特表 2024-524719 ＭＯＲ受容体アゴニストの薬学的に許容できる塩、その多形体及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-05

(54)【発明の名称】ＭＯＲ受容体アゴニストの薬学的に許容できる塩、その多形体及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/04 20060101AFI20240628BHJP

   A61K 31/4439 20060101ALI20240628BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240628BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20240628BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240628BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240628BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20240628BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240628BHJP

   A61P 13/00 20060101ALI20240628BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20240628BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240628BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240628BHJP

【ＦＩ】

C07D487/04 138

C07D487/04 CSP

A61K31/4439

A61P43/00 111

A61P25/04

A61P29/00

A61P37/02

A61P1/00

A61P25/00

A61P13/00

A61P15/00

A61P9/00

A61P11/00

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024502238

(86)(22)【出願日】2022-07-13

(85)【翻訳文提出日】2024-01-15

(86)【国際出願番号】 CN2022105473

(87)【国際公開番号】W WO2023284788

(87)【国際公開日】2023-01-19

(31)【優先権主張番号】202110788712.4

(32)【優先日】2021-07-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520415971

【氏名又は名称】上海海雁医薬科技有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＨＡＩＹＡＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯ．， ＬＴＤ．

(71)【出願人】

【識別番号】517202157

【氏名又は名称】ヤンツェー リバー ファーマシューティカル グループ カンパニー リミテッド

【住所又は居所原語表記】１ Ｓｏｕｔｈ Ｙａｎｇｔｚｅ Ｒｉｖｅｒ Ｒｏａｄ Ｔａｉｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ，２２５３２１ ＣＨＩＮＡ

(74)【代理人】

【識別番号】110001519

【氏名又は名称】弁理士法人太陽国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】但招陵

(72)【発明者】

【氏名】江涛涛

(72)【発明者】

【氏名】王吉標

(72)【発明者】

【氏名】強金磊

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086AA04

4C086CB03

4C086GA13

4C086GA14

4C086GA15

4C086MA01

4C086MA03

4C086NA03

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZA01

4C086ZA08

4C086ZA36

4C086ZA59

4C086ZA66

4C086ZA81

4C086ZB07

4C086ZB11

4C086ZC41

(57)【要約】

ＭＯＲ受容体アゴニストの薬学的に許容できる塩及びその多形体、使用を開示する。具体的に、（４Ｓ，６Ｓ）－６－イソプロピル－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミンの薬学的に許容できる塩及びその多形体並びに使用を開示する。なお、該化合物を含む薬学的に許容できる塩またはその薬物組成物及びその使用を更に開示する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩であって、前記式Ｘ化合物は以下の構造を有し、

【化1】

ただし、前記薬学的に許容できる塩は、マレイン酸塩、Ｌ－酒石酸塩またはコハク酸塩である、式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩。

【請求項2】

前記式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩は多形体であり、
前記多形体は、
Ｘ線粉末回折パターンは少なくとも１０．０６±０．２、１０．４５±０．２、１１．１３±０．２、１３．０３±０．２、１６．８１±０．２、１７．２９±０．２、１９．４５±０．２、２０．０５±０．２、２４．０４±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある、結晶型Ａである式Ｘ化合物のマレイン酸塩のＡ型結晶、
Ｘ線粉末回折パターンは少なくとも１３．８２±０．２、１４．８７±０．２、２０．５５±０．２、２３．１５±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある、結晶型Ｂである式Ｘ化合物のＬ－酒石酸塩のＢ型結晶、
Ｘ線粉末回折パターンは少なくとも６．５２±０．２、１０．３７±０．２、１０．８４±０．２、１３．６６±０．２、１４．１１±０．２、１５．６１±０．２、１７．３５±０．２、２０．９２±０．２、２３．２０±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある、結晶型Ｃ－１である式Ｘ化合物のコハク酸塩のＣ－１型結晶、及び
Ｘ線粉末回折パターンは少なくとも９．６７±０．２、１２．５５±０．２、１３．６６±０．２、１４．２６±０．２、１４．９２±０．２、１５．７０±０．２、１７．０５±０．２、１７．５６±０．２、２１．４６±０．２、２３．１２±０．２、３７．５１±０．２、４３．６４±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある、結晶型Ｃ－２である式Ｘ化合物のコハク酸塩のＣ－２型結晶、
のうちのいずれかの結晶型から選ばれる、請求項１に記載の式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩。

【請求項3】

前記結晶型ＡのＸ線粉末回折パターンは基本的に図１のように特徴づけられ、
前記結晶型ＢのＸ線粉末回折パターンは基本的に図４のように特徴づけられ、
前記結晶型Ｃ－１のＸ線粉末回折パターンは基本的に図７のように特徴づけられ、
前記結晶型Ｃ－２のＸ線粉末回折パターンは基本的に図８のように特徴づけられる、請求項２に記載の式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩。

【請求項4】

前記結晶型ＢのＸ線粉末回折パターンはさらに、１０．４１±０．２、１５．７５±０．２、１６．２８±０．２、１７．２１±０．２、１７．６３±０．２、１９．９８±０．２、２０．２２±０．２、２１．０８±０．２、２２．２２±０．２、２４．５６±０．２、２８．９１±０．２から選ばれる回折角２θ（°）値での２つ以上のピークを含む、請求項２に記載の式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩。

【請求項5】

前記結晶型Ｂは、
（ｉ）示差走査熱量分析スペクトル中で、ピーク値の温度は１４３．３１±２℃であり、前記示差走査熱量分析スペクトルは基本的に図５のように特徴づけられる特徴、
（ｉｉ）熱重量分析スペクトルは基本的に図６のように特徴づけられる特徴、及び
（ｉｉｉ）赤外スペクトル図は基本的に図１５のように特徴づけられる特徴から選ばれる１つまたは複数をさらに含む、請求項２に記載の式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩。

【請求項6】

式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の調製方法であって、
式Ｘ化合物、酸及び溶媒を混合し、造塩反応を行い、式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩を調製するステップを含み、
ただし、前記式Ｘ化合物は以下の構造を有し、

【化2】

前記酸はマレイン酸、Ｌ－酒石酸及びコハク酸から選ばれる、式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の調製方法。

【請求項7】

式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体の調製方法であって、
（ｉ）式Ｘ化合物、酸及び溶媒を混合し、造塩反応を行い、反応液を取得するステップと、
（ｉｉ）前記反応液を結晶化処理して、前記多形体を調製するステップと、を含み、
ただし、前記式Ｘ化合物は以下の構造を有し、

【化3】

前記酸は、マレイン酸、Ｌ－酒石酸及びコハク酸から選ばれる、式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体の調製方法。

【請求項8】

前記酸と前記式Ｘ化合物のモル比は（１．１～１．３）：１であり、好ましくは１．２：１である、請求項６または７に記載の調製方法。

【請求項9】

式Ｘ化合物、酸及び溶媒を混合して造塩反応を行うステップは、
式Ｘ化合物、酸及び溶媒を混合した後、温度が２５℃～５５℃の条件下で５～１２０ｍｉｎ反応させ、次に、温度が２５℃～４５℃の条件下で５～１２０ｍｉｎ反応させ、さらに、温度が２５℃～３５℃の条件下で５～１２０ｍｉｎ反応させる、請求項６または７に記載の調製方法。

【請求項10】

降温、懸濁液振とうまたは反溶媒の添加の方法により前記結晶化処理を行い、または自然降温の方法により前記結晶化処理を行う、請求項７に記載の調製方法。

【請求項11】

前記多形体は結晶型Ａであり、前記酸はマレイン酸であり、前記溶媒はアセトニトリル、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、酢酸エチル、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ｎ－ヘプタンまたはその組み合わせであり、または
前記多形体は結晶型Ｂであり、前記酸はＬ－酒石酸であり、前記溶媒はアセトニトリル、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、酢酸エチル、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ｎ－ヘプタンまたはその組み合わせであり、または
前記多形体は結晶型Ｃ－１であり、前記酸はコハク酸であり、前記溶媒はアセトンであり、または
前記多形体は結晶型Ｃ－２であり、前記酸はコハク酸であり、前記溶媒は酢酸エチルである、請求項７に記載の調製方法。

【請求項12】

前記多形体は結晶型Ｂであり、前記結晶化処理のステップは、
前記反応液を－１０℃～１０℃まで降温し、固体を収集するステップと、
前記固体を第２の溶媒に溶解し、降温方式によって結晶化し、前記結晶型Ｂを調製するステップとを含み、前記第２の溶媒は、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、酢酸エチル、アセトン、ｎ－ヘプタン及びメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルから選ばれる、請求項７に記載の調製方法。

【請求項13】

前記第２の溶媒はアセトニトリルであり、前記固体を前記第２の溶媒に溶解し、降温方式によって結晶化し、前記結晶型Ｂを調製するステップは、
３０℃～７０℃の条件下で、前記固体をアセトニトリルに溶解し、ほぼ飽和溶液を調製し、ろ過し、濾液を収集するステップと、
前記濾液にアセトニトリルを添加し、－１０℃～２０℃まで降温し、析出した結晶を収集し、結晶型Ｂを取得するステップと、を含む、請求項１２に記載の調製方法。

【請求項14】

前記多形体は請求項２～５のいずれか１項に記載の多形体である、請求項７～１３のいずれか１項に記載の調製方法。

【請求項15】

薬物組成物であって、
（ａ）請求項１に記載の式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩、請求項２～５のいずれか１項に記載の多形体、または請求項６に記載の調製方法によって調製される式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩、または請求項７～１４のいずれか１項に記載の調製方法によって調製される多形体、及び
（ｂ）薬学的に許容される担体、を含む、薬物組成物。

【請求項16】

請求項１に記載の式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩、請求項２～５のいずれか１項に記載の多形体、または請求項６に記載の調製方法によって調製される式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩、または請求項７～１４のいずれか１項に記載の調製方法によって調製される多形体、または請求項１５に記載の薬物組成物の、ＭＯＲ受容体アゴニストによって媒介された関連疾患を予防及び／又は治療する薬物の調製における使用。

【請求項17】

前記ＭＯＲ受容体アゴニストによって媒介された関連疾患は疼痛、免疫機能障害、炎症、食管逆流、神経と精神疾患、泌尿と生殖器疾患、心血管疾患及び呼吸器疾患から選ばれる、請求項１６に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本願は医薬技術分野に関し、具体的に、本願はＭＯＲ受容体アゴニストの薬学的に許容できる塩、その多形体及びその使用に関する。

【背景技術】

【0002】

オピオイド受容体は、Ｇタンパク質共役受容体（Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＧＰＣＲ）の重要なクラスであり、内因性オピオイドペプチド及びオピオイド薬物結合の標的であり、内因性オピオイドペプチドは哺乳動物の体内で日然に生成するオピオイド様活物質である。現在知られている内因性オピオイドペプチドは、エンケファリン、エンドルフィン、ダイノルフィン及びネオフテニンの幾つかの種類に大別される。中枢神経系には、μ（ＭＯＲ）、δ（ＤＯＲ）、κ（ＫＯＲ）受容体など、対応するオピオイド受容体が存在する。研究によると、内因性オピオイドペプチド鎮痛作用の強弱は、主にオピオイド受容体の発現量に依存し、オピオイド受容体はオピオイド薬物及び内因性オピオイドペプチド鎮痛作用の標的となる。

【0003】

現在の研究では、ＧＰＣＲは、Ｇタンパク質経路とβ－ａｒｒｅｓｔｉｎ経路の２つの主要な経路を介して生理学的機能を媒介及び調節することが考えられる。従来のＧＰＣＲアゴニストが受容体と結合した後、カルシウムイオンなどのセカンドメッセンジャー系、アデニル酸シクラーゼ（ａｄｅｎｙｌ ｃｙｃｌａｓｅ、ＡＣ）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅｓ、ＭＡＰＫ）等を含むＧタンパク質シグナル経路を活性化するが、β－ａｒｒｅｓｔｉｎ嗜好性リガンドは主にβ－ａｒｒｅｓｔｉｎ経路を活性化する。β－ａｒｒｅｓｔｉｎで媒介したＧＰＣＲ反応は主に、以下の３つの側面があり、１）負性調節因子として、Ｇタンパク質共役受容体キナーゼ（ＧＲＫ）と作用し、ＧＰＣＲｓに受容体脱感作反応を起こさせ、Ｇタンパク質シグナル伝達を中止し、２）足場タンパク質（ｓｃａｆｆｏｌｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）として、エンドサイトーシスタンパク質を動員し、ＧＰＣＲエンドサイトーシスを誘導し、３）アダプタータンパク質として、ＧＰＣＲ下流シグナル分子と複合体を形成し、ＭＡＰＫ、Ｓｒｃタンパク質チロシンキナーゼ及びＡｋｔなどのシグナル伝達分子をＧタンパク質非依存的に活性化する。リガンド刺激Ｇタンパク質シグナル及び／又はβ－ａｒｒｅｓｔｉｎシグナルの違いにより、最終的にＧＰＣＲのリガンド特異的細胞生物学的効果を決定する。

【0004】

ＭＯＲは内因性エンケファリンやモルヒネなどのオピオイド鎮痛薬の作用標的である。初期の研究によると、内因性エンケファリンとオピオイド薬物エトルフィンはＧタンパク質刺激して受容体エンドサイトーシスを引き起こす可能性があるが、モルヒネは完全に受容体的エンドサイトーシスをまったく引き起こしく、これは、モルヒネがＭＯＲリン酸化を刺激する能力は弱すぎて、微量のβ－ａｒｒｅｓｔｉｎをに動員できないためである（Ｚｈａｎｇなど、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１９９８，９５（１２）：７１５７－７１６２）。このようなリガンドはβ－ａｒｒｅｓｔｉｎ経路ではなく、完全にＧタンパク質シグナル経路を介してその生理学的機能を発揮する。研究によると、β－ａｒｒｅｓｔｉｎ２遺伝子ノックアウトマウスにモルヒネを注射した後、Ｇタンパク質シグナルによって媒介される鎮痛効果がより強く、且つ維持時間がより長い（Ｂｏｈｎなど、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９９年）ことが分かった。これから分かるように、このようなリガンドの負性β－ａｒｒｅｓｔｉｎ嗜好性がより強く、ひいてはβ－ａｒｒｅｓｔｉｎで媒介される受容体脱感作を逃れることができれば、Ｇタンパク質シグナル伝達時間が長くなり、より強力な鎮痛作用が生じる。

【0005】

現在開示されているＭＯ６Ｒアゴニスト特許出願は、ＷＯ２０１７１０６５４７、ＷＯ２０１７０６３５０９、ＷＯ２０１２１２９４９５、ＷＯ２０１７１０６３０６などを含む。

【0006】

オピオイド薬物の長期使用は耐性や呼吸抑制、便秘などの副作用を生じるが、これらの副作用はβ－ａｒｒｅｓｔｉｎの機能と密接に関連していることが証明されている。オピオイド薬物の副作用を軽減するために、ＭＯＲの負性β－ａｒｒｅｓｔｉｎ嗜好性リガンドに基づいて薬物を設計し、β－ａｒｒｅｓｔｉｎで媒介される副作用を低減させ、治療効果を高めることができる。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

以上のような背景に基づいて、開発されたＭＯＲ受容体アゴニストの遊離塩基の物性がよくない場合、薬物のさらなる開発を促進するように、ＭＯＲ受容体アゴニストの薬学的に許容できる塩、その多形体をさらに開発する必要がある。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本願の第１の態様では、式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩、式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体を提供し、

【0009】

【化1】

【0010】

ただし、前記薬学的に許容できる塩はマレイン酸塩、Ｌ－酒石酸塩及びコハク酸塩から選ばれる。

【0011】

いくつかの実施手段において、前記式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩及び式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体は無水形態、水和物形態または溶媒和物形態である。

【0012】

いくつかの実施手段において、前記多形体は、式Ｘ化合物のマレイン酸塩のＡ型結晶、即ち結晶型Ａであり、そのＸ線粉末回折パターンは、少なくとも１０．０６±０．２、１０．４５±０．２、１１．１３±０．２、１３．０３±０．２、１６．８１±０．２、１７．２９±０．２、１９．４５±０．２、２０．０５±０．２、２４．０４±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0013】

いくつかの実施手段において、前記多形体は、式Ｘ化合物のマレイン酸塩のＡ型結晶、即ち結晶型Ａであり、そのＸ線粉末回折パターンは、少なくとも１０．０６±０．２、１０．４５±０．２、１１．１３±０．２、１３．０３±０．２、１６．８１±０．２、１７．２９±０．２、１９．４５±０．２、２０．０５±０．２、２４．０４±０．２、３７．５１±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0014】

いくつかの実施手段において、前記結晶型ＡのＸ線粉末回折パターンは、１１．９８±０．２、１４．１９±０．２、１５．７９±０．２、１８．５２±０．２、２０．９５±０．２、２１．９７±０．２、２５．５７±０．２から選ばれる回折角２θ（°）値での２つ以上のピークをさらに含む。

【0015】

いくつかの実施手段において、前記結晶型ＡのＸ線粉末回折パターンは、１１．９８±０．２、１４．１９±０．２、１５．７９±０．２、１８．５２±０．２、２０．９５±０．２、２１．９７±０．２、２５．５７±０．２、４３．６６±０．２から選ばれる回折角２θ（°）値での２つ以上のピークをさらに含む。

【0016】

いくつかの実施手段において、前記結晶型ＡのＸ線粉末回折パターンは、１０．０６±０．２、１０．４５±０．２、１１．１３±０．２、１１．９８±０．２、１３．０３±０．２、１４．１９±０．２、１５．７９±０．２、１６．８１±０．２、１７．２９±０．２、１８．５２±０．２、１９．４５±０．２、２０．０５±０．２、２０．９５±０．２、２１．９７±０．２、２４．０４±０．２、２５．５７±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0017】

いくつかの実施手段において、前記結晶型ＡのＸ線粉末回折パターンは、１０．０６±０．２、１０．４５±０．２、１１．１３±０．２、１１．９８±０．２、１３．０３±０．２、１４．１９±０．２、１５．７９±０．２、１６．８１±０．２、１７．２９±０．２、１８．５２±０．２、１９．４５±０．２、２０．０５±０．２、２０．９５±０．２、２１．９７±０．２、２４．０４±０．２、２５．５７±０．２、３７．５１±０．２、４３．６６±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0018】

いくつかの実施手段において、前記結晶型ＡのＸ線粉末回折パターンは表Ａ１に示す２θ（°）値にピークがあり、各ピークの相対強度を表Ａ１に示す。

【0019】

【表A1】

【0020】

いくつかの実施手段において、前記結晶型ＡのＸ線粉末回折パターンは基本的に図１のように特徴づけられる。

【0021】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ａは無水形態である。

【0022】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ａはさらに、
（ｉ）示差走査熱量分析スペクトル中で、ピーク値の温度は１７７．６２±２℃であり、いくつかの実施例において、その示差走査熱量分析スペクトルは基本的に図２のように特徴づけられる特徴、
（ｉｉ）熱重量分析スペクトルは基本的に図３のように特徴づけられる特徴から選ばれる１つまたは複数をさらに含む。

【0023】

いくつかの実施手段において、前記多形体は式Ｘ化合物のＬ－酒石酸塩のＢ型結晶であり、即ち結晶型Ｂであり、そのＸ線粉末回折パターンは、少なくとも１３．８２±０．２、１４．８７±０．２、２０．５５±０．２、２３．１５±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0024】

いくつかの実施手段において、前記多形体は式Ｘ化合物のＬ－酒石酸塩のＢ型結晶、即ち結晶型Ｂであり、そのＸ線粉末回折パターンは、少なくとも１３．８２±０．２、１４．８７±０．２、２０．５５±０．２、２３．１５±０．２、３８．００±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0025】

いくつかの実施手段において、前記結晶型ＢのＸ線粉末回折パターンは、１０．４１±０．２、１５．７５±０．２、１６．２８±０．２、１７．２１±０．２、１７．６３±０．２、１９．９８±０．２、２０．２２±０．２、２１．０８±０．２、２２．２２±０．２、２４．５６±０．２、２８．９１±０．２から選ばれる回折角２θ（°）値での２つ以上のピークをさらに含む。

【0026】

いくつかの実施手段において、前記結晶型ＢのＸ線粉末回折パターンは、１０．４１±０．２、１５．７５±０．２、１６．２８±０．２、１７．２１±０．２、１７．６３±０．２、１９．９８±０．２、２０．２２±０．２、２１．０８±０．２、２２．２２±０．２、２４．５６±０．２、２８．９１±０．２、４４．２１±０．２から選ばれる回折角２θ（°）値での２つ以上のピークをさらに含む。

【0027】

いくつかの実施手段において、前記結晶型ＢのＸ線粉末回折パターンは、１０．４１±０．２、１３．８２±０．２、１４．８７±０．２、１５．７５±０．２、１６．２８±０．２、１７．２１±０．２、１７．６３±０．２、１９．９８±０．２、２０．２２±０．２、２０．５５±０．２、２１．０８±０．２、２２．２２±０．２、２３．１５±０．２、２４．５６±０．２、２８．９１±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0028】

いくつかの実施手段において、前記結晶型ＢのＸ線粉末回折パターンは、１０．４１±０．２、１３．８２±０．２、１４．８７±０．２、１５．７５±０．２、１６．２８±０．２、１７．２１±０．２、１７．６３±０．２、１９．９８±０．２、２０．２２±０．２、２０．５５±０．２、２１．０８±０．２、２２．２２±０．２、２３．１５±０．２、２４．５６±０．２、２８．９１±０．２、３８．００±０．２、４４．２１±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0029】

いくつかの実施手段において、前記結晶型ＢのＸ線粉末回折パターンは、表Ｂ１に示す２θ（°）値にピークがあり、各ピークの相対強度を表Ｂ１に示す。

【0030】

【表B1】

【0031】

いくつかの実施手段において、前記結晶型ＢのＸ線粉末回折パターンは基本的に図４のように特徴づけられる。

【0032】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｂは無水形態である。

【0033】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｂはさらに、
（ｉ）示差走査熱量分析スペクトル中で、ピーク値の温度は１４３．３１±２℃であり、いくつかの実施例において、その示差走査熱量分析スペクトルは基本的に図５のように特徴づけられる特徴、
（ｉｉ）熱重量分析スペクトルは基本的に図６のように特徴づけられる特徴から選ばれる１つまたは複数をさらに含む。

【0034】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｂの赤外スペクトルは約３４５７ ｃｍ^－１、３０７３ ｃｍ^－１、２９５９ ｃｍ^－１、２８７３ ｃｍ^－１、１７１６ ｃｍ^－１、１５８９ ｃｍ^－１、１５７１ ｃｍ^－１、１４６８ ｃｍ^－１、１４４０ ｃｍ^－１、１３７７ ｃｍ^－１、１２８７ ｃｍ^－１、１１３１ ｃｍ^－１、１１０５ ｃｍ^－１、１０６２ ｃｍ^－１、７９９ ｃｍ^－１に吸収ピークがある。

【0035】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｂの赤外スペクトル図は基本的に図１５のように特徴づけられる。

【0036】

いくつかの実施手段において、前記多形体は式Ｘ化合物のコハク酸塩のＣ－１型結晶、即ち結晶型Ｃ－１であり、そのＸ線粉末回折パターンは少なくとも６．５２±０．２、１０．３７±０．２、１０．８４±０．２、１３．６６±０．２、１４．１１±０．２、１５．６１±０．２、１７．３５±０．２、２０．９２±０．２、２３．２０±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0037】

いくつかの実施手段において、前記多形体は式Ｘ化合物のコハク酸塩のＣ－１型結晶、即ち結晶型Ｃ－１であり、そのＸ線粉末回折パターンは少なくとも６．５２±０．２、１０．３７±０．２、１０．８４±０．２、１３．６６±０．２、１４．１１±０．２、１５．６１±０．２、１７．３５±０．２、２０．９２±０．２、２３．２０±０．２、３７．５１±０．２、４３．６１±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0038】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｃ－１のＸ線粉末回折パターンは、１９．３３±０．２、２５．０９±０．２から選ばれる回折角２θ（°）値でのピークをさらに含む。

【0039】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｃ－１のＸ線粉末回折パターンは、６．５２±０．２、１０．３７±０．２、１０．８４±０．２、１３．６６±０．２、１４．１１±０．２、１５．６１±０．２、１７．３５±０．２、１９．３３±０．２、２０．９２±０．２、２３．２０±０．２、２５．０９±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0040】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｃ－１のＸ線粉末回折パターンは、６．５２±０．２、１０．３７±０．２、１０．８４±０．２、１３．６６±０．２、１４．１１±０．２、１５．６１±０．２、１７．３５±０．２、１９．３３±０．２、２０．９２±０．２、２３．２０±０．２、２５．０９±０．２、３７．５１±０．２、４３．６１±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0041】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｃ－１のＸ線粉末回折パターンは、表（Ｃ－１）に示す２θ（°）値にピークがあり、各ピークの相対強度を表（Ｃ－１）に示す。

【0042】

【表(C-1)】

【0043】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｃ－１のＸ線粉末回折パターンは基本的に図７のように特徴づけられる。

【0044】

いくつかの実施手段において、前記多形体は式Ｘ化合物のコハク酸塩のＣ－２型結晶、即ち結晶型Ｃ－２であり、そのＸ線粉末回折パターンは少なくとも３７．５１±０．２、４３．６４±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0045】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｃ－２のＸ線粉末回折パターンは、９．６７±０．２、１２．５５±０．２、１３．６６±０．２、１４．２６±０．２、１４．９２±０．２、１５．７０±０．２、１７．０５±０．２、１７．５６±０．２、２１．４６±０．２、２３．１２±０．２から選ばれる回折角２θ（°）値の２つ以上のピークをさらに含む。

【0046】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｃ－２のＸ線粉末回折パターンは、９．６７±０．２、１２．５５±０．２、１３．６６±０．２、１４．２６±０．２、１４．９２±０．２、１５．７０±０．２、１７．０５±０．２、１７．５６±０．２、２１．４６±０．２、２３．１２±０．２、３７．５１±０．２、４３．６４±０．２の回折角２θ（°）値にピークがある。

【0047】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｃ－２のＸ線粉末回折パターンは、表（Ｃ－２）に示す２θ（°）値にピークがあり、各ピークの相対強度を表（Ｃ－２）に示す。

【0048】

【表(C-2)】

【0049】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｃ－２のＸ線粉末回折パターンは基本的に図８のように特徴づけられる。

【0050】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｃ－２は無水形態である。

【0051】

いくつかの実施手段において、前記結晶型Ｃ－２はさらに、
（ｉ）示差走査熱量分析スペクトル中で、ピーク値の温度は１１７．１４±２℃であり、いくつかの実施例において、その示差走査熱量分析スペクトルは基本的に図９のように特徴づけられる特徴、
（ｉｉ）熱重量分析スペクトルは基本的に図１０のように特徴づけられる特徴から選ばれる１つまたは複数をさらに含む。

【0052】

本願の第２の態様では、式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の調製方法を提供し、
式Ｘ化合物、酸及び溶媒を混合し、造塩反応を行い、式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩を取得するＳ１００を含む。
ここで、式Ｘ化合物は以下の構造を有し、

【0053】

【化2】

【0054】

前記酸はマレイン酸、Ｌ－酒石酸及びコハク酸から選ばれる。

【0055】

本願の第３の態様では、式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体の調製方法を提供し、
式Ｘ化合物、酸及び溶媒を混合し、造塩反応を行い、反応液を取得するＳ２１０と、
反応液を結晶化処理して、多形体を取得するＳ２２０と、を含み、
ここで、式Ｘ化合物は以下の構造を有し、

【0056】

【化3】

【0057】

前記酸はマレイン酸、Ｌ－酒石酸及びコハク酸から選ばれる。

【0058】

いくつかの実施手段において、ステップＳ２１０では、酸と式Ｘ化合物のモル比は、約（１．１－１．３）：１であり、他のいくつかの手段では１．２：１である。

【0059】

いくつかの実施手段において、ステップＳ２１０では、式Ｘ化合物、酸及び溶媒を混合した後、温度が約２５℃－約５５℃の条件下で約５－１２０ｍｉｎ反応させ、次に、温度が約２５℃－約４５℃の条件下で約５－１２０ｍｉｎ反応させ、さらに、温度が約２５℃－約３５℃の条件下で約５－１２０ｍｉｎ反応させる。

【0060】

いくつかの実施手段において、ステップＳ２１０では、式Ｘ化合物、酸及び溶媒を混合した後、温度が約５０℃の条件下で約６０ｍｉｎ反応させ、次に、温度が約４０℃の条件下で約６０ｍｉｎ反応させ、さらに、温度が約３０℃の条件下で約６０ｍｉｎ反応させる。

【0061】

いくつかの実施手段において、ステップＳ２２０では、降温、懸濁液振とうまたは反溶媒添加の方法によって結晶化処理を行う。

【0062】

いくつかの実施手段において、ステップＳ２２０では、自然降温の方法によって結晶化処理を行う。

【0063】

いくつかの実施手段において、ステップＳ２１０における溶媒は、アセトニトリル、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、酢酸エチル、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、テトラヒドロフラン及びｎ－ヘプタンの中の１種又は複数種から選ばれる。

【0064】

いくつかの実施手段において、多形体は結晶型Ａであり、酸はマレイン酸であり、ステップＳ２１０における溶媒はアセトニトリル、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、酢酸エチル、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、テトラヒドロフラン及びｎ－ヘプタンの中の１種又は複数種であり、他のいくつかの手段では酢酸エチルである。

【0065】

いくつかの実施手段において、多形体は結晶型Ｂであり、酸はＬ－酒石酸であり、ステップＳ２１０における溶媒はアセトニトリル、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、酢酸エチル、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、テトラヒドロフラン及びｎ－ヘプタンの中の１種又は複数種であり、他のいくつかの手段ではアセトンである。

【0066】

いくつかの実施手段において、多形体は結晶型Ｃ－１であり、酸はコハク酸であり、ステップＳ２１０における溶媒はアセトンである。

【0067】

いくつかの実施手段において、多形体は結晶型Ｃ－２であり、酸はコハク酸であり、ステップＳ２１０における溶媒は酢酸エチルである。

【0068】

いくつかの実施手段において、多形体は本願の第１の態様に記載の多形体である。

【0069】

本願の第４の態様は、結晶型Ａの調製方法を提供し、
式Ｘ化合物、マレイン酸及び溶媒を混合し、造塩反応を行い、反応液を取得するＳ３１０と、
反応液に降温、揮発、懸濁液振とうまたは反溶媒添加の結晶化処理を行うＳ３２０と、を含む。

【0070】

いくつかの実施手段において、ステップＳ３１０では、溶媒はアセトニトリル、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、酢酸エチル、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ｎ－ヘプタンの中の１種又は複数種から選ばれる。

【0071】

いくつかの実施手段において、ステップＳ３１０では、溶媒は酢酸エチルである。

【0072】

いくつかの実施手段において、ステップＳ３２０では、自然降温の方法によって結晶型Ａを取得する。

【0073】

本願の第５の態様では、結晶型Ｂの調製方法を提供し、
式Ｘ化合物、Ｌ－酒石酸及び溶媒を混合し、造塩反応を行い、反応液を取得するＳ４１０と、
反応液に降温、懸濁液振とうまたは反溶媒添加の結晶化処理を行うＳ４２０と、を含む。

【0074】

いくつかの実施手段において、ステップＳ４２０では、降温または懸濁液振とうによって結晶化処理を行う。

【0075】

いくつかの実施手段において、ステップＳ４１０では、前記溶媒は、アセトニトリル、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、酢酸エチル、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ｎ－ヘプタンの中の１種又は複数種から選ばれる。

【0076】

いくつかの実施手段において、ステップＳ４２０では、反応液を結晶化処理した後に得られた生成物を第２の溶媒に再度溶解し、降温方式によって結晶化処理を行い、結晶型Ｂを取得する。前記第２の溶媒は、アセトニトリル、アセトン、酢酸エチル、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ｎ－ヘプタン及びその組み合わせから選ばれる。

【0077】

いくつかの実施手段において、ステップＳ４２０では、
反応液を約－１０℃～約１０℃に降温し、固体が析出した後に固体を収集するＳ４２１と、
固体を第２の溶媒に溶解し、降温方式によって結晶化し、前記結晶型Ｂを調製するＳ４２２と、を含む。

【0078】

いくつかの実施手段において、第２の溶媒はアセトニトリルであり、ステップＳ４２２は、
約３０－７０℃（いくつかの実施手段では６０℃である）の条件下で、固体をアセトニトリルに溶解し、ほぼ飽和溶液を調製し、ろ過し、濾液を収集するＳ４２２１と、
濾液にアセトニトリルを添加し、約－１０℃～約２０℃まで降温し、結晶が析出し、析出した結晶を収集し、結晶型Ｂを取得するＳ４２２２と、を含む。

【0079】

本願の第６の態様では、結晶型Ｃ－１の調製方法を提供し、
式Ｘ化合物、コハク酸及び溶媒を混合し、造塩反応を行い、反応液を取得するＳ５１０と、
反応液に降温、揮発、懸濁液振とうまたは反溶媒添加の結晶化処理を行うＳ５２０と、を含む。

【0080】

いくつかの実施手段において、ステップＳ５１０では、溶媒はアセトンから選ばれる。

【0081】

いくつかの実施手段において、ステップＳ５２０では、降温の方法によって結晶化処理を行う。

【0082】

本願の第７の態様では、結晶型Ｃ－２の調製方法を提供し、
式Ｘ化合物、コハク酸及び溶媒を混合し、造塩反応を行い、反応液を取得するＳ６１０と、
反応液に降温、揮発、懸濁液振とうまたは反溶媒添加の結晶化処理を行うＳ６２０と、を含む。

【0083】

いくつかの実施手段において、ステップＳ６１０では、溶媒は酢酸エチルから選ばれる。

【0084】

いくつかの実施手段において、ステップＳ６２０では、降温の方法によって結晶化処理を行う。

【0085】

本願の第８の態様では、薬物組成物を提供し、前記薬物組成物は、
（ａ）本願の第１の態様に記載の式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩または式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体、第２の態様に記載の調製方法によって調製された式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩、第３の態様に記載の調製方法によって調製された式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体、第４の態様に記載の調製方法によって調製された結晶型Ａ、第５の態様に記載の調製方法によって調製された結晶型Ｂ、第６の態様に記載の調製方法によって調製された結晶型Ｃ－１、または第７の態様に記載の調製方法によって調製された結晶型Ｃ－２、及び
（ｂ）薬学的に許容される担体を含む。

【0086】

本願の第９の態様では、本願の第１の態様に記載の式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩または式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体、第２の態様に記載の調製方法によって調製された式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩、第３の態様に記載の調製方法によって調製された式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体、第４の態様に記載の調製方法によって調製された結晶型Ａ、第５の態様に記載の調製方法によって調製された結晶型Ｂ、第６の態様に記載の調製方法によって調製された結晶型Ｃ－１、第７の態様に記載の調製方法によって調製された結晶型Ｃ－２、または本願の第８の態様に記載の薬物組成物の、ＭＯＲ受容体アゴニストによって媒介された関連疾患を予防及び／又は治療する薬物の調製における使用を提供する。

【0087】

いくつかの実施手段において、前記ＭＯＲ受容体アゴニストによって媒介された関連疾患は疼痛、免疫機能障害、炎症、食管逆流、神経と精神疾患、泌尿と生殖器疾患、心血管疾患及び呼吸器疾患から選ばれる。

【0088】

いくつかの実施手段において、前記ＭＯＲ受容体アゴニストによって媒介された関連疾患は疼痛である。

【0089】

いくつかの実施手段において、前記疼痛は術後疼痛、癌による疼痛、神経因性疼痛、外傷性疼痛及び炎症による疼痛から選ばれる。

【0090】

いくつかの実施手段において、前記癌による疼痛の中の癌症は、乳がん、子宮内膜癌、子宮頸がん、皮膚癌、前立腺癌、卵巣癌、卵管腫瘍、卵巣瘤、血友病及び白血病から選ばれる。

【0091】

本願の第１０の態様では、ＭＯＲ受容体アゴニストによって媒介された関連疾患を予防及び／又は治療する方法を提供し、必要な患者に治療有効量の、第１の態様に記載の式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩または式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体、第２の態様に記載の調製方法によって調製された式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩、第３の態様に記載の調製方法によって調製された式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体、第４の態様に記載の調製方法によって調製された結晶型Ａ、第５の態様に記載の調製方法によって調製された結晶型Ｂ、第６の態様に記載の調製方法によって調製された結晶型Ｃ－１、第７の態様に記載の調製方法によって調製された結晶型Ｃ－２、または本願の第８の態様に記載の薬物組成物を投与するステップを含む。

【0092】

理解すべきものとして、本願の範囲内で、本願の上記各技術的特徴と、以下（実施例）に具体的に説明する各技術的特徴とは互いに組み合わせることができ、新しいまたは好ましい技術的解決手段を構成する。スペースの都合上、ここでは繰り返さない。

【0093】

本願の式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩及びその多形体は良好な物理化学的安定性だけでなく、体内体外関連薬理活性も良好であるため、薬物として開発される可能性がある。

【図面の簡単な説明】

【0094】

【図1】本願の実施例２による結晶型ＡのＸ線粉末回折パターンである。

【図2】本願の実施例２による結晶型Ａの示差走査熱量分析スペクトルである。

【図3】本願の実施例２による結晶型Ａの熱重量分析スペクトルである。

【図4】本願の実施例３ａによる結晶ＢのＸ線粉末回折パターンである。

【図5】本願の実施例３ａによる結晶Ｂの示差走査熱量分析スペクトルである。

【図6】本願の実施例３ａによる結晶Ｂの熱重量分析スペクトルである。

【図7】本願の実施例４による結晶型Ｃ－１のＸ線粉末回折パターンである。

【図8】本願の実施例５による結晶型Ｃ－２のＸ線粉末回折パターンである。

【図9】本願の実施例５による結晶型Ｃ－２の示差走査熱量分析スペクトルである。

【図10】本願の実施例５による結晶型Ｃ－２の熱重量分析スペクトルである。

【図11】化合物１ｅの単結晶構造図である。

【図12】結晶型Ａの７日間と３０日間の６０℃と４０℃の７５％ＲＨ条件下でのＸ線粉末回折パターンである。

【図13】結晶型Ｂの７日間と３０日間の６０℃と４０℃の７５％ＲＨ条件下でのＸ線粉末回折パターンである。

【図14】結晶型Ｃ－１の７日間と３０日間の６０℃と４０℃の７５％ＲＨ条件下でのＸ線粉末回折パターンである。

【図15】結晶型Ｂの赤外スペクトルである。

【発明を実施するための形態】

【0095】

広範かつ詳細な研究の後、発明者は、ｃＡＭＰに対して高い抑制活性、及び高いＥｍａｘ値、及びβ－ａｒｒｅｓｔｉｎに対して低いＥｍａｘ値を有し、偏向性に優れている式Ｘ化合物を発見した。これに基づいて、さらなる研究によって、式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩及びその一連の多形体を意外に発見しており、これらの塩及びその多形体は良好な物理化学的安定性を有するだけでなく、良好な体内体外関連薬理活性を有するため、さらに薬物として開発される可能性がある。

【0096】

式Ｘ化合物
本願では、式Ｘ化合物は（４Ｓ，６Ｓ）－６－イソプロピル－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミンであり、ｃＡＭＰに対して高い抑制活性、及びβ－ａｒｒｅｓｔｉｎに対して低いＥｍａｘ値を有し、偏向性に優れている。

【0097】

本願は、式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩及び式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体をさらに含み、ここで、薬学的に許容できる塩はマレイン酸塩、Ｌ－酒石酸塩及びコハク酸塩から選ばれる。本願では、多形体は式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩（例えばマレイン酸塩、Ｌ－酒石酸塩またはコハク酸塩）及びその様々な溶媒和物の多形体を含み、同一の塩または溶媒和物の異なる多形体をさらに含む。本願の多形体は結晶型Ａ、結晶型Ｂ、結晶型Ｃ－１、結晶型Ｃ－２を含む（これらに限定されない）。

【0098】

多形体
固体はアモルファス形態と結晶形態を含む。結晶形態の場合、分子は３次元格子サイト内に局在化される。化合物は溶液またはスラリーから結晶化し、それは異なる空間格子配列結晶（このような性質は「多結晶型現象」と呼ばれる）で、異なる結晶形態を有する結晶を形成することができ、この様々な結晶形態は「多形体」と呼ばれる。所定の物質の異なる多形体は１つまたは複数の物理的特性（例えば溶解度と溶解速度、真比重、結晶形、堆積方式、流動性及び／又は固体安定性）において互いに異なることができる。

【0099】

結晶化
溶液を操作することにより、目的化合物の溶解度限界を超え、生産規模の結晶化を完成することができる。これは、複数の方法によって完成することができ、例えば、相対的高い温度で化合物を溶解してから、溶液を飽和限界以下まで冷却する。または沸騰、常圧蒸発、真空乾燥またはその他のいくつかの方法によって液体の体積を減少する。抗溶媒または低い溶解度の溶媒を有する化合物またはそのような溶媒の混合物を添加することにより、目的化合物の溶解度を低下させることができる。他の選択可能な方法は、溶解度を低下させるように、ｐＨ値を調整することである。結晶化の詳細な説明について、Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ，第３版，Ｊ Ｗ Ｍｕｌｌｅｎｓ， Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ－Ｈｅｉｎｅｍａｎ Ｌｔｄ．、１９９３， ＩＳＢＮ ０７５０６１１２９４を参照する。

【0100】

本願に記載の「懸濁液振とう」とは、式Ｘ化合物と対応する酸または対応する酸の溶液を適切な溶媒中で混合して濁った液を形成した後、振とうして結晶を得る方法を指す。適切な溶媒は水または有機溶媒であってもよい。

【0101】

本願に記載の「ゆっくりと揮発」とは、式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩を含む溶液または式Ｘ化合物と対応する酸を含む溶液を一定の温度で溶媒をゆっくりと揮発し、結晶を取得する方法を指す。

【0102】

本願に記載の「反溶媒添加」または「反溶媒を添加」とは、式Ｘ化合物のある溶液に他の適切な溶媒を添加して析出することによって結晶を取得する方法を指す。

【0103】

本願は、塩の形成と結晶化が同時に起こる技術であり、即ち塩が反応媒体中で原料より溶解度が小さい場合、適切な酸またはアルカリを添加すると、所望の塩の直接結晶化が起こる。同様に、最終的に所望の形態で反応物よりも溶解度が小さい媒体中で、合成反応の完成は最終生成物を直接結晶化させることができる。

【0104】

結晶化の最適化には、必要な形態の結晶を種結晶として結晶媒体に接種することが含まれる。また、多くの結晶化方法は上記手段の組み合わせを採用する。一実施例は、高温で興味のある化合物を溶媒に溶解し、続いて、系がちょうど飽和レベル以下になるように制御して適切な体積の抗溶媒を添加することである。このとき、必要な形態の種結晶（種結晶の完全性を保持）を添加して、系を冷却して結晶化を完成させる。

【0105】

本明細書に使用されるように、「室温」（ＲＴ）という用語は、一般的に約４－３０℃を指し、いくつかの実施例において約２０±５℃を指す。

【0106】

多形体の同定と性質
前記式Ｘ化合物の多形体及びその調製過程は、以下のような多種の方式と装置を用いてテスト、研究することができる。

【0107】

Ｘ線粉末回折
本願の式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体は、特定の結晶型形態を有し、Ｘ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）中で特定の特徴ピークを有する。いくつかの実施例において、ＸＲＰＤパターンはＡＲＬ Ｅｑｕｉｎｏｘ３０００ Ｘ線粉末回折分析装置で採集し、ＸＲＰＤパラメータを下表に示す。

【0108】

【表D】

【0109】

Ｘ線粉末回折パターンでは、各ピークの位置は２θ（^ｏ）によって決定される。異なる装置及び／又は条件によって生成されるデータはわずかに異なり、各ピークの位置と相対強度は変化することを理解できる。当業者は、ＸＲＰＤパターンに従って結晶型を判定する場合、回折角度が低いピーク及びその強度、ピーク形の完全性などの要素は相対的に参考的な意義があり、本願の結晶型は上記装置を使用してテストする場合、回折角度が高い２θ（°）値の３７．５－３８と４３．５－４４の両方の範囲にブランク金属ディスクの強いバックグラウンドピーク（１、４、７及び８の同じ位置はピークに対応する）が現れることを理解すべきである。本願では、各結晶型は、そのピーク高ささが最も高い回折ピークをベースピークとして、その相対強度を１００％と定義し、Ｉ_０とし、ピークの強度の分割は、各位置上のピークの近似的な大きさのみを反映している。（結晶型Ａの２θ（^ｏ）値が１７．２９のピークはベースピークであり、結晶型Ｂの２θ（^ｏ）値が１３．８２のピークはベースピークであり、結晶型Ｃ－１の２θ（^ｏ）値が１４．１１のピークはベースピークであり、結晶型Ｃ－２の２θ（^ｏ）値が３７．５１のピークはベースピークである）、他の各ピークはそのピーク高さとベースピークのピーク高さの比をその相対強度Ｉ／Ｉ_０とし、各ピークの相対強度の分割定義を下表に示す。

【0110】

【表E】

【0111】

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）と熱重量分析（ＴＧＡ）
ＤＳＣとＴＧＡスペクトルはそれぞれＤＳＣ２５Ａ示差走査熱量測定装置とＴＧＡ５５０熱重量分析装置で採集され、テストパラメータを下記表に示す。

【0112】

【表F】

【0113】

上記装置の作用と同様な他のタイプの装置を使用したり、または本願に使用されるものと異なるテスト条件を使用したりする場合、別の数値が得られる可能性があるため、引用された数値は絶対的な数値とみなされてはならないことを理解できる。

【0114】

装置の誤差や操作者の違いから、当業者は、以上の結晶の物理的性質を特徴づけるパラメータにはわずかな違いがある可能性があるため、上記のパラメータは、本願のいくつかの実施例による多形体の特徴づけを補助するためのものに過ぎず、本願の多形体に対する制限とみなされてはならないことを理解できる。

【0115】

赤外スペクトル（ＩＲ）
Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６３０ ＦＴＩＲ赤外線分光器を使用して、固体ＫＢｒ打錠法でテストした。

【0116】

式Ｘ化合物の薬物組成物及びその使用
通常、本願の式Ｘ化合物またはその薬学的に許容される塩は、１種または複数種の医薬担体と適切な剤形を形成して投与することができる。これらの剤形は経口、直腸投薬、局部投薬、口腔内投薬及びその他の非消化管投与（例えば、皮下、筋肉、静脈等）に適する。例えば、経口投薬に適する剤形は、カプセル、錠剤、顆粒剤及びシロップなどを含む。これらの製剤に含まれる本願の化合物は、固体粉末または顆粒、水性または非水性液体中の溶液または懸濁液、油中水や水中油の乳剤などであってもよい。上記剤形は、活性化合物と１種または複数種の担体または補助材とを汎用の薬剤学的方法で調製することができる。上記の担体は、活性化合物または他の補助材と互換性がある必要がある。固体製剤の場合、よく使用される無毒担体はマンニトール、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、グルコース、スクロース等を含むが、これらに制限されない。液体製剤に使用される担体は、水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エチレングリコール及びポリエチレングリコールなどがある。活性化合物は上記担体と溶液または懸濁液を形成することができる。

【0117】

本願の組成物は医学実践規範に適合するように調製し、定量し、投与する。投与化合物の「有効量」は治療対象の具体的な病態、治療対象の個体、病態の原因、薬物の標的点及び投薬方式などの要素によって決定される。

【0118】

本願は、本願の第１の態様に記載の式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩、または式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体の、ＭＯＲ受容体アゴニストによって媒介された関連疾患を予防及び／又は治療する薬物を調製するために使用される。前記ＭＯＲ受容体アゴニストによって媒介された関連疾患は疼痛、免疫機能障害、炎症、食管逆流、神経及び精神疾患、泌尿と生殖器疾患、心血管疾患と呼吸器疾患から選ばれる。前記疼痛は、術後疼痛、癌による疼痛、神経因性疼痛、外傷性疼痛と炎症による疼痛から選ばれる。前記癌による疼痛中の癌症は、乳がん、子宮内膜癌、子宮頸がん、皮膚癌、前立腺癌、卵巣癌、卵管腫瘍、卵巣瘤、血友病及び白血病から選ばれる。

【0119】

本明細書に使用されるように、「治療有効量」とは、ヒト及び／又は動物に対して機能または活性を発生させ、且つヒト及び／又は動物に受け入れられる量を指す。

【0120】

本明細書に使用されるように、「薬学的に許容される担体」とは、無毒、不活性、固体、半固体の物質または液体充填機、希釈剤、封止材料または補助製剤またはいかなる種類の補助材を指し、患者と互換性があり、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはヒトであり、試薬の活性を中止することなく、活性試薬を目的の標的点に輸送するのに適する。

【0121】

本明細書に使用されるように、「患者」とは、動物を指し、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。「哺乳動物」という用語とは、猫、犬、ウサギ、熊、キツネ、オオカミ、サル、鹿、ネズミ、豚、ヒトなどを含む温血脊椎類哺乳動物である。

【0122】

本明細書に使用されるように、「治療」とは、進行の軽減、遅延、減衰、予防、または既存の疾患または病態（例えば癌）の維持を意味する。治療はさらに疾患または病態の１つまたは複数の症状を治癒し、その進行を予防し、またはある程度軽減することも含まれる。

【0123】

本願の薬物組成物に含まれる式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩、または式Ｘ化合物の薬学的に許容できる塩の多形体の治療有効量は約０．１ｍｇ／Ｋｇ－約５ｇ／ｋｇ（体重）である。

【実施例】

【0124】

具体的な実施例
以下、具体的な実施例を結合して、本願を更に説明する。理解すべきものとして、これらの実施例は、本願を説明するためにのみ使用され、本願の範囲を制限するためのものではない。以下の実施例に具体的な条件が示されない実験方法は、通常、従来の条件に従うか、またはメーカーが推奨する条件に従う。特に明記しない限り、パーセントと部数は重量で計算される。

【0125】

試薬と装置
本願の下記実施例において、化合物の構造と純度は核磁気共鳴（^１Ｈ ＮＭＲ）及び／又は液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって決定される。^１ＨＮＭＲ：ＢｒｕｋｅｒＡＶＡＮＣＥ－４００核磁気共鳴装置、内部標準はテトラメチルシラン（ＴＭＳ）である。ＬＣ－ＭＳ：Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０ ＨＰＬＣ Ｓｙｓｔｅｍ／６１３０／６１５０ ＭＳ液体クロマトグラフィー質量分析装置（メーカー：Ａｇｉｌｅｎｔ）、カラムＷａｔｅｒｓ ＢＥＨ／ＣＨＳ、５０×２．１ｍｍ、１．７μｍ。

【0126】

単結晶検査は、ブルック社Ｄ８ ｖｅｎｔｕｒｅ Ｘ線単結晶回折装置を用いてテストする。高速液体クロマトグラフィー（ｐｒｅ－ＨＰＬＣ）：ＧＸ－２８１（メーカー：Ｇｉｌｓｏｎ）を調製する。

【0127】

ＩＳＣＯ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ－Ｒｆ７５またはＲｆ２００型自動カラム通過装置、Ａｇｅｌａ ４ｇ、１２ｇ、２０ｇ、４０ｇ、８０ｇ、１２０ｇディスポーザブルシリカゲルカラムを採用する。

【0128】

以下の実施例に公知の出発物質は、本分野において公知の方法で採用または従うことによって合成することができ、またはＡＢＣＲ ＧｍｂＨ＆Ｃｏ．ＫＧ、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、韶遠化学技術（Ａｃｃｅｌａ ＣｈｅｍＢｉｏ Ｉｎｃ）と達瑞化学品などの会社から購買することができる。

【0129】

実施例では特に明記していないが、反応はすべて窒素ガスまたはアルゴンガス雰囲気下で行った。本明細書に使用されるように、ＤＣＥは１，２－ジクロロエタンであり、ＴＨＦはテトラヒドロフランであり、ＥＡは酢酸エチルであり、ＰＥは石油エーテルであり、ＤＣＭはジクロロメタンであり、ｎ－ＢｕＬｉはｎ－ブチルリチウムであり、ＨＡＴＵは２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル尿素ヘキサフルオロリン酸塩であり、ＤＭＦはジメチルホルムアミドであり、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドであり、ＤＩＥＡまたはＤＩＰＥＡはＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンであり、ＤＢＵは１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカン－７－エンであり、ＤＩＢＡＬ－Ｈは水素化ジイソブチルアルミニウムである。アセトニトリルはＡＣＮであり、メタノールはＭｅＯＨであり、エタノールはＥｔＯＨであり、イソプロパノールはＩＰＡであり、アセトンはＡＣＥであり、酢酸エチルはＥＡであり、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルはＭＴＢＥであり、テトラヒドロフランはＴＨＦであり、水はＨ_２Ｏである。

【0130】

中間体１ａ

【0131】

【化4】

【0132】

（Ｒ）－２－（９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デシル－９－イル）アセトニトリル（１１ｇ、４３ｍｍｏｌ、上海予成医薬科技有限公司から購入、ＣＡＳ番号１４０１０３１－３８－６）をＤＣＭ（１００ｍｌ）溶液に溶解し、－７８℃で水素化ジイソブチルアルミニウム溶液（１．０Ｍ、８６ｍｌ）を滴下し、－７８℃で１時間撹拌する。反応液に硫酸ナトリウム十水和物（３０ｇ）を添加し、室温で半時間撹拌し、ろ過し、濾液を減圧濃縮して黄色油状中間体を取得する。中間体をエタノール（１００ｍｌ）溶液に溶解し、塩酸（６Ｎ、１００ｍｌ）溶液を添加し、１００℃で３６時間撹拌する。減圧濃縮し、分取液体クロマトグラフィーで得られた残留物を精製し、（Ｒ）－２－（９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デシル－９－イル）アセトアルデヒド１ａ（６．５ｇ）を取得し、収率は５９％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）： ２６０．２［Ｍ＋１］。

【0133】

中間体１ｂ

【0134】

【化5】

【0135】

ステップ１：３Ｌの単口フラスコにトリエチルホスホニルアセテート（４７６ｍＬ、２．４ｍｏｌ）、ＤＢＵ（３６５ｇ、２．４ｍｏｌ）、塩化リチウム（１２７ｇ、３ｍｏｌ）及びアセトニトリル（１．２Ｌ）を添加し、アルゴンガス保護下で室温で２０分間撹拌する。０℃（内部温度）まで冷却し、イソブチルアルデヒド（１４４ｇ、２ｍｏｌ）をゆっくりと滴下する。室温で１２時間撹拌する。ＬＣＭＳは反応が完全であることを示すと、ろ過し、濾過ケーキをＥＡで２回洗浄（１００ｍＬ）する。水（１Ｌ）を添加し、ＥＡで２回抽出（１．５Ｌ）し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、無水塩化ナトリウムで乾燥し、スピン乾燥して化合物１ｂ－１（１７５ｇ、無色液体）を取得する。

【0136】

ステップ２：化合物１ｂ－１（３００ｇ、２．１ｍｏｌ）を入れた３Ｌ単口フラスコにＤＭＦ（１Ｌ）を添加し、撹拌下で、炭酸カリウム（５７９ｇ、４．２ｍｏｌ）、ピラゾール（２８７ｇ、４．２ｍｏｌ）を添加し、６５℃で、１８時間撹拌し、ＬＣ－ＭＳは反応が完全であることを示すと、直接スピン乾燥し、残りの固体をアセトニトリル（１５０ｍｌ）でパルプ化し、ろ過して白色固体を取得する。ろ過して、濾過ケーキをＥＡで（５００ｍＬ×２）洗浄する。飽和食塩水で（３００ｍＬ×３）洗浄し、無水塩化ナトリウムで乾燥し、スピン乾燥し、カラムクロマトグラフィーで精製し（ＰＥの５％のＥＡは移動相である）化合物１ｂ－２（２５８ｇ、Ｙ：５８％、無色液体）を取得する。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２１１．１［Ｍ＋１］。

【0137】

ステップ３：水（２００ｍＬ）を水酸化カリウム（１３３ｇ、３．３２ｍｏｌ）に添加して溶解し、（５℃）まで予冷する。３Ｌフラスコに化合物１ｂ－２（４６５ｇ、２．２１ｍｏｌ）、メタノール（０．５Ｌ）、ＴＨＦ（０．５Ｌ）を添加し、さらに予冷した水酸化カリウム水溶液を添加し、２時間撹拌し、濃塩酸でｐＨを約３に調整し、ＤＣＭで抽出し（８００ｍｌ×２）、すべての有機相を合併し、飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮して化合物１ｂ－３（４１０．５ｇ、Ｙ：１００％、白色固体）を取得する。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１８３．１［Ｍ＋１］。

【0138】

ステップ４：窒素ガス保護下で、三口フラスコ（５００ｍＬ）に化合物１ｂ－３（１０．２ｇ、０．０５５ｍｏｌ）、ＴＨＦ（２００ｍＬ）を添加し、－７５℃まで降温する。２．５Ｍのｎ－ブチルリチウム（５５ｍＬ、０．１３７ｍｏｌ）のＴＨＦ溶液をゆっくりと滴下し、滴下が完了し、－１０℃までゆっくりと昇温し、３時間撹拌し続ける。飽和塩化アンモニウムでクエンチャーし、水（１００ｍＬ）を添加し、ＥＡ（４００ｍｌ×２）で抽出し、有機相を合併し、飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮して茶色い液体を得る。カラムクロマトグラフィーで精製し（ＰＥの３０％のＥＡは移動相である）化合物１ｂ－４（４ｇ、Ｙ：２２．２％、白色固体）を取得し、ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１６５．１［Ｍ＋１］。

【0139】

ステップ５：化合物１ｂ－４（１７ｇ、１０３．５ｍｍｏｌ）を２５０（ｍＬ）トルエンに溶解し、（Ｒ）－２－メチルプロパン－２－スルフェンアミド（１８．８ｇ、１５５ｍｍｏｌ）とテトライソプロピルチタネート（１１７ｇ、４１４ｍｍｏｌ）を添加し、１１０℃で１６時間撹拌して反応させる。室温まで冷却し、反応液に８０ｍＬの水、６００ｍＬのＤＣＭを添加し、ろ過し、濾過ケーキをＤＣＭ（１００ｍＬ）で洗浄し、分層し、有機相を飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水塩化ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮し、濃縮物をカラムクロマトグラフィーで精製し（ＰＥの３０％のＥＡは移動相である）化合物１ｂ（２０．３ｇ、Ｙ：７３．５％、茶色い液体）を取得する。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２６８．１［Ｍ＋１］。

【0140】

化合物１ｅ

【0141】

【化6】

【0142】

化合物１ｄ（０．１１ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（８ｍｌ）に溶解し、０℃でトリエチルアミン（０．２ｇ、２ｍｍｏｌ）と４－ブロモベンゼンスルホニルクロリド（０．２０４ｇ、０．８０４ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間撹拌し、ジクロロメタン（１０ｍｌ）を添加し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水塩化ナトリウムで乾燥し、有機相を減圧濃縮し、分取液体クロマトグラフィーで得られた残留物を精製し、白色固体である４－ブロモ－Ｎ－（（４Ｓ，６Ｓ）－６－イソプロピル－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロール［１，２－ｂ］ピラゾール－４－イル）フェニルスルホンアミド１ｅ（０．０６ｇ）を取得し、収率が２３．３％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８４．１［Ｍ＋１］。

【0143】

化合物１ｅの単結晶の調製：少量の化合物１ｅを取り、小さなビーカーに入れ、酢酸エチルで溶解し、薄膜で小さなビーカーを密封し、薄膜にいくつかの小さな穴を開ける。石油エーテルを大きいビーカーに入れ、小さなビーカーを大きいビーカーに入れ、大きいビーカーを密封し、室温で結晶を静置し、溶液から結晶を析出した。ブルック社Ｄ８ ｖｅｎｔｕｒｅ Ｘ線単結晶回折装置によって該結晶に単結晶Ｘ－ｒａｙ分析を行い、その絶対配置が（４Ｓ、６Ｓ）配置であることが確認され、その構造を図１１に示す。このため、化合物１ｄは化合物１ｅの単結晶構造によりその絶対配置が（４Ｓ、６Ｓ）配置であると推定することができる。

【0144】

【表G】

【0145】

実施例１ 式Ｘ化合物の調製

【0146】

【化7】

【0147】

ステップ１：単口フラスコに化合物１ｂ（０．３９ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）、メタノール（５ｍＬ）を添加し、０℃まで冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（０．１１ｇ、２．９ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加する。室温で１．５時間撹拌する。０℃まで冷却し、２０ミリリットルの氷水を添加し、ＤＣＭで洗浄して抽出（５０ｍＬ×２）する。飽和食塩水で洗浄し（２０ｍＬ）、無水塩化ナトリウムで乾燥し、スピン乾燥し、分取クロマトグラフィーで（分取条件、分取カラム：２１．２×２５０ｍｍ Ｃ１８カラム、系：１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３ Ｈ_２Ｏ、波長：２５４／２１４ｎｍ、勾配：２８％－３０％アセトニトリル変化）で調製して、単一ジアステレオマー化合物１ｃ（１５０ｍｇ、収率：３８．４％、白色固体、保留時間が９．５ｍｉｎ）を取得し、ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２７０．０［Ｍ＋１］。

【0148】

ステップ２：単口フラスコに化合物１ｃ（１２０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、メタノール（３ｍＬ）を添加し、０℃まで冷却し、メタノール塩酸ガス（１．２ｍＬ、４．５ｍｍｏｌ、４ｍｏｌ／Ｌ）をゆっくりと添加した。室温で１．５時間撹拌する。飽和炭酸水素ナトリウムでｐＨを約８に調整し、ＤＣＭで抽出（５０ｍｌ×２）し、すべての有機相を合併し、飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮して化合物１ｄ（７０ｍｇ、収率：９５．１２％、黄色液体）を取得する。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１６６．１［Ｍ＋１］。

【0149】

ステップ３：化合物１ｄ（５０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を（５ｍＬ）メタノールに溶解し、化合物１ａ（７８．３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）とシアノ水素化ホウ素ナトリウム（９４ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を添加し、２０℃で３時間撹拌して反応させる。反応液に２０ｍＬの水を添加し、ＤＣＭ（３０ｍＬ×２）で抽出し、無水塩化ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮し、濃縮物を分取クロマトグラフィーで精製（分取カラム：２１．２×２５０ｍｍ Ｃ１８カラム、系：１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３ Ｈ_２Ｏ波長：２５４／２１４ ｎｍ、勾配：３０％－６０％アセトニトリル変化）し、式Ｘ化合物（１０．１２ｍｇ、収率：８．２６％）を取得し、白色固体である。式Ｘ化合物の絶対配置は化合物１ｅの絶対配置によって推定して決定される。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４０９．２［Ｍ＋１］；^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ） δ ８．５１ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ４．９， １．８， ０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７９ － ７．７１ （ｍ， １Ｈ）， ７．５０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４１ （ｄ， Ｊ ＝ １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２２ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ７．５， ４．９， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．９， ０．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ２１．０， １１．７， ６．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８１ － ３．６９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７３ － ２．５８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １４．０， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．４８ － ２．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１２ － １．９７ （ｍ， ２Ｈ）， １．９５ － １．８２ （ｍ， ２Ｈ）， １．７８ － １．６５ （ｍ， ３Ｈ）， １．６４ － １．３６ （ｍ， ５Ｈ）， １．１４ － １．０４ （ｍ， １Ｈ）， ０．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．７９ － ０．６５ （ｍ， ４Ｈ）．

【0150】

実施例２ マレイン酸塩の調製
減量法により５００ｍｇの式Ｘ化合物を秤量して２０ｍｌのガラス製サンプル瓶に添加し、１０ｍＬの酢酸エチルを添加し、超音波で溶解させた後、酸塩基モル比が１．２：１の比で１ｍｏＬ／Ｌのマレイン酸溶液を添加し、５０℃で１ｈ反応し、加熱温度を４０℃まで調整して１ｈ撹拌し続き、加熱温度を３０℃まで再度調整して１ｈ撹拌し、最終的に加熱を閉じ、一晩撹拌した。反応が終了した後、０℃までゆっくりと降温し、固体の沈殿が増加し、遠心分離により固体を得て、溶媒を揮発させてマレイン酸塩の固体生成物が得られ、結晶性粉末であり、結晶型Ａとして定義され、得られた結晶型ＡのＸ線粉末回折パターンを図１に示（２θ角が図に示される）し、示差走査熱量分析スペクトルと熱重量分析スペクトルをそれぞれ図２と３に示し、ここで、吸熱ピークは１７７．６２℃であり、１５０℃まで加熱して３．２８２％減量した。

【0151】

実施例３ａ Ｌ－酒石酸塩の調製
減量法により３００ｍｇの式Ｘ化合物を秤量して２０ｍｌのガラス製サンプル瓶に添加し、１．５ｍＬアセトンを添加し、超音波で溶解させた後、酸塩基モル比が１．２：１の比で１ｍｏＬ／ＬのＬ－酒石酸溶液を添加し、５０℃で１ｈ反応させ、加熱温度を４０℃まで調整して１ｈ撹拌し続き、加熱温度を３０℃まで再度調整して１ｈ撹拌し、最終的に加熱を閉じ、一晩撹拌した。反応が終了した後、０℃までゆっくりと降温し、固体の沈殿が増加し、遠心分離により固体を得て、溶媒を揮発させて式Ｘ化合物のＬ－酒石酸塩の固体生成物ａが得られる。約４０－５０ｍｇの固体生成物ａをガラス製バイアルに秤量し、６０℃の水浴条件で適量なアセトニトリルを添加し、撹拌してそれを溶解させてほぼ飽和溶液を得て、ろ過した後に清澄溶液にさらに２０－２００μμＬの対応する溶媒であるアセトニトリルを添加し、加熱ボタンを閉じ、それをゆっくりと降温させ、室温まで降温した後、氷浴条件下で４℃程度まで降温し続き、懸濁液を収集して１２０００ｒ／ｍｉｎ条件下で１５ｍｉｎ遠心し、上澄み液を注ぎ出し、固体を室温条件下で一晩ゆっくりと揮発させ、収集してＬ－酒石酸塩の固体生成物ｂが得られ、当該固体生成物ｂが結晶性粉末であり、結晶型Ｂとして定義される。得られた結晶型ＢのＸ線粉末回折パターンを図４に示（２θ角が図に示される）し、示差走査熱量分析スペクトルと熱重量分析スペクトルをそれぞれ図５と６に示し、ここで、吸熱ピークは１４３．３１℃であり、０．７００％減量した。赤外スペクトルを図１５に示す。

【0152】

ＨＰＬＣによって結晶型ＢのＬ－酒石酸含有量を測定し、酒石酸の実測含有量：２６．０％、酒石酸理論含有量：２６．９％である。酒石酸の含有量は理論値と一致し、結果から、式Ｘ化合物とＬ－酒石酸の造塩比が１：１であることが証明される。

【0153】

実施例３ｂ Ｌ－酒石酸塩の調製
異なる溶媒系を用いて合計６つの２５℃懸濁液振とう試験を設置した。それぞれ約２０ｍｇの実施例３ａで得られた固体生成物ａをガラス製バイアル内に秤量し、１ｍＬの表１中の有機試薬を添加し、キャップを閉め、封口膜で封口して液体の揮発を防止し、２５℃、２５ｒ／ｍｉｎ条件下で振とうして取り出し、４℃、１４０００ｒ／ｍｉｎ条件下で１５ｍｉｎ遠心し、上澄み液を注ぎ出し、固体を室温条件下で一晩ゆっくりと揮発させ、収集して固体生成物を取得してＸＲＰＤテストを行う。テスト結果を表１に示す。

【0154】

【表1】

【0155】

実施例３ｃ Ｌ－酒石酸塩の調製
異なる溶媒系を用いて合計６つの５０℃懸濁液振とう試験を設置した。それぞれ約２０ｍｇの実施例３ａで得られた固体生成物ａをガラス製バイアル内に秤量し、１ｍＬの表２中の有機試薬を添加し、キャップを閉め、封口膜で封口して液体の揮発を防止し、５０℃、２２５ｒ／ｍｉｎ条件下で１日間振とうして取り出し、４℃、１４０００ｒ／ｍｉｎ条件下で１５ｍｉｎ遠心し、上澄み液を注ぎ出し、固体を室温条件下で一晩ゆっくりと揮発させ、収集して固体生成物を取得してＸＲＰＤテストを行う。テスト結果を表２に示す。

【0156】

【表2】

【0157】

実施例４ コハク酸塩の調製
減量法により２００ｍｇの式Ｘ化合物を秤量して２０ｍｌのガラス製サンプル瓶に添加し、１０ｍＬのアセトンを添加し、超音波で溶解させた後、酸塩基モル比が１．２：１の比で１ｍｏＬ／Ｌのコハク酸溶液を添加し、５０℃で１ｈ反応させ、加熱温度を４０℃まで調整して１ｈ撹拌し続き、加熱温度を３０℃まで再度調整して１ｈ撹拌し、最終的に加熱を閉じ、一晩撹拌した。反応が終了した後、０℃までゆっくりと降温し、固体の沈殿が増加し、遠心分離により固体を得て、溶媒を揮発させてコハク酸塩固体生成物が得られ、結晶性粉末であり、結晶型Ｃ－１として定義される。得られた結晶型Ｃ－１のＸ線粉末回折パターンを図７に示す（２θ角が図に示される）。

【0158】

実施例５ コハク酸塩の調製
減量法により３００ｍｇの式Ｘ化合物を秤量して２０ｍｌのガラス製サンプル瓶に添加し、１．５ｍＬの酢酸エチルを添加し、超音波で溶解させた後、酸塩基モル比が１．２：１の比で１ｍｏＬ／Ｌのコハク酸溶液を添加し、５０℃で１ｈ反応させ、加熱温度を４０℃まで調整して１ｈ撹拌し続き、加熱温度を３０℃まで再度調整して１ｈ撹拌し、最終的に加熱を閉じ、一晩撹拌した。反応が終了した後、０℃までゆっくりと降温し、固体の沈殿が増加し、遠心分離により固体を得て、溶媒を揮発させてコハク酸塩の固体生成物が得られ、結晶性粉末であり、結晶型Ｃ－２として定義される。得られた結晶型Ｃ－２のＸ線粉末回折パターンを図８に示し（２θ角が図に示される）、示差走査熱量分析スペクトルと熱重量分析スペクトルをそれぞれ図９と１０に示し、ここで、吸熱ピークは１１７．１４°Ｃであり、１２０℃まで加熱して２．７１７％減量した。

【0159】

実施例６ 溶解度の測定
それぞれ１０ｍｇのマレイン酸塩結晶型Ａ、Ｌ－酒石酸塩結晶型Ｂ、コハク酸塩結晶型Ｃ－１及び結晶型Ｃ－２サンプルを秤量し、それぞれ１ｍｌの溶媒を添加し、室温でサンプルのｐＨ４．５（醋酸－酢酸ナトリウム系）、ｐＨ６．８（リン酸二水素ナトリウム－水酸化ナトリウム系）の緩衝液及び水中での溶解度をテストする。現象を観察し、テスト結果を表３に示し（濃度の単位はｍｇ／ｍｌである）。

【0160】

【表3】

【0161】

実施例７ 安定性実験
それぞれ適量なマレイン酸塩結晶型Ａ、Ｌ－酒石酸塩結晶型Ｂ及びコハク酸塩結晶型Ｃ－１サンプルを秤量して６０℃条件及び４０℃の７５％ＲＨ条件下で放置し、同時に他のグループのサンプルを対照として５℃条件下で密封して保存し、７日と３０日目にそれぞれ結晶型と純度変化を検出する。図１２～図１４から分かるように、結晶型Ａ、結晶型Ｂ及び結晶型Ｃ－１の物理安定性が良好である。表４から分かるように、結晶型Ａ、結晶型Ｂ及び結晶型Ｃ－１の化学安定性が良好である。

【0162】

【表4】

【0163】

実施例８ 吸湿性実験
《中国薬局２０２０版４部９１０３薬物吸湿性試験ガイドライン》に従ってマレイン酸塩結晶型Ａ、Ｌ－酒石酸塩結晶型Ｂ、コハク酸塩結晶型Ｃ－１及び結晶型Ｃ－２サンプルの吸湿性を試験し、結果から、ＲＨが９５％の条件下で、結晶型Ｃ－１と結晶型Ｃ－２はわずかに吸湿性を有し、結晶型Ａはわずかに吸湿性を有し、結晶型Ｂはわずかに吸湿性を有する。

【0164】

実施例９ 生物学的試験
以下の試験例で使用される細胞株はＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ^（Ｒ） ＣＨＯ－Ｋ１ ＯＰＲＭ１ β－Ａｒｒｅｓｔｉｎ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅであり、ソース：ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、番号：９３－０２１３Ｃ２、ロット番号：１３Ｋ０４０２。

【0165】

使用される試薬、そのサプライヤー、製品番号及び保存温度は以下の通りである。
Ａｓｓａｙ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ^ＴＭ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｋｉｔ １０７、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、９２－３１０７Ｇ、－２０℃；
ＡｓｓａｙＣｏｍｐｌｅｔｅ^ＴＭ Ｔｈａｗｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、９２－４００２ＴＲ、－２０℃；
ＡｓｓａｙＣｏｍｐｌｅｔｅ^ＴＭ Ｃｅｌｌ Ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ Ｒｅａｇｅｎｔ、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、９２－０００９、－２０℃；
Ａｓｓａｙ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ^ＴＭ Ｃｅｌｌ Ｐｌａｔｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、９３－０５６３Ｒ２、－２０℃；
ＰａｔｈｈｕｎｔｅｒＤｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、９３－０００１、－２０℃；
ＰＢＳ（１×）０．００６７Ｍ（ＰＯ４）、Ｈｙｃｌｏｎｅ、ＳＨ３０２５６．０１、４℃；
ＤＭＳＯ、Ｓｉｇｍａ、Ｄ５８７９－１００ＭＬ、常温；
ＮＫＨ４７７、Ｓｉｇｍａ、１６０３、－２０℃；
ＩＢＭＸ、Ｔｏｃｒｉｓ、Ｉ５８７９、－２０℃。

【0166】

使用される装置、その型番及びサプライヤーは以下の通りである。
Ｃｏｕｎｔｓａｔｒ ＢｉｏＭｅｄ、ＩＭ１２００、ＡＬＩＴ；
Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、ＩＸ５１、ＯＬＹＭＰＵＳ；
Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ、５８０４、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ；
Ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔｉｃ Ｗａｔｅｒ Ｂａｔｈ、ＤＫ－Ｓ４２０、ＳｈａｎｇｈａｉＳｈｅｎｘｉａｎ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔｉｃ ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ｆａｃｔｏｒｙ；
Ｃｅｌｌ Ｉｎｃｕｂａｔｏｒ、３１１１、Ｔｈｅｒｍｏ；
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓａｆｅｔｙ Ｃａｂｉｎｅｔ、ＢＳＣ－１３００ＩＩＡ２、ＡＩＲＴＥＣＨ；
ＯｐｔｉＰｌａｔｅ－３８４Ｗｈｉｔｅ Ｏｐａｑｕｅ、６００７２９０、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ；
Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ、Ｖｉｃｔｏｒ Ｘ５、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ；
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｌａｔｅ－３８４ Ｗｈｉｔｅ Ｏｐａｑｕｅ， ＴＣ－ｔｒｅａｔｅｄ、６００７６８０、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ。

【0167】

（１） ＨＴＲＦ－ｃＡＭＰ細胞実験

【0168】

実験方法及びステップ

【0169】

一、細胞蘇生
１、蘇生液を４℃の冷凍庫から取り出して３７℃の水浴鍋中に１５分間予熱する。
２、液体窒素タンクからＰ６世代細胞を取り出し、凍結した細胞凍結保存管を３７℃の水浴鍋に迅速に入れて、小さな氷結晶または細胞が完全に融解するのを見るまで３０秒から１分間軽く揺らす。
３、７０％のアルコールで徹底的に消毒して拭く。
４、凍結保存液を遠心除去して、予め予熱した新鮮な蘇生液で細胞を再懸濁する。
ａ、３ｍｌの予め予熱した細胞蘇生液を１５ｍｌの遠心管に吸い取る。
ｂ、１３００ｒｐｍで３分間遠心する。
ｃ、上澄み凍結保存液を除去し、４ｍｌの予熱した蘇生液で細胞を再懸濁する。
５、細胞懸濁液をＴ２５の細胞培養フラスコに移して、３７℃、５％のＣＯ_２で２４時間培養する。
６、２４時間培養した後、細胞培養フラスコ中の蘇生液を予熱した細胞培地に変更する。

【0170】

二、細胞継代
１、Ｔ２５培養フラスコ中での細胞の成長密度＞７０％である場合、細胞消化液で細胞を消化継代培養する。
ａ、培養フラスコ中の培地を吸出し、４ｍｌの予め予熱したＰＢＳを添加し、軽く揺らし細胞を潤洗し、ＰＢＳを捨てる。
ｂ、１ｍｌの細胞消化液を吸い取って、Ｔ２５培養フラスコに添加する。
ｃ、培養フラスコを繰り返し揺らして消化液が培養フラスコを完全に覆い、３７℃、５％のＣＯ_２インキュベーターに５分間入れた。
ｄ、細胞培養フラスコを取り出し、顕微鏡で細胞を観察し、細胞が分離されるかどうかを確認する。
ｅ、３ｍｌの予熱した細胞培地を添加し、消化を終止する。
ｆ、細胞培地で培養フラスコを繰り返して軽く洗い流し、細胞懸濁液を１５ｍｌの遠心管に収集する。
ｇ、１３００ｒｐｍで３分間遠心し、上澄みを除去する。
ｈ、３ｍｌの細胞培地で再懸濁する。
２、１：３の比で細胞継代（各フラスコに１ｍｌの細胞再懸濁液＋３ｍｌの細胞培地を添加し、Ｔ２５フラスコに移る）。

【0171】

三、細胞のプレートへの接種
１、細胞がＰ８世代まで継代するまで、細胞継代ステップａ－ｈを繰り返す。細胞を計数し、次に、２×／１ｍＭのＩＢＭＸ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ液で細胞を再懸濁し、細胞密度が１．２＊１０＾６／ｍｌになり、
２、マルチチャンネルピペットを使用して、１．２＊１０＾６／ｍｌの細胞溶液を、ウェルあたり１０μｌの体積（即ちウェルあたり１２０００個の細胞）で３８４ウェルプレート内に接種する。

【0172】

四、ｃ－ＡＭＰ試験
１、関連試薬を配置し、薬物希釈配置表にしたがって、化合物を配置する。
ａ、１×Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ液：１ｍｌの５×Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ保存液を４ｍｌの蒸留水に添加し、均一に混合する。
ｂ、２×１ｍＭ ＩＢＭＸ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ液５ｍｌ：１０ｕｌの５００ｍＭＩＢＭＸ保存液を取って４９９０μｌ細胞培地に添加し、軽く吹き打って均一に混合する。

【0173】

ｃ、陽性薬モルヒネの勾配希釈配置表：

【0174】

【表H】

【0175】

ｄ、化合物希釈の前に、化合物をＤＭＳＯで溶解し、蓄積濃度を１０ｍＭとする。

【0176】

【表I】

【0177】

ｅ、５０ｕＭ ＮＫ４７７ １ｍｌ：１μｌの５０ｍＭＮＫＨ４７７保存液を９９９μｌ １×Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ液に添加し、振とうして均一に混合する。
ｆ、検出試薬
Ａ．ｃＡＭＰ－Ｃｒｙｐｔａｔｅ（ｄｏｎｏｒ，ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）反応液：１ｍｌの５×ｃＡＭＰ－Ｃｒｙｐｔａｔｅ保存液を４ｍｌの１×Ｌｙｓｉｓ＆Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ液に添加し、軽く均一に混合する。
Ｂ．Ａｎｔｉ－ｃＡＭＰ－ｄ２（ａｃｃｅｐｔｏｒ，ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）反応液：１ｍｌの５×Ａｎｔｉ－ｃＡＭＰ－ｄ２保存液を４ｍｌの１×Ｌｙｓｉｓ＆Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ液に添加し、軽く均一に混合する。
２、ｃＡＭＰ試験ステップ
ａ、ウェルあたり、１２０００個の細胞を１０μｌの２×ＩＢＭＸ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ緩衝液に接種する。
ｂ、各ウェルの細胞に８μｌの化合物サンプル希釈液を添加する。
ｃ、ウェルあたりに調製した２μｌの１０×ＮＫＨ４７７液を添加する。
ｄ、３７℃で４５ｍｉｎｓインキュベートする。
ｅ、１０μｌのｃＡＭＰ－ｄ２と１０μｌの抗ｃＡＭＰ Ｃｒｙｐｔａｔｅ反応液を添加する。
ｆ、室温で６０ｍｉｎｓ遮光でインキュベートする。
ｇ、ＨＴＲＦによりプレートを読み取る。
３、ＲＦＵ検出プレートを読み取り
６０分間インキュベートした後、すべてのサンプルは均一時間分解蛍光法によりリードプレートを検出する。

【0178】

データ分析
データを多機能プレートリーダーに接続されたパソコンにおける対応するソフトウェアから導出し、６６５ｎｍと６２０ｎｍの２つのシグナル値を含む。比の計算式：比＝６６５ｎｍシグナル値／６２０ｎｍシグナル値×１００００。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いてデータを分析する。最適フィッティング曲線にはｌｏｇ（ａｇｏｎｉｓｔ）ｖｓ．ｒｅｓｐｏｎｓｅを選択し、コンピュータ補助投与量－反応曲線の非線形回帰分析方式を利用して化合物のＥＣ５０値を決定し、ｐＥＣ５０＝－ｌｏｇＥＣ５０（ＥＣ５０値の単位がモルである）であり、％モルヒネの最大効果値＝（化合物サンプル比－空孔比）／ＴＯＰ×１００（備考：ＴＯＰ値はモルヒネサンプル比率－空孔比後にソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ分析でフィッティングした曲線Ｔｏｐ値である）である。結果を表５に示す。

【0179】

【表5】

【0180】

ここで、対照化合物Ｄ１の構造は以下に示され、ＣＮ１１１６６２２８４Ａに記載されている方法によって調製することができる。

【0181】

【化8】

【0182】

（２）β－Ａｒｒｅｓｔｉｎ細胞実験

【0183】

実験方法及びステップ
一、細胞蘇生
１、蘇生液を４℃の冷凍庫から取り出して３７℃の水浴鍋中に１５分間予熱する。
２、液体窒素タンクからＰ６世代細胞を取り出し、凍結した細胞凍結保存管を３７℃の水浴鍋に迅速に入れて、小さな氷結晶または細胞が完全に融解するのを見るまで３０秒から１分間軽く揺らす。
３、７０％のアルコールで徹底的に消毒して拭く。
４、凍結保存液を遠心除去して、予め予熱した新鮮な蘇生液で細胞を再懸濁する。
ａ、３ｍｌの予め予熱した細胞蘇生液を１５ｍｌの遠心管に吸い取る。
ｂ、１３００ｒｐｍで３分間遠心する。
ｃ、上澄みを除去し、４ｍｌの予熱した蘇生液で細胞を再懸濁する。
５、細胞懸濁液をＴ２５の細胞培養フラスコに移して、３７℃、５％のＣＯ_２で２４時間培養する。
６、２４時間培養した後、細胞培養フラスコ中の蘇生液を予熱した細胞培地に変更する。

【0184】

二、細胞継代
１、Ｔ２５培養フラスコ中での細胞の成長密度＞７０％である場合、細胞消化液で細胞を消化継代培養する。
ａ、培養フラスコ中の培地を吸出し、４ｍｌの予め予熱したＰＢＳを添加し、軽く揺らし細胞を潤洗し、ＰＢＳを捨てる。
ｂ、１ｍｌの細胞消化液を吸い取って、Ｔ２５培養フラスコに添加する。
ｃ、培養フラスコを繰り返し揺らして消化液が培養フラスコを完全に覆い、３７℃、５％のＣＯ_２インキュベーターに５分間入れた。
ｄ、細胞培養フラスコを取り出し、顕微鏡で細胞を観察し、細胞が分離されるかどうかを確認する。
ｅ、３ｍｌの予熱した細胞培地を添加し、消化を終止する。
ｆ、細胞培地で培養フラスコを繰り返して軽く洗い流し、細胞懸濁液を１５ｍｌの遠心管に収集する。
ｇ、１３００ｒｐｍで３分間遠心し、上澄みを除去する。
ｈ、３ｍｌの細胞培地で再懸濁する。
２、１：３の比で細胞継代（各フラスコに１ｍｌの細胞再懸濁液＋３ｍｌの細胞培地を添加し、Ｔ２５フラスコに移る）。
３、Ｐ８世代まで継代するまで、細胞継代ステップａ－ｈを繰り返す。

【0185】

三、細胞のプレートへの接種
１、ピペットで２０μｌの細胞懸濁液を取って細胞カウンターで細胞数を測定する。
２、１３００ｒｐｍで３分間遠心し、細胞を沈殿する。
３、上澄みを除去し、細胞濃度が２×１０^５／ｍｌになるように対応する細胞接種液を添加する。
４、マルチチャンネルピペットを使用し、実験設計に応じて、２×１０^５／ｍｌの細胞溶液を、ウェルあたり２０ｕｌの体積（即ちウェルあたり４０００個の細胞）で３８４ウェルプレート内に接種する。
５、細胞を接種した８４ウェルプレートを３７℃、５％のＣＯ_２インキュベーターで２４ｈ培養する。

【0186】

四、β－ａｒｒｅｓｔｉｎ試験
１、以下の希釈表に従って化合物を配置する。
ａ．陽性薬モルヒネの勾配希釈配置表：

【0187】

【表J】

【0188】

ｄ、化合物希釈の前に、化合物をＤＭＳＯで溶解し、蓄積濃度を１０ｍＭとする。

【0189】

【表K】

【0190】

２、５μｌの上記調製した各化合物サンプル希釈液を３８４ウェルプレートに添加する。
３、サンプルを入れた後、３８４ウェルプレートを３７℃に戻し、５％のＣＯ_２インキュベーターで９０分間培養する。

【0191】

五、相対光単位値（ＲＬＵ）検出
１、化合物のインキュベートが終了する前に、以下の比でＷｏｒｋｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ溶液（遮光を注意してください）を配置する。次に各ウェルに１２．５μｌを添加し、遮光で、常温で、ロッキングベッドで１ｈインキュベートする。

【0192】

【表L】

【0193】

２、化合物のインキュベートが終了し、各ウェルに１２．５μｌの上記作動液を添加し、遮光で、常温で、８０ｒｐｍでロッキングベッドで１ｈインキュベートする。
３、インキュベートが終了し、多機能プレートリーダーを用いてプレートを読み取る。

【0194】

データ分析
データを多機能プレートリーダーに接続されたパソコンにおける対応するソフトウェアから導出し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いてデータを分析する。最適フィッティング曲線にはｌｏｇ（ａｇｏｎｉｓｔ）ｖｓ．ｒｅｓｐｏｎｓｅを選択し、コンピュータ補助投与量－反応曲線の非線形回帰分析方式を利用して化合物のＥＣ５０値を決定し、ｐＥＣ５０＝－ｌｏｇＥＣ５０（ＥＣ５０値の単位がモルである）であり、％モルヒネの最大効果値＝（化合物サンプルのＲＬＵ値－空孔のＲＬＵ値）／ＴＯＰ×１００（備考：ＴＯＰ値はモルヒネサンプルのＲＬＵ値－空孔のＲＬＵ値後にソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ分析でフィッティングした曲線Ｔｏｐ値である）である。結果を表６に示す。

【0195】

【表6】

【0196】

表５と表６から分かるように、対照化合物Ｄ１と比べて、式Ｘ化合物はｃＡＭＰに対してより高い抑制活性、及びより高いＥｍａｘ値を有する。なお、式Ｘ化合物はβ－ａｒｒｅｓｔｉｎに対してより低いＥｍａｘ値を有し、偏向性により優れている。

【0197】

本願で言及されたすべての文献は、各文献が単独で参考として引用されるように、本願で参考として引用される。なお、理解すべきものとして、本願の上記の述べた内容を読んだ後、当業者は本願に様々な変更または修正を加えることができ、これらの等価の形態も同様に本願の添付された特許請求に限定される範囲に落ちる。
［関連出願の相互参照］

【0198】

本願は、２０２１年０７月１３日に中国特許局に提案された、出願番号が２０２１１０７８８７１２４、発明名称が「ＭＯＲ受容体アゴニストの薬学的に許容できる塩、その多形体及びその使用」の中国特許出願の優先権を主張し、その全部内容は援用により本願に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【国際調査報告】