特表 2024-522376 代謝障害を治療又は改善するための治療薬及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-06-18

(54)【発明の名称】代謝障害を治療又は改善するための治療薬及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20240611BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240611BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240611BHJP

   C07K 14/605 20060101ALI20240611BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240611BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20240611BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240611BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240611BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240611BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240611BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240611BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240611BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240611BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240611BHJP

   A61K 38/26 20060101ALI20240611BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240611BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240611BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20240611BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240611BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 D

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C07K14/605

C07K19/00

C12N15/12

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12N15/62 Z

C12P21/08

A61K39/395 N

A61K45/00

A61K38/26

A61K47/68

A61P1/16

A61P3/04

A61P3/10

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023576099

(86)(22)【出願日】2022-06-01

(85)【翻訳文提出日】2023-12-07

(86)【国際出願番号】 IB2022055142

(87)【国際公開番号】W WO2022259097

(87)【国際公開日】2022-12-15

(31)【優先権主張番号】63/208,717

(32)【優先日】2021-06-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．プルロニック

２．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】523463247

【氏名又は名称】スウィフトノボ セラピューティックス インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】リー， ロンハオ

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA02

4B064CA05

4B064CA06

4B064CA08

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA01X

4B065AA01Y

4B065AA57X

4B065AA57Y

4B065AA72X

4B065AA72Y

4B065AA83X

4B065AA83Y

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC16

4C076CC21

4C076CC41

4C076EE59

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA19

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA19

4C084BA23

4C084DB35

4C084NA05

4C084ZA70

4C084ZA75

4C084ZC35

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB11

4C085BB42

4C085EE01

4C085EE03

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA30

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

代謝障害を有する対象を治療するための治療薬及び方法が提供される。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

脂肪性肝疾患を有する対象を治療する方法であって、前記方法が、治療有効量の、胃抑制ペプチド受容体（ＧＩＰＲ）のアミノ酸配列に少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質に特異的に結合する抗原結合タンパク質を、前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項2】

前記脂肪性肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝疾患の障害である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

非アルコール性脂肪性肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝炎の障害である、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

ヒト胃抑制ペプチド受容体（ＧＩＰＲ）に特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
（ｉ）配列番号１～３、配列番号７～９、配列番号７、２、及び３、配列番号１０、２、及び３、配列番号１２～１４、配列番号１８～２０、配列番号２４～２６、配列番号３０～３２、並びに配列番号３６～３８からなる群から選択されるＬＣＤＲセットのそれぞれの配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、軽鎖若しくは軽鎖可変領域、並びに／又は
（ｉｉ）配列番号４～６、配列番号４、１１、及び６、配列番号１５～１７、配列番号２１～２３、配列番号２７～２９、配列番号３３～３５、配列番号３９～４１、配列番号３９、４０、及び４２、配列番号３９、４０、及び４３、並びに配列番号３９、４０、及び４４からなる群から選択されるＨＣＤＲセットのそれぞれの配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、重鎖若しくは重鎖可変領域を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項5】

前記軽鎖可変領域が、配列番号４５、４７～５０、５７、５９、６１、６３、６５、及び６７～６９からなる群から選択される配列を含み、
前記重鎖可変領域が、配列番号４６、５１～５６、５８、６０、６２、６４、６６、及び７０～７３からなる群から選択される配列を含む、請求項４に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項6】

前記軽鎖可変領域が、配列番号４５、４７～５０からなる群から選択される配列を含み、
前記重鎖可変領域が、配列番号４６、５１～５６からなる群から選択される配列を含む、請求項４に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項7】

前記軽鎖可変領域が、配列番号６５及び６７～６９からなる群から選択される配列を含み、
前記重鎖可変領域が、配列番号６６及び７０～７３からなる群から選択される配列を含む、請求項４に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項8】

前記軽鎖可変領域及び前記重鎖可変領域が、配列番号５７～５８、配列番号５９～６０、配列番号６１～６２、及び配列番号６３～６４からなる群から選択されるセットのそれぞれの配列を含む、請求項４に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項9】

前記軽鎖が、配列番号７４及び７８からなる群から選択される配列を含み、前記重鎖が、配列番号７６及び８０からなる群から選択される配列を含む、請求項４に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項10】

前記軽鎖及び前記重鎖が、配列番号７４及び７６並びに配列番号７８及び８０からなる群から選択されるセットのそれぞれの配列を含む、請求項９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項11】

バリアントＦｃ定常領域を更に含む、請求項４～８のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項12】

前記抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ネズミ抗体、多重特異性抗体、又はその抗体断片である、請求項４～１１のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項13】

前記抗体又は断片が、治療剤、ポリマー、検出可能な標識、又は酵素にコンジュゲートされている、請求項４～１２のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項14】

前記抗体又は断片が、ＧＬＰ－１配列にコンジュゲートされている、請求項１３に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項15】

前記ＧＬＰ－１配列が、配列番号８２の配列又はその機能的バリアントを含む、請求項１４に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項16】

前記ＧＬＰ－１配列が、前記抗体又は前記抗原結合断片に共有結合的に又は非共有結合的にコンジュゲートされている、請求項１５に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項17】

前記ＧＬＰ－１配列が、前記重鎖又は前記軽鎖に融合されている、請求項１６に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項18】

前記ＧＬＰ－１配列が、リンカー配列を介して前記重鎖又は前記軽鎖に融合されている、請求項１７に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項19】

前記ＧＬＰ－１配列が、前記重鎖又は前記軽鎖のＮ末端に融合されている、請求項１８に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項20】

前記重鎖が、配列番号８５又は８７の配列を含み、前記軽鎖が、配列番号８６又は８９の配列を含む、請求項１９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項21】

前記軽鎖及び前記重鎖が、配列番号７８及び８７、並びに配列番号８９及び８０からなる群から選択されるセットのそれぞれの配列を含む、請求項２０に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項22】

前記抗体が、ヒトＧＩＰＲの細胞外ドメインに結合する、請求項４～２１のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項23】

請求項４～２２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合部分のＣＤＲ、重鎖軽鎖可変領域、若しくは軽鎖可変領域をコードする、単離された核酸。

【請求項24】

請求項２３に記載の核酸を含む、発現ベクター。

【請求項25】

請求項２３に記載の核酸又は請求項２４に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。

【請求項26】

抗体又はその抗原結合部分を調製する方法であって、
請求項４～２２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合部分のＣＤＲ、重鎖可変領域、若しくは軽鎖可変領域をコードする核酸配列を含むベクターを含む培養宿主細胞を得ることと、
前記ベクターによってコードされるポリペプチドの発現を可能にし、抗体又はその断片を組み立てる条件下で、前記細胞を培地中で培養することと、
前記培養された細胞又は前記細胞の前記培地から前記抗体又は断片を精製することと、を含む、方法。

【請求項27】

請求項４～２２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。

【請求項28】

代謝障害を有する対象を治療する方法であって、その治療を必要とする対象に、治療有効量の請求項４～２２のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合断片、又は治療有効量の請求項２７に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項29】

代謝障害を有する対象を治療する方法であって、（ａ）前記対象に、有効量の、請求項２３に記載の核酸、請求項２４に記載の発現ベクター、又は請求項２５に記載の細胞を投与する工程と、（ｂ）前記対象において前記核酸を発現する工程と、を含む、方法。

【請求項30】

前記代謝障害が、脂肪性肝疾患の障害である、請求項２８又は２９に記載の方法。

【請求項31】

前記脂肪性肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝疾患の障害である、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記非アルコール性脂肪性肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝炎の障害である、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記代謝障害が、グルコース代謝の障害である、請求項２８又は２９に記載の方法。

【請求項34】

前記グルコース代謝障害が、高血糖症、高インスリン血症、グルコース不耐症、インスリン抵抗性、糖尿病及び肥満症のうちの１つ以上を含む、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記対象に、第２の治療剤を投与することを更に含む、請求項１～３及び２８～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記第２の治療剤が、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）受容体アゴニストである、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、リラグルチド、エキセナチド、リキシセナチド、デュラグルチド、アルビグルチド、セマグルチド、及びタスポグルチドからなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記対象が、哺乳動物である、請求項１～３及び２８～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記哺乳動物が、ヒトである、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

前記哺乳動物が、家畜化された哺乳動物である、請求項３８に記載の方法。

【請求項41】

前記家畜化された哺乳動物が、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヤギ、ブタ、又はウサギである、請求項４０に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年６月９日に出願された米国仮出願第６３／２０８，７１７号の優先権を主張する。この出願の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は、胃抑制ペプチド受容体又はグルコース依存性インスリ分泌促進ポリペプチド受容体（ＧＩＰＲ）に特異的に結合する抗原結合タンパク質を使用して、脂肪性肝疾患などの代謝障害を有する対象を治療するための治療薬及び方法に関する。

【背景技術】

【0003】

グルコース依存性インスリ分泌促進ポリペプチド（ＧＩＰ）及びグルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）は、グルコース依存性インスリン分泌を増加させる能力から、重要なインクレチンホルモンである（Ｃａｍｐｂｅｌｌ ＪＥ ａｎｄ Ｄｒｕｃｋｅｒ ＤＪ，Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ ２０１３；１７：８１９－８３７）。それらは、グルコース及び脂質代謝、食欲、並びに体重を含む、エネルギー恒常性の重要な調節因子である（Ａｈｒｅｎ Ｂ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｏｂｅｓ Ｍｅｔａｂ ２０１１；１３ Ｓｕｐｐｌ １：１５８－１６６）。リラグルチド（ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）、エキセナチド（ｅｘｅｎａｔｉｄｅ）、デュラグルチド（ｄｕｌａｇｌｕｔｉｄｅ）、アルビグルチド（ａｌｂｉｇｌｕｔｉｄｅ）、及び最近承認されたセマグルチド（ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ）などのＧＬＰー１ベースの治療薬が、２型糖尿病及び肥満症の治療のために開発されている。ＧＩＰは、糖尿病患者におけるＧＩＰによる減衰応答のためにあまり注目されていない（Ｎａｕｃｋ ｅｔ ａｌ．ＪＣＩ １９９３，９１：３０１－３０７）。ＧＩＰベースの治療法はまだ承認されていない。

【0004】

ＧＩＰ及びＧＬＰー１は、食物摂取に応答して腸によって分泌される（Ｆａｌｋｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．１９７５，４１：２６０）。ＧＩＰは、小腸、十二指腸及び空腸の上部に位置する腸内分泌細胞であるＫ細胞によって分泌される４２アミノ酸ペプチドである（Ｄａｍｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅｓ．１９９９，２９８：２８７－９３）が、ＧＬＰー１は、小腸、空腸及び回腸の下部に位置するＬ細胞によって分泌される３１アミノ酸ペプチドである（Ｄａｍｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅｓ．１９９９，２９８：２８７－９３）。ＧＬＰ－１及びＧＩＰの両方は、ＤＰＰ－４媒介切断後分泌によって急速に不活性化される（Ｋｉｅｆｆｅｒ ＴＪ，ＭｃＩｎｔｏｓｈ ＣＨ，ａｎｄ Ｐｅｄｅｒｓｏｎ ＲＡ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １９９５，１３６：３５８５－３５９６）。ＧＩＰは、Ｇｓ結合クラスＢ ＧＰＣＲであるＧＩＰＲに結合し、一方、ＧＬＰ－１は、別の閉鎖関連Ｇｓ結合クラスＢ ＧＰＣＲであるＧＬＰ－１Ｒに結合する（Ｃｏｕｖｉｎｅａｕ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ．２０１２，１：１０３－１５．）。ＧＩＰ及びＧＬＰ－１がそれらの受容体に結合すると、それらはＧαを活性化し、ｃＡＭＰレベルの上昇をもたらす（Ｔｓｅｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．２０００，１４１（３）：９４７－５２）。

【0005】

ＧＩＰＲは、膵島、脂肪組織、心臓、下垂体、副腎皮質、及び脳の特定の領域において発現される（Ｕｓｄｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１９９３，１３３：２８６１－２８７０）。膵臓では、ＧＩＰはグルコース依存性インスリン分泌を刺激する。より最近では、ＧＩＰは、２型糖尿病患者における食後高血糖症に寄与し得るグルカゴン分泌を刺激することが示されている（Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．２０１１，３００（６）：Ｅ１０３８－４６）。脂肪組織において、ＧＩＰは、インスリンとともに脂肪酸の取り込み及び組み込みを促進する（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．ＪＢＣ ２００７，２８２：８５５７）。脳において、ＧＩＰは神経保護効果を有し得る（Ｆａｉｖｒｅ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１２，６７４：２９４－３０６）。ヒトＧＩＰＲは、４６６個のアミノ酸を含み、その遺伝子は、染色体１９ｑ１３．３に位置する（Ｇｒｅｍｌｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．１９９５，４４：１２０２－８）。

【0006】

ＧＩＰＲノックアウトマウスは、高脂肪食誘発性体重増加に耐性があり、インスリン感受性及び脂質プロファイルが改善されている。（Ｍｉｙａｗａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．２００２，８：７３８－７４２）。更に、ヒト遺伝学研究は、ＧＩＰＲをボディマスインデックス（ＢＭＩ）と関連付けている（Ｓｐｅｌｉｏｔｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ２０１０，４２：９３７、Ｏｋａｄａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ２０１２，４４：３０２、Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ２０１２，４４：３０７、Ｂｅｒｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ２０１３，４５：５０１）。

【0007】

インクレチン効果に加えて、ＧＬＰ－１はまた、食物摂取を減少させ、胃内容物排出を遅らせ、グルカゴン分泌を減少させる（Ｄｒｕｃｋｅｒ，ＤＪ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ２００３，２９（１０）：２９２９－４０）。エキセナチド、リラグルチド、デュラグルチド、アルビグルチド、及びセマグルチドなどの長期持続性ＧＬＰ－１受容体作動薬は、２型糖尿病を治療するために開発されている（Ｎａｕｃｋ ｅｔ ａｌ，Ｅｘｐ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｄｉａｂｅｔｅｓ，１９９７，１０５：１８７－９５、Ｄｈｉｌｌｏｎ Ｓ，Ｄｒｕｇｓ，２０１８，７８（２）：２７５－２８４）。加えて、ＧＬＰ－１受容体アゴニストは、患者の体重減少並びに血圧及び血漿コレステロールの低下を促進することも知られており（Ｖｉｌｓｂｏｌｌ ｅｔ ａｌ．ＢＭＪ，２０１２，３４４：ｄ７７７１）、リラグルチドは、肥満症を治療するために承認されている。

【発明の概要】

【0008】

本発明は、代謝障害を治療するための治療薬及び方法を提供する。

【0009】

一態様では、本発明は、代謝障害を有する対象を治療する方法を提供する。この方法は、治療有効量の、胃抑制ペプチド受容体のアミノ酸配列に少なくとも９０％（例えば、９５、９６、９７、９８、又は９９％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質に特異的に結合する抗原結合タンパク質を対象に投与することを含む。代謝障害の例としては、脂肪性肝疾患、例えば、非アルコール性脂肪性肝疾患の障害及び非アルコール性脂肪性肝炎の障害が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、単離された抗体又は抗原結合断片である。

【0010】

更に、本発明は、ＧＩＰＲのアミノ酸配列に少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するタンパク質に特異的に結合する抗原結合タンパク質、単離された抗体又は抗原結合断片を特徴とする。抗原結合タンパク質、抗体、又は抗原結合断片は、（ｉ）配列番号１～３、配列番号７～９、配列番号７、２、及び３、配列番号１０、２、及び３、配列番号１２～１４、配列番号１８～２０、配列番号２４～２６、配列番号３０～３２、並びに配列番号３６～３８からなる群から選択されるＬＣＤＲセットのそれぞれの配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、軽鎖若しくは軽鎖可変領域、並びに／又は（ｉｉ）配列番号４～６、配列番号４、１１、及び６、配列番号１５～１７、配列番号２１～２３、配列番号２７～２９、配列番号３３～３５、配列番号３９～４１、配列番号３９、４０、及び４２、配列番号３９、４０、及び４３、並びに配列番号３９、４０、及び４４からなる群から選択されるＨＣＤＲセットのそれぞれの配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、重鎖若しくは重鎖可変領域を含む。

【0011】

一実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号４５、４７～５０、５７、５９、６１、６３、６５、及び６７～６９からなる群から選択される配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号４６、５１～５６、５８、６０、６２、６４、６６、及び７０～７３からなる群から選択される配列を含む。

【0012】

いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号４５、４７～５０からなる群から選択される配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号４６、５１～５６からなる群から選択される配列を含む。例としては、本明細書に開示されるＤＢ００９抗体及びその変異体が挙げられる。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号６５、６７～６９からなる群から選択される配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号６６、７０～７３からなる群から選択される配列を含む。例としては、本明細書に開示されるＤＢ００４抗体及びその変異体が挙げられる。

【0013】

更なる実施形態では、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、配列番号５７～５８、配列番号５９～６０、配列番号６１～６２、及び配列番号６３～６４からなる群から選択される。セットのそれぞれの配列を含む。例としては、本明細書に開示されるＤＢ０１０、ＤＢ０１１、ＤＢ０１２、及びＤＢ０１３抗体並びにそれらの変異体が挙げられる。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号７４及び７８からなる群から選択される配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号７６及び８０からなる群から選択される配列を含む。一実施形態では、軽鎖及び重鎖は、配列番号７４及び７６、並びに配列番号７８及び８０からなる群から選択されるセットのそれぞれの配列を含む。

【0014】

上述の抗原結合タンパク質、抗体、又は抗原結合断片は、バリアントＦｃ定常領域を更に含み得る。抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ネズミ抗体、多重特異性抗体、又はそれらの抗体断片であり得る。抗原結合タンパク質、抗体又は断片は、治療剤、ポリマー、検出可能な標識、又は酵素のうちの１つ以上にコンジュゲートされ得る。

【0015】

いくつかの実施形態において、上述の抗体又は断片は、ＧＬＰ－１配列にコンジュゲートされる。一例では、ＧＬＰ－１配列は、配列番号８２の配列又はその機能的バリアントを含む。ＧＬＰ－１配列は、抗体又は抗原結合断片に共有結合的に又は非共有結合的にコンジュゲートされ得る。ＧＬＰ－１配列は、フレーム内で重鎖若しくは軽鎖、又はその両方に融合することができる。ＧＬＰ－１配列は、リンカー配列を介して重鎖又は軽鎖に融合することができる。リンカー配列の例としては、任意の好適な配列、例えば、配列番号８３及び８４が挙げられる。好ましくは、ＧＬＰ－１配列は、重鎖又は軽鎖のＮ末端に融合される。ＧＬＰ－１コンジュゲート重鎖は、配列番号８５又は８７の配列を含むことができ、ＧＬＰ－１コンジュゲート軽鎖は、配列番号８６又は８９の配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、軽鎖及び重鎖は、配列番号７８及び８７、並びに配列番号８９及び８０からなる群から選択されるセットのそれぞれの配列を含む。

【0016】

好ましくは、抗原結合タンパク質、抗体又は断片は、ヒトＧＩＰＲの細胞外ドメインに結合することができる。

【0017】

別の態様では、本発明は、抗原結合タンパク質、又は上述の抗体又は抗原結合断片のうちいずれか１つのＣＤＲ、重鎖若しくは軽鎖可変領域、又は抗原結合部分のうちの１つ以上をコードする単離された核酸又は核酸のセットを提供する。核酸（単数又は複数）は、ＨＣＤＲ又はＬＣＤＲＳのうちの１つ以上のセット、抗体若しくは抗原結合断片の鎖、又は上述の抗体若しくは断片を有するポリペプチドを発現するために使用され得る。この目的のために、核酸（単数又は複数）を好適な制御配列に作動可能に連結させて、発現ベクターを生成することができる。

【0018】

したがって、本発明の範囲内には、ベクターを含む宿主細胞、及び抗原結合タンパク質、抗体、又はその抗原結合部分を産生するための方法がある。本方法は、上述した抗原結合タンパク質、又は上述の抗体若しくはその抗原結合部分のＣＤＲ、ポリペプチド、重鎖可変領域若しくは軽鎖可変領域のうちの１つ以上をコードする核酸（単数又は複数）を含むベクターを含む培養宿主細胞を得ることと、ベクターによりコードされるポリペプチドの発現を可能にし、抗原結合タンパク質、抗体又はその断片を組み立てる条件下で、培地中で細胞を培養することと、培養された細胞又は細胞の培地から抗原結合タンパク質、抗体又は断片を精製することと、を含む。

【0019】

したがって、本発明はまた、（ｉ）抗原結合タンパク質、抗体、又はその抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む薬学的組成物を更に提供する。

【0020】

代謝障害を有する対象を治療する方法も提供される。１つの方法は、代謝障害の治療を必要とする対象に、治療有効量の抗原結合タンパク質、抗体、若しくは抗原結合断片、又は治療有効量の組成物を投与することを含む。別の方法は、（ａ）対象に有効量の核酸、発現ベクター、又は上述の細胞を投与する工程と、（ｂ）対象において核酸を発現する工程と、を含む。代謝障害の例としては、脂肪性肝疾患の障害、非アルコール性脂肪性肝疾患の障害、非アルコール性脂肪性肝炎の障害、及びグルコース代謝の障害が挙げられる。グルコース代謝障害の例としては、高血糖症、高インスリン血症、グルコース不耐症、インスリン抵抗性、糖尿病及び肥満症が挙げられる。

【0021】

上述の方法は、対象に、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）アゴニスト又はＧＬＰ－１アゴニストなどの第２の治療剤を投与することを更に含むことができる。ＧＬＰ－１アゴニストの例としては、リラグルチド、エキセナチド、リキシセナチド、デュラグルチド、アルビグルチド、セマグルチド、及びタスポグルチド（ｔａｓｐｏｇｌｕｔｉｄｅからなる群から選択される１つ以上が挙げられる。対象は、ヒト及び非ヒト哺乳動物を含む哺乳動物であり得る。非ヒト哺乳動物の例としては、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヤギ、ブタ、又はウサギなどの家畜化された哺乳動物が挙げられる。

【0022】

本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、以下の説明に記載される。本発明の他の特徴、目的、及び利点は、説明及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0023】

【図1】ヒトＧＩＰＲを発現するＣＨＯ細胞への陽性抗体の結合曲線を示すプロットである。

【図2A-2B】ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒ（登録商標）ＧＩＰＲ－ＣＲＥ－ｂｌａ ＨＥＫ ２９３Ｔ細胞系アッセイを使用した、選択された抗ＧＩＰＲ抗体のインビトロ活性を示す図である。

【図3】ＡＭＬＮ食餌誘導性マウスＮＡＳＨモデルにおける慢性研究デザインを示す図である。

【図4】抗ＧＩＰＲ抗体ＤＢ００７単独、デュラグルチド単独、又はＤＢ００７とデュラグルチドの組み合わせで処置したＡＭＬＮマウスの経時的な（日数）体重（ｇ）を示す図である。

【図5A-5B】研究終了時（６４日目）に、ビヒクル対照、抗ＧＩＰＲ抗体ＤＢ００７単独、デュラグルチド単独、又はＤＢ００７とデュラグルチドの組み合わせで処置した、通常食餌対照マウス及びＡＭＬＮマウスの肝臓重量（Ａ）及び副睾丸脂肪重量（Ｂ）を示す２つの棒グラフである。

【図6】ビヒクル対照、抗ＧＩＰＲ抗体ＤＢ００７単独、デュラグルチド単独、又はＤＢ００７とデュラグルチドの組み合わせで処置した、通常食餌対照マウス及びＡＭＬＮマウスのベースライン及び終了時の空腹時グルコースレベルを示す棒グラフの図である。

【図7A-7B】ビヒクル対照、抗ＧＩＰＲ抗体ＤＢ００７単独、デュラグルチド単独、又はＤＢ００７とデュラグルチドの組み合わせで処置した、通常食餌対照マウス及びＡＭＬＮマウスのベースライン及び終了時の血漿総コレステロールレベル（Ａ）、並びにベースライン及び終了時の血漿トリグリセリドレベル（Ｂ）を示す棒グラフの図である。

【図8A-8B】ビヒクル対照、抗ＧＩＰＲ抗体ＤＢ００７単独、デュラグルチド単独、又はＤＢ００７とデュラグルチドの組み合わせで処置した、通常食餌対照マウス及びＡＭＬＮマウスのベースライン及び終了時の血漿ＡＬＴレベル（Ａ）、並びにＡＳＴ（Ｂ）を示す棒グラフの図である。

【図9A-9B】ビヒクル対照、抗ＧＩＰＲ抗体ＤＢ００７単独、デュラグルチド単独、又はＤＢ００７とデュラグルチドの組み合わせで処置した、通常食餌対照マウス及びＡＭＬＮマウスの終了時の肝臓組織総コレステロールレベル（Ａ）及び肝臓組織トリグリセリドレベル（Ｂ）を示す棒グラフの図である。

【図10A-10B】ビヒクル対照、抗ＧＩＰＲ抗体ＤＢ００７単独、デュラグルチド単独、又はＤＢ００７とデュラグルチドの組み合わせで処置した、通常食餌対照マウス及びＡＭＬＮマウスの終了時の肝臓組織総ＨＹＰレベル（Ａ）及び肝臓組織ＨＣＹレベル（Ｂ）を示す棒グラフの図である。

【図11A-11D】ビヒクル対照、抗ＧＩＰＲ抗体ＤＢ００７単独、デュラグルチド単独、又はＤＢ００７とデュラグルチドの組み合わせで処置した、通常食餌対照マウス及びＡＭＬＮマウスのａ－ｓｍａ（Ａ）、ｃｃｌ２（Ｂ）、ｃｏｌ１ａ１（Ｃ）及びｔｇｆｂ（Ｄ）の終了時の肝臓組織ｍＲＮＡ発現レベルを示す棒グラフの図である。

【図12A-12B】ビヒクル対照、抗ＧＩＰＲ抗体ＤＢ００７単独、デュラグルチド単独、又はＤＢ００７とデュラグルチドの組み合わせで処置した、通常食餌対照マウス及びＡＭＬＮマウスの２つの典型的な肝臓組織切片のＨ＆Ｅ染色（Ａ）及びシリウス赤色染色（Ｂ）の組織学を示す顕微鏡写真であり、終了時の肝臓Ｈの組織学的データは、抗ＧＩＰＲ抗体ＤＢ００７単独、デュラグルチド単独、又はＤＢ００７とデュラグルチドの組み合わせで処置されたＡＭＬＮマウスのａ－ｓｍａ（Ａ）、ｃｃｌ２（Ｂ）及びｃｏｌ１ａ１（Ｃ）の終了時の肝臓組織ｍＲＮＡ発現レベルを示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0024】

本発明は、代謝障害、例えば、脂肪性肝疾患、グルコース代謝障害（例えば、２型糖尿病、グルコースレベルの上昇、インスリンレベルの上昇、脂質異常、代謝症候群（症候群Ｘ又はインスリン抵抗性症候群）、糖尿、代謝性アシドーシス、１型糖尿病、肥満症、及び肥満症によって悪化する状態）を、ＧＩＰの生物活性を遮断又は妨害することによって治療することに関する。本発明は、少なくとも一部には、ＧＩＰＲに特異的に結合する特定の抗原結合タンパク質の予期しない抗ＧＩＰＲ活性に基づいている。これらの抗原結合タンパク質（モノクローナル抗体又はその抗原結合断片など）は、代謝障害を治療するための新規の治療戦略を構成する。一実施形態では、代謝障害の治療を必要とする対象に、治療有効量の単離されたヒトＧＩＰＲ結合タンパク質が投与される。

【0025】

ＧＩＰＲ
ＧＩＰ受容体（ＧＩＰＲ）は、細胞外Ｎ末端、７つの膜貫通ドメイン、及び細胞内Ｃ末端を有するＧタンパク質結合受容体（ＧＰＣＲ）のセクチン－グルカゴンファミリーのメンバーである。この受容体ファミリーのＮ末端細胞外ドメインは、通常、グリコシル化され、受容体の認識及び結合ドメインを形成する。ＧＩＰＲは、膵臓、腸、脂肪組織、心臓、下垂体、副腎皮質、及び脳を含むいくつかの組織において高度に発現される（Ｕｓｄｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１９９３，１３３：２８６１－２８７０）。ヒトＧＩＰＲは、４６６個のアミノ酸を含み、染色体１９ｑ１３．３に位置する遺伝子によってコードされる（Ｇｒｅｍｌｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．１９９５；４４：１２０２－８、Ｖｏｌｚ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．１９９５，３７３：２３－２９）。研究は、選択的ｍＲＮＡスプライシング（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｍＲＮＡ ｓｐｌｉｃｉｎｇ）が、ヒト、ラット及びマウスにおいて異なる長さのＧＩＰ受容体バリアントの産生をもたらすことを示唆している。

【0026】

ＧＩＰＲポリペプチドの例としては、以下の配列が挙げられる。
ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００１５５５（配列番号９１）のヒトＧＩＰＲの４６６アミノ酸配列：
ＭＴＴＳＰＩＬＱＬＬ ＬＲＬＳＬＣＧＬＬＬ ＱＲＡＥＴＧＳＫＧＱ ＴＡＧＥＬＹＱＲＷＥ ＲＹＲＲＥＣＱＥＴＬ ＡＡＡＥＰＰＳＧＬＡ ＣＮＧＳＦＤＭＹＶＣ ＷＤＹＡＡＰＮＡＴＡ ＲＡＳＣＰＷＹＬＰＷ ＨＨＨＶＡＡＧＦＶＬ ＲＱＣＧＳＤＧＱＷＧ ＬＷＲＤＨＴＱＣＥＮ ＰＥＫＮＥＡＦＬＤＱ ＲＬＩＬＥＲＬＱＶＭ ＹＴＶＧＹＳＬＳＬＡ ＴＬＬＬＡＬＬＩＬＳ ＬＦＲＲＬＨＣＴＲＮ ＹＩＨＩＮＬＦＴＳＦ ＭＬＲＡＡＡＩＬＳＲ ＤＲＬＬＰＲＰＧＰＹ ＬＧＤＱＡＬＡＬＷＮ ＱＡＬＡＡＣＲＴＡＱ ＩＶＴＱＹＣＶＧＡＮ ＹＴＷＬＬＶＥＧＶＹ ＬＨＳＬＬＶＬＶＧＧ ＳＥＥＧＨＦＲＹＹＬ ＬＬＧＷＧＡＰＡＬＦ ＶＩＰＷＶＩＶＲＹＬ ＹＥＮＴＱＣＷＥＲＮ ＥＶＫＡＩＷＷＩＩＲ ＴＰＩＬＭＴＩＬＩＮ ＦＬＩＦＩＲＩＬＧＩ ＬＬＳＫＬＲＴＲＱＭ ＲＣＲＤＹＲＬＲＬＡ ＲＳＴＬＴＬＶＰＬＬ ＧＶＨＥＶＶＦＡＰＶ ＴＥＥＱＡＲＧＡＬＲ ＦＡＫＬＧＦＥＩＦＬ ＳＳＦＱＧＦＬＶＳＶ ＬＹＣＦＩＮＫＥＶＱ ＳＥＩＲＲＧＷＨＨＣ ＲＬＲＲＳＬＧＥＥＱ ＲＱＬＰＥＲＡＦＲＡ ＬＰＳＧＳＧＰＧＥＶ ＰＴＳＲＧＬＳＳＧＴ ＬＰＧＰＧＮＥＡＳＲ ＥＬＥＳＹＣ
ヒトＧＩＰＲ（アイソフォームＸ１）ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿００５２５８７９０（配列番号９２）の４３０アミノ酸アイソフォーム：
ＭＴＴＳＰＩＬＱＬＬ ＬＲＬＳＬＣＧＬＬＬ ＱＲＡＥＴＧＳＫＧＱ ＴＡＧＥＬＹＱＲＷＥ ＲＹＲＲＥＣＱＥＴＬ ＡＡＡＥＰＰＳＶＡＡ ＧＦＶＬＲＱＣＧＳＤ ＧＱＷＧＬＷＲＤＨＴ ＱＣＥＮＰＥＫＮＥＡ ＦＬＤＱＲＬＩＬＥＲ ＬＱＶＭＹＴＶＧＹＳ ＬＳＬＡＴＬＬＬＡＬ ＬＩＬＳＬＦＲＲＬＨ ＣＴＲＮＹＩＨＩＮＬ ＦＴＳＦＭＬＲＡＡＡ ＩＬＳＲＤＲＬＬＰＲ ＰＧＰＹＬＧＤＱＡＬ ＡＬＷＮＱＡＬＡＡＣ ＲＴＡＱＩＶＴＱＹＣ ＶＧＡＮＹＴＷＬＬＶ ＥＧＶＹＬＨＳＬＬＶ ＬＶＧＧＳＥＥＧＨＦ ＲＹＹＬＬＬＧＷＧＡ ＰＡＬＦＶＩＰＷＶＩ ＶＲＹＬＹＥＮＴＱＣ ＷＥＲＮＥＶＫＡＩＷ ＷＩＩＲＴＰＩＬＭＴ ＩＬＩＮＦＬＩＦＩＲ ＩＬＧＩＬＬＳＫＬＲ ＴＲＱＭＲＣＲＤＹＲ ＬＲＬＡＲＳＴＬＴＬ ＶＰＬＬＧＶＨＥＶＶ ＦＡＰＶＴＥＥＱＡＲ ＧＡＬＲＦＡＫＬＧＦ ＥＩＦＬＳＳＦＱＧＦ ＬＶＳＶＬＹＣＦＩＮ ＫＥＶＱＳＥＩＲＲＧ ＷＨＨＣＲＬＲＲＳＬ ＧＥＥＱＲＱＬＰＥＲ ＡＦＲＡＬＰＳＧＳＧ ＰＧＥＶＰＴＳＲＧＬ ＳＳＧＴＬＰＧＰＧＮ ＥＡＳＲＥＬＥＳＹＣ
選択的スプライシングによって産生されるヒトＧＩＰＲの４９３アミノ酸アイソフォームは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ配列識別子Ｐ４８５４６－２（配列番号９３）の配列を有する。
ＡＡＡＥＰＰＳＧＬＡ ＣＮＧＳＦＤＭＹＶＣ ＷＤＹＡＡＰＮＡＴＡ ＲＡＳＣＰＷＹＬＰＷ ＨＨＨＶＡＡＧＦＶＬ ＲＱＣＧＳＤＧＱＷＧ ＬＷＲＤＨＴＱＣＥＮ ＰＥＫＮＥＡＦＬＤＱ ＲＬＩＬＥＲＬＱＶＭ ＹＴＶＧＹＳＬＳＬＡ ＴＬＬＬＡＬＬＩＬＳ ＬＦＲＲＬＨＣＴＲＮ ＹＩＨＩＮＬＦＴＳＦ ＭＬＲＡＡＡＩＬＳＲ ＤＲＬＬＰＲＰＧＰＹ ＬＧＤＱＡＬＡＬＷＮ ＱＡＬＡＡＣＲＴＡＱ ＩＶＴＱＹＣＶＧＡＮ ＹＴＷＬＬＶＥＧＶＹ ＬＨＳＬＬＶＬＶＧＧ ＳＥＥＧＨＦＲＹＹＬ ＬＬＧＷＧＡＰＡＬＦ ＶＩＰＷＶＩＶＲＹＬ ＹＥＮＴＱＣＷＥＲＮ ＥＶＫＡＩＷＷＩＩＲ ＴＰＩＬＭＴＩＬＩＮ ＦＬＩＦＩＲＩＬＧＩ ＬＬＳＫＬＲＴＲＱＭ ＲＣＲＤＹＲＬＲＬＡ ＲＳＴＬＴＬＶＰＬＬ ＧＶＨＥＶＶＦＡＰＶ ＴＥＥＱＡＲＧＡＬＲ ＦＡＫＬＧＦＥＩＦＬ ＳＳＦＱＧＦＬＶＳＶ ＬＹＣＦＩＮＫＥＶＧ ＲＤＰＡＡＡＰＡＬＷ ＲＲＲＧＴＡＰＰＬＳ ＡＩＶＳＱＶＱＳＥＩ ＲＲＧＷＨＨＣＲＬＲ ＲＳＬＧＥＥＱＲＱＬ ＰＥＲＡＦＲＡＬＰＳ ＧＳＧＰＧＥＶＰＴＳ ＲＧＬＳＳＧＴＬＰＧ ＰＧＮＥＡＳＲＥＬＥ ＳＹＣ
ネズミＧＩＰＲの４６０アミノ酸配列（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１０７４２８４；ｕｎｉｐｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ｑ０Ｐ５４３－１）（配列番号９４）：
ＭＰＬＲＬＬＬＬＬＬ ＷＬＷＧＬＱＷＡＥＴ ＤＳＥＧＱＴＴＴＧＥ ＬＹＱＲＷＥＨＹＧＱ ＥＣＱＫＭＬＥＴＴＥ ＰＰＳＧＬＡＣＮＧＳ ＦＤＭＹＡＣＷＮＹＴ ＡＡＮＴＴＡＲＶＳＣ ＰＷＹＬＰＷＦＲＱＶ ＳＡＧＦＶＦＲＱＣＧ ＳＤＧＱＷＧＳＷＲＤ ＨＴＱＣＥＮＰＥＫＮ ＧＡＦＱＤＱＴＬＩＬ ＥＲＬＱＩＭＹＴＶＧ ＹＳＬＳＬＴＴＬＬＬ ＡＬＬＩＬＳＬＦＲＲ ＬＨＣＴＲＮＹＩＨＭ ＮＬＦＴＳＦＭＬＲＡ ＡＡＩＬＴＲＤＱＬＬ ＰＰＬＧＰＹＴＧＤＱ ＡＰＴＰＷＮＱＡＬＡ ＡＣＲＴＡＱＩＭＴＱ ＹＣＶＧＡＮＹＴＷＬ ＬＶＥＧＶＹＬＨＨＬ ＬＶＩＶＧＲＳＥＫＧ ＨＦＲＣＹＬＬＬＧＷ ＧＡＰＡＬＦＶＩＰＷ ＶＩＶＲＹＬＲＥＮＴ ＱＣＷＥＲＮＥＶＫＡ ＩＷＷＩＩＲＴＰＩＬ ＩＴＩＬＩＮＦＬＩＦ ＩＲＩＬＧＩＬＶＳＫ ＬＲＴＲＱＭＲＣＰＤ ＹＲＬＲＬＡＲＳＴＬ ＴＬＶＰＬＬＧＶＨＥ ＶＶＦＡＰＶＴＥＥＱ ＶＥＧＳＬＲＦＡＫＬ ＡＦＥＩＦＬＳＳＦＱ ＧＦＬＶＳＶＬＹＣＦＩＮＫＥＶＱＳＥＩＲＱ ＧＷＲＨＲＲＬＲＬＳ ＬＱＥＱＲＰＲＰＨＱ ＥＬＡＰＲＡＶＰＬＳ ＳＡＣＲＥＡＡＶＧＮ ＡＬＰＳＧＭＬＨＶＰ ＧＤＥＶＬＥＳＹＣ
選択的スプライシングによって産生されるネズミＧＩＰＲの２３０アミノ酸アイソフォーム、ＮＣＢＩ参照配列：ＡＡＩ２０６７４（配列番号９５）：
ＭＰＬＲＬＬＬＬＬＬ ＷＬＷＧＬＱＷＡＥＴ ＤＳＥＧＱＴＴＴＧＥ ＬＹＱＲＷＥＨＹＧＱ ＥＣＱＫＭＬＥＴＴＥ ＰＰＳＧＬＡＣＮＧＳ ＦＤＭＹＡＣＷＮＹＴ ＡＡＮＴＴＡＲＶＳＣ ＰＷＹＬＰＷＦＲＱＶ ＳＡＧＦＶＦＲＱＣＧ ＳＤＧＱＷＧＳＷＲＤ ＨＴＱＣＥＮＰＥＫＮ ＧＡＦＱＤＱＴＬＩＬ ＥＲＬＱＩＭＹＴＶＧ ＹＳＬＳＬＴＴＬＬＬ ＡＬＬＩＬＳＬＦＲＲ ＬＨＣＴＲＮＹＩＨＭ ＮＬＦＴＳＦＭＬＲＡ ＡＡＩＬＴＲＤＱＬＬ ＰＰＬＧＰＹＴＧＤＱ ＡＰＴＰＷＮＱＶＬＨ ＲＬＬＰＧＧＴＫＴＦ ＰＩＹＦＲＴＦＰＨＨ
ヒトＧＩＰＲ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（配列番号９６）の１２９アミノ酸配列：
ＭＴＴＳＰＩＬＱＬＬ ＬＲＬＳＬＣＧＬＬＬ ＱＲＡＥＴＧＳＫＧＱ ＴＡＧＥＬＹＱＲＷＥ ＲＹＲＲＥＣＱＥＴＬ ＡＡＡＥＰＰＳＧＬＡ ＣＮＧＳＦＤＭＹＶＣ ＷＤＹＡＡＰＮＡＴＡ ＲＡＳＣＰＷＹＬＰＷ ＨＨＨＶＡＡＧＦＶＬ ＲＱＣＧＳＤＧＱＷＧ ＬＷＲＤＨＴＱＣＥＮ ＰＥＫＮＥＡＦ

【0027】

本明細書で使用される場合、「ＧＩＰＲポリペプチド」及び「ＧＩＰＲタンパク質」という用語は、互換的に使用され、ヒト又はマウスなどの哺乳動物で発現される天然に存在する野生型ポリペプチドを意味し、天然に存在する対立遺伝子（例えば、ヒトＧＩＰＲタンパク質の天然に存在する対立遺伝子型）を含む。本開示の目的のために、「ＧＩＰＲポリペプチド」という用語は、任意の完全長ＧＩＰＲポリペプチド、例えば、配列番号９１～９６を指すために互換的に使用することができる。

【0028】

「ＧＩＰＲポリペプチド」という用語は、天然に存在するＧＩＰＲポリペプチド配列（例えば、配列番号９１～９６）が修飾されているＧＩＰＲポリペプチドも包含する。そのような修飾には、非天然アミノ酸非天然アミノ酸類似体及びアミノ酸模倣物による置換を含む、１つ以上のアミノ酸置換が挙げられるが、これらに限定されない。

【0029】

様々な実施形態では、ＧＩＰＲポリペプチドは、天然に存在するＧＩＰＲポリペプチド（例えば、配列番号９１～９６）と少なくとも約８５％同一であるアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、ＧＩＰＲポリペプチドは、天然に存在するＧＩＰＲポリペプチドアミノ酸配列（例えば、配列番号９１～９６）と少なくとも約９０％、又は約９５、９６、９７、９８、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む。そのようなＧＩＰＲポリペプチドは、好ましくは、ＧＩＰに結合する能力などの野生型ＧＩＰＲポリペプチドの少なくとも１つの活性を有するが、その必要はない。本発明は、そのようなＧＩＰＲポリペプチド配列をコードする核酸分子も包含する。

【0030】

抗原結合タンパク質
本発明の一態様は、ＧＩＰＲ結合タンパク質に関する。本明細書で使用される「抗原結合タンパク質」は、ＧＩＰＲポリペプチド（例えば、上記で提供されるようなヒトＧＩＰＲポリペプチド）などの特定の標的抗原に特異的に結合する任意のタンパク質を意味する。抗原結合タンパク質という用語は、少なくとも２つの完全長重鎖及び２つの完全長軽鎖、並びにそれらの誘導体、バリアント、断片、及び突然変異を含むインタクトな抗体を包含する。

【0031】

抗原結合タンパク質の例としては、抗体又は抗体由来のタンパク質が挙げられる。抗原結合タンパク質の例としては、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ナノボディなどのドメイン抗体、合成抗体（本明細書では「抗体模倣物」と称されることもある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合物、及びそれぞれ、各々の部分又は断片が挙げられるが、これらに限定されない。場合によっては、抗原結合タンパク質は、完全抗体の免疫学的断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片）である。他の場合では、抗原結合タンパク質は、本発明の抗体からのＣＤＲを使用するｓｃＦｖである。

【0032】

一般に、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質は、抗原結合タンパク質が非ＧＩＰＲ分子に本質的にバックグラウンド結合を示すときに、その標的抗原ＧＩＰＲに「特異的に結合する」と言われる。しかしながら、ＧＩＰＲに特異的に結合する抗原結合タンパク質は、異なる種由来のＧＩＰＲポリペプチドと交差反応し得る。典型的には、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質は、解離定数（ＫＤ）が、表面プラズモン共鳴技術（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ、ＧＥ－ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）又は結合平衡除外法（ＫＩＮＥＴＩＣ ＥＸＣＬＵＳＩＯＮ ＡＳＳＡＹ）（ＫＩＮＥＸＡ，Ｓａｐｉｄｙｎｅ、Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄ．）によって測定されるとき、≦１０^－７Ｍである場合に、ヒトＧＩＰＲに特異的に結合する。記載の方法を用いて測定したとき、ＫＤが≦５×１０^－９Ｍである場合、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質は「高い親和性」でヒトＧＩＰＲに特異的に結合し、ＫＤが≦５×１０^－１０である場合、「非常に高い親和性」でヒトＧＩＰＲに特異的に結合する。

【0033】

「抗原結合領域」とは、特定の抗原に特異的に結合するタンパク質、又はタンパク質の一部を意味する。例えば、抗原と相互作用し、抗原結合タンパク質に抗原に対するその特異性及び親和性を付与するアミノ酸残基を含む抗原結合タンパク質の部分は、「抗原結合領域」と称される。抗原結合領域は、典型的には、免疫グロブリン、一本鎖免疫グロブリン、又はラクダ科抗体の１つ以上の「相補的結合領域」（「ＣＤＲ」）を含む。ある特定の抗原結合領域はまた、１つ以上の「フレームワーク」領域を含む。「ＣＤＲ」は、抗原結合特異性及び親和性に寄与するアミノ酸配列である。「フレームワーク」領域は、ＣＤＲの適切な立体配置（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を維持して、抗原結合領域と抗原との間の結合を促進するのを助けることができる。

【0034】

提供される抗原結合タンパク質は、アンタゴニストであり、典型的には、以下の特徴のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又は８つ全てを有する：

【0035】

（ａ）ＧＩＰのＧＩＰＲへの結合を防止又は低減する能力であって、そのレベルが、例えば、放射性又は蛍光標識リガンド結合研究などの方法によって、又は本明細書に記載の方法（例えば、ｃＡＭＰアッセイ若しくは他の機能的アッセイ）によって測定することができる、能力。この減少は、同等の条件下で、配列番号９１～９６の前処理レベルと比較して、少なくとも１０、２５、５０、１００％以上であり得る。
（ｂ）血糖を低下させる能力、
（ｃ）耐糖能を増加させる能力、
（ｄ）インスリン感受性を増加させる能力、
（ｅ）体重を減少させるか、又は体重増加を減少させる能力、
（ｆ）脂肪質量を減少させるか、又は脂肪組織中の炎症を減少させる能力、
（ｇ）空腹時インスリンレベルを低下させる能力、
（ｈ）循環コレステロールレベルを低下させる能力、
（ｉ）循環トリグリセリドレベルを低下させる能力、
（ｊ）肝臓脂肪症を減少させるか、又は肝臓におけるトリグリセリドレベルを減少させる能力、並びに
（ｋ）ＡＳＴ、ＡＬＴ、及び／又はＡＬＰレベルを低下させる能力。

【0036】

一実施形態では、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質は、以下の活性のうちの１つ以上を有する：（ａ）ＫＤが≦２００ｎＭであるか、又は≦１５０ｎＭであるか、又は≦１００ｎＭであるか、又は≦５０ｎＭであるか、又は≦１０ｎＭであるか、又は≦５ｎＭであるか、又は≦２ｎＭであるか、又は≦１ｎＭであるように、例えば、表面プラズモン共鳴又は結合平衡除外法技術によって測定されるように、ヒトＧＩＰＲに結合すること、及び（ｂ）少なくとも３日間のヒト血清中での半減期を有すること。

【0037】

抗体
本明細書に開示される本発明は、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関与する。抗体は、代謝障害を有する対象を予防的及び治療的に処置することができる。

【0038】

以下の表に列挙されるのは、いくつかの例示的な抗体及びそれらのバリアント、並びにそれらのそれぞれのクローン名、重鎖（ＨＣ）、及び軽鎖（ＬＣ）のＩＤ番号（「ＤＢ＃」）である。例えば、抗体ＤＢ００４は、ＤＢ００４＿ＶＨのＨＣ及びＤＢ００４＿ＶＫのＬＣを有する。同様に、抗体ＤＢ０２１（クローン名ＤＢ００４．８）は、それぞれ、そのＨＣ及びＬＣとしてＤＢ００４＿ＶＨ６及びＤＢ００４＿ＶＫ２を有する。同様に、抗体ＤＢ０３９（クローン名ｈＤＢ００９．１４）は、ＤＢ００９．ｈＶＨ７及びＤＢ００９．ｈＶＫ４をそのＨＣ及びＬＣとしてそれぞれ有するヒト化抗体である。

【0039】

上記の例示的な抗体、重鎖、及び軽鎖のＬＣ又はＨＣ ＣＤＲ１～３の配列を以下に列挙する。

【0040】

いくつかの例示的な抗体の軽鎖（ＬＣ）可変領域及び重鎖（ＨＣ）可変領域のアミノ酸配列を以下に列挙する。

【0041】

以下に、ＤＢ００４ヒトＩｇＧ４／カッパＶＨ６／ＶＫ２バリアントを有する、ＤＢ００４－ＶＨ６／ＶＫ２（ＤＢ０２１）の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）のアミノ酸配列を列挙する。また、対応する核酸配列も列挙される。
ＬＣ：
ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣＡＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＧＦＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＦＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＡＴＤＦＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＴＴＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号７４）
ＡＴＧＡＧＣＧＴＧＣＣＣＡＣＣＣＡＧＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＣＣＡＧＡＴＧＣＧＣＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＣＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＣＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＴＡＣＡＣＣＡＣＣＣＣＣＣＴＧＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＡＧＡＡＣＣＧＴＧＧＣＣＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＴＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＧＡ（配列番号７５）
ＨＣ：
ＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳＱＭＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＳＦＳＧＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＶＩＰＩＦＧＩＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＬＩＶＡＤＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号７６）
ＡＴＧＧＡＧＴＧＧＡＧＣＴＧＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＴＴＣＣＴＧＡＧＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＧＣＣＡＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＡＧＣＧＧＣＴＡＣＧＣＣＡＴＣＡＧＣＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＧＧＣＧＴＧＡＴＣＣＣＣＡＴＣＴＴＣＧＧＣＡＴＣＧＣＣＡＡＣＴＡＣＧＣＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＧＣＣＧＡＣＧＡＧＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧＡＡＣＣＣＴＧＡＴＣＧＴＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＣＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＣＣＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＴＣＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＡＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号７７）

【0042】

以下に、ＤＢ００９ヒトＩｇＧ４／カッパＶＨ７／ＶＫ８バリアントを有する、ＤＢ００９－ＶＨ７／ＶＫ８（ＤＢ０４５）の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）のアミノ酸配列を列挙する。また、対応する核酸配列も列挙される。
ＬＣ：
ＭＡＷＡＬＬＬＬＴＬＬＴＱＧＴＧＳＷＡＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹＳＩＳＮＬＡＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＬＱＲＳＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号７８）
ＡＴＧＧＣＴＴＧＧＧＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＡＧＧＣＡＣＡＧＧＣＴＣＴＴＧＧＧＣＴＧＡＴＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＣＡＣＡＣＴＧＴＣＴＴＴＧＡＧＣＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＴＡＣＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＡＧＡＣＴＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＡＴＣＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＡＴＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＧＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＣＧＧＴＣＣＡＣＣＴＡＴＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＣＧＧＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＣＡＡＣＴＣＣＣＡＡＧＡＧＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＴＣＴＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＧＴＧＴ（配列番号７９）
ＨＣ：
ＭＡＷＡＬＬＬＬＴＬＬＴＱＧＴＧＳＷＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＳＦＴＧＹＮＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＮＩＤＰＹＹＧＶＴＤＹＮＬＫＦＫＧＫＡＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＬＬＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号８０）
ＡＴＧＧＣＴＴＧＧＧＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＡＧＧＣＡＣＡＧＧＣＴＣＴＴＧＧＧＣＴＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＴＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＴＣＴＣＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＡＣＡＴＣＧＡＣＣＣＴＴＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＧＣＣＧＡＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＴＣＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴＧＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＴＴＧＣＴＣＣＡＧＡＴＣＴＡＣＣＴＣＣＧＡＧＴＣＴＡＣＣＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＴＣＣＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＴＣＣＴＣＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＴＡＡＴＧＴＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＴＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＧＣＧＴＧＧＡＡＴＣＴＡＡＧＴＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＧＣＧＧＣＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＴＣＴＧＴＴＣＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＴＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＣＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＡＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＴＴＣＣＡＧＣＡＴＣＧＡＡＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＡＡＧＡＧＧＡＡＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＴＣＴＣＧＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＡＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＴＣＣＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＧＴＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＧＡ（配列番号８１）

【0043】

ＧＬＰ－１は、本明細書に記載の抗体にコンジュゲートすることができる。以下に、使用されるＧＬＰ－１配列のアミノ酸配列、使用される２つのリンカー、及びＤＢ０４５の可変ドメインにコンジュゲートされたＧＬＰ－１の２つの例を列挙する。

【0044】

以下に、ＤＢ００９ヒトＩｇＧ４／カッパＶＨ７／ＶＫ８バリアントを有する、ＧＬＰ１－ＤＢ００９－ＶＨ７／ＶＫ８（ＤＢ０５０）の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）のアミノ酸配列を列挙し、ここで、ＧＬＰ１は、ＨＣにコンジュゲートされている。また、対応する核酸配列も列挙される。
ＬＣ：
ＭＡＷＡＬＬＬＬＴＬＬＴＱＧＴＧＳＷＡＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹＳＩＳＮＬＡＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＬＱＲＳＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号７８）
ＡＴＧＧＣＴＴＧＧＧＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＡＧＧＣＡＣＡＧＧＣＴＣＴＴＧＧＧＣＴＧＡＴＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＣＡＣＡＣＴＧＴＣＴＴＴＧＡＧＣＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＴＡＣＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＡＧＡＣＴＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＡＴＣＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＡＴＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＧＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＣＧＧＴＣＣＡＣＣＴＡＴＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＣＧＧＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＣＡＡＣＴＣＣＣＡＡＧＡＧＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＴＣＴＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＧＴＧＴ（配列番号７９）
ＨＣ：
ＭＡＷＡＬＬＬＬＴＬＬＴＱＧＴＧＳＷＡＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＳＦＴＧＹＮＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＮＩＤＰＹＹＧＶＴＤＹＮＬＫＦＫＧＫＡＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＬＬＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号８７）
ＡＴＧＧＣＴＴＧＧＧＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＡＧＧＣＡＣＡＧＧＣＴＣＴＴＧＧＧＣＴＣＡＴＧＧＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＴＣＣＧＡＣＧＴＧＴＣＣＴＣＣＴＡＣＣＴＧＧＡＡＧＡＡＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＡＴＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＴＣＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＣＴＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＴＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＴＣＴＣＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＡＣＡＴＣＧＡＣＣＣＴＴＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＧＣＣＧＡＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＴＣＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴＧＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＴＴＧＣＴＣＣＡＧＡＴＣＴＡＣＣＴＣＣＧＡＧＴＣＴＡＣＣＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＴＣＣＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＴＣＣＴＣＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＴＡＡＴＧＴＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＴＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＧＣＧＴＧＧＡＡＴＣＴＡＡＧＴＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＧＣＧＧＣＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＴＣＴＧＴＴＣＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＴＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＣＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＡＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＴＴＣＣＡＧＣＡＴＣＧＡＡＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＡＡＧＡＧＧＡＡＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＴＣＴＣＧＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＡＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＴＣＣＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＧＴＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＧＡ（配列番号８８）

【0045】

以下に、ＤＢ００９ヒトＩｇＧ４／カッパＶＨ７／ＶＫ８バリアントを有する、ＤＢ００９－ＶＨ７／ＧＬＰ１－ＶＫ８（ＤＢ０５１）の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）のアミノ酸配列であり、ここで、ＧＬＰ１は、ＬＣにコンジュゲートされている。また、対応する核酸配列も列挙される。
ＬＣ：
ＭＡＷＡＬＬＬＬＴＬＬＴＱＧＴＧＳＷＡＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹＳＩＳＮＬＡＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＬＱＲＳＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号８９）
ＡＴＧＧＣＴＴＧＧＧＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＡＧＧＣＡＣＡＧＧＣＴＣＴＴＧＧＧＣＴＣＡＴＧＧＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＴＣＣＧＡＣＧＴＧＴＣＣＴＣＣＴＡＣＣＴＧＧＡＡＧＡＡＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＡＴＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＡＴＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＣＡＣＡＣＴＧＴＣＴＴＴＧＡＧＣＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＴＡＣＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＡＧＡＣＴＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＡＴＣＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＡＴＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＧＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＣＧＧＴＣＣＡＣＣＴＡＴＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＣＧＧＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＣＡＡＣＴＣＣＣＡＡＧＡＧＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＴＣＴＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＧＴＧＴ（配列番号９０）
ＨＣ：
ＭＡＷＡＬＬＬＬＴＬＬＴＱＧＴＧＳＷＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＳＦＴＧＹＮＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＮＩＤＰＹＹＧＶＴＤＹＮＬＫＦＫＧＫＡＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＬＬＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号８０）
ＡＴＧＧＣＴＴＧＧＧＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＡＧＧＣＡＣＡＧＧＣＴＣＴＴＧＧＧＣＴＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＴＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＴＣＴＣＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＡＣＡＴＣＧＡＣＣＣＴＴＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＧＣＣＧＡＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＴＣＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴＧＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＴＴＧＣＴＣＣＡＧＡＴＣＴＡＣＣＴＣＣＧＡＧＴＣＴＡＣＣＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＴＣＣＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＴＣＣＴＣＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＴＡＡＴＧＴＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＴＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＧＣＧＴＧＧＡＡＴＣＴＡＡＧＴＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＧＣＧＧＣＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＴＣＴＧＴＴＣＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＴＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＣＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＡＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＴＴＣＣＡＧＣＡＴＣＧＡＡＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＡＡＧＡＧＧＡＡＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＴＣＴＣＧＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＡＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＴＣＣＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＧＴＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＧＡ（配列番号８１）

【0046】

断片
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、及び一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、並びに以下に記載される他の断片、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、及び単一ドメイン抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい：また、ＷＯ９３／１６１８５、並びに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。

【0047】

ダイアボディは、二価又は二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディもまた、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。

【0048】

単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部若しくは一部、又は軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む抗体断片である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（ＤＯＭＡＮＴＩＳ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ．；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい）。

【0049】

抗体断片は、本明細書に記載されるように、インタクト抗体のタンパク質分解消化、並びに組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ又はファージ）による産生を含むが、これらに限定されない、様々な技法によって作製され得る。

【0050】

キメラ及びヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４）を参照されたい）。一実施例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）と、ヒト定常領域と、を含む。別の実施例では、キメラ抗体は、ヒト可変領域と、非ヒト定常領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサルなどの非ヒト霊長類に由来する定常領域）と、を含む。更なる実施例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のクラス又はサブクラスから変更された「クラススイッチした」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。

【0051】

ある特定の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するようにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ、（又はその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト定常領域の少なくとも一部分も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を修復又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換される。

【0052】

ヒト化抗体及びそれらの作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）で概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフト化を記載する）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（「リサーフェシング」を記載する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載する）；並びにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングへの「誘導選択」アプローチを記載する）に更に記載されている。

【0053】

ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域として、限定されないが、「最良適合」法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞変異した）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９ー１６３３（２００８）を参照されたい）、並びにスクリーニングＦＲライブラリーに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照されたい）。

【0054】

ヒト抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野において既知の様々な技術を使用して、又は本明細書に記載されるか若しくは当該技術分野において既知（ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０（４５０）：４５９－２００８）におけるような）技術を使用して産生することができる。

【0055】

ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製されてもよい。そのような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換える、又は染色体外に存在する、若しくは動物の染色体内にランダムに組み込まれる、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含有する。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、ゼノマウス（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨＵＭＡＢ技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ－Ｍマウス技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号、並びにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ技術を記載する米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい）。そのような動物によって生成されたインタクトな抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、更に修飾され得る。

【0056】

ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、ＫｏｚｂｏｒＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，５１－（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体は、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）を参照されたい。追加の方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載）に記載されている方法が挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）にも記載されている。

【0057】

ヒト抗体はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成され得る。そのような可変ドメイン配列は、次いで、所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。

【0058】

本発明の抗体は、所望の活性を有する抗体について組み合わせライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野において知られている。そのような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００１）で概説されており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）、並びにＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）に更に記載されている。

【0059】

ある特定のファージディスプレイ方法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリー内でランダムに組換えられ、次いで、これは、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは、典型的には、ｓｃＦｖ断片又はＦａｂ断片のいずれかとして、抗体断片を表示する。免疫化源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築することを必要とすることなく、免疫原に高親和性抗体を提供する。あるいは、ナイーブレパートリーを（例えば、ヒトから）クローニングして、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ，Ｊ，１２：７２５－７３４（１９９３）に記載されるように、いかなる免疫化もなしに広範囲の非自己抗原及びまた自己抗原に対する抗体の単一供給源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８（１９９２）に記載されるように、ナイーブライブラリーは、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度に可変なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を達成することによって、合成的に作製され得る。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許公開としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、並びに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号に記載されている。ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書ではヒト抗体又はヒト抗体断片とみなされる。

【0060】

変異型
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することによって、又はペプチド合成によって調製され得る。そのような修飾としては、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基の挿入及び／若しくは置換が挙げられる。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせは、最終構築物が所望の特徴、例えば、抗原結合を有することを条件として、最終構築物に達するように作製され得る。

【0061】

置換、挿入、及び欠失変異型
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異型が提供される。置換突然変異誘発の目的の部位としては、ＨＶＲ及びＦＲが挙げられる。保存的置換は、本明細書で定義される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入される可能性があり、生成物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下、又はＡＤＣＣ若しくはＣＤＣの改善についてスクリーニングされる。

【0062】

したがって、本発明の抗体は、本明細書に記載されるＣＤＲ、重鎖可変領域、又は軽可変領域のうちの１つ以上の保存的修飾を含むことができる。本発明で開示されるペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質の保存的修飾又は機能的等価物は、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質のポリペプチド誘導体、例えば、１つ以上の点変異、挿入、欠失、切断（ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎｓ）、融合タンパク質、又はそれらの組み合わせを有するタンパク質を指す。親ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質（本発明で開示されるものなど）に対する活性を実質的に保持する。一般に、保存的修飾又は機能的等価物は、親（例えば、上述のアミノ酸配列のうちの１つ）と少なくとも６０％（例えば、６０％～１００％の任意の数（両端を含む）、例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、及び９９％）同一である。したがって、本発明の範囲内には、１つ以上の点変異、挿入、欠失、切断、融合タンパク質、又はそれらの組み合わせを有する重鎖可変領域又は軽可変領域、並びに変異型領域を有する抗体がある。

【0063】

本明細書で使用される場合、２つのアミノ酸配列間の相同性パーセントは、２つの配列間の同一性パーセントに等しい。２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップの数、及び２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要がある各ギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一の位置の数（すなわち、相同性％＝同一の位置の数／位置の総数×１００）の関数である。配列の比較及び２つの配列間の同一性パーセントの決定は、以下の非限定的な実施例に記載されるように、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。

【0064】

２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１－１７（１９８８））のアルゴリズムを使用して決定することができる。加えて、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、及び１６、１４、１２、１０、８、６、又は４のギャップ重み、並びに１、２、３、４、５、又は６の長さ重みを使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能である）のギャッププログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４－４５３（１９７０））アルゴリズムを使用して決定することができる。

【0065】

追加的又は代替的に、本発明のタンパク質配列は、例えば、関連する配列を識別するために、公開データベースに対する検索を実行するための「問い合わせ（ｑｕｅｒｙ）配列」として更に使用することができる。そのような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で実施して、本発明の抗体分子に相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のためのギャップアラインメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴをＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２に記載されているように利用することができる。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータ（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）を使用することができる。（ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい）。

【0066】

本明細書で使用される場合、「保存的修飾」という用語は、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に有意に影響を与えないか、又は変化しないアミノ酸修飾を指す。そのような保存的修飾には、アミノ酸置換、付加、及び欠失が含まれる。修飾は、部位特異的変異誘発及びＰＣＲ媒介性変異誘発などの当該技術分野において既知の標準的な技法により、本発明の抗体に導入され得る。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられたものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーには、
塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、
酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、
非荷電の極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、
非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、
ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び
芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。

【0067】

非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。

【0068】

例示的な置換変異型は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，（２００１）を参照されたい。アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端融合及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異型としては、抗体の血清半減期を増加させる別のタンパク質（例えば、酵素）又はポリペプチドへの抗体のＮ末端又はＣ末端への融合が挙げられる。

【0069】

グリコシル化変異型
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加又は減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製又は除去されるようにアミノ酸配列を変更することによって、好都合に達成され得る。

【0070】

例えば、非グリコシル化抗体（すなわち、抗体がグリコシル化を欠く）を作製することができる。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させるように変更することができる。そのような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部位を変更することによって達成され得る。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークのグリコシル化部位の排除をもたらし、それによってその部位でのグリコシル化を排除する１つ以上のアミノ酸置換を作製することができる。そのような非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加させ得る。そのようなアプローチは、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０号及び同第６，３５０，８６１号に更に詳細に記載されている。例えば、Ｎ２９７上の定常領域のグリコシル化は、Ｎ２９７残基を別の残基、例えば、Ｎ２９７Ａに変異させることによって、及び／又は隣接するアミノ酸、例えば、２９８を変異させて、Ｎ２９７上のグリコシル化を低減することによって、防止してもよい。

【0071】

追加的又は代替的に、フコシル残基の量が減少した低フコシル化抗体、又はバイセクト（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ）ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体などの、変更されたタイプのグリコシル化を有する抗体を作製することができる。そのような変化したグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが実証されている。そのような炭水化物修飾は、例えば、改変されたグリコシル化機構を有する宿主細胞において抗体を発現させることによって達成され得る。変更されたグリコシル化機構を有する細胞は、当該技術分野に記載されており、本明細書に記載される組換え抗体を発現し、それによって変更されたグリコシル化を有する抗体を産生する宿主細胞として使用され得る。例えば、ＨａｎａｉらによるＥＰ１，１７６，１９５は、フコシルトランスフェラーゼをコードする機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株を記載しており、そのような細胞株で発現される抗体が低フコシル化を示すようになっている。ＰｒｅｓｔａによるＷＯ０３／０３５８３５は、Ａｓｎ（２９７）結合炭水化物にフコースを取り付ける能力が低下し、その宿主細胞で発現される抗体の低フコシル化をもたらす、変異型チャイニーズハムスター卵巣細胞株、Ｌｅｄ ３細胞を記載する（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ。Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－２６７４０も参照されたい）。ＵｍａｎａらによるＷＯ９９／５４３４２は、操作された細胞株において発現された抗体が、抗体のＡＤＣＣ活性の増加をもたらす増加したバイセクトＧｌｃＮａｃ構造を示すように、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、ベータ（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞株を記載している（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０も参照されたい）。

【0072】

Ｆｃ領域変異型
本明細書に記載の抗体の可変領域は、Ｆｃ、例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃに連結されてもよく（例えば、共有結合若しくは融合されてもよい）、これらは、任意のアロタイプ又はアイソアロタイプであり得、例えば、ＩｇＧｌの場合：Ｇｌｍ、Ｇｌｍｌ（ａ）、Ｇｌｍ２（ｘ）、Ｇｌｍ３（ｆ）、Ｇｌｍｌ７（ｚ）；ＩｇＧ２の場合：Ｇ２ｍ、Ｇ２ｍ２３（ｎ）；ＩｇＧ３の場合：Ｇ３ｍ、Ｇ３ｍ２１（ｇｌ）、Ｇ３ｍ２８（ｇ５）、Ｇ３ｍｌｌ（ｂ０）、Ｇ３ｍ５（ｂｌ）、Ｇ３ｍｌ３（ｂ３）、Ｇ３ｍｌ４（ｂ４）、Ｇ３ｍｌ０（ｂ５）、Ｇ３ｍｌ５（ｓ）、Ｇ３ｍｌ６（ｔ）、Ｇ３ｍ６（ｃ３）、Ｇ３ｍ２４（ｃ５）、Ｇ３ｍ２６（ｕ）、Ｇ３ｍ２７（ｖ）；及びＫの場合：Ｋｍ、Ｋｍｌ、Ｋｍ２、Ｋｍ３である（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｅｓ ｅｔ ａｌ．（２００９）ｍＡｂｓ １：１を参照されたい）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体可変領域は、１つ以上の活性化Ｆｃ受容体（ＦｃγＩ、ＦｃγＩＩａ、又はＦｃγＩＩＩａ）に結合するＦｃに連結され、それによってＡＤＣＣを刺激し、Ｔ細胞枯渇を引き起こし得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体可変領域は、枯渇を引き起こすＦｃに連結されている。

【0073】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体可変領域は、典型的には、血清半減期、補体固定、Ｆｃ受容体結合、及び／又は抗原依存性細胞傷害性などの抗体の１つ以上の機能的特性を変化させるために、１つ以上の修飾を含むＦｃに連結されてもよい。更に、本明細書に記載の抗体は、化学修飾されてもよく（例えば、１つ以上の化学部分が抗体に結合されてもよい）、又はそのグリコシル化を変更して、抗体の１つ以上の機能的特性を変更してもよい。Ｆｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスのものである。

【0074】

Ｆｃ領域は、免疫グロブリン、好ましくはヒト免疫グロブリンの定常領域に由来するドメインを包含し、定常領域の断片、類似体、変異体、変異体、又は誘導体を含む。好適な免疫グロブリンとしては、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、並びにＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭなどの他のクラスが挙げられる。免疫グロブリンの定常領域は、免疫グロブリンＣ末端領域に相同な天然に存在するポリペプチド又は合成で産生されるポリペプチドとして定義され、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、又はＣＨ４ドメインを、別個に又は組み合わせて含むことができる。抗体は、ＩｇＧのもの（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）又はＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭなどの他のクラスのものからのＦｃ領域を有することができる。Ｆｃは、クラス又はサブクラスのいずれかの変異体型であり得る。

【0075】

免疫グロブリンの定常領域は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合及び補体結合（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｆｉｘａｔｉｏｎ）の重要な抗体機能に関与する。重鎖定常領域には、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭに分類される５つの主要なクラスがあり、それぞれがアイソタイプによって指定される特徴的なエフェクター機能を有する。

【0076】

Ｉｇ分子は、細胞受容体の複数のクラスと相互作用する。例えば、ＩｇＧ分子は、抗体のＩｇＧクラスに特異的な３つのクラスのＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）、すなわち、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＬと相互作用する。ＩｇＧのＦｃγＲ受容体への結合のための重要な配列は、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインに位置することが報告されている。抗体の血清半減期は、その抗体がＦｃＲに結合する能力によって影響を受ける。

【0077】

ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、望ましい構造的特徴及び／又は生物学的活性を提供するために、親Ｆｃ配列（例えば、その後、変異型を生成するように修飾される非修飾Ｆｃポリペプチド）に対して修飾された（例えば、アミノ酸置換、欠失、及び／又は挿入によって）変異型Ｆｃ領域である。例えば、（ａ）ＡＤＣＣが増加若しくは減少し、（ｂ）補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）が増加若しくは減少し、（ｃ）Ｃｌｑに対する親和性が増加若しくは減少し、及び／又は（ｄ）親Ｆｃと比較してＦｃ受容体に対する親和性が増加若しくは減少したＦｃ変異型を生成するために、Ｆｃ領域において修飾を行ってもよい。そのようなＦｃ領域変異型は、一般に、Ｆｃ領域内に少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む。アミノ酸修飾を組み合わせることが特に望ましいと考えられる。例えば、変異型Ｆｃ領域は、例えば、本明細書で特定される特定のＦｃ領域位置のうちの２つ、３つ、４つ、５つなどの置換を含んでもよい。

【0078】

変異体Ｆｃ領域はまた、ジスルフィド結合形成に関与するアミノ酸が除去されるか、又は他のアミノ酸と置き換えられる配列改変を含んでもよい。そのような除去は、本明細書に記載される抗体を産生するために使用される宿主細胞内に存在する他のシステイン含有タンパク質との反応を回避し得る。システイン残基が除去されても、一本鎖Ｆｃドメインは、依然として、非共有結合で一緒に保持される二量体Ｆｃドメインを形成することができる。他の実施形態では、Ｆｃ領域は、それを選択された宿主細胞とより適合させるように修飾され得る。例えば、典型的な天然Ｆｃ領域のＮ末端付近のＰＡ配列を除去してもよく、これは、プロリンイミノペプチダーゼなどのＥ．ｃｏｌｉ内の消化酵素によって認識されてもよい。他の実施形態では、Ｆｃドメイン内の１つ以上のグリコシル化部位を除去してもよい。典型的には、グリコシル化されている残基（例えば、アスパラギン）は、細胞溶解反応を付与してもよい。そのような残基は、非グリコシル化残基（例えば、アラニン）で欠失又は置換され得る。他の実施形態では、補体との相互作用に関与する部位、例えば、Ｃｌｑ結合部位は、Ｆｃ領域から除去され得る。例えば、ヒトＩｇＧ１のＥＫＫ配列を欠失又は置換してもよい。ある特定の実施形態では、Ｆｃ受容体への結合に影響を与える部位は除去されてもよく、好ましくは、サルベージ受容体結合部位以外の部位である。他の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣ部位を除去するように修飾されてもよい。ＡＤＣＣ部位は、当該技術分野において既知であり、例えば、ＩｇＧｌにおけるＡＤＣＣ部位に関して、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（５）：６３３－９（１９９２）を参照されたい。変異型Ｆｃドメインの具体例は、例えば、ＷＯ９７／３４６３１及びＷＯ９６／３２４７８に開示されている。

【0079】

一実施形態では、Ｆｃのヒンジ領域は、ヒンジ領域内のシステイン残基の数が変更されるように、例えば、増加又は減少するように修飾される。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒらによる米国特許第５，６７７，４２５号に更に記載されている。Ｆｃのヒンジ領域におけるシステイン残基の数は、例えば、軽鎖及び重鎖の組み立てを容易にするために、又は抗体の安定性を増加又は減少させるために変更される。一実施形態では、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生物学的半減期を減少させるように変異される。より具体的には、抗体が天然のＦｃ－ヒンジドメインＳｐＡ結合と比較して減損したブドウ球菌タンパク質Ａ（ＳｐＡ）結合を有するように、１つ以上のアミノ酸変異が、Ｆｃ－ヒンジ断片のＣＨ２－ＣＨ３ドメイン界面領域に導入される。このアプローチは、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，７４５号に更に詳細に記載されている。

【0080】

更に他の実施形態では、Ｆｃ領域は、抗体のエフェクター機能を変更するために、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置き換えることによって変更される。例えば、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、及び３２２から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体がエフェクターリガンドに対する変更された親和性を有するが、親抗体の抗原結合能力を保持するように、異なるアミノ酸残基で置き換えられ得る。親和性が変更されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体又は補体のＣＩ成分であり得る。このアプローチは、Ｗｉｎｔｅｒらによる米国特許第５，６２４，８２１号及び同第５，６４８，２６０号に更に詳細に記載されている。

【0081】

別の実施例では、アミノ酸残基３２９、３３１、及び３２２から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体がＣｌｑ結合を変更し、及び／又はＣＤＣを低減若しくは廃止したように、異なるアミノ酸残基で置き換えられ得る。このアプローチは、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号に更に詳細に記載されている。

【0082】

別の実施例では、アミノ酸位置２３１及び２３９内の１つ以上のアミノ酸残基が変更され、それによって抗体が補体を固定する能力を変更する。このアプローチは、ＢｏｄｍｅｒらによるＰＣＴ公開第９４／２９３５１号に更に記載されている。

【0083】

更に別の実施例では、Ｆｃ領域は、以下の位置で１つ以上のアミノ酸を修飾することによって、ＡＤＣＣを増加させる、及び／又はＦｃγ受容体に対する親和性を増加させるように修飾され得る：２３４、２３５、２３６、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１３、３１５、３２０、３２２、３２４、３２５、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８又は４３９。例示的な置換としては、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２６８Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｅ、２６８Ｆ、３２４Ｔ、３３２Ｄ、及び３３２Ｅが挙げられる。例示的な変異型としては、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３６Ａ／２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６８Ｆ／３２４Ｔ、２６７Ｅ／２６８Ｆ、２６７Ｅ／３２４Ｔ、及び２６７Ｅ／２６８Ｆ７３２４Ｔが挙げられる。ＦｃγＲ及び補体相互作用を増強するための他の修飾としては、置換２９８Ａ、３３３Ａ、３３４Ａ、３２６Ａ、２４７Ｉ、３３９Ｄ、３３９Ｑ、２８０Ｈ、２９０Ｓ、２９８Ｄ、２９８Ｖ、２４３Ｌ、２９２Ｐ、３００Ｌ、３９６Ｌ、３０５Ｉ、及び３９６Ｌが挙げられるが、これらに限定されない。これら及び他の修正は、Ｓｔｒｏｈｌ，２００９，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：６８５－６９１において概説されている。

【0084】

Ｆｃγ受容体への結合を増加させるＦｃ修飾は、Ｆｃ領域のアミノ酸位置２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７９、２８０、２８３、２８５、２９８、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３１２、３１５、３２４、３２７、３２９、３３０、３３５、３３７、３３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７９、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８又は４３９のうちのいずれか１つ以上におけるアミノ酸修飾を含み、ここでは、Ｆｃ領域における残基の番号付けは、ａｂａｔにおけるＥＵインデックスと同じである（ＷＯ００／４２０７２）。

【0085】

Ｆｃに行うことができる他のＦｃ修飾は、ＦｃγＲ及び／又は補体タンパク質への結合を低減又は除去するためのものであり、それによって、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣなどのＦｃ媒介性エフェクター機能を低減又は除去する。例示的な修飾としては、２３４、２３５、２３６、２３７、２６７、２６９、３２５、及び３２８位の置換、挿入、及び欠失が挙げられるが、これらに限定されず、番号付けは、ＥＵインデックスに従う。例示的な置換としては、２３４Ｇ、２３５Ｇ、２３６Ｒ、２３７Ｋ、２６７Ｒ、２６９Ｒ、３２５Ｌ、及び３２８Ｒが挙げられるが、これらに限定されず、番号付けは、ＥＵインデックスに従う。Ｆｃ変異型は、２３６Ｒ／３２８Ｒを含み得る。ＦｃγＲ及び補体相互作用を低減するための他の修飾としては、置換２９７Ａ、２３４Ａ、２３５Ａ、２３７Ａ、３１８Ａ、２２８Ｐ、２３６Ｅ、２６８Ｑ、３０９Ｌ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、２２０Ｓ、２２６Ｓ、２２９Ｓ、２３８Ｓ、２３３Ｐ、及び２３４Ｖ、並びに変異若しくは酵素的手段によって、又はタンパク質をグリコシル化しない細菌などの生物での産生によって、２９７位でのグリコシル化を除去することが挙げられる。これら及び他の修正は、Ｓｔｒｏｈｌ，２００９，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：６８５－６９１において概説されている。

【0086】

任意選択で、Ｆｃ領域は、当業者に既知の追加の及び／又は代替の位置に非天然型アミノ酸残基を含んでもよい（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、同第６，２７７，３７５号、同第６，７３７，０５６号、同第６，１９４，５５１号、同第７，３１７，０９１号、同第８，１０１，７２０号；ＷＯ００／４２０７２、ＷＯ０１／５８９５７、ＷＯ０２／０６９１９、ＷＯ０４／０１６７５０、ＷＯ０４／０２９２０７、ＷＯ０４／０３５７５２、ＷＯ０４／０７４４５５、ＷＯ０４／０９９２４９、ＷＯ０４／０６３３５１、ＷＯ０５／０７０９６３、ＷＯ０５／０４０２１７、ＷＯ０５／０９２９２５及びＷＯ０６／０２０１１４を参照されたい）。

【0087】

抑制性受容体ＦｃγＲＩＩｂに対する親和性を増強するＦｃ変異型も使用され得る。そのような変異型は、例えば、Ｂ細胞及び単球を含む、ＦｃγＲＩＩｂ細胞に関連する免疫調節活性を有するＦｃ融合タンパク質を提供してもよい。一実施形態では、Ｆｃ変異型は、１つ以上の活性化受容体と比較して、ＦｃγＲＩＩｂに対する選択的に増強された親和性を提供する。ＦｃγＲＩＩｂへの結合を変更するための修飾には、ＥＵインデックスに従って、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６６、２６７、２６８、３２５、３２６、３２７、３２８、及び３３２からなる群から選択される位置での１つ以上の修飾が挙げられる。ＦｃγＲＩＩｂ親和性を向上させるための例示的な置換としては、２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｆ、２３４Ｗ、２３５Ｄ、２３５Ｆ、２３５Ｒ、２３５Ｙ、２３６Ｄ、２３６Ｎ、２３７Ｄ、２３７Ｎ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２６６Ｍ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、３２７Ｄ、３２７Ｅ、３２８Ｆ、３２８Ｗ、３２８Ｙ、及び３３２Ｅが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な置換としては、２３５Ｙ、２３６Ｄ、２３９Ｄ、２６６Ｍ、２６７Ｅ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、３２８Ｆ、３２８Ｗ、及び３２８Ｙが挙げられる。ＦｃγＲｌｌｂへの結合を増強するための他のＦｃ変異型としては、２３５Ｙ／２６７Ｅ、２３６Ｄ／２６７Ｅ、２３９Ｄ／２６８Ｄ、２３９Ｄ／２６７Ｅ、２６７Ｅ／２６８Ｄ、２６７Ｅ／２６８Ｅ、及び２６７Ｅ／３２８Ｆが挙げられる。

【0088】

そのリガンドに対するＦｃ領域の親和性及び結合特性は、平衡法（例えば、ＥＬＩＳＡ、又は放射免疫測定法）、又は動態（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ分析）、並びに他の方法、例えば、間接結合アッセイ、競合阻害アッセイ、蛍光共鳴エネルギー伝達（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動及びクロマトグラフィー（例えば、ゲル濾過）が挙げられるが、これらに限定されない当該技術分野において既知の様々なインビトロアッセイ方法（生化学的又は免疫学的ベースのアッセイ）によって決定され得る。これら及び他の方法は、検査されている構成要素のうちの１つ以上の標識を利用してもよく、及び／又は発色、蛍光、発光、又は同位体標識が挙げられるが、これらに限定されない様々な検出方法を用いてもよい。結合親和性及び動態の詳細な説明は、抗体と免疫原の相互作用に焦点を当てている、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，ｅｄ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）で見出すことができる。

【0089】

ある特定の実施形態では、抗体は、その生物学的半減期を増加させるように修飾される。様々なアプローチが可能である。例えば、これは、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合親和性を増加させることによって行われ得る。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号に記載されるように、以下の残基のうちの１つ以上が変異され得る：２５２、２５４、２５６、４３３、４３５、４３６。具体的な例示的置換としては、以下のうちの１つ以上が挙げられる：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、及び／又はＴ２５６Ｆ。あるいは、生物学的半減期を増加させるために、抗体は、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号及び第６，１２１，０２２号に記載されているように、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから得られたサルベージ受容体結合エピトープを含有するようにＣＨ１又はＣＬ領域内で変更され得る。ＦｃＲｎへの結合を増加させる、及び／又は薬物動態特性を改善する他の例示的な変異型には、例えば、２５９Ｉ、３０８Ｆ、４２８Ｌ、４２８Ｍ、４３４Ｓ、４３４Ｈ、４３４Ｆ、４３４Ｙ、及び４３４Ｍを含む、２５９位、３０８、４２８、及び４３４位の置換が挙げられる。ＦｃＲｎへのＦｃ結合を増加させる他のバリアントとしては、２５０Ｅ、２５０Ｑ、４２８Ｌ、４２８Ｆ、２５０Ｑ／４２８Ｌ（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ，，２００４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（８）：６２１３－６２１６，Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．２００６ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １７６：３４６－３５６）、２５６Ａ、２７２Ａ、２８６Ａ、３０５Ａ、３０７Ａ、３０７Ｑ、３１１Ａ、３１２Ａ、３７６Ａ、３７８Ｑ、３８０Ａ、３８２Ａ、４３４Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，２７６（９）：６５９１－６６０４）、２５２Ｆ、２５２Ｔ、２５２Ｙ、２５２Ｗ、２５４Ｔ、２５６Ｓ、２５６Ｒ、２５６Ｑ、２５６Ｅ、２５６Ｄ、２５６Ｔ、３０９Ｐ、３１１Ｓ、４３３Ｒ、４３３Ｓ、４３３Ｉ、４３３Ｐ、４３３Ｑ、４３４Ｈ、４３４Ｆ、４３４Ｙ、２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、３０８Ｔ／３０９Ｐ／３１１Ｓ（Ｄａｌｌ Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００２，１６９：５１７１－５１８０，Ｄａｌｌ‘Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８１：２３５１４－２３５２４）が挙げられる。ＦｃＲｎ結合を調節するための他の修飾は、Ｙｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１８２：７６６３－７６７１に記載されている。ある特定の実施形態では、特定の生物学的特徴を有するハイブリッドＩｇＧアイソタイプを使用してもよい。例えば、ＩｇＧｌ／ＩｇＧ３ハイブリッド変異型は、ＣＨ２及び／又はＣＨ３領域内のＩｇＧ１位置を、２つのアイソタイプが異なる位置でＩｇＧ３由来のアミノ酸で置換することによって構築されてもよい。したがって、１つ以上の置換、例えば、２７４Ｑ、２７６Ｋ、３００Ｆ、３３９Ｔ、３５６Ｅ、３５８Ｍ、３８４Ｓ、３９２Ｎ、３９７Ｍ、４２２Ｉ、４３５Ｒ、及び４３６Ｆを含むハイブリッド変異型ＩｇＧ抗体を構築してもよい。本明細書に記載される他の実施形態では、ＩｇＧｌ／ＩｇＧ２ハイブリッド変異型は、ＣＨ２及び／又はＣＨ３領域内のＩｇＧ２位置を、２つのアイソタイプが異なる位置でＩｇＧｌからのアミノ酸で置換することによって構築されてもよい。したがって、ハイブリッド変異型ＩｇＧ抗体は、１つ以上の置換、例えば、以下のアミノ酸置換のうちの１つ以上を含むＣＨＡＴによって構築され得る：２３３Ｅ、２３４Ｌ、２３５Ｌ、２３６Ｇ（２３６位のグリシンの挿入を指す）、及び３２１ｈ。

【0090】

更に、ＦｃγＲｌ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃＲｎのヒトＩｇＧｌ上の結合部位がマッピングされ、改良された結合を有する変異型が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６６０４を参照されたい）。２５６位、２９０位、２９８位、３３３位、３３４位及び３３９位の特異的変異は、ＦｃγＲＩＩＩへの結合を改善することが示された。加えて、以下の組み合わせ変異型は、ＦｃγＲＩＩＩ結合を改善することが示された：Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４Ａ及びＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ（これらは、増強されたＦｃγＲＩＩＩａ結合及びＡＤＣＣ活性を示すことが示されている）（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１）。ＦｃγＲＩＩＩａへの結合が強く増強された他のＩｇＧｌ変異型が同定されており、これには、ＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性の最大の増加、ＦｃγＲＩＩｂ結合の減少、及びカニクイザルにおける強い細胞傷害活性を示したＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ及びＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ変異を有する変異型が含まれる（Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，２００６）。アレムツズマブ（ＣＤ５２特異的）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ特異的）、リツキシマブ（ＣＤ２０特異的）、及びセツキシマブ（ＥＧＦＲ特異的）などの抗体への三重変異の導入は、インビトロで大幅に増強されたＡＤＣＣ活性に変換され、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異型は、サルにおけるＢ細胞を枯渇させる能力の増強を示した（Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，２００６）。加えて、Ｂ細胞悪性腫瘍及び乳がんのモデルにおいて、ヒトＦｃγＲＩＩＩａを発現するトランスジェニックマウスにおいてＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増強及び同時に増強されたＡＤＣＣ活性を示したＬ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ変異を含有するＩｇＧｌ変異体が同定されている（Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００７；Ｎｏｒｄｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。使用され得る他のＦｃ変異体としては、以下が挙げられる：Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｌ３３４Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ。

【0091】

ある特定の実施形態では、ＦｃγＲへの結合が減少したＦｃが選択される。ＦｃγＲ結合が減少した例示的なＦｃ、例えばＩｇＧｌ Ｆｃは、以下の３つのアミノ酸置換を含む：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ及びＧ２３７Ａ。

【0092】

ある特定の実施形態では、補体固定が減少したＦｃが選択される。補体固定が減少した例示的なＦｃ、例えば、ＩｇＧｌ Ｆｃは、以下の２つのアミノ酸置換を有する：Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ。

【0093】

ある特定の実施形態では、本質的にエフェクター機能を有しない、すなわち、ＦｃγＲへの結合が減少し、補体固定が減少したＦｃが選択される。エフェクターレスである例示的なＦｃ、例えば、ＩｇＧｌ Ｆｃは、以下の５つの変異を含む：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ。

【0094】

ＩｇＧ４定常ドメインを使用する場合、通常、置換Ｓ２２８Ｐを含むことが好ましく、これは、ＩｇＧｌ内のヒンジ配列を模倣し、それによってＩｇＧ４分子を安定化する。

【0095】

抗体誘導体
本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するように更に修飾され得る。抗体の誘導体化に好適な部分としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。

【0096】

水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ＰＥＧ、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／マレイン酸無水物コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量を有してもよく、分枝状又は非分枝状であってもよい。抗体に結合したポリマーの数は様々であり、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらは同じ又は異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は種類は、改善される抗体の特定の特性若しくは機能、抗体誘導体が定義された条件下で治療に使用されるかどうかなどが挙げられるが、これらに限定されない考慮事項に基づいて決定され得る。

【0097】

別の実施形態において、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗体と非タンパク質性部分とのコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００－１１６０５（２００５）を参照されたい）。放射線は、任意の波長のものであってもよく、通常の細胞に害を及ぼさないが、非タンパク質性部分を抗体非タンパク質性部分に近接する細胞が死滅する温度まで加熱する波長が含まれるが、これらに限定されない。

【0098】

本明細書に記載される抗体の別の修飾は、ペグ化である。抗体をペグ化して、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させることができる。抗体をペグ化するために、抗体、又はその断片を、典型的には、１つ以上のＰＥＧ基が抗体又は抗体断片に結合する条件下で、ＰＥＧの反応性エステル又はアルデヒド誘導体などのＰＥＧと反応させる。好ましくは、ペグ化は、アシル化反応又は反応性ＰＥＧ分子（又は類似の反応性水溶性ポリマー）とのアルキル化反応を介して実行される。本明細書で使用される場合、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（ＣＩ－ＣＩＯ）アルコキシ－又はアリールオキシ－ポリエチレングリコール又はポリエチレングリコール－マレイミドなどの他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの形態のいずれかを包含することが意図される。ある特定の実施形態では、ペグ化される抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化するための方法は当該技術分野で既知であり、本明細書に記載の抗体に適用することができる。例えば、ＮｉｓｈｉｍｕｒａらのＥＰ０１５４３１６及びＩｓｈｉｋａｗａらのＥＰ０４０１３８４を参照されたい。

【0099】

本発明は、治療剤、ポリマー、検出可能な標識又は酵素にコンジュゲートされた、本明細書に記載のヒトモノクローナル抗体も包含する。一実施形態では、治療剤は、細胞傷害性剤である。一実施形態では、ポリマーは、ＰＥＧである。

【0100】

産生の方法
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているように、組換え方法及び組成物を使用して産生され得る。一実施形態では、本明細書に記載の抗体をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、ＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードしてよい。更なる実施形態では、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は、以下を含む（例えば、それらで形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター。一実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗体の作製方法が提供され、本方法は、抗体の発現に好適な条件下で、上記で提供したように、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、任意選択的に、抗体を宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から回収することと、を含む。

【0101】

抗体の組換え産生のために、例えば上述のように、抗体をコードする核酸を単離し、宿主細胞における更なるクローニング及び／又は発現のために１つ以上のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定され得る。

【0102】

抗体コードベクターのクローニング又は発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞又は真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、細菌において、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要でない場合に産生され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現を記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照されたい。）発現後、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離されてもよく、更に精製され得る。

【0103】

原核生物に加えて、糸状菌又は酵母などの真核微生物は、グリコシル化経路が「ヒト化」され、部分的又は完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体が産生される、真菌及び酵母株を含む抗体コードベクターに好適なクローニング又は発現宿主である。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）を参照されたい。

【0104】

グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞もまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と併せて使用することができる多数のバキュロウイルス株が特定されている。

【0105】

植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ技術を記載している）を参照されたい。

【0106】

脊椎動物細胞も宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳類細胞株が有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）、ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されているような２９３又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されているようなＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリサル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；ＴＲＩ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載されているような）；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ^－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含むＣＨＯ細胞；並びにＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。

【0107】

遺伝子及び細胞療法
上記に要約されるように、本発明の一態様は、ＧＩＰＲ阻害を含み、その阻害を必要とする対象に、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質を導入することを含む。一実施形態では、抗原結合タンパク質を発現する細胞を対象に導入してもよい。別の実施形態では、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質をコードする核酸又は核酸は、核酸が染色体外に留まるように、又は発現のために対象の染色体ＤＮＡに組み込まれ得るように、ベクター内の対象の細胞に導入されてもよい。これらの方法は、そのような治療を必要とする対象に、抗原結合タンパク質を発現するための治療有効量の核酸又はＧＩＰＲ抗原結合タンパク質をコードする核酸、又はその薬学的に許容される組成物を投与することを提供する。

【0108】

核酸又は核酸は、対象の標的細胞のゲノムを構成する染色体ＤＮＡに組み込まれていても、組み込まれていなくてもよい（共有結合していても）。核酸又は核酸は、核酸が染色体外に留まるように細胞に導入されてもよい。そのような状況では、核酸は、染色体外の位置から細胞によって発現される。細胞はまた、外因性核酸が染色体に組み込まれ、それが染色体複製を介して娘細胞によって継承されるように形質転換され得る。核酸は、染色体外維持又は宿主への組み込みのために、適切なベクターに導入され得る。組換え及び染色体外維持の両方のための遺伝子の導入のためのベクターは、当該技術分野で既知であり、任意の好適なベクターを使用し得る。エレクトロポレーション、リン酸カルシウム共沈降及びウイルス形質導入などのＤＮＡを細胞に導入する方法は、当該技術分野で既知であり、方法の選択は、当該技術分野のものの能力内である。

【0109】

本明細書に記載の抗原結合タンパク質をコードする遺伝子は、ＲＮＡの形態又はＤＮＡの形態であり得るポリヌクレオチド又は核酸であり得、そのＤＮＡは、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡを含む。ＤＮＡは二本鎖であっても一本鎖であってもよく、一本鎖の場合、コード鎖又は非コード（アンチセンス）鎖であってもよい。

【0110】

本発明のポリヌクレオチド又は核酸組成物又は分子は、当業者には容易に理解されるであろうように、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成形態、及びセンス鎖とアンチセンス鎖の両方の混合ポリマーを含むことができ、化学的又は生化学的に修飾されてもよく、又は非天然若しくは誘導体化ヌクレオチド塩基を含有してもよい。そのような修飾としては、例えば、標識、メチル化、天然に存在するヌクレオチドの１つ以上の類似体による置換、非荷電結合（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメートなど）、荷電結合（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）、ペンダント部分（例えば、ポリペプチド）、インターカレーター（例えば、アクリジン、プソラレンなど）、キレート剤、アルキル化剤、及び修飾結合（例えば、αアノマー核酸など）のヌクレオチド間修飾が挙げられる。また、水素結合及び他の化学相互作用を介して指定された配列に結合する能力においてポリヌクレオチドを模倣する合成分子も含まれる。そのような分子は当該技術分野で既知であり、例えば、分子の骨格内のリン酸結合をペプチド結合が置換するものが挙げられる。

【0111】

導入遺伝子のインビボ発現は、気管内、筋肉内又は動脈内への裸のＤＮＡ若しくはＤＮＡカチオン性リポソーム複合体の直接注射などの特定の組織に、又はその後の再注入を伴う宿主細胞のエクスビボトランスフェクションに、導入遺伝子を直接注射することによって実行することができる。

【0112】

インビトロ及びインビボの両方で、機能的な新しい遺伝物質を細胞に導入するための複数のアプローチが知られている。これらのアプローチとしては、改変されたレトロウイルスに発現される遺伝子の組み込み、非ウイルスベクターへの組み込み、又はリポソームを介して異種プロモーター－エンハンサーエレメントに連結された導入遺伝子の送達、リガンド仕様に基づく輸送系に結合された導入遺伝子の送達、又は裸のＤＮＡ発現ベクターの使用が挙げられる。組織への導入遺伝子の直接注射は、局所発現を産生する。ＰＣＴ／ＵＳ９０／０１５１５（Ｆｅｌｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．）は、医薬又は免疫原性ポリペプチドをコードする遺伝子をインビボで脊椎動物の細胞の内部に送達するための方法を目的としている。ほとんどの遺伝子治療戦略は、レトロウイルス又はＤＮＡウイルスベクターへの導入遺伝子挿入に依存しているが、脂質担体を使用して、宿主の肺細胞をトランスフェクトし得る。

【0113】

上記のポリヌクレオチド又は核酸は、好適な宿主細胞内で複製することによって産生され得る。所望の断片をコードする天然又は合成ポリヌクレオチド断片は、組換えポリヌクレオチド構築物、通常はＤＮＡ構築物に組み込むことができ、原核細胞又は真核細胞に導入及び複製することができる。通常、ポリヌクレオチド構築物は、酵母又は細菌などの単細胞宿主での複製に好適であり得るが、培養された哺乳類又は植物又は他の真核生物細胞株への導入（ゲノム内での組み込みの有無にかかわらず）を意図していてもよい。

【0114】

ポリヌクレオチド又は核酸はまた、化学合成によって産生されてもよく、市販のオリゴヌクレオチド自動合成装置上で実施されてもよい。二本鎖断片は、相補鎖を合成し、適切な条件下で鎖を一緒にアニーリングすることによって、又は適切なプライマー配列を有するＤＮＡポリメラーゼを使用して相補鎖を添加することによって、化学合成の一本鎖生成物から得てもよい。

【0115】

原核又は真核宿主への導入のために調製されたポリヌクレオチド又は核酸構築物は、所望のポリペプチドをコードする目的のポリヌクレオチド断片を含む、宿主によって認識される複製系を含み得、好ましくは、ポリペプチドをコードするセグメントに作動可能に連結された転写及び翻訳開始調節配列も含む。発現ベクターは、例えば、複製起点又は自律複製配列（ＡＲＳ）及び発現制御配列、プロモーター、エンハンサー、及びリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、転写ターミネーター配列、及びｍＲＮＡ安定化配列などの必要な処理情報部位を含み得る。分泌シグナルはまた、必要に応じて、天然タンパク質からであれ、他のタンパク質からであれ、同じ又は関連する種の分泌されたポリペプチドからであれ、含まれてもよく、これにより、タンパク質に細胞膜を横断させ、及び／又は細胞膜に留まらせ、したがって、その機能的トポロジーを達成するか、又は細胞から分泌される。そのようなベクターは、当該技術分野で周知の標準的な組換え技術によって調製され得る。

【0116】

適切なプロモーター及び他の必要なベクター配列は、宿主内で機能するように選択することができ、適切な場合、免疫グロブリン遺伝子に天然に関連するものを含み得る。多くの有用なベクターは当該技術分野において既知であり、ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ、ＮＥＷ ＥＮＧＬＡＮＤ ＢＩＯＬＡＢＳ、ＰＲＯＭＥＧＡ ＢＩＯＴＥＣＨなどのベンダーから入手することができる。ｔｒｐ、ｌａｃ及びファージプロモーター、ｔＲＮＡプロモーター、及び糖分解酵素プロモーターなどのプロモーターを、原核宿主に使用してもよい。有用な酵母プロモーターとしては、メタロチオネインのプロモーター領域、３－ホスホグリセリン酸キナーゼ、又はエノラーゼ若しくはグリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼなどの他の糖分解酵素、マルトース及びガラクトース利用に関与する酵素、並びに他のものが挙げられる。適切な非天然哺乳類プロモーターとしては、ＳＶ４０由来の初期及び後期プロモーター、又はマウスモロニー白血病ウイルス、マウス腫瘍ウイルス、鳥肉腫ウイルス、アデノウイルスＩＩ、ウシパピローマウイルス若しくはポリオーマ由来のプロモーターが挙げられ得る。加えて、構築物は、遺伝子の複数のコピーが作製され得るように、増幅可能な遺伝子に結合され得る。

【0117】

一実施形態では、核酸構築物は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ、ＣＭＶプロモーター及びエンハンサー、ＳＶ４０プロモーター、ＨＢＶプロモーター、ＨＣＶプロモーター、ＨＳＶプロモーター、ＨＰＶプロモーター、ＥＢＶプロモーター、ＨＴＬＶプロモーター、ＨＩＶプロモーター、及びｃｄｃ２５Ｃプロモーター、サイクリンプロモーター、ｃｄｃ２プロモーター、ｂｍｙｂプロモーター、ＤＨＦＲプロモーター、及びＥ２Ｆ－１プロモーターからなる群から選択される少なくとも１つのプロモーターを含むことができる。いくつかの実施形態では、長期発現のためにユビキチンＣプロモーターを使用することができる。

【0118】

本発明によれば、代謝障害を治療する方法であって、治療有効量の本発明の抗原結合タンパク質をコードする核酸又はその薬学的に許容される組成物を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法が提供される。方法の態様は、対象に、第１の核酸を単独で、又は抗原結合タンパク質のコード配列を含むベクター中で投与することを含む。核酸を利用する遺伝子治療方法も提供される。本発明の実施形態は、本方法において用途を見出す、例えば、核酸単独の、又はベクター及びキット中の組成物を含む。

【0119】

この方法は、対象（例えば、哺乳動物）に投与されたときに抗原結合タンパク質の発現を増加させ得る。対象へのベクターの投与は、疾患又は状態の１つ以上の症状又はマーカーを改善し得る。

【0120】

任意の好都合なウイルスを、対象に目的のベクターを送達する際に利用することができる。目的のウイルスとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、単純ヘルペスウイルス、及びレンチウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。ウイルス遺伝子治療ベクターは、当該技術分野において周知であり、例えば、Ｈｅｉｌｂｒｏｎｎ ＆ Ｗｅｇｅｒ（２０１０）Ｈａｎｄｂ Ｅｘｐ Ｐｈａｒｍａｃａｌ．１９７：１４３－７０を参照されたい。目的のベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス（ＡｄＶ）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レンチウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、及びヘルペスウイルスに基づくものなどの組み込み型及び非組み込み型ベクターが挙げられる。

【0121】

いくつかの場合には、ＡＡＶなどの非組み込み型ウイルスベクターを利用してもよい。一態様では、非組み込み型ベクターは、任意の恒久的な遺伝子改変を引き起こさない。ベクターは、対象が発達の初期段階から構成的発現の影響を受けることを回避するために、成人組織を標的とし得る。場合によっては、非組み込み型ベクターは、ＭＲＣＫα及び／又はＮＫＡ β１発現細胞の過剰増殖を回避するための安全機構を効果的に組み込む。細胞が急速に増殖し始めると、ベクター（及び結果としてのタンパク質発現）を失う可能性がある。

【0122】

目的の非組み込み型ベクターとしては、腹なし（ｇｕｔｌｅｓｓ）アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、インテグラーゼ欠損レンチウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、及びヘルペスウイルスなどのアデノウイルス（ＡｄＶ）に基づくものが挙げられる。ある特定の実施形態では、本発明で使用される非組み込み型ベクターは、天然のアデノ随伴ウイルス粒子と同様の、アデノ随伴ウイルスベースの非組み込み型ベクターである。アデノ随伴ウイルスベースの非組み込み型ベクターの例としては、任意のＡＡＶ血清型、すなわち、ＡＡＶＩ、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶＩＯ、ＡＡＶＩＩ、及びシュードタイプＡＡＶに基づくベクターが挙げられる。目的のベクターには、免疫原性が低く、優れた安全性プロファイルを有する、高効率で広範囲の組織を形質導入することができるベクターが含まれる。いくつかの場合には、ベクターは、有糸分裂後細胞を形質導入し、関連する障害の小動物モデル及び大動物モデルの両方において長期的な遺伝子発現（最大数年）を維持することができる。

【0123】

組成物及び製剤
本発明の抗原結合タンパク質（抗体を含む）は、単独で、又は代謝障害の治療のための追加の薬剤と組み合わせて、治療薬を開発するための優れた方法を表す。

【0124】

ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質を含む薬学的組成物も提供され、本明細書に開示される予防及び治療方法のうちのいずれにおいても利用され得る。実施形態では、治療有効量の１つ以上の抗原結合タンパク質、並びに薬学的に許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、防腐剤、及び／又はアジュバントもまた提供される。許容される製剤材料は、用いる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性である。

【0125】

ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、例えば、組成物のｐＨ、浸透圧、粘度、透明度、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、溶解若しくは放出速度、吸着又は貫通を修正、維持又は保存するための製剤材料を含んでもよい。そのような実施形態では、好適な製剤材料としては、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジンなど）；抗菌剤；抗酸化剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム又は亜硫酸水素ナトリウムなど）；緩衝剤（ホウ酸塩、重炭酸塩、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩又は他の有機酸など）；増量剤（マンニトール又はグリシンなど）；キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、β－シクロデキストリン又はヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンなど）；充填剤；単糖類；二糖類；及び他の炭水化物（グルコース、マンノース又はデキストリンなど）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン）；着色剤、香料及び希釈剤；乳化剤；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；低分子量ポリペプチド；塩形成対イオン（ナトリウムなど）；防腐剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸又は過酸化水素など）；溶媒（グリセリン、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールなど）；糖アルコール（マンニトール又はソルビトールなど）；懸濁剤；界面活性剤又は湿潤剤（プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えばポリソルベート２０、ポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパールなど）；安定性増強剤（スクロース又はソルビトールなど）；張力増強剤（アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは塩化ナトリウム又は塩化カリウム、マンニトールソルビトールなど）；送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤及び／又は薬学的アジュバントが挙げられるが、これらに限定されない。ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１８”Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｒｍｏ，ｅｄ．），１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙは、薬学的組成物に組み込むことができる好適な薬剤についての追加の詳細及び選択肢を提供している。

【0126】

ある特定の実施形態では、最適な薬学的組成物は、例えば、意図される投与経路、送達形態及び所望の投与量に応じて、当業者によって決定される。例えば、上記のＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳを参照されたい。ある特定の実施形態では、そのような組成物は、開示される抗原結合タンパク質の物理的状態、安定性、インビボ放出速度、及びインビボクリアランス速度に影響を及ぼし得る。ある特定の実施形態では、薬学的組成物中の主なビヒクル又は担体は、本質的に水性であっても非水性であってもよい。例えば、好適なビヒクル又は担体は、注射用水又は生理食塩水であってもよい。ある特定の実施形態では、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質組成物は、所望の純度を有する選択された組成物を、凍結乾燥ケーキ又は水溶液の形態で任意の製剤と混合することによって、保管のために調製されてもよい（上記のＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ）。更に、ある特定の実施形態では、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質は、スクロースなどの適切な賦形剤を使用して凍結乾燥物として製剤化されてもよい。

【0127】

薬学的組成物は、非経口送達のために選択することができる。あるいは、組成物は、吸入用、又は経口などの消化管を介した送達のために選択され得る。そのような薬学的に許容される組成物の調製は、当業者の技術の範囲内である。

【0128】

製剤成分は、好ましくは、投与部位が許容できる濃度で存在する。ある特定の実施形態では、緩衝液は、組成物を生理学的ｐＨ又はわずかに低いｐＨ、典型的には約５～約８のｐＨ範囲内で維持するために使用される。

【0129】

非経口投与が企図される場合、治療用組成物は、薬学的に許容されるビヒクル中に所望のヒトＧＩＰＲ抗原結合タンパク質を含む、発熱物質を含まない非経口的に許容される水溶液の形態で提供され得る。非経口注射に特に好適なビヒクルは、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質が滅菌された等張溶液として製剤化され、適切に保存される滅菌蒸留水である。ある特定の実施形態では、調製物は、注射可能な微小球、生体侵食性粒子、ポリマー化合物（ポリ乳酸又はポリグリコール酸など）、ビーズ又はリポソームなどの薬剤とともに所望の分子の製剤を含むことができ、これらは、デポ注射を介して送達することができる生成物の制御された放出又は持続的な放出を提供し得る。ある特定の実施形態では、循環における持続期間を促進する効果を有するヒアルロン酸を使用してもよい。ある特定の実施形態では、移植可能な薬物送達デバイスを使用して、所望の抗原結合タンパク質を導入してもよい。

【0130】

ある特定の薬学的組成物は、吸入用に製剤化される。いくつかの実施形態では、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質は、乾燥した吸入可能な粉末として製剤化される。特定の実施形態では、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質吸入溶液はまた、エアロゾル送達のための推進剤とともに製剤化してもよい。ある特定の実施形態では、溶液は、噴霧されてもよい。したがって、経肺投与及び製剤の方法は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９４／００１８７５号に更に記載され、これは参照により組み込まれ、化学的に修飾されたタンパク質の肺送達を記載する。いくつかの製剤は、経口投与することができる。このように投与されるＧＩＰＲ抗原結合タンパク質は、錠剤及びカプセルなどの固形剤形の配合に通常使用される担体を含むか又は含まずに製剤化することができる。ある特定の実施形態では、カプセルは、生物学的利用能が最大化され、全身循環前の分解が最小化されるときに、消化管内の点において製剤の活性部分を放出するように設計されてもよい。ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質の吸収を促進するために、追加の薬剤を含めることができる。希釈剤、香料、低融点ワックス、植物油、滑沢剤、懸濁剤、錠剤崩壊剤、及び結合剤を用いてもよい。

【0131】

持続送達製剤又は制御送達製剤中のＧＩＰＲ結合タンパク質を含む製剤を含む、追加の薬学的組成物は、当業者には明白であろう。リポソーム担体、生体浸食性微粒子、又は多孔質ビーズ及びデポ注射などの様々な他の持続送達又は制御送達手段を製剤化するための技法もまた、当業者に既知である。例えば、参照により組み込まれ、薬学的組成物の送達のための多孔質高分子微粒子の制御放出が記載される国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９号を参照されたい。持続放出製剤は、成形品の形態の半透過性ポリマーマトリックス、例えば、フィルム又はマイクロカプセルを含み得る。持続放出マトリックスは、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（それぞれが参照により組み込まれる米国特許第３，７７３，９１９号及び欧州特許出願公開第０５８４８１号に開示されるように）、Ｌ－グルタミン酸及びガンマエチル－Ｌ－グルタミン酸のコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２：５４７－５５６）、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７－２７７及びＬａｎｇｅｒ，１９８２，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８－１０５）、エチレン酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１、上記）、又はポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸（欧州特許公開第１３３，９８８号）を含み得る。持続放出組成物はまた、当該技術分野で既知のいくつかの方法のいずれかによって調製することができるリポソームを含んでもよい。例えば、参照により組み込まれる、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：３６８８－３６９２；欧州特許出願公開第０３６，６７６号、同第０８８，０４６号及び同第１４３，９４９号を参照されたい。

【0132】

インビボ投与に使用される薬学的組成物は、典型的には、無菌製剤として提供される。滅菌は、無菌濾過膜を介した濾過によって達成することができる。組成物が凍結乾燥されるとき、この方法を使用した滅菌は、凍結乾燥及び再構築の前又は後のいずれかで実施されてもよい。非経口投与用の組成物は、凍結乾燥形態又は溶液中で保存することができる。非経口組成物は、一般に、無菌アクセスポート、例えば、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルを有する容器に配置される。

【0133】

ある特定の製剤では、抗原結合タンパク質は、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、又は１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。一実施形態では、薬学的組成物は、抗原結合タンパク質、緩衝液及びポリソルベートを含む。他の実施形態では、薬学的組成物は、抗原結合タンパク質、緩衝液、スクロース、及びポリソルベートを含む。薬学的組成物の例は、５０～１００ｍｇ／ｍＬの抗原結合タンパク質、５～２０ｍＭの酢酸ナトリウム、５～１０％（ｗ／ｖ）のスクロース、及び０．００２～０．００８％（ｗ／ｖ）のポリソルベートを含むものである。ある特定の組成物は、例えば、６５～７５ｍｇ／ｍＬの抗原結合タンパク質、９～１１ｍＭの酢酸ナトリウム、８～１０％（ｗ／ｖ）のスクロース、及び０．００５～０．００６％（ｗ／ｖ）のポリソルベートを含有する。ある特定のそのような製剤のｐＨは、４．５～６の範囲である。他の製剤は、５．０～５．５のｐＨ（例えば、５．０、５．２、又は５．４のｐＨ）を有する。

【0134】

薬学的組成物が製剤化されると、それは、溶液、懸濁液、ゲル、乳剤、固体、結晶、又は脱水若しくは凍結乾燥粉末として滅菌バイアルに保管されてもよい。そのような製剤は、すぐに使用できる形態又は投与前に再構成される形態（例えば、凍結乾燥）のいずれかで保存することができる。単回投与単位を製造するためのキットも提供される。ある特定のキットは、乾燥タンパク質を有する第１の容器と、水性製剤を有する第２の容器とを含む。ある特定の実施形態では、１室型及び多室型のプレフィルドシリンジ（例えば、液体シリンジ及びリオシリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅｓ））を含むキットが提供される。用いられるＧＩＰＲ抗原結合タンパク質含有薬学的組成物の治療有効量は、例えば、治療の背景及び目的に依存する。当業者であれば、治療のための適切な用量レベルが、一部には、送達される分子、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質が使用されている適応症、投与経路、及び患者のサイズ（体重、体表面又は臓器サイズ）及び／又は状態（年齢及び全般的な健康状態）に応じて変化することを理解するであろう。ある特定の実施形態では、臨床医は、最適な治療効果を得るために、用量を滴定し、投与経路を修正してもよい。

【0135】

投与頻度は、使用される製剤中の特定のＧＩＰＲ抗原結合タンパク質の薬物動態パラメータに依存する。典型的には、臨床医は、所望の効果を達成する用量に達するまで組成物を投与する。したがって、組成物は、単回用量として、又は２回以上の用量（同じ量の所望の分子を含有しても含有しなくてもよい）として、又は移植デバイス若しくはカテーテルを介した連続注入として、経時的に投与されてもよい。適切な投与量は、適切な用量反応データの使用によって確認することができる。ある特定の実施形態では、抗原結合タンパク質は、長期間にわたって患者に投与され得る。ある特定の実施形態では、抗原結合タンパク質は、２週間毎、毎月、２ヶ月毎、３ヶ月毎、４ヶ月毎、５ヶ月毎、又は６ヶ月毎に投与される。

【0136】

薬学的組成物の投与経路は、既知の方法と一致しており、例えば、経口で、静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内、又は病変内経路による注射によって、持続放出システムによって、又は移植デバイスによってである。ある特定の実施形態では、組成物は、ボーラス注射によって、又は注入によって連続的に、又は移植デバイスによって投与されてもよい。

【0137】

組成物はまた、所望の分子が吸収又は封入された膜、スポンジ又は別の適切な材料の注入を介して局所的に投与されてもよい。移植デバイスが使用されるある特定の実施形態では、デバイスは、任意の好適な組織又は器官に移植されてもよく、所望の分子の送達は、拡散、持続放出型ボーラス、又は連続投与を介してもよい。

【0138】

また、開示されるエクスビボによるＧＩＰＲ抗原結合タンパク質薬学的組成物を使用することが望ましい場合がある。そのような場合、患者から除去された細胞、組織、又は臓器をＧＩＰＲ抗原結合タンパク質薬学的組成物に曝露し、その後、細胞、組織、及び／又は臓器を患者に再度移植する。

【0139】

医師は、特定の患者の個々のプロファイルに応じて、適切な治療適応症及び標的脂質レベルを選択することができる。高脂血症の治療指針を与えるための広く認められている１つの基準は、Ｔｈｉｒｄ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ Ｐｒｏｇｒａｍ（ＮＣＥＰ）Ｅｘｐｅｒｔ Ｐａｎｅｌ ｏｎ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｉｇｈ Ｂｌｏｏｄ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｎ Ａｄｕｌｔｓ（Ａｄｕｌｔ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｐａｎｅｌ ＩＩＩ）Ｆｉｎａｌ Ｒｅｐｏｒｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．０２－５２１５（２００２）であり、その印刷刊行物はその内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0140】

特定の用量の有効性は、バイオマーカー又は特定の生理学的パラメータの向上を参照することによって評価することができる。好適なバイオマーカー及びパラメータの例としては、グルコース、コレステロール、トリグリセリド、肝臓酵素（例えば、ＡＬＴ及びＡＳＴ）、脂質プロファイル、肝臓バイオマーカー（例えば、ＨＣＹ及びｈＹＰ）、並びに遊離コレステロール対血漿脂質の比、遊離コレステロール対膜タンパク質の比、ホスファチジルコリン対スフィンゴミエリンの比、又はＨＤＬ－Ｃレベルのうちの１つ以上などの以下の実施例に記載されるものが挙げられる。

【0141】

また、本明細書では、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質及び１つ以上の追加の治療薬を含む組成物、並びにそのような薬剤が、本明細書に開示される予防及び治療方法で使用するために、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質と同時に又は連続して投与される方法も提供される。１つ以上の追加の薬剤は、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質と共製剤化することができ、又はＧＩＰＲ抗原結合タンパク質と共投与することができる。一般に、治療方法、組成物、及び化合物は、様々な疾患状態の治療において他の治療法と組み合わせて使用することもでき、追加の薬剤は同時に投与される。

【0142】

ＧＬＰ－１受容体アゴニスト
一態様では、本発明は、代謝障害を有する対象を治療する方法を目的とし、本方法は、対象に、治療有効量のＧＬＰ－１受容体アゴニスト、及び治療有効量の、ＧＩＰＲのアミノ酸配列に少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するタンパク質に特異的に結合するＧＩＰＲアンタゴニストを投与することを含む。

【0143】

「ＧＬＰ－１受容体アゴニスト」又は「ＧＬＰ－１アゴニスト」は、ＧＬＰ－１受容体活性を有する化合物を指す。そのような例示的な化合物としては、エキセンジン、エキセンジン類似体、エキセンジンアゴニスト、ＧＬＰ－１（７－３７）、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体、ＧＬＰ－１（７－３７）アゴニストなどが挙げられる。ＧＬＰ－１受容体アゴニスト化合物は、任意選択でアミド化されてもよい。「ＧＬＰ－１受容体アゴニスト」及び「ＧＬＰ－１受容体アゴニスト化合物」という用語は、同じ意味を有する。エキセンジン、エキセンジン類似体、ＧＬＰ－１（７－３７）、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体、ＧＬＰ－１（７－３７）アゴニストなどの様々なＧＬＰ－１受容体アゴニストは、当該技術分野において既知であり、例えば、ＵＳ２０１７０２７５３７０に記載され、その内容は参照によりその全体が組み込まれる。

【0144】

「エキセンジン」という用語は、アメリカドクトカゲ（Ｇｉｌａ ｍｏｎｓｔｅｒ）の唾液分泌物中に見出される天然に存在する（又は天然に存在するものの合成バージョン）エキセンジンペプチドを含む。特に興味深いエキセンジンは、エキセンジン－３及びエキセンジン－４を含む。本明細書に記載される方法で使用されるエキセンジン、エキセンジン類似体、及びエキセンジンアゴニストは、任意選択でアミド化されてもよく、また、酸形態、薬学的に許容される塩形態、又は分子の任意の他の生理学的に活性な形態であってもよい。

【0145】

一実施形態では、ＧＩＰＲアンタゴニスト対ＧＬＰ－１受容体アゴニストのモル比は、約１：１～１：１１０、１：１～１：１００、１：１～１：７５、１：１～１：５０、１：１～１：２５、１：１～１：１０、１：１～１：５、及び１：１である。一実施形態では、ＧＩＰＲアンタゴニスト対ＧＬＰ－１受容体アゴニストのモル比は、約１：１～１：１１０、１：１～１：１００、１：１～１：７５、１：１～１：５０、１：１～１：２５、１：１～１：１０、１：１～１：５である。一実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アゴニストは、約１：１．５～１：１５０、好ましくは１：２～１：５０の治療上有効なモル比でＧＩＰＲアンタゴニストと併用される。一実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト及びＧＩＰＲアンタゴニストは、状態及び／又は疾患を治療するために必要な各化合物単独の用量よりも少なくとも約１．１～１．４、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０倍低い用量で存在する。

【0146】

本明細書に記載のＧＬＰ－１受容体アゴニスト化合物を含有する薬学的組成物は、非経口（例えば、皮下、静脈内、筋肉内）、連続注入（例えば、静脈内点滴、静脈内ボーラス、静脈内注入）、局所、鼻腔、又は経口投与などの末梢投与のために提供され得る。好適な薬学的に許容される担体及びその製剤は、標準製剤論文、例えば、ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；及びＷａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ Ｎｏ．１０，Ｓｕｐｐ．４２：２Ｓ（１９８８）に記載されている。本明細書に記載されるＧＬＰ－１受容体アゴニスト化合物は、注射又は注入用の非経口組成物で提供することができる。それらは、例えば、水、植物油（例えば、ゴマ、ピーナッツ、オリーブ油など）などの不活性油、又は他の薬学的に許容される担体に懸濁され得る。一実施形態では、化合物は、水性担体中、例えば、約３．０～８．０のｐＨ、又は約３．０～５．０の等張緩衝液中に懸濁される。組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌されてもよく、又は無菌濾過されてもよい。組成物は、ｐＨ緩衝剤などの生理学的条件に近似するために必要に応じて、薬学的に許容される補助物質を含有し得る。

【0147】

有用な緩衝液としては、例えば、酢酸緩衝液が挙げられる。治療有効量の調製物が、皮下注射、経皮注射、又は他の送達方法の後、何時間も又は何日もかけて血流に送達されるように、レポジトリ又は「デポ」遅延放出調製物の形態を使用してもよい。所望の等張性は、塩化ナトリウム又はデキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、ポリオール（マンニトール及びソルビトールなど）、又は他の無機若しくは有機溶質などの他の薬学的に許容される薬剤を使用して達成され得る。静脈内注入の一実施形態では、製剤は、（ｉ）ＧＬＰ－１受容体アゴニスト化合物と、（２）滅菌水と、任意選択的に（３）塩化ナトリウム、デキストロース、又はそれらの組み合わせと、を含み得る。

【0148】

担体又は賦形剤は、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト化合物の投与を容易にするためにも使用することができる。担体及び賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、ラクトース、グルコース、又はスクロースなどの様々な糖類、又はデンプンの種類、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、ポリエチレングリコール、及び生理学的に適合する溶媒が挙げられる。

【0149】

また、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト化合物は、薬学的に許容される塩（例えば、酸付加塩）及び／又はその複合体として製剤化することができる。薬学的に許容される塩は、それらが投与される濃度で非毒性塩である。薬学的に許容される塩としては、硫酸塩、塩酸塩、リン酸塩、スルファメート、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩及びキナ酸塩を含有するものなどの酸付加塩が挙げられる。薬学的に許容される塩は、塩酸、硫酸、リン酸、スルファミン酸、酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、マロン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、シクロヘキシルスルファミン酸、及びキン酸などの酸から得ることができる。そのような塩は、例えば、遊離酸又は塩基形態の生成物を、塩が不溶性である溶媒又は媒体中で適切な塩基又は酸の１つ以上の当量と反応させることによって、又は次いで真空中又は凍結乾燥によって除去される水などの溶媒中で反応させることによって、又は既存の塩のイオンを適切なイオン交換樹脂上の別のイオンと交換することによって調製され得る。

【0150】

ＧＬＰ－１受容体アゴニスト化合物の例示的な医薬製剤は、米国特許第７，５２１，４２３号、米国特許第７，４５６，２５４号、ＵＳ２０１７／０２７５３７０、ＵＳ２００４／０１０６５４７、ＷＯ２００６／０６８９１０、ＷＯ２００６／１２５７６３などに記載されており、これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。

【0151】

本明細書に記載される方法で使用される本明細書に記載されるＧＬＰ－１受容体アゴニスト化合物の治療有効量は、典型的には、約０．０１μｇ～約５ｍｇ、約０．１μ～約２．５ｍｇ、約１μｇ～約１ｍｇ、約１μｇ～約５０μｇ、又は約１μｇ～約２５μｇである。あるいは、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト化合物の治療有効量は、７０ｋｇの患者の体重に基づいて約０．００１μｇ～約１００μｇ、又は７０ｋｇの患者の体重に基づいて約０．０１μｇ～約５０μｇであってもよい。これらの治療有効量は、製剤に応じて、１回／日、２回／日、３回／日、１回／週、２週間に１回、又は１回／月に投与することができる。投与される正確な用量は、例えば、即時放出製剤又は徐放性製剤などの製剤によって決定される。経皮、鼻腔又は経口剤形の場合、投薬量は約５倍から約１０倍に増加し得る。

【0152】

ある特定の実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アゴニストは、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質と同時に投与される。一実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アゴニストは、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質の後に投与される。一実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アゴニストは、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質の前に投与される。ある特定の実施形態では、対象又は患者は、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質による更なる処置を受ける前に、すでにＧＬＰ－１受容体アゴニストで処置されている。

【0153】

使用及び方法
本明細書に開示される抗原結合タンパク質は、種々の有用性を有する。抗原結合タンパク質は、例えば、特異的結合アッセイ、ＧＩＰＲの親和性精製、及びＧＩＰＲ活性の他のアンタゴニストを特定するためのスクリーニングアッセイにおいて有用である。抗原結合タンパク質の他の用途として、例えば、ＧＩＰＲ関連疾患又は状態の診断、及びＧＩＰＲの有無を決定するためのスクリーニングアッセイが挙げられる。提供される抗原結合タンパク質がアンタゴニストであることを考えると、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質は、食物摂取量を維持又は増加させ、脂肪質量％を増加させ、除脂肪質量％を増加させ、グルコース耐性を改善し、インスリンレベルを低下させ、コレステロール及びトリグリセリドレベルを低下させる間であっても、体重増加を減少させる治療方法において価値を有する。したがって、抗原結合タンパク質は、糖尿病、例えば、２型糖尿病、肥満、脂質異常症、グルコースレベル上昇又はインスリンレベル上昇の治療及び予防に有用である。

【0154】

治療方法
ＧＩＰＲに関連する疾患及び／又は状態に対する現在の治療は、最適以下である。ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質、特に抗ＧＩＰＲ抗体は、部分的には、それらの高度の特異性、限定されたオフターゲット効果、及び優れた安全性プロファイルのために、これらの疾患又は状態を治療することにおいて有望である。本明細書に記載されるＧＩＰＲ抗原結合タンパク質、抗体、組成物、及び製剤を使用して、ＧＩＰＲを阻害し、それによって疾患又は状態を治療することができる。したがって、本明細書に記載されるＧＩＰＲ結合タンパク質、例えば、抗体を使用して、代謝状態又は障害を治療、診断、又は改善することができる。

【0155】

一態様では、本明細書に記載されるＧＩＰＲ結合タンパク質、例えば、抗体を使用して、代謝状態又は障害を治療又は改善することができる。一実施形態では、治療される代謝障害は、脂肪性肝疾患である。一実施形態では、治療される代謝障害は、糖尿病、例えば、２型糖尿病である。別の実施形態では、代謝状態又は障害は、肥満症である。他の実施形態では、代謝状態又は障害は、脂質異常症、グルコースレベルの上昇、インスリンレベルの上昇、又は糖尿病性腎症である。例えば、ＧＩＰＲ結合ペプチドを使用して治療又は改善することができる代謝状態又は障害は、ヒト対象が１２５ｍｇ／ｄＬ以上、例えば、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００又は２００ｍｇ／ｄＬを超える空腹時血糖値を有する状態を含む。血糖値は、摂食又は絶食状態で、又は無作為に決定することができる。代謝状態又は障害はまた、対象が代謝状態を発症するリスクが増加している状態を含むことができる。ヒト対象の場合、そのような状態は、１００ｍｇ／ｄＬの空腹時血糖値を含む。ＧＩＰＲ結合タンパク質を含む薬学的組成物を使用して治療することができる状態は、参照により本明細書に組み込まれる、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃａｒｅ ｉｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ－２０１１，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ １，Ｓ１１－Ｓ６１，２０１０にも見出すことができる。

【0156】

適用例において、脂肪性肝疾患、２型糖尿病、グルコースレベルの上昇、インスリンレベルの上昇、脂質異常、肥満又は糖尿病性腎症などの代謝障害又は状態は、その治療を必要とする患者に、治療有効量のＧＩＰＲ結合タンパク質を投与することによって治療することができる。投与は、ＩＶ注射、腹腔内（ＩＰ）注射、皮下注射、筋肉内注射などによって、又は錠剤又は液体形成の形態で経口で、本明細書に記載のように行うことができる。いくつかの状況では、治療有効量又は好ましい用量のＧＩＰＲ結合タンパク質は、臨床医によって決定することができる。治療有効量のＧＩＰＲ結合タンパク質は、とりわけ、投与スケジュール、投与される薬剤の単位用量、ＧＩＰＲ結合タンパク質が他の治療薬と組み合わせて投与されるかどうか、レシピエントの免疫状態及び健康に依存する。「治療有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、研究者、医師、又は他の臨床医が求める組織系、動物、又はヒトにおける生物学的又は薬学的応答を誘発するＧＩＰＲ結合タンパク質の量を意味し、これには、治療されている疾患又は障害の症状の緩和又は改善、すなわち、１つ以上の所望の生物学的又は薬学的応答の観察可能なレベルをサポートするＧＩＰＲ結合タンパク質の量、例えば、血糖、インスリン、トリグリセリド、又はコレステロールレベルの低下、体重の減少、又はグルコース耐性、エネルギー消費、又はインスリン感受性の改善が含まれる。

【0157】

ＧＩＰＲ結合タンパク質の治療有効量もまた、所望の結果によって変化し得ることに留意されたい。したがって、例えば、低レベルの血糖が示される状況では、ＧＩＰＲ結合タンパク質の用量は、比較的低レベルの血糖が望まれる用量よりも対応して高くなる。逆に、より高いレベルの血糖が示される状況では、ＧＩＰＲ結合タンパク質の用量は、比較的高いレベルの血糖が望まれる用量よりも対応して低くなる。様々な実施形態において、対象は、１００ｍｇ／ｄＬ以上の血糖値を有するヒトであり、ＧＩＰＲ結合タンパク質で処置することができる。

【0158】

一実施形態では、本開示の方法は、第１に、対象におけるグルコース、インスリン、コレステロール、脂質などの１つ以上の代謝的に関連する化合物のベースラインレベルを測定することを含む。次いで、ＧＩＰＲ結合タンパク質を含む薬学的組成物を、対象に投与する。所望の期間の後、対象における１つ以上の代謝的に関連する化合物（例えば、血糖、インスリン、コレステロール、脂質）のレベルを再び測定する。次いで、対象における代謝的に関連する化合物の相対変化を決定するために、２つのレベルを比較することができる。その比較の結果に応じて、ＧＩＰＲ結合タンパク質を含む薬学的組成物の別の用量を投与して、１つ以上の代謝関連化合物の所望のレベルを達成することができる。

【0159】

上述のように、ＧＩＰＲ結合タンパク質を含む薬学的組成物は、別の化合物と共投与することができる。ＧＩＰＲ結合タンパク質と共投与される化合物の同一性及び特性は、治療又は改善される状態の性質に依存することになる。ＧＩＰＲ結合タンパク質を含む薬学的組成物と組み合わせて投与することができる化合物の非限定的な例としては、ロシグリシトン、ピオグリシトン、レパグリニド、ナグリチニド、メトホルミン、エキセナチド、スチアグリプチン、プラムリンチド、グリピジド、グリムプリリドアカルボース、及びミグリトールが挙げられる。

【0160】

診断法
本明細書で提供されるＧＩＰＲ抗原結合タンパク質は、生体試料中のＧＩＰＲの検出に有用である。例えば、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質は、診断アッセイ、例えば、血清などの試料中に発現されるＧＩＰＲを検出及び／又は定量するための結合アッセイにおいて使用され得る。

【0161】

記載される抗原結合タンパク質は、診断目的で使用して、ＧＩＰＲに関連する疾患及び／又は状態を検出、診断、又は監視することができる。開示される抗原結合タンパク質は、当業者に既知の古典的免疫組織学的方法（例えば、Ｔｉｊｓｓｅｎ，１９９３，Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，Ｖｏｌ １５（Ｅｄｓ Ｒ．Ｈ．Ｂｕｒｄｏｎ ａｎｄ Ｐ．Ｈ．ｖａｎ Ｋｎｉｐｐｅｎｂｅｒｇ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）、Ｚｏｌａ，１９８７，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｐｐ．１４７－１５８（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｊａｌｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６－９８５、Ｊａｌｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７－３０９６）を使用して、試料中のＧＩＰＲの存在の検出のための手段を提供する。ＧＩＰＲの検出は、インビボ又はインビトロで行うことができる。

【0162】

本明細書に提供される診断用途には、ＧＩＰＲの発現を検出するための抗原結合タンパク質の使用が含まれる。ＧＩＰＲの存在の検出に有用な方法の例としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）及びラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）などのイムノアッセイが挙げられる。

【0163】

診断用途の場合、抗原結合タンパク質は、典型的に、検出可能な標識基で標識されることになる。好適な標識基には、以下が含まれるが、これらに限定されない：放射性同位体又は放射性核種（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、及び^１３１Ｉ）、蛍光基（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素基（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光基、ビオチニル基、又は二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）。いくつかの実施形態では、標識基は、潜在的な立体障害を低減するために、様々な長さのスペーサーアームを介して抗原結合タンパク質に結合される。タンパク質を標識するための様々な方法が当該技術分野で既知であり、使用され得る。

【0164】

いくつかの実施形態では、ＧＩＰＲ抗原結合タンパク質は、当該技術分野で既知の技法を使用して単離され、測定される。例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（ｅｄ．１９９１ ａｎｄ ｐｅｒｉｏｄｉｃ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）、Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｄ．，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓを参照されたい。

【0165】

本開示の別の態様は、提供される抗原結合タンパク質とＧＩＰＲへの結合のために競合する試験分子の存在を検出するためのものである。そのようなアッセイの１つの例は、試験分子の存在又は不在下で、ある量のＧＩＰＲを含有する溶液中の遊離抗原結合タンパク質の量を検出することを伴うであろう。遊離抗原結合タンパク質（すなわち、ＧＩＰＲに結合しない抗原結合タンパク質）の量の増加は、試験分子が抗原結合タンパク質とＧＩＰＲ結合のために競合することができることを示す。一実施形態では、抗原結合タンパク質は、標識基で標識される。あるいは、試験分子を標識し、遊離試験分子の量を、抗原結合タンパク質の存在下及び非存在下で監視する。

【0166】

キット
また、開示された方法を実践するためのキットも提供される。そのようなキットは、滅菌容器において提供され得る、本明細書において提供されるペプチド又はタンパク質をコードする核酸、そのような核酸を含むベクター及び細胞、並びにそのような核酸含有化合物を含む薬学的組成物を含むことができる。任意選択で、代謝障害の治療に提供される薬学的組成物を使用する方法に関する説明書もまた含まれ得るか、又は、患者又は医療サービス提供者に利用可能にすることができる。

【0167】

一態様では、キットは、（ａ）治療有効量のＧＩＰＲ結合タンパク質を含む薬学的組成物と、（ｂ）薬学的組成物のための１つ以上の容器と、を含む。そのようなキットはまた、その使用のための説明書を含むことができ、説明書は、治療される正確な代謝障害に合わせて調整することができる。説明書は、キットに提供される材料の使用及び性質を説明することができる。ある特定の実施形態では、キットは、脂肪性肝疾患、グルコースレベル上昇、インスリンレベル上昇、肥満、２型糖尿病、脂質異常症又は糖尿病性腎症などの代謝障害を治療するために患者が投与を行うための説明書を含む。

【0168】

説明書は、紙又はプラスチックなどの基板上に印刷され得、パッケージインサートとしてキットに、キット又はその構成要素の容器のラベルに（例えば、包装に関連付けられて）存在し得る。他の実施形態では、説明書は、適切なコンピュータ可読記憶媒体、例えば、ＣＤ－ＲＯＭ、ディスケットなどに存在する電子記憶データファイルとして存在する。更に他の実施形態では、実際の説明書は、キット内に存在しないが、インターネットを介してなどの遠隔ソースから説明書を取得するための手段が提供される。この実施形態の例は、説明書を閲覧することができる及び／又は命令をダウンロードすることができるウェブアドレスを含むキットである。

【0169】

多くの場合、キットの一部又は全ての構成要素は、無菌性を維持するために適切な包装に包装されることが望ましい。キットの構成要素は、単一の、容易に取り扱われるユニットを作るためにキット収容要素に包装することができ、キット収容要素、例えば、箱又は類似の構造は、例えば、キットの構成要素の一部又は全ての無菌性を更に維持するために、気密性のある容器であっても、そうでなくてもよい。

【0170】

定義
用語「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は、一本鎖及び二本鎖ヌクレオチドポリマーの両方を含む。ポリヌクレオチドを含むヌクレオチドは、リボヌクレオチド若しくはデオキシリボヌクレオチド、又はいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾形態であり得る。修飾には、ブロムリジン及びイノシン誘導体などの塩基修飾２’，３’－ジデオキシリボースなどのリボース修飾、並びにホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレン酸塩、ホスホロジセレン酸塩、ホスホロアニルチオエート、ホスホラニラデート及びホスホロアミデートなどのヌクレオチド間結合修飾が含まれる。

【0171】

「オリゴヌクレオチド」という用語は、２００個以下のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを意味する。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１０～６０塩基の長さである。他の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０～４０ヌクレオチド長である。オリゴヌクレオチドは、例えば、変異型遺伝子の構築における使用のために、一本鎖であっても二本鎖であってもよい。オリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチド又はアンチセンスオリゴヌクレオチドであり得る。オリゴヌクレオチドは、検出アッセイのために、放射性標識、蛍光標識、ハプテン又は抗原標識を含む標識を含むことができる。オリゴヌクレオチドは、例えば、ＰＣＲプライマー、クローニングプライマー、又はハイブリダイゼーションプローブとして使用されてもよい。

【0172】

「単離された核酸分子」という用語は、５’末端から３’末端まで読み取られるデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド塩基の一本鎖又は二本鎖ポリマー（例えば、本明細書に提供されるＧＩＰＲ核酸配列）、又はその類似体を指し、全核酸が源細胞から単離されたときに核酸が天然に見出されるポリペプチド、ペプチド、脂質、炭水化物、ポリヌクレオチド又は他の材料の少なくとも約５０％から分離されている。好ましくは、単離された核酸分子は、ポリペプチド産生又はその治療的、診断的、予防的又は研究的使用におけるその使用を妨げるであろう核酸の自然環境に見出される任意の他の汚染核酸分子又は他の分子を実質的に含まない。

【0173】

「ベクター」という用語は、タンパク質コード情報を宿主細胞に移すために使用される任意の分子又は実体（例えば、核酸、プラスミド、バクテリオファージ又はウイルス）を意味する。いくつかの実施形態では、「ベクター」は、（ａ）ポリペプチドをコードする核酸配列の発現を促進する；（ｂ）それからのポリペプチドの産生を促進する；（ｃ）それを用いた標的細胞のトランスフェクション／形質転換を促進する；（ｄ）核酸配列の複製を促進する；（ｅ）核酸の安定性を促進する；（ｆ）核酸及び／又は形質転換／形質転換された細胞の検出を促進する；及び／又は（ｇ）それ以外の場合、ポリペプチドをコードする核酸に有利な生物学的及び／又は生理化学的機能を付与する送達ビヒクルを指す。ベクターは、染色体、非染色体、及び合成核酸ベクター（発現制御エレメントの好適なセットを含む核酸配列）を含む任意の好適なベクターであり得る。そのようなベクターの例としては、ＳＶ４０の誘導体、細菌プラスミド、ファージＤＮＡ、バキュロウイルス、酵母プラスミド、プラスミド及びファージＤＮＡの組み合わせに由来するベクター、並びにウイルス核酸（ＲＮＡ又はＤＮＡ）ベクターが挙げられる。

【0174】

用語「発現ベクター」又は「発現構築物」は、宿主細胞の形質転換に好適であり、それに作動可能に連結された１つ以上の異種コード領域の発現を指示及び／又は制御する（宿主細胞と併せて）核酸配列を含むベクターを指す。発現構築物は、転写、翻訳、及びイントロンが存在する場合、それに作用可能に連結されたコード領域のＲＮＡスプライシングに影響を及ぼす配列を含み得るが、これらに限定されない。

【0175】

本明細書で使用される場合、「作動可能に連結された」とは、用語が適用される構成成分が、それらが適切な条件下でそれらの固有の機能を実行することを可能にする関係にあることを意味する。例えば、タンパク質コード配列に「作動可能に連結された」ベクター内のコントロール配列をそれにライゲーションして、タンパク質コード配列の発現が、コントロール配列の転写活性と適合する条件下で達成されるようにする。

【0176】

「宿主細胞」という用語は、核酸配列で形質転換され、それによって目的の遺伝子を発現する細胞を意味する。この用語は、目的の遺伝子が存在する限り、子孫が形態学的に同一であるか、又は元の親細胞と遺伝子構成において同一であるかどうかにかかわらず、親細胞の子孫を含む。

【0177】

用語「ポリペプチド」又は「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書において互換的に使用される。本用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の類似体又は模倣体であるアミノ酸ポリマー、並びに天然アミノ酸ポリマーにも適用される。この用語はまた、例えば、糖タンパク質を形成するための炭水化物残基の付加によって修飾された、又はリン酸化されたアミノ酸ポリマーを包含することができる。ポリペプチド及びタンパク質は、天然に存在する非組換え細胞によって産生され得るか、又は遺伝子操作された又は組換え細胞によって産生され、天然タンパク質のアミノ酸配列を有する分子、又は天然配列の１つ以上のアミノ酸からの欠失、付加、及び／又は置換を有する分子を含む。「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、抗原結合タンパク質の１つ以上のアミノ酸からの欠失、付加、及び／又は置換を有するＧＩＰＲ抗原結合タンパク質、抗体、又は配列を特異的に包含する。「ポリペプチド断片」という用語は、完全長タンパク質と比較して、アミノ末端欠失、カルボキシル末端欠失、及び／又は内部欠失を有するポリペプチドを指す。そのような断片は、完全長タンパク質と比較して修飾アミノ酸を含有してもよい。ある特定の実施形態において、断片は、約５～５００アミノ酸長である。例えば、断片は、少なくとも５、６、８、１０、１４、２０、５０、７０、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、又は４５０個のアミノ酸長であり得る。有用なポリペプチド断片としては、結合ドメインを含む、抗体の免疫学的に機能する断片が挙げられる。

【0178】

「単離されたポリペプチド」という用語は、ポリペプチドが源細胞から単離されたときに天然に見出されるポリペプチド、ペプチド、脂質、炭水化物、ポリヌクレオチド、又は他の材料の少なくとも約５０％から分離されたポリペプチド（例えば、本明細書に提供されるＧＩＰＲポリペプチド配列又は本発明の抗原結合タンパク質）を指す。好ましくは、単離されたポリペプチドは、その治療的、診断的、予防的又は研究的使用を妨げるであろう、その自然環境に見出される任意の他の汚染ポリペプチド又は他の汚染物質を実質的に含まない。

【0179】

「コードする」という用語は、１つ以上のアミノ酸をコードするポリヌクレオチド配列を指す。この用語は、開始又は停止コドンを必要としない。

【0180】

ポリペプチド（例えば、抗体などの抗原結合タンパク質）の「バリアント」は、１つ以上のアミノ酸残基が、別のポリペプチド配列と比較して、アミノ酸配列に挿入されるか、アミノ酸残基から欠失されるか、及び／又はアミノ酸配列に置換されるアミノ酸配列を含む。バリアントには、融合タンパク質が含まれる。

【0181】

参照ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質の機能的バリアント若しくは等価物は、参照ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質のポリペプチド誘導体、例えば、１つ以上の点変異、挿入、欠失、切断（ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎ）、融合タンパク質、又はそれらの組み合わせを有するタンパク質を指す。それは、参照ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質のへの活性を実質的に保持する。一般に、機能的等価物は、参照ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質と少なくとも６０％（例えば、６０％～１００％（両端の値を含む）の任意の数、例えば、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、及び９９％）同一である。

【0182】

ポリペプチドの「誘導体」は、例えば、別の化学部分へのコンジュゲーションを介して、挿入、欠失、又は置換バリアントとは異なるいくつかの方法で化学修飾されたポリペプチド（例えば、抗体などの抗原結合タンパク質）である。

【0183】

本明細書で言及される「抗体」という用語は、全抗体及びその任意の抗原結合断片又は一本鎖を含む。全抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では、Ｖ_Ｈと略記する）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３の３つのドメインから構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書では、Ｖ_Ｌと略記する）及び軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、Ｃ_Ｌから構成される。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変性の領域に更に細分化され、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域とともに散在させることができる。各Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序で並べられた３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる：ＦＲｌ、ＣＤＲｌ、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖可変領域ＣＤＲ及びＦＲは、ＨＦＲｌ、ＨＣＤＲｌ、ＨＦＲ２、ＨＣＤＲ２、ＨＦＲ３、ＨＣＤＲ３、ＨＦＲ４である。軽鎖可変領域ＣＤＲ及びＦＲは、ＬＦＲｌ、ＬＣＤＲｌ、ＬＦＲ２、ＬＣＤＲ２、ＬＦＲ３、ＬＣＤＲ３、ＬＦＲ４である。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の成分（ＣＩｑ）を含む、免疫グロブリンの宿主組織又は因子への結合を媒介することができる。

【0184】

本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合断片又は部分」（又は単に「抗体断片又は部分」）という用語は、抗原（例えば、ＧＩＰＲ）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって行われ得ることが示されている。抗体の「抗原結合断片又は部分」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｌ及びＣ_ＨＩドメインからなる一価断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、（ｉｉｉ）本質的にヒンジ領域の一部を有するＦａｂであるＦａｂ’断片（ＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（Ｐａｕｌ ｅｄ．，３^ｒｄ ｅｄ．１９９３）を参照されたい）、（ｉｖ）Ｖ_Ｈ及びＣ_ＨＩドメインからなるＦｄ断片、（ｖ）抗体の単一アームのＶ_Ｌ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）、（ｖｉｉ）単離されたＣＤＲ、並びに（ｖｉｉｉ）ナノボディ、単一可変ドメイン及び２つの定常ドメインを含有する重鎖可変領域が挙げられる。更に、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え方法を使用して、ＶＬ及びＶＨ領域が対合して一価分子（一本鎖Ｆｖ又はｓｃＦｖとして知られる）を形成する単一のタンパク質鎖として作製することを可能にする合成リンカーによって結合することができる；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照されたい）。そのような一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合断片又は部分」という用語内に包含されることが意図される。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来技術を使用して得られ、断片は、インタクト抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。

【0185】

本明細書で使用される場合、「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、ＧＩＰＲなどの特定の抗原に特異的に結合する単離された抗体は、特定の抗原以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。単離された抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まないことができる。

【0186】

本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一分子組成物の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示す。

【0187】

「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことが意図される。更に、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列にも由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム又は部位特異的変異誘発によって、又はインビボでの体細胞変異によって導入される変異）を含むことができる。しかしながら、本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳類種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むことを意図しない。

【0188】

「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体を指す。一実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含み、ヒト重鎖導入遺伝子と、不死化細胞に融合された軽鎖導入遺伝子とを含むゲノムを有するハイブリドーマによって産生され得る。

【0189】

本明細書で使用される場合、「組換えヒト抗体」という用語は、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子のためのトランスジェニック又はトランス染色体である動物（例えば、マウス）から単離された抗体、又はそこから調製されたハイブリドーマ（以下に更に記載）、（ｂ）ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えば、トランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換え、組換えヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、及び（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作製、又は単離された抗体などの、組換え手段によって調製、発現、作製、又は単離された全てのヒト抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、フレームワーク及びＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかしながら、ある特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列に対してトランスジェニックな動物が使用される場合、インビボ体細胞突然変異誘発）を受けることができ、したがって、組換え抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列に由来し、関連しながらも、ヒト抗体生殖系列レパートリー内にインビボで自然に存在し得ない配列である。

【0190】

「アイソタイプ」という用語は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭ又はＩｇＧ１）を指す。「抗原を認識する抗体」及び「抗原に特異的な抗体」は、本明細書では、「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と同義に使用される。

【0191】

「ヒト抗体誘導体」という用語は、ヒト抗体の任意の修飾形態、例えば、抗体と別の薬剤又は抗体とのコンジュゲートを指す。「ヒト化抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳類種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列が、ヒトのフレームワーク配列に移植された抗体を指すことが意図されている。追加のフレームワーク領域修飾は、ヒトフレームワーク配列内で行うことができる。

【0192】

「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を指すことが意図されている。この用語はまた、その可変領域配列又はＣＤＲが１つの供給源（例えば、ＩｇＡ１抗体）に由来し、定常領域配列又はＦｃが異なる供給源（例えば、異なる抗体、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ又はＩｇＭ抗体）に由来する抗体を指すことができる。

【0193】

「単鎖抗体」又は「ｓｃＦｖ」は、重鎖及び軽鎖可変領域が柔軟なリンカーによって接続されて単一のポリペプチド鎖を形成し、それが抗原結合領域を形成するＦｖ分子である。ｓｃＦｖは、ＷＯ８８／０１６４９及び米国特許第４，９４６，７７８号及び同第５，２６０，２０３号において詳細に説明されており、これらの開示は参照により組み込まれる。

【0194】

「ドメイン抗体」又は「一本鎖免疫グロブリン」は、重鎖の可変領域又は軽鎖の可変領域のみを含有する免疫学的に機能する免疫グロブリン断片である。ドメイン抗体の例としては、ナノボディ（商標）が挙げられる。場合によっては、２つ以上のＶＨ領域は、ペプチドリンカーと共有結合して、二価ドメイン抗体を作製する。二価ドメイン抗体の２つのＶＨ領域は、同じ又は異なる抗原を標的とし得る。

【0195】

本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）により表すことができる。親和性は、本明細書に記載されるものを含む、当技術分野で既知の一般的な方法によって測定され得る。

【0196】

本明細書で使用される場合、「ＧＩＰＲに特異的に結合する」タンパク質は、解離定数（ＫＤ）が、表面プラズモン共鳴技術（例えば、ＢＩＡＣｏｒｅ、ＧＥ－Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）又は結合平衡除外法（ＫｉｎＥｘＡ、Ｓａｐｉｄｙｎｅ、Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄ．）によって測定されるとき、≦１０^－６Ｍである場合に、ヒトＧＩＰＲに結合するタンパク質を指す。好ましくは、タンパク質（例えば、抗体）は、「高親和性」、すなわち、１×１０^－７Ｍ以下、より好ましくは５×１０^－８Ｍ以下、より好ましくは３×１０^－８Ｍ以下、より好ましくは１×１０^－８Ｍ以下、より好ましくは５×１０^－９Ｍ以下、又は更により好ましくは１×１０^－９Ｍ以下のＫＤでＧＩＰＲに結合する。本明細書で使用される場合、「実質的に結合しない」という用語は、タンパク質又は細胞に高い親和性で結合しない、又は結合しないことを意味し、すなわち、１×１０^－６Ｍ以上、より好ましくは１×１０^－５Ｍ以上、より好ましくは１×１０^－４Ｍ以上、より好ましくは１×１０^－３Ｍ以上、更により好ましくは１×１０^－２Ｍ以上のＫＤでタンパク質又は細胞に結合する。

【0197】

本明細書で使用される場合、「Ｋａｓｓｏｃ」又は「Ｋａ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度を指すことが意図され、一方、本明細書で使用される場合、「Ｋｄｉｓ」又は「Ｋｄ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度を指すことが意図される。本明細書で使用される場合、「ＫＤ」という用語は、Ｋｄ対Ｋａの比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指すことが意図される。抗体のＫＤ値は、当該技術分野において十分に確立された方法を使用して決定することができる。抗体のＫＤを決定するための好ましい方法は、表面プラズモン共鳴を使用すること、好ましくはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用することである。

【0198】

本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域で特異的な抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は、２つ以上のエピトープを有し得る。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域に結合してもよく、異なる生物学的効果を有してもよい。「エピトープ」という用語はまた、Ｂ及び／又はＴ細胞が応答する抗原上の部位を指す。また、抗体によって結合される抗原の領域も指す。エピトープは、構造的又は機能的として定義され得る。機能的エピトープは、一般に、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与する残基を有する。エピトープはまた、立体構造、すなわち、非線形アミノ酸から構成され得る。ある実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、又はスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面基である決定基を含んでもよく、ある実施形態では、特定の三次元構造特性、及び／又は特定の電荷特性を有してもよい。エピトープは、典型的には、固有の空間立体配座において、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸を含む。どのエピトープが所与の抗体によって結合されるかを決定する方法（すなわち、エピトープマッピング）は、当該技術分野で周知であり、例えば、免疫ブロッティング及び免疫沈降アッセイを含み、ここで、ＧＩＰＲタンパク質からの重複又は連続ペプチドが、所与の抗体との反応性について試験される。エピトープの空間コンフォメーションを決定する方法としては、当該技術分野及び本明細書に記載の技術、例えば、Ｘ線結晶学及び二次元核磁気共鳴が挙げられる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい）。

【0199】

「エピトープマッピング」という用語は、抗体－抗原認識のための分子決定因子の同定プロセスを指す。

【0200】

「エピトープに結合する」又は「エピトープを認識する」という用語は、抗体又は抗体断片に関して、抗原内のアミノ酸の連続的又は不連続的なセグメントを指す。当業者は、用語が必ずしも抗体又は抗体断片がエピトープ配列内の全てのアミノ酸に直接接触していることを意味しないことを理解する。

【0201】

「同一のエピトープに結合する」という用語は、２つ以上の抗体に関して、抗体がアミノ酸の同じ、重複する、又は連続的又は不連続的なセグメントを包含するように結合することを意味する。当業者は、「同一のエピトープに結合する」という語句は、抗体が全く同一のアミノ酸に結合又は接触することを必ずしも意味しないことを理解する。抗体が接触する正確なアミノ酸は、異なる場合がある。例えば、第１の抗体は、第２の抗体によって結合されるアミノ酸のセグメントによって完全に包含されるアミノ酸のセグメントに結合することができる。別の実施例では、第１の抗体は、第２の抗体によって結合された１つ以上のセグメントに有意に重複するアミノ酸の１つ以上のセグメントに結合する。本明細書の目的のために、そのような抗体は、「同じエピトープに結合する」とみなされる。

【0202】

「標的への結合に関して他の抗体と競合する」抗体は、他の抗体の標的への結合を（部分的に又は完全に）阻害する抗体を指す。２つの抗体が、標的への結合に関して互いに競合するかどうか、すなわち、一方の抗体が他方の抗体の標的への結合を阻害するかどうか及びどの程度であるかは、既知の競合実験を使用して判定され得る。ある実施形態では、抗体は、別の抗体と標的との結合を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％競合し、阻害する。阻害又は競合のレベルは、どの抗体が「遮断抗体」（すなわち、標的と最初にインキュベートされる寒冷（ｃｏｌｄ）抗体）であるかに応じて異なってもよい。競合アッセイは、例えば、Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｒｏｔｏｃ；２００６；ｄｏｉ：１０．１１０１／ｐｄｂ．ｐｒｏｔ４２７７又はＥｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅによる「Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ＵＳＡ１９９９の第１１章に記載されるように実施することができる。競合抗体は、同じエピトープ、重複するエピトープ、又は隣接するエピトープに結合する（例えば、立体障害によって証明されるように）。他の競合結合アッセイとしては、固相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２（１９８３）を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）を参照されたい）；固相直接標識化アッセイ、固相直接標識化サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８８））；１－１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６（１９９０））、及び直接標識化ＲＩＡ．（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２－７７（１９９０））が挙げられる。

【0203】

本明細書で使用される場合、「免疫応答」という用語は、脊椎動物内での外来剤に対する生物学的応答を指し、この応答は、生物をこれらの薬剤及びそれらによって引き起こされる疾患から保護する。免疫応答は、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞若しくは好中球）、並びにこれらの細胞若しくは肝臓（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）のいずれかによって産生される可溶性巨大分子の作用によって媒介され、脊椎動物の侵入病原体、病原体に感染した細胞若しくは組織、がん性若しくは他の異常細胞、又は自己免疫若しくは病理学的炎症の場合、正常なヒト細胞若しくは組織の選択的標的化、結合、損傷、破壊、及び／若しくは脊椎動物の体内からの排除をもたらす。免疫反応としては、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞若しくはＴｈ細胞、例えば、ＣＤ４＋若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化若しくは阻害、又はＴｒｅｇ細胞の阻害が挙げられる。

【0204】

本明細書で使用される場合、「検出可能な標識」という用語は、放射性同位体、蛍光体、化学発光体、発色団、酵素、酵素基質、酵素補助因子、酵素阻害剤、発色団、色素、金属イオン、金属ゾル、リガンド（例えば、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン又はハプテン）、挿入（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｎｇ）色素などを含むがこれらに限定されない、検出可能な分子を指す。「蛍光体」という用語は、検出可能な範囲で蛍光を示すことができる物質又はその一部を指す。

【0205】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、動物を指す。好ましくは、動物は、哺乳動物、例えば、ヒト又は非ヒト動物である。対象は、例えば、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚、鳥なども指す。好ましい実施形態では、対象はヒトである。

【0206】

本明細書で使用される場合、任意の疾患又は障害の「治療すること」又は「治療」という用語は、一実施形態では、疾患又は障害を緩和すること（すなわち、疾患又はその臨床症状の少なくとも１つの発症を阻止又は低減すること）を指す。別の実施形態では、「治療すること」又は「治療」とは、患者によって識別され得ない少なくとも１つの身体パラメータを改善することを指す。更に別の実施形態では、「治療すること」又は「治療」は、疾患又は障害を、身体的に、（例えば、識別可能な症状の安定化）、生理学的に、（例えば、身体パラメータの安定化）、又は両方のいずれかで調節することを指す。更に別の実施形態では、「治療すること」又は「治療」は、疾患又は障害の発症、発達、又は進行を予防若しくは遅延させることを指す。

【0207】

「有効量」は、一般に、症状の重症度及び／又は頻度を軽減し、症状及び／又は根本的な原因を排除し、症状及び／又は根本的な原因の発生を防止し、及び／又は疾患状態（例えば、脂肪肝、糖尿病、肥満症、脂質異常症、グルコースレベルの上昇、インスリンレベルの上昇、又は糖尿病性腎症）に起因する、又はそれに関連する損傷を改善又は修復するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、有効量は治療有効量又は予防有効量である。個々の活性成分に適用する場合、単独で投与され、この用語は、その成分単独を指す。組み合わせに適用される場合、この用語は、組み合わせて投与されるか、連続的に投与されるか、又は同時に投与されるかにかかわらず、治療効果をもたらす活性成分の組み合わせ量を指す。

【0208】

「治療有効量」は、疾患状態若しくは症状、特に、疾患状態に関連する状態若しくは症状を改善するか、又はそうでなければ、疾患状態若しくは疾患に関連する任意の他の望ましくない症状の進行を、いかなる方法でも防止、妨害、遅延若しくは逆転させるのに十分な量である。

【0209】

「予防有効量」は、対象に投与されたときに、意図された予防効果、例えば、疾患状態の発症（又は再発）を予防又は遅延させる、又は疾患状態又は関連する症状の発症（又は再発）の可能性を減少させる、薬学的組成物の量である。完全な治療的又は予防効果は、必ずしも１回の用量の投与によって生じるわけではなく、一連の用量の投与後にのみ生じ得る。したがって、治療有効量又は予防有効量を、１回以上の投与で投与してもよい。

【0210】

本明細書で使用される「薬学的に許容される担体又は賦形剤」という用語は、組成物の活性成分の生物学的活性の有効性を妨げず、それが投与される濃度では宿主に対して過度に毒性がない担体培地又は賦形剤を指す。本発明の文脈において、薬学的に許容される担体又は賦形剤は、好ましくは、局所製剤に好適である。この用語には、溶媒、安定剤、可溶化剤、等張化剤、構造形成剤、懸濁剤、分散剤、キレート剤、乳化剤、消泡剤、軟膏基剤、皮膚軟化剤、皮膚保護剤、ゲル形成剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、浸透促進剤、錯化剤、潤滑剤、粘滑剤、増粘剤、生体接着性ポリマー、又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，１８ｔｈ Ｅｄ．，１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．：Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡを参照されたい）。

【0211】

本明細書で使用されるとき、本発明の文脈において（とりわけ、請求項の文脈において）使用される「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」という用語及び同様の用語は、別様に本明細書に示唆されるか、又は文脈に明確に矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方を網羅するように解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、単に、その範囲内に収まる各別個の値を個別に参照する簡略表現法としての役割を果たすことが意図される。本明細書に別段の指示がない限り、各個別の値は、本明細書に個別に列挙されているかのように本明細書に組み込まれる。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書に別段の指示がない限り、又は文脈に明確に矛盾しない限り、任意の好適な順序で実行され得る。本明細書で提供される任意の及び全ての例、又は例示的な言語（例えば、「など（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、本発明をより良く示すことを意図しているに過ぎず、他の方法で特許請求される本発明の範囲に限定をもたらさない。本明細書中のいかなる言語も、本発明の実施に不可欠な任意の非請求の要素を示すものとして解釈されるべきではない。

【0212】

本明細書に開示されるように、いくつかの範囲の値が提供される。文脈によって明確に指示されない限り、下限の単位の１０分の１までの各介在値もまた、その範囲の上限と下限との間に具体的に開示されることを理解されたい。記載された範囲内の任意の記載された値又は介在値と、その記載された範囲内の任意の他の記載された値又は介在値との間の各々のより小さい範囲は、本発明に包含される。これらのより小さい範囲の上限及び下限は、独立して、範囲内に含まれるか、又は除外されてもよく、より小さい範囲内にいずれか、どちらも、又は両方の限界が含まれる各範囲も、記載された範囲内の任意の具体的に除外された限界に従うことを条件として、本発明に包含される。記載された範囲が限界のうちの一方又は両方を含む場合、それらの含まれる限界のうちの一方又は両方を除く範囲も本明細書に含まれる。

【0213】

「約」という用語は、所与の値又は範囲の１０％以内、好ましくは５％以内、より好ましくは１％以内を指す。あるいは、「約」という用語は、当業者によって考慮される場合、平均の許容できる標準誤差内を指す。

【実施例】

【0214】

実施例１ 抗ＧＩＰＲモノクローナル抗体の生成
抗原生成：ヒトＧＩＰＲ（１－１２９、配列番号８７）Ｆｃ融合タンパク質（Ｆｃ－ｈｕＧＩＰＲ ＥＣＤ）の細胞外ドメインを調製した。この融合タンパク質をコードするＤＮＡを合成し、哺乳動物細胞発現ベクターに挿入した。Ｆｃ－ｈｕＧＩＰＲ ＥＣＤを発現するプラスミドを、ＣＨＯ細胞トランスフェクションキット（Ｚｈｕｈａｉ Ｋａｉｒｕｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃａｔ＃ Ｋ７０２０１）を使用して、無血清懸濁培養下でＣＨＯ細胞中で一過性トランスフェクトした。細胞をトランスフェクションから７日後に採取し、その後、Ｆｃ－ｈｕＧＩＰＲ ＥＣＤをプロテインＡ親和性クロマトグラフィーによって精製した。

【0215】

ｈｕＧＩＰＲを一過性発現するＣＨＯ細胞：ＣＨＯ細胞を、ＣＨＯ細胞トランスフェクションキット（Ｚｈｕｈａｉ Ｋａｉｒｕｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃａｔ＃ Ｋ７０２０１）を使用して、懸濁培養中に完全長ｈｕＧＩＰＲを発現するプラスミドでトランスフェクトした。トランスフェクションから２４時間後までに、細胞を採取し、細胞凍結培地中で再懸濁した。細胞を細胞凍結バイアルに等分し、液体窒素冷凍庫で凍結した。凍結バイアルを回収し、３７℃の水浴中で直ちに解凍した。細胞を、５％ウシ胎児血清を添加した細胞培養培地中で希釈し、１×１０^５細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種し、５％のＣＯ２で３７℃にて２４時間インキュベートした後、ヒトＧＩＰＲ特異的抗体を検出する結合アッセイに使用した。モックトランスフェクションを有するＣＨＯ細胞を陰性対照として用いた。

【0216】

免疫化：Ｂａｌｂ／ｃマウスを、フロイントアジュバントと混合したＦｃ－ｈｕＧＩＰＲ ＥＣＤタンパク質で免疫化した。マウスを毎週又は毎月のいずれかで免疫化した。最初の免疫化後に少なくとも２回の増量を行った後、血清を収集し、ヒトＧＩＰＲを一過性に発現するＣＨＯ細胞を用いた結合アッセイによって特異的な力価を決定した。

【0217】

ハイブリドーマ融合及び培養：満足な力価を示す動物を同定し、リンパ球は、リンパ節及び脾臓を流入させることから得た。リンパ球を好適な培地中でリンパ組織から解離し、組織から細胞を放出し、好適な培地中に懸濁した。

【0218】

Ｂ細胞を骨髄腫細胞株ＳＰ２／Ｏ－ＡＧ１細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１５８０）と１０：１の割合で融合させた。ＰＥＧを使用して融合を実施した。融合細胞を穏やかにペレット化し（３００×ｇ １０分）、ヒポキサンチン－メトトレキサート－チミジン［ＨＭＴ］を含有する選択培地に再懸濁させた。得られたコロニーのクローン性を最大化するために、標準的な技法を使用して、細胞を９６ウェルプレートに分配させた。培養の数日後、ハイブリドーマ上清を収集し、ヒトＧＩＰＲを一過性に発現するＣＨＯ細胞を用いた結合アッセイであるスクリーニングアッセイに供した。陽性細胞を更に選択し、標準的なクローニング及びサブクローニング技術に供した。クローン株をインビトロで増殖させ、分析用に分泌されたマウス抗体を得た。

【0219】

全細胞結合アッセイによるＧＩＰＲ特異的結合抗体の選択：ハイブリドーマ上清を、全細胞結合アッセイによってＧＩＰＲ特異的抗体についてスクリーニングした。簡潔に言うと、ＣＨＯ細胞を、完全長ｈｕＧＩＰＲを発現するプラスミドでトランスフェクトした。トランスフェクションから２４時間後、細胞を９６ウェルプレートにプレートし、２４時間インキュベートした。ハイブリドーマ条件培地を各プレートに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。細胞培養培地で３回洗浄した後、細胞をエタノールで固定し、プレートを一晩乾燥させた。ブロッキングバッファー（０．１％のＴＷＥＥＮ２０及び１％のＢＳＡを含むＰＢＳ）を２００μｌ／ウェル添加し、３７℃で１時間インキュベートした。ブロッキングバッファーを除去した後、検出抗体（ヤギ抗マウスＩｇＧ ＨＲＰコンジュゲート）を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を色検出のために添加した。模擬トランスフェクションを有するＣＨＯ細胞をカウンタースクリーンとして使用した。ＧＩＰＲ発現ＣＨＯ細胞を有する特異的陽性シグナルを有する任意のクローンをサブクローニングのために選択した。結合アッセイにおいて合計８７個のクローンが陽性であった。更なるサブクローニング及び再試験により、７つの陽性クローンが同定された。その後、それらを配列決定した。

【0220】

実施例２ 選択された抗ＧＩＰＲ抗体のインビトロ活性
得られた抗ＧＩＰＲモノクローナル抗体を、ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒ（登録商標）ＧＩＰＲ－ＣＲＥ－ｂｌａ ＨＥＫ ２９３Ｔ細胞ベースアッセイ（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ、ＴＨＥＲＭＯ ＦＩＳＨＥＲ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ）で試験した。ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒ（登録商標）ＧＩＰＲ－ＣＲＥ－ｂｌａ ＨＥＫ ２９３Ｔ細胞は、ＣｅｌｌＳｅｎｓｏｒ（登録商標）ＣＲＥ－ｂｌａ ＨＥＫ ２９３Ｔ細胞株に安定的に組み込まれたヒトＧＩＰＲを含み、ＣｅｌｌＳｅｎｓｏｒ（登録商標）ＣＲＥ－ｂｌａ ＨＥＫ ２９３Ｔは、ＣＲＥ応答要素の制御下でベータ－ラクタマーゼレポーター遺伝子を含む。このアッセイは、哺乳類に最適化されたＢＬＡレポーター遺伝子をＦＲＥＴを有効にした基質と組み合わせて使用して、ヒトＧＩＰＲを発現する細胞において信頼性の高い感度の検出を提供する。このアッセイは、製造業者のプロトコルに従って実施した。その結果を図１に示す。

【0221】

簡潔に言うと、アッセイの前日に、細胞を５ｍＭのＥＤＴＡで分離し、ウェル当たり５０，０００細胞／１００μＬの９６ウェルプレートに播種した。アゴニストモードについては、ウェル当たり２５μＬのリガンド（ヒトＧＩＰ、最終濃度の５倍）を添加した。アンタゴニストモードにおいて、１２．５μＬの抗体（又は最終濃度１０倍の培地）を各ウェルに添加し、細胞を３７℃で３０分間培養した。１２．５μＬのリガンド（ヒトＧＩＰ、アッセイ緩衝液で調製した適切な濃度）を各ウェルに添加した。次いで、細胞を３７℃で５時間インキュベートした。次いで、ＣＣＦ４－ＡＭを含有する６×基質混合物のウェル当たり２５ μＬを細胞に添加し、暗所で室温で２時間インキュベートした。プレートのシグナルを蛍光プレートリーダーで読み取った。スキャン１は、励起フィルター：４０９／２０ｎｍ、及びエミッションフィルター：４６０／４０ｎｍを用いてブルーチャネル内の蛍光を測定することであり、スキャン２は、励起フィルター：４０９／２０ｎｍ、及びエミッションフィルター：５３０／３０ｎｍを用いてグリーンチャネル内の蛍光を測定することであった。データを、バックグラウンド減算及び比率計算のために、製造業者の推奨に従って分析した。

【0222】

実施例３ 選択された抗ＧＩＰＲ抗体のインビトロ活性
研究スキームを図３に示す。５週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを購入した。到着後、マウスは単独で収容された。一部は、１４週間にわたってＡＬＭＮ食（研究食Ｄ０９１００３０１、４０％脂肪、主にＰＲＩＭＥＸ）を摂取し、一部は、年齢適合対照として通常食餌を摂取した。１４週間の高脂肪処置後の動物を、同様の体重及び血糖値レベルに基づいて４つのサブグループに更に分けた（群Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥ、１０匹／群）。詳細な研究デザインについては、以下のように説明する。群Ａには、通常食餌下でビヒクル対照を注射し、群Ｂには、ＡＭＬＮ食下でビヒクル対照を注射し、群Ｃには、ＡＭＬＮ食下で抗ＧＩＰＲ ｍＡｂ ＤＢ００７を注射し、群Ｄには、ＡＭＬＮ食下でデュラグルチドを注射し、群Ｅには、ＡＭＬＮ食下でＤＢ００７＋デュラグルチド組み合わせを注射した。ＤＢ００７（１０ｍｇ／ｋｇ）、デュラグルチド（１ｍｇ／ｋｇ）及びビヒクルを、９週間の腹腔内注射を介して毎週２回投与した。動物は、日常的な観察によって異常な行動を含む一般的な状態の変化を１日１回監視し、体重を研究の過程で毎週２回測定した。

【0223】

体重。動物の各群についての体重は、ベースライン時に決定され、研究中は週に２回決定された。図４に示すように、ＡＬＭＮダイエット下のビヒクル群の体重は、通常食餌対照群よりも有意に高かった。抗ＧＩＰＲ ｍＡｂ ＤＢ００７及びデュラグルチドは、ビヒクル対照群と比較して体重を減少させた。更に、ＤＢ００７及びデュラグルチドの組み合わせ群は、より劇的に体重を減少させ、体重は通常食餌の群に近い。ＤＢ００７、デュラグルチド又は組み合わせを投与された各群とビヒクル対照群との間の体重差は全て統計的に有意であり、体重変化は治療期間を通して維持された。

【0224】

肝臓と脂肪の重量。研究終了時に、肝臓及び副睾丸脂肪を切除し、重量を量った。図５に示すように、ＡＬＭＮ食餌下のビヒクル群の肝臓脂肪重量と副睾丸脂肪重量は、通常食餌対照群の肝臓脂肪重量と副睾丸脂肪重量より有意に高かった。抗ＧＩＰＲ ｍＡｂ ＤＢ００７及びデュラグルチドは、ビヒクル対照群と比較して肝臓及び脂肪重量を減少させた。更に、ＤＢ００７とデュラグルチドとの組み合わせ群は、それら自体の単独よりも多くの肝臓及び脂肪重量を減少させた。

【0225】

グルコース。グルコースレベルは、ベースラインで、及び研究の６４日目（４時間絶食）で得られた。図６に示すように、ＡＬＭＮ食餌下のビヒクル群の空腹時グルコースレベルは、通常食餌対照群よりもやや高い。抗ＧＩＰＲ ｍＡｂ ＤＢ００７は、空腹時グルコースレベルを有意には低下させなかった。しかしながら、デュラグルチド及び併用治療は、ビヒクル群よりも有意に空腹時グルコースレベルを低下させた。

【0226】

脂質。総コレステロール、トリグリセリドの決定のために、研究終了時の６４日目に血液を採取した。図７に示すように、ＡＬＭＮ食餌下のビヒクル群の総コレステロールは、通常食餌対照群よりも有意に高い。終了時の採血において、総コレステロール値は治療群で有意に低く、組み合わせ治療は最低レベルに向かう傾向にあった。しかしながら、トリグリセリドの有意な変化は観察されなかった。

【0227】

肝臓酵素。肝臓酵素ＡＬＴ及びＡＳＴの測定のために、研究終了時の６４日目に血液を採取した。図８に示すように、終了時の採血において、ＡＬＭＮ食餌下のビヒクル群のＡＬＴレベルは、通常食餌対照群よりも有意に高かった。ＡＬＴレベルは、デュラグルチド及びＤＢ００７並びにデュラグルチド組み合わせ治療群において有意に低かった。また、ＡＬＭＮ食餌下のビヒクル群のＡＳＴレベルも、終了時の採血において、通常食餌対照群より有意に高かった。しかしながら、デュラグルチドのみがＡＳＴレベルを有意に低下させた。

【0228】

肝臓脂質プロファイル。肝臓総コレステロール及びトリグリセリドを研究終了時に測定した。図９に示すように、ＡＬＭＮ食餌下でのビヒクル群の肝臓総コレステロールは、通常食餌対照群よりも有意に高かった。ＤＢ００７とデュラグルチドは、肝臓の総コレステロール値を軽度に低下させました。ＡＬＭＮ食餌下のビヒクル群の肝臓トリグリセリドも、通常食餌対照群の肝臓トリグリセリドより有意に高かった。ＤＢ００７とデュラグルチドの両方が肝臓トリグリセリドレベルを有意に低下させ、組み合わせ治療は肝臓トリグリセリドを更に低下させた。

【0229】

肝臓バイオマーカー。メチオニン代謝の中間体として形成されるホモシステイン（ＨＣＹ）は、硫黄含有アミノ酸である。肝臓は、メチオニン及びＨＣＹの代謝において中心的な役割を果たす。ＨＣＹ代謝の増加は、肝臓の損傷で起こる可能性がある。ヒドロキシプロリン（ＨＹＰ）は、プロリン部分のヒドロキシル化後にコラーゲンに存在する最も豊富なアミノ酸の１つである。肝臓組織中のそのレベルは、肝臓線維形成の速度と進行を正しく意味することができる。ＨＹＰは、重度の線維症を伴う慢性肝疾患におけるバイオマーカーであり得る。したがって、肝臓ＨＣＹ及びＨＹＰレベルを研究終了時に測定した。図１０に示すように、ＡＬＭＮ食餌下でのビヒクル群の肝臓ＨＣＹ及びＨＹＰレベルは、通常食餌対照群よりも有意に高かった。ＤＢ００７、デュラグルチド及び組み合わせ治療は全て、肝臓ＨＣＹ及びＨＹＰレベルを正常レベルまで有意に低下させた。

【0230】

肝臓におけるいくつかの遺伝子の発現レベルも、定量的ＰＣＲを使用して測定した。アルファ平滑筋アクチン（α－ＳＭＡ）発現は、線維組織沈着に先行する肝星細胞活性化の信頼できるマーカーである。肝線維症の初期段階を特定し、治療の有効性をモニタリングするのに有用であり得る。形質転換成長因子－β（ＴＧＦ－β）は、疾患進行の全ての段階に寄与する慢性肝疾患における中心的な調節因子である。その発現は、治療の有効性をモニタリングするのにも有用である。コラーゲン１型アルファ１（Ｃｏｌ１ａ１）遺伝子は、線維症の主要成分であるＩ型コラーゲンの主要成分であるタンパク質をコードする。ＣＣＬ２は、炎症組織への単球動員に関与する重要な炎症性ケモカインである。これらの遺伝子は、研究終了時に測定した。

【0231】

図１１に示すように、ＡＬＭＮ食餌下のビヒクル群の肝臓α－ＳＭＡ、Ｃｏｌ１ａ１、及びＴＧＦβ遺伝子発現は、通常食餌対照群の肝臓α－ＳＭＡ、Ｃｏｌ１ａ１、及びＴＧＦβ遺伝子発現よりも有意に高かったが、ｃｃｌ２発現は変化しなかった。ＤＢ００７及びデュラグルチド単独では、α－ＳＭＡ、Ｃｏｌ１ａ１、及びＴＧＦβの発現を低下させ、組み合わせ療法は更にそれらの発現を低下させた。興味深いことに、組み合わせ療法は、α－ＳＭＡ及びＴＧＦβの発現を飼料対照のそれに完全に正規化しただけでなく、飼料対照のそれよりも低いＣｏｌ１ａ１及びｃｃｌ２の発現も減少させた。

【0232】

肝臓組織学的分析。研究終了時に、肝臓組織の一部を１０％ホルムアルデヒドに固定し、パラフィンに埋め込んだ。パラフィン包埋切片を、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）又はシリウスレッドで染色した。ＮＡＦＬＤ活性及び線維化ステージをスコアリングした。図１２に示すように、ＡＭＬＮ食餌は、Ｈ＆Ｅ染色における脂質液滴の増加によって実証されるように、肝臓脂肪症を有意に増加させ、シリウスレッド染色に示すように、線維症をわずかに増加させ、ＤＢ００７は、肝臓脂肪症及び線維症をわずかに減少させ、デュラグルチド単独では、肝臓脂肪症を有意に減少させ、線維症に大きな影響を与えた。この組み合わせ療法は、肝脂肪症を完全に正常化し通常食餌対照のレベルに達し、肝線維症を軽減した。ＮＡＦＬＤ及び線維症スコアを以下に示す。

【0233】

データ分析。データを、ＧＲＡＰＨＰＡＤ ＰＲＩＳＭプログラム（ＧＲＡＰＨＰＡＤ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を使用して分析した。統計解析は、一元配置又は二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）のいずれかを使用して行った。ビヒクル対照群と比較した処置群：＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。通常食餌対照群と比較したビヒクル及び治療群：＃：ｐ＜０．０５、＃＃：ｐ＜０．０１、＃＃＃：ｐ＜０．００１。Ｐ＜０．０５を有意とみなした。

【0234】

参考文献
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１３．Ｓ．Ｇｒｅｍｌｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｏｎｉｎｇ，ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｉｓｌｅｔ ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４４，１２０２－１２０８（１９９５）．
１４．Ｋ．Ｍｉｙａｗａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｏｂｅｓｉｔｙ．Ｎａｔ Ｍｅｄ ８，７３８－７４２（２００２）．
１５．Ｓ．Ｉ．Ｂｅｒｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅ ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ １１ ｎｅｗ ｌｏｃｉ ｆｏｒ ａｎｔｈｒｏｐｏｍｅｔｒｉｃ ｔｒａｉｔｓ ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ４５，５０１－５１２（２０１３）．
１６．Ｙ．Ｏｋａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｍｍｏｎ ｖａｒｉａｎｔｓ ａｔ ＣＤＫＡＬ１ ａｎｄ ＫＬＦ９ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｂｏｄｙ ｍａｓｓ ｉｎｄｅｘ ｉｎ ｅａｓｔ Ａｓｉａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ４４，３０２－３０６（２０１２）．
１７．Ｒ．Ｓａｘｅｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ ＧＩＰＲ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ａｎｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ａｎ ｏｒａｌ ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ４２，１４２－１４８（２０１０）．
１８．Ｅ．Ｋ．Ｓｐｅｌｉｏｔｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ２４９，７９６ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｒｅｖｅａｌ １８ ｎｅｗ ｌｏｃｉ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｂｏｄｙ ｍａｓｓ ｉｎｄｅｘ．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ４２，９３７－９４８（２０１０）．
１９．Ｗ．Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｃｏｍｍｏｎ ｖａｒｉａｎｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｂｏｄｙ ｍａｓｓ ｉｎｄｅｘ ｉｎ ｅａｓｔ Ａｓｉａｎｓ．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ４４，３０７－３１１（２０１２）．
２０．Ｄ．Ｊ．Ｄｒｕｃｋｅｒ，Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｉｎｃｒｅｔｉｎ ａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ２６，２９２９－２９４０（２００３）．
２１．Ｍ．Ａ．Ｎａｕｃｋ，Ｊ．Ｊ．Ｈｏｌｓｔ，Ｂ．Ｗｉｌｌｍｓ，Ｗ．Ｓｃｈｍｉｅｇｅｌ，Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ １（ＧＬＰ－１）ａｓ ａ ｎｅｗ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｔｙｐｅ ２－ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｅｘｐ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｄｉａｂｅｔｅｓ １０５，１８７－１９５（１９９７）．
２２．Ｓ．Ｄｈｉｌｌｏｎ，Ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ：Ｆｉｒｓｔ Ｇｌｏｂａｌ Ａｐｐｒｏｖａｌ．Ｄｒｕｇｓ ７８，２７５－２８４（２０１８）．
２３．Ｔ．Ｖｉｌｓｂｏｌｌ，Ｍ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ａ．Ｅ．Ｊｕｎｋｅｒ，Ｆ．Ｋ．Ｋｎｏｐ，Ｌ．Ｌ．Ｇｌｕｕｄ，Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｏｎ ｗｅｉｇｈｔ ｌｏｓｓ：ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌｓ．ＢＭＪ ３４４，ｄ７７７１（２０１２）．

【0235】

好ましい実施形態の前述の実施例及び説明は、特許請求の範囲によって定義される本発明を限定するものではなく、例示するものとして理解されるべきである。容易に理解されるように、上記の特徴の多数の変形及び組み合わせは、特許請求の範囲に記載される本発明から逸脱することなく利用され得る。そのような変形例は、本発明の範囲から逸脱したものとはみなされず、全てのそのような変形例は、以下の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが意図される。本明細書で引用される全ての参照は、その全体が、参照により組み込まれる。

【図1-1】

【図1-2】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5A-5B】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9A-9B】

【図10A-10B】

【図11A-11B】

【図11C-11D】

【図12A】

【図12B】

【配列表】

2024522376000001.app

【国際調査報告】