特表 2024-522780 ジェランガム組成物およびそれらの調製方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-06-21

(54)【発明の名称】ジェランガム組成物およびそれらの調製方法

(51)【国際特許分類】

   C08B 37/00 20060101AFI20240614BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20240614BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20240614BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20240614BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20240614BHJP

   C08L 5/00 20060101ALI20240614BHJP

   C08K 5/098 20060101ALI20240614BHJP

   C08K 3/32 20060101ALI20240614BHJP

【ＦＩ】

C08B37/00 Z

A61K47/36

A61K47/12

A61K47/02

A61K9/19

C08L5/00

C08K5/098

C08K3/32

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023577812

(86)(22)【出願日】2022-06-14

(85)【翻訳文提出日】2024-01-31

(86)【国際出願番号】 EP2022066099

(87)【国際公開番号】W WO2022263405

(87)【国際公開日】2022-12-22

(31)【優先権主張番号】21179842.6

(32)【優先日】2021-06-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517103153

【氏名又は名称】オールジャン バイオセラピューティクス エス．アー．

(74)【代理人】

【識別番号】100136629

【弁理士】

【氏名又は名称】鎌田 光宜

(74)【代理人】

【識別番号】100080791

【弁理士】

【氏名又は名称】高島 一

(74)【代理人】

【識別番号】100125070

【弁理士】

【氏名又は名称】土井 京子

(74)【代理人】

【識別番号】100121212

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 弥栄子

(74)【代理人】

【識別番号】100174296

【弁理士】

【氏名又は名称】當麻 博文

(74)【代理人】

【識別番号】100137729

【弁理士】

【氏名又は名称】赤井 厚子

(74)【代理人】

【識別番号】100152308

【弁理士】

【氏名又は名称】中 正道

(74)【代理人】

【識別番号】100201558

【弁理士】

【氏名又は名称】亀井 恵二郎

(72)【発明者】

【氏名】ケスティ、マッティ ヤーッコ ヨハネス

(72)【発明者】

【氏名】ユーウェイ、ゲイリー

【テーマコード（参考）】

4C076

4C090

4J002

【Ｆターム（参考）】

4C076AA29

4C076DD26

4C076DD43

4C076EE30

4C076FF36

4C076FF68

4C076GG06

4C090AA05

4C090AA09

4C090BA94

4C090BB12

4C090BB16

4C090BB22

4C090BB29

4C090BB52

4C090BB97

4C090BC25

4C090BD36

4C090CA19

4C090CA39

4C090DA23

4J002AB051

4J002DH046

4J002EF066

4J002FD206

4J002GB04

(57)【要約】

本発明は一般に、バイオポリマーの分野に関する。１つの態様において、本発明は、凍結乾燥ジェランガム組成物および再構成ジェランガム組成物を調製する方法に関する。さらなる態様において、本発明は、ジェランガムを含む凍結乾燥組成物、再構成ジェランガム組成物、凍結乾燥ジェランガムを含む用量単位製剤、および医薬または他の無菌適用におけるそれらの使用に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の工程を含む、凍結乾燥ジェランガム組成物を調製する方法：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｖ）得られた溶液を凍結乾燥し、それにより凍結乾燥ジェランガム組成物を提供する工程；
ここで、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度は、約３ｍｇ／ｍｌまでである。

【請求項2】

以下の工程を含む、再構成ジェランガム組成物を調製する方法：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｖ）得られた溶液を凍結乾燥する工程；
（ｖ）十分な量の医薬上許容される再構成溶媒を添加し、それにより再構成ジェランガム組成物を提供する工程；
ここで、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度は、約３ｍｇ／ｍｌまでであり、特に約１ｍｇ／ｍｌから約３ｍｇ／ｍｌである。

【請求項3】

混合工程（ｉｉ）が、最大９５℃の温度、特に約７０℃～９５℃の間の温度または約２５℃～４０℃の間の温度で実施される、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

さらに少なくともひとつのろ過工程を含む、先行する請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

凍結乾燥に供される前に、工程（ｉｉｉ）で得られた溶液が、バイオバーデン低減フィルター上でろ過および／またはフィルター滅菌され、特に最初にバイオバーデン低減ろ過し、次に無菌ろ過に供され、それにより無菌溶液を提供する、先行する請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

ジェランガムが、低アシルジェランガム、高アシルジェランガムまたはその混合物、特に低アシルジェランガムであり；および／または
医薬上許容される調製溶媒が、水またはカルシウムイオン封鎖剤の水溶液、特にクエン酸アルカリ金属塩、リン酸アルカリ金属塩またはリンゴ酸アルカリ金属塩溶液、より詳細にはクエン酸ナトリウム水溶液、より詳細にはクエン酸三ナトリウム二水和物水溶液であり；
特に、工程（ｉｉｉ）の後の組成物中のカルシウムイオン封鎖剤の濃度が、ジェランガム粉末１グラムあたり約０．１ｍＭからジェランガム粉末１グラムあたり約０．２ｍＭ、特にジェランガム粉末１グラムあたり約０．１５ｍＭである、
先行する請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

医薬上許容される調製溶媒が、クエン酸ナトリウム水溶液であって、工程（ｉｉｉ）の後の組成物中のクエン酸ナトリウム濃度が、ジェランガム粉末１グラムあたり約０．１ｍＭからジェランガム粉末１グラムあたり約０．２ｍＭ、特にジェランガム粉末１グラムあたり約０．１５ｍＭであり；および／または
工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度が、約１．０ｍｇ／ｍｌから約３．０ｍｇ／ｍｌ、特に約１．５ｍｇ／ｍｌから約２．５ｍｇ／ｍｌ、より詳細には約２．０ｍｇ／ｍｌである、
先行する請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

以下の工程を含む、請求項１および３～７のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物の調製方法：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｉｉａ）工程（ｉｉｉ）で得られた溶液をバイオバーデン低減ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｂ）工程（ｉｉｉａ）で得られた溶液を無菌ろ過に供する工程；
（ｉｖ）得られた溶液を凍結乾燥する工程；
ここで、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度が、約１ｍｇ／ｍｌから約３ｍｇ／ｍｌである。

【請求項9】

カルシウムイオン封鎖剤に対するジェランガムの重量比が、約１５：１から約３０：１、特に約２０：１から約２７：１、より詳細には約２１．５：１から約２５：１である、ジェランガムおよびカルシウムイオン封鎖剤を含む凍結乾燥組成物。

【請求項10】

無菌である、請求項９に記載の凍結乾燥組成物。

【請求項11】

ジェランガムが、低または高アシルジェランガムであり；および／または
カルシウムイオン封鎖剤が、クエン酸アルカリ金属塩、リン酸アルカリ金属塩およびリンゴ酸アルカリ金属塩からなる群より選ばれ、特にリン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウムおよびその混合物からなる群より選ばれ、より詳細にはクエン酸ナトリウム、より詳細にはクエン酸三ナトリウム二水和物であり；および／または
組成物の水分含量が、約５重量％以下、特に約４重量％以下である、請求項９または１０に記載の凍結乾燥組成物。

【請求項12】

医薬上許容される再構成溶媒を使用するジェランガムの再構成を可能にするのに十分な容量の容器に先行する請求項のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物を含む用量単位製剤。

【請求項13】

ジェランガムおよびカルシウムイオン封鎖剤を含む無菌凍結乾燥組成物；ならびに医薬上許容される再構成溶媒から再構成された無菌組成物であって、カルシウムイオン封鎖剤に対するジェランガムの重量比が、約１５：１から約３０：１；カルシウムイオン封鎖剤が、クエン酸アルカリ金属塩、リン酸アルカリ金属塩およびリンゴ酸アルカリ金属塩からなる群より選ばれ、特にリン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウムおよびその混合物からなる群より選ばれ、より詳細にはクエン酸ナトリウム、より詳細にはクエン酸三ナトリウム二水和物である、無菌組成物。

【請求項14】

医薬に使用、特にヒト医薬に使用するための、請求項９～１２のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物または請求項１３に記載の再構成組成物。

【請求項15】

無菌適用における、ジェランガムおよびクエン酸ナトリウムなどのカルシウムイオン封鎖剤を含む凍結乾燥組成物の再構成後の請求項９～１２のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、全体としてバイオポリマーの分野に関する。１つの態様において、本発明は、凍結乾燥ジェランガム組成物および再構成ジェランガム組成物を調製する方法を対象とする。さらなる態様において、本発明は、ジェランガムを含む凍結乾燥組成物、再構成ジェランガム組成物、凍結乾燥ジェランガムを含む用量単位製剤、および医薬または他の無菌適用におけるそれらの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ジェランガムは、スフィンゴモナス(Sphingomonas)属の細菌株の発酵によって得られる多糖類生成物である。四糖の繰り返し単位からなる直鎖状の陰イオン性多糖類である。各四糖は、１つのβ－Ｄ－グルクロン酸モノマー、１つのα－Ｌ－ラムノースモノマーおよび２つのβ－Ｄ－グルコースモノマーを含む。化学式を図１に示す。本来の形では、グルコースモノマーの１つはＯ－結合アセチル部分とＯ－結合グリセリル部分を含み、一般に高アシルジェランガムと呼ばれている（図１（ａ））。高温でアルカリにさらすとアシル基が除去され、一般に低アシルジェランガムとも呼ばれる脱アシル型ジェランガムが得られる（図１（ｂ））。ジェランガムは１９８０年代に初めて報告され、食品添加物として広く使用されている（Ｅ ４１８）。この１０年間で、製薬分野、例えば眼科用製剤、創傷治癒、ｉｎ ｓｉｔｕゲル化システム、放出制御製剤および固形製剤でのさらなる用途が提案されている。さらに、ジェランガムは組織工学、例えば軟骨修復に使用される。生細胞を含むバイオポリマー構築物の３Ｄプリンティングプロセスにおける安定剤および増粘剤として記載されており、例えばWO 2016/092106 A1およびEP 20 180 620.5を参照、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。ジェランガムは危険物として分類されていない（規制EC 1272/2008 GHS）。

【0003】

ジェランガム粉末は市販されている。しかし、上記の医薬品分野における多様な適用に使用されているにもかかわらず、無菌品質では市販されていない。したがって、滅菌は使用の時点で行わなければならない。しかし、ジェランガムの粘度のため、ジェランガムを含有する製品の滅菌は複雑である。バイオプリンティングなどの新たな技術で広く使用するためには、現行の適正製造基準（ｃＧＭＰ）規制、特に医薬品のためのｃＧＭＰ規制に適合するジェランガムの処理が、一貫した再現性のある方法で要求される製品品質を確保するために極めて重要である。

【発明の概要】

【0004】

発明の簡単な概要
本願発明者らは、驚いたことに、凍結乾燥工程などの特定の調製方法の使用により、ｃＧＭＰ規制、特に医薬品のためのｃＧＭＰ規制を満たし、それにより医薬適用および無菌適用に使用し得るジェランガム組成物を得ることが可能となることを見出した。

【0005】

したがって、本発明は、以下の工程を含む凍結乾燥ジェランガム組成物を調製する方法を対象とする：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｖ）得られた溶液を凍結乾燥し、それにより凍結乾燥ジェランガム組成物を提供する工程；
ここで、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度は、約３ｍｇ／ｍｌまでである。

【0006】

また本発明は、以下の工程を含む再構成ジェランガム組成物を調製する方法を対象とする：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｖ）得られた溶液を凍結乾燥する工程；
（ｖ）十分な量の医薬上許容される再構成溶媒を添加し、それにより再構成ジェランガム組成物を提供する工程；
ここで、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度は、約３ｍｇ／ｍｌまでである。

【0007】

例えば、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度は、約１ｍｇ／ｍｌから約３ｍｇ／ｍｌであってよい。いくつかの実施形態では、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度は、約１．０ｍｇ／ｍｌから約３．０ｍｇ／ｍｌ、特に約１．５ｍｇ／ｍｌから約２．５ｍｇ／ｍｌ、より特には約２．０ｍｇ／ｍｌである。

【0008】

ジェランガム粉末の溶解は、広い温度範囲で達成することができる。有利には、混合工程（ｉｉ）は、最大９５℃の温度で実施してもよい。特定の実施形態では、混合工程（ｉｉ）は、約７０℃～９５℃の間または約２５℃～４０℃の間で実施される。

【0009】

本発明によれば、本方法がさらに少なくともひとつのろ過工程を含むことが特に想定される。このろ過工程は、好適には工程（ｉｉｉ）で得られた溶液を用いて実施される。したがって、いくつかの実施形態では、凍結乾燥に供される前に、工程（ｉｉｉ）で得られた溶液は、バイオバーデン低減フィルター上でろ過および／またはフィルター滅菌される。特に、工程（ｉｖ）において凍結乾燥に供される前に、溶液は、最初にバイオバーデン低減ろ過に供され、その後無菌ろ過に供されることにより、無菌溶液を提供することができる。

【0010】

一定の実施形態では、本発明の方法で使用されるジェランガムは低アシルジェランガムである。

【0011】

医薬上許容される調製溶媒は、特に水またはカルシウムイオン封鎖剤の水溶液、より詳細にはクエン酸アルカリ金属塩、リン酸アルカリ金属塩またはリンゴ酸アルカリ金属塩溶液、より詳細にはクエン酸ナトリウム水溶液、より詳細にはクエン酸三ナトリウム二水和物水溶液であってもよい。

【0012】

調製溶媒がカルシウムイオン封鎖剤を含有する場合、工程（ｉｉｉ）の後の組成物中のカルシウムイオン封鎖剤の濃度は、一定の実施形態では、ジェランガム粉末１グラムあたり約０．１ｍＭからジェランガム粉末１グラムあたり約０．２ｍＭ、特にジェランガム粉末１グラムあたり約０．１５ｍＭであってもよい。

【0013】

本発明に記載の方法の特定の実施形態では、医薬上許容される調製溶媒は、クエン酸ナトリウム水溶液であり、工程（ｉｉｉ）の後の組成物中のクエン酸ナトリウムの濃度は、ジェランガム粉末１グラムあたり約０．１ｍＭからジェランガム粉末１グラムあたり約０．２ｍＭ、特にジェランガム粉末１グラムあたり約０．１５ｍＭである。

【0014】

一定の実施形態では、本発明に記載の凍結乾燥組成物の調製方法は以下の工程を含む：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｉｉａ）工程（ｉｉｉ）で得られた溶液をバイオバーデン低減ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｂ）工程（ｉｉｉａ）で得られた溶液を無菌ろ過に供する工程；
（ｉｖ）得られた溶液を凍結乾燥する工程；
ここで、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度は約１ｍｇ／ｍｌから約３ｍｇ／ｍｌである。

【0015】

本発明は、さらにジェランガムおよびカルシウムイオン封鎖剤を含む凍結乾燥組成物を対象とし、カルシウムイオン封鎖剤に対するジェランガムの重量比は、約１５：１から約３０：１、特に約２０：１から約２７：１、より詳細には約２１．５：１から約２５：１である。好ましい実施形態では、凍結乾燥組成物は無菌である。

【0016】

凍結乾燥組成物に使用されるジェランガムは、低アシルジェランガムでも高アシルジェランガムであってもよい。カルシウムイオン封鎖剤は、多様で適切な化合物から選ばれてもよい。いくつかの実施形態では、カルシウムイオン封鎖剤は、クエン酸アルカリ金属塩、リン酸アルカリ金属塩およびリンゴ酸アルカリ金属塩からなる群より選ばれ、特にリン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウムおよびその混合物からなる群より選ばれ、より詳細にはクエン酸ナトリウム、より詳細にはクエン酸三ナトリウム二水和物である。

【0017】

いくつかの実施形態では、組成物の水分含量は、約５重量％以下、特に約４重量％以下である。

【0018】

さらに本発明は、医薬上許容される再構成溶媒を使用するジェランガムの再構成を可能にするのに十分な容量の容器に先行する請求項のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物を含む用量単位製剤を対象とする。

【0019】

その上さらに、本発明は、ジェランガムおよびカルシウムイオン封鎖剤を含む無菌凍結乾燥組成物；ならびに医薬上許容される再構成溶媒から再構成された無菌組成物を対象とし、ここでカルシウムイオン封鎖剤に対するジェランガムの重量比は、約１５：１から約３０：１であり、カルシウムイオン封鎖剤は、クエン酸アルカリ金属塩、リン酸アルカリ金属塩およびリンゴ酸アルカリ金属塩からなる群より選ばれ、特にリン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウムおよびその混合物からなる群より選ばれ、より詳細には、クエン酸ナトリウムであり、より詳細にはクエン酸三ナトリウム二水和物である。

【0020】

その上さらに、本発明は、上記組成物の医薬用途を対象とする。したがって、本発明は、医薬、特にヒト医薬における使用のためのジェランガムおよびカルシウムイオン封鎖剤を含む凍結乾燥組成物を提供し、ここでカルシウムイオン封鎖剤に対するジェランガムの重量比は、約１５：１から約３０：１、特に約２０：１から約２７：１、より詳細には約２１．５：１から約２５：１である。本発明によれば、医薬、特にヒト医薬における使用のためのジェランガムおよびカルシウムイオン封鎖剤を含む無菌凍結乾燥組成物；ならびに医薬上許容される再構成溶媒から再構成された無菌組成物も提供し、ここでカルシウムイオン封鎖剤に対するジェランガムの重量比は、約１５：１から約３０：１である。

【0021】

最後に、本発明は、ジェランガムおよびクエン酸ナトリウムなどのカルシウムイオン封鎖剤を含む凍結乾燥組成物の再構成後の上述した通りの凍結乾燥組成物の無菌適用での用途を対象とする。

【0022】

発明の詳細な説明
第一の態様において、本発明は、凍結乾燥ジェランガム組成物を調製する方法を提供することに関する。該方法は、少なくとも下記に記載の工程を含む。

【0023】

第一の工程（工程（ｉ））において、ジェランガム粉末は、医薬上許容される調製溶媒に添加される。本発明の文脈において、高アシルジェランガムも低アシルジェランガムも、またはその混合物を使用することができる。好ましい実施形態では、低アシルジェランガムが使用される。医薬上許容される調製溶媒は、意図する適用の必要性に応じて選択され得る。すでに述べたように、医薬上許容される調製溶媒は、特に水またはカルシウムイオン封鎖剤の水溶液でもよい。

【0024】

本発明の文脈での「カルシウムイオン封鎖剤」は、カルシウムイオンの封鎖をもたらすために使用される任意の物質であり、典型的にはキレート化による。封鎖剤の使用により、使用される溶媒中の二価イオンの配合量は制御することができる。特に二価カルシウムカチオン（Ｃａ^２＋）は、ジェランガムと架橋を形成する可能性があるので、凍結乾燥組成物の調製段階ではかかるカチオンの高濃度は望ましくない。種々のクエン酸塩、リン酸塩およびリンゴ酸塩はカルシウムイオンに対して封鎖特性を有し、本発明に記載のように使用することができる。特に、医薬上許容されるカルシウムイオン封鎖剤は、水溶液、すなわち溶媒が水のクエン酸アルカリ金属塩、リン酸アルカリ金属塩またはリンゴ酸アルカリ金属塩の溶液から選ばれる。適当なアルカリ金属としては、カリウムおよびナトリウムが挙げられる。具体的な実施形態において、医薬上許容されるカルシウムイオン封鎖剤は、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リンゴ酸ナトリウム、リンゴ酸カリウムおよび医薬上許容されるそれらの混合物の水溶液から選ばれる。本発明に記載の例示的なカルシウムイオン封鎖剤は、クエン酸ナトリウム水溶液、より詳細にはクエン酸三ナトリウム二水和物の水溶液である。

【0025】

本発明の第二の工程（工程（ｉｉ））において、工程（ｉ）で得られた混合物をジェランガム粉末が実質的に完全に溶解するまで混合する。ジェランガムの文脈では、「溶解された」または「溶解」は、「水和された」または「水和」とも称する。本明細書で使用される「実質的に完全に溶解」は、添加されたジェランガムの総量に基づいて、約０．１％未満、特に約０．０１％未満のジェランガムが未溶解で残っていることを意味する。好ましい実施形態では、ジェランガム粉末は完全に溶解し、これは、例えば混合物の目視検査によって確認することができる（目に見える粒子が残っていない）。混合工程は、当業者に周知およびｃＧＭＰ規制下で許容される手段、シェーカーまたはボルテックスによる撹拌、またはマグネチックスターラーによる撹拌によって行うことができる。プロセス工程に関して本明細書で使用される「で得られた」は、それぞれのプロセス工程の完了時に存在する生成物を意味する。

【0026】

調製溶媒の組成によっては完全なジェランガム粉末の溶解のために高い温度を使用することが適当かいっそう必要かもしれない。特に、混合工程（ｉｉ）は、最大９５℃で実施してもよい。いくつかの実施形態では、混合工程（ｉｉ）は、約７０℃と約９５℃の間、例えば約８０℃で実施される。このより高い範囲の温度は、調製溶媒がカルシウムイオン封鎖剤を含有しない場合に特に使用される。他の実施形態において、混合工程（ｉｉ）は約２５℃と約４０℃の間で実施される。この範囲の温度は、調製溶媒がカルシウムイオン封鎖剤を含有する場合に特に使用される。

【0027】

高温度、例えば約７０℃と約９５℃の間での混合工程は、３０分から６０分間実施してもよい。

【0028】

発明者らは、驚いたことに、リン酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム、特にクエン酸ナトリウムなどのカルシウムイオン封鎖剤を、適切な、特に比較的多量（ジェランガムおよびカルシウムイオン封鎖剤の総重量に対して、例えば約１重量％（本明細書ではｗｔ％とも称する）から約６ｗｔ％、特に３．５ｗｔ％から４．５ｗｔ％のカルシウムイオン封鎖剤（クエン酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウム、特にクエン酸ナトリウムなど）を含有する水溶液を用いて）添加することにより、ジェランガム粉末を完全に溶解するために外部加熱がより少ないか全く必要でないことを見出した。さらに、使用する容器への温度負荷や冷却時のゲル化の問題を低減し、使用する容器の破損（ガラスバイアル瓶の破損など）を軽減することができる。一方、ジェランガムおよびカルシウムイオン封鎖剤の総重量に対して、約１ｗｔ％から約６ｗｔ％、特に３．５ｗｔ％から４．５ｗｔ％のカルシウムイオン封鎖剤（クエン酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウム、特にクエン酸ナトリウムなど）を含有する水溶液の適切な量は、下流の適用に必要とされるジェランガムの粘度を妨げない。さらに驚いたことに、カルシウムイオン封鎖剤のバイオポリマーに対するｐＨ低下作用が知られているにもかかわらず、下流適用における細胞生存率に支障がないことが見出された。

【0029】

２５℃～４０℃の範囲内の例示的な温度は、３０℃、３２℃、３４℃、３６℃、３８℃である。外部加熱は、電気加熱ブランケットやジャケットなどの当該技術分野で周知の手段によって提供されてもよい。このことは、ステンレス鋼製の装置を減らすことができ、製造が容易になる。したがって、一定の好ましい実施形態では、カルシウムイオン封鎖剤が使用され、ジェランガムの完全溶解に適用される温度は２５℃および４０℃の間である。例示的な実施形態では、クエン酸ナトリウム水溶液、特にクエン酸三ナトリウム二水和物の水溶液が３６℃または３８℃などの３５℃および４０℃の間で使用される。一定の好ましい実施形態では、ジェランガムおよびクエン酸ナトリウム、特にクエン酸三ナトリウム二水和物の総重量に対して、３．５重量％から４．５重量％のクエン酸ナトリウム水溶液、特にクエン酸三ナトリウム二水和物の水溶液が、３６℃または３８℃などの３５℃および４０℃の間で使用される。

【0030】

加熱が使用される場合、加熱された溶液は、特に冷却され、例えば２５℃～４０℃の範囲内の温度または室温まで冷却されてから、さらに進められる。例えば、高温の溶液は、連続撹拌下、室温で一晩冷却してもよい。

【0031】

ジェランガムを調製溶媒中に溶解後、さらなる調製溶媒を工程（ｉｉｉ）に添加してもよい。これは、例えばジェランガム濃度を所定の値に調整するために、特に工程（ｉｉ）の後の濃度が約３ｍｇ／ｍｌを超える場合に必要とされ得る。本発明によれば、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガム濃度は、約３ｍｇ／ｍｌまでである。典型的には、さらなる調製溶媒は工程（ｉ）で使用したものと同じ調製溶媒である。工程（ｉｉ）で得られた溶液のすべてのパラメーターが所定の要件にすでに適合している場合（例えばジェランガム濃度が約３ｍｇ／ｍｌまでである）、さらなる調製溶媒を添加しないで方法は工程（ｉｖ）に続く。言い換えると、工程（ｉｉｉ）は、必要に応じてジェランガムおよび／またはカルシウムイオン封鎖剤の濃度を調整するために入れられる。

【0032】

さらなる調製溶媒の任意の添加により、カルシウムイオン封鎖剤の濃度も調製溶媒中に存在する場合、変更される。特に、工程（ｉｉｉ）の後の組成物中のカルシウムイオン封鎖剤の濃度は、ジェランガム粉末１グラムあたり約０．１ｍＭからジェランガム粉末１グラムあたり約０．２ｍＭであり、特にジェランガム粉末１グラムあたり約０．１５ｍＭである。いくつかの実施形態によれば、医薬上許容される調製溶媒はクエン酸ナトリウム水溶液であり、工程（ｉｉｉ）の後の組成物中のクエン酸ナトリウム濃度は、ジェランガム粉末１グラムあたり約０．１ｍＭからジェランガム粉末１グラムあたり約０．２ｍＭであり、特にジェランガム粉末１グラムあたり約０．１５ｍＭである。

【0033】

さらなる必須工程（工程（ｉｖ））において、工程（ｉｉｉ）で得られた溶液を凍結乾燥に供し、それにより凍結乾燥ジェランガム組成物を提供する。凍結乾燥（Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ）または凍結乾燥させる（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇ）は、所定の組成物が凍結され真空下に置かれた後に該組成物から水を除去する周知のプロセスである。凍結乾燥は、３つのフェーズに細分することができる：第１のフェーズでは、工程（ｉｉｉ）で得られた溶液を凍結に供し、続いて昇華（一次乾燥）および脱着（二次乾燥）させる。本発明によれば、特に約９５重量％以上まで、より詳細には約９６重量％以上の水を除去し、すなわち工程（ｉｖ）の後の凍結乾燥組成物の水分含量は、特に約５重量％以下、より詳細には約４重量％以下である。

【0034】

本発明に記載の凍結温度は、例えば大気圧で約－１０℃から約－５０℃の範囲である。一次乾燥は、例えば約０℃から約－１５℃の温度範囲で減圧、例えば２００μｂａｒまたは１００μｂａｒなどの１ｍｂａｒ以下で行ってもよい。二次乾燥は、例えば約０℃から約＋５０℃の温度範囲で減圧、２００μｂａｒまたは１００μｂａｒなどの１ｍｂａｒ以下で行ってもよい。

【0035】

さらなる態様において、本発明は、再構成ジェランガム組成物を調製する方法に関し、該方法は、凍結乾燥ジェランガム組成物を調製する方法に関する上記工程（すなわち、工程（ｉ）、工程（ｉｉ）、工程（ｉｉｉ）および工程（ｉｖ））ならびにさらに十分な量の医薬上許容される再構成溶媒を添加し、それにより再構成ジェランガム組成物を提供する工程（工程（ｖ））を含む。

【0036】

医薬上許容される再構成溶媒は、多種多様な液体組成物から選ばれ得る。しかし、凍結乾燥により水のみ除去され、工程（ｉ）の調製溶媒中に以前に溶解した化合物は再構成溶媒中に再溶解することを考慮しなければならない。さらに、再構成ジェランガム組成物の使用目的は、再構成溶媒の選択に影響を及ぼす。いくつかの実施形態では、再構成溶媒は、水、特に注射用水（ＷＦＩ）である。他の実施形態では、再構成溶媒は。グルコース溶液である。例えば、グルコース溶液は、グルコース濃度、例えば約３００ｍＭグルコース水溶液であってもよく、緩衝化、例えばクエン酸緩衝化されていてもよい。付加製造などの特定の下流用途におけるジェランガムの使用を妨害する多量のカチオンを含有する溶液は、再構成する溶媒として使用することから除外される。

【0037】

使用される再構成溶媒の量は、ジェランガム組成物のさらなる使用目的によって決定される。ジェランガムが、付加製造、特に３Ｄプリンティングなどの下流用途において使用される場合、再構成組成物中のジェランガム濃度は比較的高いことが好ましい。いくつかの実施形態によれば、再構成溶媒中のジェランガム濃度は約２０ｍｇ／ｍｌおよび約５０ｍｇ／ｍｌの間である。具体的で例示的な再構成溶媒中のジェランガム濃度は、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、３５ｍｇ／ｍｌである。

【0038】

凍結乾燥ジェランガム組成物を調製する方法の好ましい実施形態では、さらに少なくともひとつのろ過工程を含む。同様に、再構成ジェランガム組成物の調製方法の好ましい実施形態では、該方法は、さらに少なくともひとつのろ過工程を含む。ろ過はバイオバーデンを減少させ、それぞれの方法のどこかで導入された望ましくない粒子を除去するのを助け得る。無菌ｃＧＭＰジェランガムを提供する可能性さえ構成し得る。ろ過は原則として、活性炭、繊維または膜などの多様なフィルター材料を用いるカートリッジまたは単回使用フィルターで行うことができる。本発明の好ましい実施形態では、膜はフィルター材料として使用される。本発明に記載の好ましい膜フィルター材料としては、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）およびフッ化ポリビニリデン（ＰＶＤＦ）が挙げられる。

【0039】

本発明のいくつかの実施形態では、上記方法の工程（ｉｉｉ）で得られた組成物は、無菌ろ過に供される。無菌ろ液の製造に適するフィルターは、孔径０．２２μｍ以下、特に０．２μｍ以下を有し、最小１０^７ｃｆｕ／ｃｍ²のブレブンディモナス・ディミヌタ（Brevundimonas dimunita）を保持してバクテリアチャレンジをパスすることができる。いくつかのサンプルは孔径０．１μｍなどのさらに小さな孔径のろ過が有益かもしれない。いくつかの実施形態では、孔径０．２２μｍ以下、例えば０．２２μｍまたは０．２μｍのＰＶＤＦ膜を無菌ろ過に使用する。

【0040】

代替的または追加的に、上記方法の工程（ｉｉｉ）で得られた組成物は、本発明のいくつかの実施形態では、バイオバーデン低減ろ過に供される。本発明に記載のバイオバーデン低減ろ過に適切なフィルターは、孔径０．４μｍ以下、特に０．２２μｍ以下を有する。例えば、孔径０．４μｍ以下、例えば０．２２μｍまたは０．２μｍのＰＥＳ膜フィルターをバイオバーデンろ過に使用してもよい。本明細書で使用されるバイオバーデン低減ろ過は、好ましくはコロニー形成単位（ＣＦＵ）の数を１００ｍＬ当たり１０に低減する。

【0041】

本発明の一定の好ましい実施形態では、上記方法の工程（ｉｉｉ）で得られた溶液をバイオバーデン低減ろ過（前ろ過とも称する）および無菌ろ過（フィルター滅菌とも称する）の両方に供する。例えば、フィルターの直径に対するろ過される容量に応じて、１０ＣＦＵ／１００ｍｌ以下は許容され、この要件を満たさない場合、その後の無菌ろ過のために十分に低いバイオバーデンを得るために、細菌保持フィルターを通する前ろ過を使用することが必要であり得る。一定の好ましい実施形態では、工程（ｉｉｉ）で得られた溶液を２つのろ過工程に供する。したがって、工程（ｉｉｉ）で得られた溶液を最初にバイオバーデン低減ろ過に供し、次に無菌ろ過に供することにより無菌溶液を提供することがさらに好ましい。

【0042】

本明細書で使用される場合、用語「無菌」とは、生存可能な微生物を含まないことを意味する。例えば、組成物は、１０^－６に等しいかまたはそれ未満の滅菌保証レベル（ＳＡＬ）を有する場合、無菌と定義され得る。所定の滅菌プロセスのＳＡＬは、そのプロセスに暴露された後の製品品目において微生物が生存する確率として表される。例えば、１０^－６のＳＡＬは、最終製品の１×１０^６滅菌品目中、非滅菌品目が１つ以下である確率を示す。本発明者らは、フィルター滅菌が、γ線照射などの他の滅菌方法よりも有利であることを見出した。なぜならｃＧＭＰ規制、特に医薬品のｃＧＭＰ規制を妨害しうる不要な不純物を生成して製品組成を変化させるリスクがないからである。

【0043】

特に工程（ｉｉｉ）で得られた溶液をバイオバーデン低減ろ過または無菌ろ過に供する場合、凍結乾燥工程（ｉｖ）は好ましくは、無菌条件下で行われる。「無菌条件」は、微生物汚染を防ぐように設計された条件である。例えば、アイソレーターまたはアクセス制限バリアシステム（ＲＡＢＳ）を使用してもよく、および／またはバイオバーデン低減からおよび／または無菌ろ過以降の溶液の処理は、クリーンルーム環境、特にクラスＡのクリーンルーム環境で行われる。

【0044】

上記方法により、それぞれの工程（ｉｉｉ）の後、すなわちジェランガムが完全に溶解し、その濃度が調製溶媒のさらなる添加によって任意に調整された後のジェランガムの濃度は、約３ｍｇ／ｍｌまでである。本発明者らは、約３ｍｇ／ｍｌより高濃度のジェランガムは、ろ過、特に無菌ろ過に問題を生じ得ることを見出した。例えば、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度は、約１ｍｇ／ｍｌから約３ｍｇ／ｍｌであってもよい。いくつかの実施形態では、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度は、約１．０ｍｇ／ｍｌから約３．０ｍｇ／ｍｌ、特に約１．５ｍｇ／ｍｌから約２．５ｍｇ／ｍｌ、より詳細には約１．８ｍｇ／ｍｌから２．２ｍｇ／ｍｌ、例えば約２．０ｍｇ／ｍｌである。

【0045】

凍結乾燥の前に、本方法は、バイアルまたは凍結乾燥トレイなどの適切な容器に適切な容量を充填する工程も包含しうる。一定の実施形態では、容器は、バイアル、特にガラスバイアル、または凍結乾燥トレイ、特に使い捨て凍結乾燥トレイである。容器がバイアルの場合、特に約１ｍｌから約１００ｍｌの容量、特に５０ｍｌの容量を有し得る。容器が凍結乾燥トレイの場合、約１００ｍｌから約２０００ｍｌの容量を有し得る。充填後、容器は典型的には、半栓または栓がされる。本方法が組成物を滅菌する工程（例えば、フィルター滅菌による）を含む場合、キャッピングは、好適には、本明細書で定義される無菌条件下で行われる。

【0046】

凍結乾燥後、本方法は、凍結乾燥組成物を含む容器をキャッピングする工程をさらに包含し得る。本方法が、組成物を滅菌する工程（例えば、フィルター滅菌による）を含む場合、キャッピングは、好適には、本明細書で定義されるような無菌条件下で行われる。

【0047】

各工程の終了時に、適切な方法によって前の工程が成功裏に終了したことを確認するために、１つ以上の試験サンプルを採取してもよいことは、本発明に包含される。例えば、ｐＨおよび／または濃度サンプルを、情報目的のため、または次の工程に進む前の調整のために、採取してもよい。一定の実施形態では、工程（ｉ）の後にｐＨ調整は行われない。

【0048】

いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の凍結乾燥組成物の調製方法は下記の工程を含む：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｉｉａ）工程（ｉｉｉ）で得られた溶液をバイオバーデン低減ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｂ）工程（ｉｉｉａ）で得られた溶液を無菌ろ過に供する工程；および
（ｉｖ）得られた溶液を凍結乾燥する工程。

【0049】

いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の凍結乾燥組成物の調製方法は下記の工程を含む：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｉｉａ）工程（ｉｉｉ）で得られた溶液をバイオバーデン低減ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｂ）工程（ｉｉｉａ）で得られた溶液を無菌ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｃ）工程（ｉｉｉｂ）で得られた溶液を適当な容器に充填する工程；
（ｉｉｉｄ）容器を半栓する工程；
（ｉｖ）容器中の溶液を凍結乾燥する工程；および
（ｖ）凍結乾燥終了後容器をキャッピングする工程。

【0050】

さらなる実施形態において、本方法は上記の工程以外の工程を含まない、すなわち、本方法は、該工程からなる：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｉｉａ）工程（ｉｉｉ）で得られた溶液をバイオバーデン低減ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｂ）工程（ｉｉｉａ）で得られた溶液を無菌ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｃ）工程（ｉｉｉｂ）で得られた溶液を適当な容器に充填する工程；
（ｉｉｉｄ）容器を半栓する工程；
（ｉｖ）容器中の溶液を凍結乾燥する工程；および
（ｖ）凍結乾燥終了後容器をキャッピングする工程。

【0051】

いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の再構成組成物を調製する方法は下記の工程を含む：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｉｉａ）工程（ｉｉｉ）で得られた溶液をバイオバーデン低減ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｂ）工程（ｉｉｉａ）で得られた溶液を無菌ろ過に供する工程；
（ｉｖ）得られた溶液を凍結乾燥する工程；および
（ｖ）十分な量の医薬的に利用可能な再構成溶液を添加し、それにより再構成ジェランガム組成物を提供する工程。

【0052】

いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の凍結乾燥組成物の調製方法は、下記の工程を含む：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｉｉａ）工程（ｉｉｉ）で得られた溶液をバイオバーデン低減ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｂ）工程（ｉｉｉａ）で得られた溶液を無菌ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｃ）工程（ｉｉｉｂ）で得られた溶液を適当な容器に充填する工程；
（ｉｉｉｄ）容器を半栓する工程；
（ｉｖ）容器中の溶液を凍結乾燥する工程；
（ｖ）凍結乾燥終了後容器をキャッピングする工程；
（ｖｉ）十分な量の医薬的に利用可能な再構成溶液を添加し、それにより再構成ジェランガム組成物を提供する工程。

【0053】

さらなる実施形態において、本方法は上記の工程以外の工程を含まない、すなわち、本方法は、該工程からなる：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｉｉａ）工程（ｉｉｉ）で得られた溶液をバイオバーデン低減ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｂ）工程（ｉｉｉａ）で得られた溶液を無菌ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｃ）工程（ｉｉｉｂ）で得られた溶液を適当な容器に充填する工程；
（ｉｉｉｄ）容器を半栓する工程；
（ｉｖ）容器中の溶液を凍結乾燥する工程；
（ｖ）凍結乾燥終了後容器をキャッピングする工程；
（ｖｉ）十分な量の医薬的に利用可能な再構成溶液を添加し、それにより再構成ジェランガム組成物を提供する工程。

【0054】

本発明のいくつかの実施形態では、再構成組成物中のジェランガム含有量は、再構成溶液の総容量に基づいて、約２％（ｗ／ｖ）から約５％（ｗ／ｖ）、特に約２．０％（ｗ／ｖ）から約３．０％（ｗ／ｖ）、より詳細には約２．５％（ｗ／ｖ）であってもよい。再構成溶液は、例えば下記のようにバイオインクの調製に使用することができる。この文脈において、再構成組成物を他のポリマーおよび／または生細胞などの他のバイオインク成分と一緒に混合することが可能である。いくつかの実施形態では、再構成溶液は、最終溶液の総容量中のアルギネートの含有量が約１％（ｗ／ｖ）から約３％（ｗ／ｖ）、特に約１．０％（ｗ／ｖ）から約２．０％（ｗ／ｖ）、より詳細には約１．５％（ｗ／ｖ）に達するようにアルギネートと一緒に混合してもよい。いくつかの実施形態では、再構成ジェランガム溶液と一緒に混合されうる例示的な生細胞は、軟骨細胞、特にヒト軟骨細胞由来の軟骨細胞、より詳細にはヒト耳介軟骨細胞由来の軟骨細胞である。

【0055】

更なる態様において、本発明は、ジェランガムおよびカルシウムイオン封鎖剤を含む凍結乾燥組成物であって、カルシウムイオン封鎖剤に対するジェランガムの重量比が約１５：１から約３０：１である組成物に関する。特定の実施形態では、カルシウムイオン封鎖剤に対するジェランガムの重量比は、約２０：１から約２７：１、より詳細には約２１．５：１から約２５：１である。凍結乾燥組成物は、本明細書に記載の方法にしたがって調製されうる。調製方法に関して上記にすでに述べたように、ジェランガムは、高アシルジェランガム、低アシルジェランガムまたはその混合物であり得る。好ましい実施形態では、低アシルジェランガムが使用される。カルシウムイオン封鎖剤は上記本明細書に定義の通りである。特定の実施形態ではカルシウムイオン封鎖剤は、クエン酸アルカリ金属塩、リン酸アルカリ金属塩およびリンゴ酸アルカリ金属塩からなる群より選ばれる。より詳細には、カルシウムイオン封鎖剤は、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウムおよびその混合物からなる群より選ばれる。一定の好ましい実施形態では、カルシウムイオン封鎖剤は、クエン酸ナトリウム、特にクエン酸三ナトリウム二水和物である。

【0056】

本発明によれば、凍結乾燥組成物は無菌が好ましい。

【0057】

残留水分含量が、凍結乾燥組成物を特徴付けるために使用され得ることは既に述べた。本発明のいくつかの実施形態では、凍結乾燥組成物は、約５重量％以下、特に約４重量％以下の水分含量を有する。いくつかの好ましい実施形態では、水分含量は約５重量％および約２重量％の間である。残留水分含量を決定するための標準的な方法は、Ｋａｒｌ－Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定である。

【0058】

さらにさらなる態様において、本発明は、医薬上許容される再構成溶媒を使用するジェランガムの再構成を可能にするのに十分な容量の容器に前述と同義の凍結乾燥組成物を含む用量単位製剤に関する。この文脈において、十分な容器容量とは、再構成溶液を製造するために凍結乾燥組成物をより広い容器に移す必要がないことを意味する。むしろ、いくつかの好ましい実施形態では、医薬上許容される、無菌再構成溶媒を組成物とともに容器に添加して、付加製造などの下流の用途に適した濃度への再構成を可能にすることができる。適切な大きさの容器を使用することにより、起こり得る汚染を低減し、下流での使用における取り扱いを容易にする。例えば、単一の容器を、ジェランガム組成物が例えば３Ｄバイオプリンターに供給されるまでの凍結乾燥、再構成、および任意のさらなる工程に使用することができる。

【0059】

容器は、様々な立体形状の様々な材料から作製し得る。いくつかの実施形態において、容器は、バイアル、特にガラスバイアル、または凍結乾燥トレイ、特にプラスチック製の使い捨て凍結乾燥トレイである。同様に、容器の容量は、意図される下流適用の必要性に応じて選ばれ得る。例示的な容量は、約１ｍｌから約１００ｍｌ、特に約５０ｍｌ、または約１００ｍｌから約２０００ｍｌの範囲であってよい。

【0060】

特定の実施形態において、容器は、約１ｍｌから約１００ｍｌ、特に５０ｍｌの容量を有するガラスバイアルである。他の特定の実施形態において、容器は、約１００ｍｌから約２０００ｍｌの容量を有する使い捨て凍結乾燥トレイである。

【0061】

例示的な投与単位製剤として、約２０ｍｇから約５０ｍｇのジェランガム、または特に、約２０ｍｇから約５０ｍｇのジェランガムおよび約０．９ｍｇから約２．５ｍｇのクエン酸ナトリウムを含む凍結乾燥組成物を含有する容器、特にガラスバイアルが記載されうる。この例示的な投与単位製剤は、例えば、注射用滅菌水などの再構成溶媒１ｍｌで再構成し得る。

【0062】

本明細書に記載の凍結乾燥ジェランガム組成物を含む第１の容器、例えばバイアルまたは凍結乾燥トレイと、医薬上許容される再構成溶媒、特に注射用水を含む第２の容器、例えばシリンジとを含むキットを提供することも本発明に包含される。

【0063】

さらにさらなる態様において、本発明は、本明細書中に上記のように無菌凍結乾燥組成物から再構成された無菌組成物を対象とする。かかる無菌再構成組成物の特定の実施形態において、ジェランガムは、低アシルジェランガムであり、カルシウムイオン封鎖剤は、クエン酸アルカリ金属塩、リン酸アルカリ金属塩およびリンゴ酸アルカリ金属塩からなる群より選ばれ、特にリン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウムおよびその混合物からなる群より選ばれ、より詳細にはクエン酸ナトリウム、より詳細にはクエン酸三ナトリウム二水和物である。

【0064】

さらにさらなる態様において、本発明は、本明細書に記載の凍結乾燥組成物または再構成組成物の医薬用途に関する。この態様によれば、凍結乾燥組成物または再構成組成物は、医薬、特にヒト医薬における使用のためのものである。

【0065】

本明細書に記載の例示的な医薬用途は、再生医療である。例えば、本発明に記載の凍結乾燥組成物または再構成組成物を組織工学、特に付加製造、より詳細にはバイオプリンティングなどの交互吸着成膜方法(layer-by-layer deposition method)において使用してもよい。付加製造に基づくバイオファブリケーション技術は、再生医療に使用するための生きた患者特異的な組織および器官を製造することを可能しうるので、大きな可能性を秘めている。これらの構造は、個々の患者の臨床３Ｄモデルに基づいて設計され、個人化された組織移植片を作製することができる。外耳または鼻の再建は、バイオプリントされた個人化された移植片によって著しく改善され得る臨床適用のひとつである。かかる移植片やインプラントは、自己細胞を用いて作製することもできる。本発明に記載のジェランガムおよび再構成溶媒を含む再構成組成物は、いわゆるバイオインク、すなわち細胞を含むバイオポリマー製剤の成分として使用し得、その結果、架橋バイオポリマー製剤または足場または組織移植片の成分として使用し得る。ジェランガムを含むバイオインクはEP 20 180 620.5に記載され、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0066】

したがって、本発明に記載の凍結乾燥組成物（再構成後）または再構成組成物をバイオインクの成分として使用してもよいし、生細胞、例えば軟骨細胞と一緒に混合してもよい。発明者らは、驚いたことに、ジェランガムおよびカルシウムイオン封鎖剤（クエン酸ナトリウムなど）の総重量に対して、特に適切な量のカルシウムイオン封鎖剤、例えば約１重量％から約６重量％、特に３．５重量％から４．５重量％のカルシウムイオン封鎖剤を含有する水溶液を使用する場合、カルシウムイオン封鎖剤は、かかるバイオインクの印刷可能性、または低ｐＨによる細胞の生存可能性を妨げないことを見出した。

【0067】

本発明による凍結乾燥組成物または再構成組成物の例示的な医薬用途は、例えば損傷後の再建手術、腫瘍を除去する手術において、または先天性欠損症（例えば、無耳症、小耳症）を治療するために組織移植片の成分としてでもよい。この文脈において、組成物は、例えば３Ｄバイオプリンティングによる組織移植片の足場の製造において使用してもよい。

【0068】

さらなる実施形態において、上述した通り、ジェランガムおよびクエン酸ナトリウムなどのカルシウムイオン封鎖剤を含む凍結乾燥組成物は、凍結乾燥組成物の再構成後、無菌適用に使用するためのものである。

【0069】

この文脈において、本発明は、またジェランガムおよびクエン酸ナトリウムなどのカルシウムイオン封鎖剤を含む凍結乾燥組成物、再構成後、無菌適用における使用に関する。

【0070】

かかる無菌適用は、例えば、非医療目的、例えば細胞培養における三次元足場を提供するためのバイオテクノロジーの分野であってもよい。

【0071】

本発明は、下記実施例および図によってさらに説明される。

【図面の簡単な説明】

【0072】

図面の説明文

【図1】ジェランガムの繰り返し単位の化学式。（ａ）高アシルジェランガム；（ｂ）低アシルジェランガム。

【実施例】

【0073】

実施例１：カルシウムイオン封鎖剤なしのジェランガムの製造
ジェランガム粉末（ＫＥＬＣＯＧＥＬ（登録商標）ＣＧ－ＬＡ）を粉末バッグに秤量する。ジェランガムを最終製品濃度（プロセス終了時）が２．５ｍｇ／ｍｌに達するように注射用水（ＷＦＩ）に溶解する。粉末をＷＦＩに徐々に加え、ジェランガムがすべて溶解し、ダマがほとんど生じないようにする。

【0074】

ジェランガムを適切に溶解／加水するために、混合物を半時間連続撹拌下で８０℃以上に加熱する。溶液を撹拌し、粉末を溶解させる。粉末が完全に溶解した後、溶液は連続撹拌下室温で一晩冷却され、その後、情報目的のためにｐＨと濃度のサンプルを採取する。

【0075】

その後、製剤化したジェランガムをバイオバーデン低減フィルター（シングルフィルター、０．２μｍ、ＰＥＳ）でろ過し、ガラス瓶に入れ、クラスＡの製造エリア（クラスＢのバックグラウンドあり）に入れる。

【0076】

バイオバーデンが減少したジェランガムを、無菌フィルター（シングルフィルター、０．２μｍ、ＰＶＤＦ）でろ過し、サージタンクに入れ、クラスＡの製造エリア（クラスＢのバックグラウンドあり）に入れる。ろ過後、凍結乾燥機への装填に則して５０ｍｌガラスバイアルへの充填が行われる。凍結乾燥は、大気圧での凍結と－１０℃、－５０℃、－１５℃および－５０℃の温度工程、１００μｂａｒでの一次乾燥と－１５℃、０℃および－１０℃の温度工程、ならびに１００μｂａｒでの二次乾燥と＋１０℃および＋５０℃の温度工程で行われる。

【0077】

凍結乾燥後、各バイアルは５０ｍｇのジェランガムを含有する。

【0078】

実施例２：カルシウムイオン封鎖剤入りのジェランガムの製造
ジェランガム粉末（ＫＥＬＣＯＧＥＬ（登録商標）ＣＧ－ＬＡ）を粉末バッグに秤量する。ジェランガムを標的濃度（プロセス終了時）が２．０ｍｇ／ｍｌ（０．２０％ｗ／ｗ）に達するようにジェランガム１グラムあたり０．１５ｍＭクエン酸ナトリウム三水和物の注射用水（ＷＦＩ）溶液に溶解する。粉末をＷＦＩに徐々に加え、ジェランガムがすべて溶解し、ダマがほとんど生じないようにする。ジェランガムを完全に添加した後、溶解を促進するためにバルクの温度を室温から３８℃までわずかに上げる。溶液を撹拌し、粉末を溶解させる。

【0079】

粉末が完全に溶解した後、情報目的のためにｐＨと濃度のサンプルを採取する。

【0080】

その後、製剤化したジェランガムをバイオバーデン低減フィルター（シングルフィルター、０．２μｍ、ＰＥＳ）でろ過し、ガラス瓶に入れる。この工程は、クラスＣの製造エリアで行った。

【0081】

バイオバーデンが減少したジェランガムを、無菌フィルター（シングルフィルター、０．２μｍ、ＰＶＤＦ）でろ過し、サージタンクに入れ、クラスＡの製造エリアに入れる。ろ過後、凍結乾燥機への装填に則して５０ｍｌガラスバイアルへの充填が行われる。凍結乾燥は、大気圧での凍結と－１０℃、－５０℃、－１５℃および－５０℃の温度工程、１００μｂａｒでの一次乾燥と－１５℃、０℃および－１０℃の温度工程、ならびに１００μｂａｒでの二次乾燥と＋１０℃および＋５０℃の温度工程で行われる。

【0082】

凍結乾燥後、各バイアルは４０．８ｍｇのジェランガムと１．８ｍｇのクエン酸ナトリウム三水和物を含有する。望ましくないゲル化またはガラスバイアル破損の問題は発生しなかった。

【0083】

本発明はさらに下記項目により特徴づけられる。

【0084】

項目１．以下の工程を含む、凍結乾燥ジェランガム組成物を調製する方法：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｖ）得られた溶液を凍結乾燥し、それにより凍結乾燥ジェランガム組成物を提供する工程；
ここで、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度は、約３ｍｇ／ｍｌまでである。

【0085】

項目２．以下の工程を含む、再構成ジェランガム組成物を調製する方法：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｖ）得られた溶液を凍結乾燥する工程；
（ｖ）十分な量の医薬上許容される再構成溶媒を添加し、それにより再構成ジェランガム組成物を提供する工程；
ここで、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度が、約３ｍｇ／ｍｌまでである。

【0086】

項目３．工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度が、約１ｍｇ／ｍｌから約３ｍｇ／ｍｌである、項目１または項目２に記載の方法。

【0087】

項目４．混合工程（ｉｉ）が、最大９５℃の温度、特に約７０℃～９５℃の間の温度または約２５℃～４０℃の間の温度で実施される、先行する項目のいずれか１項に記載の方法。

【0088】

項目５．さらに少なくともひとつのろ過工程を含む、先行する項目のいずれか１項に記載の方法。

【0089】

項目６．凍結乾燥に供される前に、工程（ｉｉｉ）で得られた溶液がバイオバーデン低減フィルター上でろ過および／またはフィルター滅菌される、先行する項目のいずれか１項に記載の方法。

【0090】

項目７．凍結乾燥に供される前に、工程（ｉｉｉ）で得られた溶液が、最初にバイオバーデン低減ろ過に次に無菌ろ過に供され、それにより無菌溶液が提供される、先行する項目のいずれか１項に記載の方法。

【0091】

項目８．無菌ろ過に使用するフィルターの孔径が、０．２２μｍ以下、例えば、０．２２μｍまたは０．２０μｍである、項目６または項目７のいずれか１項に記載の方法。

【0092】

項目９．凍結乾燥が無菌条件下で行われる、先行する項目のいずれか１項に記載の方法。

【0093】

項目１０．ジェランガムが、低アシルジェランガム、高アシルジェランガムまたはその混合物、特に低アシルジェランガムである、先行する項目のいずれか１項に記載の方法。

【0094】

項目１１．医薬上許容される調製溶媒が、水またはカルシウムイオン封鎖剤の水溶液、特にクエン酸アルカリ金属塩、リン酸アルカリ金属塩またはリンゴ酸アルカリ金属塩溶液、より詳細にはクエン酸ナトリウム水溶液、より詳細にはクエン酸三ナトリウム二水和物水溶液である、先行する項目のいずれか１項に記載の方法。

【0095】

項目１２．工程（ｉｉｉ）の後の組成物中のカルシウムイオン封鎖剤の濃度が、ジェランガム粉末１グラムあたり約０．１ｍＭからジェランガム粉末１グラムあたり約０．２ｍＭ、特にジェランガム粉末１グラムあたり約０．１５ｍＭである、項目１１に記載の方法。

【0096】

項目１３．医薬上許容される調製溶媒が、クエン酸ナトリウム水溶液であり、工程（ｉｉｉ）の後の組成物中のクエン酸ナトリウム濃度が、ジェランガム粉末１グラムあたり約０．１ｍＭからジェランガム粉末１グラムあたり約０．２ｍＭ、特にジェランガム粉末１グラムあたり約０．１５ｍＭである、先行する項目のいずれか１項に記載の方法。

【0097】

項目１４．工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度が、約１．０ｍｇ／ｍｌから約３．０ｍｇ／ｍｌ、特に約１．５ｍｇ／ｍｌから約２．５ｍｇ／ｍｌ、より詳細には約２．０ｍｇ／ｍｌである、先行する項目のいずれか１項に記載の方法。

【0098】

項目１５．以下の工程を含む、項目１、３～１４のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物の調製方法：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｉｉａ）工程（ｉｉｉ）で得られた溶液をバイオバーデン低減ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｂ） 工程（ｉｉｉａ）で得られた溶液を無菌ろ過に供する工程；
（ｉｖ）得られた溶液を凍結乾燥する工程；
ここで、工程（ｉｉｉ）の後のジェランガムの濃度が、約１ｍｇ／ｍｌから約３ｍｇ／ｍｌである。

【0099】

項目１６．以下の工程からなる、項目１、３～１４のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物の調製方法：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｉｉａ）工程（ｉｉｉ）で得られた溶液をバイオバーデン低減ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｂ）工程（ｉｉｉａ）で得られた溶液を無菌ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｃ）工程（ｉｉｉｂ）で得られた溶液を適当な容器に充填する工程；
（ｉｉｉｄ）容器を半栓する工程；
（ｉｖ）容器中の溶液を凍結乾燥する工程；および
（ｖ）凍結乾燥終了後容器をキャッピングする工程．

【0100】

項目１７．以下の工程からなる、項目２～１４のいずれか１項に記載の再構成ジェランガム組成物の調製方法：
（ｉ）ジェランガム粉末を医薬上許容される調製溶媒に添加する工程；
（ｉｉ）実質的に完全に溶解するまで混合する工程；
（ｉｉｉ）任意に、さらなる調製溶媒を添加する工程；
（ｉｉｉａ）工程（ｉｉｉ）で得られた溶液をバイオバーデン低減ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｂ）工程（ｉｉｉａ）で得られた溶液を無菌ろ過に供する工程；
（ｉｉｉｃ）工程（ｉｉｉｂ）で得られた溶液を適当な容器に充填する工程；
（ｉｉｉｄ）容器を半栓する工程；
（ｉｖ）容器中の溶液を凍結乾燥する工程；
（ｖ）凍結乾燥終了後容器をキャッピングする工程；および
（ｖｉ）十分な量の医薬上許容される再構成溶媒を添加し、それにより再構成ジェランガム組成物を提供する工程。

【0101】

項目１８．カルシウムイオン封鎖剤に対するジェランガムの重量比が、約１５：１から約３０：１、特に約２０：１から約２７：１、より詳細には約２１．５：１から約２５：１である、ジェランガムおよびカルシウムイオン封鎖剤を含む凍結乾燥組成物。

【0102】

項目１９．無菌である、項目１８に記載の凍結乾燥組成物。

【0103】

項目２０．ジェランガムが、低または高アシルジェランガムまたはその混合物、特に低アシルジェランガムである、項目１８に記載の凍結乾燥組成物。

【0104】

項目２１．カルシウムイオン封鎖剤が、クエン酸アルカリ金属塩、リン酸アルカリ金属塩およびリンゴ酸アルカリ金属塩からなる群より選ばれ、特にリン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウムおよびその混合物からなる群より選ばれ、より詳細にはクエン酸ナトリウム、より詳細にはクエン酸三ナトリウム二水和物である、項目１８から２０に記載の凍結乾燥組成物。

【0105】

項目２２．組成物の水分含量が、約５重量％以下、特に約４重量％以下である、項目１８から２１に記載の凍結乾燥組成物。

【0106】

項目２３．組成物が、項目１から１７のいずれか１項の方法で得られる、項目１８から２２のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物。

【0107】

項目２４．医薬上許容される再構成溶媒を使用するジェランガムの再構成を可能にするのに十分な容量の容器に、先行する項目のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物を含む用量単位製剤。

【0108】

項目２５．容器が、バイアル、特にガラスバイアル、より詳細には容量約１ｍｌから約１００ｍｌ、特に５０ｍｌのガラスバイアルである、項目２４に記載の用量単位製剤。

【0109】

項目２６．容器が、凍結乾燥トレイ、特に使い捨て凍結乾燥トレイ、より詳細には容量約１００ｍｌから約２０００ｍｌの使い捨て凍結乾燥トレイである、項目２４または項目２５に記載の用量単位製剤。

【0110】

項目２７．ジェランガムおよびカルシウムイオン封鎖剤を含む無菌凍結乾燥組成物および注射用水などの医薬上許容される再構成溶媒から再構成された無菌組成物であって、カルシウムイオン封鎖剤に対するジェランガムの重量比が、約１５：１から約３０：１であり、カルシウムイオン封鎖剤が、クエン酸アルカリ金属塩、リン酸アルカリ金属塩およびリンゴ酸アルカリ金属塩からなる群より選ばれ、特にリン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウムおよびその混合物からなる群より選ばれる、無菌組成物。

【0111】

項目２８．医薬に使用、特にヒト医薬に使用するための、項目１８～２３のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物または項目２４～２６のいずれか１項に記載の用量単位製剤または項目２７に記載の再構成組成物。

【0112】

項目２９．無菌適用における、ジェランガムおよびクエン酸ナトリウムなどのカルシウムイオン封鎖剤を含む凍結乾燥組成物の再構成後使用のための、項目１８～２３のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物。

【0113】

項目３０．無菌適用における、ジェランガムおよびクエン酸ナトリウムなどのカルシウムイオン封鎖剤を含む凍結乾燥組成物の再構成後の、項目１８～２３のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物または項目２４～２６のいずれか１項に記載の用量単位製剤の使用。

【図1】

【国際調査報告】