特表 2024-525957 ヘスペレチン含有組成物およびその血糖降下における相乗的応用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-12

(54)【発明の名称】ヘスペレチン含有組成物およびその血糖降下における相乗的応用

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/352 20060101AFI20240705BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240705BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240705BHJP

【ＦＩ】

A61K31/352

A61P43/00 111

A61P43/00 121

A61P3/10

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024504013

(86)(22)【出願日】2022-08-10

(85)【翻訳文提出日】2024-01-22

(86)【国際出願番号】 CN2022111358

(87)【国際公開番号】W WO2023020344

(87)【国際公開日】2023-02-23

(31)【優先権主張番号】202110960281.5

(32)【優先日】2021-08-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520468793

【氏名又は名称】中国農業科学院鄭州果樹研究所

【氏名又は名称原語表記】ＺＨＥＮＧＺＨＯＵ ＦＲＵＩＴ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＣＨＩＮＥＳＥ ＡＣＡＤＥＭＹ ＯＦ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ

【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．２８ Ｇａｎｇｗａｎ Ｒｏａｄ，Ａｎｘｕ Ｖｉｌｌａｇｅ，Ｎａｎｃａｏ Ｔｏｗｎｓｈｉｐ，Ｇｕａｎｃｈｅｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ，Ｈｅｎａｎ ４５０００９ （ＣＮ）

(74)【代理人】

【識別番号】110001139

【氏名又は名称】ＳＫ弁理士法人

(74)【代理人】

【識別番号】100130328

【弁理士】

【氏名又は名称】奥野 彰彦

(74)【代理人】

【識別番号】100130672

【弁理士】

【氏名又は名称】伊藤 寛之

(72)【発明者】

【氏名】張強

(72)【発明者】

【氏名】焦中高

(72)【発明者】

【氏名】陳大磊

(72)【発明者】

【氏名】劉杰超

(72)【発明者】

【氏名】楊文博

(72)【発明者】

【氏名】張春嶺

(72)【発明者】

【氏名】劉慧

(72)【発明者】

【氏名】呂真真

(72)【発明者】

【氏名】潘俊坤

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA08

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA17

4C086MA35

4C086MA37

4C086MA43

4C086MA52

4C086MA66

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZC20

4C086ZC35

4C086ZC75

(57)【要約】

本発明は、ヘスペレチン含有組成物およびその血糖降下における相乗的応用を開示し、天然活性化合物の技術分野に属する。本発明の組成物は、ヘスペレチンおよび化合物Ｘを含み、前記化合物Ｘは、ガランギンまたはホルモノネチンであり、ここで、ヘスペレチンとガランギンとの質量比は３０：１００であり、ヘスペレチンとホルモノネチンとの質量比は３０：２０である。本発明の組成物は、前記フラボノイド化合物を単独で使用するよりも優れたα－グルコシダーゼ阻害用の有意な相乗効果を有し、かつ使用する薬剤の投与量を減らし、薬剤耐性の発生を抑えることができる。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヘスペレチンおよび化合物Ｘを含み、前記化合物Ｘは、ガランギンまたはホルモノネチンであり、
ここで、ヘスペレチンとガランギンとの質量比は３０：１００であり、ヘスペレチンとホルモノネチンとの質量比は３０：２０であることを特徴とする、ヘスペレチン含有組成物。

【請求項2】

α－グルコシダーゼ阻害用製剤の調製における、請求項１に記載の組成物の応用。

【請求項3】

その有効成分は、ヘスペレチンとガランギンまたはヘスペレチンとホルモノネチンを含み、ここで、ヘスペレチンとガランギンとの質量比は３０：１００であり、ヘスペレチンとホルモノネチンとの質量比は３０：２０であることを特徴とする、α－グルコシダーゼ阻害剤。

【請求項4】

血糖降下用薬剤の調製における、請求項１に記載の組成物の応用。

【請求項5】

前記血糖降下作用は、過剰な食後血糖を制御する目的でα－グルコシダーゼの活性を阻害し、炭水化物の消化および吸収を阻害することにより達成されることを特徴とする、請求項４に記載の応用。

【請求項6】

その有効成分は、ヘスペレチンとガランギンまたはヘスペレチンとホルモノネチンを含み、ここで、ヘスペレチンとガランギンとの質量比は３０：１００であり、ヘスペレチンとホルモノネチンとの質量比は３０：２０であることを特徴とする、血糖降下用薬剤。

【請求項7】

前記薬剤が、薬学的に許容される担体、溶剤、希釈剤、賦形剤または他の媒体を含むことを特徴とする、請求項６に記載の薬剤。

【請求項8】

前記薬剤の剤形が、粉末、顆粒、カプセル、注射剤、経口液剤または錠剤から選択されることを特徴とする、請求項６に記載の薬剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、天然活性化合物の技術分野に属し、具体的には、ヘスペレチン含有組成物およびその血糖降下における相乗的応用に関する。

【背景技術】

【0002】

糖尿病は、持続的な高血糖によって診断される世界的な慢性疾患であり、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、妊娠糖尿病、その他の特殊な糖尿病が含まれ、ＩＩ型糖尿病は、非インスリン依存性糖尿病としても知られ、糖尿病の９５％以上を占める。α－グルコシダーゼは、基質の非還元末端からα－グルコースの遊離を触媒する炭水化物ヒドロラーゼである。α－グルコシダーゼは、大多数の微生物、植物および動物に存在し、デンプンからグルコースへの代謝経路において不可欠な酵素である。α－グルコシダーゼの活性が体内で高すぎると、体内の血糖が高くなり、糖尿病を引き起こす可能性がある。現在、糖尿病の治療には、インスリン、スルホニル尿素系薬剤、ビグアニド系薬剤、チアゾリジンジオン系薬剤、α－グルコシダーゼ阻害剤などが一般的に臨床使用されているが、これらの長期服用は、低血糖、腹痛、嘔吐、下痢などの副作用を引き起こすことがある。α－グルコシダーゼ阻害剤は、α－グルコシダーゼの活性を競合的に阻害することによって炭水化物の吸収を遅延させ、それによって食後および空腹時の血糖値を低下させる。天然由来のα－グルコシダーゼ阻害剤は、環境に優しく、安全で、有害な副作用がほとんどないため、医学、薬学、機能性食品の分野で注目の研究テーマとなっている。国内外の多くの研究学者は、植物資源からのα－グルコシダーゼ阻害剤の抽出、精製、単離、同定に専念し、糖尿病とその合併症の治療のための、新規で効率的かつ無毒な薬剤の開発を目材している。例えば、フラボノイド、フェノール酸やタンニン酸などのポリフェノール化合物は、α－グルコシダーゼ活性を阻害する植物由来の一般的な成分である。

【0003】

薬剤併用とは、治療目的で２種類以上の薬剤を同時または逐次的に応用することであり、主に薬剤治療を増強するか、または薬剤の有害な副作用を軽減することを目的とするが、時には逆の結果をもたらすこともある。したがって、薬剤の合理的な併用療法は、治療効果の向上および（または）副作用の軽減を基本原則とするべきである。相乗効果を得るために両薬剤を併用する場合、両薬剤の治療効果が単剤投与の場合よりも著しく向上する可能性がある。現在、α－グルコシダーゼ阻害剤に関する研究のほとんどは単一化合物に焦点を当てたものであり、それらは、継続使用による一定の副作用や耐性を伴うが、活性分子間の相乗効果についてはあまり報告されていない。したがって、α－グルコシダーゼを阻害し、血糖降下作用を増強するフラボノイド系化合物の併用に関する研究は、ヒトの健康増進のために重要である。

【発明の概要】

【0004】

本発明は、単一の活性成分による血糖降下作用が限られ、薬剤耐性が生じやすいという従来技術の課題を解決するために、ヘスペレチン含有組成物およびその血糖降下における相乗的応用を提供することを目的とする。

【0005】

上記目的を達成するために、本発明は、以下の技術的解決手段によって実現される。

【0006】

ヘスペレチン含有組成物であって、ヘスペレチンおよび化合物Ｘを含み、前記化合物Ｘは、ガランギンまたはホルモノネチンであり、
ここで、ヘスペレチンとガランギンとの質量比は３０：１００であり、ヘスペレチンとホルモノネチンとの質量比は３０：２０である。

【0007】

α－グルコシダーゼ阻害用製剤の調製における上記組成物の応用。

【0008】

α－グルコシダーゼ阻害剤であって、その有効成分は、ヘスペレチンとガランギンまたはヘスペレチンとホルモノネチンを含み、ここで、ヘスペレチンとガランギンとの質量比は３０：１００であり、ヘスペレチンとホルモノネチンとの質量比は３０：２０である。

【0009】

血糖降下用薬剤の調製における上記組成物の応用であって、前記血糖降下作用は、過剰な食後血糖を制御する目的でα－グルコシダーゼの活性を阻害し、炭水化物の消化および吸収を阻害することによって達成される。

【0010】

血糖降下用薬剤であって、その有効成分は、ヘスペレチンとガランギンまたはヘスペレチンとホルモノネチンを含み、ここで、ヘスペレチンとガランギンとの質量比は３０：１００であり、ヘスペレチンとホルモノネチンとの質量比は３０：２０である。

【0011】

限定された質量濃度比の範囲内で、ヘスペレチンとガランギン、ヘスペレチンとホルモノネチンの相乗的な技術効果が達成される。

【0012】

本発明に係る薬剤は、薬学的に許容される担体、溶剤、希釈剤、賦形剤、およびその他の媒体混合物を含み、必要に応じて、粉末、顆粒、カプセル、注射剤、経口液剤または錠剤として調製することができる。

【0013】

本発明の技術的解決手段の利点は、以下の通りである。

【0014】

本発明に係るヘスペレチンとガランギン、ヘスペレチンとホルモノネチンの組成物は、前記フラボノイド化合物を単独で使用するよりも優れたα－グルコシダーゼ阻害の有意な相乗効果を有し、かつ使用する薬剤の投与量を減らし、薬剤耐性の発生を抑えることができる。ホルモノネチンまたはガランギンを、同様の化学構造を持つゲニステインに引き換えると、相乗効果はなくなる。

【0015】

Ｃｈｏｕ－Ｔａｌａｌａｙ法を用いたα－グルコシダーゼのｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害試験により、本発明のヘスペレチンとガランギン、ヘスペレチンとホルモノネチンの組成物は、それぞれ３０：１００および３０：２０の質量比でα－グルコシダーゼに対して有意な相乗効果を有し、５０％ （ＧＩ_５０）、７５％ （ＧＩ_７５）および９０％ （ＧＩ_９０）の阻害率でのＣＩ値が１．０未満であり、かつ薬剤間の相乗効果の強さは、一般に阻害率が低い場合よりも高い場合の方が高いことが証明された。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】実施例１および実施例４のヘスペレチン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を示す。

【図2】ヘスペレチンとガランギン（３０：１００）の組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。

【図3】ヘスペレチンとガランギン（３０：１００）の組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すＦａ－ＣＩトレンドグラフである。

【図4】ヘスペレチンとホルモノネチン（３０：２０）の組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。

【図5】ヘスペレチンとホルモノネチン（３０：２０）の組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すＦａ－ＣＩトレンドグラフである。

【図6】実施例２および実施例５のヘスペレチン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を示す。

【図7】ヘスペレチンとガランギン（３０：１５０）の組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。

【図8】ヘスペレチンとホルモノネチン（３０：３０）の組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。

【図9】実施例３および実施例６のヘスペレチン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を示す。

【図10】ヘスペレチンとガランギン（５０：１００）の組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。

【図11】ヘスペレチンとホルモノネチン（５０：２０）の組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。

【図12】比較例１のヘスペレチン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を示す。

【図13】ヘスペレチンとゲニステイン（３０：２）の組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0017】

本発明で使用される用語は、特に指定のない限り、当業者によって一般的に理解される意味を有する。

【0018】

ヘスペレチン（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｉｎ）は、分子式がＣ_１６Ｈ_１４Ｏ_６であり、分子量は３０２．２８、ＣＡＳ登録番号は５２０－３３－２、構造式は、

ガランギン（Ｇａｌａｎｇｉｎ）は、分子式がＣ_１５Ｈ_１０Ｏ_５であり、分子量は２７０．２４、ＣＡＳ登録番号は５４８－８３－４、構造式は、

ホルモノネチン（Ｆｏｒｍｏｎｏｎｅｔｉｎ）は、分子式がＣ_１６Ｈ_１２Ｏ_４であり、分子量は２６８．２６、ＣＡＳ登録番号は４８５－７２－３、構造式は、

α－グルコシダーゼ（出芽酵母から、Ｓｉｇｍａ）、
４－ニトロフェニル－α－Ｄ－ガラクトピラノシドド（ｐＮＰＧ、ＴＯＫＹＯ Ｃｈｅｍｉｃａ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｃｏ．， ＬＴＤ）、
アカルボース（Ａｃａｒｂｏｓｅ、ＴＯＫＹＯ Ｃｈｅｍｉｃａ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｃｏ．， ＬＴＤ）、
ヘスペレチン、ガランギン、ホルモノネチン（Ｓｏｌａｒｂｉｏ北京）、
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｍｐｌｉｃｉｔｙ浄水システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、法国）、
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ６．８、０．１ｍｏｌ Ｌ^－１）、
マイクロプレートリーダーＴＥＣＡＮ ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００ ＰＲＯ（Ｔｅａｃａｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｔｄ．， Ｓｗｉｚｅｒｌａｎｄ）。

【0019】

以下、具体的な実施例と併せて、データを参照しながら本発明をさらに詳細に説明する。以下の実施例は、本発明を例示することのみを意図し、本発明の範囲を何らかの形態で限定するものではない。

【0020】

（実施例１）
ヘスペレチンとガランギンの組成物であって、ヘスペレチンとガランギンとの質量比は３０：１００であり、具体的には、組成物におけるヘスペレチンとガランギンの濃度は、それぞれ３０μｇ／ｍＬと１００μｇ／ｍＬである。

【0021】

（実施例２）
ヘスペレチンとガランギンの組成物であって、ヘスペレチンとガランギンとの質量比は３０：１５０であり、具体的には、組成物におけるヘスペレチンとガランギンの濃度は、それぞれ３０μｇ／ｍＬと１５０μｇ／ｍＬである。

【0022】

（実施例３）
ヘスペレチンとガランギンの組成物であって、ヘスペレチンとガランギンとの質量比は５０：１００であり、具体的には、組成物におけるヘスペレチンとガランギンの濃度は、それぞれ５０μｇ／ｍＬと１００μｇ／ｍＬである。

【0023】

（実施例４）
ヘスペレチンとホルモノネチンの組成物であって、ヘスペレチンとホルモノネチンとの質量比は３０：２０であり、具体的には、組成物におけるヘスペレチンとホルモノネチンの濃度は、それぞれ３０μｇ／ｍＬと２０μｇ／ｍＬである。

【0024】

（実施例５）
ヘスペレチンとホルモノネチンの組成物であって、ヘスペレチンとホルモノネチンとの質量比は３０：３０であり、具体的には、組成物におけるヘスペレチンとホルモノネチンの濃度は、それぞれ３０μｇ／ｍＬと３０μｇ／ｍＬである。

【0025】

（実施例６）
ヘスペレチンとホルモノネチンの組成物であって、ヘスペレチンとホルモノネチンとの質量比は５０：２０であり、具体的には、組成物におけるヘスペレチンとホルモノネチンの濃度は、それぞれ５０μｇ／ｍＬと２０μｇ／ｍＬである。

【0026】

ヘスペレチン組成物の血糖降下作用の試験
実験方法：
０．２５ Ｕ／ｍＬのα－グルコシダーゼ溶液と５ｍｍｏｌ／ｍＬの基質である４‐ニトロフェニル－α－Ｄ‐ガラクトピラノシド（ｐＮＰＧ）溶液を０．１ｍｏｌ Ｌ^－１のｐＨ６．８のＰＢＳ緩衝液で調合した。

【0027】

各ウェルに１００μＬの試料溶液を加え、続いて４０μＬのα－グルコシダーゼ（０．２５ Ｕ／ｍＬ）を加え、３７℃で１５分間反応させた後、５ｍｍｏｌ／ｍＬの基質である４‐ニトロフェニル－α－Ｄ‐ガラクトピラノシド（ｐＮＰＧ）を６０μＬ加え、３７℃で１５分間反応させた後、マイクロプレートリーダーを用いて４０５ｎｍの波長で測定した。

【0028】

被験試料溶液は、実施例１～６に記載のヘスペレチン組成物であり、まず、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を用いて、ヘスペレチン、ガランギン、ホルモノネチンをそれぞれ１０ｍｇ／ｍＬの母液に調合し、次いで、ＰＢＳ緩衝液を用いて、特定濃度のヘスペレチン、ガランギン、ホルモノネチンおよび組成物の試料溶液を調合した。

【0029】

陽性対照はアカルボース（３５０μｇ／ｍＬ）で、ブランク群は試料と酵素を含まないもの、試料ブランク群は酵素を含まないものである。

【0030】

計算式：阻害率＝［１－（ＯＤ_試料－ＯＤ_{試料ブランク}）／（ＯＤ_陰性対照－ＯＤ_ブランク）］×１００％
ＣｏｍｐｕＳｙｎというソフトウェアを使ってＣＩ値を算出し、薬剤間の相乗効果を評価する。

【0031】

併用指数（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ、ＣＩ）を使用して薬剤間の相乗効果の強さを表し、ＣＩ＜１は薬剤間の相乗効果を示し、薬剤併用により個々の薬剤の有効性を高めることができ、ＣＩ値が小さいほど相乗効果が強くなり、ＣＩ＝１は薬剤間の相加効果を示し、薬剤併用により個々の薬剤の有効性が直線的に重ね合わされ、ＣＩ＞１は薬剤間の拮抗効果を示し、薬剤併用によりそれぞれの薬剤の有効性が低下する。

【0032】

１、実施例１および実施例４のヘスペレチン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性
実施例１および実施例４のヘスペレチン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を図１に示す：ヘスペレチン３０μｇ／ｍＬ、ガランギン１００μｇ／ｍＬ、ホルモノネチン２０μｇ／ｍＬ、アカルボース３５０μｇ／ｍＬの対応する質量濃度での阻害率は、それぞれ４５．２±３．２％、５６．３２±４．５％、６０．０７±５．３％、４６．２５±３．５％であり、ヘスペレチンとガランギンの組成物（３０＋１００μｇ／ｍＬ）による阻害率は９２．８±６．４％であり、ヘスペレチンとホルモノネチン（３０＋２０μｇ／ｍＬ）による阻害率は７７．３１±４．５％であり、その結果、組成物の併用によりα－グルコシダーゼへの阻害活性が有意に増加することが示された。

【0033】

質量比を３０：１００としたヘスペレチンとガランギンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ヘスペレチンとガランギンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：３０＋１００、１５＋５０、７．５＋２５、３．７５＋１２．５であり、ヘスペレチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：３０、１５、７．５、３．７５であり、ガランギンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：１００、５０、２５、１２．５であり、結果を図２に示すように、質量比を３０：１００としたヘスペレチンとガランギンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を増加させた。質量比を３０：１００としたヘスペレチンとガランギンの組成物のＦａ－ＣＩトレンドグラフを図３に示し、図３から分かるように、ヘスペレチンとガランギンは共にＣＩ値が１．０以下で、相乗効果を示した。

【0034】

質量比を３０：２０としたヘスペレチンとホルモノネチンの組成が、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ヘスペレチンとホルモノネチンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：３０＋２０、１５＋１０、７．５＋５、３．７５＋２．５であり、ヘスペレチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：３０、１５、７．５、３．７５であり、ホルモノネチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：２０、１０、５、２．５であり、その結果を図４に示すように、質量比を３０：２０としたヘスペレチンとホルモノネチンの組成物も、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を増加させた。質量比を３０：２０としたヘスペレチンとホルモノネチンの組成物のＦａ－ＣＩトレンドグラフを図５に示し、図５から分かるように、ヘスペレチンとホルモノネチンは共にＣＩ値が１．０以下で、相乗効果を示した。

【0035】

実施例１および実施例４のヘスペレチン組成物の併用係数（ＣＩ）を表１に示す。

【0036】

データは３回の独立した実験から得られたもので、平均値±標準偏差で表した。

【0037】

表１の結果から分かるように、ヘスペレチンとガランギン（３０：１００）およびヘスペレチンとホルモノネチン（３０：２０）の併用時の併用係数ＣＩは共に１未満であり、相乗効果を示し、その中で、ヘスペレチンとガランギン組成物の併用係数は、ＧＩ_７５とＧＩ_９０の両方で０．６０未満であり、強い相乗効果を示し、併用指数の平均値（ＣＩ_ａｖｇ）は０．４８であり、ヘスペレチンとホルモノネチンの組成物の併用係数は、ＧＩ_７５とＧＩ_９０の両方で０．６未満であり、強い相乗効果を示し、併用指数の平均値（ＣＩ_ａｖｇ）は０．５６であった。

【0038】

２、実施例２および実施例５のヘスペレチン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性
実施例２および実施例５のヘスペレチン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を図６に示す：ヘスペレチン３０μｇ／ｍＬ、ガランギン１５０μｇ／ｍＬ、ホルモノネチン３０μｇ／ｍＬ、アカルボース３５０μｇ／ｍＬの対応する質量濃度での阻害率は、それぞれ４５．２±３．２％、８４．４±７．５％、６５．２±４．３％、４６．２５±３．５％であり、ヘスペレチンとガランギンの組成物（３０＋１５０μｇ／ｍＬ）による阻害率は８５．７±６．７％であり、ヘスペレチンとホルモノネチン（３０＋３０μｇ／ｍＬ）による阻害率は７１．６±３．５％であり、その結果、組成物を併用してもα－グルコシダーゼに対する阻害活性が有意に増加しないことが示された。

【0039】

質量比を３０：１５０としたヘスペレチンとガランギンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ヘスペレチンとガランギンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：３０＋１５０、１５＋７５、７．５＋３７．５、３．７５＋１８．７５であり、ヘスペレチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：３０、１５、７．５、３．７５であり、ガランギンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：１５０、７５、３７．５、１８．７５であり、その結果を図７に示す。

【0040】

質量比を３０：３０としたヘスペレチンとホルモノネチンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ヘスペレチンとホルモノネチンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：３０＋３０、１５＋１５、７．５＋７．５、３．７５＋３．７５であり、ヘスペレチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：３０、１５、７．５、３．７５であり、ホルモノネチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：３０、１５、７．５、３．７５であり、その結果を図８に示す。

【0041】

実施例２および実施例５のヘスペレチン組成物の併用係数（ＣＩ）を表２に示す。

【0042】

データは３回の独立した実験から得られたもので、平均値±標準偏差で表した。

【0043】

表２の結果から分かるように、ヘスペレチンとガランギン（３０：１５０）およびヘスペレチンとホルモノネチン（３０：３０）の併用時の併用係数ＣＩは共に１より大きく、拮抗効果を示した。

【0044】

３、実施例３および実施例６のヘスペレチン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性
実施例３および実施例６のヘスペレチン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を図９に示す：ヘスペレチン５０μｇ／ｍＬ、ガランギン１００μｇ／ｍＬ、ホルモノネチン２０μｇ／ｍＬ、アカルボース３５０μｇ／ｍＬの対応する質量濃度での阻害率は、それぞれ６３．４±４．２％、５６．３２±４．５％、６０．０７±５．３％、４６．２５±３．５％であり、ヘスペレチンとガランギンの組成物（５０＋１００μｇ／ｍＬ）による阻害率は７５．５±５．３％であり、ヘスペレチンとホルモノネチン（５０＋２０μｇ／ｍＬ）による阻害率は７１．３１±３．５％であり、その結果、組成物を併用してもα－グルコシダーゼに対する阻害活性が有意に増加しないことが示された。

【0045】

質量比を５０：１００としたヘスペレチンとガランギンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ヘスペレチンとガランギンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：５０＋１００、２５＋５０、１２．５＋２５、６．２５＋１２．５であり、ヘスペレチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：５０、２５、１２．５、６．２５であり、ガランギンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：１００、５０、２５、１２．５であり、その結果を図１０に示す。

【0046】

質量比を５０：２０としたヘスペレチンとホルモノネチンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ヘスペレチンとホルモノネチンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：５０＋２０、２５＋１０、１２．５＋５、６．２５＋２．５であり、ヘスペレチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：５０、２５、１２．５、６．２５であり、ホルモノネチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：２０、１０、５、２．５であり、その結果を図１１に示す。

【0047】

実施例３および実施例６のヘスペレチン組成物の併用係数（ＣＩ）を表３に示す。

【0048】

データは３回の独立した実験から得られたもので、平均値±標準偏差で表した。

【0049】

表３の結果から分かるように、ヘスペレチンとガランギン（５０：１００）およびヘスペレチンとホルモノネチン（５０：２０）の併用時の併用係数ＣＩは共に１より大きく、拮抗効果を示した。

【0050】

（比較例１）
ゲニステイン（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）は、ホルモノネチンと同様の構造を有し、分子式はＣ_１５Ｈ_１０Ｏ_５、分子量は２７０．２４、ＣＡＳ登録番号は４４６－７２－０、構造式は、

ヘスペレチンとゲニステインの組成物であって、ヘスペレチンとゲニステインの質量比は３０：２であり、具体的には、ヘスペレチンとゲニステインの濃度は、それぞれ３０μｇ／ｍＬと２μｇ／ｍＬである。

【0051】

比較例１のヘスペレチンとゲニステインの組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を図１２に示す：ヘスペレチン３０μｇ／ｍＬ、ゲニステイン２μｇ／ｍＬ、およびアカルボース３５０μｇ／ｍＬによるα－グルコシダーゼへの阻害率は、それぞれ４５．２±３．２％、４７．７±３．３％、４６．２５±３．５％であり、ヘスペレチンとゲニステインの組成物（３０＋２μｇ／ｍＬ）による阻害率は５３．３±２．７％であり、その結果、組成物の併用によりα－グルコシダーゼに対する阻害活性がわずかに増加することが示された。

【0052】

質量比を３０：２としたヘスペレチンとゲニステインの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ヘスペレチンとゲニステインの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：３０＋２、１５＋１、７．５＋０．５、３．７５＋０．２５であり、ヘスペレチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：３０、１５、７．５、３．７５であり、ゲニステインの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：２、１、０．５、０．２５であり、その結果を図１３に示す。

【0053】

比較例１のヘスペレチン組成物の併用係数（ＣＩ）を表４に示す。

【0054】

データは３回の独立した実験から得られたもので、平均値±標準偏差で表した。

【0055】

表４の結果から分かるように、ヘスペレチンとゲニステイン（３０：２）の組成物を併用する時に、α－グルコシダーゼへの阻害活性が増加した一方で、ヘスペレチンとゲニステイン（３０：２）の組成物の併用時の併用係数ＣＩは１より大きく、拮抗効果を示した。

【0056】

（比較例２）
本実施例は、各モノマー化合物とヘスペレチンとの組み合わせが相乗効果を有しない状況を示している。ここで、各モノマー化合物は、モリン、ルテオリン、ミリセチン、ヘルバセチン、ジヒドロモリン、ナリンゲニン、フィセチン、バイカレイン、アピゲニン、ケンペリド、スカビオリド、クリシン、ゲンクワニン、ビテキシン、フロレチン、ビオカニンＡおよびカリコシンから選択される。

【0057】

まず、上記の方法に従って、各モノマー化合物の対応する濃度でのα－グルコシダーゼ阻害率をテストし、以下の表５に示す。

【0058】

次に、各モノマー化合物をヘスペレチンと組み合わせ、組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害率を測定し、以下の表６に示す。

【0059】

表６から分かるように、上記の各モノマー化合物とヘスペレチンとの組み合わせでは、その組成物は、阻害率が単一化合物の阻害率よりも低く、実際に拮抗効果を示し、相乗効果はない。

【0060】

（比較例３）
本実施例は、各モノマー化合物とガランギンとの組み合わせが相乗効果を有しない状況を示している。ここで、各モノマー化合物は、モリン、ビテキシン、ケンペリド、アピゲニン、ケンペロール、ジヒドロモリン、フィセチン、ナリンゲニン、ミリセチン、ルテオリン、ダイゼイン、ビオカニンＡ、フロレチン、イソリキリチゲニン、スカビオリドおよびデルフィニジンから選択される。

【0061】

まず、上記の方法に従って、各モノマー化合物の対応する濃度でのα－グルコシダーゼ阻害率をテストし、以下の表７に示す。

【0062】

次に、各モノマー化合物をガランギンと組み合わせ、組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害率を測定し、以下の表８に示す。

【0063】

表８から分かるように、上記の各モノマー化合物とガランギンとの組み合わせでは、その組成物は、阻害率が単一化合物の阻害率よりも低く、実際に拮抗効果を示し、相乗効果はない。

【0064】

（比較例４）
本実施例は、各モノマー化合物とホルモノネチンとの組み合わせが相乗効果を有しない状況を示している。ここで、各モノマー化合物は、モリン、ビテキシン、アピゲニン、３－Ｏ－メチルクエルセチン、ケンペロール、ジヒドロモリン、フィセチン、ナリンゲニン、ミリセチン、ルテオリン、ケンペリド、バイカレイン、ビンストキシコシドＢ、ヘルバセチン、ダイゼイン、カリコシン、フロレチン、イソリキリチゲニン、スカビオリドおよびデルフィニジンから選択される。

【0065】

まず、上記の方法に従って、各モノマー化合物の対応する濃度でのα－グルコシダーゼ阻害率をテストし、以下の表９に示す。

【0066】

次に、各モノマー化合物をホルモノネチンと組み合わせ、組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害率を測定し、以下の表１０に示す。

【0067】

表１０から分かるように、上記の各モノマー化合物とホルモノネチンとの組み合わせでは、その組成物は、阻害率が単一化合物の阻害率よりも低く、実際に拮抗効果を示し、相乗効果はない。

【0068】

上記の実施例は、本発明の技術的解決手段を説明するためのものに過ぎず、それらを限定するものではない。前述の実施例を参照して本発明を詳細に説明したが、当業者であれば、前述の実施例に記載された技術的解決手段を変更したり、その技術的特徴の一部を同等に置換したりすることが可能であり、これらの変更または置換は、対応する技術的解決手段の本質を、本発明によって保護が主張される技術的解決手段の精神および範囲から逸脱させるものではない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【国際調査報告】