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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-06-28
(54)【発明の名称】官能化されたＮ－アセチルガラクトサミンヌクレオシド
(51)【国際特許分類】
C07H 19/073 20060101AFI20240621BHJP
C07H 19/14 20060101ALI20240621BHJP
C07H 21/04 20060101ALI20240621BHJP
C07H 1/02 20060101ALI20240621BHJP
A61K 47/54 20170101ALN20240621BHJP
A61P 1/16 20060101ALN20240621BHJP
A61K 31/7072 20060101ALN20240621BHJP
A61K 31/7064 20060101ALN20240621BHJP
C12N 15/11 20060101ALN20240621BHJP
【ＦＩ】
C07H19/073
C07H19/14 CSP
C07H21/04 Z
C07H1/02
A61K47/54
A61P1/16
A61K31/7072
A61K31/7064
C12N15/11 Z ZNA
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023575913
(86)(22)【出願日】2022-06-16
(85)【翻訳文提出日】2024-02-05
(86)【国際出願番号】 US2022033781
(87)【国際公開番号】W WO2022266316
(87)【国際公開日】2022-12-22
(31)【優先権主張番号】63/212,519
(32)【優先日】2021-06-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523460578
【氏名又は名称】ホンジーン バイオテック コーポレイション
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】グアン， シャオヤン
(72)【発明者】
【氏名】ユー， デイビッド
(72)【発明者】
【氏名】ゾウ， ルイミン
(72)【発明者】
【氏名】ジェン， シャオリン
(72)【発明者】
【氏名】リウ， ジョン
(72)【発明者】
【氏名】ラウ， アルドリッチ エヌ．ケー．
(72)【発明者】
【氏名】プーン， ウィング シー．
(72)【発明者】
【氏名】ジャオ， ガン
(72)【発明者】
【氏名】ドゥ， ゲンユー
(72)【発明者】
【氏名】ヤオ， ユン－チャオ
【テーマコード（参考）】
4C057
4C076
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C057AA22
4C057BB02
4C057BB05
4C057DD03
4C057LL16
4C057LL19
4C057LL26
4C057LL42
4C057MM05
4C076AA95
4C076CC16
4C076CC41
4C076EE59
4C086AA03
4C086EA16
4C086EA17
4C086NA13
4C086ZA75
(57)【要約】
本出願の実施形態は、Ｎ－アセチルガラクトサミンとコンジュゲートしたヌクレオシドに関する。特に、Ｎ－アセチルガラクトサミンは、多種多様なリンカーを通してヌクレオシドの核酸塩基上に導入される。Ｎ－アセチルガラクトサミンとコンジュゲートしたヌクレオシドを作製する方法も、本明細書で開示される。Ｎ－アセチルガラクトサミンは、十分に規定された肝臓標的化部分であり、Ｎ－アセチルガラクトサミンとコンジュゲートしたヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドベースの治療の標的化送達の調製において使用され得る。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）の化合物【化45】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃのそれぞれは、独立に、水素、ベンジル（Ｂｎ）、または－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１Ａであり、
Ｒ２は、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１～６アルキル、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１～６ハロアルキルまたは－Ｃ（＝Ｏ）フェニルであり、
Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、－Ｏ－（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、またはヒドロキシ保護基であり、
Ｒ４は、水素、ホスホロアミダイト部分、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４Ａ、または－Ｐ（ＯＲ４Ｂ）ＮＲ４ＣＲ４Ｄであり、
Ｒ５は、ヒドロキシ保護基であり、
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３のそれぞれは、独立に、結合、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｓ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－、－Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｓ）Ｏ－、－ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－、－ＮＲ６Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６－、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ－、－ＯＰ（＝Ｓ）（ＯＨ）Ｏ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ６－、必要に応じて置換されているＣ１～１０アルキレン、必要に応じて置換されているＣ６～１０アリーレン、必要に応じて置換されているＣ３～１０シクロアルキレン、必要に応じて置換されている５～１０員のヘテロアリーレン、必要に応じて置換されている５～１０員のヘテロシクリレン、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、Ｏ、ＳもしくはＮで置き換えられている必要に応じて置換されている２～１５員のヘテロアルキレンであり、ただし、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３のうちの少なくとも１つは、結合ではなく、
Ｇは、
【化46】
Ｌ４は、結合、必要に応じて置換されているＣ１～１０アルキレン、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、Ｏ、ＳもしくはＮで置き換えられている必要に応じて置換されている２～１５員のヘテロアルキレンであり、
Ｂは、天然核酸塩基、修飾天然核酸塩基、または非天然核酸塩基であり、
各Ｒ１Ａは、独立に、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、または必要に応じて置換されているフェニルであり、
Ｒ４Ａは、－ＯＨ、－ＯＲ８または－ＮＲ９Ｒ１０であり、
Ｒ４Ｂ、Ｒ４ＣおよびＲ４Ｄのそれぞれは、独立に、Ｈ、Ｃ１～６ハロアルキル、または必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルであり、
各Ｒ６は、独立に、Ｈまたは必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルであり、
Ｒ７は、独立に、ハロ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、または－Ｏ－（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキルであり、
Ｒ８は、必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルまたはヒドロキシ保護基であり、
Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、独立に、Ｈ、必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルまたはアミノ保護基である］。
【請求項2】
式（Ｉａ）の構造【化47】
【請求項3】
式（Ｉｂ）の構造【化48】
【請求項4】
Ｂが、【化49】
【請求項5】
Ｒｘが、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１～６アルキルもしくは－Ｃ（＝Ｏ）フェニルであるか、または－ＮＨＲｘの水素が存在せず、Ｒｘが、【化50】
【請求項6】
Ｒｘが、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３または－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項５に記載の化合物。
【請求項7】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃのそれぞれが、独立に、Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３または－Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈである、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項8】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃのそれぞれが、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である、請求項７に記載の化合物。
【請求項9】
Ｒ２が、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３または－Ｃ（＝Ｏ）ＣＦ３である、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項10】
Ｒ３が、Ｈ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－Ｆ、－ＯＣＦ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－Ｏ－ｔｅｒｔブチルジメチルシリル、または－Ｏ－トリ－イソプロピルシリルオキシメチルである、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項11】
Ｒ４が、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項12】
Ｒ４が、【化51】
【請求項13】
Ｒ５が、（４－メトキシフェニル）ジフェニルメチル、ビス（４－メトキシフェニル）フェニルメチル、トリス（４－メトキシフェニル）メチル、９－フェニルキサンテン－９－イルまたは９－（４－メトキシフェニル）キサンテン－９－イルから選択される、トリチルタイプのヒドロキシ保護基である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項14】
Ｌ１が、結合、Ｃ１～１０アルキレン、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、ＯまたはＮで置き換えられている２～１５員のヘテロアルキレンである、請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項15】
Ｌ２が、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－、－ＮＲ６－、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、ＯもしくはＮで置き換えられている２～１５員のヘテロアルキレンである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項16】
Ｒ６が、ＨまたはＣＨ３である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項17】
Ｌ３が、結合、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、ＯもしくはＮで置き換えられている２～１５員のヘテロアルキレンである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項18】
Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３が、－（ＣＨ２）２～６Ｃ（＝Ｏ）－である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項19】
Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３が、－［（ＣＨ２）２Ｏ］１～５－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項20】
Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３が、－［（ＣＨ２）２Ｏ］１～５（ＣＨ２）１～４－である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項21】
Ｌ４が、結合またはＣ１～１０アルキレンである、請求項１～２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項22】
【化52】
【化53】
［式中、Ｒ３は、Ｈ、－Ｆ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－Ｏ－ｔｅｒｔブチルジメチルシリルまたはヒドロキシ保護基であり、
各Ｒｘは、独立に、Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、－Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ、または－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ４は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨまたは
【化54】
【請求項23】
前記化合物のＲ４を介して共有結合している請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物を含む固体支持体。
【請求項24】
前記化合物が、部分【化55】
【請求項25】
前記化合物が、オリゴヌクレオチド配列に組み込まれている、請求項２３または２４に記載の固体支持体。
【請求項26】
合成オリゴヌクレオチドを調製する方法であって、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物をオリゴヌクレオチドと反応させるステップを含む、方法。
【請求項27】
前記オリゴヌクレオチドが、１～１００の核酸塩基長を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
前記反応が、固体支持体上で実施される、請求項２６または２７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
分野
本出願は、Ｎ－アセチルガラクトサミンとコンジュゲートしたヌクレオシドおよびそれらの調製方法に関する。本明細書で開示される、塩基上にＮ－アセチルガラクトサミンをコンジュゲートしたヌクレオシド（Ｎ－ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｏｎ－ｂａｓｅ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）は、オリゴヌクレオチドベースの治療の標的化ｉｎ ｖｉｖｏ送達のために使用され得る。
本出願は、Ｎ－アセチルガラクトサミンとコンジュゲートしたヌクレオシドおよびそれらの調製方法に関する。本明細書で開示される、塩基上にＮ－アセチルガラクトサミンをコンジュゲートしたヌクレオシド（Ｎ－ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｏｎ－ｂａｓｅ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）は、オリゴヌクレオチドベースの治療の標的化ｉｎ ｖｉｖｏ送達のために使用され得る。
【背景技術】
【0002】
背景
関連技術の説明
オリゴヌクレオチドベースの薬物は、様々な疾患を処置する能力を有する強力な典型になってきた。Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）は、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）とのその高親和性から利益を得る、十分に規定された肝臓標的化部分である。Ｎ－アセチルガラクトサミンは、クラスリン媒介性エンドサイトーシスによる、ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートした循環オリゴの取込みおよびクリアランスを促進することができる。他のオリゴコンジュゲートと比較したＧａｌＮＡｃコンジュゲートの最も強力な特質は、内部移行および細胞輸送効率であり、それによって、前臨床種およびヒト対象において並外れて低用量で、ほぼ完全なｍＲＮＡノックダウンが可能になる。この差別化要因は、肝細胞上のＡＳＧＰＲの高い膜密度、およびＡＳＧＰＲが内部移行し、再循環して細胞表面に戻る急速サイクルに関連する。ＡＳＧＰＲの内部移行および細胞表面への再循環は、わずか１５分で済む。
関連技術の説明
オリゴヌクレオチドベースの薬物は、様々な疾患を処置する能力を有する強力な典型になってきた。Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）は、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）とのその高親和性から利益を得る、十分に規定された肝臓標的化部分である。Ｎ－アセチルガラクトサミンは、クラスリン媒介性エンドサイトーシスによる、ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートした循環オリゴの取込みおよびクリアランスを促進することができる。他のオリゴコンジュゲートと比較したＧａｌＮＡｃコンジュゲートの最も強力な特質は、内部移行および細胞輸送効率であり、それによって、前臨床種およびヒト対象において並外れて低用量で、ほぼ完全なｍＲＮＡノックダウンが可能になる。この差別化要因は、肝細胞上のＡＳＧＰＲの高い膜密度、およびＡＳＧＰＲが内部移行し、再循環して細胞表面に戻る急速サイクルに関連する。ＡＳＧＰＲの内部移行および細胞表面への再循環は、わずか１５分で済む。
【0003】
ＡＳＧＰＲは、ヒト系においてＨ１およびＨ２と指定された２つの相同サブユニットからなり、それらは、それぞれ２：１および５：１の推定比で非共有結合性のヘテロオリゴマー複合体を形成する。それらのサブユニットは共に、カルシウム依存性Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃ認識ドメイン（ＣＲＤ）を有するシングルスパニング膜タンパク質である。肝細胞表面上の天然受容体上でのこれらの結合部位は、２５～３０Å離れている。モノ、ジ、トリ、またはテトラＧａｌＮＡｃ糖のすべてのコンジュゲーションが、肝細胞へのオリゴヌクレオチドの送達効率を増強することができる。
【0004】
リボースの２’および３’位におけるＧａｌＮＡｃコンジュゲーションが、既に報告されている。オリゴヌクレオチド治療は、ヌクレアーゼ媒介性分解に対する感受性、急速な排除、生体内分布の低さ、不十分な膜透過性、免疫刺激、および潜在的に著しいオフターゲット効果を含む薬理学的困難を有している。これらの薬理学的困難を克服するために、多くの場合、リボース糖への化学修飾が必要である。しかし、２’および／または３’位上のＧａｌＮＡｃの位置は、修飾ヌクレオシド、例えばすべて一般に使用される糖修飾である２’－Ｆ、２’－ＯＭｅ、２’－ＭＯＥヌクレオシドへのこれらの戦略の適用を制限することがある。塩基上にＧａｌＮＡｃをコンジュゲートしたヌクレオシドの使用は、特に、これらのヌクレオシドがセンス鎖中の内部にまたはセンス鎖の末端にある場合、ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたヌクレオシドについて公知の安定性および送達の問題に対処することができる。したがって、新規なＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたヌクレオシド、特に２’および／または３’位における修飾リボース、ならびに他の拘束リボース構造を有するものを調製する必要がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0005】
概要
一部の実施形態では、本明細書では、式（Ｉ）の化合物
または薬学的に許容されるその塩が提供される
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃのそれぞれは、独立に、水素、ベンジル（Ｂｎ）、または－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１Ａであり、
Ｒ２は、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１～６アルキル、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１～６ハロアルキル、または－Ｃ（＝Ｏ）フェニルであり、
Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、－Ｏ－（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、またはヒドロキシ保護基であり、
Ｒ４は、水素、ホスホロアミダイト部分、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４Ａ、または－Ｐ（ＯＲ４Ｂ）ＮＲ４ＣＲ４Ｄであり、
Ｒ５は、ヒドロキシ保護基であり、
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３のそれぞれは、独立に、結合、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｓ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－、－Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｓ）Ｏ－、－ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－、－ＮＲ６Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６－、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ－、－ＯＰ（＝Ｓ）（ＯＨ）Ｏ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ６－、必要に応じて置換されているＣ１～１０アルキレン、必要に応じて置換されているＣ６～１０アリーレン、必要に応じて置換されているＣ３～１０シクロアルキレン、必要に応じて置換されている５～１０員のヘテロアリーレン（hetetroarylene）、必要に応じて置換されている５～１０員のヘテロシクリレン、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、Ｏ、ＳもしくはＮで置き換えられている必要に応じて置換されている２～１５員のヘテロアルキレンであり、ただし、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３のうちの少なくとも１つは、結合ではなく、
Ｇは、
またはＲ７で必要に応じて置換されているトリアゾレンであり、
Ｌ４は、結合、必要に応じて置換されているＣ１～１０アルキレン、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、Ｏ、ＳもしくはＮで置き換えられている必要に応じて置換されている２～１５員のヘテロアルキレンであり、
Ｂは、天然核酸塩基、修飾天然核酸塩基、または非天然核酸塩基であり、
各Ｒ１Ａは、独立に、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、または必要に応じて置換されているフェニルであり、
Ｒ４Ａは、－ＯＨ、－ＯＲ８または－ＮＲ９Ｒ１０であり、
Ｒ４Ｂ、Ｒ４ＣおよびＲ４Ｄのそれぞれは、独立に、Ｈ、Ｃ１～６ハロアルキル、または必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルであり、
各Ｒ６は、独立に、Ｈまたは必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルであり、
Ｒ７は、独立に、ハロ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、または－Ｏ－（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキルであり、
Ｒ８は、必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルまたはヒドロキシ保護基であり、
Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、独立に、Ｈ、必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルまたはアミノ保護基である］。
一部の実施形態では、本明細書では、式（Ｉ）の化合物
【化1】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃのそれぞれは、独立に、水素、ベンジル（Ｂｎ）、または－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１Ａであり、
Ｒ２は、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１～６アルキル、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１～６ハロアルキル、または－Ｃ（＝Ｏ）フェニルであり、
Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、－Ｏ－（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、またはヒドロキシ保護基であり、
Ｒ４は、水素、ホスホロアミダイト部分、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４Ａ、または－Ｐ（ＯＲ４Ｂ）ＮＲ４ＣＲ４Ｄであり、
Ｒ５は、ヒドロキシ保護基であり、
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３のそれぞれは、独立に、結合、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｓ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－、－Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｓ）Ｏ－、－ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－、－ＮＲ６Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６－、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ－、－ＯＰ（＝Ｓ）（ＯＨ）Ｏ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ６－、必要に応じて置換されているＣ１～１０アルキレン、必要に応じて置換されているＣ６～１０アリーレン、必要に応じて置換されているＣ３～１０シクロアルキレン、必要に応じて置換されている５～１０員のヘテロアリーレン（hetetroarylene）、必要に応じて置換されている５～１０員のヘテロシクリレン、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、Ｏ、ＳもしくはＮで置き換えられている必要に応じて置換されている２～１５員のヘテロアルキレンであり、ただし、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３のうちの少なくとも１つは、結合ではなく、
Ｇは、
【化2】
Ｌ４は、結合、必要に応じて置換されているＣ１～１０アルキレン、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、Ｏ、ＳもしくはＮで置き換えられている必要に応じて置換されている２～１５員のヘテロアルキレンであり、
Ｂは、天然核酸塩基、修飾天然核酸塩基、または非天然核酸塩基であり、
各Ｒ１Ａは、独立に、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、または必要に応じて置換されているフェニルであり、
Ｒ４Ａは、－ＯＨ、－ＯＲ８または－ＮＲ９Ｒ１０であり、
Ｒ４Ｂ、Ｒ４ＣおよびＲ４Ｄのそれぞれは、独立に、Ｈ、Ｃ１～６ハロアルキル、または必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルであり、
各Ｒ６は、独立に、Ｈまたは必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルであり、
Ｒ７は、独立に、ハロ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、または－Ｏ－（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキルであり、
Ｒ８は、必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルまたはヒドロキシ保護基であり、
Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、独立に、Ｈ、必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルまたはアミノ保護基である］。
【0006】
一部の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、式（Ｉａ）
または薬学的に許容されるその塩の構造を有することができる。
【化3】
【0007】
一部の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、式（Ｉｂ）
または薬学的に許容されるその塩の構造を有することができる。
【化4】
【0008】
式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物の一部の実施形態では、Ｂは、
であり得、Ｒｘは、水素もしくはアミノ保護基であるか、またはＲｘおよび窒素原子に結合している水素は、アミノ保護基を形成する。一部の実施形態では、Ｒｘは、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１～６アルキルまたは－Ｃ（＝Ｏ）－フェニルであり得る。一部の実施形態では、－ＮＨＲｘの水素は存在せず、Ｒｘは、ジメチルホルムアミジン
である。一部の実施形態では、Ｒｘは、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３（Ａｃ）または－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）２（ｉＢｕ）であり得る。
【化5】
【化6】
【0009】
式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃのそれぞれは、独立に、Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３（Ａｃ）または－Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ（Ｂｚ）であり得る。一部の実施形態では、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃは、それぞれ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり得る。一部の実施形態では、Ｒ２は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３または－Ｃ（＝Ｏ）ＣＦ３であり得る。一部の実施形態では、Ｒ３は、Ｈ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－Ｆ、－ＯＣＦ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－Ｏ－ｔｅｒｔブチルジメチルシリル、または－Ｏ－トリ－イソプロピルシリルオキシメチルであり得る。一部の実施形態では、Ｒ４は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨであり得る。他の実施形態では、Ｒ４は、
であり得る。一部の実施形態では、Ｒ５は、（４－メトキシフェニル）ジフェニルメチル、ビス（４－メトキシフェニル）フェニルメチル、トリス（４－メトキシフェニル）メチル、９－フェニルキサンテン－９－イルまたは９－（４－メトキシフェニル）キサンテン－９－イルから選択される、トリチルタイプのヒドロキシ保護基であり得る。
【化7】
【0010】
式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物の一部の実施形態では、Ｌ１は、結合、Ｃ１～１０アルキレン、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、ＯもしくはＮで置き換えられている２～１５員のヘテロアルキレンであり得る。一部の実施形態では、Ｌ２は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－、－ＮＲ６－、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、ＯもしくはＮで置き換えられている２～１５員のヘテロアルキレンであり得る。一部の実施形態では、Ｒ６は、ＨまたはＣＨ３であり得る。一部の実施形態では、Ｌ３は、結合、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、ＯもしくはＮで置き換えられている２～１５員のヘテロアルキレンであり得る。一部の実施形態では、Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３は、－（ＣＨ２）２～６Ｃ（＝Ｏ）－（例えば、－（ＣＨ２）４Ｃ（＝Ｏ）－）であり得る。他の一部の実施形態では、Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３は、－［（ＣＨ２）２Ｏ］１～５－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－（例えば、－［（ＣＨ２）２Ｏ］２－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－）であり得る。他の一部の実施形態では、Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３は、－［（ＣＨ２）２Ｏ］１～５（ＣＨ２）１～４－（例えば、－［（ＣＨ２）２Ｏ］２（ＣＨ２）２－）であり得る。一部の実施形態では、Ｌ４は、結合またはＣ１～１０アルキレンであり得る。
【0011】
式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物の一部の実施形態では、化合物は、
ならびに薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される
［式中、Ｒ３は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、－Ｏ－（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、またはヒドロキシ保護基であり、
各Ｒｘは、独立に、Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、－Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ、または－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ４は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨまたは
である］。さらなる実施形態では、Ｒ３は、Ｈ、－Ｆ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、または－Ｏ－ｔｅｒｔブチルジメチルシリルである。
【化8】
【化9】
［式中、Ｒ３は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、－Ｏ－（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、またはヒドロキシ保護基であり、
各Ｒｘは、独立に、Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、－Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ、または－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ４は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨまたは
【化10】
【0012】
本開示の別の態様は、例えば化合物のＲ４を介して共有結合している、本明細書に記載される式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）のヌクレオシド化合物を含む固体支持体に関する。一実施形態では、Ｒ４は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨである。さらなる実施形態では、化合物は、部分
［式中、破線は、必要に応じてさらなるリンカーを通しての固体支持体との連結を指し、波線は、化合物の残部への化合物の３’酸素の結合点を指す］を介して共有結合している。さらなる実施形態では、固体支持体は、オリゴヌクレオチドを含み、化合物は、オリゴヌクレオチド配列に組み込まれている。
【化11】
【0013】
本開示の別の態様では、本明細書において、合成オリゴヌクレオチドを調製する方法であって、本明細書に記載される化合物をオリゴヌクレオチドと反応させるステップを含む、方法が開示される。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１～１００の核酸塩基長を有することができる。一部の実施形態では、反応は、固体支持体上で実施され得る。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【0015】
【0016】
【0017】
【0018】
【0019】
【発明を実施するための形態】
【0020】
詳細な説明
本明細書で開示される化合物は、オリゴヌクレオチド送達のための新規な方法を提供するための、核酸塩基にコンジュゲートしたＧａｌＮＡｃを有する新規なヌクレオシドに関する。一部の実施形態では、本明細書で開示されるＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたヌクレオシド化合物は、オリゴヌクレオチドの５’末端またはいずれかの内部位置への、ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたヌクレオシドの組込みを可能にするホスホロアミダイト部分を、リボースまたは２’デオキシリボースの３’位に含有することができる。他の一部の実施形態では、本明細書で開示されるＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたヌクレオシド化合物は、固体支持体上へのＧａｌＮＡｃヌクレオシドの組込みを可能にするスクシネート部分を、リボースまたは２’デオキシリボースの３’位に含有することができ、それによって、オリゴヌクレオチドの３’末端に、本明細書に記載されるＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたヌクレオシドを導入することができる。
定義
本明細書で開示される化合物は、オリゴヌクレオチド送達のための新規な方法を提供するための、核酸塩基にコンジュゲートしたＧａｌＮＡｃを有する新規なヌクレオシドに関する。一部の実施形態では、本明細書で開示されるＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたヌクレオシド化合物は、オリゴヌクレオチドの５’末端またはいずれかの内部位置への、ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたヌクレオシドの組込みを可能にするホスホロアミダイト部分を、リボースまたは２’デオキシリボースの３’位に含有することができる。他の一部の実施形態では、本明細書で開示されるＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたヌクレオシド化合物は、固体支持体上へのＧａｌＮＡｃヌクレオシドの組込みを可能にするスクシネート部分を、リボースまたは２’デオキシリボースの３’位に含有することができ、それによって、オリゴヌクレオチドの３’末端に、本明細書に記載されるＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたヌクレオシドを導入することができる。
定義
【0021】
別段定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で参照されるすべての特許、出願、公開出願および他の刊行物は、別段記載されない限りそれらの全体が参照により組み込まれる。本明細書の用語について複数の定義が存在する場合には、別段記載されない限り、この節の定義が優先する。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈によって別段明示されない限り、複数の指示対象を含む。別段指定されない限り、質量分析法、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術および薬理学の従来の方法が用いられる。「または」または「および」の使用は、別段記載されない限り、「および／または」を意味する。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに他の形態、例えば「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」という用語の使用は、限定するものではない。
【0022】
本開示を、前述の説明において詳細に例証し、記載しているが、そのような説明は、例証的または例示的なものであり、制限的なものではないとみなされるべきである。本開示は、開示される実施形態に限定されない。開示される実施形態の変形形態は、本開示および添付の特許請求の範囲の研究から、特許請求されている本開示を実践する当業者によって理解され、行われ得る。
【0023】
本明細書で引用されているすべての参考文献は、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれる刊行物および特許または特許出願が、本明細書に含まれている本開示と矛盾する限りにおいて、本明細書は、いずれのそのような矛盾材料よりも優先され、および／または上位になることが意図される。
【0024】
別段定義されない限り、すべての用語（技術用語および科学用語を含む）は、当業者にとってそれらの通常の、通例の意味を与えられるべきであり、本明細書でそのように明確に定義されない限り、特別なまたは特化された意味に限定されるべきではない。特定の用語が、本開示のある特定の特色または態様を記載する場合、その使用は、その用語が関連する本開示の特色または態様のいずれかの特定の特徴を含むように、その用語が本明細書で制限されるように再定義されることを含意すると解釈されるべきでないことに留意されたい。
【0025】
ある範囲の値が提供される場合、その範囲の上限および下限、ならびに上限と下限の間に介在する各値は、実施形態に包含されると理解される。
【0026】
本明細書で使用される場合、いずれかの「Ｒ」基（複数可）は、示された原子に結合することができる置換基を表す。Ｒ基は、置換または非置換であり得る。２つの「Ｒ」基が「一緒になって」と記載される場合、Ｒ基およびそれらが結合している原子は、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、または複素環を形成することができる。例えば、限定されるものではないが、ＲａおよびＲｂ、ならびにそれらが結合している原子が、「一緒になって」または「一緒に繋がれて」いると示される場合、それらが互いに共有結合して、環
を形成することを意味する。
【化12】
【0027】
ある基が「必要に応じて置換されている」と記載される場合はいつでも、その基は、非置換であっても、示された置換基の１つもしくは複数で置換されていてもよい。同様に、ある基が「置換されている」と記載される場合、置換基は、示された置換基の１つまたは複数から選択され得る。置換基が示されていない場合、示された「必要に応じて置換されている」または「置換されている」基は、アルキル（例えば、Ｃ１～Ｃ６アルキル）；アルケニル（例えば、Ｃ２～Ｃ６アルケニル）；アルキニル（例えば、Ｃ２～Ｃ６アルキニル）；Ｃ３～Ｃ８カルボシクリル（例えば、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ８シクロアルケニル、またはＣ３～Ｃ８シクロアルキニル（cyclalkynyl）（それぞれ、例えば、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルコキシ、（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、または－Ｏ（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキルで必要に応じてさらに置換され得る）；（Ｃ３～Ｃ７カルボシクリル）Ｃ１～Ｃ６アルキル（例えば、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルコキシ、（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、または－Ｏ（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキルで必要に応じてさらに置換され得る）；５～１０員のヘテロシクリル（例えば、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルコキシ、（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、または－Ｏ（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキルで必要に応じてさらに置換され得る）；（５～１０員のヘテロシクリル）Ｃ１～Ｃ６アルキル（例えば、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルコキシ、（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、または－Ｏ（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキルで必要に応じてさらに置換され得る）；アリール（例えば、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルコキシ、（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、または－Ｏ（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキルで必要に応じてさらに置換され得る）；（アリール）Ｃ１～Ｃ６アルキル（例えば、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルコキシ、（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、または－Ｏ（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキルで必要に応じてさらに置換され得る）；５～１０員のヘテロアリール（ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルコキシ、（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、または－Ｏ（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキルで必要に応じてさらに置換され得る）；（５～１０員のヘテロアリール）Ｃ１～Ｃ６アルキル（ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルコキシ、（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、または－Ｏ（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキルで必要に応じてさらに置換され得る）；ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード）；シアノ；ヒドロキシ；保護ヒドロキシ；アルコキシ（例えば、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）；ハロアルキル（例えば、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、例えば－ＣＦ３）；ハロアルキル（例えば、Ｃ１～Ｃ６ハロアルコキシ、例えば、－ＯＣＦ３）；（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、（Ｃ１～Ｃ６ハロアルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ６ハロアルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、アリールオキシ；スルフヒドリル（メルカプト）；アルキルチオ（例えば、Ｃ１～Ｃ６アルキルチオ）；アリールチオ；アジド；ニトロ；Ｏ－カルバミル；Ｎ－カルバミル；Ｏ－チオカルバミル；Ｎ－チオカルバミル；Ｃ－アミド；Ｎ－アミド；Ｓ－スルホンアミド；Ｎ－スルホンアミド；Ｃ－カルボキシ；保護Ｃ－カルボキシ；Ｏ－カルボキシ；アシル；シアネート；イソシアナト；チオシアナト；イソチオシアナト；シリル；スルフェニル；スルフィニル；スルホニル；トリハロメタンスルホニル；トリハロメタンスルホンアミド；アミノ（保護されたその誘導体を含む）；一置換アミノ（例えば、ＮＨ（Ｃ１～Ｃ６アルキル）；二置換アミノ（例えば、Ｎ（Ｃ１～Ｃ６アルキル）２）；オキソ（＝Ｏ）；およびチオキソ（＝Ｓ）から個々に、独立に選択される１つまたは複数の基であり得ることを意味する。
【0028】
本明細書で使用される場合、「ａ」および「ｂ」が整数である「Ｃａ～Ｃｂ」は、アルキル基における炭素原子の数、またはシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールもしくはヘテロシクリル基の環原子の数を指す。すなわち、アルキル、シクロアルキルの環、およびアリールの環は、両端を含み「ａ」～「ｂ」個の炭素原子を含有することができる。同様に、ヘテロアリールの環およびヘテロシクリルの環は、両端を含み合計「ａ」～「ｂ」個の環原子を含有することができる。したがって、例えば、「Ｃ１～Ｃ４アルキル」基は、１～４個の炭素を有するすべてのアルキル基、すなわちＣＨ３－、ＣＨ３ＣＨ２－、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２－、（ＣＨ３）２ＣＨ－、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）－および（ＣＨ３）３Ｃ－を指し、Ｃ３～Ｃ４シクロアルキル基は、３～４個の炭素原子の炭素を有するすべてのシクロアルキル基、すなわちシクロプロピルおよびシクロブチルを指す。同様に、「４～６員のヘテロシクリル」基は、合計４～６個の環原子を有するすべてのヘテロシクリル基、例えば、アゼチジン、オキセタン、オキサゾリン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン等を指す。「ａ」および「ｂ」が、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリル基に関して指定されていない場合、これらの定義において記載される最も広範な範囲が想定されるべきである。本明細書で使用される場合、「Ｃ１～Ｃ６」という用語は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ６、ならびにそれらの２つの数のいずれかによって定義される範囲を含む。例えば、Ｃ１～Ｃ６アルキルは、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルキル等を含む。同様に、Ｃ３～Ｃ８カルボシクリルまたはシクロアルキルは、それぞれ、３、４、５、６、７および８個、またはそれらの２つの数のいずれかによって定義される範囲の炭素原子を含有する炭化水素環、例えばＣ３～Ｃ７シクロアルキルまたはＣ５～Ｃ６シクロアルキルを含む。
【0029】
本明細書で使用される場合、「アルキル」は、完全に飽和の（二重結合または三重結合がない）炭化水素基を含む、直鎖または分岐の炭化水素鎖を指す。アルキル基は、１～２０個の炭素原子を有することができる（本明細書で出現する場合はいつでも、数値範囲、例えば「１～２０」は、所与の範囲の各整数を指し、例えば、「１～２０個の炭素原子」は、アルキル基が、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子等、２０個を含み最大２０個の炭素原子からなり得ることを意味するが、本発明の定義は、数値範囲が指定されていない「アルキル」という用語の出現も網羅する）。アルキル基はまた、１～１０個の炭素原子を有する中程度のサイズのアルキルであってもよい。アルキル基はまた、１～６個の炭素原子を有する低級アルキルであってもよい。化合物のアルキル基は、「Ｃ１～Ｃ４アルキル」または類似の命名として指定され得る。単なる例として、「Ｃ１～Ｃ４アルキル」は、アルキル鎖に１～４個の炭素原子が存在することを示しており、すなわち、アルキル鎖は、メチル、エチル、プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、およびｔ－ブチルから選択される。典型的なアルキル基には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第三級ブチル、ペンチル（直鎖または分岐）、およびヘキシル（直鎖または分岐）が含まれるが、それらに決して限定されない。アルキル基は、置換または非置換であり得る。
【0030】
本明細書で使用される場合、「アルケニル」は、１つまたは複数の二重結合を含有する直鎖または分岐の炭化水素鎖を指す。アルケニル基は、２～２０個の炭素原子を有することができる。単なる例として、「Ｃ２～Ｃ６アルケニル」は、アルケニル鎖に２～６個の炭素原子が存在することを示しており、すなわち、アルケニル鎖は、エテニル、プロペン－１－イル、プロペン－２－イル、プロペン－３－イル、ブテン－１－イル、ブテン－２－イル、ブテン－３－イル、ブテン－４－イル、１－メチル－プロペン－１－イル、２－メチル－プロペン－１－イル、１－エチル－エテン－１－イル、２－メチル－プロペン－３－イル、ブタ－１，３－ジエニル、ブタ－１，２，－ジエニル、およびブタ－１，２－ジエン－４－イルからなる群から選択される。典型的なアルケニル基には、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、およびヘキセニル等が含まれるが、それらに決して限定されない。アルケニル基は、置換または非置換であり得る。
【0031】
本明細書で使用される場合、「アルキニル」は、１つまたは複数の三重結合を含有する直鎖または分岐の炭化水素鎖を指す。アルキニル基は、２～２０個の炭素原子を有することができる。単なる例として、「Ｃ２～Ｃ４アルキニル」は、アルキニル鎖に２～６個の炭素原子が存在することを示しており、すなわち、アルキニル鎖は、エチニル、プロピン－１－イル、プロピン－２－イル、ブチン－１－イル、ブチン－３－イル、ブチン－４－イル、および２－ブチニルからなる群から選択される。典型的なアルキニル基には、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、およびヘキシニル等が含まれるが、それらに決して限定されない。アルキニル基は、置換または非置換であり得る。
【0032】
本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」は、完全に飽和の（二重結合または三重結合がない）単環式または多環式炭化水素環系を指す。２つまたはそれよりも多い環から構成される場合、これらの環は、縮合、架橋またはスピロ様式で一緒に繋がれていてもよい。本明細書で使用される場合、「縮合」という用語は、２つの環が、２個の原子および１個の結合を共有していることを指す。本明細書で使用される場合、「架橋シクロアルキル」という用語は、シクロアルキルが、隣接していない原子を連結する１つまたは複数の原子の連結を含有している化合物を指す。本明細書で使用される場合、「スピロ」という用語は、２つの環が１個の原子を共有しており、その２つの環が架橋によって連結されていないことを指す。シクロアルキル基は、環（複数可）内に３～１０個の原子、環（複数可）内に３～８個の原子、または環（複数可）内に３～６個の原子を含有することができる。シクロアルキル基は、非置換または置換であり得る。単環式シクロアルキル基の例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルが挙げられるが、それらに決して限定されない。二環式縮合シクロアルキル基の例は、デカヒドロナフタレニル、ドデカヒドロ－１Ｈ－フェナレニルおよびテトラデカヒドロアントラセニルであり、二環式架橋シクロアルキル基の例は、ビシクロ［１．１．１］ペンチル、アダマンタニルおよびノルボルナニルであり、二環式スピロシクロアルキル基の例として、スピロ［３．３］ヘプタンおよびスピロ［４．５］デカンが挙げられる。
【0033】
本明細書で使用される場合、「カルボシクリル」は、非芳香族の単環式または多環式炭化水素環系を指す。２つまたはそれよりも多い環から構成される場合、環は、本明細書に記載される通り、縮合、架橋またはスピロ様式で一緒に繋がれていてもよい。カルボシクリル基は、環（複数可）内に３～３０個の原子、環（複数可）内に３～２０個の原子、環（複数可）内に３～１０個の原子、環（複数可）内に３～８個の原子または環（複数可）内に３～６個の原子を含有することができる。カルボシクリル基は、非置換または置換であり得る。カルボシクリル基の例として、本明細書で定義される通りのシクロアルキル基、ならびに１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン、２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン、５，６，７，８－テトラヒドロキノリンおよび６，７－ジヒドロ－５Ｈ－シクロペンタ［ｂ］ピリジンの非芳香族部分が挙げられるが、それらに決して限定されない。
【0034】
本明細書で使用される場合、「アリール」は、すべての環を通して完全に非局在化されたπ電子系を有する、炭素環式（すべて炭素の）単環式または多環式芳香環系（２つの炭素環式環が化学結合を共有している縮合環系を含む）を指す。アリール基における炭素原子の数は、変わり得る。例えば、アリール基は、Ｃ６アリール基、またはＣ１０アリール基であり得る。アリール基の例として、ベンゼンおよびナフタレンが挙げられるが、それらに限定されない。アリール基は、置換または非置換であり得る。
【0035】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール」は、１つまたは複数のヘテロ原子（例えば、１、２または３個のヘテロ原子）、すなわち限定されるものではないが、窒素、酸素および硫黄を含む炭素以外の元素を含有する、単環式または多環式芳香環系（完全に局在化されたπ電子系を有する環系）を指す。ヘテロアリール基の環（複数可）における原子の数は、変わり得る。例えば、ヘテロアリール基は、環（複数可）内に５～１０個の原子、環（複数可）内に６～１０個の原子または環（複数可）内に５～６個の原子、例えば９個の炭素原子および１個のヘテロ原子、８個の炭素原子および２個のヘテロ原子、７個の炭素原子および３個のヘテロ原子、８個の炭素原子および１個のヘテロ原子、７個の炭素原子および２個のヘテロ原子、６個の炭素原子および３個のヘテロ原子、５個の炭素原子および４個のヘテロ原子、５個の炭素原子および１個のヘテロ原子、４個の炭素原子および２個のヘテロ原子、３個の炭素原子および３個のヘテロ原子、４個の炭素原子および１個のヘテロ原子、３個の炭素原子および２個のヘテロ原子、または２個の炭素原子および３個のヘテロ原子を含有することができる。さらに、「ヘテロアリール」という用語は、２つの環、例えば少なくとも１つのアリール環および少なくとも１つのヘテロアリール環、または少なくとも２つのヘテロアリール環が、少なくとも１つの化学結合を共有している、縮合環系を含む。ヘテロアリール環の例として、フラン、フラザン、チオフェン、ベンゾチオフェン、フタラジン、ピロール、オキサゾール、ベンゾオキサゾール、１，２，３－オキサジアゾール、１，２，４－オキサジアゾール、チアゾール、１，２，３－チアジアゾール、１，２，４－チアジアゾール、ベンゾチアゾール、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、インドール、インダゾール、ピラゾール、ベンゾピラゾール、イソオキサゾール、ベンゾイソオキサゾール、イソチアゾール、トリアゾール、ベンゾトリアゾール、チアジアゾール、テトラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、プリン、プテリジン、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、キノキサリン、シンノリンおよびトリアジンが挙げられるが、それらに限定されない。ヘテロアリール基は、置換または非置換であり得る。
【0036】
本明細書で使用される場合、「ヘテロシクリル」は、炭素原子が１～５個のヘテロ原子と一緒に環系を構成している、３、４、５、６、７、８、９、および１０員の単環式、二環式および三環式環系を指す。しかし、複素環は、完全に非局在化されたπ電子系がすべての環を通しては生じないようなやり方で位置した１つまたは複数の不飽和結合を、必要に応じて含有し得る（すなわち、ヘテロシクリル基は芳香族ではない）。ヘテロ原子（複数可）は、限定されるものではないが、酸素、硫黄および窒素を含む炭素以外の元素である。複素環は、その定義にオキソ系、例えば、ラクタム、ラクトン、および環式カルバメートが含まれるように、１つまたは複数のカルボニル官能基をさらに含有することができる。２つまたはそれよりも多い環から構成される場合、これらの環は、縮合、架橋またはスピロ様式で一緒に繋がれていてもよい。本明細書で使用される場合、「縮合」という用語は、２つの環が、２個の原子および１個の結合を共有していることを指す。本明細書で使用される場合、「架橋ヘテロシクリル」という用語は、ヘテロシクリルが、隣接していない原子を連結する１つまたは複数の原子の連結を含有している化合物を指す。本明細書で使用される場合、「スピロ」という用語は、２つの環が１個の原子を共有しており、その２つの環が架橋によって連結されていないことを指す。ヘテロシクリル基は、環（複数可）内に３～１０個の原子、環（複数可）内に３～８個の原子、環（複数可）内に３～６個の原子、または環（複数可）内に５～６個の原子を含有することができる。例えば、５個の炭素原子および１個のヘテロ原子、４個の炭素原子および２個のヘテロ原子、３個の炭素原子および３個のヘテロ原子、４個の炭素原子および１個のヘテロ原子、３個の炭素原子および２個のヘテロ原子、２個の炭素原子および３個のヘテロ原子、１個の炭素原子および４個のヘテロ原子、３個の炭素原子および１個のヘテロ原子、または２個の炭素原子および１個のヘテロ原子。加えて、ヘテロシクリル基におけるいずれかの窒素は、四級化され得る。ヘテロシクリル基は、ヘテロシクリル基の炭素原子を介して（Ｃ連結）、またはヘテロシクリル基のヘテロ原子、例えば窒素原子によって（Ｎ連結）、分子の残部に連結することができる。ヘテロシクリル基は、非置換または置換であり得る。そのような「ヘテロシクリル」基の例として、アジリジン、オキシラン、チイラン、アゼチジン、オキセタン、１，３－ジオキシン、１，３－ジオキサン、１，４－ジオキサン、１，２－ジオキソラン、１，３－ジオキソラン、１，４－ジオキソラン、１，３－オキサチアン、１，４－オキサチイン、１，３－オキサチオラン、１，３－ジチオール、１，３－ジチオラン、１，４－オキサチアン、テトラヒドロ－１，４－チアジン、２Ｈ－１，２－オキサジン、マレイミド、スクシンイミド、バルビツール酸、チオバルビツール酸、ジオキソピペラジン、ヒダントイン、ジヒドロウラシル、トリオキサン、ヘキサヒドロ－１，３，５－トリアジン、イミダゾリン、イミダゾリジン、イソオキサゾリン、イソオキサゾリジン、オキサゾリン、オキサゾリジン、オキサゾリジノン、チアゾリン、チアゾリジン、モルホリン、オキシラン、ピペリジンＮ－オキシド、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、アゼパン、ピロリドン、ピロリジノン、４－ピペリドン、ピラゾリン、ピラゾリジン、２－オキソピロリジン、テトラヒドロピラン、４Ｈ－ピラン、テトラヒドロチオピラン、チアモルホリン、チアモルホリンスルホキシド、チアモルホリンスルホンおよびそれらのベンゾ縮合アナログ（例えば、ベンゾイミダゾリジノン、テトラヒドロキノリンおよび／または３，４－メチレンジオキシフェニル）が挙げられるが、それらに限定されない。スピロヘテロシクリル基の例として、２－アザスピロ［３．３］ヘプタン、２－オキサスピロ［３．３］ヘプタン、２－オキサ－６－アザスピロ［３．３］ヘプタン、２，６－ジアザスピロ［３．３］ヘプタン、２－オキサスピロ［３．４］オクタンおよび２－アザスピロ［３．４］オクタンが挙げられる。
【0037】
本明細書で使用される場合、「アルキレン」は、２つの結合点を介して分子の残部に結合している、炭素および水素だけを含有する分岐または直鎖の完全に飽和のジラジカル化学基を指す。単なる例として、「Ｃ１～Ｃ１０アルキレン」は、アルキレン鎖に１～１０個の炭素原子が存在することを示す。非限定的な例として、エチレン（－ＣＨ２ＣＨ２－）、プロピレン（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）、ブチレン（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）、およびペンチレン（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）が挙げられる。
【0038】
本明細書で使用される場合、「アルケニレン」は、２つの結合点を介して分子の残部に結合している、炭素および水素だけを含有し、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を含有する、直鎖または分岐鎖ジラジカル化学基を指す。アルケニレン基は、「Ｃ２～Ｃ１０アルケニレン」または類似の命名として指定され得る。単なる例として、「Ｃ２～Ｃ１０アルケニレン」は、アルケニレン鎖に２～１０個の炭素原子が存在することを示す。
【0039】
本明細書で使用される場合、「アルキニレン」は、２つの結合点を介して分子の残部に結合している、炭素および水素だけを含有し、少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を含有する、直鎖または分岐鎖ジラジカル化学基を指す。アルキニレン基は、「Ｃ２～Ｃ１０アルケニレン」または類似の命名として指定され得る。単なる例として、「Ｃ２～Ｃ１０アルキニレン」は、アルキニレン鎖に２～１０個の炭素原子が存在することを示す。
【0040】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアルキレン」は、炭素骨格に１つまたは複数のヘテロ原子を含有する本明細書で定義される通りのアルキレン基（すなわち、１つまたは複数の炭素原子が、ヘテロ原子、例えば、窒素原子、酸素原子または硫黄原子で置き換えられているアルキレン基）を指す。例えば、－ＣＨ２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、または－ＮＨ－で置き換えられ得る。ヘテロアルキレン基には、エーテル、チオエーテル、アミノ－アルキレン、およびアルキレン－アミノ－アルキレン部分が含まれるが、それらに限定されない。一部の実施形態では、ヘテロアルキレンは、１、２、３、４、または５個の－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－単位を含み得る。代替的および／または付加的に、１つまたは複数の炭素原子はまた、オキソ（＝Ｏ）で置換されてカルボニルになることもできる。例えば、－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－で置き換えられ得る。
【0041】
本明細書で使用される場合、「アラルキル」および「（アリール）アルキル」は、前述のアルキレン基を介して置換基として連結している、上述で定義される通りのアリール基を指す。アラルキルのアルキレンおよびアリール基は、置換または非置換であり得る。例として、ベンジル、２－フェニルアルキル、３－フェニルアルキル、およびナフチルアルキルが挙げられるが、それらに限定されない。一部の実施形態では、アルキレンは、１、２、３、４、５、または６個のメチレン単位を含有する非置換の直鎖である。
【0042】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアラルキル」および「（ヘテロアリール）アルキル」は、上述で定義される通りのアルキレン基を介して置換基として連結している、上述で定義される通りのヘテロアリール基を指す。ヘテロアラルキルのアルキレンおよびヘテロアリール基は、置換または非置換であり得る。例として、２－チエニルアルキル、３－チエニルアルキル、フリルアルキル、チエニルアルキル、ピロリルアルキル、ピリジルアルキル、イソオキサゾリルアルキル、およびイミダゾリルアルキル、ならびにそれらのベンゾ縮合アナログが挙げられるが、それらに限定されない。一部の実施形態では、アルキレンは、１、２、３、４、５、または６個のメチレン単位を含有する非置換の直鎖である。
【0043】
本明細書で使用される場合、「（ヘテロシクリル）アルキル」は、上述で定義される通りのアルキレン基を介して置換基として連結している、上述で定義される通りの複素環式またはヘテロシクリル基を指す。（ヘテロシクリル）アルキルのアルキレンおよびヘテロシクリル基は、置換または非置換であり得る。例として、（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）メチル、（ピペリジン－４－イル）エチル、（ピペリジン－４－イル）プロピル、（テトラヒドロ－２Ｈ－チオピラン－４－イル）メチル、および（１，３－チアジナン－４－イル）メチルが挙げられるが、それらに限定されない。一部の実施形態では、アルキレンは、１、２、３、４、５、または６個のメチレン単位を含有する非置換の直鎖である。
【0044】
本明細書で使用される場合、「シクロアルキルアルキル」および「（シクロアルキル）アルキル」は、アルキレン基を介して置換基として連結しているシクロアルキル基（本明細書で定義される通り）を指す。例として、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルエチル、およびシクロヘキシルプロピルが挙げられるが、それらに限定されない。一部の実施形態では、アルキレンは、１、２、３、４、５、または６個のメチレン単位を含有する非置換の直鎖である。
【0045】
本明細書で使用される場合、「アルコキシ」は、式－ＯＲを指し、ここでＲは、本明細書で定義される通りのアルキル基である。アルコキシ基の非限定的な一覧には、メトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、１－メチルエトキシ（イソプロポキシ）、ｎ－ブトキシ、イソ－ブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、およびｔｅｒｔ－ブトキシが含まれる。アルコキシは、置換または非置換であり得る。
【0046】
本明細書で使用される場合、「ハロアルキル」は、水素原子の１つまたは複数がハロゲンによって置き換えられているアルキル基（例えば、モノ－ハロアルキル、ジ－ハロアルキル、およびトリ－ハロアルキル）を指す。そのような基には、クロロメチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチルおよび１－クロロ－２－フルオロメチル、２－フルオロイソブチルが含まれるが、それらに限定されない。ハロアルキルは、置換または非置換であり得る。
【0047】
本明細書で使用される場合、「ハロアルコキシ」は、水素原子の１つまたは複数がハロゲンによって置き換えられているアルコキシ基（例えば、モノ－ハロアルコキシ、ジ－ハロアルコキシおよびトリ－ハロアルコキシ）を指す。そのような基には、クロロメトキシ、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシおよび１－クロロ－２－フルオロメトキシ、２－フルオロイソブトキシが含まれるが、それらに限定されない。ハロアルコキシは、置換または非置換であり得る。
【0048】
本明細書で使用される場合、「アミノ」は、－ＮＨ２基を指す。「一置換アミノ基」という用語は、本明細書で使用される場合、水素原子の１個が置換基によって置き換えられているアミノ（－ＮＨ２）基を指す。「二置換アミノ基」という用語は、本明細書で使用される場合、２個の水素原子のそれぞれが置換基によって置き換えられているアミノ（－ＮＨ２）基を指す。「必要に応じて置換されているアミノ」という用語は、本明細書で使用される場合、－ＮＲＡＲＢ基を指し、ここでＲＡおよびＲＢは、独立に、水素、本明細書で定義される通りのアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アラルキル、またはヘテロシクリル（アルキル）である。
【0049】
本明細書で使用される場合、「アルキルアミノ」または「（アルキル）アミノ」は、－ＮＲＡＲＢ基を指し、ここでＲＡおよびＲＢは、水素または上述で定義されるアルキルであり、ＲＡおよびＲＢの少なくとも一方はアルキルである。（アルキル）アミンのアルキル部分は、例えば、Ｃ１～Ｃ６アルキル基を含む。
【0050】
本明細書で使用される場合、「アミノアルキル」または「（アミノ）アルキル」は、水素原子の１つまたは複数が、本明細書で定義される通りのアミノ基または「－ＮＲＡＲＢ」基によって置き換えられている、アルキル基を指す。アミノアルキルのアルキル部分は、例えば、Ｃ１～Ｃ６アルキルを含む。
【0051】
「ハロゲン原子」または「ハロゲン」という用語は、本明細書で使用される場合、元素周期表の７列目の放射線に安定な原子、例えば、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素のいずれか１つを意味する。
【0052】
本明細書で使用される場合、「アルコキシアルキル」または「（アルコキシ）アルキル」は、アルキレン基を介して連結しているアルコキシ基、例えばＣ２～Ｃ８アルコキシアルキル、または（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、例えば、－（ＣＨ２）１～３－ＯＣＨ３を指す。
【0053】
本明細書で使用される場合、「－Ｏ－アルコキシアルキル」または「－Ｏ－（アルコキシ）アルキル」は、－Ｏ－（アルキレン）基を介して連結しているアルコキシ基、例えば－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）Ｃ１～Ｃ６アルキル、例えば、－Ｏ－（ＣＨ２）１～３－ＯＣＨ３を指す。
【0054】
本明細書で使用される場合、「アリールオキシ」および「アリールチオ」は、ＲＯ－およびＲＳ－を指し、ここでＲは、上述で定義される通りのアリール、例えばフェニルであるが、それに限定されない。アリールオキシおよびアリールチオは、共に置換または非置換であり得る。
【0055】
「スルフェニル」基は、「－ＳＲ」基を指し、ここでＲは、水素、上述で定義される通りのアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アラルキル、またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。スルフェニルは、置換または非置換であり得る。
【0056】
「スルフィニル」基は、「－Ｓ（＝Ｏ）－Ｒ」基を指し、ここでＲは、スルフェニルに関して定義されているものと同じであり得る。スルフィニルは、置換または非置換であり得る。
【0057】
「スルホニル」基は、「ＳＯ２Ｒ」基を指し、ここでＲは、スルフェニルに関して定義されているものと同じであり得る。スルホニルは、置換または非置換であり得る。
【0058】
「Ｏ－カルボキシ」基は、「ＲＣ（＝Ｏ）Ｏ－」基を指し、ここでＲは、水素、本明細書で定義される通りのアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アラルキル、またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。Ｏ－カルボキシは、置換または非置換であり得る。
【0059】
「エステル」および「Ｃ－カルボキシ」という用語は、「－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ」基を指し、ここでＲは、Ｏ－カルボキシに関して定義されているものと同じであり得る。エステルまたはＣ－カルボキシは、置換または非置換であり得る。
【0060】
「トリハロメタンスルホニル」基は、「Ｘ３ＣＳＯ２－」基を指し、ここでＸはハロゲンである。
【0061】
「トリハロメタンスルホンアミド」基は、「Ｘ３ＣＳ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）－」基を指し、ここでＸはハロゲンであり、Ｒは、水素、本明細書で定義される通りのアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アラルキル、またはヘテロシクリル（アルキル）である。
【0062】
「メルカプト」基は、「－ＳＨ」基を指す。
【0063】
「Ｓ－スルホンアミド」基は、「－ＳＯ２Ｎ（ＲＡＲＢ）」基を指し、ここでＲＡおよびＲＢは、独立に、水素、本明細書で定義される通りのアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アラルキル、またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。Ｓ－スルホンアミドは、置換または非置換であり得る。
【0064】
「Ｎ－スルホンアミド」基は、「ＲＳＯ２Ｎ（ＲＡ）－」基を指し、ここでＲおよびＲＡは、独立に、水素、本明細書で定義される通りのアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アラルキル、またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。Ｎ－スルホンアミドは、置換または非置換であり得る。
【0065】
「Ｏ－カルバミル」基は、「－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡＲＢ）」基を指し、ここでＲＡおよびＲＢは、Ｓ－スルホンアミドに関して定義されているものと同じであり得る。Ｏ－カルバミルは、置換または非置換であり得る。
【0066】
「Ｎ－カルバミル」基は、「ＲＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ）－」基を指し、ここでＲおよびＲＡは、Ｎ－スルホンアミドに関して定義されているものと同じであり得る。Ｎ－カルバミルは、置換または非置換であり得る。
【0067】
「Ｏ－チオカルバミル」基は、「－ＯＣ（＝Ｓ）－Ｎ（ＲＡＲＢ）」基を指し、ここでＲＡおよびＲＢは、Ｓ－スルホンアミドに関して定義されているものと同じであり得る。Ｏ－チオカルバミルは、置換または非置換であり得る。
【0068】
「Ｎ－チオカルバミル」基は、「ＲＯＣ（＝Ｓ）Ｎ（ＲＡ）－」基を指し、ここでＲおよびＲＡは、Ｎ－スルホンアミドに関して定義されているものと同じであり得る。Ｎ－チオカルバミルは、置換または非置換であり得る。
【0069】
「Ｃ－アミド」基は、「－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡＲＢ）」基を指し、ここでＲＡおよびＲＢは、Ｓ－スルホンアミドに関して定義されているものと同じであり得る。Ｃ－アミドは、置換または非置換であり得る。
【0070】
「Ｎ－アミド」基は、「ＲＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ）－」基を指し、ここでＲおよびＲＡは、Ｎ－スルホンアミドに関して定義されているものと同じであり得る。Ｎ－アミドは、置換または非置換であり得る。
【0071】
置換基の数が特定されていない場合（例えば、ハロアルキル）、１つまたは複数の置換基が存在し得る。例えば、「ハロアルキル」は、同じまたは異なるハロゲンの１つまたは複数を含み得る。
【0072】
１つまたは複数のキラル中心を有する本明細書に記載されるいずれかの化合物において、絶対立体化学が明確に示されていない場合には、各中心は、独立に、Ｒ－立体配置もしくはＳ－立体配置またはそれらの混合物になり得ると理解される。したがって、本明細書で提供される化合物は、鏡像異性的に純粋であり、鏡像異性体的に富化されており、または立体異性体混合物である場合があり、すべてのジアステレオマー形態および鏡像異性形態を含む。加えて、ＥまたはＺとして定義することができる幾何異性体を生じる１つまたは複数の二重結合を有する、本明細書に記載されるいずれかの化合物において、各二重結合は、独立に、ＥもしくはＺまたはその混合物であり得ると理解される。所望に応じて、立体選択的な合成および／またはキラルクロマトグラフィーカラムによる立体異性体の分離等の方法によって、立体異性体が得られる。同様に、記載されるいずれかの化合物において、すべての互変異性形態が含まれることが意図されることも理解される。
【0073】
置換基がジラジカル（すなわち、分子の残部への２つの結合点を有する）として示される場合はいつでも、置換基は、別段指定されない限り、いずれかの方向の立体配置で結合していてもよいと理解されるべきである。したがって、例えば、－ＡＥ－または
と示される置換基は、Ａが分子の最も左側の結合点で結合するように配向されている置換基、およびＡが分子の最も右側の結合点で結合している場合を含む。加えて、基または置換基が、
と示され、Ｌが結合であるか、または存在しないと定義される場合、そのような基または置換基は、
に等価である。
【化13】
【化14】
【化15】
【0074】
本明細書で開示される化合物が、満たされていない原子価を有する場合には、この原子価は、水素および／または重水素で満たされることになると理解されるべきである。
【0075】
本明細書に記載される化合物は、同位体的に、あるいは限定されるものではないが発色団もしくは蛍光性部分、生物発光標識、または化学発光標識の使用を含む別の他の手段によって、標識することができると理解される。同位体、例えば、重水素での置換は、代謝安定性がより高いことから生じるある特定の治療上の利点、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期の延長または必要投与量の低減等をもたらし得る。化合物構造において表される各化学元素は、前記元素のいずれかの同位体を含み得る。例えば、化合物構造において、水素原子は、化合物中に存在することが明示的に開示され得るか、またはそのように理解され得る。水素原子が存在し得る化合物のいずれかの位置において、水素原子は、限定されるものではないが、水素－１（プロチウム）、水素－２（重水素）、および水素－３（トリチウム）を含む水素の任意の同位体であり得る。したがって、本明細書における化合物への言及は、文脈によって別段明示されない限り、潜在的に可能なすべての同位体形態を包含する。
【0076】
本明細書に記載される方法および製剤は、好ましい実施形態の化合物の結晶形態、非晶質相、ならびに／または薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物および配座異性体、ならびに同じタイプの活性を有するこれらの化合物の代謝産物および活性代謝産物の使用を含むと理解される。配座異性体は、立体構造異性体である構造である。配座異性は、構造式は同じであるが、回転する結合の周囲の原子の配座（配座異性体）が異なっている分子の現象である。特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、水、エタノール等の薬学的に許容される溶媒との溶媒和形態で存在する。他の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、非溶媒和形態で存在する。溶媒和物は、化学量論量または非化学量論量の溶媒を含有し、結晶化プロセス中に、薬学的に許容される溶媒、例えば、水、エタノール等と形成され得る。溶媒が水である場合、水和物が形成され、または溶媒がアルコールである場合、アルコラートが形成される。加えて、本明細書で提供される化合物は、非溶媒和形態でも溶媒和形態でも存在し得る。一般に、本明細書で提供される化合物および方法の目的では、溶媒和形態は、非溶媒和形態に等価であるとみなされる。好ましい実施形態の化合物を提供することができる他の形態には、非晶質形態、微粉砕形態、およびナノ微粒子状形態が含まれる。
【0077】
同様に、本明細書に記載される化合物、例えば好ましい実施形態の化合物は、本明細書に記載される形態（例えば、薬学的に許容される塩、結晶形態、非晶質形態、溶媒和形態、鏡像異性形態、互変異性形態等）のいずれかの化合物を含むと理解される。
【0078】
本明細書で使用される場合、いずれかの保護基、アミノ酸、および他の化合物の略語は、別段指定されない限り、それらの一般的な用法、認められている略語、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名法委員会（Biochem. 11:942-944 (1972)を参照されたい）に従う。
【0079】
「保護基」という用語（単数形または複数形）は、本明細書で使用される場合、分子中の既存の基が望ましくない化学反応を受けないようにするために分子に付加されるいずれかの原子または原子団を指す。保護基部分の例は、T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3. Ed. John Wiley & Sons, 1999およびJ.F.W. McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry Plenum Press, 1973に記載されており、それらは共に、好適な保護基を開示する限られた目的のために、参照により本明細書に組み込まれる。保護基部分は、ある特定の反応条件に対して安定であり、好都合な段階で、当技術分野で公知の方法を使用して容易に除去されるようなやり方で選択され得る。保護基の非限定的な一覧には、ベンジル（Ｂｎ）、置換ベンジル、アルキルカルボニル（例えば、ｔ－ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、アセチル（すなわち、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３またはＡｃ）、またはイソブチリル（ｉＢｕ）、アリールアルキルカルボニル（例えば、ベンジルオキシカルボニルまたはベンゾイル（すなわち、－Ｃ（＝Ｏ）ＰｈまたはＢｚ））、置換メチルエーテル（例えば、メトキシメチルエーテル（ＭＯＭ））、置換エチルエーテル（例えば、メトキシエチルエーテル（ＭＯＥ）、置換ベンジルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、シリルエーテル（例えば、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリ－イソ－プロピルシリルオキシメチル（ＴＯＭ）、またはｔ－ブチルジフェニルシリル）、エステル（例えば、安息香酸エステル）、カーボネート（例えば、メトキシメチルカーボネート）、スルホネート（例えば、トシレートまたはメシレート）、非環式ケタール（例えば、ジメチルアセタール）、環式ケタール（例えば、１，３－ジオキサンまたは１，３－ジオキソラン）、非環式アセタール、環式アセタール、非環式ヘミアセタール、環式ヘミアセタール、環式ジチオケタール（例えば、１，３－ジチアンまたは１，３－ジチオラン）、およびトリアリールメチル基（例えば、トリチル、モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）、４，４’－ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、または４，４’，４’’－トリメトキシトリチル（ＴＭＴｒ））が含まれる。
【0080】
「脱離基」という用語は、本明細書で使用される場合、化学反応において別の原子または部分によって置き換えることができるいずれかの原子または部分を指す。より具体的には、一部の実施形態では、「脱離基」は、求核置換反応において置き換えられる原子または部分を指す。一部の実施形態では、「脱離基」は、強酸の共役塩基であるいずれかの原子または部分である。好適な脱離基の例として、トシレートおよびハロゲンが挙げられるが、それらに限定されない。脱離基の非限定的な特徴および例は、例えば、Organic Chemistry, 2d ed., Francis Carey (1992), pages 328-331、Introduction to Organic Chemistry, 2d ed., Andrew Streitwieser and Clayton Heathcock (1981), pages 169-171、およびOrganic Chemistry, 5th ed., John McMurry (2000), pages 398 and 408において見出すことができ、それらはすべて、脱離基の特徴および例を開示する限られた目的のために、参照により本明細書に組み込まれる。
【0081】
「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書で使用される場合、広範な意味の用語であり、当業者にとって通常および通例のその意味を与えられるべきであり（特別なまたは特化された意味に限定されるべきではない）、限定されるものではないが、それらが投与される生物に対して著しい刺激を引き起こさず、化合物の生物活性および特性を無効にしない、化合物の塩を指す。一部の実施形態では、塩は、化合物の酸付加塩である。薬学的な塩は、化合物を、無機酸、例えば、ハロゲン化水素酸（例えば、塩酸または臭化水素酸）、硫酸、硝酸、およびリン酸と反応させることによって得ることができる。薬学的な塩は、化合物を、有機酸、例えば、脂肪族または芳香族カルボン酸またはスルホン酸、例えば、ギ酸、酢酸（ＡｃＯＨ）、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、マロン酸、マレイン酸、フマル酸、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、コハク酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸、酪酸、フェニル酢酸、フェニル酪酸、バルプロ酸、１，２－エタンジスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、２－ナフタレンスルホン酸、またはナフタレンスルホン酸と反応させることによって得ることもできる。薬学的な塩は、化合物を塩基と反応させて、塩、例えば、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えば、リチウム、ナトリウムもしくはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム、マグネシウムもしくはアルミニウム塩、有機塩基、例えば、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、（Ｃ１～Ｃ７アルキル）アミン、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミンの塩、ならびにアミノ酸、例えば、アルギニンおよびリシンとの塩、または無機塩基、例えば、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウムなどの塩を形成することによって得ることもできる。一部の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、トリフルオロ酢酸塩の形態であり得る。
【0082】
本明細書で使用される場合、「ヌクレオチド」は、窒素含有複素環式塩基、糖、および１つまたは複数のホスフェート基を含む。ヌクレオチドは、核酸配列のモノマー単位である。ＲＮＡでは、糖はリボースであり、ＤＮＡではデオキシリボース、すなわちリボースに存在するヒドロキシ基が欠如している糖である。窒素含有複素環式塩基は、プリン塩基またはピリミジン塩基であり得る。プリン塩基には、アデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにそれらの修飾誘導体またはアナログ、例えばデアザプリンが含まれる。ピリミジン塩基には、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、およびウラシル（Ｕ）、ならびにそれらの修飾誘導体またはアナログが含まれる。デオキシリボースのＣ－１原子は、ピリミジンのＮ－１またはプリンのＮ－９に結合している。
【0083】
本明細書で使用される場合、「ヌクレオシド」は、構造的にはヌクレオチドに類似しているが、ホスフェート部分が欠けている。ヌクレオシドアナログの例は、標識が塩基に連結しており、糖分子に結合したホスフェート基がないものである。「ヌクレオシド」という用語は、本明細書では、当業者により理解されるその通常の意味で使用される。例として、リボース部分を含むリボヌクレオシドおよびデオキシリボース部分を含むデオキシリボヌクレオシドが挙げられるが、それらに限定されない。修飾ペントース部分は、酸素原子が炭素で置き換えられ、および／または炭素が硫黄原子もしくは酸素原子で置き換えられている、ペントース部分である。「ヌクレオシド」は、置換された塩基および／または糖部分を有することができるモノマーである。加えて、ヌクレオシドは、より大きいＤＮＡおよび／またはＲＮＡのポリマーおよびオリゴマーに組み込むことができる。
【0084】
「プリン塩基」という用語は、本明細書では当業者によって理解されるその通常の意味で使用され、その互変異性体を含む。同様に、「ピリミジン塩基」という用語は、本明細書では当業者によって理解されるその通常の意味で使用され、その互変異性体を含む。必要に応じて置換されているプリン塩基の非限定的な一覧には、プリン、デアザプリン、７－デアザプリン、アデニン、７－デアザアデニン、グアニン、７－デアザグアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、アロキサンチン、７－アルキルグアニン（例えば、７－メチルグアニン）、テオブロミン、カフェイン、尿酸およびイソグアニンが含まれる。ピリミジン塩基の例として、シトシン、チミン、ウラシル、５，６－ジヒドロウラシルおよび５－アルキルシトシン（例えば、５－メチルシトシン）が挙げられるが、それらに限定されない。
【0085】
本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドが本明細書に記載されるヌクレオシド化合物を「含む」または「組み込む」と記載される場合、本明細書に記載されるヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドと共有結合を形成することを意味する。一部の実施形態では、共有結合は、本明細書に記載される式（Ｉ）のヌクレオシドの５’ヒドロキシ基と別のヌクレオシド（オリゴヌクレオシドの末端ヌクレオシドであり得る）の３’ホスホロアミダイト基との反応によってホスホジエステル結合を形成するか、または本明細書に記載される式（Ｉ）のヌクレオシドの３’ホスホロアミダイト基と別のヌクレオシド（オリゴヌクレオシドの末端ヌクレオシドであり得る）の５’ヒドロキシ基との反応によってホスホジエステル結合もしくはその等価物（例えば、チオホスホジエステル）を形成することによって形成される。
【0086】
本明細書で使用される場合、「誘導体」または「アナログ」は、修飾塩基部分および／または修飾糖部分を有する合成ヌクレオシドまたはヌクレオチド誘導体を意味する。そのような誘導体およびアナログは、例えば、Scheit, Nucleotide Analogs (John Wiley & Son, 1980)およびUhlman et al., Chemical Reviews 90:543-584, 1990に記載されている。ヌクレオチドアナログはまた、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキル－ホスホネート、ホスホロアニリデート（phosphoranilidate）、ホスホロアミダイト、およびホスホロアミデート連結を含む修飾ホスホジエステル連結を含むことができる。「誘導体」および「アナログ」は、本明細書で使用される場合、交換可能に使用することができ、本明細書で定義される「ヌクレオチド」および「ヌクレオシド」という用語によって包含される。
【0087】
本明細書で使用される場合、「ホスフェート」という用語は、当業者によって理解されるその通常の意味で使用され、そのプロトン化形態を含む（例えば、
）。本明細書で使用される場合、「モノホスフェート」、「ジホスフェート」、および「トリホスフェート」という用語は、当業者によって理解されるその通常の意味で使用され、そのプロトン化形態を含む。
式（Ｉ）の化合物
【化16】
式（Ｉ）の化合物
【0088】
一部の実施形態は、本明細書に記載される通りの式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容されるその塩
を提供する。
【化17】
【0089】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、化合物は、式（Ｉａ）
または薬学的に許容されるその塩の構造を有する。他の実施形態では、化合物は、式（Ｉｂ）
または薬学的に許容されるその塩の構造を有する。
【化18】
【化19】
【0090】
式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃのそれぞれは、独立に、水素、ベンジル（Ｂｎ）、または－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１Ａであり、Ｒ１Ａは、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、または必要に応じて置換されているフェニルである。一部の実施形態では、Ｒ１ａは、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３（Ａｃ）である。一部の実施形態では、Ｒ１ａは、Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ（Ｂｚ）である。一部の実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈである。一部の実施形態では、Ｒ１ｃは、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１ｃは、Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈである。一部の実施形態では、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ１ｃのそれぞれは、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。他の一部の実施形態では、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ１ｃのそれぞれは、Ｈである。他の一部の実施形態では、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ１ｃのそれぞれは、Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈである。
【0091】
式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ２は、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１～６アルキルである。他の実施形態では、Ｒ２は、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１～６ハロアルキルである。一実施形態では、Ｒ２は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。別の実施形態では、Ｒ２は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＦ３である。
【0092】
式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、－Ｏ－（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、またはヒドロキシ保護基である。一部の実施形態では、Ｒ３は、Ｈである。他の実施形態では、Ｒ３は、－ＯＨである。さらなる他の実施形態では、Ｒ３は、－ＯＣＨ３である。またさらなる他の実施形態では、Ｒ３は、－Ｆである。一部の実施形態では、Ｒ３は、－ＯＣＦ３である。一部の実施形態では、Ｒ３は、ヒドロキシ保護基である。一実施形態では、Ｒ３は、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３（－Ｏ－ＭＯＥ）である。別の実施形態では、Ｒ３は、－Ｏ－ｔｅｒｔブチルジメチルシリル（－Ｏ－ＴＢＤＭＳ）である。一実施形態では、Ｒ３は、－Ｏ－トリ－イソプロピルシリルオキシメチル（－Ｏ－ＴＯＭ）である。
【0093】
式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ４は、水素である。他の実施形態では、Ｒ４は、ホスホロアミダイト部分である。さらなる他の実施形態では、Ｒ４は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４Ａであり、Ｒ４Ａは、－ＯＨ、－ＯＲ８または－ＮＲ９Ｒ１０である。一部の実施形態では、Ｒ９およびＲ１０のそれぞれは、独立に、Ｈ、必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルまたはアミノ保護基である。他の実施形態では、Ｒ４は、－Ｐ（ＯＲ４Ｂ）ＮＲ４ＣＲ４Ｄであり、Ｒ４Ｂ、Ｒ４ＣおよびＲ４Ｄのそれぞれは、独立に、Ｈ、Ｃ１～６ハロアルキル、または必要に応じて置換されているＣ１～６アルキルである。一実施形態では、Ｒ４は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨである。別の実施形態では、Ｒ４は、
である。
【化20】
【0094】
式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ５は、トリチルタイプのヒドロキシ保護基である。一部の実施形態では、Ｒ５は、（４－メトキシフェニル）ジフェニルメチル（すなわち、モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ））である。他の実施形態では、Ｒ５は、ビス（４－メトキシフェニル）フェニルメチル（すなわち、４，４’－ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ））である。さらなる他の実施形態では、Ｒ５は、トリス（４－メトキシフェニル）メチル（すなわち、４，４’，４’’－トリメトキシトリチル（ＴＭＴｒ））である。一部の実施形態では、Ｒ５は、９－フェニルキサンテン－９－イルである。他の実施形態では、Ｒ５は、９－（４－メトキシフェニル）キサンテン－９－イルである。
【0095】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｇは、
である。他の実施形態では、Ｇは、Ｒ７で必要に応じて置換されているトリアゾレンである。一部の実施形態では、Ｒ７は、ハロまたはＣ１～Ｃ６アルキルである。一実施形態では、Ｒ７は、メチルである。
【化21】
【0096】
式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物の一部の実施形態では、Ｂは、天然核酸塩基である。他の実施形態では、Ｂは、修飾天然核酸塩基である。さらなる他の実施形態では、Ｂは、非天然核酸塩基である。一部の実施形態では、Ｂは、
である。他の実施形態では、Ｂは、
である。他の実施形態では、Ｂは、
である。さらなる他の実施形態では、Ｂは、
である。またさらなる他の実施形態では、Ｂは、
である。一部の実施形態では、Ｂは、
であり、Ｒｘは、水素もしくはアミノ保護基であるか、または－ＮＨＲｘの水素は存在せず、Ｒｘは、二価のアミノ保護基である。一部の実施形態では、Ｒｘは、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１～６アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒｘは、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３（Ａｃ）、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、または－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）２（ｉＢｕ）である。他の実施形態では、Ｒｘは、－Ｃ（＝Ｏ）フェニルである。他の一部の実施形態では、－ＮＨＲｘの水素は存在せず、窒素原子に直接結合しているＲｘは、アミノ保護基、例えば、アミジンタイプの保護基またはフタロイルタイプの保護基を形成する。そのような一部の実施形態では、Ｒｘは、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミジン
である。他の一部の実施形態では、Ｒｘは、
である。
【化22】
【化23】
【化24】
【化25】
【化26】
【化27】
【化28】
【化29】
【0097】
式（Ｉ）、（Ｉａ）、または（Ｉｂ）の化合物の一部の実施形態では、各Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、独立に、結合、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｓ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－、－Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｓ）Ｏ－、－ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－、－ＮＲ６Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６－、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ－、－ＯＰ（＝Ｓ）（ＯＨ）Ｏ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ６－、必要に応じて置換されているＣ１～１０アルキレン、または１つもしくは複数の炭素原子（炭素に結合している水素（複数可）と一緒に）がＣ（＝Ｏ）、Ｏ、ＳもしくはＮで置き換えられている必要に応じて置換されている２～１５員のヘテロアルキレンであり、ただし、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３のうちの少なくとも１つは、結合ではない。そのような一部の実施形態では、Ｒ６は、Ｈまたは必要に応じて置換されているＣ１～６アルキル、例えば、メチルまたはトリフルオロメチルである。一部のさらなる実施形態では、Ｌ１は、結合、Ｃ１～１０アルキレン、または１つもしくは複数の炭素原子（すなわち、ＣＨ２）がＣ（＝Ｏ）、ＯもしくはＮで置き換えられている２～１５員のヘテロアルキレンである。一部の実施形態では、Ｌ１は、Ｃ１～５アルキレンである。他の一部の実施形態では、Ｌ１は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）－１～４である。他の一部の実施形態では、Ｌ１は、３～１０または３～６員の直鎖ヘテロアルキレンであり、１、２または３個の炭素原子は、窒素またはＣ（＝Ｏ）によって置き換えられている。一部の実施形態では、Ｌ２は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－ －ＮＲ６－、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、ＯもしくはＮで置き換えられている２～１５員のヘテロアルキレンである。そのような一部の実施形態では、Ｒ６は、Ｈまたはメチルである。一部の実施形態では、Ｌ２は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）－１～４である。他の一部の実施形態では、Ｌ２は、３～１０または３～６員の直鎖ヘテロアルキレンであり、１、２または３個の炭素原子は、窒素またはＣ（＝Ｏ）によって置き換えられている。一部のさらなる実施形態では、Ｌ３は、結合、Ｃ１～１０アルキレン、または１つもしくは複数の炭素原子がＣ（＝Ｏ）、ＯもしくはＮで置き換えられている２～１５員のヘテロアルキレンである。一部の実施形態では、Ｌ３は、Ｃ１～５アルキレンである。他の一部の実施形態では、Ｌ３は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）－１～４である。他の一部の実施形態では、Ｌ３は、３～１０または３～６員の直鎖ヘテロアルキレンであり、１、２または３個の炭素原子は、窒素またはＣ（＝Ｏ）によって置き換えられている。一部の実施形態では、Ｌ１だけが結合である。一部の実施形態では、Ｌ２だけが結合である。一部の実施形態では、Ｌ３だけが結合である。他の実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３の少なくとも１つは、必要に応じて置換されているＣ６～１０アリーレン（例えば、フェニレン）、必要に応じて置換されているＣ３～１０シクロアルキレン（例えば、Ｃ３～７シクロアルキレン（clyclalkylene））、必要に応じて置換されている５～１０員のヘテロアリーレン（例えば、Ｏ、ＮまたはＳから選択される１、２または３個のヘテロ原子を含有する５または６員のヘテロアリーレン）、および必要に応じて置換されている５～１０員のヘテロシクリレン（例えば、５または６員のヘテロシクリレン、例えば、ピペリジレン、ピペラジニレンまたはモルホリニレン）を含む環または環系である。一部の実施形態では、Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３は、－（ＣＨ２）２～６Ｃ（＝Ｏ）－（例えば、－（ＣＨ２）４Ｃ（＝Ｏ）－）であり得る。他の一部の実施形態では、Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３は、－［（ＣＨ２）２Ｏ］１～５－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－（例えば、－［（ＣＨ２）２Ｏ］２－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－）であり得る。他の一部の実施形態では、Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３は、－［（ＣＨ２）２Ｏ］１～５（ＣＨ２）１～４－（例えば、－［（ＣＨ２）２Ｏ］２（ＣＨ２）２－）であり得る。
【0098】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｌ４は、結合である。他の実施形態では、Ｌ４は、必要に応じて置換されているＣ１～１０アルキレンである。例えば、一部の実施形態では、Ｌ４は、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－である。さらなる他の実施形態では、Ｌ４は、必要に応じて置換されている２～１５員のヘテロアルキレンであり、１つまたは複数の炭素原子が、Ｃ（＝Ｏ）、Ｏ、ＳまたはＮで置き換えられている。例えば、一部の実施形態では、Ｌ４は、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐであり、ｐは、１、２、３、４、または５である。
【0099】
式（Ｉ）の化合物のさらなる非限定的な例として、
ならびに薬学的に許容されるその塩が挙げられる
［式中、Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、－Ｏ－（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、またはヒドロキシ保護基であり、
各Ｒｘは、独立に、Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、－Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ、または－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ４は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨまたは
である］。さらなる実施形態では、Ｒ３は、Ｈ、－Ｆ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、または－Ｏ－ｔｅｒｔブチルジメチルシリルである。さらなる実施形態では、化合物は、
から選択され得る。
ＧａｌＮＡｃヌクレオシドとコンジュゲートした固体支持体
【化30】
【化31】
［式中、Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、－Ｏ－（Ｃ１～６アルコキシ）Ｃ１～６アルキル、またはヒドロキシ保護基であり、
各Ｒｘは、独立に、Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、－Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ、または－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ４は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨまたは
【化32】
【化33】
ＧａｌＮＡｃヌクレオシドとコンジュゲートした固体支持体
【0100】
本出願の一部の実施形態は、例えば化合物のＲ４を介して共有結合している、本明細書に記載される式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）のヌクレオシド化合物を含む固体支持体に関する。一実施形態では、Ｒ４は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨである。さらなる実施形態では、ヌクレオシド化合物は、部分
［式中、破線は、必要に応じてさらなるリンカーを通しての固体支持体との連結を指し、波線は、化合物の残部分へのヌクレオシド化合物の３’酸素の結合点を指す］を介して固体支持体に共有結合している。さらなる実施形態では、固体支持体は、オリゴヌクレオチドを含み、化合物は、オリゴヌクレオチド配列、例えば、オリゴ配列の末端（５’末端または３’末端のいずれか）に組み込まれる。いずれかの実施形態では、固体支持体は、制御多孔質ガラス（ＣＰＧ）またはマクロ多孔質ポリスチレン（ＭＰＰＳ）を含み得る。
オリゴヌクレオチド合成における、ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたヌクレオシド
【化34】
オリゴヌクレオチド合成における、ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたヌクレオシド
【0101】
本出願の一部の実施形態は、本明細書に記載される化合物をオリゴヌクレオチドと反応させるステップを含む、合成オリゴヌクレオチドを調製するための方法に関する。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１～１００塩基長、５～５０塩基長、または１０～３０塩基長を含む。さらなる実施形態では、反応は、固体支持体上で実施される。
【0102】
図６は、本明細書に記載されるホスホロアミダイト部分を含有するヌクレオシドを使用するオリゴヌクレオチドの合成サイクルを示す。そのサイクルは、典型的に、以下に詳説される以下のステップを含む。
ステップ１：脱ブロック（脱トリチル化）
ステップ１：脱ブロック（脱トリチル化）
【0103】
ＤＭＴｒ基は、不活性溶媒（ジクロロメタンまたはトルエン）中、酸の溶液、例えば２％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）または３％ジクロロ酢酸（ＤＣＡ）を用いて除去される。形成されたオレンジ色のＤＭＴｒカチオンを洗い流し、そのステップにより、固体支持体に結合した、遊離５’末端ヒドロキシ基を担持するオリゴヌクレオチド前駆体が得られる。
ステップ２：カップリング
ステップ２：カップリング
【0104】
アセトニトリル中のヌクレオシドホスホロアミダイト（または数種のホスホロアミダイトの混合物）の０．０２～０．２Ｍ溶液を、酸性アゾール触媒、１Ｈ－テトラゾール、５－エチルチオ－１Ｈ－テトラゾール、２－ベンジルチオテトラゾール、４，５－ジシアノイミダゾール、またはいくつかの類似の化合物の０．２～０．７Ｍ溶液によって活性化する。混合は、通常、非常に短時間であり、オリゴヌクレオチド合成機（以下参照）の流体ラインで行われ、一方、構成成分は、固体支持体を含有する反応器に送達される。次に、支持体に結合した材料の１．５～２０倍過剰の活性化されたホスホロアミダイトを、出発固体支持体と接触させるか（第１のカップリング）、または支持体に結合したオリゴヌクレオチド前駆体と接触させ（それに続くカップリング）、その５’－ヒドロキシ基は、入ってくるヌクレオシドホスホロアミダイトの活性化されたホスホロアミダイト部分と反応して、亜リン酸トリエステル連結を形成する。その反応はまた、特にホスホロアミダイトの希薄溶液が使用される場合、水の存在に対して高度に感受性であるので、一般に無水アセトニトリル中で行われる。カップリングが完了したら、あらゆる非結合試薬および副生成物を洗浄によって除去する。
ステップ３：キャッピング
ステップ３：キャッピング
【0105】
キャッピングステップは、固体支持体に結合した材料を、無水酢酸および１－メチルイミダゾールの混合物で、またはさほど頻繁ではないが触媒としてのＤＭＡＰで処理することによって実施され、ホスホロアミダイト方法において２つの目的を果たす。カップリング反応の完了後、小さいパーセンテージの固体支持体に結合した５’－ＯＨ基（０．１～１％）が未反応のまま残るので、一般に（ｎ－１）ショートマーと呼ばれる内部塩基が欠失したオリゴヌクレオチドの形成を防止するために、さらなる鎖伸長から永続的にブロックされる必要がある。未反応５’－ヒドロキシ基は、大部分がキャッピング混合物によってアセチル化される。
ステップ４：酸化
ステップ４：酸化
【0106】
新しく形成された三配位亜リン酸トリエステル連結は、天然ではなく、オリゴヌクレオチド合成の条件下での安定性が限られている。弱塩基（ピリジン、ルチジン、またはコリジン）の存在下でヨウ素および水を用いる、支持体に結合した材料の処理により、亜リン酸トリエステルは、天然に存在するリン酸ジエステルのヌクレオシド間連結の保護前駆体である四配位リン酸トリエステルに酸化される。酸化は、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシドまたは（１Ｓ）－（＋）－（１０－カンファースルホニル）－オキサジリジン（ＣＳＯ）を使用して無水条件下で行うことができる。酸化ステップを硫化ステップで置き換えて、オリゴヌクレオチドホスホロチオエートを得ることができる。後者の場合、硫化ステップは、最も良くはキャッピングの前に行われる。
【0107】
固相合成において、構築されるオリゴヌクレオチドは、その３’末端ヒドロキシ基を介して固体支持体材料に共有結合し、鎖構築の全過程にわたって固体支持体材料に結合したままである。固体支持体はカラムに収容され、そのカラムの寸法は、合成のスケールに応じて決まり、０．０５ｍＬ～数リットルの間で変わり得る。鎖構築の最後に、オリゴヌクレオチドは固体支持体から放出され、カラムまたはウェルから溶出される。最も頻繁に使用される２種の固相材料は、制御多孔質ガラス（ＣＰＧ）およびマクロ多孔質ポリスチレン（ＭＰＰＳ）である。
【0108】
有機固相合成およびペプチド合成とは対照的に、オリゴヌクレオチドの合成は、最も良くは非膨潤性または低膨潤性の固体支持体上で進行する。最も頻繁に使用される２種の固相材料は、制御多孔質ガラス（ＣＰＧ）およびマクロ多孔質ポリスチレン（ＭＰＰＳ）である。
【0109】
ＣＰＧは、一般に、その孔径によって定義される。オリゴヌクレオチド化学において、５００、１０００、１５００、２０００、および３０００Åの孔径が、それぞれ約５０、８０、１００、１５０、および２００マーのオリゴヌクレオチドの調製を可能にするために使用される。さらなる処理に好適な天然ＣＰＧを作製するために、材料の表面を、（３－アミノプロピル）トリエトキシシランで処理して、アミノプロピルＣＰＧを得る。アミノプロピルアームをさらに延長して、長鎖アミノアルキル（ＬＣＡＡ）ＣＰＧをもたらすことができる。次に、オリゴヌクレオチド合成に好適なリンカーのための固着点として、アミノ基が使用される。
【0110】
オリゴヌクレオチド合成に好適なＭＰＰＳは、細孔生成（porogeneous）剤の存在下で、ジビニルベンゼン、スチレン、および４－クロロメチルスチレンの重合によって得られた、低膨潤性の高度に架橋されたポリスチレンである。得られたマクロ多孔質クロロメチルＭＰＰＳは、アミノメチルＭＰＰＳに変換される。
【実施例】
【0111】
上述で論じられる実施形態の一部の態様を、以下の実施例においてさらに詳細に開示するが、以下の実施例は、本開示の範囲を限定することを決して意図されない。当業者は、他の多くの実施形態もまた、上述の本明細書および特許請求の範囲に記載される通りの、本出願の組成物、キットおよび方法の範囲内に含まれることを認識されよう。
（実施例１）
２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－（２－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）エチル）アセトアミドの調製
（実施例１）
２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－（２－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）エチル）アセトアミドの調製
【化35】
【0112】
２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－（２－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）エチル）アセトアミドリンカー（１）を使用して、ヌクレオシドにおける天然塩基、修飾塩基、または非天然塩基にＧａｌＮＡｃをコンジュゲートすることができる。リンカーは、２ステッププロセスを使用して調製した。
【0113】
ステップ１：水素化ナトリウム（３６ｇ、０．９ｍｏｌ、鉱物油中６０％分散液）を、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）５０ｍＬ中で撹拌した。混合物を沈殿するまで静置し、ＴＨＦをデカントした。この洗浄プロセスをさらに１回反復した。洗浄した水素化ナトリウムに、ＴＨＦ１３３ｍＬを添加し、得られた懸濁液を０℃に冷却した。エタノールアミン（３０．５４ｇ、０．５ｍｏｌ）を、１０分間にわたって懸濁液に滴下添加し、反応混合物を周囲温度で２時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、臭化プロパルギル（８９．２８ｇ、０．６モル、トルエン中８０％）を滴下添加した。添加が完了した後、反応物を周囲条件で１６時間撹拌した。次に、混合物をＴＨＦ２００ｍＬで希釈し、濾過し、固体をＴＨＦ（５００ｍＬ）で洗浄した。ＴＨＦ濾液を合わせ、蒸発させた。残留物を真空蒸留によって精製して、沸点約９５℃／６ｍｍＨｇを有するアミノエチルプロパルギルエーテル（ＡＥＰ）２１．４４ｇを得た。
【0114】
ステップ２：ＴＨＦ１００ｍＬ中のトリフルオロ酢酸エチル（４６．０ｇ、０．３２４ｍｏｌ）の溶液に、アミノエチルプロパルギルエーテル（２１．４ｇ、０．２１６モル）を１５分間にわたって０℃で滴下添加した。添加が完了した後、反応混合物を周囲温度で２時間撹拌し、分液漏斗に移し、水（１００ｍＬ）で洗浄した。水層を分離し、ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）／ＴＨＦ（１：１、１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、蒸発させて粗生成物を得た。粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィーによって０～１０％酢酸エチル／ジクロロメタン（ＤＣＭ）の勾配で溶出してさらに精製して、２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－（２－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）エチル）アセトアミド（１）３４．４２ｇを得た。化合物（１）はＡＥＰ－ＴＦＡとも呼ばれる。
（実施例２）
ｄｄＵ（ＡＥＰ－ＴＦＡ）の調製
（実施例２）
ｄｄＵ（ＡＥＰ－ＴＦＡ）の調製
【化36】
【0115】
乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１００ｍＬ中の５－ヨード－ｄｄＵ（２）（６．７６ｇ、０．０２モル）の溶液に、２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－（２－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）エチル）アセトアミド（１）（１１．７１ｇ、０．０６ｍｏｌ）、ＣｕＩ（０．７６ｇ、０．００４ｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２．３１ｇ、０．００２ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ）（５．８６ｍＬ、０．０４２モル）を添加した。反応混合物を、アルゴン雰囲気下、周囲温度で４時間撹拌した。反応をＨＰＬＣによってモニタリングし、ＨＰＬＣによって出発材料である５－ヨード－ｄｄＵ（２）が３％未満になったことが示されたら完了したと決定された。ビカーボネート樹脂を反応混合物に添加し、得られた混合物を１時間撹拌した。混合物を濾過し、固体をＤＣＭ－メタノール（１：１）で洗浄した。濾液を蒸発させて粗生成物を得、それをクロマトグラフィーによって２５０ｇのシリカゲルを用いて、０～１０％メタノール（ＭｅＯＨ）／ＤＣＭの勾配で溶出してさらに精製して、生成物ｄｄＵ（ＡＥＰ－ＴＦＡ）（３）６～６．５ｇを得た。
【0116】
類似の誘導体化ヌクレオシド（例えば、ｄｄＧ（ＡＥＰ－ＴＦＡ）、ｄｄＣ（ＡＥＰ－ＴＦＡ）、ｄｄＡ（ＡＥＰ－ＴＦＡ）、ｄｄＴ（ＡＥＰ－ＴＦＡ）等）は、この実施例に記載される方法に従って調製することができる。
（実施例３）
ヌクレオシドコンジュゲーションのためのＧａｌＮＡｃ部分の調製
（実施例３）
ヌクレオシドコンジュゲーションのためのＧａｌＮＡｃ部分の調製
【化37】
【0117】
β－Ｄ－ガラクトサミンペンタアセテート（１０ｇ、２５．６８ｍｍｏｌ）および５－ヘキセン－１－オール（２．８３ｇ、２８．２５ｍｍｏｌ）を、無水１，２－ジクロロエタン（１００ｍＬ）に溶解させた。トリフルオロメタンスルホン酸（ＴｆＯＨ）（０．５８ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を約１８時間還流させた。次に、反応混合物を室温に冷却し、１Ｍ ＮａＨＣＯ３溶液（５０ｍＬ）でクエンチし、有機層を分離した。有機層を、水（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発乾固させて、粗製物（４）１１．５２ｇを得た。
【0118】
上述の粗製物（４）（３．９ｇ、９．０８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解させ、次にアセトニトリル（２０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２０ｍＬ）を添加し、続いて塩化ルテニウム（７５ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を５℃に冷却し、４．５ｍｏｌ当量の（メタ）過ヨウ素酸ナトリウム（８．７ｇ、４０．６７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５℃で１５分間撹拌し、次に室温に加温し、さらに２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによって確認した。反応混合物を濾過して固体を除去し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３９．５ｇを濾液に添加した。次に、濾液を濾過し、減圧下で蒸発させて、粗生成物（５）（１２．２３ｇ）を得た。
（実施例４）
ＤＭＴ－ｄＵ－ＥＯ－ＧａｌＮＡｃ－ホスホロアミダイト／ＣＧＰの調製
（実施例４）
ＤＭＴ－ｄＵ－ＥＯ－ＧａｌＮＡｃ－ホスホロアミダイト／ＣＧＰの調製
【化38】
【0119】
１００ｍＬの丸底フラスコにおいて、５－ヨード－２’－デオキシウリジン（１．０ｇ、２．８２ｍｍｏｌ）をピリジン（３０ｍＬ）に溶解させた。ＤＭＴ－Ｃｌ（１．０４ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）をすぐに添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによって確認した。次に、この混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（５１ｍＬ）に注ぎ、有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過後、有機層を真空下で濃縮乾固させた。粗生成物を、カラム精製によってＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２％～８％ＭｅＯＨ）を使用して精製した。純粋な画分を収集し、真空下で濃縮乾固させて、５’－ＤＭＴ保護－５－ヨード－２’デオキシウリジン（１．４７ｇ、収率８０％）を得た。ＭＳ：実測値［Ｍ－Ｈ］＝６５５．５、計算値［Ｍ－Ｈ］＝６５５．１。
【0120】
１００ｍＬのＲＢフラスコにおいて、５’－ＤＭＴ保護－５－ヨード－２’デオキシウリジン（１．３１ｇ、１．９９ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．２３ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）およびＣｕＩ（０．１１５ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を添加した。空気を除去した後、ＴＥＡ（０．８０ｇ、８．０ｍｍｏｌ）、化合物１（１．１６ｇ、６．０ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（３０ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で５時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによって確認し、次に、この混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（５１ｍＬ）に注いだ。ＤＣＭ（８０ｍＬ）を添加し、有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過後、有機層を真空下で濃縮乾固させた。粗生成物を、カラム精製によってＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１０％ＭｅＯＨ）を使用して精製した。純粋な画分を収集し、真空下で濃縮乾固させて、化合物６（３２０ｍｇ、収率２２％）を得た。ＭＳ：実測値［Ｍ－Ｈ］＝７２２．８、計算値［Ｍ－Ｈ］＝７２２．２。
【0121】
５０ｍＬの丸底フラスコにおいて、化合物６（３２０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（２０ｍＬ）に溶解させ、ＮＨ４ＯＨ水溶液（１．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによって確認した。次に、この混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を添加した。有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過後、有機層を真空下で濃縮乾固させた。粗生成物を、カラム精製によってＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～２０％ＭｅＯＨ）を使用して精製した。純粋な画分を収集し、真空下で濃縮乾固させて、化合物７（１６０ｍｇ、収率５８％）を得た。ＭＳ：実測値［Ｍ－Ｈ］＝６２６．８、計算値［Ｍ－Ｈ］＝６２６．３。
【0122】
５０ｍＬの丸底フラスコにおいて、化合物７（５０ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解させた。化合物５（過アセチル化ＧａｌＮＡｃペンテン酸）（４０ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（６０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（４０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによって確認した。次に、この混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を添加した。有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過後、有機層を真空下で濃縮乾固させた。粗生成物を、カラム精製によってＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１０％ＭｅＯＨ）を使用して精製した。純粋な画分を収集し、真空下で濃縮乾固させて、化合物８（２２ｍｇ、収率２６％）を得た。ＭＳ：実測値［Ｍ－Ｈ］＝１０５６．１、計算値［Ｍ－Ｈ］＝１０５６．１。
【0123】
５０ｍＬの丸底フラスコにおいて、化合物８（４５０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解させた。２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト（2-Cyanoethyl N,N-diisopropylchlorophosphoramindite）（１２０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１６４ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによって確認し、次に、この混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）に注いだ。ＤＣＭ（２０ｍＬ）を添加し、有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過後、有機層を真空下で濃縮乾固させた。粗生成物を、カラム精製によってＤＣＭ／ＴＥＡ（０％～８０％ＴＥＡ）を使用して精製した。純粋な画分を収集し、真空下で濃縮乾固させて、化合物９（１２０ｍｇ、収率２２％）を得た。ＭＳ：実測値［Ｍ＋Ｈ］＝１２５８．１、計算値［Ｍ＋Ｈ］＝１２５８．３。３１ＰＮＭＲ（ジアステレオマーの混合物、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ１４７．４８１、１４７．０８４。
【0124】
ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたウリジン－ＣＰＧ化合物の調製：ステップ１：５０ｍＬの丸底フラスコにおいて、化合物８（８３ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解させた。無水コハク酸（１１ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（１６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによって確認し、次に、この混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）に注いだ。ＤＣＭ（２０ｍＬ）を添加し、有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過後、有機層を真空下で濃縮乾固させた。粗生成物を、カラム精製によってＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１０％ＭｅＯＨ）を使用して精製した。純粋な画分を収集し、真空下で濃縮乾固させて、白色固体（６０ｍｇ、収率６６％）を得た。ＭＳ：実測値［Ｍ－Ｈ］＝１１５６．１０、計算値［Ｍ－Ｈ］＝１１５６．２。
【0125】
ステップ２：５０ｍＬの丸底フラスコにおいて、ステップ１からの化合物（８２ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ１０ｍＬに溶解させた。ＨＡＴＵ（２７．４ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（２７．９ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、ＬＣＡＡ ＣＰＧ（１０００Å、２ｇ）を添加し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。濾過後、得られた生成物をＭｅＣＮ（５０ｍｌ×３）およびＴＨＦ（５０ｍｌ×３）で洗浄し、次に真空下で乾燥させて、キャップされていないＣＧＰ生成物１０を得た。キャッピングＡ試薬：（ＴＨＦ／無水酢酸／ピリジン ８０／１０／１０ｖ／ｖ／ｖ、５ｍＬ）およびキャッピングＢ試薬：（１－メチルイミダゾール／ＴＨＦ、１６／８４、ｖ／ｖ、５ｍＬ）をフラスコに添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。濾過後、キャップされたＣＰＧ生成物１０をＥｔＯＨ（５０ｍＬ×３）、ＥｔＯＨ／ピリジン（１０％）（５０ｍＬ×３）、ＴＨＦ（５０ｍＬ×３）およびＤＣＭ（５０ｍＬ×３）で洗浄し、次に真空下で乾燥させた。担持量は、ＵＶ－Ｖｉｓ（４９８ｎｍ）による標準ＤＭＴｒアッセイによって２２μｍｏｌ／ｇであると決定された。
（実施例５）
ＤＭＴ－ｄＡ－ＥＯ－ＧａｌＮＡｃ－ホスホロアミダイトの調製
（実施例５）
ＤＭＴ－ｄＡ－ＥＯ－ＧａｌＮＡｃ－ホスホロアミダイトの調製
【化39】
【0126】
７－デアザ－２’－デオキシ－７－ヨードアデノシン（１．５ｇ、４．０ｍｍｏｌ）をピリジン（１５ｍＬ）に溶解させた。溶液を氷浴で冷却し、ＤＭＴｒＣｌ（１．２ｇ、４．４ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応物を室温まで加温し、ＴＬＣによってモニタリングした。反応の完了後、メタノール（１．０ｍＬ）を添加することによってクエンチした。溶媒を蒸発させ、粗製物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（５％ＭｅＯＨ）を使用するフラッシュカラム精製に供して、５’－ＤＭＴ保護－７－デアザ－２’－デオキシ－７－ヨードアデノシン（5’-DMT protected-7-deaza-2’-deoxy-7-isodoadenosine）（２．３ｇ、収率８５％）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値［Ｍ－Ｈ］＝６７７．１３、実測値［Ｍ－Ｈ］＝６７７．７。
【0127】
５’－ＤＭＴ保護－７－デアザ－２’－デオキシ－７－ヨードアデノシン（１．２ｇ、１．７７ｍｍｏｌ）、化合物１（０．７５ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（４４０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（１５０ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．８ｍｌ）をＤＭＦ（１０．０ｍＬ）に分散させた。溶液を窒素でパージし、２日間撹拌した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。反応の完了後、混合物を濾過した。溶液を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、水（３×３０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１０％ＭｅＯＨ）を使用するフラッシュカラム精製に供して、化合物１１（１．０ｇ、収率７６％）を黄色油状物として得た。ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＝７４６．２７、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝７４６．７。
【0128】
化合物１１（１．０ｇ、１．３４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５．０ｍＬ）に溶解させ、続いてアンモニア水溶液（２０ｍＬ、３０％）を添加した。反応物を室温で２日間撹拌し、ＴＬＣによってモニタリングした。有機溶媒を蒸発させ、混合物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物を、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝（０％～１５％ＭｅＯＨ）を使用するフラッシュカラム精製に供して、化合物１２（０．６２ｇ、収率７２％）を白色泡状物として得た。ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＝６５０．２９、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝６５０．８。
【0129】
化合物１２（５００ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、化合物５（４００ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３２０μＬ）およびＨＡＴＵ（４４０ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５．０ｍＬ）に溶解させた。反応物を室温で２時間撹拌し、ＴＬＣによってモニタリングした。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、水（３×３０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物を、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（０％～１５％ＭｅＯＨ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物１３（５１３ｍｇ、収率６２％）を白色固体として得た。ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＝１０７９．４５、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝１０７９．８。
【0130】
化合物１３（５００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、２－シアノエチルテトライソプロピルホスホロジアミダイト（２１０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（２０ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５．０ｍＬ）に分散させた。反応物を窒素でパージし、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣによってモニタリングした。溶液を水（３×５ｍＬ）およびブライン（５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をアセトニトリル（５ｍＬ）に再溶解させ、ヘプタン（３×５ｍｌ）で洗浄した。溶媒を蒸発させ、粗製物を、ＤＣＭ／ＴＥＡ（４％ＴＥＡ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物１４（２４０ｍｇ、収率６２％）を白色固体として得た。ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＝１２７９．５６、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝１２８０．１。３１ＰＮＭＲ（ジアステレオマーの混合物、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ１４７．６２６、１４６．９６９。
（実施例６）
ＤＭＴ－ｄＡＮＨＢｚ－ＥＯ－ＧａｌＮＡｃ－ホスホロアミダイト／ＣＰＧの調製
（実施例６）
ＤＭＴ－ｄＡＮＨＢｚ－ＥＯ－ＧａｌＮＡｃ－ホスホロアミダイト／ＣＰＧの調製
【化40】
【0131】
７－デアザ－２’－デオキシ－７－ヨードアデノシン（１．０ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）をピリジン（１５ｍＬ）に溶解させた。溶液を氷浴で冷却し、ＴＭＳＣｌ（５．２ｍｌ、２６．６ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応物を、３０分にわたって室温まで加温し、次に、混合物を氷浴で再び冷却し、続いてＢｚＣｌ（０．５２ｍｌ、２．９１ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後、反応を、水（５ｍＬ）を添加することによってクエンチした。有機溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、水（３×３０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１０％ＭｅＯＨ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物１５（０．４２ｇ、収率３３％）を白色固体として得た。ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＝４８１．０３、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝４８１．５。
【0132】
化合物１５（４２５ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）をピリジン（５．０ｍＬ）に溶解させた。溶液を氷浴で冷却し、ＤＭＴｒＣｌ（３３０ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応物を、３０分にわたって室温まで加温し、ＴＬＣによってモニタリングした。反応の完了後、メタノール（１．０ｍＬ）を添加することによってクエンチした。溶媒を蒸発させ、粗製物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～５％ＭｅＯＨ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物１６（５００ｍｇ、収率７７％）を白色固体として得た。ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＝７８３．１６、実測値［Ｍ＋Ｈ］：７８３．６。
【0133】
化合物５（１ｇ、２．２７ｍｍｏｌ）、アミノエチルプロパルギルエーテル（３３７ｍｇ、３．４１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（９４７μＬ、６．８１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１．３ｇ、３．４１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解させた。反応物を室温で２時間撹拌し、ＴＬＣによってモニタリングした。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、水（３×３０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１５％ＭｅＯＨ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物１７（５６７ｍｇ、収率４７％）を白色固体として得た。ＭＳ計算値［Ｍ－Ｈ］＝５２７．２３、実測値［Ｍ－Ｈ］＝５２７．４。
【0134】
化合物１６（５００ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、化合物１７（５００ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１４８ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（２５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２６７μｌ、１．９２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５．０ｍＬ）に分散させた。反応混合物を窒素でパージし、室温で２日間撹拌した。反応をＨＰＬＣによってモニタリングした。反応の完了後、混合物を濾過した。濾液を、酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、水（３×３０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１０％ＭｅＯＨ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物１８（４６８ｍｇ、収率６２％）を薄黄色固体として得た。ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＝１１８４．２７、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝１１８４．０。
【0135】
化合物１８（２００ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、２－シアノエチルテトライソプロピルホスホロジアミダイト（１０２ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（７．３ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５．０ｍＬ）に分散させた。反応物を窒素でパージし、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣによってモニタリングした。溶液を水（３×５．０ｍＬ）およびブライン（５．０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をアセトニトリル（５．０ｍＬ）に再溶解させ、ヘプタン（３×５．０ｍＬ）で洗浄した。溶媒を蒸発させた。粗製物を、ＤＣＭ／ＴＥＡ（４％ＴＥＡ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物１９（１１０ｍｇ、収率４７％）を白色固体として得た。ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＝１３８４．４９、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝１３８４．３。３１Ｐ－ＮＭＲ（ジアステレオマーの混合物、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ１４６．９２３、１４６．３８１。
【0136】
化合物１８（５０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（６．３ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（２１ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２．０ｍＬ）に溶解させた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、ＴＬＣによってモニタリングした。反応の完了後、溶媒を蒸発させ、粗製物をＣＰＧ結合に直接使用した。残留物をアセトニトリル（３．０ｍＬ）に溶解させ、続いてＴＢＴＵ（２０ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（２１ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、および１０００ÅのＣＰＧ（０．６０ｇ）を添加した。反応を摂氏２５度で２時間進行させた。次に、混合物を濾過し、アセトニトリル（３×３．０ｍＬ）、ＴＨＦ（３×３．０ｍＬ）、ＭＴＢＥ（３×３．０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、キャップされていないＣＰＧ生成物を得た。乾燥させたキャップされていないＣＰＧ生成物をＴＨＦ（３．０ｍＬ）に分散させ、続いてピリジン（０．１２ｍＬ）、Ｎ－メチルイミダゾール（０．１２ｍＬ）および無水酢酸（０．１２ｍＬ）を添加した。混合物をロータリーエバポレーターで１時間回転させた。次に、それを濾過し、ＴＨＦ（３×３ｍｌ）、ＥｔＯＨ中１０％ピリジン（３×３．０ｍＬ）、ＥｔＯＨ（３×３．０ｍＬ）、ＡＣＮ（３×３．０ｍＬ）、ＭＴＢＥ（３×３．０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、キャップされたＣＰＧ生成物２０を得た。担持量は、ＵＶ－Ｖｉｓ（４９８ｎｍ）による標準ＤＭＴｒアッセイによって２０μｍｏｌ／ｇであると決定された。
（実施例７）
ＤＭＴ－ｄＵ－クリック－ＰＥＧ－ＧａｌＮＡｃ－ホスホロアミダイト／ＣＰＧの調製
（実施例７）
ＤＭＴ－ｄＵ－クリック－ＰＥＧ－ＧａｌＮＡｃ－ホスホロアミダイト／ＣＰＧの調製
【化41】
【0137】
化合物２１（５’－ＤＭＴ保護－２’－デオキシ－５－ヨードウリジン）（２．８ｇ、４．２７ｍｍｏｌ）、ＴＭＳ－アセチレン（７８４ｍｇ、８．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２８０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（７３ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．４ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３０ｍＬ）に分散させた。反応混合物を窒素でパージし、室温で２日間撹拌した。反応をＨＰＬＣによってモニタリングした。完了後、混合物を濾過した。溶液を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、水（３×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１０％ＭｅＯＨ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物２２（２．０ｇ、収率７５％）を黒色固体として得た。ＭＳ計算値［Ｍ－Ｈ］＝６２５．２４、実測値［Ｍ－Ｈ］＝６２５．８。
【0138】
化合物２２（２００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３．０ｍＬ）に溶解させ、続いてＴＢＡＦ（１ｍｍｏｌ、１．０ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ溶液）を添加した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。混合物を濃縮し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１５％ＭｅＯＨ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物２３（１６９ｍｇ、収率９５％）を褐色油状物として得た。ＭＳ計算値［Ｍ－Ｈ］＝５５３．２１、実測値［Ｍ－Ｈ］＝５５３．６。
【0139】
化合物２３（１．０ｇ、１．８ｍｍｏｌ）、ＧａｌＮＡｃ－ＰＥＧ２－アジド（１．９ｇ、３．７７ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（１０ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．８ｍｌ、４．６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に分散させた。反応物を室温で３日間撹拌し、ＨＰＬＣによってモニタリングした。次に、混合物を濃縮し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１５％ＭｅＯＨ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物２４（３８７ｍｇ、収率２０％）を黒色油状物として得た。ＭＳ計算値［Ｍ－Ｈ］＝１０５８．０７、実測値［Ｍ－Ｈ］＝１０５８．０。
【0140】
化合物２４（３００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、２－シアノエチルテトライソプロピルホスホロジアミダイト（１７１ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（１２ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５．０ｍＬ）に分散させた。反応混合物を窒素でパージし、室温で一晩撹拌した。反応混合物をＴＬＣによってモニタリングした。完了後、混合物を水（３×５．０ｍＬ）およびブライン（５．０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をアセトニトリル（５．０ｍＬ）に再溶解させ、ヘプタン（３×５ｍＬ）で洗浄した。溶媒を蒸発させた。粗製物を、ＤＣＭ／ＴＥＡ（４％ＴＥＡ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、ホスホロアミデート生成物２５（１１３ｍｇ、収率３２％）を白色固体として得た。ＭＳ計算値［Ｍ－Ｈ］＝１２５８．３０、実測値［Ｍ－Ｈ］＝１２５８．２。３１ＰＮＭＲ（ジアステレオマーの混合物、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ１４７．４６５、１４７．０７６。
【0141】
化合物２４（８７ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（１２．３ｍｇ、０．１２３ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（４１．５ｍｇ、０．４１１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２．０ｍＬ）に溶解させた。溶液を室温で１日間撹拌し、ＴＬＣによってモニタリングした。完了後、溶媒を蒸発させ、粗製物をＣＰＧ結合に直接使用した。残留物をアセトニトリル（３．０ｍＬ）に溶解させ、続いてＴＢＴＵ（５２．６ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（３３ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、および１０００ÅのＣＰＧ（０．７０ｇ）を添加した。反応を摂氏２５度で２時間進行させた。次に、混合物を濾過し、アセトニトリル（３×３．０ｍＬ）、ＴＨＦ（３×３．０ｍＬ）、ＭＴＢＥ（３×３．０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、キャップされていないＣＰＧ生成物を得た。乾燥させたキャップされていないＣＰＧ生成物をＴＨＦ（３．０ｍＬ）に分散させ、続いてピリジン（０．１４ｍＬ）、Ｎ－メチルイミダゾール（０．１４ｍＬ）および無水酢酸（０．１４ｍＬ）を添加した。混合物をロータリーエバポレーターで１時間回転させ、次にそれを濾過し、ＴＨＦ（３×３．０ｍＬ）、ＥｔＯＨ中１０％ピリジン（３×３．０ｍＬ）、ＥｔＯＨ（３×３．０ｍＬ）、ＡＣＮ（３×３．０ｍＬ）、ＭＴＢＥ（３×３．０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、キャップされたＣＰＧ生成物２６を得た。担持量は、ＵＶ－Ｖｉｓ（４９８ｎｍ）による標準ＤＭＴｒアッセイによって３１μｍｏｌ／ｇであると決定された。
（実施例８）
ＤＭＴ－ｄＡＮＨＢｚ－クリック－ＰＥＧ－ＧａｌＮＡｃ－ホスホロアミダイト／ＣＰＧの調製
（実施例８）
ＤＭＴ－ｄＡＮＨＢｚ－クリック－ＰＥＧ－ＧａｌＮＡｃ－ホスホロアミダイト／ＣＰＧの調製
【化42】
【0142】
５’－ＤＭＴ保護－７－デアザ－２’－デオキシ－７－ヨードアデノシン（３．３ｇ、４．８７ｍｍｏｌ）をピリジン５０ｍｌに溶解させた。溶液を氷浴で冷却し、ＴＭＳＣｌ（９．６ｍｌ、４９．１ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応物を、３０分にわたって室温まで加温した。次に、混合物を氷浴で再び冷却し、続いてＢｚＣｌ（０．６２ｍｌ、３．４７ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後、反応を、水（１０ｍＬ）を添加することによってクエンチした。有機溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、水（３×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１０％を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物２７（３．０ｇ、収率７９％）を白色固体として得た。ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＝７８３．１６、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝７８３．６。
【0143】
化合物２７（０．９ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）、ＴＭＳ－アセチレン（２２５ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２６０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（４４ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．４８ｍｌ、３．４５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に分散させた。反応混合物を窒素でパージし、３日間撹拌した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。反応の完了後、ＤＭＦを蒸発させ、粗製物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１０％ＭｅＯＨ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物２８（８４３ｍｇ、収率９８％）を褐色油状物として得た。ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＝７５３．３０、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝７５３．６。
【0144】
化合物２８（８４３ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解させ、続いてＴＢＡＦ（３ｍｍｏｌ、３．０ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ溶液）を添加した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。混合物を濃縮し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１５％ＭｅＯＨ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物２９（７１４ｍｇ、収率９３％）を褐色油状物として得た。ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＝６８１．２６、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝６８１．６。
【0145】
化合物２９（７１４ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、ＧａｌＮＡｃ－ＰＥＧ３－アジド（１．１ｇ、２．２ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（２１ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（７１０ｍｇ、５．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に分散させた。反応物を室温で１日間撹拌し、ＬＣ－ＭＳによってモニタリングした。混合物を濃縮し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１５％ＭｅＯＨ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物３０（１．３３ｇ、収率１０７％）を黒色固体として得た。ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＝１１８５．４７、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝１１８５．９。
【0146】
化合物３０（５４６ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、２－シアノエチルテトライソプロピルホスホロジアミダイト（２７８ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（２０ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５．０ｍＬ）に分散させた。反応物を窒素でパージし、室温で一晩撹拌した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。完了後、混合物を水（３×５．０ｍＬ）およびブライン（５．０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をアセトニトリル（５．０ｍＬ）に再溶解させ、ヘプタン（３×５．０ｍＬ）で洗浄した。溶媒を蒸発させた。粗製物を、ＤＣＭ／ＴＥＡ（４％ＴＥＡ）を用いるフラッシュカラム精製に供して、化合物３１（１１０ｍｇ、収率１７％）を褐色油状物として得た。ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＝１３８６．５８、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝１３８６．４。３１ＰＮＭＲ（ジアステレオマーの混合物、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ１４９．６０３、１４９．３６７。
【0147】
化合物３０（８７ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（１１ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（３７ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２．０ｍＬ）に溶解させた。溶液を１日撹拌し、ＴＬＣによってモニタリングした。反応の完了後、溶媒を蒸発させ、粗製物をＣＰＧ結合に直接使用した。残留物をアセトニトリル（３．０ｍＬ）に溶解させ、続いてＴＢＴＵ（４８ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（２３ｍｇ、０．２２５ｍｍｏｌ）、および１０００ÅのＣＰＧ（０．７０ｇ）を添加した。反応を摂氏２５度で２時間進行させた。次に、混合物を濾過し、アセトニトリル（３×３．０ｍＬ）、ＴＨＦ（３×３ｍＬ）、ＭＴＢＥ（３×３．０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、キャップされていないＣＰＧ生成物を得た。乾燥させたキャップされていないＣＰＧ生成物をＴＨＦ（３．０ｍＬ）に分散させ、続いてピリジン（０．１４ｍＬ）、Ｎ－メチルイミダゾール（０．１４ｍＬ）および無水酢酸（０．１４ｍＬ）を添加した。混合物をロータリーエバポレーターで１時間回転させた。次にそれを濾過し、ＴＨＦ（３×３．０ｍＬ）、ＥｔＯＨ中１０％ピリジン（３×３．０ｍＬ）、ＥｔＯＨ（３×３ｍＬ）、ＡＣＮ（３×３．０ｍＬ）、ＭＴＢＥ（３×３．０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、キャップされたＣＰＧ生成物３２を得た。担持量は、ＵＶ－Ｖｉｓ（４９８ｎｍ）による標準ＤＭＴｒアッセイによって３１μｍｏｌ／ｇであると決定された。
（実施例９）
ＧａｌＮＡｃリンカー化合物３３の調製
（実施例９）
ＧａｌＮＡｃリンカー化合物３３の調製
【化43】
【0148】
ステップ１：ＨＯ－ＰＥＧ２－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ（５．０ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）およびＫＨＣＯ３（３．６５ｇ、３６．５ｍｍｏｌ）を、丸底フラスコにおいて撹拌しながらＤＭＦ（６１．０ｍＬ）に溶解させた。臭化ベンジル（４．３５ｍＬ、３６．５ｍｍｏｌ）を滴下添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。揮発性物質を真空中で除去し、残留物をＤＣＭに溶解させた。沈殿物を濾過によって除去し、濾液を濃縮した。粗製材料をシリカカラム（溶離液：ＤＣＭ中０～１５％ＭｅＯＨ）によって精製した。純粋な画分を収集し、真空下で濃縮乾固させて、油状物（４．０２ｇ、収率５１．９％）を得た。ＭＳ：実測値［Ｍ＋Ｈ］＝２５５．４、計算値［Ｍ＋Ｈ］＝２５５．１。
【0149】
ステップ２：上述の油状物（４．０２ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）および過アシル化ＧａｌＮＡｃ（４．１０ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）をＤＣＥ（４０．４ｍＬ）に溶解させた。次に、Ｓｃ（ＯＴｆ）３（０．３６ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を９０℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、激しく撹拌しながら飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）に注いだ。有機層を分離し、水相をＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させた。粗製材料を順相シリカカラム（溶離液：ＤＣＭ中０～１０％ＭｅＯＨ）によって精製した。画分を収集し、真空下で濃縮乾固させて、黄色油状物（７．２３ｇ、収率１１８％）を得た。ＭＳ：実測値［Ｍ＋Ｈ］＝５８４．４、計算値［Ｍ＋Ｈ］＝５８４．２。
【0150】
ステップ３：ステップ２からの生成物を、アルゴンパージ下でＭｅＯＨ（６２ｍＬ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（２００ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）に溶解させた。空気を真空下で除去し、Ｈ２バルーンを挿入した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、セライトパッドを介して濾過した。パッドをＭｅＯＨで２回洗浄し、揮発性物質を真空中で除去した。粗製材料をＣ１８逆相カラム（溶離液：水中０～９０％ＭｅＣＮ）によって精製した。純粋な画分を収集し、真空下で濃縮乾固させて、油状物の化合物３３（３．７２ｇ、収率７１．８％）を得た。ＭＳ：実測値［Ｍ－Ｈ］＝４９２．４、計算値［Ｍ－Ｈ］＝４９２．２。
（実施例１０）
ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたウリジン－ＥＧ－ＣＰＧ化合物の調製
（実施例１０）
ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたウリジン－ＥＧ－ＣＰＧ化合物の調製
【化44】
【0151】
化合物７（０．６０ｇ、０．９６ｍｍｏｌ）および化合物３３（０．５２ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）をＤＣＥ（２．４ｍＬ）に溶解させた。ＴＥＡ（０．６６ｍＬ、４．７８ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（０．４ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で一晩撹拌した。反応が完了したら、溶媒を除去し、粗製物を、逆相カラム精製によってＨ２Ｏ／ＭｅＣＮを使用して精製した。純粋な画分を収集し、真空下で濃縮乾固させて、２９０ｍｇの化合物５を収率３０．５％で得た。ＭＳ：実測値［Ｍ－Ｈ］＝１１０１．９、計算値［Ｍ－Ｈ］＝１１０１．４。
【0152】
ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたウリジン－ＥＧ－ＣＰＧ化合物の調製－ステップ１：１つの５０ｍＬのＲＢフラスコにおいて、化合物３４（２９０ｍｇ、０．２６３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解させた。無水コハク酸（３９．５ｍｇ、０．３９５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（７９．７ｍｇ．０．７９８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによって確認した。次に、この混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（１５ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（４０ｍＬ）を添加し、有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過後、有機層を真空下で濃縮乾固させた。粗生成物を、カラム精製によってＤＣＭ／ＭｅＯＨ（０％～１０％ＭｅＯＨ）を使用して精製した。純粋な画分を収集し、真空下で濃縮乾固させて、２００ｍｇの白色固体を収率６３％で得た。ＭＳ：実測値［Ｍ－Ｈ］＝１２０１．６、計算値［Ｍ－Ｈ］＝１２０１．４。
【0153】
ステップ２：１つの５０ｍＬのＲＢフラスコにおいて、ステップ１からの化合物（４３ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（５ｍＬ）に溶解させた。ＨＡＴＵ（１３ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１４ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、ＣＰＧ（１．０ｇ）を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。濾過後、このＣＰＧ生成物をＭｅＣＮ（３×５０ｍＬ）およびＴＨＦ（３×５０ｍＬ）で洗浄し、次に真空下で乾燥させた。キャッピングＡ試薬：（ＴＨＦ／無水酢酸／ピリジン ８０／１０／１０ｖ／ｖ／ｖ、５ｍＬ）およびキャッピングＢ試薬：（１－メチルイミダゾール／ＴＨＦ、１６／８４、ｖ／ｖ、５ｍＬ）をフラスコに添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。濾過後、ＣＰＧ生成物３５（キャッピング後）をＥｔＯＨ（５０ｍＬ×３）、ＥｔＯＨ／ピリジン（１０％）（５０ｍＬ×３）、ＴＨＦ（５０ｍＬ×３）およびＤＣＭ（５０ｍＬ×３）によって洗浄した。ＣＰＧ（キャッピング後）を真空下で乾燥させた。担持量は、ＵＶ－Ｖｉｓ（４９８ｎｍ）による標準ＤＭＴｒアッセイによって３９μｇ／ｍｏｌであると決定された。
（実施例１１）
オリゴヌクレオチド合成におけるＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたホスホロアミダイトの使用法
（実施例１１）
オリゴヌクレオチド合成におけるＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたホスホロアミダイトの使用法
【0154】
オリゴヌクレオチド合成における新規なＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたホスホロアミダイトの使用法を実証するために、配列５’－Ｘ－ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ－３’（ＸはＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたホスホロアミダイトを表す）を試験のために設計した。以下の配列、配列Ｘ１．１、配列Ｘ１．２、配列Ｘ２、配列Ｘ３、および配列Ｘ４を作成した。
【0155】
オリゴヌクレオチド（配列Ｘ１．１～Ｘ４）を、固相ホスホロアミダイト方法によって合成した。ＤＭＴ－ｄＴ固体支持体を、空のカラムに詰め、ＭｅｒＭａｄｅ ６合成機内に入れた。合成スケールは０．５～１μｍｏｌである。オリゴヌクレオチド合成サイクルは、以下のステップを含む。（１）ジクロロメタン中３％トリクロロ酢酸を用いる４５秒間の脱トリチル化を２回、続いてアセトニトリルでの洗浄、（２）アセトニトリル中０．１Ｍ ＤＭＴ－ｄＴ－ＣＥ－ホスホロアミダイト（５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－チミジン－３’－シアノエチルホスホロアミダイト）および０．５Ｍアクチベーター（アセトニトリル中テトラゾール）を用いる１分間のカップリングを２回、続いてアセトニトリルでの洗浄、（３）ヨウ素（２／２０／７８の水／ピリジン／ＴＨＦ中０．０１５Ｍヨウ素）を用いる４５秒間の酸化、続いてアセトニトリルでの洗浄、ならびに（４）無水酢酸、ピリジン、およびＴＨＦの混合物を用いる４５秒間のキャッピング、続いてアセトニトリルでの洗浄。ｄＴ固体支持体から伸長させたＴ１０を合成するために、ステップ（１）～（４）を９回反復した。新規なＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたホスホロアミダイトをカップリングさせるための最終サイクルは、試料の脱トリチル化、酸化、およびキャッピングステップを含み、その間、カップリングを、アセトニトリル中０．０５Ｍの新規なＧａｌＮＡｃとコンジュゲートしたホスホロアミダイトおよび０．５Ｍアクチベーターの混合物を使用して３分間、２回行い、続いてアセトニトリルで洗浄する。
【0156】
合成後、オリゴヌクレオチドが結合した固体支持体を、切断および脱保護のために水酸化アンモニウム水溶液およびメチルアミンの１：１混合物で、５５℃で２時間処理した。完了したら、液相を収集し、真空中で加熱乾燥させた。乾燥させた残留物を水に溶解させ、逆相ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０）およびＬＣ－ＭＳ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４０００ Ｑ－Ｔｒａｐ）によって分析した。ＨＰＬＣ勾配は、２０分で３０～７０％Ｂであり、Ａ：水中５０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム、ならびにＢ：８０％の水中５０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウムおよび２０％のアセトニトリルを用いた。配列（配列Ｘ１．１～Ｘ４）ごとの保持時間（ＲＴ）、ＭＳ計算値、ＭＳ実測値、および全長生成物の純度（ＦＬＰ）を表１に一覧化した。
（実施例１２）
オリゴヌクレオチド合成におけるＧａｌＮＡｃとコンジュゲートした固体支持体の使用法
【表1】
オリゴヌクレオチド合成におけるＧａｌＮＡｃとコンジュゲートした固体支持体の使用法
【0157】
オリゴヌクレオチド合成における新規なＧａｌＮＡｃとコンジュゲートした固体支持体の使用法を実証するために、配列５’－ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ－Ｙ－３’（ＹはＧａｌＮＡｃとコンジュゲートした固体支持体を表す）を試験のために設計した。以下の配列、配列Ｙ１、配列Ｙ２、配列Ｙ３、配列Ｙ４、および配列Ｙ５を作成した。
【0158】
オリゴヌクレオチド（配列Ｙ１～Ｙ５）を、固相ホスホロアミダイト方法によって合成した。新規なＤＭＴ－ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートした固体支持体（Ｙ）を、空のカラムに詰め、ＭｅｒＭａｄｅ ６合成機内に入れた。合成スケールは０．５～１μｍｏｌである。オリゴヌクレオチド合成サイクルは、以下のステップを含む。（１）ジクロロメタン中３％トリクロロ酢酸を用いる４５秒間の脱トリチル化を２回、続いてアセトニトリルでの洗浄、（２）アセトニトリル中０．１Ｍ ＤＭＴ－ｄＴ－ＣＥ－ホスホロアミダイト（５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－チミジン－３’－シアノエチルホスホロアミダイト）および０．５Ｍアクチベーター（アセトニトリル中テトラゾール）を用いる１分間のカップリングを２回、続いてアセトニトリルでの洗浄、（３）ヨウ素（２／２０／７８の水／ピリジン／ＴＨＦ中０．０１５Ｍヨウ素）を用いる４５秒間の酸化、続いてアセトニトリルでの洗浄、ならびに（４）無水酢酸、ピリジン、およびＴＨＦの混合物を用いる４５秒間のキャッピング、続いてアセトニトリルでの洗浄。ＧａｌＮＡｃとコンジュゲートした固体支持体から伸長させたＴ１０を合成するために、ステップ（１）～（４）を１０回反復し、アセトニトリルでの洗浄を用いる最終的な脱トリチル化によって終了させた。
【0159】
合成後、オリゴヌクレオチドが結合した固体支持体を、切断および脱保護のために水酸化アンモニウム水溶液およびメチルアミンの１：１混合物で、５５℃で２時間処理した。完了したら、液相を収集し、真空中で加熱乾燥させた。乾燥させた残留物を水に溶解させ、逆相ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０）およびＬＣ－ＭＳ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４０００ Ｑ－Ｔｒａｐ）によって分析した。ＨＰＬＣ勾配は、２０分で３０～７０％Ｂであり、Ａ：水中５０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム、ならびにＢ：８０％の水中５０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウムおよび２０％のアセトニトリルを用いた。配列（配列Ｙ１～Ｙ５）ごとの保持時間（ＲＴ）、ＭＳ計算値、ＭＳ実測値、および全長生成物の純度（ＦＬＰ）を表２に一覧化した。
【表2】
【0160】
本出願をその具体的な実施形態を参照しながら記載してきたが、本出願の真の趣旨および範囲から逸脱することなく様々な変更が加えられ得、均等物で置換され得ることを、当業者には理解されたい。加えて、特定の状況、材料、物質組成、方法、方法ステップまたはステップを本出願の目的、趣旨および範囲に適合させるために、多くの修正を加えることができる。そのようなすべての修正が、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【国際調査報告】