を治療するための医薬の製造のための、本明細書に記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、もしくは融合タンパク質をコードする核酸、又はそのような核酸を含むベクターの使用に関する。

【0251】

一実施形態において、治療されるべき疾患は、炎症性疾患である。本明細書で使用されるように、用語「炎症性疾患」は、炎症の存在により特徴づけられる障害及び状態を指す。炎症の症状は、慢性的な痛み、腫れ、発赤、関節及び筋肉のこわばり、患部の機能及び動きの喪失を含み得る。炎症性疾患の例としては、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、関節リウマチ、乾癬、全身性エリテマトーデス、血管炎、敗血症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、多発性硬化症、冠動脈疾患、慢性閉塞性肺疾患、間質性肺疾患、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、及び喘息が挙げられる。一実施形態において、炎症性疾患は、結合組織疾患又は障害である。炎症性結合組織疾患又は障害の例としては、関節リウマチ、強皮症及びループスが挙げられる。

【0252】

一実施形態において、治療されるべき疾患は、自己免疫疾患である。自己免疫疾患の例としては、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ、乾癬、全身性エリテマトーデス、血管炎、Ｉ型糖尿病、バセドウ病、多発性硬化症、及び自己免疫性心筋炎が挙げられる。

【0253】

一実施形態において、治療されるべき疾患は、炎症性疾患又は自己免疫疾患である。

【0254】

一実施形態において、上記炎症性疾患又は自己免疫疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（ＡＬＰＩ関連ＩＢＤ、単一遺伝子性超早期発症型ＩＢＤを含む）、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、肺線維症又は肝線維症などの線維症、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、乾癬、乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、血管炎、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝炎、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、敗血症性ショック、Ｉ型糖尿病、バセドウ病、多発性硬化症、自己免疫性心筋炎、川崎病、冠動脈疾患、慢性閉塞性肺疾患、間質性肺疾患、自己免疫性甲状腺炎、強皮症、全身性硬化症、変形性関節症、脊椎炎、強直性脊椎炎、アトピー性皮膚炎、白斑、黄斑変性症、網膜変性症、ぶどう膜炎、化膿性汗腺炎、歯肉の炎症と疾患、移植片対宿主病、シェーグレン症候群、自己免疫性腎炎、グッドパスチャー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、アレルギー、及び喘息から選択される。本明細書で使用されるように、「炎症性腸疾患（ＩＢＤ）」は、単一遺伝子多遺伝子ＩＢＤ、単一遺伝子ＩＢＤ、超早期発症型ＩＢＤ、早期発症型ＩＢＤ、及び治療抵抗性ＩＢＤを包含する。

【0255】

一実施形態において、上記炎症性疾患又は自己免疫疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、線維症、肺線維症、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝炎、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、血管炎、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、敗血症性ショック、Ｉ型糖尿病、バセドウ病、多発性硬化症、自己免疫性心筋炎、川崎病、冠動脈疾患、慢性閉塞性肺疾患、間質性肺疾患、自己免疫性甲状腺炎、強皮症、全身性硬化症、変形性関節症、アトピー性皮膚炎、白斑、移植片対宿主病、シェーグレン症候群、自己免疫性腎炎、グッドパスチャー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、アレルギー、及び喘息から選択される。

【0256】

一実施形態において、上記炎症性疾患又は自己免疫疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、血管炎、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、敗血症性ショック、Ｉ型糖尿病、バセドウ病、多発性硬化症、自己免疫性心筋炎、川崎病、冠動脈疾患、慢性閉塞性肺疾患、間質性肺疾患、自己免疫性甲状腺炎、強皮症、全身性硬化症、変形性関節症、アトピー性皮膚炎、白斑、移植片対宿主病、シェーグレン症候群、自己免疫性腎炎、グッドパスチャー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、アレルギー、及び喘息から選択される。

【0257】

一実施形態において、治療されるべき疾患は、心血管疾患である。心血管疾患の例としては、心筋梗塞、急性心筋梗塞、脳梗塞、虚血、冠状動脈性心疾患、急性冠状動脈症候群、脳卒中、動脈瘤、安定狭心症、労作性狭心症、心筋症、高血圧性心疾患、慢性心不全、急性心不全、肺性心不全、心臓不整脈、炎症性心疾患（心内膜炎及び心筋炎など）、血管炎、末梢動脈疾患、ＳＩＲＳ関連心筋及び血管機能不全、アテローム性動脈硬化症が挙げられる。

【0258】

一実施形態において、治療されるべき疾患は、癌である。本明細書で使用されるように、用語「癌」は一般に、異常細胞の制御不能な分裂によって引き起こされる疾患を指す。用語「癌」は特に、腫瘍形成に関連するあらゆる疾患を指す。用語「癌」は、固形癌と血液癌を包含し、原発癌と転移性癌の両方を包含する。癌の例としては、癌、腺癌、軟部組織癌、肉腫、奇形腫、黒色腫、白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、及び脳の癌が挙げられる。一実施形態において、癌は、免疫回避性（ｉｍｍｕｎｏｅｖａｓｉｖｅ）である。一実施形態において、癌は、免疫応答性である。一実施形態において、癌は、黒色腫、腎臓癌又は腎癌、肝胆道癌、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）、膵臓癌、結腸癌、膀胱癌、尿路上皮癌、神経膠芽腫癌、前立腺癌、肺癌、乳（乳腺）癌、卵巣癌、胃癌、食道癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、精巣癌、白血病、リンパ腫、又は中皮腫である。一実施形態において、癌は、結腸癌、膵臓癌、又は乳癌である。

【0259】

一実施形態において、治療されるべき疾患は、感染症である。本明細書で使用されるように、用語「感染症」は、感染に起因する病理学的状態又は障害を指す。感染症の例としては、それぞれ細菌、ウイルス、真菌、及び寄生虫によって引き起こされる感染症である細菌性疾患（又は細菌感染症）、ウイルス性疾患（又はウイルス感染症）、真菌性疾患（又は真菌感染症）、及び寄生虫症（又は寄生虫感染症）が挙げられる。細菌性疾患の例としては、大腸菌感染症が挙げられる。

【0260】

一実施形態において、治療されるべき疾患は、動脈瘤、スティル病（特に、成人発症スティル病又はＡＯＳＤ）、火傷、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法後のサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法後の免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）、嚢胞性線維症、子宮内膜炎、家族性地中海熱、痛風、肝肉芽腫、特発性肉芽腫性乳腺炎、腎臓病（無菌性慢性腎損傷、腎症を含む）、肝疾患（非アルコール性脂肪性肝炎）（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝炎）、肺疾患（急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、サルコイドーシス）、肥満（及び関連疾患）、膵炎、アルツハイマー病、パーキンソン病、脳卒中、外傷、及び心血管疾患（ＣＶＤ）を含むか、又はそれらからなる群から選択される。

【0261】

一実施形態において、治療されるべき疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、ＡＬＰＩ関連ＩＢＤ、単一遺伝子性超早期発症型ＩＢＤ、クローン病、又は潰瘍性大腸炎である。

【0262】

一実施形態において、本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、医薬組成物又は医薬は、少なくとも１種のさらなる治療的活性剤又は治療法と一緒の投与のために投与されるか、又は投与のために適合されることになっている。本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、医薬組成物又は医薬は、上記少なくとも１種のさらなる治療的活性剤又は治療法と同時に、別々に、又は順次投与されてよい。一実施形態において、本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、ベクター医薬は、組み合わされた調製物、組成物、医薬組成物又は医薬の中などの少なくとも１種のさらなる治療的活性剤又は治療法と組み合わせて投与するために投与されるか、又は投与するために適合されることになっている。

【0263】

本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、医薬組成物又は医薬と共に使用され得る治療的活性剤の例としては、抗ＴＮＦα（例えば、アダリムマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、又はセルトリズマブ）、抗インターロイキン（ＩＬ）－１２／２３（例えば、ウステキヌマブ）、抗インテグリン（例えば、ベドリズマブ又はナタリズマブ）、ＪＡＫ阻害剤（例えば、トファシチニブ、バリシチニブ、又はフィルゴチニブ）、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ）、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、及び抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、イピリムマブ）が挙げられる。

【0264】

本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、医薬組成物又は医薬と共に使用され得る治療法の例としては、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２遮断療法、ＣＴＬＡ４遮断療法、Ｔ細胞上の阻害分子が遮断される全身性チェックポイント遮断療法、養子Ｔ細胞療法、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法、細胞療法、例えば樹状細胞療法、及び化学療法が挙げられる。

【0265】

一実施形態において、治療されるべき疾患は、上記の炎症性疾患、例えば上記の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）又は関節リウマチであり、本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、医薬組成物又は医薬は、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ－１２／２３、抗インテグリン、及びＪＡＫ阻害剤を含むか、又はそれらからなる群から選択される少なくとも１種のさらなる治療的活性剤と一緒の投与のために投与されるか、又は投与のために適合されることになっている。

【0266】

一実施形態において、治療されるべき疾患は、上記の癌であり、本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、医薬組成物又は医薬は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２遮断療法、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、ＣＴＬＡ４遮断療法、抗ＣＴＬＡ４抗体、Ｔ細胞上の阻害分子が遮断される全身性チェックポイント遮断療法、養子Ｔ細胞療法、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法、樹状細胞療法などの細胞療法、及び化学療法を含むか、又はそれらからなる群から選択される少なくとも１種のさらなる治療的活性剤又は治療法と一緒の投与のために投与されるか、又は投与のために適合されることになっている。

【0267】

一実施形態において、治療を必要とする対象は、生体試料中のＴＲＥＭ－１、特に可溶性ＴＲＥＭ－１（ｓＴＲＥＭ－１）の彼／彼女のレベルの測定後に特定される又は選択される。

【0268】

一実施形態において、治療を必要とする対象は、生体試料中のＴＲＥＭ－１、特にｓＴＲＥＭ－１の彼／彼女のレベルの測定を通じてモニターされる。上記モニタリングは、対象における疾患の進行のモニタリング、治療に対する対象の応答（すなわち、本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、医薬組成物もしくは医薬に対する応答）のモニタリング、及び／又は対象における治療の有効性（すなわち、本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、医薬組成物又は医薬の有効性）のモニタリングを包含し得る。

【0269】

本明細書で使用されるように、「骨髄細胞上で発現される可溶性のトリガー受容体－１（ｓｏｌｕｂｌｅ ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌ－１））」としての「ｓＴＲＥＭ－１」は、ＴＲＥＭ－１の膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを欠く可溶性形態のＴＲＥＭ－１を指す。一実施形態において、ｓＴＲＥＭ－１はそのため、ＴＲＥＭ－１の細胞外ドメインの可溶性形態に対応する。一実施形態において、ｓＴＲＥＭ－１は、骨髄細胞の膜から、特に活性化された骨髄細胞から脱落される切り詰め型ＴＲＥＭ－１に対応する。一実施形態において、ｓＴＲＥＭ－１は、配列番号４３のアミノ酸２１～２０５に対応するアミノ酸配列を有する。一実施形態において、ｓＴＲＥＭ－１は、配列番号４３のアミノ酸３１～２０５に対応するアミノ酸配列を有する。一実施形態において、ｓＴＲＥＭ－１は、配列番号４３のアミノ酸３１～１３７に対応するアミノ酸配列を含み、２００個以下のアミノ酸長、好ましくは１８５個以下のアミノ酸長を有する。

【0270】

本明細書で使用されるように、「生体試料」は、対象から単離され、採取（ｃｏｌｌｅｃｔ）され又は収集（ｈａｒｖｅｓｔ）された生体試料を指し、対象から得られた体液、細胞試料及び／又は組織抽出物、例えば、ホモジネート又は可溶化組織を含み得る。一実施形態において、本発明は、対象から生体試料を取得することを含まない。そのため、一実施形態において、対象からの生体試料は、以前に対象から取得された生体試料である。上記生体試料は、本明細書に記載されるように、使用される前に適切な状態で保存され得る。一実施形態において、対象からの生体試料は、体液試料である。体液の例としては、血液、血漿、血清、リンパ液、唾液、尿、細気管支肺胞洗浄液、脳脊髄液、汗又はそれらの任意の他の身体分泌物又は誘導体が挙げられる。

【0271】

本明細書で使用されるように、用語「測定する」は、用語「測定」又は「検出」と交換可能であり、対象からの生体試料中の所与の物質、すなわち、ＴＲＥＭ－１又はｓＴＲＥＭ－１の存在、不在、含量、又は量（有効量であり得る）を評価することを意味する。本明細書で使用されるように、「測定する」は、生体試料中及び対象内の上記物質、すなわち、ＴＲＥＭ－１又はｓＴＲＥＭ－１の定性的又は定量的濃度（例えば、血中濃度又は血漿濃度）の導出を含む。本明細書で使用されるように、「ＴＲＥＭ－１レベル」、特に「ｓＴＲＥＭ－１レベル」の中の用語「レベル」は、ＴＲＥＭ－１、特にｓＴＲＥＭ－１の含量、量、又は濃度を指す。

【0272】

ＴＲＥＭ－１、特にｓＴＲＥＭ－１のレベルは、当技術分野における任意の公知の方法により測定され得る。発現レベル、例えば、転写レベル又は翻訳レベルを測定する方法は、当業者に周知である。

【0273】

本明細書上記に記載の生体試料中のＴＲＥＭ－１、特にｓＴＲＥＭ－１の転写レベル（すなわち、ＴＲＥＭ－１のｍＲＮＡ又はｃＤＮＡのレベル、特にｓＴＲＥＭ－１のｍＲＮＡ又はｃＤＮＡのレベル）を測定するための方法は、当業者に周知であり、限定されないが、ＰＣＲ、ｑＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、ノーザンブロット、ハイブリダイゼーション技術、例えば、マイクロアレイの使用など、及びこれらの組み合わせを含み、それらは、ＲＴ－ＰＣＲによって得られたアンプリコンのハイブリダイゼーション、シーケンシング、例えば、次世代ＤＮＡシーケンシング（ＮＧＳ）又はＲＮＡ－ｓｅｑなど（「全トランスクリプトームショットガンシーケンシング」としても知られる）を含むが、これらに限定されない。

【0274】

ＴＲＥＭ－１、特にｓＴＲＥＭ－１の翻訳レベル（すなわち、ＴＲＥＭ－１タンパク質又はｓＴＲＥＭ－１タンパク質のレベル）を測定するための方法は、当業者に周知であり、限定されないが、免疫組織化学、マルチプレックス法（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標））、イムノアッセイ、ウェスタンブロット、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチＥＬＩＳＡ、マルチプレックスＥＬＩＳＡ、キャピラリーベースのＥＬＩＳＡ（例えば、ＥＬＬＡ（登録商標）プラットフォーム）、電気化学発光（ｅｌｅｃｔｒｏｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）とも呼ばれる電気化学発光（ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）（ＥＣＬ）又は電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）、酵素結合蛍光アッセイ（ＥＬＦＡ）、蛍光結合免疫吸着アッセイ（ＦＬＩＳＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、イムノクロマトグラフィーアッセイ（ＩＣＡ）（例えば、ＮＥＸＵＳ ＩＢ１０、Ｓｐｈｉｎｇｏｔｅｃｈ）及び質量分析ベースのアプローチを含む。

【0275】

以下の配列を、本明細書で列挙する：
－配列番号１：ＮＴＹＩＨ；
－配列番号２：ＲＩＤＰＡＸ_１ＧＸ_２ＴＫＹＸ_３ＰＫＶＸ_４Ｇ、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫである；
－配列番号３：ＨＸ_５ＧＸ_６ＴＭＤＹ、ここで、Ｘ_５はＹ又はＲであり、Ｘ_６はＳ又はＧである；
－配列番号４：ＲＡＳＸ_７ＳＶＸ_８ＮＹＧＩＳＦＸ_９Ｎ、ここで、Ｘ_７はＥ又はＧであり、Ｘ_８はＤ又はＳであり、Ｘ_９はＭ又はＬである；
－配列番号５：ＡＡＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４、ここで、Ｘ_１０はＳ又はＥであり、Ｘ_１１はＮ又はＹであり、Ｘ_１２はＱ又はＲであり、Ｘ_１３はＧ、Ａ、又はＫであり、Ｘ_１４はＳ又はＲである；
－配列番号６：ＱＱＳＸ_１５Ｘ_１６Ｘ_１７ＰＸ_１８Ｔ、ここで、Ｘ_１５はＫ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ_１６はＥ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ_１７はＶ又はＦであり、Ｘ_１８はＷ又はＹである；
－配列番号７：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＤＰＫＶＫＧ；
－配列番号８：ＨＹＧＧＴＭＤＹ；
－配列番号９：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＬＮ；
－配列番号１０：ＡＡＥＹＲＧＲ；
－配列番号１１：ＱＱＳＲＨＶＰＹＴ；
－配列番号１２：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＳＰＫＶＱＧ；
－配列番号１３：ＨＲＧＧＴＭＤＹ；
－配列番号１４：ＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮ；
－配列番号１５：ＡＡＳＹＱＫＲ；
－配列番号１６：ＱＱＳＳＮＦＰＷＴ；
－配列番号１７：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧ；
－配列番号１８：ＱＱＳＳＮＶＰＹＴ；
－配列番号１９：ＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＱＧ；
－配列番号２０：ＡＡＥＹＱＧＲ；
－配列番号２１：ＡＡＥＹＲＡＲ；
－配列番号２２：ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＶＱＧ；
－配列番号２３：ＨＹＧＳＴＭＤＹ；
－配列番号２４：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮ；
－配列番号２５：ＡＡＳＮＱＧＳ；
－配列番号２６：ＱＱＳＫＥＶＰＷＴ；
－配列番号２７：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＡＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＤＮＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＤＰＫＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＧＨＹＧＧＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
－配列番号２８：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＡＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＧＮＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＳＰＫＶＱＧＲＦＴＩＳＡＰＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＧＨＲＧＧＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
－配列番号２９：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＡＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＧＮＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＧＨＲＧＧＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
－配列番号３０：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＡＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＧＮＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＱＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＧＨＹＧＧＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
－配列番号３１：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＡＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＧＮＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＤＰＡＧＧＲＴＫＹＡＰＫＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＧＨＲＧＧＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
－配列番号３２：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＡＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＮＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＶＱＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＧＨＹＧＳＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
－配列番号３３：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＬＮＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＡＥＹＲＧＲＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＲＨＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
－配列番号３４：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＡＳＹＱＫＲＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＳＮＦＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
－配列番号３５：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＡＥＹＲＧＲＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＳＮＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
－配列番号３６：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＡＥＹＱＧＲＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＳＮＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
－配列番号３７：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＮＹＧＩＳＦＬＮＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＡＥＹＲＡＲＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＳＮＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
－配列番号３８：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＱＧＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＳＫＥＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
－配列番号３９：ＲＩＤＰＡＸ１ＧＸ２ＴＫＹＸ３ＰＫＦＸ４Ｇ、ここで、Ｘ_１はＮ又はＧであり、Ｘ_２はＮ又はＲであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、又はＳであり、Ｘ_４はＱ又はＫである；
－配列番号４０：ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＦＱＧ；
－配列番号４１：ＡＶＱＬＱＱＳＶＡＡＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＮＩＫＮＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＤＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＤＤＴＡＩＹＹＣＴＧＨＹＧＳＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ；
－配列番号４２：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＧＱＴＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＱＧＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＭＥＤＤＤＴＡＭＹＦＣＱＱＳＫＥＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
－配列番号４３：ＭＲＫＴＲＬＷＧＬＬＷＭＬＦＶＳＥＬＲＡＡＴＫＬＴＥＥＫＹＥＬＫＥＧＱＴＬＤＶＫＣＤＹＴＬＥＫＦＡＳＳＱＫＡＷＱＩＩＲＤＧＥＭＰＫＴＬＡＣＴＥＲＰＳＫＮＳＨＰＶＱＶＧＲＩＩＬＥＤＹＨＤＨＧＬＬＲＶＲＭＶＮＬＱＶＥＤＳＧＬＹＱＣＶＩＹＱＰＰＫＥＰＨＭＬＦＤＲＩＲＬＶＶＴＫＧＦＳＧＴＰＧＳＮＥＮＳＴＱＮＶＹＫＩＰＰＴＴＴＫＡＬＣＰＬＹＴＳＰＲＴＶＴＱＡＰＰＫＳＴＡＤＶＳＴＰＤＳＥＩＮＬＴＮＶＴＤＩＩＲＶＰＶＦＮＩＶＩＬＬＡＧＧＦＬＳＫＳＬＶＦＳＶＬＦＡＶＴＬＲＳＦＶＰ；
－配列番号４４：ＭＲＫＴＲＬＷＧＬＬＷＭＬＦＶＳＥＬＲＡＡＴＫＬＴＥＥＫＹＥＬＫＥＧＱＴＬＤＶＫＣＤＹＴＬＥＫＦＡＳＳＱＫＡＷＱＩＩＲＤＧＥＭＰＫＴＬＡＣＴＥＲＰＳＫＮＳＨＰＶＱＶＧＲＩＩＬＥＤＹＨＤＨＧＬＬＲＶＲＭＶＮＬＱＶＥＤＳＧＬＹＱＣＶＩＹＱＰＰＫＥＰＨＭＬＦＤＲＩＲＬＶＶＴＫＧＦＲＣＳＴＬＳＦＳＷＬＶＤＳ；
－配列番号４５：ＭＲＫＴＲＬＷＧＬＬＷＭＬＦＶＳＥＬＲＡＡＴＫＬＴＥＥＫＹＥＬＫＥＧＱＴＬＤＶＫＣＤＹＴＬＥＫＦＡＳＳＱＫＡＷＱＩＩＲＤＧＥＭＰＫＴＬＡＣＴＥＲＰＳＫＮＳＨＰＶＱＶＧＲＩＩＬＥＤＹＨＤＨＧＬＬＲＶＲＭＶＮＬＱＶＥＤＳＧＬＹＱＣＶＩＹＱＰＰＫＥＰＨＭＬＦＤＲＩＲＬＶＶＴＫＧＦＳＧＴＰＧＳＮＥＮＳＴＱＮＶＹＫＩＰＰＴＴＴＫＡＬＣＰＬＹＴＳＰＲＴＶＴＱＡＰＰＫＳＴＡＤＶＳＴＰＤＳＥＩＮＬＴＮＶＴＤＩＩＲＹＳＦＱＶＰＧＰＬＶＷＴＬＳＰＬＦＰＳＬＣＡＥＲＭ；
－配列番号４６：ＭＲＫＴＲＬＷＧＬＬＷＭＬＦＶＳＥＬＲＡＡＴＫＬＴＥＥＫＹＥＬＫＥＧＱＴＬＤＶＫＣＤＹＴＬＥＫＦＡＳＳＱＫＡＷＱＩＩＲＤＧＥＭＰＫＴＬＡＣＴＥＲＰＳＫＮＳＨＰＶＱＶＧＲＩＩＬＥＤＹＨＤＨＧＬＬＲＶＲＭＶＮＬＱＶＥＤＳＧＬＹＱＣＶＩＹＱＰＰＫＥＰＨＭＬＦＤＲＩＲＬＶＶＴＫＧＦＳＧＴＰＧＳＮＥＮＳＴＱＮＶＹＫＩＰＰＴＴＴＫＡＬＣＰＬＹＴＳＰＲＴＶＴＱＡＰＰＫＳＴＡＤＶＳＴＰＤＳＥＩＮＬＴＮＶＴＤＩＩＲＥＫＳＭＴＦＧＩＲＲＬＤＶＥＳＨＰＬＰＰＬＨＴＧＨＦＲＩＳＱＦＦＳＱＡＧＴＱＳＬＨＳＣＹＫＧＫＰＴＰ；
－配列番号４７：ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＣＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＣＡＧＡＣＴＣＴＣＴＴＧＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＴＣＡＡＣＡＴＣＧＡＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＡＧＡＡＴＣＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＧＡＧＧＧＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＧＴＣＡＡＧＧＧＧＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＧＣＣＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＴＧＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＧＧＧＣＡＣＴＡＣＧＧＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＧＡＣＡＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＡＧＣ；
－配列番号４８：ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＣＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＣＡＧＡＣＴＣＴＣＴＴＧＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＴＣＡＡＣＡＴＣＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＡＧＡＡＴＣＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＧＡＧＧＧＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＡＣＴＣＣＣＣＡＡＡＧＧＴＣＣＡＧＧＧＧＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＧＣＣＣＣＴＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＴＧＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＡＣＣＧＧＧＣＡＣＡＧＧＧＧＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＧＡＣＡＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＡＧＣ；
－配列番号４９：ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＣＧＣＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＴＣＡＡＣＡＴＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＧＣＡＧＡＡＴＣＧＡＴＣＣＴＧＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＧＧＧＡＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＧＣＣＧＡＣＧＡＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＴＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＡＣＣＧＧＡＣＡＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＧＡＣＡＣＴＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＴＣＣ；
－配列番号５０：ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＣＧＣＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＴＣＡＡＣＡＴＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＡＡＴＣＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＡＡＡＧＧＴＧＣＡＧＧＧＡＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＧＣＣＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＧＧＡＣＡＣＴＡＣＧＧＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＧＡＣＡＣＴＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＴＣＣ；
－配列番号５１：ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＣＧＣＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＣＡＧＡＣＴＣＴＣＴＴＧＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＴＣＡＡＣＡＴＣＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＡＡＧＡＡＴＣＧＡＴＣＣＴＧＣＴＧＧＡＧＧＧＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＡＡＡＧＧＴＣＡＡＧＧＧＧＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＧＣＣＧＡＣＧＡＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＴＧＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＡＣＣＧＧＧＣＡＣＡＧＧＧＧＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＧＡＣＡＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＡＧＣ；
－配列番号５２：ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＣＧＣＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＴＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＣＧＧＡＴＣＧＡＣＣＣＴＧＣＴＡＡＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＡＡＡＧＧＴＧＣＡＧＧＧＡＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＧＣＣＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＧＧＡＣＡＣＴＡＣＧＧＡＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＧＡＣＡＣＴＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＴＣＣ；
－配列番号５３：ＧＡＧＡＴＣＧＴＣＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＣＣＧＧＣＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＴＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＧＡＧＴＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＣＧＣＴＧＣＴＧＡＧＴＡＣＡＧＧＧＧＡＡＧＧＧＧＡＡＴＣＣＣＣＧＣＴＡＧＧＴＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＣＴＣＧＡＧＣＣＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＣＣＣＧＧＣＡＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＧＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧ；
－配列番号５４：ＧＡＧＡＴＣＧＴＣＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＣＣＧＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＣＡＧＴＣＣＧＴＧＴＣＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＡＧＡＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＣＧＣＣＧＣＣＴＣＴＴＡＣＣＡＧＡＡＧＣＧＧＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＣＣＡＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＣＴＣＧＡＧＣＣＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＣＣＴＣＣＡＡＣＴＴＣＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴＴＣＧＧＡＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧ；
－配列番号５５：ＧＡＧＡＴＣＧＴＣＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＣＣＧＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＣＡＧＴＣＣＧＴＧＴＣＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＡＧＡＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＧＴＡＣＡＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＣＣＡＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＣＴＣＧＡＧＣＣＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＣＣＴＣＣＡＡＣＧＴＧＣＣＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧ；
－配列番号５６：ＧＡＧＡＴＣＧＴＣＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＣＣＧＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＣＡＧＴＣＣＧＴＧＴＣＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＡＧＡＣＴＧＣＴＣＡＴＣＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＧＴＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＴＣＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＣＴＣＧＡＧＣＣＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＣＣＴＣＣＡＡＣＧＴＧＣＣＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＧＡＴＣＡＡＧ；
－配列番号５７：ＧＡＧＡＴＣＧＴＣＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＣＣＧＧＣＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＴＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＣＡＧＴＣＣＧＴＧＴＣＣＡＡＣＴＡＣＧＧＡＡＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＣＧＣＡＧＣＴＧＡＧＴＡＣＡＧＧＧＣＴＡＧＧＧＧＡＡＴＣＣＣＣＧＣＴＡＧＧＴＴＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＧＴＧＧＧＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＧＡＧＣＣＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＣＣＴＣＣＡＡＣＧＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＧＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧ；
－配列番号５８：ＧＡＧＡＴＣＧＴＣＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＣＣＧＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＧＡＧＴＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＣＴＣＣＴＴＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＴＣＣＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＡＧＡＣＴＧＣＴＣＡＴＣＴＡＣＧＣＣＧＣＣＴＣＴＡＡＣＣＡＧＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＣＣＡＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＣＴＣＧＡＧＣＣＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＣＣＡＡＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＴＧＧＡＣＣＴＴＴＧＧＧＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧ；
－配列番号５９：ＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＥＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＱＡＡＬＧＬ;
－配列番号６０：ＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＳＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＥＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＱＡＡＬＧＬ；
－配列番号６１：ＬＱＥＥＤＡＧＥＹＧＣＭ。

【図面の簡単な説明】

【0276】

【図1】図１は、好中球の細胞内活性酸素種（ＲＯＳ）生成に対する抗ＴＲＥＭ－１抗体（ＩＮＯ－１０ ｈＩｇＧ１）又はＦａｂ（ＩＮＯ－１０ Ｆａｂ）の効果を示すヒストグラムである。ヒト初代好中球を、非刺激状態（resting conditions）（ＮＳ）で２時間インキュベートするか、指示濃度のＩＮＯ－１０ ＩｇＧ１又はＩＮＯ－１０ Ｆａｂの存在下又は不在下で、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で刺激した。パラメトリックｔ検定によって決定される、ＬＰＳ単独に対する^＊ｐ＜０.０５、^＊＊ｐ＜０.０１、^＊＊＊ｐ＜０.００１。

【図2】図２は、Ｕ９３７細胞上の及びＴＲＥＭ－１の上方制御を誘導するためにビタミンＤ３で前処理したＵ９３７細胞（Ｕ９３７－ｖｉｔＤ３）上のＴＲＥＭ－１の発現（フローサイトメトリーによって評価した）を示すグラフである。

【図3】図３は、ＴＲＥＭ－１の上方制御を誘導するためにビタミンＤ３で前処理したＵ９３７細胞上の抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ ＩＮＯ－１０Ｆ及び陰性対照ＩＮＯ－１０Ｆ－０（０．０１～１０μｇ／ｍＬ）の結合（フローサイトメトリーによって評価した）を示すグラフである。

【図4】図４Ａ～Ｃは、ビタミンＤ３で前処理したＵ９３７細胞（Ｕ９３７－ｖｉｔＤ３）によるサイトカイン（ＩＬ－６、ＩＬ－１０及びＩＬ－１β）の生成に対する抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ ＩＮＯ－１０Ｆの効果を示す一組のグラフである。上清中のＩＬ－６（図４Ａ）、ＩＬ－１０（図４Ｂ）及びＩＬ－１β（図４Ｃ）の濃度を、ＩＮＯ－１０Ｆ又は対照（Ctrl）（ＩＮＯ－１０Ｆ－０－Ｃｔｒｌ）の存在下で、非刺激状態（resting conditions）又はＰＰ活性化状態（ペプチドグリカンと複合体化したＰＧＬＹＲＰ１に対応するＰＰ複合体での刺激）でのＵ９３７－ｖｉｔＤ３細胞の２４時間刺激後に測定した。パラメトリックｔ検定によって決定される、ＰＰ単独に対する^＊ｐ＜０.０５、^＊＊ｐ＜０.０１、^＊＊＊ｐ＜０.００１。

【図5】図５Ａ～Ｃは、ＴＲＥＭ－１の上方制御を誘導するためにＴＨＰ－１細胞及びビタミンＤ３で前処理したＴＨＰ－１細胞上のＴＲＥＭ－１発現（図５Ａ）、ＣＤ１４発現（図５Ｂ）及びＴＬＲ４発現（図５Ｃ）を示す一組のグラフである。ＴＲＥＭ－１、ＣＤ１４及びＴＬＲ４の発現を、フローサイトメトリーにより評価し、アイソタイプ対照と比較した。

【図6】図６は、ＴＨＰ－１細胞及びビタミンＤ３で前処理したＴＨＰ－１細胞（ＴＨＰ－１－ｖｉｔＤ３）上の抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ ＩＮＯ－１０Ｆ（０．０１～１０μｇ／ｍＬ）の結合（フローサイトメトリーによって評価した）を示すグラフである。

【図7】図７Ａ～Ｂは、ＴＨＰ－１ブルー細胞及びＴＨＰ－１－ｖｉｔＤ３ブルー細胞（すなわち、ＴＲＥＭ－１の上方制御を誘導するためにビタミンＤ３で前処理したＴＨＰ－１ブルー細胞）中のＮＦ－κＢの活性化に対する抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ ＩＮＯ－１０Ｆの効果を示す。図７Ａは、非刺激状態（resting conditions）で指示濃度（０．１～１０μｇ／ｍＬ）のＩＮＯ－１０Ｆの存在下（非刺激(resting)＋ＩＮＯ－１０Ｆ）で６時間、又は指示濃度（０．１～１０μｇ／ｍＬ）のＩＮＯ－１０Ｆ及びＬＰＳ（ＬＰＳ＋ＩＮＯ－１０Ｆ）の存在下で６時間のいずれかで、ＳＥＡＰ（６５０ｎｍで測定）の活性を測定することによって評価した、ＴＨＰ－１ブルー細胞及びＴＨＰ－１－ｖｉｔＤ３ブルー細胞中のＮＦ－κＢの活性化を示すヒストグラムである。メトリックｔ検定によって決定される、ＬＰＳ単独に対する^＊ｐ＜０.０５、^＊＊ｐ＜０.０１。図７Ｂは、指示濃度（０．１～１０μｇ／ｍＬ）のＩＮＯ－１０Ｆの存在下での、ＬＰＳプライミング（１００ｎｇ／ｍＬ）時のＮＦ－κＢ活性化の動態を示すグラフである。二元配置ＡＮＯＶＡ検定によって決定される、ＬＰＳ単独に対する^＊ｐ＜０.０５、^＊＊ｐ＜０.０１。

【図8】図８は、ＴＲＥＭ－１の上方制御を誘導するためにビタミンＤ３で前処理したＴＨＰ－１細胞（ＴＨＰ－１－ｖｉｔＤ３）によるＩＬ－８の生成に対する抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ ＩＮＯ－１０Ｆの効果を示すヒストグラムである。上清中のＩＬ－８濃度を、指示濃度（０、０．１又は１０μｇ／ｍＬ）のＩＮＯ－１０Ｆの存在下で、ＬＰＳ又は刺激なし（ＮＳ）でＴＨＰ－１－ｖｉｔＤ３細胞の２４時間刺激後に評価した。パラメトリックｔ検定によって決定される、ＬＰＳ単独に対する^＊ｐ＜０.０５、^＊＊ｐ＜０.０１、^＊＊＊ｐ＜０.００１。

【図9】図９は、示された時間での好中球上のＴＲＥＭ－１発現（フローサイトメトリーによって評価した）を示すグラフである。ヒト初代好中球を、非刺激状態で培養して、ＬＰＳで３時間刺激するか、又はＬＰＳで２４時間刺激した。ＴＲＥＭ－１の発現を、アイソタイプ対照と比較する。

【図10】図１０は、異なる濃度（０．０００００１～１０μｇ／ｍＬ）での新たに単離したヒト初代好中球に対するＩＮＯ－１０Ｆ（フローサイトメトリーによって評価した）の結合を示すグラフである。

【図11】図１１は、ＬＰＳと共に（黒い四角）又は非刺激状態（灰色の円）でのいずれかで、指示濃度（１０^－１１～１０^１μｇ／ｍＬ）のＩＮＯ－１０Ｆの存在下で２時間インキュベートした際のヒト初代好中球による活性酸素種（ＲＯＳ）放出を示すグラフである。

【図12】図１２Ａ～Ｂは、好中球による活性酸素種（ＲＯＳ）放出に対する抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ ＩＮＯ－１０Ｆの効果を示す。図１２Ａは、非刺激状態（ＮＳ）で、又はペプチドグリカン（ＰＰ）と複合体化されたＰＧＬＹＲＰ１に対応するＰＰ複合体で刺激してのいずれかで、指示濃度（０～１０μｇ／ｍＬ）のＩＮＯ－１０Ｆと２時間インキュベートした際の、ヒト初代好中球によるＲＯＳ放出を示すヒストグラムである。図１２Ｂは、ヒト初代好中球上の指示濃度（０～１０μｇ／ｍＬ）でのＩＮＯ－１０Ｆの結合率（黒丸）及び指示濃度（０～１０μｇ／ｍＬ）のＩＮＯ－１０Ｆの存在下のＰＰ刺激後のヒト初代好中球によるＲＯＳ放出率（灰色の四角）を示すグラフである。

【図13】図１３は、好中球によるＩＬ－６の生成に対する抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ ＩＮＯ－１０Ｆの効果を示すグラフである。好中球上清中のＩＬ－６の濃度を、ＬＰＳと共に又は非刺激状態のいずれかで、指示濃度（０、０.１、又は１０μｇ／ｍＬ）のＩＮＯ－１０Ｆでの６時間及び２４時間の刺激後に評価した。

【図14】図１４Ａ～Ｅは、２４時間の全血刺激アッセイ後のサイトカイン血漿濃度に対する抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ ＩＮＯ－１０Ｆの効果を示す一組のヒストグラムである。ＩＮＯ－１０Ｆを、非刺激状態（ＮＳ）で又はＬＰＳと共にのいずれかで、指示濃度（０～１０μｇ／ｍＬ）で添加した。陽性対照として、既知のＴＲＥＭ－１阻害剤（ペプチドＬＲ１２）による刺激を、ＬＰＳと共に実施した。２４時間後に、次のサイトカインの発現を評価した：ＩＬ－１β（図１４Ａ）、ＩＬ－１０（図１４Ｂ）、ＴＮＦα（図１４Ｃ）、ＩＬ－６（図１４Ｄ）、及びＩＬ－８（図１４Ｅ）。パラメトリックｔ検定によって決定される、ＬＰＳ単独に対する^＊ｐ＜０.０５、^＊＊ｐ＜０.０１、^＊＊＊ｐ＜０.００１。

【図15】図１５は、２４時間の全血刺激アッセイ後のＩＬ－８血漿濃度を示す箱ひげ図である。ＩＮＯ－１０Ｆを、１４人の健康なボランティアの全血に、安静状態（ＮＳ）で又はＬＰＳと共にのいずれかで指示濃度（０～１０μｇ／ｍＬ）で添加した。陽性対照として、既知のＴＲＥＭ－１阻害剤（ペプチドＬＲ１２）による刺激を、ＬＰＳと共に実施した。２４時間後に、ＩＬ－８の血漿濃度を評価した。対応のあるノンパラメトリックｔ検定によって決定される、ＬＰＳ単独に対する^＊ｐ＜０.０５、^＊＊ｐ＜０.０１、^＊＊＊ｐ＜０.００１。

【図16】図１６Ａ～Ｇは、ＬＰＳにより誘導されるエンドトキシン血症に罹患しているトランスジェニックＢＲＧＳＦ－ｈｉｓ（ヒト化免疫系）マウスにおけるヒトサイトカインの血漿濃度に対する抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ ＩＮＯ－１０Ｆ及びＨＳＡ－ＩＮＯ－１０Ｆの効果を示す一組の箱ひげ図である。ＢＲＧＳＦ－ｈｉｓマウスに、腹腔内注射でＰＢＳ（対照(control (CTRL))）又はＬＰＳのいずれかを投与した。ＬＰＳを受けたＢＲＧＳＦ－ｈｉｓマウスは最初に、ビヒクル（ＬＰＳ）、ＩＮＯ－１０Ｆ（ＬＰＳ＋１０Ｆ－１０μｇ／ｍＬ）、又はＨＳＡとＩＮＯ－１０Ｆの融合タンパク質（ＬＰＳ＋ＨＳＡ－１０Ｆ－１０μｇ／ｍＬ）のいずれかからなる、腹腔内注射による事前処置（ＬＰＳの３０分前）を受けた。血液試料を、ＬＰＳ注射の８時間後に採種し、次のヒトサイトカイン／ケモカインの血漿濃度を評価した：ＣＣＬ２（図１６Ａ）、ＩＬ－１β（図１６Ｂ）、ＩＬ－１０（図１６Ｃ）、ＩＬ－６（図１６Ｄ）、及びＩＬ－８（図１６Ｅ）、ＩＰ－１０（図１６Ｆ）、並びにＴＮＦα（図１６Ｇ）。ＬＰＳ単独に対する示された条件間のｐ値を、ノンパラメトリックｔ検定に従って計算した。

【図17】図１７Ａ～Ｂは、Ｕ９３７細胞（図１７Ａ）及びＵ９３７－ｖｉｔＤ３細胞、すなわち、ＴＲＥＭ－１の上方制御を誘導するためにビタミンＤ３で前処理したＵ９３７細胞上の抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ ＩＮＯ－１０Ｆ及び抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ変異体ＩＮＯ－１０Ｆ－０（Ｆ０）、ＩＮＯ－１０Ｆ－１（Ｆ１）、ＩＮＯ－１０Ｆ－２(Ｆ２)、ＩＮＯ－１０Ｆ－３（Ｆ３）、ＩＮＯ－１０Ｆ－４（Ｆ４）、ＩＮＯ－１０Ｆ－５（Ｆ５）、及びＩＮＯ－１０Ｆ－６（Ｆ６）の結合（フローサイトメトリーによって評価した）を示す一組のグラフである（（図１７Ｂ）。

【図18】図１８は、ビタミンＤ３で前処理したＵ９３７細胞によるＩＬ－６生成に対する抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ変異体ＩＮＯ－１０Ｆ－０（Ｆ０）、ＩＮＯ－１０Ｆ－１（Ｆ１）、ＩＮＯ－１０Ｆ－２(Ｆ２)、ＩＮＯ－１０Ｆ－３（Ｆ３）、ＩＮＯ－１０Ｆ－４（Ｆ４）、ＩＮＯ－１０Ｆ－５（Ｆ５）、及びＩＮＯ－１０Ｆ－６（Ｆ６）の効果を示すヒストグラムである。ＩＬ－６の濃度を、指示濃度（０～１０μｇ／ｍＬ）の抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ変異体の存在下で、非刺激状態（ＮＳ）又はＰＰ活性化状態（ペプチドグリカンと複合体化されたＰＧＬＹＲＰ１に対応するＰＰ複合体による刺激）での、Ｕ９３７－ｖｉｔＤ３細胞の２４時間刺激後の上清中で決定した。陽性対照として、既知のＴＲＥＭ－１阻害剤（ペプチドＬＲ１２）による刺激を、ＰＰ活性化状態（ＬＲ１２）で実施した。ＰＰ単独に対する^＊ｐ＜０.０５、^＊＊ｐ＜０.０１、^＊＊＊ｐ＜０.００１、^＊＊＊＊ｐ＜０.００１。

【図19】図１９は、新たに単離した初代好中球に対する、指示濃度（０.００１～１０μｇ／ｍＬ）の抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ変異体ＩＮＯ－１０Ｆ－３（Ｆ３）及びＩＮＯ－１０Ｆ－Ｏ（Ｆ０）の結合（フローサイトメトリーによって評価した）を比較するグラフである。

【図20】図２０は、ヒト初代好中球によるＩＬ－８の生成に対する抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ変異体ＩＮＯ－１０Ｆ－０（Ｆ０）、ＩＮＯ－１０Ｆ－１（Ｆ１）、ＩＮＯ－１０Ｆ－２(Ｆ２)、ＩＮＯ－１０Ｆ－３（Ｆ３）、ＩＮＯ－１０Ｆ－４（Ｆ４）、ＩＮＯ－１０Ｆ－５（Ｆ５）、及びＩＮＯ－１０Ｆ－６（Ｆ６）の効果を示すヒストグラムである。ＩＬ－８の濃度を、指示濃度（０～１０μｇ／ｍＬ）の抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ変異体の存在下で、非刺激状態（ＮＳ）又はＬＰＳ活性化状態での好中球の２４時間刺激後の上清中で決定した。陽性対照として、既知のＴＲＥＭ－１阻害剤（ペプチドＬＲ１２）での刺激を、ＬＰＳ活性化状態（ＬＲ１２）で実施した。ＬＰＳ単独に対する^＊ｐ＜０.０５、^＊＊ｐ＜０.０１、^＊＊＊ｐ＜０.００１、^＊＊＊＊ｐ＜０.００１。

【図21】図２１Ａ～Ｈは、好中球の細胞内活性酸素種（ＲＯＳ）生成に対する抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ ＩＮＯ－１０Ｆ及び抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ変異体の効果を示す一組のグラフである。ヒト初代好中球を、指示濃度（０．００１～１０μｇ／ｍＬ）のＩＮＯ－１０ Ｆａｂ（図２１Ａ）又は抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ変異体ＩＮＯ－１０Ｆ－０又はＦ０（図２１Ｂ）、ＩＮＯ－１０Ｆ－１又はＦ１（図２１Ｃ）、ＩＮＯ－１０Ｆ－２又はＦ２（図２１Ｄ）、ＩＮＯ－１０Ｆ－３又はＦ３（図２１Ｅ）、ＩＮＯ－１０Ｆ－４又はＦ４（図２１Ｆ）、ＩＮＯ－１０Ｆ－５又はＦ５（図２１Ｇ）、及びＩＮＯ－１０Ｆ－６又はＦ６（図２１Ｈ）の存在下で、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で２時間刺激した。

【図22】図２２Ａ～Ｃは、好中球の細胞内活性酸素種（ＲＯＳ）生成に対する抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ変異体（ＨＳＡ又はＦ３－ＨＳＡと結合したＩＮＯ－１０Ｆ－３）の効果を示す一組のグラフである。ヒト初代好中球を、指示濃度（０．０２～２０μｇ／ｍＬ）のＦ３－ＨＳＡの存在下で、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）（図２２Ａ）又はＰＧＮ（１０μｇ／ｍＬ）に対応するペプチドグリカンと複合体化されたＰＧＬＹＲＰ１（５μｇ／ｍＬ）に対応するＰＰ複合体（ＰＰ）（図２２Ｂ）又はペプチドグリカン（ＰＧＮ－１０μｇ／ｍＬ）（図２２Ｃ）のみで２時間刺激した。パラメトリックＡＮＯＶＡ検定によって決定される、ＬＰＳ単独（図２２Ａ）、ＰＰ単独（図２２Ｂ）又はＰＧＮ単独（図２２Ｃ）に対する^＊ｐ＜０.０５、^＊＊ｐ＜０.０１、^＊＊＊ｐ＜０.００１。

【図23】図２３Ａ～Ｂは、５人の健康なドナーからの赤血球の溶解後の２４時間の全血刺激アッセイ後のサイトカイン血漿濃度に対する抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ変異体（ＨＳＡ又はＦ３－ＨＳＡと結合したＩＮＯ－１０Ｆ－３）の効果を示す一組の箱ひげ図である。Ｆ３－ＨＳＡ又はアイソタイプ対照（ＣＴＬＲ）を、非刺激状態（ＮＳ）又はＰＧＮ（１０μｇ／ｍＬ）に対応するペプチドグリカンと複合体化されたＰＧＬＹＲＰ１（５μｇ／ｍＬ）に対応するＰＰ複合体（ＰＰ）又はペプチドグリカン（ＰＧＮ－１０μｇ／ｍＬ）単独のいずれかで、指示濃度（０～２０μｇ／ｍＬ）で添加した。２４時間後に、次のサイトカインの発現を評価した：ＩＬ－８（図２３Ａ）及びＴＮＦα（図２３Ｂ）。ノンパラメトリックｔ検定によって決定されるＰＰ単独又はＰＧＮ単独に対する^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０.０１、^＊＊＊ｐ＜０.００１。

【図24】図２４Ａ～Ｃは、赤血球溶解後の２４時間のカニクイザル全血刺激アッセイ後のサイトカイン血漿濃度に対する抗ＴＲＥＭ－１Ｆａｂ変異体（ＨＳＡ又はＦ３－ＨＳＡと結合したＩＮＯ－１０Ｆ－３）の効果を示す一組のヒストグラムである。Ｆ３－ＨＳＡ又はアイソタイプ対照（ＣＴＲＬ）を、ＰＧＮ（１０μｇ／ｍＬ）に対応するペプチドグリカンと複合体化されたＰＧＬＹＲＰ１（５μｇ／ｍＬ）に対応するＰＰ複合体（ＰＰ）又はペプチドグリカン（ＰＧＮ－２０μｇ／ｍＬ）単独のいずれかで、指示濃度（０～２０μｇ／ｍＬ）で添加した。２４時間後に、次のサイトカインの発現を評価した：ＩＬ－８（図２４Ａ）、ＴＮＦα（図２４Ｂ）及びＩＬ－６（図２４Ｃ）。ノンパラメトリックｔ検定によって決定される、ＰＧＮ単独に対する^＊ｐ＜０.０５、^＊＊ｐ＜０.０１、^＊＊＊ｐ＜０.００１。

【実施例】

【0277】

本発明を以下の実施例によりさらに説明する。

【0278】

実施例：
材料及び方法
抗ｈＴＲＥＭ－１抗体／Ｆａｂ断片の生成
新規抗ヒトＴＲＥＭ－１（抗ｈＴＲＥＭ１）マウス抗体を、組換えｈＴＲＥＭ－１タンパク質でマウスを免疫することによって取得した。抗ｈＴＲＥＭ－１マウス抗体及びＦａｂ断片の配列を、ハイブリドーマのシーケンシング及び配列解析（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｆｒａｎｃｅ）によって取得した。組換えキメラ抗ｈＴＲＥＭ－１抗体（ヒトＩｇＧ１又はｈＩｇＧ１）及びＦａｂ断片を次いで、生成した。可変領域由来の配列を、ｐＱＭＣＦ－１．２発現ベクターにサブクローニングし、コード領域を、シーケンシングにより検証した。ＣＨＯＥＢＮＡＬＴ８５ １Ｅ９細胞（Ｉｃｏｓａｇｅｎ）を次に、Ｒ００７トランスフェクション試薬（Ｉｃｏｓａｇｅｎ）を使用して９６時間ＣＨＯ ＴＦ培地（Ｘｅｌｌ ＡＧ）中にてｐＱＭＣＦ－１．２発現ベクターでトランスフェクトした。トランスフェクションを、ＰＣＲにより検証した。発現を、クマシー染色により確認し、分泌を、生産性を推定するためにエンドポイントクマシー染色で確認した。次いで精製工程を、ｈＩｇＧ１についてＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ、又はＦａｂ断片についてＨｉｓＴｒａｐ Ｅｘｃｅｌ（いずれもＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によるキャプチャーを使用して行った。最後に、ゲル濾過を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ１０／３００ＧＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で行い、回収したタンパク質を、０．２２μｍ（Ｕｌｔｒａ Ｃａｐｓｕｌｅ ＧＦ，Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でろ過した。プロセスの最後に、キメラｈＩｇＧ１又はＦａｂ断片は、次の許容基準を満たす必要がある：濃度１ｍｇ／ｍＬ、純度９０％超、及びタンパク質１ｍｇあたり０．１ＥＵ未満のエンドトキシンレベル。精製したｈＩｇＧ１及びＦａｂ断片を、次の緩衝液：ヒスチジン－Ｔｗｅｅｎ緩衝液[２０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０.０２％Ｔｗｅｅｎ８０、ｐＨ６.０]中で保存した。

【0279】

細胞の単離、培養及び刺激
Ｕ９３７細胞：ヒト骨髄単球細胞株Ｕ９３７（Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎ°８５０１１４４０）の細胞を、ＧｌｕｔａＭＡＸを含みかつ１０％ウシ胎児血清すなわちＦＣＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及びストレプトマイシン（全てＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を補充したＲＰＭＩ １６４０培地中で培養した。いくつかの実験では、示される場合、Ｕ９３７細胞を、ＴＲＥＭ－１の上方制御を誘導するために、１００ｎＭのビタミンＤ３又はｖｉｔＤ３とも呼ばれる１,２５－ジヒドロキシビタミンＤ３（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）を補充した同じ条件で培養した。

【0280】

ＴＨＰ－１ブルー細胞：ヒトＴＨＰ１－ブルー細胞株は、ＮＦ－κＢ誘導性ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリホスファターゼ）レポーターコンストラクト（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｆｒａｎｃｅ）の安定なトランスフェクションによるヒトＴＨＰ－１単球細胞株に由来する。実際に、これらの細胞は、ＮＦ－κＢ転写因子の活性化を報告している。ＴＨＰ１ブルー細胞を、１０％の熱不活化ＦＢＳ（ウシ胎児血清）、２ｍＭのＬ－グルタミン、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００μｇ／ｍＬのノルモシン、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリンとストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ １６４０培地中で培養した。いくつかの実験では、示される場合、ＴＨＰ１ブルー細胞を、ＴＲＥＭ－１の上方制御を誘導するために、１００ｎＭの１,２５－ジヒドロキシビタミンＤ３（ｖｉｔＤ３）を補充した同じ条件で培養した。

【0281】

Ｕ９３７細胞、ＴＨＰ１細胞、又はヒト初代好中球におけるＴＲＥＭ－１、ＴＬＲ４、及びＣＤ１４の発現を、フローサイトメトリーによって評価した。細胞を、抗ＴＲＥＭ１－ＡＰＣ、抗ＣＤ１４－ＰＥ、又は抗ＴＬＲ４－ＦＩＴＣ抗体、又は対応するアイソタイプ対照（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ－Ｂｉｏｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ）と共に暗所で、４℃で１０分間インキュベートし、次いで洗浄し、データを、フローサイトメトリー（Ｃ６ Ａｃｃｕｒｉ、ＢＤ、ＵＳＡ）によって収集した。フローサイトメトリーのデータを、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ、ＵＳＡ）を使用して解析した。

【0282】

初代細胞：初代ヒト好中球を、製造業者の指示に従い、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒト単球／好中球単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ，Ｃａｎａｄａ）を用いる免疫磁気陰性細胞選別により、健康なドナーの末梢血から単離した。純度を、フローサイトメトリーによって評価した。細胞を、刺激の前に、ＧｌｕｔａＭＡＸを含み、１０％ＦＣＳ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及びストレプトマイシン（全てＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を補充したＲＰＭＩ １６４０培地中に懸濁した。ヒト初代好中球を、指定した時間と濃度で、抗ＴＲＥＭ－１モジュレーター（ｈＩｇＧ１又はＦａｂ）と共に又はなしで、非刺激状態（resting conditions）（刺激のない状態(non-stimulating conditions)もしくはＮＳとも呼ばれる）で、又は大腸菌血清型０１２７：Ｂ８（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）由来の１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳと、又はＰＰｘとも呼ばれるＰＰ複合体（それぞれＩｎｖｉｖｏｇｅｎ，Ｆｒａｎｃｅ及びＢｉｏｔｅｃｈｎｅ、ＵＫ社製の、１０μｇ／ｍＬのペプチドグリカンと複合体化された５μｇ／ｍＬのＰＧＬＹＲＰ１（ペプチドグリカン認識タンパク質１）に対応する）と、又はペプチドグリカン（ＰＧＮ）単独（１０μｇ／ｍＬ）とインキュベートした。示される場合、好中球を、１００μｇ／ｍＬの臨床段階のＴＲＥＭ－１阻害ペプチドＬＲ１２（配列番号６１－ＬＱＥＥＤＡＧＥＹＧＣＭに記載のアミノ酸を有するＴＬＴ－１ペプチド）とインキュベートした。

【0283】

ヒト及びカニクイザルＴＲＥＭ－１への結合
細胞：Ｕ９３７細胞又は初代好中球を、３００ｇで５分間遠心分離し、ペレットを、１×１０^６細胞／ｍＬへと再懸濁した。試験される分子（ｈＩｇＧ１又はＦａｂ）を、ＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ、０.５％のＢＳＡ、２.５ｍＭのＥＤＴＡ）中にて異なる濃度（０．０００１～２０μｇ／ｍＬ）で希釈した。細胞を、試験される分子（ｈＩｇＧ１又はＦａｂ）の存在下で４℃にて３０分間インキュベートし、次いで、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を除去し、１×ＰＢＳ洗浄を、行った。細胞を、再度洗浄し、３００ｇで５分間遠心分離し、ペレットを、ＦＡＣＳ緩衝液中に回収した。次いで、二次抗体（１：２００、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）_２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）(Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，ＵＳＡ）を、細胞懸濁液に添加した。４℃で３０分間のインキュベーションの後、細胞を、１×ＰＢＳで洗浄し、３００ｇで５分間遠心分離した。最後に、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、試験された分子（ｈＩｇＧ１又はＦａｂ）の細胞への結合を定量化するためにフローサイトメトリー（Ｃ６ Ａｃｃｕｒｉ，ＢＤ，ＵＳＡ）によって分析した。最後に、フローサイトメトリーデータを、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して解析した。

【0284】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）：ｈＴＲＥＭ－１（ヒトＴＲＥＭ－１）及びｃＴＲＥＭ－１（カニクイザルＴＲＥＭ－１）に対するＴＲＥＭ－１抗体又はＦａｂの相互作用動態を評価するために、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを、実施した（ＢｉａｃｏｒｅＴＭ Ｔ２００，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）。抗ヒトＦｃ抗体（Ｃｙｔｉｖａ）を、ＩｇＧ１親和性を評価するためにＣＭ５センサーチップに固定化し、Ｆａｂを、チップ上に直接固定化した。固定化実験を、ＨＢＳ－ＥＰ＋１Ｘランニング緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）を使用して２５℃で行った。抗ヒトＦｃ抗体又はＦａｂを、センサーチップのデキストランマトリックス上のアミンカップリングを使用する固定化手順を行う前に、酸性ｐＨの１０ｍＭ酢酸ナトリウム中で希釈した。表面を、１００ｍＭの１－エチル－３－［３－ジメチルアミノプロピル]カルボジミド塩酸塩又はＥＤＣ及び４００ｍＭのＮ－ヒドロキシスルホスクシンイミド又はＮＨＳ（ＥＤＣ／ＮＨＳ）（Ｌｉｕ Ｙ，Ｗｉｌｓｏｎ ＷＤ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１０；６１３：１－２３）の溶液を使用して活性化した。これらの注入後に、エタノールアミンを注入して、表面を不活性化した。固定化ウィザードを使用して、数千の固定化ＲＵ（共振ユニット）を得た。固定化レベルを、センサーチップの表面を適切に覆うために選択した。予備的な手動実行を、捕捉条件を最適化するために、かつ全てのヒト抗体について同様の捕捉レベルを得るために、実施した。ｈＴＲＥＭ－１又はｃＴＲＥＭ－１タンパク質の結合を、全てのフローセルに検体を注入することによって行った。ヒト及びカニクイザルＴＲＥＭ－１タンパク質を、それぞれ、０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、２．５ｎＭ、１０ｎＭ及び４０ｎＭ、又は０．５ｎＭ、２ｎＭ、１０ｎＭ、４０ｎＭ及び２００ｎＭの濃度でランニング緩衝液（ＨＢＳ－ＥＰ＋１Ｘ）中に希釈した。濃度を、単一サイクルカイネティクス法を使用して評価した。このアプローチは、漸増濃度の検体の連続注入からなり、サイクルの最後に塩化マグネシウム緩衝液（Ｃｙｔｉｖａ）を使用して１回の再生工程を行う。ＴＲＥＭ－１抗体又はＦａｂとｈＴＲＥＭ－１又はｃＴＲＥＭ－１の結合親和性を、複合体の形成及び解離の速度の測定によって決定される平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）の決定により定量化した。ｋ_ａ（会合速度）とｋ_ｄ（解離速度）などの一価複合体の会合と解離に対応する速度定数を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア、バージョン３．１（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して１：１ラングミュアモデルにデータを当てはめることにより取得した。Ｋ_Ｄは、式Ｋ_Ｄ＝ｋ_ｄ／ｋ_ａによるｋ_ａとｋ_ｄに関する。

【0285】

活性酸素種（ＲＯＳ）の生成
細胞内ＲＯＳ生成の定量化を、細胞中のＲＯＳの存在の指標として使用されるフルオレセインの化学的還元型である、細胞透過性ＤＣＦＤＡ（２',７'－ジクロロフルオレセインジアセテート）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して評価した。細胞内エステラーゼと酸化による酢酸基の切断時に、非蛍光性のＤＣＦＤＡは、高蛍光の２',７'－ジクロロフルオレセイン（ＤＣＦ）に変換される。例えば、ヒト初代好中球を、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳと共に又はなしで試験される分子（ｈＩｇＧ１又はＦａｂ）、またはＰＰ複合体（それぞれＩｎｖｉｖｏｇｅｎ，Ｆｒａｎｃｅ及びＢｉｏｔｅｃｈｎｅ、ＵＫ社製からの、１０μｇ／ｍＬのペプチドグリカンと複合体化された５μｇ／ｍＬのＰＧＬＹＲＰ１（ペプチドグリカン認識タンパク質１）に対応する）、又はペプチドグリカン（ＰＧＮ）単独（１０μｇ／ｍＬ）の存在下で、５μＭのＤＣＦＤＡと３７℃にて５％ＣＯ_２で２時間インキュベートした。データを、フローサイトメトリー（Ｃ６ Ａｃｃｕｒｉ，ＢＤ，ＵＳＡ）又は蛍光光度計（Ｖａｒｉｏｓｋａｎ Ｌｕｘ，ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して取得した。結果を、平均蛍光強度（ＭＦＩ）又は相対蛍光単位（ＲＦＵ）として表す。

【0286】

ＴＨＰ－１ Ｑｕａｎｔｉブルーアッセイ：ＮＦ－κＢ細胞株レポーター
ＱＵＡＮＴＩブルーアッセイ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）は、ＳＥＡＰの活性を決定するための比色酵素試験である。この試験を、ＮＦ－κＢによって誘導可能なＳＥＡＰレポーター遺伝子を含むＴＨＰ１ブルー細胞にて使用する。この試験を使用して、ＮＦ－κＢの活性化を、ＳＥＡＰの活性（６５０ｎｍで測定）を決定することにより評価できる。１００ｎＭの１,２５－ジヒドロキシビタミンＤ３（ｖｉｔＤ３）とのＴＨＰ－１ブルー細胞の４８時間培養後に、Ｑｕａｎｔｉブルーアッセイを、実施した。９６ウェルマイクロプレート中で、細胞（１×１０^５細胞／ウェル）を、１～１０時間３７℃、５％ＣＯ_２で、指示濃度（０.１－１－１０μｇ／ｍＬ）の試験される分子（ｈＩｇＧ１又はＦａｂ）及びＬＰＳ（０.１μｇ／ｍＬ）の存在下又は不在下でインキュベートした。続いて、細胞を、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を、収集した。新しい透明の９６ウェルマイクロプレート中で、細胞上清を、Ｑｕａｎｔｉブルー試薬（１：１０）と混合し、３７℃、５％ＣＯ_２で３０分間インキュベートした。最後に、光学濃度を、マイクロプレートリーダー（Ｖａｒｉｏｓｋａｎ Ｌｕｘ、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて６５０ｎｍで測定した。

【0287】

全血検査
健康なヒトドナーから得られた全血の刺激アッセイを使用して、炎症性サイトカインレベル（ＩＬ－１β、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＩＬ－８、及びＩＬ－１０）を、評価した。試験される分子（ｈＩｇＧ１又はＦａｂ）を最初に、異なる濃度（０.１－１－１０μｇ／ｍＬ又は示されるとおり）に希釈し、ＬＰＳ（０．１μｇ／ｍＬ、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、Ｆｒａｎｃｅ）の存在下又は不在下で、又はＰＰ複合体（それぞれＩｎｖｉｖｏｇｅｎ，Ｆｒａｎｃｅ及びＢｉｏｔｅｃｈｎｅ、ＵＫ社製の、１０μｇ／ｍＬのペプチドグリカンと複合体化された５μｇ／ｍＬのＰＧＬＹＲＰ１に対応する）の存在下で、又はＰＧＮとも呼ばれるペプチドグリカン（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ，Ｆｒａｎｃｅ）単独と共に１２ウェルプレートのウェルに添加した。続いて、全血（塩化アンモニウム（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ、Ｆｒａｎｃｅ）による赤血球の溶解後の）を、ウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ_２で２４時間インキュベートした。次いで、試料を、血漿を回収するために、３００ｇで１０分間遠心分離し、その中のＩＬ－８レベルを、製造元の指示に従ってＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡヒトＩＬ－８／ＣＸＣＬ８キット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、又はＥｌｌａ技術（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ，ＵＫ）、自動イムノアッセイシステムを使用して評価した。試料を、１回のアッセイで５種のサイトカイン（ＩＬ－１β、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＩＬ－８、及びＩＬ－１０）のレベルを評価するためにシングルプレックス又はマルチプレックスカートリッジ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ，ＵＫ）に添加した。

【0288】

あるいは、カニクイザル由来の全血を、用いた。健康なカニクイザルドナー（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）から得られた全血の刺激アッセイを使用して、炎症性サイトカインレベル（ＩＬ－８、ＴＮＦα、ＩＬ－６）を、評価した。試験される分子（ｈＩｇＧ１又はＦａｂ）を最初に、異なる濃度（０.２－２－２０μｇ／ｍＬ）に希釈し、ＰＰ複合体（又はＰＰｘ）（それぞれＩｎｖｉｖｏｇｅｎ，Ｆｒａｎｃｅ及びＢｉｏｔｅｃｈｎｅ、ＵＫ社製の、１０μｇ／ｍＬのペプチドグリカンと複合体化された５μｇ／ｍＬのＰＧＬＹＲＰ１に対応する）の存在下で、又はＰＧＮとも呼ばれるペプチドグリカン（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ，Ｆｒａｎｃｅ）単独と共に２４ウェルプレートのウェルに添加した。続いて、全血（塩化アンモニウム（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ、Ｆｒａｎｃｅ）による赤血球の溶解後の）を、ウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ_２で２４時間インキュベートした。次いで、試料を、血漿を回収するために、３００ｇで１０分間遠心分離し、その中のＴＮＦα、ＩＬ－６及びＩＬ－８レベルを、Ｅｌｌａ技術（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ，ＵＫ）、自動イムノアッセイシステムを使用して評価した。試料を、１回のアッセイで３種のサイトカイン（ＴＮＦα、ＩＬ－６及びＩＬ－８）のレベルを評価するためにシングルプレックス又はマルチプレックスカートリッジ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ，ＵＫ）に添加した。

【0289】

Ｕ９３７－ＶｉｔＤ３刺激
Ｕ９３７細胞を、４８時間１００ｎＭの１,２５－ジヒドロキシビタミンＤ３（ｖｉｔＤ３）の存在下で、１０％ＦＣＳ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン及びストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ １６４０ ＧｌｕｔａＭＡＸ培地中で培養して、ＴＲＥＭ－１の上方制御を誘導した。次いで、細胞を、回収し、２４時間３７℃、５％ＣＯ_２で指示濃度（０.１－１－１０μｇ／ｍＬ）の試験される分子（ｈＩｇＧ１又はＦａｂ）及びＬＰＳ（０.１μｇ／ｍＬ）の存在下又は不在下で播種した（１×１０^５細胞／ウェル）。続いて、細胞を、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を、収集した。最後に、上清中の炎症性サイトカインレベル（ＩＬ－１β、ＩＬ－６及びＩＬ－１０）の濃度を、Ｅｌｌａ技術（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ，ＵＫ）を使用して評価した。

【0290】

好中球刺激
初代ヒト好中球を、前述のように健康なドナーの血液から単離し、１×１０^６細胞／ｍＬで播種した。次いで、細胞を、２４時間３７℃、５％ＣＯ_２で指示濃度（０.１～１０μｇ／ｍＬ）の試験される分子（ｈＩｇＧ１又はＦａｂ）及びＬＰＳ（０.１μｇ／ｍＬ）の存在下又は不在下でインキュベートした。続いて、細胞を、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を、収集した。最後に、上清中のＩＬ－６又はＩＬ－８の濃度を、製造元の指示書に従いＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡヒトＩＬ－６又はＩＬ－８キット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｒａｎｃｅ）又はＥｌｌａ技術（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ，ＵＫ）を使用して評価した。

【0291】

ヒト化免疫系（ｈｉｓ－）マウス
ＧｅｎＯｗａｙ（Ｆｒａｎｃｅ）からのＢＲＧＳＦマウスは、Ｒａｇ２－／－Ｉｌ２ｒｇ－／－ＳｉｒｐａＮＯＤＦｌｋ２＋／－遺伝子型を示すＢＡＬＢ／ｃマウスである。Ｈｉｓ（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ）（ヒト化免疫系）マウスを、以下のように作製した：簡単に説明すると、新生児マウス（５日齢以下）に、致死量未満の放射線照射後の肝内注射により臍帯から得られた約１×１０^５個のヒト造血前駆細胞（ｈＨＰＣ）ＣＤ３４^＋を移植した。骨髄免疫系を増強するために、全てのマウスは、実験前に２日ごとに１０μｇの組換えヒトｈＦＬＴ３－Ｌ／Ｆｃの腹腔内（ｉ．ｐ．）注射を４回受けた。

【0292】

ヒト実験的エンドトキシン血症
Ｈｉｓマウスを、ＬＰＳ負荷に供して、抗ＴＲＥＭ－１ ＩＮＯ－１０ Ｆａｂ断片（ＩＮＯ－１０Ｆ）のインビボ免疫調節効果を評価した。簡単に説明すると、Ｆｌｔ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）ブーストの翌日に、ｈｉｓマウスに、ＰＢＳ、ＩＮＯ－１０Ｆ、又はＨＳＡとしても知られるヒト血清アルブミンと結合されたＩＮＯ－１０Ｆ（ＩＮＯ－１０Ｆ－ＨＳＡ）を含む延長された半減期を有する融合タンパク質のいずれかを１０ｍｇ／ｋｇの腹腔内（ｉ．ｐ．）単回用量で投与し、その３０分後に、８ｍｇ／ｋｇのＬＰＳ（リポ多糖類；大腸菌血清型Ｏ１２７：Ｂ８、バッチＬ３１２９、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）をｉ．ｐ．注射した。濃度を、マウスの各群で同じ量を注入するように調整した。８時間後、血液試料を、心内穿刺によって採取し、ＥＤＴＡチューブに収集した。血漿を、全血の遠心分離（３００ｇ、１０分）により取得し、－８０℃で保存した。サイトカイン（ＣＣＬ－２、ＩＬ－１β、ＩＬ－１０、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＰ－１０、及びＴＮＦα）の血漿レベルを、Ｅｌｌａ技術（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ，ＵＫ）により実行されるシンプルＰｌｅｘカートリッジを使用して決定した。

【0293】

結果
ＩＮＯ－１０－Ｆはヒト初代好中球におけるＴＲＥＭ－１の活性化を効率的に阻止する
合計５１個の抗ｈＴＲＥＭ－１の固有配列を得、ヒトＩｇＧ１キメラ抗体（ｈＩｇＧ１）及び対応するＦａｂ断片（又は略してＦａｂ）として生成した。これらのコンストラクトを、ヒトＴＲＥＭ－１に結合するそれらの能力についてスクリーニングした。ヒトＴＲＥＭ－１とのそれらの相互作用の検証後に、全てのコンストラクトを、リポ多糖（ＬＰＳ）による好中球の活性化に続いてヒト初代好中球による活性酸素種（ＲＯＳ）の放出を減少させるそれらの能力についてスクリーニングした。実際に、ＬＰＳとのそれらのインキュベーションによる好中球（それらの表面でＴＲＥＭ－１を発現する）におけるＴＲＥＭ－１の活性化は、好中球によるＲＯＳ生成を顕著にもたらす。ＬＰＳで活性化された好中球によるＲＯＳ生成を減少させる試験されたコンストラクトの能力はそのため、ＴＲＥＭ－１を阻害するそれらの能力を反映する。１つのリード、抗ｈＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ断片である、いわゆるＩＮＯ－１０Ｆを、特定した。図１に示すように、ＩＮＯ－１０Ｆは、１μｇ／ｍＬ及び１０μｇ／ｍＬで好中球によるＲＯＳ放出を有意に減少できた。ＩＮＯ－１０Ｆはそのため、ＴＲＥＭ－１の活性化を阻害できた。機能スクリーニングから得られたデータに基づき、ＩＮＯ－１０Ｆを、最良のリード化合物として特定した。

【0294】

フローサイトメトリーによるヒトＴＲＥＭ－１へのＩＮＯ－１０Ｆ結合とＵ９３７－ｖｉｔＤ３細胞におけるＴＲＥＭ－１活性化の阻害
ビタミンＤ３（１，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３）とのＵ９３７細胞のインキュベーションは、未処理のＵ９３７対照細胞の膜におけるＴＲＥＭ－１発現と比較して、膜でのＴＲＥＭ－１発現の増加と関連付けられた（図２）。フローサイトメトリーを使用して、ＩＮＯ－１０ＦがＵ９３７－ｖｉｔＤ３細胞（すなわち、ビタミンＤ３で前処理したＵ９３７細胞）において用量依存的にヒトＴＲＥＭ－１に結合し、約０．２μｇ／ｍＬで５０％結合に達することが示された（図３）。予想通り、陰性対照のＩＮＯ－１０Ｆ－０は、Ｕ９３７－ｖｉｔＤ３細胞上でヒトＴＲＥＭ－１への結合を示さなかった（図３）。興味深いことに、ＩＮＯ－１０Ｆはまた、用量依存的にＴＲＥＭ－１活性化を阻害することが示された。例えば、ＰＧＬＹＲＰ－１：ＰＧＮ複合体（又はＰＰ）による炎症反応の誘導を介する、骨髄細胞（それらの表面でＴＲＥＭ－１を発現する）におけるＴＲＥＭ－１の活性化は顕著に、上記細胞によるサイトカイン／ケモカインの発現及び分泌をもたらす。図４に示されるように、Ｕ９３７－ｖｉｔＤ３細胞と漸増濃度のＩＮＯ－１０Ｆのインキュベーションは、ＰＧＬＹＲＰ－１：ＰＧＮ複合体（ＰＰｘ又はＰＰ）でＵ９３７－ｖｉｔＤ３細胞を２４時間刺激することにより誘導されるＩＬ－６としても知られるインターロイキン－６（図４Ａ）、ＩＬ－１０としても知られるインターロイキン－１０（図４Ｂ）、及びＩＬ－１βとしても知られるインターロイキン－１β（図４Ｃ）の放出の減少と関連付けられた。このアッセイでは、ＩＮＯ－１０Ｆの最大効果は、１～１０μｇ／ｍＬで達成され、５０％の阻害は、約０．１μｇ／ｍＬで達せられた。

【0295】

フローサイトメトリーによるヒトＴＲＥＭ－１へのＩＮＯ－１０Ｆ結合とＴＨＰ－１ブルーｖｉｔＤ３細胞におけるＴＲＥＭ－１活性化の阻害
ＴＨＰ－１細胞とビタミンＤ３のインキュベーションは、未処理のＴＨＰ－１細胞の膜におけるＴＲＥＭ－１発現と比較して、ＴＲＥＭ－１発現の増加（図５Ａ）、及びヒトＣＤ１４すなわちｈＣＤ１４の増加（図５Ｂ）及びヒトＴｏｌｌ様受容体４すなわちｈＴＬＲ４の減少（図５Ｃ）と関連付けられた。フローサイトメトリーを使用して、ＩＮＯ－１０ＦがＴＨＰ－１－ｖｉｔＤ３細胞（ビタミンＤ３で前処理したＴＨＰ－１細胞）で発現されるヒトＴＲＥＭ－１に用量依存的に結合し、０．０１４μｇ／ｍＬで５０％結合に達したことが示された（図６）。予想通り、未処理のＴＨＰ－１対照細胞へのＩＮＯ－１０Ｆの結合はほとんどなかった（図６）。

【0296】

ＩＮＯ－１０Ｆの活性を評価するために、未処理のＴＨＰ－１ブルー細胞又は４８時間ビタミンＤ３で前処理したＴＨＰ－１ブルー細胞を、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は不在下で増加する用量のＩＮＯ－１０Ｆとインキュベートした。例えばＬＰＳによる、炎症応答の誘導を介する単球（それらの表面でＴＲＥＭ－１を発現する）などの骨髄細胞におけるＴＲＥＭ－１の活性化は顕著に、上記細胞におけるＮＦ－κＢ活性化をもたらす。６時間後に、ＮＦ－κＢの活性化を、Ｑｕａｎｔｉブルー試薬を使用して評価した。図７Ａに示したＮＦ－κＢ活性化の阻害により反映されるように、ＩＮＯ－１０Ｆは、ＴＲＥＭ－１を過剰発現する細胞でのみＴＲＥＭ－１を阻害でき、０.１～１０μｇ／ｍＬで効果を有した。ＩＮＯ－１０Ｆは、ＬＰＳ活性化ナイーブＴＨＰ－１ブルー細胞（すなわち、ビタミンＤ３で前処理されなかったＴＨＰ－１ブルー細胞）に対し効果がなかった。２回目の実験は、ＩＮＯ－１０Ｆが、ビタミンＤ３で前処理したＴＨＰ－１ブルー細胞において時間依存的及び用量依存的に、ＬＰＳによるＮＦ－κＢの活性化を制限できたことをさらに確認した。ＩＮＯ－１０Ｆは、ＮＦ－κＢの活性化を６～１０時間阻害し、用量に応じて１０時間で最大の効果を示した（図７Ｂ）。

【0297】

次いで、ＴＨＰ－１ブルー細胞のＩＬ－８生成を、ビタミンＤ３によるそれらの前処理及び漸増濃度（０、０．１及び１０μｇ／ｍＬ）のＩＮＯ－１０Ｆの存在下のＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）による２４時間のそれらの刺激の後で評価した。ＩＮＯ－１０Ｆは、ＬＰＳ刺激により誘導されるＩＬ－８の放出を濃度依存的に減少させ、１０μｇ／ｍＬで最大の効果に達した（図８）。この結果は、ＩＮＯ－１０ＦがビタミンＤ３で前処理したＴＨＰ－１ブルー細胞においてＴＲＥＭ－１を阻害できることを裏付ける。

【0298】

フローサイトメトリーによるヒトＴＲＥＭ－１へのＩＮＯ－１０Ｆ結合と初代好中球及び全血におけるＴＲＥＭ－１活性化の阻害
ヒト初代好中球は、生理学的条件下で膜において高レベルのＴＲＥＭ－１を発現し、ＬＰＳ刺激時にその発現を上方制御しない。実際に、図９に示すように、ヒト初代好中球の膜でのＴＲＥＭ－１の発現は、非刺激状態および３時間又は２４時間のいずれかの、ＬＰＳによる刺激後で類似している。ＩＮＯ－１０Ｆは、新たに単離したヒト好中球上で濃度依存的にヒトＴＲＥＭ－１を結合でき、０.０１～０.１μｇ／ｍＬで、約０.０２３μｇ／ｍＬにて５０％結合に達した（図１０）。次いで、好中球上のＴＲＥＭ－１活性化を阻害するＩＮＯ－１０Ｆの能力を、ＬＰＳ刺激時のＲＯＳのそれらの放出の評価を通じて評価した。予想通り、ＩＮＯ－１０Ｆ単独は、非刺激状態でのＲＯＳ生成の不在により観察されるように、ＴＲＥＭ－１のいかなる活性化も誘導しなかった（図１１）。ＲＯＳは、ＬＰＳ刺激時にヒト初代好中球により生成され、ＩＮＯ－１０Ｆは、約４．６μｇ／ｍＬの濃度で上記ＲＯＳ生成を５０％減少させ、ＴＲＥＭ－１を阻害するその能力を確認した（図１１）。同様の実験を、ＰＧＬＹＲＰ－１：ＰＧＮ複合体（ＰＰｘ又はＰＰ）を使用して行って、ＴＲＥＭ－１の直接活性化によりヒト初代好中球におけるＲＯＳ生成を誘導した。ＩＮＯ－１０Ｆはまた、好中球によるＲＯＳ生成を減少させ、ヒト初代好中球上のヒトＴＲＥＭ－１への最大結合濃度（図１２Ｂ）に相当する１μｇ／ｍＬで最大効果に達した（図１２Ａ）。

【0299】

最後に、ヒト初代好中球によるＩＬ－６分泌を、ＬＰＳ（１００ｍｇ／ｍＬ）と共に又は非刺激状態でのいずれかで、ＩＮＯ－１０Ｆ（０．１又は１０μｇ／ｍＬ）の存在下で０、６及び２４時間の好中球のインキュベーション後に評価した。図１３に示されるように、ＩＮＯ－１０Ｆは、用量依存的及び時間依存的にＬＰＳにより誘導されるＩＬ－６の放出を低下させた。

【0300】

ＴＲＥＭ－１のその阻害によるＩＮＯ－１０Ｆの免疫調節特性をさらに確認するために、ＩＮＯ－１０Ｆの効果を、ヒト全血サイトカインアッセイ刺激で評価した。上で詳述したように、健康なヒトドナーから得られた全血を、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）と、ＩＮＯ－１０Ｆ又は陽性対照（すなわち、ＴＲＥＭ－１を阻害することが知られているペプチドＬＲ１２）のいずれかの存在下で、３７℃、５％ＣＯ_２で２４時間インキュベートした。血漿を、回収し、いくつかのサイトカインの血漿レベルを、測定した。図１４に示すように、このアッセイでは、ＩＮＯ－１０Ｆは用量依存的に、いくつかのサイトカインの放出を低下させた。実際に、ＩＮＯ－１０Ｆは、ＬＰＳが誘導するＩＬ－１β（図１４Ａ）、ＩＬ－１０（図１４Ｂ）、ＴＮＦα（図１４Ｃ）、ＩＬ－６（図１４Ｄ）、及びＩＬ－８（図１４Ｅ）の放出を制限した。ＩＬ－８血漿濃度に対するＩＮＯ－１０Ｆの効果もまた、１４人の健康なボランティアから採取した全血試料のＬＰＳ刺激後にインビトロで評価した。図１５に示すように、ＩＮＯ－１０Ｆは、ＩＬ－８血漿濃度の用量依存的な減少（０．０１～１０μｇ／ｍＬ）を誘導した。ＬＰＳが誘導するＩＬ－８生成の減少もまた、ペプチドＬＲ１２（陽性対照）を用いて観察した。全血アッセイにおいて、ＩＮＯ－１０Ｆは、非刺激状態（すなわち、ＬＰＳの不在下）でＩＬ－８又は他の研究対象サイトカインのいかなる顕著な生成も誘導しなかった。

【0301】

ＢＲＧＳ－Ｆマウスエンドトキシン血症モデルにおけるヒトＴＲＥＭ－１の阻止は、免疫炎症応答を低下させる
ＩＮＯ－１０Ｆの免疫調節効果を、ＬＰＳ（８ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）投与によりエンドトキシン血症を誘導したヒト化免疫系を有するトランスジェニックＢＲＧＳＦマウスで、インビボで評価した。マウスを、ビヒクル、ＩＮＯ－１０Ｆ、又はＩＮＯ－１０Ｆを含む融合タンパク質のいずれかと共にＰＢＳ（対照）単独又はＬＰＳのいずれかをｉ．ｐ．投与するために４つの治療グループに無作為に分けた。実際に、ＬＰＳを投与したマウスのうち、「ＬＰＳ」グループは、処置としてビヒクルを受け、「ＬＰＳ＋１０Ｆ」グループは１０μｇ／ｍＬのＩＮＯ－１０Ｆのｉ．ｐ．投与を受け、「ＬＰＳ＋ＨＳＡ－１０Ｆ」グループは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）とＩＮＯ－１０Ｆ（１０Ｆ）の融合タンパク質からなる延長された半減期を有する１０μｇ／ｍＬのＩＮＯ－１０Ｆフォーマットのｉ．ｐ．投与を受けた。マウスを、３０分間ビヒクル、ＩＮＯ－１０Ｆ又はＨＳＡ－ＩＮＯ－１０Ｆ（ＨＳＡ－１０Ｆ）で前処理し、次いで、ＬＰＳを投与してエンドトキシン血症を誘導した。血液試料を、ＬＰＳ注射の８時間後に採取し、ヒトサイトカイン／ケモカイン濃度を、血漿中で定量化した（ＣＣＬ－２、ＩＬ－１β、ＩＬ－１０、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＰ－１０、及びＴＮＦα）。ＬＰＳは、対照グループ（ＣＴＲＬ）と比較して、ヒト炎症性サイトカイン／ケモカインの放出を著しく増加させた。興味深いことに、図１６に示すように、ＩＮＯ－１０ＦとＩＮＯ－１０Ｆ－ＨＳＡの両方は、単球走化性タンパク質１すなわちＭＣＰ１としても知られる循環ヒト炎症性サイトカインケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）（図１６Ａ）、インターロイキン－１βすなわちＩＬ－１β（図１６Ｂ）、インターロイキン－１０すなわちＩＬ－１０（図１６Ｃ）、インターロイキン－６すなわちＩＬ－６（図１６Ｄ）、インターロイキン－８すなわちＩＬ－８（図１６Ｅ）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１０すなわちＣＸＣＬ１０としても知られるインターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ－１０）（図１６Ｆ）、及び腫瘍壊死因子アルファすなわちＴＮＦα又はＴＮＦａ（図１６Ｇ）の分泌を調節でき、延長された半減期を有するＨＳＡ－ＩＮＯ－１０Ｆ融合タンパク質では効果がより顕著であった。これらの結果は、インビボでの抗ＴＲＥＭ－１ ＩＮＯ－１０Ｆ Ｆａｂ断片の免疫調節効果を裏付ける。

【0302】

最適化されたＩＮＯ－１０Ｆ変異体のＴＲＥＭ－１への結合
ＩＮＯ－１０Ｆ結合特性及び活性を改善するために、抗ＴＲＥＭ－１ ＩＮＯ－１０抗体のヒト化変異体及び抗ＴＲＥＭ－１ ＩＮＯ－１０Ｆ Ｆａｂ断片の対応するヒト化変異体を、作製した。抗ＴＲＥＭ－１ ＩＮＯ－１０抗体のヒト化変異体を、ＩＮＯ－１０－２、ＩＮＯ－１０－３、ＩＮＯ－１０－４、ＩＮＯ－１０－５、及びＩＮＯ－１０－６と命名し、抗ＴＲＥＭ－１ ＩＮＯ－１０Ｆ Ｆａｂ断片のヒト化変異体を、ＩＮＯ－１０Ｆ－２（Ｆ２）、ＩＮＯ－１０Ｆ－３（Ｆ３）、ＩＮＯ－１０Ｆ－４（Ｆ４）、ＩＮＯ－１０Ｆ－５（Ｆ５）、及びＩＮＯ－１０Ｆ－６（Ｆ６）と命名した。２つの追加のヒト化変異体を、対照として使用した：ＩＮＯ－１０Ｆ－０（Ｆ０）、及びＩＮＯ－１０Ｆに最も類似したＣＤＲを有する（ＣＤＲは、Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２中のアミノ酸１個の違いを除いて同一である）ヒト化抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ断片である、ＩＮＯ－１０Ｆ－１（Ｆ１）。最初に、結合親和性定数、会合速度及び解離速度を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを使用して決定した。Ｆａｂ断片を、ＣＭ５センサーチップの表面に固定化し、その後、増加する濃度の組換えヒトＴＲＥＭ－１又はカニクイザルＴＲＥＭ－１を注入した。結果を、下記表１に示す。ＴＲＥＭ－１（ｈＴＲＥＭ－１又はｃＴＲＥＭ－１のいずれか）への結合は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０Ｆ－０（Ｆ０）では観察されなかった。Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０Ｆ－１（Ｆ１）は、ｈＴＲＥＭ－１を結合できただけであり、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０Ｆのものと類似の親和性を有した。Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０Ｆ－２～ＩＮＯ－１０Ｆ－６（Ｆ２～Ｆ６）は、Ｆａｂ断片ＩＮＯ－１０Ｆよりも高い親和性を示した。
表１：ヒトとカニクイザルＴＲＥＭ－１と異なる抗ＴＲＥＭ－１モノクローナル抗体Ｆａｂ断片の相互作用に関する結合定数ｋ_a又はｋ_on（会合速度）、ｋ_ｄ又はｋ_off（解離速度）及びＫ_Ｄ（平衡解離定数）

【表1】

【0303】

最適化されたＩＮＯ－１０Ｆ変異体はＵ９３７細胞及び初代細胞においてＴＲＥＭ－１を阻害できる
ビタミンＤ３で前処理したＵ９３７（Ｕ９３７－ｖｉｔＤ３細胞）上で及び未処理の対照Ｕ９３７細胞上で発現されるヒトＴＲＥＭ－１への、最適化された抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ断片の結合を次に、評価した。予想通り、結合は、Ｕ９３７細胞では観察されなかった（図１７Ａ）。図１７Ｂに示されるように、Ｕ９３７－ｖｉｔＤ３細胞上で、ＩＮＯ－１０Ｆ－Ｆ０は、１０μｇ／ｍＬで弱い結合を示し、ＩＮＯ－１０Ｆは、以前に得られたものと同様の結合プロファイルを示した（図３参照）。より良好な親和性への明らかなシフトが、最適化された変異体ＩＮＯ－１０Ｆ－１～ＩＮＯ－１０Ｆ－６について観察され、ＳＰＲデータを裏付けた（図１７Ｂ）。

【0304】

ＩＮＯ－１０Ｆで得られた結果に従って、ＩＮＯ－１０Ｆ－１（Ｖ_Ｈ－ＣＤＲ２におけるアミノ酸１個の違いを除いて同一のＣＤＲを有する、ＩＮＯ－１０Ｆに最も類似したヒト化Ｆａｂ断片である）は、ＰＧＬＹＲＰ－１：ＰＧＮ複合体（ＰＰ複合体）での刺激により誘導されるＵ９３７－ｖｉｔＤ３細胞によるＩＬ－６の放出を減少させることができ、０．５μｇ／ｍＬで約５０％阻害（ＩＣ５０）を達成した。ＩＮＯ－１０Ｆ－０は、ＩＮＯ－１０Ｆと比較してＴＲＥＭ－１に対する親和性の減少を示し、１０μｇ／ｍＬでのみ観察されるＩＬ－６放出の限定的な減少と関連付けられた。ＴＲＥＭ－１へのＩＮＯ－１０Ｆ－２（Ｆ２）～ＩＮＯ－１０Ｆ－６（Ｆ６）の向上された親和性は、ＩＬ－６放出の５０％阻害（ＩＣ５０）を誘導するために必要とされる用量の減少へのシフトにつながった。特に、ＩＮＯ－１０Ｆ－３（Ｆ３）は、約０.０５μｇ／ｍＬのＩＣ５０を示した。ＴＲＥＭ－１の既知の阻害剤であるペプチドＬＲ１２を、陽性対照として使用した（図１８）。ＩＮＯ－１０Ｆ－３（Ｆ３）の結合が、新たに単離したヒト好中球により発現されたＴＲＥＭ－１において確認され、約０.０３μｇ／ｍＬで５０％結合に達した（図１９）。

【0305】

次に、好中球ＬＰＳ刺激アッセイを実施して、ＬＰＳでの２４時間の刺激後にヒト初代好中球によるＩＬ－８の放出を減少させるように最適化された抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ断片の能力を評価した。図２０に示すように、ＩＮＯ－１０Ｆ－２（Ｆ２）とＩＮＯ－１０Ｆ－３（Ｆ３）は、０.１～１０μｇ／ｍＬで良好で顕著な阻害特性を示した。ＩＮＯ－１０Ｆ－４（Ｆ４）とＩＮＯ－１０Ｆ－６（Ｆ６）もまた、１μｇ／ｍＬ又は１０μｇ／ｍＬで添加された場合に、ＩＬ－８放出を有意に減少させることができた。ＩＮＯ－１０Ｆ－１（Ｆ１）とＩＮＯ－１０Ｆ－５（Ｆ５）は、１０μｇ／ｍＬで添加された場合にのみＩＬ－８放出を有意に減少させることができた。最後に、好中球ＬＰＳ刺激アッセイも実施して、ヒト初代好中球の２４時間のＬＰＳ刺激後に誘導されるＲＯＳ生成を減少させる最適化された抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂ断片の能力を評価した。図２１Ａ～Ｈに示すように、ＩＮＯ－１０Ｆ－２（Ｆ２）とＩＮＯ－１０Ｆ－３（Ｆ３）は、ＬＰＳ活性化好中球によるＲＯＳ生成の最良の阻害プロファイルを示した。実際に、ＩＮＯ－１０Ｆ－２（Ｆ２）は、０．０１μｇ／ｍＬでの２８％～１０μｇ／ｍＬでの４４％でＲＯＳ生成を阻害し（図２１Ｄ）、ＩＮＯ－１０Ｆ－３（Ｆ３）は、０．０１μｇ／ｍＬでの２１％～１０μｇ／ｍｌでの５２％でＲＯＳ放出を阻害できた（図２１Ｅ）。ＩＮＯ－１０Ｆ－４（Ｆ４）とＩＮＯ－１０Ｆ－６（Ｆ６）もまた、１μｇ／ｍＬ又は１０μｇ／ｍＬで添加された場合に、ＬＰＳ活性化好中球によるＲＯＳ生成を阻害できた。ＩＮＯ－１０Ｆ－１（Ｆ１）とＩＮＯ－１０Ｆ－５（Ｆ５）は、１０μｇ／ｍＬで添加された場合にのみ、ＬＰＳ活性化好中球によるＲＯＳ生成を阻害できた。予想通り、ＩＮＯ－１０Ｆ－０（Ｆ０）は、ＬＰＳ活性化好中球によるＲＯＳ生成を阻害しなかった。

【0306】

ＨＳＡに結合されたＩＮＯ－１０Ｆ変異体は、初代細胞及び全血アッセイにおいてＴＲＥＭ－１を阻害できる
ＨＳＡとしても知られるヒト血清アルブミンと結合された最適化されたＦａｂ断片ＩＮＯ－１０Ｆ－３（又はＦ３）からなる融合タンパク質を、作製した。Ｆ３－ＨＳＡと呼ばれる上記融合タンパク質の阻害効果を、ヒト初代好中球によるＲＯＳ生成において評価した（図２２）。ヒト初代好中球をそのため、指示濃度（０～２０μｇ／ｍＬ）のＦ３－ＨＳＡの存在下で、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）、又はペプチドグリカン（１０μｇ／ｍＬ）と複合体化されたＰＧＬＹＲＰ１（５μｇ／ｍＬ）に対応するＰＰ複合体（ＰＰ）、又はペプチドグリカンのみ（ＰＧＮ－１０μｇ／ｍＬ）で２時間刺激した。Ｆ３－ＨＳＡは、ＬＰＳ（約１μｇ／ｍＬで約５０％減少－図２２Ａ参照）で、ＰＰ複合体（約１μｇ／ｍＬで約８５％減少－図２２Ｂ）で、又はＰＧＮ単独（約１μｇ／ｍＬで約７５％減少－図２２Ｃ）で好中球を刺激した後に、ＲＯＳ放出を阻害できた。

【0307】

次に、Ｆ３－ＨＳＡの効果を、赤血球の溶解後の２４時間全血刺激アッセイ後のサイトカイン血漿濃度に対し評価した。Ｆ３－ＨＳＡ又はアイソタイプ対照（ＣＴＬＲ）を、非刺激状態、又はＰＧＮ（１０μｇ／ｍＬ）と複合体化されたＰＧＬＹＲＰ１（５μｇ／ｍＬ）に対応するＰＰ複合体の存在下で、又はＰＧＮのみ（１０μｇ／ｍＬ）の存在下で、指示濃度（０～２０μｇ／ｍＬ）で全血に添加した。２４時間後に、次のサイトカイン：ＩＬ－８及びＴＮＦα、の発現を評価した。図２３に示すように、このアッセイでは、Ｆ３－ＨＳＡは、サイトカイン放出を低下させなかった対照と比較して、用量依存的にＩＬ－８とＴＮＦαの両方の放出を低下させた。実際に、Ｆ３－ＨＳＡは、ＰＰ又はＰＧＮ単独のいずれかでの刺激後にＩＬ－８の放出を低下させ（図２３Ａ）、ＰＰ又はＰＧＮ単独のいずれかでの刺激後にＴＮＦαの放出を低下させた（図２３Ｂ）。

【0308】

同様のアッセイを次に、カニクイザル全血を用いて実施した。Ｆ３－ＨＳＡ又はアイソタイプ対照（ＣＴＬＲ）をそのため、非刺激状態、又はＰＧＮ（１０μｇ／ｍＬ）と複合体化されたＰＧＬＹＲＰ１（５μｇ／ｍＬ）に対応するＰＰ複合体の存在下で、又はＰＧＮのみ（２０μｇ／ｍＬ）の存在下で、指示濃度（０～２０μｇ／ｍＬ）で健康なカニクイザルドナー（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）から得られた全血に添加した。２４時間後に、次のサイトカインの発現を評価した：ＩＬ－８、ＴＮＦα、及びＩＬ－６。図２４に示されるように、このアッセイでは、Ｆ３－ＨＳＡは、サイトカイン放出を低下させなかった対照と比較して、ＩＬ－８、ＴＮＦα、及びＩＬ－６の放出を用量依存的に低下させた。実際に、Ｆ３－ＨＳＡは、ＰＧＮ単独又はＰＰでの刺激後にＩＬ－８の放出を低下させ（図２４Ａ）、ＰＧＮ単独又はＰＰでの刺激後にＴＮＦαの放出を低下させ（図２４Ｂ）、かつＰＧＮ単独又はＰＰのいずれかでの刺激後にＩＬ－６の放出を低下させた（図２４Ｃ）。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図14D】

【図14E】

【図15】

【図16A】

【図16B】

【図16C】

【図16D】

【図16E】

【図16F】

【図16G】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21-1】

【図21-2】

【図21-3】

【図22】

【図23】

【図24-1】

【図24-2】

【手続補正書】

【提出日】2024-03-28

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2024521904000001.app

【国際調査報告】