ホーム > 特許ランキング > ウニベルシテート バーゼル
知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
▶ ウニベルシテート バーゼルの特許一覧 ▶ パウル・シェラー・インスティトゥートの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-06-10
(54)【発明の名称】［１６１Ｔｂ］ベースの放射性ペプチド
(51)【国際特許分類】
A61K 51/08 20060101AFI20240603BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20240603BHJP
A61K 47/66 20170101ALI20240603BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240603BHJP
A61K 9/10 20060101ALI20240603BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20240603BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20240603BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20240603BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240603BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20240603BHJP
C07K 14/655 20060101ALI20240603BHJP
C07K 7/06 20060101ALI20240603BHJP
A61K 103/30 20060101ALN20240603BHJP
【ＦＩ】
A61K51/08 100
A61K47/22
A61K47/66
A61K9/08
A61K9/10
A61K47/12
A61K47/10
A61K47/02
A61P35/00
A61P35/04
C07K14/655 ZNA
C07K7/06
A61K103:30
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023574332
(86)(22)【出願日】2021-10-29
(85)【翻訳文提出日】2023-11-30
(86)【国際出願番号】 EP2021080220
(87)【国際公開番号】W WO2023051941
(87)【国際公開日】2023-04-06
(31)【優先権主張番号】63/250,621
(32)【優先日】2021-09-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【新規性喪失の例外の表示】新規性喪失の例外適用申請有り
(71)【出願人】
【識別番号】518375937
【氏名又は名称】ウニベルシテート バーゼル
(71)【出願人】
【識別番号】501494414
【氏名又は名称】パウル・シェラー・インスティトゥート
(74)【代理人】
【識別番号】110000338
【氏名又は名称】弁理士法人 ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ
(72)【発明者】
【氏名】ミュラー，クリスティナ
(72)【発明者】
【氏名】シブリ，ロジャー
(72)【発明者】
【氏名】ファン デル モイレン，ニコラス
(72)【発明者】
【氏名】ボルグナ，フランチェスカ
(72)【発明者】
【氏名】ヴィルト，ダミアン
(72)【発明者】
【氏名】メルポメニ，ファニ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076AA16
4C076AA95
4C076BB13
4C076CC27
4C076DD23
4C076DD37
4C076DD41
4C076DD59
4C076DD60
4C076EE59
4C084AA12
4C084MA17
4C084MA21
4C084MA65
4C084MA66
4C084NA05
4C084ZB26
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA15
4H045BA71
4H045EA20
(57)【要約】
（ａ）テルビウム－１６１である放射性核種、（ｂ）テルビウム－１６１を配位するキレート剤、および（ｃ）ソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）アンタゴニストであるペプチドまたはペプチドアナログ、を含む放射性ペプチドが提供される。放射性ペプチドは腫瘍疾患の治療に用いるのに適している。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ａ）テルビウム－１６１である、放射性核種、（ｂ）テルビウム－１６１のキレート剤、および
（ｃ）ソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）アンタゴニストであるペプチドまたはペプチドアナログ、を含む放射性ペプチド。
【請求項2】
前記ソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）アンタゴニストが（ｂ）に共有結合している、請求項１に記載の放射性ペプチド。
【請求項3】
前記キレート剤が環状キレート剤、特に大環状キレート剤である、請求項１または２に記載の放射性ペプチド。
【請求項4】
前記キレート剤が四座キレート剤である、請求項１～３のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項5】
前記キレート剤が４個の窒素原子を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項6】
前記キレート剤が１２員テトラアザ環系である、請求項１～５のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項7】
前記キレート剤が、少なくとも１つのカルボキシ官能基を含有する少なくとも１つの置換基を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項8】
前記キレート剤がＤＯＴＡまたはＤＯＴＡ誘導体である、請求項１～７のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項9】
前記ＤＯＴＡ誘導体が、以下からなる群より選択される、請求項８に記載の放射性ペプチド。【化1】
【請求項10】
前記キレート剤がＤＯＴＡ（ドデカン四酢酸）である、請求項９に記載の放射性ペプチド。
【請求項11】
前記ソマトスタチン受容体アンタゴニストが、アミド結合を介して前記キレート剤に共有結合している、請求項１～１０のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項12】
前記ソマトスタチン受容体アンタゴニストが、ＳＳＴＲ－２（ｓｓｔ２）に結合するか、またはＳＳＴＲ－２（ｓｓｔ２）選択的アンタゴニストである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項13】
投与された前記ソマトスタチン受容体アンタゴニストの２０％未満が細胞に内在化される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項14】
前記ソマトスタチン受容体アンタゴニストが環状ペプチドである、請求項１～１３のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項15】
前記ソマトスタチン受容体アンタゴニストが２つのシステイン残基を含み、好ましくはジスルフィド架橋を形成する、請求項１～１４のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項16】
前記ソマトスタチン受容体アンタゴニストが、ペプチドの２位および７位の位置にシステイン残基を含む、請求項１５に記載の放射性ペプチド。
【請求項17】
前記ソマトスタチン受容体アンタゴニストが８～１４アミノ酸、好ましくは８～１０アミノ酸、より好ましくは８アミノ酸からなる、請求項１～１６のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項18】
前記ソマトスタチン受容体アンタゴニストが式Ｉ：Ｘ１－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｘ３－Ｘ４－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２からなり、ここで、Ｘ１、Ｘ３およびＸ４は、天然または非天然に存在するＤ－またはＬ－アミノ酸から選択され得る、請求項１～１７のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項19】
（ｉ）Ｘ１が、天然に存在するＰｈｅ、フェニル環系に１つ以上の置換を有する置換ＰｈｅおよびＣｐａからなる群より選択され、（ｉｉ）Ｘ３が、Ａｐｈ（Ｈｏｒ）、Ｌｅｕ、Ｌ－Ａｇｌ（ＮＭｅ．ベンゾイル）、Ｄ－Ａｇｌ（ＮＭｅ．ベンゾイル）、Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、Ｔｙｒ、Ａｐｈ（ＣＯＮＨ－ＯＣＨ３）、Ｔｙｒ、Ａｐｈ（ＣＯＮＨ－ＯＨ）からなる群より選択され、ならびに／または（ｉｉｉ）Ｘ４が、Ｄ－ＴｒｐおよびＤ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）（Ｄ－４－アミノ－Ｐｈｅ（カルバモイル））からなる群より選択され、ここで、Ｘ１が好ましくはｐＮＯｓ－Ｐｈｅ、ｐＣｌ－ＰｈｅおよびＣｐａからなる群より選択され、Ｘ３が好ましくはＴｙｒ、Ａｐｈ（Ｃｂｍ）およびＡｐｈ（Ｈｏｒ）からなる群より選択され、ならびに／または、Ｘ４が好ましくはＤ－ＴｒｐおよびＤ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）からなる群より選択される、請求項１８に記載の放射性ペプチド。
【請求項20】
前記ソマトスタチン受容体アンタゴニストが、ＬＭ３（［ｐ－Ｃｌ－Ｐｈｅ－ｃｙｃｌｏ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２］）、ＪＲ１１（Ｃｐａ－ｃｙｃｌｏ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｈｏｒ）－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２）、およびＢＡＳＳ（ｐＮＯ２－Ｐｈｅ－ｃｙｃｌｏ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２）からなる群から選択される、請求項１８または１９に記載の放射性ペプチド。
【請求項21】
テルビウム－１６１がガドリニウム－１６０の中性子照射によって生産される、請求項１～２０のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項22】
テルビウム－１６１が非担体添加テルビウム－１６１（ｎ．ｃ．ａ．テルビウム－１６１）である、請求項１～２１のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項23】
前記アンタゴニストが、他の組織と比較して腫瘍に優先的に取り込まれる、請求項１～２２のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。
【請求項24】
好ましくは投与後２時間後に測定される、血液中の放射性ペプチド取り込みに対する腫瘍細胞中の放射性ペプチド取り込みの比率が少なくとも５０．０であり、肝臓細胞中の放射性ペプチド取り込みに対する腫瘍細胞中の放射性ペプチド取り込みの比率が少なくとも１０．０であり、および／または腎臓細胞中の放射性ペプチド取り込みに対する腫瘍細胞中の放射性ペプチド取り込みの比率が少なくとも２．０である、請求項２３に記載の放射性ペプチド。
【請求項25】
前記放射性ペプチドが下記式の構造を有する、請求項１～２４のいずれか１項に記載の放射性ペプチド。【化2】
【請求項26】
請求項１～２５のいずれか１項に記載の放射性ペプチド、および少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤、好ましくは水、を含む、薬学的組成物。
【請求項27】
前記組成物が０．００１～１ｍｇ／ｍｌまたは０．０１～１ｍｇ／ｍｌまたは０．０５～０．５ｍｇ／ｍｌの放射性ペプチドを含む、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項28】
前記組成物が、ゲンチジン酸、エタノール、酢酸塩、ＮａＣｌおよびアスコルビン酸塩／アスコルビン酸からなる群の少なくとも１種を含有する、請求項２６または２７に記載の医薬組成物。
【請求項29】
前記組成物がアスコルビン酸塩を含む、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項30】
前記組成物が０．５ｍＭ～０．５Ｍ、特に１ｍＭ～１００ｍＭ、または１０ｍＭ～１００ｍＭのアスコルビン酸塩を含有する、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項31】
前記組成物のｐＨ値がｐＨ３．５～ｐＨ６またはｐＨ４～ｐＨ６である、請求項２６～３０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項32】
疾患または腫瘍疾患を治療する方法であって、請求項１～２５のいずれか１項に記載の放射性ペプチド、または請求項２４～３１のいずれか１項に記載の組成物を、疾患治療または腫瘍疾患治療を必要とする対象に投与することを含む、方法。
【請求項33】
前記対象が神経内分泌新生物および／またはその転移、特に肝転移に罹患している、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
前記新生物が、胃膵臓、気管支肺管、甲状腺、胸腺または下垂体における神経内分泌新生物である、請求項３２または３３に記載の方法。
【請求項35】
前記神経内分泌新生物が、胃腸膵神経内分泌新生物、肺の神経内分泌腫瘍、肺の神経内分泌癌、特に小細胞肺癌胸腺神経内分泌腫瘍、傍神経節腫、褐色細胞腫、例えば悪性褐色細胞腫、髄膜腫、甲状腺髄様癌、甲状腺癌、乳癌、腎細胞癌、前立腺癌、および非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される、請求項３２または３３に記載の方法、。
【請求項36】
前記神経内分泌新生物が膵臓腫瘍である、請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
前記神経内分泌新生物がグレード１、グレード２またはグレード３である、請求項３２～３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項38】
前記神経内分泌新生物が、ルテチウム（１７７Ｌｕ）－オキソドトレオチド（Ｌｕｔａｔｈｅｒａ（登録商標））または他の放射性標識ソマトスタチンアナログによる治療に対して、安定または難治性である、請求項３２～３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項39】
請求項１～２５のいずれか１項に記載の放射性ペプチド、または請求項２６～３１のいずれか１項に記載の組成物が、全身的に、好ましくは静脈内に投与される、請求項３２～３８のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【0001】
神経内分泌腫瘍（ＮＥＮｓ）は、生物学的にも臨床的にも不均一な悪性腫瘍の一群であり、主に胃膵管または気管支肺管のびまん性神経内分泌系に発生する［１，２］。放射性標識ソマトスタチン（ＳＳＴ）アナログを用いたペプチド受容体放射性核種療法（ＰＲＲＴ）は、ソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）を発現する低悪性度から中悪性度のＮＥＮを治療するために、ほぼ３０年にわたって採用されている［１，３，４］。当初使用されていた［１１１Ｉｎ］Ｉｎ－オクトレオチドは、症状緩和には有効であったが、ＮＥＮに客観的なＸ線学的反応を引き起こすことはほとんどなかった。オージェ電子の短い組織透過範囲（＜１μｍ）は、効果的な癌治療には十分ではなく、インジウム－１１１による相当量のγ線放出（Ｅγ＝１７１ｋｅＶ，Ｉ＝９１％；２４５ｋｅＶ，Ｉ＝９４％）のため、線量の増加は不可能であった［５，６］。イットリウム－９０（Ｅβ平均＝９３４ｋｅＶ、Ｔ１／２＝２．６７ｄ）のＰＲＲＴへの応用はより成功した［７］。しかし、高エネルギーのβ－粒子（組織範囲は１０ｍｍまで）は、腎臓毒性を引き起こすため、好ましくないことが時間の経過とともに認識された［８，９］。中エネルギーのβ－粒子放出種であるルテチウム－１７７（Ｅβ平均＝１３４ｋｅＶ，Ｔ１／２＝６．６５ｄ；組織範囲＜２ｍｍ［１０］）がＰＲＲＴに好ましい放射性核種として登場した［１１，１２］。１７７Ｌｕ標識ソマトスタチンアナログは、一般的に良好な安全性プロファイルでＮＥＮの治療に有効であることが明らかになった［８］。ルテチウム－１７７のγ線放出は、γシンチグラフィーやＳＰＥＣＴイメージングに用いられてきた。現在、ルテチウム－１７７は、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＡＴＥ（Ｌｕｔａｔｈｅｒａ（商標））［１３，１４］または［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ［１５］を用いたＰＲＲＴに最もよく使用される放射性金属である。
【0002】
最近では、標的放射性核種治療用にα粒子放出種（ＬＥＴ＝５０～２３０ｋｅＶ／μｍ）が提案されている［１６］。ＮＥＮの場合、［２１３Ｂｉ］Ｂｉ－ＤＯＴＡＴＯＣ／ＤＯＴＡＴＡＴＥと［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡＴＯＣ／ＤＯＴＡＴＡＴＥが前臨床試験で有望な結果を示した［１７－２０］。臨床では、［２１３Ｂｉ］Ｂｉ－ＤＯＴＡＴＯＣが、［９０Ｙ］Ｙ－／［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣによる治療に抵抗性の進行性神経内分泌肝転移患者（ｎ＝７）の治療に使用された［２１］。［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡＴＡＴＥは、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＡＴＥ療法で部分寛解または病勢が安定した後、病勢が安定または進行した患者３２例を対象とした先行研究で検討された［２２］。しかしながら、アクチニウム－２２５の応用に関しては多くの不確定要素があり、その中でもイメージングに使用することができないこと、そして最後に、その入手を一般的に困難にしている困難な製造シナリオがある［２３～２５］。アクチニウム－２２５の複雑な崩壊スキームとその結果生じる望ましくない副作用のリスクの増大は、高速で内在化する放射性リガンド（例えば［２２５Ａｃ］ＡｃベースのＰＳＭＡ放射性リガンド）への適用を制限し、ソマトスタチンアンタゴニストのような細胞表面に局在する放射性医薬品との使用を妨げる。
【0003】
この研究の目的は、１７７Ｌｕについて説明したように、中エネルギーのβ－粒子の放出によって崩壊し、イメージング目的に適したγ線を放出する放射性核種治療を同定することであった。さらに、適切なターゲティング剤との併用により、協調的に作用する、放射性核種治療を可能にすることも目的であった。
【0004】
その目的に対する解決策は、請求項１の主題によって定義される。本発明は、テルビウム－１６１とアンタゴニスト性ソマトスタチンアナログとの組み合わせが高度ＰＲＲＴをもたらすという発見に基づく。テルビウム－１６１は、ルテチウム－１７７に類似した標的放射線核種治療のための崩壊特性を示す。それは、中程度のエネルギーのβ－粒子の放出によって崩壊する（Ｅβ平均＝１５４ｋｅＶ；Ｔ１／２＝６．９ｄ［２７］）、イメージングに適したγ線を放出する（Ｅγ＝４８．９ｋｅＶ、Ｉ＝１７％、７４．６ｋｅＶ、Ｉ＝１０％）［２８］。有利なことに、テルビウム－１６１は、腫瘍治療、特に単一癌細胞の治療を想定している場合に、相当数のオージェ電子と転換電子（その高い線エネルギー移動（ＬＥＴ：４－２６ｋｅＶ／μｍ）による）を共放出する［２６，２９］。テルビウム－１６１は、標的化剤としてアンタゴニスト性ソマトスタチン（ＳＳＴ）アナログと有利に組み合わされることが見出され、標的化剤が細胞内に取り込まれるよりもむしろ細胞表面に優位に局在することが見出された場合にはなおさらであった。このような組み合わせは、共放出される転換電子とオージェ電子（高ＬＥＴ電子）の効果から恩恵を受けることが示された。
【0005】
（発明の詳細）
第１の態様により、本発明は、（ａ）テルビウム－１６１である放射性同位体／放射性核種、（ｂ）テルビウム－１６１のキレート剤、および（ｃ）ソマトスタチン受容体（ｓｓｔｒ）アンタゴニストであるペプチドまたはペプチドアナログ、を含む放射性ペプチドの提供により、目的を解決する。したがって、「放射性ペプチド」という用語は、特許請求される実体が放射性同位体とペプチド成分を含むことを意味すると理解される。放射性核種」および「放射性同位体」という用語は、本明細書では同義に用いられる。
第１の態様により、本発明は、（ａ）テルビウム－１６１である放射性同位体／放射性核種、（ｂ）テルビウム－１６１のキレート剤、および（ｃ）ソマトスタチン受容体（ｓｓｔｒ）アンタゴニストであるペプチドまたはペプチドアナログ、を含む放射性ペプチドの提供により、目的を解決する。したがって、「放射性ペプチド」という用語は、特許請求される実体が放射性同位体とペプチド成分を含むことを意味すると理解される。放射性核種」および「放射性同位体」という用語は、本明細書では同義に用いられる。
【0006】
本発明は、テルビウム－１６１を３価の放射性金属同位体（すなわち放射性同位体）として同定したことに基づいており、この同位体は、本発明の放射性ペプチドの他の成分と組み合わせて、β（－）粒子（腫瘍）治療の理想的な放射性候補となる。その崩壊特性（Ｔ１／２＝６．８９ｄ）は、１７７Ｌｕと類似している。それゆえ、テルビウム－１６１の崩壊特性はＰＲＲＴに適している。さらに、オージェ電子の共放出により、β－／オージェ電子併用療法（～１２ｅ－／崩壊：オージェ／転換電子）が可能となる。本発明の実験的証拠が、ＳＳＴＲアンタゴニストとして１６１Ｔｂ標識ソマトスタチンアナログは、１６１Ｔｂおよび１７７Ｌｕが共にとても化学的に類似した３価の放射性ランタノイドであるにもかかわらず、１７７Ｌｕ標識ソマトスタチンアナログよりも有効であったことを、確実にした。
【0007】
１６１Ｔｂの生産は、１６０Ｇｄ（ｎ，γ）１６１Ｇｄ→１６１Ｔｂ核反応を利用することにより有利に行われる。高濃縮１６０Ｇｄ標的は、例えば、Ｐａｕｌ Ｓｃｈｅｒｒｅｒ研究所（スイス）にある核破砕中性子源で２～３週間、またはフランスのＬａｕｅ－Ｌａｎｇｅｖｉｎ研究所もしくはＮｅｃｓａ（Pelindaba、南アフリカ）にある原子炉などの高中性子束原子炉で１週間照射される。生産物は、イオン交換（樹脂）クロマトグラフィー法を用いてＧｄ標的物質から分離され、少量の希塩酸（例えば１ｍｌ以下）で最終生成物を得ることができる。得られる量は１０ＧＢｑを超えることもある。最終生成物の純度は、通常、９８％以上または９９％以上である（１６１ＴｂＣｌ２として）。放射性ペプチドの放射性核種テルビウム－１６１は、最終生成物中に非放射性テルビウムが存在しないことを定義する非担体添加テルビウム－１６１（ｎ．ｃ．ａ．テルビウム－１６１）として特に提供される場合がある。
【0008】
テルビウム－１６１は、典型的には、本発明によるキレート剤と安定に配位した状態で提供される。キレート剤は、キレート剤の原子を介して中心放射性核種原子に結合または配位する分子である。キレート剤は、典型的には、（ｉ）放射性核種（ａ）と錯体を形成し、（ｉｉ）キレート剤（ｂ）を本発明の放射性ペプチドのペプチド成分（ｃ）に連結する、ことを可能にする二官能性分子である。１つの実施形態において、キレート剤は、例えばＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）またはＤＴＰＡ誘導体のような開鎖構造である。別の好ましい実施形態において、キレート剤は環状構造である。特に、キレート剤は、大環状キレート剤であってもよい。さらに、キレート剤は、多座キレート剤、例えば四座キレート剤であってもよい。
【0009】
（大）環状キレート剤の環構造は、放射性同位体を配位するためのヘテロ原子、例えばＯまたはＮ、特にＮを含んでいてもよい。１つの実施形態において、大環状キレート剤は、中心放射性核種に結合または配位するための原子として作用する、４～６個、特に４個のヘテロ原子、より具体的には４個のＮ原子を含む炭素環式構造を基礎とする。有利には、本発明の放射性ペプチドのキレート剤の（大）環状基礎構造は、１２員テトラアザ環系に相当するシクレン（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン）に由来する。テトラアザ環系は、置換基、例えば中心放射性核種に結合または配位する置換基によって、さらに修飾されていてもよい。これにより、例えば２つの置換基が、例えばシクレン環系の４つのＮ原子による配位に加えて、錯体の八面体配位構造を確立していてもよい。その４つのうちの１つ以上、例えば４つ全てにおいて、シクレンのテトラアザ環系は、Ｎ－Ｈ中心を、Ｈ以外であるＸを有するＮ－Ｘ基に置き換えることにより修飾されていてもよい。Ｘは、ＣＨ２ＣＯ２Ｈまたはカルボキシ官能基を有する他の置換基であってもよい。この点に関して、キレート剤は、ＤＯＴＡＧＡ（－テトラ）（２－［１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－４，７，１０－トリス（ｔ－ブチル酢酸）］－ペンタエジオ酸－１ｔ－ブチルエステル）、ＡＡＺＴＡ（１、４－ビス（カルボキシメチル）－６－［ビス（カルボキシメチル）］アミノ－６－メチルペルヒドロ－１，４－ジアゼピン）、ＤＯＴＡ（ドデカン四酢酸）、またはＤＯＴＡＧＡ、ＡＡＺＴＡもしくはＤＯＴＡ誘導体、例えばＣｙＡＡＺＴＡ、ＤＡＴＡもしくはＡＡＺ３Ａであってもよい。ＤＯＴＡ誘導体は、ＤＯＴＡ置換パターン以外のシクレン環系の置換パターンを示してもよい。それゆえ、ＤＯＴＡ誘導体は、環系のヘテロ原子の少なくとも１つにおいて、酢酸（ＤＯＴＡを特徴付ける）とは異なる置換パターンを示していてもよい。
【0010】
本発明によって採用されるＤＯＴＡ誘導体は、以下からなる群から選択されてもよい：ＤＯ３Ａ、ＤＯ２Ａ、ＨＰ－ＤＯ３Ａ、ＢＴ－ＤＯ３Ａ、ＰＣＴＡ、ＤＯ３ＡＰ、ＤＯ２Ａ２Ｐ、ＤＯＡ３Ｐ、ＤＯＴＰ、ＤＯＴＰＭＢ、ＤＯＴＡＭＡＥ、ＤＯＴＭＡ、ＴＣＥ－ＤＯＴＡ、およびＤＯＴＡＭＡＰ。
【0011】
ＤＯＴＡまたはその誘導体の１つは、テルビウム－１６１で例示されるような３価の放射性金属に対する好ましいキレート剤であり得る。本発明の放射性ペプチドのキレート剤、特にＤＯＴＡまたはＤＯＴＡ誘導体は、錯体形成を促進するために、高温（例えば７０℃～９５℃）での錯体形成、マイクロ波照射の適用、溶媒混合物の使用、またはそれらの組み合わせによって、テルビウム－１６１と有利に錯体形成され得る。対照的に、室温での錯体形成は、より精巧な条件を適用することなく、むしろゆっくりと進行する。放射性同位体がＤＯＴＡまたはＤＯＴＡ誘導体の空洞の中に入ると、室温で安定にその中に留まる。それゆえ、テルビウム－１６１放射性同位体とキレート剤との解離による活性の損失なしに、錯体を室温で保存することができる。
【0012】
より具体的には、ＤＯＴＡは本発明の放射性ペプチドのキレート剤として使用される。
【0013】
本発明の１つの実施形態において、放射性ペプチドは、（ｃ）ソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）アンタゴニストを（ｂ）キレート剤に共有結合的にカップリングさせることを特徴とするコンジュゲート化合物である。そのカップリングは、ペプチド性ソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）アンタゴニストのＮ末端アミノ基を含むことができる。それにより、ペプチド性ソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）アンタゴニストとキレート剤は、特にＮ末端アミノ基とキレート剤のカルボキシ官能基、例えばシクレン環系の置換基のカルボキシ官能基との反応により、例えばアミド結合を形成することができる。この点に関して、例えばキレート剤のカルボキシ官能基、例えばそのＮ－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ基（Ｎはシクレン環系の窒素原子である）は、例えばペプチド性成分（ｃ）のＮ末端アミノ基と反応してコンジュゲート化合物を形成し得る。以下の式は、種々のキレート剤（ＤＯＴＡまたはＤＯＴＡ誘導体）がアミド結合を介して本発明の放射性ペプチドのペプチド性成分（ｃ）（以下の式では図示せず）に連結されてなる本発明の放射性ペプチドの実施形態を例示する：
本発明の放射性ペプチドは、その成分（ｃ）によってさらに特徴付けられる。成分（ｃ）はソマトスタチン受容体アンタゴニストである。ｓｓｔｒアンタゴニストによるソマトスタチン受容体（ｓｓｔｒ）標的化は、例えば神経内分泌新生物の治療のための貴重な治療選択肢である。ｓｓｔｒアンタゴニスト（ｃ）は、有利には、上述のように、キレート剤（ｂ）とコンジュゲート化合物を形成する。本発明の成分（ｃ）について定義したｓｓｔｒアンタゴニストは、任意のｓｓｔｒサブタイプに結合することができる。しかし、より具体的には、ＳＳＴＲ－２（ｓｓｔ２）に優先的または排他的に結合する。ソマトスタチン受容体２は、神経内分泌腫瘍において典型的に発現されるＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）である。ＳＳＴＲ２はそれぞれソマトスタチン（ＳＳＴ）－１４と（ＳＳＴ）－２８の受容体である。腫瘍におけるＳＳＴＲ２の過剰発現を利用して、放射性ペプチドを腫瘍に選択的に送達することができる。腫瘍細胞との結合により、放射性同位体の放射能、あるいはむしろ放射性核種の粒子放出（ａ）により、腫瘍細胞に損傷を与え、最終的に破壊することができる。したがって、ペプチド成分（ｃ）は、特に、ＳＳＴＲ－２（ｓｓｔ２）選択的アンタゴニストである可能性がある。
【化1】
本発明の放射性ペプチドは、その成分（ｃ）によってさらに特徴付けられる。成分（ｃ）はソマトスタチン受容体アンタゴニストである。ｓｓｔｒアンタゴニストによるソマトスタチン受容体（ｓｓｔｒ）標的化は、例えば神経内分泌新生物の治療のための貴重な治療選択肢である。ｓｓｔｒアンタゴニスト（ｃ）は、有利には、上述のように、キレート剤（ｂ）とコンジュゲート化合物を形成する。本発明の成分（ｃ）について定義したｓｓｔｒアンタゴニストは、任意のｓｓｔｒサブタイプに結合することができる。しかし、より具体的には、ＳＳＴＲ－２（ｓｓｔ２）に優先的または排他的に結合する。ソマトスタチン受容体２は、神経内分泌腫瘍において典型的に発現されるＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）である。ＳＳＴＲ２はそれぞれソマトスタチン（ＳＳＴ）－１４と（ＳＳＴ）－２８の受容体である。腫瘍におけるＳＳＴＲ２の過剰発現を利用して、放射性ペプチドを腫瘍に選択的に送達することができる。腫瘍細胞との結合により、放射性同位体の放射能、あるいはむしろ放射性核種の粒子放出（ａ）により、腫瘍細胞に損傷を与え、最終的に破壊することができる。したがって、ペプチド成分（ｃ）は、特に、ＳＳＴＲ－２（ｓｓｔ２）選択的アンタゴニストである可能性がある。
【0014】
それゆえ、ソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）アンタゴニストは、本発明の放射性ペプチドが腫瘍細胞に結合することを可能にする。それにより、成分（ｃ）としてＳＳＴＲアンタゴニストを選択することは、腫瘍細胞上への本発明の放射性ペプチドの蓄積を有利に支持し、それにより腫瘍細胞の細胞膜上への放射能の非常に高い蓄積を支持する。これはＳＳＴＲアンタゴニストが、放射性標識されたＳＳＴＲアゴニストよりもはるかに多い、細胞膜にアンカーされたＳＳＴＲ上の結合部位を認識するため。これにより、放射性標識ＳＳＴＲアンタゴニストは、そのアゴニスト性の対応物よりも非常に高い放射能を、腫瘍細胞に対して発現することを可能にする。
【0015】
有利なことに、腫瘍細胞結合体として（ペプチドを）アンタゴニスト成分（ｃ）として含む放射性ペプチドは、内在化率が低いために腫瘍細胞によって有意に内在化されず、腫瘍細胞の表面に留まる。それゆえ、投与された放射性ペプチドの３０％未満、２５％未満、２０％未満または１０％未満が、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ条件下で腫瘍細胞に内在化され得る。それゆえ、成分（ｃ）は、有利には、ｓｓｔｒ、より具体的にはｓｓｔｒ２を標的とするが、標的腫瘍細胞によって内在化されないか、または微量（例えば、３０％未満または２０％未満）しか内在化されないアンタゴニスト性ソマトスタチンアナログ（またはＳＳＴＲアンタゴニスト）を表していてもよい。標的ｓｓｔｒに結合する際に、放射性ペプチドの大部分が細胞表面膜上に保持されることは、治療的に相乗的に作用し得るか、あるいはテルビウム－１６１によるβ－／オージェ電子放出の組み合わせによる治療効果にさらに寄与し得る。
【0016】
放射性ペプチドのソマトスタチン受容体アンタゴニストは、天然または非天然に存在するアミノ酸からなるペプチドまたはペプチドアナログであってもよい。本発明の放射性ペプチドは、遊離ペプチドの形態であってもよいし、その塩、溶媒和物または互変異性体の形態であってもよい。本明細書で使用される「放射性ペプチド」のペプチド性成分を定義する用語「ペプチド」は、アミノ酸の長さまたは修飾またはアミノ酸の性質に関係なく、アミノ酸の任意の配列を指す。天然または非天然に存在するアミノ酸は、Ｄ－またはＬ－アミノ酸、すなわちＤ－またはＬ－配置であってもよい。これらは互いにアミド結合を介して連結している。ソマトスタチン受容体アンタゴニストの任意の反応性側鎖基が、キレート剤成分と共有結合してコンジュゲート化合物を形成することを可能にし得る一方で、アンタゴニストのＮ末端遊離アミノ基は、放射性ペプチドのキレート剤成分との共有結合に特に関与し得る。ペプチド性アンタゴニストは、典型的には、少なくとも８個の天然または非天然に存在するアミノ酸から構成されてもよい。より具体的には、アミノ酸の数は８～１４アミノ酸、または８～１０アミノ酸、または８アミノ酸である。
【0017】
１つの実施形態において、本発明の放射性ペプチドの成分（ｃ）としてのアンタゴニストは、環状ペプチドとして提供される。環状構造は、２つの側鎖部分の間の共有結合によって導入されてもよい。特に、２つの側鎖部分による閉環は、その遊離チオール基によってジスルフィド架橋を形成する２つのシステイン残基によって実現されてもよい。ジスルフィド架橋に基づく環状構造を形成する場合、システイン残基は、少なくとも３個、少なくとも４個または少なくとも５個のアミノ酸、より具体的には３個、４個または５個のアミノ酸の間に離間するように、アンタゴニストのペプチド配列内に配置されてもよい。具体的な実施形態では、システイン残基は互いに４アミノ酸離れている。ジスルフィド架橋形成に関与する、よりＮ末端のシステイン残基は、アンタゴニストのペプチド配列の２位または３位に配置され得る。ジスルフィド架橋形成に関与する、よりＣ末端のシステイン残基は、アンタゴニストのペプチド配列の７位または８位に位置し得る。特に、２つのジスルフィド架橋形成システイン残基は、アンタゴニストのペプチド配列のそれぞれ２位および７位に位置し得る。
【0018】
本発明の放射性ペプチドのペプチドアンタゴニストのカルボキシ末端は、例えば、下記式（Ｉ）または下記実施形態（ｉ）～（ｘｘｖ）に示されるように、アミド化されていてもよい（「－ＮＨ２」）。
【0019】
成分（ｃ）の非天然に存在するアミノ酸は、具体的には、（４－アミノ－Ｐｈｅ（カルバモイル））、（Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、Ｄ－Ａｇｌ（ＮＭｅ．ベンゾイル）、Ａｐｈ（Ｈｏｒ）、Ａｐｈ（ＣＯＮＨ－ＯＣＨ３）、置換Ｐｈｅ、およびＣｐａからなる群から選択され得る。これらはすべてＤ－またはＬ－エナンチオマーとして提供され得る。さらに、天然に存在するアミノ酸はすべて、Ｄ－エナンチオマーとして使用してもよい。
【0020】
１つの実施形態によれば、本発明ラジオペプチドの成分（ｃ）としてのソマトスタチン受容体アンタゴニストは、式Ｉによる配列からなり得：
Ｘ１－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｘ３－Ｘ４－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２ （式（Ｉ））
またはその塩、溶媒和物もしくは互変異性体であり、
ここで、Ｘ１、Ｘ３およびＸ４は、天然または非天然に存在するＤ－またはＬ－アミノ酸から選択され得る。
Ｘ１－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｘ３－Ｘ４－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２ （式（Ｉ））
またはその塩、溶媒和物もしくは互変異性体であり、
ここで、Ｘ１、Ｘ３およびＸ４は、天然または非天然に存在するＤ－またはＬ－アミノ酸から選択され得る。
【0021】
より具体的には、（ｉ）Ｘ１は、天然に存在するＰｈｅ、フェニル環系に１つ以上の置換を有する置換ＰｈｅおよびＣｐａからなる群より選択され得；（ｉｉ）Ｘ３は、Ａｐｈ（Ｈｏｒ）、Ｌｅｕ、Ｌ－Ａｇｌ（ＮＭｅ．ベンゾイル）、Ｄ－Ａｇｌ（ＮＭｅ．ベンゾイル）、Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、Ｔｙｒ、Ａｐｈ（ＣＯＮＨ－ＯＣＨ３）、Ａｐｈ（ＣＯＮＨ－ＯＨ）からなる群より選択され得；および／または（ｉｉｉ）Ｘ４は、Ｄ－ＴｒｐおよびＤ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）（Ｄ－４－アミノ－Ｐｈｅ（カルバモイル））からなる群より選択され得る。特に、式（Ｉ）のペプチド性アンタゴニストは、（ｉ）によるＸ１、（ｉｉ）によるＸ３、および（ｉｉｉ）によるＸ４について、上記で定義したようなアミノ酸を含んでいてもよい。
【0022】
Ｘ１に置換Ｐｈｅ残基を選択する場合、少なくとも１つのフェニル環置換基は、フェニル環系のオルト（ｏ）、メタ（ｍ）またはパラ（ｐ）位、より具体的にはパラ（ｐ）環位に配置されてもよい。Ｘ１位のフェニル環における少なくとも１つの置換基は、典型的には、嵩高い置換基ではなく、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシまたはニトロ基などの立体的に目立たない置換基を表すことができる。典型的には、置換Ｐｈｅ残基のフェニル環系は、１個または２個の置換基で置換されていてもよく、より具体的には１個の置換基で置換されていてもよい。フェニル環系が１つの置換基で置換されている場合、その置換基は、特にＰｈｅ環系のパラ位に配置されていてもよい。それは例えば、ニトロ基またはＣｌなどのハロゲンから選択され得る。
【0023】
式（Ｉ）によるより具体的な実施形態は、以下に基づいてもよい：（ｉ）Ｘ１は、ｐＮＯ２－Ｐｈｅ、ｐＣｌ－ＰｈｅおよびＣｐａからなる群から選択され得；（ｉｉ）Ｘ３は、Ｔｙｒ、Ａｐｈ（Ｃｂｍ）およびＡｐｈ（Ｈｏｒ）からなる群から選択され得；および／または（ｉｉｉ）Ｘ４は、Ｄ－ＴｒｐおよびＤ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）から選択され得る。特に、式（Ｉ）のペプチド性アンタゴニストは、この段落によって定義される（ｉ）によるＸ１、（ｉｉ）によるＸ３、および（ｉｉｉ）によるＸ４について、上記で定義されるようなアミノ酸を含み得る。
【0024】
より具体的な実施形態として、特に式（Ｉ）の場合、本発明の放射性ペプチドは、ＬＭ３（［ｐ－Ｃｌ－Ｐｈｅ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２］）、ＪＲ１１（Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｈｏｒ）－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２）、ＪＲ１０（ｐ－ＮＯ２－Ｐｈｅ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２）、およびＢＡＳＳ（ｐＮＯ２－Ｐｈｅ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２）からなる群から選択されるソマトスタチン受容体アンタゴニストを含んでもよい。アンタゴニストＬＭ３、ＪＲ１０、ＪＲ１１、およびＢＡＳＳはすべてｓｓｔｒ－２選択的アンタゴニストとして働く。
【0025】
別の実施形態によれば、本発明の放射性ペプチドの成分（ｃ）としてのアンタゴニストは、以下からなる群より選択され得る：
（ｉ） ｐＮＯ２－Ｐｈｅ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２；
（ｉｉ） ｐＮＯ２－Ｐｈｅ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２；
（ｉｉｉ） Ｈ２Ｎ－ｐＮＯ２－Ｐｈｅ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｉｖ） ｐＮＯ２－Ｐｈｅ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｖ） ｐＮＯ２－Ｐｈｅ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｈｏｒ）－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｖｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｌ－Ａｇｌ（ＮＭｅ．ベンゾイル）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｖｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ａｇｌ（ＮＭｅ．ベンゾイル）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｖｉｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｉｘ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘ） Ｃｂｍ－Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｉ） ［ベータ］Ａｌａ－Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｉｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－ＮＨ２；
（ｘｉｖ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｃｈａ－ＮＨ２；
（ｘｖ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ａｐｈ（Ｈｏｒ）－ＮＨ２；
（ｘｖｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－ＤＡｐｈ（Ｃｂｍ）－ＮＨ２；
（ｘｖｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－ＮＨ２；
（ｘｖｉｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－ＧｌｙＯＨ；
（ｘｉｘ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（ＣＯＮＨ－ＯＣＨ３）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｘ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（ＣＯＮＨ－ＯＨ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｘｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－５Ｆ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｘｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－５Ｆ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｘｉｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｘｉｖ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｈｏｒ）－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；および
（ｘｘｖ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｈｏｒ）－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２。
（ｉ） ｐＮＯ２－Ｐｈｅ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２；
（ｉｉ） ｐＮＯ２－Ｐｈｅ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２；
（ｉｉｉ） Ｈ２Ｎ－ｐＮＯ２－Ｐｈｅ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｉｖ） ｐＮＯ２－Ｐｈｅ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｖ） ｐＮＯ２－Ｐｈｅ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｈｏｒ）－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｖｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｌ－Ａｇｌ（ＮＭｅ．ベンゾイル）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｖｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ａｇｌ（ＮＭｅ．ベンゾイル）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｖｉｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｉｘ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘ） Ｃｂｍ－Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｉ） ［ベータ］Ａｌａ－Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｉｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－ＮＨ２；
（ｘｉｖ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｃｈａ－ＮＨ２；
（ｘｖ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ａｐｈ（Ｈｏｒ）－ＮＨ２；
（ｘｖｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－ＤＡｐｈ（Ｃｂｍ）－ＮＨ２；
（ｘｖｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－ＮＨ２；
（ｘｖｉｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－ＧｌｙＯＨ；
（ｘｉｘ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（ＣＯＮＨ－ＯＣＨ３）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｘ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（ＣＯＮＨ－ＯＨ）－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｘｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－５Ｆ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｘｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－５Ｆ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｘｉｉｉ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；
（ｘｘｉｖ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｈｏｒ）－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－２Ｎａｌ－ＮＨ２；および
（ｘｘｖ） Ｃｐａ－シクロ［Ｄ－Ｃｙｓ－Ａｐｈ（Ｈｏｒ）－Ｄ－Ａｐｈ（Ｃｂｍ）－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ］－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ２。
【0026】
またはその塩、溶媒和物もしくは互変異性体である。
【0027】
本発明の放射性ペプチドは、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて腫瘍患者の腫瘍組織に選択的に蓄積され得る。それにより、放射性ペプチドは腫瘍組織以外の組織にはあまり顕著に蓄積しない。腫瘍組織内への優先的蓄積は、他の組織、例えば腎臓、肝臓、血液における放射性ペプチドの取り込みに対する、腫瘍細胞における放射性ペプチドの取り込みの比率によって表され得る。本発明の放射性ペプチドを特徴付ける腫瘍／血液取り込み比率は、少なくとも５０．０、または少なくとも７５、または少なくとも１００であってもよい。放射性ペプチドの腫瘍／肝臓取り込み比率は、少なくとも１０．０または少なくとも２０であってもよい。この比率は、以下の生体分布ｉｎ ｖｉｖｏ試験（セクションＩＩＩ．）に示されるように決定してもよい。腫瘍／腎臓の取り込み比率は、少なくとも２．０であってよい。その測定は、対象への放射性ペプチドの投与の少なくとも２時間後、典型的には対象への放射性ペプチドの投与の２時間後または４時間後に実施されてもよい。
【0028】
本発明の具体的な実施形態により、本発明の放射性ペプチドは以下の構造を有する：
その中で、放射性核種テルビウム－１６１はＤＯＴＡキレート剤によって錯化され、錯体の八面体配位構造を確立する。ＤＯＴＡキレート剤は、ｓｓｔｒ２選択的アンタゴニストＬＭ３のＮ末端にアミドリンカーを介して共有結合的にコンジュゲート化されている。そのカルボキシ末端はアミド化されている。
【化2】
その中で、放射性核種テルビウム－１６１はＤＯＴＡキレート剤によって錯化され、錯体の八面体配位構造を確立する。ＤＯＴＡキレート剤は、ｓｓｔｒ２選択的アンタゴニストＬＭ３のＮ末端にアミドリンカーを介して共有結合的にコンジュゲート化されている。そのカルボキシ末端はアミド化されている。
【0029】
より一般的には、ペプチドアンタゴニストまたはペプチドアンタゴニスト／キレート剤コンジュゲート、または本明細書中で上述した放射性ペプチドは、水（水和物または半水和物など）または一般的な有機溶媒と溶媒和物を形成し得る。本明細書で使用される用語「互変異性体」は、最も広い意味で使用され、２つの異性体の間の平衡状態で存在することができる本発明のペプチドまたはペプチド／キレート剤コンジュゲートまたは放射性ペプチドを含む。このような化合物は、２つの原子または基を連結する結合および化合物中のこれらの原子または基の位置が異なっていてもよい。
【0030】
本発明の放射性ペプチドは、例えば亜鉛、鉄、カルシウム、バリウム、マグネシウム、アルミニウムなどとの酸付加塩または金属錯体などの、薬学的または獣医学的に許容される非毒性の塩の形態で投与することができる。このような非毒性の塩としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、タンニン酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、アルギン酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩などが挙げられる。
【0031】
本発明の別の態様は、本明細書に記載の放射性ペプチドおよび少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む、薬学的組成物を指す。より具体的には、医薬組成物は液体製剤であってもよい。それは、任意に緩衝系を含む水溶液であってもよい。本発明の水性医薬組成物は、別の水混和性溶媒、例えばエタノールを含んでもよい。典型的には、水溶液は、他の溶媒、例えばエタノールを体積比で１０％以上含有してはならない。医薬組成物は、ｐＨ３～ｐＨ７の範囲、より具体的にはｐＨ３．５～ｐＨ６またはｐＨ４～ｐＨ６の範囲のｐＨを有していてもよい。
【0032】
本発明による医薬組成物は、治療される対象または治療される疾患に応じて、本明細書で定義されるように０．００１～１ｍｇ／ｍｌの放射性ペプチドを含む。具体的には、放射性ペプチドの濃度は、０．０１～１または０．５ｍｇ／ｍｌ、または０．０５～０．５ｍｇ／ｍｌの範囲であってもよい。
【0033】
医薬組成物は、ゲンチジン酸、エタノール、酢酸塩、ＮａＣｌおよびアスコルビン酸／アスコルビン酸塩からなる群の添加物の少なくとも１つ、例えば１つ、２つまたは３つを含んでいてもよい。
【0034】
１つの実施形態において、医薬組成物は、安定剤として抗酸化剤アスコルビン酸／アスコルビン酸塩を含む。典型的にはスカベンジャーとして作用するアスコルビン酸／アスコルビン酸塩の存在は、医薬組成物を安定化させ、それにより医薬組成物の貯蔵寿命を向上させ、一方で医薬組成物をヒト、および他の哺乳動物対象への投与に適したものとして維持し得る。それゆえ、医薬組成物は、１ミリリットル当たり約５ｍｇを超えるアスコルビン酸、または１ミリリットル当たり約１０ｍｇを超えるアスコルビン酸、または１ミリリットル当たり約２０ｍｇを超えるアスコルビン酸、または１ミリリットル当たり約３０ｍｇを超えるアスコルビン酸、または１ミリリットル当たり約４０ｍｇを超えるアスコルビン酸、または１ミリリットル当たり約５０ｍｇを超えるアスコルビン酸、または１ミリリットル当たり約１００ｍｇを超えるアスコルビン酸、または１ミリリットル当たり約２００ｍｇを超えるアスコルビン酸を含んでもよい。それゆえ、医薬組成物は、５～１００ｍｇ／ｍｌのアスコルビン酸／アスコルビン酸、または２５～５００ｍｇ／ｍｌ、または５０～２００ｍｇ／ｍｌを含有していてもよい。別の言い方をすれば、医薬組成物は、０．５ｍＭ～０．５Ｍ、特に１ｍＭ～１００ｍＭまたは１０ｍＭ～１００ｍＭの範囲のアスコルビン酸／アスコルビン酸塩を含んでいてもよい。
【0035】
医薬組成物は、５０～８００ＭＢｑ／ｍｌまたは１００～６００ＭＢｑ／ｍｌまたは２００～４００ＭＢｑ／ｍｌの範囲の放射能を示すことができる。
【0036】
別の態様において、本発明は、疾患、特に腫瘍疾患を治療する方法を指す。この治療方法は、本発明の放射性ペプチドまたは本発明の組成物を、疾患治療、特に新生物または腫瘍治療を必要とする対象に投与することを含んでいてもよい。対象は哺乳動物、特にヒトであってよい。
【0037】
本発明の放射性ペプチドまたはその無毒性塩は、典型的には、薬学的または獣医学的に許容される担体／賦形剤と組み合わせて本発明の医薬組成物を形成し、ヒトおよび他の哺乳動物を含む動物に、静脈内、皮下、筋肉内、経皮、例えば経鼻、脳脊髄内または経口のいずれかで投与されてもよい。具体的には、本発明の放射性ペプチドまたは本発明の医薬組成物は、全身的に、好ましくは静脈内に、例えば点滴により投与されてもよい。医薬組成物は、対象の静脈内へ点滴により、例えば調製されたカテーテルまたはヘパリンロックラインにより、長時間にわたって、例えば１０～６０分間投与してもよく、適切な生理食塩水およびまたはヘパリン溶液でフラッシュしてもよい。投与は、カテーテルまたはヘパリンロックラインにルアーロックを介して行うことができる。投与部位は患者の腫瘍／転移プロファイルに依存する。具体的な投与部位としては、腕の静脈が考えられる。
【0038】
治療プロトコールは、腫瘍疾患、腫瘍疾患の重症度、および治療経過に依存し、通常、各治療サイクル後にＰＥＴ／ＣＴまたはＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャンによってモニターされる。ＳＰＥＣＴは、好ましくは、体内における放射性ペプチドの分布を研究する技術として機能し得る。１つの実施形態において、治療プロトコールは、２～１０治療サイクル、例えば４、５、６又は７治療サイクルで構成され得る。それゆえ、治療プロトコールは、４～１０週間ごと、例えば５～８週間ごと又は約６週間ごとに２回以上の治療サイクルを予見することができる。病勢が進行した場合には、最初の治療サイクルのプロトコールの後に再治療を行うことが想定される。
【0039】
腫瘍、例えば良性腫瘍または悪性腫瘍の治療に使用するように設計されたこのような医薬組成物は、他の組織におけるその転移の治療を含め、腫瘍の治療または制御に十分な量で投与することができる。放射性ペプチドは、少なくとも約９０％の純度であるべきであり、好ましくは少なくとも約９８％の純度を有することができる；しかしながら、より低い純度でも有効であり、ヒト以外の哺乳動物に使用してもよい。この純度とは、意図するペプチドが、組成物中に存在するすべての同種のペプチドおよびペプチドフラグメントの重量％を構成することを意味する。必要な投与量は、治療される特定の状態、状態の重篤度、および想定される治療期間によって変化する。
【0040】
より具体的には、本発明の放射性ペプチドまたは医薬組成物によって治療されるべき疾患は、内分泌（ホルモン）系および（末梢）神経系の細胞から生じる新生物である。治療すべき新生物または腫瘍の異常細胞は、典型的にはその細胞表面にｓｓｔｒ２を発現する。これらはより多くの様々な組織に発生する可能性があるが、最も一般的には腸に発生する。それゆえ新生物は、消化管膵臓（例えば、前腸、中腸、後腸、または膵臓：膵島細胞）または気管支肺管における神経内分泌新生物であってもよい。本発明の方法は、より多様な組織における神経内分泌新生物、および／または神経内分泌腫瘍転移、特に肝転移の治療を含み得ることが理解される。神経内分泌新生物／腫瘍は良性であっても悪性であってもよい。その組織学的悪性度は、ＷＨＯの悪性度分類によれば、Ｇ１、Ｇ２またはＧ３に分類される。Ｇ１、Ｇ２およびＧ３に分類される消化管膵臓系の分化神経内分泌新生物は神経内分泌腫瘍と定義される一方で、Ｇ３に分類される消化管膵臓系の低分化神経内分泌新生物は神経内分泌癌に相当する。本発明は、消化管膵臓系の分化または低分化神経内分泌腫瘍または癌腫、例えば膵臓腫瘍または癌腫を治療する方法を提供する。
【0041】
様々な他の臓器が神経内分泌新生物／腫瘍およびその転移によって冒される可能性がある。それゆえ、肺の神経内分泌腫瘍、例えば、小細胞肺癌を含む肺または気管支の神経内分泌癌は、本発明に従って治療され得る。副腎腫瘍、特に副腎髄質腫瘍は、例えば副腎髄質の腫瘍として褐色細胞腫も、本発明方法によって治療することができる。末梢神経系の腫瘍、例えば傍神経節腫、シュワンノーマまたは神経芽細胞腫は、本発明方法による治療の対象となる腫瘍疾患となり得る。胸腺、甲状腺または下垂体の腫瘍についても同様に、例えば神経内分泌甲状腺腫瘍、特に甲状腺髄様癌が治療されうる。乳癌または泌尿生殖器の癌も本発明方法によって治療され得る。前立腺癌、特に神経内分泌起源の前立腺癌も治療され得る。また、髄膜腫、腎細胞癌、非ホジキンリンパ腫の治療にも本発明の方法を適用することができる。
【0042】
有利には、本明細書に記載される治療法は、例えば取り込み値（ＳＵＶ）を決定することによって、腫瘍の新生物の異常細胞による、本発明の放射性ペプチドのトレーサー投与の取り込み量を決定することを可能にするイメージング工程（例えばＰＥＴ／ＣＴスキャンおよび／またはＭＲＩ）が先行してもよい。それにより、ソマトスタチン受容体、例えばソマトスタチン受容体サブタイプ２（ｓｓｔｒ２）が高発現している腫瘍患者が選択され、本発明のアプローチによる治療が成功する。代替的または付加的に、腫瘍細胞を分子生物学的方法またはｉｎ ｖｉｔｒｏ診断方法によって分析し、ｓｓｔｒ陽性細胞またはｓｓｔｒ２陽性細胞、すなわち腫瘍細胞表面上のｓｓｔｒ発現レベルを決定してもよい。
【0043】
この治療アプローチは、腫瘍以外の組織への副作用を最小限に抑えながら、腫瘍の治療に非常に有効である。放射性ペプチドは体内の腫瘍部位に急速な速度で蓄積する。放射性ペプチドの放射線は腫瘍部位で本質的に吸収されるか、尿中に排泄されるため、他の組織は放射性同位体の（β－）粒子放射線の影響を本質的に受けない。テルビウム－１６１で標識されたアンタゴニスト性ソマトスタチンアナログは、放射性同位体の放射線によって損傷を受けた腫瘍細胞に結合するかまたはその中に入り込み、好ましくは結合する。その後、腫瘍細胞はアポトーシスまたはネクローシス現象を受け、治療の結果として被験者の腫瘍負荷が減少する。
【0044】
具体的な実施形態では、本発明の治療法は、原発性内分泌新生物／腫瘍および、潜在的にその転移を患う患者に適用される。
【0045】
別の実施形態では、本発明の放射性ペプチドに基づく治療法は、併用治療と組み合わせて実施することができる。特に、ＡｒｇまたはＬｙｓのようなアミノ酸を含む溶液の併用注射による腎保護が想定され得る。このようなアミノ酸溶液による併用治療は、例えば３時間～０．２時間前、典型的には約１時間～約１．５時間前に開始し、放射性ペプチドの投与終了後さらに１時間～５時間継続することができる。また、本発明の放射性ペプチドによる治療サイクルの前に、制吐剤および／またはコルチコステロイドによって患者を前処置してもよい。
【0046】
具体的な実施形態において、本発明は、９０Ｙ－ＤＯＴＡＴＯＣ、１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ、（１７７Ｌｕ）－オキソドトレオチド（Ｌｕｔａｔｈｅｒａ（登録商標））；１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＡＴＥおよび他の放射性標識ソマトステインアナログ、特に１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣまたは（１７７Ｌｕ）－オキソドトレオチド（Ｌｕｔａｔｈｅｒａ（登録商標））；より特に（１７７Ｌｕ）－オキソドトレオチド（Ｌｕｔａｔｈｅｒａ（登録商標））；１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＡＴＥによる治療に対して、安定または難治性である神経内分泌新生物／腫瘍および他のＳＳＴＲ２陽性新生物の治療を可能にする。
別の態様により、本発明はキットまたは部品キットを提供する。
【化3】
別の態様により、本発明はキットまたは部品キットを提供する。
【0047】
放射性核種を用いた標識反応は、治療の前に臨床病院または実験室で実施する必要がある場合がある。このような場合、種々の反応成分は、「キット」または「複数のキット」の形態で使用者に提供され得る。したがって、本発明による医薬組成物を調製するためのキットは、（ｉ）放射性核種のキレート剤に結合した本明細書に記載のソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）アンタゴニスト、（ｉｉ）任意のアジュバントを有する不活性な薬学的に許容される担体および／または製剤化剤、（ｉｉｉ）放射性金属同位体テルビウム－１６１の塩の溶液、典型的にはその塩の形態、および任意に、（ｉｖ）キットに存在する成分を反応させるための処方箋を伴う使用説明書、以上のすべてをキットの部分として含んでいてもよい。構成要素（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および任意に（ｉｖ）は、通常、キットの別個の部分として提供される。あるいは、構成要素（ｉｉｉ）は第一のキットにより提供され、構成要素（ｉ）および（ｉｉ）は別個の第二のキットにより部品として提供されてもよい。それゆえ、第一のキットと第二のキットは別個の存在として使用部位に送達され、放射性核種のさらなる製剤化およびその後の治療的使用のための「オンタイムでの」提供を可能にする。
【0048】
ソマトスタチンアンタゴニスト（放射性ペプチドのペプチド成分（ｃ））は、本明細書で定義されるように、キレート剤（放射性ペプチドの成分（ｂ））との反応によってコンジュゲートされ得る。得られたペプチド／キレート剤コンジュゲートは、放射性同位体テルビウム－１６１（放射性ペプチドの成分（ａ））を使用部位で簡便な方法で安定に錯化するための有利な実体を提供する。ペプチド／キレート剤コンジュゲートは、例えばその塩の形態で、乾燥形態で提供され得るか、またはより典型的には、キットの一部として溶液、例えば緩衝化または非緩衝化水溶液で提供され得る。乾燥形態で提供される場合、凍結乾燥形態で提供されることがあり、凍結乾燥コンジュゲートは使用部位で溶液に溶解する必要がある。注射液としての性質上、無菌であることが望ましい。成分が乾燥状態である場合、使用者は、溶媒として滅菌生理的食塩水を使用することが好ましく、これは任意に緩衝化されている。
【0049】
放射性核種／同位体が、すべての部分を含むキット中に存在する場合、または（ｉｉｉ）放射性核種を唯一の化学的実体として含む別個のキット中に存在する場合、放射性核種またはその塩は、典型的には、例えば２未満または１未満のｐＨを示す酸性水溶液中、例えば塩酸水溶液中で提供される。放射性核種は別個のキットまたはキットの別個の部分として提供されるので、放射性核種は錯体形成反応によってペプチド／キレート剤結合体に結合するように調製されなければならない。有利には、ペプチド／キレート剤結合体を含む溶液と放射性核種を含む溶液の両方が組み合わせられる。ペプチド／キレート剤結合体を含む溶液は、例えば酢酸塩のような酸性域のｐＨを緩衝する緩衝剤を有利に含み得、適切な酸性条件下で錯体形成反応を起こし得る。（例えばヒドロキシ塩の形成による）放射性金属の沈殿を防ぐために、錯体形成反応はアルカリ性条件下で進行させるべきではない。有利には、錯形成反応は、例えば、放射性核種とペプチド／キレート剤結合体の混合溶液を、例えば、溶液の沸点に近い温度まで加熱することにより、平衡が錯形成に移行する条件下で行われる。
【0050】
さらに、得られた生成物は、安定化添加剤を添加して最終的に再製剤化してもよい。それによって、上記のテルビウム－１６１錯体化ペプチド／キレート剤結合体は、適当な安定剤、例えば、エタノール、アスコルビン酸、ゲンチジン酸またはこれらの酸の塩で安定化され得る。
【0051】
［図面の簡単な説明］
（図１）ソマトスタチン（ＳＳＴ）アナログの化学構造。（ａ）ＤＯＴＡＴＯＣ（ソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）アゴニスト）［１５，４１］；（ｂ）ＤＯＴＡ－ＬＭ３（ＳＳＴＲアンタゴニスト）［４２］。
（図２）１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ－標識ペプチドの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムのグラフ。（ａ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ；（ｂ）［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ；（ｃ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３）；（ｄ）［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３。未反応のテルビウム－１６１またはルテチウム－１７７の痕跡が２．５分の保持時間で現れた［４４］。
（図３）調製および生理食塩水（１０ＭＢｑ／２５０μＬ）希釈の１時間後、４時間後、２４時間後に調べた、無傷の放射性ペプチドの割合を示す棒グラフ。（ａ）ｌ－アスコルビン酸非存在下および存在下における無傷の［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣおよび［１７７］Ｌｕ－Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣの割合；（ｂ）ｌ－アスコルビン酸非存在下および存在下における無傷の［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３および［１７７］Ｌｕ－Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の割合。
（図４）ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞を０．５時間、２時間、４時間インキュベートした後の放射性ペプチドのｉｎ ｖｉｔｒｏ腫瘍細胞への取り込みと内在化の結果。（ａ）［１６１ Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣと［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ；（ｂ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣと［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣにＳＳＴＲをブロックするための過剰ペプチドを加えたもの；（ｃ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３；（ｄ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３を過剰のペプチドでＳＳＴＲをブロックする。
（図５）ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞を用いて、ペプチドのモル量を変化させて適用した放射性ペプチドの取り込みと内在化率を表すグラフ。ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞をそれぞれの放射性ペプチドと２時間インキュベートした。（ａ）［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ；（ｂ）［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３．
（図６）放射性ペプチドの細胞内取り込みと局在性研究のグラフ。（ａ）放射性標識ＤＯＴＡＴＯＣの細胞局在；（ｂ）放射性標識ＤＯＴＡ－ＬＭ３の細胞局在。
（図７）ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞生存可能性アッセイ（ＭＴＴ）を表すグラフ。（ａ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－／［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣで処理した細胞の結果；（ｂ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－／［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で処理した細胞の結果。
（図８）ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞の生存率（クローン形成アッセイ）を表すグラフ。（ａ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣまたは［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣで処理した細胞の結果；（ｂ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３または［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で処理した細胞の結果。
（図９）放射線ペプチド（２．５ＭＢｑおよび１０ＭＢｑ）曝露後のＤＮＡ ＤＳＢを代表するγ－Ｈ２ＡＸ陽性ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞の定量。（ａ）偽処置後のγ－Ｈ２ＡＸ陽性ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞；（ｂ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣまたは［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣで処置後のγ－Ｈ２ＡＸ陽性ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞；（ｃ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３または［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（２．５および１０ＭＢｑ）で処置後のγ－Ｈ２ＡＸ陽性ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞。陽性細胞数は、偽処置したＡＲ４２Ｊの陽性例（１．０とした）に対するパーセンテージで表した。
（図１０Ａ）最大強度投影（ＭＩＰ）として示された、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ／マウス）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ／マウス）の注射２時間後、４時間後および２４時間後の、ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスの二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像である。（ａ／ｂ／ｃ）放射性ペプチドの注射２時間後のスキャン、（ｄ／ｅ／ｆ）放射性ペプチドの注射４時間後のスキャン、（ｇ／ｈ／ｉ）放射性ペプチドの注射２４時間後のスキャン。（ａ／ｄ／ｇ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線に基づく再構成、（ｂ／ｅ／ｈ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線、ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成、（ｃ／ｆ／ｉ）ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成。ＡＲ４２Ｊ＝ＳＳＴＲ陽性腫瘍異種移植片；Ｋｉ＝腎臓；Ｂｌ＝膀胱。（図１０Ｂ）ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスで実施したブロッキング試験の二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像。画像は、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１５ＭＢｑ、０．５ｎｍｏｌ／マウス）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１５ＭＢｑ、０．５ｎｍｏｌ／マウス）ならびに過剰の非標識ＤＯＴＡＴＯＣ（２０ｎｍｏｌ／マウス）の注射２時間後および４時間後の最大強度投影（ＭＩＰ）として示す。（Ａ／Ｂ／Ｃ）放射性ペプチドの注射２時間後のスキャン、（Ｄ／Ｅ／Ｆ）放射性ペプチドの注射４時間後のスキャン。（Ａ／Ｄ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線に基づく再構成；（Ｂ／Ｅ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線、ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成；（Ｃ／Ｆ）ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成。ＡＲ４２Ｊ＝ＳＳＴＲ２陽性腫瘍異種移植片；Ｋｉ＝腎臓；Ｂｌ＝膀胱。
（図１１Ａ）最大強度投影（ＭＩＰ）として示された、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ／マウス）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ／マウス）の注射２時間後、４時間後および２４時間後のＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスの二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像である。（ａ／ｂ／ｃ）放射性ペプチドの注射２時間後のスキャン、（ｄ／ｅ／ｆ）放射性ペプチドの注射４時間後のスキャン、（ｇ／ｈ／ｉ）放射性ペプチドの注射２４時間後のスキャン。（ａ／ｄ／ｇ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線に基づく再構成、（ｂ／ｅ／ｈ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線、ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成、（ｃ／ｆ／ｉ）ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成。ＡＲ４２Ｊ＝ＳＳＴＲ陽性腫瘍異種移植片；Ｋｉ＝腎臓；Ｂｌ＝膀胱。（図１１Ｂ）ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスで実施したブロッキング試験の二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像である。画像は、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ）および過剰の非標識ＤＯＴＡ－ＬＭ３（２０ｎｍｏｌ／マウス）の注射２時間後および４時間後の最大強度投影（ＭＩＰ）として示す。（Ａ／Ｂ／Ｃ）放射性ペプチドの注射２時間後のスキャン、（Ｄ／Ｅ／Ｆ）放射性ペプチドの注射４時間後のスキャン。（Ａ／Ｄ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線に基づく再構成；（Ｂ／Ｅ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線、ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成；（Ｃ／Ｆ）ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成。ＡＲ４２Ｊ＝ＳＳＴＲ２陽性腫瘍異種移植片；Ｋｉ＝腎臓；Ｂｌ＝膀胱。
（図１２）ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスで得られた生体内分布データ。（ａ／ｂ）放射性ペプチド注射２時間後の組織分布；（ｃ／ｄ）放射性ペプチド注射２４時間後の組織分布。（ａ／ｃ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣおよび［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣで得られたデータ（ｐ＞０．０５）；（ｂ／ｄ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で得られたデータ（ｐ＞０．０５）。
（図１３）異なるモル量の放射性ペプチドを注射した２時間後にＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスで得られた生体内分布データ。（ａ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣの組織分布；（ｂ）［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣの組織分布；（ｃ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の組織分布；（ｄ）［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の組織分布。結果は、組織質量あたりの注射活性のパーセンテージ（％ＩＡ／ｇ）で示される。
（図１４）ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスに放射性ペプチド（マウス１匹あたり０．２ｎｍｏｌ）を注射して得られた生体内分布データ。（ａ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ；（ｂ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の組織分布プロファイル。結果は、組織質量あたりの注射活性の割合（％ＩＡ／ｇ）で示した。
（図１５）ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスに１６１Ｔｂおよび１７７Ｌｕ標識ＤＯＴＡＴＯＣとＤＯＴＡ－ＬＭ３を投与した治療試験。（ａ）偽治療を受けたマウス（Ａ群）、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１０ＭＢｑ、０．２ｎｍｏｌ、０日目と７日目に投与）（Ｂ群）、および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１０ＭＢｑ、０．２ｎｍｏｌ、０日目と７日目に投与）（Ｃ群）。（ｂ）偽処置（Ａ群）、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１０ＭＢｑ、０．２ｎｍｏｌ、０日目と７日目に投与）（Ｄ群）、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１０ＭＢｑ、０．２ｎｍｏｌ、０日目と７日目に投与）（Ｅ群）を受けたマウスの腫瘍増殖曲線。データは各群の最初のマウスがエンドポイントに達するまで示した。（ｃ）Ａ／Ｂ／Ｃ群のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒプロット；（ｄ）Ａ／Ｄ／Ｅ群のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒプロット。
（図１６）ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスにおいて、１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ－ＳＳＴアゴニストおよびアンタゴニスト（２×１０ＭＢｑ；０．２ｎｍｏｌ）を用いて行った治療試験の解析。（ａ）Ａ－Ｅ群の腫瘍増殖遅延；（ｂ）Ａ－Ｅ群の腫瘍倍加時間。
（図１７）治療マウスの相対体重（ＲＢＷ）を示す。（ａ）治療を受けなかったマウス（Ａ群）、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ（Ｂ群）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ（Ｃ群）のＲＢＷ。（ｂ）治療を受けなかったマウス（Ａ群）、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（Ｄ群）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（Ｅ群）のＲＢＷ。データは各群の最初のマウスがエンドポイントに達するまで示した。
（付録）２つのソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）標的ペプチドＤＯＴＡＴＯＣ（ＳＳＴＲアゴニスト）とＤＯＴＡ－ＬＭ３（ＳＳＴＲアンタゴニスト）を１６１Ｔｂまたは１７７Ｌｕで標識し、前臨床実験で評価した。それらの挙動は前臨床試験で研究された。図１８は、本発明者らが２０２０年１１月に発表したポスターに対応する。
（図１）ソマトスタチン（ＳＳＴ）アナログの化学構造。（ａ）ＤＯＴＡＴＯＣ（ソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）アゴニスト）［１５，４１］；（ｂ）ＤＯＴＡ－ＬＭ３（ＳＳＴＲアンタゴニスト）［４２］。
（図２）１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ－標識ペプチドの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムのグラフ。（ａ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ；（ｂ）［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ；（ｃ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３）；（ｄ）［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３。未反応のテルビウム－１６１またはルテチウム－１７７の痕跡が２．５分の保持時間で現れた［４４］。
（図３）調製および生理食塩水（１０ＭＢｑ／２５０μＬ）希釈の１時間後、４時間後、２４時間後に調べた、無傷の放射性ペプチドの割合を示す棒グラフ。（ａ）ｌ－アスコルビン酸非存在下および存在下における無傷の［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣおよび［１７７］Ｌｕ－Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣの割合；（ｂ）ｌ－アスコルビン酸非存在下および存在下における無傷の［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３および［１７７］Ｌｕ－Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の割合。
（図４）ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞を０．５時間、２時間、４時間インキュベートした後の放射性ペプチドのｉｎ ｖｉｔｒｏ腫瘍細胞への取り込みと内在化の結果。（ａ）［１６１ Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣと［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ；（ｂ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣと［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣにＳＳＴＲをブロックするための過剰ペプチドを加えたもの；（ｃ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３；（ｄ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３を過剰のペプチドでＳＳＴＲをブロックする。
（図５）ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞を用いて、ペプチドのモル量を変化させて適用した放射性ペプチドの取り込みと内在化率を表すグラフ。ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞をそれぞれの放射性ペプチドと２時間インキュベートした。（ａ）［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ；（ｂ）［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３．
（図６）放射性ペプチドの細胞内取り込みと局在性研究のグラフ。（ａ）放射性標識ＤＯＴＡＴＯＣの細胞局在；（ｂ）放射性標識ＤＯＴＡ－ＬＭ３の細胞局在。
（図７）ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞生存可能性アッセイ（ＭＴＴ）を表すグラフ。（ａ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－／［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣで処理した細胞の結果；（ｂ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－／［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で処理した細胞の結果。
（図８）ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞の生存率（クローン形成アッセイ）を表すグラフ。（ａ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣまたは［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣで処理した細胞の結果；（ｂ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３または［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で処理した細胞の結果。
（図９）放射線ペプチド（２．５ＭＢｑおよび１０ＭＢｑ）曝露後のＤＮＡ ＤＳＢを代表するγ－Ｈ２ＡＸ陽性ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞の定量。（ａ）偽処置後のγ－Ｈ２ＡＸ陽性ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞；（ｂ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣまたは［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣで処置後のγ－Ｈ２ＡＸ陽性ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞；（ｃ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３または［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（２．５および１０ＭＢｑ）で処置後のγ－Ｈ２ＡＸ陽性ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞。陽性細胞数は、偽処置したＡＲ４２Ｊの陽性例（１．０とした）に対するパーセンテージで表した。
（図１０Ａ）最大強度投影（ＭＩＰ）として示された、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ／マウス）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ／マウス）の注射２時間後、４時間後および２４時間後の、ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスの二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像である。（ａ／ｂ／ｃ）放射性ペプチドの注射２時間後のスキャン、（ｄ／ｅ／ｆ）放射性ペプチドの注射４時間後のスキャン、（ｇ／ｈ／ｉ）放射性ペプチドの注射２４時間後のスキャン。（ａ／ｄ／ｇ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線に基づく再構成、（ｂ／ｅ／ｈ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線、ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成、（ｃ／ｆ／ｉ）ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成。ＡＲ４２Ｊ＝ＳＳＴＲ陽性腫瘍異種移植片；Ｋｉ＝腎臓；Ｂｌ＝膀胱。（図１０Ｂ）ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスで実施したブロッキング試験の二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像。画像は、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１５ＭＢｑ、０．５ｎｍｏｌ／マウス）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１５ＭＢｑ、０．５ｎｍｏｌ／マウス）ならびに過剰の非標識ＤＯＴＡＴＯＣ（２０ｎｍｏｌ／マウス）の注射２時間後および４時間後の最大強度投影（ＭＩＰ）として示す。（Ａ／Ｂ／Ｃ）放射性ペプチドの注射２時間後のスキャン、（Ｄ／Ｅ／Ｆ）放射性ペプチドの注射４時間後のスキャン。（Ａ／Ｄ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線に基づく再構成；（Ｂ／Ｅ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線、ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成；（Ｃ／Ｆ）ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成。ＡＲ４２Ｊ＝ＳＳＴＲ２陽性腫瘍異種移植片；Ｋｉ＝腎臓；Ｂｌ＝膀胱。
（図１１Ａ）最大強度投影（ＭＩＰ）として示された、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ／マウス）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ／マウス）の注射２時間後、４時間後および２４時間後のＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスの二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像である。（ａ／ｂ／ｃ）放射性ペプチドの注射２時間後のスキャン、（ｄ／ｅ／ｆ）放射性ペプチドの注射４時間後のスキャン、（ｇ／ｈ／ｉ）放射性ペプチドの注射２４時間後のスキャン。（ａ／ｄ／ｇ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線に基づく再構成、（ｂ／ｅ／ｈ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線、ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成、（ｃ／ｆ／ｉ）ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成。ＡＲ４２Ｊ＝ＳＳＴＲ陽性腫瘍異種移植片；Ｋｉ＝腎臓；Ｂｌ＝膀胱。（図１１Ｂ）ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスで実施したブロッキング試験の二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像である。画像は、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ）および過剰の非標識ＤＯＴＡ－ＬＭ３（２０ｎｍｏｌ／マウス）の注射２時間後および４時間後の最大強度投影（ＭＩＰ）として示す。（Ａ／Ｂ／Ｃ）放射性ペプチドの注射２時間後のスキャン、（Ｄ／Ｅ／Ｆ）放射性ペプチドの注射４時間後のスキャン。（Ａ／Ｄ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線に基づく再構成；（Ｂ／Ｅ）テルビウム－１６１のＸ線およびγ線、ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成；（Ｃ／Ｆ）ルテチウム－１７７のγ線に基づく再構成。ＡＲ４２Ｊ＝ＳＳＴＲ２陽性腫瘍異種移植片；Ｋｉ＝腎臓；Ｂｌ＝膀胱。
（図１２）ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスで得られた生体内分布データ。（ａ／ｂ）放射性ペプチド注射２時間後の組織分布；（ｃ／ｄ）放射性ペプチド注射２４時間後の組織分布。（ａ／ｃ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣおよび［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣで得られたデータ（ｐ＞０．０５）；（ｂ／ｄ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で得られたデータ（ｐ＞０．０５）。
（図１３）異なるモル量の放射性ペプチドを注射した２時間後にＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスで得られた生体内分布データ。（ａ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣの組織分布；（ｂ）［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣの組織分布；（ｃ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の組織分布；（ｄ）［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の組織分布。結果は、組織質量あたりの注射活性のパーセンテージ（％ＩＡ／ｇ）で示される。
（図１４）ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスに放射性ペプチド（マウス１匹あたり０．２ｎｍｏｌ）を注射して得られた生体内分布データ。（ａ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ；（ｂ）［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の組織分布プロファイル。結果は、組織質量あたりの注射活性の割合（％ＩＡ／ｇ）で示した。
（図１５）ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスに１６１Ｔｂおよび１７７Ｌｕ標識ＤＯＴＡＴＯＣとＤＯＴＡ－ＬＭ３を投与した治療試験。（ａ）偽治療を受けたマウス（Ａ群）、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１０ＭＢｑ、０．２ｎｍｏｌ、０日目と７日目に投与）（Ｂ群）、および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１０ＭＢｑ、０．２ｎｍｏｌ、０日目と７日目に投与）（Ｃ群）。（ｂ）偽処置（Ａ群）、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１０ＭＢｑ、０．２ｎｍｏｌ、０日目と７日目に投与）（Ｄ群）、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１０ＭＢｑ、０．２ｎｍｏｌ、０日目と７日目に投与）（Ｅ群）を受けたマウスの腫瘍増殖曲線。データは各群の最初のマウスがエンドポイントに達するまで示した。（ｃ）Ａ／Ｂ／Ｃ群のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒプロット；（ｄ）Ａ／Ｄ／Ｅ群のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒプロット。
（図１６）ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスにおいて、１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ－ＳＳＴアゴニストおよびアンタゴニスト（２×１０ＭＢｑ；０．２ｎｍｏｌ）を用いて行った治療試験の解析。（ａ）Ａ－Ｅ群の腫瘍増殖遅延；（ｂ）Ａ－Ｅ群の腫瘍倍加時間。
（図１７）治療マウスの相対体重（ＲＢＷ）を示す。（ａ）治療を受けなかったマウス（Ａ群）、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ（Ｂ群）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ（Ｃ群）のＲＢＷ。（ｂ）治療を受けなかったマウス（Ａ群）、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（Ｄ群）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（Ｅ群）のＲＢＷ。データは各群の最初のマウスがエンドポイントに達するまで示した。
（付録）２つのソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）標的ペプチドＤＯＴＡＴＯＣ（ＳＳＴＲアゴニスト）とＤＯＴＡ－ＬＭ３（ＳＳＴＲアンタゴニスト）を１６１Ｔｂまたは１７７Ｌｕで標識し、前臨床実験で評価した。それらの挙動は前臨床試験で研究された。図１８は、本発明者らが２０２０年１１月に発表したポスターに対応する。
【0052】
［実施例］
本開示の実施例は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏにおけるテルビウム－１６１対ルテチウム－１７７の治療効果に対する細胞局在の影響を示している。ＤＯＴＡＴＯＣとＤＯＴＡ－ＬＭ３が用いられた。これらはそれぞれ１６１Ｔｂ標識と１７７Ｌｕで標識された。テルビウム－１６１から放出される転換電子とオージェ電子の効果が、放射性核種の細胞局在性に依存するかどうかを調べるために、標識された１６１Ｔｂ放射性ペプチドを、１７７Ｌｕ標識された対応物と比較した。テルビウム－１６１とルテチウム－１７７の治療効果を一対一で比較することは、１６１Ｔｂ－と１７７Ｌｕ－がｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞内取り込みとｉｎ ｖｉｖｏでの生体内分布に関して同等の挙動を示すことから可能であった［４４］。
本開示の実施例は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏにおけるテルビウム－１６１対ルテチウム－１７７の治療効果に対する細胞局在の影響を示している。ＤＯＴＡＴＯＣとＤＯＴＡ－ＬＭ３が用いられた。これらはそれぞれ１６１Ｔｂ標識と１７７Ｌｕで標識された。テルビウム－１６１から放出される転換電子とオージェ電子の効果が、放射性核種の細胞局在性に依存するかどうかを調べるために、標識された１６１Ｔｂ放射性ペプチドを、１７７Ｌｕ標識された対応物と比較した。テルビウム－１６１とルテチウム－１７７の治療効果を一対一で比較することは、１６１Ｔｂ－と１７７Ｌｕ－がｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞内取り込みとｉｎ ｖｉｖｏでの生体内分布に関して同等の挙動を示すことから可能であった［４４］。
【0053】
放射性ペプチドの細胞局在は、その治療効果に影響を及ぼすことが判明し、その効果は使用する放射性核種に依存した。
【0054】
１６１Ｔｂ標識ペプチドと１７７Ｌｕ標識ペプチドの間の有効性の違いが証明された。それはＤＯＴＡ－ＬＭ３の場合に最も顕著であった。［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３は、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３よりも、ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞生存可能性を低下させる効果が１０２倍高いことが明らかになった。
【0055】
前臨床治療研究により、１６１Ｔｂ標識ソマトスタチンアナログは、１７７Ｌｕ標識ソマトスタチンアナログよりもｉｎ ｖｉｖｏでより有効であることが確認された。放射性標識ＤＯＴＡ－ＬＭ３の治療効果は、放射性標識ＤＯＴＡＴＯＣの治療効果よりも有意に顕著であった。これは、生体内分布データによって示されたように、放射性標識ＤＯＴＡ－ＬＭ３の腫瘍への取り込みがより高いためと考えられる。細胞膜に局在する１６１Ｔｂ標識ソマトスタチン受容体アンタゴニスト（ＤＯＴＡ－ＬＭ３）は、ルテチウム－１７７よりもテルビウム－１６１の使用が有益であることが判明した。これは、オージェ電子放出剤としてのテルビウム－１６１の有効な標的が細胞膜であることを示唆している。
【0056】
Ｉ．生産
テルビウム－１６１とルテチウム－１７７は、ターゲティング剤の細胞局在に基づく効果を比較するために使用された。これに関しては、２種類のペプチドが使われた：（ｉ）主に細胞質に局在するＤＯＴＡＴＯＣと、（ｉｉ）主に細胞膜に留まるＤＯＴＡ－ＬＭ３。
テルビウム－１６１とルテチウム－１７７は、ターゲティング剤の細胞局在に基づく効果を比較するために使用された。これに関しては、２種類のペプチドが使われた：（ｉ）主に細胞質に局在するＤＯＴＡＴＯＣと、（ｉｉ）主に細胞膜に留まるＤＯＴＡ－ＬＭ３。
【0057】
Ａ．放射性核種およびペプチドの生産方法
テルビウム－１６１は、既報［１、２］のように１６０Ｇｄ（ｎ，γ）１６１Ｇｄ→１６１Ｔｂ核反応を用いて生産された。標的物質は、南アフリカのPelindabaにあるＮｅｃｓａのＳＡＦＡＲＩ－１原子炉、またはフランスのGrenobleにあるＬａｕｅ－Ｌａｎｇｅｖｉｎ研究所のＲＨＦ、またはスイスのVilligen-PSIにある核破砕中性子源ＳＩＮＱで照射された。テルビウム－１６１の化学分離は、既報［２］のようにＰＳＩで行われた。テルビウム－１６１は、０．０５Ｍ ＨＣｌ中の無キャリア添加（ｎ．ｃ．ａ．）［１６１Ｔｂ］ＴｂＣｌ３として入手可能であった。ルテチウム－１７７は、ドイツのＩＴＭ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｓｏｔｏｐｅｓ ＧｍｂＨから、０．０４Ｍ ＨＣｌ中のｎ．ｃ．ａ．［１７７Ｌｕ］ＬｕＣｌ３として入手した。
テルビウム－１６１は、既報［１、２］のように１６０Ｇｄ（ｎ，γ）１６１Ｇｄ→１６１Ｔｂ核反応を用いて生産された。標的物質は、南アフリカのPelindabaにあるＮｅｃｓａのＳＡＦＡＲＩ－１原子炉、またはフランスのGrenobleにあるＬａｕｅ－Ｌａｎｇｅｖｉｎ研究所のＲＨＦ、またはスイスのVilligen-PSIにある核破砕中性子源ＳＩＮＱで照射された。テルビウム－１６１の化学分離は、既報［２］のようにＰＳＩで行われた。テルビウム－１６１は、０．０５Ｍ ＨＣｌ中の無キャリア添加（ｎ．ｃ．ａ．）［１６１Ｔｂ］ＴｂＣｌ３として入手可能であった。ルテチウム－１７７は、ドイツのＩＴＭ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｓｏｔｏｐｅｓ ＧｍｂＨから、０．０４Ｍ ＨＣｌ中のｎ．ｃ．ａ．［１７７Ｌｕ］ＬｕＣｌ３として入手した。
【0058】
ＤＯＴＡ－［Ｔｙｒ３］－オクトレオチド（ＤＯＴＡＴＯＣ）は、ドイツのＩＴＭ ＧｍｂＨから提供された（図１ａ）。ＤＯＴＡ－ＬＭ３は、Fani et al.によって発表された構造に基づいて、ＣＳＢｉｏ（Ｓｉｌｉｃｏｎ Ｖａｌｌｅｙ Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、California、米国）によるカスタム合成物として入手した（図１ｂ参照）［３、４］。
【0059】
テルビウム－１６１は、１１～２１ＭＢｑ／μＬの活性濃度と９９％以上の放射性核種および放射化学的純度で、高収率（平均１０ＧＢｑを超え、分離終了時には１５ＧＢｑ／生産まで）で生産された［４３］。最大１００ＭＢｑ／ｎｍｏｌのペプチドの放射性標識は、化学分離の２週間後まで可能であり、これによって臨床前研究を計画し実行することが可能になった。テルビウム－１６１の正確な製品規格は、Gracheva et al.によって報告されたｎ．ｃ．ａ．ルテチウム－１７７と同等であった［４３］。
【0060】
Ｂ．放射性ペプチドの調製
［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣおよび［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３、ならびに［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣおよび［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３を高モル活性で調製し、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでの放射性ペプチドの評価および比較を行った。
［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣおよび［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３、ならびに［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣおよび［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３を高モル活性で調製し、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでの放射性ペプチドの評価および比較を行った。
【0061】
ＤＯＴＡＴＯＣとＤＯＴＡ－ＬＭ３のストック溶液は、最終濃度が１ｍＭになるようにＭｉｌｌｉ－Ｑ水で調製した。酢酸ナトリウム（０．５Ｍ）と塩酸（０．０５Ｍ）の１：５（ｖ／ｖ）混合溶液を用いて、ｐＨ～４．５で、１００ＭＢｑ／ｎｍｏｌまでのモル活性で、ソマトスタチンアナログをテルビウム－１６１またはルテチウム－１７７で標識した。反応混合物を９５℃で１０分間インキュベートした後、ＨＰＬＣを用いて品質管理を行った。この目的のために、Ｄ－７０００インターフェース、Ｌ－７２００オートサンプラー、放射能検出器（ＬＢ５０６Ｂ；Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）、逆相Ｃ１８カラムを接続したＬ－７１００ポンプ（Ｘｔｅｒｒａ（商標）ＭＳ，Ｃ１８，５μｍ，１５０×４．６ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ）を備えた、Ｍｅｒｃｋ Ｈｉｔａｃｈｉ ＬａＣｈｒｏｍ ＨＰＬＣシステムを使用した。移動相はＭｉｌｌｉ－Ｑ水中の０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ（Ａ）とアセトニトリル（Ｂ）であった。溶液Ａ（９５－２０％）と溶媒Ｂ（５－８０％）の１５分間の直線勾配を１．０ｍＬ／分の流速で使用した。放射性ペプチドは、ＨＰＬＣに注射する前に、ジエチレントリアミン五酢酸五ナトリウム（Ｎａ５－ＤＴＰＡ；５０μＭ）を含むＭｉｌｌｉ－Ｑ水で希釈した。
【0062】
［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣおよび［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ、ならびに［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３は、１００ＭＢｑ／ｎｍｏｌのモル活性まで放射化学的純度９８％以上で得られた（図２参照）。
【0063】
Ｃ．放射性ペプチドの放射線分解安定性
放射性標識ソマトスタチンアナログの安定性を試験し、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ評価における完全性を確認した。
放射性標識ソマトスタチンアナログの安定性を試験し、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ評価における完全性を確認した。
【0064】
放射性標識ソマトスタチンアナログの放射線分解安定性を２４時間にわたって評価した（ｎ＝２）。この目的のために、ＤＯＴＡＴＯＣとＤＯＴＡ－ＬＭ３をテルビウム－１６１またはルテチウム－１７７で５０ＭＢｑ／ｎｍｏｌのモル活性で標識した。ＨＰＬＣを用いた品質管理（ｔ＝０、放射化学的純度９８％以上、１００％として設定）の後、標識溶液を生理食塩水で希釈し、最終容量２５０μＬ、活性濃度４０ＭＢｑ／ｍＬとし、ｌ－アスコルビン酸（最終容量２５０μＬ中１２０μｇ／１０ＭＢｑ）の添加の有無にかかわらず室温（ＲＴ）でインキュベートした。放射性ペプチドの潜在的分解は、ＨＰＬＣを用いてサンプルを分析することにより、１時間後、４時間後、２４時間後に決定した。クロマトグラムの定量的評価は、放出されたテルビウム－１６１とルテチウム－１７７、および構造不明の分解生産物からなるクロマトグラム全体の積分ピーク面積の合計に対する、無傷の生産物の積分ピーク面積の割合として表すことにより行った。
【0065】
テルビウム－１６１またはルテチウム－１７７で標識した放射性ペプチドにかかわらず、すべての放射性ペプチドは調製後１時間までは安定であった（無傷の放射性ペプチドが９０％以上）（図３参照）。しかし、４時間後と２４時間後には、放射線分解により無傷の部分はそれぞれ９０％と６０％に減少した。発表されたデータ［３６、４３］において、無傷の１６１Ｔｂ標識体および１７７Ｌｕ標識体のパーセンテージは同一であったことから、付加的な活性酸素種（ＲＯＳ）の可能な形成は短距離転換によること、およびオージェ電子［４５］は放射性ペプチドの完全性に影響を与えなかったことが示された。臨床応用のための放射性ペプチドの安定化は、一般的にアスコルビン酸の追加によって達成され［４６］、１６１Ｔｂおよび１７７Ｌｕ標識ソマトスタチンアナログの長期安定化にも有効であった（図３参照）。
【0066】
放射性ペプチドが４０ＭＢｑ／ｍＬ以下の濃度および／または調製直後に使用された場合、ｌ－アスコルビン酸の添加は必要なかった。デュアルアイソトープＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージング試験は、４０ＭＢｑ／ｍＬを超える活性濃度（マウス１匹あたり１００μＬ中４ＭＢｑを超える）で実施され、放射性ペプチドの完全性を確保するためにＬ－アスコルビン酸の添加（１００μＬ中３０ＭＢｑあたり～３００μｇ）が必要であった。
【0067】
Ｄ．ｎ－オクタノール／ＰＢＳ分配係数（ＬｏｇＤ値）の測定
ｎ－オクタノール／ＰＢＳ分配係数（ｌｏｇＤ値）を各放射性ペプチドについて評価し、親水性を調べ、３つのアナログの比較を可能にした。
ｎ－オクタノール／ＰＢＳ分配係数（ｌｏｇＤ値）を各放射性ペプチドについて評価し、親水性を調べ、３つのアナログの比較を可能にした。
【0068】
放射性標識アナログ（ＤＯＴＡＴＯＣおよびＤＯＴＡ－ＬＭ３；３０ＭＢｑ／ｎｍｏｌ）のｌｏｇＤ値は、既報［４７］のようにシェイクフラスコ法で決定した。放射性標識ペプチド（０．５ＭＢｑ、２５μＬ）のアリコートをｐＨ７．４のＰＢＳ １４７５μＬとｎ－オクタノール１５００μＬの混合液に加えた。それぞれのチューブを６０秒間ボルテックスし、２５００ｒｐｍで６分間遠心分離した後、γ－ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ， Ｗａｌｌａｃ Ｗｉｚａｒｄ １４８０）を用いて各層の一定量の活性濃度を測定した。ｌｏｇＤ値は、ｐＨ７．４のＰＢＳ相で測定したｃｐｍに対するｎ－オクタノール相で測定したｃｐｍの比の対数として計算した。実験は各放射性ペプチドについて５反復で３回行い、ｌｏｇＤ値は各実験で得られた値の平均±標準偏差（ＳＤ）で表した。データは、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定による二元配置分散分析を用いて有意性を分析した。ｐ値＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【0069】
低いｌｏｇＤ値によって示されるように、放射性ペプチドは親水性を示した。重要なことは、１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ－標識された対応物は、同様のｌｏｇＤ値（ｐ＞０．０５）を示したことである（表１）。
【0070】
【表1】
【0071】
ＩＩ．ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験
Ａ．細胞培養
本研究では、ＳＳＴＲ陽性ラット膵外分泌癌細胞株であるＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞株［４８］を、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの試験に用いた。
Ａ．細胞培養
本研究では、ＳＳＴＲ陽性ラット膵外分泌癌細胞株であるＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞株［４８］を、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの試験に用いた。
【0072】
ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞（ＥＣＡＣＣ ９３１００６１８；Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ａｇｅｎｃｙ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ，Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，英国）は、グルタミン、抗生物質、２０％子牛胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培養液中で、既報［４４］のように維持した。すべてのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイには、グルタミンと抗生物質を含み、１％ＦＣＳのみを添加した細胞培養培地（本明細書では「アッセイ培地」と呼ぶ）を用いた。細胞のインキュベートは、特に他の指示がない限り、常に３７℃、５％ＣＯ２の加湿雰囲気という標準的な培養条件下で行った。ｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を、特に他の指示がない限りｉｎ ｖｉｔｒｏ実験に用いた。ポリスチレンウェルプレートは、細胞の接着を促進し、ウェルプレート材料への放射性ペプチドの付着を防ぐため、すべてのｉｎ ｖｉｔｒｏ実験においてポリ－ｌ－リジン（０．５ｍｇ／ｍＬ）でコーティングした。
【0073】
Ｂ．細胞の取り込みと内在化：１６１Ｔｂ標識ペプチドと１７７Ｌｕ標識ペプチドの比較
各放射性ペプチドの１６１Ｔｂ標識体および１７７Ｌｕ標識体を用いて、細胞の取り込みと内在化の試験を行った。
各放射性ペプチドの１６１Ｔｂ標識体および１７７Ｌｕ標識体を用いて、細胞の取り込みと内在化の試験を行った。
【0074】
細胞の取り込みと内在化の試験は、ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞を用い、既報［５］の手順に従って行った。ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞（１０６細胞／２ｍＬ）をポリ－ｌ－リジンコートした１２ウェルプレートに播種し、サプリメントを加えたＲＰＭＩ培地で一晩インキュベートした。ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で細胞を洗浄した後、アッセイ培地（９７５μＬ）と２５μＬの放射性ペプチド溶液（～１５ｋＢｑ、～０．７５ｐｍｏｌ／ウェル）を各ウェルに加え、放射性リガンド濃度を０．７５ｎＭとした。ウェルプレートを標準的な細胞培養条件下で０．５時間、２時間または４時間インキュベートした。１μＭ ＤＯＴＡＮＯＣまたは１μＭ ＤＯＴＡ－ＬＭ３を用いてＳＳＴＲブロッキング実験を行った。γ－ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｌａｃ Ｗｉｚａｒｄ １４８０）を用いて、全取り込み量と内在化画分を決定した。サンプルの活性は、Ｍｉｃｒｏ ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、各ウェルの平均タンパク質濃度（～０．３ｍｇ）で標準化した。実験は３連で２回または３回行った。統計解析は、Ｔｕｋｅｙの多重比較事後検定による二元配置分散分析を用いて行った。ｐ値＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【0075】
ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞への取り込みと内在化は、１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ－標識ＳＳＴＲアナログについて同等であった（ｐ＞０．０５）（図４参照）。ＡＲ４２Ｊ細胞への［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－／［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣの取り込みは、４時間のインキュベーション後に最も高くなった（添加した全活性の約１５％）。酸洗浄した細胞は全吸収量の４０－５０％を保持しており、これは既報［４９］のように放射性ペプチド－レセプター複合体の効率的な内在化を示していた。［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－／［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３は、調査した全ての時点でＡＲ４２Ｊ細胞の取り込みを示し、４時間のインキュベーションでほぼ７０％に達した。しかし、放射性標識ＤＯＴＡ－ＬＭ３の内在化画分はほとんど無視できるものであった（全取り込みの１０％未満）［４２］。過剰のＤＯＴＡＮＯＣの添加により、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－／［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣの細胞取り込みが阻害され、放射性ペプチドのＳＳＴＲ特異的結合が確認された。しかしながら、ＤＯＴＡＮＯＣは放射性標識ＤＯＴＡ－ＬＭ３の取り込みを完全にブロックする効果はなかった（データは示さず）。なぜなら、ＳＳＴＲ－アンタゴニストはＳＳＴＲ－アゴニストに比べて細胞膜上のより多くの結合部位にアクセスできるからである（最大１４倍）［５０］。ブロッキングは過剰の非標識ＤＯＴＡ－ＬＭ３を用いて達成された。
【0076】
Ｃ．ペプチドのモル量を増加させた場合の細胞への取り込みと内在化
このｉｎ ｖｉｔｒｏ試験の目的は、ＤＯＴＡＴＯＣとＤＯＴＡ－ＬＭ３の量を変化させて放射性ペプチドを添加し、ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞のＳＳＴＲ飽和をもたらすペプチド量を決定することであった。
このｉｎ ｖｉｔｒｏ試験の目的は、ＤＯＴＡＴＯＣとＤＯＴＡ－ＬＭ３の量を変化させて放射性ペプチドを添加し、ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞のＳＳＴＲ飽和をもたらすペプチド量を決定することであった。
【0077】
ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞におけるペプチドの取り込みと内在化率は、上記と同じ方法で測定したが、放射性ペプチドは可変モル量のペプチドを用いて適用した。ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞をＰＢＳ（ｐＨ７．４）で洗浄した後、０．３７５－７５ｐｍｏｌの［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣまたは［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（２５μＬ、～１５ｋＢｑ）とインキュベートした。３７℃で２時間インキュベートした後、細胞の取り込みと内在化画分を決定し、サンプルの活性を各ウェルの平均タンパク質濃度（～０．３ｍｇ）に標準化した。実験は３連で２回行った。
すべての場合において、非標識ペプチドのモル量を増加させるとともに、それぞれの放射性ペプチドの取り込みと内在化は減少した（図５参照）。ペプチド量０．３７５ｐｍｏｌおよび０．７５ｐｍｏｌではＳＳＴＲの飽和は観察されなかったが、ペプチド量が１．５ｐｍｏｌおよび７．５ｐｍｏｌにおいては［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣの取り込みと内在化が３０％程度減少した。ペプチドの適用モル量が最も高い場合（７５ｐｍｏｌ）、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣの取り込みと内在化は～９０％低下した。［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の取り込みは、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣと同様に、１．５ｐｍｏｌのペプチドが適用された場合、～３０％低下した。［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の取り込みは、７．５ｐｍｏｌのモル量で～８０％低下したが、同じ条件では［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣの取り込みは３０％しか低下しなかった。
すべての場合において、非標識ペプチドのモル量を増加させるとともに、それぞれの放射性ペプチドの取り込みと内在化は減少した（図５参照）。ペプチド量０．３７５ｐｍｏｌおよび０．７５ｐｍｏｌではＳＳＴＲの飽和は観察されなかったが、ペプチド量が１．５ｐｍｏｌおよび７．５ｐｍｏｌにおいては［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣの取り込みと内在化が３０％程度減少した。ペプチドの適用モル量が最も高い場合（７５ｐｍｏｌ）、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣの取り込みと内在化は～９０％低下した。［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の取り込みは、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣと同様に、１．５ｐｍｏｌのペプチドが適用された場合、～３０％低下した。［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の取り込みは、７．５ｐｍｏｌのモル量で～８０％低下したが、同じ条件では［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣの取り込みは３０％しか低下しなかった。
【0078】
Ｄ．放射性ペプチドの核局在性
ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞をそれぞれの放射性ペプチドとインキュベートした後、細胞核を分離し、核に局在する放射性ペプチドの割合を決定した。
ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞をそれぞれの放射性ペプチドとインキュベートした後、細胞核を分離し、核に局在する放射性ペプチドの割合を決定した。
【0079】
ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞（１０×１０６）をＰＬＬコートペトリ皿に播種し、サプリメントを含む１５ｍＬの細胞培養培地を用い、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。翌日、培地を除去し、腫瘍細胞をＰＢＳ（ｐＨ７．４）で洗浄し、１９．５ｍＬのアッセイ培地を加えた。放射性ペプチドを０．５ｍＬ（２．５ＭＢｑ、１２５ｐｍｏｌ）添加し、腫瘍細胞を３７℃で２時間インキュベートした。その後、細胞をＰＢＳ（ｐＨ７．４）で数回洗浄し、過剰の放射性ペプチドを完全に除去した。その後、Ｎｕｃｌｉ ＥＺ Ｐｒｅｐ Ｎｕｃｌｅｉ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ， 米国）を用いて、メーカーのプロトコールに従って細胞核と細胞質／膜画分を採取した。氷冷したＮｕｃｌｅｉ ＥＺ溶解バッファー（４ｍＬ）を各ペトリ皿に加え、腫瘍細胞を溶解した後、細胞懸濁液をエッペンドルフチューブに移し、５００ｒｃｆ、４℃で５分間遠心した。細胞質／膜画分を含む上清を、γ－ｃｏｕｎｔｅｒで活性を計数するためのチューブに移した。ペレットを４ｍＬの氷冷Ｎｕｃｌｅｉ ＥＺ溶解バッファーに懸濁し、さらに５００ｒｃｆ、４℃で５分間遠心した。残存する細胞質／膜画分を含む上清を活性測定用に収集し、ペレットを２００μＬのＮｕｃｌｅｉ ＥＺ保存バッファーに懸濁した後、γ－ｃｏｕｎｔｅｒでの活性測定用にチューブに移した。核および細胞質／細胞膜画分の測定活性は、細胞内取り込みの１００％と定義した。核への局在は、全細胞内取り込みに対するパーセンテージで表した。収集した画分を０．４％トリパンブルー溶液で染色し、核が他の細胞断片から適切に分離されていることを確認するため、顕微鏡を用いて分析した。
【0080】
［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣおよび［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の核内取り込みは、全細胞内取り込みの１％未満および～２％であった。これらの結果を取り込みと内在化のデータと組み合わせ（図５参照）、単一放射性ペプチドの細胞内分布を計算し、円グラフで示した（図６参照）。［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の内在化率は全取り込みの約９％であり、放射性標識ＤＯＴＡＴＯＣの内在化率（全取り込みの約８１％）よりはるかに低かった。核に局在する割合は２％以下であった（図６参照）。
【0081】
Ｅ．細胞生存可能性アッセイ
ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞を用いて細胞生存可能性試験を行い、１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ標識ＤＯＴＡＴＯＣとＤＯＴＡ－ＬＭ３の潜在的に異なる効果を評価した。
ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞を用いて細胞生存可能性試験を行い、１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ標識ＤＯＴＡＴＯＣとＤＯＴＡ－ＬＭ３の潜在的に異なる効果を評価した。
【0082】
合計７５００個のＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞を、ＰＬＬコート９６ウェルプレート中の２００μＬの細胞培養培地に播種した。細胞が接着するように一晩インキュベートした後、培地を除去し、アッセイ培地で希釈したＤＯＴＡＴＯＣまたはＤＯＴＡ－ＬＭ３とインキュベートし、テルビウム－１６１またはルテチウム－１７７で１００ＭＢｑ／ｎｍｏｌのモル活性で放射性標識した。ウェルあたりの適用活性濃度は０．００１ＭＢｑ／ｍＬから４０ＭＢｑ／ｍＬ（０．０１－４００ｐｍｏｌ／ｍＬ）の範囲であった。３７℃で２時間のインキュベーション後、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、その後サプリメントを加えた新鮮な細胞培養培地を添加した。腫瘍細胞は細胞培養培地を交換することなく３７℃で６日間増殖させ、既報のように３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）アッセイ［５１］を用いて、細胞生存可能性を分析した。細胞をＭＴＴ試薬で２時間インキュベートした後、形成されたフォルマザン結晶をジメチルスルホキシドに溶解した。マイクロプレートリーダー（５６０ｎｍ，Ｖｉｃｔｏｒ（商標） Ｘ３，Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，米国）で５６０ｎｍの吸光度を測定した。未処理の対照細胞について測定した吸光度を、腫瘍細胞生存可能性１００％と定義した。処理した腫瘍細胞（各濃度につきｎ＝１２）の生存可能性は、対照細胞の吸光度に対するパーセンテージで表した。細胞生存可能性を適用活性濃度（対数変換）に対してプロットし、用量反応曲線に当てはめた。細胞生存可能性阻害は、ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞の生存可能性を未処置の対照細胞の５０％まで低下させるのに必要な活性濃度として計算した（ＥＣ５０）。ＥＣ５０値は、少なくとも４回の独立した実験で決定した。
【0083】
ＡＲ４２Ｊ細胞の生存可能性を、未処理の対照細胞の生存可能性（１００％として設定）と比較して１０％未満に減少させることは、それぞれ採用したソマトスタチンアナログと放射性核種に依存する可変の活性濃度で達成された。すべての場合において、１６１Ｔｂ標識ソマトスタチンアナログは、１７７Ｌｕ標識対応物よりも強力であることが観察された（図７参照）。［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣは［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣより５倍強力であった。しかし、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３は［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３より１０２倍強力であった。
１６１Ｔｂ標識ソマトスタチンアナログのＥＣ５０を比較すると、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３は［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣよりも１５７倍高い効力を示した（表２）。［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３では状況は異なり、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣより７．７倍強力であった（表２）。
１６１Ｔｂ標識ソマトスタチンアナログのＥＣ５０を比較すると、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３は［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣよりも１５７倍高い効力を示した（表２）。［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３では状況は異なり、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣより７．７倍強力であった（表２）。
【0084】
【表2】
【0085】
Ｆ．細胞生存率（クローン形成アッセイ）
１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ－放射性標識ＤＯＴＡＴＯＣまたはＤＯＴＡ－ＬＭ３に暴露されたＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞１個がコロニーに増殖する能力は、クローン形成アッセイ［８］を行うことによって決定された。
１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ－放射性標識ＤＯＴＡＴＯＣまたはＤＯＴＡ－ＬＭ３に暴露されたＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞１個がコロニーに増殖する能力は、クローン形成アッセイ［８］を行うことによって決定された。
【0086】
コロニーの適切な形成を可能にするため、添加物を含まないＲＰＭＩ細胞培地で希釈した３００μＬのＭａｔｒｉｇｅｌ（Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｄｕｃｅｄ Ｂａｓｅｍｅｎｔ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｍａｔｒｉｘ，Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ，New York，米国；２ｍｇ／ｍＬ）を、ＰＰＬでコートした６ウェルプレートの各ウェルに加えた。固化したマトリゲル上にＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞を２ｍＬの細胞培養培地（サプリメントを含む）に１ウェルあたり２０００個の密度で播種し、一晩インキュベートした。翌日、培地を除去し、細胞を１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ－放射性標識ソマトスタチンアナログ（３０ＭＢｑ／ｎｍｏｌ）と共に、０．０１ＭＢｑ／ｍＬから０．５ＭＢｑ／ｍＬ（０．３－１５ｐｍｏｌ／ｍＬ）の活性濃度で、３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。未処理の対照細胞にも同様の操作を行った。インキュベート後、上清を捨て、腫瘍細胞をＰＢＳで洗浄してから新しい細胞培地を加えた。３７℃、５％ＣＯ２で２週間インキュベートした後、培地を除去し、ウェルをＰＢＳで１回洗浄した。コロニーをクリスタルバイオレット溶液（０．５％クリスタルバイオレット、６％グルタルアルデヒド水溶液、８００μＬ）で染色した。０．１ｍｍ以上のコロニー数は、顕微鏡下で０．５ｃｍ×０．５ｃｍの５つの正方形を選び、目視で決定した。プレーティング効率（ＰＥ）と生存率（ＳＦ）は以下の式に従って算出した：ＰＥ＝（［形成されたコロニー数（未処理）］／［播種した細胞数］）＊１００；ＳＦ＝（［処理後に形成されたコロニー数］／［播種した細胞数＊ＰＥ］）＊１００［５２］。
【0087】
放射性リガンドの様々な放射能濃度への曝露に伴うＳＦは、各実験で３連複を用い、少なくとも３回の独立した実験で測定した。データはＳｉｄａｋの多重比較事後検定による二元配置分散分析で解析した。ｐ値＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【0088】
コロニー形成アッセイでは、１６１Ｔｂ標識ペプチドは、１７７Ｌｕ標識ペプチドよりも細胞の生存率を低下させる効果があることが確認された（図８参照）。未処理の対照細胞と比較して、０．５０ＭＢｑ／ｍＬの［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣで処理した細胞の生存率は３％未満であった。［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣで同様の効果を得るには、１０倍高い活性濃度（５ＭＢｑ／ｍＬ）を適用しなければならなかった（ｎ＝１）。［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３は０．１ＭＢｑ／ｍＬの活性濃度で細胞生存率を５％未満に低下させたが、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３は１０倍高い濃度（１ＭＢｑ／ｍＬ）で適用され、生存率をわずか１５％程度に低下させた。
【0089】
Ｇ．ＤＮＡ損傷の評価
［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣと［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ、または［１６１Ｔｂ］ＴｂのＤＯＴＡ－ＬＭ３と［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で処理したＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞を用いて実験を行い、それぞれの場合に誘導された二本鎖切断（ＤＳＢ）の数を調べた。
［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣと［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ、または［１６１Ｔｂ］ＴｂのＤＯＴＡ－ＬＭ３と［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で処理したＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞を用いて実験を行い、それぞれの場合に誘導された二本鎖切断（ＤＳＢ）の数を調べた。
【0090】
２．５ＭＢｑ／ｍＬまたは１０ＭＢｑ／ｍＬの各放射性ペプチドで処理したＡＲ４２Ｊ細胞のγ－Ｈ２ＡＸの免疫染色により、ＤＮＡ ＤＳＢの数を評価した。細胞を播種し（５×１０６ｃｅｌｌｓ／ペトリ皿）、一晩増殖させた。翌日、培地を除去し、細胞をアッセイ培地で希釈した放射性ペプチドで２時間処理した。上清を除去し、新しい培地を加える前にＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞をＰＢＳで洗浄した。２４時間インキュベートした後、細胞をＰＢＳで洗浄し、１．５ｍＬのＰＢＳを用いてスクレイピングにより剥離し、１．５ｍＬのエッペンドルフチューブで遠心分離した。細胞ペレットは、１ｍＬの４％中性緩衝ホルマリンを加え、２４時間室温で静置した後、ＰＢＳと交換して固定した。パラフィン包埋後、厚さ４μｍの切片を作製した。簡単に説明すると、ＥＤＴＡ（ｐＨ９）を含む溶液を用いて９８℃で２０分間脱パラフィンした後、ＲＥＡＬ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｉｌｕｅｎｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ）を用いてＲＴで３０分間、過酸化水素（Ａｇｉｌｅｎｔ）を用いてＲＴで１０分間インキュベートすることにより抗原検索を行った。切片を一次抗体（細胞シグナリングウサギモノクローナル抗体（Ｓｅｒ１３９）；希釈度１：２００）と共にＲＴで１時間インキュベートした。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｒａｂｂｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ）検出システムをＤＡＢ基質バッファー（Ａｇｉｌｅｎｔ）とともに使用した。免疫染色した切片をデジタルスライドスキャナー（ＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ－ＸＲ Ｃ１２０００；浜松、日本）でスキャンし、病理画像解析ソフトウェアＶＩＳ（Ｖｉｓｉｏｐｈａｒｍ Ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ２０８ ２０１９．０２．２．６２３９，Ｖｉｓｉｏｐｈａｒｍ，Hoersholm，デンマーク）を用いて陽性細胞と陰性細胞の合計を定量した。まず、ディシジョンフォレスト分類法を用いて、組織細胞ペレットを関心領域（ＲＯＩ）として概説した。その後、細胞分類法を用いて各ＲＯＩ内の細胞核を検出し、陽性（茶）と陰性（青）に分類した。核の種類の分離は、「標準陽性核」と「標準陰性核」というあらかじめ決められたオプションでソフトウェアをトレーニングすることで行った。結果は総陽性細胞数と総陰性細胞数で表した。データは、Ｄｕｎｎｅｔの多重比較事後検定による一元配置分散分析で分析した。ｐ値＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【0091】
高活性濃度（１０ＭＢｑ／ｍＬ）では、すべての１６１Ｔｂ処理サンプルにおいて、対照と比較してγ－Ｈ２ＡＸ陽性病巣の数が増加したが、有意なレベルには達しなかった（ｐ＜０．０５）。１７７Ｌｕ標識ソマトスタチンアナログは、γ－Ｈ２ＡＸ陽性病巣のわずかな増加しかもたらさなかったが、これは高活性濃度でのみ明らかであった（ｐ＞０．０５）。結果を図９に示す。
【0092】
ＩＩＩ．ｉｎ ｖｉｖｏ試験
放射性ペプチドの組織分布を評価し、注射するペプチドのモル量を最適化するためにｉｎ ｖｉｖｏ試験を行った。さらに、放射性ペプチドの治療効果と初期の副作用を評価した。
放射性ペプチドの組織分布を評価し、注射するペプチドのモル量を最適化するためにｉｎ ｖｉｖｏ試験を行った。さらに、放射性ペプチドの治療効果と初期の副作用を評価した。
【0093】
動物の世話と使用に関して適用されるすべての国際的、国内的、および／または研究機関のガイドラインに従った。特に、すべての動物実験はスイス動物福祉規則のガイドラインに従って実施された。前臨床試験は、カントン動物実験委員会により倫理的に承認され、管轄のカントン当局により許可された（許可番号７５７２１および７９６９２）。５週齢の雌の無胸腺性ヌードマウス（ＣＤ－１ Ｆｏｘｎ－１／ｎｕ）をＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓｕｌｚｆｅｌｄ、ドイツ）から入手した。マウスにＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞（１００μＬＰＢＳ中５×１０６細胞）を皮下接種し、ＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージング、生体内分布および治療試験を行った。ＳＰＥＣＴ／ＣＴおよび生体内分布試験は、腫瘍細胞接種後１０－１４日目に腫瘍サイズが～２５０ｍｍ３に達した時点で実施した。
【0094】
Ａ．二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージング試験
その目的は、１６１Ｔｂ－と１７７Ｌｕ－標識ソマトスタチンアナログが同じｉｎ ｖｉｖｏ分布を持ち、腫瘍への取り込みがＳＳＴＲ特異的であることを証明することであった。第二の目的は、３つのソマトスタチンアナログの組織分布を比較することであった。
その目的は、１６１Ｔｂ－と１７７Ｌｕ－標識ソマトスタチンアナログが同じｉｎ ｖｉｖｏ分布を持ち、腫瘍への取り込みがＳＳＴＲ特異的であることを証明することであった。第二の目的は、３つのソマトスタチンアナログの組織分布を比較することであった。
【0095】
二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャンは、小動物専用ＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャナー（ＮａｎｏＳＰＥＣＴ／ＣＴ，Ｍｅｄｉｓｏ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｕｄａｐｅｓｔ，Ｈｕｎｇ；Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ Ｍａｔｅｒｉａｌ）を用いて既報［４４］のように実施した。スキャンはＮｕｃｌｉｎｅ ｓｏｆｔｗａｒｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ１．０２，Ｍｅｄｉｓｏ Ｌｔｄ．，Budapest，ハンガリー）を用いて取得した。テルビウム－１６１とルテチウム－１７７から生じたカウントの同時取得は、２つの放射性核種に対して異なるエネルギーウィンドウを選択することによって行った。テルビウム－１６１については、Ｘ線とγ線（４６．０ｋｅＶ，４８．９ｋｅＶ，５２．０ｋｅＶ）の検出を可能にする４７．７ｋｅＶ±１０％と、７４．６ｋｅＶのγ線の検出を可能にする７４．６ｋｅＶ±１０％の２つのエネルギー窓を選択した。ルテチウム１７７については、ウィンドウを２０８．４±１０％と１１２．９ｋｅＶ±１０％に設定し、それぞれ２０８．４ｋｅＶと１１２．９ｋｅＶのγ線を検出できるようにした。ＳＰＥＣＴデータはＨｉＳＰＥＣＴソフトウェア（ｖｅｒｓｉｏｎ１．４．３０４９，Ｓｃｉｖｉｓ ＧｍｂＨ，Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ，ドイツ）を用いて繰り返し再構成した。ＣＴはコーンビームフィルターによる逆投影を用いてリアルタイムで再構成した。ＳＰＥＣＴとＣＴスキャンの融合データセットは、ＶｉｖｏＱｕａｎｔポスト処理ソフトウェア（バージョン３．５、ｉｎｖｉＣＲＯ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ ａｎｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Boston、米国）を用いて解析した。Ｇａｕｓｓ ｐｏｓｔ－ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｆｉｌｔｅｒ（ＦＷＨＭ＝１．０ｍｍ）を適用した。
マウスに、０．０５％ＢＳＡおよびアスコルビン酸（～３００μｇ／３０ＭＢｑ）を含むＰＢＳ（ｐＨ７．４）中の、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ（～１５ＭＢｑ、０．５ｎｍｏｌ／マウス）と［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ（～１５ＭＢｑ、０．５ｎｍｏｌ／マウス）との混合物、または［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３と［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３との混合物を静脈注射した。ブロッキング試験は同じ実験条件で行ったが、この場合、過剰（２０ｎｍｏｌ／マウス）の非標識ＤＯＴＡＴＯＣまたはＤＯＴＡ－ＬＭ３を注射液に加えた。ＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャンは、放射性ペプチド注射の２時間後、４時間後、２４時間後に、フレームタイム６０秒、スキャン時間４５分の二重同位体ＳＰＥＣＴ収集プロトコールを用いて取得した。ｉｎ ｖｉｖｏスキャン中、マウスはイソフルランと酸素の混合吸入により麻酔された。
ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するマウスのＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像は、同時に注射された［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣおよび［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣのｉｎ ｖｉｖｏでの等しい分布を示した（図１０参照）。同じ観察が［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３についてもなされた（図１１参照）［４４］。
マウスに、０．０５％ＢＳＡおよびアスコルビン酸（～３００μｇ／３０ＭＢｑ）を含むＰＢＳ（ｐＨ７．４）中の、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ（～１５ＭＢｑ、０．５ｎｍｏｌ／マウス）と［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ（～１５ＭＢｑ、０．５ｎｍｏｌ／マウス）との混合物、または［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３と［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３との混合物を静脈注射した。ブロッキング試験は同じ実験条件で行ったが、この場合、過剰（２０ｎｍｏｌ／マウス）の非標識ＤＯＴＡＴＯＣまたはＤＯＴＡ－ＬＭ３を注射液に加えた。ＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャンは、放射性ペプチド注射の２時間後、４時間後、２４時間後に、フレームタイム６０秒、スキャン時間４５分の二重同位体ＳＰＥＣＴ収集プロトコールを用いて取得した。ｉｎ ｖｉｖｏスキャン中、マウスはイソフルランと酸素の混合吸入により麻酔された。
ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するマウスのＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像は、同時に注射された［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣおよび［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣのｉｎ ｖｉｖｏでの等しい分布を示した（図１０参照）。同じ観察が［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３についてもなされた（図１１参照）［４４］。
【0096】
ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像は、ＡＲ４２Ｊ異種移植片における活性の蓄積を示し、その蓄積量は［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の方が、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣおよび［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣよりも、調査した全ての時点において高かった。活性は腎臓を通して時間の経過とともに効率よく消失し、２４時間後にはほぼ完全に排泄された。腫瘍組織における放射性標識ＤＯＴＡ－ＬＭ３の良好な取り込みにより、腫瘍と腎臓の比率は、放射性標識ＤＯＴＡＴＯＣの注射後に得られた比率と比較して高かった［４４］。
【0097】
それぞれの非標識ペプチドを過剰に共注射した実験では、ＡＲ４２Ｊ腫瘍における放射性ペプチドの集積が阻害され、取り込みがＳＳＴＲ特異的であることが証明されていることが図１０Ｂおよび１１Ｂに示されている。
【0098】
Ｂ．生体分布試験：１６１Ｔｂ標識ペプチドと１７７Ｌｕ標識ペプチドの比較
生体分布試験は、１６１Ｔｂ標識ペプチドの組織分布を定量的に評価し、１７７Ｌｕ標識ペプチドと比較するために行われた。
生体分布試験は、１６１Ｔｂ標識ペプチドの組織分布を定量的に評価し、１７７Ｌｕ標識ペプチドと比較するために行われた。
【0099】
０．０５％ＢＳＡを含むＰＢＳ（ｐＨ７．４）で希釈した［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣまたは［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ（５ＭＢｑ；マウス１匹あたり１００μＬ中１ｎｍｏｌ）をマウスに静脈内注射した後、生体分布試験を行った。［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３または［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３も同じ条件で使用した。マウスは、注射２時間後と２４時間後（ｐ．ｉ．）に犠牲にした。選択した組織と臓器を収集し、重量を測定し、蓄積した活性をγ－ｃｏｕｎｔｅｒで計数した。減衰補正されたデータは、組織質量１ｇあたりの注射活性のパーセンテージ（％ＩＡ／ｇ）として記載された。データは、Ｔｕｋｅｙの多重比較事後検定による二元配置ＡＮＯＶＡを用いて有意性を分析した。ｐ値＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【0100】
１６１Ｔｂ標識ＤＯＴＡＴＯＣの生体内分布は、１７７Ｌｕ標識ＤＯＴＡＴＯＣの生体内分布と同程度であり、２時間後および２４時間後に調査した両方の組織および臓器において、それぞれ同様の活性蓄積により示された（ｐ＞０．０５）。ＤＯＴＡ－ＬＭ３を用いた場合にも、１６１Ｔｂ標識と１７７Ｌｕ標識の同等な組織分布が観察された（図１２、表Ａ１／Ａ２参照）。これらの結果から、テルビウム－１６１とルテチウム－１７７は、１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ－標識葉酸コンジュゲートおよびＰＳＭＡリガンドですでに実証されているように［３４、３６］、放射性ペプチドの薬物動態学的特性を変化させることなく交換可能であることが確認された。
【0101】
【表3】
【表4】
【0102】
Ｃ．生体分布試験：最適な注射モル量の評価
その目的は、１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ標識ＤＯＴＡＴＯＣとＤＯＴＡ－ＬＭ３の生体内分布に対するペプチド注射量の影響を評価することであった。
その目的は、１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ標識ＤＯＴＡＴＯＣとＤＯＴＡ－ＬＭ３の生体内分布に対するペプチド注射量の影響を評価することであった。
【0103】
０．０５％ＢＳＡを含む１００μＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）中の、放射性標識ＤＯＴＡＴＯＣまたはＤＯＴＡ－ＬＭ３（３ＭＢｑ，０．０４ｎｍｏｌ／マウス；５ＭＢｑ，０．２ｎｍｏｌ／マウス；５ＭＢｑ，１．０ｎｍｏｌ／マウス）を、マウス（各群ｎ＝３）に静脈注射した。マウスは２時間後に犠牲とし、選択した組織と臓器を収集して重量を測定し、γ－ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて蓄積した活性をカウントした。減衰補正されたデータは％ＩＡ／ｇで表示された。データは、Ｔｕｋｅｙの多重比較事後検定による二元配置ＡＮＯＶＡを用いて有意性を分析した。ｐ値＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【0104】
先行研究と一致して［５３］、注射されたペプチドの量は、様々な臓器や組織における蓄積活性に大きな影響を与えた（図１３、表Ａ３／Ａ４参照）。
【0105】
【表5】
【表6】
【0106】
［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－／［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣの腫瘍への取り込みは、マウス１匹あたり０．０４ｎｍｏｌと０．２ｎｍｏｌの投与で同程度（それぞれ～１７％ＩＡ／ｇと～１５％ＩＡ／ｇ、ｐ＞０．０５）であったが、１．０ｎｍｏｌを注射した場合（～８％ＩＡ／ｇ、ｐ＜０．０５）に比べて有意に高かった。胃での取り込みは、０．２ｎｍｏｌまたは１．０ｎｍｏｌの注射に比べ、０．０４ｎｍｏｌ注射後において高かった（ｐ＜０．０５）。膵臓、副腎、肺での取り込みも同様の傾向を示したが、設定による差は有意ではなかった（ｐ＞０．０５）。腎臓の取り込み（～１０％）と肝臓の取り込み（～０．２％ＩＡ／ｇ）には、適用する設定にかかわらず差は認められなかった。［１６１Ｔｂ］Ｔｂ／［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３は、マウス１匹あたり０．０４０ｎｍｏｌと０．２０ｎｍｏｌのペプチドを注射した場合、同様に高い腫瘍取り込みを示した（～３４％と～３８％のＩＡ／ｇ、ｐ＞０．０５）。１．０ｎｍｏｌでは取り込みは低かった（～１８％ＩＡ／ｇ、ｐ＜０．０５）。膵臓、副腎、肺および胃における取り込みは、０．０４０ｎｍｏｌのペプチドを注射した場合、０．２ｎｍｏｌの場合よりも有意に高く、最も低い取り込みは、１．０ｎｍｏｌのペプチドを注射した場合であった（ｐ＜０．０５）。肝臓での取り込みは、注射した最低モル量ではわずかに上昇したが、有意ではなかった（ｐ＞０．０５）。［１６１Ｔｂ］Ｔｂ／［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の腎臓への取り込みは、ペプチドの注射量に関係なく、１０％ＩＡ／ｇの範囲であった。結果を図１３に示す。
【0107】
これらの所見の結果、腫瘍対臓器の比率は注射された放射性ペプチドの量に依存して変化していた（表３および４）。ＤＯＴＡＴＯＣおよびＤＯＴＡ－ＬＭ３では、低モル量のペプチド（０．０４ｎｍｏｌまたは０．２ｎｍｏｌ）を注射した場合、腫瘍対腎臓（ｔｕ－ｔｏ－ｋｉ）および腫瘍対肝臓（ｔｕ－ｔｏ－ｌｉ）の比率はいずれも良好であった。腫瘍対膵臓（ｔｕ－ｔｏ－ｐａｎｃ）、腫瘍対副腎（ｔｕ－ｔｏ－ａｄｒ）、腫瘍対肺（ｔｕ－ｔｏ－ｌｕｎｇ）および腫瘍対胃（ｔｕ－ｔｏ－ｓｔｏ）の比率は、０．２ｎｍｏｌまたは１．０ｎｍｏｌの［１６１Ｔｂ］Ｔｂ／［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣを注射した後に高くなった。しかし、これらの比率は、１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ標識ＤＯＴＡ－ＬＭ３の１．０ｎｍｏｌペプチドを注射した後の方が、マウスあたり０．２ｎｍｏｌペプチドを使用した後よりも良好であった。マウス１匹あたり０．０４ｎｍｏｌペプチドを注射した場合、最も低い比率となった。マウス１匹あたり０．２ｎｍｏｌのペプチドを注射した場合、腫瘍への取り込みが最も高く、腫瘍とバックグラウンドの比率もほとんどの場合良好であったことから、このモル量のペプチドをさらなるｉｎ ｖｉｖｏ試験に使用した。
【0108】
【表7】
【表8】
【0109】
Ｄ．時間依存的な生体分布試験
腫瘍および健常臓器・組織における放射性ペプチドの全吸収量を評価するために、時間依存的な生体分布試験が行われた。
腫瘍および健常臓器・組織における放射性ペプチドの全吸収量を評価するために、時間依存的な生体分布試験が行われた。
【0110】
０．０５％ＢＳＡを含む１００μＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で、放射性標識ＤＯＴＡＴＯＣまたはＤＯＴＡ－ＬＭ３（５ＭＢｑ、０．２ｎｍｏｌ／マウス）をマウス（各群ｎ＝３）に静脈注射した。０．５時間、２時間、４時間、２４時間、４８時間後にマウスを犠牲にし、選択した組織と臓器を収集して重量を測定し、γ－ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて蓄積した活性をカウントした。減衰補正されたデータは％ＩＡ／ｇで表示された。データは、Ｔｕｋｅｙの多重比較事後検定による二元配置ＡＮＯＶＡを用いて有意性を分析した。ｐ値＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【0111】
［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣは、注射後０．５時間ですでに腫瘍への取り込みが最高（１５±２％）に達した。活性は４時間後まで腫瘍組織に保持されたが、その後数時間かけて消失し、注射２４時間後および４８時間後には６．４±０．５％ＩＡ／ｇおよび３．７±０．７％ＩＡ／ｇとなった。肺、胃および膵臓で有意な活性蓄積が観察されたが、効率よく消失し、注射４時間後には１％ＩＡ／ｇ以下となった、～４－５％ＩＡ／ｇ、注射２４時間後および４８時間後では２－３％であった（図１４ａ；表Ａ５参照）。
【0112】
【表9】
【0113】
ソマトスタチンアナログがテルビウム－１６１またはルテチウム－１７７のどちらで標識されていても組織分布は変わらないという事実に基づき、これらの結果は１７７Ｌｕ標識された対応物においても推定できる［４４］。［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の腫瘍への取り込みも速く、注射４時間後で３５±７％ＩＡ／ｇであった。４８時間後、腫瘍内の活性（２１±４％ＩＡ／ｇ）は依然として高かった。肺、胃、膵臓のような他の臓器では、最初の４時間で活性の保持が見られたが、その後は効率よく消失した。腫瘍、膵臓および胃における［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３の蓄積活性は、調査したすべての時点において［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣの場合よりも有意に高かった（ｐ＜０．０５）が、腎臓での取り込みは［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣで観察されたのと同様であった（ｐ＞０．０５）（図１４ｂ；表Ａ６参照）。
【0114】
【表10】
【0115】
Ｅ．ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスを用いた前臨床治療試験
この前臨床試験の目的は、テルビウム－１６１またはルテチウム－１７７で放射性標識したＤＯＴＡＴＯＣおよびＤＯＴＡ－ＬＭ３ペプチドの治療効果と潜在的な初期副作用を評価することであった。
この前臨床試験の目的は、テルビウム－１６１またはルテチウム－１７７で放射性標識したＤＯＴＡＴＯＣおよびＤＯＴＡ－ＬＭ３ペプチドの治療効果と潜在的な初期副作用を評価することであった。
【0116】
治療試験は、ＡＲ４２Ｊ腫瘍が平均体積９９±１６ｍｍ３に達した時点で、マウスを５群（ｎ＝６）に無作為に割り当てて開始した。試験の０日目と７日目に、マウスにビヒクルのみ（Ａ群：０．０５％ＢＳＡ入りＰＢＳ；偽処置）、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ（Ｂ群：１０ＭＢｑ、０．２ｎｍｏｌ）、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ（Ｃ群：１０ＭＢｑ，０．２ｎｍｏｌ）、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（Ｄ群：１０ＭＢｑ，０．２ｎｍｏｌ）、および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（Ｅ群：１０ＭＢｑ，０．２ｎｍｏｌ）を静脈注射した（表５）。
【0117】
相対体重（ＲＢＷ）および相対腫瘍体積（ＲＴＶ）は、治療開始時の値に基づいて、既報［５４］のように定義された。ＲＢＷは、［ＢＷｘ／ＢＷ０］として定義された。ここで、ＢＷｘは所与の第ｘ日目におけるグラム単位の体重であり、ＢＷ０は第０日目におけるグラム単位の体重である。腫瘍の寸法は、腫瘍の最長軸（Ｌ）とその垂直軸（Ｗ）をデジタルノギスで測定することにより決定した。腫瘍体積（ＴＶ）は、式［ＴＶ＝０．５×（Ｌ×Ｗ２）］に従って算出した。相対腫瘍体積（ＲＴＶ）は、［ＴＶ／ＴＶｘ０］として定義された。ここでＴＶｘは所与の第ｘ日目における腫瘍体積（ｍｍ３）であり、ＴＶ０は第０日目における腫瘍体積（ｍｍ３）である。
【0118】
エンドポイント基準はスコアリングシステムに従って定義され、スコア３以上のマウスは安楽死させた。２日おきに以下の基準を評価し、各基準に０～３のスコアをつけた：（ｉ）外見（全身状態、皮膚の色など）、（ｉｉ）行動（活力、社会性、しゃがみ込みなど）、（ｉｉｉ）体重（初期の体重と比較して、安定、５％を超え１０％以下の減少、１０％を超え１５％未満の減少、１５％以上の減少）、（ｉｖ）腫瘍の大きさ（８００ｍｍ３未満、８００ｍｍ３以上９００ｍｍ３未満、９００ｍｍ３以上１０００ｍｍ３未満、１０００ｍｍ３以上）、（ｖ）腫瘍の潰瘍化。スコアが３以上であるのは、例えば以下のような場合である：（ｉ）しわの寄った半透明の皮膚、（ｉｉ）しゃがんだ姿勢および／または無気力なマウス、（ｉｉｉ）初期体重の１５％以上の体重減少、（ｉｖ）１０００ｍｍ３以上の腫瘍体積、（ｖ）８００ｍｍ３以上の腫瘍サイズおよび１０％以上の体重減少の組み合わせ、および／または（ｖｉ）腫瘍の潰瘍化。
【0119】
治療の有効性は、Ｓｉｄａｋの多重比較事後検定による二元配置分散分析を用いて、各群のマウスの２日ごとに測定したＲＴＶを比較することにより評価した。腫瘍が増殖しなかったか、あるいはサイズが減少した時間として本明細書で定義される平均腫瘍増殖遅延を、各群のマウスについて決定した。腫瘍が再生し始めるその後の段階について、腫瘍体積の倍加時間を、適合させた指数関数的腫瘍増殖曲線に基づいて計算した。単一マウスにおける腫瘍増殖遅延の平均±ＳＤおよび腫瘍体積の倍加時間をそれぞれ、一元配置分散分析およびＴｕｋｅｙの多重比較事後検定により群間で比較した。マウスの生存期間はＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ曲線で示し、ｌｏｇ－ｒａｎｋ検定（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）を用いて解析した。
【0120】
【表11】
【0121】
Ａ群の偽薬投与マウスは指数関数的な腫瘍増殖を示し、すべての症例で最初の１４日以内にエンドポイントに達した。Ｂ－Ｅ群の治療マウスでは腫瘍増殖が遅延し、その結果、生存期間中央値は対照群の９日に比べて有意に延長した（図１５、表６）。［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣで治療したマウス（Ｂ群）は、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣで治療したマウス（Ｃ群）と比較して、腫瘍の増殖がわずかに遅かった。治療開始から１２日後、これら２群のマウスのＲＴＶは有意に異なっていた（２．０±０．７対４．０±３．３，ｐ＜０．０５）。腫瘍増殖遅延および倍加時間は、Ｃ群（それぞれ６．０±４．４日および３．４±０．８日、ｐ＞０．０５）に比べ、Ｂ群（それぞれ９．０±５．５日および３．４±３．６日）で高かった（図１６）。そのため、Ｂ群のマウスはＣ群（１２～２２日目）に比べて遅い段階（２０～２６日目）で安楽死させられた。しかし、生存期間中央値（２１日対１９．５日）は群間で同等であった（ｐ＞０．０５）。
【0122】
［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で処置したマウスの腫瘍増殖遅延は４４±５日であったが、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で処置したマウスでは３５±７日に過ぎなかった（ｐ＜０．０５）。その後、腫瘍は両群の６匹中５匹で指数関数的に再生し始めたが、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で処置したマウスの倍加時間は、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で処置したマウスの腫瘍増殖（７．４±４．６日ｖｓ３．８±１．１日、ｐ＞０．０５）と比較してかなり長かった（図１６）。［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で治療したマウスはすべて試験終了まで生存したが、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３で治療したマウスは６匹中３匹のみであった。
【0123】
【表12】
【0124】
Ｆ．初期副作用の評価
［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３、または［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３を２×１０ＭＢｑ投与したマウスにおける初期副作用の徴候を評価することが目的であった。
［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ、［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３、または［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３を２×１０ＭＢｑ投与したマウスにおける初期副作用の徴候を評価することが目的であった。
【0125】
初期の副作用は、２日おきにモニターされた各マウスのＲＢＷに基づいて評価された。エンドポイントに達したとき、あるいは試験終了時（４９日後）に、関連する臓器と組織を収集し、重量を測定して、それぞれのマウスの脳質量と体重に関連付けた。これにより、臓器対脳および臓器対体の質量比を比較することができた。さらに、安楽死直後に収集した血液から血漿パラメータを測定した。
【0126】
エンドポイントにおけるＲＢＷ、臓器質量および質量比：ＲＢＷは２日おきにモニターした。マウスはあらかじめ定義されたエンドポイント基準に達したとき、または４９日目に試験が終了したときに安楽死させた。ＲＢＷ、臓器質量、臓器質量の比率（腎臓対脳、肝臓対脳、脾臓対脳）、および臓器質量対体重の比率（腎臓対体重、肝臓対体重、脾臓対体重）を、Ｔｕｋｅｙの多重比較事後検定付き一元配置分散分析検定を用いて有意性を分析した。ｐ値＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【0127】
血漿化学：エンドポイントに達したマウスを安楽死させる直前に、球後の静脈から血液を採取した。クレアチニン（ＣＲＥ）、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、総ビリルビン（ＴＢＩＬ）およびアルブミン（ＡＬＢ）の値は、血液を遠心分離した後、乾式化学分析装置（ＤＲＩ－ＣＨＥＭ ４０００ｉ、富士フイルム、日本）を用いて血漿中で測定した。各群の平均血漿パラメータは、Ｔｕｋｅｙの多重比較後検定付き一元配置分散分析検定を用いて有意性を分析した。ｐ値＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【0128】
投与したマウスに明らかな初期副作用は見られなかった。相対体重は試験期間中に増加し、これはマウスの健康状態を示すものであった（図１７参照）。対照群の最初のマウスがエンドポイント（ｐ＞０．０５）に達した６日目には、対照マウスと投与マウスの間に体重の差は観察されなかった（表７）。
【0129】
安楽死時の臓器量、臓器対脳の比率、臓器対体重の比率について、投与マウス（Ｂ～Ｅ群）と無処置対照マウス（Ａ群）の間に有意差はなかった（ｐ＞０．０５）（表８および９）。
【0130】
血漿化学検査では、投与マウスと未投与の対照マウスに差は認められなかった。ＢＵＮ値はすべてのマウスで許容範囲内であったが、対照マウス（６．２±０．７ｍｍｏｌ／Ｌ）と比較して、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（９．９±１．５ｍｍｏｌ／Ｌ；ｐ＜０．０５）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（８．２±１．９ｍｍｏｌ／Ｌ；ｐ＞０．０５）で処置したマウスでは上昇した（表１０）。
【0131】
【表13】
【表14】
【表15】
【表16】
【0132】
（参考文献）
ここに引用されたすべての文献は、参照することにより組み込まれる。
1.Cives M, Strosberg J. Radionuclide therapy for neuroendocrine tumors. Curr Oncol Rep. 2017;19:9. doi:10.1007/s11912-017-0567-8.
2.Yao JC, Hassan M, Phan A, Dagohoy C, Leary C, Mares JE, et al. One hundred years after "carcinoid": epidemiology of and prognostic factors for neuroendocrine tumors in 35,825 cases in the United States. J Clin Oncol. 2008;26:3063-72. doi:10.1200/JCO.2007.15.4377.
3.Krenning EP, Kooij PP, Bakker WH, Breeman WA, Postema PT, Kwekkeboom DJ, et al. Radiotherapy with a radiolabeled somatostatin analogue, [111In-DTPA-D-Phe1]-octreotide. A case history. Ann N Y Acad Sci. 1994;733:496-506. doi:10.1111/j.1749-6632.1994.tb17300.x.
4.Kwekkeboom DJ, Krenning EP. Peptide receptor radionuclide therapy in the treatment of neuroendocrine tumors. Hematol Oncol Clin North Am. 2016;30:179-91. doi:10.1016/j.hoc.2015.09.009.
5.Valkema R, De Jong M, Bakker WH, Breeman WA, Kooij PP, Lugtenburg PJ, et al. Phase I study of peptide receptor radionuclide therapy with [In-DTPA]octreotide: the Rotterdam experience. Semin Nucl Med. 2002;32:110-22. doi:10.1053/snuc/2002.31025.
6.Anthony LB, Woltering EA, Espenan GD, Cronin MD, Maloney TJ, McCarthy KE. Indium-111-pentetreotide prolongs survival in gastroenteropancreatic malignancies. Semin Nucl Med. 2002;32:123-32. doi:10.1053/snuc.2002.31769.
7.Nisa L, Savelli G, Giubbini R. Yttrium-90 DOTATOC therapy in GEP-NET and other SST2 expressing tumors: a selected review. Ann Nucl Med. 2011;25:75-85. doi:10.1007/s12149-010-0444-0.
8.Valkema R, Pauwels SA, Kvols LK, Kwekkeboom DJ, Jamar F, de Jong M, et al. Long-term follow-up of renal function after peptide receptor radiation therapy with 90Y-DOTA0,Tyr3-octreotide and 177Lu-DOTA0,Tyr3-octreotate. J Nucl Med. 2005;46 Suppl 1:83S-91S. doi:46/1_suppl/83S [pii].
9.Valkema R, Pauwels S, Kvols LK, Barone R, Jamar F, Bakker WH, et al. Survival and response after peptide receptor radionuclide therapy with [90Y-DOTA0,Tyr3]octreotide in patients with advanced gastroenteropancreatic neuroendocrine tumors. Semin Nucl Med. 2006;36:147-56. doi:10.1053/j.semnuclmed.2006.01.001.
10.Banerjee S, Pillai MR, Knapp FF. Lutetium-177 therapeutic radiopharmaceuticals: linking chemistry, radiochemistry, and practical applications. Chem Rev. 2015;115:2934-74. doi:10.1021/cr500171e.
11.Kwekkeboom DJ, Bakker WH, Kam BL, Teunissen JJ, Kooij PP, de Herder WW, et al. Treatment of patients with gastro-entero-pancreatic (GEP) tumours with the novel radiolabelled somatostatin analogue [177Lu-DOTA0,Tyr3]octreotate. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2003;30:417-22. doi:10.1007/s00259-002-1050-8.
12.Romer A, Seiler D, Marincek N, Brunner P, Koller MT, Ng QK, et al. Somatostatin-based radiopeptide therapy with [177Lu-DOTA]-TOC versus [90Y-DOTA]-TOC in neuroendocrine tumours. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2014;41:214-22. doi:10.1007/s00259-013-2559-8.
13.Strosberg J, El-Haddad G, Wolin E, Hendifar A, Yao J, Chasen B, et al. Phase 3 trial of 177Lu-DOTATATE for Mmidgut neuroendocrine tumors. N Engl J Med. 2017;376:125-35. doi:10.1056/NEJMoa1607427.
14.Pillai AM, Knapp FF, Jr. Evolving Important role of lutetium-177 for therapeutic nuclear medicine. Curr Radiopharm. 2015;8:78-85. doi:10.2174/1874471008666150312155959.
15.Baum RP, Kluge AW, Kulkarni H, Schorr-Neufing U, Niepsch K, Bitterlich N, et al. [177Lu-DOTA]0-D-Phe1-Tyr3-Octreotide (177Lu-DOTATOC) for peptide receptor radiotherapy in patients with advanced neuroendocrine tumours: a Phase-II study. Theranostics. 2016;6:501-10. doi:10.7150/thno.13702.
16.Pouget JP, Lozza C, Deshayes E, Boudousq V, Navarro-Teulon I. Introduction to radiobiology of targeted radionuclide therapy. Front Med (Lausanne). 2015;2:12. doi:10.3389/fmed.2015.00012.
17.Norenberg JP, Krenning BJ, Konings IR, Kusewitt DF, Nayak TK, Anderson TL, et al. 213Bi-[DOTA0, Tyr3]octreotide peptide receptor radionuclide therapy of pancreatic tumors in a preclinical animal model. Clin Cancer Res. 2006;12:897-903. doi:10.1158/1078-0432.CCR-05-1264.
18.Chan HS, Konijnenberg MW, de Blois E, Koelewijn S, Baum RP, Morgenstern A, et al. Influence of tumour size on the efficacy of targeted alpha therapy with 213Bi-[DOTA(0),Tyr3]-octreotate. EJNMMI Res. 2016;6:6. doi:10.1186/s13550-016-0162-2.
19.Miederer M, Henriksen G, Alke A, Mossbrugger I, Quintanilla-Martinez L, Senekowitsch-Schmidtke R, et al. Preclinical evaluation of the alpha-particle generator nuclide 225Ac for somatostatin receptor radiotherapy of neuroendocrine tumors. Clin Cancer Res. 2008;14:3555-61. doi:10.1158/1078-0432.CCR-07-4647.
20.Tafreshi NK, Pandya DN, Tichacek CJ, Budzevich MM, Wang Z, Reff JN, et al. Preclinical evaluation of [225Ac]Ac-DOTA-TATE for treatment of lung neuroendocrine neoplasms. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2021. doi:10.1007/s00259-021-05315-1.
21.Kratochwil C, Giesel FL, Bruchertseifer F, Mier W, Apostolidis C, Boll R, et al. 213Bi-DOTATOC receptor-targeted alpha-radionuclide therapy induces remission in neuroendocrine tumours refractory to beta radiation: a first-in-human experience. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2014;41:2106-19. doi:10.1007/s00259-014-2857-9.
22.Ballal S, Yadav MP, Bal C, Sahoo RK, Tripathi M. Broadening horizons with 225Ac-DOTATATE targeted alpha therapy for gastroenteropancreatic neuroendocrine tumour patients stable or refractory to 177Lu-DOTATATE PRRT: first clinical experience on the efficacy and safety. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2020;47:934-46. doi:10.1007/s00259-019-04567-2.
23.de Kruijff RM, Wolterbeek HT, Denkova AG. A critical review of alpha radionuclide therapy-how to deal with recoiling daughters? Pharmaceuticals (Basel). 2015;8:321-36. doi:10.3390/ph8020321.
24.Kratochwil C, Bruchertseifer F, Giesel FL, Weis M, Verburg FA, Mottaghy F, et al. 225Ac-PSMA-617 for PSMA-targeted alpha-radiation therapy of metastatic castration-resistant prostate cancer. J Nucl Med. 2016;57:1941-4. doi:10.2967/jnumed.116.178673.
25.Morgenstern A, Apostolidis C, Kratochwil C, Sathekge M, Krolicki L, Bruchertseifer F. An overview of targeted alpha therapy with 225Actinium and 213Bismuth. Curr Radiopharm. 2018;11:200-8. doi:10.2174/1874471011666180502104524.
26.Lehenberger S, Barkhausen C, Cohrs S, Fischer E, Grunberg J, Hohn A, et al. The low-energy beta- and electron emitter 161Tb as an alternative to 177Lu for targeted radionuclide therapy. Nucl Med Biol. 2011;38:917-24. doi:S0969-8051(11)00044-8 [pii]
10.1016/j.nucmedbio.2011.02.007.
27.Duran MT, Juget F, Nedjadi Y, Bochud F, Grundler PV, Gracheva N, et al. Determination of 161Tb half-life by three measurement methods. Appl Radiat Isot. 2020;159:109085. doi:10.1016/j.apradiso.2020.109085.
28.Baum RP, Singh A, Kulkarni HR, Bernhardt P, Ryden T, Schuchardt C, et al. First-in-human application of terbium-161: a feasibility study using 161Tb-DOTATOC. J Nucl Med. 2021. doi:10.2967/jnumed.120.258376.
29.Muller C, Zhernosekov K, Koster U, Johnston K, Dorrer H, Hohn A, et al. A unique matched quadruplet of terbium radioisotopes for PET and SPECT and for a- and b--radionuclide therapy: An in vivo proof-of-concept study with a new receptor-targeted folate derivative. J Nucl Med. 2012;53:1951-9. doi:10.2967/jnumed.112.107540
jnumed.112.107540 [pii].
34.Muller C, Reber J, Haller S, Dorrer H, Bernhardt P, Zhernosekov K, et al. Direct in vitro and in vivo comparison of 161Tb and 177Lu using a tumour-targeting folate conjugate. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2014;41:476-85. doi:10.1007/s00259-013-2563-z.
36.Muller C, Umbricht CA, Gracheva N, Tschan VJ, Pellegrini G, Bernhardt P, et al. Terbium-161 for PSMA-targeted radionuclide therapy of prostate cancer. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2019;46:1919-30. doi:10.1007/s00259-019-04345-0.
39.Fani M, Andre JP, Maecke HR. 68Ga-PET: a powerful generator-based alternative to cyclotron-based PET radiopharmaceuticals. Contrast Media Mol Imaging. 2008;3:67-77. doi:10.1002/cmmi.232.
41.Wang LF, Lin L, Wang MJ, Li Y. The therapeutic efficacy of 177Lu-DOTATATE/DOTATOC in advanced neuroendocrine tumors: a meta-analysis. Medicine (Baltimore). 2020;99:e19304. doi:10.1097/MD.0000000000019304.
42.Fani M, Del Pozzo L, Abiraj K, Mansi R, Tamma ML, Cescato R, et al. PET of somatostatin receptor-positive tumors using 64Cu- and 68Ga-somatostatin antagonists: the chelate makes the difference. J Nucl Med. 2011;52:1110-8. doi:10.2967/jnumed.111.087999.
43.Gracheva N, Muller C, Talip Z, Heinitz S, Koster U, Zeevaart JR, et al. Production and characterization of no-carrier-added 161Tb as an alternative to the clinically-applied 177Lu for radionuclide therapy. EJNMMI Radiopharm Chem. 2019;4:12. doi:10.1186/s41181-019-0063-6.
44.Borgna F, Barritt P, Grundler PV, Talip Z, Cohrs S, Zeevaart JR, et al. Simultaneous visualization of 161Tb- and 177Lu-labeled somatostatin analogues using dual-isotope SPECT imaging. Pharmaceutics. 2021;13. doi:10.3390/pharmaceutics13040536.
45.Ku A, Facca VJ, Cai Z, Reilly RM. Auger electrons for cancer therapy - a review. EJNMMI Radiopharm Chem. 2019;4:27. doi:10.1186/s41181-019-0075-2.
46.Iori M, Capponi PC, Rubagotti S, Esposizione LR, Seemann J, Pitzschler R, et al. Labelling of 90Y- and 177Lu-DOTA-bioconjugates for targeted radionuclide therapy: a comparison among manual, semiautomated, and fully automated synthesis. Contrast Media Mol Imaging. 2017;2017:8160134. doi:10.1155/2017/8160134.
47.Muller C, Mindt TL, de Jong M, Schibli R. Evaluation of a novel radiofolate in tumour-bearing mice: promising prospects for folate-based radionuclide therapy. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2009;36:938-46.
48.Hofsli E, Thommesen L, Norsett K, Falkmer S, Syversen U, Sandvik A, et al. Expression of chromogranin A and somatostatin receptors in pancreatic AR42J cells. Mol Cell Endocrinol. 2002;194:165-73. doi:10.1016/s0303-7207(02)00131-4.
49.Cescato R, Schulz S, Waser B, Eltschinger V, Rivier JE, Wester HJ, et al. Internalization of sst2, sst3, and sst5 receptors: effects of somatostatin agonists and antagonists. J Nucl Med. 2006;47:502-11.
50.Wadas TJ, Eiblmaier M, Zheleznyak A, Sherman CD, Ferdani R, Liang K, et al. Preparation and biological evaluation of 64Cu-CB-TE2A-sst2-ANT, a somatostatin antagonist for PET imaging of somatostatin receptor-positive tumors. J Nucl Med. 2008;49:1819-27. doi:10.2967/jnumed.108.054502jnumed.108.054502 [pii].
51.Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J Immunol Methods. 1983;65:55-63. doi:10.1016/0022-1759(83)90303-4.
52.Franken NA, Rodermond HM, Stap J, Haveman J, van Bree C. Clonogenic assay of cells in vitro. Nat Protoc. 2006;1:2315-9. doi:10.1038/nprot.2006.339.
53.Nicolas GP, Mansi R, McDougall L, Kaufmann J, Bouterfa H, Wild D, et al. Biodistribution, pharmacokinetics, and dosimetry of 177Lu-, 90Y-, and 111In-labeled somatostatin receptor antagonist OPS201 in comparison to the agonist 177Lu-DOTATATE: the mass effect. J Nucl Med. 2017;58:1435-41. doi:10.2967/jnumed.117.191684.
54.Guzik P, Benesova M, Ratz M, Monne Rodriguez JM, Deberle LM, Schibli R, et al. Preclinical evaluation of 5-methyltetrahydrofolate-based radioconjugates-new perspectives for folate receptor-targeted radionuclide therapy. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2021;48:972-83. doi:10.1007/s00259-020-04980-y.
ここに引用されたすべての文献は、参照することにより組み込まれる。
1.Cives M, Strosberg J. Radionuclide therapy for neuroendocrine tumors. Curr Oncol Rep. 2017;19:9. doi:10.1007/s11912-017-0567-8.
2.Yao JC, Hassan M, Phan A, Dagohoy C, Leary C, Mares JE, et al. One hundred years after "carcinoid": epidemiology of and prognostic factors for neuroendocrine tumors in 35,825 cases in the United States. J Clin Oncol. 2008;26:3063-72. doi:10.1200/JCO.2007.15.4377.
3.Krenning EP, Kooij PP, Bakker WH, Breeman WA, Postema PT, Kwekkeboom DJ, et al. Radiotherapy with a radiolabeled somatostatin analogue, [111In-DTPA-D-Phe1]-octreotide. A case history. Ann N Y Acad Sci. 1994;733:496-506. doi:10.1111/j.1749-6632.1994.tb17300.x.
4.Kwekkeboom DJ, Krenning EP. Peptide receptor radionuclide therapy in the treatment of neuroendocrine tumors. Hematol Oncol Clin North Am. 2016;30:179-91. doi:10.1016/j.hoc.2015.09.009.
5.Valkema R, De Jong M, Bakker WH, Breeman WA, Kooij PP, Lugtenburg PJ, et al. Phase I study of peptide receptor radionuclide therapy with [In-DTPA]octreotide: the Rotterdam experience. Semin Nucl Med. 2002;32:110-22. doi:10.1053/snuc/2002.31025.
6.Anthony LB, Woltering EA, Espenan GD, Cronin MD, Maloney TJ, McCarthy KE. Indium-111-pentetreotide prolongs survival in gastroenteropancreatic malignancies. Semin Nucl Med. 2002;32:123-32. doi:10.1053/snuc.2002.31769.
7.Nisa L, Savelli G, Giubbini R. Yttrium-90 DOTATOC therapy in GEP-NET and other SST2 expressing tumors: a selected review. Ann Nucl Med. 2011;25:75-85. doi:10.1007/s12149-010-0444-0.
8.Valkema R, Pauwels SA, Kvols LK, Kwekkeboom DJ, Jamar F, de Jong M, et al. Long-term follow-up of renal function after peptide receptor radiation therapy with 90Y-DOTA0,Tyr3-octreotide and 177Lu-DOTA0,Tyr3-octreotate. J Nucl Med. 2005;46 Suppl 1:83S-91S. doi:46/1_suppl/83S [pii].
9.Valkema R, Pauwels S, Kvols LK, Barone R, Jamar F, Bakker WH, et al. Survival and response after peptide receptor radionuclide therapy with [90Y-DOTA0,Tyr3]octreotide in patients with advanced gastroenteropancreatic neuroendocrine tumors. Semin Nucl Med. 2006;36:147-56. doi:10.1053/j.semnuclmed.2006.01.001.
10.Banerjee S, Pillai MR, Knapp FF. Lutetium-177 therapeutic radiopharmaceuticals: linking chemistry, radiochemistry, and practical applications. Chem Rev. 2015;115:2934-74. doi:10.1021/cr500171e.
11.Kwekkeboom DJ, Bakker WH, Kam BL, Teunissen JJ, Kooij PP, de Herder WW, et al. Treatment of patients with gastro-entero-pancreatic (GEP) tumours with the novel radiolabelled somatostatin analogue [177Lu-DOTA0,Tyr3]octreotate. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2003;30:417-22. doi:10.1007/s00259-002-1050-8.
12.Romer A, Seiler D, Marincek N, Brunner P, Koller MT, Ng QK, et al. Somatostatin-based radiopeptide therapy with [177Lu-DOTA]-TOC versus [90Y-DOTA]-TOC in neuroendocrine tumours. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2014;41:214-22. doi:10.1007/s00259-013-2559-8.
13.Strosberg J, El-Haddad G, Wolin E, Hendifar A, Yao J, Chasen B, et al. Phase 3 trial of 177Lu-DOTATATE for Mmidgut neuroendocrine tumors. N Engl J Med. 2017;376:125-35. doi:10.1056/NEJMoa1607427.
14.Pillai AM, Knapp FF, Jr. Evolving Important role of lutetium-177 for therapeutic nuclear medicine. Curr Radiopharm. 2015;8:78-85. doi:10.2174/1874471008666150312155959.
15.Baum RP, Kluge AW, Kulkarni H, Schorr-Neufing U, Niepsch K, Bitterlich N, et al. [177Lu-DOTA]0-D-Phe1-Tyr3-Octreotide (177Lu-DOTATOC) for peptide receptor radiotherapy in patients with advanced neuroendocrine tumours: a Phase-II study. Theranostics. 2016;6:501-10. doi:10.7150/thno.13702.
16.Pouget JP, Lozza C, Deshayes E, Boudousq V, Navarro-Teulon I. Introduction to radiobiology of targeted radionuclide therapy. Front Med (Lausanne). 2015;2:12. doi:10.3389/fmed.2015.00012.
17.Norenberg JP, Krenning BJ, Konings IR, Kusewitt DF, Nayak TK, Anderson TL, et al. 213Bi-[DOTA0, Tyr3]octreotide peptide receptor radionuclide therapy of pancreatic tumors in a preclinical animal model. Clin Cancer Res. 2006;12:897-903. doi:10.1158/1078-0432.CCR-05-1264.
18.Chan HS, Konijnenberg MW, de Blois E, Koelewijn S, Baum RP, Morgenstern A, et al. Influence of tumour size on the efficacy of targeted alpha therapy with 213Bi-[DOTA(0),Tyr3]-octreotate. EJNMMI Res. 2016;6:6. doi:10.1186/s13550-016-0162-2.
19.Miederer M, Henriksen G, Alke A, Mossbrugger I, Quintanilla-Martinez L, Senekowitsch-Schmidtke R, et al. Preclinical evaluation of the alpha-particle generator nuclide 225Ac for somatostatin receptor radiotherapy of neuroendocrine tumors. Clin Cancer Res. 2008;14:3555-61. doi:10.1158/1078-0432.CCR-07-4647.
20.Tafreshi NK, Pandya DN, Tichacek CJ, Budzevich MM, Wang Z, Reff JN, et al. Preclinical evaluation of [225Ac]Ac-DOTA-TATE for treatment of lung neuroendocrine neoplasms. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2021. doi:10.1007/s00259-021-05315-1.
21.Kratochwil C, Giesel FL, Bruchertseifer F, Mier W, Apostolidis C, Boll R, et al. 213Bi-DOTATOC receptor-targeted alpha-radionuclide therapy induces remission in neuroendocrine tumours refractory to beta radiation: a first-in-human experience. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2014;41:2106-19. doi:10.1007/s00259-014-2857-9.
22.Ballal S, Yadav MP, Bal C, Sahoo RK, Tripathi M. Broadening horizons with 225Ac-DOTATATE targeted alpha therapy for gastroenteropancreatic neuroendocrine tumour patients stable or refractory to 177Lu-DOTATATE PRRT: first clinical experience on the efficacy and safety. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2020;47:934-46. doi:10.1007/s00259-019-04567-2.
23.de Kruijff RM, Wolterbeek HT, Denkova AG. A critical review of alpha radionuclide therapy-how to deal with recoiling daughters? Pharmaceuticals (Basel). 2015;8:321-36. doi:10.3390/ph8020321.
24.Kratochwil C, Bruchertseifer F, Giesel FL, Weis M, Verburg FA, Mottaghy F, et al. 225Ac-PSMA-617 for PSMA-targeted alpha-radiation therapy of metastatic castration-resistant prostate cancer. J Nucl Med. 2016;57:1941-4. doi:10.2967/jnumed.116.178673.
25.Morgenstern A, Apostolidis C, Kratochwil C, Sathekge M, Krolicki L, Bruchertseifer F. An overview of targeted alpha therapy with 225Actinium and 213Bismuth. Curr Radiopharm. 2018;11:200-8. doi:10.2174/1874471011666180502104524.
26.Lehenberger S, Barkhausen C, Cohrs S, Fischer E, Grunberg J, Hohn A, et al. The low-energy beta- and electron emitter 161Tb as an alternative to 177Lu for targeted radionuclide therapy. Nucl Med Biol. 2011;38:917-24. doi:S0969-8051(11)00044-8 [pii]
10.1016/j.nucmedbio.2011.02.007.
27.Duran MT, Juget F, Nedjadi Y, Bochud F, Grundler PV, Gracheva N, et al. Determination of 161Tb half-life by three measurement methods. Appl Radiat Isot. 2020;159:109085. doi:10.1016/j.apradiso.2020.109085.
28.Baum RP, Singh A, Kulkarni HR, Bernhardt P, Ryden T, Schuchardt C, et al. First-in-human application of terbium-161: a feasibility study using 161Tb-DOTATOC. J Nucl Med. 2021. doi:10.2967/jnumed.120.258376.
29.Muller C, Zhernosekov K, Koster U, Johnston K, Dorrer H, Hohn A, et al. A unique matched quadruplet of terbium radioisotopes for PET and SPECT and for a- and b--radionuclide therapy: An in vivo proof-of-concept study with a new receptor-targeted folate derivative. J Nucl Med. 2012;53:1951-9. doi:10.2967/jnumed.112.107540
jnumed.112.107540 [pii].
34.Muller C, Reber J, Haller S, Dorrer H, Bernhardt P, Zhernosekov K, et al. Direct in vitro and in vivo comparison of 161Tb and 177Lu using a tumour-targeting folate conjugate. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2014;41:476-85. doi:10.1007/s00259-013-2563-z.
36.Muller C, Umbricht CA, Gracheva N, Tschan VJ, Pellegrini G, Bernhardt P, et al. Terbium-161 for PSMA-targeted radionuclide therapy of prostate cancer. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2019;46:1919-30. doi:10.1007/s00259-019-04345-0.
39.Fani M, Andre JP, Maecke HR. 68Ga-PET: a powerful generator-based alternative to cyclotron-based PET radiopharmaceuticals. Contrast Media Mol Imaging. 2008;3:67-77. doi:10.1002/cmmi.232.
41.Wang LF, Lin L, Wang MJ, Li Y. The therapeutic efficacy of 177Lu-DOTATATE/DOTATOC in advanced neuroendocrine tumors: a meta-analysis. Medicine (Baltimore). 2020;99:e19304. doi:10.1097/MD.0000000000019304.
42.Fani M, Del Pozzo L, Abiraj K, Mansi R, Tamma ML, Cescato R, et al. PET of somatostatin receptor-positive tumors using 64Cu- and 68Ga-somatostatin antagonists: the chelate makes the difference. J Nucl Med. 2011;52:1110-8. doi:10.2967/jnumed.111.087999.
43.Gracheva N, Muller C, Talip Z, Heinitz S, Koster U, Zeevaart JR, et al. Production and characterization of no-carrier-added 161Tb as an alternative to the clinically-applied 177Lu for radionuclide therapy. EJNMMI Radiopharm Chem. 2019;4:12. doi:10.1186/s41181-019-0063-6.
44.Borgna F, Barritt P, Grundler PV, Talip Z, Cohrs S, Zeevaart JR, et al. Simultaneous visualization of 161Tb- and 177Lu-labeled somatostatin analogues using dual-isotope SPECT imaging. Pharmaceutics. 2021;13. doi:10.3390/pharmaceutics13040536.
45.Ku A, Facca VJ, Cai Z, Reilly RM. Auger electrons for cancer therapy - a review. EJNMMI Radiopharm Chem. 2019;4:27. doi:10.1186/s41181-019-0075-2.
46.Iori M, Capponi PC, Rubagotti S, Esposizione LR, Seemann J, Pitzschler R, et al. Labelling of 90Y- and 177Lu-DOTA-bioconjugates for targeted radionuclide therapy: a comparison among manual, semiautomated, and fully automated synthesis. Contrast Media Mol Imaging. 2017;2017:8160134. doi:10.1155/2017/8160134.
47.Muller C, Mindt TL, de Jong M, Schibli R. Evaluation of a novel radiofolate in tumour-bearing mice: promising prospects for folate-based radionuclide therapy. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2009;36:938-46.
48.Hofsli E, Thommesen L, Norsett K, Falkmer S, Syversen U, Sandvik A, et al. Expression of chromogranin A and somatostatin receptors in pancreatic AR42J cells. Mol Cell Endocrinol. 2002;194:165-73. doi:10.1016/s0303-7207(02)00131-4.
49.Cescato R, Schulz S, Waser B, Eltschinger V, Rivier JE, Wester HJ, et al. Internalization of sst2, sst3, and sst5 receptors: effects of somatostatin agonists and antagonists. J Nucl Med. 2006;47:502-11.
50.Wadas TJ, Eiblmaier M, Zheleznyak A, Sherman CD, Ferdani R, Liang K, et al. Preparation and biological evaluation of 64Cu-CB-TE2A-sst2-ANT, a somatostatin antagonist for PET imaging of somatostatin receptor-positive tumors. J Nucl Med. 2008;49:1819-27. doi:10.2967/jnumed.108.054502jnumed.108.054502 [pii].
51.Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J Immunol Methods. 1983;65:55-63. doi:10.1016/0022-1759(83)90303-4.
52.Franken NA, Rodermond HM, Stap J, Haveman J, van Bree C. Clonogenic assay of cells in vitro. Nat Protoc. 2006;1:2315-9. doi:10.1038/nprot.2006.339.
53.Nicolas GP, Mansi R, McDougall L, Kaufmann J, Bouterfa H, Wild D, et al. Biodistribution, pharmacokinetics, and dosimetry of 177Lu-, 90Y-, and 111In-labeled somatostatin receptor antagonist OPS201 in comparison to the agonist 177Lu-DOTATATE: the mass effect. J Nucl Med. 2017;58:1435-41. doi:10.2967/jnumed.117.191684.
54.Guzik P, Benesova M, Ratz M, Monne Rodriguez JM, Deberle LM, Schibli R, et al. Preclinical evaluation of 5-methyltetrahydrofolate-based radioconjugates-new perspectives for folate receptor-targeted radionuclide therapy. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2021;48:972-83. doi:10.1007/s00259-020-04980-y.
【0133】
（付録）
【図面の簡単な説明】
【0134】
【図1】ソマトスタチン（ＳＳＴ）アナログの化学構造を示す図である。
【図2】
１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ－標識ペプチドの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムのグラフである。
【図3】調製および生理食塩水（１０ＭＢｑ／２５０μＬ）希釈の１時間後、４時間後、２４時間後に調べた、無傷の放射性ペプチドの割合を示す棒グラフである。
【図4】ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞を０．５時間、２時間、４時間インキュベートした後の放射性ペプチドのｉｎ ｖｉｔｒｏ腫瘍細胞への取り込みと内在化の結果である。
【図5】ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞を用いて、ペプチドのモル量を変化させて適用した放射性ペプチドの取り込みと内在化率を表すグラフである。
【図6】放射性ペプチドの細胞内取り込みと局在性研究のグラフである。
【図7】ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞生存率アッセイ（ＭＴＴ）を表すグラフである。
【図8】ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞の生存率（クローン形成アッセイ）を表すグラフである。
【図9】放射線ペプチド（２．５ＭＢｑおよび１０ＭＢｑ）曝露後のＤＮＡ ＤＳＢを代表するγ－Ｈ２ＡＸ陽性ＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞の定量である。
【図10-1】最大強度投影（ＭＩＰ）として示された、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ／マウス）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＯＣ（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ／マウス）の注射２時間後、４時間後および２４時間後の、ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスの二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像である。
【図10-2】ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスで実施したブロッキング試験の二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像である。
【図11-1】最大強度投影（ＭＩＰ）として示された、［１６１Ｔｂ］Ｔｂ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ／マウス）および［１７７Ｌｕ］Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＬＭ３（１５ＭＢｑ，０．５ｎｍｏｌ／マウス）の注射２時間後、４時間後および２４時間後のＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスの二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像である。
【図11-2】ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスで実施したブロッキング試験の二重同位体ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像である。
【図12】ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスで得られた生体内分布データである。
【図13】異なるモル量の放射性ペプチドを注射した２時間後にＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスで得られた生体内分布データである。
【図14】ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスに放射性ペプチド（マウス１匹あたり０．２ｎｍｏｌ）を注射して得られた生体内分布データである。
【図15】ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスに１６１Ｔｂおよび１７７Ｌｕ標識ＤＯＴＡＴＯＣとＤＯＴＡ－ＬＭ３を投与した治療試験である。
【図16】ＡＲ４２Ｊ腫瘍保有マウスにおいて、１６１Ｔｂ－および１７７Ｌｕ－ＳＳＴアゴニストおよびアンタゴニスト（２×１０ＭＢｑ；０．２ｎｍｏｌ）を用いて行った治療試験の解析である。
【図17】治療マウスの相対体重（ＲＢＷ）である。
【図1a】
【図1b】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10-1】
【図10-2】
【図11-1】
【図11-2】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【国際調査報告】