特表 2024-526372 環状ペプチドを含む放出制御型の局所注射用組成物とその製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-17

(54)【発明の名称】環状ペプチドを含む放出制御型の局所注射用組成物とその製造方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/13 20060101AFI20240709BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20240709BHJP

   A61K 9/16 20060101ALI20240709BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20240709BHJP

   A61P 17/14 20060101ALI20240709BHJP

【ＦＩ】

A61K38/13

A61K47/34

A61K9/16

A61K9/10

A61P17/14

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024520829

(86)(22)【出願日】2022-04-07

(85)【翻訳文提出日】2023-12-13

(86)【国際出願番号】 KR2022095079

(87)【国際公開番号】W WO2022265481

(87)【国際公開日】2022-12-22

(31)【優先権主張番号】10-2021-0076648

(32)【優先日】2021-06-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(31)【優先権主張番号】10-2022-0008307

(32)【優先日】2022-01-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．プルロニック

２．ＰＬＵＲＯＮＩＣ

３．ＴＷＥＥＮ

４．ＢＲＩＪ

５．ＬＡＢＲＡＳＯＬ

６．ＳＰＡＮ

(71)【出願人】

【識別番号】523469526

【氏名又は名称】オリエントバイオ インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＯＲＩＥＮＴＢＩＯ ＩＮＣ．

【住所又は居所原語表記】３２２， Ｇａｌｍａｃｈｉ－ｒｏ， Ｊｕｎｇｗｏｎ－ｇｕ， Ｓｅｏｎｇｎａｍ－ｓｉ， Ｇｙｅｏｎｇｇｉ－ｄｏ １３２０１， Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ

(74)【代理人】

【識別番号】100077012

【弁理士】

【氏名又は名称】岩谷 龍

(72)【発明者】

【氏名】キム，サンニョン

(72)【発明者】

【氏名】チャン，ジェジン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

【Ｆターム（参考）】

4C076AA22

4C076AA31

4C076BB16

4C076CC18

4C076DD38D

4C076EE06

4C076EE24A

4C076EE26A

4C076EE32A

4C076EE32F

4C076EE36A

4C076EE37A

4C076EE38A

4C076EE41A

4C076EE43A

4C076EE48A

4C076FF02

4C076FF14

4C076FF16

4C076FF32

4C076GG26

4C084AA02

4C084AA03

4C084BA01

4C084BA09

4C084BA18

4C084BA24

4C084CA05

4C084CA59

4C084DA11

4C084MA05

4C084MA23

4C084MA41

4C084MA66

4C084NA06

4C084NA12

4C084ZA921

4C084ZA922

(57)【要約】

本発明は、シクロスポリン３位誘導体と生分解性高分子とを含む粒子、それを含む放出制御型の局所注射用組成物と、その脱毛予防および発毛促進用途に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記化学式（１）で表されるシクロスポリン３位誘導体及び生分解性高分子を含む放出制御型粒子：

前記Ｃは、－Ｎ（Ｒ_１）－ＣＨ（Ｒ_２）－Ｃ（＝Ｏ）－で表されるアミノ酸、
前記Ｒ_１は、水素またはメチル基、
前記Ｒ_２は、Ｘ－Ｒ’またはＲ’であり、前記Ｘは酸素（Ｏ）または硫黄（Ｓ）、Ｒ’は水素またはＣ１～Ｃ６の直鎖または分岐鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基；あるいはアリール基であり、
前記アルキル基、アルケニル基またはアルキニル基の各炭素は、アミノ、ヒドロキシ、ハロゲン、ハロアルキル、エステル、アルコキシ、シアノ、ナイトロ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノからなる群より選択される１ないし３個の置換基によって置換または非置換される。

【請求項2】

前記Ｘは硫黄（Ｓ）である、請求項１に記載の放出制御型粒子。

【請求項3】

前記シクロスポリン３位誘導体は、
［２－メチルチオ－サルコシン^３］シクロスポリンＡ；
［２－ジメチルアミノ－エチルチオ－サルコシン^３］シクロスポリンＡ；
［２－（４－メチルベンゼンチオ）サルコシン^３］シクロスポリンＡ；
［Ｎ－メチル－アミノ酪酸^３］シクロスポリンＡ；
［Ｎ－メチル－ノルバリン^３］シクロスポリンＡ；
［２－（メチルアミノ）－ヘキサ－４－イノイル^３］シクロスポリンＡ；
［２－（メチルアミノ）－ペント－４－イノイル^３］シクロスポリンＡ；
［Ｎ－メチル－Ｏ－プロフェニル－セリン^３］シクロスポリンＡ；
［Ｎ－メチル－セリン^３］シクロスポリンＡ；または、
［Ｎ－メチル－アラニン^３］シクロスポリンＡである、
請求項１に記載の放出制御型粒子。

【請求項4】

前記シクロスポリン３位誘導体は、
［２－メチルチオ－サルコシン^３］シクロスポリンＡである、
請求項１に記載の放出制御型粒子。

【請求項5】

前記生分解性高分子は、天然高分子または合成高分子である、
請求項１に記載の放出制御型粒子。

【請求項6】

前記天然高分子は、カルボキシメチルセルロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、アルギン（ａｌｇｉｎ）、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、アルギネート（ａｌｇｉｎａｔｅ）、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、ポリペプチド、タンパク質、ゼラチン、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）、アルブミン（ａｌｂｕｍｉｎ）、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）、デンプン（ｓｔａｒｃｈ）、カゼイン、キチン誘導体、キトサン（ｃｈｉｔｏｓａｎ）および小腸粘膜下組織からなる群より選択された１つ以上である、
請求項５に記載の放出制御型粒子。

【請求項7】

前記合成高分子は、ポリエチレン（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ、ＰＥＡ）、ポリエチレングリコール（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ、ＰＥＧ）、ポリカプロラクトン（Ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ、ＰＣＬ）、ポリアルキルカーボネート（Ｐｏｌｙａｌｋｙｌｃａｒｂｏｎａｔｅ）、ポリアミノ酸（Ｐｏｌｙａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）、ポリヒドロキシ酪酸（Ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）、ポリオルトエステル（Ｐｏｌｙｏｒｔｈｏｅｓｔｅｒ）、ポリ酸無水物（Ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、プルロニック（Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ）ｐｏｌｙ（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ）ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、ポリ乳酸（Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ、ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（Ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ、ＰＧＡ）、ポリブチレンサクシネート（Ｐｏｌｙｂｕｔｙｌｅｎｅ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ、ＰＢＳ）、ポリ（３－ヒドロキシブチレート－ｃｏ－３－ヒドロキシバレレート（Ｐｏｌｙ（３－ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ－ｃｏ－３－ｈｙｄｒｏｘｙｖａｌｅｒａｔｅ、ＰＨＢＶ）、ポリブチレンテレフタレート（Ｐｏｌｙｂｕｔｙｌｅｎｅ ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌａｔｅ、ＰＢＴ）、ポリトリメチレンテレフタレート（Ｐｏｌｙｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅｎｅ ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌａｔｅ、ＰＴＴ）、ポリエチレンナフタレン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｎａｐｈｔｈａｌａｔｅ、ＰＥＮ）、ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ｐｏｌｙ（Ｄ，Ｌ－ｌａｃｔｉｃ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、ＰＬＧＡ）、（ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸）－グルコース（Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ－ｇｌｕｃｏｓｅ、ＰＬＧＡ－ｇｌｕｃｏｓｅ）およびメトキシポリエチレングリコール－（ポリカプロラクトン－ｃｏ－ポリ乳酸）（ＭＰＥＧ－（ＰＣＬ－ｃｏ－ＰＬＬＡ）からなる群より選択された１つ以上である,
請求項５に記載の放出制御型粒子。

【請求項8】

前記生分解性高分子は、ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、ＰＬＧＡ）；またはこれを疎水性ブロックとする二重または三重ブロック共重合体である、
請求項１に記載の放出制御型粒子。

【請求項9】

前記ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、ＰＬＧＡ）は、ラクチドとグリコール酸のモノマーのモル比が９０：１０～４０：６０である、
請求項８に記載の放出制御型粒子。

【請求項10】

前記ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸の末端基（ｅｎｄ ｇｒｏｕｐ）は、エステル（中性電荷）またはカルボン酸（負電荷）である、
請求項８に記載の放出制御型粒子。

【請求項11】

前記ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸は、分子量が４，０００～２４０，０００Ｄａである、
請求項８に記載の放出制御型粒子。

【請求項12】

前記ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸は、ポリＬ－リジン（Ｐｏｌｙ ｌｙｓｉｎｅ）が導入されたカチオン性グラフト共重合体である、
請求項８に記載の放出制御型粒子。

【請求項13】

前記シクロスポリン３位誘導体と生分解性高分子の重量比は、５：９５～９０：１０である、
請求項１に記載の放出制御型粒子。

【請求項14】

前記粒子の平均直径が０．０１～３００μｍである、
請求項１に記載の放出制御型粒子。

【請求項15】

前記粒子の平均ゼータ電位は＋２ｍＶ以上、または－２ｍＶ以下である,
請求項１に記載の放出制御型粒子。

【請求項16】

前記粒子は、シクロスポリン３位誘導体を５～４０％（ｗ／ｗ）含む,
請求項１に記載の放出制御型粒子。

【請求項17】

請求項１に記載の放出制御型粒子を含む脱毛予防または発毛促進用組成物。

【請求項18】

前記脱毛は、男性型脱毛（ａｎｄｒｏｇａｎｅｔｉｃ ａｌｏｐｅｃｉａ、ＡＧＡ）、女性型脱毛（ｆｅｍａｌｅ－ｐａｔｔｅｒｎ ｈａｉｒ ｌｏｓｓ）、自己免疫疾患の円形脱毛（ａｌｏｐｅｃｉａ ａｒｅａｔａ）、休止期脱毛（ｔｅｌｏｇｅｎ ｅｆｆｌｕｖｉｕｍ）および瘢痕性脱毛症（ｃｉｃａｔｒｉｃｉａｌ ａｌｏｐｅｃｉａ）からなる群より選択された一つである、
請求項１７に記載の脱毛予防または発毛促進用組成物。

【請求項19】

前記組成物は、皮膚病変内（Ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌ）、頭皮の皮内（ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ）、または頭皮の皮下脂肪層（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）への局所投与用である、
請求項１７に記載の脱毛予防または発毛促進用組成物。

【請求項20】

前記組成物は、局所注射製剤、デポ注射（ｄｅｐｏｔ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、または皮膚移植剤（ｉｍｐｌａｎｔ）の剤形である、
請求項１７に記載の脱毛予防または発毛促進用組成物。

【請求項21】

前記組成物は、注射用水、等張化剤および懸濁化剤からなる群より選択された１つ以上をさらに含む、
請求項１７に記載の脱毛予防または発毛促進用組成物。

【請求項22】

前記注射用水は、食塩水、滅菌水、リンガー液、緩衝食塩水、アルブミン注射溶液、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール及びエタノールからなる群より選択された１つ以上である、
請求項２１に記載の脱毛予防または発毛促進用組成物。

【請求項23】

前記等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｇｅｎｔ）は、Ｄ－マンニトール（Ｄ－Ｍａｎｎｉｔｏｌ）、マルチトール（Ｍａｌｔｉｔｏｌ）、ソルビトール（Ｓｏｒｂｉｔｏｌ）、ラクチトール（Ｌａｃｔｉｔｏｌ）、キシリトール（Ｘｙｌｉｔｏｌ）及び塩化ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）からなる群より選択された１つ以上である、
請求項２１に記載の脱毛予防または発毛促進用組成物。

【請求項24】

前記懸濁化剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ｓｏｄｕｉｍ Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ポリソルベート８０（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０）、デンプン（ｓｔａｒｃｈ）、デンプン誘導体、多価アルコール、キトサン（ｃｈｉｔｏｓａｎ）、キトサン誘導体、セルロース（ｃｅｌｌｕ）、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）、ゼラチン（ｇｅｌａｔｉｎ）、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ、ＨＡ）、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、アルギン（ａｌｇｉｎ）、ペクチン（ｐｅｃｔｉｎ）、カラギーナン（ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）、コンドロイチン（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ）、コンドロイチン硫酸（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ ｓｕｌｆａｔｅ）、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）、デキストラン硫酸（ｄｅｘｔｒａｎ ｓｕｌｆａｔｅ）、ポリリジン（ｐｏｌｙｌｙｓｉｎｅ）、タイチン（ｔｉｔｉｎ）、フィブリン（ｆｉｂｒｉｎ）、アガロース（ａｇａｒｅｓ）、フルラン（ｆｌｕｒａｎ）およびキサンタンガム（ｘａｎｔｈａｎ ｇｕｍ）からなる群より選択された一つ以上である、
請求項２１に記載の脱毛予防または発毛促進用組成物。

【請求項25】

下記のステップを含む、シクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法：
ａ）シクロスポリン３位誘導体および生分解性高分子を溶媒に溶解して薬物－高分子分散相を製造するステップ；
ｂ）前記分散相を界面活性剤を含む連続相（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｐｈａｓｅ）と混合してエマルジョンを製造するステップ；と、
ｃ）調製した前記エマルジョンに焼入媒（ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ）を混合と撹拌して前記分散相の溶媒を除去し、シクロスポリン３位誘導体を担持した粒子を生成するステップ。

【請求項26】

前記生分解性高分子は、ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、ＰＬＧＡ）；あるいは、これを疎水性ブロックとする二重または三重ブロック共重合体である、
請求項２５に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項27】

前記分散相の溶媒は、ジクロロメタン（Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）、クロロホルム（Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ）、アセトニトリル（Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（Ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）、酢酸エチル（Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ、ＥＡ）、酢酸ブチル、ギ酸エチル（Ethyl formate）、酢酸イソプロピル（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌａｃｅｔａｔｅ）、ギ酸イソプロピル（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ ｆｏｒｍａｔｅ）、ジエチルエーテル（Ｄｉｅｔｈｙｌ ｅｔｈｅｒ）およびグリコフロール（Ｇｌｙｃｏｆｕｒｏｌ）からなる群より選択された１つ以上である、
請求項２５に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項28】

前記分散相の溶媒は、共溶媒としてメタノール、エタノール、アセトン、イソプロパノール、ジエチルエーテル、クロロホルム、酢酸エチル、ＤＭＳＯ及びアセトニトリルからなる群より選択された１つ以上をさらに含む、
請求項２５に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項29】

前記ａ）ステップの分散相は、放出制御剤をさらに含む、
請求項２５に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項30】

前記放出制御剤は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリル モノオレイン（ｇｌｙｃｅｒｙｌｍｏｎｏｏｌｅａｔｅ）、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリビニルアルコール、ポロキサマー、ポリエチレングリコール、パルミトステアリン酸グリセリル（ｇｌｙｃｅｒｙｌ ｐａｌｍｉｔｏｓｔｅａｒａｔｅ）、安息香酸ベンジル（ｂｅｎｚｙｌ ｂｅｎｚｏａｔｅ）、オレイン酸エチル（ｅｔｈｙｌ ｏｌｅａｔｅ）、α‐シクロデキストリン、β‐シクロデキストリン、γ‐シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルβ‐シクロデキストリン、ｔｗｅｅｎ ８０、ｓｐａｎ ２０、ＰＥＧ ４００、Ｍｒｉｊ ５２、Ｂｒｉｊ ５８、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ Ｐ１２４ およびＳＬＳからなる群より選択された１つ以上の親水性放出制御剤である、
請求項２９に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項31】

前記放出制御剤は、綿実油、レシチン、ヒマシ油、トウモロコシ油、ヒマワリ油、ゴマ油、大豆油およびピーナッツ油からなる群より選択された１つ以上の親油性放出制御剤である、
請求項２９に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項32】

前記連続相の界面活性剤は、ポリエチレングリコール、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、レシチン、ゼラチン、キトサン、オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）、ポリビニルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポロキサマー、スパン（ｓｐａｎ）、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ、Ｍｙｒｊ５２、Ｂｒｉｊ５８、ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｅｒｉｎｓ、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、エステルアミン、直鎖状ジアミンおよび脂肪族アミンからなる群より選択された１つ以上である、
請求項２５に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項33】

前記連続相の界面活性剤はポリビニルアルコールである、
請求項２５に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項34】

連続相の界面活性剤は、スパン（ｓｐａｎ）、ラブラゾール（ｌａｂｒａｓｏｌ）、レオドール（ｒｈｅｏｄｏｌ）ＭＯ－６０、グリセリルモノオレイン（ｇｌｙｃｅｒｙｌｍｏｎｏｏｌｅａｔｅ）およびトリアセチン（ｔｒｉａｃｅｔｉｎ）からなる群より選択された１つ以上である、
請求項２５に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項35】

前記連続相の界面活性剤は、連続相内に０．１～２０％（ｗ／ｖ）で含まれる、
請求項２５に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項36】

前記ｂ）ステップの分散相と連続相の混合比は、１：５～１：５０の体積比である、
請求項２５に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項37】

前記焼入媒は、水、メタノール、エタノール、プロパノール、酢酸エチル、ＰＶＡ（ポリビニルアルコール）、またはこれらの組み合わせである、
請求項２５に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項38】

前記焼入媒は、エマルジョンの１～１００倍を混合する、
請求項２５に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項39】

前記ｃ）ステップは、機械的撹拌、高圧乳化、フルイドベッド、静的モーター、超音波、メンブレン、ノズル噴射、ドリッピング（ｄｒｉｐｐｉｎｇ）から選択された乳化方法によって行われる、
請求項２５に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項40】

前記ｃ）ステップの後、
ｄ）得られた前記シクロスポリン３位誘導体担持粒子を分離するステップをさらに含む、
請求項２５に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項41】

前記ｄ）ステップの後、
ｅ）分離された粒子を真空乾燥または凍結乾燥するステップをさらに含む、
請求項４０に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【請求項42】

前記真空乾燥は３０～４０℃の温度で行われ、前記凍結乾燥は－３０～－４０℃で行われる、
請求項４１に記載のシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、環状ペプチドを含む放出制御型の局所注射用組成物およびその製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

人体の毛髪は成長期（ａｎａｇｅｎ）、退行期（ｃａｔａｇｅｎ）、休止期（ｔｅｌｏｇｅｎ）を経て成長、脱落する。脱毛症とは、成長期の毛髪が減少し、退行期または休止期の毛髪が増加して脱落する毛髪の数が異常に多くなることを意味する。脱毛の原因は男性ホルモン作用過剰、血液循環不良、皮脂分泌過剰、細菌感染、遺伝的要因、老化、ストレスなどが知られている。特に男性型脱毛症（ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｌｏｐｅｃｉａ、ＡＧＡ）は遺伝的要因とアンドロゲンによって引き起こされる脱毛である。

【0003】

免疫抑制剤であるシクロスポリンＡ（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ、ＣｓＡ）は、毛髪成長期を誘導し、退行期を阻害する効果がミノキシジルおよびフィナステリドより高いことが示されたが、全身に作用した時には高血圧、頭痛、免疫低下などの副作用がある。

【0004】

シクロスポリンＡの欠点を克服するために、シクロスポリンＡを高分子ベースの放出制御薬物送達システムに適用して局所投与する方法が研究された。高分子ベースの放出制御薬物送達システムは、薬物の放出速度を制御し、全身作用による薬物の毒性を減らし、治療効率を大幅に高めることができる。しかし、従来の高分子ベースの薬物送達システムにシクロスポリンＡを搭載すると、イニシアルバースト（ｉｎｉｔｉａｌ ｂｕｒｓｔ）が起こり、持続的で安定した放出が困難である。イニシアルバースト現象は、薬物のかなりの量が非常に短時間、例えば数時間または１～２日以内に放出することを意味する。

【0005】

したがって、局所投与したシクロスポリンＡファミリーの薬物が長期にわたって安定に放出することにより、全身副作用および投与回数を減らすことができ、脱毛の程度および種類に応じて薬物の放出速度が調節される製剤が必要である。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明は、シクロスポリン３位誘導体と生分解性高分子とを含む、放出制御型の局所注射用組成物と、それを用いた脱毛予防および発毛促進方法を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0007】

一態様は、シクロスポリン３位誘導体および生分解性高分子を含む放出制御型粒子を提供する。

【0008】

シクロスポリンＡ（Ｃ_６２Ｈ_１１１Ｎ_１１Ｏ_１２）は、１１個のアミノ酸が環構造を成している。そのうちの７つのアミノ酸はＮ－メチル化され、その外の４つのアミノ酸はＮ－メチル化されていない。Ｎ－メチル化されていない窒素原子に結合した水素は分子内のカルボニル基と水素結合し、これにより水分子との相互作用が困難であるため、シクロスポリンＡは水にほとんど溶解しない難溶性薬物である。シクロスポリンＡは分子量が非常に大きく（１，２０２，６３Ｄａ）、疎水性が強く、水溶解度（７．３μｇ／ｍｌ、３７℃）が低いため、経口投与時の生体利用率が３０％以下で吸収率が非常に低い問題点がある。

【0009】

シクロスポリンＡは、下記構造式１で表す。

前記式中、ＭｅＢｍｔはＮ－メチル－（４Ｒ）－４－［（Ｅ）－２－ブテンイル］－４－メチル－Ｌ－トレオニン（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－（４Ｒ）－４－［（Ｅ）－２－ｂｕｔｅｎｙｌ］－４－ｍｅｔｈｙｌ－Ｌ－ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）、ＡｂｕはＬ－アミノ酪酸（Ｌ－ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）、Ｓａｒはサルコシン（Ｓａｒｃｏｓｉｎｅ）、ＭｅＬｅｕはＮ－メチル－Ｌ－ロイシン（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｌ－ｌｅｕｃｉｎｅ）、ＶａｌはＬ－バリン（Ｌ－ｖａｌｉｎｅ）、ＡｌａはＬ－アラニン（Ｌ－ａｌａｎｉｎｅ）、ＤＡｌａはＤ－アラニン（ＤＡｌａｎｉｎｅ）、ＭｅＶａｌはＮ－メチル－Ｌ－バリン（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｌ－Ｖａｌｉｎｅ）である。

【0010】

前記シクロスポリンＡのアミノ酸の形態は特に言及しない限り、Ｌ－配向（Ｌ－ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ）であり、アミノ酸残基番号は構造式１で示すように、ＭｅＢｍｔを１番とし、時計回りの順に最後のＭｅＶａｌ（Ｎ－メチル－Ｌ－バリン（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｌ－Ｖａｌｉｎｅ））を番号１１とした。シクロスポリンＡおよびその誘導体の命名法は、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、１９８７；７０を参照する。

【0011】

前記シクロスポリン３位誘導体は、３位残基のサルコシンが他の残基で置換された誘導体を意味する。例えば、シクロスポリンＡの３位残基であるサルコシンが［２－メチルチオ－サルコシン^３］で置換された場合、［２－メチルチオ－サルコシン^３］シクロスポリンＡ（［２－ｍｅｔｈｙｌｔｈｉｏ－Ｓａｒ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）と命名する。本明細書において、［Ｄ－２－メチルチオ－サルコシン^３］シクロスポリンＡ（［Ｄ－２－ｍｅｔｈｙｌｔｈｉｏ－Ｓａｒ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）はＯＮＤ－１と呼び、化学式はＣ_６３Ｈ_１１３Ｎ_１１Ｏ_１２Ｓ、ＭＷは１２４８．７０である。

【0012】

前記シクロスポリン３位誘導体は、下記化学式１で表される。

【0013】

前記Ｃは、－Ｎ（Ｒ_１）－ＣＨ（Ｒ_２）－Ｃ（＝Ｏ）－で表されるアミノ酸である。

【0014】

前記Ｒ_１は、水素またはメチル基であり得る。

【0015】

前記Ｒ_２は、水素；またはＣ１～Ｃ６の直鎖または分岐鎖のアルキル基（ａｌｋｙｌ）、アルケニル基（ａｌｋｅｎｙｌ）、アルキニル基（ａｌｋｙｎｙｌ）；あるいは、アリール基（ａｒｙｌ）であり得る。前記アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、及びアリール基の各炭素は、アミノ、ヒドロキシ、ハロ、ハロアルキル、エステル、アルコキシ、シアノ、ナイトロ、アルキルアミノ、及びジアルキルアミノからなる群より選択された１つないし３つの置換基で置換または非置換される。前記アリール基はフェニル基であり得る。

【0016】

前記Ｒ_２はＸ－Ｒ’であってもよく、Ｘは酸素（Ｏ）または硫黄（Ｓ）であってもよく、Ｒ’は水素またはＣ１～Ｃ６の直鎖または分岐鎖のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、またはアリール基であり得る。前記アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基において各炭素は、アミノ、ヒドロキシ、ハロ、ハロアルキル、エステル、アルコキシ、シアノ、ナイトロ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノからなる群より選択された１つないし３つの置換基で置換または非置換される。

【0017】

前記Ｘは硫黄であってもよく、Ｒ’はメチル基であるか、またはアミノ、ヒドロキシ、ハロ、ハロアルキル、エステル、アルコキシ、シアノ、ナイトロ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノからなる群より選択された１つないし３つの置換基で置換されたメチル基であり得る。

【0018】

前記Ｃは、Ｄアミノ酸またはＬアミノ酸である。

【0019】

前記シクロスポリン３位誘導体は、［２－メチルチオ－サルコシン^３］シクロスポリンＡ（［２－（４－ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅｔｈｉｏ）Ｓａｒ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）；［２－ジメチルアミノ－エチルチオ－サルコシン^３］シクロスポリンＡ；［Ｎ－メチル－アミノ酪酸^３］シクロスポリンＡ；［Ｎ－メチル－ノルバリン^３］シクロスポリンＡ；［２－（メチルアミノ）－ヘキサ－４－イノイル^３］シクロスポリンＡ；［２－（メチルアミノ）－ペント－４－イノイル^３］シクロスポリンＡ；［Ｎ－メチル－Ｏ－プロフェニル－セリン^３］シクロスポリンＡ；［Ｎ－メチル－セリン^３］シクロスポリンＡ；［メチルアラニン^３］シクロスポリンＡ；［Ｎ－メチル－Ｄ－ノルバリン^３］シクロスポリンＡ、またはこれらの組み合わせであり得る。

【0020】

前記シクロスポリン３位誘導体は非晶形（ａｍｏｒｐｈｏｕｓ）であり得る。薬物の物理的状態は結晶形、非結晶形、またはその複合形態で存在し、製剤の薬物放出速度に影響を及ぼす重要な性質の一つである。後述する実験例において、シクロスポリン３位誘導体は非結晶形であり、高分子との相互作用が優秀であることを確認した。

【0021】

「放出制御型粒子」という用語は、シクロスポリン３位誘導体と生分解性高分子の比率、製造条件、生分解性高分子の物性などを調節し、粒子内の薬物の放出量または放出時間が調節される粒子を意味する。前記放出制御型粒子は、シクロスポリン３位誘導体薬物と生分解性高分子との相互作用により、イニシアルバーストのない優れた持続放出が達成される。前記相互作用は、ファンデルワールス力または水素結合などの分子間力であり得、これはフーリエ変換赤外分光法（ＦＴ－ＩＲ）または示差走査熱量計（ＤＳＣ）によって確認することができる。後述する実験例において、前記粒子はシクロスポリン３位誘導体とＰＬＧＡが結合してアミド１バンドである１６２２ｃｍ^－１ピーク（アミドＣ＝Ｏ）とＰＬＧＡのエステル結合の１７４６ｃｍ^－１ピーク（エステルＣ＝Ｏ）のシフトが起こり、シクロスポリン３位誘導体の固有の融点またはガラス転移温度が変化した。しかし、シクロスポリン３位誘導体と高分子を単に物理的に混合した混合物はこのような変化がなかった。これは、放出制御型粒子内のシクロスポリン３位誘導体の薬物と高分子がファンデルワールス力または水素結合などの分子間力によって強く結合したことを意味する。

【0022】

前記生分解性高分子は、合成高分子または天然高分子である。

【0023】

前記合成高分子は、ポリエチレン（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ、ＰＥＡ）、ポリエチレングリコール（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ、ＰＥＧ）、ポリカプロラクトン（Ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ、ＰＣＬ）、ポリアルキルカーボネート（Ｐｏｌｙａｌｋｙｌｃａｒｂｏｎａｔｅ）、ポリアミノ酸（Ｐｏｌｙａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）、ポリヒドロキシ酪酸（Ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）、ポリオルトエステル（Ｐｏｌｙｏｒｔｈｏｅｓｔｅｒ）、ポリ酸無水物（Ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、プルロニック（Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ）ｐｏｌｙ（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ）ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、ポリ乳酸（Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ、ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（Ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ、ＰＧＡ）、ポリブチレンサクシネート（Ｐｏｌｙｂｕｔｙｌｅｎｅ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ、ＰＢＳ）、ポリ（３－ヒドロキシブチレート－ｃｏ－３－ヒドロキシバレレート（Ｐｏｌｙ（３－ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ－ｃｏ－３－ｈｙｄｒｏｘｙｖａｌｅｒａｔｅ、ＰＨＢＶ）、ポリブチレンテレフタレート（Ｐｏｌｙｂｕｔｙｌｅｎｅ ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌａｔｅ、ＰＢＴ）、ポリトリメチレンテレフタレート（Ｐｏｌｙｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅｎｅ ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌａｔｅ、ＰＴＴ）、ポリエチレンナフタレン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｎａｐｈｔｈａｌａｔｅ、ＰＥＮ）、ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ｐｏｌｙ（Ｄ，Ｌ－ｌａｃｔｉｃ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ、ＰＬＧＡ））、（ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸）－グルコース（Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ－ｇｌｕｃｏｓｅ、ＰＬＧＡ－ｇｌｕｃｏｓｅ）およびメトキシポリエチレングリコール－（ポリカプロラクトン－ｃｏ－ポリ乳酸）（ＭＰＥＧ－（ＰＣＬ－ｃｏ－ＰＬＡ）からなる群より選択された１つ以上であり得る。

【0024】

前記合成高分子は、ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ、ＰＬＧＡ）；または、これを疎水性ブロックとする二重または三重ブロック共重合体であり得る。ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）は、体内で正常代謝過程であるクエン酸回路（ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ ｃｙｃｌｅ）によって人体無害な水と二酸化炭素に分解する優れた生体適合性を有している。

【0025】

前記生分解性高分子は、脱毛疾患治療剤が封入された球状粒子を形成し得る。

【0026】

前記生分解性高分子の種類および組成を変えると、体内での分解速度が変化し薬物放出速度を制御することができる。例えば、ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）は、ポリ乳酸（ＰＬＡ）とポリグリコール酸（ＰＧＡ）の成分比によって人体内での分解速度が変化するので、成分比を調節して薬物放出速度を制御することができる。グリコール酸は乳酸より疎水性が低いため、ＰＬＧＡ共重合体のグリコール酸の比が増加すると高分子の加水分解速度が増加し、薬物放出速度が速くなる。

【0027】

前記ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）は、乳酸モノマー（ＬＡ）とグリコール酸モノマー（ＧＡ）のモル比が９０：１０～４０：６０または８５：１５～５０：５０であり、例えば、５０：５０、６５：３５、７５：２５、または８５：１５であるが、これらに限定されない。

【0028】

前記生分解性高分子は、特定のＬＡ：ＧＡモル比を有する単一のポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）であっても良く、それぞれ異なるＬＡ：ＧＡモル比を有するポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）の混合物であっても良い。

【0029】

前記生分解性高分子は、ＬＡ：ＧＡのモル比が５０：５０のＰＬＧＡとＬＡ：ＧＡのモル比が７５：２５のＰＬＧＡとの混合；ＬＡ：ＧＡのモル比が５０：５０のＰＬＧＡとＬＡ：ＧＡのモル比が８５：１５のＰＬＧＡの混合；ＬＡ：ＧＡのモル比が７５：２５のＰＬＧＡとＬＡ：ＧＡのモル比が８５：１５のＰＬＧＡの混合；あるいは、ＬＡ：ＧＡのモル比が５０：５０のＰＬＧＡ、ＬＡ：ＧＡのモル比が７５：２５のＰＬＧＡ、およびＬＡ：ＧＡのモル比が８５：１５のＰＬＧＡの混合であり得る。

【0030】

前記ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）は、末端基（ｅｎｄ ｇｒｏｕｐ）がエステルまたはカルボン酸であり得る。

【0031】

前記ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）は、分子量が４，０００Ｄａ～２４０，０００Ｄａ、４，０００Ｄａ～７５，０００Ｄａ、４，０００Ｄａ～１５，０００Ｄａ、７，０００Ｄａ～１７，０００Ｄａ、または５０，０００Ｄａ～７５，０００Ｄａであり得る。

【0032】

前記粒子の薬物放出速度は、生分解性高分子の分子量に応じて変わり得る。低分子量のＰＬＧＡは多孔質粒子を形成し、高分子分解速度、薬物放出速度が速い。高分子量のＰＬＧＡは高密度粒子を形成し、Ｓ字型の遅い放出プロファイルを有し得る。薬物の製造に使用されるＰＬＧＡの分子量および濃度を高めると、薬物の高い封入率、大きな粒径および遅い薬物放出速度を達成することができる。前記末端基および分子量に加えて、結晶度およびガラス転移温度（Ｔｇ）などの他の物理的特性も分解速度に間接的に影響を与える。

【0033】

前記ＰＬＧＡは、鏡像異性体（ｐｏｌｙ（Ｄ－ｌａｃｔｉｃ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ、またはｐｏｌｙ（Ｌ－ｌａｃｔｉｃ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）のいずれか、またはラセミ（ｐｏｌｙ（Ｄ，Ｌ－ｌａｃｔｉｃ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ））であり得る。

【0034】

前記ＰＬＧＡは、ラクチドとグリコリドのモル比、末端基、分子量に応じて様々なＰＬＧＡを用いることができる。前記ＰＬＧＡは、例えば、ＰＣＡＳ社のＥｘｐａｎｓｏｒｂ製品群の１０Ｐ００１（５０：５０）；１０Ｐ００２（７５：２５）；１０Ｐ００３（７５：２５）；１０Ｐ００７（９０：１０）；１０Ｐ００８（８５：１５）；１０Ｐ００９（８５：１５Ｅ）；１０Ｐ０１０（６５：３５Ｅ）；１０Ｐ０１６（５０：５０Ｅ）；１０Ｐ０１７（５０：５０）；１０Ｐ０１９（５０：５０Ｅ）；１０Ｐ０２０（８５：１５）；１０Ｐ０２２（５０：５０）；１０Ｐ０２３（９０：１０）；１０Ｐ０２４（５０：５０）；１０Ｐ０２５（９０：１０）、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｅｖｏｎｉｋ Ｒｏｈｍ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ社のＲｅｓｏｍｅｒ製品群のＲＧ５０２（５０：５０）；ＲＧ５０２Ｈ（５０：５０）；ＲＧ５０３（５０：５０）；ＲＧ５０３Ｈ（５０：５０）；ＲＧ５０４（５０：５０）；ＲＧ５０４Ｈ（５０：５０）；ＲＧ５０５（５０：５０）；ＲＧ６５３Ｈ（６５：３５）；ＲＧ７５２Ｈ（７５：２５）；ＲＧ７５６Ｓ（７５：２５）、Ｐｕｒａｃ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ社のＰｕｒａｓｏｒｂ製品群のＰＤＬＧ７５０２（７５：２５）；ＰＤＬＧ７５０２Ａ（７５：２５）；ＰＤＬＧ７５０７（７５：２５）；ＰＤＬＧ５００２（５０：５０）；ＰＤＬＧ５００２Ａ（５０：５０）；ＰＤＬＧ５００４（５０：５０）；ＰＤＬＧ５００４Ａ（５０：５０）；ＰＤＬＧ５０１０（５０：５０）、Ｗａｋｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社のＰＬＧＡ－７５０５（７５：２５）；ＰＬＧＡ－７５１０（７５：２５）；ＰＬＧＡ－７５１５（７５：２５）；ＰＬＧＡ－７５２０（７５：２５）；ＰＬＧＡ－５００５（５０：５０）；ＰＬＧＡ－５０１０（５０：５０）；ＰＬＧＡ－５０１５（５０：５０）があるが、特に限定されない。

【0035】

前記ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）は、ポリリシン（Ｐｏｌｙ Ｌ－Ｌｙｓｉｎｅ、ＰＬＬ）が導入されたカチオン性グラフトコ共重合体であり得る。ＰＬＧＡにＰＬＬが導入またはグラフトされると、カチオン性が増加して細胞膜への付着性が増加し、これは本発明が属する技術分野の当業者によく知られている。

【0036】

前記天然高分子は、カルボキシメチルセルロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ、ＣＭＣ）、アルギン（ａｌｇｉｎ）、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、アルギネート（ａｌｇｉｎａｔｅ）、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、ポリペプチド、タンパク質、ゼラチン、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）、アルブミン（ａｌｂｕｍｉｎ）、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）、デンプン（ｓｔａｒｃｈ）、カゼイン、キチン誘導体、キトサン（ｃｈｉｔｏｓａｎ）および小腸粘膜下組織（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｕｂｍｕｃｏｓａ、ＳＩＳ）からなる群より選択された１つ以上であり得る。

【0037】

前記シクロスポリン３位誘導体と生分解性高分子の重量比は、５：９５～９０：１０、１０：９０～９０：１０、２０：８０～８０：２０、または２０：８０～７０：３０であってよく、一実施形態において、１０：９０～６０：４０または２０：８０～６０：４０であるが、これらに限定されない。前記重量比において、イニシアルバースト（ｉｎｉｔｉａｌ ｂｕｒｓｔ）現象が抑制され、薬物が１週間から４週間以上の期間にわたって安定して放出され、副作用が減少する。

【0038】

本発明における「粒子」は、ナノサイズまたはマイクロサイズの粒子を意味する。本明細書における粒子は、マイクロスフェア（ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ）、ナノスフェア（ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅ）、ナノ粒子（ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ）、マイクロ粒子（ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ）と互いに交換可能に使用される。前記粒子の平均直径は、０．０１～３００μｍ、０．１～２００μｍ、０．１～１００μｍ、または０．１～６０μｍであり得る。

【0039】

前記粒子の平均ゼータ電位（Ｚｅｔａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）は、正または負の値である。一実施形態によれば、前記粒子の平均ゼータ電位（Ｚｅｔａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）は、±２ｍＶ以上、±１０ｍＶ以上、または±３０ｍＶ以上であり得る。前記粒子の平均ゼータ電位は、＋２ｍＶ以上－２ｍＶ以下、＋１０ｍＶ以上－１０ｍＶ以下、または＋３０ｍＶ以上－３０ｍＶ以下であり得る。「ゼータ電位」（Ｚｅｔａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）とは、粒子周辺の電気二重層の厚さを間接的に計算した値であり、粒子間で反発力や引力に基づく正電荷密度差に由来する電気力学的な電位差をいい、電気二重層が厚いほど粒子間に静電気的斥力が発生し、互いに凝集しなくなる。前記粒子の平均ゼータ電位が前記範囲であると、粒子間の凝集が抑制されて分散液の安定性が確保される。

【0040】

前記粒子の表面は滑らかな球状であり得る。粒子の表面が滑らかであることは、表面に細孔がないか非常に少ないことを意味する。粒子の表面が滑らかであれば、細孔による薬物拡散およびイニシアルバーストを抑制され、生分解性高分子の分解によってのみ薬物放出が行われる。したがって、粒子表面が滑らかであることは、放出制御剤として適切な形態学的特性を有することを意味する。後述する実験例によれば、本発明で製造したＰＬＧＡ放出制御型組成物に含まれた粒子は表面が滑らかな球状であるため、イニシアルバーストが抑制され放出制御が優秀である。

【0041】

前記粒子には、シクロスポリン３位誘導体が５～６０％（ｗ／ｗ）、または１５～４０％（ｗ／ｗ）含まれ得る。前記シクロスポリン３位誘導体の含量において、薬物のイニシアルバーストが抑制され、意図した期間中に安定した放出が可能である。

【0042】

他の実施形態は、前記放出制御型粒子を含む脱毛防止または発毛促進用組成物を提供する。

【0043】

前記組成物は、局所投与用の注射製剤であり得る。

【0044】

前記組成物は、脱毛治療または予防用組成物であり得る。

【0045】

前記組成物は、局所投与時にシクロスポリン３位誘導体が１週間以上持続的に放出され、例えば、１週間～４週間、２週間～４週間、または３週間～４週間持続的に放出される。

【0046】

脱毛が起こった部位に薬物を局所投与して十分な薬効を示すためには、薬物が全身に拡散しないことが重要である。後述する実験例によれば、本発明の組成物は局所投与時の皮膚残存量が高かったため、脱毛予防または発毛促進効果に優れる。

【0047】

前記脱毛は、男性型脱毛（ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｌｏｐｅｃｉａ、ＡＧＡ）、女性型脱毛（ｆｅｍａｌｅ－ｐａｔｔｅｒｎ ｈａｉｒ ｌｏｓｓ）、円形脱毛（ａｌｏｐｅｃｉａ ａｒｅａｔａ）、休止期脱毛（ｔｅｌｏｇｅｎ ｅｆｆｌｕｖｉｕｍ）および瘢痕性脱毛症（ｃｉｃａｔｒｉｃｉａｌ ａｌｏｐｅｃｉａ）からなる群より選択されたいずれかであり得る。

【0048】

「予防」という用語は、本発明による組成物の投与によって疾患または異常症状が抑制または遅延される全ての行為を意味する。

【0049】

前記組成物は、局所皮膚病変内（Ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌ）に注射で投与することができる。具体的に、発毛を促進しようとする頭皮の皮内（Ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ）またはメソセラピー（ｍｅｓｏｔｈｅｒａｐｙ）で注射したり、あるいは毛包の近くの皮下脂肪層（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）に注射することができる。前記投与は、毛包の近くに真皮投与または皮下投与することであり得る。

【0050】

前記組成物はメソセラピー投与用であり得る。「メソセラピー（ｍｅｓｏｔｈｅｒａｐｙ）」は、目標部位に直接薬物を注入する注射療法であり、皮膚の中間層（皮膚真皮層）に微細な注射器で少量の薬物を注入することで効果を高め、持続期間を増やしながらも副作用を最小化する注射治療を意味する。

【0051】

前記組成物は、注射用水、等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｇｅｎｔ）および懸濁化剤（ｓｕｓｐｅｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）からなる群より選択された１つ以上をさらに含み得る。一実施形態によれば、本発明における局所注射用の放出制御型組成物は、シクロスポリン３位誘導体を含むＰＬＧＡ粒子が均一に懸濁された懸濁液である。前記懸濁液は、前記組成物と注射用水、等張化剤および懸濁化剤とからなる群より選択された１つ以上を混合して調製することができる。

【0052】

前記注射用水は、例えば、食塩水、滅菌水、リンガー液、緩衝食塩水、アルブミン注射用溶液、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロールおよびエタノールからなる群より選択された１つ以上であるが、これらに限定されない。

【0053】

前記等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｇｅｎｔ）は、例えば、Ｄ－マンニトール（Ｄ－Ｍａｎｎｉｔｏｌ）、マルチトール（Ｍａｌｔｉｔｏｌ）、ソルビトール（Ｓｏｒｂｉｔｏｌ）、ラクチトール（Ｌａｃｔｉｔｏｌ）、キシリトール（Ｘｙｌｉｔｏｌ）及び塩化ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）からなる群より選択された１つ以上であるが、これらに限定されない。

【0054】

前記懸濁化剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ｓｏｄｕｉｍ Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ポリソルベート８０（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０）、デンプン（ｓｔａｒｃｈ）、デンプン誘導体、多価アルコール類、キトサン（ｃｈｉｔｏｓａｎ）、キトサン誘導体、セルロース（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）、ゼラチン（ｇｅｌａｔｉｎ）、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ、ＨＡ）、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、アルギン（ａｌｇｉｎ）、ペクチン（ｐｅｃｔｉｎ）、カラギーナン（ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）、コンドロイチン（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ）、コンドロイチン硫酸（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ ｓｕｌｆａｔｅ）、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）、デキストラン硫酸（ｄｅｘｔｒａｎ ｓｕｌｆａｔｅ）、ポリリジン（ｐｏｌｙｌｙｓｉｎｅ）、タイチン（ｔｉｔｉｎ）、フィブリン（ｆｉｂｒｉｎ）、アガロース（ａｇａｒｅｓ）、フルラン（ｆｌｕｒａｎ）およびキサンタンガム（ｘａｎｔｈａｎ ｇｕｍ）からなる群より選択された１つ以上であるが、これらに限定されない。

【0055】

前記組成物は、局所注射剤型、デポ注射（Ｄｅｐｏｔ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、または皮膚移植（ｉｍｐｌａｎｔ）用として製剤化されたものであり得る。

【0056】

他の実施形態は、下記のステップを含むシクロスポリン３位誘導体を担持した放出制御型粒子の製造方法を提供する。

【0057】

ａ）シクロスポリン３位誘導体および生分解性高分子を溶媒に溶解して薬物－高分子分散相を製造するステップ；

【0058】

ｂ）前記分散相を界面活性剤（乳化剤）を含む連続相（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｐｈａｓｅ）と混合してエマルジョンを製造するステップ；と

【0059】

ｃ）調製した前記エマルジョンに焼入媒（ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ）を混合と撹拌して前記分散相の溶媒を除去し、シクロスポリン３位誘導体を担持した粒子を生成するステップ。

【0060】

前記製造方法において、シクロスポリン３位誘導体および生分解性高分子に関する内容は前記と同様である。

【0061】

前記ａ）ステップの溶媒は分散媒（ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ）であり得る。前記分散媒は、生分解性高分子を溶解できるものであれば特に限定されない。一実施形態によれば、分散相の溶媒は低沸点の有機溶媒を使用することができ、沸点は２５～８５℃、２５～７０℃、２５～６０℃、または２５～５０℃であり得る。有機溶媒の沸点が前記範囲である場合、粒子生成後に分散相の溶媒の蒸発および粒子乾燥において有利である。

【0062】

前記分散媒は、例えば、ジクロロメタン（Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）、クロロホルム（Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ）、アセトニトリル（Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ、ＡＣＮ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（Ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）、酢酸エチル（Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ、ＥＡ）、酢酸ブチル（Ｂｕｔｙｌ ａｃｅｔａｔｅ）、ギ酸エチル（Ｅｔｈｙｌ ｆｏｒｍａｔｅ）、酢酸イソプロピル（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌａｃｅｔａｔｅ）、ギ酸イソプロピル（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ ｆｏｒｍａｔｅ）、ジエチルエーテル（Ｄｉｅｔｈｙｌ ｅｔｈｅｒ）およびグリコフロール（Ｇｌｙｃｏｆｕｒｏｌ）からなる群より選択された１つ以上であるが、これらに限定されない。

【0063】

前記ａ）ステップにおいて、前記溶媒は共溶媒をさらに含み得る。前記共溶媒は、薬物放出のパラメータおよび封入率を改善することができる。エタノールを共溶媒として使用する場合、エタノール濃度は疎水性薬物の放出プロファイルに影響を及ぼし得る。例えば、エタノール濃度が増加するにつれて界面張力（Ｉｎｔｅｒｆａｃｉａｌ ｔｅｎｓｉｏｎ、ＩＦＴ）が減少し、薬物がＰＬＧＡ粒子の中心部から浸出して微細粒子の表面で結晶化することが示された。前記共溶媒は生分解性高分子を溶解することができ、前記分散媒と混合が可能であり、薬物の溶解度が低く、沸点が分散媒より低いものを選択することができる。例えば、共溶媒は、メタノール、エタノール、アセトン、イソプロパノール、ジエチルエーテル、クロロホルム、酢酸エチル、ＤＭＳＯおよびアセトニトリルからなる群より選択された１つ以上であるが、これらに限定されない。

【0064】

前記製造方法において、ａ）ステップの分散相は、放出制御剤をさらに含むことができる。前記放出制御剤は、微粒子が水溶液に接触して膨潤するのを防止し、微粒子が膨潤して粒子が崩壊した後でも薬物の放出を遅らせる役割を果たすことができる。前記放出制御剤は親水性放出制御剤であってもよく、例えば、レチノイン酸、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、モノオレイン（ｇｌｙｃｅｒｙｌｍｏｎｏｏｌｅａｔｅ）、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリビニルアルコール、ポロキサマー、ポリエチレングリコール、パルミトステアリン酸グリセリル（ｇｌｙｃｅｒｙｌ ｐａｌｍｉｔｏｓｔｅａｒａｔｅ）、安息香酸ベンジル（ｂｅｎｚｙｌ ｂｅｎｚｏａｔｅ）、オレイン酸エチル（ｅｔｈｙｌ ｏｌｅａｔｅ）、α‐シクロデキストリン、β‐シクロデキストリン、γ‐シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルβ‐シクロデキストリン、ｔｗｅｅｎ８０、ｓｐａｎ２０、ＰＥＧ４００、Ｍｒｉｊ５２、Ｂｒｉｊ５８、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ Ｐ１からなる群より選択された１つ以上であり得る。

【0065】

前記放出制御剤は植物油であり得る。例えば、レシチン、ヒマシ油（ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ）、ＭＣＴ油（Ｍｅｄｉｕｍ Ｃｈｉｎ Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ ｏｉｌ）、トウモロコシ油（ｃｏｒｎ ｏｉｌ）、綿実油（ｃｏｔｔｏｎ ｓｅｅｄ ｏｉｌ）、ゴマ油（ｓｅｓａｍｅ ｏｉｌ）、大豆油（ｓｏｙａ ｏｉｌ）、シナモン油（ｃｉｎｎａｍｏｎ ｏｉｌ）、アーモンド油（ａｌｍｏｎｄ ｏｉｌ）、落花生油（ａｒａｃｈｉｓ ｏｉｌ）、亜麻仁油（ｌｉｎｓｅｅｄ ｏｉｌ）、オリーブ油（ｏｌｉｖｅ ｏｉｌ）、カラウェー油（ｃａｒａｗａｙ ｏｉｌ）、ロスマリン油（ｒｏｓｅｍａｒｙ ｏｉｌ）、ペパーミント油（ｐｅｐｐｅｒｍｉｎｔ ｏｉｌ）、ヒマワリ油（ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ ｏｉｌ）、ユーカリ油（ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ ｏｉｌ）、ラベンダー油（ｌａｖｅｎｄｅｒ ｏｉｌ）、ヤシ油（ｃｏｃｏｎｕｔ ｏｉｌ）、オレンジ油（ｏｒａｎｇｅ ｏｉｌ）、アニス油（ａｎｉｓｅ ｏｉｌ）、チョウジ油、濃縮ボリジ油（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ ｂｏｒａｇｅ ｏｉｌ）、セフォール８６０（ＳＥＦＯＬ ８６０）、ミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）、エーティエムオス３００（ＡＴＭＯＳ ３００）、ジーエムオルフィック８０（ＧＭＯｒｐｈｉｃ ８０）、ＤＬ－ａ－酢酸トコフェロール（ＤＬ－ａ－Ｔｏｃｏｐｈｅｒｙｌ ａｃｅｔａｔｅ）、ラブラフィル（Ｌａｂｒａｆｉｌ）、インビトール（Ｉｍｗｉｔｏｒ）７４２、マイバセット（Ｍｙｖａｃｅｔ）、ミバプレックス（Ｍｙｖａｐｌｅｘ）、ミベロール（Ｍｙｖｅｒｏｌ）、ジェネロール（Ｇｅｎｅｒｏｌ）、ミリトール（Ｍｙｒｉｔｏｌ）、キャプテックス（Ｃａｐｔｅｘ）、キャップムル（Ｃａｐｍｕｌ）、ネオビー（Ｎｅｏｂｅｅ）Ｍ５、マゾール（Ｍａｚｏｌ）１４００、マイシン（Ｍａｉｓｉｎｅ）３５－１、クロセンシャルＧＬＯ Ｅ５０（Ｃｒｏｓｓｅｎｔｉａｌ ＧＬＯ Ｅ５０；ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ ｂｏｒａｇｅ ｏｉｌ ｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ）、ニコールＥＯＯ（Ｎｉｋｋｏｌ ＥＯＯ；ｅｔｈｙｌ ｏｌｉｖｅ ｏｌｅａｔｅ）、オレイン酸エチル（ｅｔｈｙｌ ｏｌｅａｔｅ）、オレイン酸、またはリノール酸、リノール酸エチル（Ｅｔｈｙｌ ｌｉｎｏｌｅａｔｅ）、パルミチン酸イソプロピル（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、ミリスチン酸イソプロピル（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｍｙｒｉｓｔａｔｅ）、オレイン酸ポリグリセリル（ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｙｌ ｏｌｅａｔｅ）、パルミトステアリン酸ポリグリセリル（ｇｌｙｃｅｒｙｌ ｐａｌｍｉｔｏｓｔｅａｒａｔｅ）、オレイン酸ジグリセリル（ｄｉｇｌｙｃｅｒｙｌ ｍｏｎｏｏｌｅａｔｅ）、オレイン酸テトラグリセリル（ｔｅｔｒａｇｌｙｃｅｒｙｌ ｍｏｎｏｏｌｅａｔｅ）、ヘキサグリン（Ｈｅｘａｇｌｙｎ）、デカグリン（Ｄｅｃａｇｌｙｎ）があるが、これらに限定されない。

【0066】

前記放出制御剤は動物性油およびその誘導体であり得る。例えば、スクアレン（ｓｑｕａｌｅｎｅ）、水素化スクアレン（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ ｓｑｕａｌｅｎｅ）、オメガ－３脂肪酸（ＥＦＡｓ；Ｏｍｅｇａ－３ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ）、エイコサペンタエン酸（ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）、ドコサヘキサエン酸（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）と、エチルエステル化形態の油でクロダ社（Ｃｒｏｄａ Ｃｏ．）のインクロメガ（Ｉｎｃｒｏｍｅｇａ）があるが、これらに限定されない。

【0067】

前記連続相の界面活性剤（または乳化剤）は、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤およびカチオン性界面活性剤からなる群より選択された１つ以上であり得る。

【0068】

前記界面活性剤は、例えば、高分子界面活性剤として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、メチルセルロース（Ｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ゼラチン、キトサン、オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）；親水性の低分子界面活性剤として、レシチン（ｌｅｃｉｔｈｉｎ）、Ｔｗｅｅｎ（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｓｏｒｂｉｔａｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｅｓｔｅｒ）、ポロキサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ、ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｅｒｉｎｓ、ラウリル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｌａｕｒｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ、ＳＬＳ）、ステアリン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｓｔｅａｒａｔｅ）、エステルアミン、エチレンジアミン（Ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｄｉａｍｉｎｅ）、Ｍｙｒｊ５２、Ｂｒｉｊ５８、脂肪族アミン（ｆａｔｔｙ ａｍｉｎｅ）；親油性低分子界面活性剤として、スパン（ｓｐａｎ）、ラブラゾール（ｌａｂｒａｓｏｌ）、レオドール（ｒｈｅｏｄｏｌ）ＭＯ－６０、モノオレイン（ｇｌｙｃｅｒｙｌｍｏｎｏｏｌｅａｔｅ）およびトリアセチン（ｔｒｉａｃｅｔｉｎ）からなる群より選択される１つ以上であり得る。一実施形態によればポリビニルアルコールであるが、これらに限定されない。

【0069】

前記界面活性剤は、連続相中に０．１～２０％（ｗ／ｖ）、０．１～１０％（ｗ／ｖ）、または１～３％（ｗ／ｖ）で含まれて、生分解性高分子溶液の安定したエマルジョン形成を助ける範囲で適切に調整することができる。

【0070】

前記ｂ）ステップの分散相と連続相は、１：５～１：５０の体積比、または１：１０～１：２５の体積比で混合され得る。前記分散相と連続相の体積比が前記範囲である場合、均質化した後にＯ／Ｗエマルジョン中の微小液滴間の間隔が適切であり、均一なサイズの微粒子形成に有利である。

【0071】

前記ｃ）ステップは、エマルジョンを大量の焼入媒と混合および撹拌することによって、分散媒および共溶媒が連続相へ拡散および蒸発され、一次的に高分子硬化が誘導され、薬物粒子が粒子内に封入される。すなわち、前記Ｏ／Ｗエマルジョン中に分散した微小液滴中の分散相溶媒（分散媒（有機溶媒）または共溶媒）が連続相に急激に拡散および抽出されながら、生分解性高分子が急速に固化して薬物担持粒子が形成される。

【0072】

前記焼入媒は、水、メタノール、エタノール、プロパノール、酢酸エチル、ＰＶＡ（ポリビニルアルコール）、またはそれらの組み合わせであり得る。焼入媒は、連続相と同一成分の溶液であり得る。

【0073】

前記エマルジョンと混合する焼入媒の量は、例えば、エマルジョンまたは連続相の１～１００倍、２～１００倍、３～１００倍、４～１００倍、５～１００倍、６～１００倍、７～１００倍、８～１００倍、９～１００倍、１０～１００倍、２０～１００倍、３０～１００倍、１～５０倍、２～５０倍、３～５０倍、４～５０倍、５～５０倍、６～５０倍、７～５０倍、８～５０倍、９～５０倍、１０～５０倍、２０～５０倍、３０～５０倍、１～２０倍、２～２０倍、３～２０倍、４～２０倍、５～２０倍、６～２０倍、７～２０倍、８～２０倍、９～２０倍、１０～２０倍であるが、これらに限定されない。

【0074】

前記ｃ）ステップは、溶媒抽出法、溶媒蒸発法、噴霧乾燥法などがあり、製造方法によって粒子のサイズ、薬物放出特性、薬物の封入率などの薬物送達用組成物の特性に影響を及ぼすので、必要に応じて適切な製造方法を選択する。例えば、前記ｃ）ステップは、溶媒蒸発法、相分離法、自己修復カプセル化法と、機械的工程：膜乳化法、噴霧乾燥法、超臨界流体法、マイクロ流体法で実施することができる。前記ｃ）ステップは、機械的撹拌、高圧乳化、フルイドベッド、静的モーター、超音波、メンブレン、ノズル噴射またはドリッピングなどの乳化方法で実施することができる。前記ｃ）ステップでは、微小滴が互いに凝集しないように磁力式撹拌機で強く撹拌して実施することができる。

【0075】

前記ｃ）ステップは４～１２時間実施することができるが、粒子凝集の抑制と薬物の適切な封入ができるように、実施時間を調整することができる。

【0076】

一実施形態において、前記製造方法は、ｃ）ステップの後に、ｄ）生成された前記シクロスポリン３位誘導体を担持した粒子を分離するステップをさらに備え得る。一実施形態において、前記ｄ）ステップは、ｃ）ステップで生成された薬物担持粒子を遠心分離することである。

【0077】

前記製造方法は、ｄ）ステップの後に、ｅ）分離された前記粒子を真空乾燥または凍結乾燥するステップをさらに備え得る。

【0078】

前記ｅ）ステップは、常温下で真空乾燥または－４０℃下で凍結乾燥することにより、粒子中に残留した分散媒（有機溶媒）または共溶媒を除去して二次的な高分子硬化を誘導することができる。前記乾燥工程によって薬物担持粒子の構造が堅固になり、薬物が完全に封入される。

【0079】

前記真空乾燥は、例えば３０～４０℃の温度で行われ、凍結乾燥は－３０～－４０℃で行われ得る。

【0080】

前記ｅ）ステップは、例えば２４～４８時間実施することができる。

【0081】

本発明の製造方法は、前記ｅ）ステップの後、ｆ）さらに真空乾燥または凍結乾燥するステップをさらに備え得る。

【0082】

前記ｆ）ステップにより、粒子に残留した溶媒を完全に除去し、粒子の構造がより堅固になり、薬物を完全に封入することができる。

【0083】

前記ｆ）ステップにおける追加の真空乾燥または凍結乾燥条件は、ｅ）ステップと同じ方法で実施することができる。

【0084】

前記真空乾燥温度が３０℃未満の温度条件で行われる場合には残留溶媒が完全に除去されない恐れがあるが、一方、真空乾燥温度が４０℃を超えると、生分解性高分子のガラス転移温度（Ｔｇ）を超え、乾燥過程中に粒子の構造が変形して薬物放出制御効果が低下する恐れがある。

【0085】

前記凍結乾燥工程は、真空条件下で行われ得る。

【0086】

前記ｆ）ステップは１２～２４時間行われるが、これに限定されない。

【0087】

前記追加の乾燥時間が１２時間未満の温度条件で行われると、残留溶媒が完全に除去されない恐れがあるが、一方、乾燥時間が２４時間を超えると生産性低下の恐れがある。

【発明の効果】

【0088】

本発明の放出制御型粒子を含む脱毛予防または発毛促進用組成物は、脱毛進行部位にメソセラピー（Ｍｅｓｏｔｈｅｒａｐｙ）などの方法で局所投与し、経皮浸透が困難なシクロスポリン３位誘導体を十分に供給することができ、局所投与時に全身血中で薬物が急激に増加しないため、全身の副作用を最小限に抑えることができる。

【0089】

本発明の脱毛予防または発毛促進用組成物は、局所投与した脱毛部位に薬物濃度を長期間にわたって一定に維持することができるため、患者の順応性および利便性に優れる。

【0090】

本発明の放出制御型粒子は、ＰＬＧＡの分子量などの生分解程度、放出制御剤、溶媒、高分子、界面活性剤、薬物含量、乳化工程における撹拌速度、高速乳化圧力、超音波の照射時間、連続相／分相相の比率と、乾燥法を変更して薬物放出速度を調節することができ、脱毛疾患の種類及び程度に応じて適切な放出速度を有する粒子を製造することができる。

【図面の簡単な説明】

【0091】

【図1】実施例１－Ａ（＃１２５）のＳＥＭ画像を示す。

【図2】実施例１－Ｂ（＃１２６）のＳＥＭ画像を示す。

【図3】実施例１－Ｃ（＃１２７）のＳＥＭ画像を示す。

【図4】実施例２－Ａ（＃１０９）のＳＥＭ画像を示す。

【図5】実施例２－Ｂ（＃１１０）のＳＥＭ画像を示す。

【図6】実施例２－Ｃ（＃１１１）のＳＥＭ画像を示す。

【図7】実施例４－１－Ａ（＃１２２）のＳＥＭ画像を示す。

【図8】実施例４－１－Ｂ（＃１０８）のＳＥＭ画像を示す。

【図9】実施例４－１－Ｃ（＃７３）のＳＥＭ画像を示す。

【図10】実施例４－１－Ｄ（＃７３－１）のＳＥＭ画像を示す。

【図11】実施例３１－Ｂ～３１－ＤのＳＥＭ画像を示す図である。

【図12-13】実施例３９－Ｂ、４０－Ｂ、４１－Ｂ、４２－ＢのＳＥＭ画像を示す。

【図14-16】実施例１－Ａ～１－Ｃの粒度分析結果を示す。

【図17-19】実施例３１－Ｂ～３１－Ｄの粒度分析結果を示す。

【図20-26】薬物放出パターンの実験結果を示す。

【図28-31】ＸＲＤとＤＳＣの測定結果を示す。

【図32-35】ＦＴ－ＩＲの測定結果を示す。

【図36-38】ＤＳＣの測定結果を示す。

【図39】本発明の組成物を注射投与した時に、発毛効果があるか否かを確認した結果を示す。

【図40】本発明の組成物を局所注射投与（Ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ（Ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌ）ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）時、全身血に薬物が消失したか否かを確認した結果を示す。

【図41】本発明の組成物を局所注射投与（Ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ（Ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌ）インジェクション）した時において、皮膚残存量を確認した結果を示す。

【図42】構成比率が互いに異なるＰＬＧＡ高分子を用いた３種の薬物製剤を皮膚投与した後、経時的な薬物残存量（％）を比較して示した図である。

【発明を実施するための形態】

【0092】

以下、本発明を実施例により詳しく説明する。しかし、これらの実施例は本発明を例示的に説明するためであり、本発明の範囲はこれらの実施例によって限定されない。さらに、本明細書で特に定義の用語は、本発明が属する技術分野で通常使用される意味を有すると理解すべきである。

【0093】

＜製造例：シクロスポリン３位誘導体の製造＞
シクロスポリンＡ（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）をアルキル化する一般的方法は以下の通りである。まず、窒素下でテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）にジイソプロピルアミン（（ｉ－Ｐｒ）_２ＮＨ）を加え、７８℃で核酸に溶解したブチルリチウム（ＢｕＬｉ）を加えた後、３０分間撹拌する。得られたＬＤＡ溶液にテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶かしたシクロスポリンＡ（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）を加え、１時間撹拌した後、求電子体（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｉｌｅ）を加える。

【0094】

製造例１．［Ｎ－メチル－Ｄ－アミノ酪酸^３］シクロスポリンＡ（［Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｄ－Ａｂｕ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）の合成）
一般的な方法を用いて、１０当量のＬＤＡ溶液にテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５０ｍｌ）に溶解したシクロスポリンＡ（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）（１．０ｇ）を７８℃で加えた。反応混合物を７８℃で２時間撹拌した後、ヨウ化エチル（ｅｔｈｙｌｉｏｄｉｄｅ）（０．４ｍｌ）を加えた。室温にした後、さらに２４時間撹拌し、２０ｍｌの水を加えた後、濃縮した。残渣にエーテル（Ｅｔ_２Ｏ）を加えた後、水、飽和塩化ナトリウム水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム（ＭｇＳＯ_４）で乾燥した後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００ｇ、ジクロロメタン：メチルアルコール＝９６：４）で精製した後、ＨＰＬＣで精製して標題化合物（０．１ｇ）を得た。

【0095】

製造例２．［Ｎ－メチル－Ｄ－ノルバリン^３］シクロスポリンＡ（［Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｄ－ｎｏｒｖａｌ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）の合成
一般的な方法を用いて、１０当量のＬＤＡ溶液にテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５０ｍｌ）に溶解したシクロスポリンＡ（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）（１．０ｇ）を７８℃で加えた。反応混合物を７８℃で２時間撹拌した後、沃化プロピル（ｐｒｏｐｙｌｉｏｄｉｄｅ）（０．４１ｍｌ）を加えた。室温にした後、さらに２４時間撹拌し、２０ｍｌの水を加えた後、濃縮した。残渣にエーテル（Ｅｔ_２Ｏ）を加えた後、水、飽和塩化ナトリウム水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム（ＭｇＳＯ_４）で乾燥後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００ｇ、ジクロロメタン：メチルアルコール＝９６：４）で精製した後、ＨＰＬＣで精製して標題化合物（０．１２ｇ）を得た。

【0096】

製造例３．［Ｄ－２－（メチルアミノ）ヘキサ－４－イノイル^３］シクロスポリンＡ（［Ｄ－２－（Ｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｈｅｘａ－４－ｙｎｏｙｌ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）の合成
一般的な方法を用いて、１０当量のＬＤＡ溶液にテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５０ｍｌ）に溶解したシクロスポリンＡ（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）（１．０ｇ）を７８℃で加えた。反応混合物を７８℃で２時間撹拌した後、１－ブロモ－２－ブチン（１－ｂｒｏｍｏ－２－ｂｕｔｙｎｅ）（０．７３ｍｌ）を加えた。室温にした後、さらに２４時間撹拌し、２０ｍｌの水を加えた後、濃縮した。残渣にエーテル（Ｅｔ_２Ｏ）を加えた後、水、飽和塩化ナトリウム水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム（ＭｇＳＯ_４）で乾燥後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００ｇ、ジクロロメタン：メチルアルコール＝９６：４）で精製した後、ＨＰＬＣで精製して標題化合物（０．１３ｇ）を得た。

【0097】

製造例４．［Ｄ－２－（メチルアミノ）ペント－４－イノイル^３］シクロスポリンＡ（［Ｄ－２－（Ｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｐｅｎｔ－４－ｙｎｏｙｌ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）の合成
一般的な方法を用いて、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２００ｍｌ）、ジイソプロピルアミン（（ｉ－Ｐｒ）_２ＮＨ）（３．２ｍｌ）、ブチルリチウム（ＢｕＬｉ）（８ｍｌ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５０ｍｌ）に溶解したシクロスポリンＡ（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）（３．７６ｇ）、臭化プロパルギル（ｐｒｏｐａｒｇｙｌ ｂｒｏｍｉｄｅ）（３．５７ｇ）を使用した。室温にした後さらに２時間撹拌し、４０ｍｌの水を加えた後、濃縮した。残渣にエーテル（Ｅｔ_２Ｏ）を加えた後、水、飽和塩化ナトリウム水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム（ＭｇＳＯ_４）で乾燥後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００ｇ、ジクロロメタン：メチルアルコール＝９６：４）で精製した後、ＨＰＬＣで精製して標題化合物を得た。

【0098】

製造例５．［Ｄ－２－メチルチオ－サルコシン^３］シクロスポリンＡ（［Ｄ－２－ｍｅｔｈｙｌｔｈｉｏ－Ｓａｒ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）の合成
一般的な方法を用いて、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１００ｍｌ）、ジイソプロピルアミン（（ｉ－Ｐｒ）_２ＮＨ）（１．６ｍｌ）、ブチルリチウム（ＢｕＬｉ）（４．０ｍｌ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（３０ｍｌ）に溶解したシクロスポリンＡ（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）（１．０ｇ）、ジメチルジスルフィド（Ｍｅ_２Ｓ_２）（１．５ｍｌ）を使用した。０℃で１４時間撹拌した後、２０ｍｌの水を加えた後、濃縮した。残渣にエーテルを加えた後、水、飽和塩化ナトリウム水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム（ＭｇＳＯ_４）で乾燥後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００ｇ、ジクロロメタン：メチルアルコール＝５０：１～９６：４）で精製した後、ＨＰＬＣで精製して標題化合物（ＯＮＤ－１）を得た。

【0099】

製造例６．［Ｄ－２－（４－メチルベンゼンチオ）サルコシン^３］シクロスポリンＡ（［Ｄ－２－（４－ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅｔｈｉｏ）Ｓａｒ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）の合成。
製造例５と同様に、この場合、求電子体としてｄｉ（ｔｏｌ－４－ｙｌ）ｄｉｓｕｌｆｉｄｅを利用し、標題化合物を得た。

【0100】

製造例７．［Ｄ－２－ジメチルアミノ－エチルチオ－サルコシン^３］シクロスポリンＡ（［Ｄ－２－Ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ－ｅｔｈｙｌｔｈｉｏ－Ｓａｒ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）の合成
製造例５と同様に、この場合、求電子体としてＢｉｓ（２－ジメチルアミノエチル）ジスルフィド（Ｂｉｓ（２－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ）ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ）を利用し、標題化合物を得た。

【0101】

製造例８．［Ｎ－メチル－Ｄ－セリン^３］シクロスポリンＡ（［Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｄ－Ｓｅｒ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）の合成
一般的な方法を用いて、１０当量のＬＤＡ溶液にテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５０ｍｌ）に溶解したシクロスポリンＡ（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）（１．０ｇ）を７８℃で加えた。反応混合物を７８℃で２時間撹拌した後、パラホルムアルデヒド（ｐａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）（２．０ｇ）を加えた。室温にした後、さらに２４時間撹拌し、２０ｍｌの水を加えた後、濃縮した。残渣にエーテル（Ｅｔ_２Ｏ）を加えた後、水、飽和塩化ナトリウム水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム（ＭｇＳＯ_４）で乾燥後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００ｇ、ジクロロメタン：メチルアルコール＝９６：４）で精製した後、ＨＰＬＣで精製して標題化合物（０．３ｇ）を得た。

【0102】

製造例９．［Ｎ－メチル－Ｏ－プロフェニル－Ｄ－セリン^３］シクロスポリンＡ（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｏ－Ｐｒｏｐｅｎｙｌ－Ｄ－Ｓｅｒ^３）Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）の合成
一般的な方法を用いて、［Ｄ－メチルセリン^３］－シクロスポリンＡ（０．６２ｇ、０．５ｍｍｏｌ）、塩化テトラブチルアンモニウム（ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）（０．１１ｇ、０．５ｍｍｏｌ）、および臭化アリル（ａｌｌｙｌ ｂｒｏｍｉｄｅ）（０．２４ｇ、ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍｌ）に溶かした後、３０％水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）（１．５ｍｌ）と共に２時間撹拌し、５０ｍｌのジクロロメタンを加えた後、水、飽和塩化ナトリウム水で順次洗浄、無水硫酸ナトリウム（ＭｇＳＯ_４）で乾燥後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００ｇ、ジクロロメタン：メチルアルコール＝９７：３）で精製した後、ＨＰＬＣで精製して標題化合物（０．４ｇ）を得た。

【0103】

製造例１０．［Ｎ－メチル－Ｄ－アラニン^３］シクロスポリンＡ（［Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｄ－Ａｌａ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）の合成
一般的な方法を用いて、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１２０ｍｌ）、ジイソプロピルアミン（（ｉ－Ｐｒ）_２ＮＨ）（１．７４ｍｌ）、ブチルリチウム（ＢｕＬｉ）（４．６ｍｌ）テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（３０ｍｌ）に溶解したシクロスポリンＡ（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）（２．０ｇ）、ヨウ化メチル（ＭｅＩ）（０．５１ｍｌ）を使用した。１時間撹拌しながら室温にした後、１０ｍｌの水を加えた後、濃縮した。残渣にエーテルを加えた後、水、飽和塩化ナトリウム水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム（ＭｇＳＯ_４）で乾燥後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００ｇ、ジクロロメタン：メチルアルコール＝５０：１～９６：４）で精製した後、ＨＰＬＣで精製して標題化合物（０．２６ｇ）を得た。

【実施例1】

【0104】

各種ＬＡ：ＧＡモル比のＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造（真空乾燥方式）

【0105】

以下の方法により実施例１－Ａ～１－ＣのＰＬＧＡ放出制御型粒子を製造した。製造工程で用いた各成分及び条件を下表１に示す。

【0106】

工程１．ＯＮＤ－１（４０ｍｇ）およびＰＬＧＡ（１６０ｍｇ）をＤＣＭ（ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）（２ｍｌ）に溶解させて分散相を調製した。（ＯＮＤ－１は製造例５参照）

【0107】

工程２．製造した前記分散相を連続相である１％ＰＶＡ水溶液（５００ｍｇＰＶＡ、５０ｍｌＤ．Ｗ）に添加し、ホモゲナイザー（ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ）を用いて乳化してエマルジョンを調製した。

【0108】

工程３．製造した前記エマルジョンを焼入媒（Ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ）である１％ＰＶＡ水溶液（２５００ｍｇＰＶＡ、２５０ｍｌ Ｄ．Ｗ）に入れて安定化した後、磁力撹拌機（ｍａｇｎｅｔｉｃ ｓｔｉｒｒｅｒ）で最低４時間から２４時間撹拌しながらＤＣＭを蒸発させてＰＬＧＡ粒子を形成した。

【0109】

工程４．ＰＬＧＡ粒子が形成された溶液を遠心分離（１３，０００ｒｐｍ、１０分、４℃条件）してＰＬＧＡ粒子を沈殿させた後、上層液に存在するＰＶＡを除去した。

【0110】

工程５．ＰＬＧＡ粒子沈殿物を蒸留水（Ｄ．Ｗ）１０ｍｌに再懸濁（ｒｅｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）し、遠心分離（１３，０００ｒｐｍ、１０分、４℃）する過程を４回繰り返した。

【0111】

工程６．洗浄を完了した後、沈殿物を真空乾燥して得られたＰＬＧＡ粒子を保存した。

【表1】

【0112】

１）［Ｄ－２－メチルチオ－サルコシン^３］シクロスポリンＡ（［Ｄ－２－ｍｅｔｈｙｌｔｈｉｏ－Ｓａｒ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）

【0113】

２）括弧内の数字は順に、ＬＡ：ＧＡモル比、末端基及び分子量を表す。例えば、「（ＰＬＧＡ ５０：５０、ａｃｉｄ、７０００－１７０００）」は、ＬＡ：ＧＡのモル比が５０：５０、末端基がカルボン酸、分子量が７０００－１７０００であるＰＬＧＡを表す（以下同一）。

【実施例2】

【0114】

各種ＬＡ：ＧＡモル比のＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造（凍結乾燥方式）

【0115】

前記実施例１で工程６の乾燥方式を凍結乾燥方式（１％マンニトール水溶液に分散後、凍結乾燥）に変えたことを除き、その外は同じ方法で実施例２－Ａ～２－ＣのＰＬＧＡ放出制御型の粒子を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表２に示す。

【表2】

【実施例3】

【0116】

末端基と分子量が異なるＬＡ：ＧＡモル比５０：５０ＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0117】

実施例１の分散相で末端基または分子量が異なるＬＡ：ＧＡモル比５０：５０ＰＬＧＡを用いたことを除いて、その外は実施例１と同じ方法で実施例３－Ａ～３－Ｃの放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表３に示す。

【表3】

【実施例4】

【0118】

末端基と分子量が異なるＬＡ：ＧＡモル比７５：２５ＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0119】

実施例１の分散相で末端基または分子量が異なるＬＡ：ＧＡモル比７５：２５ＰＬＧＡを用いたことを除いて、その外は実施例１と同じ方法で実施例４－Ａ～４－Ｃの放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表４に示す。

【表4】

【0120】

［実施例４－１］
乳化条件が異なるＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0121】

実施例１－Ｂまたは実施例２－Ｂで乳化条件を変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例４－１－Ａ～４－１－Ｄの放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表５に示す。

【表5】

【実施例5】

【0122】

分子量が異なるＬＡ：ＧＡモル比８５：１５ＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0123】

実施例１の分散相でＰＬＧＡを変えたことを除いて、その外は実施例１と同じ方法で実施例５－Ａの放出制御型粒子を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表６に示す。

【表6】

【実施例6】

【0124】

水に対する界面張力（Ｉｎｔｅｒｆａｃｉａｌ ｔｅｎｓｉｏｎ、ＩＦＴ）値の異なる溶媒を分散相の溶媒で用いてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を調製

【0125】

前記実施例１－Ｂで分散相の溶媒を水に対する界面張力（ＩＦＴ）値が異なる溶媒に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例６－Ａ～６－ＪのＰＬＧＡ放出制御型粒子を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表７と表８に示す。以下の表７および表８で使用される用語は以下の通りである。（ＤＣＭ＝ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ；ＥＡ＝Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ；ＤＭＳＯ＝ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ；ＡＣＮ＝ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）

【表7】

【表8】

【実施例7】

【0126】

水に対する界面張力（ＩＦＴ）値の異なる溶媒を用いてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を調製

【0127】

前記実施例１－Ａで分散相の溶媒を水に対する界面張力（ＩＦＴ）値が異なる溶媒に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例７－Ａ～７－ＪのＰＬＧＡ放出制御型粒子を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表９と表１０に示す。

【表9】

【表10】

【実施例8】

【0128】

水に対する界面張力（ＩＦＴ）値の異なる溶媒を用いてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を調製

【0129】

前記実施例１－Ｃで分散相の溶媒を水に対する界面張力（ＩＦＴ）値が異なる溶媒に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例８－Ａ～８－ＪのＰＬＧＡ放出制御型粒子を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表１１と表１２に示す。

【表11】

【表12】

【実施例9】

【0130】

分散相の溶媒に共溶媒を混合してＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0131】

前記実施例１－Ｂにおける分散相溶媒としてＤＣＭ、クロロホルム、酢酸エチル（Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ、ＥＡ）、ギ酸エチル（Ethyl formate）、ＤＭＳＯ、ＡＣＮ、酢酸ブチル（Ｂｕｔｙｌ ａｃｅｔａｔｅ）、ギ酸イソプロピル（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ ｆｏｒｍａｔｅ）、またはグリコフロール（Ｇｌｙｃｏｆｕｒｏｌ）、共溶媒としてメタノール、エタノール、アセトン、イソプロパノール、ジエチルエーテル、クロロホルム、酢酸エチル（Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ、ＥＡ）、ＤＭＳＯ、またはＣＡＮを混合したことを除いて、その外は同じ方法で実施例９－Ａ～９－ＩのＰＬＧＡ放出制御粒子を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表１３及び表１４に示す。

【表13】

【表14】

【実施例10】

【0132】

天然高分子系の徐放性粒子を製造

【0133】

前記実施例１でＰＬＧＡの代わりに天然高分子を用いたことを除いて、その外は実施例１と同じ方法で実施例１０－Ａ～１０－ＩのＰＬＧＡ放出制御型粒子を製造した。製造過程で使用した各成分および条件を下記表１５に示す。ＣＭＣはｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅである。

【表15】

【実施例11】

【0134】

合成生分解性高分子（Ａｌｉｐｈａｔｉｃ Ｈｏｍｏｐｏｌｙｍｅｒ）系の徐放性粒子を製造

【0135】

前記実施例１でＰＬＧＡの代わりに合成生分解性高分子（Ａｌｉｐｈａｔｉｃ Ｈｏｍｏｐｏｌｙｍｅｒ）を用いたことを除いて、その外は同じ方法で実施例１１－Ａ～１１－ＩのＰＬＧＡ放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表１６に示す。ＰＣＬはｐｏｌｙ－ε－ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ；ＰＬＡはｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ）；ＰＧＡはｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ；ＰＨＡはｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙａｌｋａｎｏａｔｅ；ＰＨＢはｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ；ＰＥＧはｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌである。

【表16】

【実施例12】

【0136】

合成生分解性高分子（Ａｌｉｐｈａｔｉｃ ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ）系の徐放性粒子を調製

【0137】

前記実施例１でＰＬＧＡの代わりに合成生分解性高分子（Ａｌｉｐｈａｔｉｃ Ｈｏｍｏｐｏｌｙｍｅｒ）を用いたことを除いて、その外は同じ方法で実施例１２－Ａ～１２－ＩのＰＬＧＡ放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表１７に示す。表１７で使用される用語は以下の通りである。ＰＥＡ＝ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ａｄｉｐａｔｅ；ＰＢＳ＝ｐｏｌｙｂｕｔｙｌｅｎｅ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ；ＰＨＢＶ＝ｐｏｌｙ（３－ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ－ｃｏ－３－ｈｙｄｒｏｘｙｖａｌｅｒａｔｅ）；ＰＥＴ＝ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌａｔｅ；ＰＬＧＡ＝ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ；ＰＬＧＡ－ｇｌｕｃｏｓｅ＝ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ－ｇｌｕｃｏｓｅ；ＭＰＥＧ－（ＰＣＬ－ｃｏ－ＰＬＡ）＝ｍｅｔｈｏｘｙ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ－（ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ－ｃｏ－ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ）；ｍＰＥＧ－ｂ－ＰＬＧＡ＝Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ） ｍｅｔｈｙｌ ｅｔｈｅｒ－ｂｌｏｃｋ－ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｄｅ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）；ＰＬＧＡ－ｂ－ＰＥＧ－ｂ－ＰＬＧＡ＝Ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｄｅ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）－ｂｌｏｃｋ－ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）－ｂｌｏｃｋ－ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｄｅ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）．

【表17】

【実施例13】

【0138】

合成生分解性高分子（ｓｅｍｉ－ａｒｏｍａｔｉｃ ｏｒ ａｒｏｍａｔｉｃ ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ）系の徐放性粒子を製造

【0139】

前記実施例１で合成生分解性高分子（ｓｅｍｉ－ａｒｏｍａｔｉｃ ｏｒ ａｒｏｍａｔｉｃ ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ）を用いたことを除いて、その外は同じ方法で実施例１３－Ａ～１３－ＤのＰＬＧＡ放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分および条件を下記表１８に示す。表１８で使用される用語は以下の通りである。ＰＢＴ＝ｐｏｌｙｂｕｔｙｌｅｎｅ ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌａｔｅ；ＰＴＴ＝ｐｏｌｙｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅｎｅ ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌａｔｅ；ＰＥＮ＝ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｎａｐｈｔｈａｌａｔｅ．

【表18】

【実施例14】

【0140】

連続相の界面活性剤を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0141】

前記実施例１－Ｂで連続相に１％（ｗ／ｖ）のＰＶＡ、ＰＶＰ、ＨＰＭＣ、ＰＥＧ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ、Ｃｈｉｔｏｓａｎ、Ｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅまたはＧｅｌａｔｉｎ水溶液（各界面活性剤５００ｍｇとＤ．Ｗ ５０ｍｌ）に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例１４－Ａ～１４－ＨのＰＬＧＡ放出制御型粒子を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表１９と表２０に示す。

【表19】

【表20】

【実施例15】

【0142】

連続相の界面活性剤を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0143】

前記実施例１－Ａで連続相を１％（ｗ／ｖ）のＰＶＡ、ＰＶＰ、ＨＰＭＣ、ＰＥＧ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ、Ｃｈｉｔｏｓａｎ、Ｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅまたはＧｅｌａｔｉｎ水溶液（各界面活性剤５００ｍｇとＤ．Ｗ ５０ｍｌ）に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例１５－Ａ～１５－ＨのＰＬＧＡ放出制御型粒子を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表２１に示す。

【表21】

【実施例16】

【0144】

連続相の界面活性剤を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0145】

前記実施例１－Ｃで連続相を１％（ｗ／ｖ）のＰＶＡ、ＰＶＰ、ＨＰＭＣ、ＰＥＧ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ、Ｃｈｉｔｏｓａｎ、Ｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅまたはＧｅｌａｔｉｎ水溶液（各界面活性剤５００ｍｇとＤ．Ｗ ５０ｍｌ）に変えたことを除いて、同じ方法で実施例１６－Ａ～１６－ＨのＰＬＧＡ放出制御型粒子を調製した。製造過程で用いた各成分および条件を下記表２２に示す。

【表22】

【実施例17】

【0146】

連続相で親水性低分子量の界面活性剤（乳化剤または乳化安定剤）を用いてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0147】

前記実施例１－Ｂの工程２で連続相の界面活性剤を１％（ｗ／ｖ）のレシチン、ポロキサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）、ｔｗｅｅｎ、ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ、ＳＬＳ、ステアリン酸ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ ｓｔｅａｒａｔｅ）、エチレンジアミン（Ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｄｉａｍｉｎｅ）、Ｍｒｉｊ５２、Ｂｒｉｊ５８またはシクロデキストリン水溶液（各親水性低分子量の界面活性剤５００ｍｇとＤ．Ｗ ５０ｍｌ）を変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例１７－Ａ～１７－ＪのＰＬＧＡ放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分および条件を下記表２３および表２４に示す。表２３において、ＳＬＳはラウリル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｌａｕｒｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ）である。

【表23】

【表24】

【実施例18】

【0148】

連続相に親水性低分子量界面活性剤（乳化剤または乳化安定剤）を用いてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0149】

前記実施例１－Ａの工程２で連続相の界面活性剤を１％（ｗ／ｖ）のレシチン、ポリキサマー、ツイン（ｔｗｅｅｎ）、クレモフォール（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）、ＳＬＳ、ステアリン酸ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ ｓｔｅａｒａｔｅ）、エチレンジアミン（Ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｄｉａｍｉｎｅ）、Ｍｒｉｊ５２、Ｂｒｉｊ５８、またはシクロデキストリン水溶液（各親水性低分子量の界面活性剤５００ｍｇとＤ．Ｗ ５０ｍｌ）に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例１８－Ａ～１８－ＪのＰＬＧＡ放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表２５に示す。

【表25】

【実施例19】

【0150】

連続相に親水性低分子量の界面活性剤（乳化剤または乳化安定剤）を用いてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0151】

前記実施例１－Ｃの工程２で連続相の界面活性剤を１％（ｗ／ｖ）のレシチン、ポリキサマー、ツイン（ｔｗｅｅｎ）、クレモフォール（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）、ＳＬＳ、ステアリン酸ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ ｓｔｅａｒａｔｅ）、エチレンジアミン（Ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｄｉａｍｉｎｅ）、Ｍｒｉｊ５２、Ｂｒｉｊ５８、またはシクロデキストリン水溶液（各親水性低分子量の界面活性剤５００ｍｇとＤ．Ｗ ５０ｍｌ）に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例１９－Ａ～１９－ＪのＰＬＧＡ放出制御型製剤を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表２６に示す。

【表26】

【実施例20】

【0152】

連続相で親油性低分子量の界面活性剤（乳化剤または乳化安定剤）を用いてＰＬＧＡ系の徐放性製剤を製造

【0153】

前記実施例１－Ｂの工程２で連続相の界面活性剤を１％スパン（ｓｐａｎ）、ラブラゾール（ｌａｂｒａｓｏｌ）、レオドール（ｒｈｅｏｄｏｌ）ＭＯ－６０、モノオレイン（ｇｌｙｃｅｒｏｌ ｍｏｎｏｏｌｅａｔｅ）、またはトリアセチン（ｔｒｉａｃｅｔｉｎ）水溶液（各親油性低分子量の界面活性剤５００ｍｇとＤ．Ｗ ５０ｍｌ）に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例２０－Ａ～２０－ＥのＰＬＧＡ放出制御型製剤を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表２７に示す。

【表27】

【実施例21】

【0154】

連続相で親油性低分子量の界面活性剤（乳化剤または乳化安定剤）を用いてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0155】

前記実施例１－Ａの工程２で連続相の界面活性剤を１％スパン（ｓｐａｎ）、ラブラゾール、レオドール（ｒｈｅｏｄｏｌ）ＭＯ－６０、モノオレイン（ｇｌｙｃｅｒｏｌ ｍｏｎｏｏｌｅａｔｅ）、またはトリアセチン（ｔｒｉａｃｅｔｉｎ）水溶液（各親油性低分子量の界面活性剤５００ｍｇとＤ．Ｗ ５０ｍｌ）に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例２１－Ａ～２１－ＥのＰＬＧＡ放出制御型粒子を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表２８に示す。

【表28】

【実施例22】

【0156】

連続相で親油性低分子量の界面活性剤（乳化剤または乳化安定剤）を用いてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0157】

前記実施例１－Ｃの工程２で連続相の界面活性剤を１％スパン（ｓｐａｎ）、ラブラゾール、レオドール（ｒｈｅｏｄｏｌ）ＭＯ－６０、モノオレイン（ｇｌｙｃｅｒｏｌ ｍｏｎｏｏｌｅａｔｅ）、またはトリアセチン（ｔｒｉａｃｅｔｉｎ）水溶液（各親油性低分子量の界面活性剤５００ｍｇとＤ．Ｗ ５０ｍｌ）に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例２２－Ａ～２２－ＥのＰＬＧＡ放出制御型粒子を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表２９に示す。

【表29】

【実施例23】

【0158】

分散相に調節剤（添加剤、低分子量の界面活性剤）を添加してＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0159】

前記実施例１－Ｂの工程２で分散相に調節剤（添加剤）として１００ｍｇのｔｗｅｅｎ８０、ｓｐａｎ２０、ＰＥＧ４００、Ｍｒｉｊ５２、Ｂｒｉｊ５８、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ Ｐ１２４またはＳＬＳをさらに添加したことを除いて、その外は同じ方法で実施例２３－Ａ～２３－ＧのＰＬＧＡ放出制御型製剤を調製した。製造過程で使用した各成分および条件を下記表３０および表３１に示す。

【表30】

【表31】

【実施例24】

【0160】

分散相に調節剤（添加剤、低分子量界面活性剤）を添加してＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0161】

前記実施例１－Ａの工程２で分散相に調節剤として１００ｍｇのｔｗｅｅｎ８０、ｓｐａｎ２０、ＰＥＧ４００、Ｍｒｉｊ５２、Ｂｒｉｊ５８、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ Ｐ１２４またはＳＬＳをさらに添加したことを除いて、その外は同じ方法で実施例２４－Ａ～２４－ＧのＰＬＧＡ放出制御型粒子を調製した。製造過程で使用した各成分および条件を下記表３２および表３３に示す。

【表32】

【表33】

【実施例25】

【0162】

分散相に調節剤（添加剤、低分子量界面活性剤）を添加してＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0163】

前記実施例１～Ｃの工程２で分散相に調節剤として１００ｍｇのｔｗｅｅｎ８０、ｓｐａｎ２０、ＰＥＧ４００、Ｍｒｉｊ５２、Ｂｒｉｊ５８、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ Ｐ１２４またはＳＬＳをさらに添加したことを除いて、その外は同じ方法で実施例２５－Ａ～２５－ＧのＰＬＧＡ放出制御型粒子を調製した。製造過程で使用した各成分および条件を下記表３４および表３５に示す。

【表34】

【表35】

【実施例26】

【0164】

高分子に対する薬物含量を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を調製

【0165】

前記実施例１－Ｂで薬物と高分子の含量を変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例２６－Ａ～２６－ＦのＰＬＧＡ放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表３６に示す。

【表36】

【実施例27】

【0166】

高分子に対する薬物含量を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を調製

【0167】

前記実施例１－Ａで薬物と高分子の含量を変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例２７－Ａ～２７－ＦのＰＬＧＡ放出制御型粒子を製造した。製造過程で使用した各成分および条件を下記表３７に示す。

【表37】

【実施例28】

【0168】

高分子に対する薬物含量を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を調製

【0169】

前記実施例１－Ｃで薬物と高分子の含量を変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例２８－Ａ～２８－ＦのＰＬＧＡ放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表３８に示す。

【表38】

【実施例29】

【0170】

分散相／連続相の比率を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0171】

前記実施例１－Ｂで連続相の含量を変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例２９－Ａ～２９－ＦのＰＬＧＡ放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表３９に示す。

【表39】

【実施例30】

【0172】

分散相／連続相の比率を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0173】

前記実施例１－Ａで連続相の含量を変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例３０－Ａ～３０－ＦのＰＬＧＡ放出制御型製剤を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表４０に示す。

【表40】

【実施例31】

【0174】

乳化方法を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0175】

前記実施例１－Ｃの工程２でホモゲナイザーの条件を変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例３１－Ａ～３１－ＤのＰＬＧＡ放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表４１に示す。

【表41】

【実施例32】

【0176】

超音波照射方法を利用してＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0177】

前記実施例１－Ｂの工程２でホモゲナイザーの代わりに超音波処理器で乳化したことを除いて、その外は同じ方法で実施例３２－Ａ～３２－ＢのＰＬＧＡ放出制御型粒子を製造した。製造過程で使用した各成分および条件を下記表３２に示す。

【表42】

【実施例33】

【0178】

真空乾燥条件を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0179】

前記実施例１－Ｂで真空乾燥条件を変えたことを除いて、実施例１と同じ方法で実施例３３－Ａ～３３－Ｄの放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表４３に示す。

【表43】

【実施例34】

【0180】

真空乾燥条件を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0181】

前記実施例１－Ａで真空乾燥条件を変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例３４－Ａ～３４－Ｄの放出制御型粒子を製造した。製造過程で使用した各成分および条件を下記表４４に示す。

【表44】

【実施例35】

【0182】

真空乾燥条件を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0183】

前記実施例１－Ｃで真空乾燥条件を変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例３５－Ａ～３５－Ｄの放出制御型粒子を製造した。製造過程で使用した各成分および条件を下記表４５に示す。

【表45】

【実施例36】

【0184】

乳化および凍結乾燥条件を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0185】

前記実施例２－Ｂでホモゲナイザーまたは凍結乾燥条件を変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例３６－Ａ～３６－Ｄの放出制御型粒子を製造した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表４６に示す。

【表46】

【実施例37】

【0186】

乳化および凍結乾燥条件を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0187】

前記実施例２－Ａでホモゲナイザーまたは凍結乾燥条件を変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例３７－Ａ～３７－Ｄの放出制御型粒子を製造した。製造過程で使用した各成分および条件を下記表４７に示す。

【表47】

【実施例38】

【0188】

乳化および凍結乾燥条件を変えてＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0189】

前記実施例２－Ｃでホモゲナイザーまたは凍結乾燥条件を変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例３８－Ａ～３８－Ｄの放出制御型粒子を製造した。製造過程で使用した各成分および条件を下記表４８に示す。

【表48】

【実施例39】

【0190】

［Ｄ－２－（４－メチルベンゼンチオ）サルコシン^３］シクロスポリンＡを含有したＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0191】

前記実施例１で薬物をＯＮＤ－１から［Ｄ－２－（４－メチルベンゼンチオ）サルコシン^３］に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例３９－Ａ～３９－Ｃの放出制御型粒子を調製した。製造過程で使用した各成分および条件を下記表４９に示す。

【表49】

【実施例40】

【0192】

［Ｎ－メチル－アミノ酪酸^３］シクロスポリンＡを含有したＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0193】

前記実施例１で薬物をＯＮＤ－１から［Ｎ－メチル－アミノ酪酸^３］（［Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ａｂｕ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例４０－Ａ～４０－Ｃの放出制御型粒子を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表５０に示す。

【表50】

【実施例41】

【0194】

［Ｎ－メチル－ノルバリン^３］シクロスポリンＡを含有したＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0195】

前記実施例１で薬物をＯＮＤ－１から［Ｎ－メチル－ノルバリン^３］シクロスポリンＡ（［Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｎｖａ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例４１－Ａ～４１－Ｃの放出制御型粒子を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表５１に示す。

【表51】

【実施例42】

【0196】

［Ｄ－メチルアラニン^３］シクロスポリンＡを含有したＰＬＧＡ系の徐放性粒子を製造

【0197】

前記実施例１において薬物をＯＮＤ－１から［Ｄ－メチルアラニン^３］シクロスポリンＡ（［Ｄ－ＭｅＡｌａ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）に変えたことを除いて、その外は同じ方法で実施例４２－Ａ～４２－Ｃの放出制御型粒子を調製した。製造過程で用いた各成分及び条件を下記表５２に示す。

【表52】

【0198】

実験例１．ＰＬＧＡ粒子の大きさ、形態と表面状態を評価
本実験例では、実施例で作製したＰＬＧＡ粒子の大きさ、形態（ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）と表面状態を、ＳＥＭ画像で分析して徐放性に有利な形態学的特徴を有しているかを確認した。各実施例で作製したＰＬＧＡ粒子を蒸留水に分散させた後、遠心分離して沈殿したＰＬＧＡ粒子のみを再び真空乾燥してＳＥＭ像を観察した。

【0199】

図１～図３は、真空乾燥条件で製造した実施例１－Ａ～１－ＣのＳＥＭ画像を示す。

【0200】

図１によれば、実施例１－Ａは約５～３０μｍの比較的に均一な粒度分布を示し、表面が滑らかな球状の形状を呈している。

【0201】

図２によれば、実施例１－Ｂは約２０～４０μｍの比較的に均一な粒度分布を示し、表面が滑らかな球状の形状を呈している。

【0202】

図３によれば、実施例１－Ｃは約１０～３０μｍの比較的に均一な粒度分布を示し、表面が滑らかな球状の形状を呈している。

【0203】

図４～図６は、凍結乾燥条件で製造した実施例２－Ａ～２－ＣのＳＥＭ画像を示す。

【0204】

図４によれば、実施例２－Ａは約５～１０μｍの比較的に均一な粒度分布を示し、表面が滑らかな球状の形状を呈している。

【0205】

図５によれば、実施例２－Ｂは、約２～２０μｍの多分散性の粒度分布を示し、表面が滑らかな球状の形状を呈している。

【0206】

図６によれば、実施例２－Ｃは、約５～６０μｍの多分散性の粒度分布を示し、表面が滑らかな球状の形状を呈している。

【0207】

図７～図１０は、実施例４－１－Ａ～４－１－ＤのＳＥＭ画像を示す。

【0208】

図７によれば、実施例４－１－Ａは約３～８μｍの比較的に均一な粒度分布を示し、表面が滑らかな球状の形状を呈している。

【0209】

図８によれば、実施例４－１－Ｂは、約０．２～２μｍの多分散性の粒度分布を示し、球状の形状を呈している。

【0210】

図９によれば、実施例４－１－Ｃは約５～２５μｍの粒度分布を示し、球状の形状を呈している。また、Ｉｎ－ｖｉｔｒｏ ｒｅｌｅａｓｅで１ヶ月経過後、３～１０μｍの粒度分布を示し、球状の形状を呈している。

【0211】

図１０によれば、実施例４－１－Ｄ（＃７３－１）は約２～８μｍの比較的に均一な粒度分布を示し、表面が滑らかな球状の形状を呈している。また、インビトロ放出（Ｉｎ－ｖｉｔｒｏ ｒｅｌｅａｓｅ）して１ヶ月経過後、表面が溶けて内部がくぼみ状になっている。

【0212】

図１１によれば、実施例３１－Ｂ～３１－Ｄは、乳化条件を変えたにもかかわらず、表面が滑らかな球状の形状を呈していることを確認することができる。

【0213】

図１２及び１３によれば、互いに異なるシクロスポリン３位誘導体を用いた実施例３９－Ｂ、４０－Ｂ、４１－Ｂ、４２－Ｂは、表面が滑らかな球状の形状を呈していることが確認できる。

【0214】

前記図１～図１３によれば、シクロスポリン３位誘導体含有のＰＬＧＡ粒子は滑らかな表面形状を有し、外部気孔によるイニシアルバースト現象がなく、薬物の安定した徐放性放出が可能な形態学的特徴を示すことが分かる。

【0215】

実験例２．ＰＬＧＡ放出制御型の製剤の粒度分析
試料をランダム位置でＳＥＭ画像を撮影し、画像分析プログラムで粒子の大きさを分析して粒子サイズ分布を確認した。測定する粒子の個数は少なくとも３００個以上であり、粒子の大きさは直径で測定した。

【0216】

２．１．真空乾燥したＬＡ：ＧＡ比率によるＰＬＧＡ放出制御型の製剤の粒度分析

【0217】

図１４～図１６は、実施例１－Ａ～１－Ｃの粒度分析結果を示す。

【0218】

実施例１－Ａ（＃１２５）、実施例１－Ｂ（＃１２６）および実施例１－Ｃ（＃１２７）の各々の平均粒度は、１６．８μｍ、１５．４μｍ、９．４４μｍであった。

【0219】

２．２．乳化速度による真空乾燥したＰＬＧＡ放出制御型の製剤の粒度分析

【0220】

図１７～図１９は、実施例３１－Ｂ～３１－Ｄの粒度分析結果を示す。

【0221】

実施例３１－Ｂ（＃１２０）、３１－Ｃ（＃１２１）、３１－Ｄ（＃１２２）の平均粒度は２０．９μｍ、０．７４μｍ、０．６１μｍであり、ホモゲナイザーの撹拌速度が５０００、１００００、１５０００ｒｐｍに増加するほど平均粒度が減少する傾向を示した。特に、撹拌速度が５０００ｒｐｍから１００００ｒｐｍに増加したとき、平均粒度が急激に減少したことがわかる。例えば、２０μｍ程度の大きさの粒子を製造する時に好ましいホモゲナイザー撹拌速度は５０００ｒｐｍであり、１μｍ以下の粒子を製造する時に好ましいホモゲナイザー撹拌速度は１００００ｒｐｍ以上であることがわかる。

【0222】

実験例３．ＰＬＧＡ放出制御型製剤の薬物封入率と収率の測定
薬物含量(Ｄｒｕｇ－ｌｏａｄｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ）は、封入した薬物の量を回収したミクロスフェアの量で割った値である。封入率（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）は、投入した薬物の量に対する封入した薬物の量として表すことができる。封入した薬物量は、ＨＰＬＣ分析（ＨＰＬＣ ｐｕｍｐ＆ｃｏｌｕｍｎ ｏｖｅｎ ｍｅｔｈｏｄ）によって測定した。ＨＰＬＣ条件と分析法は次の通りである。

【表53】

【0223】

[分析方法]
ＰＬＧＡミクロスフェア１ｍｇを７５％ＡＣＮ１ｍｌに溶解し、３０秒間ボルテックス（ｖｏｒｔｅｘ）した後、３分間超音波処理（ｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ）する。その後、上清液を０．２２μｍシリンジフィルターでろ過処理した後、ＨＰＬＣ分析する。薬物の含量、封入率および収率（ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ）は、計算式１ないし３のように表すことができる。

【0224】

［計算式１］
薬物含量（Ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ）（％） ＝ 封入した薬物の量（Ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｄｒｕｇ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｉｎ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ）（ｍｇ）÷回収したミクロスフェアの量（ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ）（ｍｇ）×１００

【0225】

［計算式２］
封入率（％） ＝ 封入した薬物の量（Ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｄｒｕｇ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｉｎ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ）（ｍｇ）÷投入した薬物の量（ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｔｈｅ ｆｅｅｄｉｎｇ ｄｒｕｇ）（ｍｇ）×１００

【0226】

［計算式３］
収率（ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ）（％） ＝ 回収したミクロスフェアの量（ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ）（ｍｇ）÷（投入した薬物＋高分子の量（ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｔｈｅ ｆｅｅｄｉｎｇ ｄｒｕｇ＋ｐｏｌｙｍｅｒ））（ｍｇ）×１００

【0227】

ＯＮＤ－１含有のＰＬＧＡ放出制御型粒子の封入率と収率は、下記表５４の通りである。

【表54】

【0228】

また、様々な３位誘導体で置換されたシクロスポリンＡ誘導体含有のＰＬＧＡ放出制御型粒子に対する薬物の含量、封入率及び収率を測定した実験結果を下記表５５、表５６に示す。

【表55】

【表56】

【0229】

実験例４．ＰＬＧＡ放出制御型製剤のゼータ電位（ｚｅｔａ－ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）を測定
ゼータ電位を測定して粒子間凝集の有無を分析した。ゼータ電位値が±３０ｍＶ以上の場合、斥力が発生して凝集しないが、±１０ｍＶ以下では凝集することができる。したがって、ゼータ電位値が－３０ｍＶ以下、＋３０ｍＶ以上であれば安定な分散液とみなすことができる。

【0230】

本実験では、ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（モデル名：Ｎａｎｏ ＺＳ ９０、Ｍａｌｖｅｒｎ；Ｄｉｓｐｅｒｓａｎｔ：Ｄ．Ｗ．；Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：２５℃、Ｅｑｕｉｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ：１２０ｓｅｃ）を用いて真空乾燥したＰＬＧＡ徐放性製剤である実施例１、実施例３、実施例４、実施例５、実施例１４、実施例１７、実施例２０の表面電荷を測定した。ｚｅｔａｓｉｚｅｒの測定条件は以下の通りであり、３か所を置測定して平均値を次の表に示した。

【表57】

【表58】

【0231】

前記表から確認できるように、実施例１と実施例４はいずれも－３０ｍＶ以下のゼータ電位値を示しているので、分散性に優れていることがわかる。

【0232】

実験例５．インビトロ（ｉｎ－ｖｉｔｒｏ）放出試験
（１）実験方法
薬物放出の遅延効果は、ＰＬＧＡが分解される時間に依存する。インビトロ（Ｉｎ ｖｉｔｒｏ）薬物放出試験で一般的に使用されるＰＢＳ ｗｉｔｈ ｔｗｅｅｎ８０ ０．２％（ｐＨ７．４）を放出媒体（ｒｅｌｅａｓｅ ｍｅｄｉｕｍ）として使用すると、少なくとも２週間から最大４週間まで薬物が放出されない。これはインビボ（ｉｎ－ｖｉｖｏ）放出の結果とは異なる。

【0233】

したがって、ラット血漿（Ｒａｔ ｐｌａｓｍａ）を放出媒体（ｒｅｌｅａｓｅ ｍｅｄｉｕｍ）として使用し、インビボ（ｉｎ－ｖｉｖｏ）条件と類似なインビボ放出試験を行い、最適なＩＶ－ＩＶＣ（Ｉｎ ｖｉｔｒｏ－ｉｎ ｖｉｖｏ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ）を算出した。ラット血漿は、ラットから得られた血液をヘパリンでコーティングしたチューブに分注した後、遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した上清液を使用した。得られたラット血漿２ｍｌに各実施例で調製した粒子をＯＮＤ－１基準として５０μｇ／ｍｌの濃度で添加した後、３７℃のインキュベーター中で９０ｒｐｍで振とうしながら保存した。その後、時間ごとにサンプリングし、ＨＰＬＣで分析して薬物放出量を測定した。ＨＰＬＣ条件は前記表５２の通りである。ＨＰＬＣ分析方法は以下の通りである。

【0234】

［ＨＰＬＣ分析方法］
サンプリングするバイアルを３０秒間ボルテックスした後、ビアルから１００μｌを分注し、１３，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離する。その後、層分離した上清液９０μｌを分注し、ＡＣＮ ２７０μｌ（サンプルＡ）を加える。残ったＰｅｌｌｅｔに３６０μｌの７５％ＡＣＮ（サンプルＢ）を加える。サンプルＡおよびＢを３分間超音波処理（ｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ）した後、１３，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離する。そして、層分離したサンプルＡおよびＢの上清液３００μｌを分注し、０．２２μｍシリンジフィルターでろ過処理した後、ＨＰＬＣ分析する。薬物放出パターンの実験結果を図２０～２７に示す。

【0235】

前記結果は、本発明のＰＬＧＡ放出制御剤が徐放性を示すことを実証する。さらに、実験結果に基づき、必要に応じて適切な薬物放出パターンを示す薬物を製造することができる。例えば、重度の脱毛患者のためには、最初には薬物放出が高くなるように製作し、脱毛が軽度かまたは予防の必要な患者には薬物が徐々に放出されるように製作し、女性の場合には異なる放出パターンを示すように薬物を製作する。

【0236】

各実験の具体的な結果および内容は以下の通りである。

【0237】

５．１．ＰＬＧＡのＬＡ：ＧＡ比による薬物放出パターンの比較
実施例１－Ａ～１－ＣのＯＮＤ－１薬物放出パターンを図２０に示した。図２０によれば、ＰＬＧＡのＬＡ：ＧＡが５０：５０、７５：２５、８５：１５順に薬物放出速度が速く、７日目にそれぞれ３８％、１７％、０％が放出され、１４日目にそれぞれ５３％、３２％、９％が放出された。実施例１－Ａ、１－Ｂ、１－Ｃはすべてイニシアルバースト現象は見られず、徐放性製剤として優れた薬物放出パターンを示した。

【0238】

また、薬物放出７日目の粒子のＳＥＭ画像を確認し、図２１に示した。図２１によれば、薬物が３８％放出された実施例１－Ａは、球状の形状がほぼなくなり、粒子が凝集した形態を示した。薬物が１７％放出された実施例１－Ｂは、球状の形状は維持しているが、表面が粗くなり、穴（ｈｏｌｅ）が多く観察された。一方、薬物が０％放出された実施例１－Ｃでは、表面が滑らかな球状の粒子が観察された。前記（Ｉｎ－ｖｉｔｒｏ ｒｅｌｅａｓｅ）の結果と形態学的観察の結果は互いに一致する。

【0239】

従来の文献によれば、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）を含有するＰＬＧＡミクロスフェア剤形のインビトロ薬物放出のプロファイルは、初期の急激な薬物放出のバースト後にゆっくり放出される二相性（Ｂｉｐｈａｓｉｃ）の薬物放出を示すことが知られている。例えば、論文（Ｊ． Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１４， Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ６８３１５３）では、約７０％～９２％の薬物が２４時間以内に放出されると記載しており、他の論文（Ｊ． ｏｆ Ｃｏｎ Ｒｅｌｅａｓｅ １５１ （２０１１） ２８６－２９４）では２４時間内に７５～９０％が放出されると記載しているなど、多数の論文でシクロスポリンＡ含有ＰＬＧＡマイクロスフェアのイニシアルバースト現象を指摘している。

【0240】

イニシアルバースト放出後で徐々に放出されるパターンである二相性法放出（Ｂｉｐｈａｓｉｃ Ｂｉｐｈａｓｉｃ ｒｅｌｅａｓｅ）の原因には、凍結乾燥で形成されたナノ粒子の内部構造、製造過程中に粒子表面で残っているＣｓＡ、凍結乾燥工程でＣｓＡの結晶構造が非晶質構造に変形することによる急激な溶解度の増加、ＣｓＡとＰＬＧＡが非結晶性の固体分散体（ａｍｏｒｐｈｏｕｓ Ｓｏｌｉｄ ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ）を形成することによる急激な溶解度の増加などがあるが、明確に解明されていない。本発明者らは、二相性法放出（Ｂｉｐｈａｓｉｃ Ｂｉｐｈａｓｉｃ ｒｅｌｅａｓｅ）の最も重要な原因がＣｓＡとＰＬＧＡとの間の弱い結合力および比較的高い親水性であると判断した。

【0241】

ＣｓＡの水に対する溶解度は２７μｇ／ｍｌ、分配係数（ｌｏｇＰ）は２．９２である（ｉｓｍａｉｌｏｓ ｅｔ ａｌ． １９９１， ｃｚｏｇａｌｌａ ｅｔ ａｌ． ２００９）一方、ＣｓＡの誘導体であるＯＮＤ－１は水に対する溶解度が１０μｇ／ｍｌで、分配係数（ｌｏｇＰ）が３．８４である。すなわち、ＯＮＤ－１はＣｓＡより疎水性であり、分配係数が高く、ミクロスフェアからの体内薬物放出が遅延して、持続放出および放出速度の調節が可能な利点がある。したがって、ＯＮＤ－１に比べて低い分配係数を有するＣｓＡを含むＰＬＧＡミクロスフェアは、イニシアルバースト現象が現れるのに対し、より疎水性分子であるＯＮＤ－１を含むＰＬＧＡミクロスフェアは、イニシアルバーストがなく、薬物の持続的放出が可能である。

【0242】

結論として、本発明のＯＮＤ－１含有のＰＬＧＡミクロスフェアは、従来のＣｓＡ含有のＰＬＧＡミクロスフェアとは異なり、製剤の体内安定性が高く、放出制御が優秀であり、生体内でイニシアルバーストがないため、生体内での薬物放出制御に優れた製剤であることがわかる。

【0243】

他にも後述する実験例７のＦＴ－ＩＲ結果によれば、ＯＮＤ－１はＣｓＡと異なりＯＮＤ－１のアミドＩピークがシフトし、ＯＮＤ－１とＰＬＧＡとの間に強い相互関係（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）を示した。実験例８によれば、ＯＮＤ－１はＣｓＡより疎水性が高いためＰＬＧＡと強く結合し、ＯＮＤ－１ミクロスフェアのＴｇがＰＬＧＡによりなくなって安定した形態を示した。したがって、ＯＮＤ－１含有のＰＬＧＡミクロスフェアの安定した薬物放出パターンは、ＣｓＡとその３位誘導体との化学的性質の違いによるものであり得る。

【0244】

５．２．ＰＬＧＡ（ＬＡ：ＧＡ＝５０：５０）の末端基、分子量による薬物放出パターンの比較
実施例１－Ａと３－Ａ～３－Ｃの薬物放出パターンを図２２に示す。図２２によれば、実施例１－Ａ、３－Ａ、３－Ｃ、３－Ｂ、すなわち、ａｃｉｄ－７Ｋ、ａｃｉｄ－３８Ｋ、ｅｓｔｅｒ－３８Ｋ、ｅｓｔｅｒ－７Ｋの順で薬物放出速度が速い。８日目にそれぞれ３７％、３２％、２１％、１２％が放出され、１４日目に５４％、４５％、２９％、１９％が放出された。全ての実施例において、イニシアルバースト現象がなく、優れた徐放性放出パターンを示した。

【0245】

５．３．ＰＬＧＡ（ＬＡ：ＧＡ＝７５：２５）の末端基、分子量による薬物放出パターンの比較
実施例１－Ｂと４－Ａ～４－Ｃの薬物放出パターンを図２３に示した。図２３によれば、実施例１－Ｂ、４－Ｂ、４－Ａ、４－Ｃ、すなわち、ａｃｉｄ－４Ｋ、ｅｓｔｅｒ－４Ｋ、ａｃｉｄ－３８Ｋ、ｅｓｔｅｒ－３８Ｋの順に薬物放出速度が速く、８日目にそれぞれ１７％、１１％、０％、０％が放出され、１４日目にそれぞれ３３％、１７％、９％、４％放出された。全ての実施例において、イニシアルバースト現象がなく、徐放性製剤として優れた薬物放出パターンを示した。

【0246】

５．４．ＰＬＧＡ（ＬＡ：ＧＡ＝８５：１５）の末端基、分子量による薬物放出パターンの比較
実施例１－Ｃと５－Ａの薬物放出パターンを図２４に示した。図２４によれば、実施例１－Ｃ、５－Ａ、すなわち、ｅｓｔｅｒ－５０Ｋ、ｅｓｔｅｒ－１９０Ｋの順に薬物放出速度が速く、１４日目にそれぞれ９％、１％放出された。実施例１－Ｃ、５－Ａはいずれもイニシアルバースト現象がなく、徐放性製剤として優れた薬物放出パターンを示した。

【0247】

５．５．薬物含量による薬物放出パターンの確認
実施例２６－Ａ～２６－Ｃの薬物放出パターンを図２５に示した。図２５によれば、実施例２６－Ｃ、２６－Ｂ、２６－Ａ、すなわちＯＮＤ－１含量６０％、４０％、２０％の順に薬物放出速度が速く、１４日目にそれぞれ３６％、２４％、１５％放出された。全ての実施例において、イニシアルバースト現象がなく、徐放性製剤として優れた薬物放出パターンを示した。

【0248】

５．６．調節剤による薬物放出パターンの確認
実施例２３－Ａ～２３－Ｆの薬物放出パターンを図２６に示した。図２６によれば、実施例２３－Ｂ、Ｃ、Ｆ、Ｅ、Ａ、Ｄ、すなわち、調節剤でｓｐａｎ２０、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ Ｐ１２４、Ｍｒｉｊ５２、Ｂｒｉｊ５８、ｔｗｅｅｎ８０、ＰＥＧ４００の順に９６％、５３％、４８％、３９％、３４％、１２％が放出された。全ての実施例において、イニシアルバースト現象がなく、徐放性製剤として優れた薬物放出パターンを示した。

【0249】

５．７．３位置誘導体を含有した薬物の放出パターン
図２７によれば、シクロスポリン３位誘導体である［Ｄ－２－（４－ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅｔｈｉｏ）Ｓａｒ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ、［Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｄ－Ａｂｕ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ、［Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｄ－Ｎｖａ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａと［Ｄ－ＭｅＡｌａ^３］Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａは、ＯＮＤ－１と同様に、イニシアルバーストがなく、徐放性製剤として優れた薬物パターンを示した。

【0250】

実験例６．ＯＮＤ－１とＣｓＡの結晶性の差：ＸＲＤおよびＤＳＣ実験の結果
薬物の結晶性（Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｉｔｙ）は、結晶形（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ）、非結晶性（ａｍｏｒｐｈｏｕｓ）、またはその複合形態で存在することができる。結晶性は薬物放出の速度に影響を与える重要な物理化学的特性の１つである。

【0251】

６．１．ＸＲＤ（Ｘ－ｒａｙ ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ）による結晶性の確認
本実験で用いたＸＲＤ測定条件と結晶化方法は、以下の通りである。測定結果を図２８と図２９に示す。

【0252】

［測定条件］
－Ｘ－ｒａｙ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ、モデル名：ＭｉｎｉＦｌｅｘ、Ｒｉｇａｋｕ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ／－Ｘ－ｒａｙ ｇｅｎｅｒａｔｏｒ：ｇｒａｐｈｉｔｅ ｍｏｎｏｃｈｒｏｍａｔｉｚｅｄ Ｃｕ Ｋα ｒａｄｉａｔｉｏｎ（λ＝１．５４１８Å／－２θｒａｎｇｅ：ｆｒｏｍ １０° ｔｏ ３０° ｗｉｔｈ ａ ｓｔｅｐ ｓｉｚｅ ｏｆ ０．０２°／－Ｓｃａｎｎｉｎｇ ｒａｔｅ：１．０°／ｍｉｎ

【0253】

［結晶化方法］
－Ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ：ＣｓＡまたはＯＮＤ－１ ２０ｍｇをＡＣＮ ５ｍｌに溶解し、室温でＡＣＮを２４時間以上徐々に蒸発させて結晶を得る。

【0254】

－Ｄｒｏｗｎｉｎｇ－ｏｕｔ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ：ＣｓＡまたはＯＮＤ－１ ２０ｍｇを溶かしたＡＣＮ ５ｍｌをＤ．Ｗ．５０ｍｌに投入して結晶が生成した後、濾過して結晶を得た。

【0255】

図２８によれば、シクロスポリンＡは製造条件に関係なく、結晶形ＸＲＤパターンを示した。シクロスポリンＡの原粉末（ｒａｗ ｐｏｗｄｅｒ）のＸＲＤ測定結果を見ると、結晶形特有の強いピークが現れ、シクロスポリンＡの原粉末（ｒａｗ ｐｏｗｄｅｒ）は結晶形であることが確認できる。

【0256】

しかし、図２９によれば、シクロスポリン３位誘導体であるＯＮＤ－１は、製造条件に関係なく、常に非結晶形のＸＲＤパターンを示した。結晶形を誘導するためにＥｖａｐｏｒａｔｉｏｎまたはＤｒｏｗｎｉｎｇ－ｏｕｔで再結晶化した場合にも、非結晶形を示した。この差は、シクロスポリン３位誘導体であるＯＮＤ－１が、シクロスポリンＡと全く異なる放出特性を示し得ることを示唆する。

【0257】

６．２．ＤＳＣ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ）による結晶性の確認
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）により薬物の融点、ガラス転移温度、及び再結晶の有無を確認し、シクロスポリンＡとＯＮＤ－１の結晶性の差を確認した。ＤＳＣ測定の条件は以下の通りである。ＤＳＣ測定の結果を図３０と３１に示す。

【0258】

［測定条件］
ＤＳＣモデル名：ＤＳＣ Ｑ２０００、ＴＡ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ／Ｐｕｒｇｉｎｇ ｇａｓ：Ｎ_２ Ｇａｓ（ｆｌｏｗ：７０ ｍｌ／ｍｉｎ）／Ｈｅａｔｉｎｇ ｒａｔｅ：５℃／ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：１０℃／ｍｉｎ）／ｃｙｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ：１（ｆｒｏｍ ２０℃ ｔｏ ２００℃）

【0259】

図３０によれば、シクロスポリンＡの原粉末（ｒａｗ ｐｏｗｄｅｒ）は、一次昇温曲線において、約１１２℃でＴｍ（ｍｅｌｔｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）が現れ、これはシクロスポリンＡが結晶形であることを示す。

【0260】

一方、図３１によれば、ＯＮＤ－１の原粉末（ｒａｗ ｐｏｗｄｅｒ）は、一次昇温曲線および二次昇温曲線において結晶性シクロスポリンＡのＴｍ（１１２℃）が消え、約１２５℃でＴｇ（ｇｌａｓｓ－ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）またはサーモトロピック液晶（ｔｈｅｒｍｏｔｒｏｐｉｃ ｌｉｑｕｉｄ ｃｒｙｓｔａｌ）の形成による相転移（ｐｈａｓｅ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）が現れ、非結晶形であることが確認された。

【0261】

実験例７．ＰＬＧＡ放出制御型製剤の粒子内の薬物と高分子の相互作用を評価（ＦＴ－ＩＲ）
薬物放出の制御が可能である安定な粒子は、保存中に相分離および再結晶化を起こさず、イニシアルバーストを抑制しなければならない。このためには、薬物とＰＬＧＡとの間の密接な相互作用が必要である。薬物とＰＬＧＡとの相互作用を研究するために、シクロスポリンＡ分子内の４つのアミド基の吸収領域であるアミドＩ領域とＰＬＧＡエステル波長帯領域についてＦＴ－ＩＲ分光分析を行った。

【0262】

特に、シクロスポリンＡアミドＩ領域（１６００－１７００ｃｍ^－１）は分子内に４つのアミド結合の構造変化を示す領域であり、シクロスポリンＡの二次構造が周辺の溶媒や高分子と結合によってどのように変化するかを知らせる重要な指標である。例えば、結晶化したシクロスポリンＡは、４つのアミド基が分子内水素結合（ｉｎｔｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｂｏｎｄ）の形成に関与するが、シクロスポリンＡが極性溶媒または高分子と接触すると、アミド基は内部の水素結合の代わりに外部溶媒または高分子と水素結合する。したがって、結晶化したシクロスポリンＡは分子内水素結合の特徴である１６２４ｃｍ^－１でピークを示すが、極性溶媒や高分子結合すると分子間水素結合の特徴である１６３０ｃｍ^－１でピークシフトを示す。ＯＮＤ－１に対して、溶媒の極性によるアミドＩバンドのシフトを確認した結果、ＣｓＡのように溶媒の極性が増加するにつれてピークが１６２２ｃｍ^－１から１６３４ｃｍ^－１に移動することがわかった。

【0263】

これらのＦＴ－ＩＲピークのシフトに基づいて、ＣｓＡおよびＯＮＤ－１とＰＬＧＡネットワーク間の化学的相互作用を評価するために、アミドＩ領域とＰＬＧＡエステル領域の分光吸収ピークのシフトを化学的相互作用の証拠として利用することができる。（Ｑｕｉｍｉｃａ Ｎｏｖａ ３５．４（２０１２）：７２３－７２７、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２００６、３、３４３－３４９、Ｔｈｅ ＡＡＰＳ Ｊｏｕｒｎａｌ ２００７； ９（２））。

【0264】

本実験では、ＰＬＧＡ粒子内で起こるシクロスポリン３位誘導体とＰＬＧＡ高分子との間の相互作用を評価するために、実施例２６の製剤をＦＴ－ＩＲ（Ｆｏｕｒｉｅｒ－ｔｒａｎｓｆｏｒｍ ｉｎｆｒａｒｅｄ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）を用いて分析した。また、ＯＮＤ－１とＰＬＧＡを２：８、３：７、４：６、５：５、８：２の重量比で物理的に混合した群（Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｉｘｉｎｇ、ＰＭ）を比較群とした。ＦＴ－ＩＲの測定条件は、以下の通りである。測定結果を図３２～図３５に示す。

【0265】

［ＦＴ－ＩＲ測定条件］
ＦＴ－ＩＲ モデル名：Ｎｉｃｏｌｅｔ ｉｓ ５、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ／Ｒａｎｇｅ：８００～３０００ｃｍ^－１／Ｉｎｔｅｒｖａｌ：４ｃｍ^－１／Ｃｒｙｓｔａｌ ｔｙｐｅ：Ｄｉａｍｏｎｄ（ｐＨ １～１２）

【0266】

図３２及び図３３によれば、ＯＮＤ－１は、アミドＩバンドピーク（アミドＣ＝Ｏ）が１６２２ｃｍ^－１で、ＰＬＧＡのエステル結合ピーク（エステルＣ＝Ｏ）が１７４６ｃｍ^－１で表れた。

【0267】

図３４によれば、ＯＮＤ－１とＰＬＧＡを２：８、３：７、４：６、５：５、８：２の重量比（ＯＮＤ－１：ＰＬＧＡ）で物理的に混合した比較群はＯＮＤ－１のアミド１バンドピークがピークシフトなしで１６２２ｃｍ^－１で現れ、２つの物質間の相互結合が起こらないことが示された。

【0268】

しかしながら、図３５によれば、本発明のナノ粒子は、ＯＮＤ－１のアミドＩバンドである１６２２ｃｍ^－１ピークから１６３３～１６３４ｃｍ^－１への有意なシフトが示された。特に、ＯＮＤ－１：ＰＬＧＡの重量比が２：８（実施例２６－Ａ）、３：７（実施例２６－Ｂ）のナノ粒子では、ＯＮＤ－１のアミドＩバンドピークが強くシフトしたため、ＯＮＤ－１とＰＬＧＡ間の相互結合が強いことが示された。また、ＯＮＤ－１：ＰＬＧＡの重量比が４：６、５：５、８：２の粒子でも一定な傾向のピークシフトが確認された。ＯＮＤ－１の重量比が増加するにつれて、ＰＬＧＡに結合したＯＮＤ－１が減少し、ピークシフトが減少した。

【0269】

従来知られている研究によれば、シクロスポリン（ＣｓＡ）を含むＰＬＧＡミクロスフェア製剤のＦＴ－ＩＲスペクトルでは、アミドＩ領域のシフトは観察されなかった。これは、ＣｓＡとＰＬＧＡとの間に化学的相互作用がないか弱いからであると考えられる（Ｑｕｉｍｉｃａ Ｎｏｖａ ３５．４ （２０１２）： ７２３－７２７， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ， ２００６， ３， ３４３－３４９， Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｖｏｌ． １１， Ｎｏ． ２， ２０７－２１１， ２００８， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ３８９ （２０１０） １８６－１９４）。したがって、ＣｓＡを含むＰＬＧＡミクロスフェアのイニシアルバーストおよび低い製剤安定性は、ＣｓＡとＰＬＧＡとの間の化学的相互作用が低いためであると考えられる。

【0270】

シクロスポリン３位誘導体とＰＬＧＡが粒子を形成すると、分子内アミド群がＰＬＧＡと強い結合をするということは、従来の研究結果から予測できなかった。これは、ＯＮＤ－１がシクロスポリンＡ誘導体であるが、３位にメチルチオ基が付加して性質が変化したためである可能性がある。本発明の実験例によれば、ほとんど結晶形であるＣｓＡと異なり、ＯＮＤ－１は様々な条件の結晶化工程にもかかわらず非結晶形を示したので、ＯＮＤ－１含有のＰＬＧＡナノ粒子は既存のＣｓＡ系のＰＬＧＡナノ粒子とは全然異なる性質を示すことができる。

【0271】

結論として、ＯＮＤ－１を含むＰＬＧＡミクロスフェアは、ＣｓＡを含むＰＬＧＡミクロスフェアとは異なり、ＯＮＤ－１のアミドＩピークがシフトすることによって、両方の間に強い相互関係（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）が存在することが確認された。この実験結果は、本発明の薬物調節型製剤が安定性が高く、生体内でイニシアルバーストなく、放出制御に優れた製剤であることを裏付ける。

【0272】

実験例８．ＰＬＧＡ放出制御型製剤の粒子内の薬物と高分子の安定性を評価（ＤＳＣ）
薬物担持粒子の保存中における相分離または再結晶化を防ぐためには、薬物と高分子担体との間の分子間相互作用が必要である。本実験では示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）により薬物の融点、またはガラス転移温度と再結晶の有無を確認した。ＤＳＣ測定条件は前記実施例６－２の方法と同じである。測定結果を図３６～図３８に示す。

【0273】

図３６によれば、ＯＮＤ－１のガラス転移温度（Ｇｌａｓｓ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ、Ｔｇ）またはサーモトロピック液晶（ｔｈｅｒｍｏｔｒｏｐｉｃ ｌｉｑｕｉｄ ｃｒｙｓｔａｌ）の形成による相転移（ｐｈａｓｅ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）が１２５℃で観察され、ＰＬＧＡのＴｇは５１℃で観察された。

【0274】

図３７～図３８は、実施例２６－Ａのナノ粒子粒子の結果を示す。図３７によれば、ＯＮＤ－１のＴｇ（またはサーモトロピック液晶の形成による相転移）が１２５℃であるのに比べて、ＮＰ２０％ではＯＮＤ－１のＴｇは現れなかった。また、図３８によれば、ＮＰ５０％および８０％でＴｇ値がＯＮＤ－１のＴｇ値より低くなった。これは、ＯＮＤ－１とＰＬＧＡとの相互作用によって、粒子内で昇温によるＯＮＤ－１分子の相変化や分子流動性がなくなった可能性と、ＰＬＧＡによりＯＮＤ－１が安定的に非結晶形（ａｍｏｒｐｈｏｕｓ）の状態を維持した可能性が考えられる。

【0275】

実験例９．シクロスポリン３位誘導体のインビトロ皮膚浸透実験
経皮吸収拡散試験（Ｆｒａｎｚ Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ Ｃｅｌｌ）により、シクロスポリン３位誘導体の局所皮膚塗布による皮膚浸透の有無を確認した。

【0276】

具体的に、豚の皮膚をとかして皮下脂肪（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｆａｔｔｙ）を皮膚（ｄｅｒｍｉｓ）部位から除去し、直径３ｃｍの円盤状に切った。皮膚角質層（ｓｔｒａｔｕｍ ｃｏｒｎｅｕｍ）を上部のドナーチャンバー（ｄｏｎｏｒ ｃｈａｍｂｅｒ）に、真皮層を下部の収容チャンバー（ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｈａｍｂｅｒ）に向けて、皮膚透過装置（Ｆｒａｎｚ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ、５ｍｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ容積、拡散面積０．７８５ｃｍ^２）に装着した。２００μｇのＯＮＤ－１を含有したオリーブ油０．２ｍｌをドナーチャンバーに投入し、３７℃、６００ｒｐｍでインキュベートした。時間ごとに、水溶液（Ｔｗｅｅｎ８０ ０．２％含有ＰＢＳ、ｐＨ ７．４）を５００μｌずつサンプリングし、同量の溶液を補充した。

【0277】

サンプリングした溶液中のシクロスポリン３位誘導体をＨＰＬＣで定量分析し、５回繰り返し実験の平均値を計算してシクロスポリン３位誘導体の透過量を決定し、下記表５８に示した。

【0278】

２４時間使用した皮膚を皮膚透過装置から分離し、エタノールで数回洗浄し、乾燥して、テープストリッピング（ｔａｐｅ－ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ、スコッチテープ１０回）して表面に残った薬物を完全に除去した。回収した皮膚試料をコレゲナーゼタイプＩ（Ｇｉｂｃｏ）溶液で３７℃、２４時間インキュベートして溶解した。その後、ＭＴＢＥ（ｍｅｔｈｙｌ ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ ｅｔｈｅｒ）を用いた液相－液相抽出法を利用し試料を得て、シクロスポリン３位誘導体をＨＰＬＣで定量分析し、薬物の皮膚内沈積量（ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ）を算出した。

【0279】

前記液相－液相抽出法の具体的な方法は以下の通りである。各皮膚溶解試料を２００～４００μｌ分注し、１．２ｍｌのＭＴＢＥを添加した。１０分間高速振盪した後、遠心分離（１３，０００ｒｐｍ、３分）して有機溶媒層（１ｍｌ）を分離、窒素気流下で１０分間乾燥した。再組成溶媒（７５％アセトニトリル）に溶解し、シリンジフィルターで濾過して分析対象試料を得た。

【0280】

［ＨＰＬＣ分析条件］
分析システム：Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ、ＣＳＡ ４０００／分析カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ １００－５－Ｃ１８、４．６×１５０を７０℃条件／移動相：移動相Ａは水、移動相Ｂはアセトニトリル（ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）／移動相の流速量：ｍｌ／分／サンプル注入量：２０μｌ

【表59】

【0281】

前記表５９で示すように、シクロスポリン３位誘導体の皮膚透過（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ、ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ）は極めて微量であることを確認した。また、シクロスポリン３位誘導体の皮膚内沈積量は約０．３～１．１μｇ／ｃｍ^２であった。実験結果によれば、シクロスポリン３位誘導体の発毛効果のためには、局所薬物伝達（Ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌ Ｍｅｓｏｔｈｅｒａｐｙ）などによる薬物送達が必要であることが示された。

【0282】

実験例１０．局所薬物伝達（ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌ ｍｅｓｏｔｈｅｒａｐｙ）による発毛効果の確認

【0283】

１０－１．局所注射投与による発毛効果の確認
シクロスポリン３位誘導体を注射による局所投与した時に、毛包成長促進と発毛効果を示すか否かを確認した。

【0284】

具体的に、生後４２～４９日齢のマウス（Ｃ５７ＢＬ／６、ｆｅｍａｌｅ）の背部の毛を除去し、各マウスの重量を測定して体重が均等に分散するように分けた。実施例１－Ｂの粒子を含むデポ（ｄｅｐｏｔ）溶液を、局所薬物伝達（ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌ ｍｅｓｏｔｈｅｒａｐｙ）（０．２５ｍｍ（３１Ｇ）×８ｍｍインスリンシリンジ）で局所投与し、発毛効果を確認した。

【0285】

図３９によれば、局所投与部位は毛包形成と発毛現象が強く表れたが、周辺部位は毛包形成を示さなかった。したがって、シクロスポリン３位誘導体を局所投与すると強い発毛効果を示すことが確認された。

【0286】

１０－２．局所注射投与した薬物の血中濃度の確認
本実験では、前記実験例１０－１で局所投与したシクロスポリンの発毛効果が全身作用によることであるか、局所的な作用によることであるかを確認した。

【0287】

具体的に、ＭＴＢＥ（ｍｅｔｈｙｌ ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ ｅｔｈｅｒ）を用いた液相－液相抽出法とＬＣ／ＭＳ分析により血液中に存在する薬物の濃度を測定した。発毛部位皮膚および非投与部分の皮膚試料の用意とＭＴＢＥを用いた液相－液相抽出法は、前記実施例９と同様である。前記ＬＣ／ＭＳ分析条件は以下の通りである。ＨＰＬＣの分析システムはＡｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ、ＣＳＡ ４０００を使用し、カラムはＵｎｉｓｏｎ ＵＫ－Ｃ８（３μｍ）、２．０×５０を７０℃条件、移動相Ａは水とギ酸（１００：０．１、ｖ／ｖ）、移動相Ｂはメタノールおよびギ酸（１００：０．１、ｖ／ｖ）であった。最初に移動相Ｂを２０％に３分まで増加させた後、平衡化状態になった後、移動相の流速量は０．４ｍｌ／分であり、試料注入量は３μｌであった。また、重量分析計はＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅの４０００ Ｑ ＴＲＡＰ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒシステムを使用した。

【0288】

ＬＣ／ＭＳ分析による投与部位と非投与部位の薬物残存量を下記表６０に示す。

【表60】

【0289】

前記表６０によれば、局所投与部位の皮膚内ではＯＮＤ－１が多く検出されたのに対し、周辺の皮膚と全身血内ではＯＮＤ－１がほとんど検出されなかった。したがって、シクロスポリン３位誘導体の発毛効果は全身性ではなく局所的に作用したことによる結果であり、シクロスポリン３位誘導体を脱毛部位に局所投与して発毛効果を得ることができることが確認された。

【0290】

実験例１１．ＰＬＧＡデポ（Ｄｅｐｏｔ）を局所注射投与（Ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ （Ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌ） ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）した時、全身血への薬物消失を確認
局所投与した薬物が全身血へ容易に消失すると、全身毒性や低効果などの恐れがある。本実験では、本発明のＰＬＧＡデポ（Ｄｅｐｏｔ）製剤を局所注射投与した時に全身血への拡散による薬物の消失の程度を確認した。

【0291】

４～５週齢のラット（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ、ｆｅｍａｌｅ）を用意し、薬物投与前に背部の毛を除去し、実験動物の体重を測定して個体の体重が均等に分散するように分けた。一日の適応期間の後、実施例１－ＢのＯＮＤ－１含有の薬物製剤（＃１２６）と対照群として、ＯＮＤ－１溶液（ＰＧ：ＥｔＯＨ：ＤＷ（＝６：２：２））を脱毛した背部の６箇所に注射で経皮投与（ＩＤ）した。投与した注射液は約５０μｌであり、０．２５ｍｍ（３１Ｇ）×８ｍｍのインスリンシリンジを使用した。

【0292】

薬物を投与した後、定められた時間ごと（薬物投与した後、１、３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２８、３２、３６、４０、４４、４８、５４、７２、７８、１４４、１６８、１９２時間）で実験動物の鎖骨下静脈から約３００～４００μｌの血液を採取した。採取した血液試料をＭＴＢＥ（ｍｅｔｈｙｌ ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ ｅｔｈｅｒ）を用いた液相－液相抽出法で処理し、ＬＣ／ＭＳ分析で血中の薬物濃度を測定した。（ＭＴＢＥ液相－液相抽出法とＬＣ／ＭＳ分析法は、前記実験例１０参照）

【0293】

前記実験結果を表６１および図４０に示す。

【表61】

【0294】

前記表６１および図４０によれば、本発明の薬物が封入されたＰＬＧＡ粒子製剤を投与した実験動物群は、一般溶液製剤の投与群に比べて低い全身露出程度を示した。ＡＵＣ（Ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｃｕｒｖｅ）値を算出して定量的に比較した結果、一般溶液投与群の薬物血中濃度はＰＬＧＡ粒子製剤投与群に対して約８倍高いことが確認された。

【0295】

本実験結果は、シクロスポリン３位誘導体含有のＰＬＧＡ粒子が皮膚に局所投与されると、一般注射溶液の製剤で起こり得る血中薬物の増加による全身副作用を抑えると共に、脱毛部位内の薬物濃度（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｗｉｎｄｏｗ）を緩やかで長期間（ｌｏｎｇ－ｌａｓｔｉｎｇ）にわたって維持し、脱毛および発毛効果を持続的に維持することを示す。実験の過程で実験動物の状態を比較した結果、全ての処理群で特異的な臨床症状は見られなかった。

【0296】

実験例１２．ＰＬＧＡ Ｄｅｐｏｔの局所注射投与（Ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ （Ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌ） ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）時の皮膚残存量確認
局所投与した薬物が優れた効果を示すためには、薬物は局所投与部位に一定期間残留しなければならない。本実験では、皮膚に局所投与した薬物の経時的残量を確認した。

【0297】

４～５週齢のラット（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ、ｆｅｍａｌｅ）を用意し、背部の毛を除去した。実験動物の体重を測定して個体の体重が均等に分散するように分けて、一日の適応期間を置いた。毛を除去した背部に実施例１－Ｂ粒子を含む注射製剤を経皮注射（ＩＤ）した。（０．２５ｍｍ（３１Ｇ）×８ｍｍのインスリンシリンジ使用）

【0298】

観察を終了した後、実験動物の背中から皮膚試料を採取し、ＭＴＢＥ（ｍｅｔｈｙｌ ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ ｅｔｈｅｒ）を用いた液相－液相抽出法とＨＰＬＣを実施し、残留薬物を定量分析した。（具体的な方法は実験例９参照）

【0299】

前記ＨＰＬＣ分析の結果を図４１に示す。図４１によれば、ＰＬＧＡデポ（Ｄｅｐｏｔ）は、一般溶液に比べてＡＵＣが４倍以上高く、皮膚残存量が著しく高く持続されることを確認した。これは、シクロスポリン３位誘導体がＰＬＧＡ粒子の形態で局所皮膚部位に送達されると、単純な注射溶液製剤で起こり得る急激な全身血中薬物の増加とこれによる全身副作用を最小限に抑えるとともに、脱毛部位内の薬物濃度（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｗｉｎｄｏｗ）を緩やかに長期間（ｌｏｎｇ－ｌａｓｔｉｎｇ）維持し、脱毛および発毛効果を持続的に維持することを示す。

【0300】

実験例１３．ＰＬＧＡのＬＡ：ＧＡ比による皮膚内の残存薬物の評価
４～５週齢のラット（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ、ｆｅｍａｌｅ）を用意し、背部の毛を除去し、実験動物の体重を測定して個体の体重が均等に分散するように分けた。一日の適応期間の後、互いに異なるＬＡ：ＧＡ比を有するＯＮＤ－１含有のＰＬＧＡ粒子である実施例１－Ａ（＃１２５）、１－Ｂ（＃１２６）、１－Ｃ（＃１２７）を毛が除去された背部の下端から、左：実施例１－Ａ、中央：実施例１－Ｂ、右：実施例１－Ｃの形態で定められた時間間隔（終了時点から１、４、８、１０、１５、１６、１７日前に投与、全投与回数７回）で経皮内注射（ＩＤ、（注射液：食塩水約５０μｌ））した（０．２５ｍｍ（３１Ｇ）×８ｍｍのインスリンシリンジ）。

【0301】

観察を終了した後、実験動物の背板から同様の大きさに皮膚試料を採取し、ＭＴＢＥを用いた液相－液相抽出法でＨＰＬＣで薬物定量分析を行った。（実験例９参照）

【0302】

前記実験結果を図４２に示す。図４２によれば、ＬＡ：ＧＡ比が異なる３種の製剤は経時的に投与部位の薬物消失速度で差が現れた。

【0303】

また、これを数値的に確認するため、経時的な薬物残存曲線のＡＵＣ（Ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｃｕｒｖｅ）値をグラフで示し、ＬＡ：ＧＡ比が異なる３種の製剤のＡＵＣ値は互いに統計的有意性を示した（ｔ－ｔｅｓｔ、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）。

【0304】

以上の結果によれば、シクロスポリン３位誘導体薬物が封入されたＰＬＧＡ粒子は、ＰＬＧＡ高分子の種類（ＰＬＡ：ＰＧＡ＝５０：５０、７５：２５、８５：１５）に応じて投与部位の薬物消失程度で有意な差を示すことがわかった。これは、ＰＬＧＡ高分子の種類を変更し必要に応じて薬物放出速度が制御された徐放性製剤の製造が可能であることを意味する。実験の過程で実験動物の状態を比較した結果、全ての処理群で特異的な臨床症状は見られなかった。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【図38】

【図39】

【図40】

【図41】

【図42】

【国際調査報告】