特表 2024-524276 コンタクトレンズ不快感及びドライアイを治療する薬物の製造における葉酸誘導体の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-05

(54)【発明の名称】コンタクトレンズ不快感及びドライアイを治療する薬物の製造における葉酸誘導体の使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/4985 20060101AFI20240628BHJP

   A61P 27/04 20060101ALI20240628BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240628BHJP

   A61P 25/02 20060101ALI20240628BHJP

   A23L 33/10 20160101ALI20240628BHJP

【ＦＩ】

A61K31/4985

A61P27/04

A61P29/00

A61P25/02

A23L33/10

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023579360

(86)(22)【出願日】2022-06-23

(85)【翻訳文提出日】2024-02-21

(86)【国際出願番号】 CN2022100814

(87)【国際公開番号】W WO2022268167

(87)【国際公開日】2022-12-29

(31)【優先権主張番号】202110704056.5

(32)【優先日】2021-06-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】514259750

【氏名又は名称】▲連雲▼港金康和信▲薬業▼有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＬＩＡＮＹＵＮＧＡＮＧ ＪＩＮＫＡＮＧ ＨＥＸＩＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】Ｊｉｎｑｉａｏ Ｒｏａｄ Ｓｏｕｔｈ， Ｙｕｎｑｉａｏ Ｒｏａｄ Ｅａｓｔ， Ｅｃｏｎｏｍｉｃ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｚｏｎｅ， Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ， Ｊｉａｎｇｓｕ Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110002952

【氏名又は名称】弁理士法人鷲田国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】チョン ヨンチー

(72)【発明者】

【氏名】クー ルイ

(72)【発明者】

【氏名】リエン ツォンリン

【テーマコード（参考）】

4B018

4C086

【Ｆターム（参考）】

4B018MD02

4B018MD04

4B018MD18

4B018MD19

4B018MD23

4B018MD27

4B018ME14

4C086AA01

4C086AA02

4C086CB09

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA17

4C086MA58

4C086NA14

4C086ZA08

4C086ZA20

4C086ZA21

4C086ZA33

4C086ZB11

(57)【要約】

本発明はドライアイ治療用薬品に関し、また、本発明はコンタクトレンズの装用に不快感がある装用者の装用体験を改善する方法に関し、さらに治療用点眼剤に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ドライアイ又はコンタクトレンズ装用時の不快症状を治療する薬物又は保健食品の製造における、一般式Ｉに記載の化合物の使用。

【化1】

式中、Ｒはメチル基又はホルミル基から選択され、Ｘは、５－メチルテトラヒドロ葉酸又はフォリン酸と薬学的に許容可能な塩を形成できる物質であり、カルシウムイオン、ナトリウムイオン、有機アミン、グルコサミン等を含む。

【請求項2】

前記ドライアイは蒸発性ドライアイである、請求項１に記載の使用。

【請求項3】

前記薬物はドライアイ治療用点眼剤を含む、請求項１または２に記載の使用。

【請求項4】

前記点眼剤はアルギニンをさらに含む、請求項３に記載の使用。

【請求項5】

前記点眼剤は、眼表面炎症性因子の発現による炎症を抑え、眼の三叉神経節のメタロプロテアーゼＭＭＰ－２、ＴＮＦ－αの発現による神経炎及び神経痛を抑えるために用いることができる、請求項４に記載の使用。

【請求項6】

前記コンタクトレンズ装用時の不快症状は、目の乾燥、痛み、異物感、及び痒みを含む、請求項１に記載の使用。

【請求項7】

前記薬物又は保健食品は、眼表面炎症性因子の発現による炎症を抑え、眼の三叉神経節のメタロプロテアーゼＭＭＰ－２、ＴＮＦ－αの発現による神経炎及び神経痛を抑えることができる、請求項６に記載の使用。

【請求項8】

前記治療用点眼剤は、薬学的に使用可能な添加剤をさらに含む、請求項４から７のいずれか一項に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ドライアイ治療用の薬品又は保健食品に関し、また、本発明は、コンタクトレンズ装用時に不快感がある装用者のコンタクトレンズ装用体験を改善する方法に関し、さらに、本発明はドライアイを治療する点眼剤及びコンタクトレンズ不快感の症状を治療する点眼剤に関する。

【背景技術】

【0002】

コンタクトレンズ装用時、コンタクトレンズは、眼の表面及び上下眼瞼の内側領域と直接相互作用することがあり、これらの領域に三叉神経の感覚線維が密集して分布している。毎年、コンタクトレンズの装用を断念するコンタクトレンズ装用者がいるが、その主な理由は装用による不快感である。コンタクトレンズ不快感の特徴は、コンタクトレンズ装用に関連する一時的又は持続的な不快な眼の感覚であり、現在、このような不快感反応の病因のメカニズムについての研究証拠は限られているが、注目に値するのは、症状を経験したコンタクトレンズ装用者からの症状説明（例えば、目の刺激、灼熱感、チクチク感及び痛み）は、炎症反応及び神経障害性疼痛を伴うドライアイに関連する症状と非常に類似している点である。

【0003】

ドライアイは慢性炎症性疾患であり、涙液浸透圧の増加を伴う涙液の不安定により、眼表面上皮の常在免疫細胞内のストレスシグナルが活性化され、自然炎症性分子の産生が誘発される。さらに発現したＴｈ１サイトカインであるインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）が結膜杯細胞の機能障害と死亡を促進し、涙液層の不安定を悪化させ、炎症を悪化させて悪循環を形成する［Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ ＳＣ，ｄｅ Ｐａｉｖａ ＣＳ．Ｔｈｅ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｄｒｙ Ｅｙｅ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｗｈａｔ Ｗｅ Ｋｎｏｗ ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．２０１７；１２４（１１Ｓ）：Ｓ４‐Ｓ１３．］。ドライアイの病態生理学に関する人々の知識は大きく進歩したが、ドライアイ疾患の病理学的メカニズムを単純に単一の原因に帰結することができず、既存の治療方法は全ての患者の不快感及び角膜上皮疾患を効果的に改善できるわけではないのが現実である。

【0004】

「ドライアイ」という用語は、正確に言えば、目の感覚を表すものである。眼表面疾患指数表（ＯＳＤＩ）はドライアイの臨床診断に最もよく使われるアンケートであり、主にドライアイの診断及び病状の重症度の評価に用いられる。ＯＳＤＩは主に、光と風による目の刺激、読み書き及びテレビ視聴が目の快適さに及ぼす影響等を含む目の感覚について質問する。これらの質問は全て目の不快な感覚と感情的な経験に関するものであり、炎症性因子等の診断的バイオマーカーがない状況において、ドライアイは、実は疼痛性疾患に帰結することができる。疼痛性疾患は、侵害受容性疼痛と神経障害性疼痛の２つに大きく分類することができ、どちらもドライアイに関連している可能性がある。侵害受容性疼痛は、通常、持続時間が短く、組織損傷と炎症によるものであるが、神経障害性疼痛は、身体感覚システムに直接影響を及ぼす病変又は疾患によって引き起こされる痛みであり、より慢性に近い。ドライアイでは、侵害受容性疼痛と神経障害性疼痛の誘因は同じである可能性があるが、これらの誘因の刺激は、感覚ニューロン表現型の一時的又は持続的な変化をもたらし得る［Ｇａｌｏｒ Ａ，Ｌｅｖｉｔｔ ＲＣ，Ｆｅｌｉｘ ＥＲ，Ｍａｒｔｉｎ ＥＲ，Ｓａｒａｎｔｏｐｏｕｌｏｓ ＣＤ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ ｏｃｕｌａｒ ｐａｉｎ：ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｙｅｔ ｕｎｄｅｒｅｖａｌｕａｔｅｄ ｆｅａｔｕｒｅ ｏｆ ｄｒｙ ｅｙｅ．Ｅｙｅ（Ｌｏｎｄ）．２０１５；２９（３）：３０１‐３１２．］。

【0005】

ドライアイの診断上の定義は範囲が広く、実際には眼科クリニックを訪れる患者は、涙腺欠損又は涙道閉塞を含む、より重度のドライアイ症状を有する水性涙液欠乏性ドライアイを患っていることが多い。ドライアイ患者の中には、涙液欠乏の現象がない蒸発性ドライアイの患者もいるが、このような患者は風と光に対してより敏感である［Ｃｈｈａｄｖａ Ｐ，Ｌｅｅ Ｔ，Ｓａｒａｎｔｏｐｏｕｌｏｓ ＣＤ，ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎ Ｔｅａｒ Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ Ｌｅｖｅｌｓ Ｃｏｒｒｅｌａｔｅ ｗｉｔｈ Ｓｙｍｐｔｏｍｓ ａｎｄ Ｓｉｇｎｓ ｏｆ Ｄｒｙ Ｅｙｅ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．２０１５；１２２（８）：１６７５‐１６８０．］。上記の涙液分泌が正常なドライアイ患者と症状のあるコンタクトレンズ装用者は非常に類似している症状を示し、その病理学的メカニズムも非常に類似している可能性がある。どちらも暑さや寒さの刺激に非常に敏感であり［Ｓｉｔｕ Ｐ，Ｓｉｍｐｓｏｎ Ｔ，Ｂｅｇｌｅｙ Ｃ．Ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ Ｃｏｌｄ Ｓｔｉｍｕｌｉ ｉｎ Ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ Ｃｏｎｔａｃｔ Ｌｅｎｓ Ｗｅａｒｅｒｓ．Ｏｐｔｏｍ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２０１６；９３（８）：９０９‐９１６．］、一定の「季節的な影響」がある。コンタクトレンズ関連の結膜炎の発症は季節の影響を受けることが一般に認められ、冬に角膜浸潤が発症するリスクが２～４倍高くなる。

【0006】

涙液分泌が正常なドライアイ患者と症状のあるコンタクトレンズ装用者は、眼の症状が感染又は組織損傷によるものではなく、炎症と正常状態の間にある。Ｒｕｓｌａｎ Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖは「擬似炎症（ｐａｒａｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）」という概念を導入した。コンタクトレンズによる微細な組織の障害は、組織のストレスや機能不全を引き起こし、基礎状態に近い擬似炎症状態を引き起こすことがある。このような条件では、常在する免疫細胞は、問題の重症度に応じて、他の白血球と血漿タンパク質を小範囲で送達する必要があるが、炎症の典型的な特徴は示さない［Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ Ｒ．Ｏｒｉｇｉｎ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００８，４５４（７２０３）：４２８－４３５．］。症状のあるコンタクトレンズ患者と涙液分泌が正常なドライアイ患者は、コンタクトレンズの装用を中止したり、又は光・風の環境から離れたりすると、不快感が緩和又は解消されるが、それでも患者にとっては非常に大きな苦痛を伴う。それは、眼部の神経密度が非常に高く、且つ二次神経が三叉神経節に位置しているため、関連する疼痛が発生した患者は偏頭痛又は抑うつを伴うことがあり、社交的、身体的及び心理的機能に悪影響を及ぼすことがあるからである。

【0007】

現在、ドライアイに対する治療方法は、例えば、慢性ドライアイを引き起こす病態生理学的に重要な因子であるＴ細胞を標的とするシクロスポリン及びＬｉｆｉｔｅｇｒａｓｔ等、主に炎症を対象としたものである。Ｌｉｆｉｔｅｇｒａｓｔは、Ｔ細胞上の白血球関連抗原１（ＬＦＡ－１）と、抗原提示細胞、上皮細胞及び血管内皮細胞上のリガンド細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ１）との結合を阻害することができる小分子であり、これらの分子は臨床試験ではドライアイの症状を改善したが、これらの治療法は、眼表面に対するドライアイの急性の影響には対処できず、特に光と風による急性の刺激がある場合の目の刺激を効果的に緩和することができない。コルチコステロイドは、急性の刺激に有効であることが示されているが、コルチコステロイドの長期使用には白内障や緑内障のリスクが伴う。

【0008】

炎症を対象とした療法は、神経障害性疼痛と中枢性感作の傾向がある全ての患者、特に涙液分泌が正常なドライアイ患者及びコンタクトレンズの不快感を伴う患者の不快感と角膜上皮疾患を効果的に改善することができない。神経を対象とした療法も現在非常に議論が多く、γ－アミノ酪酸類似体であるガバペンチン及びプレガバリンは、眼の異常な感覚を抑えるために使用されてきたが、現在、重度の目の痛みを伴う疾患の緩和にのみ使用される。これらの抗てんかん薬は中等度の眼不快感を有する患者に役立つ可能性があるが、臨床データが不足しており、且つ明らかな悪影響が存在する恐れがある。神経成長因子（ＮＧＦ）は、軸索の伸長と再生に有効な刺激剤であり、持続性上皮欠損の癒合に寄与することが実証されていたが、神経損傷時には、ＮＧＦの放出により、ニューロンの興奮性が向上し、疼痛閾値が低下する。ＮＧＦが痛みの媒介と増大に非常に重要であることを示す証拠は数多くあり、これは潜在的な鎮痛薬及び抗痛覚過敏薬としてのＮＧＦアンタゴニストの発展につながる。したがって、ＮＧＦアンタゴニスト又はＮＧＦによる治療の使用がドライアイ患者に有益であるか否かについては、さらなる研究が必要である。

【0009】

５－メチルテトラヒドロ葉酸は人体内の葉酸の一形態であり、研究によると、葉酸は加齢黄斑変性症の重要なリスク因子であるホモシステインのレベルを低下させることができる。また、研究によると、葉酸、ビタミンＢ６及びビタミンＢ１２を併用した治療は、加齢黄斑変性症のリスクを低減することができる。他方では、葉酸はまた、神経成長因子の分泌を促進することにより、神経損傷の回復を促すこともできる。ドライアイ患者にとって、ＮＧＦの分泌は、痛みを増大させ、神経の感作を促進する可能性があり、特に、ＮＧＦは、損傷した感覚線維における非選択的カチオンチャネルＴＲＰＶ１の感作を促進することがあり［Ｓｔｒａｔｉｉｅｖｓｋａ Ａ，Ｎｅｌｓｏｎ Ｓ，Ｓｅｎｎｉｎｇ ＥＮ，Ｌａｕｔｚ ＪＤ，Ｓｍｉｔｈ ＳＥ，Ｇｏｒｄｏｎ ＳＥ．Ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ＴＲＰＶ１ ｃｈａｎｎｅｌｓ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ ３－ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ．Ｅｌｉｆｅ．２０１８；７：ｅ３８８６９．］、ＴＲＰＶ１発現の変化は熱痛覚過敏及び痛覚過敏の進行に関連している。フォリン酸も同様に葉酸の誘導体であり、体内で５－メチルテトラヒドロ葉酸に形質転換することができる。現在、ドライアイ患者又はコンタクトレンズの不快感のある患者に対する葉酸の有益な効果に関する研究報告はない。

【0010】

現在、ドライアイに対する新しい治療方法が多く開発されているが、医薬品規制当局によって承認された治療薬は依然として不足している。ドライアイに対する治療介入試験が失敗する主な原因は、適切な疾患指標及び適切な前臨床病理モデルがないことである。

【0011】

コンタクトレンズ不快感の症状がある動物モデルの難点は、動物に適したコンタクトレンズの設計がなく、動物用コンタクトレンズの製造が困難であり、そして動物のコンプライアンスが保証しにくいことである。本発明者は、コンタクトレンズ不快感の症状の表現が一部のドライアイの表現と非常に類似しており、特に、涙液分泌が正常であるが、目の乾燥という不快感がある患者は、通常、コンタクトレンズにも同様に不快感があることを発見した。最近の研究では、コンタクトレンズとドライアイとの間に顕著な関連性があることが判明し［Ｔａｎ Ｌ Ｌ，Ｍｏｒｇａｎ Ｐ，Ｃａｉ Ｚ Ｑ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ａｎｄ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ ｄｒｙ ｅｙｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ Ｓ ｉｎｇａｐｏｒｅ［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｏｐｔｏｍｅｔｒｙ，２０１５，９８（１）：４５－５３．］、よって、コンタクトレンズ不快感の動物モデルの代わりに、ドライアイモデルを使用することを試みることは可能である。

【発明の概要】

【0012】

本発明の技術的解決手段は、葉酸誘導体の新しい使用を提供し、本発明の別の技術的解決手段は、該化合物を含有するドライアイ及びコンタクトレンズ不快感の症状を治療する薬物又は保健食品を提供し、また、ドライアイ及びコンタクトレンズ不快感の症状を治療するための点眼剤を提供する。

【発明を実施するための形態】

【0013】

本発明は、一般式Ｉに記載の化合物の、ドライアイを治療する又はコンタクトレンズ装用時の不快を緩和する薬物又は保健食品の製造における使用を提供する。

【化1】

式中、Ｒはメチル基又はホルミル基から選択され、Ｘは、５－メチルテトラヒドロ葉酸又はフォリン酸と薬学的に許容可能な塩を形成できる物質であり、Ｘは、カルシウムイオン、ナトリウムイオン、有機アミン、グルコサミン等を含む。

【0014】

ここで、ドライアイは、涙腺分泌が正常であるが、外部刺激に敏感である蒸発性ドライアイを指し、特に風恐怖、羞明、目の乾燥、灼熱感の症状がある。コンタクトレンズ不快感の症状は、目の乾燥、痛み、異物感、及び痒み等の症状を含む。

【0015】

本発明は、５－メチルテトラヒドロ葉酸又はその薬学的に許容可能な塩を含み、光や風による眼部の不快感を抑えるためのドライアイ治療用点眼剤をさらに提供する。好ましくは、本発明が提供するドライアイ治療用点眼剤は、アルギニンをさらに含む。

【0016】

好ましくは、０．０１～１０％重量／容量％の濃度で５－メチルテトラヒドロ葉酸又はその薬学的に許容可能な塩を含む。

【0017】

本発明は、５－メチルテトラヒドロ葉酸又はその薬学的に許容可能な塩を含み、乾燥、ザラザラ感、痒み等の症状を緩和するためのコンタクトレンズ不快感患者用の薬物又は保健食品をさらに提供する。コンタクトレンズ不快感患者用の薬物又は保健食品は、経口剤、点眼剤を含む。

【0018】

本明細書に開示されるように、本発明は、５－メチルテトラヒドロ葉酸が症状のあるコンタクトレンズ装用者のコンタクトレンズ装用体験を改善できるという知見に基づき、これらの患者のコンタクトレンズ装用体験を改善するために自発的措置を取る方法を提供する。また、症状のあるコンタクトレンズ装用者は、一部のドライアイ患者、特に、ドライアイではあるが、涙腺分泌が正常な患者と病理学的メカニズムが類似しており、５－メチルテトラヒドロ葉酸はこのタイプの患者の目の体験を改善することもできる。５－メチルテトラヒドロ葉酸は、眼表面組織の一部の炎症性因子、特にＩＬ－１７の発現を低減することができ、且つ眼の同一側の三叉神経節におけるＭＭＰ－２の発現を抑制することができる。

【0019】

本発明の研究によると、慢性ドライアイ、特に涙腺分泌が正常であるが、ドライアイ症状を示すドライアイのメカニズムは、重度のドライアイとは異なる可能性がある。本発明では、激しい、乾燥した風で刺激したマウスが、正常な環境で３ヶ月飼育されても、マウスの眼部角膜に依然として損傷が存在する。しかし、眼表面組織における炎症性因子の発現は多くの先行研究とは異なることが見いだされた。炎症性因子及びＭＭＰ－９の高レベル発現は観察されておらず、慢性ドライアイにはＴｈ１７反応に関連する眼表面の持続性炎症が関与しており、おそらく、主にＴｈ１７細胞によって、又はＴｈ１７細胞のみによって媒介される。炎症発生後のＴ細胞のさらなる表現型において、Ｔｈ１７は、顕著な効果持続型エフェクターメモリー細胞の特性を示す。本発明は、慢性ドライアイが眼表面の炎症だけでなく、慢性神経炎症も伴うことを発見した。本発明は、眼の神経、特にＭＭＰ－２に対する慢性ドライアイのいくつかの特定の影響を初めて明らかにした。

【0020】

最近の研究では、涙液層における尿素のレベルが潜在的なドライアイ診断用マーカーとなり得る可能性が示され、ドライアイ患者は、健康な人に比べて涙液層における尿素のレベルが顕著に低下する。尿素はいくつかのアミノ酸、特にアルギニンの代謝過程で形成されるものである。本発明は、アルギニンの単独使用は、モデルマウスの眼表面損傷を有意に改善できなかったが、フォリン酸と併用すると有意な改善効果があることを発見した。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1】様々なコンタクトレンズ装用者の涙中のＩＬ－１７の含有量である（＊は、Ｃ群と比較して、ｐが０．０５未満であることを示し、＃は、Ｂ群と比較して、ｐが０．０５未満であることを示す）。

【図2】ドライアイモデルマウスの涙分泌試験である（＊は、対照群と比較して、ｐが０．０５未満であることを示す）。

【図3】ドライアイモデルマウスの角膜染色試験である（＊は、対照群と比較して、ｐが０．０５未満であることを示す）。

【図4】マウスの涙液分泌に対する５－メチルテトラヒドロ葉酸点眼剤の影響の調査である。

【図5】マウスの眼表面損傷に対する５－メチルテトラヒドロ葉酸点眼剤の影響の調査である（＊は、対照群と比較して、ｐが０．０５未満であることを示す）。

【図6】マウスの眼表面炎症性因子に対する５－メチルテトラヒドロ葉酸点眼剤の影響の調査である（＊は、対照群と比較して、ｐが０．０５未満であることを示す）。

【図7】マウスの眼の三叉神経節におけるメタロプロテアーゼ、炎症性因子の発現に対する５－メチルテトラヒドロ葉酸点眼剤の影響の調査である（＊は、対照群と比較して、ｐが０．０５未満であることを示す）。

【図8】マウスの涙液分泌に対するフォリン酸、フォリン酸とアルギニンとの組成物、及び５－メチルテトラヒドロ葉酸の点眼剤の影響の調査である。

【図9】マウスの眼表面損傷に対するフォリン酸、フォリン酸とアルギニンとの組成物、及び５－メチルテトラヒドロ葉酸の点眼剤の影響の調査である（＊は、対照群と比較して、ｐが０．０５未満であることを示す）。

【実施例】

【0022】

実施例１ コンタクトレンズ不快感の症状改善についての初期調査
コンタクトレンズの装用に不快感がある成人計１０人が研究に参加し、そのうち、８人はコンタクトレンズ装用に不快感を感じていると述べ、２人は無症状のコンタクトレンズ装用者であった。参加者が装用したコンタクトレンズはいずれもシリコーンハイドロゲル型のコンタクトレンズである。参加者全員の健康状態が良好であり、眼部の不快感の症状及び重症度は眼表面疾患指数（ＯＳＤＩ）によって評価され、眼部に炎症等の症状があるか否かは検眼医によって検診された。

【0023】

研究参加者の平均年齢は３３歳、標準偏差ＳＤは１１歳、男性３名、女性７名であり、検査した結果、参加者の中に典型的な眼部炎症状態にある者はいなかった。無症状のコンタクトレンズ装用者と比較して、症状のある装用者は光と風に敏感であるとフィードバックした（ｎ＝６，７５％）。

【0024】

症状のあるコンタクトレンズ装用者をＡ群（ｎ＝４）とＢ群（ｎ＝４）の２群に分け、無症状のコンタクトレンズ装用者をＣ群にし、各群は２４時間コンタクトレンズを装用せず、次いで、涙を収集した後、Ａ群は、６Ｓ－５－メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム５ｍｇ／錠を含むサプリメントを毎日服用し始めた。３日後、各群はコンタクトレンズを装用し始め、６時間後、各群の涙を収集し、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１７、ＴＮＦ－αの含有量を検出した（ＥＬＩＳＡ法）。各群を往診して、コンタクトレンズ装用時の不快程度を回答させた。

【0025】

統計分析の結果、Ａ群では３人がコンタクトレンズ不快感がほとんど消えたと報告し、効果が顕著でないと報告した人は１人だけであった。炎症性因子に関しては、異なる群間の差異を検出して定量化することは困難であるが、ＩＬ－１７はコンタクトレンズの不快感がある人と正常な人との間で差異が示されており、５－メチルテトラヒドロ葉酸は涙液中のＩＬ－１７のレベルを低減することができる（図１を参照）。

【0026】

実施例２ 慢性ドライアイのマウスモデリング
ドライアイは、房水欠乏性ドライアイと蒸発性ドライアイに分類され、［Ｂｒｏｎ ＡＪ，Ｙｏｋｏｉ Ｎ，Ｇａｆｎｅｙ Ｅ，Ｔｉｆｆａｎｙ ＪＭ．Ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｄｒｙ ｅｙｅ：ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｉｔｓ ｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ．Ｏｃｕｌ Ｓｕｒｆ．２００９；７（２）：７８‐９２．］には、典型的なドライアイの異なる進行が記載されている。蒸発性ドライアイの進行歴では、涙液層の脂質層の完全性が低下し、涙液の蒸発が増加し、これにより、浸透圧が上昇し、角膜神経終末が刺激され、ドライアイの症状が発症する。その結果、まばたきが多くなり、涙液分泌が代償的に増加する。眼表面の変化が涙液機能に影響を与える正確なメカニズムはまだ明確になっていないが、一部のドライアイ患者の進行過程において、涙液分泌が減少しないだけでなく増加し、人間の臨床観察においても明らかに矛盾した同様の結果が実証された。

【0027】

上述したように、ドライアイに適した動物モデルは非常に重要であり、涙腺破壊、又は高浸透塩水のみでモデリングすれば、ドライアイ又はコンタクトレンズ装用時の不快感の実際の状態を反映することはできない。特定の環境条件でドライアイのマウスモデルを作製することが、実際の状況に最も近い。

【0028】

８～１２週齢のメスのＢＡＬＢ／ｃマウス１２０匹を、上部が開孔した隔離密閉ケージに入れ、無水ＣａＳＯ_４で乾燥した空気をエアポンプを使用してケージ内にポッピングし、空気湿度をＲＨ＝１９．５％±５％、流量を１５Ｌ／分、温度を２１～２３℃にした。乾燥した風のある環境にいるマウスをそれぞれ５日目、１５日目及び３０日目に取り出し、フェノールレッド綿糸試験で産生した涙液を測り、正常な環境にある標準ケージに飼育されたマウスと比較する。同時に、マウスに対して角膜のフルオレセイン染色を行い、角膜を検査して点状染色を記録した。

【0029】

その結果、乾燥した環境ではマウスの涙液分泌が５日目に低下したが、３０日目に涙液分泌が増加し、涙液が代償的に増加している可能性が示された。３０日後、乾燥環境下のマウスを標準飼育ボックス（温度２０℃程度、湿度４０～６０％）に移し、３ヶ月間飼育を続けた後、マウスを取り出し、涙液分泌の測定と角膜のフルオレセイン染色試験を行った。その結果、涙液分泌は正常に戻るか、又はそれ以上のマウスもいた（図２を参照）。

【0030】

角膜染色試験によると、涙液の分泌が回復してもマウスの角膜損傷は消失せず、マウスは持続的に低いレベルの角膜損傷を示した（図３を参照）。

【0031】

実施例３ 慢性ドライアイモデルマウスに対する５－メチルテトラヒドロ葉酸の影響

【0032】

５－メチルテトラヒドロ葉酸点眼剤を調製するために、６Ｓ－５－メチルテトラヒドロ葉酸アルギニン塩の凍結乾燥粉末を精製水と混合し、０．５％濃度の５－メチルテトラヒドロ葉酸点眼剤として調製した。アルギニン塩酸塩を精製水と混合し、０．５％濃度に調製した。

【0033】

実験は３群に分けて行われ、実施例２の慢性ドライアイモデルマウス２０匹を５－メチルテトラヒドロ葉酸群（Ａ群，ｎ＝１０）、アルギニン群（Ｂ群，ｎ＝１０）に分け、正常マウス４匹を対照群とした。Ａ群のマウスには毎日両眼それぞれに５－メチルテトラヒドロ葉酸点眼剤５μＬを点眼し、Ｂ群のマウスには毎日両眼それぞれに０．５％アルギニン点眼剤５μＬを点眼し、Ｃ群には毎日両眼それぞれにリン酸塩緩衝液５μＬを点眼した。治療後の３、５、７及び１０日目に、それぞれ涙液を収集し、涙液分泌を検出し、治療後の１０日目に、各群のマウスに対して角膜のフルオレセイン染色を行った。

【0034】

治療終了後、動物を安楽死させ、角膜、涙腺及びマイボーム腺等の眼部組織を摘出し、ＰＢＳで洗浄し、角膜、結膜及び流入領域リンパ節を収集し、－８０℃の冷滅菌ＰＢＳに保存し、試料を氷上で均質化して遠心分離し、上清中のＩＦＮ－γ、ＩＬ－１７、ＩＬ－６のレベルをＥＬＩＳＡキット（Ｒａｙｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して測定した。

【0035】

マウスの眼の同一側の三叉神経節及び三叉神経幹を取って氷上で迅速に解剖した後、直ちに液体窒素で凍結させ、－８０℃で保存し、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ＩＩ キット（ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ ＲＮＡ Ｓ，ドイツ）を使用して同一側の三叉神経節及び三叉神経幹からＲＮＡを抽出し、マトリックスメタロプロテアーゼＭＭＰ－９、ＭＭＰ－２、ＴＮＦ－αを標的とするマウスの特異的ｃＤＮＡでＰＣＲ増幅した。ＰＣＲ産物が増幅曲線の線形範囲内にあるように、各プライマーについて、２４、２８、３２、３６及び４０サイクルの間隔後で反応を終了し、関連遺伝子の発現の半定量的ＲＴ－ＰＣＲを実現する。

【0036】

その結果、各群のマウスの眼の涙液分泌に有意な差がないことが示されたが（図４を参照）、フルオレセイン染色を行った結果、５－メチルテトラヒドロ葉酸は角膜の損傷を改善できることが示され、ベースライン状態と比較して有意な差がみられた（図５を参照）。眼表面及びリンパ節の結果から、当該モデルの慢性ドライアイの炎症性因子の発現が誘導されていないことが示され、それはおそらく、眼表面に常在する免疫細胞が刺激を受けた後でのみ有意な差が示されるからである。しかし、ＩＬ－１７は大きな差を示し（図６を参照）、それはおそらくＩＬ－１７を発現するＴｈ１７細胞が慢性ドライアイの眼表面に常在するからである。本発明は、５－メチルテトラヒドロ葉酸点眼剤がＩＬ－１７炎症性因子を有意に低減できることを発見し、これは上記実験結果と一致する。

【0037】

本発明はさらに、ドライアイの三叉神経に関連する炎症性遺伝子の発現を調査した（図７を参照）。その結果、５－メチルテトラヒドロ葉酸点眼剤はＭＭＰ－２の遺伝子発現を有意に抑制することができ、ＴＮＦ－αに対しても一定の抑制効果を示したが、ＭＭＰ－９の抑制が顕著ではないことを発見した。神経細胞におけるメタロプロテアーゼの発現が神経痛を媒介することは既に報告されており、ＭＭＰ－９は損傷時の初期の痛みを媒介するのに対し、ＭＭＰ－２はより慢性痛に関係しているという予想外の結果が得られた。それはおそらく、５－メチルテトラヒドロ葉酸には房水循環バリアを通って神経システムに直接作用する機能があるからである。

【0038】

実施例４ 慢性ドライアイモデルマウスに対するフォリン酸の影響
５－メチルテトラヒドロ葉酸アルギニン塩は水溶液での安定性が非常に低い。このため、ドライアイモデルマウスに対するレボフォリン酸の治療可能性を検証する必要がある。レボホリナートカルシウム１００ｍｇを精製水２０ｍＬに溶解し、ホリナートカルシウム点眼剤として調製した。６Ｓ－５－メチルテトラヒドロ葉酸アルギニン塩の凍結乾燥粉末を精製水と混合し、０．５％の点眼剤として調製した。レボホリナートカルシウム１００ｍｇ、アルギニン塩酸塩８０ｍｇ、及び精製水２０ｍｌを複合型点眼剤として調製した。

【0039】

実験は４群に分けて行われ、実施例２の慢性ドライアイモデルマウス４０匹を、レボフォリン酸群（Ａ群，ｎ＝１０）、５－メチルテトラヒドロ葉酸群（Ｂ群，ｎ＝１０）、レボホリナートカルシウムとアルギニンの併用群（Ｃ群，ｎ＝１０）、対照群のリン酸塩緩衝液群（Ｄ群，ｎ＝１０）に分けた。治療後の３、５、７及び１０日目に、それぞれ涙液を収集し、涙液分泌を検出し、治療後の１０日目に、各群のマウスに対して角膜のフルオレセイン染色を行った。その結果、各群のマウスの眼の涙液分泌に有意な差がないことが示された（図８参照）。フルオレセイン染色を行った結果、レボホリナートカルシウムとアルギニンとの組成物、及び５－メチルテトラヒドロ葉酸アルギニン塩が角膜の損傷を有意に改善できることが示され、ベースライン状態と比較して有意な差がみられた（図９を参照）。データは、レボフォリン酸とアルギニンの併用がドライアイを緩和する新しい方法となり得る可能性を示唆している。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【手続補正書】

【提出日】2024-03-11

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ドライアイ又はコンタクトレンズ装用時の不快症状を治療する薬物又は保健食品の製造における、一般式Ｉに記載の化合物の使用。

【化1】

式中、Ｒはメチル基又はホルミル基から選択され、Ｘは、６Ｓ－５－メチルテトラヒドロ葉酸又はレボフォリン酸と薬学的に許容可能な塩を形成できる物質であり、前記Ｘはカルシウムイオン、ナトリウムイオン、有機アミン、又はグルコサミンである。

【請求項2】

前記Ｘは有機アミンであり、前記有機アミンはアルギニンイオンである、請求項１に記載の使用。

【請求項3】

前記ドライアイは蒸発性ドライアイである、請求項１に記載の使用。

【請求項4】

前記ドライアイは蒸発性ドライアイである、請求項２に記載の使用。

【請求項5】

前記薬物はドライアイ治療用点眼剤である、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用。

【請求項6】

前記点眼剤は、薬学的に使用可能な添加剤を含む、請求項５に記載の使用。

【請求項7】

前記点眼剤はアルギニンを含む、請求項５に記載の使用。

【請求項8】

前記点眼剤は、眼表面炎症性因子の発現による炎症を抑え、眼の三叉神経節のメタロプロテアーゼＭＭＰ－２、ＴＮＦ－αの発現による神経炎及び神経痛を抑えるために用いることができる、請求項５に記載の使用。

【請求項9】

前記コンタクトレンズ装用時の不快症状は、目の乾燥、痛み、異物感、及び痒みを含む、請求項１に記載の使用。

【請求項10】

前記薬物又は保健食品は、眼表面炎症性因子の発現による炎症を抑え、眼の三叉神経節のメタロプロテアーゼＭＭＰ－２、ＴＮＦ－αの発現による神経炎及び神経痛を抑えることができる、請求項８に記載の使用。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１３

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0013】

本発明は、一般式Ｉに記載の化合物の、ドライアイを治療する又はコンタクトレンズ装用時の不快を緩和する薬物又は保健食品の製造における使用を提供する。

【化1】

式中、Ｒはメチル基又はホルミル基から選択され、Ｘは、６Ｓ－５－メチルテトラヒドロ葉酸又はレボフォリン酸と薬学的に許容可能な塩を形成できる物質であり、Ｘは、カルシウムイオン、ナトリウムイオン、有機アミン、又はグルコサミンであり、Ｘは好ましくはアルギニンイオンである。

【国際調査報告】