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▶ ニューロドーン ファーマシューティカル カンパニー リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-06-21
(54)【発明の名称】医薬組成物及びその用途
(51)【国際特許分類】
A61K 31/197 20060101AFI20240614BHJP
A61K 31/428 20060101ALI20240614BHJP
A61P 25/04 20060101ALI20240614BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240614BHJP
【ＦＩ】
A61K31/197
A61K31/428
A61P25/04
A61P29/00
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024500118
(86)(22)【出願日】2022-06-27
(85)【翻訳文提出日】2024-01-16
(86)【国際出願番号】 CN2022101423
(87)【国際公開番号】W WO2023274117
(87)【国際公開日】2023-01-05
(31)【優先権主張番号】202110742036.7
(32)【優先日】2021-07-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523266350
【氏名又は名称】ニューロドーン ファーマシューティカル カンパニー リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110001519
【氏名又は名称】弁理士法人太陽国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】リー、フーロン
(72)【発明者】
【氏名】チャン、チョンピン
(72)【発明者】
【氏名】ファン、ファン
(72)【発明者】
【氏名】ヤン、ウェイトン
(72)【発明者】
【氏名】チェン、ロン
(72)【発明者】
【氏名】ヤン、シーパオ
【テーマコード（参考）】
4C086
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC84
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZA08
4C086ZA21
4C206AA01
4C206AA02
4C206FA44
4C206MA02
4C206MA05
4C206NA05
4C206NA14
4C206ZA08
4C206ZA21
(57)【要約】
本発明は、神経因性疼痛治療薬の調製に広い使用の見通しがある、（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾールとの組成物に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とを含む、神経因性疼痛治療薬を調製するための組成物。
【請求項2】
前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩は、遊離酸または塩基の形での質量比が５０：１～１：２０であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が２０：１～１：１０であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項4】
前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が２０：１～１：４であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項5】
前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が１０：１～１：４であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項6】
前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が６：１～１：４であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項7】
前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が３：１～１：２であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項8】
神経因性疼痛治療薬の調製における、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項9】
前記神経因性疼痛は末梢神経因性疼痛であることを特徴とする請求項８に記載の使用。
【請求項10】
前記末梢神経因性疼痛は帯状疱疹後神経痛であることを特徴とする請求項９に記載の使用。
【請求項11】
前記末梢神経因性疼痛は糖尿病性末梢神経障害であることを特徴とする請求項９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
（相互参照）
本願は、２０２１年０７月０１日に中国国家知識産権局へ提出された、出願番号２０２１１０７４２０３６．７、発明の名称が「医薬組成物及びその用途」である中国特許出願に基づき優先権を主張し、その全内容は、援用により本明細書に組み込まれる。
本願は、２０２１年０７月０１日に中国国家知識産権局へ提出された、出願番号２０２１１０７４２０３６．７、発明の名称が「医薬組成物及びその用途」である中国特許出願に基づき優先権を主張し、その全内容は、援用により本明細書に組み込まれる。
【0002】
本発明は、医薬製造の分野に属し、（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸とリルゾールとの組成物、及びその神経因性疼痛治療薬の調製における使用に関する。
【背景技術】
【0003】
神経因性疼痛（ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ ｐａｉｎ，ＮＰ）は体の感覚系の損傷または疾患による疼痛であり、末梢神経因性疼痛と中枢神経因性疼痛とに分けられ、臨床的には、末梢神経因性疼痛が比較的によく見られる。欧州からの研究資料によると、一般的な人間における神経因性疼痛痛罹患率は８．０％に達している。神経因性疼痛は、単一の疾患ではなく、異なる疾患及び損害による症候群であり、一連の症状及び身体の徴候として現れ、患者の生活の質に深刻な影響を与える。帯状疱疹後神経痛及び糖尿病性末梢神経障害は、最も一般的な２種類の神経因性疼痛のタイプであり、長期疼痛は、患者の睡眠、仕事及び生活能力に影響するだけではく、抑うつ、不安などの感情障害の発病率を増加させる。研究すると、帯状疱疹後神経痛患者の生活の質のスコアは、正常な人間の１／２にすぎないことが明らかになる。神経因性疼痛の治療薬は、不足しており、目前臨床では主にカルシウムイオンチャンネル調節剤、抗うつ薬、及び局所麻酔薬などを用いて治療を行っている。しかし、その発病機序は比較的に複雑であるため、既存の治療手段は満足させていなく、多くの患者の痛みは十分に緩和されていない。
【0004】
（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸（プレガバリン、ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ）は、臨床的に成人末梢神経痛の治療に用いることができ、糖尿病性末梢神経痛、線維筋痛、及び帯状疱疹後神経痛の治療を含み、複数の国際ガイドラインに共同で神経病理性疼痛の治療の第一選択薬として推薦されている。プレガバリンの作用機序は、電位依存性カルシウムチャネルであるα２δサブユニットを調節し、グルタミン酸、ノルアドレナリン及びサブスタンスPの放出を減少させると考えられている。プレガバリンはめまいや傾眠などの副作用を引き起こし、その副作用によってある程度の臨床的使用を制限している。
【0005】
（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸（プレガバリン）の構造式は、以下の通りである。
（化学式は、Ｃ８Ｈ１７ＮＯ２、分子量は、１５９．２３である。）
【化1】
（化学式は、Ｃ８Ｈ１７ＮＯ２、分子量は、１５９．２３である。）
【0006】
リルゾール（Ｒｉｌｕｚｏｌｅ，化学名２－アミノ－６－トリフルオロメトキシベンゾチアゾール）は、サノフィ株式会社より開発した筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）治療薬であり、１９９６年にアメリカ食品医薬品局ＦＤＡ及び欧州医薬品庁ＥＭＡの承認を得て発売され、ＡＬＳ患者の生存期間の延長、症状の緩和、及び生活の質の改善に非常に重要な役割を果たしている。その作用機序は、グルタミン酸の放出の阻害、電圧依存性ナトリウムチャネルの不活化状態の安定化、神経伝達物質が興奮性アミノ酸受容体に結合した後の細胞内イベントの干渉に関連していると考えられている。リルゾールは、グルタミン酸及びそのトランスポーターの調節、抗うつ、抗不安、抗てんかん、鎮痛及び神経保護などを含む広範な薬理学的作用を持つ。
【0007】
リルゾールの構造式は、以下の通りである。
（化学式は、Ｃ８Ｈ５Ｆ３Ｎ２ＯＳ、分子量は、２３４．２０である。）
【化2】
（化学式は、Ｃ８Ｈ５Ｆ３Ｎ２ＯＳ、分子量は、２３４．２０である。）
【0008】
なお、同じ薬効を有する２つの異なる薬物の併用による薬効であっても、非常に複雑で予期し難いであり、薬物の相乗作用、相加作用、さらには拮抗作用を生じる可能性があることを指摘する必要がある。したがって、当業者にとっては、必要な実験データが得られない限り、簡単にリルゾールが鎮痛作用を有するという理由で、ルゾールがプレガバリンの鎮痛効果を増強できると結論付けることは困難である。
【発明の概要】
【0009】
本発明は、（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸とリルゾールとを含む医薬組成物を提供し、この医薬組成物は使用時に予期せぬ相乗作用が生じ、抗神経因性疼痛の治療効果を増強させることができる。
本発明は、神経因性疼痛治療薬の調製における、（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とを含む医薬組成物の使用を提供する。
前記の組成物の（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が５０：１～１：２０である。
本発明は、神経因性疼痛治療薬の調製における、（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とを含む医薬組成物の使用を提供する。
前記の組成物の（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が５０：１～１：２０である。
【0010】
好ましくは、前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が２０：１～１：１０である。
好ましくは、前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が２０：１～１：４である。
好ましくは、前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が１０：１～１：４である。
好ましくは、前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が２０：１～１：４である。
好ましくは、前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が１０：１～１：４である。
【0011】
好ましくは、前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が６：１～１：４である。
好ましくは、前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が３：１～１：２である。
好ましくは、前記（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸又はその薬学的に許容される塩とリルゾール又はその薬学的に許容される塩とは、遊離酸または塩基の形での質量比が３：１～１：２である。
【0012】
本発明にかかる医薬組成物は、神経因性疼痛治療薬を調製するために使用されることができ、ここで、前記神経因性疼痛は、末梢神経因性疼痛であることが好ましい。
より好ましくは、前記末梢神経因性疼痛は、帯状疱疹後神経痛及び糖尿病性末梢神経障害である。
より好ましくは、前記末梢神経因性疼痛は、帯状疱疹後神経痛及び糖尿病性末梢神経障害である。
【0013】
本発明は、（Ｓ）－３－アミノメチル－５－メチルヘキサン酸とリルゾールとを含む医薬組成物を提供し、動物の薬力学的実験による結果は、該医薬組成物は相乗作用を発揮し、抗末梢神経因性疼痛の治療効果を増強させることができることを示す。
【発明を実施するための形態】
【0014】
以下、本発明の実施例と組み合わせて本発明の実施例にかかる技術的案を詳しく、完全に説明するが、もちろん、記載された実施例は本発明の一部の実施例にすぎず、全ての実施例ではない。本発明における実施例に基づいて、当業者が創造的な労働を行うことなく取得した他のすべての実施例は、いずれも本発明の保護の範囲に属する。
【0015】
実施例１ プレガバリン、リルゾール組成物の神経因性疼痛に対する薬効作用への研究１
１材料及び方法
１．１実験動物
Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、雄、ＳＰＦ級、体重１５０～２００ｇ。
１材料及び方法
１．１実験動物
Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、雄、ＳＰＦ級、体重１５０～２００ｇ。
【0016】
【化3】
【0017】
１．３実験方法
１．３．１神経因性疼痛動物モデルの作製
試験では、Ｌ５脊髄神経（ＳＮＬ）の単独結紮による神経因性疼痛モデルを用いた。７％ホルムアルデヒド水和物（用量４２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与）を用いて動物を麻酔し、ラットの四肢を腹臥位に固定し、解剖顕微鏡下で置き、背中の毛を除去し、アルコールで拭き消毒した。背中の脊椎の右側に約２～３ｃｍの長い切り口を切り、Ｌ４、Ｌ５の２本の脊髄神経を露出し、隣接する脊髄神経を損傷しないように６～０番号の編み糸でＬ５脊髄神経を軽く結紮した。実験動物の背中の切り口に二層縫合を行い、ヨードチンキで消毒し、飼育ケージに軽く入れ、自由に移動させ、餌を食べて水を飲んだ。
１．３．１神経因性疼痛動物モデルの作製
試験では、Ｌ５脊髄神経（ＳＮＬ）の単独結紮による神経因性疼痛モデルを用いた。７％ホルムアルデヒド水和物（用量４２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与）を用いて動物を麻酔し、ラットの四肢を腹臥位に固定し、解剖顕微鏡下で置き、背中の毛を除去し、アルコールで拭き消毒した。背中の脊椎の右側に約２～３ｃｍの長い切り口を切り、Ｌ４、Ｌ５の２本の脊髄神経を露出し、隣接する脊髄神経を損傷しないように６～０番号の編み糸でＬ５脊髄神経を軽く結紮した。実験動物の背中の切り口に二層縫合を行い、ヨードチンキで消毒し、飼育ケージに軽く入れ、自由に移動させ、餌を食べて水を飲んだ。
【0018】
１．３．２機械的痛み閾値の測定方法
全ての実験動物は、機械的自動型刺針を用いて実験動物の機械的足反射閾値（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ、ＭＷＴ）を測定した。実験動物を底が鉄条網である透明な有機ガラス箱に入れ、３０ｍｉｎ適応させた後、刺し針を用いて一定の速度で付勢して実験動物の後肢足底を刺激し、ラットが急速に足を縮めたり足を振ったりする反応が現れた時の反射閾値（ＭＷＴ）、すなわち動物の機械的痛み閾値を記録した。
全ての実験動物は、機械的自動型刺針を用いて実験動物の機械的足反射閾値（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ、ＭＷＴ）を測定した。実験動物を底が鉄条網である透明な有機ガラス箱に入れ、３０ｍｉｎ適応させた後、刺し針を用いて一定の速度で付勢して実験動物の後肢足底を刺激し、ラットが急速に足を縮めたり足を振ったりする反応が現れた時の反射閾値（ＭＷＴ）、すなわち動物の機械的痛み閾値を記録した。
【0019】
１．３．３動物基礎痛み閾値の測定及び計算
各実験動物はモデル構築後に２日間の基礎機械的痛み閾値を測定し、２回の平均値を実験動物の基礎機械的痛み閾値とした。
各実験動物はモデル構築後に２日間の基礎機械的痛み閾値を測定し、２回の平均値を実験動物の基礎機械的痛み閾値とした。
【0020】
１．４ 動物の群分け及び実験過程
実験モデル動物は、モデル対照群、プレガバリン群（２５ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（０．５ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（１０ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（０．５ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物５０：１群（プレガバリン２５ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール０．５ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：２０群（プレガバリン０．５ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ）という７群にランダムに分けた。プレガバリンとリルゾールを腹腔内注射で投与し、各群あたり１１～１２匹の動物であり、モデル対照群に対応するブランク溶媒を投与した。
適当な体重のＳＤラットを選択してＬ５－ＳＮＬモデルを作製し、モデルを構築してから少なくとも７日間後に術後機械的痛み閾値を測定した。術後右後肢痛み閾値が反対側の後肢痛み閾値よりも有意に低下した動物を選択して後の全ての薬効試験を行った。実験モデル動物には対応する薬物又は溶媒を投与し、投与後０．５ｈ、３ｈの時点で動物機械的痛み閾値を測定した。
実験モデル動物は、モデル対照群、プレガバリン群（２５ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（０．５ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（１０ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（０．５ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物５０：１群（プレガバリン２５ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール０．５ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：２０群（プレガバリン０．５ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ）という７群にランダムに分けた。プレガバリンとリルゾールを腹腔内注射で投与し、各群あたり１１～１２匹の動物であり、モデル対照群に対応するブランク溶媒を投与した。
適当な体重のＳＤラットを選択してＬ５－ＳＮＬモデルを作製し、モデルを構築してから少なくとも７日間後に術後機械的痛み閾値を測定した。術後右後肢痛み閾値が反対側の後肢痛み閾値よりも有意に低下した動物を選択して後の全ての薬効試験を行った。実験モデル動物には対応する薬物又は溶媒を投与し、投与後０．５ｈ、３ｈの時点で動物機械的痛み閾値を測定した。
【0021】
１．５組成物の相乗的分析
金正均の式であるｑ＝Ｅ（ａ＋ｂ）／（Ｅａ＋Ｅｂ－Ｅａ×Ｅｂ）に従って組成物中のプレガバリンとリルゾールの相乗作用の有無を評価した。式中、Ｅ（ａ＋ｂ）は、医薬品併用による改善率であり、Ｅａ、Ｅｂは、それぞれＡ薬（プレガバリン）、Ｂ薬（リルゾール）の単独投与による改善率である。Ｅ＝（投与後痛み閾値－モデル値）／（基礎値－モデル値）。ｑ値が０．８５～１．１５の範囲内にある場合、両方の医薬品の併用により単純な相加になり、ｑ値＞１．１５である場合、相乗的であり、ｑ値＜０．８５である場合、両方の医薬品の併用により拮抗作用があることを示した。
金正均の式であるｑ＝Ｅ（ａ＋ｂ）／（Ｅａ＋Ｅｂ－Ｅａ×Ｅｂ）に従って組成物中のプレガバリンとリルゾールの相乗作用の有無を評価した。式中、Ｅ（ａ＋ｂ）は、医薬品併用による改善率であり、Ｅａ、Ｅｂは、それぞれＡ薬（プレガバリン）、Ｂ薬（リルゾール）の単独投与による改善率である。Ｅ＝（投与後痛み閾値－モデル値）／（基礎値－モデル値）。ｑ値が０．８５～１．１５の範囲内にある場合、両方の医薬品の併用により単純な相加になり、ｑ値＞１．１５である場合、相乗的であり、ｑ値＜０．８５である場合、両方の医薬品の併用により拮抗作用があることを示した。
【0022】
１．６データ統計
実験データは、平均値±標準誤差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で表された。一元配置分散分析により各群間での差を分析し、群間の比較では最小有意差法（ＬＳＤ法）により検査し、Ｐ＜０．０５では有意差と定義された。
実験データは、平均値±標準誤差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で表された。一元配置分散分析により各群間での差を分析し、群間の比較では最小有意差法（ＬＳＤ法）により検査し、Ｐ＜０．０５では有意差と定義された。
【0023】
２結果
実験結果を表１に示した。溶媒対照群と比較しては、プレガバリン２５ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ、組成物５０：１、組成物１：２０は、投与後０．５ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＝０．０４６３、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０４５８、Ｐ＜０．０００１）、以上の各群では、投与後３ｈにもいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができた（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０００４、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）。相乗作用計算の結果は、組成物５０：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．０７３、０．９１９であり、組成物１：２０は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ０．９０９、０．９９８であることを示した。
データは平均値±標準誤差として表され、＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、モデル対照群と比較した。
実験結果を表１に示した。溶媒対照群と比較しては、プレガバリン２５ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ、組成物５０：１、組成物１：２０は、投与後０．５ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＝０．０４６３、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０４５８、Ｐ＜０．０００１）、以上の各群では、投与後３ｈにもいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができた（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０００４、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）。相乗作用計算の結果は、組成物５０：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．０７３、０．９１９であり、組成物１：２０は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ０．９０９、０．９９８であることを示した。
【表1】
データは平均値±標準誤差として表され、＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、モデル対照群と比較した。
【0024】
実施例２ プレガバリン、リルゾール組成物の神経因性疼痛に対する薬効作用への研究２
１材料及び方法
１．１実験動物
Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、雄、ＳＰＦ級、体重１５０～２００ｇ。
１．２被験薬
プレガバリン及びリルゾールは、実施例１と同様にした。
１．３実験方法
神経因性疼痛動物モデルの作製、機械的痛み閾値の測定方法、及び動物基礎痛み閾値の測定・計算は、実施例１と同様にした。
１材料及び方法
１．１実験動物
Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、雄、ＳＰＦ級、体重１５０～２００ｇ。
１．２被験薬
プレガバリン及びリルゾールは、実施例１と同様にした。
１．３実験方法
神経因性疼痛動物モデルの作製、機械的痛み閾値の測定方法、及び動物基礎痛み閾値の測定・計算は、実施例１と同様にした。
【0025】
１．４動物群分け及び実験過程
実験モデル動物は、モデル対照群、プレガバリン群（２０ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（１ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（１０ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（１ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物２０：１群（プレガバリン２０ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：１０群（プレガバリン１ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ）という７群にランダムに分けた。プレガバリン及びリルゾールを腹腔内注射で投与し、各群あたり１２匹の動物であり、モデル対照群に対応するブランク溶媒を投与した。
適当な体重のＳＤラットを選択してＬ５－ＳＮＬモデルを作製し、モデルを構築してから少なくとも７日間後に術後機械的痛み閾値を測定した。術後右後肢痛み閾値が反対側の後肢痛み閾値よりも有意に低下した動物を選択して後の全ての薬効試験を行った。実験モデル動物には対応する薬物又は溶媒を投与し、投与後０．５ｈ、３ｈの時点で動物機械的痛み閾値を測定した。
１．５組成物の相乗的分析
組成物の相乗的分析は、実施例１と同様にした。
１．６データ統計
データ統計は、実施例１と同様にした。
実験モデル動物は、モデル対照群、プレガバリン群（２０ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（１ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（１０ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（１ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物２０：１群（プレガバリン２０ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：１０群（プレガバリン１ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ）という７群にランダムに分けた。プレガバリン及びリルゾールを腹腔内注射で投与し、各群あたり１２匹の動物であり、モデル対照群に対応するブランク溶媒を投与した。
適当な体重のＳＤラットを選択してＬ５－ＳＮＬモデルを作製し、モデルを構築してから少なくとも７日間後に術後機械的痛み閾値を測定した。術後右後肢痛み閾値が反対側の後肢痛み閾値よりも有意に低下した動物を選択して後の全ての薬効試験を行った。実験モデル動物には対応する薬物又は溶媒を投与し、投与後０．５ｈ、３ｈの時点で動物機械的痛み閾値を測定した。
１．５組成物の相乗的分析
組成物の相乗的分析は、実施例１と同様にした。
１．６データ統計
データ統計は、実施例１と同様にした。
【0026】
２結果
実験結果を表２に示した。溶媒対照群と比較しては、プレガバリン２０ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ、組成物２０：１、組成物１：１０は投与後０．５ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＝０．０２７８、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０４８３、Ｐ＜０．０００１）、以上の各群では投与後３ｈにも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができた（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）。相乗作用計算の結果は：組成物２０：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２１６、１．１８１であり、組成物１：１０は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２０６、１．２１３であり、これにより、組成物２０：１、組成物１：１０は投与後０．５ｈ、３ｈにいずれも相乗作用を持つことを示した。
データは平均値±標準誤差として表され、＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、モデル対照群と比較された。
実験結果を表２に示した。溶媒対照群と比較しては、プレガバリン２０ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ、組成物２０：１、組成物１：１０は投与後０．５ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＝０．０２７８、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０４８３、Ｐ＜０．０００１）、以上の各群では投与後３ｈにも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができた（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）。相乗作用計算の結果は：組成物２０：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２１６、１．１８１であり、組成物１：１０は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２０６、１．２１３であり、これにより、組成物２０：１、組成物１：１０は投与後０．５ｈ、３ｈにいずれも相乗作用を持つことを示した。
【表2】
データは平均値±標準誤差として表され、＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、モデル対照群と比較された。
【0027】
実施例３ プレガバリン、リルゾール組成物の神経因性疼痛に対する薬効作用への研究３
１材料及び方法
１．１実験動物
Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、雄、ＳＰＦ級、体重１５０－２００ｇ。
１．２被験薬
プレガバリン及びリルゾールは、実施例１と同様にした。
１．３実験方法
神経因性疼痛動物モデルの作製、機械的痛み閾値の測定方法、及び動物基礎痛み閾値的測定・計算は、実施例１と同様にした。
１材料及び方法
１．１実験動物
Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、雄、ＳＰＦ級、体重１５０－２００ｇ。
１．２被験薬
プレガバリン及びリルゾールは、実施例１と同様にした。
１．３実験方法
神経因性疼痛動物モデルの作製、機械的痛み閾値の測定方法、及び動物基礎痛み閾値的測定・計算は、実施例１と同様にした。
【0028】
１．４動物群分け及び実験過程
実験モデル動物は、モデル対照群、プレガバリン群（３０ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（１８ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（３ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（１２ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１０：１群（プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：４群（プレガバリン３ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１２ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物６：１群（プレガバリン１８ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール３ｍｇ／ｋｇ）という９群にランダムに分けた。プレガバリン及びリルゾールを腹腔内注射で投与し、各群あたり１０～１２匹の動物であり、モデル対照群に対応するブランク溶媒を投与した。
適当な体重のＳＤラットを選択してＬ５－ＳＮＬモデルを作製し、モデルを構築してから少なくとも７日間後に術後機械的痛み閾値を測定した。術後右後肢痛み閾値が反対側の後肢痛み閾値よりも有意に低下した動物を選択して後の全ての薬効試験を行った。実験モデル動物には対応する薬物又は溶媒を投与し、投与後０．５ｈ、３ｈの時点で動物機械的痛み閾値を測定した。
１．５組成物の相乗的分析
組成物の相乗的分析は、実施例１と同様にした。
１．６データ統計
データ統計は、実施例１と同様にした。
実験モデル動物は、モデル対照群、プレガバリン群（３０ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（１８ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（３ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（１２ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１０：１群（プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：４群（プレガバリン３ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１２ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物６：１群（プレガバリン１８ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール３ｍｇ／ｋｇ）という９群にランダムに分けた。プレガバリン及びリルゾールを腹腔内注射で投与し、各群あたり１０～１２匹の動物であり、モデル対照群に対応するブランク溶媒を投与した。
適当な体重のＳＤラットを選択してＬ５－ＳＮＬモデルを作製し、モデルを構築してから少なくとも７日間後に術後機械的痛み閾値を測定した。術後右後肢痛み閾値が反対側の後肢痛み閾値よりも有意に低下した動物を選択して後の全ての薬効試験を行った。実験モデル動物には対応する薬物又は溶媒を投与し、投与後０．５ｈ、３ｈの時点で動物機械的痛み閾値を測定した。
１．５組成物の相乗的分析
組成物の相乗的分析は、実施例１と同様にした。
１．６データ統計
データ統計は、実施例１と同様にした。
【0029】
２結果
実験結果を表３に示した。溶媒対照群と比較しては、プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１２ｍｇ／ｋｇ、組成物１０：１、組成物１：４、組成物６：１は投与後０．５ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＝０．０１１１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．００３）、プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン１８ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１２ｍｇ／ｋｇ、組成物１０：１、組成物１：４、組成物６：１は投与後３ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができた（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）。相乗作用計算の結果は、組成物１０：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２７３、１．１８２であり、組成物１：４は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２１０、１．２１１であり、組成物６：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２２２、１．２６９であり、それにより、組成物１０：１、組成物１：４、組成物６：１は投与後０．５ｈ、３ｈにいずれも相乗作用を持つことを示した。
データは平均値±標準誤差として表され、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、モデル対照群と比較された。
実験結果を表３に示した。溶媒対照群と比較しては、プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１２ｍｇ／ｋｇ、組成物１０：１、組成物１：４、組成物６：１は投与後０．５ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＝０．０１１１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．００３）、プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン１８ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１２ｍｇ／ｋｇ、組成物１０：１、組成物１：４、組成物６：１は投与後３ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができた（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）。相乗作用計算の結果は、組成物１０：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２７３、１．１８２であり、組成物１：４は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２１０、１．２１１であり、組成物６：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２２２、１．２６９であり、それにより、組成物１０：１、組成物１：４、組成物６：１は投与後０．５ｈ、３ｈにいずれも相乗作用を持つことを示した。
【表3】
データは平均値±標準誤差として表され、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、モデル対照群と比較された。
【0030】
実施例４ プレガバリン、リルゾール組成物の神経因性疼痛に対する薬効作用への研究４
１材料及び方法
１．１実験動物
Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、雄、ＳＰＦ級、体重１５０～２００ｇ。
１．２被験薬
プレガバリン及びリルゾールは、実施例１と同様にした。
１．３実験方法
神経因性疼痛動物モデルの作製、機械的痛み閾値の測定方法、及び動物基礎痛み閾値の測定・計算は、実施例１と同様にした。
１．４動物群分け及び実験過程
実験モデル動物は、モデル対照群、プレガバリン群（１８ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（９ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（３ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（１２ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（６ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物６：１群（プレガバリン１８ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物３：１群（プレガバリン９ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：４群（プレガバリン３ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１２ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：２群（プレガバリン３ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール６ｍｇ／ｋｇ）という１１群にランダムに分けた。プレガバリン及びリルゾールを腹腔内注射で投与し、各群あたり１０匹の動物であり、モデル対照群に対応するブランク溶媒を投与した。
適当な体重のＳＤラットを選択してＬ５－ＳＮＬモデルを作製し、モデルを構築してから少なくとも７日間後に術後機械的痛み閾値を測定した。術後右後肢痛み閾値が反対側の後肢痛み閾値よりも有意に低下した動物を選択して後の全ての薬効試験を行った。実験モデル動物には対応する薬物又は溶媒を投与し、投与後０．５ｈ、３ｈの時点で動物機械的痛み閾値を測定した。
１材料及び方法
１．１実験動物
Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、雄、ＳＰＦ級、体重１５０～２００ｇ。
１．２被験薬
プレガバリン及びリルゾールは、実施例１と同様にした。
１．３実験方法
神経因性疼痛動物モデルの作製、機械的痛み閾値の測定方法、及び動物基礎痛み閾値の測定・計算は、実施例１と同様にした。
１．４動物群分け及び実験過程
実験モデル動物は、モデル対照群、プレガバリン群（１８ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（９ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（３ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（１２ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（６ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物６：１群（プレガバリン１８ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物３：１群（プレガバリン９ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：４群（プレガバリン３ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１２ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：２群（プレガバリン３ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール６ｍｇ／ｋｇ）という１１群にランダムに分けた。プレガバリン及びリルゾールを腹腔内注射で投与し、各群あたり１０匹の動物であり、モデル対照群に対応するブランク溶媒を投与した。
適当な体重のＳＤラットを選択してＬ５－ＳＮＬモデルを作製し、モデルを構築してから少なくとも７日間後に術後機械的痛み閾値を測定した。術後右後肢痛み閾値が反対側の後肢痛み閾値よりも有意に低下した動物を選択して後の全ての薬効試験を行った。実験モデル動物には対応する薬物又は溶媒を投与し、投与後０．５ｈ、３ｈの時点で動物機械的痛み閾値を測定した。
【0031】
１．５組成物の相乗的分析
組成物の相乗的分析は、実施例１と同様にした。
１．６データ統計
データ統計は、実施例１と同様にした。
２結果
実験結果を表４に示した。溶媒対照群と比較しては、リルゾール１２ｍｇ／ｋｇ、リルゾール６ｍｇ／ｋｇ、組成物６：１、組成物３：１、組成物１：４、組成物１：２は投与後０．５ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．００３１、Ｐ＝０．００３３、Ｐ＝０．０１２３、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）、プレガバリン１８ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン９ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１２ｍｇ／ｋｇ、リルゾール６ｍｇ／ｋｇ、組成物６：１、組成物３：１、組成物１：４、組成物１：２は投与後３ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができた（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０４２７、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）。相乗作用計算の結果は：組成物６：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２５０、１．２４８であり、組成物３：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．３８９、１．３９１であり、組成物１：４は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２３５、１．２９４であり、組成物１：２は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．３２０、１．３８４であり、それにより、組成物６：１、組成物３：１、組成物１：４、組成物１：２は投与後０．５ｈ、３ｈにいずれも相乗作用を持つことを示した。
データは平均値±標準誤差として表され、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、モデル対照群と比較された。
組成物の相乗的分析は、実施例１と同様にした。
１．６データ統計
データ統計は、実施例１と同様にした。
２結果
実験結果を表４に示した。溶媒対照群と比較しては、リルゾール１２ｍｇ／ｋｇ、リルゾール６ｍｇ／ｋｇ、組成物６：１、組成物３：１、組成物１：４、組成物１：２は投与後０．５ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．００３１、Ｐ＝０．００３３、Ｐ＝０．０１２３、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）、プレガバリン１８ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン９ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１２ｍｇ／ｋｇ、リルゾール６ｍｇ／ｋｇ、組成物６：１、組成物３：１、組成物１：４、組成物１：２は投与後３ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができた（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０４２７、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）。相乗作用計算の結果は：組成物６：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２５０、１．２４８であり、組成物３：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．３８９、１．３９１であり、組成物１：４は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．２３５、１．２９４であり、組成物１：２は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．３２０、１．３８４であり、それにより、組成物６：１、組成物３：１、組成物１：４、組成物１：２は投与後０．５ｈ、３ｈにいずれも相乗作用を持つことを示した。
【表4】
データは平均値±標準誤差として表され、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、モデル対照群と比較された。
【0032】
実施例５ プレガバリン、リルゾール組成物の神経因性疼痛に対する薬効作用への研究５
１材料及び方法
１．１実験動物
Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、雄、ＳＰＦ級、体重１５０～２００ｇ。
１．２被験薬
プレガバリン及びリルゾールは、実施例１と同様にした。
１．３実験方法
神経因性疼痛動物モデルの作製、機械的痛み閾値の測定方法、及び動物基礎痛み閾値の測定・計算は、実施例１と同様にした。
１．４動物群分け及び実験過程
実験モデル動物は、モデル対照群、プレガバリン群（９ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（６ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（３ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（６ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物３：１群（プレガバリン９ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：２群（プレガバリン３ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール６ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：１群（プレガバリン６ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール６ｍｇ／ｋｇ）という９群に分けた。プレガバリン及びリルゾールを腹腔内注射で投与し、各群あたり１０～１１匹の動物であり、モデル対照群に対応するブランク溶媒を投与した。
適当な体重のＳＤラットを選択してＬ５－ＳＮＬモデルを作製し、モデルを構築してから少なくとも７日間後に術後機械的痛み閾値を測定した。術後右後肢痛み閾値が反対側の後肢痛み閾値よりも有意に低下した動物を選択して後の全ての薬効試験を行った。実験モデル動物には対応する薬物又は溶媒を投与し、投与後０．５ｈ、３ｈの時点で動物機械的痛み閾値を測定した。
１材料及び方法
１．１実験動物
Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、雄、ＳＰＦ級、体重１５０～２００ｇ。
１．２被験薬
プレガバリン及びリルゾールは、実施例１と同様にした。
１．３実験方法
神経因性疼痛動物モデルの作製、機械的痛み閾値の測定方法、及び動物基礎痛み閾値の測定・計算は、実施例１と同様にした。
１．４動物群分け及び実験過程
実験モデル動物は、モデル対照群、プレガバリン群（９ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（６ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（３ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（６ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物３：１群（プレガバリン９ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール３ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：２群（プレガバリン３ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール６ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：１群（プレガバリン６ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール６ｍｇ／ｋｇ）という９群に分けた。プレガバリン及びリルゾールを腹腔内注射で投与し、各群あたり１０～１１匹の動物であり、モデル対照群に対応するブランク溶媒を投与した。
適当な体重のＳＤラットを選択してＬ５－ＳＮＬモデルを作製し、モデルを構築してから少なくとも７日間後に術後機械的痛み閾値を測定した。術後右後肢痛み閾値が反対側の後肢痛み閾値よりも有意に低下した動物を選択して後の全ての薬効試験を行った。実験モデル動物には対応する薬物又は溶媒を投与し、投与後０．５ｈ、３ｈの時点で動物機械的痛み閾値を測定した。
【0033】
１．５組成物の相乗的分析
組成物の相乗的分析は、実施例１と同様にした。
１．６データ統計
データ統計は、実施例１と同様にした。
２結果
実験結果を表５に示した。溶媒対照群と比較しては、リルゾール６ｍｇ／ｋｇ、組成物３：１、組成物１：２、組成物１：１は投与後０．５ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＝０．００１１、Ｐ＝０．０００６、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）、プレガバリン９ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン６ｍｇ／ｋｇ、リルゾール６ｍｇ／ｋｇ、組成物３：１、組成物１：２、組成物１：１は投与後３ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができた（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．００１５、Ｐ＝０．０３１５、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）。相乗作用計算の結果は：組成物３：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．３６２、１．３８４であり、組成物１：２は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．３３０、１．３６１であり、組成物１：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．４５３、１．５０１であり、それにより、組成物３：１、組成物１：２、組成物１：１は投与後０．５ｈ、３ｈにいずれも相乗作用を持つことを示した。
データは平均値±標準誤差として表され、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、モデル対照群と比較された。
組成物の相乗的分析は、実施例１と同様にした。
１．６データ統計
データ統計は、実施例１と同様にした。
２結果
実験結果を表５に示した。溶媒対照群と比較しては、リルゾール６ｍｇ／ｋｇ、組成物３：１、組成物１：２、組成物１：１は投与後０．５ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＝０．００１１、Ｐ＝０．０００６、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）、プレガバリン９ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン６ｍｇ／ｋｇ、リルゾール６ｍｇ／ｋｇ、組成物３：１、組成物１：２、組成物１：１は投与後３ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができた（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．００１５、Ｐ＝０．０３１５、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）。相乗作用計算の結果は：組成物３：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．３６２、１．３８４であり、組成物１：２は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．３３０、１．３６１であり、組成物１：１は投与後０．５ｈ及び３ｈにｑ値がそれぞれ１．４５３、１．５０１であり、それにより、組成物３：１、組成物１：２、組成物１：１は投与後０．５ｈ、３ｈにいずれも相乗作用を持つことを示した。
【表5】
データは平均値±標準誤差として表され、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、モデル対照群と比較された。
【0034】
実施例６ プレガバリン、リルゾール組成物の神経因性疼痛に対する薬効作用への研究６
１材料及び方法
１．１実験動物
Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、雄、ＳＰＦ級、体重１５０～２００ｇ。
１．２被験薬
プレガバリン及びリルゾールは、実施例１と同様にした。
１．３実験方法
神経因性疼痛動物モデルの作製、機械的痛み閾値の測定方法、及び動物基礎痛み閾値の測定・計算は、実施例１と同様にした。
１材料及び方法
１．１実験動物
Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、雄、ＳＰＦ級、体重１５０～２００ｇ。
１．２被験薬
プレガバリン及びリルゾールは、実施例１と同様にした。
１．３実験方法
神経因性疼痛動物モデルの作製、機械的痛み閾値の測定方法、及び動物基礎痛み閾値の測定・計算は、実施例１と同様にした。
【0035】
１．４動物群分け及び実験過程
実験モデル動物は、モデル対照群、プレガバリン群（３０ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（２０ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（６ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（１０ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（７．５ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（６ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：１群（プレガバリン６ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール６ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物２：１群（プレガバリン２０ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物３：１群（プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物４：１群（プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール７．５ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物５：１群（プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール６ｍｇ／ｋｇ）という１１群にランダムにわけた。プレガバリン及びリルゾールを胃内投与し、各群あたり８～１０匹の動物であり、モデル対照群に対応するブランク溶媒を投与した。
適当な体重のＳＤラットを選択してＬ５－ＳＮＬモデルを作製し、モデルを構築してから少なくとも７日間後に術後機械的痛み閾値を測定した。術後右後肢痛み閾値が反対側の後肢痛み閾値よりも有意に低下した動物を選択して後の全ての薬効試験を行った。実験モデル動物に対応する医薬品又は溶媒を投与し、投与後０．５ｈ、３ｈ、６ｈ、８ｈの時点で動物機械的痛み閾値を測定した。
１．５組成物の相乗的分析
金正均の式であるｑ＝Ｅ（ａ＋ｂ）／（Ｅａ＋Ｅｂ－Ｅａ×Ｅｂ）に従って組成物中のプレガバリンとリルゾールの投与後Ｅｍａｘ時点（３ｈ）での相乗作用の有無を評価した。式中、Ｅ（ａ＋ｂ）は、医薬品併用による改善率であり、Ｅａ、Ｅｂは、それぞれＡ薬（プレガバリン）、Ｂ薬（リルゾール）の単独投与による改善率である。Ｅ＝（投与後痛み閾値－モデル値）／（基礎値－モデル値）。ｑ値は０．８５～１．１５の範囲内である場合、両方の医薬品の併用により単純な相加になり、ｑ値＞１．１５である場合相乗効果をもち、ｑ値＜０．８５である場合、両方の医薬品の併用により拮抗作用があることを示した。
ＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェアにより組成物中のプレガバリンとリルゾールの投与後０～８ｈの全体的な薬効の相乗作用の有無を分析した。医薬品群の改善率の計算式は、（ＡＵＣ０－８ｈ－モデル値＊８ｈ）／（基礎値＊８ｈ－モデル値＊８ｈ）である。ソフトウェアにより各組成物群の併用指数（ＣＩ）を算出し、ＣＩ＜１である場合、相乗作用をもち、ＣＩ＝１である場合、相加作用を有し、ＣＩ＞１である場合、両方の医薬品の併用により拮抗作用を有することを示した。
１．６データ統計
データ統計は、実施例１と同様にした。
実験モデル動物は、モデル対照群、プレガバリン群（３０ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（２０ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン群（６ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（１０ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（７．５ｍｇ／ｋｇ）、リルゾール群（６ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物１：１群（プレガバリン６ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール６ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物２：１群（プレガバリン２０ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物３：１群（プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物４：１群（プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール７．５ｍｇ／ｋｇ）、プレガバリン・リルゾール組成物５：１群（プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ＋リルゾール６ｍｇ／ｋｇ）という１１群にランダムにわけた。プレガバリン及びリルゾールを胃内投与し、各群あたり８～１０匹の動物であり、モデル対照群に対応するブランク溶媒を投与した。
適当な体重のＳＤラットを選択してＬ５－ＳＮＬモデルを作製し、モデルを構築してから少なくとも７日間後に術後機械的痛み閾値を測定した。術後右後肢痛み閾値が反対側の後肢痛み閾値よりも有意に低下した動物を選択して後の全ての薬効試験を行った。実験モデル動物に対応する医薬品又は溶媒を投与し、投与後０．５ｈ、３ｈ、６ｈ、８ｈの時点で動物機械的痛み閾値を測定した。
１．５組成物の相乗的分析
金正均の式であるｑ＝Ｅ（ａ＋ｂ）／（Ｅａ＋Ｅｂ－Ｅａ×Ｅｂ）に従って組成物中のプレガバリンとリルゾールの投与後Ｅｍａｘ時点（３ｈ）での相乗作用の有無を評価した。式中、Ｅ（ａ＋ｂ）は、医薬品併用による改善率であり、Ｅａ、Ｅｂは、それぞれＡ薬（プレガバリン）、Ｂ薬（リルゾール）の単独投与による改善率である。Ｅ＝（投与後痛み閾値－モデル値）／（基礎値－モデル値）。ｑ値は０．８５～１．１５の範囲内である場合、両方の医薬品の併用により単純な相加になり、ｑ値＞１．１５である場合相乗効果をもち、ｑ値＜０．８５である場合、両方の医薬品の併用により拮抗作用があることを示した。
ＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェアにより組成物中のプレガバリンとリルゾールの投与後０～８ｈの全体的な薬効の相乗作用の有無を分析した。医薬品群の改善率の計算式は、（ＡＵＣ０－８ｈ－モデル値＊８ｈ）／（基礎値＊８ｈ－モデル値＊８ｈ）である。ソフトウェアにより各組成物群の併用指数（ＣＩ）を算出し、ＣＩ＜１である場合、相乗作用をもち、ＣＩ＝１である場合、相加作用を有し、ＣＩ＞１である場合、両方の医薬品の併用により拮抗作用を有することを示した。
１．６データ統計
データ統計は、実施例１と同様にした。
【0036】
２結果
実験結果を表６に示した。溶媒対照群と比較しては、プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ、リルゾール７．５ｍｇ／ｋｇ、リルゾール６ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン・リルゾール組成物１：１、プレガバリン・リルゾール組成物２：１、プレガバリン・リルゾール組成物３：１、プレガバリン・リルゾール組成物４：１、プレガバリン・リルゾール組成物５：１は投与後０．５ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＝０．０１８、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）；プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン２０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン６ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ、組成物１：１、組成物２：１、組成物３：１、組成物４：１、組成物５：１は投与後３ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０００８、Ｐ＝０．０２３、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）；プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン２０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン６ｍｇ／ｋｇ、組成物１：１、組成物２：１、組成物３：１、組成物４：１、組成物５：１は投与後６ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０００７、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）；プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン２０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン６ｍｇ／ｋｇ、組成物１：１、組成物２：１、組成物３：１、組成物４：１、組成物５：１は投与後８ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができた（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０００８、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）。金正均の式による相乗作用性を計算したところ、組成物１：１は、投与後３ｈにｑ値が１．２９６であり、組成物２：１は、投与後３ｈにｑ値が１．２５８であり、組成物３：１は、投与後３ｈにｑ値が１．２６６であり、組成物４：１は、投与後３ｈにｑ値が１．３１９であり、組成物５：１は、投与後３ｈにｑ値が１．２６４であり、それにより、組成物１：１、組成物２：１、組成物３：１、組成物４：１、組成物５：１は投与後３ｈにいずれも相乗作用を有し；ＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェアの分析により、組成物１：１は投与後のＡＵＣのＣＩ値が０．６３４であり、組成物２：１は投与後のＡＵＣのＣＩ値が０．３６４であり、組成物３：１は投与後のＡＵＣのＣＩ値が０．３４９であり、組成物４：１は投与後のＡＵＣのＣＩ値が０．３２８であり、組成物５：１は投与後のＡＵＣのＣＩ値が０．３４９であり、それにより、組成物１：１、組成物２：１、組成物３：１、組成物４：１、組成物５：１は投与後０～８ｈにいずれも相乗作用を有することを示した。
データは平均値±標準誤差として表され、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、モデル対照群と比較された。
実験結果を表６に示した。溶媒対照群と比較しては、プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ、リルゾール７．５ｍｇ／ｋｇ、リルゾール６ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン・リルゾール組成物１：１、プレガバリン・リルゾール組成物２：１、プレガバリン・リルゾール組成物３：１、プレガバリン・リルゾール組成物４：１、プレガバリン・リルゾール組成物５：１は投与後０．５ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＝０．０１８、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）；プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン２０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン６ｍｇ／ｋｇ、リルゾール１０ｍｇ／ｋｇ、組成物１：１、組成物２：１、組成物３：１、組成物４：１、組成物５：１は投与後３ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０００８、Ｐ＝０．０２３、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）；プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン２０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン６ｍｇ／ｋｇ、組成物１：１、組成物２：１、組成物３：１、組成物４：１、組成物５：１は投与後６ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができ（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０００７、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）；プレガバリン３０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン２０ｍｇ／ｋｇ、プレガバリン６ｍｇ／ｋｇ、組成物１：１、組成物２：１、組成物３：１、組成物４：１、組成物５：１は投与後８ｈにいずれも動物の機械的痛み閾値を有意に向上させることができた（Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＝０．０００８、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．０００１）。金正均の式による相乗作用性を計算したところ、組成物１：１は、投与後３ｈにｑ値が１．２９６であり、組成物２：１は、投与後３ｈにｑ値が１．２５８であり、組成物３：１は、投与後３ｈにｑ値が１．２６６であり、組成物４：１は、投与後３ｈにｑ値が１．３１９であり、組成物５：１は、投与後３ｈにｑ値が１．２６４であり、それにより、組成物１：１、組成物２：１、組成物３：１、組成物４：１、組成物５：１は投与後３ｈにいずれも相乗作用を有し；ＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェアの分析により、組成物１：１は投与後のＡＵＣのＣＩ値が０．６３４であり、組成物２：１は投与後のＡＵＣのＣＩ値が０．３６４であり、組成物３：１は投与後のＡＵＣのＣＩ値が０．３４９であり、組成物４：１は投与後のＡＵＣのＣＩ値が０．３２８であり、組成物５：１は投与後のＡＵＣのＣＩ値が０．３４９であり、それにより、組成物１：１、組成物２：１、組成物３：１、組成物４：１、組成物５：１は投与後０～８ｈにいずれも相乗作用を有することを示した。
【表6】
データは平均値±標準誤差として表され、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、モデル対照群と比較された。
【国際調査報告】