ホーム > 特許ランキング > ペプチドリーム株式会社
知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-06-28
(54)【発明の名称】ＧＨＲ結合ペプチドおよびそれを含む組成物
(51)【国際特許分類】
C07K 4/00 20060101AFI20240621BHJP
A61P 5/08 20060101ALI20240621BHJP
A61K 38/12 20060101ALI20240621BHJP
A61K 38/10 20060101ALI20240621BHJP
【ＦＩ】
C07K4/00 ZNA
A61P5/08
A61K38/12
A61K38/10
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023576426
(86)(22)【出願日】2022-06-17
(85)【翻訳文提出日】2024-02-08
(86)【国際出願番号】 JP2022024395
(87)【国際公開番号】W WO2022265109
(87)【国際公開日】2022-12-22
(31)【優先権主張番号】63/212,596
(32)【優先日】2021-06-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】506269633
【氏名又は名称】ペプチドリーム株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100094640
【弁理士】
【氏名又は名称】紺野 昭男
(74)【代理人】
【識別番号】100103447
【弁理士】
【氏名又は名称】井波 実
(74)【代理人】
【識別番号】100111730
【弁理士】
【氏名又は名称】伊藤 武泰
(74)【代理人】
【識別番号】100180873
【弁理士】
【氏名又は名称】田村 慶政
(72)【発明者】
【氏名】富山 達也
(72)【発明者】
【氏名】倉崎 晴彰
(72)【発明者】
【氏名】松井 克磨
(72)【発明者】
【氏名】増田 吉昭
(72)【発明者】
【氏名】海津 正賢
【テーマコード（参考）】
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA07
4C084BA01
4C084BA18
4C084BA25
4C084BA28
4C084DB70
4C084MA52
4C084MA55
4C084NA14
4C084ZC041
4C084ZC042
4C084ZC421
4C084ZC422
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA16
4H045EA20
4H045FA34
4H045GA25
4H045GA26
(57)【要約】
本発明は、一般に、成長ホルモン受容体（ＧｈＲ）に結合するペプチド、ＧｈＲに結合し、かつアンタゴニスト活性を有するペプチド、およびそのようなペプチドを含む組成物に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下のアミノ酸配列のペプチドまたはその塩：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｘ１１－Ｘ１２－Ｘ１３（配列番号１）
（式中：
Ｘ１が、芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ２が、Ｎ－アルキルアミノ酸またはその修飾体であり；
Ｘ３およびＸ４が、それぞれ、分岐鎖アミノ酸であり；
Ｘ５が、任意のアミノ酸であり；
Ｘ６が、Ｎであり；
Ｘ７が、Ｗまたはその置換体であり；
Ｘ８が、芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ９が、Ｋまたはその置物であるか、あるいはＲまたはその置換体であり；
Ｘ１０が、芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ１１が、Ａまたはその置換体であるか、あるいはＫまたはその置換体であり；
Ｘ１２が、任意のアミノ酸であり；そして
Ｘ１３が、Ｃである）
であって、
前記ペプチドまたはその塩が、置換、欠失、付加、または挿入を含まないか、１つ、２つ、または３つの置換、欠失、付加、または挿入を含み、かつ、前記ペプチドまたはその塩がＧｈＲに対する結合性を有する、
ペプチドまたはその塩。
【請求項2】
Ｘ２が、Ｎ－メチルリジンまたはその修飾体であり；Ｘ３およびＸ４が、それぞれ、Ｖであり；
Ｘ５が、Ｓであり；
Ｘ７が、置換されたＷであり；
Ｘ８が、Ｆまたはその置換体であるか、あるいはＹまたはその置換体であり；
Ｘ９が、Ｋまたはその置換体であるか、あるいはＲまたはその置換体であり；
Ｘ１０が、置換されたＷであり；
Ｘ１１は、Ａまたはその置換体であるか、あるいはＫまたはその置換体であり；
Ｘ１２が、Ｖである、請求項１に記載のペプチドまたはその塩。
【請求項3】
Ｘ２がＮ－メチルリジンまたはその修飾体であり；Ｘ７が１－（カルボキシメチル）－Ｌ－トリプトファン（Ｗ１ａａ）であり；Ｘ２およびＸ７の前記アミノ酸残基が結合している、請求項２に記載のペプチドまたはその塩。
【請求項4】
Ｘ２が、アルブミン結合剤が結合したＮ－メチルリジンである、請求項２に記載のペプチドまたはその塩。
【請求項5】
前記アルブミン結合剤が、４ＩｐｈｐＣＯ、Ｂｉｐｈ４ｐＣＯ、ＰｈＰｅＣＯ、ＰｈｐＣＯ、ｃＣ１４ＣＯＯ、または４ＭｅＰｈｐＣＯである、請求項４に記載のペプチドまたはその塩。
【請求項6】
Ｘ１が、Ｙ、４Ｐｙ、またはＦ４ＣＯＯであり；Ｘ８が、ＹまたはＦ４ＣＯＯであり；
Ｘ９が、Ｋ、ＫＣＯｐｉｐｚａａ、Ｈｇｎ、Ａｈｐ、またはＨａｒであり；
Ｘ１０が、Ｗ５Ｈであり；
Ｘ１１が、ＡｉｂまたはＡ４ｐｉｐａａである、請求項３～５のいずれか一項に記載のペプチドまたはその塩。
【請求項7】
前記ペプチドまたはその塩が、Ｆ４ＣＯＯ－ＭｅＫ－Ｖ－Ｖ－Ｓ－Ｎ－Ｗ１ａａ－Ｆ４ＣＯＯ－Ｋ－Ｗ５Ｈ－Ａｉｂ－Ｖ－Ｃ（配列番号１０）によって表される配列を有し；前記ペプチドまたはその塩が、１つ、２つ、または３つの置換、欠失、付加、または挿入を含み；
配列番号１０における２番目および７番目のアミノ酸残基が結合しており；
前記ペプチドまたはその塩が、ヒト成長因子受容体（ｈＧｈＲ）に対する結合性を有する、請求項１に記載のペプチドまたはその塩。
【請求項8】
前記ペプチドまたはその塩が、Ｙ－ＭｅＫ－Ｖ－Ｖ－Ｓ－Ｎ－Ｗ５ＯＭｅ－Ｆ４ＣＯＯ－Ｋ－Ｗ５Ｈ－Ａ４ｐｉｐａａ－Ｖ－Ｃ（配列番号３０）によって表される配列を有し；前記ペプチドまたはその塩が、１つ、２つ、または３つの置換、欠失、付加、または挿入を含んでいてもよく；
アルブミン結合剤がＭｅＫに結合しており；
前記ペプチドまたはその塩がｈＧｈＲに対する結合性を有する、請求項１に記載のペプチドまたはその塩。
【請求項9】
前記アルブミン結合剤が、４ＩｐｈｐＣＯ、Ｂｉｐｈ４ｐＣＯ、ＰｈＰｅＣＯ、ＰｈｐＣＯ、ｃＣ１４ＣＯＯ、または４ＭｅＰｈｐＣＯである、請求項８に記載のペプチドまたはその塩。
【請求項10】
前記ペプチドまたはその塩が環状ペプチドである、請求項１、７、８および９のいずれか一項に記載のペプチドまたはその塩。
【請求項11】
前記ペプチドまたはその塩が、Ｘ１におけるクロロアセチル化されたアミノ酸、およびシステイン残基を有する環状構造を有し；前記Ｘ１におけるクロロアセチル化されたアミノ酸および前記システイン残基が結合している、請求項１０に記載のペプチドまたはその塩。
【請求項12】
前記ペプチドまたはその塩が、配列番号２～９、１１～２９、および３１から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のペプチドまたはその塩。
【請求項13】
前記ペプチドまたはその塩が、リンカーがＣ末端に付加された、配列番号２～９、１１～２９、および３１から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のペプチドまたはその塩。
【請求項14】
前記リンカーが、配列番号３２および３５から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載のペプチドまたはその塩。
【請求項15】
前記ペプチドまたはその塩がｈＧｈＲアンタゴニスト活性を有する、請求項１～１４のいずれか一項に記載のペプチドまたはその塩
【請求項16】
請求項１～１５のいずれか一項に記載のペプチドまたはその塩、および薬学的に許容される担体、賦形剤、または添加剤を含有する、医薬組成物。
【請求項17】
前記医薬組成物がｈＧｈＲアンタゴニスト活性を有する、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項18】
ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患の治療方法であって、請求項１～１５のいずれか一項に記載のペプチドまたはその塩を、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患を有する患者に投与することを含む、方法。
【請求項19】
ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患の治療方法であって、請求項１６または１７に記載の医薬組成物を、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する前記疾患を有する患者に投与することを含む、方法。
【請求項20】
前記ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患が、先端巨大症または巨人症である、請求項１８に記載の方法。
【請求項21】
患者におけるヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患の治療のための、請求項１～１５のいずれか一項に記載のペプチドまたはその塩の使用。
【請求項22】
患者におけるヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患の治療のための医薬の製造における、請求項１～１５のいずれか一項に記載のペプチドまたはその塩の使用。
【請求項23】
患者におけるヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患の治療のための、請求項１６または１７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項24】
前記ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患が、先端巨大症または巨人症である、請求項２１～２３のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願に対する相互参照】
【0001】
本出願は、２０２１年６月１８日に出願された米国仮特許出願第６３／２１２，５９６号の利益およびそれに対する優先権を主張し、この出願の内容は、その全体が参照することにより本明細書の開示の一部とされる。
【技術分野】
【0002】
本発明は、成長ホルモン受容体（ＧｈＲ）に結合するペプチド、ＧｈＲに結合し、かつアンタゴニスト活性を有するペプチド、およびそのようなペプチドを含む組成物に関する。
【背景技術】
【0003】
成長ホルモン（Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ；ＧＨまたはＧｈ）は、成長に必須のホルモンであり、脳下垂体前葉における成長ホルモン分泌細胞によって分泌される。成長ホルモンは、成長、例えば骨の伸長および筋肉の成長、ならびに代謝、例えば肝臓におけるグリコーゲン分解を含む、さまざまな組織に対する効果を備えることが知られている。成長ホルモンは、脳下垂体において産生され血流に分泌されて、さまざまな細胞表面、例えば肝臓、筋肉組織、および骨組織において発現される成長ホルモン受容体（ＧｈＲ）に結合する。ＧＨのＧｈＲへの結合は、ある特定の細胞、特に肝臓細胞において、インスリン様成長因子－１（ＩＧＦ－１）の産生を誘導する。次いで、ＩＧＦ－１は全身の成長を刺激し、体細胞において成長を促進する効果を示す。
【0004】
ＧｈＲに結合する化合物の例として、ヒトＧｈＲに結合する成長ホルモン改変体化合物が、参照により本明細書に組み込まれる特開２０１６－５１１２７５Ａ号（ＰＣＴ出願翻訳文）に記載されており、さらにまた、ヒトＧｈＲに結合することができる薬物に対する対象の応答を生成するための方法が、参照により本明細書に組み込まれる特開２００６－５２５７８５Ａ号（ＰＣＴ出願翻訳文）に記載されている。このように、ＧｈＲに対し結合性（ａｖｉｄｉｔｙ）を有するさまざまな薬物が検討されている。
【0005】
ＧｈＲに結合するペプチド（ＧｈＲ結合ペプチド）を使用して、ＧｈＲ発現の分布および量は、例えば蛍光または同位元素標識ペプチドのＧｈＲへの結合を測定することによって確認できる。さらにまた、ＧｈＲに対するまたは異なる種のＧｈＲに対するリガンドの親和性は、ＧｈＲ結合ペプチドの使用により決定できる。加えて、ＧｈＲに対する薬理学的活性を有する化合物、例えば同位元素、低分子量化合物、ペプチド、タンパク質、抗体、および核酸を標的にし、それを輸送するために、ＧｈＲ結合ペプチドを使用することが可能である。
【0006】
したがって、新規ＧｈＲ結合ペプチドおよびＧｈＲ結合ペプチドを含む組成物はいずれも有用であり、所望されている。
【発明の概要】
【0007】
本発明の一つの実施態様は、ＧｈＲ、特に、ヒトＧｈＲに結合するペプチド、およびそのようなＧｈＲ結合ペプチドを含む組成物を提供する。
【0008】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは単離されたペプチドである。
【0009】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは精製されたペプチドである。
【0010】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、以下のアミノ酸配列：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｘ１１－Ｘ１２－Ｘ１３（配列番号１）を有し、ここで：
Ｘ１は、芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ２は、Ｎ－アルキルアミノ酸またはその修飾体であり；
Ｘ３およびＸ４は、それぞれ独立して、分岐鎖アミノ酸であり；
Ｘ５は、任意のアミノ酸であり；
Ｘ６は、Ｎ（アスパラギン）であり；
Ｘ７は、Ｗ（トリプトファン）またはその置換体であり；
Ｘ８は、側鎖に芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ９は、Ｋ（リジン）またはその置換体であるか、あるいはＲ（アルギニン）またはその置換体であり；
Ｘ１０は、側鎖に芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ１１は、Ａ（アラニン）またはその置換体であるか、あるいはＫ（リジン）またはその置換体であり；
Ｘ１２は、任意のアミノ酸であり；そして
Ｘ１３は、Ｃ（システイン）である）、かつ
当該ペプチドまたはその塩は、置換、欠失、付加、または挿入を含まないか、１つ、２つ、または３つの置換、欠失、付加、または挿入を含み、かつ当該ペプチドまたはその塩は、ＧｈＲに対する結合性を有する。
Ｘ１は、芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ２は、Ｎ－アルキルアミノ酸またはその修飾体であり；
Ｘ３およびＸ４は、それぞれ独立して、分岐鎖アミノ酸であり；
Ｘ５は、任意のアミノ酸であり；
Ｘ６は、Ｎ（アスパラギン）であり；
Ｘ７は、Ｗ（トリプトファン）またはその置換体であり；
Ｘ８は、側鎖に芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ９は、Ｋ（リジン）またはその置換体であるか、あるいはＲ（アルギニン）またはその置換体であり；
Ｘ１０は、側鎖に芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ１１は、Ａ（アラニン）またはその置換体であるか、あるいはＫ（リジン）またはその置換体であり；
Ｘ１２は、任意のアミノ酸であり；そして
Ｘ１３は、Ｃ（システイン）である）、かつ
当該ペプチドまたはその塩は、置換、欠失、付加、または挿入を含まないか、１つ、２つ、または３つの置換、欠失、付加、または挿入を含み、かつ当該ペプチドまたはその塩は、ＧｈＲに対する結合性を有する。
【0011】
これらの態様のいくつかの実施において、Ｘ２は、Ｎ－メチルリジンまたはその修飾体であり；Ｘ３およびＸ４は、それぞれ、Ｖ（バリン）であり；Ｘ５は、Ｓ（セリン）であり；Ｘ７は、置換されたＷ（トリプトファン）であり；Ｘ８は、Ｆ（フェニルアラニン）またはその置換体、あるいはＹ（チロシン）またはその置換体であり；Ｘ９は、Ｋ（リジン）またはその置換体、あるいはＲ（アルギニン）またはその置換体であり；Ｘ１０は、置換されたＷ（トリプトファン）であり；Ｘ１１は、Ａ（アラニン）またはその置換体、あるいはＫ（リジン）またはその置換体であり；Ｘ１２は、Ｖ（バリン）である。
【0012】
これらの態様のいくつかの実施において、Ｘ２は、Ｎ－メチルリジンまたはその修飾体であり；Ｘ７は、１－（カルボキシメチル）－Ｌ－トリプトファン（Ｗ１ａａ）であり、Ｘ２およびＸ７のアミノ酸残基は、結合している。
【0013】
これらの態様のいくつかの実施において、Ｘ２は、アルブミン結合剤が結合したＮ－メチルリジンである。アルブミン結合剤は、Ｎ－メチルリジンに直接結合していてもよく、または別のアミノ酸残基もしくは連結基を通して結合していてもよい。
【0014】
これらの態様のいくつかの実施において、アルブミン結合剤は、４ＩｐｈｐＣＯ、Ｂｉｐｈ４ｐＣＯ、ＰｈＰｅＣＯ、ＰｈｐＣＯ、ｃＣ１４ＣＯＯ、および４ＭｅＰｈｐＣＯのうちのいずれか１つである。
【0015】
これらの態様のいくつかの実施において、Ｘ１は、Ｙ、４Ｐｙ、またはＦ４ＣＯＯであり；Ｘ８は、ＹまたはＦ４ＣＯＯであり；Ｘ９は、Ｋ、ＫＣＯｐｉｐｚａａ、Ｈｇｎ、Ａｈｐ、またはＨａｒであり；Ｘ１０は、Ｗ５Ｈであり；Ｘ１１は、ＡｉｂまたはＡ４ｐｉｐａａである。
【0016】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドまたはその塩は、Ｆ４ＣＯＯ－ＭｅＫ－Ｖ－Ｖ－Ｓ－Ｎ－Ｗ１ａａ－Ｆ４ＣＯＯ－Ｋ－Ｗ５Ｈ－Ａｉｂ－Ｖ－Ｃ（配列番号１０）によって表されるアミノ酸配列を有するか、あるいは配列番号１０から、１つ、２つ、または３つのアミノ酸残基が、置換、欠失、付加、または挿入されているアミノ酸配列を有し、ここで、配列番号１０における２番目および７番目のアミノ酸残基は、結合しており、ペプチドまたはその塩は、ｈＧｈＲに対する結合性を有する。
【0017】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドまたはその塩は、Ｙ－ＭｅＫ－Ｖ－Ｖ－Ｓ－Ｎ－Ｗ５ＯＭｅ－Ｆ４ＣＯＯ－Ｋ－Ｗ５Ｈ－Ａ４ｐｉｐａａ－Ｖ－Ｃ（配列番号３０）によって表されるアミノ酸配列を有するか、あるいは配列番号３０から、１つ、２つ、または３つのアミノ酸残基が、置換、欠失、付加、または挿入されているアミノ酸配列を有し、ここで、アルブミン結合剤は、配列番号３０の２番目のアミノ酸残基であるＭｅＫに結合しており、ペプチドまたはその塩は、ｈＧｈＲに対する結合性を有する。
【0018】
いくつかの態様において、アルブミン結合剤は４ＩｐｈｐＣＯ、Ｂｉｐｈ４ｐＣＯ、ＰｈＰｅＣＯ、ＰｈｐＣＯ、ｃＣ１４ＣＯＯ、および４ＭｅＰｈｐＣＯのうちのいずれか１つである。いくつかの態様において、アルブミン結合剤は４ＩｐｈｐＣＯである。いくつかの態様において、アルブミン結合剤はＢｉｐｈ４ｐＣＯである。いくつかの態様において、アルブミン結合剤はＰｈＰｅＣＯである。いくつかの態様において、アルブミン結合剤はＰｈｐＣＯである。いくつかの態様において、アルブミン結合剤はｃＣ１４ＣＯＯである。いくつかの態様において、アルブミン結合剤はＢｉｐｈ４ｐＣＯである。
【0019】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドまたはその塩は、環状ペプチドまたは環状ペプチドの塩である。
【0020】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドまたはその塩は、クロロアセチル化された１番目のアミノ酸残基およびシステイン残基が結合した環状構造を有する。
【0021】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドまたはその塩は、配列番号２～９、１１～２９、および３１から選択されるアミノ酸配列を有する。
【0022】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドまたはその塩は、配列番号２～９、１１～２９、および３１から選択されるアミノ酸配列を有し、Ｃ末端にリンカーをさらに含む。
【0023】
この態様のいくつかの実施において、リンカーは、配列番号３２および３５から選択されるアミノ酸配列を有する。
【0024】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドまたはその塩は、ｈＧｈＲアンタゴニスト活性を有する。
【0025】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドまたはその塩は、本明細書に記載される任意の組み合わせ、および本明細書に記載される任意のペプチドまたはその塩を含む。
【0026】
いくつかの態様において、本発明は、医薬組成物に関する。
【0027】
いくつかの態様において、本発明による医薬組成物は、本明細書に記載される任意のペプチドまたはその塩、および薬学的に許容される担体、賦形剤、または添加剤を含む。
【0028】
いくつかの態様において、本発明による医薬組成物は、ｈＧｈＲアンタゴニスト活性を有する。したがって、本医薬組成物は、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患（例えば、先端巨大症または巨人症）の治療に有効であり、これらの疾患の治療のための医薬組成物として使用され得る。
【0029】
いくつかの態様において、本発明は、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患のための治療方法に関する。
【0030】
いくつかの態様において、本発明による治療方法は、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患の治療のためのものであり、方法は、上記に記載される医薬組成物（あるいは上記に記載されるペプチドまたはその塩）を、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患を有する患者に投与するための工程を含む。
【0031】
いくつかの態様において、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患は、先端巨大症または巨人症である。
【0032】
本発明によるペプチドはＧｈＲに結合する能力を有することから、当該ペプチドは、ＧｈＲに対する薬理学的活性を有する化合物、例えば同位元素、低分子量化合物、ペプチド、タンパク質、抗体、および核酸を目的とし、輸送することが可能である。
【0033】
本開示の他の態様および特徴は、添付の図面と併せて具体的な実施形態の以下の記載の検討の際に、当業者に明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0034】
【図1】本発明の一つの実施態様によるペプチドの配列例の概要を示す図である。
【0035】
【図2】本発明の一つのjっ氏態様によるペプチドにおけるリンカー部位の配列例の概要を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0036】
本開示において記載される実施形態のすべての特徴は、相互排他的なものではなく、別のものと組み合わせることができる。例えば、一つの実施態様の要素は、さらなる言及なしで、他の実施形態において利用することができる。具体的な実施形態の詳細な説明を、添付の図面を参照して、本明細書の以下に記載する。
【0037】
下記の一般的な説明および詳細な説明のいずれも、単に例示的および記述的なものであり、本願の本発明を限定するものではないことが理解されるべきである。本明細書において、単数形の使用は、他に規定されない限り、複数形を含む。本明細書において、「または（ｏｒ）」の使用は、別段の指定がない限り、「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」を意味する。さらにまた、「要素」または「構成要素」など用語は、別段の指定がない限り、１つの単位を含む要素および構成要素、ならびに２つ以上の下位単位を含む要素および構成要素の両方を包含する。
【0038】
本明細書において使用される見出しは、構造的な目的のためだけのものであって、記載される主題を限定するものとして解釈されるべきではない。限定されるものではないが、特許、特許出願、文献、書籍、および論文を含む、本出願において引用される文献のすべてまたは文献の部分は、本明細書で取り上げられている文献の中から、部分または全体が参照することにより明示的に開示の一部として組み込まれる。
【0039】
端点による数値範囲の本明細書における記述は、その範囲内に包含されるすべての数を含むことが意図される（例えば、１～５の記述は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、４．３２、および５を含む）。
【0040】
「約」という用語は、本明細書において明確に使用されるか、または使用されず、本明細書において与えられるすべての量は、実際に与えられた量を指すことを意図し、これは、そのような与えられた値についての実験および／または測定条件に起因する等価物および近似値を含む、当該技術分野における通常の技能に基づいて合理的に推論されるであろうそのような与えられた値に対する近似値を指すことも意図する。例えば、与えられた値または範囲の文脈における「約」という用語は、与えられた値または範囲の、２０％以内、好ましくは１５％以内、より好ましくは１０％以内、より好ましくは９％以内、より好ましくは８％以内、より好ましくは７％以内、より好ましくは６％以内、より好ましくは５％以内である値または範囲を指す。
【0041】
本明細書において使用される場合、「含む」という用語は、その語に続く項目が含まれるが、具体的に挙げられていない項目が排除されないことを意味する、その非限定的な意義で使用される。
【0042】
特別な定義が与えられない限り、本明細書において記載される分析化学、合成有機化学、ならびに創薬化学および医薬品化学だけでなく、それらの手順および技法に関して使用される専門用語は、本発明による分野において周知であり、一般に使用されている。標準的な技法が、化学合成および化学分析のために使用されてもよい。そのような技法および手順の中から定義されるものは、例えば、「Ｋ．Ｊ．Ｊｅｎｓｅｎ、Ｐ．Ｔ．Ｓｈｅｌｔｏｎ、Ｓ．Ｌ．Ｐｅｄｅｒｓｅｎ、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、第２版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、２０１３」などにおいて見出すことができ、これらは、すべての目的のために、参照することにより本明細書の開示の一部とされる。開示全体にわたって参照される、すべての特許、出願、公開出願、および他の刊行物、ならびに他のデータは、許容される場合、参照することにより本明細書の開示の一部とされる。
【0043】
略語：
本明細書において別段の記載がない限り、以下の略語は、以下の意味に従って使用される：
ＢｉＰｈ４ｐＣＯ：４－（［１，１’－ビフェニル］－４－イル）ブタン酸（ＣＡＳ番号：６０５７－６０－９）；
Ｂｏｃ：Ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル；
ｃＣ１２ＣＯＯ：テトラデカン二酸（ＣＡＳ番号：８２１－３８－５）；
ｃＣ１３ＣＯＯ：ペンタデカン二酸（ＣＡＳ番号：１４６０－１８－０）；
ｃＣ１４ＣＯＯ：ヘキサデカン二酸（ＣＡＳ番号：５０５－５４－４）；
ｃＣ１５ＣＯＯ：ヘプタデカン二酸（ＣＡＳ番号：２４２４－９０－０）；
ＣｌＡｃ：クロロアセチル；
ＤＣＭ：ジクロロメタン；
ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド；
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；
ＤＩＰＥＡまたはＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン；
ＤＯＤＴ：６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール；
Ｅ＿ｃＣ１４ＣＯＯ：Ｎ－（１５－カルボキシ－１－オキソペンタデシル）－Ｌ－グルタミン酸（ＣＡＳ番号：１４７２００５－５７－４）；
Ｆｍｏｃ：９－フルオレニルメチルオキシカルボニル；
ｇ：グラム（単位）；
ＨＯＳｕ：Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドＮ－ヒドロキシスクシンイミド；
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー；
ｉｖＤｄｅ：１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）－３－メチルブチル１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）－３－メチルブチル；
ＬＣ－ＭＳまたはＬＣ／ＭＳ：液体クロマトグラフィー質量分析計；
ＭｅＣＮ：アセトニトリル；
ｍＬ：ミリリットル（単位）；
Ｍ：モル濃度（単位）；
μＬ：マイクロリットル（単位）；
ｍＭ：ミリモル濃度（単位）；
μΜ：マイクロモル濃度（単位）；
ｍｇ：ミリグラム（単位）；
ｍｍ：ミリメートル（単位）；
ｎｍ：ナノメートル（単位）；
ｎＭ：ナノモル濃度（単位）；
Ｏｘｙｍａ ｐｕｒｅ：エチルシアノ（ヒドロキシイミノ）アセテート；
ＰｈｐＣＯ：４－フェニルブタン酸（ＣＡＳ番号：１８２１－１２－１）；
ＰｈＰｅＣＯ：６－フェニルヘキサン酸（ＣＡＳ番号：５５８１－７５－９）；
ｑＰＣＲ：定量的ＰＣＲ；
ｒｐｍ：毎分回転数（単位）；
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ－ブチル；
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン；
ＴｒｔまたはＴｒ：トリチル基；
４ＩＰｈｐＣＯ：４－（ｐ－ヨードフェニル）酪酸（ＣＡＳ番号：２７９１３－５８－２、Ｍｅｒｃｋ）；
４ＭｅＰｈｐＣＯ：４－（ｐ－トリル）ブタン酸（ＣＡＳ番号：４５２１－２２－６）。
略語（非天然アミノ酸）：
Ｗ５ＯＭｅ：５－メトキシ－Ｌ－トリプトファン（ＣＡＳ番号：２５１９７－９６－０）；
Ｆ４ＣＯＯ：４－カルボキシ－Ｌ－フェニルアラニン（ＣＡＳ番号：１２６１０９－４２－０）；
Ｗ５Ｈ：５－ヒドロキシ－Ｌ－トリプトファン（ＣＡＳ番号：２３８２８０８－４５－７）；
Ａｉｂ：アルファ－メチルアラニン（ＣＡＳ番号：６２－５７－７）；
ｄｓ：Ｄ－セリン（ＣＡＳ番号：３１２－８４－５）；
Ｗ１ａａ：１－（カルボキシメチル）－Ｌ－トリプトファン（ＣＡＳ番号：７７３８２３－５０－０）；
Ａ４ｐｉｐａａ：４－アミノ－１－（カルボキシメチル）ピペリジン－４－カルボン酸（Ｋｉｓｈｉｄａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｃ．）；
Ｈｇｎ：（Ｓ）－２，６－ジアミノ－６－オキソヘキサン酸（ＣＡＳ番号：１２６３０４６－４３－０）；
Ｈａｒ：Ｎ６－カルバムイミドイル－Ｌ－リジン（ＣＡＳ番号：２１４８５２－５２－５）；
ＫＣＯｐｉｐｚａａ：Ｎ６－（４－（カルボキシメチル）ピペラジン－１－カルボニル）－Ｌ－リジン（Ｋｉｓｈｉｄａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｃ．）；
ＰＥＧ２Ａｃ：２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）酢酸（ＣＡＳ番号：１３４９７８－９７－５）；
４Ｐｙ：４－ピリジル－Ｌ－アラニン（ＣＡＳ番号：１６９５５５－９５－７）；
Ｗ７Ｎ：（Ｓ）－２－アミノ－３－（１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル）プロパン酸（ＣＡＳ番号：７３７００７－４５－３）；
Ａｈｐ：（ｓ）－２－アミノヘプタン酸（ＣＡＳ番号：４４９０２－０２－５）；
Ｍｅ：Ｎ－メチル；
ＭｅＫ：Ｎ－メチル－Ｌ－リジン（ＣＡＳ番号：７４３１－８９－２）；
本明細書において別段の記載がない限り、以下の略語は、以下の意味に従って使用される：
ＢｉＰｈ４ｐＣＯ：４－（［１，１’－ビフェニル］－４－イル）ブタン酸（ＣＡＳ番号：６０５７－６０－９）；
Ｂｏｃ：Ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル；
ｃＣ１２ＣＯＯ：テトラデカン二酸（ＣＡＳ番号：８２１－３８－５）；
ｃＣ１３ＣＯＯ：ペンタデカン二酸（ＣＡＳ番号：１４６０－１８－０）；
ｃＣ１４ＣＯＯ：ヘキサデカン二酸（ＣＡＳ番号：５０５－５４－４）；
ｃＣ１５ＣＯＯ：ヘプタデカン二酸（ＣＡＳ番号：２４２４－９０－０）；
ＣｌＡｃ：クロロアセチル；
ＤＣＭ：ジクロロメタン；
ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド；
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；
ＤＩＰＥＡまたはＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン；
ＤＯＤＴ：６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール；
Ｅ＿ｃＣ１４ＣＯＯ：Ｎ－（１５－カルボキシ－１－オキソペンタデシル）－Ｌ－グルタミン酸（ＣＡＳ番号：１４７２００５－５７－４）；
Ｆｍｏｃ：９－フルオレニルメチルオキシカルボニル；
ｇ：グラム（単位）；
ＨＯＳｕ：Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドＮ－ヒドロキシスクシンイミド；
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー；
ｉｖＤｄｅ：１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）－３－メチルブチル１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）－３－メチルブチル；
ＬＣ－ＭＳまたはＬＣ／ＭＳ：液体クロマトグラフィー質量分析計；
ＭｅＣＮ：アセトニトリル；
ｍＬ：ミリリットル（単位）；
Ｍ：モル濃度（単位）；
μＬ：マイクロリットル（単位）；
ｍＭ：ミリモル濃度（単位）；
μΜ：マイクロモル濃度（単位）；
ｍｇ：ミリグラム（単位）；
ｍｍ：ミリメートル（単位）；
ｎｍ：ナノメートル（単位）；
ｎＭ：ナノモル濃度（単位）；
Ｏｘｙｍａ ｐｕｒｅ：エチルシアノ（ヒドロキシイミノ）アセテート；
ＰｈｐＣＯ：４－フェニルブタン酸（ＣＡＳ番号：１８２１－１２－１）；
ＰｈＰｅＣＯ：６－フェニルヘキサン酸（ＣＡＳ番号：５５８１－７５－９）；
ｑＰＣＲ：定量的ＰＣＲ；
ｒｐｍ：毎分回転数（単位）；
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ－ブチル；
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン；
ＴｒｔまたはＴｒ：トリチル基；
４ＩＰｈｐＣＯ：４－（ｐ－ヨードフェニル）酪酸（ＣＡＳ番号：２７９１３－５８－２、Ｍｅｒｃｋ）；
４ＭｅＰｈｐＣＯ：４－（ｐ－トリル）ブタン酸（ＣＡＳ番号：４５２１－２２－６）。
略語（非天然アミノ酸）：
Ｗ５ＯＭｅ：５－メトキシ－Ｌ－トリプトファン（ＣＡＳ番号：２５１９７－９６－０）；
Ｆ４ＣＯＯ：４－カルボキシ－Ｌ－フェニルアラニン（ＣＡＳ番号：１２６１０９－４２－０）；
Ｗ５Ｈ：５－ヒドロキシ－Ｌ－トリプトファン（ＣＡＳ番号：２３８２８０８－４５－７）；
Ａｉｂ：アルファ－メチルアラニン（ＣＡＳ番号：６２－５７－７）；
ｄｓ：Ｄ－セリン（ＣＡＳ番号：３１２－８４－５）；
Ｗ１ａａ：１－（カルボキシメチル）－Ｌ－トリプトファン（ＣＡＳ番号：７７３８２３－５０－０）；
Ａ４ｐｉｐａａ：４－アミノ－１－（カルボキシメチル）ピペリジン－４－カルボン酸（Ｋｉｓｈｉｄａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｃ．）；
Ｈｇｎ：（Ｓ）－２，６－ジアミノ－６－オキソヘキサン酸（ＣＡＳ番号：１２６３０４６－４３－０）；
Ｈａｒ：Ｎ６－カルバムイミドイル－Ｌ－リジン（ＣＡＳ番号：２１４８５２－５２－５）；
ＫＣＯｐｉｐｚａａ：Ｎ６－（４－（カルボキシメチル）ピペラジン－１－カルボニル）－Ｌ－リジン（Ｋｉｓｈｉｄａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｃ．）；
ＰＥＧ２Ａｃ：２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）酢酸（ＣＡＳ番号：１３４９７８－９７－５）；
４Ｐｙ：４－ピリジル－Ｌ－アラニン（ＣＡＳ番号：１６９５５５－９５－７）；
Ｗ７Ｎ：（Ｓ）－２－アミノ－３－（１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル）プロパン酸（ＣＡＳ番号：７３７００７－４５－３）；
Ａｈｐ：（ｓ）－２－アミノヘプタン酸（ＣＡＳ番号：４４９０２－０２－５）；
Ｍｅ：Ｎ－メチル；
ＭｅＫ：Ｎ－メチル－Ｌ－リジン（ＣＡＳ番号：７４３１－８９－２）；
【0044】
ペプチド：
一つの実施態様において、本発明によるペプチドは、配列番号１に示されるように、酸配列：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｘ１１－Ｘ１２－Ｘ１３（式中：
Ｘ１は、側鎖における芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ２は、Ｎ－アルキルアミノ酸またはその修飾体であり；
Ｘ３およびＸ４は、それぞれ、分岐鎖アミノ酸であり；
Ｘ５は、任意のアミノ酸であり；
Ｘ６は、Ｎ（アスパラギン）であり；
Ｘ７は、Ｗ（トリプトファン）またはその置換体であり；
Ｘ８は、側鎖における芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ９は、Ｋ（リジン）またはその置換体であるか、あるいはＲ（アルギニン）またはその置換体であり；
Ｘ１０は、側鎖における芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ１１は、Ａ（アラニン）またはその置換体であるか、あるいはＫ（リジン）またはその置換体であり；
Ｘ１２は、任意のアミノ酸であり；
Ｘ１３は、Ｃ（システイン）である）
を有し、
当該ペプチドは、アミノ酸の置換、欠失、付加、または挿入を含まないか、１つ、２つ、または３つのアミノ酸の置換、欠失、付加、または挿入を含む。この態様の実施において、本発明によるペプチドは、ＧｈＲに対する結合性を有する。
一つの実施態様において、本発明によるペプチドは、配列番号１に示されるように、酸配列：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｘ１１－Ｘ１２－Ｘ１３（式中：
Ｘ１は、側鎖における芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ２は、Ｎ－アルキルアミノ酸またはその修飾体であり；
Ｘ３およびＸ４は、それぞれ、分岐鎖アミノ酸であり；
Ｘ５は、任意のアミノ酸であり；
Ｘ６は、Ｎ（アスパラギン）であり；
Ｘ７は、Ｗ（トリプトファン）またはその置換体であり；
Ｘ８は、側鎖における芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ９は、Ｋ（リジン）またはその置換体であるか、あるいはＲ（アルギニン）またはその置換体であり；
Ｘ１０は、側鎖における芳香環を有するアミノ酸またはその置換体であり；
Ｘ１１は、Ａ（アラニン）またはその置換体であるか、あるいはＫ（リジン）またはその置換体であり；
Ｘ１２は、任意のアミノ酸であり；
Ｘ１３は、Ｃ（システイン）である）
を有し、
当該ペプチドは、アミノ酸の置換、欠失、付加、または挿入を含まないか、１つ、２つ、または３つのアミノ酸の置換、欠失、付加、または挿入を含む。この態様の実施において、本発明によるペプチドは、ＧｈＲに対する結合性を有する。
【0045】
いくつかの態様において、配列番号１に表されるアミノ酸配列を有する本発明によるペプチドは、置換、付加、欠失、または挿入を含む。アミノ酸の置換、欠失、付加、および／または挿入されるアミノ酸の数は、１つ以上かつ３つ以下であり得、その下限は、１である。その上限は、２であり、最小は、１である。いくつかの態様において、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部のさらなる実施において、１～３つのそのようなアミノ酸置換は、配列番号１におけるＸ１、Ｘ２、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、およびＸ１１から選択される位置に存在する。
【0046】
本明細書において使用される場合、「保存的アミノ酸置換」という表現は、機能的に等価なまたは類似のアミノ酸の置換を指す。ペプチドにおける保存的アミノ酸置換は、ペプチドのアミノ酸配列に静的な変化をもたらす。例えば類似の極性を有する１つまたは２つ以上のアミノ酸は、互いと機能的に等価に作用し、ペプチドのアミノ酸配列に静的な変化をもたらす。一般に、ある特定の群内の置換は、構造および機能に関して保存的と考えられ得る。しかしながら、当業者に明らかであるように、定義されたアミノ酸残基によって果たされる役割はアミノ酸を含有する分子の三次元構造におけるその影響によって決定され得る。例えば、システイン残基は、還元型（チオール）形態のものよりも低い極性を有する酸化型（ジスルフィド）形態であってもよい。アルギニン側鎖の長い脂肪族部分は、構造的および機能的に重要な特徴を構成し得る。さらにまた、芳香環を含む側鎖（トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン）は、非芳香族相互作用またはカチオン－パイ相互作用に寄与し得る。そのような場合において、これらの側鎖を有するアミノ酸が酸性基または非極性基に属するアミノ酸で置換されていても、それらは構造的および機能的に保存されていることがある。プロリン、グリシン、システイン（ジスルフィド形態）などの残基が主鎖の三次元構造に対する直接的な効果を有し、多くの場合に、構造のゆがみなく置換することができない可能性がある。
【0047】
下記に示されるように、保存的アミノ酸置換は、参照することにより本明細書の開示の一部とされる側鎖の類似性に基づく具体的な置換（例えば置換は、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、改訂第２版、１９７５年発行、７３－７５頁：Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２版、７３－７５頁、Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７５）に記載されている）および典型的な置換を含む。
【0048】
保存的アミノ酸置換に付け加えて、例えば、それらの共通の側鎖の性質に基づいて以下のように天然アミノ酸を分類することによって得られた群において、ある特定のアミノ酸が属する群と同じ群に属するアミノ酸の置換が好ましい。
【0049】
疎水性（非極性とも称される）アミノ酸：疎水性（非極性）を示すアミノ酸、アラニン（「Ａｌａ」または単に「Ａ」とも称される）、グリシン（「Ｇｌｙ」または単に「Ｇ」とも称される）、バリン（「Ｖａｌ」または単に「Ｖ」とも称される）、ロイシン（「Ｌｅｕ」または単に「Ｌ」とも称される）、イソロイシン（「Ｉｌｅ」または単に「Ｉ」とも称される）、プロリン（「Ｐｒｏ」または単に「Ｐ」とも称される）、フェニルアラニン（「Ｐｈｅ」または単に「Ｆ」とも称される）、トリプトファン（「Ｔｒｐ」または単に「Ｗ」とも称される）、チロシン（「Ｔｙｒ」または単に「Ｙ」とも称される）、およびメチオニン（「Ｍｅｔ」または単に「Ｍ」とも称される）を含む。
【0050】
疎水性アミノ酸は、以下の群にさらに分類され得る：
－ 脂肪族アミノ酸：側鎖に脂肪酸または水素を有するアミノ酸、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、およびＬｅｕを含む。
－脂肪族／分岐鎖アミノ酸：側鎖に分岐脂肪酸を有するアミノ酸、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、およびＬｅｕを含む。
－ 芳香族アミノ酸：側鎖に芳香環を有するアミノ酸、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＰｈｅを含む。
－ 脂肪族アミノ酸：側鎖に脂肪酸または水素を有するアミノ酸、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、およびＬｅｕを含む。
－脂肪族／分岐鎖アミノ酸：側鎖に分岐脂肪酸を有するアミノ酸、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、およびＬｅｕを含む。
－ 芳香族アミノ酸：側鎖に芳香環を有するアミノ酸、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＰｈｅを含む。
【0051】
親水性（極性とも称される）アミノ酸：親水性（極性）を示すアミノ酸、セリン（「Ｓｅｒ」または単に「Ｓ」とも称される）、トレオニン（「Ｔｈｒ」または単に「Ｔ」とも称される）、システイン（「Ｃｙｓ」または単に「Ｃ」とも称される）、アスパラギン（「Ａｓｎ」または単に「Ｎ」とも称される）、グルタミン（「Ｇｌｎ」または単に「Ｑ」とも称される）、アスパラギン酸（「Ａｓｐ」または単に「Ｄ」とも称される）、グルタミン酸（「Ｇｌｕ」または単に「Ｅ」とも称される）、リジン（「Ｌｙｓ」または単に「Ｋ」とも称される）、アルギニン（「Ａｒｇ」または単に「Ｒ」とも称される）、およびヒスチジン（「Ｈｉｓ」または「Ｈ」とも称される）を含む。
【0052】
親水性アミノ酸は、以下の群にさらに分類され得る：
－ 酸性アミノ酸：側鎖が酸性を示すアミノ酸、ＡｓｐおよびＧｌｕを含む。
－ 塩基性アミノ酸：側鎖が塩基性を示すアミノ酸、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、およびＨｉｓを含む。
－ 中性アミノ酸：側鎖が忠誠を示すアミノ酸、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、およびＣｙｓを含む。
－ 酸性アミノ酸：側鎖が酸性を示すアミノ酸、ＡｓｐおよびＧｌｕを含む。
－ 塩基性アミノ酸：側鎖が塩基性を示すアミノ酸、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、およびＨｉｓを含む。
－ 中性アミノ酸：側鎖が忠誠を示すアミノ酸、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、およびＣｙｓを含む。
【0053】
さらにまた、ＧｌｙおよびＰｒｏは、「主鎖の方向に影響を及ぼすアミノ酸」に分類されることがあり、側鎖に硫黄原子を含有するアミノ酸のＣｙｓおよびＭｅｔは、「硫黄含有アミノ酸」に分類されることがある。
【0054】
本明細書において使用される場合、「アミノ酸」という表現は、天然アミノ酸だけでなく非天然アミノ酸も含む。非天然アミノ酸としては、例えば上記に記載される天然アミノ酸がＮアルキル化されているＮアルキルアミノ酸；およびペプチド結合を形成する窒素が分岐または非分岐である低級アルキル基（例えばＣ１～Ｃ５、好ましくはＣ１～Ｃ３、より好ましくはＣ１のもの）で修飾されたものが挙げられる。Ｎ－アルキルアミノ酸のうち、Ｎ－エチルアミノ酸、Ｎ－ブチルアミノ酸、またはＮ－メチルアミノ酸が好ましく、Ｎ－メチルアミノ酸がより好ましい。さらにまた、非天然アミノ酸は、Ｄ型アミノ酸（Ｄ－アミノ酸とも称される）、化学修飾されたアミノ酸、例えばβ－アミノ酸、γ－アミノ酸、アミノ酸改変体、アミノ酸誘導体など；インビボでタンパク質のための構成材料ではないアミノ酸、例えばノルロイシン、オルニチンなど；なども含む。官能基が、天然アミノ酸の側鎖にさらに付加されているか、または別の官能基で置換されているアミノ酸も含まれる（例えば、側鎖のアリーレン基、アルキレン基などのような部分に置換または付加を有するアミノ酸；側鎖のアリーレン基またはアルキル基が、増加したＣ数を有するアミノ酸；側鎖の芳香環に置換を有するアミノ酸；複素環式または縮合環式アミノ酸；など）。
【0055】
天然アミノ酸の側鎖に官能基などの構造を付加または置換することによって、天然アミノ酸の性質とは異なる性質が付与され得る。例えば、Ａ４ｐは、アラニンの側鎖にピペリジル基を有するアミノ酸であるが、ピペリジル基を付加することによって、これは、非極性アミノ酸基に属するアラニンとは異なって、塩基性を有する極性アミノ酸の性質を示す。すなわち、それらの共通の側鎖の性質に基づいて天然アミノ酸を分類することによって得られる上記に記載される群は、同じ側鎖の性質を有する非天然アミノ酸を含み得る。例えば、塩基性アミノ酸に属するリジンの主鎖の窒素原子がメチル化されているアミノ酸であるＮ－メチルリジン（ＭｅＫ）は、非天然アミノ酸であるが、これは、塩基性を示すので、塩基性アミノ酸として分類され得る。そのため、ある特定のアミノ酸の性質と同じ側鎖の性質を示す非天然アミノ酸は、保存的アミノ酸置換の対象としても含まれ得る。
【0056】
非限定的な様式において、非天然アミノ酸としては、これらに限定されるものではないが、Ｎ－メチルアミノ酸、Ｗ５ＯＭｅ、Ｆ４ＣＯＯ、Ｗ５Ｈ、Ａｉｂ、ｄｓ、Ｗ１ａａ、Ａ４ｐｉｐａａ、Ｈｇｎ、Ｈａｒ、ＫＣＯｐｉｐｚａａ、４Ｐｙ、Ｗ７Ｎ、Ａｈｐなどが挙げられる。例えば、Ｗ５ＯＭｅ、Ｆ４ＣＯＯ、Ｗ５Ｈ、Ａｉｂ、Ｗ１ａａ、Ｗ７Ｎ、およびＡｈｐは、疎水性アミノ酸に分類され得；４Ｐｙ、Ａ４ｐｉｐａａ、ｄｓ、Ｈａｒ、およびＫＣＯｐｉｐｚａａは、親水性アミノ酸に分類され得；さらにまた、ＡｈｐおよびＡｉｂは、脂肪族アミノ酸に分類され得；ＫＣＯｐｉｐｚａａは、酸性アミノ酸に分類され得；Ｈａｒ、４Ｐｙ、およびＡ４ｐｉｐａａは、塩基性アミノ酸に分類され得；Ｈｇｎおよびｄｓは、中性アミノ酸に分類され得；Ｗ５ＯＭｅ、Ｗ５Ｈ、Ｗ１ａａ、Ｆ４ＣＯＯ、およびＷ７Ｎは、芳香族アミノ酸に分類され得る。ｄｓなどのＤ－アミノ酸は、Ｄ－アミノ酸として分類され得るが、それらが、それらの側鎖の性質に従っても分類され得、Ｎ－メチルアミノ酸が、Ｎ－アルキルアミノ酸として分類され得、Ｎ－メチル化を受けていない元のアミノ酸の側鎖の性質に従っても分類され得ることに留意すべきである。
【0057】
側鎖に芳香環またはその置換を有するアミノ酸のうち、側鎖に無置換の芳香環を有するアミノ酸は、側鎖に芳香環を有するアミノ酸であり、芳香族アミノ酸に属する天然アミノ酸；非天然アミノ酸、例えば、Ｎ－アセチル化芳香族アミノ酸；または天然アミノ酸の側鎖に付加もしくは置換された芳香環を有するアミノ酸を含む。さらにまた、側鎖に置換された芳香環を有するアミノ酸は、側鎖に芳香環を有するアミノ酸であり、芳香族アミノ酸に属する天然アミノ酸または非天然アミノ酸の芳香環の一部の分子、例えば、Ｎ－アセチル化芳香族アミノ酸が、別の分子もしくは官能基もしくは複素環式環で置換された環を有するアミノ酸、または縮合環式環を有するようなアミノ酸を含む。例えば、Ｔｙｒの側鎖ヒドロキシ基に置換を有するアミノ酸；Ｐｈｅのベンゼン環に置換基を有するアミノ酸；またはＴｒｐの側鎖インドール環にヘテロ原子を含有する環を有するアミノ酸；置換基を有するアミノ酸；およびそれらに付加した官能基を有するアミノ酸も含まれる。
【0058】
さらにまた、Ｗまたはその置換体のうち、無置換のＷは、天然アミノ酸であるトリプトファンであり、置換されたＷは、側鎖において、Ｗのインドール環にヘテロ原子を有するＷのアミノ酸誘導体；インドール環のＮＨに含有される水素が置換されているＷのアミノ酸誘導体；ベンゼン環に置換基を有するＷのアミノ酸誘導体；などを含む。
【0059】
Ｋまたはその置換体のうち、無置換のＫは、天然アミノ酸であるリジンであり、置換されたＫは、側鎖において、Ｋのアミノ基に置換基を有するＫのアミノ酸誘導体（アミノ基が水素で置換されている誘導体を含む）；側鎖において、Ｋのアミノブチル基が、分岐鎖または直鎖構造を有するアミノアルキル基で置換されているＫのアミノ酸誘導体；また、アルキル基が置換基を有するＫのアミノ酸誘導体；などを含む。
【0060】
Ｒまたはその置換体のうち、無置換のＲは、天然アミノ酸であるアルギニンであり、置換されたＲは、側鎖において、Ｒのグアニジノ基に置換基を有するＲのアミノ酸誘導体（グアニジノ基が水素で置換されている誘導体を含む）；側鎖において、Ｒのペンチル基が、分岐鎖または直鎖構造を有するアミノアルキル基で置換されているＲのアミノ酸誘導体；また、アルキル基が置換基を有するＲのアミノ酸誘導体；などを含む。
【0061】
Ａまたはその置換体のうち、無置換のＡは、天然アミノ酸であるアラニンであり、置換されたＡは、Ａのα－水素が置換されているＡのアミノ酸誘導体；などを含む。
【0062】
Ｙまたはその置換体のうち、無置換のＹは、天然アミノ酸であるチロシンであり、置換されたＹは、側鎖において、Ｙのフェノールのヒドロキシル基が置換されているＹのアミノ酸誘導体；複素環式環を有するＹのアミノ酸誘導体、または縮合多環式構造を有するＹのアミノ酸誘導体；などを含む。
【0063】
Ｆまたはその置換体のうち、無置換のＦは、天然アミノ酸であるフェニルアラニンであり、置換されたＦは、側鎖において、フェニルアラニンのベンゼン環に置換基を有するアミノ酸；複素環式環を有するＦのアミノ酸誘導体、または縮合多環式構造を有するＦのアミノ酸誘導体；などを含む。
【0064】
さらにまた、Ｎ－アルキルアミノ酸またはその修飾体は、官能基またはアミノ酸、化合物などが、Ｎ－アルキルアミノ酸の側鎖に付加されていてもよい、アミノ酸である。Ｎ－アルキルアミノ酸またはその修飾体の例に関して、Ｎ－アルキルアミノ酸は、Ｎ－アルキルリジンまたはＮ－メチルリジンである。修飾されたＮ－アルキルアミノ酸の別の例は、アルブミン結合剤が結合したＮ－メチルリジン、または任意のアミノ酸のうちの１つ以上が結合したＮ－メチルリジンである。修飾されたＮ－アルキルアミノ酸の別の例は、アルブミン結合剤が、Ｎメチルリジンの側鎖におけるアミノ基に結合したＮ－メチルリジン、またはグリシン、Ｎ－メチルグリシン、またはプロリンのうちの１つもしくは２つが結合したＮ－メチルリジンである。
【0065】
配列番号１のＸ１～Ｘ１１についての前述の選択肢は、任意の組み合わせで選択され得る。
【0066】
一態様において、配列番号１のＸ１は、Ｙ、４Ｐｙ、またはＦ４ＣＯＯである。
【0067】
一態様において、配列番号１のＸ２は、Ｎ－メチルリジンまたはその修飾体である。さらなる態様において、配列番号１のＸ２は、Ｎ－メチルリジンまたは修飾されたＮ－メチルリジンである。
【0068】
一態様において、配列番号１のＸ３およびＸ４は、それぞれ、Ｖである。
【0069】
一態様において、配列番号１のＸ５は、Ｓである。
【0070】
一態様において、配列番号１のＸ６は、Ｎである。
【0071】
一態様において、配列番号１のＸ７は、置換されたＷである。さらなる態様において、配列番号１のＸ７は、Ｗ５ＯＭｅ、Ｗ７Ｎ、またはＷ１ａａである。
【0072】
一態様において、配列番号１のＸ８は、置換されたＦまたは置換されたＹである。さらなる態様において、配列番号１のＸ８は、ＹまたはＦ４ＣＯＯである。
【0073】
一態様において、配列番号１のＸ９は、置換されたＫまたはＲである。さらなる態様において、配列番号１のＸ９は、Ｋ、ＫＣＯｐｉｐｚａａ、Ｈｇｎ、Ａｈｐ、またはＨａｒである。
【0074】
一態様において、配列番号１のＸ１０は、置換されたＷである。さらなる態様において、配列番号１のＸ１０は、Ｗ５Ｈである。
【0075】
一態様において、配列番号１のＸ１１は、置換されたＡまたはＫである。さらなる態様において、配列番号１のＸ１１は、ＡｉｂまたはＡ４ｐｉｐａａである。
【0076】
一態様において、配列番号１のＸ１２は、Ｖである。
【0077】
一態様において、配列番号１のＸ１３は、Ｃである。
【0078】
配列番号１のＸ１～Ｘ１３についての一態様の選択肢は、任意の組み合わせで選択され得る。本明細書において、「非限定的な様式において」および「一態様において」という表現は、互換的に使用され得る。
【0079】
一つの態様において、本発明によるペプチドは、環状ペプチドである。本明細書において使用される場合、「環状ペプチド」という表現は、２つのアミノ酸が結合し、その全体的にまたは部分的に環状である、ペプチドを指す。このペプチドは、架橋構造を形成する；ラクタム環形成またはマクロ環化反応によって環状構造を形成する；ラッソペプチド様構造を有するなどのペプチドにおけるアミノ酸なども含む。すなわち、環状ペプチドの一部分は、環状構造を形成してもよく、または直鎖部分を有していてもよい。
【0080】
一部の例において、一部のペプチドは、インビボで不十分な代謝安定性を示し、一部のペプチドは、サイズが大きく、それらが細胞膜に透過するのを困難にする。ペプチドを環化するための方法は、そのような問題を考慮して適合される。ペプチドが環化される場合、プロテアーゼ耐性が改善され、代謝安定性が改善され、コンフォメーション変化にも制限が追加され、その結果として、剛性が増加し、標的タンパク質に対する膜透過性および親和性が改善されると示唆されている。
【0081】
一つの実施態様において、本発明によるペプチドは、ペプチドに存在するクロロアセチル化されたアミノ酸およびシステイン残基が結合した環状構造を有する。一態様において、ペプチドは、ペプチドに存在するＮ末端アミノ酸（１番目のアミノ酸残基）およびシステイン残基が結合した環状構造を有する。一態様において、ペプチドは、ペプチドに存在するＮ末端アミノ酸（１番目のアミノ酸残基）および１３番目のシステイン残基が結合した環状構造を有する。一態様において、ペプチドは、ペプチドに存在するクロロアセチル化されたＮ末端アミノ酸（１番目のアミノ酸残基）および１３番目のシステイン残基が結合した環状構造を有する。「クロロアセチル化」は、別のハロゲンを使用する「ハロゲンアセチル化」であってもよい。さらにまた、「アセチル化」は、アセチル基以外のアシル基を使用する「アシル化」であってもよい。
【0082】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、配列番号２～３１のいずれか１つによるアミノ酸配列を有する。
【0083】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、配列番号２～３１のいずれか１つによるアミノ酸配列からなる。
【0084】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、配列番号２～３１のいずれか１つによるアミノ酸配列を有する環状ペプチドである。
【0085】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、配列番号２～３１のいずれか１つによるアミノ酸配列からなる環状ペプチドである。
【0086】
本発明によるペプチドに含まれるペプチドのアミド結合の数（アミノ酸の数および長さ）およびペプチド部位は、特に限定されない。総アミノ酸残基（環状構造を形成するペプチドに含まれるアミノ酸残基の数を指し、アミノ酸残基が、リンカーにおいてさらに付加され、環状ペプチドから形成される場合、それらは含まれない）が、２０残基以内であることが好ましい。一部の実施において、アミノ酸の数は、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１以上である。一部の他の実施において、アミノ酸の数は、１９以下、１８以下、１７以下、１６以下、１５以下、１４以下、１３以下、または１２以下である。
【0087】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、６アミノ酸～１９アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約６アミノ酸～１７アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約６アミノ酸～１５アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約６アミノ酸～１４アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約６アミノ酸～１３アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約６アミノ酸～１２アミノ酸を含む。
【0088】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、８アミノ酸～１９アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約８アミノ酸～１７アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約８アミノ酸～１５アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約８アミノ酸～１４アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約８アミノ酸～１３アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約８アミノ酸～１２アミノ酸を含む。
【0089】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、１０アミノ酸～１９アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約１０アミノ酸～１７アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約１０アミノ酸～１５アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約１０アミノ酸～１４アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約１０アミノ酸～１３アミノ酸を含む。いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、約１０アミノ酸～１２アミノ酸を含む。
【0090】
また、リンカーは、環状ペプチドからさらに付加されてもよい。リンカーの例としては、前述のアミノ酸リンカー（ペプチドリンカー）、化学リンカー、脂肪酸リンカー、核酸リンカー、糖鎖リンカーなどが挙げられ、または、複合体、例えば化学リンカー、ペプチドリンカーなどであってもよい。化学リンカーの例としては、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）リンカーが挙げられる。例えば、ＰＥＧリンカーは１～２４のエチレングリコール単位を含んでいてもよい。さらにまた、リンカーは、脂肪酸に由来する二価化学部分を含有する脂肪酸リンカーであってもよい。リンカーは、少なくとも１つのアミノ酸を含み、例えばグリシンリッチペプチド、例えば参照することにより本明細書の開示の一部とされる米国特許第７，２７１，１４９号によるなどの配列［Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ］ｎ（式中、ｎは、１、２、３、４、５、または６である）を有するペプチド、または参照することにより本明細書の開示の一部とされる米国特許第５，５２５，４９１号によるセリンリッチペプチドリンカーが使用されてもよい。非限定的な様式において、ペプチドの物理的性質（例えば、溶解性）が、リンカーの付加によって変化し得るいくつかの場合が存在する。一つの実施態様において、アミノ酸リンカーは、配列番号３２～３５のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。
【0091】
リンカーは、任意の位置に付加され得る。例えば、リンカーはＮ末端側に位置するＣｙｓに結合してもよく、または環状ペプチドに含まれるアミノ酸に結合してもよい。一部の例において、リンカーはＮ末端側に位置するＣｙｓに結合している。
【0092】
ＧｈＲ結合ペプチドおよびＧｈＲアンタゴニスト活性を有するペプチド
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、ＧｈＲに結合する。これらの実施形態の一部の実施において、ペプチドは、ＧｈＲアンタゴニスト活性を有する。一部の例において、ペプチドは、ヒトＧｈＲ（ｈＧｈＲ）に結合し、ｈＧｈＲアンタゴニスト活性を有する。
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、ＧｈＲに結合する。これらの実施形態の一部の実施において、ペプチドは、ＧｈＲアンタゴニスト活性を有する。一部の例において、ペプチドは、ヒトＧｈＲ（ｈＧｈＲ）に結合し、ｈＧｈＲアンタゴニスト活性を有する。
【0093】
本明細書において使用される場合、「ＧｈＲ」という用語は、任意の形態のＧｈＲ、およびＧｈＲの活性の少なくとも一部分を保持するためのその改変体を指す。ヒトＧｈＲ（ｈＧｈＲ）として具体的に別段の記載がない限り、ＧｈＲは、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、およびウシなどの哺乳動物におけるＧｈＲのネイティブ配列のすべてを含む。ＧｈＲの一例は、ｈＧｈＲ（遺伝子ＩＤ：２６９０）であり、これは、ヒトＧｈＲであり、２つのジスルフィド架橋、２２ｋＤａの分子量を有し、１９１のアミノ酸の長さを有するタンパク質である。
【0094】
本明細書において使用される場合、「ＧｈＲに結合する」という表現は、ＧｈＲに結合する活性を有することを示す。ＧｈＲへの結合は、公知の分子間結合を測定するための任意の方法によって測定され得る。非限定的な様式において、例えば、これは、競合結合アッセイ、例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ、散乱分析、および／またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、ならびにサンドイッチおよび競合アッセイによって決定され得、任意の好適な様式において、これは、当該技術分野において公知である所与の例の異なる変形を含んで、公知である。
【0095】
本明細書において使用される場合、「ＧｈＲアンタゴニスト活性」という表現は、ＧｈＲの生物活性および／またはＧｈＲシグナル伝達によって媒介される下流経路（の１つまたは複数）を阻害する活性を示す。ＧｈＲアンタゴニスト活性を有するペプチドは、ＧｈＲシグナル伝達によって媒介される下流経路を含むＧｈＲの生物活性、ならびに例えば、ＧＨ相互作用および／またはＧＨに対する細胞応答の誘導などを、遮断、アンタゴナイズ、および抑制または低減することができる（著しい程度を含む、任意の程度まで）ペプチドを含む。本発明による目的のために、「ＧＨＲアンタゴニスト活性を有するペプチド」という語句が、以前に定義された用語、表題、ならびに機能状態および特性のすべてを包含し、それによって、ＧＨＲそれ自体、ＧＨＲ生物活性（限定されるものではないが、インスリン様成長因子－１（ＩＧＦ－１）発現の任意の態様を媒介するその能力を含む）、または生物活性の結果が、任意の意味のある程度で実質的に無効化、減少、または中和されることが明確に理解されるであろう。一つの実施態様において、ＧｈＲアンタゴニスト活性を有するペプチドは、ＧｈＲに結合して、成長ホルモンとＧｈＲとの間の相互作用に影響を及ぼし、および／またはそれを防止する。いくつかの態様において、ＧｈＲアンタゴニスト活性を有するペプチドは、ＧｈＲに結合して、ＧｈＲ二量化に影響を及ぼし、および／またはそれを防止する。
【0096】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは二環式構造を有する。本明細書において使用される場合、「二環式構造」という表現は、２つ以上の環状構造を有するペプチドを指す。一例として、二環式構造を有するペプチドは、ペプチドに存在するクロロアセチル化されたアミノ酸およびシステイン残基が結合した環状構造を有する環状ペプチドであり、環状ペプチドは、環に架橋構造も有する。一つの実施態様において、二環式構造を有するペプチドは、配列番号１におけるＸ２のアミノ酸残基がＮ－メチルリジンであり、Ｘ７のアミノ酸残基がＷ１ａａであるペプチドであり、ここで、ペプチドは、クロロアセチル化されたＸ１アミノ酸残基およびＸ１３のシステイン残基が結合した環状構造を有し、Ｘ２アミノ酸残基およびＸ７アミノ酸残基が結合した構造も有する。さらにまた、一つの実施態様において、１つ以上のアミノ酸が、Ｘ２アミノ酸残基とＸ７アミノ酸残基との間に存在してもよい。例えば、Ｘ２アミノ酸残基であるＮ－メチルリジンの側鎖のアミノ基は、Ｘ６アミノ酸残基であるＷ１ａａの側鎖のカルボン酸に結合して、二環式構造を形成してもよく、さらにまた、Ｎ－メチルリジンの側鎖のアミノ基、およびＸ６アミノ酸残基であるＷ１ａａの側鎖のカルボン酸は、グリシン、Ｎ－メチルグリシン、またはプロリンを通じて結合していてもよい。
【0097】
いくつかの態様において、本発明によるペプチドは、アルブミン結合剤を含む。本明細書において使用される場合、「アルブミン結合剤」という表現は、ヒト血清アルブミンに共有結合しない化合物を指す。ヒト血清アルブミンへの結合は、結合性を測定するための公知の方法、例えば、前述の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定され得る。本発明における使用に好適な典型的なアルブミン結合剤としては、ミリスチン酸もしくはパルミチン酸などの脂肪酸、その誘導体、またはジフェニルシクロヘキサン誘導体が挙げられる。一態様において、アルブミン結合剤は、１２～４０個の炭素原子を有する直鎖および分岐鎖脂溶性基、ならびに遠位酸性基を含む化合物である。一態様において、アルブミン結合剤は、４ＩｐｈｐＣＯ、ｃＣ１４ＣＯＯ、ＢｉＰｈ４ｐＣＯ、ＰｈｐＣＯ、ＰｈＰｅＣＯ、および４ＭｅＰｈｐＣＯのうちのいずれかである。さらにまた、本明細書において、アルブミン結合剤は、１つまたは複数のグルタミン酸を含む構造を有していてもよい。一部の例において、アルブミン結合剤は、１つのグルタミン酸または２～５つのグルタミン酸が結合したペプチドのＮ末端にアルブミン結合剤が結合した構造を有する。
【0098】
一つの実施態様において、アルブミン結合剤はペプチドの環状構造部位に存在するアミノ酸に結合していてもよく、またはペプチドに結合したリンカーにさらに結合していてもよい。一例として、配列番号１におけるＸ２のアミノ酸残基に結合している場合において、Ｘ２のアミノ酸残基であるＮ－メチルリジン、およびヒト血清アルブミンに共有結合しない化合物は、１つまたは複数のグルタミン酸を有する構造を通じて結合している。好ましい態様は、１つまたは２つのグルタミン酸が、Ｎ－メチルリジンの側鎖に結合し、アルブミン結合剤がそのＮ末端に結合しているものである。
【0099】
さらにまた、一例として、１つまたは複数のグルタミン酸を有する構造を含むヒト血清アルブミンを有するアミノ酸リンカーはペプチドに結合している。好ましい態様は、Ｋ（配列番号３２）またはＧ－Ｐ－（ｄｓ）３－Ｋ（配列番号３５）を有するアミノ酸リンカーが、ペプチドのＣ末端に存在するＣｙｓに結合し、１つまたは２つのグルタミン酸が、アミノ酸リンカーのリジンの側鎖に結合し、アルブミン結合剤が、そのＮ末端に結合しているものである。
【0100】
ペイロード結合ＰＤＣの態様
一つの実施態様において、本発明は複合体に関する。この複合体は、本明細書に記載されるペプチド、ペプチドに結合したリンカー、およびこのリンカーに結合した物質のうちのいずれかを含む。ペプチドは、ＧｈＲに結合することができるので、複合体はＧｈＲに物質を輸送することが可能となる。
一つの実施態様において、本発明は複合体に関する。この複合体は、本明細書に記載されるペプチド、ペプチドに結合したリンカー、およびこのリンカーに結合した物質のうちのいずれかを含む。ペプチドは、ＧｈＲに結合することができるので、複合体はＧｈＲに物質を輸送することが可能となる。
【0101】
物質は、それがＧｈＲに送達することを当業者が所望する物質である限り、当業者に所望される任意の物質であり得る。物質の例は、これらに限定されないが、以下を含む：
－ 化合物：低分子量化合物、中分子量化合物を含み、例としては、公知の低分子量薬物が挙げられる。
－ ペプチド：身体中で標的に結合し、いくつかの種類の効果を示すペプチド、例えば、環状ペプチドであってもよい。
－ ＲＩ：放射性同位元素によって標識され得る任意の化合物、例えば、放射性同位元素によって標識された、低分子量もしくは中分子量化合物、または抗体であってもよい。例としては、ＰＥＴスキャンのための化合物が挙げられる。
－ タンパク質：身体において有用な機能を示す任意のタンパク質、例えば、抗体または酵素であってもよい。例としては、酵素補充療法において使用される酵素が挙げられる。
－ 核酸：塩基配列を有する任意の物質、例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡ。例としては、核酸医薬が挙げられる。
－ 薬物送達システム（ＤＤＳ）において使用される分子：ＤＤＳにおいて使用される公知分子、例えば、リポソームまたはミセルであってもよい。ＤＤＳ分子は、そこに、医薬品などの化合物をさらに含んでいてもよい。
－ 化合物：低分子量化合物、中分子量化合物を含み、例としては、公知の低分子量薬物が挙げられる。
－ ペプチド：身体中で標的に結合し、いくつかの種類の効果を示すペプチド、例えば、環状ペプチドであってもよい。
－ ＲＩ：放射性同位元素によって標識され得る任意の化合物、例えば、放射性同位元素によって標識された、低分子量もしくは中分子量化合物、または抗体であってもよい。例としては、ＰＥＴスキャンのための化合物が挙げられる。
－ タンパク質：身体において有用な機能を示す任意のタンパク質、例えば、抗体または酵素であってもよい。例としては、酵素補充療法において使用される酵素が挙げられる。
－ 核酸：塩基配列を有する任意の物質、例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡ。例としては、核酸医薬が挙げられる。
－ 薬物送達システム（ＤＤＳ）において使用される分子：ＤＤＳにおいて使用される公知分子、例えば、リポソームまたはミセルであってもよい。ＤＤＳ分子は、そこに、医薬品などの化合物をさらに含んでいてもよい。
【0102】
また、ＤＤＳ分子は、上記で与えられた例のいくつかが組み合わされた複合体であってもよい。
【0103】
ペプチド生成
本発明によるペプチドは、例えば、以下のものなどのペプチドを生成するための任意の公知の方法によって生成され得る：
－ 液相法、固相法、液相法および固相法を組み合わせるハイブリッド法などの化学合成法；
－ 遺伝子組み換え法；など。
本発明によるペプチドが化学合成法によって生成される一部の例において、本発明によるペプチドは合成ペプチドであると言うことができる。
本発明によるペプチドは、例えば、以下のものなどのペプチドを生成するための任意の公知の方法によって生成され得る：
－ 液相法、固相法、液相法および固相法を組み合わせるハイブリッド法などの化学合成法；
－ 遺伝子組み換え法；など。
本発明によるペプチドが化学合成法によって生成される一部の例において、本発明によるペプチドは合成ペプチドであると言うことができる。
【0104】
固相法において、例えば、ヒドロキシ基を有する樹脂のヒドロキシ基、およびα－アミノ基が保護基によって保護されている１番目のアミノ酸（通常は、標的ペプチドのＣ末端アミノ酸）のカルボキシ基は、エステル化反応に供される。エステル化触媒について、公知の脱水剤および縮合剤、例えば、１－メシチレンスルホニル－３－ニトロ－１，２，４－トリアゾール（ＭＳＮＴ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、およびジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）が使用され得る。
【0105】
次に、１番目のアミノ酸のα－アミノ基の保護基が除去され、主鎖のカルボキシ基を除くすべての官能基が保護されている２番目のアミノ酸が添加され、カルボキシ基が活性化され、１番目および２番目のアミノ酸が結合する。さらにまた、２番目のアミノ酸のα－アミノ基が脱保護され、主鎖のカルボキシ基を除くすべての官能基が保護されている３番目のアミノ酸が添加され、カルボキシ基が活性化され、２番目および３番目のアミノ酸が結合する。これが繰り返され、標的の長さを有するペプチドが合成された後、すべての官能基が脱保護される。
【0106】
固相合成のための樹脂の例としては、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂、ＭＢＨＡ樹脂、Ｃｌ－Ｔｒｔ樹脂、ＳＡＳＲＩＮ樹脂、Ｗａｎｇ樹脂、Ｒｉｎｋアミド樹脂、ＨＭＦＳ樹脂、アミノ－ＰＥＧＡ樹脂（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）、ＨＭＰＡ－ＰＥＧＡ樹脂（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）などが挙げられる。これらの樹脂は、溶媒（ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、２－プロパノール、塩化メチレンなど）を使用して洗浄された後に使用されてもよい。
【0107】
α－アミノ基の保護基の例としては、ベンジルオキシカルボニル（ＣｂｚまたはＺ）基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、ベンジル基、アリル基、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）基などが挙げられる。Ｃｂｚ基は、フッ化水素酸を使用する処理、水素化などによって脱保護され得、Ｂｏｃ基は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用する処理によって保護され得、Ｆｍｏｃ基は、ピペリジンまたはピロールリジンを使用する処理によって脱保護され得る。
【0108】
メチルエステル、エチルエステル、アリルエステル、ベンジルエステル、ｔｅｒｔ－ブチルエステル、シクロヘキシルエステルなどのような例を使用して、α－カルボキシ基が保護され得る。
【0109】
カルボキシ基の活性化は、縮合剤を使用して行われ得る。縮合剤の例としては、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣまたはＷＳＣ）、（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチル］－１Ｈ－ベンゾトリアゾリウム－３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）などが挙げられる。
【0110】
樹脂からのペプチド鎖の切断は、酸、例えば、ＴＦＡ、フッ化水素（ＨＦ）などを使用してペプチド鎖を処理することによって行われ得る。
【0111】
遺伝子組み換え法（翻訳／合成系）によるペプチドの生成は、ペプチドをコードする核酸を使用して行われ得る。ペプチドをコードする核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。
【0112】
ペプチドをコードする核酸は、公知の方法、またはそれと等価な方法によって調製され得る。例えば、ペプチドは、自動合成機によって合成され得る。制限酵素認識部位を追加して、ベクターに得られたＤＮＡを挿入してもよい。あるいは、酵素などを使用して、形成されたペプチド鎖をスプライシングするためのアミノ酸配列をコードする塩基配列が組み込まれてもよい。
【0113】
上記に記載されるように、ペプチドが細胞透過性ペプチドなどに融合される場合、核酸は、細胞透過性ペプチドをコードする核酸も含む。
【0114】
別のペプチドのキメラペプチドとして標的ペプチドを発現させるためのキメラタンパク質発現法を使用して、宿主由来プロテアーゼによる分解も抑制しされ得る。この場合において、標的ペプチドおよびそれに結合したペプチドをコードする核酸は、核酸として使用され得る。
【0115】
その後、発現ベクターが、ペプチドをコードする核酸を使用して調製される。核酸はそのまままたは制限酵素によって消化されてもよく、あるいは、核酸はリンカーなどを付加することによって発現ベクターのプロモーターの下流に挿入されてもよい。ベクターの例としては、大腸菌由来プラスミド（ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＵＣ１２、ｐＵＣ１３、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、ｐＵＣ１１８、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＩＩなど）、枯草菌由来プラスミド（ｐＵＢ１１０、ｐＴＰ５、ｐＣ１９１２、ｐＴＰ４、ｐＥ１９４、ｐＣ１９４など）、酵母由来プラスミド（ｐＳＨ１９、ｐＳＨ１５、ＹＥｐ、ＹＲｐ、ＹＩｐ、ＹＡＣなど）、バクテリオファージ（ｅファージ、Ｍ１３ファージなど）、ウイルス（レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、カリフラワーモザイクウイルス、タバコモザイクウイルス、バキュロウイルスなど）、コスミドなどが挙げられる。
【0116】
プロモーターは、宿主の種類に従って適切に選択され得る。宿主が動物細胞である場合、例えばＳＶ４０（サルウイルス４０）に由来するプロモーターまたはＣＭＶ（サイトメガロウイルス）に由来するプロモーターが使用され得る。宿主が大腸菌である場合、ｔｒｐプロモーター、Ｔ７プロモーター、ｌａｃプロモーターなどが使用され得る。
【0117】
発現ベクターは、例えばＤＮＡ複製開始点（ｏｒｉ）、選択マーカー（抗生物質耐性、栄養要求性など）、エンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加シグナル、タグ（ＦＬＡＧ、ＨＡ、ＧＳＴ、ＧＦＰなど）をコードする核酸などを組み込み得る。
【0118】
次に、適切な宿主細胞は、発現ベクターによって形質転換される。宿主は、ベクターに関連して適切に選択され得る。大腸菌、枯草菌（バチルス属）、酵母、昆虫または昆虫細胞、動物細胞などのような例が宿主として使用され得る。動物細胞として、例えばＨＥＫ２９３Ｔ細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、骨髄腫細胞、ＨｅＬａ細胞、およびＶｅｒｏ細胞が使用され得る。形質転換は、宿主の種類に応じて、公知の方法、例えばリポフェクション法、リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法、マイクロインジェクション法、遺伝子銃法などに従って行われ得る。標的ペプチドは、従来法に従って、形質転換体を培養することによって発現される。
【0119】
形質転換体培養からのペプチドの精製に関して、培養された細胞は回収され、次いで適切な緩衝溶液に懸濁され、続いて、超音波処理、凍結－解凍などのような方法によって細胞の破壊を行い、次いで、粗抽出物が遠心分離または濾過によって得られる。ペプチドが培養溶液に分泌される場合、上清が回収される。
【0120】
粗抽出物または培養上清の精製はまた、公知の方法またはそれに等価な方法（例えば、塩析、透析、限外濾過法、ゲル濾過法、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、逆相高速液体クロマトグラフィーなど）によって行われ得る。
【0121】
得られたペプチドは、公知の方法またはそれに等価な方法によって、遊離体から塩に、または塩から遊離体に変換されてもよい。
【0122】
一つの実施態様において、翻訳／合成系は無細胞翻訳系であり得る。無細胞翻訳系によれば、発現産物の高度に純粋な形態を、一般に精製なしで得ることができる。無細胞翻訳系は、例えばリボソームタンパク質、アミノアシル－ｔＲＮＡシンターゼ（ＡＲＳ）、リボソームＲＮＡ、アミノ酸、ｒＲＮＡ、ＧＴＰ、ＡＴＰ、翻訳阻害因子（ＩＦ）、伸長因子（ＥＦ）、放出因子（ＲＦ）、およびリボソーム再生因子（ＲＲＦ）、または翻訳に必要な別の因子を含む。大腸菌抽出物またはコムギ胚抽出物が、発現効率を増加させるために添加されてもよい。加えて、ウサギ赤血球抽出物または昆虫細胞抽出物が添加されてもよい。
【0123】
透析を使用してこれらを含む系にエネルギーを継続的に供給することによって、数百μｇ～数ｍｇ／ｍＬのタンパク質が、非限定的な様式において生成され得る。系は、ゲノムＤＡＮの転写を併せて行うために、ＲＮＡポリメラーゼを含んでいてもよい。使用され得る市販の無細胞翻訳系の例としては、大腸菌に由来する系のための、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｋ．Ｋ．製のＲＴＳ－１００（登録商標）、ＧｅｎｅＦｒｏｎｔｉｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製のＰＵＲＥ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ．製のＰＵＲＥｘｐｒｅｓｓインビトロタンパク質合成キットなど、およびコムギ胚抽出物を使用する系のためのＺＯＩＧＥＮＥ、ＣｅｌｌＦｒｅｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．製の系などが挙げられる。
【0124】
細胞翻訳系において、人工アミノアシル－ｔＲＮＡが使用されてもよく、所望のアミノ酸またはヒドロキシ酸は、天然アミノアシル－ｔＲＮＡシンターゼによって合成されるアミノアシル－ｔＲＮＡの代わりに、ｔＲＮＡに連結（アシル化）されてもよい。アミノアシル－ｔＲＮＡは、人工リボザイムを使用して合成されてもよい。
【0125】
リボザイムの例としては、フレキシザイム（ｆｌｅｘｉｚｙｍｅ）（Ｈ．Ｍｕｒａｋａｍｉ、Ｈ．Ｓａｉｔｏ、およびＨ．Ｓｕｇａ、（２００３）、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第１０巻、６５５－６６２；およびＷＯ２００７／０６６６２７号など）が挙げられ、すべて、参照により本明細書に組み込まれる。フレキシザイムは、プロトタイプフレキシザイム（Ｆｘ）、新たに修飾されたジニトロベンジルフレキシザイム（ｄＦｘ）、増強されたフレキシザイム（ｅＦｘ）、アミノフレキシザイム（ａＦｘ）などの名称でも公知である。
【0126】
所望のコドンは、フレキシザイムによって生成されたｔＲＮＡを使用することによって、所望のアミノ酸またはヒドロキシ酸と関連して翻訳され得、それに、所望のアミノ酸またはヒドロキシ酸が連結される。特別なアミノ酸が、所望のアミノ酸として使用されてもよい。例えば、上記の環化に必要な非天然アミノ酸も、この方法によって結合ペプチドに導入され得る。
【0127】
例えば、段階的固相合成、コンフォメーション的に支持された再ライゲーションを受けているペプチド断片の半合成、および化学的ライゲーションを含む、当該技術分野において一般に使用されるさまざまな方法が、ペプチドの化学合成のために使用され得る。ペプチドの合成は、例えば、Ｋ．Ｊ．Ｊｅｎｓｅｎ、Ｐ．Ｔ．Ｓｈｅｌｔｏｎ、Ｓ．Ｌ．Ｐｅｄｅｒｓｅｎ、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、第２版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、２０１３などに記載されているさまざまな固相技術を使用する化学合成である。好ましい戦略は、α－アミノ基を一時的に保護することができ、塩基を使用して選択的に除去することができるＦｍｏｃ基、および側鎖官能基を一時的に保護し、Ｆｍｏｃ脱保護条件下で安定である、保護基の組み合わせに基づく。この種類の一般的なペプチド側鎖の選択は、前述のＰｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、第２版；Ｇ．Ｂ．Ｆｉｅｌｄｓ、Ｒ．Ｌ．Ｎｏｂｌｅ、Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ ９－Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．３５、１９９０、１６１－２１４などにより公知である；しかしながら、好ましいペプチド側鎖保護基としては、例えば、セリンもしくはトレオニンのヒドロキシ基のためのベンジル基もしくはｔｅｒｔ－ブチル基およびトリチル（Ｔｒｔ）基；チロシンのヒドロキシ基のための２－ブロモベンジルオキシカルボニル基もしくはｔｅｒｔ－ブチル基；リジン側鎖のアミノ基のためのＢｏｃ基、メチルテトラゾールチオール（Ｍｔｔ）基、Ａｌｌｏｃ基、およびｉｖＤｄｅ基；ヒスチジンのイミダゾール基のためのＴｒｔ基もしくはＢｏｃ基；アルギニンのグアニジル基のための２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル（Ｐｂｆ）基；グルタミン酸およびアスパラギン酸などのカルボキシル基のためのｔｅｒｔ－ブチル基、アリル基、および３－メチルペンタン（Ｍｐｅ）基；グルタミンもしくはアスパラギンのカルボキサミド基のためのＴｒｔ基；またはシステインのチオール基のためのＴｒｔ基およびモノメトキシトリチル（Ｍｍｔ）基が挙げられる。
【0128】
ペプチドは、上記に記載される固相樹脂において、段階的な方法によって合成されてもよい。使用されるＣ末端アミノ酸および合成のために使用されるアミノ酸またはペプチドのすべては、α－アミノ保護基が、合成するプロセスの間に選択的に除去されなければならない。好ましくは、上記に記載される固相樹脂が使用され、Ｆｍｏｃなどによって適切に保護されたそのＮ末端を有するペプチドのＣ末端カルボキシル基、またはＦｍｏｃによって保護されたそのＮ末端を有するアミノ酸のＣ末端カルボキシ基が、適切な試薬によって活性化エステルにされると、次いで、これは、固相樹脂上のアミノ基に添加されて、開始される。ペプチド鎖のその後の伸長は、Ｎ末端保護基（Ｆｍｏｃ基）を除去すること、次いで、標的ペプチドのアミノ酸配列による保護されたアミノ酸誘導体の縮合の連続的な繰り返しによって達成され得る。これらが、最終段階において標的ペプチドを放出し得ることに留意すべきである。放出する条件の例は、Ｔｅｉｘｅｉｒａ、Ｗ．Ｅ．Ｂｅｎｃｋｈｕｉｊｓｅｎ、Ｐ．Ｅ．ｄｅ Ｋｏｎｉｎｇ、Ａ．Ｒ．Ｐ．Ｍ．Ｖａｌｅｎｔｉｊｎ、Ｊ．Ｗ．Ｄｒｉｊｆｈｏｕｔ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｅｐｔ．Ｌｅｔｔ．、２００２、９、３７９－３８５などに与えられており、ペプチドは、ＴＦＡ中の捕捉剤のような、水／シリルヒドリド／チオールを含有するＴＦＡ溶液に放出され得る。典型的な例としては、ＴＦＡ／水／ＴＩＳ／ＤＯＤＴ（体積比９２．５：２．５：２．５：２．５）が挙げられる。
【0129】
本明細書に記載されるペプチドの合成は、単一または複数チャネルのペプチド合成機、例えばＣＥＭ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製のＬｉｂｅｒｔｙ Ｂｌｕｅ合成機、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｊａｐａｎ，Ｌｔｄ．製のＳｙｒｏ Ｉ合成機またはその後継機などを使用して行われてもよい。
【0130】
カルボキシ基の活性化は、縮合剤を使用して行われ得る。縮合剤の例としては、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＤＩ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣまたはＷＳＣ）、（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチル］－１Ｈ－ベンゾトリアゾリウム－３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）などが挙げられる。
【0131】
ペプチドの環化は、公知の方法に従って行われ得る。非限定的な様式において、２つ以上のシステイン残基を含むようにペプチドを設計することによって、例えば環状構造は、翻訳後に、ジスルフィド結合によって形成され得る。さらにまた、Ｇｏｔｏら（Ｙ．Ｇｏｔｏら ＡＣＳ Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．３ １２０－１２９（２００８））の方法に従って、そのＮ末端にクロロアセチル基を有するペプチドは、遺伝コード再プログラム化技術によって合成されてもよく、そしてペプチドに硫黄分子を含有するシステイン残基を配置することによっても環化されてもよい。そのため、メルカプト基は、自発的に、翻訳後にクロロアセチル基上で求核攻撃を行い、ペプチドは、チオエーテル結合によって環化される。環を形成するように結合する他のアミノ酸の組み合わせが、ペプチド内に配置され、遺伝コード再プログラム化技術によって環化されてもよい。あるいは、環化は、ペプチドにＬ－２－アミノアジピン酸残基を配置し、それをＮ末端の主鎖アミノ酸に結合させることによって行われてもよい。この様式において、公知の環化法が任意の特定の制限なく使用され得る。
【0132】
医薬組成物
本発明は、本発明によるペプチドを含む医薬組成物にも関する。本発明による医薬組成物によって標的にされる疾患は、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連するものであり、これは、成長ホルモンの過剰な分泌、好ましくは下垂体ソマトトロピンの過剰分泌に起因してさまざまな症状を示し、これは脳下垂体などの腫瘍および炎症などによって引き起こされる。さらにまた、標的は成長ホルモンの過剰な分泌によって引き起こされる疾患、例えば先端巨大症（ａｃｒｏｍｅｇａｌｙ）または巨人症を含む。本発明によるペプチドは、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患、ならびに先端巨大症および巨人症を治療するための医薬組成物の活性成分として有用である。
本発明は、本発明によるペプチドを含む医薬組成物にも関する。本発明による医薬組成物によって標的にされる疾患は、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連するものであり、これは、成長ホルモンの過剰な分泌、好ましくは下垂体ソマトトロピンの過剰分泌に起因してさまざまな症状を示し、これは脳下垂体などの腫瘍および炎症などによって引き起こされる。さらにまた、標的は成長ホルモンの過剰な分泌によって引き起こされる疾患、例えば先端巨大症（ａｃｒｏｍｅｇａｌｙ）または巨人症を含む。本発明によるペプチドは、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患、ならびに先端巨大症および巨人症を治療するための医薬組成物の活性成分として有用である。
【0133】
いくつかの態様において、医薬組成物はＧｈＲアンタゴニスト活性を有する。いくつかの態様において、医薬組成物はｈＧｈＲアンタゴニスト活性を有する。
【0134】
成長ホルモンは、脳下垂体において産生された場合、血流に分泌され、さまざまな細胞表面、例えば肝臓、筋肉組織、および骨組織において発現される成長ホルモン受容体（ＧｈＲ）に結合する。ＧＨおよびＧｈＲの結合は、細胞、特に肝臓細胞において、インスリン様成長因子－１（ＩＧＦ－１）の産生を誘導する。下記に記載される先端巨大症および巨人症において、血漿および／または組織における成長ホルモンの上昇は、血漿および／または組織におけるＩＧＦ－Ｉレベルの上昇と関連していることが公知である。
【0135】
ＧＨの過剰なまたは不十分な分泌は、疾患を引き起こすことが公知である。ＧＨの過剰な分泌は先端巨大症と呼ばれる状態を引き起こし（小児において発生した場合、巨人症と呼ばれることがある）、これは、過剰な骨の伸長、軟組織の肥大、心臓血管および消化管の症状、ならびにインスリン抵抗性などの症状を提示する。多くの場合において、この状態は、それらの分泌機能を維持しながら、腫瘍原性（下垂体腫瘍）になる成長ホルモン分泌細胞に起因し、発生の頻度は１００，０００人あたり４～２４人と稀である。適切に治療されないと、代謝性疾患、例えば糖尿病および高血圧、アンギナ、心筋梗塞、脳血管障害下の状態、結腸および甲状腺のがんなどの合併症の高い可能性があり、そのため早期の診断および治療が必要である。
【0136】
先端巨大症のための最も一般的な治療は、下垂体腫瘍の外科的切除である。しかしながら、腫瘍は大きく、そのため切除するのが困難であることがあり、またはＧＨ分泌は切除後でさえ過剰なままであることがあり、これらの場合において薬物療法が用いられる。
【0137】
ＧｈＲを阻害する活性を有する化合物、ならびに先端巨大症および巨人症の治療のためにそのような化合物を含む組成物が所望されている。したがって、本明細書は、ＧｈＲアンタゴニスト活性を有する前述のペプチドならびにヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患、好ましくは先端巨大症および巨人症の治療のための医薬組成物も開示する。いくつかの態様において、本発明による医薬組成物は、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患の治療のための医薬組成物である。いくつかの態様において、本発明による医薬組成物は、先端巨大症または巨人症の治療のためのものである。
【0138】
本明細書において使用される場合、「ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患」という表現は、脳下垂体からの１つまたは複数のホルモンの過剰分泌に起因する過剰な末梢ホルモンによって主に引き起こされるさまざまな症状を示す疾患を指す。病因としては、脳下垂体それ自体の障害、下垂体ホルモンの分泌を制御する視床下部の障害、ならびに脳下垂体および視床下部を接続する下垂体茎の障害、ならびにそれらの組み合わせも挙げられる。本発明によるペプチドは、成長ホルモン受容体に結合することによって治療効果を誘導するので、病因は、特に限定されない。
【0139】
「先端巨大症」は、成長ホルモンの過剰分泌によって引き起こされる状態であり、小児の間に発生した場合、巨人症と呼ばれることがある。小児において、先端巨大症が思春期前に発生する場合、長骨の伸長が止まらず、身長および手足が、異常な長さに成長する。しかしながら、成人において発生する先端巨大症において、骨は、伸長よりもむしろ変形または拡大する。また、非骨組織の拡大が起こり得、例えば、先端巨大症は、心臓の拡張に起因する心不全、神経を圧縮する組織の拡大に起因する視力障害、手足の弱化などを引き起こし得る。加えて、糖尿病、高血圧、睡眠時無呼吸症候群、がんになり得る腫瘍などが発生する可能性がより高くなることが公知である。したがって、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患（例えば、限定されるものではないが、ヒト成長ホルモンの発現、産生、および／または分泌の増加と関連する疾患など）のための本発明によるペプチドを含有する医薬組成物を使用する治療を行うことで、結果として先端巨大症および巨人症によって引き起こされる、心不全、糖尿病、高血圧、睡眠時無呼吸症候群、および特定の（特に、結腸）腫瘍の防止をもたらし得る。
【0140】
いくつかの態様において、本発明による医薬組成物は、ペプチドそれ自体を含んでいてもよく、またはペプチドの薬学的に許容される塩を含んでいてもよい。本明細書における「ペプチド」は、特に断らない限り、ペプチドの薬学的に許容される塩を含み得る。医薬組成物は、好ましくは有効量の活性成分としてのペプチドを含む。
【0141】
ペプチドの塩（薬学的に許容される塩）は、好ましくは酸付加塩である。例えば、無機酸（塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）の塩、有機酸（酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、シュウ酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）の塩などがこの塩として使用される。ペプチドまたはその塩は水和物などの溶媒和物も含む。
【0142】
本明細書において、医薬組成物の投与の形態は、特に限定されず、経口または非経口であり得る。非経口投与の例としては、注射、例えば筋肉内注射、静脈内注射、または皮下注射；経皮投与；経粘膜投与（経鼻、経口、経眼、経肺、経膣、または経直腸）；などが挙げられる。
【0143】
医薬組成物は、ポリペプチドが容易に代謝および排泄される性質を考慮して、さまざまな方法で改変されてもよい。例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）または糖鎖が、血液中でのその保持時間を延長して、抗原性を低減するためにポリペプチドに付加されてもよい。さらにまた、生分解性重合化合物、例えばポリ乳酸／グリコール（ＰＬＧＡ）、多孔性ヒドロキシアパタイト、リポソーム、表面改変リポソーム、および不飽和脂肪酸において調製された、エマルジョン、ナノ粒子、ナノスフェアなどが、放出制御基材として使用され、ポリペプチドは、基材中に存在していてもよい。経皮投与の場合において、弱い電流は皮膚表面を通過し、角質層に浸透するのを可能にする（イオントフォレーシス）。
【0144】
医薬組成物に関して、活性成分はそのまま使用されてもよく、または医薬組成物は薬学的に許容される担体、賦形剤、添加剤などを含んでいてもよく、または製剤化されていてもよい。剤形の例としては、液剤（例えば、注射剤）、分散剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、散剤、坐剤、粉末化薬物、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、ロゼンジ、吸入剤、軟膏、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、パッチなどが挙げられる。製剤化は、例えば、必要に応じて、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、溶解剤、可溶化剤、着色剤、香味剤、安定剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、保存剤、酸化防止剤などを使用して、一般的な方法によって行われ得る。
【0145】
製剤化のために使用される成分の例としては、これらに限定されるものではないが、精製水、生理食塩水、リン酸緩衝溶液、デキストロース、グリセロール、薬学的に許容される有機溶媒、例えば、エタノール、動植物油、ラクトース、マンニトール、グルコース、ソルビトール、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、コーンスターチ、無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアガム、トラガカント、カゼイン、寒天、ポリエチレングリコール、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ワセリン、パラフィン、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、高級アルコール、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミンなどが挙げられる。
【0146】
医薬組成物は、一般にペプチドが粘膜を通して吸収するのが困難であるという事実を考慮して、不十分な吸収性の薬物の吸収を改善するために吸収促進剤を含んでいてもよい。以下が吸収促進剤として使用されてもよい：界面活性剤、例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ラウリル硫酸ナトリウム、およびサポニン；胆汁酸塩、例えば、グリココール酸、デオキシコール酸、およびタウロコール酸；キレート化剤、例えば、ＥＤＴＡおよびサリチル酸；脂肪酸、例えば、カプロン酸、カプリン酸、ラウリン酸、オレイン酸、リノール酸、混合ミセル；エナミン誘導体、Ｎ－アシルコラーゲンペプチド、Ｎ－アシルアミノ酸、シクロデキストリン、キトサン、一酸化窒素ドナーなど。
【0147】
医薬組成物が丸剤または錠剤である場合、それは、糖コーティング、または胃溶性もしくは腸溶コーティング物質を使用して、コーティングされていてもよい。
【0148】
医薬組成物が注射剤である場合、それは、注射用蒸留水、生理的食塩水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、アルコールなどを含んでいてもよい。加えて、保水剤、乳化剤、分散剤、安定剤、溶解剤、可溶化剤、保存剤などが添加されていてもよい。
【0149】
さらにまた、医薬組成物は、ヒトだけでなく、非ヒト哺乳動物または鳥類を標的にしてもよい。非ヒト哺乳動物の例としては、ヒト以外の霊長類（サル、チンパンジー、ゴリラなど）、家畜動物（ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジなど）、イヌ、ネコ、ラット、マウス、モルモット、ウサギなどが挙げられる。
【0150】
特に、ヒトに投与される場合における投薬量は、症状、患者の年齢、性別および体重、感受性差、投与方法、投与間隔、活性成分の種類、ならびに製剤の種類に応じて変化し、それは、非限定的な様式において、例えば１回またはいくつかの用量に分割されて、約３０μｇ～約１００ｇの間、約１μｇ～約１０ｇの間、約１μｇ～約１ｇの間、約１０μｇ～約１ｇの間、約１０μｇ～約５００ｍｇの間、約１００μｇ～約１０ｇの間、約１００μｇ～約１ｇの間、約１０μｇ～約５００ｍｇの間、約１００μｇ～約５００ｍｇの間、または約１００μｇ～約１００ｍｇの間で投与することによって、投与されてもよい。注射剤の場合において、患者の体重に従って、約１μｇ／ｋｇ～約３，０００μｇ／ｋｇまたは約３μｇ／ｋｇ～約１，０００μｇ／ｋｇが、一回またはいくつかの用量に分割されて、投与されてもよい。
【0151】
本発明は、本発明によるペプチドを対象に投与することによる、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患を治療するための方法にも関する。
【0152】
本発明は、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患の治療のための本発明によるペプチドの使用にも関する。
【0153】
本発明は、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患の治療のための医薬組成物を製造するためのペプチドの使用にも関する。
【0154】
本発明は、ヒト成長ホルモンの過剰分泌と関連する疾患を治療するための方法における使用のための本発明によるペプチドにも関する。
【実施例】
【0155】
本発明を、実施例に基づいて下記に詳細に記載するが、本発明は、これらの実施例に限定されない。当業者は、本明細書の記載に基づいて、本発明に改変および変更を容易に加えることができ、これらは本発明の技術的範囲に包含される。
【0156】
実施例１－化学合成
以下の実施例における化学合成において使用されたすべての原料、ビルディングブロック、試薬、酸、塩基、固相樹脂、および溶媒について市販の製品をそのまま使用して、または有機化学技法を使用して当業者によって、合成を完了することができる。市販製品が、別段の指定がない限り、保護基を含有するアミノ酸のために使用されたことに留意する。
以下の実施例における化学合成において使用されたすべての原料、ビルディングブロック、試薬、酸、塩基、固相樹脂、および溶媒について市販の製品をそのまま使用して、または有機化学技法を使用して当業者によって、合成を完了することができる。市販製品が、別段の指定がない限り、保護基を含有するアミノ酸のために使用されたことに留意する。
【0157】
固相樹脂におけるペプチド鎖の拡大は、出発材料としてそれぞれの実施例に記載される樹脂を使用すること、ならびに標準的なペプチドカップリング反応条件およびＦｍｏｃ除去反応条件を使用することによって行われる。反応を、製造業者のマニュアルに従って、ＣＥＭによって製造された自動ペプチド合成機であるＬｉｂｅｒｔｙ Ｂｌｕｅを使用して行った。例として、使用した一般的なアミノ酸の一部を下記に列挙し、側鎖保護基を括弧内に示す：
－ Ｆｍｏｃ－Ｎ－Ｍｅ－Ｌｙｓ（ａｌｌｏｃ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｆ４ＣＯＯ（ｔＢｕ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｗ１ａａ（アリル）－ＯＨ；
－ Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ａｌｌｏｃ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｗ５Ｈ－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ；
－ Ｆｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ａ４ｐｉｐａａ（ｔＢｕ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｗ７Ｎ－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｗ５ＯＭｅ－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ；および
－ Ｆｍｏｃ－ｄｓ（ｔＢｕ）－ＯＨ。
－ Ｆｍｏｃ－Ｎ－Ｍｅ－Ｌｙｓ（ａｌｌｏｃ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｆ４ＣＯＯ（ｔＢｕ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｗ１ａａ（アリル）－ＯＨ；
－ Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ａｌｌｏｃ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｗ５Ｈ－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ；
－ Ｆｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ａ４ｐｉｐａａ（ｔＢｕ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｗ７Ｎ－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｗ５ＯＭｅ－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ；
－ Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ；および
－ Ｆｍｏｃ－ｄｓ（ｔＢｕ）－ＯＨ。
【0158】
逆相分離ＨＰＬＣを、Ｗａｔｅｒｓによって製造されたＡｕｔｏＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎシステム－ＳＱＤ２シングル四重極質量分析計を使用して、得られた粗精製されたペプチドを精製するための方法として行い、溶出を、標的生成物に由来するｍ／ｚイオンをモニターしながら行った。ＥＳＩポジティブスキャンモードにおいて得られた質量スペクトル、および標的生成物の分子式によって計算された多価イオンを含有する質量スペクトルが、使用した質量分析計の誤差範囲内で一致したことを確認した。使用されたカラムを含む精製条件がそれぞれの実施例に示されることに留意すべきである。
【0159】
化学合成されたペプチドの構造決定に関して、標的配列に従って使用されたアミノ酸および必要により使用されたビルディングブロックを考慮して計算された分子量を、質量スペクトル分析法におけるＥＳＩ－ＭＳ（＋）によって確認した。「ＥＳＩ－ＭＳ（＋）」が、ポジティブイオンモードにおいて行われたエレクトロスプレーイオン化質量分析法を示すことに留意されたい。検出された質量は、「ｍ／ｚ」単位で報告する。およそ１，０００よりも大きい分子量を有する化合物が、二価イオンまたは三価イオンとして頻繁に検出されることに留意すべきである。
【0160】
実施例２－ｈＧｈＲ結合ペプチドの特定
成長ホルモン受容体（ＧｈＲ）結合ペプチドを、そのすべてが参照することにより本明細書の開示の一部とされる特許文献ＷＯ２０１４／１１９６００号、ＷＯ２０１２／０３３１５４号、およびＷＯ２００７／０６６６２７号に記載されるものと類似のスクリーニング方法によって、スクリーニングおよび特定した。このスクリーニングにおいて、ヒトＩｇＧのＦｃ部分に融合された組換えヒトＧｈＲタンパク質（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を、ベイトタンパク質として使用して、ＧｈＲ結合ペプチドを濃縮した。スクリーニングから得られたペプチドの結合を、最初に、シングルトンＤＮＡ鋳型から発現させたＤＮＡ／ＲＮＡタグに融合されたインビトロ翻訳されたペプチドを用いて試験した。インビトロ翻訳されたペプチドをプロテインＧ磁気ビーズ上に固定化されたヒトＧｈＲ－Ｆｃと共にインキュベートし、ビーズと共沈したペプチドの量をｑＰＣＲによって定量化した。次いで、ペプチドをそれらがＧｈＲに対する結合活性を有するかどうか定量的に確認するために化学合成した。
成長ホルモン受容体（ＧｈＲ）結合ペプチドを、そのすべてが参照することにより本明細書の開示の一部とされる特許文献ＷＯ２０１４／１１９６００号、ＷＯ２０１２／０３３１５４号、およびＷＯ２００７／０６６６２７号に記載されるものと類似のスクリーニング方法によって、スクリーニングおよび特定した。このスクリーニングにおいて、ヒトＩｇＧのＦｃ部分に融合された組換えヒトＧｈＲタンパク質（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を、ベイトタンパク質として使用して、ＧｈＲ結合ペプチドを濃縮した。スクリーニングから得られたペプチドの結合を、最初に、シングルトンＤＮＡ鋳型から発現させたＤＮＡ／ＲＮＡタグに融合されたインビトロ翻訳されたペプチドを用いて試験した。インビトロ翻訳されたペプチドをプロテインＧ磁気ビーズ上に固定化されたヒトＧｈＲ－Ｆｃと共にインキュベートし、ビーズと共沈したペプチドの量をｑＰＣＲによって定量化した。次いで、ペプチドをそれらがＧｈＲに対する結合活性を有するかどうか定量的に確認するために化学合成した。
【0161】
実施例３－ＧｈＲ結合ペプチドの合成
以下の実施例における化学合成において使用されたすべての原料、ビルディングブロック、試薬、酸、塩基、固相樹脂、および溶媒について、市販の製品をそのまま使用したか、または有機化学法を当業者によって使用した。特に断らない限り、保護基を含有する市販のアミノ酸をそのまま使用した。
以下の実施例における化学合成において使用されたすべての原料、ビルディングブロック、試薬、酸、塩基、固相樹脂、および溶媒について、市販の製品をそのまま使用したか、または有機化学法を当業者によって使用した。特に断らない限り、保護基を含有する市販のアミノ酸をそのまま使用した。
【0162】
化学合成されたペプチドの構造決定のために、標的配列に従って使用されたアミノ酸および必要により使用されたビルディングブロックを考慮して計算された分子量を質量スペクトル分析法におけるＥＳＩ－ＭＳ（＋）によって確認した。「ＥＳＩ－ＭＳ（＋）」が、ポジティブイオンモードにおいて行われたエレクトロスプレーイオン化質量スペクトル分析法を示すことに留意されたい。検出された質量は「ｍ／ｚ」単位で報告した。約１０００よりも大きい分子量を有する化合物は、二価イオンまたは三価イオンとして頻繁に検出された。カラム：ＣＯＲＴＥＣＳ（Ｒ） ＵＰＬＣ（Ｒ） Ｃ１８カラム（Ｊａｐａｎ Ｗａｔｅｒｓ）、９オングストローム、１．６μｍ、２．１×１００ｍｍ；移動相：ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ中の０．０２５％のＴＦＡ；温度：４０℃；グラジエント：５．５６分の５～９５％のＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ中の０．０２５％のＴＦＡ；線形グラジエント、流速：０．４ｍＬ／分、検出：ＵＶ ２２０ｎｍ。ペプチド合成を、Ｓｉｅｂｅｒ Ａｍｉｄｅ樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍの製品）；αアミノ基の保護基として９－フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）；および自動Ｌｉｂｅｒｔｙ Ｂｌｕｅ（ＣＥＭ Ｉｎｃ．）を使用して、一般的な固相合成法に従って行った。
【0163】
ＧｈＲ結合ペプチドを合成した：ペプチド合成を、Ｓｉｅｂｅｒ Ａｍｉｄｅ樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍの製品）：αアミノ基の保護基として９－フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）；Ｆｍｏｃ脱保護のためのＤＭＦ中の２０％のピペリジン；ペプチド伸長のためのカップリング試薬として、４．２当量のＦｍｏｃ－アミノ酸、４当量のＯｘｙｍａ Ｐｕｒｅ、および８当量のＮ，Ｎ’’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）；ならびに自動Ｌｉｂｅｒｔｙ Ｂｌｕｅ（ＣＥＭ Ｉｎｃ．）を使用して、一般的な固相合成法に従って行った。
【0164】
環状ペプチドを、ＡｕｔｏＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎシステム－ＳＱＤ２シングル四重極質量分析計（Ｗａｔｅｒｓの製品）を使用して、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって精製して、意図される生成物を得た。このようにして得られたペプチドを、ＥＳＩ－ポジティブスキャンモードにおいて得られた質量スペクトルによって特定し、標的対象の分子式から計算された多価イオンを含有する質量スペクトルは、使用した質量分析計の誤差範囲内で一致した。カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ ＥＶＯ Ｃ１８ ２．６ｕｍ、２．１ＩＤ×１５０ｍｍ、１００オングストローム（ガードカートリッジ２．１ｍｍＩＤを有する）、移動相Ａ：Ｈ２Ｏ中の０．０２５％のＴＦＡ、移動相Ｂ：ＭｅＣＮ中の０．０２５％のＴＦＡ。温度：６０℃、グラジエント：７．１５分にわたって２０～６０％のＢ、０．３分にわたって６０～９５％のＢ、１．５５分にわたって９５％のＢ、０．０１分にわたって９５～２０％のＢ、次いで３．４９分にわたって２０％のＢ、流速：０．５ｍＬ／分、検出：ＵＶ ２２５ｎｍ、２０～６０／７．１５分、６０～９５／０．３分、９５～９５／１．５５分、９５～２０／０．０１分、２０～２０／３．４９分。
【0165】
二環式ペプチド（表１－１における化合物番号１～３２）の合成を、下記に記載されるようにして行う。
ＰＤ－２１７（表１－１の化合物番号９）；二環式ペプチド（ペプチドの配列番号１０）およびアルブミン結合剤（Ｅ＿Ｅ＿４ＩＰｈｐＣＯ）コンジュゲート化リンカー（配列番号３２）を含む化合物の合成
ＰＤ－２１７（表１－１の化合物番号９）；二環式ペプチド（ペプチドの配列番号１０）およびアルブミン結合剤（Ｅ＿Ｅ＿４ＩＰｈｐＣＯ）コンジュゲート化リンカー（配列番号３２）を含む化合物の合成
【化1】
【0166】
合成において使用したＦｍｏｃアミノ酸は、Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｗ５Ｈ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｆ４ＣＯＯ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｗ１ａａ（アリル）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－ＭｅＫ（ａｌｌｏｃ）－ＯＨを含んでいた。
【0167】
樹脂を含有する反応容器に、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを添加し、混合物を撹拌した。合成を、一般的な固相合成を使用して、Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＯＨから開始した。二重カップリングを、Ｎ末端アミノ酸から１位、３位、１０位、および１１位において実行した。
【0168】
Ｎ末端Ｆｍｏｃ－Ｆ４ＣＯＯ（ｔＢｕ）－ＯＨが連結された後、０．２５当量の（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４）、１５当量のＰｈＳｉＨ３、およびＤＣＭを添加し、得られた混合物をかき混ぜて、それぞれ、Ｎ－メチル－Ｌ－リジンおよび１－（カルボキシメチル）－Ｌ－トリプトファンの側鎖上のａｌｌｏｃ基およびアリル基を除去した。このようにして得られたペプチド樹脂を、マイクロ波照射下、ＤＭＦ中の１６当量のＤＩＣおよび８当量のＯｘｙｍａ ｐｕｒｅで処理した。
【0169】
Ｆｍｏｃ基を、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンで脱保護した後、樹脂をＤＭＦで洗浄した。次いで、樹脂に、ＤＣＭ／ＮＭＰ（１：１ｖ／ｖ）中の５当量の２－クロロ酢酸、５当量のＤＩＣ、および５当量のＨＯＳｕを添加した。樹脂を、ＤＭＦおよびＤＣＭで連続して洗浄し、次いで、乾燥させた。
【0170】
ＴＦＡ－水－ＴＩＳ－ＤＯＤＴ混合物（９２．５：２．５：２．５：２．５ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）を添加し、得られた混合物を室温で１．２５時間撹拌した。
【0171】
粗ペプチドを、樹脂から切断し、エーテル沈殿によって収集した。ジイソプロピルエーテルで３回洗浄し、乾燥した後、１５当量のトリエチルアミンを含有するＤＭＳＯ－水－ＭｅＣＮ（１：１：１ｖ／ｖ／ｖ）を添加して、５ｍＭの最終濃度を得、続いて室温で２時間撹拌した。
【0172】
溶媒を除去した後、ＤＭＳＯ－水（９：１ｖ／ｖ）、１．０２当量の１－（ｔｅｒｔ－ブチル）５－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）（（Ｓ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－４－（４－（４－ヨードフェニル）ブタンアミド）－５－オキソペンタノイル）－Ｌ－グルタメート、および３当量のＮ－エチル－Ｎ－イソプロピルプロパン－２－アミンの溶液を添加し、混合物を１時間撹拌した。溶液を濃縮し、生成物を、エーテルから再沈殿させ、乾燥した。
【0173】
ＴＦＡ－水－ＴＩＳ－ＤＯＤＴ混合物（９２．５：２．５：２．５：２．５ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）を添加し、得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。ペプチドを、エーテル沈殿によって収集し、減圧下で乾燥した。
【0174】
Ｎ末端アミノ酸から９位のリジン上のｉｖＤｄｅ基を、ＤＭＳＯ中の２５当量のヒドラジン一水和物を用いて切断した。混合物を２．５時間撹拌した後、反応を、４０当量の酢酸でクエンチした。粗ペプチドを、ＬＣＭＳによる分析条件によって確認した：保持時間＝１．４８分。
【0175】
粗ペプチドを逆相ＨＰＬＣによって精製し、生成物を、以下に示されるように、その条件下でＨＰＬＣによって確認した。分析ＨＰＬＣ条件：保持時間＝４．２２０分。
ＭＳ（ＥＳＩ＋）；［Ｍ＋２Ｈ］２＋についての計算値１２４２．８、実測値１２４２．６。
ＰＤ－２３３（表１－１の化合物番号１１）；二環式ペプチド（ペプチドの配列番号１０）およびアルブミン結合剤（Ｅ－Ｅ－ｃＣ１４ＣＯＯ）コンジュゲート化リンカー（配列番号３２）を含む化合物の合成
ＭＳ（ＥＳＩ＋）；［Ｍ＋２Ｈ］２＋についての計算値１２４２．８、実測値１２４２．６。
ＰＤ－２３３（表１－１の化合物番号１１）；二環式ペプチド（ペプチドの配列番号１０）およびアルブミン結合剤（Ｅ－Ｅ－ｃＣ１４ＣＯＯ）コンジュゲート化リンカー（配列番号３２）を含む化合物の合成
【化2】
【0176】
合成において使用したＦｍｏｃアミノ酸は、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ａｌｌｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ；Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｗ５Ｈ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｆ４ＣＯＯ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｗ１ａａ（アリル）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－ＭｅＫ（ａｌｌｏｃ）－ＯＨを含んでいた。
【0177】
樹脂を含有する反応容器に、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを添加し、混合物を撹拌した。合成を、一般的な固相合成法を使用して、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ａｌｌｏｃ）－ＯＨから開始した。二重カップリングを、Ｎ末端アミノ酸から１位、３位、および１１位において実行した。
【0178】
２つのＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ単量体（ＣＡＳ：８４７９３－０７－７）および１６－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－１６－オキソヘキサデカン酸（ＣＡＳ：８４３６６６－２７－３）がＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（ａｌｌｏｃ）－ＯＨに連結された後、０．２５当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４、１５当量のＰｈＳｉＨ３、およびＤＣＭを添加し、得られた混合物をかき混ぜて、リジンの側鎖上のａｌｌｏｃ基を除去した。このようにして得られたペプチド樹脂を、さらなるペプチド合成において使用した。
【0179】
Ｎ末端Ｆｍｏｃ－Ｆ４ＣＯＯ（ｔＢｕ）－ＯＨが連結された後、０．２５当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４、１５当量のＰｈＳｉＨ３、およびＤＣＭを添加し、得られた混合物をかき混ぜて、それぞれ、ＭｅＫおよびＷ１ａａの側鎖上のａｌｌｏｃ基およびアリル基を除去した。このようにして得られたペプチド樹脂を、マイクロ波照射下、ＤＭＦ中の１６当量のＤＩＣおよび８当量のＯｘｙｍａ ｐｕｒｅで処理した。
【0180】
Ｆｍｏｃ基を、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンで脱保護した後、樹脂をＤＭＦで洗浄した。次いで、樹脂に、ＤＣＭ／ＮＭＰ（１：１ ｖ／ｖ）中の５当量の２－クロロ酢酸、５当量のＤＩＣ、および５当量のＨＯＳｕを添加した。樹脂を、ＤＭＦおよびＤＣＭで連続して洗浄し、次いで、乾燥させた。
【0181】
ＴＦＡ－水－ＴＩＳ－ＤＯＤＴ混合物（９０：２．５：２．５：５ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）を添加し、得られた混合物を室温で１．２５時間撹拌した。
【0182】
粗ペプチドを、樹脂から切断し、エーテル沈殿によって収集した。ジイソプロピルエーテルで３回洗浄し、乾燥した後、１５当量のトリエチルアミンを含有するＤＭＳＯ－水－ＭｅＣＮ（２：１：１ｖ／ｖ／ｖ）を添加して、５ｍＭの最終濃度を得、続いて室温で４時間撹拌した。粗ペプチドを、ＬＣＭＳによる分析条件によって確認した：保持時間＝２．３６分。
【0183】
粗ペプチドを逆相ＨＰＬＣによって精製し、生成物を、以下に示されるように、以下の条件下でＨＰＬＣによって確認した。分析ＨＰＬＣ条件：保持時間＝４．８９２分。
ＭＳ（ＥＳＩ＋）；［Ｍ＋２Ｈ］２＋についての計算値１２４０．１、実測値１２４０．８。
ＭＳ（ＥＳＩ＋）；［Ｍ＋２Ｈ］２＋についての計算値１２４０．１、実測値１２４０．８。
【0184】
単環式ペプチド（表１－２における化合物番号３４～５８）の合成を、下記に記載されるようにして行う。
ＰＤ－２０９（表１－２の化合物番号５４）；アルブミン結合剤（Ｅ－４ＩＰｈｐＣＯ）コンジュゲート化単環式ペプチド（ペプチド配列番号３１）およびリンカー（配列番号３４）を含む化合物の合成
ＰＤ－２０９（表１－２の化合物番号５４）；アルブミン結合剤（Ｅ－４ＩＰｈｐＣＯ）コンジュゲート化単環式ペプチド（ペプチド配列番号３１）およびリンカー（配列番号３４）を含む化合物の合成
【化3】
【0185】
合成において使用したＦｍｏｃアミノ酸は、Ｆｍｏｃ－ｄｓ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｗ５Ｈ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｆ４ＣＯＯ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｗ５ＯＭｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－ ＭｅＫ（ａｌｌｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨを含んでいた。
【0186】
樹脂を含有する反応容器に、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを添加し、混合物をかき混ぜた。合成を、一般的な固相合成法を使用して、Ｆｍｏｃ－ｄｓ（ｔＢｕ）－ＯＨから開始した。二重カップリングを、Ｎ末端アミノ酸から１位、３位、５位、１０位、１１位、１４位、および１６位において実行した。
【0187】
Ｎ末端Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨが連結された後、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを添加した。樹脂をＤＭＦで洗浄し、次いで、塩化メチレン（ＤＣＭ）／１－メチル－２－ピロリジン（ＮＭＰ）（１：１ｖ／ｖ）中の５当量の２－クロロ酢酸、５当量のＤＩＣ、および５当量のＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）を添加した。樹脂を、ＤＭＦおよびＤＣＭで連続して洗浄した。
【0188】
樹脂を含有する反応容器に、０．２５当量のテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４）、１５当量のフェニルシラン、およびＤＣＭを添加し、得られた混合物をかき混ぜて、ＭｅＫの側鎖上のアリルオキシカルボニル（ａｌｌｏｃ）基を除去した。このようにして得られたペプチド樹脂を、ＤＭＦ中の４当量の（４－（４－ヨードフェニル）ブタノイル）－Ｌ－グルタミン酸、８当量のＤＩＣ、および４当量のＯｘｙｍａ ｐｕｒｅで処理した。樹脂を、ＤＭＦおよびＤＣＭで３回洗浄し、次いで、乾燥させた。
【0189】
トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）－水－トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）－３，６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール（ＤＯＤＴ）混合物（９２．５：２．５：２．５：２．５ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）を添加し、得られた混合物を室温で１．５時間撹拌した。
【0190】
粗ペプチドを、樹脂から切断し、エーテル沈殿によって収集した。ジイソプロピルエーテルで３回洗浄し、乾燥した後、１５当量のトリエチルアミンを含有するＤＭＳＯ－水－ＭｅＣＮ（１：１：１ｖ／ｖ／ｖ）を添加して、５ｍＭの最終濃度を得、続いて室温で２時間撹拌した。粗ペプチドを、ＬＣＭＳによる分析条件によって確認した：保持時間＝１．５５分。
【0191】
粗ペプチドを逆相ＨＰＬＣによって精製し、生成物を、以下に示されるように、その条件下でＨＰＬＣによって確認した。分析ＨＰＬＣ条件：保持時間＝４．２３６分。ＭＳ（ＥＳＩ＋）；［Ｍ＋２Ｈ］２＋についての計算値１３０２．０、実測値１３０２．６。
ＰＤ－２２４（表１－２の化合物番号３６）；アルブミン結合剤（Ｅ－４ＩＰｈｐＣＯ）コンジュゲート化単環式ペプチド（ペプチド配列番号２３）を含む化合物の合成
ＰＤ－２２４（表１－２の化合物番号３６）；アルブミン結合剤（Ｅ－４ＩＰｈｐＣＯ）コンジュゲート化単環式ペプチド（ペプチド配列番号２３）を含む化合物の合成
【化4】
【0192】
ＰＤ－２２４を、ＰＤ－２０９に記載されたものと同じ手順で調製した。二重カップリングを、Ｎ末端アミノ酸から１位および３位において実行した。
【0193】
合成において使用したＦｍｏｃアミノ酸は、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａ４ｐｉｐａａ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｗ５Ｈ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｆ４ＣＯＯ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｗ５ＯＭｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｎ－Ｍｅ－Ｌｙｓ（ａｌｌｏｃ）－ＯＨを含んでいた。
【0194】
最終生成物を、以下に示されるように、以下の条件下でＨＰＬＣによって確認した。
【0195】
分析ＨＰＬＣ条件：保持時間＝３．８１２分。ＭＳ（ＥＳＩ＋）；［Ｍ＋２Ｈ］２＋についての計算値１１５８．０、実測値１１５８．５。
【0196】
実施例４－表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用するｈＧｈＲ結合ペプチドの結合活性
ＳＰＲアッセイを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ｃｙｔｉｖａ：以前はＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して行った。シリーズＳセンサーチップＣＭ５（ｃｙｔｉｖａ：以前はＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製造）のランニング緩衝液（１％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを有するＨＢＳ－ＥＰ）による平衡化後、ＥＤＣ／ＮＨＳ混合物を、１０μＬ／分の流速で７分間注入して、それによって、センサーチップ上の官能基を活性化した。１０ｍＭの酢酸塩（ｐＨ４．０）中の組換えヒトＧｈＲ－Ｆｃタンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、５μＬ／分の流速で、注入し、固定化した。センサーチップの基材表面にＧｈＲ固定化するのに７分かかった。次いで、エタノールアミンを、１０μＬ／分の流速で７分間注入した。１Ｍのエタノールアミン（水性）を、キャッピングのために、１０μＬ／分の流速で４２０秒間注入した。ＤＭＳＯ中の１０ｍＭのペプチドを、ランニング緩衝液を用いて、希釈して、１０ｕＭを得て、１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭのそれぞれのペプチド溶液（ペプチド試料）を調製した。
ＳＰＲアッセイを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ｃｙｔｉｖａ：以前はＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して行った。シリーズＳセンサーチップＣＭ５（ｃｙｔｉｖａ：以前はＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製造）のランニング緩衝液（１％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを有するＨＢＳ－ＥＰ）による平衡化後、ＥＤＣ／ＮＨＳ混合物を、１０μＬ／分の流速で７分間注入して、それによって、センサーチップ上の官能基を活性化した。１０ｍＭの酢酸塩（ｐＨ４．０）中の組換えヒトＧｈＲ－Ｆｃタンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、５μＬ／分の流速で、注入し、固定化した。センサーチップの基材表面にＧｈＲ固定化するのに７分かかった。次いで、エタノールアミンを、１０μＬ／分の流速で７分間注入した。１Ｍのエタノールアミン（水性）を、キャッピングのために、１０μＬ／分の流速で４２０秒間注入した。ＤＭＳＯ中の１０ｍＭのペプチドを、ランニング緩衝液を用いて、希釈して、１０ｕＭを得て、１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭのそれぞれのペプチド溶液（ペプチド試料）を調製した。
【0197】
ペプチド試料を使用して、ヒトＧｈＲ－Ｆｃタンパク質に対するペプチドの動態を測定した。試料測定に適合された方法は、単一サイクル動態法であった。分析を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００と共に提供された評価ソフトウェアを使用して実行した。溶媒補正測定によって得られたＤＭＳＯ補正曲線を、分析のために適用した。動態フィッティングを、試料測定データからベースラインデータを減算することによって得られた異なるデータに対して行った。ＫＤ値を、会合速度定数（ｋａ）および解離速度定数（ｋｄ）に基づいて計算した。得られた結果を、表１、２および３に示す。
【0198】
表１、２および３における「ペプチドの配列番号」は、配列表に記載されたそれぞれの配列番号を示し、これは、その化合物の環状ペプチドが、利用可能な配列番号のアミノ酸配列を有することを示す。さらにまた、「リンカー」は、配列表に記載された配列番号を示し、これは、リンカーが、結合している利用可能な配列番号のアミノ酸配列を有することを示す。「アルブミン結合剤」は、その環状ペプチドに結合したアルブミン結合剤を含有する構造を示す。「ＮＯ」と記載されている場合、これは、化合物が、この構造を含有していないことを示すことに留意されたい。合成を別々の実施例に示すが、表１、２および３におけるペプチドはすべて、１番目のアミノ酸残基および１３番目のシステイン残基（Ｃ）が結合した環状ペプチドであり、それらは、「リンカー」に示される配列番号のアミノ酸を有するリンカーが、そのシステイン残基にさらに結合した構造を有する。
【0199】
表における「ＫＤ」は、ＳＰＲを使用する化合物とｈＧｈＲとの間の結合試験結果が、ＫＤにおいて表されるところの値であり、単位はｎＭである。さらにまた、「観察ｍ／ｚ［Ｍ＋２Ｈ］２＋」は、ＥＳＩ－ＭＳ（＋）観察値を示す。別段の指定がない限り、これは二価である（［Ｍ＋２Ｈ］２＋）。
【0200】
表１において、「アルブミン結合剤」は、リンカーのＮ末端に位置するリジン側鎖のアミノ基に結合したアルブミン結合剤の種類を示す。例えば、（Ｅ＿Ｅ＿４ＩＰｈｏＣＯ）と記載されている場合、これは、４ＩｐｈｐＣＯと呼ばれるアルブミン結合剤が、２つのグルタミン酸を通じて、リンカーのＮ末端に位置するリジン側鎖のアミノ基に結合していることを示す。「アルブミン結合剤」において化合物番号１～４についてＮＯと記載されている場合、これは、これらの化合物がアルブミン結合剤を含有していないことを示すことに留意されたい。
【0201】
さらにまた、表１に示される化合物番号１～３２および５８～６５は、すべて、２番目のアミノ酸残基（Ｘ２）であるＮメチルリジンの側鎖のアミノ基が、７番目のアミノ酸残基（Ｘ７）であるＷ１ａａに結合した（化合物番号２、５～３２、および５８～６５）、またはＧ／ＭｅＧ／Ｐが、同じＮ－メチルリジンの側鎖のアミノ基に結合し、アミノ酸が、７番目のアミノ酸残基（Ｘ７）であるＷ１ａａにさらに結合した（化合物番号１～４）、二環式ペプチドである。
【0202】
表２において、「アルブミン結合剤」は、２番目のアミノ酸残残基（Ｘ２）であるＮ－メチルリジンの側鎖のアミノ基に結合したアルブミン結合剤の種類を示す。例えば、「アルブミン結合剤」において（Ｅ＿ ４ＩＰｈｐＣＯ）と記載されている場合、これは、４ＩｐｈｐＣＯと呼ばれるアルブミン結合剤が、１つのグルタミン酸を通じて、２番目のアミノ酸残基であるリジンの側鎖のアミノ基に結合していることを示す。さらにまた、「リンカー」において化合物番号３３～４０、４３～４５、４７、５０、および５３についてＮＯと記載されている場合、これは、それらがリンカーを含有していないことを意味する。表２において示される化合物番号３３～５７が、すべて、単環式ペプチドであることに留意されたい。
【0203】
表１および２において示されているように、すべての化合物は、ヒトＧｈＲ－Ｆｃタンパク質に有効に結合することができる。それは、アルブミン結合剤のペプチドへの付加が、それらの結合活性に影響を及ぼさないことを示す。
１－（ｔｅｒｔ－ブチル）５－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）（（Ｓ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－４－（４－（４－ヨードフェニル）ブタンアミド）－５－オキソペンタノイル）－Ｌ－グルタメート
【表1】
【表2】
【化5】
【0204】
３－（（（エチルイミノ）メチレン）アミノ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－１－アミン塩酸塩（４．２２ｇ、２２．００ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（４０．０ｍｌ）中の４－（４－ヨードフェニル）ブタン酸（５．８０ｇ、２０ｍｍｏｌ）および１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（２．７６ｇ、２４．００ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を０℃で１時間撹拌した。溶液を、１ＮのＨＣｌ水溶液でクエンチし、ＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾液を減圧下で乾燥した。
【0205】
ＤＭＦ（４０．０ｍｌ）中の得られた残渣およびＤＩＰＥＡ（６．９９ｍｌ、４０．０ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で終夜撹拌した。溶液を、ＥｔＯＡｃで希釈し、１ＮのＨＣｌ水溶液で抽出し、ＥｔＯＡｃで２回洗浄した。合わせた有機層を、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾液を減圧下で乾燥した。
【0206】
粗残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０％から１０％のＭｅＯＨ）によって精製して、淡黄色油状物を得た。
【0207】
ＥＤＣ（４．２２ｇ、２２．００ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（６６．７ｍｌ）中の上記で得られた淡黄色油状物および１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（２．５３ｇ、２２．００ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を０℃で１時間撹拌した。溶液を、１ＮのＨＣｌ水溶液でクエンチし、ＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾液を減圧下で乾燥した。
【0208】
ＤＭＦ（６７ｍｌ）中の粗生成物、１－（ｔｅｒｔ－ブチル）５－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）（４－（４－ヨードフェニル）ブタノイル）－Ｌ－グルタメートおよびＮ－エチル－Ｎ－イソプロピルプロパン－２－アミン（５．１７ｇ、４０．０ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で終夜撹拌した。溶液を、ＥｔＯＡｃで希釈し、１ＮのＨＣｌ水溶液で抽出し、ＥｔＯＡｃで２回洗浄した。合わせた有機層を、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾液を減圧下で乾燥して、淡黄色油状物を得た。
【0209】
ＤＣＭ（２８．０ｍｌ）中の淡黄色油状物および１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（２．０１４ｇ、１７．５０ｍｍｏｌ）の溶液に、３－（（（エチルイミノ）メチレン）アミノ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－１－アミン塩酸塩（３．３５ｇ、１７．５０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃で１時間撹拌した。溶液を、１ＮのＨＣｌ水溶液およびブラインの１：１混合物でクエンチし、ＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾液を減圧下で乾燥して、表題化合物を白色固体として得た。ＬＣＭＳによる分析：ＭＳ（ＥＳＩ＋）；［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値７５８．２、実測値７５８．４。
【0210】
本発明は、バイオ関連産業および製薬産業において使用され得る。
【0211】
本明細書において引用されたすべての参考文献、およびそれらの参考文献は、追加または代替の詳細、特徴、および／または技術的背景の教示に適切な場合、それらの全体が、参照することにより本明細書の開示の一部とされる。
【0212】
本開示を、特定の実施形態を参照して特に示し、記載したが、上記に開示したものの変形、ならびに他の特徴および機能、またはその代替が、多くの他の異なる系または適用に望ましく組み合わされてもよいことが理解されるであろう。また、それらにおけるさまざまな現時点で予見できないか、または予想外の代替、改変、変形または改良を、その後、当業者が行うことができ、これも、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【図1】
【図2】
【配列表】
【国際調査報告】