特表 2024-525939 子宮内膜がんのバイオマーカー

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-12

(54)【発明の名称】子宮内膜がんのバイオマーカー

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/68 20060101AFI20240705BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20240705BHJP

   G01N 33/574 20060101ALI20240705BHJP

【ＦＩ】

G01N33/68

G01N33/53 D

G01N33/574 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024503876

(86)(22)【出願日】2022-07-22

(85)【翻訳文提出日】2024-03-12

(86)【国際出願番号】 EP2022070680

(87)【国際公開番号】W WO2023002039

(87)【国際公開日】2023-01-26

(31)【優先権主張番号】21382680.3

(32)【優先日】2021-07-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】512274953

【氏名又は名称】フンダシオ オスピタル ウニベルシタリ バル デブロン－インスティテュート デ レセルカ

(71)【出願人】

【識別番号】518384906

【氏名又は名称】ルクセンブルク インスティテュート オブ ヘルス（エルアイエイチ）

【氏名又は名称原語表記】ＬＵＸＥＭＢＯＵＲＧ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＯＦ ＨＥＡＬＴＨ（ＬＩＨ）

【住所又は居所原語表記】１Ａ－Ｂ， ｒｕｅ Ｔｈｏｍａｓ Ｅｄｉｓｏｎ， Ｌ－１４４５ Ｓｔｒａｓｓｅｎ， ＬＵＸＥＭＢＯＵＲＧ

(74)【代理人】

【識別番号】110000659

【氏名又は名称】弁理士法人広江アソシエイツ特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】コル デ ラ ルビア，エヴァ

(72)【発明者】

【氏名】コラス オルテガ，エヴァ

(72)【発明者】

【氏名】カブレラ ディアス，シルビア

(72)【発明者】

【氏名】ジル モレノ，アントニオ

(72)【発明者】

【氏名】マルティネス ガルシア，エレナ

(72)【発明者】

【氏名】ディトマー，グナー アルフレッド ギュンター

【テーマコード（参考）】

2G045

【Ｆターム（参考）】

2G045AA24

2G045AA26

2G045CB02

2G045CB15

2G045DA36

2G045FB03

(57)【要約】

本発明は、１つ以上のタンパク質の発現レベルを検出することによって、容易に利用できる単離された婦人科試料において子宮内膜がんを診断および予後判定する方法を提供する。特に、女性生殖管の流体試料からである。本発明はまた、疾患の診断および予後判定に使用するための当該タンパク質を検出するための手段を含むキットを提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

子宮内膜がんの診断および／または予後判定のための方法であって、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含むかまたはそれらから選択される婦人科試料採取から選択される試料中、ミッドカイン（ＭＤＫ）の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む、方法。

【請求項2】

前記試料がパップスメアであり、具体的には、パップスメアに含まれる流体および／または頸管粘液である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

表１に列挙されたタンパク質のうちの１つ以上、特に以下のタンパク質のうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを決定するステップをさらに含む、請求項１から２のいずれか一項に記載の方法：
アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）、補体Ｃ１ｑサブコンポーネントサブユニットＡ（Ｃ１ＱＡ）、フィブロネクチン１（ＦＮ１）、セルピンファミリーＤメンバー１（ＳＥＲＰＩＮＤ１）、アポリポタンパク質Ｆ前駆体（ＡＰＯＦ）、アポリポタンパク質Ｃ１（ＡＰＯＣ１）、ＴＣＰ１サブユニット６Ａを含有するシャペロン（ＣＣＴ６Ａ）、リポ多糖結合タンパク質前駆体（ＬＢＰ）、血清アミロイドＡ４（ＳＡＡ４）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、リポカリン２（ＬＣＮ２）、レシチン：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）、Ｃ４ｂ結合タンパク質アルファ鎖（Ｃ４ＢＰＡ）、補体Ｃ１ｒ（Ｃ１Ｒ）、線維芽細胞成長因子結合タンパク質１（ＦＧＦＢＰ１）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ｂ（ＳＰＲＲ１Ｂ）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ａ（ＳＰＲＲ１Ａ）およびメタロプロテイナーゼ組織阻害因子２（ＴＩＭＰ２）、リポカリン－２（ＬＣＮ２）、ホスホリパーゼＢドメイン含有１（ＰＬＢＤ１）、ＣＤ４４抗原、ＩｇＧ結合タンパク質Ｆｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、上皮成長因子受容体キナーゼ基質８様タンパク質１（ＥＰＳ８Ｌ１）、アネキシンＡ３（ＡＮＸＡ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ－８（ＭＭＰ８）、ＮＥＤＤ－８タンパク質、カテリシジン抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ）、熱ショックタンパク質ファミリーＥ（Ｈｓｐ１０）メンバー１（ＨＳＰＥ１）、カルメニン（ＣＡＬＵ）、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨＡ）、ポリマー免疫グロブリン受容体（ＰＩＧＲ）、ケラチン８（ＫＲＴ８）、ペリプラキン（ＰＰＬ）、スタスミン１（ＳＴＭＮ１）、カルシフォシン（ＣＡＰＳ）、炭酸脱水酵素１（ＣＡ１）、ビメンチン（ＶＩＭ）、Ｔ複合体１（ＴＣＰ１）、アグリン（ＡＧＲ）、アネキシンＡ７（ＡＮＸＡ７）、イノシトールモノホスファターゼ１（ＩＭＰＡ１）、シンタキシン７（ＳＴＸ７）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、ガレクチン１（ＬＧＡＬＳ１）、ＡＴＰアーゼＨ＋輸送Ｖ１サブユニットＧ１（ＡＴＰ６Ｖ１Ｇ１）、ピルビン酸キナーゼアイソザイムＭ１／Ｍ２（ＰＫＭ）、グリコゲニン１（ＧＹＧ１）、リンパ球特異的タンパク質１（ＬＳＰ１）、造血細胞特異的Ｌｙｎ基質１（ＨＣＬＳ１）、増殖およびアポトーシスアダプタータンパク質１５（ＰＥＡ１５）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ９（Ｓ１００Ａ９）、サイエリン（ＳＣＥＬ）、セルピンファミリーＡメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＡ３）、インテグリンサブユニットベータ２（ＩＴＧＢ２）、ＩｇＧ結合タンパク質のＦｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１タンパク質（ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１）、荷電多胞体タンパク質４Ｂ（ＣＨＭＰ４Ｂ）、およびエキスポーチン－２（ＸＰＯ２）。

【請求項4】

前記タンパク質のうちの２、３、または４個の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記単離された試料中、ＭＤＫ、ＬＣＮ２；ＭＤＫ、ＦＮ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＢ；ＭＤＫ、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３；ＭＤＫ、Ｃ４ＢＰＡ；ＭＤＫ、ＭＭＰ８；ＭＤＫ、ＮＥＤＤ－８；ＭＤＫ、ＣＡＭＰ；ＭＤＫ、ＴＩＭＰ２；ＭＤＫ、ＨＳＰＥ１；ＭＤＫ、ＣＡＬＵ；ＭＤＫ、Ｃ１ＱＡ；ＭＤＫ、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＴＩＭＰ２；ＭＤＫ、ＰＩＧＲ；ＭＤＫ、ＫＲＴ８；ＭＤＫ、ＰＰＬ；ＭＤＫ、ＳＰＲＲ１Ａ；ＭＤＫ、ＳＴＭＮ１；ＭＤＫ、ＣＡＰＳ；ＭＤＫ、ＣＡ１；ＭＤＫ、ＣＣＴ６Ａ；ＭＤＫ、ＶＩＭ；ＭＤＫ、ＴＣＰ１；およびＭＤＫ、ＡＧＲＮからなる群の少なくとも１つの２値のセット；ならびに／または表４および表６のいずれかに列挙された少なくとも１つの２値のセットにおける、タンパク質の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記単離された試料中、ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＣＳＥ１Ｌ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＦＧＦＢＰ１；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＡＮＸＡ７；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＬＣＮ２；ＭＤＫ、ＡＰＯＦ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＩＭＰＡ１、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＩＴＩＨ２、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＩＭＰＡ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＶＩＭ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＬＭＮＢ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＡＴＰ６Ｖ１Ｇ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＢ、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＩＴＩＨ２、ＬＣＮ２；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＣＡＬＵ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＡＰＯＦ；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＣ１、ＡＮＸＡ７；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、ＴＩＭＰ２、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＨＳＰＥ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＣＡ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＨＣＬＳ１；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＩＭＰＡ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＳＴＸ７；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、Ｃ１Ｒ、ＡＮＸＡ７；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＨＣＬＳ１；ＭＤＫ、ＬＣＡＴ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＡＰＯＢ、Ｓ１００Ａ９；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＳＣＥＬ；ＭＤＫ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＩＴＧＢ２；ＭＤＫ、ＳＣＥＬ、ＡＮＸＡ３；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、Ｃ１Ｒ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＡＰＯＣ１、Ｓ１００Ａ９；ＭＤＫ、ＰＰＬ、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＴＣＰ１、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、ＰＰＬ、ＩＭＰＡ１；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＭＭＰ８；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＰＰＬ；およびＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＰＰＬからなる群の少なくとも１つの３値のセット；ならびに／または表５および表７のいずれかに列挙された少なくとも１つの３値のセットにおける、タンパク質の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む、請求項４に記載の方法。

【請求項7】

前記単離された試料中、３値のセット、ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７およびＣＳＥ１Ｌの存在および／または発現レベルを決定するステップを含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

ａ）前記女性の生殖管から単離された試料中、インビトロで、ＭＤＫの発現レベルを、場合により請求項３から７のいずれか一項に列挙されたタンパク質のうちの１つ以上と組み合わせて決定するステップと、
ｂ）ステップ（ａ）のＭＤＫ、および決定される場合、１つ以上の他の該タンパク質の該レベルを、子宮内膜がんに罹患している対象からの値もしくは値の区間から選択される、各タンパク質の対応する基準値もしくは基準区間と比較するステップ、ならびに／または子宮内膜がんと他の子宮内膜障害もしくは（すなわち、健康な）子宮内膜の状態とを識別するカットオフ値と比較するステップであって、少なくとも該ＭＤＫのレベルがこのがんに罹患している対象からの該値または値の区間内にある場合、および／または該カットオフ値に対する少なくとも該ＭＤＫのレベルが該子宮内膜がん群に分類される場合、該対象が子宮内膜がんと診断されるステップと
を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

子宮内膜がんの再発または再発リスクの診断方法であって、前記単離された女性の試料中、ＭＵＣ１、ＰＲＳＳ８、ＰＮＰ、ＡＰＥＨ、ＭＵＣ１６、Ｃ９、ＳＥＲＰＩＮＣ１、ＳＥＲＰＩＮＡ１、Ｆ２、ＡＭＢＰ、ＨＰ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＣＦＢ、ＯＲＭ２、ＣＡＴ、ＧＮＡＩ２、Ａ１ＢＧ、ＦＮ１、Ｃ７．ＡＳＴＲＧＬ１、Ｂ４ＧＡＬＴ１、ＣＡＰＳ、ＣＢＸ３、ＣＤ１６３、ＣＤＶ３、ＤＭＢＴ１、ＤＳＧ３、ＥＨＤ１、ＧＯＬＭ１、ＭＵＣ５ＡＣ、ＮＭＥ１、ＮＴ５Ｅ、ＰＤＬＩＭ５、ＲＤＸおよびＶＡＳＰからなる群から選択されるタンパク質のうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを決定するステップをさらに含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

子宮内膜がんサブタイプの診断方法であって、前記単離された女性の試料中、ＬＢＰ、ＶＷＦ、ＧＰＬＤ１、ＳＡＡ４、ＡＰＯＦ、Ｃ４ＢＰＡ、ＳＰＲＲ１Ａ、ＳＥＲＰＩＮＤ１、ＡＰＯＢ、ＳＣＥＬ、ＬＣＡＴ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＬＭＯ７、Ｃ１Ｒ、ＭＵＣ４、ＦＮ１、ＳＰＲＲ１Ｂ、Ｃ１ＱＡ、ＩＴＩＨ２、ＴＩＭＰ２、ＡＰＯＣ１、ＧＲＮ、ＡＮＸＡ３、Ｓ１００Ａ９、ＰＬＢＤ１、ＰＩＧＲ、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＨＳＰＥ１からなる群から選択されるタンパク質のうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを決定するステップをさらに含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記発現レベルが前記タンパク質レベルで決定される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記タンパク質レベルが、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、質量分析、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるアッセイまたは技術によって決定される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記タンパク質の発現レベルが、前記タンパク質に結合することができる抗体またはその断片を使用して決定される、請求項１１から１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記抗体またはその断片ｏがキットの一部を形成する、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液の１つ以上を含む婦人科試料採取から選択される試料における、子宮内膜がんの診断および／または予後判定のためのインビトロのマーカーとしてのＭＤＫの使用。

【請求項16】

固体支持体と、ＭＤＫの存在を検出するためのおよび／または発現レベルを決定するための手段と、場合により、表１に列挙した１つ以上のタンパク質、特にアポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）、補体Ｃ１ｑサブコンポーネントサブユニットＡ（Ｃ１ＱＡ）、フィブロネクチン１（ＦＮ１）、セルピンファミリーＤメンバー１（ＳＥＲＰＩＮＤ１）、アポリポタンパク質Ｆ前駆体（ＡＰＯＦ）、アポリポタンパク質Ｃ１（ＡＰＯＣ１）、ＴＣＰ１サブユニット６Ａを含有するシャペロン（ＣＣＴ６Ａ）、リポ多糖結合タンパク質前駆体（ＬＢＰ）、血清アミロイドＡ４（ＳＡＡ４）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、リポカリン２（ＬＣＮ２）、レシチン：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）、Ｃ４ｂ結合タンパク質アルファ鎖（Ｃ４ＢＰＡ）、補体Ｃ１ｒ（Ｃ１Ｒ）、線維芽細胞成長因子結合タンパク質１（ＦＧＦＢＰ１）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ｂ（ＳＰＲＲ１Ｂ）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ａ（ＳＰＲＲ１Ａ）およびメタロプロテイナーゼ組織阻害因子２（ＴＩＭＰ２）、リポカリン－２（ＬＣＮ２）、ホスホリパーゼＢドメイン含有１（ＰＬＢＤ１）、ＣＤ４４抗原、ＩｇＧ結合タンパク質Ｆｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、上皮成長因子受容体キナーゼ基質８様タンパク質１（ＥＰＳ８Ｌ１）、アネキシンＡ３（ＡＮＸＡ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ－８（ＭＭＰ８）、ＮＥＤＤ－８タンパク質、カテリシジン抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ）、熱ショックタンパク質ファミリーＥ（Ｈｓｐ１０）メンバー１（ＨＳＰＥ１）、カルメニン（ＣＡＬＵ）、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨＡ）、ポリマー免疫グロブリン受容体（ＰＩＧＲ）、ケラチン８（ＫＲＴ８）、ペリプラキン（ＰＰＬ）、スタスミン１（ＳＴＭＮ１）、カルシフォシン（ＣＡＰＳ）、炭酸脱水酵素１（ＣＡ１）、ビメンチン（ＶＩＭ）、Ｔ複合体１（ＴＣＰ１）、アグリン（ＡＧＲ）、アネキシンＡ７（ＡＮＸＡ７）、イノシトールモノホスファターゼ１（ＩＭＰＡ１）、シンタキシン７（ＳＴＸ７）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、ガレクチン１（ＬＧＡＬＳ１）、ＡＴＰアーゼＨ＋輸送Ｖ１サブユニットＧ１（ＡＴＰ６Ｖ１Ｇ１）、ピルビン酸キナーゼアイソザイムＭ１／Ｍ２（ＰＫＭ）、グリコゲニン１（ＧＹＧ１）、リンパ球特異的タンパク質１（ＬＳＰ１）、造血細胞特異的Ｌｙｎ基質１（ＨＣＬＳ１）、増殖およびアポトーシスアダプタータンパク質１５（ＰＥＡ１５）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ９（Ｓ１００Ａ９）、サイエリン（ＳＣＥＬ）、セルピンファミリーＡメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＡ３）、インテグリンサブユニットベータ２（ＩＴＧＢ２）、ＩｇＧ結合タンパク質のＦｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１タンパク質（ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１）、荷電多胞体タンパク質４Ｂ（ＣＨＭＰ４Ｂ）、およびエキスポーチン－２（ＸＰＯ２）からなる群から選択される１つ以上のタンパク質の存在を検出するためのおよび／または発現レベルを決定するための手段とを含む、キット。

【請求項17】

請求項１から１４のいずれか一項で定義された方法を実施するためのコンピュータ実装方法であって、ＭＤＫ、ならびに場合により子宮内膜がんの診断および／または予後判定のためのタンパク質のうちの１つ以上の発現レベルの決定後、該レベルに値および／またはスコアが与えられ、場合により計算値を得るために数式で計算され、該レベル、スコアおよび／または計算値に応じて、ＥＣに罹患しているか否かの選択肢の間で、ならびに／または異なる組織学的サブタイプおよびグレードおよび異なる分子的特徴を含む異なる予後判定を示す異なるＥＣの間で罹患しているという選択肢の間で決定が行われる、方法。

【請求項18】

子宮内膜がんの再発または再発リスクの診断方法であって、単離された女性の試料中、ＭＵＣ１、ＰＲＳＳ８、ＰＮＰ、ＡＰＥＨ、ＭＵＣ１６、Ｃ９、ＳＥＲＰＩＮＣ１、ＳＥＲＰＩＮＡ１、Ｆ２、ＡＭＢＰ、ＨＰ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＣＦＢ、ＯＲＭ２、ＣＡＴ、ＧＮＡＩ２、Ａ１ＢＧ、ＦＮ１、Ｃ７．ＡＳＴＲＧＬ１、Ｂ４ＧＡＬＴ１、ＣＡＰＳ、ＣＢＸ３、ＣＤ１６３、ＣＤＶ３、ＤＭＢＴ１、ＤＳＧ３、ＥＨＤ１、ＧＯＬＭ１、ＭＵＣ５ＡＣ、ＮＭＥ１、ＮＴ５Ｅ、ＰＤＬＩＭ５、ＲＤＸおよびＶＡＳＰからなる群から選択されるタンパク質のうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを決定するステップを含み、該試料が、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含むかまたはそれらから選択される婦人科試料採取から選択される試料である、方法。

【請求項19】

子宮内膜がんサブタイプおよび／または子宮内膜がん分子分類の診断方法であって、前記女性の単離された試料中、ＬＢＰ、ＶＷＦ、ＧＰＬＤ１、ＳＡＡ４、ＡＰＯＦ、Ｃ４ＢＰＡ、ＳＰＲＲ１Ａ、ＳＥＲＰＩＮＤ１、ＡＰＯＢ、ＳＣＥＬ、ＬＣＡＴ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＬＭＯ７、Ｃ１Ｒ、ＭＵＣ４、ＦＮ１、ＳＰＲＲ１Ｂ、Ｃ１ＱＡ、ＩＴＩＨ２、ＴＩＭＰ２、ＡＰＯＣ１、ＧＲＮ、ＡＮＸＡ３、Ｓ１００Ａ９、ＰＬＢＤ１、ＰＩＧＲ、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＨＳＰＥ１からなる群から選択されるタンパク質のうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを決定するステップを含み、前記試料が、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア様試料、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含むかまたはそれらから選択される婦人科試料採取から選択される試料である、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年７月２３日に出願された欧州特許出願第２１３８２６８０号明細書の利益を主張する。

【0002】

本発明は、子宮内膜がんの診断および予後判定に関する。

【背景技術】

【0003】

子宮内膜がん（ＥＣ）は、女性生殖管の最も頻繁に観察される浸潤性腫瘍であり、先進国の女性では４番目に多いがんであり、米国では２０２１年に６６，５７０例が診断され、１２，９４０例が死亡したと推定されている。その早期診断は、９５％の５年生存率に関連する。しかしながら、進行期で診断された場合、５年生存率は、局所転移では６９％、遠隔転移では１６％と劇的に低下する。現在、その早期診断のためのスクリーニングツールはなく、診断プロセスは、膣からの異常出血（ＡＶＢ）が最も一般的である関連症状の観察から始まる。ＥＣ患者の９０％がＡＶＢを経験するが、この症状は疾患に特異的ではなく、試験患者の９％のみが最終的にＥＣを呈する。第１の診断ステップは、子宮内膜にピペル（ｐｉｐｅｌｌｅ）生検の病理学的評価を実施することである。しかしながら、この処置は２２％が失敗となり、これらの患者は診断されるために子宮鏡検査などの追加の侵襲的処置を受ける。年間で約７００万人の女性が欧州でＡＶＢを経験し、この診断プロセスを開始し、患者に病的状態をもたらし、ヘルスケアシステムに大きな負担をかける。したがって、早期診断の改善は、ＥＣを適切に管理し、疾患に関連する死亡率を減少させるための主要な問題である。良性の子宮内膜病変を有する患者とＥＣを有する患者との識別は、骨盤内検査および経膣超音波検査からなる冗長な診断プロセスと、それに続く子宮内膜生検の確認的組織病理学的検査との後にのみ達成される。この処置で使用される好ましい生検は、子宮吸引（ｕｔｅｒｉｎｅ ａｓｐｉｒａｔｅ）および／またはピペル生検と呼ばれ、子宮腔内からの子宮内膜液の低侵襲吸引によって得られる。子宮吸引に対する現在の診断手順は、細胞物質の存在に依存しているため、このプロセスは、残念ながら、それぞれ８％および１５％の診断失敗および関連する不適切な採取率を有する。これは、閉経後の女性では最大１２％および２２％増加する。これらの場合、子宮鏡検査によって誘導される生検を行う必要があり、この侵襲的技術は、子宮穿孔、出血および他の器官に有害となる可能性を含む、合併症のリスク増加を呈する。

【0004】

特許文献１および２は、子宮吸引中で決定することができ、他の子宮内膜状態からのＥＣの鑑別診断に良好な特異性および感度を提供する有用なマーカーを開示している。特許文献２は、ＥＣのサブタイプのうちの２つである、類内膜子宮内膜がん（ＥＥＣ、ｅｎｄｏｍｅｔｒｏｉｄ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｎｃｅｒ）と非類内膜ＥＣ症例（ＮＥＥＣ）とを区別することを可能とするための、ＥＣの予後判定のための方法を提供している。

【0005】

今日まで、主に組織および血清試料中のＥＣタンパク質バイオマーカーを同定するために多くの研究も行われてきた（例えば、非特許文献１または２を参照されたい）。これらはいずれも臨床的有用性に変換されていない。

【0006】

ＥＣに関する重要な情報を回収するための血漿または血清試料を開示する他の文献は、議論の余地のあるまたは矛盾する結論をもたらす。例えば、非特許文献３では、ＥＣの高リスク患者を特定するのに有用な血清バイオマーカーとして、分泌型ヘパリン結合成長因子であるミッドカイン（ＭＤＫ）が提案されている。非特許文献４（図２（ｆ）参照）では、子宮内膜症患者を子宮内膜がんサブグループから除外する場合、ＭＤＫはＥＣを健常対照と区別することができないことが特定された。実際、Ｔｏｒｒｅｓらは、ＴＧＭ２のような血漿マーカーはＥＣを正確に診断することができるが、ＭＤＫなどの他のマーカーは子宮内膜症症例を含めることによってＥＣ研究において変化する可能性があり、これは将来の研究設計において考慮される必要があると結論付けている。最後に、ＭＤＫはまた、子宮頸部からの組織生検において同定されており、非特許文献５の文献において子宮頸がんに関する情報を提供している。

【0007】

いずれの場合でも、注目すべきは、試験された試料の一部（組織生検、血漿および血清）は非日常的な婦人科試料であり、それらのすべて（子宮吸引を含む）が低侵襲性であり、容易に利用できるスクリーニングおよび／または診断ツールとしてのこれらの使用が妨げられるということである。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【特許文献1】欧州特許第３４５２８２９号明細書

【特許文献2】欧州特許出願第３６５５７７８号明細書

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】ＤｅＳｏｕｚａ ＬＶら、「Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｎｃｅｒ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｔａｇｇｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ ｔａｎｄｅｍ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ」、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ＭＣＰ、２００７年、第６巻、１１７０～８頁

【非特許文献2】Ｋｅｍｉｋ Ｐら、「Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｓｅｒｕｍ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＹＫＬ－４０，ＨＥ－４ ａｎｄ ＤＫＫ－３ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｎｃｅｒ」、Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ、２０１６年、第１４０巻、６４～９頁

【非特許文献3】Ｔａｎａｂｌｅら、「Ｍｉｄｋｉｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ」、ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ、２００８年、第９９巻（６号）、１１２５～１１３０頁

【非特許文献4】Ｔｏｒｒｅｓら、「ＣＤ４４，ＴＧＭ２ ａｎｄ ＥｐＣＡＭ ａｓ ｎｏｖｅｌ ｐｌａｓｍａ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｎｃｅｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ」、ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ、２０１９年、第１９巻、４０１頁、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８６／ｓ１２８８５－０１９－５５５６－ｘ．

【非特許文献5】Ｍｏｏｎら、「Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｃｏｍｐｅｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｉｄｋｉｎｅ ａｎｄ ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ」、Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、２００３年、第８８巻、２８９～２９７頁

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

結論として、努力にもかかわらず、子宮内膜がんの診断、さらには予後判定を改善するための、診断プロセスを通じて参加する女性の現在の負担を軽減するための信頼できる除外方法、ならびに非侵襲性試料から得られた臨床環境で容易に評価することができる非常に正確なバイオマーカーが依然として必要である。

【課題を解決するための手段】

【0011】

本発明者らは、婦人科の通常のまたは日常的な管理で使用される方法から得られる単離された試料で検出可能な特定のタンパク質マーカーにより、子宮内膜がん（ＥＣ）における貴重な診断情報が得られると決定した。タンパク質を、最初に、対照、ＥＣおよび子宮頸部病変を有する患者を含む６０人の患者のコホートから後ろ向きに分析した。次いで、情報価値のあるタンパク質の群を、２４２人の患者（非ＥＣ１０６人、ＥＣ１２９人およびＥＣの前悪性病変、すなわち過形成７人）のより大きなコホートにおいて後ろ向きに検証した。

【0012】

さらに、本発明者らは、これらの種類の試料でも検出可能ないくつかのタンパク質が、子宮内膜がん（ＥＣ）の意義のある予後判定バイオマーカーであることを決定した。これらのタンパク質は、異なる組織学的サブタイプおよびグレードおよび異なる分子的特徴を含む異なる予後判定を示すＥＣを高い感度および高い特異性で識別することを可能にし、したがってこれらのサブタイプ間の偽陽性および偽陰性分類のリスクを最小限に抑えることを可能にする。

【0013】

したがって、第１の態様では、本発明は、ＥＣの診断および／または予後判定のための方法であって、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含むかまたはそれらから選択される婦人科試料採取から選択される試料中、ミッドカイン（ＭＤＫ）の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む、方法に関する。

【0014】

ＭＤＫは（ＭＫまたはＭＤＫ）であり、神経突起成長促進因子２（ＮＥＧＦ２）としても知られている。これは、ヒトにおいてＭＤＫ遺伝子によってコードされるタンパク質である。ミッドカインは、低分子量の塩基性ヘパリン結合成長因子であり、プレイオトロフィン（ＮＥＧＦ１、ＭＫと４６％相同）とファミリーを形成する。これは、ジスルフィド架橋によって保持された２つのドメインから構成される非グリコシル化タンパク質である。これは、妊娠中期に強く誘導される発生的に重要なレチノイン酸応答性遺伝子産物であり、したがってミッドカインという名称である。主に正常な成体の特定の組織に限定され、腫瘍形成、炎症および組織修復中に強く誘導される。カノニカルアミノ酸配列（アイソフォーム１）は、１４３アミノ酸の長さを有し、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースで受託番号Ｐ２１７４１（１９９１年５月１日のバージョンの配列および２０２１年４月７日のＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔデータベースのリリース１８９）で同定されている。

【0015】

本発明の別の態様は、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、頸管粘液を含有するパップスメア様試料、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される試料中の、子宮内膜がんの診断および／または予後判定のためのインビトロのマーカーとしてのＭＤＫの使用である。

【0016】

第３の態様では、本発明は、固体支持体と、ＭＤＫの存在を検出するためのおよび／または発現レベルを決定するための手段と、場合により、アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）、補体Ｃ１ｑサブコンポーネントサブユニットＡ（Ｃ１ＱＡ）、フィブロネクチン１（ＦＮ１）、セルピンファミリーＤメンバー１（ＳＥＲＰＩＮＤ１）、アポリポタンパク質Ｆ前駆体（ＡＰＯＦ）、アポリポタンパク質Ｃ１（ＡＰＯＣ１）、ＴＣＰ１サブユニット６Ａを含有するシャペロン（ＣＣＴ６Ａ）、リポ多糖結合タンパク質前駆体（ＬＢＰ）、血清アミロイドＡ４（ＳＡＡ４）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、リポカリン２（ＬＣＮ２）、レシチン：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）、Ｃ４ｂ結合タンパク質アルファ鎖（Ｃ４ＢＰＡ）、補体Ｃ１ｒ（Ｃ１Ｒ）、線維芽細胞成長因子結合タンパク質１（ＦＧＦＢＰ１）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ｂ（ＳＰＲＲ１Ｂ）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ａ（ＳＰＲＲ１Ａ）およびメタロプロテイナーゼ組織阻害因子２（ＴＩＭＰ２）、リポカリン－２（ＬＣＮ２）、ホスホリパーゼＢドメイン含有１（ＰＬＢＤ１）、ＣＤ４４抗原、ＩｇＧ結合タンパク質Ｆｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、上皮成長因子受容体キナーゼ基質８様タンパク質１（ＥＰＳ８Ｌ１）、アネキシンＡ３、マトリックスメタロプロテイナーゼ－８（ＭＭＰ８）、ＮＥＤＤ－８タンパク質、カテリシジン抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ）、熱ショックタンパク質ファミリーＥ（Ｈｓｐ１０）メンバー１（ＨＳＰＥ１）、カルメニン（ＣＡＬＵ）、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨＡ）、ポリマー免疫グロブリン受容体（ＰＩＧＲ）、ケラチン８（ＫＲＴ８）、ペリプラキン（ＰＰＬ）、スタスミン１（ＳＴＭＮ１）、カルシフォシン（ＣＡＰＳ）、炭酸脱水酵素１（ＣＡ１）、ビメンチン（ＶＩＭ）、Ｔ複合体１（ＴＣＰ１）、アグリン（ＡＧＲ）、アネキシンＡ７（ＡＮＸＡ７）、イノシトールモノホスファターゼ１（ＩＭＰＡ１）、シンタキシン７（ＳＴＸ７）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、ガレクチン１（ＬＧＡＬＳ１）、ＡＴＰアーゼＨ＋輸送Ｖ１サブユニットＧ１（ＡＴＰ６Ｖ１Ｇ１）、ピルビン酸キナーゼアイソザイムＭ１／Ｍ２（ＰＫＭ）、グリコゲニン１（ＧＹＧ１）、リンパ球特異的タンパク質１（ＬＳＰ１）、造血細胞特異的Ｌｙｎ基質１（ＨＣＬＳ１）、増殖およびアポトーシスアダプタータンパク質１５（ＰＥＡ１５）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ９（Ｓ１００Ａ９）、サイエリン（ＳＣＥＬ、Ｓｃｉｅｌｌｉｎ）、セルピンファミリーＡメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＡ３）、インテグリンサブユニットベータ２（ＩＴＧＢ２）、ＩｇＧ結合タンパク質のＦｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１タンパク質（ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１）、荷電多胞体タンパク質４Ｂ（ＣＨＭＰ４Ｂ）、およびエキスポーチン－２（ＸＰＯ２）からなる群から選択される１つ以上のタンパク質の存在を検出するためのおよび／または発現レベルを決定するための手段とを含む、新たなキットを提案する。

【0017】

換言すれば、この態様は、固体支持体と、ＭＤＫの存在を検出するためのおよび／または発現レベルを決定するための手段と、場合により、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｈｅｌｐ／ｕｎｉｐｒｏｔｋｂ：中の２０２１年７月２３日にアクセス可能なリリース番号のＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔデータベースにおけるエントリ（受託番号）を示す、以下の表１に列挙される群から選択される１つ以上のタンパク質の存在を検出するためのおよび／または発現レベルを決定するための手段とを含む新たなキットとして定義することもできる。

【0018】

【表1】

【0019】

実際、本明細書ではまた、ＥＣの診断および／または予後判定のためのツールとして、示された試料中の上に列挙したタンパク質のうちの１つ以上の発現を検出および／または決定するための手段を含むキットの使用が開示される。

【0020】

最後に、本発明の別の態様は、第１の態様で定義されたインビトロでの方法を実施するためのコンピュータ実装方法であって、ＭＤＫ、ならびに場合により子宮内膜がんの診断および／または予後判定のためのタンパク質のうちの１つ以上の発現レベルの決定後、当該レベルに値および／またはスコアが与えられ、場合により計算値を得るために数式で計算され、当該レベル、スコアおよび／または計算値に応じて、ＥＣに罹患しているか否かの選択肢の間で、ならびに／または異なる組織学的サブタイプおよびグレードおよび異なる分子的特徴を含む異なる予後判定を示す異なるＥＣの間で罹患しているという選択肢の間で決定が行われる、方法である。換言すれば、ＥＣに罹患しているか否かの選択肢の間、および／または異なるＥＣサブタイプ間で罹患しているという選択肢の間、および／または異なるＥＣグレード間で罹患しているという選択肢の間で決定が行われる。

【0021】

この態様は、本明細書で定義される方法のいずれかを実行するためのアルゴリズムから生じる。本発明の意味において、「アルゴリズム」という用語はまた、個々の試料を正しく分類するためのパネルまたは決定図、予測子およびデータの組み合わせの同義語である。

【0022】

本明細書ではまた、ＥＣの診断および／または予後判定のための方法であって、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される試料中、以下のタンパク質のうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む方法が開示される。ミッドカイン（ＭＤＫ）、アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）、補体Ｃ１ｑサブコンポーネントサブユニットＡ（Ｃ１ＱＡ）、フィブロネクチン１（ＦＮ１）、セルピンファミリーＤメンバー１（ＳＥＲＰＩＮＤ１）、アポリポタンパク質Ｆ前駆体（ＡＰＯＦ）、アポリポタンパク質Ｃ１（ＡＰＯＣ１）、ＴＣＰ１サブユニット６Ａを含有するシャペロン（ＣＣＴ６Ａ）、リポ多糖結合タンパク質前駆体（ＬＢＰ）、血清アミロイドＡ４（ＳＡＡ４）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、リポカリン２（ＬＣＮ２）、レシチン：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）、Ｃ４ｂ結合タンパク質アルファ鎖（Ｃ４ＢＰＡ）、補体Ｃ１ｒ（Ｃ１Ｒ）、線維芽細胞成長因子結合タンパク質１（ＦＧＦＢＰ１）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ｂ（ＳＰＲＲ１Ｂ）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ａ（ＳＰＲＲ１Ａ）およびメタロプロテイナーゼ組織阻害因子２（ＴＩＭＰ２）、リポカリン－２（ＬＣＮ２）、ホスホリパーゼＢドメイン含有１（ＰＬＢＤ１）、ＣＤ４４抗原、ＩｇＧ結合タンパク質Ｆｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、上皮成長因子受容体キナーゼ基質８様タンパク質１（ＥＰＳ８Ｌ１）、アネキシンＡ３（ＡＮＸＡ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ－８（ＭＭＰ８）、ＮＥＤＤ－８タンパク質、カテリシジン抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ）、熱ショックタンパク質ファミリーＥ（Ｈｓｐ１０）メンバー１（ＨＳＰＥ１）、カルメニン（ＣＡＬＵ）、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨＡ）、ポリマー免疫グロブリン受容体（ＰＩＧＲ）、ケラチン８（ＫＲＴ８）、ペリプラキン（ＰＰＬ）、スタスミン１（ＳＴＭＮ１）、カルシフォシン（ＣＡＰＳ）、炭酸脱水酵素１（ＣＡ１）、ビメンチン（ＶＩＭ）、Ｔ複合体１（ＴＣＰ１）、アグリン（ＡＧＲ）、アネキシンＡ７（ＡＮＸＡ７）、イノシトールモノホスファターゼ１（ＩＭＰＡ１）、シンタキシン７（ＳＴＸ７）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、ガレクチン１（ＬＧＡＬＳ１）、ＡＴＰアーゼＨ＋輸送Ｖ１サブユニットＧ１（ＡＴＰ６Ｖ１Ｇ１）、ピルビン酸キナーゼアイソザイムＭ１／Ｍ２（ＰＫＭ）、グリコゲニン１（ＧＹＧ１）、リンパ球特異的タンパク質１（ＬＳＰ１）、造血細胞特異的Ｌｙｎ基質１（ＨＣＬＳ１）、増殖およびアポトーシスアダプタータンパク質１５（ＰＥＡ１５）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ９（Ｓ１００Ａ９）、サイエリン（ＳＣＥＬ）、セルピンファミリーＡメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＡ３）、インテグリンサブユニットベータ２（ＩＴＧＢ２）、ＩｇＧ結合タンパク質のＦｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１タンパク質（ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１）、荷電多胞体タンパク質４Ｂ（ＣＨＭＰ４Ｂ）、およびエキスポーチン－２（ＸＰＯ２）。いくつかの例では、本方法は、特に血圧、血糖、年齢、グレード分類または病期分類のスコア（すなわち、Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ（ＦＩＧＯ）のグレード分類／病期分類システム）、子宮内膜の厚さ、ＣＡ１２５およびＨＥ４分子マーカー、ＡＶＢ、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、対象の１つ以上の臨床または特徴パラメータを決定するステップをさらに含む。

【0023】

ＥＣの診断および／または予後判定のための方法であって、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア様試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される試料中、表１に列挙される群からのタンパク質のうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む方法も開示される。

【0024】

本明細書ではまた、ＥＣの組織型の検出のための特定の予後判定方法であって、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、パップスメア様試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される試料中、ＰＩＧＲ、ＰＫＭのうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを、場合によりＭＤＫまたは表１の任意の他のタンパク質と組み合わせて決定するステップを含む方法が開示される。特に、ＰＩＧＲとＭＤＫとの組み合わせは、ＥＣ組織学の正確な決定（すなわち、診断）のために０．８４６に近いＡＵＣ値を提供する。注目すべきことに、ＰＩＧＲ、ＲＡＢ２およびＭＤＫの組み合わせも、０．８９のＡＵＣ値を生じた。

【0025】

本明細書ではまた、ＥＣのグレード分類のための特定の予後判定方法であって、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される試料中、ＰＩＧＲ、ＨＳＰＥ１のうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを、場合によりＭＤＫまたは表１の任意の他のタンパク質と組み合わせて決定するステップを含む方法が開示される。特に、ＰＩＧＲとＭＤＫとの組み合わせは、ＥＣグレードの正確な決定（すなわち、診断）のために０．９２０付近のＡＵＣ値を提供する。

【0026】

ＥＣの診断に関連するさらなる態様では、本発明は、ＥＣに罹患している疑いのある対象を特定する方法であって、
ａ）外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、パップスメア様試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される試料中、ミッドカイン（ＭＤＫ）の存在および／または発現レベルをインビトロで決定するステップと、
ｂ）ステップ（ａ）のＭＤＫのレベルを、子宮内膜がんに罹患している対象からの値もしくは値の区間から選択される、各タンパク質の対応する基準値もしくは基準区間と比較するステップ、および／または子宮内膜がんと他の婦人科障害もしくは状態とを識別するカットオフ値と比較するステップであって、ＭＤＫのレベルがこのがんに罹患している対象からの値または値の区間内にある場合、および／またはカットオフ値に対するＭＤＫのレベルが子宮内膜がん群に分類される場合、対象が子宮内膜がんと診断されるステップと
とを含む、方法を提供する。

【0027】

さらなる態様では、本発明は、子宮内膜癌に罹患している疑いのある対象の医療レジメンを開始するかどうかを決定または推奨する方法であって、
ａ）外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される試料中、ミッドカイン（ＭＤＫ）の存在および／または発現レベルをインビトロで決定するステップと、
ｂ）ステップ（ａ）のＭＤＫのレベルを、子宮内膜がんに罹患している対象からの値もしくは値の区間から選択される、各タンパク質の対応する基準値もしくは基準区間と比較するステップ、および／または子宮内膜がんと他の婦人科障害もしくは状態とを識別するカットオフ値と比較するステップであって、ＭＤＫのレベルがこのがんに罹患している対象からの値または値の区間内にある場合、および／またはカットオフ値に対するＭＤＫのレベルが子宮内膜がん群に分類される場合、対象が子宮内膜がんと診断されるステップと
とを含む、方法を提供する。

【0028】

ｉ）対象が子宮内膜癌に罹患していると診断された場合、または子宮内膜癌に罹患している疑いがあると診断された場合、医療レジメンの開始が推奨され、
ｉｉ）患者が子宮内膜癌に罹患していないと診断された場合、医師による患者の検査の結果を考慮して、フォローアップが場合により行われる、
方法を提供する。

【0029】

試験試料中のマーカーレベルを決定することによって、試料中で検出されたレベルが疾患の拡大（すなわち、重症度）を反映し得るので、当業者は、推奨され得る最も適切な治療をさらに確立することができる。

【図面の簡単な説明】

【0030】

【図1】対象のコホートの試料で試験し、ＥＣ患者と非ＥＣ患者（頸管粘液またはパップスメア様試料とも呼ばれる子宮頸部試料）とを比較した、ＭＤＫを決定するためのＥＬＩＳＡアッセイを使用して得られた結果を示す図である。（Ａ）ＥＣ患者と非ＥＣ患者との間のタンパク質濃度の分布のドットプロット。（Ｂ）ＥＬＩＳＡによって評価したＭＤＫのＲＯＣ分析（受信者動作特性分析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ））の曲線。

【図2】対象のコホートの試料で試験し、ＥＣ患者と非ＥＣ患者とを比較する、ＭＤＫを決定するための（Ａ）質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ ＰＲＭ）または（Ｂ）ＥＬＩＳＡアッセイを使用して得られた結果を示す図である。 ドットプロットは、ＥＣ患者と非ＥＣ患者との間のタンパク質濃度の分布を示す。また、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳまたはＥＬＩＳＡのいずれかによって評価したＭＤＫのＲＯＣ分析（受信者動作特性分析）を示す。（Ｃ）両方の手法の測定値間の相関。

【図3】対象のコホートの試料で試験し、ＥＣ患者と非ＥＣ患者とを比較した、子宮吸引／ピペル生検／子宮液中のＭＤＫを決定するためのＥＬＩＳＡアッセイを使用して得られた結果を示す図である。（Ａ）ＥＣ患者と非ＥＣ患者との間のタンパク質濃度の分布のドットプロット。（Ｂ）ＥＬＩＳＡによって評価したＭＤＫのＲＯＣ分析（受信者動作特性分析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ））の曲線。

【発明の詳細な説明】

【0031】

（定義）
本出願において本明細書で使用されるすべての用語は、特に明記しない限り、当技術分野で知られている通常の意味で理解されるものとする。本出願で使用される特定の用語の他のより具体的な定義は、以下に示されるとおりであり、特に明示的に記載された定義がより広い定義を提供しない限り、明細書および特許請求の範囲を通して均一に適用することを意図している。

【0032】

本発明は、女性生殖管の（すなわち、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む）、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、流体を含むパップスメア様試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される試料における、子宮内膜がんの診断および予後判定のための新たなバイオマーカーを提供する。

【0033】

「診断」という用語は、当業者に知られている。本明細書で使用される場合、「診断」は、対象における特定の医学的状態、合併症またはリスクを認識するようになること、疾患もしくは状態の性質の決定、または１つの疾患もしくは状態を別の疾患もしくは状態から区別することとして理解される。これは、可能性のある疾患または障害を決定または特定しようと試みるプロセス、およびこのプロセスによって達する意見の両方を指す。診断は、診断手順の意味において、治療および予後判定に関する医学的決定を行うことを可能にする別個の異なるカテゴリーに個体の状態を分類する試みと見なすことができる。その後、診断意見は、疾患または他の状態に関して記載されることが多い。しかしながら、診断は多くの形態をとり得る。これは、疾患、病変、機能不全または障害の存在を検出し、命名することの問題であり得る。管理または予後判定のためのカテゴリーを帰属させることが課題であり得る。これは、連続体上の異常の程度または分類内の異常の種類のいずれかを示し得る。したがって、「診断」という用語はまた、特に無症候性対象、ＥＣに罹患するリスクを有する対象、ＥＣに罹患していると既に診断されている対象、ＥＣに罹患しており、異なる組織学的サブタイプ（特にＥＥＣ対ＮＥＥＣ）およびグレードおよび異なる分子的特徴などを含む異なる予後判定を呈する対象の分類を含む、対象をいくつかの区別された群に分類するための対象の「スクリーニング」または「鑑別診断」を包含する。したがって、本発明の方法は、対象からの分析されたすべての試料の正しい分類のための強力なスクリーニングツールである。

【0034】

一般的に言えば、本明細書に列挙される診断マーカーは、子宮内膜がん試料に対して対照（非がん個体）の単離された試料で発現レベルで差次的に検出される（腫瘍および／またはいくつかのタイプのＥＣの特徴付けを含む）タンパク質である。

【0035】

本明細書で使用される「患者」（または対象）という用語は、典型的にＥＣに関連する１つ以上の徴候または症状を示す任意の対象を指す。本明細書で使用される「患者」という用語はまた、雌の哺乳動物として分類されるすべての動物を指し、家畜および農場の雌の動物、霊長類ならびにヒトを含むが、これらに限定されない。好ましくは、患者は、任意の年齢または人種のヒト女性である。

【0036】

本発明の第１の態様のスクリーニングを含む診断のインビトロでの方法は、（ａ）無症候性対象、（ｂ）子宮内膜がんに罹患している疑いがあると既に特定されている対象、（ｃ）補完的な確認診断アッセイで子宮内膜がんと既に診断されている対象、または（ｄ）疾患に罹患するリスクが高い対象の試料を用いて実施することができる。

【0037】

本明細書で使用される「基準値」という用語は、対象から収集された試料から得られた値またはデータを評価するための基準として使用される所定の基準に関する。基準値または基準レベルは、絶対値（すなわち、カットオフ値またはカットオフ識別値）、相対値、上限または下限を有する値、値の範囲（すなわち、可能なカットオフ値の範囲）、平均値（ａｖｅｒａｇｅ ｖａｌｕｅ）、中央値、平均値（ｍｅａｎ ｖａｌｕｅ）、または特定の対照もしくはベースライン値と比較した値とすることができる。基準値または基準範囲は、例えば、試験されている対象からの試料から得られるがより早い時点での値などの、個々の試料の値に基づくことができる。基準値または範囲は、経時的に年齢が一致する群の対象の集団などからの多数の試料に基づくことができ、または試験される試料を含むもしくは除外する試料のプールに基づくことができる。本発明のバイオマーカーについて基準値を決定した。タンパク質（すなわち、ＭＤＫ）の基準値は、以下の実施例を考慮して開示されるようなより低い値およびより高い値からのものであり得る。各バイオマーカーの値の範囲（タンパク質レベル）および異なるバイオマーカーの値の特定の組み合わせは、高い感度および特異性で、対象の正しい分類を提供する。

【0038】

発現レベルがタンパク質レベルで決定される場合、「基準発現レベル」はタンパク質量の所定の値であり、発現レベルがｍＲＮＡレベルで決定される場合、「基準発現レベル」はｍＲＮＡ量の所定の値である。試料は、疾患の有無、段階、組織学的サブタイプもしくはグレードまたは経過が以前に適切に行われている対象または対象の群から採取される。この値は、とりわけ、疾患の組織学的サブタイプ、子宮内膜癌を発症するまたは罹患するリスクを決定するために、分析される状態が存在する対象を、そのような状態が存在しない対象から（すなわち、子宮内膜がんを有する対象を、子宮内膜がんを有さない対象から）識別するための閾値として使用される。この基準対照レベルはまた、対象が医療レジメンを開始しなければならないかどうか、およびレジメンがどの程度有効であるかを決定するのにも有用である。「基準対照レベル」が導出される１人または複数の対象には、状態が存在しない対象（複数可）、状態が存在する対象（複数可）、またはその両方が含まれ得る。当業者は、一般知識を利用して、本発明の方法のそれぞれについて基準対照レベルを得るために、より適切に対象または対象群を選択することができる。選択された対象の群から基準値を得るための方法は、最新技術において周知である（Ｂｕｒｔｉｓ Ｃ．Ａ．ら、２００８年、第１４章、「Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｖａｌｕｅｓ」の節）。特定の場合において、「基準対照レベル」は、従来のＲＯＣ分析（受信者動作特性分析）によって定義されたカットオフ値である。当業者が理解するように、最適なカットオフ値は、診断または予後判定方法の特定の用途、すなわち目的、診断または予後判定のための標的集団、特異性と感受性との間のバランスなどに従って定義される。

【0039】

本明細書で使用される「予後判定」は、疾患の可能性のある進行および転帰の予測を指す。これには、新生物グレード分類（退形成の増加が新生物の攻撃性と相関するので、新生物における細胞分化のレベルを複製可能な用語で表現しようとする試み）、新生物病期分類（患者における新生物の程度を複製可能な用語で表現しようとする試み）、新生物組織学的サブタイプ、および新生物分子サブタイプが含まれる。本明細書で使用される場合、予後判定は、特定の実施形態では、類内膜子宮内膜がんと非類内膜子宮内膜がんとの間の区別、または低組織学的グレードの子宮内膜がんと高組織学的グレードの子宮内膜がんとの間の区別、または子宮内膜がんの分子サブタイプの間の区別、または再発リスクが高いかもしくは低い患者間の区別を意味する。

【0040】

前述のように、本発明の第１の態様は、子宮内膜がんの診断および／または予後判定のための方法であって、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される単離された試料中、ＭＤＫの存在および／または発現レベルを決定するステップを含む方法である。

【0041】

外陰から子宮頸部までの女性生殖管からの試料は、婦人科医によって通常１年に１回行われる一般的で日常的な検査から得られる試料である。

【0042】

第１の態様の特定の実施形態では、試料は、パップスメア様試料であり、具体的には、パップスメア様に含まれる流体および／または頸管粘液である。換言すれば、試料は子宮頸部試料であり、具体的には子宮頸部試料に含まれる流体である。この頸管粘液は、日常的な婦人科検査の細胞診分析に使用されるのと同様に、サイトブラシを使用して容易に得ることができる。

【0043】

別の特定の実施形態では、試料は子宮吸引（ピペル生検または子宮液とも呼ばれる）である。これは、婦人科管内の癌腫の存在を決定するために使用される一般的で日常的な婦人科検査から得られ、組織鏡検査または子宮内膜掻爬術による生検よりも損傷および不快感が少ない試料として一般的に知られている。この種の試料においても、ＭＤＫによりＥＣと非ＥＣとの区別が可能となることが重要である。

【0044】

この種の日常的な試料において、ＭＤＫが情報価値のあるものとして検出されるのはこれが初めてである。したがって、本発明は、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア様試料、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される試料における、診断マーカーとしてのＭＤＫの使用に関する。特に、本発明は、ＥＣの診断および／または予後判定マーカーとしてのＭＤＫの使用に関する。

【0045】

実施例の節で説明するように、ＭＤＫが決定されるとき、女性生殖管のこの部分の任意の試料における特定のレベルの発現で、高い感度および特異性が達成される（例えば、ＡＵＣ＝０．９１０、ＳＥ＝８２．８、ＳＰ＝８７．８）。これらの生殖管の構造から単離された試料（すなわち、特に子宮頸部からの流体）において追加のマーカーの発現レベルも決定された場合、感度が増加しながら特異性が維持され、真陽性患者のほとんどの分類が可能になった。

【0046】

したがって、第１の態様の方法の別の特定の実施形態では、表１の他のタンパク質のうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを決定するステップをさらに含む。別のより特定の実施形態では、以下のタンパク質のうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを決定するステップ：
アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）、補体Ｃ１ｑサブコンポーネントサブユニットＡ（Ｃ１ＱＡ）、フィブロネクチン１（ＦＮ１）、セルピンファミリーＤメンバー１（ＳＥＲＰＩＮＤ１）、アポリポタンパク質Ｆ前駆体（ＡＰＯＦ）、アポリポタンパク質Ｃ１（ＡＰＯＣ１）、ＴＣＰ１サブユニット６Ａを含有するシャペロン（ＣＣＴ６Ａ）、リポ多糖結合タンパク質前駆体（ＬＢＰ）、血清アミロイドＡ４（ＳＡＡ４）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、リポカリン２（ＬＣＮ２）、レシチン：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）、Ｃ４ｂ結合タンパク質アルファ鎖（Ｃ４ＢＰＡ）、補体Ｃ１ｒ（Ｃ１Ｒ）、線維芽細胞成長因子結合タンパク質１（ＦＧＦＢＰ１）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ｂ（ＳＰＲＲ１Ｂ）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ａ（ＳＰＲＲ１Ａ）およびメタロプロテイナーゼ組織阻害因子２（ＴＩＭＰ２）、リポカリン－２（ＬＣＮ２）、ホスホリパーゼＢドメイン含有１（ＰＬＢＤ１）、ＣＤ４４抗原、ＩｇＧ結合タンパク質Ｆｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、上皮成長因子受容体キナーゼ基質８様タンパク質１（ＥＰＳ８Ｌ１）、アネキシンＡ３（ＡＮＸＡ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ－８（ＭＭＰ８）、ＮＥＤＤ－８タンパク質、カテリシジン抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ）、熱ショックタンパク質ファミリーＥ（Ｈｓｐ１０）メンバー１（ＨＳＰＥ１）、カルメニン（ＣＡＬＵ）、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨＡ）、ポリマー免疫グロブリン受容体（ＰＩＧＲ）、ケラチン８（ＫＲＴ８）、ペリプラキン（ＰＰＬ）、スタスミン１（ＳＴＭＮ１）、カルシフォシン（ＣＡＰＳ）、炭酸脱水酵素１（ＣＡ１）、ビメンチン（ＶＩＭ）、Ｔ複合体１（ＴＣＰ１）、アグリン（ＡＧＲ）、アネキシンＡ７（ＡＮＸＡ７）、イノシトールモノホスファターゼ１（ＩＭＰＡ１）、シンタキシン７（ＳＴＸ７）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、ガレクチン１（ＬＧＡＬＳ１）、ＡＴＰアーゼＨ＋輸送Ｖ１サブユニットＧ１（ＡＴＰ６Ｖ１Ｇ１）、ピルビン酸キナーゼアイソザイムＭ１／Ｍ２（ＰＫＭ）、グリコゲニン１（ＧＹＧ１）、リンパ球特異的タンパク質１（ＬＳＰ１）、造血細胞特異的Ｌｙｎ基質１（ＨＣＬＳ１）、増殖およびアポトーシスアダプタータンパク質１５（ＰＥＡ１５）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ９（Ｓ１００Ａ９）、サイエリン（ＳＣＥＬ）、セルピンファミリーＡメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＡ３）、インテグリンサブユニットベータ２（ＩＴＧＢ２）、ＩｇＧ結合タンパク質のＦｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１タンパク質（ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１）、荷電多胞体タンパク質４Ｂ（ＣＨＭＰ４Ｂ）、およびエキスポーチン－２（ＸＰＯ２）。

【0047】

より特定の実施形態では、本方法は、タンパク質のパネル中、ＭＤＫを常に含むタンパク質のうちの２、３、４、５、６、７、８、９および１０個の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む。インビトロでの方法のさらに別の特定の実施形態では、タンパク質のパネル中、ＭＤＫを含むのタンパク質のうちの２、３、または４個の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む。

【0048】

本方法のより特定の実施形態では、単離された試料中、表４および６のいずれか１つに列挙された群の少なくとも１つの２値のセットにおける、タンパク質の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む。

【0049】

本方法のより特定の実施形態では、単離された試料中、ＭＤＫ、ＬＣＮ２；ＭＤＫ、ＦＮ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＢ；ＭＤＫ、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３；ＭＤＫ、Ｃ４ＢＰＡ；ＭＤＫ、ＭＭＰ８；ＭＤＫ、ＮＥＤＤ－８；ＭＤＫ、ＣＡＭＰ；ＭＤＫ、ＴＩＭＰ２；ＭＤＫ、ＨＳＰＥ１；ＭＤＫ、ＣＡＬＵ；ＭＤＫ、Ｃ１ＱＡ；ＭＤＫ、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＴＩＭＰ２；ＭＤＫ、ＰＩＧＲ；ＭＤＫ、ＫＲＴ８；ＭＤＫ、ＰＰＬ；ＭＤＫ、ＳＰＲＲ１Ａ；ＭＤＫ、ＳＴＭＮ１；ＭＤＫ、ＣＡＰＳ；ＭＤＫ、ＣＡ１；ＭＤＫ、ＣＣＴ６Ａ；ＭＤＫ、ＶＩＭ；ＭＤＫ、ＴＣＰ１；およびＭＤＫ、ＡＧＲＮからなる群の少なくとも１つの２値のセットにおける、タンパク質の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む。

【0050】

本方法のより特定の実施形態では、単離された試料中、表５および７のいずれか１つに列挙された群の少なくとも１つの３値のセットにおける、タンパク質の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む。

【0051】

別の特定の実施形態では、本方法は、単離された試料中、ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＣＳＥ１Ｌ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＦＧＦＢＰ１；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＡＮＸＡ７；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＬＣＮ２；ＭＤＫ、ＡＰＯＦ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＩＭＰＡ１、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＩＴＩＨ２、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＩＭＰＡ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＶＩＭ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＬＭＮＢ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＡＴＰ６Ｖ１Ｇ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＢ、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＩＴＩＨ２、ＬＣＮ２；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＣＡＬＵ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＡＰＯＦ；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＣ１、ＡＮＸＡ７；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、ＴＩＭＰ２、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＨＳＰＥ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＣＡ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＨＣＬＳ１；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＩＭＰＡ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＳＴＸ７；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、Ｃ１Ｒ、ＡＮＸＡ７；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＨＣＬＳ１；ＭＤＫ、ＬＣＡＴ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＡＰＯＢ、Ｓ１００Ａ９；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＳＣＥＬ；ＭＤＫ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＩＴＧＢ２；ＭＤＫ、ＳＣＥＬ、ＡＮＸＡ３；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、Ｃ１Ｒ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＡＰＯＣ１、Ｓ１００Ａ９；ＭＤＫ、ＰＰＬ、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＴＣＰ１、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、ＰＰＬ、ＩＭＰＡ１；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＭＭＰ８；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＰＰＬ；およびＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＰＰＬからなる群の少なくとも１つの３値のセットにおける、タンパク質の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む。

【0052】

より特定の実施形態では、本方法は、単離された試料中、ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７およびＣＳＥ１Ｌによって定義されるセットの存在および／または発現レベルを決定するステップを含む。
さらに別の特定の実施形態では、本方法は、単離された試料中、ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＰＥＡ１５、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＰＥＡ１５、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＦＣＧＢＰ、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＨＳＰＥ１、ＣＤ４４；．ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＣＴＮＮＢ１；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＩＭＰＡ１、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＩＭＰＡ１、ＦＣＧＢＰ、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＩＭＰＡ１、ＦＣＧＢＰ、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＩＭＰＡ１、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＣＣＴ６Ａ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＩＭＰＡ１、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＳＣＥＬ、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ、ＣＡ１；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ、ＮＡＭＰＴ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＣＡＰＳ；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＳＣＥＬ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＡＮＸＡ７、ＣＡＰＳ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＲＡＢ２１；ＭＤＫ、ＳＣＥＬ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ、ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１；ＭＤＫ、ＩＴＩＨ２、ＦＣＧＢＰ、ＣＡＰＳ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＩＭＰＡ１、ＦＣＧＢＰ、ＨＣＬＳ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＦ、ＡＮＸＡ３、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＳＴＭＮ１；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＬＳＰ１、ＶＩＭ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＦＣＧＢＰ、ＬＭＮＢ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＩＭＰＡ１、ＭＭＰ８；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＳＴＭＮ１；ＭＤＫ、ＳＣＥＬ、ＩＭＰＡ１、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＡＮＸＡ７、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＴＣＰ１、ＰＥＡ１５、ＬＭＮＢ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１、ＣＡ１；ＭＤＫ、ＳＣＥＬ、ＩＭＰＡ１、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＫＲＴ８、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１、ＬＭＮＢ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＫＲＴ８、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＣＡＰＳ、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＣＡＰＳ、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、Ｃ１Ｒ、ＦＣＧＢＰ、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＳＣＥＬ、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＴＩＭＰ２、ＣＨＭＰ４Ｂ；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＳＴＭＮ１、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＳＣＥＬ、ＣＨＭＰ４Ｂ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＭＭＰ８、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、Ｃ１Ｒ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、Ｃ４ＢＰＡ、ＦＧＦＢＰ１、ＰＰＬ；ＭＤＫ、ＩＴＩＨ２、ＦＧＦＢＰ１、ＰＰＬ；およびＭＤＫ、ＡＰＯＣ１、ＦＧＦＢＰ１、ＰＰＬからなる群の少なくとも１つの４値のセットにおける、タンパク質の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む。

【0053】

第１の態様の別の実施形態では、場合により上記または下記の実施形態のいずれかと組み合わせて、本方法は以下のステップを含む。
ａ）女性の生殖管から単離された試料中、インビトロで、ＭＤＫの発現レベルを、場合により先の実施形態のいずれか１つに列挙されたタンパク質のうちの１つ以上と組み合わせて決定するステップと、
ｂ）ステップ（ａ）のＭＤＫのレベル、および決定された場合、１つ以上の他のタンパク質のレベルを、子宮内膜がんに罹患している対象からの値もしくは値の区間から選択される各タンパク質についての対応する基準値もしくは基準区間と比較するステップ、および／または子宮内膜がんと他の子宮内膜障害もしくは子宮内膜の状態とを識別するカットオフ値と比較するステップと、
ｃ）少なくともＭＤＫのレベルが、このがんに罹患している対象からの値もしくは値の区間の範囲内である場合、および／またはカットオフ値に対する少なくともＭＤＫのレベルが子宮内膜がん群に分類される場合、対象を子宮内膜がんと診断するステップ。

【0054】

他の婦人科障害または状態という表現は、健康な子宮内膜、子宮内膜症、子宮内膜ポリープ、子宮内膜筋腫、萎縮性子宮内膜、子宮の生理学的損傷、または膣からの異常出血を引き起こし得る任意の他の状態を含むが、これらに限定されない。

【0055】

本発明に開示される方法の別の特定の実施形態では、特に血圧、血糖、年齢、グレード分類または病期分類のスコア（すなわち、Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ（ＦＩＧＯ）の病期）、子宮内膜の厚さ、ＣＡ１２５およびＨＥ４分子マーカー、ＡＶＢ、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、対象の１つ以上の臨床または特徴パラメータを決定するステップをさらに含む。

【0056】

第１の態様またはその実施形態のいずれかによる方法の別の特定の実施形態では、ＭＤＫおよび他のタンパク質の発現レベルは、タンパク質レベルで決定される。

【0057】

より特定の実施形態では、タンパク質レベルは、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、ラテラルフローアッセイ、質量分析、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるアッセイまたは技術によって決定される。

【0058】

別の特定の実施形態では、タンパク質の発現レベルは、タンパク質に特異的に結合することができる抗体またはその断片を使用して決定される。

【0059】

より特には、当該抗体またはその断片はキットの一部を形成する。

【0060】

あるいは、発現レベルはｍＲＮＡレベルで決定される。以下、この代替方法についてさらに詳細に説明する。

【0061】

第２の態様では、本発明は、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、パップスメア様試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される試料における、子宮内膜がんの診断および／または予後判定のためのインビトロのマーカーとしてのＭＤＫの使用に関する。

【0062】

第２の態様の特定の実施形態では、試料はパップスメアであり、具体的には、パップスメアに含まれる流体および／または頸管粘液である。

【0063】

第２の態様の別の特定の実施形態でも、ＭＤＫは、アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）、補体Ｃ１ｑサブコンポーネントサブユニットＡ（Ｃ１ＱＡ）、フィブロネクチン１（ＦＮ１）、セルピンファミリーＤメンバー１（ＳＥＲＰＩＮＤ１）、アポリポタンパク質Ｆ前駆体（ＡＰＯＦ）、アポリポタンパク質Ｃ１（ＡＰＯＣ１）、ＴＣＰ１サブユニット６Ａを含有するシャペロン（ＣＣＴ６Ａ）、リポ多糖結合タンパク質前駆体（ＬＢＰ）、血清アミロイドＡ４（ＳＡＡ４）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、リポカリン２（ＬＣＮ２）、レシチン：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）、Ｃ４ｂ結合タンパク質アルファ鎖（Ｃ４ＢＰＡ）、補体Ｃ１ｒ（Ｃ１Ｒ）、線維芽細胞成長因子結合タンパク質１（ＦＧＦＢＰ１）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ｂ（ＳＰＲＲ１Ｂ）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ａ（ＳＰＲＲ１Ａ）およびメタロプロテイナーゼ組織阻害因子２（ＴＩＭＰ２）、リポカリン－２（ＬＣＮ２）、ホスホリパーゼＢドメイン含有１（ＰＬＢＤ１）、ＣＤ４４抗原、ＩｇＧ結合タンパク質Ｆｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、上皮成長因子受容体キナーゼ基質８様タンパク質１（ＥＰＳ８Ｌ１）、アネキシンＡ３（ＡＮＸＡ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ－８（ＭＭＰ８）、ＮＥＤＤ－８タンパク質、カテリシジン抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ）、熱ショックタンパク質ファミリーＥ（Ｈｓｐ１０）メンバー１（ＨＳＰＥ１）、カルメニン（ＣＡＬＵ）、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨＡ）、ポリマー免疫グロブリン受容体（ＰＩＧＲ）、ケラチン８（ＫＲＴ８）、ペリプラキン（ＰＰＬ）、スタスミン１（ＳＴＭＮ１）、カルシフォシン（ＣＡＰＳ）、炭酸脱水酵素１（ＣＡ１）、ビメンチン（ＶＩＭ）、Ｔ複合体１（ＴＣＰ１）、アグリン（ＡＧＲ）、アネキシンＡ７（ＡＮＸＡ７）、イノシトールモノホスファターゼ１（ＩＭＰＡ１）、シンタキシン７（ＳＴＸ７）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、ガレクチン１（ＬＧＡＬＳ１）、ＡＴＰアーゼＨ＋輸送Ｖ１サブユニットＧ１（ＡＴＰ６Ｖ１Ｇ１）、ピルビン酸キナーゼアイソザイムＭ１／Ｍ２（ＰＫＭ）、グリコゲニン１（ＧＹＧ１）、リンパ球特異的タンパク質１（ＬＳＰ１）、造血細胞特異的Ｌｙｎ基質１（ＨＣＬＳ１）、増殖およびアポトーシスアダプタータンパク質１５（ＰＥＡ１５）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ９（Ｓ１００Ａ９）、サイエリン（ＳＣＥＬ）、セルピンファミリーＡメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＡ３）、インテグリンサブユニットベータ２（ＩＴＧＢ２）、ＩｇＧ結合タンパク質のＦｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１タンパク質（ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１）、荷電多胞体タンパク質４Ｂ（ＣＨＭＰ４Ｂ）、およびエキスポーチン－２（ＸＰＯ２）の１つ以上を含む複数のバイオマーカーのパネルにおけるインビトロのマーカーとして使用される。

【0064】

第２の態様の別の特定の実施形態でも、ＭＤＫは、表１に列挙された群からの他のタンパク質のうちの１つ以上を含む複数のバイオマーカーのパネルにおけるインビトロのマーカーとして使用される。

【0065】

ＭＤＫを含むバイオマーカーのこれらのパネルは、特定の実施形態では、２つからすべての列挙されたマーカーを含む。特に、パネルは、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０個のバイオマーカーを含み、そのうちの１つはＭＤＫである。

【0066】

表１のタンパク質のうちの１つ以上を含むバイオマーカーのパネルも開示される。特定の例では、２つからすべての列挙されたマーカーを含むパネル。特に、パネルは、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０個のバイオマーカーを含む。

【0067】

ＭＤＫおよび／または上に列挙した１つ以上のタンパク質によるＥＣの診断は、示されるように、これらのタンパク質の発現レベルを決定するための手段を含むキットの使用によって行うことができる。前述のように、本発明の第３の態様は、固体支持体と、ＭＤＫの存在を検出するためのおよび／または発現レベルを決定するための手段と、場合により、表１に列挙した１つ以上のタンパク質、特にアポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）、補体Ｃ１ｑサブコンポーネントサブユニットＡ（Ｃ１ＱＡ）、フィブロネクチン１（ＦＮ１）、セルピンファミリーＤメンバー１（ＳＥＲＰＩＮＤ１）、アポリポタンパク質Ｆ前駆体（ＡＰＯＦ）、アポリポタンパク質Ｃ１（ＡＰＯＣ１）、ＴＣＰ１サブユニット６Ａを含有するシャペロン（ＣＣＴ６Ａ）、リポ多糖結合タンパク質前駆体（ＬＢＰ）、血清アミロイドＡ４（ＳＡＡ４）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、リポカリン２（ＬＣＮ２）、レシチン：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）、Ｃ４ｂ結合タンパク質アルファ鎖（Ｃ４ＢＰＡ）、補体Ｃ１ｒ（Ｃ１Ｒ）、線維芽細胞成長因子結合タンパク質１（ＦＧＦＢＰ１）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ｂ（ＳＰＲＲ１Ｂ）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ａ（ＳＰＲＲ１Ａ）およびメタロプロテイナーゼ組織阻害因子２（ＴＩＭＰ２）、リポカリン－２（ＬＣＮ２）、ホスホリパーゼＢドメイン含有１（ＰＬＢＤ１）、ＣＤ４４抗原、ＩｇＧ結合タンパク質Ｆｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、上皮成長因子受容体キナーゼ基質８様タンパク質１（ＥＰＳ８Ｌ１）、アネキシンＡ３（ＡＮＸＡ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ－８（ＭＭＰ８）、ＮＥＤＤ－８タンパク質、カテリシジン抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ）、熱ショックタンパク質ファミリーＥ（Ｈｓｐ１０）メンバー１（ＨＳＰＥ１）、カルメニン（ＣＡＬＵ）、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨＡ）、ポリマー免疫グロブリン受容体（ＰＩＧＲ）、ケラチン８（ＫＲＴ８）、ペリプラキン（ＰＰＬ）、スタスミン１（ＳＴＭＮ１）、カルシフォシン（ＣＡＰＳ）、炭酸脱水酵素１（ＣＡ１）、ビメンチン（ＶＩＭ）、Ｔ複合体１（ＴＣＰ１）、アグリン（ＡＧＲ）、アネキシンＡ７（ＡＮＸＡ７）、イノシトールモノホスファターゼ１（ＩＭＰＡ１）、シンタキシン７（ＳＴＸ７）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、ガレクチン１（ＬＧＡＬＳ１）、ＡＴＰアーゼＨ＋輸送Ｖ１サブユニットＧ１（ＡＴＰ６Ｖ１Ｇ１）、ピルビン酸キナーゼアイソザイムＭ１／Ｍ２（ＰＫＭ）、グリコゲニン１（ＧＹＧ１）、リンパ球特異的タンパク質１（ＬＳＰ１）、造血細胞特異的Ｌｙｎ基質１（ＨＣＬＳ１）、増殖およびアポトーシスアダプタータンパク質１５（ＰＥＡ１５）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ９（Ｓ１００Ａ９）、サイエリン（ＳＣＥＬ）、セルピンファミリーＡメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＡ３）、インテグリンサブユニットベータ２（ＩＴＧＢ２）、ＩｇＧ結合タンパク質のＦｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１タンパク質（ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１）、荷電多胞体タンパク質４Ｂ（ＣＨＭＰ４Ｂ）、およびエキスポーチン－２（ＸＰＯ２）からなる群から選択される１つ以上の存在を検出するためのおよび／または発現レベルを決定するための手段とを含む、キットである。
本発明の意味における「デバイス」または「キット」は、ＥＣの診断および／もしくは予後判定のため、または一旦診断された医療レジメンについての患者の選択のためのアッセイまたは方法を実施するために使用することができる、本発明によるバイオマーカー（試料中の目的のタンパク質のレベル）またはバイオマーカーのパネル（の組み合わせ）を決定するためのアッセイまたは方法である。例は、目的のタンパク質の存在およびレベルを検出するための試薬手段を含む、当技術分野で公知のキャリアプレート、テストストリップ（ｔｅｓｔ ｓｔｒｉｐｅｓ）、バイオチップアレイ、電気化学センサなどである。本明細書で使用されるキットは、輸送および貯蔵を可能にするように包装された本発明の方法を実施するために必要な異なる試薬（または試薬手段）を含む製品を指す。キットの構成要素を包装するのに適した材料には、水晶、プラスチック（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート）、ボトル、バイアル、紙、または封筒が挙げられる。本方法を実施するための異なるフォーマットの説明書も、いくつかの実施形態では、当該キットに含まれる。説明書の特定のフォーマットは、リーフレット、例えば電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ）、または光学媒体（例えば、ＣＤ－ＲＯＭ、ＤＶＤ）、またはオーディオ材料などの、読み取りまたは理解が可能な説明書を記憶することができる電子支援から選択される。

【0068】

本発明のキットの特定の実施形態では、ＭＤＫ、ＬＣＮ２；ＭＤＫ、ＦＮ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＢ；ＭＤＫ、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３；ＭＤＫ、Ｃ４ＢＰＡ；ＭＤＫ、ＭＭＰ８；ＭＤＫ、ＮＥＤＤ－８；ＭＤＫ、ＣＡＭＰ；ＭＤＫ、ＴＩＭＰ２；ＭＤＫ、ＨＳＰＥ１；ＭＤＫ、ＣＡＬＵ；ＭＤＫ、Ｃ１ＱＡ；ＭＤＫ、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＴＩＭＰ２；ＭＤＫ、ＰＩＧＲ；ＭＤＫ、ＫＲＴ８；ＭＤＫ、ＰＰＬ；ＭＤＫ、ＳＰＲＲ１Ａ；ＭＤＫ、ＳＴＭＮ１；ＭＤＫ、ＣＡＰＳ；ＭＤＫ、ＣＡ１；ＭＤＫ、ＣＣＴ６Ａ；ＭＤＫ、ＶＩＭ；ＭＤＫ、ＴＣＰ１；およびＭＤＫ、ＡＧＲＮからなる群の少なくとも１つの２値のセットの発現レベルを検出および／または定量するための手段（すなわち、試薬手段）を含む。

【0069】

別の特定の実施形態では、２値のセットは、以下の表４および／または表６の少なくとも１つから選択される（実施例を参照）。

【0070】

本発明のキットの別の特定の実施形態では、ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＣＳＥ１Ｌ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＦＧＦＢＰ１；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＡＮＸＡ７；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＬＣＮ２；ＭＤＫ、ＡＰＯＦ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＩＭＰＡ１、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＩＴＩＨ２、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＩＭＰＡ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＶＩＭ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＬＭＮＢ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＡＴＰ６Ｖ１Ｇ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＢ、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＩＴＩＨ２、ＬＣＮ２；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＣＡＬＵ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＡＰＯＦ；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＣ１、ＡＮＸＡ７；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、ＴＩＭＰ２、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＨＳＰＥ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＣＡ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＨＣＬＳ１；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＩＭＰＡ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＳＴＸ７；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、Ｃ１Ｒ、ＡＮＸＡ７；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＨＣＬＳ１；ＭＤＫ、ＬＣＡＴ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＡＰＯＢ、Ｓ１００Ａ９；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＳＣＥＬ；ＭＤＫ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＩＴＧＢ２；ＭＤＫ、ＳＣＥＬ、ＡＮＸＡ３；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、Ｃ１Ｒ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＡＰＯＣ１、Ｓ１００Ａ９；ＭＤＫ、ＰＰＬ、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＴＣＰ１、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、ＰＰＬ、ＩＭＰＡ１；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＭＭＰ８；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＰＰＬ；およびＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＰＰＬからなる群の少なくとも１つの３値のセットの発現レベルを検出および／または定量するための手段（すなわち、試薬手段）を含む。

【0071】

別の特定の実施形態では、３値のセットは、以下の表５および／または表７の少なくとも１つから選択される（実施例を参照）。

【0072】

本発明のキットの別の特定の実施形態では、ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＰＥＡ１５、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＰＥＡ１５、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＦＣＧＢＰ、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＨＳＰＥ１、ＣＤ４４；．ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＣＴＮＮＢ１；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＩＭＰＡ１、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＩＭＰＡ１、ＦＣＧＢＰ、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＩＭＰＡ１、ＦＣＧＢＰ、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＩＭＰＡ１、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＣＣＴ６Ａ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＩＭＰＡ１、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＳＣＥＬ、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ、ＣＡ１；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ、ＮＡＭＰＴ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＣＡＰＳ；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＳＣＥＬ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＡＮＸＡ７、ＣＡＰＳ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＲＡＢ２１；ＭＤＫ、ＳＣＥＬ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ、ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１；ＭＤＫ、ＩＴＩＨ２、ＦＣＧＢＰ、ＣＡＰＳ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＩＭＰＡ１、ＦＣＧＢＰ、ＨＣＬＳ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＦ、ＡＮＸＡ３、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＳＴＭＮ１；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＬＳＰ１、ＶＩＭ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＦＣＧＢＰ、ＬＭＮＢ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＩＭＰＡ１、ＭＭＰ８；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＳＴＭＮ１；ＭＤＫ、ＳＣＥＬ、ＩＭＰＡ１、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＡＮＸＡ７、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＴＣＰ１、ＰＥＡ１５、ＬＭＮＢ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１、ＣＡ１；ＭＤＫ、ＳＣＥＬ、ＩＭＰＡ１、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＫＲＴ８、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１、ＬＭＮＢ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＫＲＴ８、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＣＡＰＳ、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＥＰＳ８Ｌ１、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＣＡＰＳ、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、Ｃ１Ｒ、ＦＣＧＢＰ、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＳＣＥＬ、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＴＩＭＰ２、ＣＨＭＰ４Ｂ；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＳＴＭＮ１、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＳＣＥＬ、ＣＨＭＰ４Ｂ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＭＭＰ８、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、Ｃ１Ｒ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、Ｃ４ＢＰＡ、ＦＧＦＢＰ１、ＰＰＬ；ＭＤＫ、ＩＴＩＨ２、ＦＧＦＢＰ１、ＰＰＬ；およびＭＤＫ、ＡＰＯＣ１、ＦＧＦＢＰ１、ＰＰＬからなる群の少なくとも１つの４値のセットの発現レベルを検出および／または定量するための手段（すなわち、試薬手段）を含む。

【0073】

第１の態様の別の特定の実施形態では、特に婦人科試料および／または子宮頸部試料中でＭＤＫレベルが決定される診断および／または予後判定のための方法は、子宮内膜がんの再発または再発リスクの診断方法であって、単離された女性の試料中、ＭＵＣ１、ＰＲＳＳ８、ＰＮＰ、ＡＰＥＨ、ＭＵＣ１６、Ｃ９、ＳＥＲＰＩＮＣ１、ＳＥＲＰＩＮＡ１、Ｆ２、ＡＭＢＰ、ＨＰ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＣＦＢ、ＯＲＭ２、ＣＡＴ、ＧＮＡＩ２、Ａ１ＢＧ、ＦＮ１、Ｃ７、ＡＳＴＲＧＬ１、Ｂ４ＧＡＬＴ１、ＣＡＰＳ、ＣＢＸ３、ＣＤ１６３、ＣＤＶ３、ＤＭＢＴ１、ＤＳＧ３、ＥＨＤ１、ＧＯＬＭ１、ＭＵＣ５ＡＣ、ＮＭＥ１、ＮＴ５Ｅ、ＰＤＬＩＭ５、ＲＤＸおよびＶＡＳＰからなる群から選択されるタンパク質のうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを決定するステップをさらに含む、方法である。

【0074】

前の段落に列挙された他の１つ以上と組み合わせたＭＤＫは、特定の実施形態では、子宮頸部試料および／または子宮吸引中で決定される。

【0075】

したがって、子宮内膜がんの再発または再発リスクの診断方法であって、以下のタンパク質（すなわち、存在または非存在および／またはそれらのレベル）：ＭＵＣ１、ＰＲＳＳ８、ＰＮＰ、ＡＰＥＨ、ＭＵＣ１６、Ｃ９、ＳＥＲＰＩＮＣ１、ＳＥＲＰＩＮＡ１、Ｆ２、ＡＭＢＰ、ＨＰ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＣＦＢ、ＯＲＭ２、ＣＡＴ、ＧＮＡＩ２、Ａ１ＢＧ、ＦＮ１、Ｃ７、ＡＳＴＲＧＬ１、Ｂ４ＧＡＬＴ１、ＣＡＰＳ、ＣＢＸ３、ＣＤ１６３、ＣＤＶ３、ＤＭＢＴ１、ＤＳＧ３、ＥＨＤ１、ＧＯＬＭ１、ＭＵＣ５ＡＣ、ＮＭＥ１、ＮＴ５Ｅ、ＰＤＬＩＭ５、ＲＤＸ、およびＶＡＳＰの１つ以上が、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分の、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、パップスメア様試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される単離された試料中で決定される方法も開示される。

【0076】

以下の実施例に示すように、これらのマーカーは、再発性ＥＣ患者と非再発性ＥＣ患者とを区別するための注目に値する精度（ＡＵＣ＞０．７５）を与えた。特に、ＡＳＴＲＧＬ１、Ｂ４ＧＡＬＴ１、ＣＡＰＳ、ＣＢＸ３、ＣＤ１６３、ＣＤＶ３、ＤＭＢＴ１、ＤＳＧ３、ＥＨＤ１、ＧＯＬＭ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ５ＡＣ、ＮＭＥ１、ＮＴ５Ｅ、ＰＤＬＩＭ５、ＰＲＳＳ８、ＲＤＸおよびＶＡＳＰから選択される１つまたは複数のマーカーは、単離された試料中、存在非存在統計分析のみでそのような区別を可能にした。

【0077】

例えば、第１の態様の方法について示される試料の種類または決定されるマーカーの数に関するすべての特定の実施形態は、子宮内膜がんの再発または再発リスクの診断を可能にする方法のいずれかにも適用される。

【0078】

「再発」については、再燃または再発性としても知られており、過去の（典型的には医学的な）状態の再発である。「再発リスク」は、そのような再発の確率に関する。

【0079】

したがって、子宮内膜がんの再発または再発リスクを診断するための方法の特定の実施形態では、本方法は以下のステップを含む：
ａ）女性の生殖管から単離された試料中、インビトロで、列挙されたタンパク質のうちの１つ以上の発現レベルを決定するステップと、
ｂ）ステップ（ａ）のこれらの１つ以上の他のタンパク質のレベルを、再発性から生じる子宮内膜がんに罹患している対象からの値または値の区間から選択される各タンパク質についての対応する基準値または基準区間と比較するステップと、
ｃ）少なくともタンパク質のうちの１つのレベルが、子宮内膜がんの再発に罹患している対象からの値または値の区間の範囲内である場合、対象を子宮内膜がんの再発と診断するステップ。

【0080】

第１の態様の別の特定の実施形態では、特に婦人科試料および／または子宮頸部試料でＭＤＫレベルが決定される診断および／または予後判定のための方法は、子宮内膜がんサブタイプおよび／または子宮内膜がん分子分類の診断方法であって、単離された女性の試料中、ＬＢＰ、ＶＷＦ、ＧＰＬＤ１、ＳＡＡ４、ＡＰＯＦ、Ｃ４ＢＰＡ、ＳＰＲＲ１Ａ、ＳＥＲＰＩＮＤ１、ＡＰＯＢ、ＳＣＥＬ、ＬＣＡＴ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＬＭＯ７、Ｃ１Ｒ、ＭＵＣ４、ＦＮ１、ＳＰＲＲ１Ｂ、Ｃ１ＱＡ、ＩＴＩＨ２、ＴＩＭＰ２、ＡＰＯＣ１、ＧＲＮ、ＡＮＸＡ３、Ｓ１００Ａ９、ＰＬＢＤ１、ＰＩＧＲ、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＨＳＰＥ１からなる群から選択されるタンパク質のうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを決定するステップをさらに含む、方法である。

【0081】

前の段落に列挙された他の１つ以上と組み合わせたＭＤＫは、特定の実施形態では、子宮頸部試料および／または子宮吸引中で決定される。

【0082】

したがって、本明細書ではまた、子宮内膜がんサブタイプおよび／または子宮内膜がん分子分類の診断方法であって、以下のタンパク質（すなわち、存在または非存在および／またはそれらのレベル）：ＬＢＰ、ＶＷＦ、ＧＰＬＤ１、ＳＡＡ４、ＡＰＯＦ、Ｃ４ＢＰＡ、ＳＰＲＲ１Ａ、ＳＥＲＰＩＮＤ１、ＡＰＯＢ、ＳＣＥＬ、ＬＣＡＴ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＬＭＯ７、Ｃ１Ｒ、ＭＵＣ４、ＦＮ１、ＳＰＲＲ１Ｂ、Ｃ１ＱＡ、ＩＴＩＨ２、ＴＩＭＰ２、ＡＰＯＣ１、ＧＲＮ、ＡＮＸＡ３、Ｓ１００Ａ９、ＰＬＢＤ１、ＰＩＧＲ、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＨＳＰＥ１の１つ以上が、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分の、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される単離された試料中で決定される、方法も開示される。

【0083】

例えば、第１の態様の方法について示される試料の種類または決定されるマーカーの数に関するすべての特定の実施形態は、それらの間の分子的区別の点から子宮内膜がんの種類の診断を可能にする方法のいずれかにも適用される。

【0084】

子宮内膜がん分子サブタイプの診断方法の特定の例では、サブタイプは、ＰＯＬＥ超変異またはＰＯＬＥ変異（ＰＯＬＥＭｕｔ）、ＭＳＩ：マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）またはミスマッチ修復タンパク質発現の喪失に基づくＭＭＲ欠損（ＭＭＲｄ）；低コピー数（低ＣＮ）または特異的分子プロファイルなし（ＮＳＭＰ）；高コピー数（高ＣＮ）または変異様免疫染色（ｐ５３ ａｂｎ）に基づくｐ５３異常からなる群から選択される。

【0085】

実施例のデータは、患者のパップスメア様試料（子宮頸部試料、頸管粘液とも呼ばれる）で分析したこれらのマーカーのそれぞれで得られたＥＣサブタイプ間の統計的有意性を示す。

【0086】

子宮内膜がんサブタイプの診断のための診断方法の特定の実施形態では、本方法は以下のステップを含む：
ａ）女性の生殖管から単離された試料中、インビトロで、列挙されたタンパク質のうちの１つ以上の発現レベルを決定するステップと、
ｂ）ステップ（ａ）のこれらの１つ以上の他のタンパク質のレベルを、特定の子宮内膜がんサブタイプに罹患している対象からの値または値の区間から選択される各タンパク質についての対応する基準値または基準区間と比較するステップと、
ｃ）少なくともタンパク質のうちの１つのレベルが、その子宮内膜がんサブタイプに罹患している対象からの値または値の区間の範囲内である場合、対象を当該子宮内膜がんサブタイプと診断するステップ。

【0087】

本発明のキットの別の特定の実施形態では、タンパク質の発現レベルを検出するための手段は、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、ラテラルフローアッセイ、質量分析、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるアッセイまたは技術を実施するための手段である。

【0088】

さらにより特定の実施形態では、キット中のタンパク質の発現レベルを検出するための手段は、抗体またはその断片である。

【0089】

さらに別のより特定の実施形態では、キットは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を実施するためのものである。

【0090】

本発明のキットの別の特定の実施形態では、個々の試料を分類するためのパネル図をさらに含む。

【0091】

好ましい実施形態では、異なるバイオマーカー（タンパク質）のレベルをアッセイするための試薬手段は、キットを形成するバイオマーカーをアッセイするための、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも１００％の総量の試薬を含む。したがって、ＭＤＫ（および場合により、先に列挙したタンパク質のうちの１つ以上）のレベルをアッセイするための試薬を含むキットの特定の場合において、当該バイオマーカーに特異的な試薬（すなわち、タンパク質に特異的に結合する抗体）は、キットに存在する少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも１００％の抗体を含む。したがって、これらのキットは、ＭＤＫ（および場合により、先に列挙したタンパク質のうちの１つ以上）のレベルを検出するための試薬手段を主に含む単純化されたキットである。

【0092】

別の特定の実施形態では、本発明のキットは診療現場での試験として考えられる。より具体的には、それらはラテラルフロー試験または電気化学センサの形態である。

【0093】

別の特定の実施形態では、本発明によるキットは、支持体（特に固体支持体）および生体流体試料、特に子宮頸部の全流体の堆積のための１つ以上の試料入口ポートと、マーカータンパク質、特に抗体に特異的に結合する手段／試薬を含む反応領域とを含み、試料入口ポートは反応領域と接続されている。別のより特定の実施形態では、キットは、検出されるマーカー（１、２または３または４）と同数の試料入口ポートと、それに接続された対応する反応領域とを含む。別の実施形態では、キットは、１つの単一の入口インポートと、同じ数の反応領域に接続する毛細管トラックを備え、当該毛細管トラックは、各対応する接続された反応領域に試料の一部を導く。２つ以上の反応領域を含むキットはマルチプレックスキットである。

【0094】

より特定の実施形態では、キットは、２セット～８０セットの組み合わせの発現レベルを検出するための手段を含む。

【0095】

本発明のキットがＥＬＩＳＡキットである特定の場合において、それらは、固体支持体と、検出される標的タンパク質に特異的に結合する抗体またはその断片とを含み、これらの抗体は、シグナルを生成することができるレポーター分子とコンジュゲートされる。

【0096】

「固体支持体」には、ニトロセルロース膜、ガラスまたはポリマーが挙げられる。最も一般的に使用されるポリマーは、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニルまたはポリプロピレンである。固体支持体は、ストリップ、チューブ、ビーズ、ディスクもしくはマイクロプレート、またはイムノアッセイを行うのに適した任意の他の表面の形態であり得る。

【0097】

本明細書で使用される「レポーター分子」は、その化学的性質により、抗原結合抗体の検出を可能にする分析的に同定可能なシグナルを提供する分子を意味する。検出は定性的または定量的のいずれであってもよい。このタイプのアッセイにおいて最も一般的に使用されるレポーター分子は、酵素、フルオロフォアまたは放射性核種含有分子（すなわち、放射性同位体）のいずれかである。酵素イムノアッセイの場合、酵素は、一般にグルタルアルデヒドまたは過ヨウ素酸塩によって第２の抗体にコンジュゲートされる。しかしながら、容易に認識されるように、多種多様な異なるコンジュゲーション技術が存在し、これらは当業者に容易に利用可能である。一般的に使用される酵素には、とりわけ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼおよびアルカリホスファターゼが挙げられる。特定の酵素と共に使用される基質は、一般に、対応する酵素による加水分解時に、検出可能な色変化の生成のために選択される。例えば、５－ブロモ－４－クロロ－３－インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウムは、アルカリホスファターゼコンジュゲートとの使用に適している。ペルオキシダーゼ複合体の場合、１，２－フェニレンジアミン、５－アミノサリチル酸、３，３：５，５：テトラメチルベンジジンまたはトリジンが一般的に使用される。上記の発色基質ではなく蛍光生成物を生じる蛍光発生基質を使用することも可能である。蛍光発生基質の例は、フルオレセインおよびローダミンである。特定の波長の光の照射によって活性化されると、蛍光色素標識抗体は光エネルギーを吸収し、分子内に励起状態を誘導し、続いて光学顕微鏡で視覚的に検出可能な特徴的な色の光を放出する。免疫蛍光法およびＥＩＡ技術はいずれも当技術分野において十分に確立されており、本方法にとって特に好ましい。しかし、他のレポーター分子、例えば放射性同位体、化学発光および生物発光分子および／または色素および他の発色性物質も使用され得る。

【0098】

特定のレポーター分子コンジュゲート抗体の選択は、大部分は、本発明の試験キットの意図される使用および使用者によって決定される。

【0099】

バイオマーカーレベルを測定するための結合アッセイは、固相または均一フォーマットを使用し得る。適切なアッセイ方法には、サンドイッチまたは競合的結合アッセイが含まれる。サンドイッチイムノアッセイの例は、両方とも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第４，１６８，１４６号明細書および米国特許第４，３６６，２４１号明細書に記載されている。競合イムノアッセイの例としては、その各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第４，２３５，６０１号明細書、米国特許第４，４４２，２０４号明細書および米国特許第５，２０８，５３５号明細書に開示されているものが挙げられる。

【0100】

マルチプレックスアッセイフォーマット、例えば、結合試薬アレイの使用による多重化、標識のスペクトル識別を使用する多重化、例えばＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）システムを使用して粒子に対して行われる結合アッセイのフローサイトメトリー分析の多重化を使用して、複数のバイオマーカーを測定することができる。

【0101】

本発明のアッセイ（方法およびキット）は、任意の好適な方法によって行われ得る。一実施形態では、バイオマーカーレベルは、単一の試料において測定され、それらの測定は、アッセイプレートの単一のウェル、単一のアッセイカートリッジ、単一のラテラルフローデバイス、単一のアッセイチューブなどを含むがこれらに限定されない、単一のアッセイチャンバまたはアッセイデバイスにおいて行われ得る。バイオマーカーレベルは、当業者が利用可能ないくつかの技術のいずれか、例えば、直接の物理的測定（例えば、質量分析）または結合アッセイ（例えば、イムノアッセイ、凝集アッセイおよびイムノクロマトグラフィーアッセイ）を使用して測定され得る。この方法はまた、化学反応、例えば、光学吸光度の変化、蛍光の変化、化学発光または電気化学発光の生成、反射率、屈折率または光散乱の変化、表面からの検出可能な標識の蓄積または放出、酸化または還元または酸化還元種、電流または電位、磁場の変化などから生じるシグナルを測定するステップを含み得る。適切な検出技術は、標識のフォトルミネッセンス（例えば、蛍光、時間分解蛍光、エバネッセント波蛍光、アップコンバージョン燐光体（ｕｐ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｐｈｏｓｐｈｏｒｓ）、多光子蛍光などの測定を介して）、化学発光、電気化学発光、光散乱、光学吸光度、放射能、磁場、酵素活性（例えば、光学吸光度もしくは蛍光の変化を引き起こすか、または化学発光を引き起こす酵素反応を介して酵素活性を測定することによって）を介した標識の測定を通じて標識結合試薬の関与を測定することによって結合事象を検出することができる。あるいは、標識の使用を必要としない検出技術、例えば、分析物の質量（例えば、表面弾性波測定）、屈折率（例えば、表面プラズモン共鳴測定）、または固有の発光の測定に基づく技術を使用してもよい。

【0102】

別の態様では、本発明は、ＥＣの診断および／または予後判定のための、第３の態様および／またはその実施形態のいずれか１つによる本発明のキットの使用に関する。

【0103】

したがって、特定の実施形態において、本発明は、本発明の方法のいずれかにおける本発明のキットの使用に関する。

【0104】

本発明の態様および実施形態のいずれかについて上記または下記に提供される実施形態のいずれかでは、ＭＤＫおよび場合により任意の他のタンパク質の発現レベルがタンパク質レベルで決定される。この実施形態では、タンパク質マーカーには、天然配列ペプチド、アイソフォーム、キメラポリペプチド、ポリペプチドの修飾形態およびその誘導体を含むマーカーのすべてのホモログ、断片および前駆体が含まれるが、これらに限定されない。

【0105】

上記または下記に提供される特定の実施形態では、発現レベルは、示されるように、免疫化学によって決定される。次の段落は、この選択肢をより詳細に示している。

【0106】

本明細書で使用される「免疫化学」という用語は、試料中の抗原（通常はタンパク質およびペプチドであり、この場合、単独でまたは組み合わせた、上に列挙したタンパク質のいずれか）を、当該抗原に特異的に結合する抗体の原理を利用することによって検出するための様々な技術を指す。抗体－抗原相互作用の可視化は、いくつかの方法で達成することができる。最も一般的な例では、抗体は、発色反応を触媒することができるペルオキシダーゼなどの酵素にコンジュゲートされる。あるいは、抗体は、フルオレセインまたはローダミンなどのフルオロフォアにタグ付けすることもできる。免疫化学技術は、直接的または間接的であり得る。直接法は一段階染色法であり、抗原と直接反応する標識抗体（例えば、ＦＩＴＣコンジュゲート抗血清）を含む。この技術は１つの抗体のみを利用し、したがって単純かつ迅速であるが、間接的な方法に伴うようなシグナル増幅がほとんどないため感度が低く、間接的な方法よりもあまり一般的に使用されない。間接法は、試料中の標的抗原に結合する非標識一次抗体（第１の層）と、一次抗体と反応する標識二次抗体（第２の層）とを含む。この方法は、二次抗体が蛍光または酵素レポーターにコンジュゲートされている場合、各一次抗体へのいくつかの二次抗体の結合に起因するシグナル増幅のため、直接検出戦略よりも感度が高い。

【0107】

二次抗体がいくつかのビオチン分子にコンジュゲートされ、アビジン、ストレプトアビジンまたはニュートラアビジン酵素の複合体をリクルートすることができる場合、さらなる増幅を達成することができる。間接法は、そのより高い感度とは別に、比較的少数の標準的なコンジュゲート（標識）二次抗体のみを生成する必要があるという利点も有する。直接法では、目的の抗原ごとに各一次抗体を標識する必要があり得る。（特定の標的核酸配列に特異的に結合するように設計された）タグ付き核酸プローブを標識抗体で後に検出することができる場合、免疫化学技術を使用して特定の核酸配列を検出することもできることに留意しなければならない。したがって、タンパク質の検出は、標的タンパク質ＲＮＡの特異的配列に結合するように設計されたタグ付き核酸を使用し、次いでタグに選択的に結合する標識抗体で当該タグ付き核酸を検出することによって行うことができる。

【0108】

適切なイムノアッセイ手順には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ、例えばマルチプレックスＥＬＩＳＡ）、酵素イムノドットアッセイ、凝集アッセイ、抗体－抗原－抗体サンドイッチアッセイ、抗原－抗体－抗原サンドイッチアッセイ、免疫クロマトグラフィー、または当業者に周知の他のイムノアッセイフォーマット、例えばラジオイムノアッセイ、化学発光アッセイ、ラテラルフローアッセイもしくは電気化学アッセイ、ならびにタンパク質マイクロアレイフォーマットが挙げられる。

【0109】

したがって、上記または下記の態様のいずれかのいくつかの態様では、タンパク質の発現レベルはイムノアッセイによって測定される。別の実施形態では、上記または下記に提供される実施形態のいずれかと組み合わせて、タンパク質の発現レベルは、ＥＬＩＳＡ、より詳細にはマルチプレックスＥＬＩＳＡによって決定される。

【0110】

あるいは、タンパク質の発現レベルは、生物発光、蛍光、化学発光、電気化学、または質量分析によって決定することができる。

【0111】

あるいは、タンパク質の発現レベルは、質量分析によってタンパク質のプロテオタイプペプチド（ｐｒｏｔｅｏｔｙｐｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅｓ）（所与のプロテオームにおいて試験タンパク質と独自に関連するアミノ酸配列を有するペプチド）のレベルを測定することによって決定することができる。

【0112】

前述のように、上記または下記に提供される実施形態のいずれかと組み合わせた本発明の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、タンパク質の発現レベルは、標的タンパク質に結合することができる抗体またはその断片を使用して決定される。これらの抗体は、本発明のキットにおける標的タンパク質の発現を決定するための「手段」として使用することができる。次の段落は、この選択肢をより詳細に示している。

【0113】

「標的タンパク質に結合することができる抗体またはその断片」という用語は、標的タンパク質に選択的に結合することができる任意の免疫グロブリンまたはその断片として理解されるべきである。これには、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体が含まれる。「その断片」という用語は、標的タンパク質のエピトープに結合するのに適したサイズおよび立体構造を有する抗体の任意の部分を包含する。適切な断片には、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）およびＦｖが挙げられる。「エピトープ」は、免疫系（Ｂ細胞、Ｔ細胞または抗体）によって認識される抗原の部分である。

【0114】

特異的検出に使用される抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであり得る。抗体を調製し、特徴付けるための周知の手段が、最新技術において存在する。ポリクローナル抗体を生成するための方法は、先行技術において周知である。簡潔には、動物をタンパク質で免疫することによってポリクローナル抗体を調製する。次いで、免疫化動物から血清を収集し、抗体を単離する。抗血清の産生には、広範囲の動物種を使用することができる。典型的には、抗血清の産生に使用される動物は、ウサギ、マウス、ラット、ハムスター、モルモットまたはヤギであり得る。

【0115】

さらに、モノクローナル抗体（ＭＡｂ）は、周知の技術を使用して調製することができる。典型的には、手順は、疾患に関連するタンパク質で適切な動物を免疫することを含む。免疫組成物は、抗体産生細胞を刺激するのに有効な量で投与することができる。モノクローナル抗体を調製するための方法は、一般に、ポリクローナル抗体調製物と同じラインに従って開始される。免疫原を抗原として動物に注射する。抗原は、完全または不完全フロイントアジュバントなどのアジュバントと混合されてもよい。およそ２週間の間隔で、同じ抗原で免疫化を繰り返す。

【0116】

標的タンパク質（すなわち、ＭＤＫおよび場合により列挙されたタンパク質のうちの１つ以上）を検出するための抗体またはその断片は、キットに含めることができる。キットは、抗体－タンパク質相互作用を可視化するための他の手段（添加剤、溶媒）をさらに含み得る。

【0117】

あるいは、ＭＤＫの発現レベル、および決定される場合、上に列挙したタンパク質のうちの１つ以上のレベルは、ｍＲＮＡレベルで決定される。次の段落は、この選択肢をより詳細に示している。

【0118】

したがって、キットまたはその使用の別の実施形態では、キットはマイクロアレイである。

【0119】

別の実施形態では、キットは、タンパク質子宮内膜がんマーカーをコードする遺伝子の定義されたセットを含むマイクロアレイである。その発現が子宮内膜疾患によって有意に変化する、分析される特定のタンパク質（リストのうちの２から１１個）について上に提供されたすべての実施形態もまた、マイクロアレイの特定の実施形態である。

【0120】

さらに、本発明のキットは、構成的遺伝子によってコードされるタンパク質を検出するための試薬を含む。当該追加の試薬の利用可能性は、バイオマーカーの発現の差が、発現の相対レベルの実際の差よりも試料中の総タンパク質量の異なる量に起因することを排除するために、異なる試料（例えば、分析される試料および対照試料）で行われた測定を正規化することを可能にする。本発明における構成的遺伝子は、常に活性であるかまたは絶えず転写され、構成的に発現され、必須の細胞機能を実行するタンパク質をコードする遺伝子である。構成的に発現され、本発明で使用することができるタンパク質には、β－２－ミクログロブリン（Ｂ２ Ｍ）、ユビキチン、１８－Ｓリボソームタンパク質、シクロフィリン、ＧＡＰＤＨ、ＰＳＭＢ４、チューブリンおよびアクチンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0121】

一実施形態では、マーカーのそれぞれ１つのｍＲＮＡの量は、例えば、１つ以上のポリヌクレオチド子宮内膜がんマーカーまたはそのようなポリヌクレオチドの相補体にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応によって検出される。他の実施形態中、ｍＲＮＡの量は、１つ以上のポリヌクレオチド子宮内膜がんマーカーまたはそのようなポリヌクレオチドの相補体にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブを用いるハイブリダイゼーション技術を使用して検出される。

【0122】

ｍＲＮＡ検出を使用する場合、本発明の方法は、単離されたｍＲＮＡを試薬と組み合わせて、当技術分野で周知の標準的な方法に従ってｃＤＮＡに変換し、変換されたｃＤＮＡを、核酸プライマーの適切な混合物と共に容器内の増幅反応試薬（ｃＤＮＡ ＰＣＲ反応試薬など）で処理するステップと、容器の内容物を反応させて、増幅産物を産生するステップと、増幅産物を分析して、試料中のポリヌクレオチド子宮内膜がんマーカーの１つ以上の存在を検出するステップによって行うことができる。ｍＲＮＡの場合、分析ステップは、ノーザンブロット分析を使用して、試料中のポリヌクレオチド子宮内膜がんマーカーの存在を検出することによって達成され得る。分析ステップは、増幅産物中のポリヌクレオチド子宮内膜がんマーカーの存在を定量的に検出し、検出されたマーカーの量を、同様のプライマーを使用して誘導された正常組織および悪性組織におけるそのようなマーカーの既知の存在または非存在についての予想値のパネルと比較することによってさらに達成され得る。

【0123】

別の実施形態では、本発明は、ｍＲＮＡを、（ａ）試料からｍＲＮＡを単離し、ｍＲＮＡを試薬と組み合わせてｃＤＮＡに変換するステップと、（ｂ）増幅反応試薬、およびポリヌクレオチド子宮内膜がんマーカー子宮内膜がんマーカーの１つ以上にハイブリダイズして増幅産物を産生する核酸プライマーで、変換されたｃＤＮＡを処理するステップと、（ｃ）タンパク質子宮内膜がんマーカーをコードするｍＲＮＡの存在量を決定するために増幅産物を分析するステップと、（ｄ）決定されたｍＲＮＡの量を、同様の方法を用いて誘導された正常組織および疾患組織（例えば、悪性組織）についての予想値のパネルに対して検出された量と比較するステップによって検出する方法を提供する。

【0124】

本発明の特定の実施形態では、ＲＴ－ＰＣＲを使用して、検出および分析のためにタンパク質子宮内膜がんマーカーのｍＲＮＡを増幅することができる。本発明の他の実施形態は、定量的ＲＴ－ＰＣＲを使用して、タンパク質子宮内膜がんマーカーのｍＲＮＡ量を定量的に決定する。本発明のさらなる実施形態は、定量化および分析のためにリアルタイムＲＴ－ＰＣＲを使用する。

【0125】

本明細書に列挙されるすべてのタンパク質、または本明細書の対応する表中のＵｎｉｐｒｏｔＫＢ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｈｅｌｐ／ｕｎｉｐｒｏｔｋｂ）データベース受託番号は、２０２１年７月２３日にアクセス可能なバージョン（データベースリリース）に対応する。

【0126】

ＡＧＲＩＮは、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｏ００４６８である。このタンパク質は、神経筋接合部の形成および維持に関与するヘパリン硫酸基底膜糖タンパク質である。

【0127】

ＰＩＧＲは、高分子免疫グロブリン受容体としても公知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｐ０１８３３、２００７年６月２６日－ｖ４である。この受容体は、上皮細胞の基底外側表面で高分子ＩｇＡおよびＩｇＭに結合する。

【0128】

ＣＤ４４抗原としても知られているＣＤ４４は、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｐ１６０７０、２０１０年１０月５日－ｖ３である。ＨＡに対する親和性を介して、およびおそらくオステオポンチン、コラーゲン、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）などの他のリガンドに対する親和性を介して、細胞－細胞および細胞－マトリックス相互作用を媒介する。

【0129】

Ｌ－乳酸デヒドロゲナーゼＡ鎖としても知られているＬＤＨＡは、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｐ００３３８、２００７年１月２３日－ｖ２である。このタンパク質は、ピルバートから（Ｓ）ラクタートを合成する副経路のステップ１に関与する。

【0130】

これらのタンパク質のいくつかは、組織試料におけるＥＣグレード分類／診断に関連している。しかしながら、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される試料中の値と相関する意義のあるデータはない。上記のように、これらの種類の試料中のマーカーの検出は、婦人科疾患の臨床診療における日常的な試料採取からデータを収集し、コストおよび重要なことに侵襲的組織生検を回避する利点を意味する。

【0131】

本発明のさらなる態様は、特に予後判定に応じて、子宮内膜がんに罹患している対象の医療レジメンを開始するかどうかを決定または推奨する方法であった。この方法の特定の実施形態では、
ａ）外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される試料中、ミッドカイン（ＭＤＫ）の存在および／または発現レベルをインビトロで決定するステップと、
ｂ）ステップ（ａ）のＭＤＫのレベルを、子宮内膜がんに罹患している対象からの値もしくは値の区間から選択される各タンパク質についての対応する基準値もしくは基準区間と比較するステップ、および／または子宮内膜がんと他の婦人科の障害もしくは状態とを識別するカットオフ値と比較するステップと、
ｃ）ＭＤＫのレベルが、このがんに罹患している対象からの値もしくは値の区間の範囲内である場合、および／またはカットオフ値に対するＭＤＫのレベルが子宮内膜がん群に分類される場合、
ｉ）対象が子宮内膜癌に罹患していると診断された場合、または子宮内膜癌に罹患している疑いがあると診断された場合、子宮全摘出術および両側卵管卵巣摘出術からなり、場合により骨盤および傍大動脈のリンパ節切除術および大網切除術で補完される医療レジメンの開始が推奨され、
ｉｉ）患者が子宮内膜癌に罹患していないと診断された場合、医師による患者の検査の結果を考慮して、場合によりフォローアップが行われるように、
対象を子宮内膜がんと診断するステップと
を含む。

【0132】

通常は確立された予後判定に応じて、子宮内膜がんに罹患している対象の医療レジメンを開始するかどうかを決定または推奨する別の特定の実施形態の方法では、放射線療法、小線源療法、ホルモン療法、化学療法、標的療法およびそれらの組み合わせから選択されるアジュバント治療が推奨される。

【0133】

子宮内膜がんに罹患している対象の医療レジメンを開始するかどうかを決定または推奨するこの方法は、子宮内膜がんの再発もしくは再発リスクの診断のための以前に開示された方法、ならびに／または子宮内膜がんサブタイプおよび／もしくは子宮内膜がん分子分類の診断にも適用可能である。

【0134】

したがって、本明細書ではまた、この疾患に罹患している対象におけるＥＣの治療のための方法であって、第１の態様またはその実施形態のいずれか１つの診断および／または予後判定の方法を実施するステップを含み、場合により骨盤および傍大動脈のリンパ節切除術ならびに／または大網切除術で補完される、子宮全摘出術および／または両側卵管卵巣摘出術によって対象を治療するステップをさらに含む、方法も開示される。提案される治療方法の特定の実施形態では、対象はまた、放射線療法、小線源療法、ホルモン療法、化学療法、標的療法およびそれらの組み合わせから選択される推奨されるアジュバント治療を受ける。

【0135】

さらにまた、対象の単離された試料中、ＭＤＫ、および／または場合により表１に列挙されたタンパク質のうちの１つ以上のレベルを検出する方法であって、
（ａ）対象から、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含む婦人科試料採取から選択される試料を取得するステップと、
（ｂ）単離された試料中のミッドカイン（ＭＤＫ）の存在および／または発現レベルを、（ｉ）当該試料を、対応するタンパク質に結合することができる手段と接触させ、当該結合を検出することによって、または（ｉｉ）当該試料を、当該タンパク質に翻訳されることになる対応するＲＮＡに結合することができる手段と接触させ、当該結合を検出することによって、検出するステップと
を含む、方法が開示される。

【0136】

本発明の別の態様は、上記の態様および実施形態で定義された診断および／もしくは予後判定の方法のいずれかを実施するための、または子宮内膜がんの再発もしくは再発リスクならびに／もしくは子宮内膜がんサブタイプおよび／もしくは子宮内膜がん分子分類の診断のための上記で開示された方法のいずれかを実施するためのアルゴリズムを提供することである。

【0137】

示されるように、この第４の態様は、第１の態様で定義された方法を実施するためのコンピュータ実装方法であって、ＭＤＫ、ならびに場合により子宮内膜がんの診断および／または予後判定のためのタンパク質のうちの１つ以上の発現レベルの決定後、当該レベルに値および／またはスコアが与えられ、場合により計算値を得るために数式で計算され、当該レベル、スコアおよび／または計算値に応じて、ＥＣに罹患しているか否かの選択肢の間で、ならびに／または異なる組織学的サブタイプおよびグレードおよび異なる分子的特徴を含む異なる予後判定を示すＥＣの間で罹患しているという選択肢の間で決定が行われる、方法に関する。

【0138】

特定の実施形態では、アルゴリズムは、ＥＣを診断するおよび／またはＥＣを予後判定するための、特にＥＣサブタイプ、特にＥＥＣまたはＮＥＥＣを決定することによる疾患の予後判定のための、コンピュータ実装方法である。このアルゴリズムは、試料がＥＣに罹患している対象に由来するか否かの決定を行うことを可能にし、また、ＥＣに罹患している対象に由来する試料がＥＥＣまたはＮＥＥＣに罹患しているかどうかの決定を行うことを可能にする。より特定の実施形態では、アルゴリズムは推奨治療を提供する。したがってまた、上記で定義された方法を実施するためのコンピュータ実装方法であって、ＥＣの診断および／または予後判定のためのタンパク質のうちの１つ以上の発現レベルの決定後、当該レベルに値および／またはスコアが与えられ、場合により計算値を得るために数式で計算され、当該レベル、スコアおよび／または計算値に応じて、ＥＣに罹患しているか否かの選択肢の間で、および／または異なるＥＣサブタイプの間で罹患しているという選択肢の間で決定が行われる、方法が提供される。

【0139】

換言すれば、本発明のアルゴリズムの別の特定の実施形態では、ＥＣの診断および／または予後判定のためのタンパク質のうちの１つ以上の発現レベルの決定後、当該レベルに値および／またはスコアが与えられ、場合により計算値を得るために数式で計算され、当該レベル、スコアおよび／または計算値に応じて、ＥＣに罹患しているか否かの選択肢の間で、および／または異なるＥＣサブタイプの間で罹患しているという選択肢の間で決定が行われる。

【0140】

特定の実施形態では、アルゴリズムは、ＦＩＧＯのものなどの既知のグレード分類または病期分類システムに従って、ＥＣを診断するおよび／またはＥＣを予後判定するための、特にＥＣグレード分類、特に低グレードまたは高グレードＥＣを決定することによる疾患の予後判定のための、コンピュータ実装方法である。別の特定の実施形態では、アルゴリズムは、ＥＣを診断するおよび／またはＥＣを予後判定するための、特に類内膜対非類内膜子宮内膜がんなどのＥＣ組織サブタイプを決定することによる疾患の予後判定のための、コンピュータ実装方法である。このアルゴリズムは、試料がＥＣに罹患している対象に由来するか否かの決定を行うことを可能にし、また、ＥＣに罹患している対象に由来する試料が低グレードまたは高グレードのＥＣに罹患しているかどうかの決定を行うことを可能にする。より特定の実施形態では、アルゴリズムは推奨治療を提供する。したがってまた、上記で定義された方法を実施するためのコンピュータ実装方法であって、ＥＣの診断および／または予後判定のためのタンパク質のうちの１つ以上の発現レベルの決定後、当該レベルに値および／またはスコアが与えられ、場合により計算値を得るために数式で計算され、当該レベル、スコアおよび／または計算値に応じて、ＥＣに罹患しているか否かの選択肢の間で、および／または異なるＥＣグレードの間で罹患しているという選択肢の間で決定が行われる、方法が提供される。

【0141】

換言すれば、本発明のアルゴリズムの別の特定の実施形態では、ＥＣの診断および／または予後判定のためのタンパク質のうちの１つ以上の発現レベルの決定後、当該レベルに値および／またはスコアが与えられ、場合により計算値を得るために数式で計算され、当該レベル、スコアおよび／または計算値に応じて、ＥＣに罹患しているか否かの選択肢の間で、および／または異なるＥＣグレードの間で罹患しているという選択肢の間で決定が行われる。

【0142】

本発明のインビトロでの方法は、診断および／または予後判定情報を提供する。一実施形態では、本発明の方法は、（ｉ）診断および／または予後判定情報を収集するステップと、（ｉｉ）情報をデータキャリアに保存するステップとをさらに含む。

【0143】

本発明の意味において、「データキャリア」は、紙などの子宮内膜癌の診断および／または予後判定のための意義のある情報データを含む任意の手段として理解されるべきである。キャリアはまた、予後判定データを保持することができる任意の実体またはデバイスであり得る。例えば、キャリアは、ＲＯＭ、例えばＣＤ ＲＯＭもしくは半導体ＲＯＭなどの記憶媒体、または磁気記録媒体、例えばフロッピーディスクもしくはハードディスクを含むことができる。さらに、キャリアは、電気もしくは光ケーブルを介して、または無線もしくは他の手段によって伝達され得る、電気または光信号などの伝送可能なキャリアであってもよい。診断／予後判定データが、ケーブルまたは他のデバイスもしくは手段によって直接伝達され得る信号で具現化される場合、キャリアは、そのようなケーブルまたは他のデバイスもしくは手段によって構成され得る。他のキャリアは、ＵＳＢデバイスおよびコンピュータアーカイブに関する。適切なデータキャリアの例は、紙、ＣＤ、ＵＳＢ、ＰＣ内のコンピュータアーカイブ、または同じ情報を有する音声登録である。

【0144】

明細書および特許請求の範囲を通して、「含む」という語およびこの語の変形は、他の技術的特徴、添加剤、成分またはステップを除外することを意図するものではない。さらに、「含む」という語は、「からなる」の場合を包含する。本発明のさらなる目的、利点および特徴は、説明を検討すると当業者に明らかになるか、または本発明の実施によって習得され得る。以下の実施例は例示として提供され、それらは本発明を限定することを意図するものではない。さらに、本発明は、本明細書に記載の特定の好ましい実施形態のすべての可能な組み合わせを網羅する。

【実施例】

【0145】

実施例１：発見コホート。検証コホートおよびマーカーの情報の分析。頸管粘液試料中のＭＤＫレベルの分析からの情報価値のあるデータ（日常的な非侵襲的婦人科試料採取）

【0146】

材料および方法：パップスメアに含まれる流体、すなわち頸管粘液試料を使用して潜在的なバイオマーカーを同定するための発見段階は、ショットガン標識を含まないプロテオミクス手法を使用して実施された。試験には６０人の患者（ＥＣ患者２０人、子宮内膜がんまたは子宮頸部病変なしでＡＶＢを患っている対照２０人、子宮内膜病変なしで子宮頸部病変を患っている対照２０人）が含まれていた。ＭａｘＱｕａｎｔおよびＲソフトウェアを使用してデータを分析した。発見段階で同定された７５個のタンパク質に対応する１１０個のペプチドのレベルを、質量分析（ＬＣ－ＰＲＭ）によって２４２人（非ＥＣ１０６人、ＥＣ１２９人、ＥＣの前悪性腫瘍７人）の患者の検証段階でさらに測定した。分析は、Ｓｋｙｌｉｎｅソフトウェア、ＳＰＳＳおよびＲソフトウェアを使用して行った。検証試験に含まれた患者の臨床病理学的特徴を表２に示す。

【0147】

結果：発見試験により、本発明者らの試料中の１つ以上のペプチドで同定された合計２，８８８個のタンパク質を決定することが可能になった。統計分析により、さらに評価および検証されるＥＣ患者と非ＥＣ患者との間で異なって発現される７５の潜在的なタンパク質を同定することが可能になった。検証段階では、ＥＣ患者と非ＥＣ患者とを比較してＥＣの非侵襲的診断に達するための、子宮頸部試料で測定されたこれらのタンパク質のうちの６０個の大きな可能性が明らかになった（ａｄｊ．ｐ値＜０．０５、倍率変化＞２、ＡＵＣ＞０．７）（表３）。具体的には、１９個のタンパク質がＡＵＣ＞０．７５を達成し、７個のタンパク質がＡＵＣ＞０．８を達成した。さらに、質量分析によって得られた結果を再現し、最良の性能のタンパク質のＥＬＩＳＡアッセイを、ＥＣを診断する（１２７人のＥＣ患者と１０６人の非ＥＣ患者とを比較する）ためのこのデータセットにおいてＡＵＣ＝０．９１に達するすべての試料で試験した（図１）。検証試験により、ＥＣ患者の組織学的サブタイプおよびグレードを区別するための予後判定のバイオマーカーとして有意なタンパク質のセットを同定することが可能になった。具体的には、低グレード（Ｇ１）ＥＣ患者３５人と高グレード（Ｇ３）ＥＣ患者３７人とを比較した場合、３４個のタンパク質バイオマーカーのセットは有意な調整されたｐ値を有し（表３、太字）、３９個のタンパク質は１．３より高い倍率変化を有していた（表３、影付き）。低グレードおよび中間グレード、Ｇ１およびＧ２と、高グレード（Ｇ３）との比較も行った。有意かつ高発現のタンパク質を表３に示す。組織学的サブタイプに関して、類内膜子宮内膜がん（ＥＥＣ）１０２人と非類内膜子宮内膜がん患者２５人とを比較した場合、３３個のタンパク質のセットが差次的に発現され（１．３倍より高い倍率変化）、３１個のタンパク質が有意であると同定された（ａｄｊ．ｐ値＜０．０５）。これらの結果をすべて表３に示す。表８および９はまた、組み合わせてＥＣ患者の組織学的サブタイプおよびグレードを区別することを可能にする２つまたは３つのタンパク質パネルを示す。

【0148】

次の表３は、他のマーカーであるＭＤＫのＡＵＣ、ＳＥおよびＳＰを示す。ＭＤＫが最良の値を提供したことに留意されたい。

【0149】

【表2】

【0150】

【表3】

【0151】

ＭＤＫを２パネルおよび３パネルのタンパク質バイオマーカーで組み合わせた場合、組み合わせのＡＵＣ値は、主にＥＣを診断するための感度を増加させることによって、ＭＤＫ単独と比較して増加した。データを次の表４および表５に示す。同様に、予後判定に関する有意な情報を提供するタンパク質を表６および７に組み合わせた。先に示したように、女性生殖管の他の障害と共通する疾患の総体症状を考慮すると、感度は重要である。

【0152】

【表4】

【0153】

【表5】

【0154】

【表6】

【0155】

【表7】

【0156】

【表8-1】

【0157】

【表8-2】

【0158】

【表9-1】

【0159】

【表9-2】

【0160】

実施例２：疾患の再発を示すマーカー。
発見試験には２０人の患者が含まれ、そのうち９人が５年間のフォローアップ後に再発した。これらの再発女性は、手術後１０ヶ月～１１９ヶ月の間に再発する。具体的には、類内膜ＥＣ４人（Ｇ２ ２人およびＧ３ ２人）および非類内膜ＥＣ５人が再発したが、ＥＥＣ１０人（Ｇ１ ２人、Ｇ２ ７人、Ｇ３ １人）および非ＥＥＣ１人は再発しなかった。したがって、再発患者９人と非再発患者１１人とを比較した。

【0161】

統計分析は、ＡＵＣ＞０．７５を有する１９個のタンパク質が再発性ＥＣ患者と非再発性ＥＣ患者とを区別することを示した（ＭＵＣ１、ＰＲＳＳ８、ＰＮＰ、ＡＰＥＨ、ＭＵＣ１６、Ｃ９、ＳＥＲＰＩＮＣ１、ＳＥＲＰＩＮＡ１、Ｆ２、ＡＭＢＰ、ＨＰ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＣＦＢ、ＯＲＭ２、ＣＡＴ、ＧＮＡＩ２、Ａ１ＢＧ、ＦＮ１およびＣ７）。さらに、存在非存在統計分析によって、再発ＥＣ患者と非再発ＥＣ患者との間で１８個の差次的発現タンパク質が同定された（ＡＳＴＲＧＬ１、Ｂ４ＧＡＬＴ１、ＣＡＰＳ、ＣＢＸ３、ＣＤ１６３、ＣＤＶ３、ＤＭＢＴ１、ＤＳＧ３、ＥＨＤ１、ＧＯＬＭ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ５ＡＣ、ＮＭＥ１、ＮＴ５Ｅ、ＰＤＬＩＭ５、ＰＲＳＳ８、ＲＤＸおよびＶＡＳＰ）。

【0162】

次の表１０（Ａ）および（Ｂ）は、データを示す。

【0163】

【表10A】

【0164】

【表10B】

【0165】

次の表１１に、使用したバイオマーカーの名称を列挙する。

【0166】

【表11】

【0167】

実施例３；ＥＬＩＳＡ－ＥＣ診断（ＭＤＫ）
ＭＤＫは、質量分析（ＭＳ）および抗体ベースのアッセイ（ＥＬＩＳＡ技術）の両方で測定した場合、良好なＥＣ診断バイオマーカーである。２４１人の患者（ｎ＝ＥＣ１２８人、非ＥＣ１１３人）の頸管粘液中のＭＤＫのレベルは、ＥＣ患者と非ＥＣ患者とを区別するための統計的差異を示し、ＭＳによって測定した場合に０．９１のＡＵＣ、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定した場合に０．９２のＡＵＣを達成した。両方の手法の測定値間で０．９１の相関を示す。

【0168】

データを図２に示し、（Ａ）質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ ＰＲＭ）データまたは（Ｂ）ＭＤＫを決定するためのＥＬＩＳＡアッセイ由来データを示す。被験者のコホートの試料で試験し、ＥＣ患者と非ＥＣ患者とを比較した。（Ｃ）では、両方の手法の測定値間の相関は、高い相関レベルとなることができ、これによってマーカーを診療現場での実施のためのものとすることができる。

【0169】

実施例４；－子宮液中のＭＤＫ
ＭＤＫのレベルはまた、子宮内膜生検、具体的にはピペル生検から得られた子宮液中のＥＣの潜在的な診断マーカーであることが実証された。具体的には、ＭＤＫレベルは、ＥＣ患者（ｎ＝１１８）と非ＥＣ患者（ｎ＝１２９）との間でｐ値＜０．０００１およびＡＵＣ＝０．６９を示した。したがって、日常的な婦人科検査中に試料の種類から得ることができるＭＤＫからの情報に加えて、このマーカーは、子宮内膜生検などの他のより侵襲的な試料採取からの情報も提供する。これらの生検は、特定の疾患が疑われる場合に行われることがあり、その結果、このマーカーが分析される場合、初期のＥＣまたはＥＣではない可能性の分析も同時に検出することができる。

【0170】

データを図３に示し、ここでは、対象のコホートの試料で試験し、ＥＣ患者と非ＥＣ患者とを比較した、子宮液中のＭＤＫを決定するためのＥＬＩＳＡアッセイからのデータを示す。（Ａ）ＥＣ患者と非ＥＣ患者との間のタンパク質濃度の分布のドットプロット。（Ｂ）ＥＬＩＳＡによって評価したＭＤＫのＲＯＣ分析（受信者動作特性分析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ））の曲線。

【0171】

実施例５；分子分類
合計２８個のタンパク質（ＬＢＰ、ＶＷＦ、ＧＰＬＤ１、ＳＡＡ４、ＡＰＯＦ、Ｃ４ＢＰＡ、ＳＰＲＲ１Ａ、ＳＥＲＰＩＮＤ１、ＡＰＯＢ、ＳＣＥＬ、ＬＣＡＴ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＬＭＯ７、Ｃ１Ｒ、ＭＵＣ４、ＦＮ１、ＳＰＲＲ１Ｂ、Ｃ１ＱＡ、ＩＴＩＨ２、ＴＩＭＰ２、ＡＰＯＣ１、ＧＲＮ、ＡＮＸＡ３、Ｓ１００Ａ９、ＰＬＢＤ１、ＰＩＧＲ、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＨＳＰＥ１）は、ＥＣの分子サブグループ：ＰＯＬＥエキソヌクレアーゼドメインホットスポット変異（ＰＯＬＥ）超変異またはＰＯＬＥ変異（ＰＯＬＥＭｕｔ）の存在、ＭＳＩ：マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）またはミスマッチ修復タンパク質発現の喪失に基づくＭＭＲ欠損（ＭＭＲｄ）；低コピー数（低ＣＮ）または特異的分子プロファイルなし（ＮＳＭＰ）；高コピー数（高ＣＮ）または変異様免疫染色に基づくｐ５３異常（ｐ５３ ａｂｎ）－ＦＣ：倍率変化を有意に区別することができた。

【0172】

データを表１２に示す：

【表12】

【0173】

さらなる態様／実施形態は、以下の項で定義される。

【0174】

条項１．子宮内膜がんの診断および／または予後判定のための方法であって、外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液およびそれらの組み合わせを含むかまたはそれらから選択される婦人科試料採取から選択される試料中、ミッドカイン（ＭＤＫ）の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む、方法。

【0175】

条項２．試料がパップスメアであり、具体的には、パップスメアに含まれる流体および／または頸管粘液である、条項１に記載の方法。

【0176】

条項３．表１に列挙されたタンパク質のうちの１つ以上、特に以下のタンパク質のうちの１つ以上の存在および／または発現レベルを決定するステップをさらに含む、条項１から２のいずれかに記載の方法：
アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）、補体Ｃ１ｑサブコンポーネントサブユニットＡ（Ｃ１ＱＡ）、フィブロネクチン１（ＦＮ１）、セルピンファミリーＤメンバー１（ＳＥＲＰＩＮＤ１）、アポリポタンパク質Ｆ前駆体（ＡＰＯＦ）、アポリポタンパク質Ｃ１（ＡＰＯＣ１）、ＴＣＰ１サブユニット６Ａを含有するシャペロン（ＣＣＴ６Ａ）、リポ多糖結合タンパク質前駆体（ＬＢＰ）、血清アミロイドＡ４（ＳＡＡ４）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、リポカリン２（ＬＣＮ２）、レシチン：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）、Ｃ４ｂ結合タンパク質アルファ鎖（Ｃ４ＢＰＡ）、補体Ｃ１ｒ（Ｃ１Ｒ）、線維芽細胞成長因子結合タンパク質１（ＦＧＦＢＰ１）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ｂ（ＳＰＲＲ１Ｂ）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ａ（ＳＰＲＲ１Ａ）およびメタロプロテイナーゼ組織阻害因子２（ＴＩＭＰ２）、リポカリン－２（ＬＣＮ２）、ホスホリパーゼＢドメイン含有１（ＰＬＢＤ１）、ＣＤ４４抗原、ＩｇＧ結合タンパク質Ｆｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、上皮成長因子受容体キナーゼ基質８様タンパク質１（ＥＰＳ８Ｌ１）、アネキシンＡ３（ＡＮＸＡ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ－８（ＭＭＰ８）、ＮＥＤＤ－８タンパク質、カテリシジン抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ）、熱ショックタンパク質ファミリーＥ（Ｈｓｐ１０）メンバー１（ＨＳＰＥ１）、カルメニン（ＣＡＬＵ）、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨＡ）、ポリマー免疫グロブリン受容体（ＰＩＧＲ）、ケラチン８（ＫＲＴ８）、ペリプラキン（ＰＰＬ）、スタスミン１（ＳＴＭＮ１）、カルシフォシン（ＣＡＰＳ）、炭酸脱水酵素１（ＣＡ１）、ビメンチン（ＶＩＭ）、Ｔ複合体１（ＴＣＰ１）、アグリン（ＡＧＲ）、アネキシンＡ７（ＡＮＸＡ７）、イノシトールモノホスファターゼ１（ＩＭＰＡ１）、シンタキシン７（ＳＴＸ７）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、ガレクチン１（ＬＧＡＬＳ１）、ＡＴＰアーゼＨ＋輸送Ｖ１サブユニットＧ１（ＡＴＰ６Ｖ１Ｇ１）、ピルビン酸キナーゼアイソザイムＭ１／Ｍ２（ＰＫＭ）、グリコゲニン１（ＧＹＧ１）、リンパ球特異的タンパク質１（ＬＳＰ１）、造血細胞特異的Ｌｙｎ基質１（ＨＣＬＳ１）、増殖およびアポトーシスアダプタータンパク質１５（ＰＥＡ１５）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ９（Ｓ１００Ａ９）、サイエリン（ＳＣＥＬ）、セルピンファミリーＡメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＡ３）、インテグリンサブユニットベータ２（ＩＴＧＢ２）、ＩｇＧ結合タンパク質のＦｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１タンパク質（ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１）、荷電多胞体タンパク質４Ｂ（ＣＨＭＰ４Ｂ）、およびエキスポーチン－２（ＸＰＯ２）。

【0177】

条項４．タンパク質のうちの２、３、または４個の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む、条項１から３のいずれかに記載の方法。

【0178】

条項５．単離された試料中、ＭＤＫ、ＬＣＮ２；ＭＤＫ、ＦＮ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＢ；ＭＤＫ、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３；ＭＤＫ、Ｃ４ＢＰＡ；ＭＤＫ、ＭＭＰ８；ＭＤＫ、ＮＥＤＤ－８；ＭＤＫ、ＣＡＭＰ；ＭＤＫ、ＴＩＭＰ２；ＭＤＫ、ＨＳＰＥ１；ＭＤＫ、ＣＡＬＵ；ＭＤＫ、Ｃ１ＱＡ；ＭＤＫ、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＴＩＭＰ２；ＭＤＫ、ＰＩＧＲ；ＭＤＫ、ＫＲＴ８；ＭＤＫ、ＰＰＬ；ＭＤＫ、ＳＰＲＲ１Ａ；ＭＤＫ、ＳＴＭＮ１；ＭＤＫ、ＣＡＰＳ；ＭＤＫ、ＣＡ１；ＭＤＫ、ＣＣＴ６Ａ；ＭＤＫ、ＶＩＭ；ＭＤＫ、ＴＣＰ１；およびＭＤＫ、ＡＧＲＮからなる群の少なくとも１つの２値のセット；ならびに／または表４および表６のいずれかに列挙された少なくとも１つの２値のセットにおける、タンパク質の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む、条項４に記載の方法。

【0179】

条項６．単離された試料中、ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＣＳＥ１Ｌ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＦＧＦＢＰ１；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＡＮＸＡ７；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＬＣＮ２；ＭＤＫ、ＡＰＯＦ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＩＭＰＡ１、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＩＴＩＨ２、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＬＧＡＬＳ１；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＩＭＰＡ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＶＩＭ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＬＭＮＢ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＡＴＰ６Ｖ１Ｇ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＢ、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＩＴＩＨ２、ＬＣＮ２；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＣＡＬＵ；ＭＤＫ、ＬＣＮ２、ＡＰＯＦ；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＡＰＯＣ１、ＡＮＸＡ７；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＧＹＧ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＰＫＭ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、ＴＩＭＰ２、ＣＤ４４；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＨＳＰＥ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＣＡ１；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＨＣＬＳ１；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＩＭＰＡ１；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＳＴＸ７；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＥＰＳ８Ｌ１；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、Ｃ１Ｒ、ＡＮＸＡ７；ＭＤＫ、ＳＴＸ７、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＨＣＬＳ１；ＭＤＫ、ＬＣＡＴ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＰＬＢＤ１、ＬＤＨＡ；ＭＤＫ、ＡＰＯＢ、Ｓ１００Ａ９；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７、ＳＣＥＬ；ＭＤＫ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＦＣＧＢＰ、ＩＴＧＢ２；ＭＤＫ、ＳＣＥＬ、ＡＮＸＡ３；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、Ｃ１Ｒ、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＦＣＧＢＰ；ＭＤＫ、ＡＰＯＣ１、Ｓ１００Ａ９；ＭＤＫ、ＰＰＬ、ＰＬＢＤ１；ＭＤＫ、ＴＣＰ１、ＰＥＡ１５；ＭＤＫ、ＡＮＸＡ３、ＬＳＰ１；ＭＤＫ、ＰＰＬ、ＩＭＰＡ１；ＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＭＭＰ８；ＭＤＫ、ＦＧＦＢＰ１、ＰＰＬ；およびＭＤＫ、Ｓ１００Ａ９、ＰＰＬからなる群の少なくとも１つの３値のセット；ならびに／または表５および表７のいずれかに列挙された少なくとも１つの３値のセットにおける、タンパク質の存在および／または発現レベルを決定するステップを含む、条項４に記載の方法。

【0180】

条項７．単離された試料中、３値のセット、ＭＤＫ、ＡＮＸＡ７およびＣＳＥ１Ｌの存在および／または発現レベルを決定するステップを含む、条項６に記載の方法。

【0181】

条項８．
ａ）女性の生殖管から単離された試料中、インビトロで、ＭＤＫの発現レベルを、場合により請求項３から７のいずれか一項に列挙されたタンパク質のうちの１つ以上と組み合わせて決定するステップと、
ｂ）ステップ（ａ）のＭＤＫ、および決定される場合、１つ以上の他のタンパク質のレベルを、子宮内膜がんに罹患している対象からの値もしくは値の区間から選択される、各タンパク質の対応する基準値もしくは基準区間と比較するステップ、ならびに／または子宮内膜がんと他の子宮内膜障害もしくは（すなわち、健康な）子宮内膜の状態とを識別するカットオフ値と比較するステップであって、少なくともＭＤＫのレベルがこのがんに罹患している対象からの値または値の区間内にある場合、および／またはカットオフ値に対する少なくともＭＤＫのレベルが子宮内膜がん群に分類される場合、対象が子宮内膜がんと診断されるステップと
を含む、条項１から７のいずれか一項に記載の方法。

【0182】

条項９．発現レベルがタンパク質レベルで決定される、条項１から８のいずれか一項に記載の方法。

【0183】

条項１０．タンパク質レベルが、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、質量分析、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるアッセイまたは技術によって決定される、条項１から９のいずれかに記載の方法。

【0184】

条項１１．タンパク質の発現レベルが、タンパク質に結合することができる抗体またはその断片を使用して決定される、条項９から１０のいずれか一項に記載の方法。

【0185】

条項１２．当該抗体またはその断片ｏがキットの一部を形成する、条項１１に記載の方法。

【0186】

条項１３．外陰、膣、子宮頸部、子宮、卵管および卵巣のうちの１つ以上を含む女性生殖管部分からの、頸管粘液、細胞診、パップスメア試料、子宮内膜生検、子宮液、子宮洗浄液の１つ以上を含む婦人科試料採取から選択される試料における、子宮内膜がんの診断および／または予後判定のためのインビトロのマーカーとしてのＭＤＫの使用。

【0187】

条項１４．固体支持体と、ＭＤＫの存在を検出するためのおよび／または発現レベルを決定するための手段と、場合により、表１に列挙した１つ以上のタンパク質、特にアポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）、補体Ｃ１ｑサブコンポーネントサブユニットＡ（Ｃ１ＱＡ）、フィブロネクチン１（ＦＮ１）、セルピンファミリーＤメンバー１（ＳＥＲＰＩＮＤ１）、アポリポタンパク質Ｆ前駆体（ＡＰＯＦ）、アポリポタンパク質Ｃ１（ＡＰＯＣ１）、ＴＣＰ１サブユニット６Ａを含有するシャペロン（ＣＣＴ６Ａ）、リポ多糖結合タンパク質前駆体（ＬＢＰ）、血清アミロイドＡ４（ＳＡＡ４）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、リポカリン２（ＬＣＮ２）、レシチン：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）、Ｃ４ｂ結合タンパク質アルファ鎖（Ｃ４ＢＰＡ）、補体Ｃ１ｒ（Ｃ１Ｒ）、線維芽細胞成長因子結合タンパク質１（ＦＧＦＢＰ１）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ｂ（ＳＰＲＲ１Ｂ）、スモールプロリンリッチタンパク質１Ａ（ＳＰＲＲ１Ａ）およびメタロプロテイナーゼ組織阻害因子２（ＴＩＭＰ２）、リポカリン－２（ＬＣＮ２）、ホスホリパーゼＢドメイン含有１（ＰＬＢＤ１）、ＣＤ４４抗原、ＩｇＧ結合タンパク質Ｆｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、上皮成長因子受容体キナーゼ基質８様タンパク質１（ＥＰＳ８Ｌ１）、アネキシンＡ３（ＡＮＸＡ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ－８（ＭＭＰ８）、ＮＥＤＤ－８タンパク質、カテリシジン抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ）、熱ショックタンパク質ファミリーＥ（Ｈｓｐ１０）メンバー１（ＨＳＰＥ１）、カルメニン（ＣＡＬＵ）、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨＡ）、ポリマー免疫グロブリン受容体（ＰＩＧＲ）、ケラチン８（ＫＲＴ８）、ペリプラキン（ＰＰＬ）、スタスミン１（ＳＴＭＮ１）、カルシフォシン（ＣＡＰＳ）、炭酸脱水酵素１（ＣＡ１）、ビメンチン（ＶＩＭ）、Ｔ複合体１（ＴＣＰ１）、アグリン（ＡＧＲ）、アネキシンＡ７（ＡＮＸＡ７）、イノシトールモノホスファターゼ１（ＩＭＰＡ１）、シンタキシン７（ＳＴＸ７）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖２（ＩＴＩＨ２）、ガレクチン１（ＬＧＡＬＳ１）、ＡＴＰアーゼＨ＋輸送Ｖ１サブユニットＧ１（ＡＴＰ６Ｖ１Ｇ１）、ピルビン酸キナーゼアイソザイムＭ１／Ｍ２（ＰＫＭ）、グリコゲニン１（ＧＹＧ１）、リンパ球特異的タンパク質１（ＬＳＰ１）、造血細胞特異的Ｌｙｎ基質１（ＨＣＬＳ１）、増殖およびアポトーシスアダプタータンパク質１５（ＰＥＡ１５）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ９（Ｓ１００Ａ９）、サイエリン（ＳＣＥＬ）、セルピンファミリーＡメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＡ３）、インテグリンサブユニットベータ２（ＩＴＧＢ２）、ＩｇＧ結合タンパク質のＦｃ断片（ＦＣＧＢＰ）、ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１タンパク質（ＮＥＤＤ８－ＭＤＰ１）、荷電多胞体タンパク質４Ｂ（ＣＨＭＰ４Ｂ）、およびエキスポーチン－２（ＸＰＯ２）からなる群から選択される１つ以上のタンパク質の存在を検出するためのおよび／または発現レベルを決定するための手段とを含む、キット。

【0188】

条項１５．条項１から３のいずれか一項で定義された方法を実施するためのコンピュータ実装方法であって、ＭＤＫ、ならびに場合により子宮内膜がんの診断および／または予後判定のためのタンパク質のうちの１つ以上の発現レベルの決定後、当該レベルに値および／またはスコアが与えられ、場合により計算値を得るために数式で計算され、当該レベル、スコアおよび／または計算値に応じて、ＥＣに罹患しているか否かの選択肢の間で、ならびに／または異なる組織学的サブタイプおよびグレードおよび異なる分子的特徴を含む異なる予後判定を示す異なるＥＣの間で罹患しているという選択肢の間で決定が行われる、方法。

【0189】

参照文献リスト
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【図1】

【図2】

【図3】

【国際調査報告】