特表 2024-523314 ＴＮＦＳＦ－Ｌ融合タンパク質およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-06-28

(54)【発明の名称】ＴＮＦＳＦ－Ｌ融合タンパク質およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20240621BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240621BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240621BHJP

   C12N 15/86 20060101ALI20240621BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240621BHJP

   C12N 15/28 20060101ALI20240621BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20240621BHJP

   C07K 14/525 20060101ALI20240621BHJP

   C12N 7/01 20060101ALI20240621BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240621BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240621BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240621BHJP

   A61K 35/768 20150101ALI20240621BHJP

   A61K 35/763 20150101ALI20240621BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240621BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20240621BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20240621BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20240621BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20240621BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z ZNA

C07K19/00

C12N15/63 Z

C12N15/86 Z

C12N5/10

C12N15/28

C12N15/12

C07K14/525

C12N7/01

A61P35/00

A61P35/02

A61K48/00

A61K35/768

A61K35/763

A61K35/17

A61K47/64

A61K9/107

A61K9/08

A61K9/06

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023577358

(86)(22)【出願日】2022-06-15

(85)【翻訳文提出日】2024-02-06

(86)【国際出願番号】 US2022033524

(87)【国際公開番号】W WO2022266163

(87)【国際公開日】2022-12-22

(31)【優先権主張番号】63/211,766

(32)【優先日】2021-06-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521244488

【氏名又は名称】カリヴィル イムノセラピューティクス， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ソーン， スティーブン ハワード

(72)【発明者】

【氏名】ジャン， ミンルイ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AA95X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4C076AA09

4C076AA12

4C076AA17

4C076BB13

4C076BB14

4C076BB15

4C076BB16

4C076BB21

4C076CC41

4C076EE59

4C084AA13

4C084MA17

4C084MA22

4C084MA28

4C084MA55

4C084MA56

4C084MA65

4C084NA14

4C084ZB26

4C084ZB27

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB37

4C087BC83

4C087CA04

4C087CA08

4C087CA12

4C087MA28

4C087MA55

4C087MA56

4C087MA65

4C087NA14

4C087ZB26

4C087ZB27

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA14

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、オリゴマー化ドメインに融合した腫瘍壊死因子スーパーファミリーリガンドの融合タンパク質をコードする核酸を含む組成物を提供する。そのような組成物を送達するためのウイルスベクターおよび非ウイルスベクターがさらに提供される。本開示はまた、オリゴマー化ドメインに融合した腫瘍壊死因子スーパーファミリーリガンドの融合タンパク質を含む組成物を提供する。上記オリゴマー化ドメインは、融合タンパク質においてネックドメインと配列近接がより緊密である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

組成物であって、前記組成物は、
核酸を含み、前記核酸は融合タンパク質をコードし、前記融合タンパク質は、
ＴＮＦ－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントと、
コレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインとを含み、前記コレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインは、
オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、
ネックドメインまたはその機能的バリアントとを含み、
前記オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、前記ネックドメインまたはその機能的バリアントとは、前記コレクチンファミリータンパク質中のそれらの位置と比較して配列近接がより緊密である、組成物。

【請求項2】

前記融合タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端の順序で、
前記オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、
前記ネックドメインまたはその機能的バリアントと、
必要に応じてリンカー配列と、
前記ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントと
を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌが、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮増殖阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＣＤ４０リガンドである、請求項３に記載の組成物。

【請求項5】

前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項４に記載の組成物。

【請求項6】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＯＸ４０リガンドである、請求項３に記載の組成物。

【請求項7】

前記ＯＸ４０リガンドが、配列番号２または配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項６に記載の組成物。

【請求項8】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌが４－１ＢＢＬである、請求項３に記載の組成物。

【請求項9】

前記４－１ＢＢＬが、配列番号４または配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項８に記載の組成物。

【請求項10】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＬＩＧＨＴである、請求項３に記載の組成物。

【請求項11】

前記ＬＩＧＨＴが、配列番号６と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項１０に記載の組成物。

【請求項12】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）である、請求項３に記載の組成物。

【請求項13】

前記ＧＩＴＲＬが、配列番号７または配列番号８と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項１２に記載の組成物。

【請求項14】

前記コレクチンファミリータンパク質が、ＳＰ－Ａ、ＳＰ－Ｄ、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）、コングルチニン、ＣＬ－４３、ＣＬ－Ｌ１、ＣＬ－Ｋ１、ＣＬ－Ｐ１、またはＣＬ－４６である、請求項１に記載の組成物。

【請求項15】

前記コレクチンファミリータンパク質がＳＰ－Ｄである、請求項１に記載の組成物。

【請求項16】

前記オリゴマー化ドメインが、配列番号９と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項17】

前記オリゴマー化ドメインおよび前記ネックドメインが共に、配列番号１０と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項18】

前記オリゴマー化ドメインおよび前記ネックドメインが共に配列番号１０を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項19】

前記融合タンパク質が前記リンカー配列を含み、前記リンカー配列がＧＳＧ（グリシン－セリン－グリシン）（配列番号１２）を含む、請求項２に記載の組成物。

【請求項20】

前記核酸がＲＮＡを含む、請求項１から１９までのいずれか１項に記載の組成物。

【請求項21】

前記核酸がＤＮＡを含む、請求項１から１９までのいずれか１項に記載の組成物。

【請求項22】

組成物であって、前記組成物は、
核酸を含み、前記核酸は、配列番号２１、２２、２３、２４、２５、２６、または２７と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、組成物。

【請求項23】

組成物であって、前記組成物は、
融合タンパク質を含み、前記融合タンパク質は、配列番号１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、組成物。

【請求項24】

組成物であって、前記組成物は、
ベクターと、
ＴＮＦ－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントをコードする核酸と
を含み、前記ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントはオリゴマー化ドメインに融合されている、組成物。

【請求項25】

前記核酸が融合タンパク質をコードし、前記融合タンパク質は、
ＴＮＦ－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントと、
コレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインと
を含み、前記コレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインは、
オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、
ネックドメインまたはその機能的バリアントと
を含み、
前記オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、前記ネックドメインまたはその機能的バリアントとは、前記コレクチンファミリータンパク質中のそれらの位置と比較して配列近接がより緊密である、請求項２４に記載の組成物。

【請求項26】

前記ベクターが、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターである、請求項２４に記載の組成物。

【請求項27】

前記非ウイルスベクターがナノ粒子担体を含む、請求項２６に記載の組成物。

【請求項28】

前記非ウイルスベクターが脂質ナノ粒子担体を含む、請求項２６に記載の組成物。

【請求項29】

前記ナノ粒子担体が、金、シリカ、カーボンナノチューブ、水溶性フラーレン、シリコンナノワイヤ、量子ドット、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２７に記載の組成物。

【請求項30】

前記ベクターが、バクテリオファージ、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、赤血球ゴースト、バクトフェクション、エキソソーム、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２４に記載の組成物。

【請求項31】

前記融合タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端の順序で、
前記オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、
前記ネックドメインまたはその機能的バリアントと、
必要に応じてリンカー配列と、
前記ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントと
を含む、請求項２５に記載の組成物。

【請求項32】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌが、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮増殖阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２４に記載の組成物。

【請求項33】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＣＤ４０リガンドである、請求項３２に記載の組成物。

【請求項34】

前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項３３に記載の組成物。

【請求項35】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＯＸ４０リガンドである、請求項３２に記載の組成物。

【請求項36】

前記ＯＸ４０リガンドが、配列番号２または配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項３５に記載の組成物。

【請求項37】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌが４－１ＢＢＬである、請求項３２に記載の組成物。

【請求項38】

前記４－１ＢＢＬが、配列番号４または配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項３７に記載の組成物。

【請求項39】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＬＩＧＨＴである、請求項３２に記載の組成物。

【請求項40】

前記ＬＩＧＨＴが、配列番号６と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項３９に記載の組成物。

【請求項41】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）である、請求項３２に記載の組成物。

【請求項42】

前記ＧＩＴＲＬが、配列番号７または配列番号８と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項４１に記載の組成物。

【請求項43】

前記コレクチンファミリータンパク質が、ＳＰ－Ａ、ＳＰ－Ｄ、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）、コングルチニン、ＣＬ－４３、ＣＬ－Ｌ１、ＣＬ－Ｋ１、ＣＬ－Ｐ１、またはＣＬ－４６を含む、請求項２５に記載の組成物。

【請求項44】

前記コレクチンファミリータンパク質がＳＰ－Ｄである、請求項４３に記載の組成物。

【請求項45】

前記オリゴマー化ドメインが、配列番号９と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項２４に記載の組成物。

【請求項46】

前記オリゴマー化ドメインおよび前記ネックドメインが共に、配列番号１０と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項２５に記載の組成物。

【請求項47】

前記オリゴマー化ドメインおよび前記ネックドメインが共に配列番号１０を含む、請求項２５に記載の組成物。

【請求項48】

前記融合タンパク質が前記リンカー配列を含み、前記リンカー配列がＧＳＧ（グリシン－セリン－グリシン）（配列番号１２）を含む、請求項３１に記載の組成物。

【請求項49】

前記核酸がＲＮＡを含む、請求項２４から４８までのいずれか１項に記載の組成物。

【請求項50】

前記核酸がＤＮＡを含む、請求項２４から４８までのいずれか１項に記載の組成物。

【請求項51】

組成物であって、前記組成物は、
ベクターと、
核酸と
を含み、前記核酸は、配列番号２１、２２、２３、２４、２５、２６、または２７と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、組成物。

【請求項52】

組成物であって、前記組成物は、
ベクターと、
核酸と
を含み、前記核酸は、配列番号１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含むタンパク質をコードする、組成物。

【請求項53】

請求項１から５２までのいずれか１項に記載の組成物を含む、細胞。

【請求項54】

前記細胞が免疫細胞である、請求項５３に記載の細胞。

【請求項55】

前記免疫細胞がリンパ系細胞である、請求項５４に記載の細胞。

【請求項56】

融合タンパク質であって、前記融合タンパク質は、
ＴＮＦ－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントと、
コレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインと
を含み、前記コレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインは、
オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、
ネックドメインまたはその機能的バリアントと
を含み、前記オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、前記ネックドメインまたはその機能的バリアントとは、前記コレクチンファミリータンパク質中のそれらの位置と比較して配列近接がより緊密である、融合タンパク質。

【請求項57】

前記融合タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端の順序で、
前記オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、
前記ネックドメインまたはその機能的バリアントと、
必要に応じてリンカー配列と、
前記ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントと
を含む、請求項５６に記載の融合タンパク質。

【請求項58】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌは、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮増殖阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５６に記載の融合タンパク質。

【請求項59】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＣＤ４０リガンドである、請求項５８に記載の融合タンパク質。

【請求項60】

前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を含む、請求項５９に記載の融合タンパク質。

【請求項61】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＯＸ４０リガンドである、請求項５８に記載の融合タンパク質。

【請求項62】

前記ＯＸ４０リガンドが、配列番号２または配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を含む、請求項６１に記載の融合タンパク質。

【請求項63】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌが４－１ＢＢＬである、請求項５８に記載の融合タンパク質。

【請求項64】

前記４－１ＢＢＬが、配列番号４または配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を含む、請求項６３に記載の融合タンパク質。

【請求項65】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＬＩＧＨＴである、請求項５８に記載の融合タンパク質。

【請求項66】

前記ＬＩＧＨＴが、配列番号６と少なくとも８５％の配列同一性を含む、請求項６５に記載の融合タンパク質。

【請求項67】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）である、請求項５８に記載の組成物。

【請求項68】

前記ＧＩＴＲＬが、配列番号７または配列番号８と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項６７に記載の組成物。

【請求項69】

前記コレクチンファミリータンパク質が、ＳＰ－Ａ、ＳＰ－Ｄ、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）、コングルチニン、ＣＬ－４３、ＣＬ－Ｌ１、ＣＬ－Ｋ１、ＣＬ－Ｐ１、ＣＬ－４６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５６に記載の融合タンパク質。

【請求項70】

前記コレクチンファミリータンパク質がＳＰ－Ｄである、請求項５６に記載の融合タンパク質。

【請求項71】

前記オリゴマー化ドメインが、配列番号９と少なくとも８５％の配列同一性を含む、請求項５６に記載の融合タンパク質。

【請求項72】

前記オリゴマー化ドメインおよびネックドメインが共に、配列番号１０と少なくとも８５％の配列同一性を含む、請求項５６に記載の融合タンパク質。

【請求項73】

前記オリゴマー化ドメインおよびネックドメインが共に配列番号１０を含む、請求項５６に記載の融合タンパク質。

【請求項74】

前記融合タンパク質が前記リンカー配列を含み、前記リンカー配列がＧＳＧ（グリシン－セリン－グリシン）（配列番号１２）を含む、請求項５７に記載の融合タンパク質。

【請求項75】

腫瘍溶解性ウイルスであって、前記腫瘍溶解性ウイルスは、
ＴＮＦ－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントは、オリゴマー化ドメインに融合されている、腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項76】

前記腫瘍溶解性ウイルスが、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、レオウイルス（ＲＶ）、粘液腫ウイルス（ＭＹＸＶ）、麻疹ウイルス（ＭＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ポリオウイルス（ＰＶ）、センダイウイルス、フラビウイルス、レンチウイルス、ポックスウイルス、レトロウイルス、アデノ随伴ウイルス、またはアデノウイルスである、請求項７５に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項77】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントをコードする前記核酸が、ウイルスゲノムに挿入されている、請求項７５に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項78】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントをコードする前記核酸が、チミジンキナーゼ遺伝子に挿入されている、請求項７５に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項79】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌが、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮増殖阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項７５に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項80】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＣＤ４０リガンドである、請求項７９に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項81】

前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項８０に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項82】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＯＸ４０リガンドである、請求項７９に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項83】

前記ＯＸ４０リガンドが、配列番号２または配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項８２に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項84】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌが４－１ＢＢＬである、請求項７９に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項85】

前記４－１ＢＢＬが、配列番号４または配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項８４に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項86】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＬＩＧＨＴである、請求項７９に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項87】

前記ＬＩＧＨＴが、配列番号６と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項８６に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項88】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）である、請求項７９に記載の組成物。

【請求項89】

前記ＧＩＴＲＬが、配列番号７または配列番号８と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項８８に記載の組成物。

【請求項90】

前記オリゴマー化ドメインが、配列番号９と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項７５に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項91】

前記核酸がＲＮＡを含む、請求項７５から９０までのいずれか１項に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項92】

前記核酸がＤＮＡを含む、請求項７５から９０までのいずれか１項に記載の腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項93】

ワクシニアウイルスであって、前記ワクシニアウイルスは、
ＴＮＦ－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントは、オリゴマー化ドメインに融合されている、ワクシニアウイルス。

【請求項94】

前記ワクシニアウイルスが、ウエスタンリザーブ（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｒｅｓｅｒｖｅ）ワクシニアウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ－１３５４）、コペンハーゲン株、ワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＡＴＣＣ ＶＲ－１５０８）、ワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＡＴＣＣ ＶＲ－１５６６）、組換えワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＮＹＶＡＣ株、ワクシニアウイルス株Ｗｙｅｔｈ（ＡＴＣＣ ＶＲ－１５３６）、ワクシニアウイルスＷｙｅｔｈ（ＡＴＣＣ ＶＲ－３２５）、Ｗｙｅｔｈ（ＮＹＣＢＯＨ）株、Ｔｉａｎ Ｔａｎ株、Ｌｉｓｔｅｒ株、ＵＳＳＲ株、およびＥｖａｎｓ株の修飾株である、請求項９３に記載のワクシニアウイルス。

【請求項95】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントをコードする前記外因性核酸が、ウイルスゲノムに挿入されている、請求項９３に記載のワクシニアウイルス。

【請求項96】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントをコードする前記外因性核酸が、チミジンキナーゼ遺伝子に挿入されている、請求項９３に記載のワクシニアウイルス。

【請求項97】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌが、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮増殖阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項９３に記載のワクシニアウイルス。

【請求項98】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＣＤ４０リガンドである、請求項９７に記載のワクシニアウイルス。

【請求項99】

前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項９８に記載のワクシニアウイルス。

【請求項100】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＯＸ４０リガンドである、請求項９７に記載のワクシニアウイルス。

【請求項101】

前記ＯＸ４０リガンドが、配列番号２または配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項１００に記載のワクシニアウイルス。

【請求項102】

前記ＴＮＦＳＦ－Ｌが４－１ＢＢＬである、請求項９７に記載のワクシニアウイルス。

【請求項103】

前記４－１ＢＢＬが、配列番号４または配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項１０２に記載のワクシニアウイルス。

【請求項104】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＬＩＧＨＴである、請求項９７に記載のワクシニアウイルス。

【請求項105】

前記ＬＩＧＨＴが、配列番号６と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項１０４に記載のワクシニアウイルス。

【請求項106】

前記ＴＮＦＳＦ－ＬがＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）である、請求項９７に記載の組成物。

【請求項107】

前記ＧＩＴＲＬが、配列番号７または配列番号８と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項１０６に記載の組成物。

【請求項108】

前記オリゴマー化ドメインが、配列番号９と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項に記載のワクシニアウイルス。

【請求項109】

前記核酸がＲＮＡを含む、請求項９３から１０８までのいずれか１項に記載のワクシニアウイルス。

【請求項110】

前記核酸がＤＮＡを含む、請求項９３から１０８までのいずれか１項に記載のワクシニアウイルス。

【請求項111】

癌の処置のための方法であって、
癌の処置に十分な量の医薬組成物を対象に投与することを含み、前記医薬組成物が、
請求項１から１１０までのいずれか１項に記載の組成物、細胞、融合タンパク質、腫瘍溶解性ウイルス、またはワクシニアウイルスを含む、方法。

【請求項112】

前記癌が血液癌または固形癌を含む、請求項１１１に記載の方法。

【請求項113】

前記癌が、黒色腫、肝細胞癌、乳癌、肺癌、腹膜癌、前立腺癌、膀胱癌、卵巣癌、白血病、リンパ腫、腎臓癌、膵臓癌、上皮癌、胃癌、結腸癌、十二指腸癌、膵臓腺癌、中皮腫、多形性膠芽腫、星状細胞腫、多発性骨髄腫、前立腺癌、肝細胞癌、胆管肉腫、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、腸型胃癌、子宮頚扁平上皮癌、骨肉腫、上皮卵巣癌、急性リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性腫瘍、または肉腫を含む、請求項１１１に記載の方法。

【請求項114】

前記癌が、膀胱癌、血液癌、骨癌、骨髄癌、脳癌、乳癌、結腸癌、食道癌、消化管癌、歯肉癌、頭部癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、上咽頭癌、頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、皮膚癌、胃癌、精巣癌、舌癌、または子宮癌を含む、請求項１１１に記載の方法。

【請求項115】

前記投与することが、全身投与または局所投与を含む、請求項１１１に記載の方法。

【請求項116】

前記投与することが、腫瘍内投与、静脈内投与、局所投与、腹腔内投与、非経口投与、筋肉内投与、皮下投与、動脈内投与、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１１１に記載の方法。

【請求項117】

前記投与することが、腫瘍内投与を含む、請求項１１１に記載の方法。

【請求項118】

前記医薬組成物が、薬学的に許容され得る担体をさらに含む、請求項１１１に記載の方法。

【請求項119】

前記薬学的に許容され得る担体が、緩衝液、エマルジョン、生体吸着性ポリマー、ゲル、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１１８に記載の方法。

【請求項120】

前記組成物、細胞または融合タンパク質が、約０．０１μｇ／用量～約１ｇ／用量の用量で投与される、請求項１１１に記載の方法。

【請求項121】

前記腫瘍溶解性ウイルスまたはワクシニアウイルスが、約１０^３～約１０^１２ＰＦＵ／用量の用量で投与される、請求項１１１に記載の方法。

【請求項122】

前記医薬組成物が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれを超える用量を含む処置サイクルで投与される、請求項１１１に記載の方法。

【請求項123】

各用量が、約１分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約１日、またはそれを超える期間にわたって投与される、請求項１２２に記載の方法。

【請求項124】

各用量が任意の他の用量から独立している、請求項１２３に記載の方法。

【請求項125】

前記処置サイクルにおける２回またはそれを超える用量が、用量が投与されない投与間隔によって隔てられている、請求項１２２に記載の方法。

【請求項126】

前記投与間隔が、約１分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約１日、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１年、またはそれを超える期間である、請求項１２５に記載の方法。

【請求項127】

各投与間隔が、任意の他の投与間隔から独立している、請求項１２６に記載の方法。

【請求項128】

腫瘍細胞成長の低減のための方法であって、腫瘍細胞成長の低減に十分な量で腫瘍細胞に、請求項１から１１０までのいずれか１項に記載の組成物、細胞、融合タンパク質、腫瘍溶解性ウイルス、またはワクシニアウイルスを投与することを含む、方法。

【請求項129】

前記腫瘍が、液体腫瘍または固形腫瘍を含む、請求項１２８に記載の方法。

【請求項130】

前記腫瘍が、黒色腫、肝細胞癌、乳房腫瘍、肺腫瘍、腹膜腫瘍、前立腺腫瘍、膀胱腫瘍、卵巣腫瘍、白血病、リンパ腫、腎臓癌腫、膵臓癌腫、上皮癌腫、胃腫瘍、結腸癌腫、十二指腸腫瘍、膵臓腺癌、中皮腫、多形性膠芽腫、星状細胞腫、多発性骨髄腫、前立腺癌、肝細胞癌、胆管肉腫、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸腫瘍、腸型胃癌、子宮頚扁平上皮癌、骨肉腫、上皮卵巣癌、急性リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性腫瘍、または肉腫を含む、請求項１２８に記載の方法。

【請求項131】

前記腫瘍が、膀胱腫瘍、血液腫瘍、骨腫瘍、骨髄腫瘍、脳腫瘍、乳房腫瘍、結腸腫瘍、食道腫瘍、消化管腫瘍、歯肉腫瘍、頭部腫瘍、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、肺腫瘍、上咽頭腫瘍、頸部腫瘍、卵巣腫瘍、前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、胃腫瘍、精巣腫瘍、舌腫瘍、または子宮腫瘍を含む、請求項１２８に記載の方法。

【請求項132】

前記投与することが、全身投与または局所投与を含む、請求項１２８に記載の方法。

【請求項133】

前記投与することが、腫瘍内投与、静脈内投与、局所投与、腹腔内投与、非経口投与、筋肉内投与、皮下投与、動脈内投与、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１２８に記載の方法。

【請求項134】

前記投与することが、腫瘍内投与を含む、請求項１２８に記載の方法。

【請求項135】

前記組成物が、薬学的に許容され得る担体をさらに含む、請求項１２８に記載の方法。

【請求項136】

前記薬学的に許容され得る担体が、緩衝液、エマルジョン、生体吸着性ポリマー、ゲル、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１３５に記載の方法。

【請求項137】

前記組成物、細胞または融合タンパク質が、約０．０１μｇ／用量～約１ｇ／用量の用量で投与される、請求項１２８に記載の方法。

【請求項138】

前記腫瘍溶解性ウイルスまたはワクシニアウイルスが、約１０^３～約１０^１２ＰＦＵ／用量の用量で投与される、請求項１２８に記載の方法。

【請求項139】

前記投与することが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれを超える用量を含む処置サイクルである、請求項１２８に記載の方法。

【請求項140】

各用量が、約１分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約１日、またはそれを超える期間にわたって投与される、請求項１３９に記載の方法。

【請求項141】

２回またはそれを超える用量が、用量が投与されない投与間隔によって隔てられている、請求項１３９に記載の方法。

【請求項142】

前記投与間隔が、約１分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約１日、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１年、またはそれを超える期間である、請求項１４１に記載の方法。

【請求項143】

各投与間隔が、任意の他の投与間隔から独立している、請求項１４２に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照
本出願は、２０２１年６月１７日に出願された米国仮出願第６３／２１１，７６６号の利益を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表

【0002】

本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２２年６月１４日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーの名称は１９９２４９－７１５６０１＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズは４５，５０５バイトである。

【背景技術】

【0003】

背景
ＴＮＦスーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）は、免疫系、血液系、および骨格系を含む多くの哺乳動物系の発達および機能にとって重要なタンパク質で構成されている。ＴＮＦＳＦタンパク質は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳ）の対応する受容体セットのリガンドである。ＴＮＦＳＦのメンバーは、分泌タンパク質として産生されるリンホトキシンαを除いて、一般にＩＩ型膜タンパク質として発現される。

【0004】

可溶性形態のＴＮＦＳＦタンパク質を産生するために、一般に、膜タンパク質は、多くの場合、ＴＮＦＳＦ細胞外ドメインを膜貫通ドメインから分離することができるプロテアーゼを有する細胞株において発現されるか、または細胞外ドメイン＋シグナル配列を有する切断形態のＴＮＦＳＦタンパク質が産生される。いずれの場合も、ＴＮＦＳＦリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）タンパク質の特定の可溶性形態は、多くの場合、細胞外ドメインのみから構成されるホモトリマーとして溶液中で不安定である。したがって、これらの重要なシグナル伝達タンパク質のより安定な形態が必要とされている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

要旨
組成物が本明細書で提供され、この組成物は核酸を含み、この核酸は融合タンパク質をコードし、この融合タンパク質は、ＴＮＦ－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントと、コレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインとを含み、このコレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインは、オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、ネックドメインまたはその機能的バリアントとを含み、このオリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、ネックドメインまたはその機能的バリアントとは、コレクチンファミリータンパク質中のそれらの位置と比較して配列近接がより緊密である。さらに提供される組成物では、融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端の順序で、オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、ネックドメインまたはその機能的バリアントと、必要に応じてリンカー配列と、ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントとを含む。さらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－Ｌは、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮増殖阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。さらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－ＬはＣＤ４０リガンドである。さらに提供される組成物では、ＣＤ４０リガンドは、配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。さらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－ＬはＯＸ４０リガンドである。さらに提供される組成物では、ＯＸ４０リガンドは、配列番号２または配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。さらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－Ｌは４－１ＢＢＬである。さらに提供される組成物では、４－１ＢＢＬは、配列番号４または配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。さらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－ＬはＬＩＧＨＴである。さらに提供される組成物では、ＬＩＧＨＴは、配列番号６と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。さらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－Ｌは、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）である。さらに提供される組成物では、ＧＩＴＲＬは、配列番号７または配列番号８と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。さらに提供される組成物では、コレクチンファミリータンパク質は、ＳＰ－Ａ、ＳＰ－Ｄ、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）、コングルチニン、ＣＬ－４３、ＣＬ－Ｌ１、ＣＬ－Ｋ１、ＣＬ－Ｐ１またはＣＬ－４６である。さらに提供される組成物では、コレクチンファミリータンパク質はＳＰ－Ｄである。さらに提供される組成物では、オリゴマー化ドメインは、配列番号９と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。さらに提供される組成物では、オリゴマー化ドメインおよびネックドメインは共に、配列番号１０と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。さらに提供される組成物では、オリゴマー化ドメインおよびネックドメインは共に配列番号１０を含む。さらに提供される組成物では、融合タンパク質はリンカー配列を含み、このリンカー配列はＧＳＧ（グリシン－セリン－グリシン）（配列番号１２）を含む。さらに提供される組成物では、核酸はＲＮＡを含む。さらに提供される組成物では、核酸はＤＮＡを含む。

【0006】

本明細書で提供される組成物は、核酸を含み、この核酸は、配列番号２１、２２、２３、２４、２５、２６、または２７と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。

【0007】

本明細書で提供される組成物は、融合タンパク質を含み、この融合タンパク質は、配列番号１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。

【0008】

本明細書で提供される組成物は、ベクターと、ＴＮＦ－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントをコードする核酸を含み、このＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントはオリゴマー化ドメインに融合されている。本明細書でさらに提供される組成物では、核酸は融合タンパク質をコードし、この融合タンパク質は、ＴＮＦ－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントと、コレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインとを含み、このコレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインは、オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、ネックドメインまたはその機能的バリアントとを含み、このオリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、ネックドメインまたはその機能的バリアントとは、コレクチンファミリータンパク質中のそれらの位置と比較して配列近接がより緊密である。本明細書でさらに提供される組成物では、ベクターはウイルスベクターまたは非ウイルスベクターである。本明細書でさらに提供される組成物では、非ウイルスベクターはナノ粒子担体を含む。本明細書でさらに提供される組成物では、非ウイルスベクターは脂質ナノ粒子担体を含む。本明細書でさらに提供される組成物では、ナノ粒子担体は、金、シリカ、カーボンナノチューブ、水溶性フラーレン、シリコンナノワイヤ、量子ドット、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本明細書でさらに提供される組成物では、ベクターは、バクテリオファージ、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、赤血球ゴースト、バクトフェクション、エキソソーム、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本明細書でさらに提供される組成物では、融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端の順序で、オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、ネックドメインまたはその機能的バリアントと、必要に応じてリンカー配列と、ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントとを含む。本明細書でさらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－Ｌは、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮増殖阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本明細書でさらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－ＬがＣＤ４０リガンドである。本明細書でさらに提供される組成物では、ＣＤ４０リガンドが、配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－ＬがＯＸ４０リガンドである。本明細書でさらに提供される組成物では、ＯＸ４０リガンドが、配列番号２または配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－Ｌが４－１ＢＢＬである。本明細書でさらに提供される組成物では、４－１ＢＢＬが、配列番号４または配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－ＬがＬＩＧＨＴである。本明細書でさらに提供される組成物では、ＬＩＧＨＴが、配列番号６と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。さらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－ＬがＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）である。さらに提供される組成物では、ＧＩＴＲＬが、配列番号７または配列番号８と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供される組成物では、コレクチンファミリータンパク質は、ＳＰ－Ａ、ＳＰ－Ｄ、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）、コングルチニン、ＣＬ－４３、ＣＬ－Ｌ１、ＣＬ－Ｋ１、ＣＬ－Ｐ１またはＣＬ－４６を含む。本明細書でさらに提供される組成物では、コレクチンファミリータンパク質はＳＰ－Ｄである。本明細書でさらに提供される組成物では、オリゴマー化ドメインが、配列番号９と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供される組成物では、オリゴマー化ドメインおよび前記ネックドメインが共に、配列番号１０と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供される組成物では、オリゴマー化ドメインおよび前記ネックドメインが共に配列番号１０を含む。本明細書でさらに提供される組成物では、融合タンパク質が前記リンカー配列を含み、前記リンカー配列がＧＳＧ（グリシン－セリン－グリシン）（配列番号１２）を含む。本明細書でさらに提供される組成物では、核酸がＲＮＡを含む。本明細書でさらに提供される組成物では、核酸がＤＮＡを含む。

【0009】

組成物が本明細書で提供され、この組成物は、ベクターと核酸とを含み、この核酸は、配列番号２１、２２、２３、２４、２５、２６、または２７１と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。

【0010】

組成物が本明細書で提供され、この組成物は、ベクターと核酸とを含み、この核酸は、配列番号１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含むタンパク質をコードする。

【0011】

細胞が本明細書で提供され、この細胞は、本明細書に記載される組成物を含む。本明細書でさらに提供される細胞では、この細胞は免疫細胞である。本明細書でさらに提供される細胞では、この免疫細胞はリンパ系細胞である。

【0012】

融合タンパク質が本明細書で提供され、この融合タンパク質は、ＴＮＦ－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントと、コレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインとを含み、このコレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインは、オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、ネックドメインまたはその機能的バリアントとを含み、このオリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、ネックドメインまたはその機能的バリアントとは、コレクチンファミリータンパク質中のそれらの位置と比較して配列近接がより緊密である。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、この融合タンパク質は、以下、Ｎ末端からＣ末端の順序で、オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、ネックドメインまたはその機能的バリアントと、必要に応じてリンカー配列と、ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントとを含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＴＮＦＳＦ－Ｌが、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮増殖阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＴＮＦＳＦ－ＬがＣＤ４０リガンドである。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＣＤ４０リガンドは、配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＴＮＦＳＦ－ＬがＯＸ４０リガンドである。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＯＸ４０リガンドは、配列番号２または配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＴＮＦＳＦ－Ｌが４－１ＢＢＬである。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、４－１ＢＢＬは、配列番号４または配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＴＮＦＳＦ－ＬがＬＩＧＨＴである。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＬＩＧＨＴは、配列番号６と少なくとも８５％の配列同一性を含む。さらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－ＬがＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）である。さらに提供される組成物では、ＧＩＴＲＬが、配列番号７または配列番号８と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、コレクチンファミリータンパク質は、ＳＰ－Ａ、ＳＰ－Ｄ、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）、コングルチニン、ＣＬ－４３、ＣＬ－Ｌ１、ＣＬ－Ｋ１、ＣＬ－Ｐ１、ＣＬ－４６、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、コレクチンファミリータンパク質はＳＰ－Ｄである。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、オリゴマー化ドメインは、配列番号９と少なくとも８５％の配列同一性を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、オリゴマー化ドメインおよびネックドメインは共に、配列番号１０と少なくとも８５％の配列同一性を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、オリゴマー化ドメインおよびネックドメインは共に配列番号１０を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、融合タンパク質が前記リンカー配列を含み、前記リンカー配列がＧＳＧ（グリシン－セリン－グリシン）（配列番号１２）を含む。

【0013】

腫瘍溶解性ウイルスが本明細書で提供され、この腫瘍溶解性ウイルスは、ＴＮＦ－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントをコードする外因性核酸を含み、このＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントは、オリゴマー化ドメインに融合されている。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、この腫瘍溶解性ウイルスは、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、レオウイルス（ＲＶ）、粘液腫ウイルス（ＭＹＸＶ）、麻疹ウイルス（ＭＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ポリオウイルス（ＰＶ）、センダイウイルス、フラビウイルス、レンチウイルス、ポックスウイルス、レトロウイルス、アデノ随伴ウイルス、またはアデノウイルスである。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントをコードする核酸は、ウイルスゲノムに挿入されている。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントをコードする核酸は、チミジンキナーゼ遺伝子に挿入されている。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－Ｌが、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮増殖阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－ＬがＣＤ４０リガンドである。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、ＣＤ４０リガンドが、配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－ＬがＯＸ４０リガンドである。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、ＯＸ４０リガンドが、配列番号２または配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－Ｌが４－１ＢＢＬである。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、４－１ＢＢＬが、配列番号４または配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－ＬがＬＩＧＨＴである。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、ＬＩＧＨＴが、配列番号６と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。さらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－ＬがＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）である。さらに提供される組成物では、ＧＩＴＲＬが、配列番号７または配列番号８と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、オリゴマー化ドメインが、配列番号９と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、核酸がＲＮＡを含む。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、核酸がＤＮＡを含む。

【0014】

ワクシニアウイルスが本明細書で提供され、このワクシニアウイルスは、ＴＮＦ－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントをコードする外因性核酸を含み、このＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントは、オリゴマー化ドメインに融合されている。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、このワクシニアウイルスは、ウエスタンリザーブ（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｒｅｓｅｒｖｅ）ワクシニアウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ－１３５４）、コペンハーゲン株、ワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＡＴＣＣ ＶＲ－１５０８）、ワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＡＴＣＣ ＶＲ－１５６６）、組換えワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＮＹＶＡＣ株、ワクシニアウイルス株Ｗｙｅｔｈ（ＡＴＣＣ ＶＲ－１５３６）、ワクシニアウイルスＷｙｅｔｈ（ＡＴＣＣ ＶＲ－３２５）、Ｗｙｅｔｈ（ＮＹＣＢＯＨ）株、Ｔｉａｎ Ｔａｎ株、Ｌｉｓｔｅｒ株、ＵＳＳＲ株、およびＥｖａｎｓ株の修飾株である。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントをコードする外因性核酸は、ウイルスゲノムに挿入されている。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントをコードする外因性核酸は、チミジンキナーゼ遺伝子に挿入されている。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－Ｌが、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮増殖阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－ＬがＣＤ４０リガンドである。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、ＣＤ４０リガンドが、配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－ＬがＯＸ４０リガンドである。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、ＯＸ４０リガンドが、配列番号２または配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－Ｌが４－１ＢＢＬである。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、４－１ＢＢＬが、配列番号４または配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－ＬがＬＩＧＨＴである。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、ＬＩＧＨＴが、配列番号６と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。さらに提供される組成物では、ＴＮＦＳＦ－ＬがＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）である。さらに提供される組成物では、ＧＩＴＲＬが、配列番号７または配列番号８と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、オリゴマー化ドメインが、配列番号９と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、核酸がＲＮＡを含む。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、核酸がＤＮＡを含む。

【0015】

癌の処置のための方法であって、癌の処置に十分な量の医薬組成物を対象に投与することを含み、医薬組成物が、本明細書に記載される組成物、細胞、融合タンパク質、腫瘍溶解性ウイルス、またはワクシニアウイルスを含む、方法が本明細書で提供される。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、癌は血液癌または固形癌を含む。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、癌は、黒色腫、肝細胞癌、乳癌、肺癌、腹膜癌、前立腺癌、膀胱癌、卵巣癌、白血病、リンパ腫、腎臓癌、膵臓癌、上皮癌、胃癌、結腸癌、十二指腸癌、膵臓腺癌、中皮腫、多形性膠芽腫、星状細胞腫、多発性骨髄腫、前立腺癌、肝細胞癌、胆管肉腫、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、腸型胃癌、子宮頚扁平上皮癌、骨肉腫、上皮卵巣癌、急性リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性腫瘍、または肉腫を含む。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、癌は、膀胱癌、血液癌、骨癌、骨髄癌、脳癌、乳癌、結腸癌、食道癌、消化管癌、歯肉癌、頭部癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、上咽頭癌、頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、皮膚癌、胃癌、精巣癌、舌癌、または子宮癌を含む。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、投与することは、全身投与または局所投与を含む。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、投与することは、腫瘍内投与、静脈内投与、局所投与、腹腔内投与、非経口投与、筋肉内投与、皮下投与、動脈内投与、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、投与することは腫瘍内投与を含む。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、医薬組成物は、薬学的に許容され得る担体をさらに含む。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、薬学的に許容され得る担体は、緩衝液、エマルジョン、生体吸着性ポリマー、ゲル、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、組成物、細胞または融合タンパク質は、約０．０１μｇ／用量～約１ｇ／用量の用量で投与される。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、腫瘍溶解性ウイルスまたはワクシニアウイルスは、約１０^３～約１０^１２ＰＦＵ／用量の用量で投与される。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、医薬組成物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれを超える用量を含む処置サイクルで投与される。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、医薬組成物は、各用量で投与され、約１分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約１日、またはそれを超える期間にわたって投与される。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、各用量は、任意の他の用量から独立している。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、処置サイクルにおける２回またはそれを超える用量が、用量が投与されない投与間隔によって隔てられている。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、投与間隔は、約１分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約１日、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１年、またはそれを超える期間である。本明細書でさらに提供される癌の処置のための方法では、各投与間隔は、任意の他の投与間隔から独立している。

【0016】

腫瘍細胞成長の低減のための方法であって、腫瘍細胞成長の低減に十分な量で腫瘍細胞に、本明細書に記載される組成物、細胞、融合タンパク質、腫瘍溶解性ウイルス、またはワクシニアウイルスを投与することを含む、方法が本明細書で提供される。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、腫瘍は液体腫瘍または固形腫瘍を含む。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、腫瘍は、黒色腫、肝細胞癌、乳房腫瘍、肺腫瘍、腹膜腫瘍、前立腺腫瘍、膀胱腫瘍、卵巣腫瘍、白血病、リンパ腫、腎臓癌腫、膵臓癌腫、上皮癌腫、胃腫瘍、結腸癌腫、十二指腸腫瘍、膵臓腺癌、中皮腫、多形性膠芽腫、星状細胞腫、多発性骨髄腫、前立腺癌、肝細胞癌、胆管肉腫、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸腫瘍、腸型胃癌、子宮頚扁平上皮癌、骨肉腫、上皮卵巣癌、急性リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性腫瘍、または肉腫を含む。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、腫瘍は、膀胱腫瘍、血液腫瘍、骨腫瘍、骨髄腫瘍、脳腫瘍、乳房腫瘍、結腸腫瘍、食道腫瘍、消化管腫瘍、歯肉腫瘍、頭部腫瘍、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、肺腫瘍、上咽頭腫瘍、頸部腫瘍、卵巣腫瘍、前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、胃腫瘍、精巣腫瘍、舌腫瘍、または子宮腫瘍を含む。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、投与することは、全身投与または局所投与を含む。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、投与することは、腫瘍内投与、静脈内投与、局所投与、腹腔内投与、非経口投与、筋肉内投与、皮下投与、動脈内投与、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、投与することは腫瘍内投与を含む。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、組成物は、薬学的に許容され得る担体をさらに含む。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、薬学的に許容され得る担体は、緩衝液、エマルジョン、生体吸着性ポリマー、ゲル、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、組成物、細胞または融合タンパク質は、約０．０１μｇ／用量～約１ｇ／用量の用量で投与される。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、腫瘍溶解性ウイルスまたはワクシニアウイルスは、約１０^３～約１０^１２ＰＦＵ／用量の用量で投与される。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、投与することは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれを超える用量を含む処置サイクルにある。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、各用量で投与され、約１分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約１日、またはそれを超える期間にわたって投与される。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、２回またはそれを超える用量が、用量が投与されない投与間隔によって隔てられている。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、投与間隔は、約１分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約１日、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１年、またはそれを超える期間である。本明細書でさらに提供される腫瘍細胞成長の低減のための方法では、各投与間隔は、任意の他の投与間隔から独立している。

【図面の簡単な説明】

【0017】

本開示の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載されている。本開示の特徴および利点のより良い理解は、本開示の原理が利用される例示的な実施形態を説明する以下の詳細な説明、および添付の図面を参照することによって得られるであろう。

【0018】

【図1】図１は、オリゴマー化ドメイン、ネックドメイン、任意選択のリンカー、およびＴＮＦＳＦ－Ｌドメインを有する例示的なドメイン構造の図を示す。

【0019】

【図2】図２は、ＣＤ４０Ｌスキャフォールドタンパク質を発現する修飾された腫瘍溶解性ワクシニアウイルス導入遺伝子に感染した細胞におけるＣＤ４０Ｌスキャフォールドタンパク質の発現を、導入遺伝子を発現しない腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに感染した細胞または非感染細胞と比較して示す。Ｙ軸はｎｇ／ｍＬ単位のｍＣＤ４０Ｌを表し、Ｘ軸はサンプル（非感染細胞、Ａ５２Ｒ欠失およびチミジンキナーゼ欠失を有するワクシニアウイルス、およびチミジンキナーゼ欠失およびバリアントＣＤ４０Ｌの挿入を有するワクシニアウイルス）を表す。

【0020】

【図3】図３は、ｍＯＸ４０Ｌ ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示し、ここで、上清を、希釈係数を考慮した後に１００倍に希釈し、ｍＯＸ４０Ｌ発現についてスクリーニングする。Ｙ軸はｐｇ／ｍＬ単位のｍＯＸ４０Ｌを表し、Ｘ軸はサンプル（非感染細胞、Ａ５２Ｒ欠失およびチミジンキナーゼ欠失を有するワクシニアウイルス、チミジンキナーゼ欠失およびネイティブＯＸ４０Ｌを有するワクシニアウイルス、およびチミジンキナーゼ欠失およびバリアントＯＸ４０Ｌの挿入を有するワクシニアウイルス）を表す。

【0021】

【図4】図４は、非希釈上清を４１ＢＢＬ発現についてスクリーニングする４１ＢＢＬ ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す。Ｙ軸はｎｇ／ｍＬ単位のｍ４１ＢＢＬを表し、Ｘ軸はサンプル（非感染細胞、Ａ５２Ｒ欠失およびチミジンキナーゼ欠失を有するワクシニアウイルス、チミジンキナーゼ欠失およびネイティブ４１ＢＢＬを有するワクシニアウイルス、およびチミジンキナーゼ欠失およびバリアント４１ＢＢＬの挿入を有するワクシニアウイルス）を表す。

【0022】

【図5】図５は、ＣＤ４０Ｌレポーター細胞アッセイの結果を示す。Ｙ軸はＯＤであり、Ｘ軸は使用される上清の体積である。サンプルは、非感染細胞、Ａ５２Ｒ欠失およびチミジンキナーゼ欠失を有するワクシニアウイルスに感染した細胞、ならびにチミジンキナーゼ欠失およびバリアントＣＤ４０Ｌを含むワクシニアウイルスに感染した細胞である。

【0023】

【図6】図６は、ＴＫ欠失を有するウイルス（ＴＫ－）、ＴＮＦＳＦＬ融合コンストラクトを有するウイルス（ｓ３ＣＤ４０Ｌ）、または緩衝液対照で処置したマウスにおける生存確率を示す。

【0024】

【図7】図７は、非感染対照細胞（緩衝液）、４１ＢＢＬを発現するウイルスに感染した細胞、および三量体ＯＸ４０Ｌ（３ｓＯＸ４０Ｌ）を発現するウイルスに感染した細胞におけるルシフェラーゼ発現レベル（ＲＬＵ）を示す。

【0025】

【図8】図８は、非感染対照細胞（緩衝液）、陰性対照として三量体ＧＩＴＲＬを発現するウイルス、４１ＢＢＬ単量体を発現するウイルス、および三量体４１ＢＢＬ（３ｓ４１ＢＢＬ）を発現するウイルスに感染した細胞におけるルシフェラーゼ発現レベル（ＲＬＵ）を示す。

【0026】

【図9】図９は、ＣＤ３単独、またはＣＤ３とＣＤ２８、組換え４１ＢＢＬ、組換えＯＸ４０Ｌ、３ｓ４１ＢＢＬを発現するウイルス、または３ｘＯＸ４０Ｌを発現するウイルスで刺激されたＣＤ８Ｔ細胞におけるＩＬ－２発現レベルを示す。

【0027】

【図10】図１０は、皮下ＲＥＮＣＡ腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウスにおける平均腫瘍体積を示し、ｙ軸の体積（ｍｍ^３）はｘ軸上の処置後日数で測定した。体積は、緩衝液対照、チミジンキナーゼ欠失を有する対照ワクシニアウイルス（ＨＣＣＴＫＭ）、３ｓ４１ＢＢＬを発現するウイルスまたは３ｓＯＸ４０Ｌを発現するウイルスでの処置から０、５、８、および１２日後に測定した。リガンド３ｓ４１ＢＢＬまたは３ｓＯＸ４０Ｌを発現するウイルス含む処置群における腫瘍体積は、５、８、および１２日後に陰性対照と比較してより小さい腫瘍体積を示した。

【0028】

【図11】図１１Ａは、緩衝液対照、チミジンキナーゼ欠失を有する対照ワクシニアウイルス（ＨＣＣＴＫＭ）、または３ｓＧＩＴＲＬを発現するウイルスで処置した３０日後の、皮下ルイス肺癌腫（ＬＬＣ）腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウスの腫瘍体積（ｍｍ^３）の散布図を示す。３０日後の各群の平均腫瘍体積が示されており、緩衝液対照群では約１４００ｍｍ^３、ＨＣＣＴＫＭ群では約７５０ｍｍ^３、３ｓＧＩＴＲＬ群では＜１００ｍｍ^３を示している。

【0029】

図１１Ｂは、緩衝液対照、チミジンキナーゼ欠失を有する対照ワクシニアウイルス（ＨＣＣＴＫＭ）、または３ｓＧＩＴＲＬを発現するウイルスで処置した１７日後の皮下ＲＥＮＣＡ腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウスにおける腫瘍体積（ｍｍ^３）の散布図を示す。１７日後の各群の平均腫瘍体積が示されており、緩衝液対照群では約８００ｍｍ^３、ＨＣＣＴＫＭ群では約３５０ｍｍ^３、３ｓＧＩＴＲＬ群では約２５０ｍｍ^３を示している。

【発明を実施するための形態】

【0030】

詳細な説明
本開示の好ましい実施形態を本明細書に示し説明してきたが、このような実施形態が例としてのみ提供されることは当業者には明らかであろう。本開示から逸脱することなく、当業者には多数の変形、変更および置換が思い浮かぶであろう。本明細書に記載される本開示の実施形態に対する様々な代替態様が、本開示を実施する際に使用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法および構造ならびにそれらの均等物がそれによってカバーされることが意図される。

【0031】

重合ドメインに融合されたＴＮＦスーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントの融合タンパク質をコードする核酸を含む、癌を処置するための組成物およびその使用が本明細書で提供される。１つの例示的な配置では、図１を参照すると、ＴＮＦＳＦ－Ｌは、Ｎ末端のオリゴマー化ドメインに（必要に応じてリンカーを介して）融合され、必要に応じて、オリゴマー化ドメインのＣ末端のネックドメインに融合される。図１の例示において、オリゴマー化ドメインおよびネックドメインは、コレクチンファミリータンパク質ＳＰ－Ｄ由来の機能性ドメインである。更なるオリゴマー化ドメイン、ならびに任意選択のネックドメインおよび／またはリンカードメインは、免疫応答を誘発する際に活性が増加した構造、またはそのマーカーを提供する融合タンパク質の重合を可能にする。本明細書では、ＴＮＦＳＦ－Ｌ、ＴＮＦＳＦ－Ｌへの融合のためのドメイン、融合タンパク質をコードする核酸の送達のためのウイルスベクターおよび非ウイルスベクター、組成物の使用条件、ならびに投与方法がより詳細に記載される。ＴＮＦＳＦ－Ｌ融合タンパク質をコードする核酸を含む腫瘍溶解性ウイルスを一般に含む、癌を処置するための組成物および方法が、本明細書でさらに提供される。本明細書に記載される融合タンパク質を発現する核酸を含む細胞が本明細書でさらに提供される。
定義

【0032】

本明細書で使用される用語は、特定の事例のみを説明するためのものであり、限定することを意図するものではない。本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上他に明確に示されない限り、複数形も含むことができる。さらに、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｗｉｔｈ）」という用語、またはそれらの変形が詳細な説明および／または特許請求の範囲のいずれかで使用される限り、そのような用語は、「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と同様に包括的であることを意図している。

【0033】

「約」または「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値の許容され得る誤差範囲内であることを意味することができ、これは値がどのように測定または決定されるか、例えば測定システムの限界に部分的に依存する。特定の値が本出願および特許請求の範囲に記載されている場合、特に明記しない限り、「約」という用語は、特定の値の許容され得る誤差範囲、例えば「約」という用語によって修飾された値の±１０％を意味すると仮定されるべきである。

【0034】

特定のウイルスに関して本明細書で使用される「異種核酸配列」、または「外因性核酸配列」、または「導入遺伝子」という用語は、指定されたウイルス以外の供給源に由来する核酸配列を指すことができる。

【0035】

本明細書で使用される「突然変異」という用語は、当該技術分野で一般に理解されているようなオープンリーディングフレーム除去突然変異を含む、欠失、異種核酸の挿入、逆位または置換を指すことができる。

【0036】

本明細書で使用される「遺伝子」という用語は、個々のタンパク質またはＲＮＡ（「コード配列」または「コード領域」とも呼ばれる）を、必要に応じて、コード配列の上流または下流に位置し得るプロモーター、オペレーター、ターミネーターなどの関連する調節領域と共にコードする核酸のセグメントを指すことができる。

【0037】

本明細書で使用される「プロモーター」は、転写の開始および速度が制御される核酸配列の領域である制御配列であり得る。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼおよび他の転写因子などの調節タンパク質および分子が結合し得る遺伝要素を含み得る。「操作可能に位置決めされた」、「操作可能に連結された」、「制御下にある」および「転写制御下にある」という用語は、プロモーターが核酸配列に対して正しい機能的位置および／または向きにあり、その配列の転写開始および／または発現を制御することを意味し得る。いくつかの実施形態では、プロモーターは、核酸配列の転写活性化に関与するシス作用性調節配列を指す「エンハンサー」と組み合わせて使用されてもよい使用されなくてもよい。

【0038】

本明細書で使用される「相同性」という用語は、最適な比較目的のために配列をアラインメントさせることによって決定され得る２つもしくはそれを超えるヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の「相同性」または「パーセント相同性」の計算に対するものであり得る（例えば、第１の配列の配列にギャップを導入することができる）。次いで、対応する位置のヌクレオチドを比較することができ、２つの配列間の同一性パーセントは、配列によって共有される同一の位置の数の関数であり得る（すなわち、相同性％＝同一位置の数／位置の総数×１００）。例えば、第１の配列中の位置は、第２の配列中の対応する位置と同じヌクレオチドによって占有されてもよく、その場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間の相同性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一の位置の数の関数であり得る。いくつかの実施形態では、比較目的のためにアラインメントされる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９５％であり得る。ＢＬＡＳＴ（登録商標）検索は、２つの配列間の相同性を決定し得る。相同性は、２つの配列の全長の間、または２つの配列の全長の一部の間であり得る。２つの配列は、遺伝子、ヌクレオチド配列、タンパク質配列、ペプチド配列、アミノ酸配列、またはそれらの断片であり得る。２つの配列の実際の比較は、例えば数学的アルゴリズムを使用して、周知の方法によって達成することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムの任意の関連パラメータ（例えば、ＮＢＬＡＳＴ）を使用することができる。例えば、配列比較のためのパラメータは、スコア＝１００、ワード長＝１２に設定することができ、または変化させることができる（例えば、Ｗ＝５またはＷ＝２０である）。他の例としては、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ、ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）、ＡＤＶＡＮＣＥ、ＡＤＡＭ、ＢＬＡＴ、およびＦＡＳＴＡのアルゴリズムが挙げられる。

【0039】

「対象」という用語は、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、またはマウスを含むがこれらに限定されない動物を指すことができる。「対象」および「患者」という用語は、例えばヒト対象などの哺乳動物の対象に関して、本明細書では互換的に使用される。

【0040】

「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」および「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、障害、疾患、もしくは症状；障害、疾患、もしくは症状に関連付けられる１つもしくはそれを超える症候を緩和もしくは抑止すること、または障害、疾患、もしくは症状自体の原因を緩和もしくは根絶することを含むことを意味し得る。

【0041】

「有効量」または「治療有効量」という用語は、投与された場合に、処置されている障害、疾患、もしくは症状の１つもしくはそれを超える症候の発症を予防するか、またはある程度緩和するのに十分であり得る化合物の量を指すことができる。

【0042】

本明細書で使用される「腫瘍溶解性」という用語は、薬剤、例えば腫瘍溶解性ポックスウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスによる、例えば上記細胞の直接溶解による、上記細胞に対する免疫応答、アポトーシス、毒性タンパク質の発現、オートファジーおよびタンパク質合成の遮断、抗腫瘍免疫の誘導、またはそれらの任意の組み合わせを刺激することによる、癌または腫瘍細胞の死滅を指すことができる。腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの薬剤に感染した癌または腫瘍細胞の直接溶解は、上記細胞内のウイルスの複製の結果であり得る。特定の例では、「腫瘍溶解性」という用語は、癌細胞または腫瘍細胞を溶解せずに死滅させることを指すことができる。

【0043】

本明細書で使用される「腫瘍溶解性ウイルス」という用語は、腫瘍細胞に優先的に感染して死滅させるウイルスを指すことができる。

【0044】

本明細書で使用される「修飾された腫瘍溶解性ウイルス」という用語は、ウイルス遺伝子の突然変異または欠失などのウイルスのネイティブゲノム（「骨格」）における修飾、外因性核酸の導入、ウイルス核酸またはウイルスタンパク質の化学的修飾、およびウイルスキャプシドへの外因性タンパク質または修飾されたウイルスタンパク質の導入などであるがこれらに限定されない、その構成要素に対する修飾を含む腫瘍溶解性ウイルスを指すことができる。一般に、腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍細胞に対する改善された治療効果を得るために修飾（「操作された」としても知られる）され得る。
融合コンストラクト

【0045】

融合タンパク質をコードする核コンストラクトが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される融合タンパク質は、必要に応じてコレクチンタンパク質由来のＴＮＦＳＦ－Ｌ領域およびオリゴマー化領域を含む。そのような融合タンパク質は、核酸によってコードされ、腫瘍溶解性ウイルスに挿入され得る。得られた発現された融合タンパク質は、ＴＮＦＳＦ－Ｌ領域とオリゴマー化領域との間にリンカー領域をさらに含み得る。ＴＮＦＳＦ－Ｌ領域に含まれるＴＮＦスーパーファミリーメンバーの例としては、限定されないが、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ１３７リガンド、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮成長阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。更なる実施形態では、ＴＮＦＳＦ－Ｌ領域は、Ｎ末端でリンカーペプチドに連結され得る。いくつかの例では、リンカーペプチドは、最大１０アミノ酸長を含み、必要に応じて、グリシンおよび／またはセリンリッチである。

【0046】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質自体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、必要に応じてコレクチンタンパク質由来のＴＮＦＳＦ－Ｌ領域およびオリゴマー化領域を含む。そのような融合タンパク質は、核酸によってコードされ、腫瘍溶解性ウイルスに挿入され得る。得られた発現された融合タンパク質は、ＴＮＦＳＦ－Ｌ領域とオリゴマー化領域との間にリンカー領域をさらに含み得る。ＴＮＦＳＦ－Ｌ領域に含まれるＴＮＦスーパーファミリーメンバーの例としては、限定されないが、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ１３７リガンド、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮成長阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。更なる実施形態では、ＴＮＦＳＦ－Ｌ領域は、Ｎ末端でリンカーペプチドに連結され得る。いくつかの例では、リンカーペプチドは、最大１０アミノ酸長を含み、必要に応じて、グリシンおよび／またはセリンリッチである。

【0047】

本明細書に記載される融合コンストラクトに全体的または部分的に含まれる例示的な腫瘍壊死スーパーファミリーリガンドのアミノ酸配列を表１に示す。そのような例示的なＴＮＦＳＦ－Ｌタンパク質には、マウスＣＤ４０Ｌ、ヒトＯＸ４０Ｌ、マウスＯＸ４０Ｌ、マウス４－１ＢＢＬ、ヒト４－１ＢＢＬ、ヒトＧＩＴＲＬ、マウスＧＩＴＲＬ、マウス３ｓＣＤ４０Ｌ、マウス３ｓＯＸ４０Ｌ、マウス３ｓ４－１ＢＢＬ、マウス３ｓＧＩＴＲＬ、ヒト３ｓＯＸ４０Ｌ、ヒト３ｓ４－１ＢＢＬ、およびマウス３ｓＧＩＴＲＬからのエクトドメインが含まれる。
表１．

【表1】

【0048】

多くのＴＮＦスーパーファミリー受容体は、ホモ三量体としてそれらの同族リガンドをブラインド（ｂｌｉｎｄ）する。リガンドは、細胞の表面上の膜貫通係留タンパク質としてネイティブに発現される。ヒトコレクチンタンパク質由来などのオリゴマー化促進断片に融合したＴＮＦＳＦリガンドを含む融合コンストラクトが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、オリゴマー化領域は、必要に応じてＴＮＦＳＦ－Ｌ領域のＮ末端またはリンカーペプチドのＮ末端に連結されたコレクチンタンパク質ポリペプチド断片を含み、リンカーペプチドのＣ末端はＴＮＦＳＦ－Ｌ領域のＮ末端に連結されている。典型的には、コレクチンは、Ｃ末端炭水化物セクション、ネックセクション、コラーゲン性セクション、およびＮ末端セクションを含む。レクチンのＣ末端炭水化物領域は、典型的にはオリゴマー化を助けるシスチン残基を含む、レクチンドメインまたはＣＲＤとしても知られる。ネックセクションは三量化を開始し、ネックセクションのコラーゲン性尾部に沿ってＮ末端セクションに向かってジッパー様の様式を形成する。Ｎ末端セクション自体は、ジスルフィド架橋によるオリゴマー化を助けるシスチンリッチ部分を含む。
オリゴマー化ドメイン

【0049】

オリゴマー化領域を含むＴＮＦＳＦ－Ｌ融合コンストラクトが本明細書で提供される。そのような領域は、発現されたＴＮＦＳＦ－Ｌの安定性および機能性の向上、したがって宿主免疫系活性の活性化の増加を可能にする。いくつかの実施形態では、オリゴマー化領域は、コレクチンファミリータンパク質由来の少なくとも１つのドメインまたはその機能的バリアントを含む。コレクチンタンパク質は、安定なオリゴマーを形成することが知られている。コレクチンは、Ｃ型レクチンドメインと呼ばれる構造タンパク質フォールドを含むタンパク質レクチンスーパーファミリーを構築する１８のグループメンバーのうちの１つである。いくつかのメンバーは、追加の構造的特徴を含むことが示されている。したがって、それらは以下の成分を含む：ｉ）ネック領域とも呼ばれるαヘリックスセグメントに結合したＮ末端コラーゲンドメイン、およびｉｉｉ）Ｃ末端のＣＲＤ。コレクチンの例としては、サーファクタントタンパク質Ａ（ＳＰ－Ａ）、サーファクタントタンパク質Ｄ（ＳＰ－Ｄ）、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）、コングルチニン、ＣＬ－４３、ＣＬ－Ｌ１、ＣＬ－Ｋ１、ＣＬ－Ｐ１、およびＣＬ－４６が挙げられる。ＳＰ－ＡおよびＳＰ－Ｄは、予め形成された三量体のジスルフィド媒介オリゴマー化に関与するＮ末端システインを含む。いくつかの実施形態では、上記のペプチド配列をコードする核酸も企図される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される融合コンストラクトは、コレクチンオリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される融合コンストラクトは、コレクチンオリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントおよびコレクチンネックドメインまたはその機能的バリアントを含む。例示的な配列を表２（アミノ酸）および表３（核酸）に提供する。
表２

【表2】

表３

【表3】

【0050】

いくつかの実施形態では、コレクチンポリペプチド断片は、融合タンパク質のＴＮＦＳＦ－Ｌ領域のＮ末端またはリンカーペプチドのＮ末端に連結され、リンカーペプチドのＣ末端は、融合タンパク質のＴＮＦＳＦ－Ｌ領域のＮ末端に連結される。
リンカー

【0051】

オリゴマー化ドメインとＴＮＦＳＦ－Ｌドメインとの間に位置する可撓性リンカーエレメントを含む融合コンストラクトが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、可撓性リンカーエレメントは、２５アミノ酸またはそれ未満の長さを有する。いくつかの実施形態では、リンカーエレメントは、３～３０アミノ酸の長さ、特に３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８または３０アミノ酸の長さを有する。いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、３～１０または５～１０アミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーエレメントは、小さい親水性の非荷電アミノ酸で構築される。いくつかの実施形態では、本発明によるリンカーエレメントは、Ｇ、Ｓ、ＡおよびＴから選択されるアミノ酸を含み得る。リンカーエレメントは、好ましくはグリシン／セリンリンカー、すなわちアミノ酸グリシンおよびセリンを含むペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＳＧ）（配列番号１２）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＳＳ）ａ（ＳＳＧ）ｂ（ＧＳＧ）ｃ（配列番号１３）を含み、ここで、ａ、ｂ、ｃは、各々０、１、２、３、４、５または６回の反復である。ＴＮＦＳＦ－Ｌがセリンまたはグリシンアミノ酸で終了または開始する場合、そのような残基もリンカーの第１の残基を形成し得る。リンカー（ｌｉｋｅｒ）エレメントの構成要素は、１、２、３、４、５またはそれを超えるアミノ酸から構成され得る。一般に、本明細書で使用されるリンカーエレメントは、構成要素から構成されてもよく、またはアミノ酸の配列から構成されてもよい。
送達ベクター

【0052】

本明細書に提供されるのは、本明細書に記載される融合コンストラクトをコードする核酸を送達するためのシステムであって、核酸のヌクレアーゼ分解を低減しながら、核酸コンストラクトを標的細胞に侵入させるシステムである。そのような送達系は、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターを含み得る。
腫瘍溶解性ウイルス

【0053】

本明細書では、ウイルスの形態のベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ウイルス送達ベクターは腫瘍溶解性ウイルスを含む。腫瘍溶解性ウイルスを含む組成物であって、腫瘍溶解性ウイルスが本明細書に記載されるＴＮＦＳＦ－Ｌ融合コンストラクトを含む組成物が本明細書で提供される。本明細書で使用される腫瘍溶解性ウイルスは、上記細胞に対する免疫応答、アポトーシス、毒性タンパク質の発現、タンパク質合成のオートファジーおよびシャットダウン、抗腫瘍免疫の誘導、またはそれらの任意の組み合わせを刺激することによって、上記細胞の直接溶解などの機序によって癌または腫瘍細胞を死滅させる。本明細書に記載される組成物に含まれる例示的な腫瘍溶解性ウイルスには、限定されないが、ポックスウイルス、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、レオウイルス（ＲＶ）、粘液腫ウイルス（ＭＹＸＶ）、麻疹ウイルス（ＭＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ポリオウイルス（ＰＶ）、センダイウイルス、フラビウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、レトロウイルス、アデノ随伴ウイルス、およびアデノウイルスが含まれる。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスはポックスウイルスであり得る。いくつかの実施形態では、ポックスウイルスは、β昆虫ポックスウイルス、ヤタポックスウイルス、セルビドポックスウイルス、γ昆虫エンドモポックスウイルス、レポリポックスウイルス、スイポックスウイルス、モラスポックスウイルス、クロコジリドポックスウイルス、α昆虫ポックスウイルス、カプリポックスウイルス、アビポックスウイルス、パラポックスウイルス、カナリポックスウイルス、または鶏痘ウイルスを含む。これらの腫瘍溶解性ウイルスは、癌細胞を特異的に標的化する傾向があり、ウイルス複製時に有意な細胞死および腫瘍退縮を引き起こす。

【0054】

いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、修飾を含まない他の点では同一のウイルスと比較して、腫瘍細胞に対してより大きな治療効果をもたらし得る１つまたはそれを超える修飾を有し得る修飾された腫瘍溶解性ウイルスであり得る。より大きな治療効果のいくつかの非限定的な例としては、ウイルスの免疫回避の増強、ウイルスの腫瘍標的全身送達の増強、ウイルスの腫瘍内および腫瘍間拡散の増強、ならびにウイルスの腫瘍特異的複製の増強、または細胞外マトリックスへの免疫調節剤および抗腫瘍剤の放出の各々または任意の組み合わせを含み得る。本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、場合によっては、全身送達のためのプラットフォームベクターとして利用することができる。

【0055】

本開示のいくつかの実施形態では、ウイルスの腫瘍標的全身送達を増強することができる修飾を含む修飾された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。典型的には、腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）全身投与されるか、または（ｂ）腫瘍上に局所接種されるか、または多くの場合、腫瘍に直接注射され得る（「腫瘍内送達」）。腫瘍溶解性ウイルスの全身送達は、原発腫瘍および顕在的なまたは未診断の転移性沈着物の両方を同時に処置する機会を与えることができると考えられる。結果として、この送達方法は、進行性／転移性疾患を有する患者、またはアクセスが例えば血液脳関門などの生理学的障壁のために困難である膵臓癌または脳癌を有する患者などのアクセス不可能な疾患を有する患者の処置のための非常に魅力的な選択肢となり得る。しかしながら、多くの腫瘍溶解性ウイルスの全身送達を成功させるための障壁が存在し得る。例えば、場合によっては、上記のように、宿主防御は、全身投与後に腫瘍に感染するほとんどの腫瘍溶解性ウイルスの能力を制限する。血球、補体、抗体、および抗ウイルスサイトカイン、ならびに肺、肝臓および脾臓などの他の組織による非特異的取り込み、組織常在マクロファージ、さらには血管区画からの不十分なウイルス回避は、腫瘍溶解性ウイルスの全身送達に対する主な障壁の１つである。本開示のいくつかの実施形態では、開示される腫瘍溶解性ウイルスは、少なくとも上記のように免疫回避の増強を通して、循環系におけるウイルスの持続的存在を促進することができる修飾を含み得る。一方、ウイルスの腫瘍標的化送達の増強は、癌に対する治療有効性を増加させるだけでなく、非腫瘍感染を制限することができ、ウイルス感染の望ましくない副作用を回避するので、ウイルス媒介性腫瘍療法に関する安全性の懸念も軽減することができるので、特定の状況下で望ましい場合もある。本明細書のいくつかの実施形態は、ウイルスの腫瘍標的化送達を促進することができる修飾を含む腫瘍溶解性ウイルスに関する。

【0056】

本開示のいくつかの実施形態では、ウイルスの腫瘍内および腫瘍間拡散を増強することができる修飾を含む修飾された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。腫瘍内および腫瘍間での腫瘍溶解性ウイルスの拡散の増強は、ウイルスに感染している癌細胞の数を増加させることによって治療効果を高めることができる。いくつかの実施形態では、外因性核酸を含み得る修飾された腫瘍溶解性ウイルスが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ウイルスのゲノムの修飾を含むことができる修飾された腫瘍溶解性ウイルスが本明細書で提供される。本明細書では、いくつかの実施形態では、外因性核酸を含み得る修飾された腫瘍溶解性ウイルス、ならびにウイルスのゲノムにおける修飾が提供される。

【0057】

いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、（ｉ）癌細胞において優先的に自然に複製し、多くの場合、先天性抗ウイルスシグナル伝達に対する感受性の上昇または発癌性シグナル伝達経路への依存に起因してヒトにおいて非病原性であるウイルス；および（ｉｉ）使用のために遺伝子操作されたウイルスを含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、麻疹ウイルス、ポリオウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、レオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、センセナウイルス、レトロウイルス、デングウイルス、または粘液腫ウイルスであり得る。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスはポックスウイルスであり得る。いくつかの実施形態では、ポックスウイルスはワクシニアウイルスであり得る。場合によっては、修飾ポックスウイルスは弱毒化カナリポックスウイルスであり得る。場合によっては、修飾ポックスウイルスは鶏痘ウイルスであり得る。

【0058】

いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスが使用される。一般に、そのようなウイルスは、ウイルス遺伝子の突然変異または欠失などのウイルスのネイティブゲノム（「骨格」）における修飾、外因性核酸の導入、ウイルス核酸またはウイルスタンパク質の化学的修飾、およびウイルスキャプシドへの外因性タンパク質または修飾されたウイルスタンパク質の導入などであるがこれらに限定されない、その構成要素に対する修飾を含む。

【0059】

いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、ＬＩＧＨＴをコードし得る外因性核酸を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、ＩＬ１５をコードし得る外因性核酸を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、ＩＬ１５をコードし得る外因性核酸、およびＣＣＬ５をコードし得る外因性核酸を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、ＩＬ１５をコードし得る外因性核酸、およびＩＬ１５－Ｒαをコードし得る外因性核酸を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、ＩＴＡＣをコードし得る外因性核酸（ＣＸＣＬ１１）、およびフラクタルカインをコードし得る外因性核酸（ＣＸ３ＣＬ１）を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）をコードし得る外因性核酸、フラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）をコードし得る外因性核酸、ＩＬ１５をコードし得る外因性核酸、およびＩＬ１５－Ｒαをコードし得る外因性核酸を含み得る。

【0060】

いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、サイトカイン、例えばＩＬ１５をコードし得る外因性核酸をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、サイトカイン、例えばＩＬ１５をコードし得る外因性核酸、およびケモカイン、例えばＣＣＬ５をコードし得る外因性核酸をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、サイトカイン、例えばＩＬ１５をコードし得る外因性核酸、およびサイトカインの受容体、例えばＩＬ１５Ｒαをコードし得る外因性核酸をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、ＬＩＧＨＴをコードし得る外因性核酸をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）をコードし得る外因性核酸をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、フラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）をコードし得る外因性核酸を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）をコードし得る外因性核酸、およびフラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）をコードし得る外因性核酸をさらに含み得る。

【0061】

いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、サイトカイン、例えばＩＬ１５をコードし得る外因性核酸をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、ケモカイン、例えばＩＬ１５をコードし得る外因性核酸、およびケモカイン、例えばＣＣＬ５をコードし得る外因性核酸をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、サイトカイン、例えばＩＬ１５をコードし得る外因性核酸、およびサイトカインの受容体、例えばＩＬ１５Ｒαをコードし得る外因性核酸をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、ＬＩＧＨＴをコードし得る外因性核酸をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）をコードし得る外因性核酸をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、フラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）をコードし得る外因性核酸を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の突然変異または欠失を含み得、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）をコードし得る外因性核酸、およびフラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）をコードし得る外因性核酸をさらに含み得る。

【0062】

場合によっては、修飾された腫瘍溶解性ウイルスからのサイトカイン（例えば、ＩＬ１５）およびその受容体（例えば、ＩＬ１５－Ｒα）の同時発現は、場合によっては、例えば、ＩＬ１５およびＩＬ１５－Ｒα（ＩＬ１５：ＩＬ１５－Ｒ複合体）によって形成される複合体がナチュラルキラー細胞を活性化し、Ｔ細胞応答を促進する能力が改善されているために、腫瘍溶解性ウイルスの免疫調節効果の増強をもたらし得る。いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、ＩＬ１５：ＩＬ１５－Ｒα複合体中のＩＬ１５は、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の表面に提示されるＩＬ１５－Ｒβγ（ＩＬ１５受容体ベータガンマ複合体）に提示され、それによってＮＫ細胞およびＴ細胞に強力な免疫調節効果を付与することができると考えられる。

【0063】

いくつかの実施形態では、Ａ５２Ｒ遺伝子を変異または欠失させることができ、さらに、分泌されたヒアルロニダーゼ（例えば、ＨｙｓＡ）をコードし得る外因性核酸を含み得る修飾された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。いくつかの実施形態では、Ａ５２Ｒ遺伝子を変異または欠失させることができ、さらにＣＸＣＲ４などのケモカイン受容体をコードし得る外因性核酸を含み得る修飾された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。

【0064】

いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスチミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子の完全または部分的な欠失を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される修飾された腫瘍溶解性ウイルスのゲノムにおいて、１つまたはそれを超える外因性核酸が欠失ＴＫ遺伝子の遺伝子座に挿入される。

【0065】

いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの修飾された腫瘍溶解性ウイルスにおいて、ウイルスＴＫ遺伝子は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ－ＴＫ）由来のＴＫ遺伝子で置き換えられ得る。ＨＳＶ ＴＫは、削除されたＴＫの代替として機能することができ、多面的な利点を有することができる。例えば、（ｉ）ＨＳＶ ＴＫは、ガンシクロビル（ＧＣＶ）を腫瘍においてその細胞傷害性代謝産物に変換するための更なる治療用プロドラッグ変換酵素として使用することができる。追加された治療効果に加えて、この修飾は自殺遺伝子としても機能することができ、例えば、ワクシニア発現細胞は、ＧＣＶの添加によって効率的に死滅させることができ、それによって、有害事象または制御されない複製の場合にウイルスを停止させることができる。したがって、いくつかの例では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、安全スイッチとして作用し得る）。追加の例では、ＨＳＶ ＴＫの変異型を使用して、感度を大幅に高めた標識基質のＰＥＴ画像化を可能にすることができる。したがって、場合によっては、ＰＥＴ画像化において使用することができるＨＳＶ ＴＫを含む修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、インビボでウイルス複製のレポーターとして作用して、処置後早期に治療活性を決定することができる。

【0066】

場合によっては、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、上記の完全長ウイルス骨格遺伝子もしくはウイルス骨格タンパク質、またはその切断型、またはその機能性ドメイン、またはその断片、またはそのバリアントを含み得る。様々な例において、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、上記のように、ウイルス骨格遺伝子またはウイルス骨格タンパク質の１つまたはそれを超える突然変異または欠失を含み得る。ウイルス骨格遺伝子およびウイルス骨格タンパク質の突然変異は、核酸配列中のヌクレオチドおよびタンパク質配列中のアミノ酸の挿入、欠失、置換または修飾を含み得る。欠失は、いくつかの例では、ウイルス骨格遺伝子またはタンパク質の完全または部分的な欠失を含み得る。
ワクシニアウイルス

【0067】

いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスはワクシニアウイルスである。例示的なワクシニアウイルスには、限定されないが、例えば本明細書に記載される融合コンストラクトを含めることによって修飾された野生型または弱毒化ワクシニアウイルス株、例えば、ウエスタンリザーブ（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｒｅｓｅｒｖｅ）ワクシニアウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ－１３５４）、コペンハーゲン株、ワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＡＴＣＣ ＶＲ－１５０８）、ワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＡＴＣＣ ＶＲ－１５６６）、組換えワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＮＹＶＡＣ株、ワクシニアウイルス株Ｗｙｅｔｈ（ＡＴＣＣ ＶＲ－１５３６）、ワクシニアウイルスＷｙｅｔｈ（ＡＴＣＣ ＶＲ－３２５）、Ｗｙｅｔｈ（ＮＹＣＢＯＨ）株、Ｔｉａｎ Ｔａｎ株、Ｌｉｓｔｅｒ株、ＵＳＳＲ株、およびＥｖａｎｓ株が含まれる。本明細書に記載されるように修飾された基本ワクシニアウイルス株は、それ自体がその親株に対して１つまたはそれを超える突然変異、例えば、限定されないが、以下の１つまたはそれを超えるものを含み得る：ＴＫの欠失「ＴＫ－」およびＡ５２Ｒの欠失（本明細書では「Ａ５２Ｒ－」とも呼ばれる）。ワクシニアウイルスは、低い毒性を有し、標的組織に蓄積するように組換え型であるかまたは選択され得る。いくつかの実施形態では、ウイルス骨格／ウイルスゲノム中の修飾は、ワクシニアウイルスを非複製性にするかまたは不十分な複製能を含む修飾である。そのような修飾の非限定的な例としては、以下のウイルス遺伝子：Ａ１、Ａ２、ＶＨ１、Ａ３３、およびＩ７における突然変異を挙げることができる。いくつかの実施形態では、ウイルス骨格突然変異は、Ａ５２Ｒ遺伝子の完全または部分的欠失；ＴＫ遺伝子の完全または部分的欠失；Ｂ１５Ｒ遺伝子の完全または部分的欠失；Ｋ７Ｒ遺伝子の完全または部分的欠失；Ｂ１４Ｒ遺伝子の完全または部分的欠失；Ｎ１Ｌ遺伝子の完全または部分的欠失；Ｋ１Ｌ遺伝子の完全または部分的欠失；Ｍ２Ｌ遺伝子の完全または部分的欠失；Ａ４９Ｒ遺伝子の完全または部分的欠失；ＶＨ１遺伝子の完全または部分的欠失；Ａ３３遺伝子の完全または部分的欠失；Ａ１の完全または部分的な欠失；Ａ２遺伝子の完全または部分的欠失；Ｉ７遺伝子の完全または部分的欠失、およびＡ４６Ｒ遺伝子の完全または部分的欠失からなる群より選択される。本明細書で使用される場合、ウイルス遺伝子への言及は、遺伝子によってコードされるタンパク質（例えば、Ａ３３遺伝子は、Ａ３３タンパク質をコードする遺伝子を意味し得る）への言及によって行うことができる。いくつかの実施形態では、置換、挿入および欠失の任意の組み合わせを含むウイルス骨格突然変異は、ウイルス遺伝子または遺伝子によってコードされるウイルスタンパク質の野生型配列と１００％、９９％、９８、％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％またはそれ未満の配列相同性を有する配列をもたらし得る。ウイルス遺伝子およびそれによってコードされるタンパク質は、いくつかの実施形態では、Ｂ１５Ｒ、Ｋ７Ｒ、Ｂ１４Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ａ４９Ｒ、ＶＨ１、Ａ３３、Ａ１、Ａ２、Ｉ７、およびＡ４６Ｒからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、ウイルス骨格は、ウイルスタンパク質のアミノ酸配列（例えば、ウイルス抗原）に１、２、３、４、５、またはそれを超える突然変異を含み得る。ウイルス抗原は、いくつかの例では、Ｂ１５Ｒ、Ｋ７Ｒ、Ｂ１４Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ａ４９Ｒ、ＶＨ１、Ａ３３、Ａ１、Ａ２、Ｉ７、およびＡ４６Ｒからなる群より選択される。本開示は、いくつかの実施形態では、突然変異が免疫応答のＴ細胞アームを増加させるように、ウイルス（ウイルス骨格）のゲノムにもう１つの突然変異を含む組換えワクシニアウイルスを提供する。突然変異は、ウイルスゲノム（ワクシニアウイルスの野生型または弱毒化ネイティブ株）中の１つまたはそれを超える核酸の付加、欠失または置換であり得る。非限定的な例では、突然変異は、Ｔｈ１免疫応答に関与するサイトカインを阻害することが知られている遺伝子の完全または部分的な欠失であり得る。非限定的な例として、突然変異は、Ｂ８Ｒ（インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－ｇ）結合タンパク質）、Ｃ１２Ｌ（インターロイキン－１８（ＩＬ－１８）結合タンパク質）をコードする核酸の欠失であり得る。更なる非限定的な例では、突然変異は、自然免疫シグナル伝達における遺伝子の完全または部分的な欠失であり得る。非限定的な例として、突然変異は、（Ｂ１８Ｒ（Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）結合タンパク質）；Ａ５２Ｒ（核因子κＢ（ＮＦ－κＢ）阻害タンパク質）；Ｅ３Ｌ（プロテインキナーゼ（ＰＫＲ）阻害剤）；Ｃ４、Ｃ１６（ＳＴＩＮＧ経路阻害剤）をコードする核酸の欠失であり得る。更なる非限定的な例では、突然変異は、免疫応答の他の成分の阻害のためのタンパク質をコードする遺伝子の完全または部分的な欠失であり得る。非限定的な例として、突然変異は、Ｂ１５、Ｋ７、Ｂ１４、Ｎ１、Ｋ１、Ｍ２、Ａ４９、ＶＨ１、Ａ４６またはそれらの組み合わせをコードする核酸の完全または部分的な欠失であり得る。ウイルス骨格突然変異はまた、ワクシニア病原性遺伝子を他のポックスウイルスからの実質的に同等の機能の遺伝子で置換することを含み得る。本明細書で提供されるワクシニアウイルスは、ウイルスゲノムにおける更なる挿入、突然変異、欠失または置換を含む。ワクシニアウイルスは、ケモカイン受容体、ＴＲＩＦタンパク質もしくはその機能的ドメインの１つもしくはそれを超えるもの、またはレプチン、インターロイキン－２（ＩＬ２）、インターロイキン－１５／インターロイキン－１５Ｒａ（ＩＬ１５／ＩＬ１５Ｒａ）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、レプチン－インターロイキン融合タンパク質（例えば、実施例１にＬ２として示されるレプチン－ＩＬ２融合タンパク質）の１つもしくはそれを超えるものをコードする外因性核酸の１つもしくはそれを超える追加の挿入または部分的な挿入を含み得る。ケモカイン受容体の挿入などの修飾は、野生型および／または突然変異型ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２、ＣＣＬ２の挿入である。ワクシニアウイルスは、Ａ５２Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｋ７Ｒ、Ａ４６Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ｅ３Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｃ１６、Ｎ２Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＶＨ１およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアント、またはそれらの任意の組み合わせからの１つもしくはそれを超える遺伝子の１つもしくはそれを超える追加の欠失または部分的欠失をさらに含み得る。場合によっては、本明細書で提供されるワクシニアウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の完全または部分的欠失およびＣＣＲ２などのケモカイン受容体の挿入を含み得る。場合によっては、本明細書で提供されるワクシニアウイルスは、Ａ５２ＲまたはＴＫウイルス遺伝子の少なくとも１つの完全または部分的欠失、および融合タンパク質（例えば、サイトカインに融合した代謝調節タンパク質、例えばレプチン－ＩＬ２融合タンパク質）をコードする外因性核酸の挿入を含み得る。
追加のベクター

【0068】

本明細書に記載される核酸コンストラクトの送達のためのベクターは、トランスフェクションの物理的、化学的または生物学的手段を含み得る。いくつかの実施形態では、ベクターは、本明細書に記載されるタンパク質の送達を提供する。いくつかの実施形態では、ベクターは脂質ナノ粒子担体である。

【0069】

いくつかの実施形態では、物理的トランスフェクションは、エレクトロポレーション、熱支援遺伝子導入、バイオリスティック（または遺伝子銃）、マイクロインジェクション、レーザー支援トランスフェクション、超音波支援遺伝子導入、流体力学的遺伝子導入、マグネトフェクション、もしくは機械的マッサージ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、レーザー支援トランスフェクションは、光注入、レーザー影響応力波、光化学的内在化、または光吸収粒子を介した選択的細胞標的化を含む。いくつかの実施形態では、マイクロインジェクションは、単一の針またはアレイを含む。

【0070】

いくつかの実施形態では、化学的トランスフェクションは、リン酸カルシウム媒介トランスフェクション；ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）デキストラン媒介トランスフェクション；カチオン性脂質媒介トランスフェクション；リポソーム；ポリマー；他のナノ粒子、例えば金、シリカ、カーボンナノチューブ、水溶性フラーレン、シリコンナノワイヤ、もしくは量子ドット；またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0071】

いくつかの実施形態では、トランスフェクションは、カチオン性、イオン化可能、または他のタイプの脂質によって媒介される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される脂質は、テトラキス（８－メチルノニル）３，３’，３’’，３’’’－（（（メチルアザンジイル）ビス（プロパン－３，１－ジイル））ビス（アザントリイル））テトラプロピオネート（３０６Ｏ_ｉ１０）；デシル（２－（ジオクチルアンモニオ）エチル）ホスフェート（９Ａ１Ｐ９）；エチル５，５－ジ（（Ｚ）－ヘプタデカ－８－エン－１－イル）－１－（３－（ピロリジン－１－イル）プロピル）－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－２－カルボキシレート（Ａ２－イソ５－２ＤＣ１８）；（（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（ＡＬＣ－０３１５）；２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド（ＡＬＣ－０１５９）；（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｒ）－５－エチル－６－メチルヘプタン－２－イル）－１０，１３ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オール（β－シトステロール）；ビス（２－（ドデシルジスルファニル）エチル）３，３’－（（３－メチル－９－オキソ－１０－オキサ－１３，１４－ジチア－３，６－ジアザヘキサコシル）アザンジイル）ジプロピオネート（ＢＡＭＥ－Ｏ１６Ｂ）；２－（（（（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）オキシ）カルボニル）アミノ）－Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ－メチルエタン－１－アミニウムブロミド（ＢＨＥＭ－コレステロール）；１，１’－（（２－（４－（２－（（２－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）アザンジイル）ビス（ドデカン－２－オール）（Ｃ１２－２００）；３，６－ビス（４－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）ブチル）ピペラジン－２，５－ジオン（ｃＫＫ－Ｅ１２）；３β－［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル］コレステロール（ＤＣ－コレステロール）；（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル－４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）；１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－エタノールアミン（ＤＯＰＥ）；２，３－ジオレイルオキシ－Ｎ－［２－（スペルミンカルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）；１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）；１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）；１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン；ｅＰＣ、エチルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）；ヘキサ（オクタン－３－イル）９，９’，９’’，９’’’，９’’’’、９’’’’’－（（（（ベンゼン－１，３，５－トリカルボニル）イリス（アザンジイル））トリス（プロパン－３，１－ジイル））トリス（アザントリイル））ヘキサノナノエート（ＦＴＴ５）；ヘプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）（６－オキソ－６－（ウンデシルオキシ）ヘキシル）アミノ）オクタノエート（脂質Ｈ（ＳＭ－１０２））；（（（３，６－ジオキソピペラジン－２，５－ジイル）ビス（ブタン－４，１－ジイル））ビス（アザントリイル））テトラキス（エタン－２，１－ジイル）（９Ｚ，９’Ｚ，９’’Ｚ，９’’’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ，１２’’Ｚ，１２’’’Ｚ）－テトラキス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）（ＯＦ－Ｄｅｇ－Ｌｉｎ）；１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００（ＰＥＧ２０００－ＤＭＧ）；Ｎ^１，Ｎ^３，Ｎ^５－トリス（３－（ジドデシルアミノ）プロピル）ベンゼン－１，３，５－トリカルボキサミド（ＴＴ３）、ジオクタデシル－アミド分解－スペルミン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0072】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるリポソームは、荷電されているまたは中性である。いくつかの実施形態では、リポソームは単層または多層小胞である。いくつかの実施形態では、リポソームは逆性リポソームである。

【0073】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるポリマーは、カチオン性ペプチドおよびその誘導体、例えばポリオルニチンまたはポリリジンを含む。いくつかの実施形態では、カチオン性ポリマーは、ポリエチレンイミンまたはポリブレンを含む直鎖または分岐合成ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、カチオン性ポリマーは、キトサンまたはシクロデキストリンを含む多糖系送達化合物を含む。いくつかの実施形態では、カチオン性ポリマーは、コラーゲンまたはヒストンを含む天然ポリマーを含む。

【0074】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるカーボンナノチューブ（ＣＮＴ）は、単層カーボンナノチューブ（ＳＷＮＴ）、多層カーボンナノチューブ（ＭＷＮＴ）またはそれを超えるカーボンナノチューブを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＮＴは、円筒状に巻かれた同心シートを含む。

【0075】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される量子ドットは、カドミウム、セレン化物、ケイ素、ヒ化インジウム、硫化カドミウム（ａｄｍｉｕｍ ｓｕｌｐｈｉｄｅ）、またはそれらの任意の組み合わせなどの半導体材料で作製されたナノ粒子を含む。

【0076】

いくつかの実施形態では、生物学的トランスフェクションは、バクテリオファージ、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、赤血球ゴースト、バクトフェクション、エキソソーム、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
核酸

【0077】

本明細書に記載される融合コンストラクトをコードする核酸が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、核酸は融合タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、全長タンパク質、全長タンパク質の切断型、全長タンパク質の機能性ドメイン、全長タンパク質の断片、全長タンパク質のバリアント、またはそれらの任意の組み合わせを含む。全長タンパク質のバリアントは、いくつかの例では、アミノ酸置換（保存的または非保存的）、欠失、付加、修飾、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態では、核酸はケモカイン受容体をコードする。いくつかの実施形態では、核酸は、腫瘍壊死スーパーファミリーメンバーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）を含む三量体化融合タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、核酸は、リンホトキシンαリガンド、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ１３７リガンド、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮成長阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、その断片、またはそれらの任意の組み合わせをコードする。

【0078】

ＴＮＦＳＦ－Ｌおよびオリゴマー化ドメインを含む融合コンストラクトをコードする核酸が本明細書で提供される。含まれる例示的なＴＮＦＳＦ－Ｌとしては、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ１３７リガンド、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮成長阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、またはそれらの任意の組み合わせ由来の機能性ドメインが挙げられる。例示的なオリゴマー化ドメインとしては、限定されないが、サーファクタントタンパク質Ａ（ＳＰ－Ａ）、サーファクタントタンパク質Ｄ（ＳＰ－Ｄ）、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）、コングルチニン、ＣＬ－４３、ＣＬ－Ｌ１、ＣＬ－Ｋ１、ＣＬ－Ｐ１、またはＣＬ－４６由来のコレクチン領域が挙げられる。そのような特徴の組み合わせを含む例示的な融合コンストラクトの配列を表４（アミノ酸）および表５（核酸）に提供する。
表４．

【表4-1】

【表4-2】

表５．

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【0079】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される核酸をベクターと組み合わせる。いくつかの実施形態では、核酸はゲノムに組み込まれる。いくつかの実施形態では、ゲノムは、ウイルスゲノム、細菌ゲノム、または細胞のゲノムである。いくつかの実施形態では、細胞は哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は免疫細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は腫瘍細胞である。

【0080】

ここでは、融合タンパク質をコードする外因性核酸の１つもしくはそれを超えるものを含む修飾された腫瘍溶解性ウイルスが提供され、融合タンパク質は、全長タンパク質、全長タンパク質の切断型、全長タンパク質の機能性ドメイン、全長タンパク質の断片、全長タンパク質のバリアント、またはそれらの任意の組み合わせを含む。全長タンパク質のバリアントは、いくつかの例では、アミノ酸置換（保存的または非保存的）、欠失、付加、修飾、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体をコードし得る外因性核酸（本明細書では導入遺伝子とも呼ばれる）を含む修飾された腫瘍溶解性ウイルスが本明細書で提供される。場合によっては、外因性核酸は治療導入遺伝子であり得る。いくつかの実施形態では、腫瘍壊死スーパーファミリーメンバーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）を含む三量体化融合タンパク質をコードし得る外因性核酸を含む修飾された腫瘍溶解性ウイルスが本明細書で提供される。

【0081】

いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、リンホトキシンαリガンド、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ１３７リガンド、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮成長阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、その断片、またはそれらの任意の組み合わせをコードする外因性核酸を含む。これらのタンパク質の各々または任意の組み合わせは、骨格腫瘍溶解性ウイルスのより大きな治療上の利益に寄与し得る。

【0082】

いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスの修飾は、修飾を含まない他の点では同一の腫瘍溶解性ウイルスと比較して、ウイルスの腫瘍標的全身送達の有効性の少なくとも約１．１、１．２、１．５、１．８、２、２．２、２．５、２．８、３、３．２、３．５、３．８、４、４．２、４．５、４．８、５、５．２、５．５、５．８、６、６．２、６．５、６．８、７、７．２、７．５、７．８、８、８．２、８．５、８．８、９、９．２、９．５、９．８、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、５００、８００、１０００、２５００、５０００、１×１０^４、２．５×１０^４、５×１０^４、７．５×１０^４、１×１０^５、２．５×１０^５、５×１０^５、７．５×１０^５、１×１０^６、２．５×１０^６、５×１０^６、７．５×１０^６、１×１０^７、２．５×１０^７、５×１０^７、７．５×１０^７、１×１０^８、２．５×１０^８、５×１０^８、７．５×１０^８、１×１０^９、２．５×１０^９、５×１０^９、７．５×１０^９、１×１０^１０倍またはそれを超える増加をもたらし得る。いくつかの実施形態では、ウイルスの腫瘍標的全身送達の有効性は、腫瘍細胞に感染するウイルスを定量化することによって、必要に応じて体内の非腫瘍細胞に感染するウイルスとは対照的に測定することができる。いくつかの実施形態では、ウイルスの定量化は、組織切片中のウイルス粒子、または白血病、リンパ腫、もしくは骨髄腫の場合の血液スメアを染色することによって行うことができる。いくつかの実施形態では、定量化は、ウイルス、例えばルシフェラーゼおよび蛍光タンパク質によって発現されるように操作されたレポーター分子によって行うことができる。場合によっては、そのような定量化は、腫瘍中のウイルスゲノムを定量化することによって行うことができる。限定されるものではないが、ウイルスの腫瘍標的全身送達は、腫瘍細胞におけるウイルス感染の特定の下流効果、例えばウイルス感染またはリンパ球蓄積に応答したサイトカインを定量化することによって測定することができる。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍壊死スーパーファミリーメンバーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）領域を含む細胞外放出のために設計されたオリゴマー化融合タンパク質をコードし得る外因性核酸を含み、外因性核酸の存在は、外因性核酸を含まない他の点では同一の腫瘍溶解性ウイルスと比較して、ウイルスの腫瘍標的全身送達の有効性の約５倍～１０倍の増加をもたらし得る。

【0083】

いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、ＴＮＦＳＦ－Ｌ領域およびオリゴマー化領域を含む細胞外放出のために設計された三量体化融合タンパク質をコードする外因性核酸を含み、修飾された腫瘍溶解性ウイルスによるこの融合タンパク質の発現は、感染した腫瘍に対する免疫応答の増強をもたらし得る。その結果、腫瘍内の免疫抑制性微小環境を変化させることができ、前述の融合タンパク質をコードする核酸を含む点の他では同一のウイルスと比較して、修飾された腫瘍溶解性ウイルスの免疫療法活性の増強をもたらす。いくつかの実施形態では、免疫療法活性の増加は、少なくとも約１．１、１．１、１．２、１．５、１．８、２、２．２、２．５、２．８、３、３．２、３．５、３．８、４、４．２、４．５、４．８、５、５．２、５．５、５．８、６、６．２、６．５、６．８、７、７．２、７．５、７．８、８、８．２、８．５、８．８、９、９．２、９．５、９．８、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、５００、８００、１０００、２５００、５０００、１×１０^４、２．５×１０^４、５×１０^４、７．５×１０^４、２．５×１０^５、５×１０^５、１×１０^６倍またはそれを超える増加であり得る。限定されるものではないが、免疫療法活性の増加は、腫瘍におけるＢ細胞蓄積の増加、腫瘍関連免疫原に対するＴ細胞応答の増加、またはその両方によって反映され得る。Ｂ細胞蓄積は、例えば、腫瘍中のＢ細胞を定量化することによって測定することができ、Ｔ細胞免疫活性は、例えば、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイにおけるインターフェロン－γ（インターフェロン－γ）分泌によって測定することができる。

【0084】

ＴＮＦＳＦ－Ｌおよびオリゴマー化ドメインを含む融合コンストラクトをコードする外因性核酸配列を含む腫瘍溶解性ウイルスが本明細書で提供される。含まれる例示的なＴＮＦＳＦ－Ｌとしては、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ１３７リガンド、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮成長阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８リガンド（ＧＩＴＲＬ）、エクトジスプラシンＡ、それらの任意の組み合わせ由来の機能性ドメインが挙げられる。例示的なオリゴマー化ドメインとしては、限定されないが、サーファクタントタンパク質Ａ（ＳＰ－Ａ）、サーファクタントタンパク質Ｄ（ＳＰ－Ｄ）、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）、コングルチニン、ＣＬ－４３、ＣＬ－Ｌ１、ＣＬ－Ｋ１、ＣＬ－Ｐ１、またはＣＬ－４６由来のコレクチン領域が挙げられる。そのような特徴の組み合わせを含む例示的な融合コンストラクトを表４（アミノ酸）および表５（核酸）に提供する。
症状および投与

【0085】

本明細書では、癌の処置のための発現系に使用するための融合コンストラクトが提供される。いくつかの実施形態では、融合コンストラクトは、癌細胞内で発現される。いくつかの実施形態では、癌は血液癌（別名造血癌）または固形癌である。いくつかの実施形態では、癌は、限定されないが、黒色腫、肝細胞癌、乳癌、肺癌、腹膜癌、前立腺癌、膀胱癌、卵巣癌、白血病、リンパ腫、腎臓癌、膵臓癌、上皮癌、胃癌、結腸癌、十二指腸癌、膵臓腺癌、中皮腫、多形性膠芽腫、星状細胞腫、多発性骨髄腫、前立腺癌、肝細胞癌、胆管肉腫、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、腸型胃癌、子宮頚扁平上皮癌、骨肉腫、上皮卵巣癌、急性リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性腫瘍、または肉腫を含む。いくつかの実施形態では、癌は、膀胱癌、血液癌、骨癌、骨髄癌、脳癌、乳癌、結腸癌、食道癌、消化管癌、歯肉癌、頭部癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、上咽頭癌、頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、皮膚癌、胃癌、精巣癌、舌癌、または子宮癌を含む。

【0086】

いくつかの実施形態では、融合コンストラクトは免疫細胞において発現される。いくつかの実施形態では、細胞はリンパ系細胞または骨髄系細胞である。いくつかの実施形態では、リンパ系細胞は、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、またはＴ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞はエフェクター細胞である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は細胞傷害性Ｔ細胞またはＣＤ８＋細胞である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞はヘルパー細胞またはＣＤ４＋細胞である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は制御性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞はメモリーＴ細胞である。いくつかの実施形態では、骨髄系細胞は好中球、好酸球、または単球である。

【0087】

本明細書では、腫瘍細胞成長の低減のための発現系で使用するための融合コンストラクトが提供される。いくつかの実施形態では、腫瘍は液体腫瘍または固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、黒色腫、肝細胞癌、乳房腫瘍、肺腫瘍、腹膜腫瘍、前立腺腫瘍、膀胱腫瘍、卵巣腫瘍、白血病、リンパ腫、腎臓癌腫、膵臓癌腫、上皮癌腫、胃腫瘍、結腸癌腫、十二指腸腫瘍、膵臓腺癌、中皮腫、多形性膠芽腫、星状細胞腫、多発性骨髄腫、前立腺癌、肝細胞癌、胆管肉腫、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸腫瘍、腸型胃癌、子宮頚扁平上皮癌、骨肉腫、上皮卵巣癌、急性リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性腫瘍、または肉腫を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍は、膀胱腫瘍、血液腫瘍、骨腫瘍、骨髄腫瘍、脳腫瘍、乳房腫瘍、結腸腫瘍、食道腫瘍、消化管腫瘍、歯肉腫瘍、頭部腫瘍、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、肺腫瘍、上咽頭腫瘍、頸部腫瘍、卵巣腫瘍、前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、胃腫瘍、精巣腫瘍、舌腫瘍、または子宮腫瘍を含む。

【0088】

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に開示される１つまたはそれを超える修飾された腫瘍溶解性ウイルスの投与によって対象を処置する方法を提供する。「個体」または「対象」：本明細書で互換的に使用される場合、ヒトまたは非ヒト対象を指す。非ヒト対象の非限定的な例としては、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ブタ、家禽、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、甲殻類などが挙げられる。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

【0089】

いくつかの実施形態では、治療有効量の上記の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの修飾ウイルス、またはそれを含む医薬組成物を癌細胞に投与することを含む、癌細胞に毒性作用を生じさせる方法が本明細書で提供される。本開示はさらに、第２の癌細胞の成長および増殖のうちの少なくとも１つを阻害する方法であって、第１の癌細胞が上記ウイルスに感染するように、第１の癌細胞に上記の修飾された腫瘍溶解性ウイルスを投与することを含む方法を提供する。したがって、本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、治療有効量の本明細書に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、またはそれを含む医薬組成物を投与すると、すべての癌または腫瘍細胞が感染するわけではなく、直接感染することなく非感染細胞の増殖を阻害することができると考えられる。

【0090】

いくつかの実施形態では、本開示の方法および組成物を使用して、腫瘍溶解を誘導し、細胞を死滅させ、増殖を阻害し、転移を阻害し、腫瘍サイズを減少させ、そうでなければ腫瘍細胞の悪性表現型を逆転または減少させるために、癌細胞または腫瘍を、治療有効用量の本明細書に記載される例示的な腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含む医薬組成物と接触させることができる。いくつかの実施形態では、有効量の本明細書に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはその医薬組成物などの本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍溶解、癌細胞の破壊もしくは溶解または癌細胞の増殖もしくはサイズの阻害もしくは低減を誘導するのに十分な量を含み得る。癌細胞の成長を低下させることは、例えば、細胞死、または細胞を含む腫瘍のより遅い複製速度もしくは成長速度の低下、または癌細胞を含む対象の生存期間の延長によって現れ得る。

【0091】

いくつかの実施形態では、癌または腫瘍を有する対象を処置する方法であって、有効量の上記の核酸、融合タンパク質または修飾ウイルスを対象に投与することを含む方法が提供される。このような方法における有効量には、癌の成長速度もしくは広がりを低下させる量、または対象の生存期間を延長させる量が含まれ得る。本開示は、腫瘍の成長を低減させる方法を提供し、この方法は、有効量の上記の核酸、融合タンパク質または修飾された腫瘍溶解性ウイルスを腫瘍に投与することを含み得る。いくつかの実施形態では、有効量の核酸、融合タンパク質、もしくは修飾ウイルス、またはその医薬組成物は、腫瘍の成長またはサイズの遅延、阻害または低減を誘導するのに十分な量を含むことができ、腫瘍の根絶を含み得る。腫瘍の成長の低下は、例えば、腫瘍を含む対象の成長速度の低下または生存期間の延長によって現れ得る。

【0092】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される核酸は、約０．０１μｇ／用量～約１ｇ／用量または約０．５μｇ／用量～約５００ｍｇ／用量の量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、核酸は、約０．０１μｇ／用量、約０．０５μｇ／用量、約０．１μｇ／用量、約０．５μｇ／用量、約１μｇ／用量、約５μｇ／用量、約１０μｇ／用量、約５０μｇ／用量、約１００μｇ／用量、約５００μｇ／用量、約１ｍｇ／用量、約５ｍｇ／用量、約１０ｍｇ／用量、約５０ｍｇ／用量、約１００ｍｇ／用量、約５００ｍｇ／用量、約１ｇ／用量で対象に投与される。

【0093】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される細胞は、約０．０１μｇ／用量～約１ｇ／用量または約０．５μｇ／用量～約５００ｍｇ／用量の量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、細胞は、約０．０１μｇ／用量、約０．０５μｇ／用量、約０．１μｇ／用量、約０．５μｇ／用量、約１μｇ／用量、約５μｇ／用量、約１０μｇ／用量、約５０μｇ／用量、約１００μｇ／用量、約５００μｇ／用量、約１ｍｇ／用量、約５ｍｇ／用量、約１０ｍｇ／用量、約５０ｍｇ／用量、約１００ｍｇ／用量、約５００ｍｇ／用量、約１ｇ／用量で対象に投与される。

【0094】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される融合タンパク質は、約０．０１μｇ／用量～約１ｇ／用量または約０．５μｇ／用量～約５００ｍｇ／用量の量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、約０．０１μｇ／用量、約０．０５μｇ／用量、約０．１μｇ／用量、約０．５μｇ／用量、約１μｇ／用量、約５μｇ／用量、約１０μｇ／用量、約５０μｇ／用量、約１００μｇ／用量、約５００μｇ／用量、約１ｍｇ／用量、約５ｍｇ／用量、約１０ｍｇ／用量、約５０ｍｇ／用量、約１００ｍｇ／用量、約５００ｍｇ／用量、約１ｇ／用量で対象に投与される。

【0095】

いくつかの実施形態では、対象に投与される本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ウイルスまたはワクシニアウイルスの量は、約１０^３～１０^１２感染性ウイルス粒子またはプラーク形成単位（ＰＦＵ）、または約１０^５～１０^１０ＰＦＵ、または約１０^５～１０^８ＰＦＵ、または約１０^８～１０^１０ＰＦＵである。いくつかの実施形態では、対象に投与される本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ウイルスまたはワクシニアウイルスの量は、約１０^３～１０^１２ウイルス粒子またはプラーク形成単位（ＰＦＵ）、または約１０^５～１０^１０ＰＦＵ、または約１０^５～１０^８ＰＦＵ、または約１０^８～１０^１０ＰＦＵである。いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、約１０^３ＰＦＵ／用量～約１０^４ＰＦＵ／用量、約１０^４ＰＦＵ／用量～約１０^５ＰＦＵ／用量、約１０^５ＰＦＵ／用量～約１０^６ＰＦＵ／用量、約１０^７ＰＦＵ／用量～約１０^８ＰＦＵ／用量、約１０^９ＰＦＵ／用量～約１０^１０ＰＦＵ／用量、約１０^１０ＰＦＵ／用量～約１０^１１ＰＦＵ／用量、約１０^１１ＰＦＵ／用量～約１０^１２ＰＦＵ／用量、約１０^１２ＰＦＵ／用量～約１０^１３ＰＦＵ／用量、約１０^１３ＰＦＵ／用量～約１０^１４ＰＦＵ／用量、または約１０^１４ＰＦＵ／用量～約１０^１５ＰＦＵ／用量を含み得る用量で投与される。いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、約２×１０^３ＰＦＵ／用量、３×１０^３ＰＦＵ／用量、４×１０^３ＰＦＵ／用量、５×１０^３ＰＦＵ／用量、６×１０^３ＰＦＵ／用量、７×１０^３ＰＦＵ／用量、８×１０^３ＰＦＵ／用量、９×１０^３ＰＦＵ／用量、約１０^４ＰＦＵ／用量、約２×１０^４ＰＦＵ／用量、約３×１０^４ＰＦＵ／用量、約４×１０^４ＰＦＵ／用量、約５×１０^４ＰＦＵ／用量、約６×１０^４ＰＦＵ／用量、約７×１０^４ＰＦＵ／用量、約８×１０^４ＰＦＵ／用量、約９×１０^４ＰＦＵ／用量、約１０^５ＰＦＵ／用量、２×１０^５ＰＦＵ／用量、約３×１０^５ＰＦＵ／用量、約４×１０^５ＰＦＵ／用量、約５×１０^５ＰＦＵ／用量、約６×１０^５ＰＦＵ／用量、約７×１０^５ＰＦＵ／用量、約８×１０^５ＰＦＵ／用量、約９×１０^５ＰＦＵ／用量、約１０^６ＰＦＵ／用量、２×１０^６ＰＦＵ／用量、約３×１０^６ＰＦＵ／用量、約４×１０^６ＰＦＵ／用量、約５×１０^６ＰＦＵ／用量、約６×１０^６ＰＦＵ／用量、約７×１０^６ＰＦＵ／用量、約８×１０^６ＰＦＵ／用量、約９×１０^６ＰＦＵ／用量、約１０^７ＰＦＵ／用量、２×１０^７ＰＦＵ／用量、約３×１０^７ＰＦＵ／用量、約４×１０^７ＰＦＵ／用量、約５×１０^７ＰＦＵ／用量、約６×１０^７ＰＦＵ／用量、約７×１０^７ＰＦＵ／用量、約８×１０^７ＰＦＵ／用量、約９×１０^７ＰＦＵ／用量、約１０^８ＰＦＵ／用量、２×１０^８ＰＦＵ／用量、約３×１０^８ＰＦＵ／用量、約４×１０^８ＰＦＵ／用量、約５×１０^８ＰＦＵ／用量、約６×１０^８ＰＦＵ／用量、約７×１０^８ＰＦＵ／用量、約８×１０^８ＰＦＵ／用量、約９×１０^８ＰＦＵ／用量、約１０^９ＰＦＵ／用量、２×１０^９ＰＦＵ／用量、約３×１０^９ＰＦＵ／用量、約４×１０^９ＰＦＵ／用量、約５×１０^９ＰＦＵ／用量、約６×１０^９ＰＦＵ／用量、約７×１０^９ＰＦＵ／用量、約８×１０^９ＰＦＵ／用量、約９×１０^９ＰＦＵ／用量、約１０^１０ＰＦＵ／用量、２×１０^１０ＰＦＵ／用量、約３×１０^１０ＰＦＵ／用量、約４×１０^１０ＰＦＵ／用量、約５×１０^１０ＰＦＵ／用量、約６×１０^１０ＰＦＵ／用量、約７×１０^１０ＰＦＵ／用量、約８×１０^１０ＰＦＵ／用量、約９×１０^１０ＰＦＵ／用量、約１０^１０ＰＦＵ／用量、２×１０^１０ＰＦＵ／用量、約３×１０^１０ＰＦＵ／用量、約４×１０^１０ＰＦＵ／用量、約５×１０^１０ＰＦＵ／用量、約６×１０^１０ＰＦＵ／用量、約７×１０^１０ＰＦＵ／用量、約８×１０^１０ＰＦＵ／用量、約９×１０^１０ＰＦＵ／用量、約１０^１１ＰＦＵ／用量、２×１０^１１ＰＦＵ／用量、約３×１０^１１ＰＦＵ／用量、約４×１０^１１ＰＦＵ／用量、約５×１０^１１ＰＦＵ／用量、約６×１０^１１ＰＦＵ／用量、約７×１０^１１ＰＦＵ／用量、約８×１０^１１ＰＦＵ／用量、約９×１０^１１ＰＦＵ／用量、約１０^１２ＰＦＵ／用量、約１０^１２ＰＦＵ／用量～約１０^１３ＰＦＵ／用量、約１０^１３ＰＦＵ／用量～約１０^１４ＰＦＵ／用量、または約１０^１４ＰＦＵ／用量～約１０^１５ＰＦＵ／用量を含み得る用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、５×１０^９ＰＦＵ／用量を含み得る用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、５×１０^９ＰＦＵ／用量までを含み得る用量で投与され得る。

【0096】

いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、約１０^３ウイルス粒子／用量～約１０^４ウイルス粒子／用量、約１０^４ウイルス粒子／用量～約１０^５ウイルス粒子／用量、約１０^５ウイルス粒子／用量～約１０^６ウイルス粒子／用量、約１０^７ウイルス粒子／用量～約１０^８ウイルス粒子／用量、約１０^９ウイルス粒子／用量～約１０^１０ウイルス粒子／用量、約１０^１０ウイルス粒子／用量～約１０^１１ウイルス粒子／用量、約１０^１１ウイルス粒子／用量～約１０^１２ウイルス粒子／用量、約１０^１２ウイルス粒子／用量～約１０^１３ウイルス粒子／用量、約１０^１３ウイルス粒子／用量～約１０^１４ウイルス粒子／用量、または約１０^１４ウイルス粒子／用量～約１０^１５ウイルス粒子／用量を含み得る用量で投与され得る。

【0097】

いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、約１０^３ＰＦＵ／ｋｇ～約１０^４ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^４ＰＦＵ／ｋｇ～約１０^５ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^５ＰＦＵ／ｋｇ～約１０^６ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^７ＰＦＵ／ｋｇ～約１０^８ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^９ＰＦＵ／ｋｇ～約１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ～約１０^１１ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^１１ＰＦＵ／ｋｇ～約１０^１２ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^１２ＰＦＵ／ｋｇ～約１０^１３ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^１３ＰＦＵ／ｋｇ～約１０^１４ＰＦＵ／ｋｇ、または約１０^１４ＰＦＵ／ｋｇ～約１０^１５ＰＦＵ／ｋｇを含み得る用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、約２×１０^３ＰＦＵ／ｋｇ、３×１０^３ＰＦＵ／ｋｇ、４×１０^３ＰＦＵ／ｋｇ、５×１０^３ＰＦＵ／ｋｇ、６×１０^３ＰＦＵ／ｋｇ、７×１０^３ＰＦＵ／ｋｇ、８×１０^３ＰＦＵ／ｋｇ、９×１０^３ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^４ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０^４ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０^４ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０^４ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０^４ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０^４ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０^４ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０^４ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０^４ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^５ＰＦＵ／ｋｇ、２×１０^５ＰＦＵ／ｋｇ、３×１０^５ＰＦＵ／ｋｇ、４×１０^５ＰＦＵ／ｋｇ、５×１０^５ＰＦＵ／ｋｇ、６×１０^５ＰＦＵ／ｋｇ、７×１０^５ＰＦＵ／ｋｇ、８×１０^５ＰＦＵ／ｋｇ、９×１０^５ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^６ＰＦＵ／ｋｇ、２×１０^６ＰＦＵ／ｋｇ、３×１０^６ＰＦＵ／ｋｇ、４×１０^６ＰＦＵ／ｋｇ、５×１０^６ＰＦＵ／ｋｇ、６×１０^６ＰＦＵ／ｋｇ、７×１０^６ＰＦＵ／ｋｇ、８×１０^６ＰＦＵ／ｋｇ、９×１０^６ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^７ＰＦＵ／ｋｇ、２×１０^７ＰＦＵ／ｋｇ、３×１０^７ＰＦＵ／ｋｇ、４×１０^７ＰＦＵ／ｋｇ、５×１０^７ＰＦＵ／ｋｇ、６×１０^７ＰＦＵ／ｋｇ、７×１０^７ＰＦＵ／ｋｇ、８×１０^７ＰＦＵ／ｋｇ、９×１０^７ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^８ＰＦＵ／ｋｇ、２×１０^８ＰＦＵ／ｋｇ、３×１０^８ＰＦＵ／ｋｇ、４×１０^８ＰＦＵ／ｋｇ、５×１０^８ＰＦＵ／ｋｇ、６×１０^８ＰＦＵ／ｋｇ、７×１０^８ＰＦＵ／ｋｇ、８×１０^８ＰＦＵ／ｋｇ、９×１０^８ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^９ＰＦＵ／ｋｇ、２×１０^９ＰＦＵ／ｋｇ、３×１０^９ＰＦＵ／ｋｇ、４×１０^９ＰＦＵ／ｋｇ、５×１０^９ＰＦＵ／ｋｇ、６×１０^９ＰＦＵ／ｋｇ、７×１０^９ＰＦＵ／ｋｇ、８×１０^９ＰＦＵ／ｋｇ、９×１０^９ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、２×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、３×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、４×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、５×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、６×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、７×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、８×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、９×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、２×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、３×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、４×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、５×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、６×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、７×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、８×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、９×１０^１０ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^１１ＰＦＵ／ｋｇ、２×１０^１１ＰＦＵ／ｋｇ、３×１０^１１ＰＦＵ／ｋｇ、４×１０^１１ＰＦＵ／ｋｇ、５×１０^１１ＰＦＵ／ｋｇ、６×１０^１１ＰＦＵ／ｋｇ、７×１０^１１ＰＦＵ／ｋｇ、８×１０^１１ＰＦＵ／ｋｇ、９×１０^１１ＰＦＵ／ｋｇ、または約１０^１２ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^１２ＰＦＵ／ｋｇ～約１０^１３ＰＦＵ／ｋｇ、約１０^１３ＰＦＵ／ｋｇ～約１０^１４ＰＦＵ／ｋｇ、または約１０^１４ＰＦＵ／ｋｇ～約１０^１５ＰＦＵ／ｋｇを含み得る用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、５×１０^９ＰＦＵ／ｋｇを含み得る用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、５×１０^９ＰＦＵ／ｋｇまでを含み得る用量で投与され得る。

【0098】

いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、約１０^３ウイルス粒子／ｋｇ～約１０^４ウイルス粒子／ｋｇ、約１０^４ウイルス粒子／ｋｇ～約１０^５ウイルス粒子／ｋｇ、約１０^５ウイルス粒子／ｋｇ～約１０^６ウイルス粒子／ｋｇ、約１０^７ウイルス粒子／ｋｇ～約１０^８ウイルス粒子／ｋｇ、約１０^９ウイルス粒子／ｋｇ～約１０^１０ウイルス粒子／ｋｇ、約１０^１０ウイルス粒子／ｋｇ～約１０^１１ウイルス粒子／ｋｇ、約１０^１１ウイルス粒子／ｋｇ～約１０^１２ウイルス粒子／ｋｇ、約１０^１２ウイルス粒子／ｋｇ～約１０^１３ウイルス粒子／ｋｇ、約１０^１３ウイルス粒子／ｋｇ～約１０^１４ウイルス粒子／ｋｇ、または約１０^１４ウイルス粒子／ｋｇ～約１０^１５ウイルス粒子／ｋｇを含み得る用量で投与され得る。

【0099】

本明細書に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの液体剤形は、いくつかの実施形態では、約１０^３ＰＦＵ／ｍＬ～約１０^４ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^４ＰＦＵ／ｍＬ～約１０^５ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^５ＰＦＵ／ｍＬ～約１０^６ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^７ＰＦＵ／ｍＬ～約１０^８ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^９ＰＦＵ／ｍＬ～約１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ～約１０^１１ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^１１ＰＦＵ／ｍＬ～約１０^１２ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^１２ＰＦＵ／ｍＬ～約１０^１３ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^１３ＰＦＵ／ｍＬ～約１０^１４ＰＦＵ／ｍＬまたは約１０^１４ＰＦＵ／ｍＬ～約１０^１５ＰＦＵ／ｍＬのウイルス量を含み得る。いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、約２×１０^３ＰＦＵ／ｍＬ、３×１０^３ＰＦＵ／ｍＬ、４×１０^３ＰＦＵ／ｍＬ、５×１０^３ＰＦＵ／ｍＬ、６×１０^３ＰＦＵ／ｍＬ、７×１０^３ＰＦＵ／ｍＬ、８×１０^３ＰＦＵ／ｍＬ、９×１０^３ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^４ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０^４ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０^４ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０^４ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０^４ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０^４ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０^４ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０^４ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０^４ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^５ＰＦＵ／ｍＬ、２×１０^５ＰＦＵ／ｍＬ、３×１０^５ＰＦＵ／ｍＬ、４×１０^５ＰＦＵ／ｍＬ、５×１０^５ＰＦＵ／ｍＬ、６×１０^５ＰＦＵ／ｍＬ、７×１０^５ＰＦＵ／ｍＬ、８×１０^５ＰＦＵ／ｍＬ、９×１０^５ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^６ＰＦＵ／ｍＬ、２×１０^６ＰＦＵ／ｍＬ、３×１０^６ＰＦＵ／ｍＬ、４×１０^６ＰＦＵ／ｍＬ、５×１０^６ＰＦＵ／ｍＬ、６×１０^６ＰＦＵ／ｍＬ、７×１０^６ＰＦＵ／ｍＬ、８×１０^６ＰＦＵ／ｍＬ、９×１０^６ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^７ＰＦＵ／ｍＬ、２×１０^７ＰＦＵ／ｍＬ、３×１０^７ＰＦＵ／ｍＬ、４×１０^７ＰＦＵ／ｍＬ、５×１０^７ＰＦＵ／ｍＬ、６×１０^７ＰＦＵ／ｍＬ、７×１０^７ＰＦＵ／ｍＬ、８×１０^７ＰＦＵ／ｍＬ、９×１０^７ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^８ＰＦＵ／ｍＬ、２×１０^８ＰＦＵ／ｍＬ、３×１０^８ＰＦＵ／ｍＬ、４×１０^８ＰＦＵ／ｍＬ、５×１０^８ＰＦＵ／ｍＬ、６×１０^８ＰＦＵ／ｍＬ、７×１０^８ＰＦＵ／ｍＬ、８×１０^８ＰＦＵ／ｍＬ、９×１０^８ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^９ＰＦＵ／ｍＬ、２×１０^９ＰＦＵ／ｍＬ、３×１０^９ＰＦＵ／ｍＬ、４×１０^９ＰＦＵ／ｍＬ、５×１０^９ＰＦＵ／ｍＬ、６×１０^９ＰＦＵ／ｍＬ、７×１０^９ＰＦＵ／ｍＬ、８×１０^９ＰＦＵ／ｍＬ、９×１０^９ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、２×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、３×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、４×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、５×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、６×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、７×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、８×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、９×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、２×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、３×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、４×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、５×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、６×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、７×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、８×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、９×１０^１０ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^１１ＰＦＵ／ｍＬ、２×１０^１１ＰＦＵ／ｍＬ、３×１０^１１ＰＦＵ／ｍＬ、４×１０^１１ＰＦＵ／ｍＬ、５×１０^１１ＰＦＵ／ｍＬ、６×１０^１１ＰＦＵ／ｍＬ、７×１０^１１ＰＦＵ／ｍＬ、８×１０^１１ＰＦＵ／ｍＬ、９×１０^１１ＰＦＵ／ｍＬ、または約１０^１２ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^１２ＰＦＵ／ｍＬ～約１０^１３ＰＦＵ／ｍＬ、約１０^１３ＰＦＵ／ｍＬ～約１０^１４ＰＦＵ／ｍＬ、または約１０^１４ＰＦＵ／ｍＬ～約１０^１５ＰＦＵ／ｍＬを含み得る用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、５×１０^９ＰＦＵ／ｍＬを含み得る用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、５×１０^９ＰＦＵ／ｍＬまでを含み得る用量で投与され得る。

【0100】

いくつかの例では、修飾腫瘍溶解性ウイルスが注射によって投与される場合、投与量は、１回の注射につき約１０^３個のウイルス粒子、１回の注射につき１０^４個のウイルス粒子、１回の注射につき１０^５個のウイルス粒子、１回の注射につき１０^６個のウイルス粒子、１回の注射につき１０^７個のウイルス粒子、１回の注射につき１０^８個のウイルス粒子、１回の注射につき１０^９個のウイルス粒子、１回の注射につき１０^１０個のウイルス粒子、１回の注射につき１０^１１個のウイルス粒子、１回の注射につき１０^１２個のウイルス粒子、１回の注射につき２×１０^１２個のウイルス粒子、１回の注射につき１０^１３個のウイルス粒子、１回の注射につき１０^１４個のウイルス粒子、または１回の注射につき１０^１５個のウイルス粒子を含み得る。更なる例では、修飾腫瘍溶解性ウイルスが注射によって投与される場合、投与量は、１回の注射につき約１０^３個の感染性ウイルス粒子、１回の注射につき１０^４個の感染性ウイルス粒子、１回の注射につき１０^５個の感染性ウイルス粒子、１回の注射につき１０^６個の感染性ウイルス粒子、１回の注射につき１０^７個の感染性ウイルス粒子、１回の注射につき１０^８個の感染性ウイルス粒子、１回の注射につき１０^９個の感染性ウイルス粒子、１回の注射につき１０^１０個の感染性ウイルス粒子、１回の注射につき１０^１１個の感染性ウイルス粒子、１回の注射につき１０^１２個の感染性ウイルス粒子、１回の注射につき２×１０^１２個の感染性ウイルス粒子、１回の注射につき１０^１３個の感染性ウイルス粒子、１回の注射につき１０^１４個の感染性ウイルス粒子、または１回の感染当たり１０^１５個の感染性ウイルス粒子を含み得る。いくつかの実施形態では、ウイルスは、腫瘍中の細胞の少なくとも約２０％、腫瘍中の細胞の少なくとも約３０％、腫瘍中の細胞の少なくとも約４０％、腫瘍中の細胞の少なくとも約５０％、腫瘍中の細胞の少なくとも約６０％、腫瘍中の細胞の少なくとも約７０％、腫瘍中の細胞の少なくとも約８０％、または腫瘍中の細胞の少なくとも約９０％において腫瘍溶解を誘導するのに十分な量で投与することができる。

【0101】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物の単回用量は、１、２、５、１０、１５、２０または２４時間にわたって対象または腫瘍に投与される量を指すことができる。いくつかの実施形態では、用量は、経時的にまたは別個の注射によって広げることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物の複数回用量（例えば、２、３、４、５、６またはそれを超える用量）を対象に投与することができ、例えば、第２の処置は、第１の処置の１、２、３、４、５、６、７日以内または１、２、３、４、５、６、７数週間以内に行うことができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物の複数回用量を、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日またはそれを超える期間にわたって対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物または本明細書に記載される医薬組成物は、約１週間～約２週間、約２週間～約３週間、約３週間～約４週間、約４週間～約５週間、約６週間～約７週間、約７週間～約８週間、約８週間～約９週間、約９週間～約１０週間、約１０週間～約１１週間、約１１週間～約１２週間、約１２週間～約２４週間、約２４週間～約４８週間、約４８週間もしくは約５２週間、またはそれを超える期間にわたって投与することができる。本明細書に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物の投与頻度は、ある場合には、１日１回、１日２回、週に１回、３週間に１回、４週間に１回（または月に１回）、８週間に１回（または２ヶ月に１回）、１２週間に１回（または３ヶ月に１回）、または２４週間に１回（６ヶ月に１回）であり得る。本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物は、独立して、第１の期間の初期用量、第２の期間の中間用量、および第３の期間の高用量で投与することができる。いくつかの実施形態では、初期用量は中間用量よりも低く、中間用量は高用量よりも低い。いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３の期間は、独立して、約１週間～約２週間、約２週間～約３週間、約３週間～約４週間、約４週間～約５週間、約６週間～約７週間、約７週間～約８週間、約８週間～約９週間、約９週間～約１０週間、約１０週間～約１１週間、約１１週間～約１２週間、約１２週間～約２４週間、約２４週間～約４８週間、約４８週間もしくは約５２週間、またはそれを超える。

【0102】

医薬組成物の１つまたはそれを超える用量は、処置サイクルを含む。処置サイクルにおける２つまたはそれを超える用量は、医薬組成物が投与されない投与間隔によって隔てられ得る。１つまたはそれを超える処置サイクルは、一連の処置を含む。一連の処置における２つまたはそれを超える処置サイクルは、処置が提供されない処置間隔によって隔てられ得る。

【0103】

本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物、細胞、融合タンパク質、腫瘍溶解性ウイルス、またはワクシニアウイルスの１つまたはそれを超える用量は、処置サイクルを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物、細胞、融合タンパク質、腫瘍溶解性ウイルスまたはワクシニアウイルスの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える用量は、処置サイクルを含む。いくつかの実施形態では、用量は、約１分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約１日、またはそれを超える期間にわたって投与される。いくつかの実施形態では、処置サイクルにおけるすべての用量は、用量量および持続期間においてほぼ同じである。いくつかの実施形態では、処置サイクルにおける各用量は、任意の他の用量から独立している。いくつかの実施形態では、処置サイクルにおける２つまたはそれを超える用量は、用量が投与されない投与間隔によって隔てられる。いくつかの実施形態では、投与間隔は、約１分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約１日、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１年、またはそれを超える期間である。いくつかの実施形態では、すべての投与間隔はほぼ同じである。いくつかの実施形態では、各投与間隔は、任意の他の投与間隔から独立している。

【0104】

本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、１つまたはそれを超える処置サイクルは、一連の処置を含む。いくつかの実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれを超える処置サイクルは、一連の処置を含む。本明細書に記載される処置サイクルは、持続期間が１～２４時間、１～６日、１～４週間、１～１２ヶ月またはそれを超える。いくつかの実施形態では、処置サイクルは、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、１０時間、１５時間、２０時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、またはそれを超える。いくつかの実施形態では、すべての処置サイクルはほぼ同じである。いくつかの実施形態では、各処置サイクルは、任意の他の処置サイクルから独立している。いくつかの実施形態では、２つまたはそれを超える処置サイクルは、処置が投与されない処置間隔によって隔てられる。いくつかの実施形態では、処置間隔は、１～６日、１～４週間、１～１２ヶ月、１～５年、またはそれを超える。いくつかの実施形態では、処置間隔は、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、またはそれを超える。いくつかの実施形態では、すべての処置間隔はほぼ同じである。いくつかの実施形態では、各処置間隔は、任意の他の処置間隔から独立している。

【0105】

本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物、細胞、融合タンパク質、腫瘍溶解性ウイルスまたはワクシニアウイルスによる１回またはそれを超える処置は、本明細書に記載される方法を含む。いくつかの実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８またはそれを超える処置のコースが方法を含む。いくつかの実施形態では、処置のコースは、１～６日、１～４週間、１～１２ヶ月、１～５年、またはそれを超える。いくつかの実施形態では、処置のコースは、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、またはそれを超える。いくつかの実施形態では、すべての処置のコースは同じである。いくつかの実施形態では、各処置のコースは、任意の他の処置のコースから独立している。いくつかの実施形態では、処置の各コースの後に、処置が投与されないコース間隔が続く。いくつかの実施形態では、コース間隔は、１～６日、１～４週間、１～１２ヶ月、１～５年、またはそれを超える。いくつかの実施形態では、コース間隔は、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、またはそれを超える。いくつかの実施形態では、コース間隔の持続期間は、疾患の発生率または再発に依存する。いくつかの実施形態では、すべてのコース間隔はほぼ同じである。いくつかの実施形態では、各コース間隔は、任意の他のコース間隔から独立している。

【0106】

いくつかの例では、対象は、本明細書に記載される任意の処置方法に従って、本明細書に記載される修飾された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含む医薬組成物の投与前、投与と同時および投与後に、炭水化物低減食、例えばケトン食を与えられ得る。いくつかの実施形態では、対象は、１日当たり５００グラム未満の炭水化物、１日当たり４５０グラム未満の炭水化物、１日当たり４５０グラム未満の炭水化物、１日当たり４００グラム未満の炭水化物、１日当たり３５０グラム未満の炭水化物、１日当たり３００グラム未満の炭水化物、１日当たり２５０グラム未満の炭水化物、１日当たり２００グラム未満の炭水化物、１日当たり１５０グラム未満の炭水化物、１日当たり１００グラム未満の炭水化物、１日当たり９０グラム未満の炭水化物、１日当たり８０グラム未満の炭水化物、１日当たり７０グラム未満の炭水化物、１日当たり６０グラム未満の炭水化物、１日当たり５０グラム未満の炭水化物、１日当たり４０グラム未満の炭水化物、１日当たり３０グラム未満の炭水化物、１日当たり２０グラム未満の炭水化物、１日当たり１０グラム未満の炭水化物を消費することを含み得る食事に置かれる。

【0107】

本明細書に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはこれを含む医薬組成物などの本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルスを癌または腫瘍細胞に送達するための例示的な方法は、腫瘍内注射によるものであり得る。しかしながら、代替の投与方法も使用することができる。投与経路は、腫瘍の位置および性質によって異なり得る。いくつかの実施形態では、投与は局所投与または全身投与であり得る。いくつかの実施形態では、投与経路は、静脈内、局所（例えば、腫瘍、特に腫瘍の脈管構造または隣接脈管構造に近接して）、腹腔内、非経口、筋肉内、皮下、動脈内、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、髄腔内、気管内、膀胱内、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、皮内、吸入、灌流、鼻腔内、尿道内、膣内、洗浄、経口、皮内、直腸、またはそれらの任意の組み合わせである。腫瘍溶解性ウイルスの注射可能な用量は、ボーラス注射または低速注入として投与することができる。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、患者に埋め込まれた供給源から患者に投与することができる。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスの投与は、選択された期間にわたる連続注入によって行うことができる。いくつかの例では、本明細書に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはこれを含む医薬組成物を、約１５分、約３０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約７５分、約９０分、約１００分、または約１２０分またはそれを超える期間にわたる注入によって治療有効用量で投与することができる。本開示の腫瘍溶解性ウイルスまたは医薬組成物は、総投与量が約１ｍＬ～約５ｍＬ、約５ｍＬ～１０ｍＬ、約１５ｍＬ～約２０ｍＬ、約２５ｍＬ～約３０ｍＬ、約３０ｍＬ～約５０ｍＬ、約５０ｍＬ～約１００ｍＬ、約１００ｍＬ～１５０ｍＬ、約１５０ｍＬ～約２００ｍＬ、約２００ｍＬ～約２５０ｍＬ、約２５０ｍＬ～約３００ｍＬ、約３００ｍＬ～約３５０ｍＬ、約３５０ｍＬ～約４００ｍＬ、約４００ｍＬ～約４５０ｍＬ、約４５０ｍＬ～５００ｍＬ、約５００ｍＬ～７５０ｍＬまたは約７５０ｍＬ～１０００ｍＬである液体投与量として投与することができる。
医薬組成物

【0108】

融合コンストラクトまたはそのようなコンストラクトをコードする核酸と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物が本明細書で提供される。本明細書で使用される「薬学的に許容され得る」は、活性成分の生物学的活性の有効性を妨げない、および／または投与される患者に毒性でない任意の担体を含む。薬学的に許容され得る担体の非限定的な例としては、緩衝剤、水、エマルジョン、様々な種類の湿潤剤、滅菌溶液、保存剤、安定剤、圧縮剤、潤滑剤、キレート剤、分散増強剤、崩壊剤、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、緩衝液は、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、エマルジョンは、水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョン、油中水型エマルジョン（Ｗ／Ｏ）、または多重エマルジョンである。薬学的に許容され得る担体の更なる非限定的な例としては、ゲル、生体吸着性ポリマー、融合コンストラクトもしくは核酸を含む埋め込み要素、または任意の他の適切なビヒクル、送達もしくは分注手段もしくは材料が挙げられ得る。いくつかの実施形態では、生体吸着性ポリマーは、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリジオキソン（ＰＤＯ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ゲルは、タンパク質、多糖、セルロース誘導体、合成ポリマー、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、ゼラチン、コラーゲン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、多糖は、ペクチン、ゲランガム（ｇｅｌｌｕｍ ｇｕｍ）、アルギン酸、寒天、キサンチン、ケツメイシ（ｃａｓｓｉａ ｔｏｒａ）、トラガカント、カラギーナン、グアーガム、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、セルロース誘導体は、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、合成ポリマーは、カルボマー、ポリアクリルアミド、ポロキサマー、ポリビニルアルコール、ポリエチレンもしくはそのコポリマー、またはそれらの任意の組み合わせを含む。そのような担体は、従来の方法によって製剤化することができ、有効量で対象に投与することができる。

【0109】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、水性溶液、油性溶液、グリセロール中分散液、液体ポリエチレングリコール、固体、吸入可能な形態、鼻腔内形態、リポソーム、ナノ粒子、微粒子、ポリマー、またはそれらの任意の組み合わせとして製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、安定剤および緩衝剤を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、滅菌水または緩衝液などの可溶化剤を含み得る。
製造方法

【0110】

いくつかの実施形態では、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、細胞株にパッケージングされる。いくつかの実施形態では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、適切な宿主細胞、例えばＨｅＬａ細胞、２９３細胞またはＶｅｒｏ細胞で増殖させ、宿主細胞から単離し、ウイルスの安定性および完全性を促進する条件で保存することができ、その結果、経時的な感染性の喪失が最小限に抑えられる。特定の例示的な方法では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、細胞スタック、ローラーボトル、または灌流バイオリアクターを使用して宿主細胞内で増殖される。いくつかの例では、修飾された腫瘍溶解性ウイルスを精製するための下流の方法は、ろ過（例えば、デプスろ過、タンジェンシャルフローろ過、またはそれらの組み合わせ）、超遠心分離またはクロマトグラフィー捕捉を含み得る。修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、例えば、凍結または乾燥、例えば凍結乾燥によって保存することができる。いくつかの実施形態では、投与前に、保存した修飾された腫瘍溶解性ウイルスを再構成し（保存のために乾燥させる場合）、投与のために薬学的に許容され得る担体で希釈することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される修飾された腫瘍溶解性ウイルスは、修飾された腫瘍溶解性ウイルス中に修飾を含まない他の点では同一のウイルスと比較して、ＨｅＬａ細胞および２９３細胞においてより高い力価を示す。ある場合には、ＨｅＬａ細胞および２９３個の細胞におけるより高い力価が、修飾された腫瘍溶解性ウイルスにおいて見られる。
キット

【0111】

実施形態では、本開示は、本明細書に記載される修飾された腫瘍溶解性ウイルスを投与するためのキットを提供する。いくつかの実施形態では、本開示のキットは、修飾された腫瘍溶解性ウイルスまたは上記の修飾された腫瘍溶解性ウイルスを含む医薬組成物を含み得る。いくつかの実施形態では、本開示のキットは、使用説明書、デバイスおよび追加の試薬などの１つまたはそれを超える構成要素、ならびに上記に開示された方法を実施するためのチューブ、容器およびシリンジなどの構成要素をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、本開示のキットは、修飾されたウイルスと組み合わせて投与することができる１つまたはそれを超える薬剤、例えば抗癌剤、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせの少なくとも１つをさらに含み得る。

【0112】

いくつかの実施形態では、本開示のキットは、本明細書に開示される修飾されたウイルスを含む１つまたはそれを超える容器を含み得る。例えば、限定するものではないが、本開示のキットは、本開示の修飾された腫瘍溶解性ウイルスを含む１つまたはそれを超える容器を含み得る

【0113】

いくつかの実施形態では、本開示のキットは、使用説明書、修飾された腫瘍溶解性ウイルスを対象に投与するためのデバイス、または追加の薬剤もしくは化合物を対象に投与するためのデバイスを含み得る。例えば、限定するものではないが、説明書は、修飾された腫瘍溶解性ウイルス、および必要に応じてキットに含まれる他の成分の説明、ならびに対象の適切な状態、適切な投薬量および修飾されたウイルスを投与するための適切な投与方法を決定するための方法を含む投与方法を含み得る。説明書はまた、処置時間の期間にわたって対象を監視するためのガイダンスを含み得る。

【0114】

いくつかの実施形態では、本開示のキットは、修飾された腫瘍溶解性ウイルスを対象に投与するためのデバイスを含み得る。医薬および医薬組成物を投与するための当該技術分野で公知の様々なデバイスのいずれも、本明細書で提供されるキットに含めることができる。例えば、限定するものではないが、そのようなデバイスは、皮下注射針、静脈内針、カテーテル、無針注射デバイス、吸入器、および点眼器などの液体ディスペンサーを含む。いくつかの実施形態では、例えば、静脈内注射、腫瘍内注射、腹腔内注射によって全身送達される修飾された腫瘍溶解性ウイルスを、皮下注射針および注射器を備えたキットに含めることができる。
例示的な実施形態

【0115】

融合タンパク質が本明細書で提供され、この融合タンパク質は、ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントと、コレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインとを含み、このコレクチンファミリータンパク質由来の複数のドメインは、オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、ネックドメインまたはその機能的バリアントとを含み、このオリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、ネックドメインまたはその機能的バリアントとは、コレクチンファミリータンパク質中のそれらの位置と比較して配列近接がより緊密である。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、融合タンパク質は、以下、Ｎ末端からＣ末端の順序で、オリゴマー化ドメインまたはその機能的バリアントと、ネックドメインまたはその機能的バリアントと、必要に応じてリンカー配列と、ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントとを含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＴＮＦＳＦ－Ｌは、リンホトキシンα、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、核因子κ－βリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＬＩＧＨＴ、血管内皮増殖阻害剤（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８、エクトジスプラシンＡである。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＴＮＦＳＦ－ＬはＣＤ４０リガンドである。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＣＤ４０リガンドは、配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＴＮＦＳＦ－ＬはＯＸ４０リガンドである。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＯＸ４０リガンドは、配列番号２または配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＴＮＦＳＦ－Ｌは４－１ＢＢＬである。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、４－１ＢＢＬは、配列番号４または配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＴＮＦＳＦ－ＬはＬＩＧＨＴである。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、ＬＩＧＨＴは、配列番号６と少なくとも８５％の配列同一性を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、コレクチンファミリータンパク質が、ＳＰ－Ａ、ＳＰ－Ｄ、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）、コングルチニン、ＣＬ－４３、ＣＬ－Ｌ１、ＣＬ－Ｋ１、ＣＬ－Ｐ１、またはＣＬ－４６である。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、コレクチンファミリータンパク質はＳＰ－Ｄである。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、オリゴマー化ドメインは、配列番号９と少なくとも８５％の配列同一性を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、オリゴマー化ドメインおよびネックドメインは共に、配列番号１１と少なくとも８５％の配列同一性を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、オリゴマー化ドメインおよびネックドメインは共に配列番号１１を含む。本明細書でさらに提供される融合タンパク質では、融合タンパク質が前記リンカー配列を含み、前記リンカー配列がＧＳＧ（グリシン－セリン－グリシン）（配列番号１２）を含む。

【0116】

配列番号１４、１５、１６、１８、または１９と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む融合タンパク質が本明細書で提供される。

【0117】

腫瘍溶解性ウイルスが本明細書で提供され、この腫瘍溶解性ウイルスは、オリゴマー化ドメインに融合されたＴＮＦ（腫瘍壊死因子）－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントを含む。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、この腫瘍溶解性ウイルスは、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、レオウイルス（ＲＶ）、粘液腫ウイルス（ＭＹＸＶ）、麻疹ウイルス（ＭＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ワクシニアウイルス（ＶＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）ポリオウイルス（ＰＶ）である。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントがウイルスゲノムに挿入されている。本明細書でさらに提供される腫瘍溶解性ウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントは、チミジンキナーゼ遺伝子に挿入されている。

【0118】

ワクシニアウイルスが本明細書で提供され、このワクシニアウイルスは、オリゴマー化ドメインに融合したＴＮＦ（腫瘍壊死因子）－スーパーファミリーリガンド（ＴＮＦＳＦ－Ｌ）またはその機能的バリアントを含む。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、このワクシニアウイルスは、ウエスタンリザーブワクシニアウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ－１３５４）、ワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＡＴＣＣ ＶＲ－１５０８）、ワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＡＴＣＣ ＶＲ－１５６６）、ワクシニアウイルス株Ｗｙｅｔｈ（ＡＴＣＣ ＶＲ－１５３６）、またはワクシニアウイルスＷｙｅｔｈ（ＡＴＣＣ ＶＲ－３２５）の修飾株である。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントがウイルスゲノムに挿入されている。本明細書でさらに提供されるワクシニアウイルスでは、ＴＮＦＳＦ－Ｌまたはその機能的バリアントは、チミジンキナーゼ遺伝子に挿入されている。

【0119】

腫瘍溶解性ウイルスが本明細書で提供され、この腫瘍溶解性ウイルスは、本明細書に記載される融合タンパク質を含む。

【0120】

ワクシニアウイルスが本明細書で提供され、このワクシニアウイルスは、本明細書に記載される融合タンパク質を含む。

【0121】

癌の処置のための方法であって、癌の処置に十分な量の核酸を含むベクターを対象に投与することを含み、核酸が本明細書に記載される融合タンパク質をコードする、方法が本明細書で提供される。

【0122】

癌の処置のための方法であって、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスを癌の処置に十分な量で対象に投与するステップを含む、方法が本明細書で提供される。

【0123】

癌の処置のための方法であって、本明細書に記載されるワクシニアウイルスを癌の処置に十分な量で対象に投与するステップを含む、方法が本明細書で提供される。

【0124】

腫瘍細胞成長の低減のための方法であって、腫瘍細胞成長の低減に十分な量で腫瘍細胞に、核酸を含むベクターを投与することを含み、核酸が本明細書に記載される融合タンパク質をコードする、方法が本明細書で提供される。

【0125】

腫瘍細胞成長の低減のための方法であって、腫瘍細胞成長の低減に十分な量で腫瘍細胞に、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスを投与することを含む、方法が本明細書で提供される。

【0126】

腫瘍細胞成長の低減のための方法であって、腫瘍細胞成長の低減に十分な量で腫瘍細胞に、本明細書に記載されるワクシニアウイルスを投与することを含む、方法が本明細書で提供される。

【実施例】

【0127】

以下の実施例は、本開示の範囲を限定することなく、記載された実施形態をさらに例示する。
実施例１：ネイティブおよびＴＮＦＳＦ－Ｌ融合コンストラクトの発現

【0128】

以下の融合ＴＮＦＳＦ－Ｌコンストラクトを設計した。３ｓＣＤ４０Ｌ（マウス）；３ｓＯＸ４０Ｌ（マウス）；３ｓ４１ＢＢＬ（マウス）；３ｓＯＸ４０Ｌ（ヒト）；および３ｓ４１ＢＢＬ（ヒト）。これらのコンストラクトの配列を表４および表５に記載する。

【0129】

さらに、以下のネイティブ単量体産生コンストラクト：ｍＯＸ４０Ｌ（マウス、ネイティブ）およびｍ４１ＢＢＬ（マウス、ネイティブ）を設計した。これらのコンストラクトの配列を表６（アミノ酸）および表７（核酸）に提供する。
表６．

【表6】

表７．

【表7-1】

【表7-2】

【0130】

腫瘍溶解性ウイルスからのＴＮＦＳＦ－Ｌネイティブ単量体またはバリアント融合コンストラクトの発現を行った。簡潔には、ＨｅＬａ細胞を、５．０のＭＯＩで、単量体もしくはスキャフォールド－ＴＮＦＳＦ－Ｌ融合体（ＯＸ４０Ｌもしくは４１ＢＢＬの場合）を発現するウイルス、またはＴＮＦＳＦ－Ｌを発現しない対照ウイルス、またはスキャフォールド－ＴＮＦＳＦ－Ｌ融合体（ＣＤ４０Ｌの場合）を発現するウイルスに感染させた。培地を２４時間で収集し、製造業者の説明書に従って市販のＥＬＩＳＡキットで実行した（サンプルは希釈しないか、または指示されるように希釈した）。サンプルを１：１００に希釈し、結合を記録し、希釈倍率を考慮した量をチャートにまとめた。

【0131】

図２を参照すると、感染していないＨｅＬａ細胞は、検出可能なレベルのｍＣＤ４０Ｌを示さなかった。同様に、Ａ５２ＲおよびＴＫ欠失を有する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに感染したＨｅＬａ細胞も、検出可能なレベルのｍＣＤ４０Ｌを示さなかった。ＴＫ欠失およびを有する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスおよびオリゴマー化ドメインを有しＴＫ遺伝子に挿入された融合コンストラクト３ｓＣＤ４０Ｌ（マウス）に感染したＨｅＬａ細胞は、約４００ｎｇ／ｍＬと非常に高レベルの発現を示す。

【0132】

図３を参照すると、感染していないＨｅＬａ細胞は、検出可能なレベルのｍＯＸ４０Ｌを示さなかった。同様に、Ａ５２ＲおよびＴＫ欠失を有する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに感染したＨｅＬａ細胞も、検出可能なレベルのｍＯＸ４０Ｌを示さなかった。ＴＫ欠失を有する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスおよびＴＫ遺伝子に挿入されたネイティブｍＯＸ４０Ｌに感染したＨｅＬａ細胞は、ｍＯＸ４０Ｌ発現のわずかな増加を示し、約４５００ｐｇ／ｍＬが検出された。ＴＫ欠失を有する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスおよびＴＫ遺伝子に挿入されたオリゴマー化ドメインを含む融合コンストラクト３ｓＯＸ４０Ｌ（マウス）に感染したＨｅＬａ細胞は、ｍＯＸ４０Ｌ発現レベルがはるかに高く、約２６５，０００ｐｇ／ｍＬのｍＯＸ４０Ｌが検出された。

【0133】

図４を参照すると、感染していないＨｅＬａ細胞は、ｍ４１ＢＢＬの検出可能なレベルを示さなかった。Ａ５２ＲおよびＴＫ欠失を有する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに感染したＨｅＬａ細胞も同様に、検出可能なレベルのｍ４１ＢＢＬを示さなかった。ＴＫ欠失を有する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスおよびＴＫ遺伝子に挿入されたネイティブｍ４１ＢＢＬに感染したＨｅＬａ細胞は最小限の発現を示し、１．４ｎｇ／ｍＬが検出された。ＴＫ欠失を有する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスおよびＴＫ遺伝子に挿入されたオリゴマー化ドメインを含む融合コンストラクト３ｓ４１ＢＢＬ（マウス）に感染したＨｅＬａ細胞は、はるかに高レベルの４１ＢＢＬ発現を示し、約１５００ｎｇ／ｍＬの４１ＢＢＬが検出された。

【0134】

実施例２：ネイティブおよびスキャフォールド構造の発現

【0135】

オリゴマー化ドメインを有するＴＮＦＳＦ－Ｌの融合コンストラクトを発現する修飾された腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの機能的効果をアッセイした。ＣＤ４０Ｌ活性のＳＥＡＰレポーターアッセイを使用し、ＳＥＡＰ産生量はＣＤ４０Ｌ機能活性と相関する。簡潔には、ＨｅＬａ細胞を、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス（ＣＤ４０Ｌなし）または腫瘍溶解性ワクシニアウイルス発現融合コンストラクト３ｓＣＤ４０Ｌ（［オリゴマー化ドメイン］－［ネックドメイン］－［ｍＣＤ４０Ｌ］を含む）に１のＭＯＩで感染させた。感染細胞および非感染細胞の上清を２４時間後に収集した。９６ウェルプレートに、２０μｌ、１０μｌまたは１μｌの上清を、２０μｌの培地を含むウェルに三連で添加した。１０ｎｇ／ｍｌ濃度の組換えＣＤ４０Ｌを陽性対照として使用した。１８０μｌのレポーター細胞株をウェルに添加して、ウェルあたり約５０，０００個の細胞に到達させた。細胞をＣＯ_２インキュベーター内で一晩インキュベートした。翌日、１ｍｌのＱｕａｎｔｉ－Ｂｌｕｅ溶液を１ｍｌのＱＢ緩衝液および９８ｍｌの滅菌水に添加し、調製した試薬を１８０μｌ／ウェルで９６ウェルプレートに分注した。実験プレートからの２０μｌの上清を、Ｑｕａｎｔｉ Ｂｌｕｅ溶液を含むプレートに添加した。３７℃で３時間インキュベートした後、プレートリーダー／分光光度計を用いて６２５ｎＭで光学密度（Ｏ．Ｄ．）を測定することによって、ＳＥＡＰの相対レベルを決定した。結果を以下の表８に示し、図５に可視化する。
表８．

【表8】

【0136】

予想外にも、実施例１および２の両方からのこれらの結果は、細胞外環境で産生される１０００倍超のより機能的に活性なＴＮＦＳＦ－Ｌを示す。特に、単量体配列は、細胞培養においてさえ、機能的に活性な三量体を産生せず、スキャフォールドドメインへの融合は、産生の有意な増加をもたらした。
実施例３：ｓ３ＣＤ４０Ｌのインビボ活性の分析

【0137】

実施例１に記載されるＴＮＦＳＦ－Ｌ融合コンストラクト３ｓＣＤ４０Ｌ（マウス）のマウスにおける活性を測定した。ＢＡＬＢ／ｃマウスの皮下に、Ｂａｌｂ／ｃＣｒマウスの腎皮質腺癌由来の細胞（ＲＥＮＣＡ）を移植した。腫瘍を５０～１００ｍｍ^３まで成長させ、ＴＫ欠失（ＴＫ－）を有する３ｓＣＤ４０Ｌ融合コンストラクトを発現する１×１０^７ＰＦＵのウイルス、または緩衝液対照で処置した。処置は、単回用量で腫瘍内（ＩＴ）に送達した。腫瘍成長を追跡し、腫瘍が１０００ｍｍ^３を超えて測定されると、マウスを研究から外した。１０００ｍｍ^３までの腫瘍を有するマウスにおける全生存を図６に示す。データは、ＴＮＦＳＦ－Ｌ融合体で処置したマウスが、ＴＫ－ウイルスまたは緩衝液対照で処置したマウスと比較して、より高い生存確率を示したことを示す。
実施例４：ｓ３ＯＸ４０Ｌの機能的活性

【0138】

実施例１に記載されているように、ＴＮＦＳＦ－Ｌ融合コンストラクト３ｓＯＸ４０Ｌ（ヒト）のインビトロ活性を測定した。ＨｅＬａ細胞を６ウェルプレートに１×１０^６細胞／ウェルで播種した。細胞に、３ｓＯＸ４０Ｌ融合コンストラクトを発現するウイルス、実施例１に記載されるｍ４１ＢＢＬを発現するウイルスを陰性対照または緩衝液対照として５．０のＭＯＩで接種した。細胞をウイルスと共に３７℃、５％ＣＯ_２で３時間インキュベートした。培地をウェルから除去し、細胞をＤＭＥＭで洗浄した。ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳを添加し、プレートを３７℃、５％ＣＯ_２で６０時間インキュベートした。上清を培地交換の６０時間後に回収した。感染細胞におけるルシフェラーゼ発現を、ルシフェラーゼ検出を使用して測定し、相対光単位（ＲＬＵ）で表した。図７は、ｓ３ＯＸ４０Ｌ融合コンストラクトを有するウイルスにおけるより高い発現を示す。
実施例５：３ｓ４１ＢＢＬの機能的活性

【0139】

実施例１に記載されているように、ＴＮＦＳＦ－Ｌ融合コンストラクト３ｓ４１ＢＢＬ（ヒト配列）のインビトロ活性を測定した。ＨｅＬａ細胞を１２ウェルプレートに４×１０^５細胞／ウェルで播種した。細胞を、３ｓ４１ＢＢＬ融合コンストラクトを発現するウイルス、４１ＢＢＬ単量体を発現するウイルス、無関係のＴＮＦＳＦ－Ｌ、三量体ＧＩＴＲＬを発現するウイルス、または緩衝液対照に５．０のＭＯＩで感染させた。細胞をウイルスと共に３７℃、５％ＣＯ_２で４８時間インキュベートした。感染の４８時間後に上清を回収した。感染細胞におけるルシフェラーゼ発現を、ルシフェラーゼ検出を使用して測定し、相対光単位（ＲＬＵ）で発現させた。図８は、ウイルス発現融合コンストラクト３ｓ４１ＢＢＬのみが活性であり、ウイルス発現４１ＢＢＬ単量体は活性ではないことを示す。
実施例６：マウス配列ｓ３ＯＸ４０Ｌおよびｓ３ ４１ＢＢＬによる刺激後のＩＬ－２分泌

【0140】

ＴＮＦＳＦ－Ｌ融合コンストラクトを含むウイルスに感染した細胞におけるＩＬ－２分泌の変化を測定した。マウス脾臓からのＣＤ８Ｔ細胞を、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）マウスＣＤ８＋Ｔ細胞単離キット（＃１９８５３、ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、カナダ国バンクーバー）を使用して精製した。細胞をカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識した。次いで、細胞を非刺激、ＣＤ３単独で刺激、またはＣＤ３およびＣＤ２８、組換え４１ＢＢＬ三量体、組換えＯＸ４０Ｌ三量体、３ｓ４１ＢＢＬ融合コンストラクトを発現するウイルス、３ｓＯＸ４０Ｌ融合コンストラクトを発現するウイルス、またはウイルス陰性対照で刺激した。細胞を３日間インキュベートした。上清中のＩＬ－２分泌を、マウスＩＬ－２ ＥＬＩＳＡキットを使用して分析した。得られた検出されたＩＬ－２レベルを図９に示す。グラフは、ウイルス発現されたＴＮＦＳＦ－Ｌ融合コンストラクト３ｓ４１ＢＢＬおよび３ｓＯＸ４０Ｌが、ＩＬ－２発現を誘導するという点で機能的に活性であることを示す。
実施例７：３ｓ４１ＢＢＬおよび３ｓＯＸ４０Ｌスキャフォールドコンストラクトを使用したマウスにおける腫瘍成長阻害

【0141】

インビボでの腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を実証するために、実施例３のように皮下ＲＥＮＣＡ腫瘍を以前に誘導したＢＡＬＢ／ｃマウスを、緩衝液対照の単回ＩＴ用量、またはチミジンキナーゼ欠失のみを有する対照ワクシニアウイルス（ＨＣＣＴＫＭ）の１×１０^７ＰＦＵ、３ｓ４１ＢＢＬを発現するウイルスまたは３ｓＯＸ４０Ｌを発現するウイルスで処置した。予備的結果は、図１０に示されるように、処置後１２日まで、３ｓ４１ＢＢＬまたは３ｓＯＸ４０Ｌのいずれかを発現するウイルスを受けたマウスにおける平均腫瘍体積が、緩衝液単独またはＨＣＣＴＫＭで処置された腫瘍よりも低かったことを示す。
実施例８：ＧＩＴＲＬ ＳＣＡＦＦＯＬＤコンストラクトを使用したマウスにおける腫瘍成長阻害

【0142】

インビボでの腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を実証するために、実施例３のように皮下ＬＬＣまたはＲＥＮＣＡ腫瘍を以前に誘導したＢＡＬＢ／ｃマウスを、緩衝液対照（ＶＦＢ）の単回ＩＴ用量、チミジンキナーゼ欠失のみを有する対照ワクシニアウイルス（ＨＣＣＴＫＭ）の１×１０^７ＰＦＵ、または３ｓＧＩＴＲＬを発現するウイルスで処置した。ＬＬＣ腫瘍を、図１１Ａに示すように、３０日後に測定した。図１１Ｂに示すように、１７日後にＲＥＮＣＡ腫瘍を測定した。結果は、３ｓＧＩＴＲＬを発現するウイルスを受けたマウスの平均腫瘍体積が、緩衝液単独または対照ＨＣＣＴＫＭで処置した腫瘍よりも低かったことを示している。

【0143】

前述の説明および添付の図面は、現時点におけるいくつかの代表的な実施形態を示す。様々な修正、追加、および代替の設計は、当然ながら、前述の説明ではなく以下の特許請求の範囲によって示される本発明の範囲から逸脱することなく、前述の教示に照らして当業者に明らかになるであろう。特許請求の範囲の均等物の意味および範囲内に含まれるすべての変更および変形は、その範囲内に包含されるべきである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【配列表】

2024523314000001.app

【国際調査報告】