特表 2024-526243 ジメチル置換チアゾロラクタム化合物及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-17

(54)【発明の名称】ジメチル置換チアゾロラクタム化合物及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07D 513/04 20060101AFI20240709BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240709BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20240709BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240709BHJP

【ＦＩ】

C07D513/04 301

C07D513/04 CSP

A61P35/00

A61K31/506

A61P43/00 111

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023580483

(86)(22)【出願日】2022-06-24

(85)【翻訳文提出日】2024-02-26

(86)【国際出願番号】 CN2022101283

(87)【国際公開番号】W WO2023274088

(87)【国際公開日】2023-01-05

(31)【優先権主張番号】202110723288.5

(32)【優先日】2021-06-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】202111669920.9

(32)【優先日】2021-12-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】202210693547.9

(32)【優先日】2022-06-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＢＲＩＪ

(71)【出願人】

【識別番号】522360286

【氏名又は名称】徳昇済医薬（無錫）有限公司

【氏名又は名称原語表記】Ｄ３ Ｂｉｏ （Ｗｕｘｉ） Ｃｏ．， Ｌｔｄ．

【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ ３２４， ８８ ＭｅｉＬｉａｎｇ Ｒｏａｄ， ＭａＳｈａｎ Ｓｔｒｅｅｔ， ＢｉｎＨｕ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｗｕｘｉ， ＪｉａｎｇＳｕ， ２１４０９２， Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110000914

【氏名又は名称】弁理士法人ＷｉｓｅＰｌｕｓ

(72)【発明者】

【氏名】李翼

(72)【発明者】

【氏名】于涛

(72)【発明者】

【氏名】劉寧

(72)【発明者】

【氏名】呉成徳

(72)【発明者】

【氏名】陳曙輝

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB27

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZC20

(57)【要約】

ジメチル置換チアゾロラクタム化合物及び関連疾患を治療するための薬物の調製におけるその使用が提供される。具体的には、式（Ｉ）によって表される化合物及びその薬学的に許容される塩が提供される。
［化１］

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）で表される化合物

【化1】

（式中、
Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ独立して、Ｈ及びＣ_１～３アルキルから選択され、ここで、上記Ｃ_１～３アルキルは、任意選択で１、２又は３個のＲ_ａで置換されており、
各Ｒ_４は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＣ_１～３アルキルから選択され、ここで、上記Ｃ_１～３アルキルは、任意選択で１、２又は３個のＲ_ｃで置換されており、
ｎは１及び２から選択され、
環Ａは、ピラゾリル及びテトラヒドロピラニルから選択され、ここで、上記ピラゾリル及びテトラヒドロピラニルは、任意選択で１、２又は３個のＲ_ｄで置換されており、
Ｒ_ａ及びＲ_ｃは、それぞれ独立して、Ｄ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩから選択され、
Ｒ_ｄは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ_１～３アルキル及びＣ_１～３アルコキシから選択され、ここで、上記Ｃ_１～３アルキル及びＣ_１～３アルコキシは、任意選択で１、２又は３個のＲで置換されており、
Ｒは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩから選択される）
又はその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

Ｒ_１及びＲ_２が、それぞれ独立して、Ｈ、ＣＨ_３及びＣＨ_２ＣＨ_３から選択され、ここで、上記ＣＨ_３及びＣＨ_２ＣＨ_３が、任意選択で１、２又は３個のＲ_ａで置換されている、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

Ｒ_１及びＲ_２が、それぞれ独立して、Ｈ、ＣＨ_３、ＣＨＦ_２、ＣＤ_３及びＣＨ_２ＣＨ_３から選択される、請求項２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

Ｒ_４が、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＣＨ_３から選択され、ここで、上記ＣＨ_３が、任意選択で１、２又は３個のＲ_ｃで置換されている、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項5】

Ｒ_４が、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＣＨ_３から選択される、請求項４に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項6】

Ｒ_ｄが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ_３及びＯＣＨ_３から選択され、ここで、上記ＣＨ_３及びＯＣＨ_３が、任意選択で１、２又は３個のＲで置換されている、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項7】

Ｒ_ｄが、ＣＨ_３及びＯＣＨ_３から選択される、請求項６に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項8】

環Ａが、

【化2】

から選択され、ここで、上記

【化3】

が、任意選択で１、２又は３個のＲ_ｄで置換されている、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項9】

環Ａが、

【化4】

から選択される、請求項８に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項10】

構造部分

【化5】

が

【化6】

から選択される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項11】

構造部分

【化7】

が

【化8】

から選択される、請求項１０に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項12】

上記化合物が、

【化9】

（式中、
Ｒ_２は、請求項１から３のいずれか一項に定義される通りであり、
Ｒ_４は、請求項１、４又は５のいずれか一項に定義される通りである）
から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項13】

以下の化合物から選択される化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化10】

【請求項14】

固形腫瘍を治療するための医薬品の製造における、請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、
２０２１年６月２８日出願の中国特許出願公開第２０２１１０７２３２８８．５号明細書、
２０２１年１２月３１日出願の中国特許出願公開第２０２１１１６６９９２０．９号明細書、
２０２２年６月１７日出願の中国特許出願公開第２０２２１０６９３５４７．９号明細書の優先権を主張する。

【0002】

＜技術分野＞
本開示は、ジメチル置換チアゾロラクタム化合物のクラス、及び関連疾患を治療するための医薬品の製造におけるその使用に関する。具体的には、本開示は、式（Ｉ）で表される化合物及びその薬学的に許容される塩に関する。

【背景技術】

【0003】

Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路は、古典的なマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達カスケード経路であり、活性化後の様々な成長因子、サイトカイン、マイトジェン及びホルモン受容体のシグナル伝達に関与し、細胞の成長、分化及び生存を制御するための最も重要なシグナル伝達経路の１つである。

【0004】

研究により、変異又は増幅によって引き起こされるＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の異常な活性化が様々ながんの決定因子であることがわかっている。ヒト腫瘍では、ＲＡＳ変異の発生率は約２２％であり、ＢＲＡＦ変異の発生率は約７％であり、ＭＥＫ変異の発生率は約１％である。したがって、この経路上の重要なノードタンパク質は、がんの治療の重要な標的となっている（ＣａｎｃｅｒＤｉｓｃｏｖ．２０１９，９，３２９－３４１）。現在、いくつかのＢＲＡＦ阻害剤及びＭＥＫ１／２阻害剤、並びにそれらの併用レジメンが、メラノーマ、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異非小細胞肺がん及び他のがんの治療について米国ＦＤＡによって承認されている。しかしながら、これらの上流ノードについてのＢＲＡＦ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤の使用は、突然変異又は経路再活性化に起因する薬物耐性の問題をたちまち引き起こし、それらの臨床応用を大幅に制限する可能性がある。

【0005】

細胞外調節プロテインキナーゼ（ＥＲＫ）（特にＥＲＫ１及びＥＲＫ２キナーゼ）は、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路における主要なプレイヤー且つ下流の重要なノードであり、それらの過剰活性化は、多くのヒトがんにおいて見出され得る。ＥＲＫは、この経路の末端シグナル伝達キナーゼとしては、薬物耐性をもたらす変異を有することは未だ見出されていない。したがって、ＥＲＫキナーゼを標的化する薬物は、上流の標的阻害剤による治療によって引き起こされる薬物耐性の問題を克服し、より有望な治療戦略になると期待される。しかし、これまでのところ、ＥＲＫ阻害剤に関する研究は依然として臨床段階にあり、いかなるＥＲＫ阻害剤も薬物として販売承認されていない。

【0006】

要約すると、腫瘍の治療のニーズを満たすために安全且つ有効なＥＲＫ阻害薬を開発することが急務である。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

本開示は、式（Ｉ）によって表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【化1】

【0008】

式中、

【0009】

Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ独立して、Ｈ及びＣ_１～３アルキルから選択され、ここで、上記Ｃ_１～３アルキルは、任意選択で１、２又は３個のＲ_ａで置換されており、

【0010】

各Ｒ_４は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＣ_１～３アルキルから選択され、ここで、上記Ｃ_１～３アルキルは、任意選択で１、２又は３個のＲ_ｃで置換されており、

【0011】

ｎは１及び２から選択され、

【0012】

環Ａは、ピラゾリル及びテトラヒドロピラニルから選択され、ここで、上記ピラゾリル及びテトラヒドロピラニルは、任意選択で１、２又は３個のＲ_ｄで置換されており、

【0013】

Ｒ_ａ及びＲ_ｃは、それぞれ独立して、Ｄ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩから選択され、

【0014】

Ｒ_ｄは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ_１～３アルキル及びＣ_１～３アルコキシから選択され、ここで、上記Ｃ_１～３アルキル及びＣ_１～３アルコキシは、任意選択で１、２又は３個のＲで置換されており、

【0015】

Ｒは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩから選択される。

【0016】

本開示は、式（Ｉ）によって表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【化2】

【0017】

式中、

【0018】

Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ独立して、Ｈ及びＣ_１～３アルキルから選択され、ここで、上記Ｃ_１～３アルキルは、任意選択で１、２又は３個のＲ_ａで置換されており、

【0019】

各Ｒ_４は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＣ_１～３アルキルから選択され、ここで、上記Ｃ_１～３アルキルは、任意選択で１、２又は３個のＲ_ｃで置換されており、

【0020】

ｎは１及び２から選択され、

【0021】

環Ａは、ピラゾリル及びテトラヒドロピラニルから選択され、ここで、上記ピラゾリル及びテトラヒドロピラニルは、任意選択で１、２又は３個のＲ_ｄで置換されており、

【0022】

Ｒ_ａ及びＲ_ｃは、それぞれ独立して、Ｄ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩから選択され、

【0023】

Ｒ_ｄは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ_１～３アルキル及びＣ_１～３アルコキシから選択され、ここで、上記Ｃ_１～３アルキル及びＣ_１～３アルコキシは、任意選択で１、２又は３個のＲで置換されており、

【0024】

Ｒは、Ｆ、Ｃｌ及びＢｒから選択される。

【0025】

本開示のいくつかの実施形態では、上述のＲ_１及びＲ_２は、それぞれ独立して、Ｈ、ＣＨ_３及びＣＨ_２ＣＨ_３から選択され、ここで、上記ＣＨ_３及びＣＨ_２ＣＨ_３は、任意選択で１、２又は３個のＲ_ａで置換され、他の変数は本開示で定義される通りである。

【0026】

本開示のいくつかの実施形態では、上述のＲ_１及びＲ_２は、それぞれ独立して、Ｈ、ＣＨ_３、ＣＨＦ_２、ＣＤ_３及びＣＨ_２ＣＨ_３から選択され、他の変数は本開示で定義される通りである。

【0027】

本開示のいくつかの実施形態では、上述のＲ_４は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＣＨ_３から選択され、ここで、上記ＣＨ_３は、任意選択で１、２又は３個のＲ_ｃで置換され、他の変数は本開示で定義される通りである。

【0028】

本開示のいくつかの実施形態では、上述のＲ_４は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＣＨ_３から選択され、他の変数は本開示で定義される通りである。

【0029】

本開示のいくつかの実施形態では、上述のＲ_ｄは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ_３及びＯＣＨ_３から選択され、ここで、上記ＣＨ_３及びＯＣＨ_３は、任意選択で１、２又は３個のＲで置換され、他の変数は本開示で定義される通りである。

【0030】

本開示のいくつかの実施形態では、上述のＲ_ｄは、ＣＨ_３及びＯＣＨ_３から選択され、他の変数は本開示で定義される通りである。

【0031】

本開示のいくつかの実施形態では、上述の環Ａは、

【化3】

から選択され、ここで、上記

【化4】

は、任意選択で１、２又は３個のＲ_ｄで置換され、他の変数は本開示で定義される通りである。

【0032】

本開示のいくつかの実施形態では、上述の環Ａは、

【化5】

から選択され、他の変数は本開示で定義される通りである。

【0033】

本開示のいくつかの実施形態では、上述の構造部分

【化6】

は

【化7】

から選択され、他の変数は本開示で定義される通りである。

【0034】

本開示のいくつかの実施形態では、上述の構造部分

【化8】

は

【化9】

から選択され、他の変数は本開示において定義される通りである。

【0035】

本開示はまた、上述の変数のいずれかを組み合わせることによって得られるいくつかの実施形態を含む。

【0036】

本開示のいくつかの実施形態では、上述の化合物又はその薬学的に許容される塩が開示され、ここで、その化合物は以下から選択される。

【化10】

【0037】

（式中、Ｒ_２及びＲ_４は本開示で定義される通りである）

【0038】

本開示はまた、以下の式によって表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【化11】

【0039】

本開示はまた、固形腫瘍を治療するための医薬品の製造における上述の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。

【発明の効果】

【0040】

本開示の化合物は、ＥＲＫ１及びＥＲＫ２酵素に対して優れた阻害活性を示し、本開示の化合物は、ＨＴ２９細胞増殖に対して優れた阻害活性を示し、本開示の化合物は、様々なｐＨ条件下で良好な溶解性を有し、本開示の化合物は、優れた薬物動態特性及び腫瘍阻害効果を有し、本開示の化合物は、ｈＥＲＧカリウムチャネル電流に対する阻害効果が弱く、心毒性のリスクが低く、安全性が高く、本開示の化合物は、中程度から高い血漿タンパク質結合を有する。

【0041】

定義及び用語
別段の定めがない限り、本明細書で使用される以下の用語及び語句は、以下の意味を有することを意図している。特定の用語又は語句は、特定の定義がない場合にあいまい又は不明確と見なされるべきではなく、従来の意味で理解されるべきである。商品名が本明細書に現れる場合、それに相当する商品又はその有効成分を指すことを意図している。

【0042】

「薬学的に許容される」という用語は、合理的な利益／リスク比に見合っており、過度の毒性、刺激、アレルギー反応又は他の問題若しくは合併症を伴わず、信頼できる医学的判断の範囲内でヒト及び動物組織と接触して使用するのに適した化合物、材料、組成物及び／又は剤形に関して本明細書で使用される。

【0043】

「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書に開示される特定の置換基を有する化合物を比較的非毒性の酸又は塩基と反応させることによって調製される、本明細書に開示される化合物の塩を意味する。本明細書に開示される化合物が比較的酸性の官能基を含む場合、純粋な溶液又は適した不活性溶媒中で化合物を十分な量の塩基と接触させることによって、塩基付加塩を得ることができる。本明細書に開示される化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合、純粋な溶液又は適した不活性溶媒中で化合物を十分な量の酸と接触させることによって、酸付加塩を得ることができる。本明細書に開示されるある特定の化合物は、塩基性及び酸性官能基の両方を含み、任意の塩基又は酸付加塩に変換することができる。

【0044】

本明細書に開示される薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって、酸性又は塩基性部分を含む親化合物から調製することができる。一般に、そのような塩は、遊離酸又は塩基形態の化合物を化学量論量の適当な塩基又は酸と水又は有機溶媒又はそれらの混合物中で反応させることによって調製することができる。

【0045】

別段の定めがない限り、「異性体」という用語は、幾何異性体、シス又はトランス異性体、立体異性体、エナンチオマー、光学異性体、ジアステレオマー及び互変異性体を含むことが意図される。

【0046】

本明細書に開示される化合物は、特定の幾何又は立体異性体形態で存在し得る。本開示は、シス異性体及びトランス異性体、（－）－エナンチオマー及び（＋）－エナンチオマー、（Ｒ）－エナンチオマー及び（Ｓ）－エナンチオマー、ジアステレオ異性体、（Ｄ）－異性体、（Ｌ）－異性体、並びにラセミ混合物及び他の混合物、例えば、エナンチオマー又はジアステレオ異性体が濃縮された混合物などの全てのこのような化合物を企図し、これらは全て本明細書に開示される範囲内に包含される。アルキルなどの置換基は、更に不斉炭素原子を有してもよい。これらの異性体及びそれらの混合物はすべて、本明細書に開示される範囲内に包含される。

【0047】

別段の定めがない限り、「エナンチオマー」又は「光学異性体」という用語は、互いに鏡像関係にある立体異性体を意味する。

【0048】

別段の定めがない限り、「シス－トランス異性体」又は「幾何異性体」という用語は、環形成炭素原子間の二重結合又は単結合が自由に回転することができないことによって生じる。

【0049】

別段の定めがない限り、「ジアステレオマー」とは、分子内にキラル中心を２個以上含み、分子間で鏡像関係にない立体異性体を意味する。

【0050】

別段の定めがない限り、「（＋）」はデキストロアイソマーを意味し、「（－）」はレボアイソマーを意味し、「（±）」はラセミ体を意味する。

【0051】

別段の定めがない限り、くさび形実線結合

【化12】

及びくさび形破線結合

【化13】

は、立体中心の絶対配置を示し、真っ直ぐな実線結合

【化14】

及び真っ直ぐな破線結合

【化15】

は、立体中心の相対配置を示し、波線

【化16】

はくさび形実線結合

【化17】

又はくさび形破線結合

【化18】

を示すか、又は波線

【化19】

は真っ直ぐな実線結合

【化20】

及び真っ直ぐな破線結合

【化21】

を示す。

【0052】

別段の定めがない限り、「互変異性体」又は「互変異性型」という用語は、異性体中の異なる官能基が動的平衡にあり、室温で互いにすぐに変換し得ることを意味する。互変異性体が（溶液中で）可能である場合、互変異性体の化学平衡が達成され得る。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピック互変異性体としても知られる）には、ケト－エノール異性化及びイミン－エナミン異性化などのプロトン移動による相互変換が含まれる。原子価互変異性体は、いくつかの結合電子の再結合による相互変換を含む。ケト－エノール互変異性化の具体例は、２つの互変異性体ペンタン－２，４－ジオン及び４－ヒドロキシペンタ－３－エン－２－オン間の相互変換である。

【0053】

別段の定めがない限り、「１つの異性体が濃縮された」、「濃縮された異性体」、「１つのエナンチオマーが濃縮された」又は「濃縮されたエナンチオマー」という用語は、１つの異性体又はエナンチオマーの含有量が１００％未満あり、その異性体又はエナンチオマーの含有量が６０％以上、又は７０％以上、又は８０％以上、又は９０％以上、又は９５％以上、又は９６％以上、又は９７％以上、又は９８％以上、又は９９％以上、又は９９．５％以上、又は９９．６％以上、又は９９．７％以上、又は９９．８％以上、又は９９．９％以上であることを意味する。

【0054】

別段の定めがない限り、「異性体過剰率」又は「エナンチオマー過剰率」という用語は、２つの異性体又は２つのエナンチオマーの相対的割合の差を意味する。例えば、一方の異性体又はエナンチオマーが９０％の量で存在し、他方の異性体又はエナンチオマーが１０％の量で存在する場合、異性体又はエナンチオマー過剰率（ｅｅ値）は８０％である。

【0055】

光学活性（Ｒ）－及び（Ｓ）－異性体、又はＤ及びＬ異性体は、キラル合成若しくはキラル試薬又は他の従来技術を用いて調製することができる。本明細書に開示される特定の化合物の１種類のエナンチオマーを得たい場合、純粋な所望のエナンチオマーは、不斉合成又はキラル補助剤の誘導体作用に続いて、得られたジアステレオマー混合物を分離し、補助基を切断することによって得ることができる。あるいは、分子が塩基性官能基（アミノ基など）又は酸性官能基（カルボキシル基など）を含む場合、化合物は適当な光学活性な酸又は塩基と反応してジアステレオマー異性体の塩を形成し、次いで、これを当技術分野における従来方法によってジアステレオマー分割に供して純粋なエナンチオマーを得る。更に、エナンチオマー及びジアステレオ異性体は、一般に、キラル固定相を使用し、任意選択で化学誘導体法（例えば、アミンから生成されるカルバメート）と組み合わせるクロマトグラフィーによって単離される。

【0056】

本明細書に開示される化合物は、化合物を構成する原子の１つ以上に不自然な割合の原子同位体を含み得る。例えば、化合物は、トリチウム（^３Ｈ）、ヨウ素－１２５（^１２５Ｉ）又はＣ－１４（^１４Ｃ）などの放射性同位体で標識することができる。別の例では、水素を重水素で置き換えて重水素化薬物を形成することができる。重水素と炭素との結合は、通常の水素と炭素との結合よりも強い。重水素化されていない薬物と比較して、重水素化された薬物は、薬物の毒性副作用の減少、薬物安定性の増加、有効性の向上、及び生物学的半減期の延長という利点を有する。本明細書に開示される化合物の同位体組成の全ての変化は、放射能にかかわらず、本開示の範囲内に含まれる。

【0057】

「任意選択の」又は「任意選択で」という用語は、後続の事象又は状態が生じ得るが必須ではないことを意味し、この用語は、その事象又は状態が生じる事例及びその事象又は状態が生じない事例を含む。

【0058】

「置換される」という用語は、特定の原子上の１個又は複数の水素原子が、重水素及び水素変異体を含む置換基によって置換されされるが、ただし、その特定の原子の原子価が正常であり、置換された化合物が安定であることを意味する。置換基がオキソ（すなわち、＝Ｏ）である場合、２個の水素原子が置換されることを意味する。芳香環上の位置をオキソで置換することはできない。「任意選択で置換される」という用語は、原子が置換基で置換される場合とされない場合があることを意味し、別段の定めがない限り、置換基の種類及び数は、化学的に達成可能である限り任意であり得る。

【0059】

化合物の構成又は構造に任意の変数（例えば、Ｒ）が複数回出現する場合、各出現時の変数の定義は独立している。したがって、例えば、ある基が０～２個のＲで置換されている場合、その基は任意選択で最大で２個のＲで置換されていてもよく、各出現時のＲの定義は独立している。更に、置換基及び／又はその変異体の組み合わせは、その組み合わせが安定な化合物をもたらす場合にのみ許容される。

【0060】

－（ＣＲＲ）_０－のように連結基の数が０である場合、連結基が単結合であることを意味する。

【0061】

置換基の数が０である場合、その置換基が存在しないことを意味する。例えば、－Ａ－（Ｒ）_０は、その構造が実際には－Ａであることを意味する。

【0062】

置換基が空の場合は、その置換基が存在しないことを意味する。例えば、Ａ－ＸにおいてＸが空である場合、Ａ－Ｘの構造は実際にはＡである。

【0063】

変数の１つが単結合である場合、単結合によって連結された２つの基が直接接続されていることを意味する。例えば、Ａ－Ｌ－ＺにおけるＬが単結合を表す場合、Ａ－Ｌ－Ｚの構造は実際にはＡ－Ｚである。

【0064】

置換基の結合が環上の２つ以上の原子に架橋することができる場合、そのような置換基は環上の任意の原子に結合することができる。例えば、構造部分

【化22】

は、その置換基Ｒがシクロヘキシル又はシクロヘキサジエン上の任意の部位で置換され得ることを表す。列挙された置換基がどの原子を介して置換される基に連結されるかを示さない場合、そのような置換基はその原子のいずれかを介して結合され得る。例えば、置換基としてのピリジル基は、ピリジン環上のいずれか１つの炭素原子を介して置換される基と連結されていてもよい。

【0065】

列挙された連結基がその連結方向を示さない場合、その連結方向は任意である。例えば、

【化23】

における連結基Ｌが－Ｍ－Ｗ－である場合、－Ｍ－Ｗ－は、左から右へ読む順序と同じ方向で環Ａ及び環Ｂと連結されて、

【化24】

を構成することができるか、又は、左から右へ読む順序とは逆方向で環Ａ及び環Ｂと連結されて、

【化25】

を構成することができる。連結基、置換基及び／又はそれらの変異体の組み合わせは、そのような組み合わせが安定な化合物をもたらすことができる場合にのみ許容される。

【0066】

別段の定めがない限り、ある基が１つ以上の接続可能な部位を有する場合、その基の任意の１つ以上の部位は、化学結合を介して他の基に接続することができる。化学結合の接続位置が可変であり、接続可能な部位にＨ原子がある場合、Ｈ原子を有する接続可能な部位が化学結合に接続されると、この部位のＨ原子の数は、接続した化学結合の数が増加するにつれ、それに応じて減少し、その基は対応する原子価の基になる。その部位と他の基との間の化学結合は、真っ直ぐな実線結合

【化26】

、
真っ直ぐな破線結合

【化27】

又は波線

【化28】

によって表すことができる。例えば、－ＯＣＨ_３における真っ直ぐな実線結合は、その基がその基中の酸素原子を介して他の基と接続されることを示し、

【化29】

における真っ直ぐな破線結合は、その基がその基中の窒素原子の２つの末端を介して他の基に接続されることを示し、

【化30】

における波線は、その基がフェニル基中の１－炭素原子及び２－炭素原子を介して他の基に接続されることを示し、

【化31】

は、ピペリジニル基上の任意の接続可能な部位が、１つの化学結合を介して他の基に接続することができ、少なくとも４つの接続様式

【化32】

が含まれることを示し、たとえＨ原子が－Ｎ－上に描かれているとしても、

【化33】

は依然として

【化34】

の接続様式を含み、ただ、１つの化学結合が接続された場合、この部位のＨが１つだけ減って、その基が対応する一価ピペリジニル基になる。

【0067】

別段の定めがない限り、環上の原子の数は、一般に、環員の数として定義され、例えば、「５～７員環」は、円周方向に配置された５～７個の原子の「環」を指す。

【0068】

別段の定めがない限り、「Ｃ_１～３アルキル」という用語は、１～３個の炭素原子からなる直鎖又は分岐飽和炭化水素基を示すために使用される。Ｃ_１～３アルキル基としては、Ｃ_１～２アルキル基、Ｃ_２～３アルキル基などが挙げられる。一価（例えば、メチル）、二価（例えば、メチレン）又は多価（例えば、メテニル）であり得る。Ｃ_１～３アルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（ｎ－プロピル及びイソプロピルを含む）などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0069】

別段の定めがない限り、「Ｃ_１～３アルコキシ」という用語は、１から３個の炭素原子を含み、酸素原子によって分子の残部に結合しているアルキル基を指す。Ｃ_１～３アルコキシ基としては、Ｃ_１～２アルコキシ基、Ｃ_２～３アルコキシ基、Ｃ_３アルコキシ基、Ｃ_２アルコキシ基などが挙げられる。Ｃ_１～３アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（ｎ－プロポキシ及びイソプロポキシを含む）などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0070】

本明細書に開示される化合物は、以下に列挙される実施形態、他の化学合成方法と組み合わせた以下に列挙される実施形態によって形成される実施形態、及び当業者に周知の同等の代替物などの当業者に周知の様々な合成方法によって調製することができる。代替の実施形態は、本明細書に開示される例を含むが、これらに限定されない。

【0071】

本開示で使用される溶媒は市販されている。

【0072】

本開示では以下の略語が使用される。ａｑは水性を表し、ｅｑは当量の又は当量を表し、ＤＣＭはジクロロメタンを表し、ＰＥは石油エーテルを表し、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し、ＥｔＯＡｃは酢酸エチルを表し、ＥｔＯＨはエタノールを表し、ＭｅＯＨはメタノールを表し、Ｃｂｚはアミン保護基であるベンジルオキシカルボニルを表し、ＢＯＣはアミン保護基であるｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルを表し、ｒ．ｔ．は室温を表し、Ｏ／Ｎは一晩を表し、ＴＨＦはテトラヒドロフランを表し、Ｂｏｃ_２Ｏはジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカーボネートを表し、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表し、ＤＩＰＥＡはジイソプロピルエチルアミンを表し、ｉＰｒＯＨは２－プロパノールを表し、ｍｐは融点を表す。

【0073】

化合物は、当技術分野における一般的な命名原理に従って、又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアによって命名され、市販の化合物は、それらのベンダーのディレクトリ名で命名される。

【図面の簡単な説明】

【0074】

【図1】溶媒及びＷＸ００１をそれぞれ投与した後のモデル動物におけるヒトメラノーマＡ３７５の腫瘍成長曲線である。

【0075】

【図2】投与中のヒトメラノーマＡ３７５のモデル動物における体重変化率である。

【発明を実施するための形態】

【0076】

以下、実施例により本開示を詳細に説明する。ただし、これらの実施例が本開示に対していかなる不利な限定も有することは意図されていない。本開示は本明細書で詳細に説明されており、実施形態も本明細書に開示されている。本明細書に開示された趣旨及び範囲から逸脱することなく、本明細書に開示された実施形態に対して様々な変更及び修正を行うことができることは当業者には明らかであろう。
参考例１

【化35】

【化36】

【0077】

工程１：化合物Ａ－１－２の合成

【0078】

反応フラスコに、Ａ－１－１（５００ｇ、２．１２ｍｏｌ、１ｅｑ）、水（１８７５ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（１８７５ｍＬ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換し、次いで、水酸化リチウム一水和物（９７．７６ｇ、２．３３ｍｏｌ、１．１ｅｑ）を添加し、混合物を２５℃で３時間反応させた。反応終了後、混合物を濃縮して有機溶媒を除去した後、氷水（２Ｌ）を加えた。次いで、４Ｎの濃度の塩酸溶液（６００ｍＬ）をゆっくり添加してｐＨを２～３に調整した。混合物を２０分間撹拌し、次いで、濾過した。濾過ケークを水（１Ｌ）及びアセトニトリル（５００ｍＬ）で洗浄した。濾過ケークを回収した。濾過ケークをアセトニトリル（１Ｌ）に添加し、混合物を０．５時間撹拌した。混合物を濾過し、濾過ケークをアセトニトリル（５００ｍＬ）で洗浄した。濾過ケークを回収し、焼成により乾燥してＡ－１－２を得た。

【数1】

【0079】

工程２：化合物Ａ－１－３の合成

【0080】

反応フラスコに、Ａ－１－２（１７５ｇ、８２３．５５ｍｍｏｌ、純度９７．９％、１ｅｑ）及び２－メチルテトラヒドロフラン（１．７５Ｌ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換し、混合物を－３０℃まで冷却した。リチウムジイソプロピルアミド（２Ｍ、９０５．９０ｍＬ、２．２ｅｑ）をゆっくり滴下し、混合物を－３０℃で更に１時間撹拌した。その後、アセトン（９５．６６ｇ、１．６５ｍｏｌ、１２１．０９ｍＬ、２ｅｑ）と２－メチルテトラヒドロフラン（１７５ｍＬ）の溶液をゆっくり滴下し、混合物を－３０℃で１時間反応させた。反応が完了した後、反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液（１７５０ｍＬ）でクエンチし、４Ｎ塩酸（約２Ｌ）でｐＨ３～４に調整した。各層を分離し、水相を酢酸エチル（３０００ｍＬ×２）で抽出した。有機相を飽和ブライン（１５００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を回収し、減圧下で濃縮乾固して粗生成物を得た。粗生成物にメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（３．５Ｌ）を加え、混合物を３０分間撹拌した。ｎ－ヘキサン（３．５Ｌ）を添加し、混合物を更に４時間撹拌した。混合物を濾過し、濾過ケークを回収してＡ－１－３を得た。

【数2】

【0081】

工程３：化合物Ａ－１－４の合成

【0082】

反応フラスコに、Ａ－１－３（２００ｇ、６６８．８９ｍｍｏｌ、純度８９％、１ｅｑ）及びアセトニトリル（２Ｌ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換し、エチルエーテル中の三フッ化ホウ素（２６５．８２ｇ、１．８７ｍｏｌ、２３１．１５ｍＬ、２．８ｅｑ）を添加した。混合物を６０℃で８時間反応させた。反応終了後、反応液にエタノール（２００ｍＬ）を加え、混合物を減圧濃縮して粗生成物を得た。続いて、粗生成物を水（２０００ｍＬ）にゆっくり注いだ。混合物を３０分間撹拌し、濾過した。濾過ケークを回収した。無水エタノール（６００ｍＬ）を濾過ケークに添加し、混合物を３０分間撹拌し、濾過した。濾過ケークをエタノール（２００ｍＬ）で洗浄した。濾過ケークを回収し、乾燥させてＡ－１－４を得た。

【数3】

【0083】

工程４：化合物Ａ－１の合成

【0084】

反応フラスコに、Ａ－１－４（１５０ｇ、４８１．９３ｍｍｏｌ、純度９２．９％、１ｅｑ）及びエタノール（７５０ｍＬ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換し、臭化水素（１．０７ｋｇ、５．３０ｍｏｌ、７１９．６７ｍＬ、純度４０％、１１ｅｑ）をゆっくり滴下した。混合物を５０℃で２４時間反応させた。反応が完了した後、ジクロロメタン（１．５Ｌ）及び氷水（５００ｍＬ）を反応液に添加し、混合物を４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（約１５００ｍＬ）でｐＨ７～８に調整した。各層を分離し、水相をジクロロメタン（１０００ｍＬ×２）で抽出して有機相を得て、これを飽和食塩水（１０００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物に酢酸エチル（２２５ｍＬ）及びｎ－ヘキサン（２２５ｍＬ）を添加し、混合物を２時間撹拌した。混合物を濾過し、濾過ケークを回収してＡ－１を得た。

【数4】

参考例２

【化37】

【化38】

【0085】

工程１：化合物Ｂ－１－２の合成

【0086】

反応フラスコに、水酸化ナトリウム（５９０．８ｇ、１４．８ｍｏｌ、１．０５ｅｑ）、水（２０Ｌ）、及びＢ－１－１（２０００．００ｇ、１４．０７ｍｏｌ、１ｅｑ）を添加した。次いで、ヨウ化メチル（２４９５．８０ｇ、１７．５９ｍｏｌ、１．２５ｅｑ）を添加し、混合物を２５℃で２時間反応させた。反応終了後、反応フラスコに６Ｎ氷塩酸水溶液をゆっくり加えてｐＨを６～７に調整した。混合物を０．５時間撹拌し、濾過した。濾過ケークを回収した。アセトニトリル（５００ｍＬ）を濾過ケークに添加した。混合物を０．５時間撹拌し、濾過した。濾過ケークを回収し、焼成により乾燥してＢ－１－２を得た。

【数5】

【0087】

工程２：化合物Ｂ－１－３の合成

【0088】

反応フラスコに、アセトニトリル（１５Ｌ）及びＢ－１－２（１５００．００ｇ、９．６０ｍｏｌ、１ｅｑ）を２５℃で添加した。次いで、オキシ塩化リン（１８４０．００ｇ、１２．０ｍｏｌ、１．２５ｅｑ）を添加した。混合物を６２℃までゆっくり加熱し、６２℃で１２時間反応させた。反応液を水（１０．５Ｌ）に注ぎ、固体の重炭酸ナトリウムを加えてｐＨを６～７に調整した。混合物を酢酸エチル（１０．５Ｌ）で抽出し、各層を分離して有機相を得た。有機相を飽和ブライン（７．５Ｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮してＢ－１－３を得た。

【数6】

【0089】

工程３：化合物Ｂ－１の合成

【0090】

反応フラスコに、Ｂ－１－３（１００ｇ、５７２．５７ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、水（２４．７６ｇ、１．３７ｍｏｌ、２４．７６ｍＬ、２．４ｅｑ）及びアセトニトリル（１０００ｍＬ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。ヨウ化ナトリウム（５７１．５９ｇ、３．８１ｍｏｌ、６．６６ｅｑ）及びトリメチルクロロシラン（１８６．６１ｇ、１．７２ｍｏｌ、２１８．００ｍＬ、３ｅｑ）を順次加え、混合物を２０℃で１４時間反応させた。反応終了後、反応液にジクロロメタン（８００ｍＬ）及び水（１２０００ｍＬ）を順次加えた。次いで、固体の重炭酸ナトリウムを添加してｐＨを６～７に調整した。各層を分離し、水相をジクロロメタン（５００ｍＬ）で１回抽出した。有機相を合わせ、飽和亜硫酸ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）及び飽和ブライン（５００ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物にｎ－ヘプタン（０．５Ｌ）を加え、混合物を１時間撹拌した。混合物を濾過し、濾過ケークを回収してＢ－１を得た。

【数7】

参考例３

【化39】

【化40】

【0091】

工程１：化合物Ｄ－１－２の合成

【0092】

乾燥した反応フラスコに、酢酸ナトリウム（４．５４ｇ、５５．３９ｍｍｏｌ、５ｅｑ）、一過硫酸カリウム（１３．６２ｇ、２２．１６ｍｍｏｌ、２ｅｑ）及び水（４６ｍＬ）を添加した。混合物を０℃に冷却し、Ｄ－１－１（４．６ｇ、１１．０８ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、メタノール（４６ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（４６ｍＬ）の溶液を添加した。混合物を２５℃で１２時間反応させた。反応が完了した後、反応液を飽和亜硫酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタン（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を水ポンプで減圧濃縮してＤ－１－２を得た。

【数8】

【0093】

工程２：化合物Ｄ－１の合成

【0094】

乾燥した反応フラスコに、Ｄ－１－２（４．６８ｇ、１０．４６ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、Ｄ－１－３（１．２２ｇ、１２．５６ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）及びテトラヒドロフラン（７０ｍＬ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。リチウムヘキサメチルジシラジド（１Ｍ、２１．９８ｍＬ、２．１ｅｑ）を－３０℃で滴下した。混合物を－３０℃で２時間反応させた。反応終了後、反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせた。合わせた有機相を飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製してＤ－１を得た。

【数9】

参考例４

【化41】

【化42】

【0095】

工程１：化合物Ｅ－１－３の合成

【0096】

反応フラスコに、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（４．８３ｇ、４３．０４ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）及びテトラヒドロフラン（１６ｍＬ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。テトラヒドロフラン（１６ｍＬ）にＥ－１－１（２ｇ、１７．２２ｍｍｏｌ、２．３０ｍＬ、１ｅｑ）及びＥ－１－１（２．５５ｇ、３４．４４ｍｍｏｌ、２．７７ｍＬ、２ｅｑ）を溶解した溶液をゆっくり滴下した。混合物を２５℃で３時間反応させた。反応が完了した後、混合物を濃縮してＥ－１－３を得た。

【0097】

工程２：化合物Ｅ－１－５の合成

【0098】

反応フラスコに、Ｅ－１－３（２．２４ｇ、１７．２１ｍｍｏｌ、１ｅｑ）及びイソプロパノール（１４０ｍＬ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。Ｅ－１－４（２．６２ｇ、３４．４２ｍｍｏｌ、２ｅｑ）を加え、混合物を９０℃で１２時間反応させた。反応終了後、反応液を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物に水２０ｍＬを加え、混合物を酢酸でｐＨ４に調整し、濾過した。濾過ケークを回収した。濾過ケークをカラムクロマトグラフィーにより精製してＥ－１－５を得た。

【数10】

【0099】

工程３：化合物Ｅ－１－６の合成

【0100】

反応フラスコに、水酸化ナトリウム（１．３４ｇ、３３．６１ｍｍｏｌ、１．０５ｅｑ）及び水（５０ｍＬ）を添加した後、化合物Ｅ－１－５（５ｇ、３２．０１ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。混合物を１０℃に冷却し、ヨウ化メチル（５．６８ｇ、４０．０１ｍｍｏｌ、２．４９ｍＬ、１．２５ｅｑ）をゆっくり添加した。混合物を１０℃で０．５時間反応させ、２５℃までゆっくりと加熱し、更に２．５時間反応させた。反応終了後、反応液を０～５℃まで冷却した後、６Ｎ塩酸でｐＨ７～８に調整し、濾過した。濾過ケークを回収し、乾燥させてＥ－１－６を得た。

【数11】

【0101】

工程４：化合物Ｅ－１－７の合成

【0102】

反応フラスコに、Ｅ－１－６（７．４ｇ、４３．４７ｍｍｏｌ、１ｅｑ）及びアセトニトリル（７５ｍＬ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した後、オキシ塩化リン（８．３３ｇ、５４．３４ｍｍｏｌ、５．０５ｍＬ、１．２５ｅｑ）をゆっくりと滴下した。混合物を６２℃で２．５時間反応させた。反応終了後、反応液を水（１００ｍＬ）に注ぎ、固体の炭酸ナトリウムを加えてｐＨを６～７に調整した。水相を酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機相を合わせ、飽和ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮してＥ－１－７を得た。

【数12】

【0103】

工程５：化合物Ｅ－１の合成

【0104】

反応フラスコに、Ｅ－１－７（３．５ｇ、１８．５５ｍｍｏｌ、１ｅｑ）及びアセトニトリル（４０ｍＬ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。ヨウ化ナトリウム（１８．５２ｇ、１２３．５４ｍｍｏｌ、６．６６ｅｑ）、トリメチルクロロシラン（６．７１ｇ、６１．７７ｍｍｏｌ、７．８４ｍＬ、３．３３ｅｑ）及び水（８０２．２６ｍｇ、４４．５２ｍｍｏｌ、８０２．２６μＬ、２．４ｅｑ）を順次添加した。混合物を２５℃で１２時間反応させた。反応が完了した後、ジクロロメタン（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を反応液に順次添加し、重炭酸ナトリウム固体を添加することによってｐＨ６～７に調整した。各層を分離した。水相をジクロロメタン（５０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせた。有機相を飽和亜硫酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）及び飽和ブライン（５０ｍＬ）でそれぞれ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製してＥ－１を得た。

【数13】

実施例１

【化43】

【0105】

合成経路：

【化44】

【0106】

工程１：ＷＸ００１－１の合成

【0107】

乾燥した反応フラスコに、Ａ－１（７０ｇ、２８３．２７ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、ジクロロメタン（１４００ｍＬ）、４－ジメチルアミノピリジン（３８．０７ｇ、３１１．６０ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）及びジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカーボネート（１２３．６５ｇ、５６６．５４ｍｍｏｌ、１３０．１５ｍＬ、２ｅｑ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。混合物を２０℃で１２時間反応させた。反応終了後、反応液に水（３００ｍＬ）を加え、有機相と水相を分離した。水相をジクロロメタン（４００ｍＬ）で３回抽出した。有機相を合わせ、飽和ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をｎ－ヘキサン（１４０ｍＬ）でスラリー化し、濾過した。濾過ケークを回収し、乾燥させてＷＸ００１－１を得た。

【数14】

【0108】

工程２：ＷＸ００１－２の合成

【0109】

乾燥した反応フラスコに、ＷＸ００１－１（１０ｇ、２８．８０ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、テトラヒドロフラン（１３３ｍＬ）、塩化亜鉛溶液（０．７Ｍ、４１．１４ｍＬ、１ｅｑ）及びテトラメチルエチレンジアミン（３．３５ｇ、２８．８０ｍｍｏｌ、４．３５ｍＬ、１ｅｑ）を添加した。混合物を－７８℃に冷却した。ｎ－ブチルリチウム（２．５Ｍ、１７．２８ｍＬ、１．５ｅｑ）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。更にｎ－ブチルリチウム（２．５Ｍ、５．７６ｍＬ、０．５ｅｑ）を添加し、混合物を更に１０分間撹拌した。更にｎ－ブチルリチウム（２．５Ｍ、３．４６ｍＬ、０．３ｅｑ）を添加し、混合物を２０℃で更に１時間反応させて反応液１を得た。

【0110】

Ｂ－１（７．６６ｇ、２８．８０ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（９９８．３９ｍｇ、８６３．９９μｍｏｌ、０．０３ｅｑ）及びＮ’Ｎ－ジメチルホルムアミド（６７ｍＬ）の混合物を５０℃に加熱して反応液２を得た。反応液１を反応液２に滴下し、混合物を５０℃で４０分間反応させた。反応終了後、反応液に０．１Ｍエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム水溶液（４５０ｍＬ）を加えた。混合物を３０分間撹拌し、濾過した。濾過ケークを回収して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製してＷＸ００１－２を得た。

【数15】

【0111】

工程３：ＷＸ００１－３の合成

【0112】

乾燥した反応フラスコに、ＷＸ００１－２（１０ｇ、２４．６０ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、ＤＣＭ（１００ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（３６．４９ｇ、３２０．０３ｍｍｏｌ、２３．６９ｍＬ、１３．０１ｅｑ）を添加した。混合物を２０℃で１時間反応させた。反応終了後、反応液を濃縮し、次いでクロロホルム（３０ｍＬ×３）で抽出して残留トリフルオロ酢酸を除去して、ＷＸ００１－３を得た。

【数16】

【0113】

工程４：ＷＸ００１－５の合成

【0114】

乾燥した反応フラスコに、ＷＸ００１－３（１５０ｍｇ、４８９．５５μｍｏｌ、１ｅｑ）、Ｎ’Ｎ－ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）、炭酸セシウム（２３９．２６ｍｇ、７３４．３２μｍｏｌ、１．５ｅｑ）及びＷＸ００１－４（１０９．３０ｍｇ、５８７．４６μｍｏｌ、１．２ｅｑ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。混合物を２５℃で１６時間反応させた。反応終了後、反応液に水（１０ｍＬ）を加えた。混合物を濾過して濾過ケークを得た。濾過ケークをジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、飽和ブライン（１５ｍＬ）で洗浄した。各層を分離して有機相を得た。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固してＷＸ００１－５を得た。

【数17】

【0115】

工程５：ＷＸ００１－６の合成

【0116】

乾燥した反応フラスコに、ＷＸ００１－５（１３０ｍｇ、３１５．８８μｍｏｌ、１ｅｑ）、アセトニトリル（３ｍＬ）、水（１．５ｍＬ）及び一過硫酸カリウム（３８８．３９ｍｇ、６３１．７７μｍｏｌ、２ｅｑ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。混合物を２０℃で１６時間反応させた。反応終了後、反応液に飽和チオ硫酸ナトリウム溶液（１０ｍＬ）を加え、混合物をジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２０ｍＬ×２）及び飽和ブライン（２０ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮してＷＸ００１－６を得た。

【数18】

【0117】

工程６：ＷＸ００１の合成

【0118】

乾燥した反応フラスコに、ＷＸ００１－６（１４０ｍｇ、３１５．６４μｍｏｌ、１ｅｑ）、Ｄ－１－３（６１．３１ｍｇ、６３１．２８μｍｏｌ、２ｅｑ）、ジクロロメタン（１ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（１ｍＬ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。反応液を０℃まで冷却し、リチウムヘキサメチルジシラジド（１Ｍ、５９９．７２μＬ、１．９ｅｑ）を滴下した。滴下終了後、混合物を０℃で更に２時間反応させた。反応が完了した後、水（１０ｍＬ）を添加することによって反応液をクエンチし、次いで、ジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、飽和ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００＊３０ｍｍ＊１０μｍ、移動相：［水（１０ｍＭ重炭酸アンモニウム）－アセトニトリル］、Ｂ（アセトニトリル）％：２５％－５５％、８分）により精製してＷＸ００１を得た。

【数19】

実施例２

【化45】

【0119】

合成経路：

【化46】

【0120】

工程１：ＷＸ００２の合成

【0121】

乾燥した反応フラスコに、ＷＸ００１－６（１８０ｍｇ、４０５．８２μｍｏｌ、１ｅｑ）、ＷＸ００２－１（２４６．２９ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ、６ｅｑ）及びＤＭＳＯ（１ｍＬ）を添加した。混合物を１００℃で１２時間反応させた。反応終了後、反応液をそのまま高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ１８ ８０＊４０ｍｍ＊３μｍ、移動相：［水（重炭酸アンモニウム）－アセトニトリル］、Ｂ（アセトニトリル）％：２５％－５５％、８分）により精製してＷＸ００２を得た。

【数20】

実施例３

【化47】

【0122】

合成経路

【化48】

【0123】

工程１：ＷＸ００３－１の合成

【0124】

乾燥した反応フラスコに、Ａ－１（５００ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、Ｎ’Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）、炭酸セシウム（９８８．８８ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）及びＷＸ００１－４（４５１．７４ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。混合物を２５℃で１６時間反応させた。反応終了後、反応液に水（２０ｍＬ）を加え、混合物を濾過した。濾過ケークをジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、飽和ブライン（１５ｍＬ×３）で洗浄した。各層を分離して有機相を得た。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固してＷＸ００３－１を得た。

【数21】

【0125】

工程２：ＷＸ００３の合成

【0126】

乾燥した反応フラスコに、ＷＸ００３－１（１５０ｍｇ、４２５．８４μｍｏｌ、１ｅｑ）、Ｄ－１（２１７．４６ｍｇ、４６８．４２μｍｏｌ、１．１ｅｑ）及びトルエン（３ｍＬ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。次いで、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（９８．４２ｍｇ、８５．１７μｍｏｌ、０．２ｅｑ）を添加した。混合物を１１０℃に加熱し、１２時間反応させた。反応終了後、反応液をそのまま減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を最初にシリカゲルプレートの薄層クロマトグラフィーによって精製し、次いで、高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００＊２５ｍｍ＊５μｍ、移動相：［水（重炭酸アンモニウム）－アセトニトリル］、Ｂ（アセトニトリル）％：２０％－５０％、１０分）によって分離してＷＸ００３を得た。

【数22】

実施例４

【化49】

【0127】

合成経路

【化50】

【0128】

工程１：ＷＸ００４－２の合成

【0129】

乾燥した反応フラスコに、ＷＸ００１－１（５００．００ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、テトラヒドロフラン（６．５ｍＬ）、塩化亜鉛溶液（０．７Ｍ、２．０６ｍＬ、１ｅｑ）及びテトラメチルエチレンジアミン（１６７．３３ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ、２１７．３２μＬ、１ｅｑ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。混合物を－７８℃まで冷却した。ｎ－ブチルリチウム（２．５Ｍ、８６３．９９μＬ、１．５ｅｑ）を滴下し、混合物を１０分間撹拌した。更にｎ－ブチルリチウム（２．５Ｍ、２８８．００μＬ、０．５ｅｑ）を添加し、混合物を更に１０分間撹拌した。更にｎ－ブチルリチウム（２．５Ｍ、１７２．８０μＬ、０．３ｅｑ）を添加した。添加終了後、混合物を２０℃で１時間反応させて反応液１を得た。

【0130】

Ｅ－１（４０３．３８ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（４９．９２ｍｇ、４３．２０μｍｏｌ、０．０３ｅｑ）及びＮ’Ｎ－ジメチルホルムアミド（３．５ｍＬ）の混合物を窒素下で５０℃に加熱し、次いで、上述の反応液１を添加した。混合物を５０℃で更に４０分間反応させた。反応が完了した後、反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液（２０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、飽和ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製してＷＸ００４－２を得た。

【数23】

【0131】

工程２：ＷＸ００４－３の合成

【0132】

反応フラスコに、ＷＸ００４－２（２００ｍｇ、４７５．５７μｍｏｌ、１ｅｑ）及びジクロロメタン（５ｍＬ）を添加した。混合物を０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（１０８．４５ｍｇ、９５１．１４μｍｏｌ、７０．４２μＬ、２ｅｑ）を反応フラスコに加え、混合物を２５℃で１時間撹拌した。反応終了後、反応液を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）にゆっくり注ぎ、ｐＨ７～８に調整した。混合物をジクロロメタン（１０ｍＬ×２）で抽出した。有機相を合わせ、飽和ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮乾固してＷＸ００４－３を得た。

【数24】

【0133】

工程３：ＷＸ００４－４の合成

【0134】

反応フラスコに、ＷＸ００４－３（２２５ｍｇ、７０２．１８μｍｏｌ、１ｅｑ）、炭酸セシウム（３４３．１７ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）及びＮ’Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。ＷＸ００１－４（１５６．７７ｍｇ、８４２．６１μｍｏｌ、１．１３ｍＬ、１．２ｅｑ）を加え、混合物を２５℃で２時間反応させた。反応が完了した後、反応液を氷水混合物（２００ｍＬ）に注いだ。混合物を０．５時間撹拌し、濾過した。濾過ケークをトルエン（５ｍＬ×３）で共沸濃縮してＷＸ００４－４を得た。

【数25】

【0135】

工程４：ＷＸ００４－５の合成

【0136】

乾燥した反応フラスコに、ＷＸ００４－４（１００ｍｇ、２３４．９８μｍｏｌ、１ｅｑ）、水（１．５ｍＬ）及びアセトニトリル（３ｍＬ）を添加した。雰囲気を窒素で置換した。混合物を０℃に冷却し、一過硫酸カリウム（２８８．９２ｍｇ、４６９．９６μｍｏｌ、２ｅｑ）を分割添加した。混合物を２５℃で１２時間反応させた。反応終了後、反応液に飽和亜硫酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えた。混合物を０．５時間撹拌し、次いで、酢酸エチル（１０ｍＬ×２）で抽出した。有機相を合わせ、飽和ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮してＷＸ００４－５を得た。

【数26】

【0137】

工程５：ＷＸ００４の合成

【0138】

ＷＸ００４－５（５５ｍｇ、１２０．２０μｍｏｌ、１ｅｑ）、Ｄ－１－３（２３．３５ｍｇ、２４０．４０μｍｏｌ、２ｅｑ）、ジクロロメタン（１ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（１ｍＬ）を反応フラスコに添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。混合物を０℃に冷却した。反応フラスコにリチウムヘキサメチルジシラジド（１Ｍ、２２８．３８μＬ、１．９ｅｑ）を滴下し、混合物を０℃で１時間撹拌した。反応が完了した後、水（１０ｍＬ）を添加することによって反応液をクエンチし、次いで、酢酸エチル（１０ｍＬ×２）で抽出した。有機相を合わせ、飽和ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を最初にシリカゲルプレートの薄層クロマトグラフィーによって精製し、次いで、高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００＊３０ｍｍ＊１０μｍ、移動相：［水（重炭酸アンモニウム）－アセトニトリル］、Ｂ（アセトニトリル）％：２５％－５５％、８分）によって分離してＷＸ００４を得た。

【数27】

【0139】

アッセイ例１．インビトロキナーゼ活性アッセイ
１．アッセイの目的：

【0140】

ＥＲＫ１及びＥＲＫ２キナーゼ活性を阻害する化合物の能力を測定した。

【0141】

２．アッセイ緩衝液：

【0142】

２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１ｍＭエチレンビス（オキシエチレンニトリロ）四酢酸（ＥＧＴＡ）、０．０２％Ｂｒｉｊ３５、０．０２ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、０．１ｍＭ Ｎａ_３ＶＯ_４、２ｍＭジチオトレイトール（ＤＴＴ）、１％ＤＭＳＯ。

【0143】

３．化合物の処理：

【0144】

アッセイ化合物を１００％ＤＭＳＯに溶解して、特定の濃度のストック溶液を調製した。Ｉｎｔｅｇｒａ Ｖｉａｆｌｏ Ａｓｓｉｓｔスマートピペットを使用して、化合物をＤＭＳＯ溶液で段階希釈した。

【0145】

４．アッセイの方法：

【0146】

ａ）新たに調製した反応緩衝液で基質ＭＢＰを調製した。

【0147】

ｂ）ＥＲＫ１（又はＥＲＫ２）キナーゼを上述のＭＢＰ溶液に添加し、穏やかに混合した。

【0148】

ｃ）１００％ＤＭＳＯに溶解した化合物を、超音波技術（Ｅｃｈｏ５５０、ナノリットル範囲）を用いてキナーゼ反応系に添加し、混合物を室温で２０分間インキュベートした。

【0149】

ｄ）反応系に^３３Ｐ－ＡＴＰ（比濃度１０μＣｉ／μＬ）を加え、この時点で反応が開始した。

【0150】

ｅ）混合物を室温で２時間インキュベートした。

【0151】

ｆ）放射能量はフィルター結合法により検出した。

【0152】

ｇ）ＥＲＫ１（又はＥＲＫ２）キナーゼ活性を、対照群（ＤＭＳＯで処理）のキナーゼ活性に対するアッセイサンプルにおける残存キナーゼ活性の比として計算した。Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア）を用いて曲線をフィッティングし、ＩＣ_５０値を計算した。

【0153】

５．アッセイ結果を表１及び表２に示す。

【表1】

【0154】

結論：本開示の化合物は、ＥＲＫ１キナーゼに対して優れた阻害活性を示す。

【表2】

【0155】

結論：本開示の化合物は、ＥＲＫ２キナーゼに対して優れた阻害活性を示す。

【0156】

アッセイ例２．インビトロ細胞増殖阻害アッセイ
１．アッセイの目的：

【0157】

ＨＴ２９腫瘍細胞の増殖を阻害する化合物の能力を測定した。

【0158】

２．化合物の処理：

【0159】

アッセイ化合物を１００％ＤＭＳＯに溶解して、１０ｍＭのストック溶液を調製した。

【0160】

３．アッセイの方法及び工程：

【0161】

ａ）生物学的安全キャビネットのＵＶ光を点灯し、３０分をカウントダウンした。

【0162】

ｂ）３７℃の水浴中で、ＲＰＭＩ１６４０培地及びトリプシンを予熱した。

【0163】

ｃ）ＵＶ照射終了後、生物学的安全キャビネットを開けた。予熱した培地、トリプシン及びリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）などをアルコールで拭き取り、生物学的安全キャビネットに入れた。

【0164】

ｄ）ＨＴ２９細胞をインキュベーターから取り出し、生物学的安全キャビネットで古い培地を取り出した。１０ｍＬのＰＢＳを添加した。混合物を穏やかに振盪し、次いで、ＰＢＳを除去した。

【0165】

ｅ）予熱した０．２５％トリプシン１．５ｍｌを添加した。トリプシンが底部の細胞を均一に覆うように培養容器を水平方向に振盪し、インキュベーターに２分間入れた。

【0166】

ｆ）完全培地で細胞消化を停止させ、細胞懸濁液を均一になるまでピペッティングし、計数した。

【0167】

ｇ）細胞計数の結果に従い、細胞懸濁液の密度を１５００細胞／ウェルに調整し、細胞懸濁液を５０μｌ／ウェルで播種した。

【0168】

ｈ）化合物のストック溶液をＤＭＳＯ溶液で段階希釈し、Ｔｅｃａｎを用いて化合物を細胞プレートに添加した。

【0169】

ｉ）化合物添加細胞プレート及びＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏを室温で平衡化させ、次いで、２５マイクロリットルのＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏを各ウェルに添加した。細胞プレートを１～２分間振盪し、次いで１０分間静置した。次いで、シグナル値を検出した。ＸＬ－Ｆｉｔを用いてデータを分析し、各化合物のＩＣ_５０を計算した。

【0170】

４．アッセイ結果を表３に示す。

【表3】

【0171】

結論：本開示の化合物は、ＨＴ２９細胞増殖に対する優れた阻害活性を示す。

【0172】

アッセイ例３．マウスにおけるインビボＰＫ試験
１．アッセイの目的：

【0173】

雌ＢＡＬＢ／ｃマウスをアッセイ動物として使用して、単回投与後の化合物の血中濃度を求め、薬物動態挙動を評価した。

【0174】

２．アッセイの手順：

【0175】

４匹の健康な成体雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを選択し、２匹のマウスを静脈内注射群とし、２匹のマウスを経口群とした。静脈内注射群のビヒクルは５％ＤＭＳＯ＋９５％（２０％ＨＰ－β－ＣＤ）とした。アッセイする化合物を適当な量の静脈内注射用ビヒクルと混合し、ボルテックスし、超音波処理して、０．５ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を調製した。透明な溶液を微多孔膜で濾過してすぐに使用できるようにした。経口群のビヒクルは５％ＤＭＳＯ＋９５％（２０％ＨＰ－β－ＣＤ）とした。アッセイする化合物をビヒクルと混合し、ボルテックスし、超音波処理して、０．３ｍｇ／ｍＬの溶液を調製した。マウスに１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与又は３ｍｇ／ｋｇ経口投与を行った後、全血を一定期間採取した。血漿を調製した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によって薬物濃度を分析し、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、米国）によって薬物動態パラメータを計算した。

【0176】

注釈：ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド、ＨＰ－β－ＣＤ：ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン

【0177】

３．アッセイ結果を表４に示す。

【表4】

【0178】

注釈：Ｃ_ｍａｘは最大濃度であり、Ｆ％は経口バイオアベイラビリティであり、ＤＮＡＵＣはＡＵＣ_ＰＯ／Ｄｏｓｅであり、ＡＵＣ_ＰＯは経口曝露であり、Ｄｏｓｅは薬物用量であり、Ｖｄ_ｓｓは分布容積であり、Ｃｌはクリアランス速度であり、Ｔ_１／２は半減期である。

【0179】

結論：本開示の化合物は、優れた経口曝露及びバイオアベイラビリティを示す。

【0180】

アッセイ例４．溶解度試験
１．アッセイの目的：

【0181】

化合物の溶解度を測定して、化合物の溶解特性を評価した。

【0182】

２．アッセイ溶液：

【0183】

１）緩衝液Ａ（ｐＨ２．０）：５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ２．０；緩衝液Ｂ（ｐＨ６．５）：５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ６．５；緩衝液Ｃ（ｐＨ７．４）：５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．４

【0184】

２）標準溶液の調製：

【0185】

ａ）５０％アセトニトリル溶液と５０％緩衝液を混合して希釈液を得た。

【0186】

ｂ）希釈液（４９０μＬ／化合物）に１０ｍＭ（１０μＬ／化合物）の化合物ストック溶液を加えて２００μＭの検出標準溶液を得た。

【0187】

ｃ）２００μＭのＵＶ検出標準溶液を１０倍及び２００倍体積の希釈液で希釈して、それぞれ２０μＭ及び１μＭのＵＶ標準溶液を得た。

【0188】

ｄ）溶解度アッセイのための標準溶液として、１μＭ、２０μＭ及び２００μＭのＵＶ標準溶液を使用した。

【0189】

３．アッセイの方法：

【0190】

ａ）化合物をＤＭＳＯに溶解して、１０ｍＭのストック溶液を調製した。アミオダロン塩酸塩、カルバマゼピン及びクロラムフェニコールを溶解度アッセイの対照として使用した。

【0191】

ｂ）アッセイ化合物及び対照のストック溶液（それぞれ１０μＬ）を９６ウェルプレートに入れ、４９０μＬの３つの異なる溶解培地（緩衝液Ａ、Ｂ、Ｃ）をそれぞれ添加した。対応する溶解度溶液のｐＨは、それぞれ２．０、６．５及び７．４であった。アッセイ化合物の理論上の最大濃度は、２％ＤＭＳＯで２００μＭである。

【0192】

ｃ）プレートを室温（２５±２℃）の振盪機で６００ｒｐｍにて２４時間振盪した。

【0193】

ｄ）この溶液２００μＬを９６ウェルプレートからピペッティングし、真空吸引濾過装置で吸引濾過し、新たな９６ウェルプレートにアッセイサンプルとして移した。

【0194】

ｅ）ＨＰＬＣ－ＵＶを用いて化合物濃度を求めた。ＨＰＬＣ条件は表５に示す通りであった。

【表5】

【0195】

ｆ）低濃度から高濃度までの３つのＵＶ標準溶液（１μＭ、２０μＭ、２００μＭ）をＨＰＬＣに注入し、次いで、アッセイする化合物のアッセイサンプルを注入した。

【0196】

ｇ）ＵＶクロマトグラフィーピークを積分し、サンプルの溶解度を計算した。

【0197】

４．アッセイ結果を表６に示す。

【表6】

【0198】

結論：本開示の化合物は、様々なｐＨ条件下で良好な溶解度を有する。

【0199】

アッセイ例５．ヒトメラノーマＡ３７５のマウスモデルにおけるインビボ有効性アッセイ：
１．アッセイの目的：

【0200】

ＷＸ００１の抗腫瘍効果を、ヌードマウスにおけるヒトメラノーマＡ３７５細胞の皮下異種移植腫瘍モデルを使用して評価した。

【0201】

２．アッセイ動物：

【0202】

種：マウス

【0203】

系統：ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス

【0204】

年齢：６～８週齢

【0205】

性別：雌

【0206】

体重：１８～２２グラム

【0207】

供給者：Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．

【0208】

３．飼育環境：

【0209】

２０～２６℃の温度及び４０～７０％の湿度でＳＰＦグレードの動物舎のＩＶＣ（独立給気システム、恒温恒湿）ケージ（１ケージあたり３匹の動物）で動物を飼育した。

【0210】

ケージ：ケージはポリカーボネート製で、容積は３７５ｍｍ×２１５ｍｍ×１８０ｍｍであった。寝床の材料をトウモロコシの芯として、これを週に１回交換した。

【0211】

餌：アッセイ動物は、アッセイ期間を通して餌（照射により滅菌された乾燥ペレット餌）を自由摂食させた。

【0212】

飲料水：アッセイ動物は滅菌水に自由飲水させた。

【0213】

ケージの識別：各ケージの動物情報カードは、ケージ内の動物の数、性別、系統、受取日、投与スケジュールのアッセイ番号、群及びアッセイの開始日を示すものとする。

【0214】

動物の識別：アッセイ動物を耳タグによって識別した。

【0215】

４．アッセイ手順：

【0216】

１）アッセイ細胞及び培養：ヒトメラノーマＡ３７５細胞をインビトロで単層で培養した。培養条件は、ＤＭＥＭ培地＋１０％ウシ胎児血清及び３７℃の５％ＣＯ_２インキュベーターとした。トリプシン－ＥＤＴＡによる定型的な消化を、継代のために週に２回行った。細胞飽和度が８０％～９０％で、その量が必要量に達したとき、細胞を回収し、計数し、接種した。

【0217】

２）腫瘍組織接種及び群分け：０．１ｍＬ（５×１０^５）のＡ３７５細胞を各マウスの右脇の下に皮下接種した。平均腫瘍体積が１７０ｍｍ^３に達したら、動物を無作為に４群に分け、投与を開始した。アッセイの群分け及び投与スケジュールを表７に示した。

【表7】

【0218】

３）アッセイ動物の毎日の観察：このアッセイプロトコルの開発及びあらゆる修正は、動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって評価及び承認された。アッセイ動物の使用及び福祉は、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ（ＡＡＡＬＡＣ）の規則に従って実施した。健康及び死亡について動物を毎日モニタリングした。定型的な検査には、腫瘍成長の観察、並びに動物の毎日の行動、例えば行動の活動、餌や水の摂取（目視検査のみ）、体重変化（週に２回の体重測定）、外観の徴候又は他の異常に対する薬物処置の効果が含まれた。各群の動物の死亡及び副作用を、各群の動物の数に基づいて記録した。

【0219】

４）アッセイ化合物の製剤

【0220】

ａ）ビヒクル群：５％ＤＭＳＯ＋９５％（２０％ＨＰ－β－ＣＤ）

【0221】

ｂ）アッセイ化合物群：定量的な量のアッセイ化合物を製剤ボトルに秤量した。対応する体積のＤＭＳＯを添加し、次いで混合物をボルテックスして透明な溶液を得た。対応する体積の２０％ＨＰ－β－ＣＤを添加し、次いで混合物をボルテックスして均一な懸濁液を得た。

【0222】

５）腫瘍測定及びアッセイ指標：

【0223】

ａ）腫瘍直径をノギスで週に２回測定した。腫瘍体積の計算式は、ＴＶ＝１／２×ａ×ｂ^２（ａは腫瘍の長径、ｂは腫瘍の短径）とした。

【0224】

ｂ）化合物の腫瘍阻害有効性をＴＧＩ（％）によって評価した。ＴＧＩ（％）は腫瘍成長の阻害率を反映した。ＴＧＩ（％）は、以下のように算出した：ＴＧＩ（％）＝｛［１－（処置群の投与終了時の平均腫瘍体積－該処置群の投与開始時の平均腫瘍体積）］／（溶媒対照群の処置終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群の処置開始時の平均腫瘍体積）｝×１００％。

【0225】

５．アッセイ結果：

【0226】

１）表８及び図１に示されるように、ヌードマウスにおけるヒトメラノーマＡ３７５細胞の皮下異種移植腫瘍モデルにおいて、ＷＸ００１は、経口投与後２１日目まで用量依存的に腫瘍成長を阻害することができ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇの３つの用量において、ＴＧＩはそれぞれ３６％、８１％及び１０４％であった。

【0227】

２）アッセイ動物の体重を、薬物毒性の間接測定のための参照指標として使用した。図２に示すように、２１日目まで投与した場合、溶媒対照群及びＷＸ００１群の全ての動物の体重は有意には減少せず、罹患も死亡もなかった。

【表8】

【0228】

結論：ＷＸ００１は、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇの３つの用量で用量依存的に腫瘍成長を阻害することができ、投与中、動物の体重の有意な減少は観察されず、耐性は良好である。

【0229】

アッセイ例６．ＳＤラットにおけるインビボＰＫ試験
１．アッセイの目的：

【0230】

雄ＳＤラットをアッセイ動物として使用した。単回投与後、化合物の血漿濃度を測定し、薬物動態挙動を評価した。

【0231】

２．アッセイの手順：

【0232】

６匹の健康な成体雄ＳＤラットを選択し、３匹のラットは静脈内注射群とし、３匹のラットは経口群とした。静脈内注射群のビヒクルは５％ＤＭＳＯ＋９５％（２０％ＨＰ－β－ＣＤ）とした。アッセイする化合物を適当な量の静脈内注射用ビヒクルと混合し、ボルテックスし、超音波処理して、０．２ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を調製した。透明な溶液を微多孔膜で濾過してすぐに使用できるようにした。経口群のビヒクルは５％ＤＭＳＯ＋９５％（２０％ＨＰ－β－ＣＤ）とした。アッセイする化合物をビヒクルと混合し、ボルテックスし、超音波処理して、１ｍｇ／ｍＬの溶液を調製した。ＳＤラットに１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与又は１０ｍｇ／ｋｇ経口投与を行った後、全血を一定期間採取した。血漿を調製した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によって薬物濃度を分析し、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、米国）によって薬物動態パラメータを計算した。

【0233】

注釈：ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド、ＨＰ－β－ＣＤ：ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン

【0234】

３．アッセイ結果を表９に示す。

【0235】

【表9】

【0236】

注釈：Ｃ_ｍａｘは最大濃度であり、Ｆ％は経口バイオアベイラビリティであり、ＤＮＡＵＣはＡＵＣ_ＰＯ／Ｄｏｓｅであり、ＡＵＣ_ＰＯは経口曝露であり、Ｄｏｓｅは薬物用量であり、Ｖｄ_ｓｓは分布容積であり、Ｃｌはクリアランス速度であり、Ｔ_１／２は半減期である。

【0237】

結論：本開示の化合物は、優れた経口曝露及びバイオアベイラビリティを示す。

【0238】

アッセイ例７．カニクイザルにおけるインビボＰＫ試験
１．アッセイの目的：

【0239】

雄カニクイザルをアッセイ動物として使用した。単回投与後、化合物の血漿濃度を測定し、薬物動態挙動を評価した。

【0240】

２．アッセイの手順：

【0241】

５匹の健康な成体雄カニクイザルを選択し、２匹の動物は静脈内注射群とし、３匹の動物は経口群とした。静脈内注射群のビヒクルは５％ＤＭＳＯ＋９５％（２０％ＨＰ－β－ＣＤ）とした。アッセイする化合物を適当な量の静脈内注射用ビヒクルと混合し、撹拌しながら溶解して、０．４ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を調製した。透明な溶液を微多孔膜で濾過してすぐに使用できるようにした。経口群のビヒクルは５％ＤＭＳＯ＋９５％（２０％ＨＰ－β－ＣＤ）とした。アッセイする化合物をビヒクルと混合し、撹拌しながら溶解して、０．３ｍｇ／ｍＬの溶液を調製した。カニクイザルに１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与又は３ｍｇ／ｋｇ経口投与を行った後、全血を一定期間採取した。血漿を調製した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によって薬物濃度を分析し、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、米国）によって薬物動態パラメータを計算した。

【0242】

注釈：ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド、ＨＰ－β－ＣＤ：ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン

【0243】

３．アッセイ結果を表１０に示す。

【0244】

【表10】

【0245】

注釈：Ｃ_ｍａｘは最大濃度であり、Ｆ％は経口バイオアベイラビリティであり、ＤＮＡＵＣはＡＵＣ_ＰＯ／Ｄｏｓｅであり、ＡＵＣ_ＰＯは経口曝露であり、Ｄｏｓｅは薬物用量であり、Ｖｄ_ｓｓは分布容積であり、Ｃｌはクリアランス速度であり、Ｔ_１／２は半減期である。

【0246】

結論：本開示の化合物は、優れた経口曝露及びバイオアベイラビリティを示す。

【0247】

アッセイ例８．ビーグル犬におけるインビボＰＫ試験
１．アッセイの目的：

【0248】

雄ビーグル犬をアッセイ動物として使用した。単回投与後、化合物の血漿濃度を測定し、薬物動態挙動を評価した。

【0249】

２．アッセイの手順：

【0250】

５匹の健康な成体雄ビーグル犬を選択し、２匹は静脈内注射群とし、３匹は経口群とした。静脈内注射群のビヒクルは５％ＤＭＳＯ＋９５％（２０％ＨＰ－β－ＣＤ）とした。アッセイする化合物を適当な量の静脈内注射用ビヒクルと混合し、撹拌しながら溶解して、０．４ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を調製した。透明な溶液を微多孔膜で濾過してすぐに使用できるようにした。経口群のビヒクルは５％ＤＭＳＯ＋９５％（２０％ＨＰ－β－ＣＤ）とした。アッセイする化合物をビヒクルと混合し、撹拌しながら溶解して、０．３ｍｇ／ｍＬの溶液を調製した。カニクイザルに１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与又は３ｍｇ／ｋｇ経口投与を行った後、全血を一定期間採取した。血漿を調製した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によって薬物濃度を分析し、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、米国）によって薬物動態パラメータを計算した。

【0251】

注釈：ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド、ＨＰ－β－ＣＤ：ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン

【0252】

３．アッセイ結果を表１１に示す。

【表11】

【0253】

注釈：Ｃ_ｍａｘは最大濃度であり、Ｆ％は経口バイオアベイラビリティであり、ＤＮＡＵＣはＡＵＣ_ＰＯ／Ｄｏｓｅであり、ＡＵＣ_ＰＯは経口曝露であり、Ｄｏｓｅは薬物用量であり、Ｖｄ_ｓｓは分布容積であり、Ｃｌはクリアランス速度であり、Ｔ_１／２は半減期である。

【0254】

結論：本開示の化合物は、優れた経口曝露及びバイオアベイラビリティを示す。

【0255】

アッセイ例９．ｈＥＲＧアッセイ
１．アッセイの目的：

【0256】

完全自動パッチクランプ法を用いて、ｈＥＲＧカリウムチャネル（ヒトＥｔｈｅｒ－ａ－ｇｏ－ｇｏ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｇｅｎｅカリウムチャネル）電流に対する化合物の効果をアッセイした。

【0257】

２．アッセイの方法：

【0258】

２．１ 細胞の調製

【0259】

ＣＨＯ－ｈＥＲＧ細胞を１７５ｃｍ^２培養フラスコで培養した。細胞が６０～８０％の密度まで増殖したら、培養培地を除去した。細胞を７ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で１回洗浄し、次いで、消化のために３ｍＬのＤｅｔａｃｈｉｎを添加した。消化終了後、７ｍＬの培養培地を加えて中和した後、混合物を遠心分離した。上清を吸引し、次いで５ｍＬの培養培地を添加して、細胞を再懸濁し、細胞密度が２～５×１０^６／ｍＬになるようにした。

【0260】

２．２ 溶液の調製

【0261】

細胞外溶液製剤（ｍＭ）：１４０ＮａＣｌ、５ＫＣｌ、１ＣａＣｌ_２、１．２５ＭｇＣｌ_２、１０ＨＥＰＥＳ及び１０グルコース；この製剤をＮａＯＨでｐＨ７．４に調整した。

【0262】

細胞内溶液製剤（ｍＭ）：１４０ＫＣｌ、１ＭｇＣｌ_２、１ＣａＣｌ_２、１０ＥＧＴＡ及び１０ＨＥＰＥＳ；この製剤をＫＯＨでｐＨ７．２に調整した。

【0263】

２．３ 電気生理学的記録プロセス

【0264】

単一細胞高インピーダンスシーリング及び全細胞パターン形成プロセスはすべて、Ｑｐａｔｃｈ機器によって自動的に実行された。全細胞記録モードを得た後、細胞を－８０ｍＶでクランプした。細胞に５０ミリ秒間－５０ｍＶのプレ電圧及び５秒間＋４０ｍＶの脱分極刺激を順次印加し、次いで５秒間－５０ｍＶに再分極してから－８０ミリボルトに戻した。この電圧刺激を１５秒毎に印加し、２分間記録した。次いで、細胞外溶液を与え、５分間記録した。次いで、薬物投与プロセスを開始した。化合物濃度は最低アッセイ濃度から開始し、各アッセイ濃度を２．５分間与えた。すべての濃度を連続して与えた後、陽性対照化合物である３Ｍシサプリドを与えた。各濃度について少なくとも３個の細胞をアッセイした（ｎ≧３）。

【0265】

２．４ 化合物の製剤

【0266】

２０．００ｍＭの化合物の母液をＤＭＳＯで希釈した。化合物の母液１０μＬをＤＭＳＯ溶液２０μＬに添加し、３倍に段階希釈して６種類のＤＭＳＯ濃度にした。６種類のＤＭＳＯ濃度を有する化合物４μＬをそれぞれ３９６μＬの細胞外溶液に添加し、１００倍に段階希釈して６種類の中間濃度にした。６種類の中間濃度を有する化合物８０μＬをそれぞれ細胞外溶液３２０μＬに添加し、５倍に段階希釈して、アッセイする最終濃度にした。最も高いアッセイ濃度は４０μＭであり、合計で６種類の濃度：それぞれ４０、１３．３、４．４、１．４８、０．４９４及び０．１６５μＭであった。最終アッセイ濃度におけるＤＭＳＯ含有量は０．２％を超えなかった。この濃度のＤＭＳＯは、ｈＥＲＧカリウムチャネルに影響を及ぼさなかった。化合物の調製における全ての希釈は、Ｂｒａｖｏ機器によって行った。

【0267】

２．５ データ解析

【0268】

アッセイデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５．０ソフトウェアによって解析した。

【0269】

２．６ 品質管理

【0270】

環境：湿度２０～５０％、温度２２～２５℃

【0271】

試薬：使用したアッセイ試薬はＳｉｇｍａから購入し、純度は９８％超であった。

【0272】

報告書のアッセイデータは、以下の基準を満たしていなければならない。

【0273】

全細胞シーリングインピーダンス＞１００ＭΩ

【0274】

テール電流振幅＞３００ｐＡ

【0275】

薬理学的パラメータ：

【0276】

ｈＥＲＧチャネルに対する複数の濃度のシサプリドの阻害効果を陽性対照として測定した。

【0277】

３．アッセイ結果を表１２に示す。

【表12】

【0278】

結論：本開示の化合物は、ｈＥＲＧカリウムチャネル電流に対する弱い阻害効果を有し、それによって心毒性のリスクを低下させ、安全性を改善する。

【0279】

アッセイ例１０．血漿タンパク質結合（ＰＰＢ）アッセイ
１．アッセイの目的：

【0280】

アッセイ化合物のヒト／マウス／ラット／イヌ／サル血漿アルブミンへの結合度を試験した。

【0281】

２．アッセイの手順：

【0282】

１）マトリックスの調製：アッセイ当日に、血漿を冷水で解凍し、３２２０ｒｐｍで５分間遠心分離して、すべての血餅を除去した。得られた血漿のｐＨを測定し、必要に応じて１％リン酸又は１Ｎ水酸化ナトリウムを用いて７．４±０．１に調整した。

【0283】

２）アッセイ化合物の希釈手順：アッセイ化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解して、それぞれ１０ｍＭ及び２ｍＭの濃度のストック溶液を調製した。２μＬのストック溶液（２ｍＭ）を９８μＬのＤＭＳＯで希釈することによって、４０μＭの作業溶液を調製した。１０μＬのストック溶液を２４０μＬのＤＭＳＯで希釈することによって、対照化合物の４００μＭの作業溶液を調製した。化合物の作業溶液（５μＬ）をブランクマトリックス（９９５μＬ）と１：２００の比率でよく混合して、ローディングマトリックスを調製した。

【0284】

３）分析工程：

【0285】

ａ）等体積の３０μＬのローディングマトリックス（ｎ＝２）をサンプル回収プレートに移して、残留物測定のための時間０（Ｔ０）サンプルを調製した。サンプルを直ちに対応するブランク緩衝液と合わせて６０μＬの最終体積とし、各ウェル中の血漿対緩衝液の体積比を１：１とした。次いで、Ｈ_２Ｏ中の４％Ｈ_３ＰＯ_４６０μＬ及び内部標準を含む停止溶液４８０μＬを、アッセイ化合物のＴ０サンプルに添加した。次いで、さらなる処理のために２～８℃で他のサンプルと共に保管した。

【0286】

ｂ）残りの血漿サンプルを、３７±１℃の二酸化炭素インキュベーター内で３０分間プレインキュベートした。タンパク質を含まないサンプル（Ｆサンプル）及びローディングマトリックスのサンプル（２３０μＬ）をすべてポリカーボネート管（ｎ＝２）に移し、３７℃及び１５５，０００×ｇ（３５，０００ｒｐｍ）で４時間超遠心分離した。

【0287】

ｃ）Ｔサンプル（アッセイサンプル）を調製するために、追加のマトリックス含有サンプルを別の９６ウェルプレート（サンプルインキュベーションプレート）に移し、３７℃で４時間インキュベートした。

【0288】

ｄ）遠心分離の終了時に、３０μＬのタンパク質を含まないサンプル及び３０μＬのＴサンプルを上清の第二の層（最上層の下）から新しいサンプル回収プレートに移した。各サンプルを対応するブランク緩衝液又はマトリックスと混合して、最終体積を６０μＬ、マトリックス：緩衝液の体積比を１：１とした。６０μＬの４％Ｈ_３ＰＯ_４水溶液及び４８０μＬの停止溶液（内部標準を含む）をすべてのサンプルに添加した。混合物を４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、各サンプルの上清１００μＬをＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって分析した。

【0289】

３．アッセイ結果を表１３に示す。

【表13】

【0290】

結論：本開示の化合物は、中程度から高い血漿タンパク質結合を有する。

【図1】

【図2】

【手続補正書】

【提出日】2024-02-26

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）で表される化合物

【化1】

（式中、
Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ独立して、Ｈ及びＣ_１～３アルキルから選択され、ここで、上記Ｃ_１～３アルキルは、任意選択で１、２又は３個のＲ_ａで置換されており、
各Ｒ_４は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＣ_１～３アルキルから選択され、ここで、上記Ｃ_１～３アルキルは、任意選択で１、２又は３個のＲ_ｃで置換されており、
ｎは１及び２から選択され、
環Ａは、ピラゾリル及びテトラヒドロピラニルから選択され、ここで、上記ピラゾリル及びテトラヒドロピラニルは、任意選択で１、２又は３個のＲ_ｄで置換されており、
Ｒ_ａ及びＲ_ｃは、それぞれ独立して、Ｄ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩから選択され、
Ｒ_ｄは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ_１～３アルキル及びＣ_１～３アルコキシから選択され、ここで、上記Ｃ_１～３アルキル及びＣ_１～３アルコキシは、任意選択で１、２又は３個のＲで置換されており、
Ｒは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩから選択される）
又はその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

上記化合物が以下の定義：
ｉ）Ｒ_１及びＲ_２が、それぞれ独立して、Ｈ、ＣＨ_３及びＣＨ_２ＣＨ_３から選択され、ここで、上記ＣＨ_３及びＣＨ_２ＣＨ_３が、任意選択で１、２又は３個のＲ_ａで置換されていること；
ｉｉ）Ｒ _１ 及びＲ _２ が、それぞれ独立して、Ｈ、ＣＨ _３ 、ＣＨＦ _２ 、ＣＤ _３ 及びＣＨ _２ ＣＨ _３ から選択されること；
ｉｉｉ）Ｒ _４ が、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＣＨ _３ から選択され、ここで、上記ＣＨ _３ が、任意選択で１、２又は３個のＲ _ｃ で置換されていること；
ｉｖ）Ｒ _４ が、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＣＨ _３ から選択されること；
ｖ）Ｒ _ｄ が、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ _３ 及びＯＣＨ _３ から選択され、ここで、上記ＣＨ _３ 及びＯＣＨ _３ が、任意選択で１、２又は３個のＲで置換されていること；
ｖｉ）Ｒ _ｄ が、ＣＨ _３ 及びＯＣＨ _３ から選択されること；
ｖｉｉ）環Ａが、

【化2】

から選択され、ここで、上記

【化3】

が、任意選択で１、２又は３個のＲ _ｄ で置換されていること；
ｖｉｉｉ）環Ａが、

【化4】

から選択されること；
ｉｘ）構造部分

【化5】

が

【化6】

から選択されること；
ｘ）構造部分

【化7】

が

【化8】

から選択されること；
ｘｉ）Ｒ _ｄ が、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＣ _１～３ アルキルから選択され、ここで、上記Ｃ _１～３ アルキルが、任意選択で１、２又は３個のＲで置換されていること；
ｘｉｉ）Ｒ _ｄ が、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＣＨ _３ から選択され、ここで、上記ＣＨ _３ が、任意選択で１、２又は３個のＲで置換されていること；
ｘｉｉｉ）Ｒ _ｄ がＣＨ _３ から選択されること；
ｘｉｖ）環Ａが、

【化9】

から選択され、ここで、上記

【化10】

が、任意選択で１、２又は３個のＲ _ｄ で置換されていること；
のうち１つ以上を有する、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

上記化合物が、

【化11】

（式中、
Ｒ_２は、請求項１に定義される通りであり、
Ｒ_４は、請求項１に定義される通りである）
から選択される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

以下の化合物から選択される化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化12】

【請求項5】

固形腫瘍を治療するための医薬組成物であって、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物。

【請求項6】

請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬品。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００９６

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0096】

反応フラスコに、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（４．８３ｇ、４３．０４ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）及びテトラヒドロフラン（１６ｍＬ）を添加した。雰囲気を窒素ガスで置換した。テトラヒドロフラン（１６ｍＬ）にＥ－１－１（２ｇ、１７．２２ｍｍｏｌ、２．３０ｍＬ、１ｅｑ）及びＥ－１－２（２．５５ｇ、３４．４４ｍｍｏｌ、２．７７ｍＬ、２ｅｑ）を溶解した溶液をゆっくり滴下した。混合物を２５℃で３時間反応させた。反応が完了した後、混合物を濃縮してＥ－１－３を得た。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０２５０

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0250】

５匹の健康な成体雄ビーグル犬を選択し、２匹は静脈内注射群とし、３匹は経口群とした。静脈内注射群のビヒクルは５％ＤＭＳＯ＋９５％（２０％ＨＰ－β－ＣＤ）とした。アッセイする化合物を適当な量の静脈内注射用ビヒクルと混合し、撹拌しながら溶解して、０．４ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を調製した。透明な溶液を微多孔膜で濾過してすぐに使用できるようにした。経口群のビヒクルは５％ＤＭＳＯ＋９５％（２０％ＨＰ－β－ＣＤ）とした。アッセイする化合物をビヒクルと混合し、撹拌しながら溶解して、０．３ｍｇ／ｍＬの溶液を調製した。ビーグル犬に１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与又は３ｍｇ／ｋｇ経口投与を行った後、全血を一定期間採取した。血漿を調製した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によって薬物濃度を分析し、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、米国）によって薬物動態パラメータを計算した。

【国際調査報告】