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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-06-21
(54)【発明の名称】酸不安定化学療法化合物および組成物
(51)【国際特許分類】
C07D 407/12 20060101AFI20240614BHJP
A61K 31/357 20060101ALI20240614BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240614BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240614BHJP
A61K 47/54 20170101ALI20240614BHJP
C07D 305/14 20060101ALN20240614BHJP
A61K 31/337 20060101ALN20240614BHJP
【ＦＩ】
C07D407/12 CSP
A61K31/357
A61P35/00
A61P35/02
A61K47/54
C07D305/14
A61K31/337
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023577552
(86)(22)【出願日】2022-06-14
(85)【翻訳文提出日】2024-02-13
(86)【国際出願番号】 US2022033482
(87)【国際公開番号】W WO2022266135
(87)【国際公開日】2022-12-22
(31)【優先権主張番号】63/211,253
(32)【優先日】2021-06-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】513252105
【氏名又は名称】ベイルド・セラピューティクス・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー
【氏名又は名称原語表記】Ｖｅｉｌｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ＬＬＣ
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100156144
【弁理士】
【氏名又は名称】落合 康
(72)【発明者】
【氏名】マクチェスニー，ジェイムズ ディ
(72)【発明者】
【氏名】チッティボイナ，アマル ジー
(72)【発明者】
【氏名】アナム，スレシュ
(72)【発明者】
【氏名】ハイデル，サクレン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C076AA94
4C076CC27
4C076DD59
4C076FF34
4C076FF67
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BA02
4C086BA12
4C086GA02
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA06
4C086NA07
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZB27
(57)【要約】
本発明は、癌化学療法剤の酸不安定親油性分子コンジュゲートおよび処置を必要とする患者への癌化学療法剤の投与による化学療法の副作用を低減または実質的に排除する方法を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式：【化1】
【化2】
【請求項2】
式：【化3】
【請求項3】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－((((２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１２６)であり、式：【化4】
【請求項4】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((Ｓ)－２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１３１)であり、式：【化5】
【請求項5】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((Ｒ)－２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１３２)であり、式：【化6】
【請求項6】
ヒドロキシル含有癌化学療法剤がタキサンである、請求項１の酸不安定親油性分子コンジュゲート。
【請求項7】
ヒドロキシル含有癌化学療法剤がパクリタキセルである、請求項１～５の何れかの酸不安定親油性分子コンジュゲート。
【請求項8】
ヒドロキシル含有癌化学療法剤がカバジタキセルである、請求項１～６の何れかの酸不安定親油性分子コンジュゲート。
【請求項9】
ａ)治療有効量の単一ジアステレオ異性体の請求項１～８の何れかの化合物；およびｂ)薬学的に許容される添加物を含む、医薬組成物。
【請求項10】
患者における癌を処置する方法であって、そのような処置を必要とする患者に治療有効量の請求項１～９の何れかの化合物または組成物を投与することを含む、方法。
【請求項11】
癌が白血病、神経芽腫、神経膠芽腫、頸部、結腸直腸、膵臓、腎臓および黒色腫からなる群から選択される、請求項１０の方法。
【請求項12】
癌が肺、乳房、前立腺、卵巣および頭頚部からなる群から選択される、請求項１０の方法。
【請求項13】
方法がコンジュゲートしていないパクリタキセルまたはカバジタキセルであるヒドロキシル含有癌化学療法剤と比較して、癌細胞により発現される耐性の程度を少なくとも１０％～５０％低減させる、請求項１０の方法。
【請求項14】
患者へのパクリタキセルまたはカバジタキセルの投与に付随する化学療法の副作用を低減または実質的に排除する方法であって、該患者に治療有効量の請求項１～９の何れかの酸不安定親油性分子コンジュゲート(ＡＬＬＭＣ)を投与することを含む、方法。
【請求項15】
方法が患者の癌細胞における高濃度のパクリタキセルまたはカバジタキセルを提供する、請求項１４の方法。
【請求項16】
方法が患者へのコンジュゲートしていないパクリタキセルまたはカバジタキセルである癌化学療法剤の投与と比較して、少なくとも５％、１０％、２０％または少なくとも５０％高濃度のパクリタキセルまたはカバジタキセルを癌細胞に送達する、請求項１５の方法。
【請求項17】
ａ)式：【化7】
【化8】
【化9】
ｂ)ホスホチジルコリン、ホスホチジルエタノールアミン、対称または非対称１,２－ジアシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリルコリン、１,２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリルコリン、１,２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリルエタノールアミン、卵リン脂質、卵ホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、卵レシチン、大豆レシチン、レシチン(ＮＯＳ)およびそれらの混合物からなる群から選択される、リン脂質(ＰＬ)；および
ｃ)ミグリオル 812 N、トリアセチン、トリプロピオニン、トリブチリン、トリイソバレリン、トリイソバレリン、トリカプロニン、トリヘプチニン、トリカプリリン、トリノニリン、トリカプリニンおよびトリウンデシリンからなる群から選択されるトリグリセリド(ＴＧ)
を含む安定な、合成低密度リポタンパク質(ＬＤＬ)固体ナノ粒子であって；ここで、４０～８０nmの平均粒子径を有する、ＬＤＬ固体ナノ粒子。
【請求項18】
酸不安定親油性分子コンジュゲートが(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－((((２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１２６)であり、式：【化10】
【請求項19】
酸不安定親油性分子コンジュゲートが(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((Ｓ)－２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１３１)であり、式：【化11】
【請求項20】
酸不安定親油性分子コンジュゲートが(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((Ｒ)－２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１３２)であり、式：【化12】
【請求項21】
ナノ粒子の平均サイズ分布が６０nmである、請求項１７～２０の何れかの安定な、合成低密度リポタンパク質(ＬＤＬ)固体ナノ粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照：
本出願は、２０２１年６月１６日出願の出願番号６３／２１１,２５３の35 USC 119(e)に基づく利益を主張し、同出願の全内容を本明細書に引用により包含させる。
本出願は、２０２１年６月１６日出願の出願番号６３／２１１,２５３の35 USC 119(e)に基づく利益を主張し、同出願の全内容を本明細書に引用により包含させる。
【0002】
発明の分野
本発明は、一般に患者の処置に使用するための化合物および方法に関する。より具体的には、本発明は、癌処置に使用するための分子コンジュゲート、特に酸不安定、親油性コンジュゲート、その製造に有用な方法および中間体ならびに患者を処置する方法に関する。
本発明は、一般に患者の処置に使用するための化合物および方法に関する。より具体的には、本発明は、癌処置に使用するための分子コンジュゲート、特に酸不安定、親油性コンジュゲート、その製造に有用な方法および中間体ならびに患者を処置する方法に関する。
【背景技術】
【0003】
発明の背景
多数の抗癌薬物が現在種々の癌の処置のために上市されている。例えば、パクリタキセルおよびドセタキセルは、乳癌および卵巣癌の処置に使用される２種の有望な抗癌薬物であり、皮膚、肺、頭頚部癌などの種々の他の癌の処置についても将来有望である。他の有望な化学療法剤は、開発中であるかまたはこれらおよび他の癌の処置について試験中である。パクリタキセル、ドセタキセルおよび他のタキサン類などの化合物は相当に興味深い。特に興味深いのは、インビトロおよびインビボで抗癌活性が示されている天然産物薬物およびその合成アナログである。
多数の抗癌薬物が現在種々の癌の処置のために上市されている。例えば、パクリタキセルおよびドセタキセルは、乳癌および卵巣癌の処置に使用される２種の有望な抗癌薬物であり、皮膚、肺、頭頚部癌などの種々の他の癌の処置についても将来有望である。他の有望な化学療法剤は、開発中であるかまたはこれらおよび他の癌の処置について試験中である。パクリタキセル、ドセタキセルおよび他のタキサン類などの化合物は相当に興味深い。特に興味深いのは、インビトロおよびインビボで抗癌活性が示されている天然産物薬物およびその合成アナログである。
【0004】
しかしながら、多くの同定された抗癌化合物は、化学療法レジメンの使用に伴う、正常、健常組織に有害に影響することなく、癌組織をターゲティングする困難さを含む多くの困難性を示す。例えば、パクリタキセルは、正常細胞より癌細胞で高頻度で起こる有糸分裂および細胞分裂過程の妨害により抗腫瘍活性を発揮する。しかし、化学療法処置を受けている患者は、正常健常細胞における有糸分裂の妨害に関連する種々の有害作用を経験する。
【0005】
体内の他の細胞を傷つけることなく癌細胞を選択的に殺す標的化癌治療は、癌の臨床処置の大きな改善を表す。癌細胞への選択的送達のための抗体へのコンジュゲーションによる薬物ターゲティングは、抗体サイズが大きく(ＭＷ＝１２５～１５０キロダルトン)、故に固形腫瘍に浸透する能力が比較的劣るため、成功は限定的である。
【0006】
従って、癌処置レジメンにおける化学療法剤を癌細胞に直接ターゲティングするために使用される新規化合物および方法の開発が高度に望ましい。これは毒性副作用の減少または排除、標的化部位への薬物のより効率的な送達および薬物投与量の削減、かつ結果的に健常細胞に対する毒性および化学療法レジメン費用の低減をもたらす。
【0007】
ある特定のアプローチは、腫瘍分子にコンジュゲートした抗癌薬物の使用である。例えば、Safavyの米国６,１９１,２９０は、腫瘍細胞表面受容体に結合できる受容体リガンドペプチドにコンジュゲートしたタキサン部分の使用を開示する。Safavyは、このような受容体リガンドペプチドは、ボンベシン／ガストリン放出ペプチド(ＢＢＮ／ＧＲＰ)受容体認識ペプチド(ＢＢＮ[７－ｌ３])、ソマトスタチン受容体認識ペプチド、上皮細胞増殖因子受容体認識ペプチド、モノクローナル抗体または受容体認識炭水化物であると指摘している。
【0008】
これらの薬物分子コンジュゲートは、所望の特徴および生物学的活性を有するコンジュゲート、特に、全身循環で安定であるが、癌細胞に内在化しまたは局所的酸性腫瘍環境で濃縮されて細胞毒性剤を放出し、正常組織に対する毒性が低いことが予測されるコンジュゲートを提供する、１以上のリンカーでこれら２ユニットを接続する。得られたコンジュゲートはまた、正常健常組織に対する毒性が低く、ターゲティング効果が最大化され、標的組織に到達するまで十分安定でなければならない。
【0009】
血液－脳関門(ＢＢＢ)は、脳を全身循環から隔離する、物理的および酵素的関門である。ＢＢＢの物理的部分は、あらゆる有意な傍細胞輸送を阻止する、密着複合系に配置された内皮細胞からなる。ＢＢＢは、脂質溶解度、分子サイズおよび電荷に基づき物質トランスサイトーシスを選択的に拡散制止として機能し、よって脳への薬物送達の問題を提起する。ＢＢＢを通過する薬物送達は、高濃度の薬物排出トランスポーター(例えば、Ｐ－糖タンパク質、多剤耐性タンパク質、乳癌耐性タンパク質)の存在により、さらに問題化する。これらのトランスポーターは、薬物分子が脳に入る前に、それを内皮細胞質から能動的に排除する。脳悪性腫瘍の処置における薬物送達のために現在用いられている方法は一般に非特異的かつ非効率である。
【0010】
細胞増殖および成長の増加は、癌の特徴である。細胞増殖の増加は、細胞コレステロールの高代謝回転と相関する。膜合成および成長のためにコレステロールを必要とする細胞は、血液中のコレステロールの主要なトランスポーターである血漿低密度リポタンパク質(ＬＤＬ)の受容体介在エンドサイトーシスまたはデノボ合成によりコレステロールを獲得し得る。ＬＤＬは、ＬＤＬ受容体(ＬＤＬＲ)として知られる受容体により細胞に取り込まれる；ＬＤＬは、受容体と共に細胞内に取り込まれ、細胞のエンドソームに輸送される。エンドソームは酸性化され、これによりＬＤＬ受容体がＬＤＬから放出される；ＬＤＬ受容体は表面にリサイクルされ、そこで、ＬＤＬ粒子のさらなる取り込みに参加できる。多様な組織における腫瘍が、血漿ＬＤＬが枯渇する程度まで、ＬＤＬを高度に必要とすることを示す証拠がある。癌細胞へのＬＤＬの移入増加は、これら腫瘍におけるＬＤＬ受容体(ＬＤＬＲ)の上昇に依る。ＬＤＬＲ発現数が多いことが知られる一部腫瘍は、ある形態の白血病、肺腫瘍、結腸直腸腫瘍および卵巣癌を含む。
【0011】
正常および悪性脳組織の比較研究は、ＬＤＬＲが高い傾向が悪性および／または急速に成長している脳細胞および組織と関連することを示している。ある研究は、発現初期および攻撃的に進行している脳腫瘍に見られるものなどの急速に成長している脳細胞が、コレステロールの必要性の増加により、ＬＤＬＲの発現が増加することを示す。
【0012】
とりわけ処置が困難であり、非効率である脳癌は、多形神経膠芽腫(ＧＢＭ)である。この壊滅的な脳腫瘍は、１００％致死である。さらに、全主要脳癌関連死の８５％超がＧＢＭによる。現在の治療は、神経外科手術、放射線療法および化学療法を含む多面的アプローチに依存する。これらのアプローチを使用する最善の努力でも、この腫瘍に罹患した患者に生存期間の若干の増加をもたらすのみである。培養中のＧＢＭ細胞は、多数の低密度リポタンパク質受容体(ＬＤＬＲ)を有する。この受容体は神経細胞および正常グリア細胞でほぼ存在しないため、細胞毒物または放射性薬物などの治療剤の送達のための理想的な標的である。既存の治療の改善または新規治療の開発に向けた努力は成功しておらず、悪性神経膠腫の処置のアウトカムは、中央生存期間約１０カ月とわずかなままである。
【0013】
ＬＤＬ受容体が少ない正常脳細胞と異なり、培養中のＧＢＭ細胞は、表面に多数のＬＤＬ受容体を有する。他の癌も、癌組織の高度に増殖性の性質およびコレステロール代謝回転の必要性により、ＬＤＬＲの発現が高い可能性がある。これは、ＬＤＬ受容体が、ＬＤＬ粒子を介する抗腫瘍薬物送達のための、ＧＢＭおよび他の悪性腫瘍における特有の分子標的である可能性を示唆する。
【0014】
Maranhaoらは、ＬＤＥと名付けたコレステロールに富むマイクロエマルジョンまたはナノ粒子製剤が、血流への注射後癌組織に濃縮されることを示している。R. C. Maranhao et al. mprovement of paclitaxel therapeutic index by derivatization and association to a cholesterol-rich microemulsion: in vitro and in vivo studies. Cancer Chemotherapy and Pharmacology 55: 565-576 (2005)。ＬＤＥに結合したパクリタキセル親油性誘導体の細胞毒性、薬物動態、動物に対する毒性および治療作用を、市販パクリタキセルと比較した。結果は、ＬＤＥ－パクリタキセルオレエートが安定であることを示した。Maranhaoらは、ＬＤＥ－パクリタキセルオレエートが安定な複合体であり、パクリタキセルと比較して、毒性は相当低減され、活性が増強され、臨床使用における治療指数の改善に至り得ることを示した。
【0015】
ＬＤＬ受容体の過剰発現を介する化学療法化合物の癌組織への選択的および特異的送達および結果としての全身循環からのＬＤＬ粒子の高い取り込みを攻略するには、癌化学療法剤が、ＬＤＬ粒子の脂質コアに封入されたままであり、正常組織の薬剤への暴露から毒性副作用に至る血漿への拡散がないために、高親油性である必要がある。ＬＤＬ粒子とその化学療法ペイロードがＬＤＬ受容体介在取り込みを介して癌細胞に侵入し、エンドソーム／リソソームカスケードの酸性環境に入ったのち、ＬＤＬ受容体はＬＤＬ粒子から解離し、細胞表面にリサイクルされ、ＬＤＬ粒子はその脂質内容物および親油性化学療法剤を酵素に放出し、エンドソームの酸性環境はリソソームとなる。ほとんどの癌化学療法剤は、ＬＤＬ粒子の脂質コア内に適切に保持されるほど十分な親油性を内因性に有しない。これにより、正常全身循環で高安定性であり、ＬＤＬ粒子の脂質コアに維持されるが、エンドソーム／リソソームの酸性環境で活性化学療法剤を容易に放出する、癌化学療法剤の適当な親油性誘導体の必要性が創生されいる。本発明の化合物は、この要請に対処する。
【発明の概要】
【0016】
定義：
用語「ジアステレオ異性体」は、２個以上の不斉炭素原子を含む化合物で起こる４個以上の異性体の何れかの群をいう。互いに立体異性体であるが、エナンチオマーではない化合物は、ジアステレオ異性体と称される。
用語「ジアステレオ異性体」は、２個以上の不斉炭素原子を含む化合物で起こる４個以上の異性体の何れかの群をいう。互いに立体異性体であるが、エナンチオマーではない化合物は、ジアステレオ異性体と称される。
【0017】
用語「ジアステレオ異性的に純粋」は、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９.５％、９９.７％、９９.８％または少なくとも９９.９％純度であるまたは化合物の他の可能性のあるジアステレオ異性体の何れの存在もない単一ジアステレオ異性体を有する化合物またはジアステレオ異性体を意味する。
【0018】
ここで使用する「薬学的に許容される添加物」または「薬学的に許容される塩」は、薬学的に許容されかつ所望の薬理学的活性を提供する、ここに開示する化合物の添加物または塩を意味する。これらの添加物および塩は、塩酸、臭化水素酸、リン酸などの無機酸との酸付加塩を含む。酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、グリコール酸、乳酸、コハク酸、リンゴ酸、クエン酸、安息香酸などの有機酸とも塩は形成され得る。
【0019】
「治療有効量」は、本明細書に挙げる生物学的効果の何れかを発揮する薬物量を意味する。
【0020】
発明の概要
ある実施態様において、ヒドロキシル含有癌化学療法剤(ＨＢＣＣＡ)の分子コンジュゲートの新規かつ有用な組成物が提供される。他の実施態様において、癌処置に使用するための癌化学療法剤の酸不安定、親油性分子コンジュゲートの組成物が提供される。他の実施態様において、癌処置に使用するための、酸不安定、親油性プロドラッグコンジュゲートなどの分子コンジュゲートの形成に使用するための、中間体化合物が提供される。他の実施態様において、酸不安定、親油性薬物コンジュゲートの製造のための効率的方法が提供される。他の実施態様において、癌患者で従来の方法で経験される副作用を低減または実質的に排除するために、化学療法剤を患者に投与する方法が提供される。他の実施態様において、患者の癌細胞に化学療法剤を濃縮する方法が提供される。
ある実施態様において、ヒドロキシル含有癌化学療法剤(ＨＢＣＣＡ)の分子コンジュゲートの新規かつ有用な組成物が提供される。他の実施態様において、癌処置に使用するための癌化学療法剤の酸不安定、親油性分子コンジュゲートの組成物が提供される。他の実施態様において、癌処置に使用するための、酸不安定、親油性プロドラッグコンジュゲートなどの分子コンジュゲートの形成に使用するための、中間体化合物が提供される。他の実施態様において、酸不安定、親油性薬物コンジュゲートの製造のための効率的方法が提供される。他の実施態様において、癌患者で従来の方法で経験される副作用を低減または実質的に排除するために、化学療法剤を患者に投与する方法が提供される。他の実施態様において、患者の癌細胞に化学療法剤を濃縮する方法が提供される。
【0021】
本出願のある実施態様において、式：
の酸不安定親油性分子コンジュゲート(ＡＬＬＭＣ)およびその単離されたジアステレオ異性体もしくはそれらの混合物；またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【化1】
【化2】
【0022】
ある態様において、酸不安定親油性分子コンジュゲートは、(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－((((２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１２６)である。他の態様において、酸不安定親油性分子コンジュゲートは、(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((Ｓ)－２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１３１)である。他の態様において、酸不安定親油性分子コンジュゲートは、(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((Ｒ)－２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１３２)である。酸不安定親油性分子コンジュゲートの他の態様において、ヒドロキシル含有癌化学療法剤はパクリタキセルまたはカバジタキセルである。ここで使用する「ヒドロキシル含有癌化学療法剤」は、炭酸基(－ＯＣ(Ｏ)Ｏ－)にコンジュゲートした２’－ヒドロキシル基を有するパクリタキセルまたはカバジタキセルである。他の実施態様において、ａ)治療有効量の単一ジアステレオ異性体の上記化合物の何れか；およびｂ)薬学的に許容される添加物を含む、医薬組成物が提供される。
【0023】
他の実施態様において、患者における癌を処置する方法であって、そのような処置を必要とする患者に治療有効量の上記化合物または組成物の何れかを投与することを含む、方法が提供される。方法の他の態様において、癌は、白血病、神経芽腫、神経膠芽腫、頸部、結腸直腸、膵臓、腎臓および黒色腫からなる群から選択される。他の態様において、癌は、肺、乳房、前立腺、卵巣および頭頚部からなる群から選択される。他の態様において、方法は、コンジュゲートしていないパクリタキセルまたはカバジタキセルであるヒドロキシル含有癌化学療法剤と比較して、癌細胞により発現される耐性の程度を少なくとも１０％～５０％低減させる。
【0024】
他の実施態様において、患者へのパクリタキセルまたはカバジタキセルの投与に付随する化学療法の副作用を低減または実質的に排除する方法であって、該患者に治療有効量の上記化合物の何れかの酸不安定親油性分子コンジュゲート(ＡＬＬＭＣ)化合物を投与することを含む、方法。他の態様において、方法は、患者の癌細胞における高濃度のパクリタキセルまたはカバジタキセルを提供する。他の態様において、方法は、患者へのコンジュゲートしていないパクリタキセルまたはカバジタキセルである癌化学療法剤の投与と比較して、少なくとも５％、１０％、２０％または少なくとも５０％高濃度のパクリタキセルまたはカバジタキセルを癌細胞に送達する。
【0025】
他の実施態様において、ａ)式ＮＣＰ－１２１、ＮＣＰ－１２２、ＮＣＰ－１２３、ＮＣＰ－１２４、ＮＣＰ－１２５、ＮＣＰ－１２７、ＮＣＰ－１２８、ＮＣＰ－１２９、ＮＣＰ－１３０、ＮＣＰ－１２６およびＮＣＰ－１３１およびＮＣＰ－１３２およびその単離されたジアステレオ異性体またはそれらの混合物の酸不安定親油性分子コンジュゲート(ＡＬＬＭＣ)；またはその薬学的に許容される塩；ｂ)リン脂質(ＰＬ)(ここで、リン脂質はホスホチジルコリン、ホスホチジルエタノールアミン、対称または非対称１,２－ジアシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリルコリン、１,２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリルコリン、１,２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリルエタノールアミン、卵リン脂質、卵ホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、卵レシチン、大豆レシチン、レシチン(ＮＯＳ)およびそれらの混合物からなる群から選択される)；およびｃ)ミグリオル(MIGLYOL) 812 N、トリアセチン、トリプロピオニン、トリブチリン、トリイソバレリン、トリイソバレリン、トリカプロニン、トリヘプチニン、トリカプリリン、トリノニリン、トリカプリニンおよびトリウンデシリンからなる群から選択されるトリグリセリド(ＴＧ)を含む、安定な、合成低密度リポタンパク質(ＬＤＬ)固体ナノ粒子であって；ここで、４０～８０nmの平均粒子径を有するＬＤＬ固体ナノ粒子が提供される。あるバリエーションにおいて、使用するトリグリセリドはミグリオル 812N(Ｃ８／Ｃ１０トリグリセリド(ＭＣＴ油))であってよくまたはここに開示する他のトリグリセリドエステルまたは他の中鎖トリグリセリドであってよい。
【0026】
上記の安定な、合成低密度リポタンパク質(ＬＤＬ)固体ナノ粒子の他の態様において、酸不安定親油性分子コンジュゲートは、(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－((((２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１２６)である。上記の安定な、合成低密度リポタンパク質(ＬＤＬ)固体ナノ粒子の他の態様において、酸不安定親油性分子コンジュゲートは、(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((Ｓ)－２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１３１)である。上記の安定な、合成低密度リポタンパク質(ＬＤＬ)固体ナノ粒子の他の態様において、酸不安定親油性分子コンジュゲートは、(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((Ｒ)－２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１３２)である。上記の安定な、合成低密度リポタンパク質(ＬＤＬ)固体ナノ粒子のある態様において、ナノ粒子の平均サイズ分布は６０nmである。
【0027】
他の実施態様において、ａ)治療有効量の単一ジアステレオ異性体の形態の上記化合物；およびｂ)薬学的に許容される添加物を含む、医薬組成物が提供される。他の態様において、医薬組成物は経口投与に適応する；または液体製剤として非経腸投与に適応する。他の態様において、組成物は、経口、非経腸、腹腔内、静脈内、動脈内、経皮、筋肉内、直腸、鼻腔内、リポソーム、皮下および髄腔内からなる群から選択される経路による投与に適応する。他の実施態様において、患者における癌を処置する方法であって、そのような処置を必要とする患者に治療有効量の上記化合物または組成物の何れかの化合物または組成物を投与することを含む、方法が提供される。方法のある態様において、癌は、白血病、神経芽腫、神経膠芽腫、頸部、結腸直腸、膵臓、腎臓および黒色腫からなる群から選択される。方法の他の態様において、癌は、肺、乳房、前立腺、卵巣および頭頚部からなる群から選択される。方法の他の態様において、方法は、コンジュゲートしていないヒドロキシル含有癌化学療法剤と比較して、癌細胞により発現される耐性の程度の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％または少なくとも５０％減少を提供する。
【0028】
他の実施態様において、患者への癌化学療法剤の投与に付随する化学療法の副作用を低減または実質的に排除する方法であって、患者に治療有効量のここに開示する式の酸不安定親油性分子コンジュゲートを投与することを含む、方法が提供される。
【0029】
ある態様において、方法は、患者の癌細胞における高濃度の癌化学療法剤を提供する。他の態様において、方法は、患者へのコンジュゲートしていない癌化学療法剤の投与と比較して、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％または少なくとも５０％高濃度の癌化学療法剤を癌細胞に送達する。
【0030】
他の実施態様において、ＬＤＬ粒子を模倣するナノ粒子脂質エマルジョンまたは「シュード－ＬＤＬ粒子」で本発明の酸不安定、親油性分子コンジュゲートを使用して、患者の選択標的細胞に癌化学療法剤を濃縮する方法が提供される。他の実施態様において、方法は、患者に選択用量の治療有効量のシュード－ＬＤＬ粒子の脂質コアに溶解された癌化学療法剤の酸不安定、親油性分子コンジュゲートを投与することを含む。
【0031】
上記実施態様、態様およびバリエーションにまた含まれるのは、アルギン酸塩などのアミノ酸の塩、グルコン酸塩およびガラクツロン酸塩だる。本発明の化合物のいくつかは溶媒和されていない形態および水和形態を含む溶媒和された形態で存在でき、本発明の範囲内であることが意図される。また提供されるのは、薬学的に許容される添加物および治療有効量の少なくとも１個の本発明の化合物を含む、医薬組成物である。
【0032】
本発明の化合物またはその誘導体の医薬組成物は非経腸投与用の溶液または凍結乾燥粉末として製剤化され得る。粉末は、使用前の適当な希釈剤または他の薬学的に許容される担体の添加により再構成され得る。液体製剤は、一般に緩衝化、等張、水溶液である。適当な希釈剤の例は、等張生理食塩水、５％デキストロース水溶液または緩衝化ナトリウムまたは酢酸アンモニウム溶液である。このような製剤は特に非経腸投与に適するが、経口投与にも使用され得る。ポリビニルピロリジノン、ゼラチン、ヒドロキシセルロース、アカシア、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムなどの添加物も添加し得る。あるいは、これらの化合物を、経口投与用にカプセル封入、打錠またはエマルジョンもしくはシロップに製剤化し得る。薬学的に許容される固体または液体担体を、組成物を増強もしくは安定化するためにまたは組成物の製造を容易にするために添加し得る。液体担体は、シロップ、ピーナツ油、オリーブ油、グリセリン、食塩水、アルコールまたは水を含む。固体担体は、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム、二水和物、白土、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸、タルク、ペクチン、アカシア、寒天またはゼラチンを含む。担体はまた単独または蝋を伴うモノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの徐放性物質も含み得る。固体担体の量は種々であるが、好ましくは、投与量単位当たり約２０mg～約１ｇである。医薬製剤は、錠剤形態の場合は製粉、混合、造粒および必要であれば圧縮；または硬ゼラチンカプセル形態の場合は製粉、混合および充填を含む薬学の通常の技術に従い製造される。液体担体を使用するとき、製剤は、シロップ、エリキシル、エマルジョンまたは水性もしくは非水性懸濁液の形態である。このような液体製剤を直接経口投与するかまたは軟ゼラチンカプセルに充填し得る。これらの投与方法各々の適当な製剤は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, A. Gennaro, ed., 20th edition, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, Paに見ることができる。
【0033】
本発明のこれらおよび他の目的は、次の本発明の例示的実施態様の詳細な記載を、添付する画像および図と共に考慮したとき、より容易に認識され、理解される。本明細書を通して引用される全ての文献の全記載を、引用によりここに包含させる。
【発明を実施するための形態】
【0034】
例示的実施態様の詳細な記載
次の方法を本発明の化合物の製造に用い得る。これらの化合物の製造に使用する出発物質および資材は、Aldrich Chemical Company(Milwaukee, Wis.)、Bachem(Torrance, Calif.)、Sigma(St. Louis, Mo.)などの商業的供給源から入手可能であるかまたはFieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, vols. 1-17, John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1991; Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, vols. 1-5 and supps., Elsevier Science Publishers, 1989; Organic Reactions, vols. 1-40, John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1991; March J.: Advanced Organic Chemistry, 4th ed., John Wiley and Sons, New York, N.Y.；および Larock: Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, New York, 1989などの文献に記載される方法に従い、当業者に周知の方法で製造される。
次の方法を本発明の化合物の製造に用い得る。これらの化合物の製造に使用する出発物質および資材は、Aldrich Chemical Company(Milwaukee, Wis.)、Bachem(Torrance, Calif.)、Sigma(St. Louis, Mo.)などの商業的供給源から入手可能であるかまたはFieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, vols. 1-17, John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1991; Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, vols. 1-5 and supps., Elsevier Science Publishers, 1989; Organic Reactions, vols. 1-40, John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1991; March J.: Advanced Organic Chemistry, 4th ed., John Wiley and Sons, New York, N.Y.；および Larock: Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, New York, 1989などの文献に記載される方法に従い、当業者に周知の方法で製造される。
【0035】
ある場合、保護基を導入し、最終的に除去し得る。アミノ、ヒドロキシおよびカルボキシ基の適当な保護基は、Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, Second Edition, John Wiley and Sons, New York, 1991に記載される。標準的有機化学反応は、例えば、Larock: Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, New York, 1989に記載されるいくつかの異なる試薬の使用により達成できる。
【実施例】
【0036】
一般法。
化学物質および資材はSigma Aldrich (MO, USA)から購入した。パクリタキセル(＞９９％)はLC Laboratories(Woburn, MA)から購入した。全ＩＲスペクトルは、Agilent 630 FTIR(Agilent Technologies, CA, USA)で記録した。１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルはBruker(４００および５００MHz; Bruker Biospin, MA, USA)スペクトロメーターで記録し、化学シフトは、内部標準としてのテトラメチルシランに対してppmとして表した。ＭａｓｓスペクトルはAgilent 1290 UHPLCおよび6120 MS(Agilent Technologies)で記録し、カラムクロマトグラフィーは(Merck, MA, USA)シリカゲルで実施した。全反応を、特に断らない限り、アルゴン雰囲気下に実施した。薄層クロマトグラフィー(ＴＬＣ)を、プレコートシリカゲルGおよびGP Uniplateで実施した。プレートを２５４nm ＵＶ光、ヨウ素チャンバーまたはホスホモリブデン酸(ＰＭＡ)での炭化により可視化した。
化学物質および資材はSigma Aldrich (MO, USA)から購入した。パクリタキセル(＞９９％)はLC Laboratories(Woburn, MA)から購入した。全ＩＲスペクトルは、Agilent 630 FTIR(Agilent Technologies, CA, USA)で記録した。１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルはBruker(４００および５００MHz; Bruker Biospin, MA, USA)スペクトロメーターで記録し、化学シフトは、内部標準としてのテトラメチルシランに対してppmとして表した。ＭａｓｓスペクトルはAgilent 1290 UHPLCおよび6120 MS(Agilent Technologies)で記録し、カラムクロマトグラフィーは(Merck, MA, USA)シリカゲルで実施した。全反応を、特に断らない限り、アルゴン雰囲気下に実施した。薄層クロマトグラフィー(ＴＬＣ)を、プレコートシリカゲルGおよびGP Uniplateで実施した。プレートを２５４nm ＵＶ光、ヨウ素チャンバーまたはホスホモリブデン酸(ＰＭＡ)での炭化により可視化した。
【0037】
癌化学療法剤の酸不安定、親油性分子コンジュゲートの合成の一般法。
酸不安定親油性コンジュゲートの形成：
酸不安定親油性コンジュゲートをＨＰＬＣおよび高解像度マススペクトロメトリーの組み合わせにより特徴づけした。詳細を各化合物について示す。
酸不安定親油性コンジュゲートの形成：
酸不安定親油性コンジュゲートをＨＰＬＣおよび高解像度マススペクトロメトリーの組み合わせにより特徴づけした。詳細を各化合物について示す。
【0038】
ＡＲＴ ２０７を、方法Ａに概説する方法に従い、製造した。ＨＰＬＣ保持時間６.０６、方法；タキサンコンジュゲート＿ＭＫＧ１７(Synergyカラム、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ ６０／４０～１００％ＡＣＮ １０分間、２分間、１００％ＡＣＮ、２３０nm、１.５ml／分、３０℃、１５分間)。+TOF MS: m/z 1220.6156 [M+1]およびm/z 1237.6382 [M+18] (M+NH4
+).
【化3】
【0039】
次のものを含む、種々の最適化ＨＰＬＣ条件を使用して、本化合物のＨＰＬＣ分析は、鋭い、単一ピークを示す：
１) Ｃ１８カラム、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ ５０／５０～１００％ＡＣＮ １０分間、２分間、１００％ＡＣＮＨ、２３０nm、１.５ml／分、３０℃、１６分間；
２) Synergyカラム、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ ７５／２５～１００％ＭｅＯＨ １０分間、２分間、１００％ＭｅＯＨ、２３０nm、１.５ml／分、３０℃、１５分間；
３) Synergyカラム、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ ５０／５０ ３分間、８０～１００％ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ １０分間、２分間、１００％ＡＣＮ、２３０nm、１.５ml／分、３０℃、１５分間；
４) Synergyカラム、７０～１００％ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ １０分間、１００％ＡＣＮ ２分間、２３０nm、１.５ml／分、３０℃、１５分間；
５) Ｃ１８カラム、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ ９５／５～１００％ＭｅＯＨ １０分間、２分間、１００％ＭｅＯＨ、２３０nm、１.５ml／分、３０℃、１６分間；および
６) Synergyカラム、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ ８０／２０ １０分間、１００％ＡＣＮ ２分間、２３０nm、１.５ml／分、３０℃、１５分間。
１) Ｃ１８カラム、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ ５０／５０～１００％ＡＣＮ １０分間、２分間、１００％ＡＣＮＨ、２３０nm、１.５ml／分、３０℃、１６分間；
２) Synergyカラム、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ ７５／２５～１００％ＭｅＯＨ １０分間、２分間、１００％ＭｅＯＨ、２３０nm、１.５ml／分、３０℃、１５分間；
３) Synergyカラム、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ ５０／５０ ３分間、８０～１００％ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ １０分間、２分間、１００％ＡＣＮ、２３０nm、１.５ml／分、３０℃、１５分間；
４) Synergyカラム、７０～１００％ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ １０分間、１００％ＡＣＮ ２分間、２３０nm、１.５ml／分、３０℃、１５分間；
５) Ｃ１８カラム、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ ９５／５～１００％ＭｅＯＨ １０分間、２分間、１００％ＭｅＯＨ、２３０nm、１.５ml／分、３０℃、１６分間；および
６) Synergyカラム、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ ８０／２０ １０分間、１００％ＡＣＮ ２分間、２３０nm、１.５ml／分、３０℃、１５分間。
【0040】
親油性プロドラッグ(ＡＲＴ－２０７およびＮＣＰ－１２１～ＮＣＰ－１３２)を含む本発明の化合物を、タンパク質結合パクリタキセル、アブラキサン(登録商標)を有するバイオシミラリティと比較するために、設計および製造した。市販メチルオレエート１を、ＤＩＢＡＬ(－７８℃)を使用して対応するオレイルアルコール２まで意図的に過剰還元し、得られたカルビノールをクロロクロム酸ピリジニウムで５０℃で酸化して、オレアルデヒド３を無色油として７６％で得た。リンカーであるラセミソルケタールカーボネート(±)－５を、スキーム１に概説するとおり、ラセミソルケタール(４)とクロロギ酸４－ニトロフェニルを、ピリジンおよびＤＭＡＰ存在下で反応させることにより、７０％収率で製造した。エナンチオマー的に純粋なソルケタールカーボネート(－)－５および(＋)－５も、それぞれ対応するエナンチオマー的に純粋なＲ(－)－ソルケタール[(－)－４]およびＳ(＋)－ソルケタール[(＋)－４]から出発する同一の化学変換を使用して、合成した(スキーム１)。アンバーリスト－１５は、オレアルデヒド３とソルケタールカーボネート５のアセタール交換反応を触媒し、anti異性体が２：１で優勢の１,３－ジオキソラン中間体６をもたらした。クロロギ酸４－ニトロフェニルを用いる先のアセタール化とその後のカルボニル化は、最初のアセタール交換反応が５.６：２.９：１.１：１比の５員および６員両方の１,３－ジオキソランの分離不可能なantiおよびsyn異性体をもたらしたため、有効ではなかった。ステアリン酸メチルから製造した飽和コンジナー、ステアラルデヒドも、次のカルボニル化およびアセタール交換反応法により、対応するラセミおよびジアステレオマー的に純粋なカーボネート８に、６５％の全体的収率で変換した。
スキーム１. 資材および条件：ａ)ＤＩＢＡＬ(２当量、ヘキサン中１Ｍ)、ＴＨＦ、－７８℃、２時間；ｂ)クロロクロム酸ピリジニウム、ＤＣＭ、５０℃、２時間；ｃ)クロロギ酸４－ニトロフェニル、ＤＭＡＰ、ピリジン、ＤＣＭ、ｒ.ｔ.、２０時間；ｄ)オレイルまたはステアリールアルデヒド、５、アンバーリスト－１５、ＤＣＭ、ｒ.ｔ.、４８時間。
【化4】
【0041】
１,３－ジオキソランカーボネート、(－)－６および(＋)－６のantiおよびsyn異性体を２セットのエナンチオマー的に純粋な、単一異性体にさらに分割する別の試みにおいて、、Phenomenex 製剤HPLCカラムを使用する再循環分取高速液体クロマトグラフィーを適用した。９４：６(ｖ／ｖ)のヘキサンおよびＴＨＦからなる移動相が、溶離剤での４回の再循環後、エナンチオマー的に純粋な単一異性体[(－)－６から(－)－６ａおよび(－)－６ｓ；(＋)－６から(＋)－６ａおよび(＋)－６ｓ；ａはanti異性体を意味し、ｓはsyn異性体を意味する]の産生に理想的定組成溶媒系であることが判明した。これらの単一エナンチオマーの純度を、完全特徴づけおよびクロマトグラフスペクトルデータで確立した。細胞毒性剤とのコンジュゲーションに適する計１０個の分岐の、容易に反応性の脂質結合ソルケタールニトロフェニルカーボネート(５、６および８)をグラム規模の量で得た。
スキーム２. エナンチオマー的に純粋な１,３－ジオキソランニトロフェニルカーボネートの製造：ａ)クロロギ酸４－ニトロフェニル、ＤＭＡＰ、ピリジン、ＤＣＭ、ｒ.ｔ.、２０時間；ｂ)オレイルアルデヒド、アンバーリスト－１５、ＤＣＭ、ｒ.ｔ.、４８時間；ｃ)４回の再循環により移動相としてヘキサン：ＴＨＦ(９４：６、ｖ／ｖ)を使用する、Phenomenex 製剤HPLCカラム(サイズ２５０×２１.２mm、Luna ５μmシリカ(２)１００Å)を備えた再循環ＨＰＬＣ半分取(Waters 5010)。
【化5】
【0042】
パクリタキセルのＣ２’位での１,３－ジオキソランニトロフェニルカーボネート(５、６および８)との選択的コンジュゲーションを、塩基としてＤＭＡＰを用いてほぼ定量的収率で達成した。適切な脂質カーボネートリンカーのスイッチングにより、エナンチオマー的に富化されたものを含む多くのコンジュゲートを、表１に挙げるとおり、合成した。例えば、当モル量のパクリタキセルおよび１,３－ジオキソラン中間体(±)－６の間のＤＭＡＰ介在反応は、ＡＲＴ－２０７を白色固体として８６％でもたらした。類似ＮＣＰ－１２４およびＮＣＰ－１２５を、それぞれ中間体(－)－６および(＋)－６から合成した。全ての他のパクリタキセルコンジュゲートを、単に１,３－ジオキソランニトロフェニルカーボネートリンカーを変えるだけで製造し、１３個の独特な、親油性、酸不安定プロドラッグを得た。
スキー３. 試薬および条件：ａ)パクリタキセル(１.０当量)、１,３－ジオキソランニトロフェニルカーボネート(５、６または８)(１.０当量)、ＤＭＡＰ(０.５当量)、ＤＣＭ、１６時間。
＊ １,３－ジオキソランカーボネートを標的化化合物に基づき一覧にした。
【化6】
【表1】
＊ １,３－ジオキソランカーボネートを標的化化合物に基づき一覧にした。
【0043】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((４Ｒ)－２－ヘプタデシル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１２１)。
【化7】
【0044】
IR: (cm-1; 無溶媒): 2927, 2853, 1718, 1654, 1235。[α]20
D
= -46.6 (c2, CHCl3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3、2異性体混合物*) δ 8.15 - 8.13 (m, 2H), 7.75 - 7.73 (m, 2H), 7.63 - 7.59 (m, 1H), 7.53 - 7.49 (m, 3H), 7.45 - 7.34 (m, 7H), 6.92 (dd, J = 9.4, 2.4 Hz, 1H), 6.29 (s, 2H), 6.00 (dd, J = 9.4, 2.5 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.43 - 5.42 (m, 1H), 4.99 - 4.96 (m, 2H), 4.88 (t, J = 6.6, 1H), 4.47 - 4.42 (m, 1H) 4.34 - 4.30 (m, 1H), 4.29 - 4.23 (m, 1H), 4.23 - 4.17 (m, 2H), 4.16 - 4.08 (m, 2H), 3.92 - 3.88 (m, 0.60H), 3.82 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 3.59 - 3.55 (m, 0.50H), 2.60 - 2.53 (m, 1H), 2.50 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.43 - 2.37 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.04 (s, 1H), 1.95 - 1.92 (m, 3H), 1.90 - 1.85 (m, 1H), 1.83 (s, 1H), 1.72 (s, 2H), 1.68 (s, 3H), 1.65 - 1.62 (m, 1H), 1.42 - 1.38 (m, 2H), 1.27 -1.25 m, 29H), 1.14 (s, 3H), 0.88 (t, J = 6.7 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 203.77, 171.22, 171.18, 169.85, 167.77, 167.16, 167.00, 154.12, 154.04, 142.56, 136.66, 133.66, 133.49, 132.91, 132.06, 130.24, 129.20, 129.14, 128.75, 128.71, 128.55, 127.17, 126.56, 105.72, 105.03, 84.45, 81.09, 79.12, 75.59, 75.12, 73.02, 72.96, 72.14, 69.12, 68.45, 66.92, 66.78, 60.41, 58.52, 52.65, 45.60, 43.21, 35.58, 33.87, 33.84, 31.93, 29.71, 29.66, 29.57, 29.54, 29.51, 29.37, 26.84, 23.95, 23.87, 22.73, 22.70, 22.17, 21.05, 20.83, 14.81, 14.21, 14.14, 9.62. HRMS (ESI): m/z (M + Na)+ C69H91NO18Naの計算値1244.6133; 実測値1244.6120
【0045】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((４Ｓ)－２－ヘプタデシル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１２２)。
【化8】
【0046】
IR: (cm-1; 無溶媒): 2924, 2851, 1718, 1664, 1369, 1235。[α]20
D= -40.0 (c2, CHCl3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.15 - 8.13 (m, 2H), 7.73 - 7.75 (m, 2H), 7.60 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.53 - 7.48 (m, 3H), 7.45 - 7.34 (m, 7H), 6.95 (dd, J = 9.4, 5.0 Hz, 1H), 6.29 (s, 2H), 6.00 (dd, J = 9.4, 2.5 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.42 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 4.98 (dd, J = 9.8, 2.2 Hz, 1H), 4.93 (d, J = 4.8 Hz, 0.37H), 4.87 (t, J = 4.8 Hz, 0.47H), 4.45 - 4.41 (m, 1H), 4.32 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.29 - 4.23 (m, 1H), 4.21 (dd, J = 6.4, 2.0 Hz, 2H), 4.16 - 4.13 (m, 2H), 3.90 (dd, J = 8.5, 7.0 Hz, 0.50H), 3.82 - 3.79 (m, 1H), 3.61 (dd, J = 8.5, 6.8 Hz, 0.50H), 2.53 (dd, J = 6.2, 3.7 Hz, 2H), 2.46 (d, J = 1.8 Hz, 3H), 2.43 - 2.37 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.03 (s, 1H) 1.93 (s, 3H), 1.89 (s, 2H), 1.81 (s, 2H), 1.68 (s, 3H), 1.63 - 1.60 (m, 1H), 1.43 - 1.33 (m, 2H), 1.25 (m, 30H), 1.14 (s, 3H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 203.78, 171.23, 171.19, 169.85, 167.78, 167.74, 167.23, 166.99, 154.09, 154.03, 142.56, 142.53, 136.66, 133.66, 133.47, 132.92, 132.07, 130.23, 129.21, 129.13, 128.74, 128.71, 128.56, 127.18, 126.57, 105.67, 105.09, 84.45, 81.10, 79.10, 75.59, 75.12, 72.88, 72.82, 72.14, 68.96, 68.32, 66.66, 60.41, 58.51, 52.69, 45.59, 43.21, 35.59, 33.88, 33.83, 31.93, 29.70, 29.68, 29.66, 29.57, 29.54, 29.50, 29.36, 26.83, 23.96, 23.84, 22.73, 22.70, 22.17, 21.05, 14.79, 14.20, 9.63. HRMS (ESI): m/z (M + Na)+ C69H91NO18Naの計算値1244.6133; 実測値1244.6116。
【0047】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－((((２－ヘプタデシル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１２３)。
【化9】
【0048】
IR: (cm-1; 無溶媒): 2920, 2849, 1718, 1239。[α]20
D = -44.4 (c2, CHCl3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (dd, J = 7.4, 1.6 Hz, 2H), 7.75 - 7.73 (m, 2H), 7.62 - 7.57 (m, 1H), 7.53 - 7.48 (m, 3H), 7.45 - 7.34 (m, 7H), 6.95 - 6.91 (m, 1H), 6.30 (s, 2H), 6.01 - 5.98 (m, 1H), 5.69 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.44 - 5.42 (m, 1H), 4.99 - 4.94 (m, 1H), 4.89 - 4.86 (m, 1H), 4.44 (dd, J = 10.9, 6.6 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.30 - 4.23 (m, 1H), 4.20 (ddd, J = 8.8, 4.9, 2.1 Hz, 2H), 4.19 - 4.15 (m, 1H), 4.12 (dd, J = 6.9, 2.2 Hz, 1H), 3.90 (dd, J = 8.6, 6.9 Hz, 0.63H), 3.83 - 3.78 (m, 2H), 3.63 - 3.55 (m, 0.46H), 2.58 - 2.50 (m, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.44 - 2.38 (m, 1H), 2.23 (s, 4H), 2.04 (s, 1H), 1.93 (t, J = 1.7 Hz, 3H), 1.90 - 1.85 (m, 1H), 1.68 (s, 3H), 1.66 - 1.62 (m, 1H), 1.40 - 1.35 (m, 2H), 1.32 - 1.22 (m, 32H), 1.14 (s, 3H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 203.78, 171.24, 169.85, 167.77, 167.17, 167.01, 154.10, 154.04, 142.58, 136.67, 133.67, 133.48, 132.90, 132.07, 130.24, 129.20, 129.14, 128.75, 128.71, 128.56, 127.17, 126.56, 114.98, 105.72, 105.68, 105.10, 105.03, 84.45, 81.10, 79.14, 75.59, 75.12, 73.02, 72.96, 72.88, 72.82, 72.14, 69.12, 68.96, 68.45, 66.92, 66.83, 66.67, 60.41, 58.52, 52.68, 52.64, 45.59, 43.21, 35.60, 35.55, 33.88, 33.84, 31.93, 29.71, 29.66, 29.57, 29.54, 29.51, 29.37, 26.84, 23.96, 23.87, 23.85, 22.73, 22.70, 22.18, 21.05, 14.80, 14.21, 9.62. HRMS (ESI): m/z (M + Na)+ C69H91NO18Naの計算値1244.6133; 実測値1244.6111。
【0049】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－((((２－((Ｚ)－ヘプタデク－８－エン－１－イル)－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＡＲＴ－２０７)。
【化10】
【0050】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.17 - 8.11 (m, 2H), 7.74 (dt, J = 8.3, 1.2 Hz, 2H), 7.63 - 7.57 (m, 1H), 7.53 - 7.49 (m, 3H), 7.45 - 7.35 (m, 7H), 6.92 (dt, J = 8.4, 4.1 Hz, 1H), 6.33 - 6.24 (m, 2H), 6.00 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.44 - 5.42 (m, 1H), 5.38 - 5.30 (m, 2H), 5.00 - 4.92 (m, 2H), 4.47 - 4.44 (m, 1H), 4.35 - 4.24 (m, 2H), 4.24 - 4.18 (m, 2H), 4.16 - 4.09 (m, 1H), 3.85 - 3.77 (m, 2H), 2.61 - 2.51 (m, 1H)、 2.49 (dd, J = 4.1, 1.4 Hz, 1H), 2.46 (dd, J = 2.6, 1.3 Hz, 3H), 2.44 - 2.36 (m, 1H), 2.23 (m, 4H), 2.00 (q, J = 6.5 Hz, 4H), 1.93 (q, J = 1.4 Hz, 3H), 1.90 - 1.84 (m, 1H), 1.81 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 1.71 - 1.65 (m, 6H), 1.38 -1.41 (m, 3H), 1.33 - 1.23 (m, 22H), 1.14 (s, 3H), 0.89 - 0.87 (m, 3H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 203.79, 171.27, 169.86, 167.76, 167.14, 167.04, 142.61, 136.66, 133.69, 133.47, 132.89, 132.08, 130.24, 129.99, 129.78, 129.18, 129.15, 128.76, 128.72, 128.56, 127.17, 126.54, 105.67, 84.45, 81.11, 79.16, 76.47, 75.59, 75.11, 72.96, 72.14, 66.85, 58.54, 52.65, 45.57, 43.22, 35.58, 33.83, 31.91, 29.77, 29.75, 29.53, 29.48, 29.45, 29.33, 29.21, 27.23, 27.20, 26.85, 23.96, 23.84, 22.73, 22.69, 22.18, 14.81, 9.62. HRMS (ESI): m/z (M + Na)+ C69H89NO18Naの計算値1242.5977; 実測値1242.5965。
【0051】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((４Ｒ)－２－((Ｚ)－ヘプタデク－８－エン－１－イル)－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１２４)。
【化11】
【0052】
[α]20
D = -46.6 (c2, CHCl3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.16 - 8.13 (m, 2H), 7.74 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 2H), 7.62 - 7.60 (m, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 3H), 7.45 - 7.34 (m, 7H), 6.92 (dd, J = 9.4, 2.6 Hz, 1H), 6.31 - 6.27 (m, 2H), 6.00 (dd, J = 9.4, 2.5 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.45 - 5.41 (m, 1H), 5.35 - 5.33 (m, 2H), 4.99 - 4.96 (m, 1H), 4.88 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.47 - 4.41 (m, 1H), 4.32 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.29 - 4.24 (m, 1H), 4.23 - 4.18 (m, 2H), 4.15 - 4.08 (m, 2H), 3.90 (dd, J = 8.6, 6.9 Hz, 0.72H), 3.84 - 3.76 (m, 2H), 3.57 (dd, J = 8.6, 6.8 Hz, 0.36H), 2.60 - 2.53 (m, 1H), 2.50 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.43 - 2.38 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.04 (s, 1H), 2.03 - 1.97 (m, 4H), 1.94 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 1.90 - 1.85 (m, 1H), 1.84 (s, 1H), 1.72 (s, 2H), 1.68 (s, 2H), 1.65 - 1.63 (m, 1H), 1.41 - 1.37 (m, 2H), 1.32 - 1.22 (m, 22H), 1.14 (s, 3H), 0.88 (t, J = 6.7 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 203.79, 171.26, 169.86, 167.77, 167.16, 167.03, 154.03, 142.60, 136.64, 133.68, 133.47, 132.89, 132.08, 130.24, 129.98, 129.78, 129.19, 129.15, 128.75, 128.72, 128.56, 127.16, 126.54, 105.71, 105.02, 84.45, 81.11, 79.14, 75.59, 75.11, 72.96, 72.14, 69.12, 66.93, 60.41, 58.54, 52.63, 45.57, 43.22, 35.59, 33.86, 33.83, 31.91, 29.77, 29.75, 29.53, 29.47, 29.44, 29.32, 29.21, 27.23, 27.20, 26.84, 23.96, 23.86, 22.73, 22.69, 22.18, 21.06, 14.82, 9.62. HRMS (ESI): m/z (M + Na)+ C69H89NO18Naの計算値1242.5977; 実測値1242.5964。
【0053】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((４Ｓ)－２－((Ｚ)－ヘプタデク－８－エン－１－イル)－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１２５)。
【化12】
【0054】
[α]20
D = -48.8 (c2, CDCl3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.16 - 8.13(m, 2H), 7.75 - 7.73 (m, 2H), 7.63 - 7.58 (m, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 3H), 7.45 - 7.34 (m, 7H), 6.93 (dd, J = 9.4, 4.9 Hz, 1H), 6.29 (s, 2H), 6.00 (dd, J = 9.4, 2.5 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.42 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 5.36 - 5.33 (m, 2H), 4.99 - 4.93 (m, 1H), 4.87 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.47 - 4.41 (m, 1H), 4.32 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.30 - 4.23 (m, 1H), 4.23 - 4.19 (m, 2H), 4.15 (dd, J = 5.5, 2.1 Hz, 1H), 4.13 - 4.09 (m, 1H), 3.90 (dd, J = 8.6, 6.9 Hz, 0.73H), 3.84 - 3.78 (m, 2H), 3.61 (dd, J = 8.6, 6.8 Hz, 0.36H), 2.60 - 2.52 (m, 1H), 2.50 (dd, J = 4.2, 1.7 Hz, 1H), 2.46 (d, J = 1.8 Hz, 3H), 2.44 - 2.38 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.04 (s, 1H), 2.00 (q, J = 6.5 Hz, 4H), 1.93 (s, 3H), 1.90 - 1.85 (m, 1H), 1.83 (s, 1H), 1.69 (s, 5H), 1.65 - 1.61 (m, 1H), 1.40 - 1.33 (m, 2H), 1.28 - 1.26 (m, 21H), 1.14 (s, 3H), 0.90 - 0.85 (m, 3H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 203.78, 171.23, 169.85, 167.77, 167.74, 167.20, 167.00, 154.09, 154.03, 142.57, 136.66, 133.66, 133.47, 132.90, 132.07, 130.23, 129.98, 129.78, 129.20, 129.14, 128.75, 128.71, 128.56, 127.18, 126.56, 105.66, 105.08, 84.45, 81.10, 79.12, 75.59, 75.12, 72.88, 72.82, 72.14, 68.96, 68.32, 66.84, 60.41, 58.52, 52.68, 45.58, 43.22, 35.61, 35.55, 33.87, 33.82, 31.91, 31.59, 29.77, 29.75, 29.52, 29.47, 29.44, 29.32, 29.21, 27.23, 27.20, 26.84, 23.96, 23.84, 22.73, 22.69, 22.19, 21.05, 14.79, 14.20, 9.63. HRMS (ESI): m/z (M + Na)+ C69H89NO18Naの計算値1242.5977; 実測値1242.5964。
【0055】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((２Ｒ,４Ｒ)－２－((Ｚ)－ヘプタデク－８－エン－１－イル)－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１２７)。
【化13】
【0056】
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.15 - 8.13 (m, 2H), 7.75 - 7.73 (m, 2H), 7.62 - 7.59 (m, 1H), 7.51 (q, J = 7.4 Hz, 3H), 7.43 - 7.36 (m, 7H), 6.92 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 2.5 Hz, 2H), 6.00 (dd, J = 9.4, 2.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.43 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 5.35 - 5.32 (m, 2H), 4.98 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 4.96 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 4.46 - 4.42 (m, 1H), 4.33 - 4.30 (m, 2H), 4.23 - 4.17 (m, 3H), 4.15 - 4.10 (m, 2H), 3.81 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 3.57 (dd, J = 8.7, 6.7 Hz, 1H), 2.60 - 2.54 (m, 1H), 2.48 (d, J = 8.3 Hz, 4H), 2.42 - 2.37 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.21 - 2.18 (m, 1H), 2.04 (s, 1H), 2.01 - 1.98 (m, 3H), 1.93 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.90 - 1.85 (m, 1H), 1.81 (s, 1H), 1.69 (d, J = 9.1 Hz, 4H), 1.38 (dd, J = 10.0, 5.0 Hz, 2H), 1.31 - 1.24 (m, 23H), 1.14 (s, 3H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 203.79, 177.71, 171.28, 169.86, 167.77, 167.13, 167.04, 154.11, 142.62, 136.63, 133.70, 133.47, 132.87, 132.08, 130.24, 129.98, 129.78, 129.17, 129.15, 128.76, 128.72, 128.56, 127.17, 126.55, 105.01, 84.44, 81.09, 79.15, 75.59, 75.09, 73.02, 72.16, 72.12, 68.51, 68.45, 66.81, 58.53, 52.63, 45.56, 43.21, 35.56, 35.53, 33.85, 31.91, 29.77, 29.75, 29.53, 29.51, 29.44, 29.32, 29.21, 27.80, 27.22, 27.20, 26.84, 23.86, 22.73, 22.69, 22.19, 14.82, 9.61. HRMS (ESI): m/z (M + Na)+ C69H89NO18Naの計算値1242.5977; 実測値1242.5973。
【0057】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((２Ｓ,４Ｒ)－２－((Ｚ)－ヘプタデク－８－エン－１－イル)－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１２８)。
【化14】
【0058】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.16 - 8.11 (m, 2H), 7.76 - 7.71 (m, 2H), 7.63 - 7.56 (m, 1H), 7.50 (td, J = 7.5, 4.4 Hz, 3H), 7.45 - 7.35 (m, 7H), 6.95 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.32 - 6.26 (m, 2H), 6.00 (dd, J = 9.4, 2.5 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.43 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 5.35 (td, J = 7.0, 5.9, 4.0 Hz, 2H), 4.97 (dd, J = 9.7, 2.3 Hz, 1H), 4.88 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.44 (ddd, J = 10.6, 6.5, 3.2 Hz, 1H), 4.31 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.26 (td, J = 6.6, 3.1 Hz, 1H), 4.23 - 4.17 (m, 2H), 4.11 (dd, J = 11.0, 6.3 Hz, 1H), 3.90 (dd, J = 8.7, 6.8 Hz, 1H), 3.84 - 3.76 (m, 2H), 2.54 (dq, J = 14.5, 6.1, 4.7 Hz, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.43 - 2.36 (m, 1H), 2.22 (s, 4H), 2.01 (q, J = 7.1, 6.4 Hz, 4H), 1.93 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.89 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 1.68 (s, 3H), 1.66 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 1.35 - 1.22 (m, 26H), 1.14 (s, 3H), 0.88 (t, J = 6.7 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 203.78, 171.24, 169.85, 167.78, 167.22, 167.01, 154.04, 142.57, 136.64, 133.67, 133.47, 132.91, 132.08, 130.24, 129.98, 129.78, 129.20, 129.15, 128.75, 128.72, 128.56, 127.17, 126.56, 115.49, 105.71, 84.45, 81.10, 79.13, 75.59, 75.13, 72.97, 72.14, 69.13, 66.93, 58.52, 52.65, 45.59, 43.22, 35.60, 35.55, 33.83, 31.91, 29.77, 29.75, 29.71, 29.53, 29.47, 29.44, 29.33, 29.21, 27.23, 27.20, 26.84, 23.95, 22.73, 22.69, 22.18, 14.82, 14.21, 9.63. HRMS (ESI): m/z (M + Na)+ C69H89NO18Naの計算値1242.5977; 実測値1242.5972。
【0059】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((２Ｒ,４Ｓ)－２－((Ｚ)－ヘプタデク－８－エン－１－イル)－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１２９)。
【化15】
【0060】
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.15 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.74 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.61 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.51 (q, J = 7.2 Hz, 3H), 7.45 - 7.35 (m, 7H), 6.91 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 10.3 Hz, 2H), 6.00 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.42 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 5.37 - 5.30 (m, 2H), 4.98 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.94 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.46 - 4.42 (m, 1H), 4.34 - 4.28 (m, 2H), 4.21 (t, J = 4.3 Hz, 3H), 4.15 - 4.11 (m, 2H), 3.82 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 3.61 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 2.59 - 2.53 (m, 1H), 2.49 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.47 (s, 2H), 2.41 (dd, J = 15.4, 9.3 Hz, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.04 (s, 1H), 2.03 - 1.96 (m, 4H), 1.93 (s, 3H), 1.91 - 1.86 (m, 1H), 1.77 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 1.67 (d, J = 12.1 Hz, 5H), 1.65 - 1.62 (m, 1H), 1.33 - 1.23 (m, 23H), 1.14 (s, 3H), 0.88 (t, J = 6.7 Hz, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 203.79, 171.28, 169.85, 167.73, 167.12, 167.06, 154.09, 142.63, 136.67, 133.70, 133.46, 132.87, 132.09, 130.25, 129.99, 129.78, 129.16, 129.14, 128.77, 128.73, 128.56, 127.17, 126.55, 105.09, 84.45, 81.10, 79.18, 75.59, 75.09, 72.87, 72.16, 72.12, 68.31, 66.69, 60.42, 58.54, 52.66, 45.57, 43.21, 35.58, 35.53, 33.87, 31.91, 29.78, 29.76, 29.53, 29.52, 29.45, 29.33, 29.22, 27.23, 27.21, 26.85, 23.84, 22.75, 22.70, 22.18, 14.82, 14.22, 9.62. HRMS (ESI): m/z (M + Na)+ C69H89NO18Naの計算値1242.5977; 実測値1242.5978。
【0061】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((２Ｓ,４Ｓ)－２－((Ｚ)－ヘプタデク－８－エン－１－イル)－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１３０)。
【化16】
【0062】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.74 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.60 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.46 (m, 3H), 7.44 - 7.35 (m, 7H), 6.92 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.28 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.00 (dd, J = 9.3, 2.5 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.42 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 5.35 - 5.32 (m, 2H), 5.01 - 4.94 (m, 1H), 4.87 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.47 - 4.42 (m, 1H), 4.32 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.29 - 4.23 (m, 1H), 4.21 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.15 (dd, J = 5.5, 2.1 Hz, 2H), 4.11 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.90 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 3.83 - 3.80 (m, 1H), 2.58 - 2.56 (m, 1H), 2.49 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.44 - 2.36 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.04 (s, 1H), 2.00 (q, J = 6.5 Hz, 4H), 1.93 (s, 3H), 1.90 - 1.84 (m, 1H), 1.77 (s, 1H), 1.69 (d, J = 5.5 Hz, 5H), 1.65 - 1.63 (m, 1H), 1.31 - 1.22 (m, 23H), 1.14 (s, 3H), 0.87 (t, J = 6.6 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 203.79, 171.26, 169.85, 167.75, 167.11, 167.05, 154.03, 142.64, 136.68, 133.68, 133.48, 132.87, 132.07, 130.24, 129.99, 129.78, 129.18, 129.14, 128.76, 128.71, 128.55, 127.17, 126.56, 105.67, 84.45, 81.10, 79.19, 75.59, 75.12, 72.82, 72.14, 68.96, 66.86, 60.41, 58.54, 52.67, 45.57, 43.21, 35.60, 35.54, 33.84, 31.91, 29.78, 29.75, 29.53, 29.47, 29.45, 29.33, 29.22, 27.23, 27.20, 26.85, 23.97, 22.74, 22.69, 22.19, 21.06, 14.81, 14.21, 9.62. HRMS (ESI): m/z (M + Na)+ C69H89NO18Naの計算値1242.5977; 実測値1242.5972。
【0063】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－((((２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１２６)。
【化17】
【0064】
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.15 - 8.13 (m, 2H), 7.74 - 7.72 (m, 2H), 7.62 - 7.58 (m, 1H), 7.53 - 7.48 (m, 3H), 7.44 - 7.35 (m, 7H), 6.95 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.32 - 6.24 (m, 2H), 6.00 (dd, J = 9.5, 2.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.42 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 4.97 (dd, J = 9.7, 2.3 Hz, 1H), 4.46 - 4.41 (m, 1H), 4.33 - 4.28 (m, 2H), 4.25 - 4.19 (m, 2H), 4.17 - 4.12 (m, 1H), 4.09 - 4.04 (m, 1H), 3.81 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 3.76 (dd, J = 8.7, 5.8 Hz, 1H), 2.60 - 2.53 (m, 1H), 2.52 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.41 (dd, J = 15.4, 9.4 Hz, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.93 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.90 (s, 1H), 1.89 - 1.85 (m, 1H), 1.82 (s, 1H), 1.68 (s, 3H), 1.36 (d, J = 10.3 Hz, 6H), 1.24 (s, 3H), 1.13 (s, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 203.79, 171.25, 169.85, 167.77, 167.19, 167.01, 154.10, 142.59, 136.66, 133.67, 133.49, 132.89, 132.07, 130.23, 129.21, 129.13, 128.75, 128.71, 128.54, 127.17, 126.54, 115.60, 110.09, 109.99, 84.45, 81.10, 79.12, 75.59, 75.12, 73.08, 72.13, 68.68, 65.91, 58.52, 52.66, 45.58, 43.21, 35.61, 35.55, 26.84, 26.56, 25.32, 22.73, 22.19, 20.83, 14.79, 9.63. HRMS (ESI): m/z (M + Na)+ C54H61NO18Naの計算値1034.3786; 実測値1034.3776。
【0065】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((Ｓ)－２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１３１)。
【化18】
【0066】
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.16 - 8.10 (m, 2H), 7.76 - 7.70 (m, 2H), 7.62 - 7.57 (m, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 3H), 7.44 - 7.35 (m, 7H), 6.95 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.32 - 6.24 (m, 2H), 6.00 (dd, J = 9.5, 2.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.42 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 4.97 (dd, J = 9.7, 2.3 Hz, 1H), 4.43 (ddd, J = 10.9, 6.6, 4.0 Hz, 1H), 4.33 - 4.28 (m, 2H), 4.25 - 4.19 (m, 2H), 4.17 - 4.12 (m, 1H), 4.09 - 4.04 (m, 1H), 3.81 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 3.76 (dd, J = 8.7, 5.8 Hz, 1H), 2.60 - 2.53 (m, 1H), 2.52 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.41 (dd, J = 15.4, 9.4 Hz, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.93 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.90 (s, 1H), 1.89 - 1.85 (m, 1H), 1.82 (s, 1H), 1.68 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.24 (s, 3H), 1.13 (s, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 203.79, 171.25, 169.85, 167.77, 167.19, 167.01, 154.10, 142.59, 136.66, 133.67, 133.49, 132.89, 132.07, 130.23, 129.21, 129.13, 128.75, 128.71, 128.54, 127.17, 126.54, 115.60, 110.09, 109.99, 84.45, 81.10, 79.12, 75.59, 75.12, 73.08, 72.13, 68.68, 65.91, 58.52, 52.66, 45.58, 43.21, 35.61, 35.55, 26.84, 26.56, 25.32, 22.73, 22.19, 20.83, 14.79, 9.63. HRMS (ESI): m/z (M + Na)+ C54H61NO18Naの計算値1034.3786; 実測値1034.3783。
【0067】
(２ａＲ,４Ｓ,４ａＳ,６Ｒ,９Ｓ,１１Ｓ,１２Ｓ,１２ａＲ,１２ｂＳ)－９－(((２Ｒ,３Ｓ)－３－ベンズアミド－２－(((((Ｒ)－２,２－ジメチル－１,３－ジオキソラン－４－イル)メトキシ)カルボニル)オキシ)－３－フェニルプロパノイル)オキシ)－１２－(ベンゾイルオキシ)－４,１１－ジヒドロキシ－４ａ,８,１３,１３－テトラメチル－５－オキソ－３,４,４ａ,５,６,９,１０,１１,１２,１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７,１１－メタノシクロデカ[３,４]ベンゾ[１,２－ｂ]オキセテ－６,１２ｂ(２ａＨ)－ジイルジアセテート(ＮＣＰ－１３２)。
【化19】
【0068】
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.17 - 8.10 (m, 2H), 7.77 - 7.70 (m, 2H), 7.60 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 3H), 7.45 - 7.34 (m, 7H), 6.93 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 4.6 Hz, 2H), 6.00 (dd, J = 9.3, 2.3 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 4.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.43 (dt, J = 10.8, 5.3 Hz, 1H), 4.35 - 4.27 (m, 2H), 4.27 - 4.18 (m, 2H), 4.16 - 4.12 (m, 1H), 4.06 (dd, J = 8.7, 6.5 Hz, 1H), 3.81 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 3.73 (dd, J = 8.7, 5.7 Hz, 1H), 2.59 - 2.49 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.42 - 2.36 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.88 (s, 2H), 1.84 (s, 1H), 1.68 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.24 (s, 3H), 1.13 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 203.77, 171.21, 169.85, 167.75, 167.14, 167.01, 154.09, 142.56, 136.66, 133.65, 133.51, 132.91, 132.05, 130.23, 129.22, 129.14, 128.74, 128.70, 128.54, 127.16, 126.56, 110.14, 84.45, 81.11, 79.14, 76.46, 75.59, 75.14, 73.17, 72.12, 69.07, 66.10, 58.53, 52.65, 45.60, 43.21, 35.56, 26.84, 26.66, 25.28, 22.72, 22.16, 20.82, 14.79, 9.62. HRMS (ESI): m/z (M + Na)+ C54H61NO18Naの計算値1034.3786; 実測値1034.3791。
【0069】
【化20】
【0070】
【化21】
【0071】
【化22】
【0072】
【化23】
【0073】
【化24】
【0074】
【化25】
【0075】
【化26】
【0076】
【化27】
【化28】
【0077】
【化29】
【0078】
【化30】
【0079】
【化31】
【0080】
キラル化合物のクロマトグラフ単離(ジアステレオマー的に純粋な化合物)：
ある方法で、ジアステレオマー化合物の混合物が合成で得られたとき、単一ジアステレオマーの精製または単離を、化学結合スルホン酸基と銀イオンを使用するなどのシリカベースのイオン交換を使用して実施できる。従って、銀浸透カラムの調製は、NucleosilTM 5SAなどの適切な固定相を有する標準プレパックカラムの使用を含み、カラムを通して水をポンプ輸送しながらRheodyneTMインジェクターで銀イオンを導入する。次いで、水相を有機溶媒に置き換える。典型的に、この方法を使用して、約５０mg～８０mgの銀イオンが固定相に結合する。銀イオンカラムを、Chromspher LipidsTM、Varian-Chrompack International, Middelburg, Netherlandsなどの商業的供給源から得ることもできる。Morris, L. J. Separation of lipids by silver ion chromatography. J. Lipid Res., 7, 717-732 (1966)参照。
ある方法で、ジアステレオマー化合物の混合物が合成で得られたとき、単一ジアステレオマーの精製または単離を、化学結合スルホン酸基と銀イオンを使用するなどのシリカベースのイオン交換を使用して実施できる。従って、銀浸透カラムの調製は、NucleosilTM 5SAなどの適切な固定相を有する標準プレパックカラムの使用を含み、カラムを通して水をポンプ輸送しながらRheodyneTMインジェクターで銀イオンを導入する。次いで、水相を有機溶媒に置き換える。典型的に、この方法を使用して、約５０mg～８０mgの銀イオンが固定相に結合する。銀イオンカラムを、Chromspher LipidsTM、Varian-Chrompack International, Middelburg, Netherlandsなどの商業的供給源から得ることもできる。Morris, L. J. Separation of lipids by silver ion chromatography. J. Lipid Res., 7, 717-732 (1966)参照。
【0081】
化合物の製剤：
次の表は、ここで製造した代表的化合物を使用して製造した製剤の代表的組成である。
次の表は、ここで製造した代表的化合物を使用して製造した製剤の代表的組成である。
【表2】
【0082】
化合物(ＡＰＩ)を選択し、上記表に示す組成に添加して、製剤製品の最終濃度を得て、例えば、０.５００グラムのＡＲＴ ２０７などの化合物を添加して、約５mg／mlの製剤製品を得る。Miglyol 812N(Ｃ８／Ｃ１０トリグリセリド(ＭＣＴ油))を、ここに開示する他のトリグリセリドエステルまたは他の中鎖トリグリセリドに置き換え得る。
【0083】
次の一般法を組成物の製造に使用した：
最初の５成分を個々に計量ボートに測り入れ、内容物を直接４００mLビーカーに移す。次の３成分を単一シンチレーションバイアルに測り入れる。約５mL ＤＣＭをシンチレーションバイアルに添加し、蓋し、倒置により混合する。内容物をバイアルからビーカーに移す。バイアルを２回約５mLのＤＣＭで濯ぎ、各洗液をビーカーに加える(総ＤＣＭ体積約１５mL；総溶液体積約１８mL)。ビーカーを時計皿で覆い、ＤＣＭを全成分が溶解するまで４５℃で還流させる；数分毎に旋回させる。おおよその時間：１５分。
最初の５成分を個々に計量ボートに測り入れ、内容物を直接４００mLビーカーに移す。次の３成分を単一シンチレーションバイアルに測り入れる。約５mL ＤＣＭをシンチレーションバイアルに添加し、蓋し、倒置により混合する。内容物をバイアルからビーカーに移す。バイアルを２回約５mLのＤＣＭで濯ぎ、各洗液をビーカーに加える(総ＤＣＭ体積約１５mL；総溶液体積約１８mL)。ビーカーを時計皿で覆い、ＤＣＭを全成分が溶解するまで４５℃で還流させる；数分毎に旋回させる。おおよその時間：１５分。
【0084】
時計皿を除き、ビーカーを６０℃の水浴に入れ、ＤＣＭ混合物の表面に穏やかな窒素流を向け、穏やかな乱流を作る。混合物が粘性フィルムを形成するまで、穏やかな撹拌を使用したＤＣＭの蒸発を続ける。
【0085】
ビーカーを完全真空の４５℃バキュームオーブンに１時間以上入れる；混合物が２００mLを超えて膨張するならば、減圧を下げる。ビーカーを６０℃水浴に入れ、次いで、約９４mLの余熱した(６０℃)１０mM 酢酸ナトリウムｐＨ５.５緩衝液(ELN 2020Dec07_R_D_dle_039参照)を添加し、旋回させて、均一乳状溶液とする。
【0086】
Osterハンドブレンダーで、低速で１～２秒バルスを使用して混合する；３分間パルスを継続する(２分以上)。粒子径を測定する。
ハンドブレンダーでのパルスを２分間、１０秒パルスを使用して続ける。粒子径を測定する。
ハンドブレンダーでのパルスを２分間、１０秒パルスを使用して続ける。粒子径を測定する。
【0087】
得られた溶液を、マイクロフルイダイザー注入口リザーバーに移し、混合物をマイクロフルイダイザー(６０℃、２５kpsi)に最低１０回通す。各２回目の通過後粒子径を測定する(最低１０ａ～１０ｅ)。濾過性を評価するための粒子径をモニタリングしながら、さらに通過を継続する。
【0088】
３０mLの緩衝液および正確に４ポンプストロークを使用してマイクロフルイダイザーホールドアップ体積から生成物を集め、約１００mL処理済物質を得る。溶液を１００mLメスシリンダーに移し、最終体積を確認する；粒子径および効力のためのサンプルを取る。得られた溶液を単一Nalgene ０.２μm aPESフィルターで、フィルターが詰まるまで濾過する。必要に応じして、さらに１以上のフィルターを使用する。各濾液の粒子径を測定する。各濾液の効力を測定する。１００mLのＩＰＡをマイクロフルイダイザー供給ホッパーに加え、緩衝液フラッシュおよびＩＰＡ(ＭＦ洗液１)の残りを廃棄する。注：この洗液は混合チャンバーないからのＩＰＡおよび残存緩衝液両方を含む。マイクロフルイダイザーをさらに１００mLのＩＰＡ(ＭＦ洗液２)で洗浄する。
【0089】
ＮＣＩ－６０細胞１回投与および５回投与スクリーニングデータ：
癌スクリーニングパネルのヒト腫瘍細胞株を、５％ウシ胎児血清および２mM Ｌ－グルタミン含有ＲＰＭＩ １６４０培地で増殖する。典型的スクリーニング実験のために、細胞を、９６ウェルマイクロタイタープレートに、個々の細胞株の倍加時間によって５,０００～４０,０００細胞／ウェルの範囲の播種密度で１００μLで接種する。細胞接種後、マイクロタイタープレートを３７℃、５％ＣＯ２、９５％空気および１００％相対湿度で２４時間インキュベートし、その後実験薬物を添加する。
癌スクリーニングパネルのヒト腫瘍細胞株を、５％ウシ胎児血清および２mM Ｌ－グルタミン含有ＲＰＭＩ １６４０培地で増殖する。典型的スクリーニング実験のために、細胞を、９６ウェルマイクロタイタープレートに、個々の細胞株の倍加時間によって５,０００～４０,０００細胞／ウェルの範囲の播種密度で１００μLで接種する。細胞接種後、マイクロタイタープレートを３７℃、５％ＣＯ２、９５％空気および１００％相対湿度で２４時間インキュベートし、その後実験薬物を添加する。
【0090】
２４時間後、各細胞株の２プレートをＴＣＡでインサイチュで固定して、薬物添加時(Ｔｚ)の各細胞株の細胞集団の測定値とする。実験薬物を、ジメチルスルホキシドで所望の最終最大試験濃度の４００倍に希釈し、使用前凍結保存する。薬物添加時、一定量の凍結濃縮物を解凍し、５０μg／ml ゲンタマイシン含有完全培地で所望の最終最大試験濃度の２倍に希釈する。さらに４、１０倍または1/2log連続希釈を行い、計５薬物濃度と対照を得る。これら種々の薬物希釈物の１００μl量を、すでに１００μlの培地を含む適切なマイクロタイターウェルに添加し、必要な最終薬物濃度とする。
【0091】
薬物添加後、プレートをさらに４８時間、３７℃、５％ＣＯ２、９５％空気および１００％相対湿度でインキュベートする。付着細胞について、アッセイを冷ＴＣＡ添加により停止させる。細胞を５０μlの冷５０％(ｗ／ｖ)ＴＣＡ(最終濃度、１０％ＴＣＡ)を穏やかに添加し、６０分間、４℃でインキュベートすることによりインサイチュで固定する。上清を廃棄し、プレートを水道水で５回洗浄し、空気乾燥させる。１％酢酸中０.４％(ｗ／ｖ)のスルホローダミンＢ(ＳＲＢ)溶液(１００μl)を各ウェルに添加し、プレートを１０分間、室温でインキュベートする。染色後、未結合色素を１％酢酸で５回洗浄することにより除去し、プレートを空気乾燥する。結合した色素をその後１０mM トリズマ塩基で可溶化し、吸光度を自動化プレートリーダーで波長５１５nmで読む。懸濁細胞について、アッセイをウェルの底の沈殿細胞を５０μlの８０％ＴＣＡ(最終濃度、１６％ＴＣＡ)を穏やかに添加して固定することにより停止する以外、方法は同じである。７吸光度測定値[０時(Ｔｚ)、対照増殖(Ｃ)および５濃度レベルの薬物存在下の試験増殖(Ｔｉ)]、パーセンテージ増殖を各薬物濃度レベルで計算する。パーセンテージ増殖阻害を：
Ｔｉ≧Ｔｚである濃度について[(Ｔｉ－Ｔｚ)／(Ｃ－Ｔｚ)]×１００
Ｔｉ＜Ｔｚである濃度について[(Ｔｉ－Ｔｚ)／Ｔｚ]×１００
として計算する。
Ｔｉ≧Ｔｚである濃度について[(Ｔｉ－Ｔｚ)／(Ｃ－Ｔｚ)]×１００
Ｔｉ＜Ｔｚである濃度について[(Ｔｉ－Ｔｚ)／Ｔｚ]×１００
として計算する。
【0092】
３用量－応答パラメーターを各実験剤で計算する。５０％(ＧＩ５０)増殖阻害を[(Ｔｉ－Ｔｚ)／(Ｃ－Ｔｚ)]×１００＝５０から計算し、これは、薬物インキュベーション中の対照細胞における正味のタンパク質増加(ＳＲＢ染色により測定)の５０％減少をもたらす薬物濃度である。完全増殖阻害(ＴＧＩ)をもたらす薬物濃度をＴｉ－Ｔｚから計算する。処置後の正味の細胞喪失を示すＬＣ５０(最初と比較して薬物処置終了時に測定タンパク質の５０％減少をもたらす薬物濃度)を[(Ｔｉ－Ｔｚ)／Ｔｚ]×１００＝－５０から計算する。値を、活性レベルが到達したならば、これら３パラメーターの各々で計算する；しかしながら、効果が到達しないかまたは過剰であるならば、このパラメーターの値を試験した最大または最小を超えるまたは未満として表す。
【0093】
細胞培養：
乳房(ＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＭＤＡ－ＭＢ－４５３)、膵臓(ＭＩＡ－ｐａｃａ－２)、肺(Ａ５４９およびＮＩＨ－１９７５)、前立腺(ＤＵ１４５)および卵巣(ＳＫＯＶ－３)癌細胞株をＡＴＣＣ(Manassas, VA)から得た。癌細胞株を、１０％ウシ胎児血清(Atlanta Biological, GA)および１％ペニシリン／ストレプトマイシン(Invitrogen-Gibco, Carlsbad, CA)を添加した各培養培地(ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ、ＡＴＣＣの推奨に従う)で、３７℃で５％ＣＯ２の加湿チャンバーで培養を維持した。
乳房(ＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＭＤＡ－ＭＢ－４５３)、膵臓(ＭＩＡ－ｐａｃａ－２)、肺(Ａ５４９およびＮＩＨ－１９７５)、前立腺(ＤＵ１４５)および卵巣(ＳＫＯＶ－３)癌細胞株をＡＴＣＣ(Manassas, VA)から得た。癌細胞株を、１０％ウシ胎児血清(Atlanta Biological, GA)および１％ペニシリン／ストレプトマイシン(Invitrogen-Gibco, Carlsbad, CA)を添加した各培養培地(ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ、ＡＴＣＣの推奨に従う)で、３７℃で５％ＣＯ２の加湿チャンバーで培養を維持した。
【0094】
細胞生存アッセイ：
癌細胞を、３８４ウェルプレート形式で３,０００細胞／ウェルで播種した。２４時間後、細胞を食塩水(０.９％ＮａＣｌ)、アブラキサン(登録商標)、媒体およびＡＲＴ－２０７で結果セクションにｈ上告する用量で４８時間および７２時間処理した。Cell Counting Kit-8(CCK8, APExBio, Houton, TX)添加により阻害を決定した。３７℃で２時間のインキュベーション後、光学密度を、４５０nmでSpectraMax M3分光光度計(Molecular Devices, San Jose, CA)を使用して測定した。
癌細胞を、３８４ウェルプレート形式で３,０００細胞／ウェルで播種した。２４時間後、細胞を食塩水(０.９％ＮａＣｌ)、アブラキサン(登録商標)、媒体およびＡＲＴ－２０７で結果セクションにｈ上告する用量で４８時間および７２時間処理した。Cell Counting Kit-8(CCK8, APExBio, Houton, TX)添加により阻害を決定した。３７℃で２時間のインキュベーション後、光学密度を、４５０nmでSpectraMax M3分光光度計(Molecular Devices, San Jose, CA)を使用して測定した。
【0095】
腫瘍異種移植阻害アッセイ：
６～８週齢NOD-SCID - NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgTM1Wjl/SzJマウスをJackson Laboratories(Bar Harbor, ME)から得て、実験前６日間実験室に順化させた。マウスをLaboratory of Animals Facility of the Mississippi Medical Center(Jackson, MS)に維持した。全動物をマイクロアイソレーターケージで、最大５匹／ケージで、１２時間明／暗サイクルで飼育した。動物は、濾過Jackson municipal水および滅菌齧歯類餌(Teklad LM-485 Mouse/Rat Diet 7912, ENVIGO)を自由に摂取した。ケージを週２回交換した。動物を毎日観察し、臨床的徴候を記録した。全実験法は、University of Mississippi Medical Center(UMMC)のInstitutional Animal Care and Use Committeeにより承認された。ＵＭＭＣの動物実験室はＡＡＡＬＡＣ公認である。５０μLのＰＢＳ中の２×１０６ ＳＫＯＶ－３卵巣癌細胞を、５０μLのMatrigel(Corning, location)と共に、マウスの右腹側部に皮下注射した。腫瘍のサイズをカリパスを使用して測定し、腫瘍体積を式：腫瘍体積＝長さ×幅２／２(ここで、長さは最長腫瘍直径であり、幅は垂直腫瘍直径を表す)を使用して、計算した。マウスを腫瘍サイズが１５０～２００mm３に達するまでモニターした。第一ラウンドの処置を、連続５日の間に注射し、第二ラウンドの５日処置を２週間後投与した。実験終了時、マウスを屠殺し、腫瘍を集め、秤量した。
６～８週齢NOD-SCID - NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgTM1Wjl/SzJマウスをJackson Laboratories(Bar Harbor, ME)から得て、実験前６日間実験室に順化させた。マウスをLaboratory of Animals Facility of the Mississippi Medical Center(Jackson, MS)に維持した。全動物をマイクロアイソレーターケージで、最大５匹／ケージで、１２時間明／暗サイクルで飼育した。動物は、濾過Jackson municipal水および滅菌齧歯類餌(Teklad LM-485 Mouse/Rat Diet 7912, ENVIGO)を自由に摂取した。ケージを週２回交換した。動物を毎日観察し、臨床的徴候を記録した。全実験法は、University of Mississippi Medical Center(UMMC)のInstitutional Animal Care and Use Committeeにより承認された。ＵＭＭＣの動物実験室はＡＡＡＬＡＣ公認である。５０μLのＰＢＳ中の２×１０６ ＳＫＯＶ－３卵巣癌細胞を、５０μLのMatrigel(Corning, location)と共に、マウスの右腹側部に皮下注射した。腫瘍のサイズをカリパスを使用して測定し、腫瘍体積を式：腫瘍体積＝長さ×幅２／２(ここで、長さは最長腫瘍直径であり、幅は垂直腫瘍直径を表す)を使用して、計算した。マウスを腫瘍サイズが１５０～２００mm３に達するまでモニターした。第一ラウンドの処置を、連続５日の間に注射し、第二ラウンドの５日処置を２週間後投与した。実験終了時、マウスを屠殺し、腫瘍を集め、秤量した。
【0096】
特定の化合物の細胞毒性：
ＳＫ－Ｎ－ＡＳ細胞を使用するＭＴＳ増殖アッセイ：
１日目：ＳＫ－Ｎ－ＡＳ細胞を、９６ウェル組織培養プレート(Falcon)に１００μLで５×１０３／ウェルで適切な増殖培地に播種し、各試験化合物につき１プレートである。カラム１は培地を含むが、細胞がないブランクであった。プレートを一夜、３７℃で５％ＣＯ２でインキュベートして、付着させる。
ＳＫ－Ｎ－ＡＳ細胞を使用するＭＴＳ増殖アッセイ：
１日目：ＳＫ－Ｎ－ＡＳ細胞を、９６ウェル組織培養プレート(Falcon)に１００μLで５×１０３／ウェルで適切な増殖培地に播種し、各試験化合物につき１プレートである。カラム１は培地を含むが、細胞がないブランクであった。プレートを一夜、３７℃で５％ＣＯ２でインキュベートして、付着させる。
【0097】
２日目：培養培地で希釈した薬物を、細胞に０.００５nM～１０μM濃度でクアドロプリケートで添加する。４８～７２時間の薬物暴露後、ＭＴＳを全ウェルに添加し、細胞型に応じて、CellTiter 96(登録商標 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay(MTS), Promegaに従い、１～６時間(３７℃、５％ＣＯ２)インキュベートする。プレートをBio-Tek Synergy HT Multi-detectionマイクロタイタープレートリーダーを４９０ナノメートル波長で処理し、データをKC4V.3ソフトウェアで処理する。薬物濃度対吸光度のデータプロットをプロットし、５０％阻害をもたらす濃度(ＩＣ５０)を各試験化合物について外挿する。
【0098】
対のＭＤＲ＋およびＭＤＲ－細胞系統を使用するＭＴＴ増殖アッセイ：
酸不安定、親油性分子コンジュゲートの細胞毒性の第二の評価を実施した。これらの実験の目的は、多剤耐性細胞およびその親感受性系統におけるコンジュゲートの毒性を比較し、これら化合物のサブセットが親感受性細胞系統で観察されたのと同程度のレベルの毒性を薬物耐性系統で示すとの仮説を試験した。
酸不安定、親油性分子コンジュゲートの細胞毒性の第二の評価を実施した。これらの実験の目的は、多剤耐性細胞およびその親感受性系統におけるコンジュゲートの毒性を比較し、これら化合物のサブセットが親感受性細胞系統で観察されたのと同程度のレベルの毒性を薬物耐性系統で示すとの仮説を試験した。
【0099】
ＭＴＴベースの細胞毒性アッセイを、ヒト癌細胞系統および多剤耐性を示す対の亜系統を使用して、実施した。これらの株は、子宮肉腫系統、ＭＥＳ－ＳＡおよびそのドキソルビシン－耐性亜系統、ＭＥＳ－ＳＡ／Ｄｘ５を含んだ。W. G. Harker et al. Development and characterization of a human sarcoma cell line, MES-SA, sensitive to multiple drugs. Cancer Research 43: 4943-4950 (1983); W. G. Harker et al. Multidrug (pleiotropic) resistance in doxorubicin-selected variants of the human sarcoma cell line MES-SA. Cancer Research 45: 4091 4096 (1985)参照。
【0100】
酸不安定、親油性分子コンジュゲートの血漿での加水分解に対する安定性を評価し、全身循環に活性癌化学療法剤を放出し、それにより、一般的オフターゲット毒性(「副作用」)を引き起こす可能性を決定する。コンジュゲートを、マウス、ラットおよびヒト起源の血漿とインキュベートする。
【0101】
ＨＰＬＣグレードメタノールはFisher(Fair lawn, NJ, USA). Part No: A452-4(074833)から。ＨＰＬＣグレード水はFisher(Fair lawn, NJ, USA). Part No: W5-4(073352)から。薬物非使用マウス、ラットおよびヒト血をInnovative Research Inc.(Southfield, MI, USA)から購入した。Liposyn(登録商標)I.V. Fat EmulsionはHospira, Inc. (Lake Forest, Illinois)から。
【0102】
血漿インキュベーションの調製：
各化合物を、個々に１０μg／ml濃度でマウス、ラットおよびヒト血漿中に調製し、１分間ボルテックス処理し、水浴中、３７℃で振盪速度７５／分に置く。サンプルを０分、１５分、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、１０５分、１２０分、１３５分、１５０分、１６５分、１８０分、２１０分、２４０分、３００分、３６０分および４８０分時点で採る。
各化合物を、個々に１０μg／ml濃度でマウス、ラットおよびヒト血漿中に調製し、１分間ボルテックス処理し、水浴中、３７℃で振盪速度７５／分に置く。サンプルを０分、１５分、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、１０５分、１２０分、１３５分、１５０分、１６５分、１８０分、２１０分、２４０分、３００分、３６０分および４８０分時点で採る。
【0103】
血漿中で分析したここで調製した化合物の分析方法：
化合物のクロマトグラフ分離を、BEH C18カラム(１.７μm、２.１×５０mm)を使用するWaters Acquity UPLCTMで実施する。移動相はメタノール：０.１％ギ酸(８０：２０)からなった。流速は０.３ml／分；サンプル注入体積は５μLであり、３分のランタイムとなった。
化合物のクロマトグラフ分離を、BEH C18カラム(１.７μm、２.１×５０mm)を使用するWaters Acquity UPLCTMで実施する。移動相はメタノール：０.１％ギ酸(８０：２０)からなった。流速は０.３ml／分；サンプル注入体積は５μLであり、３分のランタイムとなった。
【0104】
ＭＳ器具類は、Waters Micromass Quattro MicroTMトリプル四重極系(Manchester, UK)からなった。ＭＳ系をMassLynxソフトウェアの４.０バージョンで制御する。イオン化を正のエレクトロスプレーイオン化モードで実施する。ＭＳ／ＭＳ条件は次のとおりである：キャピラリー電圧３.０２kV；コーン電圧５０ｖ；引出し電圧５ｖ；およびＲＦレンズ電圧０.５ｖ。源および脱溶媒和温度はそれぞれ１００℃および４００℃であり、脱溶媒和およびコーンガス流はそれぞれ４００Ｌ／時間および３０Ｌ／時間である。
【0105】
選択モニタリング(ＳＩＭ)で使用した化合物の選択質量対電荷(ｍ／ｚ)比遷移を記録する。滞留時間を２００msecに設定した。ＭＳ条件を、メタノール中に調製した標準溶液の直接注入により最適化し、流速２０μL／分でシリンジポンプで輸送する。
【0106】
血漿サンプル調製：
１００μLのサンプルを、それぞれ０分、１５分、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、１０５分、１２０分、１３５分、１５０分、１６５分、１８０分、２１０分、２４０分、３００分、３６０分および４８０分時点で集め、メタノールで反応を停止させた。別のセットの実験で、酸不安定、親油性分子コンジュゲートを少量のエタノールに溶解し、脂質エマルジョン(Liposyn(登録商標))で希釈し、マウスおよびヒト血漿に添加し、その後インキュベーションし、コンジュゲートの加水分解を同様に測定する。集めた選択化合物を含む１００μLの血漿サンプルを、処理のために別のエッペンドルフマイクロ遠心管に入れる。メタノール(２００μL)を添加して、タンパク質沈殿技術を使用して、薬物を抽出する。次いで、マイクロチューブを１０分間ボルテックスで撹拌し、１５分間、１０,０００rpm速度で遠心分離する(Eppendorf 5415C遠心分離機)。上清を集め、０.４５μmフィルター(Waters 13mm GHP ０.４５μm)で濾過し、その後分析する。
１００μLのサンプルを、それぞれ０分、１５分、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、１０５分、１２０分、１３５分、１５０分、１６５分、１８０分、２１０分、２４０分、３００分、３６０分および４８０分時点で集め、メタノールで反応を停止させた。別のセットの実験で、酸不安定、親油性分子コンジュゲートを少量のエタノールに溶解し、脂質エマルジョン(Liposyn(登録商標))で希釈し、マウスおよびヒト血漿に添加し、その後インキュベーションし、コンジュゲートの加水分解を同様に測定する。集めた選択化合物を含む１００μLの血漿サンプルを、処理のために別のエッペンドルフマイクロ遠心管に入れる。メタノール(２００μL)を添加して、タンパク質沈殿技術を使用して、薬物を抽出する。次いで、マイクロチューブを１０分間ボルテックスで撹拌し、１５分間、１０,０００rpm速度で遠心分離する(Eppendorf 5415C遠心分離機)。上清を集め、０.４５μmフィルター(Waters 13mm GHP ０.４５μm)で濾過し、その後分析する。
【0107】
空マウス、ラットおよびヒト血漿サンプルのＵＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析は、上記化合物の定量に干渉する内因性ピークがないことを示す。
【0108】
重み付き線形最小二乗(１／ｘ)回帰を数学的モデルとして使用する。化合物の係数(ｒ)は０.９９２５～０.９９９９の範囲であった。較正範囲を、決定すべきサンプル中で予測される濃度に応じて選択する。最終較正範囲は１０～１２,５００ng／mLであり、定量下限は１０ng／mLであった。反復性および再現性バイアス(％)は、低濃度で±２０％および他の濃度レベルで±１５％の許容範囲内であり、評価した全濃度で５％未満のＲＳＤである。
【0109】
本方法の平均回収は、血漿からの試験化合物の３個の異なる濃度で８６.２２～９９.８３％の範囲であった。これらの結果は、種々の濃度レベルで抽出回収に有意な差はないことを示唆した。
【0110】
調製した化合物のインキュベーション：
ここで調製した選択化合物の２１０.６μg／ml原液からの０.２ml量を、１５分間、(３７℃)でプレインキュベートした３.８mlのヒト血漿に添加し、回帰性水浴で３７℃でインキュベートする。サンプルを０時間、０.５時間、１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間および２４時間に採る。
ここで調製した選択化合物の２１０.６μg／ml原液からの０.２ml量を、１５分間、(３７℃)でプレインキュベートした３.８mlのヒト血漿に添加し、回帰性水浴で３７℃でインキュベートする。サンプルを０時間、０.５時間、１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間および２４時間に採る。
【0111】
調製した化合物の分析方法(液体クロマトグラフィー－タンデムマススペクトロメトリー)：
クロマトグラフ分離を、バイナリーポンプ、オートサンプラー、脱ガス装置およびカラムオーブンからなるACQUITY UPLC液体クロマトグラフ(Waters Corporation, Milford, MA, USA)を使用して実施した。メタノール－アセトニトリル(５０：５０、ｖ／ｖ)の移動相を、流速０.４ml／分で２５℃に維持したACQUITY UPLC BEH C18カラム(１.７μm、２.１×５０mm ｉ.ｄ., Waters Corporation)を通してポンプ輸送する。１０μlのサンプルを注入し、ランタイムは３.０分間であった。ＬＣ溶出をエレクトロスプレーイオン化(ＥＳＩ)イオン源を備えたＥＳＣｉトリプル四重極マススペクトロメーターに直接接続する。四重極を陽イオンモードで操作する。多重反応モニタリング(ＭＲＭ)モードを、MassLynx version 4.1ソフトウェアを使用する定量に使用する。選択ｍ／ｚの質量遷移を、滞留時間０.５ｓで選択化合物に最適化する。窒素を２５０℃の脱溶媒和温で度霧化ガス(３０ｌ／時間)および脱溶媒和ガス(３００１／時間)として使用し、アルゴンを衝突ガスとして使用する。キャピラリー電圧を３.５kVおよびコーン電圧を９０Ｖに設定する；そして源温度を１００℃に設定する。
クロマトグラフ分離を、バイナリーポンプ、オートサンプラー、脱ガス装置およびカラムオーブンからなるACQUITY UPLC液体クロマトグラフ(Waters Corporation, Milford, MA, USA)を使用して実施した。メタノール－アセトニトリル(５０：５０、ｖ／ｖ)の移動相を、流速０.４ml／分で２５℃に維持したACQUITY UPLC BEH C18カラム(１.７μm、２.１×５０mm ｉ.ｄ., Waters Corporation)を通してポンプ輸送する。１０μlのサンプルを注入し、ランタイムは３.０分間であった。ＬＣ溶出をエレクトロスプレーイオン化(ＥＳＩ)イオン源を備えたＥＳＣｉトリプル四重極マススペクトロメーターに直接接続する。四重極を陽イオンモードで操作する。多重反応モニタリング(ＭＲＭ)モードを、MassLynx version 4.1ソフトウェアを使用する定量に使用する。選択ｍ／ｚの質量遷移を、滞留時間０.５ｓで選択化合物に最適化する。窒素を２５０℃の脱溶媒和温で度霧化ガス(３０ｌ／時間)および脱溶媒和ガス(３００１／時間)として使用し、アルゴンを衝突ガスとして使用する。キャピラリー電圧を３.５kVおよびコーン電圧を９０Ｖに設定する；そして源温度を１００℃に設定する。
【0112】
血漿サンプル調製：
種々の時点で(０時間、０.５時間、１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間および２４時間)、２００μl量のサンプルを採り、すぐに１.３mlの冷ＴＢＭＥに添加し、続いて２０μlの内部標準原液(８０.７μg／mlのメタノール溶液)を添加する。各チューブを約２分間ボルテックスで混合し、次いで１３０００rpmで１０分間遠心分離する。１.０mlの得られた上清を他のチューブに移し、窒素ガス下、３５℃で乾燥させる。各乾燥残渣を２００μlのメタノールで再構成し、０.５分間ボルテックスで混合する。１３０００rpmで１０分間遠心分離後、上清をＨＰＬＣオートサンプラーバイアルに移し、１０μl量の各サンプルをＬＣ－ＭＳ－ＭＳに注入する。
種々の時点で(０時間、０.５時間、１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間および２４時間)、２００μl量のサンプルを採り、すぐに１.３mlの冷ＴＢＭＥに添加し、続いて２０μlの内部標準原液(８０.７μg／mlのメタノール溶液)を添加する。各チューブを約２分間ボルテックスで混合し、次いで１３０００rpmで１０分間遠心分離する。１.０mlの得られた上清を他のチューブに移し、窒素ガス下、３５℃で乾燥させる。各乾燥残渣を２００μlのメタノールで再構成し、０.５分間ボルテックスで混合する。１３０００rpmで１０分間遠心分離後、上清をＨＰＬＣオートサンプラーバイアルに移し、１０μl量の各サンプルをＬＣ－ＭＳ－ＭＳに注入する。
【0113】
サンプルを種々の時点で集め、化合物の酸不安定、親油性分子コンジュゲートの残存パーセントをコンジュゲートの加水分解により放出された化学療法剤のパーセントと共に決定する。
【0114】
ここに開示する一団の親油性、酸不安定パクリタキセルコンジュゲートを、National Cancer Institute's NCI-60 Human Tumor Cell Lines Screen program(ＮＣＩ－６０細胞株のスクリーニング法はhttps://dtp.cancer.gov/discovery_development/nci-60/に記載)でスクリーニングして、細胞毒性をプローブし、親パクリタキセルと比較した。一段は、種々の組織学を代表する白血病、黒色腫、肺、結腸、腎臓、卵巣、乳房、前立腺および中枢神経系の９サブパネルにまとめた。スクリーニングは２段階手順であり、全化合物のＥｔＯＨ中１０μMの単回投与での６０細胞株に対する評価から開始した。全サンプルは、標準溶媒、ＤＭＳＯではなくエタノールに可溶化した。参照薬物パクリタキセル(ＮＳＣ１２５７９３)の結果は、公的に利用可能なソースhttp://dtp.nci.nih.govから読みだした。コンジュゲートの単回投与のインビトロ結果を、レーダーチャートとして一覧にし、複数試験細胞株に対する複数アナログの細胞毒性を理解した。全コンジュゲートの、パクリタキセル－耐性細胞株、ＳＫ－ＯＶ－３を含む卵巣癌細胞株に対する細胞毒性が示された。コンジュゲートは、ＮＣＩ－６０細胞に対するパクリタキセルと同等の感受性および耐性プロファイルを生じた。コンジュゲートは有意な増殖阻害を示し、０.１nMの最終濃度までの５濃度レベルでＮＣＩ－６０細胞株に対して評価し(Supporting information、Ｓ６)、ＧＩ５０値を確立した；これは、対応する非コンジュゲート化合物に対して優れた活性を示した。
【0115】
癌細胞、ＳＫ－ＯＶ－３細胞の生存を低減する能力を、製剤化コンジュゲートとＦＤＡ承認パクリタキセル製剤であるアブラキサン(登録商標)と、暴露時間および投与量を変えてインキュベートすることにより比較した。暴露７２時間後でさえ、シュード－ＬＤＬナノ粒子製剤を有するコンジュゲートのＥＣ５０は、試験濃度と無関係に、アブラキサン(登録商標)より少なくとも３倍強力であった。
【0116】
本発明のこれらおよび他の目的は、次の本発明の例示的実施態様の詳細な記載を、添付する画像および図と共に考慮したとき、より容易に認識され、理解される。本明細書を通して引用される全ての文献の全記載を、引用により本明細書に包含させる。
【国際調査報告】