特表2024-523565 | 知財ポータル「IP Force」

知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」

▶ イーライ　リリー　アンド　カンパニーの特許一覧

特表2024-523565新規ＲＮＡ治療法及びその使用

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

目に優しい文字サイズ小中大 PDF Top

< >

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-06-28

(54)【発明の名称】新規ＲＮＡ治療法及びその使用

(51)【国際特許分類】

C12N 15/113 20100101AFI20240621BHJP

A61P 3/06 20060101ALI20240621BHJP

A61K 31/713 20060101ALI20240621BHJP

A61K 48/00 20060101ALI20240621BHJP

A61K 47/54 20170101ALI20240621BHJP

A61K 31/7125 20060101ALI20240621BHJP

A61K 31/712 20060101ALI20240621BHJP

A61K 31/7115 20060101ALI20240621BHJP

【ＦＩ】

C12N15/113 Z ZNA

A61P3/06

A61K31/713

A61K48/00

A61K47/54

A61K31/7125

A61K31/712

A61K31/7115

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023579574

(86)(22)【出願日】2022-06-22

(85)【翻訳文提出日】2024-02-16

(86)【国際出願番号】 US2022034504

(87)【国際公開番号】W WO2022271808

(87)【国際公開日】2022-12-29

(31)【優先権主張番号】63/214,555

(32)【優先日】2021-06-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/214,584

(32)【優先日】2021-06-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】594197872

【氏名又は名称】イーライリリーアンドカンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100162684

【弁理士】

【氏名又は名称】呉英燦

(74)【代理人】

【識別番号】100126778

【弁理士】

【氏名又は名称】品川永敏

(72)【発明者】

【氏名】ベルリンガー，メリッサアン

(72)【発明者】

【氏名】ベイヤー，トーマスパトリック

(72)【発明者】

【氏名】チェン，クリスティンチー－タオ

(72)【発明者】

【氏名】エッゲン，マリジーン

(72)【発明者】

【氏名】ラックナー，グレゴリーローレンス

(72)【発明者】

【氏名】マイルズ，レベッカルース

(72)【発明者】

【氏名】ワン，ジボ

(72)【発明者】

【氏名】アントネリス，パトリックジョセフ

(72)【発明者】

【氏名】ウィルソン，タカコ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC21

4C076CC41

4C076DD66

4C076EE59

4C076FF68

4C084AA13

4C084NA13

4C084ZC331

4C084ZC332

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA13

4C086ZC33

(57)【要約】

本開示は、肝臓におけるＡＮＧＰＴＬ８の発現を減少させるように設計された新規ＲＮＡｉ剤に関し、ＲＮＡｉは、任意選択でリンカーを介してオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされた送達部分を含む。ＲＮＡｉ剤は、ＡＮＧＰＴＬ８発現の調節が関与する疾患の治療に有用である。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉ：

【化1】

［式中、
Ｒは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、
前記アンチセンス鎖は、配列番号４０５～５２５からなる群から選択される配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖は、少なくとも１５ヌクレオチドの相補性領域を形成し、前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖は、各々独立して、１８～２３ヌクレオチド長であり、任意選択で、前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖は、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含み、任意選択で、前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖は、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合を含み、Ｒは、リンカーを介して式Ｉに任意選択でコンジュゲートされている］
の送達部分を含むＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤。

【請求項2】

前記アンチセンス鎖が、配列番号４０５～５２５からなる群から選択される配列の少なくとも１８個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項3】

前記アンチセンス鎖が、配列番号４０５、４０８、４１２、４１３、４１４、４１５、４１８、４２０、４２５、４２６、４２８、４２９、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４８、４４９、４５１、４５２、４５４、４５７、４５８、４５９、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９５、４９９、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、及び５０９からなる群から選択される配列の少なくとも１８個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１又は２に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項4】

前記アンチセンス鎖が、２３ヌクレオチド長である、請求項１～３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項5】

前記センス鎖が、２１ヌクレオチド長である、請求項１～４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項6】

前記アンチセンス鎖が、配列番号２３１～３６１、又はこれらに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなる群から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項7】

前記センス鎖が、配列番号１２４～２３０、又はこれらに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなる群から選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項8】

前記相補性領域において、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖との間に０、１、２、又は３個のミスマッチを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項9】

前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含み、前記１つ以上の修飾ヌクレオチドは、独立して、２’フルオロ修飾ヌクレオチド、又は２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドである、請求項１～８のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項10】

前記センス鎖の各ヌクレオチド及び前記アンチセンス鎖の各ヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドである、請求項１～９のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項11】

前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合を含み、各修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項12】

前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、各々独立して、４つのホスホロチオエート結合を含む、請求項１１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項13】

前記アンチセンス鎖の５’ヌクレオチドが、リン酸基又はリン酸アナログを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項14】

前記アンチセンス鎖が、配列番号３６７～３７２及び３８９～４０４からなる群から選択される配列、又はこれらに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項15】

前記センス鎖が、配列番号３６１～３６６及び３７３～３８８からなる群から選択される配列、又はこれらに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項16】

前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、
ａ．配列番号３６１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｂ．配列番号３６２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｃ．配列番号３６３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｄ．配列番号３６４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｅ．配列番号３６５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｆ．配列番号３６６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｇ．配列番号３７３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３８９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｈ．配列番号３７４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｉ．配列番号３７５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｊ．配列番号３７６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｋ．配列番号３７７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｌ．配列番号３７８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｍ．配列番号３７９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｎ．配列番号３８０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｏ．配列番号３８１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｐ．配列番号３８２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｑ．配列番号３８３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｒ．配列番号３８４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｓ．配列番号３８５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４００に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｔ．配列番号３８６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｕ．配列番号３８７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｖ．配列番号３８８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、並びに
ｗ．配列番号３８９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖からなる群から選択される一対のオリゴヌクレオチド配列である、請求項１～１５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項17】

前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、
ａ．配列番号３６１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｂ．配列番号３６２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｃ．配列番号３６３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｄ．配列番号３６４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｅ．配列番号３６５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｆ．配列番号３６６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｇ．配列番号３７３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３８９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｈ．配列番号３７４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｉ．配列番号３７５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｊ．配列番号３７６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｋ．配列番号３７７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｌ．配列番号３７８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｍ．配列番号３７９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｎ．配列番号３８０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｏ．配列番号３８１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｐ．配列番号３８２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｑ．配列番号３８３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｒ．配列番号３８４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｓ．配列番号３８５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４００に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｔ．配列番号３８６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｕ．配列番号３８７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｖ．配列番号３８８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、並びに
ｗ．配列番号３８９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖からなる群から選択される一対のオリゴヌクレオチド配列である、請求項１～１６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項18】

【請求項19】

【請求項20】

前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、
ａ．配列番号３６１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、並びに
ｂ．配列番号３６５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖からなる群から選択される一対のオリゴヌクレオチド配列である、請求項１～１８のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項21】

前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、
ａ．配列番号３６１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、並びに
ｂ．配列番号３６５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖からなる群から選択される一対のオリゴヌクレオチド配列である、請求項１～２０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項22】

Ｒが、リンカーを介して式Ｉにコンジュゲートされている、請求項１～２１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項23】

Ｒが、リンカーを介して式Ｉにコンジュゲートされており、リンカーは、連結点Ａ及び連結点Ｂを有する式ＩＩのリンカーを含むか、又は前記リンカーは、連結点Ｃ及び連結点Ｄを有する式ＩＩＩを含み、連結点Ａ又は連結点Ｃは、式Ｉにコンジュゲートされており、連結点Ｂ又は連結点Ｄは、Ｒにコンジュゲートされているリン酸基にコンジュゲートされている、請求項２２に記載のＲＮＡｉ剤、

【化2】

【請求項24】

Ｒが、リンカーを介して式Ｉにコンジュゲートされており、前記リンカーは、連結点Ｃ及び連結点Ｄを有する式ＩＩＩを含むリンカーであり、連結点Ｃは、式Ｉにコンジュゲートされており、連結点Ｄは、Ｒにコンジュゲートされているリン酸基にコンジュゲートされている、請求項１～２３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤、

【化3】

【請求項25】

前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、
ａ．配列番号３６１に記載の配列からなるセンス鎖、及び配列番号３６７に記載の配列からなるアンチセンス鎖、並びに
ｂ．配列番号３６５に記載の配列からなるセンス鎖、及び配列番号３７１に記載の配列からなるアンチセンス鎖からなる群から選択される一対のオリゴヌクレオチド配列である、請求項１～２４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項26】

前記ＲＮＡｉ剤が、肝細胞におけるＡＮＧＰＴＬ８遺伝子の発現を減少させることができる、請求項１～２５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項27】

治療に使用するための、請求項１～２６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項28】

脂質異常症の治療に使用するための、請求項１～２６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項29】

請求項１～２６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤と、１つ以上の医薬的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。

【請求項30】

脂質異常症の治療用薬剤の製造のための、請求項１～２６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤の使用。

【請求項31】

脂質異常症を治療することを必要とする患者の前記脂質異常症を治療する方法であって、請求項１～２６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤、又はその医薬組成物を投与することを含む、方法。

【請求項32】

細胞におけるＡＮＧＰＴＬ８発現を減少させる方法であって、前記細胞を請求項１～２６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤と接触させることと、未治療細胞又は対照治療細胞と比較して、ＡＮＧＰＴＬ８ｍＲＮＡのレベルを少なくとも５０％だけ減少させるのに十分な時間、前記細胞をインキュベートすることとを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、肝臓におけるＡＮＧＰＴＬ８の発現を減少させるように設計された新規ＲＮＡｉ剤に関するものであって、前記ＲＮＡｉ剤は、任意選択でリンカーを介してオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされた送達部分を含む。ＲＮＡｉ剤は、ＡＮＧＰＴＬ８発現の調節が関与する疾患の治療に有用である。

【背景技術】

【0002】

アンジオポエチン様タンパク質８（Angiopoietin-like protein 8、ＡＮＧＰＴＬ８）は、主に、肝臓及び脂肪組織において発現され、トリグリセリド代謝において重要な役割を果たす。ＡＮＧＰＴＬ８は、ＡＮＧＰＴＬ３又はＡＮＧＰＴＬ４と共に、リポタンパク質リパーゼ（lipoprotein lipase、ＬＰＬ）の酵素活性を阻害することによってトリグリセリドレベルを調節すると考えられており、これは、活性であるときに、トリグリセリドを加水分解し、循環血漿トリグリセリドを減少させる。ＡＮＧＰＴＬ８の増加したレベルは、心血管疾患、糖尿病、脂質異常症（高トリグリセリドレベルを含む）、異常な腎機能、高血圧、非アルコール性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis、ＮＡＳＨ）などの非アルコール性脂肪肝疾患、及び肥満に観察されるか、又はこれらに関連する。

【0003】

本明細書に開示されるものなどのＲＮＡｉ剤は、遺伝子調節不全を伴う多くの異なるタイプの疾患の個別化治療のために、配列特異的な様式で遺伝子を標的化することを可能にする。本明細書のＲＮＡｉ剤などのオリゴヌクレオチドを含む化合物は、使用されるオリゴヌクレオチドの特定のタイプに応じて異なる機構を介して作用することができる。本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤を含むＲＮＡ干渉分子は、典型的には、所与の標的転写物の遺伝子発現をノックダウン又は減少させ、それによってタンパク質のレベルを減少させるように作用する。本明細書のＲＮＡｉ剤などのＲＮＡｉ分子を患者の所望の組織に送達することによって、遺伝子発現を組織特異的な様式で減少させることができる。

【0004】

肝細胞上のアシアロ糖タンパク質受容体を標的とするためのＮ－アセチルガラクトース（N-acetylgalactose、ＧａｌＮＡｃ）を含むＲＮＡｉ剤が一例である。特に、ギボシランナトリウムは、急性肝性ポルフィリン症を治療するためにＡＬＡＳ１遺伝子転写物を標的とし、肝細胞への侵入のためにＧａｌＮＡｃを含む送達部分を使用する、米国食品医薬品局によって承認されたｓｉＲＮＡである。Ｉｎｓｃｌｉｓｉｒａｎは、ＬＤＬコレステロールを低下させるためにＰＣＳＫ９遺伝子転写物を標的とし、肝細胞への侵入のためにＧａｌＮＡｃを含む送達部分も使用する、米国食品医薬品局によって承認されたｓｉＲＮＡである。ＡＮＧＰＴＬ８を標的とするｓｉＲＮＡを含むＲＮＡｉ分子は、例えば、国際公開第２０２０１０４６４９号に記載されている。しかしながら、４つのｓｉＲＮＡ分子のみがヒトでの使用に承認されており、ＡＮＧＰＴＬ８を標的とする治療用ｓｉＲＮＡはまだ承認されていない。更に、特に、心血管疾患、脂質異常症、例えば、高トリグリセリド、及び炎症性肝疾患など、肝臓の疾患又は肝臓に関与する疾患のための、ｉｎｖｉｖｏでの治療用ｓｉＲＮＡの理想的な属性について、前臨床及び臨床で利用可能な情報は限られている。

【0005】

ＡＮＧＰＴＬ８発現を減少させるために、ＧａｌＮＡｃ及び１つ以上のオリゴヌクレオチドを含む送達部分を含む代替的なＲＮＡｉ剤を提供する必要性が依然として存在する。より詳細には、新規ＧａｌＮＡｃ送達部分と、センス鎖及びアンチセンス鎖とを含むＲＮＡｉ剤を提供する必要があり、アンチセンス鎖は、ＡＮＧＰＴＬ８ｍＲＮＡに相補的であり、このようなＲＮＡｉ剤は、組織曝露の改善、好適には肝臓における曝露の改善、肝臓と腎臓との曝露比の改善、ノックダウンの改善、耐久性応答の改善、薬物動態プロファイルの改善、少ないオフターゲット効果、毒性プロファイルの改善、安全性プロファイルの改善、少ない副作用、忍容性の改善、患者におけるコレステロール及び／若しくはトリグリセリドレベルの制御の改善、患者における心血管リスクプロファイルの改善、合成の改善及び／若しくは簡略化、少ない分解産物を伴う合成プロセス、又はこれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上を示す。

【0006】

本開示の一実施形態では、式Ｉ：

【化1】

［式中、Ｒは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、ＡＮＧＰＴＬ８のｍＲＮＡ転写物に相補的である配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、少なくとも１５ヌクレオチドの相補性領域を形成し、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して１５～３０ヌクレオチド長であり、任意選択で、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して１つ以上の修飾ヌクレオチドを含み、任意選択で、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合を含み、Ｒは、リンカーを介して式Ｉに任意選択でコンジュゲートされている］
の送達部分を含むＲＮＡ干渉（RNA interference、ＲＮＡｉ）剤である。別の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号１に相補的である配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。更なる実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１８～２３ヌクレオチド長である。これらのＲＮＡｉ剤のいずれかの更なる実施形態では、アンチセンス鎖は、ＡＮＧＰＴＬ８のｍＲＮＡ転写物に対して少なくとも１８ヌクレオチドの相補性領域を形成する。これらのＲＮＡｉ剤のいずれかの異なる更なる実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号１に対して少なくとも１８ヌクレオチドの相補性領域を形成する。

【0007】

更なる実施形態では、アンチセンス鎖が配列番号４０５～５２５からなる群から選択される配列の少なくとも１５個のヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤である。また更なる実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号４０５～５２５からなる群から選択される配列の少なくとも１８個の連続するヌクレオチドを含む。

【0008】

本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の更なる実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号４０５、４０８、４１２、４１３、４１４、４１５、４１８、４２０、４２５、４２６、４２８、４２９、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４８、４４９、４５１、４５２、４５４、４５７、４５８、４５９、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９５、４９９、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、及び５０９からなる群から選択される配列の少なくとも１８個の連続するヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アンチセンス鎖は、表２のアンチセンス鎖配列の群から選択される。

【0009】

本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の実施形態のいずれかでは、任意のアンチセンス鎖のＲＮＡｉ剤が２３ヌクレオチド長であるか、又はセンス鎖が２１ヌクレオチド長であるか、又はこれらの両方である。

【0010】

本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の別の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号２３１～３６１、又はこれらに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなる群から選択される。本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の他の実施形態では、センス鎖は、配列番号１２４～２３０、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなる群から選択される。

【0011】

本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤のいずれかの更なる実施形態では、相補性領域は、センス鎖とアンチセンス鎖との間に０、１、２、又は３個のミスマッチを含む。

【0012】

ＲＮＡｉ剤の更なる実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む。更なる実施形態では、１つ以上の修飾ヌクレオチドは、独立して、２’フルオロ修飾ヌクレオチド又は２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドである。他の実施形態では、センス鎖の各ヌクレオチド及びアンチセンス鎖の各ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドであり、更なる実施形態では、修飾ヌクレオチドの各々は、独立して、２’フルオロ修飾ヌクレオチド又は２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドである。

【0013】

本明細書のＲＮＡｉ剤の他の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合を含む。更なる実施形態では、各修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。他の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、４つのホスホロチオエート結合を含む。更なる実施形態では、センス鎖の最初の２つの５’ヌクレオチド及びセンス鎖の２つの末端３’ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合である。更なる実施形態では、アンチセンス鎖の最初の２つの５’ヌクレオチド及びアンチセンス鎖の２つの末端３’ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合である。

【0014】

本明細書におけるＲＮＡｉ剤の他の実施形態では、アンチセンス鎖の５’ヌクレオチドは、リン酸基又はリン酸アナログを含む。

【0015】

別の実施形態では、本開示は、Ｒにコンジュゲートされた式Ｉ：

【化2】

［式中、
Ｒは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、ＡＮＧＰＴＬ８のｍＲＮＡ転写物に相補的である配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、少なくとも１５ヌクレオチドの相補性領域を形成し、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して１５～３０ヌクレオチド長であり、任意選択で、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して１つ以上の修飾ヌクレオチドを含み、任意選択で、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合を含み、Ｒは、任意選択で、リンカーＬを介して式Ｉの送達部分Ｄにコンジュゲートされている。別の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号１に相補的である配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む］
の送達部分を含むＲＮＡｉ剤を提供する。更なる実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１８～２３ヌクレオチド長である。これらのＲＮＡｉ剤のいずれかの更なる実施形態では、アンチセンス鎖は、ＡＮＧＰＴＬ８のｍＲＮＡ転写物に対して少なくとも１８ヌクレオチドの相補性領域を形成する。これらのＲＮＡｉ剤のいずれかの異なる更なる実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号１に対して少なくとも１８ヌクレオチドの相補性領域を形成する。更なる実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号４０５～５２５からなる群から選択される配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。

【0016】

式Ｉを含む、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤を含む本明細書の化合物のいずれかは、式Ｉ内に修飾又は付加を有してもよく、あるいは化合物は、付加部分を含んでもよい。例えば、式Ｉ中の１つ以上のアルキル鎖は、伸長若しくは短縮されてもよく、又は式Ｉを含む化合物は、１つ以上のオリゴヌクレオチドを更に含んでもよい。本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤などの式Ｉを含む本明細書の化合物は、例えば、典型的には３つのＧａｌＮＡｃ部分に結合するアシアロ糖タンパク質受容体（asialoglycoprotein receptor、ＡＳＰＧＲ）などの１つ以上のＮ－アセチルガラクトース（ＧａｌＮＡｃ、またＮ－ＧａｌＮＡｃ又はｇａｌｎａｃ又はＧａｌｎａｃ）部分に対する受容体を有する細胞に、１つ以上のオリゴヌクレオチドを送達するのに有用である。したがって、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤などの本明細書の式Ｉを含む化合物は、ＡＳＰＧＲを発現する肝細胞に優先的に結合するために使用することができ、それによって肝細胞への化合物の侵入を促進する。また、ＡＳＰＧＲは、脂肪組織にも存在するので、本明細書のＲＮＡｉ剤を含む式Ｉを含む化合物を使用して、ＡＳＰＧＲを発現する脂肪細胞にオリゴヌクレオチドを送達することができる。

【0017】

一実施形態では、送達部分及び１つ以上のオリゴヌクレオチドを含む化合物又はＲＮＡｉ剤であり、送達部分は、式Ｉを含み、オリゴヌクレオチドは、ＡＮＧＰＴＬ８遺伝子（以下、ＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチド）に相補的である。好適な更なる実施形態では、式Ｉを含む送達部分は、細胞外受容体ＡＳＰＧＲに結合し、肝組織を含む細胞へのオリゴヌクレオチドの侵入を可能にすることによって、１つ以上のＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドを肝組織に送達する。また、ＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドは、本明細書では、Ｒ又は本明細書のセンス鎖及び／若しくはアンチセンス鎖によって表され、本明細書の配列番号に示されるセンス配列及びアンチセンス配列に示されるものを含む。

【0018】

式Ｉを含む送達部分は、Ｒを含むＲＮＡｉ剤などの任意の数のＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドを送達するために使用することができ、Ｒは、診断目的、又は好適には治療目的のために、本明細書に開示されるセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖を含む。本明細書に開示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖などの１つ以上のオリゴヌクレオチドは、ＤＮＡ若しくはＲＮＡヌクレオチド又はＤＮＡ若しくはＲＮＡヌクレオシドを含み得る。

【0019】

本明細書のアンチセンス鎖を含む本明細書のオリゴヌクレオチドは、細胞内のＡＮＧＰＴＬ８配列を標的とするように、すなわち、ＡＮＧＰＴＬ８配列に結合若しくはアニールするように、又はＡＮＧＰＴＬ８配列と相補性領域を形成して、遺伝子発現を調節し、好適にはＡＮＧＰＴＬ８遺伝子発現を減少させるように設計されている。一実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ８転写物の発現を減少させるための、本明細書に開示される式Ｉを含む化合物又はＲＮＡｉ剤である。更なる実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ８転写物の発現を減少させるための、本明細書に開示される式Ｉを含む化合物又はＲＮＡｉ剤は、ＡＮＧＰＴＬ８タンパク質発現を更に減少させる。別の実施形態では、標的転写物又は標的タンパク質の発現の減少は、約９９、９８、９７、９６、９５、９４、９３、９２、９１、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、又は５０パーセントである。更なる実施形態では、発現の減少は、約３週間、約１ヶ月、約１ヶ月半、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、又は約６ヶ月間持続する。

【0020】

当業者は、１つ以上のミスマッチが、本明細書中に開示されるアンチセンスヌクレオチドなどのＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドとＡＮＧＰＴＬ８標的ヌクレオチド配列との間に存在し得、依然として遺伝子発現を調節するように機能し得ることを認識する。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的配列と９９、９８、９７、９６、９５、９４、９３、９２、９１、９０、８９、８８、８７、８６、８５、８４、８３、８２、８１、８０、７９、７８、７７、７６、７５、７４、７３、７２、７１、若しくは７０パーセントの配列同一性を有するか、又は標的配列に相補的である。オリゴヌクレオチドはまた、５’末端又は３’末端のいずれかに１～１０、１～５、若しくは１～３、又は３、２、若しくは１個の残基のオーバーハングを有し得る。５’末端又は３’末端は、例えば、脱塩基残基又はリン酸基で更に修飾されてもよい。

【0021】

参照核酸配列に関する「パーセントの配列同一性」という用語は、配列を最適に整列させ、ＰＩＤ３計算を使用して、最大パーセントの配列同一性を達成するために、必要に応じてギャップ又はオーバーハングを導入した後の、参照核酸配列中のヌクレオチド、ヌクレオシド、又は核酸塩基と同一である候補配列中のヌクレオチド、ヌクレオシド、又は核酸塩基のパーセンテージとして定義され、ＰＩＤ３計算は、同一ヌクレオチド残基の数を、２つの配列のうちの短い方のヌクレオチド、ヌクレオシド、又は核酸塩基の総数で割り、１００を掛けたものである。例えば、Ｒａｇｈａｖａ，Ｇ．，Ｂａｒｔｏｎ，Ｇ．Ｊ．Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｖａｒｉａｔｉｏｎｉｎｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｉｄｅｎｔｉｔｙｆｏｒｐｒｏｔｅｉｎｓｅｑｕｅｎｃｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ．ＢＭＣＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ７，４１５（２００６）を参照のこと。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含めて、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。

【0022】

当業者は、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤のセンス鎖又はアンチセンス鎖などの、ＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤（又は化合物若しくはＲＮＡｉ分子）の修飾が、その安定性及び半減期を増加させ得ることを認識する。修飾は、ヌクレオチド又はホスホジエステル骨格に対するものであり得る、すなわち、オリゴヌクレオチドの２つのヌクレオチド残基間の結合であり、これは、ヌクレオチド間結合とも呼ばれる。例えば、糖残基、好適にはリボース上の２’－修飾は、その安定性及び半減期を増加させることができる。これらの修飾としては、非修飾糖の２’ＯＨ基における２’フルオロ又は２’メトキシ修飾が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書において修飾ヌクレオチド間結合とも呼ばれる骨格修飾は、ホスホジエステル結合からホスホロチオエート（phosphorothioate、ＰＳ）結合への変化を含む。

【0023】

式Ｉの送達部分を含むＲＮＡｉ剤の更なる実施形態は、このようなヌクレオチド及びヌクレオチド間結合修飾を含む。したがって、一実施形態では、式Ｉ：

【化3】

［式中、
Ｒは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、
アンチセンス鎖は、配列番号４０５～５２５からなる群から選択される配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、少なくとも１５ヌクレオチドの相補性領域を形成し、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１８～２３ヌクレオチド長であり、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含み、任意選択で、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合を含み、Ｒは、リンカーを介して式Ｉに任意選択でコンジュゲートされており、１つ以上の修飾ヌクレオチドは、独立して、２’フルオロ修飾ヌクレオチド又は２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドである］の送達部分を含むＲＮＡｉ剤である。更なる実施形態では、センス鎖の各ヌクレオチド及びアンチセンス鎖の各ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。他の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合を含む。更なる実施形態では、各修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。また更なる実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、４つのホスホロチオエート結合を含む。更なる実施形態では、センス鎖の５’末端の最初の２つのヌクレオチド及びセンス鎖の３’末端の最後の２つのヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を含み、アンチセンス鎖の５’末端の最初の２つのヌクレオチド及びアンチセンス鎖の３’末端の最後の２つのヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を含む。本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の実施形態のいずれかにおいて、アンチセンス鎖の５’ヌクレオチドは、リン酸基又はリン酸アナログを含む。

【0024】

本明細書で使用される場合、本明細書で開示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む、本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド」（又は本明細書で互換的に使用される「マルチマー」若しくは「オリゴマー」）は、少なくとも１０ヌクレオチド又はヌクレオシド残基の鎖を意味し、修飾若しくは非修飾塩基、修飾若しくは非修飾糖、及び／又は修飾若しくは非修飾結合（本明細書では互換的に骨格又はホスホジエステル骨格又はヌクレオチド間結合とも称される）を含み得る。ヌクレオチド残基は、本明細書においてホスホジエステルヌクレオチド間結合又は修飾ヌクレオチド間結合とも呼ばれるホスホジエステル結合又は修飾結合によって連結され得る。ヌクレオチド残基は、核酸塩基ピリミジン若しくはプリン環中の１つ以上の原子で、又は糖残基中の１つ以上の原子で、又は環糖と核酸塩基との間の結合の１つ以上の原子で修飾され得る。また、修飾は、オリゴヌクレオチド鎖の５’末端又は３’末端で行われてもよく、このような修飾オリゴヌクレオチド又はセンス鎖若しくはアンチセンス鎖は、文脈からそうでないことが明らかでない限り、本明細書ではオリゴヌクレオチド又はセンス鎖若しくはアンチセンス鎖と互換的に称され得る。本明細書において、ヌクレオシド残基（すなわち、１つ以上のリン酸基を欠くヌクレオチド）は、修飾ヌクレオチド／ヌクレオチド残基／ヌクレオチド塩基、又は単にヌクレオチド／ヌクレオチド残基／ヌクレオチド塩基と称され得る。

【0025】

本明細書で使用される場合、「相補的」とは、２つのヌクレオチドが標準的なワトソン－クリック対合で互いに塩基対を形成することを可能にすると予想される２つのヌクレオチド間（例えば、２つの対向する核酸上、又は単一の核酸鎖、例えば、ヘアピンの対向する領域上）の構造的関係を意味する。例えば、対向する核酸のピリミジンヌクレオチドに相補的である１つの核酸のプリンヌクレオチドは、互いに相補的である。例えば、それらは互いに水素結合を形成することによって一緒に塩基対合すると予測される。同様に、２つの逆平行核酸は、本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖などの相補性領域を形成するために互いに相補的である複数のヌクレオチドの領域を有し得る。

【0026】

本明細書で使用される場合、「相補性領域」とは、適切なハイブリダイゼーション条件下（例えば、リン酸緩衝液中、細胞中など）でヌクレオチドの２つの配列間のハイブリダイゼーションを可能にするために逆平行ヌクレオチド配列に十分に相補的である核酸（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）のヌクレオチド配列を意味する。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡ標的配列に相補的な領域を有する標的化配列を含む。

【0027】

本明細書で使用される場合、「デオキシリボヌクレオチド」とは、リボヌクレオチドと比較したときに、そのペントース糖の２’位においてヒドロキシルの代わりに水素を有するヌクレオチドを意味する。修飾デオキシリボヌクレオチドは、糖の２’位に水素以外の原子の１つ以上の修飾又は置換を有し、核酸塩基、糖、又はリン酸基の修飾又は置換を含む。

【0028】

本明細書で使用される場合、「二本鎖オリゴヌクレオチド」又は「ｄｓオリゴヌクレオチド」とは、実質的に二重鎖形態であるオリゴヌクレオチドを意味する。ｄｓオリゴヌクレオチドの二重鎖領域（複数可）の相補的塩基対合は、共有結合的に分離した核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成することができる。同様に、ｄｓオリゴヌクレオチドの二重鎖領域（複数可）の相補的塩基対合は、共有結合的に結合している核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成することができる。更に、ｄｓオリゴヌクレオチドの二重鎖領域（複数可）の相補的塩基対合は、一緒に塩基対合するヌクレオチドの相補的逆平行配列を提供するように折り畳まれた（例えば、ヘアピンを介して）単一核酸鎖から形成することができる。ｄｓオリゴヌクレオチドは、互いに完全に二重鎖である２つの共有結合的に分離した核酸鎖を含むことができる。しかしながら、ｄｓオリゴヌクレオチドは、部分的に二重鎖である（例えば、一方又は両方の末端にオーバーハングを有する）２つの共有結合的に分離した核酸鎖を含むことができる。ｄｓオリゴヌクレオチドは、部分的に相補的であるヌクレオチドの逆平行配列を含むことができ、したがって、内部ミスマッチ又は末端ミスマッチを含み得る１つ以上のミスマッチを有し得る。

【0029】

本明細書で使用される場合、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）に関する「二重鎖」及び「二重鎖領域」とは、２つの共有結合的に分離した核酸鎖によって形成されるか、又は単一の折り畳まれた鎖（例えば、ヘアピンを介して）によって形成されるかにかかわらず、ヌクレオチドの２つの逆平行配列の相補的塩基対合を通じて形成される二本鎖核酸構造を意味し、適切な条件下でのアニーリング又はハイブリダイゼーションを介して形成され得る。

【0030】

本明細書で使用される場合、「リンカー」とは、ヌクレオチド（例えば、オリゴヌクレオチド）を送達部分にコンジュゲートするために使用される構造を意味する。リンカーは、「不安定」又は「切断可能」とすることができ、これは（例えば、酸性ｐＨによって）切断され得るリンカーを意味する。同様に、リンカーは、生理学的条件下で切断可能でないリンカーを意味する「安定」又は「切断不可能」とすることができる。

【0031】

本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド間結合」とは、ホスホジエステル結合を有する参照ヌクレオチド間結合と比較したときに、１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチド間結合を意味する。修飾ヌクレオチド間結合は、天然に存在しない結合であってもよい。

【0032】

本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド」とは、アデニンリボヌクレオチド、グアニンリボヌクレオチド、シトシンリボヌクレオチド、ウラシルリボヌクレオチド、アデニンデオキシリボヌクレオチド、グアニンデオキシリボヌクレオチド、シトシンデオキシリボヌクレオチド、及びチミジンデオキシリボヌクレオチドから選択される、対応する参照ヌクレオチドと比較したときに、１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチドを指す。修飾ヌクレオチドは、天然に存在しないヌクレオチドであってもよい。修飾ヌクレオチドは、例えば、その糖、核酸塩基、及び／又はリン酸基に１つ以上の化学修飾を有してもよい。加えて、又は代わりに、修飾ヌクレオチドは、対応する参照ヌクレオチドにコンジュゲートされた１つ以上の化学部分を有してもよい。

【0033】

本明細書で使用される場合、「ヌクレオチド」とは、ヌクレオシド（例えば、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、又はウラシルなどの核酸塩基、及び例えば、リボース又は２’－デオキシリボースなどのペントース糖）とリン酸基とを有する有機化合物を意味する。「ヌクレオチド」は、デオキシリボ核酸（deoxyribonucleic acid、ＤＮＡ）及びリボ核酸（ribonucleic acid、ＲＮＡ）などの核酸ポリマーのモノマー単位として機能することができる。

【0034】

本明細書で使用される場合、「オーバーハング」とは、１つの鎖又は領域が二重鎖を形成する相補鎖の末端を越えて伸長する１つの鎖又は領域から生じる末端ヌクレオチド（複数可）を意味する。オーバーハングは、ｄｓオリゴヌクレオチドの５’末端又は３’末端の二重鎖領域から伸長する１つ以上の不対合ヌクレオチドを含み得る。オーバーハングは、ｄｓオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖又はセンス鎖上の３’又は５’オーバーハングとすることができる。

【0035】

本明細書で使用される場合、「リン酸アナログ」又は「リン酸模倣物」とは、リン酸基の静電特性及び／又は立体特性を模倣した化学部分を意味する。いくつかの実施形態では、リン酸アナログは、５’－リン酸の代わりにオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドに位置する。５’リン酸アナログは、ホスファターゼ耐性結合を含むことができる。リン酸アナログの例としては、５’メチレンホスホネート（５’－ＭＰ）及び５’－（Ｅ）－ビニルホスホネート（５’－ＶＰ）などの５’ホスホネートが挙げられるが、これらに限定されない。オリゴヌクレオチドは、５’－末端ヌクレオチドの糖の４’－炭素位にリン酸アナログ（「４’－リン酸アナログ」と称される）を有することができる。４’－リン酸アナログの一例は、（例えば、その４’－炭素の）糖部分又はそのアナログにオキシメチル基の酸素原子が結合しているオキシメチルホスホネートである。例えば、国際公開第２０１８／０４５３１７号を参照のこと。

【0036】

オリゴヌクレオチドの５’末端の他の修飾も開発されている（例えば、国際公開第２０１１／１３３８７１号、米国特許第８，９２７，５１３号、及びＰｒａｋａｓｈｅｔａｌ．（２０１５年）Ｎｕｃ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．４３：２９９３－３０１１を参照のこと）。

【0037】

「パーセントの相補性」とは、標準対合を示す２本の鎖間のヌクレオチド、ヌクレオシド、又は核酸塩基の数を、２つの配列のうちの短い方の総ヌクレオチド、ヌクレオシド、又は核酸塩基で割り、１００を掛けたものである。

【0038】

本明細書で使用される場合、「リボヌクレオチド」とは、そのペントース糖としてリボースを有し、２’位にヒドロキシル基を含むヌクレオチドを意味する。本明細書において修飾ヌクレオチドとも称される修飾リボヌクレオチドは、２’位に水素以外の原子の１つ以上の修飾又は置換を有するリボヌクレオチドであり、核酸塩基、糖、又はリン酸基の修飾又は置換を含む。

【0039】

本明細書で使用される場合、「鎖」とは、ヌクレオチド間結合（例えば、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合）によって一緒に結合されたヌクレオチドの単一の連続する配列を指す。鎖は、２つの遊離末端（例えば、５’末端及び３’末端）を有することができる。

【0040】

本明細書で使用される場合、遺伝子（例えば、ＡＮＧＰＴＬ８）に関する「発現の低減」とは、適切な参照（例えば、参照細胞、細胞集団、試料、又は対象）と比較したときの、細胞、細胞集団、試料、又は対象における、遺伝子によってコードされるＲＮＡ転写物（例えば、ＡＮＧＰＴＬ８ｍＲＮＡ）若しくはタンパク質の量若しくはレベルの減少、及び／又は遺伝子の活性の量若しくはレベルの減少を意味する。例えば、細胞を本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＡＮＧＰＴＬ８ｍＲＮＡを含むヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖を有するオリゴヌクレオチド）と接触させる行為は、ｄｓオリゴヌクレオチドで処理されていない細胞と比較して、（例えば、ＲＮＡｉ経路によるＡＮＧＰＴＬ８ｍＲＮＡの分解を介して）ｍＲＮＡ、タンパク質、及び／又は活性の量又はレベルの減少をもたらし得る。同様に、本明細書で使用される場合、「発現を低減する」とは、遺伝子（例えば、ＡＮＧＰＴＬ８）の発現の低減をもたらす作用を意味する。具体的には、本明細書で使用される場合、「ＡＮＧＰＴＬ８発現の低減」とは、適切な参照（例えば、参照細胞、細胞集団、組織、又は対象）と比較したときの、細胞、細胞集団、試料、又は対象におけるＡＮＧＰＴＬ８ｍＲＮＡ、ＡＮＧＰＴＬ８タンパク質、及び／又はＡＮＧＰＴＬ８活性の量又はレベルの減少を意味する。

【0041】

ある特定の実施形態では、１つ以上のオリゴヌクレオチドは、低分子干渉ＲＮＡ（small interfering RNA、ｓｉＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ（マイクロＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（short hairpin RNA、ｓｈＲＮＡ）、シングルガイドＲＮＡ（single guide RNA、ｓｇＲＮＡ）、又はアンチセンスオリゴヌクレオチド（antisense oligonucleotide、ＡＳＯ）を含む。好適な実施形態では、１つ以上のＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡを含む。別の好適な実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤である。別の好適な実施形態では、１つ以上のＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡである。

【0042】

いくつかの実施形態では、化合物は、例えば、Ｒなどの１つ以上のＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドをコンジュゲートするためのリンカーを更に含み、Ｒは、式Ｉに対するセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤は、センス鎖又はアンチセンス鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチドをコンジュゲートするリンカーを含む。他の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、リンカーを介して式Ｉの送達部分にコンジュゲートされたセンス鎖を含む。好適なリンカーは、当技術分野で既知である。一実施形態では、リンカーは、アルキル鎖、好適にはＣ_１～８を含む。更なる実施形態では、リンカーは、アルキル鎖、好適にはＣ_１～８である。更なる実施形態では、リンカーは、下記に示すようなリンカー１を含む（連結点Ａ及びＢを有する本明細書の式ＩＩ）。更なる実施形態では、リンカーは、リンカー１である。別の実施形態では、リンカーは、ピペリジン環を含む。更なる好適な実施形態では、リンカーは、下記に示すようなリンカー２を含む（連結点Ｃ及びＤを有する本明細書の式ＩＩＩ）。更なる好適な実施形態では、リンカーは、リンカー２である。

【0043】

【化4】

【0044】

当業者は、リンカーが、Ｒを含むＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドの５’末端又は３’末端にあってもよく、Ｒが、本明細書のＲＮＡｉ剤のセンス鎖又はアンチセンス鎖を含むか、又は内部ヌクレオチドの１つに結合されることを認識するであろう。当業者はまた、リンカーが、本明細書のセンス鎖又はアンチセンス鎖を含むＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドの５’末端又は３’末端に結合又はコンジュゲートされ得ることを認識するであろう。当業者はまた、リンカーを介するか否かにかかわらず、本明細書のＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖などのＡＮＰＴＬ８オリゴヌクレオチドの５’末端への、式Ｉを含む送達部分などの送達部分の配置が、Ａｇｏ２ローディングの潜在的な非効率的なローディング、又はＲＩＳＣ複合体活性の他の障害を克服する必要があり得ることを認識するであろう。例えば、センス鎖及びアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡなどの本明細書のＲＮＡｉ剤のセンス鎖又はアンチセンス鎖に結合又はコンジュゲートされた式Ｉを含む送達部分について、アンチセンス鎖の５’末端における送達部分の配置は、Ａｇｏ２ローディングについての困難を生じ、効率的なノックダウンを妨げ得る。好適な実施形態では、１つ以上のＡＮＰＴＬ８オリゴヌクレオチド又はＲＮＡｉ剤は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡを含み、式Ｉを含む送達部分は、センス鎖の３’末端に存在する。更なる実施形態では、式Ｉを含む送達部分は、リンカーを介してセンス鎖の３’末端にコンジュゲートされている。また更なる実施形態では、リンカーは、環構造、好適にはピペリジン環を含む。また更なる実施形態では、リンカーは、リンカー１（式ＩＩ）を含む。また更なる実施形態では、リンカーは、リンカー２（式ＩＩＩ）である。一実施形態では、リンカー１、連結点Ａ、又はリンカー２、連結点Ｃは、式Ｉにコンジュゲートされている。一実施形態では、リンカー１、連結点Ａは、式Ｉにコンジュゲートされており、連結点Ｂは、Ｒにコンジュゲートされている。一実施形態では、リンカー２、連結点Ｃは、式Ｉにコンジュゲートされており、連結点Ｄは、Ｒにコンジュゲートされている。一実施形態では、リンカー１、連結点Ａは、式Ｉにコンジュゲートされており、連結点Ｂは、Ｒにコンジュゲートされているリン酸基にコンジュゲートされている。一実施形態では、リンカー２、連結点Ｃは、式Ｉにコンジュゲートされており、連結点Ｄは、Ｒにコンジュゲートされているリン酸基にコンジュゲートされている。

【0045】

ある特定の実施形態では、アンチセンス鎖などのＡＮＰＴＬ８オリゴヌクレオチドは、配列番号３～配列番号１２３のいずれか１つによって表される配列に相補的である表１の配列に相補的である。好適な実施形態では、ＡＮＰＴＬ８オリゴヌクレオチドは、表２の配列に相補的であり、すなわち、配列は、配列番号３、６、１０、１１、１２、１３、１６、１８、２３、２４、２６、２７、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４６、４７、４９、５０、５２、５５、５６、５７、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７７、８８、８９、９０、９１、９３、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、又は１０７のいずれか１つによって表される配列に相補的である。

【0046】

更なる実施形態では、本明細書のＡＮＰＴＬ８オリゴヌクレオチド又はＲＮＡｉ剤は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡを含む。また更なる実施形態では、ｓｉＲＮＡは、表２のセンス鎖、すなわち、配列番号１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、又は２３０のいずれか１つによって表される配列を含むか、又はこの配列を有するセンス鎖を含む。他の更なる実施形態では、本明細書のＡＮＰＴＬ８オリゴヌクレオチド又はＲＮＡｉ剤は、表２のアンチセンス鎖、すなわち、配列番号２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、又は３６０のうちの１つによって表される配列を含むか、又はこの配列を有するアンチセンス鎖を含む。また更なる実施形態では、ｓｉＲＮＡは、表１１の１つの行からのセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。これらの更なる実施形態の１つでは、ｓｉＲＮＡは、行１からのセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、すなわち、ｓｉＲＮＡは、配列番号１２４を含むセンス鎖及び配列番号２３１を含むアンチセンス鎖を含む。他の更なる実施形態では、ｓｉＲＮＡは、行２からのセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、すなわち、ｓｉＲＮＡは、配列番号１２５を含むセンス鎖及び配列番号２３２を含むアンチセンス鎖を含む。他の更なる実施形態では、ｓｉＲＮＡは、表１１の同じ行からのセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、行は、表１１の行１～１７４（１Ａ～１７４ｅ５と標識された行）からなる群から選択される。

【0047】

更なる実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、修飾される。更なる実施形態では、修飾は、ヌクレオチド、骨格、すなわちヌクレオシド間結合（ホスホジエステル結合）、又はこれらの両方に対して行われる。更なる実施形態では、１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート（ＰＳ）結合である。他の実施形態では、ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート（ＰＳ）結合である修飾ヌクレオチド間結合である。更なる実施形態では、修飾は、リボース上の２’フルオロ基若しくは２’メトキシ基、又はＰＳ結合、又はこれらの両方である。更なる実施形態では、これらの列挙された修飾の３つ全てのうちの１つ以上が存在する。更なる実施形態では、ｓｉＲＮＡは、リボース上に１～１０個の２’フルオロ修飾を含む。他の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、リボース上に１～１０個の２’フルオロ修飾を含み、ヌクレオチドの残り、すなわち、２’フルオロ修飾を有さないヌクレオチドは、リボース上に２’メトキシ基修飾を有する。

【0048】

本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤などの化合物の他の実施形態では、１つ以上のオリゴヌクレオチドは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡを含む。更なる実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々１５～４０ヌクレオチド長である。好適な実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチド長である。好適な実施形態では、センス鎖は、２１ヌクレオチド長である。他の好適な実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチド長であり、センス鎖は、２１ヌクレオチド長である。別の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、アニールし、任意選択で、１つ以上の５’ヌクレオチドオーバーハング若しくは３’ヌクレオチドオーバーハング、１つ以上の５’平滑末端若しくは３’平滑末端、又はこれらの両方の組み合わせを含む。

【0049】

本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤を含むＲＮＡｉ分子の別の実施形態では、Ｒがセンス鎖及びアンチセンス鎖を含むことを含む、Ｒによって表されるものなどのＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドの５’末端又は３’末端は、更に修飾される。更なる実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端は、任意選択でリン酸化される。更なる実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端のヌクレオチドは、５’ビニルホスホネート修飾を含む。別の実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端のヌクレオチドは、リン酸基を含む。別の実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端のヌクレオチドは、リン酸アナログを含む。

【0050】

他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤などのＲＮＡｉ分子は、式Ｉ及び表６又は表８のセンス鎖又はアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡを含む。他の実施形態では、本明細書に各々開示されるＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤は、式Ｉ、及び配列番号３６１、配列番号３６２、配列番号３６３、配列番号３６４、配列番号３６５、又は配列番号３６６のいずれか１つの配列を含むセンス鎖を含む。他の実施形態では、本明細書に各々開示されるＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤は、式Ｉ、及び配列番号３６７、配列番号３６８、配列番号３６９、配列番号３７０、配列番号３７１、又は配列番号３７２のいずれか１つの配列を含むアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡを含む。更なる実施形態では、本明細書に各々開示されるＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤は、式Ｉ、並びにａ～ｆに記載される、
ａ．配列番号３６１と配列番号３６７、
ｂ．配列番号３６２と配列番号３６８、
ｃ．配列番号３６３と配列番号３６９、
ｄ．配列番号３６４と配列番号３７０、
ｅ．配列番号３６５と配列番号３７１、又は
ｆ．配列番号３６６と配列番号３７２の配列の対から選択されるセンス鎖及びアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡとを含む。

【0051】

また更なる実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤を含むＲＮＡｉ分子は、式ＩＩＩのリンカー（すなわち、リンカー２）を介して式Ｉにコンジュゲートされている。また更なる実施形態では、式ＩＩＩのリンカーは、センス鎖の３’末端でヌクレオチドにコンジュゲートされている。更なる実施形態では、アンチセンス鎖上の任意の５’リン酸が省略され、リボース中の１つ以上の２’フルオロ残基が除去される。更なる実施形態では、除去される任意の２’フルオロ残基は、同じ位置で２’メトキシ修飾によって置き換えられる。

【0052】

式Ｉ、並びにＲがセンス鎖及びアンチセンス鎖を含むことを含む、Ｒによって表されるものなどの、１つ以上のＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドを含む本明細書のＲＮＡｉ分子は、肝臓の疾患又は脂肪組織に関与する疾患の治療に有用である。これらは、患者、好適にはヒトにおける使用に適した医薬組成物に製剤化される。本明細書に開示される医薬組成物は、本明細書のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤及び組成物又は製剤の他の成分と適合し、患者に有害でない、１つ以上の担体、希釈剤、及び賦形剤を含む。医薬組成物及びこれらの調製のためのプロセスの例は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ」，Ｌｏｙｄ，Ｖ．，ｅｔａｌ．Ｅｄｓ．，２２^ｎｄＥｄ．，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，２０１２に見出すことができる。

【0053】

したがって、一実施形態では、式Ｉ、並びにＲがセンス鎖及びアンチセンス鎖を含むことを含む、Ｒによって表されるものなどの１つ以上のＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドを含む、本明細書に開示されるＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤、及び１つ以上の医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物である。更なる実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤などのＲＮＡ分子、及びその医薬組成物は、疾患の治療又は治療において使用するためのものである。

【0054】

別の実施形態は、治療に使用するための、式Ｉ、並びにＲがセンス鎖及びアンチセンス鎖を含むことを含む、Ｒによって表されるものなどの１つ以上のＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドを含むＲＮＡｉ分子若しくはＲＮＡｉ剤、又はそれらの医薬組成物である。別の実施形態は、治療に使用するための本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤である。更なる実施形態では、治療は、未治療又は対照又はプラセボ治療との比較など、ＡＮＧＰＴＬ８発現のレベルを減少させることを含む。更なる実施形態は、治療が肝臓の疾患又は肝臓に関与する疾患のためのものである。別の実施形態は、本明細書に開示されるＲＮＡｉ分子、好適には式Ｉ、並びにＲが本明細書に開示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖を含むなど、Ｒを含む１つ以上のＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドを含む、好適には有効量で投与されるＲＮＡｉ分子、又は前述のいずれかの医薬組成物を投与することを含む肝疾患の治療方法である。別の実施形態は、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤、好適にはその有効量、又はＲＮＡｉ剤及び１つ以上の医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を投与することを含む、肝疾患を治療することを必要とする患者に肝疾患を治療する方法である。

【0055】

別の実施形態は、式Ｉを含むＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤、

【0056】

【化5】

並びにセンス鎖及びアンチセンス鎖であり、アンチセンス鎖は、配列番号４０５～５２５からなる群から選択される配列の少なくとも１８個の連続するヌクレオチドを含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、少なくとも１５ヌクレオチドの相補性領域を形成し、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１８～２３ヌクレオチド長であり、任意選択で、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含み、任意選択で、センス鎖及びアンチセンス鎖の１つ以上のヌクレオチド間結合は、修飾ヌクレオチド間結合であり、センス鎖又はアンチセンス鎖は、任意選択でリンカーを介して式Ｉにコンジュゲートされている。

【0057】

本明細書に開示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖などのオリゴヌクレオチドはまた、ＡＮＧＰＴＬ８の発現を減少させるために肝臓又は他の組織を標的とするために、代替的な送達部分にコンジュゲートされ得る。本明細書に開示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖などのオリゴヌクレオチドはまた、コンジュゲートされていなくてもよく、その代わりに、ＡＮＧＰＴＬ８の発現を減少させるために、カプセル化されるか、又はコンジュゲーションを必要としない別の手段によって目的の組織に送達され得る。

【0058】

したがって、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の他の実施形態は、式Ｒ－Ｌ－Ｄを有する、任意選択でリンカーＬを介してＲにコンジュゲートされた送達部分を含むＲＮＡｉ剤であり、式中、Ｒは、アンチセンス鎖若しくはセンス鎖又はこれらの両方を含み、アンチセンス鎖は、ＡＮＧＰＴＬ８のｍＲＮＡ転写物に相補的である配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、少なくとも１５ヌクレオチドの相補性領域を形成し、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖は、存在する場合及び存在するとき、各々独立して、１５～３０ヌクレオチド長であり、任意選択で、センス鎖及びアンチセンス鎖は、存在する場合及び存在するとき、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含み、任意選択で、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖は、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合を含む。別の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号１に相補的である配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。更なる実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１８～２３ヌクレオチド長である。これらのＲＮＡｉ剤のいずれかの更なる実施形態では、アンチセンス鎖は、ＡＮＧＰＴＬ８のｍＲＮＡ転写物に対して少なくとも１８ヌクレオチドの相補性領域を形成する。これらのＲＮＡｉ剤のいずれかの異なる更なる実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号１に対して少なくとも１８ヌクレオチドの相補性領域を形成する。

【0059】

【0060】

本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の更なる実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号４０５、４０８、４１２、４１３、４１４、４１５、４１８、４２０、４２５、４２６、４２８、４２９、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４８、４４９、４５１、４５２、４５４、４５７、４５８、４５９、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９５、４９９、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、及び５０９からなる群から選択される配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アンチセンス鎖は、表２のアンチセンス鎖配列の群から選択される。

【0061】

【0062】

【0063】

【0064】

【0065】

本明細書におけるＲＮＡｉ剤の他の実施形態では、アンチセンス鎖の５’ヌクレオチドは、リン酸基又はリン酸アナログを含む。

【0066】

本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の更なる実施形態は、アンチセンス鎖が、配列番号４０５、４０８、４１２、４１３、４１４、４１５、４１８、４２０、４２５、４２６、４２８、４２９、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４８、４４９、４５１、４５２、４５４、４５７、４５８、４５９、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９５、４９９、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、及び５０９からなる群から選択される配列の少なくとも１８個の連続するヌクレオチドを含む。

【0067】

別の更なる実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、２３ヌクレオチド長であるアンチセンス鎖を含む。また別の更なる実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、２１ヌクレオチド長である。好適な実施形態では、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチド長であり、センス鎖は、２１ヌクレオチド長である。

【0068】

別の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、配列番号２３１～３６１、又はこれらに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなる群から選択される。別の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、配列番号１２４～２３０、又はこれらに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなる群から選択される。相補性領域において、センス鎖とアンチセンス鎖との間に０、１、２、又は３個のミスマッチを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。

【0069】

更なる実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含むセンス鎖又はアンチセンス鎖を含む。更なる実施形態では、１つ以上の修飾ヌクレオチドは、独立して、リボース上に２’フルオロ基を有するか、又は２’０－メチル基を有するヌクレオチドである。更なる実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖の各ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。

【0070】

本明細書のＲＮＡｉ剤の別の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖の各々の５’及び３’末端の２つのヌクレオチドの各々は、修飾ヌクレオチド間結合を有する。更なる実施形態では、修飾ヌクレオチド間結合は、存在する場合、ホスホロチオレート結合である。

【0071】

本明細書におけるＲＮＡｉ剤の別の実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端のヌクレオチドは、リン酸基又はリン酸アナログである修飾又は更なる修飾を有する。

【0072】

本明細書におけるＲＮＡｉ剤の更なる実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号３６７～３７２及び３８９～４０４からなる群から選択される配列、又はこれらに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。

【0073】

本明細書におけるＲＮＡｉ剤の他の更なる実施形態では、センス鎖は、配列番号３６１～３６６及び３７３～３８８からなる群から選択される配列、又はこれらに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。

【0074】

本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の他の更なる実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、
ａ．配列番号３６１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｂ．配列番号３６２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｃ．配列番号３６３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｄ．配列番号３６４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｅ．配列番号３６５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｆ．配列番号３６６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｇ．配列番号３７３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３８９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｈ．配列番号３７４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｉ．配列番号３７５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｊ．配列番号３７６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｋ．配列番号３７７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｌ．配列番号３７８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｍ．配列番号３７９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｎ．配列番号３８０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｏ．配列番号３８１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｐ．配列番号３８２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｑ．配列番号３８３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｒ．配列番号３８４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｓ．配列番号３８５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４００に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｔ．配列番号３８６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｕ．配列番号３８７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｖ．配列番号３８８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、並びに
ｗ．配列番号３８９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖からなる群から選択される一対のオリゴヌクレオチド配列である。
好適には、列挙されたオリゴヌクレオチド配列の対を有するＲＮＡｉ剤は、式Ｉを含む。更なる好適な実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の３’末端でヌクレオチドにコンジュゲートされた式Ｉを含む。また更なる実施形態では、式Ｉは、リンカーを介してセンス鎖の３’末端でヌクレオチドにコンジュゲートされている。更なる実施形態では、リンカーは、式ＩＩＩのリンカーである。

【0075】

本明細書におけるＲＮＡｉ剤の他の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、
ａ．配列番号３６１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｂ．配列番号３６２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｃ．配列番号３６３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｄ．配列番号３６４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｅ．配列番号３６５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｆ．配列番号３６６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｇ．配列番号３７３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３８９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｈ．配列番号３７４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｉ．配列番号３７５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｊ．配列番号３７６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｋ．配列番号３７７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｌ．配列番号３７８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｍ．配列番号３７９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｎ．配列番号３８０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｏ．配列番号３８１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｐ．配列番号３８２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｑ．配列番号３８３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｒ．配列番号３８４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｓ．配列番号３８５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４００に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｔ．配列番号３８６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｕ．配列番号３８７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｖ．配列番号３８８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、並びに
ｗ．配列番号３８９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖からなる群から選択される一対のオリゴヌクレオチド配列である。
好適には、列挙されたオリゴヌクレオチド配列の対を有するＲＮＡｉ剤は、式Ｉを含む。更なる好適な実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の３’末端でヌクレオチドにコンジュゲートされた式Ｉを含む。また更なる実施形態では、式Ｉは、リンカーを介してセンス鎖の３’末端でヌクレオチドにコンジュゲートされている。更なる実施形態では、リンカーは、式ＩＩＩのリンカーである。

【0076】

本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の他の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、
ａ．配列番号３６１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｂ．配列番号３６２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｃ．配列番号３６３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｄ．配列番号３６４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、並びに
ｅ．配列番号３６５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖からなる群から選択される一対のオリゴヌクレオチド配列である。
好適には、列挙されたオリゴヌクレオチド配列の対を有するＲＮＡｉ剤は、式Ｉを含む。更なる好適な実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の３’末端でヌクレオチドにコンジュゲートされた式Ｉを含む。また更なる実施形態では、式Ｉは、リンカーを介してセンス鎖の３’末端でヌクレオチドにコンジュゲートされている。更なる実施形態では、リンカーは、式ＩＩＩのリンカーである。

【0077】

本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の更なる実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、
ａ．配列番号３６１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｂ．配列番号３６２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｃ．配列番号３６３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｄ．配列番号３６４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、並びに
ｅ．配列番号３６５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖からなる群から選択される一対のオリゴヌクレオチド配列である。

【0078】

好適には、列挙されたオリゴヌクレオチド配列の対を有するＲＮＡｉ剤は、式Ｉを含む。更なる好適な実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の３’末端でヌクレオチドにコンジュゲートされた式Ｉを含む。また更なる実施形態では、式Ｉは、リンカーを介してセンス鎖の３’末端でヌクレオチドにコンジュゲートされている。更なる実施形態では、リンカーは、式ＩＩＩのリンカーである。

【0079】

本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の別の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、
ａ．配列番号３６１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、並びに
ｂ．配列番号３６５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖からなる群から選択される一対のオリゴヌクレオチド配列であるＲＮＡ剤である。

【0080】

【0081】

本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の他の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、
ａ．配列番号３６１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、並びに
ｂ．配列番号３６５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖からなる群から選択される一対のオリゴヌクレオチド配列である。

【0082】

【0083】

本明細書における他の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、肝細胞におけるＡＮＧＰＴＬ８遺伝子の発現を減少させることができる。

【0084】

他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤は、治療に使用するためのものである。

【0085】

別の実施形態は、脂質異常症、心血管疾患、及び非アルコール性脂肪肝疾患（non-alcoholic fatty liver disease、ＮＡＦＬＤ）を各々含む肝疾患又は肝臓に関与する疾患の治療に好適である薬剤の製造に使用するための、式Ｉ、並びにＲが本明細書に開示されるセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖を含むなどのＲを含む１つ以上のＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドを好適に含む、本明細書に開示されるＲＮＡｉ分子若しくはＲＮＡｉ剤、又はその医薬組成物である。別の実施形態では、脂質異常症、心血管疾患、及び非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を各々含む肝疾患又は肝臓に関与する疾患の治療に好適である薬剤の製造において、式Ｉ、並びにＲが本明細書に開示されるセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖を含むなどのＲを含む１つ以上のＡＮＧＰＴＬ８オリゴヌクレオチドを好適に含む、本明細書に開示されるＲＮＡｉ分子若しくはＲＮＡｉ剤、又はその医薬組成物の使用である。更なる実施形態では、ＮＡＦＬＤは、非アルコール性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis、ＮＡＳＨ）である。別の実施形態は、脂質異常症、心血管疾患、及び非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を各々含む肝疾患又は肝臓に関与する疾患の治療に好適である薬剤の製造に使用するための、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤、又はその医薬組成物である。更なる実施形態では、ＮＡＦＬＤは、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。

【0086】

他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ分子又はその医薬組成物の有効量を、脂質異常症を治療することを必要とする患者に投与することを含む、脂質異常症を治療する方法である。別の実施形態は、脂質異常症を治療する際に使用するための、本明細書に開示されるＲＮＡｉ分子又はその医薬組成物である。他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤又はその医薬組成物の有効量を、脂質異常症を治療することを必要とする患者に投与することを含む、脂質異常症を治療する方法である。別の実施形態は、脂質異常症を治療する際に使用するための、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤又はその医薬組成物である。

【0087】

他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ分子又はその医薬組成物の有効量を、心血管疾患を治療することを必要とする患者に投与することを含む、心血管疾患を治療する方法が提供される。別の実施形態は、任意選択で、かつ好適には、入院加療及び／若しくは心血管事象並びに／又はこれらのいずれか若しくはこれらの両方のリスクの減少によって測定される、心血管疾患の治療に使用するための、本明細書に開示されるＲＮＡｉ分子又はその医薬組成物である。他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤又はその医薬組成物の有効量を、心血管疾患を治療することを必要とする患者に投与することを含む、心血管疾患を治療する方法が提供される。別の実施形態は、任意選択で、かつ好適には、入院加療及び／若しくは心血管事象並びに／又はこれらのいずれか若しくはこれらの両方のリスクの減少によって測定される、心血管疾患の治療に使用するための、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤又はその医薬組成物である。

【0088】

他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ分子又はその医薬組成物の有効量を、心血管事象を予防することを必要とする患者に投与することを含む、心血管事象を予防する方法である。他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤又はその医薬組成物の有効量を、心血管事象を予防することを必要とする患者に投与することを含む、心血管事象を予防する方法である。更なる実施形態では、心血管事象は、心筋梗塞である。

【0089】

他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤などの本明細書に開示されるＲＮＡｉ分子、又はその医薬組成物の有効量を、心血管疾患又は事象に関連する入院加療を減少させることを必要とする患者に投与することを含む、心血管疾患又は事象に関連する入院加療を減少させる方法である。

【0090】

他の実施形態では、本明細書に開示のＲＮＡｉ剤などのＲＮＡｉ分子又はその医薬組成物の有効量を、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療することを必要とする患者に投与することを含む、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療する方法である。別の実施形態は、ＮＡＦＬＤを治療する際に使用するための、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤などのＲＮＡｉ分子又はその医薬組成物である。更なる実施形態では、ＮＡＦＬＤは、ＮＡＳＨである。

【0091】

他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤などのＲＮＡｉ分子又はその医薬組成物の有効量を、トリグリセリドレベルを低下させることを必要とする患者に投与することを含む、トリグリセリドレベルを低下させる方法である。

【0092】

他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤などのＲＮＡｉ分子又はその医薬組成物の有効量を、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）を阻害することを必要とする患者に投与することを含む、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）を阻害する方法である。

【0093】

他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤などのＲＮＡｉ分子又はその医薬組成物の有効量を、高トリグリセリドリポタンパク質の異化を増加させることを必要とする患者に投与することを含む、高トリグリセリドリポタンパク質の異化を増加させる方法である。

【0094】

他の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤などのＲＮＡｉ分子又はその医薬組成物の有効量を、肝疾患を治療することを必要とする患者に投与することを含む、ＡＮＧＰＴＬ８の発現レベルを減少させることから利益を得る患者の肝疾患を治療する方法である。

【0095】

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、病気又は疾患を治療するのに有効である量を指す。

【0096】

本明細書で使用される場合、「治療する」又は「治療すること」という用語は、例えば、既存の状態（例えば、疾患、病気）に関して個体の健康及び／若しくは健康な状態を向上させる目的で、又は状態の発生の可能性を予防若しくは減少させるために、治療薬（例えば、本明細書のオリゴヌクレオチド）を個体に投与することによって、それを必要とする個体に治療を提供する行為を意味する。また、治療することは、個体が経験する状態（例えば、疾患、病気）の少なくとも１つの徴候、症状、又は寄与因子の頻度又は重症度を低減することを含むことができる。

【0097】

ＲＮＡｉ剤は、本明細書の非限定的な実施例において更に記載される。

【0098】

実施例１

【0099】

表１．設計されたｓｉＲＮＡのための標的及びアンチセンス配列

【表1-1】

【0100】

（表１の続き）

【表1-2】

【0101】

（表１の続き）

【表1-3】

【0102】

表１において上記に示すように、ＡＮＧＰＴＬ８転写物ＮＭ＿（配列番号１）の１８ｍｅｒ領域に相補的であるｓｉＲＮＡを設計する。センス鎖及びアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチド鎖は、１８～２３ヌクレオチド長であり、１～５リボヌクレオチドの任意のオーバーハングを有し、リボースの２’位に１～１０個のフルオロ付加を有し、残りの残基は、リボースの２’位でメチル化されている（２’メトキシ、すなわち、２’Ｏ－メチル修飾を生成する）。いくつかのアンチセンス鎖は、５’位においてリン酸化される。各ｓｉＲＮＡは、３つのＧａｌＮＡｃ基を含む送達部分にコンジュゲートされており、選択された送達部分は、式Ｉを含み、他の送達部分は、対照部分を含む。１つ以上のホスホジエステル結合は、５’末端及び３’末端に存在する。

【0103】

これらのｓｉＲＮＡによるＡＮＧＰＴＬ８発現のノックダウンを、以下の手順を使用してアッセイする。マウスの初代肝細胞（mouse primary hepatocyte、ＭＰＨ）をＡＡＶ－ＡＮＧＰＴＬ８ヒト化マウスから新たに単離し、ウェル当たり１５ｋでＣｏｒｎｉｎｇプレートに添加し、ｓｉＲＮＡをウェルに直接添加する。単一測定では、１μＭ（１０００ｎＭ）を使用し、濃度／用量反応曲線を生成するためには、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートｓｉＲＮＡ濃度の最終濃度１０００、３３３、１１１、３７、１２、４、１．３７、０．４６、０．１５、０．０５、及び０．０１７ｎＭを使用する。

【0104】

処理した細胞を溶解し、Ｑｕｉｃｋ－ＲＮＡ９６Ｋｉｔ（ＺｙｍｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を使用してＲＮＡを９６ウェルプレートに直接単離する。溶出されたＲＮＡを直ちに使用するか、又は凍結保存する。ＦａｓｔＡｄｖａｎｃｅｄＲＴＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用し、サーモサイクラーにおいて以下のステップを使用して、ｃＤＮＡを合成する。３７℃で３０分間、９５℃で５分間、及び４℃で保持。ポリメラーゼ連鎖反応（Polymerase Chain Reaction、ＰＣＲ）は、ＴａｑＭａｎＲＴＰＣＲ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を介して、以下のサイクル温度及び時間を使用して実施される。５０℃で２分間、９５℃で１０分間、９５℃で１５秒間及び６０℃で１分間の４０サイクル。

【0105】

ヒトＡＮＧＰＴＬ８レベルは、マウスＲｐｌｐ０（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に対して正規化され、ビヒクル処理対照細胞と比較したヒトＡＮＧＰＴＬ８ｍＲＮＡ発現の相対的ノックダウンを表す。ＸＬＦｉｔを使用した４パラメータフィットモデルを使用して、ＩＣ５０値を計算した。

【0106】

５０％を超えるノックダウンを示したｓｉＲＮＡのＡＮＧＰＴＬ８標的領域を下記の表２に示す。

【0107】

表２．

【表2-1】

【0108】

（表２の続き）

【表2-2】

【0109】

実施例２
３つのＧａｌＮＡｃ基を含む対照送達部分（ｃｎｔｒｌ－ＧａｌＮＡｃ）にコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ８ｓｉＲＮＡを、式Ｉの送達部分にコンジュゲートされた同じｓｉＲＮＡと比較し、アンチセンス鎖上に５’リン酸を欠くｓｉＲＮＡと比較し、この実施例２に記載のようにアッセイする。３つのｓｉＲＮＡのセンス鎖及びアンチセンス鎖を下記の表３に示しており、３つのｓｉＲＮＡは各々、配列番号３８１と３９７、又は３８２と３９８、又は３６６と３７２のセンス鎖とアンチセンス鎖との対のうちの１つを有する。修飾は、対応する修飾ヌクレオチドの直前に記されている。Ｐは、リン酸化を表し、ｍは、リボース上に２’メトキシ修飾を生成するＯＨ基のメチル化を表し、ｆは、リボースの２’フルオロ修飾を表し、^＊は、骨格のホスホジエステル結合のホスホロチオエート修飾を表す）。

【0110】

表３．

【表3】

【0111】

上記のｓｉＲＮＡを比較するために、３つのアッセイを実施して、ＡＮＧＰＴＬ３／８レベル、トリグリセリドレベル、及びｍＲＮＡレベル（％ＫＤ）によって測定されたＡＮＧＰＴＬ８発現のノックダウンを分析する。

【0112】

コンジュゲートされたｓｉＲＮＡを、ヒトコレステロールエステル転送タンパク質（cholesterol ester transfer protein、ＣＥＴＰ）及びアポリポタンパク質Ａ１（Ｔａｃｏｎｉｃｆａｒｍｓ）について雄トランスジェニックマウスにおいて試験する。マウスに、２つのアデノ随伴ウイルス（adeno-associated virus、ＡＡＶ）ベクターを後眼窩注射によって投与する。第１のベクターは、アルブミンプロモータ、及びヒトＡＮＧＰＴＬ８（ＮＭ＿０１８６８７．７）配列番号１のコード配列を有するプラスミドを含有する。第２のベクターは、ヒトＡＮＧＰＴＬ３（ＮＰ＿０５５３１０．１）配列番号２のマウスコドン最適化配列を含有する。ＡＡＶ投与の３～５週間後に、動物の体重を測定し、マウスから血液を採取する。これは、研究前採血と考えられる。血清を血液から調製し、トリグリセリドをＣＯＢＡＳ臨床化学分析装置（Ｒｏｃｈｅ）を利用して測定し、ＡＮＧＰＴＬ３／８タンパク質レベルをＥＬＩＳＡ（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）によって測定する。マウスを、同様の体重、血清トリグリセリド、及びＡＮＧＰＴＬ３／８レベルを有する群に割り当てる（ｎ＝６）。血液を研究０日目に採取し、この採取をベースラインとみなす。ＰＢＳ又は試験ｓｉＲＮＡのいずれかを、３及び１０ｍｇ／ｋｇの用量で、研究０日目にマウスに皮下投与する。イソフルラン麻酔下で、ｓｉＲＮＡ投与の１週間後及び２週間後にマウスから血液を採取する。血清を血液から調製し、トリグリセリドをＣＯＢＡＳ臨床化学分析装置（Ｒｏｃｈｅ）を利用して測定する。血清ＡＮＧＰＴＬ３／８レベルを、ＥＬＩＳＡ（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）によって測定する。１週間後のベースラインからの変化率としてのトリグリセリドは、（（１週間後のトリグリセリド－ベースラインのトリグリセリド）／（ベースラインのトリグリセリド））^＊１００として計算される。２週間後のベースラインからの変化率としてのトリグリセリドを同様に計算する。１週間後のベースラインからの変化率としてのＡＮＧＰＴＬ３／８は、（（１週間後のＡＮＧＰＴＬ３／８－ベースラインのＡＮＧＰＴＬ３／８）／（ベースラインのＡＮＧＰＴＬ３／８））^＊１００として計算される。２週間後のベースラインからの変化率としてのＡＮＧＰＴＬ３／８を同様に計算する。血清トリグリセリド及びＡＮＧＰＴＬ３／８データを、ＡＮＯＶＡ及びダネット法を使用して、対応する時点でのＰＢＳ群からの統計的有意差について分析し、ｐ＜０．０５を統計的に有意であるとみなした（ＳＡＳＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）。

【0113】

ｉｎｖｉｔｒｏノックダウンを測定するために、マウスを、皮下注射の２週間後にイソフルラン麻酔下で安楽死させる。肝臓をマウスから採取し、液体窒素中で凍結する。ＬｙｓｉｎｇＭａｔｒｉｘＤビーズチューブをＦａｓｔＰｒｅｐ－２４（ＭＰＢｉｏ）で使用して、肝臓をＴｒｉＺｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でホモジナイズし、ＲＮＡを精製し、ヌクレアーゼを含まない水に再懸濁する。ＲＮＡをＮａｎｏＤｒｏｐ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で定量する。Ｈｉｇｈ－ＣａｐａｃｉｔｙｃＤＮＡＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）をＰｒｏＦｌｅｘＴｈｅｒｍｏｃｙｃｌｅｒ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で使用して、等量のＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写する。サーモサイクラーの設定は、２５℃で１０分間、３７℃で２時間、次いで８５℃で５分間である。鋳型ｃＤＮＡをＴａｑｍａｎＵｎｉｖｅｒｓａｌＭａｓｔｅｒＭｉｘ及びＡｓｓａｙｓｏｎＤｅｍａｎｄプライマー／プローブセットと組み合わせ、ＲＴ－ＰＣＲをＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ７ＦｌｅｘＲｅａｌ－ＴｉｍｅＰＣＲシステム（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で以下のパラメータで実施する。５０℃で２分間、９５℃で１０分間、次いで９５℃で１５秒間、及び６０℃で１分間を４０サイクル。倍数変化（Fold change、ＦＣ）を、マウスＲｐｌｐ０のＣＴ値をヒトＡＮＧＰＴＬ８のＣＴ値から減算するように計算し、ΔＣＴ値を得る。ΔＣＴ値は、各試験試料のΔＣＴ値から各遺伝子についての未処理試料（ＰＢＳ対照）の平均ΔＣＴ値を差し引くことによって計算される。倍数変化は、負のΔＣＴ値の２を底とする対数をとることによって計算される。ノックダウン率（Percent knock down、％ＫＤ）は、１からＦＣを減算し、１００を掛けることによって計算される。データを表４に示す。式Ｉの送達部分を含む２つのｓｉＲＮＡは、対照送達部分よりも良好に機能し、ＡＮＧＰＴＬ８のレベルが低く、トリグリセリドレベルが低く、ＡＮＧＰＴＬ８ｍＲＮＡのノックダウン率が高いことを示している。

【0114】

表４．

【表4】

^＊は、ダネットによるｐ＜０．０５ＡＮＯＶＡを示す。

【0115】

実施例３
ＡＮＧＰＴＬ８転写物ＮＭ＿（配列番号１）（表１）の上記１８ｍｅｒ領域に相補的である例示的なｓｉＲＮＡを設計し、基礎となるヌクレオチド配列によって下記の配列表に示し、各行は、所与のセンス鎖及びアンチセンス鎖を有するｓｉＲＮＡを表す。図示のように、基礎となるセンスＲＮＡオリゴヌクレオチド鎖及びアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチド鎖は、１８～２３ヌクレオチド長であり、１～５リボヌクレオチドの任意のオーバーハングを有する。示される基礎となるヌクレオチド配列は、リボースの２’位で１～１０個のフルオロ付加により修飾されており、残りの残基は、リボースの２’位でメチル化されている（２’メトキシ修飾を生成する）。いくつかのアンチセンス鎖は、５’位においてリン酸化される。各ｓｉＲＮＡは、３つのＧａｌＮＡｃ基を含む送達部分にコンジュゲートされており、選択された送達部分は、式Ｉを含み、他の送達部分は、対照部分を含む。１つ以上のホスホジエステル結合は、５’末端及び３’末端に存在する。対照ＧａｌＮＡｃは、センス鎖の３’末端に結合している。これらのｓｉＲＮＡのサブセットをｉｎｖｉｖｏノックダウンアッセイで試験する。

【0116】

ｉｎｖｉｖｏノックダウンアッセイのために、選択したｓｉＲＮＡを雄Ｃ５７ｂｌ／６マウス（Ｔａｃｏｎｉｃｆａｒｍｓ）において試験する。マウスに、アルブミンプロモータ及びヒトＡＮＧＰＴＬ８（配列番号１）（ＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿０１８６８７．７）（ＶｅｃｔｏｒＢｉｏＬａｂｓ）のコード配列を有するプラスミドを含有するアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを、後眼窩注射によって投与する。ＡＡＶ投与の２週間後にマウスの体重を測定する。マウスを、同様の体重を有する群に割り当てる（ｎ＝５）。ＰＢＳ又は試験ｓｉＲＮＡのいずれかを、１０ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに皮下投与する。皮下注射の７日後、マウスをイソフルラン麻酔下で安楽死させる。肝臓をマウスから採取し、液体窒素中で凍結する。採取した肝臓からＲＮＡを単離及び精製し、ｃＤＮＡ合成に使用し、ＲＴＰＣＲによって定量する。

【0117】

倍数変化（Fold change、ＦＣ）を、マウスＲｐｌｐ０のＣＴ値をヒトＡＮＧＰＴＬ８のＣＴ値から減算するように計算し、ΔＣＴ値を得る。相対量は、負のΔΔＣＴ値の２を底とする対数をとることによって計算される。倍率変化は、各試料の相対量を対照群の平均で割ることによって計算される。ノックダウン率（Percent knock down、％ＫＤ）は、１からＦＣを減算し、１００を掛けることによって計算される。データを表５に示す。

【0118】

表５

【表5】

【0119】

表６の以下のｓｉＲＮＡのｉｎｖｉｖｏノックダウンを測定するために、１０ｍｇ／ｋｇ用量について上述したのと同じ手順を３ｍｇ／ｋｇの用量で実施する。（各ｓｉＲＮＡは、縦の順序でセンス鎖及びアンチセンス鎖を有し、最初に試験されたｓｉＲＮＡは、表の最初の２行、配列番号３７３及び３８９を含み、次のｓｉＲＮＡは、表の３番目及び４番目の行、配列番号３７４及び３９０を含み、以下同様である。対照ＧａｌＮＡｃは、各ｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’末端に結合している。修飾の略語は、上記実施例３に示したものと同じである。選択したＲＮＡの結果を表７において以下に示す。

【0120】

表６

【表6】

【0121】

表７

【表7】

【0122】

実施例５
ＧａｌＮＡｃ－ｓｉＲＮＡを、ヒトコレステロールエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）及びアポリポタンパク質Ａ１（Ｔａｃｏｎｉｃｆａｒｓ）を用いて雄トランスジェニックマウスにおいて試験する。ｓｉＲＮＡを分割し、３つの研究（ｎ＝２、ｎ＝２、及びｎ＝２）で試験する。マウスに、２つのアデノ随伴ウイルス（adeno-associated virus、ＡＡＶ）ベクターを後眼窩注射によって投与する。１つのベクターは、アルブミンプロモータ、及びヒトＡＮＧＰＴＬ８（配列番号１）のコード配列を有するプラスミドを含有する。第２のベクターは、ヒトＡＮＧＰＴＬ３（配列番号２）（ＮＰ＿０５５３１０．１）のマウスコドン最適化配列を含有する。ベースラインの血液試料を、ＡＡＶ投与の４～６．５週間後にマウスから採取する。血清を血液から調製し、トリグリセリドをＣＯＢＡＳ臨床化学分析装置（Ｒｏｃｈｅ）を利用して測定し、ＡＮＧＰＴＬ３／８をＥＬＩＳＡ（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）によって測定する。マウスを、同様の血清トリグリセリド及びＡＮＧＰＴＬ３／８レベルを有する群に割り当てる。ｓｉＲＮＡを表８に示すように設計し、各ｓｉＲＮＡは、式Ｉの送達部分にコンジュゲートされている。ＰＢＳ又はｓｉＲＮＡのいずれかを、０．３、１、３、及び１０ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに皮下投与する。イソフルラン麻酔下で、ｓｉＲＮＡ投与の３、６、及び９週間後にマウスから血液を採取する。血清を血液から調製し、トリグリセリドをＣＯＢＡＳ臨床化学分析装置（Ｒｏｃｈｅ）を利用して測定する。

【0123】

３週間後のベースラインからの変化率としてのトリグリセリドは、（（３週間後のトリグリセリド－ベースラインのトリグリセリド）／（ベースラインのトリグリセリド））^＊１００として計算される。６週間後及び９週間後のベースラインからの変化率としてのトリグリセリドを同様に計算する。トリグリセリドデータを、ＡＮＯＶＡ及びダネット法を使用して、対応する時点でのＰＢＳ群からの統計的有意差について分析し、ｐ＜０．０５を統計的に有意であるとみなした（ＳＡＳＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）。データを表９に示す。

【0124】

分子の各々についての１０００ｎＭでの対応するｉｎｖｉｔｒｏノックダウン率を表１０に示す。

【0125】

表８

【表8】

【0126】

表９

【表9】

【0127】

表１０

【表10】

【0128】

表１１

【表11-1】

【0129】

（表１１の続き）

【表11-2】

【0130】

（表１１の続き）

【表11-3】

【0131】

実施例６
組織試料中の表１３の式１のコンジュゲートされたｓｉＲＮＡ鎖のレベルを定量するために、組織試料をＣｌａｒｉｔｙＯＴＸ細胞溶解緩衝液（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）で１００ｍｇ／ｍＬの最終組織濃度にホモジナイズする。（センス鎖については、ｉｎｖｉｖｏでの急速な脱リン酸化のためにＯＨ代謝産物が定量される）。血漿試料をＣｌａｒｉｔｙＯＴＸ緩衝液で１：１０（ｖ／ｖ）に希釈する。試料を、弱イオン交換樹脂（Ｗａｔｅｒｓ，ＯａｓｉｓμＥｌｕｔｉｏｎＳＰＥプレート）を使用して固体相抽出に供する。試料を溶出し、ＡＳＳＡＹａｎｄＤｒｕｇＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１０（３）ｐａｇｅｓ２７８－２８８（２０１２）に記載されているように、液体クロマトグラフィー高分解能質量分析（liquid chromatography-high resolution mass spectrometry、ＬＣ－ＨＲＭＳ）に供する。

【0132】

マウス又はカニクイザルにおける血漿曝露を、皮下投与後、サルにおいて６時間及び２４時間にわたって測定する。肝臓への曝露を、６、２４、７２、１６８、３３６、及び１３４３時間でマウスにおいて決定する。結果を、ＰｈｏｅｎｉｘソフトウェアＮＣＡパッケージを使用して非コンパートメント分析に供する。Ｃ_ｍａｘ、ｔ_１／２、及びＡＵＣは、両方の種について血漿中で決定され、肝臓Ｃ_ｍａｘ、ｔ_１／２、及びＡＵＣは、マウスにおいて決定され、肝臓ｔ_１／２及びＡＵＣは、サルにおいて決定される。

【0133】

表１３は、カニクイザルにおける６つのコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの肝臓への曝露を示す。リンカー２（式ＩＩＩを有する）を介して式ＩのＧａｌＮＡｃ含有部分に（センス鎖の３’末端ヌクレオチドで）コンジュゲートされた３ｍｇ／ｋｇの列挙したＡＮＧＰＴＬ８ｓｉＲＮＡの皮下投与による治療の約２週間後及び１２週間後に、肝臓を採取し、ＬＣ／ＭＳを使用する上記の検出方法に供した。

【0134】

表１２ａ及び表１２ｂは、式ＩのＧａｌＮＡｃ含有部分がリンカー２（式ＩＩＩを有する）を介してセンス鎖の３’末端ヌクレオチドにコンジュゲートされている、コンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ８ｓｉＲＮＡの投与前（１匹のサル）及び投与後（下記に記述するように、数匹のサル、各々３ｍｇ／ｋｇ）に、カニクイザルから採取した肝臓ホモジネートのＲＴ－ＰＣＲによって決定したＡＮＧＰＴＬ８ｍＲＮＡのノックダウン率の２つの例示的な実験を示す。

【0135】

表１２ａ
カニクイザル
効力及び耐久性

【表12】

＃ｎ＝４
^＊ｎ＝５

【0136】

表１２ｂ
カニクイザル
効力及び耐久性

【表13】

ｎ＝６
^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ≦０．０１、^＊＊＊Ｐ≦０．００５対投与前生検は、ＭＭＲＭによって統計的に有意である

【0137】

表１３
カニクイザル
ＰＫ特性

【表14】

【0138】

以下の番号付けされた段落は、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤及びＲＮＡｉ分子の追加の実施形態を提供する。

【0139】

１．式Ｉを含むＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子又はＲＮＡｉ剤であって、

【化6】

１つ以上のオリゴヌクレオチドは、配列番号１に結合する１５～４０ヌクレオチドを含み、Ｒは、任意選択でリンカーを介してオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされている、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子又はＲＮＡｉ剤。
２．１つ以上のオリゴヌクレオチドは、表１又は表２に記載される配列の１つ以上に結合する、段落１に記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
３．１つ以上のオリゴヌクレオチドは、表２に記載される配列を含む、段落１に記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
４．１つ以上のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む、段落１～３のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
５．１つ以上の修飾ヌクレオチドは、糖の２’位、又はピリミジン若しくはプリン環、又はこれらの両方で修飾されている、段落４に記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
６．１つ以上の修飾ヌクレオチドは、２’ハロゲン化糖基を含む修飾ヌクレオチド、２’メチル化糖基を含む修飾ヌクレオチド、２’メトキシル化糖基を含む修飾ヌクレオチド、メチル化プリンを含む修飾ヌクレオチド、若しくはメチル化ピリミジン環を含む修飾ヌクレオチド、又はこれらの任意の組み合わせを含む修飾ヌクレオチドである、段落４又は５に記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
７．１つ以上の修飾ヌクレオチドは、糖の２’位で修飾されており、修飾は、１つ以上の２’フルオロ基若しくは１つ以上の２’メトキシ基、又はこれらの両方を含む、段落４～６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
８．１つ以上の修飾ヌクレオチドは、糖の２’位で修飾されており、糖は、リボースである、段落４～７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
９．１つ以上のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾結合を含み、１つ以上の修飾結合は、ホスホロチオエート結合である、段落１～８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
１０．１つ以上のオリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡを含み、ｓｉＲＮＡは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含む、段落１～９のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
１１．センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１５～４０ヌクレオチド長である、段落１０に記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
１２．リンカーを更に含む、段落１～１１のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
１３．リンカーは、

【化7】

の一方を含む、段落１２に記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
１４．１つ以上のオリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡを含む、段落１～１３のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
１５．ｓｉＲＮＡは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含む、段落１４に記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
１６．センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１５～４０ヌクレオチド長である、段落１５に記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
１７．センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１８～２５ヌクレオチド長である、段落１４～１６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
１８．センス鎖及びアンチセンス鎖は、アニールし、１つ以上の５’ヌクレオチドオーバーハング又は３’ヌクレオチドオーバーハングを任意選択で含む、段落１７に記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
１９．アンチセンス鎖の５’末端は、任意選択でリン酸化されている、段落１４～１８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
２０．式Ｉの化合物と、表１に示される配列番号３～配列番号１２３を有する配列のいずれか１つに結合する１つ以上のオリゴヌクレオチドと、を含む、段落１～１９のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
２１．式Ｉの化合物と、表２に示される配列のいずれか１つに結合する１つ以上のオリゴヌクレオチドとを含む、段落１～２０のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
２２．１つ以上のヌクレオチドは、リボースの２’位で修飾されている、段落１～２１のいずれかに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
２３．少なくとも１つのヌクレオチドのリボースは、２’フルオロ基又は２’メトキシ基で修飾されている、段落１～２２のいずれかに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
２４．ｓｉＲＮＡは、１つ以上の修飾結合を含む、段落１～２３のいずれかに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
２５．１つ以上の修飾結合は、ホスホロチオエート結合である、段落２４に記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
２６．ｓｉＲＮＡは、配列番号３６１、配列番号３６２、配列番号３６３、配列番号３６４、配列番号３６５、又は配列番号３６６のいずれか１つの配列を含むセンス鎖を含む、段落１～２５のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
２７．ｓｉＲＮＡは、配列番号３６７、配列番号３６８、配列番号３６９、配列番号３７０、配列番号３７１、又は配列番号３７２のいずれか１つの配列を含むアンチセンス鎖を含む、段落１～２５のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
２８．ｓｉＲＮＡは、ａ～ｆ：
ａ．配列番号３６１と配列番号３６７、
ｂ．配列番号３６２と配列番号３６８、
ｃ．配列番号３６３と配列番号３６９、
ｄ．配列番号３６４と配列番号３７０、
ｅ．配列番号３６５と配列番号３７１、又は
ｆ．配列番号３６６と配列番号３７２に記載されるような配列の対から選択されるセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む、段落１～２７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤。
２９．段落１～２８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子又はＲＮＡｉ剤と、少なくとも１つ以上の医薬的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物。
３０．脂質異常症を治療する方法であって、段落１～２８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子若しくはＲＮＡｉ剤、又はその医薬組成物を、脂質異常症を治療することを必要とする患者に投与することを含む、方法。
３１．心血管疾患を治療する方法であって、段落１～２８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子若しくはＲＮＡｉ剤、又はその医薬組成物の有効量を、心血管疾患を治療することを必要とする患者に投与することを含む、方法。
３２．心血管事象を予防する方法であって、段落１～２８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子若しくはＲＮＡｉ剤、又はその医薬組成物の有効量を、心血管事象を予防することを必要とする患者に投与することを含む、方法。
３３．心血管事象は、心筋梗塞である、段落３２に記載の方法。
３４．心血管疾患又は事象に関連する入院加療を減少させる方法であって、段落１～２８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子若しくはＲＮＡｉ剤、又はその医薬組成物を、心血管疾患又は事象に関連する入院加療を減少させることを必要とする患者に投与することを含む、方法。
３５．非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療する方法であって、段落１～２８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子若しくはＲＮＡｉ剤、又はその医薬組成物を、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療することを必要とする患者に投与することを含む、方法。
３６．ＮＡＦＬＤは、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、段落３５に記載の方法。
３７．トリグリセリドレベルを低下させる方法であって、段落１～２８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子若しくはＲＮＡｉ剤、又はその医薬組成物を、トリグリセリドレベルを低下させることを必要とする患者に投与することを含む、方法。
３８．リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）の阻害を減少させる方法であって、段落１～２８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子若しくはＲＮＡｉ剤、又はその医薬組成物を、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）の阻害を減少させることを必要とする患者に投与することを含む、方法。
３９．高トリグリセリドリポタンパク質の異化を増加させる方法であって、段落１～２８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子若しくはＲＮＡｉ剤、又はその医薬組成物を、高トリグリセリドリポタンパク質の異化を増加させることを必要とする患者に投与することを含む、方法。
４０．ＡＮＧＰＴＬ８の発現レベルを減少させることから利益を得る患者の肝疾患を治療する方法であって、段落１～２８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉ分子若しくはＲＮＡｉ剤、又はその医薬組成物を、肝疾患を治療することを必要とする患者に投与することを含む、方法。

【0140】

配列表
配列番号１
ホモサピエンスアンジオポエチン様８（ＡＮＧＰＴＬ８）
ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０１８６８７．７
ＡＴＡＣＣＴＴＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＴＣＡＴＧＣＣＡＧＴＧＣＣＴＧＣＴＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＣＣＣＴＧＧＣＡＡＴＧＧＴＧＡＣＣＣＧＧＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＣＧＧＣＣＣＣＣＡＴＧＧＧＣＧＧＣＣＣＡＧＡＡＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＡＴＧＡＧＧＡＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＣＴＣＴＴＣＣＡＴＧＧＧＡＣＣＣＴＧＣＡＧＣＴＧＧＧＣＣＡＧＧＣＣＣＴＣＡＡＣＧＧＴＧＴＧＴＡＣＡＧＧＡＣＣＡＣＧＧＡＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＧＣＣＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＴＣＴＣＴＡＴＧＧＣＣＧＣＡＣＡＡＴＡＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＧＧＴＣＡＧＣＣＧＧＧＧＣＣＧＧＧＡＴＧＣＡＧＣＣＣＡＧＧＡＡＣＴＴＣＧＧＧＣＡＡＧＣＣＴＧＴＴＧＧＡＧＡＣＴＣＡＧＡＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＡＴＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＣＡＣＡＧＣＴＧＡＧＧＴＧＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＴＧＧＣＣＣＡＧＧＣＡＣＡＧＡＡＧＧＴＧＣＴＡＣＧＧＧＡＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＣＧＧＣＴＡＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＴＧＡＧＧＡＧＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＡＣＣＧＡＧＡＡＴＴＴＧＡＧＧＴＣＴＴＡＡＡＧＧＣＴＣＡＣＧＣＴＧＡＣＡＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＣＡＴＣＣＴＡＴＧＧＧＣＣＣＴＣＡＣＡＧＧＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＡＧＧＣＧＧＧＡＧＡＴＧＧＴＧＧＣＡＣＡＧＣＡＧＣＡＴＣＧＧＣＴＧＣＧＡＣＡＧＡＴＣＣＡＧＧＡＧＡＧＡＣＴＣＣＡＣＡＣＡＧＣＧＧＣＧＣＴＣＣＣＡＧＣＣＴＧＡＡＴＣＴＧＣＣＴＧＧＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＧＡＣＣＡＡＴＣＡＴＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＡＣＡＣＴＴＣＣＡＣＧＣＣＣＣＧＴＧＡＧＧＣＣＣＣＴＧＴＧＣＡＧＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＣＴＧＴＴＣＡＣＴＧＧＧＡＴＣＡＧＣＣＡＧＧＧＣＧＣＣＧＧＧＣＣＣＣＡＣＴＴＣＴＧＡＧＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＡＧＡＣＡＧＡＣＧＣＡＧＧＣＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＡＴＧＴＡＧＣＣＣＣＡＴＴＧＧＧＧＡＧＧＧＧＴＧＧＡＧＧＡＡＧＧＡＣＡＴＧＴＡＣＣＣＴＴＴＣＡＴＧＣＣＴＡＣＡＣＡＣＣＣＣＴＣＡＴＴＡＡＡＧＣＡＧＡＧＴＣＧＴＧＧＣＡＴＣＴＣＡ

【0141】

配列番号２
マウスにおける発現に使用されるＡＮＧＰＴＬ３配列
ＡＴＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＴＣＡＴＣＧＴＧＣＣＣＣＴＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＣＡＧＡＡＴＣＧＡＣＣＡＧＧＡＣＡＡＣＡＧＣＡＧＣＴＴＣＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＣＣＣＧＡＧＣＣＣＡＡＧＡＧＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＧＡＣＧＡＣＧＴＧＡＡＧＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＧＧＣＣＡＣＧＧＣＣＴＧＡＡＧＧＡＴＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＴＣＡＡＣＧＡＣＡＴＣＴＴＣＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＡＣＡＴＣＴＴＣＧＡＣＣＡＧＡＧＣＴＴＣＴＡＣＧＡＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＡＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＡＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＧＡＧＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＣＧＡＧＧＡＡＧＴＧＡＡＡＡＡＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＡＡＣＴＧＡＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＧＣＣＴＧＣＴＧＧＡＡＧＡＡＡＡＧＡＴＴＣＴＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＡＡＧＴＧＡＡＧＴＡＣＣＴＧＧＡＡＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＣＡＣＣＣＧＡＧＣＡＣＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＴＴＣＧＴＧＧＡＡＡＡＧＣＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＡＣＣＧＴＧＧＡＡＧＡＴＣＡＧＴＡＣＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＣＣＡＧＣＡＧＣＡＣＴＣＣＣＡＧＡＴＣＡＡＡＧＡＡＡＴＣＧＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＧＡＧＧＣＧＧＡＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＧＡＡＣＣＣＡＣＣＧＡＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＡＧＣＡＡＧＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＡＡＣＣＣＣＡＴＴＣＣＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＴＧＡＧＡＴＣＣＧＧＡＡＣＧＴＧＡＡＧＣＡＣＧＡＣＧＧＣＡＴＣＣＣＴＧＣＣＧＡＧＴＧＣＡＣＣＡＣＣＡＴＣＴＡＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＡＧＣＡＣＡＣＣＡＧＣＧＧＧＡＴＧＴＡＣＧＣＣＡＴＣＡＧＡＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＧＧＴＧＴＴＣＣＡＣＧＴＧＴＡＣＴＧＣＧＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＣＴＧＡＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＡＡＴＣＧＡＴＧＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＣＴＴＣＡＡＣＧＡＧＡＣＡＴＧＧＧＡＧＡＡＣＴＡＴＡＡＧＴＡＣＧＧＣＴＴＣＧＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＣＧＧＣＧＡＧＴＴＴＴＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＴＣＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＣＡＡＣＴＡＣＧＴＧＣＴＧＡＧＡＡＴＣＧＡＧＣＴＧＧＡＡＧＡＴＴＧＧＡＡＧＧＡＣＡＡＣＡＡＧＣＡＣＴＡＣＡＴＣＧＡＧＴＡＣＡＧＣＴＴＣＴＡＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＣＡＣＧＡＧＡＣＡＡＡＣＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＡＣＣＴＧＧＴＧＧＣＣＡＴＣＡＣＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＣＡＡＡＣＧＣＣＡＴＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＡＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＧＣＴＡＡＧＧＧＣＣＡＣＴＴＣＡＡＣＴＧＣＣＣＣＧＡＧＧＧＣＴＡＣＴＣＴＧＧＣＧＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＣＡＴＧＡＴＧＡＧＴＧＣＧＧＣＧＡＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＴＡＣＡＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＧＣＡＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＣＣＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＣＡＧＡＡＣＧＧＣＡＧＧＣＴＧＴＡＣＴＣＴＡＴＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＴＧＣＴＧＡＴＣＣＡＣＣＣＣＡＣＣＧＡＣＡＧＣＧＡＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＴＧＡＴＡＡ

【0142】

表１．設計されたｓｉＲＮＡのための標的及びアンチセンス配列

【表15-1】

【0143】

（表１の続き）

【表15-2】

【0144】

（表１の続き）

【表15-3】

【0145】

表２．

【表16-1】

【0146】

（表２の続き）

【表16-2】

【0147】

表３．

【表17】

【0148】

表６

【表18】

【0149】

表８

【表19】

【0150】

表１１

【表20-1】

【0151】

（表１１の続き）

【表20-2】

【0152】

（表１１の続き）

【表20-3】

【配列表】

2024523565000001.app

【手続補正書】

【提出日】2024-02-16

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｒにコンジュゲートされた式Ｉ：

【化1】

で示される送達部分を含む、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤であって、
Ｒは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、
前記アンチセンス鎖は、配列番号４０５～５２５からなる群から選択される配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖は、少なくとも１５ヌクレオチドの相補性領域を形成し、前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖は、各々独立して、１８～２３ヌクレオチド長であり、任意選択で、前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖は、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含み、任意選択で、前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖は、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合を含み、Ｒは、リンカーを介して式Ｉに任意選択でコンジュゲートされている、ＲＮＡｉ剤。

【請求項2】

【請求項3】

【請求項4】

前記アンチセンス鎖が、２３ヌクレオチド長である、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項5】

前記センス鎖が、２１ヌクレオチド長である、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項6】

前記アンチセンス鎖が、配列番号２３１～３６１、又はこれらに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなる群から選択される、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項7】

前記センス鎖が、配列番号１２４～２３０、又はこれらに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなる群から選択される、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項8】

前記相補性領域において、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖との間に０、１、２、又は３個のミスマッチを含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項9】

前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含み、前記１つ以上の修飾ヌクレオチドは、独立して、２’フルオロ修飾ヌクレオチド、又は２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項10】

前記センス鎖の各ヌクレオチド及び前記アンチセンス鎖の各ヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項11】

前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、各々独立して、１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合を含み、各修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項12】

前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、各々独立して、４つのホスホロチオエート結合を含む、請求項１１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項13】

前記アンチセンス鎖の５’ヌクレオチドが、リン酸基又はリン酸アナログを含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項14】

前記アンチセンス鎖が、配列番号３６７～３７２及び３８９～４０４からなる群から選択される配列、又はこれらに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項15】

前記センス鎖が、配列番号３６１～３６６及び３７３～３８８からなる群から選択される配列、又はこれらに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項16】

【請求項17】

前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、
ａ．配列番号３６１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｂ．配列番号３６２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｃ．配列番号３６３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３６９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｄ．配列番号３６４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｅ．配列番号３６５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｆ．配列番号３６６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３７２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｇ．配列番号３７３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３８９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｈ．配列番号３７４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｉ．配列番号３７５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｊ．配列番号３７６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｋ．配列番号３７７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｌ．配列番号３７８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｍ．配列番号３７９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｎ．配列番号３８０に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｏ．配列番号３８１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｐ．配列番号３８２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｑ．配列番号３８３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｒ．配列番号３８４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号３９９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｓ．配列番号３８５に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４００に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｔ．配列番号３８６に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０１に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｕ．配列番号３８７に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０２に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、
ｖ．配列番号３８８に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０３に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖、並びに
ｗ．配列番号３８９に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するセンス鎖、及び配列番号４０４に記載の配列、又はこれに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有するアンチセンス鎖からなる群から選択される一対のオリゴヌクレオチド配列である、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項18】

【請求項19】

【請求項20】

【請求項21】

【請求項22】

Ｒが、リンカーを介して式Ｉにコンジュゲートされている、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。

【請求項23】

【化2】