特表 2024-523885 抗ＨＥＲ３抗体、それを含有する抗体薬物複合体及びそれらの用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-02

(54)【発明の名称】抗ＨＥＲ３抗体、それを含有する抗体薬物複合体及びそれらの用途

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20240625BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240625BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240625BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240625BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240625BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240625BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240625BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240625BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240625BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240625BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240625BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240625BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240625BHJP

   A61K 38/05 20060101ALI20240625BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61P35/00

A61K39/395 E

A61K39/395 T

A61P43/00 121

A61K45/00

A61K39/395 C

A61K39/395 L

A61K47/68

A61K38/05

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023577514

(86)(22)【出願日】2022-06-15

(85)【翻訳文提出日】2024-02-13

(86)【国際出願番号】 CN2022098929

(87)【国際公開番号】W WO2022262772

(87)【国際公開日】2022-12-22

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/099998

(32)【優先日】2021-06-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522354115

【氏名又は名称】ベイジン・シノタウ・バイオ－ファーマシューティカルズ・テクノロジー・カンパニー，リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(72)【発明者】

【氏名】ジョン，シャオヤン

(72)【発明者】

【氏名】リー，ジョー

(72)【発明者】

【氏名】ジュー，ジエ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065AA92Y

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC27

4C076EE41

4C076EE59

4C084AA01

4C084AA02

4C084AA19

4C084BA14

4C084BA23

4C084BA32

4C084NA05

4C084NA13

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC751

4C085AA13

4C085AA16

4C085AA26

4C085AA27

4C085BB11

4C085BB36

4C085CC03

4C085CC05

4C085CC21

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE03

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA71

4H045BA72

4H045DA76

4H045DA83

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

抗ＨＥＲ３抗体、又は抗ＨＥＲ３抗体を含有する抗体薬物複合体（ＡＤＣ）が提供される。また、ＨＥＲ３発現癌の治療における抗体又はＡＤＣの用途も提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片であって、前記ＶＨが、
配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ-Ｈ１と、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ-Ｈ２と、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ-Ｈ３とを含む、抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片。

【請求項2】

前記ＶＨが、配列番号１５のＣＤＲ-Ｈ１と、配列番号１７のＣＤＲ-Ｈ２と、配列番号１９のＣＤＲ-Ｈ３とを含む、請求項１に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片。

【請求項3】

軽鎖可変領域（ＶＬ）を更に含み、前記ＶＬが、
配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ-Ｌ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ-Ｌ２と、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ-Ｌ３とを含む、請求項１又は２に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片。

【請求項4】

前記ＶＬが、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ１と、配列番号７のＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号９のＣＤＲ－Ｌ３とを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片。

【請求項5】

前記ＶＨが、配列番号１３のリーダー配列を含む若しくは含まない配列番号１２のアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片。

【請求項6】

前記ＶＬが、配列番号３のリーダー配列を含む若しくは含まない配列番号２のアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片。

【請求項7】

前記抗体が、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体である、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片。

【請求項8】

前記抗体の前記重鎖がＩｇＧ１型である、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片。

【請求項9】

前記抗体がヒト化抗体であり、前記重鎖が、配列番号２１、２５若しくは２７のアミノ酸配列、又はそれらと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片。

【請求項10】

前記抗体がヒト化抗体であり、前記軽鎖が、配列番号２３のアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片。

【請求項11】

前記ＨＥＲ３がヒト又はサルのＨＥＲ３である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片。

【請求項12】

前記抗ＨＥＲ３抗体が、ＮＲＧ１によって誘導される前記ＨＥＲ３のリン酸化を阻害する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片。

【請求項13】

前記抗ＨＥＲ３抗体が、１ｎＭ未満のＥＣ_５０でヒト又はサルのＨＥＲ３に結合する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片。

【請求項14】

前記抗ＨＥＲ３抗体が、前記ＨＥＲ３に結合すると内在化活性を有する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片。

【請求項15】

請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体若しくは抗原結合断片のＶＨ、及び／又は請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体若しくは抗原結合断片のＶＬをコードするポリヌクレオチド酸配列を含む、単離された核酸。

【請求項16】

前記単離された核酸が、配列番号１、１１、２２、２４、２６及び２８から選択される、請求項１５に記載の単離された核酸。

【請求項17】

請求項１５又は１６に記載の単離された核酸を含むベクター。

【請求項18】

請求項１５若しくは１６に記載の単離された核酸、又は請求項１７に記載のベクターを含む宿主細胞。

【請求項19】

請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片を発現する宿主細胞。

【請求項20】

化学部分に結合した請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片を含む、抗体複合体。

【請求項21】

前記抗ＨＥＲ３抗体又は抗原結合断片が、リンカーを介して前記化学部分に結合する、請求項２０に記載の抗体複合体。

【請求項22】

前記リンカーが酵素切断可能である、請求項２０又は２１に記載の抗体複合体。

【請求項23】

前記リンカーがＶａｌ-Ｃｉｔ部分を含む、請求項２０～２２のいずれか一項に記載の抗体複合体。

【請求項24】

前記抗体複合体が抗体薬物複合体（ＡＤＣ）である、請求項２０～２３のいずれか一項に記載の抗体複合体。

【請求項25】

前記化学部分が放射性同位体、化学療法剤、又は細胞毒性薬である、請求項２０～２４のいずれか一項に記載の抗体複合体。

【請求項26】

前記細胞毒性薬が毒素である、請求項２０～２５のいずれか一項に記載の抗体複合体。

【請求項27】

前記毒素が、オーリスタチンＥ、オーリスタチンＦ、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦから選択される、請求項２０～２６のいずれか一項に記載の抗体複合体。

【請求項28】

請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体若しくは抗原結合断片又は請求項２０～２７のいずれか一項に記載の抗体複合体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。

【請求項29】

前記抗体複合体が１種以上の他の抗癌剤を更に含む、請求項２８に記載の医薬組成物。

【請求項30】

癌治療用の薬剤の製造における、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体若しくは抗原結合断片又は請求項２０～２７のいずれか一項に記載の抗体複合体の用途。

【請求項31】

前記癌が前記ＨＥＲ３を発現する、請求項３０に記載の用途。

【請求項32】

前記癌が胃癌又は大腸癌である、請求項３０又は３１に記載の用途。

【請求項33】

癌の治療に使用するための、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体若しくは抗原結合断片又は請求項２０～２７のいずれか一項に記載の抗体複合体。

【請求項34】

前記癌が前記ＨＥＲ３を発現する、請求項３３に記載の癌の治療に使用するための抗ＨＥＲ３抗体若しくは抗原結合断片又は抗体複合体。

【請求項35】

前記癌が胃癌又は大腸癌である、請求項３３又は３４に記載の癌の治療に使用するための抗ＨＥＲ３抗体若しくは抗原結合断片又は抗体複合体。

【請求項36】

被験者の癌を治療する方法であって、治療有効量の請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体若しくは抗原結合断片、請求項２０～２７のいずれか一項に記載の抗体複合体、又は請求項２８若しくは２９に記載の医薬組成物を前記被験者に投与することを含む、方法。

【請求項37】

前記癌が前記ＨＥＲ３を発現する、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記癌が胃癌又は大腸癌である、請求項３６又は３７に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年６月１５日に出願されたＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／０９９９９８の優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は、抗ＨＥＲ３抗体に関する。本開示はまた、抗ＨＥＲ３抗体を含有する抗体薬物複合体、及びＨＥＲ３発現癌の治療におけるそれらの用途に関する。

【背景技術】

【0003】

ＨＥＲ３はＥＲＢＢファミリーのメンバーであり、細胞増殖、腫瘍転移、及び薬物耐性において重要な役割を果たす。ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２を標的とする薬物は、多くの癌を軽減する上で大きな臨床効果を示しているが、癌治療用の抗ＨＥＲ３抗体を開発するこれまでの努力は何度も失敗に終わり、このことは、ＨＥＲ３とそれが関連する経路に単独で取り組むだけでは、腫瘍増殖を阻害するのに十分ではない可能性があることを示唆している。この仮説と一致して、ＨＥＲ３を標的とするＡＤＣであるＵ３－１４０２は、乳房及びＮＳＣＬＣを対象とした初期段階の臨床試験で有望な結果を示している。更に、ＨＥＲ３とＨＥＲ２の両方を操作する二重特異性抗体は、一部の富化集団集団において疾患バイオマーカーを有意に減少させる。最新の臨床進歩は、追加のメカニズムがあれば、ＨＥＲ３が依然として有望な腫瘍標的であることを示唆している。

【発明の概要】

【0004】

一態様では、本発明は、重鎖可変領域（ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ、ＶＨ）を含む抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片を提供し、ＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ-Ｈ１と、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ-Ｈ２と、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ-Ｈ３とを含む。

【0005】

いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１５のＣＤＲ-Ｈ１と、配列番号１７のＣＤＲ-Ｈ２と、配列番号１９のＣＤＲ-Ｈ３とを含む。

【0006】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖可変領域（ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ、ＶＬ）を更に含み、ＶＬは、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ-Ｌ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ-Ｌ２と、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ-Ｌ３とを含む。

【0007】

いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ１と、配列番号７のＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号９のＣＤＲ－Ｌ３とを含む。

【0008】

いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１３のリーダー配列を含む若しくは含まない配列番号１２のアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のアミノ酸配列を含む。

【0009】

いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号３のリーダー配列を含む若しくは含まない配列番号２のアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のアミノ酸配列を含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ３抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体である。

【0011】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ３抗体の重鎖はＩｇＧ１型である。

【0012】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ３抗体はヒト化抗体であり、重鎖は、配列番号２１、２５若しくは２７のアミノ酸配列、又はそれらと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のアミノ酸配列を含む。

【0013】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ３抗体はヒト化抗体であり、軽鎖は、配列番号２３のアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のアミノ酸配列を含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、ＨＥＲ３はヒト又はサルのＨＥＲ３である。

【0015】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ３抗体は、ＮＲＧ１によって誘導されるＨＥＲ３のリン酸化を阻害する。

【0016】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ３抗体は、１ｎＭ未満のＥＣ_５０でヒト又はサルのＨＥＲ３に結合する。

【0017】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ３抗体は、ＨＥＲ３に結合すると内在化活性を有する。

【0018】

別の態様では、本開示は、上記のＶＨ及び／又は上記のＶＬをコードするポリヌクレオチド酸配列を含む単離された核酸を提供する。

【0019】

いくつかの実施形態では、単離された核酸は、配列番号１、１１、２２、２４、２６及び２８から選択される。

【0020】

別の態様では、本開示は、単離された核酸を含むベクターを提供する。

【0021】

別の態様では、本開示は、単離された核酸又はベクターを含む宿主細胞を提供する。

【0022】

別の態様では、本開示は、抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片を発現する宿主細胞を提供する。

【0023】

別の態様では、本開示は、化学部分に結合した抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片を含む抗体複合体を提供する。

【0024】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は、リンカーを介して化学部分に結合している。

【0025】

いくつかの実施形態では、リンカーは酵素切断可能である。

【0026】

いくつかの実施形態では、リンカーはＶａｌ-Ｃｉｔ部分を含む。

【0027】

いくつかの実施形態では、抗体複合体は抗体薬物複合体（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、ＡＤＣ）である。

【0028】

いくつかの実施形態では、化学部分は、放射性同位体、化学療法剤、又は細胞毒性薬である。

【0029】

いくつかの実施形態では、細胞毒性薬は毒素である。

【0030】

いくつかの実施形態では、毒素は、オーリスタチンＥ、オーリスタチンＦ、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦから選択される。

【0031】

別の態様では、本開示は、抗ＨＥＲ３抗体若しくはその抗原結合断片又は抗体複合体と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。

【0032】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１種以上の他の抗癌剤を更に含む。

【0033】

別の態様では、本開示は、癌治療用の薬剤の製造における、抗ＨＥＲ３抗体若しくはその抗原結合断片又は抗体複合体の用途を提供する。

【0034】

いくつかの実施形態では、癌はＨＥＲ３を発現する。

【0035】

いくつかの実施形態では、癌は胃癌又は大腸癌である。

【0036】

別の態様では、本開示は、被験者の癌を治療する方法を提供し、この方法は、治療有効量の抗ＨＥＲ３抗体若しくはその抗原結合断片、抗体複合体、又は医薬組成物を被験者に投与することを含む。

【0037】

いくつかの実施形態では、癌はＨＥＲ３を発現する。

【0038】

いくつかの実施形態では、癌は胃癌又は大腸癌である。

【図面の簡単な説明】

【0039】

【図1】マウス３Ｆ８がＳＰ２／０－ＨＥＲ３細胞に特異的に結合することを示す図である。

【図2】ＥＬＩＳＡで測定した、マウス３Ｆ８とヒトＨＥＲ３、ＨＥＲ２、及びＥＧＦＲとの結合親和性を示す図である。

【図3】マウス３Ｆ８が、ＥＬＩＳＡで測定した同様の効力でヒトとサルの両方のＨＥＲ３を認識することを示す図である。

【図4】マウス３Ｆ８がＮＲＧ１誘導性リン酸化ＨＥＲ３を阻害することを示す図である。

【図5】マウス３Ｆ８が様々な表面レベルのＨＥＲ３の細胞に急速に取り込まれることを示す図である。

【図6】抗ＨＥＲ３抗体が、ＢＴ４７４皮下異種移植モデルにおける腫瘍増殖を効率的に阻害することを示す図である。

【図7】胃ＰＤＸモデルＧＡＳ０７８の［^８９Ｚｒ］Ｚｒ－ｃｈ３Ｆ８イメージングを示す図である。

【図8】６つのＰＤＸモデルにおける代表的な［^８９Ｚｒ］Ｚｒ－ｃｈ３Ｆ８イメージングを示す図である。

【図9】ｃｈ３Ｆ８－ＭＭＡＥがｃｈ３Ｆ８と同様の結合親和性を維持することを示す図である。

【図10】複数の細胞株におけるｃｈ３Ｆ８－ＭＭＡＥの細胞毒性を示す図である。

【図11】ｃｈ３Ｆ８－ＭＭＡＥが胃モデルＧＡＳ０７８における腫瘍増殖を阻害することを示す図である。

【図12A】ｈｕ３Ｆ８が熱、酸及び繰り返し凍結融解のストレス試験後に結合親和性を維持することを示す図である。ｈｕ３Ｆ８の３つのクローンをｐＨ３．５で０、２、４及び６時間インキュベートし、次にＥＬＩＳＡアッセイに進んで結合親和性を測定した図である。

【図12B】ｈｕ３Ｆ８が熱、酸及び繰り返し凍結融解のストレス試験後に結合親和性を維持することを示す図である。ｈｕ３Ｆ８の３つのクローンを４０℃で様々な日数にわたってインキュベートし、次にＥＬＩＳＡアッセイに進んで結合親和性を測定した図である。

【図12C】ｈｕ３Ｆ８が熱、酸及び繰り返し凍結融解のストレス試験後に結合親和性を維持することを示す図である。ｈｕ３Ｆ８の３つのクローンを３又は５サイクル凍結融解し、次にＥＬＩＳＡアッセイに進んで結合親和性を測定した図である。

【図13A】ｈｕ３Ｆ８-ＭＭＡＥが用量依存的に腫瘍増殖を阻害したことを示す図である。

【図13B】ｈｕ３Ｆ８-ＭＭＡＥが体重にほとんど影響を及ぼさないことを示す図である。

【図14】ｈｕ３Ｆ８-ＭＭＡＥが、胃ＰＤＸモデルＧＡＳ０７８における腫瘍増殖を１０ｍｇ／ｋｇで単回の注射で阻害することを示す図である。

【図15】ｈｕ３Ｆ８-ＭＭＡＥが６ｍｇ／ｋｇで胃ＰＤＸモデルＧＡＳ０７８における腫瘍増殖を阻害することを示す図である。

【図16】ｈｕ３Ｆ８-ＭＭＡＥが大腸ＰＤＸモデルＣＳ２２６における腫瘍増殖を阻害することを示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0040】

別段の定義がない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語は、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様又は同等の任意の方法、装置及び材料を本発明の実施に使用することができる。以下の定義は、本明細書で使用される特定の用語の理解を容易にするために提供されるものであり、本開示の範囲を限定することを意図するものではない。

【0041】

冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、本明細書では、冠詞の文法的対象の１つ又は複数（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「要素」は、１つの要素又は複数の要素を意味する。

【0042】

本明細書で使用される「及び／又は」という用語は、他方の有無に関わらず、２つの指定された特徴又は構成要素のそれぞれの具体的な開示として解釈されるべきである。したがって、「Ａ及び／又はＢ」などの語句で使用される「及び／又は」という用語は、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。

【0043】

「ヒト上皮成長因子受容体３（Ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ３、ＨＥＲ３）」は、受容体チロシンプロテインキナーゼｅｒｂＢ－３（ＥＲＢＢ３）とも呼ばれ、ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢファミリーのメンバーである。他のＥＲＢＢファミリーのメンバーであるＨＥＲ２やＥＧＦＲとは異なり、ＨＥＲ３自体はキナーゼ活性を有していない。したがって、ＨＥＲ３は、下流の活性を誘発するために、そのキナーゼ活性メンバーであるＥＧＦＲ又はＨＥＲ２のいずれかとヘテロ二量体として会合する必要がある。ＨＥＲ３は、その天然リガンドＮＲＧ１に結合すると、立体構造変化、ヘテロ二量体化、及びリン酸化を経て、ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、及びＰＬＣγを活性化するシグナル伝達を行う。同時に、ＨＥＲ３はまた、高レベルのＨＥＲ２の存在下でリガンド非依存性方法でその生物学的活性を発揮する。ＨＥＲ３は、細胞の成長と増殖、胚発生、及び腫瘍形成において重要な役割を果たす。ＨＥＲ３ノックアウトマウスは発育が著しく低下しており、胎生１３．５日目には致死的になる。ＨＥＲ３はまた、様々なタンパク質及び適応症を標的とする薬物の薬物耐性にも寄与する。

【0044】

「抗体」という用語は、一般に、４つのポリペプチド鎖、すなわち２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖で構成される任意の免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ、Ｉｇ）分子、又はＩｇ分子の必須のエピトープ結合特徴を保持するその任意の機能的断片（抗原結合断片）を指す。全長抗体では、各重鎖は重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶＨと略す）及び重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は一般に、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３の３つのドメインで構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと略す）及び軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は１つのドメイン、ＣＬで構成される。ＶＨ及びＶＬ領域は更に、フレームワーク領域（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｇｉｏｎ、ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ、ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に細分することができる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順序で配置されている３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。したがって、重鎖のＣＤＲは、重鎖のアミノ末端側からそれぞれＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３と呼ばれ、一方、軽鎖のＣＤＲは、軽鎖のアミノ末端側からそれぞれＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３と呼ばれる。免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスであり得る。広い意味では、「抗体」という用語は、４つのポリペプチド鎖を有する免疫グロブリン分子に由来しないｓｃＦｖ又はｓｄＡｂを更に指す。「抗体」という用語は更に、抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片を含む任意の多重特異性抗体（特に二重特異性抗体）を指す。

【0045】

抗体又は抗体の機能的断片は、１つ以上の修飾アミノ酸残基を有し得る。例えば、抗体の重鎖又は軽鎖は、Ｎ結合型グリコシル化、Ｏ結合型グリコシル化、Ｎ末端プロセシング、Ｃ末端プロセシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末端へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末端グルタミン又はＮ末端グルタミン酸のピログルタミン酸への変換、及びカルボキシル基からの１つ又は２つのアミノ酸の欠失からなる群から選択される１つ又は２つ以上の修飾を受けている。

【0046】

「抗原結合断片」は、例えばＦ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂなどの抗体の一部である。全長抗体の抗原結合断片は、全長抗体の標的特異性を保持する。したがって、ｓｃＦｖ（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｃｈａｉｎ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ、一本鎖可変鎖断片）などの組換え機能的抗体断片は、ｍＡｂに基づく治療薬の代替として治療薬を開発するために使用されてきた。ｓｃＦｖ断片（約２５ｋＤａ）は、２つの可変ドメイン、すなわちＶＨ及びＶＬからなる。自然に、ＶＨドメインとＶＬドメインは疎水性相互作用を介して非共有結合的に会合し、解離する傾向がある。しかしながら、ドメインを親水性の柔軟なリンカーで連結してｓｃＦｖを作製することにより、安定した断片を操作することができる。

【0047】

本明細書で使用される場合、「単一ドメイン抗体」（ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ、ｓｄＡｂ）という用語は、当該技術分野におけるその一般的な意味を有し、そして、ラクダ科哺乳動物で見られ、天然に軽鎖を欠いているタイプの抗体の単一重鎖可変ドメインを指す。このような単一ドメイン抗体は、Ｖ_ＨＨ又は「ナノボディ」とも呼ばれる。単一ドメイン抗体のアミノ酸配列及び構造は、４つのフレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）と３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）で構成されると考えることができる。したがって、単一ドメイン抗体は、一般構造：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を有するアミノ酸配列として定義することができ、これは、可変ドメインＶＨ又はＶＬに類似している。従来の抗体又は他の抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）を使用することに比べて、単一の抗原結合タンパク質として、又はより大きなタンパク質若しくはポリペプチドにおける抗原結合ドメインとしてｓｄＡｂを使用すると、多くの重要な利点が得られる。ｓｄＡｂの利点には、高い親和性及び高い選択性で抗原に結合するのに単一のドメインのみが必要であること、ｓｄＡｂは変性剤又は熱、ｐＨ、及びプロテアーゼを含む条件に対して安定性が高いこと、及び、ｓｄＡｂは従来の抗体ではアクセスできない標的及びエピトープにアクセスすることができることが含まれる。通常、ｓｄＡｂはラマのようなラクダ科動物で産生されるが、当技術分野で周知の技術を使用して合成的に生成することもできる。

【0048】

「キメラ抗体」という用語は、マウス由来の可変領域、すなわち結合領域と、異なる源又は種（例えば、ヒト）に由来する定常領域の少なくとも一部とを含む抗体を指し、通常は組換えＤＮＡ技術によって調製される。マウス可変領域及びヒト定常領域を含むキメラ抗体が特に好ましい。このようなマウス／ヒトキメラ抗体は通常、マウス免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメント及びヒト免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントを含む発現された免疫グロブリン遺伝子の産物である。キメラ抗体を産生する方法には、現在当技術分野で周知の従来の組換えＤＮＡ及び遺伝子トランスフェクション技術が含まれる。

【0049】

「ヒト化抗体」という用語は、フレームワーク又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が、親免疫グロブリンの特異性と比較して異なる特異性を有する免疫グロブリンのＣＤＲを含むように修飾された抗体を指す。好ましい実施形態では、ＶＨ及びＶＬのＣＤＲをヒト抗体のフレームワーク領域に移植して「ヒト化抗体」を調製する。重鎖及び軽鎖可変フレームワーク領域は、同じ又は異なるヒト抗体配列に由来することができる。ヒト抗体配列は、天然に存在するヒト抗体の配列であり得る。必要に応じて、フレームワーク領域を更なる突然変異によって修飾することができる。特に好ましいＣＤＲは、キメラ抗体について上記で述べた抗原を認識する配列を表すＣＤＲに対応する。好ましくは、そのようなヒト化バージョンは、ヒト定常領域とキメラ化される。本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」という用語はまた、例えば、「クラススイッチ」、すなわち、Ｆｃ部分の変化又は突然変異（例えば、ＩｇＧ１からＩｇＧ４へ、及び／又はＩｇＧ１／ＩｇＧ４突然変異）によって、特にＣ１ｑ結合及び／又はＦｃＲ結合に関して、本発明による特性を生じるように定常領域において修飾されたような抗体を含む。

【0050】

本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。ヒト抗体はまた、免疫化により、内因性免疫グロブリンの産生がない状態でヒト抗体の完全なレパートリー又は選択されたヒト抗体を産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）において産生することもできる。このような生殖系列変異マウスにヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイを導入すると、抗原チャレンジ時にヒト抗体が産生される。ヒト抗体はファージディスプレイライブラリー中で産生することもできる。

【0051】

本明細書で使用される場合、「抗ＨＥＲ３抗体」という用語は、ヒトＨＥＲ３抗原に特異的に結合する抗体を指す。目的の抗原、すなわちＨＥＲ３に「特異的に結合する」抗体は、抗体が抗原を発現する細胞を標的とするのに有用であるように、十分な親和性でその抗原に結合することができる抗体である。結合親和性は、表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、ＧＥ－Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）などの標準的な結合アッセイを用いて測定することができる。

【0052】

ペプチド又は抗体配列に関する「配列同一性」という用語は、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して最大配列同一性パーセントを達成した後、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮せずに、参照ペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ又はＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当技術分野の技術の範囲内である様々な方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含めて、アライメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。

【0053】

「内在化（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）」という用語は、癌細胞の表面におけるＨＥＲ３抗原への本発明の抗体の結合に関連して使用される場合、受容体媒介エンドサイトーシス、ミクロピノサイトーシス、食作用又は他の類似の細胞取り込み及び／又は輸送経路による、外部環境からの抗体抗原複合体の急速な取り込みを指す。したがって、一実施形態では、本発明の抗体の「内在化」は、原形質膜の折り込み及び小胞形成を含むメカニズムによる外部環境からの抗体の取り込みに関する。本発明の抗体が放射性同位体、蛍光団又は細胞毒素などの化学部分に結合される場合、化学部分は本発明の抗体とともにＨＥＲ３発現細胞に内在化することができる。抗体が内在化活性を有するか否かは、当業者に一般的に知られている方法により確認することができ、例えば、標識物質結合抗ＨＥＲ３抗体とＨＥＲ３発現細胞とを接触させ、標識物質（例えば、放射性同位体、蛍光団、又は蛍光タンパク質）が細胞内に取り込まれているか否かを確認する方法、又は細胞毒性物質結合抗ＨＥＲ３抗体とＨＥＲ３発現細胞とを接触させ、ＨＥＲ３発現細胞の死滅が誘導されているか否かを確認する方法により確認することができる。より具体的には、抗ＨＥＲ抗体の内在化活性は、例えば実施例に記載の方法により測定することができる。内在化活性を有する抗ＨＥＲ３抗体を、例えば、細胞毒性物質と結合させて、後述する抗癌剤などの医薬組成物として使用することができる。

【0054】

本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、目的のタンパク質、タンパク質断片、又はペプチドを生成するように操作することができる細胞系を指す。宿主細胞としては、限定されないが、培養細胞、例えば、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＮＳＯ、ＳＰ２／０、ＹＢ２／０などのげっ歯類（ラット、マウス、モルモット、若しくはハムスター）由来の哺乳動物培養細胞、又はヒト組織若しくはハイブリドーマ細胞、酵母細胞、及び昆虫細胞、並びにトランスジェニック動物若しくは培養組織内に含まれる細胞が挙げられる。この用語は、特定の対象の細胞だけでなく、そのような細胞の子孫も包含する。突然変異又は環境の影響により、後続の世代で特定の修飾が発生する可能性があるため、そのような子孫は親細胞と同一ではない可能性があるが、それでも「宿主細胞」という用語の範囲内に含まれる。

【0055】

本明細書で使用される場合、「核酸」という用語は、ホスホジエステル結合を介して結合したヌクレオチド単位（リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、関連する天然に存在する構造変異体、及びそれらの合成非天然類似体）で構成されるポリマー、関連する天然に存在する構造変異体、及びそれらの合成非天然類似体を指す。したがって、この用語には、ヌクレオチド及びそれらの間の結合が、例えば、限定されないが、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラル－メチルホスホネート、２－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、ペプチド－核酸（ｐｅｐｔｉｄｅ－ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ、ＰＮＡ）などの非天然合成類似体を含むヌクレオチドポリマーが含まれる。このようなポリヌクレオチドは、例えば自動ＤＮＡ合成装置を使用して合成することができる。ヌクレオチド配列がＤＮＡ配列（すなわち、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ）で表される場合、これには「Ｕ」が「Ｔ」を置換するＲＮＡ配列（すなわち、Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃ）も含まれることが理解されるであろう。

【0056】

本明細書で使用される場合、「単離された核酸」という用語は、精製状態を指し、そのような文脈では、核酸が、タンパク質、脂質、炭水化物のような他の生物学的分子、又は細胞残屑及び増殖培地のような他の物質を実質的に含まないことを意味する。

【0057】

「ＥＣ_５０」という用語は、半数効果濃度としても知られ、例えばＦＡＣＳ又はＥＬＩＳＡによる試験において半最大応答（ｈａｌｆ－ｍａｘｉｍａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を与える抗体又はその抗原結合部分の濃度を指す。

【0058】

本明細書で使用される場合、「抗体複合体」という用語は、抗体又はその抗原結合断片が、放射性同位体、化学療法剤及び毒素などの他の化学部分に結合していることを指す。いくつかの実施形態では、化学部分は同位体又は蛍光団であり、したがって、結合抗体を使用して、ＨＥＲ３を発現する細胞、組織又は器官（腫瘍を含む）をｉｎ ｖｉｖｏイメージングを通じて示すことができる。いくつかの実施形態では、抗体複合体は抗体薬物複合体（ＡＤＣ）である。

【0059】

本明細書において同義的に使用される「抗ＨＥＲ３抗体薬物複合体」及び「抗ＨＥＲ３ ＡＤＣ」という用語は、ＨＥＲ３に特異的に結合し、リンカーを介して細胞毒性薬（例えば、オーリスタチン）に結合している抗体を含む抗体薬物複合体を指す。一般に、抗体（例えば、抗ＨＥＲ３抗体）は、ＡＤＣ分子となるように修飾された後、その標的抗原に対する結合親和性などの生物学的活性を保持することができる。「細胞毒性薬」という用語は、細胞の発現活性、細胞の機能を阻害若しくは防止し、及び／又は細胞の破壊を引き起こす物質を指す。この用語は、放射性同位体、化学療法剤、及び細菌、真菌、植物又は動物由来の小分子毒素又は酵素活性毒素などの毒素（その断片及び／又は変異体を含む）を含むことが意図される。化学療法剤は当技術分野で周知であり、限定されてないが、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（ダウノマイシン、ルビドマイシン）、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、及びバルルビシン）、ミトキサントロン、及びピキサントロンなどのアントラセンジオン（アントラキノン）；白金系薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、トリプラチン、及びリポプラチン）；タモキシフェン及びその代謝産物、例えば４－ヒドロキシタモキシフェン（アフィモキシフェン）及びＮ－デスメチル－４－ヒドロキシタモキシフェン（エンドキシフェン）；パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル、カバジタキセル、１０－デアセチルバッカチンなどのタキサン；アルキル化剤（例えば、メクロレタミン（ＨＮ２）、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン（Ｌ－サルコリシン）、及びクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード）；エチレンイミン及びメチルメラミン（例えば、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、ブスルファンなどのアルキルスルホネート、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＬＪ）、セムスチン（メチル－ＣＣＮ－Ｕ）、及びストレプトゾエイン（ストレプトゾトシン）などのニトロソウレア、並びにデカルバジン（ＤＴＩＣ、ジメチルトリアゼノイミダゾールカルボキサミド）などのトリアゼン）；代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート（アメトプテリン）などの葉酸類似体、フルオロウラシル（５－フルオロウラシル、５－ＦＵ）、フロクスウリジン（フルオロデオキシウリジン、ＦＵｄＲ）、及びシタラビン（シトシンアラビノシド）などのピリミジン類似体、並びに、メルカプトプリン（６－メルカプトプリン、６－ＭＰ）、チオグアニン（６－チオグアニン、６－ＴＧ）、及びペントスタチン（２’－デオキシコホニシン）などのプリン類似体及び関連阻害剤）；天然物（例えば、ビンブラスチン（ＶＬＢ）及びビンクリスチンなどのビンカアルカロイド、エトポシド及びテニポシドなどのエピポドフィロトキシン、並びにダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、及びマイトマイシン（マイトマイシンＱ）などの抗生物質）；Ｌ－アスパラギナーゼなどの酵素；インターフェロンαなどの生物学的反応修飾物質；ヒドロキシ尿素などの置換尿素；プロカルバジン（Ｎ－メチルヒドラジン、ＭＩＨ）などのメチルヒドラジン誘導体；ミトタン及びアミノグルテチミドなどの副腎皮質抑制剤；それらの類似体、それらの誘導体、及びそれらの組み合わせが挙げられる。細胞毒性薬の例としては、オーリスタチン（例えば、オーリスタチンＥ、オーリスタチンＦ、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）、オーレオマイシン、メイタンシノイド、リシン、リシンＡ鎖、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、タキソール、シスプラチン、ｃｃ１０６５、臭化エチジウム、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｅｘｏｔｏｘｉｎ、ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α－サルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、クリシン、クロチン、カリケアマイシン、サパオナリアオフィシナリス阻害剤、グルココルチコイド及び他の化学療法剤、並びに放射性同位体が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「オーリスタチン」という用語は、抗有糸分裂剤のファミリーを指す。オーリスタチン誘導体もまた、「オーリスタチン」という用語の定義内に含まれる。オーリスタチンの例としては、オーリスタチンＥ（ＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、及びドラスタチンの合成類似体が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、抗ＨＥＲ３抗体薬物複合体は抗ＨＥＲ３抗体-ＭＭＡＥ（例えば、ｃｈ３Ｆ８-ＭＭＡＥ又はｈｕ３Ｆ８-ＭＭＡＥ）である。いくつかの実施形態では、リンカーは、抗体のヒンジ領域におけるＣｙｓ残基に結合される。

【0060】

「医薬組成物」という用語は、活性成分の生物学的活性を有効にするような形態にある製剤を指し、したがって治療用途のために被験者に投与することができる。

【0061】

「薬学的に許容される担体」という用語は、本発明の抗体又はＡＤＣなどの活性成分を送達するための製剤中での使用に適した任意の不活性物質を指す。担体は、結合剤、コーティング、崩壊剤、充填剤又は希釈剤、防腐剤（抗酸化剤、抗菌剤、又は抗真菌剤など）、甘味料、吸収遅延剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤などであり得る。適切な薬学的に許容される担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、デキストロース、植物油（オリーブ油など）、生理食塩水、緩衝液、緩衝生理食塩水、及び等張剤（糖、多価アルコール、ソルビトール、及び塩化ナトリウムなど）が挙げられる。

【0062】

「有効量」又は「治療有効量」という用語は、有益な結果又は所望の結果をもたらすのに十分な活性薬剤の量を指す。治療有効量は、治療される被験者及び疾患状態、被験者の体重及び年齢、疾患状態の重症度、投与方法などのうちの１つ以上に応じて変化し得るが、これは、当業者であれば容易に決定することができる。具体的な用量は、従うべき投与計画、他の治療薬と組み合わせて投与するか否か、投与のタイミング、画像化すべき組織、及びそれを運ぶ物理的送達システムのうちの１つ以上に応じて変化し得る。

【0063】

本明細書で使用される場合、「他の抗癌剤」という語句は、本明細書に開示される抗ＨＥＲ３抗体又は抗ＨＥＲ３ ＡＤＣとは異なる抗癌剤を指す。他の抗癌剤の非限定的な例としては、５－フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、ゲムシタビン、メトトレキサート、ドキソルビシン、エトポシド、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、メルファラン、ダカルバジン、タキソール、カンプトテシン、ＦＯＬＦＩＲＩ、ＦＯＬＦＯＸ、ドセタキセル、ダウノルビシン、パクリタキセル、オキサリプラチン、及びそれらの組み合わせなどの化学療法剤；ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＣＣＲ４、ＯＸ４０に対する抗体などの生物治療薬；電離放射線；キメラ抗原受容体（ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞又はＮＫ細胞などの細胞治療薬が挙げられる。

【0064】

本明細書において同義的に使用される「癌」及び「腫瘍」という用語は、例えば、肺癌、非小細胞肺（ｎｏｎ ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ、ＮＳＣＬ）癌、細気管支肺胞細胞肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚又は眼内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、胃癌、結腸癌、乳癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰部癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌又は尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、中皮腫、肝細胞癌、胆道癌、中枢神経系（ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ、ＣＮＳ）の新生物、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星細胞腫、神経鞘腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮癌、下垂体腺腫、リンパ腫、リンパ性白血病を指し、上記癌のいずれかの難治性バージョン、又は上記癌の１つ以上の組み合わせを含む。好ましくは、そのような癌は、乳癌、肺癌、頭頸部の癌、又は膵臓癌であり、好ましくは肺癌、頭頸部の癌、又は膵臓癌である。好ましくは、そのような癌は、ＨＥＲ３発現又は過剰発現、より好ましくはＨＥＲ３過剰発現によって更に特徴付けられる。

【0065】

本明細書で使用される場合、「治療する」又は「治療」という用語は、哺乳動物（特にヒト）などの被験者における疾患又は病状の治療又は処置を意味し、以下のことが含まれる：（ａ）被験者の予防的治療など、疾患又は病状の発生を予防すること、（ｂ）被験者の疾患又は病状を消失又は消退させるなど、疾患又は病状を改善すること、（ｃ）例えば、被験者における疾患又は病状の進行を遅らせるか又は停止させることによって、疾患又は病状を抑制すること、又は（ｄ）被験者における疾患又は病状の症状を軽減すること。

【0066】

「被験者」という用語には、ヒト及び非ヒト動物が含まれる。非ヒト動物には、すべての脊椎動物、例えば哺乳類、及び非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、及び爬虫類などの非哺乳類が含まれる。特に断りのない限り、「患者」又は「被験者」という用語は、本明細書では同じ意味で使用される。

【0067】

本発明を更に説明する前に、本発明は、説明される特定の実施形態に限定されず、当然、変更することができることを理解されたい。また、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書で使用される用語は特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図したものではないことも理解されたい。

【0068】

値の範囲が提供される場合、文脈で明確に別段の指示がない限り、その範囲の上限と下限との間の、下限の単位の１０分の１までの各中間値、及びその記載された範囲内の任意の他の記載された値又は中間値が本開示の範囲に包含されることを理解されたい。これらのより小さい範囲の上限及び下限は、独立してより小さな範囲に含まれてもよく、また、記載された範囲内で特に除外される制限に従って、本発明の範囲内に包含される。記載された範囲が限界の一方又は両方を含む場合、これらの含まれた限界の一方又は両方を除く範囲も本発明に含まれる。

【0069】

材料及び方法：
材料：以下の試薬をＳｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈから購入し、示された希釈で使用した：ヤギ抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ（１０３０－０５、１：５０００希釈）、ヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＰＥ（２０４０－０９、１：１０００希釈）、ヤギ抗ヒトカッパＩｇＧ－ＨＲＰ（２０６１－０５、１：２００００希釈）、ヤギ抗ウサギＩｇＧ－ＨＲＰ（４０３０－０５、１：５０００希釈）、ストレプトアビジン－ＦＩＴＣ（７１００－０２、１：５００希釈）、マウス抗ヒトカッパ－ＡＰＣ（９２３０－１１、１：５００希釈）、マウスＩｇＧ－ＡＰＣ（０１０７－１１、０．１ｍｇ／ｍｌ）。ＮＲＧ１はＯｒｉｇｅｎｅ（ＴＰ７２３１５５）から入手した。細胞培養培地Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）１６４０、ダルベッコ改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ、ＤＭＥＭ）、及びウシ胎児血清はＨｙｃｌｏｎｅから得た。組換えパトリツマブを自社で調製した。ＨＥＲ３抗体３Ｆ８を、ハイブリドーマ又は組換えから自社で生成した。ｍ３Ｆ８はマウス３Ｆ８を示し、ｃｈ３Ｆ８及びｈｕ３Ｆ８はそれぞれキメラ３Ｆ８及びヒト化３Ｆ８を示す。

【0070】

細胞培養：研究で使用したＳＰ２／０、ＳＰ２／０－ＨＥＲ３、ＳＰ２／０－ＨＥＲ２、ＳＰ２／０－ＥＧＦＲ、ＮＣＩ－Ｎ８７、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＭＤＡ－ＭＢ－４５３、７９０１、ＨＴ２９、ＭＣＦ－７、ＳＫ－ＢＲ－３を、ＡＴＣＣから購入し、ＡＴＣＣが推奨する適切な培地で維持した。ヒトＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、及びＨＥＲ３をそれぞれ安定して発現するＳＰ２／０－ＥＧＦＲ、ＳＰ２／０－ＨＥＲ２、ＳＰ２／０－ＨＥＲ３を自社で生成した。

【0071】

抗ＨＥＲ３ハイブリドーマの生成：１日目に、ＢＡＬＢ／ｃマウス（メス、８～１０週齢）に、ヒトＨＥＲ３を発現するＳＰ２／０－ＨＥＲ３細胞１～２ｘ１０^６個をフロイント完全アジュバントとともに腹腔内注射した。８日目に、フロイント不完全アジュバントを含む同量の細胞を用いて強化免疫を実施した。１４日目から、３日ごとにマウスを上記の量の細胞で免疫化し、これを３回繰り返した。最後の免疫化の３日後に、脾臓からＢリンパ球を単離し、不死化骨髄腫細胞ＮＳ－１細胞と融合させてハイブリドーマ細胞を生成した。

【0072】

ハイブリドーマ細胞を９６ウェルプレート中で段階希釈して培養した。上清を収集して、フローサイトメトリーによってＳＰ２／０細胞の表面に発現したＨＥＲ３を認識する抗体、又はＥＬＩＳＡによって組換えＨＥＲ３を認識する抗体をスクリーニングした。

【0073】

抗体可変領域のＤＮＡクローニング及び配列決定：簡単に説明すると、Ｔｒｉｚｏｌ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用してハイブリドーマから抽出した全ＲＮＡを第１のｃＤＮＡ鎖に逆転写した。次に、５’ＲＡＣＥキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１８３７４－０５８）の説明書に記載されているように、５’相補性ＤＮＡ（５’ＲＡＣＥ）の高速増幅、続いてネステッドＰＣＲを適用して、可変領域をコードするＤＮＡ配列を増幅した。ＰＣＲ産物をｐＧＭ－Ｔベクターにクローニングした。陽性クローンのＤＮＡ配列決定に進み、そこから対応するタンパク質配列を推定した。可変領域のアミノ酸を、Ｋａｂａｔ番号付けスキームで分析した。

【0074】

抗体発現：要するに、抗体の重鎖及び軽鎖をコードするＤＮＡを発現ベクターｐＣＤＮＡ３．１（＋）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、２９３Ｔ細胞中で発現させた。抗体をプロテインＡ又はＧカラム（ＧＥ）で精製した。

【0075】

ヒト化：ヒト化をＧｅｎＳｃｒｉｐｔで実施した。まず、マウス抗体の重鎖の定常領域をヒトＩｇＧ１定常領域の配列で置換し、マウス抗体の軽鎖の定常領域をヒトＩｇκ定常領域の配列で置換することにより、マウス－ヒトキメラ抗体（ｃｈ３Ｆ８）を生成した。次に、参考文献（Ｋｕｒａｍｏｃｈｉ ｅｔ ａｌ）の手順に従って、キメラ抗体の上でヒト化処理を行った。親和性と特異性を維持するために不可欠なマウスフレームワーク中の残基を、マウスフレームワークをヒト生殖系列フレームワークで置換してヒト化抗体を生成する際に保存した。

【0076】

ヒト化抗体をコードする最適化されたコドンのＤＮＡ配列をＧｅｎＳｃｒｉｐｔで合成した。

【0077】

抗体の発現及び精製：示された抗体のコードＤＮＡ配列を有するプラスミドでトランスフェクトしたＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞（カタログ番号Ａ２９１３３、Ｇｉｂｃｏ）を、ＥｘｐｉＣＨＯ培地（カタログ番号Ａ２９１０００１、Ｇｉｂｃｏ）中で３２℃、５％ＣＯ_２で１２日間増殖させ、維持した。４０００ｇで３０分間回転させた後、上清を収集し、０．２２μｍの膜を通して濾過した。メーカーのマニュアルに詳述されているように、プロテインＡと結合した抗体（カタログ番号１７５０８００１、ＧＥ）を２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）で洗浄し、０．１Ｍグリシン（ｐＨ３．０）で溶出した。溶出画分を０．１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ９．０）で中和し、次に限外濾過遠心分離によりＰＢＳ緩衝液に切り替えた。タンパク質濃度をＢＣＡで測定した。

【0078】

表面プラズモン共鳴（Ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌａｓｍｏｎ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ、ＳＰＲ）：反応速度及び親和性をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で測定した。簡単に説明すると、組換えヒトＨＥＲ３抗体をプロテインＡチップ（ＧＥ、カタログ番号２９－１２７５－５５）上に固定した。２倍段階希釈によって生成した５０ｎＭから最終的な０．７８１２５ｎＭまでの濃度の抗原をチップに通して、親和性及び反応速度を測定した。

【0079】

ＦＡＣＳ：培養細胞を０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡで消化し、次に１５００ｒｐｍで５分間回転させた。細胞ペレットを、５％ＦＢＳ及び０．２％ＰｒｏＣｌｉｎ３００を含有するＰＢＳのＦＡＣＳ溶液を用いて５×１０^６細胞／ｍＬに再生した。５０μＬの細胞懸濁液を、１μｇ／ｍｌの濃度の一次抗体１００μＬとともに氷上で１時間インキュベートした。ＦＡＣＳ溶液で２回洗浄した。ペレットをヤギ抗マウスＩｇＧ－ＰＥを含有するＦＡＣＳ溶液１００μＬ（１：１０００希釈）で再生し、暗所で氷上で１時間インキュベートした。次に、細胞を２回洗浄し、２００μＬのＦＡＣＳ溶液に再懸濁した。

【0080】

ウエスタンブロット法：ウェスタンブロット法のために、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離したタンパク質を、ニトロセルロース膜に移した。一次抗体は以下のとおりであった：抗ＨＥＲ２（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、カタログ番号：２１６５Ｓ）、抗ＨＥＲ３（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、カタログ番号：１２７０８）、抗ｐ－ＨＥＲ３（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、カタログ番号：４７９１）、抗β－アクチン（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、カタログ番号：４９６７）。

【0081】

ＥＬＩＳＡ：ヒトＨＥＲ２－ｅｘ－ｈｕＦｃ、ヒトＨＥＲ３－ｈｕＦｃ、及びヒトＥＧＦＲ－ｈｉｓを９６ウェルプレート中で２μｇ／ｍＬ、５０μＬ／ウェルに希釈し、４℃で一晩インキュベートした。０．５×ＰＢＳＴで洗浄し、１００μＬのブロッキング緩衝液（ＰＢＳ＋３％ＢＳＡ）とともに３７℃で２時間インキュベートし、０．５×ＰＢＳＴで洗浄した。ブロッキング緩衝液で１：３に段階希釈した３Ｆ８を５０μＬ／ウェルで添加し、３７℃で４０～５０分間インキュベートし、その後０．５×ＰＢＳＴで洗浄した。ヤギ抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ、１０３０－０５）をブロッキング緩衝液、５０μＬ／ウェルで１：２００００に希釈し、暗所で３０分間インキュベートし、その後０．５×ＰＢＳＴで洗浄した。１：１で混合した５０μＬのルミノール緩衝液Ａ＋Ｂを、検出前に各ウェルに添加した。

【0082】

ＮＲＧ１誘導性ＨＥＲ３リン酸化：細胞を６ウェルプレートで培養し、８０％コンフルエントに達したときに実験に使用した。実験当日、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、無血清培地中で６時間インキュベートし、続いて１０μｇ／ｍＬの抗体で一晩処理した。ＨＥＲ３リン酸化を誘導するために、ＮＲＧ１を作業濃度１００ｎｇ／ｍＬまで添加し、３０分後にウエスタンブロット用に細胞を収集した。

【0083】

細胞毒性：実験の前日に、細胞を９６ウェルプレートに５０００／ウェルで播種した。３Ｆ８－ＭＭＡＥを、１：３希釈で１００ｎＭから１ｐＭまでの作業濃度まで細胞に添加し、単一濃度ごとに３つのサンプルを得た。７２時間後、メーカーの説明書に記載されているように、ＡＴＰＬｉｔｅキットを使用して細胞毒性を測定した。

【0084】

抗体ストレス試験：５ｍｇ／ｍＬの精製抗体を通常どおり４℃で保存し、熱安定性評価のために４０℃で７日間及び１４日間インキュベートし、酸安定性評価のためにｐＨ３．５のグリシン溶液中で２、４及び６時間再生及び維持し、又は凍結融解安定性評価のために４サイクル又は６サイクルの凍結融解処理を繰り返した。凝集をＳＥＣ－ＨＰＬＣで測定し、結合親和性をＥＬＩＳＡで測定した。

【0085】

［^８９Ｚｒ］Ｚｒ－抗体標識：ＤＦＯ－ＮＣＳを、参考文献（Ｚｅｇｌｉｓ及びＬｅｗｉｓ、２０１５）に示されているように、抗体及び標識に結合させた。簡単に説明すると、ＤＦＯと抗体を５：１のモル比で混合し、３７℃で１時間インキュベートした。ＤＦＯ結合抗体をＳＥＣ－ＨＰＬＣで精製した。

【0086】

^８９Ｚｒ－シュウ酸塩溶液０．８ｍＣｉを、ＨＥＰＥＳ／Ｎａ_２ＣＯ_２緩衝液（ｐＨ７．０～７．５）中でＤＦＯ結合抗体（０．２ｍｇ／ｍｌ）と混合し、室温で３０分間インキュベートした。放射化学的純度をＴＬＣで評価した。Ｒｆは［^８９Ｚｒ］Ｚｒ－抗体０～０．３であり、遊離^８９ＺｒのＲｆは０．６～１．０である。

【0087】

ＰＥＴイメージング：約１００ｕＣｉの［^８９Ｚｒ］Ｚｒ－抗体を各動物に静脈内投与した。注射後の指定された時間に小動物用ＰＥＴイメージング装置を使用して画像を収集して分析した。

【0088】

３Ｆ８－ｖｃ－ＭＭＡＥ及びＵ３－１４０２の調製：ＡＤＣ調製をＣＲＯによって行った。簡単に説明すると、抗体中のジスルフィド結合を、ＴＣＥＰ（トリス－２－カルボキシエチル－ホスフィン）及びＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）の試薬を使用して２５℃で１～３時間還元した。ＭＣ－ＶＣ－ＭＭＡＥ又はＭＣ－ＧＧＦＧ－Ｄｘｄを還元した抗体溶液に滴下し、穏やかに撹拌しながら２５℃で１～４時間インキュベートした。３Ｆ８－ｖｃ－ＭＭＡＥのＤＡＲ（薬物抗体比）は約３．８であったが、Ｕ３－１４０２（パトリツマブ－ＧＧＦＧ－Ｄｘｄ）のＤＡＲは約８．０であった。両方の薬物は抗体中のシステイン残基に結合した。

【0089】

最終生成物を限外濾過により精製した。純度及びＤＡＲを、それぞれＳＥＣ－ＨＰＬＣ及びＨＩＣ－ＨＰＬＣで評価した。

【0090】

Ｉｎ ｖｉｖｏ有効性研究：ＩＡＣＵＣのガイドラインに従って動物を維持し、使用した。Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ及びＳＰＦ Ｂｉｏｔｅｃｈから別々に購入したＢＡＬＣ／ｂヌードマウス及びＮＰＧマウスを、１２時間の暗／明サイクルで自由に飲食できる状態で２５℃で飼育した。凍結保存された組織断片を皮下に移植することによって患者由来異種移植（Ｐａｔｉｅｎｔ ｄｅｒｉｖｅｄ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ、ＰＤＸ）モデルを作製した。腫瘍サイズが１００～２００ｍｍ^３に達した時点で動物に薬物治療を開始し、１０００ｍｍ^３のサイズで動物を安楽死させた。肉眼的健康状態を毎日観察した。腫瘍サイズと体重を監視し、３日ごとに記録した。

【0091】

ソフトウェア：データをＯｌｉｎｄａ、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ６．０又はＥＸＣＥＬで分析した。
実施例１

【0092】

マウス３Ｆ８をＳＰ２／０野生型細胞、又はＨＥＲ３、ＨＥＲ２、若しくはＥＧＦＲを過剰発現する細胞とともにインキュベートした。結合強度を、ＦＡＣＳ装置でＰＥ抗マウス二次抗体を使用して検出した。

【0093】

結果を図１に示した。３Ｆ８はＳＰ２／０－ＨＥＲ３細胞に特異的に結合するが、他の細胞には結合しない。
実施例２

【0094】

マウス３Ｆ８とヒトＨＥＲ３、ＨＥＲ２、及びＥＧＦＲとの結合親和性をＥＬＩＳＡで測定した。

【0095】

結果を図２に示した。マウス３Ｆ８はＨＥＲ３のみを認識するが、ＨＥＲ２又はＥＧＦＲを認識しない。
実施例３

【0096】

ヒトＨＥＲ３、ＨＥＲ２、及びＥＧＦＲに結合するマウス３Ｆ８のＥＣ５０をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ６．０で分析した。結果を表１に示した。３Ｆ８は、ナノモル以下の範囲で強力な結合親和性を示した。

【表1】

実施例４

【0097】

ヒト、サル、ラット及びマウスＨＥＲ３に対するマウス３Ｆ８の種選択性をＥＬＩＳＡで測定した。

【0098】

結果を図３に示した。３Ｆ８は、ヒトとサルの両方のＨＥＲ３を同様の効力で認識したが、マウスＨＥＲ３を認識しなかった。
実施例５

【0099】

ヒト、サル、ラット及びマウスＨＥＲ３に結合するマウス３Ｆ８のＥＣ_５０をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ６．０で分析した。結果を表２に示した。３Ｆ８は、ナノモル以下の範囲でヒト及びサルＨＥＲ３に対して同等の結合親和性を示した。

【表2】

実施例６

【0100】

マウス３Ｆ８は、ＮＲＧ１誘導性リン酸化ＨＥＲ３を阻害した。ＮＣＩ－Ｎ８７、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３をＨＥＲ３リガンドであるＮＲＧ１で処理して、ＨＥＲ３の下流のリン酸化を誘導した。ＮＲＧ１誘導性ｐ－ＨＥＲ３の阻害におけるマウス３Ｆ８の効果をウエスタンブロット法によって測定した。ＮＲＧ１とＨＥＲ３の結合を競合することが以前に証明された抗ＨＥＲ３抗体である３Ｄ４を陽性対照として適用した。

【0101】

結果を図４に示した。データは、３Ｆ８がリン酸化ＨＥＲ３タンパク質レベルを低下させるが、総ＨＥＲ３のタンパク質レベルには影響を及ぼさないことを示した。ＨＥＲ２のウェスタンブロットでも、３Ｆ８がＨＥＲ２タンパク質レベルに影響を及ぼさないことが示された。
実施例７

【0102】

マウス３Ｆ８は、様々な表面レベルのＨＥＲ３の細胞に急速に取り込まれる。様々な表面レベルのＨＥＲ３の細胞をマウス３Ｆ８とともに対照として氷上で、又は３７℃で１時間又は４時間インキュベートした。氷インキュベーションの対照から３７℃インキュベーションの細胞表面シグナルを差し引くことによって内在化率を決定した。

【0103】

結果を図５に示した。データは、３Ｆ８が急速に細胞内に取り込まれることを示した。大部分は、１時間のインキュベーション以内に取り込まれ、インキュベーション時間を４時間に延長すると細胞内画分の量がわずかに増加し、これは、３Ｆ８エンドサイトーシスが迅速かつ連続的なプロセスであることを示唆している。
実施例８

【0104】

抗ＨＥＲ３抗体は、ＢＴ４７４皮下異種移植モデルにおける腫瘍増殖を効率的に阻害した。抗ＨＥＲ３抗体ｍ３Ｆ８、ｍ３Ｄ４、又はｍ３Ｆ８＋ｍ３Ｄ４の組み合わせを２５ｍｇ／ｋｇで隔週、３週間静脈内投与した。腫瘍サイズを３～４日ごとに監視した。

【0105】

結果を図６に示した。ｍ３Ｆ８とｍ３Ｄ４は両方とも腫瘍増殖を有意に阻害するが（一元配置分散分析、ｐ＜０．０５）、３Ｆ８はより優れた効力を示す。ｍ３Ｆ８とｍ３Ｄ４の組み合わせは、ｍ３Ｆ８単独の場合と同等に効率的である。３Ｆ８と３Ｄ４は両方とも抗ＨＥＲ３抗体である。ｍ３Ｆ８はマウス抗体を示す。
実施例９

【0106】

［^８９Ｚｒ］Ｚｒ－ｃｈ３Ｆ８を使用して胃ＰＤＸモデルＧＡＳ０７８をイメージングした。［^８９Ｚｒ］Ｚｒ－ｃｈ３Ｆ８を胃モデルＧＡＳ０７８に静脈内投与した。注射後４、２４、４８、７２、９６、及び１６８時間で画像を収集した。すべての臓器における放射線取り込みをＯｌｉｎｄａで分析し、％ＩＤ／ｇ（組織グラムあたりの注射量の割合）で示した。

【0107】

図７は、ＧＡＳ０７８モデルにおける［^８９Ｚｒ］Ｚｒ－ｃｈ３Ｆ８の代表的なイメージングであった。Ｃｈ３Ｆ８は、キメラ３Ｆ８抗体を示す。データは、時間の経過とともに腫瘍における［^８９Ｚｒ］Ｚｒ－ｃｈ３Ｆ８の取り込みが徐々に増加することを示した。腫瘍取り込みは注射後９６時間まで横ばいのままであり、その後注射後１６８時間でわずかに減少した。

【0108】

データも表３に示した。腫瘍、並びに心臓、肝臓、腎臓及び脾臓の主要臓器における［^８９Ｚｒ］Ｚｒ－ｃｈ３Ｆ８の取り込みを％ＩＤ／ｇ（％注射量／グラム組織）で評価した。

【表3】

実施例１０

【0109】

［^８９Ｚｒ］Ｚｒ－ｃｈ３Ｆ８を使用して複数のＰＤＸモデルをイメージングした。［^８９Ｚｒ］Ｚｒ－ｃｈ３Ｆ８を静脈内注射した。注射後７２時間で画像を収集した。６つの動物モデルにおける［^８９Ｚｒ］Ｚｒ－ｃｈ３Ｆ８イメージングの代表的な画像を図８に示した。ＥＬＩＳＡで測定した腫瘍組織におけるＨＥＲ３発現レベルと、注射から７２時間後の主要臓器及び腫瘍組織における放射線取り込みとを表４に示した。試験した６つのＰＤＸモデルすべてにおいて、かなりの量の腫瘍取り込みが見られた。

【0110】

表４ 腫瘍組織におけるＨＥＲ３発現レベル（ｎｇ／ｍｇ）並びに主要臓器及び腫瘍組織における放射線取り込み（％ＩＤ／ｇ）

【表4】

実施例１１

【0111】

ｃｈ３Ｆ８－ＭＭＡＥは、ｃｈ３Ｆ８に対して同様の結合親和性を維持する。ＨＥＲ３とのｃｈ３Ｆ８－ＭＭＡＥ結合親和性を、ＳＰ２／０－ＨＥＲ３を用いてＦＡＣＳにより測定した。結果（図９）は、ｃｈ３Ｆ８－ＭＭＡＥがＳＰ２／０－ＨＥＲ３に対してｃｈ３Ｆ８と同じ結合親和性を有し、ＨＥＲ３陰性ＳＰ２／０とはほとんど結合しないことを示した。
実施例１２

【0112】

ｃｈ３Ｆ８－ＭＭＡＥの細胞毒性。ｃｈ３Ｆ８－ＭＭＡＥの細胞毒性を、ＡＴＰｌｉｔｅを使用して複数の細胞株において測定した。細胞を様々な濃度のｃｈ３Ｆ８－ＭＭＡＥで５日間処理した。ｃｈ３Ｆ８－ＭＭＡＥの細胞毒性をＡＴＰｌｉｔｅで測定した。データ（図１０）は、ｃｈ３Ｆ８－ＭＭＡＥが、７９０１、ＨＴ－２９、ＭＣＦ－７、Ｎ８７、ＭＤＡ－ＭＢ－４５３、ＳＫ－ＢＲ－３、及びＳＰ２／０－ＨＥＲ３のＨＥＲ３（＋）細胞を死滅させる際に強い細胞毒性を有するが、ＨＥＲ３（－）細胞ＳＰ２／０－ＷＴにはほとんど影響を及ぼさないことを示した。図１０に示す各腫瘍細胞を死滅させる際の細胞毒性ＩＣ_５０を表５に示した。データをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ６．０で分析した。

【表5】

実施例１３

【0113】

ｃｈ３Ｆ８－ＭＭＡＥは、胃モデルＧＡＳ０７８における腫瘍増殖を阻害する。Ｃｈ３Ｆ８－ＭＭＡＥを３ｍｇ／ｋｇで週１回、３週間静脈内投与し、腫瘍抑制効果を３～４日ごとに測定し、最終投与後１０日間継続した。抗体３Ｆ８を並行して投与し、生理食塩水をビヒクル対照として使用した。結果を図１１に示した。
実施例１４

【0114】

ヒト化３Ｆ８（ｈｕ３Ｆ８）及びキメラ３Ｆ８の結合親和性。ヒト化３Ｆ８及びキメラ３Ｆ８の３つのクローンの結合動態をＢｉａｃｏｒｅで測定した。３つのヒト化３Ｆ８クローン（クローン１、クローン２、及びクローン３）は、同じ重鎖ＣＤＲと１つの軽鎖を共有しながら、異なる重鎖を有する。３つのヒト化３Ｆ８クローンの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列、並びにそれらのコードＤＮＡ配列を以下に列挙する。特に明記しない限り、以下の実施例では、クローン３をｈｕ３Ｆ８として使用した。

【0115】

表６に列挙したすべてのデータを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン３．１を使用して処理した。

【表6】

実施例１５

【0116】

ｈｕ３Ｆ８の３つのクローンをｐＨ３．５で０、２、４及び６時間インキュベートし、次にＥＬＩＳＡアッセイに進んで結合親和性を測定した。結果（図１２Ａ）は、酸処理が結合親和性にほとんど影響を及ぼさないことを示した。

【0117】

ｐＨ３．５で０、２、４及び６時間インキュベートした後のｈｕ３Ｆ８の３つのクローンのＥＣ_５０。ＥＣ_５０をＥＬＩＳＡで測定した。結果（表７）は、酸処理が結合親和性にほとんど影響を及ぼさないことを示した。

【表7】

【0118】

ｈｕ３Ｆ８の３つのクローンを４０℃で様々な日数にわたってインキュベートし、次にＥＬＩＳＡアッセイに進んで結合親和性を測定した。キメラ抗体を並行して測定した。結果を図１２Ｂに示した。

【0119】

４０℃で様々な日数にわたってインキュベートしたｈｕ３Ｆ８の３つのクローンのＥＣ_５０。ヒト化３Ｆ８抗体の３つのクローンを生理食塩水中で４０℃で７日間又は１４日間インキュベートし、この熱ストレス試験後の結合親和性をＥＬＩＳＡで測定した。キメラ３Ｆ８を並行して測定した。結果（表８）は、熱ストレスが結合親和性にほとんど影響を及ぼさないことを示した。

【表8】

【0120】

ｈｕ３Ｆ８の３つのクローンを３又は５サイクル凍結融解し、次にＥＬＩＳＡアッセイに進んで結合親和性を測定した。キメラ抗体を並行して測定した。結果（図１２Ｃ）は、繰り返しの凍結融解が結合親和性にほとんど影響を及ぼさないことを示した。

【0121】

複数サイクルの凍結融解ストレス試験を経たｈｕ３Ｆ８の３つのクローンのＥＣ_５０も表９に示した。

【表9】

【0122】

これらのデータを総合すると、ｈｕ３Ｆ８は熱、酸、及び繰り返し凍結融解のストレス試験後でも結合親和性を維持しており、このことは、ｈｕ３Ｆ８が良好な開発可能性プロファイルを有することを示す。
実施例１６

【0123】

ストレス試験後のｈｕ３Ｆ８の３つのクローン及び４℃で保存したそれらの対応物の凝集評価。酸処理、繰り返し凍結融解、及び４０℃でのインキュベーション後の３つのｈｕ３Ｆ８抗体の凝集をＳＥＣ－ＨＰＬＣで測定し、４℃で保存した各抗体と比較した。結果を図１０に示した。ストレス試験後、すべてのクローンは、９５％を超えるモノマーを維持しており、これは凝集の傾向がほとんどないことを示唆している。

【表10】

実施例１７

【0124】

ｈｕ３Ｆ８のＰＴＭ（ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ、翻訳後修飾）解析。Ｐ１：ｈｕ３Ｆ８ストレスなし。Ｐ２：ｈｕ３Ｆ８、４０℃で２週間ストレスを与えた。ストレスなし、又は４０℃で２週間ストレスを与えたＨｕ３Ｆ８をトリプシンで消化し、続いて翻訳後修飾を質量分析法で解析した。データ（表１１）は、ＨＣ：３７２－３９３で脱アミド化がわずかに増加することを示した。一般に、ストレスの前後でＰＴＭに大きな差はなく、これは、良好な開発可能性プロファイルを示唆している。

【表11】

実施例１８

【0125】

ｈｕ３Ｆ８－ＭＭＡＥは、胃ＰＤＸモデルＧＡＳ０７８における腫瘍増殖を用量依存的に阻害する。Ｈｕ３Ｆ８－ＭＭＡＥを１、３ｍｇ／ｋｇで週に１回、４週間静脈内投与した。Ｕ３－１４０２を１０ｍｇ／ｋｇで並行して投与した。腫瘍サイズと体重を３～４日ごとに監視した。データは、ｈｕ３Ｆ８-ＭＭＡＥが用量依存的に腫瘍増殖を阻害し（図１３Ａ）、体重にほとんど影響を及ぼさない（図１３Ｂ）ことを示す。３ｍｇ／ｋｇのＨｕ３Ｆ８－ＭＭＡＥは、腫瘍阻害に関して１０ｍｇ／ｋｇのＵ３－１４０２に匹敵する。
実施例１９

【0126】

ｈｕ３Ｆ８－ＭＭＡＥは、胃ＰＤＸモデルＧＡＳ０７８における腫瘍増殖を１０ｍｇ／ｋｇで単回の注射で阻害する。抗ＨＥＲ３抗体パトリツマブを介してＨＥＲ３を標的とするＡＤＣであるＵ３－１４０２を並行して投与した。ｈｕ３Ｆ８－ＭＭＡＥ及びＵ３－１４０２の両方を１０ｍｇ／ｋｇで１回投与し、腫瘍阻害を３～４日ごとに監視した。データ（図１４）は、ＧＡＳ０７８モデルにおける腫瘍増殖の阻害において、１０ｍｇ／ｋｇのｈｕ３Ｆ８－ＭＭＡＥが１０ｍｇ／ｋｇのＵ３－１４０２よりも強力であることを示した。
実施例２０

【0127】

ｈｕ３Ｆ８-ＭＭＡＥは、６ｍｇ／ｋｇで胃ＰＤＸモデルＧＡＳ０７８における腫瘍増殖を阻害する。Ｕ３－１４０２は、抗ＨＥＲ３抗体パトリツマブを介してＨＥＲ３を標的とするＡＤＣである。Ｈｕ３Ｆ８－ＭＭＡＥを６ｍｇ／ｋｇで週に１回、３週間静脈内投与した。パトリツマブ、Ｕ３－１４０２の抗ＨＥＲ３抗体部分、及びＵ３－１４０２を１０ｍｇ／ｋｇで週に１回、３週間並行して投与した。最終投与１６日後の３７日目まで観察を継続した。腫瘍サイズと体重を３～４日ごとに監視した。データ（図１５）は、ｈｕ３Ｆ８－ＭＭＡＥが薬物投与中にＵ３－１４０２と同等の効力で腫瘍増殖を阻害するが、より持続的な効力を有することを示す。
実施例２１

【0128】

ｈｕ３Ｆ８－ＭＭＡＥは、大腸ＰＤＸモデルＣＳ２２６における腫瘍増殖を阻害する。３群の動物を溶媒、１０ｍｇ／ｋｇのＵ３－１４０２及び３ｍｇ／ｋｇのｈｕ３Ｆ８－ＭＭＡＥでそれぞれ３週間処理した。腫瘍阻害を３日ごとに測定した。Ｕ３－１４０２とｈｕ３Ｆ８－ＭＭＡＥは両方とも、溶媒処理群と比較して、腫瘍増殖を有意に阻害する。更に、３ｍｇ／ｋｇのｈｕ３Ｆ８は、１０ｍｇ／ｋｇのＵ３－１４０２に劣らない（図１６）。

【0129】

ここで、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍細胞の増殖を合理的な安全マージンで効率的に阻害する新しい抗ＨＥＲ３抗体又はＡＤＣ分子を報告する。ＨＥＲ３抗体、３Ｆ８を、ヒトＨＥＲ３を過剰発現するＳＰ２／０細胞で免疫化したマウスハイブリドーマから同定した。３Ｆ８は、ナノモル以下の結合親和性と他のＥＲＢＢファミリーメンバーに対する高い選択性でヒト及びサルＨＥＲ３を認識する。更に、これは、様々なレベルのＨＥＲ３を有する細胞によって迅速かつ効率的に取り込まれ、この特性は、望ましいＡＤＣ薬物に不可欠であると考えられる。ＰＥＴイメージング研究では、［８９Ｚｒ］Ｚｒ－３Ｆ８がＰＤＸモデルの腫瘍に有意に蓄積することが示され、このことは、３Ｆ８が腫瘍細胞に細胞毒性を運ぶ非常に効率的なビヒクルである可能性があることを示した。したがって、ＭＭＡＥ結合３Ｆ８を生成し、腫瘍阻害効果について試験した。ｉｎ ｖｉｔｒｏ評価では、３Ｆ８－ＭＭＡＥは、ＭＭＡＥに対する感受性の影響を受けやすいＨＥＲ３発現腫瘍細胞を約１ｎＭのＩＣ_５０で選択的に死滅させるが、ＨＥＲ３陰性細胞はそのまま残す。有効性研究では、３Ｆ８－ＭＭＡＥが用量依存的に腫瘍増殖を阻害し、体重への大きな影響や観察可能な血液毒性がないことが示された。３Ｆ８、ｈｕ３Ｆ８、及びｈｕ３Ｆ８－ＭＭＡＥのヒト化バージョンは、ＰＤＸモデルにおいて、Ｕ３－１４０２と同等の上記の結合親和性、選択性、及び腫瘍阻害の特徴を維持する。Ｈｕ３Ｆ８は、繰り返し凍結融解処理、酸インキュベーション及び４０℃での保存のストレス試験において、結合親和性、凝集及び翻訳後修飾の変化がほとんどなく、良好な開発可能性プロファイルを有する。まとめると、３Ｆ８又はそのＡＤＣ ｈｕ３Ｆ８－ＭＭＡＥは有望な腫瘍治療アプローチであり、薬物耐性の課題が増大している中で、満たされていない医療ニーズに対する代替手段を提供する可能性がある。

【0130】

以下にいくつかのアミノ酸配列と核酸配列を示す。抗体配列の番号付けはＫａｂａｔに基づいている。
マウス３Ｆ８軽鎖の可変領域：
ヌクレオチド酸配列：
ＡＴＧＡＴＧＴＣＣＴＣＴＧＣＴＣＡＧＴＴＣＣＴＴＧＧＴＣＴＣＣＴＧＴＴＧＣＴＣＴＧＴＴＴＴＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＧＡＴＧＴＧＡＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＣＴＡＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＴＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＣＴＴＴＴＡＡＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＡＣＡＣＡＴＣＡＡＴＡＴＴＡＣＡＣＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＡＴＴＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＴＡＴＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＧＡＴＡＣＧＣＴＴＣＣＴＣＣＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ（配列番号１）
アミノ酸配列：
ＭＭＳＳＡＱＦＬＧＬＬＬＬＣＦＱＧＴＲＣＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＦＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＤＴＬＰＰＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号２）

【表12】

マウス３Ｆ８重鎖の可変領域：
ヌクレオチド配列：
ＡＴＧＡＡＡＧＴＧＴＴＧＡＧＴＣＴＧＴＴＧＴＡＣＣＴＧＴＴＧＡＣＡＧＣＣＡＴＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＣＴＧＴＣＴＧＡＴＧＴＡＣＡＡＣＴＴＣＡＧＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＡＣＣＴＴＣＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＴＣＡＣＣＴＧＣＴＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＣＴＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＡＧＴＧＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＧＴＴＴＣＣＡＧＧＡＧＡＣＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＡＣＡＴＡＡＧＣＴＡＣＧＡＣＧＧＴＣＧＣＡＡＴＡＡＴＴＴＣＡＡＣＣＣＡＴＣＴＣＴＣＡＡＡＡＡＴＣＧＡＡＴＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＣＧＴＧＡＣＡＣＡＴＣＴＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＴＴＴＣＣＴＧＡＡＧＴＴＧＡＡＴＴＣＴＧＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＧＧＡＣＡＣＡＧＣＴＡＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＧＡＴＧＧＧＧＡＴＴＡＣＧＡＣＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号１１）
アミノ酸配列：
ＭＫＶＬＳＬＬＹＬＬＴＡＩＰＧＩＬＳＤＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＡＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＤＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＲＮＮＦＮＰＳＬＫＮＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＦＦＬＫＬＮＳＶＴＳＧＤＴＡＴＹＹＣＡＲＤＧＤＹＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１２）

【表13】

ヒト化３Ｆ８重鎖のアミノ酸配列：（クローン３）
ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＡＹＹＷＮＷＩＲＱＰＦＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＲＮＮＦＮＰＳＬＫＮＲＶＳＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＴＹＹＣＡＲＤＧＤＹＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２１）
ヒト化３Ｆ８重鎖のヌクレオチド酸配列：（クローン３）
ＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＣＡＴＧＣＡＴＴＡＴＴＣＴＧＴＴＴＣＴＧＧＴＣＧＣＡＡＣＴＧＣＴＡＣＡＧＧＣＧＴＧＣＡＴＡＧＴＣＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＣＣＡＡＧＣＧＡＧＡＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＡＴＧＴＡＣＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＧＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＧＣＣＴＴＴＴＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＧＣＴＡＣＧＡＣＧＧＣＡＧＡＡＡＣＡＡＣＴＴＣＡＡＣＣＣＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＡＴＡＧＡＧＴＧＴＣＣＡＴＣＴＣＴＣＧＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＣＣＧＣＴＧＡＴＡＣＣＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧＡＧＡＣＧＧＡＧＡＴＴＡＴＧＡＣＴＡＣＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＣＡＣＣＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＴＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＣＴＣＣＴＣＴＡＡＡＴＣＣＡＣＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＡＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＡＴＴＴＣＣＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＣＴＣＣＴＣＴＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＣＡＣＡＧＡＣＣＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＡＡＧＣＡＡＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＣＡＡＧＴＣＣＴＧＴＧＡＴＡＡＧＡＣＡＣＡＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＣＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＡＣＣＣＧＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＴＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＴＣＴＡＣＡＴＡＴＡＧＧＧＴＧＧＴＧＡＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＴＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＴＡＧＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＴＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＴＡＡＧＴＣＴＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＴＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＡＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＡＴＣＡＣＴＡＴＡＣＴＣＡＧＡＡＡＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＡＣＣＴＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＡＡ（配列番号２２）
ヒト化３Ｆ８軽鎖のアミノ酸配列：（クローン１～３）
ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＤＴＬＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２３）
ヒト化３Ｆ８軽鎖のヌクレオチド酸配列：（クローン１～３）
ＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＴＡＴＴＣＴＧＴＴＴＣＴＧＧＴＣＧＣＡＡＣＴＧＣＴＡＣＡＧＧＧＧＴＣＣＡＴＡＧＴＧＡＴＡＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＣＧＡＴＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＡＴＧＴＣＧＧＧＣＣＴＣＴＣＡＧＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＡＣＡＣＣＡＧＣＡＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＧＡＧＴＧＣＣＡＴＣＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＣＡＴＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＣＴＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＴＣＧＣＴＡＣＡＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＴＡＣＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＡＧＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＧＣＣＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＣＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＣＧＧＧＡＧＧＣＣＡＡＧＧＴＣＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＡＡＴＡＧＣＣＡＧＧＡＧＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＡＴＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＣＴＧＴＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＧＣＴＧＴＣＡＴＣＡＣＣＣＧＴＣＡＣＴＡＡＧＴＣＡＴＴＣＡＡＴＣＧＣＧＧＡＧＡＡＴＧＣＴＧＡＴＡＡ（配列番号２４）
ヒト化３Ｆ８重鎖のアミノ酸配列：（クローン１）
ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＡＹＹＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＤＧＲＮＮＦＮＰＳＬＫＮＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＤＹＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２５）
ヒト化３Ｆ８重鎖のヌクレオチド酸配列：（クローン１）
ＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＣＡＴＧＣＡＴＴＡＴＴＣＴＧＴＴＴＣＴＧＧＴＣＧＣＡＡＣＴＧＣＴＡＣＡＧＧＣＧＴＧＣＡＴＡＧＴＣＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＡＧＣＧＡＧＡＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＣＡＣＣＴＧＴＡＣＣＧＴＧＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＧＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＧＣＴＡＣＧＡＣＧＧＣＡＧＡＡＡＣＡＡＣＴＴＣＡＡＣＣＣＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＡＴＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＧＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＴＡＧＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＣＣＧＣＴＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧＡＧＡＣＧＧＡＧＡＴＴＡＴＧＡＣＴＡＣＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＡＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＣＡＧＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＴＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＣＴＣＣＴＣＴＡＡＡＴＣＣＡＣＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＡＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＡＴＴＴＣＣＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＣＴＣＣＴＣＴＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＣＡＣＡＧＡＣＣＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＡＡＧＣＡＡＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＣＡＡＧＴＣＣＴＧＴＧＡＴＡＡＧＡＣＡＣＡＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＣＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＡＣＣＣＧＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＴＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＴＣＴＡＣＡＴＡＴＡＧＧＧＴＧＧＴＧＡＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＴＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＴＡＧＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＴＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＴＡＡＧＴＣＴＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＴＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＡＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＡＴＣＡＣＴＡＴＡＣＴＣＡＧＡＡＡＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＡＣＣＴＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＡＡ（配列番号２６）
ヒト化３Ｆ８重鎖のアミノ酸配列：（クローン２）
ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＡＹＹＷＮＷＩＲＱＰＦＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＲＮＮＦＮＰＳＬＫＮＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＤＹＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２７）
ヒト化３Ｆ８重鎖のヌクレオチド酸配列：（クローン２）
ＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＣＡＴＧＣＡＴＴＡＴＴＣＴＧＴＴＴＣＴＧＧＴＣＧＣＡＡＣＴＧＣＴＡＣＡＧＧＣＧＴＧＣＡＴＡＧＴＣＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＣＣＣＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＡＧＣＧＡＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＣＴＣＡＣＣＴＧＴＡＣＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＧＣＣＴＴＴＴＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＡＣＡＴＣＴＣＣＴＡＣＧＡＣＧＧＣＡＧＡＡＡＣＡＡＣＴＴＣＡＡＣＣＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＡＡＡＴＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＧＧＡＣＡＣＡＡＧＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＴＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＣＣＧＣＴＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧＡＧＡＣＧＧＡＧＡＴＴＡＴＧＡＣＴＡＣＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＣＡＧＣＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＴＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＣＴＣＣＴＣＴＡＡＡＴＣＣＡＣＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＡＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＡＴＴＴＣＣＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＣＴＣＣＴＣＴＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＣＡＣＡＧＡＣＣＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＡＡＧＣＡＡＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＣＡＡＧＴＣＣＴＧＴＧＡＴＡＡＧＡＣＡＣＡＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＣＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＡＣＣＣＧＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＴＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＴＣＴＡＣＡＴＡＴＡＧＧＧＴＧＧＴＧＡＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＴＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＴＡＧＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＴＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＴＡＡＧＴＣＴＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＴＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＡＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＡＴＣＡＣＴＡＴＡＣＴＣＡＧＡＡＡＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＡＣＣＴＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＡＡ（配列番号２８）
参考文献：
Ｂｒｉａｎ Ｍ．Ｚｅｇｌｉｓ ａｎｄ Ｊａｓｏｎ Ｓ．Ｌｅｗｉｓ．Ｔｈｅ ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒａｄｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ^８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｌａｂｅｌｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｊ．Ｖｉｓ．Ｅｘｐ．２０１５；（９６）：５２５２１．
Ｋｕｒａｍｏｃｈｉ Ｔ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１４；１０６０：１２３－３７．

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図13A】

【図13B】

【図14】

【図15】

【図16】

【配列表】

2024523885000001.app

【国際調査報告】