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特表2024-521952多重標的リン酸化酵素阻害活性を有するヌクレオシド誘導体及びそれを含むがんの予防及び治療用薬学的組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-06-04
(54)【発明の名称】多重標的リン酸化酵素阻害活性を有するヌクレオシド誘導体及びそれを含むがんの予防及び治療用薬学的組成物
(51)【国際特許分類】
C07H 19/14 20060101AFI20240528BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240528BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240528BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20240528BHJP
A61P 15/14 20060101ALI20240528BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20240528BHJP
A61P 13/08 20060101ALI20240528BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240528BHJP
A61K 31/7064 20060101ALI20240528BHJP
【ＦＩ】
C07H19/14 CSP
A61P35/00
A61P11/00
A61P1/04
A61P15/14
A61P1/16
A61P13/08
A61P43/00 111
A61K31/7064
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023575577
(86)(22)【出願日】2022-05-31
(85)【翻訳文提出日】2023-12-07
(86)【国際出願番号】 KR2022007747
(87)【国際公開番号】W WO2022260336
(87)【国際公開日】2022-12-15
(31)【優先権主張番号】10-2021-0073914
(32)【優先日】2021-06-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】520188684
【氏名又は名称】フューチャー・メディシン・カンパニー・リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＦＵＴＵＲＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＣＯ．， ＬＴＤ．
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100156144
【弁理士】
【氏名又は名称】落合 康
(72)【発明者】
【氏名】チョン，ラクシン
(72)【発明者】
【氏名】イ，サングク
(72)【発明者】
【氏名】トリパティ，スシル クマール
(72)【発明者】
【氏名】マシェルカル，カリシュマ ケイ
(72)【発明者】
【氏名】ソン，キス
(72)【発明者】
【氏名】ヨム，ユンア
(72)【発明者】
【氏名】クォン，ジヨン
【テーマコード（参考）】
4C057
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C057BB02
4C057CC03
4C057CC05
4C057DD01
4C057LL04
4C057LL18
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA59
4C086ZA68
4C086ZA75
4C086ZA81
4C086ZB26
4C086ZC20
(57)【要約】
本発明はリン酸化酵素を阻害することでがんの予防または治療に使用され得るヌクレオシド誘導体及びその薬学的組成物に関し、前記ヌクレオシド誘導体はＮＴＲＫ１、ＣＳＮＫ１Ｄ、ＤＹＲＫ１Ａ、ＤＹＲＫ１Ｂ、及びＦＬＴ３のようなリン酸化酵素に対して阻害活性を有し、それによってリン酸化酵素と直接間接的に関連する多様ながん細胞に対する阻害活性を示すため、肺がん、結腸がん、乳がん、肝がん、胃がん、及び前立腺がんなどの各種がんを予防または治治療するのに使用され得る。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記化学式１で表されるヌクレオシド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩。【化1】
Ｘは酸素（０）または硫黄（Ｓ）であり、
Ｒは、水素（Ｈ）；置換または非置換のＣ１乃至Ｃ１０のアルキル（ａｌｋｙｌ）；または置換または非置換のＣ６乃至Ｃ２０のアリール（ａｒｙｌ）またはアルキルアリール（ａｌｋｙｌａｒｙｌ）であり、
Ｒ１は置換または非置換のＣ２乃至Ｃ１０のヘテロアリール（ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ）；置換または非置換のＣ２乃至Ｃ８のアルケニル（ａｌｋｅｎｙｌ）；置換または非置換のＣ６乃至Ｃ２０のアリール（ａｒｙｌ）；置換または非置換のＣ２乃至Ｃ８のアルキニル（ａｌｋｙｎｙｌ）；シアノ（ｃｙａｎｏ）；アミド（ａｍｉｄｅ）；またはカルボキシル（ｃａｒｂｏｘｙｌ）であり、
Ｒ２はハロゲン（ｈａｌｏｇｅｎ）；置換または非置換のアミン（ａｍｉｎｅ）；または置換または非置換のＣ６乃至Ｃ２０のアリール（ａｒｙｌ）またはアルキルアリール（ａｌｋｙｌａｒｙｌ）であり、
Ｙは水素（Ｈ）；ヒドロキシ（ｈｙｄｒｏｘｙ）、エステル（ｅｓｔｅｒ）、アルコキシ（ａｌｋｏｘｙ）、アリール（ａｒｙｌ）、ヘテロアリール（ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ）、ヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）、シクロアルキル（ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）、アジド（ａｚｉｄｅ）、アミン（ａｍｉｎｅ）、置換されたアミン、尿素（ｕｒｅａ）、またはアミド（ａｍｉｄｅ）に置換されたアルキル（ａｌｋｙｌ）；または＝ＣＺ２であり、前記Ｚはそれぞれ独立して水素（Ｈ）またはＣ２乃至Ｃ８のアルキル（ａｌｋｙｌ）である。
【請求項2】
前記へ輝アリールは、フラにる（furanyl）、チオフェニル（thiophenｙｌ）、ピロリル（ｐｙｒｒｏｌｙｌ）、ピラニル（ｐｙｒａｎｙｌ）、ピラゾリル（ｐｙｒａｚｏｌｙｌ）、ピリジニル（ｐｙｒｉｄｉｎｙｌ）、トリアゾリル（ｔｒｉａｚｏｌｙｌ）、イミダゾリル（ｉｍｉｄａｚｏｌｙｌ）、チアゾリル（ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）、ピリミジニル（ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｙｌ）、ピラジニル（ｐｙｒａｚｉｎｙｌ）、ピリダジニル（ｐｙｒｉｄａｚｉｎｙｌ）、インドリル（ｉｎｄｏｌｙｌ）、キノリニル（ｑｕｉｎｏｌｉｎｙｌ）、またはプリニル（ｐｕｒｉｎｙｌ）であり、前記ヘテロシクロアルキルは、テトラヒドロフラニル（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎｙｌ）、チオラニル（ｔｈｉｏｌａｎｙｌ）、ピロリジニル（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｙｌ）、テトラヒドロピラニル（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒａｎｙｌ）、ピぺリジニル（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｙｌ）、ジオキサニル（ｄｉｏｘａｎｙｌ）、モルホリノ（ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）、またはテトラヒドロピリミジニル（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｙｌ）であり、
前記アリールはフェニル（ｐｈｅｎｙｌ）、ナフタレニル（ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｙｌ）、アントラセニル（ａｎｔｈｒａｃｅｎｙｌ）、またはフェナントレニル（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎｙｌ）であり、前記アルキルアリールはベンジル（ｂｅｎｚｙｌ）であり、
前記アルキニルは、エチニル（ｅｔｈｙｎｙｌ）、プロピニル（ｐｒｏｐｙｎｙｌ）、ブチニル（ｂｕｔｙｎｙｌ）、ペンチニル（ｐｅｎｔｙｎｙｌ）、ヘキシニル（ｈｅｘｙｎｙｌ）、へプチニル（ｈｅｐｔｙｎｙｌ）、オクチニル（ｏｃｔｙｎｙｌ）、ノニニル（ｎｏｎｙｎｙｌ）、またはデシニル（ｄｅｃｙｎｙｌ）であり、
前記アルケニルはエテニル（ｅｔｈｅｎｙｌ）、プロぺニル（ｐｒｏｐｅｎｙｌ）、ブテニル（ｂｕｔｅｎｙｌ）、ペンテニル（ｐｅｎｔｅｎｙｌ）、へキセニル（ｈｅｘｅｎｙｌ）、へプテニル（ｈｅｐｔｅｎｙｌ）、オクテニル（ｏｃｔｅｎｙｌ）、ノネニル（ｎｏｎｅｎｙｌ）、またはデセニル（ｄｅｃｅｎｙｌ）であり、
前記アルキルは、メチル（ｍｅｔｈｙｌ）、エチル（ｅｔｈｙｌ）、プロピル（ｐｒｏｐｙｌ）、ブチル（ｂｕｔｙｌ）、またはペンチル（ｐｅｎｔｙｌ）である、
請求項１に記載のヌクレオシド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項3】
Ｒ１はフラニル（ｆｕｒａｎｙｌ）、チオフェニル（ｔｈｉｏｐｈｅｎｙｌ）、ビニル（ｖｉｎｙｌ）、フェニル（ｐｈｅｎｙｌ）、チオモルホリノ（Ｔｈｉｏｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）フェニル、チオモルホリノジオキシドフェニル、スルホンアミド（ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ）フェニル、エチルスルホンアミドフェニル、エチニル（ｅｔｈｙｎｙｌ）、プロピニル（ｐｒｏｐｙｎｙｌ）、ブチニル（ｂｕｔｙｎｙｌ）、ジメチルブチニル（ｄｉｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｎｙｌ）、シクロプロピルエチニル（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｎｙｌ）、シアノ（ｃｙａｎｏ）、アミド（ａｍｉｄｅ）またはカルボキシ（ｃａｒｂｏｘｙ）であり、Ｒ２は塩素（Ｃｌ）またはアミン（－ＮＨ２）である、
請求項１に記載のヌクレオシド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項4】
Ｙは水素、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＯＡｒ、－ＣＨ２Ｎ３、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨＣＯＡｒ、－ＣＨ２ＮＨＣＯＮＨ２、－ＣＨ２Ｎ－ａｌｋｙｌ、－ＣＨ２Ｎ－ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ、－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ、または＝ＣＨ２であるが、前記「Ａｒ」は、フェニル、クロロ（ｃｈｌｏｒｏ）フェニル、メトキシ（ｍｅｔｈｏｘｙ）フェニル、ジメチル（ｄｉｍｅｔｈｙｌ）フェニル、またはニコチニル（ｎｉｃｏｔｉｎｙｌ）であり、前記「ａｌｋｙｌ」はメチル、エチル、プロピル、ブチル、またはペンチルであり、前記「ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ」はシクロプロピル（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ）、シクロブチル（ｃｙｃｌｏｂｕｔｙｌ）、シクロペンチル（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ）、またはシクロヘキシル（ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）である、
請求項１に記載のヌクレオシド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項5】
前記化学式１は、下記化学式１ａ－１ｂ、２ａ－２ｄ、３、４ａ－４ｄ、５、６、７ａ－７ｈ、８ａ－８ｅ、９ａ－９ｃ、１０ａ－１０ｃ、１１ａi－１１ａiii、１１ｂ、１２ａ－１２ｂ、１３ａ－１３ｇ、及び１４のうち一つである請求項１に記載のヌクレオシド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩。【化2】
【化3】
【化4】
【化5】
【化6】
【化7】
【化8】
【化9】
【化10】
【化11】
【化12】
【化13】
【化14】
【化15】
【請求項6】
請求項１乃至請求項５のうちいずれか一項に記載のヌクレオシド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を含む、がんの予防または治療用薬学的組成物。
【請求項7】
前記がんは肺がん、結腸がん、乳がん、肝がん、胃がん、及び前立腺がんからなる群よりお選択される一つ以上である、請求項６に記載のがんの予防または治療用薬学的組成物。
【請求項8】
前記ヌクレオシド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩はリン酸化酵素阻害活性を有する、請求項６に記載のがんの予防または治療用薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明はリン酸化酵素を阻害することでがんの予防または治療に使用され得るヌクレオシド誘導体及びそれを含む薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
がんの成長の主な原因のうち一つはリン酸化酵素（ｋｉｎａｓｅ）の突然変異である。タンパク質リン酸化酵素はタンパク質のリン酸化を仲裁することで細胞機能に重要な役割を担っている。これらはアデノシン三リン酸（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ；ＡＴＰ）の末端リン酸基をタンパク質基質に移すことで信号伝達、遺伝子調節、そして代謝のような反応を起こすため、リン酸化酵素の調節障害はがんを含む多様な疾病に関連し得る。よって、リン酸化酵素をターゲットにしてヌクレオシド誘導体を開発すればがんの治療に活用し得る。
【0003】
抗がん剤の主な問題は薬物低個性であり、これは単一療法製を行っているがん患者によく発生している。このような状況の中、多重薬物療法戦略は抵抗危機を克服することができる。一つ以上のターゲットを目標とする多重標的阻害剤はがん細胞の増殖を防ぎ、２番目に腫瘍の発生を支持する微視的環境を防ぐことで、単一標的阻害剤の効果を乗り越えることができる。
【0004】
一方、ＡＴＰの窒素塩基は水素結合によって蝶番地域と、リボース環は糖ポケットの極性残基と相互作用するのに対し、知られているリン酸化酵素阻害剤は糖ポケットとは結合せず、蝶番地域や疎水性地域を占める。よって、本発明者は選択的なリン酸化酵素阻害剤のデザインにおいて、ＡＴＰが結合しない疎水性ポケットが阻害剤開発の重要な部位であることを認識した。
【0005】
そこで、本発明者は、窒素塩基は蝶番地域と水素結合を形成し、疎水性残基（下記化学式１のＲ１）と他の疎水性残基（下記化学式１のＲ２）を変形させることで、疎水性ポケットを占めるヌクレオシドリン酸化酵素阻害をデザインした。また、ＡＴＰのリボース環のように、糖の極性ヒドロキシ基が糖地域と水素結合を形成することで分子をぴったり合わせるようにするが、これは結合力を増加させるということを発見した。他にも糖の一部分（下記化学式１のＹ）を変形させることで、この部分がリン酸化酵素ドメインの三リン酸結合部位に重要な結合を形成することに基づいて、合成した化合物のリン酸化酵素阻害活性をを評価した。それによって、がん細胞における過発現に関連するリン酸化酵素であるＮＴＲＫ１、ＤＹＲＫ１Ａ、ＤＹＲＫ１Ｂ、ＦＬＴ３、ＣＳＮＫ１Ｄに対して効能のある選択的阻害剤を見つけ、これらが優れた抗がん活性を示すことを確認して本発明を完成した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
そこで、本発明が解決しようとする課題は、選択的に特定のリン酸化酵素を阻害することでがんの予防または治療に使用され得るヌクレオシド誘導体及びそれを含む薬学的組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0007】
前記課題を解決するための本発明の一実施例によるヌクレオシド誘導体は、下記化学式１で表される。
【0008】
【化1】
Ｒは、水素（Ｈ）；置換または非置換のＣ１乃至Ｃ１０のアルキル（ａｌｋｙｌ）；または置換または非置換のＣ６乃至Ｃ２０のアリール（ａｒｙｌ）またはアルキルアリール（ａｌｋｙｌａｒｙｌ）であり、
Ｒ１は置換または非置換のＣ２乃至Ｃ１０のヘテロアリール（ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ）；置換または非置換のＣ２乃至Ｃ８のアルケニル（ａｌｋｅｎｙｌ）；置換または非置換のＣ６乃至Ｃ２０のアリール（ａｒｙｌ）；置換または非置換のＣ２乃至Ｃ８のアルキニル（ａｌｋｙｎｙｌ）；シアノ（ｃｙａｎｏ）；アミド（ａｍｉｄｅ）；またはカルボキシル（ｃａｒｂｏｘｙｌ）であり、
Ｒ２はハロゲン（ｈａｌｏｇｅｎ）；置換または非置換のアミン（ａｍｉｎｅ）；または置換または非置換のＣ６乃至Ｃ２０のアリール（ａｒｙｌ）またはアルキルアリール（ａｌｋｙｌａｒｙｌ）であり、
Ｙは水素（Ｈ）；ヒドロキシ（ｈｙｄｒｏｘｙ）、エステル（ｅｓｔｅｒ）、アルコキシ（ａｌｋｏｘｙ）、アリール（ａｒｙｌ）、ヘテロアリール（ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ）、ヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）、シクロアルキル（ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）、アジド（ａｚｉｄｅ）、アミン（ａｍｉｎｅ）、置換されたアミン、尿素（ｕｒｅａ）、またはアミド（ａｍｉｄｅ）に置換されたアルキル（ａｌｋｙｌ）；または＝ＣＺ２であり、前記Ｚはそれぞれ独立して水素（Ｈ）またはＣ２乃至Ｃ８のアルキル（ａｌｋｙｌ）である。
【0009】
前記Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、及びＹが置換される場合、Ｃ１乃至Ｃ６のアルキル、Ｃ２乃至Ｃ１０のヘテロアリール及びスルホンアミド（ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ）のうち一つ以上の置換される。
【0010】
前記へテルアリールは、フラニル（ｆｕｒａｎｙｌ）、チオフェニル（ｔｈｉｏｐｈｅｎｙｌ）、ピロリル（ｐｙｒｒｏｌｙｌ）、ピラニル（ｐｙｒａｎｙｌ）、ピラゾリル（ｐｙｒａｚｏｌｙｌ）、ピリジニル（ｐｙｒｉｄｉｎｙｌ）、トリアゾリル（ｔｒｉａｚｏｌｙｌ）、イミダゾリル（ｉｍｉｄａｚｏｌｙｌ）、チアゾリル（ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）、ピリミジニル（ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｙｌ）、ピラジニル（ｐｙｒａｚｉｎｙｌ）、ピリダジニル（ｐｙｒｉｄａｚｉｎｙｌ）、インドリル（ｉｎｄｏｌｙｌ）、キノリニル（ｑｕｉｎｏｌｉｎｙｌ）、またはプリニル（ｐｕｒｉｎｙｌ）である。
【0011】
前記ヘテロシクロアルキルは、テトラヒドロフラニル（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎｙｌ）、チオラニル（ｔｈｉｏｌａｎｙｌ）、ピロリジニル（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｙｌ）、テトラヒドロピラニル（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒａｎｙｌ）、ピぺリジニル（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｙｌ）、ジオキサニル（ｄｉｏｘａｎｙｌ）、モルホリノ（ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）、またはテトラヒドロピリミジニル（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｙｌ）である。
【0012】
前記アリールはフェニル（ｐｈｅｎｙｌ）、ナフタレニル（ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｙｌ）、アントラセニル（ａｎｔｈｒａｃｅｎｙｌ）、またはフェナントレニル（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎｙｌ）であり、前記アルキルアリールはベンジル（ｂｅｎｚｙｌ）である。
【0013】
前記アルキニルはエチニル（ｅｔｈｙｎｙｌ）、プロピニル（ｐｒｏｐｙｎｙｌ）、ブチニル（ｂｕｔｙｎｙｌ）、ペンチニル（ｐｅｎｔｙｎｙｌ）、ヘキシニル（ｈｅｘｙｎｙｌ）、へプチニル（ｈｅｐｔｙｎｙｌ）、オクチニル（ｏｃｔｙｎｙｌ）、ノニニル（ｎｏｎｙｎｙｌ）、またはデシニル（ｄｅｃｙｎｙｌ）である。
【0014】
前記アルケニルはエテニル（ｅｔｈｅｎｙｌ）、プロぺニル（ｐｒｏｐｅｎｙｌ）、ブテニル（ｂｕｔｅｎｙｌ）、ペンテニル（ｐｅｎｔｅｎｙｌ）、へキセニル（ｈｅｘｅｎｙｌ）、へプテニル（ｈｅｐｔｅｎｙｌ）、オクテニル（ｏｃｔｅｎｙｌ）、ノネニル（ｎｏｎｅｎｙｌ）、またはデセニル（ｄｅｃｅｎｙｌ）である。
【0015】
前記アルキルはメチル（ｍｅｔｈｙｌ）、エチル（ｅｔｈｙｌ）、プロピル（ｐｒｏｐｙｌ）、ブチル（ｂｕｔｙｌ）、またはペンチル（ｐｅｎｔｙｌ）である。
【0016】
詳しくは、Ｘは硫黄であり、Ｒは水素であり、Ｒ１はフラニル（ｆｕｒａｎｙｌ）、チオフェニル（ｔｈｉｏｐｈｅｎｙｌ）、ビニル（ｖｉｎｙｌ）、フェニル（ｐｈｅｎｙｌ）、チオモルホリノ（Ｔｈｉｏｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）フェニル、チオモルホリノジオキシドフェニル、スルホンアミド（ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ）フェニル、エチルスルホンアミドフェニル、エチニル（ｅｔｈｙｎｙｌ）、プロピニル（ｐｒｏｐｙｎｙｌ）、ブチニル（ｂｕｔｙｎｙｌ）、ジメチルブチニル（ｄｉｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｎｙｌ）、シクロプロピルエチニル（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｎｙｌ）、シアノ（ｃｙａｎｏ）、アミド（ａｍｉｄｅ）またはカルボキシ（ｃａｒｂｏｘｙ）であり、Ｒ２は塩素（Ｃｌ）またはアミン（－ＮＨ２）であり、Ｙは水素、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＯＡｒ、－ＣＨ２Ｎ３、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨＣＯＡｒ、－ＣＨ２ＮＨＣＯＮＨ２、－ＣＨ２Ｎ－ａｌｋｙｌ、－ＣＨ２Ｎ－ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ、－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ、または＝ＣＨ２である。
【0017】
この際、前記「Ａｒ」はアリールであって、フェニル、クロロ（ｃｈｌｏｒｏ）フェニル、メトキシ（ｍｅｔｈｏｘｙ）フェニル、ジメチル（ｄｉｍｅｔｈｙｌ）フェニル、またはニコチニル（ｎｉｃｏｔｉｎｙｌ）であり、前記「ａｌｋｙｌ」はメチル、エチル、プロピル、ブチル、またはペンチルであり、前記「ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ」はシクロプロピル（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ）、シクロブチル（ｃｙｃｌｏｂｕｔｙｌ）、シクロペンチル（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ）、またはシクロヘキシル（ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）である。
【0018】
より詳しくは、本発明の一実施例によるヌクレオシド誘導体は、下記化学式１ａ－１ｂ、２ａ－２ｄ、３、４ａ－４ｄ、５、６、７ａ－７ｈ、８ａ－８ｅ、９ａ－９ｃ、１０ａ－１０ｃ、１１ａi－１１ａiii、１１ｂ、１２ａ－１２ｂ、１３ａ－１３ｇ、及び１４のうち一つで表現される。
【0019】
【化2】
【化3】
【化4】
【化5】
【化6】
【化7】
【化8】
【化9】
【化10】
【化11】
【化12】
【化13】
【化14】
【化15】
【0020】
前記本発明のヌクレオシド誘導体は薬学的に許容可能な塩の形態で提供される。塩としては、薬学的に許容される多様な有機酸または無機酸によって形成される酸付加塩が有用である。
【0021】
但し、これに限らず、本発明のヌクレオシド誘導体は通常の方法によって製造される全ての塩、水和物、及び溶媒化物の形態で提供されてもよい。
【0022】
上述したような本発明のヌクレオシド誘導体はＮＴＲＫ１、ＣＳＮＫ１Ｄ、ＤＹＲＫ１Ａ、ＤＹＲＫ１Ｂ、及びＦＬＴ３のようなリン酸化酵素に対して阻害活性を有し（実験例１を参照）、それによってリン酸化酵素と直接間接的に関連する多様ながん細胞に対する阻害活性を示すため（実験例２を参照）、肺がん（Ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）、結腸がん（Ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ）、乳がん（Ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）、肝がん（Ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、胃がん（Ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、及び前立腺がん（Ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ）などの各種がんを予防または治療し得る右薬学的組成物に含まれる。
【0023】
つまり、本発明のがんの予防または治療用薬学的組成物は前記ヌクレオシド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を含み、前記がんは肺がん、結腸がん、乳がん、肝がん、胃がん、及び前立腺がんからなる群より選択される一つ以上であり、前記ヌクレオシド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩はリン酸化酵素阻害活性を有する。
【0024】
前記薬学的組成物は全身的または局部的に投与されるが、投与のために一般に使用される充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの賦形剤（または希釈剤）を使用して剤型化される。
【0025】
前記薬学的組成物の好ましい投与量は、患者の状態及び体重、疾病の程度、薬物の形態、投与経路及び期間など多数の因子によって異なるが、当業者によって適切に選択される。また、投与経路は患者の状態及びその重症度によって変化する。
【0026】
その他の実施例の具体的な事項は詳細な説明に含まれている。
【発明の効果】
【0027】
本発明の実施例によるヌクレオシド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩はＮＴＲＫ１、ＣＳＮＫ１Ｄ、ＤＹＲＫ１Ａ、ＤＹＲＫ１Ｂ、及びＦＬＴ３のようなリン酸化酵素に対して阻害活性を有し、それによってリン酸化酵素と直接間接的に関連する多様ながん細胞に対する阻害活性を示すため、肺がん、結腸がん、乳がん、肝がん、胃がん、及び前立腺がんなどの各種がんを予防または治療するのに使用され得る。
【発明を実施するための形態】
【0028】
本明細書で使用された用語は実施例を説明するためのものであって、本発明を制限するものではない。本明細書において、「及び／または」は言及されたアイテムそれぞれ及び一つ以上の全ての組み合わせを含む。また、単数形は文の中で特に言及されない限り複数形も含む。明細書で使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び／または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、言及された構成要素以外にも一つ以上の他の構成要素の存在または追加を排除しない。「－」または「乃至」を使用して示した数値範囲は他の言及がない限り、その前後に記載の値をそれぞれ下限と上限として含む数値範囲を示す。「約」または「おおよそ」は、その後に記載の値及び数値範囲の２０％以内の値または数値範囲を意味する。
【0029】
本発明において、「予防」とは、症状または疾患はまだないが、このような症状または疾患にかかる可能性がある個体で症状または疾患の発生を抑制することを意味する。
【0030】
本明細書において、「治療」とは、個体で（ａ）症状または疾患の発展（悪化）の抑制、（ｂ）症状または疾患の軽減または改善、または（ｃ）症状または疾患の除去を意味する。
【0031】
本明細書において、「個体」とは、本発明の組成物を投与することで「予防」または「治療」される症状または疾患を有するヒトを含む動物、特に哺乳類を意味する。
【0032】
本明細書において、「置換されたＣｎ乃至Ｃｎ＋ｍ」の化合物とは、置換された部分を含む化合物の全ての炭素の個数がｎ乃至ｎ＋ｍである場合はもちろん、置換された部分を除外した化合物の炭素の個数がｎ乃至ｎ＋ｍも含む。
【0033】
以下、本発明の実施例を製造例と実験例を介して詳細に説明するが、本発明の効果が下記実験例によって制限されないことは明らかである。
【0034】
製造例：本発明のヌクレオシド誘導体の製造
製造例１：化合物１ａ－１ｂ及び２ａ－２ｄの合成
製造例１：化合物１ａ－１ｂ及び２ａ－２ｄの合成
【化16】
【0035】
製造例１－１：７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－４－クロロ－５－ヨード－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（化合物１６）の合成
無水アセトニトリルに４－クロロ－５－ヨード－７H－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（２．６ｇ、９．３３ｍｍｏｌ）とビス（トレメチルシリル）アセトアミド（ＢＳＡ、２．５ｍＬ、１０．２７ｍｍｏｌ）を窒素置換下に入れ、１０分間撹拌した。この溶液に化合物１５（５ｇ、１０．２７ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリルに溶解してから入れ、トリメチルシリルフルオロメタンスルホン酸塩（１．５ｍＬ、８．４０ｍｍｏｌ）を滴加し、常温で１５分間撹拌した後、８０℃で１時間更に攪拌した。反応が終結したことを確認した後、常温で酢酸エチル（７００ｍＬ）で抽出し、有機層を分液して飽和炭酸水素ナトリウム水溶液とｂｒｉｎｅで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧濾過によって残余固体を除去し、減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィで化合物１６（２．９ｇ、４０％）を得た。
無水アセトニトリルに４－クロロ－５－ヨード－７H－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（２．６ｇ、９．３３ｍｍｏｌ）とビス（トレメチルシリル）アセトアミド（ＢＳＡ、２．５ｍＬ、１０．２７ｍｍｏｌ）を窒素置換下に入れ、１０分間撹拌した。この溶液に化合物１５（５ｇ、１０．２７ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリルに溶解してから入れ、トリメチルシリルフルオロメタンスルホン酸塩（１．５ｍＬ、８．４０ｍｍｏｌ）を滴加し、常温で１５分間撹拌した後、８０℃で１時間更に攪拌した。反応が終結したことを確認した後、常温で酢酸エチル（７００ｍＬ）で抽出し、有機層を分液して飽和炭酸水素ナトリウム水溶液とｂｒｉｎｅで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧濾過によって残余固体を除去し、減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィで化合物１６（２．９ｇ、４０％）を得た。
【0036】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：δ８．４６（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．６４－７．５８（ｍ，４ Ｈ），７．４０－７．３３（ｍ，４Ｈ），７．３１－７．２８（ｍ，２Ｈ），６．２４（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），５．１０（ｄｄ，Ｊ＝５．５，２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｄｄ，Ｊ＝５．５，２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，７．３Ｈｚ，１Ｈ），３．７５（ｔｄ，Ｊ＝７．２，２．１Ｈｚ，１Ｈ），１．５５（ｓ，３Ｈ），１．２８（ｓ，３Ｈ），１．０４（ｓ，９Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３０Ｈ３４ＣｌＩＮ３Ｏ３ＳＳｉ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ７０６．０８１８，ｆｏｕｎｄ ７０６．０７９８．
【0037】
製造例１－２：７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－ヨード－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（化合物１７）の合成
化合物１６（２．９ｇ、４．１１ｍｍｏｌ）物質をｓｔａｉｎｌｅｓｓ ｓｔｅｅｌ ｂｏｍｂでＮＨ３／ｔ－ＢｕＯＨ（３０ ｍＬ）も溶かした後、９０℃で２４時間撹拌した。反応終結後、常温で反応溶液を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィで分離して化合物１７（２．４２ｇ、８６％）を得た。
化合物１６（２．９ｇ、４．１１ｍｍｏｌ）物質をｓｔａｉｎｌｅｓｓ ｓｔｅｅｌ ｂｏｍｂでＮＨ３／ｔ－ＢｕＯＨ（３０ ｍＬ）も溶かした後、９０℃で２４時間撹拌した。反応終結後、常温で反応溶液を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィで分離して化合物１７（２．４２ｇ、８６％）を得た。
【0038】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．２２（ｓ，１Ｈ），７．６４－７．６２（ｍ，４Ｈ），７．４３－７．４０（ｍ，２Ｈ），７．３７－７．３３（ｍ，５Ｈ），６．２１（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），５．８８（ｂｒｓ，２Ｈ），４．８８（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７８（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８６－３．７９（ｍ，２Ｈ），３．７７－３．７５（ｍ，１Ｈ），１．５８（ｓ，３Ｈ），１．２７（ｓ，３Ｈ），１．０７（ｓ，９Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３０Ｈ３６ＩＮ４Ｏ３ＳＳｉ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６８７．１３１７，ｆｏｕｎｄ ６８７．１３０１．
【0039】
製造例１－３：７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－（フラン－２－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミンと、７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－（チオフェン－２－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（化合物１８ａ／１８ｂ）の合成
公知の合成法（Ａ)：化合物１７（１当量）をテトラヒドロフランに溶かした後、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（１５ｍｏｌ％）触媒を入れて５分間窒素置換した。２－（トリブチルスタンニル）ヘタリール（２．５当量）を入れた後、マイクロウェーブで７０℃で１時間攪拌した。反応が終わった後、水とｂｒｉｎｅで反応を終結させ、酢酸エチルで抽出した。有機溶媒層を分液して減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィで純粋な物質を分離する。
公知の合成法（Ａ)：化合物１７（１当量）をテトラヒドロフランに溶かした後、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（１５ｍｏｌ％）触媒を入れて５分間窒素置換した。２－（トリブチルスタンニル）ヘタリール（２．５当量）を入れた後、マイクロウェーブで７０℃で１時間攪拌した。反応が終わった後、水とｂｒｉｎｅで反応を終結させ、酢酸エチルで抽出した。有機溶媒層を分液して減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィで純粋な物質を分離する。
【0040】
化合物１８ａは黄色の粘性物質で、８８％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ８．２７（ｓ，１Ｈ），７．６４－７．６１（ｍ，４Ｈ），７．４７－７．４６（ｍ，１Ｈ），７．３９－７．３６（ｍ，３Ｈ），７．３３－７．２９（ｍ，４Ｈ），６．４５－６．４４（ｍ，１Ｈ），６．２８－６．２７（ｍ，２Ｈ），５．９８（ｂｒｓ，２Ｈ），４．９５（ｄｄ，Ｊ＝５．９，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８２（ｄｄ，Ｊ＝５．９，３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９２－３．８２（ｍ，２Ｈ），３．７９－３．７５（ｍ，１Ｈ），１．５９（ｓ，３Ｈ），１．２８（ｓ，３Ｈ），１．０５（ｓ，９Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３４Ｈ３９Ｎ４Ｏ４ＳＳｉ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６２７．２４５６，ｆｏｕｎｄ ６２７．２４６３．
【0041】
化合物１８ｂは無色の粘性物質で、９２％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ８．２８（ｓ，１Ｈ），７．６２－７．５９（ｍ，４Ｈ），７．３７－７．３４（ｍ，３Ｈ），７．３２－７．２７（ｍ，４Ｈ），７．２３（ｓ，１Ｈ），７．１０－７．０７（ｍ，１Ｈ），７．００－６．９９（ｍ，１Ｈ），６．２８（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），５．４１（ｂｒｓ，２Ｈ），４．９４（ｄｄ，Ｊ＝５．５，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８１（ｄｄ，Ｊ＝５．９，３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９１－３．８２（ｍ，２Ｈ），３．７９－３．７４（ｍ，１Ｈ），１．５９（ｓ，３Ｈ），１．２８（ｓ，３Ｈ），１．０３（ｓ，９Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３４Ｈ３９Ｎ４Ｏ３Ｓ２Ｓｉ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６４３．２２２７，ｆｏｕｎｄ ６４３．２２１８．
【0042】
製造例１－４：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－２－（４－アミノ－５－（フラン－２－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－５－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン－３，４－ジオールと、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－２－（４－アミノ－５－（チオフェン－２－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－５－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン－３，４－ジオール（化合物１ａと１ｂ）の合成
公知の合成法（Ｂ）：化合物１８ａ／１８ｂをテトラヒドロフランに溶解した後、５０％トリフルオロ酢酸水溶液を滴加して１２時間攪拌した。弱塩基性正イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ（登録商標） ６６ ｆｒｅｅ ｂａｓｅ）と１時間撹拌して中和し、減圧濾過して残余固体を除去した。減圧濾過後、シリカゲルカラムクロマトグラフィによって化合物１ａ／１ｂをそれぞれ７５％、８１％の収率で得た。
公知の合成法（Ｂ）：化合物１８ａ／１８ｂをテトラヒドロフランに溶解した後、５０％トリフルオロ酢酸水溶液を滴加して１２時間攪拌した。弱塩基性正イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ（登録商標） ６６ ｆｒｅｅ ｂａｓｅ）と１時間撹拌して中和し、減圧濾過して残余固体を除去した。減圧濾過後、シリカゲルカラムクロマトグラフィによって化合物１ａ／１ｂをそれぞれ７５％、８１％の収率で得た。
【0043】
製造例１－５：化合物１９ａ－１９ｄの合成
公知の合成法（Ｃ）：化合物１７（１当量）にホウ酸塩エステル、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ）３（６ｍｏｌ％）、炭酸ナトリウム（２当量）を入れ、窒素置換されたジメチルホルムアミド／蒸留水（０．１４Ｍ／０．３６Ｍ）に溶解した後、マイクロウェーブで７０℃、１時間攪拌した。蒸留水で反応を終結させた後、酢酸エチルで抽出した。有機溶媒層を分液してから蒸留水とｂｒｉｎｅで洗浄し、減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィによって化合物１９ａ－ｄを得た。
公知の合成法（Ｃ）：化合物１７（１当量）にホウ酸塩エステル、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ）３（６ｍｏｌ％）、炭酸ナトリウム（２当量）を入れ、窒素置換されたジメチルホルムアミド／蒸留水（０．１４Ｍ／０．３６Ｍ）に溶解した後、マイクロウェーブで７０℃、１時間攪拌した。蒸留水で反応を終結させた後、酢酸エチルで抽出した。有機溶媒層を分液してから蒸留水とｂｒｉｎｅで洗浄し、減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィによって化合物１９ａ－ｄを得た。
【0044】
７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－ビニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（化合物１９ａ）。化合物１９ａは黄色の粘性物質で、８５％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）：δ８．０３（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，４Ｈ），７．４２－７．３９（ｍ，３ Ｈ），７．３７－７．３１（ｍ，４Ｈ），６．９１（ｄｄ，Ｊ＝１７．２，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），６．２１（ｓ，１Ｈ），５．４４（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），５．２０（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），５．０７－５．０５（ｍ，１Ｈ），４．９６－４．９５（ｍ，１Ｈ），３．９３－３．８９（ｍ，１Ｈ），３．８６－３．８１（ｍ，１Ｈ），３．７３－３．６９（ｍ，１Ｈ），１．５５（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｓ，３Ｈ），１．０４（ｓ，９Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３２Ｈ３９Ｎ４Ｏ３ＳＳｉ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ５８７．２５０７，ｆｏｕｎｄ ５８７．２５０６．
【0045】
７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－フェニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（化合物１９ｂ）。化合物１９ｂは無色の粘性物質で、９１％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）：δ８．１１（ｓ，１Ｈ），７．６２－７．５９（ｍ，４Ｈ），７．４３－７．４１（ｍ，３Ｈ），７．３９－７．３３（ｍ，４Ｈ），７．２９－７．２６（ｍ，４Ｈ），７．２３（ｓ，１Ｈ），６．２７（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｄｄ，Ｊ＝５．４，２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｄｄ，Ｊ＝５．５，２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９２－３．８２（ｍ，２Ｈ），３．７５－３．７１（ｍ，１Ｈ），１．５７（ｓ，３Ｈ），１．３０（ｓ，３Ｈ），１．０１（ｓ，９Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３６Ｈ４１Ｎ４Ｏ３ＳＳｉ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６３７．２６６３，ｆｏｕｎｄ ６３７．２６４６．
【0046】
４－（４－（４－アミノ－７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）フェニル）チオモルホリン１，１－ジオキシド（化合物１９ｃ）。化合物１９ｃは無色の粘性物質で、８９％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ８．２７（ｓ，１Ｈ），７．６１－７．５９（ｍ，４Ｈ），７．４０－７．３４（ｍ，４Ｈ），７．３２－７．２７（ｍ，４Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），６．９４－６．９２（ｍ，２Ｈ），６．３１（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｂｒｓ，２Ｈ），４．９９（ｄｄ，Ｊ＝５．９，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８２（ｄｄ，Ｊ＝５．９，２．７Ｈｚ，１Ｈ），３．９３－３．８６（ｍ，４Ｈ），３．８４－３．８２（ｍ，２Ｈ），３．７９－３．７５（ｍ，１Ｈ），３．１３－３．１１（ｍ，４Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｓ，３Ｈ），１．０３（ｓ，９Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ４０Ｈ４８Ｎ５Ｏ５Ｓ２Ｓｉ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ７７０．２８６１，ｆｏｕｎｄ ７７０．２８６５．
【0047】
Ｎ－（４－（４－アミノ－７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）フェニル）エタンスルホンアミド（化合物１９ｄ）。化合物１９ｄは無色の粘性物質で、８７％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．２９（ｓ，１Ｈ），７．６０－７．５９（ｍ，４Ｈ），７．３９－７．３４（ｍ，２Ｈ），７．３２－７．３０（ｍ，４Ｈ），７．２８－７．２７（ｍ，２Ｈ），７．２５－７．２４（ｍ，２Ｈ），７．２０（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｂｒｓ，１Ｈ），６．３０（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），５．３７（ｂｒｓ，２Ｈ），４．９７（ｄｄ，Ｊ＝５．６，３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８２（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２．７Ｈｚ，１Ｈ），３．９０－３．８２（ｍ，２Ｈ），３．８０－３．７８（ｍ，１Ｈ），３．１５（ｑ，Ｊ＝１４．７，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．２９（ｓ，３Ｈ），１．０２（ｓ，９Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３８Ｈ４６Ｎ５Ｏ５Ｓ２Ｓｉ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ７４４．２７０４，ｆｏｕｎｄ ７４４．２６９８．
【0048】
製造例１－６：化合物２ａ－２ｄの合成
前記公知の合成法（Ｂ）を利用して化合物２ａ－ｄをそれぞれ７８％、８１％、８０％、８０％の収率で合成した。
前記公知の合成法（Ｂ）を利用して化合物２ａ－ｄをそれぞれ７８％、８１％、８０％、８０％の収率で合成した。
【0049】
製造例２：化合物３及び４ａ－４ｄの合成
【化17】
【0050】
製造例２－１：７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－（（トリメチルシリル）エチニル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（化合物２０）の合成
公知の合成法（Ｄ）：化合物１７にヨウ化銅（I）（２５ｍｏｌ％）、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（１０ｍｏｌ％）を入れた後、ジメチルホルムアミド－トリエチルアミン（４：１）を入れて５分間窒素置換した。相応するアルキンを入れ、マイクロウェーブで５０℃で１時間攪拌した。酢酸エチルと蒸留水で抽出し、有機層を分液した後、無水ＭｇＳＯ４で乾燥して、減圧濾過によって残余固体を除去した。ろ液を減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで化合物を得た。
公知の合成法（Ｄ）：化合物１７にヨウ化銅（I）（２５ｍｏｌ％）、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（１０ｍｏｌ％）を入れた後、ジメチルホルムアミド－トリエチルアミン（４：１）を入れて５分間窒素置換した。相応するアルキンを入れ、マイクロウェーブで５０℃で１時間攪拌した。酢酸エチルと蒸留水で抽出し、有機層を分液した後、無水ＭｇＳＯ４で乾燥して、減圧濾過によって残余固体を除去した。ろ液を減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで化合物を得た。
【0051】
化合物２０は無色の粘性物質で、９３％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．２４（ｓ，１Ｈ），７．６５－７．６２（ｍ，４Ｈ），７．４２－７．３９（ｍ，３Ｈ），７．３７－７．３４（ｍ，４Ｈ），６．１９（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），５．７３（ｂｒｓ，２Ｈ），４．８９（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２．６Ｈｚ，１Ｈ），４．７８（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８７－３．８４（ｍ，１Ｈ），３．７９－３．７３（ｍ，２Ｈ），１．５７（ｓ，３Ｈ），１．２７（ｓ，３Ｈ），１．０７（ｓ，９Ｈ），０．２４（ｓ，９Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３５Ｈ４５Ｎ４Ｏ３ＳＳｉ２ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６５７．２７４５，ｆｏｕｎｄ ６５７．２７３９．
【0052】
製造例２－２：（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（４－アミノ－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）メタノール（化合物２１）の合成
公知の合成法（Ｅ）：化合物２０（０．５８ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（５．８ｍＬ）に溶解した後、１Ｍフッ化テトラ－ｎ－ブチルアンモニウム（２．６４ｍＬ、２．６４ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を常温で４０分間撹拌した後、塩化アンモニウムで反応を終結した。酢酸エチルで抽出した後、有機溶媒層を分液して蒸留水とｂｒｉｎｅで洗浄した後、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濾過で残余固体を除去した。減圧濾過後、シリカゲルクロマトグラフィで化合物２１（０．２７ｇ、９０％）を得た。
公知の合成法（Ｅ）：化合物２０（０．５８ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（５．８ｍＬ）に溶解した後、１Ｍフッ化テトラ－ｎ－ブチルアンモニウム（２．６４ｍＬ、２．６４ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を常温で４０分間撹拌した後、塩化アンモニウムで反応を終結した。酢酸エチルで抽出した後、有機溶媒層を分液して蒸留水とｂｒｉｎｅで洗浄した後、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濾過で残余固体を除去した。減圧濾過後、シリカゲルクロマトグラフィで化合物２１（０．２７ｇ、９０％）を得た。
【0053】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：δ８．１２（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），６．２７（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１４（ｄｄ，Ｊ＝５．３，３．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９７（ｄｄ，Ｊ＝５．４，２．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７９－３．７４（ｍ，２Ｈ），３．７３（ｓ，１Ｈ），３．７１－３．６８（ｍ，１Ｈ），１．５８（ｓ，３Ｈ），１．３２（ｓ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ１６Ｈ１９Ｎ４Ｏ３Ｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ３４７．１１７２，ｆｏｕｎｄ ３４７．１１６８．
【0054】
製造例２－３：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－２－（４－アミノ－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－５－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン－３，４－ジオール（化合物３）の合成
公知の合成法（Ｆ）：化合物２１（０．２１ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフランに溶解した後、低温で２Ｎ塩酸水溶液（６ｍＬ）を滴加し、常温で１５時間攪拌した。反応終結後、弱塩基性正イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ(登録商標) ６６ ｆｒｅｅ ｂａｓｅ）で１時間撹拌しながら中和した。減圧濾過で残余固体を除去してから減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで化合物３（０．１３ｇ、７２％）を白色固体で得た。
公知の合成法（Ｆ）：化合物２１（０．２１ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフランに溶解した後、低温で２Ｎ塩酸水溶液（６ｍＬ）を滴加し、常温で１５時間攪拌した。反応終結後、弱塩基性正イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ(登録商標) ６６ ｆｒｅｅ ｂａｓｅ）で１時間撹拌しながら中和した。減圧濾過で残余固体を除去してから減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで化合物３（０．１３ｇ、７２％）を白色固体で得た。
【0055】
製造例２－４：化合物２２ａ－２２ｄの合成
化合物２２ａ－ｄは前記公知の合成法（Ｄ）によって合成した。
化合物２２ａ－ｄは前記公知の合成法（Ｄ）によって合成した。
【0056】
７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－（プロプ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（化合物２２ａ）。化合物２２ａは粘性物質で、９６％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ８．２２（ｓ，１Ｈ），７．６６－７．６３（ｍ，４Ｈ），７．４１－７．４０（ｍ，２Ｈ），７．３８－７．３４（ｍ，４Ｈ），７．３０（ｓ，１Ｈ），６．２０（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７４（ｂｒｓ，２Ｈ），４．９０（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．８０（ｄｄ，Ｊ＝６．０，５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｄｄ，Ｊ＝１０，６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８２－３．７５（ｍ，２Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ），１．５８（ｓ，３Ｈ），１．２８（ｓ，３Ｈ），１．０８（ｓ，９Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３３Ｈ３９Ｎ４Ｏ３ＳＳｉ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ５９９．２５０７，ｆｏｕｎｄ ５９９．２５１２．
【0057】
５－（ブト－１－イン－１－イル）－７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（化合物２２ｂ）。化合物２２ｂは粘性物質で、９１％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．２２（ｓ，１Ｈ），７．６５－７．６２（ｍ，４Ｈ），７．４２－７．３９（ｍ，２Ｈ），７．３７－７．３４（ｍ，４Ｈ），７．３０（ｓ，１Ｈ），６．１９（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），５．６８（ｂｒｓ，２Ｈ），４．８９（ｄｄ，Ｊ＝５．７，２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７９（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８７－３．８５（ｍ，１Ｈ），３．８０－３．７７（ｍ，１Ｈ），３．７６－３．７４（ｍ，１Ｈ），２．４３（ｑ，Ｊ＝１４．９，７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．５７（ｓ，３Ｈ），１．２７（ｓ，３Ｈ），１．２３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３ Ｈ），１．０６（ｓ，９Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３４Ｈ４１Ｎ４Ｏ３ＳＳｉ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６１３．２６６３，ｆｏｕｎｄ ６１３．２６６９．
【0058】
７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－（３，３－ジメチルブト－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（化合物２２ｃ）。化合物２２ｃは粘性物質で、８０％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．２１（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，４Ｈ），７．４２－７．４０（ｍ，２Ｈ），７．３８－７．３４（ｍ，４Ｈ），７．３２（ｓ，１Ｈ），６．２０（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），５．８３（ｂｒｓ，２Ｈ），４．８８（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．５，２．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｄｄ，Ｊ＝９．７，６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７９－３．７３（ｍ，２Ｈ），１．５７（ｓ，３Ｈ），１．３１（ｓ，９Ｈ），１．２６（ｓ，３Ｈ），１．０７（ｓ，９Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３６Ｈ４５Ｎ４Ｏ３ＳＳｉ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６４１．２９７６，ｆｏｕｎｄ ６４１．２９９１．
【0059】
７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－（シクロプロピルエチニル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（化合物２２ｄ）。化合物２２ｄは粘性物質で、９２％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ８．２１（ｓ，１Ｈ），７．６６－７．６３（ｍ，４Ｈ），７．４４－７．４０（ｍ，２Ｈ），７．３９－７．３４（ｍ，４Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），６．１９（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），５．９３（ｂｒｓ，２Ｈ），４．８８（ｄｄ，Ｊ＝５．９，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．７９（ｄｄ，Ｊ＝５．９，２．７Ｈｚ，１Ｈ），３．８９－３．８５（ｍ，１Ｈ），３．８２－３．７３（ｍ，２Ｈ），１．５８（ｓ，３Ｈ），１．４９－１．４４（ｍ，１Ｈ），１．２７（ｓ，３Ｈ），１．０７（ｓ，９Ｈ），０．９２－０．８５（ｍ，２Ｈ），０．７９－０．７５（ｍ，２Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３５Ｈ４１Ｎ４Ｏ３ＳＳｉ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６２５．２６６３，ｆｏｕｎｄ ６２５．２６６７．
【0060】
製造例２－５：化合物４ａ－４ｄの合成
前記公知の合成法（Ｂ）によって化合物４ａ－ｄをそれぞれ８３％、８６％、８２％、８６％の収率で合成した。
前記公知の合成法（Ｂ）によって化合物４ａ－ｄをそれぞれ８３％、８６％、８２％、８６％の収率で合成した。
【0061】
製造例３：化合物５及び６の合成
【化18】
【0062】
製造例３－１：４－アミノ－７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボニトリル（化合物２３）の合成
化合物１７（０．４２ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解した後、シアン化亜鉛（０．１０ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．００７１ｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を加え、マイクロウェーブで１５０℃で１５分間撹拌した。反応が終わった後、常温で減圧濾過し、残所固体を除去してから減圧濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィで化合物２３（０．２９ｇ、８２％）を得た。
化合物１７（０．４２ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解した後、シアン化亜鉛（０．１０ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．００７１ｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を加え、マイクロウェーブで１５０℃で１５分間撹拌した。反応が終わった後、常温で減圧濾過し、残所固体を除去してから減圧濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィで化合物２３（０．２９ｇ、８２％）を得た。
【0063】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ８．３６（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），７．６６－７．６２（ｍ，４Ｈ），７．４５－７．３５（ｍ，６Ｈ），６．１７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９１（ｄｄ，Ｊ１＝２．４Ｈｚ，Ｊ２＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），１．６１（ｓ，３Ｈ），１．３０（ｓ，３Ｈ），１．０９（ｓ，９Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３１Ｈ３６Ｎ５Ｏ３ＳＳｉ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ５８６．２３０３，ｆｏｕｎｄ ５８６．２３１１．
【0064】
製造例３－２：４－アミノ－７－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－３，４－ジヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン－２－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボニトリル（化合物５）の合成
化合物２３（０．２３ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶解した後、５０％トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）水溶液を０℃で加えた。常温で１２時間攪拌した後、反応が完結したらトルエンと共に蒸発させた。シリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、化合物５（０．０７８ｇ、６５％）を得た。
化合物２３（０．２３ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶解した後、５０％トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）水溶液を０℃で加えた。常温で１２時間攪拌した後、反応が完結したらトルエンと共に蒸発させた。シリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、化合物５（０．０７８ｇ、６５％）を得た。
【0065】
製造例３－３：４－アミノ－７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド（化合物２４）の合成
エタノール－蒸留水に化合物２３（０．２５ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を溶解した後、ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（０．１８ｇ、１．９３ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（０．３２ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）を加え、２０時間還流しながら撹拌した。生成された固体を減圧濾過し、メタノールで洗浄してから乾燥した。化合物２４は合成後、精製過程なしに次の反応に使用した。
エタノール－蒸留水に化合物２３（０．２５ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を溶解した後、ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（０．１８ｇ、１．９３ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（０．３２ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）を加え、２０時間還流しながら撹拌した。生成された固体を減圧濾過し、メタノールで洗浄してから乾燥した。化合物２４は合成後、精製過程なしに次の反応に使用した。
【0066】
製造例３－４：４－アミノ－７－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－３，４－ジヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）ペトラヒドロチオフェン－２－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド（化合物６）の合成
化合物２４から、前記公知の合成法（Ｆ）を利用して化合物６（１０５ｍｇ、７７％ ２ステップ）を合成した。
化合物２４から、前記公知の合成法（Ｆ）を利用して化合物６（１０５ｍｇ、７７％ ２ステップ）を合成した。
【0067】
下記表１及び表２は、下記化学式Ｉで表される化合物の１Ｈ ＮＭＲ及びＨＲＭＳ（Ｈｉｇｈ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）データをそれぞれまとめたものである。
【0068】
【化19】
【0069】
【表1-1】
【表1-2】
【0070】
【表2】
【0071】
製造例４：化合物７ａ－７ｈの合成
【化20】
【0072】
製造例４－１：化合物２５ａ－２５ｄの合成
化合物１８ａ、２０、２３、２４（１当量）を無水テトラヒドロフランにそれぞれ溶解した後、４－ジメチルアミノピリジン（３当量）とジ－テルト－ブチルジカルボネート（６当量）を加えた。反応溶液を常温で１２時間攪拌した後、反応が終結したことを確認する。減圧濃縮後、蒸留水と酢酸エチルで抽出し、有機溶媒層を分液した後、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。減圧濾過で残余固体を除去した後、減圧濃縮して、それぞれ精製されていない化合物２５ａ－ｄを得た。
化合物１８ａ、２０、２３、２４（１当量）を無水テトラヒドロフランにそれぞれ溶解した後、４－ジメチルアミノピリジン（３当量）とジ－テルト－ブチルジカルボネート（６当量）を加えた。反応溶液を常温で１２時間攪拌した後、反応が終結したことを確認する。減圧濃縮後、蒸留水と酢酸エチルで抽出し、有機溶媒層を分液した後、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。減圧濾過で残余固体を除去した後、減圧濃縮して、それぞれ精製されていない化合物２５ａ－ｄを得た。
【0073】
製造例４－２：化合物２６ａ－２６ｄの合成
化合物２６ａ－ｄは前記公知の合成法（Ｅ）を利用して合成した。
化合物２６ａ－ｄは前記公知の合成法（Ｅ）を利用して合成した。
【0074】
テルト－ブチル（テルト－ブトキシカルボニル）（５－フラン－２－イル）－７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（ヒドロキシメチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）カルバメート（化合物２６ａ）。化合物２６ａは粘性物質で、６１％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ８．８４（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），６．４６－６．４３（ｍ，２Ｈ），６．２３（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｄｄ，Ｊ＝５．５，３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｓ，２Ｈ），３．８９（ｓ，２Ｈ），１．６５（ｓ，３Ｈ），１．３４（ｓ，３Ｈ），１．２７（ｓ，１８Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ２８Ｈ３７Ｎ４Ｏ８Ｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ５８９．２３２７，ｆｏｕｎｄ ５８９．２３２２．
【0075】
テルト－ブチル（テルト－ブトキシカルボニル）（５－フラン－７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（ヒドロキシメチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）カルバメート（化合物２６ｂ）。化合物２６ｂは粘性物質で、９０％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）：δ８．７８（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２１（ｄｄ，Ｊ＝５．６，３．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｄｄ，Ｊ＝５．２，１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７９－３．７４（ｍ，３Ｈ），３．６７（ｓ，１Ｈ），１．６１（ｓ，３Ｈ），１．３４（ｓ，２１Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ２６Ｈ３５Ｎ４Ｏ７Ｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ５４７．２２２１，ｆｏｕｎｄ ５４７．２２１４．
【0076】
化合物２６ｃ、２６ｄは精製過程なしに次の反応に使用した。
【0077】
製造例４－３：化合物２７ａ－２７ｈの合成
公知の合成法（Ｇ）：化合物２６ａ－ｄ（１当量）をジクロロメタンに溶解した後、４－ジメチルアミノピリジン（０．０８当量）、トリエチルアミン（２．５当量）、塩化ベンゾイル（１．１当量）をそれぞれ０℃で加えた。常温で１５時間攪拌した後、反応が終結したことを確認する。反応溶液を蒸留水と酢酸エチルで抽出し、有機溶媒層を分液した後、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。減圧濾過によって残余固体を除去した後、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して化合物を得た。
公知の合成法（Ｇ）：化合物２６ａ－ｄ（１当量）をジクロロメタンに溶解した後、４－ジメチルアミノピリジン（０．０８当量）、トリエチルアミン（２．５当量）、塩化ベンゾイル（１．１当量）をそれぞれ０℃で加えた。常温で１５時間攪拌した後、反応が終結したことを確認する。反応溶液を蒸留水と酢酸エチルで抽出し、有機溶媒層を分液した後、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。減圧濾過によって残余固体を除去した後、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して化合物を得た。
【0078】
（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（４－ビス（テルト－ブトキシカルボニル）アミノ）－５－（フラン－２－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）安息香酸メチル（化合物２７ａ）。化合物２７ａは化合物２６ａから合成され、粘性物質であって、７５％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ８．８７（ｓ，１Ｈ），８．０３（ｄｄ，Ｊ＝８．６，１．３Ｈｚ，２Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），７．５８－７．５４（ｍ，１Ｈ），７．４４－７．４１（ｍ，２Ｈ），７．３９－７．３８（ｍ，１Ｈ），６．４４（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），６．４２－６．４０（ｍ，２Ｈ），５．２５（ｄｄ，Ｊ＝５．４，２．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０４（ｄｄ，Ｊ＝５．４，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．７０（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，７．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，６．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｔｄ，Ｊ＝６．８，３．２Ｈｚ，１Ｈ），１．６４（ｓ，３Ｈ），１．３４（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｓ，９Ｈ），１．２６（ｓ，９Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３５Ｈ４１Ｎ４Ｏ９Ｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６９３．２５８９，ｆｏｕｎｄ ６９３．２５８５．
【0079】
（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（４－ビス（テルト－ブトキシカルボニル）アミノ）－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）安息香酸メチル（化合物２７ｂ）。化合物２７ｂは化合物２６ｂから合成され、無色の粘性物質であって、９４％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．８６（ｓ，１Ｈ），８．０４－８．０２（ｍ，２Ｈ），７．７０（ｓ，１Ｈ），７．５８－７．５５（ｍ，１Ｈ），７．４６－７．４３（ｍ，２Ｈ），６．３４（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２１（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２．４Ｈｚ，１Ｈ），５．０４（ｄｄ，Ｊ＝５．６，３．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６６（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，６．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０２－３．９９（ｍ，１Ｈ），３．１４（ｓ，１Ｈ），１．６３（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，１８Ｈ），１．３３（ｓ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３３Ｈ３９Ｎ４Ｏ８Ｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６５１．２４８３，ｆｏｕｎｄ ６５１．２４８５．
【0080】
（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（４－ビス（テルト－ブトキシカルボニル）アミノ）－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）メチル４－クロロ安息香酸（化合物２７ｃ）。化合物２７ｃは化合物２６ｃから合成され、粘性物質であって、７８％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：δ８．８０（ｓ，１Ｈ），８．０４（ｓ，１Ｈ），７．９９－７．９６（ｍ，２Ｈ），７．４９－７．４８（ｍ，２Ｈ），６．４４（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），５．４４（ｄｄ，Ｊ＝５．５，２．２Ｈｚ，１Ｈ），５．２６（ｄｄ，Ｊ＝５．５，２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｄｄ，Ｊ＝１１．３，７．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｄｄ，Ｊ＝１１．３，６．６Ｈｚ，１Ｈ），４．０３－４．０（ｍ，１Ｈ），３．６６（ｓ，１Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ），１．３５（ｓ，３Ｈ），１．３３（ｓ，１８Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３３Ｈ３８ＣｌＮ４Ｏ８Ｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６８５．２０９３，ｆｏｕｎｄ ６８５．２０９２．
【0081】
（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（４－ビス（テルト－ブトキシカルボニル）アミノ）－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）メチル４－メトキシ安息香酸（化合物２７ｄ）。化合物２７ｄは化合物２６ｂから合成され、粘性物質であって、８２％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．８５（ｓ，１Ｈ），７．９８－７．９７（ｍ，２Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），６．９２－６．９０（ｍ，２Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），５．１８（ｄｄ，Ｊ＝５．５，２．４Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｄｄ，Ｊ＝５．５，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．６３（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，７．３Ｈｚ，１Ｈ），４．４７（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，６．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０１－３．９７（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．１３（ｓ，１Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，１８Ｈ），１．３３（ｓ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３４Ｈ４１Ｎ４Ｏ９Ｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６８１．２５８９，ｆｏｕｎｄ ６８１．２５９１．
【0082】
（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（４－ビス（テルト－ブトキシカルボニル）アミノ）－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）メチル２，６－ジメチル安息香酸（化合物２７ｅ）。化合物２７ｅは化合物２６ｂから合成され、粘性物質であって、８４％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ８．８４（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ），７．２１－７．１７（ｍ，１Ｈ），７．０５－７．０２（ｍ，２Ｈ），６．３３（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１８（ｄｄ，Ｊ＝６．１，３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｄｄ，Ｊ＝５．５，３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６４－４．５３（ｍ，２Ｈ），３．９８（ｔｄ，Ｊ＝６．７，３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１５（ｓ，１Ｈ），２．３２（ｓ，６Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，１８Ｈ），１．３１（ｓ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３５Ｈ４３Ｎ４Ｏ８Ｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６７９．２７９６，ｆｏｕｎｄ ６７９．２７９１．
【0083】
（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（４－ビス（テルト－ブトキシカルボニル）アミノ）－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）イソニコチン酸メチル（化合物２７ｆ）。化合物２７ｆは化合物２６ｂから合成し、精製過程なしに次の反応に使用した。
【0084】
化合物２７ｇ、２７ｈはそれぞれ２６ｃ、２６ｄから合成し、精製過程なしに次の反応に使用した。
【0085】
製造例４－４：化合物７ａ－７ｈの合成
公知の合成法（Ｈ）：化合物２７ａ－ｈに５０％ギ酸水溶液とテトラヒドロフランを入れ、常温で１２時間攪拌した。反応が終結したことを確認した後、塩基性正イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ(登録商標) ６６ ｆｒｅｅ ｂａｓｅ）で１時間撹拌しながら溶液を中和した。減圧濾過によって残余固体を除去した後、減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して化合物７ａ－ｈをそれぞれ６０、８３％、７６％、８０％、７９％、８８％（２ステップ）、６９％（２ステップ）、７５％（２ステップ）収率で得た。
公知の合成法（Ｈ）：化合物２７ａ－ｈに５０％ギ酸水溶液とテトラヒドロフランを入れ、常温で１２時間攪拌した。反応が終結したことを確認した後、塩基性正イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ(登録商標) ６６ ｆｒｅｅ ｂａｓｅ）で１時間撹拌しながら溶液を中和した。減圧濾過によって残余固体を除去した後、減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して化合物７ａ－ｈをそれぞれ６０、８３％、７６％、８０％、７９％、８８％（２ステップ）、６９％（２ステップ）、７５％（２ステップ）収率で得た。
【0086】
製造例５：化合物８ａ－８ｅの合成
【化21】
【0087】
製造例５－１：化合物２８ａ－２８ｄの合成
化合物２６ａ－ｄ（１当量）をピリジン（１５ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解した後、攪拌しながら塩化メタンスルホニル（２当量）を０℃で滴加した。常温で４時間攪拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で反応を終結させた。そして、酢酸エチルで３回抽出した。有機溶媒層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥してから減圧濾過し、減圧濾過した残余物を精製過程なしに次の反応に使用した。精製されていないメタンスルホニル化合物をジメチルホルムアミド（５．５ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解した後、攪拌しながらアジ化ナトリウム（３当量）を滴加した。反応溶液を６０℃で２時間加熱した。揮発性物質を減圧濃縮して蒸発させ、残余物を酢酸エチルと水に分液させた。有機溶媒層は硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濾過、減圧濃縮して、それぞれ精製されていない化合物２８ａ－ｄを得た。化合物２８ａ－ｄは精製過程なしにそのまま次の反応に使用した。
化合物２６ａ－ｄ（１当量）をピリジン（１５ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解した後、攪拌しながら塩化メタンスルホニル（２当量）を０℃で滴加した。常温で４時間攪拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で反応を終結させた。そして、酢酸エチルで３回抽出した。有機溶媒層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥してから減圧濾過し、減圧濾過した残余物を精製過程なしに次の反応に使用した。精製されていないメタンスルホニル化合物をジメチルホルムアミド（５．５ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解した後、攪拌しながらアジ化ナトリウム（３当量）を滴加した。反応溶液を６０℃で２時間加熱した。揮発性物質を減圧濃縮して蒸発させ、残余物を酢酸エチルと水に分液させた。有機溶媒層は硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濾過、減圧濃縮して、それぞれ精製されていない化合物２８ａ－ｄを得た。化合物２８ａ－ｄは精製過程なしにそのまま次の反応に使用した。
【0088】
製造例５－２：化合物２９ａ－２９ｄの合成
テトラヒドロフラン（２７ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解された化合物２８ａ－ｄ（１当量）にトリフェニルホスフィン（２当量）を加えた後、常温で１２時間攪拌した。反応溶液に２５％アンモニア水（１．８ｍＬ／ｍｍｏｌ）を加えた後、６５℃で４時間撹拌した。揮発性物質は蒸発させ、精製されていない化合物２９ａ－ｄは精製過程なしにそのまま次の反応に使用した。
テトラヒドロフラン（２７ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解された化合物２８ａ－ｄ（１当量）にトリフェニルホスフィン（２当量）を加えた後、常温で１２時間攪拌した。反応溶液に２５％アンモニア水（１．８ｍＬ／ｍｍｏｌ）を加えた後、６５℃で４時間撹拌した。揮発性物質は蒸発させ、精製されていない化合物２９ａ－ｄは精製過程なしにそのまま次の反応に使用した。
【0089】
製造例５－３：化合物３０ａ－３０ｅの合成
化合物３０ａは２９ａから、３０ｂと３０ｃは２９ｂから、３０ｄと３０ｅは２９ｄ－ｅからそれぞれ一般的な合成方法（Ｇ）（３０ａ、３０ｂ、３０ｄ、３０ｅは塩化ベンゾイルを、３０ｃは４－メトキシ塩化ベンゾイル）で合成した。精製されていない３０ａ、３０ｄ、３０ｅは精製過程なしに次の反応に使用したことに対し、３０ｂと３０ｃはシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製した。
化合物３０ａは２９ａから、３０ｂと３０ｃは２９ｂから、３０ｄと３０ｅは２９ｄ－ｅからそれぞれ一般的な合成方法（Ｇ）（３０ａ、３０ｂ、３０ｄ、３０ｅは塩化ベンゾイルを、３０ｃは４－メトキシ塩化ベンゾイル）で合成した。精製されていない３０ａ、３０ｄ、３０ｅは精製過程なしに次の反応に使用したことに対し、３０ｂと３０ｃはシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製した。
【0090】
テルト－ブチル（７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（ベンズアミドメチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）（テルト－ブトキシカルボニル）カルバメート（化合物３０ｂ）。化合物３０ｂは化合物２６ｂから３ステップを経て合成され、粘性物質であって、４６％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：δ８．８１（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），７．５４（ｍｅｒｇｅｄ ｄｄ，Ｊ１＝Ｊ２＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｍｅｒｇｅｄ ｄｄ，Ｊ１＝Ｊ２＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），６．４４（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），５．３６（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１２（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２．９Ｈｚ，１Ｈ），３．９３－３．９１（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｄｄ，Ｊ＝１３．５，８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｓ，１Ｈ），３．６２（ｄｄ，Ｊ＝１３．５，６．６Ｈｚ，１Ｈ），１．５９（ｓ，３Ｈ），１．３４（ｓ，１８Ｈ），１．３３（ｓ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３３Ｈ４０Ｎ５Ｏ７Ｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６５０．２６４３，ｆｏｕｎｄ ６５０．２６３４．
【0091】
テルト－ブチル（テルト－ブトキシカルボニル）（５－エチニル－７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（４－メトキシベンズアミド）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）カルバメート（化合物３０ｃ）。化合物３０ｃは化合物２６ｂから３ステップを経て合成され、粘性物質であって、５２％の収率で得た；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ８．７７（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，２Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），６．６２（ｂｒｓ，１Ｈ），６．２９（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．２０（ｄｄ，Ｊ＝５．５，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｄｄ，Ｊ＝５．５，３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８９－３．８４（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．８０－３．７５（ｍ，１Ｈ），３．１６（ｓ，１Ｈ），１．５９（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，１８Ｈ），１．３０（ｓ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３４Ｈ４２Ｎ５Ｏ８Ｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ６８０．２７４９，ｆｏｕｎｄ ６８０．２７３９．
【0092】
製造例５－４：化合物８ａ－８ｅの合成
化合物８ａ－ｅはそれぞれ化合物３０ａ－ｅから前記公知の合成方法（Ｈ）でそれぞれ８１％（４ステップ）、６５％、７０％、７１％（４ステップ）、６８％（４ステップ）の収率で合成した。
化合物８ａ－ｅはそれぞれ化合物３０ａ－ｅから前記公知の合成方法（Ｈ）でそれぞれ８１％（４ステップ）、６５％、７０％、７１％（４ステップ）、６８％（４ステップ）の収率で合成した。
【0093】
下記表３及び表４は、下記化学式ＩＩで表される化合物の１Ｈ ＮＭＲ及びＨＲＭＳデータをそれぞれまとめたものである。
【0094】
【化22】
【表3-1】
【表3-2】
【表3-3】
【0095】
【表4】
【0096】
製造例６：化合物９ａ－９ｃ、１０ａ－１０ｃ、１１ａi－１１ａiiii、及び１１ｂの合成
【化23】
【0097】
製造例６－１：化合物９ａ－９ｃの合成
化合物９ａ－ｃはそれぞれ化合物２８ｂ－ｄから前記公知の合成方法（Ｈ）で合成した。
化合物９ａ－ｃはそれぞれ化合物２８ｂ－ｄから前記公知の合成方法（Ｈ）で合成した。
【0098】
製造例６－２：化合物１０ａ－１０ｃの合成
化合物９ａ－ｃ（１当量）をテトラヒドロフラン（５．６ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解した後、トリフェニルホスフィン（２当量）を加えてから、溶液を常温で１２時間攪拌した。水を溶液に加えた後、常温で更に３時間攪拌した。揮発性物質は蒸発させ、残余物はシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製して、化合物１０ａ－ｃをそれぞれ６３％、６５％、５９％の収率で合成した。
化合物９ａ－ｃ（１当量）をテトラヒドロフラン（５．６ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解した後、トリフェニルホスフィン（２当量）を加えてから、溶液を常温で１２時間攪拌した。水を溶液に加えた後、常温で更に３時間攪拌した。揮発性物質は蒸発させ、残余物はシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製して、化合物１０ａ－ｃをそれぞれ６３％、６５％、５９％の収率で合成した。
【0099】
製造例６－３：化合物３１ａ－３１ｃの合成
無水テトラヒドロフラン（６．６ｍＬ／ｍｍｏｌ）に化合物２９ｂ－ｄ（１当量）を溶解した溶液を撹拌しながらトリクロロアセチルイソシアン酸化物（１当量）を滴加し、反応溶液を常温で４時間攪拌した。水で反応を終わらせた後、酢酸エチルで３回抽出した。有機溶媒層を乾燥した後、減圧濾過し減圧濃縮して得た精製されていない残余物は次の反応のために使用された。精製されていない化合物にアンモニアで飽和されたメタノール（５ｍＬ／ｍｍｏｌ）を加えた後、常温で３時間攪拌した。揮発性物質を蒸発させた後、精製されていない化合物３１ａ－ｃは次の反応に使用した。
無水テトラヒドロフラン（６．６ｍＬ／ｍｍｏｌ）に化合物２９ｂ－ｄ（１当量）を溶解した溶液を撹拌しながらトリクロロアセチルイソシアン酸化物（１当量）を滴加し、反応溶液を常温で４時間攪拌した。水で反応を終わらせた後、酢酸エチルで３回抽出した。有機溶媒層を乾燥した後、減圧濾過し減圧濃縮して得た精製されていない残余物は次の反応のために使用された。精製されていない化合物にアンモニアで飽和されたメタノール（５ｍＬ／ｍｍｏｌ）を加えた後、常温で３時間攪拌した。揮発性物質を蒸発させた後、精製されていない化合物３１ａ－ｃは次の反応に使用した。
【0100】
製造例６－４：化合物１１ａi－１１ａiiiの合成
化合物１１ａi－１１ａiiiはそれぞれ３１ａ－ｃから前記公知の合成法（Ｈ）でそれぞれ５５％、６０％、５２％（２ステップ）の収率で合成した。
化合物１１ａi－１１ａiiiはそれぞれ３１ａ－ｃから前記公知の合成法（Ｈ）でそれぞれ５５％、６０％、５２％（２ステップ）の収率で合成した。
【0101】
製造例６－５：テルト－ブチル（テルトブトキシカルボニル）（７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（エチルアミノ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）カルバメート（化合物３２）の合成
化合物２９ｂ（０．０５ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）とアセトアルデヒド（０．０８ｍＬ）をメタノール（０．３５ｍＬ）に溶解した後、水素化ホウ素ナトリウムと酢酸（４μＬ）を滴加した。反応溶液を常温で３時間攪拌した後、水で反応を終わらせた。次に、酢酸エチルで３回抽出した。有機溶媒層はＭｇＳＯ４で乾燥した後、減圧濾過と減圧濃縮によって精製されていない化合物３２を合成し、精製過程なしに次の反応に使用した。
化合物２９ｂ（０．０５ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）とアセトアルデヒド（０．０８ｍＬ）をメタノール（０．３５ｍＬ）に溶解した後、水素化ホウ素ナトリウムと酢酸（４μＬ）を滴加した。反応溶液を常温で３時間攪拌した後、水で反応を終わらせた。次に、酢酸エチルで３回抽出した。有機溶媒層はＭｇＳＯ４で乾燥した後、減圧濾過と減圧濃縮によって精製されていない化合物３２を合成し、精製過程なしに次の反応に使用した。
【0102】
製造例６－６：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－２－（４－アミノ－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－５－(（エチルアミノ）メチル）テトラヒドロチオフェン－３，４－ジオール（化合物１１ｂ）の合成
化合物１１ｂは化合物３２から前記公知の合成方法（Ｈ）によって３０％の収率（２ステップ）で合成した。
化合物１１ｂは化合物３２から前記公知の合成方法（Ｈ）によって３０％の収率（２ステップ）で合成した。
【0103】
製造例７：化合物１２ａ及び１２ｂの合成
【化24】
【0104】
製造例７－１：テルト－ブチル（テルト－ブトキシカルボニル）（７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－２，２－ジメチル－６－（モルホリノメチル）テトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）カルバメート（化合物３３）の合成
塩化４－トルエンスルホニル（０．０５７ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（０．３ｍＬ）に溶解した溶液に、テトラヒドロフランに溶解した化合物２６ｂ（０．１５ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．２ｍＬ）を０℃で加えた。反応溶液を常温で４時間攪拌し、水で反応を終わらせた。酢酸エチルで３回抽出した後、集めた有機溶媒層をＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濾過、減圧濃縮して精製されていない化合物を精製過程なしに次の反応に使用した。精製されていないトルエンスルホニル化合物をイソプロピルアルコール（０．６ｍＬ）に溶解した後、モルホリン（０．０２ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を加え、７０℃で１２時間還流させた。減圧濾過後、精製過程なしに次の反応に使用された。
塩化４－トルエンスルホニル（０．０５７ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（０．３ｍＬ）に溶解した溶液に、テトラヒドロフランに溶解した化合物２６ｂ（０．１５ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．２ｍＬ）を０℃で加えた。反応溶液を常温で４時間攪拌し、水で反応を終わらせた。酢酸エチルで３回抽出した後、集めた有機溶媒層をＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濾過、減圧濃縮して精製されていない化合物を精製過程なしに次の反応に使用した。精製されていないトルエンスルホニル化合物をイソプロピルアルコール（０．６ｍＬ）に溶解した後、モルホリン（０．０２ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を加え、７０℃で１２時間還流させた。減圧濾過後、精製過程なしに次の反応に使用された。
【0105】
製造例７－２：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－２－（４－アミノ－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－５－（モルホリノメチル）テトラヒドロチオフェン－３，４－ジオール（化合物１２ａ）の合成
化合物１２ａは化合物３３から前記公知の合成方法（Ｈ）によって２０％の収率（２ステップ）で合成した。
化合物１２ａは化合物３３から前記公知の合成方法（Ｈ）によって２０％の収率（２ステップ）で合成した。
【0106】
製造例７－３：７－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）－２，２－ジメチル－６－メチレンテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（化合物３４）の合成
ジクロロメタン（２．２ｍL)に化合物２６ｂ（０．１５ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を溶解した溶液に４－ジメチルアミノピリジン（０．０００４ｇ、０．００３ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．１１ｍＬ、０．８２ｍｍｏｌ）を加え、溶液を０℃まで冷たく冷やした。この溶液に塩化メタンスルホニル（０．０３ｍL、０．４１ｍｍｏｌ）を滴加し、反応溶液は常温で１時間攪拌した。反応は飽和された炭酸水素ナトリウム溶液で終わらせ、ジクロロメタンで３回抽出した。集めた有機溶媒層は塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した後、減圧濾過、減圧濃縮して精製されていないメタンスルホニル化合物を得た。マイクロウェーブバイアルに入っている精製されていないメタンスルホニル化合物にテトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）と４０％メチルアミン水溶液（２ｍＬ）を加え、６０℃で５時間加熱した。揮発性物質は蒸発させ、残余物はシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製して、化合物３４（３９．６ｍｇ、４４％）を得た。
ジクロロメタン（２．２ｍL)に化合物２６ｂ（０．１５ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を溶解した溶液に４－ジメチルアミノピリジン（０．０００４ｇ、０．００３ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．１１ｍＬ、０．８２ｍｍｏｌ）を加え、溶液を０℃まで冷たく冷やした。この溶液に塩化メタンスルホニル（０．０３ｍL、０．４１ｍｍｏｌ）を滴加し、反応溶液は常温で１時間攪拌した。反応は飽和された炭酸水素ナトリウム溶液で終わらせ、ジクロロメタンで３回抽出した。集めた有機溶媒層は塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した後、減圧濾過、減圧濃縮して精製されていないメタンスルホニル化合物を得た。マイクロウェーブバイアルに入っている精製されていないメタンスルホニル化合物にテトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）と４０％メチルアミン水溶液（２ｍＬ）を加え、６０℃で５時間加熱した。揮発性物質は蒸発させ、残余物はシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製して、化合物３４（３９．６ｍｇ、４４％）を得た。
【0107】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）：δ８．１１（ｓ，１Ｈ），７．３５（ｓ，１Ｈ），６．３３（ｓ，１Ｈ），５．５２（ｓ，１Ｈ），５．４６（ｍｅｒｇｅｄ ｄｄ，Ｊ１＝Ｊ２＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３２（ｓ，１Ｈ），４．９６（ｄｄ，Ｊ＝４．８，０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｓ，１Ｈ），１．５０（ｓ，３Ｈ），１．３３（ｓ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ１６Ｈ１７Ｎ４Ｏ２Ｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ３２９．１０６７，ｆｏｕｎｄ ３２９．１０６４．
【0108】
製造例７－４：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）－２－（４－アミノ－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－５－メチレンテトラヒドロチオフェン－３，４－ジオール（化合物１２ｂ）の合成
化合物１２ｂは化合物３４から前記公知の合成方法（Ｈ）によって４３％の収率で合成した。
化合物１２ｂは化合物３４から前記公知の合成方法（Ｈ）によって４３％の収率で合成した。
【0109】
下記表５及び表６は、下記化学式ＩＩＩ及びＩＶで表される化合物の１Ｈ ＮＭＲ及びＨＲＭＳデータをそれぞれまとめたものである。
【0110】
【化25】
【化26】
【表5-1】
【表5-2】
【0111】
【表6】
【0112】
製造例８：化合物１３ａ－１３ｇの合成
【化27】
【0113】
製造例８－１：（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－オール（化合物３７）の合成
メタノール／テトラヒドロフラン（３０ｍL、９：１）に溶解した化合物３６（１ｇ、５．７４ｍｍｏｌ）に水素化ホウ素ナトリウム（０．２１ｇ、５．７４ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した後、同じ温度で３０分間撹拌し、次に、常温で３０分間撹拌した。水で反応を終わらせた後、水溶液層を酢酸エチルで３回抽出した。集めた有機溶媒層はＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濾過、減圧濃縮して精製されていない化合物３７を合成した。この化合物は次の反応にそのまま使用し得るほど純水であった。
メタノール／テトラヒドロフラン（３０ｍL、９：１）に溶解した化合物３６（１ｇ、５．７４ｍｍｏｌ）に水素化ホウ素ナトリウム（０．２１ｇ、５．７４ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した後、同じ温度で３０分間撹拌し、次に、常温で３０分間撹拌した。水で反応を終わらせた後、水溶液層を酢酸エチルで３回抽出した。集めた有機溶媒層はＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濾過、減圧濃縮して精製されていない化合物３７を合成した。この化合物は次の反応にそのまま使用し得るほど純水であった。
【0114】
製造例８－２：（３ａＲ，６ａＳ）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル酢酸（化合物３８）の合成
ジクロロメタン（５４ｍＬ）に化合物３７（５．４５ｇ、３０．９２ｍｍｏｌ）を溶解させた溶液を撹拌しながらトリエチルアミン（２１．５ｍＬ、１５４．６２ｍｍｏｌ）を加えた後、無水酢酸（５．８ｍＬ、６１．８５ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。反応溶液を常温で６時間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で反応を終わらせた後、酢酸エチルで３回抽出した。集めた有機溶媒層を乾燥、減圧濾過、減圧濃縮した。この化合物は次の反応にそのまま使用し得るほど純水であった。
ジクロロメタン（５４ｍＬ）に化合物３７（５．４５ｇ、３０．９２ｍｍｏｌ）を溶解させた溶液を撹拌しながらトリエチルアミン（２１．５ｍＬ、１５４．６２ｍｍｏｌ）を加えた後、無水酢酸（５．８ｍＬ、６１．８５ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。反応溶液を常温で６時間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で反応を終わらせた後、酢酸エチルで３回抽出した。集めた有機溶媒層を乾燥、減圧濾過、減圧濃縮した。この化合物は次の反応にそのまま使用し得るほど純水であった。
【0115】
製造例８－３：４－クロロ－７-(（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－ヨード－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジンン（化合物３９）の合成
窒素環境下、無水アセトニトリル（９０ｍL)で撹拌している４－クロロ－５－ヨード７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジンン（７．５ｇ、２７．０７ｍｍｏｌ）にＮ，０－ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（ＢＳＡ、７．２ｍＬ、２９．７８ｍｍｏｌ）を加え、常温で均質な溶液になるまで１０分間攪拌した。この清い溶液に化合物３８（６．５ｇ、２９．７８ｍｍｏｌ）が溶解されている無水アセトニトリル（６５ｍＬ）を加え、次に、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホン酸塩（４．３ｍＬ、２４．３６ｍｍｏｌ）を滴加した。反応溶液を常温で１５分間撹拌し、予め８０℃に加熱していおいた条件に移した。８０℃で１時間攪拌した後、反応溶液を常温に冷やした。そして、酢酸エチルで希釈した。有機溶媒層は飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。そして、減圧濾過、減圧濃縮して残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、化合物３９（５．２８ｇ、４５％）を得た。
窒素環境下、無水アセトニトリル（９０ｍL)で撹拌している４－クロロ－５－ヨード７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジンン（７．５ｇ、２７．０７ｍｍｏｌ）にＮ，０－ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（ＢＳＡ、７．２ｍＬ、２９．７８ｍｍｏｌ）を加え、常温で均質な溶液になるまで１０分間攪拌した。この清い溶液に化合物３８（６．５ｇ、２９．７８ｍｍｏｌ）が溶解されている無水アセトニトリル（６５ｍＬ）を加え、次に、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホン酸塩（４．３ｍＬ、２４．３６ｍｍｏｌ）を滴加した。反応溶液を常温で１５分間撹拌し、予め８０℃に加熱していおいた条件に移した。８０℃で１時間攪拌した後、反応溶液を常温に冷やした。そして、酢酸エチルで希釈した。有機溶媒層は飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。そして、減圧濾過、減圧濃縮して残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、化合物３９（５．２８ｇ、４５％）を得た。
【0116】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：δ８．５８（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），６．１２（ｓ，１Ｈ），５．３２（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２２（ｍｅｒｇｅｄ ｄｄ，Ｊ１＝Ｊ２＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，４．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１２（ｍｅｒｇｅｄ ｄｄ，Ｊ１＝Ｊ２＝１３Ｈｚ，１Ｈ），１．５３（ｓ，３Ｈ），１．３２（ｓ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ１３Ｈ１４ＣｌＩＮ３Ｏ２Ｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ４３７．９５３４，ｆｏｕｎｄ ４３７．９５２３．
【0117】
製造例８－４：７－（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）－２，２－ジメチルテトラヒドロシアノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－５－ヨード－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（化合物４０）の合成
アンモニアで飽和されたテルトブチルアルコール（３５ｍＬ）に化合物３９（３．５ｇ、７．９９ｍｍｏｌ）を溶解した後、ステンレススチールボムに入れて予め９０℃に加熱された条件に移した後、同じ温度で２４時間撹拌した。反応溶液が入っているスチールボムを常温に冷やした後、減圧濃縮して溶媒を蒸発させた。残余物はシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、化合物４０（２．８４ｇ、８５％）を得た。
アンモニアで飽和されたテルトブチルアルコール（３５ｍＬ）に化合物３９（３．５ｇ、７．９９ｍｍｏｌ）を溶解した後、ステンレススチールボムに入れて予め９０℃に加熱された条件に移した後、同じ温度で２４時間撹拌した。反応溶液が入っているスチールボムを常温に冷やした後、減圧濃縮して溶媒を蒸発させた。残余物はシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、化合物４０（２．８４ｇ、８５％）を得た。
【0118】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．２５（ｓ，１Ｈ），７．１２（ｓ，１Ｈ），５．８９（ｓ，１Ｈ），５．６５（ｂｒｓ，２Ｈ），５．２０－５．１９（ｍ，１Ｈ），５．１５（ｍｅｒｇｅｄ ｄｄ，Ｊ１＝Ｊ２＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６３（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，４．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１５（ｍｅｒｇｅｄ ｄｄ，Ｊ１＝Ｊ２＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），１．５６（ｓ，３Ｈ），１．３２（ｓ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ１３Ｈ１６ＩＮ４Ｏ２Ｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ４１９．００３３，ｆｏｕｎｄ ４１９．００３１．
【0119】
製造例８－５：化合物４１ａ－４１ｇの合成
化合物４１ａは化合物４０から前記公知の合成方法（Ｄ）によって合成した。化合物４１ａiは化合物４１ａから前記公知の合成方法（Ｅ）によって合成した。化合物４１ｂ－ｃは化合物４０から前記公知の合成方法（Ａ）によって合成した。化合物４１ｄ－ｅは化合物４０から前記公知の合成方法（Ｃ）によって合成した。化合物４１ｆ－ｇは化合物４０から前記公知の合成方法（Ａ）によって合成した。化合物４１ａ－４１ｇは精製過程なしに次の反応に使用した。
化合物４１ａは化合物４０から前記公知の合成方法（Ｄ）によって合成した。化合物４１ａiは化合物４１ａから前記公知の合成方法（Ｅ）によって合成した。化合物４１ｂ－ｃは化合物４０から前記公知の合成方法（Ａ）によって合成した。化合物４１ｄ－ｅは化合物４０から前記公知の合成方法（Ｃ）によって合成した。化合物４１ｆ－ｇは化合物４０から前記公知の合成方法（Ａ）によって合成した。化合物４１ａ－４１ｇは精製過程なしに次の反応に使用した。
【0120】
製造例８－６：化合物１３ａ－１３ｇの合成
化合物１３ａ－１３ｇは化合物４１ａi－４１ｇから前記公知の合成方法（Ｆ）によってそれぞれ７０％、８０％、７５％、６９％、６５％、７１％、６９％（２ステップ）の収率で合成した。
化合物１３ａ－１３ｇは化合物４１ａi－４１ｇから前記公知の合成方法（Ｆ）によってそれぞれ７０％、８０％、７５％、６９％、６５％、７１％、６９％（２ステップ）の収率で合成した。
【0121】
下記表７及び表８は、下記化学式Ｖで表される化合物の１Ｈ ＮＭＲ及びＨＲＭＳデータをそれぞれまとめたものである。
【0122】
【化28】
【0123】
【表7】
【0124】
【表8】
【0125】
製造例９：化合物１４の合成
【化29】
【0126】
製造例９－１：（３ａＲ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－オール（化合物４２）の合成
化合物１５（１．４６ｇ、３．００ｍｍｏｌ）を溶かしたジクロロメタンにアンモニアで飽和されたテルトブチルアルコールを加え、反応混合物を４時間常温で撹拌した。前記反応混合物を減圧条件下で蒸発させた。前記残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、無色シロップとして化合物４２（１．２２ｇ、９１％）を得た。
化合物１５（１．４６ｇ、３．００ｍｍｏｌ）を溶かしたジクロロメタンにアンモニアで飽和されたテルトブチルアルコールを加え、反応混合物を４時間常温で撹拌した。前記反応混合物を減圧条件下で蒸発させた。前記残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、無色シロップとして化合物４２（１．２２ｇ、９１％）を得た。
【0127】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ７．７１－７．６８（ｍ，４Ｈ），７．４８－７．４１（ｍ，６Ｈ），５．２９－５．２６（ｍ，１Ｈ），４．８３－４．７８（ｍ，２Ｈ），４．３３－４．３１（ｂｒｓ，１Ｈ），３．９０－３．８７（ｍ，１Ｈ），３．７６－３．７２（ｍ，１Ｈ），３．５５－３．５３（ｍ，１Ｈ）．
【0128】
製造例９－2：７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－２，４－ジクロロ－５－ヨード－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（化合物４３）の合成
無水テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中の化合物４２（１．１４ｇ、２．５７ｍｍｏｌ）、２．６－ジクロロ－７－ヨード－デアザアデニン（１．２１ｇ、３．８６ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（１．３５ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）の反応混合物を０℃まで冷却した。前記反応混合物に（Ｅ）－ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（１．０４ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）を添加し、反応温度が徐々に常温に達するようにした。前記反応混合物を２時間常温で撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した後、前記反応混合物を酢酸エチルと水に分配して酢酸エチルで３回抽出した。有機溶媒層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過してから蒸発させた。前記残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、黄色シロップとして化合物４３（７８０．９ｍｇ、４１％）を得た。
無水テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中の化合物４２（１．１４ｇ、２．５７ｍｍｏｌ）、２．６－ジクロロ－７－ヨード－デアザアデニン（１．２１ｇ、３．８６ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（１．３５ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）の反応混合物を０℃まで冷却した。前記反応混合物に（Ｅ）－ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（１．０４ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）を添加し、反応温度が徐々に常温に達するようにした。前記反応混合物を２時間常温で撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した後、前記反応混合物を酢酸エチルと水に分配して酢酸エチルで３回抽出した。有機溶媒層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過してから蒸発させた。前記残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、黄色シロップとして化合物４３（７８０．９ｍｇ、４１％）を得た。
【0129】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ７．６８－７．６４（ｍ，４Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．４４－７．３５（ｍ，６Ｈ），６．２７－６．２７（ｍ，１Ｈ），４．８８－４．８２（ｍ，２Ｈ），３．９５－３．８３（ｍ，３Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ），１．３０（ｓ，３Ｈ），１．０９（ｓ，９Ｈ）．
【0130】
製造例９－３：７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－２，４－ジクロロ－５－（（トリメチルシリル）エチニル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（化合物４４）の合成
ＤＭＦ（４ｍＬ）とトリエチルアミン（１ｍＬ）が混合された混合物をマイクロウェーブバイアル入れた後、化合物４３（１５３ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（４．５２ｍｇ、０．００４１ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１４．５ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガスで５分間脱気した。前記反応混合物にトリメチルシリルアセチレン（２２．３ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を加え、もう一度窒素ガスで５分間脱気した。前記反応混合物は酢酸エチルと水に分配して酢酸エチルで３回抽出した後、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過してから蒸発させた。前記残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、黄色シロップとして化合物４４（６０．２ｍｇ、５３％）を得た。
ＤＭＦ（４ｍＬ）とトリエチルアミン（１ｍＬ）が混合された混合物をマイクロウェーブバイアル入れた後、化合物４３（１５３ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（４．５２ｍｇ、０．００４１ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１４．５ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガスで５分間脱気した。前記反応混合物にトリメチルシリルアセチレン（２２．３ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を加え、もう一度窒素ガスで５分間脱気した。前記反応混合物は酢酸エチルと水に分配して酢酸エチルで３回抽出した後、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過してから蒸発させた。前記残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、黄色シロップとして化合物４４（６０．２ｍｇ、５３％）を得た。
【0131】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ７．６９－７．６５（ｍ，５Ｈ），７．４６－７．３６（ｍ，６Ｈ），６．２７－６．２６（ｍ，１Ｈ），４．８５－４．８２（ｍ，２Ｈ），３．９３－３．８３（ｍ，３Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ），１．３０（ｓ，３Ｈ），１．１０（ｓ，９Ｈ），０．２７（ｓ，９Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＦＡＢ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３５Ｈ４１Ｃｌ２Ｎ３Ｏ３ＳＳｉ２ ｆｏｕｎｄ ７１０．１８６３．
【0132】
製造例９－４：７－（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（（（テルト－ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロシチエノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）－２－クロロ－５－（（トリメチルシリル）エチニル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（化合物４５）の合成
アンモニアで飽和されたテルトブチルアルコールに化合物４４（７２ｍｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）を溶かし、前記反応混合物をステンレススチールボムに入れて予め加熱された１００℃条件に移した。前記反応混合物を同じ温度で１５時間撹拌した。ステンレススチールボムに入っている前記反応混合物が常温になるまで冷却させた後、減圧条件で蒸発させた。前記残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、黄色シロップとして化合物４５（４９．７ｍｇ、７１％）を得た。
アンモニアで飽和されたテルトブチルアルコールに化合物４４（７２ｍｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）を溶かし、前記反応混合物をステンレススチールボムに入れて予め加熱された１００℃条件に移した。前記反応混合物を同じ温度で１５時間撹拌した。ステンレススチールボムに入っている前記反応混合物が常温になるまで冷却させた後、減圧条件で蒸発させた。前記残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、黄色シロップとして化合物４５（４９．７ｍｇ、７１％）を得た。
【0133】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ７．６９－７．６５（ｍ，４Ｈ），７．４５－７．３５（ｍ，６Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），６．４０（ｂｒｓ，１Ｈ），６．１９－６．１９（ｍ，１Ｈ），４．８７－４．８４（ｍ，２Ｈ），３．９１－３．７６（ｍ，３Ｈ），１．５９（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｓ，３Ｈ），１．０９（ｓ，９Ｈ），０．２５（ｓ，９Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＦＡＢ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ３５Ｈ４３ＣｌＮ４Ｏ３ＳＳｉ２ ｆｏｕｎｄ ６９１．２３６１．
【0134】
製造例９－５：（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）－６－（４－アミノ－２－クロロ－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－２，２－ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－イル）メタノール（化合物４６）の合成
無水テトラヒドロフラン中の化合物４５（５０．１ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）に１Ｍフッ化テトラ－ｎ－ブチルアンモニウム（０．２１７ｍL、０．２１７ｍｍｏｌ）と酢酸（０．２１７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を常温で２時間撹拌した。前記反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で中和し、酢酸エチルと水に分配して、酢酸エチルで３回抽出した。有機溶媒層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過してから蒸発させた。前記残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、黄色シロップとして化合物４６（２２．３ｍｇ、８１％）を得た。
無水テトラヒドロフラン中の化合物４５（５０．１ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）に１Ｍフッ化テトラ－ｎ－ブチルアンモニウム（０．２１７ｍL、０．２１７ｍｍｏｌ）と酢酸（０．２１７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を常温で２時間撹拌した。前記反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で中和し、酢酸エチルと水に分配して、酢酸エチルで３回抽出した。有機溶媒層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過してから蒸発させた。前記残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、黄色シロップとして化合物４６（２２．３ｍｇ、８１％）を得た。
【0135】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ７．３０（ｓ，１Ｈ），６．２９（ｂｒｓ，２Ｈ），５．９９－５．９７（ｍ，１Ｈ），５．２１－５．１９（ｍ，１Ｈ），４．９６－４．９４（ｍ，１Ｈ），４．０１－３．９８（ｍ，１Ｈ），３．９０－３．８４（ｍ，２Ｈ），３．２６（ｓ，１Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ），１．３１（ｓ，３Ｈ）；ＬＲＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ１６Ｈ１７ＣｌＮ４Ｏ３Ｓ ｆｏｕｎｄ ３８１．１１００．
【0136】
製造例９－６：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－２－（４－アミノ－２－クロロ－５－エチニル－７Ｈ－ピロロ［２，１４－ｄ］ピリミジン－７－イル）－５－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチエノフェン－３，４－ジオール（化合物１４）の合成
ジクロロメタン中の化合物４６（２０．０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）に１Ｍ三塩化ホウ素（０．０７８ｍＬ、０．０７８ｍｍｏｌ）を－７８℃で滴加した。前記反応混合物は同じ温度で１時間撹拌した。前記反応混合物はリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．４）で中和した後、ジクロロメタンと水に分配させ、ジクロロメタンで３回抽出した。有機溶媒層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過してから蒸発させた。前記残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、白色固体として化合物１４（１４．８ｍｇ、８３％）を得た。
ジクロロメタン中の化合物４６（２０．０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）に１Ｍ三塩化ホウ素（０．０７８ｍＬ、０．０７８ｍｍｏｌ）を－７８℃で滴加した。前記反応混合物は同じ温度で１時間撹拌した。前記反応混合物はリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．４）で中和した後、ジクロロメタンと水に分配させ、ジクロロメタンで３回抽出した。有機溶媒層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過してから蒸発させた。前記残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、白色固体として化合物１４（１４．８ｍｇ、８３％）を得た。
【0137】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ７．８２（ｓ，１Ｈ），６．０５－６．０３（ｍ，１Ｈ），４．４５－４．４２（ｍ，１Ｈ），４．２５－４．２３（ｍ，１Ｈ），３．８９－３．８０（ｍ，２Ｈ），３．７３（ｓ，１Ｈ），３．５２－３．４４（ｍ，１Ｈ）；ＬＲＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｆｏｒ Ｃ１３Ｈ１３ＣｌＮ４Ｏ３Ｓ ｆｏｕｎｄ ３４１．０８００．
【0138】
実験例１：リン酸化酵素に対する阻害活性の評価
前記製造例で合成された本発明のヌクレオシド誘導体のリン酸化酵素に対する阻害活性を調べるために、がん細胞における過発現に関連するリン酸化酵素であるＮＴＲＫ１（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｐｅ １またはＴｒｏｐｏｍｙｏｓｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｋｉｎａｓｅ Ａ）、ＣＳＮＫ１Ｄ（Ｃａｓｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ １ ｉｓｏｆｏｒｍ ｄｅｌｔａ）、ＤＹＲＫ１Ａ（Ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ １Ａ）、ＤＹＲＫ１Ｂ（Ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ １Ｂ）、及びＦＬＴ３（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｔｙｐｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅまたはｆｍｓ ｌｉｋｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ３またはｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ １３５（ＣＤ１３５）またはｆｅｔａｌ ｌｉｖｅｒ ｋｉｎａｓｅ－２（Ｆｌｋ２））に対する前記ヌクレオシド誘導体の阻害活性を確認した。
前記製造例で合成された本発明のヌクレオシド誘導体のリン酸化酵素に対する阻害活性を調べるために、がん細胞における過発現に関連するリン酸化酵素であるＮＴＲＫ１（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｐｅ １またはＴｒｏｐｏｍｙｏｓｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｋｉｎａｓｅ Ａ）、ＣＳＮＫ１Ｄ（Ｃａｓｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ １ ｉｓｏｆｏｒｍ ｄｅｌｔａ）、ＤＹＲＫ１Ａ（Ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ １Ａ）、ＤＹＲＫ１Ｂ（Ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ １Ｂ）、及びＦＬＴ３（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｔｙｐｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅまたはｆｍｓ ｌｉｋｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ３またはｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ １３５（ＣＤ１３５）またはｆｅｔａｌ ｌｉｖｅｒ ｋｉｎａｓｅ－２（Ｆｌｋ２））に対する前記ヌクレオシド誘導体の阻害活性を確認した。
【0139】
阻害の測定方法は以下のようであった。殆どのリン酸化酵素はＢＬ２１大腸菌にリン酸化酵素がタグされたパージを３２℃で溶菌されるまで培養した後、遠心分離、ろ過して生産された。また、ＨＥＫ－２９３細胞を利用して生産された。次に、ｑＰＣＲのためにＤＮＡタブされた。ストレプトアビジンでコーティングされたビーズにビオチンタグされた基質を３０分間撹拌して親和性レジンを製作した後、非特異的に結合された基質をバッファ（ＳｅａＢｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）、１％ ＢＳＡ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０、１ｍＭ ＤＴＴ）で洗浄した。
【0140】
リン酸化酵素試験は、リン酸化酵素、基質、親和性レジン、ジメチルスルホキシドに溶かした試験物質を共にバッファ（２０％ ＳｅａＢｌｏｃｋ、０．１７×ＰＢＳ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０、６ｍＭ ＤＴＴ）に１時間常温で撹拌した。次に、親和性基質をバッファ（１×ＰＢＳ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）で洗浄した後、溶出バッファ（１×ＰＢＳ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０、０．５μＭ ｎｏｎ－ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｌｉｇａｎｄ）に懸濁して攪拌した。リン酸化酵素の濃度はｑＰＣＲで定量した。
【0141】
下記表９は１μＭの化合物１ａ乃至１４を各リン酸化酵素に処理した結果であり、（－）は効果なし；（＋）は弱い（ｗｅａｋ）阻害活性；（＋＋）は中間程度（ｍｏｄｅｒａｔｅ）の阻害活性；（＋＋＋）は強い（ｓｔｒｏｎｇ）阻害活性；ＮＤは結果なし（ｎｏｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ）を意味する。
【0142】
【表9-1】
【表9-2】
【0143】
前記表９に示したように、本発明のヌクレオシド誘導体はＮＴＲＫ１、ＣＳＮＫ１Ｄ、ＤＹＲＫ１Ａ、ＤＹＲＫ１Ｂ、及びＦＬＴ３のようなリン酸化酵素に対して大体優れた阻害活性を有することが分かる。
【0144】
実験例２：がん細胞に対する阻害活性の評価
前記製造例で合成された本発明のヌクレオシド誘導体の抗がん活性を調べるために、Ａ５４９（Ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）、ＨＣＴ１１６（Ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（Ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）、ＳＫ－Ｈｅｐ－１（Ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）、ＳＮＵ６３８（Ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）、及びＰＣ－３（Ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）のがん細胞に対するＩＣ５０を測定した。
前記製造例で合成された本発明のヌクレオシド誘導体の抗がん活性を調べるために、Ａ５４９（Ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）、ＨＣＴ１１６（Ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（Ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）、ＳＫ－Ｈｅｐ－１（Ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）、ＳＮＵ６３８（Ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）、及びＰＣ－３（Ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）のがん細胞に対するＩＣ５０を測定した。
【0145】
試験方法は以下のようであった。細胞を一日中静置し、０日目の対照群と設定した。また、細胞に試験物質を加えた後、３日間静置した。次に、１％酢酸と０．４％スルホローダミンＢで染色した。染色された細胞を乾燥して１０ｍＭトリス（ｐＨ１０．０）に溶解した。吸光度は５１５ｎｍで測定し、細胞分裂の程度は以下の数式によって求めた。細胞分裂（％）＝（平均吸光度試験物質－平均吸光度０日目）／（平均吸光度対照群－平均吸光度０日目）×１００で計算した後、ＴａｂｌｅＣｕｒｖｅ ２Ｄ ｖ５．０１（Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を利用して非直線回帰分析によって計算した。
【0146】
その結果は下記表１０のようである。
【表10-1】
【表10-2】
【表10-3】
【0147】
前記表１０に示したように、本発明のヌクレオシド誘導体はＡ５４９、ＨＣＴ１１６、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＳＫ－Ｈｅｐ－１、ＳＮＵ６３８、及びＰＣ－３のようながん細胞に対して大体低いＩＣ５０値を示したため、抗がん効果が期待されるリン酸化酵素阻害剤として活用し得ることが分かる。
【国際調査報告】