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特表2024-523639ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法、およびそれから製造されたミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-06-28
(54)【発明の名称】ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法、およびそれから製造されたミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物
(51)【国際特許分類】
C07D 513/22 20060101AFI20240621BHJP
C12P 1/04 20060101ALI20240621BHJP
C07B 61/00 20060101ALN20240621BHJP
A61P 31/04 20060101ALN20240621BHJP
A61P 31/06 20060101ALN20240621BHJP
A61K 31/439 20060101ALN20240621BHJP
C12N 1/21 20060101ALN20240621BHJP
C12N 15/31 20060101ALN20240621BHJP
C12N 15/63 20060101ALN20240621BHJP
【ＦＩ】
C07D513/22 CSP
C12P1/04 Z
C07B61/00 300
A61P31/04
A61P31/06
A61K31/439
C12N1/21 ZNA
C12N15/31
C12N15/63 Z
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023580628
(86)(22)【出願日】2022-06-27
(85)【翻訳文提出日】2023-12-27
(86)【国際出願番号】 KR2022009133
(87)【国際公開番号】W WO2023277485
(87)【国際公開日】2023-01-05
(31)【優先権主張番号】10-2021-0085881
(32)【優先日】2021-06-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(31)【優先権主張番号】10-2022-0077357
(32)【優先日】2022-06-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523184939
【氏名又は名称】エーアンドジェイ サイエンス カンパニー，リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110000176
【氏名又は名称】弁理士法人一色国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ファン，ヒ－チョン
(72)【発明者】
【氏名】ソン，ヨン－チン
(72)【発明者】
【氏名】キム，タヒョン
(72)【発明者】
【氏名】リ，チュソク
(72)【発明者】
【氏名】クロービス，シャカ
(72)【発明者】
【氏名】チュフォリニ，マルコ
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C086
4H039
【Ｆターム（参考）】
4B064CA02
4B064CA19
4B064CB06
4B064DA02
4B065AA19X
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA05
4B065CA44
4C086AA03
4C086AA04
4C086CB29
4C086NA14
4C086ZB35
4H039CA65
4H039CA71
4H039CE20
(57)【要約】
本発明は、ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法、および製造されたミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を提供するものであって、本発明のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法は、ミクロコクシン化合物にカルボン酸基が導入されることで、多様な官能基の導入が容易である。
【選択図】 図４
【選択図】 図４
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記化学式２で表されるミクロコクシン化合物を金属水酸化物と反応させ、下記化学式１で表されるミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造する方法。［化学式１］
Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールであり、
前記Ｒ１～Ｒ３のアルキル、シクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよく、
Ｒａは、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ２－Ｃ１０アルケニル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｒｂは、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルである。）
【請求項2】
前記Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルであり、前記Ｒ１～Ｒ３のアルキルは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよい、請求項１に記載のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法。
【請求項3】
前記Ｒａは水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルであり、前記ＲｂはＣ１－Ｃ１０アルキルである、請求項１に記載のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法。
【請求項4】
前記Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素または【請求項5】
前記Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素であるか、下記構造から選択されるものである、請求項４に記載のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法。【請求項6】
前記化学式２のミクロコクシン化合物は、下記化学式２－１－Ａ、下記化学式２－１－Ｂ、または下記化学式２－１－Ｃで表されるものである、請求項１に記載のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法。［化学式２－１－Ａ］
【請求項7】
前記金属水酸化物の金属は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属である、請求項１に記載のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法。
【請求項8】
前記金属水酸化物は、前記化学式２のミクロコクシン化合物１モルに対して３～１２モルで用いられる、請求項１に記載のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法。
【請求項9】
前記化学式２のミクロコクシン化合物は、天然物から分離されたもの、または合成により製造されたものである、請求項１に記載のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法。
【請求項10】
前記化学式２－１－Ａのミクロコクシン化合物は、１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、ＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを作製するステップと、
２）前記ステップ１）の前記発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、により製造される、請求項６に記載のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法。
【請求項11】
前記化学式２－１－Ｂのミクロコクシン化合物は、１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＯ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、ＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを作製するステップと、
２）前記ステップ１）の前記発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、により製造される、請求項６に記載のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法。
【請求項12】
前記化学式２－１－Ｃのミクロコクシン化合物は、１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＤ、ＢｃＴｃｌＣ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、ＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを作製するステップと、
２）前記ステップ１）の前記発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、により製造される、請求項６に記載のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法。
【請求項13】
１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、およびＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを作製するステップと、２）前記ステップ１）の前記発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、を含む、下記化学式２－２のミクロコクシン化合物の製造方法。
［化学式２－２］
Ｒ５Ａは水素またはヒドロキシであり、Ｒ５Ｂはヒドロキシまたはメトキシである。）
【請求項14】
前記発現ベクターは、ＢｃＴｃｌＯ、ＢｃＴｃｌＤ、およびＢｃＴｃｌＣ遺伝子のうち一つ以上をさらに含む、請求項１３に記載のミクロコクシン化合物の製造方法。
【請求項15】
下記化学式１で表される、ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物。［化学式１］
Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールであり、
前記Ｒ１～Ｒ３のアルキル、シクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよい。）
【請求項16】
下記化学式２のミクロコクシン化合物を金属水酸化物と反応させ、下記化学式１のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造するステップと、前記化学式１のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物から下記化学式３のミクロコクシン誘導体を製造するステップと、を含む、ミクロコクシン誘導体の製造方法。
［化学式３］
Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールであり、
前記Ｒ１～Ｒ３のアルキル、シクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよく、
Ｒａは、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ２－Ｃ１０アルケニル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｒｂは、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｚ１およびＺ２は、互いに独立して、単結合、－ＣＯＮＲ１１－、－ＮＲ１２ＣＯ－、－ＣＯＯ－、－ＯＣＯ－、－ＣＲ１３Ｒ１４－、－ＮＲ１５ＣＯＯ－、－ＮＲ１６－、－Ｓ－、－Ｏ－、－ＳＯ２－、または－ＯＣＯＮＲ１７－であり、前記Ｒ１１～Ｒ１７は、互いに独立して、水素、ヒドロキシ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、カルボキシルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ａ１は、
Ａ２は、単結合、Ｃ１－Ｃ１０アルキレン、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキレン、Ｃ３－Ｃ１０ヘテロシクロアルキレン、Ｃ６－Ｃ２０アリーレン、またはＣ６－Ｃ２０ヘテロアリーレンであり、
Ｒは、水素、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、－Ｂ（ＯＨ）２、置換もしくは非置換のハロＣ１－Ｃ１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ１－Ｃ１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ２－Ｃ１０アルケニル、置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ１０シクロアルキル、置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ１０ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のＣ６－Ｃ２０アリール、または置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ２０ヘテロアリールである。）
【請求項17】
前記化学式３中、Ｚ１は、単結合、－ＣＯＮＲ１１－、－ＮＲ１２ＣＯ－、または－ＣＯＯ－であり、Ｚ２は、単結合、－ＣＯＮＲ１１－、－ＮＲ１２ＣＯ－、－ＮＲ１５ＣＯＯ－、－ＮＲ１６－、－Ｓ－、または－ＯＣＯＮＲ１７－であり、前記Ｒ１１、前記Ｒ１２、および前記Ｒ１５～Ｒ１７は、互いに独立して、水素、ヒドロキシ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはカルボキシルＣ１－Ｃ１０アルキルである、請求項１６に記載の製造方法。
【請求項18】
前記化学式３中、Ａ１はＡ２は、単結合またはＣ１－Ｃ１０アルキレンであり、
Ｒは、水素、アミノ、または－Ｂ（ＯＨ）２であるか、下記構造から選択される何れか一つであり、
Ｘ１は、ＮＲ３１、Ｏ、Ｓ、またはＳＯ２であり、
Ｘ２～Ｘ５は、それぞれ独立して、ＮＲ３２、Ｏ、またはＳであり、
Ｒ２０～Ｒ２２、前記Ｒ３１、および前記Ｒ３２は、互いに独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルキルスルホニル、アミノスルホニル、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、ジヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、シアノＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはカルボキシルＣ１－Ｃ１０アルキルである、請求項１６に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ミクロコクシン化合物に基づいて製造されるミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法、およびそれから製造されたミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を提供する。
【0002】
また、本発明は、ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造するための出発物質であるミクロコクシン化合物の生合成方法を提供する。
【0003】
また、本発明は、上記製造されたミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物から、抗生剤として有用なミクロコクシン誘導体を製造する方法を提供する。
【背景技術】
【0004】
多様な感染症に対して、人類は抗生剤を開発して対処してきた。
【0005】
しかし、近年、大部分の抗生物質に抵抗性を持つメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、ＭＲＳＡ）の出現頻度が増加している。
【0006】
メチシリン耐性黄色ブドウ球菌は、病院や医療機関などに入院している患者に院内感染を引き起こし、身体接触により人と人との間で感染されるが、手術の後に外傷から感染されたり、肺炎を引き起こしたりすると、生命に危険になるほど危ない。
【0007】
また、マイコバクテリウムツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリウムボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）、マイコバクテリウムミクロティ（Ｍ．ｍｉｃｒｏｔｉ）、マイコバクテリウムアフリカヌム（Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ）を始めとする結核菌群により誘発される慢性感染性疾患である結核菌も、未だに克服できていない疾病の一つである。
【0008】
結核は、感染された患者の免疫状態に応じて長期間の潜伏感染状態に維持され得るが、世界人口の約３０％である２０億人が、潜伏感染状態にあると推定されている。結核に感染されると、相当な期間には無症状であり得るが、その後の共通の症状として、肺の急性炎症が現れることがあり、その結果、発熱および乾性咳嗽（ｎｏｎｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｃｏｕｇｈ）を誘発させる。これを治療しないと、一般に深刻な合併症および死亡を招く。
【0009】
抗結核薬として、１９４０年代にストレプトマイシンを始め、より効果的な抗結核薬が開発されており、これにより、結核の発生および死亡が急激に減少した。
【0010】
しかし、１９８０年代に、従来の抗生剤ではコントロールできない耐性菌株である「多剤耐性結核（Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＭＤＲ）－ＴＢ）」の発生により、多剤耐性結核の患者数が減少しておらず、深刻な保健問題となっている。
【0011】
一方、ミクロコクシンはチオペプチド天然物であって、２６個の原子から構成された巨大環を有する構造的特徴を有しており、化合物の構造によって、ミクロコクシンＰ１（ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｉｎ Ｐ１（ＭＰ１））とミクロコクシンＰ２（ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｉｎ Ｐ２（ＭＰ２））に分けられる。ミクロコクシンＰ１は、種々のグラム陽性菌に対して効能を有すると知られているが、Ｌ１１タンパク質と２３Ｓ ｒＲＮＡとの間に形成された複合体に結合し、タンパク質の合成を抑える作用機序で抗菌作用を現わす。
【0012】
そこで、向上した抗生効果を有するミクロコクシン誘導体を開発するための研究が行われている。
【0013】
しかしながら、ミクロコクシンは多数のチアゾール環を含有し、微生物により生成される複雑な構造を有するため、多様な官能基を導入することが容易ではない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0014】
そこで、本発明の発明者らは、ミクロコクシンに多様な官能基を導入するために研究する中、特定のミクロコクシン化合物を金属水酸化物と反応させることで特定の官能基を切り出すことにより、ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造することができることを見出し、本発明を完成した。
【0015】
したがって、本発明は、ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法を提供する。
【0016】
また、本発明は、ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造するための出発物質であるミクロコクシン化合物の生合成方法を提供する。
【0017】
また、本発明は、上記製造されたミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物から、抗生剤として有用なミクロコクシン誘導体を製造する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0018】
本発明は、優れた抗生効果を有することができるミクロコクシン誘導体を製造するための中間体として有用に使用可能な、ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法を提供する。
【0019】
本発明のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法は、下記化学式２で表されるミクロコクシン化合物を金属水酸化物と反応させ、下記化学式１で表されるミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造するステップを含む。
【0020】
［化学式１］
【0021】
［化学式２］
【0022】
上記化学式１および２中、
Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールであり、
上記Ｒ１～Ｒ３のアルキル、シクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよく、
Ｒａは、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ２－Ｃ１０アルケニル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｒｂは、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルである。
Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールであり、
上記Ｒ１～Ｒ３のアルキル、シクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよく、
Ｒａは、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ２－Ｃ１０アルケニル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｒｂは、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルである。
【0023】
また、本発明は、ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造するための出発物質であるミクロコクシン化合物の生合成方法を提供する。
【0024】
本発明のミクロコクシン化合物の生合成方法は、下記化学式２－２のミクロコクシン化合物の製造方法であって、
１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、およびＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを製作するステップと、
２）前記ステップ１）の発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、を含む。
１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、およびＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを製作するステップと、
２）前記ステップ１）の発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、を含む。
【0025】
［化学式２－２］
【0026】
前記化学式２－２中、Ｒ５Ａは、水素またはヒドロキシであり、Ｒ５Ｂは、ヒドロキシまたはメトキシである。
【0027】
また、本発明は、優れた抗生効果を有することができるミクロコクシン誘導体を製造するための中間体として有用に使用可能な、ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を提供し、ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物は、前記化学式１で表される。
【0028】
また、本発明は、前記製造されたミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を中間体とし、抗生剤として有用なミクロコクシン誘導体を製造する方法を提供する。
【0029】
本発明のミクロコクシン誘導体の製造方法は、
前記化学式２のミクロコクシン化合物を金属水酸化物と反応させ、前記化学式１のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造するステップと、
前記化学式１のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物から下記化学式３のミクロコクシン誘導体を製造するステップと、を含む。
前記化学式２のミクロコクシン化合物を金属水酸化物と反応させ、前記化学式１のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造するステップと、
前記化学式１のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物から下記化学式３のミクロコクシン誘導体を製造するステップと、を含む。
【0030】
［化学式３］
【0031】
前記化学式３中、
Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールであり、
前記Ｒ１～Ｒ３のアルキル、シクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよく、
Ｚ１およびＺ２は、互いに独立して、単結合、－ＣＯＮＲ１１－、－ＮＲ１２ＣＯ－、－ＣＯＯ－、－ＯＣＯ－、－ＣＲ１３Ｒ１４－、－ＮＲ１５ＣＯＯ－、－ＮＲ１６－、－Ｓ－、－Ｏ－、－ＳＯ２－、または－ＯＣＯＮＲ１７－であり、Ｒ１１～Ｒ１７は、互いに独立して、水素、ヒドロキシ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、カルボキシルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ａ１は、
または
であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ２－Ｃ１０アルケニル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシＣ１－Ｃ１０アルキルであり、ｐは、０～４の整数であり、
Ａ２は、単結合、Ｃ１－Ｃ１０アルキレン、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキレン、Ｃ３－Ｃ１０ヘテロシクロアルキレン、Ｃ６－Ｃ２０アリーレン、またはＣ６－Ｃ２０ヘテロアリーレンであり、
Ｒは、水素、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、－Ｂ（ＯＨ）２、置換もしくは非置換のハロＣ１－Ｃ１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ１－Ｃ１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ２－Ｃ１０アルケニル、置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ１０シクロアルキル、置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ１０ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のＣ６－Ｃ２０アリール、または置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ２０ヘテロアリールである。
Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールであり、
前記Ｒ１～Ｒ３のアルキル、シクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよく、
Ｚ１およびＺ２は、互いに独立して、単結合、－ＣＯＮＲ１１－、－ＮＲ１２ＣＯ－、－ＣＯＯ－、－ＯＣＯ－、－ＣＲ１３Ｒ１４－、－ＮＲ１５ＣＯＯ－、－ＮＲ１６－、－Ｓ－、－Ｏ－、－ＳＯ２－、または－ＯＣＯＮＲ１７－であり、Ｒ１１～Ｒ１７は、互いに独立して、水素、ヒドロキシ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、カルボキシルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ａ１は、
Ａ２は、単結合、Ｃ１－Ｃ１０アルキレン、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキレン、Ｃ３－Ｃ１０ヘテロシクロアルキレン、Ｃ６－Ｃ２０アリーレン、またはＣ６－Ｃ２０ヘテロアリーレンであり、
Ｒは、水素、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、－Ｂ（ＯＨ）２、置換もしくは非置換のハロＣ１－Ｃ１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ１－Ｃ１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ２－Ｃ１０アルケニル、置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ１０シクロアルキル、置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ１０ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のＣ６－Ｃ２０アリール、または置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ２０ヘテロアリールである。
【発明の効果】
【0032】
本発明のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法は、単純な工程および穏やかな条件下で、ミクロコクシン化合物からミクロコクシンに基づくカルボン酸基が導入された化合物を容易に製造することができる。
【0033】
本発明のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法は、穏やかな条件で、高い純度および収率でミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物が製造可能である。
【0034】
また、本発明のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法により製造されたミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物は、導入されたカルボン酸基に多様な官能基を容易に導入することで、多様なミクロコクシン誘導体を容易に製造することができる。つまり、本発明のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物は、多様な官能基が導入されたミクロコクシン誘導体を製造するための中間体として非常に有用である。
【0035】
したがって、本発明のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法は、優れた抗生効果を有するミクロコクシンに基づく誘導体の製造に非常に有用に用いられることができる。
【0036】
また、本発明によると、特定の遺伝子を含むベクターで形質転換されたバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）細胞内で、目的の物質であるミクロコクシン化合物を効率的に生合成することができ、有用遺伝子のさらなる導入により、巨大環に多様な置換基を導入させることができる。
【図面の簡単な説明】
【0037】
【図1】本発明の実施例２のｐＵＣ１９に導入された遺伝子組換えプラスミド１の模式図である。
【図2】本発明の実施例２のｐＵＣ１９に導入された遺伝子組換えプラスミド２の模式図である。
【図3】本発明の実施例２のｐＵＣ１９に導入された遺伝子組換えプラスミド３の模式図である。
【図4】各プラスミドにより形質転換されたバシラス抽出物のＵＰＬＣ－ＭＳ分析結果である。
【発明を実施するための形態】
【0038】
以下、本発明のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法について詳細に説明する。この時、用いられる技術用語および科学用語は、特に定義されない限り、この発明が属する技術分野において通常の知識を有する者が通常理解している意味を有するものであり、下記の説明において本発明の要旨を不明瞭にする可能性のある公知機能および構成についての説明は省略する。
【0039】
本明細書で用いられた下記の用語は次のとおり定義されるが、これは例示的なものに過ぎず、本発明、出願、または用途を限定しようとするものではない。
【0040】
本明細書で用いられた用語である「本発明のミクロコクシン化合物」は、当業者が認識できるミクロコクシン化合物であれば何れも可能であり、一例として、ミクロコクシンＰ２の化合物である化学式１１～１２のそれぞれの化合物だけでなく、これらのクラスレート（ｃｌａｔｈｒａｔｅｓ）、水和物、溶媒和物、プロドラッグ、または多形体を含む意味である。
【0041】
［化学式１１］
【0042】
［化学式１２］
【0043】
また、本明細書において、用語「ミクロコクシン化合物」、「ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物」、「ミクロコクシン誘導体」は、その薬学的に許容可能な塩が言及されない場合、本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩も含む意味である。一実施形態において、本発明のミクロコクシン化合物は、立体異性体的に純粋な化合物（例えば、他の立体異性体が実質的にない（例えば、８５％ｅｅ以上、９０％ｅｅ以上、９５％ｅｅ以上、９７％ｅｅ以上、または９９％ｅｅ以上））として存在し得る。すなわち、本発明に係る「ミクロコクシン化合物」、「ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物」、「ミクロコクシン誘導体」、またはその塩が互変異性の（ｔａｕｔｏｍｅｒｉｃ）異性体および／または立体異性体（例えば、幾何異性体（ｇｅｏｍｅｔｒｉｃａｌ ｉｓｏｍｅｒ）および配座異性体（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｉｓｏｍｅｒｓ））である場合、それらの分離された異性体および混合物のそれぞれも、本発明の化合物の範疇に含まれる。本発明の化合物またはその塩が構造内に不斉炭素（ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｃａｒｂｏｎ）を有している場合、それらの光学活性化合物およびラセミ混合物も、本発明の化合物の範囲に含まれる。例えば、本発明の化合物がスルホキシド（ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）（ＳＯＲ）構造を有する場合、これらがキラリティー（ｃｈｉｒａｌｉｔｙ）を有することができる。本発明の化合物には、かかる異性体のＲおよびＳ ｆｏｒｍが含まれ、ＲおよびＳ ｆｏｒｍの混合物も、本発明の化合物の範疇に含まれる。また、本発明の化合物は、Ｋｅｔｏ ｆｏｒｍまたはＥｎｏｌ ｆｏｒｍの何れか一つの形態で存在し得て、これらの何れの形態も本発明の化合物の範疇に含まれる。
【0044】
本明細書において、用語「置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」、「ラジカル（ｒａｄｉｃａｌ）」、「基（ｇｒｏｕｐ）」、「モイエティ（ｍｏｉｅｔｙ）」、および「断片（ｆｒａｇｍｅｎｔ）」は、互いに置き換えて用いることができる。
【0045】
本明細書において、「ＣＡ－ＣＢ」は、「炭素数がＡ以上Ｂ以下」であることを意味する。すなわち、「Ｃ１－Ｃ１０」のように記載されている場合、これは、炭素数が１～１０個であることを意味する。例えば、Ｃ１－Ｃ１０アルキルは、炭素数が１～１０であるアルキルを意味する。
【0046】
本明細書において用いられた用語「アルキル」は、（炭素数が特に限定されない場合）炭素数１～２０、好ましくは炭素数１～１５、より好ましくは炭素数１～１０、望ましくは炭素数１～６を有する、飽和された直鎖状または分岐状の非環（ｃｙｃｌｉｃ）炭化水素を意味する。「低級アルキル」は、炭素数が１～４、または炭素数が１～６である直鎖状または分岐状のアルキルを意味する。代表的な飽和直鎖状アルキルは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニル、およびｎ－デシルを含み、一方、飽和分岐状アルキルは、イソプロピル、ｓｅｃ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、イソペンチル、２－メチルヘキシル、３－メチルブチル、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、４－メチルペンチル、２－メチルヘキシル、３－メチルヘキシル、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、４－メチルペンチル、２－メチルヘキシル、３－メチルヘキシル、４－メチルヘキシル、５－メチルヘキシル、２，３－ジメチルブチル、２，３－ジメチルペンチル、２，４－ジメチルペンチル、２，３－ジメチルヘキシル、２，４－ジメチルヘキシル、２，５－ジメチルヘキシル、２，２－ジメチルペンチル、２，２－ジメチルヘキシル、３，３－ジメチルペンチル、３，３－ジメチルヘキシル、４，４－ジメチルヘキシル、２－エチルペンチル、３－エチルペンチル、２－エチルヘキシル、３－エチルヘキシル、４－エチルヘキシル、２－メチル－２－エチルペンチル、２－メチル－３－エチルペンチル、２－メチル－４－エチルペンチル、２－メチル－２－エチルヘキシル、２－メチル－３－エチルヘキシル、２－メチル－４－エチルヘキシル、２，２－ジエチルペンチル、３，３－ジエチルヘキシル、２，２－ジエチルヘキシル、および３，３－ジエチルヘキシルを含む。
【0047】
本明細書において用いられた用語「アルケニル」は、２～２０個、好ましくは２～１５、好ましくは２～１０、より好ましくは２～６の炭素原子、および少なくとも一つの炭素－炭素二重結合を含む、飽和された直鎖状または分岐状の非環炭化水素を意味する。代表的な直鎖状および分岐状の（Ｃ２－Ｃ１０）アルケニルは、ビニル、アリル、１－ブテニル、２－ブテニル、イソブチレニル、１－ペンテニル、２－ペンテニル、３－メチル－１－ブテニル、２－メチル－２－ブテニル、２，３－ジメチル－２－ブテニル、１－へキセニル（ｈｅｘｅｎｙｌ）、２－へキセニル、３－へキセニル、１－ヘプテニル、２－ヘプテニル、３－ヘプテニル、１－オクテニル、２－オクテニル、３オクテニル、１－ノネニル（ｎｏｎｅｎｙｌ）、２－ノネニル、３－ノネニル、１－デセニル、２－デセニル、および３－デセニルを含む。このようなアルケニル基は選択的に置換されてよい。
【0048】
本明細書において用いられた用語「ハロゲン」および「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を意味する。
【0049】
本明細書において用いられた用語「ハロアルキル」、「ハロアルコキシ」、または「ハロアルケニル」は、それぞれ一つ以上の水素原子がハロゲン原子で置換されたアルキル、アルコキシ、またはアルケニル基を意味する。例えば、ハロアルキルは、－ＣＦ３、－ＣＨＦ２-、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＢｒ３、－ＣＨＢｒ２、－ＣＨ２Ｂｒ、－ＣＣｌ３、－ＣＨＣｌ２、－ＣＨ２ＣＩ、－ＣＩ３、－ＣＨＩ２、－ＣＨ２Ｉ、－ＣＨ２－ＣＦ３、－ＣＨ２－ＣＨＦ２、－ＣＨ２－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨ２－ＣＢＲ３、－ＣＨ２－ＣＨＢｒ２、－ＣＨ２－ＣＨ２Ｂｒ、－ＣＨ２－ＣＣｌ３、－ＣＨ２－ＣＨＣｌ２、－ＣＨ２－ＣＨ２ＣＩ、－ＣＨ２－ＣＩ３、－ＣＨ２－ＣＨＩ２、－ＣＨ２－ＣＨ２Ｉ、およびこれらと類似のものを含む。ここで、アルキルおよびハロゲンは、上記で定義されたとおりである。
【0050】
本明細書において用いられた用語「アルコキシ」は、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－Ｏ（ＣＨ２）２ＣＨ３、－Ｏ（ＣＨ２）３ＣＨ３、－Ｏ（ＣＨ２）４ＣＨ３、－Ｏ（ＣＨ２）５ＣＨ３、およびこれらと類似のものを含む－Ｏ－（アルキル）を意味し、ここで、アルキルは上記で定義されたとおりである。
【0051】
本明細書において用いられた用語「低級アルコキシ」は、－Ｏ－（低級アルキル）を意味し、ここで、低級アルキルは上記で定義されたとおりである。
【0052】
本明細書において用いられた用語「アリール」は、５～１０の環原子を含有する炭素環芳香族基を意味する。代表的な例として、フェニル、トリル（ｔｏｌｙｌ）、キシリル（ｘｙｌｙｌ）、ナフチル、テトラヒドロナフチル、アントラセニル（ａｎｔｈｒａｃｅｎｙｌ）、フルオレニル（ｆｌｕｏｒｅｎｙｌ）、インデニル（ｉｎｄｅｎｙｌ）、アズレニル（ａｚｕｌｅｎｙｌ）などを含むが、これらに限定されるものではない。炭素環芳香族基は選択的に置換されてよい。
【0053】
本明細書において用いられた用語「シクロアルキル（ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）」は、炭素および水素原子を有し、炭素－炭素多重結合を有しない単環または多環式の飽和環（ｒｉｎｇ）を意味する。シクロアルキル基の例としては、（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロヘプチル）を含むが、これらに限定されるものではない。シクロアルキル基は選択的に置換されてよい。一実施形態において、シクロアルキル基は、単環または二環式の環である。
【0054】
本明細書において用いられた用語「ヘテロシクロアルキル」は、２～２０個、好ましくは２～１５個、好ましくは２～１０個、好ましくは２～６個の炭素原子、並びに窒素、酸素、および硫黄からなる群から選択される１～６個のヘテロ原子、例えば、１～５個のヘテロ原子、１～４個のヘテロ原子、１～３個のヘテロ原子、または１～２個のヘテロ原子からなる、安定な３～１８員の飽和または一部不飽和のラジカルを指す。例示的なヘテロシクロアルキルは、非制限的に、安定な３－１５員の飽和または一部不飽和のラジカル、安定な３－１２員の飽和または一部不飽和のラジカル、安定な３－９員の飽和または一部不飽和のラジカル、安定な８員の飽和または一部不飽和のラジカル、安定な７員の飽和または一部不飽和のラジカル、安定な６員の飽和または一部不飽和のラジカル、または安定な５員の飽和または一部不飽和のラジカルを含む。ヘテロシクロアルキルは、飽和または不飽和の単環、多環、またはスピロ環の形態を何れも含み、ヘテロ原子または炭素原子を介して結合されてよい。このようなヘテロシクロアルキルラジカルの例としては、オキセタン、アジリジン、ピロリジン、アゼチジン、ピペリジン、テトラヒドロピリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン、１，３－ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール、イミダゾリジン－２，４－ジオン、チアゾリジン－２，４－ジオン、ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン、３－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、オクタヒドロピロロ［３，４－ｃ］ピロール、２，７－ジアザスピロ［４．４］ノナン、２－アザスピロ［４．４］ノナンなどの非芳香族ヘテロ環の１価のラジカルを含んでよい。
【0055】
本明細書において用いられた用語「モノ－アルキルアミノ」は、－ＮＨＣＨ３、－ＮＨＣＨ２ＣＨ３、－ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＨ３、－ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＨ３、－ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３、－ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＨ３、およびこれらと類似のものを含む－ＮＨ（アルキル）を意味し、ここで、アルキルは上記で定義されたとおりである。
【0056】
本明細書において用いられた用語「ジ－アルキルアミノ」は、－Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、－Ｎ（（ＣＨ２）２ＣＨ３）２、－Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、およびこれらと類似のものを含む－Ｎ（アルキル）（アルキル）を意味し、ここで、各アルキルは、互いに独立して上記で定義されたアルキルである。
【0057】
本明細書において用いられた用語「アルキルアミノ」は、上記で定義されたモノ－アルキルアミノ、ジ－アルキルアミノ、およびトリ－アルキルアミノを含む概念である。
【0058】
本明細書において用いられた用語「カルボン酸」、「カルボキシル」、および「カルボキシ」は－ＣＯＯＨを意味する。
【0059】
本明細書において用いられた用語「カルボキシルアルキル」は、－ＣＨ２ＣＯＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ２）２ＣＨ２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ２）３ＣＨ２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ２）４ＣＨ２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ２）５ＣＨ２ＣＯＯＨ、－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＨ３、およびこれらと類似のものを含む、一つ以上の水素原子がヒドロキシで置換されたアルキルを意味し、ここで、アルキルは上記で定義されたとおりである。
【0060】
本明細書において用いられた用語「アミノアルキル」は、－ＣＨ２－ＮＨ２、－（ＣＨ２）２－ＮＨ２、－（ＣＨ２）３－ＮＨ２、－（ＣＨ２）４－ＮＨ２、－（ＣＨ２）５－ＮＨ２、およびこれらと類似のものを含む－（アルキル）－ＮＨ２を意味し、ここで、アルキルは上記で定義されたとおりである。
【0061】
本明細書において用いられた用語「モノ－アルキルアミノアルキル」は、－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＮＨＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２－ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＨ３、－ＣＨ２－ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＨ３、－ＣＨ２－ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３、－ＣＨ２－ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＨ３、－（ＣＨ２）２－ＮＨ－ＣＨ３、およびこれらと類似のものを含む－（アルキル）－ＮＨ（アルキル）を意味し、ここで、各アルキルは、互いに独立して上記で定義されたアルキルである。
【0062】
本明細書において用いられた「ヘテロサイクル（ヘテロ環）」は、窒素、酸素、および硫黄から独立に選択される１～４のヘテロ原子を含有する、飽和または不飽和の５～７員の単環、または７～１０員の二環、複素環式の環を意味し、ここで、窒素および硫黄ヘテロ原子は選択的に酸化されてよく、窒素ヘテロ原子は選択的に四級化（ｑｕａｔｅｒｎｉｚｅｄ）されてよく、前記ヘテロ環の一部がベンゼン環に融合した二環式の環を含む。ヘテロ環は、ヘテロ原子または炭素原子により付着されてよい。ヘテロ環としては、上記で定義されたヘテロアリールを含む。代表的なヘテロ環としては、モルホリニル（ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｙｌ）、ピロリジノニル（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏｎｙｌ）、ピロリジニル（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｙｌ）、ピペリジニル、ヒダントイニル（ｈｙｄａｎｔｏｉｎｙｌ）、バレロラクタミル（ｖａｌｅｒｏｌａｃｔａｍｙｌ）、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒａｎｙｌ）、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、およびテトラヒドロチオピラニルを含む。「フェニルに融合されたヘテロ環」は、フェニル環の二つの隣接した炭素原子に付着されたヘテロ環を意味し、ここで、ヘテロ環は上記で定義されたとおりである。
【0063】
本明細書において用いられた「ヘテロアリール」は、窒素、酸素、および硫黄からなる群から選択される少なくとも一つのヘテロ原子を有し、単環および二環式環系を含む少なくとも一つの炭素原子を含む５～１０員の芳香族ヘテロ環式（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ）環である。代表的なヘテロアリールとしては、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサジアゾリル、ピリジル、フリル、ベンゾフラニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、キノリニル、ピロリル（ｐｙｒｒｏｌｙｌ）、インドリル、オキサゾリル、ベンゾキサゾリル（ｂｅｎｚｏｘａｚｏｌｙｌ）、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル（ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）、ベンゾチアゾリル、イソキサゾリル、ピラゾリル（ｐｙｒａｚｏｌｙｌ）、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、シンノリニル（ｃｉｎｎｏｌｉｎｙｌ）、フタラジニル、キナゾリニル、ピリミジル、オキセタニル、アゼピニル、ピペラジニル、モルホリニル（ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｙｌ）、ジオキサニルおよびチエタニルである。ヘテロアリール基は、単環または二環であってよい。ヘテロアリールは、ヘテロアリール環、ヘテロアリール基、またはヘテロ芳香族の用語と併用して用いられることができ、これらの用語は何れも任意に置換された環を含んでよい。
【0064】
本明細書において用いられた用語「ヒドロキシアルキル」は、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－（ＣＨ２）２ＣＨ２ＯＨ、－（ＣＨ２）３ＣＨ２ＯＨ、－（ＣＨ２）４ＣＨ２ＯＨ、－（ＣＨ２）５ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、およびこれらと類似のものを含む、一つ以上の水素原子がヒドロキシで置換されたアルキルを意味し、ここで、アルキルは上記で定義されたとおりである。
【0065】
本明細書において用いられた用語「ヒドロキシアリール」は、一つ以上の水素原子がヒドロキシで置換されたアリールを意味し、ここで、アリールは上記で定義されたとおりである。
【0066】
本明細書において用いられた用語「アルキルチオ」は、－Ｓ－ＣＨ３、－Ｓ－ＣＨ２ＣＨ３、－Ｓ－（ＣＨ２）２ＣＨ３、－Ｓ－（ＣＨ２）３ＣＨ３、－Ｓ－（ＣＨ２）４ＣＨ３、－Ｓ－（ＣＨ２）５ＣＨ３、およびこれらと類似のものを含み、ここで、アルキルは上記で定義されたとおりである。
【0067】
本明細書において用いられた用語「スルホン酸」および「スルホ」は、－Ｓ０３Ｈを意味する。
【0068】
本明細書において用いられた用語「スルホニルアルキル」は、－ＳＯ２－ＣＨ３、－ＳＯ２－ＣＨ２ＣＨ３、－ＳＯ２－（ＣＨ２）２ＣＨ３、－ＳＯ２－（ＣＨ２）３ＣＨ３、－ＳＯ２－（ＣＨ２）４ＣＨ３、および－ＳＯ２－（ＣＨ２）５ＣＨ３を含む－ＳＯ２－（アルキル）を意味し、ここで、アルキルは上記で定義されたとおりである。
【0069】
本明細書において用いられた用語「スルフィニルアルキル（ｓｕｌｆｉｎｙｌａｌｋｙｌ）」は、－ＳＯ－ＣＨ３、－ＳＯ－ＣＨ２ＣＨ３、－ＳＯ－（ＣＨ２）２ＣＨ３、－ＳＯ－（ＣＨ２）３ＣＨ３、－ＳＯ－（ＣＨ２）４ＣＨ３、－ＳＯ－（ＣＨ２）５ＣＨ３、およびこれらと類似のものを含む－ＳＯ－（アルキル）を意味し、ここで、アルキルは上記で定義されたとおりである。
【0070】
本明細書において用いられた用語「チオアルキル」は、－Ｓ－ＣＨ３、－Ｓ－ＣＨ２ＣＨ３、－Ｓ－（ＣＨ２）２ＣＨ３、－Ｓ－（ＣＨ２）３ＣＨ３、－Ｓ－（ＣＨ２）４ＣＨ３、－Ｓ－（ＣＨ２）５ＣＨ３、およびこれらと類似のものを含み、ここで、アルキルは上記で定義されたとおりである。
【0071】
本明細書の用語「置換」は、化合物の炭素原子に結合された水素原子が他の置換基に変わることを意味し、置換される位置は、水素原子が置換される位置、すなわち、置換基が置換可能な位置であれば限定されず、２以上置換される場合、２以上の置換基は互いに同一でも異なってもよい。
【0072】
本明細書において用いられた用語「置換された」（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ）は、置換される部分（例えば、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクルまたはシクロアルキル）の水素原子が他の原子または他の官能基（すなわち、置換基）で置き換わることを意味する。ケト置換基の場合、二つの水素原子は、二重結合によって炭素に付着される酸素で置換される。置換体に関連して別の記載がない限り、本発明の任意に置換された置換体としては、ハロゲン、ヒドロキシル、（低級）アルキル、ハロアルキル、モノ－またはジ－アルキルアミノ、アリール、ヘテロサイクル、－ＮＯ２、－ＮＲａ１Ｒｂ１、－ＮＲａ１Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ１、－ＮＲａ１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ１Ｒｂ１、－ＮＲａ１Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ１、－ＮＲａ１ＳＯ２Ｒｂ１、－ＯＲａ１、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ１、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ１、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ１Ｒｂ１、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒａ１、－ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲａ１、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ１Ｒｂ１、－ＮＲａ１ＳＯ２Ｒｂ１、－ＰＯ３Ｒａ１、－ＰＯ（ＯＲａ１）（ＯＲｂ１）、－ＳＯ２Ｒａ１、－Ｓ（Ｏ）Ｒａ１、－ＳＯ（＝ＮＲａ１）Ｒｂ１（例えば、ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ）、－Ｓ（＝ＮＲａ１）Ｒｂ１（例えば、ｓｕｌｆｉｌｉｍｉｎｅ）、および－ＳＲａ１が用いられてよく、ここで、Ｒａ１とＲｂ１は同一でも異なってもよく、互いに独立して、水素、ハロゲン、アミノ、アルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、アリール、またはヘテロサイクルであり、または、付着された窒素原子のようにＲａ１とＲｂ１はヘテロサイクルの形態になってよい。ここで、Ｒａ１とＲｂ１は、結合された原子によって複数個であってよく、前記アルキルはＣ１－Ｃ２０アルキルであり、アリールはＣ６－Ｃ２０であり、ヘテロサイクルはＣ３－Ｃ２０であってよい。
【0073】
本発明は、驚くべきの抗生効果を有するミクロコクシン誘導体を製造することができるミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法を提供し、
本発明のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法は、
下記化学式２で表されるミクロコクシン化合物を金属水酸化物と反応させ、下記化学式１で表されるミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造するステップを含む。
本発明のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法は、
下記化学式２で表されるミクロコクシン化合物を金属水酸化物と反応させ、下記化学式１で表されるミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造するステップを含む。
【0074】
［化学式１］
【0075】
［化学式２］
【0076】
前記化学式１および２中、
Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールであり、
前記Ｒ１～Ｒ３のアルキル、シクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよく、
Ｒａは、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ２－Ｃ１０アルケニル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｒｂは、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルである。
Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールであり、
前記Ｒ１～Ｒ３のアルキル、シクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよく、
Ｒａは、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ２－Ｃ１０アルケニル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｒｂは、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルである。
【0077】
本発明のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法において、特定のミクロコクシン化合物を金属水酸化物と反応させ、特定の官能基（
）を切断することで、ヒドロキシ基が導入されることにより製造されたミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物は、優れた活性を有する種々の官能基が容易に導入される。
【0078】
具体的に、化学式２のミクロコクシン化合物は、末端にカルボニル基を含んでおり、末端に存在するカルボニル基は、金属水酸化物の処理により、チアゾールに結合されたアミド官能基（－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－）内の酸素と分子内水素結合を形成することができる。形成された水素結合は、チアゾール環に結合されたカルボニルを活性化させ、水酸化イオンの求核性添加を誘導することができる。これにより、チアゾールに結合されたアミド官能基（－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－）内の窒素原子は、塩基度が著しく低くなり、非常に優れた脱離基として作用することができる。
【0079】
本発明の一実施形態において、前記Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルであり、前記Ｒ１～Ｒ３のアルキルは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよく、
より好ましくは、Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素またはＣ１－Ｃ５アルキルであり、前記Ｒ１～Ｒ３のアルキルは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ５アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ５アルキル、Ｃ１－Ｃ５アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ５アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ８ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよい。
より好ましくは、Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素またはＣ１－Ｃ５アルキルであり、前記Ｒ１～Ｒ３のアルキルは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ５アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ５アルキル、Ｃ１－Ｃ５アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ５アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ８ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよい。
【0080】
好ましくは、本発明の一実施形態において、前記Ｒａは、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルであり、Ｒｂは、Ｃ１－Ｃ１０アルキルであってよい。
【0081】
好ましくは、本発明の一実施形態において、前記Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素または
であり、Ｌ１はＣ１－Ｃ３アルキレンであり、Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ４アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ４アルキル、Ｃ１－Ｃ４アルコキシ、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールであってよい。
【0082】
より好ましくは、本発明の一実施形態において、前記Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素であるか、下記構造から選択される何れか一つであってよい：
【0083】
より好ましくは、本発明の一実施形態に係る化学式２は、下記化学式２－１で表されることができる。
【0084】
［化学式２－１］
【0085】
前記化学式２－１中、
Ｒａは、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｒｂは、Ｃ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｌ１ａ～Ｌ１ｃは、互いに独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキレンであり、
Ｒ４ａ～Ｒ４ｃは、互いに独立して、水素、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールである。
Ｒａは、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｒｂは、Ｃ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｌ１ａ～Ｌ１ｃは、互いに独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキレンであり、
Ｒ４ａ～Ｒ４ｃは、互いに独立して、水素、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールである。
【0086】
好ましくは、前記化学式２Ａ中、ＲａはＣ１－Ｃ５アルキルであり、ＲｂはＣ１－Ｃ５アルキルであり、Ｌ１ａ～Ｌ１ｃは互いに独立してＣ１－Ｃ３アルキレンであり、Ｒ４ａ～Ｒ４ｃは、互いに独立して、水素、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ５アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ５アルキル、Ｃ１－Ｃ５アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ５アルキル、フェニル、ナフチル、ヒドロキシフェニル、イミダゾリル、またはインドリルであってよく、より好ましくは、前記化学式２Ａ中、ＲａはＣ１－Ｃ３アルキルであり、ＲｂはＣ１－Ｃ３アルキルであり、Ｌ１ａ～Ｌ１ｃは、互いに独立して、メチレン、１，１－エチレン、１，２－エチレン、１，１－プロピレン、１，２－プロピレン、１，３－プロピレン、または２，２－プロピレンであり、Ｒ４ａ～Ｒ４ｃは、互いに独立して、水素、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ３アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ３アルキル、ヒドロキシＣ１－Ｃ３アルキル、フェニル、ナフチル、ヒドロキシフェニル、イミダゾリル、またはインドリルであってよい。
【0087】
一具体例において、前記
、
、および
は、互いに独立して、下記構造から選択される何れか一つであってよい：
【0088】
本発明の一実施形態に係るミクロコクシン化合物は、下記化学式２－１－Ａ、化学式２－１－Ｂ、または化学式２－１－Ｃから選択されるものであってよいが、これに限定されるものではない。
【0089】
［化学式２－１－Ａ］
【0090】
［化学式２－１－Ｂ］
【0091】
［化学式２－１－Ｃ］
【0092】
本発明のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法は、金属水酸化物を用いて、穏やかな条件および単純な工程によりミクロコクシン骨格にカルボン酸基を導入することで、ミクロコクシンに基づく化合物に多様な官能基を簡単に導入することができることから、優れた抗生効果を示すことができる多様なミクロコクシン誘導体を合成するにおいて非常に有用である。
【0093】
好ましくは、一実施形態に係る金属水酸化物の金属は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属であってよいが、これに限定されるものではなく、より好ましくは、アルカリ金属であってよく、具体的にＬｉまたはＮａであってよい。
【0094】
一実施形態に係る金属水酸化物は、ミクロコクシン化合物１モルに対して３～１２モル、好ましくは５～１０モルで用いられてよく、前記反応は、３０～８０℃で８～２４時間、好ましくは４０～６０℃で１２～２４時間行われることができる。前記金属水酸化物を上述の範囲内で用いる場合、目的とするカルボン酸化合物が高い純度および収率で製造可能である。
【0095】
一実施形態に係る前記化学式２のミクロコクシン化合物は、天然物から分離されたものであっても、全合成により製造されたものであってもよく、これに限定されるものではない。
【0096】
一具体例において、前記化学式２のミクロコクシン化合物は、有機合成分野で利用可能な方法により合成されたものであってよい。本発明の化学式２のミクロコクシン化合物が合成されたものである場合、前記化学式２のミクロコクシン化合物は、当業者が認識できる方法であれば何れも利用可能である。
【0097】
一例として、山本カップリング、鈴木カップリング、スティルカップリング、薗頭カップリング、ヘックカップリング、またはバックワルドカップリングなどのアリール－アリールカップリング反応により製造されることができる。
【0098】
好ましくは、アリール－アリールカップリングは、遷移金属触媒下で行われ、鈴木カップリング反応では、Ｐｄ（０）複合体またはＰｄ（ＩＩ）塩が用いられてよく、好ましいＰｄ（０）複合体は、Ｐｄ（Ｐｈ３Ｐ）４のような一つ以上のホスフィンリガンドを含有してよい。他の好ましいホスフィンリガンドは、トリス（オルト－トリル）ホスフィン（Ｐｄ（ｏ－Ｔｏｌ）４）であってよい。
【0099】
好ましいＰｄ（ＩＩ）塩は、パラジウムアセテート、すなわち、Ｐｄ（ＯＡｃ）２であってよい。鈴木カップリングは、塩基、例えば、炭酸ナトリウム、リン酸カリウム、または、有機塩基、例えば、テトラエチルアンモニウムカーボネートの存在下で行われてよく、山本重合は、Ｎｉ（０）複合体、例えば、ビス（１，５－シクロオクタジエニル）ニッケル（０）が用いられてよい。
【0100】
一実施形態に係る化学式２のミクロコクシン化合物の製造方法における反応時間は、反応物質、溶媒の種類と量などによって変わり、一例として、ＴＬＣなどにより出発物質が完全に消えたことを確認した後に反応を完結させる。反応が完結すると、減圧下で溶媒を蒸留させた後、カラムクロマトグラフィーなどの通常の方法により目的物を分離精製することができる。
【0101】
一具体例において、前記化学式２のミクロコクシン化合物は天然物から分離されたものであってよい。
【0102】
一具体例において、前記化学式２－１－Ａのミクロコクシン化合物は、
１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、ＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを作製するステップと、
２）前記ステップ１）の発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、により製造されることができる。
１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、ＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを作製するステップと、
２）前記ステップ１）の発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、により製造されることができる。
【0103】
一具体例において、前記化学式２－１－Ｂのミクロコクシン化合物は、
１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＯ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、ＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを作製するステップと、
２）前記ステップ１）の発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、により製造されることができる。
１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＯ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、ＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを作製するステップと、
２）前記ステップ１）の発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、により製造されることができる。
【0104】
一具体例において、前記化学式２－１－Ｃのミクロコクシン化合物は、
１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＤ、ＢｃＴｃｌＣ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、ＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを作製するステップと、
２）前記ステップ１）の発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、により製造されることができる。
１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＤ、ＢｃＴｃｌＣ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、ＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを作製するステップと、
２）前記ステップ１）の発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、により製造されることができる。
【0105】
前記ステップ２）の形質転換されたバシラスサチリスを発酵培養させ、それぞれのミクロコクシン化合物を生産および分泌させるステップをさらに含んでよいが、これに制限されない。
【0106】
本発明のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物の製造方法は、ミクロコクシンに基づく化合物にカルボン酸基が導入されることで、多様な官能基の導入が非常に容易であって、多様なミクロコクシン誘導体を可能とする。
【0107】
また、本発明は、ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造するための出発物質であるミクロコクシン化合物の生合成方法を提供する。
【0108】
本発明に係るミクロコクシン化合物の生合成方法は、下記化学式２－２のミクロコクシン化合物を製造するものであって、
１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、およびＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを作製するステップと、
２）前記ステップ１）の発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、を含む。
１）ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、およびＢｃＴｃｌＰ遺伝子を含む発現ベクターを作製するステップと、
２）前記ステップ１）の発現ベクターでバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を形質転換するステップと、を含む。
【0109】
［化学式２－２］
【0110】
前記化学式２－２中、
Ｒ５Ａは、水素またはヒドロキシであり、Ｒ５Ｂは、ヒドロキシまたはメトキシである。
Ｒ５Ａは、水素またはヒドロキシであり、Ｒ５Ｂは、ヒドロキシまたはメトキシである。
【0111】
一実施形態において、前記発現ベクターは、ＢｃＴｃｌＯ、ＢｃＴｃｌＤ、およびＢｃＴｃｌＣ遺伝子のうち一つ以上をさらに含んでよい。
【0112】
一具体例において、前記発現ベクターは、ＢｃＴｃｌＯ遺伝子をさらに含んでよい。
【0113】
一具体例において、前記発現ベクターは、ＢｃＴｃｌＤおよびＢｃＴｃｌＣ遺伝子をさらに含んでよい。
【0114】
本発明の遺伝子が導入されたベクターで形質転換された形質転換体でミクロコクシン化合物の生合成が可能であり、特定の遺伝子を含むベクターで形質転換されたバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）細胞内で目的物質であるミクロコクシン化合物を効率的に生合成することができ、有用遺伝子の追加的な導入により、巨大環に多様な置換基を導入させることができる。
【0115】
また、本発明は、優れた抗生効果を有することができるミクロコクシン誘導体を製造するための中間体として有用に使用可能な、ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を提供し、ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物は前記化学式１で表される。
【0116】
また、本発明は、前記製造されたミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を中間体とし、抗生剤として有用なミクロコクシン誘導体を製造する方法を提供する。
【0117】
本発明のミクロコクシン誘導体の製造方法は、
下記化学式２のミクロコクシン化合物を金属水酸化物と反応させ、下記化学式１のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造するステップと、
下記化学式１のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物から下記化学式３のミクロコクシン誘導体を製造するステップと、を含む。
下記化学式２のミクロコクシン化合物を金属水酸化物と反応させ、下記化学式１のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物を製造するステップと、
下記化学式１のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物から下記化学式３のミクロコクシン誘導体を製造するステップと、を含む。
【0118】
［化学式３］
【0119】
［化学式１］
【0120】
［化学式２］
【0121】
前記化学式１～３中、
Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールであり、
前記Ｒ１～Ｒ３のアルキル、シクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよく、
Ｒａは、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ２－Ｃ１０アルケニル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｒｂは、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｚ１およびＺ２は、互いに独立して、単結合、－ＣＯＮＲ１１－、－ＮＲ１２ＣＯ－、－ＣＯＯ－、－ＯＣＯ－、－ＣＲ１３Ｒ１４－、－ＮＲ１５ＣＯＯ－、－ＮＲ１６－、－Ｓ－、－Ｏ－、－ＳＯ２－、または－ＯＣＯＮＲ１７－であり、Ｒ１１～Ｒ１７は、互いに独立して、水素、ヒドロキシ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、カルボキシルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ａ１は、
または
であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ２－Ｃ１０アルケニル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシＣ１－Ｃ１０アルキルであり、ｐは、０～４の整数であり、
Ａ２は、単結合、Ｃ１－Ｃ１０アルキレン、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキレン、Ｃ３－Ｃ１０ヘテロシクロアルキレン、Ｃ６－Ｃ２０アリーレン、またはＣ６－Ｃ２０ヘテロアリーレンであり、
Ｒは、水素、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、－Ｂ（ＯＨ）２、置換もしくは非置換のハロＣ１－Ｃ１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ１－Ｃ１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ２－Ｃ１０アルケニル、置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ１０シクロアルキル、置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ１０ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のＣ６－Ｃ２０アリール、または置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ２０ヘテロアリールである。
Ｒ１～Ｒ３は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、またはＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールであり、
前記Ｒ１～Ｒ３のアルキル、シクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールは、ヒドロキシ、チオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ６－Ｃ１２アリール、ヒドロキシＣ６－Ｃ１２アリール、およびＣ３－Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよく、
Ｒａは、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ２－Ｃ１０アルケニル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｒｂは、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｚ１およびＺ２は、互いに独立して、単結合、－ＣＯＮＲ１１－、－ＮＲ１２ＣＯ－、－ＣＯＯ－、－ＯＣＯ－、－ＣＲ１３Ｒ１４－、－ＮＲ１５ＣＯＯ－、－ＮＲ１６－、－Ｓ－、－Ｏ－、－ＳＯ２－、または－ＯＣＯＮＲ１７－であり、Ｒ１１～Ｒ１７は、互いに独立して、水素、ヒドロキシ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、カルボキシルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはＣ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ａ１は、
Ａ２は、単結合、Ｃ１－Ｃ１０アルキレン、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキレン、Ｃ３－Ｃ１０ヘテロシクロアルキレン、Ｃ６－Ｃ２０アリーレン、またはＣ６－Ｃ２０ヘテロアリーレンであり、
Ｒは、水素、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、－Ｂ（ＯＨ）２、置換もしくは非置換のハロＣ１－Ｃ１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ１－Ｃ１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ２－Ｃ１０アルケニル、置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ１０シクロアルキル、置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ１０ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のＣ６－Ｃ２０アリール、または置換もしくは非置換のＣ３－Ｃ２０ヘテロアリールである。
【0122】
一実施形態において、前記化学式１のミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物は、下記化学式４のアミン化合物との反応により前記化学式３のミクロコクシン誘導体を製造することができる。
【0123】
［化学式４］
【0124】
前記化学式４中、Ａ１、Ａ２、Ｚ１、Ｚ２、およびＲは、前記化学式３での定義と同様である。
【0125】
一実施形態に係る化学式３のミクロコクシン誘導体は、多様な細菌の死滅および抑制に効果的であり、抗生剤として非常に優れた効果を有する。
【0126】
一実施形態に係る化学式３中、前記Ｚ１は、単結合、－ＣＯＮＲ１１－、－ＮＲ１２ＣＯ－、または－ＣＯＯ－であり、Ｚ２は、単結合、－ＣＯＮＲ１１－、－ＮＲ１２ＣＯ－、－ＮＲ１５ＣＯＯ－、－ＮＲ１６－、－Ｓ－、または－ＯＣＯＮＲ１７－であり、Ｒ１１、Ｒ１２、およびＲ１５～Ｒ１７は、互いに独立して、水素、ヒドロキシ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはカルボキシルＣ１－Ｃ１０アルキルであってよい。
【0127】
一実施形態に係る化学式３中、前記Ｒは、水素、アミノ、－Ｂ（ＯＨ）２、Ｃ３－Ｃ１０ヘテロシクロアルキル、またはＣ３－Ｃ２０ヘテロアリールであり、前記Ｒのヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールは、ハロゲン、アミノ、ニトロ、ヒドロキシ、カルボン酸基、－Ｂ（ＯＨ）２、Ｃ１－Ｃ１０アルキルカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニル、Ｃ２－Ｃ１０アルケニル、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、ハロＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０ヘテロシクロカルボニル、アリルアミノ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルスルホニル、アミノスルホニル、アミノＣ１－Ｃ１０アルキル、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、ジヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、シアノＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルキルアミノ、ジＣ１－Ｃ１０アルキルアミノ、Ｃ６－Ｃ２０アリールアミノ、ジＣ６－Ｃ２０アリールアミノ、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロアリール、ハロＣ６－Ｃ２０アリール、ハロＣ１－Ｃ１０アルキルＣ６－Ｃ２０アリール、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキルカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキル、およびカルボン酸Ｃ１－Ｃ１０アルキルからなる群から選択される一つ以上でさらに置換されてよい。
【0128】
好ましくは、一実施形態に係る化学式３中、前記Ｚ１およびＺ２は、互いに独立して、単結合、－ＣＯＮＲ１１－、－ＣＯＯ－、または－ＮＲ１６－であり、Ｒ１１およびＲ１６は、互いに独立して、水素であってよい。
【0129】
より好ましくは、一実施形態に係る化学式３中、前記Ｚ１は、単結合、－ＣＯＮＲ１１－、または－ＣＯＯ－であり、Ｚ２は、単結合、－ＣＯＮＲ１１、－または－ＮＲ１６－であり、Ｒ１１およびＲ１６は互いに独立して水素であってよい。
【0130】
好ましくは、一実施形態に係る化学式３中、前記Ａ１は
または
であり、Ｒ’はＣ１－Ｃ１０アルキルであり、ｐは０～２の整数であり、Ａ２は単結合またはＣ１－Ｃ１０アルキレンであり、Ｒは、水素、アミノ、または－Ｂ（ＯＨ）２であるか、下記構造から選択される何れか一つであってよい。
（前記構造式中、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｘ１は、ＮＲ３１、Ｏ、Ｓ、またはＳＯ２であり、
Ｘ２～Ｘ５は、それぞれ独立して、ＮＲ３２、Ｏ、またはＳであり、
Ｒ２０～Ｒ２２、Ｒ３１、およびＲ３２は、互いに独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルキルスルホニル、アミノスルホニル、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、ジヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、シアノＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはカルボキシルＣ１－Ｃ１０アルキルである。）
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｘ１は、ＮＲ３１、Ｏ、Ｓ、またはＳＯ２であり、
Ｘ２～Ｘ５は、それぞれ独立して、ＮＲ３２、Ｏ、またはＳであり、
Ｒ２０～Ｒ２２、Ｒ３１、およびＲ３２は、互いに独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルキルスルホニル、アミノスルホニル、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、ジヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、シアノＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはカルボキシルＣ１－Ｃ１０アルキルである。）
【0131】
より好ましくは、一実施形態において、前記Ｒは、水素、アミノ、または－Ｂ（ＯＨ）２であるか、下記構造から選択される何れか一つであってよい：
（前記構造式中、
Ｒ２１およびＲ２２は、互いに独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルキルスルホニル、アミノスルホニル、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、ジヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、シアノＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはカルボン酸Ｃ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｒ３１およびＲ３２は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキルカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルキルスルホニル、アミノスルホニル、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、ジヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、シアノＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはカルボン酸Ｃ１－Ｃ１０アルキルである。）
Ｒ２１およびＲ２２は、互いに独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、Ｃ１－Ｃ１０アルキルカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルキルスルホニル、アミノスルホニル、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、ジヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、シアノＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはカルボン酸Ｃ１－Ｃ１０アルキルであり、
Ｒ３１およびＲ３２は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキルカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルキルスルホニル、アミノスルホニル、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、ジヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、シアノＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはカルボン酸Ｃ１－Ｃ１０アルキルである。）
【0132】
より好ましくは、前記Ｒ２１およびＲ２２は、互いに独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、またはＣ３－Ｃ１０シクロアルキルであり、Ｒ３１およびＲ３２は、互いに独立して、水素、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルキルスルホニル、アミノスルホニル、ヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、ジヒドロキシＣ１－Ｃ１０アルキル、シアノＣ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ１０アルキル、またはカルボン酸Ｃ１－Ｃ１０アルキルであってよい。
【0133】
一実施形態に係る化学式３のミクロコクシン誘導体は、下記構造から選択されるものであってよいが、これに限定されるものではない。
【0134】
一実施形態に係る化学式３のミクロコクシン誘導体の抗生剤としての効果は、ＫＲ１０－２０２２－００６８９３４Ａに詳細に記載されている。
【0135】
以下、本発明のミクロコクシン化合物の製造方法について具体的な一例を挙げて説明するが、このような具体的な実施例に本発明が限定されるものではない。
【0136】
［製造例１］化合物Ａ１の製造
１ステップ：化合物ａ－１の製造
Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－スレオニン（２ｇ、９．２ｍｍｏｌ）と（Ｒ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロパン－１－アミン（３．４６ｇ、１１ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）をジクロロメタン（４０ｍＬ）に溶かした後、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ、２．１ｇ、１１ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ、１．４８ｇ、１１ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、３．２ｍｌ、１８．４ｍｍｏｌ、２ｅｑ）を滴下してから常温で２時間撹拌した。ジクロロメタンで薄めた後、水で洗浄した。有機層を抽出して無水硫酸ナトリウムで脱水させた後、２０％～４０％のエチルアセテート／ヘキサン溶液でカラムクロマトグラフィーにより分離し、白色の固体化合物ａ－１（２．８０ｇ、６０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ７．６９ （ｍ， ４Ｈ）， ７．４９ － ７．４４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４３ － ７．３９ （ｍ， ４Ｈ）， ６．８９ （ｂｒｓ， １Ｈ）， ５．４７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３４ （ｑｄ， Ｊ ＝ ６．４， ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０５ － ３．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３４ － ３．３０ （ｍ， １Ｈ）， ３．２４ （ｄｔ， Ｊ ＝ １３．５， ４．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．８７ （ｂｒｓ， １Ｈ）， １．４８ （ｓ， ９Ｈ）， １．１８ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１０ （ｓ， ９Ｈ）， １．０６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ２８Ｈ４３Ｎ２Ｏ５Ｓｉに対して５１５．２ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ７．６９ （ｍ， ４Ｈ）， ７．４９ － ７．４４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４３ － ７．３９ （ｍ， ４Ｈ）， ６．８９ （ｂｒｓ， １Ｈ）， ５．４７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３４ （ｑｄ， Ｊ ＝ ６．４， ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０５ － ３．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３４ － ３．３０ （ｍ， １Ｈ）， ３．２４ （ｄｔ， Ｊ ＝ １３．５， ４．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．８７ （ｂｒｓ， １Ｈ）， １．４８ （ｓ， ９Ｈ）， １．１８ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１０ （ｓ， ９Ｈ）， １．０６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ２８Ｈ４３Ｎ２Ｏ５Ｓｉに対して５１５．２ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0137】
２ステップ：化合物ａ－２の製造
化合物ａ－１（４．５０ｇ、８．８ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）をジクロロメタン（４０ｍＬ）／トリフルオロ酢酸（４０ｍＬ）に溶かした後、常温で１時間撹拌してから減圧濃縮させた。得られた化合物をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶かした後、２－ブロモチアゾール－４－カルボン酸（１．６６ｇ、８ｍｍｏｌ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（１．６８ｇ、８．８ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．１９ｇ、８．８ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）、ジイソプロピルエチルアミン（４．２ｍＬ、２４ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を滴下してから常温で１２時間撹拌した。ジクロロメタンで薄めた後、水で洗浄した。有機層を抽出して無水硫酸ナトリウムで脱水させた後、２０％～５０％のエチルアセテート／ヘキサン溶液でカラムクロマトグラフィーにより分離し、黄色の固体化合物ａ－２（３．００ｇ、６３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．０８ （ｓ， １Ｈ）， ８．０１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６９ － ７．６５ （ｍ， ４Ｈ）， ７．４８ － ７．４４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４２ － ７．３７ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９２ － ６．９０ （ｍ， １Ｈ）， ４．４４ （ｑｄ， Ｊ ＝ ６．５， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０２ － ３．９７ （ｍ， １Ｈ）， ３．５５ （ｂｒｓ， １Ｈ）， ３．２９ （ａｐｐ．ｔ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．２２ （ｄ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．０５ （ｓ， ９Ｈ）， １．０３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ２７Ｈ３５ＢｒＮ３Ｏ４ＳＳｉに対して６０４．１ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．０８ （ｓ， １Ｈ）， ８．０１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６９ － ７．６５ （ｍ， ４Ｈ）， ７．４８ － ７．４４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４２ － ７．３７ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９２ － ６．９０ （ｍ， １Ｈ）， ４．４４ （ｑｄ， Ｊ ＝ ６．５， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０２ － ３．９７ （ｍ， １Ｈ）， ３．５５ （ｂｒｓ， １Ｈ）， ３．２９ （ａｐｐ．ｔ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．２２ （ｄ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．０５ （ｓ， ９Ｈ）， １．０３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ２７Ｈ３５ＢｒＮ３Ｏ４ＳＳｉに対して６０４．１ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0138】
３ステップ：化合物ａ－３の製造
化合物ａ－２（３ｇ、５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４０ｍＬ）に溶かした後、メタンスルホニルクロリド（ＭｓＣｌ、１．１５ｍＬ、１４．９ｍｍｏｌ、３ｅｑ）、トリエチルアミン（２．１ｍＬ、１４．９ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を滴下してから常温で１時間撹拌した。その後、１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ、１１．２ｍｌ、７４．８ｍｍｏｌ、１５ｅｑ）を添加して常温で２時間撹拌した。反応の終結を確認した後、ジクロロメタンで薄めた後、過飽和された塩化アンモニウムを入れて洗浄した。有機層を抽出して無水硫酸ナトリウムで脱水させた後、３０％～５０％のエチルアセテート／ヘキサン溶液でカラムクロマトグラフィーにより分離し、白色の固体化合物ａ－３（２．２ｇ、７５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．３２ （ｓ， １Ｈ）， ８．１２ （ｓ， １Ｈ）， ７．６６ － ７．６４ （ｍ， ４Ｈ）， ７．４８ － ７．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４０ － ７．３７ （ｍ， ４Ｈ）， ６．５３ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３９ （ａｐｐ．ｔ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０５ － ４．０１ （ｍ， １Ｈ）， ３．４１ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １３．６， ５．４， ３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．３３ （ｄｔ， Ｊ ＝ １３．６， ５．９ Ｈｚ， １Ｈ）， １．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９９ （ｓ， ９Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ２７Ｈ３３ＢｒＮ３Ｏ３ＳＳｉに対して５８６．１ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．３２ （ｓ， １Ｈ）， ８．１２ （ｓ， １Ｈ）， ７．６６ － ７．６４ （ｍ， ４Ｈ）， ７．４８ － ７．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４０ － ７．３７ （ｍ， ４Ｈ）， ６．５３ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３９ （ａｐｐ．ｔ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０５ － ４．０１ （ｍ， １Ｈ）， ３．４１ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １３．６， ５．４， ３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．３３ （ｄｔ， Ｊ ＝ １３．６， ５．９ Ｈｚ， １Ｈ）， １．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９９ （ｓ， ９Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ２７Ｈ３３ＢｒＮ３Ｏ３ＳＳｉに対して５８６．１ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0139】
４ステップ：化合物ａ－４の製造
化合物ａ－３（２．２ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）に溶かした後、１Ｍのテトラ－ｎ－ブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ、６．７４ｍＬ、６．７４ｍｍｏｌ、１．８ｅｑ）を滴下してから常温で３０分間撹拌した。エチルアセテートで薄めた後、過飽和された塩化アンモニウムを入れて洗浄した。有機層を抽出して無水硫酸ナトリウムで脱水させた後、（２％～５％メタノール：９８％～９５％ジクロロメタン）溶液でカラムクロマトグラフィーにより分離し、無色の液体化合物ａ－４（８００ｍｇ、６１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）： δ ８．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．７１ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９４ － ３．８５ （ｍ， １Ｈ）， ３．３０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．５， ４．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．２０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．４， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， １．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ１１Ｈ１５ＢｒＮ３Ｏ３Ｓに対して３４８．０ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）： δ ８．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．７１ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９４ － ３．８５ （ｍ， １Ｈ）， ３．３０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．５， ４．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．２０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．４， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， １．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ１１Ｈ１５ＢｒＮ３Ｏ３Ｓに対して３４８．０ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0140】
５ステップ：化合物Ａ１の製造
化合物ａ－４（３８６ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶かした後、デス－マーチンペルヨージナン（７０６ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を滴下した。常温で２時間撹拌した後、ジクロロメタンで薄め、過飽和された炭酸水素ナトリウムで洗浄した。有機層を抽出して無水硫酸ナトリウムで脱水させた後、（２％～５％メタノール：９８％～９５％ジクロロメタン）溶液でカラムクロマトグラフィーにより分離し、白色の固体化合物Ａ１（３５６ｍｇ、８９％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）： δ ８．３０ （ｓ， １Ｈ）， ６．７７ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０７ （ｓ， ２Ｈ）， ２．１８ （ｓ， ３Ｈ）， １．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ１１Ｈ１３ＢｒＮ３Ｏ３Ｓに対して３４５．９ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）： δ ８．３０ （ｓ， １Ｈ）， ６．７７ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０７ （ｓ， ２Ｈ）， ２．１８ （ｓ， ３Ｈ）， １．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ１１Ｈ１３ＢｒＮ３Ｏ３Ｓに対して３４５．９ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0141】
［実施例１］化合物１３（ミクロコクシンＰ２）の製造
１ステップ：化合物３の製造
４－ブロモ－２－ホルミルチアゾール（７６８ｍｇ、４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶かした後、エチニルマグネシウムブロミド溶液（０．５Ｍ ｉｎ ＴＨＦ、１６ｍＬ、８ｍｍｏｌ）を０℃でゆっくりと滴下した。常温で３０分間撹拌した後、過飽和されたアンモニウムクロリド溶液を添加して反応を中止させた。エチルアセテートで抽出した後、無水硫酸ナトリウムで脱水させて減圧濃縮した。得られた残余物を３０％エチルアセテート／７０％ヘキサン溶液でカラムクロマトグラフィーにより分離し、白色の固体化合物を得た。得られた化合物（６３２ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶かした後、二酸化マンガン（２．５２ｇ、２９ｍｍｏｌ）を添加してから常温で２時間撹拌した。セライトを用いてマンガン残余物を濾過した後、ジクロロメタンで抽出して無水硫酸ナトリウムで脱水させた後、減圧濃縮して褐色の固体化合物３（５２７ｍｇ、６１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．６９ （ｓ， １Ｈ）， ３．６７ （ｓ， １Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ６Ｈ３ＢｒＮＯＳに対して２１５．９ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．６９ （ｓ， １Ｈ）， ３．６７ （ｓ， １Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ６Ｈ３ＢｒＮＯＳに対して２１５．９ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0142】
２ステップ：化合物５の製造
化合物４は、参考文献［Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ，２０２０，２２，６，２３６５－２３７０］に開示された方法により合成された。
【0143】
アセトニトリル（６．５２ｍＬ、１２５ｍｍｏｌ、２ｅｑ）をテトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）に溶かした後、ｎ－ブチルリチウム溶液（２．５Ｍ ｉｎ ｈｅｘａｎｅｓ、５４．８ｍＬ、１３７ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ）を－７８℃でゆっくりと滴下した。－７８℃で２０分間撹拌した後、テトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）に溶解されている化合物４（２２．３ｇ、６２．６ｍｍｏｌ）を同温度でゆっくりと滴下させた。常温にゆっくりと温度を上げ、１時間反応させた後、１Ｍの濃度の塩酸を入れて反応を中止させた。エチルアセテートで薄めた後、さらに塩酸を入れてｐＨ３に酸性化させた。有機層を抽出して無水硫酸ナトリウムで脱水させた後、減圧濃縮して褐色の固体化合物５（２２．２ｇ、９７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２９ （ｓ， １Ｈ）， ４．７１ （ｄ， Ｊ ＝ １７．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３２ － ４．０９ （ｍ， ３Ｈ）， １．７０ （ｂｒｏａｄ ｐｅａｋ， ６Ｈ）， １．５４ － １．３８ （ｍ， ７Ｈ）， １．３１ － １．０６ （ｍ， ５Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ１７Ｈ２４Ｎ３Ｏ４Ｓに対して３６６．１ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２９ （ｓ， １Ｈ）， ４．７１ （ｄ， Ｊ ＝ １７．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３２ － ４．０９ （ｍ， ３Ｈ）， １．７０ （ｂｒｏａｄ ｐｅａｋ， ６Ｈ）， １．５４ － １．３８ （ｍ， ７Ｈ）， １．３１ － １．０６ （ｍ， ５Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ１７Ｈ２４Ｎ３Ｏ４Ｓに対して３６６．１ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0144】
３ステップ：化合物６の製造
化合物５（２２．３ｇ、６１．０ｍｍｏｌ）をトルエン（３００ｍＬ）と酢酸（６０ｍＬ）の混合物に溶かした後、酢酸アンモニウム（４７ｇ、６１０ｍｍｏｌ、１０ｅｑ）を滴下した。１２０℃で１時間撹拌した後、常温にゆっくりと冷やした。エチルアセテートで薄めた後、過飽和された炭酸水素ナトリウム溶液と水で洗浄した。有機層を抽出して無水硫酸ナトリウムで脱水させた後、減圧濃縮して黄色のオイル化合物６（２１．０ｇ、９４％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．６０ （ｓ， １Ｈ）， ５．５９ － ５．５１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８１ － ４．５０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２１ － ４．１０ （ｍ， １Ｈ）， １．６７ （ｓ， ６Ｈ）， １．４８ － １．３６ （ｍ， ６Ｈ）， １．２７ － ０．９６ （ｍ， ６Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ１７Ｈ２５Ｎ４Ｏ３Ｓに対して３６５．１ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．６０ （ｓ， １Ｈ）， ５．５９ － ５．５１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８１ － ４．５０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２１ － ４．１０ （ｍ， １Ｈ）， １．６７ （ｓ， ６Ｈ）， １．４８ － １．３６ （ｍ， ６Ｈ）， １．２７ － ０．９６ （ｍ， ６Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ１７Ｈ２５Ｎ４Ｏ３Ｓに対して３６５．１ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0145】
４ステップ：化合物７の製造
化合物６（２１．０ｇ、５７．５ｍｍｏｌ）をエタノール（３００ｍｌ）に溶かした後、化合物３（２２．９ｇ、１０６．３ｍｍｏｌ、１．８５ｅｑ）を滴下した後、６０℃で９０分間撹拌した。ＴＬＣとＬＣ Ｍａｓｓで出発物質が消えたことを確認した後、酢酸（３０％ ｖｏｌｕｍｅ、９０ｍｌ）を添加してから９０℃で１６時間反応させた。減圧濃縮してエタノールと酢酸を除去した後、ジクロロメタンで薄めた後、過飽和された炭酸水素ナトリウム溶液で反応を中止させた。有機層を抽出して無水硫酸ナトリウムで脱水させた後、減圧濃縮させた。５％～１５％のエチルアセテート／ヘキサン溶液でカラムクロマトグラフィーにより分離し、黄色の固体化合物７（１６．５ｇ、５１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２７ （ｓ， １Ｈ）， ８．１９ （ｓ， ２Ｈ）， ７．４８ （ｓ， １Ｈ）， ４．８５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５８ － ４．２３ （ｂｒｏａｄ ｐｅａｋ， １Ｈ）， １．８３ － １．６７ （ｂｒｏａｄ ｐｅａｋ， ６Ｈ）， １．５７ － １．４５ （ｍ， ６Ｈ）， １．３３ － １．２０ （ｍ， ６Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ２３Ｈ２５ＢｒＮ５Ｏ３Ｓ２に対して５６２．０ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２７ （ｓ， １Ｈ）， ８．１９ （ｓ， ２Ｈ）， ７．４８ （ｓ， １Ｈ）， ４．８５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５８ － ４．２３ （ｂｒｏａｄ ｐｅａｋ， １Ｈ）， １．８３ － １．６７ （ｂｒｏａｄ ｐｅａｋ， ６Ｈ）， １．５７ － １．４５ （ｍ， ６Ｈ）， １．３３ － １．２０ （ｍ， ６Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ２３Ｈ２５ＢｒＮ５Ｏ３Ｓ２に対して５６２．０ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0146】
５ステップ：化合物９の製造
化合物７（１．４２ｇ、２．５３ｍｍｏｌ）をエタノール（２７ｍＬ）とリン酸ナトリウムバッファー溶液（ｐＨ７、９ｍＬ）、水（４．５ｍＬ）の混合溶液に溶かした後、Ｌ－システイン（３．０６ｇ、２５．３ｍｍｏｌ、１０ｅｑ）を滴下した。１００℃で２４時間撹拌した後、減圧濃縮してエタノールを除去し、エチルアセテートで薄めた。過剰量のシステインを除去するために１Ｍの濃度の塩酸で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水させた。抽出して得られた溶液を減圧濃縮し、褐色オイルのチアゾリンが得られた。
【0147】
褐色オイルのチアゾリン（１．６８ｇ、２．５３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶かした後、ブロモトリクロロメタン（１．０ｍＬ、１０．１２ｍｍｏｌ、４ｅｑ）を入れた後、１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデカ－７－エン（１．８８ｍＬ、１２．６５ｍｍｏｌ、５ｅｑ）をゆっくりと滴下させた。６０℃で４時間撹拌した後、１Ｍの濃度の塩酸を入れて反応を中止させた。ジクロロメタンで抽出した後、水と塩水で洗浄した。抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水させた後、減圧濃縮し、５％～１５％のメタノール／ジクロロメタン溶液でカラムクロマトグラフィーにより分離し、褐色の固体化合物９（１．０５ｇ、６２％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．３５ － ８．０５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．８９ （ｂｓ， １Ｈ）， ７．３３ （ｓ， １Ｈ）， ４．４９ － ４．４０ （ｍ， １Ｈ）， ４．０９ － ３．９７ （ｍ， １Ｈ）， １．７１ － １．２９ （ｍ， １０Ｈ）， １．２６ － １．０８ （ｍ， ８Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ２６Ｈ２７ＢｒＮ５Ｏ５Ｓ３に対して６６４．０ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．３５ － ８．０５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．８９ （ｂｓ， １Ｈ）， ７．３３ （ｓ， １Ｈ）， ４．４９ － ４．４０ （ｍ， １Ｈ）， ４．０９ － ３．９７ （ｍ， １Ｈ）， １．７１ － １．２９ （ｍ， １０Ｈ）， １．２６ － １．０８ （ｍ， ８Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ２６Ｈ２７ＢｒＮ５Ｏ５Ｓ３に対して６６４．０ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0148】
６ステップ：化合物１０の製造
化合物Ｂ１は、参考文献［Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ，２０２０，２２，６，２３６５－２３７０］により製造された。化合物９（１．０５ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（８ｍＬ）に溶かした後、化合物Ｂ１（９３２ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）、１－メチルイミダゾール（０．３７６ｍＬ、４．７１ｍｍｏｌ、３ｅｑ）、ＴＣＦＨ（Ｃｈｌｏｒｏ－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｉｎｉｕｍ ｈｅｘａｆｌｕｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ、０．５２８ｇ、１．８８ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を入れて常温で３０分間撹拌した。この溶液をエチルアセテートで薄めた後、水で洗浄して有機層を無水硫酸ナトリウムを用いて脱水させて減圧濃縮した。この濃縮液を（４０％～９０％エチルアセテート：６０％～１０％ヘキサン）溶液でカラムクロマトグラフィーにより分離し、白色の固体化合物１０（１．０５ｇ、６０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．６９ （ｓ， １Ｈ）， ８．４４ （ｄ， Ｊ ＝ ９．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３５ － ８．２４ （ｍ， ４Ｈ）， ８．２４ － ８．１７ （ｍ， １Ｈ）， ８．０６ （ｓ， １Ｈ）， ７．９６ （ｓ， １Ｈ）， ７．９４ － ７．８７ （ｍ， １Ｈ）， ６．４７ （ｑ， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４１ － ５．３１ （ｍ， １Ｈ）， ４．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７８ （ｂｓ， １Ｈ）， ４．６８ － ４．５８ （ｍ， １Ｈ）， ４．５８ － ４．４６ （ｍ， １Ｈ）， ４．１６ － ３．９８ （ｍ， １Ｈ）， ３．８６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．４９ － ２．４５ （ｍ， １Ｈ）， １．８７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．６９ － １．４８ （ｍ， ６Ｈ）， １．４５ － １．３２ （ｍ，３Ｈ）， １．３１ － １．０８ （ｍ， １２Ｈ）， １．０３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ４６Ｈ５２ＢｒＮ１０Ｏ９Ｓ５に対して１１２７．１ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．６９ （ｓ， １Ｈ）， ８．４４ （ｄ， Ｊ ＝ ９．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３５ － ８．２４ （ｍ， ４Ｈ）， ８．２４ － ８．１７ （ｍ， １Ｈ）， ８．０６ （ｓ， １Ｈ）， ７．９６ （ｓ， １Ｈ）， ７．９４ － ７．８７ （ｍ， １Ｈ）， ６．４７ （ｑ， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４１ － ５．３１ （ｍ， １Ｈ）， ４．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７８ （ｂｓ， １Ｈ）， ４．６８ － ４．５８ （ｍ， １Ｈ）， ４．５８ － ４．４６ （ｍ， １Ｈ）， ４．１６ － ３．９８ （ｍ， １Ｈ）， ３．８６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．４９ － ２．４５ （ｍ， １Ｈ）， １．８７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．６９ － １．４８ （ｍ， ６Ｈ）， １．４５ － １．３２ （ｍ，３Ｈ）， １．３１ － １．０８ （ｍ， １２Ｈ）， １．０３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ４６Ｈ５２ＢｒＮ１０Ｏ９Ｓ５に対して１１２７．１ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0149】
７ステップ：化合物１１の製造
化合物１０（２００ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）／水（１ｍＬ）の混合溶媒に入れて水酸化リチウム一水和物（２２ｍｇ、０．５３１ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を添加した後、常温で２時間撹拌した。この溶液をジクロロメタンで薄め、１Ｍの塩酸溶液で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを用いて脱水させて減圧濃縮し、カルボン酸を得た。この濃縮液をジクロロメタン（１ｍＬ）／トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）の混合溶媒に入れ、常温で３０分間撹拌した後、減圧濃縮してトリフルオロ酢酸塩を得た。この濃縮液をＤＭＦ（１ｍＬ）で薄めた後、ジフェニルホスホリルアジド（０．０３８ｍＬ、０．１７７ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、炭酸水素ナトリウム（０．０４５ｍＬ、０．５３１ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を入れ、常温で１２時間撹拌した。この溶液をジクロロメタンで薄め、有機層を水で３回洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水させて減圧濃縮した後、（２％～５％メタノール：９８％～９５％ジクロロメタン）溶液でカラムクロマトグラフィーにより分離し、黄色の固体化合物１１（９６ｍｇ、５６％）を合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．７７ （ｓ， １Ｈ）， ８．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ９．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２２ － ８．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１６ － ８．０９ （ｍ， ３Ｈ）， ８．０１ － ７．９２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．４０ （ｓ， １Ｈ）， ６．３９ （ｑ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２７ － ５．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．９２ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６７ （ｓ， １Ｈ）， ４．４７ － ４．３３ （ｍ， １Ｈ）， ２．９５ （ｂｓ， １Ｈ）， ２．４８ （ｄｑ， Ｊ ＝ １３．４， ６．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．２２ （ｂｓ， １Ｈ）， １．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１４ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ３７Ｈ３６ＢｒＮ１０Ｏ６Ｓ５に対して９５５．０ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．７７ （ｓ， １Ｈ）， ８．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ９．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２２ － ８．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１６ － ８．０９ （ｍ， ３Ｈ）， ８．０１ － ７．９２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．４０ （ｓ， １Ｈ）， ６．３９ （ｑ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２７ － ５．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．９２ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６７ （ｓ， １Ｈ）， ４．４７ － ４．３３ （ｍ， １Ｈ）， ２．９５ （ｂｓ， １Ｈ）， ２．４８ （ｄｑ， Ｊ ＝ １３．４， ６．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．２２ （ｂｓ， １Ｈ）， １．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１４ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ３７Ｈ３６ＢｒＮ１０Ｏ６Ｓ５に対して９５５．０ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0150】
８ステップ：化合物１２の製造
化合物１１（４１ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（０．６ｍＬ）に溶かした後、ビス（ピナコラート）ジボロン（Ｂ２Ｐｉｎ２、１４．２ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）、酢酸カリウム（ＫＯＡｃ、６．７ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）、エックスホス（Ｘｐｈｏｓ、３．１ｍｇ、１５ｍｏｌ％）を添加した。添加した後、１分間窒素を入れ、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ２（ｄｂａ）３、４ｍｇ、１０ｍｏｌ％）を滴下した。９０℃で３時間撹拌した後、ジクロロメタンで薄めてから有機層を抽出した。抽出した有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水させてから減圧濃縮させ、固体化合物１２（１８ｍｇ、４７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ ８．４０ － ８．２１ （ｍ， ４Ｈ）， ８．１３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９３ （ｓ， １Ｈ）， ７．７６ （ｓ， １Ｈ）， ６．６１ （ｑ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２９ － ５．１９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７５ （ｄ， Ｊ ＝ ３．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６２ － ４．５０ （ｍ， １Ｈ）， ４．３０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．３， ２．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６４ （ｄｑ， Ｊ ＝ １３．４， ６．７ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．５３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ３７Ｈ３８ＢＮ１０Ｏ８Ｓ５に対して９２１．１ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ ８．４０ － ８．２１ （ｍ， ４Ｈ）， ８．１３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９３ （ｓ， １Ｈ）， ７．７６ （ｓ， １Ｈ）， ６．６１ （ｑ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２９ － ５．１９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７５ （ｄ， Ｊ ＝ ３．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６２ － ４．５０ （ｍ， １Ｈ）， ４．３０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．３， ２．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６４ （ｄｑ， Ｊ ＝ １３．４， ６．７ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．５３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ３７Ｈ３８ＢＮ１０Ｏ８Ｓ５に対して９２１．１ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0151】
９ステップ：化合物１３の製造
化合物１２（２７６ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（６ｍＬ）と水（１．５ｍＬ）の混合溶媒に溶かした。化合物Ａ１（１５５ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を滴下した後、３分間窒素を供給した。その後、炭酸カリウム（１２４ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ、３ｅｑ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、１０ｍｏｌ％、３５ｍｇ）を入れ、さらに窒素を１分間入れた。３８℃で３時間撹拌した後、減圧濃縮させた。得られた残余物を０～５％のメタノール／ジクロロメタン溶液でカラムクロマトグラフィーにより分離し、白色の固体化合物１３（１７９ｍｇ、５５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ ８．４０ － ８．３１ （ｍ， ４Ｈ）， ８．２７ （ｓ， １Ｈ）， ８．２２ （ｓ， １Ｈ）， ８．１３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９６ （ｓ， １Ｈ）， ６．８２ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．６０ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７８ （ｄ， Ｊ ＝ ３．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６２ － ４．５５ （ｍ， １Ｈ）， ４．３０ （ｑｄ， Ｊ ＝ ６．３， ２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１０ （ｄ， Ｊ ＝ １３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６３ （ｄｑ， Ｊ ＝ １３．４， ６．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．１９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２０ － ２．１４ （ｍ， １Ｈ）， １．９２ （ｓ， １Ｈ） １．８６ （ａｐｐ． ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ６Ｈ）， １．５５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１８ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ４８Ｈ４８Ｎ１３Ｏ９Ｓ６に対して１１４２．２ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ ８．４０ － ８．３１ （ｍ， ４Ｈ）， ８．２７ （ｓ， １Ｈ）， ８．２２ （ｓ， １Ｈ）， ８．１３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９６ （ｓ， １Ｈ）， ６．８２ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．６０ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７８ （ｄ， Ｊ ＝ ３．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６２ － ４．５５ （ｍ， １Ｈ）， ４．３０ （ｑｄ， Ｊ ＝ ６．３， ２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１０ （ｄ， Ｊ ＝ １３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６３ （ｄｑ， Ｊ ＝ １３．４， ６．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．１９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２０ － ２．１４ （ｍ， １Ｈ）， １．９２ （ｓ， １Ｈ） １．８６ （ａｐｐ． ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ６Ｈ）， １．５５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１８ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ４８Ｈ４８Ｎ１３Ｏ９Ｓ６に対して１１４２．２ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0152】
［実施例２］ミクロコクシン化合物の製造
１）バシラスセレウスゲノムＤＮＡの分離
バシラスセレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ１４５７９菌株の培養のために、ルリア－ベルターニ培地（Ｌｕｒｉａ－Ｂｅｒｔａｎｉ、ＬＢ、Ｂｅｃｔｏｎ、Ｄｉｃｋｉｎｓｏ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ、ＵＳＡ）を用いて、ルリア－ベルターニ寒天培地に形成された単一コロニーをＬＢ ｂｒｏｔｈ ５ｍｌに接種し、３０℃で３日間培養した。これにより分離された菌株からゲノムＤＮＡミニキット（ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ、ｐｒｏｍｅｇａ、ＷＩ、ＵＳＡ）を用いてゲノムＤＮＡを分離した。
１）バシラスセレウスゲノムＤＮＡの分離
バシラスセレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ１４５７９菌株の培養のために、ルリア－ベルターニ培地（Ｌｕｒｉａ－Ｂｅｒｔａｎｉ、ＬＢ、Ｂｅｃｔｏｎ、Ｄｉｃｋｉｎｓｏ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ、ＵＳＡ）を用いて、ルリア－ベルターニ寒天培地に形成された単一コロニーをＬＢ ｂｒｏｔｈ ５ｍｌに接種し、３０℃で３日間培養した。これにより分離された菌株からゲノムＤＮＡミニキット（ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ、ｐｒｏｍｅｇａ、ＷＩ、ＵＳＡ）を用いてゲノムＤＮＡを分離した。
【0153】
２）ベクターの作製
Ｔｈｉｏｃｉｌｌｉｎを生合成する遺伝子クラスターは、２４個の生合成関連遺伝子が２２ｋｂにわたって構成されている。このうち８個の遺伝子を用いてミクロコクシンＰ２を合成できるベクターを作製し、これをバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）１６８で発現して物質を確保しようとした。
Ｔｈｉｏｃｉｌｌｉｎを生合成する遺伝子クラスターは、２４個の生合成関連遺伝子が２２ｋｂにわたって構成されている。このうち８個の遺伝子を用いてミクロコクシンＰ２を合成できるベクターを作製し、これをバシラスサチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）１６８で発現して物質を確保しようとした。
【0154】
ベクターの作製に用いられた生合成遺伝子は、ＢｃＴｃｌＥ、ＢｃＴｃｌＩ、ＢｃＴｃｌＪ、ＢｃＴｃｌＫ、ＢｃＴｃｌＬ、ＢｃＴｃｌＭ、ＢｃＴｃｌＮ、ＢｃＴｃｌＰである。ＢｃＴｃｌＩＪＫＬＭＮＰの場合、キシロースにより誘導可能なプロモーター（Ｘｙｌｏｓｅ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ）に遺伝子クローニングをし、ＢｃＴｃｌＥも同様のキシロース誘導プロモーターに４個のＢｃＴｃｌＥ遺伝子を連結して組換えプラスミドを確保した。
【0155】
バシラス形質転換用のベクターは、ｐＵＣ１９ベクターを変形して準備した。ｐＵＣ１９は、バシラス形質転換に用いるためにｐＤＧ１６６１ベクターから導入したａｍｙＥ、Ｃａｔ、ＴｈｒＣ、塩基配列を用いて作製した。１番ベクターは、形質転換バシラスサチリスがａｍｙＥ ｌｏｃｕｓにインテグレーション（ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ）され、クロラムフェニコールに抵抗性を有するようにデザインしたベクターを用いて生合成遺伝子を挿入した。すなわち、１番ベクターは、ミクロコクシンＰ２生合成遺伝子（ＢｃＴｃｌＥ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ）がクローニングされており、２番ベクターは１番ベクターにＢｃＴｃｌＯ遺伝子を追加挿入したものである。３番ベクターは、ＢｃＴｃｌＤ、ＢｃＴｃｌＣ遺伝子を挿入したベクターである。
【0156】
各遺伝子は、ＤＮＡから通常の重合酵素連鎖反応（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ、ＰＣＲ）方法により増幅し、Ｇｉｂｓｏｎ ａｓｓｅｍｂｌｙ（ＮＥＢ、Ｅｎｇｌａｎｄ）またはリガーゼを用いて遺伝子クローニングをした。これに使用したベクターは、ｐＵＣ１９をバシラスサチリス形質転換できるように変形したベクターであり、クローニングおよびベクターの変形に用いられたプライマーは、下記表１から表３に記載したとおりである。
【0157】
【表1】
【0158】
【表2】
【0159】
【表3】
【0160】
遺伝子クローニングのための宿主細胞として大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＤＨ５α（Ｅｎｚｙｎｏｍｉｃｓ、Ｋｏｒｅａ）を選択した。また、遺伝子は、シーケンシングにより突然変異がないことを確認した後、次の分子クローニングを進行した。これにより、バシラスからチオペプチドを生合成できるベクターを作製した。ｐＵＣ１９に新たに導入された遺伝子組換えプラスミドの模式図を図１、図２、および図３に示し、その塩基配列は配列表に記載した。
【0161】
３）形質転換バシラスにおける物質の合成および分析
図１、図２、および図３に示された３個のプラスミドは、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ １６８宿主に通常知られたプロトコルを用いて形質転換した。形質転換されたバシラスサチリスを、ルリア－ベルターニ（ＬＢ）培地で、クロラムフェニコール（Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ、Ｓｉｇｍａ、ＵＳＡ）１０ｕｇ／ｍｌ、生合成遺伝子の発現を誘導するためにキシロース（Ｘｙｌｏｓｅ、ＴＣＩ、Ｔｏｋｙｏ）を１％となるように添加し、７２時間および３７℃で、２００ｒｐｍを維持しながら培養した。生合成遺伝子により生産される代謝産物を確認するために、各プラスミドにより形質転換されたバシラスサチリス菌株をメタノールを用いて抽出し、ＵＰＬＣ－ＭＳ（Ｕｌｔｒａ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）により確認した。その結果を図４に示しており、検出された物質の質量を確認したところ、１番物質は１１４２．６、２番物質は１１５６．５、３番物質は１１５８．３の数値を示した。
図１、図２、および図３に示された３個のプラスミドは、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ １６８宿主に通常知られたプロトコルを用いて形質転換した。形質転換されたバシラスサチリスを、ルリア－ベルターニ（ＬＢ）培地で、クロラムフェニコール（Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ、Ｓｉｇｍａ、ＵＳＡ）１０ｕｇ／ｍｌ、生合成遺伝子の発現を誘導するためにキシロース（Ｘｙｌｏｓｅ、ＴＣＩ、Ｔｏｋｙｏ）を１％となるように添加し、７２時間および３７℃で、２００ｒｐｍを維持しながら培養した。生合成遺伝子により生産される代謝産物を確認するために、各プラスミドにより形質転換されたバシラスサチリス菌株をメタノールを用いて抽出し、ＵＰＬＣ－ＭＳ（Ｕｌｔｒａ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）により確認した。その結果を図４に示しており、検出された物質の質量を確認したところ、１番物質は１１４２．６、２番物質は１１５６．５、３番物質は１１５８．３の数値を示した。
【0162】
４）発現された代謝産物の分離精製
プラスミド１と２により形質転換されたバシラスから合成された物質をそれぞれ分離精製した。キシロースによる生合成遺伝子の発現後、細胞培養液２Ｌを４，０００ｘｇで２０分間遠心分離して細胞を得て、上澄み液を捨て、メタノール１００ｍＬを用いて再懸濁した後、２０分間常温で放置した。その後、１２，０００ｘｇで１５分間遠心分離して抽出液を確保した。
プラスミド１と２により形質転換されたバシラスから合成された物質をそれぞれ分離精製した。キシロースによる生合成遺伝子の発現後、細胞培養液２Ｌを４，０００ｘｇで２０分間遠心分離して細胞を得て、上澄み液を捨て、メタノール１００ｍＬを用いて再懸濁した後、２０分間常温で放置した。その後、１２，０００ｘｇで１５分間遠心分離して抽出液を確保した。
【0163】
確保したメタノール抽出液は、無水硫酸ナトリウムで脱水させて減圧濃縮させた。これを再びメタノール／ジクロロメタン（１／９（ｖ／ｖ））で溶かし、有機層を濾過した後、分取カラムクロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ－ＨＰＬＣ）（５％～７０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）：９５％～３０％水（０．１％ＴＦＡ））を用いて化合物を得た。得られた２種の物質の構造を立証するために、６００ＭＨｚ核磁気共鳴装置を用いて１Ｈ ＮＭＲスペクトルを次のように得た。
【0164】
図４に示された１番物質は白色の固体化合物として得られ、その１Ｈ ＮＭＲは天然物のミクロコクシンＰ２と同一であることを確認した。
【0165】
＜１番物質＞ １Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ ８．４０ － ８．３１ （ｍ， ４Ｈ）， ８．２６ （ｓ， １Ｈ）， ８．２１ （ｓ， １Ｈ）， ８．１４ （ｓ， １Ｈ）， ７．９５ （ｓ， １Ｈ）， ６．８３ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．６０ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２５ （ｄ， Ｊ ＝ ２．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７７ （ｄ， Ｊ ＝ ３．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６３ － ４．５６ （ｍ， １Ｈ）， ４．３０ （ｑｄ， Ｊ ＝ ６．３， ２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１０ （ｄ， Ｊ ＝ １３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６３ （ｄｑ， Ｊ ＝ １３．４， ６．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．１９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２０ － ２．１４ （ｍ， １Ｈ）， １．９３ （ｓ， １Ｈ） １．８５ （ａｐｐ． ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ６Ｈ）， １．５５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１８ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ４８Ｈ４８Ｎ１３Ｏ９Ｓ６に対して１１４２．２ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0166】
図４に示された２番物質は黄色の固体化合物として得られ、その１Ｈ ＮＭＲは天然物のＴｈｉｏｃｉｌｌｉｎ ＩＶと同一であることを確認した。
【0167】
＜２番物質＞ １Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．７１ （ｓ， １Ｈ）， ８．５７（ｓ， １Ｈ）， ８．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２６ （ｓ， １Ｈ）， ８．２０ （ｓ， １Ｈ）， ８．１７ － ８．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ８．０８ － ７．９９ （ｍ， ３Ｈ）， ７．９２ （ｓ， １Ｈ）， ７．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７４ （ｓ， １Ｈ）， ６．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４９ （ｑ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４０ （ｄ， Ｊ ＝ １０．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２５ （ｔ， Ｊ ＝ ９．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．９６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．８， ３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４９ （ｓ， １Ｈ）， ４．４６ （ｓ， １Ｈ）， ４．１５（ｍ， １Ｈ）， ２．８５（ｓ， ３Ｈ）， ２．５３ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １６．３， １３．４， ６．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．２８ （ｓ， ３Ｈ）， １．８６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ６Ｈ）， １．６９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．２０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．００ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ４９Ｈ４９Ｎ１３Ｏ９Ｓ６に対して１１５６．６．
【0168】
一方、図４に示された３番物質はＵＰＬＣ－ＭＳにより検出された質量が１１５８．３の数値を示し、ＹＭ－２６６１８３と質量が一致することを確認した。
【0169】
各プラスミドにより生合成された物質の構造を下記表４に記載した。
【0170】
【表4】
【0171】
前記表４の各化合物は、順にプラスミド１、２、および３により合成されたミクロコクシンＰ２、Ｔｈｉｏｃｉｌｌｉｎ ＩＶ、およびＹＭ－２６６１８３の構造を示す。
【0172】
プラスミド１には生合成遺伝子ＢｃＴｃｌＥ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐが挿入されており、それから天然物のミクロコクシンＰ２が合成された。プラスミド１はミクロコクシンＰ２の生合成が可能な遺伝子クラスターであり、プラスミド１を構成している生合成遺伝子により天然物のミクロコクシンＰ２骨格が合成可能であることが分かる。
【0173】
プラスミド２は、プラスミド１にＢｃＴｃｌＯ遺伝子が追加挿入されており、それからＴｈｉｏｃｉｌｌｉｎ ＩＶが得られた。すなわち、ミクロコクシンＰ２生合成遺伝子とＢｃＴｃｌＯ遺伝子をともに挿入する場合、選択的にＯ－ＭｅｔｈｙｌａｔｉｏｎされたＴｈｉｏｃｉｌｌｉｎ ＩＶを合成できることが分かる。
【0174】
プラスミド３は、プラスミド１にＢｃＴｃｌＤ、ＢｃＴｃｌＣ遺伝子が追加挿入されており、これにより、Ｖａｌｉｎｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｉｏｎされた物質、ＹＭ－２６６１８３が得られた。すなわち、ミクロコクシンＰ２遺伝子とＢｃＴｃｌＤ、Ｃ遺伝子をともに発現するバシラスを培養、分離精製することで、ＹＭ－２６６１８３化合物を得ることができることが分かる。
【0175】
各プラスミドの例示から確認できるように、生合成遺伝子は、ＴｃｌＯ、あるいはＴｃｌＤ、Ｃと天然物のミクロコクシンＰ２との組み合わせにより、巨大環の内部の生合成酵素による変形を調節することができる。
【0176】
［実施例３］ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物Ｃ－１の製造
ミクロコクシンＰ２（１４ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１５０μＬ）／水（１５０μＬ）の混合溶媒に入れ、水酸化リチウム一水和物（ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ）（４．０ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ）を添加した後、５０℃で１７時間撹拌した。撹拌完了後、前記反応混合物をジクロロメタンで薄め、１Ｍの塩酸溶液で洗浄した後、超溶媒（クロロホルム：プロパノール＝４：１（ｖ：ｖ））で抽出した。その後、無水硫酸ナトリウムを用いて脱水させた後、分取カラムクロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ－ＨＰＬＣ）（５％～７０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）：９５％～３０％水（０．１％ＴＦＡ））により分離し、薄い黄色の固体化合物Ｃ－１（７．４ｍｇ、６１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ， ｐｐｍ） δ ９．５５ （ｓ， １Ｈ）， ８．５９ - ８．５１ （ｍ， ２Ｈ）， ８．５０ - ８．３５ （ｍ， ３Ｈ）， ８．３５ - ８．２７ （ｍ， ２Ｈ）， ８．２８ - ８．１７ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１３ （ｓ， １Ｈ）， ７．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４７ （ｑ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２０ - ４．９６ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７３ - ４．６３ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２ - ４．３３ （ｍ， １Ｈ）， ４．０４ - ３．９６ （ｍ， １Ｈ）， １．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．３８ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．００ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２５．３， ６．１ Ｈｚ， ６Ｈ）， ０．８６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ４１Ｈ３７Ｎ１１Ｏ８Ｓ６に対して１００４．２ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ， ｐｐｍ） δ ９．５５ （ｓ， １Ｈ）， ８．５９ - ８．５１ （ｍ， ２Ｈ）， ８．５０ - ８．３５ （ｍ， ３Ｈ）， ８．３５ - ８．２７ （ｍ， ２Ｈ）， ８．２８ - ８．１７ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１３ （ｓ， １Ｈ）， ７．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４７ （ｑ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２０ - ４．９６ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７３ - ４．６３ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２ - ４．３３ （ｍ， １Ｈ）， ４．０４ - ３．９６ （ｍ， １Ｈ）， １．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．３８ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．００ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２５．３， ６．１ Ｈｚ， ６Ｈ）， ０．８６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）、 ＬＣＭＳ ： Ｃ４１Ｈ３７Ｎ１１Ｏ８Ｓ６に対して１００４．２ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【0177】
［実施例４］ミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物Ｃ－２の製造
前記実施例３のミクロコクシンＰ２の代わりにＴｈｉｏｃｉｌｌｉｎ ＩＶを使用したことを除き、実施例３と同様に反応させてカルボン酸化合物Ｃ－２を製造し、これをＬＣＭＳにより確認した。ＬＣＭＳ： Ｃ４２Ｈ４０Ｎ１１Ｏ８Ｓ６ １０１８．２ （Ｍ＋Ｈ＋）
【0178】
［実施例５］ミクロコクシン誘導体９の製造
前記実施例３で製造されたミクロコクシンに基づくカルボン酸化合物Ｃ－１（３０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（０．３ｍＬ）に溶かした後、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジアミド（７．５ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（５．３ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２１μＬ、０．１２ｍｍｏｌ、４ｅｑ）、アミン化合物ｚ－１（８．６ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を入れ、常温で１２時間撹拌した。撹拌完了後、この溶液をジクロロメタンで薄め、有機層を水で３回洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水させて減圧濃縮した。得られた残余物を（３～５％メタノール：９７～９５％ジクロロメタン）溶液でカラムクロマトグラフィーにより分離し、白色の固体のミクロコクシン誘導体９（１５．１ｍｇ、４１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．５８ （ｓ， １Ｈ）， ８．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ９．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２６ - ８．１５ （ｍ， ４Ｈ）， ８．１４ - ８．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ８．０１ - ７．９４ （ｍ， ４Ｈ）， ７．４０ （ｔ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４２ （ｑ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８８ （ｓ， １Ｈ）， ５．２９ - ５．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６４ （ｓ， １Ｈ）， ４．５０ （ｓ， １Ｈ）， ４．４０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９３ （ｓ， ２Ｈ）， ３．６３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３２ - ３．２２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９６ （ｓ， １Ｈ）， ２．５４ - ２．４２ （ｍ， １Ｈ）， １．９２ - １．６９ （ｍ， ７Ｈ）， １．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．２３ - １．１６ （ｍ， ５Ｈ）， １．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９７ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ３Ｈ） 、 ＬＣＭＳ ： Ｃ５１Ｈ５１Ｎ１５Ｏ１０Ｓ６に対して１２２６．２３ （Ｍ＋Ｈ＋）．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．５８ （ｓ， １Ｈ）， ８．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ９．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２６ - ８．１５ （ｍ， ４Ｈ）， ８．１４ - ８．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ８．０１ - ７．９４ （ｍ， ４Ｈ）， ７．４０ （ｔ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４２ （ｑ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８８ （ｓ， １Ｈ）， ５．２９ - ５．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６４ （ｓ， １Ｈ）， ４．５０ （ｓ， １Ｈ）， ４．４０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９３ （ｓ， ２Ｈ）， ３．６３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３２ - ３．２２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９６ （ｓ， １Ｈ）， ２．５４ - ２．４２ （ｍ， １Ｈ）， １．９２ - １．６９ （ｍ， ７Ｈ）， １．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．２３ - １．１６ （ｍ， ５Ｈ）， １．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９７ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ３Ｈ） 、 ＬＣＭＳ ： Ｃ５１Ｈ５１Ｎ１５Ｏ１０Ｓ６に対して１２２６．２３ （Ｍ＋Ｈ＋）．
【配列表フリーテキスト】
【0179】
配列表は別途ファイルで添付している。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【配列表】
【国際調査報告】