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▶ ベタビスト・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-06-21
(54)【発明の名称】磁気共鳴イメージング用造影剤
(51)【国際特許分類】
A61K 49/06 20060101AFI20240614BHJP
A61K 47/44 20170101ALN20240614BHJP
A61K 9/08 20060101ALN20240614BHJP
A61K 9/107 20060101ALN20240614BHJP
【ＦＩ】
A61K49/06
A61K47/44
A61K9/08
A61K9/107
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023577974
(86)(22)【出願日】2022-06-20
(85)【翻訳文提出日】2023-12-15
(86)【国際出願番号】 EP2022066734
(87)【国際公開番号】W WO2022268723
(87)【国際公開日】2022-12-29
(31)【優先権主張番号】2021/010176
(32)【優先日】2021-06-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】TR
(31)【優先権主張番号】PCT/TR2021/050696
(32)【優先日】2021-07-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】TR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523473567
【氏名又は名称】ベタビスト・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング
【氏名又は名称原語表記】ＢＥＴＡＶＩＳＴ ＧＭＢＨ
(74)【代理人】
【識別番号】110001195
【氏名又は名称】弁理士法人深見特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】オズスナル，イェルダ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C085
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076AA17
4C076BB01
4C076BB11
4C076BB13
4C076BB29
4C076CC50
4C076EE53F
4C076FF16
4C085HH07
4C085JJ01
4C085KA28
4C085KB78
4C085LL01
4C085LL05
4C085LL11
(57)【要約】
本発明は、磁気共鳴イメージング用の造影剤組成物に関する。造影剤組成物は、水、および１つまたは複数の化学的に異なるベタレインを含有する。造影剤組成物は、経口、直腸および／または非経口投与に適している。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
磁気共鳴イメージングのための造影剤としての組成物の使用であって、前記組成物がｉ）水、および
ｉｉ）１つまたは複数の化学的に異なるベタレインを含む、使用。
【請求項2】
前記１つまたは複数の化学的に異なるベタレインが、一般式（Ｉ）【化1】
（式中、一般式（Ｉ）において
Ｒ１は、－Ｈを表し、Ｒ２は、
【化2】
から選択されるか、
または
Ｒ１およびＲ２は、それらが結合している窒素と一緒になって、一般式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）
【化3】
の残基を形成し、
ここで、一般式（ＩＩＩ）において、
Ｒ３およびＲ４は、互いに独立して、
－Ｈ、および
【化4】
から選択され、
ただし、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つは－Ｈを表し、
Ｒ５は、－Ｈおよび
【化5】
から選択され、
Ｒ６は－ＣＨ２ＯＨおよびＣＯ２Ｈから選択される）
の化合物、その薬学的に許容される塩、およびその互変異性体から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項3】
前記１つまたは複数の化学的に異なるベタレインが、一般式（ＩＶ）【化6】
（式中、Ｒ３およびＲ４は、請求項２で定義される意味を有する）
の化合物、その薬学的に許容される塩および／またはその互変異性体、ならびに
一般式（Ｖ）
【化7】
（式中、一般式（Ｖ）において、Ｒ７は、－ＣＯ２Ｈおよび－ＣＯＮＨ２から選択される）
の化合物、その薬学的に許容される塩および／またはその互変異性体を含む、請求項１または２に記載の使用。
【請求項4】
前記１つまたは複数の化学的に異なるベタレインが、一般式（ＩＶ）【化8】
（式中、Ｒ３およびＲ４は請求項２で定義される意味を有する）
の化合物、その薬学的に許容される塩、およびその互変異性体から選択される、請求項１または２に記載の使用。
【請求項5】
前記一般式（ＩＶ）の化合物が、高圧液体クロマトグラフィーにより決定される約２ｇ／ｋｇ～約１０ｇ／ｋｇの量で前記組成物中に存在する、請求項３または４に記載の使用。
【請求項6】
前記組成物がベータ・ブルガリス（Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）ジュースである、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用。
【請求項7】
前記組成物が以下のステップ：ａ）ベータ・ブルガリス植物の皮を剥き、スライスするステップ；
ｂ）前記ベータ・ブルガリス植物をパルプ化してパルプを得るステップ；
ｃ）ステップｂ）で得られた前記パルプを水と混合するステップ；
ｄ）ステップｃ）で得られた混合物を煮沸するステップ；
ｅ）冷却後、前記混合物を排水して液体を分離するステップ；ならびに任意に
ｆ）ステップｅ）で得られた前記液体に、ベタニンおよび／またはバルガキサンチンを含有する水溶液を添加するステップ
を含むプロセスによって得られる、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用。
【請求項8】
前記組成物が、最大５０ｖｏｌ％のオリーブ油、好ましくは１０～５０ｖｏｌ％のオリーブ油をさらに含有する、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用。
【請求項9】
前記組成物がオゾン化されている、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用。
【請求項10】
請求項１に記載の組成物を製造するためのプロセスであって、以下のステップ：ａ）ベータ・ブルガリス植物の皮を剥き、スライスするステップ；
ｂ）前記ベータ・ブルガリス植物をパルプ化してパルプを得るステップ；
ｃ）ステップｂ）で得られた前記パルプを水と混合するステップ；
ｄ）ステップｃ）で得られた混合物を煮沸するステップ；
ｅ）冷却後、前記混合物を排水して液体を分離するステップ；ならびに
ｆ）ステップｅ）で得られた前記液体に、ベタニンおよび／またはバルガキサンチンを含有する水溶液を添加するステップを含む、プロセス。
【請求項11】
請求項１０に記載のプロセスにより得られる磁気共鳴イメージング用の造影剤組成物。
【請求項12】
対象の造影増強磁気共鳴画像を取得する方法であって、－ 請求項１～９および１１のいずれか１項に記載の組成物を前記対象に投与するステップ；ならびに
－ 前記対象の前記磁気共鳴画像を取得するステップを含む、方法。
【請求項13】
前記組成物が経口投与または直腸投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記磁気共鳴画像において、前記対象の食道、消化管、肝臓、および／または腎臓が視認できる、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項15】
前記組成物が、非経口的に、好ましくは静脈内に、または腹腔内に投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項16】
前記磁気共鳴画像において、静脈系および／または動脈系が視認できる、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【0001】
発明の分野
本発明は、磁気共鳴イメージング用造影剤の技術分野に関する。
本発明は、磁気共鳴イメージング用造影剤の技術分野に関する。
【0002】
発明の背景
造影剤とは、医学的イメージングの際に体内の組織および液体のコントラストを高めるために外部から体内に投与される化学物質である。造影剤は、血管および器官（胃、腸など）、腫瘍、ならびに炎症組織の視認性を高めるために、透視、コンピュータ断層撮影、および磁気共鳴などのイメージングにおいて一般的に使用されている。医学的イメージングに使用される造影剤は、使用される画像診断法によって大別することができる。
造影剤とは、医学的イメージングの際に体内の組織および液体のコントラストを高めるために外部から体内に投与される化学物質である。造影剤は、血管および器官（胃、腸など）、腫瘍、ならびに炎症組織の視認性を高めるために、透視、コンピュータ断層撮影、および磁気共鳴などのイメージングにおいて一般的に使用されている。医学的イメージングに使用される造影剤は、使用される画像診断法によって大別することができる。
【0003】
磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）は、磁場中で水素原子のスピンが緩和される現象を利用して、身体の解剖学的、生理学的、および生化学的情報を画像として取得する方法である。ＭＲＩは、生体のヒトおよび動物の体内器官をリアルタイムでイメージングするための、現在の非侵襲的診断ツールの１つである。バイオサイエンスおよび医学の分野での多様で精密な利用のために、ＭＲＩは画像のコントラストを高めるために体内に異物を導入して行われる。これらの物質は造影剤と呼ばれる。超常磁性物質および常磁性物質が造影剤として使用され、ＭＲＩによってイメージングされる身体部分からのシグナルをコントラスト化し、身体部分とその周囲を明確に区別できるようにする。ＭＲＩ画像上の組織間のコントラストは、組織の緩和が異なるために生じる。緩和とは、組織内の水分子の核スピンが平衡状態に戻る現象である。造影剤は緩和に作用して組織間の緩和の程度に大きな差を生じさせ、ＭＲＩシグナルの変化を誘導して組織間のコントラストをより明瞭にする。
【0004】
造影剤を用いてコントラストを増強することにより、特定の生体器官および組織からの画像シグナルの強度をその周囲に対して上昇させたり、または低下させたりして、器官および組織をより明瞭にイメージングする。陽性造影剤（またはＴ１造影剤）は、ＭＲＩでイメージングされる身体部分からの画像シグナルの強度を、その周囲に対して相対的に上昇させる造影剤を指す。陰性造影剤（またはＴ２造影剤）は、ＭＲＩによりイメージングされる身体部分からの画像シグナルの強度を、その周囲に対して低下させる造影剤を指す。より具体的には、ＭＲＩ造影剤は、常磁性物質の高スピンを使用したＴ１造影剤と、強磁性物質または超常磁性物質周辺の磁気不均一性を利用したＴ２造影剤に分けられる。
【0005】
現在、ＭＲＩのＴ１造影剤としては、ガドブトロールおよびガドトリン酸などのガドリニウム（Ｇｄ）キレートの静脈内投与が使用されている。周知のように、組織の識別が十分に達成できない非増強画像において、腫瘍、感染症および血管の可視化が必要な多くの状況において、病変および診断評価に必要と考えられる場合には、ガドリニウムキレート常磁性製品が使用される。これらのガドリニウム誘導体は、疾患の診断および経過観察に一般的に使用されている。年間およそ３，０００万用量のガドリニウムキレートが診断目的で使用されている。ガドリニウム含有造影剤はキレートの形態で摂取することができるが、Ｇｄ３＋カチオンがそのリガンド（複数可）から分離すると、患者および環境の両方にとって有毒となる。ガドリニウム含有造影剤は、２００６年にこのような製品が腎性全身性線維症などの副作用を引き起こすことが報告されるまでは安全と考えられていた。２０１３年以降、ガドリニウム含有造影剤の副作用を報告する論文数が著しく増加している。リガンド非含有ガドリニウムは、体内で遊離した形態および尿によって自然環境に混合した形態の両方で、環境衛生および生態系バランスの点でリスクをもたらす。これらの製品の静脈内（ｉｖ）注射は、糖尿病、高血圧、肝不全、および特に腎機能不全の患者における全身性副作用のリスクを増大させる。さらに、ガドリニウムキレートは皮膚、肝臓、骨、および脳への蓄積を引き起こすことが示されている（ＧｕｏらＦｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、２０１８年、１１巻、論文３３５）。これらの製品の経口、肛門、および直腸投与は非実用的で不便であり、希釈の難しさを伴う。ガドリニウム系造影剤は経口投与も可能であるが、希釈を必要とする投与が困難であること、および得られるＭＲＩ画像の質の低さから、日常的には使用されていない。さらに、ガドリニウム系造影剤は粘度が低いため、肛門および直腸投与を行うことができない。
【0006】
投与に伴う副作用やリスクにかかわらず、ガドリニウムキレートは現在もＭＲＩに使用されている主な造影剤である。
【0007】
したがって、磁気共鳴イメージング、特に胃および腸の検査用の無害な造影剤は必要とされたままである。
【0008】
発明の概要
したがって、本発明の目的は、磁気共鳴イメージング用の造影剤組成物を提供することであり、ここで、前記組成物は、水、および１つまたは複数の化学的に異なるベタレインを含む。
したがって、本発明の目的は、磁気共鳴イメージング用の造影剤組成物を提供することであり、ここで、前記組成物は、水、および１つまたは複数の化学的に異なるベタレインを含む。
【0009】
また、本明細書において特許請求され、記載されるのは、本明細書に記載される造影剤組成物を製造するためのプロセスであって、以下のステップ：
ａ）ベータ・ブルガリス（Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）植物、好ましくはＡｙｄｉｎ地方（Ｔｕｒｋｅｙ）起源のベータ・ブルガリス植物の皮を剥き、スライスするステップ；
ｂ）ベータ・ブルガリス植物をパルプ化し、パルプを得るステップ；
ｃ）ステップｂ）で得られたパルプを水と混合するステップ；
ｄ）ステップｃ）で得られた混合物を煮沸するステップ；
ｅ）冷却後、混合物を排水して液体を分離するステップ；ならびに
ｆ）ステップｅ）で得られた液体に、ベタニンおよび／またはバルガキサンチンを含む水溶液、ならびに前記プロセスによって得られた造影剤組成物を添加するステップを含む、プロセスである。共に添加する場合、ベタニンとバルガキサンチンの重量比は、好ましくは３：１である。
ａ）ベータ・ブルガリス（Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）植物、好ましくはＡｙｄｉｎ地方（Ｔｕｒｋｅｙ）起源のベータ・ブルガリス植物の皮を剥き、スライスするステップ；
ｂ）ベータ・ブルガリス植物をパルプ化し、パルプを得るステップ；
ｃ）ステップｂ）で得られたパルプを水と混合するステップ；
ｄ）ステップｃ）で得られた混合物を煮沸するステップ；
ｅ）冷却後、混合物を排水して液体を分離するステップ；ならびに
ｆ）ステップｅ）で得られた液体に、ベタニンおよび／またはバルガキサンチンを含む水溶液、ならびに前記プロセスによって得られた造影剤組成物を添加するステップを含む、プロセスである。共に添加する場合、ベタニンとバルガキサンチンの重量比は、好ましくは３：１である。
【0010】
本発明によるさらなる態様は、対象の造影増強磁気共鳴画像を取得する方法であって、
－ 本明細書に記載の造影剤組成物を前記対象に投与するステップ；および
－ 前記対象の前記磁気共鳴画像を取得するステップ、を含む方法に関する。
－ 本明細書に記載の造影剤組成物を前記対象に投与するステップ；および
－ 前記対象の前記磁気共鳴画像を取得するステップ、を含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】本発明による造影剤組成物の製造プロセスの概要を示す：（１０）水による洗浄；（２０）：スライス；（３０）：パルプ化；（４０）：煮沸；（５０）：冷却；（６０）：排水；（７０）：液体部分の分離；（８０）：風味増強剤の添加。
【図2】本発明による造影剤組成物の製造プロセスの概要を示す：（１０）水による洗浄；（２０）：スライス；（３０）：パルプ化；（４０）：煮沸；（５０）：冷却；（６０）：排水；（７０）：液体部分の分離；（８０）：風味増強剤の添加；（９０）：抽出物の取得；（１００）：混合物への添加。
【図3】本発明による造影剤組成物ＣＡ１およびＣＡ２、ならびに比較用ガドリニウムキレート組成物（Ｃ１）について測定したＴ１緩和曲線の比較模式図を示す（ｘ軸：繰り返し時間（ＴＲ）／ｍｓ；ｙ軸：選択した関心領域にわたるＴ１平均画像シグナル強度）。本発明による造影組成物ＣＡ１およびＣＡ２は、現在使用されているガドリニウムキレート組成物Ｃ１に匹敵するスピンエコーＴ１を示す。したがって、造影組成物ＣＡ１およびＣＡ２は、ｉｎ ｖｉｖｏ磁気共鳴イメージング用の造影剤として使用するのに適している。
【図4】本発明による造影剤組成物ＣＡ３（左上）、比較用ガドリニウムキレート溶液Ｃ１（右上）、参照としての水（左下）、およびオリーブ油（右下）をそれぞれ用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで得られたスピンエコーＴ１強調画像と、麻酔下のラット（中央）を用いてｉｎ ｖｉｖｏで得られたスピンエコーＴ１強調画像との間の磁気共鳴コントラストを比較したものである。図４によって示されるように、造影剤組成物ＣＡ３は、比較用ガドリニウムキレート組成物Ｃ１、水、オリーブ油、および麻酔下のラット組織よりも有意に高いシグナル強度を示す。
【図5】造影剤組成物ＣＡ３の直腸投与後にラットで得られたスピンエコーＴ１強調画像（画像ａおよびｂ）を、ラットの腸の解剖学的構造を示す画像（画像ｃおよびｄ）と共に示す。画像ａおよびｂで示されるように、造影剤組成物ＣＡ３は、直腸投与後に腸管内腔において明るいＭＲＩコントラストを示し、腸管内腔のより良好な描出を可能にする。したがって、造影剤組成物ＣＡ３は下部消化管イメージングに特に適している。
【図6】造影剤組成物ＣＡ２の経口投与後にラットで得られた逐次スピンエコーＴ１強調画像を示す。図６に示されるように、造影剤組成物ＣＡ２は、経口投与後に胃において明るいＭＲＩコントラストを示し、胃内腔のより良好な描出を可能にする。したがって、造影剤組成物ＣＡ２は、胃－食道イメージングに特に適している。胃の中の黒い部分はおがくずに相当する。
【図7】Ａ）は、本発明による造影剤組成物ＣＡ２を経口投与した後のラットで得られた、初期段階（投与後１分後の取得）のスピンエコーＴ１強調画像（画像ａ）、初期段階（投与後１分後の取得）の脂肪飽和Ｔ２強調画像（画像ｂ）、および初期段階（投与後１分後の取得）の逐次勾配エコーＴ１強調画像（画像ｃおよびｄ）、ならびに後期段階（投与後３時間後の取得）のスピンエコーＴ１強調画像（画像ｅ）を示す。図７Ａ）から分かるように、造影剤組成物ＣＡ２は、経口投与後、早期段階では小腸の描出、後期段階では肝臓および腎臓の描出が可能であり、早期段階では上部消化管のイメージング、後期段階では実質のイメージングに特に有用である。Ｂ）は、比較用ガドリニウムキレート組成物（Ｃ１）を経口投与した後のラットで得られた、早期段階（投与後１分後の取得）のスピンエコーＴ１強調画像（画像ａおよびｂ）、および早期相（投与後１分後の取得）の逐次勾配エコーＴ１強調画像（画像ｃ）を示す。図７Ａおよび７Ｂに図示された結果の比較は、本発明による造影剤組成物が、現在使用されているガドリニウムキレート組成物（Ｃ１）よりも、特に逐次勾配エコーＴ１強調画像において小腸の内腔のより良好な膨張および描出を示すことを示している。これは、ＬＡＶＡ ＡＳＰＩＲ ＭＲＩシーケンスに示されるように、勾配エコーＴ１強調画像の測定がスピンエコーＴ１強調画像の測定よりも好都合であるため、特に有利である。
【図8】新しく圧搾したビートルートジュースを経口投与する前（図８ａ：左画像：アキシャル同相グラジエントエコー（ＧＲＥ）Ｔ１強調画像（ＷＩ）；右画像：冠状同相ＧＲＥ Ｔ１ ＷＩ）と経口投与した後（図８ｂ：左画像：アキシャル位相外ＧＲＥ Ｔ１ ＷＩ 右画像：冠状ＧＲＥ Ｔ２ ＷＩ）の本発明者の腹部のｉｎ ｖｉｖｏ ＭＲＩ画像を示す。図８によって示されるように、新しく圧搾したビートルートジュースは、経口投与後のヒトの胃内腔および胃壁をより明瞭に描出することができ、胃のイメージングに特に有用である。
【図9】本発明による造影剤組成物ＣＡ５、本発明による造影剤組成物ＣＡ６、比較用ガドリニウムキレート溶液Ｃ１、および参照としての水を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで得られたスピンエコーＴ１強調画像間の磁気共鳴コントラストを比較したものである。図９によって示されるように、造影剤組成物ＣＡ５は、比較用ガドリニウムキレート組成物Ｃ１に匹敵するＴ１シグナル強度を示す。さらに、造影剤組成物ＣＡ６は、比較用ガドリニウムキレート組成物Ｃ１よりも有意に高いＴ１シグナル強度を示す。
【図10】本発明による造影剤組成物ＣＡ４の手動尾部注射後の初期（手動注射後１分後の取得）ラット下引き血管造影イメージング（画像ａ）、後期段階（手動注射後２分後の取得）ラット下引き血管造影イメージング（画像ｂ）および後期段階（手動注射後３分後の取得）ラット下引き腹部イメージング（画像ｃ）を示す。図１０は、静脈相および実質相（肝臓）を示し、組成物ＣＡ４が静脈内投与後の血管および実質のイメージングに特に有用であることを示す。
【図11】Ａ）は、本発明による造影組成物ＣＡ２を４日間連続して経口投与した後の、実験ラットの腸からの組織学的サンプルの顕微鏡画像を示す。Ｂ）は、本発明による造影組成物ＣＡ２を４日間連続して経口投与した後の、実験ラットの胃からの組織学的サンプルの顕微鏡画像を示す。図１１によって表示された結果は、本発明による造影剤組成物ＣＡ２の１ｍＬのドーシスを４日間連続して経口投与することに関連する毒性作用がないことを示している。
【図12】０～６０μＭの濃度の本発明による造影剤組成物（ＣＡ２）の投与後のヒト健常線維芽細胞（ＨＦＢ）細胞における細胞増殖レベル（ｘ軸：ＣＡ２の適用濃度、ｙ軸：分光光度計装置（ＴＥＣＡＮ Ｓｕｎｒｉｓｅ）において測定された吸光度値）：ヒト健常線維芽細胞（ＨＦＢ）細胞において０～６０μＭで投与されたＣＡ２の、２４時間のインキュベーション後の細胞の生存率に対する効果を示す。細胞増殖レベルは、ＸＴＴ試験後に分光光度計で測定した。統計的に有意な差は観察されなかった。
【0012】
発明の詳細な説明
本発明の目的は、この必要性に対処することである。この目的は、請求項１により記載された造影剤組成物および請求項１１による造影剤組成物、ならびに請求項１２による対象の造影増強磁気共鳴画像を取得する方法によって達成される。好ましい実施形態は、本明細書および従属請求項に開示されている。
本発明の目的は、この必要性に対処することである。この目的は、請求項１により記載された造影剤組成物および請求項１１による造影剤組成物、ならびに請求項１２による対象の造影増強磁気共鳴画像を取得する方法によって達成される。好ましい実施形態は、本明細書および従属請求項に開示されている。
【0013】
以下、本発明をより詳細に説明する。
本明細書が「好ましい」実施形態／特徴に言及する場合、「好ましい」実施形態／特徴の特定の組合せが技術的に有意義である限り、これらの「好ましい」実施形態／特徴の組合せも開示されるものと考えられる。
本明細書が「好ましい」実施形態／特徴に言及する場合、「好ましい」実施形態／特徴の特定の組合せが技術的に有意義である限り、これらの「好ましい」実施形態／特徴の組合せも開示されるものと考えられる。
【0014】
特に断らない限り、本明細書では以下の定義を適用するものとする：
本明細書で使用される場合、本発明の文脈（特に特許請求の範囲の文脈）で使用される用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」および類似の用語は、本明細書で特に示されない限り、または文脈に明らかに矛盾しない限り、単数形および複数形の両方をカバーするものと解釈される。
本明細書で使用される場合、本発明の文脈（特に特許請求の範囲の文脈）で使用される用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」および類似の用語は、本明細書で特に示されない限り、または文脈に明らかに矛盾しない限り、単数形および複数形の両方をカバーするものと解釈される。
【0015】
本明細書で使用される場合、用語「および／または」は、前記群の要素の全てまたは１つのみが存在し得ることを意味する。例えば、「Ａおよび／またはＢ」は、「Ａのみ、もしくはＢのみ、またはＡおよびＢの両方」を意味する。「Ａのみ」の場合、この用語は、Ｂが存在しない可能性、すなわち「Ａのみで、Ｂは存在しない」可能性も包含する。
【0016】
本明細書で使用される場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、本明細書では、そのオープンエンドの非限定的な意味で使用される。様々な実施形態、嗜好および範囲は、任意に組み合わせることができることは理解される。したがって、例えば化合物Ａを含む溶液は、Ａ以外の他の化合物を含んでもよい。しかしながら、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、その特定の実施形態として、「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という、より限定的な意味も包含するため、例えば「Ａ、Ｂおよび任意にＣを含む溶液」は、（本質的に）ＡおよびＢからなっていても、または（本質的に）Ａ、ＢおよびＣからなっていてもよい。本明細書で使用される場合、「本質的にからなる」という経過的表現（および文法的変形）は、記載の材料またはステップ「かつ、特許請求される発明の基本的および新規な特徴に実質的に影響を与えない」材料またはステップを包含すると解釈される。したがって、用語「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、「からなる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と同等に解釈されるべきではない。
【0017】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、問題となる量または値が、指定された特定の値またはその近傍の他の値であってもよいことを意味する。一般的に、特定の値を示す「約」という用語は、その値の±５％以内の範囲を示すことを意図している。一例として、「約１００」という語句は、１００±５の範囲、すなわち９５～１０５の範囲を示す。好ましくは、用語「約」によって示される範囲は、値の±３％以内の範囲、より好ましくは±１％以内の範囲を示す。一般的に、「約」という用語が使用される場合、示された値の±５％の範囲内で、本発明による同様の結果または効果が得られることが期待できる。
【0018】
ベタレインは、一般的にビートルート（Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）から単離された、無毒で環境に優しい天然色素である。ベタレインは食品の着色料として主に使用されてきた。ベタレインの抗酸化活性は文献で知られている（Ｅｇｙｐｔ．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｒｅｓ．９１巻（３号）、２０１３年）。Ｕｄｏｎｋａｎｇら（Ｂｉｏｍｅｄ Ｈｕｂ２０１８年、３巻、４９２８２８）は、基本的な組織学的組織構造を染色するためのビートルートの水性およびエタノール抽出物の使用と、ヘマトキシリンおよびエオシンの環境に優しい代替物としての使用について記載した。
【0019】
驚くべきことに、以下
ｉ）水、および
ｉｉ）１つまたは複数の化学的に異なるベタレインを含有する組成物が、磁気共鳴イメージング用の造影剤として有用であることを見出した。本明細書に記載の組成物は、経口的、直腸的または非経口的に投与することができ、対象の食道、消化管、肝臓、腎臓、静脈系および／または動脈系の磁気共鳴画像の取得を可能にする。本明細書に記載の組成物を用いて得られるＭＲＩコントラストは、市販のガドリニウムキレートＧａｄｏｖｉｓｔ（登録商標）を用いて得られるＭＲＩコントラストと同様であるか、またはそれよりも良好である。好都合なことに、本明細書に記載の組成物は、抗酸化および抗炎症特性を示し、その投与に関連して毒性作用は確認されなかった。
好ましくは、１つまたは複数の化学的に異なるベタレインは、一般式（Ｉ）
（式中、一般式（Ｉ）において
Ｒ１は、－Ｈを表し、Ｒ２は、
から選択されるか、
または、
Ｒ１およびＲ２は、それらが結合している窒素と一緒になって、一般式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）
の残基を形成し、
ここで、一般式（ＩＩＩ）において
Ｒ３およびＲ４は、互いに独立して、
－Ｈ、および
から選択され、
ただし、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つは－Ｈを表し、
Ｒ５は、－Ｈおよび
から選択され、
Ｒ６は、－ＣＨ２ＯＨおよびＣＯ２Ｈから選択される）
の化合物、その薬学的に許容される塩、およびその互変異性体から選択される。
ｉ）水、および
ｉｉ）１つまたは複数の化学的に異なるベタレインを含有する組成物が、磁気共鳴イメージング用の造影剤として有用であることを見出した。本明細書に記載の組成物は、経口的、直腸的または非経口的に投与することができ、対象の食道、消化管、肝臓、腎臓、静脈系および／または動脈系の磁気共鳴画像の取得を可能にする。本明細書に記載の組成物を用いて得られるＭＲＩコントラストは、市販のガドリニウムキレートＧａｄｏｖｉｓｔ（登録商標）を用いて得られるＭＲＩコントラストと同様であるか、またはそれよりも良好である。好都合なことに、本明細書に記載の組成物は、抗酸化および抗炎症特性を示し、その投与に関連して毒性作用は確認されなかった。
好ましくは、１つまたは複数の化学的に異なるベタレインは、一般式（Ｉ）
【化1】
（式中、一般式（Ｉ）において
Ｒ１は、－Ｈを表し、Ｒ２は、
【化2】
から選択されるか、
または、
Ｒ１およびＲ２は、それらが結合している窒素と一緒になって、一般式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）
【化3】
の残基を形成し、
ここで、一般式（ＩＩＩ）において
Ｒ３およびＲ４は、互いに独立して、
－Ｈ、および
【化4】
から選択され、
ただし、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つは－Ｈを表し、
Ｒ５は、－Ｈおよび
【化5】
から選択され、
Ｒ６は、－ＣＨ２ＯＨおよびＣＯ２Ｈから選択される）
の化合物、その薬学的に許容される塩、およびその互変異性体から選択される。
【0020】
用語「塩（複数可）」には、比較的無毒性の酸または塩基を用いて調製されるベタレイン塩が含まれる。塩は、適当な不活性溶媒中で、ベタレインを塩基および／または酸と接触させることにより得ることができる。ベタレインを塩基で処理して得られる塩には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、およびマグネシウム塩が挙げられる。ベタレインを酸で処理して得られる塩としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、一水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、および硫酸などの無機酸から得られる塩、ならびに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、酪酸、マレイン酸、リンゴ酸などの比較的無毒性の有機酸から得られる塩が挙げられる。用語「薬学的に許容される塩」は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴わずにヒトおよび下等動物の組織と接触して使用するのに適しており、妥当な利益／リスク比に見合った塩を指す。
【0021】
好ましい実施形態において、１つまたは複数の化学的に異なるベタレインは、一般式（ＩＶ）
（式中、Ｒ３およびＲ４は、本明細書において定義される意味を有する）
の化合物、その薬学的に許容される塩および／またはその互変異性体、ならびに
一般式（Ｖ）
（式中、一般式（Ｖ）において、Ｒ７は、－ＣＯ２Ｈおよび－ＣＯＮＨ２である）の化合物、その薬学的に許容される塩および／またはその互変異性体を含む。
【化6】
（式中、Ｒ３およびＲ４は、本明細書において定義される意味を有する）
の化合物、その薬学的に許容される塩および／またはその互変異性体、ならびに
一般式（Ｖ）
【化7】
（式中、一般式（Ｖ）において、Ｒ７は、－ＣＯ２Ｈおよび－ＣＯＮＨ２である）の化合物、その薬学的に許容される塩および／またはその互変異性体を含む。
【0022】
代替的なさらに好ましい実施形態において、１つまたは複数の化学的に異なるベタレインは、一般式（ＩＶ）
（式中、Ｒ３およびＲ４は、本明細書において定義される意味を有する）の化合物、その薬学的に許容される塩、およびそれらの互変異性体から選択される。
【化8】
（式中、Ｒ３およびＲ４は、本明細書において定義される意味を有する）の化合物、その薬学的に許容される塩、およびそれらの互変異性体から選択される。
【0023】
好ましくは、一般式（ＩＶ）において、Ｒ４は－Ｈを表す。また好ましくは、一般式（ＩＶ）において、Ｒ５は－Ｈを表す。
【0024】
好ましい実施形態において、一般式（ＩＶ）の化合物は、化学構造ＩＶ－ａを有するベタニン、または化学構造ＩＶ－ｂを有するベタニンである。
【化9】
【0025】
好ましくは、式（ＩＶ）、（ＩＶ－ａ）または（ＩＶ－ｂ）の化合物は、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定されるように、組成物１ｋｇあたり約２ｇ（２ｇ／ｋｇ）～組成物１ｋｇあたり約１０ｇ（１０ｇ／ｋｇ）の量で組成物中に存在する。
【0026】
好都合なことに、本明細書に記載の組成物は、完全に天然物である。好ましい実施形態において、組成物は、ベータ・ブルガリスジュースまたはビートルートジュースである。好ましくは、ジュースは、Ａｙｄｉｎ地方（Ｔｕｒｋｅｙ）に由来するビートルートから得られる。他の好ましい実施形態では、組成物は、以下のステップ：
ａ）ベータ・ブルガリス植物、好ましくはＡｙｄｉｎ地方（Ｔｕｒｋｅｙ）起源のベータ・ブルガリス植物の皮を剥き、スライスするステップ；
ｂ）ベータ・ブルガリス植物をパルプ化し、パルプを得るステップ；
ｃ）ステップｂ）で得られたパルプを水と混合するステップ；
ｄ）ステップｃ）で得られた混合物を煮沸するステップ；
ｅ）冷却後、混合物を排水して液体を分離するステップ；ならびに任意に
ｆ）ステップｅ）で得られた液体に、ベタニンおよび／またはバルガキサンチンを含む水溶液を添加するステップを含むプロセスによって得られる。ステップｆ）で添加される水溶液は、好ましくはベタニンおよびバルガキサンチンを含有する。共に添加する場合、ベタニンとバルガキサンチンの重量比は好ましくは３：１である。
ａ）ベータ・ブルガリス植物、好ましくはＡｙｄｉｎ地方（Ｔｕｒｋｅｙ）起源のベータ・ブルガリス植物の皮を剥き、スライスするステップ；
ｂ）ベータ・ブルガリス植物をパルプ化し、パルプを得るステップ；
ｃ）ステップｂ）で得られたパルプを水と混合するステップ；
ｄ）ステップｃ）で得られた混合物を煮沸するステップ；
ｅ）冷却後、混合物を排水して液体を分離するステップ；ならびに任意に
ｆ）ステップｅ）で得られた液体に、ベタニンおよび／またはバルガキサンチンを含む水溶液を添加するステップを含むプロセスによって得られる。ステップｆ）で添加される水溶液は、好ましくはベタニンおよびバルガキサンチンを含有する。共に添加する場合、ベタニンとバルガキサンチンの重量比は好ましくは３：１である。
【0027】
本明細書に記載の組成物は、対象の食道、消化管、肝臓、および／または腎臓の磁気共鳴画像を取得するために経口投与してもよいし、非経口投与、好ましくは静脈内投与、または腹腔内投与、より好ましくは静脈内投与してもよい。
【0028】
非経口投与により、対象の動脈系および／または静脈系の磁気共鳴画像の取得が可能となる。非経口的に投与される場合、本明細書に記載の組成物は、等張化剤をさらに含むことができる。等張化剤の例としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、炭酸ナトリウム、デキストロース、およびその混合物が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、等張化剤は、塩化ナトリウム、デキストロース、または塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムおよび炭酸水素ナトリウムの混合物である。
【0029】
経口投与用組成物は、その嗜好性を改善するために香味剤をさらに含んでもよい。香味剤の例としては、ニンニク、サフラン、およびコリアンダーが挙げられる。組成物がステップａ）～ｅ）、またはａ）～ｆ）を含む調製プロセスで得られる場合、香味剤は、ステップｅ）で得られる液体、またはステップｆ）で得られる液体に添加することができる。粘着性を高めるために、組成物は粘着性増強物質を含むことができる。このような組成物は、消化管の磁気共鳴画像の取得に特に有用である。適切な粘着性増強物質の例としては、スクラルフェート、コロイド状ビスマス、カルベノキソロン二ナトリウム塩、ゼラチン、ペクチン、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、およびカラギーナンが挙げられるが、これに限定されない。粘着性増強物質は、マイクロカプセルおよびマイクロ粒子を含む微小球の形態で提供することができる。
【0030】
本明細書に記載の組成物は、さらに最大５０ｖｏｌ％のオリーブ油、好ましくは１０～５０ｖｏｌ％のオリーブ油を含んでいてもよい。オリーブ油はオゾン化に供されていてもよい。このような組成物は、直腸投与に特に有用であり、対象の消化管の磁気共鳴画像の取得を可能にする。したがって、本発明による好ましい実施形態は、以下
ｉ）水、
ｉｉ）本明細書に記載される１つまたは複数の化学的に異なるベタレイン、
ｉｉｉ）最大５０ｖｏｌ％、好ましくは１０～５０ｖｏｌ％のオリーブ油を含む組成物の、磁気共鳴イメージング用造影剤としての使用に関する。このような組成物は、本明細書に記載のステップａ）～ｅ）、または本明細書に記載のステップａ）～ｆ）を含む調製プロセス、およびさらに好ましくはステップｅ）またはステップｆ）の後に実施されるステップｇ）：
ｇ）ステップｅ）またはｆ）で得られた液体に、最大５０ｖｏｌ％、好ましくは１０～５０ｖｏｌ％のオリーブ油を添加するステップ
を含む調製プロセスを経て得ることができる。
ｉ）水、
ｉｉ）本明細書に記載される１つまたは複数の化学的に異なるベタレイン、
ｉｉｉ）最大５０ｖｏｌ％、好ましくは１０～５０ｖｏｌ％のオリーブ油を含む組成物の、磁気共鳴イメージング用造影剤としての使用に関する。このような組成物は、本明細書に記載のステップａ）～ｅ）、または本明細書に記載のステップａ）～ｆ）を含む調製プロセス、およびさらに好ましくはステップｅ）またはステップｆ）の後に実施されるステップｇ）：
ｇ）ステップｅ）またはｆ）で得られた液体に、最大５０ｖｏｌ％、好ましくは１０～５０ｖｏｌ％のオリーブ油を添加するステップ
を含む調製プロセスを経て得ることができる。
【0031】
直腸投与を意図する組成物は、本明細書に記載される粘着性増強物質をさらに含むことができる。
【0032】
好ましい実施形態において、本明細書に記載の組成物はオゾン化に供される。
【0033】
本発明によるさらなる態様は、本明細書に記載の造影剤組成物を製造するためのプロセスであって、以下のステップ：
ａ）ベータ・ブルガリス植物、好ましくはＡｙｄｉｎ地方（Ｔｕｒｋｅｙ）起源のベータ・ブルガリス植物の皮を剥き、スライスするステップ；
ｂ）ベータ・ブルガリス植物をパルプ化し、パルプを得るステップ；
ｃ）ステップｂ）で得られたパルプを水と混合するステップ；
ｄ）ステップｃ）で得られた混合物を煮沸するステップ；
ｅ）冷却後、混合物を排水して液体を分離するステップ；ならびに
ｆ）ステップｅ）で得られた液体に、ベタニンおよび／またはバルガキサンチンを含有する水溶液を添加するステップを含むプロセスに関する。ステップｆ）で添加される水溶液は、好ましくはベタニンおよびバルガキサンチンを含む。共に添加する場合、ベタニンとバルガキサンチンの重量比は好ましくは３：１である。
このプロセスは、ステップｅ）またはｆ）の後に実施されるステップｇ）および／またはステップｈ）：
ｇ）ステップｅ）またはｆ）で得られた液体に、最大５０ｖｏｌ％、好ましくは１０～５０ｖｏｌ％のオリーブ油を添加するステップ；
ｈ）組成物をオゾン化に供するステップをさらに含んでもよい。
ａ）ベータ・ブルガリス植物、好ましくはＡｙｄｉｎ地方（Ｔｕｒｋｅｙ）起源のベータ・ブルガリス植物の皮を剥き、スライスするステップ；
ｂ）ベータ・ブルガリス植物をパルプ化し、パルプを得るステップ；
ｃ）ステップｂ）で得られたパルプを水と混合するステップ；
ｄ）ステップｃ）で得られた混合物を煮沸するステップ；
ｅ）冷却後、混合物を排水して液体を分離するステップ；ならびに
ｆ）ステップｅ）で得られた液体に、ベタニンおよび／またはバルガキサンチンを含有する水溶液を添加するステップを含むプロセスに関する。ステップｆ）で添加される水溶液は、好ましくはベタニンおよびバルガキサンチンを含む。共に添加する場合、ベタニンとバルガキサンチンの重量比は好ましくは３：１である。
このプロセスは、ステップｅ）またはｆ）の後に実施されるステップｇ）および／またはステップｈ）：
ｇ）ステップｅ）またはｆ）で得られた液体に、最大５０ｖｏｌ％、好ましくは１０～５０ｖｏｌ％のオリーブ油を添加するステップ；
ｈ）組成物をオゾン化に供するステップをさらに含んでもよい。
【0034】
本発明によるさらなる態様は、本明細書において特許請求され記載されるプロセスによって得られる磁気共鳴イメージング用造影剤組成物に関する。
【0035】
本発明はさらに、対象の造影増強磁気共鳴画像を取得する方法であって：
－ 本明細書に記載の組成物を前記対象に投与するステップ；および
－ 前記対象の前記磁気共鳴画像を取得するステップを含む、方法を提供する。
－ 本明細書に記載の組成物を前記対象に投与するステップ；および
－ 前記対象の前記磁気共鳴画像を取得するステップを含む、方法を提供する。
【0036】
投与される組成物の実際の量、および投与の速度および時間経過は、組成物、イメージングされる標的領域、および対象に依存する。造影剤の処方（例えば投与量の決定）は、放射線科医および他の医療提供者の通常の技能の範囲内であり、典型的には、想像されるべき障害および対象の体重を考慮する。
【0037】
好ましい実施形態では、造影剤組成物は経口投与される。代替の実施形態では、造影剤組成物は直腸投与される。本発明による組成物の直腸投与および経口投与は、磁気共鳴イメージングを介して対象の食道、胃腸管、肝臓、および／または腎臓を可視化するために特に好適である。
【0038】
代替の好ましい実施形態において、組成物は非経口的に、好ましくは静脈内に、または腹腔内に投与される。本明細書において特許請求され記載される組成物の非経口投与は、対象の静脈系および／または動脈系の画像を得ることを可能にする。
【0039】
好ましい実施形態において、造影剤組成物は、以下のプロセスのステップ；ベータ・ブルガリス（ＢＶ）植物５００ｇｒを水で洗浄するステップ（１０）、皮を剥いてスライスするステップ（２０）、パルプ化するステップ（３０）、煮沸するステップ（４０）、冷却するステップ（５０）、排水するステップ（６０）、材料の液体部分を分離するステップ（７０）、ニンニク、サフランの枝４～５本およびコリアンダーを１５０ｍｌの液体に添加して、風味を増強するステップ（８０）、ベータ・ブルガリス（ＢＶ）の粒子からエタノール抽出法でベタニンとバルガキサンチン抽出物を得るステップ（９０）、ならびにベタニン（３／４）およびバルガキサンチン（１／４）を３０ｍｌの抽出物の形態で１５０ｍｌの液体（８０）に添加するステップ（１００）によって得られる。（図１、図２）。直腸で使用し、上部消化管系を観察することを目的とする場合は、オゾン化オリーブ油を１０～５０％の割合で添加してもよい。（図１、図２）。オゾン化オリーブ油を１０～５０％の割合で添加することにより、粘性および常磁性効果が向上し、直腸での使用を達成することができ、上部消化管系の観察が可能となる。
【0040】
主題となる本発明は、その元素化学的特徴から消化器官用であり、静脈ＭＲ造影剤としての開発も考えることができる。実施した動物実験の結果、本発明は泌尿器系の観察（ＭＲ尿路造影）にも有用であることが示されている。また、ナノテクノロジー的方法によりスクラルファートまたは粘着性増強物質を添加することによって、胃および腸において粘着性の高い製品として使用することも理論的には可能である。
【0041】
より好ましい実施形態では、造影剤組成物は以下のプロセスのステップ；ベータ・ブルガリス（ＢＶ）植物５００ｇｒを水で洗浄するステップ（１０）、皮を剥いてスライスするステップ（２０）、パルプ化するステップ（３０）、煮沸するステップ（４０）、冷却するステップ（５０）、排水するステップ（６０）、材料の液体部分を分離するステップ（７０）、ニンニク、サフランの枝４～５本およびコリアンダーを１５０ｍｌの液体に添加して、風味を増強するステップ（８０）、ベータ・ブルガリス（ＢＶ）の粒子からエタノール抽出法でベタニンとバルガキサンチン抽出物を得るステップ（９０）、ならびにベタニン（３／４）およびバルガキサンチン（１／４）を３０ｍｌの抽出物の形態で１５０ｍｌの液体（８０）に添加するステップ（１００）によって得られる。（図１、図２）。直腸で使用し、上部消化管系を観察することを目的とする場合は、オゾン化オリーブ油を１０～５０％の割合で添加してもよい。（図１、図２）。主題となる本発明は、その元素化学的性質によって、消化管造影剤および静脈内ＭＲ造影剤として使用することができる。ナノテクノロジー法によってスクラルファートまたは粘着性増強物質を添加することで、胃および腸で粘着性の高い製品として使用できる。オゾン化オリーブ油を１０～５０％の割合で添加することで、粘着性および常磁性効果が向上し、直腸での使用が達成され、上部消化管系での観察が可能となる。
【0042】
ベータ・ブルガリス抽出物は多量の一酸化窒素を含むことが知られている。得られた物質はまた、元素分析および食品分析用に検査される。
【0043】
本発明は、以下の条項＃１～＃４を参照することにより、さらに要約することができる：
＃１．本発明は、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）に使用され、Ｔ１およびＴ２コントラスト品質を増強するベタレインを含有する植物化学剤であって、その特徴が以下のプロセスのステップ；
－ ５００ｇｒのベータ・ブルガリス（ＢＶ）植物を水で洗浄するステップ（１０）、
－ 皮を剥き、スライスするステップ（２０）、
－ パルプ化するステップ（３０）、
－ 煮沸するステップ（４０）、
－ 冷却するステップ（５０）、
－ 排水するステップ（６０）
－ 材料の液体部分を分離するステップ（７０）、
－ ニンニク、サフラン４～５枝、コリアンダーを１５０ｍｌの液体に添加し、風味を増強するステップ（８０）
－ ベータ・ブルガリス（ＢＶ）の粒子からエタノール抽出法によってベタニンおよびバルガキサンチン抽出物を得るステップ（９０）、および
－ ベタニン（３／４）およびバルガキサンチン（１／４）を３０ｍｌの抽出物の形態で１５０ｍｌの液体（８０）に添加するステップ（１００）によって得られる、植物化学剤である。
＃１．本発明は、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）に使用され、Ｔ１およびＴ２コントラスト品質を増強するベタレインを含有する植物化学剤であって、その特徴が以下のプロセスのステップ；
－ ５００ｇｒのベータ・ブルガリス（ＢＶ）植物を水で洗浄するステップ（１０）、
－ 皮を剥き、スライスするステップ（２０）、
－ パルプ化するステップ（３０）、
－ 煮沸するステップ（４０）、
－ 冷却するステップ（５０）、
－ 排水するステップ（６０）
－ 材料の液体部分を分離するステップ（７０）、
－ ニンニク、サフラン４～５枝、コリアンダーを１５０ｍｌの液体に添加し、風味を増強するステップ（８０）
－ ベータ・ブルガリス（ＢＶ）の粒子からエタノール抽出法によってベタニンおよびバルガキサンチン抽出物を得るステップ（９０）、および
－ ベタニン（３／４）およびバルガキサンチン（１／４）を３０ｍｌの抽出物の形態で１５０ｍｌの液体（８０）に添加するステップ（１００）によって得られる、植物化学剤である。
【0044】
＃２．請求項１に記載されるのは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）に使用される、Ｔ１およびＴ２のコントラスト品質を増強し、その特徴が、オゾン化オリーブ油を１０～５０％の割合で添加することにより、粘性および常磁性効果を増強し、直腸使用が達成されまたは上部消化管系を観察できることである、ベタレイン含有植物化学剤である。
【0045】
＃３．請求項１に記載されるのは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）に使用される、Ｔ１およびＴ２のコントラスト品質を増強し、その特徴が、元素および食品化学的物理的特徴によって消化管および静脈ＭＲ造影剤として使用されることである、ベタレイン含有植物化学剤である。
【0046】
＃４．請求項１に記載されるのは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）に使用される、Ｔ１およびＴ２のコントラスト品質を増強し、その特徴が、ナノテクノロジー法によりスクラルファートまたは粘着性増強物質を添加することにより、胃や腸において粘着性の高い製品として使用されることである、ベタレイン含有植物化学剤である。
【実施例】
【0047】
本発明をさらに説明するために、以下の実施例を提供する。これらの実施例は、本発明の範囲を限定する意図で提供されるものではない。
【0048】
Ｉ．本発明による造影剤組成物の調製
Ｉ．１．本発明による造影剤組成物（ＣＡ１）の調製
Ａｙｄｉｎ地方（Ｔｕｒｋｅｙ）起源のベータ・ブルガリス（ＢＶ）植物５００ｇを水で洗浄し（１０）、皮を剥いてスライスし（２０）、パルプ化し（３０）、５００ｍＬの水と混合し、２時間煮沸した（４０）。冷却（５０）および排水（６０）の後、１５０ｍＬの液体抽出物（ＣＡ１）を得た（７０）。液体抽出物（ＣＡ１）は、磁気共鳴イメージング用の造影剤として直接使用することができる。組成物ＣＡ１は、経口投与および上部消化管のイメージングに特に適している。経口投与のために、ニンニクおよび／またはサフランの枝数本および／またはコリアンダーの枝数本を液体抽出物に添加して、風味を増強することができる（８０）。調製方法を図１に要約する。
Ｉ．１．本発明による造影剤組成物（ＣＡ１）の調製
Ａｙｄｉｎ地方（Ｔｕｒｋｅｙ）起源のベータ・ブルガリス（ＢＶ）植物５００ｇを水で洗浄し（１０）、皮を剥いてスライスし（２０）、パルプ化し（３０）、５００ｍＬの水と混合し、２時間煮沸した（４０）。冷却（５０）および排水（６０）の後、１５０ｍＬの液体抽出物（ＣＡ１）を得た（７０）。液体抽出物（ＣＡ１）は、磁気共鳴イメージング用の造影剤として直接使用することができる。組成物ＣＡ１は、経口投与および上部消化管のイメージングに特に適している。経口投与のために、ニンニクおよび／またはサフランの枝数本および／またはコリアンダーの枝数本を液体抽出物に添加して、風味を増強することができる（８０）。調製方法を図１に要約する。
【0049】
Ｉ．２．本発明による造影剤組成物（ＣＡ２、ＣＡ６）の調製
２７．７５ｇ（３０ｍｌ）の市販のビートルート赤色色素（ＣＡＳ Ｎｒ：７６５９－９５－２、トルコ食品添加物番号：Ｅ１６２；供給元：Ｓｍａｒｔ Ｋｉｍｙａ Ｔｉｃ．ｖｅ Ｄａｎ．Ｌｔｄ．Ｓｔｉ．Ｅｇｅ Ｓａｎａｙｉ Ｓｉｔｅｓｉ Ｂａｌａｔｃｉｋ Ｍａｈ．８９０１／３ Ｓｏｋ．Ｎｏ：３／３ＡＯ Ｃｉｇｌｉ／Ｉｚｍｉｒ，ｈｔｔｐｓ：／／ｍａｇａｚａ．ｈａｍｍａｄｄｅｌｅｒ．ｃｏｍ／ｋａｔｅｇｏｒｉ／ｐａｎｃａｒ－ｋｏｋｕ－ｋｉｒｍｉｚｉｓｉ－１）を、実施例１で記載したようにして得られた液体抽出物ＣＡ１（８０）１５０ｍｌに溶解し、（ＣＡ１）に比べて高いコントラストで、磁気共鳴イメージング用の造影剤として直接使用できる溶液（ＣＡ２）を得た。市販のビートルート赤色色素は、７５ｗｔ％のベタニンおよび２５ｗｔ％のバルガキサンチンを含む。組成物（ＣＡ２）は特に経口投与に適している。組成物はｐＨ３．８７を有し、ＨＰＬＣで測定したベタニン濃度は９２４．５ｍｇ／１００ｇである。ＨＰＬＣ分析は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ ＬＣ２０ＡおよびＳｈｉｍａｄｚｕ ＳＰＤ－２０Ａ ＨＰＬＣ機器で行った。サンプルは０．４５μｍ ＰＶＤＦフィルタに通し、バイアルに移してＨＰＬＣ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ ＬＣ２０Ａ）に注入した。ＵＶ検出器（Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＳＰＤ－２０Ａ）および逆相Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×４．６０ｍｍ×５μｍ）を用いた試験では、イソクラティック移動相は０．５％トリフルオロ酢酸溶液とアセトニトリル９０：１０（ｖ：ｖ）であった。５４０ｎｍ、流速１ｍＬ／分、カラム温度２０℃での分析。同定および定量化は、ベタニン標準物質を用いて行った。
２７．７５ｇ（３０ｍｌ）の市販のビートルート赤色色素（ＣＡＳ Ｎｒ：７６５９－９５－２、トルコ食品添加物番号：Ｅ１６２；供給元：Ｓｍａｒｔ Ｋｉｍｙａ Ｔｉｃ．ｖｅ Ｄａｎ．Ｌｔｄ．Ｓｔｉ．Ｅｇｅ Ｓａｎａｙｉ Ｓｉｔｅｓｉ Ｂａｌａｔｃｉｋ Ｍａｈ．８９０１／３ Ｓｏｋ．Ｎｏ：３／３ＡＯ Ｃｉｇｌｉ／Ｉｚｍｉｒ，ｈｔｔｐｓ：／／ｍａｇａｚａ．ｈａｍｍａｄｄｅｌｅｒ．ｃｏｍ／ｋａｔｅｇｏｒｉ／ｐａｎｃａｒ－ｋｏｋｕ－ｋｉｒｍｉｚｉｓｉ－１）を、実施例１で記載したようにして得られた液体抽出物ＣＡ１（８０）１５０ｍｌに溶解し、（ＣＡ１）に比べて高いコントラストで、磁気共鳴イメージング用の造影剤として直接使用できる溶液（ＣＡ２）を得た。市販のビートルート赤色色素は、７５ｗｔ％のベタニンおよび２５ｗｔ％のバルガキサンチンを含む。組成物（ＣＡ２）は特に経口投与に適している。組成物はｐＨ３．８７を有し、ＨＰＬＣで測定したベタニン濃度は９２４．５ｍｇ／１００ｇである。ＨＰＬＣ分析は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ ＬＣ２０ＡおよびＳｈｉｍａｄｚｕ ＳＰＤ－２０Ａ ＨＰＬＣ機器で行った。サンプルは０．４５μｍ ＰＶＤＦフィルタに通し、バイアルに移してＨＰＬＣ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ ＬＣ２０Ａ）に注入した。ＵＶ検出器（Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＳＰＤ－２０Ａ）および逆相Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×４．６０ｍｍ×５μｍ）を用いた試験では、イソクラティック移動相は０．５％トリフルオロ酢酸溶液とアセトニトリル９０：１０（ｖ：ｖ）であった。５４０ｎｍ、流速１ｍＬ／分、カラム温度２０℃での分析。同定および定量化は、ベタニン標準物質を用いて行った。
【0050】
調製方法を図２に要約する。
０．５ｍｌのＣＡ２を１．５ｍｌの水と混合し、およそ２３１ｍｇ／１００ｇのベタニン濃度を有する、本発明による造影剤組成物（ＣＡ６）を得た。
０．５ｍｌのＣＡ２を１．５ｍｌの水と混合し、およそ２３１ｍｇ／１００ｇのベタニン濃度を有する、本発明による造影剤組成物（ＣＡ６）を得た。
【0051】
Ｉ．３．本発明による造影剤組成物（ＣＡ３）の調製
実施例２で記載したように得られた組成物（ＣＡ２）５０ｍＬをオリーブ油５０ｍＬと混合した。得られた混合物を３時間オゾン化し、磁気共鳴イメージング用造影剤として直接使用できるエマルジョン（ＣＡ３）を得た。この組成物（ＣＡ３）は、特に直腸投与に適している。
実施例２で記載したように得られた組成物（ＣＡ２）５０ｍＬをオリーブ油５０ｍＬと混合した。得られた混合物を３時間オゾン化し、磁気共鳴イメージング用造影剤として直接使用できるエマルジョン（ＣＡ３）を得た。この組成物（ＣＡ３）は、特に直腸投与に適している。
【0052】
Ｉ．４．本発明による造影剤（ＣＡ４、ＣＡ５）の調製
溶液ＣＡ４および溶液ＣＡ５は、５００ｍｇ（ＣＡ４）および２５０ｍｇ（ＣＡ５）の市販のベタニン（デキストリンで希釈した赤色ビート抽出物、ＣＡＳ Ｎｒ．：７６５９．９５－２；供給元：Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｅ）を１Ｍの生理食塩水１ｍＬに溶解することによって調製した。いずれの溶液も磁気共鳴イメージングの造影剤として使用できる。組成物ＣＡ４およびＣＡ５は、経口、腹腔内および静脈内投与に特に有用である。組成物は、約９：１～約１：１の体積比でオリーブ油と混合し、オゾン化して、特に直腸投与に適したエマルジョンを提供することができる。
溶液ＣＡ４および溶液ＣＡ５は、５００ｍｇ（ＣＡ４）および２５０ｍｇ（ＣＡ５）の市販のベタニン（デキストリンで希釈した赤色ビート抽出物、ＣＡＳ Ｎｒ．：７６５９．９５－２；供給元：Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｅ）を１Ｍの生理食塩水１ｍＬに溶解することによって調製した。いずれの溶液も磁気共鳴イメージングの造影剤として使用できる。組成物ＣＡ４およびＣＡ５は、経口、腹腔内および静脈内投与に特に有用である。組成物は、約９：１～約１：１の体積比でオリーブ油と混合し、オゾン化して、特に直腸投与に適したエマルジョンを提供することができる。
【0053】
Ｉ．５．比較目的のガドリニウムキレート溶液（Ｃ１）の調製
Ｇａｄｏｖｉｓｔ（登録商標）（ガドリニウムキレート１ｍｍｏｌ／ｍＬ含有ＭＲＩ造影剤、供給元：Ｂａｙｅｒ）１ｍＬを水１００ｍＬで希釈し、比較目的に用いる溶液（Ｃ１）を得た。
Ｇａｄｏｖｉｓｔ（登録商標）（ガドリニウムキレート１ｍｍｏｌ／ｍＬ含有ＭＲＩ造影剤、供給元：Ｂａｙｅｒ）１ｍＬを水１００ｍＬで希釈し、比較目的に用いる溶液（Ｃ１）を得た。
【0054】
ＩＩ．本発明による組成物のＭＲＩコントラスト特性のｉｎ ｖｉｔｒｏ評価
造影剤組成物ＣＡ１、ＣＡ２、ＣＡ５およびＣＡ６を、ガドリニウムキレート溶液Ｃ１、油（エクストラバージンオリーブオイル）および水と比較して、３Ｔ ＭＲスキャナーで試験した。複数のＴＲおよびＴＥ値に基づいて、Ｔ１緩和グラフィックを作成した。Ｔ１およびＴ２は、Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４６巻：１０９９～１１０６（２００１年）に記載されている確立された手順に従って測定した。簡潔に言えば、サンプル（ＣＡ１、ＣＡ２、ＣＡ５、ＣＡ６、Ｃ１、水、および油）を円錐形および円筒形のプラスチック容器に直接注いだ。ホルダーを頭部のみのボリュームコイルに挿入し、３Ｔスキャナー（ＧＥ Ｐｉｏｎｅｅｒ、３Ｔ）を使用して冠状面および軸平面でイメージングした。標準スピンエコーシーケンスは、ＴＥ＝１０ｍｓで異なるＴＲ値（７５、１５０、３００、６００、１０００、２０００および４０００ｍｓ）、ＴＲ＝４０００ｍｓで異なるＴＥ値（１０、４０、８０および１２０ｍｓ）で実行した。図９は、それぞれのディスクがＣＡ５、ＣＡ６、Ｃ１および水のサンプルの１つを表している、得られたスライスの１つである。サンプルごとにコントラストが異なるのは、Ｔ１シグナル強度が異なることを示している。
造影剤組成物ＣＡ１、ＣＡ２、ＣＡ５およびＣＡ６を、ガドリニウムキレート溶液Ｃ１、油（エクストラバージンオリーブオイル）および水と比較して、３Ｔ ＭＲスキャナーで試験した。複数のＴＲおよびＴＥ値に基づいて、Ｔ１緩和グラフィックを作成した。Ｔ１およびＴ２は、Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４６巻：１０９９～１１０６（２００１年）に記載されている確立された手順に従って測定した。簡潔に言えば、サンプル（ＣＡ１、ＣＡ２、ＣＡ５、ＣＡ６、Ｃ１、水、および油）を円錐形および円筒形のプラスチック容器に直接注いだ。ホルダーを頭部のみのボリュームコイルに挿入し、３Ｔスキャナー（ＧＥ Ｐｉｏｎｅｅｒ、３Ｔ）を使用して冠状面および軸平面でイメージングした。標準スピンエコーシーケンスは、ＴＥ＝１０ｍｓで異なるＴＲ値（７５、１５０、３００、６００、１０００、２０００および４０００ｍｓ）、ＴＲ＝４０００ｍｓで異なるＴＥ値（１０、４０、８０および１２０ｍｓ）で実行した。図９は、それぞれのディスクがＣＡ５、ＣＡ６、Ｃ１および水のサンプルの１つを表している、得られたスライスの１つである。サンプルごとにコントラストが異なるのは、Ｔ１シグナル強度が異なることを示している。
【0055】
各サンプルに関心領域を置き、強度の平均読み取り値を表に記録した。図３は、本発明による造影剤組成物ＣＡ１およびＣＡ２、ならびに比較用ガドリニウムキレート組成物（Ｃ１）について測定したＴ１緩和曲線の比較概略図を示す（ｘ軸：反復時間（ＴＲ）／ｍｓ；ｙ軸：選択された関心領域にわたるＴ１平均画像シグナル強度）。本発明による造影組成物ＣＡ１およびＣＡ２は、現在使用されているガドリニウムキレート組成物Ｃ１に匹敵するスピンエコーＴ１を示す。したがって、造影組成物ＣＡ１およびＣＡ２は、ｉｎ ｖｉｖｏ磁気共鳴イメージング用の造影剤として使用するのに適している。
【0056】
ＩＩＩ．本発明による組成物のＭＲＩコントラスト特性のｉｎ ｖｉｖｏ評価
ＩＩＩ．１ ラットのＭＲＩシグナルを測定する一般的手順
ラットは、ケタミン（５０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）麻酔下で、３Ｔ ＭＲＩスキャナーでフレキシブルリストコイルを使用してイメージングし、Ｔ１強調画像は、パラメータ（ＴＲ＝７５、ＴＥ＝１０、スライス厚＝１０、ＦＯＶ＝２４）で冠状面を取得した。
ＩＩＩ．１ ラットのＭＲＩシグナルを測定する一般的手順
ラットは、ケタミン（５０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）麻酔下で、３Ｔ ＭＲＩスキャナーでフレキシブルリストコイルを使用してイメージングし、Ｔ１強調画像は、パラメータ（ＴＲ＝７５、ＴＥ＝１０、スライス厚＝１０、ＦＯＶ＝２４）で冠状面を取得した。
【0057】
ＩＩＩ．２ ヒトの磁気共鳴イメージングの一般的手順
新しく圧搾したビートルートジュース投与の前後に、１．５Ｔｅｓｌａスキャナー（Ｐｈｉｌｉｐｓ Ａｃｈｉｅｖａ、Ｅｉｎｄｈｏｖｅｎ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を用いて腹部検査を行った。ブレスホールドスポイルドグラジエントエコー（ＧＲＥ）アキシャルおよび冠状同相グラジエントエコー（ＧＲＥ）（ＴＥ：４．２ｍｓ、ＴＲ：８．５、ＦＡ：１０、スライス厚：１０ｍｍ）により、同相および無相のＴ１画像を得た。Ｔ１画像に続いて、軸および冠状Ｔ２強調ターボスピンエコー画像を、胃のイメージングのためにＴＥ：８０ｍｓ、ＴＲ：５５６、ＦＡ：９０、スライス厚：７ｍｍ）を用いて作成した。
新しく圧搾したビートルートジュース投与の前後に、１．５Ｔｅｓｌａスキャナー（Ｐｈｉｌｉｐｓ Ａｃｈｉｅｖａ、Ｅｉｎｄｈｏｖｅｎ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を用いて腹部検査を行った。ブレスホールドスポイルドグラジエントエコー（ＧＲＥ）アキシャルおよび冠状同相グラジエントエコー（ＧＲＥ）（ＴＥ：４．２ｍｓ、ＴＲ：８．５、ＦＡ：１０、スライス厚：１０ｍｍ）により、同相および無相のＴ１画像を得た。Ｔ１画像に続いて、軸および冠状Ｔ２強調ターボスピンエコー画像を、胃のイメージングのためにＴＥ：８０ｍｓ、ＴＲ：５５６、ＦＡ：９０、スライス厚：７ｍｍ）を用いて作成した。
【0058】
ＩＩＩ．３ ラットのＭＲＩ
実験は動物実験倫理委員会の承認（承認番号：６４５８３１０１／２０２１／０６７）後に開始した。動物実験は、体重２５０～３００ｇのＷｉｓｔａｒアルビノラット１０匹を１２週間使用して行った（対照群ｎ＝５、ＭＲＩ群ｎ＝５）。実験中、ラットは温度２２±２℃、明暗１２／１２の条件で飼育した。飼料と水は自由摂取とした。
実験は動物実験倫理委員会の承認（承認番号：６４５８３１０１／２０２１／０６７）後に開始した。動物実験は、体重２５０～３００ｇのＷｉｓｔａｒアルビノラット１０匹を１２週間使用して行った（対照群ｎ＝５、ＭＲＩ群ｎ＝５）。実験中、ラットは温度２２±２℃、明暗１２／１２の条件で飼育した。飼料と水は自由摂取とした。
【0059】
ＩＩＩ．３．１ 本発明による造影剤組成物の経口投与
投与に先立ち、ラットはＭＲＩシグナルを測定する前に１２時間絶食させた。次いで、本発明による造影組成物（ＣＡ２）および比較用ガドリニウムキレート溶液（Ｃ１）を、３ｍｌの用量で経口ガベージ（Ｈａｒｗａｒｄ装置、２２Ｇ）で適用した。ＭＲＩイメージング直前に鎮静のためケタミン（Ｋｅｔａｓｏｌ ％１０ Ｉｎｔｅｒｈａｓ、Ａｎｋａｒａ／Ｔｕｒｋｅｙ）５０ｍｇ／ｋｇおよびキシラジン（Ｘｙｌａｚｉｎｏｂｉｏ ％２、Ｂｉｏｖｅｔａ／Ｃｚｅｃｈｉａ）５ｍｇ／ｋｇを適用した。ラットはプラットホームを使って安定させ、動かないようにした。１匹のラットを１０分間隔で１時間ＭＲＩでイメージングし、実質臓器の増強を見るために後期段階もイメージングした。後期段階の測定のために、投与３時間後にＭＲＩを行った。残りのラットは、全検査のために１０分間イメージングした。撮影された画像は解析および評価のために保存した。
投与に先立ち、ラットはＭＲＩシグナルを測定する前に１２時間絶食させた。次いで、本発明による造影組成物（ＣＡ２）および比較用ガドリニウムキレート溶液（Ｃ１）を、３ｍｌの用量で経口ガベージ（Ｈａｒｗａｒｄ装置、２２Ｇ）で適用した。ＭＲＩイメージング直前に鎮静のためケタミン（Ｋｅｔａｓｏｌ ％１０ Ｉｎｔｅｒｈａｓ、Ａｎｋａｒａ／Ｔｕｒｋｅｙ）５０ｍｇ／ｋｇおよびキシラジン（Ｘｙｌａｚｉｎｏｂｉｏ ％２、Ｂｉｏｖｅｔａ／Ｃｚｅｃｈｉａ）５ｍｇ／ｋｇを適用した。ラットはプラットホームを使って安定させ、動かないようにした。１匹のラットを１０分間隔で１時間ＭＲＩでイメージングし、実質臓器の増強を見るために後期段階もイメージングした。後期段階の測定のために、投与３時間後にＭＲＩを行った。残りのラットは、全検査のために１０分間イメージングした。撮影された画像は解析および評価のために保存した。
【0060】
造影組成物ＣＡ２で得られたＭＲＩ結果を図６に示す。図６から分かるように、造影剤組成物ＣＡ２は、経口投与後の胃において明るいＭＲＩコントラストを示し、胃内腔の描出を可能にし、胃食道イメージングに特に適している。胃で認められる黒色部分はおがくずに相当する。
【0061】
造影組成物ＣＡ２を用いて得られたＭＲＩ結果を図７Ａ）に示す：初期段階（投与後１分後の取得）スピンエコーＴ１強調画像（画像ａ）、初期段階（投与後１分後の取得）脂肪飽和Ｔ２強調画像（画像ｂ）、および初期段階（投与後１分後の取得）逐次勾配エコーＴ１強調画像（画像ｃおよびｄ）、および後期段階（投与後３時間後の取得）スピンエコーＴ１強調画像（画像ｅ）。図７Ａ）から分かるように、造影剤組成物ＣＡ２は、経口投与後早期段階では小腸、および後期段階では肝臓および腎臓の描出が可能であり、特に上部消化管イメージング、および実質イメージングに有用である。
【0062】
比較用ガドリニウムキレート溶液Ｃ１で得られたＭＲＩ結果を図７Ｂ）に示す：早期段階（投与後１分後の取得）スピンエコーＴ１強調画像（画像ａおよびｂ）、および早期段階（投与後１分後の取得）逐次勾配エコーＴ１強調画像（画像ｃ）。
【0063】
図７Ａおよび７Ｂによって図示される結果の比較は、本発明による造影組成物ＣＡ２が、現在使用されているガドリニウムキレート組成物（Ｃ１）よりも、特に逐次勾配エコーＴ１強調イメージングにおいて小腸の内腔のより良好な膨張および描出を示すことを実証する。これは、ＬＡＶＡ ＡＳＰＩＲ ＭＲＩシーケンスのＴ１強調画像における勾配エコーの測定がスピンエコーＴ１強調画像のものよりも好都合であるため、特に好都合である。
【0064】
ＩＩＩ．３．２ 本発明による造影剤組成物の直腸投与
投与に先立ち、ラットはＭＲＩシグナルを測定する前に１２時間絶食させた。その後、本発明による造影組成物（ＣＡ３－図５）を１ｍｌの用量で直腸投与した。ケタミン（Ｋｅｔａｓｏｌ ％１０ Ｉｎｔｅｒｈａｓ、Ａｎｋａｒａ／Ｔｕｒｋｅｙ）５０ｍｇ／ｋｇおよびキシラジン（Ｘｙｌａｚｉｎｏｂｉｏ ％２、Ｂｉｏｖｅｔａ／Ｃｚｅｃｈｉａ）５ｍｇ／ｋｇを、ＭＲＩイメージングの直前に鎮静のために適用した。ラットはプラットホームを使って安定させ、動かないようにした。ＭＲＩは各ラットから１０分間隔で１時間行った。撮影された画像は解析および評価のために保存した。
投与に先立ち、ラットはＭＲＩシグナルを測定する前に１２時間絶食させた。その後、本発明による造影組成物（ＣＡ３－図５）を１ｍｌの用量で直腸投与した。ケタミン（Ｋｅｔａｓｏｌ ％１０ Ｉｎｔｅｒｈａｓ、Ａｎｋａｒａ／Ｔｕｒｋｅｙ）５０ｍｇ／ｋｇおよびキシラジン（Ｘｙｌａｚｉｎｏｂｉｏ ％２、Ｂｉｏｖｅｔａ／Ｃｚｅｃｈｉａ）５ｍｇ／ｋｇを、ＭＲＩイメージングの直前に鎮静のために適用した。ラットはプラットホームを使って安定させ、動かないようにした。ＭＲＩは各ラットから１０分間隔で１時間行った。撮影された画像は解析および評価のために保存した。
【0065】
造影剤組成物ＣＡ３で得られた結果を図５に示す。図５の画像ａおよびｂで示されるように、造影剤組成物ＣＡ３は直腸投与後に腸で明るいＭＲＩコントラストを示し、腸内腔の描出を可能にし、下部消化管イメージングに特に適している。
【0066】
ＩＩＩ．３．３ 本発明による造影剤組成物の静脈内投与
１．５ｍＬの造影剤組成物ＣＡ４を尾静脈から手動で投与した。ＭＲＩイメージングの直前に鎮静のためにケタミン（Ｋｅｔａｓｏｌ ％１０ Ｉｎｔｅｒｈａｓ、Ａｎｋａｒａ／Ｔｕｒｋｅｙ）５０ｍｇ／ｋｇおよびキシラジン（Ｘｙｌａｚｉｎｏｂｉｏ ％２、Ｂｉｏｖｅｔａ／Ｃｚｅｃｈｉａ）５ｍｇ／ｋｇを適用した。ラットはプラットホームを使って安定させ、動かないようにした。ＭＲＩは１０分間隔で各取得から１時間行った。撮影された画像は解析および評価のために保存した。
１．５ｍＬの造影剤組成物ＣＡ４を尾静脈から手動で投与した。ＭＲＩイメージングの直前に鎮静のためにケタミン（Ｋｅｔａｓｏｌ ％１０ Ｉｎｔｅｒｈａｓ、Ａｎｋａｒａ／Ｔｕｒｋｅｙ）５０ｍｇ／ｋｇおよびキシラジン（Ｘｙｌａｚｉｎｏｂｉｏ ％２、Ｂｉｏｖｅｔａ／Ｃｚｅｃｈｉａ）５ｍｇ／ｋｇを適用した。ラットはプラットホームを使って安定させ、動かないようにした。ＭＲＩは１０分間隔で各取得から１時間行った。撮影された画像は解析および評価のために保存した。
【0067】
造影剤組成物ＣＡ４で得られた結果を図１０に示す：初期（手動注射後１分後の取得）ラット下引き血管造影イメージング（画像ａ）、後期段階（手動注射後２分後の取得）ラット下引き血管造影イメージング（画像ｂ）および後期段階（手動注射後２分後の取得）ラット下引き腹部イメージング（画像ｃ）のイメージング。図１０は静脈相および実質相（肝臓）を示し、ＣＡ４組成物が静脈内投与後の血管および実質イメージングに特に有用であることを示している。
【0068】
ＩＩＩ．４ 急性摂食試験
造影剤組成物ＣＡ２の急性毒性作用の可能性を調べるため、２日間および４日間の摂食試験を実施した。この目的のため、１５匹のラットを対照群（ｎ＝５）、４８時間群（ｎ＝５）、および９６時間群（ｎ＝５）の３群に分けた。対照群には等張食塩水を投与し、摂食群には３ｍｌの造影剤組成物ＣＡ２を２日間および４日間連続で経口投与した。血液サンプルは心臓内で取得した。血清サンプルからＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）、およびＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）、尿素、およびクレアチン値、ＴＡＳ（総抗酸化状態）、およびＴＯＳ（総酸化状態）値を評価した（Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ、３８巻（１２号）：１１０３～１１１１、２００５年）摂食試験終了後、ラットは麻酔下（ケタミンおよびクシラジン）で頚椎脱臼により安楽死させた。
造影剤組成物ＣＡ２の急性毒性作用の可能性を調べるため、２日間および４日間の摂食試験を実施した。この目的のため、１５匹のラットを対照群（ｎ＝５）、４８時間群（ｎ＝５）、および９６時間群（ｎ＝５）の３群に分けた。対照群には等張食塩水を投与し、摂食群には３ｍｌの造影剤組成物ＣＡ２を２日間および４日間連続で経口投与した。血液サンプルは心臓内で取得した。血清サンプルからＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）、およびＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）、尿素、およびクレアチン値、ＴＡＳ（総抗酸化状態）、およびＴＯＳ（総酸化状態）値を評価した（Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ、３８巻（１２号）：１１０３～１１１１、２００５年）摂食試験終了後、ラットは麻酔下（ケタミンおよびクシラジン）で頚椎脱臼により安楽死させた。
【0069】
総酸化状態（ＴＯＳ）の測定
血清のＴＯＳは、Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ、３８巻（１２号）：１１０３～１１１１、２００５年に記載の新規の自動化測定方法を使用して決定した。試料中に存在する酸化剤は、第一鉄イオン－ｏ－ジアニシジン錯体を酸化して第二鉄イオンにする。この酸化反応は、反応媒体中に豊富に存在するグリセロール分子によって増強される。第二鉄イオンは、酸性媒体中でキシレノールオレンジと錯体を形成する。分光光度計で測定できる色の強度は、試料中に存在する酸化剤分子の総量に関連する。アッセイは過酸化水素で較正され、結果は１リットルあたりのマイクロモルＨ２Ｏ２当量（μｍｏｌ Ｈ２Ｏ２当量／Ｌ）で表される（１）。
血清のＴＯＳは、Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ、３８巻（１２号）：１１０３～１１１１、２００５年に記載の新規の自動化測定方法を使用して決定した。試料中に存在する酸化剤は、第一鉄イオン－ｏ－ジアニシジン錯体を酸化して第二鉄イオンにする。この酸化反応は、反応媒体中に豊富に存在するグリセロール分子によって増強される。第二鉄イオンは、酸性媒体中でキシレノールオレンジと錯体を形成する。分光光度計で測定できる色の強度は、試料中に存在する酸化剤分子の総量に関連する。アッセイは過酸化水素で較正され、結果は１リットルあたりのマイクロモルＨ２Ｏ２当量（μｍｏｌ Ｈ２Ｏ２当量／Ｌ）で表される（１）。
【0070】
総抗酸化状態（ＴＡＳ）の測定
血清のＴＡＳは、Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ、３７巻（２号）：１１２１１９、２００４年に記載の自動化測定方法を使用して決定した。この方法は、より安定な２，２’－アジノ－ビス（３－エチルベンズ－チアゾリン－６－スルホン酸）（ＡＢＴＳ）ラジカル陽イオンの特徴的な色が抗酸化剤によって漂白されることに基づく。結果はｍｍｏｌ Ｔｒｏｌｏｘ当量／Ｌで表した。
血清のＴＡＳは、Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ、３７巻（２号）：１１２１１９、２００４年に記載の自動化測定方法を使用して決定した。この方法は、より安定な２，２’－アジノ－ビス（３－エチルベンズ－チアゾリン－６－スルホン酸）（ＡＢＴＳ）ラジカル陽イオンの特徴的な色が抗酸化剤によって漂白されることに基づく。結果はｍｍｏｌ Ｔｒｏｌｏｘ当量／Ｌで表した。
【0071】
血液分析の結果を表１に要約する。ＴＡＳ値で示されるように、造影剤組成物ＣＡ２は抗酸化活性を示す。造影剤組成物ＣＡ２の投与後、腎毒性も肝毒性も観察されなかった。
【0072】
【表1】
【0073】
肝臓および腎臓の組織を採取し、１０％ホルモール溶液に入れ、影響の可能性について病理組織学的に評価した。
【0074】
組織学的手順
肝臓および腎臓の組織を採取し、１０％ホルマール溶液に入れ、可能性のある影響を病理組織学的に評価した。試験した組織には病理学的所見は認められなかった。
肝臓および腎臓の組織を採取し、１０％ホルマール溶液に入れ、可能性のある影響を病理組織学的に評価した。試験した組織には病理学的所見は認められなかった。
【0075】
胃および腸の組織を、処理してパラフィンワックスに包埋する前に、１０％ホルマリン溶液に２４時間入れた。パラフィン包埋組織は４μｍに切断し、ヘマトキシリン－エオジン（ＨＥ）で染色し、光学顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ ＢＸ５０；Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｃｏｒｐ．、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）で検査した。組織標本の光２顕微鏡分析を盲検下の観察により行った。図１１Ａ）は、本発明による造影組成物ＣＡ２を４日間連続して経口投与した後の実験ラットの腸からの組織学的サンプルの顕微鏡画像を示す。図１１Ｂ）は、本発明による造影組成物ＣＡ２を４日間連続して経口投与した後の、実験ラットの胃からの組織学的サンプルの顕微鏡画像を示す。図１１によって表示された結果は、本発明による造影剤組成物ＣＡ２の１ｍＬのドーシスの４日間連続の経口投与に関連する毒性作用がないことを示している。
【0076】
ＩＩＩ．５ ヒトでの磁気共鳴イメージング
本発明者は、新しく圧搾したビートルートジュース４００ｍｌを飲む前に１２時間絶食した。ＭＲＩ結果は、図８によって示される：新しく圧搾したビートルートジュースの経口投与前（図８ａ：左画像：軸方向勾配エコーＴ１強調画像；右画像：冠状勾配エコーＴ１強調画像）および経口投与後（図８ｂ：左画像：軸方向勾配エコーＴ１強調画像（位相ずれ）；右画像：冠状勾配エコーＴ２強調画像）の本発明者の腹部のＭＲＩ画像。図８から分かるように、新しく圧搾したビートルートジュースは、経口投与後のヒトの胃内腔および胃壁をより明瞭に描出することができ、特に胃のイメージングに有用である。
本発明者は、新しく圧搾したビートルートジュース４００ｍｌを飲む前に１２時間絶食した。ＭＲＩ結果は、図８によって示される：新しく圧搾したビートルートジュースの経口投与前（図８ａ：左画像：軸方向勾配エコーＴ１強調画像；右画像：冠状勾配エコーＴ１強調画像）および経口投与後（図８ｂ：左画像：軸方向勾配エコーＴ１強調画像（位相ずれ）；右画像：冠状勾配エコーＴ２強調画像）の本発明者の腹部のＭＲＩ画像。図８から分かるように、新しく圧搾したビートルートジュースは、経口投与後のヒトの胃内腔および胃壁をより明瞭に描出することができ、特に胃のイメージングに有用である。
【0077】
ＩＩＩ．６ ヒト正常線維芽細胞培養での分子解析
ＣＡ２はヒト健常線維芽細胞培養で試験され、抗増殖作用も細胞生存率への影響も示さなかった。
ＣＡ２はヒト健常線維芽細胞培養で試験され、抗増殖作用も細胞生存率への影響も示さなかった。
【0078】
ヒト新生児健常初代皮膚線維芽細胞（ＨＦＢ、ＡＴＣＣ（登録商標）ＰＣＳ－２０１－０１０（商標））を、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、５０Ｕ／ｍｌペニシリン、および５０μｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したダルベッコ改変イーグル培地で維持した。細胞は５％ＣＯ２を含む９５％加湿雰囲気中、３７℃で培養した。これらの接着細胞は、トリプシン処理およびＣａもＭｇも含まないリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）での洗浄により、３日ごとに継代した。次いで、細胞に同じ培地を供給した。実験開始の２４時間前に９６ウェルプレートに播種した。各ウェルに１×１０４個の細胞をプレーティングした。２４時間後、細胞を異なる濃度（０～６０μＭ）の造影剤組成物ＣＡ２と２４時間インキュベートした。次いで、ＸＴＴアッセイを行った。
【0079】
細胞増殖アッセイ：
細胞増殖は、ＸＴＴベースのキット（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、カタログ番号２０－３００－１０００）を用いて、製造者の指示に従って調べ、ＣＡ２投与後２４時間に３回、ＴＥＣＡＮ Ｓｕｎｒｉｓｅ装置を用いて４５０／６７０ｎｍで分光光度計により測定した。
細胞増殖は、ＸＴＴベースのキット（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、カタログ番号２０－３００－１０００）を用いて、製造者の指示に従って調べ、ＣＡ２投与後２４時間に３回、ＴＥＣＡＮ Ｓｕｎｒｉｓｅ装置を用いて４５０／６７０ｎｍで分光光度計により測定した。
【0080】
図１２は、０～６０μＭの濃度で本発明による造影剤組成物（ＣＡ２）を投与した後のヒト健常線維芽細胞（ＨＦＢ）における細胞増殖レベル（ｘ軸：ＣＡ２の適用濃度、ｙ軸：分光光度計デバイス（ＴＥＣＡＮ Ｓｕｎｒｉｓｅ）で測定した吸光度値）：ヒト健常線維芽細胞（ＨＦＢ）に０～６０μＭでＣＡ２を投与した場合の、２４時間インキュベート後の細胞の生存率に対する影響を示す。統計的に有意な差は認められなかった。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11A】
【図11B】
【図12】
【手続補正書】
【提出日】2024-02-02
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象における磁気共鳴画像を取得するための造影剤として使用するための組成物であって、前記組成物がｉ）水、および
ｉｉ）１つまたは複数の化学的に異なるベタレインを含む、組成物。
【請求項2】
前記１つまたは複数の化学的に異なるベタレインが、一般式（Ｉ）【化1】
（式中、一般式（Ｉ）において
Ｒ１は、－Ｈを表し、Ｒ２は、
【化2】
から選択されるか、
または
Ｒ１およびＲ２は、それらが結合している窒素と一緒になって、一般式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）
【化3】
の残基を形成し、
ここで、一般式（ＩＩＩ）において、
Ｒ３およびＲ４は、互いに独立して、
－Ｈ、および
【化4】
から選択され、
ただし、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つは－Ｈを表し、
Ｒ５は、－Ｈおよび
【化5】
から選択され、
Ｒ６は－ＣＨ２ＯＨおよびＣＯ２Ｈから選択される）
の化合物、その薬学的に許容される塩、およびその互変異性体から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記１つまたは複数の化学的に異なるベタレインが、一般式（ＩＶ）【化6】
（式中、Ｒ３およびＲ４は、請求項２で定義される意味を有する）
の化合物、その薬学的に許容される塩および／またはその互変異性体、ならびに
一般式（Ｖ）
【化7】
（式中、一般式（Ｖ）において、Ｒ７は、－ＣＯ２Ｈおよび－ＣＯＮＨ２から選択される）
の化合物、その薬学的に許容される塩および／またはその互変異性体を含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項4】
前記１つまたは複数の化学的に異なるベタレインが、一般式（ＩＶ）【化8】
（式中、Ｒ３およびＲ４は請求項２で定義される意味を有する）
の化合物、その薬学的に許容される塩、およびその互変異性体から選択される、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項5】
前記一般式（ＩＶ）の化合物が、高圧液体クロマトグラフィーにより決定される約２ｇ／ｋｇ～約１０ｇ／ｋｇの量で前記組成物中に存在する、請求項３に記載の組成物。
【請求項6】
前記組成物がベータ・ブルガリス（Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）ジュースである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項7】
前記組成物が以下のステップ：ａ）ベータ・ブルガリス植物の皮を剥き、スライスするステップ；
ｂ）前記ベータ・ブルガリス植物をパルプ化してパルプを得るステップ；
ｃ）ステップｂ）で得られた前記パルプを水と混合するステップ；
ｄ）ステップｃ）で得られた混合物を煮沸するステップ；
ｅ）冷却後、前記混合物を排水して液体を分離するステップ；ならびに任意に
ｆ）ステップｅ）で得られた前記液体に、ベタニンおよび／またはバルガキサンチンを含有する水溶液を添加するステップ
を含むプロセスによって得られる、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項8】
前記組成物が、最大５０ｖｏｌ％のオリーブ油をさらに含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項9】
前記組成物が、１０～５０ｖｏｌ％のオリーブ油をさらに含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項10】
前記組成物がオゾン化されている、請求項１、８または９に記載の組成物。
【請求項11】
前記組成物が経口投与用または直腸投与用である、請求項１に記載の組成物。
【請求項12】
前記磁気共鳴画像において、前記対象の食道、消化管、肝臓、および／または腎臓が視認できる、請求項１１に記載の組成物。
【請求項13】
前記組成物が、非経口投与用である、請求項１に記載の組成物。
【請求項14】
前記非経口投与は、静脈内投与及び腹腔内投与からなる群より選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項15】
前記磁気共鳴画像において、静脈系および／または動脈系が視認できる、請求項１４に記載の組成物。
【請求項16】
請求項１に記載の組成物を製造するためのプロセスであって、以下のステップ：
ａ）ベータ・ブルガリス植物の皮を剥き、スライスするステップ；
ｂ）前記ベータ・ブルガリス植物をパルプ化してパルプを得るステップ；
ｃ）ステップｂ）で得られた前記パルプを水と混合するステップ；
ｄ）ステップｃ）で得られた混合物を煮沸するステップ；
ｅ）冷却後、前記混合物を排水して液体を分離するステップ；ならびに
ｆ）ステップｅ）で得られた前記液体に、ベタニンおよび／またはバルガキサンチンを含有する水溶液を添加するステップを含む、プロセス。
【国際調査報告】