特表 2024-525705 ＢＫウイルスの治療のための金属プロトポルフィリン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-12

(54)【発明の名称】ＢＫウイルスの治療のための金属プロトポルフィリン

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/555 20060101AFI20240705BHJP

   A61P 31/20 20060101ALI20240705BHJP

   A61K 31/409 20060101ALI20240705BHJP

   A61K 33/26 20060101ALI20240705BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240705BHJP

【ＦＩ】

A61K31/555

A61P31/20

A61K31/409

A61K33/26

A61P43/00 121

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024501618

(86)(22)【出願日】2022-07-08

(85)【翻訳文提出日】2024-03-07

(86)【国際出願番号】 US2022036566

(87)【国際公開番号】W WO2023287665

(87)【国際公開日】2023-01-19

(31)【優先権主張番号】63/220,625

(32)【優先日】2021-07-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520457096

【氏名又は名称】レニバス・セラピューティクス・インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】カイザー，ドナルド・ジェフリー

(72)【発明者】

【氏名】ギエム，アルバロ・エフ

(72)【発明者】

【氏名】シン，ブピンダー

(72)【発明者】

【氏名】ルイス，ステイシー

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086CB04

4C086HA06

4C086HA11

4C086HA28

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZB33

4C086ZC75

(57)【要約】

ＢＫウイルスと診断された患者、ＢＫウイルスに感染している若しくは感染している疑いのある腎臓を受け入れている患者、又は移植手術の前、間及び／若しくは後の移植された腎臓における、ＢＫウイルスの不活性化が、記載される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＢＫウイルスと診断されている患者を治療する方法であって、前記ＢＫウイルスの影響を低減させるか、又は排除するのに有効な量の金属プロトポルフィリンを投与する工程を含む方法。

【請求項2】

金属プロトポルフィリンがスズプロトポルフィリン（ＳｎＰＰ）である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

患者が腎移植を受けたことがある、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

金属プロトポルフィリンが、０．０６～１．１２５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量速度で投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

金属プロトポルフィリンが、５～９０ｍｇの範囲の１日用量で投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

腎移植手術を受ける患者を治療する方法であって、前記腎移植手術の前に、ＢＫウイルスの影響を低減させるか、又は排除するのに有効な量の第１の金属プロトポルフィリン及び鉄源を投与する工程と、前記移植手術の後に、ＢＫウイルスの影響を低減させるか、又は排除するのに有効な量の第２の金属プロトポルフィリンを投与する工程とを含む、方法。

【請求項7】

第１の金属プロトポルフィリン及び第２の金属プロトポルフィリンがスズプロトポルフィリン（ＳｎＰＰ）である、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

ノンエンベロープウイルスがＢＫウイルスである、請求項６に記載の方法。

【請求項9】

金属プロトポルフィリンが、０．０６～１．１２５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量速度で投与される、請求項６に記載の方法。

【請求項10】

金属プロトポルフィリンが、５～９０ｍｇの範囲の１日用量で投与される、請求項６に記載の方法。

【請求項11】

金属プロトポルフィリンを含む腎臓保存溶液。

【請求項12】

少なくとも１つの非透過性物質並びにナトリウム（Ｎａ^＋）及びカリウム（Ｋ^＋）電解質をさらに含む、請求項１１に記載の腎臓保存溶液。

【請求項13】

非透過性物質が、グルコース、ラクトビオネート、マンニトール、ラフィノース又はこれらの組み合わせから選択される、請求項１２に記載の腎臓保存溶液。

【請求項14】

１つ以上の、コロイド、さらなる電解質、抗酸化剤、栄養素、添加物又はこれらの組み合わせをさらに含む、請求項１２に記載の腎臓保存溶液。

【請求項15】

腎臓保存溶液が、少なくとも１つのコロイドを含み、前記コロイドは、ヒドロキシメチルデンプン若しくはＰＥＧ－３５又はこれらの組み合わせから選択される、請求項１４に記載の腎臓保存溶液。

【請求項16】

腎臓保存溶液が、少なくとも１つのさらなる電解質を含み、前記さらなる電解質は、カルシウム（Ｃａ^２＋）、塩素（Ｃｌ^－）、サルフェート（ＳＯ_４ ^２－）、ホスフェート（ＰＯ_４ ^３－）、バイカーボネート（ＨＣＯ_３ ^－）、シトレート又はこれらの組み合わせから選択される、請求項１４に記載の腎臓保存溶液。

【請求項17】

腎臓保存溶液が、少なくとも１つの抗酸化剤を含み、前記抗酸化剤は、アロプリノール若しくはグルタチオン又はこれらの組み合わせから選択される、請求項１４に記載の腎臓保存溶液。

【請求項18】

腎臓保存溶液が、少なくとも１つの栄養素を含み、前記栄養素は、トリプトファン、アデノシン、アデニン、グルタミン酸、ヒスチジン、ケトグルタレート又はこれらの組み合わせから選択される、請求項１４に記載の腎臓保存溶液。

【請求項19】

腎臓保存溶液が、少なくとも１つの添加物を含み、前記添加物は、インスリン、ペニシリン、デキサメタゾン又はこれらの組み合わせから選択される、請求項１４に記載の腎臓保存溶液。

【請求項20】

腎臓保存溶液のモル浸透圧濃度が３００～５００ｍＯｓｍ／Ｌの範囲であり、ｐＨが７．０～７．５の範囲である、請求項１１に記載の腎臓保存溶液。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

ポリオーマウイルスは、約５０００塩基対の環状ゲノムを有するノンエンベロープ二本鎖ＤＮＡウイルスである。ゲノムは、約４０～５０ナノメートルの直径を有するウイルスキャプシド中にパッケージングされている。ポリオーマウイルス科のメンバーであるＢＫウイルスは、腎移植を受けている患者における腎症及びその後の同種移植片機能損失の重大な危険因子である。現在のところ、ＢＫウイルスによって誘発される腎症に対する承認された治療は存在しない。

【0002】

コバルト及びスズプロトポルフィリンは、エンベロープウイルスに対してインビトロで広範な抗ウイルス活性を示すことが示されているが、エンベロープを持たないポリオウイルスに対しては活性を示さなかった。Ｎｅｒｉｓら、“Ｃｏ－ｐｒｏｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎ ＩＸ ａｎｄ Ｓｎ－ｐｒｏｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎ ＩＸ ｉｎａｃｔｉｖａｔｅ Ｚｉｋａ，Ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ａｒｂｏｖｉｒｕｓｅｓ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｖｉｒａｌ ｅｎｖｅｌｏｐｅ，” Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，８：９８０５（２０１８），ＤＯＩ：１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１８－２７８５５－７を参照されたい。Ｎｅｒｉｓの論文は、ノンエンベロープウイルスを不活性化する際のポルフィリンの［非］効率性は、ポルフィリンがウイルスのエンベロープを標的とするという考えをさらに支持する」と結論づけた。

【0003】

他の研究は、エンベロープウイルスに対する金属プロトポルフィリンの活性を示した。Ｗｅｎ ＷＨら、２００９ Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．（「データは、ザナミビルにコンジュゲートされたプロトポルフィリンとの相加効果を示す；抗ウイルス活性は、プロトポルフィリンの一重項酸素反応性を介したウイルスのノイラミニダーゼの阻害及びウイルスの物理的不活性化によるものであり得る。」）；Ｌｕら、２０２１ Ｂｉｏｏｒｇ Ｃｈｅｍ．（「プロトポルフィリンは、ラッサウイルス（ＬＡＳＶ）、マチュポウイルス（ＭＡＣＶ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２及びＡ型インフルエンザ株の様々なサブタイプを含む、エンベロープを有する病原性ウイルスの一団に対して広い活性を示す。ＩＣ５０値は０．９１±０．２５μＭ～１．８８±０．３４μＭの範囲である」；「Ａ型インフルエンザ／プエルトリコ／８／２４（Ｈ１Ｎ１）では、プロトポルフィリンＩＸは、エンベロープを有するビリオンの疎水性脂質と生物物理学的に相互作用することを通じてウイルス侵入の初期段階で感染を阻害し、それによってエンベロープウイルスの宿主細胞内への侵入を阻害する」）。Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒ Ｒら、１９９６ Ｐｒｏｃ Ａｓｓｏｃ Ａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ（「ＨＩＶ－１逆転写酵素に結合し、ＨＩＶ－１のｃＤＮＡ合成を妨げる；メソポルフィリンは効果を有さなかったので、プロトポルフィリン構造に部分的に依存する。」）。Ｖｚｏｒｏｖ ＡＮら、２００２ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．（「ＨＩＶ－１ ｇｐ１２０のＣＤ４への結合を阻害し、Ｅｎｖタンパク質が標的細胞上のその受容体への細胞融合を含む能力を阻害することが示された他のプロトポルフィリンを用いて、ＭＯＡを評価した。」）；Ｇｕｏ Ｈら、２０１１ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．（「使用されたアルキル化ポルフィリン（ヘミンを含む）；エンベロープポリペプチドの分解なしに、エンベロープに包まれた粒子からのＨＢＶエンベロープタンパク質の破壊及び解離をもたらす」）；Ｈｕｏ Ｗら、２０１０ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ（「ＺｎＰＰを用いて評価された抗ウイルス活性；ＮＳ５Ａタンパク質のポリユビキチン化及びプロテアソーム依存性異化を増強することによってＮＳ５Ａタンパク質を下方制御する。」）’Ａｓｓｕｎｃａｏ－Ｍｉｒａｎｄａ Ｉら、２０１６ Ｊ Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（黄熱病及びジカウイルスに対して活性を示す）。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0004】

【非特許文献1】Ｎｅｒｉｓら、“Ｃｏ－ｐｒｏｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎ ＩＸ ａｎｄ Ｓｎ－ｐｒｏｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎ ＩＸ ｉｎａｃｔｉｖａｔｅ Ｚｉｋａ，Ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ａｒｂｏｖｉｒｕｓｅｓ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｖｉｒａｌ ｅｎｖｅｌｏｐｅ，” Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，８：９８０５（２０１８），ＤＯＩ：１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１８－２７８５５－７

【非特許文献2】Ｗｅｎ ＷＨら、２００９ Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．

【非特許文献3】Ｌｕら、２０２１ Ｂｉｏｏｒｇ Ｃｈｅｍ．

【非特許文献4】Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒ Ｒら、１９９６ Ｐｒｏｃ Ａｓｓｏｃ Ａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ

【非特許文献5】Ｖｚｏｒｏｖ ＡＮら、２００２ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ

【非特許文献6】Ｇｕｏ Ｈら、２０１１ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．

【非特許文献7】Ｈｕｏ Ｗら、２０１０ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ

【非特許文献8】Ａｓｓｕｎｃａｏ－Ｍｉｒａｎｄａ Ｉら、２０１６ Ｊ Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

腎臓治療及び移植手術に適合する、ＢＫウイルスの不活性化のための有効な作用物質を見出すことが依然として必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0006】

一態様において、本発明は、ＢＫウイルスと診断されている患者を治療する方法であって、ＢＫウイルスの影響を低減させるか、又は排除するのに有効な量の金属プロトポルフィリンを投与する工程を含む方法を含む。金属プロトポルフィリンは、スズプロトポルフィリン（ＳｎＰＰ）であり得る。患者は腎移植を受けたことがあり得る。金属プロトポルフィリンは、０．０６～１．１２５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量速度で投与され得る。用量は５～９０ｍｇの範囲であり得、９０ｍｇの用量が好ましい。

【0007】

別の態様において、本発明は、腎移植手術を受ける患者を治療する方法であって、腎移植手術の前に、ＢＫウイルスの影響を低減させるか、又は排除するのに有効な量の第１の金属プロトポルフィリン及び鉄源を投与する工程と、移植手術の後に、ＢＫウイルスの影響を低減させるか、又は排除するのに有効な量の第２の金属プロトポルフィリンを投与する工程とを含む、方法を含む。

【0008】

別の態様において、本発明は、金属プロトポルフィリンを含む腎臓保存溶液を含む。腎臓保存溶液は、少なくとも１つの非透過性物質並びにナトリウム（Ｎａ^＋）及びカリウム（Ｋ^＋）電解質も含み得る。非透過性物質は、グルコース、ラクトビオネート、マンニトール、ラフィノース又はこれらの組み合わせであり得る。腎臓保存溶液は、１つ以上の、コロイド、さらなる電解質、抗酸化剤、栄養素、添加物又はこれらの組み合わせも含み得る。コロイドは、ヒドロキシメチルデンプン若しくはＰＥＧ－３５又はこれらの組み合わせであり得る。さらなる電解質は、カルシウム（Ｃａ^２＋）、塩素（Ｃｌ^－）、サルフェート（ＳＯ_４ ^２－）、ホスフェート（ＰＯ_４ ^３－）、バイカーボネート（ＨＣＯ_３ ^－）、シトレート又はこれらの組み合わせの１つ以上を含み得る。抗酸化剤は、アロプリノール若しくはグルタチオン又はこれらの組み合わせを含み得る。栄養素は、トリプトファン、アデノシン、アデニン、グルタミン酸、ヒスチジン、ケトグルタレート又はこれらの組み合わせであり得る。添加物は、インスリン、ペニシリン、デキサメタゾン又はこれらの組み合わせを含み得る。腎臓保存溶液は、好ましくは、３００～５００ｍＯｓｍ／Ｌの範囲のモル浸透圧濃度及び７．０～７．５の範囲のｐＨを有する。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】図１は、治療的処置のための、ＢＫウイルス感染に対するＳｎＰＰのインビトロ有効性を実証するデータを示す。

【図2】図２は、予防処置のための、ＢＫウイルス感染に対するＳｎＰＰのインビトロ有効性を実証するデータを示す。

【発明を実施するための形態】

【0010】

本発明は、金属プロトポルフィリン、特に第一スズプロトポルフィリン（ＳｎＰＰ）が、特定のポリオーマウイルスであるＢＫウイルスを不活性化する予想外の能力を示したという本発明者らの発見に関する。これらのデータは、ＳｎＰＰが、ＢＫウイルスと診断された患者におけるＢＫウイルス感染の治療に関連して使用され得ること、及び腎移植に関連したＳｎＰＰの使用を実証する。

【0011】

第一スズプロトポルフィリン（ＳｎＰＰ）は、傷害前に与えられると、動物における急性腎損傷（ＡＫＩ）に対して保護的であることが知られている。２０１７年１２月１９日に付与された、「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，ｋｉｔｓ，ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｃｙｔｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｕｓｉｎｇ ｓｔｒｅｓｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｄｕｃｅｒｓ」と題する、Ｚａｇｅｒらの米国特許第９，８４４，５６３号を参照されたい。本発明者らは、ＳｎＰＰ及び鉄スクロースが十分に耐容されることを実証するＳｎＰＰ及び鉄スクロースの第Ｉ相試験を実施した。

【0012】

この文献は、金属プロトポルフィリンが広い抗ウイルス活性を有することを示唆したが、ポリオウイルスでの否定的な結果に基づいて、金属プロトポルフィリン活性はエンベロープウイルスに限定されると考えられた。本発明者らは、予想外にも、ＳｎＰＰが、ＢＫウイルスを含むある種のノンエンベロープウイルスに対して広範な不活性化活性を有し、ＪＣウイルスに対して中程度の不活性化活性を有することを発見した。この活性は、アデノウイルス（Ａｄｖ）及びヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に関しては見出されなかった。

【0013】

本発明者らは、特にＢＫウイルスを含む様々な病原体に対する抗ウイルス活性を決定するためにアッセイを使用した。１）標準的なｑＰＣＲベースの抗ウイルスアッセイ－感染の時点でのＳｎＰＰによる処理及び２）ウイルス中和－感染１時間の、ＢＫウイルスとのＳｎＰＰのプレインキュベーションという、２つの条件を調査した。ＳｎＰＰを１００μＭまでの濃度で試験した。ヒト包皮線維芽細胞（ＨＦＦ）細胞を宿主細胞として使用した。リアルタイムｑＰＣＲによってウイルス活性を評価し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏによって細胞の生存率を決定した。

【実施例】

【0014】

抗ウイルス材料及び方法
細胞培養。アラバマ大学のＢｉｒｍｉｎｇｈａｍ組織調達施設から、そのＩＲＢの承認を得て、ヒト包皮組織から調製されたヒト包皮線維芽細胞（ＨＦＦ）細胞を入手した。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｉｎｃ．Ｌｏｇａｎ ＵＴ）、Ｌ－グルタミン、ファンギゾン及びバンコマイシンが補充されたアール塩を含む最小必須培地（ＭＥＭ）からなるＣｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｕｍ中で、組織を４℃で４時間インキュベートした。次いで、組織をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に入れ、細かく刻み、すすいで赤血球を除去し、トリプシン／ＥＤＴＡ溶液に再懸濁する。

【0015】

組織懸濁液を３７℃でインキュベートし、穏やかに撹拌して細胞を分散させ、遠心分離によって細胞を収集する。細胞を４ｍｌのＣｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｕｍに再懸濁し、２５ｃｍ^２フラスコに入れ、加湿されたＣＯ_２インキュベータ中で２４時間、３７℃でインキュベートする。次いで、培地を新鮮なＣｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｕｍと交換し、集密状態の単層が形成されるまで細胞増殖を毎日監視する。次いで、１０％ＦＢＳ、Ｌ－グルタミン、ペニシリン及びゲンタマイシンが補充されたアール塩を含むＭＥＭの標準増殖培地中で、連続継代によってＨＦＦ細胞を拡大増殖させる。細胞は日常的に継代され、継代１０以下でアッセイに使用される。Ｈａｒｔｌｉｎｅら、“Ａ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｈｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｖｉｒａｌｓ ａｇａｉｎｓｔ ＤＮＡ ｖｉｒｕｓｅｓ：Ｏｒｔｈｏｐｏｘ－，ａｄｅｎｏ－，ａｎｄ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｅｓ，” Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２０１８，Ｎｏｖ；１５９：１０４－１１２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｎｔｉｖｉｒａｌ．２０１８．０９．０１５．Ｅｐｕｂ ２０１８ Ｏｃｔ １．ＰＭＩＤ：３０２８７２２６；Ｐｒｉｃｈａｒｄら、“Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｎ－ｍｅｔｈａｎｏｃａｒｂａｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ａｇａｉｎｓｔ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，” Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００６；５０（４）：１３３６－４１．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１６５６９８４９；ＰｕｂＭｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ１４２６９２９を参照されたい。ＡＴＣＣからＣＯＳ７線維芽細胞を取得し、１０％ＦＢＳ、Ｌ－グルタミン、ペニシリン及びゲンタマイシンが補充されたアール塩を含むＭＥＭの標準増殖培地中で維持した。

【0016】

ＢＫウイルス及びＪＣウイルスに対するアッセイ。以前に報告された方法によって、ＢＫＶ及びＪＣＶに対する一次アッセイを行った。Ｋｅｉｔｈら、上記を参照されたい。ＢＫＶについては、細胞を含有するプレート中で化合物希釈液を調製し、続いて感染させ、７日間インキュベートした。全ＤＮＡを調製し、プライマー５’－ＡＧＴ ＧＧＡ ＴＧＧ ＧＣＡ ＧＣＣ ＴＡＴ ＧＴＡ－３’、５’－ＴＣＡ ＴＡＴ ＣＴＧ ＧＧＴ ＣＣＣ ＣＴＧ ＧＡ－３’及びプローブ５’－６－ＦＡＭ ＡＧＧ ＴＡＧ ＡＡＧ ＡＧＧ ＴＴＡ ＧＧＧ ＴＧＴ ＴＴＧ ＡＴＧ ＧＣＡ ＣＡＧ ＴＡＭＲＡ－３’を使用してリアルタイムＰＣＲによってゲノムコピー数を定量した。Ｌｅｕｎｇら、“Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｏｍａ ＢＫ ｖｉｒｕｒｉａ ｉｎ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｃｙｓｔｉｔｉｓ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｎｇ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，” Ｂｌｏｏｄ．２００１；９８（６）：１９７１－８，ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１１５３５５３７を参照されたい。プラスミドｐＭＰ５２６は、定量目的のためのＤＮＡ標準としての役割を果たす。吸着及び侵入を含む複製の初期段階を阻害する化合物を同定するために感染の１時間後に化合物が添加される確立された検査プロトコルに従って、このアッセイにおいて陽性であった化合物を、９６ウェルプレート中での同様のアッセイにおいて確認した。上記の方法によって、ゲノムコピー数を決定した。

【0017】

ＪＣウイルスに対する化合物の一次評価も、ＢＫウイルス一次アッセイのための方法と同様の方法によって行ったが、ＣＯＳ７細胞中で行われ、ＣＯＳ７細胞においてＪＣＶの１～４株を使用した。プラスミドｐＭＰ５０８とともにプライマー５’－ＣＴＧ ＧＴＣ ＡＴＧ ＴＧＧ ＡＴＧ ＣＴＧ ＴＣＡ－３’及び５’－ＧＣＣ ＡＧＣ ＡＧＧ ＣＴＧ ＴＴＧ ＡＴＡ ＣＴＧ－３’及びプローブ５’－６－ＦＡＭ－ＣＣＣ ＴＴＴ ＧＴＴ ＴＧＧ ＣＴＧ ＣＴ－ＴＡＭＲＡ－３を使用してウイルスＤＮＡを定量して、絶対的定量化のための標準曲線を得た。ＪＣＶに対する二次アッセイも、ウイルスの吸着又は侵入を阻害した化合物を同定するためのＢＫウイルスに対する方法と同様の方法によってＣＯＳ７細胞において行った。

【0018】

ＥＣ_５０－ウイルスの複製を５０％低下させる化合物濃度
ＥＣ_９０－ウイルスの複製を９０％低下させる化合物濃度
ＣＣ_５０－細胞生存率を５０％低下させる化合物濃度
ＳＩ_５０－ＣＣ_５０／ＥＣ_５０
ＳＩ_９０－ＣＣ_５０／ＥＣ_９０

【0019】

【表1】

【0020】

【表2】

【0021】

【表3】

【0022】

【表4】

【0023】

ＳｎＰＰは、両処理条件下でＢＫウイルスに対して中程度の抗ウイルス活性を示した。５０％有効濃度（ＥＣ_５０）は、独立して実行される２回の標準的なｑＰＣＲアッセイでは平均５．５μＭであり、中和アッセイでは平均５．４μＭであった。これらのアッセイにおけるＳｎＰＰのＥＣ５０は、第１相試験で試験されたＳｎＰＰの最高用量よりも１１倍低く、十分に耐容されると考えられる。インビトロ研究における５０％細胞毒性濃度（ＣＣ_５０）は平均８９．２μＭであり、ＳｎＰＰがその有効濃度より１６．５倍高い濃度で宿主細胞生存率に悪影響を及ぼさなかったことを示している。

【0024】

インビトロでのＢＫウイルスに対するＳｎＰＰの抗ウイルス活性及び第１相ヒト研究におけるＳｎＰＰの安全性プロファイルに鑑みると、ＳｎＰＰの有効性を評価する臨床研究は、ＢＫウイルスによって誘発される腎症を発症するリスクがある患者において正当とされる。

【0025】

本発明者らは、ＳｎＰＰ活性がＡｄｖ、ＨＰＶ、ＢＫ及びＪＣを含むいくつかのポリオーマウイルスに対して均一であるかどうかを決定することを試みた。一般に、１０を超えるＳＩ_５０は、潜在的に有効であると考えられる必要がある。最も著しい活性はＢＫウイルスで観察され、続いて中程度の活性を有するＪＣウイルスで観察された。Ａｄｖ及びＨＰＶでは、最小の活性が観察されるか、又は活性は全く観察されなかった。以下のデータは、ＳｎＰＰがいくつかのウイルスを不活性化する能力を要約している。

【0026】

【表5】

【0027】

これらのデータは、ＳｎＰＰを含む金属プロトポルフィリンがＢＫウイルスを不活性化することができることを実証する。一態様において、ＳｎＰＰは、ＢＫウイルス感染と診断されている患者を治療するための単独治療として使用され得る。これに関して、患者は、ＢＫウイルスの存在を示す陽性ＰＣＲ試験を受けた後に治療され得る。治療は、ＢＫウイルスの不活性化のために、ＳｎＰＰなどの金属プロトポルフィリンの有効量を患者に投与することを含み得る。治療は、５～１２０ｍｇ、より好ましくは５０～１００ｍｇ、最も好ましくは８０～９５ｍｇの範囲の用量でのＳｎＰＰの注射を含み得る。例えば、９０ｍｇの用量。４。金属プロトポルフィリンは、０．０６～１．１２５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量速度で投与され得る。投薬は、ＰＣＲ試験が患者におけるＢＫウイルスの不活性化を示すまで、毎日、毎週又は毎月継続され得る。

【0028】

別の例では、腎移植を受けると予想される患者は、臓器を受ける前、間及び／又は後に、ＳｎＰＰなどの金属プロトポルフィリンの用量を受け得る。この場合には、患者は、移植された臓器がＢＫウイルスに感染していることが知られている場合に、金属プロトポルフィリンの用量を受け得る。その他、患者は、移植される臓器がＢＫウイルスに感染しているかどうかが不明である場合に、予防的に処置され得る。

【0029】

ある場合には、本方法は、急性腎損傷に対して保護するために手術の前に患者を治療するための既知の方法と組み合わされ得る。それらの場合、患者は、手術前にＳｎＰＰと鉄スクロースの組み合わせを投与され得る。患者がＢＫウイルス感染と診断された場合には、患者は、その後、手術後に（補充鉄源なしで）金属プロトポルフィリンでの治療を受け得る。

【0030】

一態様において、移植のために取り出された臓器は、移植されるべき臓器内に存在し得るＢＫウイルスを不活性化するために金属プロトポルフィリンを含む輸送液又は冷保存液中に保存される。Ｅｕｒｏ－Ｃｏｌｌｉｎｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＥＣ）；Ｍａｒｓｈａｌｌ’ｓ溶液としても知られる高浸透圧溶液（ＨＯＣ）溶液；ラクトビオネート及びラフィノースを含有するウィスコンシン大学（ＵＷ）溶液；ヒスチジン－トリプトファン－ケトグルタレート（ＨＴＫ）溶液；並びにＣｅｌｓｉｏｒを含むいくつかの冷保存液が当技術分野で公知である。

【0031】

一実施形態において、輸送液は、少なくとも１つの非透過性物質と、少なくともナトリウム（Ｎａ^＋）及びカリウム（Ｋ^＋）を含む電解質と、金属プロトポルフィリンとを含む。金属プロトポルフィリンは、コバルト、亜鉛又はスズプロトポルフィリンから選択され得る。好ましくは、金属ポルフィリンはスズプロトポルフィリン（ＳｎＰＰ）である。非透過性物質は、グルコース、ラクトビオネート、マンニトール、ラフィノース又はこれらの組み合わせの１つ以上から選択され得る。任意に含まれるさらなる成分には、コロイド、さらなる電解質、抗酸化剤、栄養素、添加物又はこれらの組み合わせが含まれる。コロイドには、例えば、ヒドロキシメチルデンプン若しくはＰＥＧ－３５又はこれらの組み合わせが含まれ得る。さらなる電解質には、カルシウム（Ｃａ^２＋）、塩素（Ｃｌ^－）、サルフェート（ＳＯ_４ ^２－）、ホスフェート（ＰＯ_４ ^３－）、バイカーボネート（ＨＣＯ_３ ^－）、シトレート又はこれらの組み合わせが含まれ得る。抗酸化剤には、アロプリノール若しくはグルタチオン又はこれらの組み合わせが含まれ得る。栄養素には、トリプトファン、アデノシン、アデニン、グルタミン酸、ヒスチジン、ケトグルタレート又はこれらの組み合わせが含まれ得る。添加物には、インスリン、ペニシリン、デキサメタゾン又はこれらの組み合わせが含まれ得る。輸送液のモル浸透圧濃度は、好ましくは３００～５００ｍＯｓｍ／Ｌの範囲であり得、ｐＨは、好ましくは７．０～７．５の範囲であり得る。冷保存溶液は、Ｃｈｅｎら、“Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｋｉｄｎｅｙ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：Ｈｉｓｔｏｒｙ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ａｎｄ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，” Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２８（１２）：１４７２－１４８９（２０１９）に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。

【0032】

金属プロトポルフィリンを含む輸送液は、輸送液を含有する無菌の密封可能なパウチを含むキット内に提供され得る。臓器の輸送中、臓器は、輸送液への曝露によって存在し得る任意のＢＫウイルスの不活性化を受けることができる。一態様において、臓器は、ＢＫウイルスを含有することが決定された後に輸送液に晒され得る。この場合には、臓器を受けている患者は、移植手術の前、間又は後に金属プロトポルフィリンを投与され得る。

【0033】

本発明の他の実施形態及び使用は、本明細書に開示されている本明細書の考察及び本発明の実施から当業者には明らかであろう。全ての米国及び外国の特許及び特許出願を含む、本明細書に引用される全ての参考文献は、具体的及び全体的に参照により本明細書に組み入れられる。本明細書及び実施例は例示に過ぎないと考えられ、本発明の真の範囲及び精神は以下の特許請求の範囲によって示されることが意図される。

【図1】

【図2】

【国際調査報告】