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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-06-04
(54)【発明の名称】ＣＨＫ－１阻害剤の医薬用塩
(51)【国際特許分類】
C07D 401/14 20060101AFI20240528BHJP
A61K 31/497 20060101ALI20240528BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240528BHJP
A61P 43/00 20060101ALN20240528BHJP
【ＦＩ】
C07D401/14 CSP
A61K31/497
A61P35/00
A61P43/00 111
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023574776
(86)(22)【出願日】2022-06-01
(85)【翻訳文提出日】2024-01-25
(86)【国際出願番号】 EP2022064935
(87)【国際公開番号】W WO2022253907
(87)【国際公開日】2022-12-08
(31)【優先権主張番号】2107924.9
(32)【優先日】2021-06-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＢＲＩＪ
(71)【出願人】
【識別番号】523107927
【氏名又は名称】センチネル オンコロジー リミテッド
(71)【出願人】
【識別番号】523453754
【氏名又は名称】ファーマエンジン，インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100182084
【弁理士】
【氏名又は名称】中道 佳博
(72)【発明者】
【氏名】メジャー，メリエル
(72)【発明者】
【氏名】トラバース，スチュアート
(72)【発明者】
【氏名】パーカー，ジェイク
(72)【発明者】
【氏名】ノーゼン，ジュリアン
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086AA04
4C086BC48
4C086GA07
4C086GA14
4C086GA15
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA17
4C086MA35
4C086MA37
4C086MA44
4C086MA52
4C086MA66
4C086NA02
4C086NA03
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZC20
(57)【要約】
本発明は、マレイン酸塩、トシル酸塩、ベシル酸塩、およびマロン酸塩から選択される、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩を提供する。また、これらの塩の特定の結晶形、これらの塩の調製方法、これらの塩を含有する医薬組成物、および治療における使用を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
マレイン酸塩、トシル酸塩、ベシル酸塩、およびマロン酸塩から選択される、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩。
【請求項2】
マレイン酸塩である、請求項１に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩。
【請求項3】
塩比（酸：遊離塩基のモル比）が約１：１である、請求項１または２に記載の薬学的に許容可能な塩。
【請求項4】
結晶化度が５０％～１００％である、請求項１から３のいずれか一項に記載の薬学的に許容可能な塩。
【請求項5】
６．９±０．２°および／または２６．４±０．２°および／または１１．８±０．２°および／または１７．９±０．２°における主要な°２Ｔｈ（°２Ｔｈｅｔａ）ピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、請求項２に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＢ塩。
【請求項6】
実質的に図２５に示すようなＸＲＰＤスペクトルを有するパターンＢ塩である、請求項２に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸塩。
【請求項7】
請求項１から６のいずれか一項に規定される５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項8】
がんの治療おける使用のための、請求項１から６のいずれか一項に規定される５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩。
【請求項9】
請求項１から６のいずれか一項に規定される５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩と、治療的に活性な別の薬剤とを含む医薬組み合わせ。
【請求項10】
請求項１から６のいずれか一項に規定される薬学的に許容可能な塩の調製方法であって、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルをテトラヒドロフランに分散させて混合物を形成する工程と、該混合物を４５℃～６５℃の範囲（例えば、５５℃～６５℃、特に約６０℃）の高温に加熱する工程と、必要量の酸を該混合物に添加する工程と、該混合物を定められた期間、該高温または該高温付近に維持する工程と、該混合物を冷却して該薬学的に許容可能な塩を単離させる工程と、を含む方法。
【請求項11】
請求項１から６のいずれか一項に規定される薬学的に許容可能な塩の調製方法であって、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルを、テトラヒドロフランとアセトニトリルの混合液（例えば、１：１混合液）中に分散させて混合物を形成する工程と、該混合物を４５℃～５５℃の範囲（例えば、約５０℃）の高温に加熱する工程と、必要量の酸を該混合物に添加する工程と、該混合物を定められた期間、該高温または該高温付近に維持する工程と、該混合物を冷却して該薬学的に許容可能な塩を単離させる工程と、を含む方法。
【請求項12】
請求項１から６のいずれか一項に規定される薬学的に許容可能な塩の調製方法であって、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルを、テトラヒドロフランと水の混合液（例えば、該混合液は、テトラヒドロフランを７５％（ｖ／ｖ）～９７％（ｖ／ｖ）、水を３％（ｖ／ｖ）～２５％（ｖ／ｖ）含有し、より好ましくは、テトラヒドロフランを約９５％（ｖ／ｖ）、水を約５（ｖ／ｖ）含有する）に分散させて混合物を形成する工程と、該混合物を４５℃～６５℃の範囲（例えば、約５０℃～６０℃）の高温に加熱する工程と、必要量の酸を該混合物に添加する工程と、該混合物を定められた期間、該高温または該高温付近に維持する工程と、該混合物を冷却して該薬学的に許容可能な塩を単離させる工程と、を含む方法。
【請求項13】
前記酸がマレイン酸であり、得られる薬学的に許容可能な塩がマレイン酸塩である、請求項１０から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記マレイン酸塩がマレイン酸塩パターンＡ塩である、請求項１３に記載の方法。
【請求項15】
前記パターンＡ塩を相対湿度５０％超の雰囲気中でコンディショニングすることにより、前記パターンＡマレイン酸塩をパターンＢマレイン酸塩に転換する工程をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
本明細書中の実施形態１．１から１．４８、実施形態２．１から２．１６、実施形態３．１から３．３０、実施形態４．１、および５．１から実施形態５．１３のいずれか１つに規定される発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、Ｃｈｋ－１阻害剤化合物５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの医薬用塩、それらの調製方法、それらを含有する医薬組成物、およびがん等の疾患の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【0002】
Ｃｈｋ－１は、ＤＮＡ損傷ストレスやＤＮＡ複製ストレスに応答した細胞周期チェックポイントの誘導に関与するセリン／スレオニンキナーゼである［Ｔｓｅら，Ｃｌｉｎ． Ｃａｎ． Ｒｅｓ． ２００７；１３（７）］。細胞周期チェックポイントは、細胞周期の移行の順序とタイミングを制御する調節経路である。多くのがん細胞はＧ１チェックポイント活性化が障害されている。例えば、Ｈａｈｎら、また、Ｈｏｌｌｓｔｅｉｎらは、ヒトがん全体の約５０％に見られる腫瘍抑制遺伝子であるｐ５３遺伝子の変異に腫瘍が関連していることを報告している［Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００２，３４７（２０）：１５９３；Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９１，２５３（５０１５）：４９］。
【0003】
Ｃｈｋ－１阻害は、Ｓ期内チェックポイントおよびＧ２／Ｍチェックポイントを抑止する。Ｃｈｋ－１阻害は、周知のＤＮＡ損傷剤に対する腫瘍細胞の感受性を選択的に高めることが示されている。この感受性増加作用が証明されたＤＮＡ損傷剤の例としては、ゲムシタビン、ペメトレキセド、シタラビン、イリノテカン、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン［Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１０，１６，３７６］、テモゾロミド［Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ ２００４，１００，１０６０］、ドキソルビシン［Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ． ２００６；１６：４２１－６］、パクリタキセル［ＷＯ２０１０１４９３９４］、ヒドロキシ尿素［Ｎａｔ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ２００５；７（２）：１９５－２０］、ニトロイミダゾール低酸素標的薬ＴＨ－３０２（Ｍｅｎｇら，ＡＡＣＲ，２０１３ アブストラクトＮｏ．２３８９）、および電離放射線［Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１０，１６，２０７６］が挙げられる。ＭｃＮｅｅｌｙらによるレビュー論文［Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（２０１４），１４２（１）：１－１０］も参照されたい。
【0004】
最近発表されたデータでは、Ｃｈｋ－１阻害剤がＰＡＲＰ阻害剤［Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００６．；６６：（１６）］、Ｍｅｋ阻害剤［Ｂｌｏｏｄ． ２００８；１１２（６）：２４３９－２４４９］、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤［Ｂｌｏｏｄ． ２００５；１０５（４）：１７０６－１６］、ラパマイシン［Ｍｏｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ． ２００５；４（３）：４５７－７０］、Ｓｒｃ阻害剤［Ｂｌｏｏｄ． ２０１１；１１７（６）：１９４７－５７］、およびＷＥＥ１阻害剤［Ｃａｒｒａｓｓａ，２０２１，１１（１３）：２５０７；Ｃｈａｕｄｈｕｒｉら，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ，２０１４ ９９（４）：６８８．］と相乗的に作用し得ることも示されている。
【0005】
さらに、Ｃｈｋ－１阻害剤は免疫療法剤と併用すると利点があることが証明されている［Ｍｏｕｗら，Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２０１８．（７）：９３３］。Ｃｈｋ１阻害剤は、ＳＴＩＮＧシグナル伝達を通じて自然免疫応答を誘導するｃＧＡＳを活性化させることや、インビボで、ＰＤ－Ｌ１の発現を誘導し、抗ＰＤ－Ｌ１と相乗作用を示すことが示されている［Ｓｅｎら，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ ２０１９ （５）：６４６；Ｓｅｎら，Ｊ Ｔｈｏｒａｃ Ｏｎｃｏｌ，２０１９．（１２）：２１５２］。
【0006】
化学療法や放射線療法に対する耐性は、従来の治療法の臨床的課題であるが、Ｃｈｋ－１の関与が示されているＤＮＡ損傷応答の活性化と関連づけられている［Ｎａｔｕｒｅ；２００６；４４４（７）：７５６－７６０；Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ． ２０１１；４０６（１）：５３－８］。
【0007】
また、Ｃｈｋ－１阻害剤は、単剤または併用で、ＤＮＡ損傷およびチェックポイント経路の恒常的活性化が特に複製ストレスを通じてゲノム不安定性を駆動する腫瘍細胞の治療に有用であり得ると考えられる。この表現型は、例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）患者由来の試料において、複雑核型と関連している［Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９，８９，８６５２］。小分子阻害剤またはＲＮＡ干渉法によるインビトロでのＣｈｋ－１キナーゼの拮抗は、ＤＮＡ損傷レベルが高いＡＭＬ試料のクローン原性を大きく低下させる。これに対して、Ｃｈｋ－１阻害は正常な造血前駆細胞に影響を及ぼさない。さらに、最近の研究では、腫瘍微小環境が遺伝的不安定性を駆動すること［Ｎａｔｕｒｅ；２００８；（８）：１８０－１９２］や、Ｃｈｋ－１の減少が低酸素／再酸素化に対する細胞の感受性を増加させること［Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ；２０１０；９（１３）：２５０２］が示されている。神経芽腫において、キノームのＲＮＡ干渉スクリーンにより、Ｃｈｋ－１の減少が８種の神経芽腫細胞株の成長を阻害することが証明された。ファンコニ貧血ＤＮＡ修復の欠損が見られる腫瘍細胞は、Ｃｈｋ－１阻害に対する感受性を示した［Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ ２００９，８：２４］。Ｃｈｋ－１特異的阻害剤ＰＦ－００４７７７３６は、３０種の卵巣がん細胞株の成長を阻害すること［Ｂｕｋｃｚｙｎｓｋａら，２３ｒｄ Ｌｏｒｎｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ］や、トリプルネガティブ乳がん細胞の成長を阻害すること［Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０１１，１０２，８８２］が示されている。また、ＰＦ－００４７７７３６は、ＭＹＣがん遺伝子によって駆動されるマウス自然発症がんモデルにおいて選択的単剤活性を示した［Ｆｅｒｒａｏら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２０１１年８月１５日）］。ＲＮＡ干渉法または選択的小分子阻害剤によるＣｈｋ－１阻害は、Ｂ細胞リンパ腫のインビトロとインビボマウスモデルとの両方においてＭＹＣ過剰発現細胞のアポトーシスをもたらす［Ｈｏｇｌｕｎｄら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１１］。後者のデータは、Ｂ細胞リンパ腫／白血病、神経芽腫、ならびに一部の乳がんおよび肺がんなどのＭＹＣによって駆動される悪性腫瘍の治療にＣｈｋ－１阻害剤が有用性を有するであろうことを示唆する。Ｃｈｋ－１阻害剤はまた、ユーイング肉腫や横紋筋肉腫をはじめとする小児腫瘍モデルにおいて有効であることも示されている［Ｌｏｗｅｒｙ，２０１８． Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１９，２５（７）：２２７８］。Ｃｈｋ１阻害剤は、ＤＮＡポリメラーゼのＢファミリーと合成致死性であり、複製ストレス、ＤＮＡ損傷、および細胞死を増加させることが示されている［Ｒｏｇｅｒｓら，２０２０，８０（８）；１７３５］。他の細胞周期調節遺伝子も、ＣＤＫ２やＰＯＸＭ１をはじめとするＣｈｋ－１阻害剤に対する感受性を与えることが報告されている［Ｄｉｔａｎｏら，２０２０１．１１（１）；７０７７；Ｂｒａｎｉｇａｎら，２０２１ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ３４（９）：１０９８８０８］。
【0008】
ＤＮＡ修復経路の活性を低下させる変異が、Ｃｈｋ１阻害との合成致死性相互作用をもたらし得ることも報告されている。例えば、ＲＡＤ５０複合体やＡＴＭシグナル伝達を撹乱する変異は、Ｃｈｋ１阻害に対する応答性を高める［Ａｌ－Ａｈｍａｄｉｅら，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ． ２０１４．（９）：１０１４－２１］。同様に、ファンコニ貧血相同ＤＮＡ修復経路における欠損は、Ｃｈｋ１阻害に対する感受性をもたらす［Ｃｈｅｎら，Ｍｏｌ． Ｃａｎｃｅｒ ２００９ ８：２４，Ｄｕａｎら，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１４ ４：３６８］。また、Ｒａｄ１７遺伝子産物の機能喪失を有するヒト細胞は、Ｃｈｋ１抑制に対して感受性がある［Ｓｈｅｎら，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１５．６（３４）：３５７５５］。
【0009】
Ｃｈｋ－１キナーゼの阻害剤を開発するための様々な試みがなされてきた。例えば、ＷＯ０３／１０４４４およびＷＯ２００５／０７２７３３（どちらもＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ社名義）は、Ｃｈｋ－１キナーゼ阻害剤としてアリール／ヘテロアリール尿素化合物を開示している。ＵＳ２００５／２１５５５６（Ａｂｂｏｔｔ社）は、キナーゼ阻害剤として大環状尿素を開示している。ＷＯ０２／０７０４９４、ＷＯ２００６０１４３５９、およびＷＯ２００６０２１００２（いずれもＩｃｏｓ社名義）は、Ｃｈｋ－１阻害剤としてアリール尿素およびヘテロアリール尿素を開示している。ＷＯ／２０１１／１４１７１６およびＷＯ／２０１３／０７２５０２はどちらも、Ｃｈｋ－１キナーゼ阻害剤として置換ピラジニル－フェニル尿素を開示している。ＷＯ２００５／００９４３５（Ｐｆｉｚｅｒ社）およびＷＯ２０１０／０７７７５８（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ社）は、Ｃｈｋ－１キナーゼ阻害剤としてアミノピラゾールを開示している。
【0010】
ＷＯ２０１５／１２０３９０は、Ｃｈｋ－１キナーゼ阻害剤として一種の置換フェニル－ピラゾリル－アミン類を開示している。開示された化合物の１つは、化合物５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルであり、その合成がＷＯ２０１５／１２０３９の実施例６４および合成方法Ｌに記載されている。この化合物は塩酸塩の形態で開示されている。
【0011】
ＷＯ２０１８／１８３８９１（Ｃａｓｃａｄｉａｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社）は、化合物５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルまたはその薬学的に許容可能な塩とＷＥＥ－１阻害剤との組み合わせを開示している。しかし、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの具体的な塩は開示されていない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0012】
（本発明）
現在、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルがいくつかの鉱酸および有機酸と結晶塩を形成することが分かっている。
現在、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルがいくつかの鉱酸および有機酸と結晶塩を形成することが分かっている。
【発明を実施するための形態】
【0013】
したがって、本発明は、第１の局面（実施形態１．１）において、臭化水素酸塩、メシル酸塩、Ｌ－酒石酸塩、エシル酸塩、Ｌ－アスパラギン酸塩、ベシル酸塩、トシル酸塩、硫酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、Ｌ－グルタミン酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、グルクロン酸塩、マロン酸塩、ナフチレン－２－スルホン酸塩、エタン－１，２－ジスルホン酸塩、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸塩、およびシュウ酸塩から選択される、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩を提供する。
【0014】
本明細書において、「臭化水素酸塩、メシル酸塩、Ｌ－酒石酸塩、エシル酸塩、Ｌ－アスパラギン酸塩、ベシル酸塩、トシル酸塩、硫酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、Ｌ－グルタミン酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、グルクロン酸塩、マロン酸塩、ナフチレン－２－スルホン酸塩、およびシュウ酸塩」という各用語は、それらの従来の意味で、それぞれ、臭化水素酸、メタンスルホン酸、Ｌ－酒石酸、エタンスルホン酸、Ｌ－アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、硫酸、リン酸、クエン酸、酢酸、Ｌ－グルタミン酸、マレイン酸、ゲンチシン酸、グルクロン酸、マロン酸、ナフチレン－２－スルホン酸、エタン－１，２－ジスルホン酸、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸、およびシュウ酸からなる塩を示すために用いられる。
【0015】
また、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルのいくつかの塩は、ＷＯ２０１５／１２０３９に開示された塩酸塩に比較べて特性が向上していることが分かっている。
【0016】
したがって、別の実施形態（実施形態１．２）において、本発明は、マレイン酸塩、トシル酸塩、ベシル酸塩、およびマロン酸塩から選択される、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩を提供する。
【0017】
化合物５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルは、下記の式（１）を有し、本明細書においては、便宜上、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルのマレイン酸塩、トシル酸塩、ベシル酸塩、およびマロン酸塩の各塩を、式（１）の化合物の塩または本発明の塩と呼ぶこともある。
【0018】
【化1】
【0019】
式（１）の化合物は、数個の塩基性窒素原子を有し、原理的には、塩比（すなわち、遊離塩基：酸のモル比）が異なる塩を形成することができる。例えば、酸が一塩基性の場合、塩の形成に用いられる方法において使用される酸のモル当量数に応じて、モノ塩（すなわち、酸対遊離塩基のモル比が１：１である場合）またはビス塩（酸対遊離塩基のモル比が約２：１である場合）が調製され得る。塩の形成に二塩基酸（例えば、ジカルボン酸）が使用される場合、採用される特定の塩形成条件に応じて、ヘミ塩（塩中の酸対塩基のモル比が０．５：１である場合）、モノ塩、およびビス塩が形成され得る。
【0020】
したがって、さらなる実施形態（実施形態１．３～実施形態１．９）において、本発明は以下を提供する。
【0021】
１．３ マレイン酸塩である、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩。
【0022】
１．３Ａ 本明細書において定義する結晶パターンＢを有する結晶性マレイン酸塩である、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩。
【0023】
１．４ トシル酸塩である、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩。
【0024】
１．５ ベシル酸塩である、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩。
【0025】
１．６ マロン酸塩である、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩。
【0026】
１．７ 塩比（酸：遊離塩基のモル比）が約１：１である、実施形態１．１から実施形態１．６のいずれか１つに記載の薬学的に許容可能な塩。
【0027】
１．８ 塩比（酸：遊離塩基のモル比）が約０．５：１である、実施形態１．３または実施形態１．６に記載の薬学的に許容可能な塩。
【0028】
１．９ 塩比（酸：遊離塩基のモル比）が約２：１である、実施形態１．３または実施形態１．５に記載の薬学的に許容可能な塩。
【0029】
式（１）の化合物の塩は、アモルファスであっても実質的に結晶性であってもよい。
【0030】
「実質的に結晶性」という用語は、５０％～１００％の結晶化度を有する塩を指す。この範囲内で、塩は、少なくとも５５％の結晶化度、または少なくとも６０％の結晶化度、または少なくとも７０％の結晶化度、または少なくとも８０％の結晶化度、または少なくとも９０％の結晶化度、または少なくとも９５％の結晶化度、または少なくとも９８％の結晶化度、または少なくとも９９％の結晶化度、または少なくとも９９．５％の結晶化度、または少なくとも９９．９％の結晶化度、例えば１００％の結晶化度を有してもよい。
【0031】
本発明のある特定の塩は、いくつかの異なる結晶形つまり多形体で存在し得る。
【0032】
本願が優先権を主張する２０２１年６月３日付で出願された英国特許出願第２１０７９２４．９号では、ある特定のマレイン酸塩形態を、パターンＡ、パターンＡ’、およびパターンＡ’’と称していた。本出願では、これらの形態をそれぞれパターンＡ、パターンＢ、およびパターンＣという名称に変更した。
【0033】
式（１）の化合物の塩の結晶形は、好ましくは、結晶純度が少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％であるものである。すなわち、塩の少なくとも９０％（より好ましくは少なくとも９５％）が単一の結晶形からなる。
【0034】
本発明の塩の結晶形は、溶媒和（例えば、水和）していてもよく、溶媒和していなくてもよい（例えば、無水であってもよい）。
【0035】
本明細書において「無水」という用語は、塩の結晶形上または結晶形中にいくらかの水が存在する可能性を排除するものではない。例えば、塩の結晶形の表面にいくらかの水が存在していてもよく、塩の結晶形本体の内部に少量の水が存在していてもよい。典型的には、無水形態は、式（１）の化合物１分子あたり０．４分子未満の水を含有し、より好ましくは、式（１）の化合物１分子あたり０．１分子未満の水、例えば、０分子の水を含有する。
【0036】
結晶形が水和している場合、それらは、例えば、最大３分子の結晶水、より一般的には最大２分子の水、例えば１分子の水または２分子の水を含有し得る。存在する水分子の数が１未満であるかまたは非整数である非化学量論的水和物が形成されてもよい。例えば、存在する水が１分子未満である場合、化合物（１）１分子あたり、例えば、０．４分子、または０．５分子、または０．６分子、または０．７分子、または０．８分子、または０．９分子の水が存在し得る。
【0037】
したがって、本発明のさらなる実施形態（実施形態１．１０～実施形態１．１１）では、以下が提供される。
【0038】
１．１０ 結晶化度が５０％～１００％である、実施形態１．１から実施形態１．９のいずれか１つに記載の薬学的に許容可能な塩。
【0039】
１．１１ （ｂ）結晶化度が少なくとも５５％である、または、実施形態１．１０に記載の薬学的に許容可能な塩。
【0040】
１．１１Ａ 結晶化度が少なくとも６０％である、実施形態１．１１に記載の薬学的に許容可能な塩。
【0041】
１．１１Ｂ 結晶化度が少なくとも７０％である、実施形態１．１１に記載の薬学的に許容可能な塩。
【0042】
１．１１Ｃ 結晶化度が少なくとも８０％である、実施形態１．１１に記載の薬学的に許容可能な塩。
【0043】
１．１１Ｄ 結晶化度が少なくとも９０％である、実施形態１．１１に記載の薬学的に許容可能な塩。
【0044】
１．１１Ｅ 結晶化度が少なくとも９５％である、実施形態１．１１に記載の薬学的に許容可能な塩。
【0045】
１．１１Ｆ 結晶化度が少なくとも９８％である、実施形態１．１１に記載の薬学的に許容可能な塩。
【0046】
１．１１Ｇ 結晶化度が少なくとも９９％である、実施形態１．１１に記載の薬学的に許容可能な塩。
【0047】
１．１１Ｈ 結晶化度が少なくとも９９．５％である、実施形態１．１１に記載の薬学的に許容可能な塩。
【0048】
１．１１Ｉ 結晶化度が少なくとも９９．９％である、実施形態１．１１に記載の薬学的に許容可能な塩。
【0049】
１．１１Ｊ 結晶化度が１００％である、実施形態１．１１に記載の薬学的に許容可能な塩。
【0050】
粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）、単結晶Ｘ線回折、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、および熱重量分析（ＴＧＡ）をはじめとするいくつかの技術を用いて、結晶形の特徴を明らかにすることができる。動的蒸気収着（ＤＶＳ）などの重量蒸気収着研究（ＧＶＳ）によって、様々な湿度条件下での結晶の挙動を解析することができる。
【0051】
固体技術である粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）によって、化合物の結晶構造を解析することができる。ＸＲＰＤは、本明細書中（下記の実施例を参照）や「Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｘ－ｒａｙ Ｐｏｗｄｅｒ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ」、Ｒｏｎ ＪｅｎｋｉｎｓおよびＲｏｂｅｒｔ Ｌ．Ｓｎｙｄｅｒ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ社，ニューヨーク，１９９６）に記載されているような従来の方法に従って実施することができる。ＸＲＰＤ回折図形において（ランダムなバックグラウンドノイズとは対照的に）はっきりした（defined）ピークが存在することは、化合物がある程度の結晶性を有していることを示す。
【0052】
ある化合物の粉末Ｘ線パターンは、Ｘ線回折スペクトルの回折角（２θ）（本明細書において、°２Ｔｈまたは°２Ｔｈｅｔａともいう）パラメータと格子面間隔（ｄ）パラメータとによって特徴づけられる。これらは、ブラッグの方程式ｎλ＝２ｄＳｉｎθ（式中、ｎ＝１、λ＝Ｘ線放射の波長、ｄ＝格子面間隔、θ＝回折角）によって関係づけられる。
【0053】
したがって、さらなる実施形態（実施形態１．１２～実施形態１．４２）において、本発明は以下を提供する。
【0054】
１．１２ 図５～図２５、図２７、図２９、図３１、図３３、および図３５のいずれか１つに示すものと実質的に同様のＸＲＰＤスペクトル（但し、遊離塩基またはアモルファス塩形態のＸＲＰＤスペクトルは無視する。）を有する、実施形態１．１に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能な塩。
【0055】
１．１３ 図２５に示すものと実質的に同様のＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２、実施形態１．３、および実施形態１．３Ａのいずれか１つに記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＢ塩。
【0056】
１．１４ ２６．３±０．２°における主要な°２Ｔｈ（°２Ｔｈｅｔａ）ピーク（例えば、相対強度１００％である）を特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２、実施形態１．３、実施形態１．３Ａ、実施形態１．１２、および実施形態１．１３のいずれか１つに記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＢ塩。
【0057】
１．１４Ａ ６．９±０．２°および／または２６．４±０．２°および／または１１．８±０．２°および／または１７．９±０．２°における主要な°２Ｔｈ（°２Ｔｈｅｔａ）ピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２、実施形態１．３、実施形態１．３Ａ、実施形態１．１２、および実施形態１．１３のいずれか１つに記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＢ塩。
【0058】
１．１５ ６．９±０．２°、２６．４±０．２°、１１．８±０．２°、および１７．９±０．２°における主要な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．１４に記載の薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＢ塩。
【0059】
１．１６ １５．６±０．２°および／または９．４±０．２°および／または１５．８±０．２°および／または１７．７±０．２°および／または２６．８±０．２°における中間的な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．１４または実施形態１．１５に記載の薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＢ塩。
【0060】
１．１７ １５．６±０．２°、９．４±０．２°、１５．８±０．２°、１７．７±０．２°、および２６．８±０．２°における中間的な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．１６に記載の薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＢ塩。
【0061】
１．１８ 図２７に示すものと実質的に同様のＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＡ塩。
【0062】
１．１９ ６．６±０．２°および／または１７．３±０．２°および／または１１．１±０．２°における主要な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２または実施形態１．１８に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＡ塩。
【0063】
１．２０ ６．６±０．２°、１７．３±０．２°、および１１．１±０．２°における主要な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．１９に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＡ塩。
【0064】
１．２１ ２６．５±０．２°および／または９．２±０．２°および／または１４．３±０．２°および／または１８．５±０．２°および／または２５．９±０．２°および／または１１．５±０．２°および／または１６．９±０．２°および／または２０．５±０．２°および／または１５．６±０．２°における中間的な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．１９または実施形態１．２０に記載の薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＡ塩。
【0065】
１．２２ ２６．５±０．２°、９．２±０．２°、１４．３±０．２°、１８．５±０．２°、２５．９±０．２°、１１．５±０．２°、１６．９±０．２°、２０．５±０．２°、および１５．６±０．２°における中間的な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２１に記載の薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＡ塩。
【0066】
１．２３ 図２９に示すものと実質的に同様のＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＣ塩。
【0067】
１．２４ ６．７±０．２°および／または９．２±０．２°および／または１１．５±０．２°および／または１５．６±０．２°および／または１７．４±０．２°および／または１７．７±０．２°および／または２６．３±０．２°における主要な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２または実施形態１．２３に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＣ塩。
【0068】
１．２５ ６．７±０．２°、９．２±０．２°、１１．５±０．２°、１５．６±０．２°、１７．４±０．２°、１７．７±０．２°、および２６．３±０．２°における主要な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２４に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＣ塩。
【0069】
１．２６ １８．５±０．２°および／または１４．３±０．２°および／または２１．７±０．２°および／または１１．１±０．２°および／または２７．６±０．２°および／または１７．０±０．２°および／または２５．６±０．２°および／または１６．０±０．２°および／または２２．２±０．２°における中間的な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２４または実施形態１．２５に記載の薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＣ塩。
【0070】
１．２７ １８．５±０．２°、１４．３±０．２°、２１．７±０．２°、１１．１±０．２°、２７．６±０．２°、１７．０±０．２°、２５．６±０．２°、１６．０±０．２°、および２２．２±０．２°における中間的な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２６に記載の薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＣ塩。
【0071】
１．２８ 図３１に示すものと実質的に同様のＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．１２に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマロン酸パターンＢ塩。
【0072】
１．２９ １０．６±０．２°および／または６．５±０．２°における主要な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２または実施形態１．２８に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマロン酸パターンＢ塩。
【0073】
１．３０ １０．６±０．２°および６．５±０．２°における主要な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２９に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマロン酸パターンＢ塩。
【0074】
１．３１ １６．６±０．２°および／または１８．４±０．２°および／または１４．３±０．２°および／または２５．９±０．２°における中間的な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２９または実施形態１．３０に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマロン酸パターンＢ塩。
【0075】
１．３２ １６．６±０．２°、１８．４±０．２°、１４．３±０．２°、および２５．９±０．２°における中間的な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．３１に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマロン酸パターンＢ塩。
【0076】
１．３３ 図３３に示すものと実質的に同様のＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なトシル酸パターンＡ塩。
【0077】
１．３４ ９．１±０．２°および／または２２．２±０．２°および／または１４．９±０．２°および／または１３．８±０．２°における主要な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２または実施形態１．３３に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なトシル酸パターンＡ塩。
【0078】
１．３５ ９．１±０．２°、２２．２±０．２°、１４．９±０．２°および１３．８±０．２°における主要な°２Ｔｈピークを特徴とするスペクトルを有する、実施形態１．３４に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なトシル酸パターンＡ塩。
【0079】
１．３６ １１．７±０．２°および／または８．８±０．２°および／または１５．７±０．２°および／または１７．９±０．２°および／または１６．５±０．２°および／または２４．８±０．２°および／または２２．６±０．２°における中間的な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．３４または実施形態１．３５に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なトシル酸パターンＡ塩。
【0080】
１．３７ １１．７±０．２°、８．８±０．２°、１５．７±０．２°、１７．９±０．２°、１６．５±０．２°、２４．８±０．２°、および２２．６±０．２°における中間的な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．３６に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なトシル酸パターンＡ塩。
【0081】
１．３８ 図３５に示すものと実質的に同様のＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なベシル酸パターンＣ塩。
【0082】
１．３９ １５．５±０．２°および／または１４．７±０．２°および／または２５．４±０．２°および／または２０．９±０．２°および／または１８．１±０．２°および／または１１．２±０．２°および／または１３．３±０．２°および／または１６．１±０．２°における主要な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．２または実施形態１．３８に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なベシル酸パターンＣ塩。
【0083】
１．４０ １５．５±０．２°、１４．７±０．２°、２５．４±０．２°、２０．９±０．２°、１８．１±０．２°、１１．２±０．２°、１３．３±０．２°、および１６．１±０．２°における主要な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．３９に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なベシル酸パターンＣ塩。
【0084】
１．４１ ２４．１±０．２°および／または９．４±０．２°および／または２６．４±０．２°および／または１６．３±０．２°および／または１９．２±０．２°および／または２７．０±０．２°における中間的な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．３９または実施形態１．４０に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なベシル酸パターンＣ塩。
【0085】
１．４２ ２４．１±０．２°、９．４±０．２°、２６．４±０．２°、１６．３±０．２°、１９．２±０．２°、および２７．０±０．２°における中間的な°２Ｔｈピークを特徴とするＸＲＰＤスペクトルを有する、実施形態１．４１に記載の５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なベシル酸パターンＣ塩。
【0086】
上記の実施形態において、「主要な°２Ｔｈピーク」とは、相対強度（最大ピークに対する相対強度）が少なくとも５０％であるピークを意味し、「中間的なピーク」とは、相対強度が２０％～５０％であるピークを意味する。ピーク位置は、少なくとも小数第４位まで測定したが、小数第１位までと±０．２°で示している。ピーク位置は概ね相対強度の降順で記載している。
【0087】
本発明の塩は、それらの熱的挙動によって、特にＤＳＣ分析およびＴＧＡ分析によって、特徴を明らかにすることもできる。したがって、さらなる実施形態において、本発明は以下を提供する。
【0088】
１．４３ 図２６に示すものと実質的に同様のＤＳＣ特性およびＴＧＡ特性を有する、実施形態１．１３から実施形態１．１７のいずれか１つに規定される５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＢ塩。
【0089】
１．４４ 図２８に示すものと実質的に同様のＤＳＣ特性およびＴＧＡ特性を有する、実施形態１．１８から実施形態１．２２のいずれか１つに規定される５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＡ塩。
【0090】
１．４５ 図３０に示すものと実質的に同様のＤＳＣ特性およびＴＧＡ特性を有する、実施形態１．２３から実施形態１．２７のいずれか１つに規定される５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマレイン酸パターンＣ塩。
【0091】
１．４６ 図３２に示すものと実質的に同様のＤＳＣ特性およびＴＧＡ特性を有する、実施形態１．２８から実施形態１．３２のいずれか１つに規定される５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なマロン酸パターンＢ塩。
【0092】
１．４７ 図３４に示すものと実質的に同様のＤＳＣ特性およびＴＧＡ特性を有する、実施形態１．３３から実施形態１．３７のいずれか１つに規定される５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なトシル酸パターンＡ塩。
【0093】
１．４８ 図３６に示すものと実質的に同様のＤＳＣ特性およびＴＧＡ特性を有する、実施形態１．３８から実施形態１．４２のいずれか１つに規定される５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの薬学的に許容可能なベシル酸パターンＣ塩。
【0094】
上記および本明細書の他の箇所に定義および記載される５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの様々な塩の中でも、マレイン酸塩は好ましい塩である。
【0095】
マレイン酸塩の利点は、１つの熱力学的に好ましい安定した形態（パターンＢ）を有する結晶質であり、多形の傾向が低いことである。
【0096】
２５℃／６０％ＲＨと４０℃／７５％ＲＨで保存して２週間にわたって実施した安定性試験では、マレイン酸塩が自由流動固体として残り、潮解や凝集が起こった形跡がなく、多形形態の変化もなく、化学的安定性が良好であったことが示された。その後６ヶ月間にわたって収集したデータは、これらの初期の知見を裏付けるものであった。
【0097】
マレイン酸塩は、水への溶解性が遊離塩基よりも向上しており、生体関連（biorelevant）溶媒への溶解性を評価したところ胃液への溶解性も向上していた。
【0098】
（同位体）
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される塩は、１つ以上の同位体置換を含んでいてもよく、特定の元素への言及は、その範囲内に当該元素のすべての同位体を包含する。例えば、水素への言及は、その範囲内に１Ｈ、２Ｈ（Ｄ）、および３Ｈ（Ｔ）を包含する。同様に、炭素や酸素への言及は、それらの範囲内に１２Ｃ、１３Ｃ、および１４Ｃ、または１６Ｏおよび１８Ｏをそれぞれ包含する。
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される塩は、１つ以上の同位体置換を含んでいてもよく、特定の元素への言及は、その範囲内に当該元素のすべての同位体を包含する。例えば、水素への言及は、その範囲内に１Ｈ、２Ｈ（Ｄ）、および３Ｈ（Ｔ）を包含する。同様に、炭素や酸素への言及は、それらの範囲内に１２Ｃ、１３Ｃ、および１４Ｃ、または１６Ｏおよび１８Ｏをそれぞれ包含する。
【0099】
同位体は、放射性であっても非放射性であってもよい。本発明の一実施形態において、塩は放射性同位体を含まない。このような化合物は、治療における使用に好適である。しかし、別の実施形態において、塩は１つ以上の放射性同位体を含んでもよい。そのような放射性同位体を含む塩は、診断に関連して有用であり得る。
【0100】
（本発明の塩の調製方法）
本発明の薬学的に許容可能な塩は、後述の実施例に記載の方法により、化合物５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリル（式（１）の化合物の遊離塩基から調製することができる。式（１）の化合物は、国際特許出願第ＷＯ２０１５／２０３９０号の実施例６４、方法Ｌに記載の方法により、下記の反応スキーム１に示すように調製することができる。
本発明の薬学的に許容可能な塩は、後述の実施例に記載の方法により、化合物５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリル（式（１）の化合物の遊離塩基から調製することができる。式（１）の化合物は、国際特許出願第ＷＯ２０１５／２０３９０号の実施例６４、方法Ｌに記載の方法により、下記の反応スキーム１に示すように調製することができる。
【0101】
【化2】
【0102】
さらなる実施形態（実施形態２．１から実施形態２．１０）において、本発明は、以下の通り、式（１）の化合物の薬学的に許容可能な塩を形成する方法を提供する。
【0103】
２．１ 実施形態１．１または実施形態１．２に規定される薬学的に許容可能な塩の調製方法であって、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルをテトラヒドロフラン中に分散させて混合物を形成する工程と、混合物を４５℃～６５℃の範囲（例えば、５５℃～６５℃、特に約６０℃）の高温に加熱する工程と、必要量の酸を混合物に添加する工程と、混合物を定められた期間上記高温または上記高温付近に維持する工程と、混合物を冷却して薬学的に許容可能な塩を単離させる工程と、を含む方法。
【0104】
２．２ 上記酸が、マレイン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびマロン酸から選択される、実施形態２．１に記載の方法。
【0105】
２．３ 実施形態１．１または実施形態１．２に規定される薬学的に許容可能な塩の調製方法であって、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルをテトラヒドロフランとアセトニトリルの混合液（例えば、１：１混合液）中に分散させて混合物を形成する工程と、混合物を４５℃～５５℃の範囲（例えば、約５０℃）の高温に加熱する工程と、必要量の酸を混合物に添加する工程と、混合物を定められた期間上記高温または上記高温付近に維持する工程と、混合物を冷却して薬学的に許容可能な塩を単離させる工程と、を含む方法。
【0106】
２．４ 上記酸が、マレイン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、およびベンゼンスルホン酸から選択される、実施形態２．３に記載の方法。
【0107】
２．５ 実施形態１．１または実施形態１．２に規定される薬学的に許容可能な塩の調製方法であって、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルをテトラヒドロフランと水の混合液（例えば、この混合液は、テトラヒドロフランを７５％～９７％（ｖ／ｖ）、水を３％～２５％（ｖ／ｖ）含み、より好ましくは、テトラヒドロフランを約９５％（ｖ／ｖ）、水を約５（ｖ／ｖ）含む）中に分散させて混合物を形成する工程と、混合物を４５℃～６５℃の範囲（例えば、約５０℃～６０℃）の高温に加熱する工程と、必要量の酸を混合物に添加する工程と、混合物を定められた期間上記高温または上記高温付近に維持する工程と、混合物を冷却して薬学的に許容可能な塩を単離させる工程と、を含む方法。
【0108】
２．６ 上記酸が、マレイン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびマロン酸から選択される、実施形態２．５に記載の方法。
【0109】
２．７ 前記必要量の酸が、過剰の酸（例えば、最大１モル過剰）である、実施形態２．１に記載の方法。
【0110】
２．８ 上記酸がｐ－トルエンスルホン酸である、実施形態２．７に記載の方法。
【0111】
２．９ 上記必要量の酸が、過剰の酸（例えば、最大１モル過剰）である、実施形態２．５に記載の方法。
【0112】
２．１０ 上記酸が、ｐ－トルエンスルホン酸およびベンゼンスルホン酸から選択される、実施形態２．９に記載の方法。
【0113】
２．１１ 上記酸がマレイン酸であり、得られる薬学的に許容可能な塩がマレイン酸塩である、実施形態２．１、実施形態２．３、および実施形態２．５のいずれか１つに記載の方法。
【0114】
２．１２ 上記マレイン酸塩がマレイン酸パターンＡ塩である、実施形態２．１１に記載の方法。
【0115】
２．１３ 上記パターンＡマレイン酸塩を、相対湿度５０％超（例えば、相対湿度５１％～９０％または相対湿度５１％～８５％）の雰囲気中でコンディショニングすることにより、パターンＢマレイン酸塩に転換する工程をさらに含む、実施形態２．１３に記載の方法。
【0116】
２．１４ パターンＡマレイン酸塩を、相対湿度が６０％超であり温度が３５～４５℃の範囲内にある雰囲気中でコンディショニングする、実施形態２．１３に記載の方法。
【0117】
２．１５ パターンＡマレイン酸塩を、相対湿度７０％～８０％の雰囲気中でコンディショニングする、実施形態２．１３または実施形態２．１４に記載の方法。
【0118】
２．１６ パターンＡマレイン酸塩を、相対湿度約７５％、温度約４０℃の雰囲気中でコンディショニングする、実施形態２．１４に記載の方法。
【0119】
上記の方法を実行するための特定の条件セットは、後述の実施例に記載する通りである。
【0120】
（生物学的特性および治療における使用）
式（１）の化合物およびその塩は、Ｃｈｋ－１の強力な阻害剤であるため、単独で、または様々な化学療法剤、免疫療法剤、もしくは放射線との併用で、広範な増殖性疾患の治療に有益であることが予想される。
式（１）の化合物およびその塩は、Ｃｈｋ－１の強力な阻害剤であるため、単独で、または様々な化学療法剤、免疫療法剤、もしくは放射線との併用で、広範な増殖性疾患の治療に有益であることが予想される。
【0121】
したがって、さらなる実施形態（実施形態３．１から実施形態３．１０）において、本発明は以下を提供する。
【0122】
３．１ 医学または治療における使用のための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩。
【0123】
３．２ Ｃｈｋ－１キナーゼ阻害剤としての使用のための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩。
【0124】
３．３ がん等の増殖性疾患の治療における放射線療法または化学療法または免疫療法の治療効果の増強に使用するための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩。
【0125】
３．４ がん等の増殖性疾患の治療における使用のための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩。
【0126】
３．５ がん等の増殖性疾患の治療における放射線療法または化学療法または免疫療法の治療効果を増強するための医薬の製造のための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩の使用。
【0127】
３．６ がん等の増殖性疾患の治療のための医薬の製造のための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩の使用。
【0128】
３．７ がん等の増殖性疾患の予防または治療方法であって、放射線療法、免疫療法、または化学療法と組み合わせて、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩を患者に投与する工程を含む方法。
【0129】
３．８ がん等の増殖性疾患の予防または治療方法であって、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩を患者に投与する工程を含む方法。
【0130】
３．９ 上記がんが、癌腫、例えば、膀胱、脳、乳房、結腸、腎臓、表皮、肝臓、肺、食道、胆嚢、卵巣、膵臓、胃、子宮頸部、甲状腺、前立腺、胃腸管系、または皮膚の癌腫；白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、またはバーキットリンパ腫などの造血器腫瘍；骨髄系の造血器腫瘍、例えば、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、または前骨髄救性白血病；甲状腺濾胞がん；間葉起源の腫瘍、例えば、線維肉腫または横紋筋肉腫；中枢神経系または末梢神経系の腫瘍、例えば、星細胞腫、神経芽腫、神経膠腫、髄芽腫、または神経鞘腫；黒色腫；精上皮腫；奇形がん；骨肉腫；色素性乾皮症；角化棘細胞腫；甲状腺濾胞がん；ユーイング肉腫またはカポジ肉腫から選択される、実施形態３．３から実施形態３．８のいずれか１つに規定される、使用のための薬学的に許容可能な塩、使用、または方法。
【0131】
３．１０ 上記がんが、乳がん、結腸がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、神経膠腫、ユーイング肉腫、リンパ腫（例えば、マントル細胞リンパ腫）、髄芽腫、および白血病から選択される、実施形態３．９に記載の使用のための薬学的に許容可能な塩、使用、または方法。
【0132】
また、本明細書に記載される式（１）の薬学的に許容可能な塩は、以下の治療に有用であり得ると考えられる。
（ａ）ＭｙｃやＣＣＮＥ１をはじめとするがん遺伝子によって駆動されるがん；
（ｂ）ＲＡＤ１７（例えば、ＲＡＤ１７変異腫瘍）、ＲＡＤ５０、ＴＰ５３、またはＡＴＭに欠損が見られるがん等の、細胞周期またはＤＮＡ損傷修復経路の調節が解除されているがん（例えば、変異（例えばｐ５３の変異）によってＧ１／Ｓ期ＤＮＡ損傷チェックポイントが失われたがん等の、ＤＮＡ修復機構の欠陥や細胞周期の欠陥がある腫瘍）、あるいはファンコニ貧血；および
（ｃ）Ｃｈｋ１またはＡＴＲの増幅など、高レベルの複製ストレスを伴うがん。
（ａ）ＭｙｃやＣＣＮＥ１をはじめとするがん遺伝子によって駆動されるがん；
（ｂ）ＲＡＤ１７（例えば、ＲＡＤ１７変異腫瘍）、ＲＡＤ５０、ＴＰ５３、またはＡＴＭに欠損が見られるがん等の、細胞周期またはＤＮＡ損傷修復経路の調節が解除されているがん（例えば、変異（例えばｐ５３の変異）によってＧ１／Ｓ期ＤＮＡ損傷チェックポイントが失われたがん等の、ＤＮＡ修復機構の欠陥や細胞周期の欠陥がある腫瘍）、あるいはファンコニ貧血；および
（ｃ）Ｃｈｋ１またはＡＴＲの増幅など、高レベルの複製ストレスを伴うがん。
【0133】
したがって、さらなる実施形態（実施形態３．１１から実施形態３．２３）において、本発明は以下を提供する。
【0134】
３．１１ 上記がんが、ＤＮＡ修復機構の欠陥、細胞周期の欠陥、または高レベルの複製ストレスを特徴とするものである、実施形態３．３から実施形態３．１０のいずれか１つに規定される使用のための薬学的に許容可能な塩、使用、または方法。
【0135】
３．１２ 上記がんがｐ５３陰性腫瘍またはｐ５３変異腫瘍である、実施形態３．１１に記載の使用のための薬学的に許容可能な塩、使用、または方法。
【0136】
３．１３ 上記がんが、ＭＹＣがん遺伝子によって駆動されるがんである、実施形態３．３から実施形態３．１０のいずれか１つに規定される使用のための薬学的に許容可能な塩、使用、または方法。
【0137】
３．１４ 上記ＭＹＣがん遺伝子によって駆動されるがんが、Ｂ細胞リンパ腫、白血病、神経芽腫、髄芽腫、乳がん、または肺がんである、実施形態３．１３に記載の使用のための薬学的に許容可能な塩、使用、または方法。
【0138】
３．１５ ｐ５３陰性腫瘍またはｐ５３変異腫瘍（例えば、乳がん、結腸がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、神経膠腫、および白血病から選択されるがん）の患者の治療において放射線療法、免疫療法、または化学療法と組み合わせて使用するための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩。
【0139】
３．１６ 上記治療が、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩の投与に加えて、シタラビン、エトポシド、ゲムシタビン、シクロホスファミド、Ｗｅｅ１阻害剤、およびＳＮ－３８から選択される化学療法剤の患者への投与を含む、実施形態３．３から実施形態３．１５のいずれか１つに記載の使用のための薬学的に許容可能な塩。
【0140】
３．１７ ＤＮＡ修復機構の欠陥、細胞周期の欠陥、または高レベルの複製ストレスを特徴とするがんの患者の治療のための医薬の製造のための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩の使用。
【0141】
３．１８ 上記がんが、ｐ５３陰性腫瘍またはｐ５３変異腫瘍である、実施形態３．１７に記載の使用。
【0142】
３．１９ ＤＮＡ修復機構の欠陥、細胞周期の欠陥、または高レベルの複製ストレスを特徴とするがんの患者（例えば、ヒト患者）の治療方法であって、治療上有効量の実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩を患者に投与する工程を含む方法。
【0143】
３．２０ 上記がんが、ｐ５３陰性腫瘍またはｐ５３変異腫瘍である、実施形態３．１９に記載の方法。
【0144】
３．２１ 上記がんが、ＲＡＤ１７変異腫瘍またはＡＴＭ欠損ＲＡＤ５０変異腫瘍である、実施形態３．３から実施形態３．１０のいずれか１つに規定される使用のための薬学的に許容可能な塩、使用、または方法。
【0145】
３．２１ ファンコニ貧血の治療における使用のための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩。
【0146】
３．２２ ファンコニ貧血の治療のための医薬の製造のための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩の使用。
【0147】
３．２３ ファンコニ貧血の治療を必要とする対象（例えば、ヒト対象）におけるファンコニ貧血の治療方法であって、治療上有効量の実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩を対象に投与する工程を含む方法。
【0148】
本発明のＣｈｋ－１阻害剤塩は、単独で使用してもよく、多剤耐性がんに罹患している対象を治療するためにＤＮＡ損傷性の抗がん剤および／または放射線療法および／または免疫療法と組み合わせて使用してもよい。がんがある薬剤に対して耐性を有するとみなされるのは、腫瘍が最初に当該薬剤に応答してから当該薬剤による治療中に腫瘍成長速度が正常に戻った場合である。腫瘍が「薬剤に応答する」とみなされるのは、腫瘍量（tumour mass）の減少または腫瘍成長速度の減少を示す場合である。
【0149】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩の投与に先立って、患者が罹患しているかまたは罹患している可能性があるがんが、Ｃｈｋ－１キナーゼ阻害剤化合物または化学療法剤（ＤＮＡ損傷剤など）とＣｈｋ－１キナーゼ阻害剤化合物との組み合わせによる治療に対して感受性を有するがんであるかどうかを判定するために、患者をスクリーニングしてもよい。
【0150】
より詳細には、患者が罹患しているかまたは罹患している可能性があるがんが、ＤＮＡ修復機構の欠陥、細胞周期の欠陥、または高レベルの複製ストレス、例えばｐ５３変異による細胞周期の欠陥を特徴とするがんであるかどうか、あるいは、ｐ５３陰性がんであるかどうかを判定するために、患者をスクリーニングしてもよい。
【0151】
ｐ５３変異またはｐ５３の欠如を特徴とするがんは、例えば、Ａｌｌｒｅｄら，Ｊ． Ｎａｔ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｖｏｌ．８５，Ｎｏ．３，２００－２０６（１９９３）に記載されている方法や、本出願の導入部で挙げた論文に記載されている方法によって、同定することができる。例えば、免疫染色法などの免疫組織化学的方法によってｐ５３タンパクを検出し得る。
【0152】
診断試験は、典型的には、腫瘍生検試料、血液試料（脱落した腫瘍細胞の単離および濃縮）、便生検、痰、染色体分析、胸水、腹水、または尿から選択される生体試料に対して実施される。
【0153】
ｐ５３以外に、ＲＡＤ１７、ＲＡＤ５０、およびファンコニ貧血相補群のメンバーなどの他のＤＮＡ修復因子の変異により、単独または化学療法との併用でのＣｈｋ１阻害剤に対する応答を予測し得る。これらのＤＮＡ修復経路に変異を含むがんは、腫瘍生検組織または血中循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）のＤＮＡ配列解析によって同定してもよく、あるいはファンコニ貧血の場合は、Ｄｕａｎら，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．４，１－８（２０１４）に記載されているように、ＦＡＮＣＤ２に対する抗体を用いて腫瘍生検標本におけるＤＮＡフォーカス形成を評価することによって同定してもよい。
【0154】
このように、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩は、スクリーニングを受け（例えば、患者から採取された１つ以上の生体試料を試験することによって）、ｐ５３変異を特徴とするがんまたはｐ５３陰性がん、あるいは、ＲＡＤ１７変異もしくはＲＡＤ５０変異またはファンコニ貧血相補群のメンバーの変異を含むがんに罹患していることが判明した患者の部分母集団のメンバーを治療するために使用され得る。
【0155】
したがって、さらなる実施形態（実施形態３．２４から実施形態３．３０）において、本発明は以下を提供する。
【0156】
３．２４ スクリーニングを受け、Ｃｈｋ－１キナーゼ阻害剤化合物または化学療法剤（ＤＮＡ損傷剤など）とＣｈｋ－１キナーゼ阻害剤化合物との組み合わせによる治療に対して感受性を有するであろうがんに罹患していると判定された対象（例えば、ヒト対象）におけるがんの治療における使用のための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩。
【0157】
３．２５ スクリーニングを受け、ＤＮＡ修復機構の欠陥もしくは細胞周期の欠陥、例えばｐ５３変異による細胞周期の欠陥を特徴とするかまたはｐ５３陰性がんであるがんに罹患していると判定された対象（例えば、ヒト対象）におけるがんの治療における使用のための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩。
【0158】
３．２６ スクリーニングを受け、ｐ５３変異を特徴とするがんまたはｐ５３陰性がん、あるいは、ＲＡＤ１７変異もしくはＲＡＤ５０変異またはファンコニ貧血相補群のメンバーの変異を含むがんに罹患していると判定された対象（例えば、ヒト対象）におけるがんの治療における使用のための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩。
【0159】
３．２７ 実施形態３．２４から実施形態３．２６のいずれか１つに規定される使用のための医薬の製造のための、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩の使用。
【0160】
３．２８ スクリーニングを受け、Ｃｈｋ－１キナーゼ阻害剤化合物または化学療法剤（ＤＮＡ損傷剤など）とＣｈｋ－１キナーゼ阻害剤化合物との組み合わせによる治療に対して感受性を有するであろうがんに罹患していると判定された対象（例えば、ヒト対象）におけるがんの治療方法であって、治療上有効量の実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩、および必要に応じて化学療法剤（ＤＮＡ損傷剤など）、を投与することを含む方法。
【0161】
３．２９ スクリーニングを受け、ＤＮＡ修復機構の欠陥もしくは細胞周期の欠陥、例えばｐ５３変異による細胞周期の欠陥を特徴とするかまたはｐ５３陰性がんであるがんに罹患していると判定された対象（例えば、ヒト対象）におけるがんの治療方法であって、治療上有効量の実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩を投与することを含む方法。
【0162】
３．３０ スクリーニングを受け、ｐ５３変異を特徴とするがんもしくはｐ５３陰性がん、あるいは、ＲＡＤ１７変異もしくはＲＡＤ５０変異またはファンコニ貧血相補群のメンバーの変異を含むがんに罹患していると判定された対象（例えば、ヒト対象）におけるがんの治療方法であって、治療上有効量の実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩を対象に投与する工程を含む方法。
【0163】
（併用療法）
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩は、単独で、あるいは化学療法剤（特に、ＤＮＡ損傷剤）、放射線療法、または免疫療法との併用療法で、増殖性疾患の様々な病状または病態の予防または治療に有用であると考えられる。このような病状および病態の例は、上記に記載されている。
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩は、単独で、あるいは化学療法剤（特に、ＤＮＡ損傷剤）、放射線療法、または免疫療法との併用療法で、増殖性疾患の様々な病状または病態の予防または治療に有用であると考えられる。このような病状および病態の例は、上記に記載されている。
【0164】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩は、単独で投与されるかＤＮＡ損傷剤やその他の抗がん剤および抗がん療法と組み合わせて投与されるかにかかわらず、一般的には、そのような投与を必要とする対象、例えばヒトまたは動物の患者、好ましくはヒトに投与される。
【0165】
本発明の別の実施形態である実施形態４．１によると、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩と、別の化学療法剤、例えば抗がん剤との組み合わせが提供される。
【0166】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩と共投与され得る化学療法剤として、例えば、以下が挙げられる：
・トポイソメラーゼＩ阻害剤
・代謝拮抗物質
・チューブリン標的薬
・ＤＮＡ結合剤およびトポイソメラーゼＩＩ阻害剤
・アルキル化剤
・モノクローナル抗体
・抗ホルモン剤
・シグナル伝達阻害剤
・プロテアソーム阻害剤
・ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ
・サイトカインおよびレチノイド
・低酸素誘発性ＤＮＡ損傷剤（例えば、チラパザミン、ＴＨ－３０２）。
・トポイソメラーゼＩ阻害剤
・代謝拮抗物質
・チューブリン標的薬
・ＤＮＡ結合剤およびトポイソメラーゼＩＩ阻害剤
・アルキル化剤
・モノクローナル抗体
・抗ホルモン剤
・シグナル伝達阻害剤
・プロテアソーム阻害剤
・ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ
・サイトカインおよびレチノイド
・低酸素誘発性ＤＮＡ損傷剤（例えば、チラパザミン、ＴＨ－３０２）。
【0167】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩と組み合わせて投与され得る化学療法剤の特定の例として、以下が挙げられる。
メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、およびクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード類；
カルムスチン、ロムスチン、およびセムスチンなどのニトロソウレア類；
トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミド、およびヘキサメチルメラミンなどのエチレンイミン／メチルメラミン化合物；
ブスルファンなどのアルキルスルホン酸塩類；
ダカルバジンなどのトリアジン類；
葉酸塩、メトトレキサート、トリメトレキサート、５－フルオロウラシル、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド、５－アザシチジン、２，２’－ジフルオロデオキシシチジン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、アザチオプリン、２’－デオキシコホルマイシン、エリスロヒドロキシノニル－アデニン、リン酸フルダラビン、および２－クロロデオキシアデノシンなどの代謝拮抗物質；
カンプトテシン、トポテカン、およびイリノテカンなどのＩ型トポイソメラーゼ阻害剤；
エピポドフィロトキシン類（例えば、エトポシドおよびテニポシド）などのＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤；
パクリタキセル、タキソテール、ビンカアルカロイド類（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン）、およびエストラムスチン（例えば、リン酸エストラムスチン）などの抗有糸分裂剤；
アクチノマイシンＤ、ダウノマイシン（ルビドマイシン）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、およびダクチノマイシンなどの抗生物質；
Ｌ－アスパラギナーゼなどの酵素；
インターフェロン（α、β、γ）、インターロイキン－２Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦなどの、サイトカイン類および生物学的応答調節剤：
レチノイン酸誘導体（例えば、ベキサロテン）などのレチノイド類；
メトロニダゾール、ミソニダゾール、デスメチルミソニダゾール、ピモニダゾール、エタニダゾール、ニモダゾール、ニコチンアミド、５－ブロモデオキシウリジン、５－ヨードデオキシウリジン、およびブロモデオキシシチジンなどの放射線増感剤；
シスプラチン、カルボプラチン、スピロプラチン、イプロプラチン、オンナプラチン（onnaplatin）、テトラプラチン、およびオキサリプラチンなどの白金化合物；
ミトキサントロンなどのアントラセンジオン類；
ヒドロキシ尿素などの尿素類；
Ｎ－メチルヒドラジンおよびプロカルバジンなどのヒドラジン誘導体；
ミトタンおよびアミノグルテチミドなどの副腎皮質抑制剤；
プレドニゾン、デキサメタゾン、およびアミノグルテチミドなどの、副腎皮質ステロイド類および拮抗薬；
ヒドロキシプロゲステロン（例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン）、メドロキシプロゲステロン（例えば、酢酸メドロキシプロゲステロン）、およびメゲストロール（例えば、酢酸メゲストロール）などのプロゲスチン類；
ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオールなどのエストロゲン類；
タモキシフェンなどの抗エストロゲン剤；
テストステロン（例えば、プロピオン酸テストステロン）およびフルオキシメステロンなどのアンドロゲン類；
フルタミドおよびロイプロリドなどの抗アンドロゲン剤；
フルタミドなどの非ステロイド性抗アンドロゲン剤；ならびに
ＰＡＲＰ阻害剤［例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．；６６：（１６）に開示されているもの］、Ｍｅｋ阻害剤［例えば、Ｂｌｏｏｄ． ２００８；１１２（６）：２４３９－２４４９に開示されているもの］、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤［例えば、Ｂｌｏｏｄ．２００５年２月１５日；１０５（４）：１７０６－１６に開示されているもの］、ｗｅｅ１阻害剤［例えば、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ２０１４，９９（４）：６８に開示されているもの］、ラパマイシン、およびＳｒｃ阻害剤［例えば、Ｂｌｏｏｄ． ２０１１年２月１０日；１１７（６）：１９４７－５７に開示されているもの］などのシグナル伝達阻害剤。
抗ＰＤ－Ｌ１［例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１９（５）：６４６に開示されているもの］などの免疫療法剤
メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、およびクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード類；
カルムスチン、ロムスチン、およびセムスチンなどのニトロソウレア類；
トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミド、およびヘキサメチルメラミンなどのエチレンイミン／メチルメラミン化合物；
ブスルファンなどのアルキルスルホン酸塩類；
ダカルバジンなどのトリアジン類；
葉酸塩、メトトレキサート、トリメトレキサート、５－フルオロウラシル、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド、５－アザシチジン、２，２’－ジフルオロデオキシシチジン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、アザチオプリン、２’－デオキシコホルマイシン、エリスロヒドロキシノニル－アデニン、リン酸フルダラビン、および２－クロロデオキシアデノシンなどの代謝拮抗物質；
カンプトテシン、トポテカン、およびイリノテカンなどのＩ型トポイソメラーゼ阻害剤；
エピポドフィロトキシン類（例えば、エトポシドおよびテニポシド）などのＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤；
パクリタキセル、タキソテール、ビンカアルカロイド類（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン）、およびエストラムスチン（例えば、リン酸エストラムスチン）などの抗有糸分裂剤；
アクチノマイシンＤ、ダウノマイシン（ルビドマイシン）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、およびダクチノマイシンなどの抗生物質；
Ｌ－アスパラギナーゼなどの酵素；
インターフェロン（α、β、γ）、インターロイキン－２Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦなどの、サイトカイン類および生物学的応答調節剤：
レチノイン酸誘導体（例えば、ベキサロテン）などのレチノイド類；
メトロニダゾール、ミソニダゾール、デスメチルミソニダゾール、ピモニダゾール、エタニダゾール、ニモダゾール、ニコチンアミド、５－ブロモデオキシウリジン、５－ヨードデオキシウリジン、およびブロモデオキシシチジンなどの放射線増感剤；
シスプラチン、カルボプラチン、スピロプラチン、イプロプラチン、オンナプラチン（onnaplatin）、テトラプラチン、およびオキサリプラチンなどの白金化合物；
ミトキサントロンなどのアントラセンジオン類；
ヒドロキシ尿素などの尿素類；
Ｎ－メチルヒドラジンおよびプロカルバジンなどのヒドラジン誘導体；
ミトタンおよびアミノグルテチミドなどの副腎皮質抑制剤；
プレドニゾン、デキサメタゾン、およびアミノグルテチミドなどの、副腎皮質ステロイド類および拮抗薬；
ヒドロキシプロゲステロン（例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン）、メドロキシプロゲステロン（例えば、酢酸メドロキシプロゲステロン）、およびメゲストロール（例えば、酢酸メゲストロール）などのプロゲスチン類；
ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオールなどのエストロゲン類；
タモキシフェンなどの抗エストロゲン剤；
テストステロン（例えば、プロピオン酸テストステロン）およびフルオキシメステロンなどのアンドロゲン類；
フルタミドおよびロイプロリドなどの抗アンドロゲン剤；
フルタミドなどの非ステロイド性抗アンドロゲン剤；ならびに
ＰＡＲＰ阻害剤［例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．；６６：（１６）に開示されているもの］、Ｍｅｋ阻害剤［例えば、Ｂｌｏｏｄ． ２００８；１１２（６）：２４３９－２４４９に開示されているもの］、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤［例えば、Ｂｌｏｏｄ．２００５年２月１５日；１０５（４）：１７０６－１６に開示されているもの］、ｗｅｅ１阻害剤［例えば、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ２０１４，９９（４）：６８に開示されているもの］、ラパマイシン、およびＳｒｃ阻害剤［例えば、Ｂｌｏｏｄ． ２０１１年２月１０日；１１７（６）：１９４７－５７に開示されているもの］などのシグナル伝達阻害剤。
抗ＰＤ－Ｌ１［例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１９（５）：６４６に開示されているもの］などの免疫療法剤
【0168】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩と組み合わせて使用され得る化学療法剤として、例えば、Ｂｌａｓｉｎａら，Ｍｏｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００８，７（８），２３９４－２４０４、Ａｓｈｗｅｌｌら，Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００８，１４（１３），４０３２－４０３７、Ａｓｈｗｅｌｌら，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔｉｇ． Ｄｒｕｇｓ， ２００８，１７（９），１３３１－１３４０、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１１年２月，Ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．２、およびＣｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ；１６（２） ２０１０年１月１５日に記載されている化学療法剤が挙げられる。
【0169】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩と組み合わせて使用され得る化学療法剤の特定の例としては、代謝拮抗物質（カペシタビン、シタラビン、フルダラビン、ゲムシタビン、およびペメトレキセドなど）、トポイソメラーゼＩ阻害剤（ＳＮ３８、トポテカン、イリノテカンなど）、白金化合物（カルボプラチン、オキサロプラチン（oxaloplatin）、およびシスプラチンなど）、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（ダウノルビシン、ドキソルビシン、およびエトポシドなど）、チミジル酸合成酵素阻害剤（５－フルオロウラシルなど）、有糸分裂阻害剤（ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、およびビノレルビンなど）、ならびにアルキル化剤（マイトマイシンＣなど）が挙げられる。
【0170】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩と組み合わせて使用され得るさらなる一連の化学療法剤は、複製フォークの停止を誘導する薬剤（前掲のＡｓｈｗｅｌｌら，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．を参照）を含み、このような化合物として、例えば、ゲムシタビン、５－フルオロウラシル、およびヒドロキシ尿素が挙げられる。
【0171】
（ポソロジー）
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩または実施形態４．１に規定される治療のための組み合わせは、それを必要とする患者（例えば、ヒトまたは動物の患者）に、所望の治療効果、例えば、上記の実施形態３．１から実施形態３．３０で述べた効果を達成するのに十分な量で投与される。
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩または実施形態４．１に規定される治療のための組み合わせは、それを必要とする患者（例えば、ヒトまたは動物の患者）に、所望の治療効果、例えば、上記の実施形態３．１から実施形態３．３０で述べた効果を達成するのに十分な量で投与される。
【0172】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩または実施形態４．１に規定される治療のための組み合わせは、一般に、そのような投与を必要とする対象、例えばヒトまたは動物の患者、好ましくはヒトに投与される。
【0173】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩または実施形態４．１に規定される治療のための組み合わせは、典型的には、治療的または予防的に有用であり、一般に無毒である量で投与される。しかし、ある特定の状況では、本発明の薬学的に許容可能な塩または実施形態４．１に規定される治療のための組み合わせを投与する利点が、毒性作用または副作用という欠点を上回る場合があり、その場合、本発明の薬学的に許容可能な塩または実施形態４．１に規定される治療のための組み合わせをある程度の毒性に関連する量で投与することが望ましいと考えられることもある。
【0174】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩、および、上記に説明され規定される（例えば、実施形態４．１のように）化学療法剤または放射線療法との組み合わせは、有益な治療効果を維持するために長期にわたって投与されてもよく、短期間だけ投与されてもよい。また、周期的に投与されても連続的に投与されてもよい。
【0175】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩または実施形態４．１に規定される治療のための組み合わせは、単独で（単独療法において）、または１つ以上の化学療法剤もしくは放射線療法と組み合わせて、有効量、すなわち、所望の治療効果をもたらすのに有効な量で投与される。例えば、「有効量」は、がんに罹患している対象に単独でまたはＤＮＡ損傷剤もしくは他の抗がん剤と一緒に投与された場合に、腫瘍の成長を鈍化させ、疾患の症状を改善し、および／または寿命を延長する、薬学的に許容可能な塩の量であり得る。より詳細には、放射線療法、またはＤＮＡ損傷剤もしくは他の抗がん剤と組み合わせて使用される場合の本発明の薬学的に許容可能な塩の有効量は、薬学的に許容可能な塩がＤＮＡ損傷性抗がん剤および／または放射線療法と共投与された場合に、ＤＮＡ損傷性抗がん剤および／または放射線療法が単独投与された場合と比べて、より大きな応答が得られる量である。併用療法として使用される場合、「有効量」のＤＮＡ損傷剤および／または「有効な」放射線量が対象に投与されるが、これは、抗がん効果が正常に得られる量である。実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩とＤＮＡ損傷性抗がん剤とは、同じ医薬組成物の一部として対象に共投与されてもよく、別々の医薬組成物として対象に共投与されてもよい。
【0176】
別々の医薬組成物として投与される場合、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩とＤＮＡ損傷性抗がん剤（および／または放射線療法）とは、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩による増強効果が保持される限りにおいて、同時に投与されてもよく、それぞれ異なる時期に投与されてもよい。
【0177】
１つの実施形態において、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩は、ＤＮＡ損傷性抗がん剤の投与前（例えば、最大８時間前、最大１２時間前、または最大１日前）に投与される。
【0178】
別の実施形態において、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩は、ＤＮＡ損傷性抗がん剤の投与後（例えば、最大８時間後、最大１２時間後、最大２４時間後、最大３０時間後、または最大４８時間後）に投与される。別の実施形態においては、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩の１回目の投与がＤＮＡ損傷性抗がん剤投与の１日後に行われ、該化合物の２回目の投与がＤＮＡ損傷性抗がん剤投与の２日後に行われる。
【0179】
さらなる実施形態では、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩の１回目の投与がＤＮＡ損傷性抗がん剤投与の１日後に行われ、２回目の投与がＤＮＡ損傷性抗がん剤投与の２日後に行われ、３回目の投与がＤＮＡ損傷性抗がん剤投与の３日後に行われる。
【0180】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩とＤＮＡ損傷性抗がん剤との投与を含む特定の投与計画は、ＷＯ２０１０／１１８３９０（Ａｒｒａｙ ＢｉｏＰｈａｒｍａ社）に記載の通りであってもよく、この特許文献の内容を参照により本明細書に援用される。
【0181】
対象に投与される本発明の薬学的に許容可能な塩の量と（併用療法の場合は）ＤＮＡ損傷性抗がん剤の量および放射線量は、ＤＮＡ損傷性抗がん剤の性質および効力と、疾患または病態の種類および重症度と、全身の健康、年齢、性別、体重、および薬剤耐性などの対象の特性とに依存する。当業者は、これらおよびその他の要因に応じて適切な用量を決定することができるであろう。一般的に使用されている抗がん剤および放射線療法の有効用量は、当業者によく知られている。
【0182】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩の典型的な１日投与量は、単独療法で単独投与されるかＤＮＡ損傷性抗がん剤と組み合わせて投与されるかにかかわらず、体重１キログラムあたり１００ピコグラム～１００ミリグラム、より典型的には、体重１キログラムあたり５ナノグラム～２５ミリグラム、より通常には、体重１キログラムあたり、１０ナノグラム～１５ミリグラム（例えば、１０ナノグラム～１０ミリグラム、より典型的には、１キログラムあたり１マイクログラム～１キログラムあたり２０ミリグラム、例えば、１キログラムあたり１マイクログラム～１０ミリグラム）の範囲であり得る。但し、必要に応じて、より高い投与量またはより低い投与量を投与してもよい。上記化合物は、毎日投与してもよく、例えば２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、７日ごと、１０日ごと、１４日ごと、２１日ごと、または２８日ごとに反復投与してもよい。
【0183】
しかし、最終的には、薬学的に許容可能な塩の投与量と使用される組成物の種類は、治療中の疾患または生理的状態に見合うものであり、医師の裁量に委ねられる。
【0184】
（医薬製剤）
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩および実施形態４．１に規定される治療のための組み合わせは、典型的には、医薬組成物の形態で患者に投与される。したがって、本発明の別の実施形態（実施形態５．１）において、本発明は、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な賦形剤と、必要に応じてさらなる化学療法剤とを含む医薬組成物を提供する。
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩および実施形態４．１に規定される治療のための組み合わせは、典型的には、医薬組成物の形態で患者に投与される。したがって、本発明の別の実施形態（実施形態５．１）において、本発明は、実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な賦形剤と、必要に応じてさらなる化学療法剤とを含む医薬組成物を提供する。
【0185】
さらなる実施形態では、以下が提供される。
【0186】
５．２ 約１％（ｗ／ｗ）から約９５％（ｗ／ｗ）までの実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩と、９９％（ｗ／ｗ）から５％（ｗ／ｗ）までの薬学的に許容可能な賦形剤または賦形剤の組み合わせと、必要に応じて１種以上のさらなる治療的に活性な成分とを含む、実施形態５．１に記載の医薬組成物。
【0187】
５．３ 約５％（ｗ／ｗ）から約９０％（ｗ／ｗ）までの実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩の組成物と、９５％（ｗ／ｗ）から１０％までの製薬上な賦形剤または賦形剤の組み合わせと、必要に応じて１種以上のさらなる治療的に活性な成分とを含む、実施形態５．２に記載の医薬組成物。
【0188】
５．４ 約１０％（ｗ／ｗ）から約９０％（ｗ／ｗ）までの実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩と、９０％（ｗ／ｗ）から１０％までの製薬上な賦形剤または賦形剤の組み合わせとを含む、実施形態５．３に記載の医薬組成物。
【0189】
５．５ 約２０％（ｗ／ｗ）から約９０％（ｗ／ｗ）までの実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩と、８０％（ｗ／ｗ）から１０％までの製薬上な賦形剤または賦形剤の組み合わせとを含む、実施形態５．４に記載の医薬組成物。
【0190】
５．６ 約２５％（ｗ／ｗ）から約８０％（ｗ／ｗ）までの実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩と、７５％（ｗ／ｗ）から２０％までの製薬上な賦形剤または賦形剤の組み合わせとを含む、実施形態５．５に記載の医薬組成物。
【0191】
本発明の医薬組成物は、経口投与、非経口投与、局所投与、鼻腔内投与、気管支内投与、眼投与、耳投与、直腸投与、膣内投与、または経皮投与に適した任意の剤形とすることができる。組成物が非経口投与を目的としたものである場合は、静脈内投与用、筋肉内投与用、腹腔内投与用、皮下投与用、または、注射、注入、もしくは他の送達手段による標的臓器もしくは標的組織への直接送達用に製剤化することができる。
【0192】
経口投与に適した医薬剤形には、錠剤、カプセル剤、カプレット、丸剤、トローチ剤（lozenges）、シロップ剤、溶液、スプレー剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤および懸濁剤、舌下錠、スプレー剤、オブラート（wafers）、またはパッチ剤およびバッカルパッチ剤が含まれる。
【0193】
したがって、さらなる実施形態において、本発明は以下を提供する。
【0194】
５．７ 経口投与に適している、実施形態５．１から実施形態５．６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0195】
５．８ 錠剤、カプセル剤、カプレット、丸剤、トローチ剤、シロップ剤、溶液、スプレー剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤および懸濁剤、舌下錠、スプレー剤、オブラート、またはパッチ剤およびバッカルパッチ剤から選択される、実施形態５．７に記載の医薬組成物。
【0196】
５．９ 錠剤およびカプセル剤から選択される、実施形態５．８に記載の医薬組成物。
【0197】
５．１０ 非経口投与に適している、実施形態５．１から実施形態５．６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0198】
５．１１ 静脈内投与用、筋肉内投与用、腹腔内投与用、皮下投与用、または、注射、注入、もしくは他の送達手段による標的臓器もしくは標的組織への直接送達用に製剤化された、実施形態５．１０に記載の医薬組成物。
【0199】
５．１２ 注射または注入用の溶液または懸濁剤である、実施形態５．１１に記載の医薬組成物。
【0200】
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩を含有する医薬組成物（例えば、実施形態５．１から実施形態５．１２のいずれか１つに規定されるもの）は、公知の技術に従って製剤化することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ社，イーストン，ペンシルベニア州，米国を参照されたい。
【0201】
したがって、（実施形態５．９のような）錠剤組成物は、単位用量の実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つに規定される薬学的に許容可能な塩を、例えばラクトース、スクロース、ソルビトール、もしくはマンニトールといった糖もしくは糖アルコールなどの不活性な希釈剤もしくは担体、および／または、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、タルク、炭酸カルシウムなどの非糖由来の希釈剤、または、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロースもしくはその誘導体、および、コーンスターチなどの澱粉と共に含有し得る。錠剤は、ポリビニルピロリドンなどの結合剤および造粒剤、崩壊剤（例えば、架橋カルボキシメチルセルロースなどの膨潤性架橋ポリマー）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸塩）、防腐剤（例えば、パラベン）、抗酸化剤（例えば、ＢＨＴ）、緩衝剤（例えば、リン酸緩衝液もしくはクエン酸緩衝液）、ならびにクエン酸塩／重炭酸塩混合物などの発泡剤などの標準成分を含有してもよい。このような賦形剤はよく知られており、本明細書中で詳細に説明する必要はない。
【0202】
（実施形態５．９のような）カプセル製剤は、硬質ゼラチンの類であっても軟質ゼラチンの類であってもよく、固体状、半固体状、または液体状の活性成分を収容することができる。ゼラチンカプセルは、動物ゼラチンまたはその合成同等物もしくは植物由来の同等物から形成することができる。
【0203】
固形剤形（例えば、錠剤、カプセル剤など）は、コーティングされていてもコーティングされていなくてもよいが、典型的には、コーティング、例えば、保護フィルムコーティング（例えば、ワックスもしくはワニス）または徐放性コーティングを有する。コーティング（例えば、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（商標）タイプのポリマー）は、上記薬学的に許容可能な塩を胃腸管内の所望の位置で放出するように設計することができる。このため、コーティングは、胃腸管内のある特定のｐＨ条件下で分解し、それによって薬学的に許容可能な塩を胃または回腸もしくは十二指腸において選択的に放出するように、選択することができる。
【0204】
コーティングの代わりに、またはコーティングに加えて、薬学的に許容可能な塩を胃腸管内の様々な酸性度またはアルカリ度の条件下で選択的に放出するように適合され得る例えば放出遅延剤などの放出制御剤を含む固体マトリックス中で、薬剤を提供することができる。あるいは、このようなマトリックス材料もしくは放出遅延コーティングを、当該剤形が胃腸管を通過する際に実質的に連続的に侵食される侵食性ポリマー（例えば、無水マレイン酸ポリマー）の形態とすることができる。
【0205】
局所使用のための組成物には、軟膏、クリーム、スプレー、パッチ、ゲル、液滴、およびインサート（例えば、眼内インサート）が含まれる。このような組成物は、従来の方法に従って製剤化することができる。
【0206】
（実施形態５．１０から実施形態５．１２のような）非経口投与用の組成物は、典型的には、滅菌水溶液、滅菌油性溶液、または滅菌微細懸濁液として提供されるが、注射用滅菌水で即座に調製するために、微粉化された滅菌粉末状で提供されてもよい。
【0207】
直腸投与用または膣内投与用の製剤の例としては、例えば、上記活性化合物を含有する成型可能材料またはワックス状材料の成形体から形成され得る、ペッサリーおよび坐剤が挙げられる。
【0208】
吸入投与のための組成物は、吸入可能な粉末組成物または液体スプレーもしくは粉末スプレーの形態であり得、粉末吸入装置またはエアロゾルディスペンス装置を用いて標準形態で投与可能である。このような装置はよく知られている。吸入投与の場合、粉末化された製剤は、典型的には、上記薬学的に許容可能な塩をラクトースなどの粉末化された不活性固体希釈剤と共に含む。
【0209】
上記医薬組成物は、一般に、単位用量形態（unit dosage form）で提供され、そのため、典型的には、所望の生物学的活性レベルを提供するのに十分な薬学的に許容可能な塩を含有する。例えば、実施形態５．１から実施形態５．９）のいずれか１つに記載の医薬組成物である、経口投与を目的とした組成物は、上記薬学的に許容可能な塩を２ミリグラム～２００ミリグラム、より通常には、１０ミリグラム～１００ミリグラム、例えば、１２．５ミリグラム、２５ミリグラム、または５０ミリグラム含有し得る。
【0210】
上記医薬組成物は、必要に応じて、実施形態４．１に規定されるさらなる化学療法剤を含んでもよい。
【0211】
したがって、さらなる実施形態（実施形態５．１３）において、本発明は、実施形態４．１に規定されるさらなる化学療法剤を追加的に含む、実施形態５．２から実施形態５．１２のいずれか１つに規定される医薬組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0212】
【図1】図１は、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリル（「式（１）の化合物」）の遊離塩基のＸＲＰＤスペクトルである。
【図4】図４は、式（１）の化合物の遊離塩基（１番上のトレース）と塩酸塩のいくつかの結晶形のＸＲＰＤスペクトルを示し、上から２番目のトレースから１番下のトレースまで、塩の各結晶形は順にパターンＡ、パターンＢ、パターンＣ、パターンＤ、およびパターンＥである。
【図5】図５は、式（１）の化合物の遊離塩基（１番上のトレース）と臭化水素酸塩のいくつかの結晶形のＸＲＰＤスペクトルを示し、上から２番目のトレースから１番下のトレースまで、塩の各結晶形は順にパターンＡ、パターンＢ、パターンＣ、およびパターンＤである。
【図6】図６は、式（１）の化合物の遊離塩基（１番上のトレース）とメシル酸塩のいくつかの結晶形のＸＲＰＤスペクトルを示し、上から２番目のトレースから１番下のトレースまで、塩の各結晶形は順にパターンＡ、パターンＢ、およびパターンＣである。
【図7】図７は、式（１）の化合物の遊離塩基（１番上のトレース）とＬ－酒石酸塩のいくつかの形態のＸＲＰＤスペクトルを示し、上から２番目のトレースから１番下のトレースまで、塩の各形態は順にアモルファス形態（上から２番目のトレース）、パターンＡ（上から３番目トレース）、およびパターンＢ（１番下のトレース）である。
【図8】図８は、式（１）の化合物の遊離塩基（１番上のトレース）とエシル酸塩のいくつかの結晶形のＸＲＰＤスペクトルを示し、上から２番目のトレースから１番下のトレースまで、塩の各結晶形は順にパターンＡおよびパターンＢ（上から３番目と４番目のトレース）である。
【図12】図１２は、式（１）の化合物の遊離塩基と硫酸塩のいくつかの結晶形のＸＲＰＤスペクトルを示し、上から下に、各結晶形は、遊離塩基（１番上のトレース）、塩のパターンＡ（上から２番目と３番目のトレース）、および塩のパターンＢ（１番下のトレース）である、
【図13】図１３は、式（１）の化合物の遊離塩基とリン酸塩のいくつかの結晶形のＸＲＰＤスペクトルを示し、上から下に、各結晶形は、遊離塩基（１番上のトレース）、塩のパターンＡ（上から２番目と３番目のトレース）、および塩のパターンＢ（１番下のトレース）である。
【図14】図１４は、式（１）の化合物の遊離塩基とクエン酸塩のいくつかのアモルファスまたは結晶性の形態のＸＲＰＤスペクトルを示し、上から下に、各トレースは、遊離塩基（１番上のトレース）、アモルファス塩（上から２番目のトレース）、ならびにパターンＡ塩およびパターンＢ塩である。
【図40】図４０は、遊離塩基とマレイン酸塩の様々な結晶形のＸＲＰＤスペクトルを示し、１番上のトレースから１番下のトレースへ降順に、式（１）の化合物の遊離塩基、パターンＡモノ－マレイン酸塩、パターンＡビス－マレイン酸塩、パターンＢビス－マレイン酸塩、およびパターンＡヘミ－マレイン酸塩である。
【実施例】
【0213】
（解析方法）
（プロトン－ＮＭＲ）
塩の形成（プロトンシフト対遊離塩基の観察による）と、それらの塩が１：１（遊離塩基：酸のモル比）の化学量論的塩であることの同定を、オートサンプラーを備えたＪＥＯＬ製ＥＣＸ ４００ＭＨｚ分光計を用いて収集したそれらの１Ｈ ＮＭＲスペクトルから確認した。試料は解析のための適切な重水素化溶媒に溶解した。データの取得には、Ｄｅｌｔａ ＮＭＲ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン４．３．を使用した。
（プロトン－ＮＭＲ）
塩の形成（プロトンシフト対遊離塩基の観察による）と、それらの塩が１：１（遊離塩基：酸のモル比）の化学量論的塩であることの同定を、オートサンプラーを備えたＪＥＯＬ製ＥＣＸ ４００ＭＨｚ分光計を用いて収集したそれらの１Ｈ ＮＭＲスペクトルから確認した。試料は解析のための適切な重水素化溶媒に溶解した。データの取得には、Ｄｅｌｔａ ＮＭＲ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン４．３．を使用した。
【0214】
（粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ））
ＣｕＫα線（４５ｋＶ、４０ｍＡ）、θ－θゴニオメーター、集束ミラー、発散スリット（１／２’’）、入射ビーム側および発散ビーム側の両方のソーラースリット（４ｍｍ）、ならびにＰＩＸｃｅｌ検出器を用いたＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ社製回折計で、粉末Ｘ線回折パターンを収集した。データ収集に使用したソフトウェアは、Ｘ’Ｐｅｒｔ Ｄａｔａ Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ，バージョン２．２ｆであり、Ｘ’Ｐｅｒｔ Ｄａｔａ Ｖｉｅｗｅｒ，バージョン１．２ｄを使用してデータを表示した。ＸＲＰＤパターンは、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ社のＸ’Ｐｅｒｔ ＰＲＯを用いて、周囲条件下で透過箔からなる試料ステージ（厚さ１２．７μｍのポリイミド「カプトン（Ｋａｐｔｏｎ）」フィルム）を介して周囲条件下で取得した。データ収集範囲は、２．９９４～３５°２θ、連続スキャンスピードは１秒あたり０．２０２００４°とした。
ＣｕＫα線（４５ｋＶ、４０ｍＡ）、θ－θゴニオメーター、集束ミラー、発散スリット（１／２’’）、入射ビーム側および発散ビーム側の両方のソーラースリット（４ｍｍ）、ならびにＰＩＸｃｅｌ検出器を用いたＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ社製回折計で、粉末Ｘ線回折パターンを収集した。データ収集に使用したソフトウェアは、Ｘ’Ｐｅｒｔ Ｄａｔａ Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ，バージョン２．２ｆであり、Ｘ’Ｐｅｒｔ Ｄａｔａ Ｖｉｅｗｅｒ，バージョン１．２ｄを使用してデータを表示した。ＸＲＰＤパターンは、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ社のＸ’Ｐｅｒｔ ＰＲＯを用いて、周囲条件下で透過箔からなる試料ステージ（厚さ１２．７μｍのポリイミド「カプトン（Ｋａｐｔｏｎ）」フィルム）を介して周囲条件下で取得した。データ収集範囲は、２．９９４～３５°２θ、連続スキャンスピードは１秒あたり０．２０２００４°とした。
【0215】
（示差走査熱量測定（ＤＳＣ））
４５ポジションの試料ホルダーを備えたＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社製Ｐｙｒｉｓ ６０００ ＤＳＣで、ＤＳＣデータを収集した。認証されたインジウムを用いて装置を検証し、エネルギー校正と温度校正を行った。０．５～３．０ｍｇの予め定められた量の試料を、ピンホールのあるアルミニウム製鍋に入れ、１分あたり２０℃で３０℃から３５０℃まで加熱するか、実験に応じて変化させた。１分あたり２０ｍｌの乾燥窒素のパージを試料上に維持した。装置制御、データ取得、および解析は、Ｐｙｒｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖ１１．１．１リビジョンＨを用いて行った。
４５ポジションの試料ホルダーを備えたＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社製Ｐｙｒｉｓ ６０００ ＤＳＣで、ＤＳＣデータを収集した。認証されたインジウムを用いて装置を検証し、エネルギー校正と温度校正を行った。０．５～３．０ｍｇの予め定められた量の試料を、ピンホールのあるアルミニウム製鍋に入れ、１分あたり２０℃で３０℃から３５０℃まで加熱するか、実験に応じて変化させた。１分あたり２０ｍｌの乾燥窒素のパージを試料上に維持した。装置制御、データ取得、および解析は、Ｐｙｒｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖ１１．１．１リビジョンＨを用いて行った。
【0216】
（熱重量分析（ＴＧＡ））
２０ポジションのオートサンプラーを備えたＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社製Ｐｙｒｉｓ １ ＴＧＡで、ＴＧＡデータを収集した。認証された重量と認証されたアルメルおよびパーカロイ（Ｐｅｒｋａｌｌｏｙ）を用いて装置を検証し、温度校正を行った。１～５ｍｇの予め定められた量の試料を、予め風袋引きしたアルミニウム製るつぼに投入し、１分あたり２０℃で周囲温度から４００℃まで加熱した。１分あたり２０ｍｌの窒素パージを試料上に維持した。装置制御、データ取得、および解析は、Ｐｙｒｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖ１１．１．１リビジョンＨを用いて行った。
２０ポジションのオートサンプラーを備えたＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社製Ｐｙｒｉｓ １ ＴＧＡで、ＴＧＡデータを収集した。認証された重量と認証されたアルメルおよびパーカロイ（Ｐｅｒｋａｌｌｏｙ）を用いて装置を検証し、温度校正を行った。１～５ｍｇの予め定められた量の試料を、予め風袋引きしたアルミニウム製るつぼに投入し、１分あたり２０℃で周囲温度から４００℃まで加熱した。１分あたり２０ｍｌの窒素パージを試料上に維持した。装置制御、データ取得、および解析は、Ｐｙｒｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖ１１．１．１リビジョンＨを用いて行った。
【0217】
（重量蒸気収着（ＧＶＳ））
下記のプロトコルを用いて、本発明の塩についてＧＶＳ研究を実施した。
下記のプロトコルを用いて、本発明の塩についてＧＶＳ研究を実施した。
【0218】
ＩＧＡｓｏｒｐ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｖ６．５０．４８によって制御されたＨｉｄｅｎ Ｉｓｏｃｈｅｍａ社製水分収着分析装置（モデルＩＧＡｓｏｒｐ）を用いて、収着等温線を得た。装置制御により試料を一定温度（２５℃）に維持した。湿度は、乾燥窒素流と湿潤窒素流を混合することによって制御し、総流量は１分あたり２５０ｍｌであった。装置は、３種類の校正済みＲｏｔｒｏｎｉｃ塩溶液（１０－５０－８８％）を測定することによって、相対湿度（ＲＨ）含有量について検証した。微量天秤（精度＋／－０．００５ｍｇ）によって、試料の重量変化を湿度の関数として監視した。予め定められた量の試料を、風袋引きしたメッシュステンレス鋼製バスケットに周囲条件下で入れた。完全な実験サイクルは、典型的には、一定温度（２５℃）で０～９０％の範囲にわたって１０％ＲＨ間隔（各湿度レベルにつき６０分）での３回のスキャン（収着、脱着、および収着）からなった。この種の実験は、一連の良好に決定された（well-determined）湿度範囲にわたって研究対象の試料が水分を吸収する（または吸収しない）能力を実証するはずである。
【0219】
（ＨＰＬＣ法１）
Ａｇｉｌｅｎｔ社製１１１０シリーズＨＰＬＣシステムでＨＰＬＣ分析を実施した。使用カラムは、Ａｑｕｉｔｙ ＢＥＨ Ｐｈｅｎｙｌ；３０×４．６ｍｍ、粒子径１．７μｍ（Ｅｘ Ｗａｔｅｒｓ社，ＰＮ：１８６００４６４４）であった。流量は２．０ｍＬ／分とした。移動相Ａは水：トリフルオロ酢酸（１００：０．０３％）、移動相Ｂはアセトニトリル：トリフルオロ酢酸（１００：０．０３％）とした。検出は２１０ｎｍのＵＶにより行った。注入量は５μＬとし、以下のグラジエントを使用した。
Ａｇｉｌｅｎｔ社製１１１０シリーズＨＰＬＣシステムでＨＰＬＣ分析を実施した。使用カラムは、Ａｑｕｉｔｙ ＢＥＨ Ｐｈｅｎｙｌ；３０×４．６ｍｍ、粒子径１．７μｍ（Ｅｘ Ｗａｔｅｒｓ社，ＰＮ：１８６００４６４４）であった。流量は２．０ｍＬ／分とした。移動相Ａは水：トリフルオロ酢酸（１００：０．０３％）、移動相Ｂはアセトニトリル：トリフルオロ酢酸（１００：０．０３％）とした。検出は２１０ｎｍのＵＶにより行った。注入量は５μＬとし、以下のグラジエントを使用した。
【0220】
【表1】
【0221】
（ＨＰＬＣ法２）
Ａｇｉｌｅｎｔ社製１１１０／１２００シリーズＨＰＬＣシステムでＨＰＬＣ分析を実施した。使用カラムは、Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８；１５０×４．６ｍｍ、粒子径３．０μｍ（Ｅｘ Ｗａｔｅｒｓ社、ＰＮ：１８６００４６４４）であった。流量は１．０ｍＬ／分とした。移動相Ａは水：トリフルオロ酢酸（１００：０．１％）、移動相Ｂはアセトニトリル：トリフルオロ酢酸（１００：０．１％）とした。検出は３０２ｎｍのＵＶにより行った。注入量は５μＬ、カラム温度は４０℃とし、以下のグラジエントを使用した。
Ａｇｉｌｅｎｔ社製１１１０／１２００シリーズＨＰＬＣシステムでＨＰＬＣ分析を実施した。使用カラムは、Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８；１５０×４．６ｍｍ、粒子径３．０μｍ（Ｅｘ Ｗａｔｅｒｓ社、ＰＮ：１８６００４６４４）であった。流量は１．０ｍＬ／分とした。移動相Ａは水：トリフルオロ酢酸（１００：０．１％）、移動相Ｂはアセトニトリル：トリフルオロ酢酸（１００：０．１％）とした。検出は３０２ｎｍのＵＶにより行った。注入量は５μＬ、カラム温度は４０℃とし、以下のグラジエントを使用した。
【0222】
【表2】
【0223】
（実施例１）
（５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリル遊離塩基の調製とキャラクタリゼーション）
標題化合物の調製を、化合物を塩酸塩としてではなく遊離塩基として単離したこと以外は、ＷＯ２０１５／２０３９０（この特許文献の内容を参照により本明細書に組み込む）の実施例６４、方法Ｌの方法によって行った。粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、および熱重量分析（ＴＧＡ）によって、この遊離塩基の特徴を明らかにした。ＸＲＰＤスペクトルとＤＳＣトレースおよびＴＧＡトレースを図１および図２に示す。
（５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリル遊離塩基の調製とキャラクタリゼーション）
標題化合物の調製を、化合物を塩酸塩としてではなく遊離塩基として単離したこと以外は、ＷＯ２０１５／２０３９０（この特許文献の内容を参照により本明細書に組み込む）の実施例６４、方法Ｌの方法によって行った。粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、および熱重量分析（ＴＧＡ）によって、この遊離塩基の特徴を明らかにした。ＸＲＰＤスペクトルとＤＳＣトレースおよびＴＧＡトレースを図１および図２に示す。
【0224】
この遊離塩基は結晶性であることがＸＲＰＤにより示された。ＤＳＣサーモグラフは、開始温度２０５．６℃、ピーク温度２１４℃の主な融解吸熱を示している。ＴＧＡサーモグラフは、１５０℃までで２．８％の重量減少を示している。固体の１Ｈ ＮＭＲスペクトルは分子構造と一致する。ＮＭＲスペクトルに有意な溶媒が存在しないため、ＴＧＡサーモグラフに示された重量損失は、材料の加熱に伴う水の損失に関連している。
【0225】
この遊離塩基のＧＶＳプロファイルを図３に示す。最初の脱着サイクル中、固体は、相対湿度（ＲＨ）５０％から０％ＲＨまでで２重量％減少する。その後の収着サイクル中、固体は９０％ＲＨまでで８％の水を獲得する。水分の取り込みは可逆的であり、ヒステリシスが認められる。遊離塩基の形式的な（formal）一水和物の理論含水率は４．２％であるため、湿度の極値では二水和物レベルまで水が吸収されている。
【0226】
（実施例２）
（塩の調製）
小規模法
下記の小規模法１～７により、遊離塩基から５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの酸付加塩を調製した。
（塩の調製）
小規模法
下記の小規模法１～７により、遊離塩基から５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの酸付加塩を調製した。
【0227】
方法１：ＴＨＦ媒介
１６本の晶析管に、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの遊離塩基（５０ｍｇ）を投入した。ＴＨＦ（２ｍＬ、４０倍量）を添加し、得られた各混合物を６０℃に加熱した。それぞれの酸（１Ｍ、１当量）を１つのアリコートとして投入した。各溶液を温度で保持し、１時間平衡化させた。次いで、溶液を室温まで冷却し、１８時間平衡化させた後、ろ過により単離し、１８時間真空乾燥した。結晶化が起こらなかったいくつかのケースでは、窒素による溶媒除去とＭｅＯＨを用いた固体のトリチュレーションとによって、試料をさらに操作した。溶媒低減とトリチュレーションが必要であったのは、エシル酸塩、ベシル酸塩、酢酸塩、およびマロン酸塩である。
１６本の晶析管に、５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの遊離塩基（５０ｍｇ）を投入した。ＴＨＦ（２ｍＬ、４０倍量）を添加し、得られた各混合物を６０℃に加熱した。それぞれの酸（１Ｍ、１当量）を１つのアリコートとして投入した。各溶液を温度で保持し、１時間平衡化させた。次いで、溶液を室温まで冷却し、１８時間平衡化させた後、ろ過により単離し、１８時間真空乾燥した。結晶化が起こらなかったいくつかのケースでは、窒素による溶媒除去とＭｅＯＨを用いた固体のトリチュレーションとによって、試料をさらに操作した。溶媒低減とトリチュレーションが必要であったのは、エシル酸塩、ベシル酸塩、酢酸塩、およびマロン酸塩である。
【0228】
方法２：ＴＨＦ：ＭｅＣＮ媒介
方法２は、ＴＨＦ：ＭｅＣＮ（１：１）の混合液（１ｍＬ、２０倍量）を溶媒として使用し、混合物を５０℃に加熱したこと以外は、方法１と同一であった。ベンゼンスルホン塩は、溶媒低減とトリチュレーションが必要であった。
方法２は、ＴＨＦ：ＭｅＣＮ（１：１）の混合液（１ｍＬ、２０倍量）を溶媒として使用し、混合物を５０℃に加熱したこと以外は、方法１と同一であった。ベンゼンスルホン塩は、溶媒低減とトリチュレーションが必要であった。
【0229】
方法３：ＴＨＦ：水媒介
方法３は、ＴＨＦ：水（９５：５）（１ｍＬ、２０倍量）を溶媒として使用し、混合物を５０℃に加熱したこと以外は、方法２と同一であった。ベンゼンスルホン酸塩、酢酸塩、Ｌ－グルタミン酸塩、およびＬ－アスパラギン酸塩は、溶媒低減とトリチュレーションが必要であった。
方法３は、ＴＨＦ：水（９５：５）（１ｍＬ、２０倍量）を溶媒として使用し、混合物を５０℃に加熱したこと以外は、方法２と同一であった。ベンゼンスルホン酸塩、酢酸塩、Ｌ－グルタミン酸塩、およびＬ－アスパラギン酸塩は、溶媒低減とトリチュレーションが必要であった。
【0230】
方法４：ＴＨＦ媒介、過剰の酸を使用
方法４は、酸（１Ｍ、１．８４当量）を１つのアリコートとして投入したこと以外は、方法１と同一であった。この方法を用いて、塩酸塩パターンＡ、ヘミ－フマル酸塩パターンＡ、臭化水素酸塩パターンＣ、ビス－メシル酸塩パターンＡ、ビス－マレイン酸塩パターンＡ、ビス－ベシル酸塩パターンＡ、トシル酸塩パターンＣ、および酢酸塩パターンＢを単離した。
方法４は、酸（１Ｍ、１．８４当量）を１つのアリコートとして投入したこと以外は、方法１と同一であった。この方法を用いて、塩酸塩パターンＡ、ヘミ－フマル酸塩パターンＡ、臭化水素酸塩パターンＣ、ビス－メシル酸塩パターンＡ、ビス－マレイン酸塩パターンＡ、ビス－ベシル酸塩パターンＡ、トシル酸塩パターンＣ、および酢酸塩パターンＢを単離した。
【0231】
方法５：ＴＨＦ：水媒介、過剰の酸を使用
方法５は、酸（１Ｍ、１．８４当量）を１つのアリコートとして投入したこと以外は、方法２と同一であった。この方法を用いて、Ｌ－酒石酸塩パターンＢ、トシル酸塩パターンＡ、リン酸塩パターンＢ、クエン酸塩パターンＢ、酢酸塩パターンＢ、Ｌ－グルクロン酸塩パターンＡ、塩酸塩パターンＤ、臭化水素酸塩パターンＤ、ビス－メシル酸塩パターンＢ、ビス－マレイン酸塩パターンＢ、ベシル酸塩パターンＢ、硫酸塩パターンＣを単離した。
方法５は、酸（１Ｍ、１．８４当量）を１つのアリコートとして投入したこと以外は、方法２と同一であった。この方法を用いて、Ｌ－酒石酸塩パターンＢ、トシル酸塩パターンＡ、リン酸塩パターンＢ、クエン酸塩パターンＢ、酢酸塩パターンＢ、Ｌ－グルクロン酸塩パターンＡ、塩酸塩パターンＤ、臭化水素酸塩パターンＤ、ビス－メシル酸塩パターンＢ、ビス－マレイン酸塩パターンＢ、ベシル酸塩パターンＢ、硫酸塩パターンＣを単離した。
【0232】
方法６：ＴＨＦ媒介、過剰の酸を使用
方法６は、遊離塩基（３０ｍｇ）を投入し、酸（１Ｍ、２当量）を１つのアリコートとして投入したこと以外は、方法１と同一であった。この方法を用いて塩酸パターンＢ塩を生成した。
方法６は、遊離塩基（３０ｍｇ）を投入し、酸（１Ｍ、２当量）を１つのアリコートとして投入したこと以外は、方法１と同一であった。この方法を用いて塩酸パターンＢ塩を生成した。
【0233】
方法７：ＴＨＦ媒介、０．５当量の酸を使用
方法７は、すべてのケースにおいて０．５当量の酸を添加したこと以外は、方法１と同一であった。方法７を用いて、ヘミ－マレイン酸塩パターンＡ、ヘミ－硫酸塩パターンＡ、ヘミ－エタン－１，２－ジスルホン酸塩パターンＡ、およびヘミ－ナフチレン－１，５－ジスルホン酸塩パターンＡを単離した。
方法７は、すべてのケースにおいて０．５当量の酸を添加したこと以外は、方法１と同一であった。方法７を用いて、ヘミ－マレイン酸塩パターンＡ、ヘミ－硫酸塩パターンＡ、ヘミ－エタン－１，２－ジスルホン酸塩パターンＡ、およびヘミ－ナフチレン－１，５－ジスルホン酸塩パターンＡを単離した。
【0234】
（５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリル塩の中規模調製）
中規模法１
遊離塩基を３００ｍｇとしたことを除いて、小規模法１で使用したのと同様の条件を使用し、より大きい規模で塩の調製を行った。この方法で以下の塩を調製した。
・トシル酸塩パターンＣ、＞２００℃での熱サイクルによりトシル酸塩パターンＤを得た。
・マレイン酸塩パターンＡ、４０℃／７５％ＲＨでのコンディショニングによりマレイン酸塩パターンＢを得た。
・ベシル酸塩パターンＢ
・ナフタレン－２－スルホン酸塩パターンＡ
中規模法１
遊離塩基を３００ｍｇとしたことを除いて、小規模法１で使用したのと同様の条件を使用し、より大きい規模で塩の調製を行った。この方法で以下の塩を調製した。
・トシル酸塩パターンＣ、＞２００℃での熱サイクルによりトシル酸塩パターンＤを得た。
・マレイン酸塩パターンＡ、４０℃／７５％ＲＨでのコンディショニングによりマレイン酸塩パターンＢを得た。
・ベシル酸塩パターンＢ
・ナフタレン－２－スルホン酸塩パターンＡ
【0235】
この方法を、遊離塩基１００ｍｇを用いることに変更し、以下を形成した。
・シュウ酸塩パターンＡ
・シュウ酸塩パターンＡ
【0236】
中規模法２
マロン酸パターンＢの調製を、下記の方法に従ってスケールアップした。
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリル遊離塩基（３００ｍｇ）を２５ｍＬの丸底フラスコに秤量した。ＴＨＦ：水（９５：５、２０倍量）を添加し、混合物を６０℃で１５分間平衡化させた。マロン酸（１当量）を投入し、混合物を６０℃で１５分間平衡化させた。混合物を室温まで冷却し、３０分間平衡化させた。次いで、ロータリーエバポレータを用いて５０℃、２１０ｒｐｍで混合物を急速に蒸発させた。これにより、ベージュ色の粉末を生成した。その後、これをＭｅＯＨ（２０倍量）中、室温で１８時間熟成した。得られた懸濁液を真空ろ過により単離し、固体を４５℃で週末を通じて真空乾燥した。
マロン酸パターンＢの調製を、下記の方法に従ってスケールアップした。
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリル遊離塩基（３００ｍｇ）を２５ｍＬの丸底フラスコに秤量した。ＴＨＦ：水（９５：５、２０倍量）を添加し、混合物を６０℃で１５分間平衡化させた。マロン酸（１当量）を投入し、混合物を６０℃で１５分間平衡化させた。混合物を室温まで冷却し、３０分間平衡化させた。次いで、ロータリーエバポレータを用いて５０℃、２１０ｒｐｍで混合物を急速に蒸発させた。これにより、ベージュ色の粉末を生成した。その後、これをＭｅＯＨ（２０倍量）中、室温で１８時間熟成した。得られた懸濁液を真空ろ過により単離し、固体を４５℃で週末を通じて真空乾燥した。
【0237】
中規模法３
３００ｍｇの遊離塩基と２当量の酸を用いたこと以外は、小規模法５で使用した条件を使用した。この方法と用いてビス－マレイン酸パターンＡ塩を調製した。
３００ｍｇの遊離塩基と２当量の酸を用いたこと以外は、小規模法５で使用した条件を使用した。この方法と用いてビス－マレイン酸パターンＡ塩を調製した。
【0238】
中規模法４
３００ｍｇの遊離塩基と２当量の酸を用いたこと以外は、小規模法４で使用した条件を使用した。この方法を用いてビス－ベシル酸塩パターンＢを調製した。
３００ｍｇの遊離塩基と２当量の酸を用いたこと以外は、小規模法４で使用した条件を使用した。この方法を用いてビス－ベシル酸塩パターンＢを調製した。
【0239】
熟成方法
ベシル酸塩パターンＢの水熟成（２４時間）後にベシル酸塩パターンＣが形成された。
ベシル酸塩パターンＢの水熟成（２４時間）後にベシル酸塩パターンＣが形成された。
【0240】
マレイン酸塩Ｂの水熟成（２４時間）後にマレイン酸塩パターンＣが形成された。
【0241】
塩の調製に用いた方法とこのようにして調製した塩の物理的外観とをまとめたものを下記の表に示す。
【0242】
【表3-1】
【0243】
【表3-2】
【0244】
上記の方法に従って調製した塩の特徴を明らかにするデータを下記の表に示す。
【0245】
【表4-1】
【0246】
【表4-2】
【0247】
【表4-3】
【0248】
【表4-4】
【0249】
【表4-5】
【0250】
【表4-6】
【0251】
【表4-7】
【0252】
【表4-8】
【0253】
上記の方法を用いて調製したビス塩およびヘミ塩の特徴も下記に記載する。
【0254】
【表5-1】
【0255】
【表5-2】
【0256】
【表6-1】
【0257】
【表6-2】
【0258】
（実施例３Ａ）
（塩の水への溶解度の測定）
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリル遊離塩基および選択した塩（３０ｍｇ）を晶析管に秤量し、注射用水（ＷＦＩ）（１ｍＬ）を投入し、各試料を２４時間にわたって放置して平衡化させた（２５℃）。真空ろ過により固体を単離し、ろ液を用いてＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ方法１）によって溶解度を評価した。
（塩の水への溶解度の測定）
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリル遊離塩基および選択した塩（３０ｍｇ）を晶析管に秤量し、注射用水（ＷＦＩ）（１ｍＬ）を投入し、各試料を２４時間にわたって放置して平衡化させた（２５℃）。真空ろ過により固体を単離し、ろ液を用いてＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ方法１）によって溶解度を評価した。
【0259】
【表7】
【0260】
（結論）
多数の結晶塩を同定したが、大部分の塩は、水和／溶媒和の傾向を示し、複雑な熱プロファイルを有していた。公知の塩酸塩（国際特許出願第ＷＯ２０１５／２０３９０号の実施例６４、方法Ｌに開示）は、多形を示し、かつ、水和／溶媒和を示す良好でない熱プロファイルを示すため、固体製剤の調製のための好ましい候補であるとは考えられない。
多数の結晶塩を同定したが、大部分の塩は、水和／溶媒和の傾向を示し、複雑な熱プロファイルを有していた。公知の塩酸塩（国際特許出願第ＷＯ２０１５／２０３９０号の実施例６４、方法Ｌに開示）は、多形を示し、かつ、水和／溶媒和を示す良好でない熱プロファイルを示すため、固体製剤の調製のための好ましい候補であるとは考えられない。
【0261】
トシル酸塩、マレイン酸塩、ベシル酸塩、マロン酸塩、およびシュウ酸塩はすべて、遊離塩基よりも溶解度が向上しているが、シュウ酸塩は、結晶化度が低いため、さらなる開発は考えられなかった。ビス塩は、水中で不均化を起こすため、やはりさらなる開発の候補とは考えられなかった。
【0262】
（実施例３Ｂ）
（塩の生体関連媒体への溶解度の測定）
実験：
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの遊離塩基および選択した塩（３０ｍｇ）を晶析管に秤量した。生体関連媒体（ＤＩ Ｈ２Ｏ、ＦｅＳＳＩＦ、ＦａＳＳＩＦ、およびＦａＳＳＧＦ）（２ｍＬ）を投入した。試料を２４時間にわたって放置して平衡化させた（２５℃）。ＨＰＬＣを用いて溶解度を測定した（上記の方法１を参照）。
（塩の生体関連媒体への溶解度の測定）
実験：
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの遊離塩基および選択した塩（３０ｍｇ）を晶析管に秤量した。生体関連媒体（ＤＩ Ｈ２Ｏ、ＦｅＳＳＩＦ、ＦａＳＳＩＦ、およびＦａＳＳＧＦ）（２ｍＬ）を投入した。試料を２４時間にわたって放置して平衡化させた（２５℃）。ＨＰＬＣを用いて溶解度を測定した（上記の方法１を参照）。
【0263】
【表8】
【0264】
遊離塩基と選択した塩の生体関連溶解度評価では、全体的に、１ｍｇ／ｍＬ未満という低い溶解度であった。一般的な傾向として、ＦａＳＳＩＦから、ＦｅＳＳＩＦ、ＦａＳＳＧＦへと塩の溶解度の増加が観察された。マレイン酸塩およびマロン酸塩は、ＦａＳＳＧＦへの溶解度が遊離塩基よりも向上していた。ほとんどの塩はＦｅＳＳＩＦとＦａＳＳＩＦで同様の溶解度を示したが、マレイン酸塩では胃液において差異が観察された。
【0265】
生体関連範囲全体において、塩と遊離塩基はこれらの試験条件下での性能が類似している。しかし、マレイン酸塩は、総合的な原薬形態（solid form）性能と共に胃から腸への移行を考慮すると、有望である。
【0266】
塩酸塩は、溶解性はあるが、多形であり、複雑な熱プロファイル（水和と溶媒和を示す）を有する。
【0267】
（２週間の安定性）
（プロトコル）
実験：マレイン酸塩パターンＢ（３０ｍｇ）を、別々の１５ｍＬのタイプＩガラスバイアルに入れた。これらのバイアルに、湿気の侵入を許容するように、ＨＤＰＥ製プラスチックキャップを緩く取り付けた。その後、バイアルを２５℃／６０％ＲＨと４０℃／７５％ＲＨのＩＣＨに適合した（ICH-rated）安定性キャビネット内に置き、２～８℃で冷蔵保存した。２週間保存後、これらの試料を安定性キャビネットおよび冷蔵保存から取り出し、ＨＰＬＣ（方法２）によって化学的純度を評価した。関連データを波長３０２ｎｍで収集した。試料はＭｅＣＮ：水（１：１）中で調製した。
（プロトコル）
実験：マレイン酸塩パターンＢ（３０ｍｇ）を、別々の１５ｍＬのタイプＩガラスバイアルに入れた。これらのバイアルに、湿気の侵入を許容するように、ＨＤＰＥ製プラスチックキャップを緩く取り付けた。その後、バイアルを２５℃／６０％ＲＨと４０℃／７５％ＲＨのＩＣＨに適合した（ICH-rated）安定性キャビネット内に置き、２～８℃で冷蔵保存した。２週間保存後、これらの試料を安定性キャビネットおよび冷蔵保存から取り出し、ＨＰＬＣ（方法２）によって化学的純度を評価した。関連データを波長３０２ｎｍで収集した。試料はＭｅＣＮ：水（１：１）中で調製した。
【0268】
マレイン酸塩パターンＢは、以下の条件で２週間安定である：
２５℃／６０％ＲＨ、４０℃／７５％ＲＨ、および２～８℃。
２５℃／６０％ＲＨ、４０℃／７５％ＲＨ、および２～８℃。
【0269】
【表9】
【0270】
最も優れていた４種の塩は、マレイン酸塩、トシル酸塩、ベシル酸塩、およびマロン酸塩であった。これらのうち、マレイン酸塩が最も優れた特性を示した。以下、これらの塩の選択された結晶形について、より詳細に説明する。
【0271】
【0272】
【表10】
【0273】
【0274】
【表11】
【0275】
【0276】
【表12】
【0277】
【0278】
【表13】
【0279】
【0280】
【表14】
【0281】
【0282】
【表15】
【0283】
（重量蒸気収着研究）
特定の塩の結晶形について、上記のプロトコルを用いて得られたＧＶＳデータを以下に説明する。
特定の塩の結晶形について、上記のプロトコルを用いて得られたＧＶＳデータを以下に説明する。
【0284】
マレイン酸塩パターンＡ－図４４参照
最初の収着サイクル中、固体は５０％ＲＨから９０％ＲＨまでで１．５重量％増加した。その後の脱着サイクル中、固体は０％ＲＨまでで４％の水を失った。これは、次の収着サイクルで、９０％ＲＨで４重量％まで増加した。ＧＶＳプロファイルから、この水の取り込みは相対湿度の低下に伴って可逆的であり、ヒステリシスはごくわずかに示されるだけであることを確認した。
最初の収着サイクル中、固体は５０％ＲＨから９０％ＲＨまでで１．５重量％増加した。その後の脱着サイクル中、固体は０％ＲＨまでで４％の水を失った。これは、次の収着サイクルで、９０％ＲＨで４重量％まで増加した。ＧＶＳプロファイルから、この水の取り込みは相対湿度の低下に伴って可逆的であり、ヒステリシスはごくわずかに示されるだけであることを確認した。
【0285】
０％ＲＨと９０％ＲＨで新しいパターンを単離し、Ｂと名付けた。パターンＢはパターンＡと密接に関連している。
【0286】
マレイン酸塩パターンＢ－図４５参照
最初の脱着サイクル中、固体は５０％ＲＨから０％ＲＨまでで２．５重量％を失っている。その後の収着サイクル中、固体は９０％ＲＨまでで４％の水を獲得しているが、０％ＲＨから４０％ＲＨの間で急激な増加が見られる。０％ＲＨでパターンＡに転換し、９０％ＲＨでは変化なしである。このデータは、結晶バージョン間の相互転換が水和と関係していることを示唆している。
最初の脱着サイクル中、固体は５０％ＲＨから０％ＲＨまでで２．５重量％を失っている。その後の収着サイクル中、固体は９０％ＲＨまでで４％の水を獲得しているが、０％ＲＨから４０％ＲＨの間で急激な増加が見られる。０％ＲＨでパターンＡに転換し、９０％ＲＨでは変化なしである。このデータは、結晶バージョン間の相互転換が水和と関係していることを示唆している。
【0287】
トシル酸塩パターンＡ－図４６
最初の脱着サイクル中、固体は５０％ＲＨから０％ＲＨまでで３．５重量％を失っているが、５０％ＲＨから１０％ＲＨまでは一定のペースで０．５重量％減少し、１０％ＲＨから０％ＲＨまでは約３重量％の急激な減少を示している。その後の収着サイクル中、固体は、１０％ＲＨまでで約３％の水を急激に獲得しているが、１０％ＲＨから９０％ＲＨまでは一定のペースで約１％増加している。含水率３％は、トシル酸塩の一水和物に相当する。０％ＲＨと９０％ＲＨで形態変化は見られず、このことは、周囲範囲（ambient range）全体にわたって可逆的かつ安定なチャネル水和物（channel hydrate）を示唆している。
最初の脱着サイクル中、固体は５０％ＲＨから０％ＲＨまでで３．５重量％を失っているが、５０％ＲＨから１０％ＲＨまでは一定のペースで０．５重量％減少し、１０％ＲＨから０％ＲＨまでは約３重量％の急激な減少を示している。その後の収着サイクル中、固体は、１０％ＲＨまでで約３％の水を急激に獲得しているが、１０％ＲＨから９０％ＲＨまでは一定のペースで約１％増加している。含水率３％は、トシル酸塩の一水和物に相当する。０％ＲＨと９０％ＲＨで形態変化は見られず、このことは、周囲範囲（ambient range）全体にわたって可逆的かつ安定なチャネル水和物（channel hydrate）を示唆している。
【0288】
ベシル酸塩パターンＡ－図４７参照
最初の脱着サイクル中、固体は５０％ＲＨから０％ＲＨまでで２．５重量％を失っている。その後の収着サイクル中、固体は９０％ＲＨまでで１０％の水を獲得しているが、４０％ＲＨから６０％ＲＨまでは６％の急激な増加を示している。次の脱着サイクルは、９０％ＲＨから３０％ＲＨまでは一定のペースで約３重量％の減少を示し、３０％から０％ＲＨまでは急激に０％重量％まで減少している。ベシル酸塩の形式的な一水和物に必要な水の理論量は３．６％である。したがって、塩のこのバージョンは、三水和物に水和している。
最初の脱着サイクル中、固体は５０％ＲＨから０％ＲＨまでで２．５重量％を失っている。その後の収着サイクル中、固体は９０％ＲＨまでで１０％の水を獲得しているが、４０％ＲＨから６０％ＲＨまでは６％の急激な増加を示している。次の脱着サイクルは、９０％ＲＨから３０％ＲＨまでは一定のペースで約３重量％の減少を示し、３０％から０％ＲＨまでは急激に０％重量％まで減少している。ベシル酸塩の形式的な一水和物に必要な水の理論量は３．６％である。したがって、塩のこのバージョンは、三水和物に水和している。
【0289】
ベシル酸塩パターンＢ－図４８参照
最初の脱着サイクル中、固体は５０％ＲＨから０％ＲＨまでで１重量％を失っている。その後の収着サイクル中、固体は９０％ＲＨまでで約２．２５％の水を獲得しているが、一定のペースでの増加が認められる。ベシル酸塩のこのパターンＢバージョンは、パターンＡのものよりも好ましいＧＶＳプロファイルを示している。
最初の脱着サイクル中、固体は５０％ＲＨから０％ＲＨまでで１重量％を失っている。その後の収着サイクル中、固体は９０％ＲＨまでで約２．２５％の水を獲得しているが、一定のペースでの増加が認められる。ベシル酸塩のこのパターンＢバージョンは、パターンＡのものよりも好ましいＧＶＳプロファイルを示している。
【0290】
ベシル酸塩パターンＣ－図４９参照
最初の脱着サイクル中、固体は５０％ＲＨから０％ＲＨまでで約３重量％を失っている。その後の収着サイクル中、固体は９０％ＲＨまでで３．７５％の水を獲得しているが、０％ＲＨから２０％ＲＨの間で約２．５重量％の急激な増加が認められる。
最初の脱着サイクル中、固体は５０％ＲＨから０％ＲＨまでで約３重量％を失っている。その後の収着サイクル中、固体は９０％ＲＨまでで３．７５％の水を獲得しているが、０％ＲＨから２０％ＲＨの間で約２．５重量％の急激な増加が認められる。
【0291】
ナフタレン－２－スルホン酸塩パターンＡ－図５０参照
最初の脱着サイクル中、固体は５０％ＲＨから０％ＲＨまでで１重量％を失っている。その後の収着サイクル中、固体は９０％ＲＨまでで約２．２５％の水を獲得しているが、一定のペースでの増加が認められる。ＸＲＰＤ分析により、湿度の極値において固体の結晶性に変化はなかったことが示された。
最初の脱着サイクル中、固体は５０％ＲＨから０％ＲＨまでで１重量％を失っている。その後の収着サイクル中、固体は９０％ＲＨまでで約２．２５％の水を獲得しているが、一定のペースでの増加が認められる。ＸＲＰＤ分析により、湿度の極値において固体の結晶性に変化はなかったことが示された。
【0292】
マロン酸塩パターンＢ－図５１参照
ＧＶＳプロファイルは、材料が０％ＲＨまでの最初の脱着ステップで５重量％を失っていることを示す。したがって、この材料は、吸湿性があると考えられ、周囲条件で非化学量論的レベルまで水和していた。その後の収着サイクル中、固体は９０％ＲＨまでで７．５％の水を獲得しているが、３０％ＲＨから４０％ＲＨの間で約３重量％の急激な増加が認められる。この水の取り込みは可逆的であり、相対湿度の低下に伴って、吸収された水が失われる。マロン酸塩の形式的な一水和物に必要な水の理論量は３．４％であるため、塩は、湿気の極端な状態において最大二水和物レベルまで水和している。
ＧＶＳプロファイルは、材料が０％ＲＨまでの最初の脱着ステップで５重量％を失っていることを示す。したがって、この材料は、吸湿性があると考えられ、周囲条件で非化学量論的レベルまで水和していた。その後の収着サイクル中、固体は９０％ＲＨまでで７．５％の水を獲得しているが、３０％ＲＨから４０％ＲＨの間で約３重量％の急激な増加が認められる。この水の取り込みは可逆的であり、相対湿度の低下に伴って、吸収された水が失われる。マロン酸塩の形式的な一水和物に必要な水の理論量は３．４％であるため、塩は、湿気の極端な状態において最大二水和物レベルまで水和している。
【0293】
（実施例４）
（マレイン酸塩のさらなる調査）
マレイン酸塩について５つの結晶パターンを同定し、パターンＡ、パターンＢ、パターンＣ、パターンＤ、およびパターンＥと命名した。パターンＡ、パターンＢ、およびパターンＣの特徴を明らかにするデータは上記の通りであり、パターンＤおよびパターンＥの特徴を明らかにするデータは下記の通りである。
（マレイン酸塩のさらなる調査）
マレイン酸塩について５つの結晶パターンを同定し、パターンＡ、パターンＢ、パターンＣ、パターンＤ、およびパターンＥと命名した。パターンＡ、パターンＢ、およびパターンＣの特徴を明らかにするデータは上記の通りであり、パターンＤおよびパターンＥの特徴を明らかにするデータは下記の通りである。
【0294】
上記５つの結晶パターンとＡ／Ｂパターンの混合物のＸＲＰＤスペクトルの比較を図５２に示す。
【0295】
パターンＡ、パターンＢ、パターンＣ、およびパターンＤは、水和度が異なる変種と思われる。パターンＡは、水分を吸収するとすぐにＡとＢの混合物に変化するため、単離が困難であることが分かっている。パターンＢは比較的安定な水和物であるが、一方で、パターンＣは非化学量論的な水和物であると考えられている。パターンＤも、非化学量論的な水和物であると考えられており、パターンＣに類似している。パターンＥは、Ｎ－メチルピロリドン（ＮＭＰ）溶媒和物である。
【0296】
（４Ａ．パターンＡ／Ｂ混合物を介したマレイン酸塩パターンＡの調製とその後の熱サイクル）
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの遊離塩基（４．９７５６ｇ）を丸底フラスコに投入し、さらにＴＨＦ（２０４ｍＬ、４１倍量）を加えた。混合物を６０℃に加熱した。次いで、この溶液にマレイン酸（１．４８ｇ、１当量）をＴＨＦ（２倍量）中の溶液として加えた。混合物を６０℃で１時間放置して平衡化させた後、一晩で２０℃まで放冷し、ベージュ色の懸濁液を得た。固体を真空ろ過により単離し、ＴＨＦで洗浄した。この固体を４０℃で２０時間真空乾燥し、マレイン酸塩（ＳＳＡ２０３）を得た。
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの遊離塩基（４．９７５６ｇ）を丸底フラスコに投入し、さらにＴＨＦ（２０４ｍＬ、４１倍量）を加えた。混合物を６０℃に加熱した。次いで、この溶液にマレイン酸（１．４８ｇ、１当量）をＴＨＦ（２倍量）中の溶液として加えた。混合物を６０℃で１時間放置して平衡化させた後、一晩で２０℃まで放冷し、ベージュ色の懸濁液を得た。固体を真空ろ過により単離し、ＴＨＦで洗浄した。この固体を４０℃で２０時間真空乾燥し、マレイン酸塩（ＳＳＡ２０３）を得た。
【0297】
得られた固体（ＳＳＡ２０３）の一部を晶析管に秤量し（５０ｍｇ）、メチルイソブチルケトン（５倍量）を加えた。混合物を室温で１８時間平衡化させ、パターンＡ／Ｂ混合物を得た。１５０℃まで加熱することによって熱サイクルを行い、マレイン酸塩パターンＡを得た。
【0298】
（４Ｂ．高沸点非水性溶媒法によるマレイン酸塩パターンＡの調製）
ＳＳＡ２０３（実施例４Ａから）を晶析管に秤量し（６０ｍｇ／管）、適切な高沸点溶媒（１０倍量）を加えた。混合物を、ＲＴで約３０分間平衡化させ、９５℃に加熱し、４時間平衡化させた後、７０時間かけてＲＴまで自然放冷した。その後、混合物を再び９５℃に加熱し、４時間平衡化させ、３時間かけてＲＴまで放冷した。固体を単離し、４５℃で１８時間乾燥させた。
ＳＳＡ２０３（実施例４Ａから）を晶析管に秤量し（６０ｍｇ／管）、適切な高沸点溶媒（１０倍量）を加えた。混合物を、ＲＴで約３０分間平衡化させ、９５℃に加熱し、４時間平衡化させた後、７０時間かけてＲＴまで自然放冷した。その後、混合物を再び９５℃に加熱し、４時間平衡化させ、３時間かけてＲＴまで放冷した。固体を単離し、４５℃で１８時間乾燥させた。
【0299】
溶媒と得られたマレイン酸塩パターンを下記の表に示す。
【0300】
【表16】
【0301】
（４Ｃ．逆溶媒媒介再結晶化）
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルマレイン酸塩（実施例４ＡからのＳＳＡ２０３））を２本の晶析管に秤量し、ＤＭＳＯ（４倍量）またはＮＭＰ（４倍量）を加えた。混合物を６０℃に加熱した。その後、黄色の溶液を清澄化し、予熱した６０℃の清浄なチューブに入れた。次いで、清澄化済みの溶液を、１本のチューブにつき８０ｍｇのマレイン酸塩が含まれるように、３２０μｌのアリコートに分割した。その後、溶液に、適切な逆溶媒を０．５～１倍量のアリコートで加え、各添加後に最低１０分間平衡化させた。これを、濁った溶液が生成するまで、または１０倍量の逆溶媒が添加されるまで行った。次いで、混合物を６０℃で約３０分間放置して平衡化させた後、２５℃に冷却し、約２０時間平衡化させた。
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルマレイン酸塩（実施例４ＡからのＳＳＡ２０３））を２本の晶析管に秤量し、ＤＭＳＯ（４倍量）またはＮＭＰ（４倍量）を加えた。混合物を６０℃に加熱した。その後、黄色の溶液を清澄化し、予熱した６０℃の清浄なチューブに入れた。次いで、清澄化済みの溶液を、１本のチューブにつき８０ｍｇのマレイン酸塩が含まれるように、３２０μｌのアリコートに分割した。その後、溶液に、適切な逆溶媒を０．５～１倍量のアリコートで加え、各添加後に最低１０分間平衡化させた。これを、濁った溶液が生成するまで、または１０倍量の逆溶媒が添加されるまで行った。次いで、混合物を６０℃で約３０分間放置して平衡化させた後、２５℃に冷却し、約２０時間平衡化させた。
【0302】
溶液として残ったエントリー（entries）を０℃に冷却し、約６時間平衡化させた。０℃で溶液として残った混合物を６０℃に加熱し、溶媒の約半分を穏やかな窒素流によって蒸発させ、冷却して周囲温度に戻した。
【0303】
種々の溶媒の組み合わせから単離された結晶パターンを以下に示す。
ＤＭＳＯ／水、ＮＭＰ／ＭｅＣＮ、およびＮＭＰ／水から単離された固体のパターンＢ
ＮＭＰ／ＢｕＯＨからのパターンＡ／Ｂ混合物
ＤＭＳＯ／ＢｕＯＨおよびＤＭＳＯ／ＭｅＣＮから単離されたパターンＣ
ＴＨＦ＋フラッシュ蒸発から単離されたパターンＤ
ＮＭＰ／ジオキサン、ＮＭＰ／ｎ－ＰｒＯＡｃ、ＮＭＰ／トルエン、ＮＭＰ／ＴＨＦ、およびＮＭＰ／ＥｔＯＡｃから単離されたパターンＥ
ＤＭＳＯ／水、ＮＭＰ／ＭｅＣＮ、およびＮＭＰ／水から単離された固体のパターンＢ
ＮＭＰ／ＢｕＯＨからのパターンＡ／Ｂ混合物
ＤＭＳＯ／ＢｕＯＨおよびＤＭＳＯ／ＭｅＣＮから単離されたパターンＣ
ＴＨＦ＋フラッシュ蒸発から単離されたパターンＤ
ＮＭＰ／ジオキサン、ＮＭＰ／ｎ－ＰｒＯＡｃ、ＮＭＰ／トルエン、ＮＭＰ／ＴＨＦ、およびＮＭＰ／ＥｔＯＡｃから単離されたパターンＥ
【0304】
マレイン酸塩パターンＥのＤＳＣプロファイルおよびＴＧＡプロファイルを図５５に示す。
【0305】
（４Ｄ．マレイン酸塩パターンＤの調製）
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの遊離塩基（４．９７５６ｇ）を丸底フラスコに投入し、ＴＨＦ（２０４ｍＬ、４１倍量）を加えた。混合物を６０℃に加熱した。その後、溶液に、マレイン酸（１．４８ｇ、１当量）をＴＨＦ（２倍量）中の溶液として加えた。混合物を６０℃で１時間放置して平衡化させた。この溶液１００ｍｌを清澄化し、予熱した６０℃の清浄なフラスコに入れ、約５０℃に放冷し、フラッシュ蒸発させて、マレイン酸塩パターンＤを得た。
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルの遊離塩基（４．９７５６ｇ）を丸底フラスコに投入し、ＴＨＦ（２０４ｍＬ、４１倍量）を加えた。混合物を６０℃に加熱した。その後、溶液に、マレイン酸（１．４８ｇ、１当量）をＴＨＦ（２倍量）中の溶液として加えた。混合物を６０℃で１時間放置して平衡化させた。この溶液１００ｍｌを清澄化し、予熱した６０℃の清浄なフラスコに入れ、約５０℃に放冷し、フラッシュ蒸発させて、マレイン酸塩パターンＤを得た。
【0306】
マレイン酸塩パターンＥのＤＳＣプロファイルおよびＴＧＡプロファイルを図５４に示す。
【0307】
（４Ｅ．アモルファスマレイン酸塩の合成）
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルマレイン酸塩（５８３．４ｍｇ）を３０℃のヘキサフルオロ－２－プロパノール（６Ｆ－ＩＰＡ、６倍量、１７５０μＬ）に溶解した。この溶液を清澄化し、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ、６ｍＬ）が入ったチューブに入れ、０℃に冷却した。混合物を０℃で１５分間撹拌し、固体を真空ろ過により単離し、４５℃で１８時間にわたって乾燥させた。
５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリルマレイン酸塩（５８３．４ｍｇ）を３０℃のヘキサフルオロ－２－プロパノール（６Ｆ－ＩＰＡ、６倍量、１７５０μＬ）に溶解した。この溶液を清澄化し、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ、６ｍＬ）が入ったチューブに入れ、０℃に冷却した。混合物を０℃で１５分間撹拌し、固体を真空ろ過により単離し、４５℃で１８時間にわたって乾燥させた。
【0308】
（４Ｆ．パターンＡのコンディショニングによるマレイン酸パターンＢの形成）
温かい真空オーブン（２５℃、オーブン内の流れを活性化するためにわずかに真空を流出させた）と水分源（静的、脱イオン水のトレイ）とを用いて、マレイン酸塩パターンＡを４８時間にわたってコンディショニングし、コンディショニングトレイ全体にわたってマルチ試料アプローチ（ＸＲＰＤ試料）による継続的なモニタリングをすべての試料がパターンＢであると報告されるまで行った。
温かい真空オーブン（２５℃、オーブン内の流れを活性化するためにわずかに真空を流出させた）と水分源（静的、脱イオン水のトレイ）とを用いて、マレイン酸塩パターンＡを４８時間にわたってコンディショニングし、コンディショニングトレイ全体にわたってマルチ試料アプローチ（ＸＲＰＤ試料）による継続的なモニタリングをすべての試料がパターンＢであると報告されるまで行った。
【0309】
（４Ｇ．マレイン酸塩パターンＢの動的蒸気収着（ＤＶＳ）分析）
規定量のマレイン酸塩パターンＢを、予め風袋引きしたメッシュステンレス鋼製バスケットに周囲条件下で入れた。完全な実験サイクルは、一定温度（２５℃）で０～９０％の範囲にわたって１０％ＲＨ間隔（各湿度レベルにつき６０分）での５回のスキャン（脱着、収着の繰り返し、および脱着）からなった。この種の拡張実験は、一連の良好に決定された湿度範囲にわたって研究対象の試料が水分を吸収する（または吸収しない）能力を実証するはずである。
規定量のマレイン酸塩パターンＢを、予め風袋引きしたメッシュステンレス鋼製バスケットに周囲条件下で入れた。完全な実験サイクルは、一定温度（２５℃）で０～９０％の範囲にわたって１０％ＲＨ間隔（各湿度レベルにつき６０分）での５回のスキャン（脱着、収着の繰り返し、および脱着）からなった。この種の拡張実験は、一連の良好に決定された湿度範囲にわたって研究対象の試料が水分を吸収する（または吸収しない）能力を実証するはずである。
【0310】
サイクル終了後、材料を０％ＲＨで単離し、結晶化度を試験した後、９０％ＲＨで最低３時間保持し、結晶化度に変化があるかどうかを再度試験した。
【0311】
結果を図５３に示す。
【0312】
固体は、最初の脱着前には約２．８重量％の水分が含まれていることを示した。最初の収着中、主な重量増加は２０％ＲＨから３０％ＲＨの間で起こった（約２重量％）。５サイクル後、材料は０に戻り、水分は含まれていなかった。
【0313】
ＸＲＰＤ分析により、０％ＲＨで混合相、９０％ＲＨでパターンＢが示された。３０％ＲＨから０％ＲＨの間にヒステリシスを伴うこのプロファイルは、３０％ＲＨを超えてから無水物から水和物への遷移が平衡に達するまでに速度論的に時間が必要である可逆的なチャネル水和物に典型的なものである。
【0314】
（生物学的活性）
（実施例Ａ）
（Ｃｈｋ－１キナーゼ阻害活性）
下記の材料およびプロトコルを用いて、式（１）の化合物（５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリル）のＣｈｋ－１キナーゼに対する活性を試験した。
（実施例Ａ）
（Ｃｈｋ－１キナーゼ阻害活性）
下記の材料およびプロトコルを用いて、式（１）の化合物（５－［［５－［４－（４－フルオロ－１－メチル－４－ピペリジル）－２－メトキシ－フェニル］－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アミノ］ピラジン－２－カルボニトリル）のＣｈｋ－１キナーゼに対する活性を試験した。
【0315】
反応緩衝液：
塩基反応緩衝液：２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０２％Ｂｒｉｊ３５、０．０２ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、０．１ｍＭ Ｎａ３ＶＯ４、２ｍＭ ＤＴＴ、１％ＤＭＳＯ
＊必要な補因子を各キナーゼ反応に個別に添加。
塩基反応緩衝液：２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０２％Ｂｒｉｊ３５、０．０２ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、０．１ｍＭ Ｎａ３ＶＯ４、２ｍＭ ＤＴＴ、１％ＤＭＳＯ
＊必要な補因子を各キナーゼ反応に個別に添加。
【0316】
反応手順：
（ｉ）新しく調製した塩基反応緩衝液中で、指示された基質を調製する。
（ｉｉ）必要な補因子を上記の基質溶液に供給する。
（ｉｉｉ）指示されたキナーゼを基質溶液に供給し、穏やかに混合する。
（ｉｖ）ＤＭＳＯ中の化合物をキナーゼ反応混合物に供給する。
（ｖ）３３Ｐ－ＡＴＰ（比活性０．０１μＣｉ／μｌ最終）を反応混合物に供給し、反応を開始させる。
（ｖｉ）キナーゼ反応物を室温で１２０分間インキュベートする。
（ｖｉｉ）反応物をＰ８１イオン交換ろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ ＃３６９８－９１５）上にスポットする。
（ｖｉｉｉ）ろ紙を０．１％リン酸中で十分に洗浄する。
（ｉｘ）ろ紙を乾燥させ、シンチレーションカウンターで計数を測定する。
（ｉ）新しく調製した塩基反応緩衝液中で、指示された基質を調製する。
（ｉｉ）必要な補因子を上記の基質溶液に供給する。
（ｉｉｉ）指示されたキナーゼを基質溶液に供給し、穏やかに混合する。
（ｉｖ）ＤＭＳＯ中の化合物をキナーゼ反応混合物に供給する。
（ｖ）３３Ｐ－ＡＴＰ（比活性０．０１μＣｉ／μｌ最終）を反応混合物に供給し、反応を開始させる。
（ｖｉ）キナーゼ反応物を室温で１２０分間インキュベートする。
（ｖｉｉ）反応物をＰ８１イオン交換ろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ ＃３６９８－９１５）上にスポットする。
（ｖｉｉｉ）ろ紙を０．１％リン酸中で十分に洗浄する。
（ｉｘ）ろ紙を乾燥させ、シンチレーションカウンターで計数を測定する。
【0317】
キナーゼ情報：
ＣＨＫ－１：Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ０１６５８２
組換え全長構築物、Ｎ末端ＧＳＴタグ付き、昆虫細胞から精製。
このキナーゼを活性化するための特別な措置は取らなかった。
アッセイにおける最終濃度＝０．５ｎＭ
基質：ＣＨＫｔｉｄｅ
ペプチド配列：［ＫＫＫＶＳＲＳＧＬＹＲＳＰＳＭＰＥＮＬＮＲＰＲ］
アッセイにおける最終濃度＝２０μＭ
反応混合物に追加の補因子を添加しない。
ＣＨＫ－１：Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ０１６５８２
組換え全長構築物、Ｎ末端ＧＳＴタグ付き、昆虫細胞から精製。
このキナーゼを活性化するための特別な措置は取らなかった。
アッセイにおける最終濃度＝０．５ｎＭ
基質：ＣＨＫｔｉｄｅ
ペプチド配列：［ＫＫＫＶＳＲＳＧＬＹＲＳＰＳＭＰＥＮＬＮＲＰＲ］
アッセイにおける最終濃度＝２０μＭ
反応混合物に追加の補因子を添加しない。
【0318】
上記のプロトコルに従って得られた結果から、式（１）の化合物のＣｈｋ－１キナーゼに対するＩＣ５０値は０．０００１５μＭであると決定された。
【0319】
（実施例Ｂ）
（ゲムシタビン併用細胞アッセイ）
対数増殖期にあるＭＩＡ ＰａＣａ－２（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１４２０）細胞をトリプシン処理し、プレート表面から細胞を剥がす。１０％ウシ胎児血清と１％ピルビン酸ナトリウムと１％Ｌ－ＧｌｕｔａＭａｘとを含有するＲＰＭＩ中の９６ウェルプレートに、約１０，０００個／ウェルの細胞を播種する。細胞を一晩かけてプレート表面に接着させる。各Ｃｈｋ１阻害剤試験化合物とゲムシタビンの１００．５倍希釈系列を、最終最高濃度をそれぞれ３０００ｎＭおよび１００ｎＭとして作成する。各Ｃｈｋ１阻害剤とゲムシタビンとは、各濃度のＣｈｋ１阻害剤が各濃度のゲムシタビンに添加されるように組み合わせる。各薬剤は、単剤としても試験する。薬剤を接着細胞に添加し（２連）、７２時間インキュベートする。７２時間目に、細胞をＰｒｏｍｅｇａ社製Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ試薬で約１５分間処理する。ＢＭＧ社製Ｐｏｌａｒｓｔａｒ Ｏｍｅｇａプレートリーダーを用いて発光（相対的発光量、ＲＬＵ）を記録する。総シグナルを５０％減少させる単剤濃度（ＩＣ５０）を、ＰＲＩＳＭソフトウェアと４パラメータ非線形回帰曲線フィッティングとによって算出する。併用研究の場合は、ＰＲＩＳＭを用いて、Ｘ軸をゲムシタビン濃度、Ｙ軸をＲＬＵとするＸＹプロット上にＲＬＵをプロットする。Ｃｈｋ１阻害剤の濃度ごとのＲＬＵを、ゲムシタビン濃度の関数としてプロットする。Ｃｈｋ１の各濃度におけるゲムシタビン単独のＩＣ５０は、４パラメータ非線形回帰曲線フィッティングによって決定される。ゲムシタビン単独のＩＣ５０を２分の１および１０分の１に減少させるＣｈｋ１阻害剤のおおよその濃度を、相乗的効力の指標として算出する。
（ゲムシタビン併用細胞アッセイ）
対数増殖期にあるＭＩＡ ＰａＣａ－２（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１４２０）細胞をトリプシン処理し、プレート表面から細胞を剥がす。１０％ウシ胎児血清と１％ピルビン酸ナトリウムと１％Ｌ－ＧｌｕｔａＭａｘとを含有するＲＰＭＩ中の９６ウェルプレートに、約１０，０００個／ウェルの細胞を播種する。細胞を一晩かけてプレート表面に接着させる。各Ｃｈｋ１阻害剤試験化合物とゲムシタビンの１００．５倍希釈系列を、最終最高濃度をそれぞれ３０００ｎＭおよび１００ｎＭとして作成する。各Ｃｈｋ１阻害剤とゲムシタビンとは、各濃度のＣｈｋ１阻害剤が各濃度のゲムシタビンに添加されるように組み合わせる。各薬剤は、単剤としても試験する。薬剤を接着細胞に添加し（２連）、７２時間インキュベートする。７２時間目に、細胞をＰｒｏｍｅｇａ社製Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ試薬で約１５分間処理する。ＢＭＧ社製Ｐｏｌａｒｓｔａｒ Ｏｍｅｇａプレートリーダーを用いて発光（相対的発光量、ＲＬＵ）を記録する。総シグナルを５０％減少させる単剤濃度（ＩＣ５０）を、ＰＲＩＳＭソフトウェアと４パラメータ非線形回帰曲線フィッティングとによって算出する。併用研究の場合は、ＰＲＩＳＭを用いて、Ｘ軸をゲムシタビン濃度、Ｙ軸をＲＬＵとするＸＹプロット上にＲＬＵをプロットする。Ｃｈｋ１阻害剤の濃度ごとのＲＬＵを、ゲムシタビン濃度の関数としてプロットする。Ｃｈｋ１の各濃度におけるゲムシタビン単独のＩＣ５０は、４パラメータ非線形回帰曲線フィッティングによって決定される。ゲムシタビン単独のＩＣ５０を２分の１および１０分の１に減少させるＣｈｋ１阻害剤のおおよその濃度を、相乗的効力の指標として算出する。
【0320】
上記のプロトコルに従って得られた結果から、式（１）の化合物単独のＭＩＡＰａｃａ－２細胞に対するＩＣ５０値（Ｃｈｋ１ ＩＣ５０）と、式（１）の化合物のゲムシタビン単独のＩＣ５０を２分の１に減少させるおおよその化合物濃度（２ｘＬＳ）と１０分の１に減少させるおおよその化合物濃度（１０ｘＬＳ）とを、以下に示す。
【0321】
【表17】
【0322】
（医薬製剤）
（ｉ）錠剤製剤
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩を含有する錠剤組成物を、当該化合物５０ｍｇを希釈剤としてのラクトース（ＢＰ）１９７ｍｇおよび滑沢剤としてのステアリン酸マグネシウム３ｍｇと混合し、圧縮して公知の方法で錠剤を形成することにより、調製する。
（ｉ）錠剤製剤
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩を含有する錠剤組成物を、当該化合物５０ｍｇを希釈剤としてのラクトース（ＢＰ）１９７ｍｇおよび滑沢剤としてのステアリン酸マグネシウム３ｍｇと混合し、圧縮して公知の方法で錠剤を形成することにより、調製する。
【0323】
（ｉｉ）カプセル製剤
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩１００ｍｇをラクトース１００ｍｇと混合し、得られた混合物を標準の不透明硬質ゼラチンカプセルに充填することにより、カプセル製剤を調製する。
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩１００ｍｇをラクトース１００ｍｇと混合し、得られた混合物を標準の不透明硬質ゼラチンカプセルに充填することにより、カプセル製剤を調製する。
【0324】
（ｉｉｉ）注射製剤Ｉ
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩を１０％のプロピレングリコールを含む水に溶解して、活性化合物の濃度を１．５重量％にすることにより、注射による投与用の非経口組成物を調製可能である。この溶液をろ過によって滅菌し、アンプルに充填し、密封する。
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩を１０％のプロピレングリコールを含む水に溶解して、活性化合物の濃度を１．５重量％にすることにより、注射による投与用の非経口組成物を調製可能である。この溶液をろ過によって滅菌し、アンプルに充填し、密封する。
【0325】
（ｉｖ）注射製剤ＩＩ
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩（２ｍｇ／ｍｌ）とマンニトール（５０ｍｇ／ｍｌ）とを水に溶解し、溶液を滅菌ろ過し、密封可能な１ｍｌのバイアルまたはアンプルに充填することにより、注射用の非経口組成物を調製する。
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩（２ｍｇ／ｍｌ）とマンニトール（５０ｍｇ／ｍｌ）とを水に溶解し、溶液を滅菌ろ過し、密封可能な１ｍｌのバイアルまたはアンプルに充填することにより、注射用の非経口組成物を調製する。
【0326】
（ｖ）注射製剤ＩＩＩ
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩を２０ｍｇ／ｍｌで水に溶解することにより、注射または注入による静脈内送達用の製剤を調製可能である。その後、バイアルを密封し、オートクレーブ殺菌する。
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩を２０ｍｇ／ｍｌで水に溶解することにより、注射または注入による静脈内送達用の製剤を調製可能である。その後、バイアルを密封し、オートクレーブ殺菌する。
【0327】
（ｖｉ）注射製剤ＩＶ
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩を、緩衝液（例えば、０．２Ｍ酢酸塩、ｐＨ４．６）を含む水に２０ｍｇ／ｍｌで溶解することにより、注射または注入による静脈内送達用の製剤を調製可能である。その後、バイアルを密封し、オートクレーブ殺菌する。
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩を、緩衝液（例えば、０．２Ｍ酢酸塩、ｐＨ４．６）を含む水に２０ｍｇ／ｍｌで溶解することにより、注射または注入による静脈内送達用の製剤を調製可能である。その後、バイアルを密封し、オートクレーブ殺菌する。
【0328】
（ｖｉｉ）皮下注射製剤
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩と医薬品グレードのトウモロコシ油とを５ｍｇ／ｍｌの濃度になるように混合することにより、皮下投与用の組成物を調製する。この組成物を滅菌し、適切な容器に充填する。
実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩と医薬品グレードのトウモロコシ油とを５ｍｇ／ｍｌの濃度になるように混合することにより、皮下投与用の組成物を調製する。この組成物を滅菌し、適切な容器に充填する。
【0329】
（ｖｉｉｉ）凍結乾燥製剤
製剤化した実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩のアリコートを、５０ｍｌのバイアルに入れ、凍結乾燥する。凍結乾燥の際、ワンステップ凍結プロトコルを用いて（－４５℃）で組成物を凍結させる。アニーリングのために温度を－１０℃まで上げた後、－４５℃での凍結まで下げ、次に＋２５℃で約３４００分間一次乾燥し、その次に、５０℃まで温度を段階的に上げながら二次乾燥する。一次乾燥および二次乾燥時の圧力は８０ミリトールに設定する。
製剤化した実施形態１．１から実施形態１．４８のいずれか１つまたは上記実施例に規定される薬学的に許容可能な塩のアリコートを、５０ｍｌのバイアルに入れ、凍結乾燥する。凍結乾燥の際、ワンステップ凍結プロトコルを用いて（－４５℃）で組成物を凍結させる。アニーリングのために温度を－１０℃まで上げた後、－４５℃での凍結まで下げ、次に＋２５℃で約３４００分間一次乾燥し、その次に、５０℃まで温度を段階的に上げながら二次乾燥する。一次乾燥および二次乾燥時の圧力は８０ミリトールに設定する。
【0330】
（均等物）
上述の例は、本発明を説明する目的で提示したものであり、本発明の範囲を何ら限定するものではない。上記に説明し、例で示した本発明の具体的な実施形態に対して、本発明の基礎をなす原理から逸脱することなく、多くの修正および変更を加え得ることは容易に明らかになるであろう。このような修正および変更はすべて本出願に包含されることが意図されている。
上述の例は、本発明を説明する目的で提示したものであり、本発明の範囲を何ら限定するものではない。上記に説明し、例で示した本発明の具体的な実施形態に対して、本発明の基礎をなす原理から逸脱することなく、多くの修正および変更を加え得ることは容易に明らかになるであろう。このような修正および変更はすべて本出願に包含されることが意図されている。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
【図33】
【図34】
【図35】
【図36】
【図37】
【図38】
【図39】
【図40】
【図41】
【図42】
【図43】
【図44】
【図45】
【図46】
【図47】
【図48】
【図49】
【図50】
【図51】
【図52】
【図53】
【図54】
【図55】
【国際調査報告】