(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-07-12
(54)【発明の名称】産物及び組成物
(51)【国際特許分類】
C12N 15/113 20100101AFI20240705BHJP
A61K 31/7105 20060101ALI20240705BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240705BHJP
A61K 31/7125 20060101ALI20240705BHJP
A61K 47/54 20170101ALI20240705BHJP
A61K 47/56 20170101ALI20240705BHJP
A61K 47/61 20170101ALI20240705BHJP
A61K 47/62 20170101ALI20240705BHJP
A61K 31/712 20060101ALI20240705BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240705BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240705BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20240705BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20240705BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20240705BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20240705BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20240705BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240705BHJP
A61P 21/04 20060101ALI20240705BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20240705BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240705BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20240705BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240705BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20240705BHJP
【ＦＩ】
C12N15/113 Z ZNA
A61K31/7105
A61K48/00
A61K31/7125
A61K47/54
A61K47/56
A61K47/61
A61K47/62
A61K31/712
A61K45/00
A61P37/02
A61P27/02
A61P13/12
A61P11/06
A61P19/02
A61P17/06
A61P17/00
A61P21/04
A61P21/00
A61P25/00
A61P37/06
A61P9/10
A61P31/04
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024502618
(86)(22)【出願日】2022-07-18
(85)【翻訳文提出日】2024-03-06
(86)【国際出願番号】 US2022037478
(87)【国際公開番号】W WO2023018523
(87)【国際公開日】2023-02-16
(31)【優先権主張番号】63/318,341
(32)【優先日】2022-03-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/222,974
(32)【優先日】2021-07-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】509127310
【氏名又は名称】サーナオミクス インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】サマルスキー， ドミトリー
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076BB13
4C076BB16
4C076CC07
4C076CC41
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4C084ZA01
4C084ZA33
4C084ZA36
4C084ZA59
4C084ZA81
4C084ZA89
4C084ZA94
4C084ZA96
4C084ZB07
4C084ZB08
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4C084ZB35
4C086AA01
4C086AA02
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA65
4C086NA13
4C086NA14
4C086ZA01
4C086ZA33
4C086ZA36
4C086ZA59
4C086ZA81
4C086ZA89
4C086ZA94
4C086ZA96
4C086ZB07
4C086ZB08
4C086ZB15
4C086ZB35
(57)【要約】
ＣＦＢ遺伝子発現を調節し、特に妨害又は阻害する核酸産物が提供される。産物は、ＣＦＢ遺伝子から転写されたＲＮＡの少なくとも一部に対して少なくとも部分的に相補的である少なくとも第一の核酸塩基配列を有する連結ヌクレオシドの少なくとも第一の領域を含むオリゴマー化合物であり得、第一の核酸塩基配列は、配列番号１から３９１、７５１及び７５２、又はそれらの断片から選択される。
【選択図】図７
【選択図】図７
【特許請求の範囲】
【請求項1】
補体因子Ｂ（ＣＦＢ）の発現を阻害することができるオリゴマー化合物であって、ＣＦＢ遺伝子から転写されたＲＮＡの少なくとも一部に少なくとも部分的に相補的である少なくとも第一の核酸塩基配列を有する連結ヌクレオシドの少なくとも第一の領域を含み、前記第一の核酸塩基配列が、次の配列：表１ａの配列（配列番号：１から２５０、７５１及び７５２）、又はそれらの一部から選択され、前記一部が有利には少なくとも１８ヌクレオチドの長さを有する、化合物。
【請求項2】
前記第一の核酸塩基配列に少なくとも部分的に相補的であり、次の配列：表１ｂの配列（配列番号：２５１から５００、７５３及び７５４）、又はそれらの一部から選択される、少なくとも第二の核酸塩基配列を有する連結ヌクレオシドの少なくとも第二の領域を更に含み、前記一部が有利には少なくとも８、９、１０若しくは１１ヌクレオチド、又は特には少なくとも１０ヌクレオチドの長さを有する、請求項１に記載のオリゴマー化合物。
【請求項3】
前記第一の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号：９４、２４７、１３、１０６、２８、１３５、１３２、３２、８３、１０２、６２、２４１、９、５４、１４３、１０３、１２８、５３、１５０、８２、３６、２５、７１、１７、５、１４１、９０、１２７、７５、９５、７５１、及び７５２、又はそれらの一部から選択される、請求項１又は２に記載のオリゴマー化合物。
【請求項4】
前記第二の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号：３４４、４９７、２６３、３５６、２７８、３８５、３８２、２８２、３３３、３５２、３１２、４９１、２５９、３０４、３９３、３５３、３７８、３０３、４００、３３２、２８６、２７５、３２１、２６７、２５５、３９１、３４０、３７７、３２５、３４５、７５３及び７５４、又はそれらの一部から選択される、請求項３に記載のオリゴマー化合物。
【請求項5】
前記第一の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号：１３、５３、６２、８３、１０２、１０６、１３５、７５１、及び７５２、又はそれらの一部から選択される、請求項１から４の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項6】
前記第二の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号２６３、３０３、３１２、３３３、３５２、３５６、３８５、７５３及び７５４、又はそれらの一部から選択される、請求項５に記載のオリゴマー化合物。
【請求項7】
連結ヌクレオシドの前記第一の領域が１８から３５、１８から２０、１８若しくは１９、又は１９の連結ヌクレオシドから本質的になる、請求項１から６の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項8】
連結ヌクレオシドの前記第二の領域が１０から３５、１０から２０、１０から１６、又は１０から１５の連結ヌクレオシドから本質的になる、請求項２から７の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項9】
前記第二のヌクレオシド領域の少なくとも一部に直接的又は間接的に連結された前記第一のヌクレオシド領域の少なくとも一部を含む少なくとも一つの相補的二重鎖領域を含み、二重鎖領域が、１０から１９、１２から１９、又は１２から１５の塩基対の長さを有し、任意選択的に、前記二重鎖領域内に一つのミスマッチが存在する、請求項２から８の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項10】
前記第一のヌクレオシド領域及び前記第二のヌクレオシド領域のそれぞれが５’から３’への方向性を有し、それによってそれぞれその５’領域及び３’領域を規定する、請求項９に記載のオリゴマー化合物。
【請求項11】
前記第一のヌクレオシド領域の５’領域が、例えば相補的塩基対形成によって、前記第二のヌクレオシド領域の３’領域に直接的又は間接的に連結され、有利には前記第一のヌクレオシド領域の５’末端ヌクレオシドが、前記第二のヌクレオシド領域の３’末端ヌクレオシドと塩基対形成している、請求項１０に記載のオリゴマー化合物。
【請求項12】
前記第一のヌクレオシド領域の３’領域が、前記第二のヌクレオシド領域の５’領域に直接的又は間接的に連結され、有利には、前記第一のヌクレオシド領域が、例えばリン酸、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエートにより、前記第二のヌクレオシド領域に直接的かつ共有結合的に連結されている、請求項１１又は１３に記載のオリゴマー化合物。
【請求項13】
一つ又は複数のリガンドを更に含む、請求項１から１２の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項14】
前記一つ又は複数のリガンドが、前記第二のヌクレオシド領域及び／又は前記第一のヌクレオシド領域に結合している、請求項１３に記載のオリゴマー化合物。
【請求項15】
前記一つ又は複数のリガンドが、３’領域で、有利には第二のヌクレオシド領域及び／又は第一のヌクレオシド領域の３’末端に、及び／又は前記第二のヌクレオシド領域の５’末端に結合している、請求項１０に従属する、請求項１４に記載のオリゴマー化合物。
【請求項16】
前記一つ又は複数のリガンドが、細胞膜又は細胞表面上の特定の標的に結合する、脂質、糖、アプタマー、ビタミン及び／又はペプチドなどの任意の細胞指向性部分である、請求項１３から１５の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項17】
前記一つ又は複数のリガンドが一つ又は複数の糖を含む、請求項１６に記載のオリゴマー化合物。
【請求項18】
前記一つ又は複数の糖が、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖又は多糖でありうる、請求項１７に記載のオリゴマー化合物。
【請求項19】
前記一つ又は複数の糖が、一つ又は複数のヘキソース部分を含むか、又はそれらからなる、請求項１８に記載のオリゴマー化合物。
【請求項20】
前記一つ又は複数のヘキソース部分が、一つ又は複数のガラクトース部分、一つ又は複数のラクトース部分、一つ又は複数のＮ－アセチル－ガラクトサミン部分、及び／又は一つ又は複数のマンノース部分である、請求項１９に記載のオリゴマー化合物。
【請求項21】
前記一つ又は複数の糖が一つ又は複数のＮ－アセチル－ガラクトサミン部分を含む、請求項２０に記載のオリゴマー化合物。
【請求項22】
二つ以上、有利には三つのＮ－アセチル－ガラクトサミン部分を含む、請求項２１に記載のオリゴマー化合物。
【請求項23】
前記一つ又は複数のリガンドが、直鎖状配置又は分岐状配置で前記オリゴマー化合物に、有利にはその第二のヌクレオシド領域に結合している、請求項１３から２２の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項24】
前記一つ又は複数のリガンドが、二分岐又は三分岐配置として前記オリゴマー化合物に結合している、請求項２３に記載のオリゴマー化合物。
【請求項25】
前記化合物が、連結ヌクレオシドの前記第一の領域と連結ヌクレオシドの前記第二の領域からなる、請求項１から２４の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項26】
前記第一の領域と前記第二の領域の間に、連結ヌクレオシドの介在する第三の領域が存在する、請求項１から２４の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項27】
前記オリゴマー化合物が、前記第一のヌクレオシド領域、前記第三のヌクレオシド領域、及び前記第二のヌクレオシド領域を含むか、又はそれらからなる一本鎖を含むか、又はそれらからなり、前記第一のヌクレオシド領域の少なくとも一部が、前記少なくとも部分的に相補的な二重鎖領域を形成するように、前記第二のヌクレオシド領域の少なくとも一部に直接的又は間接的に連結される、請求項２６に記載のオリゴマー化合物。
【請求項28】
前記オリゴマー化合物が、前記第一のヌクレオシド領域及び第二のヌクレオシド領域を含むか、又はそれらからなる一本鎖を含むか、又はそれらからなり、前記第一のヌクレオシド領域の少なくとも一部が、前記少なくとも部分的に相補的な二重鎖領域を形成するように、前記第二のヌクレオシド領域の少なくとも一部に直接的又は間接的に連結される、請求項９から２５の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項29】
前記第一のヌクレオシド領域及び前記第二のヌクレオシド領域が前記一本鎖上で直接隣接している、請求項２８に記載のオリゴマー化合物。
【請求項30】
前記第一のヌクレオシド領域が、第二のヌクレオシド領域と比較してより多数の連結ヌクレオシドを有する、請求項２８又は２９に記載のオリゴマー化合物。
【請求項31】
第一のヌクレオシド領域の追加数の連結ヌクレオシドが、第一のヌクレオシド領域及び第二のヌクレオシド領域を連結するヘアピンループを形成する、請求項３０に記載のオリゴマー化合物。
【請求項32】
前記一本鎖が、配列番号：７５１及び７５２から選択される核酸塩基配列を有し、有利には、前記鎖が、配列番号：７５３及び７５４から選択される追加の核酸塩基配列を有する、請求項２７から３１の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項33】
前記一本鎖が、表３から、特に配列「１３（５）ａ＋ｓ」及び「１０６－１３（４）ａｓ＋ｓ」から、又は表４から選択される、請求項３２に記載のオリゴマー化合物。
【請求項34】
前記ヘアピンループが、前記第一のヌクレオシド領域の３’領域に存在し、任意選択的に、一つ又は二つ以上の３’末端ヌクレオチドの核酸塩基が許容する程度まで該一つ又は二つ以上の３’末端ヌクレオチドが、第二のヌクレオシド領域を折り畳んで第二のヌクレオシド領域を形成し若しくは第二のヌクレオシド領域に寄与する、請求項１０に従属する、請求項３３に記載のオリゴマー化合物。
【請求項35】
前記第三のヌクレオシド領域と任意選択的に前記第一のヌクレオシド領域の、有利には１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０の連結ヌクレオシドからなる、３’末端部分、及び／又は前記第二のヌクレオシド領域の、有利には１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０の連結ヌクレオシドからなる、５'末端部分が、ヘアピンを形成する、請求項２６又は２７に記載のオリゴマー化合物。
【請求項36】
前記ヘアピンループが、１から８、２から７、３から６、有利には４又は５の連結ヌクレオシドを含む、請求項２９から３１の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項37】
表２に示される配列（配列番号：５０１から７５０、７５５又は７５６）の何れか一つの核酸塩基配列を有するか又は含む、請求項２９から３２の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項38】
ヌクレオシド間結合を含み、少なくとも一つのヌクレオシド間結合が、修飾ヌクレオシド間結合である、請求項１から３７の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項39】
前記修飾ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合である、請求項３８に記載のオリゴマー化合物。
【請求項40】
１から１６のホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項３９に記載のオリゴマー化合物。
【請求項41】
７、８、９又は１０のホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項４０に記載のオリゴマー化合物。
【請求項42】
第一のヌクレオシド領域の５’領域に一つ又は複数のホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項１０に従属する、請求項３９から４１の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項43】
第二のヌクレオシド領域の５’領域に一つ又は複数のホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項１０に従属する、請求項３９から４２の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項44】
ヘアピンループ内に存在するヌクレオチドの数に依存して、ヘアピンループの少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、又は少なくとも５つの隣接ヌクレオシド間にホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項３０から３２の何れか一項に従属する、請求項３９から４３の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項45】
前記ヘアピンループ内に存在する各隣接ヌクレオシド間にホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項４４に記載のオリゴマー化合物。
【請求項46】
少なくとも一つのヌクレオシドが修飾糖を含む、請求項１から４５の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項47】
前記修飾糖が、２’修飾糖；ロックド核酸（ＬＮＡ）糖、（Ｓ）拘束エチル二環式核酸、及び拘束エチル（ｃＥｔ）糖などの立体構造的に制限されたヌクレオチド（ＣＲＮ）糖、トリシクロＤＮＡ、モルホリノ、非ロック核酸（ＵＮＡ）糖、グリコール核酸（ＧＮＡ）、Ｄ－ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、及びシクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）から選択される、請求項４６に記載のオリゴマー化合物。
【請求項48】
前記２’修飾糖が、２’－Ｏ－アルキル修飾糖、２’－Ｏ－メチル修飾糖、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾糖、２’－Ｏ－アリル修飾糖、２’－Ｃ－アリル修飾糖、２’－デオキシ修飾糖、例えば、２’－デオキシリボース、２’－Ｆ修飾糖、２’－アラビノ－フルオロ修飾糖、２’－Ｏ－ベンジル修飾糖、及び２’－Ｏ－メチル－４－ピリジン修飾糖から選択される、請求項４７に記載のオリゴマー化合物。
【請求項49】
少なくとも一つの修飾糖が２’－Ｏ－メチル修飾糖である、請求項４８に記載のオリゴマー化合物。
【請求項50】
少なくとも一つの修飾糖が２’－Ｆ修飾糖であり、有利には最大５つの糖が２’－Ｆ修飾糖である、請求項４８又は４９に記載のオリゴマー化合物。
【請求項51】
糖がリボースである、請求項４９又は５０に記載のオリゴマー化合物。
【請求項52】
第一のヌクレオシド領域の５’領域の第一のヌクレオシドから下流の２位及び１４位の何れかのヌクレオシドの糖が、２’－Ｏ－メチル修飾を含まない、請求項１０に従属する、請求項４９から５１の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項53】
第二のヌクレオシド領域の３’末端位置が２’－Ｏ－メチル修飾を含まない、請求項４９から５２の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項54】
第一のヌクレオシド領域の５’領域の第一のヌクレオチドから下流の２位及び１４位の何れかのヌクレオシドの糖が、２’－Ｆ修飾を含む、請求項５３に記載のオリゴマー化合物。
【請求項55】
第一のヌクレオシド領域の５’領域の第一のヌクレオチドから下流の９位から１１位の何れかの第一のヌクレオシド領域のヌクレオシドの何れかと位置が対応する、第二のヌクレオシド領域のヌクレオシドの糖が、２’－Ｆ修飾を含む、請求項５３から５４の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項56】
第二のヌクレオシド領域の３’末端位置が、２’－Ｆ修飾を含む、請求項５４又は５５に記載のオリゴマー化合物。
【請求項57】
第一のヌクレオシド領域の５’領域から始まる奇数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が修飾され、及び／又は第一のヌクレオシド領域の５’領域から始まる偶数番目のヌクレオチドの一つ又は複数が修飾され、典型的には、偶数番目のヌクレオチドの修飾が、奇数番目のヌクレオチドの修飾とは異なる第二の修飾である、請求項１０に従属する、請求項５３から５６の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項58】
第二のヌクレオシド領域の３’領域から始まる奇数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が、第一のヌクレオシド領域の奇数番目のヌクレオシドの修飾とは異なる修飾によって修飾されている、請求項５７に記載のオリゴマー化合物。
【請求項59】
第二のヌクレオシド領域の３’領域から始まる偶数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が、請求項５２に記載の第一のヌクレオシド領域の偶数番目のヌクレオシドの修飾とは異なる修飾によって修飾されている、請求項５７又は５８に記載のオリゴマー化合物。
【請求項60】
第一のヌクレオシド領域の修飾された偶数番目のヌクレオシドの少なくとも一つ又は複数が、第一のヌクレオシド領域の異なって修飾された奇数番目のヌクレオシドの少なくとも一つ又は複数に隣接する、請求項５７から５９の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項61】
第二のヌクレオシド領域の修飾された偶数番目のヌクレオシドの少なくとも一つ又は複数が、第二のヌクレオシド領域の異なって修飾された奇数番目のヌクレオシドの少なくとも一つ又は複数に隣接する、請求項５７から６０の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項62】
第一のヌクレオシド領域の５’領域から始まる奇数番目のヌクレオシドの一つ又は複数の糖が２’－Ｏ－メチル修飾糖である、請求項５７から６１の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項63】
第一のヌクレオシド領域の５’領域から始まる偶数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が２’－Ｆ修飾糖である、請求項５７から６２の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項64】
第二のヌクレオシド領域の３’領域から始まる奇数番目のヌクレオシドの一つ又は複数の糖が２’－Ｆ修飾糖である、請求項５７から６３の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項65】
第二のヌクレオシド領域の３’領域から始まる偶数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が２’－Ｏ－メチル修飾糖である、請求項５７から６４の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項66】
第一のヌクレオシド領域の複数の隣接ヌクレオシドの糖が共通の修飾によって修飾されている、請求項４６から６５の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項67】
第二のヌクレオシド領域の複数の隣接ヌクレオシドの糖が共通の修飾によって修飾されている、請求項４６から６６の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項68】
ヘアピンループの複数の隣接ヌクレオシドの糖が共通の修飾によって修飾されている、請求項３０から３３の何れか一項に従属する、請求項５７から６７の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項69】
前記共通の修飾が２’－Ｆ修飾糖である、請求項６６から６８の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項70】
前記共通の修飾が２’－Ｏ－メチル修飾糖である、請求項６６から６８の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項71】
前記複数の隣接２’－Ｏ－メチル修飾糖が、前記第一のヌクレオシド領域及び／又は前記第二のヌクレオシド領域の少なくとも８つの隣接ヌクレオシドに存在する、請求項７０に記載のオリゴマー化合物。
【請求項72】
前記複数の隣接２’－Ｏ－メチル修飾糖が、前記ヘアピンループの３つ又は４つの隣接ヌクレオシドに存在する、請求項７０に記載のオリゴマー化合物。
【請求項73】
前記ヘアピンループが、修飾糖を有する少なくとも一つのヌクレオシドを含む、請求項３１から３４の何れか一項に従属する、請求項４６に記載のオリゴマー化合物。
【請求項74】
前記少なくとも一つのヌクレオシドが、異なる修飾糖を有するヌクレオシドに隣接している、請求項７３に記載のオリゴマー化合物。
【請求項75】
前記修飾糖が２’－Ｏ－メチル修飾糖であり、前記異なる修飾糖が２’－Ｆ修飾糖である、請求項７４に記載のオリゴマー化合物。
【請求項76】
第一のヌクレオシド領域及び／若しくは第二のヌクレオシド領域の一つ又は複数のヌクレオシドが逆位ヌクレオシドであり、その糖の３’炭素と隣接ヌクレオシドの糖の３’炭素を介して隣接ヌクレオシドに結合し、並びに／又は第一のヌクレオシド領域及び／若しくは第二のヌクレオシド領域の一つ又は複数のヌクレオシドが逆位ヌクレオシドであり、その糖の５’炭素と隣接ヌクレオシドの糖の５’炭素を介して隣接ヌクレオシドに結合している、請求項１から７５の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項77】
平滑末端である、請求項１から７６の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項78】
第一のヌクレオシド領域又は第二のヌクレオシド領域の何れかがオーバーハングを有する、請求項１から７６の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項79】
表３に記載の化合物から選択される、請求項３７から８の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項80】
請求項１から７９の何れか一項に記載のオリゴマー化合物と、生理学的に許容される添加物とを含む組成物。
【請求項81】
請求項１から７９の何れか一項に記載のオリゴマー化合物を含む薬学的組成物。
【請求項82】
薬学的に許容される添加物、希釈剤、抗酸化剤、及び／又は保存料を更に含む、請求項８１に記載の薬学的組成物。
【請求項83】
前記オリゴマー化合物が唯一の薬学的活性剤である、請求項８１又は８２に記載の薬学的組成物。
【請求項84】
一又は複数種の更なる薬学的活性剤を更に含む、請求項８１又は８２に記載の薬学的組成物。
【請求項85】
前記更なる薬学的活性剤が、自然免疫系及び／若しくは適応免疫系を調節する薬剤、例えば、ＣＦＢとは異なる免疫系標的、有利にはインターロイキン－６に向けられている更なるオリゴマー化合物；インターロイキン－６の発現若しくはレベルを低下させる薬剤；又は補体成分を標的とする抗体などの薬剤であり、前記抗体が有利にはエクリズマブである、請求項８４に記載の薬学的組成物。
【請求項86】
前記オリゴマー化合物と前記更なる薬学的活性剤が、同時に又は任意の順序で投与される、請求項８４又は８５に記載の薬学的組成物。
【請求項87】
ヒト又は動物用医薬又は治療に使用するための、請求項１から７９の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項88】
疾患又は障害を治療、改善及び／又は予防する方法において使用するための、請求項１から７９の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【請求項89】
前記疾患又は障害が、補体成分関連疾患若しくは障害、又はＣＦＢ発現レベルの減少を必要とする疾患若しくは障害である、請求項８８に記載の使用のための化合物。
【請求項90】
前記疾患又は障害が、自己免疫疾患、ＣＦＢなどの補体成分の異常な上方制御を含む補体系機能不全、ドライ型ＡＭＤ及び地図状萎縮を含む加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、ＩｇＡ腎症及び原発性膜性腎症などのＩｇ媒介腎臓病変、喘息、リウマチ性疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）血管炎、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、糸球体腎炎、乾癬、皮膚筋炎水疱性類天疱瘡、志賀毒素大腸菌関連溶血性尿毒症症候群、重症筋無力症（ＭＧ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、デンスデポジット病、Ｃ３神経障害、寒冷凝集素病、体液性及び血管性移植拒絶、移植片機能不全、心筋梗塞、移植に対する感作、並びに敗血症から選択される、請求項８９に記載の使用のための化合物。
【請求項91】
前記疾患又は障害が、ドライ型ＡＭＤ及び地図状萎縮を含む加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、並びにＣ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）から選択される、請求項８９又は９０に記載の使用のための化合物。
【請求項92】
治療を必要とする個体に、請求項１から７９の何れか一項に記載のオリゴマー化合物を投与することを含む、疾患又は障害を治療する方法。
【請求項93】
オリゴマー化合物が個体に皮下又は静脈内投与される、請求項９２に記載の方法。
【請求項94】
遺伝子機能解析ツールとして研究に使用するための、請求項１から７９の何れか一項に記載のオリゴマー化合物の使用。
【請求項95】
疾患又は障害の治療のための医薬の製造における、請求項１から７９の何れか一項に記載のオリゴマー化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
［関連する特許出願との相互参照］
この出願は、内容の全体が出典明示によりここに援用される、２０２２年３月９日に出願された米国仮特許出願第６３／３１８３４１号及び２０２１年７月１７日に出願された米国仮特許出願第６３／２２２９７４号の利益及び優先権を主張する。
この出願は、内容の全体が出典明示によりここに援用される、２０２２年３月９日に出願された米国仮特許出願第６３／３１８３４１号及び２０２１年７月１７日に出願された米国仮特許出願第６３／２２２９７４号の利益及び優先権を主張する。
【0002】
［分野］
補体因子Ｂ（ＣＦＢ）遺伝子発現を調節し、特に妨害又は阻害する核酸産物が提供される。核酸を含む組成物がまた、ＣＦＢ関連を含む補体系関連障害、例えば自己免疫疾患、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、及びＣ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）を治療、予防、又は改善するためのそれらの使用方法と共に提供される。
補体因子Ｂ（ＣＦＢ）遺伝子発現を調節し、特に妨害又は阻害する核酸産物が提供される。核酸を含む組成物がまた、ＣＦＢ関連を含む補体系関連障害、例えば自己免疫疾患、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、及びＣ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）を治療、予防、又は改善するためのそれらの使用方法と共に提供される。
【背景技術】
【0003】
補体系は自然免疫系の一部である。適応免疫系と比較して、それは進化的に古く、殆どの分類群にわたって保存されている。その機能には、潜在的に病原性の微生物を装飾し（オプソニン化と呼ばれるプロセス）、それらを破壊の標的にすることが含まれ、これは、膜付着複合体（ＭＡＣ）として知られる巨大分子集合体によってなされる。補体系の所定の成分は、ひとたび活性化されると、白血球の化学誘引と活性化に寄与する。
【0004】
補体活性化は、全てが微生物の存在を含む様々な要因によって引き起こされうるが、ＩｇＭを含むＩｇなどの適応免疫系の構成要素もまた関与する場合がある。補体活性化には三つの主要経路が認識されており、古典経路、代替経路、レクチン経路と呼ばれる。
【0005】
機能的な観点では、補体活性化は本質的に低レベルで発生し（Ｃ３の自発的切断によりＣ３ａ及びＣ３ｂが生成）、微生物の存在下において不活性型の酵素（酵素前駆体）をその活性対応物に変換する酵素カスケードを介して強化される。Ｃ３コンバターゼなどの「コンバターゼ」という用語は、主に機能的用語であり、構造的に異なる複合体を指す場合がある。Ｃ３コンバターゼの一つのタイプは、Ｃ３ｂと補体因子Ｂ（ＣＦＢ、因子Ｂ）の複合体である。Ｃ３コンバターゼは、ひとたび形成されると、大量のＣ３をその切断産物Ｃ３ａ及びＣ３ｂに短時間のうちに転換できる。Ｃ３ｂと因子Ｂの複合体である特定のＣ３コンバターゼは、もともと代替経路の文脈で記載されているが、他の二つの経路の文脈でも形成される場合がある。代替経路内では、因子Ｂは、経路のより下流の成分であるＣ５をその活性型に転換する複合体であるＣ５コンバターゼの構成成分でもある。
【0006】
［疾患］
補体系は一般に、表面上の結合部位のパターンによって引き起こされる。これらの結合部位は微生物又は病原体の構成要素である場合があるが、以前に任意の標的に結合した抗体である場合もある。後者の場合、補体系は適応免疫系を強化するように作用する。その結果、述べた抗体が自己抗体である場合、補体系は望ましくない自己免疫反応を悪化させる。このような状況で補体系を妨害することは、自己免疫疾患を治療し又は改善する方法である。補体系、より具体的には古典経路のＣ１は抗体の定常部分を認識するため、補体系の妨害により、一般に自己免疫疾患を特に制限なく妨害する道が開かれる。そうは言っても、経験上、自己免疫疾患は他の臓器よりも皮膚、関節、腎臓に頻繁に影響を及ぼす。
補体系は一般に、表面上の結合部位のパターンによって引き起こされる。これらの結合部位は微生物又は病原体の構成要素である場合があるが、以前に任意の標的に結合した抗体である場合もある。後者の場合、補体系は適応免疫系を強化するように作用する。その結果、述べた抗体が自己抗体である場合、補体系は望ましくない自己免疫反応を悪化させる。このような状況で補体系を妨害することは、自己免疫疾患を治療し又は改善する方法である。補体系、より具体的には古典経路のＣ１は抗体の定常部分を認識するため、補体系の妨害により、一般に自己免疫疾患を特に制限なく妨害する道が開かれる。そうは言っても、経験上、自己免疫疾患は他の臓器よりも皮膚、関節、腎臓に頻繁に影響を及ぼす。
【0007】
一方、自己抗体がない場合の補体機能不全も疾患の引き金となる場合がある。また、これに関連して、補体系の一般的な機構により、補体系の阻害剤、より具体的には因子Ｂ（ＣＦＢ）阻害剤による治療が受け入れられる疾患は、特に限定されないと言える。
【0008】
［治療］
エクリズマブは、Ｃ５を標的とするヒト化モノクローナル抗体であり、ＰＮＨ治療用に承認されている。その生産にはマウス細胞株が使用される。エクリズマブは、マウスタンパク質に対して感受性のある患者には使用されるべきではない。エクリズマブによる治療は非常に高価であり、費用は１患者当たり年間６０００００ユーロを超える場合がある。
エクリズマブは、Ｃ５を標的とするヒト化モノクローナル抗体であり、ＰＮＨ治療用に承認されている。その生産にはマウス細胞株が使用される。エクリズマブは、マウスタンパク質に対して感受性のある患者には使用されるべきではない。エクリズマブによる治療は非常に高価であり、費用は１患者当たり年間６０００００ユーロを超える場合がある。
【0009】
従って、因子Ｂ関連疾患を含む補体関連疾患を治療するための治療法の必要性が依然として存在する。従って、我々は、そのような疾患の治療のための化合物、方法、及び薬学的組成物を提供することを目的としている。
【0010】
発現されたｍＲＮＡに相補的に結合できる二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）と名付けられた機構により、遺伝子発現を遮断できることが示されている（Ｆｉｒｅ等，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ．１９９８ Ｆｅｂ １９；３９１（６６６９）：８０６－１ １及びＥｌｂａｓｈｉｒ等，２００１，Ｎａｔｕｒｅ．２００１ Ｍａｙ ２４；４１ １（６８３６）：４９４－８）。低分子ｄｓＲＮＡは、脊椎動物を含む多くの生物において遺伝子特異的な転写後サイレンシングを指示し、遺伝子機能を研究するための有用なツールとなっている。ＲＮＡｉは、ＲＩＳＣ複合体にロードされたサイレンシングトリガーと相同なメッセンジャーＲＮＡを破壊する配列特異的な多成分ヌクレアーゼであるＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）によって媒介される。ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、マイクロＲＮＡなどの干渉ＲＮＡ（ｉＲＮＡ）は、遺伝子サイレンシング、つまりｍＲＮＡ分子の分解によるタンパク質の遺伝子翻訳の阻害によってタンパク質の形成を防ぐオリゴヌクレオチドである。遺伝子サイレンシング剤は、医学における治療用途にとって益々重要になってきている。
【0011】
Ｗａｔｔｓ及びＣｏｒｅｙのＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ（２０１２；Ｖｏｌ２２６，ｐ３６５－３７９）によると、核酸サイレンシングトリガーの設計に使用できるアルゴリズムはあるが、これらには全て重大な制約がある。アルゴリズムでは標的ｍＲＮＡの三次構造又はＲＮＡ結合タンパク質の関与などの要因が考慮されていないため、強力なｓｉＲＮＡを同定するには様々な実験的方法が必要となる場合がある。従って、オフターゲット効果を最小限に抑えた強力な核酸サイレンシングトリガーの発見は複雑なプロセスである。これらの高度に緊迫した分子の薬学的開発には、それらが経済的に合成され、標的組織に分布し、細胞に入り、許容範囲内の毒性で機能しうることが必要である。従って、目的は、ＲＮＡｉによる遺伝子発現を調節し、特に阻害するオリゴマー化合物を含む、ここに記載の血栓塞栓性疾患の治療のための化合物、方法、及び薬学的組成物を提供することである。
【発明の概要】
【0012】
補体因子Ｂ（ＣＦＢ）遺伝子発現を調節し、特に妨害又は阻害する核酸産物が、関連する治療用途と共に、提供される。特定のオリゴマー化合物及び配列がここに記載される。この概要は、請求項記載の主題の重要な特徴又は本質的な特徴を特定することを意図したものではないし、請求項記載の主題の範囲を決定するために使用されることを意図したものでもない。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【発明を実施するための形態】
【0014】
次は非限定的な態様である。
態様１．ＣＦＢの発現を阻害することができるオリゴマー化合物であって、ＣＦＢ遺伝子から転写されたＲＮＡの少なくとも一部に少なくとも部分的に相補的である少なくとも第一の核酸塩基配列を有する連結ヌクレオシドの少なくとも第一の領域を含み、第一の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号１から２５０、７５１及び７５２の配列、又はそれらの一部から選択され、前記一部が有利には少なくとも１８ヌクレオチドの長さを有する、化合物。
態様１．ＣＦＢの発現を阻害することができるオリゴマー化合物であって、ＣＦＢ遺伝子から転写されたＲＮＡの少なくとも一部に少なくとも部分的に相補的である少なくとも第一の核酸塩基配列を有する連結ヌクレオシドの少なくとも第一の領域を含み、第一の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号１から２５０、７５１及び７５２の配列、又はそれらの一部から選択され、前記一部が有利には少なくとも１８ヌクレオチドの長さを有する、化合物。
【0015】
特に有利な実施態様は、最適化されたヘアピンＲＮＡ（ｍｘＲＮＡと呼ばれる）に関する；更なる詳細については、以下の実施態様とその考察を更に参照のこと。
【0016】
加えて、ここに開示されるアンチセンス領域及びセンス領域は、複数の標的に向けられた化合物のビルディングブロックとして機能しうる。このような化合物の一般的な構造は、国際公開第２０２０／０６５６０２号に記載されている。
【0017】
更に、以下に更に開示されるように、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が提供される。ｍｘＲＮＡとは異なり、ｄｓＲＮＡにはアンチセンス部分とセンス部分を連結するループが欠如しているため、二本の鎖を含む。これら二本の鎖は互いに共有結合で連結されていないが、塩基対形成が起こる二重鎖領域を形成する。
【0018】
態様２．態様１に記載のオリゴマー化合物と生理学的に許容される添加物とを含む組成物。
態様３．態様１に記載のオリゴマー化合物を含む薬学的組成物。
態様４．ヒト又は動物用医薬又は治療に使用するための、態様１に記載のオリゴマー化合物。
態様５．疾患又は障害を治療する方法において使用するための、態様１に記載のオリゴマー化合物。
態様６．治療を必要とする個体に態様１に記載のオリゴマー化合物を投与することを含む、疾患又は障害を治療する方法。
態様７．遺伝子機能解析ツールとして研究に使用するための、態様１に記載のオリゴマー化合物の使用。
態様８．疾患又は障害の治療のための医薬の製造における、態様１に記載のオリゴマー化合物の使用。
態様３．態様１に記載のオリゴマー化合物を含む薬学的組成物。
態様４．ヒト又は動物用医薬又は治療に使用するための、態様１に記載のオリゴマー化合物。
態様５．疾患又は障害を治療する方法において使用するための、態様１に記載のオリゴマー化合物。
態様６．治療を必要とする個体に態様１に記載のオリゴマー化合物を投与することを含む、疾患又は障害を治療する方法。
態様７．遺伝子機能解析ツールとして研究に使用するための、態様１に記載のオリゴマー化合物の使用。
態様８．疾患又は障害の治療のための医薬の製造における、態様１に記載のオリゴマー化合物の使用。
【0019】
更なる実施態様（項）は、単なる例として以下に記載される。
ここに記載される利益と利点は、一つの実施態様に関連する場合もあれば、幾つかの実施態様に関連する場合もあることが理解されよう。実施態様は、述べられた課題の一部又は全てを解決するもの、或いは述べられた利益と利点の何れか又は全てを有するものに限定されない。
ここに記載される利益と利点は、一つの実施態様に関連する場合もあれば、幾つかの実施態様に関連する場合もあることが理解されよう。実施態様は、述べられた課題の一部又は全てを解決するもの、或いは述べられた利益と利点の何れか又は全てを有するものに限定されない。
【0020】
ここに記載の異なる態様と実施態様の特徴は、当業者には明らかであるように、必要に応じて組み合わせることができ、また任意の他の態様と組み合わせることができる。
【0021】
［定義］
特定の定義が提供されない限り、ここに記載される分析化学、有機合成化学、及び薬化学及び製薬化学に関連して使用される命名法、及びそれらの手順及び技術は、当該技術分野でよく知られており、一般的に使用されているものである。化学合成及び化学分析には標準的な技術を使用できる。所定のそのような技術及び手順は、例えば、”Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ”Ｓａｎｇｖｉ及びＣｏｏｋ編，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，１９９４；”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，”Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，２１版，２００５；及び”Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”Ｓｔａｎｌｅｙ Ｔ．Ｃｒｏｏｋｅ編，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ；及びＳａｍｂｒｏｏｋ等，”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，”２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９に見出すことができ、これらは如何なる目的に対しても出典明示によりここに援用される。許可される場合、本開示を通して引用される全ての特許、出願、公開出願及び他の刊行物及び他のデータは、それらの全体が出典明示によりここに援用される。
特定の定義が提供されない限り、ここに記載される分析化学、有機合成化学、及び薬化学及び製薬化学に関連して使用される命名法、及びそれらの手順及び技術は、当該技術分野でよく知られており、一般的に使用されているものである。化学合成及び化学分析には標準的な技術を使用できる。所定のそのような技術及び手順は、例えば、”Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ”Ｓａｎｇｖｉ及びＣｏｏｋ編，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，１９９４；”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，”Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，２１版，２００５；及び”Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”Ｓｔａｎｌｅｙ Ｔ．Ｃｒｏｏｋｅ編，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ；及びＳａｍｂｒｏｏｋ等，”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，”２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９に見出すことができ、これらは如何なる目的に対しても出典明示によりここに援用される。許可される場合、本開示を通して引用される全ての特許、出願、公開出願及び他の刊行物及び他のデータは、それらの全体が出典明示によりここに援用される。
【0022】
特に明記されていない限り、次の用語は次の意味を持つ：
ここで使用される場合、「添加物」は、オリゴマー化合物の送達に適した、ここで提供される組成物に添加される任意の化合物又は化合物の混合物を意味する。
ここで使用される場合、「添加物」は、オリゴマー化合物の送達に適した、ここで提供される組成物に添加される任意の化合物又は化合物の混合物を意味する。
【0023】
ここで使用される場合、「ヌクレオシド」は、核酸塩基部分と糖部分とを含む化合物を意味する。ヌクレオシドには、限定されないが、（ＤＮＡ及びＲＮＡに見出される）天然に存在するヌクレオシド及び修飾ヌクレオシドが含まれる。ヌクレオシドはリン酸部分に連結されていてもよく、リン酸連結ヌクレオシドはまた「ヌクレオチド」とも呼ばれる。
【0024】
ここで使用される場合、「化学修飾」又は「化学的に修飾された」とは、天然に存在する対応物と比較したときの化合物における化学的差異を意味する。オリゴヌクレオチドの化学修飾には、（糖部分修飾及び核酸塩基修飾を含む）ヌクレオシド修飾とヌクレオシド間結合修飾とが含まれる。オリゴヌクレオチドに関して、化学修飾には、核酸塩基配列のみの違いは含まれない。
【0025】
ここで使用される場合、「フラノシル」は、四つの炭素原子と一つの酸素原子を含む５員環を含む構造を意味する。
【0026】
ここで使用される場合、「天然に存在する糖部分」は、天然に存在するＲＮＡに見出されるリボフラノシル、又は天然に存在するＤＮＡに見出されるデオキシリボフラノシルを意味する。ここで言及される「天然に存在する糖部分」は、「未修飾糖部分」とも呼ばれる。特に、ここで言及されるそのような「天然に存在する糖部分」又は「未修飾糖部分」は、糖部分の２’位に－Ｈ（ＤＮＡ糖部分）又は－ＯＨ（ＲＮＡ糖部分）を有し、特に糖部分の２’位に－Ｈ（ＤＮＡ糖部分）を有する。
【0027】
ここで使用される場合、「糖部分」は、ヌクレオシドの天然に存在する糖部分又は修飾された糖部分を意味する。ここで使用される場合、「修飾された糖部分」は、置換された糖部分又は糖代替物を意味する。
【0028】
ここで使用される場合、「置換された糖部分」は、置換されているフラノシルを意味する。置換された糖部分には、限定されないが、２’位、３’位、５’位及び／又は４’位に置換基を含むフラノシルが含まれる。所定の置換糖部分は二環式糖部分である。
【0029】
ここで使用される場合、「２’置換糖部分」は、２’位にＨ又はＯＨ以外の置換基を含むフラノシルを意味する。特に明記しない限り、２’置換糖部分は二環式糖部分ではない（すなわち、２’置換糖部分の２’置換基はフラノシル環の別の原子への架橋を形成しない）。
【0030】
ここで使用される場合、「ＭＯＥ」は、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３を意味する。
【0031】
ここで使用される場合、「２’－Ｆヌクレオシド」は、２’位にフッ素を含む糖を含むヌクレオシドを指す。特に明記しない限り、２’－Ｆヌクレオシドのフッ素は（天然リボースのＯＨを置き換える）リボ位置にある。ＲＮＡ鎖にハイブリダイズした均一に修飾された２’－フッ素化（リボ）オリゴヌクレオチドの二重鎖はＲＮａｓｅ Ｈ基質ではないが、ａｒａ類似体はＲＮａｓｅ Ｈ活性を保持する。
【0032】
ここで使用される場合、「糖代替物」という用語は、フラノシルを含まず、得られるヌクレオシドサブユニットが一緒に結合し、及び／又は他のヌクレオシドに結合して、相補的なオリゴマー化合物にハイブリダイズできるオリゴマー化合物を形成できるように、ヌクレオシドの天然に存在する糖部分を置き換えることができる構造を意味する。そのような構造には、フラノシルとは異なる数の原子を含む環（例えば、４、６、又は７員環）；フラノシルの酸素の非酸素原子（例えば、炭素、硫黄、又は窒素）での置換；或いは原子の数の変化と酸素の置換の両方が含まれる。そのような構造にはまた、置換された糖部分について記載されたものに対応する置換が含まれうる（例えば、追加の置換基を任意選択的に含む６員炭素環二環糖代替物）。糖代替物にはまたより複雑な糖置換物（ペプチド核酸の非環系など）が含まれる。糖代替物には、限定されないが、モルホリノ、シクロヘキセニル及びシクロヘキシトールが含まれる。
【0033】
ここで使用される場合、「二環式糖部分」は、第二の環を形成するために４から７員環の二つの原子を連結する架橋を含み、二環式構造を生じる（限定されないが、フラノシルを含む）４から７員環を含む修飾された糖部分を意味する。所定の実施態様では、４から７員環は糖環である。所定の実施態様では、４から７員環はフラノシルである。所定のそのような実施態様では、架橋はフラノシルの２’炭素と４’炭素を連結する。
【0034】
ここで使用される場合、「ヌクレオチド」は、リン酸連結基を更に含むヌクレオシドを意味する。ここで使用される場合、「連結ヌクレオシド」は、リン酸結合によって連結されていても連結されていなくてもよく、従って、限定されないが、「連結ヌクレオチド」を含む。ここで使用される場合、「連結ヌクレオシド」は、連続した配列で連結されたヌクレオシドである（すなわち、追加のヌクレオシドが連結されたヌクレオシド間に存在しない）。
【0035】
ここで使用される場合、「核酸塩基」は、オリゴヌクレオチドに取り込むことができるヌクレオシドを生成するために糖部分に連結することができる原子団であって、別のオリゴヌクレオチド又は核酸の相補的な天然に存在する核酸塩基と結合（より特定的には水素結合）することができる原子団を意味する。核酸塩基は天然に存在する場合もあれば、修飾されている場合もある。
【0036】
ここで使用される場合、「未修飾核酸塩基」又は「天然に存在する核酸塩基」という用語は、ＲＮＡ又はＤＮＡの天然に存在する複素環式核酸塩基、すなわちプリン塩基のアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、並びにピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）（５－メチルＣを含む）、及びウラシル（Ｕ）を意味する。
【0037】
ここで使用される場合、「修飾核酸塩基」とは、天然に存在する核酸塩基ではない任意の核酸塩基を意味する。
【0038】
ここで使用される場合、「修飾ヌクレオシド」は、天然に存在するＲＮＡ又はＤＮＡヌクレオシドと比較して、少なくとも一つの化学修飾を含むヌクレオシドを意味する。修飾ヌクレオシドは、修飾糖部分及び／又は修飾核酸塩基を含みうる。
【0039】
ここで使用される場合、「二環式ヌクレオシド」又は「ＢＮＡ」は、二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【0040】
ここで使用される場合、「ロックド核酸ヌクレオシド」又は「ＬＮＡ」は、４’－ＣＨ２－Ｏ－２’架橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【0041】
ここで使用される場合、「２’－置換ヌクレオシド」は、糖部分の２’位にＨ又はＯＨ以外の置換基を含むヌクレオシドを意味する。特に明記しない限り、２’－置換ヌクレオシドは二環式ヌクレオシドではない。
【0042】
ここで使用される場合、「デオキシヌクレオシド」は、天然に存在するデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）に見出されるような、２’－Ｈフラノシル糖部分を含むヌクレオシドを意味する。所定の実施態様では、２’－デオキシヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含んでもよく、又はＲＮＡ核酸塩基（例えば、ウラシル）を含んでもよい。
【0043】
ここで使用される場合、「オリゴヌクレオチド」は、複数の連結ヌクレオシドを含む化合物を意味する。所定の実施態様では、オリゴヌクレオチドは、一つ又は複数の未修飾リボヌクレオシド（ＲＮＡ）及び／又は未修飾デオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）及び／又は一つ又は複数の修飾ヌクレオシドを含む。
【0044】
ここで使用される場合、「修飾オリゴヌクレオチド」は、少なくとも一つの修飾ヌクレオシド及び／又は少なくとも一つの修飾ヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドを意味する。
【0045】
有利な修飾ヌクレオシド間結合には、天然に存在するホスホジエステルと比較して増加した安定性を与えるものが含まれる。「安定性」とは、特に、酵素触媒加水分解を含む加水分解、エキソヌクレアーゼ及びエンドヌクレアーゼを含む酵素に対する安定性を指す。
【0046】
有利には、そのような修飾ヌクレオシド間結合は、ここに記載されるような一本鎖オリゴマー化合物の末端及び／又はヘアピンループに配置されうる。例えば、５’末端から数えて第一及び第二ヌクレオシドと第二及び第三ヌクレオシドを連結するヌクレオシド間結合、並びに／又は３’末端から数えて第一及び第二ヌクレオシドと第二及び第三ヌクレオシドを連結するヌクレオシド間結合が修飾される。加えて、３’末端の末端ヌクレオシドをＧａｌＮＡｃなどのリガンドと連結する結合が修飾されてもよい。
【0047】
上で検討したように、有利な位置は、一本鎖オリゴマー化合物のヘアピンループ内にある。特に、ヘアピンループ内の全ての結合、一つを除く全ての結合、又は大部分の結合が修飾される。ここで使用される場合、「ヘアピンループ内の結合」とは、塩基対形成に関与していないヌクレオシド間の結合を指す。例えば、５つのヌクレオシドからなるヘアピンループには、塩基対形成に関与していない４つのヌクレオシド間結合がある。「ヘアピンループ内の結合」はまたステムをループに連結する結合、すなわち、塩基対のヌクレオシドを非塩基対のヌクレオシドに連結する結合にまで延びうる。一般に、ここに記載されているように、ヘアピンとｍｘＲＮＡにはそのような位置が二つある。
【0048】
有利には、修飾ヌクレオシド間結合は両末端及びヘアピンループ内にある。
【0049】
ここで使用される場合、「結合」又は「連結基」は、二つ以上の他の原子団を連結する原子団を意味する。
【0050】
ここで使用される場合、「ヌクレオシド間結合」は、オリゴヌクレオチド中の隣接するヌクレオシド間の共有結合を意味する。
【0051】
ここで使用される場合、「天然に存在するヌクレオシド間結合」とは、３’から５’ホスホジエステル結合を意味する。ここで使用される場合、「修飾ヌクレオシド間結合」とは、天然に存在するヌクレオシド間結合以外の任意のヌクレオシド間結合を意味する。特に、ここで言及される「修飾ヌクレオシド間結合」には、ホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合などの修飾リン連結基が含まれうる。
【0052】
ここで使用される場合、「末端ヌクレオシド間結合」は、オリゴヌクレオチド又はその規定領域の最後の二つのヌクレオシド間の結合を意味する。
【0053】
ここで使用される場合、「リン連結基」は、リン原子を含む連結基を意味し、ホスホジエステル連結基などの天然に存在するＲＮＡ又はＤＮＡ中に存在するような天然に存在するリン連結基、或いはホスホロチオエート又はホスホロジチオエート連結基などの天然に存在するＲＮＡ又はＤＮＡ中に一般には存在しない修飾リン連結基を含みうる。従って、リン連結基には、限定されないが、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホネート、メチルホスホネート、ホスホロアミダート、ホスホロチオアミダート、チオノアルキルホスホネート、ホスホトリエステル、チオノアルキルホスホトリエステル及びボラノホスフェートが含まれうる。
【0054】
ここで使用される場合、「ヌクレオシド間リン連結基」は、二つのヌクレオシドを直接連結するリン連結基を意味する。
【0055】
ここで使用される場合、「オリゴマー化合物」は、二つ以上の部分構造を含むポリマー構造を意味する。所定の実施態様では、オリゴマー化合物は、修飾オリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドを含む。所定の実施態様では、オリゴマー化合物は、一つ又は複数のコンジュゲート基及び／又は末端基及び／又はリガンドを更に含む。所定の実施態様では、オリゴマー化合物はオリゴヌクレオチドからなる。所定の実施態様では、オリゴマー化合物は、一つ又は複数の連結された単量体糖部分の骨格を含み、各連結された単量体糖部分は、複素環式塩基部分に直接的又は間接的に結合している。所定の実施態様では、オリゴマー化合物はまた、複素環塩基部分に連結していない単量体糖部分を含み得、それによって脱塩基部位を提供しうる。オリゴマー化合物は、核酸塩基配列に関してのみ、つまり、Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｕ（又はＴ）の配列を特定することによって規定されうる。そのような場合、糖－リン酸骨格の構造は特に限定されず、修飾糖及び／又は修飾リン酸を含んでもよく、含まなくてもよい。他方、オリゴマー化合物は、より包括的に、つまり、核酸塩基配列だけでなく、骨格の構造、特に糖（未修飾、２’－ＯＭｅ修飾、２’－Ｆ修飾など）及び／又はリン酸の修飾状態を特定することによって規定されうる。
【0056】
ここで使用される場合、「末端基」は、オリゴヌクレオチドの３’末端又は５’末端の何れか又は両方に結合した一つ又は複数の原子を意味する。所定の実施態様では、末端基は、一つ又は複数の末端基ヌクレオシドを含む。
【0057】
ここで使用される場合、「コンジュゲート」又は「コンジュゲート基」は、オリゴヌクレオチド又はオリゴマー化合物に結合した原子又は原子団を意味する。所定の実施態様では、コンジュゲート基は、リガンドを修飾オリゴヌクレオチド又はオリゴマー化合物に連結する。一般に、コンジュゲート基は、限定されないが、薬力学、薬物動態、結合、吸収、細胞分布、細胞取り込み、電荷及び／又はクリアランス特性を含む、それらが結合する化合物の一つ又は複数の特性を改変しうる。
【0058】
ここで使用される場合、コンジュゲート基の文脈における「コンジュゲートリンカー」又は「リンカー」は、任意の原子又は原子団を含み、オリゴヌクレオチドをコンジュゲート基の別の部分に共有結合させるコンジュゲート基の一部を意味する。所定の実施態様では、オリゴマー化合物上の結合点は、オリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオシドの３’ヒドロキシル基の３’酸素原子である。所定の実施態様では、オリゴマー化合物上の結合点は、オリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオシドの５’ヒドロキシル基の５’酸素原子である。所定の実施態様では、オリゴマー化合物への結合を形成するための結合は、切断可能な結合である。所定のそのような実施態様では、そのような切断可能な結合は、切断可能な部分の全部又は一部を構成する。
【0059】
所定の実施態様では、コンジュゲート基は、切断可能な部分（例えば、切断可能な結合又は切断可能なヌクレオシド）と、一つ又は複数のリガンドを含みうるリガンド部分、例えば「ＧａｌＮＡｃ」とも呼ばれるＮ－アセチル－ガラクトサミンクラスター部分などの糖クラスター部分を含む。所定の実施態様では、糖クラスター部分は、リガンドの数及びアイデンティティによって識別される。例えば、所定の実施態様では、糖クラスター部分は２つのＧａｌＮＡｃ基を含む。例えば、所定の実施態様では、糖クラスター部分は３つのＧａｌＮＡｃ基を含む。所定の実施態様では、糖クラスター部分は、４つのＧａｌＮＡｃ基を含む。そのようなリガンド部分は、切断可能な結合又は切断可能なヌクレオシドなどの切断可能な部分を介してオリゴマー化合物に結合される。リガンドは、二分岐又は三分岐配置などの直鎖状又は分岐状配置で配置されうる。糖クラスターの例は次の式：
（構造式中、一つ、二つ、又は三つのホスホジエステル結合をホスホチオネート結合で置換することもできる）を有する。
【0060】
ここで使用される場合、「切断可能な部分」は、生理学的条件下で切断可能な結合又は基を意味する。所定の実施態様では、切断可能な部分は、エンドソーム又はリソソームなどの細胞又は細胞内区画の内部で切断される。所定の実施態様では、切断可能な部分は、ヌクレアーゼなどの内因性酵素によって切断される。所定の実施態様では、切断可能な部分は、一つ、二つ、三つ、四つ、又は四つを超える切断可能な結合を有する原子団を含む。所定の実施態様では、切断可能な部分はホスホジエステル結合である。
【0061】
ここで使用される場合、「切断可能な結合」とは、切断可能な任意の化学結合を意味する。
【0062】
ここで使用される場合、「糖クラスター」は、リンカー基に結合した一つ又は複数の糖残基を有する化合物を意味する。
【0063】
ここで使用される場合、「修飾糖」は、天然に存在する糖と比べて一つ又は複数の化学修飾を有する任意の糖を意味する。
【0064】
ここで使用される場合、「糖誘導体」は、出発物質又は中間体として糖を使用して合成されうる任意の化合物を意味する。
【0065】
ここで使用される場合、「糖」は、天然に存在する糖、修飾糖、又は糖誘導体を意味する。糖は、炭素（Ｃ）、水素（Ｈ）、酸素（Ｏ）原子を含む生体分子である。糖には、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖又は多糖、例えば、一若しくは複数のガラクトース部分、一若しくは複数のラクトース部分、一若しくは複数のＮ－アセチル－ガラクトサミン部分、及び／又は一若しくは複数のマンノース部分が含まれうる。有利には、糖はＮ－アセチル－ガラクトサミンである。
【0066】
ここで使用される場合、「鎖」は、連結ヌクレオシドを含むオリゴマー化合物を意味する。
【0067】
ここで使用される場合、「一本鎖（ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ）」又は「一本鎖（ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄ）」は、間に切れ目なく連続した配列で連結された連結ヌクレオシドを含むオリゴマー化合物を意味する。そのような一本鎖は、ヘアピン構造で安定した自己二重鎖を形成できるように十分な自己相補性の領域を含みうる。
【0068】
ここで使用される場合、「ヘアピン」は、自己相補的で方向性が反対である鎖内の配列間の塩基対形成によって形成される二重鎖を含む一本鎖オリゴマー化合物を意味する。
【0069】
ここで使用される場合、「ヘアピンループ」は、自己相補的配列のハイブリダイゼーションの結果として生成されるヘアピン内の連結ヌクレオシドの不対ループを意味する。結果として得られる構造は、ループ又はＵ字形のように見える。
【0070】
特に、ｓｈＲＮＡとも呼ばれる低分子ヘアピンＲＮＡは、二重鎖領域と、二重鎖を形成する領域を連結するループを含む。ループを持たない二重鎖領域の末端は、平滑末端であり得、或いは（ａ）３’及び／又は（ａ）５’オーバーハングを有しうる。平滑末端コンストラクトが特に有利である。
【0071】
ここで使用される場合、「方向性」とは、糖部分の炭素原子の番号付けの化学慣例に基づいた、オリゴヌクレオチドのエンドツーエンドの化学的配向を意味し、糖部分の５’炭素によって定義される５’末端と、糖部分の３’炭素によって定義される３’末端とが存在することを意味する。二重鎖又は二本鎖オリゴヌクレオチドでは、それぞれの鎖が反対の５’から３’方向に延び、それらの間で塩基対形成が可能になる。
【0072】
ここで使用される場合、「二重鎖（ｄｕｐｌｅｘ）」は、又は「ｄｕｐ」とも略され、それらの間の非共有結合性の配列特異的相互作用によって一緒にハイブリダイズされた、オリゴヌクレオチド（一つ又は複数）の二つ以上の相補鎖領域又は鎖を意味する。最も一般的には、二重鎖におけるハイブリダイゼーションは、核酸塩基アデニン（Ａ）とチミン（Ｔ）、及び／又は（Ａ）アデニンとウラシル（Ｕ）、及び／又はグアニン（Ｇ）とシトシン（Ｃ）の間でなされる。二重鎖は一本鎖構造の一部であってもよく、その場合、自己相補性によりハイブリダイゼーションが生じるか、又は二本鎖コンストラクトのそれぞれの鎖間のハイブリダイゼーションの結果として生じる。
【0073】
ここで使用される場合、「二本鎖（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ）」又は「二本鎖（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄ）」は、互いにハイブリダイズされる一対のオリゴマー化合物を意味する。所定の実施態様では、二本鎖オリゴマー化合物は、第一及び第二のオリゴマー化合物を含む。
【0074】
ここで使用される場合、「発現」とは、遺伝子が最終的にタンパク質をもたらすプロセスを意味する。発現には、限定されないが、転写、転写後修飾（例えば、スプライシング、ポリアデニル化、５’キャップの付加）、及び翻訳が含まれる。
【0075】
ここで使用される場合、「転写」又は「転写された」とは、ＤＮＡの標的配列が酵素ＲＮＡポリメラーゼによってＲＮＡ（特にｍＲＮＡ）にコピーされる、ＤＮＡベースの遺伝子発現の幾つかのステップの最初のステップを指す。転写中、ＤＮＡ配列はＲＮＡポリメラーゼによって読み取られ、これが一次転写物と呼ばれる相補的で逆平行のＲＮＡ配列を生成する。
【0076】
ここで使用される場合、「標的配列」とは、オリゴマー化合物がハイブリダイズしてＣＦＢ発現に関して所望の活性をもたらすことが意図される配列を意味する。オリゴヌクレオチドは、生理学的条件下でハイブリダイゼーションを可能にするために、その標的配列に対して十分な相補性を有している。
【0077】
ここで使用される場合、「核酸塩基相補性」又は「相補性」は、核酸塩基に関して言及する場合、別の核酸塩基と塩基対形成をなすことができる核酸塩基を意味する。例えば、ＤＮＡでは、アデニン（Ａ）はチミン（Ｔ）に相補的である。例えば、ＲＮＡでは、アデニン（Ａ）はウラシル（Ｕ）に相補的である。ＤＮＡとＲＮＡの両方において、グアニン（Ｇ）はシトシン（Ｃ）と相補的である。所定の実施態様では、相補的核酸塩基は、その標的配列の核酸塩基と塩基対形成をなすことができるオリゴマー化合物の核酸塩基を意味する。例えば、オリゴマー化合物の所定の位置にある核酸塩基が、標的配列の所定の位置にある核酸塩基と水素結合できる場合、オリゴマー化合物と標的配列との間の水素結合の位置はその核酸塩基対において相補的であるとみなされる。所定の修飾を含む核酸塩基は、対応する核酸塩基と対形成する能力を維持する場合があり、従って依然として核酸塩基の相補性が可能である。
【0078】
ここで使用される場合、核酸塩基に関して「非相補的」とは、互いに水素結合を形成しない一対の核酸塩基を意味する。
【0079】
ここで使用される場合、オリゴマー化合物（例えば、連結ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド）に関する「相補的」とは、そのようなオリゴマー化合物又はその領域が、核酸塩基相補性を通じて標的配列又はオリゴマー化合物自体の領域にハイブリダイズする能力を意味する。
【0080】
相補的なオリゴマー化合物は、各ヌクレオシドにおいて核酸塩基の相補性を有している必要はない。むしろ、多少のミスマッチは許容される。所定の実施態様では、相補的なオリゴマー化合物又は領域は、核酸塩基の７０％で相補的である（７０％相補的）。所定の実施態様では、相補的なオリゴマー化合物又は領域は８０％＞相補的である。所定の実施態様では、相補的なオリゴマー化合物又は領域は９０％＞相補的である。所定の実施態様では、相補的なオリゴマー化合物又は領域は少なくとも９５％相補的である。所定の実施態様では、相補的なオリゴマー化合物又は領域は１００％相補的である。
【0081】
ここで使用される場合、オリゴマー化合物に関する「自己相補性」は、それ自体で折り返され、内部相補鎖領域の核酸塩基ハイブリダイゼーションの結果として二重鎖を形成しうる化合物を意味する。鎖領域がどの程度接近しているか、及び／又はどの程度長いかに応じて、化合物はヘアピンループ、ジャンクション、バルジ、又は内部ループを形成しうる。
【0082】
ここで使用される場合、「ミスマッチ」とは、標的配列の対応する位置において、又はオリゴマー化合物が自己相補性の結果としてハイブリダイズする場合、オリゴマー化合物とオリゴマー化合物の標的配列及び／又は自己相補的領域とが整列している場合のオリゴマー化合物自体の対応する位置において、核酸塩基と対形成できないオリゴマー化合物の核酸塩基を意味する。
【0083】
ここで使用される場合、「ハイブリダイゼーション」とは、相補的なオリゴマー化合物（例えば、オリゴマー化合物とその標的配列）の対形成を意味する。特定の機構に限定されないが、最も一般的な対形成機構には、相補的核酸塩基間のワトソン・クリック水素結合、フーグスティーン水素結合、又は逆フーグスティーン水素結合などの水素結合が含まれる。
【0084】
ここで使用される場合、「特異的にハイブリダイズする」とは、オリゴマー化合物が、別の核酸部位にハイブリダイズするよりも高い親和性で、ある核酸部位にハイブリダイズする能力を意味する。
【0085】
ここで使用される場合、オリゴマー化合物又はその領域に関して「完全に相補的」とは、オリゴマー化合物又はその領域の各核酸塩基が、相補的核酸標的配列又はオリゴマー化合物の自己相補的領域の核酸塩基と対形成することができることを意味する。従って、完全に相補的なオリゴマー化合物又はその領域は、その標的配列又はオリゴマー化合物の自己相補的領域に関してミスマッチ又はハイブリダイズしていない核酸塩基を含まない。
【0086】
ここで使用される場合、「相補性パーセント」は、標的核酸の等しい長さの部分に相補的であるオリゴマー化合物の核酸塩基のパーセンテージを意味する。相補性パーセントは、標的核酸内の対応する位置の核酸塩基に相補的であるオリゴマー化合物の核酸塩基の数をオリゴマー化合物の全長で割ることによって計算される。
【0087】
ここで使用される場合、「同一性パーセント」は、第二の核酸の対応する位置にある核酸塩基と同じタイプ（化学修飾とは無関係）である第一の核酸の核酸塩基の数を、第一の核酸の核酸塩基の全数で割ったものを意味する。
【0088】
ここで使用される場合、「調節」は、調節前の分子、機能又は活性の量又は質と比較したときの、分子、機能又は活性の量又は質の変化を意味する。例えば、調節には、遺伝子発現の増加（刺激若しくは誘導）又は減少（阻害若しくは低下）の何れかの変化が含まれる。
【0089】
ここで使用される場合、ヌクレオシド又はある「タイプ」のヌクレオシドに関する「修飾のタイプ」は、ヌクレオシドの化学修飾を意味し、修飾ヌクレオシド及び未修飾ヌクレオシドを含む。従って、別段の指示がない限り、「第一のタイプの修飾を有するヌクレオシド」は、未修飾ヌクレオシドであってもよい。
【0090】
ここで使用される場合、「異なって修飾」されたとは、修飾が存在しないことを含み、互いに異なる化学修飾又は化学置換基を意味する。従って、例えば、たとえ天然に存在するヌクレオシドが未修飾であっても、ＭＯＥヌクレオシド及び未修飾の天然に存在するＲＮＡヌクレオシドは、「異なって修飾」されている。同様に、ＤＮＡオリゴヌクレオチドとＲＮＡオリゴヌクレオチドは、たとえ両方とも天然に存在する未修飾ヌクレオシドであっても、「異なって修飾」される。同じであるが異なる核酸塩基を含むヌクレオシドは、異なって修飾されてはいない。例えば、２’－ＯＭｅ修飾糖部分及び未修飾アデニン核酸塩基を含むヌクレオシドと、２’－ＯＭｅ修飾糖部分及び未修飾チミン核酸塩基を含むヌクレオシドとは、異なって修飾されてはいない。
【0091】
ここで使用される場合、「同じタイプの修飾」とは、修飾が存在しないことを含み、互いに同じである修飾を指す。従って、例えば、二つの未修飾ＲＮＡヌクレオシドは、たとえＲＮＡヌクレオシドが未修飾であっても、「同じタイプの修飾」を有している。そのような同じタイプの修飾を有するヌクレオシドは、異なる核酸塩基を含む場合がある。
【0092】
ここで使用される場合、「領域（一つ又は複数）」又は「部分（一つ又は複数）」は、特にここに提供される主題及び定義を参照して、ここに定義されるような機能又は特性を有する複数の連結ヌクレオシドを意味する。典型的には、そのような領域又は部分は、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、又は少なくとも１３の連結ヌクレオシドを含む。例えば、そのような領域は、１３から２０の連結ヌクレオシド、例えば１３から１６又は１８から２０の連結ヌクレオシドを含みうる。典型的には、ここで定義される第一の領域は１８から２０のヌクレオシドから本質的になり、ここで定義される第二の領域は１３から１６の連結ヌクレオシドから本質的になる。
【0093】
ここで使用される場合、「薬学的に許容される担体又は希釈剤」とは、動物への投与に使用するのに適した任意の物質を意味する。所定の実施態様では、薬学的に許容される担体又は希釈剤は滅菌生理食塩水である。所定の実施態様では、そのような滅菌生理食塩水は医薬品等級の生理食塩水である。
【0094】
ここで使用される場合、「置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」及び「置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ ｇｒｏｕｐ）」は、指定された親化合物の原子又は基と置き換わる原子又は基を意味する。例えば、修飾ヌクレオシドの置換基は、天然に存在するヌクレオシドに見出される原子又は基とは異なる任意の原子又は基である（例えば、修飾２’－置換基は、ヌクレオシドの２’位にあるＨ又はＯＨ以外の任意の原子又は基である）。置換基は保護されていても未保護であってもよい。所定の実施態様では、本開示の化合物は、親化合物の一又は一を超える位置に置換基を有する。置換基はまた、他の置換基で更に置換されてもよく、親化合物に直接又は酸素若しくはアルキル若しくはヒドロカルビル基などの連結基を介して結合されてもよい。
【0095】
そのような置換基は、糖部分上の修飾として存在し得、特に糖部分の２’位に存在する置換基である。特に示されない限り、置換基として使用可能な基には、限定されないが、ハロ、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、カルボキシル、アルコキシ、アルコキシアルキレン及びアミノ置換基の一つ又は複数が含まれる。ここに記載される所定の置換基は、糖部分の環に直接結合した修飾（糖環に直接結合したフルオロなどのハロなど）、又はそれ自体が糖部分に直接結合している酸素連結原子を介して糖部分の環に間接的に結合した修飾（酸素原子に結合しているメトキシエチレンなどのアルコキシアルキレンなど、全体として糖部分の２’位に結合したここに記載のＭＯＥ置換基を提供する）を表しうる。
【0096】
ここで使用される場合、ここで使用される「アルキル」は、飽和直鎖又は分岐鎖の一価Ｃ１－６炭化水素基を意味する。メチルが有利には糖部分の２’位の置換基として用いられるアルキルである。アルキル基は典型的には糖の２’位の酸素連結原子に結合し、従って全体として、ここに記載されるオリゴマー化合物の糖部分に－ＯＣＨ３置換基などの－Ｏアルキル置換基を提供する。これは当業者にはよく理解されるであろう。
【0097】
ここで使用される場合、「アルキレン」は、一般式－ＣｎＨ２ｎ－（式中、ｎは１～６である）の飽和直鎖又は分岐鎖二価炭化水素基を意味する。メチレン又はエチレンが有利なアルキレンである。
【0098】
ここで使用される場合、「アルケニル」は、直鎖又は分岐鎖の不飽和一価Ｃ２－６炭化水素基を意味し、エテニル又はプロペニルが糖部分の２’位の置換基としての特定のアルケニルである。当該技術分野でよく理解されているように、アルケニル基中に存在する不飽和度は、少なくとも一つの炭素－炭素二重結合の存在である。アルケニル基は典型的には糖の２’位の酸素連結原子に結合し、従って、全体として、ここに記載されるオリゴマー化合物の糖部分に－ＯＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２置換基などの－Ｏアルケニル置換基を提供する。これは当業者にはよく理解されるであろう。
【0099】
ここで使用される場合、「アルキニル」は、直鎖又は分岐鎖の不飽和Ｃ２－６炭化水素基を意味し、エチニルが糖部分の２’位の置換基の例である。当該技術分野でよく理解されているように、アルキニル基中に存在する不飽和度は、少なくとも一つの炭素－炭素三重結合の存在である。アルキニル基は典型的には糖の２’位の酸素連結原子に結合し、従って、全体として、ここに記載されるオリゴマー化合物の糖部分に－Ｏアルキニル置換基を提供する。これは当業者にはよく理解されるであろう。
【0100】
ここで使用される場合、「カルボキシル」は、一般式－ＣＯ２Ｈを有する基である。
【0101】
ここで使用される場合、「アシル」は、ここで定義されるカルボキシル基からヒドロキシル基を除去することによって形成される基を意味し、一般式－Ｃ（Ｏ）－Ｘ（式中、Ｘは典型的にはＣ１－６アルキルである）を有する。
【0102】
ここで使用される場合、「アルコキシ」は、Ｃ１－６アルキル基などのアルキル基と酸素原子との間に形成される基を意味し、酸素原子は、アルコキシ基を親分子（例えば、糖部分の２’位）に、又はここで定義されるアルキレン基などの別の基に結合させるために使用される。アルコキシ基の例には、限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ－ブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ及びｔｅｒｔ－ブトキシが含まれる。ここで使用されるアルコキシ基は、任意選択的に更なる置換基を含みうる。
【0103】
ここで使用される場合、アルコキシアルキレンは、またここで定義されるアルキレン基に結合する、ここで定義されるアルコキシ基を意味し、アルコキシ基の酸素原子はアルキレン基に結合し、アルキレンは親分子に結合する。アルキレン基は典型的には、糖の２’位の酸素連結原子に結合し、従って、全体として、ここに記載されるオリゴマー化合物の糖部分に、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３置換基などの－Ｏアルキレンアルコキシ置換基を提供する。これは当業者にはよく理解されており、ここで定義され当該技術分野で知られているように一般にＭＯＥ置換基と呼ばれる。
【0104】
ここで使用される場合、「アミノ」には、第一級アミノ基、第二級アミノ基、及び第三級アミノ基が含まれる。
【0105】
ここで使用される場合、「ハロ」及び「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選択される原子を意味する。
【0106】
ここで使用される場合、「ｍｘＲＮＡ」という用語は、特に、その全体が出典明示によりここに援用される国際公開第２０２０／０４４１８６Ａ２号に定義されているように理解される。
【0107】
ここで使用される場合、「因子Ｂｂ」という用語は、補体活性化内のＣ３コンバターゼ内のＣ３ｂに結合する、対応する一般に知られたタンパク質を意味する。因子ＢｂはＣＦＢの活性サブユニットであり、ＣＦＢがＣ３ｂに結合した後、例えば補体活性化の代替経路において、因子ＤによるＣＦＢの因子Ｂａと因子Ｂｂへの切断によって産生されうる。以下に提供される実施例におけるように、因子Ｂｂレベルは、ＣＦＢ発現のサイレンシングの成功の指標として使用できる。
【0108】
また、ここに記載のオリゴマー化合物は、生理学的に適切な条件下でハイブリダイゼーションを維持するのに十分な相補性がある限り、一方若しくは両方の鎖の一端若しくは両端に一つ若しくは複数の非ハイブリダイズヌクレオシド（オーバーハング）及び／又は一つ若しくは複数の内部非ハイブリダイズヌクレオシド（ミスマッチ）を有しうることもまた理解されるであろう。或いは、ここに記載のオリゴマー化合物は、少なくとも一端が平滑末端でありうる。
【0109】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、ここでは、特定された方法ステップ又は要素を含むが、そのようなステップ又は要素は排他的なリストを構成せず、従って追加のステップ又は要素が存在する場合があることを意味するために使用される。
【0110】
更に、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」という用語が詳細な説明又は特許請求の範囲の何れかで使用される限り、そのような用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」が請求項に移行語として用いられる場合に解釈されるように、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と同様の形で包括的であることが意図される。
【0111】
次の非限定的な実施態様（項）が提供される：
１．補体因子Ｂ（ＣＦＢ）の発現を阻害することができるオリゴマー化合物であって、ＣＦＢ遺伝子から転写されたＲＮＡの少なくとも一部に少なくとも部分的に相補的である少なくとも第一の核酸塩基配列を有する連結ヌクレオシドの少なくとも第一の領域を含み、第一の核酸塩基配列が、次の配列：表１ａの配列（配列番号：１から２５０、７５１及び７５２）、又はそれらの一部から選択され、前記一部が有利には少なくとも１８ヌクレオチドの長さを有する、化合物。
１．補体因子Ｂ（ＣＦＢ）の発現を阻害することができるオリゴマー化合物であって、ＣＦＢ遺伝子から転写されたＲＮＡの少なくとも一部に少なくとも部分的に相補的である少なくとも第一の核酸塩基配列を有する連結ヌクレオシドの少なくとも第一の領域を含み、第一の核酸塩基配列が、次の配列：表１ａの配列（配列番号：１から２５０、７５１及び７５２）、又はそれらの一部から選択され、前記一部が有利には少なくとも１８ヌクレオチドの長さを有する、化合物。
【0112】
第一の領域はアンチセンス領域又はガイド領域とも呼ばれ、第二の領域はセンス領域又はパッセンジャー領域とも呼ばれる。以下の特定の実施態様に開示されるように、二つの領域は同じ鎖上に、有利には隣接した形で位置しうる。これにより、ｍｘＲＮＡとも呼ばれるヘアピン分子が生じる。一方、二つの領域は、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を生じさせる別個の鎖上に位置し得、有利には各鎖がそれぞれの領域からなる。
【0113】
更に、前記領域は、ｍｕＲＮＡ（上記を参照）のビルディングブロックとして機能しうる。換言すれば、ここで定義される第一の領域及び第二の領域は、次のｍｕＲＮＡの定義に従って、それぞれ第一の領域及び第三の領域として使用されうる：
少なくとも、
（ａ）ＣＦＢ遺伝子から転写されるＲＮＡの少なくとも第一の部分に少なくとも部分的に相補的である第一の核酸部分；
（ｂ）別の遺伝子から転写されるＲＮＡの少なくとも第二の部分に少なくとも部分的に相補的である第二の核酸部分；
（ｃ）（ａ）の第一の核酸部分と少なくとも部分的に相補的であり、それと共に第一の核酸二重鎖領域を形成する第三の核酸部分；
（ｄ）（ｂ）の第二の核酸部分と少なくとも部分的に相補的であり、それと共に第二の核酸二重鎖領域を形成する第四の核酸部分
を含む、核酸コンストラクト（ｍｕＲＮＡ）。
少なくとも、
（ａ）ＣＦＢ遺伝子から転写されるＲＮＡの少なくとも第一の部分に少なくとも部分的に相補的である第一の核酸部分；
（ｂ）別の遺伝子から転写されるＲＮＡの少なくとも第二の部分に少なくとも部分的に相補的である第二の核酸部分；
（ｃ）（ａ）の第一の核酸部分と少なくとも部分的に相補的であり、それと共に第一の核酸二重鎖領域を形成する第三の核酸部分；
（ｄ）（ｂ）の第二の核酸部分と少なくとも部分的に相補的であり、それと共に第二の核酸二重鎖領域を形成する第四の核酸部分
を含む、核酸コンストラクト（ｍｕＲＮＡ）。
【0114】
ｍｕＲＮＡの特定の実施態様及びそれに関連する更なる態様は、国際公開第２０２０／０６５６０２号に開示されている。
特定の核酸塩基配列は、配列番号：７５１及び７５２のものである。
特定の核酸塩基配列は、配列番号：７５１及び７５２のものである。
【0115】
２．第一の核酸塩基配列に少なくとも部分的に相補的であり、次の配列：表１ｂの配列（配列番号：２５１から５００、７５３及び７５４）、又はそれらの一部から選択される、少なくとも第二の核酸塩基配列を有する連結ヌクレオシドの少なくとも第二の領域を更に含み、前記一部が有利には少なくとも８、９、１０若しくは１１ヌクレオチドの長さを有する、１項に記載のオリゴマー化合物。
特定の核酸塩基配列は配列番号：７５３及び７５４のものである。
３．第一の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号：９４、２４７、１３、１０６、２８、１３５、１３２、３２、８３、１０２、６２、２４１、９、５４、１４３、１０３、１２８、５３、１５０、８２、３６、２５、７１、１７、５、１４１、９０、１２７、７５、９５、７５１、及び７５２の配列、又はそれらの一部から選択される、１項又は２項に記載のオリゴマー化合物。
４．第二の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号：３４４、４９７、２６３、３５６、２７８、３８５、３８２、２８２、３３３、３５２、３１２、４９１、２５９、３０４、３９３、３５３、３７８、３０３、４００、３３２、２８６、２７５、３２１、２６７、２５５、３９１、３４０、３７７、３２５、３４５、７５３及び７５４、又はそれらの一部から選択される、３項に記載のオリゴマー化合物。
５．第一の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号：１３、５３、６２、８３、１０２、１０６、１３５、７５１、及び７５２、又はそれらの一部から選択される、１項から４項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６．第二の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号２６３、３０３、３１２、３３３、３５２、３５６、３８５、７５３及び７５４、又はそれらの一部から選択される、５項に記載のオリゴマー化合物。
７．連結ヌクレオシドの第一の領域が１８から３５、１８から２０、１８若しくは１９、又は１９の連結ヌクレオシドから本質的になる、１項から６項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
８．連結ヌクレオシドの第二の領域が１０から３５、１０から２０、１０から１６、又は１０から１５の連結ヌクレオシド、例えば１１、１２、１３又は１４の連結ヌクレオシドから本質的になり、１４が特に有利である、２項から７項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
９．第二のヌクレオシド領域の少なくとも一部に直接的又は間接的に連結された第一のヌクレオシド領域の少なくとも一部を含む少なくとも一つの相補的二重鎖領域を含み、有利には二重鎖領域が、１０から１９、１２から１９、又は１２から１５の塩基対、１３又は１４の塩基対、又は１４の塩基対の長さを有し、任意選択的に、二重鎖領域内に一つのミスマッチが存在する、２項から８項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
１０．第一のヌクレオシド領域及び第二のヌクレオシド領域のそれぞれが５’から３’への方向性を有し、それによってそれぞれその５’領域及び３’領域を規定する、９項に記載のオリゴマー化合物。
１１．第一のヌクレオシド領域の５’領域が、例えば相補的塩基対形成によって、第二のヌクレオシド領域の３’領域に直接的又は間接的に連結され、有利には第一のヌクレオシド領域の５’末端ヌクレオシドが、第二のヌクレオシド領域の３’末端ヌクレオシドと塩基対形成している、１０項に記載のオリゴマー化合物。
１２．第一のヌクレオシド領域の３’領域が、第二のヌクレオシド領域の５’領域に直接的又は間接的に連結され、有利には、第一のヌクレオシド領域が、例えばリン酸、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエートにより、第二のヌクレオシド領域に直接的かつ共有結合的に連結されている、１１項又は１３項に記載のオリゴマー化合物。
特定の核酸塩基配列は配列番号：７５３及び７５４のものである。
３．第一の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号：９４、２４７、１３、１０６、２８、１３５、１３２、３２、８３、１０２、６２、２４１、９、５４、１４３、１０３、１２８、５３、１５０、８２、３６、２５、７１、１７、５、１４１、９０、１２７、７５、９５、７５１、及び７５２の配列、又はそれらの一部から選択される、１項又は２項に記載のオリゴマー化合物。
４．第二の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号：３４４、４９７、２６３、３５６、２７８、３８５、３８２、２８２、３３３、３５２、３１２、４９１、２５９、３０４、３９３、３５３、３７８、３０３、４００、３３２、２８６、２７５、３２１、２６７、２５５、３９１、３４０、３７７、３２５、３４５、７５３及び７５４、又はそれらの一部から選択される、３項に記載のオリゴマー化合物。
５．第一の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号：１３、５３、６２、８３、１０２、１０６、１３５、７５１、及び７５２、又はそれらの一部から選択される、１項から４項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６．第二の核酸塩基配列が、次の配列：配列番号２６３、３０３、３１２、３３３、３５２、３５６、３８５、７５３及び７５４、又はそれらの一部から選択される、５項に記載のオリゴマー化合物。
７．連結ヌクレオシドの第一の領域が１８から３５、１８から２０、１８若しくは１９、又は１９の連結ヌクレオシドから本質的になる、１項から６項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
８．連結ヌクレオシドの第二の領域が１０から３５、１０から２０、１０から１６、又は１０から１５の連結ヌクレオシド、例えば１１、１２、１３又は１４の連結ヌクレオシドから本質的になり、１４が特に有利である、２項から７項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
９．第二のヌクレオシド領域の少なくとも一部に直接的又は間接的に連結された第一のヌクレオシド領域の少なくとも一部を含む少なくとも一つの相補的二重鎖領域を含み、有利には二重鎖領域が、１０から１９、１２から１９、又は１２から１５の塩基対、１３又は１４の塩基対、又は１４の塩基対の長さを有し、任意選択的に、二重鎖領域内に一つのミスマッチが存在する、２項から８項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
１０．第一のヌクレオシド領域及び第二のヌクレオシド領域のそれぞれが５’から３’への方向性を有し、それによってそれぞれその５’領域及び３’領域を規定する、９項に記載のオリゴマー化合物。
１１．第一のヌクレオシド領域の５’領域が、例えば相補的塩基対形成によって、第二のヌクレオシド領域の３’領域に直接的又は間接的に連結され、有利には第一のヌクレオシド領域の５’末端ヌクレオシドが、第二のヌクレオシド領域の３’末端ヌクレオシドと塩基対形成している、１０項に記載のオリゴマー化合物。
１２．第一のヌクレオシド領域の３’領域が、第二のヌクレオシド領域の５’領域に直接的又は間接的に連結され、有利には、第一のヌクレオシド領域が、例えばリン酸、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエートにより、第二のヌクレオシド領域に直接的かつ共有結合的に連結されている、１１項又は１３項に記載のオリゴマー化合物。
【0116】
これは、互いに直接融合している二つの領域を含むか又はそれらからなる単一オリゴヌクレオチドの形成に相当する。先の実施態様で規定されたような塩基対形成により、そのようなオリゴヌクレオチドはヘアピン構造をとることになる。特にサイズに関して最適化されたヘアピンは、以下の更なる実施態様の主題である。
【0117】
１３．一つ又は複数のリガンドを更に含む、１項から１２項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
１４．一つ又は複数のリガンドが、第二のヌクレオシド領域及び／又は第一のヌクレオシド領域に結合している、１３項に記載のオリゴマー化合物。
１５．一つ又は複数のリガンドが、３’領域で、有利には第二のヌクレオシド領域及び／又は第一のヌクレオシド領域の３’末端に、及び／又は第二のヌクレオシド領域の５’末端に結合している、１０項に従属する、１４項に記載のオリゴマー化合物。
１６．一つ又は複数のリガンドが、細胞膜又は細胞表面上の特定の標的に結合する、脂質、糖、アプタマー、ビタミン及び／又はペプチドなどの任意の細胞指向性部分である、１３項から１５項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
１７．一つ又は複数のリガンドが一つ又は複数の糖を含む、１６項に記載のオリゴマー化合物。
１８．一つ又は複数の糖が、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖又は多糖でありうる、１７項に記載のオリゴマー化合物。
１９．一つ又は複数の糖が、一つ又は複数のヘキソース部分を含むか、又はそれらからなる、１８項に記載のオリゴマー化合物。
２０．一つ又は複数のヘキソース部分が、一つ又は複数のガラクトース部分、一つ又は複数のラクトース部分、一つ又は複数のＮ－アセチル－ガラクトサミン部分、及び／又は一つ又は複数のマンノース部分である、１９項に記載のオリゴマー化合物。
２１．一つ又は複数の糖が一つ又は複数のＮ－アセチル－ガラクトサミン部分を含む、２０項に記載のオリゴマー化合物。
２２．二つ又は三つ、有利には三つのＮ－アセチル－ガラクトサミン部分を含む、２１項に記載のオリゴマー化合物。
２３．一つ又は複数のリガンドが、直鎖状配置又は分岐状配置でオリゴマー化合物に、有利にはその第二のヌクレオシド領域に結合している、１３項から２２項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
１４．一つ又は複数のリガンドが、第二のヌクレオシド領域及び／又は第一のヌクレオシド領域に結合している、１３項に記載のオリゴマー化合物。
１５．一つ又は複数のリガンドが、３’領域で、有利には第二のヌクレオシド領域及び／又は第一のヌクレオシド領域の３’末端に、及び／又は第二のヌクレオシド領域の５’末端に結合している、１０項に従属する、１４項に記載のオリゴマー化合物。
１６．一つ又は複数のリガンドが、細胞膜又は細胞表面上の特定の標的に結合する、脂質、糖、アプタマー、ビタミン及び／又はペプチドなどの任意の細胞指向性部分である、１３項から１５項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
１７．一つ又は複数のリガンドが一つ又は複数の糖を含む、１６項に記載のオリゴマー化合物。
１８．一つ又は複数の糖が、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖又は多糖でありうる、１７項に記載のオリゴマー化合物。
１９．一つ又は複数の糖が、一つ又は複数のヘキソース部分を含むか、又はそれらからなる、１８項に記載のオリゴマー化合物。
２０．一つ又は複数のヘキソース部分が、一つ又は複数のガラクトース部分、一つ又は複数のラクトース部分、一つ又は複数のＮ－アセチル－ガラクトサミン部分、及び／又は一つ又は複数のマンノース部分である、１９項に記載のオリゴマー化合物。
２１．一つ又は複数の糖が一つ又は複数のＮ－アセチル－ガラクトサミン部分を含む、２０項に記載のオリゴマー化合物。
２２．二つ又は三つ、有利には三つのＮ－アセチル－ガラクトサミン部分を含む、２１項に記載のオリゴマー化合物。
２３．一つ又は複数のリガンドが、直鎖状配置又は分岐状配置でオリゴマー化合物に、有利にはその第二のヌクレオシド領域に結合している、１３項から２２項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
【0118】
特定のリガンドは次の通りであり、「歯ブラシ（ｔｏｏｔｈｂｒｕｓｈ）」とも呼ばれる：
２４．一つ又は複数のリガンドが、二分岐又は三分岐配置としてオリゴマー化合物に結合している、２３項に記載のオリゴマー化合物。
２５．連結ヌクレオシドの第一の領域と連結ヌクレオシドの第二の領域とからなる、１項から２４項の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
２５．連結ヌクレオシドの第一の領域と連結ヌクレオシドの第二の領域とからなる、１項から２４項の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
【0119】
領域の各々が別個の鎖を構成し、それによって二重鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が生じうる。特に有利なｄｓＲＮＡは、１９ヌクレオシドの第一鎖の長さと１４又は１５、有利には１４ヌクレオシドの第二の領域の長さを有するものである。領域又は鎖の長さを定義するために使用される場合、「ヌクレオシド」及び「ヌクレオチド」（「ｎｔ」と略されることもある）という用語は同等に使用される。
或いは、上で述べたように、二つの領域を融合させてヘアピンを生じさせることもできる。
或いは、上で述べたように、二つの領域を融合させてヘアピンを生じさせることもできる。
【0120】
２６．第一の領域と第二の領域の間に、連結ヌクレオシドの介在する第三の領域が存在する、１項から２４項の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
２７．第一のヌクレオシド領域、第三のヌクレオシド領域、及び第二のヌクレオシド領域を含むか、又はそれらからなる一本鎖を含むか、又はそれらからなり、一本鎖が二量体化し、それにより、第一のヌクレオシド領域の少なくとも一部が、少なくとも部分的に相補的な二重鎖領域を形成するように、第二のヌクレオシド領域の少なくとも一部に直接的又は間接的に連結される、２６項に記載のオリゴマー化合物。
２７．第一のヌクレオシド領域、第三のヌクレオシド領域、及び第二のヌクレオシド領域を含むか、又はそれらからなる一本鎖を含むか、又はそれらからなり、一本鎖が二量体化し、それにより、第一のヌクレオシド領域の少なくとも一部が、少なくとも部分的に相補的な二重鎖領域を形成するように、第二のヌクレオシド領域の少なくとも一部に直接的又は間接的に連結される、２６項に記載のオリゴマー化合物。
【0121】
換言すれば、オリゴマー化合物は、第一のヌクレオシド領域及び第二のヌクレオシド領域を含む一本鎖を含み、第一のヌクレオシド領域の少なくとも一部が、少なくとも部分的に相補的な二重鎖領域を形成するように、第二のヌクレオシド領域の少なくとも一部に直接的又は間接的に連結される。上で述べたように、第三の領域は任意選択的である。
【0122】
２８．第一のヌクレオシド領域及び第二のヌクレオシド領域を含むか、又はそれらからなる一本鎖を含むか、又はそれらからなり、一本鎖が二量体化し、それにより、第一のヌクレオシド領域の少なくとも一部が、少なくとも部分的に相補的な二重鎖領域を形成するように、第二のヌクレオシド領域の少なくとも一部に直接的又は間接的に連結される、９項から２５項の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
２９．第一のヌクレオシド領域及び第二のヌクレオシド領域が一本鎖上で直接隣接している、２８項に記載のオリゴマー化合物。
３０．第一のヌクレオシド領域が、第二のヌクレオシド領域と比較してより多数の連結ヌクレオシドを有する、２８項又は２９項に記載のオリゴマー化合物。
３１．第一のヌクレオシド領域の追加数の連結ヌクレオシドが、第一のヌクレオシド領域及び第二のヌクレオシド領域を連結するヘアピンループを形成する、２９項に記載のオリゴマー化合物。
２９．第一のヌクレオシド領域及び第二のヌクレオシド領域が一本鎖上で直接隣接している、２８項に記載のオリゴマー化合物。
３０．第一のヌクレオシド領域が、第二のヌクレオシド領域と比較してより多数の連結ヌクレオシドを有する、２８項又は２９項に記載のオリゴマー化合物。
３１．第一のヌクレオシド領域の追加数の連結ヌクレオシドが、第一のヌクレオシド領域及び第二のヌクレオシド領域を連結するヘアピンループを形成する、２９項に記載のオリゴマー化合物。
【0123】
そのような化合物は、ここではヘアピン又はｍｘＲＮＡとも呼ばれる。第二の領域は第一の領域に比べて短いため、同程度の長さの二つの領域を有する従来のｓｉＲＮＡと比較して、化合物はサイズの点で最適化（又は小型化）される。
【0124】
有利には、ループは４つ又は５つの連結ヌクレオシドを有する。特に有利なのは、第一の領域の長さが１９ヌクレオシド、第二の領域の長さが１４ヌクレオチド、及びヘアピンループの長さが５ヌクレオチドであり、ヘアピン内の５ヌクレオチドが第一の領域の５つの３’末端ヌクレオシドである。ヘアピン又はｍｘＲＮＡのそのような分子構造は、ここでは「１４－５－１４」とも呼ばれる。
【0125】
３２．一本鎖が、配列番号：７５１及び７５２から選択される核酸塩基配列を有し、有利には、一本鎖が、配列番号：７５３及び７５４から選択される追加の核酸塩基配列を有する、２７項から３１項の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
３３．一本鎖が、表３から、特に配列「１３（５）ａ＋ｓ」及び「１０６－１３（４）ａｓ＋ｓ」から、又は表４から選択される、３２項に記載のオリゴマー化合物。
３４．ヘアピンループが、第一のヌクレオシド領域の３’領域に存在し、任意選択的に、一つ又は二つ以上の３’末端ヌクレオチドの核酸塩基が許容する程度まで該一つ又は二つ以上の３’末端ヌクレオチドが、第二のヌクレオシド領域を折り畳んで第二のヌクレオシド領域を形成し若しくは第二のヌクレオシド領域に寄与する、１０項に従属する、３３項に記載のオリゴマー化合物。
３３．一本鎖が、表３から、特に配列「１３（５）ａ＋ｓ」及び「１０６－１３（４）ａｓ＋ｓ」から、又は表４から選択される、３２項に記載のオリゴマー化合物。
３４．ヘアピンループが、第一のヌクレオシド領域の３’領域に存在し、任意選択的に、一つ又は二つ以上の３’末端ヌクレオチドの核酸塩基が許容する程度まで該一つ又は二つ以上の３’末端ヌクレオチドが、第二のヌクレオシド領域を折り畳んで第二のヌクレオシド領域を形成し若しくは第二のヌクレオシド領域に寄与する、１０項に従属する、３３項に記載のオリゴマー化合物。
【0126】
これは「スピルオーバー」とも呼ばれる構造デザインである。これは、二重鎖に含まれるガイド配列の領域の３’末端の核酸塩基と、同じガイド配列のまさに３’末端の核酸塩基との間に自己相補性がある場合にのみ可能である。例えば、これを１３－５－１３デザインとして実行することで、更なる小型化が可能になる。第一の「１３」は二重鎖に含まれるガイド配列の領域を指し、５はガイド配列によってまた形成されるループの長さであり、第二の１３は二重鎖の第二の領域を指し、ガイド配列の一つの核酸塩基とパッセンジャー領域の１２の核酸塩基によって５’から３’方向に形成される。而して、１９ヌクレオチドのガイド配列の長さは維持されるが、パッセンジャー配列は１２ヌクレオチドに短縮される。
【0127】
更なる例は、以下でより詳細に検討されるように、コンストラクト１０６－１３（４）によって実行される１３－４－１３デザインである。
【0128】
３５．第三のヌクレオシド領域と任意選択的に第一のヌクレオシド領域の、有利には１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０の連結ヌクレオシドからなる、３’末端部分、及び／又は第二のヌクレオシド領域の、有利には１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０の連結ヌクレオシドからなる、５'末端部分が、ヘアピンを形成する、２６項又は２７項に記載のオリゴマー化合物。
３６．ヘアピンループが、４から１０、有利には４又は５の連結ヌクレオシドを含む、２９項から３１項の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
３７．表２に示される配列（配列番号：５０１から７５０、７５５又は７５６）の何れか一つの核酸塩基配列を有するか又は含む、２９項から３４項の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
３８．ヌクレオシド間結合を含み、少なくとも一つのヌクレオシド間結合が修飾ヌクレオシド間結合である、１項から３７項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
３９．修飾ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合である、３８項に記載のオリゴマー化合物。
３６．ヘアピンループが、４から１０、有利には４又は５の連結ヌクレオシドを含む、２９項から３１項の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
３７．表２に示される配列（配列番号：５０１から７５０、７５５又は７５６）の何れか一つの核酸塩基配列を有するか又は含む、２９項から３４項の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
３８．ヌクレオシド間結合を含み、少なくとも一つのヌクレオシド間結合が修飾ヌクレオシド間結合である、１項から３７項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
３９．修飾ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合である、３８項に記載のオリゴマー化合物。
【0129】
特定の修飾ヌクレオシド間結合は、続く特定の実施態様の主題である。所定の修飾ヌクレオシド間結合は当該技術分野で知られており、例えば、Ｈｕ等，Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０２０）５：１０１に記載されている。
【0130】
４０．１から１５のホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、３９項に記載のオリゴマー化合物。
４１．７、８、９又は１０のホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、４０項に記載のオリゴマー化合物。
４２．第一のヌクレオシド領域の５’領域に一つ又は複数のホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、１０項に従属する、３９項から４１項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
４３．第二のヌクレオシド領域の５’領域に一つ又は複数のホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、１０項に従属する、３９項から４２項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
４４．ヘアピンループ内に存在するヌクレオチドの数に依存して、ヘアピンループの少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、又は少なくとも５つの隣接ヌクレオシド間にホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、３１項から３３項の何れか一項に従属する、３９項から４３項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
４５．ヘアピンループ内に存在する各隣接ヌクレオシド間にホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、４４項に記載のオリゴマー化合物。
４６．少なくとも一つのヌクレオシドが修飾糖を含む、１項から４５項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
４１．７、８、９又は１０のホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、４０項に記載のオリゴマー化合物。
４２．第一のヌクレオシド領域の５’領域に一つ又は複数のホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、１０項に従属する、３９項から４１項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
４３．第二のヌクレオシド領域の５’領域に一つ又は複数のホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、１０項に従属する、３９項から４２項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
４４．ヘアピンループ内に存在するヌクレオチドの数に依存して、ヘアピンループの少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、又は少なくとも５つの隣接ヌクレオシド間にホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、３１項から３３項の何れか一項に従属する、３９項から４３項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
４５．ヘアピンループ内に存在する各隣接ヌクレオシド間にホスホロチオエート又はホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含む、４４項に記載のオリゴマー化合物。
４６．少なくとも一つのヌクレオシドが修飾糖を含む、１項から４５項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
【0131】
特定の修飾糖は、続く特定の実施態様の主題である。所定の修飾糖は当該技術分野で知られており、例えば、Ｈｕ等，Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０２０）５：１０１に記載されている。
【0132】
４７．修飾糖が、２’修飾糖；ロックド核酸（ＬＮＡ）糖、（Ｓ）拘束エチル二環式核酸、及び拘束エチル（ｃＥｔ）糖などの立体構造的に制限されたヌクレオチド（ＣＲＮ）糖、トリシクロＤＮＡ、モルホリノ、非ロック核酸（ＵＮＡ）糖、グリコール核酸（ＧＮＡ）、Ｄ－ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、及びシクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）から選択される、４６項に記載のオリゴマー化合物。
４８．２’修飾糖が、２’－Ｏ－アルキル修飾糖、２’－Ｏ－メチル修飾糖、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾糖、２’－Ｏ－アリル修飾糖、２’－Ｃ－アリル修飾糖、２’－デオキシ修飾糖、例えば、２’－デオキシリボース、２’－Ｆ修飾糖、２’－アラビノ－フルオロ修飾糖、２’－Ｏ－ベンジル修飾糖、及び２’－Ｏ－メチル－４－ピリジン修飾糖から選択される、４７項に記載のオリゴマー化合物。
４９．少なくとも一つの修飾糖が２’－Ｏ－メチル修飾糖である、４８項に記載のオリゴマー化合物。
５０．少なくとも一つの修飾糖が２’－Ｆ修飾糖であり、任意選択的に最大５つの糖が２’－Ｆ修飾糖である、４８項又は４９項に記載のオリゴマー化合物。
５１．糖がリボースである、４９項又は５０項に記載のオリゴマー化合物。
５２．第一のヌクレオシド領域の５’領域の第一のヌクレオシドから下流の２位及び１４位の何れかのヌクレオシドの糖が、２’－Ｏ－メチル修飾を含まない、１０項に従属する、４９項から５１項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
５３．第一のヌクレオシド領域の５’領域の第一のヌクレオチドから下流の９位から１１位の何れかの第一のヌクレオシド領域のヌクレオシドの何れかと位置が対応する、第二のヌクレオシド領域のヌクレオシドの糖が２’－Ｏ－メチル修飾を含まない、１０項に従属する、４９項から５２項の何れかに記載のオリゴマー化合物。９位から１１位は、２、１又は０の２’－Ｏ－メチル置換を含みうる。
５４．第二のヌクレオシド領域の３’末端位置が２’－Ｏ－メチル修飾を含まない、４９項から５３項の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
５５．第一のヌクレオシド領域の５’領域の第一のヌクレオチドから下流の２位及び１４位の何れかのヌクレオシドの糖が、２’－Ｆ修飾を含む、５３項又は５４項に記載のオリゴマー化合物。
５６．第一のヌクレオシド領域の５’領域の第一のヌクレオチドから下流の９位から１１位の何れかの第一のヌクレオシド領域のヌクレオシドの何れかと位置が対応する、第二のヌクレオシド領域のヌクレオシドの糖が、２’－Ｆ修飾を含む、５３項から５５項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
５７．第二のヌクレオシド領域の３’末端位置が、２’－Ｆ修飾を含む、５５項又は５６項に記載のオリゴマー化合物。
５８．第一のヌクレオシド領域の５’領域から始まる奇数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が修飾され、及び／又は第一のヌクレオシド領域の５’領域から始まる偶数番目のヌクレオチドの一つ又は複数が修飾され、典型的には、偶数番目のヌクレオチドの修飾が、奇数番目のヌクレオチドの修飾とは異なる第二の修飾である、１０項に従属する、５３項から５７項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
５９．第二のヌクレオシド領域の３’領域から始まる奇数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が、第一のヌクレオシド領域の奇数番目のヌクレオシドの修飾とは異なる修飾によって修飾されている、５８項に記載のオリゴマー化合物。
６０．第二のヌクレオシド領域の３’領域から始まる偶数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が、５２項に記載の第一のヌクレオシド領域の偶数番目のヌクレオシドの修飾とは異なる修飾によって修飾されている、５８項又は５９項に記載のオリゴマー化合物。
６１．第一のヌクレオシド領域の修飾された偶数番目のヌクレオシドの少なくとも一つ又は複数が、第一のヌクレオシド領域の異なって修飾された奇数番目のヌクレオシドの少なくとも一つ又は複数に隣接する、５８項から６０項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６２．第二のヌクレオシド領域の修飾された偶数番目のヌクレオシドの少なくとも一つ又は複数が、第二のヌクレオシド領域の異なって修飾された奇数番目のヌクレオシドの少なくとも一つ又は複数に隣接する、５８項から６１項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６３．第一のヌクレオシド領域の５’領域から始まる奇数番目のヌクレオシドの一つ又は複数の糖が２’－Ｏ－メチル修飾糖である、５８項から６２項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６４．第一のヌクレオシド領域の５’領域から始まる偶数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が２’－Ｆ修飾糖である、５８項から６３項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６５．第二のヌクレオシド領域の３’領域から始まる奇数番目のヌクレオシドの一つ又は複数の糖が２’－Ｆ修飾糖である、５８項から６４項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６６．第二のヌクレオシド領域の３’領域から始まる偶数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が２’－Ｏ－メチル修飾糖である、５８項から６５項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６７．第一のヌクレオシド領域の複数の隣接ヌクレオシドの糖が共通の修飾によって修飾されている、４６項から６６項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６８．第二のヌクレオシド領域の複数の隣接ヌクレオシドの糖が共通の修飾によって修飾されている、４６項から６７項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６９．ヘアピンループの複数の隣接ヌクレオシドの糖が共通の修飾によって修飾されている、３０項から３３項の何れか一項に従属する、５８項から６８項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
７０．共通の修飾が２’－Ｆ修飾糖である、６７項から６９項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
７１．共通の修飾が２’－Ｏ－メチル修飾糖である、６７項から６９項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
７２．複数の隣接２’－Ｏ－メチル修飾糖が、第一のヌクレオシド領域及び／又は第二のヌクレオシド領域の少なくとも８つの隣接ヌクレオシドに存在する、７１項に記載のオリゴマー化合物。
７３．複数の隣接２’－Ｏ－メチル修飾糖が、ヘアピンループの３つ又は４つの隣接ヌクレオシドに存在する、７１項に記載のオリゴマー化合物。
７４．ヘアピンループが、修飾糖を有する少なくとも一つのヌクレオシドを含む、３０項から３３項の何れか一項に従属する、４６項に記載のオリゴマー化合物。
７５．前記少なくとも一つのヌクレオシドが、異なる修飾糖を有するヌクレオシドに隣接している、７４項に記載のオリゴマー化合物。
７６．修飾糖が２’－Ｏ－メチル修飾糖であり、前記異なる修飾糖が２’－Ｆ修飾糖である、７５項に記載のオリゴマー化合物。
７７．未修飾糖部分を有する一つ又は複数のヌクレオシドを含む、１項から７６項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
７８．未修飾糖が第二のヌクレオシド領域の５’領域に存在する、７７項に記載のオリゴマー化合物。
７９．未修飾糖がヘアピンループ内に存在する、３１項から３６項の何れか一項に従属する、７７項又は７８項に記載のオリゴマー化合物。
８０．第一のヌクレオシド領域及び／若しくは第二のヌクレオシド領域の一つ又は複数のヌクレオシドが逆位ヌクレオシドであり、その糖の３’炭素と隣接ヌクレオシドの糖の３’炭素を介して隣接ヌクレオシドに結合し、並びに／又は第一のヌクレオシド領域及び／若しくは第二のヌクレオシド領域の一つ又は複数のヌクレオシドが逆位ヌクレオシドであり、その糖の５’炭素と隣接ヌクレオシドの糖の５’炭素を介して隣接ヌクレオシドに結合している、１項から７９項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
８１．平滑末端である、１項から８０項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
８２．第一のヌクレオシド領域又は第二のヌクレオシド領域の何れかがオーバーハングを有する、１項から８０項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
８３．オリゴマー化合物が、表３に記載の化合物から選択される、３７項から８２項の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
８４．１項から８０項の何れかに記載のオリゴマー化合物と、生理学的に許容される添加物とを含む組成物。
８５．１項から８３項の何れかに記載のオリゴマー化合物を含む薬学的組成物。
８６．薬学的に許容される添加物、希釈剤、抗酸化剤、及び／又は保存料を更に含む、８５項に記載の薬学的組成物。
８７．オリゴマー化合物が唯一の薬学的活性剤である、８５項又は８６項に記載の薬学的組成物。
８８．薬学的組成物が一又は複数種の更なる薬学的活性剤を更に含む、８５項又は８６項に記載の薬学的組成物。
８９．更なる薬学的活性剤が、自然免疫系及び／若しくは適応免疫系を調節する薬剤、例えば、ＣＦＢとは異なる免疫系標的、有利にはインターロイキン－６に向けられている更なるオリゴマー化合物；インターロイキン－６の発現若しくはレベルを低下させる薬剤；又は補体成分を標的とする抗体などの薬剤、例えばエクリズマブである、８８項に記載の薬学的組成物。
９０．オリゴマー化合物と更なる薬学的活性剤が、同時に又は任意の順序で投与される、８８項又は８９項に記載の薬学的組成物。
９１．ヒト又は動物用医薬又は治療に使用するための、１項から８３項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
９２．疾患又は障害を治療、改善及び／又は予防する方法において使用するための、１項から８３項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
９３．疾患又は障害が、補体成分関連疾患若しくは障害、又はＣＦＢ発現レベルの低下を必要とする疾患若しくは障害である、９２項の使用のための化合物。
９４．疾患又は障害が、自己免疫疾患、ＣＦＢなどの補体成分の異常な上方制御を含む補体系機能不全、ドライ型ＡＭＤ及び地図状萎縮を含む加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、ＩｇＡ腎症及び原発性膜性腎症などのＩｇ媒介腎臓病変、喘息、リウマチ性疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）血管炎、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、糸球体腎炎、乾癬、皮膚筋炎水疱性類天疱瘡、志賀毒素大腸菌関連溶血性尿毒症症候群、重症筋無力症（ＭＧ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、デンスデポジット病、Ｃ３神経障害、寒冷凝集素病、体液性及び血管性移植拒絶、移植片機能不全、心筋梗塞、移植に対する感作、並びに敗血症から選択される、９３項の使用のための化合物。
９５．疾患又は障害が、ドライ型ＡＭＤ及び地図状萎縮を含む加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、並びにＣ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）から選択される、９３項又は９４項の使用のための化合物。
９６．治療を必要とする個体に、１項から８３項の何れかに記載のオリゴマー化合物を投与することを含む、疾患又は障害を治療する方法。
９７．オリゴマー化合物が個体に皮下又は静脈内投与される、９６項に記載の方法。
９８．遺伝子機能解析ツールとして研究に使用するための、１項から８３項の何れかに記載のオリゴマー化合物の使用。
９９．疾患又は障害の治療のための医薬の製造における、１項から８３項の何れかに記載のオリゴマー化合物の使用。疾患及び障害は、上記の９１項に記載されているものと同じであってもよい。
４８．２’修飾糖が、２’－Ｏ－アルキル修飾糖、２’－Ｏ－メチル修飾糖、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾糖、２’－Ｏ－アリル修飾糖、２’－Ｃ－アリル修飾糖、２’－デオキシ修飾糖、例えば、２’－デオキシリボース、２’－Ｆ修飾糖、２’－アラビノ－フルオロ修飾糖、２’－Ｏ－ベンジル修飾糖、及び２’－Ｏ－メチル－４－ピリジン修飾糖から選択される、４７項に記載のオリゴマー化合物。
４９．少なくとも一つの修飾糖が２’－Ｏ－メチル修飾糖である、４８項に記載のオリゴマー化合物。
５０．少なくとも一つの修飾糖が２’－Ｆ修飾糖であり、任意選択的に最大５つの糖が２’－Ｆ修飾糖である、４８項又は４９項に記載のオリゴマー化合物。
５１．糖がリボースである、４９項又は５０項に記載のオリゴマー化合物。
５２．第一のヌクレオシド領域の５’領域の第一のヌクレオシドから下流の２位及び１４位の何れかのヌクレオシドの糖が、２’－Ｏ－メチル修飾を含まない、１０項に従属する、４９項から５１項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
５３．第一のヌクレオシド領域の５’領域の第一のヌクレオチドから下流の９位から１１位の何れかの第一のヌクレオシド領域のヌクレオシドの何れかと位置が対応する、第二のヌクレオシド領域のヌクレオシドの糖が２’－Ｏ－メチル修飾を含まない、１０項に従属する、４９項から５２項の何れかに記載のオリゴマー化合物。９位から１１位は、２、１又は０の２’－Ｏ－メチル置換を含みうる。
５４．第二のヌクレオシド領域の３’末端位置が２’－Ｏ－メチル修飾を含まない、４９項から５３項の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
５５．第一のヌクレオシド領域の５’領域の第一のヌクレオチドから下流の２位及び１４位の何れかのヌクレオシドの糖が、２’－Ｆ修飾を含む、５３項又は５４項に記載のオリゴマー化合物。
５６．第一のヌクレオシド領域の５’領域の第一のヌクレオチドから下流の９位から１１位の何れかの第一のヌクレオシド領域のヌクレオシドの何れかと位置が対応する、第二のヌクレオシド領域のヌクレオシドの糖が、２’－Ｆ修飾を含む、５３項から５５項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
５７．第二のヌクレオシド領域の３’末端位置が、２’－Ｆ修飾を含む、５５項又は５６項に記載のオリゴマー化合物。
５８．第一のヌクレオシド領域の５’領域から始まる奇数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が修飾され、及び／又は第一のヌクレオシド領域の５’領域から始まる偶数番目のヌクレオチドの一つ又は複数が修飾され、典型的には、偶数番目のヌクレオチドの修飾が、奇数番目のヌクレオチドの修飾とは異なる第二の修飾である、１０項に従属する、５３項から５７項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
５９．第二のヌクレオシド領域の３’領域から始まる奇数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が、第一のヌクレオシド領域の奇数番目のヌクレオシドの修飾とは異なる修飾によって修飾されている、５８項に記載のオリゴマー化合物。
６０．第二のヌクレオシド領域の３’領域から始まる偶数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が、５２項に記載の第一のヌクレオシド領域の偶数番目のヌクレオシドの修飾とは異なる修飾によって修飾されている、５８項又は５９項に記載のオリゴマー化合物。
６１．第一のヌクレオシド領域の修飾された偶数番目のヌクレオシドの少なくとも一つ又は複数が、第一のヌクレオシド領域の異なって修飾された奇数番目のヌクレオシドの少なくとも一つ又は複数に隣接する、５８項から６０項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６２．第二のヌクレオシド領域の修飾された偶数番目のヌクレオシドの少なくとも一つ又は複数が、第二のヌクレオシド領域の異なって修飾された奇数番目のヌクレオシドの少なくとも一つ又は複数に隣接する、５８項から６１項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６３．第一のヌクレオシド領域の５’領域から始まる奇数番目のヌクレオシドの一つ又は複数の糖が２’－Ｏ－メチル修飾糖である、５８項から６２項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６４．第一のヌクレオシド領域の５’領域から始まる偶数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が２’－Ｆ修飾糖である、５８項から６３項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６５．第二のヌクレオシド領域の３’領域から始まる奇数番目のヌクレオシドの一つ又は複数の糖が２’－Ｆ修飾糖である、５８項から６４項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６６．第二のヌクレオシド領域の３’領域から始まる偶数番目のヌクレオシドの一つ又は複数が２’－Ｏ－メチル修飾糖である、５８項から６５項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６７．第一のヌクレオシド領域の複数の隣接ヌクレオシドの糖が共通の修飾によって修飾されている、４６項から６６項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６８．第二のヌクレオシド領域の複数の隣接ヌクレオシドの糖が共通の修飾によって修飾されている、４６項から６７項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
６９．ヘアピンループの複数の隣接ヌクレオシドの糖が共通の修飾によって修飾されている、３０項から３３項の何れか一項に従属する、５８項から６８項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
７０．共通の修飾が２’－Ｆ修飾糖である、６７項から６９項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
７１．共通の修飾が２’－Ｏ－メチル修飾糖である、６７項から６９項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
７２．複数の隣接２’－Ｏ－メチル修飾糖が、第一のヌクレオシド領域及び／又は第二のヌクレオシド領域の少なくとも８つの隣接ヌクレオシドに存在する、７１項に記載のオリゴマー化合物。
７３．複数の隣接２’－Ｏ－メチル修飾糖が、ヘアピンループの３つ又は４つの隣接ヌクレオシドに存在する、７１項に記載のオリゴマー化合物。
７４．ヘアピンループが、修飾糖を有する少なくとも一つのヌクレオシドを含む、３０項から３３項の何れか一項に従属する、４６項に記載のオリゴマー化合物。
７５．前記少なくとも一つのヌクレオシドが、異なる修飾糖を有するヌクレオシドに隣接している、７４項に記載のオリゴマー化合物。
７６．修飾糖が２’－Ｏ－メチル修飾糖であり、前記異なる修飾糖が２’－Ｆ修飾糖である、７５項に記載のオリゴマー化合物。
７７．未修飾糖部分を有する一つ又は複数のヌクレオシドを含む、１項から７６項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
７８．未修飾糖が第二のヌクレオシド領域の５’領域に存在する、７７項に記載のオリゴマー化合物。
７９．未修飾糖がヘアピンループ内に存在する、３１項から３６項の何れか一項に従属する、７７項又は７８項に記載のオリゴマー化合物。
８０．第一のヌクレオシド領域及び／若しくは第二のヌクレオシド領域の一つ又は複数のヌクレオシドが逆位ヌクレオシドであり、その糖の３’炭素と隣接ヌクレオシドの糖の３’炭素を介して隣接ヌクレオシドに結合し、並びに／又は第一のヌクレオシド領域及び／若しくは第二のヌクレオシド領域の一つ又は複数のヌクレオシドが逆位ヌクレオシドであり、その糖の５’炭素と隣接ヌクレオシドの糖の５’炭素を介して隣接ヌクレオシドに結合している、１項から７９項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
８１．平滑末端である、１項から８０項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
８２．第一のヌクレオシド領域又は第二のヌクレオシド領域の何れかがオーバーハングを有する、１項から８０項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
８３．オリゴマー化合物が、表３に記載の化合物から選択される、３７項から８２項の何れか一項に記載のオリゴマー化合物。
８４．１項から８０項の何れかに記載のオリゴマー化合物と、生理学的に許容される添加物とを含む組成物。
８５．１項から８３項の何れかに記載のオリゴマー化合物を含む薬学的組成物。
８６．薬学的に許容される添加物、希釈剤、抗酸化剤、及び／又は保存料を更に含む、８５項に記載の薬学的組成物。
８７．オリゴマー化合物が唯一の薬学的活性剤である、８５項又は８６項に記載の薬学的組成物。
８８．薬学的組成物が一又は複数種の更なる薬学的活性剤を更に含む、８５項又は８６項に記載の薬学的組成物。
８９．更なる薬学的活性剤が、自然免疫系及び／若しくは適応免疫系を調節する薬剤、例えば、ＣＦＢとは異なる免疫系標的、有利にはインターロイキン－６に向けられている更なるオリゴマー化合物；インターロイキン－６の発現若しくはレベルを低下させる薬剤；又は補体成分を標的とする抗体などの薬剤、例えばエクリズマブである、８８項に記載の薬学的組成物。
９０．オリゴマー化合物と更なる薬学的活性剤が、同時に又は任意の順序で投与される、８８項又は８９項に記載の薬学的組成物。
９１．ヒト又は動物用医薬又は治療に使用するための、１項から８３項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
９２．疾患又は障害を治療、改善及び／又は予防する方法において使用するための、１項から８３項の何れかに記載のオリゴマー化合物。
９３．疾患又は障害が、補体成分関連疾患若しくは障害、又はＣＦＢ発現レベルの低下を必要とする疾患若しくは障害である、９２項の使用のための化合物。
９４．疾患又は障害が、自己免疫疾患、ＣＦＢなどの補体成分の異常な上方制御を含む補体系機能不全、ドライ型ＡＭＤ及び地図状萎縮を含む加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、ＩｇＡ腎症及び原発性膜性腎症などのＩｇ媒介腎臓病変、喘息、リウマチ性疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）血管炎、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、糸球体腎炎、乾癬、皮膚筋炎水疱性類天疱瘡、志賀毒素大腸菌関連溶血性尿毒症症候群、重症筋無力症（ＭＧ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、デンスデポジット病、Ｃ３神経障害、寒冷凝集素病、体液性及び血管性移植拒絶、移植片機能不全、心筋梗塞、移植に対する感作、並びに敗血症から選択される、９３項の使用のための化合物。
９５．疾患又は障害が、ドライ型ＡＭＤ及び地図状萎縮を含む加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、並びにＣ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）から選択される、９３項又は９４項の使用のための化合物。
９６．治療を必要とする個体に、１項から８３項の何れかに記載のオリゴマー化合物を投与することを含む、疾患又は障害を治療する方法。
９７．オリゴマー化合物が個体に皮下又は静脈内投与される、９６項に記載の方法。
９８．遺伝子機能解析ツールとして研究に使用するための、１項から８３項の何れかに記載のオリゴマー化合物の使用。
９９．疾患又は障害の治療のための医薬の製造における、１項から８３項の何れかに記載のオリゴマー化合物の使用。疾患及び障害は、上記の９１項に記載されているものと同じであってもよい。
【0133】
［オリゴマー化合物によって達成される効果］
ここに記載のオリゴマー化合物は、例えばここに開示される実施例に示されているように、例えば、インビトロで、補体因子Ｂの遺伝子発現の有意な低下を引き起こす。加えて、例えば実施例に示すような非ヒト霊長類の血漿中のＢｂレベルの有意な低下を、哺乳動物におけるＲＮＡｉの成功を示すここに記載のオリゴマーコンストラクトを使用することによって達成することができる。特に、これらの効果は、例えば非ヒト霊長類では、１３週間などの長期間にわたって持続する場合がある。特に、その切断産物Ｂｂを介して定量されるＣＦＢレベルは、本発明のオリゴマーコンストラクトを使用することによって、例えば最大７４％まで、大幅に低下させることができる。
ここに記載のオリゴマー化合物は、例えばここに開示される実施例に示されているように、例えば、インビトロで、補体因子Ｂの遺伝子発現の有意な低下を引き起こす。加えて、例えば実施例に示すような非ヒト霊長類の血漿中のＢｂレベルの有意な低下を、哺乳動物におけるＲＮＡｉの成功を示すここに記載のオリゴマーコンストラクトを使用することによって達成することができる。特に、これらの効果は、例えば非ヒト霊長類では、１３週間などの長期間にわたって持続する場合がある。特に、その切断産物Ｂｂを介して定量されるＣＦＢレベルは、本発明のオリゴマーコンストラクトを使用することによって、例えば最大７４％まで、大幅に低下させることができる。
【0134】
更に、驚くべきことに、所定の実施態様において、述べられた効果は、より長い長さを有する従来のｓｈＲＮＡ分子と比較して、例えば３０又は３３ヌクレオシドの低減された長さを有するｓｈＲＮＡコンストラクトの形態のここに記載されるオリゴマー化合物を使用することによって達成されることが見出された。これは、例えば、必要とされる単位が少ないため、ｓｈＲＮＡ分子の合成をより効率的にしうる。
【0135】
前述の効果は、哺乳動物において、特に限定されないが、ここの実施例に示されるような非ヒト霊長類に対して、約１ｍｇ／ｋｇ体重から約１０ｍｇ／ｋｇ体重以上の投薬量の本発明のオリゴマー化合物を使用することによって達成することができる。
【0136】
特に、前述の効果は、哺乳動物において、特に限定されないが、ここの実施例に示されるような非ヒト霊長類に対して、約１から約３ｍｇ／ｋｇ体重以上の投薬量を使用して一又は一より多い、例えば３用量で得られた。
【0137】
また、驚くべきことに、所定の実施態様では、従来のｓｈＲＮＡ分子と比較してそのリボース単位のそれぞれの２’位に、合計で５のフッ素置換など、少ない数のフッ素置換を有するｓｈＲＮＡコンストラクトの形態のここに記載のオリゴマー化合物を使用することによって、前述の有益な効果を達成できることがまた見出された。
【0138】
ｓｈＲＮＡコンストラクトの形態であるここに記載の所定のオリゴマー化合物については、驚くべきことに、従来のｓｈＲＮＡ分子のセンス鎖の長さより短い１１又は１４ヌクレオシドの長さを任意選択的に有するｓｈＲＮＡ内の短センス鎖を使用することによって、前述の効果を達成できることが見出された。
【0139】
［本発明のオリゴマー化合物のコンストラクト］
次の表は、ここに記載されるオリゴマー化合物のアンチセンス鎖及びセンス鎖の核酸塩基配列、並びに一本鎖オリゴマー化合物の核酸塩基配列、及び修飾オリゴマー化合物の定義（表記には、核酸塩基配列、糖修飾、及び該当する場合には修飾リン酸が含まれる）を示す。
次の表は、ここに記載されるオリゴマー化合物のアンチセンス鎖及びセンス鎖の核酸塩基配列、並びに一本鎖オリゴマー化合物の核酸塩基配列、及び修飾オリゴマー化合物の定義（表記には、核酸塩基配列、糖修飾、及び該当する場合には修飾リン酸が含まれる）を示す。
【0140】
使用される表記は当該技術分野で共通であり、次の意味を持つ：
Ａはアデニンを表し；
Ｕはウラシルを表し；
Ｃはシトシンを表し；
Ｇはグアニンを表す。
Ｐは、有利ではあるが必須ではない末端リン酸基を表し；
ｍは、基礎となるヌクレオシドの糖の２’位のメチル修飾を表し；
ｆは、基礎となるヌクレオシドの糖の２’位のフルオロ修飾を表す。
ｒは未修飾（２’－ＯＨ）リボヌクレオチドを示し；
（ｐｓ）又は＃はホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し；
ｉは、３’－３’又は５’－５’の何れかでありうる逆位ヌクレオシド間結合を表し；
ｖｐはビニルホスホネートを表し；
ｍｖｐはメチルビニルホスホネートを表し；
３×ＧａｌＮＡｃは３価ＧａｌＮＡｃを表す。
Ａはアデニンを表し；
Ｕはウラシルを表し；
Ｃはシトシンを表し；
Ｇはグアニンを表す。
Ｐは、有利ではあるが必須ではない末端リン酸基を表し；
ｍは、基礎となるヌクレオシドの糖の２’位のメチル修飾を表し；
ｆは、基礎となるヌクレオシドの糖の２’位のフルオロ修飾を表す。
ｒは未修飾（２’－ＯＨ）リボヌクレオチドを示し；
（ｐｓ）又は＃はホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し；
ｉは、３’－３’又は５’－５’の何れかでありうる逆位ヌクレオシド間結合を表し；
ｖｐはビニルホスホネートを表し；
ｍｖｐはメチルビニルホスホネートを表し；
３×ＧａｌＮＡｃは３価ＧａｌＮＡｃを表す。
【0141】
［特定のコンストラクトの使用表記法と特徴］
更に、本発明のコンストラクトの一つの配列を記述するために「１３（５）」のような表記が使用される場合、数字「１３」は、例えば、ＣＦＢを用いたＲＮＡｉに適した、第一の態様に係るその１８ヌクレオチドの一部を含む、配列番号：１３のアンチセンス配列に基づく配列を示し、丸括弧内の数字、すなわちこの場合の５は、ｓｈＲＮＡのヘアピンループ内に存在するヌクレオシドの数を示す。１３（５）の特定の場合では、配列番号：１３の５’末端ＡがＵに置換されている。コンストラクト１３（５）は、１４－５－１４デザインを実施する。
更に、本発明のコンストラクトの一つの配列を記述するために「１３（５）」のような表記が使用される場合、数字「１３」は、例えば、ＣＦＢを用いたＲＮＡｉに適した、第一の態様に係るその１８ヌクレオチドの一部を含む、配列番号：１３のアンチセンス配列に基づく配列を示し、丸括弧内の数字、すなわちこの場合の５は、ｓｈＲＮＡのヘアピンループ内に存在するヌクレオシドの数を示す。１３（５）の特定の場合では、配列番号：１３の５’末端ＡがＵに置換されている。コンストラクト１３（５）は、１４－５－１４デザインを実施する。
【0142】
「１０６－１３（４）」の場合、最初の数字（１０６）は、コンストラクトが配列番号：１０６のガイド配列に由来することを再び示す。数字１３は、１３塩基対の短縮された二重鎖を指し、（４）は４ヌクレオチドのループ領域を指す。言い換えれば、１０６－１３（４）は１３－４－１３デザインに従った分子であり、１９ヌクレオチドのガイド配列を持ち、その５’末端の１３ヌクレオチドは二重鎖領域内の塩基対形成に関与し、隣接する４つのヌクレオチドがループを形成し、２つの３’末端ヌクレオチド（ガイド配列内の１８位と１９位）が折り返され、それぞれガイド配列の１３位と１２位と塩基対を形成する。このようなスピルオーバー（ループを越えて伸びるガイド配列のヌクレオチド）により、パッセンジャー領域の更なる短縮が可能となり、この場合、長さは１１ヌクレオチドのみとなる。ガイド領域の２つの３’末端ヌクレオチドは、パッセンジャー領域の隣接する１１ヌクレオチドと共に、ガイド領域の５’末端の１３ヌクレオチドと塩基対を形成する一続きの１３連続ヌクレオチドを形成する。コンストラクト１３（５）と比較すると、１０６－１３（４）は、スピルオーバーと５ヌクレオチドではなく４ヌクレオチドであるループ長のため、３ヌクレオチド短い。
【0143】
一般的に言えば、ここで使用される場合、表記の後の「ａｓ」は配列がアンチセンス配列であることを示す一方、「ｓ」は配列がセンス配列であることを示す。従って、センス鎖に連結されたアンチセンス鎖は「ａｓ＋ｓ」と表記される。
【0144】
以下の表１ａ及び１ｂは、実施例による２５０のオリゴマー化合物のアンチセンス鎖及びセンス鎖の核酸塩基配列を示す。表１ａ内の番号は、配列表の対応するエントリー番号と一致する。表１ｂについては、次の点が適用される：配列表のエントリー番号＝表のエントリー番号＋２５０、但し、エントリー「１３（５）ａｓ」は配列番号７５１を指し、「１０６－１３（４）ａｓ」は配列番号７５２（表１ａ）を指し；エントリー「１３（５）ｓ」は配列番号７５３を指し、「１０６－１３（４）ｓ」は配列番号７５４を指す。
【0145】
以下の表２は、実施例に従って選択された２５０のヘアピンコンストラクトの核酸塩基配列を示す。核酸塩基配列は、表１ａのアンチセンス配列と表１ｂの対応するセンス配列との直接融合である。表２については、次が適用される：配列表のエントリー番号＝表のエントリー番号＋５００、但し、配列番号７５５を指す「１３（５）ａｓ＋ｓ」で示されるコンストラクトと配列番号７５６を指す「１０６－１３（４）ａｓ＋ｓ」で示されるコンストラクトを除く。
【0146】
以下の表３は、２５２のヘアピンを、完全な修飾情報（修飾糖と該当する場合は修飾リン酸）と共に示す。
注＝上記コンストラクトの各々は、５’末端基にリン酸修飾がある場合とない場合がある。更に、独立して、上記コンストラクトの各々は、３’末端基に結合した「３×ＧａｌＮＡｃ」がある場合とない場合がある。有利には、コンストラクトは、３×ＧａｌＮＡｃリガンド、特にここで定義される歯ブラシ（ｔｏｏｔｈｂｒｕｓｈ）リガンドを用いる。特に有利なのは、５’リン酸を加えて有するコンストラクトであり、これは厳密な要件ではないが、その非存在下では、投与される分子にそのリン酸が存在しない場合には哺乳動物細胞がそのようなリン酸を付加することになる。
【0147】
以下の表４は、コンストラクト「１０６－１３（４）ａｓ＋ｓ」及び「１３（５）ａｓ＋ｓ」をそれらのヌクレオシド間結合と共に示す。
表中の命名法に関する注意：
Ｎｆ：２’－フルオロ残基
ｎ：２’－Ｏ－メチル残基
（ｉｎｖＡ）：逆位リボＡ
（ｉｎｖＧ）：逆位リボＧ
ｓ：ホスホロチオエート
ｐ：リン酸
（ＳＯ－ＧａＮＡｃ）：ここでは「歯ブラシ（ｔｏｏｔｈｂｒｕｓｈ）」とも呼ばれるＳｉｒｎａｏｍｉｃｓモノ－ＧａｌＮＡｃビルディングブロック
上表の配列に対応する配列では、アンチセンス（ガイド）鎖の５’ヌクレオシド（本願の特許請求の範囲に記載された第一の領域）は、ＲＮＡ分子中に存在しうる任意の核酸塩基を含み得、換言すれば、アデニン（Ａ）、ウラシル（Ｕ）、グアニン（Ｇ）又はシトシン（Ｃ）の何れかでありうる。加えて、センス（パッセンジャー）鎖の３’ヌクレオシド（本出願の特許請求の範囲に記載された第二の領域）は、ＲＮＡ分子中に存在しうる任意の核酸塩基を含み得、換言すれば、アデニン（Ａ）、ウラシル（Ｕ）、グアニン（Ｇ）又はシトシン（Ｃ）の何れかでありうるが、有利には、アンチセンス（ガイド）鎖（ここで定義される第一の領域）の５’核酸塩基に相補的な核酸塩基である。
Ｎｆ：２’－フルオロ残基
ｎ：２’－Ｏ－メチル残基
（ｉｎｖＡ）：逆位リボＡ
（ｉｎｖＧ）：逆位リボＧ
ｓ：ホスホロチオエート
ｐ：リン酸
（ＳＯ－ＧａＮＡｃ）：ここでは「歯ブラシ（ｔｏｏｔｈｂｒｕｓｈ）」とも呼ばれるＳｉｒｎａｏｍｉｃｓモノ－ＧａｌＮＡｃビルディングブロック
上表の配列に対応する配列では、アンチセンス（ガイド）鎖の５’ヌクレオシド（本願の特許請求の範囲に記載された第一の領域）は、ＲＮＡ分子中に存在しうる任意の核酸塩基を含み得、換言すれば、アデニン（Ａ）、ウラシル（Ｕ）、グアニン（Ｇ）又はシトシン（Ｃ）の何れかでありうる。加えて、センス（パッセンジャー）鎖の３’ヌクレオシド（本出願の特許請求の範囲に記載された第二の領域）は、ＲＮＡ分子中に存在しうる任意の核酸塩基を含み得、換言すれば、アデニン（Ａ）、ウラシル（Ｕ）、グアニン（Ｇ）又はシトシン（Ｃ）の何れかでありうるが、有利には、アンチセンス（ガイド）鎖（ここで定義される第一の領域）の５’核酸塩基に相補的な核酸塩基である。
【0148】
方法は、特定の順序で実施される一連の行為であるとして示され、説明されているが、該方法はその順序によって限定されないことが理解され、認識されるべきである。例えば、一部の行為は、ここに記載されているものとは異なる順序で発生する場合がある。加えて、ある行為は別の行為と同時に発生する場合がある。更に、場合によっては、ここに記載の方法を実行するために全ての行為が必要なわけではないことがある。
【0149】
ここに記載の方法のステップの順序は例示的であるが、ステップは任意の適切な順序で、又は必要に応じて同時に実行することができる。加えて、ここに記載の主題の範囲から逸脱することなく、任意の方法にステップを追加又は置換したり、或いは個々のステップを削除したりすることができる。上述の実施例の何れかの態様を、記載された他の実施例の何れかの態様と組み合わせて、更なる実施例を形成することができる。
【0150】
特定の実施態様の上記の説明は、単なる例として与えられたものであり、当業者であれば様々な修正を加えることができることが理解されるであろう。上で説明したことには、一つ又は複数の実施態様の例が含まれる。もちろん、前述の態様を説明する目的で、上記の化合物、組成物又は方法の考えられる全ての修正及び変更を記載することは不可能であるが、当業者であれば、様々な態様の多くの更なる修正及び置換が可能であることを認識できるであろう。従って、記載された態様は、添付の特許請求の範囲に含まれる全てのそのような変更、修正、及び変形を包含することを意図している。
【実施例】
【0151】
次の実施例は、本開示の所定の実施態様を例証するもので、限定するものではない。更に、特定の実施態様が提供される場合、発明者は、それらの特定の実施態様の一般的な応用を企図している。例えば、特定のモチーフ又は修飾パターンを有するオリゴヌクレオチドの開示は、同じ又は類似のモチーフ又は修飾パターンを有する追加のオリゴヌクレオチドに対する合理的な裏付けを提供する。
【0152】
ここに開示されるＲＮＡｉコンストラクトの合成は、当業者に知られている合成方法、例えばｈｔｔｐｓ：／／ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ＿ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ｛２０２２年２月１６日に検索｝に開示されている合成方法を使用して実施されており、このウェブサイトに開示された方法は、その全体が出典明示によりここに援用される。この参考文献に開示された合成方法との唯一の違いは、担体上に固定化されたＧａｌＮＡｃホスホラミダイトが合成方法において最初の合成ステップ中に使用されることである。
【0153】
実施例１：
［材料と方法］
細胞培養：
ＨｅｐＧ２（ＡＴＣＣ ｃａｔ．８５０１１４３０）細胞を、１０％ ＦＢＳ、２０ｍＭ Ｌ－グルタミン、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．２、１ｍＭ ピルビン酸ナトリウム、１×ＭＥＭ非必須アミノ酸、及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（ＥＭＥＭ完全）を補填したＥＭＥＭに隔週で通過させて維持した。
［材料と方法］
細胞培養：
ＨｅｐＧ２（ＡＴＣＣ ｃａｔ．８５０１１４３０）細胞を、１０％ ＦＢＳ、２０ｍＭ Ｌ－グルタミン、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．２、１ｍＭ ピルビン酸ナトリウム、１×ＭＥＭ非必須アミノ酸、及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（ＥＭＥＭ完全）を補填したＥＭＥＭに隔週で通過させて維持した。
【0154】
ＣＦＢ標的同定と二重鎖調製：
ＣＦＢを標的とするオリゴマー化合物を、ＲｅｆＳｅｑ配列ＩＤ ＮＭ＿００１７１０．５に示されるヒトＣＦＢ ｍＲＮＡ配列に対するバイオインフォマティクス分析によって同定した。２５０個の化合物を非対称二重鎖として合成用に選択した。化合物を分子生物学等級の水に５０μＭまで溶解し、９５℃で５分間加熱することによってアニーリングし、続いて室温まで徐々に冷却した。
ＣＦＢを標的とするオリゴマー化合物を、ＲｅｆＳｅｑ配列ＩＤ ＮＭ＿００１７１０．５に示されるヒトＣＦＢ ｍＲＮＡ配列に対するバイオインフォマティクス分析によって同定した。２５０個の化合物を非対称二重鎖として合成用に選択した。化合物を分子生物学等級の水に５０μＭまで溶解し、９５℃で５分間加熱することによってアニーリングし、続いて室温まで徐々に冷却した。
【0155】
ＣＦＢ－一次スクリーニング：
トランスフェクションの日に、ＨｅｐＧ２細胞をトリプシン処理によって収集し、計数し、２０％のＦＢＳを含む５０μＬの完全ＥＭＥＭ中、ウェル当たり１００００細胞で９６ウェル組織培養処理プレートに播種した。細胞を４時間静置した後、ＲＮＡｉＭａｘ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を介して、２ピコモルの各ＣＦＢ標的化オリゴマー化合物を三連でトランスフェクションした。簡単に言うと、８ピコモルの各化合物を１００μＬのＯｐｔｉＭＥＭで希釈し、１００μＬのＯｐｔｉＭＥＭ中の０．８μＬのＲＮＡｉＭａｘと穏やかに混合して、合計２００μＬの複合体を作製した。５０μＬの各ＲＮＡｉＭａｘ複合化化合物をＨｅｐＧ２細胞のそれぞれの三連ウェルに加え、１００μＬ容量中２０ｎＭの化合物、１０％ＦＢＳの５０／５０ ＥＭＥＭ／ＯｐｔｉＭＥＭの最終混合物を得た。
トランスフェクションの日に、ＨｅｐＧ２細胞をトリプシン処理によって収集し、計数し、２０％のＦＢＳを含む５０μＬの完全ＥＭＥＭ中、ウェル当たり１００００細胞で９６ウェル組織培養処理プレートに播種した。細胞を４時間静置した後、ＲＮＡｉＭａｘ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を介して、２ピコモルの各ＣＦＢ標的化オリゴマー化合物を三連でトランスフェクションした。簡単に言うと、８ピコモルの各化合物を１００μＬのＯｐｔｉＭＥＭで希釈し、１００μＬのＯｐｔｉＭＥＭ中の０．８μＬのＲＮＡｉＭａｘと穏やかに混合して、合計２００μＬの複合体を作製した。５０μＬの各ＲＮＡｉＭａｘ複合化化合物をＨｅｐＧ２細胞のそれぞれの三連ウェルに加え、１００μＬ容量中２０ｎＭの化合物、１０％ＦＢＳの５０／５０ ＥＭＥＭ／ＯｐｔｉＭＥＭの最終混合物を得た。
【0156】
トランスフェクションの７２時間後、細胞を収集し、ＰｕｒｅＬｉｎｋ Ｐｒｏ９６ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，１２１７３０１１Ａ）を製造元のプロトコルに従って使用して、ＲＮＡを単離した。収集したＲＮＡを、Ｌｕｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｒｏｂｅ Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ＲＴ－ｑＰＣＲ Ｋｉｔ（ＮＥＢ，Ｅ３００６）を使用したＴａｑｍａｎ ｑＰＣＲによってＣＦＢ発現についてアッセイした。共通のＧＡＰＤＨ ＶＩＣプローブ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，４３２６３１７Ｅ）と多重化された二種の別個のＣＦＢ Ｔａｑｍａｎプローブセットを使用して、各サンプルに対して二種の別個のｑＰＣＲアッセイを実施した。サーモサイクリングとデータ取得は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ３ リアルタイムＰＣＲシステムを用いて実施した。
【0157】
ＣＦＢ－二次スクリーニング：
一次スクリーニングのデータに基づいて、最良パフォーマンスの３０のＣＦＢ標的コンストラクトの更に狭いセットを用量曲線で試験した。前と同様に、ＨｅｐＧ２細胞をトリプシン処理によって収集し、２０％のＦＢＳを含む５０μＬの完全ＥＭＥＭ中、ウェル当たり１００００細胞で９６ウェル組織培養プレートに播種し、４時間静置した。トランスフェクション複合体を、１８０μＬのＯｐｔｉＭＥＭ中の３６ピコモルの各化合物を１８０μＬのＯｐｔｉＭＥＭ中の２．１６μＬのＲＮＡｉＭａｘと穏やかに混合して合計３６０μＬの複合体を作製することによって、形成した。次に、ベースのＯｐｔｉＭＥＭを用いて２倍希釈系列を実施した。各希釈液５０μＬを各三連のＨｅｐＧ２細胞に加え、１０％ＦＢＳで１００μＬ容量の５０／５０ＥＭＥＭ／ＯｐｔｉＭＥＭ中、５０ｎＭから０．３２ｎＭまでの最終希釈系列を作製した。
一次スクリーニングのデータに基づいて、最良パフォーマンスの３０のＣＦＢ標的コンストラクトの更に狭いセットを用量曲線で試験した。前と同様に、ＨｅｐＧ２細胞をトリプシン処理によって収集し、２０％のＦＢＳを含む５０μＬの完全ＥＭＥＭ中、ウェル当たり１００００細胞で９６ウェル組織培養プレートに播種し、４時間静置した。トランスフェクション複合体を、１８０μＬのＯｐｔｉＭＥＭ中の３６ピコモルの各化合物を１８０μＬのＯｐｔｉＭＥＭ中の２．１６μＬのＲＮＡｉＭａｘと穏やかに混合して合計３６０μＬの複合体を作製することによって、形成した。次に、ベースのＯｐｔｉＭＥＭを用いて２倍希釈系列を実施した。各希釈液５０μＬを各三連のＨｅｐＧ２細胞に加え、１０％ＦＢＳで１００μＬ容量の５０／５０ＥＭＥＭ／ＯｐｔｉＭＥＭ中、５０ｎＭから０．３２ｎＭまでの最終希釈系列を作製した。
【0158】
トランスフェクションの７２時間後、細胞を収集し、ＰｕｒｅＬｉｎｋ Ｐｒｏ ９６ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，１２１７３０１１Ａ）を製造元のプロトコルに従って使用してＲＮＡを単離した。収集したＲＮＡを、Ｌｕｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｒｏｂｅ Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ＲＴ－ｑＰＣＲ Ｋｉｔ（ＮＥＢ，Ｅ３００６）を使用したＴａｑｍａｎ ｑＰＣＲによってＣＦＢ発現についてアッセイした。共通のＧＡＰＤＨ ＶＩＣプローブ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，４３２６３１７Ｅ）と多重化されたＣＦＢ Ｔａｑｍａｎプローブセットを使用して、各サンプルに対して単一のｑＰＣＲアッセイを実施した。サーモサイクリングとデータ取得は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ３ リアルタイムＰＣＲシステムを用いて実施した。
【0159】
実施例２：
［結果］
以下の表５は、実施例に従って選択された３０の特定のコンストラクトについてのＩＣ５０値（ｎＭ）を示す。最大ＫＤ％は、最大に達成されたノックダウンを示し、０％はノックダウンなし、１００％は完全なノックダウンである。
［結果］
以下の表５は、実施例に従って選択された３０の特定のコンストラクトについてのＩＣ５０値（ｎＭ）を示す。最大ＫＤ％は、最大に達成されたノックダウンを示し、０％はノックダウンなし、１００％は完全なノックダウンである。
【0160】
１桁から２桁前半のナノモル範囲のＩＣ５０データは、ここに記載の多数のコンストラクトの優れた性能を実証している。
【0161】
実施例３
［材料と方法］
細胞培養：
ヒト初代肝細胞（５ドナープール－セキスイゼノテック，ＨＰＣＨ０５＋）を実験直前に解凍し、肝細胞プレーティングサプリメントパック（Ｇｉｂｃｏ，ＣＭ３０００）を補充した１×完全ウィリアムズ培地（Ｇｉｂｃｏ，Ａ１２１７６０１）で培養した。化合物の安定性のために、ＦＢＳ濃度を、製造レシピから最終２．５％（５％ではなく）に変更した。
１×完全ＷＥＭ： ２．５％ ＦＢＳ、１μＭ デキサメタゾン、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（１００Ｕ／ｍＬ／１００μｇ／ｍＬ）、４μｇ／ｍｌ ヒトインスリン、２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ、１５ｍＭ ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４。
肝細胞を、コラーゲンＩ（ラットの尾）被覆９６ウェル組織培養プレート（Ｇｉｂｃｏ，Ａ１１４２８０３）上に播種した。
［材料と方法］
細胞培養：
ヒト初代肝細胞（５ドナープール－セキスイゼノテック，ＨＰＣＨ０５＋）を実験直前に解凍し、肝細胞プレーティングサプリメントパック（Ｇｉｂｃｏ，ＣＭ３０００）を補充した１×完全ウィリアムズ培地（Ｇｉｂｃｏ，Ａ１２１７６０１）で培養した。化合物の安定性のために、ＦＢＳ濃度を、製造レシピから最終２．５％（５％ではなく）に変更した。
１×完全ＷＥＭ： ２．５％ ＦＢＳ、１μＭ デキサメタゾン、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（１００Ｕ／ｍＬ／１００μｇ／ｍＬ）、４μｇ／ｍｌ ヒトインスリン、２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ、１５ｍＭ ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４。
肝細胞を、コラーゲンＩ（ラットの尾）被覆９６ウェル組織培養プレート（Ｇｉｂｃｏ，Ａ１１４２８０３）上に播種した。
【0162】
ＣＦＢ化合物の調製：
化合物を水中２００μＭまで溶解し、９５℃で５分間加熱してアニールし、続いて氷上で急冷した。
化合物を水中２００μＭまで溶解し、９５℃で５分間加熱してアニールし、続いて氷上で急冷した。
【0163】
ＣＦＢ化合物のトランスフェクション：
トランスフェクションの日に、初代ヒト肝細胞を４５ｍＬのヒトＯｐｔｉＴｈａｗ（セキスイゼノテック，Ｋ８０００）中で解凍し、２００ｇで５分間遠心分離した。細胞を２×完全ＷＥＭに再懸濁し、計数した。ついで、細胞を、９６ウェル１型ラット尾コラーゲンプレート上でウェル当たり２５０００細胞で５０μＬの２×完全ＷＥＭに蒔き、トランスフェクション前に４時間静置して付着させた。
トランスフェクションの日に、初代ヒト肝細胞を４５ｍＬのヒトＯｐｔｉＴｈａｗ（セキスイゼノテック，Ｋ８０００）中で解凍し、２００ｇで５分間遠心分離した。細胞を２×完全ＷＥＭに再懸濁し、計数した。ついで、細胞を、９６ウェル１型ラット尾コラーゲンプレート上でウェル当たり２５０００細胞で５０μＬの２×完全ＷＥＭに蒔き、トランスフェクション前に４時間静置して付着させた。
【0164】
化合物をベースのＷＥＭ中で２μＭまで更に希釈した。７段階の５倍希釈系列を、２μＭから０．０００１２８μＭのベースＷＥＭで調製した。５０μＬの各希釈液を、１００μＬ容量の１×完全ＷＥＭ中で１μＭから０．００００６４μＭまでの最終希釈系列として、蒔いた肝細胞のそれぞれの三連に加えた。
【0165】
トランスフェクションの７２時間後、細胞を収集し、ＰｕｒｅＬｉｎｋ Ｐｒｏ ９６ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，１２１７３０１１Ａ）を製造元のプロトコルに従って使用してＲＮＡを単離した。収集したＲＮＡを、Ｌｕｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｒｏｂｅ Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ＲＴ－ｑＰＣＲ Ｋｉｔ（ＮＥＢ，Ｅ３００６）を使用したＴａｑｍａｎ ｑＰＣＲによってＣＦＢ発現についてアッセイした。共通のＧＡＰＤＨ ＶＩＣプローブ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，４３２６３１７Ｅ）と多重化されたＣＦＢ Ｔａｑｍａｎプローブセットを使用して、各サンプルに対して単一のｑＰＣＲアッセイを実施した。サーモサイクリングとデータ取得は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ３／５ リアルタイムＰＣＲシステムを用いて実施した。
【0166】
［結果］
この実施例のインビトロ研究の結果を図１に示す。
この実施例のインビトロ研究の結果を図１に示す。
【0167】
実施例４
非ナイーブカニクイザルへの単回／反復皮下注射後のＳＴＰ１４４Ｇの薬力学研究
［研究プロトコル］
次の研究プロトコルは、動物実験と研究が完了する前に起草されたため、未来時制が使用されている。しかし、研究は既に完全に実施されているため、研究プロトコルの次の説明において、「未来時制」の各使用は「過去時制」として考慮されるべきである。
非ナイーブカニクイザルへの単回／反復皮下注射後のＳＴＰ１４４Ｇの薬力学研究
［研究プロトコル］
次の研究プロトコルは、動物実験と研究が完了する前に起草されたため、未来時制が使用されている。しかし、研究は既に完全に実施されているため、研究プロトコルの次の説明において、「未来時制」の各使用は「過去時制」として考慮されるべきである。
【0168】
１ 研究情報
１．１ 研究目的
この研究の目的は、雄カニクイザルへの単回／反復皮下（ＳＣ）投与後のＳＴＰ１４４Ｇの薬力学（ＰＤ）を決定することである。
１．１ 研究目的
この研究の目的は、雄カニクイザルへの単回／反復皮下（ＳＣ）投与後のＳＴＰ１４４Ｇの薬力学（ＰＤ）を決定することである。
【0169】
１．２ 規制順守
この研究は、ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ社（以下、ＷｕＸｉ）で、動物福祉法及び実験動物の管理及び使用に関するガイドに準拠したＩＡＣＵＣガイドラインと共にＷｕＸｉ施設内動物管理使用委員会（ＩＡＣＵＣ）標準動物手順に従って行われる。
この研究は、ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ社（以下、ＷｕＸｉ）で、動物福祉法及び実験動物の管理及び使用に関するガイドに準拠したＩＡＣＵＣガイドラインと共にＷｕＸｉ施設内動物管理使用委員会（ＩＡＣＵＣ）標準動物手順に従って行われる。
【0170】
この研究は、このプロトコル及びプロトコル修正（該当する場合）及び関連する研究特有の手順、及び該当するＷｕＸｉ標準作業手順（ＳＯＰ）及び一般に認められている優良試験所規範に従って実施される。この研究は、優良試験所規範規制の範囲内とはみなされない。
【0171】
被験物質及びビヒクル情報
【0172】
２．２ 陰性対照とビヒクル
ビヒクルはＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ社で調製される。詳細は生データに文書化される。
ビヒクルはＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ社で調製される。詳細は生データに文書化される。
【0173】
２．３ 製剤調製
直ぐに注射できる製剤は、Ｓｉｒｎａｏｍｉｃｓによって提供される。
直ぐに注射できる製剤は、Ｓｉｒｎａｏｍｉｃｓによって提供される。
【0174】
試験系の特定
３．１ 動物の特定
３．１ 動物の特定
【0175】
３．２ 動物の世話
３．２．１ 環境条件
部屋は、相対湿度（目標平均範囲４０％から７０％、この範囲から３時間を超えて逸脱した場合は逸脱と記録される）及び温度（目標平均範囲１８℃から２６℃、この範囲からの逸脱は逸脱と記録される）が、１時間当たり１０から２０回の換気で、制御され、監視される。研究活動により中断が必要とされる場合を除き、部屋は１２時間の明暗サイクルとされる。
３．２．１ 環境条件
部屋は、相対湿度（目標平均範囲４０％から７０％、この範囲から３時間を超えて逸脱した場合は逸脱と記録される）及び温度（目標平均範囲１８℃から２６℃、この範囲からの逸脱は逸脱と記録される）が、１時間当たり１０から２０回の換気で、制御され、監視される。研究活動により中断が必要とされる場合を除き、部屋は１２時間の明暗サイクルとされる。
【0176】
３．２．２ ハウジング
動物は、順応期間中、適用される動物福祉法及び規制に従ってケージ内にペアで収容される。実験中、サルは個別にケージ内に収容される。
動物は、順応期間中、適用される動物福祉法及び規制に従ってケージ内にペアで収容される。実験中、サルは個別にケージ内に収容される。
【0177】
餌と給餌
動物には１日２回餌を与える。ストックサルには、毎日約１２０グラムの認定サル食餌が与えられる。これらの量は、群の食物摂取量又は個体の体重変化及び／若しくは認定された食餌の変化に基づいて、必要に応じて調整されうる。
動物は、血清化学検査のための血液採取前に一晩絶食させられる。
動物には１日２回餌を与える。ストックサルには、毎日約１２０グラムの認定サル食餌が与えられる。これらの量は、群の食物摂取量又は個体の体重変化及び／若しくは認定された食餌の変化に基づいて、必要に応じて調整されうる。
動物は、血清化学検査のための血液採取前に一晩絶食させられる。
【0178】
【0179】
飲み水
逆浸透（ＲＯ）水が全ての動物に自由に与えられる。
逆浸透（ＲＯ）水が全ての動物に自由に与えられる。
【0180】
３．２．３ 餌と水の分析
ＲＯ水は３か月ごとに分析され、餌の全てのバッチが使用前に分析される。餌と水の分析は施設の記録に保管される。
ＲＯ水は３か月ごとに分析され、餌の全てのバッチが使用前に分析される。餌と水の分析は施設の記録に保管される。
【0181】
３．２．４ 環境の充実
充実したおもちゃが提供される。
充実したおもちゃが提供される。
【0182】
４．１ 観察と検査
４．１．１ 臨床観察
１日二回（およそ午前９時３０分と午後４時）、ケージ側で一般的な健康状態と外観の観察が行われる。動物の健康状態を確認するために、研究開始前に動物の身体検査が行われる。投与日には、投与から２、４及び６時間後に動物を観察する。研究全体を通じて認められた全身状態、注射部位、行動、活動、排泄、呼吸、又はその他の異常な観察が生データに記録される。必要に応じて、追加の臨床観察が実施され、記録される。臨床観察により動物の状態の悪化が示された場合、スタッフ獣医師又は獣医学技師が各動物を評価し、治験責任者に通知される。治験責任者又は指名された者は、評価によって正当化される場合、治験依頼者に通知する。
４．１．１ 臨床観察
１日二回（およそ午前９時３０分と午後４時）、ケージ側で一般的な健康状態と外観の観察が行われる。動物の健康状態を確認するために、研究開始前に動物の身体検査が行われる。投与日には、投与から２、４及び６時間後に動物を観察する。研究全体を通じて認められた全身状態、注射部位、行動、活動、排泄、呼吸、又はその他の異常な観察が生データに記録される。必要に応じて、追加の臨床観察が実施され、記録される。臨床観察により動物の状態の悪化が示された場合、スタッフ獣医師又は獣医学技師が各動物を評価し、治験責任者に通知される。治験責任者又は指名された者は、評価によって正当化される場合、治験依頼者に通知する。
【0183】
４．１．２ 体重
全ての動物の体重を毎週測定する。投与日には、投与前に動物の体重を測定する。
全ての動物の体重を毎週測定する。投与日には、投与前に動物の体重を測定する。
【0184】
４．１．３ 臨床病理検査のための血液採取
全ての血液サンプルは、拘束され、鎮静されていない動物の末梢血管から採取される。
全ての血液サンプルは、拘束され、鎮静されていない動物の末梢血管から採取される。
【0185】
（１）血液学的検査のための血液採取：動物から全血（少なくとも１．０ｍＬ）をカリウム（Ｋ２）ＥＤＴＡを含む市販のチューブに室温（ＲＴ）において採取する。血液サンプルはＲＴの臨床病理学検査室に送られ、表８に列挙されている血液学的パラメータについて試験される。
赤血球数（ＲＢＣ）、赤血球分布幅（ＲＤＷ）、ヘマトクリット（ＨＣＴ）、血小板数（ＰＬＴ）、ヘモグロビン（ＨＧＢ）、平均血小板容積（ＭＰＶ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、白血球数（ＷＢＣ）、及び示差（絶対及びパーセント）、平均赤血球ヘモグロビン（ＭＣＨ）、可能性のある細胞診用の血液塗抹標本、平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）、絶対網状赤血球数（Ｒｅｔｉｃ）、ヘモグロビン濃度分布幅（ＨＤＷ）及び血小板分布幅（ＰＤＷ）
血液塗抹標本は各血液学サンプルから調製される。血液塗抹標本はラベル付けされ、染色されて保管される。血液塗抹標本は、血液学分析の結果を調査するために読み取られる場合がある。追加の血液塗抹標本試験が必要であると判断された場合、その後塗抹標本を評価することができ、この評価は研究計画修正に記載される。
赤血球数（ＲＢＣ）、赤血球分布幅（ＲＤＷ）、ヘマトクリット（ＨＣＴ）、血小板数（ＰＬＴ）、ヘモグロビン（ＨＧＢ）、平均血小板容積（ＭＰＶ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、白血球数（ＷＢＣ）、及び示差（絶対及びパーセント）、平均赤血球ヘモグロビン（ＭＣＨ）、可能性のある細胞診用の血液塗抹標本、平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）、絶対網状赤血球数（Ｒｅｔｉｃ）、ヘモグロビン濃度分布幅（ＨＤＷ）及び血小板分布幅（ＰＤＷ）
血液塗抹標本は各血液学サンプルから調製される。血液塗抹標本はラベル付けされ、染色されて保管される。血液塗抹標本は、血液学分析の結果を調査するために読み取られる場合がある。追加の血液塗抹標本試験が必要であると判断された場合、その後塗抹標本を評価することができ、この評価は研究計画修正に記載される。
【0186】
（２）臨床化学検査のための血液採取： 抗凝固剤を含まない全血サンプル（約１．４ｍＬ）を、分離ゲルを含む市販のプレーンチューブに採取し、ＲＴ及び直立状態で少なくとも３０分間保持し、臨床病理学検査室に送る。サンプルは血清に処理され、表８に列挙されているパラメータについて試験される。
アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、総タンパク質量（ＴＰ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アルブミン（ＡＬＢ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、ｇ－グルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、ビリルビン、総（ＴＢＩＬ）、グロブリン（ＧＬＢ）、リン（Ｐ）、アルブミン／グロブリン比クレアチニン（ＣＲＥ）、ナトリウム（Ｎａ）、グルコース（ＧＬＵ）、クロライド（Ｃｌ）、カルシウム（Ｃａ）、トリグリセリド（ＴＧ）、総コレステロール（ＴＣＨＯ）、尿素（ＵＲＥＡ）、カリウム（Ｋ）、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、乳酸デヒドロギナーゼ（ＬＤＨ）、グルタミン酸デヒドロギナーゼ（ＧＬＤＨ）
アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、総タンパク質量（ＴＰ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アルブミン（ＡＬＢ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、ｇ－グルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、ビリルビン、総（ＴＢＩＬ）、グロブリン（ＧＬＢ）、リン（Ｐ）、アルブミン／グロブリン比クレアチニン（ＣＲＥ）、ナトリウム（Ｎａ）、グルコース（ＧＬＵ）、クロライド（Ｃｌ）、カルシウム（Ｃａ）、トリグリセリド（ＴＧ）、総コレステロール（ＴＣＨＯ）、尿素（ＵＲＥＡ）、カリウム（Ｋ）、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、乳酸デヒドロギナーゼ（ＬＤＨ）、グルタミン酸デヒドロギナーゼ（ＧＬＤＨ）
【0187】
４．１．４ 薬力学（ＰＤ）のための血液採取
血液： 全ての血液サンプルは、拘束され鎮静されていない動物の末梢血管から採取される。
投与後
血液量： 全量およそ５．０ｍＬ
頻度： 表８を参照。実際のサンプル採取時間が研究記録に記録される。投与後最初の一時間以内に採取されるサンプルでは、±１分は許容される。残りの時点では、予定時間の５％以内に採取されるサンプルは許容され、プロトコル逸脱とはみなされない。
サンプル処理： ＣＦＢ ＥＬＩＳＡでは、２ｍＬの血液が濡れた氷上でＫ２ＥＤＴＡを含むチューブ（治験依頼者が要求した会社から購入）に採取される。次に、全ての血液が４回上下逆にして混合される。サンプルは遠心分離（４℃において１０００ｇで２０分）され、およそ１ｍＬの血漿が二本のチューブに素早く移される（チューブ当たりおよそ０．５０ｍＬ）。全てのチューブは急速冷凍され、ついでＥＬＩＳＡによるＣＦＢタンパク質の分析のため、ＷｕＸｉ ＳＨサイト、宛先：Ｚｈａｎｇ Ｒｏｎｇｈｕａ（ｚｈａｎｇ＿ｒｏｎｇｈｕａ＠ｗｕｘｉａｐｐｔｅｃ．ｃｏｍ）に発送（ドライアイス上で）されるか又はバックアップとして保管されるまで、－８０℃で保存される必要がある。
血清： 抗凝固剤なしで全血サンプル（およそ３．０ｍL）が血清分離チューブに採取される。チューブを穏やかに４回逆さにする。ついで、ＲＴ及び直立状態で３０分保持して凝固させ、ついでサンプルを遠心分離（４℃において３２００ｇで１０分）し、およそ１．５ｍＬの血清を三本のチューブに素早く移す（チューブ当たりおよそ０．５ｍＬ）。一本はＥＬＩＳＡによるＣＦＢタンパク質の分析のため、（ドライアイス上で）ＷｕＸｉ ＳＨサイト、宛先：Ｚｈａｎｇ Ｒｏｎｇｈｕａ（ｚｈａｎｇ＿ｒｏｎｇｈｕａ＠ｗｕｘｉａｐｐｔｅｃ．ｃｏｍ）に４Ｃで発送され、他の二本は急速凍結され、バックアップとして－８０℃で保存される必要がある。
血液： 全ての血液サンプルは、拘束され鎮静されていない動物の末梢血管から採取される。
血液量： 全量およそ５．０ｍＬ
頻度： 表８を参照。実際のサンプル採取時間が研究記録に記録される。投与後最初の一時間以内に採取されるサンプルでは、±１分は許容される。残りの時点では、予定時間の５％以内に採取されるサンプルは許容され、プロトコル逸脱とはみなされない。
サンプル処理： ＣＦＢ ＥＬＩＳＡでは、２ｍＬの血液が濡れた氷上でＫ２ＥＤＴＡを含むチューブ（治験依頼者が要求した会社から購入）に採取される。次に、全ての血液が４回上下逆にして混合される。サンプルは遠心分離（４℃において１０００ｇで２０分）され、およそ１ｍＬの血漿が二本のチューブに素早く移される（チューブ当たりおよそ０．５０ｍＬ）。全てのチューブは急速冷凍され、ついでＥＬＩＳＡによるＣＦＢタンパク質の分析のため、ＷｕＸｉ ＳＨサイト、宛先：Ｚｈａｎｇ Ｒｏｎｇｈｕａ（ｚｈａｎｇ＿ｒｏｎｇｈｕａ＠ｗｕｘｉａｐｐｔｅｃ．ｃｏｍ）に発送（ドライアイス上で）されるか又はバックアップとして保管されるまで、－８０℃で保存される必要がある。
血清： 抗凝固剤なしで全血サンプル（およそ３．０ｍL）が血清分離チューブに採取される。チューブを穏やかに４回逆さにする。ついで、ＲＴ及び直立状態で３０分保持して凝固させ、ついでサンプルを遠心分離（４℃において３２００ｇで１０分）し、およそ１．５ｍＬの血清を三本のチューブに素早く移す（チューブ当たりおよそ０．５ｍＬ）。一本はＥＬＩＳＡによるＣＦＢタンパク質の分析のため、（ドライアイス上で）ＷｕＸｉ ＳＨサイト、宛先：Ｚｈａｎｇ Ｒｏｎｇｈｕａ（ｚｈａｎｇ＿ｒｏｎｇｈｕａ＠ｗｕｘｉａｐｐｔｅｃ．ｃｏｍ）に４Ｃで発送され、他の二本は急速凍結され、バックアップとして－８０℃で保存される必要がある。
【0188】
［プロトコルの修正と逸脱］
承認されたプロトコルへの変更は、治験責任者及び治験依頼者によって承認された修正の形で行われる。修正にはプロトコル変更が明確に記載され、変更の発効日と変更の正当性が含まれる。治験責任者及び治験代表者は、緊急又は重大な変更が必要なときに物理的にその場にいない場合、電話又は電子的手段によってプロトコル変更を承認してもよい。上記のように行われたかかる変更に対するあらゆる承認は適切に文書化され、適切に作成された書面によるプロトコル修正が伴わなければならない。修正には、発効日から４５日以内に治験責任者が署名し、日付を記入しなければならない。
承認されたプロトコルへの変更は、治験責任者及び治験依頼者によって承認された修正の形で行われる。修正にはプロトコル変更が明確に記載され、変更の発効日と変更の正当性が含まれる。治験責任者及び治験代表者は、緊急又は重大な変更が必要なときに物理的にその場にいない場合、電話又は電子的手段によってプロトコル変更を承認してもよい。上記のように行われたかかる変更に対するあらゆる承認は適切に文書化され、適切に作成された書面によるプロトコル修正が伴わなければならない。修正には、発効日から４５日以内に治験責任者が署名し、日付を記入しなければならない。
【0189】
プロトコル及びＳＯＰからの全ての逸脱と逸脱の理由は文書化され、治験責任者によって承認される。治験依頼者の代表者には、研究の結果に影響を与える可能性のある逸脱の発生、及び講じられた是正措置について直ちに通知される。データ解釈に影響を与える可能性のあるプロトコル及びＳＯＰの逸脱は、最終レポートに含まれる。
【0190】
［資料のアーカイブ化］
被験物質の調製、被験物質の追跡、生存中のデータ、プロトコル、プロトコル修正（該当する場合）、及びこの研究の結果として作成されたオリジナルの最終レポートは、ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ（Ｗｕｚｈｏｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ，Ｓｕｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ２１５１０４，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）でアーカイブ化される。ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃは、この研究の結果として生成される生データをアーカイブ化する責任を負い、保管期間は研究完了日から少なくとも２年間であるべきである。
被験物質の調製、被験物質の追跡、生存中のデータ、プロトコル、プロトコル修正（該当する場合）、及びこの研究の結果として作成されたオリジナルの最終レポートは、ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ（Ｗｕｚｈｏｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ，Ｓｕｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ２１５１０４，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）でアーカイブ化される。ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃは、この研究の結果として生成される生データをアーカイブ化する責任を負い、保管期間は研究完了日から少なくとも２年間であるべきである。
【0191】
［統計的解析］
次のセクションは、予定外の機会に記録されたデータには適用されない。そのようなデータは個別に報告される。
次のセクションは、予定外の機会に記録されたデータには適用されない。そのようなデータは個別に報告される。
【0192】
後に別段の記載がされていない限り、全ての数値データ（Ｐｒｏｖａｎｔｉｓによって直接収集され分析されたものを除く）は、マイクロソフトエクセルソフトウェアを使用して群平均と標準偏差の計算に供される。これらの記述統計は、分析対象の変数とデータセット分類変数（例えば、性別、測定機会、及び記述統計がどの下位区分で報告されるべきかを特定するために使用されうる任意の他の関連変数）によって決定されて、対象のデータセットごとに提示される。
【0193】
データセットの各群に含まれる非欠損値が３つ未満の場合、次の推論データ解析は実行されない。
【0194】
二群を超える群がある場合は常に、０．０５の有意水準でルビーン検定を使用して群分散の均一性が評価される。群分散間の差異が有意であることが判明しない場合（ｐ＞０．０５）、パラメトリック一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）が実施される。ＡＮＯＶＡ検定によって平均間の有意差が示された場合（ｐ≦０．０５）、ダネット検定を使用して、対照群と各治療群の間の群平均比較を実施する。
【0195】
ルビーン検定で不均一な群分散（ｐ≦０．０５）が示され、データセットに正の値のみが含まれている場合は、対数変換が実施される。変換されたデータがまだ分散の均一性の検定に合格しない場合（ｐ≦０．０５）、又はデータにゼロ及び／又は負の値が含まれている場合は、ノンパラメトリックのクラスカル・ワリス検定を使用して、考慮される全ての群を比較する。クラスカル・ワリス検定が有意である場合（ｐ≦０．０５）、順位に関するダネット検定を使用して、対象のペアワイズ群比較を実施する。
【0196】
比較する群が２群だけの場合は、前述のようにルビーン検定が実施されるが、一元配置ＡＮＯＶＡの代わりに２サンプルのｔ検定が実施され、クラスカル・ワリスの代わりにウィルコクソンの順位和検定が実施され、ダネット検定又は順位に関するダネット検定は実施されない。
【0197】
対象の各ペアワイズ群比較は、５％の有意水準で両側検定を介して実行される。有意な結果は、ｐ≦０．００１、ｐ≦０．０１、又はｐ≦０．０５の何れかとして報告され、ここで、ｐは観察された確率を表す。
【0198】
［結果］
因子Ｂｂの最大減少と反応期間（図３Ａを参照）：
> １０６－１３（４）
－ ５週目で７４％の最大抑制
－ ２週目から１３週目までで＞６０％減少
－ ２週目から１０週目まで平均ＢＬＱ
> １３－５
－ ６週目で５９％の最大抑制
－ ２週目から１３週目までで＞５０％減少
－ どの時点でも平均ＢＬＱなし
因子Ｂｂの最大減少と反応期間（図３Ｂを参照）：
> １０６－１３（４）
－ ６週目で６８％の最大抑制
－ ４週目から１３週目までで＞５０％減少
－ ６週目の平均ＢＬＱ
> １３－５
－ ６週目で６８％の最大抑制
－ ２週目から１３週目までで＞５０％減少
－ ６週目から１１週目まで平均ＢＬＱ
因子Ｂｂの最大減少と反応期間（図３Ａを参照）：
> １０６－１３（４）
－ ５週目で７４％の最大抑制
－ ２週目から１３週目までで＞６０％減少
－ ２週目から１０週目まで平均ＢＬＱ
> １３－５
－ ６週目で５９％の最大抑制
－ ２週目から１３週目までで＞５０％減少
－ どの時点でも平均ＢＬＱなし
因子Ｂｂの最大減少と反応期間（図３Ｂを参照）：
> １０６－１３（４）
－ ６週目で６８％の最大抑制
－ ４週目から１３週目までで＞５０％減少
－ ６週目の平均ＢＬＱ
> １３－５
－ ６週目で６８％の最大抑制
－ ２週目から１３週目までで＞５０％減少
－ ６週目から１１週目まで平均ＢＬＱ
【0199】
実施例５
ヒト化肝臓マウスモデルにおけるインビボでの用量反応と持続反応
この研究の目的は、ヒト化肝臓ＵＰＡ－ＳＣＩＤマウスモデルにおける補体因子Ｂ（ＣＦＢ）を標的とするＧａｌＮＡｃ－ｓｉＲＮＡコンストラクトについての選択された候補リードの用量反応及び持続反応効果を評価することである。被験物質は皮下投与によって投与され、投与後１４日及び４２日で評価される。エンドポイントには、肝臓パンチ生検の収集と、それぞれ因子Ｂｂ ＥＬＩＳＡ及び溶血アッセイにおける因子Ｂｂ及びＣＦＢ活性の評価のための血清及び血漿サンプルの収集が含まれる。
ヒト化肝臓マウスモデルにおけるインビボでの用量反応と持続反応
この研究の目的は、ヒト化肝臓ＵＰＡ－ＳＣＩＤマウスモデルにおける補体因子Ｂ（ＣＦＢ）を標的とするＧａｌＮＡｃ－ｓｉＲＮＡコンストラクトについての選択された候補リードの用量反応及び持続反応効果を評価することである。被験物質は皮下投与によって投与され、投与後１４日及び４２日で評価される。エンドポイントには、肝臓パンチ生検の収集と、それぞれ因子Ｂｂ ＥＬＩＳＡ及び溶血アッセイにおける因子Ｂｂ及びＣＦＢ活性の評価のための血清及び血漿サンプルの収集が含まれる。
【0200】
［材料と方法］
［被験物質と対照物質］
［被験物質と対照物質］
【0201】
［投与製剤］
試験物質は直ぐに投与できる製剤として受け取られるため、調製は必要とされない。
試験物質は直ぐに投与できる製剤として受け取られるため、調製は必要とされない。
【0202】
［被験物質と対照物質の識別］
全ての被験物質、陽性対照、及びビヒクル対照の保存容器には、少なくとも識別情報（入手可能な場合はロット／バッチ番号を含む）、保管条件、有効期限／再試験日（入手可能な場合）を含むラベルが貼られる。
全ての被験物質、陽性対照、及びビヒクル対照の保存容器には、少なくとも識別情報（入手可能な場合はロット／バッチ番号を含む）、保管条件、有効期限／再試験日（入手可能な場合）を含むラベルが貼られる。
【0203】
［試験系］
［試験系の正当性］
ヒト化肝臓ｕＰＡ－ＳＣＩＤマウスは、最大９５％のヒト肝細胞の生着；正常なヒト肝臓の組織学及び機能；ヒト特異的代謝及び排泄経路；ヒト遺伝子、ｍＲＮＡ、及びタンパク質の発現；ヒト様脂質プロファイル、ヒトアルブミンの産生及びヒト様胆汁排泄、並びに幅広い研究への応用性を有していると報告されている。従って、ヒト化肝臓ｕＰＡ－ＳＣＩＤマウスは、肝臓でＣＦＢが産生されるため、ＣＦＢ標的を含む治療薬の評価に理想的な試験系である。
［試験系の正当性］
ヒト化肝臓ｕＰＡ－ＳＣＩＤマウスは、最大９５％のヒト肝細胞の生着；正常なヒト肝臓の組織学及び機能；ヒト特異的代謝及び排泄経路；ヒト遺伝子、ｍＲＮＡ、及びタンパク質の発現；ヒト様脂質プロファイル、ヒトアルブミンの産生及びヒト様胆汁排泄、並びに幅広い研究への応用性を有していると報告されている。従って、ヒト化肝臓ｕＰＡ－ＳＣＩＤマウスは、肝臓でＣＦＢが産生されるため、ＣＦＢ標的を含む治療薬の評価に理想的な試験系である。
【0204】
［動物］
雌ヒト化肝臓ｕＰＡ－ＳＣＩＤマウス（約２２～２４週齢）を、使用の少なくとも７日前に順応させた。投与前に良好な健康状態にあった動物のみが研究に割り当てられる。動物は、局所的又は全身的な毒性の出現について毎日監視される。全ての動物はクリーンルームに収容され、動物の取り扱いは、適切に消毒された個人用保護具を着用した訓練を受けた職員によって、滅菌された生物学的安全キャビネット内で実施される。
雌ヒト化肝臓ｕＰＡ－ＳＣＩＤマウス（約２２～２４週齢）を、使用の少なくとも７日前に順応させた。投与前に良好な健康状態にあった動物のみが研究に割り当てられる。動物は、局所的又は全身的な毒性の出現について毎日監視される。全ての動物はクリーンルームに収容され、動物の取り扱いは、適切に消毒された個人用保護具を着用した訓練を受けた職員によって、滅菌された生物学的安全キャビネット内で実施される。
【0205】
［方法論］
［研究概要］
０日目に、以下の研究概要に従って、全ての研究動物に皮下注射により投与する。臨床観察は毎日記録される。研究デザインには、３２匹の雌マウス（治療群当たり４匹のマウスと２匹の余分のマウス）が必要とされる。１４日目に、４匹のビヒクル動物（群１Ａ）、８匹のＣＦＢ ｍｘＲＮＡ＃１３－５動物（群２Ａ及び群２Ｂ）、並びに８匹のＣＦＢ ｍｘＲＮＡ＃１０６－１３（４）動物（群３Ａ及び群３Ｂ）が安楽死される。４２日目に、４匹のＣＦＢ ｍｘＲＮＡ＃１３－５動物（群２Ｃ）及び４匹のＣＦＢ ｍｘＲＮＡ＃１０６－１３（４）動物（群３Ｃ）が安楽死される。各時点において、血清及び血漿の最終採血、肝臓パンチ生検、及び残りの肝臓組織の収集が実施される。
［研究概要］
０日目に、以下の研究概要に従って、全ての研究動物に皮下注射により投与する。臨床観察は毎日記録される。研究デザインには、３２匹の雌マウス（治療群当たり４匹のマウスと２匹の余分のマウス）が必要とされる。１４日目に、４匹のビヒクル動物（群１Ａ）、８匹のＣＦＢ ｍｘＲＮＡ＃１３－５動物（群２Ａ及び群２Ｂ）、並びに８匹のＣＦＢ ｍｘＲＮＡ＃１０６－１３（４）動物（群３Ａ及び群３Ｂ）が安楽死される。４２日目に、４匹のＣＦＢ ｍｘＲＮＡ＃１３－５動物（群２Ｃ）及び４匹のＣＦＢ ｍｘＲＮＡ＃１０６－１３（４）動物（群３Ｃ）が安楽死される。各時点において、血清及び血漿の最終採血、肝臓パンチ生検、及び残りの肝臓組織の収集が実施される。
【0206】
【0207】
［体重］
体重は、（一般的健康評価のため）受け取り時、－１日目、及び安楽死前の最終時点で収集される。
体重は、（一般的健康評価のため）受け取り時、－１日目、及び安楽死前の最終時点で収集される。
【0208】
［投与（０日目）］
０日目に、研究概要表に従って全てのマウスにビヒクル又は被験物質が皮下注射される。各動物は首筋に２００μＬの注射量で皮下注射される。
０日目に、研究概要表に従って全てのマウスにビヒクル又は被験物質が皮下注射される。各動物は首筋に２００μＬの注射量で皮下注射される。
【0209】
［連日の観察］
全ての動物は少なくとも一日一回、臨床徴候について観察される。ヒト化マウスは免疫機能の低下により日和見感染を起こしやすいためである。スタッフは、ベースラインで存在する僅かに波立った毛及び前かがみの姿勢を超えて更に顕著になる、波立った毛及び前かがみの姿勢、並びに活動性の低下を含む、感染を示す場合のある臨床症状についてマウスを監視する。これらのマウスで注意すべき一般的な感染症には、感染した皮膚創傷、蜂窩織炎、膿瘍（皮膚及び内臓）、中耳炎、結膜炎、全眼球炎、並びに肝臓、心臓、肺、子宮、副性腺に関わる限局性及び広範囲の感染症が含まれる。感染を示すものではないが、腹部膨満（肝臓組織の生着に関連する）が観察される場合があり、観察された場合は書き留められる。
全ての動物は少なくとも一日一回、臨床徴候について観察される。ヒト化マウスは免疫機能の低下により日和見感染を起こしやすいためである。スタッフは、ベースラインで存在する僅かに波立った毛及び前かがみの姿勢を超えて更に顕著になる、波立った毛及び前かがみの姿勢、並びに活動性の低下を含む、感染を示す場合のある臨床症状についてマウスを監視する。これらのマウスで注意すべき一般的な感染症には、感染した皮膚創傷、蜂窩織炎、膿瘍（皮膚及び内臓）、中耳炎、結膜炎、全眼球炎、並びに肝臓、心臓、肺、子宮、副性腺に関わる限局性及び広範囲の感染症が含まれる。感染を示すものではないが、腹部膨満（肝臓組織の生着に関連する）が観察される場合があり、観察された場合は書き留められる。
【0210】
［予定外の死と瀕死の動物］
重篤な影響を示している瀕死の動物は獣医師と相談するか、獣医師と研究責任者の推奨に従って安楽死させる。研究対象の他の動物の死亡を含め、有害な臨床徴候が観察される場合には、動物を多い頻度で監視する（一日二回まで、観察間隔は少なくとも５時間）。異常所見は観察次第で記録される。
重篤な影響を示している瀕死の動物は獣医師と相談するか、獣医師と研究責任者の推奨に従って安楽死させる。研究対象の他の動物の死亡を含め、有害な臨床徴候が観察される場合には、動物を多い頻度で監視する（一日二回まで、観察間隔は少なくとも５時間）。異常所見は観察次第で記録される。
【0211】
死亡しているのが発見された動物からサンプルが収集され、死骸は更なる評価を行わずに処分される。
【0212】
［最終手順（１４日目及び４２日目）］
予定された間隔（１４日目及び４２日目）で残っている全てのマウスはＣＯ２による窒息によって安楽死させられ、最終血液採取が、血清及び血漿への処理のために、心臓スティック又は下大静脈を介して採取される（最大量、採取部位は研究記録に記録される）。最終体重は安楽死の前に収集される。
予定された間隔（１４日目及び４２日目）で残っている全てのマウスはＣＯ２による窒息によって安楽死させられ、最終血液採取が、血清及び血漿への処理のために、心臓スティック又は下大静脈を介して採取される（最大量、採取部位は研究記録に記録される）。最終体重は安楽死の前に収集される。
【0213】
［血漿及び血清の処理］
それぞれ１４日目と４２日目の最終採取後、血液は因子Ｂｂ分析のために血漿に、溶血アッセイのために血清に処理される。血液サンプル量は、血漿及び血清の処理のために均等に分割される。
それぞれ１４日目と４２日目の最終採取後、血液は因子Ｂｂ分析のために血漿に、溶血アッセイのために血清に処理される。血液サンプル量は、血漿及び血清の処理のために均等に分割される。
【0214】
［血漿］
血液サンプルはＫ２ ＥＤＴＡ採血管に入れられ、８～１０回反転されて十分な混合が確保される。サンプルは氷上に冷たく維持され、サンプル収集から６０分以内に２～４℃、≦１３００×ｇに設定した機器で１０分間遠心分離される。各血漿サンプルはラベルを付けた二本の新鮮な収集チューブに等分され、分析が実施されるまで－７０℃以下で冷凍保存される。
血液サンプルはＫ２ ＥＤＴＡ採血管に入れられ、８～１０回反転されて十分な混合が確保される。サンプルは氷上に冷たく維持され、サンプル収集から６０分以内に２～４℃、≦１３００×ｇに設定した機器で１０分間遠心分離される。各血漿サンプルはラベルを付けた二本の新鮮な収集チューブに等分され、分析が実施されるまで－７０℃以下で冷凍保存される。
【0215】
［血清］
血液サンプルは抗凝固剤を含まない採血管に入れられ、３０～６０分間凝固させられる。次に、室温に設定した機器内で２５００×ｇで５分間遠心分離し、サンプルを血清に処理する。各血清サンプルはラベルを付けた新鮮な収集チューブに等分され、収集直後にドライアイスで急速冷凍される。サンプルチューブには研究番号とサンプルタイプのラベルが貼られ、分析が実施されるまで－７０℃以下で保存される。
血液サンプルは抗凝固剤を含まない採血管に入れられ、３０～６０分間凝固させられる。次に、室温に設定した機器内で２５００×ｇで５分間遠心分離し、サンプルを血清に処理する。各血清サンプルはラベルを付けた新鮮な収集チューブに等分され、収集直後にドライアイスで急速冷凍される。サンプルチューブには研究番号とサンプルタイプのラベルが貼られ、分析が実施されるまで－７０℃以下で保存される。
【0216】
［臓器処理］
採取した各肝臓（それぞれ左葉、中葉、右葉から採取）から三（３）つの肝臓パンチ生検（２ｍｍ）を取得し、ＲＮＡＬａｔｅｒを含む別々のラベル付き２ｍＬチューブに入れる。肝臓パンチ生検はＲＮＡＬａｔｅｒに１５分間浸漬し、その後急速冷凍して－７０℃以下で保存する。
採取した各肝臓（それぞれ左葉、中葉、右葉から採取）から三（３）つの肝臓パンチ生検（２ｍｍ）を取得し、ＲＮＡＬａｔｅｒを含む別々のラベル付き２ｍＬチューブに入れる。肝臓パンチ生検はＲＮＡＬａｔｅｒに１５分間浸漬し、その後急速冷凍して－７０℃以下で保存する。
【0217】
［結果］
ヒト化肝細胞を持つマウス（約２０から２５％のマウス肝細胞を保持）を使用して、二種の特定の化合物の性能を研究した。
ヒト化肝細胞を持つマウス（約２０から２５％のマウス肝細胞を保持）を使用して、二種の特定の化合物の性能を研究した。
【0218】
図５は、研究プロトコルの概要を示している。
図６は、２週間後及び６週間後の陰性対照と比較した、二種の化合物によるｍＲＮＡレベルでのノックダウンを示す。
図７は、２週間後及び６週間後の陰性対照と比較した、血漿中のＣＦＢ（「因子Ｂ」）並びに因子Ｂｂの量（ＣＦＢ及び補体経路の下方制御についての更なる読み出しとして）を示す。
図６は、２週間後及び６週間後の陰性対照と比較した、二種の化合物によるｍＲＮＡレベルでのノックダウンを示す。
図７は、２週間後及び６週間後の陰性対照と比較した、血漿中のＣＦＢ（「因子Ｂ」）並びに因子Ｂｂの量（ＣＦＢ及び補体経路の下方制御についての更なる読み出しとして）を示す。
【0219】
データは、両化合物についてｍＲＮＡレベルとタンパク質レベルの両方での有意なノックダウンを示しており、１０６－１３（４）は１３（５）よりも優れている。前者の化合物では程度は低いものの、６週間後にはある程度のリバウンドが見られる。
【0220】
補体経路の成分Ｂｂを含むタンパク質レベルに関して、更により持続的なノックダウンが観察される。特に、化合物１０６－１３（４）は、６週間後も依然として６４％減少レベルで血漿中のＢｂノックダウンを示している。このような所見は、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０週間毎などの長い間隔での投与を必要とする好ましい投与計画を示している。
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【図6】
【図7】
【配列表】
【国際調査報告】