(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-07-12
(54)【発明の名称】α－グルコシダーゼ阻害用組成物およびその応用
(51)【国際特許分類】
A61K 31/353 20060101AFI20240705BHJP
A61K 31/352 20060101ALI20240705BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240705BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240705BHJP
【ＦＩ】
A61K31/353
A61K31/352
A61P3/10
A61P43/00 111
A61P43/00 121
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024504015
(86)(22)【出願日】2022-08-10
(85)【翻訳文提出日】2024-01-22
(86)【国際出願番号】 CN2022111359
(87)【国際公開番号】W WO2023020345
(87)【国際公開日】2023-02-23
(31)【優先権主張番号】202110962157.2
(32)【優先日】2021-08-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520468793
【氏名又は名称】中国農業科学院鄭州果樹研究所
【氏名又は名称原語表記】ＺＨＥＮＧＺＨＯＵ ＦＲＵＩＴ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＣＨＩＮＥＳＥ ＡＣＡＤＥＭＹ ＯＦ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．２８ Ｇａｎｇｗａｎ Ｒｏａｄ，Ａｎｘｕ Ｖｉｌｌａｇｅ，Ｎａｎｃａｏ Ｔｏｗｎｓｈｉｐ，Ｇｕａｎｃｈｅｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ，Ｈｅｎａｎ ４５０００９ （ＣＮ）
(74)【代理人】
【識別番号】110001139
【氏名又は名称】ＳＫ弁理士法人
(74)【代理人】
【識別番号】100130328
【弁理士】
【氏名又は名称】奥野 彰彦
(74)【代理人】
【識別番号】100130672
【弁理士】
【氏名又は名称】伊藤 寛之
(72)【発明者】
【氏名】劉杰超
(72)【発明者】
【氏名】張強
(72)【発明者】
【氏名】焦中高
(72)【発明者】
【氏名】陳大磊
(72)【発明者】
【氏名】潘俊坤
(72)【発明者】
【氏名】張春嶺
(72)【発明者】
【氏名】劉慧
(72)【発明者】
【氏名】楊文博
(72)【発明者】
【氏名】呂真真
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086BA08
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA17
4C086MA35
4C086MA37
4C086MA41
4C086MA43
4C086MA52
4C086MA66
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZC20
4C086ZC35
4C086ZC75
(57)【要約】
本発明は、α－グルコシダーゼ阻害用組成物およびその応用を開示し、天然活性化合物の技術分野に属する。本発明の組成物は、ダイゼインとクエルセチン誘導体を含み、前記クエルセチン誘導体は、タキシホリンまたは３－Ｏ－メチルクエルセチンであり、ここで、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：２５～１０：２５であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：２～８：４である。本発明の組成物は、前記フラボノイド化合物を単独で使用するよりも優れたα－グルコシダーゼ阻害用の有意な相乗効果を有し、かつ使用する薬剤の投与量を減らし、薬剤耐性の発生を抑えることができる。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ダイゼインとクエルセチン誘導体を含み、前記クエルセチン誘導体は、タキシホリンまたは３－Ｏ－メチルクエルセチンであり、ここで、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：２５～１０：２５であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：２～８：４であることを特徴とする、組成物。
【請求項2】
α－グルコシダーゼ阻害用製剤の調製における、請求項１に記載の組成物の応用。
【請求項3】
その有効成分は、ダイゼインとタキシホリンまたはダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンを含み、ここで、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：２５～１０：２５であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：２～８：４であることを特徴とする、α－グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項4】
血糖降下用薬剤の調製における、請求項１に記載の組成物の応用。
【請求項5】
前記血糖降下作用は、過剰な食後血糖を制御する目的でα－グルコシダーゼの活性を阻害し、炭水化物の消化および吸収を阻害することにより達成されることを特徴とする、請求項４に記載の応用。
【請求項6】
その有効成分は、ダイゼインとタキシホリンまたはダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンを含み、ここで、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：２５～１０：２５であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：２～８：４であることを特徴とする、血糖降下用薬剤。
【請求項7】
前記薬剤が、薬学的に許容される担体、溶剤、希釈剤、賦形剤または他の媒体を含むことを特徴とする、請求項６に記載の薬剤。
【請求項8】
前記薬剤の剤形が、粉末、顆粒、カプセル、注射剤、経口液剤または錠剤から選択されることを特徴とする、請求項６に記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、天然活性化合物の技術分野に属し、具体的には、α－グルコシダーゼ阻害用組成物およびその応用に関する。
【背景技術】
【0002】
時代の進歩は科学技術の急速な発展をもたらし、人々の生活水準も科学の進歩によって改善しつつあり、同時に人々の食生活も劇的に変化し、高糖質、高タンパク質や高脂肪などの過剰摂取が非科学的に行われ、その結果、いくつかの「文明病」の罹患率が大幅に増加し、糖尿病はその一つである。糖尿病は、世界的な慢性代謝疾患で、完全に治癒することは一生不可能である。この疾患の主な特徴は、血液中のグルコース濃度が長期間高く、尿中のグルコースが検出されることである。α－グルコシダーゼの活性を制御することは、食後の血糖上昇を抑える重要な手段である。
【0003】
ダイゼインは、天然の植物性エストロゲンのイソフラボン系化合物である。主に抗がん、抗血栓、抗心血管疾患、血糖降下などの生理活性の薬理作用がある。したがって、ダイゼインは医薬品やサプリメントとして広く利用されることが多い。食用大豆イソフラボンは、ＩＩ型糖尿病を緩和する効果があることが既に証明されている。Ｃｈｏらは研究を経て、ダイゼインがＰＰＡＲγを活性化し、ＧＬＵＴ４とＩＲＳ－１の発言を増加させることにより、インスリン刺激脂肪細胞によるグルコースの取り込みを増加させることを発見した。最近の研究結果をさらに裏付けるように、食用大豆イソフラボンの糖尿病に対する有益な効果は、ダイゼインおよびその代謝産物であるエクオールに起因している可能性がある（Ｃｈｏ，Ｋ．Ｗ．，Ｌｅｅ，Ｏ．Ｈ．，Ｂａｎｚ，Ｗ．Ｊ．，Ｍｏｕｓｔａｉｄ－Ｍｏｕｓｓａ，Ｎ．，Ｓｈａｙ，Ｎ．Ｆ．，Ｋｉｍ，Ｙ．Ｃ．，２０１０．Ｄａｉｄｚｅｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｄａｉｄｚｅｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ，ｅｑｕｏｌ，ｅｎｈａｎｃｅ ａｄｉｐｏｃｙｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ＰＰＡＲγ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｊ Ｎｕｔｒ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２１，８４１－８４７．）。
【0004】
活性分子併用の最終目標は、有効性を高め、投与量を減らし、有害な副作用を低減し、耐性の発生を回避または遅延させることである。したがって、α－グルコシダーゼを阻害し、血糖降下作用を増強するフラボノイド系化合物の併用に関する研究は、ヒトの健康増進のために重要である。
【発明の概要】
【0005】
本発明は、単一の活性成分による血糖降下作用が限られ、薬剤耐性が生じやすいという従来技術の課題を解決するために、α－グルコシダーゼ阻害用組成物およびその応用を提供することを目的とする。
【0006】
上記目的を達成するために、本発明は、以下の技術的解決手段によって実現される。
【0007】
組成物であって、ダイゼインとクエルセチン誘導体を含み、前記クエルセチン誘導体は、タキシホリンまたは３－Ｏ－メチルクエルセチンであり、
ここで、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：２５～１０：２５であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：２～８：４である。
ここで、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：２５～１０：２５であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：２～８：４である。
【0008】
いくつかの具体的な実施例では、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：２５、１０：２５であり、ここで、ダイゼインとタキシホリンとの質量比が８：２５である場合、その併用指数の平均値（ＣＩａｖｇ）は０．８２であり、１０：２５の質量比よりも優れ、強い相乗効果を有する。
【0009】
いくつかの具体的な実施例では、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：２、８：４であり、ここで、当ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比が８：２である場合、その併用指数の平均値（ＣＩａｖｇ）は０．６であり、８：４の質量比よりも優れ、強い相乗効果を有する。
【0010】
α－グルコシダーゼ阻害用製剤の調製における上記組成物の応用。
【0011】
α－グルコシダーゼ阻害剤であって、その有効成分は、ダイゼインとタキシホリンまたはダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンを含み、ここで、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：２５～１０：２５であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：２～８：４である。
【0012】
血糖降下用薬剤の調製における上記組成物の応用であって、前記血糖降下作用は、過剰な食後血糖を制御する目的でα－グルコシダーゼの活性を阻害し、炭水化物の消化および吸収を阻害することにより達成される
血糖降下用薬剤であって、その有効成分は、ダイゼインとタキシホリンまたはダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンを含み、ここで、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：２５～１０：２５であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：２～８：４である。
血糖降下用薬剤であって、その有効成分は、ダイゼインとタキシホリンまたはダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンを含み、ここで、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：２５～１０：２５であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：２～８：４である。
【0013】
限定された質量比の範囲内で、ダイゼインとタキシホリン、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの相乗的な技術効果が達成される。
【0014】
本発明に係る薬剤は、薬学的に許容される担体、溶剤、希釈剤、賦形剤、およびその他の媒体混合物を含み、必要に応じて、粉末、顆粒、カプセル、注射剤、経口液剤または錠剤として調製することができる。
【0015】
本発明の技術的解決手段の利点は、以下の通りである。
【0016】
本発明のダイゼインとタキシホリン、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン組成物は、前記フラボノイド化合物を単独で使用するよりも優れたα－グルコシダーゼ阻害用の有意な相乗効果を有し、かつ使用する薬剤の投与量を減らし、薬剤耐性の発生を抑えることができる。Ｃｈｏｕ－Ｔａｌａｌａｙ法を用いたα－グルコシダーゼのｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害試験により、本発明のダイゼインとタキシホリン、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物は、それぞれ８：２５および８：２の質量比でα－グルコシダーゼに対して有意な相乗効果を有し、５０％（ＧＩ５０）、７５％（ＧＩ７５）および９０％（ＧＩ９０）の阻害率でのＣＩ値が１．０未満であり、かつ薬剤間の相乗効果の強さは、一般に阻害率が低い場合よりも高い場合の方が高いことが証明された。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1】実施例１および実施例５のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を示す。
【図2】ダイゼイン＋タキシホリン（８：２５）組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。
【図3】ダイゼイン＋タキシホリン（８：２５）組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すＦａ－ＣＩトレンドグラフである。
【図4】ダイゼイン＋３－Ｏ－メチルクエルセチン（８：２）組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。
【図5】ダイゼイン＋３－Ｏ－メチルクエルセチン（８：２）組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すＦａ－ＣＩトレンドグラフである。
【図6】実施例２および実施例６のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を示す。
【図7】ダイゼイン＋タキシホリン（８：３０）組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。
【図8】ダイゼイン＋３－Ｏ－メチルクエルセチン（８：４）組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。
【図9】実施例３および実施例７のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を示す。
【図10】ダイゼイン＋タキシホリン（８：５０）組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。
【図11】ダイゼイン＋３－Ｏ－メチルクエルセチン（８：６）組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。
【図12】実施例４および実施例８のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を示す。
【図13】ダイゼイン＋タキシホリン（１０：２５）組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。
【図14】ダイゼイン＋３－Ｏ－メチルクエルセチン（１０：２）組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0018】
本発明で使用される用語は、特に指定のない限り、当業者によって一般的に理解される意味を有する。
【0019】
ダイゼイン（Ｄａｉｄｚｅｉｎ）は、分子式がＣ１５Ｈ１０Ｏ４であり、分子量は２５４．２４、ＣＡＳ登録番号は４８６－６６－８、構造式は、
タキシホリン（Ｔａｘｉｆｏｌｉｎ）は、分子式がＣ１５Ｈ１２Ｏ７であり、分子量は３０４．２５、ＣＡＳ登録番号は４８０－１８－２、構造式は、
３－Ｏ－メチルクエルセチン（３－Ｏ－Ｍｅｔｈｙｌ Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）は、分子式がＣ１６Ｈ１２Ｏ７であり、分子量は３１６．２６、ＣＡＳ登録番号は１４８６－７０－０、構造式は、
α－グルコシダーゼ（出芽酵母から、Ｓｉｇｍａ）、
４－ニトロフェニル－α－Ｄ－ガラクトピラノシドド（ｐＮＰＧ、ＴＯＫＹＯ Ｃｈｅｍｉｃａ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｃｏ．，ＬＴＤ）、
アカルボース（Ａｃａｒｂｏｓｅ、ＴＯＫＹＯ Ｃｈｅｍｉｃａ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｃｏ．，ＬＴＤ）、
ダイゼイン、タキシホリン、３－Ｏ－メチルクエルセチン（Ｓｏｌａｒｂｉｏ北京）、
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｍｐｌｉｃｉｔｙ浄水システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、法国）、
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８，、０．１ｍｏｌ Ｌ－１）、
マイクロプレートリーダーＴＥＣＡＮ ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００ ＰＲＯ（Ｔｅａｃａｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｔｄ．，Ｓｗｉｚｅｒｌａｎｄ）。
４－ニトロフェニル－α－Ｄ－ガラクトピラノシドド（ｐＮＰＧ、ＴＯＫＹＯ Ｃｈｅｍｉｃａ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｃｏ．，ＬＴＤ）、
アカルボース（Ａｃａｒｂｏｓｅ、ＴＯＫＹＯ Ｃｈｅｍｉｃａ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｃｏ．，ＬＴＤ）、
ダイゼイン、タキシホリン、３－Ｏ－メチルクエルセチン（Ｓｏｌａｒｂｉｏ北京）、
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｍｐｌｉｃｉｔｙ浄水システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、法国）、
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８，、０．１ｍｏｌ Ｌ－１）、
マイクロプレートリーダーＴＥＣＡＮ ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００ ＰＲＯ（Ｔｅａｃａｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｔｄ．，Ｓｗｉｚｅｒｌａｎｄ）。
【0020】
以下、具体的な実施例と併せて、データを参照しながら本発明をさらに詳細に説明する。以下の実施例は、本発明を例示することのみを意図し、本発明の範囲を何らかの形態で限定するものではない。
【0021】
（実施例１）
ダイゼインとタキシホリンの組成物であって、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：２５であり、具体的には、組成物におけるダイゼインとタキシホリンの濃度は、それぞれ８μｇ／ｍＬと２５μｇ／ｍＬである。
ダイゼインとタキシホリンの組成物であって、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：２５であり、具体的には、組成物におけるダイゼインとタキシホリンの濃度は、それぞれ８μｇ／ｍＬと２５μｇ／ｍＬである。
【0022】
（実施例２）
ダイゼインとタキシホリンの組成物であって、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：３０であり、具体的には、組成物におけるダイゼインとタキシホリンの濃度は、それぞれ８μｇ／ｍＬと３０μｇ／ｍＬである。
ダイゼインとタキシホリンの組成物であって、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：３０であり、具体的には、組成物におけるダイゼインとタキシホリンの濃度は、それぞれ８μｇ／ｍＬと３０μｇ／ｍＬである。
【0023】
（実施例３）
ダイゼインとタキシホリンの組成物であって、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：５０であり、具体的には、組成物におけるダイゼインとタキシホリンの濃度は、それぞれ８μｇ／ｍＬと５０μｇ／ｍＬである。
ダイゼインとタキシホリンの組成物であって、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は８：５０であり、具体的には、組成物におけるダイゼインとタキシホリンの濃度は、それぞれ８μｇ／ｍＬと５０μｇ／ｍＬである。
【0024】
（実施例４）
ダイゼインとタキシホリンの組成物であって、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は１０：２５であり、具体的には、組成物におけるダイゼインとタキシホリンの濃度は、それぞれ１０μｇ／ｍＬと２５μｇ／ｍＬである。
ダイゼインとタキシホリンの組成物であって、ダイゼインとタキシホリンとの質量比は１０：２５であり、具体的には、組成物におけるダイゼインとタキシホリンの濃度は、それぞれ１０μｇ／ｍＬと２５μｇ／ｍＬである。
【0025】
（実施例５）
ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物であって、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：２であり、具体的には、組成物におけるダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの濃度は、それぞれ８μｇ／ｍＬと２μｇ／ｍＬである。
ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物であって、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：２であり、具体的には、組成物におけるダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの濃度は、それぞれ８μｇ／ｍＬと２μｇ／ｍＬである。
【0026】
（実施例６）
ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物であって、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：４であり、具体的には、組成物におけるダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの濃度は、それぞれ８μｇ／ｍＬと４μｇ／ｍＬである。
ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物であって、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：４であり、具体的には、組成物におけるダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの濃度は、それぞれ８μｇ／ｍＬと４μｇ／ｍＬである。
【0027】
（実施例７）
ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物であって、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：６であり、具体的には、組成物におけるダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの濃度は、それぞれ８μｇ／ｍＬと６μｇ／ｍＬである。
ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物であって、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は８：６であり、具体的には、組成物におけるダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの濃度は、それぞれ８μｇ／ｍＬと６μｇ／ｍＬである。
【0028】
（実施例８）
ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物であって、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は１０：２であり、具体的には、組成物におけるダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの濃度は、それぞれ１０μｇ／ｍＬと２μｇ／ｍＬである。
ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物であって、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンとの質量比は１０：２であり、具体的には、組成物におけるダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの濃度は、それぞれ１０μｇ／ｍＬと２μｇ／ｍＬである。
【0029】
ダイゼイン組成物の血糖降下作用の試験
実験方法：
０．２５ Ｕ／ｍＬのα－グルコシダーゼ溶液と５ｍｍｏｌ／ｍＬの基質である４‐ニトロフェニルα‐Ｄ‐ガラクトピラノシド（ｐＮＰＧ）溶液を０．１ｍｏｌ Ｌ－１のｐＨ６．８のＰＢＳ緩衝液で調合した。
実験方法：
０．２５ Ｕ／ｍＬのα－グルコシダーゼ溶液と５ｍｍｏｌ／ｍＬの基質である４‐ニトロフェニルα‐Ｄ‐ガラクトピラノシド（ｐＮＰＧ）溶液を０．１ｍｏｌ Ｌ－１のｐＨ６．８のＰＢＳ緩衝液で調合した。
【0030】
４０μＬのα－グルコシダーゼ溶液を確実に称量し、それぞれ１００μＬの被験試料溶液を加え、３７℃で１０分間反応させ、基質である４‐ニトロフェニルα‐Ｄ‐ガラクトピラノシド（ｐＮＰＧ）溶液を６０μＬ加え、３７℃で１５分間反応させた後、マイクロプレートリーダーを用いて４０５ｎｍの波長で測定した。
【0031】
前記被験試料溶液は、実施例１～８に記載のダイゼイン組成物であり、まず、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を用いて、ダイゼイン、タキシホリン、３－Ｏ－メチルクエルセチンをそれぞれ１０ｍｇ／ｍＬの母液に調合し、次いで、ＰＢＳ緩衝液を用いて、特定濃度のダイゼイン、タキシホリン、３－Ｏ－メチルクエルセチンおよび組成物の試料溶液を調合した。
【0032】
陽性対照はアカルボース（３５０μｇ／ｍＬ）で、ブランク群は試料と酵素を含まないもの、試料ブランク群は酵素を含まないものである。
【0033】
計算式：阻害率＝［１－（ＯＤ試料－ＯＤ試料ブランク）／（ＯＤ陰性対照－ＯＤブランク）］×１００％
ＣｏｍｐｕＳｙｎというソフトウェアを使ってＣＩ値を算出し、薬剤間の相乗効果を評価する。
ＣｏｍｐｕＳｙｎというソフトウェアを使ってＣＩ値を算出し、薬剤間の相乗効果を評価する。
【0034】
併用指数（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ、ＣＩ）を使用して薬剤間の相乗効果の強さを表し、ＣＩ＜１は薬剤間の相乗効果を示し、薬剤併用により個々の薬剤の有効性を高めることができ、ＣＩ値が小さいほど相乗効果が強くなり、ＣＩ＝１は薬剤間の相加効果を示し、薬剤併用により個々の薬剤の有効性が直線的に重ね合わされ、ＣＩ＞１は薬剤間の拮抗効果を示し、薬剤併用によりそれぞれの薬剤の有効性が低下する。
【0035】
１、実施例１および実施例５のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性
実施例１および実施例５のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を図１に示す：ダイゼイン８μｇ／ｍＬ、タキシホリン２５μｇ／ｍＬ、３－Ｏ－メチルクエルセチン２μｇ／ｍＬ、およびアカルボース３５０μｇ／ｍＬによるα－グルコシダーゼへの阻害率は、それぞれ４４．５±２．５％、４０．１２±２．１％、４６．２３±１．２％、４６．２５±３．５％であり、ダイゼインとタキシホリンの組成物（８＋２５μｇ／ｍＬ）による阻害率は６７．２５±３．３５％であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（８＋２μｇ／ｍＬ）による阻害率は７１．５６±３．４％であり、その結果、組成物の併用によりα－グルコシダーゼへの阻害活性が大幅に増加することが示された。
実施例１および実施例５のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を図１に示す：ダイゼイン８μｇ／ｍＬ、タキシホリン２５μｇ／ｍＬ、３－Ｏ－メチルクエルセチン２μｇ／ｍＬ、およびアカルボース３５０μｇ／ｍＬによるα－グルコシダーゼへの阻害率は、それぞれ４４．５±２．５％、４０．１２±２．１％、４６．２３±１．２％、４６．２５±３．５％であり、ダイゼインとタキシホリンの組成物（８＋２５μｇ／ｍＬ）による阻害率は６７．２５±３．３５％であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（８＋２μｇ／ｍＬ）による阻害率は７１．５６±３．４％であり、その結果、組成物の併用によりα－グルコシダーゼへの阻害活性が大幅に増加することが示された。
【0036】
質量比を８：２５としたダイゼインとタキシホリンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ダイゼインとタキシホリンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：８＋２５、４＋１２．５、２＋６．２５、１＋３．１２５であり、前記ダイゼインの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：８、４、２、１であり、前記タキシホリンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：２５、１２．５、６．２５、３．１２５であり、その結果を図２に示すように、質量比を８：２５としたダイゼインとタキシホリンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を増加させた。質量比を８：２５としたダイゼインとタキシホリンの組成物のＦａ－ＣＩトレンドグラフを図３に示し、図３から分かるように、ダイゼインとタキシホリンは共にＣＩ値が１．０以下で、相乗効果を示した。
【0037】
質量比を８：２としたダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：８＋２、４＋１、２＋０．５、１＋０．２５であり、前記ダイゼインの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：８、４、２、１であり、前記３－Ｏ－メチルクエルセチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：２、１、０．５、０．２５であり、その結果を図４に示すように、質量比を８：２としたダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性も対応して増加した。質量比を８：２としたダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物のＦａ－ＣＩトレンドグラフを図５に示し、図５から分かるように、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンは共にＣＩ値が１．０以下で、相乗効果を示した。実施例１および実施例５のダイゼイン組成物の併用係数（ＣＩ）を表１に示す。
【0038】
【0039】
表１の結果から分かるように、ダイゼインとタキシホリン（８：２５）およびダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（８：２）の併用時の併用係数ＣＩは共に１未満であり、相乗効果を示し、その中で、ダイゼインとタキシホリン（８：２５）の併用指数の平均値（ＣＩａｖｇ）は０．８２であり、相乗効果を示し、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（８：２）の併用指数の平均値（ＣＩａｖｇ）は０．６０であり、強い相乗効果を示した。
【0040】
２、実施例２および実施例６のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性
実施例２および実施例６のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を図６に示す：ダイゼイン８μｇ／ｍＬ、タキシホリン３０μｇ／ｍＬ、３－Ｏ－メチルクエルセチン４μｇ／ｍＬ、およびアカルボース３５０μｇ／ｍＬによるα－グルコシダーゼへの阻害率は、それぞれ４４．５±２．５％、５４．５±２．４％、５３．５２±３．２％、４６．２５±３．５％であり、ダイゼインとタキシホリンの組成物（８＋３０μｇ／ｍＬ）による阻害率は５８．６±３．５％であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（８＋４μｇ／ｍＬ）による阻害率は６４．５±２．４％であり、その結果、組成物の併用によりα－グルコシダーゼに対する阻害活性が増加することが示された。
実施例２および実施例６のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を図６に示す：ダイゼイン８μｇ／ｍＬ、タキシホリン３０μｇ／ｍＬ、３－Ｏ－メチルクエルセチン４μｇ／ｍＬ、およびアカルボース３５０μｇ／ｍＬによるα－グルコシダーゼへの阻害率は、それぞれ４４．５±２．５％、５４．５±２．４％、５３．５２±３．２％、４６．２５±３．５％であり、ダイゼインとタキシホリンの組成物（８＋３０μｇ／ｍＬ）による阻害率は５８．６±３．５％であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（８＋４μｇ／ｍＬ）による阻害率は６４．５±２．４％であり、その結果、組成物の併用によりα－グルコシダーゼに対する阻害活性が増加することが示された。
【0041】
質量比を８：３０としたダイゼインとタキシホリンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ダイゼインとタキシホリンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：８＋３０、４＋１５、２＋７．５、１＋３．７５であり、前記ダイゼインの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：８、４、２、１であり、前記タキシホリンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：３０、１５、７．５、３．７５であり、その結果を図７に示す。
【0042】
質量比を８：４としたダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：８＋４、４＋２、２＋１、１＋０．５であり、前記ダイゼインの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：８、４、２、１であり、前記３－Ｏ－メチルクエルセチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：４、２、１、０．５であり、その結果を図８に示す。実施例２および実施例６のダイゼイン組成物の併用係数（ＣＩ）を表２に示す。
【0043】
【0044】
表２の結果から分かるように、ダイゼインとタキシホリン（８：３０）の組成物およびダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（８：４）を併用する時に、α－グルコシダーゼへの阻害活性が増加した一方で、ダイゼインとタキシホリン（８：３０）の組成物の併用時の併用係数ＣＩは１より大きく、拮抗効果を示し、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（８：４）の併用時の併用係数ＣＩは１に近く、弱い相乗効果を示した。
【0045】
３、実施例３および実施例７のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性
実施例３および実施例７のダイゼイン組成物によりα－グルコシダーゼへの阻害活性を図９に示す：ダイゼイン８μｇ／ｍＬ、タキシホリン５０μｇ／ｍＬ、３－Ｏ－メチルクエルセチン６μｇ／ｍＬ、およびアカルボース３５０μｇ／ｍＬによるα－グルコシダーゼへの阻害率は、それぞれ４４．５±２．５％、７５．２１±３．４％、６１．７２±３．５％、４６．２５±３．５％であり、ダイゼインとタキシホリンの組成物（８＋５０μｇ／ｍＬ）による阻害率は６７．８±３．７％であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（８＋６μｇ／ｍＬ）による阻害率は５８．９±３．４％であり、その結果、組成物を併用してもα－グルコシダーゼに対する阻害活性が有意に増加しないことが示された。
実施例３および実施例７のダイゼイン組成物によりα－グルコシダーゼへの阻害活性を図９に示す：ダイゼイン８μｇ／ｍＬ、タキシホリン５０μｇ／ｍＬ、３－Ｏ－メチルクエルセチン６μｇ／ｍＬ、およびアカルボース３５０μｇ／ｍＬによるα－グルコシダーゼへの阻害率は、それぞれ４４．５±２．５％、７５．２１±３．４％、６１．７２±３．５％、４６．２５±３．５％であり、ダイゼインとタキシホリンの組成物（８＋５０μｇ／ｍＬ）による阻害率は６７．８±３．７％であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（８＋６μｇ／ｍＬ）による阻害率は５８．９±３．４％であり、その結果、組成物を併用してもα－グルコシダーゼに対する阻害活性が有意に増加しないことが示された。
【0046】
質量比を８：５０としたダイゼインとタキシホリンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ダイゼインとタキシホリンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：８＋５０、４＋２５、２＋１２．５、１＋６．２５であり、前記ダイゼインの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：８、４、２、１であり、前記タキシホリンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：５０、２５、１２．５、６．２５であり、その結果を図１０に示す。
【0047】
質量比を８：６としたダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：８＋６、４＋３、２＋１．５、１＋０．７５であり、前記ダイゼインの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：８、４、２、１であり、前記３－Ｏ－メチルクエルセチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：６、３、１．５、０．７５であり、その結果を図１１に示す。
【0048】
実施例３および実施例７のダイゼイン組成物の併用係数（ＣＩ）を表３に示す。
【0049】
【0050】
表３の結果から分かるように、ダイゼインとタキシホリン（８：５０）およびダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（８：６）の組成物の併用時の併用係数ＣＩは共に１より大きく、拮抗効果を示した。
【0051】
４、実施例４および実施例８のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性
実施例４および実施例８のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を図１２に示す：ダイゼイン１０μｇ／ｍＬ、タキシホリン２５μｇ／ｍＬ、３－Ｏ－メチルクエルセチン２μｇ／ｍＬ、およびアカルボース３５０μｇ／ｍＬによるα－グルコシダーゼへの阻害率は、それぞれ５２．２５±２．５％、４０．１２±２．１％、４６．２３±１．２％、４６．２５±３．５％であり、ダイゼインとタキシホリンの組成物（１０＋２５μｇ／ｍＬ）による阻害率は６２．３±１．７％であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（１０＋２μｇ／ｍＬ）による阻害率は４５．２±２．５％であり、その結果、組成物を併用してもα－グルコシダーゼに対する阻害活性が有意に増加しないことが示された。
実施例４および実施例８のダイゼイン組成物によるα－グルコシダーゼへの阻害活性を図１２に示す：ダイゼイン１０μｇ／ｍＬ、タキシホリン２５μｇ／ｍＬ、３－Ｏ－メチルクエルセチン２μｇ／ｍＬ、およびアカルボース３５０μｇ／ｍＬによるα－グルコシダーゼへの阻害率は、それぞれ５２．２５±２．５％、４０．１２±２．１％、４６．２３±１．２％、４６．２５±３．５％であり、ダイゼインとタキシホリンの組成物（１０＋２５μｇ／ｍＬ）による阻害率は６２．３±１．７％であり、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（１０＋２μｇ／ｍＬ）による阻害率は４５．２±２．５％であり、その結果、組成物を併用してもα－グルコシダーゼに対する阻害活性が有意に増加しないことが示された。
【0052】
質量比を１０：２５としたダイゼインとタキシホリンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ダイゼインとタキシホリンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：１０＋２５、５＋１２．５、２．５＋６．２５、１．２５＋３．１２５であり、前記ダイゼインの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：１０、５、２．５、１．２５であり、前記タキシホリンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：２５、１２．５、６．２５、３．１２５であり、その結果を図１３に示す。
【0053】
質量比を１０：２としたダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物の、異なる濃度勾配でα－グルコシダーゼに対する阻害活性を検出し、前記ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチンの組成物の濃度勾配は、（μｇ／ｍＬ）：１０＋２、５＋１、２．５＋０．５、１．２５＋０．２５であり、前記ダイゼインの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：１０、５、２．５、１．２５であり、前記３－Ｏ－メチルクエルセチンの濃度勾配は（μｇ／ｍＬ）：２、１、０．５、０．２５であり、その結果を図１４に示す。
【0054】
実施例４および実施例８のダイゼイン組成物の併用係数（ＣＩ）を表４に示す。
【0055】
【0056】
表４の結果から分かるように、α－グルコシダーゼに対する阻害活性は、ダイゼインとタキシホリン（１０：２５）を併用する時に増加したが、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（１０：２）の組成物の併用では有意な効果は認められなかった。また、ダイゼインとタキシホリン（１０：２５）の併用時の併用係数ＣＩは１に近く、弱い相乗効果を示し、ダイゼインと３－Ｏ－メチルクエルセチン（１０：２）の組成物の併用係数ＣＩは１より大きく、拮抗効果を示した。
【0057】
（比較例１）
本実施例は、各モノマー化合物とダイゼインとの組み合わせが相乗効果を有しない状況を示している。ここで、各モノマー化合物は、ケンペリド、ケンペロール、ジオスメチン、ヘルバセチン、ミリセチン、モリン、ゲンクワニン、バイカレイン、ヘスペレチン、フィセチン、クリシン、没食子酸エピガロカテキン、デルフィニジン、スカビオリド、イソリキリチゲニン、ホルモノネチンおよびビオカニンＡから選択される。
本実施例は、各モノマー化合物とダイゼインとの組み合わせが相乗効果を有しない状況を示している。ここで、各モノマー化合物は、ケンペリド、ケンペロール、ジオスメチン、ヘルバセチン、ミリセチン、モリン、ゲンクワニン、バイカレイン、ヘスペレチン、フィセチン、クリシン、没食子酸エピガロカテキン、デルフィニジン、スカビオリド、イソリキリチゲニン、ホルモノネチンおよびビオカニンＡから選択される。
【0058】
まず、上記の方法に従って、各モノマー化合物の対応する濃度でのα－グルコシダーゼ阻害率をテストし、以下の表５に示す。
【0059】
【0060】
【0061】
（比較例２）
本実施例は、各モノマー化合物と３－Ｏ－メチルクエルセチンとの組み合わせが相乗効果を有しない状況を示している。ここで、各モノマー化合物は、ケンペロール、ルテオリン、ビンストキシコシドＢ、ヘルバセチン、ミリセチン、ジヒドロモリン、ビテキシン、バイカレイン、タキシホリン、ヘスペレチン、クリシン、没食子酸エピガロカテキン、デルフィニジン、スカビオリド、イソリキリチゲニン、フロレチンおよびビオカニンＡから選択される。
本実施例は、各モノマー化合物と３－Ｏ－メチルクエルセチンとの組み合わせが相乗効果を有しない状況を示している。ここで、各モノマー化合物は、ケンペロール、ルテオリン、ビンストキシコシドＢ、ヘルバセチン、ミリセチン、ジヒドロモリン、ビテキシン、バイカレイン、タキシホリン、ヘスペレチン、クリシン、没食子酸エピガロカテキン、デルフィニジン、スカビオリド、イソリキリチゲニン、フロレチンおよびビオカニンＡから選択される。
【0062】
まず、上記の方法に従って、各モノマー化合物の対応する濃度でのα－グルコシダーゼ阻害率をテストし、以下の表７に示す。
【0063】
【0064】
【0065】
上記は、本発明の好ましい実施例に過ぎず、本発明を他の形態で限定するものではなく、当業者であれば、以上で開示された技術内容を変更または変形することによって同等の実施例を形成することができる。しかし、本発明の技術的解決手段から逸脱することなく、本発明の技術的実質に基づいて上記実施例に対して行われる任意の簡単な修正、同等の変更および変形は、依然として本発明の技術的解決手段の保護範囲内に属する。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【国際調査報告】