特表 2024-523411 ペプチド薬物複合体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-06-28

(54)【発明の名称】ペプチド薬物複合体

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/64 20170101AFI20240621BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240621BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240621BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240621BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240621BHJP

   A61K 31/4184 20060101ALI20240621BHJP

【ＦＩ】

A61K47/64

A61P35/00

A61P35/02

A61P43/00 121

A61K45/00

A61K31/4184

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023577977

(86)(22)【出願日】2022-06-20

(85)【翻訳文提出日】2024-02-13

(86)【国際出願番号】 EP2022066756

(87)【国際公開番号】W WO2022263679

(87)【国際公開日】2022-12-22

(31)【優先権主張番号】2108818.2

(32)【優先日】2021-06-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】513267523

【氏名又は名称】オンコペプティデス エービー

【氏名又は名称原語表記】Ｏｎｃｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ＡＢ

(74)【代理人】

【識別番号】110003708

【氏名又は名称】弁理士法人鈴榮特許綜合事務所

(72)【発明者】

【氏名】ベルメホ・ゴメス、アントニオ

(72)【発明者】

【氏名】クマー・チンタキンディ、プラビーン

(72)【発明者】

【氏名】デンメア、チャールズ

(72)【発明者】

【氏名】ファルネガルディ、カタリナ

(72)【発明者】

【氏名】ファルネガルディ、マティアス

(72)【発明者】

【氏名】レーマン、フレデリク

(72)【発明者】

【氏名】サンタンジェロ、エレン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC27

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF68

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZB271

4C084ZC751

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086BC39

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086NA13

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC75

(57)【要約】

本発明は、ペプチダーゼ増強細胞毒性物質である式（Ｉ）で表される化合物をに関する。本発明は、また、当該化合物を含む医薬組成物に関し、特に多発性骨髄腫、骨肉腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、白血病及びリンパ腫といったがんの予防又は治療に使用する薬剤としての当該化合物又は医薬組成物の使用に関する。
【化１】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）

【化1】

（式中、
ＸはＣ_１－６アルキレンであり；
Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４は、それぞれＣＨであるか、Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４の１つはＮであり、他のものはＣＨであり；
Ｒ^１は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、及びハロゲンからなる群から選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいフェニル、及びハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ^３は、式（ＩＩ）

【化2】

又は式（ＩＩＩ）

【化3】

で表される基である、
ここで、
Ｒ^４は、Ｎ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）及び式（ＩＶ）

【化4】

で表される基からなる群から選択され；
Ｒ^４が式（ＩＶ）で表される基である場合、Ｒ^５はＲ^ｂであり、Ｒ^４がＮ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）である場合、Ｒ^５はＲ^ｂ及び式（Ｖ）

【化5】

で表される基からなる群から選択され；
各Ｒ^ａは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、－ＣＨ_２－フェニル又は－ＣＨ_２－ヘテロシクリルからなる群から独立して選択され、前記ヘテロシクリルは、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１、２、３及び４のヘテロ原子を有する３～１２員ヘテロシクリルであり、前記Ｃ_１－６アルキルは、－ＯＨ、－ＯＣ_１－６アルキル、－ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＨ、－ＳＣＨ_３及びハロゲンからなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく、前記フェニル又は前記ヘテロシクリルは、ハロゲン、－ＮＨ_２、－ＯＨ、－ＯＣ_１－６アルキル及び－ＮＯ_２からなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ^ｂは、－ＯＨ、－Ｎ（Ｒ^ｅ）（Ｒ^ｆ）、及び、ハロゲン、－ＯＨ、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ^ｅ）（Ｒ^ｆ）、－Ｃ_６－１０アリール又は、１以上のＯ、Ｎ若しくはＳ原子を有し、かつ、１、２若しくは３のハロゲンで置換されていてもよい３～１２員複素環から選択される１以上の置換基で置換されていてもよい－ＯＣ_１－６アルキルからなる群から選択され、前記アルキルは、１、２又は３のＯ、Ｎ又はＳ原子によって分断されていてもよく；
Ｒ^ｃ及びＲ^ｄは、それぞれ、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ_１－６アルキル及び－ＣＨ_２－フェニルからなる群から独立して選択され、前記アルキル又は前記フェニルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ^ｅ及びＲ^ｆは、それぞれ、Ｈ及び－Ｃ_１－６アルキルからなる群から独立して選択され、前記アルキルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく、又は、Ｒ^ｅ及びＲ^ｆは、結合している窒素原子と共に、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい４、５又は６員複素環を形成する）
で表される化合物、又は、その薬学的に許容される塩、エステル、アミド若しくはカルバメート、若しくは、そのようなエステル、アミド若しくはカルバメートの塩。

【請求項2】

式（Ｉａ）

【化6】

で表される構造、例えば、式（Ｉｂ）

【化7】

で表される構造を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｒ^１はＨである、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ^２は、１、２又は３のハロゲンで置換されていてもよいフェニル、及び、１、２又は３のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－６アルキルからなる群から選択され、例えば、１、２又は３のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、例えばメチルである、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項5】

Ｘは－ＣＨ_２－又は－ＣＨ_２－ＣＨ_２－である、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項6】

Ｒ^３は、式（ＩＩａ）

【化8】

又は式（ＩＩＩａ）

【化9】

で表される基である、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項7】

Ｒ^４は、Ｎ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）及び式（ＩＶａ）

【化10】

で表される基からなる群から選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項8】

Ｒ^４が式（ＩＶ）又は式（ＩＶａ）で表される基である場合、Ｒ^５はＲ^ｂであり、Ｒ^４がＮ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）である場合、Ｒ^５はＲ^ｂ及び式（Ｖａ）

【化11】

で表される基からなる群から選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項9】

Ｒ^４はＮＨ_２である、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項10】

各Ｒ^ａは、Ｃ_１－６アルキル及び－ＣＨ_２－フェニルからなる群から独立して選択され、前記Ｃ_１－６アルキルは、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＨ、－ＳＣＨ_３又はハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）で置換されていてもよく、前記フェニルは、ハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）、－ＮＨ_２、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル及び－ＮＯ_２からなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項11】

Ｒ^ａは、－Ｃ_１－６アルキル及び－ＣＨ_２－フェニルからなる群から選択され、前記フェニルは、１、２又は３のハロゲンで置換されていてもよい、請求項１０に記載の化合物。

【請求項12】

Ｒ^４が式（ＩＶ）又は式（ＩＶａ）で表される基である場合、Ｒ^５は－ＯＣ_１－６アルキルであり、Ｒ^４がＮＨ_２である場合、Ｒ^５は、－ＯＣ_１－６アルキル又は式（Ｖ）若しくは（Ｖａ）で表される基である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項13】

Ｒ^ｂが－ＯＣ_１－６アルキルである場合、Ｒ^ｂはメトキシ、エトキシ及びイソプロポキシからなる群から選択される、請求項１２に記載の化合物。

【請求項14】

前記化合物は、
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物１）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル（実施例化合物２）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステル（実施例化合物３）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物４）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル（実施例化合物５）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステル（実施例化合物６）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物７）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物８）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物９）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル（実施例化合物１０）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル（実施例化合物１１）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル（実施例化合物１２）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物１３）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸メチルエステル（実施例化合物１４）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸イソプロピルエステル（実施例化合物１５）；
(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物１６）；
(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物２１）；
(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル（実施例化合物２２）；
(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物２３）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸2-モルホリノエチルエステル（実施例化合物２４）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸2-イソプロポキシエチルエステル（実施例化合物２５）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸イソプロピルエステル（実施例化合物２６）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸メチルエステル（実施例化合物２７）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸3-(ジメチルアミノ)プロピルエステル（実施例化合物２８）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸(2-メトキシ-1-メチル-エチル)エステル（実施例化合物２９）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-N,N,4-トリメチル-ペンタンアミド（実施例化合物３０）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-N,4-ジメチル-ペンタンアミド（実施例化合物３１）；
(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(メチルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物３２）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アセトアミド-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル（実施例化合物３４）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アセトアミド-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物３５）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アセトアミド-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル（実施例化合物３６）；
(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物３８）；
(2R)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物４５）；
(2S)-2-[[(2R)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物４６）；
(2R)-2-[[(2R)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物４７）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[6-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-3-メチル-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物４８）；及び
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物５０）
又は、その薬学的に許容される塩、アミド若しくはカルバメートからなる群から選択され、そのようなアミド若しくはカルバメートの塩を含む、請求項１に記載の化合物。

【請求項15】

前記化合物は、
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸（実施例化合物１９）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（実施例化合物２０）；
(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(メチルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（実施例化合物３３）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸（実施例化合物３７）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸（実施例化合物３９）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（実施例化合物４０）；
2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸（実施例化合物４２）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸（実施例化合物４３）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（実施例化合物４４）及び
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（実施例化合物５１）
又はその塩からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。

【請求項16】

請求項１～１５のいずれか一項に記載の化合物及び薬学的に許容される担体に含む医薬組成物。

【請求項17】

別の治療薬、例えば、ステロイド、チェックポイント阻害剤、核輸送阻害剤、抗アポトーシス阻害剤、養子細胞療法、二重特異性Ｔ細胞誘導剤（ＢｉＴＥ）、免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）、プロテアソーム阻害剤（ＰＩ）、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤、ペプチド薬物複合体（ＰＤＣ）、アルキル化剤又はＤＮＡインターカレーターを更に含む、請求項１６に記載の医薬組成物。

【請求項18】

医薬として使用するための、請求項１～１５のいずれか一項に記載の化合物、又は、請求項１６若しくは１７に記載の医薬組成物。

【請求項19】

がんの予防又は治療で使用するための、
請求項１～１５のいずれか一項に記載の化合物、又は、請求項１６若しくは１７に記載の医薬組成物。

【請求項20】

前記がんが、多発性骨髄腫、骨肉腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、白血病及びリンパ腫から選択され、例えば、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病又はリンパ腫である、請求項１９における使用のための化合物又は組成物。

【請求項21】

前記化合物又は組成物が、１以上の別の治療薬、例えばステロイド、チェックポイント阻害剤、核輸送阻害剤、抗アポトーシス阻害剤、養子細胞療法、二重特異性Ｔ細胞誘導剤（ＢｉＴＥ）、免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）、プロテアソーム阻害剤（ＰＩ）、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤、ペプチド薬物複合体（ＰＤＣ）、アルキル化剤又はＤＮＡインターカレーターとともに（例えば、同時に、連続的に又は別々に）投与される
、請求項１９又は２０における使用のための化合物又は組成物。

【請求項22】

請求項１～１５のいずれか一項に記載の化合物、又は、請求項１６若しくは１７に記載の医薬組成物の薬学的有効量を投与することを含む、患者を治療する方法。

【請求項23】

請求項１～１５のいずれか一項に記載の化合物、又は、請求項１６若しくは１７に記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む、がんを予防又は治療する方法であって、例えば、前記がんは、多発性骨髄腫、骨肉腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、白血病及びリンパ腫のいずれか、例えば、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病又はリンパ腫である、方法。

【請求項24】

がんを予防又は治療する医薬品の製造における請求項１～１５のいずれか一項に記載の化合物の使用であって、例えば、前記がんは、多発性骨髄腫、骨肉腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、白血病及びリンパ腫のいずれか、例えば、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病又はリンパ腫である、使用。

【請求項25】

式（Ｉ）

【化12】

（式中、
ＸはＣ_１－６アルキレンであり；
Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４は、それぞれＣＨであるか、Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４の１つはＮであり、他のものはＣＨであり；
Ｒ^１は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、及びハロゲンからなる群から選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいフェニル、及びハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ^３は、式（ＶＩａ）

【化13】

（式中、Ｒ^ｃ及びＲ^ｄは、それぞれ、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ_１－６アルキル及び－ＣＨ_２－フェニルからなる群から独立して選択され、前記アルキル又は前記フェニルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ^ｇは、Ｈ及び－Ｃ_１－６アルキルからなる群から選択され、前記アルキルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい）
で表される基である）
で表される化合物又はその塩若しくは溶媒和物。

【請求項26】

構造が請求項２に記載の式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）で表される構造、又は、Ｒ^１、Ｒ^２若しくはＸが、請求項３～５のいずれか一項に記載のもの；Ｒ^ｃ及びＲ^ｄがそれぞれＨ；Ｒ^ｇがＨである、請求項２５に記載の化合物。

【請求項27】

前記化合物は、
(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸（実施例化合物１７）；
(S)-2-アミノ-4-(5-(ビス(2-クロロエチル)アミノ)-1-メチル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-イル)ブタン酸（実施例化合物１８）；
(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物３８）；
(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸（実施例化合物４１）；及び
(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸（実施例化合物４９）；又はその塩
からなる群から選択される、請求項２５に記載の化合物。

【請求項28】

多発性骨髄腫、骨肉腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、白血病及びリンパ腫からなる群から選択されるがん、例えば、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病又はリンパ腫の治療に使用するための、式（Ｉ）

【化14】

（式中、
ＸはＣ_１－６アルキレンであり；
Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４は、それぞれＣＨであるか、Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４の１つはＮであり、他のものはＣＨであり；
Ｒ^１は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、及びハロゲンからなる群から選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいフェニル、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ^３は、式（ＶＩ）

【化15】

（式中、Ｒ^ｃ及びＲ^ｄは、それぞれ、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ_１－６アルキル及び－ＣＨ_２－フェニルからなる群から独立して選択され、前記アルキル又は前記フェニルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ^ｇは、Ｈ及び－Ｃ_１－６アルキルからなる群から選択され、前記アルキルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい）で表される基である）
で表される化合物又はその塩若しくは溶媒和物。

【請求項29】

請求項２８に記載の化合物の有効量を投与することを含む、多発性骨髄腫、骨肉腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、白血病及びリンパ腫からなる群から選択されるがん、例えば、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病又はリンパ腫の治療方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

この発明は、ペプチド薬物複合体（ＰＤＣ）及びがんのような疾患の治療における当該化合物の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ペプチダーゼ、エステラーゼ及びプロテアーゼのようなさまざまな加水分解酵素の発現の増加が、ヒトのいくつかの悪性腫瘍、特に、急速に成長し、攻撃的であることを特徴とする腫瘍で説明されている（Pharmacol Ther. 1999; 83; 67-123）。哺乳動物細胞で広く発現するＺｎ^２＋依存膜結合エクトペプチダーゼであるアミノペプチダーゼＮ（ＡＰＮ、ＣＤ１３としても公知）は、腫瘍細胞の浸潤、分化、増殖、アポトーシス、運動性及び血管形成のようなプロセスを含むがんの発症で重要な役割を果たす（Cancer Lett. 2006; 243; 135-43；Curr Med Chem. 2007; 14; 639-47；Curr Med Chem. 2008; 15; 2850-65）。ＡＰＮの複数の機能は、「ムーンライティングエクトエンザイム」と呼ばれることにつながった（Trends Mol Med. 2008; 14; 361-71）。総合すると、これらの能力は、ＡＰＮが、がんの治療において治療標的となる可能性があることを示唆する。さまざまなアプローチが、酵素阻害剤やＡＰＮを標的とする担体構築物を含む、ＡＰＮに向けられた新薬の開発に使用されている（Cancer Sci. 2011; 102; 501-8）。

【0003】

悪性腫瘍に存在するペプチダーゼ、エステラーゼ及びプロテアーゼなどの加水分解酵素を利用するがんの治療に使用される可能性がある薬物の１種は、ペプチド薬物複合体（ＰＤＣ）である。我々は、がんの治療に有用なペプチド薬物複合体の新しいグループを見いだした。

【発明の概要】

【0004】

この発明は、請求項１に記載の式（Ｉ）で表される化合物、又は、その薬学的に許容される塩、エステル、アミド若しくはカルバメートに関し、そのようなエステル、アミド若しくはカルバメートの塩を含む。

【0005】

発明者らは、式（Ｉ）で表される化合物が強力な抗がん剤であることを見いだした。特に、発明者らは、in vitro細胞毒性アッセイにおいて、式（Ｉ）で表される化合物がさまざまな血液がんの細胞株に対して優れたin vitro細胞毒性を示すことを実証した。発明者らは、式（Ｉ）で表される化合物が、リンパ腫のニワトリ胚へのin ovo異種移植モデルにおいて腫瘍の増殖を減少させるのに有効であることも見いだした。さらに、発明者らは、式（Ｉ）で表される化合物が、がん細胞内でたやすく加水分解され、優先的に細胞内に隔離されて保持され、強力なアルキル化活性を示す代謝物を形成することを見いだした。

【0006】

本発明は、本発明の化合物を薬学的に許容される担体とともに含む医薬組成物を更に規定する。医薬組成物は、場合によっては、１以上の別の治療薬、例えば、ステロイド、チェックポイント阻害剤、核輸送阻害剤、抗アポトーシス阻害剤、細胞療法（養子細胞療法を含む）、二重特異性Ｔ細胞誘導剤（ＢｉＴＥ）、免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）、プロテアソーム阻害剤（ＰＩ）、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤、ペプチド薬物複合体（ＰＤＣ）、アルキル化剤又はＤＮＡインターカレーターを含んでいてもよい。

【0007】

この発明は、医薬として使用するための、本発明の化合物又は医薬組成物も提供する。加えて、がん、例えば、多発性骨髄腫、骨肉腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、白血病及びリンパ腫の予防又は治療で使用するための、本発明の化合物又は医薬組成物も提供する。

【0008】

本発明は、本発明の化合物又は医薬組成物の薬学的有効量を投与することを含む、患者を治療する方法も提供する。

【0009】

本発明は、がんを予防又は治療するための医薬品の製造における本発明の化合物の使用も提供する。

【0010】

請求項２５に記載の本発明の別の化合物も更に提供する。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】図１は、ＭＭ．１Ｓ細胞をin vitroで処理した後の本発明の代謝化合物（実施例化合物１８、本発明の実施例化合物１による処理後に同定、図１（Ａ））、ベンダムスチン（図１（Ａ））及びメルファラン（図１（Ｂ））比較対照の細胞内及び細胞外濃度の測定結果を示す。

【図2】図２は、ニワトリ胚in ovoモデルにおけるＳＵ－ＤＨＬ－４ヒトリンパ腫細胞株異種移植片の腫瘍増殖に対する実施例化合物１の効果を示す。

【図3】図３（Ａ）～（Ｇ）は、ＭＭ．１Ｓ細胞をin vitroで処理した後の、本発明の化合物及びその代謝物の細胞内及び細胞外濃度の測定結果を示す。

【図4】図４（Ａ）～（Ｃ）は、本発明の化合物及び対照が引き起すＤＮＡ損傷を検討するアッセイの結果を示す。

【図5】図５（Ａ）及び（Ｂ）は、本発明の化合物及び対照が引き起すＤＮＡ断片化を検討するアッセイの結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0012】

発明の詳細な説明
発明者らは、ヒトのがん細胞、特にヒトの血液がん細胞に対して高度に細胞毒性を示す新しいＰＤＣを見いだした。実施例の項で説明するように、本発明のさまざまな実施例化合物を合成し、いくつかの血液がん細胞株に対する細胞毒性をin virto細胞毒性アッセイで試験した。発明者らは、本発明の化合物が、非常に強力であり、線維芽細胞株ＢＪに対する化合物の細胞毒性が低いことで示されるように、血液がん細胞に対する選択性を示すことを見いだした。発明者らは、ヒトリンパ腫細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－４を使用するニワトリ胚のin ovo異種移植片モデルにおいて、実施例化合物１が腫瘍増殖を阻害するのに特に有効であることを見いだした。

【0013】

発明者らは、別の実験において、本発明の実施例化合物が、ＭＭ．１Ｓがん細胞内でたやすく加水分解されて、細胞内に隔離されて保持される代謝物を形成し、強力なアルキル化活性を有することを見いだし、本発明の化合物が、がんの予防又は治療、特に血液がんの予防又は治療に有効な新しいＰＤＣであることを実証した。

【0014】

本発明は、式（Ｉ）

【化1】

（式中、Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４は、それぞれＣＨであるか、Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４の１つはＮであり、他のものはＣＨである）
で表される化合物に関する。

【0015】

ある態様では、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４はそれぞれＣＨで、Ｗ_１はＮである。

【0016】

－Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃｌ）_２基は、環の炭素原子を介して分子の環骨格に結合していることが直ちに理解できる。そのようなＷ基では、ＣＨのＨは存在しない。

【0017】

好ましい態様では、Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４はそれぞれＣＨであり、式（Ｉ）で表される化合物は、式（Ｉａ）

【化2】

で表される化合物となる。

【0018】

好ましい態様では、式（Ｉ）で表される化合物は、式（Ｉｂ）

【化3】

で表される化合物である。

【0019】

式（Ｉ）で表される化合物において、ＸはＣ_１－６アルキレンである。例えば、Ｘは、Ｃ_１－４アルキレン、Ｃ_１－３アルキレン、Ｃ_１－２アルキレン、Ｃ_２アルキレン又はＣ_１アルキレンであってもよい。Ｘは、直鎖状又は分岐鎖状のアルキレンであってもよい。Ｘのアルキレンは、本発明の化合物のイミダゾール環とペプチド（すなわち、以下で説明する化合物のＲ^３）との間に結合を形成する。炭素数が１又は２のＸのアルキレンリンカーが、特に効果的であることが判明した。したがって、好ましい態様では、Ｘは、Ｃ_１アルキレン（すなわち、－ＣＨ_２－）又は直鎖状Ｃ_２アルキレン（すなわち、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－）である。

【0020】

式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ^１は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、及びハロゲンからなる群から選択される（例えば、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル及びハロゲンからなる群から選択される）。例えば、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群から選択してもよい。場合により、これらの基は、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい。特定の態様では、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、Ｆ及びＣｌからなる群から選択される。特定の好ましい態様では、Ｒ^１はＨである。

【0021】

式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ^２は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいフェニル、及びハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－６アルキルからなる群から選択される。例えば、Ｒ^２は、Ｈ、１、２又は３のＦ又はＣｌで置換されていてもよいフェニル、及び、１、２又は３のＦ又はＣｌで置換されていてもよいＣ_１－４アルキル（例．メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル又はtert-ブチル）からなる群から選択されてもよい。ある態様では、Ｒ^２は、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいフェニル、及びハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－６アルキルからなる群から選択され、例えば、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－４アルキル（例．メチル）である。特定の態様では、Ｒ^２は、置換されていないＣ_１－２アルキル（例．メチル）又は置換されていないフェニルである。

【0022】

式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ^３は、式（ＩＩ）

【化4】

又は式（ＩＩＩ）

【化5】

で表される基である。

【0023】

好ましい態様では、Ｒ^３は、式（ＩＩａ）

【化6】

又は式（ＩＩＩａ）

【化7】

で表される基である。

【0024】

誤解を避けるために説明すると、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩａ）及び（ＩＩＩａ）中の

【化7-1】

は、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩａ）又は（ＩＩＩａ）で表される基の、式（Ｉ）、（Ｉａ）又は（ＩＩａ）で表される化合物への結合点を示す。

【0025】

式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＩＩａ）では、Ｒ^４は、Ｎ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）及び式（ＩＶ）

【化8】

で表される基からなる群から選択される。

【0026】

好ましい態様では、Ｒ^４は、Ｎ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）及び式（ＩＶａ）

【化9】

で表される基からなる群から選択される。

【0027】

誤解を避けるために説明すると、式（ＩＶ）及び（ＩＶａ）中の

【化9-1】

は、式（ＩＶ）又は（ＩＶａ）で表される基の、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩａ）又は（ＩＩＩａ）で表される化合物への結合点を示す。

【0028】

式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ^４が式（ＩＶ）又は式（ＩＶａ）で表される基である場合、Ｒ^５はＲ^ｂである。

【0029】

Ｒ^ｂは、－ＯＨ、－Ｎ（Ｒ^ｅ）（Ｒ^ｆ）、及び、ハロゲン、－ＯＨ、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ^ｅ）（Ｒ^ｆ）、－Ｃ_６－１０アリール、又は、１以上のＯ、Ｎ若しくはＳ原子を有し、かつ、１、２若しくは３のハロゲンで置換されていてもよい３～１２員複素環から選択される１以上の置換基で置換されていてもよい－ＯＣ_１－６アルキルからなる群から選択され、前記アルキルは、１、２又は３のＯ、Ｎ又はＳ原子によって分断されていてもよい。

【0030】

例えば、Ｒ^４が式（ＩＶ）又は式（ＩＶａ）で表される基である場合、Ｒ^５（すなわちＲ^ｂ）は、－ＯＨ及び－ＯＣ_１－４アルキル（例．メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、sec-ブトキシ又はtert-ブトキシ）からなる群から選択されてもよい。好ましくは、Ｒ^４が式（ＩＶ）又は式（ＩＶａ）で表される基である場合、Ｒ^５は、－ＯＨ及び－ＯＣ_１－３アルキル（例．メトキシ、エトキシ、プロポキシ又はイソプロポキシ）からなる群から選択される。より好ましくは、Ｒ^４が式（ＩＶ）又は式（ＩＶａ）で表される基である場合、Ｒ^５は、メトキシ、エトキシ又はイソプロポキシからなる群から選択される。

【0031】

式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ^４がＮ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）である場合、Ｒ^５は、Ｒ^ｂ及び式（Ｖ）

【化10】

で表される基からなる群から選択される。

【0032】

好ましい態様では、Ｒ^４がＮ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）である場合、Ｒ^５は、－ＯＨ、－ＯＣ_１－６アルキル又は式（Ｖａ）

【化11】

で表される基である。

【0033】

誤解を避けるために説明すると、式（Ｖ）及び（Ｖａ）中の

【化11-1】

は、式（Ｖ）又は（Ｖａ）で表される基の、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩａ）又は（ＩＩＩａ）で表される化合物への結合点を示す。

【0034】

いくつかの態様では、Ｒ^４はＮ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）で、Ｒ^５（すなわちＲ^ｂ）は、ＯＨ、－ＯＣ_１－４アルキル（例．メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、sec-ブトキシ又はtert-ブトキシ）からなる群から選択されてもよいか、又は、Ｒ^５は、式（Ｖ）及び式（Ｖａ）で表される基から選択されてもよい。好ましくは、Ｒ^４がＮ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）である場合、Ｒ^５は、－ＯＨ、－ＯＣ_１－３アルキル（例．メトキシ、エトキシ、プロポキシ又はイソプロポキシ）及び式（Ｖａ）で表される基からなる群から選択される。より好ましくは、Ｒ^４がＮ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）である場合、Ｒ^５は、メトキシ、エトキシ又はイソプロポキシからなる群から選択される。

【0035】

発明者らは、Ｒ^４が、Ｎ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）、式（ＩＶ）又は式（ＩＶａ）で表される基から選択され、Ｒ^５（すなわちＲ^ｂ）が－ＯＣ_１－３アルキル（例．メトキシ、エトキシ又はイソプロポキシ）である式（Ｉ）で表される化合物は、がん細胞に対して、特に細胞毒性であることを見いだした。したがって、特定の好ましい態様では、式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ^５は－ＯＣ_１－３アルキル（例．メトキシ、エトキシ又はイソプロポキシ）である。つまり、Ｒ^４が、Ｎ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）、式（ＩＶ）又は式（ＩＶａ）で表される基である場合、Ｒ^５は、－ＯＣ_１－３アルキル（例．メトキシ、エトキシ又はイソプロポキシ）であることが好ましい。

【0036】

特定の態様では、Ｒ^５は－ＯＨである。

【0037】

式（Ｉ）で表される化合物において、各Ｒ^ａは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、－ＣＨ_２－フェニル又は、－ＣＨ_２－ヘテロシクリルからなる群から独立して選択され、前記ヘテロシクリルは、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１、２、３及び４のヘテロ原子を有する３～１２員ヘテロシクリルであり、前記Ｃ_１－６アルキルは、－ＯＨ、－ＯＣ_１－６アルキル、－ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＨ、－ＳＣＨ_３及びハロゲンからなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく、前記フェニル又はヘテロシクリルは、－ＮＨ_２、－ＯＨ、－ＯＣ_１－６アルキル及び－ＮＯ_２からなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい。特定の態様では、各Ｒ^ａは、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、－ＣＨ_２－インドリル、－ＣＨ_２－フェニル及び－ＣＨ_２－ヘテロアリールからなる群から独立して選択され、前記ヘテロアリールは、１、２、３又は４のＮ又はＳ原子を有する５員ヘテロアリールであり、ここで、Ｃ_１－６アルキルは、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＨ、－ＳＣＨ_３又はハロゲン（例．Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩ）で置換されていてもよく、フェニルは、ハロゲン（例．Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩ）、－ＮＨ_２、－ＯＨ、－ＯＣ_１－６アルキル及び－ＮＯ_２からなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい。好ましくは、各Ｒ^ａは、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル及び－ＣＨ_２－フェニルからなる群から独立して選択され、ここで、アルキル又はフェニルは、１又は２のハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）で置換されていてもよい。例えば、各Ｒ^ａは、独立して、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、－ＣＨ_２－フェニル、－ＣＨ_２－フルオロフェニル、－ＣＨ_２－クロロフェニル、－ＣＨ_２－ジフルオロフェニル又は－ＣＨ_２－ジクロロフェニルであってもよい。特定の好ましい態様では、各Ｒ^ａは、独立して、イソプロピル、イソブチル、sec-ブチル、－ＣＨ_２－フェニル又は－ＣＨ_２－フルオロフェニル（すなわち、2-フルオロベンジル、3-フルオロベンジル又は4-フルオロベンジル）であってもよい。

【0038】

式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ^ｂは、－ＯＨ、－Ｎ（Ｒ^ｅ）（Ｒ^ｆ）、及び、ハロゲン、－ＯＨ、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ^ｅ）（Ｒ^ｆ）、－Ｃ_６－１０アリール、又は、１以上のＯ、Ｎ若しくはＳ原子を有し、かつ、１、２若しくは３のハロゲンで置換されていてもよい３～１２員複素環から選択される１以上の置換基で置換されていてもよい－ＯＣ_１－６アルキルからなる群から選択され、前記アルキルは、１、２又は３のＯ、Ｎ又はＳ原子によって分断されていてもよい。特定の態様では、Ｒ^ｂは、－ＯＨ又は－ＯＣ_１－６アルキルで、前記アルキルは、１、２又は３のＯ又はＮ原子によって分断されていてもよい。別の好ましい態様では、Ｒ^ｂは、－ＯＨ又は－ＯＣ_１－６アルキルで、例えば－ＯＣ_１－６アルキルである。好ましくは、Ｒ^ｂは－ＯＣ_１－４アルキルである。例えば、Ｒ^ｂは、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ又はsec-ブトキシであってもよい。特定の好ましい態様では、Ｒ^ｂは、メトキシ、エトキシ又はイソプロポキシである。より好ましくは、Ｒ^ｂはエトキシである。

【0039】

特定の態様では、Ｒ^ｂは－ＯＨである。

【0040】

Ｒ^ｃ及びＲ^ｄは、それぞれ、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１－６アルキル及び－ＣＨ_２－フェニルからなる群から独立して選択され、前記アルキル又は前記フェニルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい。好ましい化合物では、Ｒ^ｃはＨで、Ｒ^ｄは、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル及び－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１－６アルキルから選択され、前記アルキルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい。例えば、Ｒ^ｃはＨで、Ｒ^ｄは、Ｈ、－Ｃ_１－４アルキル及びＣ（Ｏ）Ｃ_１－４アルキルから選択される。例えば、Ｒ^ｃはＨで、Ｒ^ｄは、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、－Ｃ（Ｏ）メチル、－Ｃ（Ｏ）エチル、－Ｃ（Ｏ）プロピル、－Ｃ（Ｏ）イソプロピル、－Ｃ（Ｏ）ブチル、－Ｃ（Ｏ）イソブチル及び－Ｃ（Ｏ）sec-ブチルから選択される。好ましくは、Ｒ^ｃはＨで、Ｒ^ｄは、Ｈ、メチル及び－Ｃ（Ｏ）メチルから選択される。好ましくは、Ｒ^ｃはＨで、Ｒ^ｄはＨである。

【0041】

式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ^ｅ及びＲ^ｆは、それぞれ、Ｈ及び－Ｃ_１－６アルキルからなる群から独立して選択され、前記アルキルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく、又は、Ｒ^ｅ及びＲ^ｆは、結合している窒素原子と共に、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい４、５又は６員複素環を形成する。好ましい化合物では、Ｒ^ｅ及びＲ^ｆは、それぞれ、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル及びsec-ブチルからなる群から独立して選択される。例えば、Ｒ^ｅ及びＲ^ｆは、それぞれ、Ｈ及びメチルからなる群から独立して選択される。好ましくは、Ｒ^ｅ及びＲ^ｆは、いずれもＨ、いずれもメチル、又は、一方がＨで他方がメチルである。

【0042】

特定の態様では、本発明の化合物は、式（Ｉａ）で表される化合物、又は、その薬学的に許容される塩、エステル、アミド若しくはカルバメートであり、そのようなエステル、アミド若しくはカルバメートの塩を含み、式中、
Ｘは－Ｃ_１－２アルキレン（すなわち、－ＣＨ_２－又は－ＣＨ_２－ＣＨ_２－）であり；
Ｒ^１はＨであり；
Ｒ^２は、１、２又は３のＦで置換されていてもよいＣ_１－２アルキル、又は１、２又は３のＦで置換されていてもよいフェニルであり、例えば、Ｒ^２は、置換されていないＣ_１－２アルキル又は置換されていないフェニルであってもよく；
Ｒ^３は、式（ＩＩａ）又は式（ＩＩＩａ）で表される基であり；
Ｒ^４は、Ｎ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）及び式（ＩＶａ）で表される基からなる群から選択され；
Ｒ^４が式（ＩＶａ）で表される基である場合、Ｒ^５（すなわちＲ^ｂ）は－ＯＣ_１－４アルキルであり、Ｒ^４がＮ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）である場合、Ｒ^５は－ＯＣ_１－４アルキル又は式（Ｖａ）で表される基であり；
各Ｒ^ａは、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、－ＣＨ_２－インドリル、－ＣＨ_２－フェニル又は－ＣＨ_２－ヘテロアリールからなる群から独立して選択され、前記ヘテロアリールは、１、２、３又は４のＮ又はＳ原子を有する５員ヘテロアリールであり、前記－Ｃ_１－６アルキルは、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＨ、－ＳＣＨ_３又はハロゲンで置換されていてもよく、前記フェニルは、ハロゲン、－ＮＨ_２、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル及び－ＮＯ_２からなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ^ｂは－ＯＣ_１－６アルキルであり；
Ｒ^ｃはＨで、Ｒ^ｄは、Ｈ、－Ｃ_１－４アルキル及び－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１－４アルキルから選択される。

【0043】

他の好ましい態様では、本発明の化合物は、式（Ｉａ）で表される化合物、又は、その薬学的に許容される塩、エステル、アミド若しくはカルバメートであり、そのようなエステル、アミド若しくはカルバメートの塩を含み、式中、
Ｘは－Ｃ_１－２アルキレン（すなわち、－ＣＨ_２－又は－ＣＨ_２－ＣＨ_２－）であり；
Ｒ^１はＨであり；
Ｒ^２は、メチル又はフェニルであり；
Ｒ^３は、式（ＩＩａ）又は式（ＩＩＩａ）で表される基であり；
Ｒ^４は、Ｎ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）又は式（ＩＶａ）で表される基であり；
Ｒ^５（すなわちＲ^ｂ）は－ＯＣ_１－３アルキルであり；
各Ｒ^ａは、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、－ＣＨ_２－インドリル、－ＣＨ_２－フェニル又は－ＣＨ_２－ヘテロアリールからなる群から独立して選択され、前記ヘテロアリールは、１、２、３又は４のＮ又はＳ原子を有する５員ヘテロアリールであり、ここで、Ｃ_１－６アルキルは、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＨ、－ＳＣＨ_３又はハロゲンで置換されていてもよく、フェニルは、ハロゲン、ＮＨ_２、－ＯＨ、－ＯＣ_１－６アルキル及び－ＮＯ_２からなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい。

【0044】

発明者らは、式（Ｉａ）で表される化合物、又は、その薬学的に許容される塩、エステル、アミド若しくはカルバメートであり、そのようなエステル、アミド若しくはカルバメートの塩を含み、式中、
Ｘは－Ｃ_１－２アルキレン（すなわち、－ＣＨ_２－又は－ＣＨ_２－ＣＨ_２－）であり；
Ｒ^１はＨであり；
Ｒ^２は、メチル又はフェニルであり；
Ｒ^３は、式（ＩＩａ）又は式（ＩＩＩａ）で表される基であり；
Ｒ^４は、Ｎ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）又は式（ＩＶａ）で表される基であり；
Ｒ^５（すなわちＲ^ｂ）は－ＯＣ_１－３アルキルであり；
各Ｒ^ａは、イソプロピル、イソブチル及び１つのＦで置換されていてもよい－ＣＨ_２－フェニル（例．2-フルオロベンジル、3-フルオロベンジル又は4-フルオロベンジル）からなる群から独立して選択される化合物が、in vitro細胞傷害性アッセイ及びリンパ腫のニワトリ胚in ovo異種移植モデルにおいて、血液がん細胞に対して特に細胞毒性であることを見いだした。

【0045】

他の好ましい態様では、本発明の化合物は、式（Ｉａ）で表される化合物、又は、その薬学的に許容される塩、エステル、アミド若しくはカルバメートであり、そのようなエステル、アミド若しくはカルバメートの塩を含み、式中、
Ｘは－Ｃ_１－２アルキレン（すなわち、－ＣＨ_２－又は－ＣＨ_２－ＣＨ_２－）であり；
Ｒ^１はＨであり；
Ｒ^２は、１、２又は３のＦで置換されていてもよいＣ_１－２アルキル又は１、２又は３のＦで置換されていてもよいフェニルであり、例えば、Ｒ^２は、置換されていないＣ_１－２アルキル又は置換されていないフェニルであってもよく；
Ｒ^３は式（ＩＩａ）で表される基であり；
Ｒ^４はＮＨ_２であり；
Ｒ^５（すなわちＲ^ｂ）は－ＯＣ_１－４アルキルであり；
各Ｒ^ａは、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、－ＣＨ_２－インドリル、－ＣＨ_２－フェニル又は－ＣＨ_２－ヘテロアリールからなる群から独立して選択され、前記ヘテロアリールは、１、２、３又は４のＮ又はＳ原子を有する５員ヘテロアリールであり、ここで、Ｃ_１－６アルキルは、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＨ、－ＳＣＨ_３又はハロゲンで置換されていてもよく、フェニルは、ハロゲン、－ＮＨ_２、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル及び－ＮＯ_２からなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい。

【0046】

他の好ましい態様では、本発明の化合物は、式（Ｉａ）で表される化合物、又は、その薬学的に許容される塩、エステル、アミド若しくはカルバメートであり、そのようなエステル、アミド若しくはカルバメートの塩を含み、式中、
Ｘは－Ｃ_１－２アルキレン（すなわち、－ＣＨ_２－又は－ＣＨ_２－ＣＨ_２－）であり；
Ｒ^１はＨであり；
Ｒ^２は、１、２又は３のＦで置換されていてもよいＣ_１－２アルキル又は１、２又は３のＦで置換されていてもよいフェニルであり、例えば、Ｒ^２は、置換されていないＣ_１－２アルキル又は置換されていないフェニルであり；
Ｒ^３は式（ＩＩＩａ）で表される基であり；
Ｒ^４はＮＨ_２であり；
Ｒ^５は－ＯＣ_１－４アルキルであり；
各Ｒ^ａは、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、－ＣＨ_２－インドリル、－ＣＨ_２－フェニル又は－ＣＨ_２－ヘテロアリールからなる群から独立して選択され、前記ヘテロアリールは、１、２、３又は４のＮ又はＳ原子を有する５員ヘテロアリールであり、ここで、Ｃ_１－６アルキルは、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＨ、－ＳＣＨ_３又はハロゲンで置換されていてもよく、フェニルは、ハロゲン、－ＮＨ_２、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル及び－ＮＯ_２からなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい。

【0047】

他の好ましい態様では、本発明の化合物は、式（Ｉａ）で表される化合物、又は、その薬学的に許容される塩、エステル、アミド若しくはカルバメートであり、そのようなエステル、アミド若しくはカルバメートの塩を含み、式中、
Ｘは－Ｃ_１－２アルキレン（すなわち、－ＣＨ_２－又は－ＣＨ_２－ＣＨ_２－）であり；
Ｒ^１はＨであり；
Ｒ^２は、１、２又は３のＦで置換されていてもよいＣ_１－２アルキル又は１、２又は３のＦで置換されていてもよいフェニルであり、例えば、Ｒ^２は、置換されていないＣ_１－２アルキル又は置換されていないフェニルであり；
Ｒ^３は式（ＩＩＩａ）で表される基であり；
Ｒ^４は式（ＩＶａ）で表される基であり；
Ｒ^５は－ＯＣ_１－４アルキルであり；
各Ｒ^ａは、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、－ＣＨ_２－インドリル、－ＣＨ_２－フェニル又は－ＣＨ_２－ヘテロアリールからなる群から独立して選択され、前記ヘテロアリールは、１、２、３又は４のＮ又はＳ原子を有する５員ヘテロアリールであり、ここで、－Ｃ_１－６アルキルは、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＨ、－ＳＣＨ_３又はハロゲンで置換されていてもよく、フェニルは、ハロゲン、－ＮＨ_２、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル及び－ＮＯ_２からなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい。

【0048】

特定の好ましい態様では、本発明の化合物は、
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物１）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル（実施例化合物２）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステル（実施例化合物３）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物４）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル（実施例化合物５）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステル（実施例化合物６）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物７）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物８）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物９）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル（実施例化合物１０）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル（実施例化合物１１）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル（実施例化合物１２）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物１３）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸メチルエステル（実施例化合物１４）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸イソプロピルエステル（実施例化合物１５）；
(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物１６）；
(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物２１）；
(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル（実施例化合物２２）；
(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物２３）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸2-モルホリノエチルエステル（実施例化合物２４）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸2-イソプロポキシエチルエステル（実施例化合物２５）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸イソプロピルエステル（実施例化合物２６）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸メチルエステル（実施例化合物２７）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸3-(ジメチルアミノ)プロピルエステル（実施例化合物２８）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸(2-メトキシ-1-メチル-エチル)エステル（実施例化合物２９）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-N,N,4-トリメチル-ペンタンアミド（実施例化合物３０）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-N,4-ジメチル-ペンタンアミド（実施例化合物３１）；
(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(メチルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物３２）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アセトアミド-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル（実施例化合物３４）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アセトアミド-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物３５）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アセトアミド-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル（実施例化合物３６）；
(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物３８）；
(2R)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物４５）；
(2S)-2-[[(2R)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物４６）；
(2R)-2-[[(2R)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物４７）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[6-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-3-メチル-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物４８）；及び
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物５０）
又は、その薬学的に許容される塩、アミド若しくはカルバメートであり、そのようなアミド若しくはカルバメートの塩を含む。

【0049】

本発明の化合物は、有機化学の当業者に公知の方法で製造できる。式（Ｉ）で表される化合物を製造する代表的な手順は、実施例の項に記載している。

【0050】

いくつかの態様では、本発明の化合物は、同位体原子を含んでいてもよい。この明細書では、同位体原子は、天然に存在する最も一般的な同位体ではない元素の原子である。重水素は、水素の安全で安定な同位体である。ある態様では、本発明の化合物は、天然の重水素の存在量よりも多い重水素を有する。重水素の天然存在度は０．０１５６ｍｏｌ％であり、ここで、ｍｏｌ％は、試料の水素の総モルに対する重水素の割合（％）である。したがって、天然の水素１モル中、０．１５６ｍｍｏｌが重水素であるか、６．０２２×１０^２３個の天然の水素原子の試料には、９．３９×１０^１９個の重水素原子が存在するか、又は６４１３個の天然の水素原子には、１個の重水素原子が含まれる。重水素の天然存在度を超える重水素のレベルは、少なくとも１ｍｏｌ％、５ｍｏｌ％、１０ｍｏｌ％、５０ｍｏｌ％、９０ｍｏｌ％又は９８ｍｏｌ％の重水素であってもよい。特定の態様では、本発明の化合物には、少なくとも１ｍｏｌ％、５ｍｏｌ％、１０ｍｏｌ％、５０ｍｏｌ％、９０ｍｏｌ％又は９８ｍｏｌ％の重水素が存在する。重水素化化合物を製造する手順は、当該技術分野において公知である。例えば、Sajiki, New Horizons of Process Chemistry (2017), Springer, pg 29-40及びHanson, The Organic Chemistry of Isotopic Labelling (2011), Chapter 3, RSC Publishingを参照。

【0051】

本発明の化合物に存在する置換基に依存して、化合物は、エステル、アミド、カルバメート及び／又は塩を形成できる。医薬における使用に適した本発明の化合物の塩は、対イオンが薬学的に許容されるものである。しかし、薬学的に許容されない対イオンを有する塩は、例えば、本発明の化合物及びその薬学的に許容される塩並びに生理学的に機能的な誘導体の製造における中間体として使用するために、本発明の範囲に含まれる。用語「生理学的に機能的な誘導体」は、例えば、体内でそれに変換可能であることによって、本発明の化合物と同じ生理学的機能を有する本発明の化合物の化学的誘導体を指す。エステル、アミド及びカルバメートは、生理学的に機能的な誘導体の例である。

【0052】

本発明での使用に適した塩の形態には、有機又は無機の酸又は塩基によって形成されるものが含まれる。特に、本発明の酸によって形成される適切な塩には、無機酸、非置換であるか若しくは例えばハロゲンで置換された炭素原子数１～４のアルカンカルボン酸、飽和若しくは不飽和のジカルボン酸、ヒドロキシカルボン酸又はアミノ酸といった強有機カルボン酸、あるいは、非置換であるか若しくは例えばハロゲンで置換された（Ｃ１～Ｃ４）アルキル又はアリールスルホン酸といった有機スルホン酸によって形成される塩が含まれる。薬学的に受容される酸付加塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、クエン酸、酒石酸、酢酸、リン酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、コハク酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、オキサロ酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン-2-スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、イセチオン酸、アスコルビン酸、リンゴ酸、フタル酸、アスパラギン酸、及びグルタミン酸、リシン及びアルギニンによって形成されるものが含まれる。シュウ酸などの他の酸は、それ自体は薬学的に許容されないが、本発明の化合物及びその薬学的に許容される酸付加塩を得る際の中間体として有用である可能性がある。

【0053】

薬学的に許容される塩基塩には、アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例．カリウム及びナトリウムの塩）、アルカリ土類金属塩（例．カルシウム及びマグネシウムの塩）、並びに、例えばジシクロヘキシルアミン、N-メチル-D-グルコミン、モルホリン、チオモルホリン、ピペリジン、ピロリジン、モノ、ジ若しくはトリ低級アルキルアミン（例．エチル、tertブチル、ジエチル、ジイソプロピル、トリエチル、トリブチル又はジメチル－プロピルアミン）、又は、モノ、ジ若しくはトリヒドロキシ低級アルキルアミン（例．モノ、ジ又はトリエタノールアミン）といった有機塩基との塩が含まれる。対応する分子内塩が更に形成されてもよい。

【0054】

本発明の化合物の好ましい塩には、塩酸、臭化水素酸、酢酸、p-トルエンスルホン酸、酒石酸、硫酸、コハク酸、リン酸、シュウ酸、硝酸、メタンスルホン酸、リンゴ酸、マレイン酸及びクエン酸によって形成されるものなどの酸付加塩が含まれる。より好ましくは、本発明の化合物の塩は、塩酸塩（すなわち、塩酸によって形成される付加塩）である。

【0055】

それ自体は不活性であるが、レシピエントへの投与で活性な薬物に変換される化合物は、「プロドラッグ」として知られている。例えば、プロドラッグは体内で、例えば血液中での加水分解によって、医学的効果を有する活性形態に変換される可能性がある。薬学的に許容されるプロドラッグは、T. Higuchi and V. Stella, Prodrugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A. C. S. Symposium Series (1976)；“Design of Prodrugs” ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985及びin Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987に記載されている。

【0056】

本発明の請求項１又は請求項２５（及びそれらの対応する従属請求項）の化合物は、プロドラッグの形態で提供できる。プロドラッグの例には、エステル、アミド及びカルバメートが含まれる。

【0057】

本発明の化合物は、エステル、アミド又はカルバメートに変換された適切な基を有していてもよい。したがって、本発明の化合物中の酸基で形成される代表的なエステル基及びアミド基には、－ＣＯＯＲ^Ｇ、－ＣＯＮＲ^Ｇ _２、－ＳＯ_２ＯＲ^Ｇ又は－ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^Ｇ）_２が含まれ、本発明の化合物中のＯＨ基又は－ＮＨＲ^Ｇ基で形成される代表的なエステル基、アミド基及びカルバメート基には、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ^Ｇ、－ＮＲ^ＧＣ（Ｏ）Ｒ^Ｇ、－ＮＲ^ＧＣＯ_２Ｒ^Ｇ、－ＯＳＯ_２Ｒ^Ｇ及び－ＮＲ^ＧＳＯ_２Ｒ^Ｇが含まれる；ここで、Ｒ^Ｇは、Ｃ_１－８アルキル、Ｃ_２－８アルケニル、Ｃ_２－８アルキニル、Ｃ_３－８シクロアルキル及びＣ_３－８シクロアルキルＣ_１－８アルキル、ハロＣ_１－８アルキル、ジハロＣ_１－８アルキル、トリハロＣ_１－８アルキル、フェニル及びフェニルＣ_１－４アルキルからなる群から選択され；より好ましくは、Ｒ^Ｇは、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_２－６アルケニル、Ｃ_２－６アルキニル、Ｃ_３－８シクロアルキル及びＣ_３－８シクロアルキルＣ_１－６アルキルからなる群から選択される。

【0058】

有機化学の当業者は、多くの有機化合物が、それが反応するか、又はそれが沈殿若しくは結晶化する溶媒と複合体を形成できることを理解する。これらの複合体は「溶媒和物」として知られている。例えば、水との複合体は「水和物」として知られている。複合体は、化学量論的又は非化学量論的な量で溶媒を組み込むことができる。溶媒和物は、Water-Insoluble Drug Formulation, 2^nd edn, R. Lui, CRC Press, page 553及びByrn et al., Pharm. Res., 12(7), 1995, 945-954に記載されている。溶液にする前に、本発明の化合物、並びにそのエステル、アミド、カルバメート及び／又は塩は、溶媒和物の形態であってもよい。医薬としての使用に適した本発明の化合物の溶媒和物は、溶媒が薬学的に許容されるものである。例えば、水和物は、薬学的に許容される溶媒和物である。

【0059】

発明者らは、Ｒ^５が－ＯＣ_１～６アルキル、
式（Ｖ）

【化12】

及び式（Ｖａ）

【化13】

で表されるものからなる群から選択され、
Ｒ^ｂが、－Ｎ（Ｒ^ｅ）（Ｒ^ｆ）及び－ＯＣ_１～６アルキルから選択される基である本発明の化合物が、がん細胞内でたやすく加水分解されて、細胞内に優先的に隔離されて保持され、強力なアルキル化活性を有する代謝物を形成することを見いだした。

【0060】

したがって、また、本発明は代謝物に関し、前記代謝物は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で表される構造を有するか、その塩であり、式中、
ＸはＣ_１－６アルキレンであり；
Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４は、それぞれＣＨであるか、Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４の１つはＮであり、他のものはＣＨであり；
Ｒ^１は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、及びハロゲンからなる群から選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいフェニル、及びハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ^３は、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＩａ）又は式（ＩＩＩａ）で表される基であり；
Ｒ^４は、Ｎ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）、式（ＩＶ）又は式（ＩＶａ）で表される基から選択され；
Ｒ^４が式（ＩＶ）又は式（ＩＶａ）で表される基である場合、Ｒ^５は－ＯＨであり、Ｒ^４がＮ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）である場合、Ｒ^５は、－ＯＨ、式（Ｖ）又は式（Ｖａ）で表される基であり；
各Ｒ^ａは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、－ＣＨ_２－フェニル又は－ＣＨ_２－ヘテロシクリルからなる群から独立して選択され、前記ヘテロシクリルは、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１、２、３及び４のヘテロ原子を有する３～１２員ヘテロシクリルであり、前記－Ｃ_１－６アルキルは、－ＯＨ、－ＯＣ_１－６アルキル、－ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＨ、－ＳＣＨ_３及びハロゲンからなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく、前記フェニル又は前記ヘテロシクリルは、ハロゲン、－ＮＨ_２、－ＯＨ、－ＯＣ_１－６アルキル及び－ＮＯ_２からなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ^ｂはＯＨである。

【0061】

上記代謝化合物の好ましいラジカルは、式（Ｉ）、（Ｉａ）及び（Ｉｂ）で表される化合物について、上記のとおりである。例えば、特定の態様では、代謝物は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で表される構造を有するか、その塩であり、式中、
Ｘは－Ｃ_１－２アルキレン（すなわち、－ＣＨ_２－又は－ＣＨ_２－ＣＨ_２－）であり；
Ｒ^１はＨであり；
Ｒ^２は、メチル又はフェニルであり；
Ｒ^３は、式（ＩＩａ）又は式（ＩＩＩａ）で表される基であり；
Ｒ^４は、Ｎ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）又は式（ＩＶａ）で表される基からなる群から選択され；
Ｒ^４が式（ＩＶａ）で表される基である場合、Ｒ^５は－ＯＨで、Ｒ^４がＮ（Ｒ^ｃ）（Ｒ^ｄ）である場合、Ｒ^５は、－ＯＨ又は式（Ｖａ）で表される基であり；
各Ｒ^ａは、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、－ＣＨ_２－インドリル、－ＣＨ_２－フェニル又は－ＣＨ_２－ヘテロアリールからなる群から独立して選択され、前記ヘテロアリールは、１、２、３又は４のＮ又はＳ原子を有する５員ヘテロアリールであり、ここで、－Ｃ_１－６アルキルは、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＨ、－ＳＣＨ_３又はハロゲンで置換されていてもよく、フェニルは、ハロゲン、－ＮＨ_２、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル及び－ＮＯ_２からなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ^ｂはＯＨである。

【0062】

特定の態様では、代謝物は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で表される構造を有するか、その塩であり、式中、
Ｘは－Ｃ_１－２アルキレン（すなわち、－ＣＨ_２－又は－ＣＨ_２－ＣＨ_２－）であり；
Ｒ^１はＨであり；
Ｒ^２は、メチル又はフェニルであり；
Ｒ^３は、式（ＩＩａ）又は式（ＩＩＩａ）で表される基であり；
Ｒ^４は、ＮＨ_２又は式（ＩＶａ）で表される基であり；
Ｒ^５は－ＯＨであり；
各Ｒ^ａは、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、－ＣＨ_２－インドリル、－ＣＨ_２－フェニル又は－ＣＨ_２－ヘテロアリールからなる群から独立して選択され、前記ヘテロアリールは、１、２、３又は４のＮ又はＳ原子を有する５員ヘテロアリールであり、ここで、Ｃ_１－６アルキルは、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＨ、－ＳＣＨ_３又はハロゲンで置換されていてもよく、フェニルは、ハロゲン、－ＮＨ_２、－ＯＨ、－ＯＣ_１－６アルキル及び－ＮＯ_２からなる群から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい。好ましくは、各Ｒ^ａは、イソプロピル、イソブチル及び１つのＦで置換されていてもよい－ＣＨ_２－フェニル（例．2-フルオロベンジル、3-フルオロベンジル又は4-フルオロベンジル）からなる群から独立して選択される。

【0063】

特定の好ましい態様では、代謝物は、
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸（実施例化合物１９）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（実施例化合物２０）；
(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(メチルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（実施例化合物３３）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸（実施例化合物３７）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸（実施例化合物３９）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（実施例化合物４０）；
2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸（実施例化合物４２）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸（実施例化合物４３）；
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（実施例化合物４４）；及び
(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（実施例化合物５１）
又はその塩である。

【0064】

発明者らは、本発明の化合物が更にがん細胞内でたやすく加水分解されて、細胞内に優先的に隔離されて保持され、強力なアルキル化活性を有するより高度な代謝物を形成することを更に見いだした。したがって、また、本発明は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で表される構造の代謝物に関し、式中、
ＸはＣ_１－６アルキレンであり；
Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４は、それぞれＣＨであるか、Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４の１つはＮであり、他のものはＣＨであり；
Ｒ^１は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、及びハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）からなる群から選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、ハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）の中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいフェニル、及びハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）の中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ^３は、式（ＶＩａ）

【化14】

（式中、Ｒ^ｃ及びＲ^ｄは、それぞれ、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１－６アルキル及び－ＣＨ_２－フェニルからなる群から独立して選択され、前記アルキル又は前記フェニルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく（好ましくは、Ｒ^ｃ及びＲ^ｄはＨである）；
Ｒ^ｇは、Ｈ及び－Ｃ_１－６アルキルからなる群から選択され、前記アルキルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい（好ましくはＲ^ｇはＨである））
で表される基である。

【0065】

誤解を避けるために説明すると、式（ＶＩ）及び（ＶＩａ）中の

【化14-1】

は、式（ＶＩ）又は（ＶＩａ）で表される基の、式（Ｉ）、（Ｉａ）又は（Ｉｂ）で表される化合物への結合点を示す。

【0066】

特定の態様では、代謝物は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で表される構造を有するか、その塩であり、式中、
ＸはＣ_１－６アルキレンであり；
Ｒ^１は、Ｈ、－Ｃ_１－４アルキル及びハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）からなる群から選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、１、２又は３のハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）で置換されたフェニル、及び、１、２又は３のハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）で置換されたＣ_１－６アルキル（例えば、１、２又は３のハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）で置換されたフェニル、及び、１、２又は３のハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）で置換されたＣ_１－６アルキルからなる群から選択される）からなる群から選択され；
Ｒ^３は式（ＶＩａ）で表される基であり；
Ｒ^ｃ及びＲ^ｄはＨである。

【0067】

他の好ましい態様では、代謝物は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で表される構造を有するか、その塩であり、式中、
Ｘは、Ｃ_１アルキレン（すなわち、－ＣＨ_２－）又はＣ_２アルキレン（すなわち、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－）であり；
Ｒ^１は、Ｈ、－Ｃ_１－４アルキル及びハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）からなる群から選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、１、２又は３のハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）で置換されていてもよいフェニル、及び、１、２又は３のハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）で置換されていてもよいＣ_１－６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ^３は式（ＶＩａ）で表される基であり；
Ｒ^ｃ及びＲ^ｄはＨである。

【0068】

好ましくは、化合物は式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）で表されるものである。

【0069】

したがって、また、本発明は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で表される構造の化合物に関し、式中、
ＸはＣ_２－６アルキレンであり；
Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４は、それぞれＣＨであるか、Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４の１つはＮであり、他のものはＣＨであり；
Ｒ^１は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、及びハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）からなる群から選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、ハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）の中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいフェニル、及びハロゲン（例．Ｆ又はＣｌ）の中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい－Ｃ_１－６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ^３は、式（ＶＩ）

【化15】

（式中、Ｒ^ｃ及びＲ^ｄは、それぞれ、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１－６アルキル及び－ＣＨ_２－フェニルからなる群から独立して選択され、前記アルキル又は前記フェニルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく（例えば、Ｒ^ｃ及びＲ^ｄはＨである）；
Ｒ^ｇは、Ｈ及び－Ｃ_１－６アルキルからなる群から選択され、前記アルキルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい（例えばＲ^ｇはＨである））
で表される基である。

【0070】

より進んで代謝された化合物は医薬として使用できる。したがって、本発明は、医薬として使用するための、例えば、多発性骨髄腫、骨肉腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、白血病及びリンパ腫からなる群から選択されるがん、例えば、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病又はリンパ腫の治療のための、式（Ｉ）

【化16】

（式中、
ＸはＣ_１－６アルキレンであり；
Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４は、それぞれＣＨであるか、Ｗ_１、Ｗ_２、Ｗ_３及びＷ_４の１つはＮであり、他のものはＣＨであり；
Ｒ^１は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、及びハロゲンからなる群から選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、ハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいフェニル、及びハロゲンの中から独立して選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよいＣ_１－６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ^３は、式（ＶＩ）

【化17】

（式中、Ｒ^ｃ及びＲ^ｄは、それぞれ、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１－６アルキル及び－ＣＨ_２－フェニルからなる群から独立して選択され、前記アルキル又は前記フェニルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ^ｇは、Ｈ及び－Ｃ_１－６アルキルからなる群から選択され、前記アルキルは、ハロゲンの中から選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよい）
で表される基である）
で表される化合物又はその塩若しくは溶媒和物に関する。

【0071】

医薬として使用するための、これらの化合物の好ましい態様は、この発明の他の観点に関連してこれまでに説明したとおりである。

【0072】

特定の好ましい態様では、一段と、より高度な代謝物は、
(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸（実施例化合物１７）；
(S)-2-アミノ-4-(5-(ビス(2-クロロエチル)アミノ)-1-メチル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-イル)ブタン酸（実施例化合物１８）；
(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル（実施例化合物３８）；
(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸（実施例化合物４１）；又は
(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸（実施例化合物４９）
若しくはその塩である。

【0073】

明細書に記載の代謝物は、式（Ｉ）で表されるの化合物の１つ以上で処理した細胞から単離してもよく、及び／又は、標準的な有機化学の技術を使用して製造できる。本発明の代謝物を製造する代表的な手順は、実施例の項に記載している。誤解を避けるために説明すると、この明細書に記載した代謝物は、本発明の化合物の更なる例であり、式（Ｉ）で表される他の化合物について、この明細書に記載したのと同じ様式で、組成物の形態で及び／又は医薬として使用できる。

【0074】

以下の定義は、特定の場合に他に限定しない限り、この明細書全体で使用する用語に適用される。

【0075】

この明細書では、用語「アルキル」は、直鎖状及び分岐鎖状の飽和炭化水素基を意味する。
アルキル基の例には、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、ペンチル及びヘキシル基が含まれる。非分枝鎖状のアルキル基の中では、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル及びn-ブチル基が好ましい。分岐鎖状アルキル基の中では、t-ブチル、i-ブチル、1-エチルプロピル及び1-エチルブチル基を挙げることができる。

【0076】

この明細書では、用語「シクロアルキル」は、飽和の環系を意味する。シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが含まれる。

【0077】

この明細書では、用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を意味する。フッ素、塩素及び臭素が好ましく、フッ素及び塩素が特に好ましい。

【0078】

この明細書では、用語「１、２、３又は４の窒素、酸素又は硫黄原子を含むヘテロアリール」は、１、２、３又は４個の炭素原子が、窒素、酸素及び硫黄（好ましくは窒素及び硫黄）から独立して選択される１、２、３又は４個のヘテロ原子によって置換されている、炭素原子の芳香族環式基を意味する。１、２又は３の窒素及び／又は硫黄原子を含む５員ヘテロアリールの例には、チオフェン、チアゾール、イソチアゾール、ピロール、ピロリン、ピラゾール、ピラゾリン、イミダゾール、イミダゾリン、トリアゾール及びチアジアゾールが含まれる。

【0079】

医薬組成物
本発明の化合物、組成物及び医薬組成物は、腫瘍の増殖の減少させ、及び／又は腫瘍細胞を死滅させる、がんの予防及び／又は治療に使用できる。したがって、本発明の化合物は、がん患者の治癒及び／又は生存の延長に使用できる。この発明は、がん腫、肉腫、骨髄腫、白血病、リンパ腫又は混合型のがん、例えば、多発性骨髄腫、骨肉腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、白血病及びリンパ腫の予防及び／又は治療に特に有用である。

【0080】

本発明の化合物は単独で投与できるが、組成物、特に医薬組成物中に存在することが好ましい。医薬組成物には、経口、非経口（皮下、皮内、骨内注入、筋肉内、血管内（ボーラス又は注入）、硝子体内及び骨髄内を含む）、腹腔内、経粘膜、経皮、直腸及び局所（皮膚、頬内、舌下及び眼内を含む）投与に適したものが含まれるが、最も適した経路は、例えば、治療中の対象の症状及び障害に依存する可能性がある。

【0081】

経口投与に適した本発明の医薬組成物は、それぞれが所定の量の活性成分を有するカプセル剤、カシェ剤若しくは錠剤などの個別の投与単位として、粉末若しくは顆粒として、水性液体若しくは非水性液体中の溶液若しくは懸濁液として、又は、水中油型液体エマルション若しくは油中水型液体エマルションとして提供できる。本発明の化合物は、ボーラス、練薬又はペーストとしても提供できる。さまざまな薬学的に許容される担体とその処方は、標準的な製剤の専門書、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences by E. W. Martinに記載されている。Wang, Y. J. and Hanson, M. A., Journal of Parenteral Science and Technology, Technical Report No. 10, Supp. 42;2S, 1988も参照。

【0082】

非経口投与に適した本発明の医薬組成物には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、製剤を患者の血液と等張にする溶質、並びに、懸濁化剤及び増粘剤を含んでいてもよい水性及び非水性の滅菌懸濁液を含んでいてもよい、水性及び非水性滅菌注射溶液が含まれる。好ましくは、製剤は、１回分の用量又は分割された投与容器、例えば密封されたアンプル及びバイアルで提供されてもよい。製剤は、使用直前に滅菌液体担体、例えば生理食塩水又は注射用水を添加するのみの、凍結乾燥状態で保存できる。直ちに投与する注射及び注入溶液並びに懸濁液は、滅菌粉末、顆粒又は他の乾燥組成物から調製できる。非経口投与のための代表的な組成物には、例えば、マンニトール、1,3-ブタンジオール、水、リンゲル溶液、等張塩化ナトリウム溶液、合成モノ若しくはジグリセリド、オレイン酸又はクレモフォール（登録商標）を含む脂肪酸を含む他の適切な分散剤若しくは湿潤剤及び懸濁剤といった非経口で許容される適切で非毒性の溶質、希釈剤若しくは溶媒を含むことができる注射可能な溶液又は懸濁液が含まれる。

【0083】

経鼻投与、エアロゾルとしての投与又は吸入に適した本発明の医薬組成物には、例えば、ベンジルアルコール又は他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティを増強する吸収促進剤、及び／又は、当該技術分野で知られている他の可溶化剤若しくは分散剤を含むことができる生理食塩水が含まれる。

【0084】

直腸投与に適した本発明の医薬組成物は、カカオ脂、合成グリセリドエステル又はポリエチレングリコールなどの通常の担体を含む坐剤として提供できる。そのような担体は、通常、常温で固体であるが、直腸内で液化及び／又は溶解して薬物を放出する。

【0085】

口内、例えば頬内又は舌下への局所投与に適した本発明の医薬組成物には、スクロース及びアカシア又はトラガカントなどの香味基剤中に活性成分を含むトローチ（lozenge）、並びに、ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアなどの基剤中に活性成分を含むトローチ（pastille）が含まれる。局所投与用の代表的な組成物には、プラスチベース（ポリエチレンでゲル化した鉱油）などの局所用担体を含む。

【0086】

好ましい単位投与組成物は、本発明の化合物の探索用量若しくは治療用量、又はその適切な一部を有するものである。

【0087】

好ましい態様では、本発明の組成物は、本発明の化合物及び少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤から本質的になる。

【0088】

本発明で使用する組成物は、特に上記成分の他に、組成物の種類を考慮して、当該技術分野において慣用的な他の薬剤を含んでいてもよいことが理解されるべきである。

【0089】

本発明の組成物は、１以上の他の治療剤を含んでいてもよい。本発明の組成物中に存在してもよい他の治療剤の例には、ステロイド（プレドニン及びデキサメタゾン）、チェックポイント阻害剤（例．ＣＴＬＡ－４阻害剤及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤）、核輸送阻害剤（例．セリネクソル）、抗アポトーシス阻害剤（例．ベネトクラクス）、養子細胞療法（例．腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）療法、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞療法、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法、及び改変Ｔ細胞受容体療法）、二重特異性Ｔ細胞誘導剤（ＢｉＴＥ）、免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）（例．サリドマイド、レナリドミド及びポマリドミド）、プロテアソーム阻害剤（ＰＩ）（例．ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ及びマリゾミブ）、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤（例．パノビノスタット）、本発明の化合物以外のペプチド薬物複合体（ＰＤＣ）（例．メルフルフェン）、アルキル化剤（例．メルファラン、シクロホスファミド）及びＤＮＡインターカレーター（例．ドキソルビシン）が含まれるが、これらに限定されるものではない。

【0090】

治療
これまでに説明したように、本発明の化合物は、ペプチド薬物複合体（ＰＤＣ）である。本発明は、医薬として使用するための、本発明の化合物又は本発明の化合物を薬学的に許容される担体とともに含む組成物に関する。

【0091】

特に、本発明の化合物及び組成物は、がんの予防及び／又は治療に使用される。本発明の化合物又は組成物を投与することで予防又は治療できるがんの特定の例には、がん腫、肉腫、骨髄腫、白血病、リンパ腫又は混合型のがんが含まれる。本発明の化合物又は組成物を投与することで予防又は治療できる代表的ながんには、白血病などの血液がん／血球がん（例．成人及び小児の急性リンパ芽球性白血病を含む急性リンパ芽球性白血病；成人及び小児の急性骨髄性白血病を含む急性骨髄性白血病；Ｂ細胞慢性リンパ性白血病といった慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病及び有毛細胞白血病）；リンパ腫（例：エイズ関連リンパ腫；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；成人及び小児のホジキンリンパ腫並びに妊娠中のホジキンリンパ腫を含むホジキンリンパ腫；成人及び小児の非ホジキンリンパ腫並びに妊娠中の非ホジキンリンパ腫を含む非ホジキンリンパ腫；菌状息肉症；セザリー症候群；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫；マントル細胞リンパ腫；びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫並びに原発性中枢神経系リンパ腫）；他の血液がん（例．慢性骨髄増殖性疾患；多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍；骨髄異形成症候群及び骨髄異形成／骨髄増殖性疾患）；骨肉腫、卵巣がん、乳がん；肺がん；膠芽腫；網膜芽細胞腫及びこれらのがんの転移が含まれるが、これらに限定されるものではない。

【0092】

発明者らは、本発明の化合物が血液がん細胞に対して特に細胞毒性であることを見いだした。したがって、本発明の化合物は、上述した血液がんの１つ以上の予防又は治療に特に有益である。

【0093】

さらに、本化合物は、固形腫瘍の治療にも使用できる。本発明の化合物及び組成物は、本発明の化合物又は本発明の組成物を、必要とする対象に投与する工程を含む、また、疾患又は障害を予防又は治療する方法にも有用である。したがって、本発明の化合物又は組成物は、がん、特に血液がんに罹患している、又はそれを発症する危険性がある対象に投与できる。

【0094】

本発明の化合物はまた、医薬の製造、特に、がん、特に血液がんに罹患している、又はそれを発症する危険性がある対象に投与する医薬の製造に使用される。

【0095】

治療効果を達成するために必要な本発明の化合物の量は、投与経路及び治療を行う対象の特徴例えば、種、年齢、体重、性別、体調、疾患又は状態とその重篤度、並びに他の医学的及び身体的因子、によって異なる。通常の技術を有する医師は、疾患又は状態の予防又は治療に必要な本発明の化合物の有効量をたやすく決定し、投与できる。

【0096】

本発明の化合物又はその塩及び／若しくは溶媒和物は、治療を行う対象及び疾患又は障害に応じて、毎日（１日に数回を含む）、２日ごと、３日ごと、毎週、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、又は更に高い単回用量として投与できる。

【0097】

好ましくは、本発明の化合物若しくは本発明の代謝物又はその塩及び／若しくは溶媒和物は、（対イオン又は溶媒の質量を除いて）１回の投与につき約１ｍｇ～１５０ｍｇ、例えは、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ又は１５０ｍｇ投与できる。あるいは、本発明の化合物又はその塩及び／若しくは溶媒和物は、（対イオン又は溶媒の質量を除いて）単回の高用量で投与できる。単回の高用量は約１５０ｍｇ～８００ｍｇ、例えば、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、又は８００ｍｇであってもよい。

【0098】

本発明の化合物は、この発明における唯一の活性成分として使用できるが、１以上の他の治療剤と組み合わせて使用することも可能であり、そのような組合せの使用は、本発明の好ましい態様の１つを提供する。このような他の治療剤は、がんの予防若しくは治療に有用な薬剤、又は他の薬学的に活性な物質であってもよい。このような薬剤は、当該技術分野において知られている。この発明で使用する他の治療剤の適切な例は、この明細書に記載されている。

【0099】

１以上の他の治療剤は、本発明の化合物の投与と同時に、連続的に又は別々に使用できる。このような組合せの個々の成分は、治療中の異なる時点で別々に投与でき、又は分割された若しくは単一の組合せ形態で同時に投与できる。

【0100】

本発明で使用する好ましい単位投与組成物は、本発明の化合物の有効量又はその適切な一部を有するものである。

【0101】

キット
本発明は、式（Ｉ）で表される化合物、１以上の薬学的に許容される賦形剤、及び場合によっては１以上の他の治療剤を含むキットに関する。このような他の治療剤の例には、この発明での使用に適しており、場合によって他の治療剤として本発明の医薬組成物中に存在するものとして明細書に記載したものが含まれる。

【0102】

本発明のキットは、がん、特に血液がんの予防及び／又は治療に使用される。

【0103】

特定の態様では、キットは、１以上の容器を含み、サンプリング装置、例えば、ボトル、バッグ（静脈内輸液バッグなど）、バイアル、注射器及び試験管も含んでいてもよい。他の要素には、針、希釈剤、洗浄試薬及び緩衝液が含まれてもよい。実用的には、キットは、薬学的に許容される有機溶媒、又は、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びブドウ糖溶液といった薬学的に許容される緩衝液を含む少なくとも１つの容器を含んでいてもよい。

【0104】

好ましくは、本発明のキットは、説明書、例えば、規定量の本発明の化合物又は組成物を、規定量の、生理学的に許容される水性溶媒若しくは希釈剤、薬学的に許容される有機溶媒、及び／又は、１以上の他の治療剤（任意）と混合することを使用者に指示する説明書を含む。このような指示は、保管条件及び／又は投与に関するガイダンスも提供してもよい。

【0105】

誤解を避けるために説明すると、本発明の化合物又は組成物、生理学的に許容される水性溶媒又は希釈剤（任意）、１以上の薬学的に許容される有機溶媒（任意）、及び１以上の他の治療剤（任意）は、本発明の医薬製剤の製造に適した形態及び量で、この発明のキット中に存在する。当業者は、本発明での使用に適した、本発明の化合物又は組成物、生理学的に許容される水性溶媒又は希釈剤、薬学的に許容される有機溶媒、及び１以上の他の治療剤（任意）の量をたやすく決定できる。

【0106】

均等物
本発明を、この明細書で広範かつ一般的に説明してきた。当業者は、この明細書に記載される全てのパラメータ、寸法、材料、及び構成が代表的なもので、実際のパラメータ、寸法、材料、及び／又は構成は、特定の用途又は本発明の教示で使用する用途に依存することをたやすく理解する。当業者は、この明細書に記載した本発明の特定の態様に対する多くの均等物を認識するか、又は日常的な実験にみによって、そのような均等物を確認できる。したがって、これまでに説明した態様は、例としてのみ提示され、特許請求の範囲及びその均等の範囲内で、本発明は、具体的に説明し、特許請求した方法以外の方法で実施してもよいことが理解される。本発明は、この明細書に記載した個々の特徴、システム、物品、材料、キット及び／又は方法を対象とする。加えて、そのような特徴、システム、物品、材料、キット及び／又は方法の２以上の組合せは、そのような特徴、システム、物品、材料、キット及び／又は方法が相互に矛盾しない場合、この発明の範囲に含まれる。さらに、一般的な開示の範囲に含まれるものよりも狭い種及び亜属に属するものも、本発明の一部を形成する。これは、削除された材料が明細書に具体的に記載されていたか否かにかかわらず、ただし書きによる発明の一般的な説明、又は属から主題を削除するという否定的な限定を含む。

【0107】

参照による組み込み
この明細書で言及又は引用した論文、特許及び特許出願、並びに、他の全ての文書及び電子的に入手可能な情報の内容は、あたかも個々の刊行物が参照により組み入れられることが具体的かつ個別に示されているかのように、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。出願人は、そのような論文、特許、特許出願又は他の物理的及び電子的文書からのありとあらゆる材料及び情報を、この出願に物理的に組み込む権利を留保する。

【0108】

以下の実施例は、本発明を説明するものである。

【実施例】

【0109】

実施例化合物：
本発明の化合物は、当業者に公知の方法で製造できる。他の反応スキーム、溶媒、温度及び反応条件は、当業者であればたやすく工夫できる。

【0110】

中間体１～４を、一般スキーム１に従い合成した。最初に、対応する保護されたアミノ酸とアニリンの間でアミド化反応を行った。得られた生成物を酸性条件で環化して、ベンゾイミダゾール複素環を形成させ、中間体１（ｎ＝１）、中間体３（ｎ＝０）を得た。ＢＯＣ保護、ケン化を行い、中間体３（ｎ＝１）、中間体４（ｎ＝０）を得た。

【0111】

【化18】

【0112】

ＴＣＦＨを用いる中間体（２又は４）と対応する保護されたアミノ酸の間のペプチドカップリングにより、目的のジペプチドを得た。ニトロ基の還元は、加圧水素雰囲気中でＰｄ／Ｃを用いて行った。得られたアニリンを、エチレンオキシドを用い酸性条件でアルキル化した。メシル化とその後の塩素置換により、ナイトロジェンマスタード部分を得た。最後に、ＢＯＣ保護基をＨＣｌ又はＴＦＡで除去して、目的の類似体を得た（スキーム２）。

【0113】

中間体２及び４は、スキーム１３に従って合成することもできる。

【0114】

【化19】

【0115】

実施例化合物１～６を、スキーム２に示す合成経路に従い合成した。実施例化合物１３～１５、１９、２０、２２～３６、３９、４０～４２及び４４～５１は、以下に詳しく説明するように合成した。同様の戦略を、ジペプチドのＣ末端にベンズイミダゾール置換基を有する実施例化合物７～１２の合成に適用した（スキーム３）。実施例化合物１６、２１、３７及び４３は、以下に詳しく説明するように合成した。

【0116】

【化20】

【0117】

材料と方法
一般的な方法Ａ
分取ＨＰＬＣは、ミリＱ水中の０．１％ＴＦＡ／ＣＨ_３ＣＮ（酸性条件）（流速２５ｍＬ／分、１５分間の勾配）を移動相として用い、Kinetex ＸＢ Ｃ_１８（５μｍ、２１×１００ｍｍ）カラムが装着されたGilson ＨＰＬＣシステムで行った。ＵＶのシグナルに基づいて分画した。分析は、ミリＱ水中の０．１％ＴＦＡ／ＣＨ_３ＣＮ（酸性条件）を移動相として用い、Kinetex ＸＢ Ｃ_１８（２．６μｍ、３．０×５０ｍｍ）カラムを使用する方法、又は、ミリＱ水中の１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３（ｐＨ１０）／ＣＨ_３ＣＮ（塩基性条件）を移動相として用い、Kinetex ＥＶＯ Ｃ_１８（２．６μｍ、３．０×５０ｍｍ）カラムを使用する方法による Agilentシリーズ1100システムで行った（流速１ｍＬ／分）。エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ－ＭＳ）は、Agilent 1100シリーズ液体クロマトグラフィー／質量選択検出器（ＭＳＤ）を使用して、標的分子の擬分子[M+H]⁺イオンを得た。

【0118】

核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、５ｍｍ三重共鳴プローブを備えたVarian Inova 600MHzにより２５℃で測定した。

【0119】

一般的な方法Ｂ
いくつかの実施例では一般的な方法Ｂを使用した。フラッシュクロマトグラフィーはシリカゲル６０Ａ、４０－６３μｍで行った。分取ＨＰＬＣは、ＡＣＥ５ Ｃ_８ Ｐｒｅｐ、１００×２１．２ｍｍカラムを使用し、ＵＶ検出器を備えたGilsonシステムで行った。分析ＨＰＬＣ－ＭＳは、エレクトロスプレー インターフェイスとＵＶダイオードアレイ検出器を備えたAgilent 1100シリーズ液体クロマトグラフィー／質量選択検出器（ＭＳＤ）（単一四重極）で行った。分析は、ＡＣＥ３ Ｃ_８（３．０×５０ｍｍ）カラムを用い、３分間の０．１％ＴＦＡ水溶液中のアセトニトリルの勾配（流速１ｍＬ／分）で、又は、Xbridge Ｃ_１８（３．０×５０ｍｍ）カラムを用い、３分間の１０ｍＭ 重炭酸アンモニウム中のアセトニトリルの勾配（流速１ｍＬ／分）で行った。¹H-NMRスペクトルは、Bruker 400MHzにより２５℃で測定した。

【0120】

共通する一般的な方法
実施例化合物を塩酸塩として製造する場合、トリフルオロ酢酸を塩酸で置換するために、分取クロマトグラフィーの合わせた純粋な画分に、塩化水素（例．1,4-ジオキサン中に４Ｍ）を添加した。

【0121】

化合物は、Biovia, Dotmatics and PerkinElmer（ChemDraw）のソフトウェアを使用して命名した。さらに、市販の出発物質と試薬には、商品名又は慣用名を使用した。

【0122】

Mestrelab Research S.Lが提供するMestReNovaを使用して、スペクトルを処理した。残留する溶媒を内部標準として使用して、化学シフトをｐｐｍ（δ）で記録する。Ｈｚ単位で示されるピーク多重度は、以下のとおり：ｓ、シングレット；ｄ、ダブレット；ｄｄ、ダブレットのダブレット；ｄｄｄ、ダブレットのダブレットのダブレット；ｔ、トリプレット；ｄｔ、ダブレットのトリプレット；ｑ、カルテット；ｄｑ、ダブレットのカルテット；ｐ、ペンテット；ｈ、ヘプテット；ｍ、マルチプレット；ｂｒ ｓ、ブロードなシングレット。ある低磁場プロトン（約１４．５～１４．９ｐｐｍ）は範囲外となることがあり、必ず多重線に含まれるものではない。

【0123】

中間体１ (2S)-2-アミノ-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸エチルエステル

【化21】

【0124】

(4S)-4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-メトキシ-5-オキソ-ペンタン酸（７．４６ｇ、２８．６ｍｍｏｌ）、N1-メチル-4-ニトロ-ベンゼン-1,2-ジアミン（５．０１ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）、1-メチルイミダゾール（４．７８ｍＬ、６０．０ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（２２０ｍＬ）溶液に、[クロロ(ジメチルアミノ)メチレン]-ジメチル-アンモニウム；六フッ化リン酸（８．８１ｇ、３１．４ｍｍｏｌ）を室温で加えた［わずかに発熱］。混合物を室温で１時間撹拌し、揮発性の物質を減圧下で蒸発させた。粗生成物をＤＣＭ（４００ｍＬ）に溶解し、２Ｎ ＨＣｌ：水 １：４溶液（２００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、濃縮して茶色の固体を得た。粗生成物(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-[2-(メチルアミノ)-5-ニトロ-アニリノ]-5-オキソ-ペンタン酸メチルエステル（１３．４ｇ、２８．４ｍｍｏｌ、収率９９％）を、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：８７％；MS (ESI+) m/z = 354 [M+H-tBu]⁺。

【0125】

(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-[2-(メチルアミノ)-5-ニトロ-アニリノ]-5-オキソ-ペンタン酸メチルエステル（１１．７ｇ、２８．５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（４００ｍＬ）溶液に、塩酸（１２．０ｍｏｌ／Ｌ、４２．３ｍＬ、５０７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を７０℃で終夜撹拌した。反応物を減圧下で蒸発させて、水（５００ｍＬ）を加えた。水相をＥｔＯＡｃ（２× ２００ｍＬ）で洗浄した。有機相を捨てた。水相をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）と混合し、ｐＨ９～１０になるまで固体のＫ_２ＣＯ_３を加えた。水相をＥｔＯＡｃ（２× ３００ｍＬ）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させて、粗生成物(2S)-2-アミノ-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸エチルエステル（中間体１）を得、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：８３％；MS (ESI⁺) m/z = 307 [M+H]⁺。

【0126】

中間体２ (2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸リチウム

【化22】

【0127】

粗(2S)-2-アミノ-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸エチルエステル（中間体１）（５．７３ｇ、１８．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（３．１３ｍＬ、２２．４ｍｍｏｌ）と二炭酸ジ-tert-ブチル（４．４９ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。粗生成物を減圧下で濃縮し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に溶解し、０．５Ｎ ＨＣｌ（２００ｍＬ）で洗浄した。２つの相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（２× ５０ｍＬ）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させた。Ｅｔ_２Ｏ（１５０ｍＬ）を加えると、固体が沈殿し始めた。フラスコを０℃に冷却し、３０分間放置した。固体をろ過により集め、冷Ｅｔ_２Ｏ（３× ５０ｍＬ）で洗浄した。固体を減圧下で乾燥して、(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸エチルエステルを薄黄色の固体として得た（４．７０ｇ、１１．６ｍｍｏｌ、３工程の収率５５％）。ＨＰＬＣ純度：９６％、MS (ESI+) m/z = 407 [M+H]⁺。

【0128】

(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸エチルエステル（１．４７ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２０ｍＬ）溶液に、水（５ｍＬ）とＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ（０．１５９ｇ、３．８０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。粗生成物(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸リチウム（中間体２）を、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：１００％；MS (ESI+) m/z = 379 [M(カルボン酸)+H]⁺。

【0129】

中間体３ (2S)-2-アミノ-3-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)プロパン酸エチルエステル

【化23】

【0130】

中間体３は、出発物質として(3S)-3-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メトキシ-4-オキソ-ブタン酸を使用したこと以外は中間体１と同じ手順で合成した：

【0131】

工程１ 粗生成物(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-[2-(メチルアミノ)-5-ニトロ-アニリノ]-4-オキソ-ブタン酸メチルエステルを、茶色の固体として単離した（収率７１％）。ＨＰＬＣ純度：７１％；m/z = 341 (M+H-tBu)⁺。

【0132】

工程２ (2S)-2-アミノ-3-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)プロパン酸エチルエステル（中間体３）を黄色がかったオレンジ色の固体として単離した（収率９８％）。ＨＰＬＣ純度：９１％；m/z = 293 (M+H)⁺。

【0133】

中間体４ (2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)プロパン酸リチウム

【化24】

【0134】

中間体４は、出発物質として(2S)-2-アミノ-3-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)プロパン酸エチルエステル（中間体３）を使用したこと以外は中間体１と同じ手順で合成した。

【0135】

工程１ 粗生成物(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)プロパン酸エチルエステルを茶色の固体として単離した（収率８３％）。ＨＰＬＣ純度：９７％；m/z = 393 [M+H]⁺。

【0136】

工程２ (2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)プロパン酸リチウム（中間体４）を黄色がかったオレンジ色の固体として単離した（定量的）。ＨＰＬＣ純度：９１％；m/z = 365 [M(カルボン酸)+H]⁺。

【0137】

実施例１ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１）

【化25】

【0138】

工程１ (2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；塩酸塩（０．５８１ｇ、２．９７ｍｍｏｌ）、(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸リチウム（中間体２）（１．０４ｇ、２．７０ｍｍｏｌ）及び1-メチルイミダゾール（０．４５２ｍＬ、５．６７ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（３０ｍＬ）溶液に、[クロロ(ジメチルアミノ)メチレン]-ジメチル-アンモニウム；六フッ化リン酸（０．８３４ｇ、２．９７ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。反応物をクエン酸溶液（１０％水溶液）でクエンチし、揮発性の物質を蒸発させた。粗生成物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（×３）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させた。粗生成物をシリカクロマトグラフィー（ＤＣＭ-->ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０％））で精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステルを薄黄色の泡状物として得た（１．２７ｇ、２．４４ｍｍｏｌ、収率９０％）。ＨＰＬＣ純度：９６％；MS (ESI+) m/z = 520 [M+H]⁺。

【0139】

工程２ (2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（１．２７ｇ、０．００２４４ｍｏｌ）をＥｔＯＨ（３０ｍＬ）に溶解し、Ｈ反応器に入れた。Ｐｄ／Ｃ（１０％、０．１３０ｇ、０．０００１２２ｍｏｌ）を加え、反応器を密閉した。窒素パージを行った。水素ガスを３バールで反応器に充填し、反応物を３５℃で１．５時間撹拌した。水素ガスを窒素パージで排気した。触媒をセライトろ過により除去した。溶媒を蒸発させ、粗生成物(2S)-2-[[(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステルを単離し（０．６７０ｇ、１．３７ｍｍｏｌ、収率８５％）、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９３％；MS (ESI+) m/z = 490 [M+H]⁺。

【0140】

工程３ (2S)-2-[[(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（６７０ｍｇ、０．００１３７ｍｏｌ）を酢酸（５ｍＬ）に溶解し、オキシラン（２．３０ｍｏｌ／Ｌ、５．９５ｍＬ、０．０１３７ｍｏｌ）を加え、反応物を室温で２４時間撹拌した。揮発性の物質を真空で除去し、粗製の物質をＤＣＭに溶解し、ＮａＨＣＯ_３の飽和水溶液で洗浄した。有機相を水とブラインで洗浄し、相分離器に通過させ、濃縮した。粗生成物をシリカクロマトグラフィー（ＤＣＭ-->ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０％））で精製して、(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステルを淡い白色の泡状物として得た（０．３４０ｇ、０．５８９ｍｍｏｌ、収率４３％）。ＨＰＬＣ純度：９６％；MS (ESI+) m/z = 578 [M+H]⁺。

【0141】

工程４ (2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（３４０ｍｇ、０．５８９ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．２３８ｇ、２．３５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、塩化メシル（０．１４１ｍＬ、１．８２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２０分間撹拌し、次いで、ＮａＨＣＯ_３（ｓａｔ）：水（２／５）（２０ｍＬ）、０．３Ｍ ＨＣｌ（２０ｍＬ）及びブライン（２０ｍＬ）の混合物で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させた。

【0142】

ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の粗混合物（メシル化中間体）と塩化リチウム（０．３７４ｇ、８．８３ｍｍｏｌ）を６０℃で２．５時間加熱した。反応混合物をトルエン（４０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）の混合物で希釈し、次いでブライン（３× ５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、溶媒を蒸発させて粗製の残留物を得た。粗生成物を、溶出剤としてＤＣＭ-->ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（５％）を使用してフラッシュクロマトグラフィーで精製した。目的化合物、(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステルを薄黄色の泡状物として得た（０．３０８ｇ、０．４８１ｍｍｏｌ、収率８２％）。メシル化中間体のＨＰＬＣ：MS (ESI+) m/z = 734 [M+H]⁺。目的の生成物のＨＰＬＣ純度：９６％；MS (ESI+) m/z = 614 [M+H]⁺。

【0143】

工程５ (2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（３０８ｍｇ、０．４７６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１５ｍＬ）溶液に、ジオキサン中の塩酸（４Ｍ）（４．００ｍｏｌ／Ｌ、１．７９ｍＬ、７．１４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。溶媒を蒸発させて粗生成物を得、Ｅｔ_２Ｏ中で撹拌した。得られたオフホワイトの固体をろ過し、Ｅｔ_２Ｏ（２× １０ｍＬ）で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）で洗浄し、真空で乾燥させて、最終生成物(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１）をオフホワイトの固体として得た（０．１７０ｇ、０．２７２ｍｍｏｌ、収率５７％）。ＨＰＬＣ純度：９５％。MS (ESI+) m/z = 514 [M+H]⁺。

【0144】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.86 (br s, 1H), 9.31 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 5.3 Hz, 3H), 7.75 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 9.4, 2.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.34 - 4.27 (m, 1H), 4.15 - 4.06 (m, 3H), 3.91 (s, 3H), 3.83 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 3.78 (t, J = 6.9 Hz, 4H), 3.43 - 3.30 (m, 2H), 2.41 - 2.25 (m, 2H), 1.81 - 1.71 (m, 1H), 1.64 (ddd, J = 13.7, 10.4, 5.1 Hz, 1H), 1.54 (ddd, J = 13.8, 9.2, 4.7 Hz, 1H), 1.18 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。

【0145】

実施例１は、実施例４６に記載した手順でも合成した。

【0146】

実施例２ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２）

【化26】

【0147】

表題化合物を、実施例１に記載の方法により５工程で製造した。

【0148】

工程１ (2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステルを白色の固体として単離した（５．１４ｇ、８．９９ｍｍｏｌ、収率８６％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 572 [M+H]⁺。

【0149】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6, 回転異性体の存在) δ 8.44 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.37 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 8.9, 2.2 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 8.4, 5.6 Hz, 2H), 7.10 - 7.01 (m, 3H), 4.51 - 4.44 (m, 1H), 4.10 - 4.04 (m, 1H), 4.02 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.06 - 2.92 (m, 2H), 2.92 - 2.83 (m, 2H), 2.13 - 2.02 (m, 2H), 1.37 (s, 8H, 主たる回転異性体), 1.21 (s, 1H, 従たる回転異性体), 1.08 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。

【0150】

工程２ 粗生成物(2S)-2-[[(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステルを薄黄色の泡状物として単離した（４．８３ｇ、０．００８９２ｍｏｌ、収率９３％）。粗生成物を次の工程で直接使用した。ＨＰＬＣ純度：９６％；MS (ESI+) m/z = 542 [M+H]⁺。

【0151】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6, 回転異性体の存在) δ 8.49 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 8.5, 5.7 Hz, 2H), 7.14 - 7.03 (m, 4H), 6.69 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.53 (dd, J = 8.5, 2.1 Hz, 1H), 4.68 (s, 2H), 4.49 - 4.41 (m, 1H), 4.07 - 3.98 (m, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.07 - 2.94 (m, 2H), 2.82 - 2.70 (m, 2H), 2.08 - 1.98 (m, 1H), 1.98 - 1.87 (m, 1H), 1.37 (s, 8H, 主たる回転異性体), 1.19 (s, 1H, 従たる回転異性体), 1.13 - 1.03 (m, 3H)。

【0152】

工程３ 目的の生成物、(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステルを白色の固体として単離した（３．００ｇ、４．７６ｍｍｏｌ、収率５４％）。ＨＰＬＣ純度：１００％、MS (ESI+) m/z = 630 [M+H]⁺。

【0153】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6, 回転異性体の存在) δ 8.47 - 8.43 (m, 1H), 7.30 - 7.23 (m, 3H), 7.13 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 6.82 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.73 - 6.69 (m, 1H), 4.71 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 4.46 (q, J = 7.4 Hz, 1H), 4.07 - 3.98 (m, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.53 (q, J = 6.2 Hz, 4H), 3.42 - 3.35 (m, 4H), 3.07 - 2.93 (m, 2H), 2.80 - 2.74 (m, 2H), 2.09 - 2.00 (m, 1H), 2.00 - 1.92 (m, 1H), 1.37 (s, 8H, 主たる回転異性体), 1.20 (s, 1H, 従たる回転異性体), 1.11 - 1.05 (m, 3H)。

【0154】

工程４ 粗生成物をビュッヒ自動フラッシュシステム（８０ｇカラム、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００：０～９２：８）で精製し、(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステルを薄黄色の固体として得た（１．６０ｇ、２．４０ｍｍｏｌ、収率５０％）。ＨＰＬＣ純度：９７％、MS (ESI+) m/z = 666 [M+H]⁺。

【0155】

工程５ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２）をオフホワイトの固体として単離した（１．４６ｇ、２．２８ｍｍｏｌ、収率９５％）。ＨＰＬＣ純度：９７％、MS (ESI+) m/z = 566 [M+H]⁺。

【0156】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.75 (br s, 1H), 9.42 - 9.38 (m, 1H), 8.56 (s, 3H), 7.75 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 8.5, 5.6 Hz, 2H), 7.18 - 7.09 (m, 3H), 6.93 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 4.52 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.11 - 4.00 (m, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.85 - 3.82 (m, 4H), 3.79 - 3.76 (m, 4H), 3.41 - 3.26 (m, 2H), 3.10 - 3.01 (m, 2H), 2.36 - 2.27 (m, 2H), 1.11 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。

【0157】

実施例３ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物３）

【化27】

【0158】

表題化合物を、実施例１に記載の方法により５工程で製造した。

【0159】

工程１ (2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステルを薄黄色の泡状物として単離した（１．２７ｇ、２．２７ｍｍｏｌ、収率８４％）。ＨＰＬＣ純度：９３％、MS (ESI+) m/z = 506 [M+H]⁺。

【0160】

工程２ 粗生成物(2S)-2-[[(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステルをベージュ色の固体として得（１．２ｇ、収率９７％）、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９７％、MS (ESI+) m/z = 476 [M+H]⁺。

【0161】

工程３ (2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステルを茶色のオイル状物として得（１．３８ｇ、収率９８％）、これは静置すると固化した。化合物を、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９８％、MS (ESI+) m/z = 564 [M+H]⁺。

【0162】

工程４ 目的の化合物、(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステルを茶色のオイル状物として得た（８３６ｍｇ、収率６５％）。ＨＰＬＣ純度：９３％、MS (ESI+) m/z = 600 [M+H]⁺。メシル化中間体のＨＰＬＣ：MS (ESI+) m/z = 720 [M+H]⁺。

【0163】

工程５ (2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステル（純度９３％、２１６ｍｇ、０．３３４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２ｍＬ）溶液に、ジオキサン中の塩酸（４．００ｍｏｌ／Ｌ、０．８３６ｍＬ、３．３４ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で３時間撹拌した。粗生成物を蒸発させ、分取クロマトグラフィー（酸性緩衝液）で精製した。ＬＣ－ＭＳ分析を行うまで、得られた画分を氷浴した。ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ、１ｍＬ）を加え、試料を直ちに凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物３）をほんのり淡いピンクの固体として得た（５４ｍｇ、収率２８％）。ＨＰＬＣ純度：９８％、MS (ESI+) m/z = 500 [M+H]⁺。

【0164】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.78 (s, 1H), 9.07 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 8.67 - 8.50 (m, 3H), 7.75 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 7.3, 5.5 Hz, 2H), 4.18 - 4.07 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.83 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 3.78 (t, J = 6.2 Hz, 4H), 3.33 (dq, J = 24.7, 8.5 Hz, 2H), 2.40 - 2.22 (m, 2H), 2.14 (ddt, J = 14.0, 12.5, 6.9 Hz, 1H), 1.19 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.97 (dd, J = 6.9, 5.4 Hz, 6H)。

【0165】

実施例４ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物４）

【化28】

【0166】

表題化合物を、実施例１に記載の方法により５工程で製造した。

【0167】

工程１ (2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（１．３６ｇ、２．４２ｍｍｏｌ、収率８９％）を薄黄色の泡状物として単離した。ＨＰＬＣ純度：９０％、MS (ESI+) m/z = 506 [M+H]⁺。

【0168】

工程２ 粗生成物(2S)-2-[[(2S)-3-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステルを黄色のオイル状物として単離し（１．４７ｇ、２．７８ｍｍｏｌ、収率１００％）、更に精製することなく次の工程で直接使用した。ＨＰＬＣ純度：９０％、MS (ESI+) m/z = 476 [M+H]⁺。

【0169】

工程３ 粗生成物(2S)-2-[[(2S)-3-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステルを茶色の固体として得た（１．５０ｇ、２．４２ｍｍｏｌ、収率８６％）。ＨＰＬＣ純度：９１％、MS (ESI+) m/z = 564 [M+H]⁺。

【0170】

工程４ (2S)-2-[[(2S)-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステルを黄色のオイル状物として単離した（０．５５０ｇ、０．８７０ｍｍｏｌ、収率３３％）。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 600 [M+H]⁺。メシル化中間体のＨＰＬＣ：MS (ESI+) m/z = 720 [M+H]⁺。

【0171】

工程５ (2S)-2-[[(2S)-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（９５％、２００ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１５ｍＬ）溶液に、ジオキサン中の塩酸（４Ｍ）（４．００ｍｏｌ／Ｌ、１．１９ｍＬ、４．７５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させることで粗生成物を得、分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物４）を白色の固体として得た（０．１１２ｇ、０．１８９ｍｍｏｌ、収率６０％）。ＨＰＬＣ純度：１００％、MS (ESI+) m/z = 500 [M+H]⁺。

【0172】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.75 (br s, 1H), 9.29 (dd, J = 7.8, 2.5 Hz, 1H), 8.86 (s, 3H), 7.78 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 9.4, 2.4 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.34 (ddd, J = 10.0, 7.5, 4.9 Hz, 1H), 4.06 - 4.01 (m, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.90 - 3.74 (m, 9H), 3.65 (dd, J = 15.4, 6.6 Hz, 1H), 1.72 (ddd, J = 11.9, 7.9, 5.9 Hz, 1H), 1.56 (ddd, J = 13.7, 10.0, 5.2 Hz, 1H), 1.50 (ddd, J = 13.9, 9.0, 5.0 Hz, 1H), 1.15 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.88 (dd, J = 16.2, 6.6 Hz, 6H)。

【0173】

実施例５ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物５）

【化29】

【0174】

表題化合物を、実施例１に記載の方法により５工程で製造した。

【0175】

工程１ (2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)プロパノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステルを薄黄色の泡状物として単離した（１．３６ｇ、２．１９ｍｍｏｌ、収率８１％）。ＨＰＬＣ純度：９０％、MS (ESI+) m/z = 558 [M+H]⁺。

【0176】

工程２ 粗生成物(2S)-2-[[(2S)-3-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステルをオフホワイトの固体として得（９５４ｍｇ、収率７３％）、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９８％、MS (ESI+) m/z = 528 [M+H]⁺。

【0177】

工程３ 粗生成物(2S)-2-[[(2S)-3-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステルを茶色のオイル状物として得（９６４ｍｇ、収率８５％）、これは静置すると固化した。化合物を、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９６％、MS (ESI+) m/z = 616 [M+H]⁺。

【0178】

工程４ (2S)-2-[[(2S)-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステルを黄色のオイル状物として単離した（０．６３５ｇ、０．９２４ｍｍｏｌ、収率６９％）。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 652 [M+H]⁺。ＨＰＬＣメシル化中間体：MS (ESI+) m/z = 772 [M+H]⁺。

【0179】

工程５ 粗生成物を分取ＨＰＬＣ（酸性条件；流速２５ｍＬ／分、１２％Ｂから４２％Ｂまで１５分間の勾配。２３９ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製した。ジオキサン中の４ＮのＨＣｌ（１ｍＬ）を合わせた画分に加え、凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物５）をオフホワイトの固体として得た（７８ｍｇ、０．１２１ｍｍｏｌ、収率１３％）。ＨＰＬＣ純度：９７％、MS (ESI+) m/z = 552 [M+H]⁺。

【0180】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.66 (br s, 1H), 9.31 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.79 (s, 3H), 7.81 - 7.67 (m, 1H), 7.33 - 7.28 (m, 2H), 7.15 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.12 - 7.06 (m, 2H), 6.88 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.59 (p, J = 8.4, 7.7 Hz, 1H), 4.41 (s, 1H), 4.01 (dddd, J = 13.6, 10.8, 7.2, 3.8 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.84 (ddt, J = 23.1, 12.2, 6.2 Hz, 4H), 3.77 (ddd, J = 9.3, 7.2, 4.8 Hz, 5H), 3.63 (s, 1H), 3.05 - 2.95 (m, 2H), 1.10 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。

【0181】

実施例６ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物６）

【化30】

【0182】

表題化合物を、実施例１に記載の方法により５工程で製造した。

【0183】

工程１ 目的の生成物、(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)プロパノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステルを薄黄色の泡状物として単離した（０．９９２ｇ、１．８２ｍｍｏｌ、収率６７％）。ＨＰＬＣ純度：９０％、MS (ESI+) m/z = 492 [M+H]⁺。

【0184】

工程２ 粗生成物(2S)-2-[[(2S)-3-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステルを茶色のオイル状物として得（９３１ｍｇ、収率９８％）、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９８％、MS (ESI+) m/z = 462 [M+H]⁺。

【0185】

工程３ 粗生成物(2S)-2-[[(2S)-3-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステルを黄色のオイル状物として得（０．８４８ｇ、１．３９ｍｍｏｌ、収率７０％）、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９０％、MS (ESI+) m/z = 550 [M+H]⁺。

【0186】

工程４ (2S)-2-[[(2S)-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステルを黄色のオイル状物として単離した（０．２１０ｇ、０．３４０ｍｍｏｌ、収率２２％）。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 586 [M+H]⁺。ＨＰＬＣメシル化中間体：MS (ESI+) m/z = 706 [M+H]⁺。

【0187】

工程５ 粗生成物を分取ＨＰＬＣ（流速２５ｍＬ／分、８％Ｂから３８％Ｂまで１５分間の勾配。２３９ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製し、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物６）をオフホワイトの固体として得た（８５ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ、収率４３％）。ＨＰＬＣ純度：９７％、MS (ESI+) m/z = 486 [M+H]⁺。

【0188】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.77 (br s, 1H), 9.04 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.85 (s, 3H), 7.78 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 9.6, 2.3 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.59 (s, 1H), 4.26 (dd, J = 7.9, 5.5 Hz, 1H), 4.07 - 3.99 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.89 - 3.75 (m, 9H), 3.59 (dd, J = 15.5, 6.8 Hz, 1H), 2.12 - 2.03 (m, 1H), 1.15 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 6.8 Hz, 6H)。

【0189】

実施例７ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物７）

【化31】

【0190】

工程１ (2S)-2-アミノ-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸エチルエステル（中間体１）（１．００ｇ、３．２６ｍｍｏｌ）、(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタン酸；水和物（０．８１４ｇ、３．２６ｍｍｏｌ）及び1-メチルイミダゾール（０．５４６ｍＬ、６．８６ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（３０ｍＬ）溶液に、[クロロ(ジメチルアミノ)メチレン]-ジメチル-アンモニウム；六フッ化リン酸（１．０１ｇ、３．５９ｍｍｏｌ）室温で加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。反応物をクエン酸溶液（１０％水溶液）でクエンチし、揮発性の物質を蒸発させた。粗生成物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（×３）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させた。粗生成物をシリカクロマトグラフィー（ＤＣＭ-->ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０％））で精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸エチルエステルを薄黄色の泡状物として得た（９０％、１．４７ｇ、２．５４ｍｍｏｌ、収率７８％）。ＨＰＬＣ純度：90％；MS (ESI+) m/z = 520 [M+H]⁺。

【0191】

工程２ (2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸エチルエステル（１．４７ｇ、０．００２８３ｍｏｌ）をＥｔＯＨ（３０ｍＬ）に溶解し、Ｈ反応器に入れた。Ｐｄ／Ｃ（１０％、０．１５１ｇ、０．０００１４１ｍｏｌ）を加え、反応器を密閉した。窒素パージを行った。水素ガスを３バールで反応器に充填し、反応物を３５℃で１．５時間撹拌した。水素ガスを窒素パージで排気した。触媒をセライトろ過により除去した。溶媒を蒸発させ、粗生成物(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステルを茶色の泡状物として得（１．２０ｇ、２．２１ｍｍｏｌ、収率７８％）、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９０％；MS (ESI+) m/z = 490 [M+H]⁺。

【0192】

工程３ (2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステル（１．２６ｇ、２．４５ｍｍｏｌ、純度９５％）を酢酸（５ｍＬ）に溶解した。オキシラン（２．３Ｍ、１０．６ｍＬ）を加え、反応物を室温で２４時間撹拌した。揮発性の物質を真空で除去し、粗製の物質をＤＣＭに溶解し、ＮａＨＣＯ_３の飽和水溶液で洗浄した。有機相を水とブラインで洗浄し、相分離器カートリッジに通過させ、濃縮し、(2S)-4-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステルを茶色のオイル状物として得（１．３８ｇ、収率９３％）、これは静置すると固化した。生成物を更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 578 [M+H]⁺。

【0193】

工程４ (2S)-4-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステル（１．３８ｇ、２．２７ｍｍｏｌ、純度９５％）とトリエチルアミン（１．２７ｍＬ、９．０８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に、塩化メシル（０．５４４ｍＬ、７．０３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１０分間撹拌した。反応混合物を、ＮａＨＣＯ_３（飽和）：水（２：５）（１００ｍＬ）、０．３ＭのＨＣｌ（１００ｍＬ）及びブライン（１００ｍＬ）の混合物で洗浄した。有機相を相分離カートリッジに通過させ、減圧下で蒸発させた。粗生成物(2S)-4-[5-[ビス(2-メチルスルホニルオキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステルを、更に精製することなく次の工程で直ちに使用した。

【0194】

(2S)-4-[5-[ビス(2-メチルスルホニルオキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステル（１．８２ｇ、１．６４ｍｍｏｌ、純度６６％）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。ＬｉＣｌ（１．０４ｇ、２４．６ｍｍｏｌ）を加え、反応物を６０℃で１時間加熱した。反応混合物を、トルエン（１０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）の混合物で希釈し、次いでブライン（３× ２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、蒸発させた。得られた粗生成物を、ＤＣＭ中の酢酸エチルの０～２０％の勾配を使用するフラッシュクロマトグラフィーで精製した。目的の化合物を含む画分を合わせて濃縮し、(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステルを茶色のオイル状物として得た（６５２ｍｇ、収率６２％）。メシル化中間体のＨＰＬＣ：MS (ESI+) m/z = 734 [M+H]⁺。目的の生成物のＨＰＬＣ純度：９６％；MS (ESI+) m/z = 614 [M+H]⁺。

【0195】

工程５ (2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステル（２０５ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ、純度９５％）のＥｔＯＨ（２ｍＬ）溶液に、ジオキサン中の塩酸（４．００ｍｏｌ／Ｌ、１．１９ｍＬ、４．７５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２５℃で３時間撹拌した。溶媒を蒸発させることで粗生成物を得、分取クロマトグラフィー（酸性緩衝液；流速２５ｍＬ／分、７％Ｂから３７％Ｂまで１５分間の勾配。２３５ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製した。ＬＣ－ＭＳ分析を行うまで、画分を氷浴した。ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ、１ｍＬ）を加え、試料を直ちに凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物７）を黄色のオイル状物として得た（５０ｍｇ、収率２６％）。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 514 [M+H]⁺。

【0196】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.41 (s, 1H), 9.04 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 5.3 Hz, 3H), 7.74 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 9.4, 2.3 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.51 (ddd, J = 9.6, 8.0, 4.9 Hz, 2H), 4.10 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.84 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 3.78 (t, J = 6.9 Hz, 4H), 3.18 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 2.42 - 2.32 (m, 1H), 2.19 - 2.09 (m, 1H), 1.70 (dp, J = 13.4, 6.8 Hz, 1H), 1.61 (dt, J = 13.9, 7.0 Hz, 1H), 1.55 (dt, J = 14.1, 7.5 Hz, 1H), 1.19 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.92 (dd, J = 16.4, 6.5 Hz, 6H)。

【0197】

実施例８ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物８）

【化32】

【0198】

表題化合物を、実施例７に記載の方法により５工程で製造した。

【0199】

工程１ (2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸エチルエステルを薄黄色の泡状物として単離した（１．８７ｇ、２．９４ｍｍｏｌ、収率９０％）。
ＨＰＬＣ純度：９０％、MS (ESI+) m/z = 572 [M+H]⁺。

【0200】

工程２ 粗生成物(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステルを薄黄色の固体として得（１．７８ｇ、収率９０％）、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９０％、MS (ESI+) m/z = 542 [M+H]⁺。

【0201】

工程３ 粗生成物(2S)-4-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステルを薄茶色の固体として得た（１．７４ｇ、収率８６％）。化合物を、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９２％、MS (ESI+) m/z = 630 [M+H]⁺。

【0202】

工程４ (2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステルを茶色のオイル状物として単離した（６２８ｍｇ、収率３７％）。ＨＰＬＣ純度：９２％、MS (ESI+) m/z = 666 [M+H]⁺。ＨＰＬＣメシル化中間体：MS (ESI+) m/z = 786 [M+H]⁺。

【0203】

工程５ 粗生成物を分取ＨＰＬＣ（酸性条件；流速２５ｍＬ／分、１１％Ｂから４０％Ｂまで１５分間の勾配。２３５ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製した。ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ、１ｍＬ）を合わせた画分に加え、試料を直ちに凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物８）をオフホワイトの固体として得た（３５ｍｇ、収率２３％）。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 566 [M+H]⁺。

【0204】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.61 (s, 1H), 9.57 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.40 (d, J = 5.5 Hz, 3H), 7.75 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.45 - 7.36 (m, 2H), 7.15 (dtd, J = 9.4, 7.4, 6.9, 2.3 Hz, 3H), 6.91 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.44 (ddd, J = 9.5, 7.6, 4.3 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.08 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.83 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 3.78 (t, J = 6.1 Hz, 4H), 3.36 - 3.25 (m, 2H), 3.19 (dd, J = 14.0, 5.7 Hz, 1H), 2.98 (dd, J = 14.0, 8.0 Hz, 1H), 2.40 - 2.31 (m, 1H), 2.17 (dtd, J = 14.6, 9.5, 5.5 Hz, 1H), 1.18 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。

【0205】

実施例９ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物９）

【化33】

【0206】

表題化合物を、実施例７に記載の方法により５工程で製造した。

【0207】

工程１ (2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸エチルエステルを薄黄色の泡状物として単離した（０．７５７ｇ、１．３５ｍｍｏｌ、収率４１％）。ＨＰＬＣ純度：９０％、MS (ESI+) m/z = 506 [M+H]⁺。

【0208】

工程２ 粗生成物(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-メチル-ブタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステルを薄茶色の固体として得（０．６４２ｇ、１．２８ｍｍｏｌ、収率８６％）、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 476 [M+H]⁺。

【0209】

工程３ 粗生成物(2S)-4-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-メチル-ブタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステルを茶色のオイル状物として得（０．６８５ｇ、１．０９ｍｍｏｌ、収率８５％）、これは静置すると固化した。化合物を、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９０％、MS (ESI+) m/z = 564 [M+H]⁺。

【0210】

工程４ (2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-メチル-ブタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステルを薄茶色のオイル状物として単離した（０．４０２ｇ、０．６２３ｍｍｏｌ、収率５８％）。ＨＰＬＣ純度：９３％、MS (ESI+) m/z = 600 [M+H]⁺。ＨＰＬＣメシル化中間体：MS (ESI+) m/z = 720 [M+H]⁺。

【0211】

工程５ 粗生成物を蒸発させ、分取クロマトグラフィー（酸性緩衝液；流速２５ｍＬ／分、７％Ｂから３６％Ｂまで１５分間の勾配。２３５ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製した。得られた画分を氷浴し、ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ、１ｍＬ）を加え、試料を直ちに凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物９）をオフホワイトの固体として得た（１２ｍｇ、収率６．３％）。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 500 [M+H]⁺。

【0212】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.70 (s, 1H), 9.37 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 5.7 Hz, 3H), 7.75 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 9.3, 2.4 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.46 (ddd, J = 10.0, 7.6, 4.0 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.83 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 3.80 - 3.77 (m, 4H), 3.74 - 3.63 (m, 1H), 3.52 - 3.41 (m, 1H), 3.31 (ddd, J = 15.9, 9.6, 6.8 Hz, 1H), 2.37 (dt, J = 13.3, 4.9 Hz, 1H), 2.20 - 2.10 (m, 2H), 1.18 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.04 - 0.94 (m, 6H)。

【0213】

実施例１０ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１０）

【化34】

【0214】

表題化合物を、実施例７に記載の方法により５工程で製造した。

【0215】

工程１ (2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)プロパン酸エチルエステルを薄黄色の泡状物として単離した（１．６８ｇ、２．９９ｍｍｏｌ、収率８７％）。ＨＰＬＣ純度：９０％、MS (ESI+) m/z = 506 [M+H]⁺。

【0216】

工程２ 粗生成物(2S)-3-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]プロパン酸エチルエステルを茶色のオイル状物として得（１．５０ｇ、２．９０ｍｍｏｌ、収率８７％）、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９２％、MS (ESI+) m/z = 476 [M+H]⁺。

【0217】

工程３ 粗生成物(2S)-3-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]プロパン酸エチルエステル（１．２０ｇ、１．６０ｍｍｏｌ、収率５２％）を茶色の固体として得た。ＨＰＬＣ純度：７５％、MS (ESI+) m/z = 564 [M+H]⁺。

【0218】

工程４ (2S)-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]プロパン酸エチルエステルを黄色のオイル状物として単離した（０．４３０ｇ、０．６８０ｍｍｏｌ、収率３２％）。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 600 [M+H]⁺。ＨＰＬＣメシル化中間体：MS (ESI+) m/z = 720 [M+H]⁺。

【0219】

工程５ 粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（酸性条件；流速２５ｍＬ／分、６％Ｂから３６％Ｂまで１５分間の勾配。２３７ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製した。ジオキサン中の４ＮのＨＣｌ（１ｍＬ）を合わせた画分に加え、凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１０）を白色の固体として得た（０．１０２ｇ、０．１６９ｍｍｏｌ、収率５３％）。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 500 [M+H]⁺。

【0220】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.85 (br s, 1H), 9.56 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.40 (s, 3H), 7.76 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 5.02 (q, J = 7.6 Hz, 1H), 4.12 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.87 - 3.73 (m, 9H), 3.67 (dd, J = 15.8, 6.1 Hz, 1H), 3.58 (dd, J = 15.6, 8.2 Hz, 1H), 1.64 (dt, J = 13.4, 6.7 Hz, 1H), 1.52 (hept, J = 6.8 Hz, 2H), 1.14 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.87 (dd, J = 9.5, 6.5 Hz, 6H)。

【0221】

実施例１１ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１１）

【化35】

【0222】

表題化合物を、実施例７に記載の方法により５工程で製造した。

【0223】

工程１ (2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-3-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)プロパン酸エチルエステルを薄黄色の固体として単離した（０．７９４ｇ、１．１４ｍｍｏｌ、収率２９％）。ＨＰＬＣ純度：８０％、MS (ESI+) m/z = 558 [M+H]⁺。

【0224】

工程２ 粗生成物(2S)-3-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]プロパン酸エチルエステルを薄茶色の固体として得（７７２ｍｇ、収率９３％）、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９１％、MS (ESI+) m/z = 528 [M+H]⁺。

【0225】

工程３ 粗生成物(2S)-3-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]プロパン酸エチルエステルを茶色のオイル状物として得（８１７ｍｇ、収率９１％）、これは静置すると固化した。化合物を、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 616 [M+H]⁺。

【0226】

工程４ (2S)-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]プロパン酸エチルエステルを茶色のオイル状物として単離した（４４９ｍｇ、収率５１％）。ＨＰＬＣ純度：８６％、MS (ESI+) m/z = 652 [M+H]⁺。ＨＰＬＣメシル化中間体：MS (ESI+) m/z = 772 [M+H]⁺。

【0227】

工程５ 粗生成物を分取クロマトグラフィー（酸性緩衝液；流速２５ｍＬ／分、１０％Ｂから４０％Ｂまで１５分間の勾配。２３７ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製した。ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ、１ｍＬ）を合わせた画分に加え、試料を直ちに凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１１）をオフホワイトの固体として得た（１２ｍｇ、収率１５％）。ＨＰＬＣ純度：９６％、MS (ESI+) m/z = 552 [M+H]⁺。

【0228】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.73 (s, 1H), 9.64 (s, 1H), 8.32 (s, 3H), 7.77 - 7.67 (m, 1H), 7.33 (dt, J = 9.6, 4.9 Hz, 2H), 7.14 (t, J = 8.7 Hz, 3H), 6.94 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.98 (q, J = 7.5 Hz, 1H), 4.12 (dtt, J = 10.8, 6.7, 3.7 Hz, 3H), 3.96 (s, 3H), 3.83 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 3.77 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 3.14 (dd, J = 14.1, 6.0 Hz, 1H), 2.97 (dd, J = 14.1, 7.8 Hz, 1H), 1.13 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.87 - 0.81 (m, 2H)。

【0229】

実施例１２ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１２）

【化36】

【0230】

表題化合物を、実施例７に記載の方法により５工程で製造した。

【0231】

工程１ (2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-3-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)プロパン酸エチルエステルを黄色の固体として単離した（０．４２８ｇ、０．７８４ｍｍｏｌ、収率２３％）。ＨＰＬＣ純度：９０％、MS (ESI+) m/z = 492 [M+H]⁺。

【0232】

工程２ 粗生成物(2S)-3-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-メチル-ブタノイル]アミノ]プロパン酸エチルエステルを黄色の固体として得（３９３ｍｇ、収率９３％）、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 462 [M+H]⁺。

【0233】

工程３ 粗生成物(2S)-3-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-メチル-ブタノイル]アミノ]プロパン酸エチルエステルを茶色の固体として得た（０．３０５ｇ、０．４９９ｍｍｏｌ、収率５８％）。化合物を、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９０％、MS (ESI+) m/z = 550 [M+H]⁺。

【0234】

工程４ (2S)-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-メチル-ブタノイル]アミノ]プロパン酸エチルエステルを黄色のオイル状物として単離した（０．１６８ｇ、０．２７２ｍｍｏｌ、収率３７％）。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 586 [M+H]⁺。ＨＰＬＣメシル化中間体：MS (ESI+) m/z = 706 [M+H]⁺。

【0235】

工程５ 粗生成物を蒸発させ、分取ＨＰＬＣ（酸性条件；流速２５ｍＬ／分、５％Ｂから３４％Ｂまで１５分間の勾配。２３８ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製した。ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ、１ｍＬ）を合わせた画分に加え、溶液を直ちに凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１２）を得た（４５ｍｇ、０．０７２４ｍｍｏｌ、収率２７％）。ＨＰＬＣ純度：９０％、MS (ESI+) m/z = 486 [M+H]⁺。

【0236】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 13.82 (br s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.49 - 7.30 (m, 3H), 6.85 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.15 (q, J = 7.4 Hz, 1H), 3.22 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.06 (s, 3H), 2.96 - 2.86 (m, 8H), 2.80 (dt, J = 9.3, 4.1 Hz, 2H), 2.66 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 1.22 (dq, J = 13.4, 6.7 Hz, 1H), 0.23 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.11 - 0.00 (m, 6H)。

【0237】

実施例１３ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；塩酸塩（実施例化合物１３）

【化37】

【0238】

実施例１３を以下のスキーム４に従い行った。

【化38】

【0239】

スキーム４： ａ） ＴＥＡ、ＭｅＯＨ、６０℃、ｂ） 亜ジチオン酸ナトリウム、ＥｔＯＨ、８０℃、ｃ） ＨＡＴＵ、ＴＥＡ、ＤＭＦ、室温、ｄ） １２Ｍ ＨＣｌ、ＥｔＯＨ、７０℃、ｅ） ＢＯＣ_２Ｏ、ＴＥＡ、ＴＨＦ、室温、ｆ） ＬｉＯＨ－Ｈ_２Ｏ、1,4-ジオキサン、水、５０℃、ｇ） ＨＡＴＵ、ＴＥＡ、ＤＭＦ、室温、ｈ） Ｐｄ／Ｃ１０％、水素ガス雰囲気、ＥｔＯＨ、室温、ｉ） ＮａＢＨ３ＣＮ、ＴＦＡ、ＥｔＯＨ、室温、ｊ） ＴＦＡ、ＤＣＭ、次いで１２Ｍ ＨＣｌ、室温。

【0240】

2,4-ジニトロ-N-フェニル-アニリン（化合物１３－３）
ＴＥＡ（６．１９ｍＬ、４４．４ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の1-クロロ-2,4-ジニトロ-ベンゼン（３．００ｇ、１４．８ｍｍｏｌ、化合物１３－２）とアニリン（１．３５ｍＬ、１４．８ｍｍｏｌ、化合物１３－１）に加えた。反応物を６０℃で終夜撹拌した。反応物の加熱を中止すると薄いレンガ色の固体が得られた。固体をろ別し、氷冷ＭｅＯＨで洗浄して表題化合物を得た（３．２６ｇ、１２．５４ｍｍｏｌ、収率８５％）。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 260 [M+H]⁺。

【0241】

4-ニトロ-N1-フェニル-ベンゼン-1,2-ジアミン（化合物１３－４）
亜ジチオン酸ナトリウム（６．５７ｇ、３７．７ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（１２０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）溶媒混合物中の2,4-ジニトロ-N-フェニル-アニリン（３．２６ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）に８０℃で加えた。反応物を１時間撹拌した。有機溶媒を蒸発させ、水を更に加えた。化合物をＤＣＭで抽出した。水相を捨てた。ＤＣＭ相は固体を含み、これをろ別した。ろ液をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、溶媒を蒸発させて表題化合物を得た（１．２５ｇ、５．４５ｍｍｏｌ、収率４３％）。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z = 230 [M+H]⁺。

【0242】

(2S)-5-(2-アニリノ-5-ニトロ-アニリノ)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-オキソ-ペンタン酸ベンジルエステル（化合物１３－５）
ＨＡＴＵ（２．２８ｇ、６．００ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の(4S)-5-ベンジルオキシ-4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-オキソ-ペンタン酸（１．９３ｇ、５．７３ｍｍｏｌ）とＴＥＡ（２．２８ｍＬ、１６．４ｍｍｏｌ）に加えた。この混合物に、4-ニトロ-N1-フェニル-ベンゼン-1,2-ジアミン（１．２５ｇ、５．４５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を一晩撹拌した。トルエン（７０ｍＬ）を加え、有機相を水（１００ｍＬ）とブライン（６０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、溶媒を蒸発させて、表題化合物を得た（２．９０ｇ、５．４５ｍｍｏｌ、収率９７％）。ＨＰＬＣ純度：８８％、MS (ESI+) m/z = 449 [M+H-BOC]⁺。この物質をそのまま次の工程で使用した。

【0243】

(2S)-2-アミノ-4-(5-ニトロ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸ベンジルエステル（化合物１３－６）
(2S)-5-(2-アニリノ-5-ニトロ-アニリノ)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-オキソ-ペンタン酸ベンジルエステル（２．９９ｇ、５．４５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（３７ｍＬ）溶液に、１２ＭのＨＣｌ（８．１８ｍＬ、９８．１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を７０℃で４０分間撹拌した。粗生成物を水（２００ｍＬ）で希釈し、４ＭのＮａＯＨによって注意深くｐＨ７に中和した。生成物を酢酸エチル（３× １００ｍＬ）で抽出し、有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、溶媒を蒸発させて表題化合物を得た（２．３５ｇ、５．４５ｍｏｌ、定量的）。ＨＰＬＣ純度：６５％、MS (ESI+) m/z = 431 [M+H]⁺。この物質をそのまま次の工程で使用した。

【0244】

(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(5-ニトロ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸ベンジルエステル（化合物１３－７）
ＴＨＦ（２５ｍＬ）中の(2S)-2-アミノ-4-(6-ニトロ-3-フェニル-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)ブタン酸ベンジルエステル（２．３５ｇ、０．００５４５ｍｏｌ）に、ＴＥＡ（２．２８ｍＬ、０．０１６３ｍｏｌ）と二炭酸ジ-tert-ブチル（１．４３ｇ、６．５４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を週末中、室温で撹拌した。過剰のＢＯＣ_２Ｏを除去するために、イミダゾール（０．１１１ｇ、１．６３ｍｏｌ）を加え、反応物を更に１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチルに溶解した。有機相を５％クエン酸で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物をシリカのフラッシュクロマトグラフィーにかけ、p-エーテル中の２０～３０％酢酸エチルで溶出して、表題化合物（２．２１ｇ、４．１７ｍｍｏｌ、収率７６％）を得た。ＨＰＬＣ純度：７７％、MS (ESI+) m/z = 531 [M+H]⁺。

【0245】

(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(5-ニトロ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸（化合物１３－８）
(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(5-ニトロ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸ベンジルエステル（２．２１ｇ、４．１７ｍｍｏｌ）の、水（１０ｍＬ）を含む1,4-ジオキサン（３０ｍＬ）溶液に、ＬｉＯＨ－Ｈ_２Ｏ（０．６９９ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を５０℃で４０分間撹拌し、室温で、酢酸エチルで希釈し、５％クエン酸で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、溶媒を蒸発させて表題化合物を得た（１．８３ｇ、０．００４１５ｍｏｌ、定量的）。ＨＰＬＣ純度：８０％、MS (ESI+) m/z = 441 [M+H]⁺。この物質をそのまま次の工程で使用した。

【0246】

(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(5-ニトロ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物１３－９）
ＨＡＴＵ（１．７４ｇ、０．００４５７ｍｏｌ）を、ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の、(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(5-ニトロ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸（１．８３ｇ、０．００４１５ｍｏｌ）、(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；塩酸塩（０．８９４ｇ、０．００４５７ｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２．３２ｍＬ、０．０１６６ｍｏｌ）の混合物に加えた。反応物を１時間撹拌した。トルエンを加え、混合物を５％クエン酸とブラインで洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、溶媒を蒸発させて表題化合物を得た（１．８２ｇ、０．００３１２ｍｏｌ、収率７５％）。ＨＰＬＣ純度：９５％、MS (ESI+) m/z =582 [M+H]⁺。この物質をそのまま次の工程で使用した。

【0247】

(2S)-2-[[(2S)-4-(5-アミノ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物１３－１０）
エタノール（９０ｍＬ）中の、(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(5-ニトロ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（１．８１ｇ、０．００３１１ｍｏｌ）とＰｄ／Ｃ１０％（０．３３１ｇ、０．００３１１ｍｏｌ）の混合物を、水素ガス雰囲気下で４時間撹拌した。固体の材料をろ過し、溶媒を蒸発させて表題化合物を得た（１．７１ｇ、０．００３１１ｍｏｌ、定量的）。この物質をそのまま次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９３％、MS (ESI+) m/z = 552 [M+H]⁺。

【0248】

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.26 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.55 - 7.49 (m, 1H), 7.43 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.80 - 6.75 (m, 2H), 6.52 (dd, J = 8.5, 2.1 Hz, 1H), 4.81 (s, 2H), 4.24 (ddd, J = 9.9, 7.6, 5.0 Hz, 1H), 4.09 - 3.96 (m, 3H), 2.77 - 2.64 (m, 2H), 2.20 - 2.09 (m, 1H), 1.99 - 1.87 (m, 1H), 1.70 - 1.44 (m, 3H), 1.33 (s, 9H), 1.14 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.82 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。

【0249】

(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物１３－１１）
ＮａＢＨ_３ＣＮ（０．１３７ｇ、０．００２１８ｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（６ｍＬ）中の、(2S)-2-[[(2S)-4-(5-アミノ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（０．３００ｇ、０．０００５４４ｍｏｌ）、2-クロロアセトアルデヒド（水中に５０．０％、０．３４４ｍＬ、０．００２７２ｍｏｌ）及びＴＦＡ（０．２４２ｍＬ、３．２６ｍｍｏｌ）のスラリー化した混合物に室温で加えた。２０分後に、2-クロロアセトアルデヒド（水中に５０％、０．３４４ｍＬ、２．７２ｍｍｏｌ）とＮａＢＨ_３ＣＮ（０．１３７ｇ、２．１８ｍｍｏｌ）を更に加えた。１０分後に、最後の2-クロロアセトアルデヒド（水中に５０％， ０．３４４ｍＬ、２．７２ｍｍｏｌ）、ＮａＢＨ_３ＣＮ（０．１３７ｇ、２．１８ｍｍｏｌ）及びＴＦＡ（０．２４２ｍＬ、３．２６ｍｍｏｌ）を更に加えた。酢酸エチルを混合物に加え、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液とブラインで洗浄した。化合物をシリカのフラッシュクロマトグラフィーに２回かけ、最初にＤＣＭ中の２％ＥｔＯＨ、そして、石油エーテル中の２０～３０％酢酸エチルで溶出して、表題化合物（０．１５８ｇ、０．００２３４ｍｏｌ、収率４３％）を得た。ＨＰＬＣ純度：９７％、MS (ESI+) m/z = 676 [M+H]⁺。

【0250】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；塩酸塩（実施例化合物１３）
(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（１９０ｍｇ、０．２８１ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２ｍＬ）中のＴＦＡ（２ｍＬ）で処理した。溶媒を蒸発させ、粗製の残留物を、ＡＣＥ５ Ｃ_８ Ｐｒｅｐ、１００×２１．２ｍｍカラム（水中の０．１％ＴＦＡ）２５～５０％アセトニトリル勾配を使用し、ＵＶ検出器を備えたGilsonシステムによる分取ＨＰＬＣに、数回注入して精製した。純粋な画分をプールして、７５０ｍＬの溶液を得た。氷冷溶液に１２ＭのＨＣｌ（３ｍＬ）を加えて、０．０５ＭのＨＣ溶液を得た。溶媒を凍結乾燥で除去して、表題化合物（実施例化合物１３）（９２ｍｇ、０．１５９ｍｍｏｌ、収率５３％）を得た。MS (ESI+) m/z 576 [M+H]⁺。

【0251】

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 8.54 - 8.42 (m, 3H), 7.73 - 7.62 (m, 4H), 7.16 - 7.01 (m, 3H), 4.28 - 4.20 (m, 2H), 4.06 - 3.97 (m, 3H), 3.88 - 3.73 (m, 8H), 3.14 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.41 - 2.24 (m, 2H), 1.76 - 1.65 (m, 1H), 1.61 - 1.46 (m, 2H), 1.13 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.89 (dd, J = 18.0, 6.5 Hz, 6H)。

【0252】

実施例１４ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸メチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１４）

【化39】

【0253】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物４）（１１ｍｇ、０．０１８２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２ｍＬ）に溶解した。ＨＣｌを１滴加え、反応混合物を７０℃で一晩撹拌した。試料を分取クロマトグラフィー（酸性緩衝液；流速２５ｍＬ／分、１０％Ｂから４０％Ｂまで１５分間の勾配。２３８ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製した。ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ、０．０１ｍＬ）を合わせた画分に加え、試料を直ちに凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸メチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１４）を黄色の固体として得た（３．５ｍｇ、０．００６１９ｍｍｏｌ、収率３４％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 486 [M+H]⁺。

【0254】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.8 (s, 1H), 9.09 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.59 (s, 3H), 7.62 (s, 1H), 6.89 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.54 (s, 1H), 4.37 (dt, J = 31.5, 7.6 Hz, 2H), 3.93 - 3.70 (m, 11H), 3.54 (s, 3H), 2.51 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 1.63 (dq, J = 12.5, 6.3 Hz, 1H), 1.56 - 1.45 (m, 2H), 1.31 - 1.17 (m, 1H), 0.85 (dd, J = 13.8, 6.5 Hz, 6H)。

【0255】

実施例１５ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸イソプロピルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１５）

【化40】

【0256】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物４）（１０ｍｇ、０．０１６６ｍｍｏｌ）をイソプロピルアルコール（２ｍＬ）に溶解した。ＨＣｌを１滴加え、反応混合物を７０℃で一晩撹拌した。試料を分取クロマトグラフィー（酸性緩衝液；流速２５ｍＬ／分、１１％Ｂから４２％Ｂまで１５分間の勾配。２３９ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製した。ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ、０．０１ｍＬ）を合わせた画分に加え、試料を直ちに凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸イソプロピルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１５）を黄色の固体として得た（４．８ｍｇ、０．００７９３ｍｍｏｌ、収率４８％）。ＨＰＬＣ純度：９７％；MS (ESI+) m/z = 514 [M+H]⁺。

【0257】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.60 (s, 1H), 9.14 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.68 (s, 3H), 7.71 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.89 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.83 (h, J = 6.3 Hz, 1H), 4.44 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 4.28 (ddd, J = 9.8, 7.6, 5.2 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.81 (dt, J = 12.4, 6.9 Hz, 4H), 3.75 (dd, J = 9.9, 4.8 Hz, 4H), 3.58 (s, 2H), 1.68 (ddt, J = 15.3, 12.9, 6.6 Hz, 1H), 1.50 (qdd, J = 13.8, 9.3, 5.3 Hz, 2H), 1.14 (dd, J = 36.1, 6.3 Hz, 6H), 0.86 (dd, J = 17.3, 6.6 Hz, 6H)。

【0258】

実施例１６ (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１６）
実施例１６を以下のスキーム５に従い行った。

【化41】

【0259】

(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸チルエステル（化合物１６－１）
(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸（０．７００ｇ、０．００２４７ｍｏｌ）のＤＭＦ（５．０ｍＬ）溶液に、室温で、ＨＡＴＵ（０．９４０ｇ、０．００２４７ｍｏｌ）とＤＩＥＡ（０．４２３ｍＬ、０．００２４７ｍｏｌ）を加え、続いて(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタン酸メチルエステル（０．３９５ｇ、０．００２７２ｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をＨ_２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機相を乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、真空中、２０℃以下で濃縮した。粗生成物をビュッヒ自動フラッシュシステム（１０ｇカラム、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）で精製し、(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸メチルエステルを白色の固体として得た（０．４２０ｇ、１．０２ｍｍｏｌ、収率４１％）。ＨＰＬＣ純度：７５％；MS (ESI+) m/z = 411 [M+H]⁺。

【0260】

(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（化合物１６－２）
(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸メチルエステル（４２０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．５ｍＬ）溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ（４７．２ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）の水溶液（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。沈殿した固体をろ過し、乾燥して(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸を白色の固体として得た（３５０ｍｇ、０．８８３ｍｍｏｌ、収率８６％）。ＨＰＬＣ純度：８５％；MS (ESI+) m/z = 341 [M+H-tBu]⁺。

【0261】

(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステル（化合物１６－３）
(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（９５．０ｍｇ、０．２４０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．０ｍＬ）溶液に、室温で、ＨＡＴＵ（９１．１ｍｇ、０．２４０ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．０８２０ｍＬ、０．４７９ｍｍｏｌ）及び(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物３８）（１２５ｍｇ、０．２６４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をＨ_２Ｏで希釈し、相分離器を使用してＤＣＭで抽出した。有機相を乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、真空中、２０℃以下で濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（酸性緩衝液；流速２５ｍＬ／分、３１％Ｂから５７％Ｂまで１５分間の勾配。２３５ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製して、(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステルをオフホワイトの固体として得た（８０．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ、４３％収率）。ＨＰＬＣ純度：１００％；MS (ESI+) m/z = 779 [M+H]⁺。

【0262】

(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１６）
ＥｔＯＨ（１ｍＬ）中の(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステル（８０．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）に、ジオキサン中のＨＣｌ（４．００ｍｏｌ／Ｌ、０．１２８ｍＬ、０．５１３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を一晩撹拌した。反応の完了後、溶媒を約１５℃で蒸発させて、直ちに分取ＨＰＬＣ（酸性緩衝液；流速２５ｍＬ／分、１２％Ｂから４４％Ｂまで１５分間の勾配。２３５ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）を行った。全ての純粋なＨＰＬＣ画分をMivacuumに保持してアセトニトリルを蒸発させ、ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ、０．０１ｍＬ）を、得られた画分に加えた。混合物を直ちにドライアイスが入った氷浴中で凍結させ、凍結乾燥機に入れて、(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１６）を白色の粉末として得た（６．００ｍｇ、０．００７９７ｍｍｏｌ、収率８％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 679 [M+H]⁺。

【0263】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.4 (br s, 1H), 8.80 - 8.71 (m, 2H), 8.24 - 8.01 (m, 3H), 7.36 - 7.25 (m, 2H), 7.18 - 7.08 (m, 2H), 6.97 - 6.82 (m, 1H), 4.53 - 4.32 (m, 2H), 4.19 - 3.99 (m, 3H), 3.90 - 3.67 (m, 12H), 3.09 (m, 4H), 2.88 (dd, J = 14.2, 8.3 Hz, 1H), 2.38 -2.26 (m, 1H), 2.21 - 2.09 (m, 1H), 1.67 (dq, J = 13.5, 6.6 Hz, 1H), 1.55 - 1.43 (m, 2H), 1.17 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.93 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.6 Hz, 3H)。

【0264】

実施例１７ (2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸；二塩酸塩（実施例化合物１７）
実施例１７を以下のスキーム６に従い行った。

【化42】

【0265】

(2S)-3-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパン酸エチルエステル（化合物１７－１）
(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)プロパン酸エチルエステル（スキーム１）（５７３ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、Ｈ反応器に入れた。１０％Ｐｄ／Ｃ（７５．４ｍｇ）を加え、反応器を密閉した。窒素パージを行った。水素ガスを３バールで反応器に充填し、反応物を３５℃で３時間撹拌した。水素ガスを窒素パージで排気した。触媒をセライトろ過により除去した。溶媒を蒸発させ、粗生成物(2S)-3-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパン酸エチルエステルを黄色の固体として得（４２１ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ、収率７４％）、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９０％；MS (ESI+) m/z = 363 [M+H]⁺。

【0266】

(2S)-3-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパン酸エチルエステル（化合物１７－２）
(2S)-3-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパン酸エチルエステル（４２１ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）を酢酸（５ｍＬ）に溶解した。オキシラン（２．３Ｍ、４．５５ｍＬ）を加え、反応物を室温で２４時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗製の物質をＤＣＭに溶解し、ＮａＨＣＯ_３の飽和水溶液で洗浄した。有機相を水とブラインで洗浄し、相分離器に通過させた。物質を濃縮して(2S)-3-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパン酸エチルエステルを茶色のオイル状物として得（０．４２１ｇ、０．８８８ｍｍｏｌ、収率８５％）、これは、次の工程での使用に十分に純粋であった。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 451 [M+H]⁺。

【0267】

(2S)-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパン酸エチルエステル（化合物１７－３）
(2S)-3-[5-[ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパン酸エチルエステル（４２１ｇ、０．８８８ｍｍｏｌ、純度９５％）とトリエチルアミン（０．４９５ｍＬ、３．５５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、メタンスルホン酸クロリド（０．２１３ｍＬ、２．７５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２０分間撹拌した。反応混合物を、ＮａＨＣＯ_３（飽和）：水（２：５）（５０ｍＬ）、０．３ＭのＨＣｌ（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）の混合物で洗浄した。有機相を相分離器にかけ、減圧下で蒸発させた。(2S)-3-[5-[ビス(2-メチルスルホニルオキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパン酸エチルエステルの粗生成物を、更に精製することなく次の工程で直ちに使用した。

【0268】

(2S)-3-[5-[ビス(2-メチルスルホニルオキシエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパン酸エチルエステル（５２１ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ、純度９２％）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。ＬｉＣｌ（０．５０２ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を６０℃で２時間加熱した。反応混合物を、トルエン（１０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）の混合物で希釈し、次いでブライン（３× ２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、蒸発させた。得られた粗生成物を、ＤＣＭ中の酢酸エチルの０～２０％の勾配を使用するフラッシュクロマトグラフィーで精製した。目的化合物を含む画分を合わせて濃縮し、(2S)-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパン酸エチルエステルを茶色のオイル状物として得た（３７５ｍｇ、０．６９２ｍｍｏｌ、収率８８％）。ＨＰＬＣ純度：９０％；MS (ESI+) m/z = 487 [M+H]⁺。ＨＰＬＣ純度（メシル化中間体）：９５％；MS (ESI+) m/z = 607 [M+H]⁺。

【0269】

(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（化合物１７－４）
(2S)-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパン酸エチルエステル（３７５ｍｇ、０．６９２ｍｍｏｌ、純度９０％）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）溶液に、ジオキサン中の塩酸（４．００ｍｏｌ／Ｌ、１．７３ｍＬ、６．９２ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で３時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させて(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩のオフホワイトの固体を得た（０．３０７ｇ、０．６６０ｍｍｏｌ、収率９５％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 387 [M+H]⁺。

【0270】

(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸；二塩酸塩（実施例化合物１７）
(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル（３０ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）及び５ＮのＨＣｌ（０．０２５ｍＬ）を室温で４時間撹拌した。温度をゆっくりと６０℃に上昇させた。温度を１００℃に上げ、３０分間撹拌した。反応物を室温まで放冷し、揮発性の物質を真空で除去した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（酸性緩衝液；流速２５ｍＬ／分、１％Ｂから２８％Ｂまで１５分間の勾配。２３６ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製して、(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸；二塩酸塩（実施例化合物１７）を淡い薄ピンクの固体として得た（８ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、収率２６％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 359 [M+H]⁺。

【0271】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.90 (s, 1H), 8.93 (s, 3H), 7.75 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 9.3, 2.4 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 4.65 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.84 - 3.71 (m, 13H)。

【0272】

実施例１８ (S)-2-アミノ-4-(5-(ビス(2-クロロエチル)アミノ)-1-メチル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-イル)ブタン酸二塩酸塩（実施例化合物１８）
実施例１８を以下のスキーム７に従い行った。

【化43】

【0273】

(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸エチルエステル（化合物１８－１）
(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-[2-(メチルアミノ)-5-ニトロ-アニリノ]-5-オキソ-ペンタン酸メチルエステル（スキーム１）（５０ｇ、９８．２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）溶液に、塩酸（１２．０ｍｏｌ／Ｌ、７３．６ｍＬ、８８４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を７０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を水（５００ｍＬ）に溶解し、ＥｔＯＡｃ（２× １５０ｍＬ）で洗浄した。水相をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）と混合し、ｐＨ９～１０になるまで固体のＫ_２ＣＯ_３を加えた。水相をＥｔＯＡｃ（２× １００ｍＬ）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させて、(2S)-2-アミノ-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸メチルを赤みがかった固体として得た（２６．０ｇ、８２．７ｍｍｏｌ、収率８４％）。粗生成物を更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９３％；MS (ESI+) m/z = 293 [M+H]⁺。

【0274】

(2S)-2-アミノ-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸メチルエステル（２６ｇ、８２．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（１３．８ｍＬ、９９．３ｍｍｏｌ）と二炭酸ジ-tert-ブチル（２０．９ｍＬ、９１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。粗生成物を減圧下で濃縮し、ＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）に溶解し、０．５ＮのＨＣｌ（４００ｍＬ）で洗浄した。２つの相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（２× ２００ｍＬ）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させた。粗生成物を少量のＴＨＦに溶解し、Ｅｔ_２Ｏを加えた。混合物を０℃に冷却し、３０分間放置した。固体をろ過し、冷Ｅｔ_２Ｏで洗浄した。固体を減圧下で乾燥して、(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸エチルエステルをオフホワイトの固体として得た（２７ｇ、６８．８ｍｍｏｌ、収率８３％）。ＨＰＬＣ純度：１００％；MS (ESI+) m/z = 393 [M+H]⁺。

【0275】

(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（化合物１８－２）
(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸メチルエステル（１．９５ｇ、４．９７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５ｍＬ）に溶解し、Ｈ反応器に入れた。１０％Ｐｄ／Ｃ（２６４ｍｇ）を加え、反応器を密閉した。窒素パージを行った。水素ガスを３バールで反応器に充填し、反応物を３５℃で２時間撹拌した。水素ガスを窒素パージで排気した。触媒をセライトろ過により除去した。溶媒を蒸発させ、粗生成物(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステルをオフホワイト（わずかにピンク）の固体として得（１．８ｇ、定量的）、更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z 363 [M+H]⁺。

【0276】

(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（化合物１８－３）
2-クロロアセトアルデヒド（１．３０ｇ、１．０５ｍＬ、８．２８ｍｍｏｌ、５０％、１０当量）を、(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（３００ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）、ＴＦＡ（０．３６９ｍＬ、４．９７ｍｍｏｌ、６当量）及びＭｅＯＨ（１０ｍＬ）の溶液に加えた。反応混合物を０℃で１５分間撹拌し、次いで、ＮａＢＨ_３ＣＮ（１０４ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ、２当量）を５分間かけて加え、混合物を０℃で２０分間撹拌した。水（１０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）を加えて、層に分けた。水相をＥｔＯＡｃ（３× １０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２× ２０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製の残留物をシリカカラムで精製し、生成物をp-エーテル中の８０％ＥｔＯＡｃで溶出した。画分をプールし、濃縮して、(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（２０７ｍｇ、０．４２５ｍｍｏｌ、収率５１％）を得た。ＨＰＬＣ純度：９３％；MS (ESI+) m/z 487 [M+H]⁺。

【0277】

(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニル-アミノ)ブタン酸（化合物１８－４）
(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（２０７ｍｇ、０．４２５ｍｍｏｌ）とＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ（５４ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）の混合物を、1,4-ジオキサン（１２ｍＬ）と水（４ｍＬ）に懸濁した。反応混合物を５０℃で２０分間加熱した。溶液を室温まで放冷し、水（２０ｍＬ）を加えた。次いで、混合物を１ＭのＨＣｌでｐＨ５にし、生成物をＥｔＯＡｃ（３× ７０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、ロータリーエバポレーターで濃縮して、(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニル-アミノ)ブタン酸（１８８ｍｇ、０．３９７ｍｍｏｌ、収率９４％）を得た。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z 473 [M+H]⁺。

【0278】

(S)-2-アミノ-4-(5-(ビス(2-クロロエチル)アミノ)-1-メチル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-イル)ブタン酸二塩酸塩（実施例化合物１８）
(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニル-アミノ)ブタン酸（１８８ｍｇ、０．３９７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解し、ジオキサン中の４ＭのＨＣｌ（１．０ｍＬ）を滴下した。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次いで、ジエチルエーテル（１５ｍＬ）を加えた。ジエチルエーテルを加えると沈殿物が形成し、これをろ過して単離し、真空で乾燥して、(S)-2-アミノ-4-(5-(ビス(2-クロロエチル)アミノ)-1-メチル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-イル)ブタン酸二塩酸塩（実施例化合物１８）を得た（１１８ｍｇ、０．２８８ｍｍｏｌ、収率７３％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z 373 [M+H]⁺。

【0279】

¹H NMR (600 MHz, CD₃OD) δ 7.71 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 9.3, 2.4 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.23 (dd, J = 7.3, 5.5 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.89 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 3.76 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 3.54 - 3.44 (m, 1H), 3.44 - 3.35 (m, 1H), 2.61 - 2.49 (m, 1H), 2.49 - 2.37 (m, 1H)。

【0280】

実施例１９ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸；二塩酸塩（実施例化合物１９）

【化44】

【0281】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物３）（１５．３ｍｇ、０．０２６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ：ＭｅＯＨ（２：１、１ｍＬ）溶液に、水酸化リチウム一水和物の水溶液（０．５Ｍ、０．０５５５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。試料をろ過し、分取クロマトグラフィー（酸性緩衝液；流速２５ｍＬ／分、２％Ｂから３１％Ｂまで１５分間の勾配。２３５ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製した。エタノール中のＨＣｌ（２．５Ｍ、１ｍＬ）を合わせた画分に加え、試料を直ちに凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸；二塩酸塩（実施例化合物１９）を白色の固体として得た（５．８ｍｇ、０．０１０６ｍｍｏｌ、収率４０％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 472 [M+H]⁺。

【0282】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.72 (s, 1H), 12.91 (s, 1H), 8.86 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.55 (d, J = 5.2 Hz, 3H), 7.73 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 9.4, 2.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.19 (dd, J = 7.7, 5.1 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.81 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 3.76 (t, J = 6.9 Hz, 4H), 3.31 (h, J = 9.4 Hz, 2H), 2.33 (ddd, J = 13.1, 9.4, 6.8 Hz, 1H), 2.23 (ddt, J = 13.9, 9.5, 6.9 Hz, 1H), 2.19 - 2.10 (m, 1H), 0.94 (dd, J = 6.9, 3.6 Hz, 6H)。

【0283】

実施例２０ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（実施例化合物２０）

【化45】

【0284】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１）（１５ｍｇ、０．０２５５ｍｍｏｌ）をＨＣｌ（ジオキサン中に４Ｍ、０．３１９ｍＬ）に溶解し、室温で４８時間撹拌した。粗生成物を分取クロマトグラフィー（酸性緩衝液；流速２５ｍＬ／分、９％Ｂから４２％Ｂまで１５分間の勾配。２３５ｎｍのＵＶシグナルに基づいて画分を回収）で精製した。(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（実施例化合物２０）を白色の固体として得た（７．３ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、収率５１％収率）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 486 [M+H]⁺。

【0285】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.64 (s, 1H), 12.92 (s, 1H), 9.00 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 7.73 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.26 (ddd, J = 10.0, 7.3, 5.1 Hz, 1H), 4.05 - 3.99 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.82 (t, J = 6.9 Hz, 4H), 3.76 (d, J = 6.3 Hz, 4H), 3.30 (s, 2H), 2.32 (p, J = 7.2 Hz, 1H), 2.26 - 2.19 (m, 1H), 1.76 - 1.69 (m, 1H), 1.57 (pt, J = 9.4, 5.0 Hz, 2H), 0.89 (dd, J = 24.6, 6.6 Hz, 6H)。

【0286】

実施例２１ (2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２１）

【化46】

【0287】

実施例２１を以下のスキーム８に従い行った。

【化47】

【0288】

(2R)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸メチルエステル（化合物２１－１）
(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸（５００ｍｇ、０．００１７６ｍｏｌ）、(2R)-2-アミノ-4-メチル-ペンタン酸メチルエステル；塩酸塩（０．４１７ｇ、０．００２２９ｍｏｌ）、1-メチルイミダゾール（０．４３６ｍＬ、０．００５４７ｍｏｌ）のＭｅＣＮ（８ｍＬ）溶液に、[クロロ(ジメチルアミノ)メチレン]-ジメチル-アンモニウム；六フッ化リン酸（０．５４５ｇ、０．００１９４ｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）を加え、続いてＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）を加えた。２つの相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）で洗浄し、合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、減圧下で蒸発させた。粗生成物をケイソウ土に吸着させ、Buchi Pure C-810 Flash system（２０ｇカラム、ＥｔＯＡｃ：石油エーテル０：１００～５０：５０）で精製して、(2R)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸メチルエステルを白色の固体として得た（４８０ｍｇ、０．００１１７ｍｏｌ、収率６６％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z 411 [M+H]⁺。

【0289】

(2R)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（化合物２１－２）
(2R)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸メチルエステル（２００ｍｇ、０．０００４８７ｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に、水酸化リチウム一水和物（０．０２１５ｇ、０．０００５１２ｍｏｌ）の水溶液（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）、１ＮのＨＣｌ（０．５ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）を加えた。２つの相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で更に抽出した。合わせた有機相をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させた。(2R)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸を無色で粘着性のオイル状物として得た（０．１８５ｇ、０．０００４６７ｍｏｌ、収率９６％）。ＨＰＬＣ純度：９４％；MS (ESI+) m/z 341 [M-tBu]⁺。

【0290】

(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステル（化合物２１－３）
ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中の(2R)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチルペンタン酸（９５．０ｍｇ、０．２４０ｍｍｏｌ）に、室温で、ＨＡＴＵ（９１．１ｍｇ、０．２４０ｍｍｏｌ）とＤＩＥＡ（０．０８２０ｍＬ、０．４７９ｍｍｏｌ）を加え、続いて(2S)-2-アミノ-4-[5- [ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物３８）（１２５ｍｇ、０．２６４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をＨ_２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機相を乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、真空で濃縮し、分取クロマトグラフィーで精製した。純粋な画分を凍結乾燥して、(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステルを白色の固体として得た（０．０８０ｇ、０．１０３ｍｍｏｌ、収率４３％）。ＨＰＬＣ純度：９７％；MS (ESI+) m/z = 779 [M+H] ⁺。

【0291】

(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２１）
ＥｔＯＨ（１ｍＬ）中の(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]ブタン酸エチルエステル（８０．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）に、ジオキサン中のＨＣｌ（４．００ｍｏｌ／Ｌ、０．１２８ｍＬ、０．５１３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を一晩撹拌した。反応の完了後、溶媒を蒸発させ、粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製した。純粋な画分を回収し、凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２１）を白色の固体として得た（６ｍｇ、０．００７９ｍｍｏｌ、収率８％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 679 [M+H] ⁺。

【0292】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.15 (s, 1H), 8.80 - 8.64 (m, 2H), 8.06 (s, 3H), 7.38 - 7.22 (m, 2H), 7.22 - 7.08 (m, 2H), 6.95- 6.81 (m, 1H), 4.51 - 4.27 (m, 2H), 4.14 - 3.96 (m, 3H), 3.89 - 3.67 (m, 12H), 3.13 (s, 1H), 3.14 (m, 2H), 3.07 (dd, J = 14.3,4.9 Hz, 1H), 2.87 (dd, J = 14.2, 8.3 Hz, 1H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.21 - 2.07 (m, 1H), 1.76 - 1.60 (m, 1H), 1.58 -1.39 (m, 2H), 1.17 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.93 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。

【0293】

実施例２２ (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２２）

【化48】

【0294】

1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（１．１５当量、６８ｍｇ、０．３５５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中の、4-メチルモルホリン（１．１５当量、０．０３９ｍＬ、０．３５５ｍｍｏｌ）、シアノグリオキシル酸エチル-2-オキシム（１．００当量、４４ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ）、(2S)-2-アミノ-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル（１．１５当量、７４．９ｍｇ、０．３５５ｍｍｏｌ）及び(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（実施例化合物２０）（１．００当量、１５０ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。水を加え、混合物をＤＣＭで抽出した。有機相を、１０％のＫ_２ＨＰＯ_４と１０％のＮａＣｌで洗浄し、続いて２５ＭのＨＣｌと１０％のＮａＣｌで酸性洗浄し、相分離カートリッジに通過させ、蒸発させた。粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２２）を白色の固体として得た（４ｍｇ、０．００５３ｍｍｏｌ、収率２％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 679 [M+H]⁺。

【0295】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.34 (br s, 1H), 8.72 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 8.34 (s, 3H), 7.68 (s, 1H), 7.25 (dd, J = 8.3, 5.5 Hz, 2H), 7.01 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.43 (dq, J = 15.5, 7.7 Hz, 2H), 4.05 - 3.96 (m, 2H), 3.95 (q, J = 6.5, 5.8 Hz, 1H), 3.84 - 3.69 (m, 11H), 3.13 - 2.98 (m, 4H), 2.93 (dd, J = 13.9, 9.0 Hz, 1H), 2.23 (dq, J = 13.4, 6.8, 6.1 Hz, 1H), 2.10 (dd, J = 15.9, 8.1 Hz, 1H), 1.69 (dp, J = 13.5, 6.7 Hz, 1H), 1.47 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.08 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.91 (dd, J = 19.1, 6.5 Hz, 6H)。

【0296】

実施例２３ (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸ブチルエステル二塩酸塩（実施例化合物２３）

【化49】

【0297】

4-メチルモルホリン（１．１５当量、０．０３９ｍＬ、０．３５５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中の、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（実施例化合物２０）（１．００当量、１５０ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ）、(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（１．１５当量、５６ｍｇ、０．３５５ｍｍｏｌ）、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（１．１５当量、６８ｍｇ、０．３５５ｍｍｏｌ）及びシアノグリオキシル酸エチル-2-オキシム（１．００当量、４４ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。水を加え、混合物をＤＣＭで抽出した。有機相を、１０％のＫ_２ＨＰＯ_４と１０％のＮａＣｌで洗浄し、続いて０．２５ＭのＨＣｌと１０％のＮａＣｌで酸性洗浄し、相分離カートリッジに通過させ、蒸発させた。得られた粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル ；二塩酸塩（実施例化合物２３）の固体を得た（５．１ｍｇ、０．００７２８ｍｍｏｌ、収率２％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 627 [M+H]⁺。

【0298】

1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.41 (br s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.54 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 123.3 Hz, 3H), 7.70 (s, 1H), 6.90 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.57 (s, 1H), 4.39 (dt, J = 13.0, 6.5 Hz, 1H), 4.27 (ddd, J = 10.6, 7.5, 4.9 Hz, 1H), 4.10 - 4.00 (m, 2H), 3.97 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.91 - 3.71 (m, 11H), 3.1 (m, 2H), 2.25 (dt, J = 13.5, 7.2 Hz, 1H), 2.13 (s, 1H), 1.73 (dt, J = 13.4, 6.3 Hz, 1H), 1.64 (dd, J = 13.9, 7.0 Hz, 1H), 1.53 (tddd, J = 22.7, 14.1, 9.6, 5.1 Hz, 4H), 1.15 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.95 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.78 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。

【0299】

実施例２４ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸2-モルホリノエチルエステル二塩酸塩（実施例化合物２４）

【化50】

【0300】

(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（１．００当量、５０ｍｇ、０．０７５８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）に懸濁し、塩化チオニル（５．５３当量、３１ｕＬ、０．４２０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で３０分間撹拌し、次いで、4-(2-ヒドロキシエチル)モルホリン（５．００当量、０．０４６ｍＬ、０．３７９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物をろ過し、分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸2-モルホリノエチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２４）の固体を得た（６ｍｇ、０．００８９ｍｍｏｌ、収率１２％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 599 [M+H]⁺。

【0301】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.79 (s, 1H), 11.42 (s, 1H), 9.36 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 8.55 (s, 2H), 7.72 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.44 (td, J = 13.5, 11.9, 5.2 Hz, 2H), 4.11 (s, 1H), 3.96 - 3.74 (m, 15H), 3.56 (s, 2H), 3.15 (s, 6H), 2.32 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.74 (dq, J = 13.3, 6.6, 6.1 Hz, 1H), 1.63 (dddd, J = 18.6, 13.8, 9.1, 4.6 Hz, 2H), 0.91 (dd, J = 20.5, 6.5 Hz, 6H)。

【0302】

実施例２５ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸2-イソプロポキシエチルエステル二塩酸塩（実施例化合物２５）

【化51】

【0303】

(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（１．００当量、５０ｍｇ、０．０７５８ｍｍｏｌ）を、ＭｅＣＮ（２ｍＬ）中のエチレングリコールモノイソプロピルエーテル（５．００当量、０．０４２ｍＬ、０．３７９ｍｍｏｌ）と塩化チオニル（５．５３当量、３１ｕＬ、０．４２０ｍｍｏｌ）の溶液に、－５℃で、少しずつ加えた。反応物が室温になるまで放置し、次いで、３０℃で３時間加熱した。溶媒をトルエンとの共沸混合物として真空で除去し、次いで、高真空ポンプを使用して乾燥した。得られた粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸2-イソプロポキシエチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２５）の固体を得た（６．２ｍｇ、０．００９６ｍｍｏｌ、収率１２％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 572 [M+H]⁺。

【0304】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.77 (s, 1H), 9.25 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.56 (s, 2H), 7.72 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.93 (dd, J = 10.1, 2.4 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 4.37 - 4.28 (m, 1H), 4.23 (dq, J = 8.1, 4.4, 3.9 Hz, 1H), 4.09 (ddt, J = 13.8, 10.7, 5.5 Hz, 2H), 3.90 - 3.74 (m, 11H), 3.54 (td, J = 8.6, 7.0, 3.6 Hz, 3H), 2.36 - 2.24 (m, 2H), 1.77 (dd, J = 13.9, 6.7 Hz, 1H), 1.60 (ddt, J = 28.1, 13.4, 8.4 Hz, 2H), 1.05 (dd, J = 18.5, 6.1 Hz, 6H), 0.91 (dd, J = 25.5, 6.5 Hz, 6H)。１つのＣＨ_２信号が、Ｈ_２Ｏ信号で隠されている。

【0305】

実施例２６ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸イソプロピルエステル二塩酸塩（実施例化合物２６）

【化52】

【0306】

(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（１．００当量、５０ｍｇ、０．０７５８ｍｍｏｌ）を、イソプロパノール（２００当量、１．２ｍＬ、１５．２ｍｍｏｌ）と塩化チオニル（５．５３当量、３１ｕＬ、０．４２０ｍｍｏｌ）の溶液に－５℃で、少しずつ加えた。反応物が室温になるまで放置し、３時間撹拌した。溶媒をトルエンとの共沸混合物として真空で蒸発させ、次いで、高真空ポンプを使用して乾燥した。得られた粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸イソプロピルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２６）をオフホワイトの固体として得た（３２ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ、収率６９％）。ＨＰＬＣ純度：９８％；MS (ESI+) m/z = 528 [M+H]⁺。

【0307】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.79 (s, 1H), 9.20 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.55 (s, 3H), 7.74 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.90 (p, J = 6.3 Hz, 1H), 4.26 (dt, J = 11.0, 5.7 Hz, 1H), 4.08 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.80 (dt, J = 33.7, 6.9 Hz, 8H), 3.37 - 3.32 (m, 2H), 2.31 (dh, J = 22.0, 7.3 Hz, 2H), 1.75 (p, J = 6.7 Hz, 1H), 1.62 (ddd, J = 15.0, 10.2, 5.1 Hz, 1H), 1.53 (ddd, J = 13.9, 9.2, 4.9 Hz, 1H), 1.18 (dd, J = 11.4, 6.3 Hz, 6H), 0.90 (dd, J = 27.2, 6.5 Hz, 6H)。

【0308】

実施例２７ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸メチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２７）

【化53】

【0309】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（実施例化合物２０）（１．００当量、３５ｍｇ、０．０６２６０ｍｍｏｌ）を０．４ｍＬのＭｅＯＨ（１３７当量）に溶解した。塩化チオニル（５．７２当量、３０ｕＬ、０．４１１ｍｍｏｌ）を溶液に室温で滴下した。反応物を室温で４．５時間撹拌した。粗反応混合物を分取クロマトグラフィーで精製して、オフホワイトの(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸メチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２７）（１４ｍｇ、０．０２４４ｍｍｏｌ、収率３３％）を得た。ＨＰＬＣ純度：９７％；MS (ESI+) m/z = 500 [M+H]⁺。

【0310】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.86 (s, 1H), 9.32 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 8.61 (s, 3H), 7.74 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 4.33 (dt, J = 11.1, 5.5 Hz, 1H), 4.10 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.80 (dt, J = 33.0, 6.9 Hz, 8H), 3.65 (s, 3H), 3.35 (h, J = 10.1, 8.5 Hz, 2H), 2.33 (ddq, J = 30.2, 15.1, 7.5 Hz, 2H), 1.75 (p, J = 6.7 Hz, 1H), 1.65 (td, J = 12.2, 10.3, 5.1 Hz, 1H), 1.54 (ddd, J = 14.2, 9.6, 4.7 Hz, 1H), 0.90 (dd, J = 23.3, 6.5 Hz, 6H)。

【0311】

実施例２８ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸3-(ジメチルアミノ)プロピルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２８）

【化54】

【0312】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１）（１．００当量、５０ｍｇ、０．０８５１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解した。ＨＣｌ（ＥｔＯＡｃ中に４Ｍ）（１０．０当量、０．２１ｍＬ、０．８５１ｍｍｏｌ）を加え、続いて3-ジメチルアミノ-1-プロパノール（１０．０当量、０．１０ｍＬ、０．８５１ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を８０℃で４時間撹拌した。混合物をろ過し、分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸3-(ジメチルアミノ)プロピルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２８）をオフホワイトの固体として得た（２ｍｇ、０．００３１ｍｍｏｌ、収率３％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 571 [M+H]⁺。

【0313】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 15.9 (br s, 1H), 10.7 (br s, 1H), 9.43 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 8.55 (d, J = 73.7 Hz, 3H), 7.79 (m, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.34 (s, 1H), 4.18 - 4.12 (m, 2H), 3.76 (s, 11H), 3.09 (s, 1H), 2.73 (d, J = 20.6 Hz, 6H), 2.34 (s, 1H), 2.01 (q, J = 7.8, 7.3 Hz, 2H), 1.81 - 1.52 (m, 4H), 1.23 (s, 4H), 0.97 - 0.89 (m, 6H)。

【0314】

実施例２９ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸(2-メトキシ-1-メチル-エチル)エステル；二塩酸塩（実施例化合物２９）

【化55】

【0315】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（実施例化合物２０）（１．０当量、３６ｍｇ、０．０６４４ｍｍｏｌ）を1-メトキシ-2-プロパノール（５５当量、０．４０ｍＬ、４．０７ｍｍｏｌ）に溶解し、塩化チオニル（５．６当量、３０ｕＬ、０．４１１ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。反応物を室温で１時間撹拌し、次いで、４０℃で２１時間加熱した。粗反応混合物を分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸(2-メトキシ-1-メチル-エチル)エステル；二塩酸塩（実施例化合物２９）（２．７ｍｇ、０．００４３ｍｍｏｌ、収率６％）をオフホワイトの固体として得た。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 558 [M+H]⁺。

【0316】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.88 (s, 1H), 9.30 (p, J = 6.1 Hz, 1H), 8.60 (s, 3H), 7.75 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 4.96 (dtd, J = 16.3, 6.5, 4.0 Hz, 1H), 4.28 (qd, J = 11.2, 10.4, 6.1 Hz, 1H), 4.13 - 4.05 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.83 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 3.78 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 3.40 - 3.33 (m, 4H), 3.22 (d, J = 13.7 Hz, 3H), 2.34 (dd, J = 18.1, 9.2 Hz, 2H), 1.77 (td, J = 9.9, 9.3, 4.6 Hz, 1H), 1.62 (ddd, J = 15.1, 12.3, 7.7 Hz, 1H), 1.53 (ddt, J = 13.8, 9.6, 4.8 Hz, 1H), 1.14 (dd, J = 11.9, 6.5 Hz, 3H), 0.90 (dd, J = 26.5, 6.6 Hz, 6H)。

【0317】

実施例３０ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-N,N,4-トリメチル-ペンタンアミド；二塩酸塩（実施例化合物３０）

【化56】

【0318】

3-(3-ジメチルアミノプロピル)-1-エチル-カルボジイミド塩酸塩（１．１５当量、５９ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（実施例化合物２０）（１．００当量、１５０ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミン塩酸塩（１．１５当量、２５ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ）、(2E)-シアノ(ヒドロキシイミノ)酢酸エチル（１．００当量、３８ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ）及びN-メチルモルホリン（２．００当量、０．０５９ｍＬ、０．５３６ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。反応物を室温で３時間撹拌した。水とＤＣＭを加え、混合物を１０％ Ｋ_２ＨＰＯ_４と１０％ ＮａＣｌで２回抽出し、続いて２５ＭのＨＣｌと１０％のＮａＣｌで酸性洗浄した。有機相を濃縮し、得られた粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-N,N,4-トリメチル-ペンタンアミド；二塩酸塩（実施例化合物３０）の固体を得た（１３ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、収率８％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 513 [M+H]⁺。

【0319】

1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.63 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.51 (s, 3H), 7.73 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.91 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.72 (ddd, J = 11.0, 7.5, 3.6 Hz, 1H), 4.00 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.82 (d, J = 6.7 Hz, 4H), 3.77 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 3.3 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 2.84 (s, 3H), 2.39 - 2.30 (m, 1H), 2.19 (dq, J = 14.3, 7.3 Hz, 1H), 1.75 - 1.67 (m, 1H), 1.50 (ddd, J = 14.7, 10.8, 4.2 Hz, 1H), 1.39 (ddd, J = 13.7, 9.8, 3.6 Hz, 1H), 0.92 (t, J = 6.1 Hz, 6H)。

【0320】

実施例３１ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-N,4-ジメチル-ペンタンアミド；二塩酸塩（実施例化合物３１）

【化57】

【0321】

実施例３１を以下のスキーム９に従い行った。

【化58】

【0322】

N-[(1S)-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-1-[[(1S)-3-メチル-1-(メチルカルバモイル)ブチル]カルバモイル]プロピル]カルバミン酸tert-ブチルエステル；二塩酸塩（化合物３１－１）
メチルアミン（ＭｅＯＨ中に４０％）（６３ｍｇ、０．８１４ｍｍｏｌ）中の(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物１の合成経路の工程４）（５０ｍｇ、０．０８１４ｍｍｏｌ）を、密封したチューブに入れ、マイクロ波の照射下、８０℃で２０分間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製して、N-[(1S)-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-1-[[(1S)-3-メチル-1-(メチルカルバモイル)ブチル]カルバモイル]プロピル]カルバミン酸tert-ブチルエステル；二塩酸塩（３５ｍｇ、０．０５８６ｍｍｏｌ、収率６４％）を白色の固体として得た。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 599 [M+H]⁺。

【0323】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-N,4-ジメチル-ペンタンアミド；二塩酸塩（実施例化合物３１）
N-[(1S)-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-1-[[(1S)-3-メチル-1-(メチルカルバモイル)ブチル]カルバモイル]プロピル]カルバミン酸tert-ブチルエステル（３５ｍｇ、０．０５８６ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（１ｍＬ）に溶解した。塩酸（ジオキサン中に４Ｍ）（０．１５ｍＬ、０．５８６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-N,4-ジメチル-ペンタンアミド；二塩酸塩（実施例化合物３１）をオフホワイトの固体として得た（１４ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、収率４０％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 499 [M+H]⁺。

【0324】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.62 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.48 (s, 3H), 8.18 (q, J = 4.6 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.91 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.29 (ddd, J = 10.0, 7.6, 5.0 Hz, 1H), 3.98 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.82 (s, 4H), 3.77 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 3.3 (m, 2H), 2.59 (d, J = 4.6 Hz, 3H), 2.33 (s, 1H), 2.21 (dq, J = 14.0, 7.2 Hz, 1H), 1.66 (dt, J = 13.3, 6.5 Hz, 1H), 1.52 (ddd, J = 14.7, 10.0, 5.1 Hz, 1H), 1.43 (ddd, J = 13.8, 9.0, 5.1 Hz, 1H), 0.90 (dd, J = 15.6, 6.6 Hz, 6H)。

【0325】

実施例３２ (2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(メチルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物３２）

【化59】

【0326】

実施例３２を以下のスキーム１０に従い行った。

【化60】

【0327】

(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[tert-ブトキシカルボニル(メチル)アミノ]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（化合物３２－１）
(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物１の合成経路の工程４）（３００ｍｇ、０．４８８ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（３ｍＬ）溶液に、水素化ナトリウム（５０％；５９ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で気体の発生が終了するまで撹拌した。1,3-ジメチル-3,4,5,6-テトラヒドロ-2(1H)-ピリミジノン（０．１２ｍＬ、１．０３ｍｍｏｌ）を、反応混合物に加え、続いてヨウ化メチル（０．２７ｍＬ、４．３９ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で終夜撹拌した。反応物を水で注意深くクエンチし、分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[tert-ブトキシカルボニル(メチル)アミノ]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸を白色の固体として得た（１０５ｍｇ、０．１７５ｍｍｏｌ、収率３６％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 600 [M+H]⁺。

【0328】

(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(メチルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物３２）
(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[tert-ブトキシカルボニル(メチル)アミノ]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（４２ｍｇ、０．０６９９ｍｍｏｌ）を、エタノール（２ｍＬ）と塩化チオニル（３１ｕＬ、０．４２０ｍｍｏｌ）溶液に、－５℃で少しずつ加えた。反応物を室温で５分間撹拌し、次いで、２時間還流した。反応物を室温まで放冷し、溶媒をトルエンとの共沸混合物として真空で蒸発させ、次いで、高真空ポンプを使用して乾燥した。粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(メチルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物３２）をオフホワイトの固体として得た（２５ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ、収率５９％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 528 [M+H]⁺。

【0329】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.84 (s, 1H), 9.43 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 7.73 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.35 (ddd, J = 11.0, 7.0, 4.7 Hz, 1H), 4.12 (p, J = 7.0 Hz, 2H), 4.04 (dd, J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.83 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 3.77 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 3.30 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.47 (dd, J = 8.5, 4.9 Hz, 1H), 2.28 (dq, J = 14.8, 7.9 Hz, 1H), 1.69 (dddd, J = 39.0, 15.1, 9.7, 5.6 Hz, 2H), 1.57 (ddd, J = 13.8, 9.2, 4.8 Hz, 1H), 1.19 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.91 (dd, J = 26.6, 6.5 Hz, 6H)。

【0330】

実施例３３ (2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(メチルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（実施例化合物３３）

【化61】

【0331】

(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-[tert-ブトキシカルボニル(メチル)アミノ]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸（化合物３２－１）（１２ｍｇ、０．０２００ｍｍｏｌ）をエタノール（１ｍＬ）に溶解した。ＨＣｌ（ジオキサン中に４Ｍ）（５０ｕＬ、０．２００ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で３時間撹拌した。反応混合物をろ過し、分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(メチルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（実施例化合物３３）をオフホワイトの固体として得た（４ｍｇ、０．００６９ｍｍｏｌ、収率３４％）。ＨＰＬＣ純度：９７％；MS (ESI+) m/z = 500 [M+H]⁺。

【0332】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.43 (s, 1H), 13.03 (s, 1H), 9.13 (s, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.16 - 6.98 (m, 1H), 6.92 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.34 (q, J = 7.5 Hz, 1H), 3.95 (dd, J = 7.8, 4.7 Hz, 1H), 3.87 - 3.72 (m, 11H), 3.14 (s, 3H), 2.57 (s, 3H), 2.44 - 2.36 (m, 1H), 2.21 (ddt, J = 19.1, 13.7, 5.8 Hz, 1H), 1.70 (dp, J = 13.2, 6.6 Hz, 1H), 1.62 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 0.92 (dd, J = 28.5, 6.5 Hz, 6H)。

【0333】

実施例３４ (2S)-2-[[(2S)-2-アセトアミド-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル；塩酸塩（実施例化合物３４）

【化62】

【0334】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル；塩酸塩（実施例化合物２）（１５ｍｇ、０．０２３３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解した。N,N-ジイソプロピルエチルアミン（０．００５５３ｍＬ、０．０３１７ｍｍｏｌ）を加え、続いて塩化アセチル（０．００２２７ｍＬ、０．０３１８ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アセトアミド-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル；塩酸塩（実施例化合物３４）をオフホワイトの固体として得た（７ｍｇ、０．０１０８ｍｍｏｌ、収率４１％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 608 [M+H]⁺。

【0335】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.20 (s, 1H), 8.49 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.29 - 7.19 (m, 2H), 7.14 - 7.04 (m, 3H), 6.86 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.40 (dtd, J = 20.2, 8.2, 6.1 Hz, 2H), 4.00 (qd, J = 7.2, 2.2 Hz, 2H), 3.84 - 3.74 (m, 11H), 3.05 (q, J = 9.3, 8.4 Hz, 2H), 3.00 - 2.88 (m, 2H), 2.09 (ddd, J = 13.9, 8.2, 4.3 Hz, 1H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.76 (s, 3H), 1.06 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。

【0336】

実施例３５ (2S)-2-[[(2S)-2-アセトアミド-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；塩酸塩（実施例化合物３５）

【化63】

【0337】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物４）（１１ｍｇ、０．０１８２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解した。N,N-ジイソプロピルエチルアミン（０．００３８１ｍＬ、０．０２１９ｍｍｏｌ）を加え、続いて塩化アセチル（０．００１５６ｍＬ、０．０２１９ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アセトアミド-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；塩酸塩（実施例化合物３５）を白色の固体として得た（８ｍｇ、０．０１３８ｍｍｏｌ、収率７６％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 542 [M+H]⁺。

【0338】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.16 (s, 1H), 8.56 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.41 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 4.83 (td, J = 8.0, 6.5 Hz, 1H), 4.26 (ddd, J = 9.8, 7.6, 5.2 Hz, 1H), 4.00 (qd, J = 7.2, 1.2 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.81 (dd, J = 8.9, 6.4 Hz, 4H), 3.76 (t, J = 6.1 Hz, 4H), 3.29 (dd, J = 15.0, 7.8 Hz, 2H), 1.80 (s, 3H), 1.61 - 1.49 (m, 2H), 1.46 (ddd, J = 13.7, 8.9, 5.1 Hz, 1H), 1.11 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.83 (dd, J = 25.2, 6.4 Hz, 6H)。

【0339】

実施例３６ (2S)-2-[[(2S)-2-アセトアミド-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル；塩酸塩（実施例化合物３６）

【化64】

【0340】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物５）（１５ｍｇ、０．０２２８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解した。N,N-ジイソプロピルエチルアミン（０．００４７６ｍＬ、０．０２７３ｍｍｏｌ）を加え、続いて塩化アセチル（０．００１９５ｍＬ、０．０２７３ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アセトアミド-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル；塩酸塩（実施例化合物３６）を白色の固体として得た（１０．６ｍｇ、０．０１６８ｍｍｏｌ、収率７１％）。ＨＰＬＣ純度：９７％；MS (ESI+) m/z = 594 [M+H]⁺。

【0341】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.18 (s, 1H), 8.62 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.24 - 7.18 (m, 2H), 7.12 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 2H), 6.86 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.83 (td, J = 8.0, 6.5 Hz, 1H), 4.45 (td, J = 8.0, 6.1 Hz, 1H), 3.97 (qd, J = 7.1, 2.1 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.85 - 3.79 (m, 4H), 3.75 (t, J = 7.1 Hz, 4H), 3.25 (dd, J = 15.0, 7.9 Hz, 2H), 3.01 - 2.89 (m, 2H), 1.79 (s, 3H), 1.04 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。

【0342】

実施例３７ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸；二塩酸塩（実施例化合物３７）

【化65】

【0343】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物７）（６ｍｇ、０．０１０２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ：ＭｅＯＨ（２：１、１ｍＬ）溶液に、水酸化リチウム一水和物の水溶液（０．５Ｍ、０．０２３８ｍＬ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、次いでろ過し、分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸；二塩酸塩（実施例化合物３７）を白色の固体として得た（１ｍｇ、０．００１７７ｍｍｏｌ、収率１６％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 486 [M+H]⁺。

【0344】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.50 (s, 1H), 13.04 (s, 1H), 9.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.38 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 7.73 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 9.3, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.37 (td, J = 8.8, 4.0 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.86 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 3.81 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 3.76 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 3.32 - 3.22 (m, 2H), 2.36 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 2.12 (ddt, J = 14.0, 9.2, 4.7 Hz, 1H), 1.69 (dq, J = 13.3, 6.6 Hz, 1H), 1.59 (dt, J = 13.9, 7.1 Hz, 1H), 1.51 (dt, J = 14.2, 7.4 Hz, 1H), 0.90 (dd, J = 22.4, 6.5 Hz, 6H)。

【0345】

実施例３８ (2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物３８）

【化66】

【0346】

(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸エチルエステル（スキーム１に示した(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸エチルエステルを出発物質として使用し、スキーム６に従って合成）（５５９ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ、純度９５％）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）溶液に、ジオキサン中の塩酸（４．００ｍｏｌ／Ｌ、２．６５ｍＬ、１０．６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２５℃で３時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させて粗生成物を得、これを分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物３８）を白色の固体として得た（４１６ｍｇ、０．８７７ｍｍｏｌ、収率８３％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 401 [M+H]⁺。

【0347】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.81 (s, 1H), 8.86 (s, 3H), 7.85 - 7.68 (m, 1H), 7.15 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.27 (s, 1H), 4.21 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.93 (t, J = 4.4 Hz, 3H), 3.84 (q, J = 6.0 Hz, 4H), 3.78 (t, J = 5.8 Hz, 4H), 3.36 (dq, J = 16.9, 6.1 Hz, 2H), 2.44 - 2.31 (m, 2H), 1.25 (q, J = 6.3 Hz, 3H)。

【0348】

実施例３９ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸；二塩酸塩（実施例化合物３９）

【化67】

【0349】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物２）（１０．２ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）をＨＣｌ（ジオキサン中に４Ｍ、０．０７５８ｍＬ）に溶解し、室温で４８時間撹拌した。反応混合物を分取クロマトグラフィーで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-3-(4-フルオロフェニル)プロパン酸；二塩酸塩ブタノエート（実施例化合物３９）を白色の固体として得た（２．３ｍｇ、０．００３４８ｍｍｏｌ、収率２５％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 538 [M+H]⁺。

【0350】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.74 (s, 1H), 13.10 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.54 (s, 3H), 7.73 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.36 (ddd, J = 8.1, 5.6, 2.1 Hz, 2H), 7.16 - 7.07 (m, 3H), 6.91 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 4.47 (td, J = 8.4, 4.8 Hz, 1H), 4.04 (q, J = 5.9 Hz, 1H), 3.87 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 3.82 (d, J = 6.9 Hz, 4H), 3.76 (d, J = 6.2 Hz, 4H), 3.32 (s, 2H), 3.10 (dd, J = 14.1, 4.7 Hz, 1H), 2.98 (dd, J = 14.1, 8.9 Hz, 1H), 2.38 - 2.22 (m, 2H)。

【0351】

実施例４０ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（実施例化合物４０）

【化68】

【0352】

(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物１３－１１）（９０．０ｍｇ、０．０００１３３ｍｏｌ）を1,4-ジオキサン（５．０ｍＬ）に溶解し、次いで、水（１．０ｍＬ）とＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ（３当量、１６ｍｇ）を加えた。混合物を５０℃で２時間撹拌した。水（１０ｍＬ）とＤＣＭ（１０ｍＬ）を加え、ＨＣｌ（水溶液）でｐＨを５～６に調整した。混合物の相を分離し、有機相を水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を真空で除去した。残留物を再度ＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、次いでＨＣｌ（1,4-ジオキサン中に４Ｍ、１．０ｍＬ）を加え、溶液を室温で３０分間撹拌した。混合物を蒸発乾固して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（実施例化合物４０）の固体を得た（７０ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ、収率９０％）。ＨＰＬＣ純度：８９％；MS (ESI+) m/z = 548 [M+H]⁺。

【0353】

実施例４１ (2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸（実施例化合物４１）

【化69】

【0354】

実施例４１を以下のスキーム１１に従い行った。

【化70】

【0355】

(2S)-5-(2-アニリノ-5-ニトロ-アニリノ)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-オキソ-ペンタン酸メチルエステル（化合物４１－１）
Ｂｏｃ－Ｇｌｕ－ＯＭｅ（１．６３ｇ、０．００６２４ｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶解した。ＤＩＥＡ（２．９７ｍＬ、０．０１７０ｍｏｌ）を加え、続いて4-ニトロ-N1-フェニル-ベンゼン-1,2-ジアミン（１．３０ｇ、０．００５６７ｍｏｌ；１３－４）とＣＯＭＵ（２．９１ｇ、０．００６８１ｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で一晩撹拌した。ＤＭＦの大部分を真空で蒸発させ、次いでトルエン（１０ｍＬ）を加え、有機相を水（３× １００ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、溶媒を蒸発させて、表題化合物（４１－１）をこげ茶色でオイル状の粗生成物として得た（５．６１ｇ）。ＨＰＬＣ純度：４８％；(ESI+) m/z 373 [M+H-BOC]⁺。この物質を更に精製することなく次の工程で使用した。

【0356】

(2S)-2-アミノ-4-(5-ニトロ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸メチルエステル（化合物４１－２）
粗(2S)-5-(2-アニリノ-5-ニトロ-アニリノ)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-オキソ-ペンタン酸メチルエステル（５．６１ｇ、純度４８％；４１－１）のＥｔＯＨ（１００ｍＬ）溶液に、１２ＭのＨＣｌ（１５ｍＬ）を加え、混合物を７０℃で４５分間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、４ＭのＮａＯＨ（約４５ｍＬ）によって注意深くｐＨ７に中和し、ＥｔＯＡｃ（３× １００ｍＬ）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、溶媒を蒸発させて、表題化合物（４１－２）を濃い赤褐色の固体として得た（２．０４ｇ）。ＨＰＬＣ純度：６０％；MS (ESI+) m/z 355 [M+H]⁺。この物質を更に精製することなく次の工程で使用した。

【0357】

(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(5-ニトロ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸メチルエステル（化合物４１－３）
粗製の(2S)-2-アミノ-4-(5-ニトロ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸メチルエステル（２．０４ｇ）のＴＨＦ（２５ｍＬ）溶液に、ＴＥＡ（２．３８ｍＬ）と二炭酸ジ-tert-ブチル（１．４９ｇ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。有機相を５％クエン酸で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、次いで、溶媒を蒸発させた。粗生成物を石油エーテル中のＥｔＯＡｃの２０～８０％の勾配で溶出するシリカによるフラッシュクロマトグラフィーで精製して、表題化合物（４１－３）（１．１３ｇ、０．００２４９ｍｍｏｌ、収率４４％）を得た。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z 455 [M+H]⁺。

【0358】

(2S)-4-(5-アミノ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（化合物４１－４）
(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(5-ニトロ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸メチルエステル（０．３３０ｇ、０．０００５８１ｍｏｌ、純度８０％）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１０．０％、０．０７３４ｇ、０．００００６９ｍｏｌ）を加え、排気した。水素ガスが入ったバルーンを装着し、混合物を室温で４時間撹拌した。Ｐｄ／Ｃをろ過によって除き、溶媒を蒸発乾固して、(2S)-4-(5-アミノ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tertブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステルを得た（１９０ｍｇ、０．０００６３６ｍｏｌ；４１－４）。ＨＰＬＣ純度：９０％；MS (ESI+) m/z 425 [M+H]⁺。

【0359】

(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（化合物４１－５）
ＮａＢＨ_３ＣＮ（１２０ｍｇ）を、ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中の、(2S)-4-(5-アミノ-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（９０％、３００ｍｇ、０．６３６ｍｍｏｌ、純度９０％）、2-クロロアセトアルデヒド（５０％、０．２４ｍＬ）及びＴＦＡ（０．１９ｍＬ）の混合物に加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。３過剰当量のＮａＢＨ_３ＣＮ、2-クロロアセトアルデヒド及びＴＦＡを加え、反応物を室温で１時間撹拌した。トルエンと飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を加え、有機相を分離し、水で洗浄した。溶媒を蒸発させ、薄茶色の固体の残留物を石油エーテル中のＥｔＯＡｃの５０～１００％で溶出するシリカによるフラッシュクロマトグラフィーで精製して、(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステルを得た（１９０ｍｇ、０．０００３１１ｍｏｌ、収率４９％）。ＨＰＬＣ純度：９０％；MS (ESI+) m/z = 550 [M+H]⁺。

【0360】

(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸；二塩酸塩（実施例化合物４１）
(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（１９０ｍｇ、０．０００３１１ｍｏｌ）を1,4-ジオキサン（５．００ｍＬ）に溶解し、次いで、水（１．５ｍＬ）とＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ（４４ｍｇ）を加えた。混合物５０℃で２０分間撹拌し、次いで、水（１０ｍＬ）とＤＣＭ（１０ｍＬ）を加え、ｐＨを１Ｍの塩酸で６～７に調整した。２つの相を分離し、有機相を水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥した。ＨＣｌ（1,4-ジオキサン中に４Ｍ、０．５０ｍＬ、０．００４ｍｏｌ）を、有機相に加え、透明な溶液を室温で１時間撹拌した。沈殿物から溶媒を除去し、ジエチルエーテルで洗浄した。次いで、少量の水に再溶解し、直ちに凍結乾燥して、(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-フェニル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸；二塩酸塩（実施例化合物４１）の固体を得た（１３８ｍｇ、０．０００２４２ｍｏｌ、収率７８％）。ＨＰＬＣ純度：８９％；MS (ESI+) m/z = 435 [M+H]⁺。

【0361】

実施例４２ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸；2,2,2-トリフルオロ酢酸（実施例化合物４２）

【化71】

【0362】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸エチルエステル；二塩酸塩（化合物６）（１２ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１ｍＬ）、ＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）及び０．５Ｍ ＬｉＯＨ（水溶液、０．１３ｍＬ、０．０６５ｍｍｏｌ）の混合物に溶解した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。有機溶媒を蒸発させ、残留物を分取ＨＰＬＣで精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸；2,2,2-トリフルオロ酢酸（実施例化合物４２）の固体を得た（２．６ｍｇ、０．００４５４ｍｍｏｌ、収率２１％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 458 [M+H]⁺。

【0363】

実施例４３ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸；二塩酸塩（実施例化合物４３）

【化72】

【0364】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物１０）（１２ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）に、１Ｍの塩酸（１ｍＬ）を加え、反応物を室温で終夜撹拌した。濃ＨＣｌを加えた（１０滴）。４時間後、０．３ｍＬの濃ＨＣｌを更に加え、混合物を一晩撹拌した。混合物を丸底フラスコに移し、水を混合物に加えて凍結乾燥した。(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパン酸；二塩酸塩（実施例化合物４３）の固体を得た（５ｍｇ、０．００９１７ｍｍｏｌ、収率４４％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 472 [M+H]⁺。

【0365】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.78 (s, 1H), 9.40 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.38 (s, 3H), 7.76 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.16 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 4.93 (td, J = 7.9, 5.7 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.80 (dt, J = 33.0, 6.8 Hz, 9H), 3.64 (dd, J = 15.5, 5.9 Hz, 1H), 3.60 - 3.56 (m, 2H), 1.67 - 1.60 (m, 1H), 1.50 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 0.85 (t, J = 7.2 Hz, 6H)。

【0366】

実施例４４ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（実施例化合物４４）

【化73】

【0367】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物４）（１０ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）に、１Ｍ 塩酸（１ｍＬ）を加え、反応物を室温で終夜撹拌した。濃ＨＣｌを加え（１０滴）、反応物を一晩撹拌した。混合物を丸底フラスコに移し、水で希釈し、凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]プロパノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（実施例化合物４４）の固体を得た（５ｍｇ、０．００９１７ｍｍｏｌ、収率５３％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 472 [M+H]⁺。

【0368】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.61 (s, 1H), 9.11 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.73 (s, 3H), 7.75 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.51 - 4.44 (m, 1H), 4.27 (q, J = 7.6 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.87 - 3.75 (m, 9H), 3.66 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 1.76 - 1.68 (m, 1H), 1.55 (dt, J = 8.8, 4.6 Hz, 2H), 0.88 (dd, J = 19.5, 6.5 Hz, 6H)。

【0369】

実施例４５ (2R)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル ジ-2,2,2-トリフルオロ酢酸（実施例化合物４５）

【化74】

【0370】

実施例４５を以下のスキーム１２に従い行った。

【化75】

【0371】

試薬及び条件： ａ） １．２当量 ＳＯＣｌ_２、エタノール、０℃～還流、ｂ） ＨＡＴＵ、ＴＥＡ、ＤＭＦ、ｃ） 炭素担体上の１０％パラジウム（約５５％の水で湿潤化、ＥｔＯＨ、５％ ＡｃＯＨ、ｄ） 2-クロロアセトアルデヒド（１５当量）、ＮａＢＨ_３ＣＮ（１０当量）、ＴＦＡ（１２当量）、ＥｔＯＨ、ｅ） ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌ：ＥｔＯＨ：ＤＣＭ

【0372】

R-ロイシンエチルエステル塩酸塩（化合物４５－１）
２５ｍＬのフラスコに、(2R)-2-アミノ-4-メチル-ペンタン酸（１．００ｇ、０．００７６２ｍｏｌ）と無水エタノール（６．００ｍＬ）を入れた。反応物を氷浴上で冷却し、塩化チオニル（０．６６７ｍＬ、０．００９１５ｍｏｌ）を滴下してスラリーを得た。滴下後、反応物を還流下で２時間３０分撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔ_２Ｏ（１６ｍＬ）に懸濁し、１時間撹拌した。生成物をろ過して表題化合物（４５－１）を得た（１．３６ｇ、０．００６９３ｍｏｌ、収率９１％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 160 [M+H]⁺。

【0373】

((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-イル)ブタノイル)-D-ロイシンエチルエステル（化合物４５－２）
ＤＭＦ（４．６０ｍＬ）中の、(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸（中間体２）（０．５００ｇ、０．００１３２ｍｏｌ）、R-ロイシンエチルエステル塩酸塩（０．２５９ｇ、０．００１３２ｍｏｌ）及びＴＥＡ（０．５５３ｍＬ、０．００３９６ｍｏｌ）の混合物に、ＨＡＴＵ（０．５０２ｇ、０．００１３２ｍｏｌ）を加えた。反応物を２時間撹拌し、次いで水（９ｍＬ）を加えた。生成物はオイル状であった。液体をピペットで除いた。湿った半固体に、ＥｔＯＨ（５ｍＬ）を加えた。半固体を８０℃に加熱して溶解した。沈殿の兆候が見られるまで水（５ｍＬ）を加えた。加熱を停止した。生成物はオイル状であった。溶媒を蒸発させ、残留物をトルエンに溶解し、水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、溶媒を蒸発させて表題化合物（４５－２）を得た（０．５７５ｇ、０．００１１１ｍｏｌ、収率８４％）。ＨＰＬＣ純度：９７％；MS (ESI+) m/z = 520 [M+H]⁺。この物質を更に精製することなく次の工程で使用した。

【0374】

(2R)-2-[[(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物４５－３）
(2R)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（５７５ｍｇ、０．００１１１ｍｏｌ）と炭素担体上の１０％パラジウム（約５５％の水で湿潤化（０．２６２ｇ、０．００１１１ｍｏｌ））の混合物を、ＡｃＯＨ（１．３０ｍＬ）を含んだＥｔＯＨ（２５．０ｍＬ）中で終夜撹拌した。固体の物質をセライトでろ過して、表題化合物を得た（５４２ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ、収率１００％）。ＨＰＬＣ純度：９８％；MS (ESI+) m/z = 490 [M+H]⁺。この物質を更に精製することなく次の工程で使用した。

【0375】

(2R)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物４５－４）
室温で、ＮａＢＨ_３ＣＮ（０．３４８ｇ、０．００５５４ｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（３０ｍＬ）中の、(2R)-2-[[(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（０．５４２ｇ、０．００１１１ｍｏｌ；４５－３）、2-クロロアセトアルデヒド（５０％、０．７０１ｍＬ、０．００５５４ｍｏｌ）及びＴＦＡ（０．４９３ｍＬ、０．００６６４ｍｏｌの混合物に加えた。２０分間の撹拌後、ＮａＢＨ_３ＣＮ（０．３４８ｇ、０．００５５４ｍｏｌ）と2-クロロアセトアルデヒド（５．０％、０．７０１ｍＬ、０．００５５４ｍｏｌ）を更に加えた。反応物を更に２０分間撹拌した後、2-クロロアセトアルデヒド（５０％、０．７０１ｍＬ、０．００５５４ｍｏｌ）を加えた。反応物を更に２時間撹拌し、その後、トルエンを加え、有機相を炭酸水素ナトリウムとブラインで洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させた。化合物を球状シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ＤＣＭ中の２％ＥｔＯＨで溶出して、表題化合物４５－４（２０９ｍｇ、０．３４０ｍｍｏｌ、収率３１％）を得た。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 614 [M+H]⁺。

【0376】

(2R)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル ジ-2,2,2-トリフルオロ酢酸（実施例化合物４５）
ジオキサン（１．４０ｍＬ）中の４ＭのＨＣｌを、ＤＣＭ（１．４０ｍＬ）とＥｔＯＨ（０．８６０ｍＬ）の混合物中の(2R)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（０．２０９ｇ、０．０００３４０ｍｏｌ）に加えた。反応物を５時間撹拌し、次いで、溶媒を蒸発させて純度９０％の粗生成物を得た。粗生成物を水を３０％含むＭｅＣＮに溶解し、ＡＣＥカラムの分取ＨＰＬＣで精製し、１０～６０％ ＭｅＣＮ／水（０．１％ＴＦＡ）で溶出して、表題化合物（実施例化合物４５）（１０４ｍｇ、０，１４０ｍｍｏｌ、収率４９％）を得た。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 514 [M+H]⁺。

【0377】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6 δ 9.18 - 8.99 (m, 1H), 8.41 (s, 3H), 7.70 - 7.59 (m, 1H), 7.13 - 7.02 (m, 1H), 6.94 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 4.33 (q, J = 7.8 Hz, 1H), 4.13 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.07 - 4.01 (m, 1H), 3.85 - 3.71 (m, 11H), 3.17 - 3.07 (m, 2H), 2.25 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.65 - 1.52 (m, 3H), 1.21 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.86 (d, J = 6.1 Hz, 3H)。

【0378】

実施例４６ (2S)-2-[[(2R)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物４６）

【化76】

【0379】

実施例４６を以下のスキーム１３に従い行った。

【化77】

【0380】

(2R)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-[2-(メチルアミノ)-5-ニトロ-アニリノ]-5-オキソ-ペンタン酸メチルエステル（化合物４６－１）
N-tert-ブトキシカルボニル-D-グルタミン酸α-メチルエステル（１．００当量、２．００ｇ、７．６５ｍｍｏｌ）、1-メチルイミダゾール（１．００当量、０．６１ｍＬ、７．６５ｍｍｏｌ）及びN1-メチル-4-ニトロ-ベンゼン-1,2-ジアミン（１．３４ｇ、８．０３７ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（２０ｍＬ）溶液に、クロロ(ジメチルアミノ)-N,N-ジメチル六フッ化リン酸メタンイミニウム（ＴＣＦＨ）（１．１０当量、２．３６ｇ、８．４２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、次いで水（２００ｍＬ）を加えた。有機相を相分離カートリッジに通過させ、蒸発させ、真空で乾燥して、(2R)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-[2-(メチルアミノ)-5-ニトロ-アニリノ]-5-オキソ-ペンタン酸メチルエステルの固体を得た（３．１ｇ、７．５５ｍｍｏｌ、収率９９％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 843 [2M+Na]⁺。

【0381】

(2R)-2-アミノ-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸（化合物４６－２）
(2R)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-[2-(メチルアミノ)-5-ニトロ-アニリノ]-5-オキソ-ペンタン酸メチルエステル（１．００当量、３．１０ｇ、７．５５ｍｍｏｌ）を、塩酸（４Ｍ）（１８．０当量、３４ｍＬ、１３６ｍｍｏｌ）に加えた。添加後、混合物を加熱し、栓をせずに１００℃で２時間撹拌した。反応物を室温まで放冷し、少量の茶色の固体をろ過した。ろ液を氷浴中で冷やし、１０Ｍ ＮａＯＨを、ｐＨが２になるまで、注意深く加えた。その後、４Ｍ ＮａＯＨ溶液を、ｐＨが５．２になるまで加えた。得られた固体をろ過し、水とＥｔ_２Ｏで洗浄し、真空で乾燥して、(2R)-2-アミノ-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸の固体を得た（２．３ｇ、７．５２ｍｍｏｌ、収率９９％以上）。ＨＰＬＣ純度：９１％；MS (ESI+) m/z = 279 [M+H]⁺。

【0382】

(2R)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸（化合物４６－３）
(2R)-2-アミノ-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸（１．００当量、２．３０ｇ、７．５２ｍｍｏｌ）の水溶液（１０ｍＬ）に、ＮａＯＨ水溶液（４Ｍ）（１．１０当量、２．１ｍＬ、８．２７ｍｍｏｌ）を加えた。溶液に二炭酸ジ-tert-ブチル（１．４０当量、２．４ｍＬ、１０．５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。沈殿物が得られた。４ＭのＮａＯＨ（０．５当量）を更に加え、反応物を室温で３時間撹拌した。ｐＨを９．２に調整し、反応混合物をＥｔ_２Ｏ（３× ３００ｍＬ）で洗浄した。得られた有機相を捨て、水相を蒸発させてＥｔ_２Ｏ残留物を除去した。４ＭのＨＣｌを水相に滴下した。得られた固体を集め、水で洗浄し、乾燥して、(2R)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸の固体を得た（１．８５ｇ、４．５９ｍｍｏｌ、収率６１％）。ＨＰＬＣ純度：９４％；MS (ESI+) m/z = 379 [M+H]⁺。

【0383】

(2R)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸（化合物４６－４）
(2R)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(1-メチル-5-ニトロ-ベンズイミダゾール-2-イル)ブタン酸（１．００当量、３００ｍｇ、０．７６９ｍｍｏｌ）をエタノール（５ｍＬ）に溶解し、Ｈ反応器に入れた。Ｐｄ／Ｃ １０％（０．０５００当量、８．２ｍｇ、０．０３８５ｍｍｏｌ）を加え、反応器を密閉した。窒素パージを行った。水素ガスを３バールで反応器に充填し、反応物を室温で２時間撹拌した。水素ガスを窒素パージで排気した。触媒をセライトろ過により除去した。溶媒を蒸発させて、(2R)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸を得た（２３５ｍｇ、０．６９０ｍｍｏｌ、収率９４％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 349 [M+H]⁺。

【0384】

(2R)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸（化合物４６－５）
(2R)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸（１．００当量、２５３ｍｇ、０．６９０ｍｍｏｌ）をエタノール（２ｍＬ）に懸濁した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（３．００当量、１３０ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）を加え、続いてトリフルオロ酢酸（１．５０当量、０．０７９ｍＬ、１．０３ｍｍｏｌ）を加え、次いでクロロアセトアルデヒド（５０％、３．００当量、０．２６ｍＬ、２．０７ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を３０分間撹拌した。２過剰当量のＮａＢＨ_３ＣＮ、クロロアセトアルデヒド及びＴＦＡを加え、反応物を室温で２時間撹拌した。４Ｍ ＮａＯＨを滴下してｐＨを３．６に調整した。エタノールを蒸発させ、水を加え、水相をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を蒸発させて、粗生成物(2R)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸を固体として単離した（３０３ｍｇ、０．５５７ｍｍｏｌ、収率８１％）。ＨＰＬＣ純度：８７％；MS (ESI+) m/z = 473 [M+H]⁺。

【0385】

(2S)-2-[[(2R)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物４６－６）
1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（１．１５当量、４１ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ）を、ＭｅＣＮ（３ｍＬ）中の、(2R)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸（１．００当量、１００ｍｇ、０．１８４ｍｍｏｌ）、(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（１．１５当量、３４ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ）、シアノグリオキシル酸エチル-2-オキシム（１．００当量、２６ｍｇ、０．１８４ｍｍｏｌ）及び4-メチルモルホリン（１．１５当量、２３ｕＬ、０．２１１ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をろ過し、分取クロマトグラフィーで精製した。純粋な画分を凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2R)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステルを得た（１７ｍｇ、０．０２７５ｍｍｏｌ、収率１５％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 614 [M+H]⁺。

【0386】

(2S)-2-[[(2R)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物４６）
(2S)-2-[[(2R)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（１．００当量、１７．１ｍｇ、０．０２７５ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（２ｍＬ）に溶解し、塩酸（ジオキサン中に４Ｍ）（５．００当量、３５ｕＬ、０．１３９ｍｍｏｌ） を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した。混合物をろ過し、分取クロマトグラフィーで精製し、純粋な画分をプールし、凍結乾燥して、(2S)-2-[[(2R)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物４６）の固体を得た（１４．３ｍｇ、０．０２３４ｍｍｏｌ、収率８４％）。ＨＰＬＣ純度：９６％；MS (ESI+) m/z = 514 [M+H]⁺。

【0387】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.81 (s, 1H), 9.23 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.59 (s, 3H), 7.75 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 4.30 - 4.24 (m, 1H), 4.11 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.04 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.83 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 3.77 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 3.2-3-3 (m, 2H), 2.32 (dp, J = 29.8, 7.6 Hz, 2H), 1.69 - 1.57 (m, 2H), 1.53 (ddd, J = 13.8, 8.5, 5.6 Hz, 1H), 1.20 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.87 (dd, J = 21.4, 6.3 Hz, 6H)。

【0388】

実施例４７ (2R)-2-[[(2R)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物４７）

【化78】

【0389】

実施例４７をスキーム１３に従い行ったが、化合物４６－５とのペプチドカップリングにおける出発物質として、D-ロイシンエチルエステル塩酸塩（１．１５当量、４１ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ）を使用して、(2R)-2-[[(2R)-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；2,2,2-トリフルオロ酢酸を固体として単離した（２７ｍｇ、０．０３７５ｍｍｏｌ、収率２０％）。ＨＰＬＣ純度：９９％；MS (ESI+) m/z = 614 [M+H]⁺。

【0390】

(2R)-2-[[(2R)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物４７）を固体として得た（６ｍｇ、０．００９７ｍｍｏｌ、収率２５％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z = 514 [M+H]⁺。

【0391】

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 14.79 (s, 1H), 9.25 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.69 - 8.47 (m, 3H), 7.75 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.31 (dt, J = 11.3, 5.7 Hz, 1H), 4.16 - 4.04 (m, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.83 (d, J = 6.7 Hz, 4H), 3.78 (d, J = 6.4 Hz, 4H), 3.38 - 3.33 (m, 2H), 2.32 (dp, J = 23.6, 7.6, 7.0 Hz, 2H), 1.75 (h, J = 6.9 Hz, 1H), 1.64 (td, J = 12.3, 10.8, 5.1 Hz, 1H), 1.55 (ddd, J = 14.0, 9.4, 4.8 Hz, 1H), 1.18 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.90 (dd, J = 25.1, 6.5 Hz, 6H)。

【0392】

実施例４８ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[6-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-3-メチル-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル ジ-2,2,2-トリフルオロ酢酸（実施例化合物４８）

【化79】

【0393】

実施例４８を以下のスキーム１４に従い行った。

【化80】

【0394】

試薬及び条件： ａ） ＭｅＮＨ_２、ＭｅＯＨ、０℃、ｂ） ２０％硫化アンモニウム水溶液、ＭｅＯＨ、加熱、ｃ） ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、ｄ） n-ＰｒＯＨ、１００℃、ｅ） ＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ、ＴＨＦ、ＭｅＯＨ、Ｈ_２Ｏ、室温、ｆ） ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、ｇ） Ｐｄ／Ｃ１０％、Ｈ_２、ＥｔＯＨ、ｈ） クロロアセトアルデヒド溶液（水中に約５５wt％）、ＮａＢＨ_３ＣＮ、ＴＦＡ、ＥｔＯＨ、ｉ） ＴＦＡ、ＤＣＭ、０℃～室温、その後１２Ｍ ＨＣｌ。

【0395】

N-メチル-3,5-ジニトロ-ピリジン-2-アミン（化合物４８－１）
2-クロロ-3,5-ジニトロピリジン（４．０ｇ、０．０１９６ｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４０ｍＬ）懸濁液に、０～５℃で、ＭｅＮＨ_２（４．３２ｍＬ、４０体積％、０．０５９ｍｏｌ）とＭｅＯＨ（１６ｍＬ）の水溶液の混合物を滴下した。得られた黄色の沈殿をろ過により回収し、ＭｅＯＨと水で洗浄し、真空で一晩乾燥して、N-メチル-3,5-ジニトロ-ピリジン-2-アミンを得た（３．００ｇ、０．０１５１ｍｏｌ、収率７７％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z=199 [M+H]⁺。

【0396】

N2-メチル-5-ニトロ-ピリジン-2,3-ジアミン（化合物４８－２）
N-メチル-3,5-ジニトロ-ピリジン-2-アミン（２．８０ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）をメタノール（６０ｍＬ）に懸濁し、硫化アンモニウムの２０％水溶液（２４．１ｍＬ）を加えた。温度を７５℃に上昇させ、混合物を２．５時間撹拌した。次いで、反応物を室温で一晩撹拌した。混合物を氷浴中に置くと沈殿物が得られた。固体をろ過により集め、一晩真空で乾燥してN2-メチル-5-ニトロ-ピリジン-2,3-ジアミンを赤茶色の固体として得た（３．３９ｇ、理論収量超え）。この物質を更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９０％；MS (ESI+) m/z=169 [M+H]⁺。

【0397】

(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-[[2-(メチルアミノ)-5-ニトロ-3-ピリジル]アミノ]-5-オキソ-ペンタン酸ベンジルエステル（化合物４８－３）
(4S)-5-ベンジルオキシ-4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-オキソ-ペンタン酸（１．００ｇ、２．９７ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（７．５０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（１．３６ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）とＤＩＥＡ（１．０４ｍＬ、５．４５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を２分間撹拌した後、N2-メチル-5-ニトロ-ピリジン-2,3-ジアミン（化合物４８－２）（０．５００ｇ、２．９７ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で２２時間撹拌した。ＥｔＯＡｃを加え、有機相をブライン（３×）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、デカンテーションして濃縮し、(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-[[2-(メチルアミノ)-5-ニトロ-3-ピリジル]アミノ]-5-オキソ-ペンタン酸ベンジルエステルを得た（２．７４ｇ、理論収量超え）。この物質を更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：80％；MS (ESI+) m/z=488 [M+H]⁺。

【0398】

(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(3-メチル-6-ニトロ-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)ブタン酸ベンジルエステル（化合物４８－４）
1-プロパノール（２０．０ｍＬ）中の(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-[[2-(メチルアミノ)-5-ニトロ-3-ピリジル]アミノ]-5-オキソ-ペンタン酸ベンジルエステル（１．０７ｇ、２．１９ｍｍｏｌ）を１００℃で６日間加熱した（小規模で実施した場合と比較して遅い反応）。1-プロパノールを蒸発させてＥｔＯＡｃを加えた。有機相をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。粗製の物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２ １２ｇ、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ ０－１００％）で精製して、(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(3-メチル-6-ニトロ-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)ブタン酸ベンジルエステルを得た（２８０ｍｇ、収率２７％）。ＨＰＬＣ純度：９０％；MS (ESI+) m/z= 470 [M+H]⁺。

【0399】

(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(3-メチル-6-ニトロ-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)ブタン酸（化合物４８－５）
(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(3-メチル-6-ニトロ-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)ブタン酸ベンジルエステル（０．２８０ｇ、０．５９６ｍｍｏｌ）の水（０．２ｍＬ）を含むテトラヒドロフラン（１．２０ｍＬ）／メタノール（１．２０ｍＬ）溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ（０．０４２５ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で２時間撹拌した。ＥｔＯＡｃと５％クエン酸を加え、２つの相を分離した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、溶媒を蒸発させて、(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(3-メチル-6-ニトロ-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)ブタン酸を得た（０．２４０ｇ）。この物質を更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z= 380 [M+H]⁺。

【0400】

(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(3-メチル-6-ニトロ-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物４８－６）
(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(3-メチル-6-ニトロ-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)ブタン酸（０．２４０ｇ、０．６３３ｍｍｏｌ）のN,N-ジメチルホルムアミド（１．５０ｍＬ）溶液に、(2S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル塩酸塩（０．１２４ｇ、０．６３３ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（０．２８９ｇ、０．７５９ｍｍｏｌ）を加え、続いてN,N-ジイソプロピルエチルアミン（０．２０４ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応物を室温で一晩撹拌した。ＥｔＯＡｃを加え、有機相をブライン（３×）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ過して濃縮した。粗製の物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ ０－１００％）で精製して、(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(3-メチル-6-ニトロ-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステルを得た（０．３４０ｇ）。ＨＰＬＣ純度：９０％；MS (ESI+) m/z= 521 [M+H]⁺。

【0401】

(2S)-2-[[(2S)-4-(6-アミノ-3-メチル-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物４８－７）
エタノール（２０．０ｍＬ）中の(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-4-(3-メチル-6-ニトロ-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（０．３４０ｇ、０．６５３ｍｍｏｌ）とＰｄ／Ｃ １０％（０．０６９５ｇ、０．６５３ｍｍｏｌ）の混合物を、水素ガス雰囲気（大気圧）下で一晩撹拌した。触媒をろ別し、溶媒を蒸発して表題化合物(2S)-2-[[(2S)-4-(6-アミノ-3-メチル-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステルを透明で粘着性のオイル状物（０．２７３ｇ、収率８５％）として得た。この物質を更に精製することなく次の工程で使用した。ＨＰＬＣ純度：９０％；MS (ESI+) m/z= 491 [M+H]⁺。

【0402】

(2S)-2-[[(2S)-4-[6-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-3-メチル-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物４８－８）
(2S)-2-[[(2S)-4-(6-アミノ-3-メチル-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（１７０ｍｇ、０．３４６ｍｍｏｌ）に、クロロアセトアルデヒド（０．２２ｍＬ、５０％水溶液）とＴＦＡ（０．１２ｍＬ）を室温で加えた。次いで、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１０９ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で３０分間撹拌し、その時点で５０％の変換が観察された。再び、同量の上記全ての試薬を加え、反応物を更に３０分間撹拌した。揮発性の物質を真空で蒸発させた。粗生成物を酢酸エチルに溶解し、飽和炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製の物質をフラッシュクロマトグラフィー（１２ｇシリカカラム、ＤＣＭ中の７０～９０％ＭｅＯＨ）で精製して、表題化合物(2S)-2-[[(2S)-4-[6-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-3-メチル-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステルを無色の濃厚なオイル状物として得た（７５ｍｇ、収率３５％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z= 615 [M+H]⁺。

【0403】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[6-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-3-メチル-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；ジ-2,2,2-トリフルオロ酢酸（実施例化合物４８）
(2S)-2-[[(2S)-4-[6-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-3-メチル-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物４８－８）（３５ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（０．１ｍＬ）を５℃で加えた。反応物を５℃で３０分間撹拌し、室温になるまで放置した。次いでＴＦＡ（０．２ｍＬ）を更に加え、反応物を室温で３時間撹拌した。粗製の物質を逆相酸性分取ＨＰＬＣ（１０～９０％アセトニトリル、水中に０．１％ＴＦＡ）で精製した。純粋な画分を濃縮して、(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[6-[ビス(2-クロロエチル)アミノ]-3-メチル-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；ジ-2,2,2-トリフルオロ酢酸（実施例化合物４８）の固体を得た（１１．３ｍｇ、収率３９％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z= 515 [M+H]⁺。

【0404】

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.57 - 8.26 (m, 3H), 8.10 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.38 - 4.30 (m, 1H), 4.12 - 4.08 (m, 2H), 4.05 - 4.02 (m, 1H), 3.81 - 3.73 (m, 11H), 3.13 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.39 - 2.22 (m, 2H), 1.77 - 1.67 (m, 1H), 1.65 - 1.52 (m, 2H), 1.17 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.93 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。

【0405】

実施例４９ (2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸；二塩酸塩（実施例化合物４９）

【化81】

【0406】

実施例４９を以下のスキーム１５に従い行った。

【化82】

【0407】

試薬及び条件： ａ） 2-ブロモエタノール-ｄ４、ＫＩ、ＣａＣＯ_３、1,4-ジオキサン／水、９０℃、１７時間、ｂ） 塩化メシル、トリエチルアミン、室温、１時間、ｃ） ＬｉＣｌ、ＤＭＦ、６０℃、２時間、ｄ） ＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ、1,4-ジオキサン、５０℃、２０分、ｅ） 1,4-ジオキサン中のＨＣｌ、ＤＣＭ、室温、１時間。

【0408】

(2S)-4-[5-[ビス(1,1,2,2-テトラジュウテリオ-2-ヒドロキシ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（化合物４９－１）
密閉した反応管中の(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（化合物１８－２）（５０ｍｇ、０．１３８ｍｍｏｌ）の1,4-ジオキサン（１．００ｍＬ）／水（０．５００ｍＬ）混合溶液に、ＣａＣＯ_３（２１．５ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ）と触媒量のＫＩ（５．１ｍｇ、０．０３０６ｍｍｏｌ）を加え、続いて2-ブロモエタノール-ｄ４（３９．５ｍｇ、０．３０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を９０℃で１７時間加熱し、その後、混合物をアセトニトリルで希釈し、XBridgeカラムの分取ＨＰＬＣで精製し、５０ｍＭのＮＨ_４ＨＣＯ_３を含む水中の１０～８０％ＭｅＣＮで溶出した。表題化合物（４９－１）を、１９％までのモノアルキル化副生成物と２％の過剰アルキル化副生成物を有する白色の固体として得た（２９ｍｇ）。MS (ESI+) m/z=459 [M+H]⁺。

【0409】

(2S)-4-[5-[ビス(1,1,2,2-テトラジュウテリオ-2-メタンスルホニルオキシ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（化合物４９－２）
(2S)-4-[5-[ビス(1,1,2,2-テトラジュウテリオ-2-ヒドロキシ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（２９ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（１．００ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。次いで、トリエチルアミン（２０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）と塩化メシル（０．００９６ｍＬ、０．１２４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で反応が完了するまで撹拌した。水を加え、ＤＣＭ相を洗浄し、乾燥して、表題化合物（４９－２）を茶色いオイル状の粗生成物として得（３１ｍｇ）、更に精製することなく次の工程で使用した。MS (ESI+) m/z=615 [M+H]⁺。

【0410】

(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（化合物４９－３）
(2S)-4-[5-[ビス(1,1,2,2-テトラジュウテリオ-2-メタンスルホニルオキシ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（２１ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）を乾燥ジメチルホルムアミド（０．５０ｍＬ）に溶解し、次いでＬｉＣｌ（３０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を６０℃で反応が完了するまで撹拌した。混合物を、石油エーテル中のＥｔＯＡｃの５０～１００％を使用するシリカによるフラッシュクロマトグラフィーで精製して、オフホワイトでオイル状の生成物を得た（１４ｍｇ、収率９２％）。ＨＰＬＣ純度：９０％；MS (ESI+) m/z=495 [M+H]⁺。

【0411】

(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸二塩酸塩（実施例化合物４９）
(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸メチルエステル（１３ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を1,4-ジオキサン（１．０ｍＬ）に溶解し、次いで水（０．３ｍＬ）とＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ（２６ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５０℃で２０分間撹拌し、水（２ｍＬ）とジクロロメタン（１ｍＬ）を加え、塩酸でｐＨを５～６に調整した。２つの相を分離し、有機相を水で洗浄し、乾燥した。乾燥させた有機相に1,4-ジオキサン中の過剰ＨＣｌ（４ｍｏｌ／Ｌ）を加え、透明な溶液を室温で３０分間撹拌した。混合物を濃縮乾固した。(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタン酸二塩酸塩（実施例化合物４９）の固体を得た（６ｍｇ、収率５５％）。ＨＰＬＣ純度：９７％；MS (ESI+) m/z=381 [M+H]⁺。

【0412】

実施例５０ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル；二塩酸塩（実施例化合物５０）

【化83】

【0413】

実施例５０を以下のスキーム１６に従い行った。

【化84】

【0414】

試薬及び条件： ａ） 2-ブロモエタノール-ｄ４、ＫＩ、ＣａＣＯ_３、1,4-ジオキサン／水、９０℃、１７時間、ｂ） 塩化メシル、トリエチルアミン、室温、１時間、ｃ） ＬｉＣｌ、ＤＭＦ、６０℃、２時間、ｄ） ＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ、1,4-ジオキサン、５０℃、２０分、ｅ） 1,4-ジオキサン中のＨＣｌ、ＤＣＭ、室温、１時間。

【0415】

(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(1,1,2,2-テトラジュウテリオ-2-ヒドロキシ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物５０－１）
表題化合物（５０－１）は、化合物４９－１の合成で記載した手順により、(2S)-2-[[(2S)-4-(5-アミノ-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物１の合成に向け、工程２に記載のとおりに製造）から製造した（３９ｍｇ、収率６５％）。ＨＰＬＣ純度：８０％；MS (ESI+) m/z=586 [M+H]⁺。

【0416】

(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(1,1,2,2-テトラジュウテリオ-2-メチルスルホニルオキシ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物５０－２）
表題化合物（５０－２）は、化合物４９－２の合成で記載した手順により、化合物５０－１から製造した（２６ｍｇ、収率７１％）。MS (ESI+) m/z=742 [M+H]⁺。

【0417】

(2S)-2-[[(2S)-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（化合物５０－３）
表題化合物（５０－３）は、化合物４９－３の合成で記載した手順により、化合物５０－２から製造した（２０ｍｇ、収率９２％）。ＨＰＬＣ純度：９０％；MS (ESI+) m/z=622 [M+H]⁺。

【0418】

(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸エチルエステル（実施例化合物５０）
表題化合物（実施例化合物５０）を、実施例化合物１の合成における工程５で記載した手順により、条件を若干変更（溶媒はＤＣＭ、反応時間は１時間）して、化合物５０－３から製造した（９ｍｇ、収率４％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z=522 [M+H]⁺。

【0419】

実施例５１ (2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-4-[5-[ビス(2-クロロ-1,1,2,2-テトラジュウテリオ-エチル)アミノ]-1-メチル-ベンズイミダゾール-2-イル]ブタノイル]アミノ]-4-メチル-ペンタン酸；二塩酸塩（実施例化合物５１）

【化85】

【0420】

実施例５１をスキーム１６に従い行った。この化合物を、実施例化合物４９の合成における最終工程で記載した手順により、化合物５０－３から製造した（８ｍｇ、収率６８％）。ＨＰＬＣ純度：９５％；MS (ESI+) m/z=494 [M+H]⁺。

【0421】

生物学的実施例：
生物学的実施例１ ＭＭ．１Ｓ細胞生存率アッセイによるin vitro細胞毒性の検討
方法： ＭＭ．１Ｓ細胞を、１０μｇ／μＬペニシリン／ストレプトマイシン、１０％熱不活化ＦＢＳ、０．１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１× ＭＥＭ ＮＥＡＡ（ThermoFisher）及び１ｍＭ ＨＥＰＥＳを補充したＲＰＭＩ培地１６４０（ＩＸ）で培養した。細胞が対数期になるまで増殖させた後、試験化合物に曝露した。

【0422】

試験化合物（実施例化合物１～３６、３８～４１及び４５～４８）及び比較化合物（ベンダムスチン、ブスルファン、メルファラン、クロラムブシル及び4-ヒドロペルオキシシクロホスファミド）を１００％ＤＭＳＯに溶かし、３８４アッセイプレートに入れた。ＤＭＳＯを更に添加して、全てのウェルで同じ最終ＤＭＳＯ濃度（０．２％）とした。１０００００細胞／ｍＬの細胞懸濁液２５μＬを各ウェルに加えた。細胞をＣＯ_２インキュベーター中、３７℃で７２時間培養した。プレートを３０分間室温にした後、全てのウェルにCellTiter-Glo（登録商標）2.0（Promega）試薬２０μＬを添加した。次いで、プレートを２０分間安定化させた後、Envisionプレートリーダーで発光（発光フィルター７００ｎｍ）を記録した。プレートリーダーのデータを、陰性対照（処理なし）と陽性対照（細胞を４００μＭクロルプロマジンで７２時間処理）で正規化し、４パラメーターロジスティック回帰曲線にフィッティングさせてＩＣ_５０を算出した。

【0423】

結果： 試験化合物を、ＭＭ．１Ｓ細胞増殖を阻害し、in vitroで細胞毒性を引き起こす能力について評価した。実験から用量応答が抽出でき、表１に示す。試験化合物のＭＭ．１Ｓ細胞に対する細胞毒性は良好であった。このアッセイにおいて、実施例化合物１～１６、２１～３２、３４～３６、３８及び４５～４８は、ベンダムスチン、ブスルファン、メルファラン、クロラムブシル及び4-ヒドロペルオキシシクロホスファミドよりも細胞毒性であることが判明した。

【0424】

【表1】

【0425】

生物学的実施例２ 血液細胞株、ヒト末梢血単核細胞及び正常線維芽細胞によるin vitro細胞毒性の検討
方法： 実験に使用した細胞株を、表２に示す。全ての細胞をＲＰＭＩ培地１６４０（ＩＸ）で培養した。全ての培地に、１０μｇ／μＬペニシリン／ストレプトマイシン、１０％熱不活化ＦＢＳ、０．１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１× ＭＥＭ ＮＥＡＡ（ThermoFisher）及び１ｍＭ ＨＥＰＥＳを補充した。ＤＥＲＬ－２細胞では、ＦＢＳは２０％とし、４０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２を添加した。ｈＰＢＭＣを解凍し、一晩順化させ、次いで、１０μｇ／ｍＬ ＰＨＡ－Ｍ及び４０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２で４時間刺激した後に、試験化合物に曝露した。ｈＰＢＭＣを除く全ての細胞は、対数期になるまで増殖させた後、試験化合物に曝露した。

【0426】

【表2】

【0427】

試験化合物を１００％ＤＭＳＯに溶かし、３８４アッセイプレートに入れた。ＤＭＳＯを更に添加して、全てのウェルで同じ最終ＤＭＳＯ濃度（０．２％）とした。１０００００細胞／ｍＬの細胞懸濁液２５μＬを各ウェルに加えた。細胞をＣＯ_２インキュベーター中、３７℃で７２時間培養した。プレートを３０分間室温にした後、全てのウェルにCellTiter-Glo（登録商標）2.0（Promega）試薬２０μＬを添加した。次いで、プレートを２０分間安定化させた後、Envisionプレートリーダーで発光（発光フィルター７００ｎｍ）を記録した。プレートリーダーのデータを、陰性対照（処理なし）と陽性対照（細胞を４００μＭクロルプロマジンで７２時間処理）で正規化し、４パラメーターロジスティック回帰曲線にフィッティングさせてＩＣ_５０を算出した。

【0428】

結果： 試験化合物を、血液学的起源のいくつかの細胞株を使用して、in vitroで細胞増殖を阻害する能力について評価した。細胞毒性は、悪性ではないヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）及び線維芽細胞（ＢＪ）でも評価した。表３に、試験を行った全ての化合物の実験から抽出した用量応答を示す。表では、結果を、細胞毒性ＩＣ_５０ μＭ±標準偏差（試験数）として示す。ｎｄは、値を求めなかったことを意味する。

【0429】

【表3-1】

【0430】

【表3-2】

【0431】

本発明の化合物は、従来技術の２つの化合物よりも常に細胞毒性が高いことが理解できる。

【0432】

生物学的実施例３ 実施例１８（実施例１による処理後）、ベンダムスチン及びメルファランの細胞保持／流出の検討
方法： ２×１０^６細胞／ｍＬのＭＭ．１Ｓ細胞を、９６ウェルプレートに２５０μＬ／ウェルで播種した。試験化合物の存在下で、細胞を５分、１５分及び６０分間インキュベートした後、４℃で５分間遠心分離して細胞をペレット化した。細胞培地を第２のプレートに直ちに回収し、分析するまで－８０℃で保管した。ペレット化した細胞を氷冷ＰＢＳで１回洗浄した後、分析するまで－８０℃で保管した。

【0433】

細胞を溶解し、内部標準を含むアセトニトリル：ジメチルホルムアミド（９：１）で培地中のタンパク質を沈殿させた。試料を遠心分離し、上清をＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（ACQUITY UPLC -Xevo TQ-S micro）で分析し、化合物濃度を求めた。

【0434】

実施例化合物１、ベンダムスチン及びメルファランを試験化合物として使用した。

【0435】

結果： 結果を図１に示す。図１（Ａ）は、ベンダムスチン及び実施例化合物１から形成された代謝化合物（実施例化合物１８）の、細胞内及び細胞外の濃度を示す。実施例化合物１８は、実施例化合物１による処理後に細胞内で急速に形成され、細胞外の培地中では低レベルであることが理解できる。この結果は、細胞内で実施例化合物１が加水分解され、実施例化合物１の代謝物が細胞内に保持されたことを示す。ベンダムスチンの細胞内濃度は低く、そのレベルは経時的に減少する。ベンダムスチンの細胞外濃度は極めて高く、経時的に減少した。

【0436】

図１（Ｂ）は、実験中のメルファランの細胞内及び細胞外濃度を示す。ＭＭ．１Ｓ細胞をメルファランによってin vitroで処理した後、細胞内のメルファランの濃度は低かった。細胞外のメルファランの濃度は高く、実験中一定であった。

【0437】

生物学的実施例４ ニワトリ胚異種移植モデルによる試験化合物のin vivo細胞毒性の検討
方法： ３×１０^６個のＳＵ－ＤＨＬ－４腫瘍細胞を、９日目（受精後）に、白色レグホン受精卵に接種した。１００μＬの実施例化合物１（８．４μＭ（０．００８ｍｇ／ｋｇ）、３３．５μＭ（０．０３３ｍｇ／ｋｇ）、１６７．５μＭ（０．１６４ｍｇ／ｋｇ））、ベンダムスチン（８．４μＭ（０．００５ｍｇ／ｋｇ）、３３．５μＭ（０．０２ｍｇ／ｋｇ）、１６７．５μＭ（０．１ｍｇ／ｋｇ））又はビヒクルのいずれかを、１１、１３、１５及び１７日目に、生存卵に注射した。１８日目に、腫瘍を除去して秤量した。

【0438】

結果： 実施例化合物１では、腫瘍重量に対する用量依存的な効果が明らかであった（図２）。実施例化合物１について、ビヒクルと比較した腫瘍減少は、８．４μＭ、３３．５μＭ及び１６７．５μＭで、それぞれ、３８％、７０％及び８２％であった。ベンダムスチンについて、ビヒクルと比較した腫瘍減少は、３３．５μＭ及び１６７．５μＭでのみ明らかで、それぞれ３０％及び７６％の減少であった。したがって、実施例化合物１は、このモデルにおいて強力な腫瘍細胞毒性を示す。

【0439】

生物学的実施例５ ＰＤＣ化合物及び代謝物の細胞保持／流出の検討
方法： 生物学的実施例３で説明の方法。

【0440】

実施例化合物１、２、３、４、６、７及び１０を検討した。試験を行った全ての化合物から細胞内代謝物が形成される。細胞の処理に使用した化合物は、エステル加水分解化合物（代謝物Ａという）及びアミド加水分解化合物（代謝物Ｂという）に代謝された。実施例化合物の構造とそれぞれの化合物の２つの代謝物の構造を、表４に示す。試験を行った条件で形成された代謝物Ｂは、実施例１７及び１８の構造の化合物であった。

【0441】

【化86】

【0442】

【表4-1】

【0443】

【表4-2】

【0444】

代謝物の細胞内濃度は、経時的にゆっくりと減少した。細胞外の培地中では、代謝物は、ほとんど検出されないか、又は検出不可能である。この結果は、細胞内で実施例化合物が加水分解され、実施例化合物の代謝物が細胞内に保持されたことを示す。

【0445】

生物学的実施例６ 試験化合物による直接的なＤＮＡ損傷の検討
方法： ＤＮＡを、Furda et al., Methods Mol Biol, 2012に記載のプロトコルに従い、QIAGENゲノムチップ20/GによってＭＭ．１Ｓ細胞から調製した。１μｇのＤＮＡを０．２５μＭの化合物により３７℃で３０分間処理した。ＤＭＳＯを対照として使用した。処理を行ったＤＮＡ２０ｎｇを、Phusion Hot Start II High Fidelity PCR Master Mix（Thermo Scientific）と、ＨＰＲＴに対するプライマー又はミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）に対するプライマーのいずれかを使用してＰＣＲ増幅し、それぞれ、１０．４ｋｂ又は８．９ｋｂの断片を得た。ＰＣＲ反応物を１％アガロースゲルで分離し、ChemiDoc（商標）MP Imaging System（BioRad）で可視化した。実施例化合物１、２及び３８、並びに、化合物１の代謝物である化合物１８及び２０を検討した。それらを、ベンダムスチン、メルファラン及びＤＭＳＯ対照と比較した。ＨＰＲＴプライマーを用いた化合物１、２、１８及び２０の結果を図４（Ａ）に示し、ｍｔＤＮＡプライマーを用いた結果を図４（Ｂ）に示す。ＨＰＲＴプライマー及びｍｔＤＮＡプライマーを用いた化合物１８及び３８の結果を図４（Ｃ）に示す。

【0446】

結果： 図４から、メルファラン及びベンダムスチンは、試験を行った濃度では、核及びミトコンドリアＤＮＡの両者で、ＤＮＡ損傷効果がないか、又は非常にわずかであったことが理解できる。実施例化合物１及び２は、ＰＣＲバンドがゲル上で検出できなかったという事実が示すように、核及びミトコンドリアＤＮＡの両者に対し、強力なＤＮＡ損傷効果を有した。実施例化合物１８及び３８は、核及びミトコンドリアＤＮＡの両者を効果的に損傷し、弱いＰＣＲバンドのみが検出された。実施例化合物２０もＤＮＡ損傷効果を有したが、実施例化合物１、２及び１８と比較してその程度は小さく、ベンダムスチン又はメルファランよりは大きかった。

【0447】

生物学的実施例７ 試験化合物によるＤＮＡ断片化の検討
方法： １×１０^６個のＭＭ．１Ｓ細胞（CRL-2974, ATCC）を、０．００６μＭ、０．０６μＭ、０．６μＭ、６μＭの実施例化合物１又はベンダムスチンで２４時間処理した。インキュベーション後、細胞をＰＢＳ（10010-015, Gibco）で洗浄し、フローサイトメトリー固定化緩衝液（FC004, R&D Systems）で１０分間固定し、７０％エタノール中、－２０℃で一晩保管した。デオキシチミジン類似体（ＢｒｄＵＴＰ）を加えし、ＤＮＡ切断部位を標識した。翌日、細胞を洗浄し、製造業者のプロトコルに従ってAPO-BrdU（商標）TUNEL Assay Kitで染色し、続いてBD FACSCanto（商標）IIで分析した。ＴＵＮＥＬ陽性細胞の割合は、断片化したＤＮＡを有する細胞の割合を示す。

【0448】

結果： ２４時間のインキュベーションにおけるＤＮＡ損傷に対する実施例化合物１とベンダムスチンの用量応答効果を図５（Ａ）に示す。全てのデータは、平均±ＳＤ（ｎ＝２）として表した。実施例化合物１への２４時間の曝露は、用量依存的な様式でＤＮＡ損傷を誘導したが、ベンダムスチンのＤＮＡ損傷に対する明らかな効果は、２４時間のインキュベーションでは認められなかった。０．６μＭの試験化合物又はベンダムスチン（ｎ＝２）による２４時間処理後のAlexa fluor 488強度の代表的なＦＡＣＳヒストグラムを図５（Ｂ）に示す。上の２つは実施例化合物１に、中央の２つはベンダムスチンに、下の２つはＤＭＳＯ対照に関するものである。注目すべきことに、０．６μＭの実施例化合物１による２４時間の処理は、試験を行った９０％を超える細胞でＤＮＡを切断化したが、ベンダムスチンでは、そうではなかった。実施例化合物１は、ＤＮＡ損傷を引き起こすことにおいてより強力である。

【図1(A)】

【図1(B)】

【図2】

【図3(A)】

【図3(B)】

【図3(C)】

【図3(D)】

【図3(E)】

【図3(F)】

【図3(G)】

【図4】

【図5(A)】

【図5(B)】

【国際調査報告】