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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-06-28
(54)【発明の名称】がんの再発の予測
(51)【国際特許分類】
G01N 33/574 20060101AFI20240621BHJP
C07K 16/40 20060101ALI20240621BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240621BHJP
C07K 17/00 20060101ALI20240621BHJP
【ＦＩ】
G01N33/574 A
C07K16/40 ZNA
C12N15/13
C07K17/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023579474
(86)(22)【出願日】2022-06-21
(85)【翻訳文提出日】2023-12-22
(86)【国際出願番号】 SE2022050614
(87)【国際公開番号】W WO2022271069
(87)【国際公開日】2022-12-29
(31)【優先権主張番号】63/213,791
(32)【優先日】2021-06-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523482248
【氏名又は名称】アロセル エービー
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】エリクソン，スタファン
(72)【発明者】
【氏名】ヴェンジ，パー
【テーマコード（参考）】
4H045
【Ｆターム（参考）】
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA09
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA50
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、血液癌と診断された患者の身体サンプルに含まれる血清チミジンキナーゼ１（ＳＴＫ１）物質のレベルを、ヒトＴＫ１の血清型に特異的に結合する抗体またはその断片を使用して測定することによって、がんの再発を予測することまたは患者の生存期間を予測することに関する。測定されたＳＴＫ１物質のレベルは、該患者の年齢に基づいて選択される閾値と比較される。がんの再発は、その後該比較に基づいて予測される。
【選択図】図８
【選択図】図８
【特許請求の範囲】
【請求項1】
がんの再発を予測する方法であって：血液癌と診断された患者の身体サンプルに含まれる血清チミジンキナーゼ１（ＳＴＫ１）物質のレベルを、ヒトＴＫ１の血清型に特異的に結合する抗体またはその断片を使用して測定すること、
前記測定されたＳＴＫ１物質のレベルを、前記患者の年齢に基づいて選択される閾値と比較すること、及び
前記患者のがんの再発を、前記比較に基づいて予測すること
を含む、前記方法。
【請求項2】
さらに、前記比較に基づいて、前記患者に関するハザード比（ＨＲ）を推定することを含み、がんの再発を予測することが、前記推定されたＨＲに基づいて、前記患者のがんの再発を予測することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
がんの再発を予測することが、前記身体サンプルで測定されたＳＴＫ１物質のレベルが、前記選択された閾値を超えた場合に前記患者のがんの再発に関する高リスクを予測すること、及び他の場合には、前記患者のがんの再発に関する低リスクを予測することを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
さらに、前記患者の年齢に基づいて、前記閾値を選択することを含む、請求項１～３のいずれかに記載の方法。
【請求項5】
さらに、前記患者の年齢が規定の年齢以上の場合には第一の閾値を選択すること、及び
前記患者の年齢が規定の年齢未満の場合には第二の異なる閾値を選択すること
を含む、請求項１～４のいずれかに記載の方法。
【請求項6】
前記第二の異なる閾値が、前記第一の閾値よりも高い、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
前記規定の年齢が６７歳である、請求項５または６に記載の方法。
【請求項8】
前記血液癌が、リンパ腫、白血病及び多発性骨髄腫からなる群から選択され、好ましくは、前記血液癌がリンパ腫であり、より好ましくは、前記血液癌がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、請求項１～７のいずれかに記載の方法。
【請求項9】
前記ＳＴＫ１物質のレベルを測定することが、血清サンプルまたは血漿サンプルに含まれるＳＴＫ１物質のレベルを、前記ヒトＴＫ１の血清型に特異的に結合する抗体またはその断片を使用して測定することを含む、請求項１～８のいずれかに記載の方法。
【請求項10】
前記身体サンプルに含まれるＳＴＫ１物質のレベルを測定することが、前記身体サンプルを、前記抗体またはその断片と接触させること、及び
前記ＳＴＫ１物質に結合した前記抗体またはその断片の量を測定すること
を含む、請求項１～９のいずれかに記載の方法。
【請求項11】
さらに、前記ＳＴＫ１物質に結合した前記抗体またはその断片の前記測定された量を、ＳＴＫ１物質のレベルに相関させることを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記抗体または断片の測定された量を相関させることが、前記抗体またはその断片の測定された量を、ＳＴＫ１物質のレベルに、組み換えヒトＴＫ１に結合した前記抗体またはその断片の測定された量と、組み換えヒトＴＫ１の濃度の間の所定の相関関係を使用して相関させることを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記ＳＴＫ１物質のレベルを測定することが、前記ヒトＴＫ１の血清型に特異的に結合する抗体またはその断片を使用して、前記患者から採取した身体サンプルに含まれるＳＴＫ１物質のレベルを、前記血液癌の患者の診断に関連して、または前記血液癌の処置の開始前に測定することを含む、請求項１～１２のいずれかに記載の方法。
【請求項14】
前記抗体またはその断片が、前記ヒトＴＫ１の血清型に特異的に結合するモノクローナル抗体またはその断片である、請求項１～１３のいずれかに記載の方法。
【請求項15】
前記モノクローナル抗体またはその断片が、ヒトＴＫ１のＧＥＡＶＡＡＲＫＬＦ（配列番号１）に対して特異性を有するモノクローナル抗体またはその断片、
ヒトＴＫ１のＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥ（配列番号２）、ＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号３）及びＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号４）のうちの少なくとも１つに対して特異性を有するモノクローナル抗体またはその断片、ならびに
ヒトＴＫ１のコンフォメーション依存性エピトープに対して特異性を有するモノクローナル抗体またはその断片
からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記モノクローナル抗体またはその断片が、配列番号５のアミノ酸配列を有する可変重（ＶＨ）ドメインの相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、
配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨドメインのＣＤＲ２、
配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨドメインのＣＤＲ３、
配列番号８のアミノ酸配列を有する可変軽（ＶＬ）ドメインのＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬドメインのＣＤＲ２、及び
配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＬドメインのＣＤＲ３
を有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
前記モノクローナル抗体またはその断片が、配列番号５のアミノ酸配列を有する可変重（ＶＨ）ドメインの相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、
配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨドメインのＣＤＲ２、
配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨドメインのＣＤＲ３、
配列番号１３のアミノ酸配列を有する可変軽（ＶＬ）ドメインのＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬドメインのＣＤＲ２、及び
配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＬドメインのＣＤＲ３
を有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項18】
前記モノクローナル抗体またはその断片が、配列番号１４のアミノ酸配列を有する可変重（ＶＨ）ドメインの相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、
配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＨドメインのＣＤＲ２、
配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＨドメインのＣＤＲ３、
配列番号１７のアミノ酸配列を有する可変軽（ＶＬ）ドメインのＣＤＲ１、
配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬドメインのＣＤＲ２、及び
配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＬドメインのＣＤＲ３
を有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項19】
前記ＳＴＫ１物質のレベルを測定することが、前記身体サンプルに含まれるＳＴＫ１物質のレベルを、身体サンプルに含まれるＳＴＫ１物質のレベルを測定するためのキットを使用して測定することを含み、前記キットが、ヒトＴＫ１のＧＥＡＶＡＡＲＫＬＦ（配列番号１）、
ヒトＴＫ１のＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥ（配列番号２）、ＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号３）及びＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号４）のうちの少なくとも１つ、ならびに
ヒトＴＫ１のコンフォメーション依存性エピトープ
からなる群から選択されるエピトープに対して特異性を有する第一のモノクローナル抗体またはその第一の断片、ならびに
ヒトＴＫ１のＧＥＡＶＡＡＲＫＬＦ（配列番号１）、
ヒトＴＫ１のＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥ（配列番号２）、ＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号３）及びＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号４）のうちの少なくとも１つ、ならびに
ヒトＴＫ１のコンフォメーション依存性エピトープ
からなる群から選択されるエピトープに対して特異性を有する第二のモノクローナル抗体またはその第二の断片を含む、請求項１５～１８のいずれかに記載の方法。
【請求項20】
前記第一のモノクローナル抗体またはその第一の断片及び前記第二のモノクローナル抗体またはその第二の断片のうちの一方が、固体支持体に固定化されるか、または前記固体支持体に固定化されることが意図される、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
前記キットが、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）キットである、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項22】
さらに、前記患者の予測されるがんの再発に基づいて、前記患者のための抗がん治療を選択することを含む、請求項１～２１のいずれかに記載の方法。
【請求項23】
さらに、前記患者の予測されるがんの再発に基づいて、前記患者のための患者サーベイランススケジュールを選択することを含む、請求項１～２２のいずれかに記載の方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、概して、チミジンキナーゼ１（ＴＫ１）の測定に関し、特に、測定された血清ＴＫ１レベルに基づくがんの再発の予測に関する。
【背景技術】
【0002】
２’－デオキシチミジンキナーゼ、またはＡＴＰ－チミジン５’－ホスホトランスフェラーゼとも呼ばれるチミジンキナーゼ１（ＴＫ１）（ＥＣ２．７．１．２１）は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）前駆体合成に関与する酵素である。ＴＫ１は、チミジンをリン酸化して、ＤＮＡへの組み込みを可能にする。ＴＫ１の発現は、活発な細胞増殖のマーカーであり、細胞周期のＧ０／Ｇ１期に細胞内濃度が低く、Ｓ／Ｇ２期に増加する。
【0003】
ある形態のＴＫ１は、悪性腫瘍を有するヒト及び動物の血清及び血漿中に高レベルで存在する。そのため、血清ＴＫ１の活性測定は、いくつかの異なる悪性疾患におけるモニタリング及び予測目的のために使用されているが、これまでのところ、主に白血病及びリンパ腫の場合である。
【0004】
さらに、ＴＫ１は、血液中で測定することができる唯一の増殖マーカーであり、日常検査として利用可能であれば、大きな臨床的利益をもたらす可能性がある。
【0005】
血清ＴＫ１活性は、放射性基質１２５Ｉ－ｄＵｒｄ（ＰＲＯＬＩＦＩＧＥＮ（登録商標）ＴＫ－ＲＥＡ、ＤｉａＳｏｒｉｎ Ｉｎｃ．）を用いて数十年間測定されているが、この放射性酵素アッセイは、使用が限られており、悪性の血液悪性腫瘍の場合に優先的である。２０００年以来、非放射測定のＴＫ１活性アッセイ（ＴＫ ＬＩＡＩＳＯＮ（登録商標）アッセイ、ＤｉａＳｏｒｉｎ Ｉｎｃ．）が利用可能となっている。これは、高感度かつロバストなアッセイであり、特に治療のモニタリング及び再発の予測のために、ヒト及びイヌにおいて臨床的に価値のある情報を提供している。
【0006】
過去１５年の間に、ヒトＴＫ１に対する抗体が利用可能になり、ＴＫ１タンパク質レベルの測定は、ＴＫ１活性とは対照的に、血液系及び固形腫瘍疾患の両方、例えば、乳癌、ならびにいくつかの他の形態の固形腫瘍及び血液系腫瘍においても可能になった。
【0007】
ＴＫ１タンパク質の測定の１種類は、ＴＫ１のＣ末端部分に対して生成される抗ＴＫ１抗体に基づくドットブロット法に依存している。この抗体産生戦略を選択する主な理由は、Ｃ末端領域が、ＴＫ１の細胞周期調節に関与していることである。これは、有糸分裂中にＴＫ１の分解を開始するための認識配列を含み、これが、抗体を生成することが可能であり得る露出領域であると想定されている。ドットブロットアッセイは、多くの研究に使用され成功しているが、大きな制限は、それが臨床検査業務における常法ではないことである。
【0008】
ＡｒｏＣｅｌｌ ＴＫ ２１０ ＥＬＩＳＡは、ヒトの血液中のＴＫ１の測定のための定量的免疫アッセイキットである。このＥＬＩＳＡ構成は、単純かつロバストであり、実施するための特殊な計装を必要とせず、標準的な実験室プロセスに容易に組み込むことができる。ＡｒｏＣｅｌｌ ＴＫ ２１０ ＥＬＩＳＡは、血液サンプルからＴＫ１をモニタリングするための迅速かつ単純な方法であるだけでなく、臨床化学における標準装備を使用して、信頼できる再現性のある結果をもたらす。
【発明の概要】
【0009】
本発明の一般的目的は、がんの生存率及び／またはがんの再発を患者において正確に予測することである。
【0010】
この目的及び他の目的は、本明細書に開示する実施形態によって達成される。
【0011】
本発明の態様は、がんの再発を予測するための方法に関する。該方法は、血液癌と診断された患者の身体サンプルに含まれる血清チミジンキナーゼ１（ＳＴＫ１）物質のレベルを、ヒトＴＫ１の血清型に特異的に結合する抗体またはその断片を使用して測定することを含む。該方法は、測定されたＳＴＫ１物質のレベルを、当該患者の年齢に基づいて選択される閾値と比較することも含む。該方法は、さらに、該患者のがんの再発を、該比較に基づいて予測することを含む。
【0012】
本発明は、測定されたＳＴＫ１のレベルと年齢に依存する閾値との比較に基づいて、がんの再発を予測する。本明細書に提示する実験データにより、血液癌のバイオマーカーとしてＳＴＫ１を使用した場合の精度が、年齢の異なる患者群に対して年齢関連基準または閾値範囲を使用すると著しく向上することが示される。
【0013】
実施形態は、さらなる目的及びその利点とともに、以下の説明を添付の図面とともに参照することによって最良に理解され得る。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【図1a】Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ病期に関する処置前の血清中のＴＫ１濃度。
【図1b】年齢調整国際予後指標に関する治療前の血清中のＴＫ１濃度。
【図2a】疾患の再発までの時間に関する処置前の血清中のＴＫ１濃度。
【図2b】生存期間に関する処置前の血清中のＴＫ１濃度。
【図3a】処置前に採取した血清中のＴＫ１濃度が高い患者と低い患者の全生存の差。二分のカットオフ値は、健常者の上限、すなわち、０．４５μｇ／Ｌに設定した。
【図3b】処置前に採取した血清中のＴＫ１濃度が高い患者と低い患者の無病生存の差。二分のカットオフ値は、健常者の上限、すなわち、０．４５μｇ／Ｌに設定した。
【図3c】処置前に採取した血清中のＴＫ１濃度が高い患者と低い患者の疾患特異的生存の差。二分のカットオフ値は、健常者の上限、すなわち、０．４５μｇ／Ｌに設定した。
【図4a】処置前の二分したＴＫ１（カットオフは正常値の上限である０．４５μｇ／Ｌ）及びａａＩＰＩスコアの多変量解析。
【図4b】処置前の二分したＴＫ１（カットオフは正常値の上限である０．４５μｇ／Ｌ）及びａａＩＰＩスコアの多変量解析。
【図4c】処置前の二分したＴＫ１（カットオフは正常値の上限である０．４５μｇ／Ｌ）及びＩＰＩスコアの多変量解析。
【図4d】処置前の二分したＴＫ１（カットオフは正常値の上限である０．４５μｇ／Ｌ）及びＩＰＩスコアの多変量解析。
【図5】Ｕ－ＣＡＮ研究プロジェクト内で収集された血液サンプルで測定されたＴＫ１濃度。処置中の血液サンプル（第三の化学療法サイクル後）は、Ｕ ＣＡＮプロジェクトの立ち上げ時には含まれていなかったが、ごく最近になって該Ｕ－ＣＡＮのプロトコルに追加された。
【図6】生存中及び罹患した患者に関する処置前後の血清中のＴＫ１濃度の比較。
【図7a】年齢調整国際予後指標（ａａＩＰＩ）０～１の個体に関する血清中のＴＫ１濃度。分析した血液サンプルは、処置開始前、処置中（すなわち、３回の化学療法サイクル後）及び処置終了後に血液サンプルを提示するＵ－ＣＡＮ研究プロジェクト内で採取された。
【図7b】ａａＩＰＩ ２～３の個体に関する血清中のＴＫ１濃度。分析した血液サンプルは、処置開始前、処置中（すなわち、３回の化学療法サイクル後）及び処置終了後に血液サンプルを提示するＵ－ＣＡＮ研究プロジェクト内で採取された。
【図8】処置中の血液サンプルは、立ち上げ時には採取されなかったが、ごく最近になってこのプロトコルに追加された（第三の化学療法サイクル後のサンプル）。したがって、利用可能な処置中のＴＫ１値を有する患者の数は限られ、これが、利用可能な処置前／後のＴＫ１比に反映されている。
【図9a】再発時期、日数との関連で、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者における診断時及び処置前のＴＫ１の血清濃度に関するカットオフ０．２５μｇ／Ｌでの疾患の再発の確率のカプラン・マイヤープロットである。
【図9b】再発時期、日数との関連で、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者における診断時及び処置前のＴＫ１の血清濃度に関するカットオフ０．３５μｇ／Ｌでの疾患の再発の確率のカプラン・マイヤープロットである。
【図9c】再発時期、日数との関連で、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者における診断時及び処置前のＴＫ１の血清濃度に関するカットオフ０．４５μｇ／Ｌでの疾患の再発の確率のカプラン・マイヤープロットである。
【図9d】再発時期、日数との関連で、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者における診断時及び処置前のＴＫ１の血清濃度に関するカットオフ０．７５μｇ／Ｌでの疾患の再発の確率のカプラン・マイヤープロットである。
【図9e】再発時期、日数との関連で、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者における診断時及び処置前のＴＫ１の血清濃度に関するカットオフ１．０５μｇ／Ｌでの疾患の再発の確率のカプラン・マイヤープロットである。
【図9f】再発時期、日数との関連で、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者における診断時及び処置前のＴＫ１の血清濃度に関するカットオフ２．５μｇ／Ｌでの疾患の再発の確率のカプラン・マイヤープロットである。
【図10a】再発時期、日数との関連で、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者における診断時及び処置前のＴＫ１の血清濃度に関するカットオフ０．４５μｇ／Ｌでの疾患の再発の確率のカプラン・マイヤープロットである。全患者。
【図10b】再発時期、日数との関連で、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者における診断時及び治療前のＴＫ１の血清濃度に関するカットオフ０．４５μｇ／Ｌでの疾患の再発の確率のカプラン・マイヤープロットである。６６歳を超える患者。
【図10c】再発時期、日数との関連で、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者における診断時及び治療前のＴＫ１の血清濃度に関するカットオフ０．４５μｇ／Ｌでの疾患の再発の確率のカプラン・マイヤープロットである。６７歳未満の患者。
【発明を実施するための形態】
【0015】
本発明は、概して、チミジンキナーゼ１（ＴＫ１）の測定に関し、特に、測定された血清ＴＫ１（ＳＴＫ１）レベルに基づくがんの再発の予測に関する。
【0016】
本発明は、測定されたＳＴＫ１のレベル及び年齢に依存する閾値との比較に基づいて、がんの再発を予測する。本明細書に提示する実験データにより、ＳＴＫ１の濃度が高いほど、血液癌の例としてのびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の病期のさらなる進行と相関したこと、及び全患者コホートに関して、処置前のＳＴＫ１レベルの上昇が、無病生存期間及び疾患特異的生存期間の短縮と相関したことが示される。しかしながら、この患者コホートを診断時の患者の年齢に応じた群に分けた場合、異なる事態が生じた。高齢患者に関しては、測定されたＳＴＫ１レベルとがんの再発のリスクとの間に比例相関はなかった。明らかに対照的に、健常者の平均レベルを上回るＳＴＫ１レベルの比較的低い増加は、すでにがんの再発のリスクが高いことと関連していた。さらに、規定の閾値をわずかに上回るＳＴＫ１レベルを有する高齢患者と、規定の閾値を大幅に上回るＳＴＫ１レベルを有する別の高齢患者とでは、がんの再発のリスクに有意差はなかった。しかしながら、この状況は、若年のＤＬＢＣＬ患者では異なり、比較的高いＳＴＫ１レベルは、高齢のＤＬＢＣＬ患者と比較してがんの再発のリスクが高いことと相関していた。
【0017】
したがって、血液癌のバイオマーカーとしてＳＴＫ１を使用した場合の精度は、年齢の異なる患者群に対して年齢関連基準または閾値範囲を使用すると著しく向上する。
【0018】
本発明の態様は、がんの再発を予測するための方法に関する。該方法は、血液癌と診断された患者の身体サンプルに含まれる血清チミジンキナーゼ１（ＳＴＫ１）物質のレベルを、ヒトＴＫ１の血清型に特異的に結合する抗体またはその断片を使用して測定することを含む。該方法は、測定されたＳＴＫ１物質のレベルを、当該患者の年齢に基づいて選択される閾値と比較することも含む。該方法は、さらに、該患者のがんの再発を、該比較に基づいて予測することを含む。
【0019】
ヒトのＴＫ１タンパク質は、ある特定の分子の存在、例えば、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の有無に応じて、該タンパク質の濃度、すなわち、高または低濃度に応じて、該タンパク質の型、例えば、天然型または組み換え型のＴＫ１に応じて、及び該タンパク質の部位、すなわち、血清または細胞質に応じて様々な形態で存在する。
【0020】
一般に、細胞質及び組み換え型ヒトＴＫ１は、ＡＴＰの存在下または高濃度では四量体として生じ、ＡＴＰの非存在下または低濃度では二量体として生じる。細胞質及び組み換え型ヒトＴＫ１の四量体型は、高ＴＫ１活性を有するが、二量体型は、より低いＴＫ１活性を有する。細胞ＴＫ１とも称される細胞質ＴＫ１は、細胞内部に存在するＴＫ１であり、かかる細胞から単離され得る。
【0021】
ヒトＳＴＫ１は、明らかに対照的に、高分子量複合体、例えば、オリゴマーの形態で、またはかかるオリゴマーを含む形態でＴＫ１活性を有する可能性があり、二量体及び四量体型は、ＴＫ１活性が極めて低いか、または活性を欠いている可能性もある。該オリゴマー化は、血液中で生じるジスルフィド架橋の形成に関連していると思われる。ＳＴＫ１は、患者の血液中に見られ、それにより、とりわけ、血液サンプル、血漿サンプル、または血清サンプルで測定され得る。
【0022】
本明細書で使用されるＳＴＫ１物質は、ＳＴＫ１のその様々な形態、例えば、二量体、四量体、オリゴマー及びＳＴＫ１を含む複合体を指す。該ＳＴＫ１物質は、患者の血液、血漿または血清に存在するＳＴＫ１物質である。該ＳＴＫ１物質は、ひいてはＳＴＫ１を上述の形態、例えば、二量体、四量体、オリゴマー及びＳＴＫ１を含む複合体で含み得る。ＳＴＫ１物質はまた、少なくとも１つのＴＫ１タンパク質単位及び他の分子及び／または高分子との複合体を含む。
【0023】
当技術分野では、リンパ節生検サンプルを含めた、がん細胞サンプル及び生検におけるＴＫ１メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）転写産物を測定するための様々な遺伝子発現アレイが提案されている。上述のように、ＴＫ１は、対象において、細胞質ＴＫ１及び血清ＴＫ１を含めた様々な形態で利用可能である。かかる生検サンプルからＴＫ１ ｍＲＮＡ転写産物を測定する遺伝子発現アレイは、主に、がん細胞に存在する細胞質ＴＫ１のＴＫ１ ｍＲＮＡ転写産物を測定するものである。したがって、かかる遺伝子発現アレイを、対象におけるＳＴＫ１物質のレベルを測定するために使用することはできない。
【0024】
実施形態では、該ＳＴＫ１物質のレベルを測定することは、該身体サンプルを、該抗体またはその断片と接触させることを含む。この実施形態はまた、該ＳＴＫ１物質に結合した抗体またはその断片の量を測定することを含む。
【0025】
該身体サンプルを該抗体またはその断片と接触させることは、該抗体またはその断片を、該身体サンプルに加えること及び該身体サンプルを該抗体またはその断片とインキュベートすることによって達成され得る。これにより、該抗体またはその断片が該ＳＴＫ１物質に結合し、該抗体またはその断片と該ＳＴＫ１物質の間で複合体が形成される。かかる実施形態では、該ＳＴＫ１物質に結合した該抗体またはその断片の量の測定は、該抗体またはその断片と該ＳＴＫ１物質の間の複合体を測定または定量化することにより、該ＳＴＫ１物質に結合した該抗体またはその断片の量を測定または定量化することを含み得る。
【0026】
実施形態では、該方法はまた、該ＳＴＫ１物質に結合した該抗体またはその断片の測定された量を、ＳＴＫ１物質のレベルに相関させることも含む。これは、基準ＴＫ１物質に結合した該抗体またはその断片の測定された量と、該基準ＴＫ１物質の濃度の所定の相関関係を使用して行われ得る。かかる所定の相関関係を生成する際に使用され得る典型的な基準ＴＫ１物質は、組み換えヒトＴＫ１である。
【0027】
したがって、該所定の相関関係は、該抗体またはその断片を、異なる濃度の該基準ＴＫ１物質、好ましくは、組み換えヒトＴＫ１を含む異なるサンプルに加えることによって生成され得る。該基準ＴＫ１物質、好ましくは、組み換えヒトＴＫ１に結合した該抗体またはその断片の量を、次いで異なるサンプルで測定することによって、基準ＴＫ１物質、好ましくは、組み換えヒトＴＫ１の濃度と、該基準ＴＫ１物質、好ましくは、組み換えヒトＴＫ１に結合した該抗体またはその断片の測定された量との間の標準曲線、関数または関係を得る。
【0028】
その後、この所定の相関関係、例えば、標準曲線、関数または関係を使用して、該身体サンプル中のＳＴＫ１物質に結合した該抗体またはその断片の測定された量を、該身体サンプルに含まれるＳＴＫ１物質の濃度にマッピングまたは変換することができる。
【0029】
血液癌と診断された患者の身体サンプルに含まれるＳＴＫ１物質のレベルを測定することに関しては、同じ型の抗体またはその断片を、該所定の相関関係を生成するために使用することが概して好ましい。したがって、好ましい実施形態では、該抗体またはその断片は、ヒトＴＫ１の血清型だけでなく、基準ＴＫ１物質、好ましくは、組み換えヒトＴＫ１にも特異的に結合することが可能である。
【0030】
実施形態では、該身体サンプルは、該身体サンプルを該抗体またはその断片とインキュベーションする前に、またはその間に処理される。このサンプル処理は、該身体サンプルに含まれる選択されたＳＴＫ１形態を安定化するため及び／またはより大きいＳＴＫ１複合体もしくはオリゴマーを、より小さい複合体もしくは多量体に分割するために使用され得る。
【0031】
したがって、実施形態では、サンプルの希釈または前処理緩衝液を、該身体サンプルに、該抗体またはその断片を該身体サンプルに加える前に、またはそれとの関連で加え、好ましくは、該抗体またはその断片を該身体サンプルに加える前に加える。
【0032】
実施形態では、該サンプルの希釈緩衝液は、ＡＴＰを、好ましくは、０．５ｍＭ～最大５０ｍＭの区間内で選択される濃度、例えば、０．５ｍＭ～最大２０ｍＭまたは１．５ｍＭ～最大５０ｍＭで含む。本明細書で先に記載の通り、ＡＴＰは、高い酵素ＴＫ１活性を有する四量体型のＴＫ１を安定させる。
【0033】
別の実施形態では、該サンプルの希釈緩衝液は、還元剤を含む。該還元剤がその後、より大きいＳＴＫ１複合体及びオリゴマーに含まれるジスルフィド架橋を切断し、より小さいＳＴＫ１形態、例えば、四量体が得られる可能性がある。ジチオエリトリトール（ＤＴＥ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオブチルアミン（ＤＴＢＡ）、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、及びそれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されないジスルフィド結合を切断することができる様々な還元剤が、該実施形態に従って使用され得る。該還元剤の量は、典型的には、０．１ｍＭ～最大１０ｍＭの区間内で選択される。
【0034】
該サンプルの希釈緩衝液は、実施形態では、ＡＴＰと還元剤の両方を含む。
【0035】
該ＳＴＫ１物質のレベルは、実施形態では、該患者から採取した身体サンプルに含まれる該ヒトＴＫ１の血清型に特異的に結合する抗体またはその断片を使用して、該血液癌の患者の診断に関連して、または少なくとも該血液癌の処置開始前に測定される。したがって、好ましい実施形態では、該身体サンプルは、好ましくは、診断時に、または該患者が血液癌と診断された時点もしくは少なくとも血液癌に罹患していると疑われた時点の少なくとも直後に採取される。
【0036】
実施形態では、該方法は、測定されたＳＴＫ１物質のレベルと、選択された閾値との比較に基づいて、該患者に対するハザード比（ＨＲ）を推定することを含む。かかる実施形態では、該患者のがんの再発を予測することは、推定されたＨＲに基づいて、該患者のがんの再発を予測することを含む。
【0037】
実施形態では、がんの再発を予測することは、該身体サンプルで測定されたＳＴＫ１物質のレベルが、選択された閾値を超えた場合に該患者のがんの再発に関する高リスクを予測すること、及び他の場合には、該患者のがんの再発に関する低リスクを予測することを含む。
【0038】
実施形態では、該方法はまた、該患者の薬剤（ａｇｅｎｔ）に基づいて閾値を選択することも含む。
【0039】
特定の実施形態では、該方法は、該患者の年齢が規定の年齢以上の場合には第一の閾値を選択すること、及び該患者の年齢が規定の年齢未満の場合には第二の異なる閾値を選択することを含む。
【0040】
したがって、この特定の実施形態では、２つの異なる年齢最適化閾値が採用され、使用する特定の年齢最適化閾値は、該患者の年齢が規定の年齢以上であるか、または規定の年齢未満であるかに依存する。
【0041】
実施形態では、該第二の異なる閾値は、該第一の閾値よりも高い。したがって、実施形態では、若年患者には、高齢患者と比較して高い閾値が使用される。
【0042】
例示的であるが現在は好ましい実施形態として、該既定の年齢は、６７歳である。これは、該患者が６７歳以上の場合には、第一の閾値が、測定されたＳＴＫ１物質のレベルとの比較に使用されるが、該患者が６７歳より若い場合には、第二の、好ましくはより高い閾値が該比較に使用されることを意味する。
【0043】
表５に示すように、０．３５μｇ／Ｌ～０．６０μｇ／Ｌの範囲内の閾値、特に０．４５μｇ／Ｌを選択することにより、６７歳以上の患者に関して、再発に関する高ハザード比、ひいてはがんの再発に関して高リスクを有する患者と、再発に関する低ハザード比を有する患者との区別が可能になった。実際には、より高い閾値を使用することにより、高ハザード比と低ハザード比を区別するためのｐ値が実際に低下した。これは、６７歳未満の患者に関して再発に関する対応するハザード比を示す表６とは明らかに対照的である。かかるより若年の患者については、より高い、少なくとも最大１．０５μｇ／Ｌの閾値が、高ハザード比と低ハザード比を区別するためのｐ値の低下と関連していた。したがって、高齢の患者群（年齢≧６７歳）では、がんの再発を予測する際の最適閾値は、０．３５μｇ／Ｌ～０．６０μｇ／Ｌの範囲内、特に０．４５μｇ／Ｌであるが、若年の患者群（年齢＜６７歳）では、該最適閾値は、０．７５μｇ／Ｌを超え、２．５μｇ／Ｌ未満であり、例えば、約１μｇ／Ｌである。
【0044】
本明細書に提示する実験データにより、高齢の患者では、ＳＴＫ１レベルの実にほぼ２倍の増加が、ハザード比の大きな増加と相関したことが示された。さらに、高齢の患者では、より高いＳＴＫ１レベルにおいて、ハザード比は中程度にさらに上昇したのみであった。これは、この高齢患者群では、より高いＳＴＫ１レベルは、高齢の患者におけるがんの再発の高リスクと比例的に関連しないことを意味する。この発見により、該ＳＴＫ１測定法及び特に、該ＳＴＫ１測定法の感度及びロバスト性に対して、生体サンプル中の比較的低いＳＴＫ１レベルの検出、及び健常者における対応するＳＴＫ１レベルからのかかる低ＳＴＫ１レベルの区別を可能にすることが要求される。
【0045】
該抗体またはその断片は、該ＳＴＫ１物質に特異的に結合し、特に、該ＴＫ１タンパク質の血清型に特異的に結合する。
【0046】
抗体またはその断片の特異性は、アフィニティー及び／またはアビディティーに基づいて特定され得る。抗原と該抗体またはその断片の解離の平衡定数（Ｋｄ）で表されるアフィニティーは、抗原決定基と該抗体またはその断片の抗原結合部位の間の結合強度の尺度である。Ｋｄの値が小さいほど、該抗原決定基と該抗体またはその断片の間の結合強度は強い。代替的に、該アフィニティーは、１／Ｋｄであるアフィニティー定数（Ｋａ）としても表すことができる。当業者には明らかなように、アフィニティーは、目的の特定の抗原に応じて、それ自体既知の方法で特定され得る。
【0047】
アビディティーは、抗体またはその断片と、関連する抗原の間の結合強度の尺度である。アビディティーは、抗原決定基と、その抗体またはその断片の抗原結合部位の間のアフィニティー、及び該抗体またはその断片に存在する関連する結合部位の数の両方に関連する。
【0048】
通常、抗体は、その抗原に対して、解離定数（Ｋｄ）１０－５～１０－１２モル／リットル（Ｍ）以下、及び好ましくは、１０－７～１０－１２Ｍ以下、及びより好ましくは、１０－８～１０－１２Ｍ、すなわち、結合定数（Ｋａ）１０５～１０１２Ｍ－１以上、及び好ましくは、１０７～１０１２Ｍ－１以上、及びより好ましくは、１０８～１０１２Ｍ－１で結合する。
【0049】
一般に、１０－４Ｍを超える任意のＫｄ値（または１０４Ｍ－１未満の任意のＫａ値）は、概して非特異的結合を示すと考えられている。好ましくは、抗体またはその断片は、該ＳＴＫ１物質に対して、アフィニティー５００ｎＭ未満、好ましくは、２００ｎＭ未満、より好ましくは、１０ｎＭ未満、例えば、５ｎＭ未満またはそれより低値、例えば、１ｎＭ未満で結合する。
【0050】
抗体またはその断片の抗原または抗原決定基に対する特異的結合は、例えば、スキャッチャード解析及び／または競合的結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素免疫測定（ＥＩＡ）及びサンドイッチ競合アッセイを含めたそれ自体既知の任意の適切な方法、ならびに当技術分野でそれ自体既知のその種々の変法で特定され得る。
【0051】
実施形態では、該抗体は、モノクローナル抗体、すなわち、モノクローナル抗ＴＫ１抗体である。別の実施形態では、該抗体は、ポリクローナル抗体、すなわち、ポリクローナル抗ＴＫ１抗体である。
【0052】
実施形態では、該抗体またはその断片は、ＴＫ１、好ましくは、ヒトＴＫ１のＣ末端領域からのアミノ酸配列からなるエピトープまたはペプチドに対して特異性を有する。
【0053】
該ペプチドは、好ましくは、ＴＫ１のアミノ酸位置２００から末端、すなわち、ヒトにおけるアミノ酸位置２３４に及ぶＴＫ１の部分（配列番号２８）から選択される。特定の実施形態では、該ペプチドは、アミノ酸位置２０５から、好ましくは２１０～アミノ酸位置２３０、好ましくは、２２５に及ぶＴＫ１タンパク質の部分から選択される。
【0054】
該ペプチドは、好ましくは、Ｎ量体であり、ここで、Ｎは、８～２０の範囲内、好ましくは、１０～最大１５の範囲内の整数である。該ペプチドは、好ましくは、該ＴＫ１タンパク質のＣ末端におけるＮ個の連続したアミノ酸からなる。
【0055】
実施形態では、該ペプチドは、以下のアミノ酸配列、ＧＥＡＶＡＡＲＫＬＦ（配列番号１）からなる。別の実施形態では、該ペプチドは、以下のアミノ酸配列、ＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥ（配列番号２）からなる。さらなる実施形態では、該ペプチドは、以下のアミノ酸配列、ＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号３）からなる。さらに別の実施形態では、該ペプチドは、以下のアミノ酸配列、ＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号４）からなる。
【0056】
ＧＥＡＶＡＡＲＫＬＦ（配列番号１）からなるエピトープに対して特異性を有するモノクローナル抗体は、アミノ酸配列ＤＹＥＭＨ（配列番号５）を有する可変重（ＶＨ）ドメインの相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、アミノ酸配列ＡＩＨＰＧＹＧＧＴＡＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号６）を有するＶＨドメインのＣＤＲ２、アミノ酸配列ＦＩＴＫＦＤＹ（配列番号７）を有するＶＨドメインのＣＤＲ３、アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＦＬＮ（配列番号８）を有する可変軽（ＶＬ）ドメインのＣＤＲ１、アミノ酸配列ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号９）を有するＶＬドメインのＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＷＱＧＴＨＦＰＷＴ（配列番号１０）を有するＶＬドメインのＣＤＲ３を有する。
【0057】
エピトープＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥ（配列番号２）、ＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号３）及びＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号４）に対して特異性を有するモノクローナル抗体は、アミノ酸配列ＤＹＥＭＨ（配列番号５）を有するＶＨドメインのＣＤＲ１、アミノ酸配列ＡＩＬＰＧＳＧＧＴＡＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号１１）を有するＶＨドメインのＣＤＲ２、アミノ酸配列ＬＩＴＴＦＤＹ（配列番号１２）を有するＶＨドメインのＣＤＲ３、アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮ（配列番号１３）を有するＶＬドメインのＣＤＲ１、アミノ酸配列ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号９）を有するＶＬドメインのＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＷＱＧＴＨＦＰＷＴ（配列番号１０）を有するＶＬドメインのＣＤＲ３を有する。
【0058】
別の実施形態態様では、該抗体またはその断片は、ヒトＴＫ１のコンフォメーション依存性エピトープに対して特異性を有する。かかるコンフォメーション依存性エピトープに対して特異性を有するモノクローナル抗体は、アミノ酸配列ＳＧＹＳＷＨ（配列番号１４）を有するＶＨドメインのＣＤＲ１、アミノ酸配列ＹＩＨＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＧ（配列番号１５）を有するＶＨドメインのＣＤＲ２、アミノ酸配列ＷＧＴＧＨＷＹＦＤＶ（配列番号１６）を有するＶＨドメインのＣＤＲ３、アミノ酸配列ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＴＮＹＡＮ（配列番号１７）を有するＶＬドメインのＣＤＲ１、アミノ酸配列ＧＴＮＮＲＶＰ（配列番号１８）を有するＶＬドメインのＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＡＬＷＹＳＮＨＷＶ（配列番号１９）を有するＶＬドメインのＣＤＲ３を有する。
【0059】
実施形態に従って使用され得るモノクローナル抗ＴＫ１抗体の上記に提示した３つの例は、ＷＯ２０１５／０９４１０６にさらに開示されている。モノクローナル抗ＴＫ１抗体に関するその教示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0060】
したがって、実施形態では、該モノクローナル抗体またはその断片は、ヒトＴＫ１のＧＥＡＶＡＡＲＫＬＦ（配列番号１）に対して特異性を有するモノクローナル抗体またはその断片、ヒトＴＫ１のＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥ（配列番号２）、ＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号３）及びＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号４）のうちの少なくとも１つに対して特異性を有するモノクローナル抗体またはその断片、ならびにヒトＴＫ１のコンフォメーション依存性エピトープに対して特異性を有するモノクローナル抗体またはその断片からなる群から選択される。
【0061】
別の実施形態では、該抗体またはその断片は、ＫＰＧＥＡＶＡＡＲＫＬＦＡＰＱ（配列番号２０）からなるエピトープまたはペプチドに対して特異性を有する。少なくとも１つのさらなるアミノ酸、例えば、システイン残基を、該ペプチドのＮ末端またはＣ末端、好ましくは、Ｎ末端に、他の分子、例えば、担体タンパク質へのカップリングとして使用するために付加してもよい。
【0062】
このエピトープに対して特異性を有する抗体は、ＷＯ９５／２９１９２にさらに開示されている。抗ＴＫ１抗体に関するその教示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0063】
さらなる実施形態では、該抗体またはその断片は、ＴＫ１の活性部位からのアミノ酸配列からなるエピトープまたはペプチドに対して特異性を有する。該ペプチドは、好ましくは、ヒトＴＫ１のアミノ酸位置１５０～アミノ酸位置１９０に及ぶＴＫ１の部分から選択される。特定の実施形態では、該ペプチドは、アミノ酸位置１５５、好ましくは、１６０及びより好ましくは、１６１から、アミノ酸位置１８５、好ましくは、１８３に及ぶＴＫ１の部分から選択される。
【0064】
該ペプチドは、好ましくは、Ｍ量体であり、ここで、Ｍは、１０～最大４０の範囲内、好ましくは、２０～最大３０の範囲内の整数及びより好ましくは、２３または２４である。該ペプチドは、好ましくは、該ＴＫ１タンパク質の活性部位におけるＭ個の連続したアミノ酸からなる。
【0065】
少なくとも１つのさらなるアミノ酸、例えば、システイン残基を、該ペプチドのＮ末端またはＣ末端、好ましくは、Ｎ末端に、他の分子、例えば、担体タンパク質へのカップリングとして使用するために付加してもよい。
【0066】
実施形態では、該ＴＫ１の活性部位からのアミノ酸配列からなるペプチドは、ヒトＴＫ１のアミノ酸位置１６１～１８３に相当するアミノ酸配列を有する、すなわち、ＡＹＴＫＲＬＧＴＥＫＥＶＥＶＩＧＧＡＤＫＹＨＳ（配列番号２１）のアミノ酸配列を有する。
【0067】
このエピトープに対して特異性を有する抗体は、ＷＯ２００８／１４２６６４にさらに開示されている。抗ＴＫ１抗体に関するその教示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0068】
さらなる実施形態では、該抗体またはその断片は、ＷＯ２０１９／２０１９０１に開示されているモノクローナル抗体またはその断片であり、モノクローナル抗ＴＫ１抗体に関するその教示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0069】
例えば、該モノクローナル抗体は、ｍＡｂ ６Ｃ６、ｍＡｂ ４Ｈ４またはｍＡｂ ２３Ｃ１１であり得る。
【0070】
ｍＡｂ ６Ｃ６ ＶＨドメイン（配列番号２２）：
ＭＥＴＧＬＲＷＬＬＬＶＡＶＬＫＧＶＱＣＱＥＱＬＥＥＳＧＧＤＬＶＫＰＥＧＳＬＴＬＴＣＴＡＳＲＦＳＦＳＳＳＹＷＩＣＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＡＣＩＹＡＧＤＳＧＳＳＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＶＳＫＴＳＳＴＴＶＴＬＱＴＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲＡＳＶＧＡＡＹＤＹＦＡＬＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＧＱＰＫＡＰＳＶＦＰＬＡＰＣＣＧＤＴＰＳＳＴＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＬＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧ
ＭＥＴＧＬＲＷＬＬＬＶＡＶＬＫＧＶＱＣＱＥＱＬＥＥＳＧＧＤＬＶＫＰＥＧＳＬＴＬＴＣＴＡＳＲＦＳＦＳＳＳＹＷＩＣＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＡＣＩＹＡＧＤＳＧＳＳＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＶＳＫＴＳＳＴＴＶＴＬＱＴＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲＡＳＶＧＡＡＹＤＹＦＡＬＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＧＱＰＫＡＰＳＶＦＰＬＡＰＣＣＧＤＴＰＳＳＴＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＬＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧ
【0071】
ｍＡｂ ６Ｃ６ ＶＬドメイン（配列番号２３）：
ＭＤＴＲＡＰＴＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＧＡＲＣＡＬＶＭＴＱＴＰＡＳＶＥＡＡＭＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＥＤＶＳＳＨＬＡＷＹＱＱＲＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＧＡＳＤＬＡＳＧＶＰＳＲＦＴＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＡＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＧＹＹＹＩＳＤＳＰＹＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＧＤＰＶＡＰＴＶＬＩＦＰＰＡＡＤＱＶＡＴＧＴＶＴＩＶＣＶＡＮＫＹＦＰＤＶＴＶＴＷＥＶＤＧＴＴＱＴＴＧＩＥＮＳＫＴＰＱＮＳＡＤＣＴＹＮＬＳＳＴＬＴＬＴＳＴＱＹＮＳＨＫＥＹＴＣＫＶＴＱＧＴＴＳＶＶＱＳＦＮＲＧＤＣ
ＭＤＴＲＡＰＴＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＧＡＲＣＡＬＶＭＴＱＴＰＡＳＶＥＡＡＭＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＥＤＶＳＳＨＬＡＷＹＱＱＲＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＧＡＳＤＬＡＳＧＶＰＳＲＦＴＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＡＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＧＹＹＹＩＳＤＳＰＹＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＧＤＰＶＡＰＴＶＬＩＦＰＰＡＡＤＱＶＡＴＧＴＶＴＩＶＣＶＡＮＫＹＦＰＤＶＴＶＴＷＥＶＤＧＴＴＱＴＴＧＩＥＮＳＫＴＰＱＮＳＡＤＣＴＹＮＬＳＳＴＬＴＬＴＳＴＱＹＮＳＨＫＥＹＴＣＫＶＴＱＧＴＴＳＶＶＱＳＦＮＲＧＤＣ
【0072】
ｍＡｂ ４Ｈ４ ＶＨドメイン（配列番号２４）：
ＭＥＴＧＬＲＷＬＬＬＶＡＶＬＫＧＶＱＣＱＳＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＥＧＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＦＳＳＧＹＤＭＣＷＶＲＱＴＰＧＫＧＬＥＷＩＡＣＩＳＶＤＳＤＧＶＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＳＴＴＶＴＬＱＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＹＥＳＳＳＧＶＹＩＰＹＦＴＬＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＧＱＰＫＡＰＳＶＦＰＬＡＰＣＣＧＤＴＰＳＳＴＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＬＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧ
ＭＥＴＧＬＲＷＬＬＬＶＡＶＬＫＧＶＱＣＱＳＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＥＧＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＦＳＳＧＹＤＭＣＷＶＲＱＴＰＧＫＧＬＥＷＩＡＣＩＳＶＤＳＤＧＶＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＳＴＴＶＴＬＱＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＹＥＳＳＳＧＶＹＩＰＹＦＴＬＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＧＱＰＫＡＰＳＶＦＰＬＡＰＣＣＧＤＴＰＳＳＴＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＬＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧ
【0073】
ｍＡｂ ４Ｈ４ ＶＬドメイン（配列番号２５）：
ＭＤＭＲＡＰＴＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＧＡＲＣＡＤＩＶＬＴＱＴＰＡＳＶＥＡＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＳＩＹＳＹＬＡＷＹＱＨＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＫＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＨＹＹＹＳＳＴＳＧＧＧＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＧＤＰＶＡＰＴＶＬＩＦＰＰＡＡＤＱＶＡＴＧＴＶＴＩＶＣＶＡＮＫＹＦＰＤＶＴＶＴＷＥＶＤＧＴＴＱＴＴＧＩＥＮＳＫＴＰＱＮＳＡＤＣＴＹＮＬＳＳＴＬＴＬＴＳＴＱＹＮＳＨＫＥＹＴＣＫＶＴＱＧＴＴＳＶＶＱＳＦＮＲＧＤＣ
ＭＤＭＲＡＰＴＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＧＡＲＣＡＤＩＶＬＴＱＴＰＡＳＶＥＡＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＳＩＹＳＹＬＡＷＹＱＨＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＫＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＨＹＹＹＳＳＴＳＧＧＧＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＧＤＰＶＡＰＴＶＬＩＦＰＰＡＡＤＱＶＡＴＧＴＶＴＩＶＣＶＡＮＫＹＦＰＤＶＴＶＴＷＥＶＤＧＴＴＱＴＴＧＩＥＮＳＫＴＰＱＮＳＡＤＣＴＹＮＬＳＳＴＬＴＬＴＳＴＱＹＮＳＨＫＥＹＴＣＫＶＴＱＧＴＴＳＶＶＱＳＦＮＲＧＤＣ
【0074】
ｍＡｂ ２３Ｃ１１ ＶＨドメイン（配列番号２６）：
ＭＥＴＧＬＲＷＬＬＬＶＡＶＬＫＧＶＱＣＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＮＹＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＹＧＤＤＮＴＹＣＡＮＷＴＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＴＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＰＤＹＩＡＡＫＭＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬＧＱＰＫＡＰＳＶＦＰＬＡＰＣＣＧＤＴＰＳＳＴＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＬＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧ
ＭＥＴＧＬＲＷＬＬＬＶＡＶＬＫＧＶＱＣＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＮＹＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＹＧＤＤＮＴＹＣＡＮＷＴＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＴＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＰＤＹＩＡＡＫＭＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬＧＱＰＫＡＰＳＶＦＰＬＡＰＣＣＧＤＴＰＳＳＴＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＬＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧ
【0075】
ｍＡｖ ２３Ｃ１１ ＶＬドメイン（配列番号２７）：
ＭＤＴＲＡＰＴＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＧＡＲＣＤＶＶＭＴＱＴＰＡＳＶＥＡＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＳＩＳＧＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＲＰＫＬＬＩＹＲＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＣＴＹＧＳＳＴＦＳＳＹＧＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＧＤＰＶＡＰＴＶＬＩＦＰＰＡＡＤＱＶＡＴＧＴＶＴＩＶＣＶＡＮＫＹＦＰＤＶＴＶＴＷＥＶＤＧＴＴＱＴＴＧＩＥＮＳＫＴＰＱＮＳＡＤＣＴＹＮＬＳＳＴＬＴＬＴＳＴＱＹＮＳＨＫＥＹＴＣＫＶＴＱＧＴＴＳＶＶＱＳＦＮＲＧＤＣ
ＭＤＴＲＡＰＴＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＧＡＲＣＤＶＶＭＴＱＴＰＡＳＶＥＡＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＳＩＳＧＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＲＰＫＬＬＩＹＲＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＣＴＹＧＳＳＴＦＳＳＹＧＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＧＤＰＶＡＰＴＶＬＩＦＰＰＡＡＤＱＶＡＴＧＴＶＴＩＶＣＶＡＮＫＹＦＰＤＶＴＶＴＷＥＶＤＧＴＴＱＴＴＧＩＥＮＳＫＴＰＱＮＳＡＤＣＴＹＮＬＳＳＴＬＴＬＴＳＴＱＹＮＳＨＫＥＹＴＣＫＶＴＱＧＴＴＳＶＶＱＳＦＮＲＧＤＣ
【0076】
実施形態では、該身体サンプルに含まれるＳＴＫ１物質のレベルは、キットを使用して測定される。該キットは、好ましくは、第一の抗体またはその第一の断片及び第二の抗体またはその第二の断片を含む。該第一及び第二の抗体は、上記の例示的なモノクローナル及びポリクローナル抗ＴＫ１抗体の例から選択され得る。
【0077】
特定の実施形態では、該キットは、ｉ）ヒトＴＫ１のＧＥＡＶＡＡＲＫＬＦ（配列番号１）、ｉｉ）ヒトＴＫ１のＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥ（配列番号２）、ＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号３）及びＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号４）のうちの少なくとも１つ、ならびにｉｉｉ）ヒトＴＫ１のコンフォメーション依存性エピトープからなる群から選択されるエピトープに対して特異性を有する第一のモノクローナル抗体またはその第一の断片を含む。該キットはまた、ｉ）ヒトＴＫ１のＧＥＡＶＡＡＲＫＬＦ（配列番号１）、ｉｉ）ヒトＴＫ１のＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥ（配列番号２）、ＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号３）及びＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号４）のうちの少なくとも１つ、ならびにｉｉｉ）ヒトＴＫ１のコンフォメーション依存性エピトープからなる群から選択されるエピトープに対して特異性を有する第二のモノクローナル抗体またはその第二の断片も含む。
【0078】
実施形態では、該第一の抗体またはその第一の断片は、支持体に固定化された、または支持体に固定化されることが意図されたいわゆる捕捉抗体であり、該第二の抗体またはその第二の断片は、いわゆる検出抗体である。別の実施形態では、該第二の抗体またはその第二の断片は、支持体に固定化された、または支持体に固定化されることが意図された捕捉抗体であり、該第一の抗体またはその第一の断片は、検出抗体として使用される。
【0079】
実施形態では、該第一及び第二の抗体または該第一及び第二の断片は、該ＳＴＫ１物質中の異なるエピトープに対して特異性を有する。
【0080】
別の実施形態では、該第一及び第二の抗体または該第一及び第二の断片は、該ＳＴＫ１物質中の同じエピトープに対して特異性を有する。これは、同じエピトープが、複数のＴＫ１タンパク質単位の高分子量複合体中の複数のコピーに存在し得るために起こり得る。したがって、該ＳＴＫ１物質は、複数の、すなわち、少なくとも２つのＴＫ１タンパク質単位の多価複合体であり得る。実際には、同じ型の抗体またはその断片を、該第一及び第二の抗体または第一及び第二の断片として使用することができる。
【0081】
実施形態では、該第一及び該第二の抗体または該第一及び第二の断片のうちの一方は、該ＴＫ１の活性部位からのアミノ酸配列からなるペプチドに対して特異性を有し、該第一及び該第二の抗体または該第一及び第二の断片のうちの他方は、該ＴＫ１のＣ末端領域からのアミノ酸配列からなるペプチドに対して特異性を有する。
【0082】
別の実施形態では、該第一及び該第二の抗体または該第一及び第二の断片のうちの一方は、該ＴＫ１のＣ末端領域からの第一のアミノ酸配列からなるペプチドに対して特異性を有し、該第一及び該第二の抗体または該第一及び第二の断片のうちの他方は、該ＴＫ１のＣ末端領域からの該第一のアミノ酸配列、または該ＴＫ１のＣ末端領域からの第二の異なるアミノ酸配列からなるペプチドに対して特異性を有する。
【0083】
さらなる実施形態では、該第一及び該第二の抗体または該第一及び第二の断片のうちの一方は、該ＴＫ１のＣ末端領域からの第一のアミノ酸配列からなるペプチドに対して特異性を有し、該第一及び該第二の抗体または該第一及び第二の断片のうちの他方は、ヒトＴＫ１のコンフォメーション依存性エピトープに対して特異性を有する。
【0084】
さらに別の実施形態では、該第一及び該第二の抗体または該第一及び第二の断片のうちの一方は、該ＴＫ１の活性部位からのアミノ酸配列からなるペプチドに対して特異性を有し、該第一及び第二の抗体または該第一及び第二の断片のうちの他方は、ヒトＴＫ１のコンフォメーション依存性エピトープに対して特異性を有する。
【0085】
本明細書で使用される抗体の断片は、一本鎖抗体、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｄ断片、シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ｓｃＦｖ－Ｆｃ断片、ジ－ｓｃＦｖ断片及びＣＤＲ領域からなる群から選択され得る。
【0086】
実施形態では、該キットは、サンドイッチアッセイキットである。特定の実施形態では、該キットは、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）キットであり、好ましくは、サンドイッチＥＬＩＳＡである。
【0087】
以下の考察では、該第一の抗体または第一の断片は、捕捉抗体であると仮定され、該第二の抗体または第二の断片は、検出抗体として作用する。該実施形態は、しかしながら、これに限定されるものではなく、捕捉及び検出の抗体を交換することができる。
【0088】
サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して、支持体、例えば、固体支持体の表面を調製し、それに該第一の抗体または該第一の断片を、いわゆる捕捉抗体として結合させることにより、身体サンプルに含まれるＳＴＫ１物質を検出することができる。好ましい実施形態では、既知量の該第一の抗体または該第一の断片を、該支持体の表面に結合させる。該表面上の任意の非特異的結合部位は、任意にではあるが、好ましくは、ブロックされる。次いで、該身体サンプルが該表面に載せられ、その中に存在する任意のＳＴＫ１物質が、固定化された第一の抗体または第一の断片によって捕捉される。未結合の物質は、好ましくは１回または複数回の洗浄ステップにより除去される。その後、通常は検出抗体と称される第二の抗体または第二の断片を添加し、該第一の抗体または該第一の断片に捕捉された任意のＳＴＫ１物質に結合させる。
【0089】
次いで、結合した第二の抗体または第二の断片の量を、直接または間接的な検出方法によって測定する。例えば、標識または酵素が、該第二の抗体または該第二の断片に直接、または結合、例えば、ビオチン－ストレプトアビジンもしくはビオチン－アビジン結合を介して間接的に取り付けられ得る。代替的に、標識されているか、または酵素に結合されており、該第二の抗体または第二の断片に特異的に結合する第二の抗体または第二の断片を使用することも可能である。
【0090】
したがって、実施形態では、該第二の抗体または第二の断片は、共有結合したビオチンを有する。代替的に、該第二の抗体または第二の断片は、共有結合したストレプトアビジンまたはアビジンを有する。
【0091】
該キットは、好ましくは、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識ストレプトアビジンまたはＨＲＰ標識アビジンも含む。代替的に、該キットは、ＨＲＰ標識ビオチンも含む。該キットはまた、ＨＲＰの基質、例えば、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質、３，３’－ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）基質または２，２’－アジノ－ビス（３－エチルベンゾチアゾリン－６－スルホン酸）（ＡＢＴＳ）基質も含む。かかる場合、該サンプルに含まれるＳＴＫ１物質のレベルは、ＨＲＰによる該発色基質の検出可能な着色生成物への変換を検出する分光光度法によって測定され得る。
【0092】
実施形態では、該キットはまた、該第一の抗体または第一の断片が固定化される、または固定化されることが意図される支持体としてマイクロタイタープレート（ＭＣＰ）も含む。
【0093】
実施形態では、該第一の抗体または該第一の断片及び該第二の抗体または該第二の断片のうちの一方は、ＧＥＡＶＡＡＲＫＬＦ（配列番号１）からなるエピトープに対して特異性を有し、アミノ酸配列ＤＹＥＭＨ（配列番号５）を有するＶＨドメインのＣＤＲ１、アミノ酸配列ＡＩＨＰＧＹＧＧＴＡＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号６）を有するＶＨドメインのＣＤＲ２、アミノ酸配列ＦＩＴＫＦＤＹ（配列番号７）を有するＶＨドメインのＣＤＲ３、アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＦＬＮ（配列番号８）を有するＶＬドメインのＣＤＲ１、アミノ酸配列ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号９）を有するＶＬドメインのＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＷＱＧＴＨＦＰＷＴ（配列番号１０）を有するＶＬドメインのＣＤＲ３を有する。
【0094】
特定の実施形態では、該第一の抗体または該第一の断片及び該第二の抗体または該第二の断片のうちの他方は、エピトープＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥ（配列番号２）、ＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号３）及びＮＣＰＶＰＧＫＰＧＥＡＶ（配列番号４）に対して特異性を有し、アミノ酸配列ＤＹＥＭＨ（配列番号５）を有するＶＨドメインのＣＤＲ１、アミノ酸配列ＡＩＬＰＧＳＧＧＴＡＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号１１）を有するＶＨドメインのＣＤＲ２、アミノ酸配列ＬＩＴＴＦＤＹ（配列番号１２）を有するＶＨドメインのＣＤＲ３、アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮ（配列番号１３）を有するＶＬドメインのＣＤＲ１、アミノ酸配列ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号９）を有するＶＬドメインのＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＷＱＧＴＨＦＰＷＴ（配列番号１０）を有するＶＬドメインのＣＤＲ３を有する。
【0095】
該キットは、必ずしもＥＬＩＳＡキットである必要はない。別の実施形態では、該キットは、アフィニティークロマトグラフィーを使用し、ここでは、該第一の抗体は、該固定相、例えば、カラムに含まれるゲルマトリクスまたはビーズに結合する。例えば、該ゲルマトリクスまたはビーズは、アガロース、例えば、ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）で作製され得る。
【0096】
かかる場合、身体サンプルに存在するＴＫ１物質は、固定化された第一の抗体または第一の断片への結合を介して、該カラムに捕捉される。洗浄後、結合したＳＴＫ１物質は、溶出され、該第二の抗体または第二の断片を使用して検出され得る。例えば、溶出されたＳＴＫ１物質の量は、ウェスタンブロッティングを使用し、該ＳＴＫ１検出用の第二の抗体または第二の断片で、直接または間接的な検出法を使用して測定され得る。
【0097】
該支持体は、代替的に、磁気ビーズ、例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）磁気ビーズであってもよい。
【0098】
さらなる実施形態では、該キットは、化学ルミネセンス免疫検定（ＣＬＩＡ）キットである。ＣＬＩＡは、その標識が発光性分子である免疫測定技術である。ＣＬＩＡ法は、発光団マーカーを使用した直接の場合もあれば、酵素マーカーを使用した間接的の場合もある。いずれの方法も、競合的でも非競合的でもよい。直接ＣＬＩＡ法では、使用される発光団マーカーは、通常、アクリジニウム及びルテニウムエステルである一方、間接的な方法で使用される酵素マーカーは、通常、アダマンチル１，２－ジオキセタンアリールホスフェート（ＡＭＰＰＤ）を基質とするアルカリホスファターゼ、及びルミノールまたはその誘導体を基質とするＨＲＰである。
【0099】
該キットは、必ずしも２つの抗体または断片を含む必要はないが、その代わりに、１つの型の抗体または断片のみを含み得る。
【0100】
さらに、該キットは、必ずしも、いわゆる捕捉抗体または断片を含む必要はない。明らかに対照的に、複数の、すなわち、少なくとも２つの異なる抗体または断片を使用して、該抗体または断片の少なくとも１つを固定化する必要なく、該ＳＴＫ１物質のレベルを測定することができる。
【0101】
実施形態では、該方法はまた、予測されるがんの再発のリスクに基づいて、当該患者のための抗がん治療を選択することも含む。したがって、最適なまたは少なくとも適切な抗がん治療が、血液癌患者のために、測定された身体サンプルに含まれるＳＴＫ１物質のレベルに基づいて、ひいては測定された身体サンプルに含まれるＳＴＫ１物質のレベルと、選択された閾値の比較に基づいて該患者に関して推定された予測されるがんの再発のリスクに基づいて選択される。これは、測定されたＳＴＫ１物質のレベルが、選択された閾値よりも高い、ひいてはがんの再発の高リスクが予測される患者には、ＳＴＫ１物質のレベルが該閾値よりも低い、ひいてはがんの再発の低リスクが予測される患者と比較して、より積極的な抗がん治療が選択され得ることを意味する。選択され得る抗がん治療の例としては、対症療法、例えば、輸血、化学療法、放射線療法、免疫療法及び骨髄移植のうちの１つ以上が挙げられる。
【0102】
例えば、先に言及した選択された閾値を超える測定されたＳＴＫ１物質のレベルを有する患者には、第一の抗がん治療が選択され得る一方、選択された閾値未満のＳＴＫ１物質のレベルが測定された他の患者には、第二の異なる抗がん治療が選択される。
【0103】
実施形態では、該方法は、当該患者の予測されるがんの再発のリスクに基づいて、該患者のための患者サーベイランススケジュールを選択することを含む。したがって、最適なまたは少なくとも適切な患者サーベイランススケジュールまたはスキームが、該患者のために、測定された身体サンプルに含まれるＳＴＫ１物質のレベルと、選択された閾値の比較に基づいて、ひいては測定された身体サンプルに含まれるＳＴＫ１物質のレベルに基づいて該患者に関して推定された予測されるがんの再発のリスクに基づいて選択される。これは、測定されたＳＴＫ１物質のレベルが、選択された閾値よりも高い、ひいてはがんの再発の高リスクが予測される患者には、より頻繁なサーベイランス及び経過観察（第一のサーベイランススケジュール）が選択され得ることと比較して、ＳＴＫ１物質のレベルが、選択された閾値よりも低い、ひいてはがんの再発の低リスクが予測される患者は、その代わりにより低頻度のサーベイランス及び経過観察（第二のサーベイランススケジュール）に従い得ることを意味する。
【実施例】
【0104】
びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）に罹患しており、かつＲ－ＣＨＯＰで処置された１４６名の患者（６４名の女性、８２名の男性）からのチミジンキナーゼ１（ＴＫ１）の血清レベルを、処置前、処置中、及び処置後に、免疫測定法によって測定した。血清中のＴＫ１濃度は、リンパ腫患者では、健常者のＴＫ１濃度と比較して、有意に上昇することが分かった（ｐ＜０．００００１）。より高い濃度は、より進行した病期及び高い国際予後指標（ＩＰＩ）と相関した（ｐ＜０．００００１）。処置前のＴＫ１の上昇は、生存期間の短縮と相関した（ｐ＜０．００１）。全体として、ＴＫ１濃度は、処置中に約１０倍に増加し、その後低下した。この変化は、１期及び２期の患者で最も顕著であった。結論として、免疫測定法により測定されたＴＫ１は、ＤＬＢＣＬの特徴及びアウトカムと相関する可能性があり、処置の評価において重要な基準値を提示する可能性がある。
【0105】
材料及び方法
試験デザイン及び設定
２０１０年～２０１６年にＤＬＢＣＬと診断された１４６名の患者の血清及び臨床データを、Ｕｐｐｓａｌａ－Ｕｍｅａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ（Ｕ－ＣＡＮ）から入手した。Ｕ－ＣＡＮプロジェクトの中心は、将来の研究のために、がん患者からのインフォームド・コンセントを得ながら、データ、血液及び組織サンプルの長期的な収集を確立することである。Ｕ－ＣＡＮの枠内で、血液サンプルは、バイオバンキング用に、がんの診断及びその後の処置の過程のいくつかの所定の時点で採取される。ＤＬＢＣＬを有する患者の場合、これらの時点は、診断時（または少なくとも処置開始前）、処置中（すなわち、３回の処置サイクル後）、処置終了後３か月及び１年、ならびに再発時と定義されている。処置中の血液サンプルは、Ｕ－ＣＡＮの立ち上げ時には含まれていなかったが、ごく最近になってプロトコルに追加された。この試験の対象とされるすべての患者を、治癒目的で標準的化学療法レジメンであるＲ－ＣＨＯＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾン）、または同等のもので処置し、１４日または２１日間隔で投与した。
試験デザイン及び設定
２０１０年～２０１６年にＤＬＢＣＬと診断された１４６名の患者の血清及び臨床データを、Ｕｐｐｓａｌａ－Ｕｍｅａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ（Ｕ－ＣＡＮ）から入手した。Ｕ－ＣＡＮプロジェクトの中心は、将来の研究のために、がん患者からのインフォームド・コンセントを得ながら、データ、血液及び組織サンプルの長期的な収集を確立することである。Ｕ－ＣＡＮの枠内で、血液サンプルは、バイオバンキング用に、がんの診断及びその後の処置の過程のいくつかの所定の時点で採取される。ＤＬＢＣＬを有する患者の場合、これらの時点は、診断時（または少なくとも処置開始前）、処置中（すなわち、３回の処置サイクル後）、処置終了後３か月及び１年、ならびに再発時と定義されている。処置中の血液サンプルは、Ｕ－ＣＡＮの立ち上げ時には含まれていなかったが、ごく最近になってプロトコルに追加された。この試験の対象とされるすべての患者を、治癒目的で標準的化学療法レジメンであるＲ－ＣＨＯＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾン）、または同等のもので処置し、１４日または２１日間隔で投与した。
【0106】
ベースラインのデータは、Ｕ－ＣＡＮを介して取得し、診断時の年齢、性別、Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ病期、Ｂ－症状（発熱＞３８℃、寝汗、直近６か月で体重減少＞１０％）、巨大病変（横径＞７．５ｃｍの腫瘍として定義される）、米国東海岸がん臨床試験グループによる一般状態（ＥＣＯＧ－ＰＳ）、国際予後指標（ＩＰＩ）スコア、年齢調整ＩＰＩ（ａａＩＰＩ）、治療の種類、国際治療効果判定基準に従って定義された治療のアウトカム（Ｃｈｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２００７；２５：５７９－５８６）で構成した。
【0107】
ＴＫ１を、ＡｒｏＣｅｌｌ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎが提供する免疫測定法（ＡｒｏＣｅｌｌ ＴＫ ２１０ ＥＬＩＳＡ）によって血清で測定した。このアッセイを、製造業者の説明書に従って実行した。このアッセイの不正確さは、二連サンプルの測定により判断して、１０％未満の標準偏差（ＣＶ）であった。定量化の下限、すなわち、ＣＶ％が二連について２０％を超えたのは、０．２０μｇ／Ｌであった（Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．，ＡｒｏＣｅｌｌ ＴＫ ２１０ ＥＬＩＳＡ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＫ１ ｐｒｏｔｅｉｎ：ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｒａｎｇｅｓ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ＴＫ１ ａｓｓａｙｓ．ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．２０２０；ｂｔｎ－２０１９－０１４８．４１）。
【0108】
非感染の外見上健常者を対照とした。５７名の男性（年齢の中央値４２歳、四分位（ＩＱ）範囲２９．７～５２．２歳）及び８８名の女性（中央値４５．５、ＩＱ範囲３４．５～５７．５歳）を試験対象とした。
【0109】
統計データ
無病生存期間（ＤＦＳ）を、診断日から文書化された再発または直近の経過観察までで計算した。完全寛解を達成しなかった患者は、ＤＦＳゼロ日と見なされた。疾患特異的生存期間（ＤＳＳ）を、診断日から残存リンパ腫を伴う死亡日または直近の経過観察までで計算した。全生存期間（ＯＳ）を、診断日から死亡または直近の経過観察までで計算した。
無病生存期間（ＤＦＳ）を、診断日から文書化された再発または直近の経過観察までで計算した。完全寛解を達成しなかった患者は、ＤＦＳゼロ日と見なされた。疾患特異的生存期間（ＤＳＳ）を、診断日から残存リンパ腫を伴う死亡日または直近の経過観察までで計算した。全生存期間（ＯＳ）を、診断日から死亡または直近の経過観察までで計算した。
【0110】
特に断りのない限り、実施例全体を通してノンパラメトリック統計を用いた。マン・ホイットニーＵ検定を２群の比較のため使用し、クラスカル・ウォリス分散分析を２群を超える比較に使用した。ウィルコクソン検定を使用して、対応のあるサンプルを比較した。ｐ値は、本文または図に示されており、ｐ＜０．０５を有意であると見なした。変数間の相関をスピアマンの順位により計算した。ＤＦＳ、ＤＳＳ及びＯＳの推定値を、カプラン・マイヤーの統計及び関連するログランク検定によって算出した。Ｃｏｘ比例ハザード検定を多変量時間依存解析に使用した。統計プログラムＭｅｄｃａｌｃ（ＭｅｄＣａｌｃ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖｅｒｓｉｏｎ １９．２．６（ＭｅｄＣａｌｃ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｌｔｄ，Ｏｓｔｅｎｄ，Ｂｅｌｇｉｕｍ；ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｍｅｄｃａｌｃ．ｏｒｇ；２０２０）及び統計プログラムＲバージョン３．４．３（Ｒ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ；ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．Ｒ－ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／）を、すべての分析に使用した。
【0111】
倫理
本試験は、Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎにおける施設倫理委員会により承認された（Ｄｎｒ ２０１４／２３３）。この試験はまた、Ｕ－ＣＡＮ試験選考委員会によっても承認された。したがって、書面によるインフォームド・コンセントは、Ｕ－ＣＡＮプログラム内で以前に取得されていた。
本試験は、Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎにおける施設倫理委員会により承認された（Ｄｎｒ ２０１４／２３３）。この試験はまた、Ｕ－ＣＡＮ試験選考委員会によっても承認された。したがって、書面によるインフォームド・コンセントは、Ｕ－ＣＡＮプログラム内で以前に取得されていた。
【0112】
結果
患者及び処置
患者の特徴を表１にまとめる。経過観察中に４４名の患者が死亡したが、３１名は残存するリンパ腫により死亡した。
ＤＬＢＣＬ：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＴＫ１：チミジンキナーゼ１、ｎ：数、ＥＣＯＧ：米国東海岸がん臨床試験グループ、ＮＡ：該当なし、ＩＰＩ：国際予後指標、ａａＩＰＩ：年齢調整ＩＰＩ、ＧＣ：胚中心
患者及び処置
患者の特徴を表１にまとめる。経過観察中に４４名の患者が死亡したが、３１名は残存するリンパ腫により死亡した。
【表1】
【0113】
血清中のＴＫ１と疾患の関係
処置前の血清中のＴＫ１濃度は、リンパ腫患者において、健常者における濃度に対して有意に高く、中央値０．４４μｇ／Ｌ（ＩＱ範囲０．２２～１．０６μｇ／Ｌ）対中央値０．２２μｇ／Ｌ（ＩＱ範囲０．１８～０．２９μｇ／Ｌ）、ｐ＜０．００００１であった。図１ａは、ＴＫ１濃度と病期の関係を示し、より進行した疾患でＴＫ１濃度が増加する。最も高い濃度は、４期の患者で見出された（ｐ＜０．００００１）。図１ｂでは、国際予後指標（ＩＰＩ）との強い関係も示された。ｐ＜０．００００１。
処置前の血清中のＴＫ１濃度は、リンパ腫患者において、健常者における濃度に対して有意に高く、中央値０．４４μｇ／Ｌ（ＩＱ範囲０．２２～１．０６μｇ／Ｌ）対中央値０．２２μｇ／Ｌ（ＩＱ範囲０．１８～０．２９μｇ／Ｌ）、ｐ＜０．００００１であった。図１ａは、ＴＫ１濃度と病期の関係を示し、より進行した疾患でＴＫ１濃度が増加する。最も高い濃度は、４期の患者で見出された（ｐ＜０．００００１）。図１ｂでは、国際予後指標（ＩＰＩ）との強い関係も示された。ｐ＜０．００００１。
【0114】
アウトカムに対するＴＫ１の関係
疾患の再発までの期間（図２ａ）及び死亡までの期間（図２ｂ）は、両方とも、処置前の血清中のＴＫ１濃度の血清濃度と有意に相関し（それぞれ、ｒｓ＝－０．３０及びｒｓ＝－０．２９、両相関に関してｐ＜０．００１）、濃度が最高の患者が最短であった。処置前のＴＫ１濃度を、健常者の上限、すなわち、０．４５μｇ／Ｌで二分することにより、カプラン・マイヤー及び関連するログランク検定によって推定されたＯＳ、ＤＦＳ及びＤＳＳ（図３ａ～３ｃ）が、正常濃度を有する患者にとって最も好ましくなった（それぞれ、ｐ＝０．０３、ｐ＝０．０００６及びｐ＝０．０００９）。多変量解析では、二分したＴＫ１はまた、ＤＦＳ及びＤＳＳに関して、ａａＩＰＩ及びＩＰＩの各々とともに重要な予後因子であることが分かった（それぞれ、ｐ＜０．０１及びｐ＜０．０２５）（図４ａ～４ｄ）。表２には、Ｂ－症状を有する患者が、有意に高濃度（ｐ＜０．０００１）の血清ＴＫ１を有したことが示される。
疾患の再発までの期間（図２ａ）及び死亡までの期間（図２ｂ）は、両方とも、処置前の血清中のＴＫ１濃度の血清濃度と有意に相関し（それぞれ、ｒｓ＝－０．３０及びｒｓ＝－０．２９、両相関に関してｐ＜０．００１）、濃度が最高の患者が最短であった。処置前のＴＫ１濃度を、健常者の上限、すなわち、０．４５μｇ／Ｌで二分することにより、カプラン・マイヤー及び関連するログランク検定によって推定されたＯＳ、ＤＦＳ及びＤＳＳ（図３ａ～３ｃ）が、正常濃度を有する患者にとって最も好ましくなった（それぞれ、ｐ＝０．０３、ｐ＝０．０００６及びｐ＝０．０００９）。多変量解析では、二分したＴＫ１はまた、ＤＦＳ及びＤＳＳに関して、ａａＩＰＩ及びＩＰＩの各々とともに重要な予後因子であることが分かった（それぞれ、ｐ＜０．０１及びｐ＜０．０２５）（図４ａ～４ｄ）。表２には、Ｂ－症状を有する患者が、有意に高濃度（ｐ＜０．０００１）の血清ＴＫ１を有したことが示される。
【表2】
【0115】
処置に関するＴＫ１
患者の一部（４０／１４６、２７％）で、３回の処置サイクルの後、ＴＫ１濃度を積極的治療の最中に測定した。全体として、濃度は処置中に約１０倍上昇し（ｐ＜０．００００１）（図５）、その後初期値よりも低下した（表３）。疾患が再発した患者（ｎ＝１８）またはリンパ腫によって死亡した患者（ｎ＝１２）は、再発も死亡もしていない患者と比較して、処置後に有意に高いＴＫ１濃度を有していた（それぞれ、ｐ＝０．００２及びｐ＝０．０００１）（図６）。ａａＩＰＩに関する処置中のＴＫ１濃度の変化は、表３ならびに図７ａ及び７ｂに示されている。３回目の処置サイクル後の測定値と比較した診断時の測定値の間のＴＫ１濃度の相対的変動は、１期及び２期では３８３２％であったのに対して、３期及び４期では３０２％であった（ｐ＝０．０００８）。病期に関する相対的変動は、図８にも示されている。
患者の一部（４０／１４６、２７％）で、３回の処置サイクルの後、ＴＫ１濃度を積極的治療の最中に測定した。全体として、濃度は処置中に約１０倍上昇し（ｐ＜０．００００１）（図５）、その後初期値よりも低下した（表３）。疾患が再発した患者（ｎ＝１８）またはリンパ腫によって死亡した患者（ｎ＝１２）は、再発も死亡もしていない患者と比較して、処置後に有意に高いＴＫ１濃度を有していた（それぞれ、ｐ＝０．００２及びｐ＝０．０００１）（図６）。ａａＩＰＩに関する処置中のＴＫ１濃度の変化は、表３ならびに図７ａ及び７ｂに示されている。３回目の処置サイクル後の測定値と比較した診断時の測定値の間のＴＫ１濃度の相対的変動は、１期及び２期では３８３２％であったのに対して、３期及び４期では３０２％であった（ｐ＝０．０００８）。病期に関する相対的変動は、図８にも示されている。
【表3】
【0116】
プロトコルに従って、血液サンプルは、１診断時（または少なくとも処置の開始前）、２３回の化学療法サイクル後（処置サイクルが１４日の長さであるか２１日の長さであるかにかかわらない）、及び３処置の終了後３か月及び１年で採取した。これらの血液サンプルでＴＫ１を分析した。
【0117】
以下の表４は、全患者について、０．２５μｇ／Ｌ～最大２．５μｇ／Ｌに及ぶ様々なカットオフ値を使用したＤＬＢＣＬ患者における再発に関するハザード比及び計算されたｐ値をまとめている。
【表4】
【0118】
表５及び表６は、全患者について、０．２５μｇ／Ｌ～最大２．５μｇ／Ｌに及ぶ様々なカットオフ値を使用した６６歳を超えるＤＬＢＣＬ患者（表５）または６７歳未満のＤＬＢＣＬ患者（表６）における対応する再発に関するハザード比及び計算されたｐ値を記載している。
【表5】
【表6】
【0119】
図９は、再発時期との関連で、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者における診断時及び処置前のＴＫ１の血清濃度に関するカットオフ（図９ａ）０．２５μｇ／Ｌ、（図９ｂ）０．３５μｇ／Ｌ、（図９ｃ）０．４５μｇ／Ｌ、（図９ｄ）０．７５μｇ／Ｌ、（図９ｅ）１．０５μｇ／Ｌ及び（図９ｆ）２．５μｇ／Ｌでの疾患の再発の確率のカプラン・マイヤープロットを示す。
【0120】
図１０は、再発時期との関連で、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者における診断時及び処置前のＴＫ１の血清濃度に関するカットオフ０．４５μｇ／Ｌでの疾患の再発の確率のカプラン・マイヤープロットを示す。図１０ａは、全患者についての結果を示しており、図１０ｂは、６６歳を超える患者についての結果を示しており、図１０ｃは、６７歳未満の患者についての結果を示している。
【0121】
考察
本試験は、リンパ腫の患者において、カプラン・マイヤー曲線及び関連するログランク検定ならびに多変量解析で明らかなように、疾患の重症度及びアウトカムに極めて強い関係を有するＴＫ１測定の有用性を検証した。
本試験は、リンパ腫の患者において、カプラン・マイヤー曲線及び関連するログランク検定ならびに多変量解析で明らかなように、疾患の重症度及びアウトカムに極めて強い関係を有するＴＫ１測定の有用性を検証した。
【0122】
本試験における発見は、処置中の血清ＴＫ１の増加であった。この増加は、疾患の再発または死に見舞われる患者では有意に高かったが、低病期のリンパ腫の患者でも若干顕著であった。対照的に、ａａＩＰＩ ０～１とａａＩＰＩ ２～３を比較した場合、明らかな違いは見られなかった。
【0123】
本発明者らは、本試験において、処置を受けたＤＬＢＣＬ患者の大部分で血清ＴＫ１の増加及び疾患の明らかな完全寛解を観察した。本試験では、本発明者らは、ＴＫ１の反応が低い群においてネガティブ事象の差を観察しなかったが、本発明者らは、これを、利用可能なＴＫサンプルを有する患者間の事象（再発及び／または死亡）の全体数の少なさと関連付けた。
【0124】
表５及び６からの結果により、高齢の患者では、ＳＴＫ１レベルの実にほぼ２倍の増加が、ハザード比の大きな増加と相関したことが示された。さらに、高齢の患者では、より高いＳＴＫ１レベルにおいて、ハザード比は中程度にさらに上昇したのみであった。これは、この患者群では、より高いＳＴＫ１レベルは、高齢の患者におけるがんの再発の高リスクと比例的に関連しないことを意味する。
【0125】
前述した実施形態は、本発明のいくつかの例示的な実施例として理解すべきである。当業者には、本発明の範囲から逸脱することなく、該実施形態に種々の修正、組み合わせ、及び変更がなされ得ることが理解されよう。特に、技術的に可能であるならば、異なる実施形態における異なる部分の解決策を他の構成において組み合わせることができる。
【図1a】
【図1b】
【図2a】
【図2b】
【図3a】
【図3b】
【図3c】
【図4a】
【図4b】
【図4c】
【図4d】
【図5】
【図6】
【図7a】
【図7b】
【図8】
【図9a】
【図9b】
【図9c】
【図9d】
【図9e】
【図9f】
【図10a】
【図10b】
【図10c】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-01-15
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】