特表 2024-523453 ビス－ベンゾイミダゾールＳＴＩＮＧアゴニスト免疫複合体及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-06-28

(54)【発明の名称】ビス－ベンゾイミダゾールＳＴＩＮＧアゴニスト免疫複合体及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20240621BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240621BHJP

   A61K 47/60 20170101ALI20240621BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240621BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240621BHJP

   C07D 403/14 20060101ALI20240621BHJP

   A61K 31/4184 20060101ALI20240621BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28

A61K39/395 N

A61K39/395 L

A61K47/60

A61P35/00

A61P37/04

C07D403/14

A61K31/4184

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023578817

(86)(22)【出願日】2022-06-24

(85)【翻訳文提出日】2024-01-29

(86)【国際出願番号】 US2022034865

(87)【国際公開番号】W WO2022272039

(87)【国際公開日】2022-12-29

(31)【優先権主張番号】63/215,100

(32)【優先日】2021-06-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519211672

【氏名又は名称】ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ブラント， ゲイリー

(72)【発明者】

【氏名】クディルカ， ロマス

(72)【発明者】

【氏名】サフィナ， ブライアン

(72)【発明者】

【氏名】チョウ， マシュー

【テーマコード（参考）】

4C076

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC27

4C076CC42

4C076EE23

4C076EE59

4C076FF34

4C085AA14

4C085AA21

4C085EE01

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC39

4C086GA07

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA06

4C086NA05

4C086NA13

4C086NA14

4C086NA15

4C086ZB09

4C086ZB26

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA51

4H045BA57

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA50

4H045GA25

(57)【要約】

本発明は、１以上のＳＴＩＮＧアゴニスト部分への結合によって連結された抗体を含む、式Ｉの免疫複合体を提供する。本発明はまた、反応性官能基を含むＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物も提供する。そのような中間体組成物は、リンカーまたは連結部分を介した前記免疫複合体の形成に好適な基質である。本発明はさらに、前記免疫複合体を使用してがんを治療する方法を提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

免疫複合体であって、リンカーによって１以上のＳＴＩＮＧアゴニスト部分に共有結合された抗体を含み、式Ｉ：
Ａｂ［Ｌ－Ｄ］_ｐ Ｉ
またはその薬学的に許容される塩を有する前記免疫複合体であり、
式中、
Ａｂは前記抗体であり；
ｐは１～８の整数であり；
Ｄは以下の式を有する前記ＳＴＩＮＧアゴニスト部分であり；

【化1】

Ｘ^ａ及びＸ^ｂは独立して、Ｒ^５によって任意で置換される５員環ヘテロアリールから選択され；
Ｒ^１及びＲ^４は独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）及びＲ^５から成る群から選択され；
Ｒ^２ａ及びＲ^２ｂはＨ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）_２、及びＲ^５から独立して選択され；
Ｘ^ａ、Ｘ^ｂ、Ｒ^１、Ｒ^４、Ｒ^２ａ、Ｒ^２ｂのうちの１つがＲ^５によって置換され；
Ｒ^３は、Ｆ、Ｃｌ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２から選択される１以上の基によって任意で置換されるＣ_１－Ｃ_６アルキルジイル、－（Ｃ_１－Ｃ_３アルキルジイル）－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_３アルキルジイル）－、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニルジイル及びＣ_２－Ｃ_６アルキニルジイルから選択され；
Ｒ^５は、
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；
－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；及び
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－＊から成る群から選択され；
星印＊はＬの結合部位を示し；
Ｒ^６は独立してＨまたはＣ_１－Ｃ_６アルキルであり；
Ｌは、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ^＋（Ｒ^６）_２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－から成る群から選択される前記リンカーであり；
ＰＥＧは、式：－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－を有し、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり；
Ｇｌｕｃは

【化2】

を有し；
ＰＥＰは、式：

【化3】

を有し、
ＡＡは独立して天然のまたは非天然のアミノ酸側鎖から選択され、またはＡＡの１以上と隣接する窒素原子とが５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示し；
Ｃｙｃは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３及び以下の構造を有するグルクロン酸から選択される１以上の基によって任意で置換されるＣ_６－Ｃ_２０アリールジイル及びＣ_１－Ｃ_２０ヘテロアリールジイルから選択され、

【化4】

Ｒ^７は－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ^８）－、及び－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－から成る群から選択され、Ｒ^８はＨ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^９）_２から選択され、Ｒ^９は独立してＨ、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキル、及び－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＯＨから成る群から選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ^９基は一緒に５もしくは６員環のヘテロシクリル環を形成し；
ｙは２～１２の整数であり；
ｚは０または１であり；
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール及びヘテロアリールジイルは独立して且つ任意で、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨＦ_２、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨＦ_２、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＮＨＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＮＨＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯＣＨ_３、－ＣＯ_２ＣＨ_３、－ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、－ＣＯＮＨ_２、－ＣＯＮＨＣＨ_３、－ＣＯＮ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＨＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＮＨＣＯＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＯＣＨ_３、－ＮＨＳ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＯ_２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３Ｏ）_２、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＦ_３、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、及び－Ｓ（Ｏ）_３Ｈから独立して選択される１以上の基で置換される、前記免疫複合体。

【請求項2】

前記抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトである、請求項１に記載の免疫複合体。

【請求項3】

前記抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ及びアベルマブ、またはこれらのバイオ後続品またはバイオベターから成る群から選択される、請求項２に記載の免疫複合体。

【請求項4】

前記抗体が、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトである、請求項１に記載の免疫複合体。

【請求項5】

前記抗体が、トラスツズマブ及びペルツズマブ、またはこれらのバイオ後続品またはバイオベターから成る群から選択される、請求項４に記載の免疫複合体。

【請求項6】

前記抗体が、ＣＥＡに結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトである、請求項１に記載の免疫複合体。

【請求項7】

前記抗体が、ラベツズマブ、またはそのバイオ後続品またはバイオベターである、請求項６に記載の免疫複合体。

【請求項8】

前記抗体が、Ｔｒｏｐ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトである、請求項１に記載の免疫複合体。

【請求項9】

前記抗体が、サシツズマブ、またはそのバイオ後続品またはバイオベターである、請求項８に記載の免疫複合体。

【請求項10】

Ｘ^ａ及びＸ^ｂが独立して、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、オキサジアゾリル、及びチアジアゾリルから成る群から選択される、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項11】

Ｘ^ａ及びＸ^ｂがそれぞれ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、及び－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２から選択される１以上の基によって置換されるピラゾリルである、請求項１０に記載の免疫複合体。

【請求項12】

Ｘ^ａ及びＸ^ｂの一方がＲ^５で置換される、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項13】

Ｒ^１が、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、及び－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２から成る群から選択される、請求項１～９いずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項14】

Ｒ^１が、－ＯＣＨ_３である、請求項１３に記載の免疫複合体。

【請求項15】

Ｒ^１がＦである、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項16】

Ｒ^２ａ及びＲ^２ｂがそれぞれ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２である、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項17】

Ｒ^２ａ及びＲ^２ｂの一方がＲ^５で置換される、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項18】

Ｒ^３が、－ＣＨ_２ＣＨ_２－、－ＣＨ＝ＣＨ－、及び－Ｃ≡Ｃ－から選択される、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項19】

Ｒ^３が、Ｆ、－ＯＨ及び－ＯＣＨ_３から選択される１以上の基で置換されるＣ_２－Ｃ_４アルケニルジイルである、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項20】

Ｒ^４が、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２－アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊である、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項21】

Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイルがプロピルジイルであり、Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイルがピペリジイルである、請求項２０に記載の免疫複合体。

【請求項22】

Ｒ^１及びＲ^４の一方がＲ^５で置換される、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項23】

Ｌが、－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－または－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－である、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項24】

Ｌが前記抗体のシステインチオールに結合する、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項25】

前記ＰＥＧについて、ｍが１または２であり、ｎが２～１０の整数である、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項26】

ｎが１０である、請求項２５に記載の免疫複合体。

【請求項27】

ＬがＰＥＰを含み、ＰＥＰはジペプチドであり、以下の式を有する、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体：

【化5】

【請求項28】

ＬがＰＥＰを含み、ＰＥＰはトリペプチドであり、以下の式を有する、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体：

【化6】

【請求項29】

ＬがＰＥＰを含み、ＰＥＰはテトラペプチドであり、以下の式を有する、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体：

【化7】

【請求項30】

Ｌが以下の構造から選択され：

【化8】

式中、波線はＲ^５への結合点を示す、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項31】

式ＩＩを有するＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物であって、

【化9】

式中、
Ｘ^ａ及びＸ^ｂは独立して、Ｒ^５によって任意で置換される５員環ヘテロアリールから選択され；
Ｒ^１及びＲ^４は独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）及びＲ^５から成る群から選択され；
Ｒ^２ａ及びＲ^２ｂは独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）_２、及びＲ^５から選択され；
Ｘ^ａ、Ｘ^ｂ、Ｒ^１、Ｒ^４、Ｒ^２ａ、Ｒ^２ｂのうちの１つがＲ^５によって置換され；
Ｒ^３は、Ｆ、Ｃｌ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２から選択される１以上の基によって任意で置換されるＣ_１－Ｃ_６アルキルジイル、－（Ｃ_１－Ｃ_３アルキルジイル）－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_３アルキルジイル）－、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニルジイル及びＣ_２－Ｃ_６アルキニルジイルから選択され；
Ｒ^５は、
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｌ；
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－Ｌ；
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｌ；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｌ；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－Ｌ；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｌ；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２－アルキルジイル）－Ｌ；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２－アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２－アルキルジイル）－Ｏ－Ｌ；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｌ；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｌ；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－Ｌ；
－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｌ；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｌ；及び
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌから成る群から選択され；
Ｒ^６は独立してＨまたはＣ_１－Ｃ_６アルキルであり；
Ｌは、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ^＋（Ｒ^６）_２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－から成る群から選択されるリンカーであり；
ＰＥＧは、式：－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－を有し；ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり；
Ｇｌｕｃは

【化10】

を有し；
ＰＥＰは、式：

【化11】

を有し、
ＡＡは独立して天然のまたは非天然のアミノ酸側鎖から選択され、またはＡＡの１以上と隣接する窒素原子とが５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示し；
Ｃｙｃは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３及び以下の構造を有するグルクロン酸から選択される１以上の基によって任意で置換されるＣ_６－Ｃ_２０アリールジイル及びＣ_１－Ｃ_２０ヘテロアリールジイルから選択され、

【化12】

Ｒ^７は－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ^８）－、及び－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－から成る群から選択され、Ｒ^８はＨ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^９）_２から選択され、Ｒ^９は独立してＨ、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキル、及び－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＯＨから成る群から選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ^９基は一緒に５もしくは６員環のヘテロシクリル環を形成し；
ｙは２～１２の整数であり；
ｚは０または１であり；
Ｑは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２及びＳＯ_３ ^－から独立して選択される１以上の基で置換されたＮ－ヒドロキシスクシンイミジル、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル、マレイミド、及びフェノキシから成る群から選択され；
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール及びヘテロアリールジイルは独立して且つ任意で、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨＦ_２、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨＦ_２、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＮＨＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＮＨＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯＣＨ_３、－ＣＯ_２ＣＨ_３、－ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、－ＣＯＮＨ_２、－ＣＯＮＨＣＨ_３、－ＣＯＮ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＨＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＮＨＣＯＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＯＣＨ_３、－ＮＨＳ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＯ_２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＦ_３、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３及び－Ｓ（Ｏ）_３Ｈから独立して選択される１以上の基で置換される、前記ＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物。

【請求項32】

Ｑが、

【化13】

から選択される、請求項３１に記載のＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物。

【請求項33】

ＱがＦ、Ｃｌ、ＮＯ_２、及びＳＯ_３ ^－から独立して選択される１以上の基で置換されたフェノキシである、請求項３１に記載のＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物。

【請求項34】

Ｑが２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシである、請求項３１に記載のＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物。

【請求項35】

Ｑが２，３，５，６－テトラフルオロ－４－スルホナト－フェノキシである、請求項３１に記載のＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物。

【請求項36】

Ｑがマレイミドである、請求項３１に記載のＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物。

【請求項37】

Ｌが、構造：

【化14】

から選択され、波線がＲ^５への結合点を示す、請求項３１に記載のＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物。

【請求項38】

表１から選択されるＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物。

【請求項39】

抗体の、請求項３１～３８のいずれか１項に記載のＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物との結合によって調製される免疫複合体。

【請求項40】

医薬組成物であって、治療有効量の請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体と、１以上の薬学的に許容される希釈剤、ビヒクル、担体または賦形剤とを含む、前記医薬組成物。

【請求項41】

がんの治療方法であって、治療有効量の請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体を、それを必要とする患者に投与することを含む、前記方法。

【請求項42】

前記がんが、ＳＴＩＮＧアゴニズムによって誘発される炎症誘発性応答に感受性である、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記がんが、膀胱癌、唾液腺癌、子宮内膜癌、尿路癌、尿路上皮癌、肺癌、非小細胞肺癌、メルケル細胞癌、結腸癌、大腸癌、胃癌、及び乳癌から選択される、請求項４１に記載の方法。

【請求項44】

がんを治療するための、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫複合体の使用。

【請求項45】

請求項１～９のいずれか１項に記載の式Ｉの免疫複合体を調製する方法であって、請求項３１に記載のＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物が前記抗体と結合されている、前記方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、参照によってその全体が組み込まれる、２０２１年６月２５日出願の米国仮出願第６３／２１５，１００号に対する優先権の利益を主張する。

【0002】

技術分野
本発明は一般に、１以上のビス－ベンゾイミダゾール分子に結合された抗体を含む免疫複合体に関する。

【背景技術】

【0003】

ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子）は、膜貫通タンパク質１７３（ＴＭＥＭ１７３）及びＭＰＹＳ／ＭＩＴＡ／ＥＲＩＳとしても知られ、ヒトではＳＴＩＮＧ１遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＳＴＩＮＧは特に免疫細胞、肺、及び卵巣にて広く発現される。ＳＴＩＮＧは、細胞がウイルス、マイコバクテリア、及び細胞内寄生虫のような細胞内病原体に感染した場合にＩ型インターフェロンの産生を誘導することによって自然免疫にて役割を担う。ＳＴＩＮＧが介在するＩ型インターフェロンは、自己分泌シグナル伝達によってそれを分泌する細胞及び傍分泌シグナル伝達による隣接細胞に結合することによって、感染した同じ細胞及び隣接細胞を局所感染から保護する。ＳＴＩＮＧは、異なる分子機構を介するＩ型インターフェロンのシグナル伝達にて直接細胞質ＤＮＡセンサー（ＣＤＳ）及びアダプタータンパク質の双方として機能する。ＳＴＩＮＧは、ＴＢＫ１を介して下流の転写因子ＳＴＡＴ６及びＩＲＦ３を活性化させることが示されており、これらは、細胞内病原体に対する抗ウイルス応答及び自然免疫応答に関与する。ＳＴＩＮＧに結合し、アゴニストとして作用する化合物は、ヒトＰＢＭＣとインキュベートした際に１型インターフェロンを含む炎症誘発性サイトカインの分泌を誘導することが示されている（ＷＯ２０１７／１７５１４７）。ＳＴＩＮＧ調節因子は、種々の障害、例えば、アレルギー性疾患、神経変性疾患、前がん性症候群及びがんの治療に有用であってもよく、且つ免疫原性組成物またはワクチンアジュバントにも有用であってもよい。

【0004】

アクセスできない腫瘍に到達するために及び／またはがん患者や他の対象の治療の選択肢を拡大するために、抗体及び免疫アジュバントを送達するための新しい組成物及び方法が必要とされている。

【発明の概要】

【0005】

本発明は一般に、リンカーによって１以上のＳＴＩＮＧアゴニスト部分に共有結合した抗体を含み、式Ｉ：
Ａｂ－［Ｌ－Ｄ］_ｐ Ｉ
またはその薬学的に許容される塩を有する免疫複合体を対象とするものであり、
式中、
Ａｂは当該抗体であり；
ｐは１～８の整数であり；
Ｄは以下の式を有するＳＴＩＮＧアゴニスト部分であり；

【化1】

置換基は本明細書で定義されている。

【0006】

本発明はさらに、疾病、特にがんの治療におけるそのような免疫複合体の使用を対象とする。

【0007】

本発明の別の態様は、ビス－ベンゾイミダゾール－リンカー化合物である。

【0008】

本発明の別の態様は、１以上のビス－ベンゾイミダゾール部分への結合によって連結された抗体を含む、治療有効量の免疫複合体を投与することを含む、がんを治療する方法である。

【0009】

本発明の別の態様は、がんを治療するための１以上のビス－ベンゾイミダゾール部分への結合によって連結された抗体を含む免疫複合体の使用である。

【0010】

本発明の別の態様は、１以上のビス－ベンゾイミダゾール部分を抗体と結合させることによって免疫複合体を調製する方法である。

【発明を実施するための形態】

【0011】

これより本発明の特定の実施形態を詳細に参照するが、それらの例は、添付の構造及び式に例証されている。本発明は、列挙される実施形態と組み合わせて説明されるが、それらは、本発明をそれらの実施形態に限定することを意図するものではないことを理解されたい。逆に、本発明は、すべての代替形、修正形、及び同等物を網羅することが意図されており、それらは、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれ得る。

【0012】

当業者であれば、本発明の実施に使用することができる、本明細書に記載されているものに類似または同等である多くの方法及び材料を理解するであろう。本発明は、決して記載されている方法及び材料に限定されるものではない。

【0013】

定義
「免疫複合体」という用語は、リンカーを介してアジュバント部分に共有結合している抗体コンストラクトを指す。「アジュバント」という用語は、アジュバントに曝露された対象において免疫応答を誘発することができる物質を指す。「アジュバント部位」という用語は、本明細書に記載されているように、例えばリンカーを介して抗体コンストラクトに共有結合されるアジュバントを指す。アジュバント部位は、抗体コンストラクトに結合している間、または対象への免疫複合体の投与後の抗体コンストラクトからの切断（例えば、酵素的切断）後に免疫応答を誘発することができる。

【0014】

「免疫刺激剤」及び「免疫賦活性」という用語は、同等に使用され、且つリンカーの生体内での切断後、免疫賦活性部分または免疫賦活性化合物に曝露された対象にて免疫応答を誘発できる部分、物質またはアジュバントを指す。「アジュバント部分」または「免疫賦活性部分」という用語は、本明細書に記載されているように、エラスターゼ基質、ペプチドリンカーを介して抗体コンストラクトのような細胞結合剤に共有結合しているアジュバントを指し、あるいは「ペイロード」と呼ばれる。アジュバント部分は、抗体コンストラクトに結合している間、または対象への免疫複合体の投与後の抗体コンストラクトからの切断（例えば、酵素的切断）後に免疫応答を誘発することができる。免疫複合体は、標的抗原が結合している間に、活性アジュバント部分を標的とした送達を可能にする。

【0015】

「パターン認識受容体」（ＰＲＲ）という用語は、病原体に典型的な分子を検出し、自然免疫系の機能を調節する生殖細胞系でコードされた宿主センサーを指す（Ｍａｈｌａ，ＲＳ．ｅｔ ａｌ，（２０１３），Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４：２４８；Ｋｕｍａｒ，Ｈ．ｅｔ ａｌ，（２０１１），Ｉｎｔｌ．Ｒｅｖ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎ．３０：１６－３４；Ｓｃｈｒｏｄｅｒ Ｋ．ｅｔ ａｌ，（２０１０），Ｃｅｌｌ，１４０（６）：８２１－８３２）。ＰＲＲは、樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球及び上皮細胞のような自然免疫系の細胞によって主に発現されるタンパク質であり、微生物病原体に関連する病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）と、細胞の損傷または死滅中に放出される宿主細胞の成分に関連する損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）とを同定する。ＰＲＲはまた、免疫系の他の部分より前、特に適応免疫の前に発生するため、初期パターン認識受容体とも呼ばれる。ＰＲＲはまた、抗原特異的な適応免疫応答の開始及び炎症性サイトカインの放出にも介在する。ＰＲＲには、トール様受容体（ＴＬＲ）、ＳＴＩＮＧ様受容体、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）、ＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）、Ｃ型レクチン様受容体（ＣＬＲ）、及びＤＮＡセンサーが挙げられるが、これらに限定されない。

【0016】

「アジュバント」とは、アジュバントに曝露された対象にて免疫応答を誘発することができる物質を指す。「アジュバント部分」という用語は、本明細書に記載されているように、例えば、リンカーを介して抗体コンストラクトに共有結合されるアジュバントを指す。アジュバント部分は、抗体コンストラクトに結合している間、または対象への免疫複合体の投与後の抗体コンストラクトからの切断（例えば、酵素的切断）後に免疫応答を誘発することができる。

【0017】

「抗体」という用語は、最も広義に使用され、具体的には、それらが所望される生物活性を呈する限り、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を包含する。本明細書で使用されるとき「抗体断片」及びその全ての文法上の変形は、インタクト抗体の抗原結合部位または可変領域を含むインタクト抗体の一部と定義され、その際、当該部分は、インタクト抗体のＦｃ領域の定常重鎖ドメイン（すなわち、抗体のアイソタイプに応じて、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４）を含まない。抗体断片の例には、限定しないで（１）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（２）関連する重鎖部分を含まずに一方の軽鎖可変ドメインのみを含有する単鎖ポリペプチド、または軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有するその断片；（３）関連する軽鎖部分を含まずに一方の重鎖可変領域のみを含有する単鎖ポリペプチド、または重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含有するその断片；（４）非ヒト種由来の単一Ｉｇドメインを含むナノボディまたは他の特定の単一ドメイン結合モジュール；及び（５）抗体断片から形成される多重特異性構造体または多価構造体を含む、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；連続するアミノ酸残基の１つの途切れない配列から成る一次構造を有するポリペプチドである任意の抗体断片（本明細書では「単鎖抗体断片」または「単鎖ポリペプチド」と呼ばれる）が挙げられる。１以上の重鎖を含む抗体断片では、重鎖（複数可）は、インタクト抗体の非Ｆｃ領域に見られる任意の定常ドメイン配列（例えば、ＩｇＧアイソタイプのＣＨ１）を含有することができ、及び／またはインタクト抗体に見られる任意のヒンジ領域配列を含有することができ、及び／またはヒンジ領域配列もしくは重鎖（複数可）の定常ドメイン配列に融合するもしくは位置するロイシンジッパー配列を含有することができる。

【0018】

「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子またはその断片に由来する抗原結合領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む）を含むポリペプチドを指す。「抗体」という用語は具体的には、所望の生物活性を示す、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を包含する。例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖対で構成され、各対は、ジスルフィド結合によって接続される、１つの「軽鎖」（約２５ｋＤａ）及び１つの「重鎖」（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖は、免疫グロブリンドメインと呼ばれる構造ドメインから構成される。これらのドメインは、例えば、軽鎖及び重鎖の可変ドメインまたは領域（それぞれＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）、軽鎖及び重鎖の定常ドメインまたは領域（それぞれＣ_Ｌ及びＣ_Ｈ）など、サイズと機能によって様々なカテゴリーに分類される。各鎖のＮ－末端は、抗原認識を主に担う、パラトープと称される、約１００～１１０個以上のアミノ酸の可変領域、すなわち抗原結合ドメインを画定する。軽鎖は、κまたはλのいずれかに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δまたはεとして分類され、そして、これらの重鎖によって、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥという免疫グロブリンの分類が定められる。ＩｇＧ抗体は、４つのペプチド鎖で構成される約１５０ｋＤａの大きな分子である。ＩｇＧ抗体は、約５０ｋＤａの２つの同一のクラスγ重鎖と約２５ｋＤａの２つの同一の軽鎖を含み、したがって四量体の四次構造を含む。２つの重鎖は互いに結合され、それぞれジスルフィド結合によって軽鎖に結合されている。得られた四量体は２つの同じの半分部分を持ち、これらが一緒になってＹ字型の形状を形成する。枝分かれした両端には、同じの抗原結合ドメインが含まれている。ヒトには４つのＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）があり、血清中の存在量の順に名前がつけられている（つまり、ＩｇＧ１が最も豊富である）。通常、抗体の抗原結合ドメインは、がん細胞への結合の特異性及び親和性にて最も重要である。

【0019】

特定の抗原を標的にする抗体は、特定の抗原を標的にする少なくとも１つの抗原結合領域を持つ二重特異性または多重特異性の抗体を含む。いくつかの実施形態では、標的モノクローナル抗体は、腫瘍細胞を標的とする少なくとも１つの抗原結合領域を持つ二重特異性抗体である。そのような抗原には、メソテリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＨＥＲ２、ＴＲＯＰ２、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ、５Ｔ４、ネクチン４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４（０８Ｅとしても知られている）、タンパク質チロシンキナーゼ７（ＰＴＫ７）、グリピカン－３、ＲＧ１、フコシル－ＧＭＩ、ＣＴＬＡ－４、及びＣＤ４４（ＷＯ２０１７／１９６５９８）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0020】

「抗体コンストラクト」とは、（ｉ）抗原結合ドメイン及び（ｉｉ）Ｆｃドメインを含む、抗体または融合タンパク質を指す。

【0021】

いくつかの実施形態では、結合剤は、抗原結合抗体「断片」であり、これは、抗体の少なくとも抗原結合領域を単独で、または一緒になって抗原結合コンストラクトを構築する他の構成成分と共に含むコンストラクトである。多くの異なる種類の抗体「断片」は当該技術分野で公知であり、例えば、（ｉ）Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｌ及びＣＨ_１ドメインから成る一価の断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でのジスルフィド架橋によって結合した２つのＦａｂ断片を含む２価の断片である、Ｆ（ａｂ’）_２断片、（ｉｉｉ）抗体の単一アームのＶ_Ｌ及びＶ_Ｈドメインから成るＦｖ断片、（ｉｖ）穏やかな還元条件下でＦ（ａｂ’）_２断片のジスルフィド架橋の切断から得られる、Ｆａｂ’断片、（ｖ）ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、ならびに（ｖｉ）２つのドメインが１つのポリペプチド鎖として合成されることを可能にする合成リンカーによって結合されたＦｖ断片の２つのドメイン（つまり、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈ）から成る１価の分子である、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。

【0022】

抗体または抗体断片は、より大きなコンストラクトの一部、例えば、抗体断片の追加の領域への結合または融合コンストラクトの一部であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、抗体断片は、本明細書に記載されているようにＦｃ領域に融合することができる。他の実施形態では、抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）は、例えば、膜貫通ドメインへの融合（任意選択で介在するリンカーまたは「ストーク」（例えば、ヒンジ領域）によって）及び任意選択の細胞間シグナル伝達ドメインへの融合によって、キメラ抗原受容体またはキメラＴ細胞受容体の一部であり得る。例えば、抗体断片は、ＴＲＯＰ２に結合するＴ細胞受容体様コンストラクトを提供するためにＴ細胞受容体のγ鎖及び／またはδ鎖に融合され得る。さらに別の実施形態では、抗体断片は、ＣＤ１またはＣＤ３を結合するドメイン及びリンカーを含む二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）の一部である。

【0023】

「エピトープ」とは、抗原結合ドメインが結合する（すなわち、抗原結合ドメインのパラトープにて）抗原の任意の抗原決定基またはエピトープ決定基を意味する。抗原決定基は通常、アミノ酸または糖側鎖のような分子の化学的に活性がある表面群化から成り、通常、特定の３次元構造特性及び特定の電荷特性を有する。

【0024】

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を指す。Ｆｃ受容体には３つの主要なクラス：（１）ＩｇＧに結合するＦｃγＲ、（２）ＩｇＡに結合するＦｃαＲ、及び（３）ＩｇＥに結合するＦｃεＲがある。ＦｃγＲファミリーには、ＦｃγＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）及びＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６Ｂ）のようないくつかのメンバーが含まれる。Ｆｃγ受容体はＩｇＧに対する親和性が異なり、ＩｇＧサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）に対する親和性も異なる。

【0025】

本明細書で使用する場合、「免疫チェックポイント阻害剤」という語句は、免疫チェックポイント分子の活性を阻害する任意の調節剤を指す。免疫チェックポイント阻害剤には、免疫チェックポイント分子結合タンパク質、小分子阻害剤、抗体（免疫チェックポイントタンパク質を標的とする少なくとも１つの抗原結合領域を有する二重特異性抗体及び多重特異性抗体、例えば、免疫チェックポイントタンパク質のみを標的としない二重特異性抗体または多重特異性抗体、ならびに二重免疫調節剤（同時に２つの免疫調節標的を標的とする）（阻害標的の遮断、抑制細胞の枯渇、及び／またはエフェクター細胞の活性化をもたらす）；腫瘍標的免疫調節剤（腫瘍抗原及びＣＤ４０または４－１ＢＢのような共刺激分子を標的とすることによって、腫瘍浸潤免疫細胞に強力な共刺激を誘導する）；ＮＫ細胞リダイレクト剤（腫瘍抗原及びＣＤ１６Ａを標的とすることによって、ＮＫ細胞を悪性細胞にリダイレクトする）；またはＴ細胞リダイレクト剤（腫瘍抗原及びＣＤ３を標的とすることによって、Ｔ細胞を悪性細胞にリダイレクトする）である抗体を含む）、抗体誘導体（Ｆｃ融合、Ｆａｂ断片及びｓｃＦｖを含む）、抗体薬物複合体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、アプタマー、ペプチド及びペプチド模倣物が含まれ得るが、これらに限定されない。

【0026】

本明細書で言及される核酸またはアミノ酸配列の「同一性」は、対象の核酸またはアミノ酸配列を参照する核酸またはアミノ酸配列と比較することによって決定され得る。同一性パーセントは、最適に整列された対象の配列と最長の配列の長さ（すなわち、対象の配列または参照配列のいずれかの長さ、いずれか長い方）で割った参照配列との間で同じ（すなわち、同一）であるヌクレオチドまたはアミノ酸残基の数である。配列のアラインメント及び同一性パーセントの計算は、利用可能なソフトウェアプログラムを使用して実行することができる。そのようなプログラムの例としては、ＣＬＵＳＴＡＬ－Ｗ、Ｔ－Ｃｏｆｆｅ、及びＡＬＩＧＮ（核酸及びアミノ酸配列のアラインメントのため）、ＢＬＡＳＴプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ２．１、ＢＬ２ＳＥＱ、ＢＬＡＳＴｐ、ＢＬＡＳＴｎなど）、及びＦＡＳＴＡプログラム（例えば、ＦＡＳＴＡ３ｘ、ＦＡＳＴＭ及びＳＲＥＳＥＡＲＣＨ）（配列アラインメント及び配列相似性検索のため）が挙げられる。配列アラインメントアルゴリズムはまた、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３－４１０（１９９０），Ｂｅｉｇｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕｓａ，１０６（１０）：３７７０－３７７５（２００９），Ｄｕｒｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ｐｒｏｂａｌｉｓｔｉｃ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ（２００９），Ｓｏｄｉｎｇ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，２１（７）：９５１－９６０（２００５），Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５（１７）：３３８９－３４０２ １９９７）及びＧｕｓｆｉｅｌｄ，Ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ ｏｎ Ｓｔｒｉｎｇｓ，Ｔｒｅｅｓ ａｎｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＵＫ（１９９７）に開示されている。配列の同一性パーセント（％）は、例えば、１００×１［（同一位置）／ｍｉｎ（ＴＧ_Ａ，ＴＧ_Ｂ）］として計算することもでき、ＴＧ_Ａ及びＴＧ_Ｂは、ＴＧ_Ａ及びＴＧ_Ｂを最小化するアラインメントにおけるペプチド配列Ａ及びＢの残基数と内部ギャップ位置の合計である。例えば、Ｒｕｓｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２４４：３３２－３５０（１９９４）を参照のこと。

【0027】

結合剤は、抗原結合部位を一緒に形成するＩｇ重鎖及び軽鎖の可変領域ポリペプチドを含む。重鎖及び軽鎖の可変領域のそれぞれは、フレームワーク領域によって連結された３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含むポリペプチドである。結合剤は、Ｉｇ重鎖及び軽鎖を含む、当該技術分野で公知の様々な種類の結合剤のいずれかであり得る。例えば、結合剤は、抗体、抗原結合抗体「断片」、またはＴ細胞受容体であり得る。

【0028】

「バイオ後続品」とは、例えば、サシツズマブゴビテカン（ＴＲＯＤＥＬＶＹ（登録商標）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ、ＩＭＭＵ－１３２）にて以前に承認されたＴｒｏｐ２を標的とする抗体コンストラクトであるサシツズマブに類似する活性特性を有する抗体コンストラクトを指す。

【0029】

「バイオベター」とは、サシツズマブまたはサシツズマブゴビテカンのような以前に承認された抗体コンストラクトを改善したものである、抗体コンストラクトを指す。バイオベターは、以前に承認された抗体コンストラクトに対して１以上の修飾（例えば、変更されたグリカンプロファイル、または固有のエピトープ）を有することができる。

【0030】

「アミノ酸」とは、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質に組み込むことができる任意のモノマー単位を指す。アミノ酸には、天然に存在するα－アミノ酸とその立体異性体、及び非天然（天然に存在しない）アミノ酸とその立体異性体が含まれる。所与のアミノ酸の「立体異性体」とは、分子式及び分子内結合が同じであるが、結合及び原子の三次元配置が異なる異性体（例えば、ｌ－アミノ酸及び対応するｄ－アミノ酸）を指す。アミノ酸は、グリコシル化（例えば、Ｎ－結合型グリカン、Ｏ－結合型グリカン、ホスホグリカン、Ｃ－結合型グリカン、またはグリピケーション）または脱グリコシル化することができる。アミノ酸は、本明細書では、広く知られている３文字の記号、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨されている１文字の記号のいずれかによって表され得る。

【0031】

天然アミノ酸は、遺伝子コードによってコードされたもの、及びそれらのアミノ酸が後で修飾されたもの（例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタメート及びＯ－ホスホセリン）である。天然に存在するα－アミノ酸としては、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リシン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。天然に存在するα－アミノ酸の立体異性体としては、Ｄ－アラニン（Ｄ－Ａｌａ）、Ｄ－システイン（Ｄ－Ｃｙｓ）、Ｄ－アスパラギン酸（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－Ｇｌｕ）、Ｄ－フェニルアラニン（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｄ－ヒスチジン（Ｄ－Ｈｉｓ）、Ｄ－イソロイシン（Ｄ－Ｉｌｅ）、Ｄ－アルギニン（Ｄ－Ａｒｇ）、Ｄ－リシン（Ｄ－Ｌｙｓ）、Ｄ－ロイシン（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｄ－メチオニン（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｄ－アスパラギン（Ｄ－Ａｓｎ）、Ｄ－プロリン（Ｄプロ）、Ｄ－グルタミン（Ｄ－Ｇｌｎ）、Ｄ－セリン（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｄ－トレオニン（Ｄ－Ｔｈｒ）、Ｄ－バリン（Ｄ－Ｖａｌ）、Ｄ－トリプトファン（Ｄ－Ｔｒｐ）、Ｄ－チロシン（Ｄ－Ｔｙｒ）及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0032】

天然に存在するアミノ酸には、シトルリン（Ｃｉｔ）のような翻訳後修飾によってタンパク質に形成されたものが含まれる。

【0033】

非天然（天然に存在しない）アミノ酸には、アミノ酸類似体、アミノ酸模倣物、合成アミノ酸、Ｎ－置換グリシン、及び天然アミノ酸と同様に機能するＬ－配置またはＤ－配置のＮ－メチルアミノ酸が含まれるが、これらに限定されない。「アミノ酸類似体」とは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造（すなわち、水素と結合している炭素、カルボキシル基、アミノ基）を有するが、側鎖基またはペプチド主鎖が修飾されている非天然アミノ酸、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド及びメチオニンメチルスルホニウムであり得る。「アミノ酸模倣体」とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様に機能する化学化合物を指す。

【0034】

「リンカー」とは、化合物または材料の２つ以上の部分を共有結合する官能基を指す。例えば、連結部位は、アジュバント部分を免疫複合体の抗体コンストラクトに共有結合させるのに役立つことができる。

【0035】

「連結部位」とは、化合物や材料中の２つ以上の部分を共有結合させる官能基を指す。例えば、連結部位は、アジュバント部分を免疫複合体の抗体に共有結合させる役割を果たすことができる。連結部位をタンパク質及び他の材料に接続するための有用な結合には、アミド、アミン、エステル、カルバミン酸、尿素、チオエーテル、チオカルバミン酸、チオカーボネート、及びチオ尿素が含まれるが、これらに限定されない。

【0036】

「二価」とは、２つの官能基を連結するための２つの結合点を含む、化学部位を指す。多価連結部位は、さらなる官能基を連結するための追加の結合点を有することができる。二価ラジカルは、接尾辞「ジイル」で示され得る。例えば、二価連結部位には、二価ポリ（エチレングリコール）、二価シクロアルキル、二価ヘテロシクロアルキル、二価アリール、及び二価ヘテロアリール基のような二価ポリマー部位が含まれる。「二価シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基」とは、分子または材料中の２つの部分を共有結合させるための２つの結合点を有するシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基を指す。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、置換型または非置換型であり得る。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１以上の基で置換することができる。

【0037】

波線

【化2】

は、特定の化学部位の結合点を表す。特定の化学部位に２本の波線

【化3】

が存在する場合、化学部位は双方で、つまり左から右または右から左に読み取って使用できることが理解される。いくつかの実施形態では、存在する２つの波線

【化4】

を有する特定の部位は、左から右へと読み取られるように使用されると見なされる。

【0038】

「アルキル」とは、示された炭素原子の数を有する、直鎖（線状）または分岐した飽和脂肪族ラジカルを指す。アルキルには、例えば１～１２つの任意の数の炭素を含むことができる。アルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ、－ＣＨ_３）、エチル（Ｅｔ、－ＣＨ_２ＣＨ_３）、１－プロピル（ｎ－Ｐｒ、ｎ－プロピル、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－プロピル（ｉ－Ｐｒ、ｉ－プロピル、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、１－ブチル（ｎ－Ｂｕ、ｎ－ブチル、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－メチル－１－プロピル（ｉ－Ｂｕ、ｉ－ブチル、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２－ブチル（ｓ－Ｂｕ、ｓ－ブチル、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－メチル－２－プロピル（ｔ－Ｂｕ、ｔ－ブチル、－Ｃ（ＣＨ_３）_３）、１－ペンチル（ｎ－ペンチル、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２）、２－メチル－２－ブチル（－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３－メチル－２－ブチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、３－メチル－１－ブチル（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２－メチル－１－ブチル（－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_３）、１－ヘキシル（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－ヘキシル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３－ヘキシル（－ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３））、２－メチル－２－ペンチル（－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３－メチル－２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_３）、４－メチル－２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、３－メチル－３－ペンチル（－Ｃ（ＣＨ_３）（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２）、２－メチル－３－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２，３－ジメチル－２－ブチル（－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、３，３－ジメチル－２－ブチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_３、１－ヘプチル、１－オクチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、置換型または非置換型であることができる。置換アルキル基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１以上の基で置換することができる。置換アルキル基をジェミナル置換することができ、その際、アルキルの炭素原子はスピロ、シクロアルキル基、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルを形成する。

【0039】

「アルキルジイル」という用語は二価のアルキルラジカルを指す。アルキルジイル基の例には、メチレン（－ＣＨ_２－）、エチレン（－ＣＨ_２ＣＨ_２－）、プロピレン（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－）などが挙げられるが、これらに限定されない。アルキルジイル基はまた「アルキレン」基とも呼ばれてもよい。アルキルジイル基は置換または非置換であることができる。置換アルキルジイル基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１以上の基で置換することができる。置換アルキルジイル基をジェミナル置換することができ、その際、アルキルの炭素原子がスピロ、シクロアルキル基、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルを形成する。

【0040】

「アルケニル」は、示された炭素原子の数及び少なくとも１つの炭素－炭素二重結合、ｓｐ２を有する、直鎖（線状）または分岐した不飽和脂肪族ラジカルを指す。アルケニルは、２～約１２以上の炭素原子を含むことができる。アルケニル基は、「シス」及び「トランス」配向、代替的に「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有するラジカルである。例としては、エチレニルまたはビニル（－ＣＨ＝ＣＨ_２）、アリル（－ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２）、ブテニル、ペンテニル、及びこれらの異性体を含むが、これらに限定されない。アルケニル基は、非置換型または置換型であり得る。「置換アルケニル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１以上の基で置換することができる。

【0041】

「アルケニレン」または「アルケニルジイル」という用語は、直鎖または分岐鎖の二価の炭化水素ラジカルを指す。例としては、エチレニレンまたはビニレン（－ＣＨ＝ＣＨ－）、アリル（－ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ－）などがあるが、これらに限定されない。

【0042】

「アルキニル」とは、示された炭素原子の数及び少なくとも１つの炭素－炭素三重結合、ｓｐを有する、直鎖（線状）または分岐した不飽和脂肪族ラジカルを指す。アルキニルは、２～約１２個以上の炭素原子を含むことができる。例えば、Ｃ_２－Ｃ_６アルキニルには、エチニル（－Ｃ≡ＣＨ）、プロピニル（プロパルギル、－ＣＨ_２Ｃ≡ＣＨ）、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、及びこれらの異性体が含まれるが、これらに限定されない。アルキニル基は置換型または非置換型であり得る。「置換アルキニル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１以上の基で置換することができる。

【0043】

「アルキニレン」または「アルキニルジイル」という用語は二価のアルキニルラジカルを指す。

【0044】

「カルボサイクル」、「カルボシクリル」、「炭素環」及び「シクロアルキル」という用語は、３～１２の環原子または示された原子数を含む、飽和もしくは部分不飽和の単環式、縮合二環式、スピロ、または架橋多環式の集合体を指す。飽和単環式炭素環には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロオクチルが挙げられる。飽和二環式及び多環式炭素環には、例えば、ノルボルナン、［２．２．２］ビシクロオクタン、デカヒドロナフタレン及びアダマンタンが含まれる。炭素環式基は部分的に不飽和であり、環に１以上の二重結合または三重結合を有する場合もある。部分的に不飽和である代表的な炭素環式基には、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘキサジエン（１，３－及び１，４－異性体）、シクロヘプテン、シクロヘプタジエン、シクロオクテン、シクロオクタジエン（１，３－、１，４－及び１，５－異性体）、ノルボルネン、及びノルボルナジエンが含まれるが、これらに限定されない。

【0045】

「シクロアルキルジイル」という用語は、二価のシクロアルキルラジカルを指す。

【0046】

「アリール」とは、親の芳香環系の１つの炭素原子から１つの水素原子を除去することによって誘導される、６～２０個の炭素原子（Ｃ_６－Ｃ_２０）の一価の芳香族炭化水素ラジカルを意味する。アリール基は、単環式である、縮合して二環式もしくは三環式基を形成する、または結合によって連結してビアリール基を形成することができる。代表的なアリール基には、フェニル、ナフチル、ビフェニルが含まれる。他のアリール基には、メチレン連結基を有するベンジルが含まれる。フェニル、ナフタレンまたはビフェニルなど、一部のアリール基には６～１２個の環員がある。他のアリール基には、フェニルまたはナフチルのような６～１０個の環員がある。

【0047】

「アリーレン」または「アリールジイル」とは、親の芳香環系の２個の炭素原子から２個の水素原子を除去することによって誘導される、６～２０個の炭素原子（Ｃ_６－Ｃ_２０）の二価の芳香族炭化水素ラジカルを意味する。いくつかのアリールジイル基は、例示的構造で「Ａｒ」と表される。アリールジイルは、飽和環、部分的不飽和環、または芳香族炭素環と縮合した芳香環を含む、二環式ラジカルを含む。典型的なアリールジイル基としては、ベンゼン（フェニレン）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニレン、インデニレン、インダニレン、１，２－ジヒドロナフタレン、１，２，３，４－テトラヒドロナフチルなどに由来するラジカルが挙げられるが、これらに限定されない。アリールジイル基は「アリーレン」とも呼ばれ、任意で、本明細書に記載されている１以上の置換基によって置換される。

【0048】

「複素環」、「ヘテロシクリル」及び「複素環式環」という用語は、本明細書では相互交換可能に使用され、３～約２０の環原子の飽和または部分不飽和（すなわち１以上の二重及び／または三重結合を環の中に有する）の炭素環式ラジカルを指し、少なくとも１つの環原子は、窒素、酸素、リン、及びイオウから選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子はＣであり、１以上の環原子は任意で、以下に記載されている１以上の置換基によって独立して置換される。複素環は、３～７員環（２～６の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～４のヘテロ原子）を有する単環または７～１０員環（４～９の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～６のヘテロ原子）を有する二環、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、もしくは［６，６］系であってもよい。複素環は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ Ａ．，”Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６８）の特に第１章、第３章、第４章、第６章、第７章、及び第９章、”Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９５０～現在）の特に第１３巻、第１４巻、第１６巻、第１９巻、及び第２８巻、ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。「ヘテロシクリル」は、複素環ラジカルが、飽和環、部分的不飽和環、または芳香族炭素環式環もしくは複素環式環と縮合したラジカルも含む。複素環式環としては、例えば、モルホリン－４－イル、ピペリジン－１－イル、ピペラジニル、ピペラジン－４－イル－２－オン、ピペラジン－４－イル－３－オン、ピロリジン－１－イル、チオモルホリン－４－イル、Ｓ－ジオキソチオモルホリン－４－イル、アゾカン－１－イル、アゼチジン－１－イル、オクタヒドロピリド［１，２－ａ］ピラジン－２－イル、［１，４］ジアゼパン－１－イル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２－ピロリニル、３－ピロリニル、インドリニル、２Ｈ－ピラニル、４Ｈ－ピラニル、ジオキサニル、１，３－ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリニルイミダゾリニル、イミダゾリニル、３－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３－アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、アザビシクロ［２．２．２］ヘキサニル、３Ｈ－インドリルキノリジニル、及びＮ－ピリジルウレアが挙げられるが、これらに限定されない。スピロヘテロシクリル部位も、本定義の範囲内に含まれる。スピロヘテロシクリル部位の例には、アザスピロ［２．５］オクタニル及びアザスピロ［２．４］ヘプタニルが挙げられる。２つの環原子がオキソ（＝Ｏ）部位で置換された複素環式基の例は、ピリミジノニル及び１，１－ジオキソ－チオモルホリニルである。本明細書の複素環基は、任意選択で、本明細書に記載されている１以上の置換基で独立して置換される。

【0049】

「ヘテロシクリルジイル」という用語は、３～約２０個の環原子の二価の飽和または部分的に不飽和（すなわち１以上の二重及び／または三重結合を環の中に有する）の炭素環式ラジカルを指し、少なくとも１つの環原子は、窒素、酸素、リン、及びイオウから選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子はＣであり、１以上の環原子は、任意選択で、記載されている１以上の置換基で、独立して置換される。５員及び６員のヘテロシクリルジイルとしては、モルホリニルジイル、ピペリジニルジイル、ピペラジニルジイル、ピロリジニルジイル、ジオキサニルジイル、チオモルホリニルジイル、及びＳ－ジオキソチオモルホリニルジイルが挙げられる。

【0050】

「ヘテロアリール」という用語は、５、６または７員環の一価の芳香族ラジカルを指し、窒素、酸素及びイオウから独立して選択される１以上のヘテロ原子を含む５～２０個の原子の縮合環系（その少なくとも１つは芳香族である）を含む。ヘテロアリール基の例は、ピリジニル（例えば２－ヒドロキシピリジニルを含む）、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピリミジニル（例えば４－ヒドロキシピリミジニルを含む）、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、及びフロピリジニルである。ヘテロアリール基は、任意選択で、本明細書に記載されている１以上の置換基で独立して置換される。

【0051】

「ヘテロアリールジイル」という用語は、５、６または７員環の二価の芳香族ラジカルを指し、窒素、酸素及びイオウから独立して選択される１以上のヘテロ原子を含む５～２０個の原子の縮合環系（その少なくとも１つは芳香族である）を含む。５員及び６員のヘテロアリールジイルの例には、ピリジルジイル、イミダゾリルジイル、ピリミジニルジイル、ピラゾリルジイル、トリアゾリルジイル、ピラジニルジイル、テトラゾリルジイル、フリルジイル、チエニルジイル、イソオキサゾリルジイル、チアゾリルジイル、オキサジアゾリルジイル、オキサゾリルジイル、イソチアゾリルジイル及びピロリルジイルが含まれる。

【0052】

複素環またはヘテロアリール基は、可能であれば、炭素（炭素結合した）または窒素（窒素結合した）結合してもよい。例として、限定されないが、炭素結合した複素環またはヘテロアリールは、ピリジンの２、３、４、５もしくは６位、ピリダジンの３、４、５もしくは６位、ピリミジンの２、４、５もしくは６位、ピラジンの２、３、５もしくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、もしくはテトラヒドロピロールの２、３、４もしくは５位、オキサゾール、イミダゾール、もしくはチアゾールの２、４もしくは５位、イソキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの３、４もしくは５位、アジリジンの２もしくは３位、アゼチジンの２、３もしくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７もしくは８位、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７もしくは８位で結合される。

【0053】

例として、限定されないが、窒素結合した複素環またはヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２－ピロリン、３－ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２－イミダゾリン、３－イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２－ピラゾリン、３－ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ－インダゾールの１位、イソインドールまたはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾ－ルまたはβ－カルボリンの９位で結合される。

【0054】

単独または別の置換基の一部としての「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を指す。

【0055】

単独でまたは別の置換基の一部としての「カルボニル」という用語は、Ｃ（＝Ｏ）また－Ｃ（＝Ｏ）－、すなわち、酸素に二重結合し、カルボニルを有する部分の他の２つの基に結合した炭素原子を指す。

【0056】

本明細書で使用する場合、「第四級アンモニウム塩」という語句は、アルキル置換基（例えば、メチル、エチル、プロピル、またはブチルのようなＣ_１－Ｃ_４アルキル）で四級化された第三級アミンを指す。

【0057】

「治療する」、「治療」及び「治療すること」という用語は、傷害、病態、状態（例えば、がん）もしくは症状（例えば、認知障害）の治療または寛解における任意の成功の兆候を指し、緩解、寛解、症状の軽減、もしくは症状、傷害、病態もしくは状態を患者にとってより耐えられるものにする、症状の進行速度の減少、症状もしくは状態の頻度、もしくは期間の減少、または状況によっては症状の発症の防止など、任意の客観的または主観的パラメータが含まれる。症状の治療または寛解は、身体検査の結果を含む、任意の客観的または主観的パラメータに基づくことができる。

【0058】

「がん」、「新生物」、及び「腫瘍」という用語は本明細書で、細胞増殖の制御を著しく失うことを特徴とする異常な増殖表現型を示すような、自律的で制御されない増殖を示す細胞を指すために使用される。本発明の文脈において検出、分析、及び／または治療の対象となる細胞には、がん細胞（例えば、がんを有する個体からのがん細胞）、悪性がん細胞、前転移性がん細胞、転移性がん細胞、及び非転移性がん細胞が含まれる。実質的にすべての組織のがんは、知られている。「がん負荷量」という語句は、対象中のがん細胞量またはがん体積を指す。したがって、がん負荷量を減少させることは、対象中のがん細胞数またはがん細胞体積を減少させることを指す。本明細書で使用される「がん細胞」という用語は、がん細胞（例えば、個体を治療することができる任意のがんから、例えば、がんを有する個体から単離された）である、またはがん細胞に由来する任意の細胞（例えば、がん細胞のクローン）を指す。例えば、がん細胞は、確立されたがん細胞株からのものであってもよく、がんを有する個体から単離された初代細胞であってもよく、がんを有する個体から単離された初代細胞からの子孫細胞であってもよい、などである。いくつかの実施形態では、この用語はまた、がん細胞の細胞内部分、細胞膜部分、または細胞溶解物のようながん細胞の一部を指すことができる。細胞腫、肉腫、膠芽腫、メラノーマ、リンパ腫及び骨髄腫のような固形腫瘍、ならびに白血病のような循環癌を含む、多くの種類のがんは、当業者に知られている。

【0059】

本明細書で使用する場合、「がん」という用語は、微小残存病変を含み、且つ原発腫瘍及び転移腫瘍の双方を含む、固形腫瘍がん（例えば、皮膚、肺、前立腺、乳房、胃、膀胱、結腸、卵巣、膵臓、腎臓、肝臓、神経膠芽腫、髄芽腫、平滑筋肉腫、頭頸部扁平上皮癌、黒色腫、及び神経内分泌）、及び液状がん（例えば、血液癌）；癌腫；軟部組織腫瘍；肉腫；奇形腫；黒色腫；白血病；リンパ腫；及び脳腫瘍を含むが、これらに限定されない、任意の形態のがんを含む。

【0060】

がんの「病態」には、患者の健康状態を損なうすべての現象が含まれる。これには、異常または制御不能な細胞増殖、転移、隣接する細胞の正常な機能の阻害、異常なレベルでのサイトカインまたは他の分泌物の放出、炎症または免疫反応の抑制または悪化、新生物、前悪性、悪性腫瘍、及びリンパ節のような周辺または遠隔組織または器官への浸潤が含まれるが、これらに限定されない。

【0061】

本明細書で使用する場合、「がん再発」及び「腫瘍再発」という語句、ならびにそれらの文法的変形は、がんの診断後の腫瘍またはがん細胞のさらなる増殖を指す。特に、がん組織でさらなるがん細胞増殖が起こると再発が起こり得る。同様に「腫瘍の広がり」は、腫瘍の細胞が局所または遠隔組織や臓器に散在するときに発生し、したがって、腫瘍の広がりには腫瘍の転移が含まれる。「腫瘍浸潤」は、腫瘍の増殖が局所的に広がり、正常な臓器機能を圧迫、破壊または阻止することによって関係する組織の機能を損なうときに発生する。

【0062】

本明細書で使用する場合、「転移」という用語は、がん腫瘍のある器官に直接接続していない、器官または身体部分で癌腫瘍が増殖することを指す。転移は、がん腫瘍のある器官に直接接続していない器官または身体部分での検出不可能な量のがん細胞の存在である、微小転移を含むと理解されるであろう。転移は、がん細胞が元の腫瘍部位から離れること、がん細胞が身体の他の部位に移動及び／または浸潤することなど、いくつかの段階のプロセスとして定義することもできる。

【0063】

「有効量」及び「治療有効量」という語句は、それが投与される治療効果を生み出す免疫複合体のような物質の投与量または量を指す。実際の投与量は、治療の目的に依存し、また当業者であれば既知の技術を使用して確認可能であろう（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１－３，１９９２）；Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）；Ｐｉｃｋａｒ，Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）；Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１１ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，２００６）；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，２０１２）を参照のこと）。がんの場合、治療有効量の免疫複合体は、がん細胞の数を低下、腫瘍サイズを低下、末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害（すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止）、腫瘍転移を阻害（すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止）、腫瘍増殖をある程度阻害、及び／またはがんに関連する症状のうちの１以上をある程度軽減し得る。免疫複合体が、存在するがん細胞の増殖を阻害し得る、及び／またはそれらを死滅させ得る限り、それは、細胞増殖抑制性及び／または細胞毒性であり得る。がん療法に関して、有効性は、例えば、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）の評価及び／または奏効率（ＲＲ）の決定によって測定することができる

【0064】

「レシピエント」「個体」「対象」「宿主」及び「患者」という用語は同じ意味で使用され、診断、処置または治療が所望される任意の哺乳類対象（例えば、ヒト）を指す。治療目的のための「哺乳動物」とは、ヒト、飼育動物及び畜産動物、動物園、競技用、愛玩動物、例えば犬、馬、猫、牛、羊、山羊、豚、ラクダなどを含む哺乳動物に分類される任意の動物を指す。特定の実施形態では、哺乳動物はヒトである。

【0065】

本発明の文脈における「相乗的アジュバント」または「相乗的組み合わせ」という語句は、受容体アゴニスト、サイトカイン、及びアジュバントポリペプチドのような２つの免疫調節因子の組み合わせを含み、これらは組み合わせて、単独で投与される場合と比較して免疫に対する相乗効果を誘発する。特に、本明細書に開示される免疫複合体は、特許請求されたアジュバント及び抗体コンストラクトの相乗的組み合わせを含む。投与時のこれらの相乗的組み合わせは、例えば、抗体コンストラクトまたはアジュバントが他の部分の非存在下で投与される場合と比較して、免疫に対してより大きな効果を誘発する。さらに、抗体コンストラクトまたはアジュバントのいずれかと単独で投与した場合と比較して、減少した量の免疫複合体を投与してもよい（免疫複合体の一部として投与される抗体コンストラクトの総数またはアジュバントの総数によって測定される）。

【0066】

本明細書で使用する場合、「投与する」という用語は、非経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、病巣内、鼻腔内もしくは皮下投与、経口投与、座薬としての投与、局所接触、クモ膜下投与、または徐放出装置、例えば小型浸透ポンプを対象に埋め込むことを意味する。

【0067】

本明細書で数値を修正するために使用される「約」及び「およそ」という用語は、その数値の周囲にある近い範囲を示す。したがって、「Ｘ」が値である場合、「約Ｘ」または「およそＸ」は、０．９Ｘ～１．１Ｘ、例えば、０．９５Ｘ～１．０５Ｘ、または０．９９Ｘ～１．０１Ｘの値を示す。「約Ｘ」または「およそＸ」への言及は特に、少なくとも値Ｘ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘ、及び１．０５Ｘを示す。したがって、「約Ｘ」及び「およそＸ」は、例えば「０．９８Ｘ」のクレーム限定について本明細書のサポートを教示及び提供することを意図している。

【0068】

抗体
本発明の免疫複合体は抗体を含む。本発明の実施形態の範囲に含まれるのは、本明細書に記載されている抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインの機能的変異体である。本明細書で使用されるとき「機能的変異体」という用語は、親抗体コンストラクトもしくは抗原結合ドメインと実質的なまたは有意な配列同一性もしくは類似性を有する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトを指し、この機能的変異体は、それが変異体である抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインの生物活性を保持する。機能的変異体は、例えば、Ｔｒｏｐ２を発現する標的細胞を認識する能力を親抗体コンストラクトもしくは抗原結合ドメインと類似する程度、同じ程度またはより高度に保持する、本明細書に記載されている抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメイン（親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメイン）の変異体を包含する。

【0069】

抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインに関して、機能的変異体は、アミノ酸配列が抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインと、例えば少なくとも約３０％、約５０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上同一であることができる。

【0070】

機能的変異体は、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含むことができる。あるいはまたはさらに、機能的変異体は、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換が機能的変異体の生物活性を妨害または阻害しないことが好ましい。非保存的アミノ酸置換は、機能的変異体の生物活性を増強してもよいので、機能的変異体の生物活性は、親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインと比較して上昇する。

【0071】

本発明の免疫複合体を含む抗体はＦｃ操作された変異体を含む。いくつかの実施形態では、１以上のＦｃ受容体への調節された結合をもたらすＦｃ領域の変異は、以下の変異：ＳＤ（Ｓ２３９Ｄ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＥ（Ｓ２６７Ｅ）、ＳＥＬＦ（Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＤＩＥＡＬ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ）、ＧＡ（Ｇ２３６Ａ）、ＡＬＩＥ（Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、ＧＡＳＤＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、Ｖ９（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）及びＶ１１（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）の１以上、及び／または以下のアミノ酸：Ｅ３４５Ｒ、Ｅ２３３、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｈ２６８、Ｐ２７１、Ｌ３２８及びＡ３３０での１以上の変異を含むことができる。Ｆｃ受容体結合を調節するためのさらなるＦｃ領域の修飾は、例えば、ＵＳ２０１６／０１４５３５０、ＵＳ７４１６７２６及びＵＳ５６２４８２１に記載されており、これらは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。

【0072】

本発明の免疫複合体を含む抗体は脱フコシル化のようなグリカン変異体を含む。いくつかの実施形態では、結合剤のＦｃ領域は、ネイティブの非修飾Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃ領域のグリコシル化パターンの変化を有するように修飾される。

【0073】

本発明の抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインのアミノ酸置換は、好ましくは保存的アミノ酸置換である。保存的アミノ酸置換は当該技術分野で公知であり、特定の物理的及び／または化学的特性を有する１つのアミノ酸を、同じまたは類似の化学的または物理的特性を有する別のアミノ酸に交換するアミノ酸置換が含まれる。例えば、保存的アミノ酸置換は、別の酸性／負に帯電した極性アミノ酸に置換された酸性／負に帯電した極性アミノ酸（例えば、ＡｓｐまたはＧｌｕ）、非極性側鎖を有する別のアミノ酸に置換された正に帯電したアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｖａｌなど）、別の塩基性／正に帯電した極性アミノ酸に置換された塩基性／正に帯電した極性アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇなど）、極性側鎖を有する他の非荷電性アミノ酸に置換された極性側鎖を有する非荷電性アミノ酸（例えば、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）、ベータ分岐側鎖を有する別のアミノ酸に置換されたベータ分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ及びＶａｌ）、芳香族側鎖を有する別のアミノ酸に置換された芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ及びＴｙｒ）などであり得る。

【0074】

抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、他の成分、例えば他のアミノ酸が抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメイン機能的変異体の生物活性を実質的に変化させないように、本明細書に記載されている特定のアミノ酸配列（複数可）から本質的になり得る。

【0075】

いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、修飾Ｆｃ領域を含み、修飾は１以上のＦｃ受容体へのＦｃ領域の結合を調節する。

【0076】

いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体（例えば、少なくとも２つのアジュバント部分に結合された抗体）は、Ｆｃ領域の変異が欠如している天然抗体と比較して、１以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）及び／またはＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ））に調節された結合（例えば、結合の増加または結合の減少）をもたらす、Ｆｃ領域の１以上の修飾（例えば、アミノ酸の挿入、欠失及び／または置換）を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、抗体のＦｃ領域のＦｃγＲＩＩＢへの結合を減少させる、Ｆｃ領域の１以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失及び／または置換）を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、Ｆｃ領域の変異が欠如している天然抗体と比較して、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）及び／またはＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）への同じ結合または増加した結合を維持しながら、ＦｃγＲＩＩＢへの抗体の結合を減少させる、抗体のＦｃ領域の１以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失及び／または置換）を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、ＦｃγＲＩＩＢへの抗体のＦｃ領域の結合を増加させる、Ｆｃ領域の１以上の修飾を含む。

【0077】

いくつかの実施形態では、調節された結合は、抗体の天然Ｆｃ領域と比較した抗体のＦｃ領域の変異によって提供される。変異は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはこれらの組み合わせにあり得る。「天然Ｆｃ領域」は「野生型Ｆｃ領域」と同義であり、自然界に見いだされるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一の、または天然抗体（例えば、セツキシマブ）に見いだされるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域、ならびにこれらの天然に存在する変異型が含まれる。天然配列Ｆｃには、Ｆｃの種々のアロタイプが含まれる（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，（２００９）ｍＡｂｓ，１（４）：３３２－３３８）。

【0078】

いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体のＦｃ領域は、天然の非修飾Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃ領域のグリコシル化パターンの変化を有するように修飾される。

【0079】

ヒト免疫グロブリンは、各重鎖のＣγ２ドメインのＡｓｎ２９７残基でグリコシル化される。このＮ－結合型オリゴ糖は、コア七糖であるＮ－アセチルグルコサミン４マンノース３（ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３）から成る。エンドグリコシダーゼまたはＰＮＧａｓｅＦによる七糖の除去は、抗体Ｆｃ領域の配座変化を引き起こすことが知られており、ＦｃγＲの活性化に対する抗体結合親和性を大幅に低下させ、エフェクター機能を低下させる可能性がある。コア七糖は、ガラクトース、バイセクトＧｌｃＮＡｃ、フコース、またはシアル酸で修飾されることが多く、活性型ＦｃγＲ及び抑制型ＦｃγＲへのＦｃ結合に異なる影響を与える。さらに、α２，６－シアリル化は生体内で抗炎症活性を増強する一方で、脱フコシル化はＦｃγＲＩＩＩａ結合を改善し、且つ抗体依存性細胞傷害及び抗体依存性食作用の１０倍の上昇をもたらすことが実証されている。したがって、特定のグリコシル化パターンを使用して、炎症性エフェクター機能を制御することができる。

【0080】

いくつかの実施形態では、グリコシル化パターンを変更するための修飾は突然変異である。例えば、Ａｓｎ２９７での置換。いくつかの実施形態では、Ａｓｎ２９７をグルタミン（Ｎ２９７Ｑ）に変異させる。ＦｃγＲ制御シグナル伝達を調節する抗体によって免疫応答を制御する方法は、例えば、ＵＳ７４１６７２６、ＵＳ２００７／００１４７９５及びＵＳ２００８／０２８６８１９に記載されており、これらは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。

【0081】

いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体は、天然に存在しないグリコシル化パターンを有する操作されたＦａｂ領域を含有するように修飾される。例えば、ハイブリドーマは、ＦｃＲγＩＩＩａ結合及びエフェクター機能の増加を可能にする特定の変異を有する脱フコシル化ｍＡｂ、脱シアリル化ｍＡｂまたは脱グリコシル化Ｆｃを分泌するように遺伝子操作することができる。いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体は、脱フコシル化されるように操作される。

【0082】

いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体の全Ｆｃ領域は、異なるＦｃ領域と交換され、その結果、抗体のＦａｂ領域は、非天然Ｆｃ領域に結合される。例えば、通常はＩｇＧ１Ｆｃ領域を含むセツキシマブのＦａｂ領域は、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＡに結合できる、または通常はＩｇＧ４Ｆｃ領域を含むニボルマブのＦａｂ領域をＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１またはＩｇＧ２に結合できる。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体はまた、記載されたＦｃドメインの安定性を調節する、ＩｇＧ４ Ｆｃ内のＳ２２８Ｐ変異のような１以上のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体はまた、ＦｃＲへのＦｃ結合を調節する、本明細書に記載されている１以上のアミノ酸修飾を含む。

【0083】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＦｃＲへの結合を調節する修飾は、天然の非修飾抗体と比較した場合、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合を変化させない。他の実施形態では、Ｆｃ領域のＦｃＲへの結合を調節する修飾はまた、天然の非修飾抗体と比較した場合、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合を増加させる。

【0084】

いくつかの実施形態では、免疫複合体における抗体は修飾Ｆｃ領域を含有し、その際、修飾は１以上のＦｃ受容体へのＦｃ領域の結合を調節する。

【0085】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＴＧＦβ１に結合することができる、トランスフォーミング成長因子β１（ＴＧＦβ１）受容体またはその断片を含めることによって修飾される。例えば、受容体は、ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）であり得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ受容体は、ヒトＴＧＦβ受容体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧは、本明細書に組み込まれるＵＳ９６７６８６３に記載されているように、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）へのＣ末端融合を有する。「Ｆｃリンカー」を使用してＩｇＧをＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメインに結合してもよい。Ｆｃリンカーは、標的への結合特異性を維持しながら、分子の適切な三次元折り畳みを可能にする、短くて可撓性のペプチドであってもよい。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ受容体のＮ末端は、抗体コンストラクトのＦｃに融合されている（Ｆｃリンカーの有無にかかわらず）。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクト重鎖のＣ末端は、ＴＧＦβ受容体に融合されている（Ｆｃリンカーの有無にかかわらず）。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクト重鎖のＣ末端リシン残基をアラニンに変異させる。

【0086】

いくつかの実施形態では、免疫複合体における抗体はグリコシル化されている。

【0087】

いくつかの実施形態では、免疫複合体における抗体は、操作されたシステインが結合には利用可能であるが、免疫グロブリンの折り畳み及び集合を障害せず、または抗原結合及びエフェクター機能を変化させない部位にてシステインの置換を介してアジュバント、標識または薬物の部分の抗体への部位特異的結合を提供するシステインが操作された抗体である（Ｊｕｎｕｔｕｌａ， ｅｔ ａｌ．，（２００８），Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５－９３２；Ｄｏｒｎａｎ ｅｔ ａｌ．（２００９），Ｂｌｏｏｄ，１１４（１３）：２７２１－２７２９；ＵＳ７５２１５４１；ＵＳ７７２３４８５；ＵＳ２０１２／０１２１６１５；ＷＯ２００９／０５２２４９）。「システインが操作された抗体」または「システインが操作された抗体変異体」とは、抗体の１以上の残基がシステイン残基で置換されている抗体である。システインが操作された抗体は、均一な化学量論（例えば、単一の操作されたシステイン部位を有する抗体にて抗体あたり２つまでのチエノアゼピン部分）を伴うチエノアゼピンリンカー化合物としてチエノアゼピンアジュバント部分に結合することができる。

【0088】

いくつかの実施形態では、システインが操作された抗体は免疫複合体を調製するのに使用される。免疫複合体は、Ｋａｂａｔ番号付けによって番号付けされているように、軽鎖上の部位、例えば１４９－リシン部位（ＬＣ Ｋ１４９Ｃ）、または重鎖上の部位、例えば１２２－セリン部位（ＨＣ Ｓ１２２Ｃ）に導入された反応性システインチオール残基を有し得る。他の実施形態では、システイン操作抗体は、重鎖（ＨＣ Ａ１１８Ｃ）の１１８－アラニン部位（ＥＵ番号付け）に導入されたシステイン残基を有する。この部位には、配列番号付けで１２１、Ｋａｂａｔ番号付けで１１４の番号がつけられている。他の実施形態では、システインが操作された抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔ番号付けによるＧ６４Ｃ、Ｒ１４２Ｃ、Ｋ１８８Ｃ、Ｌ２０１Ｃ、Ｔ１２９Ｃ、Ｓ１１４ＣもしくはＥ１０５Ｃでの軽鎖、（ｉｉ）Ｋａｂａｔ番号付けによるＤ１０１Ｃ、Ｖ１８４Ｃ、Ｔ２０５ＣもしくはＳ１２２Ｃでの重鎖、または（ｉｉｉ）他のシステイン変異抗体に導入されたシステイン残基、及びＢｈａｋｔａ，Ｓ．ｅｔ ａｌ，（２０１３），“Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ＴＨＩＯＭＡＢｓ ｆｏｒ Ｓｉｔｅ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｉｏｌ－Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｌｉｎｋｅｒｓ”，Ｌａｕｒｅｎｔ Ｄｕｃｒｙ（ｅｄ．），Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１０４５，ｐａｇｅｓ １８９－２０３；ＷＯ２０１１／１５６３２８；ＵＳ９０００１３０に記載されたようなシステイン残基を有する。

【0089】

免疫チェックポイント阻害剤
いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体は免疫チェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。別の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１以上の免疫チェックポイントタンパク質とそのリガンドとの間の相互作用を低下させる。免疫チェックポイント分子の発現及び／または活性を低下させる阻害性核酸も、本明細書に開示されている方法で使用することができる。

【0090】

免疫チェックポイント阻害剤であるニボルマブ及びアテゾリズマブは、ＩｇＧ１ Ｆｃを含むように改変され、続いて本発明の免疫複合体に変換され得る。

【0091】

ほとんどのチェックポイント抗体は、細胞を死滅させるエフェクター機能を有するのではなく、シグナル伝達を遮断するように設計されている。本発明の免疫複合体は、骨髄性免疫を活性化するのに必要な「エフェクター機能性」を取り戻すことができる。

【0092】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ４、ＣＤ１５２としても知られている）、Ｉｇドメイン及びＩＴＩＭドメインを持つＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、グルココルチコイド誘発性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ、ＴＮＦＲＳＦ１８としても知られている）、誘導性Ｔ細胞共刺激性（ＩＣＯＳ、ＣＤ２７８としても知られている）、ＣＤ９６、ポリオウイルス受容体関連２（ＰＶＲＬ２、ＣＤ１１２Ｒとしても知られている）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１、ＣＤ２７９としても知られている）、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１、Ｂ７－Ｈ３及びＣＤ２７４としても知られている）、プログラム細胞死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－ＤＣ及びＣＤ２７３としても知られている）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３、ＣＤ２２３としても知られている）、Ｂ７－Ｈ４、キラー免疫グロブリン受容体（ＫＩＲ）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＲＳＴ４、ＯＸ４０及びＣＤ１３４としても知られている）及びそのリガンドＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ１（ＩＤＯ－１）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ２（ＩＤＯ－２）、がん胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）、Ｂ及びＴリンパ球減衰因子（ＢＴＬＡ、ＣＤ２７２としても知られている）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）、アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２Ａｒ）、及びＴ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡタンパク質）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、またはＰＤ－Ｌ１の阻害剤である。

【0093】

いくつかの実施形態では、抗体は、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）としても知られている）、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）としても知られている）、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても知られている）、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）としても知られている）、アベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）としても知られている）、及びデュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標）としても知られている）から選択される。

【0094】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＣＴＬＡ４の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＣＴＬＡ４に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＣＴＬＡ４に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４に対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４のような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。

【0095】

一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１に対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１のような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。

【0096】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ１に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ１に対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１のような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を低下させる。

【0097】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ２の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ２に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ２に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ２に対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ２のような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１とＰＤ－Ｌ２との間の相互作用を低下させる。

【0098】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＬＡＧ－３の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＬＡＧ－３に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＬＡＧ－３に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＬＡＧ－３に対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ－３のような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。

【0099】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＢ７－Ｈ４の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＢ７－Ｈ４に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＢ７－Ｈ４に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＢ７－Ｈ４に対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７－Ｈ４のような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。

【0100】

一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＫＩＲの阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＫＩＲに対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＫＩＲに対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＫＩＲに対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＫＩＲのような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。

【0101】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＴＮＦＲＳＦ４の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＴＮＦＲＳＦ４に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＴＮＦＲＳＦ４に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＴＮＦＲＳＦ４に対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４のような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。

【0102】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＯＸ４０Ｌの阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＯＸ４０Ｌに対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＯＸ４０Ｌに対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＯＸ４０Ｌに対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＯＸ４０Ｌのような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４とＯＸ４０Ｌとの間の相互作用を低下させる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＩＤＯ－１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＩＤＯ－１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＩＤＯ－１に対するモノクローナル抗体であり、いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＩＤＯ－１に対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＩＤＯ－１のような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。

【0103】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＩＤＯ－２の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＩＤＯ－２に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＩＤＯ－２に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＩＤＯ－２に対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＩＤＯ－２のような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。

【0104】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＣＥＡＣＡＭ１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＣＥＡＣＡＭ１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＣＥＡＣＡＭ１に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＣＥＡＣＡＭ１に対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＣＥＡＣＡＭ１のような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。

【0105】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＢＴＬＡの阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＢＴＬＡに対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＢＴＬＡに対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＢＭＡに対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡのような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。

【0106】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＴＩＭ３の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＴＩＭ３に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＴＩＭ３に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＴＩＭ３に対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ３のような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。

【0107】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＡ２Ａｒの阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＡ２Ａｒに対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＡ２Ａｒに対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＡ２Ａｒに対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ａ２Ａｒのような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。

【0108】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＶＩＳＴＡタンパク質の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＶＩＳＴＡタンパク質に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＶＩＳＴＡタンパク質に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＶＩＳＴＡタンパク質に対するヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡタンパク質のような１以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現または活性を低下させる。

【0109】

抗体標的
いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体は、５Ｔ４、ＡＢＬ、ＡＢＣＦ１、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬ１、ＡＤＯＲＡ２Ａ、アグレカン、ＡＧＲ２、ＡＩＣＤＡ、ＡＩＦ１、ＡＩＧＩ、ＡＫＡＰ１、ＡＫＡＰ２、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＰＥＰ、ＡＰＣ、ＡＰＯＣ１、ＡＲ、アロマターゼ、ＡＴＸ、ＡＸ１、ＡＺＧＰ１（亜鉛－ａ－糖タンパク質）、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７－Ｈ１、ＢＡＤ、ＢＡＦＦ、ＢＡＧ１、ＢＡＩ１、ＢＣＲ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＢＤＮＦ、ＢＬＮＫ、ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）、ＢＩｙＳ、ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦＩＯ）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ８、ＢＭＰＲＴＡ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、ＢＰＡＧ１（プレクチン）、ＢＲＣＡ１、Ｃ１９ｏｒｆｌＯ（ＩＬ２７ｗ）、Ｃ３、Ｃ４Ａ、Ｃ５、Ｃ５Ｒ１、ＣＡＮＴ１、ＣＡＰＲＩＮ－１、ＣＡＳＰ１、ＣＡＳＰ４、ＣＡＶ１、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＬＩ（１－３０９）、ＣＣＬＩ１（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ－Ｉｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３ｂ）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＭＣＡＦ、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＥＰ－２）、ＳＬＣ、エクソダス－２、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－Ｉ）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３（ＭＩＰ－Ｉａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰＩｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２）、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ－ＩＲＢ／ＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）、ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲＩ／ＣＫＲ－Ｌ１）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）、ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）、ＣＤ１６４、ＣＤ１９、ＣＤＩＣ、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２００、ＣＤ－２２、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３３、ＣＤ３５、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ２７４、ＣＤＨ１（エカドヘリン）、ＣＤＨ１Ｏ、ＣＤＨ１２、ＣＤＨ１３、ＣＤＨ１８、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２Ｏ、ＣＤＨ５、ＣＤＨ７、ＣＤＨ８、ＣＤＨ９、ＣＤＫ２、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＣＥＢＰＢ、ＣＥＲＩ、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、チチナーゼ、ＣＨＳＴ１Ｏ、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦ５、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦ８、ＣＬＤＮ３、ＣＬＤＮ７（クラウジン－７）、ＣＬＤＮ１８．２（クラウジン１８．２），ＣＬＮ３、ＣＬＵ（クラステリン）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＮＲ１、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬＩＡ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＲ２、Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＲＰ、ＣＳＦ１（Ｍ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＣＴＬ８、ＣＴＮＮＢ１（ｂ－カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）、ＣＸＣＬ１（ＧＲＯ１）、ＣＸＣＬ１Ｏ（ＩＰ－ＩＯ）、ＣＸＣＬＩ１（１－ＴＡＣ／ＩＰ－９）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ２（ＧＲＯ２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲＯ３）、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ－７８／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＣＹＢ５、ＣＹＣ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８、ＤＮＣＬ１、ＤＰＰ４、Ｅ２Ｆ１、エンゲル、エッジ、フェンネル、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＬＡＣ２、ＥＮＧ、エノラ、ＥＮＯ２、ＥＮＯ３、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＡ９、ＥＰＲＡ１０、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ５、ＥＰＨＢ６、ＥＰＨＲＩＮ－Ａ１、ＥＰＨＲＩＮ－Ａ２、ＥＰＨＲＩＮＡ３、ＥＰＨＲＩＮ－Ａ４、ＥＰＨＲＩＮ－Ａ５、ＥＰＨＲＩＮ－Ａ６、ＥＰＨＲＩＮ－Ｂ１、ＥＰＨＲＩＮ－Ｂ２、ＥＰＨＲＩＮ－Ｂ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＧ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ－２）、ＥＲＥＧ、ＥＲＫ８、エストロゲン受容体、Ｅａｒｌ、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＡＤＤ、ファメシルトランスフェラーゼ、ＦａｓＬ、ＦＡＳＮｆ、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＧＦ、ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦＲ３、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＦＩＬＩ（ＥＰＳＩＬＯＮ）、ＦＢＬ１（ＺＥＴＡ）、ＦＬＪ１２５８４、ＦＬＪ２５５３０、ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）、ＦＬＴ１、ＦＬＴ－３、ＦＯＳ、ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ－１）、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ－６ＳＴ、ＧＡＴＡ３、ＧＤ２、ＧＤＦ５、ＧＦＩ１、ＧＧＴ１、ＧＭ－ＣＳＦ、ＧＮＡＳ１、ＧＮＲＨ１、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ４４、ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）、ＧＲＣＣ１Ｏ（Ｃ１Ｏ）、ＧＲＰ、ＧＳＮ（ゲルソリン）、ＧＳＴＰ１、ＨＡＶＣＲ２、ＨＤＡＣ、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ヘッジホッグ、ＨＧＦ、ＨＩＦ１Ａ、ＨＩＰ１、ヒスタミン及びヒスタミン受容体、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＭ７４、ＨＭＯＸＩ、ＨＳＰ９０、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤ２、ＩＦＮ－ａ、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＥＦＮＡ６、ＢＦＮＡ７、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮγ、ＩＦＮＷ１、ＩＧＢＰ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦＩＲ、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＤＬ－１、ＩＬＩＯ、ＩＬＩＯＲＡ、ＩＬＩＯＲＢ、ＩＬ－１、ＩＬ１Ｒ１（ＣＤ１２１ａ）、ＩＬ１Ｒ２（ＣＤ１２１ｂ）、ＩＬ－ＩＲＡ、ＩＬ－２、ＩＬ２ＲＡ（ＣＤ２５）、ＩＬ２ＲＢ（ＣＤ１２２）、ＩＬ２ＲＧ（ＣＤ１３２）、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ（ＣＤ１２３）、ＩＬ－５、ＩＬ５ＲＡ（ＣＤ１２５）、ＩＬ３ＲＢ（ＣＤ１３１）、ＩＬ－６、ＩＬ６ＲＡ、（ＣＤ１２６）、ＩＲ６ＲＢ（ＣＤ１３０）、ＩＬ－７、ＩＬ７ＲＡ（ＣＤ１２７）、ＩＬ－８、ＣＸＣＲ１（ＩＬ８ＲＡ）、ＣＸＣＲ２、（ＩＬ８ＲＢ／ＣＤ１２８）、ＩＬ－９、ＩＬ９Ｒ（ＣＤ１２９）、ＩＬ－１０、ＩＬ１０ＲＡ（ＣＤ２１０）、ＩＬ１０ＲＢ（ＣＤＷ２１０Ｂ）、ＩＬ－１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ａ、ＩＬ－１２Ｂ、ＩＬ－１２ＲＢ１、ＩＬ－１２ＲＢ２、ＩＬ－１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８、ＩＬ１８ＢＰ、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ１９、ＩＬＩＡ、ＩＬＩＢ、ＩＬＩＦ１０、ＩＬＩＦ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬＩＦ７、ＩＬ１Ｆ８、ＤＬ１Ｆ９、ＩＬＩＨＹＩ、ＩＬＩＲ１、ＩＬＩＲ２、ＩＬＩＲＡＰ、ＩＬＩＲＡＰＬＩ、ＩＬＩＲＡＰＬ２、ＩＬＩＲＬ１、ＩＬ１ＲＬ２、ＩＬＩＲＮ、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ２２ＲＡ２、ＩＬ２３、ＤＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８Ａ、ＩＬ２８Ｂ、ＩＬ２９、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３０、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、ＩＬ４、ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）、ＩＬＫ、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ６（α６インテグリン）、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４（β４インテグリン）、ＪＡＧ１、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＪＴＢ、ＪＵＮ、Ｋ６ＨＦ、ＫＡＩ１、ＫＤＲ、ＫＩＴＬＧ、ＫＬＦ５（ＧＣ Ｂｏｘ ＢＰ）、ＫＬＦ６、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１５、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＫＲＴ１、ＫＲＴ１９（ケラチン１９）、ＫＲＴ２Ａ、ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的ＩＩ型ケラチン）、ＬＡＭＡ５、ＬＥＰ（レプチン）、Ｌｉｎｇｏ－ｐ７５、Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ、ＬＰＳ、ＬＲＲＣ１５、ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ））、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＧまたはＯＭｇｐ、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）、ＭＣＰ－１、ＭＤＫ、ＭＩＢ１、ミッドカイン、ＭＩＦ、ＭＩＳＲＩＩ、ＭＪＰ－２、ＭＫ、ＭＫＩ６７（Ｋｉ－６７）、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳ４Ａ１、ＭＳＭＢ、ＭＴ３（メタロチオネクチン－ＵＩ）、ｍＴＯＲ、ＭＴＳＳ１、ＭＵＣ１（ムチン）、ＭＹＣ、ＭＹＤ８８、ＮＣＫ２、ニューロカン、ネクチン－４、ＮＦＫＢＩ、ＮＦＫＢ２、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ、ＮｇＲＮｏｇｏ６６、（Ｎｏｇｏ）、ＮｇＲ－ｐ７５、ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ、ＮＭＥＩ（ＮＭ２３Ａ）、ＮＯＴＣＨ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＸ５、ＮＰＰＢ、ＮＲＯＢ１、ＮＲＯＢ２、ＮＲＩＤ１、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲ１Ｈ２、ＮＲ１Ｈ３、ＮＲ１Ｈ４、ＮＲ１１２、ＮＲ１１３、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ４Ａ３、ＮＲ５Ａ１、ＮＲ５Ａ２、ＮＲ６Ａ１、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＮＴ５Ｅ、ＮＴＮ４、ＯＤＺＩ、ＯＰＲＤＩ、Ｐ２ＲＸ７、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ１、ＰＡＴＥ、ＰＡＷＲ、ＰＣＡ３、ＰＣＤＧＦ、ＰＣＮＡ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＥＣＡＭＩ、ペグ－アスパラギナーゼ、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＧＦ、ＰＧＲ、ホスファカン、ＰＩＡＳ２、ＰＩ３キナーゼ、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＬＧ、ＰＬＸＤＣＩ、ＰＫＣ、ＰＫＣ－ｂｅｔａ、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＰＰＩＤ、ＰＲ１、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＰＲＯＣ、ＰＲＯＫ２、ＰＳＡＰ、ＰＳＣＡ、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＥＮ、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）、ＰＩＮ、ＲＡＣ２（Ｐ２１Ｒａｃ２）、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫリガンド、ＲＡＲＢ、ＲＧＳ１、ＲＧＳ１３、ＲＧＳ３、ＲＮＦＩ１Ｏ（ＺＮＦ１４４）、Ｒｏｎ、ＲＯＢＯ２、ＲＸＲ、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）、
ＳＤＦ２、ＳＥＲＰＥＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）、ＳＥＲＰＩＮＥＩ（ＰＡＩ－Ｉ）、ＳＥＲＰＩＮＦＩ、ＳＨＩＰ－１、ＳＨＩＰ－２、ＳＨＢ１、ＳＨＢ２、ＳＨＢＧ、ＳｆｃＡＺ、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＩＴ２、ＳＰＰ１、ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＴＥ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＢ４Ｒ２、ＴＢＸ２１、ＴＣＰ１Ｏ、ＴＤＧＦ１、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＥＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨＩＬ、ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン－１）、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４、ＴＨＰＯ、ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）、ＴＩＭＰ３、組織因子、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＮＦ、ＴＮＦ－ａ、ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＳＦ１Ｏ（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰＯ３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）、ＴＯＬＬＩＰ、トール－様受容体、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼ１ｉａ）、ＴＰ５３、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＦ５、ＴＲＡＦ６、ＴＲＫＡ、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＴＲＯＰ２、ＴＲＰＣ６、ＴＳＬＰ、ＴＷＥＡＫ、チロシナーゼ、ｕＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ベルシカン、ＶＨＬＣ５、ＶＬＡ－４、Ｗｎｔ－１、ＸＣＬ１（チムホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ－Ｉｂ）、ＸＣＲＩ（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）、ＹＹＩ、ＺＦＰＭ２、ＣＬＥＣ４Ｃ（ＢＤＣＡ－２、ＤＬＥＣ、ＣＤ３０３、ＣＬＥＣＳＦ７）、ＣＬＥＣ４Ｄ（ＭＣＬ、ＣＬＥＣＳＦ８）、ＣＬＥＣ４Ｅ（ミンクル）、ＣＬＥＣ６Ａ（デクチン－２）、ＣＬＥＣ５Ａ（ＭＤＬ－１、ＣＬＥＣＳＦ５）、ＣＬＥＣ１Ｂ（ＣＬＥＣ－２）、ＣＬＥＣ９Ａ（ＤＮＧＲ－１）、ＣＬＥＣ７Ａ（デクチン－１）、ＰＤＧＦＲａ、ＳＬＡＭＦ７、ＧＰ６（ＧＰＶＩ）、ＬＩＬＲＡ１（ＣＤ８５Ｉ）、ＬＩＬＲＡ２（ＣＤ８５Ｈ、ＩＬＴ１）、ＬＩＬＲＡ４（ＣＤ８５Ｇ、ＩＬＴ７）、ＬＩＬＲＡ５（ＣＤ８５Ｆ、ＩＬＴ１１）、ＬＩＬＲＡ６（ＣＤ８５ｂ、ＩＬＴ８）、ＮＣＲ１（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３７、ＮＫｐ３０）、ＯＳＣＡＲ、ＴＡＲＭ１、ＣＤ３００Ｃ、ＣＤ３００Ｅ、ＣＤ３００ＬＢ（ＣＤ３００Ｂ）、ＣＤ３００ＬＤ（ＣＤ３００Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＬ４（ＣＤ１５８Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＳ、ＫＬＲＣ２（ＣＤ１５９Ｃ、ＮＫＧ２Ｃ）、ＫＬＲＫ１（ＣＤ３１４、ＮＫＧ２Ｄ）、ＮＣＲ２（ＣＤ３３６、ＮＫｐ４４）、ＰＩＬＲＢ、ＳＩＧＬＥＣ１（ＣＤ１６９、ＳＮ）、ＳＩＧＬＥＣ１４、ＳＩＧＬＥＣ１５（ＣＤ３３Ｌ３）、ＳＩＧＬＥＣ１６、ＳＩＲＰＢ１（ＣＤ１７２Ｂ）、ＴＲＥＭ１（ＣＤ３５４）、ＴＲＥＭ２、及びＫＬＲＦ１（ＮＫｐ８０）から選択される１以上の標的に結合することができる（例えば、それらから選択される標的に特異的に結合する）。

【0110】

いくつかの実施形態では、抗体はＦｃＲ．ガンマ結合受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲ．ガンマ共役受容体は、ＧＰ６（ＧＰＶＩ）、ＬＩＬＲＡ１（ＣＤ８５Ｉ）、ＬＩＬＲＡ２（ＣＤ８５Ｈ、ＩＬＴ１）、ＬＩＬＲＡ４（ＣＤ８５Ｇ、ＩＬＴ７）、ＬＩＬＲＡ５（ＣＤ８５Ｆ、ＩＬＴ１１）、ＬＩＬＲＡ６（ＣＤ８５ｂ、ＩＬＴ８）、ＮＣＲ１（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３７、ＮＫｐ３０）、ＯＳＣＡＲ及びＴＡＲＭ１から成る群から選択される。

【0111】

いくつかの実施形態では、抗体はＤＡＰ１２共役受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ＤＡＰ１２共役受容体は、ＣＤ３００Ｃ、ＣＤ３００Ｅ、ＣＤ３００ＬＢ（ＣＤ３００Ｂ）、ＣＤ３００ＬＤ（ＣＤ３００Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＬ４（ＣＤ１５８Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＳ、ＫＬＲＣ２（ＣＤ１５９Ｃ、ＮＫＧ２Ｃ）、ＫＬＲＫ１（ＣＤ３１４、ＮＫＧ２Ｄ）、ＮＣＲ２（ＣＤ３３６、ＮＫｐ４４）、ＰＩＬＲＢ、ＳＩＧＬＥＣ１（ＣＤ１６９、ＳＮ）、ＳＩＧＬＥＣ１４、ＳＩＧＬＥＣ１５（ＣＤ３３Ｌ３）、ＳＩＧＬＥＣ１６、ＳＩＲＰＢ１（ＣＤ１７２Ｂ）、ＴＲＥＭ１（ＣＤ３５４）、及びＴＲＥＭ２から成る群から選択される。

【0112】

いくつかの実施形態では、抗体は、ヘムＩＴＡＭ含有受容体に結合する。いくつかの実施形態では、当該ヘムＩＴＡＭ含有受容体はＫＬＲＦ１（ＮＫｐ８０）である

【0113】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＬＥＣ４Ｃ（ＢＤＣＡ－２、ＤＬＥＣ、ＣＤ３０３、ＣＬＥＣＳＦ７）、ＣＬＥＣ４Ｄ（ＭＣＬ、ＣＬＥＣＳＦ８）、ＣＬＥＣ４Ｅ（ミンクル）、ＣＬＥＣ６Ａ（デクチン－２）、ＣＬＥＣ５Ａ（ＭＤＬ－１、ＣＬＥＣＳＦ５）、ＣＬＥＣ１Ｂ（ＣＬＥＣ－２）、ＣＬＥＣ９Ａ（ＤＮＧＲ－１）及びＣＬＥＣ７Ａ（デクチン－１）から選択される１以上の標的に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗体はＣＬＥＣ６Ａ（デクチン－２）またはＣＬＥＣ５Ａに結合することができる。いくつかの実施形態では、抗体はＣＬＥＣ６Ａ（デクチン－２）に結合することができる。

【0114】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＴＰ５Ｉ（Ｑ０６１８５）、ＯＡＴ（Ｐ２９７５８）、ＡＩＦＭ１（Ｑ９Ｚ０Ｘ１）、ＡＯＦＡ（Ｑ６４１３３）、ＭＴＤＣ（Ｐ１８１５５）、ＣＭＣ１（Ｑ８ＢＨ５９）、ＰＲＥＰ（Ｑ８Ｋ４１１）、ＹＭＥＬ１（Ｏ８８９６７）、ＬＰＰＲＣ（Ｑ６ＰＢ６６）、ＬＯＮＭ（Ｑ８ＣＧＫ３）、ＡＣＯＮ（Ｑ９９ＫＩ０）、ＯＤＯ１（Ｑ６０５９７）、ＩＤＨＰ（Ｐ５４０７１）、ＡＬＤＨ２（Ｐ４７７３８）、ＡＴＰＢ（Ｐ５６４８０）、ＡＡＴＭ（Ｐ０５２０２）、ＴＭＭ９３（Ｑ９ＣＱＷ０）、ＥＲＧＩ３（Ｑ９ＣＱＥ７）、ＲＴＮ４（Ｑ９９Ｐ７２）、ＣＬ０４１（Ｑ８ＢＱＲ４）、ＥＲＬＮ２（Ｑ８ＢＦＺ９）、ＴＥＲＡ（Ｑ０１８５３）、ＤＡＤ１（Ｐ６１８０４）、ＣＡＬＸ（Ｐ３５５６４）、ＣＡＬＵ（Ｏ３５８８７）、ＶＡＰＡ（Ｑ９ＷＶ５５）、ＭＯＧＳ（Ｑ８０ＵＭ７）、ＧＡＮＡＢ（Ｑ８ＢＨＮ３）、ＥＲＯ１Ａ（Ｑ８Ｒ１８０）、ＵＧＧＧ１（Ｑ６Ｐ５Ｅ４）、Ｐ４ＨＡ１（Ｑ６０７１５）、ＨＹＥＰ（Ｑ９Ｄ３７９）、ＣＡＬＲ（Ｐ１４２１１）、ＡＴ２Ａ２（Ｏ５５１４３）、ＰＤＩＡ４（Ｐ０８００３）、ＰＤＩＡ１（Ｐ０９１０３）、ＰＤＩＡ３（Ｐ２７７７３）、ＰＤＩＡ６（Ｑ９２２Ｒ８）、ＣＬＨ（Ｑ６８ＦＤ５）、ＰＰＩＢ（Ｐ２４３６９）、ＴＣＰＧ（Ｐ８０３１８）、ＭＯＴ４（Ｐ５７７８７）、ＮＩＣＡ（Ｐ５７７１６）、ＢＡＳＩ（Ｐ１８５７２）、ＶＡＰＡ（Ｑ９ＷＶ５５）、ＥＮＶ２（Ｐ１１３７０）、ＶＡＴ１（Ｑ６２４６５）、４Ｆ２（Ｐ１０８５２）、ＥＮＯＡ（Ｐ１７１８２）、ＩＬＫ（Ｏ５５２２２）、ＧＰＮＭＢ（Ｑ９９Ｐ９１）、ＥＮＶ１（Ｐ１０４０４）、ＥＲＯ１Ａ（Ｑ８Ｒ１８０）、ＣＬＨ、（Ｑ６８ＦＤ５）、ＤＳＧ１Ａ（Ｑ６１４９５）、ＡＴ１Ａ１（Ｑ８ＶＤＮ２）、ＨＹＯＵ１（Ｑ９ＪＫＲ６）、ＴＲＡＰ１（Ｑ９ＣＱＮ１）、ＧＲＰ７５（Ｐ３８６４７）、ＥＮＰＬ（Ｐ０８１１３）、ＣＨ６０（Ｐ６３０３８）、及びＣＨ１０（Ｑ６４４３３）から選択される１以上の標的に結合することができる（例えば、それらから選択される標的に特異的に結合する）。先行するリストでは、受入番号を括弧内で示す。

【0115】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＤＨ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＳＬＡＭＦ７及びｇｐ７５から選択される抗原に結合する。いくつかの実施形態では、抗原はＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、及びＨｅｒ２から選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｔｎ抗原及びトムゼン－フリーデンライヒ抗原から選択される抗原に結合する。

【0116】

いくつかの実施形態では、抗体またはＦｃ融合タンパク質は、アバゴボマブ、アバタセプト（ＯＲＥＮＣＩＡ（登録商標）としても知られている）、アブシキシマブ（ＲＥＯＰＲＯ（登録商標）としても知られている）、ｃ７Ｅ３Ｆａｂ）、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）としても知られている）、アデカツムマブ、アレンツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）としても知られている）、ＭａｂＣａｍｐａｔｈまたはＣａｍｐａｔｈ－１Ｈ）、アルツモマブ、アフェリモマブ、アナツモマブ、マフェナトックス、アネツムマブ、アンルキズマブ、アポリズマブ、アクチルモマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、アトロリムマブ、バピネズマブ、バシリキシマブ（ＳＩＭＵＬＥＣＴ（登録商標）としても知られている）、バビツキシマブ、ベクツモマブ（ＬＹＭＰＨＳＣＡＮ（登録商標）としても知られている）、ベリムマブ（ＬＹＭＰＨＯ－ＳＴＡＴ－Ｂ（登録商標）としても知られている）、ベルチリムマブ、ベシリソマブ、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）しても知られている）、ビシロマブ、ブラロバルビタール、ビバツズマブメルタンシン、カムパス、カナキヌマブ（ＡＣＺ８８５としても知られている）、カンツズマブメルタンシン、カプロマブ（ＰＲＯＳＴＡＳＣＩＮＴ（登録商標）としても知られている）、カツマキソマブ（ＲＥＭＯＶＡＢ（登録商標）としても知られている）、セデリズマブ（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標）としても知られている）、セルトリズマブペゴール、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）としても知られている）、クレノリキシマブ、デカツズマブ、ダクリキシマブ、ダクリズマブ（ＺＥＮＡＰＡＸ（登録商標）としても知られている）、デノスマブ（ＡＭＧ１６２としても知られている）、デツモマブ、ドリモマブアリトックス、ドリキシズマブ、ダンツマブ、デュリムルマブ、デュルムマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ（ＳＯＬＩＲＩＳ（登録商標）としても知られている）、エドバコマブ、エドレコロマブ（Ｍａｂ１７－１Ａ、ＰＡＮＯＲＥＸ（登録商標）としても知られている）、エファリズマブ（ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標）としても知られている）、エフンギュマブ（ＭＹＣＯＧＲＡＢ（登録商標）としても知られている）、エルシリモマブ、エンリモマブペゴール、エピツモマブシツキセタン、エファリズマブ、エピツモマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ（ＲＥＸＯＭＵＮ（登録商標）としても知られている）、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）としても知られている）、エタラシズマブ（エタラツズマブ、ＶＩＴＡＸＩＮ（登録商標）、ＡＢＥＧＲＩＮ（登録商標）としても知られている）、エクスビビルマブ、ファノレソマブ（ＮＥＵＴＲＯＳＰＥＣ（登録商標）としても知られている）、ファラリモマブ、フェリズマブ、フォントリズマブ（ＨＵＺＡＦ（登録商標）としても知られている）、ガリキシマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ（ＡＢＸＣＢＬ（登録商標）としても知られている）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）としても知られている）、ゴリムマブ（ＣＮＴＯ１４８としても知られている）、ゴミリキシマブ、イバリズマブ（ＴＮＸ－３５５としても知られている）、イブリツモマブチウキセタン（ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）としても知られている）、イゴボマブ、イムシロマブ、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）としても知られている）、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１としても知られている）、イラツムマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、レマレソマブ、レブリリズマブ、レルデリムマブ、レクサツムマブ（ＨＧＳ－ＥＴＲ２、ＥＴＲ２－ＳＴ０１としても知られている）、レキシツムマブ、リビビルマブ、リンツズマブ、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ（ＨＧＳＥＴＲ１、ＴＲＭ－１としても知られている）、マスリモマブ、マツズマブ（ＥＭＤ７２０００としても知られている）、メポリズマブ（ＢＯＳＡＴＲＩＡ（登録商標）としても知られている）、メテリムマブ、ミラツムマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モロリムマブ、モタビズマブ（ＮＵＭＡＸ（登録商標）としても知られている）、ムロモナブ（ＯＫＴ３としても知られている）、ナコロマブタフェナトックス、ナプツモマブエスタフェナトックス、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）、ＡＮＴＥＧＲＥＮ（登録商標）としても知られている）、ネバクマブ、ネレリモマブ、ニモツマブ（ＴＨＥＲＡＣＩＭ ｈＲ３（登録商標）、ＴＨＥＲＡ－ＣＩＭ－ｈＲ３（登録商標）、ＴＨＥＲＡＬＯＣ（登録商標）としても知られている）、ノフェツモマブメルペンタン（ＶＥＲＬＵＭＡ（登録商標）としても知られている）、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オファツムマブ、オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）としても知られている）、オレゴボマブ（ＯＶＡＲＥＸ（登録商標）としても知られている）、オテリキシズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）としても知られている）、パニツムマブ（ＡＢＸ－ＥＧＦ、ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）としても知られている）、パスコリズマブ、ペムツモマブ（ＴＨＥＲＡＧＹＮ（登録商標）としても知られている）、ペルツズマブ（２Ｃ４、ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）としても知られている）、ペクセリズマブ、ピンツモマブ、プリリキシマブ、プリツムマブ、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）としても知られている）、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、ＭａｂＴＨＥＲＡ（登録商標）としても知られている）、ロベリズマブ、ルピズマブ、サツモマブ、セビルマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ（ＭＥＤＩ－５０７としても知られている）、ソンツズマブ、スタムルマブ（ＭＹＯ－０２９としても知られている）、スレソマブ（ＬＥＵＫＯＳＣＡＮ（登録商標）としても知られている）、タカツズマブ、テトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タプリツモマブ、パプトックス、テフィバズマブ（ＡＵＲＥＸＩＳ（登録商標）としても知られている）、テリモマブアリトックス、テネリキシマブ、テプリズマブ、チシリムマブ、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標）としても知られている）、トラリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）としても知られている）、トレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６としても知られている）、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ（ＣＮＴＯ１２７５としても知られている）、バパリキシマブ、ベルツズマブ、バパリモマブ、ビシリズマブ（ＮＵＶＩＯＮ（登録商標）としても知られている）、ボロシキシマブ（Ｍ２００も知られている）、ボツムマブ（ＨＵＭＡＳＰＥＣＴ（登録商標）としても知られている）、ザルツムマブ、ザノリムマブ（ＨｕＭＡＸ－ＣＤ４としても知られている）、ジルアリムマブ、ゾリモマブアリトックス、ダラツムマブ、エロツクスマブ、オビンツンズマブ、オララツマブ、ブレンツキシマブベドチン、アフィベルセプト、アバタセプト、ベラタセプト、アフィベルセプト、エタネルセプト、ロミプロスチム、ＳＢＴ－０４０（ＵＳ２０１７／０１５８７７２にて列挙された配列）から選択される。いくつかの実施形態では、抗体はリツキシマブである。

【0117】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＰＤ－Ｌ１を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。

【0118】

プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１、分化抗原群２７４、ＣＤ２７４、Ｂ７－ホモログ１、またはＢ７－Ｈ１）は、Ｂ７タンパク質スーパーファミリーに属し、且つプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１、ＰＤＣＤ１、分化抗原群２７９、またはＣＤ２７９）のリガンドである。ＰＤ－Ｌ１はまた、Ｂ７．１（ＣＤ８０）と相互作用することができ、そのような相互作用は、Ｔ細胞のプライミングを阻害すると考えられている。ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１軸は、適応免疫応答の抑制に大きな役割を果たす。より具体的には、ＰＤ－Ｌ１とその受容体であるＰＤ－１との結合は、Ｔ細胞の活性化及び増殖を阻害するシグナルをもたらすと考えられている。ＰＤ－Ｌ１に結合し、リガンドがＰＤ－１受容体に結合するのを防ぐ薬剤は、この免疫抑制を妨げ、したがって、必要に応じて、例えばがんまたは感染症の治療のために、免疫応答を増強することができる。ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１経路はまた、自己免疫の予防に寄与し、したがって、ＰＤ－Ｌ１に対するアゴニスト剤、または免疫阻害ペイロードを送達する薬剤は、自己免疫障害の治療に役立ち得る。

【0119】

ＰＤ－Ｌ１を標的とする複数の抗体、例えば、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標））、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（商標））及びアベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（商標））を、がんの治療のために開発した。それにもかかわらず、ＰＤ－Ｌ１に高い親和性で結合し、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１シグナル伝達を効果的に阻害する薬剤、及びＰＤ－Ｌ１発現細胞に治療ペイロードを送達し得る薬剤を含む、新しいＰＤ－Ｌ１結合剤が依然として必要とされている。さらに、自己免疫疾患及び感染症を治療するための新規のＰＤ－Ｌ１結合剤が必要とされている。

【0120】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＨＥＲ２を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。

【0121】

特定の実施形態では、本発明の免疫複合体は抗ＨＥＲ２抗体を含む。本発明の一実施形態では、本発明の免疫複合体の抗ＨＥＲ２抗体は、ＵＳ５８２１３３７の表３に記載されているように、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－７及びｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８を含み、それは参照によって本明細書に特に組み込まれる。これらの抗体には、ＨＥＲ２に結合するマウス抗体（４Ｄ５）の相補性決定領域を有するヒトフレームワーク領域が含まれる。ヒト化抗体ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８はトラスツズマブとも呼ばれ、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）の商品名で市販されている。

【0122】

トラスツズマブ（ＣＡＳ １８０２８８－６９－１、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８、ｒｈｕＭＡｂ ＨＥＲ２、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、細胞に基づくアッセイにて、ＨＥＲ２の細胞外ドメインに高親和性で選択的に結合する（Ｋｄ＝５ｎＭ）マウス抗ＨＥＲ２抗体（４Ｄ５）のヒト化型である、組換えＤＮＡ由来のＩｇＧ１κ、モノクローナル抗体である（米国特許第５６７７１７１号、同第５８２１３３７号、同第６０５４２９７号、同第６１６５４６４号、同第６３３９１４２号、同第６４０７２１３号、同第６６３９０５５号、同第６７１９９７１号、同第６８００７３８号、同第７０７４４０４号、Ｃｏｕｓｓｅｎｓ ｅｔ ａｌ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３０：１１３２－９、Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：７０７－１２、Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２）。

【0123】

本発明の一実施形態では、抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、トラスツズマブのＣＤＲ領域を含む。本発明の一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブのフレームワーク領域をさらに含む。本発明の一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブの一方または双方の可変領域をさらに含む。

【0124】

本発明の別の実施形態では、本発明の免疫複合体の抗ＨＥＲ２抗体は、米国特許第７８６２８１７号に記載されているように、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、ヒト化２Ｃ４を含む。例示的なヒト化２Ｃ４抗体は、ペルツズマブである（ＣＡＳ登録番号３８０６１０－２７－５）、ＰＥＲＪＥＴＡ（商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．）。ペルツズマブはＨＥＲ二量体化阻害剤（ＨＤＩ）であり、他のＨＥＲ受容体（例えば、ＥＧＦＲ／ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３及びＨＥＲ４）と活性なヘテロ二量体またはホモ二量体を形成するＨＥＲ２の能力を阻害する機能を有する。例えば、Ｈａｒａｒｉ ａｎｄ Ｙａｒｄｅｎ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９：６１０２－１４（２０００）、Ｙａｒｄｅｎ ａｎｄ Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２：１２７－３７（２００１）；Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ １０：１５８－９（２００３）；Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ４２１：７５６－６０（２００３）；及びＭａｌｉｋ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏ Ａｍ Ｓｏｃ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ４４：１７６－７（２００３）を参照のこと。ＰＥＲＪＥＴＡ（商標）は乳癌の治療薬として承認されている。

【0125】

本発明の一実施形態では、抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ペルツズマブのＣＤＲ領域を含む。本発明の一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ペルツズマブのフレームワーク領域をさらに含む。本発明の一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体はさらに、ペルツズマブの一方または双方の可変領域を含む。

【0126】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＣＥＡを特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。がん胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）は、ＣＤ６６ｅ（分化抗原群６６ｅ）としても知られ、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）遺伝子ファミリーのメンバーである。

【0127】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＣＥＡを特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。

【0128】

がん胎児性抗原（（ＣＥＡ、ＣＤ６６ｅ、ＣＥＡＣＡＭ５）の発現の上昇は、特に腫瘍細胞の接着、転移、細胞免疫機構の遮断、及び抗アポトーシス機能を有することなど、腫瘍の種々の生物学的側面に関係している。ＣＥＡはまた、多くの癌腫の血液マーカーとしても使用されている。ＭＮ－１４及びｈＭＮ１４としても知られている、ラベツズマブ（ＣＥＡ－ＣＩＤＥ（商標）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ、ＣＡＳ登録番号２１９６４９－０７－７）は、ヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体であり、結腸直腸癌の治療のために研究されている（Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ，Ｒ．ｅｔ ａｌ（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ５４（４）：３１５－３２７）。カンプトテシン類似体（ラベツズマブゴビテカン、ＩＭＭＵ－１３０）に結合したラベツズマブは、がん胎児性抗原関連の細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）を標的とし、再発性または難治性の転移性大腸癌の患者で研究されている（Ｓｈａｒｋｅｙ，Ｒ．ｅｔ ａｌ，（２０１８），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ１７（１）：１９６－２０３；Ｃａｒｄｉｌｌｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ（２０１８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １７（１）：１５０－１６０）。

【0129】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体はＴｒｏｐ２を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質２（ＴＲＯＰ２）は、ＴＡＣＳＴＤ２遺伝子によってコードされる膜貫通糖タンパク質である（Ｌｉｎｎｅｎｂａｃｈ ＡＪ，ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１３（３）：１５０７～１５；Ｃａｌａｂｒｅｓｅ Ｇ，ｅｔ ａｌ（２００１）Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔ．９２（１－２）：１６４－５）。Ｔｒｏｐ２は細胞内カルシウムシグナル伝達物質であり、多くのがんで発現が異なり、細胞に自己複製、増殖、浸潤、生存のシグナルを送る。Ｔｒｏｐ２は幹細胞マーカーと考えられており、多くの正常組織で発現しているが、対照的に多くの癌では過剰発現している（Ｏｈｍａｃｈｉ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，（２００６），Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１２（１０），３０５７－３０６３；Ｍｕｈｌｍａｎｎ Ｇ，ｅｔ ａｌ．，（２００９），Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．，６２（２），１５２－１５８；Ｆｏｎｇ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，（２００８），Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，９９（８），１２９０－１２９５；Ｆｏｎｇ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，（２００８），Ｍｏｄ．Ｐａｔｈｏｌ．，２１（２），１８６－１９１；Ｎｉｎｇ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，３４（１０），１７４５－１７５０））。Ｔｒｏｐ２の過剰発現は予後に重要である。Ｔｒｏｐ２と相互作用するいくつかのリガンドが提案されている。Ｔｒｏｐ２は、異なる経路を介して細胞にシグナル伝達し、それは、いくつかの転写因子の複雑なネットワークによって転写で調節されている。

【0130】

ヒトＴｒｏｐ２（ＴＡＣＳＴＤ２：腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質２、ＧＡ７３３－１、ＥＧＰ－１、Ｍ１Ｓ１；以下、ｈＴｒｏｐ２と呼ぶ）は、３２３アミノ酸残基から成る単回膜貫通１型細胞膜タンパク質である。ヒト栄養膜細胞及びがん細胞に共通する（Ｆａｕｌｋ Ｗ Ｐ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７５（４）：１９４７－１９５１（１９７８））免疫抵抗性に関与する細胞膜タンパク質の存在が以前から示唆されいる一方で、ヒト絨毛癌細胞株における細胞膜タンパク質に対するモノクローナル抗体によって認識される抗原分子が同定され、ヒト栄養膜細胞で発現される分子の１つとしてＴｒｏｐ２と命名された（Ｌｉｐｉｎｓｋｉ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７８（８），５１４７－５１５０（１９８１））。この分子はまた、胃癌細胞株での免疫によって得られた、マウスモノクローナル抗体ＧＡ７３３（Ｌｉｎｎｅｎｂａｃｈ Ａ．Ｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６（１），２７－３１（１９８９））によって認識される腫瘍抗原ＧＡ７３３－１とも表された、または非小細胞肺癌細胞での免疫によって得られたマウスモノクローナル抗体ＲＳ７－３Ｇ１１によって認識される上皮糖タンパク質（ＥＧＰ－１；Ｂａｓｕ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６２（４），４７２－４７９（１９９５））とも表された。しかしながら、１９９５年にＴｒｏｐ２遺伝子がクローニングされ、これらの分子はすべて同一の分子であることが確認された（Ｆｏｒｎａｒｏ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６２（５），６１０－６１８（１９９５））。ｈＴｒｏｐ２のＤＮＡ配列及びアミノ酸配列は公開データベースで利用可能であり、例えば、受入番号ＮＭ＿００２３５３及びＮＰ＿００２３４４（ＮＣＢＩ）で参照することができる。

【0131】

がんとの関連を示唆するこのような情報に対して、これまで複数の抗ｈＴｒｏｐ２抗体が確立されており、それらの抗腫瘍効果について検討されている。これらの抗体の中でも、例えば、ヌードマウス異種移植片モデルにてそれ自体で抗腫瘍活性を示す非結合抗体（ＷＯ２００８／１４４８９１；ＷＯ２０１１／１４５７４４；ＷＯ２０１１／１５５５７９；ＷＯ２０１３／０７７４５８号）、と同様に細胞傷害性薬物によるＡＤＣとして抗腫瘍活性を示す抗体（ＷＯ２００３／０７４５６６；ＷＯ２０１１／０６８８４５；ＷＯ２０１３／０６８９４６；ＵＳ７９９９０８３号）が開示されている。しかしながら、それらの活性の強度または適用範囲は依然として不十分であり、ｈＴｒｏｐ２は治療標的として、未だ満たされていない医療ニーズがある。

【0132】

がん細胞におけるＴＲＯＰ２発現は薬剤耐性と相関している。いくつかの戦略は、抗体、抗体融合タンパク質、化学阻害剤、ナノ粒子などを含むがん細胞上のＴＲＯＰ２を標的としている。これらの様々な治療的処置を用いた試験管内研究及び前臨床研究によって、マウスにおける試験管内及び生体内の双方で腫瘍細胞の増殖が有意に抑制された。臨床研究によって、予後バイオマーカーとしての、及び逆耐性に対する治療標的としての双方のＴｒｏｐ２の適用の可能性が検討されている。

【0133】

トポイソメラーゼ阻害剤に連結したＴｒｏｐ２指向性抗体を含む抗体薬物複合体であるサシツズマブゴビテカン（ＴＲＯＤＥＬＶＹ（登録商標）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ、ＩＭＭＵ－１３２）は、少なくとも２回の先行治療を受けた成人患者における転移性トリプルネガティブ乳癌（ｍＴＮＢＣ）の治療に適応される。サシツズマブゴビテカンにおけるＴｒｏｐ２抗体は、イリノテカンの活性代謝物であるＳＮ－３８に結合される（ＵＳ２０１６／０２９７８９０；ＷＯ２０１５／０９８０９９）。

【0134】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、カプリン－１を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む、抗体コンストラクトを含む（Ｅｌｌｉｓ ＪＡ，Ｌｕｚｉｏ ＪＰ．（１９９５），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（３５）：２０７１７－２３；Ｗａｎｇ Ｂ，ｅｔ ａｌ．（２００５），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５（７）：４２７４－８２；Ｓｏｌｏｍｏｎ Ｓ，ｅｔ ａｌ．（２００７），Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２７（６）：２３２４－４２）。カプリン－１はＧＰＩＡＰ１、ＧＰＩＰ１３７、ＧＲＩＰ１３７、Ｍ１１Ｓ１、ＲＮＧ１０５、ｐ１３７ＧＰＩ、及び細胞周期関連タンパク質１としても知られている。

【0135】

細胞質活性化／増殖関連タンパク質－１（カプリン－１）は、細胞周期制御関連遺伝子の調節に関与するＲＮＡ結合タンパク質である。カプリン－１は、ｃ－Ｍｙｃ及びサイクリンＤ２のｍＲＮＡに選択的に結合し、Ｇ_１期を通ってＳ期への細胞の進行を加速し、細胞生存率を高め、細胞増殖を促進する。これは、それが腫瘍形成にて重要な役割を果たす場合があることを示している（Ｗａｎｇ Ｂ，ｅｔ ａｌ．（２００５），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５：４２７４－４２８２）。カプリン－１は、単独で、またはＲａｓＧＡＰ ＳＨ３ドメイン結合タンパク質１及び脆弱Ｘ精神遅滞タンパク質のような他のＲＮＡ結合タンパク質と組み合わせて作用する。腫瘍形成過程では、カプリン－１は、主に細胞増殖を活性化し、免疫チェックポイントタンパク質の発現を上方調節することによって機能する。ストレス性顆粒の形成を介して、カプリン－１はまた、腫瘍細胞が有害条件に適応する過程にも関与しており、これは放射線及び化学療法の耐性に寄与する。種々の臨床悪性腫瘍におけるその役割を考慮すると、カプリン－１は、バイオマーカーとして、及び新規治療薬開発の標的として使用される可能性がある。（Ｙａｎｇ，Ｚ－Ｓ，ｅｔ ａｌ，（２０１９），Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１８：１５－２１）。

【0136】

治療及び検出のためのカプリン－１を標的とする抗体が記載されている（ＷＯ２０１１／０９６５１９；ＷＯ２０１３／１２５６５４；ＷＯ２０１３／１２５６３６；ＷＯ２０１３／１２５６４０；ＷＯ２０１３／１２５６３０；ＷＯ２０１３／０１８８８９；ＷＯ２０１３／０１８８９１；ＷＯ２０１３／０１８８８３；ＷＯ２０１３／０１８８９２；ＷＯ２０１４／０１４０８２；ＷＯ２０１４／０１４０８６；ＷＯ２０１５／０２０２１２；ＷＯ２０１８／０７９７４０）。

【0137】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、クローディン－１を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。

【0138】

クローディン１は、細胞間の密着結合に位置する膜貫通タンパク質ファミリーのクローディンのメンバーであり、肝細胞へのＨＣＶ侵入のための共受容体として作用する（Ｋｎｉｅｓｅｌ Ｕ，ｅｔ ａｌ．（２０００）．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２０（１）：５７－７６；Ｆｕｒｕｓｅ Ｍ，ｅｔ ａｌ．（１９９８）．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１４１（７）：１５３９－５０；Ｓｗｉｓｓｈｅｌｍ Ｋ，ｅｔ ａｌ．（２００５），Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５７（６）：９１９－２８）。クローディン１は、老化関連上皮膜タンパク質、老化関連上皮膜タンパク質１、ＣＬＤＮ１、ＣＬＤ１、ＩＬＶＡＳＣ、ＳＥＭＰ１としても知られている。

【0139】

クローディンは上皮細胞の極性を維持する管腔上皮シートに豊富に含まれる。クローディン１は、膀胱、卵管、肝臓、膵臓、前立腺、及び皮膚のようなほとんどの組織で発現されている。

【0140】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体はネクチン－４を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。

【0141】

ネクチンは、カルシウム依存性細胞接着に関与する細胞接着分子のタンパク質ファミリーである（Ｔａｋａｉ Ｙ．ｅｔ ａｌ．（２００３），Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ，９４（８）：６５５－６７；Ｆｕｃｈｓ，Ａ．ｅｔ ａｌ．（２００６），Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１６（５）：３５９－３６６；Ｍｉｙｏｓｈｉ Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００７），Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，２７（６）：５９０－６０４）。ネクチンは、上皮細胞の中間接合部、または神経細胞の化学的シナプスを含む、多くの異なる組織における細胞間の結合に重要な役割を担う。

【0142】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＬＲＲＣ１５（ロイシンリッチ反復含有１５）を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。

【0143】

ＬＲＲＣ１５は、ヒトにてＬＲＲＣ１５遺伝子によってコードされる細胞膜発現タンパク質である。ＬＲＲＣ１５は、多くの固形腫瘍（例えば、乳房、頭頸部、肺、膵臓）にて間質線維芽細胞上に発現し、同様に間葉系由来のがん細胞のサブセット（例えば、肉腫、黒色腫、膠芽細胞腫）上に直接発現している。ＬＲＲＣ１５はＬＲＲＣ１５陽性間質線維形成があるがん、または間葉系起源のがんの治療について治療標的として有用であってもよい（Ｐｕｒｃｅｌｌ，ＪＷ．ｅｔ ａｌ．（２０１８），Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，７８（１４）：４０５９－４０７２）。

【0144】

ビス－ベンゾイミダゾールアジュバント化合物
本発明の免疫複合体はビス－ベンゾイミダゾールアジュバント部分を含む。本明細書に記載されているアジュバント部分は、免疫応答を誘発する化合物（すなわち、免疫賦活剤）である。一般に、本明細書に記載されているアジュバント部分はＳＴＩＮＧアゴニストである。

【0145】

特定のアミドベンゾイミダゾール化合物は全身性活性があるＳＴＩＮＧ受容体アゴニストを示している（Ｒａｍａｎｊｕｌｕ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２０１８），Ｎａｔｕｒｅ，５６４：４３９－４４３；Ｂａｒｂｅｒ，Ｇ．Ｎ．（２０１５），Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：７６０－７７０；ＵＳ２０１９／０３００５１３）。

【0146】

ＳＴＩＮＧは大きく対称的な結合ポケットがあるダイマー構造である。標的抗体に結合した表１のビス－ベンゾイミダゾール化合物は、ＳＴＩＮＧの結合ポケットの開放型立体配座を標的とし、これに結合するように設計された。小分子アゴニストへの結合は通常、ＳＴＩＮＧタンパク質の閉鎖型立体配座を誘導する。このことは、リンカーが、特に「非切断性」であれば、結合及び活性化を妨げるリスクを導入する。ビス－ベンゾイミダゾールは、開放型立体配座を介して結合し、及び活性化することが報告されており、これは我々がリンカーの結合にさらに適すると予想したことである（Ｒａｍａｎｊｕｌｕ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２０１８），Ｎａｔｕｒｅ，５６４：４３９－４４３；Ｂａｒｂｅｒ，Ｇ．Ｎ．（２０１５），Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５：７６０－７７０）。

【0147】

ビス－ベンゾイミダゾール－リンカー化合物
本発明の免疫複合体は、抗体のビス－ベンゾイミダゾール－リンカー化合物との結合によって調製される。ビス－ベンゾイミダゾール－リンカー化合物は、リンカーユニット（Ｌ）に共有結合したビス－ベンゾイミダゾール（ＢＢＩ）部分を含む。リンカーユニットは、免疫複合体の安定性、透過性、溶解性、及び他の薬物動態、安全性、及び有効性の特性に影響を与える官能基ならびにサブユニットを含む。リンカーユニットは、抗体の反応性官能基と反応する、すなわち、結合する反応性官能基を含む。例えば、抗体のリシン側鎖アミノのような求核基は、ＢＢＩ－リンカー化合物の求電子反応性官能基と反応して免疫複合体を形成する。また、例えば、抗体のシステインチオールは、ＢＢＩリンカー化合物のマレイミド基またはブロモアセトアミド基と反応して免疫複合体を形成する。

【0148】

本発明の免疫複合体の設計のための考慮は、（１）生体内循環中のビス－ベンゾイミダゾール（ＢＢＩ）部分の早期放出を防ぐことと、（２）ＢＢＩ部分の生物活性形態が所望の作用部位にて適切な速度で放出されることを保証することとを含む。その機能的特性と合わせた免疫複合体の複雑な構造は、抗体、結合部位、リンカー構造、及びビス－ベンゾイミダゾール化合物を含む分子のあらゆる構成成分の慎重な設計と選択を必要とする。リンカーはアジュバント放出のメカニズムと速度を決定する。

【0149】

一般に、リンカーユニット（Ｌ）は切断可能であってもよく、または切断可能でなくてもよい。切断可能なリンカーユニットは、ペプチドリンカーユニットを認識して切断し、ＳＴＩＮＧアゴニストを抗体から分離するカテプシンのような特定のプロテアーゼの基質であるペプチド配列を含んでもよい（Ｃａｃｕｌｉｔａｎ ＮＧ，ｅｔ ａｌ．（２０１７），Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７７（２４）：７０２７－７０３７）。

【0150】

切断可能なリンカーユニットは、酸感受性ジスルフィド基のような不安定な機能性を含んでもよい（Ｋｅｌｌｏｇｇ，ＢＡ．ｅｔ ａｌ．（２０１１），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２２，７１７－７２７；Ｒｉｃａｒｔ，Ａ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（２０１１），Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１７，６４１７－６４２７；Ｐｉｌｌｏｗ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．（２０１７），Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．８，３６６－３７０；Ｚｈａｎｇ Ｄ，ｅｔ ａｌ．（２０１６），ＡＣＳ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ．７（１１）：９８８－９９３）。

【0151】

いくつかの実施形態では、リンカーは生理学的条件下で切断可能ではない。本明細書で使用されるとき、「生理的条件」という用語は、摂氏２０～４０度の温度範囲、大気圧（すなわち１気圧）、約６～約８のｐＨ、及び１以上の生理学的酵素、プロテアーゼ、酸、及び塩基を指す。免疫複合体における抗体とＳＴＩＮＧアゴニストとの間の切断できないリンカーの１つの利点は、早期のペイロード放出及び対応する毒性を最小限に抑えることである。ＳＴＩＮＧは広く発現される受容体であり、したがって特に関連する検討事項である。

【0152】

一実施形態では、本発明は、細胞結合剤と免疫賦活部分との間に、カテプシン、腫瘍関連エラスターゼ酵素、またはプロテアーゼ様もしくはエラスターゼ様活性がある酵素のようなプロテアーゼによって選択的に切断され得る特定のアミノ酸残基の直鎖配列に基づくペプチドラジカルを含むペプチド連結ユニット、すなわちＬまたはリンカーを含む。ペプチドラジカルは約２～約１２のアミノ酸であってもよい。ペプチドリンカー内の結合を酵素によって切断することによって、免疫賦活部分の活性形態が放出される。このことは、本発明に係る複合体の組織特異性の増大をもたらすので、他の組織型における本発明に係る複合体の毒性のさらなる低下をもたらす。

【0153】

リンカーは、生体媒体、例えば、培養培地または血清にて免疫複合体の十分な安定性を提供し、同時に、免疫賦活部分、すなわち「ペイロード」の放出を伴うその特異的な酵素的切断性または加水分解切断性の結果としての腫瘍組織内で所望の細胞内作用を提供する。

【0154】

プロテアーゼ、カテプシンまたはエラスターゼの酵素活性は、生理的条件下で免疫複合体の共有結合の切断を触媒することができる。酵素活性は腫瘍組織に関連する細胞の発現産物である。ターゲッティングペプチドの切断部位での酵素活性が免疫複合体をターゲッティングペプチド及び連結基を含まない活性がある免疫賦活薬に変換する。切断部位は酵素によって特異的に認識されてもよい。カテプシンまたはエラスターゼは、特定のペプチドのＣ末端アミノ酸残基と免疫複合体の免疫賦活部分との間の特定のペプチド結合の切断を触媒してもよい。

【0155】

一実施形態では、本発明は、細胞結合剤と免疫賦活部分との間に、グルクロニダーゼ（Ｊｅｆｆｒｅｙ ＳＣ，ｅｔ ａｌ．（２００６），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．１７（３）：８３１－４０）、またはスルファターゼ（Ｂａｒｇｈ ＪＤ，ｅｔ ａｌ（２０２０），Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１１（９）：２３７５－２３８０）による切断の基質を含む連結ユニット、すなわちＬまたはリンカーを含む。特に、ＬはＧｌｕｃユニットを含み、且つ以下から選択される式を含む：

【化5】

【0156】

本発明の免疫複合体の特異的切断は、免疫系の腫瘍浸潤細胞及び白血球分泌酵素の存在を利用して、腫瘍部位での抗癌剤の活性化を促進する。

【0157】

ＢＢＩリンカー化合物に好適な反応性求電子反応性官能基（式ＩＩのＱ）には、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステル及びＮ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル（スルホ－ＮＨＳ）エステル（アミン反応性）；カルボジイミド（アミン及びカルボキシル反応性）；ヒドロキシメチルホスフィン（アミン反応性）；マレイミド（チオール反応性）；Ｎ－ヨードアセトアミド（チオール反応性）のようなハロゲン化アセトアミド；アリールアジド（一級アミン反応性）；フッ化アリールアジド（炭素－水素（Ｃ－Ｈ）挿入を介した反応性）；ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル（アミン反応性）；テトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）及びスルホテトラフルオロフェニル（ＳＴＰ）エステル（アミン反応性）；イミドエステル（アミン反応性）；イソシアン酸（ヒドロキシル反応性）；ビニルスルホン（チオール、アミン、及びヒドロキシル反応性）；ピリジルジスルフィド（チオール反応性）；及びベンゾフェノン誘導体（Ｃ－Ｈ結合挿入を介した反応性）が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる試薬には、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，２００８に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。

【0158】

本発明は、免疫複合体の設計、調製及び使用に対する制限ならびに課題に対する解決策を提供する。プロテアーゼのペプチドユニット及び基質を含むもののようないくつかのリンカーは、血流中で不安定であってもよく、それによって、標的細胞での内部移行前に許容できない量のアジュバント／薬物を放出してもよい（Ｋｈｏｔ，Ａ．ｅｔ ａｌ（２０１５），Ｂｉｏａｎａｌｙｓｉｓ，７（１３）：１６３３－１６４８）。他のリンカーは、血流中では安定性を提供してもよいが、細胞内放出の有効性に悪影響を及ぼす場合がある。所望の細胞内放出を提供するリンカーは通常、血流中での安定性に乏しい。換言すると、血流安定性及び細胞内放出は通常、反比例関係にある。さらに、標準的な結合プロセスで、抗体上に負荷されたアジュバント／薬物部分の量（すなわち、薬物負荷）、結合反応で形成される凝集体の量、及び得ることができる最終精製結合の収率は、相関する。例えば、凝集体の形成は一般に、抗体に結合されるアジュバント／薬物部分及びその誘導体の当量数に正相関する。高い薬物負荷のもとでは、形成された凝集体は治療用途については除去されなければならない。結果として、薬物負荷が介在する凝集体形成は、免疫複合体の収率を低下させ、プロセスの規模拡大を困難し得る。

【0159】

例示的な実施形態は、式ＩＩのビス－ベンゾイミダゾール－リンカー化合物：

【化6】

を含み、式中、
Ｘ^ａ及びＸ^ｂは独立して、Ｒ^５によって任意で置換される５員環ヘテロアリールから選択され；
Ｒ^１及びＲ^４は独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）及びＲ^５から成る群から選択され；
Ｒ^２ａ及びＲ^２ｂは独立してＨ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）_２、及びＲ^５から選択され；
Ｘ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^１、Ｒ^４、Ｒ^２ａ、Ｒ^２ｂのうちの１つがＲ^５によって置換され；
Ｒ^３は、Ｆ、Ｃｌ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２から選択される１以上の基によって任意で置換されるＣ_１－Ｃ_６アルキルジイル、－（Ｃ_１－Ｃ_３アルキルジイル）－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_３アルキルジイル）－、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニルジイル及びＣ_２－Ｃ_６アルキニルジイルから選択され；
Ｒ^５は、
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｌ；
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－Ｌ；
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｌ；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｌ；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－Ｌ；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｌ；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２－アルキルジイル）－Ｌ；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２－アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２－アルキルジイル）－Ｏ－Ｌ；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｌ；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｌ；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌ；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－Ｌ；
－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｌ；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｌ；及び
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－Ｌから成る群から選択され；
Ｒ^６は独立してＨまたはＣ_１－Ｃ_６アルキルであり；
Ｌは、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ^＋（Ｒ^６）_２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－から成る群から選択されるリンカーであり；
ＰＥＧは、式：－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－を有し、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり；
Ｇｌｕｃは式：

【化7】

を有し；
ＰＥＰは式：

【化8】

を有し、
ＡＡは独立して天然のまたは非天然のアミノ酸側鎖から選択され、またはＡＡの１以上と隣接する窒素原子とが５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示し；
Ｃｙｃは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３及び以下の構造を有するグルクロン酸から選択される１以上の基によって任意で置換されるＣ_６－Ｃ_２０アリールジイル及びＣ_１－Ｃ_２０ヘテロアリールジイルから選択され、

【化9】

Ｒ^７は－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ^８）－、及び－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－から成る群から選択され、Ｒ^８はＨ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^９）_２から選択され、Ｒ^９は独立してＨ、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキル、及び－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＯＨから成る群から選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ^９基は一緒に５もしくは６員環のヘテロシクリル環を形成し；
ｙは２～１２の整数であり；
ｚは０または１であり；
Ｑは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２及びＳＯ_３ ^－から独立して選択される１以上の基で置換されたＮ－ヒドロキシスクシンイミジル、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル、マレイミド、及びフェノキシから成る群から選択され；
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール及びヘテロアリールジイルは独立して且つ任意で、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨＦ_２、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨＦ_２、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＮＨＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＮＨＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯＣＨ_３、－ＣＯ_２ＣＨ_３、－ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、－ＣＯＮＨ_２、－ＣＯＮＨＣＨ_３、－ＣＯＮ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＨＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＮＨＣＯＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＯＣＨ_３、－ＮＨＳ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＯ_２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣ_Ｈ２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＦ_３、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（Ｏ_）２ＣＨ_３及び－Ｓ（Ｏ）_３Ｈから独立して選択される１以上の基で置換される。

【0160】

例示的な一実施形態では、ＬはＰＥＰを含み、ＰＥＰはジペプチドであり、且つ式：

【化10】

を有する。

【0161】

例示的な一実施形態では、ＬはＰＥＰを含み、ＰＥＰはトリペプチドであり、且つ式：

【化11】

を有する。

【0162】

例示的な一実施形態では、ＰＥＰはトリペプチドであり、その際、ＡＡ_１はメチルであり、ＡＡ_２はプロリンを形成し、且つＡＡ_３はイソプロピルである。

【0163】

例示的な一実施形態では、ＬはＰＥＰを含み、ＰＥＰはテトラペプチドであり、且つ式：

【化12】

を有する。

【0164】

例示的な一実施形態では、ＰＥＰはテトラペプチドであり、その際、
ＡＡ_１はＡｂｕ、Ａｌａ及びＶａｌから成る群から選択され；
ＡＡ_２はＮｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）、Ｏｉｃ及びＰｒｏから成る群から選択され；
ＡＡ_３はＡｌａ及びＭｅｔ（Ｏ）_２から成る群から選択され；
ＡＡ_４はＯｉｃ、Ａｒｇ（ＮＯ_２）、Ｂｐａ、及びＮｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）から成る群から選択される。

【0165】

例示的な一実施形態では、ＰＥＰは、

【化13-1】

【化13-2】

から成る群から選択されるアミノ酸のアミノ酸残基で構成される。

【0166】

例示的な一実施形態では、ＰＥＰはＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｖａｌ及びＷＯ２０２１／２２６４４０に記載されているような他のペプチド配列から成る群から選択される。

【0167】

例示的な一実施形態では、ＰＥＰは式：

【化14】

を有する。

【0168】

例示的な一実施形態では、ＰＥＰは式：

【化15】

を有する。

【0169】

ＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物の例示的な一実施形態は、Ｌが式：

【化16】

を含むことを含む。

【0170】

ＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物の例示的な実施形態は、Ｑが以下から選択されることを含む。

【化17】

【0171】

ＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物の例示的な実施形態は、ＱがＦ、Ｃｌ、ＮＯ_２、及びＳＯ_３ ^－から独立して選択される１以上の基で置換されているフェノキシであることを含む。

【0172】

ＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物の例示的な実施形態は、Ｑが２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシであることを含む。

【0173】

ＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物の例示的な実施形態は、Ｑが２，３，５，６－テトラフルオロ－４－スルホナト－フェノキシであることを含む。

【0174】

ＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物の例示的な実施形態は、Ｑがマレイミドであることを含む。

【0175】

ＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物の例示的な実施形態は、Ｌが以下の構造から選択されることを含む。

【化18】

式中、波線はＲ^５への結合点を示す。

【0176】

ビス－ベンゾイミダゾール、ＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物の例示的な実施形態を表１ａ及び１ｂに示す。各ＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物が調製され、質量分析によって特徴付けられ、示された質量を有することが示された。表１ａ及び１ｂのＳＴＩＮＧアゴニスト－リンカー中間化合物は、抗体に結合した場合にがん及び他の障害を治療するための有用な治療活性を予測し得る、ＳＴＩＮＧアゴニストの選択性の驚くべき且つ予想外の特性を示す。

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【表1-7】

【表1-8】

【表1-9】

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

【表2-4】

【表2-5】

【表2-6】

【表2-7】

【表2-8】

【表2-9】

【表2-10】

【0177】

免疫複合体
本発明の免疫複合体は、骨髄細胞のような免疫エフェクター細胞と同様にＳＴＩＮＧを発現している腫瘍細胞自体の標的特異的活性化を誘導する。腫瘍ターゲティングは、的外れなＳＴＩＮＧ活性化をできるだけ減らすための特異性をもたらし、当該免疫複合体は、食細胞作用がエフェクター細胞の活性化を高めるだけでなく、免疫複合体の取り込み及びその後の腫瘍抗原のプロセッシング及び提示も増加させることを可能にする。

【0178】

免疫複合体の例示的な実施形態は、リンカーによって１以上のＳＴＩＮＧアゴニスト、ビス－ベンゾイミダゾール（ＢＢＩ）部分に共有結合された抗体を含み、式Ｉ：
Ａｂ－［Ｌ－Ｄ］_ｐ Ｉ
またはその薬学的に許容される塩を有し、
式中、
Ａｂは当該抗体であり；
ｐは１～８の整数であり；
Ｄは以下の式を有するＳＴＩＮＧアゴニスト部分であり；

【化19】

Ｘ^ａ及びＸ^ｂは独立して、Ｒ^５によって任意で置換される５員環ヘテロアリールから選択され；
Ｒ^１及びＲ^４は独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）及びＲ^５から成る群から選択され；
Ｒ^２ａ及びＲ^２ｂは独立してＨ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）_２、及びＲ^５から選択され；
Ｘ^ａ、Ｘ^ｂ、Ｒ^１、Ｒ^４、Ｒ^２ａ、Ｒ^２ｂのうちの１つがＲ^５によって置換され；
Ｒ^３は、Ｆ、Ｃｌ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２から選択される１以上の基によって任意で置換されるＣ_１－Ｃ_６アルキルジイル、－（Ｃ_１－Ｃ_３アルキルジイル）－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_３アルキルジイル）－、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニルジイル及びＣ_２－Ｃ_６アルキニルジイルから選択され；
Ｒ^５は、
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；
－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）＊；
－Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；
－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；
－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；及び
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６－）＊から成る群から選択され；
星印＊はＬの結合部位を示し；
Ｒ^６はそれぞれ独立してＨまたはＣ_１－Ｃ_６アルキルであり；
Ｌは、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ^＋（Ｒ^６）_２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－から成る群から選択されるリンカーであり；
ＰＥＧは式：－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－を有し、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり；
Ｇｌｕｃは

【化20】

を有し；
ＰＥＰは式：

【化21】

を有し、ＡＡは独立して天然のまたは非天然のアミノ酸側鎖から選択され、またはＡＡの１以上と隣接する窒素原子とが５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示し；
Ｃｙｃは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３及び以下の構造を有するグルクロン酸から選択される１以上によって任意で置換されるＣ_６－Ｃ_２０アリールジイル及びＣ_１－Ｃ_２０ヘテロアリールジイルから選択され、

【化22】

Ｒ^７は－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ^８）－、及び－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－から成る群から選択され、Ｒ^８はＨ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^９）_２から選択され、Ｒ^９は独立してＨ、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキル、及び－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＯＨから成る群から選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ^９基は一緒に５もしくは６員環のヘテロシクリル環を形成し；
ｙは２～１２の整数であり；
ｚは０または１であり；
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール及びヘテロアリールジイルは独立して且つ任意で、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨＦ_２、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨＦ_２、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＮＨＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＮＨＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯＣＨ_３、－ＣＯ_２ＣＨ_３、－ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、－ＣＯＮＨ_２、－ＣＯＮＨＣＨ_３、－ＣＯＮ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＨＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＮＨＣＯＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＯＣＨ_３、－ＮＨＳ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＯ_２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＦ_３、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３及び－Ｓ（Ｏ）_３Ｈから独立して選択される１以上の基で置換される。

【0179】

抗体は、腫瘍特異的及び／または免疫特異的な（例えばＰＤ－Ｌ１）抗原を標的として、免疫複合体のターゲティングに特異性をもたらし、安全且つ全身性の送達を可能にする。

【0180】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、及びアベルマブのようなＰＤ－Ｌ１に結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクト、またはそのバイオ後続品もしくはバイオベターであることが含まれる。

【0181】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、抗体が、トラスツズマブ及びペルツズマブのようなＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクト、またはそのバイオ後続品もしくはバイオベターであることが含まれる。

【0182】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、抗体が、ラベツズマブのようなＣＥＡに結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクト、またはそのバイオ後続品もしくはバイオベターであることが含まれる。

【0183】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、抗体が、サシツズマブのようなＴｒｏｐ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクト、またはそのバイオ後続品もしくはバイオベターであることが含まれる。

【0184】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｘ^ａ及びＸ^ｂは独立して、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、オキサジアゾリル、及びチアジアゾリルから成る群から選択されることが含まれる。

【0185】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｘ^ａ及びＸ^ｂはそれぞれ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、及び－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２から選択される１以上の基によって置換されるピラゾリルであることが含まれる。

【0186】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｘ^ａ及びＸ^ｂの一方がＲ^５で置換されることが含まれる。

【0187】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｒ^１が－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、及び－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２から成る群から選択されることが含まれる。

【0188】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｒ^１が－ＯＣＨ_３であることが含まれる。

【0189】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｒ^１がＦであることが含まれる。

【0190】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｒ^２ａ及びＲ^２ｂがそれぞれ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２であることが含まれる。

【0191】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｒ^２ａ及びＲ^２ｂの一方がＲ^５で置換されることが含まれる。

【0192】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｒ^３が－ＣＨ_２ＣＨ_２－、－ＣＨ＝ＣＨ－及び－Ｃ≡Ｃ－から選択されることが含まれる。

【0193】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｒ^３がＦ、－ＯＨ及び－ＯＣＨ_３から選択される１以上の基で置換されているＣ_２－Ｃ_４アルケニルジイルであることが含まれる。

【0194】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｒ^４が－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊であることが含まれる。

【0195】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイルがプロピルジイルであり、且つＣ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイルがピペリジイルであることが含まれる。

【0196】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｒ^１及びＲ^４の一方がＲ^５で置換されることが含まれる。

【0197】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｌが－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－または－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－であることが含まれる。

【0198】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｌが抗体のシステインチオールに結合していることが含まれる。

【0199】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、ＰＥＧについてはｍは１または２であり、ｎは２～１０の整数であることが含まれる。

【0200】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、ＰＥＧについてはｎは１０であることが含まれる。

【0201】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、ＬがＰＥＰを含み、ＰＥＰはジペプチドであり、以下の式を有することが含まれる：

【化23】

【0202】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、ＬがＰＥＰを含み、ＰＥＰはトリペプチドであり、以下の式を有することが含まれる：

【化24】

【0203】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、ＬがＰＥＰを含み、ＰＥＰはテトラペプチドであり、以下の式を有することが含まれる：

【化25】

【0204】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｌは以下の式から選択されるＧｌｕｃを含むことが含まれる：

【化26】

【0205】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態には、Ｌは以下の構造から選択されることが含まれ：

【化27】

式中、波線はＲ^５への結合点を示す。

【0206】

本発明は、式Ｉの実施形態のすべての合理的な組み合わせ、及び特徴の並べ替えを含む。

【0207】

特定の実施形態では、本発明の免疫複合体化合物は免疫賦活活性を有するものを含む。本発明の抗体薬物複合体は、有効用量のビス－ベンゾイミダゾール薬物を腫瘍組織に選択的に送達し、それによって、複合体化されていないビス－ベンゾイミダゾールと比べて、治療指数（「治療濃度域」）を増加させながら、さらに高い選択性（すなわち、さらに低い効果的用量）が達成されてもよい。

【0208】

薬物負荷は、式Ｉの免疫複合体内の抗体当たりのＢＢＩ部分の数である、ｐによって表される。薬物（ＢＢＩ）負荷は抗体当たり１～約８の薬物部分（Ｄ）の範囲であってもよい。式Ｉの免疫複合体は、１～約８の範囲の薬物部分に結合された抗体の混合物または集団を含む。いくつかの実施形態では、抗体に結合され得る薬物部分の数は、リシン及びシステインのような反応性または利用可能なアミノ酸側鎖残基の数によって制限される。いくつかの実施形態では、遊離システイン残基は、本明細書に記載されている方法によって抗体アミノ酸配列中に導入される。そのような態様では、ｐは、１、２、３、４、５、６、７または８、及びその範囲、例えば、１～８または２～５であってもよい。そのような態様では、ｐ及びｎは等しい（すなわち、ｐ＝ｎ＝１、２、３、４、５、６、７もしくは８、またはその間のいくつかの範囲）。式Ｉの例示的な免疫複合体化合物には、１、２、３または４の操作されたシステインアミノ酸を有する抗体が挙げられるが、これらに限定されない（Ｌｙｏｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍ．５０２：１２３－１３８）。いくつかの実施形態では、１以上の遊離のシステイン残基が、遺伝子操作を使用することなく、鎖内及び鎖間のジスルフィド結合（ネイティブジスルフィド基）を形成する抗体にすでに存在しており、その場合、既存の遊離の還元システイン残基を使用して、抗体を薬物に結合させてもよい。いくつかの実施形態では、抗体は１以上の遊離システイン残基を生成するために、抗体の結合前に還元条件に曝露される。

【0209】

いくつかの免疫複合体について、ｐは、抗体上の結合部位の数によって制限され得る。例えば、本明細書に記載されている特定の例示的な実施形態におけるように、結合がシステインチオールである場合、抗体は、１つのみもしくは限定された数のシステインチオール基を有してもよく、または１つのみもしくは限定された数の反応性が十分なチオール基を有してもよく、それに、薬物が結合されてもよい。他の実施形態では、抗体における１以上のリシンアミノ基が利用可能であり、式ＩＩのＢＢＩリンカー化合物との結合に対して反応性であってもよい。特定の実施形態では、されに高い薬物負荷、例えば、５超のｐは、特定の抗体薬物複合体の凝集、不溶性、毒性、または細胞透過性の喪失を引き起こし得る。特定の実施形態では、免疫複合体の平均薬物負荷は、１～約８、約２～約６または約３～約５の範囲である。特定の実施形態では、抗体は、リシンまたはシステインのような反応性求核基を明らかにするために変性条件に供される。

【0210】

免疫複合体の負荷（薬物／抗体比）は、異なる方法で、ならびに例えば、（ｉ）抗体と比較してモル過剰のＢＢＩリンカー中間化合物を制限すること、（ｉｉ）結合反応時間または温度を制限すること、及び（ｉｉｉ）最適化された抗体反応性のための部分的または制限的還元変性条件によって制御されてもよい。

【0211】

抗体の１を超える求核性基が薬物と反応する場合、結果として生じる生成物は、抗体に結合した１以上の薬物部分が分布する免疫複合体化合物の混合物であることを理解すべきである。１抗体当たりの平均数薬物は、抗体に特異的及び薬物に特異的である、二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から算出され得る。個々の免疫複合体分子は、質量分析法によって混合物中で特定され、ＨＰＣＬ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって、分離されてもよい（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ １９（７）：２９９－３０７；Ｈａｍｂｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３－７０７０；Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．”Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ－ＣＤ３０ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４，Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７－３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００４；Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．”Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４，Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ，２７－３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ，２００４を参照にこと）。特定の実施形態では、単一の負荷値を有する均一の免疫複合体は、電気泳動またはクロマトグラフィーによって複合混合物から単離されてもよい。

【0212】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、表２ａ及び表２ｂの免疫複合体から選択される。試験管内での免疫複合体活性の評価は、実施例２０２の方法に従って行ってもよい。

【0213】

ＳＴＩＮＧ活性化は、ＩＲＦ３（インターフェロン調節因子３）のシグナル伝達を介したＩ／ＩＩＩ型ＩＦＮ（インターフェロン）の誘導と標準的に関連するが、例えば、ＮＦ－κＢ（活性化Ｂ細胞の核因子κ軽鎖エンハンサー）経路を介したＴＮＦα（腫瘍壊死因子α）のような炎症誘発性サイトカインを誘導することもできる。特定の免疫複合体は、ＳＴＩＮＧ活性化と一致する、ＩＦＮλ１（インターフェロンラムダ１）と同様にＴＮＦαを誘発する能力を示す。比較因子として、トラスツズマブは、ＰＢＭＣ腫瘍共培養アッセイにてＴＮＦαまたはＩＦＮλ１を実質的に誘発しなかった（実施例２０２）。

【表3】

【表4-1】

【表4-2】

【0214】

免疫複合体の組成物
本発明は、本明細書に記載されている複数の免疫複合体と、任意でそのための担体、例えば、薬学的または薬理学的に許容される担体とを含む、組成物、例えば、薬学的または薬理学的に許容される組成物または製剤を提供する。免疫複合体は、組成物にて同じであっても異なっていてもよく、すなわち、組成物は、抗体コンストラクト上の同じ位置に連結された同じ数のＢＢＩアジュバントを有する免疫複合体を含むことができ、及び／または抗体コンストラクトの異なる位置に連結された同じ数のＢＢＩアジュバントを有する、抗体コンストラクトの同じ位置に連結された異なる数のアジュバントを有する、もしくは抗体コンストラクトの異なる位置に連結された異なる数のアジュバントを有する免疫複合体を含むことができる。

【0215】

例示的な実施形態では、免疫複合体化合物を含む組成物は免疫複合体化合物の混合物を含み、その際、免疫複合体化合物の混合物における１抗体当たりの平均薬物（ＢＢＩ）負荷は、約２～約５である。

【0216】

本発明の免疫複合体の組成物は、約０．４～約１０のアジュバントの抗体コンストラクトに対する平均比（ＤＡＲ）を有することができる。当業者は、抗体コンストラクトに結合したチエノアゼピンアジュバントの数が、本発明の複数の免疫複合体を含む組成物にて免疫複合体ごとに変化してもよいので、アジュバントの抗体コンストラクト（例えば、抗体）対する比を薬物／抗体比（ＤＡＲ）と呼ばれることがある平均として測定できることを認識するであろう。アジュバントの抗体コンストラクト（例えば、抗体）に対する比は、任意の適切な手段によって評価することができ、その多くは当該技術分野で既知である。

【0217】

結合反応から免疫複合体を調製する際の１抗体当たりのアジュバント部分の平均数（ＤＡＲ）は、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣのような従来の手段によって特徴付けることができる。ｐという点での組成物における免疫複合体の定量的分布もまた、決定されてもよい。特定の事例では、ｐが特定の値である均質な免疫複合体の、他の薬物負荷を有する免疫複合体からの分離、精製、及び特性評価は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動のような手段によって達成されてもよい。

【0218】

いくつかの実施形態では、組成物はさらに、１以上の薬学的にまたは薬理学的に許容される賦形剤を含む。例えば、本発明の免疫複合体は、ＩＶ投与または体腔もしくは臓器の内腔への投与のような非経口投与用に調製されることができる。あるいは、免疫複合体を腫瘍内（腫瘍内に）に注射することができる。注射用の組成物は一般に、薬学的に許容される担体に溶解された免疫複合体の溶液を含むであろう。用いられ得る許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水、及び塩化ナトリウムのような１以上の塩の等張液、例えばリンゲル溶液がある。さらに、減菌された固定油を、溶媒または懸濁媒質として従来どおり使用することができる。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激性固定油を使用できる。さらに、オレイン酸のような脂肪酸が、注射剤の調製において同様に使用され得る。これらの組成物は、望ましくは滅菌されており、一般に望ましくない物質を含まない。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技法によって滅菌され得る。組成物は、生理学的条件に近似させるために必要とされる、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、等張化剤のような薬学的に許容される補助物質、例えば酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含有してもよい。

【0219】

組成物は、任意の適切な濃度の免疫複合体を含むことができる。組成物中の免疫複合体の濃度は大きく変動する可能性があり、選択された特定の投与様式及び患者のニーズに従って、主に流体量、粘度、体重などに基づいて選択される。特定の実施形態では、注射用の溶液製剤中の免疫複合体の濃度は、約０．１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）の範囲である。

【0220】

免疫複合体によるがんの治療法
本発明は、がんを治療するための方法を提供する。当該方法は、治療有効量の本明細書に記載されている免疫複合体（例えば、本明細書に記載されている組成物）を、それを必要とする対象、例えば、がんを有し、がんの治療を必要とする対象に投与することを含む。前記方法は、表２から選択される治療有効量の免疫複合体（ＩＣ）を投与することを含む。

【0221】

本発明の免疫複合体は、種々の過剰増殖性の疾患または障害、例えば、腫瘍抗原の過剰発現を特徴とするものを治療するのに使用されてもよいことが企図される。例示的な過剰増殖性障害としては、良性または悪性の固形腫瘍、ならびに血液疾患（白血病及びリンパ系腫瘍など）が挙げられる。

【0222】

別の態様では、薬物として使用するための免疫複合体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、有効量の免疫複合体を個体に投与することを含む、個体を治療する方法で使用するための免疫複合体を提供する。そのような一実施形態では、この方法は、例えば、本明細書に記載されている、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。

【0223】

さらなる態様では、本発明は、薬物の製造または調製での、免疫複合体の使用を提供する。一実施形態では、薬物は、がんの治療のためのものであり、その方法は、がんを有する個体に有効量の薬物を投与することを含む。そのような一実施形態では、この方法は、例えば、本明細書に記載されている、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。

【0224】

癌腫とは、上皮組織から生じる悪性腫瘍である。上皮細胞は、体の外側表面を覆い、内部空洞を覆い、且つ腺組織の内層を形成する。癌腫の例として、腺癌（腺（分泌）細胞、例えば、乳、膵臓、肺、前立腺、胃、胃食道接合部及び結腸で始まる癌）；副腎皮質癌；肝細胞癌；腎細胞癌；卵巣癌；上皮内癌；腺管癌；乳癌；基底細胞癌；扁平上皮癌；移行細胞癌；結腸癌；鼻咽頭癌；多房嚢腫性腎細胞癌；燕麦細胞癌；大細胞肺癌；小細胞肺癌；非小細胞肺癌などを含むが、これらに限定されない。癌腫は、前立腺、膵臓、結腸、脳（通常、続発性転移として）、肺、乳房、皮膚に見られることがある。

【0225】

軟部組織腫瘍は、結合組織に由来するまれな腫瘍の非常に多様な群である。軟部腫瘍の例としては、胞状軟部肉腫、類血管腫型線維性組織球腫、軟骨粘液線維腫、骨格軟骨肉腫、骨外性粘液型軟骨肉腫、明細胞肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、隆起性皮膚線維肉腫、子宮内膜間質腫瘍、ユーイング肉腫、線維腫症（デスモイド）、乳児性線維腫腫、消化管間質腫瘍、骨巨細胞腫、腱鞘巨細胞腫、炎症性筋線維芽細胞性腫瘍、子宮筋腫、平滑細胞腫、脂肪芽細胞腫、典型的な脂肪腫、紡錘細胞または多形脂肪腫、異型脂肪腫、軟骨様脂肪腫、高分化脂肪肉腫、粘液様／円形細胞脂肪肉腫、多形脂肪肉腫、粘液型悪性線維性組織球腫、高悪性線維組織球腫、粘液線維肉腫、悪性末梢神経鞘腫、中皮腫、神経芽細胞腫、骨軟骨腫、骨肉腫、原始神経外胚葉性腫瘍、胞巣状横紋筋肉腫、胎児性横紋筋肉腫、良性または悪性シュワン腫、滑膜肉腫、エヴァンズ腫瘍、結節性筋膜炎、デスモイド型線維腫症、孤立性線維性腫瘍、隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）、血管肉腫、類上皮血管内皮腫、腱鞘巨細胞腫（ＴＧＣＴ）、色素性絨毛結節性滑膜炎（ＰＶＮＳ）、線維性骨異形成症、粘液線維肉腫、滑膜肉腫、悪性末梢神経鞘腫、神経線維腫、軟組織の多形腺腫、ならびに線維芽細胞、筋線維芽細胞、組織球、血管細胞／内皮細胞及び神経鞘細胞に由来する腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。

【0226】

肉腫は、間葉起源の細胞で、例えば骨で、または軟骨、脂肪、筋肉、血管、線維組織、もしくは他の結合組織もしくは支持組織を含む体の軟部組織で生じる、まれなタイプのがんである。異なる種類の肉腫は、がんが形成する場所に基づく。例えば、骨肉腫は骨に生じ、脂肪肉腫は脂肪に生じ、横紋筋肉腫は筋肉に生じる。肉腫の例には、アスキン腫瘍；ブドウ状肉腫；軟骨肉腫；ユーイング肉腫；悪性血管内皮腫；悪性神経鞘腫；骨肉腫；及び軟部組織肉腫（例えば、胞状軟部肉腫；血管肉腫；葉状嚢肉腫；隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）；類腱腫；線維形成性小円形細胞腫；類上皮肉腫；骨外性軟骨肉腫；骨外性骨肉腫；線維肉腫；胃腸間質腫瘍（ＧＩＳＴ）；血管外皮細胞腫；血管肉腫（より一般的には「血管肉腫」と呼ばれる）；カポジ肉腫；平滑筋肉腫；脂肪肉腫；リンパ管肉腫；悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）；神経芽肉腫；滑膜肉腫；及び未分化多形性肉腫）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0227】

奇形腫は、例えば、毛髪、筋肉、及び骨を含むいくつかの異なる種類の組織（例えば、３つの胚葉：内胚葉、中胚葉、及び外胚葉のうちのいずれか及び／またはすべてに由来する組織を含むことができる）を含有してもよい生殖細胞腫瘍の一種である。奇形腫は、女性においては卵巣に、男性においては精巣に、及び小児においては尾骨に、最もよく発生する。

【0228】

黒色腫は、メラノサイト（色素メラニンを作る細胞）で発生するがんの形態である。黒色腫は、ほくろ（皮膚黒色腫）において始まる場合があるが、眼の中または腸の中のような他の色素組織でも始まる場合がある。

【0229】

メルケル細胞癌はまれな種類の皮膚癌であり、通常、顔面、頭部もしくは頚部に肉色または青みがかった赤色の結節として現れる。メルケル細胞癌は皮膚の神経内分泌癌とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、メルケル細胞癌を治療する方法は、Ｔｒｏｐ２に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、サシツズマブ、サシツズマブゴビテカン、それらのバイオ後続品、またはそれらのバイオベター）を含有する免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、メルケル細胞癌は投与が行われるときに転移している。

【0230】

白血病は、骨髄のような血液形成組織から発生し、多数の異常血球の生成及び血流への侵入を引き起こすがん細胞である。例えば、白血病は、通常であれば血流中で成熟する骨髄由来の細胞で発生する可能性がある。白血病は、病気の発生と進行の速さ（例、急性と慢性）、及び影響を受ける白血球の種類（例、骨髄性とリンパ性）にちなんで名付けられる。骨髄性白血病は、骨髄性白血病または骨髄芽球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病は、リンパ芽球性白血病またはリンパ球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病細胞はリンパ節に集まり、腫れることがある。白血病の例としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含むが、これらに限定されない。

【0231】

リンパ腫は、免疫系の細胞から始まるがんである。例えば、リンパ腫は、通常であればリンパ系で成熟する骨髄由来細胞に発生する可能性がある。リンパ腫には２つの基本的なカテゴリーがある。リンパ腫の１つのカテゴリーはホジキンリンパ腫（ＨＬ）であり、リードステルンベルク細胞と呼ばれる種類の細胞の存在によって特徴付けられる。現在、ＨＬには６つの認識されている種類がある。ホジキンリンパ腫の例としては、結節性硬化型古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、混合細胞型ＣＨＬ、リンパ球減少型ＣＨＬ、リンパ球豊富型ＣＨＬ、及び結節性リンパ球優位型ＨＬが挙げられる。

【0232】

リンパ腫の他のカテゴリーは非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であり、これには免疫系細胞のがんの大規模で多様な群が含まれる。非ホジキンリンパ腫はさらに、緩徐な（成長の遅い）経過をたどる癌と、攻撃的な（成長の速い）経過をたどる癌に分けることができる。現在、ＮＨＬには６１つの認識されている種類がある。非ホジキンリンパ腫の例は、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、血液免疫芽細胞性リンパ腫、芽細胞性ＮＫ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキット様リンパ腫（小型非開裂細胞性リンパ腫）、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、肝脾ガンマ・デルタＴ細胞リンパ腫、Ｔ細胞白血病、リンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、鼻Ｔ細胞リンパ腫、小児リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、形質転換リンパ腫、処置関連Ｔ細胞リンパ腫、及びワルデンストレームマクログロブリン血症を含むが、これらに限定されない。

【0233】

脳腫瘍には、脳組織の癌が含まれる。脳腫瘍の例には、神経膠腫（例えば、神経膠芽腫、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫など）、髄膜腫、下垂体腺腫、及び前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍（髄芽細胞腫）が含まれるが、これらに限定されない。

【0234】

本発明の免疫複合体は、治療にて、単独で、または他の薬剤と組み合わせてのいずれかで使用することができる。例えば、本発明の免疫複合体は、化学療法剤のような少なくとも１つの追加の治療剤と共に同時投与され得る。このような併用療法は、組み合わせた投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）、及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、免疫複合体の投与は、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与の前、それと同時、及び／またはその後に生じ得る。免疫複合体はまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。

【0235】

本発明の免疫複合体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに局所療法のために所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、投与が短期であるか、または長期であるかに部分的に依存して、任意の適した経路、例えば、静脈内または皮下注入のような注入によることができる。単回投与または種々の時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス点滴を含むが、これらに限定されない種々の投薬スケジュールが本明細書にて企図される。

【0236】

本明細書に記載されている免疫複合体は、サシツズマブ、サシツズマブゴビテカン、それらのバイオ後発品、及びそれらのバイオベターと同じ種類のがん、特に乳癌、特にトリプルネガティブ（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、及び過剰なＨＥＲ２タンパク質の検査で陰性）乳癌、膀胱癌、及びメルケル細胞癌を治療するのに使用することができる。

【0237】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている免疫複合体は、膀胱癌、唾液腺癌、子宮内膜癌、尿路癌、尿路上皮癌、肺癌、非小細胞肺癌、メルケル細胞癌、結腸癌、大腸癌、胃癌、及び乳癌の治療にて効果的であってもよい。

【0238】

免疫複合体は、サシツズマブ、サシツズマブゴビテカン、それらのバイオ後続品、及びそれらのバイオベターに利用される投薬計画のような任意の好適な投薬計画を使用して、治療有効量でそれを必要とする対象に投与される。例えば、当該方法は、約１００ｎｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供するために免疫複合体を投与することを含むことができる。免疫複合体の用量は、約５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。免疫複合体の用量は、約１００、２００、３００、４００、または５００μｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体の用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体の用量は、特定の複合体、及び治療される癌の種類と重症度に応じて、これらの範囲外になることもある。投与の頻度は、１週当たり単回投与から複数回投与まで、またはより頻繁に及び得る。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、月に約１回から週に約５回まで投与される。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、週に１回投与される。

【0239】

別の態様では、本発明は、がんを防ぐための方法を提供する。この方法は、治療有効量の免疫複合体を（例えば、上記のような組成物として）対象に投与することを含む。特定の実施形態では、対象は、予防されるべき特定のがんに感受性である。例えば、この方法は、約１００ｎｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供するために免疫複合体を投与することを含むことができる。免疫複合体の用量は、約５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。免疫複合体の用量は、約１００、２００、３００、４００、または５００μｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体の用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体の用量は、特定の複合体、及び治療される癌の種類と重症度に応じて、これらの範囲外になることもある。投与の頻度は、１週当たり単回投与から複数回投与まで、またはより頻繁に及び得る。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、月に約１回から週に約５回まで投与される。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、週に１回投与される。

【0240】

本発明のいくつかの実施形態は、上記のようながんを治療するための方法を提供し、そこでがんは乳癌である。乳癌は乳房の様々な領域から生じる可能性があり、様々な種類の乳癌が特性評価されている。例えば、本発明の免疫複合体は、非浸潤性乳管癌；浸潤性乳管癌（例えば、乳房の管状癌、髄様癌、粘液癌、乳頭癌、または篩状癌）；非浸潤性小葉癌；浸潤性小葉癌；炎症性乳癌；トリプルネガティブ（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、及び過剰なＨＥＲ２タンパク質の検査で陰性）乳癌のような他の形態の乳癌を治療するために使用することができる。

【0241】

いくつかの実施形態では、がんはＳＴＩＮＧによって誘導される炎症誘発性応答に感受性である。

【実施例】

【0242】

ビス－ベンゾイミダゾール－リンカー（ＢＢＩ－Ｌ）式ＩＩの化合物及び中間体の調製
実施例３：（２Ｅ）－１－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－（３－ピペラジン－１－イルプロポキシ）－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、３の合成

【化28】

４－クロロ－３－メトキシ－５－ニトロ－ベンズアミド、３ｂの調製
４－クロロ－３－メトキシ－５－ニトロ－安息香酸メチルの溶液に、ＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ（１３６．５ｇ、９７３．７ｍｍｏｌ、１５０ｍＬ、純度２５％、１６．０当量）における３ａ（１５ｇ、６１．０ｍｍｏｌ、１当量）を加え、これを５０℃で２４時間撹拌した。混合物を濾過し、濾過ケーキを水（３００ｍＬ）で洗浄した。ケーキを減圧下で乾燥させて、オフホワイトの固形物として３ｂ（１１ｇ、４７．７０ｍｍｏｌ、収率７８．１１％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）δ８．２９（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ）。

【0243】

４－クロロ－３－ヒドロキシ－５－ニトロ－ベンズアミド、３ｃの調製
３ｂ（６ｇ、２６．０ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（１００ｍＬ）溶液に、ＡｌＣｌ_３（２１．０ｇ、１５６ｍｍｏｌ、８．５０ｍＬ、６当量）を加え、４０℃で１２時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、０℃での５０ｍＬの２ＭのＨＣｌ水溶液の添加によって反応を止め、次いで１５℃で３０分間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、淡黄色の固形物として３ｃ（４ｇ、粗製）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）δ１１．５２（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｓ，１Ｈ）。

【0244】

３－［３－［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシプロポキシ］－４－クロロ－５－ニトロ－ベンズアミド、３ｄの調製
３－ブロモプロパン－１－オール（２５ｇ、１８０．０ｍｍｏｌ、１６．０ｍＬ、１当量）のＴＨＦ混合物（２５０ｍＬ）に、イミダゾール（２５．０ｇ、３６０ｍｍｏｌ、２当量）及びＴＢＳＣｌ（３２．６ｇ、２１６ｍｍｏｌ、２６．５０ｍＬ、１．２当量）を加え、１５℃で２時間撹拌した。混合物を水（３００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；７０ｇのＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、０～１０％の酢酸エチル／石油エーテルの勾配の溶離液、１００ｍＬ／分）によって精製して、無色の油として３－ブロモプロポキシ－ｔｅｒｔ－ブチル－ジメチル－シラン（４３ｇ、１７０ｍｍｏｌ、収率９４．４０％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ３．７５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．５３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．１１－１．９９（ｍ，２Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．０８（ｓ，６Ｈ）。

【0245】

３－ブロモプロポキシ－ｔｅｒｔ－ブチル－ジメチル－シラン（１９．８ｇ、７８．０ｍｍｏｌ、１．３当量）のＤＭＦ（２００ｍＬ）溶液に、３ｃ（１３ｇ、６０．０ｍｍｏｌ、１当量）及びＫ_２ＣＯ_３（１６．６０ｇ、１２０．０ｍｍｏｌ、２当量）を１５℃にて加え、１００℃で２時間撹拌した。混合物を水（６００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（２００ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；３５ｇのＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、０～５０％の酢酸エチル／石油エーテル勾配の溶離液、６５ｍＬ／分）によって精製し、淡黄色の固形物として３ｄ（２４ｇ、粗製）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）δ８．２８（ｓ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），４．２９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．０１－１．９３（ｍ，２Ｈ），０．８３（ｓ，９Ｈ），０．０１（ｓ，６Ｈ）。

【0246】

４－クロロ－３－（３－ヒドロキシプロポキシ）－５－ニトロ－ベンズアミド、３ｅの調製
３ｄ（２４ｇ、６１．７ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（３００ｍＬ）溶液に塩化アセチル（４８．４ｇ、６１７ｍｍｏｌ、４４．０ｍＬ、１０当量）を加え、それを１５℃で２時間撹拌した。固体のＮａＨＣＯ_３を徐々に添加することによって混合物のｐＨを約８に調節し、次いで濾過し、及び濃縮して、淡黄色の固形物として３ｅ（１５ｇ、５４．６１ｍｍｏｌ、収率８８．５０％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）δ８．３５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），４．６４（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６４－３．５２（ｍ，２Ｈ），１．９７－１．８９（ｍ，２Ｈ）。

【0247】

４－メチルベンゼンスルホン酸３－（５－カルバモイル－２－クロロ－３－ニトロ－フェノキシ）プロピル、３ｆの調製
３ｅ（１５ｇ、５４．６ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）溶液に、Ｅｔ_３Ｎ（２７．６ｇ、２７３ｍｍｏｌ、３８．０ｍＬ、５当量）、ＤＭＡＰ（６６７ｍｇ、５．５ｍｍｏｌ、０．１当量）及びＴｓＣｌ（１１．６０ｇ、１６４ｍｍｏｌ、３当量）を加え、１５℃で１２時間撹拌した。混合物を水（３００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；４０ｇＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、４５ｍＬ／分で０～８０％酢酸エチル／石油エーテルの勾配の溶離液）によって精製して、淡黄色の固形物として３ｆ（２０ｇ、４６．６ｍｍｏｌ、収率８５．３９％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）δ８．２８（ｓ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），７．７５－７．６９（ｍ，３Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），４．２２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），４．１３（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．１５－２．０７（ｍ，２Ｈ）。

【0248】

４－［３－（５－カルバモイル－２－クロロ－３－ニトロ－フェノキシ）プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、３ｇの調製
３ｆ（１３．５ｇ、３１．５ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）溶液に、Ｅｔ_３Ｎ（６．４０ｇ、６３．０ｍｍｏｌ、８．８０ｍＬ、２当量）及びピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル；塩酸塩（９．８０ｇ、４４．０ｍｍｏｌ、１．４当量）を加え、８０℃で１２時間撹拌した。混合物を水（３００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；２０ｇのＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、４５ｍＬ／分で０～８０％の酢酸エチル／石油エーテル勾配の溶離液）によって精製し、淡黄色の固形物として３ｇ（１０ｇ、２２．５８ｍｍｏｌ、収率７１．７２％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）δ８．２８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），４．２７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．３０（ｂｒ ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，４Ｈ），２．４８－２．４４（ｍ，２Ｈ），２．３２（ｂｒ ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，４Ｈ），１．９５（ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ）。

【0249】

【化29-1】

【化29-2】

２－［（Ｅ）－４－ブロモブタ－２－エニル］イソインドリン－１，３－ジオン、３ｈの調製
（１，３－ジオキソイソインドリン－２－イル）カリウム（３３．６ｇ、１８１ｍｍｏｌ、０．８当量）のＤＭＦ（３００ｍＬ）溶液に、（Ｅ）－１，４－ジブロモブタ－２－エン（４８．５ｇ、２２７ｍｍｏｌ、１当量）を加え、１５℃で１２時間撹拌した。混合物を水（１０００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（３００ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；１００ｇのＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、０～６０％の酢酸エチル／石油エーテル勾配の溶離液、６５ｍＬ／分）によって精製し、白色の固形物として２－［（Ｅ）－４－ブロモブタ－２－エニル］イソインドリン－１，３－ジオン（５０ｇ、１７８ｍｍｏｌ、収率７８．７２％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ７．８９－７．８３（ｍ，２Ｈ），７．７７－７．６９（ｍ，２Ｈ），６．００－５．９０（ｍ，１Ｈ），５．８８－５．７９（ｍ，１Ｈ），４．３５－４．２８（ｍ，２Ｈ），３．９３－３．８８（ｍ，２Ｈ）。

【0250】

Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－Ｎ－［（Ｅ）－４－（１，３－ジオキソイソインドリン－２－イル）ブタ－２－エニル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル、３ｉの調製
３ｈ（５０ｇ、１７８ｍｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（５００ｍＬ）溶液に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（８７．２ｇ、２６８ｍｍｏｌ、１．５当量）及びＮ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（５０．０ｇ、２３２ｍｍｏｌ、１．３当量）を加え、１５℃で１２時間撹拌した。混合物を水（２０００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（５００ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；１００ｇのＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、６５ｍＬ／分で０～７０％酢酸エチル／石油エーテルの勾配の溶離液）によって精製し、白色の固形物として３ｉ（４６．５ｇ、１１２ｍｍｏｌ、収率６２．５５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、４００ＭＨｚ）δ７．８７－７．８２（ｍ，２Ｈ），７．７５－７．６９（ｍ，２Ｈ），５．８２－５．６３（ｍ，２Ｈ），４．２７（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），４．１４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），１．４６（ｓ，１８Ｈ）。

【0251】

Ｎ－［（Ｅ）－４－アミノブタ－２－エニル］－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル、３ｊの調製
３ｉ（４６．５ｇ、１１２ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（５００ｍＬ）溶液に、２０℃にてヒドラジン；水和物（１９．７ｇ、３３５ｍｍｏｌ、１９．０ｍＬ、純度８５％、３当量）を加え、７０℃で３時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。粗生成物を１５℃にて２０分間ＭＴＢＥでトリチュレートし、濾液を濃縮して、淡黄色の油として３ｊ（３３ｇ、粗製）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ５．７９－５．６９（ｍ，１Ｈ），５．６６－５．５５（ｍ，１Ｈ），４．１５（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１．２Ｈｚ，２Ｈ），３．２９（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．２，Ｈｚ，２Ｈ），１．５０（ｓ，１８Ｈ）

【0252】

Ｎ－［（Ｅ）－４－（４－カルバモイル－２－メトキシ－６－ニトロ－アニリノ）ブタ－２－エニル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル、３ｋの調製
４－クロロ－３－メトキシ－５－ニトロ－ベンズアミド、３ｂ（５ｇ、２１．７ｍｍｏｌ、１．０当量）及び３ｊ（１８．６ｇ、６５．１ｍｍｏｌ、３．０当量）のＤＩＥＡ（１１．２１ｇ、８６．７３ｍｍｏｌ、１５．１１ｍＬ、４．０当量）混合物（ニート反応）を１１０℃で５．５時間撹拌した。次に、反応混合物を２５℃に冷却し、酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え、１０分間撹拌した後、氷水（１００ｍＬ）に注ぎ、１０分間撹拌し、混合物から所望の固形物を沈殿させ、次いで濾過し、橙色の固形物として３ｋ（１０ｇ、粗製）を得た。

【0253】

４－［［（Ｅ）－４－アミノブタ－２－エニル］アミノ］－３－メトキシ－５－ニトロ－ベンズアミド、３ｌの調製
ＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ）中の３ｋ（１０ｇ、２６．２９ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に１５℃にてＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１９７ｍＬ、３０当量）を加え、次いで１５℃にて１時間撹拌した。混合物を濃縮し、赤色の固形物として３ｌ（８．５ｇ、２４．０７ｍｍｏｌ、収率９１．５４％、２ＨＣｌ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．２１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｓ，４Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｓ，１Ｈ），５．９１－５．８４（ｍ，１Ｈ），５．６６－５．６１（ｍ，１Ｈ），４．１７（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．３９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）。

【0254】

４－［３－［５－カルバモイル－２－［［（Ｅ）－４－（４－カルバモイル－２－メトキシ－６－ニトロ－アニリノ）ブタ－２－エニル］アミノ］－３－ニトロ－フェノキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、３ｍの調製
３ｌ（５．３１ｇ、１５．０ｍｍｏｌ、１．２６当量、２ＨＣｌ）のブタン－１－オール（１０６．００ｍＬ）溶液に、ＮａＨＣＯ_３（５．０３ｇ、５９．８ｍｍｏｌ、２．３３ｍＬ、５当量）及びＤＩＥＡ（７．７３ｇ、５９．８ｍｍｏｌ、１０．４ｍＬ、５当量）を加えた。混合物を２０℃で３０分間撹拌し、次いでＮ_２のもとで２０℃にて４－［３－（５－カルバモイル－２－クロロ－３－ニトロフェノキシ）プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、３ｇ（５．３ｇ、１１．９７ｍｍｏｌ、１当量）を加え、混合物を１２０℃で１２時間撹拌した。反応混合物を真空にて濃縮し、残留物を得た。残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）及び氷水（２００ｍＬ）で希釈し、これを１０分間撹拌した。沈殿物を濾過して、赤色の固形物として３ｍ（１４ｇ、粗製）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）δ８．１５（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．６Ｈｚ，２Ｈ），８．０３（ｓ，２Ｈ），７．８１－７．６５（ｍ，３Ｈ），７．５３－７．４７（ｍ，２Ｈ），７．３３（ｓ，２Ｈ），５．６５－５．５５（ｍ，２Ｈ），４．１２－４．１０（ｍ，２Ｈ），４．０８－３．９７（ｍ，４Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．３０－３．２７（ｍ，４Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３１－２．２４（ｍ，４Ｈ），１．９３－１．８２（ｍ，２Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）。

【0255】

４－［３－［３－アミノ－２－［［（Ｅ）－４－（２－アミノ－４－カルバモイル－６－メトキシ－アニリノブタ－２－エニル］アミノ］－５－カルバモイル－フェノキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、３ｎの調製
３ｍ（１０．５ｇ、１５．０ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）、ＴＨＦ（５０ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）との溶液に、ＮａＨＣＯ_３（６．５ｇ、７６．０ｍｍｏｌ、３．０ｍＬ、５当量）及び亜ジチオン酸二ナトリウムＮａ_２Ｓ_２Ｏ_４（４０．０ｇ、２２９ｍｍｏｌ、１５当量）を加え、これを２０℃で５時間撹拌した。混合物を水（２００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ：ｉ－ＰｒＯＨ＝３：１（１００ｍＬ×６）で抽出した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、黄色の固形物として３ｎ（４．６ｇ、７．３４ｍｍｏｌ、収率４８．００％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ６．９４－６．９１（ｍ，２Ｈ），６．８８－６．８３（ｍ，２Ｈ），５．７７－５．６４（ｍ，２Ｈ），４．００（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），３．５６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），３．５１（ｂｒ ｓ，４Ｈ），２．８９－２．６４（ｍ，６Ｈ），２．１１－２．０２（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）

【0256】

イソチオシアン酸２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニルの調製

【化30】

２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボン酸（６ｇ、３９．０ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＥ（６０ｍＬ）溶液に、０℃にてＮ_２のもとで塩化チオニル、ＳＯＣｌ_２（２３．０ｇ、１９５ｍｍｏｌ、１４．０ｍＬ、５当量）を加え、８０℃で１２時間撹拌した。この混合物を濃縮して、無色の油として塩化２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル（８ｇ、粗製）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、４００ＭＨｚ）δ６．９１（ｓ，１Ｈ），４．４５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．４１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。

【0257】

チオシアナトカリウム（４．０ｇ、４１．７ｍｍｏｌ、４．０ｍＬ、１．２当量）のアセトン（２０ｍＬ）溶液に、Ｎ_２のもとで塩化２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル（６ｇ、３４．８ｍｍｏｌ、１当量）を加え、０℃で１時間撹拌した。混合物を濾過して、濃縮した。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；１０ｇのＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、０～４０％の酢酸エチル／石油エーテルの勾配の溶離液、４５ｍＬ／分）によって精製し、淡黄色の油としてイソチオシアン酸２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル（５．５ｇ、２８．１７ｍｍｏｌ、収率８１．０４％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、４００ＭＨｚ）δ６．７３（ｓ，１Ｈ），４．５０（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），１．４１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。

【0258】

４－［３－［６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシプロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、３ｏの調製
３ｎ（５００ｍｇ、７９８ｕｍｏｌ（マイクロモル）、１当量）及びイソチオシアン酸２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル（３２７ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ、２．１当量）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液を０℃で３０分間撹拌し、次いでＥｔ３Ｎ（５６５ｍｇ、５．６０ｍｍｏｌ、７７７ｕＬ、７当量）及びＥＤＣＩ（７６５．０ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ、５当量）を加え、この混合物を１５℃でさらに１２時間撹拌した。残留物をＮａＨＣＯ_３（３０ｍＬ）の飽和水溶液に注ぎ、濾過し、ケーキをＨ_２Ｏ（１０ｍＬ×３）で洗浄し、乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を２０℃にて２０分間ＣＨ_３ＣＮでトリチュレートし、淡黄色の固形物として３ｏ（５００ｍｇ、５２７ｕｍｏｌ、収率６６．０４％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．５８（ｄ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２９－７．１７（ｍ，２Ｈ），６．６３－６．５２（ｍ，２Ｈ），５．８９－５．７６（ｍ，２Ｈ），５．００（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝４．４，８．８Ｈｚ，４Ｈ），４．６４－４．５５（ｍ，４Ｈ），３．８９（ｂｒ ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．３７－３．３３（ｍ，４Ｈ），２．３９－２．３３（ｍ，２Ｈ），２．２９－２．２６（ｍ，４Ｈ），２．０３（ｓ，６Ｈ），１．７８－１．６７（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．３８－１．３２（ｍ，６Ｈ）。

【0259】

３の調製
３ｏ（５０ｍｇ、４７．０ｕｍｏｌ、１当量、ＴＦＡ）のＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１１．０ｍＬ）を加え、これを１５℃にて１時間撹拌した。この混合物を濃縮し、次いで凍結乾燥して、淡黄色の固形物として３（３９ｍｇ、４２．３ｕｍｏｌ、収率８９．９５％、２ＨＣｌ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．６６（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），６．６６（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，２Ｈ），６．００（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８８－５．７８（ｍ，１Ｈ），５．１３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，４Ｈ），４．６９－４．５９（ｍ，４Ｈ），４．１９－４．０７（ｍ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．６９（ｂｒ ｓ，８Ｈ），３．４３－３．３７（ｍ，２Ｈ），２．２３（ｓ，６Ｈ），２．２２－２．１５（ｍ，２Ｈ），１．４４－１．３５（ｍ，６Ｈ）。ＨＰＬＣ：９５．０９９％（２２０ｎｍ）。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_４２Ｈ_５２Ｎ_１４Ｏ_６の質量計算値８４８．４２、ｍ／ｚ観察値８４９．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0260】

実施例Ｌ－１：３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［４－［３－［［（２Ｅ）－６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシ］プロピル］ピペラジン－１－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（２，３，５，６－テトラフルオロフェニル）、ＢＢＩ－Ｌ－１の合成

【化31】

３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ｔｅｒｔ－ブチル（５ｇ、８．５２ｍｍｏｌ、１当量）と（４－ニトロフェニル）カルボノクロリデート（１．８９ｍｇ、９．３７ｍｍｏｌ、１．１当量）との混合物に０℃にてピリジン（１．０１ｍｇ、１２．８ｍｍｏｌ、１．０３ｍＬ、１．５当量）を加え、次いで２５℃にて２時間撹拌した。この混合物を氷水（ｗ／ｗ＝１／１）（１００ｍＬ）に注ぎ、１０分間撹拌し、ＨＣｌ（１Ｍ）で混合物のｐＨを約４に調整した。水性相をＤＣＭ（５０ｍＬ×２）で抽出し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、真空にて濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（カラムの高さ２５０ｍｍ、直径１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、０／１，酢酸エチル／メタノール＝１／０，２／１）によって精製し、無色の油として３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ｔｅｒｔ－ブチル（３ｇ、３．９９ｍｍｏｌ、収率４６．８２％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ８．３６－８．２８（ｍ，２Ｈ），７．５４－７．４６（ｍ，２Ｈ），４．４６－４．４０（ｍ，２Ｈ），３．８３－３．７７（ｍ，２Ｈ），３．７２－３．５７（ｍ，４０Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）

【0261】

【化32】

３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［４－［３－［［（２Ｅ）－６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシ］プロピル］ピペラジン－１－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－１ａの調製
ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の（２Ｅ）－１－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－（３－ピペラジン－１－イルプロポキシ）－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、３（７０ｍｇ、７９．１ｕｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）と、３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ｔｅｒｔ－ブチル（５５．５ｍｇ、９４．８ｕｍｏｌ、１．２当量）との混合物に、１５℃にてＮａＢＨ_３ＣＮ（１４．９ｍｇ、２３７ｕｍｏｌ、３当量）を一気に加えた。混合物を１５℃で１６時間攪拌した。次いで、これを３５℃にて減圧下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０μｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％～４０％、１０分）によって精製し、黄色の固形物としてＬ－１ａ（８０ｍｇ、５６．４３ｕｍｏｌ、収率７１．３８％）を得た。

【0262】

３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［４－［３－［［（２Ｅ）－６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシ］プロピル］ピペラジン－１－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、Ｌ－１ｂの調製
Ｈ_２Ｏ（２ｍＬ）中のＬ－１ａ（８０ｍｇ、５２．２ｕｍｏｌ、１当量、ＴＦＡ）の混合物に、１５℃にてＨＣｌ（１２Ｍ、６５．３ｕＬ、１５当量）を加えた。この混合物を８０℃で１時間撹拌し、次いで５０℃にて減圧下で濃縮して、淡黄色の油としてＬ－１ｂ（８０ｍｇ、粗製、ＨＣｌ）を得た。

【0263】

ＢＢＩ－Ｌ－１の調製
ＤＣＭ（０．３ｍＬ）及びＤＭＡ（０．０３ｍＬ）中のＬ－１ｂ（６８．１ｍｇ、５０．０７ｕｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）の混合物に１５℃にて２，３，５，６－テトラフルオロフェノール（６６．５ｍｇ、４００ｕｍｏｌ、８当量）及びＥＤＣＩ（９６．０ｍｇ、５０１ｕｍｏｌ、１０当量）を一気に加えた。この混合物を１５℃で３０分間撹拌した。次いで、これを３５℃にて減圧下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０μｍ（ミクロン）；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、８分）によって精製し、淡黄色の油としてＢＢＩ－Ｌ－１（１７．４ｍｇ、１０．７２ｕｍｏｌ、収率２１．４０％、ＴＦＡ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．６３（ｓ，１Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），７．４８－７．３７（ｍ，１Ｈ），７．３３（ｓ，１Ｈ），７．３０（ｓ，１Ｈ），６．６５（ｓ，１Ｈ），６．５９（ｓ，１Ｈ），５．８７（ｓ，２Ｈ），５．１０－５．００（ｍ，４Ｈ），４．７４－４．５５（ｍ，４Ｈ），４．００（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．８９－３．８２（ｍ，４Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．７３－３．５６（ｍ，４２Ｈ），３．２８－３．２１（ｍ，２Ｈ），３．１５（，２Ｈ），２．９７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７９（ｓ，２Ｈ），２．６３－２．５５（ｍ，２Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），１．７９－１．７７（ｍ２Ｈ），１．４４－１．３２（ｍ，６Ｈ）。ＨＰＬＣ：９６．０８％（２２０ｎｍ）。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_７１Ｈ_９６Ｆ_４Ｎ_１４Ｏ_１６の質量計算値１５０８．７０、ｍ／ｚ観察値１５０９．５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0264】

実施例Ｌ－３：４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［４－［３－［［（２Ｅ）－６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシ］プロピル］ピペラジン－１－イル］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＢＢＩ－Ｌ－３の合成

【化33-1】

【化33-2】

３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［４－［３－［［（２Ｅ）－６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシ］プロピル］ピペラジン－１－イル］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－３ａの調製
（２Ｅ）－１－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－（３－ピペラジン－１－イルプロポキシ）－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、３（１８０ｍｇ、２０３ｕｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）のＤＭＦ（３．００ｍＬ）溶液に、Ｅｔ_３Ｎ（８２．０ｍｇ、８１３ｕｍｏｌ、１１３ｕＬ、４当量）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（３－ｔｅｒｔ－ブトキシ－３－オキソ－プロポキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（２，３，５，６－テトラフルオロフェニル）（１７１ｍｇ、２２３ｕｍｏｌ、１．１当量）を加え、次いで０℃にて１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を得た。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、８分）によって精製し、淡黄色の固形物としてＬ－３ａ（２８０ｍｇ、１９４ｕｍｏｌ、収率９５．３％）を得た。

【0265】

３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［４－［３－［［（２Ｅ）－６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシ］プロピル］ピペラジン－１－イル］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、Ｌ－３ｂの調製
Ｈ_２Ｏ（３．００ｍＬ）中のＬ－３ａ（２８０ｍｇ、１９４ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＨＣｌ（１２Ｍ、０．２０ｍＬ、１２．４当量）を加え、次いで８０℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を得た。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％～３０％，８分）によって精製し、淡黄色の固形物としてＬ－３ｂ（１００ｍｇ、６６．５１ｕｍｏｌ、収率３４．３４％、ＴＦＡ）を得た。

【0266】

ＢＢＩ－Ｌ－３の調製
ＤＣＭ（２．００ｍＬ）及びＤＭＡ（０．１０ｍＬ）中のＬ－３ｂ（１００ｍｇ、７１．９ｕｍｏｌ、１当量）及び（２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）スルホニルオキシナトリウム（７７．０ｍｇ、２８８ｕｍｏｌ、４当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（５５．０ｍｇ、２８８ｕｍｏｌ、４当量）を加え、次いで２０℃にて１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を得た。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４０％、８分）によって精製し、淡黄色の固形物としてＢＢＩ－Ｌ－３（２８ｍｇ、１６．１７ｕｍｏｌ、収率２２．４７％、ＴＦＡ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．６６－７．５８（ｍ，２Ｈ），７．２８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，２Ｈ），６．６０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ），５．８５－５．７８（ｍ，２Ｈ），５．０６－４．９７（ｍ，４Ｈ），４．７０－４．５１（ｍ，４Ｈ），４．３４－４．２３（ｍ，２Ｈ），４．０５－３．９８（ｍ，２Ｈ），３．８６－３．８０（ｍ，２Ｈ），３．７８－３．６６（ｍ，５Ｈ），３．６４－３．４７（ｍ，３８Ｈ），３．３８－３．３２（ｍ，２Ｈ），３．１８－３．０７（ｍ，２Ｈ），２．９４（ｂｒ ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，６Ｈ），２．５７－２．４５（ｍ，２Ｈ），２．２８－２．１４（ｍ，６Ｈ），２．１０－２．０３（ｍ，２Ｈ），１．４３－１．３０（ｍ，６Ｈ）。ＨＰＬＣ：９６．２１％（２２０ｎｍ）、９７．９５％（２５４ｎｍ）。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_７２Ｈ_９６Ｆ_４Ｎ_１４Ｏ_２２Ｓの質量計算値：１６１６．６５、ｍ／ｚ観察値１６１７．５［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0267】

実施例Ｌ－９：４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［４－［３－［６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシプロピル］ピペラジン－１－イル］エチルカルバモイルオキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＢＢＩ－Ｌ－９の合成

【化34】

Ｎ－［２－［４－［３－［６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシプロピル］ピペラジン－１－イル］エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－９ａの調製
１－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－（３－ピペラジン－１－イルプロポキシ）ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、３（５３０ｍｇ、４９６ｕｍｏｌ、１．０当量、２ＨＣｌ）、及びＮ－（２－オキソエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（３９５ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ、５．０当量）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）溶液に酢酸、ＡｃＯＨ（２．９８ｍｇ、４９．６ｕｍｏｌ、２．８４ｕＬ、０．１当量）を加え、それを２０℃で０．５時間撹拌した。０℃にてシアノホウ化水素ナトリウム、ＮａＢＨ_３ＣＮ（６２．４ｍｇ、９９３ｕｍｏｌ、２．０当量）を加え、この混合物を２０℃でさらに１時間撹拌した。この反応混合物に、０℃にてＨ_２Ｏ（１ｍＬ）を加えて反応を止め、次いで飽和ＮａＨＣＯ_３によって混合物のｐＨを８に調整した。水性相を酢酸エチルで抽出した（１０ｍＬ×５）。合わせた有機相をブライン（２０ｍＬ×１）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、真空にて濃縮した。粗生成物を２０℃にて１０分間ＭＴＢＥでトリチュレートし、黄色の固形物としてＬ－９ａ（６００ｍｇ、４５０ｕｍｏｌ、収率９０．６０％）を得た。

【0268】

１－［（Ｅ）－４－［７－［３－［４－（２－アミノエチル）ピペラジン－１－イル］プロポキシ］－５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、Ｌ－９ｂの調製
Ｌ－９ａ（２０ｍｇ、２０．２ｕｍｏｌ、１．０当量）のＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１ｍＬ）を加え、次いで２０℃で１時間撹拌した。混合物を真空にて濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％，８分）によって精製し、黄色の固形物としてＬ－９ｂ（５ｍｇ、４．０５ｕｍｏｌ、収率２０．１０％、３ＴＦＡ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ７．６０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．５９（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，２Ｈ），５．８０（ｓ，２Ｈ），５．０６－５．００（ｍ，４Ｈ），４．６７－４．５３（ｍ，４Ｈ），４．０５－３．９５（ｍ，４Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．３３－３．８０（ｍ，１０Ｈ），２．７５－２．７０（ｍ，２Ｈ），２．５２－２．４５（ｍ，２Ｈ），２．２１（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，６Ｈ），２．１０－１．９１（ｍ，２Ｈ），１．４０－１．３２（ｍ，６Ｈ）。ＨＰＬＣ：１００．００％（２２０ｎｍ）。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_４４Ｈ_５７Ｎ_１５Ｏ_６についての質量計算値８９１．４６、ｍ／ｚ観察値８９２．４［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0269】

３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［４－［３－［６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシプロピル］ピペラジン－１－イル］エチルカルバモイルオキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－９ｃの調製
Ｌ－９ｂ（１５０ｍｇ、１４５ｕｍｏｌ、１当量、４ＨＣｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、Ｅｔ_３Ｎ（５８．５ｍｇ、５７８ｍｍｏｌ、８０．５ｕＬ、４．０当量）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１２０ｍｇ、１５９ｕｍｏｌ、１．１当量）を加えた。混合物を２０℃で１時間撹拌した。水（５ｍＬ）を混合物に加え、１０分間撹拌した。水性相をＤＣＭ／ｉ－ＰｒＯＨ＝３／１（５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、真空にて濃縮し、黄色の油としてＬ－９ｃ（１５０ｍｇ、８１．２ｕｍｏｌ、収率５６．２０％）を得た。

【0270】

３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［４－［３－［６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシプロピル］ピペラジン－１－イル］エチルカルバモイルオキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、Ｌ－９ｄの調製
ＭｅＣＮ（０．５ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（２ｍＬ）中のＬ－９ｃ（１５０ｍｇ、８１．２ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液にＴＦＡ（９２．６ｍｇ、８１２ｕｍｏｌ、６０．１ｕＬ、１０当量）を加え、次いで８０℃で１時間撹拌した。混合物を濾過した。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４０％、８分）によって精製し、黄色の油としてＬ－９ｄ（１００ｍｇ、５５．８ｕｍｏｌ、収率６８．７％、３ＴＦＡ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ７．５９（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，２Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝１９．２Ｈｚ，２Ｈ），６．６５－６．５６（ｍ，２Ｈ），５．８３（ｓ，２Ｈ），５．０２（ｓ，４Ｈ），４．６９－４．４９（ｍ，４Ｈ），４．２１（ｓ，２Ｈ），４．０１－３．９１（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．７３－３．６７（ｍ，６Ｈ），３．６４－３．５７（ｍ，３６Ｈ），３．４３－３．３５（ｍ，２Ｈ），２．９８－２．９２（ｍ，４Ｈ），２．７８－２．７０（ｍ，４Ｈ），２．５３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．２６－２．１６（ｍ，６Ｈ），１．８３－１．７９（ｍ，２Ｈ），１．３９－１．３２（ｍ，６Ｈ）。

【0271】

ＢＢＩ－Ｌ－９の調製
ＤＣＭ（２ｍＬ）及びＤＭＡ（１ｍＬ）中のＬ－９ｄ（１００ｍｇ、５５．８ｕｍｏｌ、１．０当量、３ＴＦＡ）の溶液に（２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）スルホニルオキシナトリウム（５９．９ｍｇ、２２３ｕｍｏｌ、４．０当量）及びＥＤＣＩ（４２．８ｍｇ、２２３ｕｍｏｌ、４．０当量）を加えた。混合物を２０℃で１時間撹拌した。混合物を真空にて濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～３５％，８分）によって精製し、黄色の固形物としてＢＢＩ－Ｌ－９（４３ｍｇ、２２．６ｕｍｏｌ、収率４０．４２％、２ＴＦＡ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ７．５９（ｄ，Ｊ＝１８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝２２．８Ｈｚ，２Ｈ），６．５７（ｄ，Ｊ＝２２．４Ｈｚ，２Ｈ），５．８６－５．７２（ｍ，２Ｈ），５．０２－４．９５（ｍ，４Ｈ），４．６５－４．５０（ｍ，４Ｈ），４．１９（ｓ，２Ｈ），４．００－３．９４（ｍ，２Ｈ），３．８４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．６９－３．５４（ｍ，４０Ｈ），３．４８－３．４２（ｍ，４Ｈ），３．２４－３．０７（ｍ，６Ｈ），２．９５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．１９（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，６Ｈ），１．９５－１．９０（ｍ，２Ｈ），１．３９－１．３０（ｍ，６Ｈ）。ＨＰＬＣ：１００．００％（２２０ｎｍ）、ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_７４Ｈ_１０１Ｆ_４Ｎ_１５Ｏ_２３Ｓについての質量計算値１６７５．６９、ｍ／ｚ観察値１６７６．６［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0272】

実施例Ｌ－１３：４－［３－［［（２Ｅ）－６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルアミノ］プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル、ＢＢＩ－Ｌ－１３の合成

【化35-1】

【化35-2】

【0273】

２－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）ピロリジン－１，２－ジカルボン酸（Ｓ）－１－（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル）、１３ｂの調製
（２Ｓ）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル）ピロリジン－２－カルボン酸、１３ａ（１５ｇ、４４．５ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（２００ｍＬ）溶液に、１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（５．１２ｇ、４４．５ｍｍｏｌ、１．０当量）及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ＥＤＣＩ、ＥＤＡＣ、ＥＤＣ，ＣＡＳ登録番号２５９５２－５３－８（１０．２ｇ、５３．４４ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、２０℃で１２時間撹拌した。混合物をＮａＨＣＯ_３の飽和水溶液（７０ｍＬ×３）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濃縮して、白色固形物として１３ｂ（１７．５ｇ、４０．２８ｍｍｏｌ、収率９０．６０％）を得た。

【0274】

（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル）ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタン酸、１３ｃの調製
（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタン酸、Ｌ－バリン（４．９５ｇ、４２．３ｍｍｏｌ、１．０５当量）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液に、Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）中のＮａＨＣＯ_３（３．５５ｇ、４２．３ｍｍｏｌ、１．６４ｍＬ、１．０５当量）及び１３ｂ（１７．５ｇ、４０．２８ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、これを２０℃で１２時間撹拌した。この混合物をＭＴＢＥ（２×１００ｍＬ）で抽出した（廃棄）。水性層のｐＨをＨＣｌ（６Ｍ）で５～６に調整し、ＥｔＯＡｃ（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濃縮し、白色の固形物として１３ｃ（１５ｇ、３４．３６ｍｍｏｌ、収率８５．３１％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．８０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．７０－７．５４（ｍ，２Ｈ），７．４３－７．２８（ｍ，４Ｈ），４．４９－４．１５（ｍ，５Ｈ），３．６９－３．３８（ｍ，２Ｈ），２．４２－２．０１（ｍ，３Ｈ），２．００－１．８２（ｍ，２Ｈ），１．０１－０．８６（ｍ，６Ｈ）。

【0275】

９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（２Ｓ）－２－［［（１Ｓ）－１－［［４－（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］ピロリジン－１－カルボン酸塩、１３ｄの調製
ＭｅＯＨ（８０ｍＬ）及びＤＣＭ（８０ｍＬ）中の１３ｃ（１０ｇ、２２．９ｍｍｏｌ、１．０当量）及び（４－アミノフェニル）メタノール（４．２３ｇ、３４．４ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液に、２－エトキシ－１－エトキシカルボニル－１，２－ジヒドロキノリン、ＥＥＤＱ、ＣＡＳ登録番号１６３５７－５９－８（８．５０ｇ、３４．３６ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、次いで２０℃で１２時間撹拌した。混合物を真空にて濃縮して残留物を得て、残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（シリカフラッシュカラム、０～４０％の酢酸エチル／ＭｅＯＨの溶離液、６５ｍＬ／分）によって精製し、黄色の固形物として１３ｄ（１３ｇ、２４．０ｍｍｏｌ、収率５２．３８％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．８５－７．７１（ｍ，２Ｈ），７．６８－７．４８（ｍ，３Ｈ），７．４７－７．１６（ｍ，７Ｈ），４．５３（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，２Ｈ），４．４９－４．４１（ｍ，１Ｈ），４．４０－４．３３（ｍ，２Ｈ），４．３２－４．２７（ｍ，１Ｈ），４．２６－４．１７（ｍ，１Ｈ），４．１６－４．０７（ｍ，１Ｈ），３．６９－３．３８（ｍ，２Ｈ），２．４０－２．０５（ｍ，２Ｈ），１．９９－１．８２（ｍ，２Ｈ），１．０８－０．８８（ｍ，６Ｈ）。

【0276】

（２Ｓ）－Ｎ－［（１Ｓ）－１－［［４－（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］ピロリジン－２－カルボキサミド、１３ｅの調製
１３ｄ（１３ｇ、２４．０ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（１３０ｍＬ）溶液に、ピペリジン（１０．２２ｇ、１２０ｍｍｏｌ、１１．８５ｍＬ、５．０当量）を加え、次いで２０℃で２時間撹拌した。この混合物を濃縮して残留物を得て、残留物を２０℃にて２０分間ＥｔＯＡｃでトリチュレートし、白色の固形物として７ｅ（８ｇ、粗製）を得た。

【0277】

Ｎ－［（１Ｓ）－２－［（２Ｓ）－２－［［（１Ｓ）－１－［［４－（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］ピロリジン－１－イル］－１－メチル－２－オキソ－エチル］カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル、１３ｆの調製
（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパン酸（３．９５ｇ、１２．６８ｍｍｏｌ、１．５当量）のＤＭＦ（３０ｍＬ）溶液に、ヘキサフルオロリン酸１－ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシド、ヘキサフルオロリン酸アザベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム、ＨＡＴＵ、ＣＡＳ登録番号１４８８９３－１０－１（４．８２ｇ、１２．６８ｍｍｏｌ、１．５当量）及びＤＩＰＥＡ（３．２８ｇ、２５．３６ｍｍｏｌ、４．４２ｍＬ、３当量）を０℃で加えた。添加後に、この混合物をこの温度で５分間撹拌し、次いで１３ｅ（２．７ｇ、８．４５ｍｍｏｌ、１当量）を０℃で加え、次いで得られた混合物を０℃で２５分間撹拌した。反応混合物にＨ_２Ｏ（１５０ｍＬ）を加えることによって反応を止め、次にＥｔＯＡｃ（７０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍｌ×３）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～０：１）、次いで（ＳｉＯ_２、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ＝１：０～１０：１）によって精製し、オフホワイトの固形物として１３ｆ（２．９４ｇ、４．８０ｍｍｏｌ、収率５６．７６％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ－ｄ_４、４００ＭＨｚ）δ７．７９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．６６（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．３５－７．２６（ｍ，４Ｈ），４．５９－４．５１（ｍ，３Ｈ），４．５０－４．４０（ｍ，１Ｈ），４．３９－４．３０（ｍ，２Ｈ），４．２９－４．１８（ｍ，２Ｈ），３．８３－３．７１（ｍ，１Ｈ），３．６８－３．６３（ｍ，１Ｈ），２．３１－２．０９（ｍ，２Ｈ），２．０７－１．９１（ｍ，３Ｈ），１．３６（ｄｄ，Ｊ＝６．４，９．６，Ｈｚ，４Ｈ），１．０３（ｄｄ，Ｊ＝４．０，６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

【0278】

炭酸［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル（４－ニトロフェニル）、１３ｇの調製
１３ｆ（２．４ｇ、３．９２ｍｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、炭酸ビス（４－ニトロフェニル）（２．３８ｇ、７．８３ｍｍｏｌ、２当量）及びＤＩＰＥＡ（１．０１ｇ、７．８３ｍｍｏｌ、１．３６ｍＬ、２当量）を加え、次いで２０℃で１時間撹拌した。反応混合物に０℃でＨ_２Ｏ（１００ｍＬ）を加えることによって反応を止め、次にＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍｌ×３）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル：酢酸エチル）＝１：０～０：１）によって精製し、白色の固形物として１３ｇ（２．７ｇ、３．４７ｍｍｏｌ、収率８８．６２％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ８．３２－８．２２（ｍ，３Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．６７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．４６－７．２９（ｍ，８Ｈ），７．１８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．６０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），５．２５（ｓ，２Ｈ），４．７０－４．６６（ｍ，１Ｈ），４．６２－４．５２（ｍ，１Ｈ），４．４６－４．２８（ｍ，３Ｈ），４．２８－４．１９（ｍ，１Ｈ），３．８１－３．６８（ｍ，１Ｈ），３．６２－３．５８（ｍ，１Ｈ），２．４８－２．２９（ｍ，２Ｈ），２．１９－１．９８（ｍ，３Ｈ），１．４１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．１０－０．９４（ｍ，６Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］７７８．３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］７７８．２（観察値）。

【0279】

３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ｔｅｒｔ－ブチル、１３ｉの調製
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ｔｅｒｔ－ブチル、１３ｈ（１１．３ｇ、１９．３ｍｍｏｌ、１当量）、２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）酢酸（３ｇ、１９．３ｍｍｏｌ、１当量）及びＤＩＰＥＡ（１０．０ｇ、７７．４ｍｍｏｌ、１３．５ｍＬ、４当量）のＤＣＭ（１００ｍＬ）溶液にＨＡＴＵ（８．０９ｇ、２１．３ｍｍｏｌ、１．１当量）を０℃で加え、次いで混合物を０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ ｃ１８ ２５０ｍｍ＊１００ｍｍ＊１０ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２５％～５５％、２５分）によって精製し、黄色の油として１３ｉ（４．５ｇ、６．２３ｍｍｏｌ、収率３２．２％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ６．８８－６．８０（ｍ，１Ｈ），６．７８（ｓ，２Ｈ），４．２２（ｓ，２Ｈ），３．７７－３．５４（ｍ，４０Ｈ），３．４７（ｑ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），２．５１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）。

【0280】

３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、１３ｊの調製
ＣＨ_３ＣＮ（２５ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（２５ｍＬ）中の１３ｉ（４．５ｇ、６．２３ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＦＡ（５．６８ｇ、４９．８ｍｍｏｌ、３．６９ｍＬ、８当量）を加え、次いで８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＣＨ_３ＣＮを除去した。残留物をＭＴＢＥ（１０ｍＬ×３）で抽出し、処分した。水性相を減圧下で濃縮し、残留物を得た。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ｃ１８ ２５０ｍｍ×１００ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：０％～２５％，２４分）によって精製し、淡黄色の油として１３ｊ（１．６ｇ、２．４０ｍｍｏｌ、収率３８．６％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ６．９５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．７８（ｓ，２Ｈ），４．２２（ｓ，２Ｈ），３．７８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．７０－３．６３（ｍ，３６Ｈ），３．６０－３．５４（ｍ，２Ｈ），３．４６（ｑ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），２．６１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_４２Ｈ_４３Ｎ_５Ｏ_１０についての質量計算値６６７．３、ｍ／ｚ観察値６６７．２［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0281】

４－［３－［［（２Ｅ）－６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－アミノプロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル、１３ｌの調製
（２Ｅ）－１－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－（３－ピペラジン－１－イルプロポキシ）－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド，１３ｋ（１５０ｍｇ、１５１ｕｍｏｌ、１当量、４ＨＣｌ）及び１３ｇ（１２９ｍｇ、１６６ｕｍｏｌ、１．１当量）のＤＭＦ（３．００ｍＬ）溶液にＤＩＰＥＡ（９７．０ｍｇ、７５４ｕｍｏｌ、１３１ｕＬ、５当量）を２０℃で加え、混合物をこの温度で２時間撹拌し、次いでピペリジン（３９．０ｍｇ、４５２．３５ｕｍｏｌ、４５．０ｕＬ、３当量）を加えた。混合物を２０℃でさらに２時間撹拌した。混合物を濾過し、残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％～４０％、８分）によって精製し、淡黄色の固形物として１３ｌ（９０ｍｇ、６０．２６ｕｍｏｌ、収率３９．９７％、２ＴＦＡ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．６７－７．５３（ｍ，４Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．２５（ｄｄ，Ｊ＝１．２，１４．０Ｈｚ，２Ｈ），６．６０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），５．８５－５．６８（ｍ，２Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），５．００（ｂｒ ｓ，５Ｈ），４．６４－４．５４（ｍ，４Ｈ），４．３３－４．１８（ｍ，２Ｈ），３．９５（ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７４－３．５８（ｍ，５Ｈ），３．２５－３．１３（ｍ，４Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ），２．１６－１．９２（ｍ，６Ｈ），１．５２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．４０－１．２９（ｍ，６Ｈ），１．０８－０．９８（ｍ，６Ｈ）。

【0282】

ＢＢＩ－Ｌ－１３の調製
１３ｌ（５０ｍｇ、３３．５ｕｍｏｌ、１当量、２ＴＦＡ）及び７ｊ（２２．０ｍｇ、３３．５ｕｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（１．００ｍＬ）溶液に、Ｅｔ_３Ｎ（７．００ｍｇ、６６．９ｕｍｏｌ、９．００ｕＬ、２当量）及び１－プロパンホスホン酸無水物、Ｔ_３Ｐ、ＣＡＳ登録番号６８９５７－９４－８（３２．０ｍｇ、５０．２ｕｍｏｌ、３０．０ｕＬ、純度５０％、１．５当量）を加え、次に２０℃で２時間撹拌した。混合物を濾過し、残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４０％、８分）によって精製し、白色の固形物としてＢＢＩ－Ｌ－１３（１６ｍｇ、７．４７ｕｍｏｌ、収率２２．３１％、２ＴＦＡ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．６８－７．５３（ｍ，４Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３０－７．２０（ｍ，２Ｈ），６．８８（ｓ，２Ｈ），６．６０（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），５．７８（ｂｒ ｓ，２Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），４．９９（ｂｒ ｓ，４Ｈ），４．６８－４．４７（ｍ，８Ｈ），４．２９－４．２５（ｍ，１Ｈ），４．１６（ｓ，３Ｈ），３．９６（ｂｒ ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｔｄ，Ｊ＝６．８，９．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７４－３．７１（ｍ，２Ｈ），３．７０（ｓ，４Ｈ），３．６７－３．５６（ｍ，３６Ｈ），３．５３（ｂｒ ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．４８（ｔｄ，Ｊ＝１．６，３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３６（ｂｒ ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．２３－３．１３（ｍ，４Ｈ），２．５４－２．４３（ｍ，２Ｈ），２．２０（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，６Ｈ），２．１８－２．１０（ｍ，２Ｈ），２．０６－１．９４（ｍ，５Ｈ），１．４０－１．２８（ｍ，９Ｈ），１．０２（ｄｄ，Ｊ＝５．２，６．４Ｈｚ，６Ｈ）。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_４２Ｈ_４３Ｎ_５Ｏ_１０についての質量計算値１９１３．９、ｍ／ｚ観察値１９１４．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0283】

実施例Ｌ－１８：１－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－７－［３－［４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］ピペラジン－１－イル］プロポキシ］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－３ａ，７ａ－ジヒドロベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、ＢＢＩ－Ｌ－１８の合成

【化36】

ＭｅＯＨ（３ｍＬ）における２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）－Ｎ－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－オキソエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］アセトアミド（６８．９ｍｇ、１０８ｕｍｏｌ、２当量）及び１－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－（３－ピペラジン－１－イルプロポキシ）－３ａ，７ａ－ジヒドロベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、３（５０ｍｇ、５４．１ｕｍｏｌ、１当量、２ＨＣｌ）の混合物にＮ_２のもとで２５℃にてシアノホウ化水素ナトリウム、ＮａＢＨ_３ＣＮ（６．８ｍｇ、１０８ｕｍｏｌ、２当量）を加え、次いで２５℃で１３時間撹拌した。混合物を真空にて濃縮し残留物を得た。残留物を分取ＨＰＬＣカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４０％，８分によって精製し、淡黄色の油としてＢＢＩ－Ｌ－１８（１５ｍｇ、９．４６ｕｍｏｌ、収率１７．４８％、ＴＦＡ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ７．６１（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｓ，２Ｈ），６．６３（ｓ，１Ｈ），６．５７（ｓ，１Ｈ），５．８８－５．８３（ｍ，２Ｈ），５．０８－５．０１（ｍ，４Ｈ），４．５４－４．６９（ｍ，４Ｈ），４．１６（ｓ，２Ｈ），４，０１－３．９５（ｍ，２Ｈ），３．８０－３．８８（ｍ，２Ｈ），３．５５－３．７２（ｍ，３８Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３８－３．３０（ｍ，６Ｈ），２．６９－２．９３（ｍ，４Ｈ），２．６０（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．２１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，６Ｈ），１．７１－１．８２（ｍ，２Ｈ），１．４０－１．３２（ｍ，６Ｈ）。ＨＰＬＣ：９９．６７％（２２０ｎｍ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１４６９．７（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１４６９．８（観測値）。

【0284】

実施例Ｌ－２４：１－［４－［５－カルバモイル－７－［３－［４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］ピペラジン－１－イル］プロポキシ］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－１－イル］ブチル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、ＢＢＩ－Ｌ－２４の合成

【化37-1】

【化37-2】

４－［３－［６－カルバモイル－３－［４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブチル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシプロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－２４ａの調製
４－［３－［６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシプロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、３ｏ（０．３ｇ、３１６．１０ｕｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）溶液にＮ_２のもとでＰｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（１０％、０．１ｇ）を加えた。懸濁液を真空下で脱気し、Ｈ_２で数回パージし、次いでＨ_２（５０ｐｓｉ）のもとで２０℃にて１２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、黒色の固形物としてＬ－２４ａ（０．２ｇ、２１０．２９ｕｍｏｌ、収率６６．５３％）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９５１．５（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９５１．４（観測値）。

【0285】

１－［４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－（３－ピペラジン－１－イルプロポキシ）ベンゾイミダゾール－１－イル］ブチル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、Ｌ－２４ｂの調製
Ｌ－２４ａ（０．２ｇ、２１０．２９ｕｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１０．００ｍＬ、１９０当量）を加えた。混合物を２０℃で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を得た。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％～４０％，８分）によって精製し、白色の固形物としてＬ－２４ｂ（０．１ｇ、１１７．５１ｕｍｏｌ、収率５５．８８％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ７．３２－７．２７（ｍ，２Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．６８（ｓ，２Ｈ），４．７３－４．６３（ｍ，４Ｈ），４．４３－４．３４（ｍ，４Ｈ），４．１３－４．０４（ｍ，２Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ），３．２６－３．１８（ｍ、４Ｈ）、２．７７－２．６３（ｍ、４Ｈ）、２．６０－２．５１（ｍ、２Ｈ）、２．２４（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、６Ｈ）、２．０７－１．９６（ｍ、４Ｈ）、１．９４－１．７６（ｍ、２Ｈ）、１．４６－１．３５（ｍ、６Ｈ）。ＨＰＬＣ：９６．０１０％（２２０ｎｍ）、９６．７５３％（２５４ｎｍ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８５１．４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８５１．４（観測値）。

【0286】

ＢＢＩ－Ｌ－２４の調製
Ｌ－２４ｂ（８０．０ｍｇ、７４．１ｕｍｏｌ、１当量、２ＴＦＡ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液に１５℃にて２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）－Ｎ－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－オキソエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］アセトアミド（１４２ｍｇ、２２２ｕｍｏｌ、３当量）を加えた。添加後、この混合物をこの温度で３０分間撹拌した後、ＮａＢＨ_３ＣＮ（１４．０ｍｇ、２２２ｕｍｏｌ、３当量）を加えた。得られた混合物を１５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を得た。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、８分）によって精製し、白色固形物としてＢＢＩ－Ｌ－２４（４０．１ｍｇ、２３．６ｕｍｏｌ、収率３１．８％、２ＴＦＡ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ７．３６－７．２９（ｍ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），６．８８（ｓ，２Ｈ），６．６８（ｓ，２Ｈ），４．６７（ｑ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，４Ｈ），４．４５－４．３１（ｍ，４Ｈ），４．１６（ｓ，２Ｈ），４．１０（ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８９－３．７７（ｍ，５Ｈ），３．７２－３．６６（ｍ，４Ｈ），３．６６－３．５５（ｍ，３２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．４７－３．３３（ｍ，８Ｈ），３．０３－２．９０（ｍ，４Ｈ），２．８４－２．７２（ｍ，２Ｈ），２．２３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，６Ｈ），２．０８－１．８７（ｍ，６Ｈ），１．４９－１．３４（ｍ，６Ｈ）。ＨＰＬＣ：９７．３８％（２２０ｎｍ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１４７１．７（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１４７１．７（観測値）。

【0287】

実施例Ｌ－２６：７－［３－［４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］ピペラジン－１－イル］プロポキシ］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－１－［（Ｅ）－４－［２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、ＢＢＩ－Ｌ－２６の合成

【化38-1】

【化38-2】

Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－Ｎ－［（Ｅ）－４－（２－ニトロアニリノ）ブタ－２－エニル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－２６ａの調製
１－フルオロ－２－ニトロ－ベンゼン（１ｇ、７．０９ｍｍｏｌ、７４６ｕＬ、１当量）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＤＩＥＡ（２．７５ｇ、２１．２６ｍｍｏｌ、３．７ｍＬ、３当量）及びＮ－［（Ｅ）－４－アミノブタ－２－エニル］－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル、３ｊ（２．２３ｇ、７．８０ｍｍｏｌ、１．１当量）を加え、次いで５０℃で１６時間撹拌した。反応混合物に２０℃にてＨ_２Ｏ（１００ｍＬ）を加えることによって反応を止め、次にＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）及びブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残留物を得た。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；４０ｇのＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、０～５％の酢酸エチル／石油エーテル勾配の溶離液、１００ｍＬ／分）によって精製し、褐色の固形物としてＬ－２６ａ（２ｇ、４．９１ｍｍｏｌ、収率６９．２６％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ８．１２（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｔｄ，Ｊ＝１．６，７．２，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝１．６，７．２，８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８０－５．７２（ｍ，２Ｈ），４．１７（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），４．０３（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），１．４５（ｓ，１８Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４０８．２（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４０８．２（観測値）。

【0288】

（Ｅ）－Ｎ’－（２－ニトロフェニル）ブタ－２－エン－１，４－ジアミン、Ｌ－２６ｂの調製
Ｌ－２６ｂ（５００ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１５．３４ｍＬ、５０当量）を加えた。混合物を２０℃で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、白色の固形物としてＬ－２６ｂ（５００ｍｇ、粗製）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ８．１４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｔｄ，Ｊ＝１．６，７．２，８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｔｄ，Ｊ＝１．６，７．２，８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．１４－６．０２（ｍ ，１Ｈ），５．８６－５．７０（ｍ，１Ｈ），４．１１（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．４Ｈｚ，２Ｈ），３．５７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２０８．１（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２０８．１（観測値）。

【0289】

４－［３－［５－カルバモイル－３－ニトロ－２－［［（Ｅ）－４－（２－ニトロアニリノ）ブタ－２－エニル］アミノ］フェノキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－２６ｃの調製
Ｌ－２６ｂ（０．５ｇ、１．７８ｍｍｏｌ、１当量、２ＨＣｌ）、ＤＩＥＡ（１．１５ｇ、８．９２ｍｍｏｌ、１．５５ｍＬ、５当量）及びＮａＨＣＯ_３（３７５ｍｇ、４．４６ｍｍｏｌ、１７４ｕＬ、２．５当量）のｎ－ＢｕＯＨ（１０ｍＬ）溶液を１５℃にて２０分間撹拌した。次いで４－［３－（５－カルバモイル－２－クロロ－３－ニトロ－フェノキシ）プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、３ｇ（６３２ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ、０．８当量）を加えた。混合物を１２０℃で１６時間撹拌した。この反応混合物を減圧下で濃縮してｎ－ＢｕＯＨを除去し、残留物に２０℃にてＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）を加えることによって反応を止め、次いでＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、黄色の固形物としてＬ－２６ｃ（５５０ｍｇ、８９６．２６ｕｍｏｌ、収率５０．２２％）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６１４．３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６１４．２（観測値）。

【0290】

４－［３－［３－アミノ－２－［［（Ｅ）－４－（２－アミノアニリノ）ブタ－２－エニル］アミノ］－５－カルバモイル－フェノキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－２６ｄの調製
ＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＴＨＦ（１ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（０．５ｍＬ）中のＬ－２６ｃ（５５０ｍｇ、８９６ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｎａ_２ＣＯ_３（５７０ｍｇ、５．３８ｍｍｏｌ、６当量）及び亜ジチオン酸二ナトリウム（１．５６ｇ、８．９６ｍｍｏｌ、１．９５ｍＬ、１０当量）を加え、次いで２０℃で２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮してＴＨＦ及びＭｅＯＨを除去した。残留物をＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、沈殿物を濾過し、黄色の固形物としてＬ－２６ｄ（５５０ｍｇ、粗製）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５５４．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５５４．３（観察値）。

【0291】

４－［３－［６－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－３－［（Ｅ）－４－［２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシプロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－２６ｅの調製
Ｌ－２６ｄ（５５０ｍｇ、９９３ｕｍｏｌ、１当量）及びイソチオシアン酸２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル、３ｏ（２１３ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ、１．１当量）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液を０℃で１０分間撹拌した後、Ｅｔ_３Ｎ（３０１ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ、４１４ｕＬ、３当量）及びＥＤＣＩ（５７１ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。得られた混合物を２０℃で１６時間撹拌した。反応混合物に飽和重炭酸ナトリウム（１０ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）を加えて反応を止め、沈殿物を濾過して白色の固形物としてＬ－２６ｅ（５６０ｍｇ、６３９ｕｍｏｌ、収率６４．３６％）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８７６．５（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８７６．４（観測値）。

【0292】

２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－１－［（Ｅ）－４－［２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－７－（３－ピペラジン－１－イルプロポキシ）ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、Ｌ－２６ｆの調製
Ｌ－２６ｅ（５６０ｍｇ、６３９ｕｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、７．９９ｍＬ、５０当量）を加え、次いで２０℃で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０×３０ｍｍ×３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～４０％、８分）によって精製し、白色の固形物としてＬ－２６ｅ（９６．７ｍｇ、１２４．６３ｕｍｏｌ、収率１９．５０％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ７．５７（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３５－７．２４（ｍ，３Ｈ），７．２２－７．１６（ｍ，１Ｈ），６．６３（ｓ，１Ｈ），６．５７（ｓ，１Ｈ），６．００－５．９０（ｍ，１Ｈ），５．８４－５．７４（ｍ，１Ｈ），５．０６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），４．８３－４．７９（ｍ，２Ｈ），４．６９－４．５４（ｍ，４Ｈ），４．０４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．３３（ｓ，２Ｈ），３．２７－３．２３（ｍ，４Ｈ），２．８６－２．６９（ｍ，４Ｈ），２．６１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ），１．８８－１．７７（ｍ，２Ｈ），１．３８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．３３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］７７６．４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］７７６．４（観測値）。

【0293】

ＢＢＩ－Ｌ－２６の調製
Ｌ－２６ｅ（３０ｍｇ、２９．９ｕｍｏｌ、１当量、２ＴＦＡ）及び２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）－Ｎ－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－オキソエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］アセトアミド（４７．６ｍｇ、７４．７ｕｍｏｌ、２．５当量）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）溶液を２０℃にて１０分間撹拌し、次いでＮａＢＨ_３ＣＮ（５．６３ｍｇ、８９．６ｕｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２０℃でさらに０．５時間撹拌した。反応混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０×３０ｍｍ×３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％～４０％、８分）によって精製し、白色の固形物としてＢＢＩ－Ｌ－２６（１４．９ｍｇ、１０．６７ｕｍｏｌ、収率３５．７０％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ７．５７（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３５－７．３０（ｍ，２Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２２－７．１６（ｍ，１Ｈ），６．８６（ｓ，２Ｈ），６．６２（ｓ，１Ｈ），６．５６（ｓ，１Ｈ），６．０５－５．８７（ｍ，１Ｈ），５．８６－５．７０（ｍ，１Ｈ），５．０６（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），４．６５－４．５４（ｍ，４Ｈ），４．１５（ｓ，２Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８６－３．７８（ｍ，２Ｈ），３．６７（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，４Ｈ），３．６４－３．５４（ｍ，３４Ｈ），３．５１（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，４Ｈ），３．３７－３．３３（ｍ，４Ｈ），３．２１－２．７５（ｍ，６Ｈ），２．６６（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．２１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，６Ｈ），１．８８－１．７８（ｍ，２Ｈ），１．３７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１３９６．７（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１３９６．７（観察値）。

【0294】

実施例Ｌ－２８：１－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－７－［３－［４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］ピペラジン－１－イル］プロポキシ］－２－［［２－（２－ヒドロキシエチル）－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル］アミノ］ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［［２－（２－ヒドロキシエチル）－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル］アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、ＢＢＩ－Ｌ－２８の合成

【化39-1】

【化39-2】

２－（２－アセトキシエチル）－５－メチル－ピラゾール－３－カルボン酸エチル、Ｌ－２８ｂの調製
３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－カルボン酸エチル、Ｌ－２８ａ（３ｇ、１９．５ｍｍｏｌ、１当量）及び酢酸２－ヒドロキシエチル（２．０３ｇ、１９．５ｍｍｏｌ、１．８３ｍＬ、１当量）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液に、トリフェニルホスフィン、ＰＰｈ_３（１５．３ｇ、５８．４ｍｍｏｌ、３当量）及びアゾ－ジカルボン酸ジイソプロピル、ＤＩＡＤ（１１．８０ｇ、５８．４ｍｍｏｌ、１１．４ｍＬ、３当量）を加えた。混合物を０℃で２時間撹拌した。反応混合物にＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）を加えることによって反応を止め、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残留物を得た。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；４０ｇのＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、０～５０％の酢酸エチル／石油エーテル勾配の溶離液、６０ｍＬ／分）によって精製し、無色の油としてＬ－２８ｂ（５ｇ、粗製）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ６．６３（ｓ，１Ｈ），４．７５（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），４．４１（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），４．３２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），１．９９（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。

【0295】

２－（２－ヒドロキシエチル）－５－メチル－ピラゾール－３－カルボン酸、Ｌ－２８ｃの調製
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（５ｍＬ）中のＬ－２８ｂ（５ｇ、２０．８ｍｍｏｌ、１当量）の溶液にＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（２．６２ｇ、６２．４ｍｍｏｌ、３当量）を加え、次いで２０℃で２時間撹拌した。反応混合物のｐＨを０℃にてＨＣｌ（４Ｍ）で約１に調整し、混合物から所望の固体を沈殿させ、濾過して白色の固形物としてＬ－２８ｃ（３ｇ、１７．６ｍｍｏｌ、収率８４．７１％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ８．８７（ｓ，１Ｈ），６．５７（ｓ，１Ｈ），４．４６（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６６（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ）。

【0296】

２－（２－アセトキシエチル）－５－メチル－ピラゾール－３－カルボン酸、Ｌ－２８ｄの調製
Ｌ－２８ｃ（３ｇ、１７．６ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に、無水酢酸（３．６０ｇ、３５．３ｍｍｏｌ、３．３０ｍＬ、２当量）及びピリジン（２．７９ｇ、３５．３ｍｍｏｌ、２．８５ｍＬ、２当量）を加えた。混合物を２０℃で１時間撹拌した。反応混合物のｐＨを０℃にてＨＣｌ（４Ｍ）で約１に調整し、混合物から所望の固体を沈殿させ、濾過して白色の固形物としてＬ－２８ｄ（３ｇ、１４．１４ｍｍｏｌ、収率８０．１９％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ８．８８（ｓ，１Ｈ），６．６０（ｓ，１Ｈ），４．６４（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），４．３０（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），１．９２（ｓ，３Ｈ）。

【0297】

酢酸２－（５－クロロカルボニル－３－メチル－ピラゾール－１－イル）エチル、Ｌ－２８ｅの調製
Ｌ－２８ｄ（１ｇ、４．７１ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、ＤＭＦ（３４４ｍｇ、４．７１ｍｍｏｌ、３６３ｕＬ、１当量）及び二塩化オキサリル、（ＣＯＣｌ）_２（１．２０ｇ、９．４２ｍｍｏｌ、８２５ｕＬ、２当量）を加え、次いで２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、黄色の油としてＬ－２８ｅを得た。

【0298】

酢酸２－（５－カルボニルイソチオシアナチドイル－３－メチル－ピラゾール－１－イル）エチル、Ｌ－２８ｆの調製
Ｌ－２８ｅ（１ｇ、４．３４ｍｍｏｌ、１当量）及びチオシアン酸カリウム、ＫＳＣＮ（８４３ｍｇ、８．６７ｍｍｏｌ、８４３ｕＬ、２当量）のＭｅＣＮ（５ｍＬ）溶液を２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して残留物を得た。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；４０ｇのＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、０～３０％の酢酸エチル／石油エーテル勾配の溶離液、４５ｍＬ／分）によって精製し、黄色の油としてＬ－２８ｆ（０．４ｇ、１．５８ｍｍｏｌ、収率３６．４３％）を得た。

【0299】

４－［３－［２－［［２－（２－アセトキシエチル）－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル］アミノ］－３－［（Ｅ）－４－［２－［［２－（２－アセトキシエチル）－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル］アミノ］－５－カルバモイル－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－６－カルバモイル－ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシプロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－２８ｇの調製
４－［３－［３－アミノ－２－［［（Ｅ）－４－（２－アミノ－４－カルバモイル－６－メトキシ－アニリノ）ブタ－２－エニル］アミノ］－５－カルバモイル－フェノキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、３ｎ（０．３ｇ、４７９ｕｍｏｌ、１当量）及びＬ－２８ｆ（２４２ｍｇ、９５７ｕｍｏｌ、２当量）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液を０℃で０．５時間撹拌した。次いで、ＥＤＣＩ（４５９ｍｇ、２．３９ｍｍｏｌ、５当量）及びＥｔ_３Ｎ（２４２ｍｇ、２．３９ｍｍｏｌ、３３３ｕＬ、５当量）を加えた。得られた混合物を２５℃でさらに１２時間撹拌した。反応混合物に０℃にて１０ｍＬのＮａＨＣＯ_３水溶液を加えることによって反応を止め、混合物から所望の固体生成物を沈殿させ、濾過して、黄色の固形物としてＬ－２８ｇ（０．４ｇ、３７５ｕｍｏｌ、収率７８．４６％）を得た。

【0300】

１－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［［２－（２－ヒドロキシエチル）－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル］アミノ］－７－（３－ピペラジン－１－イルプロポキシ）ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［［２－（２－ヒドロキシエチル）－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル］アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、Ｌ－２８ｈの調製
Ｌ－２８ｇ（０．４ｍｇ、３７５ｕｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、５．０ｍＬ、５３．３当量）を加え、次いで２０℃で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を得た。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、８分）によって精製し、白色の固形物としてＬ－２８ｈ（０．０５ｇ、５６．８ｕｍｏｌ、収率１５．１１％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１３．０６－１２．６７（ｍ，２Ｈ），８．９５－８．４４（ｍ，２Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，３Ｈ），７．６５（ｓ，３Ｈ），７．３６（ｓ，２Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ），６．５５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．８５－５．８０（ｍ，２Ｈ），４．９１（ｄｄ，Ｊ＝３．６，９．６Ｈｚ，４Ｈ），４．６１（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，４Ｈ），３．９５（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，４Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１５－３．１０（ｍ，４Ｈ），２．５８－２．５０（ｍ，６Ｈ），２．１２（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，６Ｈ），１．７５－１．７０（ｍ，２Ｈ）。ＨＰＬＣ：９８．１２４％（２２０ｎｍ）、９８．８０８％（２５４ｎｍ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８８１．４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８８１．４（観測値）。

【0301】

ＢＢＩ－Ｌ－２８の調製
Ｌ－２８ｈ（３５ｍｇ、３１．６ｕｍｏｌ、１当量、２ＴＦＡ）及び２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）－Ｎ－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－オキソエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］アセトアミド（４０．２ｍｇ、６３．１当量、２当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）溶液にシアノホウ化水素ナトリウム、ＮａＢＨ_３ＣＮ（５．９５ｍｇ、９４．７ｕｍｏｌ、３当量）を加え、次いで２０℃で１２時間撹拌した。反応混合物を濾過した。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、８分）によって精製し、白色の固形物としてＢＢＩ－Ｌ－２８を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１３．０１－１２．７１（ｍ，１Ｈ），８．２１（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，２Ｈ），７．６５（ｓ，２Ｈ），７．３７（ｓ，２Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．０８（ｓ，２Ｈ），６．５５（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），５．９８－５．６８（ｍ，２Ｈ），４．９３－４．９０（４，３Ｈ），４．６３－４．５９（ｍ，４Ｈ），４．０１（ｓ，２Ｈ），３．９５－３．９０（ｍ，２Ｈ），３．７２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，４Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ），３．５５－３．４５（ｍ，３８Ｈ），３．４４－３．４０（ｍ，６Ｈ），３．２６－３．１４（ｍ，６Ｈ），２．１２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ），１．８０－１．６０（ｍ，２Ｈ）。ＨＰＬＣ：９６．８７８％（２２０ｎｍ）、９９．５１２％（２５４ｎｍ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１５０１．７（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１５０１．８（観測値）。

【0302】

実施例Ｌ－３１：１－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－７－［３－［４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］ピペラジン－１－イル］プロポキシ］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［［２－（２，３－ジヒドロキシプロピル）－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル］アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド，ＢＢＩ－Ｌ－３１の合成

【化40-1】

【化40-2】

【化40-3】

２－［（２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－イル）メチル］－５－メチル－ピラゾール－３－カルボン酸エチル、Ｌ－３１ｂの調製
３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－カルボン酸エチル、Ｌ－３１ａ（５ｇ、３２．４３ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液に、ＰＰｈ_３（２５．５２ｇ、９７．３０ｍｍｏｌ、３当量）及び（２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－イル）メタノール（５．１４ｇ、３８．９２ｍｍｏｌ、４．８ｍＬ、１．２当量）を加え、続いてＤＥＡＤ（１１．３０ｇ、６４．８７ｍｍｏｌ、１１．８ｍＬ、２当量）を加えた。混合物を１５℃で１６時間撹拌した。混合物の反応をＨ_２Ｏ（３００ｍＬ）で止め、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残留物を得た。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；１２０ｇのＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、０～８％の酢酸エチル／石油エーテル勾配の溶離液、１００ｍＬ／分）によって精製し、無色の油としてＬ－３１ｂ（５ｇ、１８．６４ｍｍｏｌ、収率５７．４６％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ６．６０（ｓ，１Ｈ），４．７５（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．５９－４．５１（ｍ，１Ｈ），４．５１－４．４２（ｍ，１Ｈ），４．３２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），４．０１（ｄｄ，Ｊ＝６．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｄｄ，Ｊ＝６．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ），１．４２－１．２８（ｍ，９Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２６９．１（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２６９．０（観測値）。

【0303】

２－［（２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－イル）メチル］－５－メチル－ピラゾール－３－カルボン酸、Ｌ－３１ｃの調製
ＴＨＦ（２０ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（５ｍＬ）中のＬ－３１ｂ（２．５ｇ、９．３２ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ（１．９６ｇ、４６．５９ｍｍｏｌ、５当量）を加え、次いで１５℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮してＴＨＦを除去し、次いで水性相のｐＨをＴＦＡでｐＨ＝約５に調整し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、白色の固形物として粗生成物Ｌ－３１ｃ（２．０５ｇ、８．５３ｍｍｏｌ、収率９１．５７％）を得たが、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ６．６４（ｓ，１Ｈ），４．７２（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．５９－４．４９（ｍ，１Ｈ），４．４２（ｑ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｄｄ，Ｊ＝６．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８０（ｄｄ，Ｊ＝６．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），１．３３（ｓ，３Ｈ），１．２８（ｓ，３Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２４１．１（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２４１．１（観測値）。

【0304】

塩化２－［（２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－イル）メチル］－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル、Ｌ－３１ｄの調製
Ｌ－３１ｃ（１ｇ、４．１６ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（１５ｍＬ）溶液に１－クロロ－Ｎ，Ｎ，２－トリメチル－プロプ－１－エン－１－アミン（１．１１ｇ、８．３２ｍｍｏｌ、１．１ｍＬ、２当量）を０℃で加え、次いで１５℃で５時間撹拌した。この混合物を濃縮して、淡黄色の油としてＬ－３１ｄ（０．６ｇ、２．３２ｍｍｏｌ、収率５５．７２％）を得たが、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。

【0305】

イソチオシアン酸２－［（２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－イル）メチル］－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル、Ｌ－３１ｅの調製
Ｌ－３１ｄ（０．６ｇ、２．３２ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＣＮ（２ｍＬ）溶液にチオシアン酸カリウム、ＫＳＣＮ（６７６．２ｍｇ、６．９６ｍｍｏｌ、３当量）を加え、次いで１５℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；４０ｇのＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、０～４０％の酢酸エチル／石油エーテル勾配の溶離液、７５ｍＬ／分）によって精製し、黄色の油として、淡黄色の油としてＬ－３１ｅ（０．５ｇ、１．７８ｍｍｏｌ、収率７６．６３％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ６．７６（ｓ，１Ｈ），４．７４（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．５９－４．４３（ｍ，２Ｈ），４．０６（ｄｄ，Ｊ＝６．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｄｄ，Ｊ＝５．６，８．８Ｈｚ，１Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｓ，３Ｈ），１．３３（ｓ，３Ｈ）。

【0306】

Ｎ－［（Ｅ）－４－（４－カルバモイル－２－メトキシ－６－ニトロ－アニリノ）ブタ－２－エニル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－３１ｇの調製
４－クロロ－３－メトキシ－５－ニトロ－ベンズアミド、Ｌ－３１ｆ（４ｇ、１７．３５ｍｍｏｌ、１当量）及びＮ－［（Ｅ）－４－アミノブタ－２－エニル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（４．５２ｇ、２４．２８ｍｍｏｌ、１．４当量）のｎ－ＢｕＯＨ（７０ｍＬ）溶液に、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＩＥＡ（１１．２１ｇ、８６．７３ｍｍｏｌ、１５．１１ｍＬ、５当量）を加え、次いでＮ_２のもとで１２０℃にて１８時間撹拌した。この反応混合物を濃縮してｎ－ＢｕＯＨを除去し、残留物を１５℃で１００ｍＬのＨ_２Ｏで希釈し、３０分間撹拌し、濾過して粗生成物を得た。粗生成物を１５℃にてＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で３０分間トリチュレートし、赤色の固形物としてＬ－３１ｇ（６ｇ、１５．７７ｍｍｏｌ、収率９０．９３％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，δ８．１８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｓ，１Ｈ），５．５３（ｓ，２Ｈ），４．０９（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．４８（ｓ，２Ｈ），１．４４－１．３０（ｍ，９Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３８１．２（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ－５５］３２５．０（観察値）。

【0307】

Ｎ－［（Ｅ）－４－（２－アミノ－４－カルバモイル－６－メトキシ－アニリノ）ブタ－２－エニル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－３１ｈの調製
Ｌ－３１ｇ（６ｇ、１５．７７ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（３０ｍＬ）とＴＨＦ（３０ｍＬ）とＨ_２Ｏ（１５ｍＬ）との溶液にＮａ_２ＣＯ_３（６．６９ｇ、６３．０９ｍｍｏｌ、４当量）と亜ジチオン酸二ナトリウム（１９．２２ｇ、１１０．４ｍｍｏｌ、７当量）とを加えた。混合物を１５℃で１時間撹拌した。この混合物を濃縮してＴＨＦ及びＭｅＯＨを除去し、次いでＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）を加え、それを１０分間撹拌し、濾過して、オフホワイトの固形物として粗生成物Ｌ－３１ｈ（４ｇ、１１．４２ｍｍｏｌ、収率７２．３７％）を得たが、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ６．９３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７４－５．５７（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．６０－３．５７（ｍ，４Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３５１．２（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３５１．１（観測値）。

【0308】

３－アミノ－４－［［（Ｅ）－４－アミノブタ－２－エニル］アミノ］－５－メトキシ－ベンズアミド、Ｌ－３１ｉの調製
Ｌ－３１ｈ（１．２ｇ、３．４２ｍｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、４２．８ｍＬ、５０当量）を加え、次いで１５℃で０．５時間撹拌し、混合物を濃縮して白色固形物としてＬ－３１ｉ（１．１ｇ、３．４０ｍｍｏｌ、収率９９．３８％、２ＨＣｌ）を得たが、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２５１．２（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２５１．１（観測値）。

【0309】

４－［３－［２－［［（Ｅ）－４－（２－アミノ－４－カルバモイル－６－メトキシ－アニリノ）ブタ－２－エニル］アミノ］－５－カルバモイル－３－ニトロ－フェノキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－３１ｊの調製
Ｌ－３１ｉ（１．１ｇ、３．４０ｍｍｏｌ、１当量、２ＨＣｌ）及びＤＩＥＡ（３．５２ｇ、２７．２ｍｍｏｌ、４．７ｍＬ、８当量）のｎ－ＢｕＯＨ（３０ｍＬ）溶液を１５℃で０．５時間撹拌し、次いで４－［３－（５－カルバモイル－２－クロロ－３－ニトロ－フェノキシ）プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（８２９ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ、０．５５当量）を加え、この混合物を１２０℃で１２時間撹拌した。混合物を真空にて濃縮してｎ－ＢｕＯＨを除去し、次いで残留物を水２０ｍＬで希釈し、ＤＣＭ／ｉ－ＰｒＯＨ＝３／１（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン２０ｍＬで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残留物を得た。粗生成物を１５℃にて１０分間ＭＴＢＥ／ＥｔＯＡｃ＝５／１（３０ｍｌ）でトリチュレートして赤色の固形物としてＬ－３１ｊ（１ｇ、１．５２ｍｍｏｌ、収率４４．７４％）を得たが、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ８．３２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７７－５．６１（ｍ，２Ｈ），４．２３（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，２Ｈ），４．０４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．７１－３．５７（ｍ，２Ｈ），３．４８－３．４４（ｍ，４Ｈ），２．５４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．４６（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，４Ｈ），２．０６－１．９８（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６５７．３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６５７．３（観察値）。

【0310】

４－［３－［５－カルバモイル－２－［［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［［２－［（２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－イル）メチル］－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル］アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］アミノ］－３－ニトロ－フェノキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－３１ｋの調製
Ｌ－３１ｅ（１１１ｍｇ、３９６ｕｍｏｌ、１．３当量）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液にＬ－３１ｊ（２００ｍｇ、３０５ｕｍｏｌ、１当量）を加え、０℃で３０分間撹拌し、次いでＥｔ_３Ｎ（９２．５ｍｇ、９１４ｕｍｏｌ、１２７ｕＬ、３当量）及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ＥＤＣＩ，ＥＤＡＣ，ＥＤＣ、ＣＡＳ登録番号２５９５２－５３－８（１７５ｍｇ、９１４ｕｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を１５℃で１６時間撹拌した。ＮａＨＣＯ_３水溶液（５ｍＬ）及び水（５ｍＬ）で反応物の反応を止め、混合物から所望の固体を沈殿させ、濾過して、淡黄色の固形物としてＬ－３１ｋ（０．２ｇ、２２１ｕｍｏｌ、収率７２．６５％）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９０４．４（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９０４．３（観測値）。

【0311】

４－［３－［３－アミノ－５－カルバモイル－２－［［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［［２－［（２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－イル）メチル］－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル］アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］アミノ］フェノキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－３１ｌの調製
Ｌ－３１ｋ（０．２ｇ、２２１ｕｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（１ｍＬ）とＭｅＯＨ（１ｍＬ）とＨ_２Ｏ（１ｍＬ）との溶液にＮａ_２ＣＯ_３（９３．８ｍｇ、８８５ｕｍｏｌ、４当量）及び亜ジチオン酸二ナトリウム（２７０ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ、７当量）を加え、次いで１５℃で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮してＴＨＦ及びＭｅＯＨを除去した。所望の固体を水性相から沈殿させ、濾過し、ケーキをＨ_２Ｏ（５ｍＬ）で洗浄して、黄色の固形物としてＬ－３１ｌ（１７０ｍｇ、１９４．５１ｕｍｏｌ、収率８７．９２％）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８７４．４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８７４．４（観測値）。

【0312】

４－［３－［６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［［２－［（２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－イル）メチル］－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル］アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシプロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－３１ｍの調製
Ｌ－３１ｌ（１７０ｍｇ、１９５ｕｍｏｌ、１当量）及びイソチオシアン酸２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル、３ｏ（４９．４ｍｇ、２５３ｕｍｏｌ、１．３当量）のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液を０℃で０．５時間撹拌し、次いでＥｔ_３Ｎ（５９．１ｍｇ、５８４ｕｍｏｌ、８１．２ｕＬ、３当量）及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ＥＤＣＩ、ＥＤＡＣ、ＥＤＣ，ＣＡＳ登録番号２５９５２－５３－８（１１２ｍｇ、５８４ｕｍｏｌ、３当量）を加えた。得られた混合物を１５℃で１６時間撹拌した。ＮａＨＣＯ_３水溶液（５ｍＬ）及び水（５ｍＬ）で反応物の反応を止めた。混合物から所望の固体を沈殿させ、濾過して、黄色の固形物としてＬ－３１ｍ（０．１５ｇ、１４４．９１ｕｍｏｌ、収率７４．５０％）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０３５．５（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０３５．５（観察値）。

【0313】

１－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－（３－ピペラジン－１－イルプロポキシ）ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［［２－（２，３－ジヒドロキシプロピル）－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル］アミノ］－７－メトキシ－ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、Ｌ－３１ｎの調製
Ｌ－３１ｍ（０．１５ｇ、１４５ｕｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、７．２５ｍＬ、２００当量）を加え、次いで１５℃で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３０％，８分）によって精製し、白色の固形物としてＬ－３１ｎ（７５ｍｇ、６６．７８ｕｍｏｌ、収率４６．０９％、２ＴＦＡ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ７．６０（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．６５（ｓ，１Ｈ），６．６３（ｓ，１Ｈ），５．９２－５．８２（ｍ，２Ｈ），５．０５－５．０１（ｍ，４Ｈ），４．７９－４．７２（ｍ，１Ｈ），４．６９－４．５９（ｍ，３Ｈ），４．０９－４．０１（ｍ，１Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），３．５４（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．２０（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，４Ｈ），２．７０－２．６４（ｍ，４Ｈ），２．５１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），１．７８－１．６９（ｍ，２Ｈ），１．３９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８９５．４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８９５．４（観測値）。

【0314】

ＢＢＩ－Ｌ－３１の調製
２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）－Ｎ－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－オキソエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］アセトアミド（４２．５ｍｇ、６６．８ｕｍｏｌ、２．５当量）のＭｅＯＨ（０．３ｍＬ）溶液に、Ｌ－３１ｎ（３０ｍｇ、２６．７ｕｍｏｌ、１当量、２ＴＦＡ）及びＮａＢＨ_３ＣＮ（５．０４ｍｇ、８０．１ｕｍｏｌ、３当量）を加え、次いで１５℃で１２時間撹拌した。この混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％～４０％、８分）によって精製し、淡黄色の油としてＢＢＩ－Ｌ－３１（１５．６ｍｇ、１０．２９ｕｍｏｌ、収率３８．５３％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ７．６３（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），７．２７（ｓ，１Ｈ），６．８９（ｓ，２Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），６．６１（ｓ，１Ｈ），５．９６－５．８３（ｍ，２Ｈ），５．１０－５．０２（ｍ，４Ｈ），４．７９－４．６１（ｍ，４Ｈ），４．２１－４．１６（ｍ，２Ｈ），４．１１－４．０２（ｍ，１Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８６－３．８１（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．７２－３．６９（ｍ，４Ｈ），３．６７－３．５９（ｍ，３８Ｈ），３．５６－３．５２（ｍ，４Ｈ），３．３９－３．３６（ｍ，３Ｈ），２．９９－２．７２（ｍ，４Ｈ），２．６２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），１．７９（ｔｄ，Ｊ＝６．８，１３．６Ｈｚ，２Ｈ），１．４１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１５１５．７（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１５１５．７（観測値）

【0315】

実施例Ｌ－３４：１－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－７－［３－［４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］ピペラジン－１－イル］プロポキシ］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、ＢＢＩ－Ｌ－３４の合成

【化41-1】

【化41-2】

４－［３－［２－［［（Ｅ）－４－アミノブタ－２－エニル］アミノ］－５－カルバモイル－３－ニトロ－フェノキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－３４ａの調製
（Ｅ）－ブタ－２－エン－１，４－ジアミン（８．９８ｇ、５６．４５ｍｍｏｌ、５当量、２ＨＣｌ）のｎ－ＢｕＯＨ（１５０ｍＬ）溶液にＤＩＥＡ（２９．１８ｇ、２２５．７９ｍｍｏｌ、３９．３ｍＬ、２０当量）及び４－［３－（５－カルバモイル－２－クロロ－３－ニトロ－フェノキシ）プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、３ｇ（５ｇ、１１．２９ｍｍｏｌ、１当量）を加えた。混合物をＮ_２のもとで１２０℃にて１２時間撹拌した。混合物を濾過して不溶性物質を除去した。濾液を濃縮して残留物を得た。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １０ｕ ２５０ｍｍ＊８０ｍｍ；移動相：［水（ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％～５０％、２７分）によって精製し、赤色の固形物としてＬ－３４ａ（４ｇ、８．１２ｍｍｏｌ、収率３５．９７％）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４９３．３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４９３．２（観測値）。

【0316】

４－［３－［５－カルバモイル－２－［［（Ｅ）－４－（４－メトキシカルボニル－２－ニトロ－アニリノ）ブタ－２－エニル］アミノ］－３－ニトロ－フェノキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－３４ｂの調製
Ｌ－３４ａ（４００ｍｇ、８１２ｕｍｏｌ、１当量）のｎ－ＢｕＯＨ（１．２０ｇ、１６．２ｍｍｏｌ、１．４９ｍＬ、２０当量）溶液にＤＩＥＡ（５２４ｍｇ、４．０６ｍｍｏｌ、７０７ｕＬ、５当量）及び４－フルオロ－３－ニトロ－安息香酸メチル（２４２ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ、１．５当量）を加えた。混合物をＮ_２のもと１２０℃で１２時間撹拌した。反応混合物を濃縮してｎ－ＢｕＯＨを除去した。残留物をＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、次いでＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４にて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して黄色の固形物としてＬ－３４ｂ（６００ｍｇ、粗製）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６７２．３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６７２．３（観察値）。

【0317】

４－［３－［３－アミノ－２－［［（Ｅ）－４－（２－アミノ－４－メトキシカルボニル－アニリノ）ブタ－２－エニル］アミノ］－５－カルバモイル－フェノキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－３４ｃの調製
Ｌ－３４ｂ（６００ｍｇ、８９３ｕｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）とＴＨＦ（３ｍＬ）とＨ_２Ｏ（１．５ｍＬ）との溶液にＮａ_２ＣＯ_３（４７３ｍｇ、４．４７ｍｍｏｌ、５当量）及び亜ジチオン酸二ナトリウム（１．０９ｇ、６．２５ｍｍｏｌ、７当量）を加え、次いで１５℃にて１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して残留物を得た。残留物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、濾過して不溶性物質を除き、濾液を減圧下で濃縮し、白色の固形物としてＬ－３４ｃ（５７０ｍｇ、粗製）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６１２．３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６１２．３（観察値）。

【0318】

１－［（Ｅ）－４－［７－［３－（４－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルピペラジン－１－イル）プロポキシ］－５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－５－カルボン酸メチル、Ｌ－３４ｄの調製
Ｌ－３４ｃ（５７０ｍｇ、９３１ｍｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に、イソチオシアン酸２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル（４００ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ、２．２当量）を加えた。添加後、混合物を０℃で３０分間撹拌し、次いで０℃にてＥｔ_３Ｎ（５６５ｍｇ、５．５９ｍｍｏｌ、７７８ｕＬ、６当量）及びＥＤＣＩ（１．０７ｇ、５．５９ｍｍｏｌ、６当量）を加えた。得られた混合物を１５℃でさらに１２時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３（２０ｍＬ）で混合物の反応を止め、水性相をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出し、合わせた有機相をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、黄色の固形物としてＬ－３４ｄ（８００ｍｇ、粗製）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９３４．５（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９３４．５（観察値）。

【0319】

１－［（Ｅ）－４－［７－［３－（４－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルピペラジン－１－イル）プロポキシ］－５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－５－カルボン酸、Ｌ－３４ｅの調製
Ｈ_２Ｏ（２ｍＬ）及びＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＬ－３４ｄ（７００ｍｇ、７４９ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に水酸化リチウム水和物、ＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（１２５ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ、４当量）を加え、次いで５０℃で４時間撹拌した。反応混合物に、ｐＨが約５になるまでＨＣｌ（２Ｍ）を加えて反応を止め、この混合物を減圧下で濃縮して残留物を得て、この残留物をＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）でトリチュレートし、濾過して、白色の固形物としてＬ－３４ｅ（８００ｍｇ、粗製）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９２０．５（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９２０．５（観察値）。

【0320】

４－［３－［６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシプロピル］ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｌ－３４ｆの調製
Ｌ－３４ｅ（２５０ｍｇ、２７２ｕｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶液に、ＮＨ４Ｃｌ（１４５ｍｇ、２．７２ｍｍｏｌ、１０当量）、ＤＩＥＡ（１０５ｍｇ、８１５ｕｍｏｌ、１４２ｕＬ、３当量）及びヘキサフルオロリン酸１－ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシド、ヘキサフルオロホスフェートアザベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム、ＨＡＴＵ、ＣＡＳ登録番号１４８８９３－１０－１（１５５ｍｇ、４０８ｕｍｏｌ、１．５当量）を加えた。混合物を１５℃で１時間撹拌した。混合物を水（１５ｍＬ）に注ぎ、水性相をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出し、合わせた有機相をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上にて乾燥させ、濾過し、濃縮して、白色の固形物としてＬ－３４ｆ（２５０ｍｇ、粗製）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９１９．４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９１９．４（観察値）。

【0321】

１－［（Ｅ）－４－［５－カルバモイル－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－［（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）アミノ］－７－（３－ピペラジン－１－イルプロポキシ）ベンゾイミダゾール－５－カルボキサミド、Ｌ－３４ｇの調製
Ｌ－３４ｆ（２５０ｍｇ、２７２ｕｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、４．１７ｍＬ、６１．３当量）を加えた。この混合物を２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を真空にて濃縮して残留物を得た。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ１８ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～２５％、８分）によって精製し、白色の固形物としてＬ－３４ｇ（２１ｍｇ、２５．６４ｕｍｏｌ、収率９．４３％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ７．９４（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），６．５８（ｓ，１Ｈ），６．５３（ｓ，１Ｈ），６．００－５．８６（ｍ，１Ｈ），５．７６－５．７３（ｍ，１Ｈ），５．０２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），４．９２－－４．８４（ｍ，２Ｈ），４．６５－４．４８（ｍ，４Ｈ），４．０１（ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．３６（ｂｒ ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，４Ｈ），３．０２－２．９８（ｍ，４Ｈ），２．８０（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．１８（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，６Ｈ），１．９４－１．７９（ｍ，２Ｈ），１．４３－１．２５（ｍ，６Ｈ）。ＨＰＬＣ：９６．６６％（２２０ｎｍ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８１９．４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８１９．４（観察値）。

【0322】

ＢＢＩ－Ｌ－３４の調製
Ｌ－３４ｇ（５０ｍｇ、６１．０６ｕｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）溶液に２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）－Ｎ－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－オキソエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］アセトアミド（３８．８７ｍｇ、６１．０６ｕｍｏｌ、１当量）を０℃で加え、この混合物を０℃で１５分間撹拌した。次に、ＮａＢＨ３ＣＮ（１１．５１ｍｇ、１８３．１７ｕｍｏｌ、３当量）を加え、得られた混合物を１５℃で１６時間撹拌した。この混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％～４０％，８分）によって精製し、白色の固形物としてＢＢＩ－Ｌ－３４（６０ｍｇ、３５．９８ｕｍｏｌ、収率５８．９３％、２ＴＦＡ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ７．９７（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），６．８７（ｓ，２Ｈ），６．６２（ｓ，１Ｈ），６．５６（ｓ，１Ｈ），６．０２－５．８９（ｍ，１Ｈ），５．８６－５．７３（ｍ，１Ｈ），５．０９－５．０３（ｍ，２Ｈ），４．９０－４．８０（ｍ，２Ｈ），４．６７－４．５３（ｍ，４Ｈ），４．１６（ｓ，２Ｈ），４．０５（ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８９－３．８０（ｍ，２Ｈ），３．７４－３．４６（ｍ，４２Ｈ），３．３７－３．３３（ｍ，４Ｈ），２．９８－２．７５（ｍ，４Ｈ），２．６６（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．２０（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，６Ｈ），１．８７－１．７６（ｍ，２Ｈ），１．３８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。ＨＰＬＣ：９７．１６％（２２０ｎｍ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１４３９．７（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１４３９．９（観測値）。

【0323】

実施例２０１：免疫複合体（ＩＣ）の調製
例示的な手順では、リシンに基づく結合の調製については、Ｚｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ｐＨ８．３で１００ｍＭのホウ酸塩、５０ｍＭの塩化ナトリウム、１ｍＭのエチレンジアミン四酢酸を含有する結合緩衝液に抗体の緩衝液を交換する。緩衝液交換抗体の濃度は、結合緩衝液を使用して約５～２５ｍｇ／ｍｌに調整し、滅菌濾過した。式（ＩＩ）のビス－ベンゾイミダゾール－リンカー（ＢＢＩ－Ｌ）中間化合物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）のいずれかに５～２０ｍＭの濃度まで溶解させる。結合のために、抗体を４～２０モル当量のＢＢＩ－Ｌと混合する。場合によっては、２０％（ｖ／ｖ）までの追加のＤＭＡまたはＤＭＳＯを加え、結合緩衝液中でのＢＢＩ－Ｌの溶解度を改善した。反応を、２０℃または３０℃または３７℃で約３０分～４時間進行させる。得られた複合体を、２つの連続するＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラムを使用して、未反応のＢＢＩ－Ｌから精製する。カラムを、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．２で予め平衡化する。アジュバントの抗体に対する比（ＤＡＲ）を、ＸＥＶＯ（商標）Ｇ２－ＸＳ ＴＯＦ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に接続されたＡＣＱＵＩＴＹ（商標）ＵＰＬＣ Ｈ－ｃｌａｓｓ（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）のＣ４逆相カラムを使用した液体クロマトグラフィー質量分析によって推定する。

【0324】

例示的な手順では、システインに基づく結合の調製については、Ｚｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、２ｍＭのＥＤＴＡを伴うｐＨ７．２のＰＢＳを含有する結合緩衝液に抗体の緩衝液を交換する。２～４モル過剰のトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）またはジチオスレイトール（ＤＴＴ）を使用して３７℃にて３０分～２時間にわたって鎖間ジスルフィドを還元する。結合緩衝液で予め平衡化したＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラムを使用して過剰なＴＣＥＰまたはＤＴＴを除去した。緩衝液交換抗体の濃度は、結合緩衝液を使用して約５～２０ｍｇ／ｍｌに調整し、滅菌濾過した。ＢＢＩ－Ｌはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）のいずれかに５～２０ｍＭの濃度まで溶解させる。結合のために、抗体を１０～２０モル当量のＢＢＩ－Ｌと混合する。場合によっては、２０％（ｖ／ｖ）までの追加のＤＭＡまたはＤＭＳＯを加え、結合緩衝液中でのＢＢＩ－Ｌの溶解度を改善した。反応を２０℃で約３０分～４時間進行させる。得られた複合体を、２つの連続するＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラムを使用して未反応のＢＢＩ－Ｌから精製する。カラムをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．２で予め平衡化する。アジュバントの抗体に対する比（ＤＡＲ）を、ＸＥＶＯ（商標）Ｇ２－ＸＳ ＴＯＦ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に接続されたＡＣＱＵＩＴＹ（商標）ＵＰＬＣ Ｈ－ｃｌａｓｓ（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）のＣ４逆相カラムを使用した液体クロマトグラフィー質量分析によって推定する。

【0325】

結合後に、未反応のＢＢＩ－Ｌ及び／または高分子量の凝集物を取り除く可能性があるために、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、クロマト分画、限外濾過、遠心限外濾過、接線濾過、及びこれらの組み合わせをさらに使用して複合体を精製してもよい。

【0326】

別の例示的な手順では、Ｇ－２５ ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）脱塩カラム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用してｐＨ８．３にて１００ｍＭのホウ酸、５０ｍＭの塩化ナトリウム、１ｍＭのエチレンジアミン四酢酸を含有する結合緩衝液に抗体の緩衝液を交換する。次に当該緩衝液を使用して、溶出液をそれぞれ約１～１０ｍｇ／ｍｌの濃度に調整し、次いで滅菌濾過する。抗体を２０～３０℃に予熱し、２～２０（例えば、７～１０）モル当量の式（ＩＩ）のビス－ベンゾイミダゾール－リンカー（ＢＢＩ－Ｌ）中間化合物と迅速に混合する。反応を３０℃で約１６時間進行させ、ｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で平衡化した２つの連続するＧ－２５脱塩カラムに通して免疫複合体（ＩＣ）を反応物から分離して、表２の免疫複合体（ＩＣ）を提供する。アジュバントの抗体に対する比（ＤＡＲ）は、ＸＥＶＯ（商標）Ｇ２－ＸＳ ＴＯＦ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に接続されたＡＣＱＵＩＴＹ（商標）ＵＰＬＣ Ｈクラス（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）のＣ４逆相カラムを使用した液体クロマトグラフィー質量分析によって決定される。

【0327】

結合については、抗体は、抗体の安定性または抗原結合特異性に悪影響を及ぼさない、当該技術分野で既知の水性緩衝液系に溶解させてもよい。リン酸緩衝生理食塩水を使用してもよい。ＢＢＩ－Ｌは、本明細書の別の箇所に記載されている少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒を含む溶媒系に溶解される。いくつかのそのような態様では、ＢＢＩ－Ｌはトリス緩衝液ｐＨ８（例えば、５０ｍＭのＴｒｉｓ）中に約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、または約５０ｍＭ、及びこれらの範囲内、例えば、約５ｍＭ～約５０ｍＭまたは約１０ｍＭ～約３０ｍＭの濃度まで溶解される。いくつかの態様では、ＢＢＩ－ＬはＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）、またはアセトニトリル、または別の好適な双極性非プロトン性溶媒に溶解される。

【0328】

あるいは結合反応では、当量過剰のＢＢＩ－Ｌ溶液を希釈し、抗体溶液と合わせてもよい。ＢＢＩ－Ｌ溶液は好適には、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒及び少なくとも１つの極性プロトン性溶媒で希釈されてもよく、これらの例には、水、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、及び酢酸が挙げられる。抗体に対するチエノアゼピン－リンカー中間体のモル当量は、約１．５：１、約３：１、約５：１、約１０：１、約１５：１または約２０：１、及びこれらの範囲内、例えば、約１．５：１～約２０：１、約１．５：１～約１５：１、約１．５：１～約１０：１、約３：１～約１５：１、約３：１～約１０：１、約５：１～約１５：１、または約５：１～約１０：１であってもよい。反応の完了は、ＬＣ－ＭＳのような当該技術分野で知られている方法によって好適にモニターされてもよい。結合反応は通常、約１時間～約１６時間の範囲内で完了する。反応が完了した後、試薬を反応混合物に加えて、反応を停止させてもよい。抗体チオール基がＢＢＩ－Ｌのマレイミドのようなチオール反応性基と反応する場合、未反応の抗体チオール基はキャッピング試薬と反応させてもよい。好適なキャッピング試薬の例はエチルマレイミドである。

【0329】

結合後に、免疫複合体は、例えば、これらに限定されないが、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、クロマト分画、限外濾過、遠心限外濾過、接線濾過、及びこれらの組み合わせのような当該技術分野で既知の精製方法によって精製され、結合されていない反応物質及び／または結合凝集体から分離されてもよい。例えば、精製の前に、免疫複合体を２０ｍＭコハク酸ナトリウム、ｐＨ５などで希釈してもよい。希釈した溶液をカチオンイオン交換カラムに適用した後、例えば、少なくとも１０カラム容量の２０ｍＭコハク酸ナトリウム、ｐＨ５で洗浄する。複合体はＰＢＳのような緩衝液で好適に溶出されてもよい。

【0330】

実施例２０２：免疫複合体の機能的評価
本発明の免疫複合体は、標的抗原発現腫瘍細胞と共培養される初代ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する共培養アッセイにて評価され得る。簡単に言えば、ＰＢＭＣは、密度遠心分離によって健康なヒト供与体血液（Ｓｔａｎｆｏｒｄ血液センター）から新たに単離される。次に、完全培地（１０％のＦＢＳを補充したＲＰＭＩ）にて１０：１のエフェクターの標的に対する比でＰＢＭＣを抗原発現腫瘍細胞と共培養し、示された被験物質の濃度の範囲で一晩インキュベートする。活性化は、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＬＥＧＥＮＤＰＬＥＸ（商標）サイトカインビーズアッセイによってＩＦＮλ１及びＴＮＦαのような炎症誘発性サイトカインの分泌によって測定される。

【0331】

本明細書にて引用されている刊行物、特許出願及び特許を含むすべての参考文献は、各参考文献が個々に且つ具体的に参照によって組み込まれるように指示されたかのように、且つその全体が本明細書で示されたかのように、参照によって本明細書に組み込まれる。

【国際調査報告】