▶ ハーバー・バイオメド・（シャンハイ）・カンパニー・リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-06-28
(54)【発明の名称】二重抗体の組み合わせ及びその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/62 20060101AFI20240621BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20240621BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20240621BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240621BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240621BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240621BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240621BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240621BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240621BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240621BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240621BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240621BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240621BHJP
A61K 35/74 20150101ALI20240621BHJP
A61K 35/12 20150101ALI20240621BHJP
【ＦＩ】
C12N15/62 Z
C07K16/46 ZNA
C07K16/28
C12N15/13
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
A61K39/395 N
A61K39/395 T
A61K39/395 U
A61P35/00
A61P43/00 121
A61K48/00
A61K35/74
A61K35/12
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023578000
(86)(22)【出願日】2022-06-17
(85)【翻訳文提出日】2024-02-15
(86)【国際出願番号】 CN2022099607
(87)【国際公開番号】W WO2022262868
(87)【国際公開日】2022-12-22
(31)【優先権主張番号】202110678326.X
(32)【優先日】2021-06-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202210634042.5
(32)【優先日】2022-06-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520223321
【氏名又は名称】ハーバー・バイオメド・（シャンハイ）・カンパニー・リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＨＡＲＢＯＵＲ ＢＩＯＭＥＤ （ＳＨＡＮＧＨＡＩ） ＣＯ．， ＬＴＤ
(74)【代理人】
【識別番号】110001818
【氏名又は名称】弁理士法人Ｒ＆Ｃ
(72)【発明者】
【氏名】▲呉▼ ▲暁▼▲東▼
(72)【発明者】
【氏名】▲鐘▼ ▲シェン▼
(72)【発明者】
【氏名】杜 芳芳
(72)【発明者】
【氏名】▲賈▼ ▲鴿▼子
(72)【発明者】
【氏名】王 永▲強▼
(72)【発明者】
【氏名】石 ▲レイ▼
(72)【発明者】
【氏名】何 云
(72)【発明者】
【氏名】戒 一平
【テーマコード（参考）】
4B065
4C084
4C085
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA01X
4B065AA26X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA87X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065AC20
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C084AA13
4C084MA02
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZB26
4C084ZC75
4C085AA14
4C085BB01
4C085BB11
4C085BB31
4C085DD62
4C085EE03
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB65
4C087BC34
4C087CA12
4C087MA02
4C087NA05
4C087NA14
4C087ZB26
4C087ZC75
4H045AA11
4H045AA30
4H045AA40
4H045BA10
4H045BA40
4H045CA40
4H045DA75
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
二重特異性抗体Ｉと、二重特異性抗体ＩＩとを含む二重抗体の組み合わせ及びその使用を提供し、前記二重特異性抗体Ｉは、ＣＤ３を標的とするドメインと、腫瘍関連抗原を標的とするドメインとを含み、前記二重特異性抗体ＩＩは、４－１ＢＢを標的とするドメインと、腫瘍関連抗原を標的とするドメインとを含む。それを含む医薬組成物、キット、キットセット及び投与装置、並びにそれらを使用してがんを治療する方法も開示する。二重特異性抗体の併用は、Ｔ細胞の枯渇を減少させるだけでなく、後期の腫瘍殺傷を有意に促進することができる。さらに、二重特異性抗体の併用は、特に同じ腫瘍関連抗原の異なるエピトープを標的とする場合、又は異なる腫瘍関連抗原を標的とする場合に、強い相乗的殺傷効果を有する。前記二重抗体の組み合わせ及びそれを含む医薬組成物の使用は、固形腫瘍の治療に潜在的に臨床的に有効な解決策を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
第１治療剤としての二重特異性抗体Ｉと、第２治療剤としての二重特異性抗体ＩＩとを含む二重抗体の組み合わせであって、前記二重特異性抗体Ｉは、ＣＤ３を標的とするドメインと、腫瘍関連抗原を標的とするドメインとを含み、前記二重特異性抗体ＩＩは、４－１ＢＢを標的とするドメインと、腫瘍関連抗原を標的とするドメインとを含み；好ましくは、前記二重特異性抗体Ｉにおいて、前記腫瘍関連抗原のドメインは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインであり；及び／又は、前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、腫瘍関連抗原を標的とするドメインは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン又はＨｅｒ２を標的とするドメインであり；より好ましくは、前記二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩにおけるＢ７－Ｈ４を標的とするドメインは、それぞれＢ７－Ｈ４の異なるエピトープを標的とすることを特徴とする、二重抗体の組み合わせ。
【請求項2】
前記二重特異性抗体Ｉは、Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ又はＦａｂ－Ｆｃ－（ＶＨ）ｎの非対称構造であり、前記二重特異性抗体ＩＩは、ＩｇＧ－ＶＨの対称構造であり；ここで、ｎは１以上の自然数であり；好ましくは、前記二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインはｓｃＦｖ又はＶＨ＿Ａ－ＶＨ＿Ｂであり、前記ＶＨ＿ＡとＶＨ＿Ｂは同一又は異なり、ＣＤ３を標的とするドメインはＦａｂであり、前記Ｆａｂと前記ｓｃＦｖ又はＶＨ＿Ａ－ＶＨ＿Ｂはヒンジ領域又はリンカーペプチドを介してＦｃに連結され；前記Ｆｃは、好ましくは、ＩｇＧ１のＦｃであり、前記リンカーペプチドのアミノ酸配列は、配列番号９３～９６、１２４に示され、より好ましくは、前記Ｆｃは、例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ突然変異、「ｋｎｏｂ」突然変異Ｔ３６６Ｗと「Ｈｏｌｅ」突然変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡとＹ４０７Ｖ、及び／又は、「ｋｎｏｂ」突然変異Ｓ３５４Ｃと「Ｈｏｌｅ」突然変異Ｙ３４９Ｃなどの１～３個のアミノ酸の付加、欠失又は突然変異を含み；及び／又は
前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン又はＨｅｒ２を標的とするドメインはＩｇＧであり、前記ＩｇＧのＦｃは、好ましくは、例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ突然変異などの１～３個のアミノ酸の付加、欠失又は突然変異を含み；４－１ＢＢを標的とするドメインはＶＨ又はｓｃＦｖであり；前記Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン又はＨｅｒ２を標的とするドメインと前記４－１ＢＢを標的とするドメインは、リンカーペプチドを介して連結され、前記リンカーペプチドのアミノ酸配列は、好ましくは、配列番号９３～９６に示されることを特徴とする、請求項１に記載の二重抗体の組み合わせ。
【請求項3】
前記二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示され；或いは、前記Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインはＶＨ＿Ａ－ＶＨ＿Ｂを含み、前記ＶＨ＿Ａ及びＶＨ＿ＢのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、又は前記ＶＨ＿ＡのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、前記ＶＨ＿ＢのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９７、１０３、９９に示され；ＣＤ３を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；及び／又は、
前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示され；或いは、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示され；Ｈｅｒ２を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示され；
４－１ＢＢを標的とするドメインはＶＨであり、そのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示され、又は配列番号７、２２、３０に示され；
好ましくは、前記二重特異性抗体ＩＩは下記の群から選択され：
ａ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含み；ここで、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示され；或いは、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示され；
ｂ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｈｅｒ２を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含み；ここで、Ｈｅｒ２を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示され；
より好ましくは、前記二重抗体の組み合わせは下記から選択され：
ｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示され；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示され；
ｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示され；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示され；
ｉｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのＶＨ＿Ａ及びＶＨ＿ＢのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示され；
ｉｖ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのＶＨ＿Ａ及びＶＨ＿ＢのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示され；
ｖ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのＶＨ＿ＡのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、ＶＨ＿Ｂのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９７、１０３、９９に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示され；
ｖｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのＶＨ＿ＡのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、ＶＨ＿Ｂのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９７、１０３、９９に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の二重抗体の組み合わせ。
【請求項4】
前記二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示され；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；或いは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示され；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６４に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；或いは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２２に示されたアミノ酸配列を含み、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；或いは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２３に示されたアミノ酸配列を含み、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６４に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；及び／又は、前記二重特異性抗体ＩＩは下記の群から選択され：
ａ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含み；ここで、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６５に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７１に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＶＨのアミノ酸配列は配列番号６８に示され；或いは、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示され；
ｂ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｈｅｒ２を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含み；Ｈｅｒ２を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６２に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示され；
好ましくは、前記二重抗体の組み合わせは下記から選択され：
ｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示され；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６５に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７１に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６８に示され；
ｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示され；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６２に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示され；
ｉｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２２に示されたアミノ酸配列を含み；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６５に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７１に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６８に示され；
ｉｖ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２２に示されたアミノ酸配列を含み；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６２に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示され；
ｖ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２３に示されたアミノ酸配列を含み；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６５に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７１に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６８に示され；
ｖｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２３に示されたアミノ酸配列を含み；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６２に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示されることを特徴とする、請求項１～３のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせ。
【請求項5】
前記二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号９２、１１５、１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；或いは、前記Ｂ７－Ｈ４のドメインのアミノ酸配列は、配列番号９２、１１５、１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７５、配列番号８１に示され；及び／又は、前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、又はそれぞれ配列番号７７、配列番号８３に示され；Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３、配列番号８０に示され；及び／又は、４－１ＢＢを標的とするドメインの重鎖のアミノ酸配列は配列番号７４又は７９に示され；
好ましくは、前記二重抗体の組み合わせは下記から選択され：
ｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号９２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に直接に連結され；
ｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号９２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、配列番号９５に示されたリンカーペプチドを介してＢ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に連結され；
ｉｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号９２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３、配列番号８０に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７４に示され；
ｉｖ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１５に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に直接に連結され；
ｖ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１５に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、配列番号９５に示されたリンカーペプチドを介してＢ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に連結され；
ｖｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１５に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３、配列番号８０に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７４に示され；
ｖｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に直接に連結され；
ｖｉｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、配列番号９５に示されたリンカーペプチドを介してＢ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に連結され；
ｉｘ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３、配列番号８０に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７４に示されることを特徴とする、請求項１～４のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせ。
【請求項6】
二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩ、又は二重特異性抗体Ｉ及びウレルマブ（Ｕｒｅｌｕｍａｂ）を含む二重抗体の組み合わせであって；前記二重特異性抗体Ｉは、ポリペプチド鎖－１、ポリペプチド鎖－２及びポリペプチド鎖－３の３つのポリペプチド鎖を含み、そのアミノ酸配列はそれぞれ配列番号８１、配列番号８８、配列番号８７；又は配列番号８１、配列番号８６、配列番号８７；又は配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５；又は配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１６に示され；及び／又は、前記二重特異性抗体ＩＩは、短鎖及び長鎖の２つのポリペプチド鎖を含み、前記短鎖及び長鎖のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号８２及び配列番号８５、配列番号８２及び配列番号８９、配列番号８２及び配列番号９０、配列番号８３及び配列番号９１、配列番号８０及び配列番号８４に示され；
好ましくは、前記二重抗体の組み合わせは下記から選択され：
ｉ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８１、配列番号８８、配列番号８７に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８９に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｉｉ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８１、配列番号８８、配列番号８７に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８５に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｉｉｉ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８１、配列番号８８、配列番号８７に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８０及び配列番号８４に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｉｖ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８９に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｖ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８５に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｖｉ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８０及び配列番号８４に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｖｉｉ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１６に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８９に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｖｉｉｉ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１６に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８５に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｉｘ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１６に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８０及び配列番号８４に示された２つのポリペプチド鎖を含むことを特徴とする、二重抗体の組み合わせ。
【請求項7】
請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩをコードすることを特徴とする、単離された核酸。
【請求項8】
請求項７に記載の単離された核酸を含むことを特徴とする、組換え発現ベクター。
【請求項9】
請求項７に記載の単離された核酸又は請求項８に記載の組換え発現ベクターを含む形質転換体であって、好ましくは、前記形質転換体の宿主は原核細胞又は真核細胞であり、前記原核細胞は好ましくは大腸菌であり、前記真核細胞は好ましくは酵母又は哺乳動物細胞であることを特徴とする、形質転換体。
【請求項10】
請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせを含み；好ましくは、免疫チェックポイント抗体及び／又は化学療法薬などの第３治療剤をさらに含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項11】
請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせ、請求項７に記載の単離された核酸、請求項８に記載の組換え発現ベクター、請求項９に記載の形質転換体、又は請求項１０に記載の医薬組成物、及び任意選択の説明書を含むことを特徴とする、キット。
【請求項12】
がんを治療するための医薬の製造における、請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせ、請求項７に記載の単離された核酸、請求項８に記載の組換え発現ベクター、請求項９に記載の形質転換体、又は請求項１０に記載の医薬組成物の使用であって、好ましくは、前記がんは血液腫瘍又は固形腫瘍であり、前記固形腫瘍は好ましくは乳がん、卵巣がん、子宮内膜がんである、使用。
【請求項13】
キットＩ及びキットＩＩを含むキットセットであって、前記キットＩは、請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体Ｉを含み、前記キットＩＩは、請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体ＩＩを含み；或いは、前記キットＩは、請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩを含み；前記キットＩＩは、免疫チェックポイント抗体及び／又は化学療法薬などの第３治療剤を含むことを特徴とする、キットセット。
【請求項14】
（１）請求項１０に記載の医薬組成物をそれを必要とする対象に投与するための注入モジュールと、（２）任意選択の薬効監視モジュールとを含むことを特徴とする、投与装置。
【請求項15】
請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせ、請求項１０に記載の医薬組成物、請求項１３に記載のキットセット、又は請求項１４に記載の投与装置をそれを必要とする対象に使用する、がんを治療する方法であって、好ましくは、前記がんは血液腫瘍又は固形腫瘍であり、前記固形腫瘍は好ましくは乳がん、卵巣がん、子宮内膜がんであることを特徴とする、方法。
【請求項16】
前記二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩは、同時に又は逐次的に投与されることを特徴とする、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は出願日が２０２１年６月１８日である中国特許出願２０２１１０６７８３２６Ｘ、出願日が２０２２年６月６日である中国特許出願２０２２１０６３４０４２５の優先権を主張する。本出願は上記の中国特許出願の全文を引用する。
【0002】
（技術分野）
本発明は、生物医薬品の分野に属し、具体的には二重抗体の組み合わせ、それを含む医薬組成物、及びその使用に関する。
本発明は、生物医薬品の分野に属し、具体的には二重抗体の組み合わせ、それを含む医薬組成物、及びその使用に関する。
【背景技術】
【0003】
腫瘍細胞は、細胞表面の主要組織適合性複合体Ｉ（ＭＨＣＩ）を下方制御することにより、腫瘍抗原の提示を減少させ、生体の抗腫瘍免疫応答を回避することができる。ＣＤ３二重特異性抗体は、Ｔ細胞上のＣＤ３分子及び腫瘍細胞上の腫瘍関連抗原に同時に結合することにより、免疫シナプスの形成を媒介し、腫瘍細胞を死滅させる。理論的には、ＣＤ３二重特異性抗体は、Ｔ細胞上のＣＤ３分子を直接活性化することにより、組織適合性複合体による抗原の提示に依存せず、同時に抗原特異的Ｔ細胞の活性化に依存せず、ポリクローナルＴ細胞を活性化することができるため、Ｔ細胞による腫瘍細胞の死滅を媒介する強力な役割を果たす。２０１４年、ＢｉＴＥと呼ばれるＡｍｇｅｎのブリナツモマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）は、再発／難治性のＢ細胞性急性リンパ腫（Ｂ－ＡＬＬ）の治療薬として販売され、良好な治療効果を達成した。ブリナツモマブ二重特異性抗体は、一端が腫瘍細胞上のＣＤ１９に結合し、もう一端がＴ細胞上のＣＤ３に結合することにより、Ｔ細胞による強力な腫瘍細胞の死滅効果を媒介することができ、患者の初期奏効率は５０％を超えている（Ｂｅｊｎｊａｍｉｎ ａｎｄ Ｓｔｅｉｎ２０１６，Ｔｈｅｒ Ａｄｖ Ｈｅｍａｔｏｌ， ７（３）：１４２－１４６）。
【0004】
ＣＤ３二重特異性抗体は、現在臨床試験で開発中の二重特異性抗体のほぼ半分を占め、その約２／３は血液腫瘍に対するものであり、１／３は固形腫瘍に対するものである（Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： ａ ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｐｉｐｅｌｉｎｅ． Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ， ２０１９ Ａｕｇ； １８（８）：５８５－６０８）。固形腫瘍に対するＣＤ３二重特異性抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験又は動物実験で強い抗腫瘍活性を示しているが、その臨床効果は現在満足のいくものではない。固形腫瘍は多くの間質細胞と細胞外マトリックスを含むことが多く、形成された物理的障壁がリンパ球の浸潤を阻止し、固形腫瘍では腫瘍細胞の数に比べてＴ細胞が占める割合は非常に小さい；同時に、腫瘍内部免疫阻害性微小環境は、Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣ、ＴＡＭ、免疫チェックポイントの発現を含む；ＣＤ３二重特異性抗体は単独では、Ｔ細胞に第２シグナルがない場合にＴ細胞のアポトーシスを引き起こす可能性が高い。これらの要因はすべて、固形腫瘍におけるＣＤ３二重特異性抗体の臨床効果の低下に寄与している可能性がある。文献により、ＣＤ３二重特異性抗体と４－１ＢＢなどの第２シグナルとの併用、又はＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ細胞内セグメントへの４－１ＢＢの組み込みにより、Ｔ細胞の活性化を有意に促進し、Ｔ細胞の枯渇を減少させ、これによって治療効果を向上させることができる（Ｔｒａｎｓｌ． Ｍｅｄ． ２０１９； １１， ｅａａｖ５９８９）。
【0005】
Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１、Ｂ７ｈ．５、Ｂ７Ｓ１、Ｂ７ｘ、Ｂ７Ｈ４）は、Ｂ７／ＣＤ２８スーパーファミリーに属する膜貫通タンパク質である。Ｂ７－Ｈ４タンパク質は、ほとんどの正常組織では発現されないか、乳管や小葉、卵管上皮、子宮内膜腺などの組織など、生体の一部の管上皮細胞でのみ低レベルで発現される。しかし、Ｂ７－Ｈ４は、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、特にトリプルネガティブ乳がんの腫瘍細胞の表面で過剰発現される。乳がんは世界で２番目に多い悪性腫瘍であり、その発生率は徐々に増加している。乳がんは女性のがん患者の約４分の１を占める。卵巣がんと子宮内膜がんは、女性の生殖器系によく見られる悪性腫瘍である。卵巣がんは婦人科悪性腫瘍の中で死亡率トップであり、子宮内膜がんは死亡に至る婦人科悪性腫瘍の中で第３位であり、より安全で効果的な治療法の開発が急務である。Ｂ７－Ｈ４がこの大きな腫瘍群では高発現され、正常組織では低発現されることを考慮すると、Ｂ７－Ｈ４を標的とする二重特異性抗体の開発は有望な治療手段である。
【0006】
従って、Ｔ細胞の第１シグナルと第２シグナルを同時に提供し、腫瘍を標的とすることができる抗体製品を開発することは非常に重要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0007】
【非特許文献1】Ｂｅｊｎｊａｍｉｎ ａｎｄ Ｓｔｅｉｎ２０１６，Ｔｈｅｒ Ａｄｖ Ｈｅｍａｔｏｌ， ７（３）：１４２－１４６
【非特許文献2】Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： ａ ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｐｉｐｅｌｉｎｅ． Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ， ２０１９ Ａｕｇ； １８（８）：５８５－６０８
【非特許文献3】Ｔｒａｎｓｌ． Ｍｅｄ． ２０１９； １１， ｅａａｖ５９８９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
有効な二重抗体の組み合わせ（即ち、二重抗体の組み合わせ）が不足し、それをがんの治療に使用するという従来技術の欠点を解決するために、本発明は、二重抗体の組み合わせ、それを含む医薬組成物、及びその使用を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0009】
上記の技術的課題を解決するために、本発明の技術的解決策１は、第１治療剤としての二重特異性抗体Ｉと、第２治療剤としての二重特異性抗体ＩＩとを含む二重抗体の組み合わせを提供し、ここで、前記二重特異性抗体Ｉは、ＣＤ３を標的とするドメインと、腫瘍関連抗原（ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ、ＴＡＡ）を標的とするドメインとを含み、前記二重特異性抗体ＩＩは、４－１ＢＢを標的とするドメインと、腫瘍関連抗原を標的とするドメインとを含む。
【0010】
好ましくは、前記二重特異性抗体Ｉにおいて、前記腫瘍関連抗原のドメインは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインである；及び／又は、前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、腫瘍関連抗原を標的とするドメインは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン又はＨｅｒ２を標的とするドメインである。
【0011】
より好ましくは、前記二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩにおけるＢ７－Ｈ４を標的とするドメインは、それぞれＢ７－Ｈ４の異なるエピトープを標的とする。
【0012】
いくつかの好ましい実施例において、前記二重特異性抗体Ｉは、Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ又はＦａｂ－Ｆｃ－（ＶＨ）ｎの非対称構造であり、前記二重特異性抗体ＩＩは、ＩｇＧ－ＶＨの対称構造である；ここで、ｎは１以上の自然数である。
【0013】
好ましくは、前記二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインはｓｃＦｖ又はＶＨ＿Ａ－ＶＨ＿Ｂであり、前記ＶＨ＿ＡとＶＨ＿Ｂは同一又は異なる；ＣＤ３を標的とするドメインはＦａｂであり、前記Ｆａｂと前記ｓｃＦｖはヒンジ領域又はリンカーペプチドを介してＦｃに連結される；或いは前記Ｆａｂと前記ＶＨ＿Ａ－ＶＨ＿Ｂはヒンジ領域又はリンカーペプチドを介してＦｃに連結される；前記Ｆｃは、好ましくは、ＩｇＧ１のＦｃであり、前記リンカーペプチドのアミノ酸配列は、配列番号９３～９６、１２４に示され、より好ましくは、前記Ｆｃは、例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ突然変異、「ｋｎｏｂ」突然変異Ｔ３６６Ｗと「Ｈｏｌｅ」突然変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡとＹ４０７Ｖ、及び／又は、「ｋｎｏｂ」突然変異Ｓ３５４Ｃと「Ｈｏｌｅ」突然変異Ｙ３４９Ｃなどの１～３個のアミノ酸の付加、欠失又は突然変異を含む；及び／又は
前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン又はＨｅｒ２を標的とするドメインはＩｇＧであり、前記ＩｇＧのＦｃは、好ましくは、例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ突然変異などの１～３個のアミノ酸の付加、欠失又は突然変異を含む；４－１ＢＢを標的とするドメインはＶＨ又はｓｃＦｖである；前記Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン又はＨｅｒ２を標的とするドメインは前記４－１ＢＢを標的とするドメインに、リンカーペプチドを介して連結され、前記リンカーペプチドのアミノ酸配列は、好ましくは配列番号９３～９６に示される。
前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン又はＨｅｒ２を標的とするドメインはＩｇＧであり、前記ＩｇＧのＦｃは、好ましくは、例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ突然変異などの１～３個のアミノ酸の付加、欠失又は突然変異を含む；４－１ＢＢを標的とするドメインはＶＨ又はｓｃＦｖである；前記Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン又はＨｅｒ２を標的とするドメインは前記４－１ＢＢを標的とするドメインに、リンカーペプチドを介して連結され、前記リンカーペプチドのアミノ酸配列は、好ましくは配列番号９３～９６に示される。
【0014】
他のいくつかの好ましい実施例において、前記二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示される；或いは、前記Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインはＶＨ＿Ａ－ＶＨ＿Ｂを含み、前記ＶＨ＿Ａ及びＶＨ＿ＢのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、又は前記ＶＨ＿ＡのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、前記ＶＨ＿ＢのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９７、１０３、９９に示される；ＣＤ３を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示される；及び／又は、
前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示される；或いは、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示される；Ｈｅｒ２を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示される。
前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示される；或いは、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示される；Ｈｅｒ２を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示される。
【0015】
４－１ＢＢを標的とするドメインはＶＨであり、そのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示され、又は配列番号７、２２、３０に示される。
【0016】
好ましくは、前記二重特異性抗体ＩＩは下記の群から選択される：
ａ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含む；ここで、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示される；或いは、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示される；
ｂ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｈｅｒ２を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含む；ここで、Ｈｅｒ２を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示される。
具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示される；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示される。
ａ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含む；ここで、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示される；或いは、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示される；
ｂ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｈｅｒ２を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含む；ここで、Ｈｅｒ２を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示される。
具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示される；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示される。
【0017】
他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示される；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示される。
【0018】
具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのＶＨ＿Ａ及びＶＨ＿ＢのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示される。
【0019】
他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのＶＨ＿Ａ及びＶＨ＿ＢのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示される。
【0020】
具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのＶＨ＿ＡのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、ＶＨ＿Ｂのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９７、１０３、９９に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示される。
【0021】
他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのＶＨ＿ＡのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、ＶＨ＿Ｂのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９７、１０３、９９に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示される。
【0022】
他のいくつかの好ましい実施例において、前記二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示される；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示される；或いは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示される；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６４に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示される；或いは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２２に示されたアミノ酸配列を含み、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示される；或いは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２３に示されたアミノ酸配列を含み、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６４に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示される；
及び／又は、前記二重特異性抗体ＩＩは下記の群から選択される：
ａ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含む；ここで、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６５に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７１に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＶＨのアミノ酸配列は配列番号６８に示される；或いは、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示される；
ｂ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｈｅｒ２を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含む；Ｈｅｒ２を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６２に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６９に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示される。
及び／又は、前記二重特異性抗体ＩＩは下記の群から選択される：
ａ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含む；ここで、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６５に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７１に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＶＨのアミノ酸配列は配列番号６８に示される；或いは、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示される；
ｂ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｈｅｒ２を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含む；Ｈｅｒ２を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６２に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６９に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示される。
【0023】
具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示される；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６５に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７１に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６８に示される。
【0024】
他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示される；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６２に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６９に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示される。
【0025】
具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２２に示されたアミノ酸配列を含む；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６５に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７１に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６８に示される。
【0026】
他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２２に示されたアミノ酸配列を含む；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６２に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６９に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示される。
【0027】
具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２３に示されたアミノ酸配列を含む；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６５に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７１に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６８に示される。
【0028】
他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２３に示されたアミノ酸配列を含む；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６２に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６９に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示される。他のいくつかの好ましい実施例において、前記二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は、配列番号９２、１１５、１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示される；或いは、前記Ｂ７－Ｈ４のドメインのアミノ酸配列は、配列番号９２、１１５、１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７５、配列番号８１に示される；及び／又は、
前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、又はそれぞれ配列番号７７、配列番号８３に示される；Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３、配列番号８０に示される。４－１ＢＢを標的とするドメインの重鎖のアミノ酸配列は配列番号７４又は７９に示される。
前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、又はそれぞれ配列番号７７、配列番号８３に示される；Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３、配列番号８０に示される。４－１ＢＢを標的とするドメインの重鎖のアミノ酸配列は配列番号７４又は７９に示される。
【0029】
具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号９２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に直接に連結される。
【0030】
他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号９２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、配列番号９５に示されたリンカーペプチドを介してＢ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に連結される。
【0031】
さらに他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号９２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３、配列番号８０に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７４に示される。
【0032】
具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１５に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に直接に連結される。
【0033】
他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１５に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、配列番号９５に示されたリンカーペプチドを介してＢ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に連結される。
【0034】
さらに他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１５に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号７８、配列番号８１に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３、配列番号８０に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７４に示される。
【0035】
具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に直接に連結される。
【0036】
他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示される；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、配列番号９５に示されたリンカーペプチドを介してＢ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に連結される。
【0037】
さらに他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示される；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３、配列番号８０に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７４に示される。
【0038】
上記の技術的課題を解決するために、本発明の技術的解決策２は、二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩ、又は二重特異性抗体Ｉ及びウレルマブ（Ｕｒｅｌｕｍａｂ）を含む二重抗体の組み合わせを提供する；前記二重特異性抗体Ｉは、ポリペプチド鎖－１、ポリペプチド鎖－２及びポリペプチド鎖－３の３つのポリペプチド鎖を含み、そのアミノ酸配列はそれぞれ配列番号８１、配列番号８８、配列番号８７、又は配列番号８１、配列番号８８、配列番号８７、又は配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５；又は配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１６に示される；
及び／又は、前記二重特異性抗体ＩＩは、短鎖及び長鎖の２つのポリペプチド鎖を含み、前記短鎖及び長鎖のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号８２及び配列番号８５、配列番号８２及び配列番号８９、配列番号８２及び配列番号９０、配列番号８３及び配列番号９１、配列番号８０及び配列番号８４に示される。
及び／又は、前記二重特異性抗体ＩＩは、短鎖及び長鎖の２つのポリペプチド鎖を含み、前記短鎖及び長鎖のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号８２及び配列番号８５、配列番号８２及び配列番号８９、配列番号８２及び配列番号９０、配列番号８３及び配列番号９１、配列番号８０及び配列番号８４に示される。
【0039】
具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８１、配列番号８８、配列番号８７に示された３つのポリペプチド鎖を含む；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８９に示された２つのポリペプチド鎖を含む。
【0040】
他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８１、配列番号８８、配列番号８７に示された３つのポリペプチド鎖を含む；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８５に示された２つのポリペプチド鎖を含む。
【0041】
さらに他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８１、配列番号８８、配列番号８７に示された３つのポリペプチド鎖を含む；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８０及び配列番号８４に示された２つのポリペプチド鎖を含む。
【0042】
具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５に示された３つのポリペプチド鎖を含む；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８９に示された２つのポリペプチド鎖を含む。
【0043】
他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５に示された３つのポリペプチド鎖を含む；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８５に示された２つのポリペプチド鎖を含む。
【0044】
さらに他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５に示された３つのポリペプチド鎖を含む；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８０及び配列番号８４に示された２つのポリペプチド鎖を含む。
【0045】
具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１６に示された３つのポリペプチド鎖を含む；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８９に示された２つのポリペプチド鎖を含む。
【0046】
他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１６に示された３つのポリペプチド鎖を含む；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８５に示された２つのポリペプチド鎖を含む。
【0047】
さらに他の具体的な実施例において、前記二重抗体の組み合わせは下記の通りである：二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１６に示された３つのポリペプチド鎖を含む；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８０及び配列番号８４に示された２つのポリペプチド鎖を含む。
【0048】
上記の技術的課題を解決するために、本発明の技術的解決策３は、本発明の技術的解決策１又は２に記載の二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩをそれぞれコードすることを特徴とする単離された核酸を提供する。
【0049】
上記の技術的課題を解決するために、本発明の技術的解決策４は、本発明の技術的解決策３に記載の単離された核酸を含むことを特徴とする組換え発現ベクターを提供する。
【0050】
上記の技術的課題を解決するために、本発明の技術的解決策５は、本発明の技術的解決策３に記載の単離された核酸又は本発明の技術的解決策４に記載の組換え発現ベクターを含むことを特徴とする形質転換体を提供する；好ましくは、前記形質転換体の宿主は原核細胞又は真核細胞であり、前記原核細胞は好ましくは大腸菌であり、前記真核細胞は好ましくは酵母又は哺乳動物細胞である。
【0051】
上記の技術的課題を解決するために、本発明の技術的解決策６は、本発明の技術的解決策１又は２に記載の二重抗体の組み合わせを含むことを特徴とする医薬組成物を提供する。
【0052】
好ましくは、免疫チェックポイント抗体及び／又は化学療法薬などの第３治療剤；及び任意選択の薬学的に許容される担体をさらに含む。
【0053】
前記薬学的に許容される担体は、当該技術分野における通常の担体であってもよく、前記担体は、任意の適切な生理学的又は薬学的に許容される医薬補助材であってもよい。前記医薬補助材は、当該技術分野における通常の医薬補助材であり、好ましくは、薬学的に許容される賦形剤、充填剤又は希釈剤などを含む。より好ましくは、前記医薬組成物は、０．０１～９９．９９％の上記の二重抗体の組み合わせ、及び０．０１～９９．９９％の医薬担体を含み、前記百分比は、前記医薬組成物に占める質量百分比である。
【0054】
本発明に記載の医薬組成物の投与経路は、好ましくは非経口投与、注射投与又は経口投与である。前記注射投与は、好ましくは静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮内注射又は皮下注射などの経路を含む。前記医薬組成物は、当該技術分野における通常の種々の剤形であり、好ましくは、固体、半固体又は液体の形態である、即ち、水溶液、非水溶液又は懸濁液であってもよく、より好ましくは、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、注射剤又は点滴剤などである。より好ましくは、血管内、皮下、腹腔内又は筋肉内を介して投与される。好ましくは、前記医薬組成物は、エアロゾル又は粗いスプレーとして、即ち、経鼻投与されることもできる；又はくも膜下腔内、髄内又は心室内に投与されることもできる。より好ましくは、前記医薬組成物は、経皮、経皮、局所、経腸、膣内、舌下又は経直腸に投与されることもできる。本発明の医薬組成物は、必要に応じて種々の剤形とすることができ、患者の種類、年齢、体重及びおおよその疾患の状態、投与方法などの因子に基づいて、医師により患者にとって有益な投与量を決定して投与することができる。投与方法は、例えば、注射又は他の治療方法を使用することができる。
【0055】
本発明に記載の医薬組成物の投与量レベルは、所望の診断又は治療結果を達成する組成物の量に応じて調整することができる。投与レジメンは、単回注射又は複数回注射であってもよく、或いは調整されてもよい。選択される投与量レベル及びレジメンは、前記医薬組成物の活性及び安定性（即ち、半減期）、製剤、投与経路、他の薬物又は治療法との組み合わせ、検出及び／又は治療される疾患又は症状、並びに治療される対象の健康状態及び既往歴を含む様々な要因に依存して、合理的に調整される。
【0056】
本発明に記載の医薬組成物の治療有効量は、細胞培養実験、或いはげっ歯類、ウサギ、イヌ、ブタ及び／又は霊長類などの動物モデルにおいて最初に推定することができる。動物モデルは、適切な濃度範囲と投与経路を決定するためにも使用することができる。そして、ヒトにおける有用な投与量と投与経路を決定するために使用することができる。一般に、投与の有効量又は投与量の決定及び調整、並びにそのような調整をいつどのように行うかの評価は、当業者に知られている。
【0057】
組み合わせ療法の場合、上記の抗体、二重特異性抗体、及び／又は追加の治療若しくは診断剤は、それぞれ単一の薬剤として、意図する治療又は診断を行うのに適した任意の時間範囲内で投与することができる。従って、これらの単一の薬剤は、実質的に同時に（即ち、単一の製剤として、又は数分若しくは数時間以内に）、又は順番に連続的に投与することができる。
【0058】
製剤、投与量、投与レジメン、及び測定可能な治療結果に関する追加のガイダンスについては、Ｂｅｒｋｏｗら（２０００）Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（Ｍｅｒｃｋ医学情報ハンドブック）及びＭｅｒｃｋ＆Ｃｏ．Ｉｎｃ．， Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ Ｓｔａｔｉｏｎ， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ； Ｅｂａｄｉ （１９９８） ＣＲＣ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（臨床薬理学ハンドブック）などの著作を参照されたい。
【0059】
上記の技術的課題を解決するために、本発明の技術的解決策７は、本発明の技術的解決策１又は２に記載の二重抗体の組み合わせ、本発明の技術的解決策３に記載の単離された核酸、本発明の技術的解決策４に記載の組換え発現ベクター、本発明の技術的解決策５に記載の形質転換体、又は本発明の技術的解決策６に記載の医薬組成物、及び任意選択の説明書を含むことを特徴とするキットを提供する。
【0060】
上記の技術的課題を解決するために、本発明の技術的解決策８は、がんを治療するための医薬の調製における、本発明の技術的解決策１又は２に記載の二重抗体の組み合わせ、本発明の技術的解決策３に記載の単離された核酸、本発明の技術的解決策４に記載の組換え発現ベクター、本発明の技術的解決策５に記載の形質転換体、又は本発明の技術的解決策６に記載の医薬組成物の使用を提供する。
【0061】
好ましくは、前記がんは血液腫瘍又は固形腫瘍であり、前記固形腫瘍は好ましくは乳がん、卵巣がん、子宮内膜がんである。
【0062】
上記の技術的課題を解決するために、本発明の技術的解決策９は、キットＩ及びキットＩＩを含むキットセットを提供する。
【0063】
ここで、前記キットＩは、本発明の技術的解決策１又は本発明の技術的解決策２に記載の二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体Ｉを含み、前記キットＩＩは、本発明の技術的解決策１又は２に記載の二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体ＩＩを含む；或いは、
前記キットＩは、本発明の技術的解決策１又は２に記載の二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩを含む；前記キットＩＩは、免疫チェックポイント抗体及び／又は化学療法薬などの第３治療剤を含む。
前記キットＩは、本発明の技術的解決策１又は２に記載の二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩを含む；前記キットＩＩは、免疫チェックポイント抗体及び／又は化学療法薬などの第３治療剤を含む。
【0064】
上記の技術的課題を解決するために、本発明の技術的解決策１０は、（１）本発明の技術的解決策６に記載の医薬組成物をそれを必要とする対象に投与するための注入モジュールと、（２）任意選択の薬効監視モジュールとを含む投与装置を提供する。
【0065】
前記注入モジュールは、抗体又は抗体の組み合わせ、二重抗体の組み合わせ、又は医薬組成物、又は化学療法薬などの液体薬物を、それを必要とする対象に連続的、断続的又は時限的に送達するために、輸液ポンプ又はシリンジなどの輸液装置及び／又は注射装置を含む。例えば、輸液ポンプは輸液の滴下数又は輸液の流速を正確に制御することができ、抗体の組み合わせ又は医薬組成物が均一な速度で、正確な投与量で、必要な対象の体内に安全に入って機能することができることを保証する。前記薬効監視モジュールは、データ処理ユニット、注入監視ユニット、及び注入制御ユニットを含む。前記データ処理ユニットは、薬物の有効性、安全性及び／又はコンプライアンスを評価するために、薬力学、薬物動態学などの治療に関する共通の情報を受信し、評価する；いくつかの実施例において、薬力学は、大量の薬物を送達した後の所定期間の血中の薬物の「活性」のパーセンテージ（又は量）を記載する曲線又は関数によって表される。前記注入監視ユニット及び前記注入制御ユニットは前記注入モジュールに接続され、前記注入モジュールの注入量をそれぞれ取得及び制御するために使用される。
【0066】
前記薬効監視モジュールは、任意選択で、前記データ処理ユニットに接続された看護記録読み取りユニット、液体排泄監視ユニット、給水監視ユニット、警告装置、及び表示装置のうちの１つ又は複数をさらに含む。前記看護記録読み取りユニットは前記看護システムに接続され、患者の手背部注射された液体薬物の量を取得するために使用される；前記給水監視ユニットは前記給水装置に接続され、必要な対象の給水量を取得するために使用される；前記液体排泄監視ユニットは、前記排泄物受入装置に接続され、必要な対象の液体排泄量を取得するために使用される；前記警告装置は、前記データ処理ユニットの処理結果に応じて警告を生成するために使用される；前記表示装置は、必要な対象の注入情報、液体薬物の量、排尿量、給水量及び／又は発汗量、並びに前記注入情報、液体薬物の量、排尿量、給水量及び発汗量に応じる前記データ処理ユニットの処理結果を表示するために使用される。
【0067】
上記の技術的課題を解決するために、本発明の技術的解決策１１は、本発明の技術的解決策１又は２に記載の二重抗体の組み合わせ、本発明の技術的解決策６に記載の医薬組成物、本発明の技術的解決策９に記載のキットセット、又は本発明の技術的解決策１０に記載の投与装置をそれを必要とする対象に使用する、がんを治療する方法を提供する。
【0068】
好ましくは、前記がんは血液腫瘍又は固形腫瘍であり、前記固形腫瘍は好ましくは乳がん、卵巣がん、子宮内膜がんである。
【0069】
好ましくは、前記二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩは、同時に又は逐次的に投与される。
【0070】
本発明において、特に明記しない限り、本明細書で使用される科学用語及び技術用語は、当業者に一般的に理解される意味を有する。さらに、本明細書で使用される細胞培養、分子遺伝学、核酸化学、免疫学の実験手順は、対応する分野で広く使用されている通常の手順である。また、本発明をよりよく理解するために、関連用語の定義と説明を以下に示す。
【0071】
本発明で使用されるアミノ酸の３文字コード及び１文字コードは当業者に公知であるか、又はＪ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ， ２４３， ｐ３５５８（１９６８）に記載された通りである。
【0072】
本明細書で使用される場合、「含む」又は「包含する」という用語は、組成物及び方法が前記要素を含むが、他の要素を排除しないことを意味することを意図しているが、文脈から理解されるように、「．．．からなる」という場合も含む。
【0073】
本発明で使用される「抗体」という用語は、免疫グロブリン（Ｉｇ）を含み、鎖間ジスルフィド結合によって連結された２つの同一の重鎖と２つの同一の軽鎖からなるテトラペプチド鎖構造である。免疫グロブリン重鎖定常領域のアミノ酸組成と配列が異なるため、抗原性も異なる。従って、免疫グロブリンは、免疫グロブリンの５つのカテゴリー又はアイソタイプ、即ちＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥに分類することができ、それらに対応する重鎖はそれぞれμ鎖、δ鎖、γ鎖、α鎖及びε鎖である。同じ種類のＩｇは、そのヒンジ領域のアミノ酸組成、重鎖ジスルフィド結合の数と位置の違いに基づいて、異なるサブクラスに分類することもでき、たとえば、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４に分類することができる。軽鎖は定数領域の違いによってκ鎖又はλ鎖に分類される。５種類のＩｇはそれぞれ、κ鎖又はλ鎖を持つことができる。
【0074】
本発明において、本明細書に記載の抗体軽鎖可変領域は、軽鎖定常領域をさらに含んでもよく、前記軽鎖定常領域は、ヒト化κ鎖、λ鎖、又はそれらの変異体を含む。本発明において、本明細書に記載の抗体重鎖可変領域は、重鎖定常領域をさらに含んでもよく、前記重鎖定常領域は、ヒト化ＩｇＧ１、２、３、４又はそれらの変異体を含む。
【0075】
抗体の重鎖と軽鎖のＮ末端付近の約１１０個のアミノ酸の配列は大きく変化し、可変領域（Ｖ領域）である；Ｃ末端付近の残りのアミノ酸の配列は比較的安定であり、定常領域（Ｃ領域）である。軽鎖可変領域（ＶＬ）と重鎖可変領域（ＶＨ）のそれぞれは３つの相補的決定領域（ＣＤＲ）と４つのフレームワーク領域（ＦＷＲ）から構成され、アミノ末端からカルボキシル末端までＦＷＲ１、ＣＤＲ１、ＦＷＲ２、ＣＤＲ２、ＦＷＲ３、ＣＤＲ３、ＦＷＲ４の順で配置される。軽鎖の３つのＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を指す；重鎖の３つのＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を指す。
【0076】
特に明記しない限り、所与の抗体又はその領域（例えば、可変領域）の「ＣＤＲ」及び「相補的決定領域」という用語は、本発明に記載の上記の公知実施例のいずれかによって定義される相補的決定領域を包含すると理解されるべきであることが、当業者には理解されるべきである。本発明において、上記に列挙されたＣＤＲのアミノ酸配列はすべてＣｈｏｔｈｉａ定義規則に従って示されている。しかし、抗体のＣＤＲは、配列可変性に基づくＫａｂａｔの定義規則（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ （Ｕ．Ｓ．）， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍａｒｙｌａｎｄ （１９９１）を参照）、及び構造ループ領域の位置に基づくＣｈｏｔｈｉａ定義規則（ＪＭｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７－４８，１９９７を参照）などの当該技術分野の様々な方法によって定義できることは当業者には周知である。本発明により請求される抗体はＣｈｏｔｈｉａ定義規則に基づいて示される配列であるが、他のＣＤＲ定義規則による対応するアミノ酸配列も本発明の保護範囲に入るはずである。
【0077】
「突然変異」という用語には、アミノ酸又はヌクレオチドの置換、付加及び／又は欠失が含まれ、「アミノ酸の置換」とは、アミノ酸残基が別のアミノ酸残基及び類似の側鎖を有するアミノ酸残基により置換されたものである。本発明において、前記突然変異は、当業者に現在知られている突然変異を含んでもよく、例えば、抗体の産生又は適用中に抗体に対して行われ得る突然変異、例えば、存在し得る部位、特にＣＤＲにおける潜在的な転写後修飾（Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ、ＰＴＭｓ）を受ける部位に対する突然変異であり、抗体の凝集、脱アミド化（アスパラギン脱アミド化（ＮＧ、ＮＳ及び／又はＮＨなど）感受性部位、アスパラギン酸異性化（ＤＧ、ＤＰ）感受性部位、Ｎ－グリコシル化（Ｎ－｛Ｐ｝Ｓ／Ｔ）感受性部位、酸化感受性部位などの関連する突然変異が含まれる。本発明において、アミノ酸突然変異を有する抗体を変異体と呼ぶ。
【0078】
本明細書で使用される「ベクター」又は「発現ベクター」という用語は、単離された核酸を含み、単離された核酸を細胞の内部に送達するために使用できる組成物である。線状ポリヌクレオチド、イオン性又は両親媒性化合物に関連するポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスを含むが、これらに限定されない多くのベクターが当技術分野で知られている。従って、「ベクター」という用語には、自律的に複製するプラスミド又はウイルスが含まれる。この用語はまた、ポリリジン化合物、リポソームなど、細胞への核酸の導入を促進する非プラスミド及び非ウイルス化合物を含むものと解釈されるべきである。ウイルスベクターの例としては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが含まれるが、これらに限定されない。
【0079】
「トランスフェクション」という用語は、真核細胞への外因性核酸の導入を指す。トランスフェクションは、リン酸カルシウム－ＤＮＡ共沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、ポリブレン媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポソーム融合、リポフェクション、プロトプラスト融合、レトロウイルス感染及びバイオリスティック（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃｓ）を含む、当技術分野で知られている様々な手段によって達成することができる。
【0080】
本明細書で使用する場合、ＥＣ５０という用語は、最大効果の５０％の濃度（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｆｏｒ ５０％ ｏｆ ｍａｘｉｍａｌ ｅｆｆｅｃｔ）、即ち、最大効果の５０％を引き起こす濃度を指す。
【0081】
本発明で使用される場合、「がん」、「腫瘍」という用語は、組織病理学的タイプ又は浸潤段階に関係なく、全てのタイプのがん性増殖又は腫瘍形成プロセス、転移組織又は悪性形質転換細胞、組織又は器官を含むことを意図している。例としては、固形腫瘍、血液がん、軟部組織腫瘍、及び転移性病変が含まれるが、これらに限定されない。
【0082】
当該分野における常識に基づいて、上記の各好ましい条件を任意に組み合わせて、本発明の各好ましい実例を得ることができる。
【0083】
本発明で使用される試薬及び原料はいずれも市販品として入手できる。
【0084】
本発明の積極的かつ進歩的効果は下記の通りである：
１）本発明の二重抗体の組み合わせは、ＴＡＡ×ＣＤ３二重抗体ＩとＴＡＡ×４－１ＢＢ二重抗体ＩＩの組み合わせであり、好ましくはＢ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体とＴＡＡ×４－１ＢＢ二重抗体、例えば、Ｂ７－Ｈ４（又はＨｅｒ－２）×４－１ＢＢの二重抗体の組み合わせである。Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重抗体の併用、例えばＰＲ００３８９９とＰＲ００４２８１二重抗体の併用は、Ｔ細胞の枯渇を減少させるだけでなく、後期の腫瘍殺傷を有意に促進することができる；ＰＲ００７１６８とＰＲ００４２８２二重抗体の併用は、腫瘍細胞の殺傷効果をさらに高めることができる。
２）本発明において、二重特異性抗体ＴＡＡ×ＣＤ３（好ましくはＢ７－Ｈ４×ＣＤ３）単独で、例えばＰＲ００３８９９は、エフェクター細胞：標的細胞の比率が低い場合には殺傷効果を示さないが、ＴＡＡ×４－１ＢＢ、好ましくはＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢとの併用では強い殺傷効果を示す。特に、同じＴＡＡで異なるエピトープを持つＰＲ００３３３８、又は異なるＴＡＡを持つＰＲ００２８２８と併用する場合、強い相乗効果がある；二重特異性抗体ＰＲ００７０７８とＰＲ００４２８２の併用は、Ｔ細胞の分裂と増殖を有意に促進し、Ｔ細胞のアポトーシスを減少させる。
従って、本発明の二重抗体の組み合わせの使用は、固形腫瘍の治療に潜在的に臨床的で有効な解決策を提供する。
１）本発明の二重抗体の組み合わせは、ＴＡＡ×ＣＤ３二重抗体ＩとＴＡＡ×４－１ＢＢ二重抗体ＩＩの組み合わせであり、好ましくはＢ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体とＴＡＡ×４－１ＢＢ二重抗体、例えば、Ｂ７－Ｈ４（又はＨｅｒ－２）×４－１ＢＢの二重抗体の組み合わせである。Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重抗体の併用、例えばＰＲ００３８９９とＰＲ００４２８１二重抗体の併用は、Ｔ細胞の枯渇を減少させるだけでなく、後期の腫瘍殺傷を有意に促進することができる；ＰＲ００７１６８とＰＲ００４２８２二重抗体の併用は、腫瘍細胞の殺傷効果をさらに高めることができる。
２）本発明において、二重特異性抗体ＴＡＡ×ＣＤ３（好ましくはＢ７－Ｈ４×ＣＤ３）単独で、例えばＰＲ００３８９９は、エフェクター細胞：標的細胞の比率が低い場合には殺傷効果を示さないが、ＴＡＡ×４－１ＢＢ、好ましくはＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢとの併用では強い殺傷効果を示す。特に、同じＴＡＡで異なるエピトープを持つＰＲ００３３３８、又は異なるＴＡＡを持つＰＲ００２８２８と併用する場合、強い相乗効果がある；二重特異性抗体ＰＲ００７０７８とＰＲ００４２８２の併用は、Ｔ細胞の分裂と増殖を有意に促進し、Ｔ細胞のアポトーシスを減少させる。
従って、本発明の二重抗体の組み合わせの使用は、固形腫瘍の治療に潜在的に臨床的で有効な解決策を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0085】
【図1】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３（Ｆａｂ－Ｆｃ－ＳｃＦｖ）、Ｂ７－Ｈ４×４－１ＢＢ（ＩｇＧ－ＨＣ－ＶＨ）、Ｈｅｒ２×４－１ＢＢ（ＩｇＧ－ＨＣ－ＶＨ）の二重特異性抗体の構造と設計を示す。
【図2】ヒト、サル、及びマウスのＢ７－Ｈ４に結合するＢ７－Ｈ４×ＣＤ３二重特異性抗体ＰＲ００３７３３、ＰＲ００３８９９のフローサイトメトリー検出を示す。
【図3】腫瘍細胞上のＢ７－Ｈ４、及びＴ細胞に結合するＢ７－Ｈ４×ＣＤ３二重特異性抗体ＰＲ００３７３３、ＰＲ００３８９９のフローサイトメトリー検出を示す。
【図4】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重特異性抗体ＰＲ００３７３３、ＰＲ００３８９９がＭＤＡ－ＭＢ－４６８腫瘍細胞に対するＴ細胞殺傷を媒介することを示す。
【図5】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重特異性抗体ＰＲ００３７３３、ＰＲ００３８９９がＨＣＣ－１９５４腫瘍細胞に対するＴ細胞殺傷を媒介することを示す。
【図6】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重特異性抗体ＰＲ００３７３３、ＰＲ００３８９９がＢＴ－４７４腫瘍細胞に対するＴ細胞殺傷を媒介することを示す。
【図7】Ｂ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重特異性抗体ＰＲ００４２８１、ＰＲ００４２８２がヒト、サルの４－１ＢＢに結合することを示す。
【図8】Ｂ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重特異性抗体ＰＲ００４２８１、ＰＲ００４２８２がヒト、サル、マウスのＢ７－Ｈ４、及び腫瘍細胞上のＢ７－Ｈ４に結合することを示す。
【図9】Ｂ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重特異性抗体ＰＲ００４２８１、ＰＲ００４２８２のｉｎ ｖｉｔｒｏＴ細胞活性化実験を示す。
【図10】腫瘍細胞に対するＴ細胞の比率を検出するためのヒト乳がん組織切片のＩＨＣ染色を示す。
【図11】Ｔ細胞：腫瘍細胞の比率が低い条件下でのＢ７－Ｈ４×ＣＤ３二重特異性抗体分子ＰＲ００３７３３、ＰＲ００３８９９のｉｎ ｖｉｔｒｏ殺傷実験を示す。
【図12】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３（ＰＲ００３８９９）とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢ（ＰＲ００４２８１）の併用がＴ細胞の枯渇を減少させることを示す。
【図13】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３（ＰＲ００３８９９）とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢ（ＰＲ００４２８１）の併用が腫瘍の殺傷を促進することを示す。
【図14】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３（ＰＲ００３８９９）とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢ（ＰＲ００４３５９、ＰＲ００３３３８、ＰＲ００２８２８）の併用が腫瘍の殺傷を促進することを示す。
【図15】異なる二重抗体の組み合わせ（ＰＲ００３８９９とＰＲ００４３５９、ＰＲ００３８９９とＰＲ００３３３８、ＰＲ００３８９９とＰＲ００２８２８）のｉｎ ｖｉｔｒｏ複合殺傷実験を示す。
【図16】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３（Ｆａｂ－Ｆｃ－ＶＨ－ＶＨ）の非対称構造の分子構造の模式図を示す。
【図17】ヒト、サル、及びマウスのＢ７－Ｈ４に結合するＢ７－Ｈ４×ＣＤ３二重特異性抗体ＰＲ００７０７８、ＰＲ００７１６８のフローサイトメトリー検出を示す。
【図18】腫瘍細胞上のＢ７－Ｈ４、及びＴ細胞に結合するＢ７－Ｈ４×ＣＤ３二重特異性抗体ＰＲ００７０７８、ＰＲ００７１６８のフローサイトメトリー検出を示す。
【図19】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重特異性抗体ＰＲ００７０７８、ＰＲ００７１６８がＭＤＡ－ＭＢ－４６８腫瘍細胞に対するＴ細胞殺傷を媒介することを示す。
【図20】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重特異性抗体ＰＲ００７０７８、ＰＲ００７１６８がＨＣＣ－１９５４腫瘍細胞に対するＴ細胞殺傷を媒介することを示す。
【図21】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３（ＰＲ００７０７８、ＰＲ００７１６８）とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢ（ＰＲ００４２８２）の併用がＳＫ－ＢＲ－３腫瘍細胞に対するＴ細胞殺傷を媒介することを示す。
【図22】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３（ＰＲ００７０７８、ＰＲ００７１６８）とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢ（ＰＲ００４２８２）の併用がＴ細胞の増殖を増加させることを示す。
【図23】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３（ＰＲ００７０７８、ＰＲ００７１６８）とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢ（ＰＲ００４２８２）の併用がＴ細胞の分裂を増加させることを示す。
【図24】Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３（ＰＲ００７０７８、ＰＲ００７１６８）とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢ（ＰＲ００４２８２）の併用がＴ細胞のアポトーシスを減少させることを示す。
【発明を実施するための形態】
【0086】
以下、実施例により本発明をさらに説明するが、それによって本発明はこれらの実施例の範囲に限定されるものではない。以下の実施例において、具体的な条件が示されていない実験方法は、通常の方法及び条件、或いは商品の説明書に従って選択される。
【0087】
実施例１ 二重特異性抗体の構造と設計
【0088】
１．１ Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ非対称構造を有する二重特異性抗体Ｉの構築（構造番号Ａ）
【0089】
二重特異性抗体Ｉ（Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体分子）には２つのドメインが含まれ、その１つは腫瘍細胞の表面に特異的に発現されるＢ７－Ｈ４を認識することができ、もう１つはＴ細胞上のＣＤ３分子に結合することができる。Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体分子が腫瘍細胞の表面に結合すると、腫瘍細胞付近のＴ細胞を動員して活性化し、これによって腫瘍細胞を死滅させることができる。
【0090】
図１のＡは、Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３のＦａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ非対称構造の分子構造の模式図であり、ここで、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインはｓｃＦｖ構造であり、ＣＤ３を標的とするドメインはＦａｂ構造であり、この二重抗体分子はポリペプチド鎖－１、ポリペプチド鎖－２及びポリペプチド鎖－３の３つのポリペプチド鎖に関する。Ｎ末端からＣ末端までのポリペプチド鎖－１の構造はＶＬ＿Ａ－ＣＬであり、ポリペプチド鎖－２の構造はＶＨ＿Ａ－ＣＨ１－ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３であり、ポリペプチド鎖－３の構造はＶＬ＿Ｂ－Ｌ－ＶＨ＿Ｂ－ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３である；ここで、Ａ及びＢはそれぞれ異なる標的を標的とすることを表し、Ｌはリンカーペプチドであり、ｈはヒンジ領域である。
【0091】
ミスマッチした重鎖（例えば、抗ＣＤ３抗体の２つの重鎖がミスマッチしている）による副産物の形成を最小限に抑えるために、ＷＯ２００９０８０２５１及びＷＯ２００９０８０２５２に記載されているように、「ｋｎｏｂ－ｈｏｌｅ」突然変異と修飾ジスルフィド結合を有する変異ヘテロ二量体Ｆｃ領域を使用した。Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重特異性抗体はＩｇＧ１のＦｃを有し、ＦｃのＣＨ２にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（ＥＵインデックスに従って番号付け）突然変異を有する。同時に三つの異なる哺乳動物の発現ベクターをトランスフェクションすることによって二重特異性抗体を生成し、それぞれ１）ヘテロ二量体抗体を生成するためにＦｃ領域に「Ｈｏｌｅ」突然変異を持ち、ＦｃのＣＨ２はＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ突然変異を持つ、対応する抗Ｂ７－Ｈ４抗体のＳｃＦｖ重鎖、２）ヘテロ二量体抗体を生成するためにＦｃ領域に「ｋｎｏｂ」突然変異を持ち、ＦｃのＣＨ２はＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａを持つ、対応する抗ＣＤ３抗体の重鎖、３）対応する抗ＣＤ３抗体の軽鎖、をコードする。ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の「ｋｎｏｂ」突然変異はＴ３６６Ｗで構成され、「Ｈｏｌｅ」突然変異はＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖから構成される。さらに、「ｋｎｏｂ」Ｆｃ領域のＳ３５４Ｃ及び「Ｈｏｌｅ」Ｙ３４９Ｃを含んで一対のジスルフィド結合を形成し、安定性とヘテロ二量体抗体収量を増加させることができる。
【0092】
１．２ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＶＨ－ＶＨ非対称構造を有する二重特異性抗体Ｉの構築（構造番号Ｃ）
【0093】
図１６は、Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３非対称構造の分子構造の模式図であり、この二重特異性抗体分子はポリペプチド鎖－１、ポリペプチド鎖－２、ポリペプチド鎖－３の３つのポリペプチド鎖に関する。ポリペプチド鎖－１とポリペプチド鎖－２の組成はＣＤ３のＦａｂ部分を標的とし、ポリペプチド鎖－３はＢ７－Ｈ４を標的とする２つのＶＨ部分（ＶＨ＿Ａ－ＶＨ＿Ｂ）を含む。ここで、ＶＨ＿ＡとＶＨ＿Ｂの配列は同一でも異なっていてもよく、ＶＨ＿ＡとＶＨ＿ＢはリンカーペプチドＧＳ＿１５を介して連結される。
【0094】
Ｆｃγ受容体の結合によって引き起こされる架橋とエフェクター機能の低下を防ぐために、「ＡＡ」二重突然変異体（Ｌ２３４ＡとＬ２３５Ａ）又は「ＡＡＡ」三重突然変異体（Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡとＧ２３７Ａ）をポリペプチド鎖－２及びポリペプチド鎖－３の重鎖定常領域に導入した。さらに、相同な重鎖二量体の生成を減らすために、２つの重鎖の定常領域にそれぞれ異なるアミノ酸突然変異を導入し、それらに「ｋｎｏｂ－ｈｏｌｅ」突然変異と修飾ジスルフィド結合を持たせた。ＣＤ３を標的とするポリペプチド鎖－２に突然変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃを導入した；同時に、Ｂ７－Ｈ４を標的とするポリペプチド鎖－３に突然変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを導入した。さらに、抗体分子の熱安定性を向上させるために、Ｂ７－Ｈ４は抗Ｂ７－Ｈ４のＶＨドメインのＫａｂａｔ番号の４９位と６９位の２つのアミノ酸をＣｙｓに変更し、ジスルフィド結合を形成させた；即ち、Ｓ４９ＣとＩ７０Ｃの突然変異をそれぞれに導入した。
【0095】
１．３ ＩｇＧ－ＶＨの４価対称構造を有する二重特異性抗体ＩＩの構築（構造番号Ｂ）
【0096】
二重特異性抗体ＩＩは、ＴＡＡ×４－１ＢＢ二重抗体であり、本発明では、ＴＡＡはＢ７－Ｈ４及びＨｅｒ２のみに例示され、Ｔ細胞とＴＡＡ陽性腫瘍細胞を架橋することによって４－１ＢＢの凝集を促進し、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞に有効な共刺激シグナルを提供し、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介した活性をさらに増強し、腫瘍溶解を引き起こすことを意図している。従って、ＴＡＡ×４－１ＢＢを介した４－１ＢＢの活性化は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＴ細胞と腫瘍細胞の共局在に偏り、末梢の活性化による毒性反応を減少させる。
【0097】
図１のＢは、ＴＡＡ×４－１ＢＢのＩｇＧ－ＶＨ対称構造の分子構造の模式図であり、ＩｇＧ－ＶＨの４価対称構造のドメインは、アミノ末端からカルボキシル末端まで、ＶＬ＿Ａ－ＣＬを含む、短鎖とも呼ばれるポリペプチド鎖１；アミノ末端からカルボキシル末端まで、ＶＨ＿Ａ－ＣＨ１－ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｌ－ＶＨ＿Ｂを含む、長鎖とも呼ばれるポリペプチド鎖２；の２つのポリペプチド鎖を含む；ここで、Ａ及びＢはそれぞれ異なる標的を標的とすることを表し、Ｌはリンカーペプチドであり、ｈはヒンジ領域である。ＴＡＡ×４－１ＢＢの対称構造の二重抗体分子は、Ｎ末端のＩｇＧを介して腫瘍細胞を特異的に認識し、Ｃ末端のＶＨを介してＴ細胞を認識し活性化する。さらに、ＦｃはＬ２３４ＡとＬ２３５Ａの変異を導入してＦｃの機能を除去し、末梢における４－１ＢＢの非特異的活性化を減少させ、ＴＡＡ×４－１ＢＢ二重抗体による腫瘍細胞の特異的殺傷を実現した。ＴＡＡ×４－１ＢＢの例としては、ＰＲ００４２８１、ＰＲ００４２８２、ＰＲ００４３５９、ＰＲ００３３３８及びＰＲ００２８２８がある。
【0098】
本発明のＢ７－Ｈ４×ＣＤ３二重特異性抗体Ｉの構造情報は下記の表３に示される。
【0099】
本発明のＴＡＡ×４－１ＢＢ（Ｂ７－Ｈ４×４－１ＢＢ、ＨＥＲ２×４－１ＢＢ）二重特異性抗体ＩＩの構造情報は下記の表４に示される。
【0100】
１．４ 抗体情報
【0101】
本発明で使用される対照分子及び二重特異性抗体分子の構築に使用される親モノクローナル抗体に関する情報は下記の表１に示される。対照分子及び親モノクローナル抗体の配列表における番号は下記の表２に示される。
【0102】
【表1】
【0103】
【表2】
【0104】
【表3】
【0105】
【表4】
【0106】
本発明の二重特異性抗体分子において使用することができるリンカー（Ｌ）配列は、下記の表５の配列表に示される。
【0107】
【表5】
【0108】
本発明の二重特異性抗体分子のポリペプチド鎖のアミノ酸配列の配列表における番号は、下記の表６に示される。
【0109】
【表6】
【0110】
本発明により得られた二重特異性抗体のＣＤＲ配列番号は、下記の表７に示される。
【0111】
【表7】
【0112】
本発明により得られた二重特異性抗体のＣＤＲのアミノ酸配列と対応する配列番号は、表８に示される。
【0113】
【表8】
【0114】
本発明により得られた二重特異性抗体のＦＷＲ配列番号は、下記の表９に示される。
【0115】
【表9】
【0116】
実施例２ Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３の結合活性とｉｎ ｖｉｔｒｏ機能有効性
【0117】
２．１ ＦＡＣＳによるＢ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体のＢ７－Ｈ４及びＣＤ３結合能力の検出
【0118】
ヒトＢ７－Ｈ４を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株ＣＨＯ－Ｋ１／ｈｕＢ７－Ｈ４（Ｈａｒｂｏｕｒ ＢｉｏＭｅｄ製造）、カニクイザルＢ７－Ｈ４を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株ＣＨＯ－Ｋ１／ｃｙｎｏＢ７－Ｈ４（Ｈａｒｂｏｕｒ ＢｉｏＭｅｄ製造）、マウスＢ７－Ｈ４を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株ＣＨＯ－Ｋ１／ｍＢ７－Ｈ４（Ｈａｒｂｏｕｒ ＢｉｏＭｅｄ製造）、ＳＫ－ＢＲ－３及びＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞を消化した。ヒトＴ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、＃１３０－０９６－５３５）を使用して、説明書の方法に従ってＴ細胞を分離した。２％ＦＢＳを含むＰＢＳで再懸濁させた。細胞密度をそれぞれ１×１０６細胞／ｍＬに調節した。９６ウェルＶボトムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃３８９４）に１００μＬ細胞／ウェルで細胞を接種し、次に最終濃度の２倍で３倍濃度勾配希釈した試験抗体を１００μＬ／ウェルで加えた。細胞を４℃に置き、光を避けて２時間培養した。その後、２％ＢＳＡを含む予め冷却させたＰＢＳを１００μＬ／ウェルで加えて細胞を２回洗浄し、５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。さらに１００μＬ／ウェルで蛍光二次抗体（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ、Ｆｃγ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ、Ｊａｃｋｓｏｎ、＃１０９－５４５－０９８、１：５００希釈）を加え、４℃で、光を避けて１時間培養した。２％ＦＢＳを含む予め冷却させたＰＢＳで１００μＬ／ウェルで細胞を２回洗浄し、５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。最後に、２％ＢＳＡを含む予め冷却させたＰＢＳで２００μＬ／ウェルで細胞を再懸濁させ、ＡＣＥＡＮｏｖｏｃｙｔｅ３０００フローサイトメーターを使用して蛍光発光シグナル値を読み取った。
【0119】
Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体分子ＰＲ００３８９９、ＰＲ００３７３３のＣＨＯ－Ｋ１／ｈｕＢ７－Ｈ４、ＣＨＯ－Ｋ１／ｃｙｎｏＢ７－Ｈ４、ＣＨＯ－Ｋ１／ｍＢ７－Ｈ４細胞への結合の結果は図２のＡ～Ｄに示される；ここで、図２のＤは図２のＡ～ＣのＭＦＩ最大値とＥＣ５０をまとめたものである。その結果、ＰＲ００３７３３及びＰＲ００３８９９の２つの分子は同じ抗Ｂ７－Ｈ４ ＳｃＦｖフラグメントを使用するため、Ｂ７－Ｈ４に対する二重抗体分子の結合活性は基本的に同じであることが示されている。
【0120】
Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体分子ＰＲ００３８９９、ＰＲ００３７３３のＳＫ－ＢＲ－３及びＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞への結合の結果は図３のＡ、Ｂに示される。その結果、２種類の腫瘍細胞におけるＢ７－Ｈ４に対する二重抗体分子の結合活性は基本的に同じであることが示されている。Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体分子のヒトＴ細胞への結合の結果は図３のＣに示される。その結果、Ｔ細胞に対するＰＲ００３７３３の結合活性はＰＲ００３８９９よりも有意に高いことが示されている。図３のＤは、Ａ、Ｂ、ＣのＭＦＩ最大値とＥＣ５０をまとめたものである。
【0121】
ヒト、サルのＢ７－Ｈ４を過剰発現するＣＨＯＫ１細胞に対する二重抗体分子ＰＲ００７０７８及びＰＲ００７１６８の結合活性は基本的に同じであるが（図１７のＡ、Ｂ、Ｄ）、ＰＲ００７０７８はマウスのＢ７－Ｈ４に対してより強い結合を有する（図１７のＣ）。Ｂ７－Ｈ４の発現が比較的低い細胞である腫瘍細胞への結合は、ＰＲ００７１６８の方がＰＲ００７０７８よりも強い（図１８のＡ、Ｃ）。２つの分子は同じ抗ＣＤ３抗体フラグメントを使用し、ＣＤ３に対するそれらの結合能力は近い（図１８のＢ）。
【0122】
２．２ Ｔ細胞殺傷実験
【0123】
本実験では、ヒト初代Ｔ細胞をエフェクター細胞として使用し、異なるレベルのＢ７－Ｈ４を発現する細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＨＣＣ－１９５４又はＢＴ－４７４を標的細胞として使用した。ＡＣＥＡ社のＲＴＣＡ機器を使用して標的細胞の導電率を検出し、殺傷効率を反映した。９６ウェルプレートｅ－ｐｌａｔｅをまず５０μｌの完全培地で平衡化した。標的細胞を消化し、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭ１６４０完全培地に再懸濁させ、４×１０５／ｍＬに希釈し、ｅ－ｐｌａｔｅ９６プレートに５０μｌ／ウェル、即ち２×１０４／ウェルで広げ、３７℃で一晩培養した。翌日、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｔ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、＃１３０－０９６－５３５）を使用して、説明書の方法に従って初代Ｔ細胞を分離した。２×１０５Ｔ細胞を含む新鮮な培地５０μｌを各ウェルに加え、次に４×濃度勾配希釈した抗体５０μｌを加え、抗体の最高最終濃度は１０ｎＭであり、各抗体には合計８つの濃度があり、２つの重複を設定した。標的細胞の導電率をリアルタイムで検出し、一般に、２４時間時点のデータを使用して、標的細胞の殺傷効率＝（１－試料／ブランク対照）×１００％を計算した。２４時間後に上清を回収し、ＩＦＮ－γの濃度をＥＬＩＳＡ方法により検出した。ＥＬＩＳＡ検出方法は、ＩＦＮ ｇａｍｍａ Ｈｕｍａｎ Ｕｎｃｏａｔｅｄ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ、＃８８－７３１６－７７）のキット操作説明書を参照した。Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体分子ＰＲ００３７３３、ＰＲ００３８９９によるＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＨＣＣ－１９５４及びＢＴ－４７４腫瘍細胞の殺傷結果は、それぞれ図４のＡ、図５のＡ及び図６のＡに示される。
その結果、ＰＲ００３７３３とＰＲ００３８９９はいずれも腫瘍細胞を効果的に殺傷することができ、且つＰＲ００３７３３の殺傷効率はＰＲ００３８９９よりも高いことが示されている。Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体分子によるＩＦＮ－γの放出レベルの促進は、それぞれ図４のＢ、図５のＢ、図６のＢに示される。
その結果、ＰＲ００３７３３とＰＲ００３８９９はいずれも腫瘍細胞を効果的に殺傷することができ、且つＰＲ００３７３３の殺傷効率はＰＲ００３８９９よりも高いことが示されている。Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体分子によるＩＦＮ－γの放出レベルの促進は、それぞれ図４のＢ、図５のＢ、図６のＢに示される。
【0124】
Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗分子ＰＲ００７０７８及びＰＲ００７１６８はいずれも腫瘍細胞を効果的に殺傷することができ、かつＰＲ００７１６８の殺傷効率はＰＲ００７０７８よりも高く（図１９のＡ、図２０のＡを参照）、サイトカインＩＦＮ－γの放出もＰＲ００７０７８よりも高い（図１９のＢ、図２０のＢを参照）。
【0125】
実施例３ Ｂ７－Ｈ４×４－１ＢＢの結合活性とｉｎ ｖｉｔｒｏ機能有効性
【0126】
３．１ ＦＡＣＳによるＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重抗体のＢ７－Ｈ４及び４－１ＢＢ結合能力の検出
【0127】
ヒトＢ７－Ｈ４を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株ＣＨＯ－Ｋ１／ｈｕＢ７－Ｈ４（Ｈａｒｂｏｕｒ ＢｉｏＭｅｄ製造）、カニクイザルＢ７－Ｈ４を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株ＣＨＯ－Ｋ１／ｃｙｎｏＢ７－Ｈ４（Ｈａｒｂｏｕｒ ＢｉｏＭｅｄ製造）、マウスＢ７－Ｈ４を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株ＣＨＯ－Ｋ１／ｍＢ７－Ｈ４（Ｈａｒｂｏｕｒ ＢｉｏＭｅｄ製造）、ＳＫ－ＢＲ－３、及びヒト４－１ＢＢを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株ＣＨＯ－Ｋ１／ｈ４－１ＢＢ（Ｈａｒｂｏｕｒ ＢｉｏＭｅｄ製造）、カニクイザル４－１ＢＢを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株ＣＨＯ－Ｋ１／ｃｙｎｏ４－１ＢＢ細胞（Ｈａｒｂｏｕｒ ＢｉｏＭｅｄ製造）を消化した。２％ＦＢＳを含むＰＢＳで再懸濁させた。細胞密度をそれぞれ１×１０６細胞／ｍＬに調節した。９６ウェルＶボトムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃３８９４）に１００μＬ細胞／ウェルで細胞を接種し、次に最終濃度の２倍で３倍濃度勾配希釈した試験抗体を１００μＬ／ウェルで加えた。細胞を４℃に置き、光を避けて２時間培養した。その後、２％ＢＳＡを含む予め冷却させたＰＢＳを１００μＬ／ウェルで加えて細胞を２回洗浄し、５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。さらに１００μＬ／ウェルで蛍光二次抗体（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ、Ｆｃγ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ、Ｊａｃｋｓｏｎ、＃１０９－５４５－０９８、１：５００希釈）を加え、４℃で、光を避けて１時間培養した。２％ＦＢＳを含む予め冷却させたＰＢＳで１００μＬ／ウェルで細胞を２回洗浄し、５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。最後に、２％ＢＳＡを含む予め冷却させたＰＢＳで２００μＬ／ウェルで細胞を再懸濁させ、ＡＣＥＡＮｏｖｏｃｙｔｅ３０００フローサイトメーターを使用して蛍光発光シグナル値を読み取った。
【0128】
Ｂ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重抗体分子ＰＲ００４２８１、ＰＲ００４２８２のＣＨＯ－Ｋ１／ｈｕ４－１ＢＢ、ＣＨＯ－Ｋ１／ｃｙｎｏ４－１ＢＢへの結合の結果は図７のＡ～Ｃに示され、ここで、ＣはＡ、ＢのＭＦＩ最大値とＥＣ５０値をまとめたものである。その結果、ＰＲ００４２８１、ＰＲ００４２８２はヒトとサルの４－１ＢＢに類似の結合活性を有するが、ウレルマブ（Ｕｒｅｌｕｍａｂ）は文献報告と一致してサルの４－１ＢＢに結合しないことが示されている。Ｂ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重抗体分子のＣＨＯ－Ｋ１／ｈｕＢ７－Ｈ４、ＣＨＯ－Ｋ１／ｃｙｎｏＢ７－Ｈ４、ＣＨＯ－Ｋ１／ｍＢ７－Ｈ４及びＳＫ－ＢＲ－３細胞への結合の結果は図８のＡ～Ｅに示され、ここで、ＥはＡ～ＤのＭＦＩ最大値とＥＣ５０値をまとめたものである。その結果、ＰＲ００４２８１、ＰＲ００４２８２はヒト、サル、マウスの４－１ＢＢ及び腫瘍細胞ＳＫ－ＢＲ－３に対して類似の結合活性を有することが示されている。
【0129】
３．２ Ｔ細胞活性化実験
【0130】
１ｍｇ／ｍｌのＯＫＴ３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、製品番号１６－００３７－８５）をＰＢＳで希釈し、各ウェルに１０μｇ／ｍｌのＯＫＴ３ １００μｌを採取して９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、製品番号３５９９）にコーティングし、４℃で一晩コーティングした。翌日、ＳＫ－ＢＲ－３、又はＪＩＭＴ－１又はＣＨＯ－Ｋ１／ＣＤ３２ｂ細胞を消化し、完全培地に再懸濁させ、使用のために細胞密度をそれぞれ４×１０５細胞／ｍｌに調節した。ＭＡＣＳキット（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ、製品番号１３０－０９６－５３５）を使用してヒトＰＢＭＣからヒトＣＤ３陽性Ｔ細胞を単離した。前日に９６ウェルプレートにコーティングしたＯＫＴ３を洗い流し、５０μｌの精製Ｔ細胞を１ウェルあたり１×１０５個で加えた。さらに５０μｌのＳＫ－ＢＲ－３又はＪＩＭＴ－１又はＣＨＯ－Ｋ１／ＣＤ３２ｂ細胞を取って９６ウェルプレートに入れ、１ウェル当たり２×１０４個であった。次に、対応する濃度のＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重特異性抗体又は対照モノクローナル抗体５０μｌを加え、３７℃のインキュベーターで培養した。４８時間後、８０μｌの上清を取り、ＥＬＩＳＡキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃８８－７０２５－８８）を使用してＩＬ－２の含量を検出した。ＥＬＩＳＡ検出は供給者の説明書に従って実行された。
【0131】
図９のＡは、ＳＫ－ＢＲ－３細胞の表面のＢ７－Ｈ４の架橋下で、Ｂ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重抗体分子ＰＲ００４２８１、ＰＲ００４２８２がＴ細胞によるＩＬ－２分泌を活性化する強い効果を有することを示している。一方、ＪＩＭＴ－１はＢ７－Ｈ４発現陰性細胞であり、Ｂ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重抗体分子を架橋することができないため、ＰＲ００４２８１、ＰＲ００４２８２はＪＩＭＴ－１存在下でＴ細胞を活性化する機能を持たない（図９のＢ）。同時に、二重抗体分子はＬＡＬＡ突然変異であり、Ｆｃ受容体ＣＤ３２ｂとの結合を減少させるため、ＣＨＯ－Ｋ１／ＣＤ３２ｂ細胞の存在下でＴ細胞を活性化する機能も持たない（図９のＣ）。Ｂ７－Ｈ４×４－１ＢＢは、Ｂ７－Ｈ４が高発現している腫瘍環境でのみＴ細胞を活性化する機能を発揮し、末梢効果を低下させ、それによって末梢毒性を低下させることが示唆されている。対照分子であるウレルマブの機能の発揮は架橋には依存しないが（図９のＡ、Ｂ）、ＣＤ３２ｂ架橋の存在下で活性はさらに増強される（図９のＣ）。
【0132】
実施例４ ヒト乳がん組織におけるＴ細胞：腫瘍細胞の比率
【0133】
病理組織チップは、Ｇｕｉｌｉｎ Ｆａｎｐｕ Ｂｉｏｔｅｃｈ， ＩｎｃのＢＲＣ１０２１乳がん組織チップから購入した。パラフィン切片の厚さは４μｍであり、陽性対照組織が付着した。脱蝋、洗浄を行った；抗原賦活化：ｐＨ６（クエン酸）で、１２５℃で５分間加熱し、１０分間密封した後、室温で３０分間冷却させた；水で洗浄した後、０．３％過酸化水素で５分間洗浄し、次にＴＢＳＴで３回５分間洗浄した；Ｄａｋｏブロッキング溶液を直接に使用し、インキュベーションボックス内で室温で２０分間ブロッキングした；ブロッキング溶液を振って除去し、ウサギ抗ヒトＣＤ３一次抗体を加え、抗体希釈液Ｄａｋｏを直接に使用し、インキュベーションボックス内で室温で６０分間培養し、対照をウサギＩｇＧで置換した；ＴＢＳＴで３回、毎回５分間洗浄した；二次抗体である抗ウサギ（ＥｎＶｉｓｉｏｎ＋Ｓｙｓｔｅｍ－ＨＲＰ Ｌａｂｅｌｌｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ）をインキュベーションボックス内で室温で３０分間培養した；ＴＢＳＴで３回、毎回５分間洗浄した；ＤＡＢで発色し、０．８５ｍＬの蒸留水を試薬ＡＢＣの順に従って５０μＬの各試薬に加え、インキュベーションボックス内で室温で５分間培養した；蒸留水で洗浄し、ヘマトキシリンで対比染色した。チップを顕微鏡で観察し、封止し、読み取った。
【0134】
その結果（図１０のＡ）、腫瘍組織におけるＴ細胞の比率は低く、ほとんどの試料におけるＴ細胞の比率は１０％未満であることが示され、病理学的条件下では、腫瘍組織に対するＴ細胞の比率が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験よりもはるかに低いことが示されている。図１０のＢは試料の一例である。
【0135】
実施例５ 低いＴ細胞：腫瘍細胞の比率の条件下でのＢ７－Ｈ４×ＣＤ３のｉｎ ｖｉｔｒｏ殺傷実験
【0136】
この方法は実施例２．２と同様であり、標的細胞としてＭＤＡ－ＭＢ－４６８腫瘍細胞を使用した。ＡＣＥＡ社のＲＴＣＡ機器を使用して標的細胞の導電率を検出し、殺傷効率を反映した。９６ウェルプレートｅ－ｐｌａｔｅをまず５０μｌの完全培地で平衡化した。標的細胞を消化し、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭ１６４０完全培地に再懸濁させ、４×１０５／ｍＬに希釈し、ｅ－ｐｌａｔｅ９６プレートに５０μｌ／ウェル、即ち２×１０４／ウェルで広げ、３７℃で一晩培養した。翌日、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｔ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、＃１３０－０９６－５３５）を使用して、説明書の方法に従って初代Ｔ細胞を分離した。異なる密度を含む新鮮なＴ細胞５０μｌを各ウェルに加え、Ｔ細胞：腫瘍細胞の比は０．０３：１～１０：１であり、次に最終濃度２ｎＭの抗体５０μｌを加えた。この濃度は、エフェクター細胞：標的細胞の比率（Ｅ：Ｔ）が１０：１の殺傷実験における飽和濃度であった（図４Ａ）。標的細胞の導電率をリアルタイムで検出し、２４、４８、７２、９６時間後のデータを使用して、標的細胞の殺傷効率＝（１－試料／ブランク対照）×１００％を計算した。
【0137】
Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体分子ＰＲ００３７３３、ＰＲ００３８９９によるＭＤＡ－ＭＢ－４６８腫瘍細胞の殺傷結果は、図１１のＡ～Ｄに示される（２４～９６時間）。その結果、ＰＲ００３７３３とＰＲ００３８９９の腫瘍細胞効率は、エフェクター細胞：標的細胞の比率が低下するにつれて低下し、１：３より低い比では抗体は基本的に殺傷活性を持たず、その傾向は２４時間から９６時間まで一貫していることが示されている。エフェクター細胞：標的細胞の比率が低い場合（例えば、腫瘍環境）、Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体分子は腫瘍の殺傷を媒介する効率が低いことが示唆されている。
【0138】
実施例６ Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢの併用条件下におけるＴ細胞枯渇の指標
【0139】
標的細胞としてＭＤＡ－ＭＢ－４６８腫瘍細胞を使用し、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞の表面にはＢ７－Ｈ４分子が内因的に高発現されている。９６ウェルプレートをまず５０μｌの完全培地で平衡化した。標的細胞を消化し、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭ１６４０完全培地に再懸濁させ、４×１０５／ｍＬに希釈し、ｅ－ｐｌａｔｅ９６プレートに５０μｌ／ウェル、即ち２×１０４／ウェルで広げ、３７℃で一晩培養した。翌日、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｔ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、＃１３０－０９６－５３５）を使用して、説明書の方法に従って初代Ｔ細胞を分離した。６６６６個のＴ細胞を含む新鮮な５０μｌを各ウェルに加えた、即ち、エフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）の比率は１：３であった。次に、抗体ＰＲ００３８９９を単独で、又はＰＲ００４２８１と組み合わせて、最終濃度１ｎＭまで加えた。標的細胞の導電率をリアルタイムで検出した。４８時間後にＴ細胞を収集し、Ｔ細胞上の免疫チェックポイントＰＤ１、Ｔｉｍ３、Ｌａｇ３の発現をフローサイトメトリーで検出し、これら３つのマーカーの高発現は、多くの場合、Ｔ細胞の枯渇を示している。一般的な手順は下記の通りであった：懸濁細胞を収集し、ＰＢＳで１回洗浄し、１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳを含むＰＢＳ）に再懸濁させ、１μｌのＦＩＴＣ抗ヒトＣＤ３抗体、１μｌのＡＰＣ抗ヒトＰＤ１抗体、１μｌのＢｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ４２１抗Ｔｉｍ３抗体、１μｌのＢｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ４２１抗Ｌａｇ３抗体を加え、４℃で４５分間培養し、２回洗浄した後、機器で検出した。
【0140】
その結果、Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体ＰＲ００３８９９とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重抗体ＰＲ００４２８１を併用した場合、４８時間培養後に、Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３単独の場合と比較して、ＰＤ１、Ｔｉｍ３、Ｌａｇ３の発現はいずれもある程度低下し、特にＴｉｍ３は有意に低下することが示されている（図１２のＡ～Ｃ）。
【0141】
実施例７ Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢの併用は、低いＴ細胞：腫瘍細胞の比率の条件下で、後期の腫瘍殺傷を有意に促進することができる。
【0142】
この方法は実施例６と同様であり、異なる時点での標的細胞の殺傷率を検出した。標的細胞としてＭＤＡ－ＭＢ－４６８腫瘍細胞を使用した。９６ウェルプレートをまず５０μｌの完全培地で平衡化した。標的細胞を消化し、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭ１６４０完全培地に再懸濁させ、４×１０５／ｍＬに希釈し、ｅ－ｐｌａｔｅ９６プレートに５０μｌ／ウェル、即ち２×１０４／ウェルで広げ、３７℃で一晩培養した。翌日、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｔ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、＃１３０－０９６－５３５）を使用して、説明書の方法に従って初代Ｔ細胞を分離した。６６６６個のＴ細胞を含む新鮮な５０μｌを各ウェルに加えた、即ち、エフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）の比率は１：３であった。次に、抗体ＰＲ００３８９９を単独で、又はＰＲ００４２８１と組み合わせて、最終濃度１ｎＭまで加えた。標的細胞の導電率をリアルタイムで検出した。
【0143】
Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体分子ＰＲ００３８９９によるＭＤＡ－ＭＢ－４６８腫瘍細胞の殺傷結果は、図１３のＡ～Ｅに示される（１～５日）。その結果、ＰＲ００３８９９単独で使用した場合の殺傷効率は、３日目に最高点に達したが、おそらくＴ細胞の枯渇のため、４日目以降には徐々に殺傷効率が低下したことが示されている。ＰＲ００３８９９とＰＲ００４２８１の併用による殺傷効率は、最初の３日間はＰＲ００３８９９単独と有意差がなかったが、後期の４～５日間は殺傷効率が上昇し続け、ＰＲ００３８９９単独との差が徐々に大きくなった。ＰＲ００４２８１の併用により、Ｔ細胞の枯渇とアポトーシスを減少させた可能性がある。
【0144】
実施例８ Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢの併用は、殺傷を強化しながらＴ細胞の分裂と増殖を増加させる。
【0145】
この方法は実施例５と同様である。標的細胞としてＢ７－Ｈ４分子が内因性に高発現されているＳＫＢＲ３腫瘍細胞を使用した。９６ウェルプレートをまず５０μｌの完全培地で平衡化した。標的細胞を消化し、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭ１６４０完全培地に再懸濁させ、４×１０５／ｍＬに希釈し、ｅ－ｐｌａｔｅ９６プレートに５０μｌ／ウェル、即ち２×１０４／ウェルで広げ、３７℃で一晩培養した。翌日、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｔ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、＃１３０－０９６－５３５）を使用して、説明書の方法に従って初代Ｔ細胞を分離した。標識Ｔ細胞５０μｌを各ウェルに加えた、エフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）の比率は１：５であった。次に、抗体ＰＲ００７０７８単独、ＰＲ００７１６８又はＰＲ００４２８２と組み合わせて加えた。標的細胞の導電率をリアルタイムで検出した。そして、７日目に標的細胞の殺傷効率を計算した。
【0146】
その結果（図２１）、Ｂ７－Ｈ４×ＣＤ３二重抗体ＰＲ００７０７８、ＰＲ００７１６８とＢ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重抗体ＰＲ００４２８２を併用した場合、７日間培養後に、ＰＲ００７０７８単独ではエフェクター細胞：標的細胞の比率（Ｅ：Ｔ）が低い場合には殺傷効果を示さなかったが、Ｂ７－Ｈ４×４－１ＢＢ二重抗体ＰＲ００４２８２との併用では強い殺傷効果を示した。ＰＲ００７１６８は単独でもある程度の殺傷効果を有したが、ＰＲ００４２８２との併用で殺傷効果がさらに増強された。
【0147】
別の実験では、Ｔ細胞を１μＭのＣＳＦＥで標識した後、ＳＫＢＲ３標的細胞と共培養し、７日目にＴ細胞を収集し、生存Ｔ細胞の数、Ｔ細胞の分裂世代数をフローサイトメトリーで数え、アネキシンＶ染色でＴ細胞のアポトーシスを検出した。
【0148】
その結果、ＰＲ００７０７８とＰＲ００４２８２の併用は、単剤と比較して、Ｔ細胞の絶対数を有意に促進し（図２２）、Ｔ細胞の分裂世代数を有意に増加させ（図２３）、同時に、アポトーシスの割合を有意に減少させたことが示されている（図２４）。この実験ではＰＲ００７１６８単独では強い効果を示したが、ＰＲ００４２８２との併用ではＴ細胞自体には有意な効果はなかった。
【0149】
実施例９ 異なる二重抗体の組み合わせのｉｎ ｖｉｔｒｏ殺傷実験
【0150】
９．１ ＰＲ００２４０８、ＰＲ００２４１０のＢ７－Ｈ４エピトープへの結合の決定
【0151】
本発明は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６ｅプラットフォームを使用することにより、ＰＲ００２４０８、ＰＲ００２４１０がＢ７－Ｈ４の異なるエピトープと結合することを確認した。ステップ１：抗体の１００％シグナルを取得した：Ｂ７－Ｈ４に結合した一次抗体（ＰＲ００２４０８）の最終シグナルをこの抗体の１００％シグナルとして記録した。ステップ２：一次抗体を捕捉した後、ＳＡセンサーを一次抗体と二次抗体（ＰＲ００２４１０）の混合物に浸し、センサーを抗体混合物に浸した後の信号の差を、その抗体を二次抗体とする信号として記録した。阻害率は下記の式で計算された。
【0152】
阻害率（％）＝（Ａ－Ｂ）／Ａ×１００
Ａ：ある抗体の１００％シグナル（ステップ１で得られた）、Ｂ：この抗体の二次抗体としてのシグナル（ステップ２で得られた）。
Ａ：ある抗体の１００％シグナル（ステップ１で得られた）、Ｂ：この抗体の二次抗体としてのシグナル（ステップ２で得られた）。
【0153】
得られた阻害率が８５（％）を超える場合、２つの抗体のエピトープが完全に重なっていることを意味し、阻害率が８５（％）未満の場合、２つの抗体が結合するエピトープが完全に重なっていないことを意味する。結果は表１０に示され、ＰＲ００２４０８とＰＲ００２４１０の間にはエピトープの競合がなく、Ｂ７－Ｈ４の異なる抗原エピトープに結合することが示唆されている。エピトープ競合実験の結果は下記の表１０に示される。
【0154】
【表10】
【0155】
９．２ 異なる二重抗体の組み合わせによるｉｎ ｖｉｔｒｏ殺傷効果
【0156】
ＴＡＡ×ＣＤ３とＴＡＡ×４－１ＢＢの組み合わせを媒介する際の異なるＴＡＡ又は同じＴＡＡの異なる結合エピトープの役割を調べるために、本実施例ではＴＡＡ×ＣＤ３とＴＡＡ×４－１ＢＢの異なる組み合わせを使用した。ＴＡＡ×ＣＤ３はＰＲ００３８９９であり、そのＴＡＡは抗Ｂ７－Ｈ４であり、ＴＡＡ×４－１ＢＢはＰＲ００４３５９、ＰＲ００３３３８、ＰＲ００２８２８であり、ウレルマブは陽性対照であった。ＰＲ００４３５９のＴＡＡは抗Ｂ７－Ｈ４であり、ＰＲ００３８９９と全く同じであった；ＰＲ００３３３８のＴＡＡは抗Ｂ７－Ｈ４であったが、ＰＲ００３８９９のＴＡＡとは異なるＢ７－Ｈ４の抗原エピトープに結合した；ＰＲ００２８２８のＴＡＡは抗Ｈｅｒ２であった。模式図は図１５に示される。
【0157】
殺傷方法は実施例７と同様であり、８日目の標的細胞の殺傷率を検出した。標的細胞としてＳＫ－ＢＲ－３腫瘍細胞を使用し、ＳＫ－ＢＲ－３細胞はＢ７－Ｈ４とＨｅｒ２を同時に高発現した。９６ウェルプレートをまず５０μｌの完全培地で平衡化した。標的細胞を消化し、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭ１６４０完全培地に再懸濁させ、４×１０５／ｍＬに希釈し、ｅ－ｐｌａｔｅ９６プレートに５０μｌ／ウェル、即ち２×１０４／ウェルで広げ、３７℃で一晩培養した。翌日、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｔ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、＃１３０－０９６－５３５）を使用して、説明書の方法に従って初代Ｔ細胞を分離した。２０００個のＴ細胞を含む新鮮な５０μｌを各ウェルに加えた、即ち、エフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）の比率は１：１０であった。次に、抗体ＰＲ００３８９９を単独で、又は他のＴＡＡ×４－１ＢＢと組み合わせて、ＰＲ００３８９９の最終濃度は０．５ｎＭであり、ＴＡＡ×４－１ＢＢの濃度は２ｎＭ又は０．２ｎＭであった。標的細胞の導電率をリアルタイムで検出した。そして８日目にＴ細胞を収集し、生存Ｔ細胞の染色と計数を行った。
【0158】
結果は図１４に示され、ＰＲ００３８９９単独では、エフェクター細胞：標的細胞の比率が低い場合、即ちＥ：Ｔの比率が１：１０では殺傷効果を示さなかったが、ＴＡＡ×４－１ＢＢとの併用では強い殺傷効果を示し、同時に、生存Ｔ細胞数は有意に上昇し、ＳＫ－ＢＲ－３腫瘍細胞の殺傷率は図１４のＡに、生存Ｔ細胞数は図１４のＢに示される。ここで、ＰＲ００４３５９のＢ７－Ｈ４抗原結合エピトープはＰＲ００３８９９と同じであり、エピトープ競合関係にあるため、２ｎＭの高濃度では相乗効果が低下した；一方、ＰＲ００３８９９は同じＴＡＡの異なるエピトープを持つＰＲ００３３３８、又は異なるＴＡＡを持つＰＲ００２８２８と強い相乗効果を示す。これは、ＴＡＡ×ＣＤ３が、同じＴＡＡの異なるエピトープ、又は異なるＴＡＡを持つＴＡＡ×４－１ＢＢの二重抗体の組み合わせが強い相乗的殺傷効果を有することを示し、潜在的な臨床的組み合わせ価値があることを示唆している。
【0159】
以上、本発明の具体的な実施例について説明したが、当業者であれば、これらは単なる例であり、本発明の原理及び本質から逸脱することなく、これらの実施例に対して様々な変更や修正を加えることができることを理解されたい。従って、本発明の保護範囲は添付の特許請求の範囲によって限定される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-02-20
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
第１治療剤としての二重特異性抗体Ｉと、第２治療剤としての二重特異性抗体ＩＩとを含む二重抗体の組み合わせであって、前記二重特異性抗体Ｉは、ＣＤ３を標的とするドメインと、腫瘍関連抗原を標的とするドメインとを含み、前記二重特異性抗体ＩＩは、４－１ＢＢを標的とするドメインと、腫瘍関連抗原を標的とするドメインとを含み；好ましくは、前記二重特異性抗体Ｉにおいて、前記腫瘍関連抗原のドメインは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインであり；及び／又は、前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、腫瘍関連抗原を標的とするドメインは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン又はＨｅｒ２を標的とするドメインであり；より好ましくは、前記二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩにおけるＢ７－Ｈ４を標的とするドメインは、それぞれＢ７－Ｈ４の異なるエピトープを標的とすることを特徴とする、二重抗体の組み合わせ。
【請求項2】
前記二重特異性抗体Ｉは、Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ又はＦａｂ－Ｆｃ－（ＶＨ）ｎの非対称構造であり、前記二重特異性抗体ＩＩは、ＩｇＧ－ＶＨの対称構造であり；ここで、ｎは１以上の自然数であり；好ましくは、前記二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインはｓｃＦｖ又はＶＨ＿Ａ－ＶＨ＿Ｂであり、前記ＶＨ＿ＡとＶＨ＿Ｂは同一又は異なり、ＣＤ３を標的とするドメインはＦａｂであり、前記Ｆａｂと前記ｓｃＦｖ又はＶＨ＿Ａ－ＶＨ＿Ｂはヒンジ領域又はリンカーペプチドを介してＦｃに連結され；前記Ｆｃは、好ましくは、ＩｇＧ１のＦｃであり、前記リンカーペプチドのアミノ酸配列は、配列番号９３～９６、１２４に示され、より好ましくは、前記Ｆｃは、例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ突然変異、「ｋｎｏｂ」突然変異Ｔ３６６Ｗと「Ｈｏｌｅ」突然変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡとＹ４０７Ｖ、及び／又は、「ｋｎｏｂ」突然変異Ｓ３５４Ｃと「Ｈｏｌｅ」突然変異Ｙ３４９Ｃなどの１～３個のアミノ酸の付加、欠失又は突然変異を含み；及び／又は
前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン又はＨｅｒ２を標的とするドメインはＩｇＧであり、前記ＩｇＧのＦｃは、好ましくは、例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ突然変異などの１～３個のアミノ酸の付加、欠失又は突然変異を含み；４－１ＢＢを標的とするドメインはＶＨ又はｓｃＦｖであり；前記Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン又はＨｅｒ２を標的とするドメインと前記４－１ＢＢを標的とするドメインは、リンカーペプチドを介して連結され、前記リンカーペプチドのアミノ酸配列は、好ましくは、配列番号９３～９６に示されることを特徴とする、請求項１に記載の二重抗体の組み合わせ。
【請求項3】
前記二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示され；或いは、前記Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインはＶＨ＿Ａ－ＶＨ＿Ｂを含み、前記ＶＨ＿Ａ及びＶＨ＿ＢのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、又は前記ＶＨ＿ＡのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、前記ＶＨ＿ＢのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９７、１０３、９９に示され；ＣＤ３を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；及び／又は、
前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示され；或いは、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示され；Ｈｅｒ２を標的とするドメインは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示され；
４－１ＢＢを標的とするドメインはＶＨであり、そのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示され、又は配列番号７、２２、３０に示され；
好ましくは、前記二重特異性抗体ＩＩは下記の群から選択され：
ａ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含み；ここで、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示され；或いは、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示され；
ｂ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｈｅｒ２を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含み；ここで、Ｈｅｒ２を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示され；
より好ましくは、前記二重抗体の組み合わせは下記から選択され：
ｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのＶＨ＿ＡとＶＨ＿ＢのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示され；
ｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示され；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示され；
ｉｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０、２１、３３に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３、４９、５７に示され；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示され；
ｉｖ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのＶＨ＿Ａ及びＶＨ＿ＢのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示され；
ｖ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのＶＨ＿ＡのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、ＶＨ＿Ｂのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９７、１０３、９９に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９、２０、３２に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２、４９、５６に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、配列番号７、２２、３０に示され；
ｖｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのＶＨ＿ＡのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０４、１０２に示され、ＶＨ＿Ｂのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９７、１０３、９９に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８、１９、３１に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４１、４８、５５に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６、１７、２９に示され、軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０、４７、５４に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＨＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１８、３０に示されることを特徴とする、請求項１に記載の二重抗体の組み合わせ。
【請求項4】
前記二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示され；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；或いは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示され；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６４に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；或いは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２２に示されたアミノ酸配列を含み、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；或いは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２３に示されたアミノ酸配列を含み、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；及び／又は、前記二重特異性抗体ＩＩは下記の群から選択され：
ａ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含み；ここで、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６５に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７１に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＶＨのアミノ酸配列は配列番号６８に示され；或いは、
Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示され；
ｂ）前記二重特異性抗体ＩＩは、Ｈｅｒ２を標的とするドメイン及び４－１ＢＢを標的とするドメインを含み；Ｈｅｒ２を標的とするドメインにおいて、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６２に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインにおいて、ＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示され；
好ましくは、前記二重抗体の組み合わせは下記から選択され：
ｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１２２に示され；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６５に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７１に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６８に示され；
ｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示され；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６２に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示され；
ｉｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６６に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７２に示され；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６５に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７１に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６８に示され；
ｉｖ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２２に示されたアミノ酸配列を含み；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６２に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示され；
ｖ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２３に示されたアミノ酸配列を含み；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６５に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７１に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６８に示され；
ｖｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインは配列番号１２３に示されたアミノ酸配列を含み；ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６７に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７０に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６２に示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＶＨのアミノ酸配列は配列番号６３に示されることを特徴とする、請求項１に記載の二重抗体の組み合わせ。
【請求項5】
前記二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号９２、１１５、１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；或いは、前記Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は、配列番号９２、１１５、１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７５、配列番号８１に示され；及び／又は、前記二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、又はそれぞれ配列番号７７、配列番号８３に示され；Ｈｅｒ２を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３、配列番号８０に示され；及び／又は、４－１ＢＢを標的とするドメインの重鎖のアミノ酸配列は配列番号７４又は７９に示され；
好ましくは、前記二重抗体の組み合わせは下記から選択され：
ｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１５に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に直接に連結され；
ｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１５に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、配列番号９５に示されたリンカーペプチドを介してＢ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に連結され；
ｉｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号９２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に直接に連結され；
ｉｖ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号９２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、配列番号９５に示されたリンカーペプチドを介してＢ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に連結され；
ｖ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号９２に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３、配列番号８０に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７４に示され；
ｖｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１５に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３、配列番号８０に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７４に示され；
ｖｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に直接に連結され；
ｖｉｉｉ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７６、配列番号８２に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７９に示され；４－１ＢＢを標的とするドメインのＮ末端は、配列番号９５に示されたリンカーペプチドを介してＢ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖のＣ末端に連結され；
ｉｘ）二重特異性抗体Ｉにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号１１６に示され、ＣＤ３を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７８、配列番号８１に示され；二重特異性抗体ＩＩにおいて、Ｂ７－Ｈ４を標的とするドメインの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７３、配列番号８０に示され、４－１ＢＢを標的とするドメインのアミノ酸配列は配列番号７４に示されることを特徴とする、請求項１に記載の二重抗体の組み合わせ。
【請求項6】
二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩ、又は二重特異性抗体Ｉ及びウレルマブ（Ｕｒｅｌｕｍａｂ）を含む二重抗体の組み合わせであって；前記二重特異性抗体Ｉは、ポリペプチド鎖－１、ポリペプチド鎖－２及びポリペプチド鎖－３の３つのポリペプチド鎖を含み、そのアミノ酸配列はそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５又は；配列番号８１、配列番号８８、配列番号８７；又は配列番号８１、配列番号８６、配列番号８７；又は配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１６に示され；及び／又は、前記二重特異性抗体ＩＩは、短鎖及び長鎖の２つのポリペプチド鎖を含み、前記短鎖及び長鎖のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号８２及び配列番号９０、又は、配列番号８２及び配列番号８５、配列番号８２及び配列番号８９、配列番号８３及び配列番号９１、配列番号８０及び配列番号８４に示され；
好ましくは、前記二重抗体の組み合わせは下記から選択され：
ｉ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号９０に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｉｉ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８１、配列番号８８、配列番号８７に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８９に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｉｉｉ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８１、配列番号８８、配列番号８７に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８５に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｉｖ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８１、配列番号８８、配列番号８７に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８０及び配列番号８４に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｖ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８９に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｖｉ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８５に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｖｉｉ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８０及び配列番号８４に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｖｉｉｉ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１６に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８９に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｉｘ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１６に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８２及び配列番号８５に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｘ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１６に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８０及び配列番号８４に示された２つのポリペプチド鎖を含み；
ｘｉ）二重特異性抗体Ｉは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１６に示された３つのポリペプチド鎖を含み；二重特異性抗体ＩＩは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号８０及び配列番号９０に示された２つのポリペプチド鎖を含むことを特徴とする、二重抗体の組み合わせ。
【請求項7】
請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩをコードすることを特徴とする、単離された核酸。
【請求項8】
請求項７に記載の単離された核酸を含むことを特徴とする、組換え発現ベクター。
【請求項9】
請求項７に記載の単離された核酸又は請求項８に記載の組換え発現ベクターを含む形質転換体であって、好ましくは、前記形質転換体の宿主は原核細胞又は真核細胞であり、前記原核細胞は好ましくは大腸菌であり、前記真核細胞は好ましくは酵母又は哺乳動物細胞であることを特徴とする、形質転換体。
【請求項10】
請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせを含み；好ましくは、免疫チェックポイント抗体及び／又は化学療法薬などの第３治療剤をさらに含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項11】
請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせ、請求項７に記載の単離された核酸、請求項８に記載の組換え発現ベクター、請求項９に記載の形質転換体、又は請求項１０に記載の医薬組成物、及び任意選択の説明書を含むことを特徴とする、キット。
【請求項12】
がんの治療に使用するための、請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせ、請求項７に記載の単離された核酸、請求項８に記載の組換え発現ベクター、請求項９に記載の形質転換体、又は請求項１０に記載の医薬組成物であって、好ましくは、前記がんは血液腫瘍又は固形腫瘍であり、前記固形腫瘍は好ましくは乳がん、卵巣がん、子宮内膜がんである。
【請求項13】
キットＩ及びキットＩＩを含むキットセットであって、前記キットＩは、請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体Ｉを含み、前記キットＩＩは、請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体ＩＩを含み；或いは、前記キットＩは、請求項１～６のいずれか一項に記載の二重抗体の組み合わせにおける二重特異性抗体Ｉ及び二重特異性抗体ＩＩを含み；前記キットＩＩは、免疫チェックポイント抗体及び／又は化学療法薬などの第３治療剤を含むことを特徴とする、キットセット。
【請求項14】
（１）請求項１０に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与するための注入モジュールと、（２）任意選択の薬効監視モジュールとを含むことを特徴とする、投与装置。
【国際調査報告】