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特表2024-526840がんを処置するためのチェックポイント阻害剤と腫瘍溶解性ウイルスの組合せ

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-19

(54)【発明の名称】がんを処置するためのチェックポイント阻害剤と腫瘍溶解性ウイルスの組合せ

(51)【国際特許分類】

A61K 39/12 20060101AFI20240711BHJP

A61K 39/205 20060101ALI20240711BHJP

A61K 45/06 20060101ALI20240711BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20240711BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20240711BHJP

A61K 39/395 20060101ALI20240711BHJP

C12N 15/86 20060101ALN20240711BHJP

C12N 7/01 20060101ALN20240711BHJP

【ＦＩ】

A61K39/12

A61K39/205

A61K45/06

A61P35/00

A61P43/00 121

A61K39/395 T

A61K39/395 U

C12N15/86 Z ZNA

C12N7/01

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024503369

(86)(22)【出願日】2022-07-18

(85)【翻訳文提出日】2024-02-26

(86)【国際出願番号】 US2022073845

(87)【国際公開番号】W WO2023004287

(87)【国際公開日】2023-01-26

(31)【優先権主張番号】63/223,281

(32)【優先日】2021-07-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/365,030

(32)【優先日】2022-05-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】597160510

【氏名又は名称】リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＲＥＧＥＮＥＲＯＮＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ，ＩＮＣ．

(71)【出願人】

【識別番号】522403893

【氏名又は名称】ヴィリアドインコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＶＹＲＩＡＤ，ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田純次

(74)【代理人】

【識別番号】100216105

【弁理士】

【氏名又は名称】守安智

(72)【発明者】

【氏名】サイダ・ダディ－メームタック

(72)【発明者】

【氏名】マルクス・モアーズ

(72)【発明者】

【氏名】ギャヴィン・サーストン

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

【Ｆターム（参考）】

4B065AA95X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA01

4B065CA24

4B065CA44

4C084AA20

4C084AA24

4C084MA02

4C084MA66

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC751

4C084ZC752

4C085AA14

4C085AA35

4C085BA64

4C085BB11

4C085CC08

4C085DD62

4C085EE03

4C085GG01

4C085GG02

(57)【要約】

本開示は、がん患者において腫瘍の増殖を処置または阻害するための、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤の新規な３重組合せ療法に関する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

腫瘍の増殖を処置または阻害する方法であって：
（ａ）がん患者を選択すること；ならびに
（ｂ）（ｉ）治療有効量の腫瘍溶解性ウイルスを、（ｉｉ）治療有効量のプログラム死１（ＰＤ－１）経路阻害剤および（ｉｉｉ）治療有効量の細胞傷害性Ｔリンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ４）阻害剤と組み合わせて、それを必要とする患者に投与すること、を含む方法。

【請求項2】

腫瘍溶解性ウイルスは腫瘍溶解性ベジクロウイルスを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

腫瘍溶解性ベジクロウイルスは腫瘍溶解性水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を含む、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

ＶＳＶは組換えＶＳＶを含む、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

組換えＶＳＶはＭ５１Ｒ置換を含む、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

組換えＶＳＶはサイトカインを発現する、請求項３～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

サイトカインはインターフェロンベータ（ＩＦＮｂ）を含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

ＩＦＮｂをコードする核酸配列は、Ｍウイルス遺伝子とＧウイルス遺伝子の間に位置している、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

組換えＶＳＶは、ナトリウム／ヨウ素共輸送体（ＮＩＳ）をさらに発現する、請求項４～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

ＮＩＳをコードする核酸配列は、Ｇウイルス遺伝子とＬウイルス遺伝子の間に位置している、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

腫瘍溶解性ウイルスはＶｏｙａｇｅｒＶ１である、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤は、同時に患者に投与される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

１回またはそれ以上の用量の腫瘍溶解性ウイルスは、１回またはそれ以上の用量のＰＤ－１経路阻害剤および１回またはそれ以上の用量のＣＴＬＡ４阻害剤と組み合わせて、連続して投与される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

１回またはそれ以上の用量のＣＴＬＡ４阻害剤は、単回用量のＣＴＬＡ４阻害剤を含み、単回用量のＣＴＬＡ４阻害剤の投与は、２回以上の用量のＣＴＬＡ４阻害剤を含む組合せ療法を用いるものと匹敵する抗腫瘍効能につながる、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

抗腫瘍効能は、各処置群における平均（ｍｅａｎ）もしくは平均（ａｖｅｒａｇｅ）腫瘍体積、生存パーセント、腫瘍がない患者の数のまたはこれらの組合せの減少を特徴とする、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

腫瘍溶解性ウイルスは、１０^４～１０^１４ＴＣＩＤ_５０、１０^４～１０^１２ＴＣＩＤ_５０、１０^６～１０^１２ＴＣＩＤ_５０、１０^８～１０^１４ＴＣＩＤ_５０、１０^８～１０^１２ＴＣＩＤ_５０または１０^１０～１０^１２ＴＣＩＤ_５０の１回またはそれ以上の用量として患者に投与される、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

ＰＤ－１経路阻害剤は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ患者体重の１回またはそれ以上の用量で患者に投与される、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

ＰＤ－１経路阻害剤は、約１ｍｇ～約１０００ｍｇの１回またはそれ以上の用量で患者に投与される、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

ＣＴＬＡ４阻害剤は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ患者体重の１回またはそれ以上の用量で患者に投与される、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項20】

ＣＴＬＡ４阻害剤は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ患者体重の単回用量で患者に投与される、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

ＣＴＬＡ４阻害剤は、約１ｍｇ～約６００ｍｇの１回またはそれ以上の用量で患者に投与される、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

腫瘍溶解性ウイルスは、患者に腫瘍内または静脈内投与される、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤は、患者に静脈内、皮下または腹腔内投与される、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

がんは、副腎腫瘍、胆道がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、癌腫、中枢または末梢神経系組織がん、子宮頸がん、結腸がん、内分泌もしくは神経内分泌がんまたは造血がん、食道がん、線維腫、胃腸がん、神経膠腫、頭頸部がん、リー－フラウメニ腫瘍、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、多発性神経内分泌Ｉ型およびＩＩ型腫瘍、鼻咽頭がん、口腔がん、中咽頭がん、骨原性肉腫腫瘍、卵巣がん、膵臓がん、膵島細胞がん、副甲状腺がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、呼吸器がん、肉腫、皮膚がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、気管がん、泌尿生殖器がんならびに子宮がんから選択される、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

がんは少なくとも１つの抗ＰＤ－１剤または療法を用いた処置に抵抗性である、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

ＰＤ－１経路阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合性フラグメント、または抗ＰＤ－Ｌ２抗体もしくはその抗原結合性フラグメントを含む、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

抗ＰＤ－１抗体は、セミプリマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ０６０８、ＢＩ７５４０９１、ＰＦ－０６８０１５９１、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、ＪＮＪ－６３７２３２８３およびＭＣＬＡ－１３４から選択される、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、請求項２６または２７に記載の方法。

【請求項29】

抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号３、４および５のそれぞれのアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）；ならびに配列番号６、７および８のそれぞれのアミノ酸配列を含む３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む、請求項２６～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項２６～２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号９と１０の重鎖配列と軽鎖配列の対を含む、請求項２６～３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＲＥＧＮ３５０４、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＬＹ３３０００５４、ＦＡＺ０５３、ＳＴＩ－１０１４、ＣＸ－０７２、ＫＮ０３５およびＣＫ－３０１から選択される、請求項２６に記載の方法。

【請求項33】

抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；および配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項34】

抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＲＥＧＮ３５０４を含む、請求項２６～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

ＣＴＬＡ４阻害剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントを含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

抗ＣＴＬＡ４抗体は、イピリムマブ、トレメリムマブおよびＲＥＧＮ４６５９から選択される、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、請求項３５または３６に記載の方法。

【請求項38】

抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１５、１６および１７のそれぞれのアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）；ならびに配列番号１８、１９および２０のそれぞれのアミノ酸配列を含む３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む、請求項３５～３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；および配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項３５～３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項40】

抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２１と２２の重鎖配列と軽鎖配列の対を含む、請求項３５～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

処置は、腫瘍増殖の遅延、腫瘍細胞数の減少、腫瘍退縮、生存の延長、部分奏効および完全奏効のうちの１つまたはそれ以上から選択される治療効果をもたらす、請求項１～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

腫瘍増殖は、未処置患者と比較して少なくとも５０％阻害される、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

腫瘍増殖は、単独療法として腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤が投与される患者と比較して、少なくとも５０％阻害される、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

腫瘍増殖は、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤のうちのいずれか２つが投与される患者と比較して、少なくとも５０％阻害される、請求項１～４３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

さらなる治療用薬剤または療法を患者に施すことをさらに含む、請求項１～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

さらなる治療用薬剤または療法は、放射線照射、手術、化学療法剤、がんワクチン、Ｂ７－Ｈ３阻害剤、Ｂ７－Ｈ４阻害剤、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）阻害剤、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有３（ＴＩＭ３）阻害剤、ガレクチン９（ＧＡＬ９）阻害剤、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリン（Ｉｇ）含有サプレッサー（ＶＩＳＴＡ）阻害剤、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）阻害剤、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）阻害剤、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、アンジオポエチン－２（Ａｎｇ２）阻害剤、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体、カルメット－ゲラン桿菌ワクチン、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、細胞毒、インターロイキン６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤、インターロイキン４受容体（ＩＬ－４Ｒ）阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、抗体－薬物コンジュゲート、抗炎症薬ならびにこれらの組合せから選択される、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

腫瘍の増殖を処置または阻害する方法で使用するための、腫瘍溶解性ウイルスとＰＤ－１経路阻害剤とＣＴＬＡ４阻害剤の組合せであって、方法は：
（ａ）がん患者を選択すること；ならびに
（ｂ）（ｉ）治療有効量の腫瘍溶解性ウイルスを、（ｉｉ）治療有効量のＰＤ－１経路阻害剤および（ｉｉｉ）治療有効量のＣＴＬＡ阻害剤と組み合わせて、それを必要とする患者に投与すること、を含む、腫瘍溶解性ウイルスとＰＤ－１経路阻害剤とＣＴＬＡ４阻害剤の組合せ。

【請求項48】

患者の腫瘍の増殖を処置または阻害するための腫瘍溶解性ウイルスとＰＤ－１経路阻害剤とＣＴＬＡ４阻害剤の治療有効量の組合せの使用に関して記載される指示書と併せて、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤を含むキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、概して、腫瘍溶解性ウイルスおよびチェックポイント阻害剤、例えば、プログラム死１（ＰＤ－１）経路阻害剤および細胞傷害性Ｔリンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ４）阻害剤を用いたがん処置のための組合せ療法に関する。

【背景技術】

【0002】

最近まで、がん免疫療法は、活性化されたエフェクター細胞の養子移入、関連する抗原に対する免疫化、またはサイトカインなどの非特異的免疫刺激薬剤を与えることによって抗腫瘍免疫応答を増強するアプローチに対してかなりの努力を注いできた。しかし、過去１０年間で、特異的な免疫チェックポイント経路阻害剤を開発するための集中的な努力によって、抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＴＬＡ４抗体の開発を含めて、がんを処置するための新しい免疫療法的アプローチが提供され始めた。

【0003】

ＰＤ－１（ＣＤ２７９としても知られる）は、自己免疫、感染に対する免疫および抗腫瘍免疫において重要な役割を果たす。モノクローナル抗体を含めたアンタゴニストによるＰＤ－１の遮断は、がんおよび慢性のウイルス感染症の処置で研究されている。ＰＤ－１の遮断はまた、免疫応答を刺激するための有効かつ忍容性に優れたアプローチであり、黒色腫、腎細胞がん（ＲＣＣ）および非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）を含めて、ヒトの様々ながんに対して治療的利点が達成されている（非特許文献１；非特許文献２）。

【0004】

ＣＴＬＡ４（ＣＤ１５２としても知られる）は、通常および調節性のＴ細胞で発現している、Ｉ型膜貫通Ｔ細胞阻害性チェックポイント受容体である。ＣＴＬＡ４は、刺激性受容体ＣＤ２８をその共通の天然リガンド、Ｂ７－１（ＣＤ８０）およびＢ７－２（ＣＤ８６）に結合させないように打ち負かすことによって、Ｔ細胞活性化を消極的に調節する。

【0005】

最初のＴ細胞活性化は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の主要組織適合性複合体クラスＩまたはＩＩ（ＭＨＣＩまたはＭＨＣＩＩ）タンパク質によって提示される特定のペプチドを認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を刺激することによって達成される（非特許文献３）。次に、活性化されたＴＣＲ複合体は、様々な転写因子、例えば、アクチベータータンパク質１（ＡＰ－１）、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）または活性化Ｂ細胞の核内因子カッパ軽鎖エンハンサー（Ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａ－ｌｉｇｈｔ－ｃｈａｉｎ－ｅｎｈａｎｃｅｒ）（ＮＦカッパＢ）の発現を調節するプロモーターによって引き起こされるシグナリングイベントのカスケードを惹起する。次いでＴ細胞応答は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）または他の分子などのＴ細胞上で構成的かまたは誘導的かのいずれかで発現している共刺激性または共阻害性受容体の結合を介してさらにモジュレートされる（非特許文献４）。

【0006】

腫瘍溶解性ウイルスもがん処置に期待できる。これらのウイルスは、正常な組織に影響を与えずに、悪性細胞に感染し、悪性細胞で特異的に複製し、悪性細胞を死滅させる。いくつかの腫瘍溶解性ウイルスは、様々な新生物の処置のための臨床評価の進んだ段階に達している。しかし、腫瘍による免疫抑制およびウイルスの早すぎる排除は、弱い腫瘍特異的免疫応答しかもたらさないことが多く、がん治療剤としてのこれらのウイルスの可能性が制限される。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】Ｓｈｅｒｉｄａｎ２０１２、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、３０：７２９～７３０

【非特許文献2】Ｐｏｓｔｏｗら、２０１５、ＪＣｌｉｎＯｎｃｏｌ、３３：１９７４～１９８２

【非特許文献3】Ｇｏｌｄｒａｔｈら、１９９９、Ｎａｔｕｒｅ４０２：２５５～２６２

【非特許文献4】Ｓｈａｒｐｅら、２００２、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１１６～１２６

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

したがって、本明細書で開示されるような、腫瘍溶解性ウイルスならびにチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤を含む組合せ療法を含めて、がん処置のためのより有効な療法が強く必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0009】

一態様では、開示される技術は、腫瘍の増殖を処置または阻害する方法に関し、方法は：（ａ）がん患者を選択すること；ならびに（ｂ）（ｉ）治療有効量の腫瘍溶解性ウイルスを、（ｉｉ）治療有効量のプログラム死１（ＰＤ－１）経路阻害剤および（ｉｉｉ）治療有効量の細胞傷害性Ｔリンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ４）阻害剤と組み合わせて、それを必要とする患者に投与すること、を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは腫瘍溶解性ベジクロウイルスを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ベジクロウイルスは腫瘍溶解性水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を含む。いくつかの実施形態では、ＶＳＶは組換えＶＳＶを含む。いくつかの実施形態では、組換えＶＳＶは１つまたはそれ以上の突然変異、例えば、Ｍ５１Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、組換えＶＳＶはサイトカインを発現する。いくつかの実施形態では、組換えＶＳＶは、サイトカインなどの免疫刺激性分子をコードする核酸配列を含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、サイトカインは、インターフェロンベータ（ＩＦＮｂ）、例えば、ヒトもしくはマウスのＩＦＮｂまたはそれらの変異体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＦＮｂをコードする核酸配列はＭウイルス遺伝子とＧウイルス遺伝子の間に位置している。

【0011】

いくつかの実施形態では、組換えＶＳＶは、ナトリウム／ヨウ素共輸送体（ＮＩＳ）をさらに発現する。いくつかの実施形態では、組換えＶＳＶは、ナトリウム／ヨウ素共輸送体（ＮＩＳ）またはその変異体をコードする核酸配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＮＩＳをコードする核酸配列はＧウイルス遺伝子とＬウイルス遺伝子の間に位置している。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスはＶｏｙａｇｅｒＶ１である。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤は同時に患者に投与される。いくつかの実施形態では、１回またはそれ以上の用量の腫瘍溶解性ウイルスは、１回またはそれ以上の用量のＰＤ－１経路阻害剤および１回またはそれ以上の用量のＣＴＬＡ４阻害剤と組み合わせて、連続して投与される。

【0012】

いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、ＰＤ－１経路阻害剤および／またはＣＴＬＡ４阻害剤の前または後に患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１経路阻害剤は、腫瘍溶解性ウイルスおよび／またはＣＴＬＡ４阻害剤の前または後に患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４阻害剤は、腫瘍溶解性ウイルスおよび／またはＰＤ－１経路阻害剤の前または後に患者に投与される。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤のうちの少なくとも１つは、１日１回、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、週に１回、２週間に１回または３週間に１回患者に投与される。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤のある用量が、それぞれ、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤の直前の用量の１日～１２週間後に患者に投与される。

【0013】

いくつかの実施形態では、１回またはそれ以上の用量のＣＴＬＡ４阻害剤は単回用量のＣＴＬＡ４阻害剤を含み、単回用量のＣＴＬＡ４阻害剤の投与は、２回以上の用量のＣＴＬＡ４阻害剤を含む組合せ療法を用いるものと匹敵する抗腫瘍効能につながる。

【0014】

いくつかの実施形態では、抗腫瘍効能は、各処置群における平均（ｍｅａｎ）もしくは平均（ａｖｅｒａｇｅ）腫瘍体積、生存パーセント、腫瘍がない患者の数またはこれらの組合せの減少を特徴とする。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、１０^４～１０^１４ＴＣＩＤ_５０（５０％組織培養感染用量）、１０^４～１０^１２ＴＣＩＤ_５０、１０^６～１０^１２ＴＣＩＤ_５０、１０^８～１０^１４ＴＣＩＤ_５０、１０^８～１０^１２ＴＣＩＤ_５０または１０^１０～１０^１２ＴＣＩＤ_５０の１回またはそれ以上の用量として患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１経路阻害剤は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ患者体重の１回またはそれ以上の用量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１経路阻害剤は、約１ｍｇ～約１０００ｍｇの１回またはそれ以上の用量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４阻害剤は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ患者体重の１回またはそれ以上の用量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４阻害剤は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ患者体重の単回用量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４阻害剤は、約１ｍｇ～約６００ｍｇの１回またはそれ以上の用量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、患者に腫瘍内または静脈内投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤は、患者に静脈内、皮下または腹腔内投与される。

【0015】

いくつかの実施形態では、がんは、副腎腫瘍、胆道がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、癌腫、中枢または末梢神経系組織がん、子宮頸がん、結腸がん、内分泌もしくは神経内分泌がんまたは造血がん、食道がん、線維腫、胃腸がん、神経膠腫、頭頸部がん、リー－フラウメニ腫瘍、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、多発性神経内分泌Ｉ型およびＩＩ型腫瘍、鼻咽頭がん、口腔がん、中咽頭がん、骨原性肉腫腫瘍、卵巣がん、膵臓がん、膵島細胞がん、副甲状腺がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、呼吸器がん、肉腫、皮膚がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、気管がん、泌尿生殖器がんならびに子宮がんから選択される。いくつかの実施形態では、がんは少なくとも１つの抗ＰＤ－１剤または療法を用いた処置に抵抗性である。

【0016】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１経路阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合性フラグメント、または抗ＰＤ－Ｌ２抗体もしくはその抗原結合性フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、セミプリマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ０６０８、ＢＩ７５４０９１、ＰＦ－０６８０１５９１、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、ＪＮＪ－６３７２３２８３およびＭＣＬＡ－１３４から選択される。

【0017】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号３、４および５のそれぞれのアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）；ならびに配列番号６、７および８のそれぞれのアミノ酸配列を含む３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号９と１０の重鎖配列と軽鎖配列の対を含む。

【0019】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＲＥＧＮ３５０４、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＬＹ３３０００５４、ＦＡＺ０５３、ＳＴＩ－１０１４、ＣＸ－０７２、ＫＮ０３５およびＣＫ－３０１から選択される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；および配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＲＥＧＮ３５０４を含む。

【0020】

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４阻害剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体は、イピリムマブ、トレメリムマブおよびＲＥＧＮ４６５９から選択される。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。

【0021】

いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１５、１６および１７のそれぞれのアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）；ならびに配列番号１８、１９および２０のそれぞれのアミノ酸配列を含む３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；および配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２１と２２の重鎖配列と軽鎖配列の対を含む。

【0022】

いくつかの実施形態では、処置は、以下の１つまたはそれ以上から選択される治療効果をもたらす：腫瘍増殖の遅延、腫瘍細胞数の減少、腫瘍退縮、生存の延長、部分奏効および完全奏効。いくつかの実施形態では、腫瘍増殖は、未処置患者と比較して少なくとも５０％阻害される。いくつかの実施形態では、腫瘍増殖は、単独療法として腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤が投与される患者と比較して少なくとも５０％阻害される。いくつかの実施形態では、腫瘍増殖は、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤のうちのいずれか２つが投与される患者と比較して少なくとも５０％阻害される。

【0023】

いくつかの実施形態では、方法は、さらなる治療用薬剤または療法を患者に施すことをさらに含む。いくつかの実施形態では、さらなる治療用薬剤または療法は、以下から選択される：放射線照射、手術、化学療法剤、がんワクチン、Ｂ７－Ｈ３阻害剤、Ｂ７－Ｈ４阻害剤、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）阻害剤、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有３（ＴＩＭ３）阻害剤、ガレクチン９（ＧＡＬ９）阻害剤、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリン（Ｉｇ）含有サプレッサー（ＶＩＳＴＡ）阻害剤、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）阻害剤、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）阻害剤、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、アンジオポエチン－２（Ａｎｇ２）阻害剤、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体、カルメット－ゲラン桿菌ワクチン、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、細胞毒、インターロイキン６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤、インターロイキン４受容体（ＩＬ－４Ｒ）阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、抗体－薬物コンジュゲート、抗炎症薬ならびにこれらの組合せ。

【0024】

別の態様では、開示される技術は、腫瘍の増殖を処置または阻害する方法で使用するための、腫瘍溶解性ウイルスとＰＤ－１経路阻害剤とＣＴＬＡ４阻害剤の組合せに関し、方法は：（ａ）がん患者を選択すること；ならびに（ｂ）（ｉ）治療有効量の腫瘍溶解性ウイルスを、（ｉｉ）治療有効量のＰＤ－１経路阻害剤および（ｉｉｉ）治療有効量のＣＴＬＡ阻害剤と組み合わせて、それを必要とする患者に投与すること、を含む。

【0025】

別の態様では、開示される技術は、患者の腫瘍の増殖を処置または阻害するための腫瘍溶解性ウイルスとＰＤ－１経路阻害剤とＣＴＬＡ４阻害剤の治療有効量の組合せの使用に関して記載される指示書と併せて、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤を含むキットに関する。

【0026】

前述の概要は、本開示のすべての態様を定義することを意図するものではなく、さらなる態様は、他のセクション、例えば、以下の詳細な説明に記載される。文書全体は、統合された開示として関連づけられることが意図され、本明細書に記載の構成の組合せが本文書の同じセンテンスまたはパラグラフまたはセクションにたとえ一緒に見出されないとしても、本明細書に記載の構成のすべての組合せが企図されることを理解されたい。本発明の他の構成および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。しかし、詳細な説明および特定の実施例は、本開示の特定の実施形態を示すが、本開示の趣旨および範囲内の様々な変更および改変が、この詳細な説明から当業者には明らかになるため、例示としてのみ与えられることを理解されたい。

【図面の簡単な説明】

【0027】

【図1】実施例１に記載されるように、平均１５０ｍｍ^３のＭＣ３８腫瘍を有するマウスにおける、抗ＰＤ－１、抗ＣＴＬＡ４および腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－Ｆｌｕｃの腫瘍内送達を用いた組合せ処置の抗腫瘍効能を示すグラフである。各処置群における腫瘍移植後の複数の時点での平均腫瘍体積（ｍｍ^３＋／－ＳＥＭ）を示し、実施例１に記載されるように、処置日を矢印で示す。

【図2】実施例１に記載される各処置群に対する、処置開始後１１日目（腫瘍移植後２６日目）の個々の腫瘍体積を示すグラフである。

【図3】実施例１に記載される各処置群に対するカプラン－マイヤー生存曲線を示すグラフである。

【図4-1】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄおよび４Ｅは、実施例２に記載されるように、３重組合せの抗ＰＤ－１、抗ＣＴＬＡ４および腫瘍内送達される腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－ＧＦＰの抗腫瘍効能が、わずか１回用量の抗ＣＴＬＡ４ｍＩｇＧ２ａ抗体で達成することができることを示す一連の図である。図４Ａは、ＰＢＳ処置群における腫瘍移植後の複数の時点での平均腫瘍体積を示す。図４Ｂは、ＰＢＳ、抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＴＬＡ４抗体（４回用量）処置群における腫瘍移植後の複数の時点での平均腫瘍体積を示す。図４Ｃは、ＶＳＶ、抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＴＬＡ４抗体（１回用量）処置群における腫瘍移植後の複数の時点での平均腫瘍体積を示す。図４Ｄは、ＶＳＶ、抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＴＬＡ４抗体（２回用量）処置群における腫瘍移植後の複数の時点での平均腫瘍体積を示す。図４Ｅは、ＶＳＶＩＴ、抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＴＬＡ４抗体（４回用量）処置群における腫瘍移植後の複数の時点での平均腫瘍体積を示す。処置日を矢印で示す。ＴＦ：腫瘍がない。

【図4-2】図４－１の続き。

【図4-3】図４－２の続き。

【図5】実施例２に記載される各処置群に対するカプラン－マイヤー生存曲線を示すグラフである。

【図6】実施例３に記載されるように、３重組合せの抗ＰＤ－１、抗ＣＴＬＡ４および腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－ＧＦＰの抗腫瘍効能が、ウイルスの腫瘍内送達または静脈内送達のいずれかで達成することができることを示すグラフである。各処置群における腫瘍移植後の複数の時点での平均腫瘍体積（ｍｍ^３＋／－ＳＥＭ）を示す。表５および実施例３に記載されるように処置を施した。

【図7】実施例３に記載される各処置群に対するカプラン－マイヤー生存曲線を示すグラフである。

【図8】実施例４に記載されるように、平均１５０ｍｍ^３のＭＣ３８腫瘍を有するマウスにおける、抗ＰＤ－１、抗ＣＴＬＡ４および腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－ｍＩＦＮｂ－ＮＩＳの静脈内送達を用いた組合せ処置の抗腫瘍効能を示すグラフである。各処置群における腫瘍移植後の複数の時点での平均腫瘍体積（ｍｍ^３＋／－ＳＥＭ）を示す。表７および実施例４に記載されるように処置を施した。

【図9】実施例４に記載される各処置群に対する、処置開始後１０日目の個々の腫瘍体積を示すグラフである。統計的有意性は、ダネットの多重比較事後検定を用いる一元配置ＡＮＯＶＡによって決定した（^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

【図10】実施例４に記載される各処置群に対するカプラン－マイヤー生存曲線を示すグラフである。

【図11】実施例５に記載される各処置群における腫瘍移植後の複数の時点での平均腫瘍体積（ｍｍ^３＋／－ＳＥＭ）を示すグラフである。処置日を矢印で示す。

【図12】実施例５に記載される各処置群に対する、処置開始後２９日目の個々の腫瘍体積を示すグラフである。

【図13】実施例５に記載される各処置群に対するカプラン－マイヤー生存曲線を示すグラフである。

【図14】実施例６に記載される各処置群における腫瘍移植後の複数の時点での平均腫瘍体積（ｍｍ^３＋／－ＳＥＭ）を示すグラフである。処置日を矢印で示す。

【図15】実施例６に記載される各処置群に対する、腫瘍移植後後２２日目（処置開始後１０日日目）の個々の腫瘍体積を示すグラフである。

【図16】実施例６に記載される各処置群に対するカプラン－マイヤー生存曲線を示すグラフである。

【図17】実施例７に記載される各処置群における腫瘍移植後の複数の時点での平均腫瘍体積（ｍｍ^３＋／－ＳＥＭ）を示すグラフである。処置日を矢印で示す。

【図18】実施例８に記載される各処置群における腫瘍移植後の複数の時点での平均腫瘍体積（ｍｍ^３＋／－ＳＥＭ）を示すグラフである。処置日を矢印で示す。

【図19】実施例９に記載される各処置群における腫瘍移植後の複数の時点での平均腫瘍体積（ｍｍ^３＋／－ＳＥＭ）を示すグラフである。

【図20】腫瘍から回収し、２回用量の抗ＰＤ－１とともに１２日目にＶＳＶを受け、１２日目および１４日目にａ－ＣＴＬＡ４を受けた後１７日目に実施例１０に記載される各処置群において示される腫瘍抗原またはＶＳＶ－ＮＰに一晩再曝露したＣＤ８ＴＩＬによって放出されたＩＦＮｇの平均スポット形成単位（ＳＦＵ）を示すグラフである。ＤＭＳＯおよびＰＭＡ／イオノマイシンは、腫瘍移植後の複数の時点における陰性および陽性対照としてそれぞれ働き、処置日を矢印で示す。

【発明を実施するための形態】

【0028】

本開示は、腫瘍溶解性ウイルス、プログラム死１（ＰＤ－１）経路阻害剤および細胞傷害性Ｔリンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ４）阻害剤の新規な３重組合せ療法が、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤の単独療法または２重組合せ療法のどれよりも腫瘍増殖の阻害において相乗活性を示すという予想外の発見に少なくとも部分的に基づく。本明細書で示されるように、１回用量のＣＴＬＡ４阻害剤が投与されることを含む開示される３重組合せ療法は、２、３、４回またはそれ以上の用量のＣＴＬＡ４阻害剤を含む組合せ療法と匹敵する抗腫瘍効能を達成した。さらに、腫瘍溶解性ウイルスの静脈内投与は、該ウイルスの腫瘍内投与と少なくとも同程度に効果的である。したがって、本明細書で開示される３重組合せ療法は、処置関連毒性の危険性を低減した、がん処置のための驚くほど有効な療法に相当する。

【0029】

したがって、一態様では、本開示は、腫瘍の増殖を処置または阻害する方法を提供し、方法は：（ａ）がん患者を選択すること；ならびに（ｂ）（ｉ）治療有効量の腫瘍溶解性ウイルスを、（ｉｉ）治療有効量のＰＤ－１経路阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１もしくは抗ＰＤ－Ｌ２抗体またはその抗原結合性フラグメント）および（ｉｉｉ）治療有効量のＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント）を組み合わせて、それを必要とする患者に投与すること、を含む。

【0030】

本明細書で使用する場合、用語「患者」は、用語「対象」と互換的に使用することができる。表現「それを必要とする対象」は、がんの１つもしくはそれ以上の症状もしくは徴候を示す、および／またはがんと診断されたヒトまたはヒト以外の哺乳動物を意味する。いくつかの実施形態では、ヒト対象は、原発性もしくは転移性腫瘍および／または１つもしくはそれ以上の症状もしくは徴候、例えば、限定されないが、リンパ節腫大、腹部の腫れ、胸部の痛み／圧迫感、原因不明の体重減少、発熱、寝汗、持続性疲労、食欲不振、脾臓の腫大、そう痒を有すると診断される。本表現は、毒性副作用がある化学療法の１またはそれ以上のサイクルを受けた患者を含む。いくつかの実施形態では、表現「それを必要とする対象」は、処置を受けたが、その後に、再発または転移したがん患者を含む。例えば、腫瘍退縮につながる１つまたはそれ以上の抗がん剤を用いた処置を受けることができたが、その後、１つまたはそれ以上の抗がん剤に抵抗性のがん（例えば、化学療法抵抗性がん）を再発した患者は、本開示の方法で処置される。

【0031】

本明細書で使用する場合、用語「処置すること」、「処置する」などは、少なくとも１つの症状もしくは徴候の重症度を軽減させるかもしくは低減させること、一時的にもしくは永続的にのいずれかで症状の原因を排除すること、腫瘍増殖を遅延させるかもしくは阻害すること、腫瘍細胞負荷もしくは腫瘍量を低減させること、腫瘍退縮を促進すること、腫瘍の縮小、壊死および／もしくは消失を引き起こすこと、腫瘍の再発を予防すること、転移を予防するかもしくは阻害すること、転移性腫瘍増殖を阻害すること、放射線照射もしくは手術の必要性を排除すること、ならびに／または対象の生存期間を延ばすことを意味する。

【0032】

多くの実施形態では、用語「腫瘍」、「病変」、「腫瘍病変」、「がん」および「悪性腫瘍」は互換的に使用され、１つまたはそれ以上のがん性増殖物を指す。いくつかの実施形態では、がんは、副腎腫瘍、胆道がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、癌腫、中枢または末梢神経系組織がん、子宮頸がん、結腸がん、内分泌もしくは神経内分泌がんまたは造血がん、食道がん、線維腫、胃腸がん、神経膠腫、頭頸部がん、リー－フラウメニ腫瘍、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、多発性神経内分泌Ｉ型およびＩＩ型腫瘍、鼻咽頭がん、口腔がん、中咽頭がん、骨原性肉腫腫瘍、卵巣がん、膵臓がん、膵島細胞がん、副甲状腺がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、呼吸器がん、肉腫、皮膚がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、気管がん、泌尿生殖器がんならびに子宮がんから選択される。

【0033】

いくつかの実施形態によれば、本開示は、腫瘍の増殖を処置する、遅延させるまたは阻害するための方法を含む。いくつかの実施形態では、本開示は、腫瘍退縮を促進するための方法を含む。いくつかの実施形態では、本開示は、腫瘍細胞負荷を低減させるための、または腫瘍量を低減させるための方法を含む。いくつかの実施形態では、本開示は、腫瘍の再発を予防するための方法を含む。

【0034】

いくつかの実施形態によれば、本開示の方法は、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性フラグメント）またはＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合性フラグメント）を、それらを必要とする対象に投与することを含む。

【0035】

いくつかの実施形態では、方法は、１回もしくはそれ以上の用量のＰＤ－１経路阻害剤および／または１回もしくはそれ以上の用量のＣＴＬＡ４阻害剤の対象への投与の前、後または該投与と同時に、１回またはそれ以上の用量の腫瘍溶解性ウイルスを対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、１回またはそれ以上の用量のＰＤ－１経路阻害剤は、１回またはそれ以上の用量のＣＴＬＡ４阻害剤と組み合わせて投与することができる。

【0036】

本明細書で使用する場合、用語「と組み合わせて」は、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント）およびＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント）の連続的投与または同時投与も含む。例えば、ＣＴＬＡ４阻害剤の「前に」投与される場合、１回またはそれ以上の用量のＰＤ－１経路阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント）は、１回またはそれ以上の用量のＣＴＬＡ阻害剤の投与の約１２週間、約１１週間、約１０週間、約９週間、約８週間、約７週間、約６週間、約５週間、約４週間、約３週間、約２週間、約１５０時間、約１００時間、約７２時間、約６０時間、約４８時間、約３６時間、約２４時間、約１２時間、約１０時間、約８時間、約６時間、約４時間、約２時間、約１時間、約３０分、約１５分または約１０分よりも前に投与することができる。

【0037】

ＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント）の「後に」投与される場合、ＰＤ－１経路阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント）は、ＣＴＬＡ４阻害剤の投与から約１２週間、約１１週間、約１０週間、約９週間、約８週間、約７週間、約６週間、約５週間、約４週間、約３週間、約２週間、約１５０時間、約１００時間、約７２時間、約６０時間、約４８時間、約３６時間、約２４時間、約１２時間、約１０時間、約８時間、約６時間、約４時間、約２時間、約１時間、約３０分、約１５分または約１０分後に投与することができる。

【0038】

ＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント）と「同時の」投与は、ＰＤ－１経路阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント）が、ＣＴＬＡ４阻害剤の投与の１０分未満以内（前、後もしくは同時）に別々の投薬量で対象に投与されるか、またはＰＤ－１経路阻害剤とＣＴＬＡ４阻害剤の両方を含む単一の配合投与製剤として対象に投与されることを意味する。

【0039】

いくつかの実施形態では、開示される方法は、抗腫瘍療法を施すことをさらに含むことができる。抗腫瘍療法としては、限定されないが、化学療法、放射線照射、手術などの、または本明細書の他の個所に記載されるような従来の抗腫瘍療法が挙げられる。

【0040】

いくつかの実施形態では、処置は、以下の１つまたはそれ以上から選択される治療効果をもたらす：腫瘍増殖の遅延、腫瘍細胞数の減少、腫瘍退縮、生存の延長、部分奏効および完全奏効。いくつかの実施形態では、患者の腫瘍増殖は、未処置患者の腫瘍増殖と比較して、少なくとも１０日遅延させられる。いくつかの実施形態では、腫瘍増殖は、未処置患者と比較して、少なくとも２０％（例えば、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、少なくとも３００％）阻害される。いくつかの実施形態では、腫瘍増殖は、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤が単独療法として投与される患者と比較して、少なくとも２０％（例えば、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、少なくとも３００％）阻害される。いくつかの実施形態では、腫瘍増殖は、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤のうちの２つが投与される患者と比較して、少なくとも２０％（例えば、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、少なくとも３００％）阻害される。

【0041】

腫瘍溶解性ウイルス
腫瘍溶解性ウイルスは、操作されたかまたは天然に進化したがん指向性のウイルスを用いて、処置される患者において腫瘍細胞死を誘発するがん療法である。一般に、複製型腫瘍溶解性ウイルスが投与されると、感染した腫瘍細胞は、後代ウイルスを産生する可能性があり、これによって、破壊的感染が隣接した腫瘍細胞に伝播することが可能になる。ウイルス複製の可能性は、細胞がウイルス感染を感知し、それに応答する能力によって決定される。そのうえ、腫瘍溶解性ウイルスは、骨髄系細胞（マクロファージおよび樹状細胞）を刺激してＴ細胞刺激を増強するためのアジュバントとして作用することができる、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を有する。

【0042】

いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、複製能がある腫瘍溶解性ラブドウイルスである。そのような腫瘍溶解性ラブドウイルスとしては、限定されないが、野生型または遺伝子改変のアラジャス（Ａｒａｊａｓ）ウイルス、チャンディプラウイルス、コーカルウイルス、イスファハンウイルス、マラバ（Ｍａｒａｂａ）ウイルス、ピリーウイルス、水疱性口内炎アラゴアスウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ＢｅＡｎ１５７５７５ウイルス、ボテケ（Ｂｏｔｅｋｅ）ウイルス、カルチャキ（Ｃａｌｃｈａｑｕｉ）ウイルス、ウナギウイルスアメリカン、グレーロッジ（ＧｒａｙＬｏｄｇｅ）ウイルス、ジュロナ（Ｊｕｒｏｎａ）ウイルス、クラマスウイルス、クワッタ（Ｋｗａｔｔａ）ウイルス、ラホヤ（ＬａＪｏｙａ）ウイルス、マルペススプリング（ＭａｌｐａｉｓＳｐｒｉｎｇ）ウイルス、エルゴン山コウモリウイルス、ペリネット（Ｐｅｒｉｎｅｔ）ウイルス、ツパイ（Ｔｕｐａｉａ）ウイルス、ファーミントン（Ｆａｒｍｉｎｇｔｏｎ）、バイアグランデ（ＢａｈｉａＧｒａｎｄｅ）ウイルス、ミュアースプリングス（ＭｕｉｒＳｐｒｉｎｇｓ）ウイルス、リードランチ（ＲｅｅｄＲａｎｃｈ）ウイルス、ハートパークウイルス、フランダースウイルス、カメセ（Ｋａｍｅｓｅ）ウイルス、モスケイロ（Ｍｏｓｑｕｅｉｒｏ）ウイルス、モスリル（Ｍｏｓｓｕｒｉｌ）ウイルス、バルール（Ｂａｒｕｒ）ウイルス、フクオカウイルス、ケルンキャニオンウイルス、ンコルビソン（Ｎｋｏｌｂｉｓｓｏｎ）ウイルス、ル・ダンテック（ＬｅＤａｎｔｅｃ）ウイルス、キューラリバ（Ｋｅｕｒａｌｉｂａ）ウイルス、コネチカットウイルス、ニューミントウイルス（ＮｅｗＭｉｎｔｏ）、ソーグラス（Ｓａｗｇｒａｓｓ）ウイルス、チャコ（Ｃｈａｃｏ）ウイルス、セナ・マドゥレイラ（ＳｅｎａＭａｄｕｒｅｉｒａ）ウイルス、ティンボ（Ｔｉｍｂｏ）ウイルス、アルムピウォー（Ａｌｍｐｉｗａｒ）ウイルス、アルアク（Ａｒｕａｃ）ウイルス、バンゴラン（Ｂａｎｇｏｒａｎ）ウイルス、ビンボ（Ｂｉｍｂｏ）ウイルス、ビベンスアーム（ＢｉｖｅｎｓＡｒｍ）ウイルス、ブルークラブウイルス、チャールビルウイルス、コースタルプレーンズ（ＣｏａｓｔａｌＰｌａｉｎｓ）ウイルス、ＤａｋＡｒＫ７２９２ウイルス、エントアメーバウイルス、ガルバ（Ｇａｒｂａ）ウイルス、ゴサス（Ｇｏｓｓａｓ）ウイルス、ハンプティドゥー（ＨｕｍｐｔｙＤｏｏ）ウイルス、ジョインジャカカ（Ｊｏｉｎｊａｋａｋａ）ウイルス、カナマンガラム（Ｋａｎｎａｍａｎｇａｌａｍ）ウイルス、コロンゴ（Ｋｏｌｏｎｇｏ）ウイルス、クールピニャ（Ｋｏｏｌｐｉｎｙａｈ）ウイルス、コトンカンウイルス、ランジャ（Ｌａｎｄｊｉａ）ウイルス、マニトバ（Ｍａｎｉｔｏｂａ）ウイルス、マルコ（Ｍａｒｃｏ）ウイルス、ナソウル（Ｎａｓｏｕｌｅ）ウイルス、ナバロ（Ｎａｖａｒｒｏ）ウイルス、ヌガイガン（Ｎｇａｉｎｇａｎ）ウイルス、オーク－ベール（Ｏａｋ－Ｖａｌｅ）ウイルス、オボディアンウイルス、オオイタ（Ｏｉｔａ）ウイルス、ウアンゴ（Ｏｕａｎｇｏ）ウイルス、パリークリーク（ＰａｒｒｙＣｒｅｅｋ）ウイルス、リオグランデシクリッド（ＲｉｏＧｒａｎｄｅｃｉｃｈｌｉｄ）ウイルス、サンジンバ（Ｓａｎｄｊｉｍｂａ）ウイルス、シグマウイルス、スリプル（Ｓｒｉｐｕｒ）ウイルス、スウィートウォーターブランチ（ＳｗｅｅｔｗａｔｅｒＢｒａｎｃｈ）ウイルス、ティブローガーガン（Ｔｉｂｒｏｇａｒｇａｎ）ウイルス、キシブレマ（Ｘｉｂｕｒｅｍａ）ウイルス、ヤタ（Ｙａｔａ）ウイルス、ロードアイランド（ＲｈｏｄｅＩｓｌａｎｄ）ウイルス、アデレードリバー（ＡｄｅｌａｉｄｅＲｉｖｅｒ）ウイルス、ベリマー（Ｂｅｒｒｉｍａｈ）ウイルス、キンバリー（Ｋｉｍｂｅｒｌｅｙ）ウイルスまたはウシ流行熱ウイルスが挙げられる。

【0043】

水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）は、前述のように、ラブドウイルス科のメンバーである。ＶＳＶゲノムは、５つの主要なポリペプチド：ヌクレオカプシド（Ｎ）ポリペプチド、リンタンパク質（Ｐ）ポリペプチド、マトリックス（Ｍ）ポリペプチド、糖タンパク質（Ｇ）ポリペプチドおよびウイルスポリメラーゼ（Ｌ）ポリペプチドをコードするマイナス鎖ＲＮＡの単一分子である。

【0044】

いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは野生型または組換えＶＳＶである。いくつかの実施形態では、組換えＶＳＶは、１つまたはそれ以上の突然変異、例えば、Ｍ５１Ｒ置換（本明細書において、ＶＳＶ－Ｍ５１Ｒとも称される）を含む。

【0045】

いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、インターフェロンベータ（ＩＦＮｂ）などの１つまたはそれ以上のサイトカインを発現するように操作することができる。いくつかの実施形態では、ＩＦＮｂ（例えば、インターフェロンベータ－１ａ）は、ヒトもしくはマウスのＩＦＮｂまたはそれらの変異体であってもよい。いくつかの実施形態では、ＩＦＮｂは、配列番号２３もしくは２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、または配列番号２３もしくは２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＦＮｂをコードする核酸配列はＭウイルス遺伝子とＧウイルス遺伝子の間に位置している。そのような位置によって、ウイルスが、非がん性組織において抗ウイルス免疫応答を活性化し、それにより、がん細胞における効率的なウイルス複製を妨げることなく、潜在的なウイルス毒性を軽減させるのに有効な量のＩＦＮｂポリペプチドを発現することが可能になる。

【0046】

いくつかの実施形態では、組換えＶＳＶは、ナトリウム／ヨウ素共輸送体（ＮＩＳ）またはその変異体をさらに発現する。いくつかの実施形態では、ＮＩＳは、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、または配列番号２５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＮＩＳをコードする核酸配列はＧウイルス遺伝子とＬウイルス遺伝子の間に位置しており、これにより、ＮＩＳポリペプチドの適切な発現レベルが可能になる。

【0047】

ある特定の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、例えば、その内容全体を参照によって本明細書に組み入れるＵＳ９４２８７３６に記載されているＶｏｙａｇｅｒＶ１として当技術分野で既知の組換えＶＳＶである。

【0048】

ＰＤ－１経路阻害剤
本明細書に開示される方法は、治療有効量のＰＤ－１経路阻害剤を投与することを含む。本明細書で使用する場合、「ＰＤ－１経路阻害剤」は、ＰＤ－１の活性または発現を阻害、遮断、抑止または妨害することができる任意の分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１経路阻害剤は、抗体、小分子化合物、核酸、ポリペプチドまたはこれらの機能的フラグメントもしくは変異体であってもよい。適切なＰＤ－１経路阻害剤の非限定例としては、抗ＰＤ－１抗体およびその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤ－Ｌ１抗体およびその抗原結合性フラグメントならびに抗ＰＤ－Ｌ２抗体およびその抗原結合性フラグメントが挙げられる。

【0049】

適切なＰＤ－１経路阻害剤の他の非限定例としては、ＲＮＡｉ分子、例えば、抗ＰＤ－１ＲＮＡｉ分子、抗ＰＤ－Ｌ１ＲＮＡｉおよび抗ＰＤ－Ｌ２ＲＮＡｉ、アンチセンス分子、例えば、抗ＰＤ－１アンチセンスＲＮＡ、抗ＰＤ－Ｌ１アンチセンスＲＮＡおよび抗ＰＤ－Ｌ２アンチセンスＲＮＡ、ならびにドミナントネガティブタンパク質、例えば、ドミナントネガティブＰＤ－１タンパク質、ドミナントネガティブＰＤ－Ｌ１タンパク質およびドミナントネガティブＰＤ－Ｌ２タンパク質が挙げられる。前述のＰＤ－１経路阻害剤のいくつかの例は、例えば、ＵＳ９３０８２３６、ＵＳ１００１１６５６およびＵＳ２０１７０２９０８０８に記載されており、ＰＤ－１経路阻害剤を特定する部分を、参照によって本明細書に組み入れる。

【0050】

本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続した４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖から構成される免疫グロブリン分子（すなわち、「完全な抗体分子」）、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）またはその抗原結合性フラグメントを指すことが意図される。各重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）ならびに重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される）を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が点在している。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。いくつかの実施形態では、抗体（またはその抗原結合性フラグメント）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、または天然もしくは人工的に修飾されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲの並行（ｓｉｄｅ－ｂｙ－ｓｉｄｅ）解析に基づいて定義することができる。本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、完全な抗体分子の抗原結合性フラグメントも含む。

【0051】

本明細書で使用する場合、用語、抗体の「抗原結合性フラグメント」、抗体の「抗原結合部分」などは、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、天然に存在する、酵素的に入手可能な、合成の、または遺伝子操作されている任意のポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合性フラグメントは、例えば、任意の適切な標準的な技法、例えば、タンパク質消化、または抗体の可変ドメインおよび場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現をともなう組換え遺伝子操作技法を使用して、完全な抗体分子から生じ得る。そのようなＤＮＡは既知であり、および／または例えば、商業的供給元、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であり、または合成することができる。ＤＮＡは、例えば、１つもしくはそれ以上の可変および／もしくは定常ドメインを適切な構成に配置するために、またはコドンを導入する、システイン残基を作出する、アミノ酸を修飾する、付加する、もしくは欠失させるなどのために、化学的に、または分子生物学的技法を使用することによって、配列させ、操作することができる。

【0052】

抗原結合性フラグメントの非限定例としては、以下が挙げられる：（ｉ）Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント；（ｉｖ）Ｆｖフラグメント；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））、または拘束されたＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチド。他の操作された分子、例えば、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインも、本明細書で使用する場合、表現「抗原結合性フラグメント」内に包含される。

【0053】

抗体の抗原結合性フラグメントは、典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成のものであってもよく、１つもしくはそれ以上のフレームワーク配列に隣接するか、または該フレームワーク配列とインフレームである、少なくとも１つのＣＤＲを概して含む。Ｖ_Ｌドメインと結合したＶ_Ｈドメインを有する抗原結合性フラグメントでは、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌドメインは、任意の適切な配置で、互いに対して位置し得る。例えば、可変領域は二量体であってもよく、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｈ－Ｖ_ＬまたはＶ_Ｌ－Ｖ_Ｌ二量体を含むことができる。あるいは、抗体の抗原結合性フラグメントは、単量体のＶ_ＨまたはＶ_Ｌドメインを含むことができる。

【0054】

いくつかの実施形態では、抗体の抗原結合性フラグメントは、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合した少なくとも１つの可変ドメインを含むことができる。本開示の抗体の抗原結合性フラグメント内で見出すことができる可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な例示的構成としては、以下が挙げられる：（ｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１；（ｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ２；（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ３；（ｉｖ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２；（ｖ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（ｖｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（ｖｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｌ；（ｖｉｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１；（ｉｘ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ２；（ｘ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ３；（ｘｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２；（ｘｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（ｘｉｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；および（ｘｉｖ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ。上に列挙した例示的構成のうちのいずれかを含む、可変ドメインおよび定常ドメインの任意の構成において、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接連結されるか、または完全もしくは部分的なヒンジもしくはリンカー領域によって連結される。ヒンジ領域は、単一ポリペプチド分子において隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメインの間で可動性または半可動性の連結をもたらす、少なくとも２個（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０個またはそれ以上）のアミノ酸からなり得る。さらに、本開示の抗体の抗原結合性フラグメントは、互いと、および／または１つもしくはそれ以上の単量体のＶ_ＨドメインもしくはＶ_Ｌドメインと（例えば、ジスルフィド結合によって）非共有結合した、上に列挙した可変ドメインおよび定常ドメインの構成のうちのいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または、他の多量体）を含むことができる。

【0055】

本明細書に開示される方法で使用する抗体は、ヒト抗体であってもよい。本明細書で使用する場合、用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を指す。本開示のヒト抗体は、それにもかかわらず、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列にコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダムまたは部位特異的突然変異誘発によって、またはインビボで体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含むことができる。しかし、本明細書で使用する場合、用語「ヒト抗体」は、別の哺乳類種、例えばマウスの生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフト化された抗体を含むことを意図するものではない。

【0056】

本明細書に開示される方法で使用する抗体は、組換えヒト抗体であってもよい。本明細書で使用する場合、用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段によって製造、発現、作出または単離されたすべてのヒト抗体、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現させられた抗体（以下でさらに記載する）、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（以下でさらに記載する）、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒら（１９９２）Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．２０：６２８７～６２９５を参照されたい）、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列から他のＤＮＡ配列へのスプライシングをともなう任意の他の手段によって製造、発現、作出もしくは単離された抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかし、いくつかの実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックである動物が使用される場合、インビボ体細胞突然変異誘発）を受け、それにより、組換え抗体のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ配列に由来し、該配列に関連しているが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在し得ない配列である。

【0057】

抗ＰＤ－１抗体およびその抗原結合性フラグメント
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法で使用されるＰＤ－１経路阻害剤は、ＰＤ－１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、抗ＰＤ－１抗体）である。用語「特異的に結合する」などは、抗体またはその抗原結合性フラグメントが、生理的条件下で比較的安定な抗原と複合体を形成することを意味する。抗体が抗原に特異的に結合するかどうかを決定する方法は当技術分野で周知であり、該方法としては、例えば、平衡透析、表面プラスモン共鳴などが挙げられる。例えば、ＰＤ－１に「特異的に結合する」抗体としては、本開示において使用される場合、表面プラスモン共鳴アッセイで測定した場合に、約５００ｎＭ未満、約３００ｎＭ未満、約２００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約９０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０未満ｎＭ、約５０未満ｎＭ、約４０未満ｎＭ、約３０未満ｎＭ、約２０未満ｎＭ、約１０未満ｎＭ、約５未満ｎＭ、約４未満ｎＭ、約３未満ｎＭ、約２未満ｎＭ、約１ｎＭ未満または約０．５ｎＭ未満のＫ_Ｄで、ＰＤ－１またはその一部に結合する抗体が挙げられる。しかし、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する単離抗体は、他の抗原、例えば、他の（非ヒト）種由来のＰＤ－１分子に交差反応性を有することがある。

【0058】

ある特定の例示的実施形態によれば、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、その内容全体を参照によって本明細書に組み入れるＵＳ９９８７５００に記載される抗ＰＤ－１抗体のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および／または相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。

【0059】

ある特定の例示的実施形態では、本開示の文脈において使用することができる抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。

【0060】

いくつかの実施形態によれば、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、３つのＨＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）ならびに３つのＬＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号３のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２は配列番号４のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ３は配列番号５のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ１は配列番号６のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２は配列番号７のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ３は配列番号８のアミノ酸配列を含む。

【0061】

さらに他の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１を含むＨＣＶＲおよび配列番号２を含むＬＣＶＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0062】

配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む例示的抗体は、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０；ＬＩＢＴＡＹＯ（登録商標）としても知られる）として知られる完全ヒト抗ＰＤ－１抗体である。

【0063】

ある特定の例示的実施形態によれば、本開示の方法は、セミプリマブまたはその生物学的同等物の使用を含む。本明細書で使用する場合、ＰＤ－１経路阻害剤に関する用語「生物学的同等物」は、同様の実験条件下において同じモル用量で単回用量または複数回用量のいずれかで投与された場合に吸収の速度および／または程度が、参照抗体（例えば、セミプリマブ）のものと有意差を示さない医薬的同等物または医薬的代替物である、抗ＰＤ－１抗体またはＰＤ－１結合タンパク質またはこれらのフラグメントを指す。本開示の文脈において、用語「生物学的同等物」は、ＰＤ－１に結合し、安全性、純度および／または効力に関してセミプリマブと臨床的に意味のある差異がない抗原結合タンパク質を含む。

【0064】

本開示のいくつかの実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有するＨＣＶＲを含む。

【0065】

本開示のいくつかの実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２に対して（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有するＬＣＶＲを含む。配列同一性は、当技術分野で既知の方法（例えば、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴおよびＢＬＡＳＴ）によって測定することができる。

【0066】

本開示のいくつかの実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１またはその抗原結合性フラグメントは、１０個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む。本開示のいくつかの実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１またはその抗原結合性フラグメントは、１０個以下のアミノ酸置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。

【0067】

１つまたはそれ以上の保存的アミノ酸置換を有する、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のうちのいずれかの変異体も本開示の範囲内である。例えば、本開示は、例えば、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のうちのいずれかに対して１０個以下、８個以下、６個以下、４個以下などの保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＰＤ－Ｌ１抗体の使用を含む。

【0068】

本開示の方法の文脈において使用することができる他の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントとしては、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ＭＥＤＩ０６０８、ピディリズマブ、ＢＩ７５４０９１、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１としても知られる）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０としても知られる）、ＪＮＪ－６３７２３２８３、ＭＣＬＡ－１３４として当技術分野で言及され、既知である抗体、または米国特許第６８０８７１０号、第７４８８８０２号、第８００８４４９号、第８１６８７５７号、第８３５４５０９号、第８６０９０８９号、第８６８６１１９号、第８７７９１０５号、第８９００５８７および第９９８７５００号、ならびに特許公報ＷＯ２００６／１２１１６８、ＷＯ２００９／１１４３３５に記載される抗ＰＤ－１抗体のうちのいずれかが挙げられる。抗ＰＤ－１抗体を特定する前述の刊行物のすべての部分を、参照によって本明細書に組み入れる。

【0069】

本開示の方法の文脈において使用される抗ＰＤ－１抗体は、ｐＨ依存結合特性を有し得る。例えば、本開示の方法で使用するための抗ＰＤ－１抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで、ＰＤ－１への結合の低減を示し得る。あるいは、本開示の抗ＰＤ－１抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで、その抗原への結合の増強を示し得る。表現「酸性ｐＨ」は、約６．２未満、例えば、約６．０、５．９５、５．９、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０またはそれ以下のｐＨ値を含む。本明細書で使用する場合、表現「中性ｐＨ」は、約７．０～約７．４のｐＨを意味する。表現「中性ｐＨ」は、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５および７．４のｐＨ値を含む。

【0070】

ある特定の場合では、「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでのＰＤ－１への結合の低減」は、酸性ｐＨでのＰＤ－１への抗体結合のＫ_Ｄ値対中性ｐＨでのＰＤ－１への抗体結合のＫ_Ｄ値（または逆）の比に換算して表される。例えば、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗体またはその抗原結合性フラグメントが約３．０以上の酸性／中性Ｋ_Ｄ比を示す場合、本開示の目的において、「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでのＰＤ－１への結合の低減」を示すと見なすことができる。ある特定の例示的実施形態では、本開示の抗体または抗原結合性フラグメントに対する酸性／中性Ｋ_Ｄ比は、約３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、４０．０、５０．０、６０．０、７０．０、１００．０またはそれ以上であり得る。

【0071】

ｐＨ依存結合特性を有する抗体は、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでの特定の抗原への結合の低減（または増強）について抗体の集団をスクリーニングすることによって得ることができる。さらに、アミノ酸レベルでの抗原結合ドメインの修飾は、ｐＨ依存特性を有する抗体をもたらすことができる。例えば、抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤＲ内）の１つまたはそれ以上のアミノ酸をヒスチジン残基と置換することによって、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで抗原結合が低減した抗体を得ることができる。本明細書で使用する場合、表現「酸性ｐＨ」は６．０以下のｐＨを意味する。

【0072】

抗ＰＤ－Ｌ１抗体およびその抗原結合性フラグメント
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法で使用されるＰＤ－１経路阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）である。例えば、本開示の文脈において使用される場合、「ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する」抗体としては、約１×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄ（例えば、Ｋ_Ｄが小さいほど密接な結合を示す）でＰＤ－Ｌ１またはその一部に結合する抗体が挙げられる。「高親和性」抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、表面プラスモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）または溶液親和性ＥＬＩＳＡによって測定した場合に、少なくとも１０^－８Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍまたは１０^－１２ＭのＫ_Ｄとして表されるＰＤ－Ｌ１に対する結合親和性を有するｍＡｂを指す。しかし、ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する単離抗体は、他の抗原、例えば、他の（非ヒト）種由来のＰＤ－Ｌ１分子に交差反応性を有することがある。

【0073】

ある特定の例示的実施形態によれば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、その内容全体を参照によって本明細書に組み入れるＵＳ９９３８３４５に記載される抗ＰＤ－Ｌ１抗体のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および／または相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。

【0074】

ある特定の例示的実施形態では、本開示の文脈において使用することができる抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１１を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および配列番号１２を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。配列番号１１のＨＣＶＲおよび配列番号１２のＬＣＶＲを含む例示的抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＲＥＧＮ３５０４である。

【0075】

本開示のいくつかの実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１１に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有するＨＣＶＲを含む。本開示のいくつかの実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１２に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有するＬＣＶＲを含む。

【0076】

本開示のいくつかの実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、１０個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む。本開示のいくつかの実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、１０個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。

【0077】

１つまたはそれ以上の保存的アミノ酸置換を有する、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のうちのいずれかの変異体も本開示の範囲内である。例えば、本開示は、例えば、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のうちのいずれかに対して１０個以下、８個以下、６個以下、４個以下などの保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＰＤ－Ｌ１抗体の使用を含む。

【0078】

本開示の方法の文脈において使用することができる他の抗ＰＤ－Ｌ１抗体としては、例えば、ＭＤＸ－１１０５、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標））、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（商標））、アベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（商標））、ＬＹ３３０００５４、ＦＡＺ０５３、ＳＴＩ－１０１４、ＣＸ－０７２、ＫＮ０３５（Ｚｈａｎｇら、ＣｅｌｌＤｉｓｃｏｖｅｒｙ、３、１７０００４（２０１７年３月））、ＣＫ－３０１（Ｇｏｒｅｌｉｋら、ＡｍｅｒｉｃａｎＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｆｏｒＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＡｎｎｕａｌＭｅｅｔｉｎｇ（ＡＡＣＲ）、２０１６－０４－０４抄録４６０６）として当技術分野で言及され、既知の抗体、または米国特許第７９４３７４３号、第８２１７１４９号、第９４０２８９９号、第９６２４２９８号および第９９３８３４５号、ならびに特許公報ＷＯ２００７／００５８７４、ＷＯ２０１０／０７７６３４、ＷＯ２０１３／１８１４５２、ＷＯ２０１３／１８１６３４、ＷＯ２０１６／１４９２０１、ＷＯ２０１７／０３４９１６またはＥＰ３１７７６４９に記載される他の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のうちのいずれかが挙げられる。抗ＰＤ－Ｌ１抗体を特定する前述の刊行物のすべての部分を、参照によって本明細書に組み入れる。

【0079】

抗ＰＤ－Ｌ２抗体およびその抗原結合性フラグメント
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法で使用されるＰＤ－１経路阻害剤は、ＰＤ－Ｌ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、抗ＰＤ－Ｌ２抗体）である。例えば、ＰＤ－Ｌ２に「特異的に結合する」抗体としては、本開示の文脈において使用される場合、約１×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄ（例えば、Ｋ_Ｄが小さいほど密接な結合を示す）でＰＤ－Ｌ２またはその一部に結合する抗体が挙げられる。「高親和性」抗ＰＤ－Ｌ２抗体は、表面プラスモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）または溶液親和性ＥＬＩＳＡによって測定した場合に、少なくとも１０^－８Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍまたは１０^－１２ＭのＫ_Ｄとして表されるＰＤ－Ｌ２に対する結合親和性を有するｍＡｂを指す。しかし、ヒトＰＤ－Ｌ２に特異的に結合する単離抗体は、他の抗原、例えば、他の（非ヒト）種由来のＰＤ－Ｌ２分子に交差反応性を有することがある。

【0080】

本開示の方法の文脈において使用することができる抗ＰＤ－Ｌ２抗体としては、例えば、米国特許第８５５２１５４号および第１０６４７７７１号に記載される抗ＰＤ－Ｌ２抗体が挙げられる。抗ＰＤ－Ｌ２抗体を特定する前述の刊行物のすべての部分を、参照によって本明細書に組み入れる。

【0081】

ＣＴＬＡ４阻害剤
本明細書に開示される方法は、治療有効量のＣＴＬＡ４阻害剤を投与することを含む。本明細書で使用する場合、「ＣＴＬＡ４阻害剤」は、ＣＴＬＡ４の活性または発現を阻害、遮断、抑止または妨害することができる任意の分子を指す。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４阻害剤は、抗体、小分子化合物、核酸、ポリペプチドまたはこれらの機能的フラグメントもしくは変異体であってもよい。適切なＣＴＬＡ４阻害剤の非限定例としては、抗ＣＴＬＡ４抗体およびその抗原結合性フラグメントが挙げられる。適切なＣＴＬＡ４阻害剤の他の非限定例としては、ＲＮＡｉ分子、例えば、抗ＣＴＬＡ４ＲＮＡｉ分子およびドミナントネガティブタンパク質、例えば、ドミナントネガティブＣＴＬＡ４タンパク質が挙げられる。

【0082】

抗ＣＴＬＡ４抗体およびその抗原結合性フラグメント
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法で使用されるＣＴＬＡ４阻害剤は、ＣＴＬＡ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体）である。用語「特異的に結合する」などは、抗体またはその抗原結合性フラグメントが、生理的条件下で比較的安定な抗原と複合体を形成することを意味する。抗体が抗原に特異的に結合するかどうかを決定する方法は当技術分野で周知であり、該方法としては、例えば、平衡透析、表面プラスモン共鳴などが挙げられる。例えば、ＣＴＬＡ４に「特異的に結合する」抗体としては、本開示の文脈において使用される場合、表面プラスモン共鳴アッセイで測定した場合に、約５００ｎＭ未満、約３００ｎＭ未満、約２００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約９０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０未満ｎＭ、約５０未満ｎＭ、約４０未満ｎＭ、約３０未満ｎＭ、約２０未満ｎＭ、約１０未満ｎＭ、約５未満ｎＭ、約４未満ｎＭ、約３未満ｎＭ、約２未満ｎＭ、約１ｎＭまたは約０．５ｎＭ未満のＫ_Ｄで、ＣＴＬＡ４抗体またはその一部に結合する抗体が挙げられる。しかし、ヒトＣＴＬＡ４に特異的に結合する単離抗体は、他の抗原、例えば、他の（非ヒト）種由来のＣＴＬＡ４分子に交差反応性を有することがある。

【0083】

ある特定の例示的実施形態では、本開示の文脈において使用することができる抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。

【0084】

いくつかの実施形態によれば、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントは、３つのＨＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）ならびに３つのＬＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２は配列番号１６のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ３は配列番号１７のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ１は配列番号１８のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２は配列番号１９のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ３は配列番号２０のアミノ酸配列を含む。

【0085】

さらに他の実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲおよび配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0086】

配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む例示的抗体は、ＲＥＧＮ４６５９として知られる完全ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体である。

【0087】

ある特定の例示的実施形態によれば、本開示の方法は、ＲＥＧＮ４６５９またはその生物学的同等物の使用を含む。本明細書で使用する場合、ＣＴＬＡ４阻害剤に関する用語「生物学的同等物」は、同様の実験条件下において同じモル用量で単回用量または複数回用量のいずれかで投与された場合に吸収の速度および／または程度が、参照抗体（例えば、ＲＥＧＮ４６５９）のものと有意差を示さない医薬的同等物または医薬的代替物である、抗ＣＴＬＡ４抗体またはＣＴＬＡ４結合タンパク質またはこれらのフラグメントを指す。本開示の文脈において、用語「生物学的同等物」は、ＣＴＬＡ４に結合し、安全性、純度および／または効力に関してＲＥＧＮ４６５９と臨床的に意味のある差異がない抗原結合タンパク質を含む。

【0088】

本開示のいくつかの実施形態によれば、抗ヒトＣＴＬＡ４またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有するＨＣＶＲを含む。

【0089】

本開示のいくつかの実施形態によれば、抗ヒトＣＴＬＡ４またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１４のアミノ酸配列に対して（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有するＬＣＶＲを含む。

【0090】

本開示のいくつかの実施形態によれば、抗ヒトＣＴＬＡ４またはその抗原結合性フラグメントは、１０個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む。本開示のいくつかの実施形態によれば、抗ヒトＣＴＬＡ４またはその抗原結合性フラグメントは、１０個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。

【0091】

【0092】

本開示の方法の文脈において使用することができる他の抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントとしては、例えば、イピリムマブ、トレメリムマブとして当技術分野で言及され、既知の抗体、または米国特許第７５２７９６９号、第８７７９０９８号、第７６６６４２４号、第７７３７２５８号、第７７４０８４５号、第８１４８１５４号、第８４１４８９２号、第８５０１４７１号および第９０６２１１０；ならびに特許公報ＵＳ２０１３／００７８２３４、ＵＳ２０１０／０１４３２４５、ＷＯ２０１７０６２６１５Ａ２、ＷＯ２００４／００１３８１およびＷＯ２０１２／１４７７１３に記載される抗ＣＴＬＡ４抗体のうちのいずれかを挙げることができる。抗ＣＴＬＡ４抗体を特定する前述の刊行物のすべての部分を、参照によって本明細書に組み入れる。

【0093】

医薬組成物および投与
本開示は、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤、および／またはＣＴＬＡ４阻害剤を対象に投与することを含む方法であって、抗体が別々のまたは配合された（単一の）医薬組成物内に含まれる、方法を含む。本開示の医薬組成物は、適切な移入、送達、忍容性などを提供する、適切な担体、賦形剤および他の薬剤とともに製剤化することができる。すべての薬剤師に既知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａに数多くの適切な製剤を見出すことができる。これらの製剤としては、例えば、粉末剤、ペースト剤、軟膏剤、ゼリー剤、ワックス、油、脂質、脂質（陽イオン性または陰イオン性）含有小胞（リポフェクチンなど）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト剤、水中油型および油中水型乳剤、カーボワックス乳剤（ｅｍｕｌｓｉｏｎｓｃａｒｂｏｗａｘ）（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル剤、ならびにカーボワックス含有半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌら、ＰＤＡ（１９９８）ＪＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌ５２：２３８～３１１も参照されたい。

【0094】

様々な送達系が既知であり、本開示の医薬組成物を投与するために使用することができ、例えば、リポソーム中のカプセル化、マイクロ粒子、マイクロカプセル、突然変異ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕら、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９～４４３２を参照されたい）である。投与方法としては、限定されないが、皮内、筋肉内、腫瘍内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口の経路が挙げられる。組成物は、好都合な任意の経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または皮膚粘膜の内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸の粘膜など）を介した吸収によって投与することができ、他の生理活性物質とともに投与することができる。

【0095】

腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤を含む医薬組成物は、標準的な針およびシリンジを用いて、腫瘍内、皮下または静脈内送達することができる。さらに、皮下送達に関して、ペン型送達装置は、本開示の医薬組成物の送達において容易に適用される。そのようなペン型送達装置は、再使用可能であるかまたは使い捨てであり得る。再使用可能なペン型送達装置は、概して、医薬組成物を含む交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内の医薬組成物のすべてが投与され、カートリッジが空になると、空カートリッジを容易に廃棄し、医薬組成物を含む新しいカートリッジと交換することができる。次いで、ペン型送達装置を再使用することができる。使い捨てのペン型送達装置では、交換可能なカートリッジはない。むしろ、使い捨てのペン型送達装置は、装置内のリザーバー中に保持された医薬組成物で予め充填されている。リザーバーが医薬組成物を出して空になると、装置全体が廃棄される。

【0096】

ある特定の状況では、医薬組成物は制御放出系で送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる；例えば、ＭｅｄｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ、ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編）、１９７４、ＣＲＣＰｒｅｓ．、ＢｏｃａＲａｔｏｎ、Ｆｌａを参照されたい。さらに別の実施形態では、制御放出系を組成物の標的の近くに置くことができるので、全身的用量のごく一部しか必要としない（Ｇｏｏｄｓｏｎ、１９８４、ＭｅｄｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ、上記、第２巻、１１５～１３８頁を参照されたい）。他の制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５２７～１５３３による総説で論じられている。

【0097】

注射用調製物は、静脈内、皮下、皮内、腫瘍内および筋肉内注射、点滴注入などのための剤形を含み得る。これらの注射用調製物は、既知の方法によって製造することができる。例えば、注射用調製物は、例えば、注射用に従来から使用されている無菌の水性媒体または油性媒体中に上記の抗体またはその塩を溶解、懸濁または乳化させることによって、製造することができる。注射用の水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコースおよび他の補助剤を含む等張液などがあり、これらは、適切な可溶化剤、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０モル）付加物）］などと組み合わせて使用することができる。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが用いられ、これらは、可溶化剤、例えば、ベンジル安息香酸、ベンジルアルコールなどと組み合わせて使用することができる。このようにして製造される注射剤は、好ましくは、適切なアンプル中に充填される。

【0098】

好都合なことに、上記の経口または非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量に合うように適合された単位用量の剤形に製造される。単位用量のそのような剤形としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが挙げられる。

【0099】

本開示は、患者の腫瘍の増殖を処置または阻害するための腫瘍溶解性ウイルスとＰＤ－１経路阻害剤とＣＴＬＡ４阻害剤の治療有効量の組合せの使用に関して記載される指示書と併せて、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤を含むキットも提供する。

【0100】

投与レジメン
本開示の方法は、週に約４回、週に２回、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、８週間に１回、１２週間に１回の投薬頻度で、または治療応答が達成される限りより低頻度に、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１もしくは抗ＰＤ－Ｌ２抗体もしくはこれらの抗原結合性フラグメント）またはＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合性フラグメント）を対象に投与することを含むことができる。本開示の方法は、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤のそれぞれ単回用量を投与することを含むこともできる。

【0101】

いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤のうちの少なくとも１つは、１日１回、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、週に１回、２週間に１回または３週間に１回患者に投与される。

【0102】

いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤は同時に患者に投与される。

【0103】

いくつかの実施形態では、方法は、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤のうちの２つ以上を対象に連続的に投与することを含むことができる。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、ＰＤ－１経路阻害剤およびＣＴＬＡ４阻害剤の前または後に患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１経路阻害剤は、腫瘍溶解性ウイルスおよびＣＴＬＡ４阻害剤の前または後に患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４阻害剤は、腫瘍溶解性ウイルスおよびＰＤ－１経路阻害剤の前または後に患者に投与される。

【0104】

本明細書で使用する場合、「連続的に投与すること」は、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤の各用量が、異なる時点で、例えば、所定の間隔（例えば、時間、日、週または月）で区切られた異なる日に対象に投与されることを意味する。本開示は、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤の単回初回用量、続いて、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤の１回またはそれ以上の二次用量、場合により、続いて、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤の１回またはそれ以上の三次用量を患者に連続的に投与することを含む方法を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤の単回初回用量、続いて、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤の１回またはそれ以上の二次用量、場合により、続いて、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤の１回またはそれ以上の三次用量を患者に連続的に投与することをさらに含む。

【0105】

用語「初回用量」、「二次用量」および「三次用量」は、投与の時間的順序を指す。したがって、「初回用量」は、処置レジメンの初めに投与される用量（「ベースライン用量」とも称される）であり；「二次用量」は初回用量の後に投与される用量であり；「三次用量」は二次用量の後に投与される用量である。初回、二次および三次用量はすべて、同じ量の腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤を含むことができる。しかし、いくつかの実施形態では、初回、二次および／または三次用量に含まれる量は、処置の過程で互いに異なる（例えば、適宜、上げるまたは下げるに調整される）。いくつかの実施形態では、処置レジメンの初めに１回またはそれ以上（例えば、１、２、３、４または５回）の用量が「負荷用量」として投与され、続いて、より低頻度で投与される後続の用量（例えば、「維持用量」）が投与される。

【0106】

本開示の例示的一実施形態では、各二次および／または三次用量は、直前の用量の１／２～１４（例えば、１／２、１、１１／２、２、２１／２、３、３１／２、４、４１／２、５、５１／２、６、６１／２、７、７１／２、８、８１／２、９、９１／２、１０、１０１／２、１１、１１１／２、１２、１２１／２、１３、１３１／２、１４、１４１／２またはそれ以上）週間後に投与される。本明細書で使用する場合、フレーズ「直前の用量」は、複数回投与の順序において、介在用量なしの順序におけるすぐ次の用量の投与より前に患者に投与される、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤のある用量を意味する。

【0107】

いくつかの実施形態では、方法は、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性フラグメント）またはＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合性フラグメント）の任意の数の二次および／または三次用量を患者に投与することを含むことができる。例えば、いくつかの実施形態では、単回二次用量のみが患者に投与される。他の実施形態では、２回以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８回またはそれ以上）の二次用量が患者に投与される。同様に、いくつかの実施形態では、単回三次用量のみが患者に投与される。他の実施形態では、２回以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８回またはそれ以上）の三次用量が患者に投与される。

【0108】

複数回の二次用量をともなう実施形態では、各二次用量は、他の二次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各二次用量は、直前の用量の１～２週間後に患者に投与することができる。同様に、複数回の三次用量をともなう実施形態では、各三次用量は、他の三次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各三次用量は、直前の用量の２～４週間後に患者に投与することができる。あるいは、二次および／または三次用量が患者に投与される頻度は、処置レジメンの過程にわたって変動し得る。投与頻度は、臨床検査後の個々の患者の必要性に応じて、処置の過程で医師が調整することもできる。

【0109】

いくつかの実施形態では、１回またはそれ以上の用量の腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤またはＣＴＬＡ４阻害剤は、「導入用量」として、より高頻度（週に２回、週に１回または２週間に１回）で処置レジメンの初めに投与され、続いて、より低頻度（例えば、４～１２週間に１回）で投与される後続の用量（「強化用量」または「維持用量」）が投与される。

【0110】

投薬量
本明細書に開示される方法に従って対象に投与される腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性フラグメント）またはＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合性フラグメント）の量は、概して、治療有効量である。本明細書で使用する場合、用語「治療有効量」は、未処置の対象、単独療法で処置される対象、または本明細書に開示される３つの治療用薬剤（ＰＤ－１経路阻害剤、ＣＴＬＡ４阻害剤および腫瘍溶解性ウイルス）のうちのいずれか２つで処置される対象と比較して、以下のうちの１つまたはそれ以上をもたらす、腫瘍溶解性ウイルス、ＰＤ－１経路阻害剤および／またはＣＴＬＡ４阻害剤の量を意味する：（ａ）がんの症状もしくは徴候、例えば、腫瘍病変の重症度もしくは持続期間の低減；（ｂ）腫瘍増殖の抑制もしくは腫瘍壊死、腫瘍縮小および／もしくは腫瘍消失の増加；（ｃ）腫瘍増殖および発達の遅延；（ｄ）腫瘍転移の抑制；（ｅ）腫瘍増殖の再発の予防；（ｆ）がんを有する対象の生存の延長；ならびに／または（ｇ）従来の抗がん療法の使用もしくは必要性の低減（例えば、手術の必要性の排除、もしくは化学療法剤もしくは細胞傷害性剤の使用の低減もしくは排除）。

【0111】

いくつかの実施形態では、組合せの腫瘍溶解性ウイルスは、１０、１００、１０^３、１０^４、１０^５、１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０、１０^１１、１０^１２、１０^１３、１０^１４またはそれ以上のウイルス粒子（ｖｐ）またはプラーク形成単位（ｐｆｕ）の１つまたはそれ以上の単位用量として投与することができる。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは腫瘍溶解性ラブドウイルス（例えば、野生型または遺伝子改変のＶＳＶ）であり、１０^６～１０^１４ｐｆｕ、１０^６～１０^１２ｐｆｕ、１０^８～１０^１４ｐｆｕ、１０^８～１０^１２もしくは１０^１０～１０^１２ｐｆｕまたはそれらの間の任意の範囲の１つまたはそれ以上の投薬量としてがんを有するヒトに投与される。

【0112】

いくつかの実施形態では、組合せの腫瘍溶解性ウイルスは、１０、１００、１０^３、１０^４、１０^５、１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０、１０^１１、１０^１２、１０^１３、１０^１４またはそれ以上の５０％組織培養感染用量（ＴＣＩＤ_５０）の１つまたはそれ以上の単位用量として投与することができる。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは腫瘍溶解性ラブドウイルス（例えば、野生型または遺伝子改変のＶＳＶ）であり、１０^４～１０^１４ＴＣＩＤ_５０、１０^４～１０^１４ＴＣＩＤ_５０、１０^４～１０^１２ＴＣＩＤ_５０、１０^８～１０^１４ＴＣＩＤ_５０、１０^８～１０^１２もしくは１０^１０～１０^１２ＴＣＩＤ_５０またはそれらの間の任意の範囲の１つまたはそれ以上の投薬量としてがんを有するヒトに投与される。

【0113】

いくつかの実施形態では、治療有効量のＰＤ－１経路阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性フラグメント、例えば、セミプリマブまたはそれらの生物学的同等物）は、抗体約０．０５ｍｇ～約１５００ｍｇ、約１ｍｇ～約８００ｍｇ、約５ｍｇ～約６００ｍｇ、約１０ｍｇ～約５５０ｍｇ、約５０ｍｇ～約４００ｍｇ、約７５ｍｇ～約３５０ｍｇまたは約１００ｍｇ～約３００ｍｇであり得る。例えば、様々な実施形態では、ＰＤ－１経路阻害剤の量は、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６１０ｍｇ、約６２０ｍｇ、約６３０ｍｇ、約６４０ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６６０ｍｇ、約６７０ｍｇ、約６８０ｍｇ、約６９０ｍｇ、約７００ｍｇ、約７１０ｍｇ、約７２０ｍｇ、約７３０ｍｇ、約７４０ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７６０ｍｇ、約７７０ｍｇ、約７８０ｍｇ、約７９０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８１０ｍｇ、約８２０ｍｇ、約８３０ｍｇ、約８４０ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８６０ｍｇ、約８７０ｍｇ、約８８０ｍｇ、約８９０ｍｇ、約９００ｍｇ、約９１０ｍｇ、約９２０ｍｇ、約９３０ｍｇ、約９４０ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９６０ｍｇ、約９７０ｍｇ、約９８０ｍｇ、約９９０ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０１０ｍｇ、約１０２０ｍｇ、約１０３０ｍｇ、約１０４０ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０６０ｍｇ、約１０７０ｍｇ、約１０８０ｍｇ、約１０９０ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２１０ｍｇ、約１２２０ｍｇ、約１２３０ｍｇ、約１２４０ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２６０ｍｇ、約１２７０ｍｇ、約１２８０ｍｇ、約１２９０ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３１０ｍｇ、約１３２０ｍｇ、約１３３０ｍｇ、約１３４０ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３６０ｍｇ、約１３７０ｍｇ、約１３８０ｍｇ、約１３９０ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４１０ｍｇ、約１４２０ｍｇ、約１４３０ｍｇ、約１４４０ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４６０ｍｇ、約１４７０ｍｇ、約１４８０ｍｇ、約１４９０ｍｇまたは約１５００ｍｇである。

【0114】

個々の用量に含まれるＰＤ－１経路阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント）の量は、対象体重のキログラム当たりのミリグラム抗体（すなわち、ｍｇ／ｋｇ）に換算して表される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法で使用されるＰＤ－１経路阻害剤は、約０．０００１～約１００ｍｇ／ｋｇ対象体重の用量で対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ患者体重の用量で投与することができる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、約１ｍｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ患者体重の用量のＰＤ－１経路阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント）の投与を含む。

【0115】

いくつかの実施形態では、各用量は、０．１～１０ｍｇ／ｋｇ対象体重（例えば、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）を含む。ある特定の他の実施形態では、各用量は、ＰＤ－１経路阻害剤（抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントなど）５～１５００ｍｇ、例えば、ＰＤ－１経路阻害剤５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１００ｍｇ、１１５０ｍｇ、１２００ｍｇ、１５５０ｍｇ、１３００ｍｇ、１３５０ｍｇ、１４００ｍｇ、１４５０ｍｇまたは１５００ｍｇを含む。

【0116】

いくつかの実施形態では、治療有効量のＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその生物学的同等物）は、抗体約０．０５ｍｇ～約１０００ｍｇ、約１ｍｇ～約８００ｍｇ、約５ｍｇ～約６００ｍｇ、約１０ｍｇ～約５５０ｍｇ、約５０ｍｇ～約４００ｍｇ、約７５ｍｇ～約３５０ｍｇ、または約１００ｍｇ～約３００ｍｇであり得る。例えば、様々な実施形態では、ＣＴＬＡ４阻害剤の量は、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６１０ｍｇ、約６２０ｍｇ、約６３０ｍｇ、約６４０ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６６０ｍｇ、約６７０ｍｇ、約６８０ｍｇ、約６９０ｍｇ、約７００ｍｇ、約７１０ｍｇ、約７２０ｍｇ、約７３０ｍｇ、約７４０ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７６０ｍｇ、約７７０ｍｇ、約７８０ｍｇ、約７９０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８１０ｍｇ、約８２０ｍｇ、約８３０ｍｇ、約８４０ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８６０ｍｇ、約８７０ｍｇ、約８８０ｍｇ、約８９０ｍｇ、約９００ｍｇ、約９１０ｍｇ、約９２０ｍｇ、約９３０ｍｇ、約９４０ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９６０ｍｇ、約９７０ｍｇ、約９８０ｍｇ、約９９０ｍｇまたは約１０００ｍｇである。

【0117】

個々の用量に含まれるＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント）の量は、対象体重のキログラム当たりのミリグラム抗体（すなわち、ｍｇ／ｋｇ）に換算して表すことができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ患者体重の用量で投与することができる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、約１ｍｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは１５ｍｇ／ｋｇ患者体重の用量のＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント）の投与を含む。

【0118】

いくつかの実施形態では、各用量は、０．１～１０ｍｇ／ｋｇ対象体重（例えば、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）を含む。ある特定の他の実施形態では、各用量は、ＣＴＬＡ４阻害剤（抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントなど）５～１０００ｍｇ、例えば、ＣＴＬＡ４阻害剤５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇまたは１０００ｍｇを含む。

【0119】

いくつかの実施形態では、本開示の方法は、さらなる治療用薬剤または療法を対象に施すことをさらに含む。さらなる治療用薬剤または療法は、抗腫瘍効能を高めるために、１つもしくはそれ以上の療法の毒性作用を低減させるために、および／または１つもしくはそれ以上の療法の投薬量を低減させるために、施すことができる。様々な実施形態では、さらなる治療用薬剤または療法は、以下のうちの１つまたはそれ以上を含むことができる：放射線照射、手術、がんワクチン、イミキモド、抗ウイルス剤（例えば、シドホビル）、光線力学的療法、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ３抗体、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）アゴニスト（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチン含有３（ＴＩＭ３）阻害剤、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）阻害剤、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）阻害剤、ＣＤ３８阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、ＣＤ２８アクチベーター、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト（例えば、アフリベルセプトなどの「ＶＥＧＦ－Ｔｒａｐ」、もしくは抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合性フラグメント（例えば、ベバシズマブもしくはラニビズマブ）またはＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブもしくはパゾパニブ））、アンジオポエチン－２（Ａｎｇ２）阻害剤、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体（例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、がん胎児抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１およびＣＡ１９－９）、ワクチン（例えば、カルメット－ゲラン桿菌）、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、第２の腫瘍溶解性ウイルス、細胞毒、化学療法剤（例えば、ペメトレキセド、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、トポテカン、イリノテカン、ビノレルビンおよびビンクリスチン）、ＩＬ－６Ｒ阻害剤、ＩＬ－４Ｒ阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、サイトカイン、例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１およびＩＬ－１５、抗体薬物コンジュゲート、抗炎症薬、例えば、コルチコステロイド、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、クライオセラピー、抗ＨＰＶ療法、レーザー療法、ＨＰＶを有する細胞の電気手術的切除ならびにこれらの組合せ。

【0120】

いくつかの実施形態では、この方法はさらなる治療用薬剤、例えば、抗がん剤を投与することをさらに含む。本明細書で使用する場合、「抗がん剤」は、限定されないが、細胞毒、ならびに代謝拮抗剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗生物質、抗有糸分裂剤、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、ミトタン（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、バイオ医薬品（例えば、抗体およびインターフェロン）および放射性薬剤などの薬剤を含む、がんを処置するのに有用な任意の薬剤を意味する。本明細書で使用する場合、「細胞毒または細胞傷害性剤」は化学療法剤も指し、細胞に有害な任意の薬剤を意味する。例としては、タキソール（パクリタキセル）、テモゾロミド、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、シスプラチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－ジヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにこれらの類似体または相同体が挙げられる。

【0121】

さらなる定義
本開示による組成物および方法の詳細な説明の理解の一助となるために、本開示の様々な態様の明白な開示を容易にするようにいくつかの明確な定義を提供する。別段定義しない限り、本明細書で使用するすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者が通常理解するものと同じ意味を有する。

【0122】

本明細書で使用する場合、用語「薬剤」は、化学化合物、化学化合物の混合物、生物高分子（核酸、抗体、タンパク質もしくはこれらの一部、例えば、ペプチドなど）、または生物材料、例えば、細菌、植物、真菌もしくは動物（特に哺乳類）の細胞もしくは組織から作られる抽出物を表す。そのような薬剤の活性は、対象において局所的または全身的に作用する生物学的、生理学的または薬理学的に活性な物質（または複数の物質）である「治療用薬剤」として該薬剤を適切なものにすることができる。本開示の文脈において、用語「治療用薬剤」は、本明細書に開示されるＰＤ－１経路阻害剤、ＣＴＬＡ４阻害剤または腫瘍溶解性ウイルスのうちのいずれかを指す。

【0123】

本明細書で使用する場合、用語「治療用薬剤」、「治療可能な薬剤」または「処置剤」は互換的に使用され、対象への投与の際に何らかの有益効果を与える、分子または化合物を指す。有益効果としては、診断判定の実施可能性（ｅｎａｂｌｅｍｅｎｔ）；疾患、症状、障害または病態の改善；疾患、症状、障害または状態の発症の低減または予防；および概して、疾患、症状、障害または病態を弱めることが挙げられる。

【0124】

本明細書で使用する場合、用語「医薬的に許容可能な」は、組成物の生物活性または特質を抑止せず、かつ比較的無毒である材料、例えば、担体または希釈剤を指し、すなわち、材料は、望ましくない生物学的効果を引き起こすことも、それが含まれる組成物の成分のうちのいずれかと有害な様式で相互作用することもなく個体に投与することができる。

【0125】

本明細書で使用する場合、用語「医薬的に許容可能な担体」は、その意図された機能を果たすことができるように、対象内でまたは対象に本開示の化合物を運搬または輸送することに関与する、医薬的に許容可能な塩、医薬的に許容可能な材料、組成物または担体、例えば、液体または固体のフィラー、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化材を含む。典型的には、そのような化合物は、体のある器官または部分から体の別の器官または部分に運搬または輸送される。各塩または担体は、製剤の他の成分と適合性であり、かつ対象に傷害性ではないという意味で「許容可能」でなければならない。医薬的に許容可能な担体として働くことができる材料のいくつかの例としては、以下が挙げられる：糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびショ糖；デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン；セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；粉末化トラガント；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤、例えば、ココアバターおよび座薬用ワックス；油、例えば、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油；グリコール、例えば、プロピレングリコール；ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；寒天；緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；アルギン酸；発熱物質を含有しない水；等張食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝液溶液；希釈剤；造粒剤；潤滑剤；結合剤；崩壊剤；湿潤剤；乳化剤；着色剤；放出剤；コーティング剤；甘味剤；着香剤；芳香剤；防腐剤；抗酸化剤；可塑剤；ゲル化剤；増粘剤；硬化剤；凝固剤（ｓｅｔｔｉｎｇａｇｅｎｔ）；懸濁化剤；界面活性剤；湿潤剤；担体；安定化剤；ならびに医薬製剤で用いられる他の無毒の適合性物質、またはこれらの任意の組合せ。本明細書で使用する場合、「医薬的に許容可能な担体」としては、本開示の１つまたはそれ以上の成分の活性に適合し、対象にとって生理的に許容可能である、ありとあらゆるコーティング、抗菌剤および抗真菌剤ならびに吸収遅延剤なども挙げられる。補足的な活性化合物も組成物中に組み入れることができる。

【0126】

用量は、体重との関連で表されることが多い。したがって、［ｇ、ｍｇまたは他の単位］／ｋｇ（または、ｇ、ｍｇなど）として表される用量は、通常、たとえ用語「体重」がはっきりと言及されないとしても、「ｋｇ（または、ｇ、ｍｇなど）体重当たりの」［ｇ、ｍｇまたは他の単位］を指す。処置は、様々な「単位用量」を含み得る。単位用量は、治療用組成物の所定の量を含むと定義される。単位用量は、単回注射として投与される必要はないが、設定期間にわたる持続注入を含むことができる。腫瘍溶解性ウイルスについては、単位用量は、ウイルスコンストラクトについてのプラーク形成単位（ｐｆｕ）またはウイルス粒子に換算して記載される。単位用量は、１０^３、１０^４、１０^５、１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０、１０^１１、１０^１２、１０^１３ｐｆｕまたはｖｐおよびそれ以上に及ぶ。あるいは、ウイルスの種類および達成可能な力価に応じて、１～１００、１０～５０、１００～１０００、または約１×１０^４、１×１０^５、１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、１×１０^１０、１×１０^１１、１×１０^１２、１×１０^１３、１×１０^１４もしくは１×１０^１５まで、またはそれ以上の感染性ウイルス粒子（ｖｐ）を患者に、または患者の細胞に送達する。あるいは、腫瘍溶解性ウイルスについての単位用量は、ＴＣＩＤ_５０によって表される。「ＴＣＩＤ_５０」は「組織培養感染用量」を指し、播種された細胞培養の所与のバッチの５０％に感染するのに必要とされるウイルスの希釈度と定義される。本明細書全体にわたって利用されるスピアマン－カーバー法を含む、当業者に既知の様々な方を使用して、ＴＣＩＤ_５０を計算することができる。スピアマン－カーバー法の説明については、Ｂ．Ｗ．Ｍａｈｙ＆Ｈ．０．Ｋａｎｇｒｏ、ＶｉｒｏｌｏｇｙＭｅｔｈｏｄｓＭａｎｕａｌ２５～４６（１９９６）を参照されたい。いくつかの実施形態では、単位用量は、１０^３、１０^４、１０^５、１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０、１０^１１、１０^１２、１０^１３ＴＣＩＤ_５０およびそれ以上またはこれらの間の任意の範囲に及ぶ。

【0127】

本明細書で使用する場合、用語「疾患」は、概して、すべてが、ヒトもしくは動物の体の、または正常な機能を害するその部分のうちの１つの異常な状態（例えば、がん）を反映するという点において、用語「障害」および（医学的状態と同様の）「状態」と同義であり、これらの用語と互換的に使用されることが意図され、典型的には、際立った兆候と症状によって顕在化され、ヒトまたは動物に寿命または生活の質の低減を引き起こす。

【0128】

本明細書で使用する場合、用語「インビトロ」は、多細胞生物内ではなく、人工の環境、例えば、試験管または反応器、細胞培養などで生じるイベントを指す。

【0129】

本明細書で使用する場合、用語「インビボ」は、多細胞生物、例えば、非ヒト動物内で生じるイベントを指す。

【0130】

本明細書で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈において別段明記しない限り、複数形の意味を含む。

【0131】

本明細書で使用する場合、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」または「有する」およびそれらの変形は、特記しない限り、その後に列挙される項目およびそれらの均等物ならびにさらなる主題を包含することを意図する。

【0132】

本明細書で使用する場合、フレーズ「一実施形態では」、「様々な実施形態では」、「いくつかの実施形態では」などは、繰り返して使用される。そのようなフレーズは、必ずしも同じ実施形態を指すとは限らないが、文脈において別段示さない限り、同じ実施形態を指すこと
がある。

【0133】

本明細書で使用する場合、用語「および／または」または「／」は、この用語が関連する項目のうちのいずれか１つ、項目の任意の組合せ、または項目のすべてを意味する。

【0134】

本明細書で使用する場合、単語「実質的に」は、「完全に」を除外せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、完全にＹを含まないことがある。必要に応じて、単語「実質的に」を本開示の定義から省略することがある。

【0135】

本明細書で使用する場合、用語「各」は、項目の集団に関連して使用する場合、集団中の個々の項目を特定することが意図されるが、必ずしも集団中のすべての項目を指すとは限らない。明示的な開示または文脈において、特に明記される場合、例外が生じ得る。

【0136】

本明細書で使用する場合、用語「およそ」または「約」は、１つまたはそれ以上の目的の値に適用される場合、記載される基準値と類似している値を指す。いくつかの実施形態では、用語「およそ」または「約」は、別段の記載がない限りまたは文脈から明らかでない限り、記載される基準値のいずれかの方向（より大きいかまたはより小さい）において、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ以下に入る値の範囲を指す（ただし、そのような数が、可能な値の１００％を超える場合を除く）。本明細書で別段指示がない限り、用語「約」は、個々の成分、組成物または実施形態の機能性の点から同等である、列挙される範囲に最も近い値、例えば、重量パーセントを含むことが意図される。

【0137】

本明細書で開示されるように、値のいくつかの範囲が提供される。その範囲の上限と下限の間の、文脈において別段明記しない限り下限の単位の１０分の１までの各介在値も具体的に開示されることが理解されよう。記載された範囲内の任意の記載された値または介在値とその記載された範囲内の任意の他の記載された値または介在値との間のより小さな各範囲は、本開示内に包含される。これらのより小さな範囲の上限および下限は、独立して、その範囲に含むことができ、または含まないようにすることができ、かつそのより小さな範囲にいずれかの限界値が含まれる、いずれの限界値も含まれない、または両方の限界値が含まれる各範囲も、記載された範囲内の具体的に除外された任意の限界値を条件として、本開示内に包含される。記載された範囲が限界値の一方または両方を含む場合、これらの含まれる限界値のいずれかまたは両方を除いた範囲も本開示に含まれる。

【0138】

本明細書で提供されるありとあらゆる例または例示的な言葉（例えば、「などの」）の使用は、本開示をよりよく例示することが単に意図され、特に主張されていない限り、本開示の範囲の制限を課すものではない。本明細書のいかなる言語も、任意の主張されていない要素を本開示の実施に必須であるとして示すものとして解釈されるべきではない。

【0139】

本明細書に記載のすべての方法は、本明細書で別段指示がない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順番で行われる。提供される方法のいずれに関しても、方法の工程は、同時にまたは連続的に行われ得る。方法の工程が連続的に行われる場合、工程は、特記しない限り、任意の順番で行うことができる。方法が工程の組合せを含む場合、本明細書で特記しない限り、工程のありとあらゆる組合せまたは部分的組合せが、本開示の範囲内に包含される。

【0140】

本明細書で引用される各刊行物、特許出願、特許および他の参考文献を、本開示と矛盾しない程度まで、その全体を参照によって組み入れる。本明細書に開示される刊行物は、本開示の出願日より前の開示のためだけに提供される。本明細書のいずれの記載も、先行開示によって本開示がそのような刊行物に先行する権利を与えられないことの承認として解釈されるべきでない。さらに、提供される刊行日は実際の刊行日と異なることがあり、これらを個別に確認する必要があり得る。

【0141】

本明細書に記載の実施例および実施形態は例示目的のためのみであること、ならびにそれらを鑑みて様々な改変または変更が当業者に示唆され、そのような様々な改変または変更が本出願の趣旨および範囲内および添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが理解されよう。

【実施例】

【0142】

以下の実施例は、本開示の方法および組成物の作製および使用方法の完全な開示および説明を当業者に提供するために記載され、本発明者らが自身の発明であると見なすものの範囲を限定することを意図しない。同様に、本開示は、本明細書に記載のいかなる特定の好ましい実施形態にも限定されない。実際に、実施形態の改変および変形は、本明細書を読めば当業者に明らであり得、その趣旨および範囲から逸脱することなく行うことができる。使用される数（例えば、量、温度など）について正確性を確実にするように努力したが、いくらかの実験上の誤差および偏差が考慮されるべきである。別段指示がない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、室温は約２５^ｏＣであり、圧力は大気圧または大気圧付近である。

【実施例1】

【0143】

平均１５０ｍｍ^３のＭＣ３８腫瘍を有するマウスにおける、抗ＰＤ－１、抗ＣＴＬＡ４および腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－Ｆｌｕｃの腫瘍内送達を用いた組合せ処置の抗腫瘍効能
本実施例は、ＭＣ３８腫瘍が移植された野生型マウスにおける、抗ＰＤ－１および抗ＣＴＬＡ４とともに腫瘍溶解性ウイルスの水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を使用する３重組合せの抗腫瘍効能を記載する。本実施例（および後続の実施例２～３）で使用するＶＳＶは、Ｍタンパク質中に突然変異（Ｍ５１Ｒ）（Ｍタンパク質は宿主細胞タンパク質の産生を阻害するが、Ｍ５１Ｒ突然変異は宿主細胞タンパク質の産生を保持する）をコードし、Ｇウイルス遺伝子とＬウイルス遺伝子の間に挿入されたホタルルシフェラーゼをコードするのでＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－Ｆｌｕｃと名付けられた、遺伝的に弱毒化されたウイルスである。本実施例（および後続の実施例２～４）で使用する抗ＰＤ－１抗体は、抗マウスＰＤ－１ラットＩｇＧ２ａ抗体（Ｂｉｏｘｃｅｌｌのクローン２９Ｆ１．Ａ１２）であり、本実施例（および後続の実施例２～４）で使用する抗ＣＴＬＡ４抗体は抗マウスＣＴＬＡ４－ｍＩｇＧ２ａ抗体（クローン９Ｄ９）であった。

【0144】

ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのＣ５７ＢＬ／６系統バックグラウンドマウスにＭＣ３８細胞（ＤＭＥＭ１００μｌに懸濁した３×１０^５個の細胞／マウス）を０日目に皮下移植した。キャリパーを使用して腫瘍を測定し、式（Ｌ^２×Ｗ）／２で腫瘍体積を計算した（式中Ｌは最小サイズである）。平均腫瘍サイズが１５０ｍｍ^３に達したら（これは１５日目であった）、マウスを７つの処置群に均等に無作為化した。マウスに、ＰＢＳ５０μｌに再懸濁した５×１０^５ＴＣＩＤ_５０用量のＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－Ｆｌｕｃウイルス５０μｌもしくは対照としてのＰＢＳ５０μｌを腫瘍内注射し、ならびに／または１５、１９、２２および２６日目に、いずれかのアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ２ａおよび／もしくはラットＩｇＧ２ａ）２５０μｇおよび／もしくは抗ＣＴＬＡ４抗体２５０μｇおよび／もしくは抗ＰＤ－１抗体２５０μｇを腹腔内注射した。様々な群に対する実験的な投薬および処置プロトコールを表１に示す。

【0145】

【表1】

【0146】

６０日目の研究の終了まで、キャリパー測定によって腫瘍体積を週に２回モニターした。

【0147】

各群の経時的な平均腫瘍体積は、ＶＳＶまたは抗ＰＤ－１抗体のいずれかを用いる単独療法が、ＰＢＳを用いた処置およびアイソタイプ対照処置群と比較して部分的な腫瘍増殖抑制を示したことを示す（図１）。処置開始後２６日目の個々の腫瘍体積（図２）を統計解析に使用したのは、これが、すべての群のすべての動物が生きていた、研究の最後の時点であったからである。統計的有意性は、ダネットの多重比較事後検定を用いる一元配置ＡＮＯＶＡによって決定した（^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。抗ＰＤ－１抗体またはＶＳＶの単独療法の効能は、統計的有意性に達しなかった。抗ＣＴＬＡ４抗体または抗ＰＤ－１抗体とのＶＳＶの組合せの処置は、抗ＰＤ－１抗体を用いる単独療法または対照と比較して、より効果的な腫瘍増殖抑制をもたらし、抗ＰＤ－１抗体処置群よりも、組合せ処置群において、２６日目に統計学的に有意なより小さな腫瘍があった（図３）。抗ＣＴＬの４抗体と抗ＰＤ－１抗体の組合せの処置は、すべての他の単一および２重の組合せと比較して、腫瘍増殖において統計学的に有意な低減をもたらし、２６日目までに腫瘍がないマウスはいなかった。注目すべきことに、抗ＣＴＬＡ４抗体と抗ＰＤ－１抗体との３重組合せＶＳＶの処置は、すべての他の群と比較して、より効果的であり、２９日目までにすべてのマウスの腫瘍が排除され、この腫瘍排除は、６０日目までの研究の終了まで永続性があった（図１、２、３）。表２は、各処置群における平均腫瘍体積、生存パーセントおよび腫瘍がないマウスの数を概説する。

【0148】

【表2】

【0149】

表２に示すように、抗ＰＤ－１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体との３重組合せＶＳＶで処置したマウスは、研究の過程において、大きな腫瘍の制御および排除において非常に効果的であり、６匹のマウスのうち６匹が２９日目までに腫瘍がなくなった。ＶＳＶと組み合わせて、または組み合わせずに、抗ＰＤ－１抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体のいずれかで処置したマウスは、研究の２６日目で、対照と比較して腫瘍体積のわずかな低減を示した。これに対して、抗ＰＤ１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体の２重組合せを用いた処置は、本研究において、対照と比較して、腫瘍体積の低減において有意な効能を示し、５匹のうち１匹のマウスは腫瘍排除を達成したが；これは、抗ＰＤ１および抗ＣＴＬＡ４抗体と組み合わせてＶＳＶも送達した場合ほど効果的ではなかった。研究の２９日目までに、対照ＰＢＳ群、抗ＰＤ－１群、ＶＳＶ処置群ではすべてのマウスを排除しなければならず、抗ＰＤ－１との２重組合せＶＳＶ処置群の６匹のうちの５匹、抗ＣＴＬＡ４との２重組合せＶＳＶ群の６匹のうち３匹を排除しなければならず、ＰＤ１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体の２重組合せ群、および抗ＰＤ－１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体との３重組合せＶＳＶでは、すべてのマウスが依然として生きていた。研究の終わりに、抗ＰＤ１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体の２重組合せ群の５匹のうち１匹のマウスのみとあわせて、３重組合せ群のみが腫瘍がないままであり、生存していた。３重組合せ療法の結果として、体重減少の証拠は観察されなかった。

【0150】

まとめると、抗ｍＣＴＬＡ４抗体および抗ＰＤ－１抗体とのＶＳＶの組合せを用いた処置は、いずれかの抗体および／またはＶＳＶを用いる単独療法または２重療法と比較して、腫瘍増殖の低減およびより長い生存をもたらした。

【実施例2】

【0151】

３重組合せの抗ＰＤ－１、抗ＣＴＬＡ４および腫瘍内送達される腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－ＧＦＰの抗腫瘍効能は、わずか１回用量の抗ＣＴＬＡ４ｍＩｇＧ２ａ抗体で達成することができる
本実施例は、ＭＣ３８腫瘍が移植された野生型マウスにおける、抗ＰＤ－１および抗ＣＴＬＡ４とともに腫瘍溶解性ウイルスの水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を使用する３重組合せにおいて抗腫瘍効能を達成するのに必要な抗ＣＴＬＡ４抗体の用量の数を記載する。本研究で使用するＶＳＶは、Ｍタンパク質中に突然変異（Ｍ５１Ｒ）（Ｍタンパク質は宿主細胞タンパク質の産生を阻害するが、Ｍ５１Ｒ突然変異は宿主細胞タンパク質の産生を保持する）をコードし、Ｇウイルス遺伝子とＬウイルス遺伝子の間に挿入されたＧＦＰをコードするのでＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－ＧＦＰと名付けられた、遺伝的に弱毒化されたウイルスである。ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのＣ５７ＢＬ／６系統バックグラウンドマウスにＭＣ３８細胞（３×１０^５個の細胞／マウス）を０日目に皮下移植した。キャリパーを使用して腫瘍を測定し、式（Ｌ^２×Ｗ）／２で腫瘍体積を計算した（式中Ｌは最小サイズである）。平均腫瘍サイズが１５０ｍｍ^３に達したら（これは１５日目であった）、マウスを５つの処置群に均等に無作為化した。マウスに、ＰＢＳに再懸濁した５×１０^８ＴＣＩＤ_５０用量のＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－ＧＦＰウイルス５０μｌもしくは対照としてのＰＢＳ５０μｌを腫瘍内注射し、ならびに／または１５、１８、２２および２５日目に、いずれかのアイソタイプ対照抗体２５０μｇおよび／もしくは抗ＰＤ－１抗体２５０μｇ、および／もしくは４回用量（１５、１８、２２および２５日目）もしくは１回用量（１５日目）もしくは２回用量（１５および１８日目）のいずれかの様々な投与量の抗ＣＴＬＡ４抗体２５０μｇを腹腔内注射した（表３）。

【0152】

【表3】

【0153】

６０日目の研究の終了まで、キャリパー測定によって腫瘍体積を週に２回モニターした。

【0154】

表４は、各処置群における平均腫瘍体積、生存パーセントおよび腫瘍がないマウスの数を概説する。抗ＰＤ－１抗体およびｍＩｇＧ２ａ型式の抗ＣＴＬＡ４抗体との３重組合せＶＳＶの抗腫瘍効能は、１または２または４回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体のいずれかを受けた群と非常に類似しており（図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ）、４回用量群の７匹のマウスのうち５匹（７１％）と比較して、１回用量および２回用量群において８匹のマウスのうち６匹（７５％）が４５日目までに腫瘍がなくなった。６０日目までに、４回用量群の７１．４％と比較して、１回用量および２回用量群は６２．５％のマウスが生存し、腫瘍がなかった（図５）。これらの結果は、ウイルスおよび最初の用量の抗ＰＤ－１抗体と同時に与えたわずか１回用量の抗ＣＴＬＡ４で、抗ＰＤ－１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体との３重組合せＶＳＶの強力な抗腫瘍効能を再現することができることを示唆する。

【0155】

【表4】

【実施例3】

【0156】

３重組合せの抗ＰＤ－１、抗ＣＴＬＡ４および腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－ＧＦＰの抗腫瘍効能は、ウイルスの腫瘍内送達または静脈内送達のいずれかで達成することができる
本実施例は、ＭＣ３８腫瘍が移植された野生型マウスにおける、抗ＰＤ－１および抗ＣＴＬＡ４とともに腫瘍溶解性ウイルスの水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を使用する３重組合せにおいて抗腫瘍効能を達成するためにウイルスを送達することができる送達経路を記載する。本実施例で使用するＶＳＶは、Ｍタンパク質中に突然変異（Ｍ５１Ｒ）（Ｍタンパク質は宿主細胞タンパク質の産生を阻害するが、Ｍ５１Ｒ突然変異は宿主細胞タンパク質の産生を保持する）をコードし、Ｇウイルス遺伝子とＬウイルス遺伝子の間に挿入されたＧＦＰをコードするのでＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－ＧＦＰと名付けられた、遺伝的に弱毒化されたウイルスである。ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのＣ５７ＢＬ／６系統バックグラウンドマウスにＭＣ３８細胞（３×１０^５個の細胞／マウス）を０日目に皮下移植した。キャリパーを使用して腫瘍を測定し、式（Ｌ^２×Ｗ）／２で腫瘍体積を計算した（式中Ｌは最小サイズである）。平均腫瘍サイズが１５０ｍｍ^３に達したら（これは１５日目であった）、マウスを４処置群に均等に無作為化した。マウスに、ＰＢＳに再懸濁した５×１０^８ＴＣＩＤ_５０用量のＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－ＧＦＰウイルス５０μｌを腫瘍内注射し、もしくはＰＢＳに再懸濁した１×１０^９ＴＣＩＤ_５０用量のＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－ＧＦＰウイルスもしくは対照としてのＰＢＳ２００μｌを静脈内注射し、ならびに／または１５、１８、２２および２５日目に、いずれかのアイソタイプ対照抗体２５０μｇおよび／もしくは抗ＰＤ－１抗体２５０μｇ、および／もしくは抗ＣＴＬＡ４抗体２５０μｇを腹腔内注射した（表５）。６０日目の研究の終了まで腫瘍体積をモニターした。

【0157】

【表5】

【0158】

表６は、本実験の各処置群における平均腫瘍体積、生存パーセントおよび腫瘍がないマウスの数を概説する。

【0159】

抗ＰＤ－１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体との３重組合せＶＳＶの抗腫瘍効能は、腫瘍内に単回用量として、または静脈内に単回用量としてのいずれかとしてＶＳＶを受けた群で非常に強力であり、静脈内送達は、腫瘍内より効果的である傾向があり（図６）、腫瘍内群の７匹のマウスのうち５匹（７１％）と比較して、静脈内投与群において８匹のマウスのうち８匹（１００％）が４５日目までに腫瘍がなくなった。６０日目までに、腫瘍内群の７１．４％と比較して、静脈内投与群の１００％が生存し、腫瘍がなかった（図７）。ＶＳＶの静脈内送達は、抗ＰＤ－１および抗ＣＴＬＡ４の組合せチェックポイント療法を強力に増強し、３重組合せの効能は、ウイルスの腫瘍内送達または静脈内送達のいずれかで達成することができることを示す。

【0160】

【表6】

【実施例4】

【0161】

平均１５０ｍｍ^３のＭＣ３８腫瘍を有するマウスにおける、抗ＰＤ－１、抗ＣＴＬＡ４および腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－ｍＩＦＮｂ－ＮＩＳの静脈内送達を用いた組合せ処置の抗腫瘍効能
本実施例は、ＭＣ３８腫瘍が移植された野生型マウスにおける、抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＴＬＡ４抗体とともに静脈内送達される腫瘍溶解性ウイルスの水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を使用する３重組合せの抗腫瘍効能を記載する。本研究で使用するＶＳＶは、Ｍウイルス遺伝子とＧウイルス遺伝子の間に挿入されたマウスインターフェロンベータ（ＩＦＮｂ）およびＧウイルス遺伝子とＬウイルス遺伝子の間に挿入されたナトリウム／ヨウ素共輸送体（ＮＩＳ）をコードする、遺伝的に弱毒化されたウイルスＶＳＶ－ｍＩＦＮｂ－ＮＩＳ（またはｍＶＶ１）である。

【0162】

【0163】

【表7】

【0164】

表８は、各処置群における平均腫瘍体積、生存パーセントおよび腫瘍がないマウスの数を概説する。各群の経時的な平均腫瘍体積は、ｍＶＶ１または抗ＰＤ－１抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体のいずれかを用いる単独療法が、ＰＢＳを用いた処置およびアイソタイプ対照処置群と比較して、軽微な腫瘍増殖抑制を示したことを示す（図８）。処置開始後２４日目の個々の腫瘍体積（図９）を統計解析に使用したのは、これが、すべての群のすべての動物が生きていた、研究の最後の時点であったからである。統計的有意性は、ダネットの多重比較事後検定を用いる一元配置ＡＮＯＶＡによって決定した（^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。抗ＰＤ－１抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体またはｍＶＶ１の単独療法は、統計的有意性に達せず、ｍＶＶ１と抗ＰＤ－１抗体の組合せも統計的有意性に達しなかった。ｍＶＶ１と抗ＣＴＬＡ４抗体の組合せの処置は、抗ＰＤ－１抗体もしくは抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはｍＶＶ１を用いる単独療法または対照と比較して、より効果的な腫瘍増殖抑制をもたらした（図１０）。抗ＣＴＬＡ４抗体と抗ＰＤ－１抗体の組合せは腫瘍増殖の低減をもたらしたが、すべての他の単一および２重の組合せと比較して、２４日目に統計学的に有意な低減をもたらさなかった。注目すべきことに、静脈内送達されるｍＶＶ１と抗ＣＴＬＡ４抗体および抗ＰＤ－１抗体の３重組合せの処置は、すべての他の群と比較して非常に効果的であり、７匹のマウスのうち２匹は、６０日目の研究の終了まで、腫瘍がないままであった（図８、９、１０）。３重組合せ療法の結果として、体重減少の証拠は観察されなかった。まとめると、静脈内送達されるｍＶＶ１と抗ｍＣＴＬＡ４抗体および抗ＰＤ－１抗体の組合せを用いた処置は、いずれかの抗体および／またはｍＶＶ１を用いる単独療法または２重療法と比較して、腫瘍増殖の低減および生存の向上をもたらした。

【0165】

【表8】

【実施例5】

【0166】

３重組合せの抗ＰＤ－１、抗ＣＴＬＡ４および腫瘍内送達される腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－ＧＦＰの抗腫瘍効能は、より低用量の抗ＣＴＬＡ４ｍＩｇＧ２ａ抗体で達成することができる
本実施例は、ＭＣ３８腫瘍が移植された野生型マウスにおける、抗ＰＤ－１および抗ＣＴＬＡ４とともに腫瘍溶解性ウイルスの水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を使用する３重組合せにおいて抗腫瘍効能を依然として達成する低減用量の抗ＣＴＬＡ４抗体を記載する。本研究で使用するＶＳＶは、Ｍタンパク質中に突然変異（Ｍ５１Ｒ）（Ｍタンパク質は宿主細胞タンパク質の産生を阻害するが、Ｍ５１Ｒ突然変異はタンパク質の産生を保持する）をコードし、Ｇウイルス遺伝子とＬウイルス遺伝子の間に挿入されたＧＦＰをコードするのでＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－ＧＦＰと名付けられた、遺伝的に弱毒化されたウイルスである。本研究で使用する抗ＰＤ－１抗体はＢｉｏｘｃｅｌｌのクローン２９Ｆ１．Ａ１２ラットＩｇＧ２ａであり、使用される抗ＣＴＬＡ４抗体はＩｎｖｉｖｏｇｅｎから購入したｍＩｇＧ２ａ型式のクローン９Ｄ９である。ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのＣ５７ＢＬ／６系統バックグラウンドマウスにＭＣ３８細胞（３×１０^５個の細胞／マウス）を０日目に皮下移植した。キャリパーを使用して腫瘍を測定し、式（Ｌ^２×Ｗ）／２で腫瘍体積を計算した（式中Ｌは最小サイズである）。平均腫瘍サイズが１５０ｍｍ^３に達したら（これは１５日目であった）、マウスを４つの処置群に均等に無作為化した。マウスに、ＰＢＳに再懸濁した５×１０^８ＴＣＩＤ_５０用量のＶＳＶ－Ｍ５１Ｒ－ＧＦＰウイルス５０μｌもしくは対照としてのＰＢＳ５０μｌを腫瘍内注射し、ならびに／または１５、１８、２２および２５日目に、いずれかのアイソタイプ対照抗体２５０μｇおよび／もしくは抗マウスＰＤ－１ラットＩｇＧ２ａ抗体（２９Ｆ１．Ａ１２）２５０μｇおよび／もしくは４回用量（１５、１８、２２および２５日目）の抗マウスＣＴＬＡ４－ｍＩｇＧ２ａ（クローン９Ｄ９）２５０μｇもしくは５０μｇを腹腔内注射した。６０日目の研究の終了まで、キャリパー測定によって腫瘍体積を週に２回モニターした。

【0167】

抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＴＬＡ４抗体との３重組合せＶＳＶの抗腫瘍効能は、低用量の抗ＣＴＬＡ４抗体を受けた群で観察され（図１１、１２）、高用量群の７匹のマウスのうち５匹（７１％）と比較して、８匹のマウスのうち４匹（５０％）が４５日目までに腫瘍がなくなった。６０日目までに、４回用量群の７１．４％と比較して、低用量群は５０％のマウスが生存し、腫瘍がなかった（図１３）。これらの結果は、抗ＰＤ－１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体との３重組合せＶＳＶにおいて投与される抗ＣＴＬＡ４の量を低減させても、依然として抗腫瘍効能を達成することができることを示唆する。

【0168】

【表9】

【0169】

表９に示すように、抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＴＬＡ４抗体との３重組合せＶＳＶＩ．Ｔ．（腫瘍内）で処置したマウスは腫瘍増殖の制御において非常に有効であり、７匹のマウスのうち５匹は４５日目までに腫瘍がなくなった。５分の１（２５０μｇから５０μｇ）までの抗ＣＴＬＡ４用量の低減は、抗ＰＤ－１抗体とともにＶＳＶと組み合わせた場合に、驚くほど有意な抗腫瘍効能を示した。

【実施例6】

【0170】

平均１５０ｍｍ^３のＭＣ３８腫瘍を有するマウスにおける、抗ＰＤ－１、１回用量の抗ＣＴＬＡ４と腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－ｍＩＦＮｂ－ＮＩＳの静脈内送達を用いた組合せ処置の抗腫瘍効能
本実施例は、ＭＣ３８腫瘍が移植された野生型マウスにおける、ＩＦＮｂおよびＮＩＳをコードする腫瘍溶解性ウイルスの水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）と抗ＰＤ－１および１回用量の抗ＣＴＬＡ４を使用する３重組合せの抗腫瘍効能を記載する。本研究で使用するＶＳＶは、Ｍウイルス遺伝子とＧウイルス遺伝子の間に挿入されたマウスインターフェロンベータ（ＩＦＮｂ）およびＧウイルス遺伝子とＬウイルス遺伝子の間に挿入されたナトリウム／ヨウ素共輸送体（ＮＩＳ）をコードするのでＶＳＶ－ｍＩＦＮｂ－ＮＩＳ（またはｍＶＶ１）と名付けられた、遺伝的に弱毒化されたウイルスである。本研究で使用する抗ＰＤ－１抗体はＢｉｏｘｃｅｌｌのクローン２９Ｆ１．Ａ１２ラットＩｇＧ２ａであり、使用される抗ＣＴＬＡ４抗体はＩｎｖｉｖｏｇｅｎのｍＩｇＧ２ａ型式のクローン９Ｄ９であった。

【0171】

ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのＣ５７ＢＬ／６系統バックグラウンドマウスにＭＣ３８細胞（３×１０^５個の細胞／マウス）を０日目に皮下移植した。キャリパーを使用して腫瘍を測定し、式（Ｌ^２×Ｗ）／２で腫瘍体積を計算した（式中Ｌは最小サイズである）。平均腫瘍サイズが１５０ｍｍ^３に達したら（これは１２日目であった）、マウスを処置群に均等に無作為化した。マウスに、ＰＢＳに再懸濁した１×１０^９ＴＣＩＤ_５０用量のｍＶＶ１２００μｌもしくは対照としてのＰＢＳ２００μｌの静脈内注射を与え、ならびに／または１２、１５、１９および２２日目に、いずれかのアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ２ａおよび／もしくはラットＩｇＧ２ａ）２５０μｇおよび／もしくは抗マウスＰＤ－１ラットＩｇＧ２ａ抗体（２９Ｆ１．Ａ１２）２５０μｇおよび／もしくは１２もしくは１５日目に単回用量もしくは１２、１５、１９および２２日目に４回用量としての抗マウスＣＴＬＡ４－ｍＩｇＧ２ａ抗体（クローン９Ｄ９）２５０μｇを腹腔内注射した。６０日目の研究の終了まで、キャリパー測定によって腫瘍体積を週に２回モニターした。各群の経時的な平均腫瘍体積は、１回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体が、ｍＶＶ１および抗ＰＤ－１と組み合わせて投与された場合、４回用量の抗ＣＴＬＡ４を用いた処置と比較して同様の腫瘍増殖抑制を示したことを示す（図１４）。処置開始後２２日目の個々の腫瘍体積（図１５）を統計解析に使用したのは、これが、すべての群のすべての動物が生きていた、研究の最後の時点であったからである。統計的有意性は、ダネットの多重比較事後検定を用いる一元配置ＡＮＯＶＡによって決定した（^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。ｍＶＶ１と１回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体の組合せの処置は、４回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体と比較して、同等の腫瘍増殖抑制効能をもたらした（図１４、１５）。特に、静脈内送達されるｍＶＶ１と１回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体および抗ＰＤ－１抗体の３重組合せの処置は、４回用量のＣＴＬＡ４を受けた群と同様に生存の延長ももたらした（図１６）。まとめると、静脈内送達されるｍＶＶ１と抗ＰＤ－１抗体および１回用量の抗ｍＣＴＬＡ４抗体の組合せを用いた処置は、４回用量の抗ｍＣＴＬＡ４抗体の投与と同様の効能をもたらした。

【0172】

【表10】

【0173】

【表11】

【0174】

表１１に示すように、抗ＰＤ－１抗体および４回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体との３重組合せｍＶＶ１で処置したマウスは、研究の過程において、大きな腫瘍の制御および排除において非常に効果的であった。ウイルスと同時に与えた抗ＰＤ－１抗体および１回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体との３重組合せｍＶＶ１で処置したマウスは、４回用量と比較して、同様の腫瘍体積の低減を示した。これに対して、１回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体をウイルスと抗ＰＤ－１の３日後に与えた場合、３重組合せの効能は抑止された。このデータは、ｍＶＶ１と同時に与えられる１回用量の抗ＣＴＬＡ４、および抗ＰＤ－１の連続的投薬を、強い抗腫瘍効能を達成するために使用することができることを示す。

【実施例7】

【0175】

平均１５０ｍｍ^３のＭＣ３８腫瘍を有するマウスにおける、腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－ｍＩＦＮｂ－ＮＩＳの静脈内送達と同時に投与される抗ＰＤ－１、１回用量の抗ＣＴＬＡ４を用いた組合せ処置の抗腫瘍効能
本実施例は、ＭＣ３８腫瘍が移植された野生型マウスにおける、ＩＦＮｂおよびＮＩＳをコードする腫瘍溶解性ウイルスの水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）と抗ＰＤ－１および１回用量の抗ＣＴＬＡ４を使用する３重組合せの抗腫瘍効能を記載する。本研究で使用するＶＳＶは、Ｍウイルス遺伝子とＧウイルス遺伝子の間に挿入されたマウスインターフェロンベータ（ＩＦＮｂ）およびＧウイルス遺伝子とＬウイルス遺伝子の間に挿入されたナトリウム／ヨウ素共輸送体（ＮＩＳ）をコードするのでＶＳＶ－ｍＩＦＮｂ－ＮＩＳ（またはｍＶＶ１）と名付けられた、遺伝的に弱毒化されたウイルスである。本研究で使用する抗ＰＤ－１抗体はＢｉｏｘｃｅｌｌのクローン２９Ｆ１．Ａ１２ラットＩｇＧ２ａであり、使用される抗ＣＴＬＡ４抗体はＩｎｖｉｖｏｇｅｎのｍＩｇＧ２ａ型式のクローン９Ｄ９であった。

【0176】

【0177】

まとめると、静脈内送達されるｍＶＶ１とウイルスと同時に投与される抗ＰＤ－１抗体および１回用量の抗ｍＣＴＬＡ４抗体の組合せを用いた処置は、強い抗腫瘍効能をもたらした。

【実施例8】

【0178】

平均１００ｍｍ^３のＢ１６Ｆ１０腫瘍を有するマウスにおける、抗ＰＤ－１、１回用量の抗ＣＴＬＡ４と腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－ｍＩＦＮｂ－ＮＩＳの静脈内送達を用いた組合せ処置の抗腫瘍効能
本実施例は、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍が移植された野生型マウスにおける、ＩＦＮｂおよびＮＩＳをコードする腫瘍溶解性ウイルスの水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）と抗ＰＤ－１および１回用量の抗ＣＴＬＡ４を使用する３重組合せの抗腫瘍効能を記載する。本研究で使用するＶＳＶは、Ｍウイルス遺伝子とＧウイルス遺伝子の間に挿入されたマウスインターフェロンベータ（ＩＦＮｂ）およびＧウイルス遺伝子とＬウイルス遺伝子の間に挿入されたナトリウム／ヨウ素共輸送体（ＮＩＳ）をコードするのでＶＳＶ－ｍＩＦＮｂ－ＮＩＳ（またはｍＶＶ１）と名付けられた、遺伝的に弱毒化されたウイルスである。本研究で使用する抗ＰＤ－１抗体はＢｉｏｘｃｅｌｌのクローン２９Ｆ１．Ａ１２ラットＩｇＧ２ａであり、使用される抗ＣＴＬＡ４抗体はＩｎｖｉｖｏｇｅｎのｍＩｇＧ２ａ型式のクローン９Ｄ９であった。

【0179】

ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのＣ５７ＢＬ／６系統バックグラウンドマウスにＢ１６Ｆ１０細胞（５×１０^５個の細胞／マウス）を０日目に皮下移植した。キャリパーを使用して腫瘍を測定し、式（Ｌ^２×Ｗ）／２で腫瘍体積を計算した（式中Ｌは最小サイズである）。平均腫瘍サイズが１００ｍｍ^３に達したら（これは１０日目であった）、マウスを７つの処置群に均等に無作為化した。マウスに、ＰＢＳに再懸濁した１×１０^９もしくは５×１０^７もしくは１×１０^７もしくは１×１０^６のいずれかのＴＣＩＤ_５０用量のｍＶＶ１２００μｌもしくは対照としてのＰＢＳ２００μｌの静脈内注射を与え、ならびに／または１２、１５、１９および２２日目に、いずれかのアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ２ａおよび／もしくはラットＩｇＧ２ａ）２５０μｇおよび／もしくは抗マウスＰＤ－１ラットＩｇＧ２ａ抗体（２９Ｆ１．Ａ１２）２５０μｇおよび／もしくは１０日目に単回用量としての抗マウスＣＴＬＡ４－ｍＩｇＧ２ａ抗体（クローン９Ｄ９）２５０μｇを腹腔内注射した。６０日目の研究の終了まで、キャリパー測定によって腫瘍体積を週に２回モニターした。各群の経時的な平均腫瘍体積は、１回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体が、ＰＢＳまたは単剤と比較して、Ｂ１６Ｆ１０モデルにおいて強い腫瘍増殖抑制を示したことを示す（図１８）。特に、静脈内送達されるｍＶＶ１と１回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体および抗ＰＤ－１抗体の３重組合せの処置は、ウイルス用量を１×１０^９から５×１０^７または１×１０^７または１×１０^６ＴＣＩＤ_５０に低下させた場合、生存の延長の同様の効能ももたらした（図１８）。

【0180】

まとめると、静脈内送達されるｍＶＶ１と抗ＰＤ－１抗体および１回用量の抗ｍＣＴＬＡ４抗体の組合せを用いた処置は、Ｂ１６Ｆ１０抗ＰＤ－１抵抗性腫瘍モデルにおいて強い抗腫瘍効能をもたらし、広範囲のウイルス力価が強い組合せ効能を依然として達成することができる。

【0181】

【表12】

【0182】

【表13】

【0183】

表１３に示すように、Ｂ１６Ｆ１０皮下腫瘍モデルを使用して、ｍＶＶ１または１回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体と組み合わせた抗ＰＤ－１のいずれかで処置したマウスは、この高障害（ｈｉｇｈｂａｒ）免疫チェックポイント抵抗性腫瘍モデルにおいて、腫瘍増殖に対して非常にわずかな効果しかなかった。しかし、１回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体と組み合わせた抗ＰＤ－１との３重組合せｍＶＶ１は、他の群と比較して抗腫瘍効能を実質的に高めた。本データは、ＶＳＶが、チェックポイント抵抗性腫瘍を免疫療法に感受性にすることができることを示す。

【実施例9】

【0184】

平均１５０ｍｍ^３のＣＭＴ６４肺腫瘍を有するマウスにおける、抗ＰＤ－１、１回用量の抗ＣＴＬＡ４と腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－ｍＩＦＮｂ－ＮＩＳの静脈内送達を用いた組合せ処置の抗腫瘍効能
本実施例は、抗ＰＤ－１処置に抵抗性のＣＭＴ６４腫瘍を移植された野生型マウスにおける、ＩＦＮｂおよびＮＩＳをコードする腫瘍溶解性ウイルスの水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）と抗ＰＤ－１および１回用量の抗ＣＴＬＡ４を使用する３重組合せの抗腫瘍効能を記載する。本研究で使用するＶＳＶは、Ｍウイルス遺伝子とＧウイルス遺伝子の間に挿入されたマウスインターフェロンベータ（ＩＦＮｂ）およびＧウイルス遺伝子とＬウイルス遺伝子の間に挿入されたナトリウム／ヨウ素共輸送体（ＮＩＳ）をコードするのでＶＳＶ－ｍＩＦＮｂ－ＮＩＳ（またはｍＶＶ１）と名付けられた、遺伝的に弱毒化されたウイルスである。本研究で使用する抗ＰＤ－１抗体はＢｉｏｘｃｅｌｌのクローン２９Ｆ１．Ａ１２ラットＩｇＧ２ａであり、使用される抗ＣＴＬＡ４抗体はＩｎｖｉｖｏｇｅｎのｍＩｇＧ２ａ型式のクローン９Ｄ９であった。

【0185】

ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのＣ５７ＢＬ／６系統バックグラウンドマウスにＢ１６Ｆ１０細胞（５×１０^５個の細胞／マウス）を０日目に皮下移植した。キャリパーを使用して腫瘍を測定し、式（Ｌ^２×Ｗ）／２で腫瘍体積を計算した（式中Ｌは最小サイズである）。平均腫瘍サイズが１００ｍｍ^３に達したら（これは１０日目であった）、マウスを４つの処置群に均等に無作為化した。マウスに、ＰＢＳに再懸濁した１×１０^９ＴＣＩＤ_５０用量のｍＶＶ１もしくは対照としてのＰＢＳ２００μｌの静脈内注射を与え、ならびに／または１２、１５、１９および２２日目に、いずれかのアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ２ａおよび／もしくはラットＩｇＧ２ａ）２５０μｇおよび／もしくは抗マウスＰＤ－１ラットＩｇＧ２ａ抗体（２９Ｆ１．Ａ１２）２５０μｇおよび／もしくは１０日目に単回用量としての抗マウスＣＴＬＡ４－ｍＩｇＧ２ａ抗体（クローン９Ｄ９）５０μｇを腹腔内注射した。６０日目の研究の終了まで、キャリパー測定によって腫瘍体積を週に２回モニターした。各群の経時的な平均腫瘍体積は、１回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体が、ＰＢＳまたは抗ＣＴＬＡ４をともなう抗ＰＤ－１と比較して、ＣＭＴ６４腫瘍モデルにおいて強い腫瘍増殖抑制を示したことを示す（図１９）。図２０は、腫瘍から回収し、２回用量の抗ＰＤ－１とともに１２日目にＶＳＶを受け、１２および１４日目にａ－ＣＴＬＡ４を受けた後１７日目に各処置群において示される腫瘍抗原またはＶＳＶ－ＮＰに一晩再曝露したＣＤ８ＴＩＬによって放出されたＩＦＮｇの平均スポット形成単位（ＳＦＵ）を示す。ＤＭＳＯおよびＰＭＡ／イオノマイシンは、腫瘍移植後の複数の時点における陰性および陽性対照としてそれぞれ働き、処置日を矢印で示す。

【0186】

まとめると、静脈内送達されるｍＶＶ１と抗ＰＤ－１抗体および１回用量の抗ｍＣＴＬＡ４抗体の組合せを用いた処置は、ＣＭＴ６４抗ＰＤ－１抵抗性腫瘍モデルにおいて驚くほど強い抗腫瘍効能をもたらし、これは、この３重組合せの効能を様々な腫瘍状況に適用することができることを示す。

【0187】

【表14】

【0188】

【表15】

【0189】

表１５に示すように、抗ＰＤ－１抗体および１回用量の抗ＣＴＬＡ４抗体との３重組合せｍＶＶ１静脈内注射で処置したマウスは、ＣＭＴ６４腫瘍増殖の制御において非常に効果的であった。

【実施例10】

【0190】

平均１５０ｍｍ^３のＣＭＴ６４肺腫瘍を有するマウスにおける抗ＰＤ－１、抗ＣＴＬＡ４と腫瘍溶解性ウイルスＶＳＶ－ｍＩＦＮｂ－ＮＩＳの静脈内送達の組合せ処置は、幅広いポリクローナル抗腫瘍Ｔ細胞応答を引き出す
本実施例は、抗ＰＤ－１処置に抵抗性のＣＭＴ６４腫瘍を移植された野生型マウスにおける、ＩＦＮｂおよびＮＩＳをコードする腫瘍溶解性ウイルスの水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）と抗ＰＤ－１および１回用量の抗ＣＴＬＡ４を使用する３重組合せの作用機序を記載する。本研究で使用するＶＳＶは、Ｍウイルス遺伝子とＧウイルス遺伝子の間に挿入されたマウスインターフェロンベータ（ＩＦＮｂ）およびＧウイルス遺伝子とＬウイルス遺伝子の間に挿入されたナトリウム／ヨウ素共輸送体（ＮＩＳ）をコードするのでＶＳＶ－ｍＩＦＮｂ－ＮＩＳ（またはｍＶＶ１）と名付けられた、遺伝的に弱毒化されたウイルスである。本研究で使用する抗ＰＤ－１抗体はＢｉｏｘｃｅｌｌのクローン２９Ｆ１．Ａ１２ラットＩｇＧ２ａであり、使用される抗ＣＴＬＡ４抗体はＩｎｖｉｖｏｇｅｎのｍＩｇＧ２ａ型式のクローン９Ｄ９であった。

【0191】

ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのＣ５７ＢＬ／６系統バックグラウンドマウスにＣＭＴ６４細胞（５×１０^６個の細胞／マウス）を０日目に皮下移植した。キャリパーを使用して腫瘍を測定し、式（Ｌ^２×Ｗ）／２で腫瘍体積を計算した（式中Ｌは最小サイズである）。平均腫瘍サイズが１００ｍｍ^３に達したら（これは１０日目であった）、マウスを７つの処置群に均等に無作為化した。マウスに、ＰＢＳに再懸濁した１×１０^９ＴＣＩＤ_５０用量のｍＶＶ１もしくは対照としてのＰＢＳ２００μｌの静脈内注射を与え、ならびに／または１０および１４日目に、いずれかのアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ２ａおよび／もしくはラットＩｇＧ２ａ）２５０μｇおよび／もしくは抗マウスＰＤ－１ラットＩｇＧ２ａ抗体（２９Ｆ１．Ａ１２）２５０μｇおよび／もしくは抗マウスＣＴＬＡ４－ｍＩｇＧ２ａ抗体（クローン９Ｄ９）１０μｇを腹腔内注射した。１７日目に腫瘍を回収した。ウェル当たり１０，０００個の細胞をプレーティングし、ＩＦＮｇＥＬＩＳＰＯＴアッセイのためのそれぞれのペプチド抗原とともに一晩インキュベートすることによって、精製したＣＤ８ＴＩＬおよびナイーブ脾細胞を１：１の比で共インキュベートした。ＶＳＶを受けた群において、ＣＤ８ＴＩＬの大きな反応性がＶＳＶ－ＮＰ抗原に特異的であることが検出された。特に、腫瘍新生抗原の多くは、ＶＳＶを受けた群から収集された再曝露ＣＤ８ＴＩＬにおいてシグナルを誘導しており、抗ＰＤ－１および抗ＣＴＬＡ４単独で処置した群について、非常に限られた応答が検出された。ａ－ＰＤ－１およびａ－ＣＴＬＡ４との３重組合せＶＳＶは、他の群と比較して大きなポリクローナル抗腫瘍Ｔ細胞応答を誘導し、ＮＡＩＰ２およびＺＨＸ２などのいくつかの新生抗原反応性は、３重組合せのみで検出された。

【0192】

このデータは、３重組合せの効能が、腫瘍内で機能的であり、抗腫瘍Ｔ細胞応答を誘導するポリクローナル抗腫瘍Ｔ細胞の生成によって引き起こされることを示す。

【0193】

【表16】