特表 2024-524415 不飽和化合物を生成するための方法及び酵母細胞

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-05

(54)【発明の名称】不飽和化合物を生成するための方法及び酵母細胞

(51)【国際特許分類】

   C12N 1/19 20060101AFI20240628BHJP

   C12N 9/02 20060101ALI20240628BHJP

   C12P 7/6472 20220101ALI20240628BHJP

   A01P 19/00 20060101ALI20240628BHJP

   A01N 31/02 20060101ALI20240628BHJP

   A01N 35/02 20060101ALI20240628BHJP

   A01N 37/02 20060101ALI20240628BHJP

【ＦＩ】

C12N1/19

C12N9/02

C12P7/6472

A01P19/00

A01N31/02

A01N35/02

A01N37/02

【審査請求】未請求

【予備審査請求】有

(21)【出願番号】P 2023580704

(86)(22)【出願日】2022-07-01

(85)【翻訳文提出日】2024-02-16

(86)【国際出願番号】 EP2022068272

(87)【国際公開番号】W WO2023275361

(87)【国際公開日】2023-01-05

(31)【優先権主張番号】21183447.8

(32)【優先日】2021-07-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】22161107.2

(32)【優先日】2022-03-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523424433

【氏名又は名称】エフエムシー アグリカルチュラル ソリューションズ エー／エス

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】ホルケンブリンク，カリナ

(72)【発明者】

【氏名】ボロディナ，イリナ

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4H011

【Ｆターム（参考）】

4B064AD67

4B064CA21

4B064CB24

4B064CC24

4B064DA16

4B065AA72X

4B065AB01

4B065BA01

4B065CA12

4B065CA13

4B065CA60

4H011AC07

4H011BB05

4H011BB06

4H011BB08

(57)【要約】

本発明は、Δ（１２）不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ及び任意に脂肪族アルコールを生成できる酵母細胞に関し、本酵母細胞は、少なくとも（１３）個の炭素鎖長を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの（１２）位に二重結合を、すなわち、（１２）位の炭素と（１３）位の炭素との間に二重結合を導入できる異種Δ（１２）デサチュラーゼを発現する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル補酵素Ａ（脂肪酸アシル－ＣｏＡ）を生成できる酵母細胞であって、前記二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が１２位にあり、
前記酵母細胞が、異種Δ１２脂肪酸アシル－ＣｏＡデサチュラーゼを発現し、前記デサチュラーゼが、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合（複数可）を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ、好ましくは不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入でき、
ここで、ｎ及びｎ’が整数であり、
ここで、０≦ｎ≦３であり、１≦ｎ’≦４である、前記酵母細胞。

【請求項2】

前記異種Δ１２デサチュラーゼが、Ｃａｄｒａ、Ｅｐｈｅｓｔｉａ、Ｐｌｏｄｉａ、Ｍａｌｉａｒｐｈａ、Ｆｕｍｉｂｏｔｙｓ及びＡｍｏｒｂｉａからなる群から選択される属の生物から、例えば、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａ、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａ、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａ、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ、Ｍａｌｉａｒｐｈａ ｓｅｐａｒａｔｅｌｌａ、及びＡｍｏｒｂｉａ ｃｕｎｅａｎａからなる群から選択される種などから生じ、任意に、前記異種Δ１２デサチュラーゼが、Ｐｌｏｄｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼなど、またはＣａｄｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａデサチュラーゼなど、またはＥｐｈｅｓｔｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａもしくはＥｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａデサチュラーゼなどであり、さらに任意に、前記異種Δ１２デサチュラーゼが、配列番号：２に記載されるようなＰｉｄ１２デサチュラーゼもしくは配列番号：８５に記載されるようなＥｋｕ＿ｄ１２デサチュラーゼ、またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的ホモログである、請求項１に記載の酵母細胞。

【請求項3】

前記異種Δ１２デサチュラーゼが、配列番号：８０、配列番号：８１及び配列番号：８２に記載される前記デサチュラーゼから選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【請求項4】

少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する前記飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、
ｉ）少なくとも１４個、例えば、少なくとも１５個などの炭素長を有し、
ｉｉ）テトラデカノイル－ＣｏＡもしくはテトラデセノイル－ＣｏＡであり、
ｉｉｉ）１個の二重結合を有し（すなわち、ｎ＝１）、及び／または
ｉｖ）（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡである、
先行請求項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【請求項5】

ｎ’個の二重結合（複数可）を有する前記不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、
ｉ）多くとも１８個、例えば、多くとも１７個など、多くとも１６個など、多くとも１５個など、多くとも１４個など、少なくとも１５個など、少なくとも１６個など、少なくとも１７個など、少なくとも１８個など、少なくとも１９個など、少なくとも２０個などの炭素鎖長を有し、
ｉｉ）１個の二重結合を有し（すなわち、ｎ’＝１）、
ｉｉｉ）２個の二重結合を有し（すなわち、ｎ’＝２）、
ｉｖ）（Ｅ１２）－テトラデセノイル－ＣｏＡであり、及び／または
ｖ）（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡである、
先行請求項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【請求項6】

前記酵母細胞が、さらなる異種デサチュラーゼを発現し、任意に、前記さらなる異種デサチュラーゼが、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位ではない任意の位置に二重結合を導入でき、任意に、前記さらなる異種デサチュラーゼが、少なくとも９位に二重結合を導入でき、さらに任意に、前記さらなる異種デサチュラーゼが、Δ９デサチュラーゼ及びΔ１１デサチュラーゼからなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【請求項7】

前記さらなる異種デサチュラーゼが、ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａまたはＣｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｏｊａｖｅｎｓｉｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｐｓｅｕｄｏｏｂｓｃｕｒａ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅまたはＣｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼなどであり、任意に、前記さらなる異種デサチュラーゼが、Ｄｅｓａｔ５９（配列番号：８）、Ｄｅｓａｔ６１（配列番号：４）、Ｄｅｓａｔ５６（配列番号：５７）、Ｄｅｓａｔ６０（配列番号：５９）、Ｄｅｓａｔ７４（配列番号：６１）及びＤｅｓａｔ２４（配列番号：６）またはそれらに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それらに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントからなる群から選択される、請求項６に記載の酵母細胞。

【請求項8】

前記酵母細胞が、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを生成でき、前記酵母細胞が、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールに変換できる、少なくとも１つのアルコール生成脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ（ＦＡＲ）をさらに発現し、任意に、前記ＦＡＲが、Ａｇｒｏｔｉｓ、Ａｍｙｅｌｏｉｓ、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ、Ｂｏｍｂｕｓ、Ｃｈｉｌｏ、Ｃｙｄｉａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ、Ｌｏｂｅｓｉａ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ、Ｐｌｏｄｉａ、Ｐｌｕｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ、Ｔｙｔａ、及びＹｐｏｎｏｍｅｕｔａからなる群から選択される属の生物、例えば、Ａｇｒｏｔｉｓ ｉｐｓｉｌｏｎ、Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａ、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ、Ｂｏｍｂｕｓ ｌａｐｉｄａｒｉｕｓ、Ｃｈｉｌｏ Ｓｕｐｐｒｅｓｓａｌｉｓ、Ｃｙｄｉａ ｐｏｍｏｎｅｌｌａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｓｕｂｆｌｅｘａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ、Ｌｏｂｅｓｉａ ｂｏｔｒａｎａ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｎｕｂｉｌａｌｉｓ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚａｇ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚｅａ、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ、Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ、Ｔｙｔａ ａｌｂａ、ａｎｄ Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｒｏｒｅｌｌｕｓ、ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ及びＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａなどから生じ、さらに任意に、前記ＦＡＲが、ＦＡＲ１（配列番号：２０）、ＦＡＲ１６（配列番号：２２）、ＦＡＲ１７（配列番号：２４）、ＦＡＲ１９（配列番号：２６）、ＦＡＲ２８（配列番号：２８）、ＦＡＲ３２（配列番号：３０）、ＦＡＲ４４（配列番号：６３）、ＦＡＲ４８（配列番号：６５）、ＦＡＲ４９（配列番号：６７）、ＦＡＲ３８（配列番号：３２）、ＦＡＲ４（配列番号：６９）、ＦＡＲ６（配列番号：７１）、ＦＡＲ８（配列番号：７３）、ＦＡＲ１２（配列番号：７５）、ＦＡＲ１１（配列番号：７７）もしくはＦＡＲ５（配列番号：７９）、またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントからなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【請求項9】

前記酵母細胞が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｙａｒｒｏｗｉａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ及びＬｉｐｏｍｙｃｅｓから選択される属に属し、任意に前記酵母細胞が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ ｌｉｐｏｆｅｒａ、Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ ｓｔａｒｋｅｙｉ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇｌｕｔｉｎｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｐｕｌｌｕｌａｎ及びＹａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａから選択される種に属し、好ましくは前記酵母細胞が、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞である、先行請求項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【請求項10】

前記酵母細胞が、
ｉ）少なくとも１ｍｇ／Ｌ、例えば、少なくとも１．５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１．７ｍｇ／Ｌなどの、もしくはそれを超える力価で（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン酸を、
ｉｉ）少なくとも２０ｍｇ／Ｌ、例えば、少なくとも５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも６０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも８０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも９０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｇ／Ｌなど、少なくとも２ｇ／Ｌなど、少なくとも３ｇ／Ｌなど、少なくとも４ｇ／Ｌなど、少なくとも５ｇ／Ｌなど、少なくとも６ｇ／Ｌなど、少なくとも７ｇ／Ｌなど、少なくとも８ｇ／Ｌなど、少なくとも９ｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｇ／Ｌなどの、もしくはそれを超える力価でＥ１２－脂肪酸及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン酸を、及び／または
ｉｉｉ）少なくとも０．００５ｍｇ／Ｌ、例えば、少なくとも０．０１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０７５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．４ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．７ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．８ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．９ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも４ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７ｍｇ／Ｌなど、少なくとも８ｍｇ／Ｌなど、少なくとも９ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｍｇ／Ｌなどの、もしくはそれを超える力価でＥ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを
生成できる、先行請求項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【請求項11】

ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの生成方法であって、前記二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が、酵母細胞内の１２位にあり、以下のステップ：
ｉ）請求項１及び１０のいずれか１項に記載の酵母細胞を提供するステップ、
ｉｉ）異種Δ１２デサチュラーゼの発現を可能にする条件下において培地中で前記酵母細胞をインキュベートし、前記デサチュラーゼが、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ、好ましくは不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入できるステップを含み、
ここで、ｎ及びｎ’が整数であり、
ここで、０≦ｎ≦３であり、１≦ｎ’≦４であり、
それによって、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成し、前記二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が１２位にある、前記方法。

【請求項12】

ｉ）前記異種Δ１２デサチュラーゼが、請求項２に定義される通りであり、
ｉｉ）前記さらなる異種デサチュラーゼが、請求項６及び７のいずれか１項に定義される通りであり、
ｉｉｉ）前記酵母細胞が、請求項１及び１０のいずれか１項に定義される通りであり、
ｉｖ）ｎ’個の二重結合（複数可）を有する前記不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、請求項５に定義される通りであり、及び／または
ｖ）少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する前記飽和もしくは不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、請求項４に定義される通りである、
請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記酵母細胞が、（Ｅ１２）－テトラデセノイル－ＣｏＡ及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を、それぞれＥ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールに変換できる、少なくとも１つのアルコール生成脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ（ＦＡＲ）をさらに発現し、任意に、前記ＦＡＲが請求項８に定義される通りである、請求項１１～１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

ｉ）前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを回収するステップ、
ｉｉ）前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに変換するステップ、
ｉｉｉ）前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに変換するステップ、及び／または
ｉｖ）Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールをフェロモン組成物に製剤化するステップ
をさらに含む、請求項１１～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

フェロモン組成物であって、以下のステップ：
ｉ）請求項１１～１４のいずれか１項に記載の方法によって、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール及び／またはＥ１２－脂肪族アルコールを生成するステップ、
ｉｉ）前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール及び／またはＥ１２－脂肪族アルコールを回収するステップ、
ｉｉｉ）前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに変換するステップ、
ｉｖ）前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに変換するステップ、
ｖ）前記Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールをフェロモン組成物として製剤化するステップ
を含む方法によって得られる、前記フェロモン組成物。

【請求項16】

フェロモン組成物であって、Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールを含み、前記フェロモン組成物が、少なくとも７０％のバイオベース炭素、例えば、少なくとも７５％などのバイオベース炭素、少なくとも８０％などのバイオベース炭素、少なくとも８５％などのバイオベース炭素、少なくとも９０％などのバイオベース炭素、少なくとも９５％などのバイオベース炭素を含む、前記フェロモン組成物。

【請求項17】

フェロモン化合物であって、Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールからなる群から選択され、前記フェロモン化合物が、少なくとも７０％のバイオベース炭素、例えば、少なくとも７５％などのバイオベース炭素、少なくとも８０％などのバイオベース炭素、少なくとも８５％などのバイオベース炭素、少なくとも９０％などのバイオベース炭素、少なくとも９５％などのバイオベース炭素を含む、前記フェロモン化合物。

【請求項18】

飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入する方法におけるＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼの使用であって、任意に、前記Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼが、Ｐｉｄ１２（配列番号：２）またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである、前記使用。

【請求項19】

飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入する方法におけるＥｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａデサチュラーゼの使用であって、任意に、前記Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａデサチュラーゼが、Ｅｋｕ＿ｄ１２（配列番号：８５）またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである、前記使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、Δ１２不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ及び任意に不飽和脂肪族アルコールを生成できる酵母細胞に関し、本酵母細胞は、異種Δ１２デサチュラーゼを発現する。本化合物は、いくつかの昆虫、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｒｉｄａｎｉａなどの性フェロモン成分の前駆体である。

【背景技術】

【0002】

総合的病害虫管理（ＩＰＭ）は、作物収量を増加させ、環境への影響を最小限に抑えて有機食品の生産を可能にするという、両方の重要な役割を果たすことが期待されている。ＩＰＭは、代替害虫防除方法、例えば、フェロモンを使用した交配撹乱、フェロモンを使用した大量捕獲、益虫などを用いる。

【0003】

フェロモンは、昆虫が（他の生物と同様に）配偶者誘引、警報、道しるべ及び集合を含む、様々な状況で同種の個体と交信するために使用する多様な化学物質の群を構成する。長距離間での配偶者発見と関連する昆虫フェロモンは、農薬に代わる安全かつ環境に優しい代替手段として、害虫のモニタリング及び防除を目的とした農業及び林業用途ですでに使用されている。害虫防除に使用するためのフェロモンの生物学的生成は、価格、特異性、及び環境への影響という点で化学合成よりも有利である。

【0004】

目的のフェロモンは、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナール及び（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエニルの酢酸エステルである。これらの化合物は、多数の鱗翅目の蛾、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｒｉｄａｎｉａなどのフェロモン単独または混合フェロモンのいずれかである。これらの蛾は、保存及び園芸作物において経済的に非常に重要な害虫である。

【0005】

Ｘｉａ ｅｔ ａｌ．（２０１９）は、ＳｅｘｉＤｅｓ５という名称のＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ由来のデサチュラーゼを発現する酵母細胞について開示している。ＳｅｘｉＤｅｓ５デサチュラーゼの主要生成物は、（Ｚ１１）－ヘキサデカン酸であるが、他の一価及び二価不飽和脂肪酸以外に、少量の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカン酸を生成することも分かった。

【0006】

高い力価でΔ１２不飽和化合物を生成し得る微生物細胞工場が依然として必要である。

【発明の概要】

【0007】

本発明は、特許請求の範囲において定義される通りである。

【0008】

本開示は、Δ１２不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ及び任意にΔ１２不飽和脂肪族アルコールを生成できる酵母細胞を提供し、本酵母細胞は、異種Δ１２デサチュラーゼを発現する。特に、本開示は、フェロモン（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナール及び（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルの前駆体である、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン酸または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを生成できる酵母細胞を提供する。（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナール及び（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルは、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａの性フェロモン成分である。さらに、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｒｉｄａｎｉａなどのフェロモン成分である。Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａも知られていて、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｃａｕｔｅｌｌａとも称される。（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルも知られていて、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－イルの酢酸エステルとも称される。

【0009】

したがって、本明細書では、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル補酵素Ａ（脂肪酸アシル－ＣｏＡ）を生成できる酵母細胞が提供され、本二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が１２位にあり、
本酵母細胞は、異種Δ１２脂肪酸アシル－ＣｏＡデサチュラーゼを発現し、本デサチュラーゼは、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合（複数可）を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ、好ましくは不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入でき、
ここで、ｎ及びｎ’が整数であり、
ここで、０≦ｎ≦３であり、１≦ｎ’≦４である。

【0010】

また本明細書では、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成する方法が提供され、本二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が、酵母細胞内の１２位にあり、本方法は、
ｉ）本明細書で開示されるような酵母細胞を提供するステップ、
ｉｉ）異種Δ１２デサチュラーゼの発現を可能にする条件下において培地中で本酵母細胞をインキュベートし、本デサチュラーゼが、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ、好ましくは不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入できるステップを含み、
ここで、ｎ及びｎ’が整数であり、
ここで、０≦ｎ≦３であり、１≦ｎ’≦４であり、
それによって、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成し、本二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が１２位にある。

【0011】

さらに本明細書では、以下のステップを含む方法によって得られるフェロモン組成物が提供される：
ｉ）本明細書で開示されるような方法によって、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール及び／またはＥ１２－脂肪族アルコールを生成するステップ、
ｉｉ）（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール及び／またはＥ１２－脂肪族アルコールを回収するステップ、
ｉｉｉ）Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに変換するステップ、
ｉｖ）Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに変換するステップ、
ｖ）Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールをフェロモン組成物として製剤化するステップ。

【0012】

さらに本明細書では、Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールを含むフェロモン組成物が提供され、フェロモン組成物は、少なくとも２０％のバイオベース炭素、例えば、少なくとも３０％など、少なくとも４０％など、少なくとも５０％など、少なくとも６０％など、少なくとも７０％など、少なくとも８０％など、少なくとも８５％など、少なくとも９０％など、少なくとも９５％などのバイオベース炭素を含む。

【0013】

また本明細書では、Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールからなる群から選択されるフェロモン化合物が提供され、フェロモン化合物は、少なくとも２０％のバイオベース炭素、例えば、少なくとも３０％など、少なくとも４０％など、少なくとも５０％など、少なくとも６０％など、少なくとも７０％など、少なくとも８０％など、少なくとも８５％など、少なくとも９０％など、少なくとも９５％などのバイオベース炭素を含む。

【0014】

さらに本明細書では、Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールを含むフェロモン組成物が提供され、フェロモン組成物は、少なくとも２０％、例えば、少なくとも３０％など、少なくとも４０％など、少なくとも５０％など、少なくとも６０％など、少なくとも７０％など、少なくとも８０％など、少なくとも８５％など、少なくとも９０％など、少なくとも９５％などの放射性^１４Ｃレベルを有する。

【0015】

また本明細書では、Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールからなる群から選択されるフェロモン化合物が提供され、フェロモン化合物は、少なくとも２０％、例えば、少なくとも３０％など、少なくとも４０％など、少なくとも５０％など、少なくとも６０％など、少なくとも７０％など、少なくとも８０％など、少なくとも８５％など、少なくとも９０％など、少なくとも９５％などの放射性^１４Ｃレベルを有する。

【0016】

また本明細書では、飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入する方法においてＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼの使用が提供され、任意にＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼが、Ｐｉｄ１２（配列番号：２）またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである。

【0017】

また本明細書では、飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入する方法においてＣａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａデサチュラーゼの使用が提供され、任意にＣａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａデサチュラーゼが、ＥｃａｕＤｅｓ１２（配列番号：５５）またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである。

【0018】

さらに本明細書では、飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入する方法においてＥｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａデサチュラーゼの使用が提供され、任意にＥｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａデサチュラーゼが、Ｅｋｕ＿ｄ１２（配列番号：８５）またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである。

【図面の簡単な説明】

【0019】

【図1】（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール（Ｚ９，Ｅ１２－１４：ＯＨ）の酵母における生成及び（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル（Ｚ９，Ｅ１２－１４：ＯＡｃ）または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナール（Ｚ９，Ｅ１２－１４：Ａｌｄ）への酵素変換または化学変換のための経路。略語：略語：１４：ＣｏＡ、テトラデカノイル－ＣｏＡ、Ｚ９－１４：ＣｏＡ、（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡ、Ｚ９，Ｅ１２－１４：ＣｏＡ、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡ。

【図2】（Ａ）Ｚ９，Ｅ１２－１４：ＯＨ分析標準のＧＣクロマトグラム、（Ｂ）対照株ＳＴ１０６２８の抽出物のＧＣクロマトグラム、（Ｃ）Ｐｉｄ１２を発現する株ＳＴ１０８７０の抽出物のＧＣクロマトグラム、ならびに（Ｄ）分析標準のマススペクトル及び（Ｅ）保持時間が１０．２分のＳＴ１０８７０抽出物のマススペクトル（任意単位）。

【図3A】実施例１２の出発材料Ａ及び生成物ＢのＧＣクロマトグラム。

【図3B】実施例１２の出発材料Ａ及び生成物Ｂのマススペクトル。

【図4A】対照株ＳＴ１０７４８の抽出物、Ｅｋｕ＿ｄ１２を発現する株ＳＴ１２５９６の抽出物、及びＺ９，Ｅ１２－１４：Ｍｅ分析標準のＧＣクロマトグラム。

【図4B】保持時間が１０．３９分のＳＴ１２５９６抽出物のマススペクトル。

【図4C】保持時間が１０．３９分のＺ９，Ｅ１２－１４：Ｍｅ分析標準のマススペクトル（任意単位）。

【発明を実施するための形態】

【0020】

定義
異種Δ１２デサチュラーゼ：「異種Δ１２デサチュラーゼ」という用語は、本明細書で使用される場合、「さらなる異種デサチュラーゼ」とは異なるデサチュラーゼを指す。異種デサチュラーゼは、飽和または不飽和脂肪酸アシル補酵素Ａ（脂肪酸アシル－ＣｏＡ）の１２位に二重結合を導できる。

【0021】

さらなる異種デサチュラーゼ：「さらなる異種デサチュラーゼ」という用語は、本明細書で使用される場合、「異種デサチュラーゼ」とは異なるデサチュラーゼを指す。さらなる異種デサチュラーゼは、飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位以外の任意の他の位置に二重結合を導入できる。さらなる異種デサチュラーゼは、異種Δ１２デサチュラーゼと同じ生物から生じる場合があるか、またはさらなる異種デサチュラーゼは、異種Δ１２デサチュラーゼとは異なる生物から生じる場合があり、異種Δ１２デサチュラーゼとは異なる反応を触媒する。

【0022】

生物農薬：「生物農薬（ｂｉｏｐｅｓｔｉｃｉｄｅ）」という用語は、「生物農薬（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ）」の短縮形であり、捕食性、寄生性、または化学的関係による、いくつかの種類の害虫管理介入を指す。ＥＵでは、生物農薬は「微生物または天然物に基づく農薬の一種」と定義されている。米国では、それらは、ＥＰＡによって「害虫を防除する天然に存在する物質（生化学的農薬）、害虫を防除する微生物（微生物農薬）、及び追加の遺伝物質を含有する植物によって生成される殺虫性物質（植物組込み保護剤）またはＰＩＰを含む」と定義されている。本発明は、より具体的には、天然物または天然に存在する物質を含む生物農薬に関する。これに関連して、それらは、細菌及び他の微生物、真菌、線虫、タンパク質などを含む、天然に存在する生物及び／またはそれらの代謝産物を培養及び濃縮することによって製造される。それらの化合物は、総合的病害虫管理（ＩＰＭ）プログラムの重要な構成要素であると考えられ、合成化学植物保護製品（ＰＰＰ）の代用品として実用的に非常に注目を集めている。Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ Ａｇｅｎｔｓ（２００９：旧ｔｈｅ Ｂｉｏｐｅｓｔｉｃｉｄｅ Ｍａｎｕａｌ）には、利用可能な生物殺虫剤（及び他の生物学に基づく防除）製品の概説が記載されている。

【0023】

不飽和化：「不飽和化（ｄｅｓａｔｕｒａｔｅｄ）」という用語は、本明細書では「不飽和化（ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ）」という用語と交換可能に使用され、１個以上の二重または三重炭素－炭素結合、好ましくは二重炭素－炭素結合を含有する化合物を指す。以下の命名法は、本明細書全体を通して使用される：Δｉ不飽和化合物（ここで、ｉは整数である）は、炭素鎖のｉ位の炭素原子と炭素鎖のｉ＋１位の炭素原子との間に二重または三重炭素－炭素結合を有する化合物を指す。したがって、炭素鎖長は、少なくともｉ＋１に等しい。例えば、Δ１２不飽和化合物は、炭素１２と炭素１３との間に二重または三重炭素－炭素結合を有する化合物を指し、本明細書では、１２位に炭素－炭素結合を有する炭素鎖と称される。本Δ１２不飽和化合物は、１３個以上の炭素鎖長を有し得る。二重または三重結合は、Ｅ配置またはＺ配置であり得る。したがって、本明細書では、ＥｉまたはＺｉ不飽和化合物は、炭素鎖の炭素ｉと炭素ｉ＋１との間に、それぞれＥ配置またはＺ配置で二重炭素－炭素結合を有する化合物を指すことになり、本不飽和化合物は、少なくともｉ＋１に等しい全長を有する。例えば、Ｅ１２不飽和脂肪族アルコールは、Ｅ配置の１２位に不飽和化（すなわち、炭素原子１２と炭素原子１３との間に二重結合）を有し、１３個以上の炭素鎖長を有する。

【0024】

に由来する：生物に由来するポリペプチドまたはポリヌクレオチドに言及する場合の「に由来する」という用語は、本ポリペプチドまたはポリヌクレオチドが本生物から生じる、すなわち、本生物中で天然に見出されることを意味する。

【0025】

１２位に少なくとも１個の二重結合を有するＥ１２－脂肪酸アシル－ＣｏＡ：「１２位に少なくとも１個の二重結合を有するＥ１２－脂肪酸アシル－ＣｏＡ」という用語は、本明細書で使用される場合、Ｅ１２－脂肪酸アシル－ＣｏＡが１２位に１個の二重結合を有することを意味する。本発明のいくつかの実施形態では、Ｅ１２－脂肪酸アシル－ＣｏＡは、１２位にのみ二重結合を有する。本発明の他の実施形態では、Ｅ１２－脂肪酸アシル－ＣｏＡは、１２位の二重結合に加えて追加の二重結合を有する。追加の二重結合は、１２位以外の任意の位置にあり得る。その一例は、１２位に二重結合を有し、９位などの任意の他の位置に追加の二重結合を有するＥ１２－脂肪酸アシル－ＣｏＡである。

【0026】

脂肪酸：「脂肪酸」という用語は、本明細書では長い脂肪族鎖、すなわち、１３～２８個の炭素原子、例えば、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８個の炭素原子などの脂肪族鎖を有するカルボン酸を指す。天然に存在する脂肪酸の多くは直鎖状、すなわち、分岐していない。それらは飽和、または不飽和であり得る。

【0027】

脂肪酸アシル－ＣｏＡ：本用語は、本明細書では「脂肪酸アシル－ＣｏＡエステル」と交換可能に使用されることになり、一般式Ｒ－ＣＯ－ＳＣｏＡの化合物を指し、式中、Ｒは、１３～２８個の炭素原子、例えば、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８個の炭素原子などの炭素鎖長を有する脂肪炭素鎖である。脂肪炭素鎖は、チオエステル結合によってＣｏＡの－ＳＨ基に連結される。脂肪酸アシル－ＣｏＡは、それが由来する脂肪酸が飽和または不飽和かどうかに応じて、飽和または不飽和であり得る。

【0028】

脂肪族アルコール：「脂肪族アルコール」という用語は、本明細書では１３～２８個の炭素原子、例えば、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８個の炭素原子などの炭素鎖長を有する、脂肪酸アシル－ＣｏＡに由来するアルコールを指す。脂肪族アルコールは、飽和または不飽和であり得る。

【0029】

脂肪族アルコールの酢酸エステル：本用語は、脂肪炭素鎖、すなわち、１３～２８個の炭素原子、例えば、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８個の炭素原子などの脂肪族鎖を有する酢酸エステルを指す。脂肪酸アシルの酢酸エステルは、飽和または不飽和であり得る。

【0030】

脂肪族アルデヒド：本用語は、本明細書では１３～２８個の炭素原子、例えば、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８個の炭素原子などの炭素鎖長を有する、脂肪酸アシル－ＣｏＡに由来するアルデヒドを指す。脂肪族アルデヒドは、飽和または不飽和であり得る。

【0031】

機能的バリアント：本用語は、本明細書では親酵素の活性の少なくとも一部を保持している、酵素の機能的バリアントを指す。したがって、アシル－ＣｏＡオキシダーゼ、デサチュラーゼ、アルコール生成脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、アルデヒド生成脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ、アセチルトランスフェラーゼ、またはＮＡＤ（Ｐ）Ｈシトクロムｂ５オキシドレダクターゼ（Ｎｃｂ５ｏｒ）の機能的バリアントはそれぞれ、それらが由来するアシル－ＣｏＡオキシダーゼ、デサチュラーゼ、アルコール生成脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、アルデヒド生成脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ、またはアセチルトランスフェラーゼと同じ変換を触媒し得るが、反応効率は異なる場合がある、例えば、親酵素と比較して効率が低下もしくは増加するか、または基質特異性が変更される。

【0032】

異種：タンパク質もしくは酵素などのポリペプチド、またはポリヌクレオチドに言及する場合の「異種」という用語は、本明細書では野生型細胞内における天然には存在しないポリペプチドまたはポリヌクレオチドを指すと解釈されるものとする。例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅに適用される場合の「異種Δ９デサチュラーゼ」という用語は、野生型Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞内では天然には存在しないΔ９デサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒに由来するΔ９デサチュラーゼを指す。

【0033】

同一性／類似性：ポリヌクレオチド（またはポリペプチド）に関する同一性及び類似性という用語は、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して同一性／類似性の最大パーセントを達成し、配列同一性の一部としてＮＣＩＵＢルール（ｈｔｔｐｓ：／／ｉｕｂｍｂ．ｑｍｕｌ．ａｃ．ｕｋ／ｍｉｓｃ／ｎａｓｅｑ．ｈｔｍｌ、ＮＣ－ＩＵＢ，Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ（１９８５））に従って任意の保存的置換を考慮した後、本明細書ではそれぞれ、対応する天然核酸（またはアミノ酸）の残基に対して同一であるか、または類似している、候補配列中の核酸（またはアミノ酸）のパーセンテージとして定義される。特に、類似性のパーセンテージは、類似した物理化学的特性を持ちながら保存された残基のパーセンテージを指す。５’もしくは３’側の伸長も挿入も（核酸の場合）、またはＮ’もしくはＣ’側の伸長も挿入も（ポリペプチドの場合）、同一性または類似性の低下をもたらさない。アラインメントのための方法及びコンピュータプログラムが、当該技術分野において周知である。一般に、２つの配列間における所与の類似性は、それらの配列間の同一性が、少なくともその類似性に等しいことを示唆し、例えば、２つの配列が互いに７０％類似している場合、それらは互いに同一性が７０％未満であることはあり得ないが、８０％の同一性を共有し得る。

【0034】

活性の増加：「活性の増加」という用語は、本明細書ではタンパク質または酵素などの所与のペプチドの活性増加を指す。活性の増加は、当該技術分野において既知の方法を使用して、例えば、酵素活性の増加を測定するための酵素アッセイなどを使用して測定され得る。いくつかの場合には、活性の増加によって、酵素が生成する化合物（複数可）、すなわち、生成物の生成量の増加がもたらされる。したがって、酵素活性の増加は、生成物の濃度などの量を測定することによって測定されてよい。酵素の活性が増加している場合、生成物の濃度は、活性が増加していない同じ酵素、例えば、親酵素または非改変酵素によって類似または同一の条件で生成される生成物の濃度と比較して高くなる。活性が増加している酵素が細胞内で発現される場合、生成物は生成物力価、すなわち、細胞が生成した生成物の量として測定され得、親酵素または非改変酵素を発現しているが、それ以外は活性が増加している酵素を発現している細胞と同一または類似の遺伝子型を有する細胞から、類似または同一の条件で得られる同じ生成物の力価または量と比較され得る。

【0035】

ｎ個の二重結合：本明細書で使用される「ｎ個の二重結合」という用語は、脂肪酸アシル－ＣｏＡ中に存在する二重結合の数を指す。ｎ個の二重結合を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡは、０～３個の二重結合（複数可）を有する。したがって、ｎ個の二重結合を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡは、０個の二重結合を有する飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡまたは１個以上の二重結合、例えば、１個、２個もしくは３個などの二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡであり得る。ｎ個の二重結合は、１２位以外の任意の位置にあってよい。

【0036】

ｎ’個の二重結合：「ｎ’個の二重結合」という用語は、本明細書で使用される場合、脂肪酸アシル－ＣｏＡ中に存在する二重結合の数を指す。ｎ’個の二重結合を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡは、１～４個の二重結合（複数可）を有する。したがって、ｎ’個の二重結合を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡは、１個以上の二重結合、例えば、１個、２個、３個または４個などの二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡであり得、その二重結合のうち１個が１２位にある。

【0037】

天然：タンパク質もしくは酵素などのポリペプチド、またはポリヌクレオチドに言及する場合の「天然」という用語は、本明細書では野生型細胞内で天然に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチドを指すと解釈されるものとする。

【0038】

害虫：本明細書で使用される場合、「害虫」という用語は、特に農業または家畜生産との関連において人間または人間の関心事に有害な生物、特に昆虫などの動物を指すものとする。害虫は、植物または動物、人間または人間の関心事、家畜、人間の構造、野生の生態系のいずれかなどに対して侵食的または繁殖力のある、有害な、厄介な、有毒な、破壊的不快害虫である、あらゆる生物である。本用語は、関連する用語の害虫（ｖｅｒｍｉｎ）、雑草、動植物の寄生生物及び病原体と多くの場合に重複する。ある生物がある環境では害虫であっても、別の環境では有益で家畜化されるか、または許容される可能性がある。

【0039】

フェロモン：フェロモンは天然に存在する化合物である。鱗翅目フェロモンは、アルコール、アルデヒドまたは酢酸エステル官能基で終わり、脂肪族主鎖に最大で３個の二重結合、例えば、１個、２個または３個などの二重結合を含有する非分岐脂肪族鎖（９～１８個の炭素、例えば、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８個の炭素原子など）によって指定される。したがって、不飽和脂肪族アルコール、不飽和脂肪族アルデヒド及び不飽和脂肪族アルコールの酢酸エステルは、典型的にはフェロモンに含まれる。フェロモン組成物は、例えば、本明細書に記載されるように化学的または生化学的に生成されてよい。したがって、フェロモンは、本明細書に記載される方法及び細胞によって得られるものなどの不飽和脂肪族アルコール、不飽和脂肪族アルデヒド及び／または不飽和脂肪族アルコールの酢酸エステルを含む。

【0040】

「ＰｉｄＺ１１」及び「Ｐｉｄ１２」：配列番号：２に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼが、最初に「ＰｉｄＺ１１」という内部名が付けられてから、本酵素がΔ１２活性を有することが判明した。したがって、より適切な名称は「Ｐｉｄ１２」であるとよい。「ＰｉｄＺ１１」及び「Ｐｉｄ１２」という用語は、本明細書では交換可能に使用される。

【0041】

活性の低下：「活性の低下」という用語は、本明細書ではタンパク質または酵素などの所与のペプチドの完全な、または部分的な活性喪失を指してよい。いくつかの場合には、ペプチドは必須遺伝子によってコードされ、欠失され得ない。これらの場合、ペプチドの活性は、転写または翻訳の下方制御、ペプチドの阻害などの、当該技術分野において既知の方法によって低下され得る。他の場合には、ペプチドは非必須遺伝子によってコードされ、例えば、ペプチドをコードする遺伝子の欠失の結果として活性が低下する場合があるか、または活性が完全に消失する場合がある。所与のペプチドの活性を部分的または全体的であろうと低下させるために、当該技術分野において既知の方法は、ペプチドをコードする遺伝子の変異だけでなく、ペプチドをコードする遺伝子の転写または翻訳に関与する調節因子をコードする遺伝子の変異も含み、例えば、転写因子またはリプレッサーの発現が増加または低下し、それによってペプチドをコードする遺伝子からの転写レベルを低下させる転写因子遺伝子の、または転写リプレッサー遺伝子の変異、例えば、転写因子結合部位を除去するか、またはそれらを転写因子が到達できないようにするための、遺伝子の天然プロモーターの切断または変異、ペプチドをコードするコード配列の転写を低下させる、天然プロモーターとより弱いプロモーターとの置換、遺伝子の天然ターミネーターの切断もしくは変異、または遺伝子の天然ターミネーターと別のターミネーター配列との置換、Ｋｏｚａｋ配列の変異を含む。他の方法は、ＲＮＡレベルでの制御を含み、ダイサーまたはアルゴノートなどのＲＮＡ干渉システム、ＲＮＡサイレンシング方法、標的ＲＮＡ分解をもたらすＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムの導入を含む。例えば、阻害剤またはタンパク質分解配列を使用することによって、タンパク質レベルでの制御も想定される。列挙される方法は誘導可能な場合がある、すなわち、それらは、当該技術分野において既知のように一過性の方法で達成されてよい。

【0042】

飽和：「飽和」という用語は、二重または三重炭素－炭素結合を欠いている化合物を指す。

【0043】

特異性：所与の基質に対する酵素の特異性は、その基質から始まる反応を触媒するために本酵素が示す優先性である。本開示において、ヘキサデカノイル－ＣｏＡ（パルミトイル－ＣｏＡ）に対するよりも、テトラデカノイル－ＣｏＡ（ミリストイル－ＣｏＡ）に対してより高い特異性を有するデサチュラーゼ及び／または脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼは、好ましくは、基質としてのヘキサデカノイル－ＣｏＡとの反応よりも、テトラデカノイル－ＣｏＡとの反応を触媒する。デサチュラーゼまたは脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼの特異性を決定する方法は、当該技術分野において既知である。例えば、所与のデサチュラーゼを発現する所与の細胞内におけるそのデサチュラーゼの特異性は、ミリスチン酸メチルを含む溶液中において細胞を最長で４８時間インキュベートし、続いて生成物をメタノールで抽出してエステル化することによって決定され得る。次いで、得られた脂肪酸メチルエステルのプロファイルは、ＧＣ－ＭＳによって決定され得る。例えば、ミリストイル－ＣｏＡに対する特異性が高く、パルミトイル－ＣｏＡに対する特異性が低いデサチュラーゼは、（Ｚ）９－Ｃ１６：Ｍｅよりも（Ｚ）９－Ｃ１４：Ｍｅの濃度がより高くなる。例えば、所与の細胞内における所与のレダクターゼの特異性は、（Ｚ）９－ミリスチン酸メチルエステルを含む溶液中においてレダクターゼを発現する細胞を最長で４８時間インキュベートし、続いて得られた脂肪族アルコールを抽出してＧＣ－ＭＳにより分析することによって決定され得る。（Ｚ）９－Ｃ１４：ＣｏＡに対する特異性が高く、（Ｚ）９－Ｃ１６：ＣｏＡに対する特異性が低いレダクターゼは、（Ｚ）９－Ｃ１６：ＯＨよりも（Ｚ）９－Ｃ１４：ＯＨの濃度がより高くなる。

【0044】

力価：化合物の力価は、本明細書では生成された化合物の濃度を指す。化合物が細胞によって生成される場合、本用語は、細胞によって生成される総濃度、すなわち、化合物の総量を培養培地の体積で除したものを指す。これは、特に揮発性化合物の場合、力価は培養培地から蒸発した可能性のある化合物の部分を含み、したがって、発酵ブロスから、及び発酵槽からの潜在的なオフガスから生成された化合物を収集することによって力価が決定されることを意味する。

【0045】

Ｅ１２不飽和化合物の生成
本発明者らは、酵母細胞における異種Δ１２デサチュラーゼの発現によって、１２位に二重結合を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡが生成されることを発見した。本明細書に開示される異種Δ１２デサチュラーゼは、少なくとも１３個の炭素鎖長を有する不飽和または飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を、及び任意に１２位以外の位置に二重結合を導入できる。デサチュラーゼが１２位に二重結合を導入する場合がある出発化合物は、飽和化合物、または１２位ではない位置に二重結合をすでに含む不飽和化合物であってよい。好ましくは、出発化合物は、９位に二重結合を含む不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡである。Δ１２デサチュラーゼは、１２位の二重結合に加えて追加の二重結合を導入できる場合がある。

【0046】

したがって、本明細書では、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成できる酵母細胞が提供され、本二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が１２位にあり、
本酵母細胞は、Δ１２異種脂肪酸アシル－ＣｏＡデサチュラーゼを発現し、本デサチュラーゼは、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合（複数可）を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入でき、
ここで、ｎ及びｎ’が整数であり、
ここで、０≦ｎ≦３であり、１≦ｎ’≦４である。

【0047】

また本明細書では、異種Δ１２デサチュラーゼを発現する酵母細胞が提供され、本デサチュラーゼは、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合（複数可）を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入でき、それによって、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成し、本二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が１２位にあり、
ここで、ｎ及びｎ’が整数であり、
ここで、０≦ｎ≦３であり、１≦ｎ’≦４である。

【0048】

好ましい実施形態では、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合（複数可）を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、１４個の炭素鎖長を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ、例えば、（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡなどである。

【0049】

さらに本明細書では、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡを生成できる酵母細胞が提供され、本酵母細胞は、
ｉ）テトラデカノイル－ＣｏＡの９位に第１二重結合を導入し、それによって、本テトラデカノイル－ＣｏＡを（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡに変換できる少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼ、及び
ｉｉ）（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡの１２位に第２二重結合を導入し、それによって、（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡを（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡに変換できる少なくとも１つの異種Δ１２デサチュラーゼ
を発現する。

【0050】

また本明細書では、不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成できる酵母細胞が提供され、本酵母細胞は、脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位にトランス二重結合を導入し、それによって、脂肪酸アシル－ＣｏＡを不飽和Ｅ１２－脂肪酸アシル－ＣｏＡに変換できるＰｉｄ１２（配列番号：２）デサチュラーゼ、ＥｃａｕＤｅｓ１２（配列番号：５５）デサチュラーゼ、Ｅｅ＿ｄ１２（配列番号：８７）デサチュラーゼまたはＥｋｕ＿ｄ１２（配列番号：８５）デサチュラーゼを発現する。ＥｃａｕＤｅｓ１２デサチュラーゼはまた、Ｅｃａｕ＿Ｄ４としても知られている（Ｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０２１）。

【0051】

デサチュラーゼ
本発明において、「脂肪酸アシル－ＣｏＡデサチュラーゼ」、「デサチュラーゼ」、「脂肪酸アシルデサチュラーゼ」及び「ＦＡＤ」という用語は、交換可能に使用されることになる。本用語は一般に、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１または２２個の炭素原子の鎖長を有するアシル－ＣｏＡ内にＥ／Ｚ確定で少なくとも１個の二重結合を導入できる酵素を指す。二重結合は、いずれの位置に導入されてもよい。例えば、１２位に二重結合を導入するデサチュラーゼは、Δ１２デサチュラーゼと称される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるデサチュラーゼは、例えば、１２位及び９位などの脂肪酸アシル－ＣｏＡのいくつかの位置に二重結合を導入できる。

【0052】

デサチュラーゼは、以下の反応を触媒する：
脂肪酸アシル－ＣｏＡ＋２フェロシトクロムｂ５＋Ｏ（２）＋２Ｈ（＋）＜＝＞不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ＋２フェロシトクロムｂ５＋２Ｈ（２）Ｏ

【0053】

本明細書では、異種Δ１２デサチュラーゼ及び任意に他の異種デサチュラーゼを発現する酵母細胞が提供される。

【0054】

Δ１２デサチュラーゼ
本明細書では、１３個以上の炭素鎖長を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入できるΔ１２デサチュラーゼが開示され、酵母細胞内で発現される場合、本酵母細胞が、１２位に二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成することを可能にする。異種Δ１２デサチュラーゼは、不飽和または飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入できる場合がある。言い換えれば、Δ１２デサチュラーゼは、二重結合を有しないか、または１２位以外の１つ以上の位置、例えば、８、９、１０、１１、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０及び２１位からなる群から選択される１つ以上の位置に１個以上の二重結合を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入できる場合がある。一実施形態では、Δ１２デサチュラーゼは、二重結合を有しないか、または９位に少なくとも１個の二重結合を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入できる。好ましい実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼは、９位に二重結合を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡなどの、不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入できる。

【0055】

いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼは、１２位に少なくとも１個の二重結合を導入でき、また脂肪酸アシル－ＣｏＡの追加の位置、例えば、１２位以外の任意の他の位置などに少なくとも１個の追加の二重結合も導入できる。言い換えれば、Δ１２デサチュラーゼは、１２位ならびに８、９、１０、１１、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０及び２１位からなる群から選択される少なくともあと１つの位置に二重結合を導入できる場合がある。一実施形態では、Δ１２デサチュラーゼは、脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位及び９位に二重結合を導入できる。

【0056】

一実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼは、Ｃａｄｒａ、Ｐｌｏｄｉａ、Ｅｐｈｅｓｔｉａ、Ｍａｌｉａｒｐｈａ、及びＡｍｏｒｂｉａからなる群から選択される属の生物から生じる。一実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼは、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａ、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａ、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａ、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ、Ｍａｌｉａｒｐｈａ ｓｅｐａｒａｔｅｌｌａ、及びＡｍｏｒｂｉａ ｃｕｎｅａｎａからなる群から選択される種の生物から生じる。好ましい実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼは、Ｐｌｏｄｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼなどである。Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａも知られていて、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｃａｕｔｅｌｌａとも称される。

【0057】

一実施形態では、Δ１２デサチュラーゼは、ＰｌｏｄｉａΔ１２デサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：２に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼ（Ｐｉｄ１２）などの、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼである。いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼは、ＰｌｏｄｉａΔ１２デサチュラーゼの機能的バリアント、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼの機能的バリアント、または配列番号：２に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼ（Ｐｉｄ１２）の機能的バリアントであり、それらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性または類似性、例えば、配列番号：２に記載されるようなＰｉｄ１２Δ１２デサチュラーゼに対して少なくとも６１％など、少なくとも６２％など、少なくとも６３％など、少なくとも６４％など、少なくとも６５％など、少なくとも６６％など、少なくとも６７％など、少なくとも６８％など、少なくとも６９％など、少なくとも７０％など、少なくとも７１％など、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの同一性または類似性を有する。理論に束縛されるものではないが、Ｐｉｄ１２Δ１２デサチュラーゼは、少なくとも１３個の炭素鎖長を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡ内に単一の二重結合を導入し、本単一の二重結合が１２位にある。

【0058】

異種Δ１２デサチュラーゼをコードする遺伝子は、当該技術分野において既知であるように、デサチュラーゼを発現する酵母細胞に対してコドン最適化されている場合がある。デサチュラーゼが細胞内で発現されるかどうかを決定する方法は当業者には既知であり、例えば、本明細書において上で詳述されるように、かつ以下の実施例に示されるように、所与の基質から所与の生成物を検出することを含む。

【0059】

さらに本明細書では、飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に少なくとも１個の二重結合を導入する方法においてＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼの使用が提供される。いくつかの実施形態では、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼは、脂肪酸アシル－ＣｏＡに単一の二重結合を導入し、それは１２位にある。いくつかの実施形態では、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼは、Ｐｉｄ１２（配列番号：２）またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである。

【0060】

一実施形態では、本方法はインビトロで、例えば、上に記載されるようなデサチュラーゼ、特に配列番号：２に記載されるようなＰｉｄ１２デサチュラーゼ、またはそれらに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントを提供し、本デサチュラーゼを飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡと接触させることによって実施される。デサチュラーゼは、当該技術分野において既知であるように本デサチュラーゼを発現する細胞から精製されてよい。一実施形態では、本方法はインビボで、好ましくは本明細書の節「酵母細胞」で定義されるような酵母細胞内で実施される。

【0061】

一実施形態では、Δ１２デサチュラーゼは、ＣａｄｒａΔ１２デサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：５５に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼ（ＥｃａｕＤｅｓ１２）などの、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼである。いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼは、ＣａｄｒａΔ１２デサチュラーゼの機能的バリアント、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼの機能的バリアント、または配列番号：５５に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼ（ＥｃａｕＤｅｓ１２）の機能的バリアントであり、それらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性または類似性、例えば、配列番号：５５に記載されるようなＥｃａｕＤｅｓ１２Δ１２デサチュラーゼに対して少なくとも６１％など、少なくとも６２％など、少なくとも６３％など、少なくとも６４％など、少なくとも６５％など、少なくとも６６％など、少なくとも６７％など、少なくとも６８％など、少なくとも６９％など、少なくとも７０％など、少なくとも７１％など、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの同一性または類似性を有する。理論に束縛されるものではないが、ＥｃａｕＤｅｓ１２Δ１２デサチュラーゼは、少なくとも１３個の炭素鎖長を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡ内に単一の二重結合を導入し、本単一の二重結合が１２位にある。

【0062】

さらに本明細書では、飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に少なくとも１個の二重結合を導入する方法においてＣａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａデサチュラーゼの使用が提供される。いくつかの実施形態では、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａデサチュラーゼは、脂肪酸アシル－ＣｏＡに単一の二重結合を導入し、それは１２位にある。いくつかの実施形態では、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａデサチュラーゼは、配列番号：５５（ＥｃａｕＤｅｓ１２）またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである。

【0063】

一実施形態では、本方法はインビトロで、例えば、上に記載されるようなデサチュラーゼ、特に配列番号：５５に記載されるようなＥｃａｕＤｅｓ１２デサチュラーゼ、またはそれらに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントを提供し、本デサチュラーゼを飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡと接触させることによって実施される。デサチュラーゼは、当該技術分野において既知であるように本デサチュラーゼを発現する細胞から精製されてよい。一実施形態では、本方法はインビボで、好ましくは本明細書の節「酵母細胞」で定義されるような酵母細胞内で実施される。

【0064】

一実施形態では、Δ１２デサチュラーゼは、ＥｐｈｅｓｔｉａΔ１２デサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：８５に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼ（Ｅｋｕ＿ｄ１２）などの、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：８７に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼ（Ｅｅ＿ｄ１２）などの、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼである。いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼは、ＥｐｈｅｓｔｉａΔ１２デサチュラーゼの機能的バリアント、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼの機能的バリアント、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼの機能的バリアント、または配列番号：８５（Ｅｋｕ＿ｄ１２）もしくは配列番号：８７（Ｅｅ＿ｄ１２）に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼの機能的バリアントであり、それらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性または類似性、例えば、配列番号：８５に記載されるようなＥｋｕ＿ｄ１２Δ１２デサチュラーゼまたは配列番号：８７に記載されるようなＥｅ＿ｄ１２Δ１２デサチュラーゼに対して少なくとも６１％など、少なくとも６２％など、少なくとも６３％など、少なくとも６４％など、少なくとも６５％など、少なくとも６６％など、少なくとも６７％など、少なくとも６８％など、少なくとも６９％など、少なくとも７０％など、少なくとも７１％など、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの同一性または類似性を有する。理論に束縛されるものではないが、Ｅｋｕ＿ｄ１２Δ１２デサチュラーゼ及びＥｅ＿ｄ１２Δ１２デサチュラーゼは、少なくとも１３個の炭素鎖長を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡ内に単一の二重結合を導入し、本単一の二重結合が１２位にある。

【0065】

さらに本明細書では、飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に少なくとも１個の二重結合を導入する方法においてＥｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａデサチュラーゼの使用が提供される。いくつかの実施形態では、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａデサチュラーゼは、脂肪酸アシル－ＣｏＡに単一の二重結合を導入し、それは１２位にある。いくつかの実施形態では、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａデサチュラーゼは、Ｅｋｕ＿ｄ１２（配列番号：８５）またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである。

【0066】

さらに本明細書では、飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に少なくとも１個の二重結合を導入する方法においてＥｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａデサチュラーゼの使用が提供される。いくつかの実施形態では、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａデサチュラーゼは、脂肪酸アシル－ＣｏＡに単一の二重結合を導入し、それは１２位にある。いくつかの実施形態では、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａデサチュラーゼは、Ｅｋｕ＿ｄ１２（配列番号：８７）またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである。

【0067】

一実施形態では、本方法はインビトロで、例えば、上に記載されるようなデサチュラーゼ、特に配列番号：８５に記載されるようなＥｋｕ＿ｄ１２デサチュラーゼもしくは配列番号：８７に記載されるようなＥｅ＿ｄ１２デサチュラーゼ、またはそれらに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントを提供し、本デサチュラーゼを飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡと接触させることによって実施される。デサチュラーゼは、当該技術分野において既知であるように本デサチュラーゼを発現する細胞から精製されてよい。一実施形態では、本方法はインビボで、好ましくは本明細書の節「酵母細胞」で定義されるような酵母細胞内で実施される。

【0068】

本酵母細胞は、少なくとも１つの異種Δ１２デサチュラーゼを発現する場合がある。いくつかの実施形態では、細胞は１つの異種Δ１２デサチュラーゼを発現する。しかしながら、少なくとも２つの異種Δ１２デサチュラーゼなどのいくつかの異種Δ１２デサチュラーゼを発現することが望ましい場合があり、それらは同一であるか、または異なっていてもよい。あるいは、少なくとも１つの異種Δ１２デサチュラーゼをコードする核酸のいくつかのコピー、例えば、少なくとも２つのコピーなど、少なくとも３つのコピーなど、またはそれを超えるコピーを発現することが望ましい場合がある。他の実施形態では、細胞は少なくとも２つの異種Δ１２デサチュラーゼ、例えば、３つの異種Δ１２デサチュラーゼを発現する。

【0069】

いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼは、少なくとも２つの異なるタンパク質、例えば、２つの異なるデサチュラーゼなど、３つの異なるデサチュラーゼなどからのアミノ酸配列を含む、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントである。そのような機能的バリアントは、例えば、Δ１２デサチュラーゼの融合タンパク質、例えば、モザイクまたはキメラタンパク質などであってよい。好ましくは、Δ１２デサチュラーゼのそのような機能的バリアントに含まれるアミノ酸配列のうち少なくとも１つが、Δ１２デサチュラーゼに由来する。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるΔ１２デサチュラーゼは、Δ１２デサチュラーゼからのアミノ酸配列及び少なくとも１つの他のデサチュラーゼ、例えば、Δ９デサチュラーゼなどからの少なくとも１つのアミノ酸配列、例えば、２つ以上のアミノ酸配列などを含むか、またはそれらからなるΔ１２デサチュラーゼの機能的バリアントである。他の実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、Δ１２デサチュラーゼからのアミノ酸配列及び少なくとも１つの他のデサチュラーゼ、例えば、Δ９デサチュラーゼ、Δ１１デサチュラーゼ、２つのΔ９デサチュラーゼ、２つのΔ１１デサチュラーゼ、またはそれを超えるものなどからの少なくとも２つのアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。さらに他の実施形態では、本明細書に開示されるΔ１２デサチュラーゼは、Δ１２デサチュラーゼに由来するアミノ酸配列及び別のΔ１２デサチュラーゼに由来するアミノ酸配列を含むΔ１２デサチュラーゼの機能的バリアントであり、結果として、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、２つの異なるΔ１２デサチュラーゼからのアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。

【0070】

いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼならびに少なくとも１つの他のデサチュラーゼ、例えば、Δ９、Δ１１及び／またはΔ１２デサチュラーゼなどは、同種に由来する。言い換えれば、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、同種から生じるΔ１２デサチュラーゼ及び少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列、例えば、Δ１２デサチュラーゼからのアミノ酸配列及びΔ１１デサチュラーゼからのアミノ酸配列などを含むか、またはそれらからなり、本Δ１２デサチュラーゼ及びΔ１１デサチュラーゼは、両方ともＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａに由来する。他の実施形態では、Δ１２デサチュラーゼ及び少なくとも１つの他のデサチュラーゼは、２つの異なる種、３つの異なる種、またはそれを超える異なる種に由来する。言い換えれば、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、少なくとも２つの異なる種から生じるΔ１２デサチュラーゼ及び少なくとも１つの別のデサチュラーゼからのアミノ酸配列、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼからのアミノ酸配列及びＣａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼからのアミノ酸配列などを含むか、またはそれらからなる。

【0071】

いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、１つのデサチュラーゼからのアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、本１つのデサチュラーゼの末端のうち少なくとも１つが置換されていて、例えば、別のデサチュラーゼの末端、例えば、別のデサチュラーゼの対応する末端などと交換されているなどである。本１つのデサチュラーゼのＮ末端の対応する末端は、本明細書では別のデサチュラーゼのＮ末端を指し、同じ専門用語がＣ末端にも適用される。当業者は、デサチュラーゼの末端などの多くの酵素の末端が、それらの天然配列に関して変更される場合がある一方で、本酵素の機能が維持されている、すなわち、酵素がその活性を失わない状態であると理解することになる。対照的に、触媒部位を含む残基及び／または酵素の触媒活性に重要な残基の変更は、本酵素の機能及び／または触媒活性を妨害または変更することなく可能にはならない場合がある。末端に関して、当業者は、酵素の特徴及び／または機能を保持するために、末端の柔軟性、疎水性及び／または親水性を維持することが重要な場合があると理解することになる。例えば、酵素が、その末端のうち少なくとも１つを介して、例えば、膜などに固定される（埋め込まれる、及び／または挿入されるとしても知られる）場合、その末端の同じか、または類似した疎水性を維持することが重要な場合がある。

【0072】

したがって、いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、その本来のＮ末端及び／またはＣ末端から切り離されて、別のデサチュラーゼ、例えば、別のΔ１２デサチュラーゼ、Δ９デサチュラーゼまたはΔ１１デサチュラーゼなどのＮ末端及び／またはＣ末端に融合された、Δ１２デサチュラーゼからのアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、Δ１２デサチュラーゼのアミノ酸配列の一部を含むか、またはそれからなり、本Δ１２デサチュラーゼの６０個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されていて、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの５０個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの４０個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの３５個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの３０個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの２５個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの２０個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの１５個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの１０個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの５個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの１～５５個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの５～４５個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの１０～４０個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの１５～３５個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの２０～３５個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの２５～３５個のＮ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、
及び／または
本Δ１２デサチュラーゼの５０個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されていて、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの４０個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの３５個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの３０個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの２５個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの２０個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの１５個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの１０個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの１～５５個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの５～４５個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの１０～４０個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの１５～３５個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの２０～３５個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどであり、例えば、本Δ１２デサチュラーゼの２５～３５個のＣ末端アミノ酸残基は、少なくとも１つの他のデサチュラーゼからのアミノ酸配列によって欠失もしくは置換されているなどである。好ましい実施形態では、本Δ１２デサチュラーゼは、配列番号：２（Ｐｉｄ１２）、配列番号：５５（ＥｃａｕＤｅｓ１２）、配列番号：８５（Ｅｋｕ＿ｄ１２）または配列番号：８７（Ｅｅ＿ｄ１２）に記載されるΔ１２デサチュラーゼから選択される。

【0073】

好ましくは、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントでは、欠失しているＣ末端またはＮ末端残基は、他方のデサチュラーゼからの等量またはほぼ等量のアミノ酸残基で置換されていて、例えば、３０個のＮ末端アミノ酸が欠失しているΔ１２デサチュラーゼの機能的バリアントでは、本３０個のアミノ酸は、別のデサチュラーゼ、例えば、別のΔ１１デサチュラーゼなどからの２０～４０個のＮ末端アミノ酸残基の範囲で、例えば、別のデサチュラーゼからの２５～３５個のＮ末端アミノ酸残基などの範囲で、例えば、別のデサチュラーゼからの２８～３２個のＮ末端アミノ酸残基などの範囲で置換されているようになる。したがって、例えば、３０個のＣ末端アミノ酸が欠失しているΔ１２デサチュラーゼの機能的バリアントでは、本３０個のアミノ酸は、別のデサチュラーゼ、例えば、別のΔ１１デサチュラーゼなどからの２０～４０個のＣ末端アミノ酸残基の範囲で、例えば、別のデサチュラーゼからの２５～３５個のＣ末端アミノ酸残基などの範囲で、例えば、別のデサチュラーゼからの２８～３２個のＣ末端アミノ酸残基などの範囲で置換されている。

【0074】

Ｎ末端残基は、本明細書ではタンパク質のアミノ酸配列の第１残基として定義され、結果として、タンパク質のＮ末端のＸ個のアミノ酸残基を欠失または置換することは、本タンパク質のＸ個の第１アミノ酸を欠失または置換することを指す。言い換えれば、３００個のアミノ酸のタンパク質のＮ末端における３０個のアミノ酸残基を欠失または置換することは、本タンパク質のアミノ酸番号１～３０を欠失または置換することを指す。

【0075】

Ｃ末端残基は、本明細書ではタンパク質のアミノ酸配列の最終残基として定義され、結果として、タンパク質のＣ末端のＸ個のアミノ酸残基を欠失または置換することは、本タンパク質のＸ個の最終アミノ酸を欠失または置換することを指す。言い換えれば、３００個のアミノ酸のタンパク質のＣ末端における３０個のアミノ酸残基を欠失または置換することは、本タンパク質のアミノ酸番号２７１～３００を欠失または置換することを指す。

【0076】

いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、デサチュラーゼからのアミノ酸配列、例えば、配列番号：２（Ｐｉｄ１２）、配列番号：５５（ＥｃａｕＤｅｓ１２）、配列番号：８５（Ｅｋｕ＿ｄ１２）または配列番号：８７（Ｅｅ＿ｄ１２）などを含むか、またはそれからなり、少なくとも１個のアミノ酸残基が欠失しているか、別のアミノ酸残基を挿入されているか、またはそれで置換されている。欠失、挿入、または置換は、配列のＣ末端またはＮ末端部分に見られる場合がある。

【0077】

いくつかの実施形態では、配列、例えば、配列番号：２（Ｐｉｄ１２）、配列番号：５５（ＥｃａｕＤｅｓ１２）、配列番号：８５（Ｅｋｕ＿ｄ１２）及び配列番号：８７（Ｅｅ＿ｄ１２）から選択される配列などのＮ末端アミノ酸残基１～５０、例えば、１～４０など、１～３０など、１～２０などのうち少なくとも１個が、欠失しているか、別のアミノ酸残基を挿入されているか、またはそれで置換されている。

【0078】

いくつかの実施形態では、配列、例えば、配列番号：２（Ｐｉｄ１２）、配列番号：５５（ＥｃａｕＤｅｓ１２）、配列番号：８５（Ｅｋｕ＿ｄ１２）及び配列番号：８７（Ｅｅ＿ｄ１２）から選択される配列などのＣ末端アミノ酸残基２５０～４００、例えば、２６０～３９０など、２７０～３８０など、２８０～３７０など、２９０～３５０など、３００～３５０などのうち少なくとも１個が、欠失しているか、別のアミノ酸残基を挿入されているか、またはそれで置換されている。いくつかの実施形態では、配列、例えば、配列番号：２（Ｐｉｄ１２）、配列番号：５５（ＥｃａｕＤｅｓ１２）、配列番号：８５（Ｅｋｕ＿ｄ１２）及び配列番号：８７（Ｅｅ＿ｄ１２）などのアミノ酸残基２９０～４００、例えば、２９０～３９０など、２９０～３８０など、２９０～３７０など、２９０～３５０などのうち少なくとも１個が、欠失しているか、別のアミノ酸残基を挿入されているか、またはそれで置換されている。いくつかの実施形態では、配列、例えば、配列番号：２（Ｐｉｄ１２）、配列番号：５５（ＥｃａｕＤｅｓ１２）、配列番号：８５（Ｅｋｕ＿ｄ１２）及び配列番号：８７（Ｅｅ＿ｄ１２）などのアミノ酸残基３０２～３４８のうち少なくとも１個が、欠失しているか、別のアミノ酸残基を挿入されているか、またはそれで置換されている。

【0079】

いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼからのアミノ酸配列、及び別のＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼからのアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。一実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、配列番号：２に記載されるＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼＰｉｄ１２のアミノ酸配列の一部、及び配列番号：４７に記載されるＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼＤｅｓａｔ６５のアミノ酸配列の一部を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、Ｐｉｄ１２（配列番号：２）のバリアントからなり、Ｎ末端のアミノ酸残基１～３０及び／またはＣ末端のアミノ酸残基３００～３３５は、それぞれＤｅｓａｔ６５（配列番号：４７）のＣ末端のアミノ酸残基１～２９及びＮ末端のアミノ酸残基２９９～３４４で置換されている。したがって、いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、配列番号：８０に記載される配列からなる。

【0080】

いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼからのアミノ酸配列、及びＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼからのアミノ酸を含むか、またはそれらからなる。一実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、配列番号：５５に記載されるようなＣａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａデサチュラーゼＥｃａｕＤｅｓ１２のアミノ酸配列の一部、及び配列番号：４７に記載されるようなＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼＤｅｓａｔ６５のアミノ酸配列の一部を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、ＥｃａｕＤｅｓ１２（配列番号：５５）のバリアントからなり、Ｎ末端のアミノ酸残基１～３０及びＣ末端のアミノ酸残基３００～３３８は、それぞれＤｅｓａｔ６５（配列番号：４７）のＮ末端のアミノ酸残基１～２９及びＣ末端のアミノ酸残基２９９～３４４で置換されている。したがって、いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、配列番号：８１に記載される配列からなる。

【0081】

いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼからのアミノ酸配列、及びＡｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａΔ１１デサチュラーゼからのアミノ酸を含むか、またはそれらからなる。一実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、配列番号：５５に記載されるようなＣａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａデサチュラーゼＥｃａｕＤｅｓ１２のアミノ酸配列の一部、及び配列番号：８３に記載されるようなＡｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａΔ１１デサチュラーゼＤｅｓａｔ１６のアミノ酸配列の一部を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、ＥｃａｕＤｅｓ１２（配列番号：５５）のバリアントからなり、Ｎ末端のアミノ酸残基１～３０及びＣ末端のアミノ酸残基３００～３３８は、それぞれＤｅｓａｔ１６（配列番号：８３）のＮ末端のアミノ酸残基１～２０及びＣ末端のアミノ酸残基３０２～３２６で置換されている。したがって、いくつかの実施形態では、Δ１２デサチュラーゼの機能的バリアントは、配列番号：８２に記載される配列からなる。

【0082】

さらなるデサチュラーゼ
本明細書で提供される酵母細胞は、異種Δ１２デサチュラーゼに加えて、Δ１２デサチュラーゼではない少なくとも１つのさらなるデサチュラーゼを発現してよい。いくつかの実施形態では、さらなるデサチュラーゼは、同種デサチュラーゼ、例えば、同種Δ９デサチュラーゼまたは同種Δ１１デサチュラーゼなどである。言い換えれば、酵母細胞は、Δ１２デサチュラーゼではない少なくとも１つの天然デサチュラーゼを発現する。例えば、酵母細胞は、同種Δ９デサチュラーゼＯｌｅ１を発現するＹａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ酵母細胞であってよい。しかしながら、好ましい実施形態では、さらなるデサチュラーゼは、異種デサチュラーゼである。言い換えれば、酵母細胞は、Δ１２デサチュラーゼではない少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現する。

【0083】

一実施形態では、さらなるデサチュラーゼは、少なくとも１３個の炭素鎖長を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位ではない任意の位置に少なくとも１個の二重結合を導入できる異種デサチュラーゼである。言い換えれば、さらなるデサチュラーゼは、脂肪酸アシル－ＣｏＡの８、９、１０、１１、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０及び２１位からなる群から選択される位置に少なくとも１個の二重結合を導入できる場合がある。好ましい実施形態では、本脂肪酸アシル－ＣｏＡは、飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ、例えば、テトラデカノイル－ＣｏＡである。別の実施形態では、本脂肪酸アシル－ＣｏＡは、１２位に二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡである。さらに別の実施形態では、本脂肪酸アシル－ＣｏＡは、１２位及び１２位以外の位置、例えば、１２位及び９位などに二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡである。

【0084】

したがって、一実施形態では、酵母細胞は、異種Δ５デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ６デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ７デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ８デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ９デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ１０デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ１１デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ１３デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ１４デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ１５デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ１６デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ１７デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ１８デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ１９デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ２０デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。別の実施形態では、酵母細胞は、異種Δ２１デサチュラーゼである少なくとも１つのさらなる異種デサチュラーゼを発現できる。好ましい実施形態では、さらなるデサチュラーゼは、Δ９デサチュラーゼまたはΔ１１デサチュラーゼである。したがって、さらなるデサチュラーゼは、それぞれ９位または１１位に二重結合を導入できる場合がある。

【0085】

さらなる異種デサチュラーゼは、本方法に従ってそのデサチュラーゼが発現される酵母細胞とは異なる任意の種類の生物から生じてよい。いくつかの実施形態では、異種デサチュラーゼは植物、例えば、Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓまたはＰｅｌａｒｇｏｎｉｕｍ ｈｏｒｔｏｒｕｍなどから生じる。別の実施形態では、異種デサチュラーゼは昆虫、例えば、双翅目、甲虫目、または鱗翅目などの昆虫、例えば、Ａｇｒｏｔｉｓ、Ａｒｇｙｒｏｔａｅｎｉａ、Ａｍｙｅｌｏｉｓ、Ｃｈａｕｌｉｏｇｎａｔｈｕｓ、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ、Ｃｙｄｉａ、Ｄｅｎｄｒｏｐｈｉｌｕｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、Ｅｐｉｐｈｙａｓ、Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ、Ｌａｍｐｒｏｎｉａ、Ｌｏｂｅｓｉａ、Ｍａｎｄｕｃｔａ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ、Ｐｅｃｔｉｎｏｐｈｏｒａ、Ｐｌｕｔｅｌｌａ、Ｔｈａｌａｓｓｉｏｓｉｒａ、Ｔｈａｕｍｅｔｏｐｏｅａ、Ｔｒｉｂｏｌｉｕｍ、ＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａまたはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ属などの昆虫、例えば、Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ、Ａｒｇｙｒｏｔａｅｎｉａ ｖｅｌｕｔｉａｎａ、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａ、Ｃｈａｕｌｉｏｇｎａｔｈｕｓ ｌｕｇｕｂｒｉｓ、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａ、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｒｏｓａｃｅａｎａ、Ｃｙｄｉａ ｐｏｍｏｎｅｌｌａ、Ｄｅｎｄｒｏｐｈｉｌｕｓ ｐｕｎｃｔａｔｕｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｏｊａｖｅｎｓｉｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｐｓｅｕｄｏｏｂｓｃｕｒａ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａ、Ｅｐｉｐｈｙａｓ ｐｏｓｔｖｉｔｔａｎａ、Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ｚｅａ、Ｌａｍｐｒｏｎｉａ ｃａｐｉｔｅｌｌａ、Ｌｏｂｅｓｉａ ｂｏｔｒａｎａ、Ｍａｎｄｕｃｔａ ｓｅｘｔａ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｎｕｂｉｌａｌｉｓ、Ｐｅｃｔｉｎｏｐｈｏｒａ ｇｏｓｓｙｐｉｅｌｌａ、Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ、Ｔｈａｌａｓｓｉｏｓｉｒａ ｐｓｅｕｄｏｎａｎａ、Ｔｈａｕｍｅｔｏｐｏｅａ ｐｉｔｙｏｃａｍｐａ、Ｔｒｉｂｏｌｉｕｍ ｃａｓｔａｎｅｕｍまたはＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉなどから生じる。

【0086】

好ましい実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａデサチュラーゼ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｏｊａｖｅｎｓｉｓデサチュラーゼ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｐｓｅｕｄｏｏｂｓｃｕｒａデサチュラーゼ、またはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅデサチュラーゼなどである。

【0087】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：４に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ６１）などのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：６に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ２４）などのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：８に記載されるデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ５９）などのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：５７に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ５６）などのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａデサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：５９に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ６０）などのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅデサチュラーゼである。いくつかの実施形態では、デサチュラーゼは、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼの機能的バリアント、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼの機能的バリアント、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼの機能的バリアント、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼの機能的バリアント、配列番号：６に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ２４）の機能的バリアント、配列番号：４に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ６１）の機能的バリアント、配列番号：５９に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ６０）の機能的バリアント、配列番号：５７に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ５６）の機能的バリアント、または配列番号：８に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ５９）の機能的バリアントであり、それらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性または類似性を有する。

【0088】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、Ａｍｙｅｌｏｉｓデサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：１０（Ｄｅｓａｔ１７）または配列番号：１２（Ｄｅｓａｔ１８）に記載されるようなデサチュラーゼなどのＡｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼである。いくつかの実施形態では、デサチュラーゼは、Ａｍｙｅｌｏｉｓデサチュラーゼの機能的バリアント、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼの機能的バリアント、配列番号：１０に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ１７）の機能的バリアント、または配列番号：１２に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ１８）の機能的バリアントであり、それらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性または類似性を有する。

【0089】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：６１に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ７４）などのＣｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼである。いくつかの実施形態では、デサチュラーゼは、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼの機能的バリアント、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼの機能的バリアント、または配列番号：６１に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ７４）の機能的バリアントであり、それらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性または類似性を有する。

【0090】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａデサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：１８に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ２６）などのＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａデサチュラーゼである。いくつかの実施形態では、デサチュラーゼは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａデサチュラーゼの機能的バリアント、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａデサチュラーゼの機能的バリアント、または配列番号：１８に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ２６）の機能的バリアントであり、それらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性または類似性を有する。

【0091】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓデサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：１４に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ４２）などのＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅデサチュラーゼである。いくつかの実施形態では、デサチュラーゼは、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓデサチュラーゼの機能的バリアント、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅデサチュラーゼの機能的バリアント、または配列番号：１４に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ４２）の機能的バリアントであり、それらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性または類似性を有する。

【0092】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、Ｙａｒｒｏｗｉａデサチュラーゼである。一実施形態では、デサチュラーゼは、配列番号：１６に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ６９）などのＹａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａデサチュラーゼである。いくつかの実施形態では、デサチュラーゼは、Ｙａｒｒｏｗｉａデサチュラーゼの機能的バリアント、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａデサチュラーゼの機能的バリアント、または配列番号：１６に記載されるようなデサチュラーゼ（Ｄｅｓａｔ６９）の機能的バリアントであり、それらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性または類似性を有する。

【0093】

所与の酵素に関して「少なくとも６０％の同一性または類似性を有するそのバリアント」という用語は、本酵素に対して６０％以上の同一性または類似性、例えば、酵素に対して少なくとも６１％など、少なくとも６２％など、少なくとも６３％など、少なくとも６４％など、少なくとも６５％など、少なくとも６６％など、少なくとも６７％など、少なくとも６８％など、少なくとも６９％など、少なくとも７０％など、少なくとも７１％など、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、またはそれを超える同一性または類似性を有するバリアントを指すと理解されるものとする。

【0094】

改変される酵母細胞は、天然デサチュラーゼを発現する場合があり、それは不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ及び／または不飽和脂肪族アルコールの生成に悪影響を及ぼす場合がある。したがって、改変される細胞がそのような天然デサチュラーゼを発現する場合、天然デサチュラーゼの活性を低下させるか、または存在しないように生物を改変する場合がある。

【0095】

天然デサチュラーゼの活性を確実に欠如させるか、または最低限まで低下させるために、当該技術分野において既知の方法が用いられ得る。天然デサチュラーゼが確実に発現しないようにするために、天然デサチュラーゼをコードする遺伝子を欠失または部分的に欠失させてもよい。あるいは、例えば、酵素の触媒部位の変異によって天然デサチュラーゼは発現するが、活性を欠くように遺伝子を変異させてよい。あるいは、ｍＲＮＡから活性タンパク質への翻訳が、ＲＮＡまたはｓｉＲＮＡのサイレンシングなどの方法によって防止されてよい。あるいは、細胞は、天然デサチュラーゼの活性を阻害する阻害剤を含む培地中でインキュベートされてよい。天然デサチュラーゼをコードする遺伝子の転写を阻害する化合物もまた、化合物が存在する場合に転写が不活性化されるように提供されてよい。当該技術分野において既知の他の方法が用いられてもよい。

【0096】

したがって、天然デサチュラーゼの不活性化は永続的もしくは長期的であってよく、すなわち、改変細胞が安定した方法で天然デサチュラーゼの活性低下を示すか、もしくは活性を全く示さないか、または不活性化は一過性であってよく、すなわち、改変細胞が天然デサチュラーゼの活性をある期間で示す場合があるが、その活性は他の期間では抑制され得るか、もしくは減少し得る。

【0097】

いくつかの実施形態では、天然酵母デサチュラーゼは、異種デサチュラーゼで置き換えられる。異種デサチュラーゼは、例えば、同じ条件下で試験される場合に天然酵母デサチュラーゼと比較して、望ましくない副生成物を生成しないか、または望ましくない副生成物の生成がより少ないデサチュラーゼであってよい。そのような望ましくない副生成物は、例えば、（Ｚ９）－ヘキサデセノイル－ＣｏＡ（Ｚ９－１６：ＣｏＡ）及び／または（Ｚ９）－ヘキサデセノール（Ｚ９－１６：ＯＨ）であってよい。Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ ＯＬＥ１デサチュラーゼをＰｕｃｃｉｎｉａ ｇｒａｍｉｎｉｓまたはＡｒｘｕｌａ ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓからの異種デサチュラーゼに置き換えると、副生成物のＺ９－１６：ＯＨの生成が減少することが見出された（Ｔｓａｋｒａｋｌｉｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。

【0098】

天然酵母デサチュラーゼに代わる異種デサチュラーゼは、オクタデカノイル－ＣｏＡなどのＣ１８化合物に特異的であってよく、オクタデセノイル－ＣｏＡを主生成物として作製する（Ｔｓａｋｒａｋｌｉｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。

【0099】

Δ１２デサチュラーゼ及びさらなるデサチュラーゼ
上記Δ１２デサチュラーゼのいずれも、上記さらなるデサチュラーゼのいずれかと共に発現され得る。

【0100】

したがって、いくつかの実施形態では、細胞は以下を発現する：
－Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、配列番号：２に記載されるようなＰｉｄ１２、及び
－以下から選択されるさらなるデサチュラーゼ：Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：４に記載されるようなＤｅｓａｔ６１、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６に記載されるようなＤｅｓａｔ２４、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：８に記載されるようなＤｅｓａｔ５９、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５７に記載されるようなＤｅｓａｔ５６、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５９に記載されるようなＤｅｓａｔ６０、Ａｍｙｅｌｏｉｓデサチュラーゼ、例えば、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１０に記載されるようなＤｅｓａｔ１７もしくは配列番号：１２に記載されるようなＤｅｓａｔ１８、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６１に記載されるようなＤｅｓａｔ７４、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１８に記載されるようなＤｅｓａｔ２６、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓデサチュラーゼ、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１４に記載されるようなＤｅｓａｔ４２、Ｙａｒｒｏｗｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１６に記載されるようなＤｅｓａｔ６９、
またはそれらに対して少なくとも６０％の同一性もしくは類似性を有するその機能的バリアント。

【0101】

いくつかの実施形態では、細胞は以下を発現する：
－Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、配列番号：５５に記載されるようなＥｃａｕＤｅｓ１２、及び
－以下から選択されるさらなるデサチュラーゼ：Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：４に記載されるようなＤｅｓａｔ６１、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６に記載されるようなＤｅｓａｔ２４、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：８に記載されるようなＤｅｓａｔ５９、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５７に記載されるようなＤｅｓａｔ５６、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５９に記載されるようなＤｅｓａｔ６０、Ａｍｙｅｌｏｉｓデサチュラーゼ、例えば、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１０に記載されるようなＤｅｓａｔ１７もしくは配列番号：１２に記載されるようなＤｅｓａｔ１８、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６１に記載されるようなＤｅｓａｔ７４、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１８に記載されるようなＤｅｓａｔ２６、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓデサチュラーゼ、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１４に記載されるようなＤｅｓａｔ４２、Ｙａｒｒｏｗｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１６に記載されるようなＤｅｓａｔ６９、
またはそれらに対して少なくとも６０％の同一性もしくは類似性を有するその機能的バリアント。

【0102】

いくつかの実施形態では、細胞は以下を発現する：
－Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、配列番号：８５に記載されるようなＥｋｕ＿ｄ１２、及び
－以下から選択されるさらなるデサチュラーゼ：Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：４に記載されるようなＤｅｓａｔ６１、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６に記載されるようなＤｅｓａｔ２４、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：８に記載されるようなＤｅｓａｔ５９、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５７に記載されるようなＤｅｓａｔ５６、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５９に記載されるようなＤｅｓａｔ６０、Ａｍｙｅｌｏｉｓデサチュラーゼ、例えば、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１０に記載されるようなＤｅｓａｔ１７もしくは配列番号：１２に記載されるようなＤｅｓａｔ１８、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６１に記載されるようなＤｅｓａｔ７４、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１８に記載されるようなＤｅｓａｔ２６、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓデサチュラーゼ、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１４に記載されるようなＤｅｓａｔ４２、Ｙａｒｒｏｗｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１６に記載されるようなＤｅｓａｔ６９、
またはそれらに対して少なくとも６０％の同一性もしくは類似性を有するその機能的バリアント。

【0103】

いくつかの実施形態では、細胞は以下を発現する：
－Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、配列番号：８７に記載されるようなＥｅ＿ｄ１２、及び
－以下から選択されるさらなるデサチュラーゼ：Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：４に記載されるようなＤｅｓａｔ６１、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６に記載されるようなＤｅｓａｔ２４、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：８に記載されるようなＤｅｓａｔ５９、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５７に記載されるようなＤｅｓａｔ５６、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５９に記載されるようなＤｅｓａｔ６０、Ａｍｙｅｌｏｉｓデサチュラーゼ、例えば、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１０に記載されるようなＤｅｓａｔ１７もしくは配列番号：１２に記載されるようなＤｅｓａｔ１８、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６１に記載されるようなＤｅｓａｔ７４、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１８に記載されるようなＤｅｓａｔ２６、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓデサチュラーゼ、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１４に記載されるようなＤｅｓａｔ４２、Ｙａｒｒｏｗｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１６に記載されるようなＤｅｓａｔ６９、
またはそれらに対して少なくとも６０％の同一性もしくは類似性を有するその機能的バリアント。

【0104】

上記の所与のデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性または類似性を有するデサチュラーゼの機能的バリアントは、デサチュラーゼに対して少なくとも６１％、少なくとも６２％など、少なくとも６３％など、少なくとも６４％など、少なくとも６５％など、少なくとも６６％など、少なくとも６７％など、少なくとも６８％など、少なくとも６９％など、少なくとも７０％など、少なくとも７１％など、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの同一性または類似性を有する場合があると理解されることになる。

【0105】

Ｃ１４特異性の増加
多くの望ましいフェロモン化合物は、１４個の炭素鎖長を有する。したがって、Ｃ１４化合物の生成に対して反応を誘導することが必要となる場合がある。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される酵母細胞は、ヘキサデカノイル－ＣｏＡに対するよりも、テトラデカノイル－ＣｏＡに対してより高い特異性を有するデサチュラーゼ及び／または不飽和ヘキサデカノイル－ＣｏＡ（すなわち、ヘキサデカノイル－ＣｏＡ）に対するよりも、不飽和テトラデカノイル－ＣｏＡ（すなわち、テトラデセノイル－ＣｏＡ）に対してより高い特異性を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼを発現する。言い換えれば、デサチュラーゼは、１６個の鎖長を有する基質に対するよりも、１４個の炭素鎖長を有する基質に対してより特異的である。そのようなデサチュラーゼを発現する酵母細胞の例が、ＷＯ２０１８／１０９１６７、特に「デサチュラーゼ」と題した節に開示されている。

【0106】

酵母細胞内でのそのようなデサチュラーゼの（及び本明細書に記載されるレダクターゼのいずれかの）発現は、特に１６個の炭素鎖長を有する全不飽和脂肪族アルコールの割合と比較して、１４個の炭素鎖長を有する全不飽和脂肪族アルコールの割合を増加させる。必要な特異性を有するデサチュラーゼは、特にＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ、Ｃｈｏｒｉｓｔｎｅｕｒａ種から生じるデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａもしくはＣｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｒｏｓａｃｅａｎａから生じるデサチュラーゼなど、またはそれらに対して少なくとも６０％の同一性を有するそのバリアントである。

【0107】

いくつかの実施形態では、デサチュラーゼは、以下：
ｉ）配列番号：６に記載されるようなＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒのΔ９デサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性を有するΔ９デサチュラーゼ、
ｉｉ）配列番号：８に記載されるようなＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉのΔ９デサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性を有するデサチュラーゼ、
ｉｉｉ）配列番号：４に記載されるようなＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓのΔ９デサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性を有するデサチュラーゼ、
ｉｖ）配列番号：１８に記載されるようなＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａのΔ９デサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性を有するΔ９デサチュラーゼ、
及びそれらに対して少なくとも６０％の同一性または類似性、例えば、それらに対して少なくとも６１％など、少なくとも６２％など、少なくとも６３％など、少なくとも６４％など、少なくとも６５％など、少なくとも６６％など、少なくとも６７％など、少なくとも６８％など、少なくとも６９％など、少なくとも７０％など、少なくとも７１％など、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの同一性または類似性を有するその機能的バリアント
からなる群から選択される。

【0108】

それらのデサチュラーゼは、酵母細胞で発現される場合、Ｃ１４基質の不飽和化を選択的に触媒することが見出されている。

【0109】

そのような細胞では、不飽和テトラデカノイル－ＣｏＡ対不飽和ヘキサデカノイル－ＣｏＡの比は、少なくとも０．１、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５など、またはそれを超えるものである。

【0110】

以下で詳細に記載されるように、異種デサチュラーゼが脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼと共に発現される場合、酵母細胞は、不飽和脂肪族アルコールを生成する。

【0111】

そのような実施形態では、不飽和テトラデカノイル－ＣｏＡに由来する不飽和脂肪族アルコールの力価は、少なくとも１ｍｇ／Ｌ、少なくとも１．５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｇ／Ｌなど、少なくとも２ｇ／Ｌなど、少なくとも３ｇ／Ｌなど、少なくとも４ｇ／Ｌなど、少なくとも５ｇ／Ｌなど、またはそれを超えるものである。

【0112】

いくつかの実施形態では、１４個の鎖長を有する不飽和テトラデカノイル－ＣｏＡに由来する不飽和脂肪族アルコールの力価は、少なくとも１ｍｇ／Ｌ、少なくとも１．５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｇ／Ｌなど、少なくとも２ｇ／Ｌなど、少なくとも３ｇ／Ｌなど、少なくとも４ｇ／Ｌなど、少なくとも５ｇ／Ｌなど、またはそれを超えるものである。

【0113】

いくつかの実施形態では、不飽和脂肪族アルコールは、少なくとも１％、少なくとも１．５％など、少なくとも２％など、少なくとも２．５％など、少なくとも３％など、少なくとも３．５％など、少なくとも４％など、少なくとも４．５％など、少なくとも５％など、少なくとも７．５％など、少なくとも１０％などの、またはそれを超える１４個の鎖長を有する不飽和脂肪族アルコールを含んで生成される。いくつかの実施形態では、酵母細胞は、１４個の炭素鎖長を有する不飽和脂肪族アルコール及び１６個の炭素鎖長を有する不飽和脂肪族アルコールを含む、一連の炭素鎖長を有する不飽和脂肪族アルコールを生成する。そのような実施形態では、１４個の炭素鎖長を有する不飽和脂肪族アルコールと１６個の炭素鎖長を有する不飽和脂肪族アルコールとの合計に対する１４個の炭素鎖長を有する不飽和脂肪族アルコールの割合は、少なくとも５％、例えば、少なくとも７．５％など、少なくとも１０％など、少なくとも１５％など、少なくとも２０％など、またはそれを超える。

【0114】

所与のデサチュラーゼが必要な特異性を有するかどうかを試験する方法は、本明細書に記載されるように行われ得る。

【0115】

脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ
さらに本明細書では、脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ（ＦＡＲ）を発現する酵母細胞が提供され、本酵母細胞は、（Ｅ１２）－脂肪酸アシル－ＣｏＡまたは（Ｚ９，Ｅ１２）－脂肪酸アシル－ＣｏＡの少なくとも一部を、対応する脂肪族アルコールに変換できる。例えば、酵母細胞は、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールに変換できてよい。

【0116】

「脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ」及び「ＦＡＲ」という用語は、本明細書では交換可能に使用されることになる。「異種ＦＡＲ」という用語は、酵母細胞などの生物によって天然には発現されないＦＡＲを指す。

【0117】

ＦＡＲは２段階の反応を触媒する：
アシル－ＣｏＡ＋２ＮＡＤＰＨ＜＝＞ＣｏＡ＋アルコール＋２ＮＡＤＰ（＋）
式中、第１ステップでは脂肪酸アシル－ＣｏＡが脂肪族アルデヒドに還元され、その後に第２ステップで脂肪族アルデヒドが、脂肪族アルコールにさらに還元される。脂肪酸アシル－ＣｏＡは、不飽和または飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡであってよい。

【0118】

そのような反応を触媒できるＦＡＲは、ＥＣ番号１．２．１．８４のアルコール生成脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼである。

【0119】

一実施形態では、ＦＡＲは、Ａｇｒｏｔｉｓ、Ａｍｙｅｌｏｉｓ、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ、Ｂｏｍｂｕｓ、Ｃｈｉｌｏ、Ｃｙｄｉａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ、Ｌｏｂｅｓｉａ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ、Ｐｌｏｄｉａ、Ｐｌｕｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ、Ｔｙｔａ、及びＹｐｏｎｏｍｅｕｔａからなる群から選択される属の生物、例えば、Ａｇｒｏｔｉｓ ｉｐｓｉｌｏｎ、Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａ、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ、Ｂｏｍｂｕｓ ｌａｐｉｄａｒｉｕｓ、Ｃｈｉｌｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓａｌｉｓ、Ｃｙｄｉａ ｐｏｍｏｎｅｌｌａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｓｕｂｆｌｅｘａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ、Ｌｏｂｅｓｉａ ｂｏｔｒａｎａ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｎｕｂｉｌａｌｉｓ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚａｇ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚｅａ、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ、Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ、Ｔｙｔａ ａｌｂａ、ａｎｄ Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｒｏｒｅｌｌｕｓ、ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ及びＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａなどから生じる。

【0120】

一実施形態では、ＦＡＲは、ＦＡＲ１（配列番号：２０）、ＦＡＲ１６（配列番号：２２）、ＦＡＲ１７（配列番号：２４）、ＦＡＲ１９（配列番号：２６）、ＦＡＲ２８（配列番号：２８）、ＦＡＲ３２（配列番号：３０）、ＦＡＲ３８（配列番号：３２）、ＦＡＲ４４（配列番号：６３）、ＦＡＲ４８（配列番号：６５）、ＦＡＲ４９（配列番号：６７）、ＦＡＲ３８（配列番号：３２）、ＦＡＲ４（配列番号：６９）、ＦＡＲ６（配列番号：７１）、ＦＡＲ８（配列番号：７３）、ＦＡＲ１２（配列番号：７５）、ＦＡＲ１１（配列番号：７７）もしくはＦＡＲ５（配列番号：７９）、またはそれらに対して少なくとも６０％の同一性もしくは類似性、例えば、それらに対して少なくとも６１％など、少なくとも６２％など、少なくとも６３％など、少なくとも６４％など、少なくとも６５％など、少なくとも６６％など、少なくとも６７％など、少なくとも６８％など、少なくとも６９％など、少なくとも７０％など、少なくとも７１％など、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの同一性もしくは類似性を有するその機能的バリアントからなる群から選択される。

【0121】

一実施形態では、異種ＦＡＲは、Ａｇｒｏｔｉｓ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：７５に記載されるようなＦＡＲ（ＦＡＲ１２）などのＡｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ ＦＡＲである。いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、Ａｇｒｏｔｉｓ ＦＡＲの機能的バリアント、またはＡｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ ＦＡＲの機能的バリアント、例えば、配列番号：７５に記載されるＦＡＲ（ＦＡＲ１２）の機能的バリアントなどであり、それらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の同一性を有する。

【0122】

一実施形態では、異種ＦＡＲは、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：７７に記載されるようなＦＡＲ（ＦＡＲ１１）などのＢｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ ＦＡＲである。いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ＦＡＲの機能的バリアント、またはＢｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ ＦＡＲの機能的バリアント、例えば、配列番号：７７に記載されるＦＡＲ（ＦＡＲ１１）の機能的バリアントなどであり、それらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の同一性を有する。

【0123】

一実施形態では、異種ＦＡＲは、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：２０に記載されるようなＦＡＲ（ＦＡＲ１）などのＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ ＦＡＲである。いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ＦＡＲの機能的バリアント、またはＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ ＦＡＲの機能的バリアント、例えば、配列番号：２０に記載されるＦＡＲ（ＦＡＲ１）の機能的バリアントなどであり、それらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の同一性を有する。

【0124】

一実施形態では、異種ＦＡＲは、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：７１に記載されるようなＦＡＲ（ＦＡＲ６）などのＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ ＦＡＲである。いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ＦＡＲの機能的バリアント、またはＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ ＦＡＲの機能的バリアント、例えば、配列番号：７１に記載されるＦＡＲ（ＦＡＲ６）の機能的バリアントなどであり、それらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の同一性を有する。

【0125】

一実施形態では、異種ＦＡＲは、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：６９に記載されるようなＦＡＲ（ＦＡＲ４）などのＨｅｌｉｏｔｈｉｓ ｓｕｂｆｌｅｘａ ＦＡＲである。いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ＦＡＲの機能的バリアント、またはＨｅｌｉｏｔｈｉｓ ｓｕｂｆｌｅｘａ ＦＡＲの機能的バリアント、例えば、配列番号：６９に記載されるＦＡＲ（ＦＡＲ４）の機能的バリアントなどであり、それらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の同一性を有する。

【0126】

一実施形態では、異種ＦＡＲは、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：７９に記載されるようなＦＡＲ（ＦＡＲ５）などのＨｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＦＡＲである。いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ＦＡＲの機能的バリアント、またはＨｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＦＡＲの機能的バリアント、例えば、配列番号：７９に記載されるＦＡＲ（ＦＡＲ５）の機能的バリアントなどであり、それらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の同一性を有する。

【0127】

一実施形態では、異種ＦＡＲは、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：６３に記載されるようなＦＡＲ（ＦＡＲ４４）などのＯｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ ＦＡＲである。いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ＦＡＲの機能的バリアント、またはＯｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ ＦＡＲの機能的バリアント、例えば、配列番号：６３に記載されるＦＡＲ（ＦＡＲ４４）の機能的バリアントなどであり、それらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の同一性を有する。

【0128】

一実施形態では、異種ＦＡＲは、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：６５に記載されるようなＦＡＲ（ＦＡＲ４８）などのＯｓｔｒｉｎｉａ ｚａｇ ＦＡＲである。いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ＦＡＲの機能的バリアント、またはＯｓｔｒｉｎｉａ ｚａｇ ＦＡＲの機能的バリアント、例えば、配列番号：６５に記載されるＦＡＲ（ＦＡＲ４８）の機能的バリアントなどであり、それらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の同一性を有する。

【0129】

一実施形態では、異種ＦＡＲは、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：６７に記載されるようなＦＡＲ（ＦＡＲ４９）などのＯｓｔｒｉｎｉａ ｚｅａ ＦＡＲである。いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ＦＡＲの機能的バリアント、またはＯｓｔｒｉｎｉａ ｚｅａ ＦＡＲの機能的バリアント、例えば、配列番号：６７に記載されるＦＡＲ（ＦＡＲ４９）の機能的バリアントなどであり、それらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の同一性を有する。

【0130】

一実施形態では、異種ＦＡＲは、Ｐｌｏｄｉａ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：２８（ＦＡＲ２８）または配列番号：３０（ＦＡＲ３２）に記載されるようなＦＡＲなどのＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ ＦＡＲである。いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、Ｐｌｏｄｉａ ＦＡＲの機能的バリアント、またはＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ ＦＡＲの機能的バリアント、例えば、配列番号：２８（ＦＡＲ２８）もしくは配列番号：３０（ＦＡＲ３２）に記載されるＦＡＲの機能的バリアントなどであり、それらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の同一性を有する。

【0131】

一実施形態では、異種ＦＡＲは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：２２（ＦＡＲ１６）または配列番号：２４（ＦＡＲ１７）に記載されるようなＦＡＲなどのＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：２６に記載されるようなＦＡＲ（ＦＡＲ１９）などのＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ ＦＡＲである。いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ＦＡＲの機能的バリアント、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ ＦＡＲの機能的バリアント、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ ＦＡＲの機能的バリアント、配列番号：２２（ＦＡＲ１６）、配列番号：２４（ＦＡＲ１７）に記載されるＦＡＲの機能的バリアントまたは配列番号：２６に記載されるＦＡＲ（ＦＡＲ１９）の機能的バリアントなどであり、それらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の同一性を有する。

【0132】

一実施形態では、異種ＦＡＲは、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：３２に記載されるようなＦＡＲ（ＦＡＲ３８）などのＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ＦＡＲである。いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ＦＡＲの機能的バリアント、またはＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ＦＡＲの機能的バリアント、例えば、配列番号：３２に記載されるＦＡＲ（ＦＡＲ３８）の機能的バリアントなどであり、それらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の同一性を有する。

【0133】

一実施形態では、異種ＦＡＲは、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ＦＡＲである。一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：７３に記載されるようなＦＡＲ（ＦＡＲ８）などのＹｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｒｏｒｅｌｌｕｓ ＦＡＲである。いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ＦＡＲの機能的バリアント、またはＹｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｒｏｒｅｌｌｕｓ ＦＡＲの機能的バリアント、例えば、配列番号：７３に記載されるＦＡＲ（ＦＡＲ８）の機能的バリアントなどであり、それらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の同一性を有する。

【0134】

所与の酵素に関して「少なくとも６０％の同一性または類似性を有するそのバリアント」という用語は、本酵素に対して６０％以上の同一性または類似性、例えば、酵素に対して少なくとも６１％など、少なくとも６２％など、少なくとも６３％など、少なくとも６４％など、少なくとも６５％など、少なくとも６６％など、少なくとも６７％など、少なくとも６８％など、少なくとも６９％など、少なくとも７０％など、少なくとも７１％など、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、またはそれを超える同一性または類似性を有するバリアントを指すと理解されるものとする。

【0135】

本細胞は、少なくとも１つの異種ＦＡＲを発現する場合がある。いくつかの実施形態では、細胞は１つの異種ＦＡＲを発現する。しかしながら、少なくとも２つの異種ＦＡＲなどのいくつかの異種ＦＡＲを発現することが望ましい場合があり、それらは同一であるか、または異なっていてもよい。あるいは、少なくとも１つの異種ＦＡＲをコードする核酸のいくつかのコピー、例えば、少なくとも２つのコピー、少なくとも３つのコピーまたはそれを超えるコピーなどを発現することが望ましい場合がある。他の実施形態では、細胞は少なくとも２つの異種ＦＡＲ、例えば、３つの異種ＦＡＲを発現する。

【0136】

例えば、細胞は、ＦＡＲ１もしくはそのバリアントの２つのコピー、またはＦＡＲ１の１つのコピー及びＦＡＲ１６の１つのコピー、またはＦＡＲ１の２つのコピー、ＦＡＲ１６の１つのコピー及びＦＡＲ１９の１つのコピーを発現する場合がある。

【0137】

デサチュラーゼ及びＦＡＲ
上記ＦＡＲのいずれも、任意のデサチュラーゼ、特に本明細書に記載されるデサチュラーゼのいずれかと共に発現され得る。

【0138】

いくつかの実施形態では、細胞は以下を発現する：
－Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、配列番号：２に記載されるようなＰｉｄ１２、及び
－以下から選択されるさらなるデサチュラーゼ：Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：４に記載されるようなＤｅｓａｔ６１、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６に記載されるようなＤｅｓａｔ２４、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：８に記載されるようなＤｅｓａｔ５９、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５７に記載されるようなＤｅｓａｔ５６、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５９に記載されるようなＤｅｓａｔ６０、Ａｍｙｅｌｏｉｓデサチュラーゼ、例えば、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１０に記載されるようなＤｅｓａｔ１７もしくは配列番号：１２に記載されるようなＤｅｓａｔ１８、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６１に記載されるようなＤｅｓａｔ７４、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１８に記載されるようなＤｅｓａｔ２６、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓデサチュラーゼ、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１４に記載されるようなＤｅｓａｔ４２、Ｙａｒｒｏｗｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１６に記載されるようなＤｅｓａｔ６９、及び／または
－以下から選択されるＦＡＲ：Ａｇｒｏｔｉｓ ＦＡＲ、例えば、Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７５に記載されるようなＦＡＲ１２、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ＦＡＲ、例えば、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７７に記載されるようなＦＡＲ１１、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ＦＡＲ、例えば、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ ＦＡＲもしくはＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２０に記載されるようなＦＡＲ１もしくは配列番号：７１に記載されるようなＦＡＲ６、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ＦＡＲ、例えば、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｓｕｂｆｌｅｘａ ＦＡＲもしくはＨｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：６９に記載されるようなＦＡＲ４もしくは配列番号：７９に記載されるようなＦＡＲ５、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ ＦＡＲ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚａｇ ＦＡＲもしくはＯｓｔｒｉｎｉａ ｚｅａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：６３に記載されるようなＦＡＲ４４、配列番号：６５に記載されるようなＦＡＲ４８もしくは配列番号：６７に記載されるようなＦＡＲ４９、Ｐｌｏｄｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２８に記載されるようなＦＡＲ２８もしくは配列番号：３０に記載されるようなＦＡＲ３２、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ＦＡＲ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２２に記載されるようなＦＡＲ１６、もしくは配列番号：２４に記載されるようなＦＡＲ１７、もしくはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２６に記載されるようなＦＡＲ１９、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：３２に記載されるようなＦＡＲ３８、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ＦＡＲ、例えば、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｒｏｒｅｌｌｕｓ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７３に記載されるようなＦＡＲ８、
あるいはそれらに対して少なくとも６０％の同一性または類似性を有するその機能的バリアント。

【0139】

いくつかの実施形態では、細胞は以下を発現する：
－Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、配列番号：５５に記載されるようなＥｃａｕＤｅｓ１２、及び
－以下から選択されるさらなるデサチュラーゼ：Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：４に記載されるようなＤｅｓａｔ６１、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６に記載されるようなＤｅｓａｔ２４、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：８に記載されるようなＤｅｓａｔ５９、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５７に記載されるようなＤｅｓａｔ５６、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５９に記載されるようなＤｅｓａｔ６０、Ａｍｙｅｌｏｉｓデサチュラーゼ、例えば、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１０に記載されるようなＤｅｓａｔ１７もしくは配列番号：１２に記載されるようなＤｅｓａｔ１８、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６１に記載されるようなＤｅｓａｔ７４、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１８に記載されるようなＤｅｓａｔ２６、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓデサチュラーゼ、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１４に記載されるようなＤｅｓａｔ４２、Ｙａｒｒｏｗｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１６に記載されるようなＤｅｓａｔ６９、及び／または
－以下から選択されるＦＡＲ：Ａｇｒｏｔｉｓ ＦＡＲ、例えば、Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７５に記載されるようなＦＡＲ１２、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ＦＡＲ、例えば、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７７に記載されるようなＦＡＲ１１、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ＦＡＲ、例えば、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ ＦＡＲもしくはＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２０に記載されるようなＦＡＲ１もしくは配列番号：７１に記載されるようなＦＡＲ６、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ＦＡＲ、例えば、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｓｕｂｆｌｅｘａ ＦＡＲもしくはＨｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：６９に記載されるようなＦＡＲ４もしくは配列番号：７９に記載されるようなＦＡＲ５、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ ＦＡＲ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚａｇ ＦＡＲもしくはＯｓｔｒｉｎｉａ ｚｅａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：６３に記載されるようなＦＡＲ４４、配列番号：６５に記載されるようなＦＡＲ４８もしくは配列番号：６７に記載されるようなＦＡＲ４９、Ｐｌｏｄｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２８に記載されるようなＦＡＲ２８もしくは配列番号：３０に記載されるようなＦＡＲ３２、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ＦＡＲ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２２に記載されるようなＦＡＲ１６、もしくは配列番号：２４に記載されるようなＦＡＲ１７、もしくはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２６に記載されるようなＦＡＲ１９、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：３２に記載されるようなＦＡＲ３８、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ＦＡＲ、例えば、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｒｏｒｅｌｌｕｓ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７３に記載されるようなＦＡＲ８、
あるいはそれらに対して少なくとも６０％の同一性または類似性を有するその機能的バリアント。

【0140】

いくつかの実施形態では、細胞は以下を発現する：
－Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、配列番号：８５に記載されるようなＥｋｕ＿ｄ１２、及び
－以下から選択されるさらなるデサチュラーゼ：Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：４に記載されるようなＤｅｓａｔ６１、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６に記載されるようなＤｅｓａｔ２４、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：８に記載されるようなＤｅｓａｔ５９、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５７に記載されるようなＤｅｓａｔ５６、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５９に記載されるようなＤｅｓａｔ６０、Ａｍｙｅｌｏｉｓデサチュラーゼ、例えば、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１０に記載されるようなＤｅｓａｔ１７もしくは配列番号：１２に記載されるようなＤｅｓａｔ１８、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６１に記載されるようなＤｅｓａｔ７４、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１８に記載されるようなＤｅｓａｔ２６、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓデサチュラーゼ、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１４に記載されるようなＤｅｓａｔ４２、Ｙａｒｒｏｗｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１６に記載されるようなＤｅｓａｔ６９、及び／または
－以下から選択されるＦＡＲ：Ａｇｒｏｔｉｓ ＦＡＲ、例えば、Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７５に記載されるようなＦＡＲ１２、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ＦＡＲ、例えば、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７７に記載されるようなＦＡＲ１１、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ＦＡＲ、例えば、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ ＦＡＲもしくはＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２０に記載されるようなＦＡＲ１もしくは配列番号：７１に記載されるようなＦＡＲ６、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ＦＡＲ、例えば、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｓｕｂｆｌｅｘａ ＦＡＲもしくはＨｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：６９に記載されるようなＦＡＲ４もしくは配列番号：７９に記載されるようなＦＡＲ５、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ ＦＡＲ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚａｇ ＦＡＲもしくはＯｓｔｒｉｎｉａ ｚｅａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：６３に記載されるようなＦＡＲ４４、配列番号：６５に記載されるようなＦＡＲ４８もしくは配列番号：６７に記載されるようなＦＡＲ４９、Ｐｌｏｄｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２８に記載されるようなＦＡＲ２８もしくは配列番号：３０に記載されるようなＦＡＲ３２、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ＦＡＲ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２２に記載されるようなＦＡＲ１６、もしくは配列番号：２４に記載されるようなＦＡＲ１７、もしくはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２６に記載されるようなＦＡＲ１９、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：３２に記載されるようなＦＡＲ３８、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ＦＡＲ、例えば、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｒｏｒｅｌｌｕｓ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７３に記載されるようなＦＡＲ８、
あるいはそれらに対して少なくとも６０％の同一性または類似性を有するその機能的バリアント。

【0141】

いくつかの実施形態では、細胞は以下を発現する：
－Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、配列番号：８７に記載されるようなＥｅ＿ｄ１２、及び
－以下から選択されるさらなるデサチュラーゼ：Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：４に記載されるようなＤｅｓａｔ６１、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６に記載されるようなＤｅｓａｔ２４、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：８に記載されるようなＤｅｓａｔ５９、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５７に記載されるようなＤｅｓａｔ５６、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５９に記載されるようなＤｅｓａｔ６０、Ａｍｙｅｌｏｉｓデサチュラーゼ、例えば、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１０に記載されるようなＤｅｓａｔ１７もしくは配列番号：１２に記載されるようなＤｅｓａｔ１８、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６１に記載されるようなＤｅｓａｔ７４、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１８に記載されるようなＤｅｓａｔ２６、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓデサチュラーゼ、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１４に記載されるようなＤｅｓａｔ４２、Ｙａｒｒｏｗｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１６に記載されるようなＤｅｓａｔ６９、及び／または
－以下から選択されるＦＡＲ：Ａｇｒｏｔｉｓ ＦＡＲ、例えば、Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７５に記載されるようなＦＡＲ１２、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ＦＡＲ、例えば、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７７に記載されるようなＦＡＲ１１、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ＦＡＲ、例えば、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ ＦＡＲもしくはＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２０に記載されるようなＦＡＲ１もしくは配列番号：７１に記載されるようなＦＡＲ６、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ＦＡＲ、例えば、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｓｕｂｆｌｅｘａ ＦＡＲもしくはＨｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：６９に記載されるようなＦＡＲ４もしくは配列番号：７９に記載されるようなＦＡＲ５、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ ＦＡＲ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚａｇ ＦＡＲもしくはＯｓｔｒｉｎｉａ ｚｅａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：６３に記載されるようなＦＡＲ４４、配列番号：６５に記載されるようなＦＡＲ４８もしくは配列番号：６７に記載されるようなＦＡＲ４９、Ｐｌｏｄｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２８に記載されるようなＦＡＲ２８もしくは配列番号：３０に記載されるようなＦＡＲ３２、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ＦＡＲ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２２に記載されるようなＦＡＲ１６、もしくは配列番号：２４に記載されるようなＦＡＲ１７、もしくはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２６に記載されるようなＦＡＲ１９、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：３２に記載されるようなＦＡＲ３８、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ＦＡＲ、例えば、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｒｏｒｅｌｌｕｓ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７３に記載されるようなＦＡＲ８、
あるいはそれらに対して少なくとも６０％の同一性または類似性を有するその機能的バリアント。

【0142】

上記の所与のＦＡＲまたはデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性または類似性を有するＦＡＲまたはデサチュラーゼの機能的バリアントが、ＦＡＲまたはデサチュラーゼに対して少なくとも６１％、少なくとも６２％など、少なくとも６３％など、少なくとも６４％など、少なくとも６５％など、少なくとも６６％など、少なくとも６７％など、少なくとも６８％など、少なくとも６９％など、少なくとも７０％など、少なくとも７１％など、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの同一性または類似性を有してよいと理解されることになる。

【0143】

本Δ１２デサチュラーゼ、さらなるデサチュラーゼ及びＦＡＲを発現する酵母細胞は、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを生成できる。

【0144】

酵母細胞
本発明は、不飽和化合物、特に１２位に少なくとも１個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ及び不飽和脂肪族アルコールを生成するように改変または操作されている酵母細胞を提供する。それらの一部は、フェロモンの成分である。したがって、本明細書に開示される酵母細胞は、環境に優しいフェロモン生成のための改善されたプラットフォームを提供する。

【0145】

したがって、本明細書では、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成できる酵母細胞が提供され、本二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が１２位にあり、
本酵母細胞は、異種Δ１２デサチュラーゼを発現し、本デサチュラーゼは、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合（複数可）を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ、好ましくは不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入でき、
ここで、ｎ及びｎ’が整数であり、
ここで、０≦ｎ≦３であり、１≦ｎ’≦４である。

【0146】

好ましい実施形態では、基質として使用される飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ及びｎ’個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、同じ炭素鎖長を有する。

【0147】

異種Δ１２デサチュラーゼは、本明細書の節「Δ１２デサチュラーゼ」に開示されている通りであってよい。例えば、Δ１２デサチュラーゼは、ＰｌｏｄｉａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼなど、例えば、配列番号：２に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼ（Ｐｉｄ１２）など、またはそれらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントであってよい。例えば、Δ１２デサチュラーゼは、ＣａｄｒａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５５に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼ（ＥｃａｕＤｅｓ１２）など、またはそれらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントであってよい。例えば、Δ１２デサチュラーゼは、ＥｐｈｅｓｔｉａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼもしくはＥｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼなど、例えば、配列番号：８５（Ｅｋｕ＿ｄ１２）もしくは配列番号：８７（Ｅｅ＿ｄ１２）に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼなど、またはそれらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントであってよい。

【0148】

一実施形態では、本明細書に開示される酵母細胞は、本明細書の節「さらなるデサチュラーゼ」に開示される通りであってよいさらなるデサチュラーゼを発現する。例えば、さらなるデサチュラーゼは、飽和または不飽和脂肪酸の１２位以外の位置に二重結合を導入できるデサチュラーゼであってよい。いくつかの実施形態では、デサチュラーゼは、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：４に記載されるようなＤｅｓａｔ６１、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６に記載されるようなＤｅｓａｔ２４、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：８に記載されるようなＤｅｓａｔ５９、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５７に記載されるようなＤｅｓａｔ５６、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５９に記載されるようなＤｅｓａｔ６０、Ａｍｙｅｌｏｉｓデサチュラーゼ、例えば、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１０に記載されるようなＤｅｓａｔ１７もしくは配列番号：１２に記載されるようなＤｅｓａｔ１８、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６１に記載されるようなＤｅｓａｔ７４、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１８に記載されるようなＤｅｓａｔ２６、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓデサチュラーゼ、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１４に記載されるようなＤｅｓａｔ４２、Ｙａｒｒｏｗｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１６に記載されるようなＤｅｓａｔ６９、またはそれらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである。

【0149】

異種Δ１２デサチュラーゼ及びさらなるデサチュラーゼを発現する酵母細胞は、１２位に二重結合を有し、他の１箇所の位置に二重結合を有する二重不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成できる。一実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼ及びさらなる異種デサチュラーゼを発現する酵母細胞は、１２位及び９位に二重結合を有する脂肪酸アシル－ＣｏＡ、例えば、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡなどを生成できる。

【0150】

一実施形態では、本明細書に開示される酵母細胞は、本明細書の節「脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ」に開示される通りであってよいＦＡＲをさらに発現する。例えば、ＦＡＲは、Ａｇｒｏｔｉｓ ＦＡＲ、例えば、Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７５に記載されるようなＦＡＲ１２、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ＦＡＲ、例えば、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７７に記載されるようなＦＡＲ１１、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ＦＡＲ、例えば、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ ＦＡＲもしくはＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２０に記載されるようなＦＡＲ１もしくは配列番号：７１に記載されるようなＦＡＲ６、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ＦＡＲ、例えば、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｓｕｂｆｌｅｘａ ＦＡＲもしくはＨｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：６９に記載されるようなＦＡＲ４もしくは配列番号：７９に記載されるようなＦＡＲ５、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ ＦＡＲ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚａｇ ＦＡＲもしくはＯｓｔｒｉｎｉａ ｚｅａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：６３に記載されるようなＦＡＲ４４、配列番号：６５に記載されるようなＦＡＲ４８もしくは配列番号：６７に記載されるようなＦＡＲ４９、Ｐｌｏｄｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２８に記載されるようなＦＡＲ２８もしくは配列番号：３０に記載されるようなＦＡＲ３２、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ＦＡＲ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２２に記載されるようなＦＡＲ１６、もしくは配列番号：２４に記載されるようなＦＡＲ１７、もしくはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２６に記載されるようなＦＡＲ１９、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：３２に記載されるようなＦＡＲ３８、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ＦＡＲ、例えば、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｒｏｒｅｌｌｕｓ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７３に記載されるようなＦＡＲ８、またはそれらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントであってよい。

【0151】

異種Δ１２デサチュラーゼ、さらなるデサチュラーゼ、及びＦＡＲを発現する酵母細胞は、二重不飽和脂肪族アルコール、例えば、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールなどを生成できる。言い換えれば、異種Δ１２デサチュラーゼ、さらなるデサチュラーゼ、及びＦＡＲを発現する酵母細胞は、異種Δ１２デサチュラーゼ及びさらなる異種デサチュラーゼによって生成される（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を、ＦＡＲの作用によって（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールに変換できる。

【0152】

いくつかの実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼ、さらなる異種デサチュラーゼまたはＦＡＲをコードする遺伝子は、本酵母細胞のためにコドン最適化されている。

【0153】

一実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼ、さらなる異種デサチュラーゼまたはＦＡＲをコードする遺伝子のうち少なくとも１つが、酵母細胞内に高コピー数で存在する。

【0154】

一実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼ、さらなる異種デサチュラーゼまたはＦＡＲをコードする遺伝子のうち少なくとも１つが、誘導性プロモーターの制御下にある。

【0155】

一実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼ、さらなる異種デサチュラーゼまたはＦＡＲをコードする遺伝子のうち少なくとも１つが、各々独立して細胞のゲノム内または酵母細胞内に含まれるベクター内に含まれる。

【0156】

一実施形態では、酵母細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｙａｒｒｏｗｉａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ及びＬｉｐｏｍｙｃｅｓから選択される属に属し、任意に酵母細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ ｌｉｐｏｆｅｒａ、Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ ｓｔａｒｋｅｙｉ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇｌｕｔｉｎｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｐｕｌｌｕｌａｎ及びＹａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａから選択される種に属し、好ましくは酵母細胞は、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞である。

【0157】

いくつかの実施形態では、酵母細胞は、節「核酸」に記載されるような、核酸または核酸の系を含む。

【0158】

本発明による酵母細胞は、発酵ブロス、発酵系、及び／または触媒系に含まれてよい。言い換えれば、発酵ブロス、発酵系、及び／または触媒系は、本発明による酵母細胞を含んでよい。

【0159】

一実施形態では、酵母細胞は、異種ＮＡＤ（Ｐ）Ｈシトクロムｂ５オキシドレダクターゼ（Ｎｃｂ５ｏｒ）をさらに発現する。「ＮＡＤ（Ｐ）Ｈシトクロムｂ５オキシドレダクターゼ」及び「Ｎｃｂ５ｏｒ」という用語は、本明細書では交換可能に使用されることになる。「異種Ｎｃｂ５ｏｒ」という用語は、細胞などの生物によって天然には発現されないＮｃｂ５ｏｒを指す。

【0160】

Ｎｃｂ５ｏｒは、ヘムタンパク質をアクセプターとして用いて、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨに対して作用するオキシドレダクターゼである。Ｎｃｂ５ｏｒは、シトクロムｂ５、シトクロムｂ５レダクターゼ及びＣＨＯＲＤ－ＳＧＴ１に類似した機能ドメインを含有する（Ｄｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．，２０１０）。Ｎｃｂ５ｏｒｓは、以下の反応を触媒する：
２Ｆｅ^３＋＋ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ＜＝＞２Ｆｅ^２＋＋Ｈ＋＋ＮＡＤ（Ｐ）＋

【0161】

そのような反応を触媒できるＮｃｂ５ｏｒは、ＥＣ番号１．６．２．２を有する。

【0162】

デサチュラーゼ及び／またはＦＡＲを発現する細胞内における１つ以上のＮｃｂ５ｏｒの発現は、それによって不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ及び／または不飽和脂肪族アルコールの力価の増加がもたらされるため、デサチュラーゼ及び／またはＦＡＲの活性に好影響を及ぼす。したがって、デサチュラーゼ及び／またはＦＡＲならびに１つ以上のＮｃｂ５ｏｒを発現する酵母細胞は、同じデサチュラーゼ及び／またはＦＡＲを発現するが、異種Ｎｃｂ５ｏｒを発現しない酵母細胞と比較して、同じ条件で培養される場合により高い力価で本化合物を生成できる。

【0163】

Ｎｃｂ５ｏｒは、植物、昆虫または哺乳動物、例えば、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓなどから生じてよい。一実施形態では、Ｎｃｂ５ｏｒは、昆虫、例えば、Ａｇｒｏｔｉｓ、Ａｍｙｅｌｏｉｓ、Ａｐｈａｎｔｏｐｕｓ、Ａｒｃｔｉａ、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ、Ｂｏｍｂｕｓ、Ｂｏｍｂｙｘ、Ｃｈｉｌｏ、Ｃｙｄｉａ、Ｄａｎａｕｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、Ｅｕｍｅｔａ、Ｇａｌｌｅｒｉａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ、Ｈｙｐｏｓｍｏｃｏｍａ、Ｌｅｐｔｉｄｅａ、Ｌｏｂｅｓｉａ、Ｍａｎｄｕｃａ、Ｏｐｅｒｏｐｈｔｅｒａ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ、Ｐａｐｉｌｉｏ、Ｐａｐｉｌｉｏ、Ｐａｐｉｌｉｏ、Ｐｉｅｒｉｓ、Ｐｌｕｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ、及びＶａｎｅｓｓａ属の昆虫などから生じる。一実施形態では、Ｎｃｂ５ｏｒは、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａ、Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ、Ａｐｈａｎｔｏｐｕｓ ｈｙｐｅｒａｎｔｕｓ、Ａｒｃｔｉａ ｐｌａｎｔａｇｉｎｉｓ、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ、Ｂｏｍｂｕｓ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ、Ｂｏｍｂｙｘ ｍａｎｄａｒｉｎａ、Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ、Ｃｈｉｌｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓａｌｉｓ、Ｃｙｄｉａ ｐｏｍｏｎｅｌｌａ、Ｄａｎａｕｓ ｐｌｅｘｉｐｐｕｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ、Ｅｕｍｅｔａ ｊａｐｏｎｉｃａ、Ｇａｌｌｅｒｉａ ｍｅｌｌｏｎｅｌｌａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ、Ｈｙｐｏｓｍｏｃｏｍａ ｋａｈａｍａｎｏａ、Ｌｅｐｔｉｄｅａ ｓｉｎａｐｉｓ、Ｌｏｂｅｓｉａ ｂｏｔｒａｎａ、Ｍａｎｄｕｃａ ｓｅｘｔａ、Ｏｐｅｒｏｐｈｔｅｒａ ｂｒｕｍａｔａ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ、Ｐａｐｉｌｉｏ ｍａｃｈａｏｎ、Ｐａｐｉｌｉｏ ｐｏｌｙｔｅｓ、Ｐａｐｉｌｉｏ ｘｕｔｈｕｓ、Ｐｉｅｒｉｓ ｒａｐａｅ、Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ、及びＶａｎｅｓｓａ ｔａｍｅａｍｅａから選択される昆虫から生じる。

【0164】

一実施形態では、Ｎｃｂ５ｏｒは、２０２２年５月１０日に同じ出願人によって出願された「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｓｅｃｔ ｐｈｅｒｏｍｏｎｅｓ」と題した特許出願ＰＣＴ／ＥＰ２０２２／０６２６４１における節「配列概要」内の表「Ｎｃｂ５ｏｒ」に記載されるＮｃｂ５ｏｒの群から選択される。

【0165】

したがって、一実施形態では、Ｎｃｂ５ｏｒは、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：８８、配列番号：８９及び配列番号：９０に記載されるＮｃｂ５ｏｒまたはそれらに対して少なくとも７０％の同一性もしくは類似性、例えば、それらに対して少なくとも７５％などの同一性、少なくとも８０％などの同一性、少なくとも８５％などの同一性、少なくとも９０％などの同一性、少なくとも９５％などの同一性もしくは類似性を有する機能的バリアントの群から選択される。

【0166】

いくつかの実施形態では、酵母細胞は、ＷＯ２０１８／１０９１６３に、及び欧州特許第３５５５２６８号に、特に「Ｒｅｄｕｃｅｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｈｆｄ１，Ｈｆｄ４，Ｐｅｘ１０，Ｆａｏ１，ＧＰＡＴ ｏｒ ａ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ ｔｈｅｒｅｏｆ」と題した節に開示されるように１つ以上のタンパク質の活性が低下している。例えば、酵母細胞は、Ｐｅｘ１０、Ｈｆｄ１、Ｈｆｄ４、Ｆａｏ１及び／またはＧＰＡＴの活性低下（すなわち、下方制御）をもたらす変異を有する場合がある。好ましくは、酵母細胞は、少なくともＦａｏ１ならびにＨｆｄ１、Ｈｆｄ４、Ｐｅｘ１０及び／またはＧＰＡＴのうち１つ以上の活性低下をもたらす少なくとも１つの変異を有する。そのような変異は、異種デサチュラーゼ及び異種脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼを発現する酵母細胞内における不飽和脂肪族アルコール及び／または不飽和脂肪族アルコールの酢酸エステルの生成を増加させる可能性がある。

【0167】

したがって、一実施形態では、酵母細胞は、Ｈｆｄ１、Ｈｆｄ４、ＧＰＡＴ、Ｆａｏ１、Ｐｅｘ１０のうち１つ以上の部分的または全体的な活性喪失をもたらす変異を有し、例えば、少なくともＦａｏ１及びＨｆｄ１、Ｈｆｄ４、Ｐｅｘ１０またはＧＰＡＴのうち１つ以上の部分的または全体的な活性喪失をもたらす変異などを有する。

【0168】

一実施形態では、酵母細胞は、ＰＥＸ１０（アクセッション番号：ＸＰ＿５０１３１１．１）ならびにＨＦＤ１（アクセッション番号：ＸＰ＿５０５８０２．１）、ＨＦＤ４（アクセッション番号：ＸＰ＿５００３８０．１Ｘ）、ＦＡＯ１（アクセッション番号：ＸＰ＿５００８６４．１）及び／またはＧＰＡＴ（アクセッション番号：ＸＰ＿５０１２７５．１）のうち少なくとも１つ、あるいはそれらに対して少なくとも６０％の同一性を有するそのホモログに変異を有する。

【0169】

一実施形態では、酵母細胞は、ＦＡＯ１（アクセッション番号：ＸＰ＿５００８６４．１）ならびにＨＦＤ１（アクセッション番号：ＸＰ＿５０５８０２．１）、ＨＦＤ４（アクセッション番号：ＸＰ＿５００３８０．１Ｘ）、ＰＥＸ１０（アクセッション番号：ＸＰ＿５０１３１１．１）及び／またはＧＰＡＴ（アクセッション番号：ＸＰ＿５０１２７５．１）のうち少なくとも１つ、あるいはそれらに対して少なくとも６０％の同一性を有するそのホモログに変異を有する。

【0170】

一実施形態では、ＨＦＤ１（アクセッション番号：ＸＰ＿５０５８０２．１）、ＨＦＤ４（アクセッション番号：ＸＰ＿５００３８０．１Ｘ）、ＰＥＸ１０（アクセッション番号：ＸＰ＿５０１３１１．１）及び／またはＦＡＯ１（アクセッション番号：ＸＰ＿５００８６４．１）またはそれらに対して少なくとも６０％の同一性を有するそのホモログが欠失もしくは変異し、Ｈｆｄ１、Ｈｆｄ４、Ｐｅｘ１０、及び／またはＦａｏ１の活性の部分的喪失もしくは全体的喪失をもたらし、及び／またはＧＰＡＴもしくはそれに対して少なくとも６０％の同一性を有するそのホモログが変異し、ＧＰＡＴの活性低下をもたらす。

【0171】

一実施形態では、酵母細胞は、少なくとも１つのＰＯＸ遺伝子、例えば、ＰＯＸ１（アクセッション番号：Ｏ７４９３４．１）、ＰＯＸ２（アクセッション番号：ＸＰ＿５０５２６４．１）、ＰＯＸ３（アクセッション番号：ＸＰ＿５０３２４４．１）、ＰＯＸ４（アクセッション番号：ＸＰ＿５０４４７５．１）、ＰＯＸ５（アクセッション番号：ＸＰ＿５０２１９９．１）、及びＰＯＸ６（アクセッション番号：ＸＰ＿５０３６３２．１）からなる群から選択されるＰＯＸ遺伝子などにおける変異を含む。

【0172】

一実施形態では、酵母細胞は、ＰＯＸ１（アクセッション番号：Ｏ７４９３４．１）、ＰＯＸ２（アクセッション番号：ＸＰ＿５０５２６４．１）、ＰＯＸ３（アクセッション番号：ＸＰ＿５０３２４４．１）、ＰＯＸ４（アクセッション番号：ＸＰ＿５０４４７５．１）、ＰＯＸ５（アクセッション番号：ＸＰ＿５０２１９９．１）、及び／またはＰＯＸ６（アクセッション番号：ＸＰ＿５０３６３２．１）あるいはそれらに対して少なくとも６０％の同一性を有するそのホモログに欠失または変異を含み、Ｐｏｘ１、Ｐｏｘ２、Ｐｏｘ３、Ｐｏｘ４、Ｐｏｘ５及び／またはＰｏｘ６の部分的な活性喪失または全体的な活性喪失をもたらす。

【0173】

酵母細胞は、任意の種類のタンパク質を発現するようにさらに操作されてよい。そのような他のタンパク質の発現は、本明細書に開示される化合物の生成、例えば、力価などを改善する場合がある。一実施形態では、酵母細胞は以下を発現する：
ｉ）異種シトクロムｂ５、
ｉｉ）異種シトクロムｂ５レダクターゼ、
ｉｉｉ）ヘモグロビン、
ｉｖ）異種チオエステラーゼ遺伝子、及び／または
ｖ）脂肪酸アシルシンターゼとチオエステラーゼとの融合タンパク質。

【0174】

酵母細胞の天然遺伝子も操作されてよい。一実施形態では、酵母細胞は、以下の不活性化または改変を有する：
ｉ）全体的もしくは部分的な活性喪失をもたらす天然エロンガーゼ（複数可）、
ｉｉ）全体的もしくは部分的な活性喪失をもたらすチオエステラーゼ（複数可）、及び／または
ｉｉｉ）天然脂肪族アルデヒドデヒドロゲナーゼ（複数可）、脂肪族アルコールオキシダーゼ（複数可）、ペルオキシソーム形成因子及び／または脂肪酸アシルシンターゼ（複数可）の活性。

【0175】

いくつかの実施形態では、１４個の鎖長を有する脂肪酸アシルの利用能が増加またはさらに増加するように、酵母細胞がさらに改変される。例えば、脂肪酸シンターゼ複合体は、テトラデカノイル－ＣｏＡの形成が増加するように操作されてよい。脂肪酸シンターゼ複合体（ＥＣ２．３．１．８６）は、２つのサブユニット、すなわち、Ｆａｓ１（ベータサブユニット）及びＦａｓ２（アルファサブユニット）からなる。アルファサブユニットは、合成脂肪酸の長さの決定に関与すると仮定されるケトアシルシンターゼドメイン（「結合ポケット」）を含む。

【0176】

したがって、代謝フラックスを、１４個の炭素（Ｃ１４）の鎖長を有する不飽和脂肪族アルコール、酢酸エステルまたはアルデヒドの生成に誘導するために、酵母細胞は、改変されたケトンシンターゼドメインを有する脂肪酸アシルシンターゼバリアントをさらに発現してよい。理論に束縛されるものではないが、改変されたケトンシンターゼドメインによって改変された結合ポケットがもたらされ、それゆえ、Ｃ１４基質などの中間の長さの基質をより容易に収容し、それによってより高い割合のＣ１４生成物を生成すると仮定される。

【0177】

一実施形態では、酵母細胞は、本明細書に記載されるような酵母細胞であり、本細胞は、改変された脂肪酸シンターゼ複合体をさらに発現する。一実施形態では、脂肪酸シンターゼ複合体は、複合体のアルファサブユニットをコードする遺伝子を変異させることによって改変される。いくつかの実施形態では、変異は、ＦＡＳ２をコードする遺伝子内にある。一実施形態では、酵母細胞は、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ酵母細胞であり、変異によって、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ ＦＡＳ２の残基１２２０（Ｉ１２２０）、残基１２１７（Ｍ１２１７）または残基１２２６（Ｍ１２２６）のうち１つ以上の改変がもたらされ、バリアントＦＡＳ２を生じる場合がある。当業者であれば、そのような変異を設計する方法を知っていることになる。

【0178】

好ましくは、変異によって、Ｉ１２２０Ｆバリアント、Ｉ１２２０Ｗバリアント、Ｉ１２２０ＹバリアントまたはＩ１２２０Ｈバリアントが生じる。特定の実施形態では、変異によってＩ１２２０Ｆバリアントが生じる。いくつかの実施形態では、変異によって、Ｍ１２１７Ｆバリアント、Ｍ１２１７Ｗバリアント、Ｍ１２１７ＹバリアントまたはＭ１２１７Ｈバリアントが生じる。他の実施形態では、変異によって、Ｍ１２２６Ｆバリアント、Ｍ１２２６Ｗバリアント、Ｍ１２２６ＹバリアントまたはＭ１２２６Ｈバリアントが生じる。上記変異のうち２つ以上、例えば、残基Ｉ１２２０、Ｍ１２１７またはＭ１２２６の２つの変異または３つの変異などを有する酵母細胞も企図される。

【0179】

細胞によって生成される脂肪酸アシル－ＣｏＡは、細胞によって対応する脂肪酸にさらに変換されてよい。本脂肪酸は、遊離脂肪酸またはトリアシルグリセリド（脂質）の一部であってよい。

【0180】

一実施形態では、酵母細胞は、少なくとも０．００５ｍｇ／Ｌ、例えば、少なくとも０．０１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０７５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．４ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．７ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．８ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．９ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも４ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも６０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも８０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも９０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも４００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｇ／Ｌなど、少なくとも２ｇ／Ｌなど、少なくとも５ｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｇ／Ｌなど、少なくとも２０ｇ／Ｌなど、少なくとも５０ｇ／Ｌなど、少なくとも１００ｇ／Ｌなどの、またはそれを超える力価でＥ１２－脂肪酸及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン酸を生成できる。

【0181】

一実施形態では、酵母細胞は、少なくとも０．００５ｍｇ／Ｌ、例えば、少なくとも０．０１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０７５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．４ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．７ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．８ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．９ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも４ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも６０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも８０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも９０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも４００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｇ／Ｌなど、少なくとも２ｇ／Ｌなど、少なくとも５ｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｇ／Ｌなど、少なくとも２０ｇ／Ｌなど、少なくとも５０ｇ／Ｌなど、少なくとも１００ｇ／Ｌなどの、またはそれを超える力価でＥ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを生成できる。

【0182】

異種Δ１２デサチュラーゼ、任意にさらなる異種デサチュラーゼ、及びさらに任意に異種ＦＡＲを発現する、本明細書に開示される酵母細胞は、１２位に二重結合を有し、１２位以外の位置（複数可）に任意に他の二重結合（複数可）を有する、少なくとも１３個の炭素鎖長を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ及び／または不飽和脂肪族アルコールを生成できる。

【0183】

したがって、本明細書では、本明細書に提示される方法に従って得られる不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ及び不飽和脂肪族アルコールが提供される。

【0184】

また本明細書では、本発明によるフェロモン化合物を生成できる酵母細胞が提供され、酵母細胞は、異種Δ１２脂肪酸アシル－ＣｏＡデサチュラーゼを発現する。

【0185】

いくつかの実施形態では、酵母細胞は、さらなる異種デサチュラーゼを発現する。

【0186】

いくつかの実施形態では、酵母細胞は、少なくとも１つのアルコール生成脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ（ＦＡＲ）をさらに発現する。

【0187】

さらに本明細書では、本明細書に提示される方法に従って得られる不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ及び／または不飽和脂肪族アルコールの使用が提供される。そのような化合物は、例えば、害虫の存在をモニターするために、または害虫の存在を妨害するために使用され得、例えば、それらはフェロモン組成物として製剤化され得る。

【0188】

不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ
一実施形態では、酵母細胞は、異種Δ１２デサチュラーゼ、及び任意にさらなるデサチュラーゼを発現し、本酵母細胞は、１２位に二重結合を有し、任意に１２位以外の位置に二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成できる。

【0189】

したがって、本明細書に開示される酵母細胞は、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成でき、本二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が１２位にあり、
本酵母細胞は、異種Δ１２デサチュラーゼを発現し、本デサチュラーゼは、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合（複数可）を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ、好ましくは不飽和脂肪酸アシル－ＣＯＡの１２位に二重結合を導入でき、
ここで、ｎ及びｎ’が整数であり、
ここで、０≦ｎ≦３であり、１≦ｎ’≦４である。

【0190】

好ましい実施形態では、基質として使用される飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ及びｎ’個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、同じ炭素鎖長を有する。

【0191】

一実施形態では、酵母細胞は、本明細書の節「さらなるデサチュラーゼ」に開示されるようなさらなるデサチュラーゼを発現する。

【0192】

一実施形態では、ｎ＝０である。言い換えれば、酵母細胞は、二重結合を有しない飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに、最大で４個の二重結合、例えば、１個、２個、３個、または４個などの二重結合を導入できる。したがって、本酵母細胞は、１個、２個、３個、または４個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成できる。好ましい実施形態では、酵母細胞は、二重結合をテトラデカノイル－ＣｏＡに導入し、それによって、本テトラデカノイル－ＣｏＡを（Ｅ１２）－テトラデセノイル－ＣｏＡに変換できる。

【0193】

一実施形態では、ｎ＝１である。言い換えれば、酵母は、１２位以外の位置、例えば、８位、９位、１０位、１１位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位または２２位などに１個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに、最大で３個の二重結合、例えば、１個、２個または３個などの二重結合を導入できる。したがって、本酵母細胞は、２個、３個または４個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ、好ましくは２個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成できる。一実施形態では、酵母細胞は、９位に二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに二重結合を導入できる。好ましい実施形態では、酵母細胞は、二重結合を（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡに導入し、それによって、本（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡを（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡに変換できる。

【0194】

一実施形態では、ｎ＝２である。言い換えれば、酵母細胞は、１２位以外の位置に２個の二重結合、例えば、８位、９位、１０位、１１位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位または２２位のうち少なくとも２箇所に二重結合などを有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに、最大で２個の二重結合、例えば、１個または２個などの二重結合を導入できる。したがって、本酵母細胞は、３個または４個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成できる。

【0195】

一実施形態では、ｎ＝３である。言い換えれば、酵母は、１２位以外の位置に３個の二重結合、例えば、８位、９位、１０位、１１位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位または２２位のうち少なくとも３箇所に１個の二重結合などを有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに１個の二重結合を導入できる。したがって、本酵母細胞は、４個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成できる。

【0196】

一実施形態では、ｎ’＝１及びｎ＝０である。言い換えれば、酵母細胞は、二重結合を有しない飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを、１２位に１個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに変換できる。

【0197】

一実施形態では、ｎ’＝２及びｎ＝０である。言い換えれば、酵母細胞は、飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを、２個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに変換でき、１個の二重結合が１２位にある。

【0198】

一実施形態では、ｎ’＝３及びｎ＝０である。言い換えれば、酵母細胞は、飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを、３個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに変換でき、１個の二重結合が１２位にある。

【0199】

一実施形態では、ｎ’＝４及びｎ＝０である。言い換えれば、酵母細胞は、飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを、４個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに変換でき、１個の二重結合が１２位にある。

【0200】

好ましい実施形態では、ｎ’＝２及びｎ＝１である。言い換えれば、酵母細胞は、１個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを、２個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに変換でき、１個の二重結合が１２位にある。

【0201】

一実施形態では、ｎ’＝３及びｎ＝１である。言い換えれば、酵母細胞は、１個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを、３個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに変換でき、１個の二重結合が１２位にある。

【0202】

一実施形態では、ｎ’＝４及びｎ＝１である。言い換えれば、酵母細胞は、１個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを、４個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに変換でき、１個の二重結合が１２位にある。

【0203】

一実施形態では、ｎ’＝３及びｎ＝２である。言い換えれば、酵母細胞は、２個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを、３個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに変換でき、１個の二重結合が１２位にある。

【0204】

一実施形態では、ｎ’＝４及びｎ＝２である。言い換えれば、酵母細胞は、２個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを、４個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに変換でき、１個の二重結合が１２位にある。

【0205】

一実施形態では、ｎ’＝４及びｎ＝３である。言い換えれば、酵母細胞は、３個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを、４個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡに変換でき、１個の二重結合が１２位にある。

【0206】

一実施形態では、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、少なくとも１３個、例えば、少なくとも１４個など、少なくとも１５個など、少なくとも１６個など、少なくとも１７個など、少なくとも１８個など、少なくとも１９個など、少なくとも２０個など、少なくとも２１個など、少なくとも２２個などの炭素鎖長を有する。好ましい実施形態では、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、１３、１４、１５、１６、１７または１８個の炭素鎖長を有する。

【0207】

一実施形態では、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、１４個の長さを有し、テトラデカノイル－ＣｏＡまたは（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡである。好ましい実施形態では、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、１４個の長さを有し、（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡである。

【0208】

一実施形態では、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、少なくとも１３個、例えば、少なくとも１４個など、少なくとも１５個など、少なくとも１６個など、少なくとも１７個など、少なくとも１８個など、少なくとも１９個など、少なくとも２０個など、少なくとも２１個など、少なくとも２２個などの炭素鎖長を有する。一実施形態では、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、多くとも１８個、例えば、多くとも１７個など、多くとも１６個など、多くとも１５個など、多くとも１４個など、多くとも１３個など、多くとも１２個などの炭素鎖長を有する。好ましい実施形態では、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、１３、１４、１５、１６、１７または１８個の炭素鎖長を有する。

【0209】

一実施形態では、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、１個の二重結合を有し、（Ｅ１２）－テトラデセノイル－ＣｏＡである。

【0210】

一実施形態では、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、２個の二重結合を有し、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡである。

【0211】

したがって、また本明細書では、本明細書に提示される方法に従って得られる（Ｅ１２）－テトラデセノイル－ＣｏＡ及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡも提供される。

【0212】

不飽和脂肪族アルコール
一実施形態では、Δ１２デサチュラーゼ、及び任意にさらなるデサチュラーゼを発現する酵母細胞はまた、本明細書の節「脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ」に提示されるようなＦＡＲも発現する。本酵母細胞は、１２位に二重結合を有し、任意に１２位以外の位置、例えば、９位などに二重結合を有する不飽和脂肪族アルコールを生成できてよい。

【0213】

不飽和脂肪族アルコールを生成するために必要な本ＦＡＲは、本明細書の節「脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ」に記載される任意のＦＡＲであり得、本不飽和脂肪族アルコールは、本明細書の節「不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ」に記載される脂肪酸アシル－ＣｏＡに対応する任意の不飽和脂肪族アルコールであり得る。

【0214】

一実施形態では、不飽和脂肪族アルコールは、（Ｅ１２）－脂肪族アルコール、例えば、（Ｅ１２）－テトラデセン－１－オールなどである。一実施形態では、不飽和脂肪族アルコールは、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールである。

【0215】

したがって、さらに本明細書では、本明細書に提示される方法によって得られる（Ｅ１２）－脂肪族アルコール、例えば、（Ｅ１２）－テトラデセン－１－オール、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールなどが提供される。

【0216】

不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの生成方法
本明細書では、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成する方法が提供され、本二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が、酵母細胞内の１２位にあり、本方法は、
ｉ）本明細書で定義されるような酵母細胞を提供するステップ、
ｉｉ）異種Δ１２デサチュラーゼの発現を可能にする条件下において培地中で本酵母細胞をインキュベートし、本デサチュラーゼが、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ、好ましくは不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入できるステップを含み、
ここで、ｎ及びｎ’が整数であり、
ここで、０≦ｎ≦３であり、１≦ｎ’≦４であり、
それによって、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成し、本二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が１２位にある。

【0217】

好ましい実施形態では、基質として使用される飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ及びｎ’個の二重結合を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、同じ炭素鎖長を有する。

【0218】

一実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼは、本明細書の節「Δ１２デサチュラーゼ」に定義される通りである。例えば、Δ１２デサチュラーゼは、ＰｌｏｄｉａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼなど、例えば、配列番号：２に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼ（Ｐｉｄ１２）など、またはそれらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の同一性もしくは類似性を有するその機能的バリアントであってよい。例えば、Δ１２デサチュラーゼは、ＣａｄｒａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５５に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼ（ＥｃａｕＤｅｓ１２）など、またはそれらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントであってよい。例えば、Δ１２デサチュラーゼは、ＥｐｈｅｓｔｉａΔ１２デサチュラーゼ、例えば、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼもしくはＥｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼなど、例えば、配列番号：８５（Ｅｋｕ＿ｄ１２）もしくは配列番号：８７（Ｅｅ＿ｄ１２）に記載されるようなΔ１２デサチュラーゼなど、またはそれらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントであってよい。

【0219】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、本明細書の節「さらなるデサチュラーゼ」に定義される通りである。例えば、さらなるデサチュラーゼは、飽和または不飽和脂肪酸の１２位以外の位置に二重結合を導入できるデサチュラーゼであってよい。いくつかの実施形態では、さらなるデサチュラーゼは、酵母細胞から生じるデサチュラーゼ、例えば、同種デサチュラーゼなどである。いくつかの実施形態では、さらなるデサチュラーゼは、酵母細胞から生じないデサチュラーゼ、例えば、異種デサチュラーゼなどである。いくつかの実施形態では、デサチュラーゼは、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：４に記載されるようなＤｅｓａｔ６１、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６に記載されるようなＤｅｓａｔ２４、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：８に記載されるようなＤｅｓａｔ５９、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５７に記載されるようなＤｅｓａｔ５６、もしくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：５９に記載されるようなＤｅｓａｔ６０、Ａｍｙｅｌｏｉｓデサチュラーゼ、例えば、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１０に記載されるようなＤｅｓａｔ１７もしくは配列番号：１２に記載されるようなＤｅｓａｔ１８、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：６１に記載されるようなＤｅｓａｔ７４、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１８に記載されるようなＤｅｓａｔ２６、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓデサチュラーゼ、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１４に記載されるようなＤｅｓａｔ４２、Ｙａｒｒｏｗｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａデサチュラーゼなど、例えば、配列番号：１６に記載されるようなＤｅｓａｔ６９、またはそれらのデサチュラーゼに対して少なくとも６０％の類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである。

【0220】

少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合（複数可）を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、本明細書の節「不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ」で定義される通りであってよい。一実施形態では、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、テトラデカノイル－ＣｏＡまたは（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡである。

【0221】

ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、本明細書の節「不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ」で定義される通りであってよい。一実施形態では、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡは、（Ｅ１２）－テトラデセノイル－ＣｏＡ及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡである。

【0222】

一実施形態では、本方法は、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ、例えば、（Ｅ１２）－テトラデセノイル－ＣｏＡ及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡなどを、少なくとも０．００５ｍｇ／Ｌ、例えば、少なくとも０．０１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０７５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．４ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．７ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．８ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．９ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも４ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも６０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも８０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも９０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも４００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｇ／Ｌなど、少なくとも２ｇ／Ｌなど、少なくとも５ｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｇ／Ｌなど、少なくとも２０ｇ／Ｌなど、少なくとも５０ｇ／Ｌなど、少なくとも１００ｇ／Ｌなどの、またはそれを超える力価で生じる。

【0223】

一実施形態では、酵母細胞は、（Ｅ１２）－テトラデセノイル－ＣｏＡ及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を、それぞれ（Ｅ１２）－テトラデセン－１－オール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールに変換できる少なくとも１つのアルコール生成脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ（ＦＡＲ）をさらに発現する。

【0224】

ＦＡＲは、本明細書の節「脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ」で定義される通りであってよい。例えば、ＦＡＲは、Ａｇｒｏｔｉｓ ＦＡＲ、例えば、Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７５に記載されるようなＦＡＲ１２、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ＦＡＲ、例えば、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７７に記載されるようなＦＡＲ１１、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ＦＡＲ、例えば、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ ＦＡＲもしくはＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２０に記載されるようなＦＡＲ１もしくは配列番号：７１に記載されるようなＦＡＲ６、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ＦＡＲ、例えば、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｓｕｂｆｌｅｘａ ＦＡＲもしくはＨｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：６９に記載されるようなＦＡＲ４もしくは配列番号：７９に記載されるようなＦＡＲ５、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ ＦＡＲ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚａｇ ＦＡＲもしくはＯｓｔｒｉｎｉａ ｚｅａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：６３に記載されるようなＦＡＲ４４、配列番号：６５に記載されるようなＦＡＲ４８もしくは配列番号：６７に記載されるようなＦＡＲ４９、Ｐｌｏｄｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２８に記載されるようなＦＡＲ２８もしくは配列番号：３０に記載されるようなＦＡＲ３２、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ＦＡＲ、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２２に記載されるようなＦＡＲ１６、もしくは配列番号：２４に記載されるようなＦＡＲ１７、もしくはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：２６に記載されるようなＦＡＲ１９、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ＦＡＲ、例えば、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：３２に記載されるようなＦＡＲ３８、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ＦＡＲ、例えば、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｒｏｒｅｌｌｕｓ ＦＡＲなど、例えば、配列番号：７３に記載されるようなＦＡＲ８、またはそれらのＦＡＲに対して少なくとも６０％の類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントであってよい。

【0225】

一実施形態では、本方法は、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、少なくとも０．００５ｍｇ／Ｌ、例えば、少なくとも０．０１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０７５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．４ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．７ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．８ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．９ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも４ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも６０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも８０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも９０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも４００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｇ／Ｌなど、少なくとも２ｇ／Ｌなど、少なくとも５ｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｇ／Ｌなど、少なくとも２０ｇ／Ｌなど、少なくとも５０ｇ／Ｌなど、少なくとも１００ｇ／Ｌなどの、またはそれを超える力価で生じる。

【0226】

一実施形態では、本方法は、Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを回収するステップをさらに含む。

【0227】

一実施形態では、Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールは、それぞれＥ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルにさらに改変される。

【0228】

一実施形態では、Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルへの変換は、インビトロで実施される。

【0229】

一実施形態では、Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルへの変換は、Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに変換できるアセチルトランスフェラーゼを細胞内でさらに発現させることによってインビボで実施される。

【0230】

一実施形態では、本方法は、Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、（Ｅ１２）－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに変換するステップをさらに含む。一実施形態では、アルデヒドへの変換は、化学変換または酵素変換である。

【0231】

本開示の化合物は、本明細書に記載されるように、当業者に既知の方法によって、または同じ出願人による２０２１年８月６日に出願の欧州特許出願第ＥＰ２１１９００９７．２号に記載されるように酸化されてよい。一実施形態では、Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールは、（Ｅ１２）－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに化学的に酸化される。

【0232】

本開示の化合物は、本明細書に記載されるように、または当業者に既知の方法によってアセチル化されてよい。一実施形態では、Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールは、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに化学的にアセチル化される。

【0233】

一実施形態では、本方法は、Ｅ１２－脂肪族アルコール、例えば、（Ｅ１２）－テトラデセン－１－オールなど、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、（Ｅ１２）－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールを、本明細書の節「フェロモン組成物」で定義されるようなフェロモン組成物に製剤化するステップをさらに含む。

【0234】

したがって、本明細書では、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの生成方法が提供され、本方法は、
ｉ）本明細書で開示されるような酵母細胞を提供するステップ、
ｉｉ）以下の発現を可能にする条件下において培地中で本酵母細胞をインキュベートするステップ：
ａ．さらなるデサチュラーゼであって、本デサチュラーゼが、テトラデカノイル－ＣｏＡの９位に二重結合を導入し、それによって、テトラデカノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡに変換できる、前記さらなるデサチュラーゼ、
ｂ．異種Δ１２デサチュラーゼであって、本デサチュラーゼが、（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入し、それによって、（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡに変換できる、前記異種Δ１２デサチュラーゼ、
ｃ．ＦＡＲであって、本ＦＡＲが、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールに変換できる、前記ＦＡＲ、
ｉｉｉ）任意に、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを回収するステップ、
ｉｖ）任意に、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに変換するステップ、
ｖ）任意に、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに変換するステップ、
ｖｉ）任意に、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールをフェロモン組成物に製剤化するステップ
を含む。

【0235】

核酸
本明細書では、酵母細胞を改変するための核酸または核酸の系が提供され、本核酸または系は、異種Δ１２デサチュラーゼをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含み、本デサチュラーゼは、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入でき、それによって、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成し、本二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が１２位にあり、
ここで、ｎ及びｎ’が整数であり、
ここで、０≦ｎ≦３であり、１≦ｎ’≦４である。

【0236】

一実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼは、配列番号：１に記載されるような、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性、例えば、それに対して少なくとも６１％などの同一性、少なくとも６２％などの同一性、少なくとも６３％などの同一性、少なくとも６４％などの同一性、少なくとも６５％などの同一性、少なくとも６６％などの同一性、少なくとも６７％などの同一性、少なくとも６８％などの同一性、少なくとも６９％などの同一性、少なくとも７０％などの同一性、少なくとも７１％などの同一性、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％などの同一性、１００％などの同一性を有する核酸によってコードされる。

【0237】

一実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼは、配列番号：５４に記載されるような、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性、例えば、それに対して少なくとも６１％などの同一性、少なくとも６２％などの同一性、少なくとも６３％などの同一性、少なくとも６４％などの同一性、少なくとも６５％などの同一性、少なくとも６６％などの同一性、少なくとも６７％などの同一性、少なくとも６８％などの同一性、少なくとも６９％などの同一性、少なくとも７０％などの同一性、少なくとも７１％などの同一性、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％などの同一性、１００％などの同一性を有する核酸によってコードされる。

【0238】

一実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼは、配列番号：８４に記載されるような、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性、例えば、それに対して少なくとも６１％などの同一性、少なくとも６２％などの同一性、少なくとも６３％などの同一性、少なくとも６４％などの同一性、少なくとも６５％などの同一性、少なくとも６６％などの同一性、少なくとも６７％などの同一性、少なくとも６８％などの同一性、少なくとも６９％などの同一性、少なくとも７０％などの同一性、少なくとも７１％などの同一性、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％などの同一性、１００％などの同一性を有する核酸によってコードされる。

【0239】

一実施形態では、異種Δ１２デサチュラーゼは、配列番号：８６に記載されるような、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａΔ１２デサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性、例えば、それに対して少なくとも６１％などの同一性、少なくとも６２％などの同一性、少なくとも６３％などの同一性、少なくとも６４％などの同一性、少なくとも６５％などの同一性、少なくとも６６％などの同一性、少なくとも６７％などの同一性、少なくとも６８％などの同一性、少なくとも６９％などの同一性、少なくとも７０％などの同一性、少なくとも７１％などの同一性、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％などの同一性、１００％などの同一性を有する核酸によってコードされる。

【0240】

一実施形態では、核酸または核酸の系は、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位ではない任意の位置に、二重結合を導入できるさらなる異種デサチュラーゼをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。

【0241】

いくつかの実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：５６、配列番号：５８及び配列番号：６０に記載されるデサチュラーゼからなる群から選択される核酸に対して少なくとも６０％の同一性、例えば、それに対して少なくとも６１％などの同一性、少なくとも６２％などの同一性、少なくとも６３％などの同一性、少なくとも６４％などの同一性、少なくとも６５％などの同一性、少なくとも６６％などの同一性、少なくとも６７％などの同一性、少なくとも６８％などの同一性、少なくとも６９％などの同一性、少なくとも７０％などの同一性、少なくとも７１％などの同一性、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％などの同一性、１００％などの同一性を有する核酸によってコードされる。

【0242】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、配列番号：３に記載されるような、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓデサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0243】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、配列番号：５に記載されるような、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒデサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0244】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、配列番号：７に記載されるような、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉデサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0245】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、配列番号：９または配列番号：１１に記載されるような、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0246】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、配列番号：１３に記載されるような、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅデサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0247】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、配列番号：１５に記載されるような、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａデサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0248】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、配列番号：１７に記載されるような、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａデサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0249】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、配列番号：５６に記載されるような、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａデサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0250】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、配列番号：５８に記載されるような、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅデサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0251】

一実施形態では、さらなる異種デサチュラーゼは、配列番号：６０に記載されるような、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0252】

一実施形態では、核酸または核酸の系は、二重不飽和（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールに変換できるＦＡＲをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。

【0253】

いくつかの実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：１９、配列番号：２１、配列番号：２３、配列番号：２５、配列番号：２７、配列番号：２９、配列番号：３１、配列番号：６２、配列番号：６４、配列番号：６６、配列番号：６８、配列番号：７０、配列番号：７２、配列番号：７４、配列番号：７６及び配列番号：７８に記載されるＦＡＲからなる群から選択される核酸に対して少なくとも６０％の同一性、例えば、それに対して少なくとも６１％などの同一性、少なくとも６２％などの同一性、少なくとも６３％などの同一性、少なくとも６４％などの同一性、少なくとも６５％などの同一性、少なくとも６６％などの同一性、少なくとも６７％などの同一性、少なくとも６８％などの同一性、少なくとも６９％などの同一性、少なくとも７０％などの同一性、少なくとも７１％などの同一性、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％などの同一性、１００％などの同一性を有する核酸によってコードされる。

【0254】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：７４に記載されるような、Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0255】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：７６に記載されるような、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0256】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：１９に記載されるような、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0257】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：７０に記載されるような、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0258】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：６８に記載されるような、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｓｕｂｆｌｅｘａ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0259】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：７８に記載されるような、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0260】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：６２に記載されるような、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0261】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：６４に記載されるような、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚａｇ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0262】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：６６に記載されるような、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚｅａ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0263】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：２７または配列番号：２９に記載されるような、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0264】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：２１または配列番号：２３に記載されるような、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0265】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：２５に記載されるような、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0266】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：３１に記載されるような、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0267】

一実施形態では、ＦＡＲは、配列番号：７２に記載されるような、Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｒｏｒｅｌｌｕｓ ＦＡＲをコードする核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸によってコードされる。

【0268】

本明細書では、所与の核酸に対して少なくとも６０％の同一性を有する核酸は、所与の核酸に対して少なくとも６１％の同一性、少なくとも６２％などの同一性、少なくとも６３％などの同一性、少なくとも６４％などの同一性、少なくとも６５％などの同一性、少なくとも６６％などの同一性、少なくとも６７％などの同一性、少なくとも６８％などの同一性、少なくとも６９％などの同一性、少なくとも７０％などの同一性、少なくとも７１％などの同一性、少なくとも７２％など、少なくとも７３％など、少なくとも７４％など、少なくとも７５％など、少なくとも７６％など、少なくとも７７％など、少なくとも７８％など、少なくとも７９％など、少なくとも８０％など、少なくとも８１％など、少なくとも８２％など、少なくとも８３％など、少なくとも８４％など、少なくとも８５％など、少なくとも８６％など、少なくとも８７％など、少なくとも８８％など、少なくとも８９％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、またはそれを超える同一性を有する場合がある。

【0269】

したがって、核酸の系は、酵母細胞内で発現される酵素をコードする複数のポリヌクレオチド、特に本明細書に記載されるような異種Δ１２デサチュラーゼ、及び任意に本明細書に記載されるようなさらなる異種デサチュラーゼ、ならびにさらに任意にＦＡＲ及び／または追加の酵素、例えば、Ｎｃｂ５ｏｒなどを含み得る。

【0270】

回収
本明細書に開示される方法によって得られる生成物を回収することが望ましい場合がある。したがって、本方法は、本明細書に提示される方法に従って生成される遊離形態の、または脂質としての不飽和脂肪酸、不飽和脂肪族アルコール、不飽和脂肪族アルコールの酢酸エステル、及び／または不飽和脂肪族アルデヒドを回収するさらなるステップを含んでよい。

【0271】

いくつかの実施形態では、本方法は、不飽和脂肪族アルコールを回収するステップを含む。他の実施形態では、本方法は、不飽和脂肪族アルコールの酢酸エステルを回収するステップを含む。

【0272】

本発明によって得られる生成物を回収する方法は当該技術分野において既知であり、デカン、ヘキサンまたは植物油などの疎水性溶媒による抽出を含んでよい。

【0273】

回収された生成物はさらに改変されてよく、例えば、本明細書で上に記載されるように、不飽和脂肪族アルコールが、対応する不飽和脂肪族アルデヒドまたは脂肪族の酢酸エステルに変換されてよい。不飽和脂肪族アルデヒド及び／または脂肪族の酢酸エステルが、例えば、インビボで、または細胞を関連酵素と接触させることによって培養培地中で直接生成される実施形態では、不飽和脂肪族アルデヒド及び／または脂肪族の酢酸エステルも回収されてよい。

【0274】

同じ出願人による、２０２０年９月２２日出願の「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｉｎ ａ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ」という表題の出願ＷＯ２０２１／０７８４５２に記載されているように、発酵系を使用して、不飽和脂肪族アルコール、不飽和脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または不飽和脂肪族アルデヒドを生成できる細胞、特に酵母細胞を培養する場合、培養培地への抽出剤の添加によって力価及び細胞外分泌がさらに増加する場合がある。いくつかの実施形態では、培地は、水溶液中でその曇り濃度以上の量で抽出剤を含み、抽出剤は、消泡剤などの非イオン性界面活性剤、好ましくはポリエチレンポリプロピレングリコール、ポリエーテル分散液の混合物、シメチコンなどのモノステアリン酸ポリエチレングリコールを含む消泡剤ならびにエトキシル化及びプロポキシル化Ｃ_１６～Ｃ_１８アルコール系消泡剤から選択されるポリエトキシル化界面活性剤ならびにそれらの組合せである。いくつかの実施形態では、
－非イオン性界面活性剤は、エトキシル化及びプロポキシル化Ｃ_１６～Ｃ_１８アルコール系消泡剤、例えば、Ｃ_１６～Ｃ_１８アルキルアルコールエトキシレートプロポキシレート（ＣＡＳ番号６８００２－９６－０）などであり、培養培地は、少なくとも１ｖｏｌ／ｖｏｌ％のＣ_１６～Ｃ_１８アルキルアルコールエトキシレートプロポキシレート、少なくとも１．５％など、少なくとも２％など、少なくとも２．５％など、少なくとも３％など、少なくとも３．５％など、少なくとも４％など、少なくとも５％など、少なくとも６％など、少なくとも７％など、少なくとも８％など、少なくとも９％など、少なくとも１０％など、少なくとも１２．５％など、少なくとも１５％など、少なくとも１７．５％など、少なくとも２０％など、少なくとも２２．５％など、少なくとも２５％など、少なくとも２７．５％など、少なくとも３０ｖｏｌ／ｖｏｌ％などのＣ_１６～Ｃ_１８アルキルアルコールエトキシレートプロポキシレート、もしくはそれを超えるものを含み、
－非イオン性界面活性剤は、ポリエチレンポリプロピレングリコール、例えば、Ｋｏｌｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７（ＣＡＳ番号９００３－１１－６）であり、培養培地は、少なくとも１０ｖｏｌ／ｖｏｌ％のＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７などのポリエチレンポリプロピレングリコール、少なくとも１１ｖｏｌ／ｖｏｌ％など、少なくとも１２ｖｏｌ／ｖｏｌ％など、少なくとも１３ｖｏｌ／ｖｏｌ％など、少なくとも１４ｖｏｌ／ｖｏｌ％など、少なくとも１５ｖｏｌ／ｖｏｌ％など、少なくとも１６ｖｏｌ／ｖｏｌ％など、少なくとも１７ｖｏｌ／ｖｏｌ％など、少なくとも１８ｖｏｌ／ｖｏｌ％など、少なくとも１９ｖｏｌ／ｖｏｌ％など、少なくとも２０ｖｏｌ／ｖｏｌ％など、少なくとも２５ｖｏｌ／ｖｏｌ％など、少なくとも３０ｖｏｌ／ｖｏｌ％など、少なくとも３５ｖｏｌ／ｖｏｌ％などのＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７などのポリエチレンポリプロピレングリコール、もしくはそれを超えるものを含み、
－非イオン性界面活性剤は、消泡剤２０４などのポリエーテル分散液の混合物であり、培養培地は、少なくとも１ｖｏｌ／ｖｏｌ％の消泡剤２０４などのポリエーテル分散液の混合物、少なくとも１．５％など、少なくとも２％など、少なくとも２．５％など、少なくとも３％など、少なくとも３．５％など、少なくとも４％など、少なくとも５％など、少なくとも６％など、少なくとも７％など、少なくとも８％など、少なくとも９％など、少なくとも１０％など、少なくとも１２．５％など、少なくとも１５％など、少なくとも１７．５％など、少なくとも２０％など、少なくとも２２．５％など、少なくとも２５％など、少なくとも２７．５％など、少なくとも３０ｖｏｌ／ｖｏｌ％などの消泡剤２０４などのポリエーテル分散液の混合物、もしくはそれを超えるものを含み、及び／または
－非イオン性界面活性剤は、シメチコンなどのモノステアリン酸ポリエチレングリコールを含む非イオン性界面活性剤であり、培養培地は、少なくとも１ｖｏｌ／ｖｏｌ％のモノステアリン酸ポリエチレングリコールもしくはシメチコン、少なくとも１．５％など、少なくとも２％など、少なくとも２．５％など、少なくとも３％など、少なくとも３．５％など、少なくとも４％など、少なくとも５％など、少なくとも６％など、少なくとも７％など、少なくとも８％など、少なくとも９％など、少なくとも１０％など、少なくとも１２．５％など、少なくとも１５％など、少なくとも１７．５％など、少なくとも２０％など、少なくとも２２．５％など、少なくとも２５％など、少なくとも２７．５％など、少なくとも３０ｖｏｌ／ｖｏｌ％などのモノステアリン酸ポリエチレングリコールもしくはシメチコン、またはそれを超えるものを含む。

【0275】

他の実施形態では、培養培地はその曇り濃度を、少なくとも５０％、少なくとも１００％など、少なくとも１５０％など、少なくとも２００％など、少なくとも２５０％など、少なくとも３００％など、少なくとも３５０％など、少なくとも４００％など、少なくとも５００％など、少なくとも７５０％など、少なくとも１０００％など以上を超える量で抽出剤を含み、及び／または培養培地は、少なくとも２倍のその曇り濃度、少なくとも３倍などのその曇り濃度、少なくとも４倍などのその曇り濃度、少なくとも５倍などのその曇り濃度、少なくとも６倍などのその曇り濃度、少なくとも７倍などのその曇り濃度、少なくとも８倍などのその曇り濃度、少なくとも９倍などのその曇り濃度、少なくとも１０倍などのその曇り濃度、少なくとも１２．５倍などのその曇り濃度、少なくとも１５倍などのその曇り濃度、少なくとも１７．５倍などのその曇り濃度、少なくとも２０倍などのその曇り濃度、少なくとも２５倍などのその曇り濃度、少なくとも３０倍などのその曇り濃度の量で抽出剤を含む。

【0276】

回収された生成物、すなわち、不飽和脂肪族アルコール、不飽和脂肪族アルコールの酢酸エステル、及び／または不飽和脂肪族アルデヒドは、節「フェロモン組成物」に記載されるものなどのフェロモン組成物にも製剤化されてよい。一実施形態では、フェロモン組成物に製剤化される本回収された生成物は、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールである。組成物はさらに、液体または固体の担体または基材などの１つ以上の追加の化合物を含んでよい。脂肪族アルコールから得られる脂肪族アルデヒドもまた、そのような組成物中に含まれてよい。

【0277】

脂肪酸は、例えば、葉を均質化し、当該技術分野において既知の方法によって脂質を回収した後、当該技術分野において既知の方法によって回収され得る。回収した脂質を加水分解して遊離脂肪酸にし、エステル化して脂肪酸アルキルエステルにして、続いて脂肪族アルコールまたは脂肪族アルデヒドのいずれかに還元する。

【0278】

キット
本明細書では、本方法を実施するための要素のキットが提供される。要素のキットは、本明細書に記載されるような「すぐに使用できる」酵母細胞を含んでよい。一実施形態では、酵母細胞は、Ｙａｒｒｏｗｉａ細胞、例えば、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞などである。一実施形態では、酵母細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ細胞、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞などである。

【0279】

一実施形態では、要素のキットは、本明細書の節「核酸」に記載される核酸の系などの、生物内に導入される、目的の活性をコードする核酸または核酸の系を含む。核酸または核酸の系は、複数のベクターなどの複数の核酸構築物として提供されてよく、各ベクターは、１つまたはいくつかの所望の活性をコードする。

【0280】

要素のキットは、改変される酵母細胞を任意に含んでよい。

【0281】

要素のキットは、使用説明書も含んでよい。

【0282】

いくつかの実施形態では、要素のキットは、上記の全てまたは組合せを含む。

【0283】

フェロモン組成物
本発明は、化合物、特に不飽和脂肪族アルコール、及び不飽和脂肪族アルコールの酢酸エステルに加えて、不飽和脂肪族アルデヒドなどのその誘導体、ならびにそれらの使用を提供する。特に、本発明の細胞及び方法を使用して得られる不飽和化合物は、フェロモン組成物の成分として有用である。そのようなフェロモン組成物は、総合的病害虫管理に有用な場合がある。それらは、当該技術分野において既知であるように、例えば、交配撹乱のために使用され得る。

【0284】

したがって、本方法によって、または本酵母細胞を使用して得られる不飽和脂肪族アルコール、不飽和脂肪族アルコールの酢酸エステル、及び不飽和脂肪族アルデヒドは、フェロモン組成物に製剤化されてよい。一実施形態では、（Ｅ１２）－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール及び／または対応する脂肪族アルデヒド及び／または脂肪族の酢酸エステルは、フェロモン組成物に製剤化される。

【0285】

そのようなフェロモン組成物は、総合的病害虫管理生成物として使用されてよく、それは害虫の存在をモニターする方法または害虫の交配を撹乱する方法に使用され得る。

【0286】

したがって、本明細書では害虫の存在をモニターする方法または害虫の交配を撹乱する方法が提供され、本方法は、以下のステップ：
ｉ）本明細書に記載される方法によって、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール及び／またはＥ１２－脂肪族アルコールを生成するステップ、
ｉｉ）Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに変換するステップ、
ｉｉｉ）Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに変換するステップ、
ｉｖ）本Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールをフェロモン組成物として製剤化するステップ、ならびに
ｖ）本フェロモン組成物を総合的病害虫管理組成物として用いるステップ
を含む。

【0287】

また本明細書では、以下のステップを含む方法によって得られるフェロモン組成物が提供される：
ｉ）本明細書に記載される方法によって、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール及び／または（Ｅ１２）－脂肪族アルコールを生成するステップ、
ｉｉ）（Ｅ１２）－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれ（Ｅ１２）－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに変換するステップ、
ｉｉｉ）（Ｅ１２）－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれ（Ｅ１２）－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに変換するステップ、
ｉｖ）本（Ｅ１２）－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、（Ｅ１２）－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールをフェロモン組成物として製剤化するステップ。

【0288】

また本明細書では、Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールを含むフェロモン組成物が提供され、フェロモン組成物は、少なくとも２０％のバイオベース炭素、例えば、少なくとも３０％などのバイオベース炭素、少なくとも４０％などのバイオベース炭素、少なくとも５０％などのバイオベース炭素、少なくとも６０％などのバイオベース炭素、少なくとも７０％などのバイオベース炭素、少なくとも８０％などのバイオベース炭素、少なくとも８５％などのバイオベース炭素、少なくとも９０％などのバイオベース炭素、少なくとも９５％などのバイオベース炭素、１００％などのバイオベース炭素を含む。

【0289】

本フェロモン組成物中のＥ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールの相対量は、作物及び／または防除される害虫の性質に応じて変動する場合があり、地理的な変動も存在する可能性がある。したがって、最適な相対量を決定するには、日常的な最適化が必要となる場合がある。

【0290】

したがって、フェロモン組成物は、１～１００％のＥ１２－脂肪族アルコール、１～１００％の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、１～１００％のＥ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、１～１００％の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、１～１００％のＥ１２－脂肪族アルデヒド及び／または１～１００％の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールを含んでよい。

【0291】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール対Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル対Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナール対Ｅ１２－脂肪族アルデヒドの比は、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える。

【0292】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール対Ｅ１２－脂肪族アルコールの比は、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える。

【0293】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル対Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステルの比は、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える。

【0294】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナール対Ｅ１２－脂肪族アルデヒドの比は、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える。

【0295】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール対Ｚ９－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル対Ｚ９－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナール対Ｚ９－脂肪族アルデヒドの比は、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える。

【0296】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール対Ｚ９－脂肪族アルコールの比は、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える。

【0297】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル対Ｚ９－脂肪族アルコールの酢酸エステルの比は、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える。

【0298】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナール対Ｚ９－脂肪族アルデヒドの比は、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える。

【0299】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール対（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール対（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルの比は、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える。

【0300】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール対（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナール比は、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える。

【0301】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール対（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルの比は、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える。

【0302】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物は、少なくとも３０％のバイオベース炭素、あるいは４０％のバイオベース炭素、あるいは５０％のバイオベース炭素、あるいは６０％のバイオベース炭素、あるいは７０％のバイオベース炭素、あるいは７５％のバイオベース炭素、あるいは８０％のバイオベース炭素、あるいは８５％のバイオベース炭素、あるいは９０％のバイオベース炭素、あるいは９５％のバイオベース炭素を含む。

【0303】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物は、少なくとも８０％のバイオベース炭素、あるいは８５％のバイオベース炭素、あるいは９０％のバイオベース炭素、あるいは９５％のバイオベース炭素、あるいは９６％のバイオベース炭素、あるいは９７％のバイオベース炭素、あるいは９８％のバイオベース炭素、あるいは９９％のバイオベース炭素を含む。

【0304】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物は、３０～１００％のバイオベース炭素、あるいは４０～１００％のバイオベース炭素、あるいは５０～１００％のバイオベース炭素、あるいは６０～１００％のバイオベース炭素、あるいは７０～１００％のバイオベース炭素、あるいは７５～１００％のバイオベース炭素、あるいは８０～１００％のバイオベース炭素、あるいは８５～１００％のバイオベース炭素、あるいは９０～１００％のバイオベース炭素、あるいは９５～１００％のバイオベース炭素を含む。

【0305】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物は、８０～１００％のバイオベース炭素、あるいは８５～１００％のバイオベース炭素、あるいは９０～１００％のバイオベース炭素、あるいは９５～１００％のバイオベース炭素、あるいは９６～１００％のバイオベース炭素、あるいは９７～１００％のバイオベース炭素、あるいは９８～１００％のバイオベース炭素、あるいは９９～１００％のバイオベース炭素を含む。

【0306】

また本明細書では、Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールを含むフェロモン組成物が提供され、フェロモン組成物は、少なくとも２０％の放射性^１４Ｃレベルを有する。

【0307】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物は、少なくとも３０％、あるいは４０％、あるいは５０％、あるいは６０％、あるいは７０％、あるいは７５％、あるいは８０％、あるいは８５％、あるいは９０％、あるいは９５％の放射性^１４Ｃレベルを有する。

【0308】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物は、少なくとも８０％、あるいは８５％、あるいは９０％、あるいは９５％、あるいは９６％、あるいは９７％、あるいは９８％、あるいは９９％の放射性^１４Ｃレベルを有する。

【0309】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物は、３０～１００％、あるいは４０～１００％、あるいは５０～１００％、あるいは６０～１００％、あるいは７０～１００％、あるいは７５～１００％、あるいは８０～１００％、あるいは８５～１００％、あるいは９０～１００％、あるいは９５～１００％の放射性^１４Ｃレベルを有する。

【0310】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物は、８０～１００％、あるいは８５～１００％、あるいは９０～１００％、あるいは９５～１００％、あるいは９６～１００％、あるいは９７～１００％、あるいは９８～１００％、あるいは９９～１００％の放射性^１４Ｃレベルを有する。

【0311】

また本明細書では、以下のステップを含む、本発明によるフェロモン組成物の生成方法が提供される：
ｉ）本明細書で開示されるような方法によって、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール及び／またはＥ１２－脂肪族アルコールを生成するステップ、
ｉｉ）Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに変換するステップ、
ｉｉｉ）Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに変換するステップ、
ｉｖ）Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールをフェロモン組成物として製剤化し、任意に液体または固体の担体または基材などの１つ以上の追加の化合物を含むステップ、
ｖ）任意に、フェロモン組成物のバイオベース炭素含有量または放射性^１４Ｃレベルを決定するステップ。

【0312】

本明細書に開示されるようなフェロモン組成物は、生物農薬として使用されてよい。そのような組成物は、畑または果樹園の栽培物に噴霧または分配され得る。それらはまた、当該技術分野において既知であるように、例えば、ゴム隔膜上に浸漬され得るか、または他の成分と混合され得る。一実施形態では、組成物は、フェロモン組成物を拡散させるフェロモンディスペンサーなどのデバイス内に配置される。ディスペンサーは、例えば、予め調整可能な一定の速度でフェロモンを放出してよい。これにより交配撹乱を引き起こし、それによって害虫の繁殖を妨げ得るか、またはそれは害虫を捕獲するための捕獲デバイスと組み合わせて使用され得る。本フェロモン組成物が使用され得る害虫の非限定的な例は、オオタバコガ（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ）、ニカメイガ（Ｃｈｉｌｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓａｌｉｓ）、コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）、ヨトウガ（Ｍａｍｅｓｔｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、ケブカノメイガ（Ｃｒｏｃｉｄｏｌｏｍｉａ ｂｉｎｏｔａｌｉｓ）、アワノメイガ（Ｓｅｓａｍｉａ ｎｏｎａｇｒｉｏｉｄｅｓ）、スグリコスカシバ（Ｓｙｎａｎｔｈｅｄｏｎ ｔｉｐｕｌｉｆｏｒｍｉｓ）、ヨモギトリバ（ａｒｔｉｃｈｏｋｅ ｐｌｕｍｅ ｍｏｔｈ）（Ｐｌａｔｙｐｔｉｌｉａ ｃａｒｄｕｉｄａｃｔｙｌａｌ）、ノシメマダラメイガ（Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ）、ビートアーミーワーム（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ）、スジマダラメイガ（Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａ）、サザンアーミーワーム（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｒｉｄａｎｉａ）などである。したがって、本組成物を培養物に使用すると、実質的に環境に影響を与えることなく、作物収量の増加をもたらし得る。

【0313】

本フェロモン組成物中の脂肪族アルコール、脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または脂肪族アルデヒドの相対量は、作物及び／または防除される害虫の性質に応じて変動する場合があり、地理的な変動も存在する可能性がある。したがって、最適な相対量を決定するには、日常的な最適化が必要となる場合がある。

【0314】

害虫防除に使用される組成物の例は、Ｈ．ａｒｍｉｇｅｒａについてはＫｅｈａｔ＆Ｄｕｎｋｅｌｂｌｕｍ（１９９３）、Ｃ．ｓｕｐｐｒｅｓｓａｌｉｓについてはＡｌｆａｒｏ ｅｔ ａｌ．（２００９）、Ｓ．ｎｏｎａｇｒｉｏｉｄｅｓについてはＥｉｚａｇｕｉｒｒｅ ｅｔ ａｌ．（２００２）、Ｐ．ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａについてはＷｕ ｅｔ ａｌ．（２０１２）、Ｐ．ｃａｒｄｕｉｄａｃｔｙｌａについてはＢａｒｉ ｅｔ ａｌ．（２００３）、Ｐ．ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａについてはＺｈｕ ｅｔ ａｌ．（１９９９）、Ｓ．ｅｘｉｇｕａについてはＷａｋａｍｕｒａ（１９８７）、及びＣ．ｃａｕｔｅｌｌａについてはＢｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．（１９７１）に見出され得る。

【0315】

いくつかの実施形態では、フェロモン組成物はさらに、液体または固体の担体または基材などの１つ以上の追加の化合物を含んでよい。例えば、好適な担体または基材としては、植物油、精製鉱油またはその画分、ゴム、プラスチック、シリカ、珪藻土、ワックスマトリックス及びセルロース粉末が挙げられる。

【0316】

フェロモン組成物は、当該技術分野において既知であるように製剤化されてよい。例えば、それは溶液、ゲル、粉末の形態であってよい。フェロモン組成物は、当該技術分野において既知である通り、それが容易に分配され得るように製剤化されてよい。

【0317】

本交配撹乱方法は、トランスジェニック作物の分野で用いられてよい。

【0318】

また本明細書では、殺虫性形質に対する耐性の出現を減少または遅延させる方法も提供され、本方法は、総合的抵抗性管理方法であってよい。したがって、トランスジェニック殺虫作物に、及び／または化学殺虫剤に対する、害虫、例えば、昆虫、例えば、本明細書に列挙される昆虫のうちいずれかなどにおける耐性発現を遅延させる先制的な応答方法、すなわち、先制戦略が開示される。また、一旦耐性が発現されてしまった場合の、トランスジェニック殺虫作物及び／または化学殺虫剤に対する１つ以上の害虫の感受性を回復させる方法、すなわち、応答戦略も開示される。いくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に開示される方法によって得られるものなどのフェロモン組成物を、野外個体群を含む農業地域に適用することを含み、１つ以上の殺虫性形質、例えば、本明細書に列挙される昆虫のうち１つに対するトランスジェニック殺虫性形質活性などを含むトランスジェニック作物、及び任意に害虫の交配を撹乱し、それによって殺虫性形質に対する抵抗性の出現を遅延させるための、殺虫性形質を欠く作物を含む緩衝帯を含む。したがって、本組成物は、ＷＯ２０１７／１１２８８７に記載されている方法のいずれかと組み合わせて使用されてよい。

【0319】

また本明細書では、本明細書に列挙されるような昆虫などの害虫による作物被害を予防または軽減する方法も提供される。そのような方法は、本明細書に開示されるようなフェロモン組成物を適用することによって畑に交配撹乱を適用すること、及び１つ以上の害虫における１つ以上の標的遺伝子の発現を破壊し、それによって畑での作物被害を軽減または予防することを含む。１つ以上の標的遺伝子の発現の破壊は、例えば、ＷＯ２０１７／２０５７５１に記載されるように、ＲＮＡｉを使用して達成され得る。したがって、本組成物は、ＷＯ２０１７／２０５７５１に記載されている方法のいずれかと組み合わせて使用されてよい。

【0320】

フェロモン化合物
また本明細書では、Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールからなる群から選択されるフェロモン化合物が提供され、フェロモン化合物は、少なくとも２０％のバイオベース炭素を含む。

【0321】

いくつかの実施形態では、フェロモン化合物は、少なくとも３０％のバイオベース炭素、あるいは４０％のバイオベース炭素、あるいは５０％のバイオベース炭素、あるいは６０％のバイオベース炭素、あるいは７０％のバイオベース炭素、あるいは７５％のバイオベース炭素、あるいは８０％のバイオベース炭素、あるいは８５％のバイオベース炭素、あるいは９０％のバイオベース炭素、あるいは９５％のバイオベース炭素を含む。

【0322】

いくつかの実施形態では、フェロモン化合物は、少なくとも８０％のバイオベース炭素、あるいは８５％のバイオベース炭素、あるいは９０％のバイオベース炭素、あるいは９５％のバイオベース炭素、あるいは９６％のバイオベース炭素、あるいは９７％のバイオベース炭素、あるいは９８％のバイオベース炭素、あるいは９９％のバイオベース炭素を含む。

【0323】

いくつかの実施形態では、フェロモン化合物は、３０～１００％のバイオベース炭素、あるいは４０～１００％のバイオベース炭素、あるいは５０～１００％のバイオベース炭素、あるいは６０～１００％のバイオベース炭素、あるいは７０～１００％のバイオベース炭素、あるいは７５～１００％のバイオベース炭素、あるいは８０～１００％のバイオベース炭素、あるいは８５～１００％のバイオベース炭素、あるいは９０～１００％のバイオベース炭素、あるいは９５～１００％のバイオベース炭素を含む。

【0324】

いくつかの実施形態では、フェロモン化合物は、８０～１００％のバイオベース炭素、あるいは８５～１００％のバイオベース炭素、あるいは９０～１００％のバイオベース炭素、あるいは９５～１００％のバイオベース炭素、あるいは９６～１００％のバイオベース炭素、あるいは９７～１００％のバイオベース炭素、あるいは９８～１００％のバイオベース炭素、あるいは９９～１００％のバイオベース炭素を含む。

【0325】

また本明細書では、Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールからなる群から選択されるフェロモン化合物が提供され、フェロモン化合物は、少なくとも２０％の放射性^１４Ｃレベルを有する。

【0326】

いくつかの実施形態では、フェロモン化合物は、少なくとも３０％、あるいは４０％、あるいは５０％、あるいは６０％、あるいは７０％、あるいは７５％、あるいは８０％、あるいは８５％、あるいは９０％、あるいは９５％の放射性^１４Ｃレベルを有する。

【0327】

いくつかの実施形態では、フェロモン化合物は、少なくとも８０％、あるいは８５％、あるいは９０％、あるいは９５％、あるいは９６％、あるいは９７％、あるいは９８％、あるいは９９％の放射性^１４Ｃレベルを有する。

【0328】

いくつかの実施形態では、フェロモン化合物は、３０～１００％、あるいは４０～１００％、あるいは５０～１００％、あるいは６０～１００％、あるいは７０～１００％、あるいは７５～１００％、あるいは８０～１００％、あるいは８５～１００％、あるいは９０～１００％、あるいは９５～１００％の放射性^１４Ｃレベルを有する。

【0329】

いくつかの実施形態では、フェロモン化合物は、８０～１００％、あるいは８５～１００％、あるいは９０～１００％、あるいは９５～１００％、あるいは９６～１００％、あるいは９７～１００％、あるいは９８～１００％、あるいは９９～１００％の放射性^１４Ｃレベルを有する。

【0330】

さらに本明細書では、酵母細胞内における、本発明によるフェロモン化合物の生成方法が提供され、本方法は、以下のステップ：
ｉ）異種Δ１２脂肪酸アシル－ＣｏＡデサチュラーゼを発現する酵母細胞を提供するステップ、
ｉｉ）異種Δ１２脂肪酸アシル－ＣｏＡデサチュラーゼの発現を可能にする条件下において培地中で本酵母細胞をインキュベートするステップ
を含み、それによってフェロモン化合物を生成する。

【0331】

いくつかの実施形態では、酵母細胞は、さらなる異種デサチュラーゼを発現する。

【0332】

いくつかの実施形態では、酵母細胞は、少なくとも１つのアルコール生成脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ（ＦＡＲ）をさらに発現する。

【0333】

いくつかの実施形態では、本方法は、フェロモン化合物のバイオベース炭素含有量または放射性^１４Ｃレベルを決定するステップをさらに含む。

【0334】

バイオベース生成物
「バイオベース」生成物は、以下の生成物として定義されてよい：
１．生成物の全炭素含有量が少なくとも３０％である
２．再生可能原料（バイオベース）の炭素含有量が、少なくとも２０％である。

【0335】

化石原料及び再生可能原料の両方とも、主に炭素（Ｃ）からなる。炭素は、いくつかの同位体で生じる。同位体^１４Ｃは放射性であり、全ての生物（植物、動物など）において、大気中の相対的^１４Ｃ濃度とほぼ同一の一定の相対濃度で天然に存在する。この濃度では、^１４Ｃの放射能レベルは１００％である。生物がもはや生息しなくなると、この濃度、すなわち、放射能率は、およそ５７００年の半減期で減衰する。したがって、未知の物質の放射性^１４Ｃレベルは、物質中に含有される炭素がどの程度古いかを決定するのに役立ち得る。

【0336】

植物または動物などの再生可能原料に由来する「若い」炭素（０～１０年）は、大気中の相対的^１４Ｃ濃度とほぼ同一である相対的な同位体^１４Ｃ濃度を有し、それゆえ、そのような若い炭素の放射性^１４Ｃレベルは、約１００％である。

【0337】

合成源または化石（石油化学）源に由来する「古い」炭素（数百万年）は、そのような合成源及び化石源の経過年月が、およそ５７００年である同位体^１４Ｃの半減期をはるかに超えるため、同位体^１４Ｃで大幅に枯渇している。したがって、合成源または化石源に由来する炭素は、およそ０％の相対的な同位体^１４Ｃ濃度を有し、それゆえ、そのような古い炭素の放射性^１４Ｃレベルは、約０％である。

【0338】

一実施形態では、「放射性^１４Ｃレベル」という用語は、上で定義されるような所与の物質、生成物または組成物の全放射性^１４Ｃレベルを指す。

【0339】

同位体^１４Ｃ法が、古い（化石）源の濃度と比較して若い（再生可能な）材料の濃度を決定するために使用されてよい。再生可能原料の炭素含有量は、「バイオベース炭素含有量」と称される。再生可能原料の炭素含有量または「バイオベース炭素含有量」は、以下に記載されるように決定されてよい。

【0340】

バイオベース炭素含有量を測定する場合、結果は「バイオベース炭素％」として報告されてよい。これは、「合成」または「化石」（石油化学）源に対する「天然」（植物または動物副生成物）源からの炭素のパーセンテージを示す。参考として、１００％のバイオベース炭素は、材料が植物または動物副生成物から完全に供給されていることを示し、０％のバイオベース炭素は、材料が植物または動物副生成物からの炭素を一切含有していなかったことを示している。その間の値は、天然源と化石源との混合物を表している。

【0341】

例：生成物の放射性^１４Ｃレベルが８０％である場合、これは、生成物が８０％の再生可能炭素及び２０％の化石炭素（Ｃ）からなることを意味する。言い換えれば、生成物は８０％がバイオベースである。

【0342】

分析測定は、「現代炭素パーセント（ｐＭＣ）」として言及される場合がある。これは、現代の参照基準（ＮＩＳＴ ４９９０Ｃ）に対する試料中で測定された^１４Ｃのパーセンテージである。バイオベース炭素含有量％は、現在の空気中における二酸化炭素の^１４Ｃの小さい調整係数を適用することによってｐＭＣから算出される。^１４Ｃを使用する全ての国際的に認められた標準は、植物またはバイオマスの供給原料が、自然環境から得られたと想定していることに留意することが重要である。

【実施例】

【0343】

実施例１－ＢｉｏＢｒｉｃｋ及びプラスミドの構築
全ての異種遺伝子を、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａに対するコドン最適化型で合成した。全ての遺伝子を、Ｐｈｕｓｉｏｎ Ｕ Ｈｏｔ Ｓｔａｒｔ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用してＰＣＲによって増幅し、酵母発現ベクターにクローニングするための断片を得た。プライマーを表１に列挙し、得られたＤＮＡ断片（ＢｉｏＢｒｉｃｋ）を表２に列挙する。「＊＊＊ＢｓａＩ」で標識したＢｉｏＢｒｉｃｋを、製造業者の指示に従って、示した親プラスミドのＢｓａＩ制限消化によって得た。ＰＣＲ産物または制限消化反応物を、Ｍｉｄｏｒｉ Ｇｒｅｅｎ Ａｄｖａｎｃｅ（Ｎｉｐｐｏｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｅｕｒｏｐｅ ＧｍｂＨ）を含有する１％アガロースゲル上で分離した。正確なサイズのＰＣＲ産物／制限消化物をゲルから切り取り、Ｎｕｃｌｅｏｓｐｉｎ Ｇｅｌ ａｎｄ ＰＣＲ Ｃｌｅａｎ－ｕｐキット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ）を使用して精製した。

【0344】

ＵＳＥＲカセットを含む酵母ベクターを、ＦａｓｔＤｉｇｅｓｔ ＳｆａＡＩ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いて３７℃で２時間線状化し、次いでＮｂ．Ｂｓｍｌ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を用いて６５℃で１時間ニックを入れた。付着末端を含有する得られたベクターをゲル電気泳動によって分離してゲルから切り取り、Ｎｕｃｌｅｏｓｐｉｎ Ｇｅｌ ａｎｄ ＰＣＲ Ｃｌｅａｎ－ｕｐキット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ）を使用してゲル精製した。ＤＮＡ断片を、（Ｈｏｌｋｅｎｂｒｉｎｋ，ｅｔ ａｌ．，２０１８、Ｊｅｎｓｅｎ，ｅｔ ａｌ．，ＥａｓｙＣｌｏｎｅ：ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｉｔｅｒａｔｉｖｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ，２０１４）に記載されるようなＵＳＥＲ－クローニングによってベクターにクローニングした。「ライゲーション」で印を付けたプラスミド（表３）を、製造業者の指示に従って、示したＢｉｏＢｒｉｃｋを含むＤＮＡ Ｔ４ライゲーション反応によって得た。ＵＳＥＲ／Ｔ４リガーゼ反応物を化学的にコンピテントなＥ．ｃｏｌｉ ＤＨα細胞に形質転換し、細胞を、１００ｍｇ／Ｌのアンピシリンを含む溶原培地（ＬＢ）寒天プレート上に播種した。プレートを３７℃で一晩インキュベートし、得られたコロニーをコロニーＰＣＲによってスクリーニングした。プラスミドを、Ｅ．ｃｏｌｉ液体培養物から一晩精製し、正確なクローニングをシーケンシングによって確認した。構築したベクターを表３に列挙する。

【0345】

「＊＊」で印を付けた株を以下の通りに構築した。示した遺伝子を、フォワードプライマー内に「ＡＣＴＴＴＴＴＧＣＡＧＴＡＣＵＡＡＣＣＧＣＡＧ」の５’オーバーハング及びリバースプライマー内に「ＣＡＣＧＣＧＡＵ」の３’オーバーハングを含有する遺伝子特異的プライマーを用いて増幅した。標的遺伝子配列の最初の「ＡＴＧ」を除去した。これらのＰＣＲ産物を、ＢＢ９４５４と共に（Ｈｏｌｋｅｎｂｒｉｎｋ，ｅｔ ａｌ．，２０１８）に記載されるような組込みベクターまたはエピソーマルベクターのいずれかにクローニングした。

【0346】

Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅに使用するためのエピソーム発現ベクターを、Ｊｅｎｓｅｎ，２０１４に記載されているようにクローニングして形質転換した。デサチュラーゼＤｅｓａｔ５９及びＰｉｄ１２を、それぞれ遺伝子ＴＥＦ１及びＴＤＨ３のＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ天然プロモーターの制御下で発現させた。

【表1】

【表2】

【表3】

【0347】

実施例２－酵母株の構築
酵母株を、Ｈｏｌｋｅｎｂｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ．，２０１８、Ｊｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４に記載されるようなＤＮＡベクターの形質転換によって構築した。組込みベクターを、形質転換前にＦａｓｔＤｉｇｅｓｔ ＮｏｔＩで線状化した。必要に応じて、特定のゲノム領域内への組込みを促進するためのヘルパーベクターを、表３に列挙した組込みプラスミドまたはＤＮＡ修復断片で共形質転換した。株を、適切な抗生物質のセレクションを用いて酵母ペプトンデキストロース（ＹＰＤ）寒天上で、または特定のアミノ酸を欠いている合成ドロップアウト培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｄｒｉｃｈ）上で選択した。正確な遺伝子型をコロニーＰＣＲによって、及び必要に応じてシーケンシングによって確認した。得られた株を表４に列挙する。

【表4】

【0348】

実施例３－株の培養ならびに脂肪族アルコール及び脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）の分析
Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ株を、ＹＰＤ寒天プレート（１０ｇ／Ｌの酵母抽出物、１０ｇ／Ｌのペプトン、２０ｇ／Ｌのグルコース、１５ｇ／Ｌの寒天）から、０．１～０．２の初期ＯＤ６００まで２４ウェルプレート（ＥｎｚｙＳｃｒｅｅｎ）中の２．５ｍＬのＹＰＧ培地（１０ｇ／Ｌの酵母抽出物、１０ｇ／Ｌのペプトン、４０ｇ／Ｌのグリセロール）に播種した。プレートを３００ｒｐｍで振盪しながら２８℃でインキュベートした。２２時間後、プレートを３，０００×ｇで５分間、４℃で遠心分離した。上清を廃棄し、細胞をウェル当たり１．２５ｍＬの生産培地（５０ｇ／Ｌのグリセロール、５ｇ／Ｌの酵母抽出物、４ｇ／ＬのＫＨ_２ＰＯ_４、１．５ｇ／ＬのＭｇＳＯ_４、０．２ｇ／ＬのＮａＣｌ、０．２６５ｇ／ＬのＣａＣｌ_２．２Ｈ_２Ｏ、２ｍＬ／Ｌの微量元素溶液：４．５ｇ／ＬのＣａＣｌ_２．２Ｈ_２Ｏ、４．５ｇ／ＬのＺｎＳＯ_４．７Ｈ２Ｏ、３ｇ／ＬのＦｅＳＯ_４．７Ｈ_２Ｏ、１ｇ／ＬのＨ_３ＢＯ_３、１ｇ／ＬのＭｎＣｌ_２．４Ｈ_２Ｏ、０．４ｇ／ＬのＮ Ｎａ_２ＭｏＯ_４．２Ｈ_２Ｏ、０．３ｇ／ＬのＣｏＣｌ_２．６Ｈ_２Ｏ、０．１ｇ／ＬのＣｕＳＯ_４．５Ｈ_２Ｏ、０．１ｇ／ＬのＫＩ、１５ｇ／ＬのＥＤＴＡ）中に再懸濁した。必要に応じて、培地に抗生物質を補充した。プレートを３００ｒｐｍで振盪しながら２８℃で２８時間インキュベートした。

【0349】

Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株を、合成ドロップアウト寒天プレート（ウラシル、ロイシン及びヒスチジンを欠く）から、０．１～０．２の初期ＯＤ６００まで２４ウェルプレート（ＥｎｚｙＳｃｒｅｅｎ）中の、２％グルコース、１％ｔｅｒｇｉｔｏｌ、オレイン酸（５．６ｍｌ／Ｌ）及びミリスチン酸メチル（２ｍｌ／Ｌ）を補充した２．５ｍＬの合成ドロップアウト培地（ウラシル、ロイシン及びヒスチジンを欠く）に播種した。

【0350】

脂肪族アルコールの分析のために、１ｍｌの培養ブロスを遠心分離し、上清を吸引して廃棄した。１ｍｌの酢酸エチル：エタノール（８４：１５）及び内部標準物質として１０μＬのＺ１０－１７：Ｍｅ（２ｍｇ／ｍＬ）を、細胞ペレットに添加した。試料を２０秒間ボルテックスして室温で１時間インキュベートし、続いて５分間ボルテックスした。３００μＬのＨ２Ｏを各試料に添加した。試料をボルテックスし、２１℃及び３，０００×ｇで５分間遠心分離した。上部の有機相をガスクロマトグラフィー－質量分析法（ＧＣ－ＭＳ）によって分析した。ＧＣ－ＭＳ分析を、質量選択検出器Ａｇｉｌｅｎｔ ５９７７Ｂに連結したＡｇｉｌｅｎｔ ７８２０Ａ ＧＣ上で実施した。ＧＣにはＤＢ Ｆａｔｗａｘカラム（３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ）を取り付け、キャリアガスとしてヘリウムを使用した。ＭＳを電子衝撃モード（７０ｅＶ）で動作させ、ｍ／ｚ３０～４００でスキャンし、インジェクターを２２０℃でスプリットモード２０：１に設定した。オーブン温度を８０℃まで１分間設定し、次いで２０℃／分の速度で２１０℃まで上昇させ、続いて２１０℃で７分間保持し、次いで２０℃／分の速度で２３０℃まで上昇させた。化合物を、参照化合物の保持時間及びマススペクトルの比較によって同定した。データを、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｍａｓｓｈｕｎｔｅｒソフトウェアによって分析した。脂肪族アルコールの濃度を、参照標準を用いて準備した標準検量線に基づいて算出した。

【0351】

脂肪酸の分析のために、４℃及び３０００×ｇで５分間、遠心分離によって１ｍＬの各バイアルを採取した。各ペレットを１０００μＬの１Ｍ ＨＣｌのメタノール（無水）溶液中で抽出した。試料を２０秒間ボルテックスし、８０℃の水浴中に２時間置いた。試料を３０分ごとに１０秒間ボルテックスした。試料を室温まで冷却した後、１０００μＬの１Ｍ ＮａＯＨのメタノール（無水）溶液、５００μＬのＮａＣｌ飽和Ｈ２Ｏ、９９０μＬのヘキサン及び内部標準物質として１０μＬのＺ１０－１７：Ｍｅ（２ｍｇ／ｍＬ）を添加した。試料をボルテックスし、２１℃及び３，０００×ｇで５分間遠心分離した。上部の有機相を上に記載したようにＧＣ－ＭＳによって分析した。

【0352】

実施例４－酵母Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ内におけるＺ９，Ｅ１２－１４：ＣｏＡの生成
Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓのΔＺ９デサチュラーゼＤｅｓａｔ６１を、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ株ＳＴ７９８２（Ｐｅｔｋｅｖｉｃｉｕｓ ｅｔ ａｌ．，２０２１）内において単独で（ＳＴ１０６２８）、またはＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａのＰｉｄ１２デサチュラーゼと組み合わせた（ＳＴ１０８７０）いずれかで発現させ、それに対応する株ＳＴ１０６２８及びＳＴ１０８７０を得た。株を培養し、実施例３に記載したように脂肪酸を抽出した。

【0353】

ΔＺ９デサチュラーゼＤｅｓａｔ６１を発現する株ＳＴ１０６２８によって、Ｚ９－１４：Ｍｅが得られた（図２Ｂ及び表４）。ΔＺ９デサチュラーゼＤｅｓａｔ６１及び新たに同定したＰｉｄ１２デサチュラーゼの両方を発現する株ＳＴ１０８７０によって、Ｚ９－１４：Ｍｅ及び二重不飽和Ｃ１４脂肪酸メチルエステルの両方が得られた。二重不飽和Ｃ１４脂肪酸メチルエステルは、Ｚ９，Ｅ１２：Ｍｅの分析標準と同じ保持時間（１０．２分）で溶出し（図２Ａ、Ｃ）、標準と同様のマススペクトルを示した（図２Ｄ、Ｅ）。Ｚ９－１４：Ｍｅ及びＺ９，Ｅ１２－１４：Ｍｅの力価を表５に列挙する。

【表5】

【0354】

実施例５－Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ内におけるＺ９，Ｅ１２－１４：ＯＨの生成
Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓのデサチュラーゼＤｅｓａｔ６１及びＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａのＰｉｄ１２デサチュラーゼを、単独で、または異なる昆虫種からの脂肪酸アシルレダクターゼと組み合わせたいずれかで、Ｙ．ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ株ＳＴ７９８２（Ｐｅｔｋｅｖｉｃｉｕｓ ｅｔ ａｌ．，２０２１）中で発現させた。株を培養し、実施例３に記載したように脂肪族アルコールを抽出した。

【0355】

株ＳＴ１０８７２～ＳＴ１０８７９は、それぞれＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａの脂肪酸アシルレダクターゼＦＡＲ１、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａのＦＡＲ１６、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａのＦＡＲ１７、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａのＦＡＲ１９ならびにＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａのＦＡＲ２８、ＦＡＲ２９及びＰｉＦＡＲ３１を発現し、Ｚ９－１４：ＯＨ及び標的化合物Ｚ９，Ｅ１２－１４：ＯＨの両方を生成した（表６）。ＦＡＲ１９を発現するＳＴ１０８７５株は、０．８８ｍｇ／Ｌの最高力価でＺ９，Ｅ１２－１４：ＯＨを生成した。ＦＡＲ２９及びＦＡＲ３１を発現する株ＳＴ１０８７７及びＳＴ１０８７９は、少量のＺ９－１４：ＯＨのみを生成し、Ｚ９，Ｅ１２－１４：ＯＨは生成しなかった。

【表6】

【0356】

実施例６－Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ内におけるＰ．ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼの発現
株ＳＴ１０６２９及びＳＴ１１１９０～ＳＴ１１１９３は、ΔＺ９デサチュラーゼＤｅｓａｔ６１、脂肪酸アシルレダクターゼＦＡＲ１及びＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａの様々なデサチュラーゼ遺伝子を発現する。株ＳＴ１０６６１は、Ｄｅｓａｔ６１及びＦＡＲ１のみを発現する対照株として機能する。

【0357】

試験した全ての株がＺ９－１４：ＯＨを生成したが、Ｐｉｄ１２を発現する株のＳＴ１０６２９のみが、０．６ｍｇ／ｌの力価でＺ９，Ｅ１２－１４：ＯＨを生成した。

【表7】

【0358】

実施例７－酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ内におけるＺ９，Ｅ１２－１４：ＣｏＡ及びＺ９，Ｅ１２－１４：ＯＨの生成
ΔＺ９デサチュラーゼＤｅｓａｔ５９もしくはＤｅｓａｔ６１または別のΔＺ９デサチュラーゼ、Ｐｉｄ１２デサチュラーゼ及び脂肪酸アシルレダクターゼを、Ｊｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４に記載されているように、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ遺伝子発現ベクターにクローニングし、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅに形質転換し得る。実施例３と同様に、株の培養及び試料の抽出を実施できる。ΔＺ９デサチュラーゼ及びＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａのＰｉｄ１２デサチュラーゼを発現する株は、Ｚ９，Ｅ１２－１４：Ｍｅを生成する一方で、脂肪酸アシルレダクターゼ遺伝子をさらに発現する株は、Ｚ９，Ｅ１２－１４：ＯＨを生成する。

【0359】

実施例８－他の脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼを使用したＹａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ内におけるＺ９，Ｅ１２－１４：ＯＨの生成
Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓのデサチュラーゼＤｅｓａｔ６１及びＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａのＰｉｄ１２デサチュラーゼを、単独で、またはＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａの脂肪酸アシルレダクターゼＦＡＲ３２と組み合わせたいずれかで、Ｙ．ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ株ＳＴ７９８２（Ｐｅｔｋｅｖｉｃｉｕｓ ｅｔ ａｌ．，２０２１）中で発現させた。株を培養し、実施例３に記載したように脂肪族アルコールを抽出した。

【0360】

実施例９－バイオベース炭素含有量の測定
本発明によるフェロモン化合物のバイオベース炭素含有量を、「現代炭素パーセント（ｐＭＣ）」として言及する場合がある分析測定を使用して測定する。これは、現代の参照基準（ＮＩＳＴ ４９９０Ｃ）に対する試料中で測定された同位体^１４Ｃのパーセンテージである。バイオベース炭素含有量％を、現在の空気中における二酸化炭素の同位体^１４Ｃの小さい調整係数を適用することによってｐＭＣから算出する。

【0361】

本発明によるフェロモン化合物は、８０％超のバイオベース炭素含有量を有する。

【0362】

実施例１０－Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ内におけるＺ９，Ｅ１２－１４：ＣｏＡの生成
Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓのΔＺ９デサチュラーゼＤｅｓａｔ６１を、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ株ＳＴ７９８２（Ｐｅｔｋｅｖｉｃｉｕｓ ｅｔ ａｌ．，２０２１）内において単独で（ＳＴ１０６２８）、またはＣａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａのＥｃａｕＤｅｓ１２デサチュラーゼと組み合わせた（ＳＴ１２９３０）いずれかで発現させ、それに対応する株ＳＴ１０６２８及びＳＴ１２９３０を得る。株を培養し、実施例３に記載したように脂肪酸を抽出する。

【0363】

株ＳＴ１０６２８の誘導体化抽出物がＺ９－１４：Ｍｅを含有した一方で、株ＳＴ１２９３０の誘導体化抽出物は、Ｚ９－１４：Ｍｅ及びＺ９，Ｅ１２－１４：Ｍｅの両方を含有した。

【0364】

実施例１１－酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ内におけるＺ９，Ｅ１２－１４：ＣｏＡの生成
ΔＺ９デサチュラーゼＤｅｓａｔ５９を、Ｊｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４に記載されているようにＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ内において単独で、またはＰｉｄ１２と組み合わせたいずれかで発現させた。実施例３と同様に、株の培養及び試料の抽出を実施した。Ｄｅｓａｔ５９及びＰｉｄ１２を共発現する株ＳＴ１２５８５の誘導体化抽出物が、０．０５±０．００ｍｇ／ＬのＺ９，Ｅ１２－１４：Ｍｅを含有した一方で、Ｄｅｓａｔ５９のみを発現する株ＳＴ１２５８７の抽出物は、Ｚ９，Ｅ１２－１４：Ｍｅを一切含有しなかった。

【0365】

実施例１２－Ｚ９，Ｅ１２－１４：ＯＨのアセチル化によるＺ９，Ｅ１２－１４：ＯＡｃの調製
アセチル化反応を、マグネチックスターラーを備えたガラス丸底フラスコ内で行った。反応フラスコに、２ｇのＺ９，Ｅ１２－１４：ＯＨ（純度９１％、９．５ｍｍｏｌ）及び１，０６ｇの無水酢酸（純度９９％、１０．５ｍｍｏｌ、１．１当量）を充填した。反応混合物を、一定速度で混合しながら８０℃に加熱した。２時間後、ＧＣ分析は完全なアルコール消費を示した。

【0366】

酢酸副生成物に加えて、未反応無水酢酸を減圧下で蒸発させて、２．２８ｇの無色の油を得た。ＧＣ－ＭＳ分析によって、生成物の構造を９２％純粋なＺ９，Ｅ１２－１４：ＯＡｃ（収率９５％）として確認した（図３Ａ及びＢ）。

【0367】

実施例１３－代替ＦＡＲを使用したＹａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ内におけるＺ９，Ｅ１２－１４：ＯＨの生成
ΔＺ９デサチュラーゼＤｅｓａｔ６１及びΔ１２デサチュラーゼＰｉｄ１２を、様々な生物に個々に由来する様々な脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼと共発現させた。細胞をＹＰＧ培地中で２２時間ではなく、４７時間インキュベートしたことを除いて、株を培養し、実施例３に記載したように脂肪族アルコールを抽出した。

【0368】

株ＳＴ１０８７２、ＳＴ１２２９４～ＳＴ１２２９６、ＳＴ１２２９９、ＳＴ１２２７１～ＳＴ１２２７４、ＳＴ１２７７７及びＳＴ１２７７９の抽出物は、＞０．０１ｍｇ／ＬのＺ９，Ｅ１２－１４：ＯＨを含有した（以下の表において「＋」で示す通り）。

【表8】

【0369】

実施例１４－代替Δ９デサチュラーゼを使用したＹａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ内におけるＺ９，Ｅ１２－１４：酸の生成
Δ１２デサチュラーゼＰｉｄ１２及びＥｃａｕＤｅｓ１２を、様々な生物に由来する様々なΔ９デサチュラーゼと共に個々に共発現させた。細胞をＹＰＧ培地中で２２時間ではなく、４７時間インキュベートしたことを除いて、株を培養し、実施例３に記載したようにＦＡＭＥを抽出した。

【0370】

Ｚ９，Ｅ１２－１４：Ｍｅの最低力価（以下の表において「＋」で示した＞０ｍｇ／Ｌ）を、Ｐｉｄ１２のみを発現した株ＳＴ１２６３０の抽出物で検出した。本株では、Δ１２不飽和化反応のための基質であるＺ９－１４：ＣｏＡが、酵母天然デサチュラーゼＯＬＥ１によって副生成物として生成される。

【0371】

株ＳＴ１２６３１、ＳＴ１２６３２、ＳＴ１２６３４、ＳＴ１２６３５、ＳＴ１２６４０、ＳＴ１２２５６、ＳＴ１２２５７、ＳＴ１２２６０、ＳＴ１２２６１及びＳＴ１２２６６は、Δ１２デサチュラーゼに加えて異種Δ９デサチュラーゼを発現した。これらの株の誘導体化抽出物は、株ＳＴ１２６３０の抽出物よりも高いレベルのＺ９，Ｅ１２－１４：Ｍｅ（以下の表において「＋＋」で示したような≧０．０２ｍｇ／Ｌ）を含有した。

【表9】

【0372】

実施例１５－代替Δ１２デサチュラーゼを使用したＹａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ内におけるＺ９，Ｅ１２－１４：酸の生成
Ｐｉｄ１２とＥｃａｕＤｅｓ１２との融合タンパク質バリアントを設計して試験した。それらのバリアントでは、Δ１２デサチュラーゼＰｉｄ１２及びＥｃａｕＤｅｓ１２のＮ末端及びＣ末端を、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼＤｅｓａｔ６５またはＡｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａデサチュラーゼＤｅｓａｔ１６のいずれかのＮ末端及びＣ末端で置き換えた。融合タンパク質の配列同一性を、以下の表に見ることができる。細胞をＹＰＧ培地中で２２時間ではなく、４７時間インキュベートしたことを除いて、株を培養し、実施例３に記載したようにＦＡＭＥを抽出した。

【0373】

Ｎ末端及びＣ末端（Ｎ末端アミノ酸１～３０、Ｃ末端アミノ酸３００～３３５）を、Ｄｅｓａｔ６５のそれら（Ｎ末端アミノ酸１～２９、Ｃ末端アミノ酸２９９～３４４）で置き換えているＰｉｄ１２のバリアントを発現する株ＳＴ１２３６８は、未改変Ｐｉｄ１２及びＥｃａｕＤｅｓ１２をそれぞれ発現する株ＳＴ１２３６６及びＳＴ１２３６７とほぼ同量のＺ９，Ｅ１２－１４：Ｍｅ（以下の表において「＋」で示したような＞０．０２ｍｇ／Ｌ）を生成した。株ＳＴ１２３７４及びＳＴ１２３７９についても同様のことを観察したが、これらの株は、Ｎ末端及びＣ末端（Ｎ末端アミノ酸１～３０、Ｃ末端アミノ酸３００～３３８）を、それぞれデサチュラーゼＤｅｓａｔ６５のそれら（Ｎ末端アミノ酸１～２９、Ｃ末端アミノ酸２９９～３４４）及びＤｅｓａｔ１６のそれら（Ｎ末端アミノ酸１～２０、Ｃ末端アミノ酸：３０２～３２６）で置き換えているＥｃａｕＤｅｓ１２のバリアントを発現する。
タンパク質間の配列同一性のパーセンテージを表に示す。

【表10】

【0374】

実施例１６－Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａのΔ１２デサチュラーゼを使用したＹａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ内におけるＺ９，Ｅ１２－１４：酸の生成
Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａのデサチュラーゼを、Ｙ．ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ（ＳＴ１２５９６）のΔ９デサチュラーゼＤｅｓａｔ６１と共発現させた。Ｄｅｓａｔ６１のみを発現する株ＳＴ１０７４８が陰性対照として機能した。細胞をＹＰＧ培地中で２２時間ではなく、４７時間インキュベートしたことを除いて、株を培養し、実施例３に記載したようにＦＡＭＥを抽出した。

【0375】

株ＳＴ１２５９６のＦＡＭＥ抽出物は、二重不飽和テトラデカジエン酸メチルを含有した（図４Ａ）。１０．３９分の保持時間に加えて、このピークのマススペクトルの両方とも、Ｚ９，Ｅ１２－１４：Ｍｅの純粋な分析標準の１回と同一であった（図４Ａ、Ｂ及びＣ）。対照株ＳＴ１０７４８の抽出物は、１０．３９分で溶出する化合物を含有していなかった（図４Ａ）。Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａデサチュラーゼは、Δ１２二重結合を導入できるため、Ｅｋｕ＿ｄ１２という略称を付与した。

【0376】

【表11】

【0377】

参考文献
Ａｌｆａｒｏ ｅｔ ａｌ．２００９．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｅｒｏｍｏｎｅ ｄｉｓｐｅｎｓｅｒ ｄｅｎｓｉｔｙ ｆｏｒ ｍａｎａｇｉｎｇ ｔｈｅ ｒｉｃｅ ｓｔｒｉｐｅｄ ｓｔｅｍ ｂｏｒｅｒ，Ｃｈｉｌｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓａｌｉｓ（Ｗａｌｋｅｒ），ｂｙ ｍａｔｉｎｇ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ．Ｃｒｏｐ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．２８：５６７－５７２．
Ｂａｒｉ，２００３．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｐｈｅｒｏｍｏｎｅ ｍａｔｉｎｇ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｔｉｃｈｏｋｅ ｐｌｕｍｅ ｍｏｔｈ ｉｎ ａｒｔｉｃｈｏｋｅｓ ｇｒｏｗｎ ｏｎ ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｃｏａｓｔ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ．ＩＳＨＳ Ａｃｔａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ ６６０：Ｖ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ｏｎ Ａｒｔｉｃｈｏｋｅ．ｄｏｉ：１０．１７６６０／ＡｃｔａＨｏｒｔｉｃ．２００４．６６０．８０
Ｂｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．１９７１．Ｓｅｘ ｓｔｉｍｕｌａｎｔ ａｎｄ ａｔｔｒａｃｔａｎｔ ｉｎ ｔｈｅ Ｉｎｄｉａｎ ｍｅａｌ ｍｏｔｈ ａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ａｌｍｏｎｄ ｍｏｔｈ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．１７１：８０２－８０４．
Ｄｅｎｇ，Ｂ ｅｔ ａｌ．（２０１０）．Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｂ５ ａｎｄ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｂ５ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｄｏｍａｉｎｓ ｏｆ Ｎｃｂ５ｏｒ ｒｅｖｅａｌｓ ａ ｕｎｉｑｕｅ ｈｅｍｅ ｐｏｃｋｅｔ ａｎｄ ａ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｏｌｅ ｔｈｅ ＣＳ ｄｏｍａｉｎ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０１８１－３０１９１．
Ｄｉｎｇ，ＢＪ ｅｔ ａｌ．（２０２１）．Ｂ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ （Ｚ，Ｅ）－９，１２－ｔｅｔｒａｄｅｃａｄｉｅｎｙｌ ａｃｅｔａｔｅ（ＺＥＴＡ），ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｐｈｅｒｏｍｏｎｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ Ｐｌｏｄｉａ，Ｅｐｈｅｓｔｉａ，ａｎｄ Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ｙｅａｓｔ．Ｐｅｓｔ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，７８（３），１０４８－１０５９．
Ｅｉｚａｇｕｉｒｒｅ ｅｔ ａｌ．２００２．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍａｔｉｎｇ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ Ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａｎ ｃｏｒｎ ｂｏｒｅｒ，Ｓｅｓａｍｉａ ｎｏｎａｇｒｉｏｉｄｅｓ，ｏｎ ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｃｏｒｎ ｂｏｒｅｒ Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｎｕｂｉｌａｌｉｓ．Ｕｓｅ ｏｆ ｐｈｅｒｏｍｏｎｅｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｓｅｍｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ ｉｎ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ＩＯＢＣ ｗｐｒｓ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ．
Ｈｏｌｋｅｎｂｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ．，２０１８．ＥａｓｙＣｌｏｎｅＹＡＬＩ：ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９－Ｂａｓｅｄ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｔｏｏｌｂｏｘ ｆｏｒ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｙｅａｓｔ Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｊ．，Ｓｅｐ；１３（９）
Ｈｏｌｋｅｎｂｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ．，２０２０．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｔｈ ｓｅｘ ｐｈｅｒｏｍｏｎｅｓ ｆｏｒ ｐｅｓｔ ｃｏｎｔｒｏｌ ｂｙ ｙｅａｓｔ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｍｅｔａｂ Ｅｎｇ．２０２０ Ｎｏｖ；６２：３１２－３２１．
Ｊｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４．ＥａｓｙＣｌｏｎｅ：ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｉｔｅｒａｔｉｖｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ．ＦＥＭＳ Ｙｅａｓｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２３８－２４８．
Ｋｅｈａｔ＆Ｄｕｎｋｅｌｂｌｕｍ，１９９３．Ｓｅｘ Ｐｈｅｒｏｍｏｎｅｓ：ａｃｈｉｅｖｅｍｅｎｔｓ ｉｎ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ａｎｄ ｍａｔｉｎｇ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｔｔｏｎ ｐｅｓｔｓ ｉｎ Ｉｓｒａｅｌ，Ａｃｈｉｅｖｅｓ ｏｆ Ｉｎｓｅｃｔ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．２２：４２５－４３１．
Ｐｅｔｋｅｖｉｃｉｕｓ ｅｔ ａｌ．，２０２１．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｃｏｒｎ ｂｏｒｅｒ ｓｅｘ ｐｈｅｒｏｍｏｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｙｅａｓｔ Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｊ．，Ｊｕｎ；１６（６）
Ｔｓａｋｒａｋｌｉｄｅｓ ｅｔ ａｌ．（２０１８）．Ｈｉｇｈ－ｏｌｅａｔｅ ｙｅａｓｔ ｏｉｌ ｗｉｔｈｏｕｔ ｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ ｂｉｏｆｕｅｌｓ，１１，１３１．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８６／ｓ１３０６８－０１８－１１３１－ｙ
Ｗａｋａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）．Ｓｅｘ ｐｈｅｒｏｍｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｂｅｅｔ ａｒｍｙｗｏｒｍ Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ（Ｈｕｂｎｅｒ）（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ：Ｎｏｃｔｕｉｄａｅ）：Ｆｉｅｌｄ ａｔｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｌｅ ｍｏｔｈｓ ｉｎ Ｊａｐａｎ ｔｏ （Ｚ，Ｅ）－９ １２－ｔｅｔｒａｄｅｃａｄｉｅｎｙｌａｃｅｔａｔｅ ａｎｄ （Ｚ）－９ ｔｅｔｒａｄｅｃｅｎ－１－ｏｌ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｚｏｏｌｏｇｙ，２２（３），３４８－３５１．
Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，２０１２．Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ ｍｏｔｈ，Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ：Ｐｌｕｔｅｌｌｉｄａｅ） ｂｙ ｍａｔｉｎｇ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ．Ｉｎｓｅｃｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ １９（６），６４３－６４８．
Ｘｉａ ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｍｕｌｔｉ－Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｄｅｓａｔｕｒａｓｅｓ ｉｎ Ｔｗｏ Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｍｏｔｈｓ ｗｉｔｈ Δ１１ ａｎｄ Δ１２ Ｄｅｓａｔｕｒａｔｉｏｎ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｊ Ｃｈｅｍ Ｅｃｏｌ ４５，３７８－３８７．
Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ．，１９９９．Ｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｅｍａｌｅ ｓｅｘ ｐｈｅｒｏｍｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｄｉａｎ ｍｅａｌ ｍｏｔｈ，Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ：Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ ｆｏｕｒ－ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｐｈｅｒｏｍｏｎｅ ｂｌｅｎｄ．Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｉａ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｉｓ Ｅｔ Ａｐｐｌｉｃａｔａ，９２（２），ｐ．１３７－１４６．

【0378】

条項
１．ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル補酵素Ａ（脂肪酸アシル－ＣｏＡ）を生成できる酵母細胞であって、前記二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が１２位にあり、
前記酵母細胞が、異種Δ１２脂肪酸アシル－ＣｏＡデサチュラーゼを発現し、前記デサチュラーゼが、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合（複数可）を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ基質、好ましくは不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入でき、
ここで、ｎ及びｎ’が整数であり、
ここで、０≦ｎ≦３であり、１≦ｎ’≦４である、前記酵母細胞。

【0379】

２．基質として使用される前記飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ及びｎ’個の二重結合を有する前記不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、同じ炭素鎖長を有する、条項１に記載の酵母細胞。

【0380】

３．前記異種Δ１２デサチュラーゼが、Ｃａｄｒａ、Ｅｐｈｅｓｔｉａ、Ｐｌｏｄｉａ、Ｍａｌｉａｒｐｈａ、及びＡｍｏｒｂｉａからなる群から選択される属の生物から生じる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0381】

４．前記異種Δ１２デサチュラーゼが、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａ、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａ、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａ、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ、Ｍａｌｉａｒｐｈａ ｓｅｐａｒａｔｅｌｌａ、及びＡｍｏｒｂｉａ ｃｕｎｅａｎａからなる群から選択される種の生物から生じる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0382】

５．前記異種Δ１２デサチュラーゼが、Ｐｌｏｄｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼなどである、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0383】

６．前記異種Δ１２デサチュラーゼが、Ｃａｄｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａデサチュラーゼなどである、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0384】

７．前記異種Δ１２デサチュラーゼが、Ｅｐｈｅｓｔｉａデサチュラーゼ、例えば、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａデサチュラーゼまたはＥｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａデサチュラーゼなどである、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0385】

８．前記異種Δ１２デサチュラーゼが、配列番号：２に記載されるようなＰｉｄ１２デサチュラーゼまたはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0386】

９．前記異種Δ１２デサチュラーゼが、配列番号：５５に記載されるようなＥｃａｕＤｅｓ１２デサチュラーゼまたはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0387】

１０．前記異種Δ１２デサチュラーゼが、配列番号：８５に記載されるようなＥｋｕ＿ｄ１２デサチュラーゼまたはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0388】

１１．前記異種Δ１２デサチュラーゼが、配列番号：８７に記載されるようなＥｅ＿ｄ１２デサチュラーゼまたはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0389】

１２．前記異種Δ１２デサチュラーゼが、配列番号：８０、配列番号：８１及び配列番号：８２に記載される前記デサチュラーゼから選択される、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0390】

１３．少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する前記飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、少なくとも１４個の、例えば、少なくとも１５個などの炭素長を有する、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0391】

１４．少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する前記飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、テトラデカノイル－ＣｏＡまたは（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡである、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0392】

１５．ｎ＝１である、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0393】

１６．少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する前記飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡである、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0394】

１７．ｎ’個の二重結合（複数可）を有する前記不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、少なくとも１３個、例えば、少なくとも１４個など、少なくとも１５個など、少なくとも１６個など、少なくとも１７個など、少なくとも１８個など、少なくとも１９個など、少なくとも２０個などの炭素鎖長を有する、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0395】

１８．ｎ’個の二重結合（複数可）を有する前記不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、多くとも１８個、例えば、多くとも１７個など、多くとも１６個など、多くとも１５個など、多くとも１４個など、少なくとも１５個など、少なくとも１６個など、少なくとも１７個など、少なくとも１８個など、少なくとも１９個など、少なくとも２０個などの炭素鎖長を有する、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0396】

１９．ｎ’＝１である、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0397】

２０．ｎ’個の二重結合（複数可）を有する前記不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、（Ｅ１２）－テトラデセノイル－ＣｏＡである、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0398】

２１．ｎ’＝２である、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0399】

２２．ｎ’個の二重結合（複数可）を有する前記不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡである、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0400】

２３．前記酵母細胞が、さらなる異種デサチュラーゼを発現する、先行条項のいずれか１項に記載の細胞。

【0401】

２４．前記さらなる異種デサチュラーゼが、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位ではない任意の位置に二重結合を導入できる、先行条項のいずれか１項に記載の細胞。

【0402】

２５．前記さらなる異種デサチュラーゼが、少なくとも９位に二重結合を導入できる、先行条項のいずれか１項に記載の細胞。

【0403】

２６．前記さらなる異種デサチュラーゼが、Δ９デサチュラーゼ及びΔ１１デサチュラーゼからなる群から選択される、先行条項のいずれか１項に記載の細胞。

【0404】

２７．前記さらなる異種デサチュラーゼが、テトラデカノイル－ＣｏＡまたはテトラデセノイル－ＣｏＡに対して、それぞれヘキサデカノイル－ＣｏＡまたはヘキサデカノイル－ＣｏＡに対するよりも、より高い特異性を有する、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0405】

２８．前記さらなる異種デサチュラーゼが、ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａまたはＣｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａデサチュラーゼ、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｖｉｒｉｌｉｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｏｊａｖｅｎｓｉｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｐｓｅｕｄｏｏｂｓｃｕｒａ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｎａｎａｓｓａｅまたはＣｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼなどである、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0406】

２９．前記さらなる異種デサチュラーゼが、Ｄｅｓａｔ５９（配列番号：８）、Ｄｅｓａｔ６１（配列番号：４）、Ｄｅｓａｔ５６（配列番号：５７）、Ｄｅｓａｔ６０（配列番号：５９）及びＤｅｓａｔ２４（配列番号：６）からなる群から選択されるＤｒｏｓｏｐｈｉｌａデサチュラーゼまたはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0407】

３０．前記さらなる異種デサチュラーゼが、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｐａｒａｌｌｅｌａデサチュラーゼＤｅｓａｔ７４（配列番号：６１）である、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0408】

３１．前記酵母細胞が、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを生成でき、前記酵母細胞が、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールに変換できる、少なくとも１つのアルコール生成脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ（ＦＡＲ）をさらに発現する、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0409】

３２．前記ＦＡＲが、Ａｇｒｏｔｉｓ、Ａｍｙｅｌｏｉｓ、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ、Ｂｏｍｂｕｓ、Ｃｈｉｌｏ、Ｃｙｄｉａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ、Ｌｏｂｅｓｉａ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ、Ｐｌｏｄｉａ、Ｐｌｕｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ、Ｔｙｔａ、及びＹｐｏｎｏｍｅｕｔａからなる群から選択される属の生物、例えば、Ａｇｒｏｔｉｓ ｉｐｓｉｌｏｎ、Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａ、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ、Ｂｏｍｂｕｓ ｌａｐｉｄａｒｉｕｓ、Ｃｈｉｌｏ Ｓｕｐｐｒｅｓｓａｌｉｓ、Ｃｙｄｉａ ｐｏｍｏｎｅｌｌａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｓｕｂｆｌｅｘａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ、Ｌｏｂｅｓｉａ ｂｏｔｒａｎａ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｎｕｂｉｌａｌｉｓ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚａｇ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｚｅａ、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ、Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ、Ｔｙｔａ ａｌｂａ、ａｎｄ Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｒｏｒｅｌｌｕｓ、ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ及びＰｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａなどから生じる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0410】

３３．前記ＦＡＲが、ＦＡＲ１（配列番号：２０）、ＦＡＲ１６（配列番号：２２）、ＦＡＲ１７（配列番号：２４）、ＦＡＲ１９（配列番号：２６）、ＦＡＲ２８（配列番号：２８）もしくはＦＡＲ３２（配列番号：３０）、ＦＡＲ４４（配列番号：６３）、ＦＡＲ４８（配列番号：６５）、ＦＡＲ４９（配列番号：６７）、ＦＡＲ３８（配列番号：３２）、ＦＡＲ４（配列番号：６９）、ＦＡＲ６（配列番号：７１）、ＦＡＲ８（配列番号：７３）、ＦＡＲ１２（配列番号：７５）、ＦＡＲ１１（配列番号：７７）またはＦＡＲ５（配列番号：７９）、あるいはそれに対して少なくとも７０％の類似性または同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性または同一性を有するその機能的バリアントからなる群から選択される、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0411】

３４．前記酵母細胞が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｙａｒｒｏｗｉａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ及びＬｉｐｏｍｙｃｅｓから選択される属に属し、任意に前記酵母細胞が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ ｌｉｐｏｆｅｒａ、Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ ｓｔａｒｋｅｙｉ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇｌｕｔｉｎｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｐｕｌｌｕｌａｎ及びＹａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａから選択される種に属し、好ましくは前記酵母細胞が、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞である、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0412】

３５．異種ＮＡＤ（Ｐ）Ｈシトクロムｂ５オキシドレダクターゼ（Ｎｃｂ５ｏｒ）をさらに発現する、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0413】

３６．前記Ｎｃｂ５ｏｒが、植物、昆虫または哺乳動物、例えば、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓなどから生じる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0414】

３７．前記Ｎｃｂ５ｏｒが、昆虫、例えば、Ａｇｒｏｔｉｓ、Ａｍｙｅｌｏｉｓ、Ａｐｈａｎｔｏｐｕｓ、Ａｒｃｔｉａ、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ、Ｂｏｍｂｕｓ、Ｂｏｍｂｙｘ、Ｃｈｉｌｏ、Ｃｙｄｉａ、Ｄａｎａｕｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、Ｅｕｍｅｔａ、Ｇａｌｌｅｒｉａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ、Ｈｙｐｏｓｍｏｃｏｍａ、Ｌｅｐｔｉｄｅａ、Ｌｏｂｅｓｉａ、Ｍａｎｄｕｃａ、Ｏｐｅｒｏｐｈｔｅｒａ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ、Ｐａｐｉｌｉｏ、Ｐａｐｉｌｉｏ、Ｐａｐｉｌｉｏ、Ｐｉｅｒｉｓ、Ｐｌｕｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ、及びＶａｎｅｓｓａ属の昆虫などから生じる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0415】

３８．前記Ｎｃｂ５ｏｒが、Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ、Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａ、Ａｐｈａｎｔｏｐｕｓ ｈｙｐｅｒａｎｔｕｓ、Ａｒｃｔｉａ ｐｌａｎｔａｇｉｎｉｓ、Ｂｉｃｙｃｌｕｓ ａｎｙｎａｎａ、Ｂｏｍｂｕｓ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ、Ｂｏｍｂｙｘ ｍａｎｄａｒｉｎａ、Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ、Ｃｈｉｌｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓａｌｉｓ、Ｃｙｄｉａ ｐｏｍｏｎｅｌｌａ、Ｄａｎａｕｓ ｐｌｅｘｉｐｐｕｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｇｒｉｍｓｈａｗｉ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ、Ｅｕｍｅｔａ ｊａｐｏｎｉｃａ、Ｇａｌｌｅｒｉａ ｍｅｌｌｏｎｅｌｌａ、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ、Ｈｙｐｏｓｍｏｃｏｍａ ｋａｈａｍａｎｏａ、Ｌｅｐｔｉｄｅａ ｓｉｎａｐｉｓ、Ｌｏｂｅｓｉａ ｂｏｔｒａｎａ、Ｍａｎｄｕｃａ ｓｅｘｔａ、Ｏｐｅｒｏｐｈｔｅｒａ ｂｒｕｍａｔａ、Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ、Ｐａｐｉｌｉｏ ｍａｃｈａｏｎ、Ｐａｐｉｌｉｏ ｐｏｌｙｔｅｓ、Ｐａｐｉｌｉｏ ｘｕｔｈｕｓ、Ｐｉｅｒｉｓ ｒａｐａｅ、Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ、及びＶａｎｅｓｓａ ｔａｍｅａｍｅａから選択される昆虫から生じる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0416】

３９．前記Ｎｃｂ５ｏｒが、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：８８、配列番号：８９もしくは配列番号：９０に記載されるＮｃｂ５ｏｒ、またはそれらに対して少なくとも７０％の同一性もしくは類似性、例えば、それらに対して少なくとも７５％などの同一性、少なくとも８０％などの同一性、少なくとも８５％などの同一性、少なくとも９０％などの同一性、少なくとも９５％などの同一性もしくは類似性を有する機能的バリアントの群から選択される、先行条項のいずれか１項に記載の酵母。

【0417】

４０．Ｈｆｄ１、Ｈｆｄ４、Ｐｅｘ１０、ＧＰＡＴ及び／またはＦａｏ１のうち１つ以上の部分的または全体的な活性喪失をもたらす変異を有し、例えば、少なくともＦａｏ１ならびにＨｆｄ１、Ｈｆｄ４、Ｐｅｘ１０及び／またはＧＰＡＴのうち１つ以上の部分的または全体的な活性喪失をもたらす変異などを有する、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0418】

４１．ＰＥＸ１０ならびにＨＦＤ１、ＨＦＤ４、ＦＡＯ１及び／またはＧＰＡＴのうち少なくとも１つ、あるいはそれらのホモログに変異を有する、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0419】

４２．ＦＡＯ１ならびにＨＦＤ１、ＨＦＤ４、ＰＥＸ１０及び／またはＧＰＡＴのうち少なくとも１つ、あるいはそれらのホモログに変異を有する、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0420】

４３．ＨＦＤ１、ＨＦＤ４、ＰＥＸ１０及び／またはＦＡＯ１もしくはそれらに対して少なくとも６０％の同一性を有するその機能的バリアントが欠失もしくは変異し、Ｈｆｄ１、Ｈｆｄ４、Ｐｅｘ１０及び／またはＦａｏ１の活性の部分的喪失もしくは全体的喪失をもたらし、及び／またはＧＰＡＴもしくはそれに対して少なくとも６０％の同一性を有するその機能的バリアントが変異し、ＧＰＡＴの活性低下をもたらす、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0421】

４４．少なくとも１つのＰＯＸ遺伝子、例えば、ＰＯＸ１、ＰＯＸ２、ＰＯＸ３、ＰＯＸ４、ＰＯＸ５、及びＰＯＸ６からなる群から選択されるＰＯＸ遺伝子などにおける変異を含む、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0422】

４５．ＰＯＸ１、ＰＯＸ２、ＰＯＸ３、ＰＯＸ４、ＰＯＸ５、及び／またはＰＯＸ６、あるいはそれらに対して少なくとも６０％の同一性を有するその機能的バリアントが欠失または変異し、Ｐｏｘ１、Ｐｏｘ２、Ｐｏｘ３、Ｐｏｘ４、Ｐｏｘ５及び／またはＰｏｘ６の活性の部分的喪失または全体的喪失をもたらす、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0423】

４６．前記酵母細胞が、
－異種シトクロムｂ５、
－異種シトクロムｂ５レダクターゼ、
－ヘモグロビン、
－異種チオエステラーゼ遺伝子、及び／または
－脂肪酸アシルシンターゼとチオエステラーゼとの融合タンパク質
をさらに発現する、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0424】

４７．以下：
－全体的もしくは部分的な活性喪失をもたらす天然エロンガーゼ（複数可）、
－全体的もしくは部分的な活性喪失をもたらすチオエステラーゼ（複数可）、及び／または
－天然脂肪族アルデヒドデヒドロゲナーゼ（複数可）、脂肪族アルコールオキシダーゼ（複数可）、ペルオキシソーム形成因子及び／または脂肪酸アシルシンターゼ（複数可）の活性
の不活性化または改変を有する、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0425】

４８．前記酵母細胞が、テトラデカノイル－ＣｏＡの利用能を増加させるようにさらに改変される、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0426】

４９．前記異種Δ１２デサチュラーゼ、前記さらなる異種デサチュラーゼまたは前記ＦＡＲをコードする遺伝子のうち少なくとも１つが、高コピー数で存在する、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0427】

５０．前記異種Δ１２デサチュラーゼ、前記さらなる異種デサチュラーゼまたは前記ＦＡＲをコードする前記遺伝子のうち少なくとも１つが、誘導性プロモーターの制御下にある、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0428】

５１．前記異種Δ１２デサチュラーゼ、前記さらなる異種デサチュラーゼまたは前記ＦＡＲをコードする前記遺伝子のうち少なくとも１つが、各々独立して前記細胞のゲノム内または前記酵母細胞内に含まれるベクター内に含まれる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0429】

５２．前記酵母細胞が、少なくとも１ｍｇ／Ｌ、例えば、少なくとも１．５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１．７ｍｇ／Ｌなどの、またはそれを超える力価で（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン酸を生成できる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0430】

５３．前記酵母細胞が、少なくとも２０ｍｇ／Ｌ、例えば、少なくとも５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも６０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも８０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも９０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５００ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７５０ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｇ／Ｌなど、少なくとも２ｇ／Ｌなど、少なくとも３ｇ／Ｌなど、少なくとも４ｇ／Ｌなど、少なくとも５ｇ／Ｌなど、少なくとも６ｇ／Ｌなど、少なくとも７ｇ／Ｌなど、少なくとも８ｇ／Ｌなど、少なくとも９ｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｇ／Ｌなどの、またはそれを超える力価でＥ１２－脂肪酸及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン酸を生成できる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0431】

５４．前記酵母細胞が、少なくとも０．００５ｍｇ／Ｌ、例えば、少なくとも０．０１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．０７５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．４ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．７ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．８ｍｇ／Ｌなど、少なくとも０．９ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１ｍｇ／Ｌなど、少なくとも２ｍｇ／Ｌなど、少なくとも３ｍｇ／Ｌなど、少なくとも４ｍｇ／Ｌなど、少なくとも５ｍｇ／Ｌなど、少なくとも６ｍｇ／Ｌなど、少なくとも７ｍｇ／Ｌなど、少なくとも８ｍｇ／Ｌなど、少なくとも９ｍｇ／Ｌなど、少なくとも１０ｍｇ／Ｌなどの、またはそれを超える力価でＥ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを生成できる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。

【0432】

５５．ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの生成方法であって、前記二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が、酵母細胞内の１２位にあり、以下のステップ：
ｉ）条項１～５４のいずれか１項に記載の酵母細胞を提供するステップ、
ｉｉ）異種Δ１２デサチュラーゼの発現を可能にする条件下において培地中で前記酵母細胞をインキュベートし、前記デサチュラーゼが、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡ、好ましくは不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入できるステップを含み、
ここで、ｎ及びｎ’が整数であり、
ここで、０≦ｎ≦３であり、１≦ｎ’≦４であり、
それによって、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成し、前記二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が１２位にある、前記方法。

【0433】

５６．前記異種Δ１２デサチュラーゼが、先行条項のいずれか１項で定義される通りである、条項５５に記載の方法。

【0434】

５７．前記さらなる異種デサチュラーゼが、先行条項のいずれか１項で定義される通りである、条項５５～５６のいずれか１項に記載の方法。

【0435】

５８．ｎ’個の二重結合（複数可）を有する前記不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、先行条項のいずれか１項で定義される通りである、条項５５～５７のいずれか１項に記載の方法。

【0436】

５９．少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する前記飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、先行条項のいずれか１項で定義される通りである、条項５５～５８のいずれか１項に記載の方法。

【0437】

６０．前記酵母細胞が、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールに変換できる、少なくとも１つのアルコール生成脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ（ＦＡＲ）をさらに発現する、条項５５～５９のいずれか１項に記載の方法。

【0438】

６１．前記ＦＡＲが、先行条項のいずれか１項で定義される通りである、条項５５～６０のいずれか１項に記載の方法。

【0439】

６２．フェロモン組成物に前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを製剤化するステップをさらに含む、条項５５～６１のいずれか１項に記載の方法。

【0440】

６３．前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを回収するステップをさらに含む、条項５５～６２のいずれか１項に記載の方法。

【0441】

６４．前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールが、それぞれＥ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルにさらに変換される、条項５５～６３のいずれか１項に記載の方法。

【0442】

６５．前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールが、それぞれＥ１２－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールにさらに変換される、条項５５～６４のいずれか１項に記載の方法。

【0443】

６６．前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルへの前記変換が、
ａ．前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに変換できるアセチルトランスフェラーゼを、前記酵母細胞内でさらに発現させることによってインビボで実施されるか、あるいは
ｂ．例えば、化学変換によってインビトロで実施される、
条項５５～６５のいずれか１項に記載の方法。

【0444】

６７．前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールが、（Ｅ１２）－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに酸化され、任意に前記酸化が化学的に実施される、条項５５～６６のいずれか１項に記載の方法。

【0445】

６８．前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールが、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに化学的にアセチル化される、条項５５～６６のいずれか１項に記載の方法。

【0446】

６９．酵母細胞を改変するための核酸または核酸の系であって、前記核酸または核酸の系が、異種Δ１２デサチュラーゼをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含み、前記デサチュラーゼが、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入でき、それによって、ｎ’個の二重結合（複数可）を有する不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成し、前記二重結合（複数可）のうち少なくとも１個が１２位にあり、
ここで、ｎ及びｎ’が整数であり、
ここで、０≦ｎ≦３であり、１≦ｎ’≦４である、前記核酸または核酸の系。

【0447】

７０．前記異種Δ１２デサチュラーゼが、配列番号：１、配列番号：５４、配列番号：８４及び配列番号：８６に記載される配列のうちいずれか１つ、またはそれらに対して少なくとも８０％の同一性、例えば、それらに対して少なくとも８５％などの同一性、少なくとも９０％などの同一性、少なくとも９１％などの同一性、少なくとも９２％などの同一性、少なくとも９３％などの同一性、少なくとも９４％などの同一性、少なくとも９５％などの同一性、少なくとも９６％などの同一性、少なくとも９７％などの同一性、少なくとも９８％などの同一性、少なくとも９９％などの同一性を有するその機能的バリアントによってコードされる、条項６９に記載の核酸または核酸の系。

【0448】

７１．前記核酸または核酸の系が、少なくとも１３個の炭素鎖長を有し、ｎ個の二重結合を有する飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位ではない任意の位置に、二重結合を導入できるさらなる異種デサチュラーゼをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、条項６９～７０のいずれか１項に記載の核酸または核酸の系。

【0449】

７２．前記さらなる異種デサチュラーゼが、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：５６、配列番号：５８及び配列番号：６０に記載される配列のうちいずれか１つ、またはそれらに対して少なくとも８０％の同一性、例えば、それらに対して少なくとも８５％などの同一性、少なくとも９０％などの同一性、少なくとも９１％などの同一性、少なくとも９２％などの同一性、少なくとも９３％などの同一性、少なくとも９４％などの同一性、少なくとも９５％などの同一性、少なくとも９６％などの同一性、少なくとも９７％などの同一性、少なくとも９８％などの同一性、少なくとも９９％などの同一性を有するその機能的バリアントによってコードされる、条項６７～７１のいずれか１項に記載の核酸または核酸の系。

【0450】

７３．前記核酸または核酸の系が、二重不飽和（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールに変換できる脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼ（ＦＡＲ）をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、条項６７～７２のいずれか１項に記載の核酸または核酸の系。

【0451】

７４．前記ＦＡＲが、配列番号：１９、配列番号：２１、配列番号：２３、配列番号：２５、配列番号：２７、配列番号：２９、配列番号：６２、配列番号：６４、配列番号：６６、配列番号：６８、配列番号：７０、配列番号：７２、配列番号：７４、配列番号：７６及び配列番号：７８に記載される配列のうちいずれか１つ、またはそれらに対して少なくとも８０％の同一性、例えば、それらに対して少なくとも８５％などの同一性、少なくとも９０％などの同一性、少なくとも９１％などの同一性、少なくとも９２％などの同一性、少なくとも９３％などの同一性、少なくとも９４％などの同一性、少なくとも９５％などの同一性、少なくとも９６％などの同一性、少なくとも９７％などの同一性、少なくとも９８％などの同一性、少なくとも９９％などの同一性を有するその機能的バリアントによってコードされる、条項７３に記載の核酸または核酸の系。

【0452】

７５．害虫の存在のモニター方法または害虫の交配の撹乱方法であって、以下のステップ：
ｉ）条項５５～６３のいずれか１項に記載の方法によって、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール及び／またはＥ１２－脂肪族アルコールを生成するステップ、
ｉｉ）前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに変換するステップ、
ｉｉｉ）前記Ｅ１２－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれＥ１２－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに変換するステップ、
ｉｖ）前記Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールをフェロモン組成物として製剤化するステップ、ならびに
ｖ）前記フェロモン組成物を総合的病害虫管理組成物として用いるステップ
を含む、前記方法。

【0453】

７６．フェロモン組成物であって、以下のステップ：
ｉ）条項５５～６３のいずれか１項に記載の方法によって、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール及び／または（Ｅ１２）－脂肪族アルコールを生成するステップ、
ｉｉ）前記（Ｅ１２）－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれ（Ｅ１２）－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに変換するステップ、
ｉｉｉ）前記（Ｅ１２）－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれ（Ｅ１２）－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに変換するステップ、
ｉｖ）前記（Ｅ１２）－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、（Ｅ１２）－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールをフェロモン組成物として製剤化するステップ
を含む方法によって得られる、前記フェロモン組成物。

【0454】

７７．フェロモン組成物であって、Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールを含み、前記フェロモン組成物が、少なくとも２０％のバイオベース炭素を含む、前記フェロモン組成物。

【0455】

７８．フェロモン化合物であって、Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、Ｅ１２－脂肪族アルデヒド、及び（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールからなる群から選択され、前記フェロモン化合物が、少なくとも２０％のバイオベース炭素を含む、前記フェロモン化合物。

【0456】

７９．液体担体、固体担体及び基材からなる群から選択される１つ以上の追加の化合物をさらに含む、条項７７に記載のフェロモン組成物。

【0457】

８０．植物油、精製鉱油またはその画分、ゴム、プラスチック、シリカ、珪藻土、ワックスマトリックス及びセルロース粉末からなる群から選択される１つ以上の化合物をさらに含む、条項７７または７９のいずれかに記載のフェロモン組成物。

【0458】

８１．前記フェロモン組成物が、溶液、ゲル、または粉末の形態である、条項７７または７９～８０のいずれかに記載のフェロモン組成物。

【0459】

８２．前記フェロモン組成物が、分注され得るように製剤化される、条項７７または７９～８１のいずれかに記載のフェロモン組成物。

【0460】

８３．前記フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール対前記Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル対前記Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナール対前記Ｅ１２－脂肪族アルデヒドの比が、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える、条項７７または７９～８２のいずれかに記載のフェロモン組成物。

【0461】

８４．前記フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール対（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール対（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルの比が、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える、条項７７または７９～８３のいずれかに記載のフェロモン組成物。

【0462】

８５．前記フェロモン組成物中の（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール対Ｚ９－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル対Ｚ９－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナール対Ｚ９－脂肪族アルデヒドの比が、少なくとも０．１、例えば、少なくとも０．１５など、少なくとも０．２など、少なくとも０．３など、少なくとも０．４など、少なくとも０．５など、少なくとも０．７５など、少なくとも１など、少なくとも２など、少なくとも３など、少なくとも４など、少なくとも５など、少なくとも６など、少なくとも７など、少なくとも８など、少なくとも９など、少なくとも１０など、少なくとも１２．５など、少なくとも１５などのもの、またはそれを超える、条項７７または７９～８４のいずれかに記載のフェロモン組成物。

【0463】

８６．前記フェロモン組成物または前記フェロモン化合物が、少なくとも３０％のバイオベース炭素、あるいは４０％のバイオベース炭素、あるいは５０％のバイオベース炭素、あるいは６０％のバイオベース炭素、あるいは７０％のバイオベース炭素、あるいは７５％のバイオベース炭素、あるいは８０％のバイオベース炭素、あるいは８５％のバイオベース炭素、あるいは９０％のバイオベース炭素、あるいは９５％のバイオベース炭素を含む、条項７７～８５のいずれかに記載のフェロモン組成物またはフェロモン化合物。

【0464】

８７．前記フェロモン組成物または前記フェロモン化合物が、少なくとも８０％のバイオベース炭素、あるいは８５％のバイオベース炭素、あるいは９０％のバイオベース炭素、あるいは９５％のバイオベース炭素、あるいは９６％のバイオベース炭素、あるいは９７％のバイオベース炭素、あるいは９８％のバイオベース炭素、あるいは９９％のバイオベース炭素を含む、条項７７～８６のいずれかに記載のフェロモン組成物またはフェロモン化合物。

【0465】

８８．前記フェロモン組成物または前記フェロモン化合物が、３０～１００％のバイオベース炭素、あるいは４０～１００％のバイオベース炭素、あるいは５０～１００％のバイオベース炭素、あるいは６０～１００％のバイオベース炭素、あるいは７０～１００％のバイオベース炭素、あるいは７５～１００％のバイオベース炭素、あるいは８０～１００％のバイオベース炭素、あるいは８５～１００％のバイオベース炭素、あるいは９０～１００％のバイオベース炭素、あるいは９５～１００％のバイオベース炭素を含む、条項７７～８７のいずれかに記載のフェロモン組成物またはフェロモン化合物。

【0466】

８９．前記フェロモン組成物または前記フェロモン化合物が、８０～１００％のバイオベース炭素、あるいは８５～１００％のバイオベース炭素、あるいは９０～１００％のバイオベース炭素、あるいは９５～１００％のバイオベース炭素、あるいは９６～１００％のバイオベース炭素、あるいは９７～１００％のバイオベース炭素、あるいは９８～１００％のバイオベース炭素、あるいは９９～１００％のバイオベース炭素を含む、条項７７～８８のいずれかに記載のフェロモン組成物またはフェロモン化合物。

【0467】

９０．条項７７または７９～８９のいずれかに記載のフェロモン組成物の生成方法であって、以下のステップ：
ｉ）条項５５～６３のいずれか１項に記載の方法によって、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール及び／または（Ｅ１２）－脂肪族アルコールを生成するステップ、
ｉｉ）前記（Ｅ１２）－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれ（Ｅ１２）－脂肪族アルコールの酢酸エステル及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに変換するステップ、
ｉｉｉ）前記（Ｅ１２）－脂肪族アルコール及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを、それぞれ（Ｅ１２）－脂肪族アルデヒド及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに変換するステップ、
ｉｖ）前記Ｅ１２－脂肪族アルコール、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、Ｅ１２－脂肪族アルコールの酢酸エステル、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、（Ｅ１２）－脂肪族アルデヒド、及び／または（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールをフェロモン組成物として製剤化し、任意に液体または固体の担体または基材などの１つ以上の追加の化合物を含むステップ、
ｖ）任意に、前記フェロモン組成物の前記バイオベース炭素含有量を決定するステップ
を含む、前記方法。

【0468】

９１．酵母細胞内における、条項７８～８９のいずれかに記載のフェロモン化合物の生成方法であって、以下のステップ：
ｉ）異種Δ１２脂肪酸アシル－ＣｏＡデサチュラーゼを発現する酵母細胞を提供するステップ、
ｉｉ）異種Δ１２脂肪酸アシル－ＣｏＡデサチュラーゼの発現を可能にする条件下において培地中で前記方法酵母細胞をインキュベートするステップ
を含み、それによって前記フェロモン化合物を生成する、前記方法。

【0469】

９２．条項７８～８９のいずれかに記載のフェロモン化合物を生成できる酵母細胞であって、前記酵母細胞が、異種Δ１２脂肪酸アシル－ＣｏＡデサチュラーゼを発現する、前記酵母細胞。

【0470】

９３．前記酵母細胞が、さらなる異種デサチュラーゼを発現する、条項９１～９２のいずれかに記載の方法または酵母細胞。

【0471】

９４．前記酵母細胞が、少なくとも１つのアルコール生成脂肪酸アシル－ＣｏＡレダクターゼをさらに発現する、条項９１～９３のいずれかに記載の方法または酵母細胞。

【0472】

９５．前記フェロモン化合物の前記バイオベース炭素含有量を決定するステップをさらに含む、条項９１～９４のいずれかに記載の方法。

【0473】

９６．飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入する方法における、Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼの使用。

【0474】

９７．前記不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、１２個以上、例えば、１３個など、１４個など、１５個以上などの炭素長を有し、及び／または飽和脂肪酸メチルエステルが、１２個以上、例えば、１３個など、１４個など、１５個以上などの炭素長を有する、条項９６に記載の使用。

【0475】

９８．前記Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａデサチュラーゼが、Ｐｉｄ１２（配列番号：２）またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである、条項９６～９７のいずれか１項に記載の使用。

【0476】

９９．飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入する方法における、Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａデサチュラーゼの使用。

【0477】

１００．前記不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、１２個以上、例えば、１３個など、１４個など、１５個以上などの炭素長を有し、及び／または飽和脂肪酸メチルエステルが、１２個以上、例えば、１３個など、１４個など、１５個以上などの炭素長を有する、条項９９に記載の使用。

【0478】

１０１．前記Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａデサチュラーゼが、ＥｃａｕＤｅｓ１２（配列番号：５５）またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである、条項９９～１００のいずれか１項に記載の使用。

【0479】

１０２．飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入する方法における、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａデサチュラーゼの使用。

【0480】

１０３．前記不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、１２個以上、例えば、１３個など、１４個など、１５個以上などの炭素長を有し、及び／または飽和脂肪酸メチルエステルが、１２個以上、例えば、１３個など、１４個など、１５個以上などの炭素長を有する、条項１０２に記載の使用。

【0481】

１０４．前記Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａデサチュラーゼが、Ｅｋｕ＿ｄ１２（配列番号：８５）またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである、条項１０２～１０３のいずれか１項に記載の使用。

【0482】

１０５．飽和または不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入する方法における、Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａデサチュラーゼの使用。

【0483】

１０６．前記不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡが、１２個以上、例えば、１３個など、１４個など、１５個以上などの炭素長を有し、及び／または飽和脂肪酸メチルエステルが、１２個以上、例えば、１３個など、１４個など、１５個以上などの炭素長を有する、条項１０５に記載の使用。

【0484】

１０７．前記Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａデサチュラーゼが、Ｅｅ＿ｄ１２（配列番号：８７）またはそれに対して少なくとも７０％の類似性もしくは同一性、例えば、それに対して少なくとも８０％など、少なくとも９０％など、少なくとも９１％など、少なくとも９２％など、少なくとも９３％など、少なくとも９４％など、少なくとも９５％など、少なくとも９６％など、少なくとも９７％など、少なくとも９８％など、少なくとも９９％など、１００％などの類似性もしくは同一性を有するその機能的バリアントである、条項１０５～１０６のいずれか１項に記載の使用。

【0485】

１０８．前記方法がインビトロで実施される、条項９６～１０１のいずれか１項に記載の使用。

【0486】

１０９．前記方法がインビボで実施され、好ましくは、前記方法が、条項１～５４のいずれか１項に記載の酵母細胞内で実施される、条項９６～１０８のいずれか１項に記載の使用。

【0487】

１１０．条項５５～６４のいずれか１項に記載の方法によって得られる、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡ。

【0488】

１１１．条項６０～６４のいずれか１項に記載の方法によって得られる、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール。

【0489】

１１２．条項１～５４のいずれか１項に記載の酵母細胞を含む、発酵ブロス。

【0490】

１１３．（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡを生成できる酵母細胞であって、
ｉ）テトラデカノイル－ＣｏＡの９位に第１二重結合を導入し、それによって、前記テトラデカノイル－ＣｏＡを（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡに変換できる少なくとも１つの第１異種デサチュラーゼ、及び
ｉｉ）（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡの１２位に第２二重結合を導入し、それによって、（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡを（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡに変換できる少なくとも１つの第２異種デサチュラーゼ
を発現する、前記酵母細胞。

【0491】

１１４．不飽和脂肪酸アシル－ＣｏＡを生成できる酵母細胞であって、前記酵母細胞が、脂肪酸アシル－ＣｏＡの１２位にトランス二重結合を導入し、それによって、前記脂肪酸アシル－ＣｏＡをＥ１２－脂肪酸アシル－ＣｏＡに変換できるＰｉｄ１２（配列番号：２）デサチュラーゼ、ＥｃａｕＤｅｓ１２（配列番号：５５）デサチュラーゼ、Ｅｋｕ＿ｄ１２（配列番号：８５）またはＥｅ＿ｄ１２（配列番号：８７）デサチュラーゼを発現する、前記酵母細胞。

【0492】

１１５．（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの生成方法であって、以下のステップ：
ｉ）条項１～５４のいずれか１項に記載の酵母細胞を提供するステップ、
ｉｉ）以下の発現を可能にする条件下において培地中で前記酵母細胞をインキュベートするステップ：
ａ．さらなるデサチュラーゼであって、前記デサチュラーゼが、テトラデカノイル－ＣｏＡの９位に二重結合を導入し、それによって、テトラデカノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡに変換できる、前記さらなるデサチュラーゼ、
ｂ．異種Δ１２デサチュラーゼであって、前記デサチュラーゼが、（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡの１２位に二重結合を導入し、それによって、（Ｚ９）－テトラデセノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡに変換できる、前記異種Δ１２デサチュラーゼ、
ｃ．ＦＡＲであって、前記ＦＡＲが、（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエノイル－ＣｏＡの少なくとも一部を（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールに変換できる、前記ＦＡＲ、
ｉｉｉ）任意に、前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを回収するステップ、
ｉｖ）任意に、前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステルに変換するステップ、
ｖ）任意に、前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールを（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールに変換するステップ、
ｖｉ）任意に、前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オール、前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエン－１－オールの酢酸エステル、及び／または前記（Ｚ９，Ｅ１２）－テトラデカジエナールをフェロモン組成物に製剤化するステップ
を含む、前記方法。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【配列表】

2024524415000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2024-03-18

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2024524415000001.xml

【国際調査報告】