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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-07-10
(54)【発明の名称】網膜障害
(51)【国際特許分類】
C12N 15/12 20060101AFI20240703BHJP
C12N 15/85 20060101ALI20240703BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240703BHJP
C12N 15/864 20060101ALI20240703BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20240703BHJP
A61P 27/06 20060101ALI20240703BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240703BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20240703BHJP
A61K 38/22 20060101ALN20240703BHJP
A61K 31/7088 20060101ALN20240703BHJP
【ＦＩ】
C12N15/12 ZNA
C12N15/85 Z
C12N15/13
C12N15/864 100Z
A61P27/02
A61P27/06
A61K48/00
A61K35/76
A61K38/22
A61K31/7088
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023577965
(86)(22)【出願日】2022-06-17
(85)【翻訳文提出日】2024-02-08
(86)【国際出願番号】 GB2022051536
(87)【国際公開番号】W WO2022263841
(87)【国際公開日】2022-12-22
(31)【優先権主張番号】2108759.8
(32)【優先日】2021-06-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(31)【優先権主張番号】2204231.1
(32)【優先日】2022-03-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】523473408
【氏名又は名称】イカロベック リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110000671
【氏名又は名称】ＩＢＣ一番町弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】ウィドウソン，ピーター
(72)【発明者】
【氏名】ビンリー，ケイティー
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
4C087
【Ｆターム（参考）】
4C084AA13
4C084DB55
4C084NA13
4C084NA14
4C084ZA33
4C086AA01
4C086AA02
4C086EA16
4C086MA02
4C086MA05
4C086NA13
4C086NA14
4C086ZA33
4C087AA01
4C087AA02
4C087BC83
4C087CA12
4C087NA13
4C087NA14
4C087ZA33
(57)【要約】
本発明は、網膜障害に関し、また、遺伝的構築物およびそのような構築物を含む組換えベクター、ならびに広範囲の網膜障害を処置、予防または寛解するための遺伝子療法の方法におけるそれらの使用に関する。構築物およびベクターは、地図状萎縮（ＧＡ）およびドライ型加齢性黄斑変性（ドライ型ＡＭＤ）の処置に特に有用である。本発明は、補体活性化ならびに網膜細胞損傷および喪失を低減させるための構築物およびベクターの使用に拡大する。本発明はまた、医薬組成物それ自体と、網膜障害の処置、予防または寛解、ならびに補体活性化ならびに網膜細胞損傷および喪失の低減におけるその使用に拡大する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＰＥＤＦ受容体のアゴニストをコードする第１のコード配列および抗補体タンパク質をコードする第２のコード配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む、遺伝的構築物。
【請求項2】
前記プロモーターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＣＭＶ初期エンハンサーエレメントおよびニワトリベータ－アクチン遺伝子の第１のイントロンの融合物（ＣＡＧ）、卵黄様黄斑変性症タンパク質－２（ＶＭＤ２）プロモーター、ヒトホスホグリセリン酸キナーゼ－１（ＰＧＫ－１）プロモーター、またはＥＦ１αプロモーターであり、前記プロモーターは、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８もしくは９に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含んでもよい、請求項１に記載の遺伝的構築物。
【請求項3】
前記第１のコード配列が、ＰＥＤＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項１または２に記載の遺伝的構築物。
【請求項4】
前記第１のコード配列が、配列番号１１、１２もしくは１３のうちいずれか１つに実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む、および／または前記第１のコード配列が、配列番号１０に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする、請求項１～３のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項5】
前記抗補体タンパク質が、補体活性化を中和または減弱することが可能である、請求項１～４のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項6】
前記抗補体タンパク質が、補体系の代替経路（ＡＰ）を標的とすることが可能であり、好ましくは、前記抗補体タンパク質が、補体系の古典的経路（ＣＰ）および／またはレクチン経路（ＬＰ）に最小限に影響する、請求項１～５のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項7】
前記抗補体タンパク質が、抗Ｃ３ｂ、抗Ｂｂもしくは抗Ｃ５抗体、またはその抗原結合性断片であり、前記抗補体タンパク質は、単鎖可変断片（ＳＣＶＦ）であってもよい、請求項１～６のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項8】
前記抗補体タンパク質が、ＣＤ５５、好ましくは、可溶性ＣＤ５５（ｓＣＤ５５）である、請求項１～６のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項9】
前記抗補体タンパク質が、補体Ｈ因子関連タンパク質－１（ＣＦＨＲ１）である、請求項１～６のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項10】
前記抗補体タンパク質が、ＣＤ４６、好ましくは、可溶性ＣＤ４６（ｓＣＤ４６）である、請求項１～６のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項11】
前記抗補体タンパク質が、補体Ｈ因子様タンパク質１（ＣＦＨＬ１）である、請求項１～６のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項12】
前記第２のコード配列が、配列番号１５、１７もしくは８３に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む、および／または前記第２のコード配列が、配列番号１４、１６もしくは８２に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする、請求項７に記載の遺伝的構築物。
【請求項13】
前記第２のコード配列が、配列番号１９に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む、および／または前記第２のコード配列が、配列番号１８に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする、請求項８に記載の遺伝的構築物。
【請求項14】
前記第２のコード配列が、配列番号２１もしくは２２に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む、および／または前記第２のコード配列が、配列番号２０に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする、請求項９に記載の遺伝的構築物。
【請求項15】
前記第２のコード配列が、配列番号２４に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む、および／または前記第２のコード配列が、配列番号２３に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする、請求項１０に記載の遺伝的構築物。
【請求項16】
前記第２のコード配列が、配列番号８１に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む、および／または前記第２のコード配列が、配列番号８０に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする、請求項１１に記載の遺伝的構築物。
【請求項17】
前記遺伝的構築物が、前記第１および第２のコード配列の間に配置されたスペーサー配列を含み、このスペーサー配列が、前記ＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび前記抗補体タンパク質を別々の分子として産生するように構成されたペプチドスペーサーをコードする、請求項１～１６のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項18】
前記スペーサー配列が、ウイルスペプチドスペーサー配列を含みかつコードし、最も好ましくはウイルス－２Ａペプチドスペーサー配列を含みかつコードする、請求項１７に記載の遺伝的構築物。
【請求項19】
前記ウイルス－２Ａペプチドスペーサー配列が、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｔ２ＡまたはＰ２Ａ配列を含む、請求項１８に記載の遺伝的構築物。
【請求項20】
前記スペーサー配列が、配列番号２６、２８、３０もしくは３２に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む、および／または前記スペーサー配列が、配列番号２５、２７、２９もしくは３１に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする、請求項１７～１９のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項21】
前記遺伝的構築物が、ウイルス－２Ａ除去配列を含み、前記ウイルス－２Ａ除去配列は、前記ウイルス－２Ａ配列の５’に配置されてもよい、請求項１７～２０のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項22】
前記ウイルス－２Ａ除去配列が、トリペプチドグリシン－セリン－グリシン配列（Ｇ－Ｓ－Ｇ）を含むリンカー配列によって前記ウイルス－２Ａペプチドスペーサー配列から分離されている、請求項２１に記載の遺伝的構築物。
【請求項23】
前記ウイルス－２Ａ除去配列が、フューリン認識配列であり、前記ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号３３に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードしてもよい、請求項２１または２２に記載の遺伝的構築物。
【請求項24】
前記ウイルス－２Ａ除去配列が、配列番号３５もしくは３７に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む、および／または前記ウイルス－２Ａ除去配列が、配列番号３４もしくは３６に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする、請求項２３に記載の遺伝的構築物。
【請求項25】
前記ウイルス－２Ａ除去配列が、ゼラチナーゼＭＭＰ－２認識配列であり、前記ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号３９に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含んでもよく、および／または前記ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号３８に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードしてもよい、請求項２１または２２に記載の遺伝的構築物。
【請求項26】
前記ウイルス－２Ａ除去配列が、レニン認識配列であり、前記ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号４１に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含んでもよく、および／または前記ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号４０に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードしてもよい、請求項２１または２２に記載の遺伝的構築物。
【請求項27】
前記遺伝的構築物が、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）をコードするヌクレオチド配列を含み、前記ＷＰＲＥは、配列番号４２もしくは４３に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含んでもよい、請求項１～２６のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項28】
前記遺伝的構築物が、ポリＡテールをコードするヌクレオチド配列を含み、前記ポリＡテールは、配列番号４４、４５もしくは８４に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含んでもよい、請求項１～２７のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項29】
前記遺伝的構築物が、左および／または右逆位末端反復配列（ＩＴＲ）をコードするヌクレオチド配列を含み、前記左および／または右逆位末端反復は、配列番号４６もしくは４７に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含んでもよい、請求項１～２８のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項30】
前記遺伝的構築物が、非コードイントロンを含み、前記非コードイントロンは、前記プロモーターおよび前記第１のコード配列の間に位置してもよい、請求項１～２９のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項31】
前記非コードイントロンが、配列番号４８、４９もしくは５０に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む、請求項３０に記載の遺伝的構築物。
【請求項32】
前記遺伝的構築物が、シグナルペプチドコード配列を含み、前記シグナルペプチドコード配列は、配列番号５２もしくは５４のうちいずれか１つに実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含んでもよく、および／または前記シグナルペプチドコード配列は、配列番号５１もしくは５３に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードしてもよい、請求項１～３１のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項33】
配列番号５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、８５、８７もしくは８９に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする、および／または配列番号５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、８６、８８もしくは９０に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む、請求項１～３２のいずれか１項に記載の遺伝的構築物。
【請求項34】
請求項１～３３のいずれか１項に記載の遺伝的構築物を含む、組換えベクター。
【請求項35】
組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターである、請求項３４に記載の組換えベクター。
【請求項36】
前記ｒＡＡＶが、ＡＡＶ－１、ＡＡＶ－２、ＡＡＶ－２．７ｍ８、ＡＡＶ－３Ａ、ＡＡＶ－３Ｂ、ＡＡＶ－４、ＡＡＶ－５、ＡＡＶ－６、ＡＡＶ－７、ＡＡＶ－８、ＡＡＶ－９、ＡＡＶ－１０またはＡＡＶ－１１である、請求項３５に記載の組換えベクター。
【請求項37】
前記ｒＡＡＶが、ｒＡＡＶ血清型－２である、請求項３６に記載の組換えベクター。
【請求項38】
配列番号６７に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む、請求項３４～３７のいずれか１項に記載の組換えベクター。
【請求項39】
医薬としてのまたは治療における使用のための、請求項１～３３のいずれか１項に記載の遺伝的構築物または請求項３４～３８のいずれか１項に記載の組換えベクター。
【請求項40】
網膜障害の処置、予防もしくは寛解における使用のための、または補体活性化ならびに網膜細胞の損傷および喪失を低減させるための、請求項１～３３のいずれか１項に記載の遺伝的構築物または請求項３４～３８のいずれか１項に記載の組換えベクター。
【請求項41】
処置される前記網膜障害が、ドライ型加齢性黄斑変性、地図状萎縮、および／または補体活性化による網膜損傷を伴う任意の病態生理学的状態である、請求項４０に記載の遺伝的構築物または組換えベクター。
【請求項42】
前記網膜障害が、ドライ型加齢性黄斑変性である、請求項４１に記載の遺伝的構築物または組換えベクター。
【請求項43】
前記網膜障害が、地図状萎縮である、請求項４１に記載の使用のための遺伝的構築物または組換えベクター。
【請求項44】
次の状態：網膜色素変性症、シュタルガルト病、糖尿病性黄斑変性、加齢性黄斑変性および／またはレーバー先天黒内障のうちいずれか１つに関連する補体活性化ならびに網膜細胞の損傷および喪失を低減させるために使用される、請求項４０に記載の遺伝的構築物または組換えベクター。
【請求項45】
請求項１～３３のいずれか１項に記載の遺伝的構築物または請求項３４～３８のいずれか１項に記載の組換えベクターと、薬学的に許容される媒体とを含む、医薬組成物。
【請求項46】
請求項４５に記載の医薬組成物を調製する方法であって、請求項１～３３のいずれか１項に記載の遺伝的構築物または請求項３４～３８のいずれか１項に記載の組換えベクターを、薬学的に許容される媒体と接触させるステップを含む、方法。
【請求項47】
緑内障に関連する補体活性化ならびに網膜細胞の損傷および喪失を低減させるために使用される、請求項４０に記載の遺伝的構築物または組換えベクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、網膜障害に関し、また、遺伝的構築物およびそのような構築物を含む組換えベクター、ならびに広範囲の網膜障害を処置、予防または寛解するための遺伝子療法の方法におけるそれらの使用に関する。構築物およびベクターは、排他的にではないが特に、地図状萎縮（ＧＡ）およびドライ型加齢性黄斑変性（ドライ型ＡＭＤ）の処置に有用である。本発明はまた、補体活性化ならびに網膜細胞損傷および喪失を低減させるための構築物およびベクターの使用に拡大する。本発明はまた、医薬組成物それ自体と、網膜障害の処置、予防または寛解、ならびに補体活性化ならびに網膜細胞損傷および喪失の低減におけるその使用に拡大する。
【背景技術】
【0002】
世界中で、地図状萎縮（ＧＡ）を有する人々がおよそ５００万人いると推定されており［１］、米国単独で１００万人を超え［２］、７５歳を超える人々の平均で２９人に１人に等しい。ＧＡは、後期加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）の一部としての、黄斑の慢性進行性変性である。この疾患は、中心暗点および永続的な視力喪失を生じる、網膜組織および脈絡毛細管の限局性の萎縮によって特徴付けされる。加齢およびＡＭＤの家族歴は、ＧＡの最も広く認識されるリスク因子である［３］。過去または現在の喫煙もまた、個体のＧＡ発症リスクを有意に増加させ［３、４］、現在まで、ＧＡ疾患有病率に何らかの性差を見出した研究はない［３、５］。加齢性眼疾患研究は、甲状腺ホルモンまたは制酸薬の使用者におけるＧＡのリスク増加を見出し、他の研究は、冠動脈心疾患、水晶体混濁を有するまたは以前に白内障手術を受けた患者が、より大きいＧＡ発症リスクを有することを示した［６］。にもかかわらず、ＧＡの病態形成は、依然として不明である。
【0003】
ＡＭＤの自然経過は、色素転置、ならびに網膜色素上皮（ＲＰＥ）およびブルッフ膜の間に形成される黄色沈着物であるドルーゼンの存在によって特徴付けられる初期から始まる［７、８］。網状偽ドルーゼンは、ＧＡの発症に特に関連付けられる［９、１０］。ＡＭＤのより後期は、脈絡膜血管新生またはＧＡのいずれかによって特徴付けされる。ＧＡは、ＲＰＥ、上を覆う光受容体および脈絡毛細管の萎縮を有する、後極における明瞭に画定された区域として認識される。
【0004】
ドルーゼンの主要成分の１つは、蓄積された自己蛍光膜結合型リポフスチンである［１０］。リポフスチンは、老化網膜に見出されることが多く、ＧＡ患者においてＲＰＥ細胞層内で著しく上昇される［１１～１３］。リポフスチンは主に、正常な老化した網膜およびより激烈にはＧＡ患者において、ヒト眼底の自家蛍光の原因となる［１４、１５］。９０歳前後で、リポフスチン顆粒は、黄斑ＲＰＥ細胞の区域のおよそ２０％を占める［１２］。萎縮区域が拡大するにつれて、視覚機能は減少する［１０、１２、１３、１６］。臨床的には、滲出型および非滲出型ＡＭＤは非常に異なるが、このようなＡＭＤ後期は、決して共通点がない（exclusive）訳ではない。ＧＡを有する個体は、脈絡膜血管新生を発症するより高いリスクを保有し、滲出型ＡＭＤ患者は、萎縮区域を発症する高いリスクがある。
【0005】
リポフスチンは、色素の複合混合物を含有するが、主要成分は、光受容体外節膜に見出されるオールトランス－レチナールまたは１１－シス－レチナールおよびエタノールアミンの２個の分子から形成されるＡ２Ｅ（Ｎ－レチニリデン（retinylidene）－Ｎ－レチニルエタノールアミン；およびイソ－Ａ２Ｅ、これらは容易に相互変換する）であることが示されている［１７～２２］。リポフスチンレベルが、ＧＡの病理組織学的損傷と直接相関することが示されており［１２、１３、２２］、リポフスチンが、ＧＡの主要因子の１つであることを指し示す。Ａ２Ｅは、界面活性剤として作用し、これにより正常ＲＰＥリソソーム活性に干渉するのみならず、Ａ２Ｅは、コレステロール代謝に干渉し［２３］、酸化的損傷を生じることができる。
【0006】
Ａ２Ｅのレベルおよびドルーゼン蓄積を低減させるためのいくつかの失敗に終わったアプローチは、生化学的視覚サイクルを遅くする薬物を使用して試みられた。例えば、経口網膜結合タンパク質（ＲＢＰ４）－トランスサイレチン－レチノール複合体阻害剤であるフェンレチニド（ＲｅＶｉｓｉｏｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）は、第２相臨床研究においてＧＡ進行を遅くすることができなかった。加えて、ＲＰＥ６５イソメラーゼ阻害剤、ＡＣＵ－４４２６（エミクススタト塩酸塩、Ａｃｕｃｅｌａ）は、ＡＢＣＡ４／ＲＤＨ８ダブルノックアウトマウスモデルにおいてＡ２Ｅ蓄積を低減させたが［２４、２５］、第２ｂ／３相臨床研究においてＧＡ進行を停止することができなかった［２６］。
【0007】
補体系（ＣＳ）は、微生物等の外来性病原体から防御するための自然免疫系の一部であり［２７～２９］、ドルーゼン低減における役割を果たすことができる。例えば、補体Ｈ因子バリアント、Ｙ４０２ＨおよびＡＲＭＳ２は、ＧＡ発症のリスク増加に関連付けられており［３０、３１］、ドルーゼンは、リポフスチンに加えて複数の補体成分を含有することが示された［２７～３３］。これは、補体系によって媒介される限局性の炎症が、ＡＭＤにおける重要なエレメントとなり得ることを指し示す。
【0008】
ＣＳは、３種の生化学的経路：古典的経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）および代替経路（ＡＰ）からなり、これらのそれぞれは、別個の誘因を有する［２７～２９］。各経路は、別々の成分によって活性化され得るが、経路は、補体因子３（Ｃ３）と呼ばれる肝要なタンパク質成分を伴うように収束する。
【0009】
古典的経路（ＣＰ）は、特に、Ｃ１ｑおよび抗体の間の相互作用を介して、抗原－抗体複合体によって活性化される。Ｃ１複合体の活性化の後に、補体Ｃ２およびＣ４は、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、Ｃ４ａおよびＣ４ｂへと切断される。次に、Ｃ４ｂおよびＣ２ａタンパク質は、Ｃ３コンバターゼであるＣ４ｂ２ａ複合体へと組み合わさる。Ｃ４ｂ２ａ複合体は、Ｃ３ｂにさらに結合して、Ｃ５コンバターゼを形成する。
【0010】
レクチン経路（ＬＰ）は通常、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒおよびＣ１ｓに似ている、マンノース結合レクチンまたはフィコリンのいずれかを介して、微生物表面におけるマンノース残基に結合して、マンナン結合レクチン関連セリンプロテアーゼ（ＭＡＳＰ）を形成することによって活性化される。３種のＭＡＳＰが、現在までに特徴付けられた；ＭＡＳＰ－１、ＭＡＳＰ－２およびＭＡＳＰ－３。ＭＡＳＰ－２は、触媒特異性がＣ１ｓと同様であり、Ｃ２およびＣ４を切断することができる。
【0011】
代替経路（ＡＰ）は、ＡＭＤの病態形成と密接に関係付けられる。ＡＰにおいて、補体Ｂ、Ｐ（プロパージン）およびＤ因子は、Ｃ３コンバターゼ複合体を形成する、Ｃ３ｂおよび活性化因子Ｂ因子（Ｂｂ）を介して、Ｃ３の活性化に関与する。次に、Ｃ３は、Ｃ３ａおよびＣ３ｂへと分割する。Ｃ３ｂは、免疫細胞におけるＣ３ａ受容体に結合し、炎症を引き起こし、よって、免疫細胞の浸潤を可能にして、病原体をさらに中和することができる。Ｃ３ｂ成分はさらにＣ３コンバターゼ活性を増幅し、また、Ｃ４ｂおよびＣ２ａ（Ｃ４ｂ－Ｃ２ａ－Ｃ３ｂ）またはＢｂ（Ｃ３ｂ－Ｂｂ－Ｃ３ｂ）のいずれかとの複合体も形成し、これらは両者共に、Ｃ５コンバターゼとして作用して、Ｃ５タンパク質からＣ５ａおよびＣ５ｂを生成する。次に、Ｃ５ａは、Ｃ３ａと同様に、免疫細胞におけるＣ５ｂ受容体に結合することができ、一方、Ｃ５ｂは、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８およびＣ９と複合体を形成し（Ｓ５ｂ－９）、膜侵襲複合体（ＭＡＣ）または終末補体複合体（ＴＣＣ）を形成する。ＴＣＣは、細胞膨張および最終的な溶解を介して侵入した微生物を破壊することが可能である。
【0012】
ＡＰの活性は、細胞に結合したまたは液相のＣ３ｂおよびＣ４ｂを切断することからＣ３ｂ／Ｃ４ｂ不活性化因子とも呼ばれる、補体Ｉ因子（ＣＦＩ）によってモジュレートすることができる［３４、３５］。別のモジュレート因子は、補体媒介性溶解からの細胞の保護を行う膜結合タンパク質である、ＣＤ５５または崩壊促進因子（ＤＡＦ）である［３６～３９］。ＣＤ５５の主要機能は、Ｃ３コンバターゼをその構成タンパク質へと解離することにより不活性化することである［３６～３９］。補体Ｈ因子のスプライスバリアントである補体Ｈ因子関連タンパク質－１（ＣＦＨＲ１）と呼ばれるさらに別のモジュレートタンパク質［４０～４３］も、補体活性化の低減に関与する。顕著な調節因子は、崩壊促進および補因子活性によって液相および表面における補体活性を調節する、補体Ｈ因子およびそのスプライス産物ＦＨＬ－１である。Ｈ因子およびＦＨＬ－１は、Ｃ３ｂおよびＢ因子で構成されるＣ３コンバターゼを標的とし崩壊させる。補体活性化を低減させることが可能である別の因子は、膜結合性であるメンブレンコファクタープロテインまたはＣＤ４６［４４、４６］と呼ばれる。Ｃ３ｂに結合されると、Ｈ因子およびＣＦＨＬ－１は、Ｃ３ｂにおけるＢ因子結合部位を占有し、崩壊を促進し、新しいＣ３コンバターゼの形成を防止する。さらに、Ｈ因子、ＣＦＨＬ－１およびＣＤ４６は、Ｃ３ｂをｉＣ３ｂへと切断するプロテアーゼＩ因子のための補因子として、また、ＣＤ４６の場合はＣ４ｂのための補因子として作用する。ＣＦＨＲ－１は、崩壊促進またはＩ因子補因子活性を媒介しない。Ｈ因子と同様に、ＣＦＨＲ－１は、Ｃ３ｂに結合し、グリコサミノグリカンに結合することにより自己表面を認識し、Ｃ５コンバターゼおよび末端補体複合体形成を阻害する［４３］。
【0013】
ＧＡの媒介における補体系の肝要な役割の証拠にもかかわらず、補体系をモジュレートする薬剤の治験は、一貫しない結果を示した。例えば、モノクローナル抗体エクリズマブ（Ａｅｘｉｏｎ）およびランパリズマブ（lampalizumab）［４４］（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）は、診療所においてＧＡ進行を遅くするのに失敗した。その上、Ｇｙｒｏｓｃｏｐｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓは、ＧＡの臨床治験（ＧＴ００５）に至る補体Ｉ因子遺伝子療法を生成した［４７］。しかし、ＣＦＩが低いまたは存在しない患者においてＣＦＩをブーストすることは、補体活性化を理論上は低減させるが、抗微生物活性の原因となるＣＰおよびＬＰを含む３種の経路全てがこの処置により影響されることになる。したがって、全ての補体系経路の全身的な低減は、眼を細菌感染に対して脆弱なままにする可能性がある、または感染した眼がクリアになるのにより時間がかかるであろう。その上、抗補体単独療法、例えば、アバシンカプタドペゴル（avacincaptad pegol）および補体Ｉ因子遺伝子療法による初期臨床治験は、ウエット型ＡＭＤを発症する一部のＧＡ患者の証拠となり、これは、患者が、急速な視覚喪失を予防するために、ラニビズマブまたはアフリベルセプトの毎月の抗ＶＥＧＦ注射を必要とすることを要求した。
【0014】
ＰＥＤＦは、ＲＰＥ細胞から大量に頂端側方に（apicolaterally）放出される５０ｋＤａタンパク質であり［４８、４９］、ＰＥＤＦ受容体との相互作用を介して網膜神経保護特性を表示する［５０、５１］。ＰＥＤＦは、網膜におけるいくつかの機能を有する、すなわち、これは、内皮細胞遊走の阻害を部分的に介して［５４］、抗血管新生であり、抗腫瘍形成および神経栄養特性を表示する［５０～５６］。ＲＰＥ細胞層において高密度のＰＥＤＦ受容体が存在し［５７］、網膜における自己分泌および傍分泌神経保護的役割を示唆する。加えて、ＰＥＤＦは、脱共役タンパク質－２（ＵＣＰ－２）の上方調節を介して、酸化ストレスからヒトＲＰＥ細胞を保護することが実証された（リポフスチン蓄積の結果としてＧＡ患者の網膜において提唱される現象）［５５、５８］。したがって、本発明者らは、ＧＡ患者におけるＰＥＤＦの網膜濃度の低減が、網膜色素上皮および光受容体を酸化ストレスおよび補体攻撃による損傷に対して極めて脆弱なままにすると推論した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0015】
したがって、ＰＥＤＦ受容体を活性化し、補体系を中和または減弱することができる、地図状萎縮（ＧＡ）およびドライ型加齢性黄斑変性（ドライ型ＡＭＤ）等の網膜障害の処置のための改善された療法の必要が大いにある。
【0016】
多大な発明努力を用いて、本発明者らは、単一のプロモーターの制御下で、ＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質をコードする新規遺伝的構築物を慎重に設計および構築しており、すなわち、これは、バイシストロニックである。構築物のプロモーターは、ＰＥＤＦ受容体のアゴニストおよび抗補体タンパク質の両方が、最大限に発現されて、２種の独立した病態生理学的経路、すなわち、ＰＥＤＦ受容体における活性の増加および補体活性化の低減を介して、網膜細胞損傷および喪失を低減させることを確実にするために使用することができる。
【課題を解決するための手段】
【0017】
よって、本発明の第１の態様において、ＰＥＤＦ受容体のアゴニストをコードする第１のコード配列および抗補体タンパク質をコードする第２のコード配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む、遺伝的構築物が提供される。
【0018】
ＰＥＤＦ受容体アゴニストは、ＰＥＤＦの濃度を回復し、これにより、炎症を低減させ、毒性リポフスチン成分のレベルを低減させ、ＲＰＥおよび光受容体細胞を保存する。その上、抗補体タンパク質は、代替補体経路を中和または減弱し、これにより、さらなるＲＰＥ細胞喪失を抑止することが可能である。有利には、本発明の遺伝的構築物は、ＡＰ経路を標的とし、これは、侵入した病原体の破壊を容易にすることができる抗微生物防御系が維持されるように、補体系の古典的およびレクチン経路が保存されることを意味する。重要なことに、抗補体とＰＥＤＦ受容体活性化との組合せは、未処置のままではドライ型ＡＭＤをはるかに侵襲性が高いウエット型ＡＭＤ病態生理に変換する潜在力を有する網膜ＶＥＧＦ放出を限定するであろう。さらに、構築物のプロモーターは、ＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質の両方が、最大限に発現されて、ＰＥＤＦの濃度を回復し、炎症を低減させ、補体経路を中和して、さらなるＲＰＥ細胞喪失を抑止することを確実にするために使用することができる。
【0019】
本発明者らは、驚いたことに、単一の遺伝的構築物においてＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質の両方をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を組み合わせることが可能であることを実施例において実証した。ＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質の大きいサイズを考慮すると、これは特に困難であった。単一のプロモーターの制御下で単一の発現カセットから生理学的に有用な濃度でこれらの大きいタンパク質の両方を同時発現すること、また、この発現カセットが、ＡＡＶベクター（ｒＡＡＶ－２ベクター等）によって収容されることが可能であると予測することはできなかった。有利には、本発明の構築物により、先行技術に記載されているように、組換えタンパク質を注射する必要はない。さらに、先行技術において、依然として、明らかに不都合である、眼へのタンパク質の定期的な注射を行う必要があり、一方、本発明の構築物は、驚いたことに、長期治療効果を達成するのに単一の投与のみを要求し、これにより、患者に多大な利益を提供する。
【0020】
好ましくは、本発明の遺伝的構築物は、その一実施形態が図２に示されている発現カセットを含む。図２から分かる通り、一実施形態では、構築物は、プロモーター、ＰＥＤＦ受容体アゴニストをコードする第１のヌクレオチド配列、および抗補体タンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列を含む。よって、好ましくは、遺伝的構築物および発現カセットは、バイシストロニックであると称することができる。
【0021】
図２に例証される通り、ＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質をコードする第１および第２のコード配列は、５’から３’へと任意の順序で配置することができる。例えば、一実施形態では、ＰＥＤＦ受容体アゴニストのコード配列は、抗補体タンパク質のコード配列の５’に配置され、好ましくは、それらの間にスペーサー配列（ｓｅｑｕｅｎｃｅｒ）がある。あるいは、別の実施形態では、抗補体タンパク質のコード配列は、ＰＥＤＦ受容体アゴニストのコード配列の５’に配置することができ、好ましくは、それらの間にスペーサー配列がある。
【0022】
第１の態様の遺伝的構築物におけるプロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼが第１および第２のコード配列に結合し、それを転写するように誘導することが可能である任意のヌクレオチド配列であり得る。
【0023】
プロモーターは、構成的または組織特異的であり得る。
【0024】
適した構成的プロモーターは、サイトメガロウイルスプロモーターであり得る。サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターをコードするヌクレオチド配列（５０８ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号１と本明細書で称される：
CGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCT
［配列番号１］
別の実施形態では、プロモーターは、好ましくは、ＣＭＶプロモーターのトランケート形態である。ＣＭＶプロモーターのトランケート形態をコードするヌクレオチド配列（６０ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号２と本明細書で称される：
AGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTTTAGTGAACCGTCAGAT
［配列番号２］
別の実施形態では、プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期エンハンサーエレメントおよびニワトリベータ－アクチン遺伝子の第１のイントロンの融合物（ＣＡＧ）である。サイトメガロウイルス初期エンハンサーエレメントおよびニワトリベータ－アクチン遺伝子の第１のイントロンをコードするヌクレオチド配列（５８３ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号３と本明細書で称される：
CGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG
［配列番号３］
適した組織特異的プロモーターは、卵黄様黄斑変性症タンパク質－２（ＶＭＤ２）プロモーター（時に、ベストロフィン－１と称される）であり得る。有利には、このプロモーターは、導入遺伝子発現をＲＰＥ細胞に制限する。ＶＭＤ２プロモーターをコードするヌクレオチド配列（２０３９ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号４と本明細書で称される：
AATTCTGTCATTTTACTAGGGTGATGAAATTCCCAAGCAACACCATCCTTTTCAGATAAGGGCACTGAGGCTGAGAGAGGAGCTGAAACCTACCCGGCGTCACCACACACAGGTGGCAAGGCTGGGACCAGAAACCAGGACTGTTGACTGCAGCCCGGTATTCATTCTTTCCATAGCCCACAGGGCTGTCAAAGACCCCAGGGCCTAGTCAGAGGCTCCTCCTTCCTGGAGAGTTCCTGGCACAGAAGTTGAAGCTCAGCACAGCCCCCTAACCCCCAACTCTCTCTGCAAGGCCTCAGGGGTCAGAACACTGGTGGAGCAGATCCTTTAGCCTCTGGATTTTAGGGCCATGGTAGAGGGGGTGTTGCCCTAAATTCCAGCCCTGGTCTCAGCCCAACACCCTCCAAGAAGAAATTAGAGGGGCCATGGCCAGGCTGTGCTAGCCGTTGCTTCTGAGCAGATTACAAGAAGGGACTAAGACAAGGACTCCTTTGTGGAGGTCCTGGCTTAGGGAGTCAAGTGACGGCGGCTCAGCACTCACGTGGGCAGTGCCAGCCTCTAAGAGTGGGCAGGGGCACTGGCCACAGAGTCCCAGGGAGTCCCACCAGCCTAGTCGCCAGACCTTCTGTGGGATCATCGGACCCACCTGGAACCCCACCTGTGAGTACAAGGTGCCCCAGGTGGACTGGGCTGGGGCTTTGAGGCCTTCAGGGTTGGATGGCCATCTTGCGTATTTGTGTGGGATATGCACACACAGGCAGCACATGCGCAGGTGTGTGGGCACCTGTGTGTCTGTGCAAATGCCCTGAGGTGGGAATGAGCTTGGTGTGCATCAGGCACAGCCAGCCAGTGTGGCTGCAGCAAAACACACAGGGAAAGAATGGAGGGGGCATCAATCACTGCTTCAGTAAATTTTTATTGAGCGCCTTCTACGAGAACACAAGAGGAGCTTCCATTCTGAGGAGGAAACAGGCAGGAAACAGGCAGATATCCTGTATAATTTCAAGTAGTGATAAGTGCTCTCTAGAAATATCAAGCAAGGTGAGGAGACACAGAGCACCGGTGGCAGTGGGGCTCTATTTCCAGGTTGGATGGTTGGGAACATCCTTTCTAAAGGGAACCTGGAGTGGGAAGGAACCATGCAGGTATCTCAGGAAGAGCTTCCTCCAGGCAGGAAGATCAGCAGGTGGAAAGGCCCTGGAGCCACCATTCAGTAAACATCATTTGAGCATCTCTACCAGCTAGGTTCCATTATGGGAATGGGAATATGGTGGTGGACAGGGCTGCCTGGTCCCTTCCATACTTCTCACACTAGGGTGGTTGAGAGAGCTTGGGAGCTAACGAACAAGATGGGCTGAGAACACTGCCTAGCCCAGAGGACCTGAGCTTAGTGTGTAGACATTGCTGCTGTTACTGCCTTTGTCATTGTATTATTTATTTATTTATTTATTTATTTTTAGACAGAGTTTTGCTCTTCTTACCCAGGCTGGAGTGCAATGGCGTGATCTCAGCTCACTGCAACCTCCACCTCCTGGGTTCAAGCGATTCTCCTGCCTCAGCCTCCTGAGTAGCTGGGATTACAGGCACCCGCACCACGCCTGGATAATTTTTTTGTATTTTTAGTAGAGACAGGGTTTCACCATGTTGGCCAGGCTGGTCTCGAACTCCTGACCTTAGGTGATCCACCTGCCTCGACTTCCCAAAGTGCTGGGATTATAGGCATGAGCCACTGCGCCCAGTGATTATAGAAAGTTAAAGGCACATGGCAATGCACACGCCTATCTACGTCTTCCCTGCCAAAGCAAAGGGCAGCCTCTGGGCTCACTTTCTTGCGTTTCTACTTCCAAAAGGCAGTCAGAACTGGCAGGGCCTTGGAGACCACTTCATCCACCTCCTAGGGTCCCTATGGGAGAGTTGAGGTCCAGAGCAGGGAAGGGTCCTGACAGGCTCTGACCAGGGCCTCTGATCCCTACAAACCCCCAATCGGTGTCCCTCTCTACCAGGACCCAAGCCCACCTGCTGCAGCCCACTGCCTGGCC
［配列番号４］
またさらに好ましい実施形態では、プロモーターは、ＶＭＤ２プロモーターのトランケート形態である。ＶＭＤ２プロモーターのトランケート形態をコードするヌクレオチド配列（６２３ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号５と本明細書で称される：
AATTCTGTCATTTTACTAGGGTGATGAAATTCCCAAGCAACACCATCCTTTTCAGATAAGGGCACTGAGGCTGAGAGAGGAGCTGAAACCTACCCGGCGTCACCACACACAGGTGGCAAGGCTGGGACCAGAAACCAGGACTGTTGACTGCAGCCCGGTATTCATTCTTTCCATAGCCCACAGGGCTGTCAAAGACCCCAGGGCCTAGTCAGAGGCTCCTCCTTCCTGGAGAGTTCCTGGCACAGAAGTTGAAGCTCAGCACAGCCCCCTAACCCCCAACTCTCTCTGCAAGGCCTCAGGGGTCAGAACACTGGTGGAGCAGATCCTTTAGCCTCTGGATTTTAGGGCCATGGTAGAGGGGGTGTTGCCCTAAATTCCAGCCCTGGTCTCAGCCCAACACCCTCCAAGAAGAAATTAGAGGGGCCATGGCCAGGCTGTGCTAGCCGTTGCTTCTGAGCAGATTACAAGAAGGGACTAAGACAAGGACTCCTTTGTGGAGGTCCTGGCTTAGGGAGTCAAGTGACGGCGGCTCAGCACTCACGTGGGCAGTGCCAGCCTCTAAGAGTGGGCAGGGGCACTGGCCACAGAGTCCCAGGGAGTCCCACCAGCCTAGTCGCCAGACC
［配列番号５］
また別の好ましい実施形態では、ＶＭＤ２プロモーターのトランケート形態をコードするヌクレオチド配列（４６２ｂｐ）は、次の通り、配列番号６と本明細書で称される：
TCATTCTTTCCATAGCCCACAGGGCTGTCAAAGACCCCAGGGCCTAGTCAGAGGCTCCTCCTTCCTGGAGAGTTCCTGGCACAGAAGTTGAAGCTCAGCACAGCCCCCTAACCCCCAACTCTCTCTGCAAGGCCTCAGGGGTCAGAACACTGGTGGAGCAGATCCTTTAGCCTCTGGATTTTAGGGCCATGGTAGAGGGGGTGTTGCCCTAAATTCCAGCCCTGGTCTCAGCCCAACACCCTCCAAGAAGAAATTAGAGGGGCCATGGCCAGGCTGTGCTAGCCGTTGCTTCTGAGCAGATTACAAGAAGGGACTAAGACAAGGACTCCTTTGTGGAGGTCCTGGCTTAGGGAGTCAAGTGACGGCGGCTCAGCACTCACGTGGGCAGTGCCAGCCTCTAAGAGTGGGCAGGGGCACTGGCCACAGAGTCCCAGGGAGTCCCACCAGCCTAGTCGCCAGACC
［配列番号６］
別の実施形態では、プロモーターは、ヒトホスホグリセリン酸キナーゼ－１（ＰＧＫ）プロモーターである。ヒトＰＧＫ－１プロモーターをコードするヌクレオチド配列（５００ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号７と本明細書で称される：
GGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATGCGCTTTAGCAGCCCCGCTGGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGCCTCGCACACATTCCACATCCACCGGTAGGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTTGGTGGCCCCTTCGCGCCACCTTCTACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCCCCCCGCCCCGCAGCTCGCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGCACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGATGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAAGCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATAGCAGCTTTGCTCCTTCGCTTTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCCCGAAGGTCCTCCGGAGGCCCGGCATTCTGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTCCTCATCTCCGGGCCTTTCG
［配列番号７］
さらなる実施形態では、プロモーターは、真核生物伸長因子１のアルファサブユニットを発現するヒトＥＥＦ１Ａ１遺伝子に由来するＥＦ１αである。ＥＦ１αプロモーターをコードするヌクレオチド配列（１１８２ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号８と本明細書で称される：
GCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACGCCCCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCTTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGA
［配列番号８］
さらなる実施形態では、プロモーターは、大きいイントロンがないＥＦ１αである。ＥＦ１αプロモーターをコードするヌクレオチド配列（２３０ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号９と本明細書で称される：
GCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAG
［配列番号９］
したがって、好ましくは、プロモーターは、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８もしくは９に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
CGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCT
［配列番号１］
別の実施形態では、プロモーターは、好ましくは、ＣＭＶプロモーターのトランケート形態である。ＣＭＶプロモーターのトランケート形態をコードするヌクレオチド配列（６０ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号２と本明細書で称される：
AGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTTTAGTGAACCGTCAGAT
［配列番号２］
別の実施形態では、プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期エンハンサーエレメントおよびニワトリベータ－アクチン遺伝子の第１のイントロンの融合物（ＣＡＧ）である。サイトメガロウイルス初期エンハンサーエレメントおよびニワトリベータ－アクチン遺伝子の第１のイントロンをコードするヌクレオチド配列（５８３ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号３と本明細書で称される：
CGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG
［配列番号３］
適した組織特異的プロモーターは、卵黄様黄斑変性症タンパク質－２（ＶＭＤ２）プロモーター（時に、ベストロフィン－１と称される）であり得る。有利には、このプロモーターは、導入遺伝子発現をＲＰＥ細胞に制限する。ＶＭＤ２プロモーターをコードするヌクレオチド配列（２０３９ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号４と本明細書で称される：
AATTCTGTCATTTTACTAGGGTGATGAAATTCCCAAGCAACACCATCCTTTTCAGATAAGGGCACTGAGGCTGAGAGAGGAGCTGAAACCTACCCGGCGTCACCACACACAGGTGGCAAGGCTGGGACCAGAAACCAGGACTGTTGACTGCAGCCCGGTATTCATTCTTTCCATAGCCCACAGGGCTGTCAAAGACCCCAGGGCCTAGTCAGAGGCTCCTCCTTCCTGGAGAGTTCCTGGCACAGAAGTTGAAGCTCAGCACAGCCCCCTAACCCCCAACTCTCTCTGCAAGGCCTCAGGGGTCAGAACACTGGTGGAGCAGATCCTTTAGCCTCTGGATTTTAGGGCCATGGTAGAGGGGGTGTTGCCCTAAATTCCAGCCCTGGTCTCAGCCCAACACCCTCCAAGAAGAAATTAGAGGGGCCATGGCCAGGCTGTGCTAGCCGTTGCTTCTGAGCAGATTACAAGAAGGGACTAAGACAAGGACTCCTTTGTGGAGGTCCTGGCTTAGGGAGTCAAGTGACGGCGGCTCAGCACTCACGTGGGCAGTGCCAGCCTCTAAGAGTGGGCAGGGGCACTGGCCACAGAGTCCCAGGGAGTCCCACCAGCCTAGTCGCCAGACCTTCTGTGGGATCATCGGACCCACCTGGAACCCCACCTGTGAGTACAAGGTGCCCCAGGTGGACTGGGCTGGGGCTTTGAGGCCTTCAGGGTTGGATGGCCATCTTGCGTATTTGTGTGGGATATGCACACACAGGCAGCACATGCGCAGGTGTGTGGGCACCTGTGTGTCTGTGCAAATGCCCTGAGGTGGGAATGAGCTTGGTGTGCATCAGGCACAGCCAGCCAGTGTGGCTGCAGCAAAACACACAGGGAAAGAATGGAGGGGGCATCAATCACTGCTTCAGTAAATTTTTATTGAGCGCCTTCTACGAGAACACAAGAGGAGCTTCCATTCTGAGGAGGAAACAGGCAGGAAACAGGCAGATATCCTGTATAATTTCAAGTAGTGATAAGTGCTCTCTAGAAATATCAAGCAAGGTGAGGAGACACAGAGCACCGGTGGCAGTGGGGCTCTATTTCCAGGTTGGATGGTTGGGAACATCCTTTCTAAAGGGAACCTGGAGTGGGAAGGAACCATGCAGGTATCTCAGGAAGAGCTTCCTCCAGGCAGGAAGATCAGCAGGTGGAAAGGCCCTGGAGCCACCATTCAGTAAACATCATTTGAGCATCTCTACCAGCTAGGTTCCATTATGGGAATGGGAATATGGTGGTGGACAGGGCTGCCTGGTCCCTTCCATACTTCTCACACTAGGGTGGTTGAGAGAGCTTGGGAGCTAACGAACAAGATGGGCTGAGAACACTGCCTAGCCCAGAGGACCTGAGCTTAGTGTGTAGACATTGCTGCTGTTACTGCCTTTGTCATTGTATTATTTATTTATTTATTTATTTATTTTTAGACAGAGTTTTGCTCTTCTTACCCAGGCTGGAGTGCAATGGCGTGATCTCAGCTCACTGCAACCTCCACCTCCTGGGTTCAAGCGATTCTCCTGCCTCAGCCTCCTGAGTAGCTGGGATTACAGGCACCCGCACCACGCCTGGATAATTTTTTTGTATTTTTAGTAGAGACAGGGTTTCACCATGTTGGCCAGGCTGGTCTCGAACTCCTGACCTTAGGTGATCCACCTGCCTCGACTTCCCAAAGTGCTGGGATTATAGGCATGAGCCACTGCGCCCAGTGATTATAGAAAGTTAAAGGCACATGGCAATGCACACGCCTATCTACGTCTTCCCTGCCAAAGCAAAGGGCAGCCTCTGGGCTCACTTTCTTGCGTTTCTACTTCCAAAAGGCAGTCAGAACTGGCAGGGCCTTGGAGACCACTTCATCCACCTCCTAGGGTCCCTATGGGAGAGTTGAGGTCCAGAGCAGGGAAGGGTCCTGACAGGCTCTGACCAGGGCCTCTGATCCCTACAAACCCCCAATCGGTGTCCCTCTCTACCAGGACCCAAGCCCACCTGCTGCAGCCCACTGCCTGGCC
［配列番号４］
またさらに好ましい実施形態では、プロモーターは、ＶＭＤ２プロモーターのトランケート形態である。ＶＭＤ２プロモーターのトランケート形態をコードするヌクレオチド配列（６２３ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号５と本明細書で称される：
AATTCTGTCATTTTACTAGGGTGATGAAATTCCCAAGCAACACCATCCTTTTCAGATAAGGGCACTGAGGCTGAGAGAGGAGCTGAAACCTACCCGGCGTCACCACACACAGGTGGCAAGGCTGGGACCAGAAACCAGGACTGTTGACTGCAGCCCGGTATTCATTCTTTCCATAGCCCACAGGGCTGTCAAAGACCCCAGGGCCTAGTCAGAGGCTCCTCCTTCCTGGAGAGTTCCTGGCACAGAAGTTGAAGCTCAGCACAGCCCCCTAACCCCCAACTCTCTCTGCAAGGCCTCAGGGGTCAGAACACTGGTGGAGCAGATCCTTTAGCCTCTGGATTTTAGGGCCATGGTAGAGGGGGTGTTGCCCTAAATTCCAGCCCTGGTCTCAGCCCAACACCCTCCAAGAAGAAATTAGAGGGGCCATGGCCAGGCTGTGCTAGCCGTTGCTTCTGAGCAGATTACAAGAAGGGACTAAGACAAGGACTCCTTTGTGGAGGTCCTGGCTTAGGGAGTCAAGTGACGGCGGCTCAGCACTCACGTGGGCAGTGCCAGCCTCTAAGAGTGGGCAGGGGCACTGGCCACAGAGTCCCAGGGAGTCCCACCAGCCTAGTCGCCAGACC
［配列番号５］
また別の好ましい実施形態では、ＶＭＤ２プロモーターのトランケート形態をコードするヌクレオチド配列（４６２ｂｐ）は、次の通り、配列番号６と本明細書で称される：
TCATTCTTTCCATAGCCCACAGGGCTGTCAAAGACCCCAGGGCCTAGTCAGAGGCTCCTCCTTCCTGGAGAGTTCCTGGCACAGAAGTTGAAGCTCAGCACAGCCCCCTAACCCCCAACTCTCTCTGCAAGGCCTCAGGGGTCAGAACACTGGTGGAGCAGATCCTTTAGCCTCTGGATTTTAGGGCCATGGTAGAGGGGGTGTTGCCCTAAATTCCAGCCCTGGTCTCAGCCCAACACCCTCCAAGAAGAAATTAGAGGGGCCATGGCCAGGCTGTGCTAGCCGTTGCTTCTGAGCAGATTACAAGAAGGGACTAAGACAAGGACTCCTTTGTGGAGGTCCTGGCTTAGGGAGTCAAGTGACGGCGGCTCAGCACTCACGTGGGCAGTGCCAGCCTCTAAGAGTGGGCAGGGGCACTGGCCACAGAGTCCCAGGGAGTCCCACCAGCCTAGTCGCCAGACC
［配列番号６］
別の実施形態では、プロモーターは、ヒトホスホグリセリン酸キナーゼ－１（ＰＧＫ）プロモーターである。ヒトＰＧＫ－１プロモーターをコードするヌクレオチド配列（５００ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号７と本明細書で称される：
GGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATGCGCTTTAGCAGCCCCGCTGGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGCCTCGCACACATTCCACATCCACCGGTAGGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTTGGTGGCCCCTTCGCGCCACCTTCTACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCCCCCCGCCCCGCAGCTCGCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGCACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGATGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAAGCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATAGCAGCTTTGCTCCTTCGCTTTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCCCGAAGGTCCTCCGGAGGCCCGGCATTCTGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTCCTCATCTCCGGGCCTTTCG
［配列番号７］
さらなる実施形態では、プロモーターは、真核生物伸長因子１のアルファサブユニットを発現するヒトＥＥＦ１Ａ１遺伝子に由来するＥＦ１αである。ＥＦ１αプロモーターをコードするヌクレオチド配列（１１８２ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号８と本明細書で称される：
GCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACGCCCCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCTTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGA
［配列番号８］
さらなる実施形態では、プロモーターは、大きいイントロンがないＥＦ１αである。ＥＦ１αプロモーターをコードするヌクレオチド配列（２３０ｂｐ）の一実施形態は、次の通り、配列番号９と本明細書で称される：
GCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAG
［配列番号９］
したがって、好ましくは、プロモーターは、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８もしくは９に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
【0025】
ＧＡ患者における損傷したおよび脆弱なＲＰＥ細胞の生存を確実にするために、本発明者らは、本発明の遺伝的構築物にＰＥＤＦ受容体アゴニストを取り込んだ。本発明者らは、ＰＥＤＦ受容体アゴニストの配列を慎重に考慮し、第１の態様の遺伝的構築物における第１のコード配列によってコードされ得るタンパク質のいくつかの好ましい実施形態を作り出した。
【0026】
一実施形態では、第１のコード配列は、ＰＥＤＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。好ましくは、ＰＥＤＦタンパク質は、ヒトＰＥＤＦタンパク質である。好ましくは、ヒトＰＥＤＦタンパク質は、次の通り、配列番号１０と本明細書で称されるアミノ酸配列（４１８残基）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
MQALVLLLCIGALLGHSSCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGP
［配列番号１０］
好ましくは、この実施形態では、第１のコード配列は、次の通り、配列番号１１と本明細書で称されるヌクレオチド配列（１２５４ｂｐ）を含む：
ATGCAGGCCCTGGTGCTACTCCTCTGCATTGGAGCCCTCCTCGGGCACAGCAGCTGCCAGAACCCTGCCAGCCCCCCGGAGGAGGGCTCCCCAGACCCCGACAGCACAGGGGCGCTGGTGGAGGAGGAGGATCCTTTCTTCAAAGTCCCCGTGAACAAGCTGGCAGCGGCTGTCTCCAACTTCGGCTATGACCTGTACCGGGTGCGATCCAGCACGAGCCCCACGACCAACGTGCTCCTGTCTCCTCTCAGTGTGGCCACGGCCCTCTCGGCCCTCTCGCTGGGAGCGGAGCAGCGAACAGAATCCATCATTCACCGGGCTCTCTACTATGACTTGATCAGCAGCCCAGACATCCATGGTACCTATAAGGAGCTCCTTGACACGGTCACTGCCCCCCAGAAGAACCTCAAGAGTGCCTCCCGGATCGTCTTTGAGAAGAAGCTGCGCATAAAATCCAGCTTTGTGGCACCTCTGGAAAAGTCATATGGGACCAGGCCCAGAGTCCTGACGGGCAACCCTCGCTTGGACCTGCAAGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCGCAGATGAAAGGGAAGCTCGCCAGGTCCACAAAGGAAATTCCCGATGAGATCAGCATTCTCCTTCTCGGTGTGGCGCACTTCAAGGGGCAGTGGGTAACAAAGTTTGACTCCAGAAAGACTTCCCTCGAGGATTTCTACTTGGATGAAGAGAGGACCGTGAGGGTCCCCATGATGTCGGACCCTAAGGCTGTTTTACGCTATGGCTTGGATTCAGATCTCAGCTGCAAGATTGCCCAGCTGCCCTTGACCGGAAGCATGAGTATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAAGTGACCCAGAATTTGACCTTGATAGAGGAGAGCCTCACCTCCGAGTTCATTCATGACATAGACCGAGAACTGAAGACCGTGCAGGCGGTCCTCACTGTCCCCAAGCTGAAGCTGAGTTATGAAGGCGAAGTCACCAAGTCCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAATCCTTGTTTGATTCACCAGACTTTAGCAAGATCACAGGCAAACCCATCAAGCTGACTCAGGTGGAACACCGGGCTGGCTTTGAGTGGAACGAGGATGGGGCGGGAACCACCCCCAGCCCAGGGCTGCAGCCTGCCCACCTCACCTTCCCGCTGGACTATCACCTTAACCAGCCTTTCATCTTCGTACTGAGGGACACAGACACAGGGGCCCTTCTCTTCATTGGCAAGATTCTGGACCCCAGGGGCCCC
［配列番号１１］
オンライン希少コドン解析ツール（www.jcaj.deおよびhttps://www.genscript.com/tools/rare-codon-analysis）を使用した内在性ＰＥＤＦ １２５４ヌクレオチド配列（配列番号１１）のコドン解析は、配列が、不十分なコドン適応指数（ＣＡＩ）（ＪＣＡＴ ＣＡＩ＝０．４０およびＧｅｎｓｃｒｉｐｔ ＣＡＩ＝０．７８）を表示したことを明らかにした。高発現の導入遺伝子は、理想的には、効率的な遺伝子発現のために０．８０～１．００の間のＣＡＩを表示するはずである。したがって、内在性ＰＥＤＦ導入遺伝子内に含有される希少コドンが同定され、発現宿主（すなわち、ヒトの眼）においてより高頻度で使用されるコドンに置換され、よって、コドン最適化された１２５４配列（ＪＣＡＴ ＣＡＩ＝０．９６；Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ ＣＡＩ＝１．００）を生成した。
MQALVLLLCIGALLGHSSCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGP
［配列番号１０］
好ましくは、この実施形態では、第１のコード配列は、次の通り、配列番号１１と本明細書で称されるヌクレオチド配列（１２５４ｂｐ）を含む：
ATGCAGGCCCTGGTGCTACTCCTCTGCATTGGAGCCCTCCTCGGGCACAGCAGCTGCCAGAACCCTGCCAGCCCCCCGGAGGAGGGCTCCCCAGACCCCGACAGCACAGGGGCGCTGGTGGAGGAGGAGGATCCTTTCTTCAAAGTCCCCGTGAACAAGCTGGCAGCGGCTGTCTCCAACTTCGGCTATGACCTGTACCGGGTGCGATCCAGCACGAGCCCCACGACCAACGTGCTCCTGTCTCCTCTCAGTGTGGCCACGGCCCTCTCGGCCCTCTCGCTGGGAGCGGAGCAGCGAACAGAATCCATCATTCACCGGGCTCTCTACTATGACTTGATCAGCAGCCCAGACATCCATGGTACCTATAAGGAGCTCCTTGACACGGTCACTGCCCCCCAGAAGAACCTCAAGAGTGCCTCCCGGATCGTCTTTGAGAAGAAGCTGCGCATAAAATCCAGCTTTGTGGCACCTCTGGAAAAGTCATATGGGACCAGGCCCAGAGTCCTGACGGGCAACCCTCGCTTGGACCTGCAAGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCGCAGATGAAAGGGAAGCTCGCCAGGTCCACAAAGGAAATTCCCGATGAGATCAGCATTCTCCTTCTCGGTGTGGCGCACTTCAAGGGGCAGTGGGTAACAAAGTTTGACTCCAGAAAGACTTCCCTCGAGGATTTCTACTTGGATGAAGAGAGGACCGTGAGGGTCCCCATGATGTCGGACCCTAAGGCTGTTTTACGCTATGGCTTGGATTCAGATCTCAGCTGCAAGATTGCCCAGCTGCCCTTGACCGGAAGCATGAGTATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAAGTGACCCAGAATTTGACCTTGATAGAGGAGAGCCTCACCTCCGAGTTCATTCATGACATAGACCGAGAACTGAAGACCGTGCAGGCGGTCCTCACTGTCCCCAAGCTGAAGCTGAGTTATGAAGGCGAAGTCACCAAGTCCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAATCCTTGTTTGATTCACCAGACTTTAGCAAGATCACAGGCAAACCCATCAAGCTGACTCAGGTGGAACACCGGGCTGGCTTTGAGTGGAACGAGGATGGGGCGGGAACCACCCCCAGCCCAGGGCTGCAGCCTGCCCACCTCACCTTCCCGCTGGACTATCACCTTAACCAGCCTTTCATCTTCGTACTGAGGGACACAGACACAGGGGCCCTTCTCTTCATTGGCAAGATTCTGGACCCCAGGGGCCCC
［配列番号１１］
オンライン希少コドン解析ツール（www.jcaj.deおよびhttps://www.genscript.com/tools/rare-codon-analysis）を使用した内在性ＰＥＤＦ １２５４ヌクレオチド配列（配列番号１１）のコドン解析は、配列が、不十分なコドン適応指数（ＣＡＩ）（ＪＣＡＴ ＣＡＩ＝０．４０およびＧｅｎｓｃｒｉｐｔ ＣＡＩ＝０．７８）を表示したことを明らかにした。高発現の導入遺伝子は、理想的には、効率的な遺伝子発現のために０．８０～１．００の間のＣＡＩを表示するはずである。したがって、内在性ＰＥＤＦ導入遺伝子内に含有される希少コドンが同定され、発現宿主（すなわち、ヒトの眼）においてより高頻度で使用されるコドンに置換され、よって、コドン最適化された１２５４配列（ＪＣＡＴ ＣＡＩ＝０．９６；Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ ＣＡＩ＝１．００）を生成した。
【0027】
したがって、別の実施形態では、第１のコード配列は、次の通り、配列番号１２と本明細書で称されるヌクレオチド配列（１２５４ｂｐ）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCAGGCCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACAGCAGCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCC
［配列番号１２］
また別の好ましい実施形態では、第１のコード配列は、次の通り、配列番号１３と本明細書で称される、改変されたシグナルペプチド配列を含むヌクレオチド配列（１２５４ｂｐ）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCC
［配列番号１３］
したがって、好ましい実施形態では、第１のコード配列は、配列番号１１、１２もしくは１３のうちいずれか１つに実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、ＰＥＤＦ受容体アゴニストは、配列番号１０に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
ATGCAGGCCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACAGCAGCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCC
［配列番号１２］
また別の好ましい実施形態では、第１のコード配列は、次の通り、配列番号１３と本明細書で称される、改変されたシグナルペプチド配列を含むヌクレオチド配列（１２５４ｂｐ）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCC
［配列番号１３］
したがって、好ましい実施形態では、第１のコード配列は、配列番号１１、１２もしくは１３のうちいずれか１つに実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、ＰＥＤＦ受容体アゴニストは、配列番号１０に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
【0028】
第２のコード配列が、抗補体タンパク質をコードすることが認められるであろう。好ましくは、抗補体タンパク質は、補体活性化を中和または減弱することが可能である。さらにより好ましくは、抗補体タンパク質は、補体系の代替経路（ＡＰ）を標的とすることが可能である。好ましくは、抗補体タンパク質は、補体系の古典的経路（ＣＰ）および／またはレクチン経路（ＬＰ）に最小限に影響する。好ましくは、抗補体タンパク質は、補体系の古典的経路（ＣＰ）および／またはレクチン経路（ＬＰ）を標的としない。
【0029】
好ましくは、抗補体タンパク質は、補体因子Ｃ３ｂ、Ｂｂおよび／またはＣ５を中和することが可能である。したがって、この実施形態では、抗補体タンパク質は、抗Ｃ３ｂ、抗Ｂｂおよび／もしくは抗Ｃ５抗体、またはその抗原結合性断片である。
【0030】
その抗原結合性断片は、Ｃ３ｂおよび／またはＢｂに結合する、ＶＨ、ＶＬ、Ｆｄ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｃ断片からなる群から選択される断片のいずれかを含むかまたはそれからなることができる。抗原結合性断片は、Ｃ３ｂおよび／またはＢｂエピトープに結合する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むことができる。
【0031】
さらにより好ましくは、抗補体タンパク質は、単鎖可変断片（ＳＣＶＦ）である。換言すると、この好ましい実施形態では、抗補体タンパク質は、抗Ｃ３ｂ単鎖可変断片、抗Ｂｂ単鎖可変断片または抗Ｃ５単鎖可変断片である。
【0032】
あるいは、別の好ましい実施形態では、抗補体タンパク質は、正常では膜結合型ＣＤ５５の可溶性形態（ｓＣＤ５５）（時に、崩壊促進因子；ＤＡＦとしても知られている）である。好ましくは、抗補体タンパク質は、非膜付着型ＣＤ５５（ｓＣＤ５５）である。可溶性ＣＤ５５（ＤＡＦ）は、補体タンパク質複合体を不安定化し、これにより、この生化学的経路の活性を低減させる。
【0033】
別の好ましい実施形態では、抗補体タンパク質は、補体Ｈ因子関連タンパク質－１（ＣＦＨＲ１）である。好ましくは、ＣＦＨＲ１は、補体系活性カスケードを減弱する。
【0034】
別の好ましい実施形態では、抗補体タンパク質は、正常では膜結合型ＣＤ４６の可溶性形態（ｓＣＤ４６）である。好ましくは、この実施形態では、抗補体タンパク質は、可溶性（非膜会合型）ヒト補体調節タンパク質ＣＤ４６（ｓＣＤ４６）である。
【0035】
別の好ましい実施形態では、抗補体タンパク質は、補体Ｈ因子様タンパク質１（ＣＦＨＬ１）である。ＣＦＨＬ１は、調節ドメインを含むＨ因子のスプライスバリアントであり、中心的補体成分Ｃ３およびそれ以降（ｂｅｙｏｎｄ）のレベルで補体活性化を阻害する。
【0036】
好ましい一実施形態では、抗Ｃ３ｂ単鎖可変断片のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号１４、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYATLPTFEQGTKVEIKRGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFTSSSVSPGKGLEWVGLIYPYNGFNYYADSVKGRFTISADTSLQMNSLRAEDTAVYYCARNALYGSGGYYAMDYWGQGTLVTVSS
［配列番号１４］
好ましい実施形態では、抗Ｃ３ｂ単鎖可変断片をコードする核酸配列（７２６ｂｐ）は、次の通り、配列番号１５、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCCGCGCCAGCCAGGACGTAAGCACCGCCGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAGCGCCAGCTTCCTGTACAGCGGCGTGCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCTACGCCACCCTGCCCACCTTCGAGCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCAGCTTCACCAGCAGCAGCGTGAGCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCCTGATCTACCCCTACAACGGCTTCAACTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCAGCGCCGACACCAGCCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCAACGCCCTGTACGGCAGCGGCGGCTACTACGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
［配列番号１５］
別の実施形態では、抗Ｂｂ単鎖可変断片のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号１６、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
DVQITQSPSYLAASPGETITINCRASKSISKYLAWYQDKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAMYYCQQHDEYPWTFGGGTKLEIKRGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELAKPGASVRMSCKASGYTFTNYWIHWVKQRPGQGLEWIGYINPNTGYNDYNQKFKDKATLTADKSSSTVYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGQLGLRRAMDYWGQGTSVTVSS
［配列番号１６］
好ましい実施形態では、抗Ｂｂ単鎖可変断片をコードする核酸配列（７５０ｂｐ）は、次の通り、配列番号１７、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GACGTGCAGATCACCCAGAGCCCCAGCTACCTGGCCGCCAGCCCCGGCGAGACCATCACCATCAACTGCCGCGCCAGCAAGAGCATCAGCAAGTACCTGGCCTGGTACCAGGACAAGCCCGGCAAGACCAACAAGCTGCTGATCTACAGCGGCAGCACCCTGCAGAGCGGCATCCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCATGTACTACTGCCAGCAGCACGACGAGTACCCCTGGACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCCAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCGCCGAGCTGGCCAAGCCCGGCGCCAGCGTGCGCATGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAACTACTGGATCCACTGGGTGAAGCAGCGCCCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTACATCAACCCCAACACCGGCTACAACGACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACCCTGACCGCCGACAAGAGCAGCAGCACCGTGTACATGCAGCTGAGCAGCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGGCGGCCAGCTGGGCCTGCGCCGCGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACCGTGAGCAGC
［配列番号１７］
別の実施形態では、正常では細胞膜結合型ＣＤ５５の可溶性形態（ｓＣＤ５５、時に、崩壊促進因子；ＤＡＦとしても知られている）のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号１８、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
DCGLPPDVPNAQPALEGRTSFPEDTVITYKCEESFVKIPGEKDSVICLKGSQWSDIEEFCNRSCEVPTRLNSASLKQPYITQNYFPVGTVVEYECRPGYRREPSLSPKLTCLQNLKWSTAVEFCKKKSCPNPGEIRNGQIDVPGGILFGATISFSCNTGYKLFGSTSSFCLISGSSVQWSDPLPECREIYCPAPPQIDNGIIQGERDHYGYRQSVTYACNKGFTMIGEHSIYCTVNNDEGEWSGPPPECRGKSLTSKVPPTVQKPTTVNVPTTEVSPTSQKTTTKTTTPNAQATRSTPVSRTTKHFHETTPNKGSGTTSG
［配列番号１８］
好ましい実施形態では、正常では細胞膜結合型ＣＤ５５の可溶性形態（ｓＣＤ５５、時に、崩壊促進因子；ＤＡＦとしても知られている）をコードする核酸配列（９６０ｂｐ）は、次の通り、配列番号１９、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GACTGCGGCCTGCCCCCCGACGTGCCCAACGCCCAGCCCGCCCTGGAGGGCCGCACCAGCTTCCCCGAGGACACCGTGATCACCTACAAGTGCGAGGAGAGCTTCGTGAAGATCCCCGGCGAGAAGGACAGCGTGATCTGCCTGAAGGGCAGCCAGTGGAGCGACATCGAGGAGTTCTGCAACCGCAGCTGCGAGGTGCCCACCCGCCTGAACAGCGCCAGCCTGAAGCAGCCCTACATCACCCAGAACTACTTCCCCGTGGGCACCGTGGTGGAGTACGAGTGCCGCCCCGGCTACCGCCGCGAGCCCAGCCTGAGCCCCAAGCTGACCTGCCTGCAGAACCTGAAGTGGAGCACCGCCGTGGAGTTCTGCAAGAAGAAGAGCTGCCCCAACCCCGGCGAGATCCGCAACGGCCAGATCGACGTGCCCGGCGGCATCCTGTTCGGCGCCACCATCAGCTTCAGCTGCAACACCGGCTACAAGCTGTTCGGCAGCACCAGCAGCTTCTGCCTGATCAGCGGCAGCAGCGTGCAGTGGAGCGACCCCCTGCCCGAGTGCCGCGAGATCTACTGCCCCGCCCCCCCCCAGATCGACAACGGCATCATCCAGGGCGAGCGCGACCACTACGGCTACCGCCAGAGCGTGACCTACGCCTGCAACAAGGGCTTCACCATGATCGGCGAGCACAGCATCTACTGCACCGTGAACAACGACGAGGGCGAGTGGAGCGGCCCCCCCCCCGAGTGCCGAGGCAAGAGCCTGACCAGCAAGGTGCCCCCCACCGTGCAGAAGCCCACCACCGTGAACGTGCCCACCACCGAGGTGAGCCCCACCAGCCAGAAGACCACCACCAAGACCACCACCCCCAACGCCCAGGCCACCCGCAGCACCCCCGTGAGCCGCACCACCAAGCACTTCCACGAGACCACCCCCAACAAGGGCAGCGGCACCACCAGCGGC
［配列番号１９］
さらなる実施形態では、ヒト補体Ｈ因子関連タンパク質－１（ＣＦＨＲ１）のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号２０、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
EATFCDFPKINHGILYDEEKYKPFSQVPTGEVFYYSCEYNFVSPSKSFWTRITCTEEGWSPTPKCLRLCFFPFVENGHSESSGQTHLEGDTVQIICNTGYRLQNNENNISCVERGWSTPPKCRSTDTSCVNPPTVQNAHILSRQMSKYPSGERVRYECRSPYEMFGDEEVMCLNGNWTEPPQCKDSTGKCGPPPPIDNGDITSFPLSVYAPASSVEYQCQNLYQLEGNKRITCRNGQWSEPPKCLHPCVISREIMENYNIALRWTAKQKLYLRTGESAEFVCKRGYRLSSRSHTLRTTCWDGKLEYPTCAKR
［配列番号２０］
好ましい実施形態では、ヒト補体Ｈ因子関連タンパク質－１（ＣＦＨＲ１）をコードする核酸配列（９３６ｂｐ）は、次の通り、配列番号２１、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GAAGCAACATTTTGTGATTTTCCAAAAATAAACCATGGAATTCTATATGATGAAGAAAAATATAAGCCATTTTCCCAGGTTCCTACAGGGGAAGTTTTCTATTACTCCTGTGAATATAATTTTGTGTCTCCTTCAAAATCATTTTGGACTCGCATAACATGCACAGAAGAAGGATGGTCACCAACACCAAAGTGTCTCAGACTGTGTTTCTTTCCTTTTGTGGAAAATGGTCATTCTGAATCTTCAGGACAAACACATCTGGAAGGTGATACTGTGCAAATTATTTGCAACACAGGATACAGACTTCAAAACAATGAGAACAACATTTCATGTGTAGAACGGGGCTGGTCCACCCCTCCCAAATGCAGGTCCACTGACACTTCCTGTGTGAATCCGCCCACAGTACAAAATGCTCATATACTGTCGAGACAGATGAGTAAATATCCATCTGGTGAGAGAGTACGTTATGAATGTAGGAGCCCTTATGAAATGTTTGGGGATGAAGAAGTGATGTGTTTAAATGGAAACTGGACAGAACCACCTCAATGCAAAGATTCTACGGGAAAATGTGGGCCCCCTCCACCTATTGACAATGGGGACATTACTTCATTCCCGTTGTCAGTATATGCTCCAGCTTCATCAGTTGAGTACCAATGCCAGAACTTGTATCAACTTGAGGGTAACAAGCGAATAACATGTAGAAATGGACAATGGTCAGAACCACCAAAATGCTTACATCCGTGTGTAATATCCCGAGAAATTATGGAAAATTATAACATAGCATTAAGGTGGACAGCCAAACAGAAGCTTTATTTGAGAACAGGTGAATCAGCTGAATTTGTGTGTAAACGGGGATATCGTCTTTCATCACGTTCTCACACATTGCGAACAACATGTTGGGATGGGAAACTGGAGTATCCAACTTGTGCAAAAAGA
［配列番号２１］
別の実施形態では、ヒト補体Ｈ因子関連タンパク質－１（ＣＦＨＲ１）をコードするコドン最適化された核酸配列（９３６ｂｐ）は、次の通り、配列番号２２、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GAGGCCACCTTCTGCGACTTCCCCAAGATCAACCACGGCATCCTGTACGACGAGGAGAAGTACAAGCCCTTCAGCCAGGTGCCCACCGGCGAGGTGTTCTACTACAGCTGCGAGTACAACTTCGTGAGCCCCAGCAAGAGCTTCTGGACCCGCATCACCTGCACCGAGGAGGGCTGGAGCCCCACCCCCAAGTGCCTGCGCCTGTGCTTCTTCCCCTTCGTGGAGAACGGCCACAGCGAGAGCAGCGGCCAGACCCACCTGGAGGGCGACACCGTGCAGATCATCTGCAACACCGGCTACCGCCTGCAGAACAACGAGAACAACATCAGCTGCGTGGAGCGCGGCTGGAGCACCCCCCCCAAGTGCCGCAGCACCGACACCAGCTGCGTGAACCCCCCCACCGTGCAGAACGCCCACATCCTGAGCCGCCAGATGAGCAAGTACCCCAGCGGCGAGCGCGTGCGCTACGAGTGCCGCAGCCCCTACGAGATGTTCGGCGACGAGGAGGTGATGTGCCTGAACGGCAACTGGACCGAGCCCCCCCAGTGCAAGGACAGCACCGGCAAGTGCGGCCCCCCCCCCCCCATCGACAACGGCGACATCACCAGCTTCCCCCTGAGCGTGTACGCCCCCGCCAGCAGCGTGGAGTACCAGTGCCAGAACCTGTACCAGCTGGAGGGCAACAAGCGCATCACCTGCCGCAACGGCCAGTGGAGCGAGCCCCCCAAGTGCCTGCACCCCTGCGTGATCAGCCGCGAGATCATGGAGAACTACAACATCGCCCTGCGCTGGACCGCCAAGCAGAAGCTGTACCTGCGCACCGGCGAGAGCGCCGAGTTCGTGTGCAAGCGCGGCTACCGCCTGAGCAGCCGCAGCCACACCCTGCGCACCACCTGCTGGGACGGCAAGCTGGAGTACCCCACCTGCGCCAAGCGC
［配列番号２２］
さらなる実施形態では、正常では細胞膜結合型ＣＤ４６の可溶性形態（ｓＣＤ４６）のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号２３、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
CEEPPTFEAMELIGKPKPYYEIGERVDYKCKKGYFYIPPLATHTICDRNHTWLPVSDDACYRETCPYIRDPLNGQAVPANGTYEFGYQMHFICNEGYYLIGEEILYCELKGSVAIWSGKPPICEKVLCTPPPKIKNGKHTFSEVEVFEYLDAVTYSCDPAPGPDPFSLIGESTIYCGDNSVWSRAAPECKVVKCRFPVVENGKQISGFGKKFYYKATVMFECDKGFYLDGSDTIVCDSNSTWDPPVPKCLKVLPPSSTKPPALSHSVSTSSTTKSPASSASGPRPTYKPPVSNYPGYPKPEEGILDSLDV
［配列番号２３］
好ましい実施形態では、正常では細胞膜結合型ＣＤ４６の可溶性形態（ｓＣＤ４６）をコードする核酸配列（９３０ｂｐ）は、次の通り、配列番号２４、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
TGCGAGGAGCCCCCCACCTTCGAGGCCATGGAGCTGATCGGCAAGCCCAAGCCCTACTACGAGATCGGCGAGCGCGTGGACTACAAGTGCAAGAAGGGCTACTTCTACATCCCCCCCCTGGCCACCCACACCATCTGCGACCGCAACCACACCTGGCTGCCCGTGAGCGACGACGCCTGCTACCGCGAGACCTGCCCCTACATCCGCGACCCCCTGAACGGCCAGGCCGTGCCCGCCAACGGCACCTACGAGTTCGGCTACCAGATGCACTTCATCTGCAACGAGGGCTACTACCTGATCGGCGAGGAGATCCTGTACTGCGAGCTGAAGGGCAGCGTGGCCATCTGGAGCGGCAAGCCCCCCATCTGCGAGAAGGTGCTGTGCACCCCCCCCCCCAAGATCAAGAACGGCAAGCACACCTTCAGCGAGGTGGAGGTGTTCGAGTACCTGGACGCCGTGACCTACAGCTGCGACCCCGCCCCCGGCCCCGACCCCTTCAGCCTGATCGGCGAGAGCACCATCTACTGCGGCGACAACAGCGTGTGGAGCCGCGCCGCCCCCGAGTGCAAGGTGGTGAAGTGCCGCTTCCCCGTGGTGGAGAACGGCAAGCAGATCAGCGGCTTCGGCAAGAAGTTCTACTACAAGGCCACCGTGATGTTCGAGTGCGACAAGGGCTTCTACCTGGACGGCAGCGACACCATCGTGTGCGACAGCAACAGCACCTGGGACCCCCCCGTGCCCAAGTGCCTGAAGGTGCTGCCCCCCAGCAGCACCAAGCCCCCCGCCCTGAGCCACAGCGTGAGCACCAGCAGCACCACCAAGAGCCCCGCCAGCAGCGCCAGCGGCCCCCGCCCCACCTACAAGCCCCCCGTGAGCAACTACCCCGGCTACCCCAAGCCCGAGGAGGGCATCCTGGACAGCCTGGACGTG
［配列番号２４］
好ましい実施形態では、ＣＦＨＬ１のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号８０、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
EDCNELPPRRNTEILTGSWSDQTYPEGTQAIYKCRPGYRSLGNVIMVCRKGEWVALNPLRKCQKRPCGHPGDTPFGTFTLTGGNVFEYGVKAVYTCNEGYQLLGEINYRECDTDGWTNDIPICEVVKCLPVTAPENGKIVSSAMEPDREYHFGQAVRFVCNSGYKIEGDEEMHCSDDGFWSKEKPKCVEISCKSPDVINGSPISQKIIYKENERFQYKCNMGYEYSERGDAVCTESGWRPLPSCEEKSCDNPYIPNGDYSPLRIKHRTGDEITYQCRNGFYPATRGNTAKCTSTGWIPAPRCTLKPCDYPDIKHGGLYHENMRRPYFPVAVGKYYSYYCDEHFETPSGSYWDHIHCTQDGWSPAVPCLRKCYFPYLENGYNQNYGRKFVQGKSIDVACHPGYALPKAQTTVTCMENGWSPTPRCIR
［配列番号８０］
好ましい実施形態では、ＣＦＨＬ１をコードする核酸配列（１２７８ｂｐ）は、次の通り、配列番号８１、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GAGGACTGCAACGAGCTGCCCCCCCGCCGCAACACCGAGATCCTGACCGGCAGCTGGAGCGACCAGACCTACCCCGAGGGCACCCAGGCCATCTACAAGTGCCGCCCCGGCTACCGCAGCCTGGGCAACGTGATCATGGTGTGCCGCAAGGGCGAGTGGGTGGCCCTGAACCCCCTGCGCAAGTGCCAGAAGCGCCCCTGCGGCCACCCCGGCGACACCCCCTTCGGCACCTTCACCCTGACCGGCGGCAACGTGTTCGAGTACGGCGTGAAGGCCGTGTACACCTGCAACGAGGGCTACCAGCTGCTGGGCGAGATCAACTACCGCGAGTGCGACACCGACGGCTGGACCAACGACATCCCCATCTGCGAGGTGGTGAAGTGCCTGCCCGTGACCGCCCCCGAGAACGGCAAGATCGTGAGCAGCGCCATGGAGCCCGACCGCGAGTACCACTTCGGCCAGGCCGTGCGCTTCGTGTGCAACAGCGGCTACAAGATCGAGGGCGACGAGGAGATGCACTGCAGCGACGACGGCTTCTGGAGCAAGGAGAAGCCCAAGTGCGTGGAGATCAGCTGCAAGAGCCCCGACGTGATCAACGGCAGCCCCATCAGCCAGAAGATCATCTACAAGGAGAACGAGCGCTTCCAGTACAAGTGCAACATGGGCTACGAGTACAGCGAGCGCGGCGACGCCGTGTGCACCGAGAGCGGCTGGCGCCCCCTGCCCAGCTGCGAGGAGAAGAGCTGCGACAACCCCTACATCCCCAACGGCGACTACAGCCCCCTGCGCATCAAGCACCGCACCGGCGACGAGATCACCTACCAGTGCCGCAACGGCTTCTACCCCGCCACCCGGGGCAACACCGCCAAGTGCACCAGCACCGGCTGGATCCCCGCCCCCCGCTGCACCCTGAAGCCCTGCGACTACCCCGACATCAAGCACGGCGGCCTGTACCACGAGAACATGCGCCGCCCCTACTTCCCCGTGGCCGTGGGCAAGTACTACAGCTACTACTGCGACGAGCACTTCGAGACCCCCAGCGGCAGCTACTGGGACCACATCCACTGCACCCAGGACGGCTGGAGCCCCGCCGTGCCCTGCCTGCGCAAGTGCTACTTCCCCTACCTGGAGAACGGCTACAACCAGAACTACGGCCGCAAGTTCGTGCAGGGCAAGAGCATCGACGTGGCCTGCCACCCCGGCTACGCCCTGCCCAAGGCCCAGACCACCGTGACCTGCATGGAGAACGGCTGGAGCCCCACCCCCCGCTGCATCCGC
［配列番号８１］
好ましい実施形態では、抗Ｃ５単鎖可変断片のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号８２、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNQLSWYQQKPGKAPKLLIYYASTLASGYPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQGSYYSGGWDYGFGQGTKVEIKRGGGGGSGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSGRYWIQWVRQAPGKGLEWVASVWPGITGTNYANWAKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREPVAWGGGLDLWGQGTLVTVSS
［配列番号８２］
好ましい実施形態では、抗Ｃ５単鎖可変断片をコードする核酸配列（７５９ｂｐ）は、次の通り、配列番号８３、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCCAGGCCAGCCAGAGCATCAACAACCAGCTGAGCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCACCCTGGCCAGCGGCTACCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGGGCAGCTACTACAGCGGCGGCTGGGACTACGGCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCAGCTTCAGCGGCCGCTACTGGATCCAGTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCAGCGTGTGGCCCGGCATCACCGGCACCAACTACGCCAACTGGGCCAAGGGCCGCTTCACCATCAGCCGCGACGACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGAGCCCGTGGCCTGGGGCGGCGGCCTGGACCTGTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCTGA
［配列番号８３］
したがって、好ましい実施形態では、第２のコード配列は、配列番号１５、１７、１９、２１、２２、２４、８１もしくは８３のうちいずれか１つに実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、抗補体タンパク質は、配列番号１４、１６、１８、２０、２３、８０もしくは８２に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYATLPTFEQGTKVEIKRGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFTSSSVSPGKGLEWVGLIYPYNGFNYYADSVKGRFTISADTSLQMNSLRAEDTAVYYCARNALYGSGGYYAMDYWGQGTLVTVSS
［配列番号１４］
好ましい実施形態では、抗Ｃ３ｂ単鎖可変断片をコードする核酸配列（７２６ｂｐ）は、次の通り、配列番号１５、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCCGCGCCAGCCAGGACGTAAGCACCGCCGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAGCGCCAGCTTCCTGTACAGCGGCGTGCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCTACGCCACCCTGCCCACCTTCGAGCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCAGCTTCACCAGCAGCAGCGTGAGCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCCTGATCTACCCCTACAACGGCTTCAACTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCAGCGCCGACACCAGCCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCAACGCCCTGTACGGCAGCGGCGGCTACTACGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
［配列番号１５］
別の実施形態では、抗Ｂｂ単鎖可変断片のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号１６、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
DVQITQSPSYLAASPGETITINCRASKSISKYLAWYQDKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAMYYCQQHDEYPWTFGGGTKLEIKRGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELAKPGASVRMSCKASGYTFTNYWIHWVKQRPGQGLEWIGYINPNTGYNDYNQKFKDKATLTADKSSSTVYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGQLGLRRAMDYWGQGTSVTVSS
［配列番号１６］
好ましい実施形態では、抗Ｂｂ単鎖可変断片をコードする核酸配列（７５０ｂｐ）は、次の通り、配列番号１７、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GACGTGCAGATCACCCAGAGCCCCAGCTACCTGGCCGCCAGCCCCGGCGAGACCATCACCATCAACTGCCGCGCCAGCAAGAGCATCAGCAAGTACCTGGCCTGGTACCAGGACAAGCCCGGCAAGACCAACAAGCTGCTGATCTACAGCGGCAGCACCCTGCAGAGCGGCATCCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCATGTACTACTGCCAGCAGCACGACGAGTACCCCTGGACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCCAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCGCCGAGCTGGCCAAGCCCGGCGCCAGCGTGCGCATGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAACTACTGGATCCACTGGGTGAAGCAGCGCCCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTACATCAACCCCAACACCGGCTACAACGACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACCCTGACCGCCGACAAGAGCAGCAGCACCGTGTACATGCAGCTGAGCAGCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGGCGGCCAGCTGGGCCTGCGCCGCGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACCGTGAGCAGC
［配列番号１７］
別の実施形態では、正常では細胞膜結合型ＣＤ５５の可溶性形態（ｓＣＤ５５、時に、崩壊促進因子；ＤＡＦとしても知られている）のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号１８、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
DCGLPPDVPNAQPALEGRTSFPEDTVITYKCEESFVKIPGEKDSVICLKGSQWSDIEEFCNRSCEVPTRLNSASLKQPYITQNYFPVGTVVEYECRPGYRREPSLSPKLTCLQNLKWSTAVEFCKKKSCPNPGEIRNGQIDVPGGILFGATISFSCNTGYKLFGSTSSFCLISGSSVQWSDPLPECREIYCPAPPQIDNGIIQGERDHYGYRQSVTYACNKGFTMIGEHSIYCTVNNDEGEWSGPPPECRGKSLTSKVPPTVQKPTTVNVPTTEVSPTSQKTTTKTTTPNAQATRSTPVSRTTKHFHETTPNKGSGTTSG
［配列番号１８］
好ましい実施形態では、正常では細胞膜結合型ＣＤ５５の可溶性形態（ｓＣＤ５５、時に、崩壊促進因子；ＤＡＦとしても知られている）をコードする核酸配列（９６０ｂｐ）は、次の通り、配列番号１９、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GACTGCGGCCTGCCCCCCGACGTGCCCAACGCCCAGCCCGCCCTGGAGGGCCGCACCAGCTTCCCCGAGGACACCGTGATCACCTACAAGTGCGAGGAGAGCTTCGTGAAGATCCCCGGCGAGAAGGACAGCGTGATCTGCCTGAAGGGCAGCCAGTGGAGCGACATCGAGGAGTTCTGCAACCGCAGCTGCGAGGTGCCCACCCGCCTGAACAGCGCCAGCCTGAAGCAGCCCTACATCACCCAGAACTACTTCCCCGTGGGCACCGTGGTGGAGTACGAGTGCCGCCCCGGCTACCGCCGCGAGCCCAGCCTGAGCCCCAAGCTGACCTGCCTGCAGAACCTGAAGTGGAGCACCGCCGTGGAGTTCTGCAAGAAGAAGAGCTGCCCCAACCCCGGCGAGATCCGCAACGGCCAGATCGACGTGCCCGGCGGCATCCTGTTCGGCGCCACCATCAGCTTCAGCTGCAACACCGGCTACAAGCTGTTCGGCAGCACCAGCAGCTTCTGCCTGATCAGCGGCAGCAGCGTGCAGTGGAGCGACCCCCTGCCCGAGTGCCGCGAGATCTACTGCCCCGCCCCCCCCCAGATCGACAACGGCATCATCCAGGGCGAGCGCGACCACTACGGCTACCGCCAGAGCGTGACCTACGCCTGCAACAAGGGCTTCACCATGATCGGCGAGCACAGCATCTACTGCACCGTGAACAACGACGAGGGCGAGTGGAGCGGCCCCCCCCCCGAGTGCCGAGGCAAGAGCCTGACCAGCAAGGTGCCCCCCACCGTGCAGAAGCCCACCACCGTGAACGTGCCCACCACCGAGGTGAGCCCCACCAGCCAGAAGACCACCACCAAGACCACCACCCCCAACGCCCAGGCCACCCGCAGCACCCCCGTGAGCCGCACCACCAAGCACTTCCACGAGACCACCCCCAACAAGGGCAGCGGCACCACCAGCGGC
［配列番号１９］
さらなる実施形態では、ヒト補体Ｈ因子関連タンパク質－１（ＣＦＨＲ１）のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号２０、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
EATFCDFPKINHGILYDEEKYKPFSQVPTGEVFYYSCEYNFVSPSKSFWTRITCTEEGWSPTPKCLRLCFFPFVENGHSESSGQTHLEGDTVQIICNTGYRLQNNENNISCVERGWSTPPKCRSTDTSCVNPPTVQNAHILSRQMSKYPSGERVRYECRSPYEMFGDEEVMCLNGNWTEPPQCKDSTGKCGPPPPIDNGDITSFPLSVYAPASSVEYQCQNLYQLEGNKRITCRNGQWSEPPKCLHPCVISREIMENYNIALRWTAKQKLYLRTGESAEFVCKRGYRLSSRSHTLRTTCWDGKLEYPTCAKR
［配列番号２０］
好ましい実施形態では、ヒト補体Ｈ因子関連タンパク質－１（ＣＦＨＲ１）をコードする核酸配列（９３６ｂｐ）は、次の通り、配列番号２１、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GAAGCAACATTTTGTGATTTTCCAAAAATAAACCATGGAATTCTATATGATGAAGAAAAATATAAGCCATTTTCCCAGGTTCCTACAGGGGAAGTTTTCTATTACTCCTGTGAATATAATTTTGTGTCTCCTTCAAAATCATTTTGGACTCGCATAACATGCACAGAAGAAGGATGGTCACCAACACCAAAGTGTCTCAGACTGTGTTTCTTTCCTTTTGTGGAAAATGGTCATTCTGAATCTTCAGGACAAACACATCTGGAAGGTGATACTGTGCAAATTATTTGCAACACAGGATACAGACTTCAAAACAATGAGAACAACATTTCATGTGTAGAACGGGGCTGGTCCACCCCTCCCAAATGCAGGTCCACTGACACTTCCTGTGTGAATCCGCCCACAGTACAAAATGCTCATATACTGTCGAGACAGATGAGTAAATATCCATCTGGTGAGAGAGTACGTTATGAATGTAGGAGCCCTTATGAAATGTTTGGGGATGAAGAAGTGATGTGTTTAAATGGAAACTGGACAGAACCACCTCAATGCAAAGATTCTACGGGAAAATGTGGGCCCCCTCCACCTATTGACAATGGGGACATTACTTCATTCCCGTTGTCAGTATATGCTCCAGCTTCATCAGTTGAGTACCAATGCCAGAACTTGTATCAACTTGAGGGTAACAAGCGAATAACATGTAGAAATGGACAATGGTCAGAACCACCAAAATGCTTACATCCGTGTGTAATATCCCGAGAAATTATGGAAAATTATAACATAGCATTAAGGTGGACAGCCAAACAGAAGCTTTATTTGAGAACAGGTGAATCAGCTGAATTTGTGTGTAAACGGGGATATCGTCTTTCATCACGTTCTCACACATTGCGAACAACATGTTGGGATGGGAAACTGGAGTATCCAACTTGTGCAAAAAGA
［配列番号２１］
別の実施形態では、ヒト補体Ｈ因子関連タンパク質－１（ＣＦＨＲ１）をコードするコドン最適化された核酸配列（９３６ｂｐ）は、次の通り、配列番号２２、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GAGGCCACCTTCTGCGACTTCCCCAAGATCAACCACGGCATCCTGTACGACGAGGAGAAGTACAAGCCCTTCAGCCAGGTGCCCACCGGCGAGGTGTTCTACTACAGCTGCGAGTACAACTTCGTGAGCCCCAGCAAGAGCTTCTGGACCCGCATCACCTGCACCGAGGAGGGCTGGAGCCCCACCCCCAAGTGCCTGCGCCTGTGCTTCTTCCCCTTCGTGGAGAACGGCCACAGCGAGAGCAGCGGCCAGACCCACCTGGAGGGCGACACCGTGCAGATCATCTGCAACACCGGCTACCGCCTGCAGAACAACGAGAACAACATCAGCTGCGTGGAGCGCGGCTGGAGCACCCCCCCCAAGTGCCGCAGCACCGACACCAGCTGCGTGAACCCCCCCACCGTGCAGAACGCCCACATCCTGAGCCGCCAGATGAGCAAGTACCCCAGCGGCGAGCGCGTGCGCTACGAGTGCCGCAGCCCCTACGAGATGTTCGGCGACGAGGAGGTGATGTGCCTGAACGGCAACTGGACCGAGCCCCCCCAGTGCAAGGACAGCACCGGCAAGTGCGGCCCCCCCCCCCCCATCGACAACGGCGACATCACCAGCTTCCCCCTGAGCGTGTACGCCCCCGCCAGCAGCGTGGAGTACCAGTGCCAGAACCTGTACCAGCTGGAGGGCAACAAGCGCATCACCTGCCGCAACGGCCAGTGGAGCGAGCCCCCCAAGTGCCTGCACCCCTGCGTGATCAGCCGCGAGATCATGGAGAACTACAACATCGCCCTGCGCTGGACCGCCAAGCAGAAGCTGTACCTGCGCACCGGCGAGAGCGCCGAGTTCGTGTGCAAGCGCGGCTACCGCCTGAGCAGCCGCAGCCACACCCTGCGCACCACCTGCTGGGACGGCAAGCTGGAGTACCCCACCTGCGCCAAGCGC
［配列番号２２］
さらなる実施形態では、正常では細胞膜結合型ＣＤ４６の可溶性形態（ｓＣＤ４６）のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号２３、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
CEEPPTFEAMELIGKPKPYYEIGERVDYKCKKGYFYIPPLATHTICDRNHTWLPVSDDACYRETCPYIRDPLNGQAVPANGTYEFGYQMHFICNEGYYLIGEEILYCELKGSVAIWSGKPPICEKVLCTPPPKIKNGKHTFSEVEVFEYLDAVTYSCDPAPGPDPFSLIGESTIYCGDNSVWSRAAPECKVVKCRFPVVENGKQISGFGKKFYYKATVMFECDKGFYLDGSDTIVCDSNSTWDPPVPKCLKVLPPSSTKPPALSHSVSTSSTTKSPASSASGPRPTYKPPVSNYPGYPKPEEGILDSLDV
［配列番号２３］
好ましい実施形態では、正常では細胞膜結合型ＣＤ４６の可溶性形態（ｓＣＤ４６）をコードする核酸配列（９３０ｂｐ）は、次の通り、配列番号２４、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
TGCGAGGAGCCCCCCACCTTCGAGGCCATGGAGCTGATCGGCAAGCCCAAGCCCTACTACGAGATCGGCGAGCGCGTGGACTACAAGTGCAAGAAGGGCTACTTCTACATCCCCCCCCTGGCCACCCACACCATCTGCGACCGCAACCACACCTGGCTGCCCGTGAGCGACGACGCCTGCTACCGCGAGACCTGCCCCTACATCCGCGACCCCCTGAACGGCCAGGCCGTGCCCGCCAACGGCACCTACGAGTTCGGCTACCAGATGCACTTCATCTGCAACGAGGGCTACTACCTGATCGGCGAGGAGATCCTGTACTGCGAGCTGAAGGGCAGCGTGGCCATCTGGAGCGGCAAGCCCCCCATCTGCGAGAAGGTGCTGTGCACCCCCCCCCCCAAGATCAAGAACGGCAAGCACACCTTCAGCGAGGTGGAGGTGTTCGAGTACCTGGACGCCGTGACCTACAGCTGCGACCCCGCCCCCGGCCCCGACCCCTTCAGCCTGATCGGCGAGAGCACCATCTACTGCGGCGACAACAGCGTGTGGAGCCGCGCCGCCCCCGAGTGCAAGGTGGTGAAGTGCCGCTTCCCCGTGGTGGAGAACGGCAAGCAGATCAGCGGCTTCGGCAAGAAGTTCTACTACAAGGCCACCGTGATGTTCGAGTGCGACAAGGGCTTCTACCTGGACGGCAGCGACACCATCGTGTGCGACAGCAACAGCACCTGGGACCCCCCCGTGCCCAAGTGCCTGAAGGTGCTGCCCCCCAGCAGCACCAAGCCCCCCGCCCTGAGCCACAGCGTGAGCACCAGCAGCACCACCAAGAGCCCCGCCAGCAGCGCCAGCGGCCCCCGCCCCACCTACAAGCCCCCCGTGAGCAACTACCCCGGCTACCCCAAGCCCGAGGAGGGCATCCTGGACAGCCTGGACGTG
［配列番号２４］
好ましい実施形態では、ＣＦＨＬ１のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号８０、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
EDCNELPPRRNTEILTGSWSDQTYPEGTQAIYKCRPGYRSLGNVIMVCRKGEWVALNPLRKCQKRPCGHPGDTPFGTFTLTGGNVFEYGVKAVYTCNEGYQLLGEINYRECDTDGWTNDIPICEVVKCLPVTAPENGKIVSSAMEPDREYHFGQAVRFVCNSGYKIEGDEEMHCSDDGFWSKEKPKCVEISCKSPDVINGSPISQKIIYKENERFQYKCNMGYEYSERGDAVCTESGWRPLPSCEEKSCDNPYIPNGDYSPLRIKHRTGDEITYQCRNGFYPATRGNTAKCTSTGWIPAPRCTLKPCDYPDIKHGGLYHENMRRPYFPVAVGKYYSYYCDEHFETPSGSYWDHIHCTQDGWSPAVPCLRKCYFPYLENGYNQNYGRKFVQGKSIDVACHPGYALPKAQTTVTCMENGWSPTPRCIR
［配列番号８０］
好ましい実施形態では、ＣＦＨＬ１をコードする核酸配列（１２７８ｂｐ）は、次の通り、配列番号８１、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GAGGACTGCAACGAGCTGCCCCCCCGCCGCAACACCGAGATCCTGACCGGCAGCTGGAGCGACCAGACCTACCCCGAGGGCACCCAGGCCATCTACAAGTGCCGCCCCGGCTACCGCAGCCTGGGCAACGTGATCATGGTGTGCCGCAAGGGCGAGTGGGTGGCCCTGAACCCCCTGCGCAAGTGCCAGAAGCGCCCCTGCGGCCACCCCGGCGACACCCCCTTCGGCACCTTCACCCTGACCGGCGGCAACGTGTTCGAGTACGGCGTGAAGGCCGTGTACACCTGCAACGAGGGCTACCAGCTGCTGGGCGAGATCAACTACCGCGAGTGCGACACCGACGGCTGGACCAACGACATCCCCATCTGCGAGGTGGTGAAGTGCCTGCCCGTGACCGCCCCCGAGAACGGCAAGATCGTGAGCAGCGCCATGGAGCCCGACCGCGAGTACCACTTCGGCCAGGCCGTGCGCTTCGTGTGCAACAGCGGCTACAAGATCGAGGGCGACGAGGAGATGCACTGCAGCGACGACGGCTTCTGGAGCAAGGAGAAGCCCAAGTGCGTGGAGATCAGCTGCAAGAGCCCCGACGTGATCAACGGCAGCCCCATCAGCCAGAAGATCATCTACAAGGAGAACGAGCGCTTCCAGTACAAGTGCAACATGGGCTACGAGTACAGCGAGCGCGGCGACGCCGTGTGCACCGAGAGCGGCTGGCGCCCCCTGCCCAGCTGCGAGGAGAAGAGCTGCGACAACCCCTACATCCCCAACGGCGACTACAGCCCCCTGCGCATCAAGCACCGCACCGGCGACGAGATCACCTACCAGTGCCGCAACGGCTTCTACCCCGCCACCCGGGGCAACACCGCCAAGTGCACCAGCACCGGCTGGATCCCCGCCCCCCGCTGCACCCTGAAGCCCTGCGACTACCCCGACATCAAGCACGGCGGCCTGTACCACGAGAACATGCGCCGCCCCTACTTCCCCGTGGCCGTGGGCAAGTACTACAGCTACTACTGCGACGAGCACTTCGAGACCCCCAGCGGCAGCTACTGGGACCACATCCACTGCACCCAGGACGGCTGGAGCCCCGCCGTGCCCTGCCTGCGCAAGTGCTACTTCCCCTACCTGGAGAACGGCTACAACCAGAACTACGGCCGCAAGTTCGTGCAGGGCAAGAGCATCGACGTGGCCTGCCACCCCGGCTACGCCCTGCCCAAGGCCCAGACCACCGTGACCTGCATGGAGAACGGCTGGAGCCCCACCCCCCGCTGCATCCGC
［配列番号８１］
好ましい実施形態では、抗Ｃ５単鎖可変断片のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号８２、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNQLSWYQQKPGKAPKLLIYYASTLASGYPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQGSYYSGGWDYGFGQGTKVEIKRGGGGGSGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSGRYWIQWVRQAPGKGLEWVASVWPGITGTNYANWAKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREPVAWGGGLDLWGQGTLVTVSS
［配列番号８２］
好ましい実施形態では、抗Ｃ５単鎖可変断片をコードする核酸配列（７５９ｂｐ）は、次の通り、配列番号８３、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCCAGGCCAGCCAGAGCATCAACAACCAGCTGAGCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCACCCTGGCCAGCGGCTACCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGGGCAGCTACTACAGCGGCGGCTGGGACTACGGCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCAGCTTCAGCGGCCGCTACTGGATCCAGTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCAGCGTGTGGCCCGGCATCACCGGCACCAACTACGCCAACTGGGCCAAGGGCCGCTTCACCATCAGCCGCGACGACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGAGCCCGTGGCCTGGGGCGGCGGCCTGGACCTGTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCTGA
［配列番号８３］
したがって、好ましい実施形態では、第２のコード配列は、配列番号１５、１７、１９、２１、２２、２４、８１もしくは８３のうちいずれか１つに実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、抗補体タンパク質は、配列番号１４、１６、１８、２０、２３、８０もしくは８２に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
【0037】
科学文献に発表されている２種以上の遺伝子を発現する多くの遺伝子構築物は、（ｉ）２種以上の遺伝子の発現を別々に駆動するためのデュアルプロモーター、または（ｉｉ）組換えウイルスベクター内の単一のプロモーターによって駆動される単一の転写物からの遺伝子の翻訳を可能にするための、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）由来のもの等、遺伝子を連結するための配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）のいずれかを有する。しかし、ＩＲＥＳ依存性翻訳の効率は、異なる細胞および組織において劇的に変動し、ＩＲＥＳ依存性翻訳は、キャップ（ｃａｐ）依存性翻訳よりも有意に低くなり得、発現カセットの１位（すなわち、５’終端）にある遺伝子と比較して、ＩＲＥＳの下流の遺伝子のより低い発現が生じることが多いことを意味する。さらに、ｒＡＡＶベクターの限られたコード容量（一般に＜５ｋｂ）は、デュアルプロモーターおよび／またはＩＲＥＳリンカー（これに関して、ＥＭＣＶ ＩＲＥＳは、５５３ヌクレオチドの長さである）を使用した、ＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質のコード配列等の大きい遺伝子／ＯＲＦの取込みを防止する。
【0038】
したがって、好ましい実施形態では、遺伝的構築物は、第１および第２のコード配列の間に配置されたスペーサー配列を含む。例えば、スペーサー配列（ｖ２Ａ）が第１および第２のコード配列の間に配置されている、図３を参照されたい。このスペーサー配列は、ＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質を別々の分子として産生するように構成されたペプチドスペーサーをコードする。スペーサーが、直線的リボソーム配列転写をスキップして、別々の分子またはペプチドを産生するように構成されているため、これが可能となる。別々の分子に活性があることが認められるであろう。
【0039】
好ましくは、スペーサー配列は、ウイルスペプチドスペーサー配列、最も好ましくは、ウイルス－２Ａペプチドスペーサー配列を含みこれをコードする。一実施形態では、このウイルス－２Ａペプチドスペーサー配列は、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｔ２ＡまたはＰ２Ａ配列を含む。
【0040】
好ましくは、ウイルス－２Ａペプチド配列は、第１のコード配列を第２のコード配列に接続する。これは、構築物が、様々なベクターにおける発現に伴い生じるサイズ制限を克服することを可能にし、第１の態様の構築物によってコードされる全てのペプチドの発現が、単一のｍＲＮＡ転写物として単一のプロモーターの制御下で生じることを可能にする。
【0041】
よって、一実施形態では、ＰＥＤＦ受容体アゴニスト、ウイルス－２Ａペプチドおよび抗補体タンパク質の配列をコードする単一のｍＲＮＡ転写物の転写後に、翻訳スキッピングが、ウイルス－２Ａペプチドの末端グリシン－プロリンの間のウイルス－２Ａペプチド配列において生じることができる。この翻訳スキッピングは、これにより、２個のタンパク質、すなわち、ＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質を生成するであろう（図３を参照）。
【0042】
本発明者らは、スペーサー配列の４種の実施形態を生成した。本明細書に記載されている全ての実施形態に共通するペプチドスペーサー配列の重要なセクションの１つは、Ｃ末端である。
【0043】
一実施形態では、ペプチドスペーサー配列は、Ｐ２Ａである。好ましくは、Ｐ２Ａペプチドスペーサー配列は、次の通り、配列番号２５と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
ATNFSLLKQAGDVEENPGP
［配列番号２５］
好ましくは、ペプチドスペーサー配列の消化または切断部位は、配列番号２５における末端グリシンおよび終端プロリンの間に配置される。
ATNFSLLKQAGDVEENPGP
［配列番号２５］
好ましくは、ペプチドスペーサー配列の消化または切断部位は、配列番号２５における末端グリシンおよび終端プロリンの間に配置される。
【0044】
この第１の実施形態では、Ｐ２Ａペプチドスペーサー配列は、次の通り、配列番号２６と本明細書で称されるヌクレオチド配列（５７ｂｐ）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
GCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCC
［配列番号２６］
第２の実施形態では、ペプチドスペーサー配列は、Ｅ２Ａである。好ましくは、Ｅ２Ａペプチドスペーサー配列は、次の通り、配列番号２７と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
QCTNYALLKLAGDVESNPGP
［配列番号２７］
好ましくは、ペプチドスペーサー配列の消化または切断部位は、配列番号２７における末端グリシンおよび終端プロリンの間に配置される。
GCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCC
［配列番号２６］
第２の実施形態では、ペプチドスペーサー配列は、Ｅ２Ａである。好ましくは、Ｅ２Ａペプチドスペーサー配列は、次の通り、配列番号２７と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
QCTNYALLKLAGDVESNPGP
［配列番号２７］
好ましくは、ペプチドスペーサー配列の消化または切断部位は、配列番号２７における末端グリシンおよび終端プロリンの間に配置される。
【0045】
この第２の実施形態では、Ｅ２Ａペプチドスペーサー配列は、次の通り、配列番号２８と本明細書で称されるヌクレオチド配列（６０ｂｐ）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
CAGTGCACCAACTACGCCCTGCTGAAGCTGGCCGGCGACGTGGAGAGCAACCCCGGCCCC
［配列番号２８］
第３の実施形態では、ペプチドスペーサー配列は、Ｔ２Ａである。好ましくは、Ｔ２Ａペプチドスペーサー配列は、次の通り、配列番号２９と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
EGRGSLLTCGDVEENPGP
［配列番号２９］
好ましくは、ペプチドスペーサー配列の消化または切断部位は、配列番号２９における末端グリシンおよび終端プロリンの間に配置される。
CAGTGCACCAACTACGCCCTGCTGAAGCTGGCCGGCGACGTGGAGAGCAACCCCGGCCCC
［配列番号２８］
第３の実施形態では、ペプチドスペーサー配列は、Ｔ２Ａである。好ましくは、Ｔ２Ａペプチドスペーサー配列は、次の通り、配列番号２９と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
EGRGSLLTCGDVEENPGP
［配列番号２９］
好ましくは、ペプチドスペーサー配列の消化または切断部位は、配列番号２９における末端グリシンおよび終端プロリンの間に配置される。
【0046】
この第３の実施形態では、Ｔ２Ａペプチドスペーサー配列は、次の通り、配列番号３０と本明細書で称されるヌクレオチド配列（５４ｂｐ）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
GAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCC
［配列番号３０］
第４の好ましい実施形態では、ペプチドスペーサー配列は、Ｆ２Ａである。好ましくは、Ｆ２Ａペプチドスペーサー配列は、次の通り、配列番号３１と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
［配列番号３１］
好ましくは、ペプチドスペーサー配列の消化または切断部位は、配列番号３１における末端グリシンおよび終端プロリンの間に配置される。
GAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCC
［配列番号３０］
第４の好ましい実施形態では、ペプチドスペーサー配列は、Ｆ２Ａである。好ましくは、Ｆ２Ａペプチドスペーサー配列は、次の通り、配列番号３１と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
［配列番号３１］
好ましくは、ペプチドスペーサー配列の消化または切断部位は、配列番号３１における末端グリシンおよび終端プロリンの間に配置される。
【0047】
この第４の実施形態では、Ｆ２Ａペプチドスペーサー配列は、次の通り、配列番号３２と本明細書で称されるヌクレオチド配列（６６ｂｐ）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
GTGAAGCAGACCCTGAACTTCGACCTGCTGAAGCTGGCCGGCGACGTGGAGAGCAACCCCGGCCCC
［配列番号３２］
したがって、好ましい一実施形態では、ペプチドスペーサー配列は、配列番号２６、２８、３０もしくは３２のうちいずれか１つに実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、ペプチドスペーサー配列は、配列番号２５、２７、２９もしくは３１に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
GTGAAGCAGACCCTGAACTTCGACCTGCTGAAGCTGGCCGGCGACGTGGAGAGCAACCCCGGCCCC
［配列番号３２］
したがって、好ましい一実施形態では、ペプチドスペーサー配列は、配列番号２６、２８、３０もしくは３２のうちいずれか１つに実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、ペプチドスペーサー配列は、配列番号２５、２７、２９もしくは３１に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
【0048】
翻訳スキッピングの後に、ウイルス－２Ａペプチド配列は、上流タンパク質（ＰＥＤＦ受容体アゴニスト等）のＣ末端に融合されたままであり、一方、プロリンは、下流タンパク質（抗補体タンパク質等）のＮ末端に融合されたままである。これは、免疫原性リスクを課し、ＰＥＤＦ受容体における細胞内シグナル伝達能力に潜在的に干渉し得る。したがって、本発明者らは、コードされたタンパク質（すなわち、ＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質）の両方から残っているウイルス－２Ａペプチド配列が除去されるように、ウイルス－２Ａペプチド配列の直接上流に酵素切断コード配列を導入した。酵素切断部位の導入は、酵素フューリンの場合は分泌タンパク質の放出に先立ち細胞内で、またはマトリックス金属タンパク質（ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎ）－２（ＭＭＰ－２）もしくはレニンのための酵素認識部位の場合は標的（網膜）細胞からタンパク質が分泌された直後に、ウイルス－２Ａペプチドを除去する効果を有する。
【0049】
したがって、一実施形態では、構築物は、ウイルス－２Ａ除去配列をさらに含む。好ましくは、ウイルス－２Ａ除去配列は、ウイルス－２Ａ配列の５’に配置される。好ましくは、ウイルス－２Ａ除去配列は、トリペプチドグリシン－セリン－グリシン配列（Ｇ－Ｓ－Ｇ）を含むリンカー配列によって、ウイルス－２Ａ配列から分離されている。
【0050】
本発明者らは、タンパク質のＣ末端からウイルス－２Ａペプチド配列を酵素的に除去するために、フューリン認識配列を導入した。したがって、一実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、フューリン認識配列である。
【0051】
現在、フューリン認識配列は、２位に必要に応じた非塩基性アミノ酸を有する、３または４個の塩基性アミノ酸（アルギニンまたはリジン）を含むと一般に認識されており、最後の塩基性アミノ酸の後で酵素フューリンによって切断される。しかし、様々なプラスミド構築物を使用して、本発明者らは、この塩基性フューリン認識配列が、必ずしも酵素活性およびウイルス－２Ａ配列の分離をもたらすとは限らないことを決定した。そのようなものとして、本発明者らは、本発明の遺伝的構築物における使用のための好ましいフューリン認識配列を生成した。
【0052】
したがって、好ましい実施形態では、遺伝的構築物は、次の通り、配列番号３３と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードするウイルス－２Ａ除去配列を含み、配列中：Ｂ＝塩基性アミノ酸、Ｘ＝親水性アミノ酸およびＳ＝セリンである：
BB(X)BBS
［配列番号３３］
好ましくは、親水性アミノ酸（Ｘ）は、セリン（Ｓ）またはスレオニン（Ｔ）のいずれかである。したがって、一実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号３３に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
BB(X)BBS
［配列番号３３］
好ましくは、親水性アミノ酸（Ｘ）は、セリン（Ｓ）またはスレオニン（Ｔ）のいずれかである。したがって、一実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号３３に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
【0053】
一実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、次の通り、配列番号３４と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
RRSKRSGSG
［配列番号３４］
この第１の実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、次の通り、配列番号３５と本明細書で称されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む：
CGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGC
［配列番号３５］
第２の実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、次の通り、配列番号３６と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
RRTKRSGSG
［配列番号３６］
この第２の実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、次の通り、配列番号３７と本明細書で称されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む：
CGCCGCACCAAGCGCAGCGGCAGCGGC
［配列番号３７］
したがって、一実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号３５もしくは３７のいずれかに実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号３４もしくは３６に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
RRSKRSGSG
［配列番号３４］
この第１の実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、次の通り、配列番号３５と本明細書で称されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む：
CGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGC
［配列番号３５］
第２の実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、次の通り、配列番号３６と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
RRTKRSGSG
［配列番号３６］
この第２の実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、次の通り、配列番号３７と本明細書で称されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む：
CGCCGCACCAAGCGCAGCGGCAGCGGC
［配列番号３７］
したがって、一実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号３５もしくは３７のいずれかに実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号３４もしくは３６に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
【0054】
あるいは、別の実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、ゼラチナーゼＭＭＰ－２認識配列である。好ましくは、この実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、アミノ酸配列GPQGIAGQ［配列番号７４］、GPLGIAGA［配列番号７５］もしくはGPQGLLGQ［配列番号７６］、またはその断片もしくはバリアントをコードする。切断は、好ましくは、第２のグリシン残基の後に生じる。
【0055】
本発明者らは、ゼラチナーゼＭＭＰ－２認識配列およびトリペプチドＧＳＧリンカー配列を含む、配列番号３８と本明細書で称される好ましいアミノ酸配列を生成した。
【0056】
したがって、一実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、次の通り、配列番号３８と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
GPQGIAGQGSG
［配列番号３８］
この実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、次の通り、配列番号３９と本明細書で称されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む：
GGCCCCCTGGGCATCGCCGGCCAGGGCAGCGGC
［配列番号３９］
したがって、一実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号３９に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号３８に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
GPQGIAGQGSG
［配列番号３８］
この実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、次の通り、配列番号３９と本明細書で称されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む：
GGCCCCCTGGGCATCGCCGGCCAGGGCAGCGGC
［配列番号３９］
したがって、一実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号３９に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号３８に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
【0057】
あるいは、別の実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、レニン認識配列である。好ましくは、この実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、アミノ酸配列HPFHLVYS［配列番号７７］もしくはHPFHLLVYS［配列番号７８］、またはその断片もしくはバリアントをコードする。切断は、好ましくは、ロイシン残基（複数可）の後に生じる。
【0058】
本発明者らは、レニン認識配列およびトリペプチドＧＳＧリンカー配列を含む、配列番号４０と本明細書で称される好ましいアミノ酸配列を生成した。
【0059】
したがって、一実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、次の通り、配列番号４０と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
HPFHLLVYSGSG
［配列番号４０］
この実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、次の通り、配列番号４１と本明細書で称されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む：
CGCCCCTTCCACCTGCTGGTCATCCACGGCAGCGGC
［配列番号４１］
したがって、一実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号４１に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号４０に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
HPFHLLVYSGSG
［配列番号４０］
この実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、次の通り、配列番号４１と本明細書で称されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む：
CGCCCCTTCCACCTGCTGGTCATCCACGGCAGCGGC
［配列番号４１］
したがって、一実施形態では、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号４１に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、ウイルス－２Ａ除去配列は、配列番号４０に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
【0060】
図２に例証される通り、発現カセットは、肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）をコードする配列、ポリＡテールをコードする配列、ならびに左および右側の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）をさらに含む。好ましくは、遺伝的構築物は、導入遺伝子、すなわち、ＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質の発現を増強する、ウッドチャック肝炎ウイルス（ＷＨＰ）転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）をコードするヌクレオチド配列を含む。好ましくは、ＷＰＲＥコード配列は、導入遺伝子コード配列の３’に配置される。
【0061】
ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）の一実施形態は、ガンマ－アルファ－ベータエレメントを含む５９２ヌクレオチド長であり、次の通り、配列番号４２と本明細書で称される：
AATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTG
［配列番号４２］
好ましくは、ＷＰＲＥは、配列番号４２に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
AATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTG
［配列番号４２］
好ましくは、ＷＰＲＥは、配列番号４２に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
【0062】
しかし、好ましい実施形態では、β－エレメントの欠失により２４７ヌクレオチド長であり、次の通り、配列番号４３と本明細書で称される、トランケート型ＷＰＲＥが使用される：
AATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTAGTTCTTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGT
［配列番号４３］
好ましくは、したがって、トランケート型ＷＰＲＥは、配列番号４３に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
AATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTAGTTCTTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGT
［配列番号４３］
好ましくは、したがって、トランケート型ＷＰＲＥは、配列番号４３に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
【0063】
有利には、構築物において使用されるトランケート型ＷＰＲＥ配列は、導入遺伝子発現にマイナスの影響を与えることなく、合計で約３００ヌクレオチドを省く。好ましくは、したがって、ＷＰＲＥは、配列番号４３に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
【0064】
好ましくは、遺伝的構築物は、ポリＡテールをコードするヌクレオチド配列を含む。好ましくは、ポリＡテールコード配列は、導入遺伝子コード配列の３’に、好ましくは、ＷＰＲＥコード配列の３’に配置される。ポリＡテールは、ｍＲＮＡの核外移行、翻訳および安定性に重要である。テールは、経時的に短縮され、十分に短くなると、ｍＲＮＡは、酵素的に分解される。
【0065】
好ましくは、ポリＡテールは、サルウイルス－４０ポリＡ ２２４ヌクレオチド配列を含む。ポリＡテールの一実施形態は、次の通り、配列番号４４と本明細書で称される：
AGCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTA
［配列番号４４］
別の実施形態では、ポリＡテールは、次の通り、配列番号４５と本明細書で称される、１６９ヌクレオチド配列ポリＡ成分を含む：
TTCGAGCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCGTCTAGCATCGAAGATCCCCCGATCTG
［配列番号４５］
さらなる実施形態では、ポリＡテールは、次の通り、配列番号８４と本明細書で称される、ウシ成長ホルモンポリＡ ２２５ヌクレオチド配列を含む：
CTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGG
［配列番号８４］
好ましくは、したがって、ポリＡテールは、配列番号４４、４５もしくは８４に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
AGCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTA
［配列番号４４］
別の実施形態では、ポリＡテールは、次の通り、配列番号４５と本明細書で称される、１６９ヌクレオチド配列ポリＡ成分を含む：
TTCGAGCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCGTCTAGCATCGAAGATCCCCCGATCTG
［配列番号４５］
さらなる実施形態では、ポリＡテールは、次の通り、配列番号８４と本明細書で称される、ウシ成長ホルモンポリＡ ２２５ヌクレオチド配列を含む：
CTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGG
［配列番号８４］
好ましくは、したがって、ポリＡテールは、配列番号４４、４５もしくは８４に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
【0066】
好ましくは、遺伝的構築物は、左および／または右逆位末端反復配列（ＩＴＲ）を含む。好ましくは、各ＩＴＲは、構築物の５’および／または３’終端に配置される。ＩＴＲは、ウイルス（例えば、ＡＡＶまたはレンチウイルス）血清型に特異的であり得、その二次構造においてヘアピンループを形成する限りにおいて、いかなる配列となることもできる。
【0067】
ＩＴＲの一実施形態（市販の組換えＡＡＶゲノムプラスミドから得られる左ＩＴＲ配列）のＤＮＡ配列は、次の通り、配列番号４６として本明細書で表される：
CGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTG
［配列番号４６］
ＩＴＲの別の実施形態（市販の組換えＡＡＶゲノムプラスミドから得られる右ＩＴＲ配列）のＤＮＡ配列は、次の通り、配列番号４７として本明細書で表される：
AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGC
［配列番号４７］
好ましくは、左および／または右逆位末端反復は、配列番号４６もしくは４７に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
CGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTG
［配列番号４６］
ＩＴＲの別の実施形態（市販の組換えＡＡＶゲノムプラスミドから得られる右ＩＴＲ配列）のＤＮＡ配列は、次の通り、配列番号４７として本明細書で表される：
AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGC
［配列番号４７］
好ましくは、左および／または右逆位末端反復は、配列番号４６もしくは４７に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
【0068】
近年、プロモーターおよび遺伝子の間に位置する非コードイントロン（プロモーターの３’終端および遺伝子の５’終端の隣）が、ｍＲＮＡ蓄積を介して、ある特定のゲノム配列における遺伝子発現を容易にすることができることが発見された［５９、６０］。したがって、ウイルスベクターの遺伝的構築物へのイントロンの包含は、構成的または調節型プロモーターと組み合わせて使用された場合に、より優れた導入遺伝子発現および成熟タンパク質のその後の生成を容易にすることができる。
【0069】
したがって、一実施形態では、遺伝的構築物は、非コードイントロンを含む。好ましくは、非コードイントロンは、プロモーターおよび第１のコード配列の間に位置する。換言すると、非コードイントロンは、プロモーターの３’かつ第１のコード配列の５’に配置される。
【0070】
一実施形態では、非コードイントロンは、次の通り、配列番号４８と本明細書で称されるマウス微小ウイルス（ＭＶＭ）小（１２１ｂｐ）イントロン［６１］である：
AGGTACGATGGCGCCTCCAGCTAAAAGAGCTAAAAGAGGTAAGGGTTTAAGGGATGGTTGGTTGGTGGGGTATTAATGTTTAATTACCTGTTTTACAGGCCTGAAATCACTTGGTTTTAGG
［配列番号４８］
別の実施形態では、非コードイントロンは、次の通り、配列番号４９と本明細書で称される、ヒトβ－グロビン遺伝子の第１のイントロンの５’－ドナー部位、ならびに免疫グロブリン遺伝子重鎖可変領域のイントロン由来の分枝および３’－アクセプター部位由来の配列（１３３ｂｐ）である：
GTAAGTATCAAGGTTACAAGACAGGTTTAAGGAGACCAATAGAAACTGGGCTTGTCGAGACAGAGAAGACTCTTGCGTTTCTGATAGGCACCTATTGGTCTTACTGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAG
［配列番号４９］
別の実施形態では、非コードイントロンは、次の通り、配列番号５０と本明細書で称される、ウサギβ－グロブリン遺伝子１のスプライスアクセプターの５’および３’ヌクレオチド成分の融合（２１０ｂｐ）である：
GTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTC
［配列番号５０］
したがって、好ましくは、非コードイントロンは、配列番号４８、４９もしくは５０に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
AGGTACGATGGCGCCTCCAGCTAAAAGAGCTAAAAGAGGTAAGGGTTTAAGGGATGGTTGGTTGGTGGGGTATTAATGTTTAATTACCTGTTTTACAGGCCTGAAATCACTTGGTTTTAGG
［配列番号４８］
別の実施形態では、非コードイントロンは、次の通り、配列番号４９と本明細書で称される、ヒトβ－グロビン遺伝子の第１のイントロンの５’－ドナー部位、ならびに免疫グロブリン遺伝子重鎖可変領域のイントロン由来の分枝および３’－アクセプター部位由来の配列（１３３ｂｐ）である：
GTAAGTATCAAGGTTACAAGACAGGTTTAAGGAGACCAATAGAAACTGGGCTTGTCGAGACAGAGAAGACTCTTGCGTTTCTGATAGGCACCTATTGGTCTTACTGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAG
［配列番号４９］
別の実施形態では、非コードイントロンは、次の通り、配列番号５０と本明細書で称される、ウサギβ－グロブリン遺伝子１のスプライスアクセプターの５’および３’ヌクレオチド成分の融合（２１０ｂｐ）である：
GTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTC
［配列番号５０］
したがって、好ましくは、非コードイントロンは、配列番号４８、４９もしくは５０に実質的に示される核酸配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
【0071】
遺伝的構築物によってコードされるポリペプチドの正しいフォールディング、標的細胞からのＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質の細胞内輸送および分泌を可能にするために、これらのタンパク質のコード配列に先行して、知られている分泌ヒトタンパク質の配列に由来する新規Ｎ末端最小シグナルペプチドコード配列がある。分泌シグナルペプチドは、メチオニンイニシエーターアミノ酸、一連の２個以上の塩基性アミノ酸（アルギニンまたはリジン）と、それに続く一連の疎水性アミノ酸（ロイシン、イソロイシン、バリンまたはフェニルアラニン）と、最後に、最終成熟分泌タンパク質からのシグナルペプチドの切断を可能にするカッティング配列で構成される。
【0072】
したがって、一実施形態では、遺伝的構築物は、シグナルペプチドコード配列を含む。有利には、本発明者らによって生成されたこの新規シグナルペプチドコード配列は、細胞内での分泌タンパク質の細胞内切断および輸送を最適化する。好ましくは、遺伝的構築物は、第１のコード配列の前に配置された第１のシグナルペプチドコード配列と、第２のコード配列の前に配置された第２のシグナルペプチドコード配列とを含む。好ましくは、第１および第２のシグナルペプチドコード配列は、それぞれ第１および第２のコード配列の５’に配置される。
【0073】
一実施形態では、本発明者らは、オンラインプログラムＳｉｇｎａｌ－Ｐ ５．０（http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/data.php）を使用してシグナルペプチドを最適化して、シグナルペプチダーゼによる酵素切断のレベルを増加させ、これにより、成熟ＰＥＤＦの細胞分泌を増強した。内在性シグナルペプチド配列ＭＱＡＬＶＬＬＬＣＩＧＡＬＬＧＨＳＳＣ［配列番号７９］のＮ末端グルタミン［Ｑ］およびアラニン［Ａ］アミノ酸は、アルギニン［Ｒ］またはリジン［Ｋ］残基等の塩基性アミノ酸へと置換され、末端３アミノ酸［ＳＳＣ］は、［ＶＦＣ］へと置換された。
【0074】
したがって、一実施形態では、シグナルペプチドコード配列は、次の通り、配列番号５１として本明細書で参照されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
MRRLVLLLCIGALLGHVFC
［配列番号５１］
好ましくは、この実施形態では、シグナルペプチドコード配列は、次の通り、配列番号５２と本明細書で称されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGC
［配列番号５２］
抗補体タンパク質（抗Ｃ３ｂ、抗Ｂｂまたは抗Ｃ５単鎖可変断片、ＣＤ５５、ｓＣＤ４６、ＣＦＨＬ１またはＣＦＨＲ１）が、産生株細胞から放出されるために、コード配列は、Ｎ末端アミノ酸がアルギニン［Ｒ］またはリジン［Ｋ］に置換された、ヒト脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）由来のシグナルペプチドの改変された形態によって進められる。
MRRLVLLLCIGALLGHVFC
［配列番号５１］
好ましくは、この実施形態では、シグナルペプチドコード配列は、次の通り、配列番号５２と本明細書で称されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGC
［配列番号５２］
抗補体タンパク質（抗Ｃ３ｂ、抗Ｂｂまたは抗Ｃ５単鎖可変断片、ＣＤ５５、ｓＣＤ４６、ＣＦＨＬ１またはＣＦＨＲ１）が、産生株細胞から放出されるために、コード配列は、Ｎ末端アミノ酸がアルギニン［Ｒ］またはリジン［Ｋ］に置換された、ヒト脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）由来のシグナルペプチドの改変された形態によって進められる。
【0075】
したがって、一実施形態では、シグナルペプチドコード配列は、次の通り、配列番号５３と本明細書で称されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする：
MRRFLTVISFLLYFGCAFA
［配列番号５３］
好ましくは、この実施形態では、シグナルペプチドコード配列は、次の通り、配列番号５４として本明細書で参照されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCTTCCTGACCGTGATCAGCTTCCTGCTGTACTTCGGCTGCGCCTTCGCC
［配列番号５４］
したがって、好ましくは、シグナルペプチドコード配列は、配列番号５２もしくは５４に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、シグナルペプチドコード配列は、配列番号５１もしくは５３に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
MRRFLTVISFLLYFGCAFA
［配列番号５３］
好ましくは、この実施形態では、シグナルペプチドコード配列は、次の通り、配列番号５４として本明細書で参照されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCTTCCTGACCGTGATCAGCTTCCTGCTGTACTTCGGCTGCGCCTTCGCC
［配列番号５４］
したがって、好ましくは、シグナルペプチドコード配列は、配列番号５２もしくは５４に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。好ましくは、シグナルペプチドコード配列は、配列番号５１もしくは５３に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
【0076】
好ましい実施形態では、遺伝的構築物は、この指定の順序で、５’プロモーター；ＰＥＤＦ受容体アゴニストをコードする第１のコード配列；および抗補体タンパク質をコードする３’の第２のコード配列を含むことができる。５’および３’の使用は、特色が、上流または下流のいずれかであることを指し示し、特色が必ず末端特色であると指し示すことを意図するものではない。さらに、当業者であれば、ＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質をコードする第１および第２のコード配列が、任意の５’から３’への順序で配置され得ることを理解するであろう。
【0077】
特定の実施形態では、遺伝的構築物は、この指定の順序で、５’プロモーター；ＰＥＤＦ受容体アゴニストをコードする第１のコード配列；スペーサー配列；および抗補体タンパク質をコードする３’の第２のコード配列を含むことができる。
【0078】
特定の実施形態では、遺伝的構築物は、この指定の順序で、５’プロモーター；ＰＥＤＦ受容体アゴニストをコードする第１のコード配列；ウイルス－２Ａ除去配列；スペーサー配列；および抗補体タンパク質をコードする３’の第２のコード配列を含むことができる。
【0079】
特定の実施形態では、遺伝的構築物は、この指定の順序で、５’ＩＴＲ；プロモーター；ＰＥＤＦ受容体アゴニストをコードする第１のコード配列；ウイルス－２Ａ除去配列；スペーサー配列；抗補体タンパク質をコードする第２のコード配列；ＷＰＲＥをコードする配列；ポリＡテールをコードする配列；および３’ＩＴＲを含むことができる。
【0080】
特定の実施形態では、遺伝的構築物は、この指定の順序で、５’ＩＴＲ；プロモーター；非コードイントロン；ＰＥＤＦ受容体アゴニストをコードする第１のコード配列；ウイルス－２Ａ除去配列；スペーサー配列；抗補体タンパク質をコードする第２のコード配列；ＷＰＲＥをコードする配列；ポリＡテールをコードする配列；および３’ＩＴＲを含むことができる。
【0081】
特定の実施形態では、遺伝的構築物は、この指定の順序で、５’ＩＴＲ；プロモーター；非コードイントロン；第１のシグナルペプチドコード配列；ＰＥＤＦ受容体アゴニストをコードする第１のコード配列；ウイルス－２Ａ除去配列；スペーサー配列；第２のシグナルペプチドコード配列；抗補体タンパク質をコードする第２のコード配列；ＷＰＲＥをコードする配列；ポリＡテールをコードする配列；および３’ＩＴＲを含むことができる。
【0082】
前述から、当業者であれば、第１の態様の構築物の実施形態のヌクレオチド配列と共に、コードされる導入遺伝子のアミノ酸配列を認めるであろう。しかし、誤解を避けるために、一実施形態では、ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－抗Ｃ３ｂ ＳＣＶＦのアミノ酸配列は、次の通り、配列番号５５と本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLLTFISILALVGAFADIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYATLPTFEQGTKVEIKRGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFTSSSVSPGKGLEWVGLIYPYNGFNYYADSVKGRFTISADTSLQMNSLRAEDTAVYYCARNALYGSGGYYAMDYWGQGTLVTVSS
［配列番号５５］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号５６と本明細書で称される２１２１ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１５７Ｐ内に含有される）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGCTGACCTTCATCAGCATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCTTCGCCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCCGCGCCAGCCAGGACGTAAGCACCGCCGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAGCGCCAGCTTCCTGTACAGCGGCGTGCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCTACGCCACCCTGCCCACCTTCGAGCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCAGCTTCACCAGCAGCAGCGTGAGCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCCTGATCTACCCCTACAACGGCTTCAACTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCAGCGCCGACACCAGCCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCAACGCCCTGTACGGCAGCGGCGGCTACTACGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCTGA
［配列番号５６］
別の実施形態では、ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－ｓＣＤ５５のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号５７、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRFLTVISFLLYFGCAFADCGLPPDVPNAQPALEGRTSFPEDTVITYKCEESFVKIPGEKDSVICLKGSQWSDIEEFCNRSCEVPTRLNSASLKQPYITQNYFPVGTVVEYECRPGYRREPSLSPKLTCLQNLKWSTAVEFCKKKSCPNPGEIRNGQIDVPGGILFGATISFSCNTGYKLFGSTSSFCLISGSSVQWSDPLPECREIYCPAPPQIDNGIIQGERDHYGYRQSVTYACNKGFTMIGEHSIYCTVNNDEGEWSGPPPECRGKSLTSKVPPTVQKPTTVNVPTTEVSPTSQKTTTKTTTPNAQATRSTPVSRTTKHFHETTPNKGSGTTSG
［配列番号５７］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号５８と本明細書で称される２３５８ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１５８Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCTTCCTGACCGTGATCAGCTTCCTGCTGTACTTCGGCTGCGCCTTCGCCGACTGCGGCCTGCCCCCCGACGTGCCCAACGCCCAGCCCGCCCTGGAGGGCCGCACCAGCTTCCCCGAGGACACCGTGATCACCTACAAGTGCGAGGAGAGCTTCGTGAAGATCCCCGGCGAGAAGGACAGCGTGATCTGCCTGAAGGGCAGCCAGTGGAGCGACATCGAGGAGTTCTGCAACCGCAGCTGCGAGGTGCCCACCCGCCTGAACAGCGCCAGCCTGAAGCAGCCCTACATCACCCAGAACTACTTCCCCGTGGGCACCGTGGTGGAGTACGAGTGCCGCCCCGGCTACCGCCGCGAGCCCAGCCTGAGCCCCAAGCTGACCTGCCTGCAGAACCTGAAGTGGAGCACCGCCGTGGAGTTCTGCAAGAAGAAGAGCTGCCCCAACCCCGGCGAGATCCGCAACGGCCAGATCGACGTGCCCGGCGGCATCCTGTTCGGCGCCACCATCAGCTTCAGCTGCAACACCGGCTACAAGCTGTTCGGCAGCACCAGCAGCTTCTGCCTGATCAGCGGCAGCAGCGTGCAGTGGAGCGACCCCCTGCCCGAGTGCCGCGAGATCTACTGCCCCGCCCCCCCCCAGATCGACAACGGCATCATCCAGGGCGAGCGCGACCACTACGGCTACCGCCAGAGCGTGACCTACGCCTGCAACAAGGGCTTCACCATGATCGGCGAGCACAGCATCTACTGCACCGTGAACAACGACGAGGGCGAGTGGAGCGGCCCCCCCCCCGAGTGCCGAGGCAAGAGCCTGACCAGCAAGGTGCCCCCCACCGTGCAGAAGCCCACCACCGTGAACGTGCCCACCACCGAGGTGAGCCCCACCAGCCAGAAGACCACCACCAAGACCACCACCCCCAACGCCCAGGCCACCCGCAGCACCCCCGTGAGCCGCACCACCAAGCACTTCCACGAGACCACCCCCAACAAGGGCAGCGGCACCACCAGCGGCTAA
［配列番号５８］
別の実施形態では、ｓＣＤ５５－フューリン－Ｐ２Ａ－ＰＥＤＦのアミノ酸配列は、次の通り、配列番号５９、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRFLTVISFLLYFGCAFADCGLPPDVPNAQPALEGRTSFPEDTVITYKCEESFVKIPGEKDSVICLKGSQWSDIEEFCNRSCEVPTRLNSASLKQPYITQNYFPVGTVVEYECRPGYRREPSLSPKLTCLQNLKWSTAVEFCKKKSCPNPGEIRNGQIDVPGGILFGATISFSCNTGYKLFGSTSSFCLISGSSVQWSDPLPECREIYCPAPPQIDNGIIQGERDHYGYRQSVTYACNKGFTMIGEHSIYCTVNNDEGEWSGPPPECRGKSLTSKVPPTVQKPTTVNVPTTEVSPTSQKTTTKTTTPNAQATRSTPVSRTTKHFHETTPNKGSGTTSGRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGP
［配列番号５９］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号６０と本明細書で称される２３５８ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１２６Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCTTCCTGACCGTGATCAGCTTCCTGCTGTACTTCGGCTGCGCCTTCGCCGACTGCGGCCTGCCCCCCGACGTGCCCAACGCCCAGCCCGCCCTGGAGGGCCGCACCAGCTTCCCCGAGGACACCGTGATCACCTACAAGTGCGAGGAGAGCTTCGTGAAGATCCCCGGCGAGAAGGACAGCGTGATCTGCCTGAAGGGCAGCCAGTGGAGCGACATCGAGGAGTTCTGCAACCGCAGCTGCGAGGTGCCCACCCGCCTGAACAGCGCCAGCCTGAAGCAGCCCTACATCACCCAGAACTACTTCCCCGTGGGCACCGTGGTGGAGTACGAGTGCCGCCCCGGCTACCGCCGCGAGCCCAGCCTGAGCCCCAAGCTGACCTGCCTGCAGAACCTGAAGTGGAGCACCGCCGTGGAGTTCTGCAAGAAGAAGAGCTGCCCCAACCCCGGCGAGATCCGCAACGGCCAGATCGACGTGCCCGGCGGCATCCTGTTCGGCGCCACCATCAGCTTCAGCTGCAACACCGGCTACAAGCTGTTCGGCAGCACCAGCAGCTTCTGCCTGATCAGCGGCAGCAGCGTGCAGTGGAGCGACCCCCTGCCCGAGTGCCGCGAGATCTACTGCCCCGCCCCCCCCCAGATCGACAACGGCATCATCCAGGGCGAGCGCGACCACTACGGCTACCGCCAGAGCGTGACCTACGCCTGCAACAAGGGCTTCACCATGATCGGCGAGCACAGCATCTACTGCACCGTGAACAACGACGAGGGCGAGTGGAGCGGCCCCCCCCCCGAGTGCCGAGGCAAGAGCCTGACCAGCAAGGTGCCCCCCACCGTGCAGAAGCCCACCACCGTGAACGTGCCCACCACCGAGGTGAGCCCCACCAGCCAGAAGACCACCACCAAGACCACCACCCCCAACGCCCAGGCCACCCGCAGCACCCCCGTGAGCCGCACCACCAAGCACTTCCACGAGACCACCCCCAACAAGGGCAGCGGCACCACCAGCGGCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCTAA
［配列番号６０］
別の実施形態では、ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－ＣＦＨＲ１のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号６１、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRFLTVISFLLYFGCAFAEATFCDFPKINHGILYDEEKYKPFSQVPTGEVFYYSCEYNFVSPSKSFWTRITCTEEGWSPTPKCLRLCFFPFVENGHSESSGQTHLEGDTVQIICNTGYRLQNNENNISCVERGWSTPPKCRSTDTSCVNPPTVQNAHILSRQMSKYPSGERVRYECRSPYEMFGDEEVMCLNGNWTEPPQCKDSTGKCGPPPPIDNGDITSFPLSVYAPASSVEYQCQNLYQLEGNKRITCRNGQWSEPPKCLHPCVISREIMENYNIALRWTAKQKLYLRTGESAEFVCKRGYRLSSRSHTLRTTCWDGKLEYPTCAKR
［配列番号６１］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号６２と本明細書で称される２３３４ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１２７Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCTTCCTGACCGTGATCAGCTTCCTGCTGTACTTCGGCTGCGCCTTCGCCGAGGCCACCTTCTGCGACTTCCCCAAGATCAACCACGGCATCCTGTACGACGAGGAGAAGTACAAGCCCTTCAGCCAGGTGCCCACCGGCGAGGTGTTCTACTACAGCTGCGAGTACAACTTCGTGAGCCCCAGCAAGAGCTTCTGGACCCGCATCACCTGCACCGAGGAGGGCTGGAGCCCCACCCCCAAGTGCCTGCGCCTGTGCTTCTTCCCCTTCGTGGAGAACGGCCACAGCGAGAGCAGCGGCCAGACCCACCTGGAGGGCGACACCGTGCAGATCATCTGCAACACCGGCTACCGCCTGCAGAACAACGAGAACAACATCAGCTGCGTGGAGCGCGGCTGGAGCACCCCCCCCAAGTGCCGCAGCACCGACACCAGCTGCGTGAACCCCCCCACCGTGCAGAACGCCCACATCCTGAGCCGCCAGATGAGCAAGTACCCCAGCGGCGAGCGCGTGCGCTACGAGTGCCGCAGCCCCTACGAGATGTTCGGCGACGAGGAGGTGATGTGCCTGAACGGCAACTGGACCGAGCCCCCCCAGTGCAAGGACAGCACCGGCAAGTGCGGCCCCCCCCCCCCCATCGACAACGGCGACATCACCAGCTTCCCCCTGAGCGTGTACGCCCCCGCCAGCAGCGTGGAGTACCAGTGCCAGAACCTGTACCAGCTGGAGGGCAACAAGCGCATCACCTGCCGCAACGGCCAGTGGAGCGAGCCCCCCAAGTGCCTGCACCCCTGCGTGATCAGCCGCGAGATCATGGAGAACTACAACATCGCCCTGCGCTGGACCGCCAAGCAGAAGCTGTACCTGCGCACCGGCGAGAGCGCCGAGTTCGTGTGCAAGCGCGGCTACCGCCTGAGCAGCCGCAGCCACACCCTGCGCACCACCTGCTGGGACGGCAAGCTGGAGTACCCCACCTGCGCCAAGCGCTAA
［配列番号６２］
別の実施形態では、ＣＦＨＲ１－フューリン－Ｐ２Ａ－ＰＥＤＦのアミノ酸配列は、次の通り、配列番号６３、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRFLTVISFLLYFGCAFAEATFCDFPKINHGILYDEEKYKPFSQVPTGEVFYYSCEYNFVSPSKSFWTRITCTEEGWSPTPKCLRLCFFPFVENGHSESSGQTHLEGDTVQIICNTGYRLQNNENNISCVERGWSTPPKCRSTDTSCVNPPTVQNAHILSRQMSKYPSGERVRYECRSPYEMFGDEEVMCLNGNWTEPPQCKDSTGKCGPPPPIDNGDITSFPLSVYAPASSVEYQCQNLYQLEGNKRITCRNGQWSEPPKCLHPCVISREIMENYNIALRWTAKQKLYLRTGESAEFVCKRGYRLSSRSHTLRTTCWDGKLEYPTCAKRSKRSGSATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGP
［配列番号６３］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号６４と本明細書で称される２３２５ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１２８Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGCTGACCTTCATCAGCATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCTTCGCCGAGGCCACCTTCTGCGACTTCCCCAAGATCAACCACGGCATCCTGTACGACGAGGAGAAGTACAAGCCCTTCAGCCAGGTGCCCACCGGCGAGGTGTTCTACTACAGCTGCGAGTACAACTTCGTGAGCCCCAGCAAGAGCTTCTGGACCCGCATCACCTGCACCGAGGAGGGCTGGAGCCCCACCCCCAAGTGCCTGCGCCTGTGCTTCTTCCCCTTCGTGGAGAACGGCCACAGCGAGAGCAGCGGCCAGACCCACCTGGAGGGCGACACCGTGCAGATCATCTGCAACACCGGCTACCGCCTGCAGAACAACGAGAACAACATCAGCTGCGTGGAGCGCGGCTGGAGCACCCCCCCCAAGTGCCGCAGCACCGACACCAGCTGCGTGAACCCCCCCACCGTGCAGAACGCCCACATCCTGAGCCGCCAGATGAGCAAGTACCCCAGCGGCGAGCGCGTGCGCTACGAGTGCCGCAGCCCCTACGAGATGTTCGGCGACGAGGAGGTGATGTGCCTGAACGGCAACTGGACCGAGCCCCCCCAGTGCAAGGACAGCACCGGCAAGTGCGGCCCCCCCCCCCCCATCGACAACGGCGACATCACCAGCTTCCCCCTGAGCGTGTACGCCCCCGCCAGCAGCGTGGAGTACCAGTGCCAGAACCTGTACCAGCTGGAGGGCAACAAGCGCATCACCTGCCGCAACGGCCAGTGGAGCGAGCCCCCCAAGTGCCTGCACCCCTGCGTGATCAGCCGCGAGATCATGGAGAACTACAACATCGCCCTGCGCTGGACCGCCAAGCAGAAGCTGTACCTGCGCACCGGCGAGAGCGCCGAGTTCGTGTGCAAGCGCGGCTACCGCCTGAGCAGCCGCAGCCACACCCTGCGCACCACCTGCTGGGACGGCAAGCTGGAGTACCCCACCTGCGCCAAGCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCTAA
［配列番号６４］
別の実施形態では、ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－抗Ｃ５ ＳＣＶＦのアミノ酸配列は、次の通り、配列番号８５、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHSSCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRVRRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLLILALVGAAVADIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNQLSWYQQKPGKAPKLLIYYASTLASGYPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQGSYYSGGWDYGFGQGTKVEIKRGGGGGSGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSGRYWIQWVRQAPGKGLEWVASVWPGITGTNYANWAKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREPVAWGGGLDLWGQGTLVTVSS
［配列番号８５］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号８６と本明細書で称される２１３６ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ０９４Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACAGCAGCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCGTGCGCCGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGCTGATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCGCCGTGGCCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCCAGGCCAGCCAGAGCATCAACAACCAGCTGAGCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCACCCTGGCCAGCGGCTACCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGGGCAGCTACTACAGCGGCGGCTGGGACTACGGCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCAGCTTCAGCGGCCGCTACTGGATCCAGTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCAGCGTGTGGCCCGGCATCACCGGCACCAACTACGCCAACTGGGCCAAGGGCCGCTTCACCATCAGCCGCGACGACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGAGCCCGTGGCCTGGGGCGGCGGCCTGGACCTGTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCTGA
［配列番号８６］
別の実施形態では、ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－抗Ｂｂ ＳＣＶＦのアミノ酸配列は、次の通り、配列番号６５、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHSSCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRVRRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLLILALVGAAVADVQITQSPSYLAASPGETITINCRASKSISKYLAWYQDKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAMYYCQQHDEYPWTFGGGTKLEIKRGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELAKPGASVRMSCKASGYTFTNYWIHWVKQRPGQGLEWIGYINPNTGYNDYNQKFKDKATLTADKSSSTVYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGQLGLRRAMDYWGQGTSVTVSS
［配列番号６５］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号６６と本明細書で称される２１３０ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ０９３Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACAGCAGCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCGTGCGCCGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGCTGATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCGCCGTGGCCGACGTCCAGATCACCCAGAGCCCCAGCTACCTGGCCGCCAGCCCCGGCGAGACCATCACCATCAACTGCCGCGCCAGCAAGAGCATCAGCAAGTACCTGGCCTGGTACCAGGACAAGCCCGGCAAGACCAACAAGCTGCTGATCTACAGCGGCAGCACCCTGCAGAGCGGCATCCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCATGTACTACTGCCAGCAGCACGACGAGTACCCCTGGACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCCAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCGCCGAGCTGGCCAAGCCCGGCGCCAGCGTGCGCATGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAACTACTGGATCCACTGGGTGAAGCAGCGCCCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTACATCAACCCCAACACCGGCTACAACGACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACCCTGACCGCCGACAAGAGCAGCAGCACCGTGTACATGCAGCTGAGCAGCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGGCGGCCAGCTGGGCCTGCGCCGCGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACCGTGAGCAGCTGA
［配列番号６６］
別の実施形態では、ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－抗Ｂｂ ＳＣＶＦのアミノ酸配列は、次の通り、配列番号６７、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHSSCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLLILALVGAAVADVQITQSPSYLAASPGETITINCRASKSISKYLAWYQDKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAMYYCQQHDEYPWTFGGGTKLEIKRGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELAKPGASVRMSCKASGYTFTNYWIHWVKQRPGQGLEWIGYINPNTGYNDYNQKFKDKATLTADKSSSTVYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGQLGLRRAMDYWGQGTSVTVSS
［配列番号６７］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号６８と本明細書で称される２１３６ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１２９Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACAGCAGCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGCTGATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCGCCGTGGCCGACGTCCAGATCACCCAGAGCCCCAGCTACCTGGCCGCCAGCCCCGGCGAGACCATCACCATCAACTGCCGCGCCAGCAAGAGCATCAGCAAGTACCTGGCCTGGTACCAGGACAAGCCCGGCAAGACCAACAAGCTGCTGATCTACAGCGGCAGCACCCTGCAGAGCGGCATCCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCATGTACTACTGCCAGCAGCACGACGAGTACCCCTGGACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCCAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCGCCGAGCTGGCCAAGCCCGGCGCCAGCGTGCGCATGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAACTACTGGATCCACTGGGTGAAGCAGCGCCCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTACATCAACCCCAACACCGGCTACAACGACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACCCTGACCGCCGACAAGAGCAGCAGCACCGTGTACATGCAGCTGAGCAGCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGGCGGCCAGCTGGGCCTGCGCCGCGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACCGTGAGCAGCTGA
［配列番号６８］
別の実施形態では、ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－ｓＣＤ４６のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号６９、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRFLTVISFLLYFGCAFACEEPPTFEAMELIGKPKPYYEIGERVDYKCKKGYFYIPPLATHTICDRNHTWLPVSDDACYRETCPYIRDPLNGQAVPANGTYEFGYQMHFICNEGYYLIGEEILYCELKGSVAIWSGKPPICEKVLCTPPPKIKNGKHTFSEVEVFEYLDAVTYSCDPAPGPDPFSLIGESTIYCGDNSVWSRAAPECKVVKCRFPVVENGKQISGFGKKFYYKATVMFECDKGFYLDGSDTIVCDSNSTWDPPVPKCLKVLPPSSTKPPALSHSVSTSSTTKSPASSASGPRPTYKPPVSNYPGYPKPEEGILDSLDV
［配列番号６９］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号７０と本明細書で称される２３２８ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１５９Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCTTCCTGACCGTGATCAGCTTCCTGCTGTACTTCGGCTGCGCCTTCGCCTGCGAGGAGCCCCCCACCTTCGAGGCCATGGAGCTGATCGGCAAGCCCAAGCCCTACTACGAGATCGGCGAGCGCGTGGACTACAAGTGCAAGAAGGGCTACTTCTACATCCCCCCCCTGGCCACCCACACCATCTGCGACCGCAACCACACCTGGCTGCCCGTGAGCGACGACGCCTGCTACCGCGAGACCTGCCCCTACATCCGCGACCCCCTGAACGGCCAGGCCGTGCCCGCCAACGGCACCTACGAGTTCGGCTACCAGATGCACTTCATCTGCAACGAGGGCTACTACCTGATCGGCGAGGAGATCCTGTACTGCGAGCTGAAGGGCAGCGTGGCCATCTGGAGCGGCAAGCCCCCCATCTGCGAGAAGGTGCTGTGCACCCCCCCCCCCAAGATCAAGAACGGCAAGCACACCTTCAGCGAGGTGGAGGTGTTCGAGTACCTGGACGCCGTGACCTACAGCTGCGACCCCGCCCCCGGCCCCGACCCCTTCAGCCTGATCGGCGAGAGCACCATCTACTGCGGCGACAACAGCGTGTGGAGCCGCGCCGCCCCCGAGTGCAAGGTGGTGAAGTGCCGCTTCCCCGTGGTGGAGAACGGCAAGCAGATCAGCGGCTTCGGCAAGAAGTTCTACTACAAGGCCACCGTGATGTTCGAGTGCGACAAGGGCTTCTACCTGGACGGCAGCGACACCATCGTGTGCGACAGCAACAGCACCTGGGACCCCCCCGTGCCCAAGTGCCTGAAGGTGCTGCCCCCCAGCAGCACCAAGCCCCCCGCCCTGAGCCACAGCGTGAGCACCAGCAGCACCACCAAGAGCCCCGCCAGCAGCGCCAGCGGCCCCCGCCCCACCTACAAGCCCCCCGTGAGCAACTACCCCGGCTACCCCAAGCCCGAGGAGGGCATCCTGGACAGCCTGGACGTGTAA
［配列番号７０］
別の実施形態では、ｓＣＤ４６－フューリン－Ｐ２Ａ－ＰＥＤＦのアミノ酸配列は、次の通り、配列番号７１、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRFLTVISFLLYFGCAFACEEPPTFEAMELIGKPKPYYEIGERVDYKCKKGYFYIPPLATHTICDRNHTWLPVSDDACYRETCPYIRDPLNGQAVPANGTYEFGYQMHFICNEGYYLIGEEILYCELKGSVAIWSGKPPICEKVLCTPPPKIKNGKHTFSEVEVFEYLDAVTYSCDPAPGPDPFSLIGESTIYCGDNSVWSRAAPECKVVKCRFPVVENGKQISGFGKKFYYKATVMFECDKGFYLDGSDTIVCDSNSTWDPPVPKCLKVLPPSSTKPPALSHSVSTSSTTKSPASSASGPRPTYKPPVSNYPGYPKPEEGILDSLDVRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGP
［配列番号７１］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号７２と本明細書で称される２３２８ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１４５Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCTTCCTGACCGTGATCAGCTTCCTGCTGTACTTCGGCTGCGCCTTCGCCTGCGAGGAGCCCCCCACCTTCGAGGCCATGGAGCTGATCGGCAAGCCCAAGCCCTACTACGAGATCGGCGAGCGCGTGGACTACAAGTGCAAGAAGGGCTACTTCTACATCCCCCCCCTGGCCACCCACACCATCTGCGACCGCAACCACACCTGGCTGCCCGTGAGCGACGACGCCTGCTACCGCGAGACCTGCCCCTACATCCGCGACCCCCTGAACGGCCAGGCCGTGCCCGCCAACGGCACCTACGAGTTCGGCTACCAGATGCACTTCATCTGCAACGAGGGCTACTACCTGATCGGCGAGGAGATCCTGTACTGCGAGCTGAAGGGCAGCGTGGCCATCTGGAGCGGCAAGCCCCCCATCTGCGAGAAGGTGCTGTGCACCCCCCCCCCCAAGATCAAGAACGGCAAGCACACCTTCAGCGAGGTGGAGGTGTTCGAGTACCTGGACGCCGTGACCTACAGCTGCGACCCCGCCCCCGGCCCCGACCCCTTCAGCCTGATCGGCGAGAGCACCATCTACTGCGGCGACAACAGCGTGTGGAGCCGCGCCGCCCCCGAGTGCAAGGTGGTGAAGTGCCGCTTCCCCGTGGTGGAGAACGGCAAGCAGATCAGCGGCTTCGGCAAGAAGTTCTACTACAAGGCCACCGTGATGTTCGAGTGCGACAAGGGCTTCTACCTGGACGGCAGCGACACCATCGTGTGCGACAGCAACAGCACCTGGGACCCCCCCGTGCCCAAGTGCCTGAAGGTGCTGCCCCCCAGCAGCACCAAGCCCCCCGCCCTGAGCCACAGCGTGAGCACCAGCAGCACCACCAAGAGCCCCGCCAGCAGCGCCAGCGGCCCCCGCCCCACCTACAAGCCCCCCGTGAGCAACTACCCCGGCTACCCCAAGCCCGAGGAGGGCATCCTGGACAGCCTGGACGTGCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCTAA
［配列番号７２］
別の実施形態では、［ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－ＣＦＨＬ１］のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号８７、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLLTFISILALVGAFAEDCNELPPRRNTEILTGSWSDQTYPEGTQAIYKCRPGYRSLGNVIMVCRKGEWVALNPLRKCQKRPCGHPGDTPFGTFTLTGGNVFEYGVKAVYTCNEGYQLLGEINYRECDTDGWTNDIPICEVVKCLPVTAPENGKIVSSAMEPDREYHFGQAVRFVCNSGYKIEGDEEMHCSDDGFWSKEKPKCVEISCKSPDVINGSPISQKIIYKENERFQYKCNMGYEYSERGDAVCTESGWRPLPSCEEKSCDNPYIPNGDYSPLRIKHRTGDEITYQCRNGFYPATRGNTAKCTSTGWIPAPRCTLKPCDYPDIKHGGLYHENMRRPYFPVAVGKYYSYYCDEHFETPSGSYWDHIHCTQDGWSPAVPCLRKCYFPYLENGYNQNYGRKFVQGKSIDVACHPGYALPKAQTTVTCMENGWSPTPRCIR
［配列番号８７］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号８８と本明細書で称される２６７０ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１６１Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGCTGACCTTCATCAGCATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCTTCGCCGAGGACTGCAACGAGCTGCCCCCCCGCCGCAACACCGAGATCCTGACCGGCAGCTGGAGCGACCAGACCTACCCCGAGGGCACCCAGGCCATCTACAAGTGCCGCCCCGGCTACCGCAGCCTGGGCAACGTGATCATGGTGTGCCGCAAGGGCGAGTGGGTGGCCCTGAACCCCCTGCGCAAGTGCCAGAAGCGCCCCTGCGGCCACCCCGGCGACACCCCCTTCGGCACCTTCACCCTGACCGGCGGCAACGTGTTCGAGTACGGCGTGAAGGCCGTGTACACCTGCAACGAGGGCTACCAGCTGCTGGGCGAGATCAACTACCGCGAGTGCGACACCGACGGCTGGACCAACGACATCCCCATCTGCGAGGTGGTGAAGTGCCTGCCCGTGACCGCCCCCGAGAACGGCAAGATCGTGAGCAGCGCCATGGAGCCCGACCGCGAGTACCACTTCGGCCAGGCCGTGCGCTTCGTGTGCAACAGCGGCTACAAGATCGAGGGCGACGAGGAGATGCACTGCAGCGACGACGGCTTCTGGAGCAAGGAGAAGCCCAAGTGCGTGGAGATCAGCTGCAAGAGCCCCGACGTGATCAACGGCAGCCCCATCAGCCAGAAGATCATCTACAAGGAGAACGAGCGCTTCCAGTACAAGTGCAACATGGGCTACGAGTACAGCGAGCGCGGCGACGCCGTGTGCACCGAGAGCGGCTGGCGCCCCCTGCCCAGCTGCGAGGAGAAGAGCTGCGACAACCCCTACATCCCCAACGGCGACTACAGCCCCCTGCGCATCAAGCACCGCACCGGCGACGAGATCACCTACCAGTGCCGCAACGGCTTCTACCCCGCCACCCGGGGCAACACCGCCAAGTGCACCAGCACCGGCTGGATCCCCGCCCCCCGCTGCACCCTGAAGCCCTGCGACTACCCCGACATCAAGCACGGCGGCCTGTACCACGAGAACATGCGCCGCCCCTACTTCCCCGTGGCCGTGGGCAAGTACTACAGCTACTACTGCGACGAGCACTTCGAGACCCCCAGCGGCAGCTACTGGGACCACATCCACTGCACCCAGGACGGCTGGAGCCCCGCCGTGCCCTGCCTGCGCAAGTGCTACTTCCCCTACCTGGAGAACGGCTACAACCAGAACTACGGCCGCAAGTTCGTGCAGGGCAAGAGCATCGACGTGGCCTGCCACCCCGGCTACGCCCTGCCCAAGGCCCAGACCACCGTGACCTGCATGGAGAACGGCTGGAGCCCCACCCCCCGCTGCATCCGC
［配列番号８８］
別の実施形態では、次の通り、［ＣＦＨＬ１－フューリン－Ｐ２Ａ－ＰＥＤＦ］のアミノ酸配列は、配列番号８９、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLLTFISILALVGAFAEDCNELPPRRNTEILTGSWSDQTYPEGTQAIYKCRPGYRSLGNVIMVCRKGEWVALNPLRKCQKRPCGHPGDTPFGTFTLTGGNVFEYGVKAVYTCNEGYQLLGEINYRECDTDGWTNDIPICEVVKCLPVTAPENGKIVSSAMEPDREYHFGQAVRFVCNSGYKIEGDEEMHCSDDGFWSKEKPKCVEISCKSPDVINGSPISQKIIYKENERFQYKCNMGYEYSERGDAVCTESGWRPLPSCEEKSCDNPYIPNGDYSPLRIKHRTGDEITYQCRNGFYPATRGNTAKCTSTGWIPAPRCTLKPCDYPDIKHGGLYHENMRRPYFPVAVGKYYSYYCDEHFETPSGSYWDHIHCTQDGWSPAVPCLRKCYFPYLENGYNQNYGRKFVQGKSIDVACHPGYALPKAQTTVTCMENGWSPTPRCIRRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGP
［配列番号８９］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号９０と本明細書で称される２６７０ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１７４Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGCTGACCTTCATCAGCATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCTTCGCCGAGGACTGCAACGAGCTGCCCCCCCGCCGCAACACCGAGATCCTGACCGGCAGCTGGAGCGACCAGACCTACCCCGAGGGCACCCAGGCCATCTACAAGTGCCGCCCCGGCTACCGCAGCCTGGGCAACGTGATCATGGTGTGCCGCAAGGGCGAGTGGGTGGCCCTGAACCCCCTGCGCAAGTGCCAGAAGCGCCCCTGCGGCCACCCCGGCGACACCCCCTTCGGCACCTTCACCCTGACCGGCGGCAACGTGTTCGAGTACGGCGTGAAGGCCGTGTACACCTGCAACGAGGGCTACCAGCTGCTGGGCGAGATCAACTACCGCGAGTGCGACACCGACGGCTGGACCAACGACATCCCCATCTGCGAGGTGGTGAAGTGCCTGCCCGTGACCGCCCCCGAGAACGGCAAGATCGTGAGCAGCGCCATGGAGCCCGACCGCGAGTACCACTTCGGCCAGGCCGTGCGCTTCGTGTGCAACAGCGGCTACAAGATCGAGGGCGACGAGGAGATGCACTGCAGCGACGACGGCTTCTGGAGCAAGGAGAAGCCCAAGTGCGTGGAGATCAGCTGCAAGAGCCCCGACGTGATCAACGGCAGCCCCATCAGCCAGAAGATCATCTACAAGGAGAACGAGCGCTTCCAGTACAAGTGCAACATGGGCTACGAGTACAGCGAGCGCGGCGACGCCGTGTGCACCGAGAGCGGCTGGCGCCCCCTGCCCAGCTGCGAGGAGAAGAGCTGCGACAACCCCTACATCCCCAACGGCGACTACAGCCCCCTGCGCATCAAGCACCGCACCGGCGACGAGATCACCTACCAGTGCCGCAACGGCTTCTACCCCGCCACCCGGGGCAACACCGCCAAGTGCACCAGCACCGGCTGGATCCCCGCCCCCCGCTGCACCCTGAAGCCCTGCGACTACCCCGACATCAAGCACGGCGGCCTGTACCACGAGAACATGCGCCGCCCCTACTTCCCCGTGGCCGTGGGCAAGTACTACAGCTACTACTGCGACGAGCACTTCGAGACCCCCAGCGGCAGCTACTGGGACCACATCCACTGCACCCAGGACGGCTGGAGCCCCGCCGTGCCCTGCCTGCGCAAGTGCTACTTCCCCTACCTGGAGAACGGCTACAACCAGAACTACGGCCGCAAGTTCGTGCAGGGCAAGAGCATCGACGTGGCCTGCCACCCCGGCTACGCCCTGCCCAAGGCCCAGACCACCGTGACCTGCATGGAGAACGGCTGGAGCCCCACCCCCCGCTGCATCCGCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCC
［配列番号９０］
したがって、好ましい実施形態では、構築物は、配列番号５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、８５、８７もしくは８９に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
MRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLLTFISILALVGAFADIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYATLPTFEQGTKVEIKRGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFTSSSVSPGKGLEWVGLIYPYNGFNYYADSVKGRFTISADTSLQMNSLRAEDTAVYYCARNALYGSGGYYAMDYWGQGTLVTVSS
［配列番号５５］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号５６と本明細書で称される２１２１ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１５７Ｐ内に含有される）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGCTGACCTTCATCAGCATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCTTCGCCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCCGCGCCAGCCAGGACGTAAGCACCGCCGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAGCGCCAGCTTCCTGTACAGCGGCGTGCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCTACGCCACCCTGCCCACCTTCGAGCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCAGCTTCACCAGCAGCAGCGTGAGCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCCTGATCTACCCCTACAACGGCTTCAACTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCAGCGCCGACACCAGCCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCAACGCCCTGTACGGCAGCGGCGGCTACTACGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCTGA
［配列番号５６］
別の実施形態では、ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－ｓＣＤ５５のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号５７、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRFLTVISFLLYFGCAFADCGLPPDVPNAQPALEGRTSFPEDTVITYKCEESFVKIPGEKDSVICLKGSQWSDIEEFCNRSCEVPTRLNSASLKQPYITQNYFPVGTVVEYECRPGYRREPSLSPKLTCLQNLKWSTAVEFCKKKSCPNPGEIRNGQIDVPGGILFGATISFSCNTGYKLFGSTSSFCLISGSSVQWSDPLPECREIYCPAPPQIDNGIIQGERDHYGYRQSVTYACNKGFTMIGEHSIYCTVNNDEGEWSGPPPECRGKSLTSKVPPTVQKPTTVNVPTTEVSPTSQKTTTKTTTPNAQATRSTPVSRTTKHFHETTPNKGSGTTSG
［配列番号５７］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号５８と本明細書で称される２３５８ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１５８Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCTTCCTGACCGTGATCAGCTTCCTGCTGTACTTCGGCTGCGCCTTCGCCGACTGCGGCCTGCCCCCCGACGTGCCCAACGCCCAGCCCGCCCTGGAGGGCCGCACCAGCTTCCCCGAGGACACCGTGATCACCTACAAGTGCGAGGAGAGCTTCGTGAAGATCCCCGGCGAGAAGGACAGCGTGATCTGCCTGAAGGGCAGCCAGTGGAGCGACATCGAGGAGTTCTGCAACCGCAGCTGCGAGGTGCCCACCCGCCTGAACAGCGCCAGCCTGAAGCAGCCCTACATCACCCAGAACTACTTCCCCGTGGGCACCGTGGTGGAGTACGAGTGCCGCCCCGGCTACCGCCGCGAGCCCAGCCTGAGCCCCAAGCTGACCTGCCTGCAGAACCTGAAGTGGAGCACCGCCGTGGAGTTCTGCAAGAAGAAGAGCTGCCCCAACCCCGGCGAGATCCGCAACGGCCAGATCGACGTGCCCGGCGGCATCCTGTTCGGCGCCACCATCAGCTTCAGCTGCAACACCGGCTACAAGCTGTTCGGCAGCACCAGCAGCTTCTGCCTGATCAGCGGCAGCAGCGTGCAGTGGAGCGACCCCCTGCCCGAGTGCCGCGAGATCTACTGCCCCGCCCCCCCCCAGATCGACAACGGCATCATCCAGGGCGAGCGCGACCACTACGGCTACCGCCAGAGCGTGACCTACGCCTGCAACAAGGGCTTCACCATGATCGGCGAGCACAGCATCTACTGCACCGTGAACAACGACGAGGGCGAGTGGAGCGGCCCCCCCCCCGAGTGCCGAGGCAAGAGCCTGACCAGCAAGGTGCCCCCCACCGTGCAGAAGCCCACCACCGTGAACGTGCCCACCACCGAGGTGAGCCCCACCAGCCAGAAGACCACCACCAAGACCACCACCCCCAACGCCCAGGCCACCCGCAGCACCCCCGTGAGCCGCACCACCAAGCACTTCCACGAGACCACCCCCAACAAGGGCAGCGGCACCACCAGCGGCTAA
［配列番号５８］
別の実施形態では、ｓＣＤ５５－フューリン－Ｐ２Ａ－ＰＥＤＦのアミノ酸配列は、次の通り、配列番号５９、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRFLTVISFLLYFGCAFADCGLPPDVPNAQPALEGRTSFPEDTVITYKCEESFVKIPGEKDSVICLKGSQWSDIEEFCNRSCEVPTRLNSASLKQPYITQNYFPVGTVVEYECRPGYRREPSLSPKLTCLQNLKWSTAVEFCKKKSCPNPGEIRNGQIDVPGGILFGATISFSCNTGYKLFGSTSSFCLISGSSVQWSDPLPECREIYCPAPPQIDNGIIQGERDHYGYRQSVTYACNKGFTMIGEHSIYCTVNNDEGEWSGPPPECRGKSLTSKVPPTVQKPTTVNVPTTEVSPTSQKTTTKTTTPNAQATRSTPVSRTTKHFHETTPNKGSGTTSGRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGP
［配列番号５９］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号６０と本明細書で称される２３５８ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１２６Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCTTCCTGACCGTGATCAGCTTCCTGCTGTACTTCGGCTGCGCCTTCGCCGACTGCGGCCTGCCCCCCGACGTGCCCAACGCCCAGCCCGCCCTGGAGGGCCGCACCAGCTTCCCCGAGGACACCGTGATCACCTACAAGTGCGAGGAGAGCTTCGTGAAGATCCCCGGCGAGAAGGACAGCGTGATCTGCCTGAAGGGCAGCCAGTGGAGCGACATCGAGGAGTTCTGCAACCGCAGCTGCGAGGTGCCCACCCGCCTGAACAGCGCCAGCCTGAAGCAGCCCTACATCACCCAGAACTACTTCCCCGTGGGCACCGTGGTGGAGTACGAGTGCCGCCCCGGCTACCGCCGCGAGCCCAGCCTGAGCCCCAAGCTGACCTGCCTGCAGAACCTGAAGTGGAGCACCGCCGTGGAGTTCTGCAAGAAGAAGAGCTGCCCCAACCCCGGCGAGATCCGCAACGGCCAGATCGACGTGCCCGGCGGCATCCTGTTCGGCGCCACCATCAGCTTCAGCTGCAACACCGGCTACAAGCTGTTCGGCAGCACCAGCAGCTTCTGCCTGATCAGCGGCAGCAGCGTGCAGTGGAGCGACCCCCTGCCCGAGTGCCGCGAGATCTACTGCCCCGCCCCCCCCCAGATCGACAACGGCATCATCCAGGGCGAGCGCGACCACTACGGCTACCGCCAGAGCGTGACCTACGCCTGCAACAAGGGCTTCACCATGATCGGCGAGCACAGCATCTACTGCACCGTGAACAACGACGAGGGCGAGTGGAGCGGCCCCCCCCCCGAGTGCCGAGGCAAGAGCCTGACCAGCAAGGTGCCCCCCACCGTGCAGAAGCCCACCACCGTGAACGTGCCCACCACCGAGGTGAGCCCCACCAGCCAGAAGACCACCACCAAGACCACCACCCCCAACGCCCAGGCCACCCGCAGCACCCCCGTGAGCCGCACCACCAAGCACTTCCACGAGACCACCCCCAACAAGGGCAGCGGCACCACCAGCGGCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCTAA
［配列番号６０］
別の実施形態では、ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－ＣＦＨＲ１のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号６１、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRFLTVISFLLYFGCAFAEATFCDFPKINHGILYDEEKYKPFSQVPTGEVFYYSCEYNFVSPSKSFWTRITCTEEGWSPTPKCLRLCFFPFVENGHSESSGQTHLEGDTVQIICNTGYRLQNNENNISCVERGWSTPPKCRSTDTSCVNPPTVQNAHILSRQMSKYPSGERVRYECRSPYEMFGDEEVMCLNGNWTEPPQCKDSTGKCGPPPPIDNGDITSFPLSVYAPASSVEYQCQNLYQLEGNKRITCRNGQWSEPPKCLHPCVISREIMENYNIALRWTAKQKLYLRTGESAEFVCKRGYRLSSRSHTLRTTCWDGKLEYPTCAKR
［配列番号６１］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号６２と本明細書で称される２３３４ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１２７Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCTTCCTGACCGTGATCAGCTTCCTGCTGTACTTCGGCTGCGCCTTCGCCGAGGCCACCTTCTGCGACTTCCCCAAGATCAACCACGGCATCCTGTACGACGAGGAGAAGTACAAGCCCTTCAGCCAGGTGCCCACCGGCGAGGTGTTCTACTACAGCTGCGAGTACAACTTCGTGAGCCCCAGCAAGAGCTTCTGGACCCGCATCACCTGCACCGAGGAGGGCTGGAGCCCCACCCCCAAGTGCCTGCGCCTGTGCTTCTTCCCCTTCGTGGAGAACGGCCACAGCGAGAGCAGCGGCCAGACCCACCTGGAGGGCGACACCGTGCAGATCATCTGCAACACCGGCTACCGCCTGCAGAACAACGAGAACAACATCAGCTGCGTGGAGCGCGGCTGGAGCACCCCCCCCAAGTGCCGCAGCACCGACACCAGCTGCGTGAACCCCCCCACCGTGCAGAACGCCCACATCCTGAGCCGCCAGATGAGCAAGTACCCCAGCGGCGAGCGCGTGCGCTACGAGTGCCGCAGCCCCTACGAGATGTTCGGCGACGAGGAGGTGATGTGCCTGAACGGCAACTGGACCGAGCCCCCCCAGTGCAAGGACAGCACCGGCAAGTGCGGCCCCCCCCCCCCCATCGACAACGGCGACATCACCAGCTTCCCCCTGAGCGTGTACGCCCCCGCCAGCAGCGTGGAGTACCAGTGCCAGAACCTGTACCAGCTGGAGGGCAACAAGCGCATCACCTGCCGCAACGGCCAGTGGAGCGAGCCCCCCAAGTGCCTGCACCCCTGCGTGATCAGCCGCGAGATCATGGAGAACTACAACATCGCCCTGCGCTGGACCGCCAAGCAGAAGCTGTACCTGCGCACCGGCGAGAGCGCCGAGTTCGTGTGCAAGCGCGGCTACCGCCTGAGCAGCCGCAGCCACACCCTGCGCACCACCTGCTGGGACGGCAAGCTGGAGTACCCCACCTGCGCCAAGCGCTAA
［配列番号６２］
別の実施形態では、ＣＦＨＲ１－フューリン－Ｐ２Ａ－ＰＥＤＦのアミノ酸配列は、次の通り、配列番号６３、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRFLTVISFLLYFGCAFAEATFCDFPKINHGILYDEEKYKPFSQVPTGEVFYYSCEYNFVSPSKSFWTRITCTEEGWSPTPKCLRLCFFPFVENGHSESSGQTHLEGDTVQIICNTGYRLQNNENNISCVERGWSTPPKCRSTDTSCVNPPTVQNAHILSRQMSKYPSGERVRYECRSPYEMFGDEEVMCLNGNWTEPPQCKDSTGKCGPPPPIDNGDITSFPLSVYAPASSVEYQCQNLYQLEGNKRITCRNGQWSEPPKCLHPCVISREIMENYNIALRWTAKQKLYLRTGESAEFVCKRGYRLSSRSHTLRTTCWDGKLEYPTCAKRSKRSGSATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGP
［配列番号６３］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号６４と本明細書で称される２３２５ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１２８Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGCTGACCTTCATCAGCATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCTTCGCCGAGGCCACCTTCTGCGACTTCCCCAAGATCAACCACGGCATCCTGTACGACGAGGAGAAGTACAAGCCCTTCAGCCAGGTGCCCACCGGCGAGGTGTTCTACTACAGCTGCGAGTACAACTTCGTGAGCCCCAGCAAGAGCTTCTGGACCCGCATCACCTGCACCGAGGAGGGCTGGAGCCCCACCCCCAAGTGCCTGCGCCTGTGCTTCTTCCCCTTCGTGGAGAACGGCCACAGCGAGAGCAGCGGCCAGACCCACCTGGAGGGCGACACCGTGCAGATCATCTGCAACACCGGCTACCGCCTGCAGAACAACGAGAACAACATCAGCTGCGTGGAGCGCGGCTGGAGCACCCCCCCCAAGTGCCGCAGCACCGACACCAGCTGCGTGAACCCCCCCACCGTGCAGAACGCCCACATCCTGAGCCGCCAGATGAGCAAGTACCCCAGCGGCGAGCGCGTGCGCTACGAGTGCCGCAGCCCCTACGAGATGTTCGGCGACGAGGAGGTGATGTGCCTGAACGGCAACTGGACCGAGCCCCCCCAGTGCAAGGACAGCACCGGCAAGTGCGGCCCCCCCCCCCCCATCGACAACGGCGACATCACCAGCTTCCCCCTGAGCGTGTACGCCCCCGCCAGCAGCGTGGAGTACCAGTGCCAGAACCTGTACCAGCTGGAGGGCAACAAGCGCATCACCTGCCGCAACGGCCAGTGGAGCGAGCCCCCCAAGTGCCTGCACCCCTGCGTGATCAGCCGCGAGATCATGGAGAACTACAACATCGCCCTGCGCTGGACCGCCAAGCAGAAGCTGTACCTGCGCACCGGCGAGAGCGCCGAGTTCGTGTGCAAGCGCGGCTACCGCCTGAGCAGCCGCAGCCACACCCTGCGCACCACCTGCTGGGACGGCAAGCTGGAGTACCCCACCTGCGCCAAGCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCTAA
［配列番号６４］
別の実施形態では、ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－抗Ｃ５ ＳＣＶＦのアミノ酸配列は、次の通り、配列番号８５、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHSSCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRVRRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLLILALVGAAVADIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNQLSWYQQKPGKAPKLLIYYASTLASGYPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQGSYYSGGWDYGFGQGTKVEIKRGGGGGSGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSGRYWIQWVRQAPGKGLEWVASVWPGITGTNYANWAKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREPVAWGGGLDLWGQGTLVTVSS
［配列番号８５］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号８６と本明細書で称される２１３６ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ０９４Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACAGCAGCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCGTGCGCCGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGCTGATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCGCCGTGGCCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCCAGGCCAGCCAGAGCATCAACAACCAGCTGAGCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCACCCTGGCCAGCGGCTACCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGGGCAGCTACTACAGCGGCGGCTGGGACTACGGCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCAGCTTCAGCGGCCGCTACTGGATCCAGTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCAGCGTGTGGCCCGGCATCACCGGCACCAACTACGCCAACTGGGCCAAGGGCCGCTTCACCATCAGCCGCGACGACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGAGCCCGTGGCCTGGGGCGGCGGCCTGGACCTGTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCTGA
［配列番号８６］
別の実施形態では、ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－抗Ｂｂ ＳＣＶＦのアミノ酸配列は、次の通り、配列番号６５、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHSSCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRVRRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLLILALVGAAVADVQITQSPSYLAASPGETITINCRASKSISKYLAWYQDKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAMYYCQQHDEYPWTFGGGTKLEIKRGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELAKPGASVRMSCKASGYTFTNYWIHWVKQRPGQGLEWIGYINPNTGYNDYNQKFKDKATLTADKSSSTVYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGQLGLRRAMDYWGQGTSVTVSS
［配列番号６５］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号６６と本明細書で称される２１３０ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ０９３Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACAGCAGCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCGTGCGCCGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGCTGATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCGCCGTGGCCGACGTCCAGATCACCCAGAGCCCCAGCTACCTGGCCGCCAGCCCCGGCGAGACCATCACCATCAACTGCCGCGCCAGCAAGAGCATCAGCAAGTACCTGGCCTGGTACCAGGACAAGCCCGGCAAGACCAACAAGCTGCTGATCTACAGCGGCAGCACCCTGCAGAGCGGCATCCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCATGTACTACTGCCAGCAGCACGACGAGTACCCCTGGACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCCAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCGCCGAGCTGGCCAAGCCCGGCGCCAGCGTGCGCATGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAACTACTGGATCCACTGGGTGAAGCAGCGCCCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTACATCAACCCCAACACCGGCTACAACGACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACCCTGACCGCCGACAAGAGCAGCAGCACCGTGTACATGCAGCTGAGCAGCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGGCGGCCAGCTGGGCCTGCGCCGCGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACCGTGAGCAGCTGA
［配列番号６６］
別の実施形態では、ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－抗Ｂｂ ＳＣＶＦのアミノ酸配列は、次の通り、配列番号６７、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHSSCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLLILALVGAAVADVQITQSPSYLAASPGETITINCRASKSISKYLAWYQDKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAMYYCQQHDEYPWTFGGGTKLEIKRGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELAKPGASVRMSCKASGYTFTNYWIHWVKQRPGQGLEWIGYINPNTGYNDYNQKFKDKATLTADKSSSTVYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGQLGLRRAMDYWGQGTSVTVSS
［配列番号６７］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号６８と本明細書で称される２１３６ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１２９Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACAGCAGCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGCTGATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCGCCGTGGCCGACGTCCAGATCACCCAGAGCCCCAGCTACCTGGCCGCCAGCCCCGGCGAGACCATCACCATCAACTGCCGCGCCAGCAAGAGCATCAGCAAGTACCTGGCCTGGTACCAGGACAAGCCCGGCAAGACCAACAAGCTGCTGATCTACAGCGGCAGCACCCTGCAGAGCGGCATCCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCATGTACTACTGCCAGCAGCACGACGAGTACCCCTGGACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCCAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCGCCGAGCTGGCCAAGCCCGGCGCCAGCGTGCGCATGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAACTACTGGATCCACTGGGTGAAGCAGCGCCCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTACATCAACCCCAACACCGGCTACAACGACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACCCTGACCGCCGACAAGAGCAGCAGCACCGTGTACATGCAGCTGAGCAGCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGGCGGCCAGCTGGGCCTGCGCCGCGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACCGTGAGCAGCTGA
［配列番号６８］
別の実施形態では、ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－ｓＣＤ４６のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号６９、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRFLTVISFLLYFGCAFACEEPPTFEAMELIGKPKPYYEIGERVDYKCKKGYFYIPPLATHTICDRNHTWLPVSDDACYRETCPYIRDPLNGQAVPANGTYEFGYQMHFICNEGYYLIGEEILYCELKGSVAIWSGKPPICEKVLCTPPPKIKNGKHTFSEVEVFEYLDAVTYSCDPAPGPDPFSLIGESTIYCGDNSVWSRAAPECKVVKCRFPVVENGKQISGFGKKFYYKATVMFECDKGFYLDGSDTIVCDSNSTWDPPVPKCLKVLPPSSTKPPALSHSVSTSSTTKSPASSASGPRPTYKPPVSNYPGYPKPEEGILDSLDV
［配列番号６９］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号７０と本明細書で称される２３２８ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１５９Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCTTCCTGACCGTGATCAGCTTCCTGCTGTACTTCGGCTGCGCCTTCGCCTGCGAGGAGCCCCCCACCTTCGAGGCCATGGAGCTGATCGGCAAGCCCAAGCCCTACTACGAGATCGGCGAGCGCGTGGACTACAAGTGCAAGAAGGGCTACTTCTACATCCCCCCCCTGGCCACCCACACCATCTGCGACCGCAACCACACCTGGCTGCCCGTGAGCGACGACGCCTGCTACCGCGAGACCTGCCCCTACATCCGCGACCCCCTGAACGGCCAGGCCGTGCCCGCCAACGGCACCTACGAGTTCGGCTACCAGATGCACTTCATCTGCAACGAGGGCTACTACCTGATCGGCGAGGAGATCCTGTACTGCGAGCTGAAGGGCAGCGTGGCCATCTGGAGCGGCAAGCCCCCCATCTGCGAGAAGGTGCTGTGCACCCCCCCCCCCAAGATCAAGAACGGCAAGCACACCTTCAGCGAGGTGGAGGTGTTCGAGTACCTGGACGCCGTGACCTACAGCTGCGACCCCGCCCCCGGCCCCGACCCCTTCAGCCTGATCGGCGAGAGCACCATCTACTGCGGCGACAACAGCGTGTGGAGCCGCGCCGCCCCCGAGTGCAAGGTGGTGAAGTGCCGCTTCCCCGTGGTGGAGAACGGCAAGCAGATCAGCGGCTTCGGCAAGAAGTTCTACTACAAGGCCACCGTGATGTTCGAGTGCGACAAGGGCTTCTACCTGGACGGCAGCGACACCATCGTGTGCGACAGCAACAGCACCTGGGACCCCCCCGTGCCCAAGTGCCTGAAGGTGCTGCCCCCCAGCAGCACCAAGCCCCCCGCCCTGAGCCACAGCGTGAGCACCAGCAGCACCACCAAGAGCCCCGCCAGCAGCGCCAGCGGCCCCCGCCCCACCTACAAGCCCCCCGTGAGCAACTACCCCGGCTACCCCAAGCCCGAGGAGGGCATCCTGGACAGCCTGGACGTGTAA
［配列番号７０］
別の実施形態では、ｓＣＤ４６－フューリン－Ｐ２Ａ－ＰＥＤＦのアミノ酸配列は、次の通り、配列番号７１、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRFLTVISFLLYFGCAFACEEPPTFEAMELIGKPKPYYEIGERVDYKCKKGYFYIPPLATHTICDRNHTWLPVSDDACYRETCPYIRDPLNGQAVPANGTYEFGYQMHFICNEGYYLIGEEILYCELKGSVAIWSGKPPICEKVLCTPPPKIKNGKHTFSEVEVFEYLDAVTYSCDPAPGPDPFSLIGESTIYCGDNSVWSRAAPECKVVKCRFPVVENGKQISGFGKKFYYKATVMFECDKGFYLDGSDTIVCDSNSTWDPPVPKCLKVLPPSSTKPPALSHSVSTSSTTKSPASSASGPRPTYKPPVSNYPGYPKPEEGILDSLDVRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGP
［配列番号７１］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号７２と本明細書で称される２３２８ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１４５Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCTTCCTGACCGTGATCAGCTTCCTGCTGTACTTCGGCTGCGCCTTCGCCTGCGAGGAGCCCCCCACCTTCGAGGCCATGGAGCTGATCGGCAAGCCCAAGCCCTACTACGAGATCGGCGAGCGCGTGGACTACAAGTGCAAGAAGGGCTACTTCTACATCCCCCCCCTGGCCACCCACACCATCTGCGACCGCAACCACACCTGGCTGCCCGTGAGCGACGACGCCTGCTACCGCGAGACCTGCCCCTACATCCGCGACCCCCTGAACGGCCAGGCCGTGCCCGCCAACGGCACCTACGAGTTCGGCTACCAGATGCACTTCATCTGCAACGAGGGCTACTACCTGATCGGCGAGGAGATCCTGTACTGCGAGCTGAAGGGCAGCGTGGCCATCTGGAGCGGCAAGCCCCCCATCTGCGAGAAGGTGCTGTGCACCCCCCCCCCCAAGATCAAGAACGGCAAGCACACCTTCAGCGAGGTGGAGGTGTTCGAGTACCTGGACGCCGTGACCTACAGCTGCGACCCCGCCCCCGGCCCCGACCCCTTCAGCCTGATCGGCGAGAGCACCATCTACTGCGGCGACAACAGCGTGTGGAGCCGCGCCGCCCCCGAGTGCAAGGTGGTGAAGTGCCGCTTCCCCGTGGTGGAGAACGGCAAGCAGATCAGCGGCTTCGGCAAGAAGTTCTACTACAAGGCCACCGTGATGTTCGAGTGCGACAAGGGCTTCTACCTGGACGGCAGCGACACCATCGTGTGCGACAGCAACAGCACCTGGGACCCCCCCGTGCCCAAGTGCCTGAAGGTGCTGCCCCCCAGCAGCACCAAGCCCCCCGCCCTGAGCCACAGCGTGAGCACCAGCAGCACCACCAAGAGCCCCGCCAGCAGCGCCAGCGGCCCCCGCCCCACCTACAAGCCCCCCGTGAGCAACTACCCCGGCTACCCCAAGCCCGAGGAGGGCATCCTGGACAGCCTGGACGTGCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCTAA
［配列番号７２］
別の実施形態では、［ＰＥＤＦ－フューリン－Ｐ２Ａ－ＣＦＨＬ１］のアミノ酸配列は、次の通り、配列番号８７、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGPRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLLTFISILALVGAFAEDCNELPPRRNTEILTGSWSDQTYPEGTQAIYKCRPGYRSLGNVIMVCRKGEWVALNPLRKCQKRPCGHPGDTPFGTFTLTGGNVFEYGVKAVYTCNEGYQLLGEINYRECDTDGWTNDIPICEVVKCLPVTAPENGKIVSSAMEPDREYHFGQAVRFVCNSGYKIEGDEEMHCSDDGFWSKEKPKCVEISCKSPDVINGSPISQKIIYKENERFQYKCNMGYEYSERGDAVCTESGWRPLPSCEEKSCDNPYIPNGDYSPLRIKHRTGDEITYQCRNGFYPATRGNTAKCTSTGWIPAPRCTLKPCDYPDIKHGGLYHENMRRPYFPVAVGKYYSYYCDEHFETPSGSYWDHIHCTQDGWSPAVPCLRKCYFPYLENGYNQNYGRKFVQGKSIDVACHPGYALPKAQTTVTCMENGWSPTPRCIR
［配列番号８７］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号８８と本明細書で称される２６７０ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１６１Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGCTGACCTTCATCAGCATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCTTCGCCGAGGACTGCAACGAGCTGCCCCCCCGCCGCAACACCGAGATCCTGACCGGCAGCTGGAGCGACCAGACCTACCCCGAGGGCACCCAGGCCATCTACAAGTGCCGCCCCGGCTACCGCAGCCTGGGCAACGTGATCATGGTGTGCCGCAAGGGCGAGTGGGTGGCCCTGAACCCCCTGCGCAAGTGCCAGAAGCGCCCCTGCGGCCACCCCGGCGACACCCCCTTCGGCACCTTCACCCTGACCGGCGGCAACGTGTTCGAGTACGGCGTGAAGGCCGTGTACACCTGCAACGAGGGCTACCAGCTGCTGGGCGAGATCAACTACCGCGAGTGCGACACCGACGGCTGGACCAACGACATCCCCATCTGCGAGGTGGTGAAGTGCCTGCCCGTGACCGCCCCCGAGAACGGCAAGATCGTGAGCAGCGCCATGGAGCCCGACCGCGAGTACCACTTCGGCCAGGCCGTGCGCTTCGTGTGCAACAGCGGCTACAAGATCGAGGGCGACGAGGAGATGCACTGCAGCGACGACGGCTTCTGGAGCAAGGAGAAGCCCAAGTGCGTGGAGATCAGCTGCAAGAGCCCCGACGTGATCAACGGCAGCCCCATCAGCCAGAAGATCATCTACAAGGAGAACGAGCGCTTCCAGTACAAGTGCAACATGGGCTACGAGTACAGCGAGCGCGGCGACGCCGTGTGCACCGAGAGCGGCTGGCGCCCCCTGCCCAGCTGCGAGGAGAAGAGCTGCGACAACCCCTACATCCCCAACGGCGACTACAGCCCCCTGCGCATCAAGCACCGCACCGGCGACGAGATCACCTACCAGTGCCGCAACGGCTTCTACCCCGCCACCCGGGGCAACACCGCCAAGTGCACCAGCACCGGCTGGATCCCCGCCCCCCGCTGCACCCTGAAGCCCTGCGACTACCCCGACATCAAGCACGGCGGCCTGTACCACGAGAACATGCGCCGCCCCTACTTCCCCGTGGCCGTGGGCAAGTACTACAGCTACTACTGCGACGAGCACTTCGAGACCCCCAGCGGCAGCTACTGGGACCACATCCACTGCACCCAGGACGGCTGGAGCCCCGCCGTGCCCTGCCTGCGCAAGTGCTACTTCCCCTACCTGGAGAACGGCTACAACCAGAACTACGGCCGCAAGTTCGTGCAGGGCAAGAGCATCGACGTGGCCTGCCACCCCGGCTACGCCCTGCCCAAGGCCCAGACCACCGTGACCTGCATGGAGAACGGCTGGAGCCCCACCCCCCGCTGCATCCGC
［配列番号８８］
別の実施形態では、次の通り、［ＣＦＨＬ１－フューリン－Ｐ２Ａ－ＰＥＤＦ］のアミノ酸配列は、配列番号８９、またはその断片もしくはバリアントと本明細書で称される：
MRRLLTFISILALVGAFAEDCNELPPRRNTEILTGSWSDQTYPEGTQAIYKCRPGYRSLGNVIMVCRKGEWVALNPLRKCQKRPCGHPGDTPFGTFTLTGGNVFEYGVKAVYTCNEGYQLLGEINYRECDTDGWTNDIPICEVVKCLPVTAPENGKIVSSAMEPDREYHFGQAVRFVCNSGYKIEGDEEMHCSDDGFWSKEKPKCVEISCKSPDVINGSPISQKIIYKENERFQYKCNMGYEYSERGDAVCTESGWRPLPSCEEKSCDNPYIPNGDYSPLRIKHRTGDEITYQCRNGFYPATRGNTAKCTSTGWIPAPRCTLKPCDYPDIKHGGLYHENMRRPYFPVAVGKYYSYYCDEHFETPSGSYWDHIHCTQDGWSPAVPCLRKCYFPYLENGYNQNYGRKFVQGKSIDVACHPGYALPKAQTTVTCMENGWSPTPRCIRRRSKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRRLVLLLCIGALLGHVFCQNPASPPEEGSPDPDSTGALVEEEDPFFKVPVNKLAAAVSNFGYDLYRVRSSTSPTTNVLLSPLSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGTYKELLDTVTAPQKNLKSASRIVFEKKLRIKSSFVAPLEKSYGTRPRVLTGNPRLDLQEINNWVQAQMKGKLARSTKEIPDEISILLLGVAHFKGQWVTKFDSRKTSLEDFYLDEERTVRVPMMSDPKAVLRYGLDSDLSCKIAQLPLTGSMSIIFFLPLKVTQNLTLIEESLTSEFIHDIDRELKTVQAVLTVPKLKLSYEGEVTKSLQEMKLQSLFDSPDFSKITGKPIKLTQVEHRAGFEWNEDGAGTTPSPGLQPAHLTFPLDYHLNQPFIFVLRDTDTGALLFIGKILDPRGP
［配列番号８９］
好ましくは、この実施形態では、構築物は、次の通り、配列番号９０と本明細書で称される２６７０ヌクレオチド配列（プラスミドＩＫＣ１７４Ｐ内に含有される通り）、またはその断片もしくはバリアントを含む：
ATGCGCCGCCTGCTGACCTTCATCAGCATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCTTCGCCGAGGACTGCAACGAGCTGCCCCCCCGCCGCAACACCGAGATCCTGACCGGCAGCTGGAGCGACCAGACCTACCCCGAGGGCACCCAGGCCATCTACAAGTGCCGCCCCGGCTACCGCAGCCTGGGCAACGTGATCATGGTGTGCCGCAAGGGCGAGTGGGTGGCCCTGAACCCCCTGCGCAAGTGCCAGAAGCGCCCCTGCGGCCACCCCGGCGACACCCCCTTCGGCACCTTCACCCTGACCGGCGGCAACGTGTTCGAGTACGGCGTGAAGGCCGTGTACACCTGCAACGAGGGCTACCAGCTGCTGGGCGAGATCAACTACCGCGAGTGCGACACCGACGGCTGGACCAACGACATCCCCATCTGCGAGGTGGTGAAGTGCCTGCCCGTGACCGCCCCCGAGAACGGCAAGATCGTGAGCAGCGCCATGGAGCCCGACCGCGAGTACCACTTCGGCCAGGCCGTGCGCTTCGTGTGCAACAGCGGCTACAAGATCGAGGGCGACGAGGAGATGCACTGCAGCGACGACGGCTTCTGGAGCAAGGAGAAGCCCAAGTGCGTGGAGATCAGCTGCAAGAGCCCCGACGTGATCAACGGCAGCCCCATCAGCCAGAAGATCATCTACAAGGAGAACGAGCGCTTCCAGTACAAGTGCAACATGGGCTACGAGTACAGCGAGCGCGGCGACGCCGTGTGCACCGAGAGCGGCTGGCGCCCCCTGCCCAGCTGCGAGGAGAAGAGCTGCGACAACCCCTACATCCCCAACGGCGACTACAGCCCCCTGCGCATCAAGCACCGCACCGGCGACGAGATCACCTACCAGTGCCGCAACGGCTTCTACCCCGCCACCCGGGGCAACACCGCCAAGTGCACCAGCACCGGCTGGATCCCCGCCCCCCGCTGCACCCTGAAGCCCTGCGACTACCCCGACATCAAGCACGGCGGCCTGTACCACGAGAACATGCGCCGCCCCTACTTCCCCGTGGCCGTGGGCAAGTACTACAGCTACTACTGCGACGAGCACTTCGAGACCCCCAGCGGCAGCTACTGGGACCACATCCACTGCACCCAGGACGGCTGGAGCCCCGCCGTGCCCTGCCTGCGCAAGTGCTACTTCCCCTACCTGGAGAACGGCTACAACCAGAACTACGGCCGCAAGTTCGTGCAGGGCAAGAGCATCGACGTGGCCTGCCACCCCGGCTACGCCCTGCCCAAGGCCCAGACCACCGTGACCTGCATGGAGAACGGCTGGAGCCCCACCCCCCGCTGCATCCGCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCC
［配列番号９０］
したがって、好ましい実施形態では、構築物は、配列番号５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、８５、８７もしくは８９に実質的に示されるアミノ酸配列、またはその断片もしくはバリアントをコードする。
【0083】
好ましくは、構築物は、配列番号５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、８６、８８もしくは９０に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
【0084】
本発明者らは、本発明の構築物を含む一連の組換え発現ベクターを創出した。
【0085】
よって、第２の態様において、第１の態様に係る遺伝的構築物を含む組換えベクターが提供される。
【0086】
一実施形態では、組換えベクター（例えば、「ＩＫＣ０１２１Ｖ」として知られている）は、次の通り、配列番号７３と本明細書で称されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む：
CGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTGTAGTTAATGATTAACCCGCCATGCTACTTATCTACGTAGCCATGCTCTAGACATGGCTCGACAGATCGAGCTCCACCGGGTACCCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGACGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTCGCGACTCGACCCGCTAGCGCCACCATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGCTGACCTTCATCAGCATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCTTCGCCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCCGCGCCAGCCAGGACGTAAGCACCGCCGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAGCGCCAGCTTCCTGTACAGCGGCGTGCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCTACGCCACCCTGCCCACCTTCGAGCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCAGCTTCACCAGCAGCAGCGTGAGCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCCTGATCTACCCCTACAACGGCTTCAACTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCAGCGCCGACACCAGCCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCAACGCCCTGTACGGCAGCGGCGGCTACTACGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCTGATATACTACTAGTACGCGGCCGCACCGGTGTACAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTAGTTCTTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTGAATTCGAGCTAGGTACAGCTTATCGATACCGTCGACAGCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTATGCTCGAGGGCATGCAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGATGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTAAAATCCGATAAGGACTAGAGCATGGCTACGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAACTACAAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGC
［配列番号７３］
したがって、一実施形態では、組換えベクターは、配列番号７３に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
CGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTGTAGTTAATGATTAACCCGCCATGCTACTTATCTACGTAGCCATGCTCTAGACATGGCTCGACAGATCGAGCTCCACCGGGTACCCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGACGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTCGCGACTCGACCCGCTAGCGCCACCATGCGCCGCCTGGTGCTGCTGCTGTGCATCGGCGCCCTGCTGGGCCACGTGTTCTGCCAGAACCCCGCCAGCCCCCCCGAGGAGGGCAGCCCCGACCCCGACAGCACCGGCGCCCTGGTGGAGGAGGAGGACCCCTTCTTCAAGGTGCCCGTGAACAAGCTGGCCGCCGCCGTGAGCAACTTCGGCTACGACCTGTACCGCGTGCGCAGCAGCACCAGCCCCACCACCAACGTGCTGCTGAGCCCCCTGAGCGTGGCCACCGCCCTGAGCGCCCTGAGCCTGGGCGCCGAGCAGCGCACCGAGAGCATCATCCACCGCGCCCTGTACTACGACCTGATCAGCAGCCCCGACATCCACGGCACCTACAAGGAGCTGCTGGACACCGTGACCGCCCCCCAGAAGAACCTGAAGAGCGCCAGCCGCATCGTGTTCGAGAAGAAGCTGCGCATCAAGAGCAGCTTCGTGGCCCCCCTGGAGAAGAGCTACGGCACCCGCCCCCGCGTGCTGACCGGCAACCCCCGCCTGGACCTGCAGGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCCCAGATGAAGGGCAAGCTGGCCCGCAGCACCAAGGAGATCCCCGACGAGATCAGCATCCTGCTGCTGGGCGTGGCCCACTTCAAGGGCCAGTGGGTGACCAAGTTCGACAGCCGCAAGACCAGCCTGGAGGACTTCTACCTGGACGAGGAGCGCACCGTGCGCGTGCCCATGATGAGCGACCCCAAGGCCGTGCTGCGCTACGGCCTGGACAGCGACCTGAGCTGCAAGATCGCCCAGCTGCCCCTGACCGGCAGCATGAGCATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAGGTGACCCAGAACCTGACCCTGATCGAGGAGAGCCTGACCAGCGAGTTCATCCACGACATCGACCGCGAGCTGAAGACCGTGCAGGCCGTGCTGACCGTGCCCAAGCTGAAGCTGAGCTACGAGGGCGAGGTGACCAAGAGCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAGAGCCTGTTCGACAGCCCCGACTTCAGCAAGATCACCGGCAAGCCCATCAAGCTGACCCAGGTGGAGCACCGCGCCGGCTTCGAGTGGAACGAGGACGGCGCCGGCACCACCCCCAGCCCCGGCCTGCAGCCCGCCCACCTGACCTTCCCCCTGGACTACCACCTGAACCAGCCCTTCATCTTCGTGCTGCGCGACACCGACACCGGCGCCCTGCTGTTCATCGGCAAGATCCTGGACCCCCGCGGCCCCCGCCGCAGCAAGCGCAGCGGCAGCGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGCGCCGCCTGCTGACCTTCATCAGCATCCTGGCCCTGGTGGGCGCCTTCGCCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCCGCGCCAGCCAGGACGTAAGCACCGCCGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAGCGCCAGCTTCCTGTACAGCGGCGTGCCCAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCTACGCCACCCTGCCCACCTTCGAGCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCAGCTTCACCAGCAGCAGCGTGAGCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCCTGATCTACCCCTACAACGGCTTCAACTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCAGCGCCGACACCAGCCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCAACGCCCTGTACGGCAGCGGCGGCTACTACGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCTGATATACTACTAGTACGCGGCCGCACCGGTGTACAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTAGTTCTTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTGAATTCGAGCTAGGTACAGCTTATCGATACCGTCGACAGCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTATGCTCGAGGGCATGCAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGATGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTAAAATCCGATAAGGACTAGAGCATGGCTACGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAACTACAAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGC
［配列番号７３］
したがって、一実施形態では、組換えベクターは、配列番号７３に実質的に示されるヌクレオチド配列、またはその断片もしくはバリアントを含む。
【0087】
組換えベクターは、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターであり得る。ｒＡＡＶは、天然に存在するベクターまたはハイブリッドＡＡＶ血清型を有するベクターであり得る。ｒＡＡＶは、ＡＡＶ－１、ＡＡＶ－２、ＡＡＶ－２．７ｍ８、ＡＡＶ－３Ａ、ＡＡＶ－３Ｂ、ＡＡＶ－４、ＡＡＶ－５、ＡＡＶ－６、ＡＡＶ－７、ＡＡＶ－８、ＡＡＶ－９、ＡＡＶ－１０およびＡＡＶ－１１であり得る。好ましくは、ｒＡＡＶは、ｒＡＡＶ血清型－２である。
【0088】
有利には、組換えＡＡＶ２は、宿主生物における最小限の免疫応答を誘発し、網膜においてベクター投与後に少なくとも１年間持続し得る長期導入遺伝子発現を媒介する。
【0089】
用語「組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクター」は、組換えＡＡＶ由来核酸を意味することができる。これは、少なくとも１個の末端反復配列を含有することができる。
【0090】
ＡＡＶおよび組換えベクターのカプシドコートは、ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３と呼ばれる３種のカプシドタンパク質で構成されることが知られており、これら３種は全て、その間に相当量の重複するアミノ酸を含むが、特有のＮ末端配列を含む。ＡＡＶウイルスは、一緒になって正二十面体構造を形成する、１：１：１０比のＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３カプシドタンパク質［６２］のそれぞれによる６０個のサブユニットを含有する。アミノ酸組成が異なり、よって、宿主細胞における受容体への異なる結合特性を付与する、多くのＡＡＶ血清型が同定された。ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１およびＡＡＶ１２等の同定されたいくつかの天然に存在するＡＡＶ血清型、ならびにカプシドコード配列のライブラリーからのＤＮＡバリアントのスクリーニングによりアミノ酸配列に対するさらなる改変が同定された、多くの人工バリアントが存在する［６３］。したがって、異なる血清型は、トロピズムを表示することができ、１つの偽型の様々なアミノ酸の交換は、異なる標的細胞に対するトロピズムまたは感染力を変化させることができる。よって、１つの特定の細胞型を標的とするように、または特定の臓器に感染力を大いに制限するように、特異的なＡＡＶ偽型を設計することができる。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２を含むＡＡＶ血清型に由来するベクターである。ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２カプシドを含む任意のＡＡＶ血清型に由来するカプシドタンパク質を含むことができる。ｒＡＡＶ粒子は、同じ血清型または混合型の血清型のウイルスタンパク質およびウイルス核酸を含むことができる。
【0091】
本発明の組換えウイルス粒子の（ｏｒ）カプシドタンパク質は、天然に存在するタンパク質（例えば、ＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２のカプシドタンパク質等、天然に存在するＡＡＶカプシドタンパク質）のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなることができる、または例えば、所望の組織型もしくは細胞型（網膜神経節細胞、光受容体または網膜色素上皮細胞等）に対するトロピズムを付与するためか、もしくは組換えウイルス粒子の免疫原性を低減させるために、天然に存在するカプシドタンパク質のアミノ酸配列と比較して１個もしくは複数のアミノ酸置換、欠失もしくは付加を含む天然に存在するカプシドタンパク質の誘導体もしくはキメラであり得る。
【0092】
一部の実施形態では、本発明の組換えウイルス粒子のカプシドタンパク質は、その長さ全体に沿って、天然に存在するカプシドタンパク質、例えば、血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２の天然に存在するＡＡＶカプシドタンパク質のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％アミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0093】
本明細書に記載されている構築物および発現ベクターを使用して、網膜障害、特に、ドライ型加齢性黄斑変性および地図状萎縮を処置し、より一般的には、補体活性化ならびに網膜細胞損傷および喪失を低減させることができる。
【0094】
したがって、第３の態様において、医薬としてのまたは治療における使用のための、第１の態様に係る遺伝的構築物または第２の態様に係る組換えベクターが提供される。
【0095】
第４の態様において、網膜障害の処置、予防もしくは寛解における使用のための、または補体活性化ならびに網膜細胞損傷および喪失を低減させるための、第１の態様に係る遺伝的構築物または第２の態様に係る組換えベクターが提供される。
【0096】
第５の態様において、対象における網膜障害を処置、予防もしくは寛解する、または補体活性化ならびに網膜細胞損傷および喪失を低減させるための方法であって、そのような処置を必要とする対象に、治療有効量の第１の態様に係る遺伝的構築物または第２の態様に係る組換えベクターを投与するステップまたは投与したステップを含む方法が提供される。
【0097】
好ましくは、発明に係る遺伝的構築物または組換えベクターは、遺伝子療法の技法において使用される。構築物またはベクターによってコードされるＰＥＤＦ受容体アゴニストは、ＰＥＤＦ受容体を活性化して、これにより、ＲＰＥおよび光受容体細胞を保存し、ＶＥＧＦ放出を低減させ、ドライ型ＡＭＤからウエット型ＡＭＤへの変換を防止する。構築物またはベクターによってコードされる抗補体タンパク質は、補体因子を中和して、これにより、補体活性化を低減させ、ＧＡ区域および網膜細胞喪失を低減させる。
【0098】
一実施形態では、処置される網膜障害は、ドライ型加齢性黄斑変性または地図状萎縮であり得る。加えて、処置される網膜障害は、補体活性化による網膜損傷を伴う任意の病態生理学的状態であり得る。
【0099】
別の実施形態では、構築物およびベクターを使用して、補体活性化ならびに網膜細胞損傷および喪失を低減させることができる。構築物およびベクターを使用して、次の状態；網膜色素変性症、シュタルガルト病、糖尿病性黄斑変性、加齢性黄斑変性およびレーバー先天黒内障に関連する網膜細胞損傷および喪失を処置することができる。別の実施形態では、構築物およびベクターを使用して、緑内障に関連する網膜細胞損傷および喪失を処置することができる。
【0100】
第１の態様に係る遺伝的構築物または第２の態様に係る組換えベクターを、網膜障害を処置、寛解もしくは予防するための、または補体活性化ならびに網膜細胞損傷および喪失を低減させるための、単独療法として使用され得る医薬において使用することができる（すなわち、本発明の第１の態様に係る遺伝的構築物または第２の態様に係るベクターの使用）ことが認められるであろう。あるいは、本発明に係る遺伝的構築物または組換えベクターは、網膜障害を処置、寛解もしくは予防するための、または補体活性化ならびに網膜細胞損傷および喪失を低減させるための知られている療法の補助として、またはそれと組み合わせて使用することができる。
【0101】
有効量の組換えウイルスベクターが、処置の目的に応じて投与される。例えば、低いパーセンテージの形質導入が、所望の治療効果を達成することができる場合、処置の目的は一般に、このレベルの形質導入を満たすまたは超えることである。一部の実例では、このレベルの形質導入は、標的細胞のほんの約１～５％、一部の実施形態では、所望の組織型の少なくとも約２０％、一部の実施形態では、所望の組織型の細胞の少なくとも約５０％、一部の実施形態では、少なくとも約８０％、一部の実施形態では、少なくとも約９５％、一部の実施形態では、少なくとも約９９％の形質導入によって達成することができる。本発明の一部の実施形態では、対象に投与されるウイルス粒子の用量は、１×１０８～１×１０１４ゲノムコピーの間である。
【0102】
組換えウイルス粒子は、同じ手順において、または数日間、数週間、数カ月間もしくは数年間間隔をあけて、１回または複数の注射によって投与することができる。一部の実施形態では、複数のベクターを使用して、対象を処置することができる。一部の実施形態では、標的組織の細胞（例えば、眼の網膜細胞）の少なくとも２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％または７５％から１００％までが形質導入される。組換えウイルス粒子カプシドを含む組換えウイルス粒子によって形質導入された細胞を同定する方法は、当技術分野で知られている。例えば、免疫組織化学検査またはマーカー（ｍａｒｋｅｔ）、例えば、高感度緑色蛍光タンパク質の使用を使用して、組換えウイルス粒子の形質導入を検出することができる。
【0103】
一部の実施形態では、組換えベクターは、所望の組織（例えば、眼）における１個または複数の位置に投与される（例えば、注射または注入によって）。一部の実施形態では、組換えベクターは、組織における１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個または１０個よりも多い位置のうちいずれか１個に投与される（例えば、注射または注入によって）。一部の実施形態では、組換えベクターは、１個よりも多い位置に同時にまたは逐次に投与される。一部の実施形態では、組換えベクターの複数の注射は、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、９時間、１２時間または２４時間以下離れている。
【0104】
本発明に係る遺伝的構築物または組換えベクターは、特に、組成物が使用されるべき様式に応じて多数の異なる形態を有する組成物において組み合わせることができる。よって、例えば、組成物は、粉末、錠剤、カプセル、液体、軟膏、クリーム、ゲル、ハイドロゲル、エアロゾル、スプレー、ミセル溶液、経皮パッチ、リポソーム懸濁液の形態、または処置を必要とする人もしくは動物に投与され得る任意の他の適した形態であり得る。本発明に係る医薬の媒体が、それが与えられる対象にとって耐容性が良い媒体となるべきであることが認められるであろう。
【0105】
本発明に係る遺伝的構築物または組換えベクターは、緩徐または遅延放出デバイス内に取り込むこともできる。そのようなデバイスを例えば、皮膚の上または下に挿入することができ、医薬を数週間またはさらには数カ月間にわたって放出させることができる。デバイスは、処置部位に少なくとも隣接して位置することができる。そのようなデバイスは、遺伝的構築物または組換えベクターによる長期処置が要求される場合に特に有利であり得、この場合は通常、高頻度投与（例えば、少なくとも毎日の注射）を要求するであろう。
【0106】
好ましい実施形態では、本発明に係る医薬は、血流、神経中への注射によって、または処置を要求する部位へと直接的に対象に投与することができる。例えば、医薬は、網膜の少なくとも隣接に注射することができる。注射は、硝子体内、上脈絡膜、網膜下、網膜内、静脈内（ボーラスまたは注入）または皮下（ボーラスまたは注入）または皮内（ボーラスまたは注入）であり得る。
【0107】
要求される遺伝的構築物または組換えベクターの量が、その生物活性およびバイオアベイラビリティによって決定され、これは次いで、投与の機序、遺伝的構築物または組換えベクターの生理化学的特性、およびそれが単独療法として使用されているか併用療法において使用されているかに依存することが認められるであろう。投与の頻度は、処置されている対象内での導入遺伝子タンパク質の半減期によっても影響されるであろう。投与されるべき最適な投薬量は、当業者が決定することができ、使用中の特定の遺伝的構築物または組換えベクター、医薬組成物の強さ、投与の機序、および網膜浮腫またはその結果生じる網膜の損傷もしくは網膜ニューロンにおける喪失の前進に伴い変動するであろう。対象の年齢、体重、性別、食事、および投与の時間を含む、処置されている特定の対象に依存する追加の因子は、投薬量を調整する必要をもたらすであろう。
【0108】
一般に、０．００１μｇ／ｋｇ（体重）～１０ｍｇ／ｋｇ（体重）の間のＤＮＡプラスミドまたは１×１０８ＧＣ／ｍＬ～１×１０１３ＧＣ／ｍＬの間の本発明に係るウイルスベクターの一日用量を、使用されている遺伝的構築物または組換えベクターに応じて、網膜障害を処置、寛解または予防するために使用することができる。
【0109】
遺伝的構築物または組換えベクターは、網膜障害または網膜毛細血管機能障害の発病の前、その間またはその後に投与することができる。一日用量は、単一の投与（例えば、単一の毎日の注射または点鼻薬の吸入）として与えることができる。あるいは、遺伝的構築物または組換えベクターは、１日の間に２回以上の回数の投与を要求する場合がある。例として、遺伝的構築物または組換えベクターは、０．００１μｇ／ｋｇ（体重）～１０ｍｇ／ｋｇ（体重）の間のＤＮＡプラスミド、または１×１０８ＧＣ／ｍＬ～１×１０１３ＧＣ／ｍＬの間のウイルスベクター（すなわち、７０ｋｇの体重を仮定）の、２回（以上、これは処置されている網膜障害または網膜毛細血管機能障害の重症度に依存）の一日用量として投与することができる。処置を受けている患者は、起床後に第１の用量を、次いで夜に第２の用量を服用することができる（２用量レジメン（ｒｅｇｉｍｅ）の場合は）、またはその後３もしくは４時間毎の間隔で服用することができる。あるいは、緩徐放出デバイスを使用して、反復用量を投与する必要なく、最適な用量の本発明に係る遺伝的構築物または組換えベクターを患者に提供することができる。
【0110】
医薬品産業によって従来用いられてきた手順等の知られている手順（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ実験法、臨床治験等）を使用して、本発明に係る遺伝的構築物または組換えベクターの特異的な製剤および正確な治療レジメンを形成することができる（薬剤の一日用量および投与の頻度等）。本発明者らは、自身を、ＰＥＤＦ濃度をブーストし、補体カスケードを減弱することにより、網膜生存を改善し、ＧＡ疾患進行を低減するであろうコード配列に作動可能に連結されたプロモーターをコードする、バイシストロニック遺伝的構築物を示唆する最初の者であると考える。
【0111】
第６の態様において、第１の態様に係る遺伝的構築物または第２の態様に係る組換えベクターと、薬学的に許容される媒体とを含む医薬組成物が提供される。
【0112】
第７の態様において、第６の態様に係る医薬組成物を調製する方法であって、第１の態様に係る遺伝的構築物または第２の態様に係る組換えベクターを、薬学的に許容される媒体と接触させるステップを含む方法が提供される。
【0113】
「対象」は、脊椎動物、哺乳動物または飼育動物であり得る。したがって、本発明に係る組成物および医薬は、任意の哺乳動物、例えば、家畜（例えば、ウマ）、ペットの処置に使用することができる、または他の獣医学適用において使用することができる。しかし、最も好ましくは、対象は、人間である。
【0114】
遺伝的構築物、組換えベクターまたは医薬組成物の「治療有効量」は、対象に投与されたときに、ドライ型加齢性黄斑浮腫またはＧＡの処置に必要とされる上述の量である任意の量である。
【0115】
例えば、使用される遺伝的構築物、組換えベクターまたは医薬組成物の治療有効量は、約１×１０８個のベクター粒子～約１×１０１５個のベクター粒子、好ましくは、約１×１０１１個のベクター粒子～約１×１０１２個のベクター粒子であり得る。
【0116】
一部の実施形態では、本発明の医薬組成物のウイルス力価は、１ミリリットル当たり５×１０１０～５×１０１３ゲノムコピーの間である。
【0117】
一部の実施形態では、本発明の医薬組成物のウイルス力価は、１ミリリットル当たり５×１０１０～５×１０１３形質導入単位の間である。ウイルス力価を参照して使用される用語「形質導入単位」は、［６４］に記載されるもの等の機能アッセイにおいて測定される機能的な導入遺伝子産物の産生をもたらす感染性組換えベクター粒子の数を指す。
【0118】
本明細書で参照される「薬学的に許容される媒体」は、医薬組成物の製剤化において有用であることが当業者に知られている、任意の知られている化合物または知られている化合物の組合せである。
【0119】
一実施形態では、薬学的に許容される媒体は、固体であり得、組成物は、粉末または錠剤の形態であり得る。固体の薬学的に許容される媒体は、香味料、潤滑剤、可溶化剤、懸濁剤、色素、フィラー、流動促進剤、圧縮補助物質（ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｉｄ）、不活性結合剤、甘味料、保存料、色素、コーティングまたは錠剤崩壊剤として作用することもできる１種または複数の物質を含むことができる。媒体は、カプセル封入材料となることもできる。粉末において、媒体は、本発明に係る微粉化活性剤との混合物中の微粉化固体である。錠剤において、活性剤（例えば、本発明に係る遺伝的構築物または組換えベクター）は、適した比率で、必要な圧縮特性を有する媒体と混合し、所望の形状およびサイズに詰め込むことができる。粉末および錠剤は、好ましくは、最大９９％の活性剤を含有する。適した固体媒体は、例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、デキストリン、デンプン、ゼラチン、セルロース、ポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ）、低融点ワックスおよびイオン交換樹脂を含む。別の実施形態では、医薬品媒体は、ゲルであり得、組成物は、クリームその他の形態であり得る。
【0120】
しかし、医薬品媒体は、液体であり得、医薬組成物は、溶液中の粒子懸濁液の形態である。液体媒体は、溶液、懸濁液、エマルション、シロップ、エリキシル剤および加圧された組成物の調製において使用される。本発明に係る遺伝的構築物または組換えベクターは、水、イオン性緩衝溶液、有機溶媒、両者の混合物、または薬学的に許容される油もしくは脂肪等の薬学的に許容される液体媒体中に溶解または懸濁することができる。液体媒体は、可溶化剤、乳化剤、バッファー、保存料、甘味料、香味料、懸濁剤、増粘剤、着色料、粘性調節因子、安定剤または浸透圧（ｏｓｍｏ）調節因子等の他の適した医薬品添加物を含有することができる。経口および非経口投与のための液体媒体の適した例は、水（上述の通りの添加物を部分的に含有する、例えば、セルロース誘導体、好ましくは、カルボキシメチルセルロースナトリウム溶液）、アルコール（一価アルコールおよび多価アルコール、例えば、グリコールを含む）およびそれらの誘導体、ならびに油（例えば、分画されたココナツ油およびラッカセイ油）を含む。非経口投与のため、媒体は、オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピル等の油性エステルとなることもできる。滅菌液体媒体は、非経口投与のための滅菌液体形態組成物において有用である。加圧された組成物のための液体媒体は、ハロゲン化炭化水素または他の薬学的に許容される噴霧剤であり得る。
【0121】
滅菌溶液または懸濁液である液体医薬組成物は、例えば、硝子体内、上脈絡膜、網膜下、網膜内、前房内、筋肉内、くも膜下腔内、硬膜外、腹腔内、静脈内および特に皮下注射によって利用され得る。遺伝的構築物または組換えベクターは、滅菌水、食塩水または他の適切な滅菌注射用培地を使用して投与時に溶解または懸濁され得る滅菌固体組成物として調製することができる。
【0122】
薬学的に許容される担体、賦形剤および希釈剤は、投与を容易にする相対的に不活性な物質または薬学的に有効な物質であり、液体の溶液もしくは懸濁液として、エマルションとして、または使用に先立つ液体における溶解もしくは懸濁に適した固体形態として供給することができる。例えば、賦形剤は、粘度（ｆｏｒ ｏｒ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ）に適した形態をもたらすことができる、または希釈剤として作用することができる。適した賦形剤は、安定化剤、湿潤剤および乳化剤、モル浸透圧濃度を変動させるための塩、カプセル封入剤、ｐＨ緩衝物質、およびバッファーを含むがこれらに限定されない。そのような賦形剤は、過度の毒性を伴わずに投与され得る、対象への直接的送達（例えば、硝子体内または網膜下）に適した任意の医薬剤を含む。薬学的に（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）許容される賦形剤は、ソルビトール、様々なＴＷＥＥＮ化合物のいずれか、ならびに水、食塩水、グリセロールおよびエタノール等の液体を含むがこれらに限定されない。薬学的に許容される塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩その他等の鉱酸塩；および酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩または安息香酸塩等の有機酸の塩がその中に含まれてよい。
【0123】
一部の実施形態では、薬学的に（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）許容される賦形剤は、薬学的に（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）許容される担体を含むことができる。そのような薬学的に許容される担体は、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱物油等、石油、動物、植物または合成起源のものを含む水および油等の滅菌液体であり得る。食塩水溶液およびデキストロース水、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびグリセロール溶液を、特に、注射用溶液のための液体担体として用いることもできる。追加の成分、例えば、保存料、バッファー、等張化剤、抗酸化剤および安定剤、非イオン性湿潤剤または清澄化剤、または粘性増加剤を使用することもできる。薬学的に（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）許容される賦形剤および担体についての徹底的な議論は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （Ｅｄ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ ＪＰ ａｎｄ Ｇｅｎｎａｒｏ ＡＲ； Ｍａｃｋ Ｐｕｂ． Ｃｏ． Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ １９９０）において得ることができる。
【0124】
本発明が、そのバリアントまたは断片を含む、本明細書で参照される配列のいずれかの実質的にアミノ酸または核酸配列を含む任意の核酸もしくはペプチド、またはそのバリアント、誘導体もしくはアナログに拡大することが認められるであろう。用語「実質的にアミノ酸／ヌクレオチド／ペプチド配列」、「バリアント」および「断片」は、本明細書で参照される配列のうちいずれか１つのアミノ酸／ヌクレオチド／ペプチド配列と少なくとも４０％配列同一性を、例えば、配列番号１～９０等々として同定された配列と４０％同一性を有する配列であり得る。
【0125】
参照される配列のいずれかに対して６５％を超える、より好ましくは７０％を超える、さらにより好ましくは７５％を超える、なおより好ましくは８０％を超える配列同一性である配列同一性を有するアミノ酸／ポリヌクレオチド／ポリペプチド配列も想定される。好ましくは、アミノ酸／ポリヌクレオチド／ポリペプチド配列は、参照される配列のいずれかと少なくとも８５％同一性、より好ましくは、本明細書で参照される配列のいずれかと少なくとも９０％同一性、さらにより好ましくは少なくとも９２％同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％同一性、さらにより好ましくは少なくとも９７％同一性、さらにより好ましくは少なくとも９８％同一性、最も好ましくは少なくとも９９％同一性を有する。
【0126】
当業者は、２種のアミノ酸／ポリヌクレオチド／ポリペプチド配列の間のパーセンテージ同一性を計算する仕方を認めるであろう。２種のアミノ酸／ポリヌクレオチド／ポリペプチド配列の間のパーセンテージ同一性を計算するために、２種の配列のアラインメントを先ず作成し、続いて配列同一性値を計算する必要がある。２種の配列のパーセンテージ同一性は、次のものに応じて異なる値を取ることができる：（ｉ）配列をアラインするのに使用される方法、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＷ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ、Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎ（異なるプログラムにおいて実行）、または３Ｄ比較からの構造的アラインメント；ならびに（ｉｉ）アラインメント方法、例えば、局所的ｖｓ全体的アラインメントによって使用されるパラメータ、使用されるペア－スコアマトリックス（例えば、ＢＬＯＳＵＭ６２、ＰＡＭ２５０、Ｇｏｎｎｅｔ等）、およびギャップ－ペナルティ、例えば、関数形式および定数。
【0127】
アラインさせたら、２種の配列の間のパーセンテージ同一性を計算する多くの異なる仕方が存在する。例えば、同一性の数を、（ｉ）最も短い配列の長さ；（ｉｉ）アラインメントの長さ；（ｉｉｉ）配列の平均長；（ｉｖ）非ギャップ位置の数；または（ｉｖ）オーバーハングを除外した同等の（ｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅｄ）位置の数で割ることができる。さらに、パーセンテージ同一性がまた、強く長さ依存性であることが認められるであろう。したがって、配列のペアが短いほど、偶然に生じると予想することができる配列同一性が高くなる。
【0128】
したがって、タンパク質またはＤＮＡ配列の正確なアラインメントが複雑なプロセスであることが認められるであろう。一般的な多重アラインメントプログラムＣｌｕｓｔａｌＷ［６５、６６］は、本発明に従ってタンパク質またはＤＮＡの多重アラインメントを生成するための好ましい仕方である。ＣｌｕｓｔａｌＷに適したパラメータは、次の通りであり得る：ＤＮＡアラインメントのため：ギャップオープンペナルティ＝１５．０、ギャップ伸長ペナルティ＝６．６６およびマトリックス＝同一性。タンパク質アラインメントのため：ギャップオープンペナルティ＝１０．０、ギャップ伸長ペナルティ＝０．２およびマトリックス＝Ｇｏｎｎｅｔ。ＤＮＡおよびタンパク質アラインメントのため：ＥＮＤＧＡＰ＝－１およびＧＡＰＤＩＳＴ＝４。当業者であれば、最適な配列アラインメントのために上述および他のパラメータを変動させる必要がある場合があることに気づくであろう。
【0129】
好ましくは、次いで、２種のアミノ酸／ポリヌクレオチド／ポリペプチド配列の間のパーセンテージ同一性の計算を、（Ｎ／Ｔ）＊１００（式中、Ｎは、配列が同一残基を共有する位置の数であり、Ｔは、ギャップを含み、オーバーハングを含むかまたは除外する、比較される位置の総数である）のようなアラインメントから計算することができる。好ましくは、オーバーハングは、計算に含まれる。したがって、２種の配列の間のパーセンテージ同一性を計算するための最も好ましい方法は、（ｉ）例えば、上に示される通り、パラメータの適したセットを使用したＣｌｕｓｔａｌＷプログラムを使用して配列アラインメントを作成するステップ；ならびに（ｉｉ）次式：配列同一性＝（Ｎ／Ｔ）＊１００にＮおよびＴの値を挿入するステップを含む。
【0130】
同様の配列を同定するための代替方法は、当業者に知られているであろう。例えば、実質的に同様のヌクレオチド配列は、ストリンジェントな条件下でＤＮＡ配列またはその相補体にハイブリダイズする配列によってコードされるであろう。ストリンジェントな条件とは、ヌクレオチドが、およそ４５℃の３×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）において、およびそれに続くおよそ２０～６５℃の０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳにおける少なくとも１回の洗浄において、フィルターに結合したＤＮＡまたはＲＮＡにハイブリダイズすることを意味する。あるいは、実質的に同様のポリペプチドは、本明細書に示される配列とは、少なくとも１個、ただし、５、１０、２０、５０または１００個未満のアミノ酸が異なることができる。
【0131】
遺伝暗号の縮重により、本明細書に記載されている任意の核酸配列を、それによってコードされるタンパク質の配列を実質的に影響させることなく変動または変化させて、その機能的なバリアントを提供することができることが明らかである。適したヌクレオチドバリアントは、配列内に同じアミノ酸をコードする異なるコドンの置換によって変更された配列を有し、よって、サイレント変化を生じるバリアントである。他の適したバリアントは、保存的変化を生じるように、置換されるアミノ酸と同様の生物物理学的特性の側鎖を有するアミノ酸をコードする異なるコドンの置換によって変更された、相同ヌクレオチド配列を有するが配列の全てまたは部分を含む、バリアントである。例えば、小さい非極性、疎水性アミノ酸は、グリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリンおよびメチオニンを含む。大きい非極性、疎水性アミノ酸は、フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンを含む。極性中性アミノ酸は、セリン、スレオニン、システイン、アスパラギンおよびグルタミンを含む。正に荷電した（塩基性）アミノ酸は、リジン、アルギニンおよびヒスチジンを含む。負に荷電した（酸性）アミノ酸は、アスパラギン酸およびグルタミン酸を含む。したがって、いずれのアミノ酸を、同様の生物物理学的特性を有するアミノ酸に置き換えることができるか認められ、当業者であれば、そのようなアミノ酸をコードするヌクレオチド配列が分かるであろう。本明細書に記載されている特色の全て（いずれかの添付の特許請求の範囲、要約書および図面を含む）および／またはそのように開示されたいずれかの方法もしくはプロセスのステップの全ては、そのような特色および／またはステップの少なくともいくつかが相互排他的である組合せを除いて、上述の態様のいずれかといずれかの組合せで組み合わせることができる。
【0132】
本明細書に記載されている特色の全て（いずれかの添付の特許請求の範囲、要約書および図面を含む）および／またはそのように開示されたいずれかの方法もしくはプロセスのステップの全ては、そのような特色および／またはステップの少なくともいくつかが相互排他的である組合せを除いて、上述の態様のいずれかといずれかの組合せで組み合わせることができる。
【0133】
本発明をより深く理解するために、また、その実施形態を実施することができる仕方を示すために、次に、例として、次に示す添付の図面を参照する。
【図面の簡単な説明】
【0134】
【図1】図１は、様々な導入遺伝子タンパク質、すなわち、ＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質を発現する本発明に係るウイルスベクター（図の上部）、ならびに地図状萎縮およびドライ型ＡＭＤ等の網膜障害に関連する病態生理の低減におけるそれらの生物学的効果の一実施形態の例証である。
【図2】図２は、本発明に係る遺伝的構築物の一実施形態の模式図を示す。構築物は、バイシストロニックカセットであり、カセットにおいて、ＰＥＤＦ受容体アゴニストのコード配列は、細胞分泌を導くシグナルペプチドが先行し；抗補体タンパク質のコード配列は、細胞分泌を導くシグナルペプチドが同様に先行し；両者は、酵素切断－ウイルス－２Ａリンカー配列／スキッピング部位によっていずれかの方向性で連結されている。
【図3】図３は、網膜細胞を保護し、補体活性化を中和または減弱することが可能である２種の成熟した治療タンパク質を生成するための、遺伝子療法構築物からの遺伝材料の細胞内プロセシングを例証する。ステップ１は、単一のプロモーターによるメッセンジャーＲＮＡの転写である。ステップ２は、２個の別々のプロタンパク質を生じる、ウイルス２Ａ配列によって導かれるリボソームによる翻訳スキッピングである。ステップ３は、ゴルジのレベルで生じ、そこで、ウイルス－２Ａ配列は、上流切断部位においてフューリン／酵素の活性によりプロタンパク質から切断される。ステップ４は、分泌シグナルペプチドの除去であり、これは、標的網膜細胞からの分泌に先立ち、下流成分のＮ末端から残っているプロリンアミノ酸を除去する。
【図4】図４は、異なるプロモーター配列：小ニワトリベータ－アクチンプロモーター／サイトメガロウイルスエンハンサープロモーター（ｓＣＡＧ）、ｓＣＡＧプロモーターと、それに続くウサギベータ－グロブリンイントロンの５’および３’に由来する短ストレッチのヌクレオチドの融合から創出されたイントロンの付加（ｓＣＡＧ－イントロン）、サイトメガロウイルスプロモーター（ＣＭＶ）、マウスホスホグリセリン酸キナーゼプロモーター（ｍＰＧＫ）、ならびにヒトシナプシン（ｓｙｎａｐｔｉｎ）－１プロモーター（ｈＳＹＮ１）を含有するｒＡＡＶ２ベクターによる形質導入の２４時間後に採取されたＨＥＫ２９３細胞における、高感度緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）レポーター遺伝子発現の画像を示す。
【図5】図５は、異なるプロモーター：小ニワトリベータ－アクチンプロモーター／サイトメガロウイルスエンハンサープロモーター（ｓＣＡＧ）；サイトメガロウイルスエンハンサーエレメント、プラス、ニワトリベータ－アクチンプロモーター、ならびにウサギベータ－グロブリンイントロンの５’および３’に由来する短ストレッチのヌクレオチド（ｓＣＡＧ－イントロン）；サイトメガロウイルスプロモーター（ＣＭＶ）；マウスホスホグリセリン酸キナーゼ－１プロモーター（ｍＰＧＫ）；ならびにヒトシナプシン（ｓｙｎａｐｔｉｎ）－１（ｈＳＹＮ１）プロモーターを含有するｒＡＡＶ２ベクターによる硝子体内注射の３週間後のｅＧＦＰ発現のレベルを例証するために、マウス網膜の断面およびフラットマウント画像の両方を示す。記号「＊」は、神経節細胞層を指し示す。
【図6】図６は、一連の発現プラスミドによるトランスフェクションの２４時間後にＨＥＫ２９３ＴまたはＡＲＰＥ－１９細胞のいずれかから収集された上清におけるＰＥＤＦタンパク質の発現、および基本的配列と比較して最適化された配列を有する構築物における有効なフューリン切断、および上流タンパク質のＣ末端からのウイルス－２Ａリンカーの遊離を例証するウエスタンブロットを示す（図６Ａ）。ＩＫＣ０３６Ｐ［ヌル対照］、ＩＫＣ０３０Ｐ［ＰＥＤＦのみ］、ＩＫＣ０９３Ｐ［ｈＰＥＤＦ－基本的フューリン－ウイルスＰ２Ａ－抗Ｂｂ ＳＣＶＦ］、ＩＫＣ０９４Ｐ［ｈＰＥＤＦ－基本的フューリン－ウイルスＰ２Ａ－抗Ｃ５ ＳＣＶＦ］、ＩＫＣ１０４Ｐ［ｈＰＥＤＦ－最適化フューリン－ウイルスＰ２Ａ－抗Ｃ３ｂ ＳＣＶＦ］、ＩＫＣ１２１Ｐ［ｈＰＥＤＦ－最適化フューリン－ウイルスＰ２Ａ－抗Ｃ３ｂ ＳＣＶＦ］、ＩＫＣ１２２Ｐ［ｈＰＥＤＦ－最適化フューリン－ウイルスＰ２Ａ－ｓＣＤ５５］。図６Ｂは、ＨＥＫ２９３Ｔ上清におけるパーセンテージフューリン切断を示し、図６Ｃは、ＡＲＰＥ－１９上清におけるパーセンテージフューリン切断を示す。
【図7】図７は、一連のバイシストロニックまたは対照プラスミド；ＩＫＣ０３６［ヌル対照］、ＩＫＣ０９３Ｐ、ＩＫＣ１０４Ｐ、ＩＫＣ１２１ＰおよびＩＫＣ１２２Ｐによるトランスフェクションの２４時間後にＨＥＫ２９３Ｔ細胞から細胞培養培地へと放出されたＰＥＤＦ濃度を例証するためのＥＬＩＳＡアッセイの図画による表現である。
【図8】図８は、プラスミドＩＫＣ１５７Ｐ、ＩＫＣ１５８Ｐ、ＩＫＣ１５９ＰおよびＩＫＣ１６１Ｐ、対、ヌル対照ＩＫＣ１６６プラスミドによるＨＥＫ２９３Ｔ細胞のトランスフェクション後の、ＰＥＤＦタンパク質および非膜結合型抗補体因子の細胞内プロセシングおよび培養培地への放出を例証するウエスタンブロットである。
【図9】図９は、プラスミドＩＫＣ０９３Ｐ、ＩＫＣ０９４Ｐ、ＩＫＣ１５７Ｐ、ＩＫＣ１５８Ｐ、ＩＫＣ１５９ＰおよびＩＫＣ１６１Ｐ、対、ヌル対照ＩＫＣ１６６Ｐプラスミドによるトランスフェクション後の、培養培地へと放出されることになる、免疫細胞化学（光で染色）を使用して、分泌に先立つＰＥＤＦおよび非膜結合型抗補体タンパク質を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を示す。
【図10】図１０Ａおよび図１０Ｂは、ＩＫＣ１２２Ｐプラスミドまたは対照ＩＫＣ０３６ヌルプラスミドによるトランスフェクション後の、それぞれＨＥＫ２９３Ｔ細胞培養培地またはＡＲＰＥ－１９細胞培養培地由来の可溶性ｓＣＤ５５（ＤＡＦ）の産生および放出を例証する。
【図11】図１１は、ヌル対照プラスミド（ＩＫＣ０３６Ｐ）、またはヒトＣ３ｂに結合しこれを中和することが可能である単鎖可変断片を分泌したＩＫＣ０８７Ｐ、ＩＫＣ１０４ＰもしくはＩＫＣ０１２１ＰをトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞由来の細胞成長培地と血清のインキュベーション後の、ヒト血清における補体Ｃ３ｂの中和および／または低減を示すデータを例証する。ＩＫＣ０８７Ｐが、非最適化発現カセットを有すること、また、ＥＬＩＳＡ抗体が、ヒトＣ３との８０％交差反応性を有する（免疫反応性のおよそ２／３を構成し、よって、ＳＣＶＦはＣ３に結合しないため、読み取り値の３０％低減は、Ｃ３ｂのほぼ１００％中和に等しいであろう）ことに留意されたい。
【図12】図１２Ａは、ヌル対照プラスミド（ＩＫＣ０３６Ｐ）およびヒトＣ３ｂに結合しこれを中和することが可能である単鎖可変断片を発現するＩＫＣ１２１Ｐプラスミド構築物と比較して、ＢおよびＤ因子の存在下で親Ｃ３からの組換えＣ３ｂ（Ｃ３コンバターゼ）の生成を低減させる、ｓＣＤ５５を産生するＩＫＣ１２２Ｐプラスミド構築物をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞から収集された上清の能力を実証する。図１２Ｂは、ＩＫＣ１２１Ｐの存在下でＣ３からＣ３ｂへのパーセンテージ変換の低減が、ＩＫＣ０３６Ｐ対照と比較して有意であることを示す。
【図13】図１３Ａは、それぞれＩ因子補因子ｓＣＤ４６およびＣＦＨＬ１を生成する構築物ＩＫＣ１３９ＰおよびＩＫＣ１４３ＰをトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞から収集された上清が、低濃度の組換えＣＦＩの存在下で、２個のｉＣ３ｂ断片（６８および４３ｋＤａ）への組換えＣ３ｂ分解を容易にすることができることを例証する。ヌル対照プラスミドＩＫＣ０３６ＰまたはＰＢＳ対照によって産生されるＣ３ｂの分解がないことに留意されたい。図１３Ｂは、Ｃ３ｂからｉＣ３ｂへの分解を示さなかったＩＫＣ０３６ＰおよびＰＢＳ対照と比較した、ＩＫＣ１３９ＰおよびＩＫＣ１４３Ｐの存在下でのｉＣ３ｂ断片のパーセンテージを示す。
【図15】図１５は、ベクターＩＫＣ１５７Ｖ、ＩＫＣ１５８Ｖ、ＩＫＣ１５９Ｖ、ＩＫＣ１６１Ｖ、ＩＫＣ１６７Ｖ、対、ヌル対照ベクターＩＫＣ１６６ＶによるＨＥＫ２９３Ｔ細胞の形質導入の４８時間後の、発現され培養培地へと分泌されたＰＥＤＦおよび抗補体導入遺伝子発現のウエスタンブロットデータを示す。
【図16】図１６は、ヌル対照トランスフェクト細胞（ＩＫＣ０３６Ｐ）と比べた、低濃度の組換え補体Ｉ因子（１１ｎＭ）およびＨ因子（０．５ｎＭ）による補体Ｃ３ｂ因子（３９ｎＭ）分解における、可溶性ＣＤ４６（ＩＫＣ１３７Ｐ）または補体Ｉ（ＩＫＣ１３９Ｐ）のいずれかを発現するプラスミドによるＨＥＫ２９３Ｔトランスフェクト細胞の添加の効果を比較する。ＩＫＣ１３７Ｐ（補体Ｉ）をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞から収集された細胞培養培地による組換え補体Ｉ因子の補充が、ＩＫＣ０３６Ｐヌル対照と比較して、Ｃ３ｂ分解を増加させなかったことに留意されたい。対照的に、ＩＫＣ１３９Ｐ（可溶性ＣＤ４６）をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞から収集された細胞培養培地による補充は、Ｃ３ｂアルファ鎖バンドの減少およびｉＣ３ｂ（６８ｋＤａおよび４３ｋＤａ）バンドの増加から分かる通り、酵素的Ｃ３ｂ分解を有意に増加させた。
【発明を実施するための形態】
【0135】
実施例
図１および図２を参照すると、本発明者らは、単一のプロモーターの制御下で、（ｉ）ＰＥＤＦ受容体のアゴニストおよび（ｉｉ）抗補体タンパク質をコードする新規遺伝的構築物を設計および構築した。図３に例証される通り、本発明者らは、有利には、構築物によってコードされるペプチドの全ての発現が、単一のプロモーターの制御下で、単一のｍＲＮＡ転写物として生じることを可能にする、スペーサー配列も遺伝的構築物に導入した（例えば、ウイルス－２Ａペプチドスペーサー配列）。その上、タンパク質のＣ末端からウイルス－２Ａペプチド配列を酵素的に除去するために、本発明者らは、図６を参照して、フューリン認識配列等、ウイルス－２Ａ除去配列を構築物に導入した。
図１および図２を参照すると、本発明者らは、単一のプロモーターの制御下で、（ｉ）ＰＥＤＦ受容体のアゴニストおよび（ｉｉ）抗補体タンパク質をコードする新規遺伝的構築物を設計および構築した。図３に例証される通り、本発明者らは、有利には、構築物によってコードされるペプチドの全ての発現が、単一のプロモーターの制御下で、単一のｍＲＮＡ転写物として生じることを可能にする、スペーサー配列も遺伝的構築物に導入した（例えば、ウイルス－２Ａペプチドスペーサー配列）。その上、タンパク質のＣ末端からウイルス－２Ａペプチド配列を酵素的に除去するために、本発明者らは、図６を参照して、フューリン認識配列等、ウイルス－２Ａ除去配列を構築物に導入した。
【0136】
図３に例証される通り、バイシストロニック発現カセットは、２種の成熟した治療タンパク質、ＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質を産生する（図７～図１１および図１５）。ＰＥＤＦ受容体アゴニストは、細胞傷害性生化学的侵襲および細胞死から網膜色素上皮（ＲＰＥ）および他の網膜細胞、例えば、光受容体を保護するように作用する。ドライ型ＡＭＤおよび地図状萎縮患者において、眼におけるＰＥＤＦの内在性濃度は、疾患病理により有意に枯渇され、これにより、正常に機能する網膜の能力を低減させる。本発明の遺伝的構築物は、網膜ＰＥＤＦ濃度を補充し、よって、酸化的損傷およびドライ型ＡＭＤにおいて働く他の病態生理学的因子に対する網膜防御機構を回復するであろう。図１７に例証される通り、ＰＥＤＦ濃度のブーストは、ＲＰＥ細胞および上を覆う光受容体に対するさらなる喪失の防止を生じ、これにより、視覚の喪失を遅くするまたは停止するであろう。加えて、抗補体タンパク質は、図１２、図１３、図１６～図１８に例証される通り、ＧＡにおいて有意な役割を果たすことも示された補体系活性化を低減させることが可能である。低減した補体活性化と共役した増加した網膜ＰＥＤＦ濃度を介した網膜細胞喪失からのより優れた保護により、バイシストロニック遺伝子構築物は、さらなる網膜損傷および関連する視力喪失を減弱または停止することができる。
【0137】
次に、本発明者らは、ｒＡＡＶ２等の組換え発現ベクターに遺伝的構築物を導入した（例えば、図１４を参照）。
材料と方法
ＤＮＡプラスミド設計および産生
ツール（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｃａｔ．ｄｅ）またはＧｅｎｓｃｒｉｐｔオンラインツール）を使用して、ＤＮＡ配列のコドン最適化を行った。標準分子生物学技法を使用して、合成ＤＮＡブロックおよびクローニングを行った。全てのＤＮＡプラスミドを、最小エンドトキシン存在によるマキシプレップ（ｍａｘｉ－ｐｒｅｐ）精製後に、一晩のＳＵＲＥコンピテント細胞（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）においてスケールアップした。
材料と方法
ＤＮＡプラスミド設計および産生
ツール（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｃａｔ．ｄｅ）またはＧｅｎｓｃｒｉｐｔオンラインツール）を使用して、ＤＮＡ配列のコドン最適化を行った。標準分子生物学技法を使用して、合成ＤＮＡブロックおよびクローニングを行った。全てのＤＮＡプラスミドを、最小エンドトキシン存在によるマキシプレップ（ｍａｘｉ－ｐｒｅｐ）精製後に、一晩のＳＵＲＥコンピテント細胞（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）においてスケールアップした。
【0138】
ＩＫＣ０３６Ｐは、ヌル対照である。ＩＫＣ０３０Ｐは、ＰＥＤＦのみを含む。ＩＫＣ０９３Ｐは、［ｈＰＥＤＦ－基本的フューリン－ウイルスＰ２Ａ－抗Ｂｂ ＳＣＶＦ］を含み、ＩＫＣ０９４Ｐは、［ｈＰＥＤＦ－基本的フューリン－ウイルスＰ２Ａ－抗Ｃ５ ＳＣＶＦ］を含み、ＩＫＣ１０４Ｐは、［ｈＰＥＤＦ－最適化フューリン－ウイルスＰ２Ａ－抗Ｃ３ｂ ＳＣＶＦ］を含み、ＩＫＣ１２１Ｐは、［ｈＰＥＤＦ－最適化フューリン－ウイルスＰ２Ａ－抗Ｃ３ｂ ＳＣＶＦ］を含み、ＩＫＣ１２２Ｐは、［ｈＰＥＤＦ－最適化フューリン－ウイルスＰ２Ａ－ｓＣＤ５５］を含み、ＩＫＣ１５７Ｐは、［ｈＰＥＤＦ－最適化フューリン－ウイルスＰ２Ａ－抗Ｃ３ｂ ＳＣＶＦ］を含み、ＩＫＣ１５８Ｐは、［ｈＰＥＤＦ－最適化フューリン－ウイルスＰ２Ａ－ｓＣＤ５５］を含み、ＩＫＣ１５９Ｐは、［ｈＰＥＤＦ－最適化フューリン－ウイルスＰ２Ａ－ｓＣＤ４６］を含み、ＩＫＣ１６１Ｐは、［ｈＰＥＤＦ－最適化フューリン－ウイルスＰ２Ａ－ＣＦＨＬ１］を含み、ＩＫＣ１６６Ｐは、［ヌル対照］を含む。
組換えＡＡＶベクター産生
ＤＮＡプラスミドを使用して、組換えＡＡＶ２ベクターを製造した。ＨＥＫ２９３細胞（２．５×１０８個）に、総計５００μｇの３種のプラスミド（Ｒｅｐ－２－Ｃａｐ２、ｐＨｅｌｐｅｒならびにＯＲＦおよびＩＴＲ含有プラスミド）を形質導入した。ウイルスベクター粒子を遊離させるためのＨＥＫ２９３細胞の凍結融解後に、イオジキサノール勾配超遠心分離および脱塩を続けて行った。ＩＴＲ領域を認識するプライマーを使用したｑＰＣＲによってベクター力価を得た後に、ｃＧＭＰ標準に製造されたＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ／Ｇｉｂｃｏのダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）バッファーにベクターを懸濁した（カタログ番号１４１９０２５０であり、８ｇ／Ｌ ＮａＣｌ、１．１５ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４、０．２ｇ／ＬのＫＣｌおよび０．２ｇ／ＬのＫ２ＨＰＯ４からなり、カルシウムもマグネシウムも含まない；ｐＨ７．０～７．３、２７０～３００ｍＯｓｍ／ｋｇ）。
組換えＡＡＶベクター産生
ＤＮＡプラスミドを使用して、組換えＡＡＶ２ベクターを製造した。ＨＥＫ２９３細胞（２．５×１０８個）に、総計５００μｇの３種のプラスミド（Ｒｅｐ－２－Ｃａｐ２、ｐＨｅｌｐｅｒならびにＯＲＦおよびＩＴＲ含有プラスミド）を形質導入した。ウイルスベクター粒子を遊離させるためのＨＥＫ２９３細胞の凍結融解後に、イオジキサノール勾配超遠心分離および脱塩を続けて行った。ＩＴＲ領域を認識するプライマーを使用したｑＰＣＲによってベクター力価を得た後に、ｃＧＭＰ標準に製造されたＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ／Ｇｉｂｃｏのダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）バッファーにベクターを懸濁した（カタログ番号１４１９０２５０であり、８ｇ／Ｌ ＮａＣｌ、１．１５ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４、０．２ｇ／ＬのＫＣｌおよび０．２ｇ／ＬのＫ２ＨＰＯ４からなり、カルシウムもマグネシウムも含まない；ｐＨ７．０～７．３、２７０～３００ｍＯｓｍ／ｋｇ）。
【0139】
図４は、異なるプロモーター配列：ｓＣＡＧ、ｓＣＡＧ－イントロン、ＣＭＶ、ｈＳＹＮ１、およびｍＰＧＫを含有するｒＡＡＶ２ベクターによる形質導入の２４時間後に採取されたＨＥＫ２９３細胞における高感度緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）レポーター遺伝子発現を例証する。図４に例証される通り、ｓＣＡＧおよびＣＭＶの両方が、ＨＥＫ２９３細胞における高レベルのｅＧＦＰ導入遺伝子発現を表示する。
【0140】
その上、図５は、異なるプロモーター配列：ｓＣＡＧ、ｓＣＡＧ－イントロン、ＣＭＶ、ｍＰＧＫおよびｈＳＹＮ１を含有するｒＡＡＶ２ベクターによる硝子体内注射の３週間後のｅＧＦＰ発現のレベルを例証するために、マウス網膜の断面およびフラットマウント画像の両方を示す。図５から分かる通り、ｓＣＡＧ－イントロンプロモーターにおけるイントロンの付加は、イントロンがない同じプロモーター、すなわち、ｓＣＡＧと比較して、網膜発現を増加させる。
【実施例1】
【0141】
様々なプラスミド構築物による細胞トランスフェクション後のＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＰＥＤＦ濃度
手短に説明すると、ＤＮＡプラスミドを、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉ；Ｌｏｕｇｈｂｏｒｏｕｇｈ、Ｌｅｉｃｓ．、Ｕ．Ｋ．）およびリポフェクタミン３０００（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉ）と混合し、各ウェルが０．５μｇのプラスミドＤＮＡおよび０．７５μＬのリポフェクタミンを受けるように、２４ウェルプレートにおいて８０％コンフルエンシーとなるように培養されたＨＥＫ２９３Ｔ細胞に添加した。細胞を２４時間３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞インキュベーション培地を捕集し、遠心分離して、いかなる細胞デブリも除去し、市販のヒトＰＥＤＦ ＥＬＩＳＡキット（Ａｂｃａｍ；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｕ．Ｋ．；ａｂ２４６５３５）を使用して、またはウエスタンブロット（Ａｂｃａｍ ａｂ１８０７１１、１：１０００希釈）により、細胞から生成されたＰＥＤＦ濃度をその後に測定した。対照ヌルプラスミド（ＩＫＣ０３６ＰまたはＩＫＣ１６６Ｐ）は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞によって生成される少量までのいかなるさらなるＰＥＤＦに寄与するとも示されなかった。
手短に説明すると、ＤＮＡプラスミドを、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉ；Ｌｏｕｇｈｂｏｒｏｕｇｈ、Ｌｅｉｃｓ．、Ｕ．Ｋ．）およびリポフェクタミン３０００（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉ）と混合し、各ウェルが０．５μｇのプラスミドＤＮＡおよび０．７５μＬのリポフェクタミンを受けるように、２４ウェルプレートにおいて８０％コンフルエンシーとなるように培養されたＨＥＫ２９３Ｔ細胞に添加した。細胞を２４時間３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞インキュベーション培地を捕集し、遠心分離して、いかなる細胞デブリも除去し、市販のヒトＰＥＤＦ ＥＬＩＳＡキット（Ａｂｃａｍ；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｕ．Ｋ．；ａｂ２４６５３５）を使用して、またはウエスタンブロット（Ａｂｃａｍ ａｂ１８０７１１、１：１０００希釈）により、細胞から生成されたＰＥＤＦ濃度をその後に測定した。対照ヌルプラスミド（ＩＫＣ０３６ＰまたはＩＫＣ１６６Ｐ）は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞によって生成される少量までのいかなるさらなるＰＥＤＦに寄与するとも示されなかった。
【0142】
図６および図７は、一連のプラスミドによるトランスフェクションの２４時間後にＨＥＫ２９３Ｔ細胞によって分泌されるＰＥＤＦの量が、ヌル対照（ＩＫＣ０３６ＰおよびＩＫＣ１６６Ｐ）よりも有意に大きいことを例証する。
【実施例2】
【0143】
フューリン活性およびウイルス－２Ａペプチド切断の検出
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に、上に記載されているプラスミドをトランスフェクトした。バイシストロニック構築物由来の被験導入遺伝子（ＰＥＤＦおよび抗補体タンパク質）の分子量を、単一の導入遺伝子のみを産生する導入遺伝子構築物と比較した。Ｃ末端からのウイルス－２Ａペプチドの切断を確認するために、Ｂｉｏ－Ｔｅｃｈｎｅ社（Ａｂｉｎｇｄｏｎ、Ｏｘｏｎ、Ｕ．Ｋ．）の２Ａ抗体（ＮＢＰ２－５９６２７）を使用して、ウイルス－２Ａペプチドの存在について試験した。
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に、上に記載されているプラスミドをトランスフェクトした。バイシストロニック構築物由来の被験導入遺伝子（ＰＥＤＦおよび抗補体タンパク質）の分子量を、単一の導入遺伝子のみを産生する導入遺伝子構築物と比較した。Ｃ末端からのウイルス－２Ａペプチドの切断を確認するために、Ｂｉｏ－Ｔｅｃｈｎｅ社（Ａｂｉｎｇｄｏｎ、Ｏｘｏｎ、Ｕ．Ｋ．）の２Ａ抗体（ＮＢＰ２－５９６２７）を使用して、ウイルス－２Ａペプチドの存在について試験した。
【0144】
図６は、一連の発現プラスミドによるトランスフェクションの２４時間後にＨＥＫ２９３ＴおよびＡＲＰＥ－１９細胞から収集された上清におけるＰＥＤＦタンパク質（ウイルス－２Ａありおよびなし）の発現を例証する。その上、図６Ｂおよび図６Ｃは、一連のプラスミドをトランスフェクトされたＨＥＫ２９３ＴおよびＡＲＰＥ－１９細胞におけるＰＥＤＦのＣ末端からのウイルス－２Ａリンカーの有効なフューリン切断および遊離の定量化を例証して、ＩＫＣ１０４Ｐ、ＩＫＣ１２１ＰおよびＩＫＣ１２２Ｐプラスミドにおける最適化フューリン配列が、ＩＫＣ０９３ＰおよびＩＫＣ０９４Ｐプラスミドにおける基本的フューリン配列よりも有意に有効であることを示す。Ｃ末端フューリンもウイルス２Ａ配列も有しないため、ＩＫＣ０３０ＰプラスミドをトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞に由来するＰＥＤＦを対照として使用した。
【実施例3】
【0145】
発現された抗補体タンパク質の検出
図８および図９は、プラスミドによるトランスフェクション後のＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＰＥＤＦおよび下流抗補体タンパク質の生成、正しいプロセシングおよび放出を実証する。図８において、全て１：１０００希釈された、免疫細胞化学（後述）に使用されるものと同じ抗体を使用したウエスタンブロットによる、対照ＩＫＣ１６６Ｐ（ヌル）またはＩＫＣ１５７Ｐ、ＩＫＣ１５８Ｐ、ＩＫＣ１５９ＰおよびＩＫＣ１６１ＰプラスミドのいずれかをトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞から培養培地へのＰＥＤＦおよび抗補体タンパク質の両方の放出が示される。二次抗体は、１：１０，０００希釈のヤギ－抗ウサギ（Ａｂｃａｍ、ａｂ６７２１）であった。
図８および図９は、プラスミドによるトランスフェクション後のＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＰＥＤＦおよび下流抗補体タンパク質の生成、正しいプロセシングおよび放出を実証する。図８において、全て１：１０００希釈された、免疫細胞化学（後述）に使用されるものと同じ抗体を使用したウエスタンブロットによる、対照ＩＫＣ１６６Ｐ（ヌル）またはＩＫＣ１５７Ｐ、ＩＫＣ１５８Ｐ、ＩＫＣ１５９ＰおよびＩＫＣ１６１ＰプラスミドのいずれかをトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞から培養培地へのＰＥＤＦおよび抗補体タンパク質の両方の放出が示される。二次抗体は、１：１０，０００希釈のヤギ－抗ウサギ（Ａｂｃａｍ、ａｂ６７２１）であった。
【0146】
図９には、放出に先立つ、カバーガラス上で成長され、免疫細胞化学（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ（ペプチド１）によって生成されたカスタムウサギポリクローナル抗体で染色された抗Ｂｂ、抗Ｃ５および抗Ｃ３ｂ ＳＣＶＦ；ＣＤ５５ Ａｂｃａｍ ａｂ１３３６８４；ＣＤ４６ Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＰＡ５３５３１１；ならびにＣＦＨ Ａｂｃａｍ ａｂ１３３５３６）によって染色された、トランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞内のＰＥＤＦおよび抗補体タンパク質が示されている。図１５において、対照ＩＫＣ１６６Ｖ（ヌルベクター）またはＩＫＣ１５７Ｖ、ＩＫＣ１５８Ｖ、ＩＫＣ１５９Ｖ、ＩＫＣ１６１ＶおよびＩＫＣ１６７Ｖ ｒＡＡＶ２ベクターを含むｒＡＡＶベクターで形質導入されたＨＥＫ２９３Ｔ細胞から培養培地へのＰＥＤＦおよび抗補体タンパク質の両方の放出を、図８および図９について上に記載されているものと同じ抗体を使用したウエスタンブロッティングにより評価した。
【0147】
図１０は、ＣＤ５５抗体（Ａｂｃａｍ社（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｕ．Ｋ．）の１：１０００希釈ａｂ－１３３６８４）およびペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ウサギ二次抗体（１：１０，０００希釈、ａｂｃａｍ、ａｂ６７２１）を使用したウエスタンブロットによる、プラスミドＩＫＣ１２２Ｐによるトランスフェクションの２４時間後の、ＨＥＫ２９３ＴおよびＡＲＰＥ－１９細胞の両方における（ＤＡＦ）ｓＣＤ５５の可溶性／非細胞膜結合型形態の産生および分泌を例証する。
【実施例4】
【0148】
抗補体タンパク質活性の実証
抗補体タンパク質の活性は、図１１、図１２、図１３および図１６に示されており、それによると、Ｃ３ｂの中和は、図１１に示され、Ｃ３コンバターゼ（Ｃ３ｂＢｂ）生成の防止は、図１２に例証され、補体Ｉ因子（ＣＦＩ）媒介性Ｃ３ｂ切断アッセイは、図１３および図１６に示されている。
抗補体タンパク質の活性は、図１１、図１２、図１３および図１６に示されており、それによると、Ｃ３ｂの中和は、図１１に示され、Ｃ３コンバターゼ（Ｃ３ｂＢｂ）生成の防止は、図１２に例証され、補体Ｉ因子（ＣＦＩ）媒介性Ｃ３ｂ切断アッセイは、図１３および図１６に示されている。
【0149】
図１１に示されるＣ３ｂ中和アッセイのために、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に、上に記載されているプラスミドをトランスフェクトした。２４時間後に、上清を捕集し、短時間の遠心分離によって清澄化した。上清（１９０μＬ）を、１０μＬの正常ヒト血清（１：２０，０００希釈）と共に室温で３０分間、穏やかに撹拌しつつインキュベートした。インキュベーション後に、ヒトＣ３との８０％交差反応性を有する（免疫反応性のおよそ２／３を構成し、よって、ＳＣＶＦはＣ３に結合しないため、読み取り値の３０％低減は、Ｃ３ｂのほぼ１００％中和に等しいであろう）ヒト補体Ｃ３ｂ ＥＬＩＳＡキット（ａｂｃａｍ、ａｂ１９５４６１）を使用して試料を定量化した。
【0150】
図１２に示されるＣ３コンバターゼアッセイのために、組換えタンパク質（Ｃ３、０．２μＭ；補体Ｂ因子；０．２μＭおよび補体Ｄ因子、０．０２μＭ、最終濃度；Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｔｙｌｅｒ、ＴＸ７５７０３、Ｕ．Ｓ．Ａ）をベロナールバッファー中で、５０μＬの総体積で様々なプラスミドを以前にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ培養培地と共に３０分間３７℃でインキュベートした。インキュベーション後に、ＳＤＳ－Ｐａｇｅ電気泳動およびＳｉｍｐｌｙＢｌｕｅ Ｓａｆｅ染色（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）を使用したゲルの染色により、Ｃ３コンバターゼの生成を測定した。
【0151】
図１３に例証されているＣ３ｂ切断アッセイのために、様々なプラスミドを以前にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ培養培地を、６０μＬの総体積でＣ３ｂ基質（４２ｎＭ）および組換えＣＦＩ（１．２ｎＭ）（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．）と共に６０分間３７℃でインキュベートした。ヤギ抗ヒトＣ３抗体（ＡＨＰ１７５２希釈１：２，０００；ＢｉｏＲａｄ）およびペルオキシダーゼ標識ロバ抗ヤギ二次抗体（７０５－０３５－１４７、１：１０，０００；Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｅｕｒｏｐｅ、Ｅｌｙ、Ｕ．Ｋ．）を使用したウエスタンブロットによって、Ｃ３ｂ分解産物（ｉＣ３ｂ ６４ｋＤａおよび４３ｋＤａ）を試験した。
【0152】
図１６に例証されているＣ３ｂ切断アッセイのために、トランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞由来の培地を組換え補体因子と組み合わせた。以前に使用された組換え補体Ｉ因子およびＨ因子の濃度を、それぞれ１１ｎＭおよび０．５ｎＭに低減させ、一方、基質Ｃ３ｂは、３９ｎＭ前後に維持した。ＨＥＫ２９３Ｔ培養培地（ＩＫＣ１３７Ｐ）由来のより多くの補体Ｉ因子の添加が、Ｃ３ｂ分解を有意に増加させなかったが、一方、可溶性ＣＤ４６補因子を含有するＨＥＫ２９３Ｔ培養培地の添加が、Ｃ３ｂ分解を有意にブーストすることができた（ＩＫＣ１３９Ｐ）ことに留意されたい。これらのデータは、Ｃ３ｂ分解が、Ｉ因子補充に対するよりも、補因子添加に対する感受性が高いことを示唆するであろう。
【実施例5】
【0153】
ｉｎ ｖｉｖｏでのバイシストロニックｒＡＡＶベクターの抗補体タンパク質およびＰＥＤＦ活性の実証
ＩＫＣ１５９Ｖ（可溶性ＣＤ４６ベクター）の硝子体内送達後のｓＣＤ４６およびＰＥＤＦタンパク質の両方の活性は、図１７に示されている。
ＩＫＣ１５９Ｖ（可溶性ＣＤ４６ベクター）の硝子体内送達後のｓＣＤ４６およびＰＥＤＦタンパク質の両方の活性は、図１７に示されている。
【0154】
マウスに、ＩＫＣ１６６Ｖ（ヌル対照）またはＩＫＣ１５９Ｖを硝子体内注射した（２μＬ）。２１日後に、マウスの眼を自由に（free）解剖し、硝子体試料（４～５μＬの間）を抽出し、上に記載されているＣ３ｂ切断アッセイ方法を使用してｅｘ－ｖｉｖｏでのＣ３ｂ分解の査定に使用した。結果は、ＩＫＣ１６６Ｖ（ヌル）群と比較して、ＩＫＣ１５９Ｖ処置した眼由来の硝子体におけるＣ３ｂの有意な分解を示した。
【0155】
ＩＫＣ１６６Ｖ（ヌル対照）またはＩＫＣ１５９Ｖの硝子体内注射（２μＬ）を受けるマウスの別のセットをＮＭＤＡ研究において使用した。ベクター注射の２１日後に、マウスは、ＮＭＤＡ（３０ｎｍｏｌ／眼）または媒体のさらなる硝子体内注射を受け、８日後に、動物を終結させた。媒体注射した眼から硝子体試料を得て、市販のＰＥＤＦ ＥＬＩＳＡキット（Ａｂｃａｍ）を使用してＰＥＤＦ濃度を測定した。全ての眼から網膜フラットマウントを調製し、ＲＢＰＭＳ免疫標識を使用して網膜神経節細胞計数を測定した。注目すべきは、ＩＫＣ１５９ＶプラスＮＭＤＡ処置群におけるほぼ完全な保護と比較した、ＩＫＣ１６６Ｖ（ヌル）プラスＮＭＤＡ処置群における網膜神経節細胞のおよそ５０％喪失である。
【実施例6】
【0156】
ＡＲＰＥ－１９細胞経上皮抵抗性の低減の防止におけるバイシストロニックｒＡＡＶ２ベクター（ＩＫＣ１５９Ｖ）の有益な効果の実証
図１８に示されるＡＲＰＥ－１９細胞経上皮抵抗性（ＴＥＲ）アッセイのために、ＡＲＰＥ－１９細胞を、定期的に培地交換しつつ、安定した単層およびＴＥＲに達するまで、トランズウェル（２４ウェル、Ｇｒｅｉｎｅｒ）において２週間育成した。次に、さらに２週間にわたり培地を無血清培地と交換し、その後、４８時間にわたるｒＡＡＶベクターによる単層の形質導入を行った。１ｍＭ Ｈ２Ｏ２およびヒト血清への曝露の前ならびに１、２および４時間後に、ＴＥＲアッセイ読み取り値を得た。図１８に例証される通り、ＩＫＣ１５９Ｖ ｒＡＡＶ２ベクターは、軽度酸化ストレスを負荷したときの、ＡＲＰＥ－１９細胞経上皮抵抗性の一過性低減を防止した。
考察および結論
実施例に例証される通り、本発明者らは、驚いたことに、単一の遺伝的構築物においてＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を組み合わせることが可能であることを実証した。
図１８に示されるＡＲＰＥ－１９細胞経上皮抵抗性（ＴＥＲ）アッセイのために、ＡＲＰＥ－１９細胞を、定期的に培地交換しつつ、安定した単層およびＴＥＲに達するまで、トランズウェル（２４ウェル、Ｇｒｅｉｎｅｒ）において２週間育成した。次に、さらに２週間にわたり培地を無血清培地と交換し、その後、４８時間にわたるｒＡＡＶベクターによる単層の形質導入を行った。１ｍＭ Ｈ２Ｏ２およびヒト血清への曝露の前ならびに１、２および４時間後に、ＴＥＲアッセイ読み取り値を得た。図１８に例証される通り、ＩＫＣ１５９Ｖ ｒＡＡＶ２ベクターは、軽度酸化ストレスを負荷したときの、ＡＲＰＥ－１９細胞経上皮抵抗性の一過性低減を防止した。
考察および結論
実施例に例証される通り、本発明者らは、驚いたことに、単一の遺伝的構築物においてＰＥＤＦ受容体アゴニストおよび抗補体タンパク質をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を組み合わせることが可能であることを実証した。
【0157】
ＰＥＤＦ受容体アゴニストは、ＰＥＤＦの濃度を回復し、これにより、炎症を低減させ、ＲＰＥおよび光受容体細胞を保存する。その上、抗補体タンパク質は、代替補体経路を中和または減弱し、これにより、さらなるＲＰＥ細胞喪失を抑止することが可能である。有利には、本発明の遺伝的構築物は、ＡＰ経路を標的とし、これは、補体系の古典的およびレクチン経路が保存され、これにより、侵入した病原体の破壊を容易にすることができる抗微生物防御系を維持することを意味する。
【0158】
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【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【配列表】
【国際調査報告】