特表 2024-523316 ＣＡＲ Ｔ細胞における、および疾患の処置のための抗ＣＤ３０７Ｅ単一ドメイン抗体、その使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-06-28

(54)【発明の名称】ＣＡＲ Ｔ細胞における、および疾患の処置のための抗ＣＤ３０７Ｅ単一ドメイン抗体、その使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20240621BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20240621BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240621BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240621BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240621BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240621BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240621BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240621BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240621BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240621BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240621BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240621BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20240621BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240621BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C07K14/705

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N15/13

C12N5/10

A61P35/00

A61P43/00 105

A61P35/02

A61K47/68

A61K39/395 T

A61K35/17

A61K35/76

A61K48/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023577365

(86)(22)【出願日】2022-06-17

(85)【翻訳文提出日】2024-02-09

(86)【国際出願番号】 GB2022051550

(87)【国際公開番号】W WO2022263855

(87)【国際公開日】2022-12-22

(31)【優先権主張番号】2108773.9

(32)【優先日】2021-06-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(31)【優先権主張番号】2116502.2

(32)【優先日】2021-11-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517215973

【氏名又は名称】オートラス リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100107489

【弁理士】

【氏名又は名称】大塩 竹志

(72)【発明者】

【氏名】キンナ， アレクサンダー

(72)【発明者】

【氏名】フェラーリ， マテュー

(72)【発明者】

【氏名】オヌオハ， シモビ

(72)【発明者】

【氏名】プーレ， マーティン

(72)【発明者】

【氏名】イルカ， チューダー

(72)【発明者】

【氏名】ダッタ， プリータ

(72)【発明者】

【氏名】ウー， フィリップ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC26

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE59

4C084AA13

4C084NA05

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZB021

4C084ZB211

4C084ZB261

4C084ZB271

4C085AA16

4C085BB01

4C085BB12

4C085BB50

4C085CC03

4C085CC31

4C085DD62

4C085EE01

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB37

4C087BC83

4C087CA04

4C087CA12

4C087NA05

4C087NA13

4C087NA14

4C087ZB02

4C087ZB21

4C087ZB26

4C087ZB27

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、ＦｃＲＨ５結合ドメインに関する。特に、本発明は、そのような結合ドメインを含む、単一ドメイン抗体、抗体コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および免疫細胞エンゲージャーを提供する。本発明者らは、驚くべきことに、本明細書に記載される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む単一ドメイン抗体は、ＦｃＲＨ５を標的とすることができることを実証した。これらの単一ドメインＦｃＲＨ５結合剤は、そのようなＦｃＲＨ５結合ドメインを含む抗原結合実体、例えば、ＶＨＨ抗体、抗体コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および免疫細胞エンゲージャーにおいて有益であり得る。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＦｃＲＨ５結合ドメインを含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）。

【請求項2】

前記ＦｃＲＨ５結合ドメインが、
（ｉ）以下の配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号４）
ＣＤＲ２－ＩＮＳＤＧＧＴＡ（配列番号５）
ＣＤＲ３－ＡＡＮＲＧＦＣＡＧＶＲＣＬＥＹＱＹ（配列番号６）；または
（ｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＧＧＳＧＲＶＳＳＴ（配列番号８）
ＣＤＲ３－ＡＡＲＲＤＹＬＰＦＰＰＥＳＹＤＹ（配列番号９）；または
（ｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＧＧＳＧＲＶＳＳＴ（配列番号８）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＴＳＴＮＧＧＤＹＤＹ（配列番号１０）；または
（ｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＡＴ（配列番号１１）
ＣＤＲ３－ＡＧＴＲＲＡＦＳＴＧＬＲＤＹＤＹ（配列番号１２）；または
（ｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＮＳＴ（配列番号１３）
ＣＤＲ２－ＩＳＷＳＧＧＴＹ（配列番号１４）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＫＧＷＳＴＲＧＤＤＹＤＹ（配列番号１５）；または
（ｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＹＮＮＹＡ（配列番号１６）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＭＴ（配列番号１７）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＡＲＲＤＹＳＹ（配列番号１８）；または
（ｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＳＹＡ（配列番号１９）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＩＧＧＶＴ（配列番号２０）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＧＬＶＳＩＳＴＴＰＮＤＹＤＹ（配列番号２１）；または
（ｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＬ（配列番号２４）；または
（ｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＲＮＩＦＳＬＮＰ（配列番号２５）
ＣＤＲ２－ＩＴＤＧＧＳＴ（配列番号２６）
ＣＤＲ３－ＮＲＶＧＧＬＱＴＷＡ（配列番号２７）；または
（ｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号３０）；または
（ｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＤＳＲＰ（配列番号３１）
ＣＤＲ２－ＶＳＷＲＧＥＳＴ（配列番号３２）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＥＰＹＳＧＴＹＹＹＲＧＲＤＹＤＹ（配列番号３３）；または
（ｘｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＭＹＡ（配列番号３４）
ＣＤＲ２－ＩＳＧＳＡＲＩＴ（配列番号３５）
ＣＤＲ３－ＡＡＳＳＴＹＴＳＴＳＧＳＳＹＮＹ（配列番号３６）；または
（ｘｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｘｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＳＳＲＡＡ（配列番号１５５）
ＣＤＲ２－ＩＳＷＳＧＧＴＴ（配列番号１５６）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＴＴＡＲＮＤＹＤＨ（配列番号１５７）；または
（ｘｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＬＳ（配列番号１８６）；または
（ｘｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＡ（配列番号１６０）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＬＳ（配列番号１８６）；または
（ｘｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＶＲＳＡ（配列番号１８７）；または
（ｘｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＣＲＳＡ（配列番号１８８）；または
（ｘｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＳＦＲＬＮＧ（配列番号１６１）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＳＲＡ（配列番号１８９）；または
（ｘｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＶＳＩＮＡ（配列番号１６２）
ＣＤＲ２－ＩＤＲＳＧＮＴ（配列番号１７６）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＹＳＤＳ（配列番号１９０）；または
（ｘｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＳＹＡ（配列番号１９）
ＣＤＲ２－ＩＤＧＩＧＧＩＴ（配列番号１７７）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＳＡ（配列番号１９１）；または
（ｘｘｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＰＳ（配列番号１９２）；または
（ｘｘｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＲＳ（配列番号１９３）；または
（ｘｘｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＥＲＩＦＲＩＮＡ（配列番号１６４）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＲＳ（配列番号１９３）；または
（ｘｘｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＰＦＲＬＳ（配列番号１９４）；または
（ｘｘｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＴＰＦＲＬＳ（配列番号１９５）；または
（ｘｘｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＲＧＧＮＴ（配列番号１７９）
ＣＤＲ３－ＮＳＩＰＦＲＬＳ（配列番号１９６）；または
（ｘｘｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＩＮＧ（配列番号１６６）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＩＳ（配列番号１９７）；または
（ｘｘｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＬＹ（配列番号１９８）；または
（ｘｘｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＫＡＩＰＦＲＬＳ（配列番号１９９）；または
（ｘｘｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１６７）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｘｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｘｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＡ（配列番号１６０）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｘｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＧＮＮＡ（配列番号１６８）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｘｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＴＹＧ（配列番号１６９）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＡＴ（配列番号１１）
ＣＤＲ３－ＡＧＴＲＲＡＦＳＴＧＬＲＤＹＤＹ（配列番号１２）；または
（ｘｘｘｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＴＩＥＲＮＮＡ（配列番号１７０）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＲＳＲＤＹＤＹ（配列番号２００）；または
（ｘｘｘｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＳＳＲＤＹＤＹ（配列番号２０１）；または
（ｘｌ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＧＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０２）；または
（ｘｌｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＳＹＡ（配列番号１９）
ＣＤＲ２－ＩＳＱＦＧＧＶＴＴ（配列番号１７９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＧＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０２）；または
（ｘｌｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＧＧＲＲＦＳＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０３）；または
（ｘｌｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＳＳＲＥＹＤＩ（配列番号２０４）；または
（ｘｌｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＰ（配列番号１８０）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＬＳＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０５）；または
（ｘｌｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＧＧＧＶＳ（配列番号１８１）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＬＲＦＳＴＧＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０６）；または
（ｘｌｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＲＲＹＡ（配列番号１７１）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＭＴ（配列番号１７）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＴＲＲＤＹＡＹ（配列番号２０７）；または
（ｘｌｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＮＳＴ（配列番号１３）
ＣＤＲ２－ＩＳＷＳＧＧＴＴ（配列番号１５６）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＫＧＷＳＴＲＧＤＤＹＤＹ（配列番号１５）；または
（ｘｌｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＶＩ（配列番号１７２）
ＣＤＲ２－ＳＳＧＳＧＧＶＴ（配列番号１８２）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＬＴＷＳＴＲＰＳＤＦＴＳ（配列番号２０８）；または
（ｘｌｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＶＩ（配列番号１７２）
ＣＤＲ２－ＳＮＷＳＧＧＶＴ（配列番号１８３）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＡＲＲＤＹＳＹ（配列番号１８）；または
（ｌ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＭＴ（配列番号１７）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＡＲＲＤＹＳＹ（配列番号１８）；または
（ｌｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＲＹＡ（配列番号１７３）
ＣＤＲ２－ＩＮＧＳＧＧＴ（配列番号１８４）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＴＴＴＲＮＥＹＤＨ（配列番号２０９）；または
（ｌｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＲＹＡ（配列番号１７３）
ＣＤＲ２－ＩＮＧＳＧＧＴ（配列番号１８４）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＴＴＴＲＮＥＹＤＨ（配列番号２０９）；または
（ｌｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＳＴＡＲＮＤＹＤＨ（配列番号２１０）；または
（ｌｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＧＧＲＩＦＲＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号２１１）；または
（ｌｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＦＦＴＴＡＲＮＤＹＤＨ（配列番号２１２）；または
（ｌｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＧ（配列番号２１３）；または
（ｌｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＧ（配列番号２１３）；または
（ｌｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＤＧ（配列番号２１４）；または
（ｌｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＡＰＮＹＧ（配列番号２１５）；または
（ｌｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＶ（配列番号２１６）；または
（ｌｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＩＮＡ（配列番号１７４）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＬＮＹＧ（配列番号２１７）；または
（ｌｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＬＶＰＮＹＧ（配列番号２１８）；または
（ｌｘｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＬＰＮＹＧ（配列番号２１９）；または
（ｌｘｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＴＮＹＧ（配列番号２２０）；または
（ｌｘｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＴＮＹＧ（配列番号２２０）；または
（ｌｘｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＶ（配列番号２２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＲＧＧＳＴ（配列番号１８５）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＧ（配列番号２１３）；または
（ｌｘｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＳＩＮＡ（配列番号１７５）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＡＲＮＰＴＲＧＷＹＳＴＤＹ（配列番号２２１）
を含み、
必要に応じて、前記ＣＤＲのうちの１つまたは複数が、１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を含む、請求項１に記載のｓｄＡｂ。

【請求項3】

前記ＦｃＲＨ５結合ドメインが、
（ｉ）配列番号４０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有する可変重鎖ドメイン抗体（ＶＨＨ）；または
（ｉｉ）配列番号４１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｉｉｉ）配列番号４２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｉｖ）配列番号４３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｖ）配列番号４４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｖｉ）配列番号４５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｖｉｉ）配列番号４６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｖｉｉｉ）配列番号４７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｉｘ）配列番号４８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘ）配列番号４９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｉ）配列番号５０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｉｉ）配列番号５１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｉｉｉ）配列番号５２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｉｖ）配列番号５３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；
（ｘｖ）配列番号１５８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｖｉ）配列番号２２３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｖｉｉ）配列番号２２４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｖｉｉｉ）配列番号２２５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｖｉｘ）配列番号２２６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘ）配列番号２２７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉ）配列番号２２８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉｉ）配列番号２２９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉｉｉ）配列番号２３０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉｖ）配列番号２３１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｖ）配列番号２３２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｖｉ）配列番号２３３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｖｉｉ）配列番号２３４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号２３５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉｘ）配列番号２３６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘ）配列番号２３７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉ）配列番号２３８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉｉ）配列番号２３９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号２４０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉｖ）配列番号２４１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｖ）配列番号２４２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｖｉ）配列番号２４３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｖｉｉ）配列番号２４４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｖｉｉｉ）配列番号２４５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉｘ）配列番号２４６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌ）配列番号２４７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉ）配列番号２４８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉｉ）配列番号２４９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉｉｉ）配列番号２５０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉｖ）配列番号２５１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｖ）配列番号２５２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｖｉ）配列番号２５３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｖｉｉ）配列番号２５４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｖｉｉｉ）配列番号２５５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉｘ）配列番号２５６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌ）配列番号２５７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉ）配列番号２５８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉｉ）配列番号２５９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉｉｉ）配列番号２６０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉｖ）配列番号２６１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｖ）配列番号２６２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｖｉ）配列番号２６３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｖｉｉ）配列番号２６４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｖｉｉｉ）配列番号２６５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉｘ）配列番号２６６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘ）配列番号２６７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉ）配列番号２６８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉｉ）配列番号２６９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉｉｉ）配列番号２７０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉｖ）配列番号２７１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｖ）配列番号２７２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｖｉ）配列番号２７３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｖｉｉ）配列番号２７４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｖｉｉｉ）配列番号２７５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉｘ）配列番号２７６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘ）配列番号２７７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉ）配列番号２７８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉｉ）配列番号２７９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉｉｉ）配列番号２８０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉｖ）配列番号２８１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｖ）配列番号２８２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｖｉ）配列番号２８３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｖｉｉ）配列番号２８４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｖｉｉｉ）配列番号２８５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉｘ）配列番号２８６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｘ）配列番号２８７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｘｉ）配列番号２８８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ
を含む、請求項１または２に記載のｓｄＡｂ。

【請求項4】

ヒト化ｓｄＡｂである、前記請求項のいずれかに記載のｓｄＡｂ。

【請求項5】

前記請求項のいずれかに記載のｓｄＡｂを含むＦｃＲＨ５結合分子であって、抗体コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または免疫細胞エンゲージャー、例えば、Ｔ細胞エンゲージャー分子、ガンマデルタＴ細胞エンゲージャー分子、ナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞エンゲージャー分子もしくはＮＫ細胞エンゲージャー分子から選択される、ＦｃＲＨ５結合分子。

【請求項6】

請求項１から４のいずれか一項に記載のｓｄＡｂを含むＣＡＲ。

【請求項7】

配列番号７６～配列番号８９、配列番号１５９および配列番号２８９～配列番号３５４を含む群から選択される配列、またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するが、ｉ）ＦｃＲＨ５に結合する能力およびｉｉ）Ｔ細胞シグナル伝達を誘導する能力を保持するそのバリアントを含む、請求項６に記載のＣＡＲ。

【請求項8】

（ｉ）請求項１から４のいずれか一項に記載のｓｄＡｂを含む第１のドメイン；および
（ｉｉ）Ｔ細胞を活性化することができる第２のドメイン
を含み；必要に応じて
（ｉｉｉ）Ｔ細胞を共活性化することができる第３のドメイン
をさらに含む免疫細胞エンゲージャー分子。

【請求項9】

請求項１から４のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ、請求項６または７に記載のＣＡＲ、または請求項８に記載の免疫細胞エンゲージャー分子をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。

【請求項10】

請求項９に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項11】

請求項６または７に記載のＣＡＲ、請求項９に記載のポリヌクレオチド、または請求項１０に記載のベクターを含む細胞。

【請求項12】

請求項１から４のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ、請求項５に記載のＦｃＲＨ５結合分子、請求項８に記載の免疫細胞エンゲージャー分子、請求項９に記載のポリヌクレオチド、請求項１０に記載のベクター、または請求項１１に記載の細胞を、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と共に含む医薬組成物。

【請求項13】

疾患の処置における医薬として使用するための、請求項１から４のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ、請求項５に記載のＦｃＲＨ５結合分子、請求項８に記載の免疫細胞エンゲージャー分子、請求項９に記載のポリヌクレオチド、請求項１０に記載のベクター、請求項１１に記載の細胞、または請求項１２に記載の医薬組成物。

【請求項14】

疾患を処置するための方法であって、請求項１から４のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ、請求項５に記載のＦｃＲＨ５結合分子、請求項８に記載の免疫細胞エンゲージャー分子、請求項９に記載のポリヌクレオチド、請求項１０に記載のベクター、請求項１１に記載の細胞、または請求項１２に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。

【請求項15】

疾患を処置するための医薬の製造における、請求項１から４のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ、請求項５に記載のＦｃＲＨ５結合分子、請求項８に記載の免疫細胞エンゲージャー分子、請求項９に記載のポリヌクレオチド、請求項１０に記載のベクター、請求項１１に記載の細胞、または請求項１２に記載の医薬組成物の使用。

【請求項16】

前記疾患がＢ細胞悪性腫瘍または形質細胞障害である、請求項１３に記載の使用のための前記ｓｄＡｂ、ＦｃＲＨ５結合分子または前記免疫細胞エンゲージャーまたは前記免疫細胞エンゲージャー分子または前記ベクターまたは前記細胞または前記医薬組成物、または請求項１４に記載の方法、または請求項１５に記載の使用。

【請求項17】

前記Ｂ細胞悪性腫瘍または形質細胞障害が、白血病、有毛細胞白血病、慢性リンパ球性白血病、非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ＥＢＶ関連リンパ腫（バーキット）、リンパ形質細胞性リンパ腫、形質細胞腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、形質細胞白血病、多発性骨髄腫、マクログロブリン血症、アミロイドーシス、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、骨の孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、骨硬化性骨髄腫、重鎖疾患、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、非ＩｇＭ ＭＧＵＳ、ＩｇＭ ＭＧＵＳ、軽鎖ＭＧＵＳおよびくすぶり型多発性骨髄腫を含むリストから選択される、使用のための前記ｓｄＡｂまたは前記ＦｃＲＨ５結合分子または前記免疫細胞エンゲージャー分子または前記免疫細胞エンゲージャー分子または前記ベクターまたは前記細胞または前記医薬組成物；前記方法；または請求項１６に記載の使用。

【請求項18】

がんが多発性骨髄腫である、使用のための前記ｓｄＡｂまたは前記ＦｃＲＨ５結合分子または前記免疫細胞エンゲージャー分子または前記免疫細胞エンゲージャー分子または前記ベクターまたは前記細胞または前記医薬組成物；前記方法；または請求項１７に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

発明の分野
本発明は、ＦｃＲＨ５結合ドメインに関する。特に、本発明は、そのようなＦｃＲＨ５結合ドメインを含む単一ドメイン抗体、抗体コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、免疫細胞エンゲージャーに関する。ＦｃＲＨ５を標的にする様式は、例えば、多発性骨髄腫のようながん性疾患の処置に有益であり得る。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
多発性骨髄腫（骨髄腫）は、形質細胞の骨髄悪性腫瘍である。異常形質細胞の集団が骨髄中に蓄積し、正常血液細胞の産生を妨害する。骨髄腫は、米国においては２番目に多い血液悪性腫瘍であり（非ホジキンリンパ腫に次ぐ）、血液悪性腫瘍の１３％、および全てのがんの１％を構成する。この疾患は、病的骨折、感染感受性、腎不全、および続く骨髄不全後の死亡を引き起こすため、苦痛ならびに医療費の点から負担となる。

【0003】

多くのリンパ腫とは異なり、骨髄腫は現在、不治である。リンパ腫において使用される標準の化学療法剤は、骨髄腫にはおおむね無効である。さらに、形質細胞中ではＣＤ２０発現が消失しているため、この疾患に対して、リツキシマブを使用することができない。ボルテゾミブ（Ｂｏｒｔｅｚａｍｉｂ）およびレナリドミド（Ｌｅｎｏｌｉｄｏｍｉｄｅ）のような新規薬剤は、部分的に有効であるが、長続きする寛解はもたらさない。

【0004】

したがって、有効性の増加および長期効果の改善を有する、骨髄腫の処置のための代替薬剤に対する必要性が存在する。

【0005】

Ｆｃ受容体様５（ＦｃＲＨ５）は、ＣＤ３０７、ＩＲＴＡ２、ＦｃＲＬ５、およびＢＸＭＡＳ１としても公知で、免疫グロブリン受容体スーパーファミリーおよびＦｃ受容体ファミリーのメンバーである。ＦｃＲＨ５は、細胞外領域に９つのＩｇ様ドメインを含む１型膜貫通タンパク質である。ＦｃＲＨ５は、Ｂ細胞系統において排他的に発現され、形質細胞中に保持され、かつ多発性骨髄腫での治療標的として現在調査中である。

【0006】

以下のいくつかのアイソフォームが存在する：標準的構造のアイソフォームｃ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ９６ＲＤ９－１－ｖ３）は、細胞外領域にある９つのＩｇ様ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質尾部を含有する；アイソフォームａは、８つの可溶型のＩｇ様細胞外ドメインを含有する（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ９６ＲＤ９－３）；アイソフォームｂは、最初の６つのＩｇ様ドメインおよび３２ａａペプチドを含むＧＰＩアンカータンパク質である（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ９６ＲＤ９－４）；アイソフォームｄは、最初の２つのＩｇ様ドメインのみを含有する（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ９６ＲＤ９－５）。

【0007】

治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、イムノコンジュゲートｍＡｂ、放射性コンジュゲート（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）ｍＡｂ、および二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーを含む、いくつかの免疫療法剤が、がん処置で使用するために記載された。

【0008】

しかし、ＦｃＲＨ５を標的とする免疫療法剤に対する必要性がなおも存在する。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0009】

発明の概要
本発明者らは、驚くべきことに、本明細書に記載される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む単一ドメイン抗体は、ＦｃＲＨ５を標的とすることができることを実証した。これらの単一ドメインＦｃＲＨ５結合剤は、そのようなＦｃＲＨ５結合ドメインを含む抗原結合実体、例えば、ＶＨＨ抗体、抗体コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および免疫細胞エンゲージャーにおいて有益であり得る。

【0010】

したがって、第１の態様では、本発明は、ＦｃＲＨ５結合ドメインを含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を提供する。

【0011】

好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、
（ｉ）以下の配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号４）
ＣＤＲ２－ＩＮＳＤＧＧＴＡ（配列番号５）
ＣＤＲ３－ＡＡＮＲＧＦＣＡＧＶＲＣＬＥＹＱＹ（配列番号６）；または
（ｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＧＧＳＧＲＶＳＳＴ（配列番号８）
ＣＤＲ３－ＡＡＲＲＤＹＬＰＦＰＰＥＳＹＤＹ（配列番号９）；または
（ｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＧＧＳＧＲＶＳＳＴ（配列番号８）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＴＳＴＮＧＧＤＹＤＹ（配列番号１０）；または
（ｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＡＴ（配列番号１１）
ＣＤＲ３－ＡＧＴＲＲＡＦＳＴＧＬＲＤＹＤＹ（配列番号１２）；または
（ｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＮＳＴ（配列番号１３）
ＣＤＲ２－ＩＳＷＳＧＧＴＹ（配列番号１４）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＫＧＷＳＴＲＧＤＤＹＤＹ（配列番号１５）；または
（ｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＹＮＮＹＡ（配列番号１６）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＭＴ（配列番号１７）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＡＲＲＤＹＳＹ（配列番号１８）；または
（ｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＳＹＡ（配列番号１９）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＩＧＧＶＴ（配列番号２０）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＧＬＶＳＩＳＴＴＰＮＤＹＤＹ（配列番号２１）；または
（ｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＬ（配列番号２４）；または
（ｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＲＮＩＦＳＬＮＰ（配列番号２５）
ＣＤＲ２－ＩＴＤＧＧＳＴ（配列番号２６）
ＣＤＲ３－ＮＲＶＧＧＬＱＴＷＡ（配列番号２７）；または
（ｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号３０）；または
（ｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＤＳＲＰ（配列番号３１）
ＣＤＲ２－ＶＳＷＲＧＥＳＴ（配列番号３２）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＥＰＹＳＧＴＹＹＹＲＧＲＤＹＤＹ（配列番号３３）；または
（ｘｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＭＹＡ（配列番号３４）
ＣＤＲ２－ＩＳＧＳＡＲＩＴ（配列番号３５）
ＣＤＲ３－ＡＡＳＳＴＹＴＳＴＳＧＳＳＹＮＹ（配列番号３６）；または
（ｘｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｘｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＳＳＲＡＡ（配列番号１５５）
ＣＤＲ２－ＩＳＷＳＧＧＴＴ（配列番号１５６）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＴＴＡＲＮＤＹＤＨ（配列番号１５７）；または
（ｘｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＬＳ（配列番号１８６）；または
（ｘｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＡ（配列番号１６０）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＬＳ（配列番号１８６）；または
（ｘｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＶＲＳＡ（配列番号１８７）；または
（ｘｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＣＲＳＡ（配列番号１８８）；または
（ｘｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＳＦＲＬＮＧ（配列番号１６１）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＳＲＡ（配列番号１８９）；または
（ｘｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＶＳＩＮＡ（配列番号１６２）
ＣＤＲ２－ＩＤＲＳＧＮＴ（配列番号１７６）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＹＳＤＳ（配列番号１９０）；または
（ｘｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＳＹＡ（配列番号１９）
ＣＤＲ２－ＩＤＧＩＧＧＩＴ（配列番号１７７）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＳＡ（配列番号１９１）；または
（ｘｘｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＰＳ（配列番号１９２）；または
（ｘｘｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＲＳ（配列番号１９３）；または
（ｘｘｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＥＲＩＦＲＩＮＡ（配列番号１６４）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＲＳ（配列番号１９３）；または
（ｘｘｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＰＦＲＬＳ（配列番号１９４）；または
（ｘｘｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＴＰＦＲＬＳ（配列番号１９５）；または
（ｘｘｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＲＧＧＮＴ（配列番号１７９）
ＣＤＲ３－ＮＳＩＰＦＲＬＳ（配列番号１９６）；または
（ｘｘｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＩＮＧ（配列番号１６６）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＩＳ（配列番号１９７）；または
（ｘｘｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＬＹ（配列番号１９８）；または
（ｘｘｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＫＡＩＰＦＲＬＳ（配列番号１９９）；または
（ｘｘｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１６７）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｘｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｘｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＡ（配列番号１６０）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｘｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＧＮＮＡ（配列番号１６８）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｘｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＴＹＧ（配列番号１６９）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＡＴ（配列番号１１）
ＣＤＲ３－ＡＧＴＲＲＡＦＳＴＧＬＲＤＹＤＹ（配列番号１２）；または
（ｘｘｘｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＴＩＥＲＮＮＡ（配列番号１７０）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＲＳＲＤＹＤＹ（配列番号２００）；または
（ｘｘｘｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＳＳＲＤＹＤＹ（配列番号２０１）；または
（ｘｌ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＧＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０２）；または
（ｘｌｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＳＹＡ（配列番号１９）
ＣＤＲ２－ＩＳＱＦＧＧＶＴＴ（配列番号１７９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＧＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０２）；または
（ｘｌｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＧＧＲＲＦＳＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０３）；または
（ｘｌｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＳＳＲＥＹＤＩ（配列番号２０４）；または
（ｘｌｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＰ（配列番号１８０）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＬＳＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０５）；または
（ｘｌｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＧＧＧＶＳ（配列番号１８１）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＬＲＦＳＴＧＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０６）；または
（ｘｌｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＲＲＹＡ（配列番号１７１）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＭＴ（配列番号１７）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＴＲＲＤＹＡＹ（配列番号２０７）；または
（ｘｌｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＮＳＴ（配列番号１３）
ＣＤＲ２－ＩＳＷＳＧＧＴＴ（配列番号１５６）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＫＧＷＳＴＲＧＤＤＹＤＹ（配列番号１５）；または
（ｘｌｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＶＩ（配列番号１７２）
ＣＤＲ２－ＳＳＧＳＧＧＶＴ（配列番号１８２）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＬＴＷＳＴＲＰＳＤＦＴＳ（配列番号２０８）；または
（ｘｌｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＶＩ（配列番号１７２）
ＣＤＲ２－ＳＮＷＳＧＧＶＴ（配列番号１８３）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＡＲＲＤＹＳＹ（配列番号１８）；または
（ｌ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＭＴ（配列番号１７）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＡＲＲＤＹＳＹ（配列番号１８）；または
（ｌｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＲＹＡ（配列番号１７３）
ＣＤＲ２－ＩＮＧＳＧＧＴ（配列番号１８４）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＴＴＴＲＮＥＹＤＨ（配列番号２０９）；または
（ｌｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＲＹＡ（配列番号１７３）
ＣＤＲ２－ＩＮＧＳＧＧＴ（配列番号１８４）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＴＴＴＲＮＥＹＤＨ（配列番号２０９）；または
（ｌｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＳＴＡＲＮＤＹＤＨ（配列番号２１０）；または
（ｌｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＧＧＲＩＦＲＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号２１１）；または
（ｌｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＦＦＴＴＡＲＮＤＹＤＨ（配列番号２１２）；または
（ｌｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＧ（配列番号２１３）；または
（ｌｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＧ（配列番号２１３）；または
（ｌｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＤＧ（配列番号２１４）；または
（ｌｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＡＰＮＹＧ（配列番号２１５）；または
（ｌｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＶ（配列番号２１６）；または
（ｌｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＩＮＡ（配列番号１７４）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＬＮＹＧ（配列番号２１７）；または
（ｌｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＬＶＰＮＹＧ（配列番号２１８）；または
（ｌｘｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＬＰＮＹＧ（配列番号２１９）；または
（ｌｘｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＴＮＹＧ（配列番号２２０）；または
（ｌｘｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＴＮＹＧ（配列番号２２０）；または
（ｌｘｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＶ（配列番号２２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＲＧＧＳＴ（配列番号１８５）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＧ（配列番号２１３）；または
（ｌｘｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＳＩＮＡ（配列番号１７５）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＡＲＮＰＴＲＧＷＹＳＴＤＹ（配列番号２２１）
を含み得る。

【0012】

ＣＤＲのうちの１つまたは複数は、１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を含み得る。

【0013】

結合ドメインは、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）であり得る。ｓｄＡｂは、ＶＨＨまたは重鎖可変領域（ＶＨ）ドメインであり得る。ｓｄＡｂは、ヒト化ｓｄＡｂであり得る。

【0014】

好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、
（ｉ）配列番号４０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有する可変重鎖ドメイン抗体（ＶＨＨ）；または
（ｉｉ）配列番号４１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｉｉｉ）配列番号４２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｉｖ）配列番号４３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｖ）配列番号４４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｖｉ）配列番号４５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｖｉｉ）配列番号４６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｖｉｉｉ）配列番号４７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｉｘ）配列番号４８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘ）配列番号４９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｉ）配列番号５０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｉｉ）配列番号５１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｉｉｉ）配列番号５２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｉｖ）配列番号５３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；
（ｘｖ）配列番号１５８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｖｉ）配列番号２２３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｖｉｉ）配列番号２２４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｖｉｉｉ）配列番号２２５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｖｉｘ）配列番号２２６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘ）配列番号２２７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉ）配列番号２２８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉｉ）配列番号２２９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉｉｉ）配列番号２３０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉｖ）配列番号２３１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｖ）配列番号２３２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｖｉ）配列番号２３３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｖｉｉ）配列番号２３４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号２３５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉｘ）配列番号２３６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘ）配列番号２３７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉ）配列番号２３８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉｉ）配列番号２３９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号２４０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉｖ）配列番号２４１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｖ）配列番号２４２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｖｉ）配列番号２４３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｖｉｉ）配列番号２４４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｖｉｉｉ）配列番号２４５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉｘ）配列番号２４６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌ）配列番号２４７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉ）配列番号２４８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉｉ）配列番号２４９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉｉｉ）配列番号２５０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉｖ）配列番号２５１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｖ）配列番号２５２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｖｉ）配列番号２５３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｖｉｉ）配列番号２５４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｖｉｉｉ）配列番号２５５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉｘ）配列番号２５６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌ）配列番号２５７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉ）配列番号２５８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉｉ）配列番号２５９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉｉｉ）配列番号２６０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉｖ）配列番号２６１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｖ）配列番号２６２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｖｉ）配列番号２６３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｖｉｉ）配列番号２６４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｖｉｉｉ）配列番号２６５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉｘ）配列番号２６６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘ）配列番号２６７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉ）配列番号２６８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉｉ）配列番号２６９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉｉｉ）配列番号２７０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉｖ）配列番号２７１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｖ）配列番号２７２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｖｉ）配列番号２７３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｖｉｉ）配列番号２７４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｖｉｉｉ）配列番号２７５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉｘ）配列番号２７６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘ）配列番号２７７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉ）配列番号２７８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉｉ）配列番号２７９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉｉｉ）配列番号２８０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉｖ）配列番号２８１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｖ）配列番号２８２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｖｉ）配列番号２８３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｖｉｉ）配列番号２８４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｖｉｉｉ）配列番号２８５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉｘ）配列番号２８６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｘ）配列番号２８７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｘｉ）配列番号２８８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ
を含み得る。

【0015】

第２の態様では、本発明は、本発明の第１の態様のｓｄＡｂを含むＦｃＲＨ５結合分子であって、抗体コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または免疫細胞エンゲージャー、例えば、Ｔ細胞エンゲージャー分子、ガンマデルタＴ細胞エンゲージャー分子、ナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞エンゲージャー分子もしくはＮＫ細胞エンゲージャー分子から選択される、ＦｃＲＨ５結合分子を提供する。

【0016】

第３の態様では、本発明は、本発明の第１の態様のｓｄＡｂを含む抗体コンジュゲートを提供する。

【0017】

好適には、抗体コンジュゲートは、化学療法用実体、放射性核種または検出用実体とコンジュゲートされてもよい。

【0018】

第４の態様では、本発明は、本発明の第１の態様のｓｄＡｂを含むＣＡＲを提供する。

【0019】

ＣＡＲは、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン；ＣＤ２８膜貫通ドメイン；またはＴｙｒｐ１膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインを含み得る。

【0020】

ＣＡＲは、配列番号５４、配列番号５５もしくは配列番号５６を含む群から選択される配列の１つ、または少なくとも８０％の配列同一性を有するそのバリアントを含む膜貫通ドメインを含み得る。

【0021】

ｓｄＡｂおよび膜貫通ドメインは、スペーサーによって連結され得る。

【0022】

スペーサーは、以下：ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン；ＩｇＧ１ヒンジ；ＩｇＧ１ヒンジ－ＣＤ８ストーク；またはＣＤ８ストークの１つを含み得る。

【0023】

スペーサーは、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０もしくは配列番号６１を含む群から選択される配列の１つ；または少なくとも８０％の配列同一性を有するそのバリアントを含み得る。

【0024】

ＣＡＲは、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインも含み得る。

【0025】

細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、以下のエンドドメイン：ＣＤ２８エンドドメイン；ＯＸ４０エンドドメイン；４１ＢＢエンドドメイン；およびＣＤ３ゼータエンドドメインの１つまたは複数を含み得る。

【0026】

細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、もしくは配列番号７０を含む群から選択される配列の１つもしくは複数；または少なくとも８０％の配列同一性を有するそのバリアントを含み得る。

【0027】

ＣＡＲは、配列番号７６～配列番号８９、配列番号１５９および配列番号２８９～配列番号３５４を含む群から選択される配列、またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するが、ｉ）ＦｃＲＨ５に結合する能力およびｉｉ）Ｔ細胞シグナル伝達を誘導する能力を保持するそのバリアントを含み得る。

【0028】

第５の態様では、本発明は、（ｉ）本発明の第１の態様のｓｄＡｂを含む第１のドメイン；および（ｉｉ）Ｔ細胞を活性化することができる第２のドメインを含む免疫細胞エンゲージャー分子を提供する。

【0029】

免疫細胞エンゲージャー分子は、Ｔ細胞を共活性化することができる第３のドメインをさらに含み得る。

【0030】

第２のドメインは、Ｔ細胞表面上のＣＤ３に結合することによってＴ細胞を活性化し得る。

【0031】

第２のドメインは、ＣＤ３特異的抗体またはその一部を含み得る。

【0032】

第２のドメインは、配列番号９６、配列番号１０３もしくは配列番号１１０を含む群から選択される配列、または少なくとも８０％の配列同一性を有し、かつＣＤ３に結合するそのバリアントを含み得る。

【0033】

第１および第２の結合ドメインは、スペーサーまたはリンカーによって連結され得る。第２および第３の結合ドメインは、スペーサーまたはリンカーによって連結され得る。

【0034】

スペーサーは、ＩｇＧ１ヒンジまたはＣＤ８ストークを含み得る。

【0035】

スペーサーは、配列番号１１３もしくは配列番号１１４を含む群から選択される配列の１つ、または少なくとも８０％の配列同一性を有するそのバリアントを含み得る。リンカーは、ＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１６）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７）、（（Ｇｌｙ_４）Ｓｅｒ）_２（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、配列番号３５５）、（（Ｇｌｙ_４）Ｓｅｒ）_３（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、配列番号３５６）および（（Ｇｌｙ_４）Ｓｅｒ）_４（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、配列番号３５７）などのセリン－グリシンリンカーを含み得る。

【0036】

第３のドメインはＣＤ２８に結合することができ得る。

【0037】

第３のドメインは、ＣＤ２８特異的抗体またはその一部を含み得る。

【0038】

第３のドメインは、
（ｉ）配列番号１３０として示す配列を有するＶＨ領域および配列番号１３１として示す配列を有するＶＬ領域、もしくは
（ｉｉ）配列番号１３２として示す配列を有するＶＨ領域および配列番号１３３として示す配列を有するＶＬ領域、もしくは
（ｉｉｉ）配列番号１３４として示す配列を有するＶＨ領域および配列番号１３５として示す配列を有するＶＬ領域；
または少なくとも８０％の配列同一性を有し、かつＣＤ２８に結合するそのバリアント
を含み得る。

【0039】

第６の態様では、本発明は、（ｉ）本発明の第１の態様のｓｄＡｂを含む第１のドメイン；および（ｉｉ）ＮＫ細胞を活性化することができる第２のドメインを含む免疫細胞エンゲージャー分子を提供する。

【0040】

免疫細胞エンゲージャー分子は、ＮＫ細胞を活性化することができる第３のドメインをさらに含み得る。

【0041】

第２のドメインは、ＮＫ細胞表面上のＣＤ１６に結合することによってＮＫ細胞を活性化し得る。

【0042】

第２のドメインは、ＣＤ１６特異的抗体またはその一部を含み；必要に応じて、第２のドメインが、
（ｉ）配列番号１４２として示す配列を有するＶＨ領域および配列番号１４３として示す配列を有するＶＬ領域、もしくは
（ｉｉ）配列番号１４６として示す配列を有するＶＨ領域および配列番号１４７として示す配列を有するＶＬ領域、もしくは
（ｉｉｉ）配列番号１５３として示す配列を有するＶＨ領域および配列番号１５４として示す配列を有するＶＬ領域；
または少なくとも８０％の同一性を有し、かつＣＤ１６に結合するそのバリアント
を含み得る。

【0043】

第３のドメインは、ＩＬ－１５を架橋することができ得る。

【0044】

第７の態様では、本発明は、本発明の第１の態様にしたがうｓｄＡｂをコードする核酸配列、本発明の第４の態様にしたがうＣＡＲ、本発明の第５の態様にしたがう免疫細胞エンゲージャー分子、または本発明の第６の態様にしたがう免疫細胞エンゲージャー分子を含むポリヌクレオチドを提供する。

【0045】

第８の態様では、本発明は、本発明の第７の態様にしたがうポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。

【0046】

第９の態様では、本発明は、本発明の第４の態様にしたがうＣＡＲを含む細胞を提供する。

【0047】

第１０の態様では、本発明は、本発明の第７の態様にしたがうポリヌクレオチドまたは本発明の第８の態様にしたがうベクターを含む細胞を提供する。

【0048】

細胞は、免疫細胞、例えばＴ細胞またはＮＫ細胞であってよい。

【0049】

第１１の態様では、本発明は、本発明の第９または第１０の態様にしたがう細胞を作製するための方法であって、本発明の第７の態様にしたがうポリヌクレオチドまたは本発明の第８の態様にしたがうベクターを導入するステップを含む方法を提供する。

【0050】

第１２の態様では、本発明は、本発明の第１の態様にしたがうｓｄＡｂ、または本発明の第３の態様にしたがう抗体コンジュゲート、または本発明の第５の態様にしたがう免疫細胞エンゲージャー分子、または本発明の第６の態様にしたがう免疫細胞エンゲージャー分子、または本発明の第７の態様にしたがうポリヌクレオチド、または本発明の第８の態様にしたがうベクター、または本発明の第９もしくは第１０の態様にしたがう細胞を、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と共に含む医薬組成物を提供する。

【0051】

第１３の態様では、本発明は、疾患の処置における医薬としての使用のための、本発明の第１の態様にしたがうｓｄＡｂ、または本発明の第３の態様にしたがう抗体コンジュゲート、または本発明の第５の態様にしたがう免疫細胞エンゲージャー分子、または本発明の第６の態様にしたがう免疫細胞エンゲージャー分子、または本発明の第７の態様にしたがうポリヌクレオチド、または本発明の第８の態様にしたがうベクター、または本発明の第９もしくは第１０の態様にしたがう細胞、または本発明の第１２の態様にしたがう医薬組成物を提供する。

【0052】

第１４の態様では、本発明は、疾患を処置するための方法であって、本発明の第１の態様にしたがうｓｄＡｂ、または本発明の第３の態様にしたがう抗体コンジュゲート、または本発明の第５の態様にしたがう免疫細胞エンゲージャー分子、または本発明の第６の態様にしたがう免疫細胞エンゲージャー分子、または本発明の第７の態様にしたがうポリヌクレオチド、または本発明の第８の態様にしたがうベクター、または本発明の第９もしくは第１０の態様にしたがう細胞、または本発明の第１２の態様にしたがう医薬組成物を、対象に投与するステップを含む方法を提供する。

【0053】

第１５の態様では、本発明は、疾患を処置するための医薬の製造における、本発明の第１の態様にしたがうｓｄＡｂ、または本発明の第３の態様にしたがう抗体コンジュゲート、または本発明の第５の態様にしたがう免疫細胞エンゲージャー分子、または本発明の第６の態様にしたがう免疫細胞エンゲージャー分子、または本発明の第７の態様にしたがうポリヌクレオチド、または本発明の第８の態様にしたがうベクター、または本発明の第９もしくは第１０の態様にしたがう細胞、または本発明の第１２の態様にしたがう医薬組成物の使用を提供する。

【0054】

疾患は、Ｂ細胞悪性腫瘍または形質細胞障害であり得る。

【0055】

Ｂ細胞悪性腫瘍または形質細胞障害は、白血病、有毛細胞白血病、慢性リンパ球性白血病、非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ＥＢＶ関連リンパ腫（バーキット）、リンパ形質細胞性リンパ腫、形質細胞腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、形質細胞白血病、多発性骨髄腫、マクログロブリン血症、アミロイドーシス、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、骨の孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、骨硬化性骨髄腫、重鎖疾患、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、非ＩｇＭ ＭＧＵＳ、ＩｇＭ ＭＧＵＳ、軽鎖ＭＧＵＳおよびくすぶり型多発性骨髄腫を含むリストから選択され得る。

【0056】

がんは、多発性骨髄腫であり得る。

【図面の簡単な説明】

【0057】

【図1】プレート結合抗原アッセイ用のＦＣＲＨ５－ＣＡＲ構築の概略図。

【0058】

【図2】プレートＦｃＲＨ５による刺激（２４ｈ）後のＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞におけるｍＣｌｏｖｅｒ－ＮＵＲ７７上方制御。たいていのＣＡＲ候補は、２４ｈの抗原刺激後、ＮＵＲ７７を上方制御する。非形質導入（ＮＴ）細胞は、一貫して低レベルのｍＣｌｏｖｅｒ発現を示し、一方、陽性対照（ａＣＤ３／ＣＤ２８）コーティングしたウェルは、著しく活性化される。

【0059】

【図3-1】プレートＦｃＲＨ５による刺激（７２ｈ）後のＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞におけるｍＣｌｏｖｅｒ－ＮＵＲ７７上方制御。予想どおり、Ｎｕ７７－ｍＣｌｏｖｅｒ発現は、７２ｈ後、抗原との初期接触と比べて低減する。ここで示される低下は、陽性対照刺激の減少に一致する。示すデータは、二つ組実験を代表する。

【図3-2】プレートＦｃＲＨ５による刺激（７２ｈ）後のＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞におけるｍＣｌｏｖｅｒ－ＮＵＲ７７上方制御。予想どおり、Ｎｕ７７－ｍＣｌｏｖｅｒ発現は、７２ｈ後、抗原との初期接触と比べて低減する。ここで示される低下は、陽性対照刺激の減少に一致する。示すデータは、二つ組実験を代表する。

【図3-3】プレートＦｃＲＨ５による刺激（７２ｈ）後のＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞におけるｍＣｌｏｖｅｒ－ＮＵＲ７７上方制御。予想どおり、Ｎｕ７７－ｍＣｌｏｖｅｒ発現は、７２ｈ後、抗原との初期接触と比べて低減する。ここで示される低下は、陽性対照刺激の減少に一致する。示すデータは、二つ組実験を代表する。

【0060】

【図4】プレート結合抗原での刺激に応じた、抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ ＣＡＲ形質導入Ｊｕｒｋａｔ ＮＲ４Ａ１ Ｔ細胞によるｍＣｌｏｖｅｒ－ＮＵＲ７７上方制御（ＭＦＩに対するＦｃＲＨ５濃度）。Ａ）２４ｈインキュベーション；Ｂ）７２ｈインキュベーション。

【0061】

【図5-1】プレートＦｃＲＨ５＿２倍希釈系列による刺激（２４ｈ）後のＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞における反復ｍＣｌｏｖｅｒ－ＮＵＲ７７上方制御。

【図5-2】プレートＦｃＲＨ５＿２倍希釈系列による刺激（２４ｈ）後のＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞における反復ｍＣｌｏｖｅｒ－ＮＵＲ７７上方制御。

【0062】

【図6】プレート結合抗原活性化後のｍＣｌｏｖｅｒ陽性細胞の百分率。Ａ）ＰＢＡまたはａＣＤ３／ＣＤ２８刺激によるＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞の活性化。Ｂ）ａＣＤ３／ＣＤ２８データを除いた、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞の活性化。ＰＢＡ＝プレート結合抗原。

【0063】

【図7】ＦｃＲＨ５ Ｉｇ８に対するＥＬＩＳＡアッセイ。ヒトＦｃＲＨ５ Ｉｇ８ドメインに対する、可溶性抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ抗体のＥＬＩＳＡアッセイ。ＦｃＲＨ５ Ｉｇ８－ｍｕＦｃに対する抗マウス二次抗体により検出された結合。Ａ）抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｈｉｓコーティングの滴定。Ｂ）１μｇ／ｍｌのＶＨＨコーティングでの最大シグナルに基づく、クローンのランク付け。クローン８５１３９の結合エピトープは、Ｉｇ８ドメインの外側にある。

【0064】

【図8】Ａ）ＨＥＫ２９３Ｔ ＮＴ、およびＦｃＲＨ５ Ｉｇ８ドメインをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔの代表的ドットプロット。３３％の細胞が、ｅＧＦＰトランスフェクションマーカーを含有する、ヒトＦｃＲＨ５ Ｉｇ８ドメインを発現する構築物をトランスフェクトされる。Ｂ）抗Ｈｉｓ ＡＦ６４７二次抗体で検出された抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｈｉｓ抗体によるＨＥＫ２９３Ｔ ＮＴ染色のヒストグラムプロット。青色曲線＝二次抗体のみ。赤色曲線＝ＶＨＨ－Ｈｉｓ染色。Ｃ）抗Ｈｉｓ ＡＦ６４７二次抗体で検出された抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｈｉｓ抗体によるＨＥＫ２９３Ｔ ＦｃＲＨ５ Ｉｇ８染色のヒストグラムプロット。青色曲線＝二次抗体のみ。赤色曲線＝ＶＨＨ－Ｈｉｓ染色。

【0065】

【図9-1】抗ＦｃＲＨ５結合剤に関する、粒子分散および凝集プロファイルのＭＡＤＬＳ解析。Ａ）粒径分布。抗体は、主として単分散プロファイルを示す。Ｂ）平均粒径。サイズは、予想される分子量８２ｋＤａに一致する。Ｃ）サイズに基づく％凝集。

【図9-2】抗ＦｃＲＨ５結合剤に関する、粒子分散および凝集プロファイルのＭＡＤＬＳ解析。Ａ）粒径分布。抗体は、主として単分散プロファイルを示す。Ｂ）平均粒径。サイズは、予想される分子量８２ｋＤａに一致する。Ｃ）サイズに基づく％凝集。

【発明を実施するための形態】

【0066】

発明の詳細な説明
単一ドメイン抗体
本発明は、ＦｃＲＨ５結合ドメインを含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を提供する。したがって、ｓｄＡｂは、ＦｃＲＨ５に選択的に結合することができるものであってよい。

【0067】

本明細書で使用される場合、「抗体」は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗原結合部位または抗原結合ドメインを有するタンパク質またはポリペプチドを意味する。抗体は、３つのＣＤＲを含むことができ、ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）の抗原結合部位と同等である抗原結合部位を有することができる。

【0068】

用語「ポリペプチド」は、その従来の意味で、一般的に、隣接するアミノ酸のα－アミノ基とカルボキシル基との間のペプチド結合により、一方が他方に連結した、一連のアミノ酸、一般的にＬ－アミノ酸を意味して使用される。用語「ポリペプチド」は、用語「アミノ酸配列」、「ペプチド」、および／または「タンパク質」と交換可能に使用される。用語「残基」は、アミノ酸配列中のアミノ酸に関して使用される。

【0069】

ｓｄＡｂ（すなわちナノボディ）は、単一モノマー可変抗体ドメインを含む抗体断片である。ｓｄＡｂは、３つのＣＤＲを有する、重鎖可変（ＶＨ）ドメインまたは軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであり得る単鎖可変ドメインであってよい。

【0070】

ＳｄＡｂは、可変重鎖ドメイン抗体（ＶＨＨ）を産生するために、ラクダ類で見出された重鎖抗体から操作された。ＳｄＡｂは、可変新抗原受容体抗体（ＶＮＡＲ）を産生するために、軟骨魚類で見出された免疫グロブリン新抗原受容体（ＩｇＮＡＲ）と呼ばれる重鎖抗体からも操作された。

【0071】

好適には、ｓｄＡｂは、ＶＨＨ、ＶＨドメインまたはＶＮＡＲであってよい。好適には、ｓｄＡｂはＶＨＨであってよい。

【0072】

ｓｄＡｂは、Ｈｕｍａｂｏｄｙ（登録商標）（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）であってよい。Ｈｕｍａｂｏｄｙは、ＶＬドメインを有さずに完全ヒトＶＨドメインを有する重鎖のみ抗体を産生するトランスジェニックマウスにより産生される抗体である。

【0073】

ｓｄＡｂは、非ヒト、ヒト化または完全ヒトであってよい。好適には、ｓｄＡｂはヒト化ｓｄＡｂであってよい。好適には、ｓｄＡｂは完全ヒトｓｄＡｂであってよい。

【0074】

ポリペプチドの残部は、抗原結合部位のための好適な足場を提供し、かつその抗原結合部位を、抗原に結合するために適当なやり方で提示する任意の配列であってよい。

【0075】

「重鎖可変領域」または「ＶＨ」は、フレームワーク領域として公知である隣接するストレッチ間に挟まれた３つのＣＤＲを含有する、抗原結合ドメインまたは抗体の重鎖の断片を指し、前記フレームワーク領域は、前記ＣＤＲよりも高度に保存されており、前記ＣＤＲを支持する足場を形成する。「軽鎖可変領域」または「ＶＬ」は、フレームワーク領域間に挟まれた３つのＣＤＲを含有する、抗原結合ドメインまたは抗体の軽鎖の断片を指す。

【0076】

抗原結合ドメインまたは抗体またはその抗原結合断片に関する「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗体の重鎖または軽鎖（ｔｈｅ ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ）の可変領域中の高度可変ループを指す。ＣＤＲは、抗原の立体構造と相互作用でき、抗原への結合を主として決定する（いくつかのフレームワーク領域は、結合に関与することが公知であるが）。重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、各々、３つのＣＤＲを含有する（アミノ末端からカルボキシ末端へと重鎖ＣＤＲ１、２、および３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、２、および３と番号付け）。

【0077】

ＣＤＲのいくつかの定義が一般的に使用される。Ｋａｂａｔの定義は、配列変動性に基づいており、最も一般的に使用される（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／を参照）。ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム（ＩＭＧＴ）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇを参照）も使用することができる。このシステムによると、相補性決定領域（ＣＤＲ－ＩＭＧＴ）は、Ｖドメインに対するＩＭＧＴの固有の番号付けにしたがい区切られた、可変ドメインのループ領域である。可変ドメイン中には３つのＣＤＲ－ＩＭＧＴ：ＣＤＲ１－ＩＭＧＴ（ＢＣループ）、ＣＤＲ２－ＩＭＧＴ（Ｃ’Ｃ”ループ）、およびＣＤＲ３－ＩＭＧＴ（ＦＧループ）がある。ＣＤＲの他の定義も開発されており、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、ＡｂＭの定義、および接触定義である（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇを参照）。異なる指定がない限り、本明細書に記載されるＣＤＲは、ＩＭＧＴシステムを使用して導き出される。

【0078】

「ヒト化抗体」は、ヒト抗体定常ドメインと、ヒト可変ドメインに対する高レベルの配列相同性を含有するように改変された非ヒト可変ドメインとを含有する、遺伝子操作された非ヒト抗体を指す。それは、共に抗原結合部位を形成する３つ（または６つ）の非ヒト抗体相補性決定領域（ＣＤＲ）を、相同ヒトアクセプターフレームワーク領域（ＦＲ）上にグラフトさせることにより達成され得る。抗体ヒト化法の非限定的な例には、ＣＤＲグラフティング、ＣＤＲ相同性（フレームワーク類似性よりはむしろマウス／ヒト配列間のＣＤＲ相同性に基づく）；再表面化（すなわち、「よりヒトらしい」表面を得るために表面残基を置換え）、および生殖細胞系列ベースのヒト化が含まれる。例えば、親抗体の結合親和性および特異性を完全に再構成するためには、親抗体（すなわち非ヒト抗体）からヒトフレームワーク領域への、フレームワーク残基の置換（復帰変異）が必要であり得る。構造的相同性モデリングは、抗体の結合特性にとって重要である、フレームワーク領域中のアミノ酸残基の同定に役立つことができる。したがって、ヒト化抗体は、非ヒトＣＤＲ配列、非ヒトアミノ酸配列への１つまたは複数のアミノ酸復帰変異を必要に応じて含む主にはヒトフレームワーク領域、および必要に応じて完全にヒトの定常領域を含むことができる。必要に応じて、好ましい特徴、例えば、親和性および生化学的特性を有するヒト化抗体を得るために、必ずしも復帰変異ではない追加のアミノ酸改変を導入することができる。非ヒト治療用抗体のヒト化は、ヒトでのその免疫原性を最小にするために行い、そのようなヒト化抗体は、同時に、非ヒト起源の抗体の特異性および結合親和性を維持する。ＶＨＨのヒト化の例示的な方法は、Ｖｉｎｃｋｅ ｅｔ ａｌ． （Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ； ２００９； ２８４（５）； ３２７３－３２８４）およびＲｏｓｓｏｔｔｉ ｅｔ ａｌ． （ＦＥＢＳ； ２０２１； ｄｏｉ：１０．１１１１／ｆｅｂｓ／１５８０９）に記載される。

【0079】

ｓｄＡｂは、抗原結合ドメインとコグネイト標的との間の結合相互作用に依拠する任意の方法において有益であると判明し得る。したがって、ｓｄＡｂは、検出抗体および／または捕捉抗体として使用することができる。ｓｄＡｂは、治療用抗体、例えば、ＦｃＲＨ５タンパク質、またはＦｃＲＨ５を発現する細胞を標的とする治療用抗体として使用することができる。したがって、ｓｄＡｂの適用に関する非限定的な例は、ＦｃＲＨ５の発現および／または過剰発現で特徴付けられるがんの処置での使用である。

【0080】

本発明は、本明細書に定義される任意のｓｄＡｂまたはタンパク質またはポリペプチドの断片も包含する。断片は、ｓｄＡｂまたはタンパク質またはポリペプチドの全長配列よりも短いものの、ｓｄＡｂまたはタンパク質またはポリペプチドの全長配列の完全な生物活性および／または抗原性特質を保持するアミノ酸配列を含むと理解される。前記断片は、ｓｄＡｂまたはタンパク質またはポリペプチドの全長配列と同じ結合親和性を保持するとも理解される。

【0081】

ＦｃＲＨ５結合ドメイン
本明細書に記載される結合ドメインは、ＦｃＲＨ５に特異的に結合できる。

【0082】

好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列を含み得る。
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号４）
ＣＤＲ２－ＩＮＳＤＧＧＴＡ（配列番号５）
ＣＤＲ３－ＡＡＮＲＧＦＣＡＧＶＲＣＬＥＹＱＹ（配列番号６）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＧＧＳＧＲＶＳＳＴ（配列番号８）
ＣＤＲ３－ＡＡＲＲＤＹＬＰＦＰＰＥＳＹＤＹ（配列番号９）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＧＧＳＧＲＶＳＳＴ（配列番号８）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＴＳＴＮＧＧＤＹＤＹ（配列番号１０）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＡＴ（配列番号１１）
ＣＤＲ３－ＡＧＴＲＲＡＦＳＴＧＬＲＤＹＤＹ（配列番号１２）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＮＳＴ（配列番号１３）
ＣＤＲ２－ＩＳＷＳＧＧＴＹ（配列番号１４）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＫＧＷＳＴＲＧＤＤＹＤＹ（配列番号１５）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＹＮＮＹＡ（配列番号１６）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＭＴ（配列番号１７）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＡＲＲＤＹＳＹ（配列番号１８）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＳＹＡ（配列番号１９）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＩＧＧＶＴ（配列番号２０）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＧＬＶＳＩＳＴＴＰＮＤＹＤＹ（配列番号２１）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＬ（配列番号２４）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＲＮＩＦＳＬＮＰ（配列番号２５）
ＣＤＲ２－ＩＴＤＧＧＳＴ（配列番号２６）
ＣＤＲ３－ＮＲＶＧＧＬＱＴＷＡ（配列番号２７）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号３０）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＤＳＲＰ（配列番号３１）
ＣＤＲ２－ＶＳＷＲＧＥＳＴ（配列番号３２）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＥＰＹＳＧＴＹＹＹＲＧＲＤＹＤＹ（配列番号３３）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＭＹＡ（配列番号３４）
ＣＤＲ２－ＩＳＧＳＡＲＩＴ（配列番号３５）
ＣＤＲ３－ＡＡＳＳＴＹＴＳＴＳＧＳＳＹＮＹ（配列番号３６）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＳＳＲＡＡ（配列番号１５５）
ＣＤＲ２－ＩＳＷＳＧＧＴＴ（配列番号１５６）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＴＴＡＲＮＤＹＤＨ（配列番号１５７）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＬＳ（配列番号１８６）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＡ（配列番号１６０）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＬＳ（配列番号１８６）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＶＲＳＡ（配列番号１８７）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＣＲＳＡ（配列番号１８８）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＳＳＦＲＬＮＧ（配列番号１６１）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＳＲＡ（配列番号１８９）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＶＳＩＮＡ（配列番号１６２）
ＣＤＲ２－ＩＤＲＳＧＮＴ（配列番号１７６）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＹＳＤＳ（配列番号１９０）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＳＹＡ（配列番号１９）
ＣＤＲ２－ＩＤＧＩＧＧＩＴ（配列番号１７７）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＳＡ（配列番号１９１）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＰＳ（配列番号１９２）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＲＳ（配列番号１９３）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＥＲＩＦＲＩＮＡ（配列番号１６４）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＲＳ（配列番号１９３）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＰＦＲＬＳ（配列番号１９４）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＴＰＦＲＬＳ（配列番号１９５）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＲＧＧＮＴ（配列番号１７９）
ＣＤＲ３－ＮＳＩＰＦＲＬＳ（配列番号１９６）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＩＮＧ（配列番号１６６）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＩＳ（配列番号１９７）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＬＹ（配列番号１９８）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＫＡＩＰＦＲＬＳ（配列番号１９９）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１６７）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＡ（配列番号１６０）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＧＮＮＡ（配列番号１６８）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＴＹＧ（配列番号１６９）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＡＴ（配列番号１１）
ＣＤＲ３－ＡＧＴＲＲＡＦＳＴＧＬＲＤＹＤＹ（配列番号１２）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＴＩＥＲＮＮＡ（配列番号１７０）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＲＳＲＤＹＤＹ（配列番号２００）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＳＳＲＤＹＤＹ（配列番号２０１）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＧＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０２）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＳＹＡ（配列番号１９）
ＣＤＲ２－ＩＳＱＦＧＧＶＴＴ（配列番号１７９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＧＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０２）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＧＧＲＲＦＳＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０３）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＳＳＲＥＹＤＩ（配列番号２０４）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＰ（配列番号１８０）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＬＳＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０５）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＧＧＧＶＳ（配列番号１８１）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＬＲＦＳＴＧＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０６）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＲＲＹＡ（配列番号１７１）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＭＴ（配列番号１７）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＴＲＲＤＹＡＹ（配列番号２０７）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＮＳＴ（配列番号１３）
ＣＤＲ２－ＩＳＷＳＧＧＴＴ（配列番号１５６）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＫＧＷＳＴＲＧＤＤＹＤＹ（配列番号１５）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＶＩ（配列番号１７２）
ＣＤＲ２－ＳＳＧＳＧＧＶＴ（配列番号１８２）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＬＴＷＳＴＲＰＳＤＦＴＳ（配列番号２０８）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＶＩ（配列番号１７２）
ＣＤＲ２－ＳＮＷＳＧＧＶＴ（配列番号１８３）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＡＲＲＤＹＳＹ（配列番号１８）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＭＴ（配列番号１７）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＡＲＲＤＹＳＹ（配列番号１８）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＲＹＡ（配列番号１７３）
ＣＤＲ２－ＩＮＧＳＧＧＴ（配列番号１８４）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＴＴＴＲＮＥＹＤＨ（配列番号２０９）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＲＹＡ（配列番号１７３）
ＣＤＲ２－ＩＮＧＳＧＧＴ（配列番号１８４）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＴＴＴＲＮＥＹＤＨ（配列番号２０９）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＳＴＡＲＮＤＹＤＨ（配列番号２１０）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＧＧＲＩＦＲＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号２１１）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＦＦＴＴＡＲＮＤＹＤＨ（配列番号２１２）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＧ（配列番号２１３）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＧ（配列番号２１３）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＤＧ（配列番号２１４）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＡＰＮＹＧ（配列番号２１５）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＶ（配列番号２１６）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＩＮＡ（配列番号１７４）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＬＮＹＧ（配列番号２１７）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＬＶＰＮＹＧ（配列番号２１８）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＬＰＮＹＧ（配列番号２１９）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＴＮＹＧ（配列番号２２０）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＴＮＹＧ（配列番号２２０）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＶ（配列番号２２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＲＧＧＳＴ（配列番号１８５）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＧ（配列番号２１３）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＳＩＮＡ（配列番号１７５）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）
一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは以下の配列を含み得る：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＡＲＮＰＴＲＧＷＹＳＴＤＹ（配列番号２２１）

【0083】

ＣＤＲの１つまたは複数は、１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を含むことができる。これらのＣＤＲを含むＦｃＲＨ５結合ドメインは、ＦｃＲＨ５に結合する能力を好適に維持することができる。

【0084】

好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、ＶＨＨを含むことができる。

【0085】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４０として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４０として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0086】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４１として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４１として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0087】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４２として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４２として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0088】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４３として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４３として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0089】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４４として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４４として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0090】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４５として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４５として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0091】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４６として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４６として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0092】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４７として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４７として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0093】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４８として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４８として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0094】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４９として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号４９として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0095】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号５０として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号５０として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0096】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号５１として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号５１として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0097】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号５２として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号５２として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0098】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号５３として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号５３として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0099】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号１５８として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号１５８として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0100】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２３として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２３として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0101】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２４として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２４として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0102】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２５として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２５として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0103】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２６として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２６として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0104】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２７として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２７として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0105】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２８として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２８として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0106】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２９として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２２９として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0107】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３０として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３０として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0108】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３１として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３１として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0109】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３２として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３２として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0110】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３３として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３３として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0111】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３４として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３４として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0112】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３５として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３５として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0113】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３６として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３６として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0114】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３７として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３７として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0115】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３８として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３８として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0116】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３９として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２３９として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0117】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４０として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４０として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0118】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４１として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４１として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0119】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４２として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４２として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0120】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４３として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４３として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0121】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４４として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４４として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0122】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４５として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４５として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0123】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４６として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４６として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0124】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４７として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４７として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0125】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４８として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４８として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0126】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４９として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２４９として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0127】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５０として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５０として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0128】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５１として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５１として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0129】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５２として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５２として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0130】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５３として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５３として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0131】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５４として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５４として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0132】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５５として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５５として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0133】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５６として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５６として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0134】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５７として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５７として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0135】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５８として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５８として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0136】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５９として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２５９として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0137】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６０として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６０として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0138】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６１として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６１として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0139】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６２として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６２として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0140】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６３として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６３として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0141】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６４として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６４として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0142】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６５として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６５として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0143】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６６として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６６として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0144】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６７として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６７として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0145】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６８として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６８として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0146】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６９として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２６９として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0147】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７０として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７０として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0148】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７１として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７１として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0149】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７２として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７２として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0150】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７３として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７３として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0151】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７４として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７４として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0152】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７５として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７５として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0153】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７６として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７６として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0154】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７７として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７７として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0155】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７８として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７８として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0156】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７９として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２７９として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0157】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８０として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８０として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0158】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８１として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８１として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0159】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８２として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８２として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0160】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８３として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８３として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0161】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８４として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８４として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0162】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８５として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８５として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0163】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８６として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８６として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0164】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８７として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８７として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0165】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８８として示される配列あるいはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨを含み得る。好適には、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、配列番号２８８として示される配列を有するＶＨＨを含み得る。

【0166】

配列番号４０～５３、１５８、および２２３～２８８のアミノ酸配列は、下の表１に提供される。

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【0167】

好適には、本明細書に記載されるＶＨＨは、本明細書に記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含むことができる。
したがって、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、
以下の番号付け：
ＣＤＲ１
ＣＤＲ２
ＣＤＲ３
を有するＣＤＲを有するＶＨＨ
を含むことができる。

【0168】

用語「バリアント」は、本明細書に記載されるアミノ酸配列と同等の機能を有するものの、１つまたは複数のアミノ酸の置換、挿入または欠失を含むポリペプチドを指す。したがって、ＶＨＨは、本明細書に記載される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するバリアントを含むことができる。

【0169】

本明細書で使用される場合、「バリアント」は、「変異体」と同義であり、対応する野生型配列と比べて異なるアミノ酸配列を指す。用語「野生型」は、それぞれ天然タンパク質と同一であるアミノ酸配列をそれぞれ有するタンパク質を意味して使用される。

【0170】

１つまたは複数の変異（置換、付加または欠失）を、結合活性に悪影響を与えることなしに各ＣＤＲに導入することが可能であり得る。各ＣＤＲは、例えば、１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を有することができる。１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を含むＣＤＲの１つまたは複数を含むＦｃＲＨ５結合ドメインを含むＶＨＨ領域は、ＦｃＲＨ５に結合する能力を好適に維持することができる。

【0171】

ＦｃＲＨ５結合ドメインの、ＦｃＲＨ５に結合する能力は、結合親和性の決定により評価することができる。

【0172】

本明細書で使用される用語「親和性」は、抗体の抗原結合部位とエピトープとの間の相互作用の強度を指す。親和性は、通常は、抗体と抗原との間の、解離速度定数（ｋ_ｄまたはｋ_ｏｆｆ）の会合速度定数（ｋ_ａまたはｋ_ｏｎ）に対する比、すなわちｋ_ｄ／ｋ_ａまたはｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎである平衡解離定数（ＫＤ）として測定される。ＫＤと親和性とは、反比例する。本明細書で使用される用語「会合速度定数」または「ｏｎ速度」または「ｋ_ａ」または「ｋ_ｏｎ」は、抗体がいかに素早くその標的に結合するかを特徴付けるために使用される定数を指す。本明細書で使用される用語「解離速度定数」または「ｏｆｆ速度」または「ｋ_ｄ」または「ｋ_ｏｆｆ」は、抗体がいかに素早くその標的から結合を解除するかまたは解離するかを特徴付けるために使用される定数を指す。ＫＤは、Ｍで測定される；ｋ_ａは、Ｍ^－１ｓ^－１で測定される；そしてｋ_ｄは、ｓ^－１で測定される。

【0173】

結合親和性の定量的な評価または測定（例えば、ＫＤ値の確定）は、当技術分野で公知の方法を使用して、例えば、標識依存性の方法、例えば直接的および間接的ＥＬＩＳＡならびにラジオイムノアッセイ方法により、ならびに例えば生体層干渉および表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）などの相互作用のリアルタイムでの直接検出および測定を可能にする無標識方法により、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムを使用して決定または測定することができる。平衡解離定数（ＫＤ）に加えて、会合速度定数（Ｋａ（１／Ｍｓ））、および解離速度定数（Ｋｄ（１／ｓ））も決定することができる。

【0174】

ＦｃＲＨ５結合ドメインのＫＤおよび動力学速度定数（ｋｉｎｅｔｉｃ ｒａｔｅ ｃｏｎｓｔａｎｔ）は、ＳＰＲにより測定することができる。アッセイは、異なるパラメータを使用して、および市販の様々な機器を使用して行うことができる。表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）実験は、例えば、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００またはＢｉａｃｏｒｅ８ｋ装置を使用して行うことができる。ＫＤおよび動力学速度定数は、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００またはＢｉａｃｏｒｅ８ｋ装置を用いて、必要に応じてＨＢＳ－Ｐ＋またはＨＢＳＰ１をランニング緩衝液および希釈緩衝液として使用して（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）、２５℃において３０ｍｌ／分の流速で測定することができる。動力学速度定数は、１：１のラングミュア結合モデルにしたがう曲線あてはめによって得ることができる。

【0175】

結合特異性を決定するための方法には、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、免疫組織化学、フローサイトメトリー、フェルスター共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、ファージディスプレイライブラリー、酵母ツーハイブリッドスクリーン、共免疫沈降、二分子蛍光補完、およびタンデムアフィニティー精製が限定されずに含まれる。結合親和性は、蛍光消光、等温滴定熱量測定のような方法を使用して決定することもできる。

【0176】

本発明に包含されるバリアントは、対応する全長配列と比べて必須の未変更または改善した結合活性を有する。

【0177】

同一性比較は、目測で、または通常は、容易に入手可能な配列比較プログラムを用いて行うことができる。これらの市販のコンピュータプログラムは、２つまたはそれよりも多くの配列間の％同一性を計算することができる。そのようなアライメントを行うための好適なコンピュータプログラムは、ＧＣＧウィスコンシンベストフィットパッケージ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ， Ｕ．Ｓ．Ａ．； Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．， １９８４， Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２：３８７）である。配列比較を行うことができる（ｔｈａｎ ｃａｎ ｐｅｒｆｏｒｍ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ）他のソフトウェアの例には、比較ツールのＢＬＡＳＴパッケージ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， １９９９ ｉｂｉｄ － Ｃｈａｐｔｅｒ １８を参照）、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， １９９０， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ４０３－４１０）、およびＧＥＮＥＷＯＲＫＳスート（ｓｕｉｔｅ）が限定されずに含まれる。ＢＬＡＳＴおよびＦＡＳＴＡの両方が、オフラインおよびオンライン検索に利用可能である。例えば、２つのポリペプチド配列間の同一性百分率は、ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．から自由に入手可能なＢＬＡＳＴによって容易に決定することができる。

【0178】

ソフトウェアが最適なアライメントを生成したら、％同一性を計算することが可能である。ソフトウェアは、一般的に、それを配列比較の一部として行い、数値結果を生成する。

【0179】

配列は、サイレント変化を生じて機能的に同等の分子をもたらす、アミノ酸残基の１つまたは複数の欠失、挿入または置換を有することができる。これらの配列は、本発明に包含される。意図的なアミノ酸置換は、活性が保持される限り、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性および／または両親媒性の性質の類似性に基づいて行うことができる。例えば、負電荷アミノ酸にはアスパラギン酸およびグルタミン酸が含まれ；正電荷アミノ酸にはリジンおよびアルギニンが含まれ；非電荷極性の頭部基を有する、親水性値が類似したアミノ酸には、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、フェニルアラニンおよびチロシンが含まれる。

【0180】

好適には、単一ドメイン抗体を含むポリペプチドまたはＦｃＲＨ５結合分子は、抗体コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、免疫細胞エンゲージャーであってよい。

【0181】

前記のＦｃＲＨ５結合分子との関連で、細胞活性化を刺激するために、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、ある特定の結合プロファイルで（例えば、必要とされる結合親和性で）、そのコグネイト抗原（ＦｃＲＨ５）に結合することができる。

【0182】

抗体および結合分子の有用性は、多くの場合は互いに関連する溶解特性、例えば、溶解性、凝集、および熱安定性によって制限される場合がある。抗体溶解性および抗体凝集は、熱安定性と無関係でもあり得るが、熱安定性が低いことは、抗体の溶解性および凝集の両方に影響を与える場合がある。

【0183】

熱安定性の定量的な評価または測定は、当技術分野で公知の方法、例えば、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）を含む、アンフォールディング温度およびタンパク質アンフォールディング中の熱力学的パラメータを測定する技術を使用して決定または測定することができる。折畳み状態からアンフォールディングした状態への移行が起こる融解温度（Ｔｍ）が、抗体および結合分子の熱安定性に関する代替パラメータとして使用される。例えば、ＤＳＦは、Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮＴ．４８装置（Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ）を使用して行うことができる。Ｔｍは、Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮＴ．４８装置を用い、２０℃から９５℃への１℃／分の温度勾配で、３３０ｎｍおよび３５０ｎｍにおいて走査して行うことができる。融解温度（Ｔｍ）は、３５０ｎｍ／３３０ｎｍ比の一次導関数として計算される。

【0184】

タンパク質凝集は、タンパク質分子が互いに自己会合するプロセスである。凝集は、タンパク質がアンフォールディングまたは部分的アンフォールディングを受けることを必要とする。凝集の定量的な評価または測定は、当技術分野で公知の方法、例えば、多くの場合、超遠心分離、サイズ排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、動的光散乱法または濁度測定に依拠する、タンパク質凝集体をモニタリングするための生化学的アッセイを使用して決定または測定することができる。例えば、抗体および結合ドメインの凝集傾向および平均粒径は、多角度動的光散乱法（ＭＡＤＬＳ）によって決定することができる。ＭＡＤＬＳは、ゼータサイザーＵｌｔｒａデバイスおよびＺＳ Ｘｐｌｏｒｅｒソフトウェア（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を使用して行うことができる。

【0185】

好ましいＦｃＲＨ５ ＶＨＨドメインは、下の表１２に記載される：

【表12】

【0186】

一実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、Ｂｉａｃｏｒｅ ８ｋ装置でのＳＰＲにより測定して、少なくとも約１×１０^－８Ｍ、５×１０^－９Ｍ、１×１０^－９Ｍ、５×１０^－１０Ｍ、１×１０^－１０Ｍ、５×１０^－１１Ｍ、１×１０^－１１Ｍ、５×１０^－１２Ｍ、１×１０^－１２Ｍ、５×１０^－１３Ｍ、１×１０^－１３Ｍ、５×１０^－１４Ｍ、１×１０^－１４Ｍまたは５×１０^－１５Ｍまたは１×１０^－１５Ｍの親和性（ＫＤ）を有する。別の実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、Ｂｉａｃｏｒｅ ８ｋ装置でのＳＰＲにより測定して、少なくとも約５×１０^－３ｓ^－１、１×１０^－３ｓ^－１、５×１０^－４ｓ^－１、１×１０^－４ｓ^－１、５×１０^－５ｓ^－１、１×１０^－５ｓ^－１、５×１０^－６ｓ^－１、１×１０^－６ｓ^－１、５×１０^－７ｓ^－１、１×１０^－７ｓ^－１、５×１０^－８ｓ^－１、１×１０^－８ｓ^－１、５×１０^－９ｓ^－１または１×１０^－９ｓ^－１の解離速度定数（ｋ_ｄまたはｋ_ｏｆｆ）を有する。別の実施形態では、本発明のＦｃＲＨ５結合部分は、Ｂｉａｃｏｒｅ ８ｋ装置でのＳＰＲにより測定して、少なくとも約１×１０^３Ｍ^－１ｓ^－１、５×１０^３Ｍ^－１ｓ^－１、１×１０^４Ｍ^－１ｓ^－１、５×１０^４Ｍ^－１ｓ^－１、１×１０^５Ｍ^－１ｓ^－１、５×１０^５Ｍ^－１ｓ^－１、１×１０^６Ｍ^－１ｓ^－１または５×１０^６Ｍ^－１ｓ^－１の会合速度定数（ｋ_ａまたはｋ_ｏｎ）を有する。

【0187】

別の実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）により、２０℃から９５℃への１℃／分の温度勾配で３３０ｎｍおよび３５０ｎｍにおいて測定して（Ｔｍは、３５０ｎｍ／３３０ｎｍ比の一次導関数として計算）、少なくとも約５９℃、６０℃、６１℃、６２℃、６３℃、６４℃、６５℃、６６℃、６７℃、６８℃、６９℃、７０℃、７１℃、７２℃、７３℃、７４℃、７５℃、７６℃、７７℃、７８℃、７９℃または８０℃の熱安定性Ｔｍを有する。

【0188】

さらに別の実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、Ｂｉａｃｏｒｅ ８ｋ装置でのＳＰＲにより測定して、少なくとも約１×１０^－８Ｍ、５×１０^－９Ｍ、１×１０^－９Ｍ、５×１０^－１０Ｍ、１×１０^－１０Ｍ、５×１０^－１１Ｍ、１×１０^－１１Ｍ、５×１０^－１２Ｍ、１×１０^－１２Ｍ、５×１０^－１３Ｍ、１×１０^－１３Ｍ、５×１０^－１４Ｍ、１×１０^－１４Ｍ、５×１０^－１５Ｍまたは１×１０^－１５Ｍの親和性（ＫＤ）を有し、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）により、２０℃から９５℃への１℃／分の温度勾配で３３０ｎｍおよび３５０ｎｍにおいて測定して（Ｔｍは、３５０ｎｍ／３３０ｎｍ比の一次導関数として計算）、少なくとも約５９℃、６０℃、６１℃、６２℃、６３℃、６４℃、６５℃、６６℃、６７℃、６８℃、６９℃、７０℃、７１℃、７２℃、７３℃、７４℃、７５℃、７６℃、７７℃、７８℃、７９℃または８０℃の熱安定性Ｔｍを有する。

【0189】

さらに別の実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、Ｂｉａｃｏｒｅ ８ｋ装置でのＳＰＲにより測定して、少なくとも約５×１０^－３ｓ^－１、１×１０^－３ｓ^－１、５×１０^－４ｓ^－１、１×１０^－４ｓ^－１、５×１０^－５ｓ^－１、１×１０^－５ｓ^－１、５×１０^－６ｓ^－１、１×１０^－６ｓ^－１、５×１０^－７ｓ^－１、１×１０^－７ｓ^－１、５×１０^－８ｓ^－１、１×１０^－８ｓ^－１、５×１０^－９ｓ^－１または１×１０^－９ｓ^－１の解離速度定数（ｋ_ｄまたはｋ_ｏｆｆ）を有し、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）により、２０℃から９５℃への１℃／分の温度勾配で３３０ｎｍおよび３５０ｎｍにおいて測定して（Ｔｍは、３５０ｎｍ／３３０ｎｍ比の一次導関数として計算）、少なくとも約５９℃、６０℃、６１℃、６２℃、６３℃、６４℃、６５℃、６６℃、６７℃、６８℃、６９℃、７０℃、７１℃、７２℃、７３℃、７４℃、７５℃、７６℃、７７℃、７８℃、７９℃または８０℃の熱安定性Ｔｍを有する。

【0190】

さらに別の実施形態では、ＦｃＲＨ５結合ドメインは、Ｂｉａｃｏｒｅ ８ｋ装置でのＳＰＲにより測定して、少なくとも約１×１０^３Ｍ^－１ｓ^－１、５×１０^３Ｍ^－１ｓ^－１、１×１０^４Ｍ^－１ｓ^－１、５×１０^４Ｍ^－１ｓ^－１、１×１０^５Ｍ^－１ｓ^－１、５×１０^５Ｍ^－１ｓ^－１、１×１０^６Ｍ^－１ｓ^－１または５×１０^６Ｍ^－１ｓ^－１の会合速度定数（ｋ_ａまたはｋ_ｏｎ）を有し、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）により、２０℃から９５℃への１℃／分の温度勾配で３３０ｎｍおよび３５０ｎｍにおいて測定して（Ｔｍは、３５０ｎｍ／３３０ｎｍ比の一次導関数として計算）、少なくとも約５９℃、６０℃、６１℃、６２℃、６３℃、６４℃、６５℃、６６℃、６７℃、６８℃、６９℃、７０℃、７１℃、７２℃、７３℃、７４℃、７５℃、７６℃、７７℃、７８℃、７９℃または８０℃の熱安定性Ｔｍを有する。

【0191】

別の実施形態では、ＦｃＲＨ５ドメインは、予測分子量に一致する平均粒径を有する優先的には単分散のプロファイル（例えば単一ピーク）、および多角度動的光散乱法（ＭＡＤＬＳ）により、ゼータサイザーＵｌｔｒａデバイスおよびＺＳ Ｘｐｌｏｒｅｒソフトウェア（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を使用して、ｐＨ７．４のＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍｌで測定して、約１％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％または０．１％未満の凝集を有する。

【0192】

抗体コンジュゲート
本発明は、本発明のｓｄＡｂ、および薬物、カーゴまたはペイロード構成要素を含む抗体コンジュゲートを提供する。抗体コンジュゲートは、がん薬物の選択性および細胞傷害活性の両方を向上させる、標的治療薬のクラスである抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であってよい。

【0193】

一般的に、ＡＤＣは、３つの構成要素を有し、（ｉ）抗体は、（ｉｉ）リンカーとコンジュゲートされ、そのリンカーも、（ｉｉｉ）薬物、治療用実体またはペイロード、例えば、細胞傷害性薬物または化学療法薬物とコンジュゲートされる。

【0194】

細胞の表面上の標的抗原に結合すると、抗体コンジュゲートは、内在化されて、リソソームへと輸送され、そこでペイロードは、切断可能リンカーのタンパク質分解（例えば、リソソーム内に見出されるカテプシンＢによる）によってか、または非切断可能リンカーを介してペイロードが結合している場合は、抗体のタンパク質分解による分解かのいずれかによって放出される。

【0195】

好適には、薬物またはペイロードは、化学療法用実体、放射性核種または検出用実体であってよい。

【0196】

本明細書で使用される用語「治療用実体」または「化学療法用実体」は、細胞の機能を阻害するもしくは妨げる、および／または細胞の破壊（細胞死）を引き起こす、および／または抗増殖効果を発揮する任意の分子を指すことができる。細胞傷害性薬物または化学療法薬物は、細胞に破壊的であり、かつ細胞の生存能力を低減する薬物を指す。好適な細胞傷害性薬物または化学療法薬物は、当技術分野で公知であり、チューブリン阻害剤、ＤＮＡ傷害剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、およびＲＮＡポリメラーゼＩＩ阻害剤を限定されずに含む。

【0197】

用語「放射性核種」は、独自のセラノスティック（すなわち治療および診断）潜在能力を有する放射性イムノコンジュゲートを指すことができる。診断目的には、抗体は、画像化手順、例えば、単一光子放射断層撮影または陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）と適合性の放射性核種で標識することができる。治療目的には、放射性核種の選択は、主として、処置すべき腫瘍のサイズに依存し、高エネルギーβ放射体、例えば、９０Ｙは、より大きな腫瘍の治療に好適であり、中エネルギーβ放射体、例えば、１３１Ｉおよび１７７Ｌｕは、より小さい腫瘍の処置のためにより有効である。ＡＲＣで使用するために好適な放射性核種は、当技術分野で周知であり、他の放射性核種も、本発明において企図される。放射性免疫療法の主な魅力的な特色の１つは、クロスファイア効果またはバイスタンダー効果、すなわち、抗体局在の部位に近接する細胞を損傷する能力である。ほとんどの場合、抗体の放射性標識は、チロシンのヨウ素化によってか、または金属キレート剤、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）もしくは１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）の、抗体分子へのコンジュゲートによるかのいずれかで達成する。

【0198】

抗体コンジュゲートの内在化特性を調査する目的で、ペイロードを、検出用実体または検出可能な実体により置き換えることができる。

【0199】

「検出可能な実体」は、蛍光実体、例えば蛍光ペプチドまたは蛍光色素または蛍光標識であってよい。本明細書で使用される用語「蛍光実体」は、励起の後に検出可能な波長の光を放出する部分を指す。蛍光実体の例には、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ）、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、増強ＧＦＰ、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）およびｍＣｈｅｒｒｙが限定されずに含まれる。抗体コンジュゲートの内部移行を追跡するためには、ｐＨ感受性の色素または標識が特に有利である。ｐＨ感受性色素の非限定的な例には、明るい蛍光を示し、ｐＨが低下すると消光するフルオレセイン、および中性ｐＨでは非常に低い蛍光を示し、ｐＨがより酸性になると蛍光の増加を示すｐＨｒｏｄｏ色素が含まれる。

【0200】

本発明の抗体コンジュゲートは、それにコンジュゲートされた、少なくとも１つの治療薬またはペイロード分子（検出用実体を含む）を含むことができる。本発明の抗体コンジュゲートは、所望の治療効果を達成するために、任意の好適な数、すなわち１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはそれよりも多いペイロード分子を含むことができる。

【0201】

好適には、本発明の抗体コンジュゲートは、生物学的に活性な細胞傷害性のペイロードまたは薬物、例えば抗がん薬物に連結された（すなわちコンジュゲートされた）、本明細書に記載されるｓｄＡｂで構成される分子である。リンカーは、当技術分野で公知の任意の適当なリンカーであってよい。当業者は、そのようなリンカーが、コンジュゲート分子の生成において常套的に使用されることを知り、適当なリンカーを選択できるであろう。

【0202】

そのようなリンカーは、一般的に、各端部に化学的に反応性の基を有する。それらのリンカーは、２つの分子、例えば、ｓｄＡｂと薬物またはペイロードとの間で共有結合を形成することができる。したがって、ｓｄＡｂおよび薬物またはペイロードの両方が、リンカーに共有結合的に連結することができる。好適には、リンカーの一方の領域がｓｄＡｂに結合することができ、リンカーの他方の領域が薬物またはペイロードに結合することができる。リンカーは、ｓｄＡｂおよび／または薬物もしくはペイロードとの間で、例えば、ヒドラゾン結合、ジスルフィド結合またはアミド結合を形成することができる。

【0203】

キメラ抗原受容体
本発明は、本明細書に定義されるｓｄＡｂを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。

【0204】

キメラＴ細胞受容体、人工Ｔ細胞受容体およびキメラ免疫受容体としても公知のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、任意の特異性を免疫エフェクター細胞上にグラフトする、操作された受容体である。古典的なＣＡＲでは、モノクローナル抗体の特異性が、Ｔ細胞上にグラフトされる。ＣＡＲコード核酸は、例えば、レトロウイルスベクターを使用して、Ｔ細胞に移入させることができる。このやり方で、多数のがん特異的Ｔ細胞を、養子細胞移入のために生成することができる。このアプローチの第Ｉ相臨床試験は有効性を示す。

【0205】

ＣＡＲの標的抗原結合ドメインは、一般的に、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介してシグナル伝達エンドドメインに融合しており、前記シグナル伝達エンドドメインは、活性化シグナルを、Ｔ細胞活性化シグナル伝達カスケードへと直接に変換することが可能である。ＣＡＲが標的抗原に結合すると、それはＣＡＲが発現されるＴ細胞への活性化シグナルの伝達をもたらす。したがって、本発明のＣＡＲは、標的細胞の表面上で発現されるＦｃＲＨ５へのＣＡＲの結合後に、ＣＡＲが発現されるＴ細胞を活性化できる。

【0206】

好適には、本明細書に定義されるｓｄＡｂは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介して、シグナル伝達エンドドメインに融合することができる。

【0207】

膜貫通ドメイン
本発明のＣＡＲは、細胞の膜にまたがる膜貫通ドメインを含むことができる。膜貫通ドメインは、膜の中で熱力学的に安定している任意のタンパク質構造であってよい。それは、疎水性アルファヘリックスを含むことができる。膜貫通ドメインは、ＣＤ８、ＣＤ２８、ヒトＴｙｒｐ－１またはヒトＩｇＧに由来することができる。

【0208】

膜貫通ドメインは、優れた受容体安定性を与えるＣＤ８に由来することができる。

【0209】

膜貫通ドメインは、任意のＩ型膜貫通タンパク質に由来することができる。膜貫通ドメインは、疎水性ヘリックスを形成すると予測される合成配列であってよい。

【0210】

本明細書で使用されるように、用語「に由来する」は、起源または供与源を指し、天然に存在する、組換え、未精製または精製された分子を含むことができる。用語「に由来する」は、用語「に起因する」、「から得られる」、「から入手可能である」、「から単離される」、および「から作製される」を包含する。

【0211】

膜貫通ドメインは、配列番号５４として示す配列を含むことができる。

【0212】

膜貫通ドメインは、配列番号５５として示す配列を含むことができる。

【0213】

膜貫通ドメインは、配列番号５６として示す配列を含むことができる。
配列番号５４（ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン）
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ
配列番号５５（ＣＤ２８膜貫通ドメイン）
ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ
配列番号５６（Ｔｙｒｐ－１膜貫通ドメイン）
ＩＩＡＩＡＶＶＧＡＬＬＬＶＡＬＩＦＧＴＡＳＹＬＩ

【0214】

本発明のＣＡＲは、バリアント配列が膜に挿入して膜をまたぐ能力を保持するならば、少なくとも８０％の配列同一性を有する、配列番号５４、５５または５６として示す配列のバリアントを含むことができる。

【0215】

バリアント配列は、膜に挿入して膜をまたぐ能力を保持するならば、配列番号５４と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有することができる。

【0216】

バリアント配列は、膜に挿入して膜をまたぐ能力を保持するならば、配列番号５５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有することができる。

【0217】

バリアント配列は、膜に挿入して膜をまたぐ能力を保持するならば、配列番号５６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有することができる。

【0218】

スペーサー
本発明のＣＡＲは、ｓｄＡｂを膜貫通ドメインに連結し、ｓｄＡｂをエンドドメインから空間的に分離するスペーサー配列を含むことができる。柔軟なスペーサーは、ＦｃＲＨ５の結合を可能にするためにｓｄＡｂが異なる方向に配向することを可能にする。

【0219】

スペーサー配列は、例えば、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域、ＩｇＧ１ヒンジまたはＣＤ８ストークまたはそれらの組合せを含むことができる。スペーサーは、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域、ＩｇＧ１ヒンジまたはＣＤ８ストークに類似した長さおよび／またはドメイン間隔特性を有する代わりの配列を代わりに含むことができる。スペーサー配列は、例えば、ＣＤ２外部ドメイン、ＣＤ３４外部ドメインまたはＣＯＭＰを含むことができる。

【0220】

ヒトＩｇＧ１スペーサーは、Ｆｃ結合モチーフを取り除くように変更することができる。

【0221】

本発明のＣＡＲのスペーサーは、配列番号５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３もしくは６４として示す配列の１つもしくは複数、または少なくとも８０％の配列同一性を有するそのバリアントを含むことができる。

【0222】

これらのスペーサーのアミノ酸配列の例を下に示す：
配列番号５７（ヒトＩｇＧ１のヒンジ－ＣＨ２ＣＨ３）

【化1】

配列番号５８（ヒトＣＤ８ストーク）：
ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ
配列番号５９（ヒトＩｇＧ１ヒンジ）：
ＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＫＤＰＫ
配列番号６０（ＩｇＧ１ヒンジＦｃ）

【化2】

配列番号６１（Ｆｃ受容体認識モチーフを取り除くように改変されたＩｇＧ１ヒンジ－Ｆｃ）

【化3】

改変された残基に下線が引かれている；^＊欠失を示す。
配列番号６２（ＣＤ２外部ドメイン）

【化4】

配列番号６３（ＣＤ３４外部ドメイン）

【化5】

配列番号６４（ＣＯＭＰ）
ＤＬＧＰＱＭＬＲＥＬＱＥＴＮＡＡＬＱＤＶＲＥＬＬＲＱＱＶＲＥＩＴＦＬＫＮＴＶＭＥＣＤＡＣＧ

【0223】

Ｎ末端でＣＯＭＰコイルドコイルドメインをトランケーションし、表面発現を保持することが可能である。したがって、コイルドコイルＣＯＭＰスペーサーは、Ｎ末端でトランケーションされる、配列番号６４のトランケーションされたバージョンを含むかそれからなることができる。トランケーションされたＣＯＭＰは、配列番号６４の５つのＣ末端アミノ酸、すなわち配列ＣＤＡＣＧ（配列番号６５）を含むことができる。トランケーションされたＣＯＭＰは、５～４４アミノ酸、例えば少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５または４０アミノ酸を含むことができる。トランケーションされたＣＯＭＰは、配列番号６４のＣ末端に対応することができる。例えば、２０アミノ酸を含むトランケーションされたＣＯＭＰは、配列ＱＱＶＲＥＩＴＦＬＫＮＴＶＭＥＣＤＡＣＧ（配列番号６６）を含むことができる。トランケーションされたＣＯＭＰは、多量体化に関与するシステイン残基（複数可）を保持することができる。トランケーションされたＣＯＭＰは、多量体を形成する能力を保持することができる。

【0224】

バリアント配列は、配列番号５７に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得る。

【0225】

バリアント配列は、配列番号５８に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得る。

【0226】

バリアント配列は、配列番号５９に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得る。

【0227】

バリアント配列は、配列番号６０に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得る。

【0228】

バリアント配列は、配列番号６１に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得る。

【0229】

バリアント配列は、配列番号６２に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得る。

【0230】

バリアント配列は、配列番号６３に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得る。

【0231】

バリアント配列は、配列番号６４に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得る。

【0232】

細胞内シグナル伝達ドメイン（エンドドメイン）
エンドドメインは、ＣＡＲのシグナル伝達部分である。抗原認識の後、受容体がクラスター化し、シグナルが細胞に伝達される。最も一般的に使用されるエンドドメイン構成要素は、３つのＩＴＡＭを含有するＣＤ３ゼータのそれである。これは、抗原に結合した後に活性化シグナルをＴ細胞に伝達する。ＣＤ３ゼータは完全にコンピテントな活性化シグナルを提供することができないので、追加の共刺激シグナル伝達が必要となる場合がある。例えば、キメラＣＤ２８、４１－ＢＢおよびＯＸ４０を、増殖／生存シグナルを伝達するためにＣＤ３ゼータと使用することができ、または３つ全てを共に使用することができる。

【0233】

本発明のＣＡＲのエンドドメインは、ＣＤ２８エンドドメインおよび／またはＯＸ４０エンドドメインおよび／または４１－ＢＢエンドドメインおよび／またはＣＤ３ゼータエンドドメインを含むことができる。

【0234】

本発明のＣＡＲの細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン（エンドドメイン）は、配列番号６７、６８、６９、７０、７１、７２もしくは１１９として示す配列の１つもしくは複数、または少なくとも８０％の配列同一性を有するそのバリアントを含むことができる。
配列番号６７（ＣＤ２８エンドドメイン）
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹ
配列番号６８（ＯＸ４０エンドドメイン）
ＲＲＤＱＲＬＰＰＤＡＨＫＰＰＧＧＧＳＦＲＴＰＩＱＥＥＱＡＤＡＨＳＴＬＡＫＩ
配列番号６９（４１－ＢＢエンドドメイン）
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ
配列番号７０（ＣＤ３ゼータエンドドメイン）

【化6】

配列番号７１（ＣＤ２８Ｚ）

【化7】

配列番号７２（ＣＤ２８ＯＸＺ）

【化8】

配列番号１１９（４－１ＢＢ－ＣＤ３Ｚ）

【化9】

【0235】

バリアント配列は、配列番号６７に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得、ただし、配列は、有効な細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを提供する。

【0236】

バリアント配列は、配列番号６８に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得、ただし、配列は、有効な細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを提供する。

【0237】

バリアント配列は、配列番号６９に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得、ただし、配列は、有効な細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを提供する。

【0238】

バリアント配列は、配列番号７０に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得、ただし、配列は、有効な細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを提供する。

【0239】

バリアント配列は、配列番号７１に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得、ただし、配列は、有効な細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを提供する。

【0240】

バリアント配列は、配列番号７２に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得、ただし、配列は、有効な細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを提供する。

【0241】

バリアント配列は、配列番号１１９に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有し得、ただし、配列は、有効な細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを提供する。

【0242】

シグナルペプチド
本発明のＣＡＲは、ＣＡＲがＴ細胞などの細胞の中で発現されると、新生タンパク質（ｎａｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）が小胞体に、その後それが発現される細胞表面に導かれるように、シグナルペプチドを含むことができる。

【0243】

シグナルペプチドのコアは、単一のアルファヘリックスを形成する傾向のある長いひと続きの疎水性アミノ酸を含有することができる。シグナルペプチドは短い正に荷電したひと続きのアミノ酸で開始することができ、それは転位の間、ポリペプチドの適切なトポロジーを強制するのを助ける。シグナルペプチドの端部には、シグナルペプチダーゼによって認識され、切断されるひと続きのアミノ酸が一般的に存在する。シグナルペプチダーゼは、転位の間または完了後に切断して、遊離のシグナルペプチドおよび成熟タンパク質を生成することができる。遊離のシグナルペプチドは、特異的プロテアーゼによってその後消化される。

【0244】

シグナルペプチドは、分子のアミノ末端にあってよい。

【0245】

本発明のＣＡＲは、次の一般式を有することができる：
シグナルペプチド－ｓｄＡｂ－スペーサードメイン－膜貫通ドメイン－細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン（複数可）。

【0246】

シグナルペプチドは、配列番号７３もしくは配列番号３５８として示す配列、またはシグナルペプチドがＣＡＲの細胞表面発現を引き起こす機能がなおあるならば、５つ、４つ、３つ、２つもしくは１つのアミノ酸変異（例えば、挿入、置換または付加）を有するそのバリアントを含むことができる。
配列番号７３：ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ
配列番号３５８：ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ

【0247】

配列番号７３または配列番号３５８のシグナルペプチドはコンパクトであり、高度に効率的である。それは末端グリシンの後ろで約９５％の切断を与えることが予測され、シグナルペプチダーゼによる効率的な除去を与える。

【0248】

自殺遺伝子
Ｔ細胞は生着し自律的であるため、ＣＡＲ Ｔ細胞のレシピエントにおいて、ＣＡＲ Ｔ細胞を選択的に欠失させる手段が望まれる。自殺遺伝子は、許容できない毒性に直面すると、注入されたＴ細胞の選択的破壊をもたらす、遺伝的にコード可能な機構である。自殺遺伝子に関する最初の臨床経験は、Ｔ細胞をガンシクロビルに対して感受性にするヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ＴＫ）である。ＨＳＶ－ＴＫは高度に有効な自殺遺伝子である。しかし、前もって形成された免疫応答は、免疫抑制が著しい臨床状況に、例えば、半合致幹細胞移植に対するその使用を制限することがある。誘導性カスパーゼ９（ｉＣａｓｐ９）は、カスパーゼ９の活性化ドメインを、改変ＦＫＢＰ１２で置き換えることにより構築された自殺遺伝子である。ｉＣａｓｐ９は、他の点では不活性の小分子二量体誘導化合物（ＣＩＤ）により活性化される。ｉＣａｓｐ９は、半合致ＨＳＣＴの状況において最近試験されており、ＧｖＨＤを未然に防ぐことができる。ｉＣａｓｐ９の最大の限定は、臨床グレード専売（ｃｌｉｎｉｃａｌ ｇｒａｄｅ ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ）ＣＩＤの入手可能性への依存である。ｉＣａｓｐ９およびＨＳＶ－ＴＫの両方とも、細胞内タンパク質であるため、唯一の導入遺伝子として使用されるとき、形質導入細胞の選択を可能にするマーカー遺伝子と共発現させた。

【0249】

ｉＣａｓｐ９は、配列番号７４として示す配列、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するそのバリアントを含むことができる。
配列番号７４

【化10】

【0250】

別のマーカー／自殺遺伝子は、抗体ＱＢＥｎｄ１０、および治療用抗体リツキシマブで溶解させた発現細胞により検出することができるＲＱＲ８である。

【0251】

ＲＱＲ８は、配列番号７５として示す配列、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するそのバリアントを含むことができる。
配列番号７５

【化11】

【0252】

自殺遺伝子は、別個の実体としての２つのポリペプチドの共発現を可能にする共発現部位により分離されているＣＡＲを含む単一ポリペプチドとして発現することができる。両方のポリペプチドが切断部位により連結されるように、切断部位をコードする配列であってよい。切断部位は、自己切断性であってよく、そのため、ポリペプチドが産生されると、いかなる外部切断活性も必要なしに、個々のペプチドに直ちに切断される。

【0253】

切断部位は、２つのポリペプチドが別々になることを可能にする任意の配列であってよい。

【0254】

用語「切断」は、本明細書で便宜上使用されるが、切断部位は、古典的な切断以外の機構により、ペプチドを個々の実体に分離させてもよい。例えば、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）２Ａ自己切断ペプチドには（下を参照）、「切断」活性を説明する様々なモデル：宿主細胞プロテイナーゼによるタンパク質分解、自己タンパク質分解または翻訳効果が提案されている（Ｄｏｎｎｅｌｌｙ ｅｔ ａｌ （２００１） Ｊ． Ｇｅｎ． Ｖｉｒｏｌ． ８２：１０２７－１０４１）。そのような「切断」の正確な機構は、切断部位が、タンパク質をコードする核酸配列間に位置するとき、タンパク質を別個の実体として発現させる限り、本発明の目的には重要でない。

【0255】

切断部位は、例えば、フリン切断部位、タバコエッチ病ウイルス（ＴＥＶ）切断部位であってもよく、または自己切断ペプチドをコードしてもよい。

【0256】

「自己切断ペプチド」は、タンパク質と自己切断ペプチドとを含むポリペプチドが産生されると、いかなる外部切断活性も必要なしに、直ちに別個かつ個別の第１および第２のポリペプチドに「切断される」または分離されるように機能するペプチドを指す。

【0257】

自己切断ペプチドは、アフトウイルスまたはカルジオウイルスからの２Ａ自己切断ペプチドであってよい。アフトウイルスおよびカルジオウイルスの一次２Ａ／２Ｂ切断は、それ自身のＣ末端での２Ａ「切断」によって媒介される。アフトウイルス、例えば、ＦＭＤＶおよびウマ鼻炎Ａウイルスでは、２Ａ領域は、タンパク質２ＢのＮ末端残基（保存されたプロリン残基）と共に、それ自身のＣ末端において「切断」を媒介することが可能である自律因子を表す、約１８個のアミノ酸の短い部分である（前記のＤｏｎｅｌｌｙ ｅｔ ａｌ （２００１））。

【0258】

「２Ａ様」配列は、アフトウイルスまたはカルジオウイルス以外のピコルナウイルス、「ピコルナウイルス様」昆虫ウイルス、Ｃ型ロタウイルス、およびトリパノソーマｓｐｐ内の反復配列、および細菌配列において見出された（前記のＤｏｎｎｅｌｌｙ ｅｔ ａｌ （２００１））。

【0259】

切断部位は、配列番号３５９（ＲＡＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ）として示す２Ａ様配列を含むことができる。

【0260】

ＦｃＲＨ５ ＣＡＲ
本発明のＣＡＲは、配列番号７６～８９、１５９、および２８９～３５４として示す配列からなる群から選択される配列、またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するが、ｉ）ＦｃＲＨ５に結合する能力およびｉｉ）Ｔ細胞シグナル伝達を誘導する能力を保持するそのバリアントを含むことができる。

【0261】

ＣＡＲは、ＣＤ８スペーサー領域、ＣＤ８膜貫通領域、４１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ｚ鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含むことができる。ＣＡＲは、２Ａ部位によって分離されたＲＱＲ８形質導入マーカーも含むことができる。
配列番号７６

【化12】

配列番号７７

【化13】

配列番号７８

【化14】

配列番号７９

【化15】

配列番号８０

【化16】

配列番号８１

【化17】

配列番号８２

【化18】

配列番号８３

【化19】

配列番号８４

【化20】

配列番号８５

【化21】

配列番号８６

【化22】

配列番号８７

【化23】

配列番号８８

【化24】

配列番号８９

【化25】

配列番号１５９

【化26】

配列番号２８９

【化27】

配列番号２９０

【化28】

配列番号２９１

【化29】

配列番号２９２

【化30】

配列番号２９３

【化31】

配列番号２９４

【化32】

配列番号２９５

【化33】

配列番号２９６

【化34】

配列番号２９７

【化35】

配列番号２９８

【化36】

配列番号２９９

【化37】

配列番号３００

【化38】

配列番号３０１

【化39】

配列番号３０２

【化40】

配列番号３０３

【化41】

配列番号３０４

【化42】

配列番号３０５

【化43】

配列番号３０６

【化44】

配列番号３０７

【化45】

配列番号３０８

【化46】

配列番号３０９

【化47】

配列番号３１０

【化48】

配列番号３１１

【化49】

配列番号３１２

【化50】

配列番号３１３

【化51】

配列番号３１４

【化52】

配列番号３１５

【化53】

配列番号３１６

【化54】

配列番号３１７

【化55】

配列番号３１８

【化56】

配列番号３１９

【化57】

配列番号３２０

【化58】

配列番号３２１

【化59】

配列番号３２２

【化60】

配列番号３２３

【化61】

配列番号３２４

【化62】

配列番号３２５

【化63】

配列番号３２６

【化64】

配列番号３２７

【化65】

配列番号３２８

【化66】

配列番号３２９

【化67】

配列番号３３０

【化68】

配列番号３３１

【化69】

配列番号３３２

【化70】

配列番号３３３

【化71】

配列番号３３４

【化72】

配列番号３３５

【化73】

配列番号３３６

【化74】

配列番号３３７

【化75】

配列番号３３８

【化76】

配列番号３３９

【化77】

配列番号３４０

【化78】

配列番号３４１

【化79】

配列番号３４２

【化80】

配列番号３４３

【化81】

配列番号３４４

【化82】

配列番号３４５

【化83】

配列番号３４６

【化84】

配列番号３４７

【化85】

配列番号３４８

【化86】

配列番号３４９

【化87】

配列番号３５０

【化88】

配列番号３５１

【化89】

配列番号３５２

【化90】

配列番号３５３

【化91】

配列番号３５４

【化92】

【0262】

配列番号７６～配列番号８９、配列番号１５９、および配列番号２８９～配列番号３５４として示す配列には、ＲＱＲ８（配列番号７５）、２Ａ様配列（配列番号３５９）および配列番号３５８のシグナルペプチドの配列が含まれる。本発明の一態様は、ＲＱＲ８（配列番号７５）、２Ａ様配列（配列番号３５９）、および必要に応じて配列番号３５８のシグナルペプチドの配列を欠く、配列番号７６～８９、１５９、および２８９～３５４として示す配列からなる群から選択される配列を含むＣＡＲ、またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するが、ｉ）ＦｃＲＨ５に結合する能力およびｉｉ）Ｔ細胞シグナル伝達を誘導する能力を保持する前記ＣＡＲのバリアントでもある。

【0263】

免疫細胞エンゲージャー
免疫細胞エンゲージャー分子は、主に抗がん薬物としての使用のために開発された抗体型分子のクラスである。宿主の免疫系の免疫エフェクター細胞を、標的細胞、例えば、がん細胞に対して導く。これらの免疫細胞エンゲージャー分子では、少なくとも１つの結合ドメインは、例えば、免疫細胞上で発現する受容体を介して免疫細胞に結合し、別の結合ドメインは、標的細胞、例えば、腫瘍細胞に（例えば、腫瘍特異性分子を介して）結合する。免疫細胞エンゲージャー分子は標的細胞および免疫細胞の両方に結合するので、それは標的細胞を免疫細胞と近接させ、そのため免疫細胞はその効果、例えばがん細胞への細胞傷害効果を発揮することができる。免疫細胞：免疫細胞エンゲージャー：がん細胞複合体の形成は免疫細胞でシグナル伝達を誘導し、例えば、細胞傷害性メディエーターの放出をもたらす。理想的には、本剤は標的細胞の存在下で所望のシグナル伝達を誘導するだけであり、選択的殺傷をもたらす。

【0264】

したがって、本発明の（ｗｈｉｃｈ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ）免疫細胞エンゲージャー分子は、ＦｃＲＨ５発現細胞（例えば、ＦｃＲＨ５＋がん細胞）を免疫細胞と近接させ、そのため免疫細胞はその効果をがん細胞に対して発揮することができる。ＦｃＲＨ５免疫細胞エンゲージャー分子の結合を介した共局在の要件が、ＦｃＲＨ５陽性細胞の選択的殺傷をもたらし得る。好適には、本発明の免疫細胞エンゲージャー分子は、標的細胞の表面上で発現するＦｃＲＨ５への免疫細胞エンゲージャー分子の結合後に、免疫細胞を活性化することができる。

【0265】

免疫細胞エンゲージャーは、多価であってもよく、同じ免疫細胞結合ドメインの複数のコピーを含むことができる。

【0266】

免疫細胞エンゲージャーは、複数の免疫細胞結合ドメインを含むことができ、各免疫細胞結合ドメインは、免疫細胞上で発現する異なる標的分子を有する。

【0267】

免疫細胞エンゲージャーは、Ｔ細胞エンゲージャー、ＮＫ細胞エンゲージャー、Ｂ細胞エンゲージャー、樹状細胞エンゲージャーまたはマクロファージ細胞エンゲージャーであってよい。一部の実施形態では、免疫細胞エンゲージャーは、免疫細胞、例えばエフェクター細胞に結合して活性化する。一部の実施形態では、免疫細胞エンゲージャーは、免疫細胞、例えばエフェクター細胞に結合するが、それを活性化はしない。

【0268】

免疫細胞エンゲージャーは、例えば、Ｔ細胞（すなわちアルファベータＴ細胞）、ＮＫＴ細胞、ガンマデルタＴ細胞またはＮＫ細胞に結合することができるものであってよい。

【0269】

二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢＩＴＥ）および三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー
一実施形態では、本発明は、本明細書に記載されるｓｄＡｂを第１のドメインとして、およびＴ細胞活性化ドメインを第２のドメインとして含む二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）であるＴ細胞エンゲージャー分子を提供する。Ｔ細胞活性化ドメインは、Ｔ細胞を活性化することができるドメインである。

【0270】

二重特異性Ｔ細胞エンゲージ分子は、一般には、例えば、ＣＤ３受容体を介してＴ細胞に結合する結合ドメイン、および（例えば、腫瘍特異的分子を介して）腫瘍細胞などの標的細胞に結合する他方の結合ドメインを含む。二重特異性分子は標的細胞およびＴ細胞の両方に結合するので、それは標的細胞をＴ細胞と近接させ、そのためＴ細胞はその効果、例えばがん細胞への細胞傷害効果を発揮することができる。Ｔ細胞：二重特異性Ａｂ：がん細胞複合体の形成はＴ細胞でシグナル伝達を誘導し、例えば、細胞傷害性メディエーターの放出をもたらす。理想的には、本剤は標的細胞の存在下で所望のシグナル伝達を誘導するだけであり、選択的殺傷をもたらす。

【0271】

したがって、本発明の二重特異性分子であるＴ細胞エンゲージャー分子は、ＦｃＲＨ５発現細胞（例えば、ＦｃＲＨ５＋がん細胞）をＴ細胞と近接させ、そのためＴ細胞はその効果をがん細胞に対して発揮することができる。ＦｃＲＨ５二重特異性分子の結合を介した共局在の要件が、好適には、ＦｃＲＨ５陽性細胞の選択的殺傷をもたらす。言い換えると、本発明の二重特異性分子は、標的細胞の表面上で発現するＦｃＲＨ５への二重特異性分子の結合後に、Ｔ細胞を活性化することができる。

【0272】

ＢｉＴＥは、一般的に、短い５残基ペプチドリンカー（例えばＧＧＧＧＳ（配列番号１１７））を介して、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖを抗標的抗原ｓｃＦｖと融合することにより作製される。

【0273】

一実施形態では、本発明は、本明細書に記載されるｓｄＡｂを第１のドメインとして、Ｔ細胞活性化ドメインを第２のドメインとして、および別のＴ細胞共活性化ドメインを第３のドメインとして含む三重特異性Ｔ細胞エンゲージャーであるＴ細胞エンゲージャー分子を提供する。Ｔ細胞活性化ドメインは、Ｔ細胞を活性化することができるドメインである。

【0274】

三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子に関して本明細書に記載されるのと同じ第１および第２のドメインを、同じくＴ細胞を共活性化することができる第３のドメインの付加と共に含むことができる。したがって、三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、本明細書に記載される二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子と類似した効果および機能を有することができる。

【0275】

第２のドメイン－Ｔ細胞活性化ドメイン
本発明の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子または本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子の第２のドメインは、Ｔ細胞を活性化することができる。Ｔ細胞は細胞表面に、抗原提示細胞の表面上でＭＨＣ分子によって抗原ペプチドが提示される場合、抗原ペプチドを認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有する。そのような抗原認識は、Ｓｒｃファミリーキナーゼによる、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）のリン酸化をもたらし、さらなるキナーゼの動員を誘発し、Ｃａ^２＋放出を含むＴ細胞活性化をもたらす。

【0276】

第２のドメインは、ＴＣＲによる抗原特異的認識によって誘発されるのと同じ経路の誘発により、Ｔ細胞活性化を引き起こすことができる。したがって、第２のドメインは、Ｔ細胞シグナル伝達を誘導してＴ細胞活性化をもたらすことができる。

【0277】

分化抗原群３（ＣＤ３）
本発明の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子または本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子の第２のドメインは、ＣＤ３に結合することができる。

【0278】

ＣＤ３は、４つの別個の鎖：ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、および２つのＣＤ３ε鎖で構成されるタンパク質複合体である。ＣＤ３は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）およびＴ細胞の表面上のζ鎖と会合し、活性化シグナルを生成する。ＴＣＲ、ζ鎖およびＣＤ３分子が共にＴＣＲ複合体を含む。

【0279】

例えば、固定された抗ＣＤ３抗体による、Ｔ細胞上でのＣＤ３のクラスタリングは、Ｔ細胞受容体の会合に類似するＴ細胞の活性化をもたらすが、そのクローン典型的な特異性には依存しない。

【0280】

Ｔ細胞活性のモジュレーションにおけるその中心的な役割ゆえ、ＴＣＲ／ＣＤ３に結合できる分子を開発する試みが存在した。この研究のかなりは、ヒトＣＤ３抗原に特異的である抗体の生成に注目していた。

【0281】

第２のドメインは、ＣＤ３、例えば、ＯＫＴ３、ＷＴ３２、抗ｌｅｕ－４、ＵＣＨＴ－１、ＳＰＶ－３ＴＡ、ＴＲ６６、ＳＰＶ－Ｔ３Ｂに特異的に結合する抗体もしくはその一部、または親和性が調整されたそのバリアントを含むことができる。

【0282】

免疫細胞エンゲージャーの第２または第３のドメインとの関連で本明細書で使用される場合、「抗体」は、少なくとも１つの相補性決定領域ＣＤＲを含む抗原結合部位を有するポリペプチドを意味する。抗体は、３つのＣＤＲを含むことができ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）の抗原結合部位と同等である抗原結合部位を有することができる。抗体は、６つのＣＤＲを含むことができ、古典的抗体分子の抗原結合部位と同等である抗原結合部位を有することができる。ポリペプチドの残部は、抗原結合部位のための好適な足場を提供し、かつその抗原結合部位を、抗原に結合するために適当なやり方で提示する任意の配列であってよい。抗体は、免疫グロブリン全分子またはその一部、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’_２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）断片、ナノボディまたは単鎖可変ドメイン（３つのＣＤＲを有するＶＨ鎖もしくはＶＬ鎖であり得る）であってよい。抗体は二機能性抗体であってよい。抗体は、非ヒト、キメラ、ヒト化または完全ヒトであってよい。

【0283】

あるいは、第２のドメインは、免疫グロブリンに由来しないかまたは基づかないＣＤ３結合分子を含むことができる。いくつかの「抗体ミメティック」設計反復タンパク質（ＤＲＰ）は、非抗体ポリペプチドの結合能力を活用するために開発された。そのような分子には、アンキリンまたはロイシンリッチリピートタンパク質、例えば、ＤＡＲＰｉｎ（設計アンキリンリピートタンパク質）、アンチカリン、アビマー、およびバーサボディ（Ｖｅｒｓａｂｏｄｙ）が含まれる。

【0284】

本発明の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子または本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子の第２のドメインは、ＦＤＡによって承認された最初のモノクローナル抗体であるモノクローナル抗体ＯＫＴ３の全部または一部を含むことができる。ＯＫＴ３は、ＡＴＣＣ ＣＲＬ８００１から利用可能である。抗体配列は、米国特許第７，３８１，８０３号に公開されている。

【0285】

第２のドメインは、ＯＫＴ３からの１つまたは複数のＣＤＲを含むことができる。第２の結合ドメインは、ＯＫＴ３の重鎖からのＣＤＲ３および／またはＯＫＴ３の軽鎖からのＣＤＲ３を含むことができる。第２の結合ドメインは、下に示す、ＯＫＴ３からの６つ全てのＣＤＲを含むことができる。
重鎖
ＣＤＲ１：（配列番号９０）ＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨ
ＣＤＲ２：（配列番号９１）ＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤ
ＣＤＲ３：（配列番号９２）ＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹ
軽鎖
ＣＤＲ１：（配列番号９３）ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮ
ＣＤＲ２：（配列番号９４）ＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳ
ＣＤＲ３：（配列番号９５）ＱＱＷＳＳＮＰＦＴ

【0286】

好適には、ＣＤＲの１つまたは複数は、１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を含むことができる（ｍａｙ ｃｏｍｐｒｉｓｅ ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）。

【0287】

第２の結合ドメインは、ＯＫＴ３からのＣＤＲ配列を含むｓｃＦｖを含むことができる。第２の結合ドメインは、下に配列番号９６として示すｓｃＦｖ配列、またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ３に結合する能力を保持するそのバリアントを含むことができる。
配列番号９６

【化93】

【0288】

第２のドメインは、ＵＣＨＴ１からの１つまたは複数のＣＤＲを含むことができる。第２の結合ドメインは、ＵＣＨＴ１の重鎖からのＣＤＲ３および／またはＵＣＨＴ１の軽鎖からのＣＤＲ３を含むことができる。第２の結合ドメインは、下に示す、ＵＣＨＴ１からの６つ全てのＣＤＲを含むことができる。
重鎖
ＣＤＲ１：ＧＹＳＦＴＧＹＴ（配列番号９７）
ＣＤＲ２：ＩＮＰＹＫＧＶＳ（配列番号９８）
ＣＤＲ３：ＡＲＳＧＹＹＧＤＳＤＷＹＦＤＶ（配列番号９９）
軽鎖
ＣＤＲ１：ＱＤＩＲＮＹ（配列番号１００）
ＣＤＲ２：ＹＴＳ（配列番号１０１）
ＣＤＲ３：ＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（配列番号１０２）

【0289】

好適には、ＣＤＲの１つまたは複数は、１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を含むことができる。

【0290】

第２の結合ドメインは、ＵＣＨＴ１からのＣＤＲ配列を含むｓｃＦｖを含むことができる。第２の結合ドメインは、下に配列番号１０３として示すｓｃＦｖ配列、またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ３に結合する能力を保持するそのバリアントを含むことができる。
配列番号１０３

【化94】

【0291】

第２のドメインは、ＹＴＨからの１つまたは複数のＣＤＲを含むことができる。第２の結合ドメインは、ＹＴＨの重鎖からのＣＤＲ３および／またはＹＴＨの軽鎖からのＣＤＲ３を含むことができる。第２の結合ドメインは、下に示す、ＹＴＨからの６つ全てのＣＤＲを含むことができる。
重鎖
ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＳＳＦＰ（配列番号１０４）
ＣＤＲ２：ＩＳＴＳＧＧＲＴ（配列番号１０５）
ＣＤＲ３：ＡＫＦＲＱＹＳＧＧＦＤＹ（配列番号１０６）
軽鎖
ＣＤＲ１：ＳＧＮＩＥＮＮＹ（配列番号１０７）
ＣＤＲ２：ＤＤＤ（配列番号１０８）
ＣＤＲ３：ＨＳＹＶＳＳＦＮＶ（配列番号１０９）

【0292】

好適には、ＣＤＲの１つまたは複数は、１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を含むことができる。

【0293】

第２の結合ドメインは、ＹＴＨからのＣＤＲ配列を含むｓｃＦｖを含むことができる。第２の結合ドメインは、下に配列番号１１０として示すｓｃＦｖ配列、またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ３に結合する能力を保持するそのバリアントを含むことができる。
配列番号１１０

【化95】

【0294】

配列番号９６、１０３または１１０のバリアント配列は、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有することができ、配列番号９６、１０３または１１０として示す配列と比べて、同等または向上した、ＣＤ３に結合する能力および／またはＴＣＲ活性化能力を有することができる。

【0295】

本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子の第２の結合ドメインは、配列番号１２０として示す配列を有するＶＨ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ３に結合する能力を保持するバリアント；および配列番号１２１として示す配列を有するＶＬ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ３に結合する能力を保持するバリアントを含むことができる。好適には、第２の結合ドメインは、配列番号１２０として示す配列を有するＶＨ領域；および配列番号１２１として示す配列を有するＶＬ領域を含むことができる。
ＶＨドメイン（配列番号１２０）

【化96】

ＶＬドメイン（配列番号１２１）

【化97】

【0296】

本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子の第２の結合ドメインは、配列番号１２２として示す配列を有するＶＨ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ３に結合する能力を保持するバリアント；および配列番号１２３として示す配列を有するＶＬ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ３に結合する能力を保持するバリアントを含むことができる。好適には、第２の結合ドメインは、配列番号１２２として示す配列を有するＶＨ領域；および配列番号１２３として示す配列を有するＶＬ領域を含むことができる。
ＶＨドメイン（配列番号１２２）

【化98】

ＶＬドメイン（配列番号１２３）

【化99】

【0297】

第３のドメイン－Ｔ細胞共活性化ドメイン
本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子の第３のドメインは、Ｔ細胞を共活性化することができる。

【0298】

第３のドメインは、Ｔ細胞の共刺激によって誘発されるのと同じ経路を誘発することにより、Ｔ細胞活性化を引き起こすことができる。したがって、第３のドメインは、Ｔ細胞活性化をもたらすことができる。

【0299】

本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子の第１および第２のドメインは、本発明の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子に関して本明細書に記載される第１および第２のドメインを含むことができる。

【0300】

ＣＤ２８
本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子の第３のドメインは、ＣＤ２８に結合することができる。

【0301】

第３のドメインは、ＴＧＮ１４１２のような、ＣＤ２８に特異的に結合する抗体もしくはその一部、または親和性が調整されたそのバリアントを含むことができる。

【0302】

本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子の第３のドメインは、モノクローナル抗体ＴＧＮ１４１２の全部または一部を含むことができる。

【0303】

第３のドメインは、ＴＧＮ１４１２からの１つまたは複数のＣＤＲを含むことができる。第２の結合ドメインは、ＴＧＮ１４１２の重鎖からのＣＤＲ３および／またはＴＧＮ１４１２の軽鎖からのＣＤＲ３を含むことができる。第２の結合ドメインは、下に示す、ＴＧＮ１４１２からの６つ全てのＣＤＲを含むことができる。
重鎖
ＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号１２４）
ＣＤＲ２：ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号１２５）
ＣＤＲ３：ＴＲＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶ（配列番号１２６）
軽鎖
ＣＤＲ１：ＱＮＩＹＶＷ（配列番号１２７）
ＣＤＲ２：ＫＡ（配列番号１２８）
ＣＤＲ３：ＱＱＧＱＴＹＰＹＴ（配列番号１２９）

【0304】

好適には、ＣＤＲの１つまたは複数は、１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を含むことができる。

【0305】

第３の結合ドメインは、ＴＧＮ１４１２からのＣＤＲ配列を含むｓｃＦｖを含むことができる。

【0306】

第３の結合ドメインは、配列番号１３０として示す配列を有するＶＨ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ２８に結合する能力を保持するバリアント；および配列番号１３１として示す配列を有するＶＬ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ２８に結合する能力を保持するバリアントを含むことができる。好適には、第３の結合ドメインは、配列番号１３０として示す配列を有するＶＨ領域；および配列番号１３１として示す配列を有するＶＬ領域を含むことができる。
ＶＨドメイン配列番号１３０

【化100】

ＶＬドメイン配列番号１３１

【化101】

【0307】

本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子の第３の結合ドメインは、配列番号１３２として示す配列を有するＶＨ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ２８に結合する能力を保持するバリアント；および配列番号１３３として示す配列を有するＶＬ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ２８に結合する能力を保持するバリアントを含むことができる。好適には、第３の結合ドメインは、配列番号１３２として示す配列を有するＶＨ領域；および配列番号１３３として示す配列を有するＶＬ領域を含むことができる。
ＶＨドメイン（配列番号１３２）

【化102】

ＶＬドメイン（配列番号１３３）

【化103】

【0308】

本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子の第３の結合ドメインは、配列番号１３４として示す配列を有するＶＨ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ２８に結合する能力を保持するバリアント；および配列番号１３５として示す配列を有するＶＬ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ２８に結合する能力を保持するバリアントを含むことができる。好適には、第３の結合ドメインは、配列番号１３４として示す配列を有するＶＨ領域；および配列番号１３５として示す配列を有するＶＬ領域を含むことができる。
ＶＨドメイン（配列番号１３４）

【化104】

ＶＬドメイン（配列番号１３５）

【化105】

【0309】

分泌シグナルペプチド
本発明の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子または本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、その産生を助けるシグナルペプチドを含むことができる。シグナルペプチドは宿主細胞による二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子または三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子の分泌を引き起こすことができ、そのため、分子を宿主細胞の上清から採取することができる。

【0310】

シグナルペプチドのコアは、単一のアルファヘリックスを形成する傾向のある長いひと続きの疎水性アミノ酸を含有することができる。シグナルペプチドは短い正に荷電したひと続きのアミノ酸で開始することができ、それは転位の間、ポリペプチドの適切なトポロジーを強制するのを助ける。シグナルペプチドの端部には、シグナルペプチダーゼによって認識され、切断されるひと続きのアミノ酸が一般的に存在する。シグナルペプチダーゼは、転位の間または完了後に切断して、遊離のシグナルペプチドおよび成熟タンパク質を生成することができる。遊離のシグナルペプチドは、特異的プロテアーゼによってその後消化される。

【0311】

シグナルペプチドは、分子のアミノ末端にあってよい。
二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、次の一般式を有することができる：
シグナルペプチド－第１のドメイン－第２のドメイン。
三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、次の一般式を有することができる：
シグナルペプチド－第１のドメイン－第２のドメイン－第３のドメイン。

【0312】

シグナルペプチドは、配列番号１１１もしくは１１２、またはシグナルペプチドが分子の分泌を引き起こす機能がなおあるならば、５つ、４つ、３つ、２つもしくは１つのアミノ酸変異（挿入、置換または付加）を有するそのバリアントを含むことができる。
配列番号１１１：ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ
配列番号１１２：ＭＧＴＳＬＬＣＷＭＡＬＣＬＬＧＡＤＨＡＤＧ

【0313】

配列番号１１１および１１２のシグナルペプチドはコンパクトであり、高度に効率的である。それらは末端グリシンの後ろで約９５％の切断を与えることが予測され、シグナルペプチダーゼによる効率的な除去を与える。

【0314】

スペーサー
本発明の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子または本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、ドメインを空間的に分離するために、第１のドメインを第２のドメインに連結する、および／または第２のドメインを第３のドメインに連結するスペーサーまたはリンカー配列を含むことができる。

【0315】

スペーサー配列は、例えば、ＩｇＧ１ヒンジまたはＣＤ８ストークを含むことができる。スペーサーまたはリンカーは、ＩｇＧ１ヒンジまたはＣＤ８ストークに類似した長さおよび／またはドメイン間隔特性を有する代わりのリンカー配列を代わりに含むことができる。

【0316】

スペーサーは、短いスペーサー、例えば、１００未満、８０未満、６０未満または４５未満のアミノ酸を含むスペーサーであってよい。スペーサーは、ＩｇＧ１ヒンジもしくはＣＤ８ストークもしくはそれらの改変バージョンであってよいか、または含むことができる。
これらのスペーサーのアミノ酸配列の例を下に示す：
配列番号１１３（ＩｇＧ１ヒンジ）：ＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＫＤＰＫＳＧＧＧＧＳ
配列番号１１４（ＣＤ８ストーク）：
ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ

【0317】

ＣＤ８ストークは、ホモ二量体の形成を誘導することができるような配列を有する。それが望ましくない場合、１つまたは複数のシステイン残基を置換するか、またはＣＤ８ストーク配列から除去してもよい。

【0318】

本発明の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、配列番号１１３もしくは１１４として示す配列、またはそのバリアント配列が、第１のドメインと第２のドメインとのおよそ同等の間隔を引き起こす分子であるならば、および／もしくはそのバリアント配列が二重特異性分子のホモ二量体化を引き起こすならば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するそのバリアント、を含むかまたはそれからなるスペーサーを含むことができる。

【0319】

本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、配列番号１１３もしくは１１４として示す配列、またはそのバリアント配列が、第１のドメインと第２のドメインとの、および／もしくは第２のドメインと第３のドメインとのおよそ同等の間隔を引き起こす分子であるならば、ならびに／またはそのバリアント配列が三重特異性分子のホモ二量体化を引き起こすならば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するそのバリアント、を含むかまたはそれからなる１つまたは複数のスペーサーを含むことができる。

【0320】

スペーサーは、鎖切断を導入する１つまたは複数のリンカーモチーフも含むことができる。鎖切断は、２つの別個のドメインを分離するが、異なる角度での配向を可能にする。そのような配列は、配列ＳＤＰおよび配列ＳＧＧＧＳＤＰ（配列番号１１５）を含む。

【0321】

本発明の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子または本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、セリン－グリシンリンカーを含むリンカーを含むことができる。リンカーは、セリン－グリシンのいくつかのモジュール、例えば、例えばＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１６）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７）、（（Ｇｌｙ_４）Ｓｅｒ）_２（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、配列番号３５５）、（（Ｇｌｙ_４）Ｓｅｒ）_３（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、配列番号３５６）および（（Ｇｌｙ_４）Ｓｅｒ）_４（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、配列番号３５７）で構成され得る。

【0322】

本発明の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、次の一般式を有することができる：
シグナルペプチド－第１のドメイン－スペーサー／リンカー－第２のドメイン。

【0323】

本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、次の一般式を有することができる：
シグナルペプチド－第１のドメイン－スペーサー／リンカー－第２のドメイン－スペーサー／リンカー－第３のドメイン。

【0324】

ガンマデルタ細胞エンゲージャー
本発明の免疫細胞エンゲージャーは、ガンマデルタＴ細胞をエンゲージする分子であってよい。ガンマデルタ細胞の例は、Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞を含む。

【0325】

ガンマデルタＴ細胞エンゲージャーの第２のドメインは、本明細書に記載されるＣＤ３に結合することができる。

【0326】

ガンマデルタＴ細胞エンゲージャーの第２のドメインは、Ｖγ９Ｖδ２＋γδＴ細胞受容体のＶγ９鎖に結合することができる。好適にはＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞に結合できる抗体は、例えば、国際公開第２０２０／１５９３６８号に記載されている。

【0327】

ＮＫＴ細胞エンゲージャー
本発明の免疫細胞エンゲージャーは、ＮＫＴ細胞をエンゲージする分子であってよい。

【0328】

ＮＫＴ Ｔ細胞エンゲージャーの第２のドメインは、本明細書に記載されるＣＤ３に結合することができる。

【0329】

二重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＢＩＫＥ）および三重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＴＲＩＫＥ）
一実施形態では、本発明は、本明細書に記載されるｓｄＡｂを第１のドメインとして、およびＮＫ細胞活性化ドメインを第２のドメインとして含む二重特異性キラー細胞エンゲージャー分子（ＢｉＫＥ）であるＮＫ細胞エンゲージャー分子を提供する。ＮＫ細胞活性化ドメインは、ＮＫ細胞を活性化することができるドメインである。

【0330】

ＢｉＫＥまたはＴＲｉＫＥは、第２のドメインの複数のコピーを含むことができ、したがって、ＮＫ細胞活性化ドメインの複数のコピーを包含することができる。ＢｉＫＥまたはＴＲｉＫＥは、同じＮＫ細胞活性化ドメインの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれよりも多くを含むことができる。例えば、ＮＫ細胞エンゲージャーは、各々がＣＤ１６に結合する３つのＣＤ１６結合ドメインを含むことができる。

【0331】

二重特異性キラー細胞エンゲージ分子は、主に抗がん薬物としての使用のために開発された二重特異性抗体型分子のクラスである。それらは宿主の免疫系、より具体的にはＮＫ細胞の細胞傷害活性を、がん細胞などの標的細胞に対して向ける。これらの二重特異性キラー細胞エンゲージャー分子では、一方の結合ドメインが、例えばＣＤ１６受容体を介してＮＫ細胞に結合し、他方が腫瘍細胞などの標的細胞に結合する（例えば、腫瘍特異的分子を介して）。二重特異性キラー細胞エンゲージャー分子は標的細胞およびＮＫ細胞の両方に結合するので、それは標的細胞をＮＫ細胞と近接させ、そのためＮＫ細胞はその効果、例えばがん細胞への細胞傷害効果を発揮することができる。ＮＫ細胞：二重特異性Ａｂ：がん細胞複合体の形成はＮＫ細胞でシグナル伝達を誘導し、例えば、細胞傷害性メディエーターの放出をもたらす。理想的には、本剤は標的細胞の存在下で所望のシグナル伝達を誘導するだけであり、選択的殺傷をもたらす。

【0332】

したがって、本発明のＮＫ細胞エンゲージャーは、ＦｃＲＨ５発現細胞（例えば、ＦｃＲＨ５＋がん細胞）をＮＫ細胞と近接させ、そのためＮＫ細胞はその効果をがん細胞に対して発揮することができる。ＦｃＲＨ５二重特異性キラー細胞エンゲージャー分子の結合を介した共局在の要件が、ＦｃＲＨ５陽性細胞の選択的殺傷をもたらす。言い換えると、本発明のＮＫ細胞エンゲージャー分子は、標的細胞の表面上で発現するＦｃＲＨ５へのＮＫ細胞エンゲージャー分子の結合後に、ＮＫ細胞を活性化することができる。

【0333】

好適には、第２のドメインは、ＮＫ細胞表面上のＣＤ１６に結合することによってＮＫ細胞を活性化する。

【0334】

好適には、第２のドメインは、ＣＤ１６特異的抗体またはその一部を含む。

【0335】

第２のドメインは、３Ｇ８もしくはＬＳＩＶ２１のような、ＣＤ１６に特異的に結合する抗体もしくはその一部、または親和性が調整されたそのバリアントを含むことができる。

【0336】

本発明のＮＫ細胞エンゲージャー分子の第２のドメインは、マウス３Ｇ８からの１つまたは複数のＣＤＲを含むことができる。第２の結合ドメインは、マウス３Ｇ８の重鎖からのＣＤＲ３および／またはマウス３Ｇ８の軽鎖からのＣＤＲ３を含むことができる。第２の結合ドメインは、下に示す、マウス３Ｇ８からの６つ全てのＣＤＲを含むことができる。
重鎖
ＣＤＲ１：ＧＦＳＬＲＴＳＧＭＧ（配列番号１３６）
ＣＤＲ２：ＩＷＷＤＤＤＫ（配列番号１３７）
ＣＤＲ３：ＡＱＩＮＰＡＷＦＡＹ（配列番号１３８）
軽鎖
ＣＤＲ１：ＱＳＶＤＦＤＧＤＳＦ（配列番号１３９）
ＣＤＲ２：ＴＴ（配列番号１４０）
ＣＤＲ３：ＱＱＳＮＥＤＰＹＴ（配列番号１４１）

【0337】

好適には、ＣＤＲの１つまたは複数は、１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を含むことができる。

【0338】

ＮＫ細胞エンゲージャー分子の第２のドメインは、マウス３Ｇ８からのＣＤＲ配列を含むｓｃＦｖを含むことができる。

【0339】

ＮＫ細胞エンゲージャー分子の第２のドメインは、配列番号１４２として示す配列を有するＶＨ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ１６に結合する能力を保持するバリアント；および配列番号１４３として示す配列を有するＶＬ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ１６に結合する能力を保持するバリアントを含むことができる。好適には、第３の結合ドメインは、配列番号１４２として示す配列を有するＶＨ領域；および配列番号１４３として示す配列を有するＶＬ領域を含むことができる。
ＶＨドメイン配列番号１４２

【化106】

ＶＬドメイン配列番号１４３

【化107】

【0340】

本発明のＮＫ細胞エンゲージャー分子の第２のドメインは、ヒト化３Ｇ８からの１つまたは複数のＣＤＲを含むことができる。第２の結合ドメインは、ヒト化３Ｇ８の重鎖からのＣＤＲ３および／またはヒト化３Ｇ８の軽鎖からのＣＤＲ３を含むことができる。第２の結合ドメインは、下に示す、ヒト化３Ｇ８からの６つ全てのＣＤＲを含むことができる。
重鎖
ＣＤＲ１：ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧ（配列番号１４４）
ＣＤＲ２：ＩＷＷＤＤＤＫ（配列番号１３７）
ＣＤＲ３：ＡＲＩＮＰＡＷＦＡＹ（配列番号１４５）
軽鎖
ＣＤＲ１：ＱＳＶＤＦＤＧＤＳＦ（配列番号１３９）
ＣＤＲ２：ＴＴ（配列番号１４０）
ＣＤＲ３：ＱＱＳＮＥＤＰＹＴ（配列番号１４１）

【0341】

好適には、ＣＤＲの１つまたは複数は、１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を含むことができる。

【0342】

ＮＫ細胞エンゲージャー分子の第２のドメインは、ヒト化３Ｇ８からのＣＤＲ配列を含むｓｃＦｖを含むことができる。

【0343】

ＮＫ細胞エンゲージャー分子の第２のドメインは、配列番号１４６として示す配列を有するＶＨ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ１６に結合する能力を保持するバリアント；および配列番号１４７として示す配列を有するＶＬ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ１６に結合する能力を保持するバリアントを含むことができる。好適には、第３の結合ドメインは、配列番号１４６として示す配列を有するＶＨ領域；および配列番号１４７として示す配列を有するＶＬ領域を含むことができる。
ＶＨドメイン配列番号１４６

【化108】

ＶＬドメイン配列番号１４７

【化109】

【0344】

本発明のＮＫ細胞エンゲージャー分子の第２のドメインは、ＬＳＩＶ２１からの１つまたは複数のＣＤＲを含むことができる。第２の結合ドメインは、ＬＳＩＶ２１の重鎖からのＣＤＲ３および／またはＬＳＩＶ２１の軽鎖からのＣＤＲ３を含むことができる。第２の結合ドメインは、下に示す、マウスＬＳＩＶ２１からの６つ全てのＣＤＲを含むことができる。
重鎖
ＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号１２４）
ＣＤＲ２：ＩＮＰＳＧＧＳＴ（配列番号１４８）
ＣＤＲ３：ＡＲＧＳＡＹＹＹＤＦＡＤＹ（配列番号１４９）
軽鎖
ＣＤＲ１：ＮＩＧＳＫＮ（配列番号１５０）
ＣＤＲ２：ＱＤ（配列番号１５１）
ＣＤＲ３：ＱＶＷＤＮＹＳＶＬ（配列番号１５２）

【0345】

好適には、ＣＤＲの１つまたは複数は、１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を含むことができる。

【0346】

ＮＫ細胞エンゲージャー分子の第２のドメインは、ＬＳＩＶ２１からのＣＤＲ配列を含むｓｃＦｖを含むことができる。

【0347】

ＮＫ細胞エンゲージャー分子の第２のドメインは、配列番号１５３として示す配列を有するＶＨ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ１６に結合する能力を保持するバリアント；および配列番号１５４として示す配列を有するＶＬ領域またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有する、ＣＤ１６に結合する能力を保持するバリアントを含むことができる。好適には、第３の結合ドメインは、配列番号１５３として示す配列を有するＶＨ領域；および配列番号１５４として示す配列を有するＶＬ領域を含むことができる。
ＶＨドメイン配列番号１５３

【化110】

ＶＬドメイン配列番号１５４

【化111】

【0348】

本発明は、三重特異性キラー細胞エンゲージャー分子であるＮＫ細胞エンゲージャーも提供する。ＢｉＫＥに関して本明細書に記載される第１および第２のドメインに加えて、ＴｒｉＫＥは、別のＮＫ細胞活性化ドメインを第３のドメインとしてさらに含む。ＮＫ細胞活性化ドメインは、ＮＫ細胞を活性化することができるドメインである。したがって、ＴｒｉＫＥは、本明細書に記載されるＢｉＫＥと類似した効果および機能を有することができる。

【0349】

ＴｒｉＫＥの第３のドメインは、追加の活性化シグナルをＮＫ細胞に提供するドメインであってよい。

【0350】

好適には、第３のドメインは、ＩＬ－１５を架橋することができる。

【0351】

ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥは、一般的に、短い５残基ペプチドリンカー（ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７））を介して、抗ＣＤ１６ ｓｃＦｖを抗標的抗原ｓｃＦｖと融合することにより作製される。

【0352】

本発明のＢｉＫＥまたは本発明のＴｒｉＫＥは、ドメインを空間的に分離するために、本発明のＢｉＴＥまたは本発明の三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子との関連で記載される、第１のドメインを第２のドメインに連結する、および／または第２のドメインを第３のドメインに連結するスペーサーまたはリンカー配列を含むことができる。

【0353】

本発明のＢｉＫＥまたは本発明のＴｒｉＫＥは、その産生を助ける、本明細書に記載されるシグナルペプチドを含むことができる。

【0354】

本発明の二重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー分子は、次の一般式を有することができる：
シグナルペプチド－第１のドメイン－スペーサー／リンカー－第２のドメイン。

【0355】

本発明の三重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー分子は、次の一般式を有することができる：
シグナルペプチド－第１のドメイン－スペーサー／リンカー－第２のドメイン－スペーサー／リンカー－第３のドメイン。

【0356】

ポリヌクレオチド
一態様では、本発明は、本発明のｓｄＡｂをコードする核酸配列を提供する。

【0357】

一態様では、本発明は、本発明のＣＡＲをコードする核酸配列を提供する。

【0358】

一態様では、本発明は、本発明の免疫細胞エンゲージャー分子をコードする核酸配列を提供する。

【0359】

遺伝暗号の冗長性ゆえ、同じポリペプチドをコードする核酸配列における変動が可能である。これらの配列は、本発明に包含される。したがって、各核酸配列は異なるが、本発明によるポリペプチドまたは本明細書に記載されるさらなるポリペプチドをコードする複数のポリヌクレオチドが想定される。そのような核酸配列の設計および産生が難なく可能である。

【0360】

核酸配列は、ＲＮＡまたはＤＮＡ配列またはそのバリアントであってよい。用語「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。それは一本鎖であっても二本鎖であってもよい。それは、例えば、ゲノム、組換えｍＲＮＡまたはｃＤＮＡであってよい。

【0361】

ヌクレオチド配列は、好まれる宿主細胞での産生用にコドン最適化されてもよい。

【0362】

本明細書で使用される場合、「バリアント」は、「変異体」と同義であり、対応する野生型配列と比べて異なるポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列を指す。用語「野生型」は、それぞれ天然の遺伝子またはタンパク質と同一であるポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列をそれぞれ有する遺伝子またはタンパク質を意味して使用される。

【0363】

好適には、核酸配列は、発現カセットを形成する、プロモーターまたは制御配列のような異種配列に作動可能に連結していてもよい。

【0364】

発現カセットは、１つまたは複数の調節配列を含むことができる。調節配列は、前記ｓｄＡｂ、ＣＡＲまたは免疫細胞エンゲージャーの転写および適当である場合は翻訳を調節および制御する配列であり、プロモーター配列、転写制御因子コード配列、リボソーム結合配列（ＲＢＳ）および／または転写終結配列を含む。本発明の発現カセットは、エンハンサーをさらに含むことができ、それは、プロモーター配列に隣接していても離れていてもよく、かつその発現カセットからの転写を上昇させるように機能できる。発現調節配列は、原核細胞または真核細胞および生物体、例えば、哺乳動物細胞中で機能的であってもよい。発現カセットは、プロモーターを含むことができる。任意のプロモーターを、この方法において使用することができる。一般に、真核細胞中で機能的な強力プロモーターを利用することが有利である。強力プロモーターは、それに限定されないが、ヒトもしくはマウス起源の、または必要に応じて、ラットもしくはモルモットのような別の起源を有する最初期サイトメガロウイルスプロモーター（ＣＭＶ－ＩＥ）であってよい。

【0365】

さらに一般的には、プロモーターは、ウイルス起源または細胞起源のいずれかを有する。本発明の実践において有益に利用することができる、ＣＭＶ－ＩＥ以外の強力ウイルスプロモーターは、ＳＶ４０ウイルスの初期／後期プロモーターまたはラウス肉腫ウイルスのＬＴＲプロモーターである。本発明の実践において有益に利用することができる強力細胞プロモーターは細胞骨格の遺伝子のプロモーター、例えば、デスミンプロモーター（Ｋｗｉｓｓａ ｅｔ ａｌ．， ２０００）またはアクチンプロモーター（Ｍｉｙａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．， １９８９）である。

【0366】

プロモーターは、構成的プロモーターであってよい。プロモーターは、組織特異的プロモーターであってよい。

【0367】

ベクター
本発明は、本発明による核酸配列を含むベクターも提供する。例えば、本発明のベクターは、本発明のＦｃＲＨ５結合分子、例えば、本発明のｓｄＡｂ、または本発明のＣＡＲ、または本発明の免疫細胞エンゲージャー分子（ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌ ｃｅｌｌ ｅｎｇａｇｅｒ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを含むことができる。そのようなベクターは、それが本発明のＦｃＲＨ５結合分子を発現および産生するように、核酸配列を宿主細胞に導入するために使用することができる。

【0368】

ベクターは、核酸を宿主細胞中で送達または維持することができる任意の作用物質であってよく、ウイルスベクター、プラスミド、ネイキッド核酸、ポリペプチドまたは他の分子と複合体形成した核酸、および固相粒子上に固定された核酸を含む。ベクターは、例えば、プラスミドまたはウイルスベクター、例えばレトロウイルスベクターもしくはレンチウイルスベクターであってよい。

【0369】

ベクターは、プロモーターまたは制御配列のような異種配列に作動可能に連結した、本発明によるｓｄＡｂ、ＣＡＲ、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、二重特異性キラー細胞エンゲージャー分子、または三重特異性キラー細胞エンゲージャー分子をコードする核酸配列を含むことができる。一般に、真核細胞中で機能的な強力プロモーターを利用することが有利である。強力プロモーターは、それに限定されないが、ヒトもしくはマウス起源の、または必要に応じて、ラットもしくはモルモットのような別の起源を有する最初期サイトメガロウイルスプロモーター（ＣＭＶ－ＩＥ）であってよい。

【0370】

さらに一般的には、プロモーターは、ウイルス起源または細胞起源のいずれかを有する。本発明の実践において有益に利用することができる、ＣＭＶ－ＩＥ以外の強力ウイルスプロモーターは、ＳＶ４０ウイルスの初期／後期プロモーターまたはラウス肉腫ウイルスのＬＴＲプロモーターである。本発明の実践において有益に利用することができる強力細胞プロモーターは細胞骨格の遺伝子のプロモーター、例えば、デスミンプロモーター（Ｋｗｉｓｓａ ｅｔ ａｌ．， ２０００）またはアクチンプロモーター（Ｍｉｙａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．， １９８９）である。

【0371】

プロモーターは、構成的プロモーターであってよい。プロモーターは、組織特異的プロモーターであってよい。

【0372】

ベクターは、細胞にトランスフェクトまたは形質導入することができるものであってよい。一態様では、ベクターは、Ｔ細胞またはＮＫ細胞にトランスフェクトまたは形質導入することができるものであってよい。

【0373】

ベクターは、ｉＣａｓｐ９またはＲＱＲ８のような自殺遺伝子をコードする核酸配列も含むことができる。

【0374】

細胞
本発明は、本発明による核酸またはベクターを含む宿主細胞も提供する。

【0375】

宿主細胞は、本発明のｓｄＡｂを産生することができるものであってよい。宿主細胞は、本発明の免疫細胞エンゲージャーを産生することができるものであってよい。宿主細胞は、本発明のＣＡＲを、産生および／もしくは発現することができるものであってよく、ならびに／または含むことができる。

【0376】

宿主細胞は、細菌細胞、真菌細胞、酵母細胞、植物細胞または動物細胞であってよい。好適には、本発明のｓｄＡｂまたは免疫細胞エンゲージャーは、細菌細胞、真菌細胞、酵母細胞、植物細胞または動物細胞中で産生することができる。好適には、宿主細胞は、哺乳動物細胞、例えば、ヒト胎児腎細胞系２９３であってよい。

【0377】

細胞は、細胞表面でＣＡＲを発現することができる任意の真核細胞、例えば免疫学的細胞であってよい。特に、細胞は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞であってよい。

【0378】

Ｔ細胞またはＴリンパ球は、細胞媒介性免疫で中心的な役割を演ずるタイプのリンパ球である。それらは、細胞表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の存在によって、他のリンパ球、例えばＢ細胞およびナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）から区別することができる。下で要約される通り、各種のＴ細胞がある。

【0379】

ヘルパーＴ細胞（ＴＨ細胞）は、Ｂ細胞の形質細胞およびメモリーＢ細胞への成熟化、ならびに細胞傷害性Ｔ細胞およびマクロファージの活性化を含めた免疫学的プロセスにおいて他の白血球を補助する。ＴＨ細胞は、表面上にＣＤ４を発現する。ＴＨ細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上のＭＨＣクラスＩＩ分子によってペプチド抗原が提示されると活性化される。これらの細胞は、異なる型の免疫応答を促進するような異なるサイトカインを分泌する、ＴＨ１、ＴＨ２、ＴＨ３、ＴＨ１７、Ｔｈ９、またはＴＦＨを含めたいくつかの亜型のうちの１つに分化し得る。

【0380】

細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＣ細胞、またはＣＴＬ）は、ウイルス感染細胞および腫瘍細胞を破壊し、また、移植拒絶にも関係づけられる。ＣＴＬは、表面上にＣＤ８を発現する。これらの細胞は、全ての有核細胞の表面上に存在するＭＨＣクラスＩに付随する抗原に結合することによってそれらの標的を認識する。調節性Ｔ細胞から分泌されるＩＬ－１０、アデノシンおよび他の分子を通じて、ＣＤ８＋細胞を不活性化してアネルギーの状態にすることができ、それにより、実験的自己免疫性脳脊髄炎などの自己免疫疾患を予防する。

【0381】

メモリーＴ細胞は、感染が消散した後、長期間存続する抗原特異的Ｔ細胞のサブセットである。これらは、同族抗原に再曝露されると直ちに増大して多数のエフェクターＴ細胞になり、そうすることで、過去の感染に対する「メモリー」による免疫系をもたらす。メモリーＴ細胞は、３つの亜型：セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）およびエフェクターメモリーＴ細胞の２つの型（ＴＥＭ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞）を含む。メモリー細胞は、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋のいずれかであり得る。メモリーＴ細胞は、一般には、細胞表面タンパク質ＣＤ４５ＲＯを発現する。

【0382】

調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）は、以前はサプレッサーＴ細胞として公知であり、免疫寛容を維持するために極めて重要である。それらの主要な役割は、Ｔ細胞媒介性免疫をシャットダウンして免疫反応の終わりに向かわせること、および胸腺における負の選択のプロセスを免れた自己反応性Ｔ細胞を抑制することである。

【0383】

２種の主要なクラスのＣＤ４＋Ｔｒｅｇ細胞が記載されている－天然に存在するＴｒｅｇ細胞および適応性Ｔｒｅｇ細胞。

【0384】

天然に存在するＴｒｅｇ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞としても公知）は、胸腺において生じ、発達中のＴ細胞と、ＴＳＬＰで活性化された骨髄樹状細胞（ＣＤ１１ｃ＋）および形質細胞様樹状細胞（ＣＤ１２３＋）との間の相互作用に関連付けられている。天然に存在するＴｒｅｇ細胞は、ＦｏｘＰ３と称される細胞内分子が存在することにより、他のＴ細胞と区別することができる。ＦＯＸＰ３遺伝子の変異により、調節性Ｔ細胞の発生が妨げられ、それにより、致死的な自己免疫疾患ＩＰＥＸが引き起こされる可能性がある。

【0385】

適応性Ｔｒｅｇ細胞（Ｔｒ１細胞またはＴｈ３細胞としても公知）は、正常な免疫応答の間に生じる可能性がある。

【0386】

ガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞）は、１つのγ（ガンマ）鎖および１つのδ（デルタ）鎖で構成されるＴＣＲを有するＴ細胞である。ガンマデルタＴ細胞は、一般的に、αβＴ細胞ほど一般的ではない。ヒトでは、Ｔ細胞の９５％において、ＴＣＲは、アルファ（α）鎖およびベータ（β）鎖（それぞれ、ＴＲＡおよびＴＲＢによりコードされる）からなる。しかし、Ｔ細胞の約５％において、ＴＣＲは、ガンマおよびデルタ（γ／δ）鎖（それぞれ、ＴＲＧおよびＴＲＤによりコードされる）からなる。ガンマデルタＴ細胞は、腸粘膜に豊富にある。ガンマデルタ細胞の例は、Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞を含む。

【0387】

γδＴＣＲは、ＭＨＣに依存せず、かつ腫瘍によって発現される細胞ストレスのマーカーを検出することができる。γδＴＣＲは、ホスホアンチゲン／ブチロフィリン３Ａ１複合体；主要組織適合性複合体クラスＩ鎖関連Ａ（ＭＩＣＡ）；主要組織適合性複合体クラスＩ鎖関連Ｂ（ＭＩＣＢ）；ＮＫＧ２Ｄリガンド１－６（ＵＬＢＰ１－６）；ＣＤ１ｃ；ＣＤ１ｄ；内皮細胞タンパク質Ｃ受容体（ＥＰＣＲ）；リポヘキサペプチド；フィコエリトリン（ｐｈｙｃｏｒｅｙｔｈｒｉｎ）またはヒスチジルｔＲＮＡ合成酵素に結合することができるものであってよい。

【0388】

ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞は、Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞の両方の特性を共有するＴ細胞の異質群である。これらの細胞の多くは、自己脂質および外来脂質および糖脂質に結合する抗原提示分子である非多形ＣＤ１ｄ分子を認識する。

【0389】

本発明の細胞は、上で指摘したＴ細胞型のいずれか、特にＣＴＬであってよい。

【0390】

ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）は、自然免疫系の一部を形成するある種類の細胞溶解性細胞である。ＮＫ細胞により、ウイルス感染細胞からの生得的なシグナルに対する迅速な応答がＭＨＣ非依存的にもたらされる。

【0391】

ＮＫ細胞（生得的なリンパ系細胞の群に属する）は、大型顆粒リンパ球（ＬＧＬ）と定義され、Ｂリンパ球およびＴリンパ球を生成する共通のリンパ系前駆細胞から分化する第３の種類の細胞を構成する。ＮＫ細胞は、骨髄、リンパ節、脾臓、扁桃および胸腺において分化および成熟し、次いでそこから循環中に入ることが公知である。

【0392】

本発明のＣＡＲ細胞は、上で指摘した細胞型のいずれかであってよい。

【0393】

好適には、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、本発明のＣＡＲを産生および／または発現および／または含むことができる。

【0394】

好適には、宿主細胞はＴ細胞であってよい。好適には、宿主細胞はＮＫ細胞であってよい。

【0395】

本発明によるＣＡＲを発現することができるＴ細胞は、ＣＡＲコード核酸をＴ細胞に形質導入またはトランスフェクトすることによって作製することができる。本発明によるＣＡＲを発現することができるＮＫ細胞は、ＣＡＲコード核酸をＮＫ細胞に形質導入またはトランスフェクトすることによって作製することができる。

【0396】

細胞は、患者自身の末梢血（第一者）から、または造血幹細胞移植の状況ではドナー末梢血（第二者）から、または無関係のドナーからの末梢血（第三者）からｅｘ ｖｉｖｏで作製することができる。細胞は、患者またはドナーからの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）試料からのものであってよい。

【0397】

あるいは、細胞は、誘導可能な前駆体細胞または胚性前駆体細胞の、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞へのｅｘ ｖｉｖｏ分化に由来してもよい。あるいは、その溶解機能を保持し、治療薬として作用することができる不死化されたＴ細胞系を使用することができる。

【0398】

細胞は、ＣＡＲコード核酸が形質導入される前に、例えば抗ＣＤ３モノクローナル抗体による処理によって活性化および／または拡大することができる。

【0399】

本発明は、本発明による細胞を作製するための方法であって、本発明によるポリヌクレオチドまたは本発明によるベクターを細胞に導入するステップを含む方法も提供する。ポリヌクレオチドまたはベクターは、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏでの形質導入またはトランスフェクションによって導入することができる。

【0400】

前記細胞は、次いで、分子の産生に好適な条件下で宿主細胞を培養すると、本発明のｓｄＡｂ、または本発明のＣＡＲ、または本発明の免疫細胞エンゲージャーを発現および／または産生することができる。次いで、分子は、宿主細胞または上清から採取することができる。

【0401】

前記の細胞中で産生される本発明の抗体および免疫細胞エンゲージャーは、細胞内（例えば、サイトゾル内、ペリプラズマ（ｐｅｒｉｐｌａｓｍａ）内または封入体内）で産生した後に宿主細胞から単離し、必要に応じてさらに精製することができるか；または細胞外（例えば、宿主細胞が培養される培地中）で産生した後に培養培地から単離し、必要に応じてさらに精製することができるかのいずれかである。

【0402】

医薬組成物
本発明は、本発明のポリヌクレオチドまたはベクターを、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤、および必要に応じて１つまたは複数のさらなる医薬活性ポリペプチドおよび／または化合物と共に含む医薬組成物にも関する。

【0403】

本発明は、本発明のｓｄＡｂを、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤、および必要に応じて１つまたは複数のさらなる医薬活性ポリペプチドおよび／または化合物と共に含む医薬組成物にも関する。

【0404】

本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤、および必要に応じて１つまたは複数のさらなる医薬活性ポリペプチドおよび／または化合物と共に含む医薬組成物にも関する。

【0405】

本発明は、本発明のＣＡＲ発現細胞を、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤、および必要に応じて１つまたは複数のさらなる医薬活性ポリペプチドおよび／または化合物と共に含む医薬組成物にも関する。

【0406】

本発明は、本発明の免疫細胞エンゲージャーを、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤、および必要に応じて１つまたは複数のさらなる医薬活性ポリペプチドおよび／または化合物と共に含む医薬組成物にも関する。

【0407】

医薬組成物は、患者に投与することができる。

【0408】

医薬組成物は、宿主細胞または対象における、本発明のポリヌクレオチドの送達および／または維持を可能にすることができる。そのような送達は、宿主細胞または対象における、本発明のｓｄＡｂまたはさらなる生成物の発現を好適に可能にする。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはｍＲＮＡであってもよい。医薬組成物は、ウイルスベクター、プラスミド、ネイキッド核酸、ポリペプチドまたは他の分子と複合体形成した核酸、および固相粒子上に固定された核酸を含むことができる。ベクターは、例えば、プラスミドまたはウイルスベクター、例えばレトロウイルスベクターもしくはレンチウイルスベクターであってよい。他の送達剤は、送達ナノ粒子および脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む。

【0409】

投与の形は、例えば、経口投与または非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内もしくは皮下注射または静脈内注入による）に好適な形、または腫瘍内であってよい。

【0410】

好適には、そのような製剤は、例えば、静脈内注入に好適な形であってよい。

【0411】

医学的使用
本発明は、疾患の処置における医薬として使用するための本発明のｓｄＡｂを提供する。

【0412】

本発明は、疾患の処置における医薬として使用するための本発明の抗体コンジュゲートを提供する。

【0413】

本発明は、疾患の処置における医薬として使用するための本発明のＣＡＲを発現する本発明の細胞を提供する。

【0414】

本発明は、疾患の処置における医薬として使用するための本発明の免疫細胞エンゲージャーを提供する。

【0415】

本発明は、疾患の処置における医薬として使用するための本発明のポリヌクレオチドを提供する。

【0416】

本発明は、疾患の処置における医薬として使用するための本発明のベクターを提供する。

【0417】

本発明は、疾患の処置における医薬として使用するための本発明の医薬組成物を提供する。

【0418】

好適には、疾患は、ＦｃＲＨ５発現と関連した疾患であってよい。ＦｃＲＨ５は、分化したＢ細胞および形質細胞上で発現することが公知である。

【0419】

好適には、疾患は、がん性疾患、特にＦｃＲＨ５発現と関連したがん性疾患であってよい。

【0420】

疾患は、Ｂ細胞悪性腫瘍であってよい。

【0421】

疾患は、白血病または非ホジキンリンパ腫であってよい。

【0422】

白血病は、有毛細胞白血病または慢性リンパ球性白血病であってよい。

【0423】

非ホジキンリンパ腫は、マントル細胞リンパ腫、ＥＢＶ関連リンパ腫（バーキット）またはリンパ形質細胞性リンパ腫であってよい。

【0424】

好適には、疾患は、形質細胞障害または形質細胞異常症、特にＦｃＲＨ５発現と関連する形質細胞障害または形質細胞異常症であってよい。

【0425】

疾患は、形質細胞腫、孤立性形質細胞腫（ｓｏｌｉｔａｒｙ ｐｌａｓｍｏｃｙｔｏｍａ）、髄外性形質細胞腫（ｅｘｔｒａｍｅｄｕｌｌａｒｙ ｐｌａｓｍｏｃｙｔｏｍａ）、形質細胞白血病、多発性骨髄腫、マクログロブリン血症、アミロイドーシス、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、骨の孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、骨硬化性骨髄腫、重鎖疾患、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、非ＩｇＭ ＭＧＵＳ、ＩｇＭ ＭＧＵＳ、軽鎖ＭＧＵＳおよびくすぶり型多発性骨髄腫から選択される形質細胞障害または形質細胞異常症であってよい。

【0426】

疾患は、多発性骨髄腫であってよい。

【0427】

好適には、本発明のｓｄＡｂ、本発明の抗体コンジュゲート、本発明のＣＡＲを発現する細胞、本発明の免疫細胞エンゲージャー、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクターおよび／または本発明の医薬組成物は、ＦｃＲＨ５発現と関連するがん性疾患の処置のために使用することができる。

【0428】

好適には、本発明のｓｄＡｂ、本発明の抗体コンジュゲート、本発明のＣＡＲを発現する細胞、本発明の免疫細胞エンゲージャー、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクターおよび／または本発明の医薬組成物は、多発性骨髄腫の処置のために使用することができる。

【0429】

本発明のＣＡＲ分子を発現する細胞は、がん細胞を殺傷することができる。ＣＡＲ発現細胞は、患者自身の末梢血（第一者）から、または造血幹細胞移植の状況ではドナー末梢血（第二者）から、または無関係のドナーからの末梢血（第三者）からのいずれかでｅｘ ｖｉｖｏで作製することができる。あるいは、ＣＡＲ細胞は、誘導可能な前駆体細胞または胚性前駆体細胞のＴ細胞またはＮＫ細胞へのｅｘ ｖｉｖｏ分化に由来してもよい。これらの場合、ＣＡＲ細胞は、ウイルスベクターの形質導入、ＤＮＡまたはＲＮＡのトランスフェクションを含む多くの手段のうちの１つによって、ＣＡＲをコードするＤＮＡまたはＲＮＡを導入することによって生成される。

【0430】

本発明は、疾患の処置のための方法であって、本発明のｓｄＡｂ、本発明の抗体コンジュゲート、本発明のＣＡＲを発現する細胞、本発明の免疫細胞エンゲージャー、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクターおよび／または本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法にも関する。

【0431】

その点で、ｓｄＡｂ、抗体コンジュゲート、ＣＡＲ発現細胞、免疫細胞エンゲージャー ポリヌクレオチド、ベクターおよび／または医薬組成物は、疾患と関連する少なくとも１つの症状を軽くするか、低減するか、向上させるために、および／または疾患の進行を遅くするか、低減するか、ブロックするために、既存の疾患または状態を有する対象に投与することができる。例えば、本発明の方法は、ＦｃＲＨ５発現細胞、例えばがん細胞の、Ｔ細胞またはＮＫ細胞媒介性殺傷を引き起こすまたは促進することができる。

【0432】

本発明は、疾患を処置するための医薬の製造における、本発明のｓｄＡｂ、本発明の抗体コンジュゲート、本発明のＣＡＲを発現する細胞、本発明の免疫細胞エンゲージャー、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクターおよび／または本発明の医薬組成物の使用にも関する。

【0433】

本発明の態様
本発明のさらなる態様を、以下の番号付き項（ｐａｒａ）において記載する：
１．ＦｃＲＨ５結合ドメインを含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）。

【0434】

２．ＦｃＲＨ５結合ドメインが、
（ｉ）以下の配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号４）
ＣＤＲ２－ＩＮＳＤＧＧＴＡ（配列番号５）
ＣＤＲ３－ＡＡＮＲＧＦＣＡＧＶＲＣＬＥＹＱＹ（配列番号６）；または
（ｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＧＧＳＧＲＶＳＳＴ（配列番号８）
ＣＤＲ３－ＡＡＲＲＤＹＬＰＦＰＰＥＳＹＤＹ（配列番号９）；または
（ｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＧＧＳＧＲＶＳＳＴ（配列番号８）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＴＳＴＮＧＧＤＹＤＹ（配列番号１０）；または
（ｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＡＴ（配列番号１１）
ＣＤＲ３－ＡＧＴＲＲＡＦＳＴＧＬＲＤＹＤＹ（配列番号１２）；または
（ｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＮＳＴ（配列番号１３）
ＣＤＲ２－ＩＳＷＳＧＧＴＹ（配列番号１４）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＫＧＷＳＴＲＧＤＤＹＤＹ（配列番号１５）；または
（ｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＹＮＮＹＡ（配列番号１６）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＭＴ（配列番号１７）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＡＲＲＤＹＳＹ（配列番号１８）；または
（ｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＳＹＡ（配列番号１９）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＩＧＧＶＴ（配列番号２０）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＧＬＶＳＩＳＴＴＰＮＤＹＤＹ（配列番号２１）；または
（ｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＬ（配列番号２４）；または
（ｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＲＮＩＦＳＬＮＰ（配列番号２５）
ＣＤＲ２－ＩＴＤＧＧＳＴ（配列番号２６）
ＣＤＲ３－ＮＲＶＧＧＬＱＴＷＡ（配列番号２７）；または
（ｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号３０）；または
（ｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＤＳＲＰ（配列番号３１）
ＣＤＲ２－ＶＳＷＲＧＥＳＴ（配列番号３２）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＥＰＹＳＧＴＹＹＹＲＧＲＤＹＤＹ（配列番号３３）；または
（ｘｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＭＹＡ（配列番号３４）
ＣＤＲ２－ＩＳＧＳＡＲＩＴ（配列番号３５）
ＣＤＲ３－ＡＡＳＳＴＹＴＳＴＳＧＳＳＹＮＹ（配列番号３６）；または
（ｘｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｘｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＳＳＲＡＡ（配列番号１５５）
ＣＤＲ２－ＩＳＷＳＧＧＴＴ（配列番号１５６）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＴＴＡＲＮＤＹＤＨ（配列番号１５７）；または
（ｘｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＬＳ（配列番号１８６）；または
（ｘｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＡ（配列番号１６０）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＬＳ（配列番号１８６）；または
（ｘｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＶＲＳＡ（配列番号１８７）；または
（ｘｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＣＲＳＡ（配列番号１８８）；または
（ｘｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＳＦＲＬＮＧ（配列番号１６１）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＳＲＡ（配列番号１８９）；または
（ｘｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＶＳＩＮＡ（配列番号１６２）
ＣＤＲ２－ＩＤＲＳＧＮＴ（配列番号１７６）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＹＳＤＳ（配列番号１９０）；または
（ｘｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＳＹＡ（配列番号１９）
ＣＤＲ２－ＩＤＧＩＧＧＩＴ（配列番号１７７）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＳＡ（配列番号１９１）；または
（ｘｘｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＰＳ（配列番号１９２）；または
（ｘｘｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＲＳ（配列番号１９３）；または
（ｘｘｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＥＲＩＦＲＩＮＡ（配列番号１６４）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＲＳ（配列番号１９３）；または
（ｘｘｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＰＦＲＬＳ（配列番号１９４）；または
（ｘｘｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＴＰＦＲＬＳ（配列番号１９５）；または
（ｘｘｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＲＧＧＮＴ（配列番号１７９）
ＣＤＲ３－ＮＳＩＰＦＲＬＳ（配列番号１９６）；または
（ｘｘｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＩＮＧ（配列番号１６６）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＩＳ（配列番号１９７）；または
（ｘｘｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＩＰＦＲＬＹ（配列番号１９８）；または
（ｘｘｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＫＡＩＰＦＲＬＳ（配列番号１９９）；または
（ｘｘｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＳＦＳＮＮＡ（配列番号１６７）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｘｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｘｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＡ（配列番号１６０）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｘｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＲＳＳＦＧＮＮＡ（配列番号１６８）
ＣＤＲ２－ＩＴＫＧＧＶＴ（配列番号２）
ＣＤＲ３－ＮＴＩＰＦＲＳＡ（配列番号３）；または
（ｘｘｘｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＴＹＧ（配列番号１６９）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＡＴ（配列番号１１）
ＣＤＲ３－ＡＧＴＲＲＡＦＳＴＧＬＲＤＹＤＹ（配列番号１２）；または
（ｘｘｘｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＴＩＥＲＮＮＡ（配列番号１７０）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＲＳＲＤＹＤＹ（配列番号２００）；または
（ｘｘｘｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＳＳＲＤＹＤＹ（配列番号２０１）；または
（ｘｌ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＧＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０２）；または
（ｘｌｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＳＹＡ（配列番号１９）
ＣＤＲ２－ＩＳＱＦＧＧＶＴＴ（配列番号１７９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＧＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０２）；または
（ｘｌｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＧＧＲＲＦＳＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０３）；または
（ｘｌｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＦＳＴＳＳＲＥＹＤＩ（配列番号２０４）；または
（ｘｌｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＰ（配列番号１８０）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＲＲＬＳＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０５）；または
（ｘｌｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＧＧＧＶＳ（配列番号１８１）
ＣＤＲ３－ＡＡＧＬＲＦＳＴＧＳＲＤＹＤＩ（配列番号２０６）；または
（ｘｌｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＲＲＹＡ（配列番号１７１）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＭＴ（配列番号１７）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＴＲＲＤＹＡＹ（配列番号２０７）；または
（ｘｌｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＮＳＴ（配列番号１３）
ＣＤＲ２－ＩＳＷＳＧＧＴＴ（配列番号１５６）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＫＧＷＳＴＲＧＤＤＹＤＹ（配列番号１５）；または
（ｘｌｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＶＩ（配列番号１７２）
ＣＤＲ２－ＳＳＧＳＧＧＶＴ（配列番号１８２）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＬＴＷＳＴＲＰＳＤＦＴＳ（配列番号２０８）；または
（ｘｌｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＶＩ（配列番号１７２）
ＣＤＲ２－ＳＮＷＳＧＧＶＴ（配列番号１８３）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＡＲＲＤＹＳＹ（配列番号１８）；または
（ｌ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＩＮＡ（配列番号７）
ＣＤＲ２－ＩＳＲＳＧＧＭＴ（配列番号１７）
ＣＤＲ３－ＡＡＹＶＧＧＦＳＴＡＲＲＤＹＳＹ（配列番号１８）；または
（ｌｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＲＹＡ（配列番号１７３）
ＣＤＲ２－ＩＮＧＳＧＧＴ（配列番号１８４）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＴＴＴＲＮＥＹＤＨ（配列番号２０９）；または
（ｌｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＦＳＲＹＡ（配列番号１７３）
ＣＤＲ２－ＩＮＧＳＧＧＴ（配列番号１８４）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＴＴＴＲＮＥＹＤＨ（配列番号２０９）；または
（ｌｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＩＦＳＴＡＲＮＤＹＤＨ（配列番号２１０）；または
（ｌｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＡＧＧＲＩＦＲＴＳＳＲＤＹＤＩ（配列番号２１１）；または
（ｌｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＡＡＡＲＦＦＴＴＡＲＮＤＹＤＨ（配列番号２１２）；または
（ｌｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＧ（配列番号２１３）；または
（ｌｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＧ（配列番号２１３）；または
（ｌｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＤＧ（配列番号２１４）；または
（ｌｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＡＰＮＹＧ（配列番号２１５）；または
（ｌｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＶ（配列番号２１６）；または
（ｌｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＩＮＡ（配列番号１７４）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＬＮＹＧ（配列番号２１７）；または
（ｌｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＬＶＰＮＹＧ（配列番号２１８）；または
（ｌｘｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＬＰＮＹＧ（配列番号２１９）；または
（ｌｘｉｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＴＮＹＧ（配列番号２２０）；または
（ｌｘｖ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＳＩＦＳＩＮＡ（配列番号３７）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＴＮＹＧ（配列番号２２０）；または
（ｌｘｖｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＴＶ（配列番号２２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＲＧＧＳＴ（配列番号１８５）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＮＹＧ（配列番号２１３）；または
（ｌｘｖｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｖｉｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＮＦＲＬＮＡ（配列番号１６３）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＮＴ（配列番号２３）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｉｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＲＬＮＧ（配列番号２２）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｘ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＲＳＦＳＮＹＧ（配列番号２８）
ＣＤＲ２－ＩＧＭＶＧＧＬＴ（配列番号２９）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｘｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＮＩＦＳＩＮＡ（配列番号１７５）
ＣＤＲ２－ＩＴＳＧＧＳＴ（配列番号３８）
ＣＤＲ３－ＮＡＬＧＧＦＶＰＳＹＧ（配列番号３９）；または
（ｌｘｘｉｉ）以下の配列を有するＣＤＲ：
ＣＤＲ１－ＧＦＴＦＳＴＹＷ（配列番号１６５）
ＣＤＲ２－ＩＤＮＧＧＧＴＴ（配列番号１７８）
ＣＤＲ３－ＡＲＮＰＴＲＧＷＹＳＴＤＹ（配列番号２２１）
を含み、
必要に応じて、ＣＤＲのうちの１つまたは複数が、１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を含む、項１に従うｓｄＡｂ。

【0435】

３．ＶＨＨまたは重鎖可変領域（ＶＨ）ドメインである、いずれかの前出の項に従うｓｄＡｂ。

【0436】

４．ＦｃＲＨ５結合ドメインが、
（ｉ）配列番号４０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有する可変重鎖ドメイン抗体（ＶＨＨ）；または
（ｉｉ）配列番号４１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｉｉｉ）配列番号４２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｉｖ）配列番号４３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｖ）配列番号４４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｖｉ）配列番号４５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｖｉｉ）配列番号４６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｖｉｉｉ）配列番号４７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｉｘ）配列番号４８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘ）配列番号４９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｉ）配列番号５０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｉｉ）配列番号５１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｉｉｉ）配列番号５２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｉｖ）配列番号５３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；
（ｘｖ）配列番号１５８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｖｉ）配列番号２２３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｖｉｉ）配列番号２２４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｖｉｉｉ）配列番号２２５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｖｉｘ）配列番号２２６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘ）配列番号２２７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉ）配列番号２２８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉｉ）配列番号２２９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉｉｉ）配列番号２３０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉｖ）配列番号２３１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｖ）配列番号２３２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｖｉ）配列番号２３３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｖｉｉ）配列番号２３４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号２３５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｉｘ）配列番号２３６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘ）配列番号２３７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉ）配列番号２３８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉｉ）配列番号２３９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号２４０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉｖ）配列番号２４１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｖ）配列番号２４２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｖｉ）配列番号２４３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｖｉｉ）配列番号２４４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｖｉｉｉ）配列番号２４５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｘｘｉｘ）配列番号２４６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌ）配列番号２４７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉ）配列番号２４８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉｉ）配列番号２４９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉｉｉ）配列番号２５０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉｖ）配列番号２５１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｖ）配列番号２５２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｖｉ）配列番号２５３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｖｉｉ）配列番号２５４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｖｉｉｉ）配列番号２５５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｘｌｉｘ）配列番号２５６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌ）配列番号２５７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉ）配列番号２５８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉｉ）配列番号２５９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉｉｉ）配列番号２６０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉｖ）配列番号２６１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｖ）配列番号２６２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｖｉ）配列番号２６３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｖｉｉ）配列番号２６４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｖｉｉｉ）配列番号２６５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｉｘ）配列番号２６６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘ）配列番号２６７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉ）配列番号２６８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉｉ）配列番号２６９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉｉｉ）配列番号２７０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉｖ）配列番号２７１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｖ）配列番号２７２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｖｉ）配列番号２７３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｖｉｉ）配列番号２７４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｖｉｉｉ）配列番号２７５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｉｘ）配列番号２７６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘ）配列番号２７７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉ）配列番号２７８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉｉ）配列番号２７９として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉｉｉ）配列番号２８０として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉｖ）配列番号２８１として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｖ）配列番号２８２として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｖｉ）配列番号２８３として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｖｉｉ）配列番号２８４として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｖｉｉｉ）配列番号２８５として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｉｘ）配列番号２８６として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｘ）配列番号２８７として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ；または
（ｌｘｘｘｉ）配列番号２８８として示される配列またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアントを有するＶＨＨ
を含む、いずれかの前出の項に従うｓｄＡｂ。

【0437】

５．ヒト化ｓｄＡｂである、いずれかの前出の項に従うｓｄＡｂ。

【0438】

６．いずれかの前出の項に従うｓｄＡｂを含むＦｃＲＨ５結合分子であって、抗体コンジュゲート、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または免疫細胞エンゲージャー、例えば、Ｔ細胞エンゲージャー分子、ガンマデルタＴ細胞エンゲージャー分子、ナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞エンゲージャー分子もしくはＮＫ細胞エンゲージャー分子から選択される、ＦｃＲＨ５結合分子。

【0439】

７．項１から５のいずれか一項に従うｓｄＡｂを含む抗体コンジュゲート。

【0440】

８．抗体コンジュゲートが、化学療法用実体、放射性核種または検出用実体とコンジュゲートされてもよい、項７に従う抗体コンジュゲート。

【0441】

９．項１から５のいずれか一項に従うｓｄＡｂを含むＣＡＲ。

【0442】

１０．ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン；ＣＤ２８膜貫通ドメイン；またはＴｙｒｐ１膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインを含む、項９に従うＣＡＲ。

【0443】

１１．配列番号５４、配列番号５５もしくは配列番号５６を含む群から選択される配列の１つ、または少なくとも８０％の配列同一性を有するそのバリアントを含む膜貫通ドメインを含む、項９または１０に従うＣＡＲ。

【0444】

１２．ｓｄＡｂおよび膜貫通ドメインが、スペーサーによって連結されている、項９から１１のいずれか一項に従うＣＡＲ。

【0445】

１３．スペーサーが、以下：ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン；ＩｇＧ１ヒンジ；ＩｇＧ１ヒンジ－ＣＤ８ストーク；またはＣＤ８ストークの１つを含む、項１２に従うＣＡＲ。

【0446】

１４．スペーサーが、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０もしくは配列番号６１を含む群から選択される配列の１つ；または少なくとも８０％の配列同一性を有するそのバリアントを含む、項１２または１３に従うＣＡＲ。

【0447】

１５．細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインも含む、項９から１４のいずれか一項に従うＣＡＲ。

【0448】

１６．細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインが、以下のエンドドメイン：ＣＤ２８エンドドメイン；ＯＸ４０エンドドメイン；４１ＢＢエンドドメイン；およびＣＤ３ゼータエンドドメインの１つまたは複数を含む、項１５に従うＣＡＲ。

【0449】

１７．細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインが、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、もしくは配列番号７０を含む群から選択される配列の１つもしくは複数；または少なくとも８０％の配列同一性を有するそのバリアントを含む、項１５または１６に従うＣＡＲ。

【0450】

１８．配列番号７６～配列番号８９、配列番号１５９および配列番号２８９～配列番号３５４を含む群から選択される配列、またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するが、ｉ）ＦｃＲＨ５に結合する能力およびｉｉ）Ｔ細胞シグナル伝達を誘導する能力を保持するそのバリアントを含む、項９から１７のいずれか一項に従うＣＡＲ。

【0451】

１９．（ｉ）項１から５のいずれか一項に従うｓｄＡｂを含む第１のドメイン；および
（ｉｉ）Ｔ細胞を活性化することができる第２のドメイン
を含み免疫細胞エンゲージャー分子。

【0452】

２０．（ｉｉｉ）Ｔ細胞に結合することができる第３のドメインをさらに含む、項１９に従う免疫細胞エンゲージャー分子。

【0453】

２１．第２のドメインが、Ｔ細胞表面上のＣＤ３に結合することによってＴ細胞を活性化する、項１９または２０に従う免疫細胞エンゲージャー分子。

【0454】

２２．第２のドメインが、ＣＤ３特異的抗体またはその一部を含む、項２１に従う免疫細胞エンゲージャー分子。

【0455】

２３．第２のドメインが、配列番号９６、配列番号１０３もしくは配列番号１１０を含む群から選択される配列、または少なくとも８０％の配列同一性を有し、かつＣＤ３に結合するそのバリアントを含む、項１９から２２のいずれか一項に従う免疫細胞エンゲージャー分子。

【0456】

２４．第１および第２の結合ドメインが、スペーサーまたはリンカーによって連結されている、項１９から２３のいずれかに従う免疫細胞エンゲージャー分子。

【0457】

２５．第２および第３の結合ドメインが、スペーサーまたはリンカーによって連結されている、項１９から２４のいずれかに従う免疫細胞エンゲージャー分子。

【0458】

２６．スペーサーが、ＩｇＧ１ヒンジまたはＣＤ８ストークを含む、項２４または２５に従う免疫細胞エンゲージャー分子。

【0459】

２７．スペーサーが、配列番号１１３もしくは配列番号１１４からなる群から選択される配列の１つ、または少なくとも８０％の配列同一性を有するそのバリアントを含む、項２４から２６のいずれか一項に従う免疫細胞エンゲージャー分子。

【0460】

２７ａ．リンカーが、ＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１６）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７）、（（Ｇｌｙ４）Ｓｅｒ）２（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、配列番号３５５）、（（Ｇｌｙ４）Ｓｅｒ）３（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、配列番号３５６）および（（Ｇｌｙ４）Ｓｅｒ）４（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、配列番号３５７）からなる群から選択される配列の１つを含む、項２４または２５に従う免疫細胞エンゲージャー分子。

【0461】

２８．第３のドメインがＣＤ２８に結合することができる、項２０に従う免疫細胞エンゲージャー分子。

【0462】

２９．第３のドメインが、ＣＤ２８特異的抗体またはその一部を含む、項２８に従う免疫細胞エンゲージャー分子。

【0463】

３０．第３のドメインが、
（ｉ）配列番号１３０として示す配列を有するＶＨ領域および配列番号１３１として示す配列を有するＶＬ領域、もしくは
（ｉｉ）配列番号１３２として示す配列を有するＶＨ領域および配列番号１３３として示す配列を有するＶＬ領域、もしくは
（ｉｉｉ）配列番号１３４として示す配列を有するＶＨ領域および配列番号１３５として示す配列を有するＶＬ領域；
または少なくとも８０％の配列同一性を有し、かつＣＤ２８に結合するそのバリアント
を含む、項２８から２９のいずれか一項に従う免疫細胞エンゲージャー分子。

【0464】

３１．（ｉ）項１から５のいずれか一項に従うｓｄＡｂを含む第１のドメイン；および
（ｉｉ）ＮＫ細胞を活性化することができる第２のドメイン
を含む免疫細胞エンゲージャー分子。

【0465】

３２．（ｉｉ）ＮＫ細胞を活性化することができる第３のドメイン
をさらに含む、項３１に従う免疫細胞エンゲージャー分子。

【0466】

３３．第２のドメインが、ＮＫ細胞表面上のＣＤ１６に結合することによってＮＫ細胞を活性化する、項３１または３２に従う免疫細胞活性化分子。

【0467】

３４．第２のドメインが、ＣＤ１６特異的抗体またはその一部を含み；必要に応じて、第２のドメインが、
（ｉ）配列番号１４２として示す配列を有するＶＨ領域および配列番号１４３として示す配列を有するＶＬ領域、もしくは
（ｉｉ）配列番号１４６として示す配列を有するＶＨ領域および配列番号１４７として示す配列を有するＶＬ領域、もしくは
（ｉｉｉ）配列番号１５３として示す配列を有するＶＨ領域および配列番号１５４として示す配列を有するＶＬ領域；
または少なくとも８０％の同一性を有し、かつＣＤ１６に結合するそのバリアント
を含む、項３３に従う免疫細胞活性化分子。

【0468】

３５．第３のドメインが、ＩＬ－１５を架橋することができる、項３２に従う免疫細胞活性化分子。

【0469】

３６．項１から５のいずれか一項に従うｓｄＡｂ、項９から１８のいずれか一項に従うＣＡＲ、項１９から３０のいずれか一項に従う免疫細胞エンゲージャー分子、または項３１から３５のいずれかに従う免疫細胞エンゲージャー分子をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。

【0470】

３７．項３６に従うポリヌクレオチドを含むベクター。

【0471】

３８．項９から１８のいずれかに従うＣＡＲを含む細胞。

【0472】

３９．項３６に従うポリヌクレオチドまたは項３７に従うベクターを含む細胞。

【0473】

４０．細胞がＴ細胞またはＮＫ細胞である、項３８または３９に従う細胞。

【0474】

４１．項３８から４０のいずれか一項に従う細胞を作製するための方法であって、項３６に従うポリヌクレオチドまたは項３７に従うベクターを細胞に導入するステップを含む方法。

【0475】

４２．項１から５のいずれか一項に従うｓｄＡｂ、項７または８に従う抗体コンジュゲート、項１９から３０のいずれかに従う免疫細胞エンゲージャー分子、項３１から３５のいずれかに従う免疫細胞エンゲージャー分子、または項３６に従うポリヌクレオチド、または項３７に従うベクター、または項３８から４０のいずれか一項に従う細胞を、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と共に含む医薬組成物。

【0476】

４３．疾患の処置における医薬としての使用のための、項１から５のいずれか一項に従うｓｄＡｂ、項７または８に従う抗体コンジュゲート、項１９から３０のいずれかに従う免疫細胞エンゲージャー分子、項３１から３５のいずれかに従う免疫細胞エンゲージャー分子、または項３７に従うベクター、または項３８から４０のいずれか一項に従う細胞、または項４２に従う医薬組成物。

【0477】

４４．疾患を処置するための方法であって、項１から５のいずれか一項に従うｓｄＡｂ、項７または８に従う抗体コンジュゲート、項１９から３０のいずれかに従う免疫細胞エンゲージャー分子、項３１から３５のいずれかに従う免疫細胞エンゲージャー分子、または項３７に従うベクター、または項３８から４０のいずれか一項に従う細胞、または項４２に従う医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。

【0478】

４５．疾患を処置するための医薬の製造における、項１から５のいずれか一項に従うｓｄＡｂ、項７または８に従う抗体コンジュゲート、項１９から３０のいずれかに従う免疫細胞エンゲージャー分子、項３１から３５のいずれかに従う免疫細胞エンゲージャー分子、または項３７に従うベクター、または項３８から４０のいずれか一項に従う細胞、または項４２に従う医薬組成物の使用。

【0479】

４６．疾患がＢ細胞悪性腫瘍または形質細胞障害である、項４３に従う使用のためのｓｄＡｂ、または抗体コンジュゲート、または免疫細胞エンゲージャーまたは免疫細胞エンゲージャー分子またはベクターまたは細胞または医薬組成物、または項４４に従う方法、または項４５に従う使用。

【0480】

４７．Ｂ細胞悪性腫瘍または形質細胞障害が、白血病、有毛細胞白血病、慢性リンパ球性白血病、非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ＥＢＶ関連リンパ腫（バーキット）、リンパ形質細胞性リンパ腫、形質細胞腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、形質細胞白血病、多発性骨髄腫、マクログロブリン血症、アミロイドーシス、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、骨の孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、骨硬化性骨髄腫、重鎖疾患、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、非ＩｇＭ ＭＧＵＳ、ＩｇＭ ＭＧＵＳ、軽鎖ＭＧＵＳおよびくすぶり型多発性骨髄腫を含むリストから選択される、使用のためのｓｄＡｂまたは抗体コンジュゲートまたは免疫細胞エンゲージャー分子または免疫細胞エンゲージャー分子またはベクターまたは細胞または医薬組成物；方法；または項４６に従う使用。

【0481】

４８．がんが多発性骨髄腫である、使用のためのｓｄＡｂまたは抗体コンジュゲートまたは免疫細胞エンゲージャー分子または免疫細胞エンゲージャー分子またはベクターまたは細胞または医薬組成物；方法；または項４７に従う使用。

【0482】

本開示は、本明細書に開示される例示的な方法および材料によって限定されず、本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の方法および材料を、本開示の実施形態の実践または試験において使用することができる。数値範囲は、範囲を定義する数を含む。明記されない限り、それぞれ、任意の核酸配列は、左から右へと５’から３’への配向で記述され；アミノ酸配列は、左から右へとアミノからカルボキシへの配向で記述される。

【0483】

値の範囲が提供される場合、その範囲の上限値と下限値との間にある、各中間値（ｉｎｔｅｒｖｅｎｉｎｇ ｖａｌｕｅ）も、文脈が明らかに異なる指定をしない限り下限値の単位の１０分の１まで、明確に開示されると理解される。ある表示範囲内の任意の表示値または中間値とその表示範囲内の他の任意の表示値または中間値との間の、各々のより小さい範囲が、本開示の範囲内に包含される。それらのより小さい範囲の上限値および下限値は、独立にその範囲に含まれることも除外されることもあり、それらのより小さい範囲に片方の限界が含まれる、どちらの限界も含まれない、または両方の限界が含まれる各々の範囲も本開示の範囲内に包含され、表示範囲における任意の特に除外される限界値の対象となる。表示範囲が、限界値の一方または両方を含む場合、含まれるそれらの限界値の一方または両方を除いた範囲も本開示に含まれる。

【0484】

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに異なる指定をしない限り、複数の指示対象も含むと明記されなければならない。

【0485】

本明細書で使用される用語「～を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「～で構成される（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ ｏｆ）」は、「～を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」または「～を含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「～を含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」と同義であり、包括的またはオープンエンドであり、追加の、列挙されないメンバー、要素または方法ステップを除外しない。用語「～を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「～で構成される（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ ｏｆ）」は、用語「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」も含む。

【0486】

本明細書で考察される刊行物は、本出願の出願日前のその開示に関してのみ提供される。本明細書のいかなる記載も、そのような刊行物が本明細書に添付される特許請求の範囲に対する先行技術を構成するという承認として解釈されるべきではない。

【0487】

本発明は、実施例として今からさらに記載されるが、それらは、当業者が本発明を実行するのを支援する役目をするものであり、本発明の範囲を限定するものでは決してない。

【実施例】

【0488】

実施例における以下の実験で使用した構築物は、以下のＣＤＲ１－３およびＶＨＨ配列により同定することができる：

【表2-1】

【表2-2】

【0489】

（実施例１）－抗ＦｃＲＨ５結合ドメインの生成および生物物理学的特徴付け
表３は、本実施例で使用したＤＮＡ構築物および細胞系を列挙する。

【表3】

【0490】

マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃドメインを保持する抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｆｃを、ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞において一過性トランスフェクションにより発現させて、プロテインＡを用いて精製した。これらの結合剤の生物物理学的特性を特徴付けた。

【0491】

熱安定性を決定するための示差走査蛍光定量法
精製抗体を、二つ組で、ガラスキャピラリー（Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ）上にロードした。３３０および３５０ｎｍでの走査は、Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮＴ．４８装置（Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ）を使用して、２０℃から９５℃への１℃／分の温度勾配で行った。３５０ｎｍ／３３０ｎｍ比の一次導関数として計算した融解温度（Ｔｍ）。

【0492】

結果
アンフォールディングは、２０℃から９５℃への１℃／分の温度勾配でモニタリングした。３５０ｎｍ／３３０ｎｍ比の一次導関数として表されるデータ（表４）。

【表4】

【0493】

凝集を決定するための多角度動的光散乱法
試験タンパク質の凝集傾向および平均粒径は、ゼータサイザーＵｌｔｒａデバイスおよびＺＳ Ｘｐｌｏｒｅｒソフトウェア（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を使用して、ＭＡＤＬＳにより決定した。試料は、小容量石英キュベット（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ－ＺＥＮ２１１２）に１ｍｇ／ｍｌの濃度でロードした。各試料に関して三つ組測定を行った。

【0494】

結果
精製抗ＦｃＲＨ５抗体の粒子分散および凝集プロファイルは、ゼータサイザーＵｌｔｒａ装置において多角度動的光散乱法（ＭＡＤＬＳ）を使用して決定した。抗体は、ｐＨ７．４のＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍｌで試験した。試験した全ての抗体は、予測分子量８２ｋＤａに一致する平均粒径を有する優先的には単分散のプロファイルを示した（図９）。

【0495】

表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）
マウスＩｇＧ２ａフォーマットでの組換え抗ＦｃＲＨ５抗体を、メーカーの推奨（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にしたがって抗マウス捕捉キットで機能を持たせた、シリーズＳ ＣＭ５チップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上のフローセル２の上に捕捉した。Ｂｉａｃｏｒｅ ８ｋ装置を使用して、抗体は１６０ ＲＵの密度に捕捉した。全ての実験条件で、ＨＢＳ－Ｐ＋緩衝液をランニング緩衝液として使用した。既知濃度（２倍段階希釈による５００ｎＭ）の組換え精製ＦｃＲＨ５ Ｉｇ－８ドメインを「分析物」として使用し、２５℃の一定温度の３０μｌ／分の流速で１５０秒の接触時間および５００秒の解離でそれぞれのフローセルの上に注入した。各実験で、フローセル１は未改変であり、参照減算のために使用した。ドリフトを計算に入れるために、緩衝液だけの「０濃度」センサーグラムを二重参照減算として使用した。データは、１：１のラングミュア結合モデルにあてはめた。捕捉系を使用したので、各場合にデータフィッティングのために局所最大解析応答（Ｒｍａｘ）パラメータを使用した。

【0496】

結果
Ｂｉａｃｏｒｅ ８ｋ装置を用いた表面プラスモン共鳴を介して、標的抗原ＦｃＲＨ５ Ｉｇ８ドメインに対する抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨの結合親和性および動力学プロファイルを決定した。

【表5】

＊ｋｄは装置限界外

【0497】

（実施例２）－Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞系におけるＮＵＲ７７上方制御を介した抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－ＣＡＲ活性化アッセイ
方法
構築物および細胞系
表６は、本実施例で使用したＶＨＨ ＤＮＡ ＩＤ、対応するＣＡＲ構築物およびウイルス上清を列挙する。

【表6】

【0498】

ＣＡＲ構築
２Ａ切断ペプチドによって分離されたＲＱＲ８形質導入マーカーのほかに、ＣＤ８スペーサーおよび膜貫通領域を４１ＢＢおよびＣＤ３ｚ鎖細胞内シグナル伝達ドメインと共に包含するガンマレトロウイルスベクターにＶＨＨをクローニングした（図１）。

【0499】

プレート結合抗原ＣＡＲ刺激アッセイ
滅菌ＥＬＩＳＡプレートを、１０μｇ／ｍｌの最高濃度で１：２または１：５の段階希釈を６回行った、ＰＢＳ中の１００μｌの標的抗原により４℃で一晩コーティングし；バックグラウンド対照のために、ウェルはＰＢＳのみでもコーティングした。実験の当日、コーティングしたＥＬＩＳＡプレートを使用前にＰＢＳで３×洗浄し、形質導入細胞を数え、８×１０^５細胞／ｍｌの濃度で調製した。細胞を、８×１０^４細胞／ウェル（１００μｌの細胞懸濁液）でプレーティングし、２４ｈおよび７２ｈにわたりインキュベーターに戻した。

【0500】

フローサイトメトリー
ＥＬＩＳＡプレートからの細胞を収集し、Ｕ底プレートに移した。細胞を１０００ｇで２分間遠心分離し、上清を捨てた。細胞を、室温暗所で２０分間にわたり抗ＣＤ３４抗体（１：１００希釈）で染色して、ＰＢＳで２回洗浄し、残りの未結合抗体を除去した。細胞を、１００μｌのＳｙｔｏｘ死細胞染色剤（１：１０００希釈）と共に再懸濁し、ＦＡＣＳ機を用いて分析し、形質導入細胞上のｍＣｌｏｖｅｒ発現を評価した。ゲーティング戦略は、以下のとおり：細胞を、シングレット（ｓｉｎｇｌｅｔ）、生細胞でゲートし、ＲＱＲ８およびｍＣｌｏｖｅｒの発現に基づいて細胞活性化を評価した。

【0501】

結果
実験１＿予備的Ｎｕｒ－７７／ｍＣｌｏｖｅｒ活性化アッセイ（１０、２および０．４μｇ／ｍｌの抗原）
プレート結合抗原による、ＮＵＲ７７経路の活性化
プレート結合抗原曝露（前記のアッセイ）は、調節されたやり方でＣＡＲ活性化を評価するために使用できる。ここでは、刺激されたＣＡＲ Ｔ細胞の代用として蛍光ｍＣｌｏｖｅｒ連結ＮＵＲ７７を使用して、ＣＡＲ活性化を評価するために、抗原の３つの濃度（５倍希釈）を使用した。アッセイは、活性化から２４ｈおよび７２ｈ後に行った。

【0502】

２４ｈの抗原曝露（１０、２、０．４μｇ／ｍｌのコーティング）
上清８５０１８、８５０２１および８５０２３で形質導入された細胞以外の全ての形質導入Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞は、１０μｇ／ｍｌのプレート結合ＦｃＲＨ５に応じて、２４ｈの曝露後にｍＣｌｏｖｅｒ－ＮＵＲ７７の上方制御を受けた（図２）。ｍＣｌｏｖｅｒ検出の、１０μｇ／ｍｌから０．４μｇ／ｍｌへの濃度依存的な低減が存在し、最大抗原刺激は４５．４５％であった（ａＣＤ３／ＣＤ２８陽性対照は７８．９８）（図４）。

【0503】

７２ｈの抗原曝露（１０、２、０．４μｇ／ｍｌのコーティング）
７２ｈの抗原曝露後（図３）、ＮＵＲ７７－ｍＣｌｏｖｅｒ発現は、その、初期Ｔ細胞活性化マーカーとしての役割ゆえ、わずかに低下すると予想される。陽性対照ウェル（ａＣＤ３／ＣＤ２８）は、約７８％の活性化から５７％未満へと低減し、ＮＴ細胞はｍＣｌｏｖｅｒの上方制御を示さない。同様に、ＦｃＲＨ５活性化ＣＡＲ Ｔ細胞も、ここで試験した全ての抗原濃度においてｍＣｌｏｖｅｒ発現を低減させた。しかし、活性化されたＴ細胞は、それぞれ、１０および２μｇ／ｍｌコーティングされたウェルの両方にわたり、なおも存在する（図４）。

【表7】

【0504】

実験２＿Ｎｕｒ７７－ｍＣｌｏｖｅｒ活性化アッセイ、プレート抗原の２倍希釈系列
予備的なプレート結合抗原ベースＣＡＲ会合アッセイは、抗ＦＣＲＨ５ ＶＨＨ－ＣＡＲが、Ｎｕｒ７７経路を活性化できることを示した。ここでは、活性化アッセイを、ＦｃＲＨ５濃度の（５倍よりはむしろ）低減させた２倍希釈系列により繰り返した。

【0505】

ＦｃＲＨ５の２倍希釈により繰り返したプレート結合抗原による、ＮＵＲ７７経路の活性化。

【0506】

試験した全てのＣＡＲ構築物にわたり、濃度依存的な、Ｎｕｒ７７の活性化が存在し、ＣＡＲ会合を示した（図５～６）。０．６２５μｇ／ｍｌ（０．０６２５μｇ／ウェル）未満では活性化がなく、０．４μｇ／ｍｌにおける結合の低減を示唆する先行研究と相関した（誤り！参照元は見出されず。７）。１０μｇ／ｍｌでは、活性化はＣＡＲにわたって類似したが、抗原の低濃度では、結合の低減が存在した。８５０１７、８５０２０および８５０２２で形質導入されたＴ細胞は、１．２５および０．６２５μｇ／ｍｌの両方において最も活性化された集団を示した。細胞の活性化に対するＦｃＲＨ５の濃度（誤り！参照元は見出されず。８）は、構築物の差別化を示し、計算したＥＣ５０を表８に報告する。

【0507】

【表8】

【0508】

（実施例３）－可溶性抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｈｉｓ結合ドメインの生成および生物物理学的特徴付け
方法
構築物および細胞系
表９は、本実施例で使用したＤＮＡ構築物および細胞系を列挙する。

【表9-1】

【表9-2】

【0509】

抗体を、一過性トランスフェクションにより、ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞において発現させた。二重６ｘＨｉｓタグを保持する抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｈｉｓを、表９に列挙されるプラスミドを使用して一過性トランスフェクションによりｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞において発現させ、Ｎｉビーズ懸濁液を使用して上清から精製した。

【0510】

熱安定性を決定するための示差走査蛍光定量法
精製抗体を、二つ組で、ガラスキャピラリー（Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ）上にロードした。３３０および３５０ｎｍでの走査は、Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮＴ．４８装置（Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ）を使用して、２０℃から９５℃への１℃／分の温度勾配で行った。３５０ｎｍ／３３０ｎｍ比の一次導関数として計算した融解温度（Ｔｍ）。

【0511】

結果
クローン８５１３４は、ランから除外した。クローン８５１３８および８５１３９は、温度の範囲ではアンフォールディング事象を示さなかった。結果を表１０に示す。

【表10】

【0512】

ＥＬＩＳＡ
組換え精製抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｈｉｓ抗体は、１μｇ／ｍｌの５０μｌ／ウェルで、３倍段階希釈により、９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ）上に４℃で一晩コーティングした。プレートは、２００μｌ／ウェルのＰＢＳ ２％ＢＳＡによりＲＴで１ｈ、プレートシェーカー上でブロッキングした。プレートを、２５０μｌ／ウェルのＰＢＳ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０で３回洗浄し、５０μｌ／ウェルのＰＢＳ ０．５％ ＢＳＡ中の、マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃに融合させた組換えＦｃＲＨ５ Ｉｇ８ドメインを加えて、ＲＴで１ｈ、プレートシェーカー上でインキュベートした。プレートを、２５０μｌ／ウェルのＰＢＳ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０で３回洗浄し、５０μｌ／ウェルの、ＰＢＳ ０．５％ ＢＳＡ中で１：５０００希釈したＨＲＰコンジュゲート抗マウス二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ－１１５－０３５－１６６）を加えて、ＲＴで１ｈ、プレートシェーカー上でインキュベートした。プレートをＰＢＳ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０中で４回洗浄し、４５μｌ／ウェルの１－Ｓｔｅｐ Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を加えて、ＲＴで３分間、結合を顕色させた。反応を４５μｌ／ウェルの１Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４でブロックし、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ Ｌｕｘプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてＯＤ４５０ｎｍで吸光度を読み取った。

【0513】

フローサイトメトリー
ＦｃＲＨ５の結合は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、およびヒトＣＤ１９膜貫通ドメインおよび細胞質尾部と融合させた、ＦｃＲＨ５の細胞外Ｉｇ８ドメイン（ＡＵ４５２８３）を発現するように一過性トランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞に対するフローサイトメトリーを介して決定した。構築物は、ｅＧＦＰタンパク質をトランスフェクションマーカーとして含有する。５×１０^４細胞／ウェルをＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ ２％ ＦＣＳ）中で２回洗浄し、２μｇ／ｍｌの一次抗体５０μｌ（表８）により、氷上で３０の間染色した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄し、未結合抗体を除去し、５０μｌ／ウェルの、１：１００希釈した、Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ６４７とコンジュゲートさせた抗Ｈｉｓ二次抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ｓｃ－５３０７３ＡＦ６４７）により、氷上で３０分間染色した。次いで、細胞をＦＡＣＳ緩衝液中で洗浄し、１００μｌ／ウェルの生存能力決定用Ｓｙｔｏｘ ｂｌｕｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｓ３４８５７）により、メーカーの推奨にしたがって染色した。細胞は、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ １０装置を用いて取得した。細胞をまずシングレットでゲートしてから、ＳＳＣ／ＦＳＣの外観に基づいて集団を定義し、Ｓｙｔｏｘ ｂｌｕｅ染色に基づいて生細胞を同定した。

【0514】

結果
ヒトＦｃＲＨ５ Ｉｇ８ドメイン（マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃタグ付き）に対する可溶性抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ抗体の結合能力は、ＥＬＩＳＡアッセイを介して決定した（図７）。ＶＨＨドメインは、１μｇ／ｍｌの濃度で３倍段階希釈によりプレート上にコーティングした。ＦｃＲＨ５ Ｉｇ８－Ｆｃへの結合を、抗マウスＨＲＰ二次抗体で検出した。

【0515】

クローン８５１３９（非Ｉｇ８結合剤）を除き、全てのクローンは、ＦｃＲＨ５ Ｉｇ８ドメインへの結合を示した。クローン８５１４１および８５１２７は、最も強力な結合相互作用を示した。

【0516】

ＦｃＲＨ５ Ｉｇ８発現細胞へのモノマー可溶性ＶＨＨ－Ｈｉｓ抗体ドメインの結合は、フローサイトメトリーを介して調査した（図８）。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に一過性トランスフェクトして、ＦｃＲＨ５ Ｉｇ８ドメインおよびｅＧＦＰマーカーを発現させた。非トランスフェクトＨＥＫ２９３Ｔ（ＮＴ）を対照として含めた。結合したＶＨＨ－Ｈｉｓを、Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ６４７とコンジュゲートさせた抗Ｈｉｓ二次抗体により検出した。陽性染色は、一次抗体省略条件に対する比較として測定した。ＨＥＫ２９３Ｔ ＦｃＲＨ５ Ｉｇ８集団では、低いトランスフェクション効率が検出された。低いタンパク質発現にもかかわらず、いくつかのクローンは、ＦｃＲＨ５への特異的結合を示した。

【0517】

（実施例４）－可溶性抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｆｃ結合ドメインおよび抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｈｉｓ結合ドメインの生成および生物物理学的特徴付け
実施例４で使用する構築物のＶＨＨ配列は、以下のＣＤＲ１～３およびＶＨＨ配列により特定することができる：

【表11-1】

【表11-2】

【表11-3】

【表11-4】

【表11-5】

【表11-6】

【0518】

可溶性抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｆｃ結合ドメインの調製
マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃドメインを保持する抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｆｃを、ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞において一過性トランスフェクションにより発現させて、プロテインＡを用いて精製する。この結合剤の生物物理学的特性を特徴付ける。

【0519】

熱安定性を決定するための示差走査蛍光定量法
精製抗体を、二つ組で、ガラスキャピラリー（Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ）上にロードする。３３０および３５０ｎｍでの走査は、Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮＴ．４８装置（Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ）を使用して、２０℃から９５℃への１℃／分の温度勾配で行う。３５０ｎｍ／３３０ｎｍ比の一次導関数として計算した融解温度（Ｔｍ）。

【0520】

凝集を決定するための多角度動的光散乱法
試験タンパク質の凝集傾向および平均粒径は、ゼータサイザーＵｌｔｒａデバイスおよびＺＳ Ｘｐｌｏｒｅｒソフトウェア（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を使用して、ＭＡＤＬＳにより決定する。試料は、小容量石英キュベット（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ－ＺＥＮ２１１２）に１ｍｇ／ｍｌの濃度でロードする。各試料に関して三つ組測定を行う。

【0521】

表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）
マウスＩｇＧ２ａフォーマットでの組換え抗ＦｃＲＨ５抗体を、メーカーの推奨（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にしたがって抗マウス捕捉キットで機能を持たせた、シリーズＳ ＣＭ５チップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上のフローセル２の上に捕捉する。Ｂｉａｃｏｒｅ ８ｋ装置を使用して、抗体は１６０ ＲＵの密度に捕捉する。全ての実験条件で、ＨＢＳ－Ｐ＋緩衝液をランニング緩衝液として使用する。既知濃度（２倍段階希釈による５００ｎＭ）の組換え精製ＦｃＲＨ５ Ｉｇ－８ドメインを「分析物」として使用し、２５℃の一定温度の３０μｌ／分の流速で１５０秒の接触時間および５００秒の解離でそれぞれのフローセルの上に注入する。各実験で、フローセル１は未改変であり、参照減算のために使用する。ドリフトを計算に入れるために、緩衝液だけの「０濃度」センサーグラムを二重参照減算として使用する。データは、１：１のラングミュア結合モデルにあてはめる。捕捉系を使用するので、各場合にデータフィッティングのために局所最大解析応答（Ｒｍａｘ）パラメータを使用する。

【0522】

可溶性抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｈｉｓ結合ドメインの調製
抗体を、一過性トランスフェクションにより、ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞において発現させる。二重６ｘＨｉｓタグを保持する抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｈｉｓを、一過性トランスフェクションによりｅｘｐｉ－ＣＨＯにおいて発現させ、Ｎｉビーズ懸濁液を使用して上清から精製する。

【0523】

ＥＬＩＳＡ
組換え精製抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－Ｈｉｓ抗体は、１μｇ／ｍｌの５０μｌ／ウェルで、３倍段階希釈により、９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ）上に４℃で一晩コーティングする。プレートは、２００μｌ／ウェルのＰＢＳ ２％ＢＳＡによりＲＴで１ｈ、プレートシェーカー上でブロッキングする。プレートを、２５０μｌ／ウェルのＰＢＳ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０で３回洗浄し、５０μｌ／ウェルのＰＢＳ ０．５％ ＢＳＡ中の、マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃに融合させた組換えＦｃＲＨ５ Ｉｇ８ドメインを加えて、ＲＴで１ｈ、プレートシェーカー上でインキュベートする。プレートを、２５０μｌ／ウェルのＰＢＳ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０で３回洗浄し、５０μｌ／ウェルの、ＰＢＳ ０．５％ ＢＳＡ中で１：５０００希釈したＨＲＰコンジュゲート抗マウス二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ－１１５－０３５－１６６）を加えて、ＲＴで１ｈ、プレートシェーカー上でインキュベートする。プレートをＰＢＳ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０中で４回洗浄し、４５μｌ／ウェルの１－Ｓｔｅｐ Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を加えて、ＲＴで３分間、結合を顕色させる。反応を４５μｌ／ウェルの１Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４でブロックし、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ Ｌｕｘプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてＯＤ４５０ｎｍで吸光度を読み取る。

【0524】

フローサイトメトリー
ＦｃＲＨ５の結合は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、およびヒトＣＤ１９膜貫通ドメインおよび細胞質尾部と融合させた、ＦｃＲＨ５の細胞外Ｉｇ８ドメイン（ＡＵ４５２８３）を発現するように一過性トランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞に対するフローサイトメトリーを介して決定する。構築物は、ｅＧＦＰタンパク質をトランスフェクションマーカーとして含有する。５×１０^４細胞／ウェルをＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ ２％ ＦＣＳ）中で２回洗浄し、２μｇ／ｍｌの一次抗体５０μｌ（表８）により、氷上で３０の間染色する。細胞をＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄し、未結合抗体を除去し、５０μｌ／ウェルの、１：１００希釈した、Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ６４７とコンジュゲートさせた抗Ｈｉｓ二次抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ｓｃ－５３０７３ＡＦ６４７）により、氷上で３０分間染色する。次いで、細胞をＦＡＣＳ緩衝液中で洗浄し、１００μｌ／ウェルの生存能力決定用Ｓｙｔｏｘ ｂｌｕｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｓ３４８５７）により、メーカーの推奨にしたがって染色する。細胞は、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ １０装置を用いて取得する。細胞をまずシングレットでゲートしてから、ＳＳＣ／ＦＳＣの外観に基づいて集団を定義し、Ｓｙｔｏｘ ｂｌｕｅ染色に基づいて生細胞を同定する。

【0525】

（実施例５）－Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞系におけるＮＵＲ７７上方制御を介した抗ＦｃＲＨ５ ＶＨＨ－ＣＡＲ活性化アッセイ
２Ａ切断ペプチドによって分離されたＲＱＲ８形質導入マーカーのほかに、ＣＤ８スペーサーおよび膜貫通領域を４１ＢＢおよびＣＤ３ｚ鎖細胞内シグナル伝達ドメインと共に包含するガンマレトロウイルスベクターに、表１１に示すＶＨＨをクローニングする（図１）。

【0526】

プレート結合抗原ＣＡＲ刺激アッセイおよびフローサイトメトリーは、実施例２に記載の方法にしたがって行う。

【0527】

本出願は、２０２１年６月１８日に出願した英国出願第２１０８７７３．９号および２０２１年１１月１６日に出願した英国出願第２１１６５０２．２号の利益を主張するものである。これらの出願は、参照により本明細書にその全体が組み込まれる。

【0528】

上記の明細書に記載されている全ての刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明の範囲および主旨から逸脱することなく、当該記載の方法および本発明のシステムの種々の改変および変形が当業者には明らかである。本発明は、特定の好ましい実施形態に関連して記載されているが、特許請求された本発明はそのような特定の実施形態に過度に限定されるべきではないことが理解されるべきである。実際に、分子生物学または関連する分野の当業者には明らかである本発明を実行するための記載の方式の種々の改変は以下の特許請求の範囲の範囲内にあるものとする。

【図1】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】

【図3-3】

【図4】

【図5-1】

【図5-2】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9-1】

【図9-2】

【配列表】

2024523316000001.app

【国際調査報告】