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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-07-09
(54)【発明の名称】局所麻酔薬を含む架橋ヒアルロン酸組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 47/36 20060101AFI20240702BHJP
A61P 23/02 20060101ALI20240702BHJP
A61K 9/06 20060101ALI20240702BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20240702BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240702BHJP
A61K 47/34 20170101ALI20240702BHJP
A61K 8/73 20060101ALI20240702BHJP
A61K 8/86 20060101ALI20240702BHJP
A61K 8/96 20060101ALI20240702BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20240702BHJP
【ＦＩ】
A61K47/36
A61P23/02
A61K9/06
A61P19/02
A61K45/00
A61K47/34
A61K8/73
A61K8/86
A61K8/96
A61Q19/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】有
(21)【出願番号】P 2023579167
(86)(22)【出願日】2022-06-30
(85)【翻訳文提出日】2024-01-24
(86)【国際出願番号】 EP2022068056
(87)【国際公開番号】W WO2023275241
(87)【国際公開日】2023-01-05
(31)【優先権主張番号】21183109.4
(32)【優先日】2021-07-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522122798
【氏名又は名称】バイオポリメリ エス．アール．エル．
(74)【代理人】
【識別番号】110000659
【氏名又は名称】弁理士法人広江アソシエイツ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】デ ベネディクティス，ヴィンセンゾ マリア
(72)【発明者】
【氏名】ラミレス，ピエラ アンジェラ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C083
4C084
【Ｆターム（参考）】
4C076AA09
4C076AA11
4C076AA12
4C076AA17
4C076AA22
4C076BB11
4C076BB13
4C076BB15
4C076BB16
4C076CC01
4C076EE23P
4C076EE37P
4C076FF02
4C076FF04
4C076FF35
4C076FF68
4C083AD111
4C083AD112
4C083AD331
4C083AD332
4C083BB51
4C083CC02
4C083DD41
4C083EE12
4C083FF01
4C084AA17
4C084AA27
4C084MA28
4C084MA66
4C084NA05
4C084NA11
4C084ZA032
(57)【要約】
本発明は、局所麻酔剤を含有するポリグリセロールポリグリシジルエーテルと架橋したヒアルロン酸、その調製方法ならびに治療、化粧品におけるおよび担体としてのその使用に言及する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
組成物であって、Ａ）式（Ｉ）
【化1】
（Ｉ）、
の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
式（ＩＩ）
【化2】
（ＩＩ）
の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
および式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物
からなる群から選択される１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
Ｂ）式（ＩＩＩ）
【化3】
（ＩＩＩ）、
の１つ以上のポリグリセロール、
式（ＩＶ）
【化4】
（ＩＶ）、
の１つ以上のポリグリセロール、
および式（ＩＩＩ）の１つ以上のポリグリセロールと式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセリンとの混合物
からなる群から選択される１つ以上のポリグリセロール、
Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤またはその塩、ならびに
Ｄ）必要に応じて、１つ以上の許容可能な賦形剤または担体
を含み、
各Ｒ１が、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５からなる群から独立して選択され、
Ｒ２が
であり、
Ｒ３が
であり、
Ｒ４が
であり、
Ｒ５が
であり、
各Ｒ６が、Ｒ３およびＲ５からなる群から独立して選択され、
ｂが、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃが、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄが、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｅが、１～５０からなる群から選択される整数であり、
ｆが、０～５０からなる群から選択される整数であり、
ｇが、０～５０からなる群から選択される整数であり、
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の前記架橋ヒアルロン酸が、式１：
【数1】
（式．１）
［式中、
ＭＷｒｅｐ．ｕｎｉｔが、ヒアルロン酸モノマー繰り返し単位の分子量である４０１Ｄａであり、
Ｍｅが、以下の式２：
【数2】
（式２）
（Ｇ´が、回転式レオメータを使用するレオロジー測定によって実験的に得られ、
Ｒ・Ｔが、熱エネルギーであり、
ｃが、ヒアルロン酸濃度であり、
Ｍｎが、ヒアルロン酸の数平均分子量である）
の逆式を使用して数学的に計算される］
によって測定して、０．０３０～０．９００％の架橋パーセンテージ（Ｃ．Ｄ．）を有し、
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の前記ポリグリセロールが、ＵＶ可視および質量検出器と連結したサイズ排除クロマトグラフィー
（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ）によって測定して、２４０から３．７００Ｄａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有し、
但し、
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の前記架橋ヒアルロン酸において、少なくとも１つのＲ１がＲ４であり、
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の前記ポリグリセロールにおいて、Ｒ１が存在する場合、Ｒ１がＲ４以外である、組成物。
【請求項2】
式（Ｉ）、もしくは式（ＩＩ）の前記架橋ヒアルロン酸、またはそれらの混合物が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５０００Ｄａの重量平均分子量およびＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量を有するＰＰＥを架橋剤として使用して得られる、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の前記ポリグリセロールの分子量が、ＵＶ可視および質量検出器と連結したサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ）による方法によって測定して、２４０から３７００Ｄａである、請求項１から２のいずれかに記載の組成物。
【請求項4】
前記組成物中の式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）の前記ポリグリセロールまたはそれらの混合物の濃度が０．４５～２５ｍｇ／ｍＬである、請求項１から３のいずれかに記載の組成物。
【請求項5】
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の前記１つ以上のポリグリセロールが、式（１）の化合物、
【化5】
（１）、
式（２）の化合物、
【化6】
（２）、
式（３）の化合物、
【化7】
（３）、
式（４）の化合物、
【化8】
（４）、
式（５）の化合物、
【化9】
（５）、
式（６）の化合物、
【化10】
（６）、
およびそれらの混合物、
からなる群から選択される、請求項１から４のいずれかに記載の組成物。
【請求項6】
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の前記架橋ヒアルロン酸中のヒアルロン酸の濃度が１～５０ｍｇ／ｍｌである、請求項１から５のいずれかに記載の組成物。
【請求項7】
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の前記架橋ヒアルロン酸のヒアルロン酸の分子量が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法で測定して、１００～３０００ｋＤａである、請求項１から６のいずれかに記載の組成物。
【請求項8】
前記局所麻酔剤が、アムブカイン、アモラノン、アミロカイン、アルケイン、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタンベン、ブタンニカイン、ブテタミン、ブトキシカイン、クロロプロカイン、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン、ジメチルイソキン、ジメトカイン、ジペロドン、ジシクロミン、エクゴニジン、エクゴニン、エチドカイン、ベータ－エウカイン、ユープロシン、フェナルコミン、ファルモカイン、フロモカイン、ヘキシルカイン、ヒドロキシテトラカイン、ｐ－アミノ安息香酸イソブチル、メシル酸ロイシノシル、レボキサドロール、リドカイン、メピバカイン、メプリルカイン、メタブトキシカイン、ミルテカイン、ナエカイン、オクタカイン、オルトカイン、オキセタジン、パレトキシカイン、フェナカイン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパノカイン、プロパラカイン、プロピポカイン、プロポキシカイン、プソイドカイン、ピロカイン、ロピバカイン、サリチルアルコール、テトラカイン、トリカイン、トリメカイン、ゾラミン、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１から７のいずれかに記載の組成物。
【請求項9】
－（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、ｉ）ヒアルロン酸を式（Ｖ）の化合物
【化11】
（Ｖ）、
（式中、
各Ｒ７は、Ｒ２およびＲ８からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ８は
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
と架橋させる工程と、
（ｉｉ）（Ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸および（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（ｉ）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ）必要に応じて、工程（ｉｉ）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ）必要に応じて、工程（ｉｉｉ）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ´）ヒアルロン酸を式（ＶＩ）の化合物
【化12】
（ＶＩ）、
（式中、
各Ｒ７は、Ｒ２およびＲ８からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は
であり、
Ｒ８は
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
と架橋させる工程と、
（ｉｉ´）（Ａ）式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、および（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（ｉ´）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ´）必要に応じて、工程（ｉｉ´）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ´）必要に応じて、工程（ｉｉｉ´）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、
ｉ´´）ヒアルロン酸を式（Ｖ）、
【化13】
（Ｖ）、
および式（ＶＩ）
【化14】
（ＶＩ）、
の化合物
（式中、
各Ｒ７は、Ｒ２およびＲ８からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ８は、
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
を含む混合物と架橋させる工程と、
（ｉｉ´´）（Ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、ならびに（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（Ｉ´´）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ´´）必要に応じて、工程（ｉｉ´´）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ´´）必要に応じて、工程（ｉｉｉ´´）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができる、請求項１から８のいずれかに記載の組成物。
【請求項10】
－（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、ｉ）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（Ｖ）の化合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ´）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（ＶＩ）の化合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、
ｉ´´）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（Ｖ）の化合物および式（ＶＩ）の化合物を含む混合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができる、請求項９に記載の組成物。
【請求項11】
－（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉｉ）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ）の後に、あるいは工程（ｉｖ）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ）を含む方法によって得ることができるか、あるいは、
－（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉｉ´）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ´）の後に、あるいは工程（ｉｖ´）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ´）を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、工程（ｉｉ´´）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ´´）の後に、あるいは工程（ｉｖ´´）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ´´）を含む方法によって得ることができる、請求項９または１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項12】
－（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉ）の後に追加の洗浄工程（ｖｉ）をさらに含む方法によって得ることができるか、あるいは、
－（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉ´）の後に追加の洗浄工程（ｖｉ´）をさらに含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、工程（ｉ´´）の後に追加の洗浄工程（ｖｉ´´）をさらに含む方法によって得ることができる、請求項９から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項13】
注射可能な組成物の形態である、請求項１から１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項14】
式（Ｉ）、式（ＩＩ）の前記１つ以上の架橋ヒアルロン酸またはそれらの混合物の治療有効量、式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）の前記１つ以上のポリグリセロールまたはそれらの混合物の治療有効量、
１つ以上の麻酔剤の治療有効量、および
必要に応じて、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を、治療において使用するために含む医薬組成物である、請求項１から１３のいずれかにおいて定義される医薬組成物、
あるいは、
式（Ｉ）、式（ＩＩ）の前記１つ以上の架橋ヒアルロン酸またはその混合物の化粧品的に有効な量、
式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）の前記１つ以上のポリグリセロールまたはそれらの混合物の化粧品的に有効な量、
１つ以上の麻酔剤の化粧品的に有効な量、および
必要に応じて、１つ以上の化粧品的に許容される賦形剤または担体を、スキンケア剤として、特に皮膚充填剤として含む化粧品組成物である、請求項１から１３のいずれかにおいて定義される組成物の使用。
【請求項15】
担体としての、特に薬物送達系としての、請求項１から１３に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年７月１日に出願された欧州特許出願第２１１８３１０９．４号の利益を主張する。
本出願は、２０２１年７月１日に出願された欧州特許出願第２１１８３１０９．４号の利益を主張する。
【0002】
本発明は、ヒアルロン酸組成物の技術に属し、特に、ポリグリセロールポリグリシジルエーテルと架橋したヒアルロン酸および局所麻酔剤を含有する組成物に属する。
【背景技術】
【0003】
局所麻酔薬（ＬＡ）は、全身麻酔薬とは対照的に、意識を失うことなく身体の特定の位置で痛覚の欠如を引き起こす医薬である。特に、ＬＡは、ナトリウムイオンの流入（取り込み）を阻害することによって神経伝導を遮断する。ほとんどの場合には、これは神経膜を通って軸索原形質に拡散し、そこでこれらはナトリウムチャネルに入り、それらが活性状態または開放状態をとるのを防ぐ。
【0004】
局所麻酔剤は、親油性基（芳香環）、親水性基（第三級アミン）および中間連結基（エステルまたはアミド）によって形成される。これらの各基（構成成分）は、脂質および水への溶解性に関して麻酔分子に別個の特性を付与することが知られており、これは、効率的な作用持続時間および短い開始時間を有するために重要である（すなわち、全局所麻酔薬投与の終了と完全な感覚または運動ブロックとの間の時間間隔）。一方で、芳香環はＬＡの脂溶性を改善すると考えられており、これは、アミン基上の脂肪族置換によってさらに増強され得る。より大きい脂溶性は、神経鞘、および神経幹を含む個々の軸索の神経膜を介して拡散を増強する。この特性は、投与された用量のより大きな生物学的に利用可能な部分がニューロンに入ることができるため、有効成分の麻酔効力と相関している。さらに、他方では、アミン基は、中性の（イオン化されていない）第三級アミンとして、または正に帯電した（イオン化された）第四級塩として存在し得る。イオン化されていない第三級アミンを有する局所麻酔薬の中性形態は、脂溶性であり、したがって生物学的に利用可能な形態（したがって、活性形態）である。代わりに、正に帯電した形態（第四級アンモニウム塩を有する）は水溶性であり、したがって生物学的に利用可能ではない（すなわち、非活性）。しかしながら、正に帯電した形態（生物学的に利用可能な活性形態でなくても）は、麻酔薬の作用機序に積極的に関与する可能性があり、受容体部位に位置するタンパク質に麻酔薬カチオンをより強固に結合させることができ、局所麻酔作用の持続時間が長くなると思われる。
【0005】
典型的には、局所麻酔薬は、ＬＡの塩（塩酸塩など）および架橋多糖（ヒアルロン酸など）で構成されるヒドロゲルを含有する滅菌注射可能な剤形の形態で投与される。局所麻酔塩を含有するこれらのヒドロゲルは、特にそれらが審美的目的または変形性関節症の処置のための充填剤として使用される場合、細い針を通して投与される。
【0006】
残念ながら、これらの注射可能な剤形にはいくつかの欠点がある。一方で、ヒドロゲルに含有される局所麻酔薬の（塩酸塩）塩は、主にその水溶性の正に荷電した形態（すなわち、局所麻酔薬の非活性形態）であり、したがってヒドロゲルの生理学的ｐＨ（すなわち、局所麻酔薬の活性形態）での脂溶性形態の沈殿を回避し、ＬＡの望ましくない開始時間を増加させ、ＬＡのニューロンへの浸透能力を低下させることによって局所麻酔薬の有効性を損なう。さらに、他方では、架橋度の高い架橋ヒアルロン酸（ヒドロゲル）は、不適切な乏しい流動性を示す。実際、架橋のパーセンテージは、ヒドロゲルの弾性および粘度に正に寄与するが、微細針による押出性特性を損ない、痛みおよび組織への機械的損傷に対する応答としての炎症反応も引き起こす（注射中の針の貫通および粘弾性ヒドロゲルが周囲の組織に及ぼす力によって引き起こされる）。さらに、（架橋）ヒアルロン酸（ＨＡ）は、活性酸素種（ＲＯＳ）によって生物において自然に分解され、さらなる一過性の炎症反応をもたらす可能性もある。上記のすべての理由から、架橋ヒドロゲルは、それらの組成物に局所麻酔薬を組み込んで製剤化され、最も重要なことに、局所麻酔薬はヒドロゲルの注射後短時間で作用するはずである。
【0007】
したがって、本明細書で上記に開示されているように、多くの要因が麻酔薬の中性形態の安定性を変化させ、麻酔薬の治療効果、特に治療効果の開始時間および持続時間に寄与し得る。これらの要因は、局所麻酔薬の特性（その化学構造など）またはヒアルロン酸ヒドロゲルの特性（化学組成、架橋度およびさらなる溶解化合物の存在、重量オスモル濃度および／またはイオン強度）、局所麻酔薬が溶解された媒体の重量オスモル濃度および／またはイオン強度（すなわち、架橋ヒドロゲル）、ならびにその投与に使用される滅菌方法のいずれかに関連し得る。
【0008】
麻酔剤を含有する架橋ヒアルロン酸ヒドロゲルの安定なヒドロゲルを開発するためのいくつかの戦略が最新技術で開示されている。特に、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）と架橋したヒアルロン酸およびレオロジー特性（物理的特性）が改善された麻酔剤のヒドロゲルが、最新技術で開示されている。実際、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）と架橋したヒアルロン酸および麻酔剤、ならびにグリセロール、ソルビトール、プロピレングリコール、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、マルチトールおよびラクチトールから選択される１つ以上のポリオールを含有するヒドロゲルの注射可能な水性組成物は、ｉｎ ｖｉｖｏでのヒアルロン酸ベースのゲルの分解に対して安定性の改善を示し（ヒアルロニダーゼによる酵素分解、フリーラジカル分解、３７℃での熱分解）、ヒドロゲルの貯蔵寿命を改善する。しかしながら、ヒドロゲル中に含有される麻酔剤の治療効果においてヒドロゲル内部の麻酔薬の活性形態の量を増加させる効果を有するヒドロゲル（遊離ポリグリセロール）の組成物、およびそれからの有効成分（すなわち、局所麻酔薬）の放出およびその後の麻酔剤の開始時間に対する効果がさらに低いことについては、すべての文献に記載されていない。
【0009】
あるいは、有効性を高め、特に局所麻酔剤の開始時間を短縮するためのいくつかの戦略が、最新技術において開示されている。それらの方法のいくつかは、局所麻酔剤の塩の変更（重炭酸対アニオンの塩酸塩の変更）および／または８を超えるｐＨの使用に基づいていた。残念なことに、これらの方法は、ヒアルロン酸を含有する永久的または半永久的な注射可能な医療機器の調製にはあまり適用できない。他の戦略は、神経のリポタンパク質バリアを通るＬＡの透過性を増加させる界面活性剤またはマンニトールなどの物質の添加に焦点を当てた（すなわち、神経透過促進剤）。しかしながら、これらの神経透過促進剤の使用に関連する副作用も当技術分野で開示されている。特に、マンニトールの使用の主な欠点は、マンニトールが、注射部位における水または流体のリコールに起因する重篤な有害作用（浮腫のような）を引き起こし得る高浸透圧溶液の形態で使用されることである。したがって、高浸透圧マンニトール溶液の使用は、長期適用では示されておらず、骨関節、皮内または眼内適用のための高浸透圧溶液の形態では推奨されていない（許容できない）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0010】
したがって、当技術分野で知られていることから、バイオアベイラビリティが改善された、特に、開始時間の短縮によって引き起こされる治療効果の向上を伴う１つ以上の麻酔剤を含有する適切な安定性およびレオロジー特性を有する架橋ヒアルロン酸を提供する必要性が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【0011】
本発明者らは、驚くべきことに、安全で安定な架橋ヒアルロン酸局所麻酔剤含有組成物であって、それに含有される局所麻酔剤の活性形態の放出を促進し、速い治療効果（作用開始時間の短縮）をもたらす組成物を提供した。局所麻酔薬の非活性形態が主にヒドロゲルから放出される最新技術とは対照的である。特に、特定の濃度の遊離ポリグリセロール、ならびに機械的特性、低い酵素／酸化分解速度、およびその投与、特にその注射可能な適用に関連する望ましくない副作用を引き起こすことなくｉｎ ｖｉｖｏ適用で使用するのに適当な生体適合性を有するＰＰＥ架橋ヒアルロン酸を含む架橋ヒアルロン酸組成物。特に、本発明者らは、麻酔剤の開始の短縮が達成されるので、ポリグリセロールジグリシジルエーテル（ＰＰＥ）と架橋したヒアルロン酸と、本発明で開示される特定濃度の遊離ポリグリセロールとの組合せが、ＨＡ組成物の投与に関連する疼痛および炎症性の望ましくない副作用を軽減し得ることを見出した。この短い開始は、ヒアルロン酸の機械的特性を損なうことなく、局所麻酔活性形態のバイオアベイラビリティの増加によって引き起こされる局所麻酔薬の最も速い作用に関連する。
【0012】
いかなる理論にも拘束されるものではないが、本発明者らは、局所麻酔薬のバイオアベイラビリティの増加（局所麻酔薬の活性形態の割合を増加させる）が、遊離ポリグリセロールの制御された濃度、それらの分子量と、ヒドロゲルから周囲組織への局所麻酔薬の動的放出にも正の影響を及ぼす架橋剤ＰＰＥの構造との組合せに起因すると考える。さらに、架橋剤の構造と、ＨＡとＰＰＥとの間の（共有結合および非共有結合による）相互作用に由来するその凝集特性との組合せ効果に対する、ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸の機械的特性および耐分解性。特に、ＰＰＥとＨＡとの相互作用は、ヒドロゲルマトリックスを無傷で保持し、低い架橋度であってもインプラントに浸透して３Ｄネットワークを分解する酵素の能力を制限する緻密な３次元ＨＡネットワークを作り出す。
【0013】
実験のセクションで実証されているように、本発明の組成物は、３Ｄ－ＨＡネットワーク内の局所麻酔薬のｐＫａ値が生理学的ｐＨにより近付くことを可能にし、３Ｄ－ＨＡネットワーク内で、局所麻酔薬が、所与の生理学的に許容されるｐＨでヘンダーソン・ハッセルバルヒの式（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ－Ｈａｓｓｅｌｂａｌｃｈ ｅｑｕａｔｉｏｎ）によって予測される理論濃度よりも高い濃度の局所麻酔薬の活性形態（すなわち、生理学的ｐＨでの脂溶性形態）を有することになる。内部での局所麻酔薬のこのような増加量が、次いで、発症時間の短縮をもたらす。実際、本発明の３Ｄ－ＨＡ組成物の内部に位置する局所麻酔薬の実験によるｐＫａ値は、理論的なｐＫａ値よりも低いことが示されている。
【0014】
さらに、本発明者らは、特定の濃度の遊離ポリグリセロールの存在とともに、３Ｄ－ＨＡネットワークにより、このｉｎ ｖｉｖｏでの迅速な開始と本発明に開示された麻酔薬の有効性との間の強い相関関係も実証した。
【0015】
いかなる理論にも拘束されるものではないが、本発明の組成物、特にＰＰＥ架橋剤と遊離ポリグリセロールとの組合せの相乗効果は、ヒドロゲル内部の局所麻酔薬のバイオアベイラビリティの変化およびヒドロゲルからの薬物の急速な拡散を与えると思われる。
【0016】
特に、架橋剤として使用されるＰＰＥの両親媒性特性、その分子量および架橋度は、未反応ＰＰＥ架橋剤の加水分解性エポキシ環開環およびヒアルロン酸鎖結合架橋剤の天然加水分解に由来する遊離ポリグリセロールの両親媒性特性と組み合わせて、マトリックス内部の麻酔薬の活性形態の予想外の安定化を与えると考えられる。これにより、麻酔剤の生物学的に利用可能な形態（形態Ｂ）のパーセンテージが、熱力学的方程式によって予測され、最新技術で知られている製品（すなわち、熱力学的ｐＫａ値は、その予測値の２．５％～１０％に低下する）に見られるパーセンテージと比較して、定量的に増加し、同時に、架橋ＨＡの三次元構造は、ＨＡの３Ｄ架橋マトリックスからの麻酔剤の最も速い動的放出に寄与し、薬物の活性形態の急速な拡散をもたらす（その開始を短縮する）。
【0017】
最後に、ＰＰＥ架橋ＨＡ、特定濃度の遊離ポリグリセロールおよび麻酔剤を含む本発明の組成物は、良好な流動特性を示す。さらに、上述のように、本発明の組成物の注射は、その適用中および適用後に患者による炎症および疼痛の知覚を低下させるかまたはそれをなくす。
【0018】
要約すると、本発明の組成物は、（ａ）超分岐ＰＰＥ架橋剤のこのような両親媒性特性、（ｂ）このような特定濃度の遊離超分岐ポリオール断片、および（ｃ）それらの組合せが組成物内部の局所麻酔薬の脂溶性活性形態を増加させることを可能にするこのような遊離超分岐ポリオールの分子量を有する（すなわち、Ｈａｎｄｅｒｓｏｎ－Ｈａｓｓｅｌｂａｃｈの式に従って予想されるモル濃度よりも高い局所麻酔薬の形態を有する）。次に、本発明のヒドロゲル組成物の架橋３Ｄマトリックス（すなわち、物理的特性）は、局所麻酔薬のより多量の脂溶性活性形態のより速い動的放出を提供し、局所麻酔薬の迅速な開始をもたらす。よって、本発明の第１の態様は、
【0019】
Ａ）式（Ｉ）、
（Ｉ）
の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
式（ＩＩ）、
（ＩＩ）
の１つ以上の架橋ヒアルロン酸
および式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物
からなる群から選択される１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
Ｂ）式（ＩＩＩ）、
（ＩＩＩ）
の１つ以上のポリグリセロール、
式（ＩＶ）
（ＩＶ）
の１つ以上のポリグリセロール、
および式（ＩＩＩ）の１つ以上のポリグリセロールと式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールとの混合物
からなる群から選択される１つ以上のポリグリセロール、
Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤またはその塩、および
Ｄ）必要に応じて、１つ以上の許容される賦形剤または担体
を含む組成物であって、
式中、
各Ｒ１は、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
Ｒ３は、
Ｒ４は、
Ｒ５は、
ここで、各Ｒ６は、Ｒ３およびＲ５からなるから独立して選択され、ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、ｄは、０～７０からなる群から選択される整数であり、ｅは、１～５０からなる群から選択される整数であり、
ｆは、０～５０からなる群から選択される整数であり、ｇは、０～５０からなる群から選択される整数であり、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸が、０．０３０～０．９００％の架橋パーセンテージを有し、式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のポリグリセロールは、ＵＶ可視および質量検出器と連結したサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ）によって測定して、２４０～３．７００Ｄａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有し、但し、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸において、少なくとも１つのＲ１はＲ４であり、式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のポリグリセロールにおいて、Ｒ１が存在する場合、Ｒ１はＲ４以外である。
【化1】
（Ｉ）
の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
式（ＩＩ）、
【化2】
（ＩＩ）
の１つ以上の架橋ヒアルロン酸
および式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物
からなる群から選択される１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
Ｂ）式（ＩＩＩ）、
【化3】
（ＩＩＩ）
の１つ以上のポリグリセロール、
式（ＩＶ）
【化4】
の１つ以上のポリグリセロール、
および式（ＩＩＩ）の１つ以上のポリグリセロールと式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールとの混合物
からなる群から選択される１つ以上のポリグリセロール、
Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤またはその塩、および
Ｄ）必要に応じて、１つ以上の許容される賦形剤または担体
を含む組成物であって、
式中、
各Ｒ１は、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
Ｒ３は、
Ｒ４は、
Ｒ５は、
ここで、各Ｒ６は、Ｒ３およびＲ５からなるから独立して選択され、ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、ｄは、０～７０からなる群から選択される整数であり、ｅは、１～５０からなる群から選択される整数であり、
ｆは、０～５０からなる群から選択される整数であり、ｇは、０～５０からなる群から選択される整数であり、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸が、０．０３０～０．９００％の架橋パーセンテージを有し、式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のポリグリセロールは、ＵＶ可視および質量検出器と連結したサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ）によって測定して、２４０～３．７００Ｄａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有し、但し、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸において、少なくとも１つのＲ１はＲ４であり、式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のポリグリセロールにおいて、Ｒ１が存在する場合、Ｒ１はＲ４以外である。
【0020】
本発明の第２の態様は、本発明の第１の態様の調製方法に関する。
【0021】
本発明の第３の態様は、治療に使用するための本発明の第１の態様の組成物に関する。
【0022】
本発明の第４の態様は、化粧品における、特に皮膚充填剤としての本発明の第１の態様の組成物の使用に関する。
【0023】
本発明の第５の態様は、担体としての、特に薬物送達系としての本発明の第１の態様の組成物の使用に関する。
【発明を実施するための形態】
【0024】
発明の詳細な説明
本出願において本明細書で使用されるすべての用語は、特に明記しない限り、当技術分野で知られている通常の意味で理解されるものとする。本出願で使用される他のより具体的な定義の用語は、以下に記載されており、特に明示的に記載された定義がより広い定義を提供しない限り、明細書および特許請求の範囲全体にわたって均一に適用されることを意図する。
本出願において本明細書で使用されるすべての用語は、特に明記しない限り、当技術分野で知られている通常の意味で理解されるものとする。本出願で使用される他のより具体的な定義の用語は、以下に記載されており、特に明示的に記載された定義がより広い定義を提供しない限り、明細書および特許請求の範囲全体にわたって均一に適用されることを意図する。
【0025】
本発明の目的のために、与えられた任意の範囲は、範囲の上限値と下限値の両方を含む。所与の範囲、例えば、温度、時間、重量などは、特に明記しない限り、近似値とみなされるべきである。本明細書で使用される「約」または「およそ」という用語は、特定の値の±１０％の範囲の値を指す。例えば、「約０．５」または「およそ０．５」という表現は、０．５の±１０％、すなわち０．４５～０．５５を含む。
【0026】
「重量パーセント（％）」という用語は、組成物の総重量に対する各成分のパーセンテージを指す。
【0027】
上に開示されているように、本発明の第１の態様は、ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸からなる群から選択される１つ以上の架橋ヒアルロン、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、および式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物を含む。一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸を含む。一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、ａ）式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸を含む。一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物を含む。
【0028】
本発明の目的のために、「ヒアルロン酸」、「ヒアルロナン」という用語、および略語「ＨＡ」は同じ意味を有し、互換的に使用される。それらは、交互のβ－（１→４）およびβ－（１→３）グリコシド結合を介して連結された、Ｄ－グルクロン酸およびＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミンの反復モノマーからなる直鎖高分子量多糖を有するアニオン性非硫酸化グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を指す。その化学構造は、以下の式に対応する：
【化5】
【0029】
本発明の目的のために、「ヒアルロン酸」という用語は、ヒアルロン酸の薬学的または化粧品的に許容される塩などのその生理学的に許容される塩も包含する。一実施形態では、本発明の架橋多糖は、多糖がヒアルロン酸の薬学的または化粧品的に許容される塩であるものである。治療目的または美容目的で使用される場合、薬学的または化粧品的に許容される限り、使用され得るヒアルロン酸塩の種類に制限はない。ヒアルロン酸およびその塩は、一部の物理的特性が異なっていてもよいが、それらは本発明の目的のために同等であり、ヒアルロン酸の皮膚に優しい特性は、薬学的または化粧品的に許容される塩、特にそのナトリウム塩（またはヒアルロン酸ナトリウム）およびカリウム塩（ヒアルロン酸カリウム）に拡張可能である。「生理学的に許容される塩」という用語は、患者（ヒトを含む哺乳動物など）によって生理学的に許容的な塩を指す。特に、「薬学的に許容される塩」という用語は、医学的使用のために組成物を調製するための薬学的技術における使用に適切な塩を指し、本明細書で互換的に使用される「化粧品的に許容される塩」または「皮膚科学的に許容される塩」という用語は、とりわけ、毒性、不適合性、不安定性、不適切なアレルギー反応なしにヒト皮膚接触での使用に適切な塩を指す。特に、「薬学的または化粧品的に許容される塩」という用語は、一般的に使用される塩、例えばアルカリ金属塩などを包含する。ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩の調製は、当該技術において公知の方法によって行うことができる。本発明に適切なヒアルロン酸の薬学的または化粧品的に許容される塩の非限定的な例としては、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸亜鉛およびヒアルロン酸コバルトなどの無機塩、ならびにヒアルロン酸テトラブチルアンモニウムなどの有機塩が挙げられる。一実施形態では、ヒアルロン酸の薬学的または化粧品的に許容される塩は、ナトリウム塩（ＣＡＳ番号９０６７－３２－７）またはカリウム塩（ＣＡＳ番号３１７９９－９１－４）の選択されたアルカリ金属の塩である。
【0030】
一実施形態では、本発明の組成物は、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸中のヒアルロン酸の濃度が１～５０ｍｇ／ｍｌ、特に１０～３０ｍｇ／ｍｌである組成物である。本発明の目的のために、溶液の密度は１に近いので（１ｍＬ＝１ｇ）、したがって、ｍｇ／ｍＬとして表される濃度はｍｇ／ｇと互換的である。ヒアルロン酸の濃度は、最新技術に開示されている任意の適切な方法によって測定することができる。本発明において、ヒアルロン酸の濃度は、１０５℃の換気オーブン中で適切な時間ヒドロゲルを脱水した後に得られた乾燥残留物の重量測定によって測定される。
【0031】
一実施形態では、本発明の組成物は、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸のヒアルロン酸の分子量がサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して１００～３０００ｋＤａ、特に２５０～２０００ｋＤａである組成物である。
【0032】
本発明のヒアルロン酸は、「架橋された」ヒアルロン酸である。「架橋された」という用語は、１つ以上の架橋剤によって崩壊した出発ヒアルロン酸によってネットワークが形成される三次元架橋ネットワークを有するヒアルロン酸を指す。「架橋」という用語は、ポリマー科学分野において、ポリマー（ヒアルロン酸）の物理的特性の差を促進するための架橋の使用を指す。「架橋」という用語は、ヒアルロン酸のヒドロキシル基による本発明の架橋剤のエポキシド環の開環によって形成される結合を指す。本明細書で互換的に使用される「架橋剤（ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｒ）」または「架橋剤（ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ ａｇｅｎｔ）」という用語は、１つ以上のヒアルロン酸鎖を架橋する能力を有する化合物を指す。
【0033】
「架橋パーセンテージ」、「架橋の割合（％）」、「架橋度」および略語「Ｃ．Ｄ．」という用語は同じ意味を有し、これらは互換的に使用される。それらは、架橋され、修飾されたヒアルロン酸モノマー単位と修飾されていないヒアルロン酸モノマー単位との比率をパーセンテージで示す。一般に、材料の架橋度（Ｃ．Ｄ．）の測定は、最新技術で周知の異なる方法を使用して評価することができる。いくつかの方法は、酵素消化後のポリマー断片の１Ｈ ＮＭＲまたは定量的ＧＰＣ分析など直接的である。他の方法は、レオロジー測定、圧縮または振動試験により間接的である。通常、これらの方法はすべて比較的であり、同じポリマーのファミリー内の異なる架橋度を区別することができる。本発明において、架橋度の値は、下記式１：
（式１）
［式中、
ＭＷｒｅｐ．ｕｎｉｔは、ヒアルロン酸モノマー繰り返し単位の分子量である４０１Ｄａであり、
Ｍｅは、以下の式２：
（式２）
（式中、
Ｇ´は、回転式レオメータを使用するレオロジー測定によって実験的に得られ、
Ｒ・Ｔは熱エネルギーであり、
ｃはヒアルロン酸濃度、Ｍｎはヒアルロン酸の数平均分子量である
）の逆式を使用して数学的に計算される。］
を使用して、レオロジー測定により得られたＧ´の値から数学的に算出される（Ｓ．Ｃ．Ｄｅ Ｓｍｅｄｔ，ｅｔ ａｌ．´´Ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃ ａｎｄ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｎｅｔｗｏｒｋ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ａｓ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，´´Ｂｉｏｒｈｅｏｌｏｇｙ，１９９３．ｖｏｌ．３０（１），ｐｐ．３１－４１を参照されたい）。
【数1】
（式１）
［式中、
ＭＷｒｅｐ．ｕｎｉｔは、ヒアルロン酸モノマー繰り返し単位の分子量である４０１Ｄａであり、
Ｍｅは、以下の式２：
【数2】
（式２）
（式中、
Ｇ´は、回転式レオメータを使用するレオロジー測定によって実験的に得られ、
Ｒ・Ｔは熱エネルギーであり、
ｃはヒアルロン酸濃度、Ｍｎはヒアルロン酸の数平均分子量である
）の逆式を使用して数学的に計算される。］
を使用して、レオロジー測定により得られたＧ´の値から数学的に算出される（Ｓ．Ｃ．Ｄｅ Ｓｍｅｄｔ，ｅｔ ａｌ．´´Ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃ ａｎｄ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｎｅｔｗｏｒｋ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ａｓ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，´´Ｂｉｏｒｈｅｏｌｏｇｙ，１９９３．ｖｏｌ．３０（１），ｐｐ．３１－４１を参照されたい）。
【0034】
一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、Ａ）式（Ｉ）、あるいは式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸を含み、０．０３％～０．９％、特に０．０４５～０．０７７％の架橋パーセンテージを有する。本出願の目的のために、架橋パーセンテージは、上記で定義された式１を使用してレオロジー測定によって得られたＧ´の値から測定される。
【0035】
一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物を含む。式（Ｉ）あるいは式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸を含む組成物について上述したすべての実施形態は、式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物を含む組成物にも適用される。
【0036】
一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、および式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物からなる群から選択される１つ以上の架橋ヒアルロン酸を含み、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸は、１つ以上のポリグリセロールジグリシジルエーテル（ＰＰＥ）架橋剤を使用することによって得られる。
【0037】
一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、ａ）ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して１００～７．０００ｇ／ｅｑ、特に１００～６００ｇ／ｅｑの平均ＥＥＷを有する架橋剤ＰＰＥを使用することによって得られる式（Ｉ）あるいは式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸を含む。「エポキシ当量」、「平均ＥＥＷ」という用語、および略語「ＥＥＷ」は同じ意味を有し、これらは互換的に使用される。ＥＥＷは、１グラム当量のエポキシを含有する架橋剤の重量（グラム）である。ＥＥＷは、本発明で開示される架橋剤１グラム中に存在するエポキシ基の含有量を指し、ｇ／ｅｑで表される。最新技術（Ｈｅ，Ｚ．，ｅｔ ａｌ．，´´Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｐｏｘｉｄｅ ｖａｌｕｅｓ ｉｎ ｐｏｌｙｍｅｒ ｍｉｘｔｕｒｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｅｐｏｘｙ ｒｅｓｉｎ´´．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１４，ｖｏｌ．６（１２），ｐｐ．４２５７－４２６１を参照されたい）に開示されているエポキシドの迅速な決定のために、ＨＣｌを用いる定量的超音波支援滴定を使用してＥＥＷを実験的に測定した。
【0038】
一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、ａ）サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａ、特に２０４から３．５００ＤａのＭｗを有する架橋剤ＰＰＥを使用することによって得られる、式（Ｉ）の、または代替では式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸を含む。「分子量」、「重量平均分子量」、「重量平均モル質量」、「質量平均モル質量」、「平均Ｍｗ」および略語「ＭＷ」という用語は同じ意味を有し、これらは互換的に使用される。質量平均モル質量は、以下の式：
（式中、Ｎｉは分子質量Ｍｉの分子数である）
によって計算される。質量平均分子質量は、静的光散乱、小角中性子散乱、Ｘ線散乱、および沈降速度によって決定することができる。本出願において、Ｍｗはサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される。
【数3】
（式中、Ｎｉは分子質量Ｍｉの分子数である）
によって計算される。質量平均分子質量は、静的光散乱、小角中性子散乱、Ｘ線散乱、および沈降速度によって決定することができる。本出願において、Ｍｗはサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される。
【0039】
一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、および式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物からなる群から選択される１つ以上の架橋ヒアルロン酸を含み、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸は、架橋剤として、２０４～１５．０００ｇ／モルのＭｗ、および１００～７．０００ｇ／ｅｑのＥＥＷを有するポリグリセロールジグリシジルエーテル（ＰＰＥ）を使用することによって得られる。一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、および式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物からなる群から選択される１つ以上の架橋ヒアルロン酸を含み、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸は、架橋剤として、２０４～３．５００ｇ／モルのＭｗ、および１００～６００ｇ／ｅｑのＥＥＷを有するポリグリセロールジグリシジルエーテル（ＰＰＥ）を使用することによって得られる。
【0040】
一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、ａ）式（Ｉ）の、あるいは式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸が、０．０３％～０．９％の架橋パーセンテージを有し、２０４～１５．０００ｇ／モルのＭｗ、および１００～７．０００ｇ／ｅｑのＥＥＷを有する架橋剤ＰＰＥを使用することによって得られる。
【0041】
一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、ａ）式（Ｉ）の、あるいは式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸が、０．０４５％～０．０７７％の架橋パーセンテージを有し、２０４～３．５００ｇ／モルのＭｗ、および１００～６００ｇ／ｅｑのＥＥＷを有する架橋剤ＰＰＥを使用することによって得られる。
【0042】
一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、および式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物からなる群から選択される１つ以上の架橋ヒアルロン酸を含み、Ｒ２の量は、式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の総重量に対して２ｐｐｍ未満である。Ｈｅ，Ｚ．，ｅｔ ａｌ．，´´Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｐｏｘｉｄｅ ｖａｌｕｅｓ ｉｎ ｐｏｌｙｍｅｒ ｍｉｘｔｕｒｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｅｐｏｘｙ ｒｅｓｉｎ´´．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１４，ｖｏｌ．６（１２），ｐｐ．４２５７－４２６１に開示されているエポキシドの迅速な決定のために、ＨＣｌを用いる定量的超音波支援滴定を使用して、Ｒ２の量を実験的に測定する。
【0043】
上に開示されているように、本発明の第１の態様は、Ｂ）式（ＩＩＩ）の１つ以上のポリグリセロール、式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロール、および式（ＩＩＩ）の１つ以上のポリグリセロールと式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールとの混合物からなる群から選択される１つ以上のポリグリセロールを含む組成物を指す。一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、Ｂ）式（ＩＩＩ）の１つ以上のポリグリセロールを含む。一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、Ｂ）式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む。
【0044】
本発明の目的のために、式（ＩＩＩ）のポリグリセロールまたは式（ＩＶ）のポリグリセロールは、それぞれ式（ＩＩＩ）の「遊離」ポリグリセロールまたは式（ＩＶ）の「遊離」ポリグリセロールと命名することもできる。
【0045】
一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、Ｂ）ＵＶ可視および質量検出器と連結したサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ）によって測定して、２４０～３．７００Ｄａ、特に３１４～１１２９Ｄａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する１つ以上のポリグリセロールジグリシジルエーテル（ＰＰＥ）架橋剤を使用することによって得られる式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む。
【0046】
一実施形態では、本発明の組成物は、０．４５～２５ｍｇ／ｍＬ、特に２～２０ｍｇ／ｍＬの組成物中の式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のポリグリセロールの濃度を有する組成物である。式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のポリグリセロールの濃度は、最新技術に開示されている任意の適切な方法によって測定することができる。本発明において、式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のポリグリセロールの濃度は、ＵＶ可視および質量検出器と連結したサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ）によって測定される。
【0047】
一実施形態では、本発明の組成物は、式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールが、
式（１）の化合物、
（１）、
式（２）の化合物、
（２）、
式（３）の化合物、
（３）、
式（４）の化合物、
（４）、
式（５）の化合物、
（５）、
式（６）の化合物、
（６）、
およびそれらの混合物
からなる群から選択される組成物である。
式（１）の化合物、
【化6】
（１）、
式（２）の化合物、
【化7】
（２）、
式（３）の化合物、
【化8】
（３）、
式（４）の化合物、
【化9】
（４）、
式（５）の化合物、
【化10】
（５）、
式（６）の化合物、
【化11】
（６）、
およびそれらの混合物
からなる群から選択される組成物である。
【0048】
一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、Ｂ）式（ＩＩＩ）の１つ以上のポリグリセロールと式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールとの混合物を含む。Ｂ）式（ＩＩＩ）の１つ以上のポリグリセロール、あるいは式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む組成物について上述したすべての実施形態は、式（ＩＩＩ）の１つ以上のポリグリセロールと式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールとの混合物を含む組成物にも適用される。
【0049】
上に開示されているように、本発明の第１の態様は、Ｃ）有効量の１つ以上の局所麻酔剤またはその塩を含む組成物を指す。「麻酔剤」という用語は、意識消失の有無にかかわらず、ヒトまたは他の哺乳動物において感覚喪失を引き起こす薬剤を指す。より詳細には、「局所麻酔剤」という用語は、末梢神経の興奮および／または伝導を可逆的に阻害することによって局所麻酔を誘導する麻酔剤を指す。本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、上述の麻酔効果、例えば、感覚の部分的もしくは全体的な喪失、感覚知覚の阻害、または運動機能の阻害をもたらす１つ以上の局所麻酔剤の量を指す。
【0050】
本発明で使用するのに好適な局所麻酔薬としては、以下に限定されないが、アムブカイン、アモラノン、アミロカイン、アルチカイン、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタンベン、ブタニカイン、ブテタミン、ブトキシカイン、クロロプロカイン、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン、ジメチソキン、ジメトカイン、ジペロドン、ジシクロミン、エクゴニジン、エクゴニン、エチドカイン、ベータ－エウカイン、ユープロシン、フェナルコミン、ファーモカイン、ホモカイン、ヘキシルカイン、ヒドロキシテトラカイン、イソブチルｐ－アミノベンゾアート、ロイシノカインメシラート、レボキサドロール、リドカイン、メピバカイン、メプリルカイン、メタブトキシカイン、ミルテカイン、ナエピン、オクタカイン、オルトカイン、オキセサゼイン、パレトキシカイン、フェナカイン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパノカイン、プロパラカイン、プロピポカイン、プロポキシカイン、プソドコカイン、ピロカイン、ロピバカイン、サリチルアルコール、テトラカイン、トリカイン、トリメカイン、ゾラミン、およびそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親油性部分および親水性部分を含むこれらの麻酔剤またはその塩が挙げられる。
【0051】
一実施形態では、本発明の組成物は、局所麻酔剤またはその塩が、リドカイン、メピバカイン、アルチカインまたはそれらの混合物などのアミド系局所麻酔薬からなる群から選択される組成物である。一実施形態では、本発明の組成物は、局所麻酔剤またはその塩がリドカインまたはその塩である組成物である。一実施形態では、本発明の組成物は、局所麻酔剤またはその塩がメピバカインまたはその塩である組成物である。一実施形態では、本発明の組成物は、局所麻酔剤またはその塩がアルチカインまたはその塩である組成物である。
【0052】
局所麻酔薬の塩は、無機酸または有機酸を含む許容される非毒性酸から形成される塩を包含する。それらは、それぞれ薬学的または化粧品的な目的で使用される場合、治療的または化粧品的に許容されなければならないことを除いて、塩に関する制限はない。許容される塩のほとんどは市販されている。そうでない場合、これらの塩は、無機酸および有機酸を含む許容される非毒性酸から出発することを含む、最新技術に開示されている方法に従って調製され得る。このような酸としては、例えば、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ－トルエンスルホン酸および塩酸塩が挙げられる。例えば、これらは、従来の化学的方法によって、塩基性部分を含有する親化合物から調製することができる。一般に、このような塩は、例えば、この化合物の遊離塩基形態を化学量論量の適切な許容される酸と水もしくは有機溶媒中またはそれらの混合物中で反応させることによって調製される。本発明の目的のために、本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、上記で定義された薬学的に許容される非毒性酸から形成される任意の塩を包含する。本明細書で使用される「化粧品として許容される塩」という用語は、上記で定義された化粧品として許容される非毒性の酸から形成される任意の塩を包含する。
【0053】
一実施形態では、本発明の組成物は、局所麻酔剤が塩の形態である組成物である。一実施形態では、本発明の組成物は、リドカイン塩酸塩を含む。一実施形態では、本発明の組成物は、メピバカイン塩酸塩を含む。一実施形態では、本発明の組成物は、アルチカイン塩酸塩を含む。
【0054】
一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式によって計算された予測される熱力学的ｐＫａ値よりも２．５～１０％低いヘンダーソン・ハッセルバルヒの式によって計算された実験的ｐＫａ値を有する有効量の１つ以上の局所麻酔剤またはその塩を含む。
【0055】
本発明の目的のために、「熱力学的ｐＫａ値」（ｐＫａＴと略す）という用語は、最新技術（Ｒｅｎｅ．Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．´´Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｃｏｎｓｔａｎｔｓ ｏｆ ｌｏｃａｌ ａｎａｅｓｔｈｅｔｉｃ ａｍｉｎｅｓ：ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｉｏｎｉｃ ｓｔｒｅｎｇｔｈ´´ Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃ．，１９７２，ｖｏｌ．２４，ｐｐ．８４１－８４７を参照されたい）で表にされたｐＫａ値であり、摂動平衡剤の非存在下で、弱酸の解離平衡定数から計算される（Ｒｅｎｅ．Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．を参照されたい）。
【0056】
「実験的ｐＫａ値」（ｐＫａＳと略す）という用語は、ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式を使用して、それぞれｐＨ計を使用し、摂動平衡剤（すなわち、遊離ポリグリセロールおよびＰＰＥ架橋ヒアルロン酸）の存在下でＵＶ可視および質量検出器と連結したサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ）によって実験的に測定されたｐＨ、［Ｂ］および［ＢＨ＋］値から出発して、実験的に計算されたｐＫａである。
【0057】
本発明の目的のために、ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式は以下通りである：
式中、
ｐＨは－ｌｏｇ（［Ｈ＋］）であり、
ｐＫａは、弱酸の解離平衡定数の－ｌｏｇであり、［Ｂ］（［塩基］）は、局所麻酔薬のコンジュゲート塩基形態の濃度であり、
［ＢＨ＋］（［酸］）は、局所麻酔薬のコンジュゲート酸性形態である。
【数4】
式中、
ｐＨは－ｌｏｇ（［Ｈ＋］）であり、
ｐＫａは、弱酸の解離平衡定数の－ｌｏｇであり、［Ｂ］（［塩基］）は、局所麻酔薬のコンジュゲート塩基形態の濃度であり、
［ＢＨ＋］（［酸］）は、局所麻酔薬のコンジュゲート酸性形態である。
【0058】
以下の平衡から［Ｂ］および［ＢＨ＋］の値を導出する。
【数5】
【0059】
ｐＫａの値は、上記で定義された最新技術で集計された各局所麻酔薬の熱力学的ｐＫａ値に対応する（Ｒｅｎｅ．Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．´´Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｃｏｎｓｔａｎｔｓ ｏｆ ｌｏｃａｌ ａｎａｅｓｔｈｅｔｉｃ ａｍｉｎｅｓ：ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｉｏｎｉｃ ｓｔｒｅｎｇｔｈ´´ Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃ．，１９７２，ｖｏｌ．２４，ｐｐ．８４１－８４７を参照されたい）。
【0060】
一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤としての有効量のリドカインまたはその塩であって、ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式によって計算して、７．２～７．８の実験ｐＫａ値を有するリドカインまたはその塩を含む。一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤として有効量のメピバカインまたはその塩であって、ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式によって計算して、７．１～７．７の実験ｐＫａ値を有するメピバカインまたはその塩を含む。一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤としての有効量のアルチカインまたはその塩であって、ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式によって計算して、７．０～７．５の実験ｐＫａ値を有するアルチカインまたはその塩を含む。
【0061】
一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）ＧＣ／ＭＳによって決定された局所麻酔薬の中性形態Ｂのパーセンテージが、本発明に開示されるヘンダーソン・ハッセルバルヒの式によって計算された予測値より４０％～１６０％高い、有効量の１つ以上の局所麻酔剤またはその塩を含む。
【0062】
一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤としての有効量のリドカインまたはその塩であって、約ｐＨ７．４でのＧＣ／ＭＳによって決定して、２５％～６３％のパーセンテージの中性形態Ｂのリドカインまたはその塩を有するリドカインまたはその塩を含む。一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤としての有効量のリドカインまたはその塩であって、約ｐＨ７．２でのＧＣ／ＭＳによって決定した１７％～３４％のパーセンテージの中性形態Ｂのリドカインまたはその塩を有するリドカインまたはその塩を含む。一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤としての有効量のリドカインまたはその塩であって、約ｐＨ７．０でのＧＣ／ＭＳによって決定した１２％～２５％のパーセンテージの中性形態Ｂのリドカインまたはその塩を有するリドカインまたはその塩を含む。
【0063】
一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤としての有効量のメピバカインまたはその塩であって、約ｐＨ７．４でのＧＣ／ＭＳによって決定して、２９％～６５％のパーセンテージの中性形態Ｂのメピバカインまたはその塩を有するメピバカインまたはその塩を含む。一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤としての有効量のメピバカインまたはその塩であって、約ｐＨ７．２でのＧＣ／ＭＳによって決定して、２１％～４０％のパーセンテージの中性形態Ｂのメピバカインまたはその塩を有するメピバカインまたはその塩を含む。一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤としての有効量のメピバカインまたはその塩であって、約ｐＨ７．０でのＧＣ／ＭＳによって決定して、１５％～２６％のパーセンテージの中性形態Ｂのメピバカインまたはその塩を有するメピバカインまたはその塩を含む。
【0064】
一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤としての有効量のアルチカインまたはその塩であって、約ｐＨ７．４でのＧＣ／ＭＳによって決定して、４１％～７０％のパーセンテージの中性形態Ｂのアルチカインまたはその塩を有するアルチカインまたはその塩を含む。一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤としての有効量のアルチカインまたはその塩であって、約ｐＨ７．２でのＧＣ／ＭＳによって決定して、２９％～５０％のパーセンテージの中性形態Ｂのアルチカインまたはその塩を有するアルチカインまたはその塩を含む。一実施形態では、本発明の組成物は、Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤としての有効量のアルチカインまたはその塩であって、約ｐＨ７．０でのＧＣ／ＭＳによって決定して、２１％～４０％のパーセンテージの中性形態Ｂのアルチカインまたはその塩を有するアルチカインまたはその塩を含む。
【0065】
上述のように、本発明の組成物は、必要に応じて、Ｄ）１つ以上の許容される賦形剤または担体を含む。一実施形態では、組成物は、Ｄ）１つ以上の許容される賦形剤または担体を含む。適切な賦形剤および／または担体、それらの量ならびにそれらの調製のための実験的プロセス条件は、調製される製剤の技術分野および種類に従って当業者によって容易に決定され得る。
【0066】
一実施形態では、本発明の組成物は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸またはその混合物の治療有効量、式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールまたはそれらの混合物の治療有効量、１つ以上の麻酔剤、および
必要に応じて、１つ以上の薬学的に許容され得る賦形剤または担体の治療有効量を含む「医薬組成物」である。「医薬組成物」という用語は、医学的使用を伴う医薬技術における使用に好適な組成物を指す。「治療有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、投与された場合に、対処される疾患の症状の１つ以上の発症を防止するか、または処置するか、治癒するか、またはある程度緩和するのに十分な、架橋ヒアルロン酸、ポリグリセロール、および麻酔剤の量を指す。本発明に従って投与される架橋ヒアルロン酸、ポリグリセロール、および麻酔剤の治療有効量の用量は、投与される化合物、投与経路、処置される特定の状態、および同様の考慮事項を含む、症例を取り巻く特定の状況によって当然決定される。本発明の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含むことができる。「薬学的に許容される賦形剤または担体」という用語は、医薬用途で組成物を調製するための医薬技術における使用に好適な賦形剤または担体を指す。
必要に応じて、１つ以上の薬学的に許容され得る賦形剤または担体の治療有効量を含む「医薬組成物」である。「医薬組成物」という用語は、医学的使用を伴う医薬技術における使用に好適な組成物を指す。「治療有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、投与された場合に、対処される疾患の症状の１つ以上の発症を防止するか、または処置するか、治癒するか、またはある程度緩和するのに十分な、架橋ヒアルロン酸、ポリグリセロール、および麻酔剤の量を指す。本発明に従って投与される架橋ヒアルロン酸、ポリグリセロール、および麻酔剤の治療有効量の用量は、投与される化合物、投与経路、処置される特定の状態、および同様の考慮事項を含む、症例を取り巻く特定の状況によって当然決定される。本発明の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含むことができる。「薬学的に許容される賦形剤または担体」という用語は、医薬用途で組成物を調製するための医薬技術における使用に好適な賦形剤または担体を指す。
【0067】
一実施形態では、組成物は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸またはその混合物の化粧品的に有効な量、式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールまたはそれらの混合物の化粧品的に有効な量、１つ以上の麻酔剤、および
必要に応じて、１つ以上の化粧品的に許容される賦形剤または担体の化粧品的に有効な量を含む化粧品組成物である。本発明の化粧品組成物は、その外観を改善するため、または皮膚、爪もしくは毛髪を美化する、保つ、コンディショニングする、クレンジングする、着色するかもしくは保護するために適切な量（「化粧品的に有効な量」）を身体に適用するように設計される。Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９２，ｐｐ．５３１；Ａ ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．２００７，ｐｐ．１９０を参照されたい）。したがって、上記化粧品組成物は、非医療用途に形容詞的に使用される。本明細書で互換的に使用される「化粧品的に許容される」または「皮膚科学的に許容される」という用語は、とりわけ、過度の毒性、不適合性、不安定性、アレルギー反応なしにヒトの皮膚と接触して使用するのに好適な賦形剤または担体を指す。
必要に応じて、１つ以上の化粧品的に許容される賦形剤または担体の化粧品的に有効な量を含む化粧品組成物である。本発明の化粧品組成物は、その外観を改善するため、または皮膚、爪もしくは毛髪を美化する、保つ、コンディショニングする、クレンジングする、着色するかもしくは保護するために適切な量（「化粧品的に有効な量」）を身体に適用するように設計される。Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９２，ｐｐ．５３１；Ａ ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．２００７，ｐｐ．１９０を参照されたい）。したがって、上記化粧品組成物は、非医療用途に形容詞的に使用される。本明細書で互換的に使用される「化粧品的に許容される」または「皮膚科学的に許容される」という用語は、とりわけ、過度の毒性、不適合性、不安定性、アレルギー反応なしにヒトの皮膚と接触して使用するのに好適な賦形剤または担体を指す。
【0068】
上記で定義された局所医薬組成物または局所化粧品組成物は、皮膚バリア機能改善剤、水和剤、皮膚軟化剤、乳化剤、増粘剤、保湿剤、ｐＨ調節剤、抗酸化剤、保存剤、ビヒクル、またはそれらの混合物を含むがこれらに限定されない、薬学的または化粧品的に許容される賦形剤であり得る局所投与用の適切な賦形剤または担体を含む。使用される賦形剤または担体は、皮膚に対して親和性を有し、忍容性がよく、安定であり、所望の稠度を与え、適用を容易にするのに十分な量で使用される。さらに、本発明の組成物は、香料、着色剤、および局所製剤に使用するための最新技術で公知の他の成分などの他の成分を含有してもよい。本発明の局所組成物は、溶液、エアロゾルおよび非エアロゾルスプレー、クリーム、粉末、ムース、ローション、ゲル、スティック、軟膏、ペースト、シャンプー、シャワーゲル、ボディーウォッシュまたは洗顔料およびエマルジョンを含むがこれらに限定されないいくつかの形態で製剤化することができる。
【0069】
一実施形態では、医薬組成物または化粧品組成物は注射可能な組成物である。一実施形態では、医薬組成物または化粧品組成物は、筋肉内、皮下、または静脈内投与からなる群から選択される注射可能な組成物である。一実施形態では、本発明の医薬組成物または化粧品組成物は、体内への注射、注入、または移植に好適な非経口組成物の形態である。上記で定義された非経口組成物は、滅菌され、発熱物質を含まず、それらは、溶液、エマルジョン、もしくは懸濁液などの液体の形態であってもよく、または使用前に公的に希釈された単回用量もしくは複数回用量の容器のいずれかにパッケージングされた固体形態であってもよい。非経口組成物は、非経口投与のための適切な賦形剤または担体を含むことができ、非経口投与のための適切な賦形剤または担体は、溶媒、懸濁化剤、緩衝剤、調製物を血液と等張にする物質、安定剤、または抗菌性保存剤を含むがこれらに限定されない薬学的または化粧品賦形剤であり得る。賦形剤の添加は最小限に保たれるべきである。賦形剤が使用される場合、それらは、ポリマーおよび／もしくは活性剤の安定性、生物学的利用能、安全性、もしくは有効性に悪影響を及ぼすべきではなく、または毒性もしくは過度の局所刺激を引き起こすべきではない。剤形の成分のいずれかの間にいかなる不適合性も存在すべきではない。
【0070】
実験のセクションで実証されているように、本発明の組成物は、物理的特性（レオロジー）および化学的特性（遊離ポリグリセロールおよびＰＰＥ架橋ヒドロゲルの濃度）が向上して、本発明のヒドロゲルマトリックス組成物からの脂溶性（活性）形態の局所麻酔薬の量およびそのより速い放出が予想外に改善され、局所麻酔薬の開始の低減をもたらす。
【0071】
一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は、１０～１５００Ｐａ、特に、１．０Ｈｚで測定して３０～７００Ｐａの貯蔵弾性率Ｇ´を有する組成物である。
【0072】
本発明の第１の態様の調製方法も本発明の一部である。
【0073】
一実施形態では、本発明の組成物の調製方法は、
－組成物が（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ）ヒアルロン酸を式（Ｖ）の化合物
（Ｖ）
（式中、
各Ｒ７は、Ｒ２およびＲ８からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ８は
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
と架橋させる工程と、
（ｉｉ）（Ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸および（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（ｉ）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ）必要に応じて、工程（ｉｉ）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ）必要に応じて、工程（ｉｉｉ）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ´）ヒアルロン酸を式（ＶＩ）の化合物
（ＶＩ）
（式中、
各Ｒ７は、Ｒ２およびＲ８からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ８は
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
と架橋させる工程と、
（ｉｉ´）（Ａ）式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸および（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（ｉ´）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ´）必要に応じて、工程（ＩＩ´）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ´）必要に応じて、工程（ｉｉｉ´）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、
ｉ´´）ヒアルロン酸を式（Ｖ）
（Ｖ）
および式（ＶＩ）
（ＶＩ）
の化合物
（式中、
各Ｒ７は、Ｒ２およびＲ８からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ８は、
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
を含む混合物と架橋させる工程と、
（ｉｉ´´）（Ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、ならびに（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（Ｉ´´）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ´´）必要に応じて、工程（ｉｉ´´）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ´´）必要に応じて、工程（ｉｉｉ´´）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができる組成物を含む。
－組成物が（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ）ヒアルロン酸を式（Ｖ）の化合物
【化12】
（Ｖ）
（式中、
各Ｒ７は、Ｒ２およびＲ８からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ８は
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
と架橋させる工程と、
（ｉｉ）（Ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸および（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（ｉ）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ）必要に応じて、工程（ｉｉ）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ）必要に応じて、工程（ｉｉｉ）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ´）ヒアルロン酸を式（ＶＩ）の化合物
【化13】
（ＶＩ）
（式中、
各Ｒ７は、Ｒ２およびＲ８からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ８は
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
と架橋させる工程と、
（ｉｉ´）（Ａ）式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸および（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（ｉ´）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ´）必要に応じて、工程（ＩＩ´）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ´）必要に応じて、工程（ｉｉｉ´）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、
ｉ´´）ヒアルロン酸を式（Ｖ）
【化14】
（Ｖ）
および式（ＶＩ）
【化15】
（ＶＩ）
の化合物
（式中、
各Ｒ７は、Ｒ２およびＲ８からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ８は、
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
を含む混合物と架橋させる工程と、
（ｉｉ´´）（Ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、ならびに（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（Ｉ´´）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ´´）必要に応じて、工程（ｉｉ´´）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ´´）必要に応じて、工程（ｉｉｉ´´）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができる組成物を含む。
【0074】
一実施形態では、本発明の組成物の調製方法は、
－組成物が（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（ｖ）の化合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ´）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（ＶＩ）の化合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、
Ｉ´´）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（Ｖ）の化合物および式（ＶＩ）の化合物を含む混合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができる組成物を含む。
－組成物が（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（ｖ）の化合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ´）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（ＶＩ）の化合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、
Ｉ´´）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（Ｖ）の化合物および式（ＶＩ）の化合物を含む混合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができる組成物を含む。
【0075】
一実施形態では、本発明の組成物の調製方法は、
－組成物が（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉｉ）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ）の後に、あるいは工程（ｉｖ）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ）を含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉｉ´）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ´）の後に、あるいは工程（ｉｖ´）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ´）を含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、工程（ｉｉ´´）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ´´）の後に、あるいは工程（ｉｖ´´）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ´´）を含む方法によって得ることができる組成物を含む。
－組成物が（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉｉ）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ）の後に、あるいは工程（ｉｖ）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ）を含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉｉ´）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ´）の後に、あるいは工程（ｉｖ´）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ´）を含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、工程（ｉｉ´´）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ´´）の後に、あるいは工程（ｉｖ´´）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ´´）を含む方法によって得ることができる組成物を含む。
【0076】
一実施形態では、本発明の組成物の調製方法は、
組成物が、（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含み、本方法がｉ）ヒアルロン酸を式（Ｖ）の化合物と架橋させる工程を含む場合、式（Ｖ）の化合物が、
ａ）１，３－グリセロールジグリシジルエーテルを含有するアルカリ溶液を準備する工程と、
ｂ）工程ａ）で得られた溶液を１０～８０℃の温度で１分～３０日間維持する工程とを含む方法によって得られるか、
あるいは、
組成物が（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含み、本方法がＩ´）ヒアルロン酸を式（ＶＩ）の化合物と架橋させる工程を含む場合、式（ＶＩ）の化合物が、
ｃ）１，２－グリセロールジグリシジルエーテルを含有するアルカリ溶液を準備する工程と、
ｄ）工程ｃ）で得られた溶液を１０～８０℃の温度で１分～３０日間維持する工程とを含む方法によって得られるか、
あるいは、
組成物が（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含み、本方法がｉ´´）ヒアルロン酸を式（Ｖ）の化合物および式（ＶＩ）の化合物を含む混合物と架橋させる工程を含む場合、式（Ｖ）の化合物が、
ａ）１，３－グリセロールジグリシジルエーテルを含有するアルカリ溶液を準備する工程と、
ｂ）工程ａ）で得られた溶液を１０～８０℃の温度で１分～３０日間維持する工程とを含む方法によって得られ、
式（ＶＩ）の化合物が、
ｃ）１，２－グリセロールジグリシジルエーテルを含有するアルカリ溶液を準備する工程と、
ｄ）工程ｃ）で得られた溶液を１０～８０℃の温度で１分～３０日間維持する工程とを含み、
特に、
工程ａ）において、アルカリ溶液が、１～５０重量パーセントの１，３－グリセロールジグリシジルエーテルを含み、
工程ｃ）において、アルカリ溶液が、１～５０重量パーセントの１，２－グリセロールジグリシジルエーテルを含む方法によって得られる、方法である。
組成物が、（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含み、本方法がｉ）ヒアルロン酸を式（Ｖ）の化合物と架橋させる工程を含む場合、式（Ｖ）の化合物が、
ａ）１，３－グリセロールジグリシジルエーテルを含有するアルカリ溶液を準備する工程と、
ｂ）工程ａ）で得られた溶液を１０～８０℃の温度で１分～３０日間維持する工程とを含む方法によって得られるか、
あるいは、
組成物が（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含み、本方法がＩ´）ヒアルロン酸を式（ＶＩ）の化合物と架橋させる工程を含む場合、式（ＶＩ）の化合物が、
ｃ）１，２－グリセロールジグリシジルエーテルを含有するアルカリ溶液を準備する工程と、
ｄ）工程ｃ）で得られた溶液を１０～８０℃の温度で１分～３０日間維持する工程とを含む方法によって得られるか、
あるいは、
組成物が（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含み、本方法がｉ´´）ヒアルロン酸を式（Ｖ）の化合物および式（ＶＩ）の化合物を含む混合物と架橋させる工程を含む場合、式（Ｖ）の化合物が、
ａ）１，３－グリセロールジグリシジルエーテルを含有するアルカリ溶液を準備する工程と、
ｂ）工程ａ）で得られた溶液を１０～８０℃の温度で１分～３０日間維持する工程とを含む方法によって得られ、
式（ＶＩ）の化合物が、
ｃ）１，２－グリセロールジグリシジルエーテルを含有するアルカリ溶液を準備する工程と、
ｄ）工程ｃ）で得られた溶液を１０～８０℃の温度で１分～３０日間維持する工程とを含み、
特に、
工程ａ）において、アルカリ溶液が、１～５０重量パーセントの１，３－グリセロールジグリシジルエーテルを含み、
工程ｃ）において、アルカリ溶液が、１～５０重量パーセントの１，２－グリセロールジグリシジルエーテルを含む方法によって得られる、方法である。
【0077】
一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物の調製方法は：－組成物が（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉ）の後に追加の洗浄工程（ｖｉ）をさらに含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉ´）の後に追加の洗浄工程（ｖｉ´）をさらに含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、工程（ｉ´´）の後に追加の洗浄工程（ｖｉ´´）をさらに含む方法によって得ることができる組成物を含む。
あるいは、
－組成物が（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉ´）の後に追加の洗浄工程（ｖｉ´）をさらに含む方法によって得ることができる組成物、
あるいは、
－組成物が（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、工程（ｉ´´）の後に追加の洗浄工程（ｖｉ´´）をさらに含む方法によって得ることができる組成物を含む。
【0078】
一実施形態では、工程（ｖｉ）、あるいは工程（ｖｉ´）、あるいは工程（ｖｉ´´）は、６．５～７．４のｐＨを得るためにこのような適切量の酸性水溶液を添加することによって実施され、組成物中の式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）のポリグリセロールまたはそれらの混合物の濃度は０．４５～２５ｍｇ／ｍＬである。適切な酸性水溶液の例には、以下に限定されないが、塩酸、硫酸、オルトリン酸、ホウ酸、硝酸などの強および弱無機（鉱）酸、および酢酸、乳酸、ギ酸、クエン酸、シュウ酸、尿酸、リンゴ酸、酒石酸、またはそれらの混合物などの強および弱有機酸が含まれる。一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物の調製方法の上記および下記のすべての実施形態は、追加の工程（ｖｉ）、あるいは追加の工程（ｖｉ´）、あるいは工程（ｖｉ´´）をさらに含む。
【0079】
一実施形態では、工程ｉ）、あるいは工程ｉ´）、あるいは工程ｉ´´）は、１０～５０℃、特に約３０℃の温度で実施される。一実施形態では、工程ｉ）、あるいは工程ｉ´）、あるいは工程ｉ´´）は、１～４８時間、特に約８時間実施される。
【0080】
一実施形態では、工程ｉｉ）、あるいは工程ｉｉ´）、あるいは工程ｉｉ´´）は、１０～５０℃の温度、特に約２５℃で実施される。一実施形態では、工程ｉｉ）、あるいは工程ｉｉ´）、あるいは工程ｉｉ´´）は、１～８時間、特に約２時間実施される。
【0081】
一実施形態では、１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）の場合、方法は、工程ｉｉｉ）、あるいは工程ｉｉｉ´）、あるいは工程ｉｉｉ´´）を含む。一実施形態では、１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）の場合、方法は、１～８時間、特に約２時間実施される工程ｉｉｉ）、あるいは工程ｉｉｉ´）、あるいは工程ｉｉｉ´´）を含む。
【0082】
一実施形態では、本方法は、滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。一実施形態では、本方法は、１２０～１３５℃、特に１２１～１３０℃の温度で実施される滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。一実施形態では、本方法は、滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。一実施形態では、本方法は、１２１～１２６℃の温度で実施される滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。一実施形態では、本方法は、滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。一実施形態では、本方法は、１分～２０分間、特に３分～１５分間実施される滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。一実施形態では、本方法は、滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。一実施形態では、本方法は、１０分～１５分間実施される滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。一実施形態では、本方法は、滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。一実施形態では、本方法は、ａ１２１℃で１５分間実施される滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。一実施形態では、本方法は、滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。一実施形態では、本方法は、ａ１２６℃で１０分間実施される滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。一実施形態では、本方法は、滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。一実施形態では、本方法は、１３４℃で３分間実施される滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）を含む。
【0083】
滅菌工程は、最新技術で周知の方法に従って実施することができる。一実施形態では、滅菌工程は、濾過、オートクレーブ、加熱、照射、およびそれらの組合せからなる群から選択される方法によって実施され、好ましくは、滅菌工程は、オートクレーブ内で滅菌された蒸気によって実施され、特に、ＥＮ ＩＳＯ １７６６５－１（Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅａｌｔｈ ｃａｒｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ－Ｍｏｉｓｔ ｈｅａｔ Ｐａｒｔ １：ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｏｕｔｉｎｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｖｉｃｅ（例えば、１２１℃で１５分）に報告されている薬局方で認可された手順に従う。一実施形態では、本方法は、組成物をコンディショニングすること、特に、本発明の組成物をシリンジに充填することを含む、滅菌工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）の前に以前の工程をさらに含む。このようにして工程ｉｖ）、あるいは工程ｉｖ´）、あるいは工程ｉｖ´´）の後に得られる滅菌組成物は、すぐに使用できる滅菌注射可能な組成物であるので有利である。
【0084】
一実施形態では、本方法は、工程ｖ）、あるいは工程ｖ´）、あるいは工程ｖ´´）を含む。
【0085】
一実施形態では、工程ａ）あるいは工程ｃ）のアルカリ溶液は、生理学的に許容されるアルカリ金属またはアンモニウムの水酸化物（Ｎａ、Ｋ）、アルカリ土類金属の水酸化物（Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ）、生理学的に許容される重金属の水酸化物（Ｆｅ、Ａｌ、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｓｅ、Ｚｎ、Ｃｒ、Ｎｉ）、生理学的に許容される第四級アンモニウムカチオンの水酸化物、生理学的に許容される重金属または炭酸水素アンモニウム（ＮＨ４、Ｆｅ、Ａｌ、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｓｅ、Ｚｎ、Ｃｒ、Ｎｉ）およびそれらの混合物からなる群から選択される塩基を含む。
【0086】
「生理学的に許容される」という用語は、細胞、細胞培養物、組織または生物などの生物系と適合する非毒性物質を指す。好ましくは、生体系は、哺乳動物、特にヒトなどの生物である。
【0087】
一実施形態では、工程ａ）あるいは工程ｃ）のアルカリ溶液は、水酸化カリウム（ＫＯＨ）、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）、水酸化アンモニウムおよびそれらの混合物からなる群から選択されるアルカリ金属またはアンモニウムの水酸化物、特に水酸化ナトリウムを含む。
【0088】
一実施形態では、工程ａ）または代替的に工程ｃ）のアルカリ溶液は、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、水酸化ストロンチウムおよびそれらの混合物からなる群から選択されるアルカリ土類金属の水酸化物を含む。
【0089】
一実施形態では、工程ａ）あるいは工程ｃ）のアルカリ溶液は、水酸化鉄、水酸化アルミニウム、水酸化コバルト、水酸化セレン、水酸化スズ、水酸化クロム、水酸化ニッケルおよびそれらの混合物からなる群から選択される重金属の水酸化物を含む。
【0090】
一実施形態では、工程ａ）あるいは工程ｃ）のアルカリ溶液は、式ＨＯＮＲ６Ｒ７Ｒ８Ｒ９の第四級アンモニウム水酸化物を含み、式中、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９のうちの各１つは、（Ｃ１～Ｃ８）アルキルからなる群から独立して選択され、あるいはＲ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ９のうちの２つは（Ｃ５～Ｃ６）シクロアルキル環を形成する。
【0091】
一実施形態では、工程ａ）あるいは工程ｃ）のアルカリ溶液は、炭酸水素鉄、炭酸水素アルミニウム、炭酸水素コバルト、炭酸水素銅、炭酸水素セレン、炭酸水素亜鉛、炭酸水素クロム、炭酸水素ニッケル、炭酸水素アンモニウムおよびそれらの混合物からなる群から選択される重金属またはアンモニウムの炭酸水素塩、特に炭酸水素ナトリウムを含む。
【0092】
一実施形態では、工程ａ）あるいは工程ｃ）のアルカリ溶液は、１～５０重量パーセントの１，３－ＧＤＥあるいは１，２－ＧＤＥを含む。一実施形態では、工程ａ）あるいは工程ｃ）のアルカリ溶液は、アルカリ水酸化物を含み、１～５０重量パーセントの１，３－ＧＤＥあるいは１，２－ＧＤＥを含む。一実施形態では、工程ａ）あるいは工程ｃ）のアルカリ溶液は、水酸化カリウム（ＫＯＨ）、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）およびそれらの混合物からなる群から選択されるアルカリ水酸化物を含み、１～５０重量パーセントの１，３－ＧＤＥあるいは１，２－ＧＤＥを含む。一実施形態では、工程ａ）あるいは工程ｃ）のアルカリ溶液は、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）を含み、１～５０重量パーセントの１，３－ＧＤＥあるいは１，２－ＧＤＥを含む。１，３－ＧＤＥおよび１，２－ＧＤＥは、最新技術で以前に開示されており、市販されている（実験セクションを参照されたい）。
【0093】
一実施形態では、本発明の方法の工程ａ）あるいは工程ｃ）は室温で実施される。「室温」という用語は、約２５～３５℃の温度を指す。一実施形態では、本発明の方法の工程ａ）あるいは工程ｃ）は溶媒の存在下で実施される。一実施形態では、本発明の方法の工程ａ）あるいは工程ｃ）は、水、（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－ＣＯ－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル、（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－ＣＯ－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ４）アルキル、（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－ＣＮ、およびそれらの混合物からなる群から選択される溶媒の存在下で実施される。一実施形態では、本発明の方法の工程ａ）あるいは工程ｃ）は、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、アセトン、アセトニトリル、酢酸エチルおよびそれらの混合物からなる群から選択される溶媒の存在下で実施され、特に、溶媒は水である。
【0094】
「アルキル」という用語は、明細書または特許請求の範囲で指定された数の炭素原子を含有する飽和直鎖または分岐炭化水素鎖を指す。例としては、とりわけ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチルおよびｔｅｒｔ－ブチルの基が挙げられる。
【0095】
一実施形態では、工程ｂ）あるいは工程ｄ）は、１，３－ＧＤＥあるいは１，２－ＧＤＥを、１０～８０℃の温度にＧＤＥの自己重合が起こる１分～３０日間供することによって実施される。
【0096】
一実施形態では、工程ｂ）あるいは工程ｄ）は、１，３－ＧＤＥあるいは１，２－ＧＤＥを、５０～８０℃の範囲の温度に１分～５００分間供することによって実施される。一実施形態では、工程ｂ）あるいは工程ｄ）は、１，３－ＧＤＥあるいは１，２－ＧＤＥを、５０～８０℃の範囲の温度に５分～６０分間供することによって実施される。
【0097】
一実施形態では、工程ｂ）あるいは工程ｄ）は、１，３－ＧＤＥあるいは１，２－ＧＤＥを、１０～４０℃の範囲の温度に１日～３０日間供することによって実施される。一実施形態では、工程ｂ）あるいは工程ｄ）は、１，３－ＧＤＥあるいは１，２－ＧＤＥを、１０～４０℃の範囲の温度に２日～７日間供することによって実施される。
【0098】
上記で定義された方法によって得ることができる本発明の第１の態様の組成物も本発明の一部である。本発明の目的のために、「得ることができる」、「得られた」という表現および同等の表現は互換的に使用され、いずれの場合も、「得ることができる」という表現は「得られた」という表現を包含する。調製方法および組成物自体について上に開示されているすべての実施形態は、本発明の方法によって得ることができる組成物にも適用される。
【0099】
本発明の第１の態様の組成物の使用も本発明の一部である。
【0100】
本発明の第１の態様の組成物は、医薬分野で使用することができる。一実施形態では、本発明の組成物は、治療に使用するための上記で定義された医薬組成物である。一実施形態では、本発明の組成物は、ヒアルロン酸の欠乏および／または欠損を伴う疾患または状態の処置に使用するための上記で定義された医薬組成物である。一実施形態では、本発明の組成物は、変形性関節症、顔面および身体の低体積、顔面および身体の非対称性などの関節および骨の疾患からなる群から選択されるヒアルロン酸の欠乏および／または欠損を伴う疾患または状態；創傷治癒、網膜剥離または他の眼の損傷、組織および粘膜の炎症、耳および副鼻腔の感染症、ならびに組織および粘膜の菲薄化に伴って生じる灼熱感、かゆみ、および痛みの処置に使用するための上記で定義された医薬組成物である。
【0101】
この態様は、医薬を調製するための上記で定義された本発明の第１の態様の医薬組成物の使用として製剤化することもできる。本発明はまた、ヒアルロン酸の欠乏および／または欠損を伴う疾患または状態、例えば上述のものに罹患しているかまたは罹患しやすい哺乳動物の処置方法に関する。この態様は、ヒアルロン酸の欠乏および／または欠損を伴う疾患または状態、例えば上述のものの処置用医薬を調製するための本発明の医薬組成物の使用として製剤化することもできる。
【0102】
本発明の第１の態様の組成物は、化粧品分野で使用することができる。一実施形態では、本発明の組成物は、スキンケア剤として有用な上記で定義された化粧品組成物である。「スキンケア剤」という用語は、以下の症状：粗さ、はがれ、脱水、引き締まり、ひび割れ、および弾性の欠如のうちの少なくとも１つを改善することができる薬剤を包含する一実施形態では、本発明の組成物は、スキンケア剤として皮膚充填剤（軟組織増強剤としても知られる）として有用な上記で定義された化粧品組成物である。
【0103】
担体としての本発明の第１の態様の組成物の使用も本発明の一部である。一実施形態では、本発明の第１の態様の組成物は薬物送達系、特に、薬学的有効成分、診断剤、化粧品化合物、ペプチド、タンパク質、抗体、ワクチン、ポリヌクレオチド、ビタミン、抗酸化剤、および遺伝子の送達系である。
【0104】
本明細書および特許請求の範囲を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語およびこの語の変形は、他の技術的特徴、添加剤、成分または工程を排除することを意図しない。さらに、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」の場合を包含する。本発明のさらなる目的、利点および特徴は、説明を検討すると当業者に明らかになるか、または本発明の実施によって習得され得る。以下の実施例は例示として提供され、それらは本発明を限定することを意図するものではない。さらに、本発明は、本明細書に記載の特定の好ましい実施形態のすべての可能な組合せを網羅する。
【実施例】
【0105】
略語のリスト
ＨＡ：ヒアルロン酸
ＧＡＧ：グリコサミノグリカン
Ｃ．Ｄ．：架橋度
ＧｌｃＡ：Ｄ－グルクロン酸
ＧｌｃＮＡｃ：Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミン
ＥＣＭ：細胞外マトリックス
ＨＹＡＬ：ヒアルロニダーゼ酵素
ＩＡ：炎症性関節炎
ＢＤＤＥ：１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル
ＧＤＥ：１，３－グリセロールジグリシジルエーテル
ＰＰＥ：ポリグリセロールジグリシジルエーテル
ＦＤＡ：食品医薬品局
ＥＥＷ：エポキシ当量
ＧＣ／ＭＳ：質量検出器と連結したガスクロマトグラフィー
ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ：紫外線および質量検出器と連結したサイズ排除クロマトグラフィー
ＵＶ－Ｖｉｓ：紫外可視分光法
ＰＢＳ：リン酸緩衝液
ＩＰＮ：相互浸透ネットワーク
Ｍｗ：重量平均分子量；
Ｍｎ：数平均分子量；
ＬＡ：局所麻酔薬；
Ｇｌｙ：グリセロール
Ｍａｎｎ：マンニトール
ＬＩＤＯ：塩酸リドカイン；
ＡＲＴＩ：塩酸アルチカイン；
ＭＥＰＩ：塩酸メピバカイン
ＨＡ：ヒアルロン酸
ＧＡＧ：グリコサミノグリカン
Ｃ．Ｄ．：架橋度
ＧｌｃＡ：Ｄ－グルクロン酸
ＧｌｃＮＡｃ：Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミン
ＥＣＭ：細胞外マトリックス
ＨＹＡＬ：ヒアルロニダーゼ酵素
ＩＡ：炎症性関節炎
ＢＤＤＥ：１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル
ＧＤＥ：１，３－グリセロールジグリシジルエーテル
ＰＰＥ：ポリグリセロールジグリシジルエーテル
ＦＤＡ：食品医薬品局
ＥＥＷ：エポキシ当量
ＧＣ／ＭＳ：質量検出器と連結したガスクロマトグラフィー
ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ：紫外線および質量検出器と連結したサイズ排除クロマトグラフィー
ＵＶ－Ｖｉｓ：紫外可視分光法
ＰＢＳ：リン酸緩衝液
ＩＰＮ：相互浸透ネットワーク
Ｍｗ：重量平均分子量；
Ｍｎ：数平均分子量；
ＬＡ：局所麻酔薬；
Ｇｌｙ：グリセロール
Ｍａｎｎ：マンニトール
ＬＩＤＯ：塩酸リドカイン；
ＡＲＴＩ：塩酸アルチカイン；
ＭＥＰＩ：塩酸メピバカイン
【0106】
材料
Ａｌｔｅｒｇｏｎ ＩｔａｌｙからのＳＨＹＡＬＴ超純粋ヒアルロン酸ナトリウム（ヒアルロン酸）。
Ａｌｔｅｒｇｏｎ ＩｔａｌｙからのＳＨＹＡＬＴ超純粋ヒアルロン酸ナトリウム（ヒアルロン酸）。
【0107】
１，３－ビス（２－オキシラニルメトキシ）－２－プロパノールは、以下の名称、商品名、同義語および略語：１，３－ビス（オキシラン－２－イルメトキシ）プロパン－２－オール；２－プロパノール、１，３－ビス（オキシラニルメトキシ）；グリセロール１，３－ジグリシジルエーテル；Ｄｅｎａｃｏｌ ＥＸ－３１３、ＭＷ＝２０４Ｄａ、ＥＥＷ＝１４１ｇ／ｅｑ（Ｎａｇａｓｅ Ｃｈｅｍｔｅｘ）；１，３－グリセロールジグリシジルエーテル、ＭＷ＝２０４Ｄａ（Ｍｅｒｃｋ）；および１，３－ＧＤＥでも知られており、以下の構造：
を有する。
２，３－ビス（２－オキシラニルメトキシ）－１－プロパノールは、以下の名称、商品名、同義語および略語２，３－ビス（オキシラン－２－イルメトキシ）プロパン－１－オール：１－プロパノール、１，２－ビス（オキシラニルメトキシ）；グリセロール１，２－ジグリシジルエーテル；１，２－グリセロールジグリシジルエーテル、ＭＷ＝２０４Ｄａ（Ｍｅｒｃｋ）；１，２－ＧＤＥでも知られており、以下の構造：
を有する。
１，３－ＧＤＥと１，２－ＧＤＥとの混合物も、以下の商標名：Ｄｅｎａｃｏｌ ＥＸ－３１４、ＭＷ＝２６０Ｄａ、ＥＥＷ＝１４４ｇ／ｅｑ（Ｎａｇａｓｅ Ｃｈｅｍｔｅｘ）でも市販されている。
【化16】
を有する。
２，３－ビス（２－オキシラニルメトキシ）－１－プロパノールは、以下の名称、商品名、同義語および略語２，３－ビス（オキシラン－２－イルメトキシ）プロパン－１－オール：１－プロパノール、１，２－ビス（オキシラニルメトキシ）；グリセロール１，２－ジグリシジルエーテル；１，２－グリセロールジグリシジルエーテル、ＭＷ＝２０４Ｄａ（Ｍｅｒｃｋ）；１，２－ＧＤＥでも知られており、以下の構造：
【化17】
を有する。
１，３－ＧＤＥと１，２－ＧＤＥとの混合物も、以下の商標名：Ｄｅｎａｃｏｌ ＥＸ－３１４、ＭＷ＝２６０Ｄａ、ＥＥＷ＝１４４ｇ／ｅｑ（Ｎａｇａｓｅ Ｃｈｅｍｔｅｘ）でも市販されている。
【0108】
以下の化合物をＭｅｒｃｋから購入した：ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＭＷ＝２０２Ｄａ；水酸化ナトリウムペレット（ＮａＯＨ）；塩酸３７％（ＨＣｌ）；塩化ナトリウム粉末（ＮａＣｌ）；塩化カリウム粉末（ＫＣｌ）；リン酸８５％（Ｈ３ＰＯ４）；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）ペレット；蒸留水（Ｈ２Ｏ）；グリセロール；マンニトール；塩酸リドカイン（ＬＩＤＯ）；塩酸アルチカイン（ＡＲＴＩ）；塩酸メピバカイン（ＭＥＰＩ）。
【0109】
分析方法
中性画分および局所麻酔薬の総量を決定するための定量方法を、ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計によって評価した。半揮発性化合物の測定のための定量的方法を、局所麻酔薬の中性画分についてＧＣ／ＭＳクロマトグラフィー機器によって評価した。ＬＣは、使用されるカラムまたは移動相（水性または有機）の化学的性質に応じて、歴史的に高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）などの異なる頭字語を使用して呼ばれる液体クロマトグラフィー技術を含む方法を指す。国際純正応用化学連合（ＩＵＰＡＣ）は、この種の実験にはＳＥＣという用語を使用することを好む。検出および定量される分析物の化学的性質に応じて、カラムと連結したＵｌｔｒａ Ｖｉｏｌｅｔ（ＵＶ）、ＵＶ可視（ＵＶ－ｖｉｓ）、質量（ＭＳ）、屈折率（ＲＩ）、光散乱（ＬＳ）などの異なる検出器の組み合わせも可能である。不揮発性化合物の測定のための定量的方法を、局所麻酔薬の総量についてＵＶ可視および質量検出器ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳクロマトグラフィー機器と連結したサイズ排除クロマトグラフィーによって評価した。平均重量平均分子量（Ｍｗ）、数平均分子量（Ｍｎ）および多分散性（Ｍｗ／Ｍｎ）の測定のための定量的方法を、光散乱検出器ＳＥＣ／ＬＳと連結したサイズ排除クロマトグラフィーによって評価した。エポキシ当量（ＥＥＷ）の測定のための定量的方法は、超音波支援滴定によって評価した。ｐＨを測定するための定量的方法は、ヒドロゲルに直接浸漬した電極を備えたｐＨ計の直接読み取りによって計算した。浸透圧を測定するための定量的方法は、ヒドロゲルに直接浸漬したプローブを備えた浸透圧計の直接読み取りによって計算した。
中性画分および局所麻酔薬の総量を決定するための定量方法を、ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計によって評価した。半揮発性化合物の測定のための定量的方法を、局所麻酔薬の中性画分についてＧＣ／ＭＳクロマトグラフィー機器によって評価した。ＬＣは、使用されるカラムまたは移動相（水性または有機）の化学的性質に応じて、歴史的に高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）などの異なる頭字語を使用して呼ばれる液体クロマトグラフィー技術を含む方法を指す。国際純正応用化学連合（ＩＵＰＡＣ）は、この種の実験にはＳＥＣという用語を使用することを好む。検出および定量される分析物の化学的性質に応じて、カラムと連結したＵｌｔｒａ Ｖｉｏｌｅｔ（ＵＶ）、ＵＶ可視（ＵＶ－ｖｉｓ）、質量（ＭＳ）、屈折率（ＲＩ）、光散乱（ＬＳ）などの異なる検出器の組み合わせも可能である。不揮発性化合物の測定のための定量的方法を、局所麻酔薬の総量についてＵＶ可視および質量検出器ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳクロマトグラフィー機器と連結したサイズ排除クロマトグラフィーによって評価した。平均重量平均分子量（Ｍｗ）、数平均分子量（Ｍｎ）および多分散性（Ｍｗ／Ｍｎ）の測定のための定量的方法を、光散乱検出器ＳＥＣ／ＬＳと連結したサイズ排除クロマトグラフィーによって評価した。エポキシ当量（ＥＥＷ）の測定のための定量的方法は、超音波支援滴定によって評価した。ｐＨを測定するための定量的方法は、ヒドロゲルに直接浸漬した電極を備えたｐＨ計の直接読み取りによって計算した。浸透圧を測定するための定量的方法は、ヒドロゲルに直接浸漬したプローブを備えた浸透圧計の直接読み取りによって計算した。
【0110】
要約すると、液体クロマトグラフィーによる測定方法を特定するために、国際純正応用化学連合（ＩＵＰＡＣ）の命名法が使用されている。したがって、本発明の目的のために、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）という用語は同等であると見なされ、明確化のためにそれらのすべてをサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）と呼んでいる。
１．局所麻酔薬およびポリグリセロールポリグリシジルエーテル（ＰＰＥ）架橋ヒアルロン酸コンジュゲート
１．１．ポリグリセロールポリグリシジルエーテル（ＰＰＥ）
１．１．出発物質として１，３－ＧＤＥを使用
１．局所麻酔薬およびポリグリセロールポリグリシジルエーテル（ＰＰＥ）架橋ヒアルロン酸コンジュゲート
１．１．ポリグリセロールポリグリシジルエーテル（ＰＰＥ）
１．１．出発物質として１，３－ＧＤＥを使用
【0111】
以下に述べる調製プロセスは、１，３－ＧＤＥの供給源としてＮａｇａｓｅから市販されているＤｅｎａｃｏｌ（登録商標）ＥＸ－３１３を使用することによっても実施され得る。それにもかかわらず、これらの方法は、Ｍｅｒｃｋから市販されている１，３－グリセロールジグリシジルエーテルを使用することによって、またはＤｅｎａｃｏｌ（登録商標）ＥＸ－３１３の代わりに１，３－ＤＧＥを含有する混合物である商標Ｄｅｎａｃｏｌ（登録商標）ＥＸ－３１４を用いても実施され得る。
１．１．１．ＰＰＥの調製方法
１．１．１．ＰＰＥの調製方法
【0112】
水酸化ナトリウムペレット（ＮａＯＨ）を水に溶解させて、総溶液重量に基づいて４パーセントのＮａＯＨ（１Ｍ）を含有するアルカリ溶液（溶液Ａ）を形成した。
【0113】
１，３－ＧＤＥ（Ｄｅｎａｃｏｌ（登録商標）ＥＸ－３１３）を溶液Ａの一部に室温で溶解させて、総溶液重量に基づいて１～５０重量パーセントの１，３－ＧＤＥを含有するアルカリ溶液（溶液Ｃ１）を形成した。
【0114】
次いで、溶液Ｃ１を、１，３－ＧＤＥの自己重合が起こる１分～３０日間、１０～８０℃の範囲の制御された温度で反応させて、表１に開示されているポリグリセロールポリグリシジルエーテルを得た（実施例１～５）。
１．１．２．ＰＰＥの特徴付け
１．１．２．ＰＰＥの特徴付け
【0115】
出発ＧＤＥのＥＥＷのパーセンテージとして表されるエポキシ当量として測定して、上記で定義された方法に従って得られたＰＰＥの重量平均分子量（Ｍｗ）および得られたＰＰＥのエポキシ含有量を、それぞれ前述のように光散乱検出器およびＨＣｌによる定量滴定を備えたＧＰＣ機器を使用して、経時的に分析的にモニターした。各分析の前に、１Ｍの塩酸溶液およびＰＢＳを添加してアルカリ触媒を中和し、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル溶液のｐＨを７．０に戻すことによってＧＤＥの自己重合反応を停止した。
【0116】
温度と時間の各組み合わせについて得られたポリグリセロールポリグリシジルエーテル（ＰＰＥ）の平均分子量（ＭＷ）およびＥＥＷの値を表１に報告する。
【0117】
【表1】
【0118】
１．２．局所麻酔薬とＰＰＥ架橋ヒアルロン酸とのコンジュゲート
１．２．１．非滅菌コンジュゲート
１．２．１．１．調製方法
１．２．１．１．１．ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸の調製方法
１．２．１．非滅菌コンジュゲート
１．２．１．１．調製方法
１．２．１．１．１．ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸の調製方法
【0119】
以下に定義する方法に従って、ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸を調製した：
工程Ａ．上に開示された方法に従うＰＰＥ １～５の調製。
工程Ｂ：架橋ヒアルロン酸の調製
工程Ａ．上に開示された方法に従うＰＰＥ １～５の調製。
工程Ｂ：架橋ヒアルロン酸の調製
【0120】
代替案Ｂ１：ヒアルロン酸（ＨＡ）乾燥粉末を溶液Ａの一部に室温（２５℃）で穏やかに溶解させて（または溶液Ｃ３に直接添加して）、総溶液重量に基づいて５～１５重量パーセントの水和ＨＡを含有するアルカリ溶液（溶液Ｂ）を形成した。
【0121】
次いで、溶液Ｃ３を溶液Ｂに添加して、最終溶液中の水酸化物濃度が０．２５～０．７５Ｍの範囲であり、ＨＡとＰＰＥの比が２～１２．５％ｗ／ｗ（ＰＰＥ対乾燥多糖の重量比として表される）のアルカリ溶液を得る。
【0122】
代替案Ｂ２：次いで、溶液Ｃ３を溶液Ｂに添加して、最終溶液中の水酸化物濃度が０．２５～０．７５Ｍの範囲であり、最終溶液中のＨＡの濃度が総重量に対して８～１０重量％の範囲であり、最終溶液中のＰＰＥの濃度が総重量に対して０．２～１重量％の範囲であるアルカリ溶液を得る。乾燥多糖に対するＰＰＥの重量比として表される比は、乾燥多糖に対するＰＰＥの重量比として表される２～４０％ｗ／ｗである。
【0123】
次いで、ヒアルロン酸（ＨＡ）、ＰＰＥおよびＮａＯＨからなる得られたアルカリ溶液を室温で完全に混合する。次いで、均質溶液を２０～５０℃の間の範囲の制御された温度で１～４８時間の期間反応させた。
工程Ｃ：架橋多糖の精製および単離
工程Ｃ：架橋多糖の精製および単離
【0124】
次いで、ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸（ヒドロゲル）を酸性水溶液（１Ｍの塩酸およびＰＢＳ）で４８～１２０時間洗浄し、未反応の物質および副生成物を除去し、アルカリ触媒を中和し、ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸（ヒドロゲル）のｐＨをイオン交換によって６．５～７．４に戻し、以下の表に示すように、ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸ヒドロゲル中のＨＡの所望の最終濃度が１～５０ｍｇ／ｍＬに達するようにした。
【0125】
固定したチェックポイント（すなわち、１２、２４、３６、４８時間）で、ヒドロゲルの一部（１グラム）を取り出し、以下の表２～１５に報告する最終生成物のパラメーターの決定に使用したのと同じ技術を使用して分析した。特に、ＰＰＥ架橋ＨＡ中の遊離ポリグリセロールの濃度をｍｇ／ｍＬで表し、それらの化学構造をＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって評価した。
１．２．１．１．２．ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸への局所麻酔薬の添加
１．２．１．１．２．ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸への局所麻酔薬の添加
【0126】
塩酸塩乾燥粉末としての１つ以上の局所麻酔剤を、リン酸緩衝生理食塩水の一部に室温（２５℃）で穏やかに溶解させて、許容される生理学的ｐＨを有する総溶液重量に対して１～２０重量％の局所麻酔薬を含有する局所麻酔溶液（溶液Ｄ）を形成した。
【0127】
次いで、溶液Ｄを前のセクションで得られた洗浄したＰＰＥ架橋ヒアルロン酸ヒドロゲルに添加して混合し、ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸ヒドロゲル中のＨＡおよび局所麻酔薬（ＬＡ）の所望の最終濃度として、それぞれ、ＨＡについては１～５０ｍｇ／ｍＬおよび局所麻酔薬については０．１～１０ｍｇ／ｍＬに達するようにする。
【0128】
局所麻酔薬を含有するＰＰＥ架橋ヒアルロン酸（ヒドロゲル）は、必要に応じて、３０℃、真空下で脱水させるか、または凍結乾燥（フリーズドライ）させ、その後の使用または分析のために保存することができる。
１．２．２．滅菌コンジュゲート
１．２．２．１．調製方法
１．２．２．滅菌コンジュゲート
１．２．２．１．調製方法
【0129】
局所麻酔薬を含有する前のセクションで得られたＰＰＥ架橋ヒアルロン酸（ヒドロゲル）をシリンジに充填し、ＥＮ ＩＳＯ １７６６５－１，Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅａｌｔｈ ｃａｒｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ－Ｍｏｉｓｔ ｈｅａｔ Ｐａｒｔ １：ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｒｏｕｔｉｎｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ａ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｖｉｃｅ（例えば、１２１℃で１５分）に報告された薬局方で認可された手順に従って、オートクレーブで蒸気滅菌した。
【0130】
局所麻酔薬を含有するＰＰＥ架橋ヒアルロン酸（ヒドロゲル）は、必要に応じて、３０℃、真空下で脱水させるか、または凍結乾燥（フリーズドライ）させ、その後の使用または分析のために保存することができる。
１．２．２．２．ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸の実施例１～７０の特徴付け
１．２．２．２．ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸の実施例１～７０の特徴付け
【0131】
（上記で調製したＰＰＥ架橋ヒアルロン酸および局所麻酔薬（リドカイン、メピバカイン、およびアルチカイン）との滅菌および非滅菌コンジュゲートの化学組成を表２～７に開示する。
【0132】
【表2】
【0133】
【表3】
【0134】
【表4】
【0135】
【表5】
【0136】
【表6】
【0137】
【表7】
【0138】
（ａ）ＰＰＥ架橋ＨＡコンジュゲート中のＨＡの濃度をｍｇ／ｍＬとして表した。
（ｂ）ＰＰＥ架橋ＨＡ中の遊離ポリグリセロールの濃度をｍｇ／ｍＬで表し、それらの化学構造をＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって評価した。
（ｃ）ＧＣ／ＭＳおよびＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって評価した、ＰＰＥ架橋ＨＡ中の（局所麻酔薬）ＬＡの濃度（ｍｇ／ｍＬ）。
（ｄ）非滅菌および１２１℃で１５分間滅菌のいずれかで、ＰＰＥ架橋ＨＡおよび局所麻酔薬を含有するコンジュゲート中の局所麻酔薬Ｂ＋ＢＨ＋（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳを使用して決定）の総量に対する局所麻酔薬の中性形態Ｂ（ＧＣ／ＭＳを使用して決定）のパーセンテージを計算した。
（ｂ）ＰＰＥ架橋ＨＡ中の遊離ポリグリセロールの濃度をｍｇ／ｍＬで表し、それらの化学構造をＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって評価した。
（ｃ）ＧＣ／ＭＳおよびＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって評価した、ＰＰＥ架橋ＨＡ中の（局所麻酔薬）ＬＡの濃度（ｍｇ／ｍＬ）。
（ｄ）非滅菌および１２１℃で１５分間滅菌のいずれかで、ＰＰＥ架橋ＨＡおよび局所麻酔薬を含有するコンジュゲート中の局所麻酔薬Ｂ＋ＢＨ＋（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳを使用して決定）の総量に対する局所麻酔薬の中性形態Ｂ（ＧＣ／ＭＳを使用して決定）のパーセンテージを計算した。
【0139】
要約すると、本発明のＰＰＥ架橋ＨＡコンジュゲートは、表１に報告されるように、異なるＭＷおよびＥＥＷでＰＰＥを使用して得られた。ＰＰＥ架橋ＨＡコンジュゲートは、１５～３０ｍｇ／ｍＬの架橋ヒアルロン酸濃度の範囲であり、これは、上の対応する表に開示される異なる架橋度を示すことを意味する。上述のように、ＰＰＥ架橋ＨＡコンジュゲートは、ＭＷおよび濃度がＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって測定されたポリグリセロールを含有する。さらに、本発明のＰＰＥ架橋ＨＡコンジュゲートは、例えばｐＨ７．４において、ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式からの予測される熱力学的値よりもはるかに高いパーセンテージの中性形態Ｂの局所麻酔薬を含有する。したがって、ＢおよびＢＨ＋の実験濃度を使用してヘンダーソン・ハッセルバルヒ方程式によって計算された固定ｐＨ値での局所麻酔薬について実験的に計算されたｐＫａＳは、熱力学的ｐＫａよりもはるかに低い。
予測されたＢの％と比較したＢの％の実験データを以下の表に要約する。
予測されたＢの％と比較したＢの％の実験データを以下の表に要約する。
【表8】
【0140】
調査したすべての局所審美性について、それらの化学構造に制限はないが、予想外にも、ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸ヒドロゲル中の生物学的に利用可能な中性形態Ｂは、いくつかの要因によるこの形態の安定化のために、予測よりもはるかに高いパーセンテージを示す。実際、本明細書の上記の実験データ（表２～７参照）に示されているように、熱力学的ｐＫａ値（比Ｂ／ＢＨ＋から計算）は、その予測値の２．５％～１０％低下する。換言すれば、本発明のヒドロゲルに含有される各局所麻酔薬について、その実験ｐＫａは、それぞれ予測された熱力学的ｐＫａよりも２．５％～１０％低い。局所麻酔剤の中性の生物学的に利用可能な形態の観点から、Ｂ形態は、最新技術で知られているその値（予測される熱力学的ｐＫａ値）の４０％～１６０％増加する。
【0141】
したがって、いかなる理論にも基づかないが、中性形態Ｂの安定化は、架橋剤として使用される超分岐ＰＰＥの両親媒性特性、その分子量および架橋度、天然加水分解に由来する遊離ポリグリセロールの濃度および分子量と、これらの因子間の相乗効果による複雑な関係で相関しているようである。
２．１．３．局所麻酔剤とＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸との比較コンジュゲート（比較例７１～１５０）
２．１．３．局所麻酔剤とＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸との比較コンジュゲート（比較例７１～１５０）
【0142】
比較コンジュゲートＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸および局所麻酔薬は、ＰＰＥの代わりにＢＤＤＥから調製され、こうして得られたコンジュゲートにグリセロールまたはマンニトールをさらに添加したものである。
２．１．３．１．調製方法
２．１．３．１．調製方法
【0143】
水酸化ナトリウムペレット（ＮａＯＨ）を水に溶解させて、総溶液重量に基づいて４パーセントのＮａＯＨ（１Ｍ）を含有するアルカリ溶液（溶液Ａ）を形成した。ヒアルロン酸を溶液Ａの一部に室温（２５℃）で穏やかに溶解させて、総溶液重量に基づいて５～１５重量パーセントの水和ＨＡを含有するアルカリ溶液（溶液Ｂ）を形成した。
【0144】
ＢＤＤＥを蒸留水に室温で溶解させて、総溶液重量に対して０．２～２重量パーセントのＢＤＤＥを含有する中性溶液（溶液Ｃ１）を形成した。必要に応じて、ＢＤＤＥを溶液Ａの一部に室温で溶解させて、総溶液重量に対して１～１０重量パーセントのＢＤＤＥを含有するアルカリ溶液（溶液Ｃ２）を形成した。次いで、溶液Ｃ（Ｃ１中性またはＣ２アルカリ性）を溶液Ｂに添加して、最終溶液中の水酸化物濃度が０．２５～０．７５Ｍの範囲であり、所望の比率のＨＡおよびＢＤＤＥを有するアルカリ性溶液を得る。次いで、得られたＨＡ、ＢＤＤＥおよびＮａＯＨからなるアルカリ溶液を室温で完全に混合する。次いで、均質溶液を２０～５０℃の範囲の制御された温度で３０分～４８時間の期間反応させた。
【0145】
次いで、比較ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸（ヒドロゲル）を酸性水溶液（１Ｍの酸およびＰＢＳ）で４８から１２０時間洗浄し、未反応の物質および複製生物を除去し、アルカリ触媒を中和し、ヒドロゲルのｐＨをイオン交換によって６．５～７．４に戻し、比較ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸（ヒドロゲル）中のＨＡの濃度が１～５０ｍｇ／ｍＬ達するようにした。このようにして得られた洗浄した比較ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸に対して、グリセロールあるいはマンニトールを洗浄したヒドロゲルに直接添加した。
【0146】
塩酸塩乾燥粉末としての１つ以上の局所麻酔剤を、リン酸緩衝生理食塩水の一部に室温（２５℃）で穏やかに溶解させて、許容される生理学的ｐＨを有する総溶液重量に対して１～２０重量％の局所麻酔薬を含有する局所麻酔溶液（溶液Ｄ）を形成した。次いで、溶液Ｄを前のセクションで得られたグリセロールまたはマンニトールをさらに含有する洗浄したＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸ヒドロゲルに添加して混合し、ＨＡの所望の最終濃度（１～５０ｍｇ／ｍＬ）として、グリセロールまたはマンニトール（１～５０ｍｇ／ｍＬ）および局所麻酔薬（ＬＡ）（０．１～１０ｍｇ／ｍＬ）に達するようにする。
【0147】
遊離グリセロールまたはマンニトールおよび局所麻酔薬を含有する比較ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸（ヒドロゲル）をシリンジに充填し、ＥＮ ＩＳＯ １７６６５－１、Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅａｌｔｈ ｃａｒｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ－Ｍｏｉｓｔ ｈｅａｔ Ｐａｒｔ １：ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｒｏｕｔｉｎｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｖｉｃｅ（例えば、１２１℃で１５分）に報告された薬局方で認可された手順に従ってオートクレーブで蒸気滅菌した。
【0148】
遊離グリセロールまたはマンニトールおよび局所麻酔薬を含有する比較ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸（ヒドロゲル）は、必要に応じて、３０℃で真空下で脱水するか、または凍結乾燥（フリーズドライ）させ、その後の使用または分析のために保存することができる。
２．１．３．２．ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸、局所麻酔薬および遊離グリセロールまたはマンニトールの比較コンジュゲートの特徴付け
２．１．３．２．ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸、局所麻酔薬および遊離グリセロールまたはマンニトールの比較コンジュゲートの特徴付け
【0149】
局所麻酔剤を含有する比較ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸コンジュゲートの化学組成を表８～１５に開示する。
【0150】
【表9】
【0151】
【表10】
【0152】
【表11】
【0153】
【表12】
【0154】
【表13】
【0155】
【表14】
【0156】
【表15】
【0157】
【表16】
【0158】
（ａ）ｍｇ／ｍＬとして表される比較ＢＤＤＥ架橋ＨＡ中のＨＡの濃度
（ｂ）ｍｇ／ｍＬとして表される比較ＢＤＤＥ架橋ＨＡ中の遊離グリセロールの濃度、およびその化学構造をＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって測定した。
（ｃ）ＧＣ／ＭＳおよびＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって測定した、ｍｇ／ｍＬとして表される、比較ＢＤＤＥ架橋ＨＡ中の局所麻酔薬（ＬＡ）の濃度。
（ｄ）ｍｇ／ｍＬ（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって測定）として表される、比較ＢＤＤＥ架橋ＨＡ中の遊離マンニトールの濃度。
（ｂ）ｍｇ／ｍＬとして表される比較ＢＤＤＥ架橋ＨＡ中の遊離グリセロールの濃度、およびその化学構造をＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって測定した。
（ｃ）ＧＣ／ＭＳおよびＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって測定した、ｍｇ／ｍＬとして表される、比較ＢＤＤＥ架橋ＨＡ中の局所麻酔薬（ＬＡ）の濃度。
（ｄ）ｍｇ／ｍＬ（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって測定）として表される、比較ＢＤＤＥ架橋ＨＡ中の遊離マンニトールの濃度。
【0159】
要約すると、本発明の範囲外にある比較ＢＤＤＥ架橋ＨＡコンジュゲートは、異なる量のＢＤＤＥを使用して得られた。比較ＢＤＤＥ架橋ＨＡコンジュゲートは、１５～３０ｍｇ／ｍＬの架橋ヒアルロン酸濃度の範囲であり、これは、上の対応する表に開示される異なる架橋度を示すことを意味する。上述のように、比較ＢＤＤＥ架橋ＨＡコンジュゲートは、０．５～２５ｍｇ／ｍＬの範囲の遊離ポリオール（グリセロールまたはマンニトール）を含有する。
【0160】
さらに、比較ＢＤＤＥ架橋ＨＡコンジュゲートは、例えばｐＨ７．４において、ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式からの予測される熱力学的値に匹敵するパーセンテージの中性形態Ｂの局所麻酔薬を含有する。したがって、ＢおよびＢＨ＋の実験濃度を使用してヘンダーソン・ハッセルバルヒ方程式によって計算された固定ｐＨ値での局所麻酔薬について実験的に計算されたｐＫａＳは、熱力学的ｐＫａと統計的に異ならない。
２．１．４．分析活性
２．１．４．１．試料溶液の調製およびデータの精緻化
２．１．４．分析活性
２．１．４．１．試料溶液の調製およびデータの精緻化
【0161】
定量分析は、各製品の３つの異なるバッチで三連で行い、結果は平均値±標準偏差として報告した。分析される生成物のアリコートを水で５０倍希釈し、「試料溶液」を得た。
【0162】
クロマトグラフィー分析技法（ＧＣ／ＭＳおよびＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ）については、試料溶液中のピーク面積が機器ソフトウェアのパラメーターとして課されたシグナル／ノイズ比の３倍大きい場合にのみ化合物を考慮した。定量は、試料溶液中のピーク面積とブランク溶液のピーク面積との差として性能評価した。
【0163】
質量検出器を使用する技法については、トータルイオンクロマトグラム（ＴＩＣ）からの質量シグナルの存在量により各化合物の濃度を算出し、ＵＶ－Ｖｉｓ検出器を使用する技法については、数種の純粋な化合物の濃度から得られる検量線から導かれる式を使用して各化合物の濃度を算出した。
【0164】
ＧＣ／ＭＳおよびＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ分析方法が試料からの化合物の検出に適していることを評価するために、最も一般的な局所麻酔剤の中から参照標準を選択し、さらに分析した。
２．１．４．２．局所麻酔薬の中性画分に関するＧＣ／ＭＳクロマトグラフィー機器を使用した半揮発性化合物の測定のための定量方法。
２．１．４．２．局所麻酔薬の中性画分に関するＧＣ／ＭＳクロマトグラフィー機器を使用した半揮発性化合物の測定のための定量方法。
【0165】
試料調製
「試料溶液」のアリコートをＣＨ２Ｃｌ２により１：１で抽出し、有機相を分析した。
データ分析
「試料溶液」のアリコートをＣＨ２Ｃｌ２により１：１で抽出し、有機相を分析した。
データ分析
【0166】
試料溶液分析から得たクロマトグラムを評価し、３を超えるシグナル／ノイズで検出されたすべてのピークを報告し、ＭＳライブラリーを使用して同定を試みた（２０２１年６月２８日にウェブサイトｈｔｔｐｓ：／／ｗｅｂｂｏｏｋ．ｎｉｓｔ．ｇｏｖ／ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ／で入手可能なＷｉｌｅｙ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ １１ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ／ＮＩＳＴ ２０１７ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ）。フェナントレン－ｄ１０溶液（ＱＬ＝１μｇ／ｍＬ）を化合物の定量のための内部標準として使用した。
結果
結果
【0167】
本発明の比較ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸およびＰＰＥ架橋ヒアルロン酸の分析方法の定量結果を、上に開示した表にまとめた。
【0168】
局所麻酔薬Ｂの中性形態の濃度を、ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳを使用して見出されたイオン化形態ＢＨ＋の濃度と組み合わせて、全ＬＡ（Ｂ＋ＢＨ＋）に対するＢのパーセンテージ、Ｂのパーセンテージおよび上に開示した表で報告した実験ｐＫａＳを得た。
【0169】
２．１．４．３ 局所麻酔薬ならびに遊離グリセロール、ポリグリセロールおよびマンニトール断片の総量およびそれらの化学構造についてＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳクロマトグラフィー機器を使用して不揮発性化合物を測定するための定量方法。
試料調製
試料調製
【0170】
「試料溶液」のアリコートを、さらなる処理を行わずにＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって分析した。
データ分析
データ分析
【0171】
試料溶液分析から得たクロマトグラムを評価し、３を超えるシグナル／ノイズで検出されたすべてのピークを報告し、ＭＳライブラリー（Ｗｉｌｅｙ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ １１ ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ／ＮＩＳＴ ２０１７ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ）を使用して同定を試みた。レセルピン溶液（ＱＬ＝１μｇ／ｍＬ）を化合物の定量のための内部標準として使用した。
【0172】
ＳＥＣの検出器として質量分析を使用して、遊離グリセロール、ポリグリセロールおよびマンニトール断片の化学構造を評価し、検出されたすべてのピークの質量スペクトルを、ＭＳライブラリー（Ｗｉｌｅｙ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ １１ ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ／ＮＩＳＴ ２０１７ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ）を使用して参照と比較した。
結果
結果
【0173】
本発明の比較ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸、およびＰＰＥ架橋ヒアルロン酸の分析方法の定量結果を上記表にまとめた。
【0174】
遊離ポリグリセリンの濃度をｍｇ／ｍＬで表し、イオン化形態の局所麻酔薬ＢＨ＋の濃度を、ＧＣ／ＭＳを使用して見い出された中性形態Ｂの濃度と組み合わせて、全ＬＡ（Ｂ＋ＢＨ＋）に対するＢのパーセンテージ、Ｂのパーセンテージおよび上の表に報告された実験ｐＫａＳを得た。
【0175】
２．１．４．４ 動的放出のためにＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計を使用して、中性画分および局所麻酔薬の総量を決定するための定量的方法。
試料調製
試料調製
【0176】
「試料溶液」のアリコートを、局所麻酔薬（Ｂ＋ＢＨ＋）の総量を決定するためのさらなる処理なしでＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計によって分析した。
【0177】
「試料溶液」のアリコートをＣＨ２Ｃｌ２により１：１で抽出し、有機相をＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計で分析して、局所麻酔薬（Ｂ）の中性画分を決定した。
データ分析
データ分析
【0178】
各化合物の濃度は、純粋な化合物のいくつかの濃度で得られた検量線から導かれる式を使用して算出した。
２．１．５ 局所麻酔薬の動的放出
２．１．５ 局所麻酔薬の動的放出
【0179】
本発明のＰＰＥ架橋ヒアルロン酸、比較ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸および水溶液（対照として）からの局所麻酔剤の動的放出を以下に要約した。
試料：
試料：
【0180】
対照として、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に室温で粉末局所麻酔薬を溶解させて局所麻酔薬を含有する溶液を調製して、総溶液重量に対して０．１～１０重量パーセントの局所麻酔薬を含有する局所麻酔薬リン酸緩衝生理食塩水を形成し、ＮａＯＨ ０．２ＭおよびＨＣｌ ０．２Ｍを使用して溶液のｐＨを７．４に調整した。
【0181】
非滅菌および滅菌ＰＰＥヒアルロン酸（実施例３および実施例１８）および局所麻酔薬を含有する比較の滅菌および滅菌ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸（比較例８５および比較例７５）を、さらなる処理をせずに使用した。
方法：
方法：
【0182】
局所麻酔薬を含有する各試料（対照、ＰＰＥおよび比較ＢＤＤＥ架橋ＨＡ）５ｍｌを、５ｍＬのサイズおよび２０ｋＤのＭＷＣＯのＳｐｅｃｔｒａＰｏｒ（登録商標）Ｆｌｏａｔ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ透析デバイスに入れ、閉じた。透析チューブを２４５ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（５０倍希釈）を含有するスクリューキャップ付きガラス瓶に浸した。全麻酔薬が完全に放出され、局所麻酔薬濃度が試料と外部ＰＢＳ溶液との間で平衡状態になるまで、溶液を３７℃の恒温槽内で穏やかに攪拌した。
【0183】
一定期間、試料溶液を外部リン酸緩衝生理食塩水から取り出し、ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計を使用して全局所麻酔薬放出の総量について分析した。
【0184】
放出された局所麻酔薬の濃度は、純粋な局所麻酔薬のいくつかの濃度によって得られた検量線から導出された式を使用して計算した。１ｃｍ光路の石英セルを使用するＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計により、局所麻酔標準液（３．０μｇ／ｍｌ～４５μｇ／ｍｌ）の検量線を得た。２００÷３００ｎｍの範囲で吸収スペクトルを取得した。
【0185】
１２０時間後、外部リン酸緩衝生理食塩水のアリコートをＣＨ２Ｃｌ２により１：１で抽出し、セクション２．１．４．２に記載したＧＣ／ＭＳクロマトグラフィー機器を使用して有機相を分析し、外部リン酸緩衝生理食塩水のアリコートを、セクション２．１．４．３に記載したＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳクロマトグラフィー機器を使用して、さらなる処理なしでＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳによって分析した。
結果：
結果：
【0186】
緩衝生理食塩水対照、非滅菌および滅菌ＰＰＥ（実施例３および１８）ならびに同等の架橋度を有する比較非滅菌および滅菌ＢＤＤＥ（比較例８５および例７５）架橋ヒアルロン酸からの３ｍｇ／ｍＬの局所麻酔リドカインの総量のパーセンテージ。
【0187】
ＰＢＳ、ならびに非滅菌ＰＰＥ（実施例３）および比較の非滅菌ＢＤＤＥ（比較例８５）架橋ヒアルロン酸からの水中放出の１、２、４８および１２０時間後のリドカインの総量のパーセンテージを以下の表１６に要約する。
【表17】
【0188】
滅菌ＰＰＥ（実施例１８）および比較滅菌ＢＤＤＥ（比較例７５）架橋ヒアルロン酸からの、ＰＢＳからの水中放出の１、２、４８および１２０時間後のリドカインの総量のパーセンテージを以下の表１７に要約する。
【表18】
【0189】
さらに、非滅菌および滅菌ＰＰＥ架橋および比較ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸からのリン酸緩衝生理食塩水中での１２０時間の放出（全放出）後のリドカインの総量（Ｂ＋ＢＨ＋）に対する中性形態Ｂの分布を以下の表に開示する。
【表19】
【0190】
ここでも、リン酸緩衝生理食塩水中で１２０時間放出（全放出）後のリドカインの総量（Ｂ＋ＢＨ＋）に対する中性形態Ｂの分布は、対照（ＰＢＳ）ならびに非滅菌および滅菌比較ＢＤＤＥ架橋ＨＡから、放出されたリドカインの中性形態Ｂがヘンダーソン・ハッセルバルヒの式から予測される熱力学値と非常に類似しており、その結果、見かけのｐＫａＳが熱力学的ｐＫａと統計学的に異ならないことを示した（ｐＫａＴ＝７．９）。代わりに、本発明の非滅菌および滅菌ＰＰＥ架橋ＨＡから、放出されたリドカインの中性形態Ｂは、ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式から予測される熱力学的値よりはるかに高く、その結果、見かけのｐＫａＳは熱力学的ｐＫａよりはるかに低く、上記の表に報告された結果を裏付けている。
【0191】
したがって、上述のすべての結果に関して、局所麻酔薬の開始はそのｐＫａに依存すると結論付けることができ、７．４の生理学的ｐＨ値では、その最も短い開始を有する局所麻酔薬は、そのｐＫａが７．４に最も近いものであり、その理由は、その脂溶性および生物学的に利用可能な形態は、神経上膜および神経細胞膜を貫通するものであり、その後、有効成分分子がナトリウムチャネルをブロックするためにより迅速に利用可能になるからである。言い換えれば、開始は、注射の瞬間の比Ｂ／ＢＨ＋（または％Ｂ）およびＢＨ＋からＢへの変換率に依存し、これらは多くの因子によってｉｎ ｖｉｖｏで影響され得る。各麻酔薬に固有のイオン化定数（ｐＫａ）は、これらの状態のそれぞれに存在する分子の割合を予測する。したがって、麻酔水溶液のｐＨおよび局所麻酔薬のｐＫａは、局所麻酔薬の開始に影響を及ぼす最も重要な因子である。
【0192】
よって、実験データ（表２～７を参照されたい）に示されているように、ヒドロゲルの実施例１、実施例２および実施例３は、それぞれｐＨ７．２４、ｐＨ７．３８および７．５０でリドカインの最も速い開始を有する。一方、最新技術で知られている比較のヒドロゲル（表８～１５を参照されたい）では、最も速い開始は、それぞれリドカインではｐＨ７．９、メピバカインでは７．８、およびアルチカインでは７．６である。したがって、すべての比較ヒドロゲルは、注射可能なヒアルロン酸ヒドロゲルにとって生理学的であるとは考えられない７．４を超えるｐＨで最も早く開始する（６．９～７．４）。
結果
結果
【0193】
局所麻酔薬（リドカイン－ＬＡ）を、各試験試料から異なる比率で外部ＰＢＳ溶液に放出した。表１６～１７に示されているように、非滅菌および滅菌ＰＢＳ対照中のリドカイン溶液が最も速い放出を示し、１２０時間以内に１００％のリドカインが放出された。しかしながら、本発明の非滅菌および滅菌ＰＰＥ架橋ヒアルロン酸からのリドカイン放出は、それぞれ、比較の非滅菌および滅菌ＢＤＤＥ架橋ヒアルロン酸よりも速かった。本発明の滅菌ＰＰＥ架橋ＨＡが、非滅菌のＰＰＥ架橋ＨＡよりもリドカインの動的放出がわずかに高いことが注目される（おそらく、滅菌プロセスにおける熱分解により非滅菌のものの架橋度が低いためである）。
【0194】
したがって、上記実験データは、局所麻酔薬とのＰＰＥ架橋ヒアルロン酸コンジュゲートが局所麻酔薬の開始時間を短縮させ、よって、麻酔作用の持続時間を延長することを実証し、これは、局所麻酔薬のｉｎ ｖｉｖｏでの急速な開始および有効性を意味する。
先行技術文献
先行技術文献
【0195】
１．Ｈｅ，Ｚ．，ｅｔ ａｌ．，´´Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｐｏｘｉｄｅ ｖａｌｕｅｓ ｉｎ ｐｏｌｙｍｅｒ ｍｉｘｔｕｒｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｅｐｏｘｙ ｒｅｓｉｎ´´．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１４，ｖｏｌ．６（１２），ｐｐ．４２５７－４２６１．
２．ｃｆ．Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９２，ｐｐ．５３１；
３．Ａ ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．２００７，ｐｐ．１９０．
４．Ｒｅｎｅ．Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．´´Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｃｏｎｓｔａｎｔｓ ｏｆ ｌｏｃａｌ ａｎａｅｓｔｈｅｔｉｃ ａｍｉｎｅｓ：ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｉｏｎｉｃ ｓｔｒｅｎｇｔｈ´´ Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃ．，１９７２，ｖｏｌ．２４，ｐｐ．８４１－８４７
５．Ｗｉｌｅｙ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ １１ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ ／ ＮＩＳＴ ２０１７ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ
６．Ｓ．Ｃ．Ｄｅ Ｓｍｅｄｔ，ｅｔ ａｌ．´´Ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃ ａｎｄ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｎｅｔｗｏｒｋ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ａｓ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，´´ Ｂｉｏｒｈｅｏｌｏｇｙ，１９９３．ｖｏｌ．３０（１），ｐｐ．３１－４１）．
２．ｃｆ．Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９２，ｐｐ．５３１；
３．Ａ ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．２００７，ｐｐ．１９０．
４．Ｒｅｎｅ．Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．´´Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｃｏｎｓｔａｎｔｓ ｏｆ ｌｏｃａｌ ａｎａｅｓｔｈｅｔｉｃ ａｍｉｎｅｓ：ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｉｏｎｉｃ ｓｔｒｅｎｇｔｈ´´ Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃ．，１９７２，ｖｏｌ．２４，ｐｐ．８４１－８４７
５．Ｗｉｌｅｙ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ １１ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ ／ ＮＩＳＴ ２０１７ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ
６．Ｓ．Ｃ．Ｄｅ Ｓｍｅｄｔ，ｅｔ ａｌ．´´Ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃ ａｎｄ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｎｅｔｗｏｒｋ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ａｓ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，´´ Ｂｉｏｒｈｅｏｌｏｇｙ，１９９３．ｖｏｌ．３０（１），ｐｐ．３１－４１）．
【0196】
完全を期すために、本発明の様々な態様は、以下の番号付けされた項に記載されている。
条項１．組成物であって、
Ａ）式（Ｉ）
（Ｉ）
の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
式（ＩＩ）
（ＩＩ）
の１つ以上の架橋ヒアルロン酸
および式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物
からなる群から選択される１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
Ｂ）式（ＩＩＩ）
（ＩＩＩ）
の１つ以上のポリグリセロール、
式（ＩＶ）
（ＩＶ）
の１つ以上のポリグリセロール、
および式（ＩＩＩ）の１つ以上のポリグリセロールと式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールとの混合物
からなる群から選択される１つ以上のポリグリセロール、
Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤またはその塩、および
Ｄ）必要に応じて、１つ以上の許容される賦形剤または担体
を含み、
式中、
各Ｒ１が、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５からなる群から独立して選択され、
Ｒ２
Ｒ３が
であり、
Ｒ４が
であり、
Ｒ５が
であり、
各Ｒ６が、Ｒ３およびＲ５からなる群から独立して選択され、
ｂが、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃが、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄが、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｅが、１～５０からなる群から選択される整数であり、
ｆが、０～５０からなる群から選択される整数であり、
ｇが、０～５０からなる群から選択される整数であり、
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸が、０．０３０～０．９００％の架橋パーセンテージを有し、
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のポリグリセロールが、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ）によって測定して、２４０～３．７００Ｄａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有し、
但し、
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸において、少なくとも１つのＲ１がＲ４であり、
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のポリグリセロールにおいて、Ｒ１が存在する場合、Ｒ１がＲ４以外である、組成物。
条項１．組成物であって、
Ａ）式（Ｉ）
【化18】
（Ｉ）
の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
式（ＩＩ）
【化19】
（ＩＩ）
の１つ以上の架橋ヒアルロン酸
および式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物
からなる群から選択される１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
Ｂ）式（ＩＩＩ）
【化20】
（ＩＩＩ）
の１つ以上のポリグリセロール、
式（ＩＶ）
【化21】
（ＩＶ）
の１つ以上のポリグリセロール、
および式（ＩＩＩ）の１つ以上のポリグリセロールと式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールとの混合物
からなる群から選択される１つ以上のポリグリセロール、
Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤またはその塩、および
Ｄ）必要に応じて、１つ以上の許容される賦形剤または担体
を含み、
式中、
各Ｒ１が、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５からなる群から独立して選択され、
Ｒ２
Ｒ３が
であり、
Ｒ４が
であり、
Ｒ５が
であり、
各Ｒ６が、Ｒ３およびＲ５からなる群から独立して選択され、
ｂが、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃが、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄが、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｅが、１～５０からなる群から選択される整数であり、
ｆが、０～５０からなる群から選択される整数であり、
ｇが、０～５０からなる群から選択される整数であり、
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸が、０．０３０～０．９００％の架橋パーセンテージを有し、
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のポリグリセロールが、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ）によって測定して、２４０～３．７００Ｄａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有し、
但し、
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸において、少なくとも１つのＲ１がＲ４であり、
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のポリグリセロールにおいて、Ｒ１が存在する場合、Ｒ１がＲ４以外である、組成物。
【0197】
条項２．
式（Ｉ）、もしくは式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸、またはそれらの混合物が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５０００Ｄａの重量平均分子量およびＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量を有するＰＰＥを架橋剤として使用して得られる、条項１に記載の組成物。
式（Ｉ）、もしくは式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸、またはそれらの混合物が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５０００Ｄａの重量平均分子量およびＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量を有するＰＰＥを架橋剤として使用して得られる、条項１に記載の組成物。
【0198】
条項３．
ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式：
｛式中、
ｐＨは、－ｌｏｇ（［Ｈ＋］）であり、
ｐＫａは、弱酸の解離平衡定数の－ｌｏｇであり、
［Ｂ］（［塩基］）は、局所麻酔薬のコンジュゲート塩基形態の濃度であり、
［ＢＨ＋］（［酸］）は、局所麻酔薬のコンジュゲート酸性形態である｝
によって計算された予測値よりも４０％～１６０％高い、質量検出器と連結したガスクロマトグラフィーによって決定される局所麻酔剤の中性形態Ｂのパーセンテージを有する１つ以上の局所麻酔剤またはその塩を含む、条項１または２のいずれかに記載の組成物。
ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式：
【数6】
｛式中、
ｐＨは、－ｌｏｇ（［Ｈ＋］）であり、
ｐＫａは、弱酸の解離平衡定数の－ｌｏｇであり、
［Ｂ］（［塩基］）は、局所麻酔薬のコンジュゲート塩基形態の濃度であり、
［ＢＨ＋］（［酸］）は、局所麻酔薬のコンジュゲート酸性形態である｝
によって計算された予測値よりも４０％～１６０％高い、質量検出器と連結したガスクロマトグラフィーによって決定される局所麻酔剤の中性形態Ｂのパーセンテージを有する１つ以上の局所麻酔剤またはその塩を含む、条項１または２のいずれかに記載の組成物。
【0199】
条項４．
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のポリグリセロールの分子量が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２４０～３７００Ｄａである、条項１から３のいずれかに記載の組成物。
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のポリグリセロールの分子量が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２４０～３７００Ｄａである、条項１から３のいずれかに記載の組成物。
【0200】
条項５．
組成物中の式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）のポリグリセロールまたはそれらの混合物の濃度が０．４５～２５ｍｇ／ｍＬである、条項１から４のいずれかに記載の組成物。
組成物中の式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）のポリグリセロールまたはそれらの混合物の濃度が０．４５～２５ｍｇ／ｍＬである、条項１から４のいずれかに記載の組成物。
【0201】
条項６．
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールが、
式（１）の化合物、
（１）、
式（２）の化合物、
（２）、
式（３）の化合物、
（３）、
式（４）の化合物、
（４）、
式（５）の化合物、
（５）、
式（６）の化合物、
（６）、
およびそれらの混合物、
からなる群から選択される、条項１から５のいずれかに記載の組成物。
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールが、
式（１）の化合物、
【化22】
（１）、
式（２）の化合物、
【化23】
（２）、
式（３）の化合物、
【化24】
（３）、
式（４）の化合物、
【化25】
（４）、
式（５）の化合物、
【化26】
（５）、
式（６）の化合物、
【化27】
（６）、
およびそれらの混合物、
からなる群から選択される、条項１から５のいずれかに記載の組成物。
【0202】
条項７．
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸中のヒアルロン酸の濃度が１～５０ｍｇ／ｍｌである、条項１から６のいずれかに記載の組成物。
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸中のヒアルロン酸の濃度が１～５０ｍｇ／ｍｌである、条項１から６のいずれかに記載の組成物。
【0203】
条項８．
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸のヒアルロン酸の分子量が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法で測定して、１００～３０００ｋＤａである、条項１から７のいずれかに記載の組成物。
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸のヒアルロン酸の分子量が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法で測定して、１００～３０００ｋＤａである、条項１から７のいずれかに記載の組成物。
【0204】
条項９．
局所麻酔剤が、アムブカイン、アモラノン、アミロカイン、アルケイン、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタンベン、ブタンニカイン、ブテタミン、ブトキシカイン、クロロプロカイン、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン、ジメチルイソキン、ジメトカイン、ジペロドン、ジシクロミン、エクゴニジン、エクゴニン、エチドカイン、ベータ－エウカイン、ユープロシン、フェナルコミン、ファルモカイン、フロモカイン、ヘキシルカイン、ヒドロキシテトラカイン、ｐ－アミノ安息香酸イソブチル、メシル酸ロイシノシル、レボキサドロール、リドカイン、メピバカイン、メプリルカイン、メタブトキシカイン、ミルテカイン、ナエカイン、オクタカイン、オルトカイン、オキセタジン、パレトキシカイン、フェナカイン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパノカイン、プロパラカイン、プロピポカイン、プロポキシカイン、プソイドカイン、ピロカイン、ロピバカイン、サリチルアルコール、テトラカイン、トリカイン、トリメカイン、ゾラミン、およびそれらの混合物からなる群から選択される、条項１から８のいずれかに記載の組成物。
局所麻酔剤が、アムブカイン、アモラノン、アミロカイン、アルケイン、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタンベン、ブタンニカイン、ブテタミン、ブトキシカイン、クロロプロカイン、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン、ジメチルイソキン、ジメトカイン、ジペロドン、ジシクロミン、エクゴニジン、エクゴニン、エチドカイン、ベータ－エウカイン、ユープロシン、フェナルコミン、ファルモカイン、フロモカイン、ヘキシルカイン、ヒドロキシテトラカイン、ｐ－アミノ安息香酸イソブチル、メシル酸ロイシノシル、レボキサドロール、リドカイン、メピバカイン、メプリルカイン、メタブトキシカイン、ミルテカイン、ナエカイン、オクタカイン、オルトカイン、オキセタジン、パレトキシカイン、フェナカイン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパノカイン、プロパラカイン、プロピポカイン、プロポキシカイン、プソイドカイン、ピロカイン、ロピバカイン、サリチルアルコール、テトラカイン、トリカイン、トリメカイン、ゾラミン、およびそれらの混合物からなる群から選択される、条項１から８のいずれかに記載の組成物。
【0205】
条項１０．
－（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ）ヒアルロン酸を式（Ｖ）の化合物
（Ｖ）
（式中、
各Ｒ１は、Ｒ２およびＲ３からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ３は
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
と架橋させる工程と、
（ｉｉ）（Ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、および（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（ｉ）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ）必要に応じて、工程（ｉｉ）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ）必要に応じて、工程（ｉｉｉ）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ´）ヒアルロン酸を式（ＶＩ）の化合物
（ＶＩ）、
（式中、
各Ｒ１は、Ｒ２およびＲ３からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ３は、
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
と架橋させる工程と、
（ｉｉ´）（Ａ）式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、および（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（ｉ´）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ´）必要に応じて、工程（ｉｉ´）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ´）必要に応じて、工程（ｉｉｉ´）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、
Ｉ´´）ヒアルロン酸を式（Ｖ）
（Ｖ）、
および式（ＶＩ）の化合物
（ＶＩ）
（式中、
各Ｒ１は、Ｒ２およびＲ３からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ３は
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
を含む混合物と架橋させる工程と、
（ｉｉ´´）（Ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、ならびに（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（Ｉ´´）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ´´）必要に応じて、工程（ｉｉ´´）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ´´）必要に応じて、工程（ｉｉｉ´´）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができる、条項１から９のいずれかに記載の組成物。
－（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ）ヒアルロン酸を式（Ｖ）の化合物
【化28】
（Ｖ）
（式中、
各Ｒ１は、Ｒ２およびＲ３からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ３は
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
と架橋させる工程と、
（ｉｉ）（Ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、および（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（ｉ）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ）必要に応じて、工程（ｉｉ）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ）必要に応じて、工程（ｉｉｉ）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ´）ヒアルロン酸を式（ＶＩ）の化合物
【化29】
（ＶＩ）、
（式中、
各Ｒ１は、Ｒ２およびＲ３からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ３は、
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
と架橋させる工程と、
（ｉｉ´）（Ａ）式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、および（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（ｉ´）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ´）必要に応じて、工程（ｉｉ´）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ´）必要に応じて、工程（ｉｉｉ´）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、
Ｉ´´）ヒアルロン酸を式（Ｖ）
【化30】
（Ｖ）、
および式（ＶＩ）の化合物
【化31】
（ＶＩ）
（式中、
各Ｒ１は、Ｒ２およびＲ３からなる群から独立して選択され、
Ｒ２は、
であり、
Ｒ３は
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である）
を含む混合物と架橋させる工程と、
（ｉｉ´´）（Ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、ならびに（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（Ｉ´´）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ´´）必要に応じて、工程（ｉｉ´´）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ´´）必要に応じて、工程（ｉｉｉ´´）で得られた混合物を滅菌する工程
とを含む方法によって得ることができる、条項１から９のいずれかに記載の組成物。
【0206】
条項１１．
－（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（Ｖ）の化合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ´）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（ＶＩ）の化合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、
Ｉ´´）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（Ｖ）の化合物および式（ＶＩ）の化合物を含む混合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができる、条項１０に記載の組成物。
－（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（Ｖ）の化合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ´）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（ＶＩ）の化合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、
Ｉ´´）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（Ｖ）の化合物および式（ＶＩ）の化合物を含む混合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができる、条項１０に記載の組成物。
【0207】
条項１２．
－（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉｉ）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ）の後に、あるいは工程（ｉｖ）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ）を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉｉ´）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ´）の後に、あるいは工程（ｉｖ´）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ´）を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
あるいは、
－（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、工程（ｉｉ´´）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ´´）の後に、あるいは工程（ｉｖ´´）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ´´）を含む方法によって得ることができる、条項１０または１１のいずれかに記載の組成物。
－（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉｉ）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ）の後に、あるいは工程（ｉｖ）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ）を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉｉ´）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ´）の後に、あるいは工程（ｉｖ´）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ´）を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
あるいは、
－（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、工程（ｉｉ´´）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ´´）の後に、あるいは工程（ｉｖ´´）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ´´）を含む方法によって得ることができる、条項１０または１１のいずれかに記載の組成物。
【0208】
条項１３．
注射可能な組成物の形態である、条項１から１２のいずれかに記載の組成物。
注射可能な組成物の形態である、条項１から１２のいずれかに記載の組成物。
【0209】
条項１４
式（Ｉ）、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸またはそれらの混合物の治療有効量、
式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールまたはそれらの混合物の治療有効量、
１つ以上の麻酔剤の治療有効量、および
必要に応じて、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を、治療において使用するために含む、条項１から１３のいずれかにおいて定義される組成物、
あるいは、
式（Ｉ）、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸またはその混合物の化粧品的に有効な量、
式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールまたはそれらの混合物の化粧品的に有効な量、１つ以上の麻酔剤の化粧品的に有効な量、および
必要に応じて、１つ以上の化粧品的に許容される賦形剤または担体を、スキンケア剤として、特に皮膚充填剤として含む化粧品組成物である、条項１から１３のいずれかにおいて定義される組成物の使用。
式（Ｉ）、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸またはそれらの混合物の治療有効量、
式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールまたはそれらの混合物の治療有効量、
１つ以上の麻酔剤の治療有効量、および
必要に応じて、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を、治療において使用するために含む、条項１から１３のいずれかにおいて定義される組成物、
あるいは、
式（Ｉ）、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸またはその混合物の化粧品的に有効な量、
式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールまたはそれらの混合物の化粧品的に有効な量、１つ以上の麻酔剤の化粧品的に有効な量、および
必要に応じて、１つ以上の化粧品的に許容される賦形剤または担体を、スキンケア剤として、特に皮膚充填剤として含む化粧品組成物である、条項１から１３のいずれかにおいて定義される組成物の使用。
【0210】
条項１５．
担体としての、特に薬物送達系としての条項１～１３のいずれかに記載の組成物の使用。
担体としての、特に薬物送達系としての条項１～１３のいずれかに記載の組成物の使用。
【手続補正書】
【提出日】2024-02-26
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
組成物であって、Ａ）式（Ｉ）
【化1】
（Ｉ）、
の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
式（ＩＩ）
【化2】
（ＩＩ）
の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
および式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸と式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸との混合物
からなる群から選択される１つ以上の架橋ヒアルロン酸、
Ｂ）式（ＩＩＩ）
【化3】
（ＩＩＩ）、
の１つ以上のポリグリセロール、
式（ＩＶ）
【化4】
（ＩＶ）、
の１つ以上のポリグリセロール、
および式（ＩＩＩ）の１つ以上のポリグリセロールと式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセリンとの混合物
からなる群から選択される１つ以上のポリグリセロール、
Ｃ）１つ以上の局所麻酔剤またはその塩、ならびに
Ｄ）必要に応じて、１つ以上の許容可能な賦形剤または担体
を含み、
各Ｒ１が、Ｒ２、 Ｒ４およびＲ５からなる群から独立して選択され、
Ｒ２が
であり、
Ｒ４が
であり、
Ｒ５が
であり、
各Ｒ６が、Ｒ ５ であり、
ｂが、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃが、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄが、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｅが、１～５０からなる群から選択される整数であり、
ｆが、０～５０からなる群から選択される整数であり、
ｇが、０～５０からなる群から選択される整数であり、
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の前記架橋ヒアルロン酸が、本明細書に開示される測定方法によって測定して、０．０３０～０．９００％の架橋パーセンテージ（Ｃ．Ｄ．）を有し、
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の前記ポリグリセロールが、ＵＶ可視および質量検出器と連結したサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ／ＵＶ／ＭＳ）によって測定して、２４０から３．７００Ｄａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有し、
前記組成物中の式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）の前記ポリグリセロールまたはそれらの混合物の濃度が０．４５～２５ｍｇ／ｍＬであり、
但し、
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の前記架橋ヒアルロン酸において、少なくとも２つのＲ１がＲ４であり、
－前記組成物が、（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含むとき、前記組成物は、
ｉ）ヒアルロン酸を式（Ｖ）、
【化5】
（Ｖ）、
の化合物で架橋させる工程であって、
ここで、各Ｒ ７ が、Ｒ ２ であり、
Ｒ ２ は、
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である、架橋させる工程と、
（ｉｉ）（Ａ）式（Ｉ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸および（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（ｉ）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ）必要に応じて、工程（ｉｉ）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ）必要に応じて、工程（ｉｉｉ）で得られた混合物を滅菌する工程と、
を含む方法によって得ることができ、
あるいは、
－前記組成物が、（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ´）ヒアルロン酸を式（ＶＩ）、
【化6】
（ＶＩ）、
の化合物で架橋させる工程であって、
ここで、各Ｒ ７ はＲ ２ であり、
Ｒ ２ は
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である、架橋させる工程と、
（ｉｉ´）（Ａ）式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、および（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（ｉ´）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ´）必要に応じて、工程（ｉｉ´）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ´）必要に応じて、工程（ｉｉｉ´）で得られた混合物を滅菌する工程と、
さらに、工程（ｉ´）の後の、追加の洗浄工程(ｖｉ´）と、
とを含む方法によって得ることができ、
あるいは、
－（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、
ｉ´´）ヒアルロン酸を式（Ｖ）、
【化7】
（Ｖ）、
および式（ＶＩ）
【化8】
（ＶＩ）、
の化合物で架橋させる工程であって、
ここで、各Ｒ ７ はＲ ２ であり、
Ｒ ２ は
であり、
ｂは、１～７０からなる群から選択される整数であり、
ｃは、０～７０からなる群から選択される整数であり、
ｄは、０～７０からなる群から選択される整数である、架橋させる工程と、
（ｉｉ´´）（Ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸、ならびに（Ｂ）式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の１つ以上のポリグリセロールを含む工程（Ｉ´´）で得られた混合物を、１つ以上の麻酔剤（Ｃ）と接触させる工程と、
（ｉｉｉ´´）必要に応じて、工程（ｉｉ´´）で得られた混合物を１つ以上の賦形剤または担体（Ｄ）と接触させる工程と、
（ｉｖ´´）必要に応じて、工程（ｉｉｉ´´）で得られた混合物を滅菌する工程と、
さらに、工程（ｉ´）の後の、追加の洗浄工程(ｖｉ´）と、
とを含む方法によって得ることができ、
工程（ｖｉ）、あるいは工程（ｖｉ´）、あるいは工程（ｖｉ´´）は、６．５～７．４のｐＨを得るためにこのような適切量の酸性水溶液を添加することによって実施され、
組成物中の式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）のポリグリセロールまたはそれらの混合物の濃度は０．４５～２５ｍｇ／ｍＬである、組成物。
【請求項2】
式（Ｉ）、もしくは式（ＩＩ）の前記架橋ヒアルロン酸、またはそれらの混合物が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５０００Ｄａの重量平均分子量およびＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量を有するＰＰＥを架橋剤として使用して得られる、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の前記１つ以上のポリグリセロールが、式（１）の化合物、
【化9】
（１）、
式（２）の化合物、
【化10】
（２）、
式（３）の化合物、
【化11】
（３）、
式（４）の化合物、
【化12】
（４）、
式（５）の化合物、
【化13】
（５）、
式（６）の化合物、
【化14】
（６）、
およびそれらの混合物、
からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項4】
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の前記架橋ヒアルロン酸中のヒアルロン酸の濃度が１～５０ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載の組成物。
【請求項5】
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の前記架橋ヒアルロン酸のヒアルロン酸の分子量が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法で測定して、１００～３０００ｋＤａである、請求項１に記載の組成物。
【請求項6】
前記局所麻酔剤が、アムブカイン、アモラノン、アミロカイン、アルケイン、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタンベン、ブタンニカイン、ブテタミン、ブトキシカイン、クロロプロカイン、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン、ジメチルイソキン、ジメトカイン、ジペロドン、ジシクロミン、エクゴニジン、エクゴニン、エチドカイン、ベータ－エウカイン、ユープロシン、フェナルコミン、ファルモカイン、フロモカイン、ヘキシルカイン、ヒドロキシテトラカイン、ｐ－アミノ安息香酸イソブチル、メシル酸ロイシノシル、レボキサドロール、リドカイン、メピバカイン、メプリルカイン、メタブトキシカイン、ミルテカイン、ナエカイン、オクタカイン、オルトカイン、オキセタジン、パレトキシカイン、フェナカイン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパノカイン、プロパラカイン、プロピポカイン、プロポキシカイン、プソイドカイン、ピロカイン、ロピバカイン、サリチルアルコール、テトラカイン、トリカイン、トリメカイン、ゾラミン、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項7】
－（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、ｉ）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの重量平均分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（Ｖ）の化合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、
ｉ´）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの重量平均分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（ＶＩ）の化合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、
ｉ´´）ヒアルロン酸を、
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による方法によって測定して、２０４～１５．０００Ｄａの重量平均分子量（Ｍｗ）、および
ＨＣｌを用いる超音波支援迅速滴定によって測定して、１００～７．０００ｇ／ｅｑのエポキシ当量
を有する式（Ｖ）の化合物および式（ＶＩ）の化合物を含む混合物と架橋させる工程を含む方法によって得ることができる、請求項１に記載の組成物。
【請求項8】
－（ａ）式（Ｉ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉｉ）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ）の後に、あるいは工程（ｉｖ）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ）を含む方法によって得ることができるか、あるいは、
－（ａ）式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸を含む場合、工程（ｉｉ´）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ´）の後に、あるいは工程（ｉｖ´）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ´）を含む方法によって得ることができるか、
あるいは、
－（ａ）式（Ｉ）および式（ＩＩ）の架橋ヒアルロン酸の混合物を含む場合、工程（ｉｉ´´）の後に、あるいは工程（ｉｉｉ´´）の後に、あるいは工程（ｉｖ´´）の後に、式（ＩＩＩ）の化合物、式（ＩＶ）の化合物またはそれらの混合物の添加を含む追加の工程（ｖ´´）を含む方法によって得ることができる、請求項１に記載の組成物。
【請求項9】
注射可能な組成物の形態である、請求項１に記載の組成物。
【請求項10】
式（Ｉ）、式（ＩＩ）の前記１つ以上の架橋ヒアルロン酸またはそれらの混合物の治療有効量、式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）の前記１つ以上のポリグリセロールまたはそれらの混合物の治療有効量、
１つ以上の麻酔剤の治療有効量、および
必要に応じて、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を、治療において使用するために含む医薬組成物である、請求項１において定義される医薬組成物。
。
【請求項11】
担体としての、特に薬物送達系としての、請求項１から１０において定義される組成物の使用。
【請求項12】
請求項１において定義される組成物の化粧品分野の使用であって、前記組成物が、
式（Ｉ）、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸またはそれらの混合物の化粧品としての有効量、
式（ＩＩＩ）もしくは式（ＩＶ）の前記１つ以上のポリグリセロールまたはそれらの混合物の化粧品としての有効量、
１つ以上の麻酔剤の美容的な有効量、および
必要に応じて、１つ以上の化粧品として許容される賦形剤または担体、
を含み、ヒアルロン酸の欠乏および／または障害を伴う疾患または状態に罹患していない対象に対するスキンケアのための化粧品組成物。
【請求項13】
（Ａ）式（Ｉ）の１種以上の架橋ヒアルロン酸、
（Ｂ）式（ＩＩＩ）の１種以上のポリグリセロール、
（Ｃ）１種以上の麻酔剤またはその塩、および
（Ｄ）必要に応じて、1つ以上の許容される賦形剤または担体、
を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項14】
（Ａ）式（Ｉ）の１種以上の架橋ヒアルロン酸、
（Ｂ）式（ＩＶ）の１種以上のポリグリセロール、
（Ｃ）１種以上の麻酔剤またはその塩、および
（Ｄ）必要に応じて、1つ以上の許容される賦形剤または担体、
を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項15】
（Ａ）式（ＩＩ）の１種以上の架橋ヒアルロン酸、
（Ｂ）式（ＩＩＩ）の１種以上のポリグリセロール、
（Ｃ）１種以上の麻酔剤またはその塩、および
（Ｄ）必要に応じて、1つ以上の許容される賦形剤または担体、
を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項16】
（Ａ）式（ＩＩ）の１種以上の架橋ヒアルロン酸、
（Ｂ）式（ＩＶ）の１種以上のポリグリセロール、
（Ｃ）１種以上の麻酔剤またはその塩、および
（Ｄ）必要に応じて、1つ以上の許容される賦形剤または担体、
を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項17】
（Ａ）式（Ｉ）の１種以上の架橋ヒアルロン酸と、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸の混合物、
（Ｂ）式（ＩＩＩ）の１種以上のポリグリセロール、
（Ｃ）１種以上の麻酔剤またはその塩、および
（Ｄ）必要に応じて、1つ以上の許容される賦形剤または担体、
を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項18】
（Ａ）式（Ｉ）の１種以上の架橋ヒアルロン酸と、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸の混合物、
（Ｂ）式（ＩＶ）の１種以上のポリグリセロール、
（Ｃ）１種以上の麻酔剤またはその塩、および
（Ｄ）必要に応じて、1つ以上の許容される賦形剤または担体、
を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項19】
（Ａ）式（Ｉ）の１種以上の架橋ヒアルロン酸、
（Ｂ）式（ＩＩＩ）の１種以上のポリグリセロールと、式（ＩＶ）の１種以上のポリグリセロールの混合物、
（Ｃ）１種以上の麻酔剤またはその塩、および
（Ｄ）必要に応じて、1つ以上の許容される賦形剤または担体、
を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項20】
（Ａ）式（ＩＩ）の１種以上の架橋ヒアルロン酸、
（Ｂ）式（ＩＩＩ）の１種以上のポリグリセロールと、式（ＩＶ）の１種以上のポリグリセロールの混合物、
（Ｃ）１種以上の麻酔剤またはその塩、および
（Ｄ）必要に応じて、1つ以上の許容される賦形剤または担体、
を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項21】
（Ａ）式（Ｉ）の１種以上の架橋ヒアルロン酸と、式（ＩＩ）の１つ以上の架橋ヒアルロン酸の混合物、
（Ｂ）式（ＩＩＩ）の１種以上のポリグリセロールと、式（ＩＶ）の１種以上のポリグリセロールの混合物、
（Ｃ）１種以上の麻酔剤またはその塩、および
（Ｄ）必要に応じて、1つ以上の許容される賦形剤または担体、
を含む、請求項１に記載の組成物。
【国際調査報告】