特表 2024-526912 虚血性脳損傷関連疾患を治療する化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-19

(54)【発明の名称】虚血性脳損傷関連疾患を治療する化合物

(51)【国際特許分類】

   C07D 307/88 20060101AFI20240711BHJP

   A61K 31/341 20060101ALI20240711BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240711BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240711BHJP

【ＦＩ】

C07D307/88 CSP

A61K31/341

A61P25/00

A61P9/00

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024503689

(86)(22)【出願日】2022-07-20

(85)【翻訳文提出日】2024-01-19

(86)【国際出願番号】 CN2022106618

(87)【国際公開番号】W WO2023001164

(87)【国際公開日】2023-01-26

(31)【優先権主張番号】202110829381.4

(32)【優先日】2021-07-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520468276

【氏名又は名称】チャンスー チア タイ フェンハイ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＪＩＡＮＧＳＵ ＣＨＩＡ ＴＡＩ ＦＥＮＧＨＡＩ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．２６６ Ｎａｎｘｉａｎｇ Ｗｅｓｔ Ｒｏａｄ， Ｄａｆｅｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｙａｎｃｈｅｎｇ， Ｊｉａｎｇｓｕ， Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110002952

【氏名又は名称】弁理士法人鷲田国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】チュー ヨンチアン

(72)【発明者】

【氏名】リウ チア

(72)【発明者】

【氏名】ワン ジア

(72)【発明者】

【氏名】チェン チー

(72)【発明者】

【氏名】ヤン ヤン

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086AA04

4C086BA05

4C086GA15

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA02

4C086ZA36

(57)【要約】

本発明は、虚血性脳損傷関連疾患を治療する化合物を開示し、上記化合物の構造は下記式（ＩＩ）で示され、本発明に記載の化合物は、生物学的利用能がより高く、ラット血漿及び脳組織における分布濃度がより高く、虚血性脳損傷に良好な効果を有する。
【化１】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（ＩＩ）：

【化1】

の構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

式（Ｉ）：

【化2】

の構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

以下の単位胞パラメータ：

【表1】

を有することを特徴とする式（Ｉ）の化合物の単結晶。

【請求項4】

医薬組成物であって、請求項１に記載の式（ＩＩ）の構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩、請求項２に記載の式（Ｉ）の構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩、或いは請求項３に記載の単結晶、及び１種又は複数種の薬学的に許容される担体を含む、
ことを特徴とする医薬組成物。

【請求項5】

請求項１に記載の式（ＩＩ）の構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩、請求項２に記載の式（Ｉ）の構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩、請求項３に記載の単結晶、或いは請求項４に記載の組成物の、虚血性脳損傷関連疾患を治療及び／又は予防するための薬物の製造における使用。

【請求項6】

前記虚血性脳損傷関連疾患は、虚血性脳卒中、血管性認知症、脳虚血後炎症、痙攣、虚血性脳神経損傷又は壊死を含む、
ことを特徴とする請求項５に記載の使用。

【請求項7】

式（ＩＩ）の化合物及び式（Ｉ）の化合物を合成する方法であって、前記式（Ｉ）で示される化合物が、好ましくは、下記式のようにの製造される、方法。

【化3】

【請求項8】

請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物を石油エーテルに溶解してろ過した後、ろ液をピンホール膜で覆い、通風環境に置いて室温で溶媒を緩やかに蒸発させることにより、請求項３に記載の単結晶を製造する方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗脳虚血、抗虚血後炎症及び抗痙攣作用を有し、虚血性脳卒中患者における神経機能障害を改善できる化合物、医薬組成物、並びに虚血性脳神経損傷及び壊死関連疾患を治療するための方法に関する。

【背景技術】

【0002】

白質は中枢神経系の重要な構成要素であり、神経線維が集積した場所である。白質病変（ＷＭＬ）は、通常、血流減少や血中酸素供給不足によって引き起こされる。脳血液供給障害（不足）により、脳組織代謝の需要を満たすことが困難になり、従って一連の症状をもたらす。臨床では、眩暈、頭痛、四肢しびれ、又は一過性の意識喪失が見られ、重篤な者は、脳機能に不可逆的な損傷を引き起こし、死に至る場合もある。脳虚血関連疾患は、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、虚血性脳卒中（脳梗塞）、もやもや病、慢性脳供血不足などがあり、患者の認知機能低下及び血管性認知症の原因の１つでもある。

【0003】

現在、脳虚血による疾患を治療するための薬物は多数あるが、真に有効な者は数多くない。従来の薬物ニモジピンは、脳虚血に対して予防効果を有するが、治療効果は確実ではない。セロリ種子揮発油から抽出した３－ｎ－ブチルフタリド（ＮＢＰ）は、２００５年に中国で、軽・中等度急性虚血性脳卒中の治療に使用されると承認されたが、現在の作用機序はまだ不明であり、且つ臨床使用過程において肝機能異常及び消化管反応などの副作用を引き起こす可能性がある。

【0004】

脳虚血は、異なる程度の脳神経損傷及び壊死を引き起こし、人体の対応するシステム機能障害を引き起こし、患者の生存品質を大幅に低下させ、現在は依然として、より優れた治療効果を有し、抗脳虚血、抗虚血後炎症及び抗痙攣作用を有し、虚血性脳卒中患者における神経機能障害を改善でき、且つ記憶障害を改善し、神経細胞及び血液脳関門を保護できるなどの作用を有する、他の化合物を提供する必要がある。

【発明の概要】

【0005】

本発明は、虚血性脳神経損傷及び壊死関連疾患を治療するための、抗脳虚血、抗虚血後炎症及び抗痙攣作用を有し、虚血性脳卒中患者における神経機能障害を改善できる新規化合物を提供する。

【0006】

本発明は、以下の構造を有する式（ＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【化1】

【0007】

本発明はまた、以下の構造を有する式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【化2】

【0008】

本発明は更に、本発明の式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び１種又は複数種の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

【0009】

本発明は更に、本発明の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び１種又は複数種の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

【0010】

本発明は更に、本発明の式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容される塩の、虚血性脳損傷関連疾患を治療及び／又は予防するための薬物の製造における使用を提供する。

【0011】

本発明は更に、本発明の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩の、虚血性脳損傷関連疾患を治療及び／又は予防するための薬物の製造における使用を提供する。

【0012】

本発明は更に、本発明に記載の組成物の、虚血性脳損傷関連疾患を治療及び／又は予防するための薬物の製造における使用を提供する。

【0013】

本発明に記載の虚血性脳損傷関連疾患は、虚血性脳卒中、血管性認知症、脳虚血後炎症、痙攣、虚血性脳神経損傷又は壊死などを含むが、これらに限定されない。

【0014】

本発明は更に、本発明の式（ＩＩ）の化合物及び式（Ｉ）の化合物を合成するための方法を提供する。

【0015】

一具体的な実例において、本発明は更に、式（Ｉ）で示される化合物の製造方法を提供する。

【0016】

【化3】

【0017】

本発明は更に、以下の単位胞パラメータを有する、本発明に記載の式（Ｉ）の化合物の単結晶を提供する。

【表1】

【0018】

一具体的な実例において、式（Ｉ）の化合物の単結晶の非対称単位は図２で示される。

【0019】

本発明は更に、本発明に記載の式（Ｉ）の化合物を石油エーテルに溶解してろ過した後、ろ液をピンホール膜で覆い、通風環境に置いて室温で溶媒を緩やかに蒸発させることにより、上記単結晶を製造する方法を提供する。

【0020】

本発明に記載の化合物は、生物学的利用能がより高く、ラット血漿及び脳組織における分布濃度がより高く、虚血性脳損傷に良好な効果を有する。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1】（Ｚ）－３－（１－ヒドロキシブテニル）ベンゾフラン－２（３Ｈ）－オン単結晶の顕微鏡写真である。

【図2】（Ｚ）－３－（１－ヒドロキシブテニル）ベンゾフラン－２（３Ｈ）－オン単結晶の非対称単位である。

【発明を実施するための形態】

【0022】

以下、具体的な実施例を結合して、当分野における一般的技術知識及び通常の手段に基づき、本発明を更に説明する。以下の実施例は、本発明の好適な実施形態の一部に過ぎず、本発明を限定するものと解釈されるべきではなく、当業者は、本発明の範囲から逸脱することなく、若干の改変を加えることができ、それらも本発明の保護範囲にあると解釈されるべきである。

【0023】

実施例１
（Ｚ）－３－（１－ヒドロキシブテニル）ベンゾフラン－２（３Ｈ）－オンの合成

【化4】

【0024】

３－ベンゾフラノン（５．０ｇ、３７．３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、５℃まで降温し、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（６ｇ、５３．５ｍｍｏｌ、１．４ｅｑ．）を緩やかに加え、０．５ｈ反応させた後、塩化ｎ－ブチリル（８ｇ、７５．０ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ．）を緩やかに加え、１ｈ反応させ、水（５０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を取って０．１Ｎの塩酸で酸性（ｐＨ＜２）に洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウム（５ｇ）で０．５ｈ乾燥させ、ろ過し、濃縮して油状物を得、その後、高圧分取クロマトグラフィーを使用して分取精製し、精製後の溶液を凍結乾燥させ、白色固体の式（Ｉ）の化合物（（Ｚ）－３－（１－ヒドロキシブテニル）ベンゾフラン－２（３Ｈ）－オン（２．５ｇ、３２．９％）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ１２．０２（ｓ，１Ｈ），７．３５－７．３３（ｄ，１Ｈ），７．２８－７．１７（ｍ，３Ｈ），２．７６－２．７３（ｍ，２Ｈ），１．９０－１．８０（ｍ，２Ｈ），１．１２－１．０８（ｍ，３Ｈ）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３＋Ｄ_２Ｏ，４００ＭＨｚ）：δ７．３４－７．３２（ｄ，１Ｈ），７．２８－７．１６（ｍ，３Ｈ），２．７６－２．７２（ｍ，２Ｈ），１．８９－１．８０（ｍ，２Ｈ），１．１２－１．０８（ｍ，３Ｈ）。

【0025】

実施例２
（Ｚ）－３－（１－ヒドロキシブテニル）ベンゾフラン－２（３Ｈ）－オン単結晶の製造
２０ｍｇ（０．０９８ｍｍｏｌ）の実施例３で製造された（Ｚ）－３－（１－ヒドロキシブテニル）ベンゾフラン－２（３Ｈ）－オンを石油エーテル（０．４ｍＬ）に溶解し、ろ過した後、ろ液をピンホール膜で覆い、ヒュームフードに置き、室温で溶媒を緩やかに蒸発させ、２４ｈ後に（Ｚ）－３－（１－ヒドロキシブテニル）ベンゾフラン－２（３Ｈ）－オン単結晶（図１）を得た。

【0026】

（Ｚ）－３－（１－ヒドロキシブテニル）ベンゾフラン－２（３Ｈ）－オン単結晶のＸ線データは、ＭｏターゲットＫα線（λ＝０．７１０７３Å）を光源とするＢｒｕｋｅｒ Ｄ８ Ｖｅｎｔｕｒｅ回折計で収集された。データ収集過程において、結晶は２９６Ｋに維持された。単結晶の構造解析はＯｌｅｘ２ソフトウェアにおいて行われ、ＳＨＥＬＸＴプログラムのＩｎｔｒｉｎｓｉｃ Ｐｈａｓｉｎｇ方法を使用して初期構造を計算し、そしてＳＨＥＬＸＬプログラムの最小二乗法により構造精密化を行った。（Ｚ）－３－（１－ヒドロキシブテニル）ベンゾフラン－２（３Ｈ）－オンの結晶学的データ及び構造精密化パラメータは表１で示され、（Ｚ）－３－（１－ヒドロキシブテニル）ベンゾフラン－２（３Ｈ）－オン単結晶の非対称単位は図２で示された。

【0027】

【表2】

【0028】

生物学的測定：
本発明の化合物Ｉが虚血性神経機能障害を改善する作用を有することは、以下の測定により証明された。また、測定結果により、本発明の化合物Ｉは経口投与後に良好な生物学的利用能及び薬効を有することが示された。

【0029】

試験１：ラット薬物動態試験
ＳＤ雄性ラット（体重１８０～２６０ｇ）に、化合物Ｉを１．０ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈注射及び１０．０ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与し、各群に３匹の動物であった。投与溶媒は、５％ＤＭＳＯ＋５％ポリオキシエチレンヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ）の生理食塩水溶液であった。投与前に約１２時間禁食させ、投与後４ｈ自由に摂取させ、水を禁じない。投与前及び投与後５、１５、３０ｍｉｎ、１、２、４、６、８、２４ｈに、眼窩から約０．２ｍＬ採血し、ＥＤＴＡ－Ｋ２抗凝固ＥＰチューブに置いて氷浴し、４℃で、３５００ｒｐｍで１０分間低速遠心分離して血漿を分離し、分析するまで－２０℃で保存した。液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析の併用法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して、化合物Ｉの血漿における濃度の定量分析を行った。試料分析結果は、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェアを使用して薬物動態パラメータを計算した。

【0030】

表２のデータにより、経口投与後に、ブチルフタリド文献（王寧寧、李月、李暁紅、姜明燕、ＲＰ－ＨＰＬＣ法によるラット血漿における３－ｎ－ブチルフタリドの含有量及びその薬物動態学の測定、中国新薬と臨床雑誌、２０１２年１２月、第３１巻第１２期、７４３～７４７ページ）に報告されている値と比較して、化合物Ｉのラット体内における排除時間がより長く、生物学的利用能がより高いことが分かった（生物学的利用能が１００％を超えた原因は、非線形薬物動態であると推測された）。

【0031】

【表3】

【0032】

試験２：ラット脳組織分布試験
雄性ＳＤラット（体重２００～２７０ｇ）に、化合物Ｉ、ブチルフタリド（ＮＢＰ）をそれぞれ２０ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与した。投与後０．５、１、４、２４ｈに、動物の血漿及び脳組織サンプルを採取した。血漿の採取：ＥＤＴＡ－Ｋ２含有ＥＰチューブで全血を０．２ｍＬ収集し、３５００ｇで１０分間遠心分離した後、上層血漿を収集して－２０℃で保存した。脳組織の採取：動物の安楽死後に適量の脳組織を秤取り、脳組織：８０％メタノール水（ｗ／ｖ）＝１：４に従って均質化した。液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析の併用法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して、化合物の血漿及び脳組織サンプルにおける濃度の定量分析を行った。

【0033】

表３のデータにより、経口投与後に、本発明の化合物Ｉのラット血漿及び脳組織における分布濃度がより高いことが分かった。

【0034】

【表4】

【0035】

試験３：化合物のラット脳卒中モデルにおける薬効学的研究：単回治療投与
ラット脳虚血再灌流に対する化合物のニューロン保護効果を評価するために、糸栓子法を使用してＳＤラット中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）モデルを構築した。ＳＤラット（２４０～２７０ｇ）を３．０％イソフルランで麻酔誘導した後、手術を行い、そして右側総頸動脈（ＣＣＡ）、外頸動脈（ＥＣＡ）及び内頸動脈（ＩＣＡ）を分離露出させた。ＥＣＡを結紮し、ＩＣＡを一旦クランプし、そしてＣＣＡの近位端、遠位端にそれぞれ糸通しし、遠位端で締め付け、近位端で解けやすい結び目を作って必要に備え、両糸の間に小さな切り口をはさみ、ＣＣＡの切り口から４－０番糸栓子を挿入し、更に緩やかに内頸動脈へ軽く押し込め、ＩＣＡの動脈クリップに当てると一旦止まり、結紮糸を更に締め付けた後、ＩＣＡの血流を遮断していた動脈クリップを外し、その直後に糸栓子をＩＣＡへ押し込めて頭蓋内まで入れた。総頸動脈分岐から約１８ｍｍ程度の深さまで糸栓子を挿入した場合、軽い抵抗感があり、即ち糸栓子の先端が既に前大脳動脈（ＡＣＡ）に入り、糸栓子の側壁が既に中大脳動脈の開口を閉塞した時に、挿入を止め、そして時間を記録した。ＣＣＡ上の動脈クリップを除去し、活動性出血がないことを観察した後、切り口を閉じた。虚血ラットを室温に置いて体温を３７℃に維持し、１２０ｍｉｎ後に誘導麻酔し、麻酔を維持する状態で緩やかに糸栓子を軽く引き、その先端を外頸動脈内に戻すことで、中大脳動脈再灌流を実現した。動物は再灌流の直後（１０ｍｉｎ以内）に１回投与し、モデル対照群、化合物Ｉ静脈群（３０ｍｇ／ｋｇ）及び化合物Ｉ経口投与群（６０ｍｇ／ｋｇ）の合計３群をそれぞれ設けた。動物を虚血再灌流後２４ｈに安楽死させ、そして脳を速やかに摘出し、凍結後に切片化し、ＴＴＣ染色を行った。正常組織は染色後ローズ色になり、梗塞組織は白色になった。ラット脳虚血損傷の程度を評価するために、梗塞組織の全脳重量に対する百分率を梗塞範囲（Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ Ａｒｅａ％）とした。

【0036】

術後１日のＴＴＣ染色分析により、モデル対照群の動物の脳梗塞範囲は２１．６３±５．６６％であった。化合物Ｉ静脈群、化合物Ｉ経口投与群の動物の脳梗塞範囲は、それぞれ１３．６１±３．６６％及び１４．８８±５．１１％であり、これにより、本発明に記載の化合物Ｉ静脈群及び経口投与群は、何れも動物の脳梗塞範囲を著しく低減できることが分かり（Ｐ＝０．００２５及びＰ＝０．０３８９）、同時に、化合物Ｉ静脈群及び化合物Ｉ経口投与群の動物の脳梗塞抑制率は、それぞれ３７．１％及び３１．２％であった。以上の結果から、化合物Ｉはラットの脳梗塞に対する改善効果が高いことが示され、具体的には表４で示された。

【0037】

【表5】

【0038】

試験４：化合物のラット脳卒中中長期モデルに対する薬効学的研究
糸栓子法を使用してＳＤラット中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）モデルを構築し、２８日間連続で被験薬物介入を行い、一般観察、神経行動学スコアにより、被験薬物に対して脳卒中の薬効学的評価を行った。

【0039】

ＳＤラット（２４０～２８０ｇ）を３．０％イソフルランで麻酔誘導した後、手術を行い、そして右側総頸動脈（ＣＣＡ）、外頸動脈（ＥＣＡ）及び内頸動脈（ＩＣＡ）を分離露出させた。ＥＣＡを結紮し、ＩＣＡを一旦クランプし、そしてＣＣＡの近位端、遠位端にそれぞれ糸通しし、遠位端で締め付け、近位端で解けやすい結び目を作って必要に備え、両糸の間に小さな切り口をはさみ、ＣＣＡの切り口から４－０番糸栓子を挿入し、更に緩やかに内頸動脈へ軽く押し込め、ＩＣＡの動脈クリップに当てると一旦止まり、結紮糸を更に締め付けた後、ＩＣＡの血流を遮断していた動脈クリップを外し、その直後に糸栓子をＩＣＡへ押し込めて頭蓋内まで入れた。総頸動脈分岐から約１８ｍｍ程度の深さまで糸栓子を挿入した場合、軽い抵抗感があり、即ち糸栓子の先端が既に前大脳動脈（ＡＣＡ）に入り、糸栓子の側壁が既に中大脳動脈の開口を閉塞した時に、挿入を止め、そして時間を記録した。ＣＣＡ上の動脈クリップを除去し、活動性出血がないことを観察した後、切り口を閉じた。虚血ラットを室温に置いて体温を３７℃に維持し、１２０ｍｉｎ後に誘導麻酔し、麻酔を維持する状態で緩やかに糸栓子を軽く引き、その先端を外頸動脈内に戻すことで、中大脳動脈再灌流を実現した。動物は再灌流の直後（１０ｍｉｎ以内）に投与し、その後、毎日１回、２８日間連続で、手術当日はＤ１（Ｄａｙ０）と定義された。偽手術群、モデル対照群、ブチルフタリド（ＮＢＰ）投与群（６０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｑ．ｄ）、化合物Ｉ低用量経口投与群（６ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｑ．ｄ）、化合物Ｉ高用量経口投与群（２０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｑ．ｄ）の合計５群をそれぞれ設けた。投与の間、全ての動物に対して、グリッド試験（Ｄ７、Ｄ１４、Ｄ２１、及びＤ２８の合計４回）、新規物体認識試験（Ｄ２６は新規物体認識適応、Ｄ２７は検出）を行い、Ｄ２８に投与終了後、群における全ての生存動物を安楽死させた後、脳を速やかに摘出し、そして病理学的分析を行った。

【0040】

（１）グリッド試験の結果により、手術後１週間、モデル対照群の動物の踏み外し頻度は７．２４±３．５９回であり、ＮＢＰ治療群、化合物Ｉ低、高用量群の踏み外し頻度は、それぞれ７．３７±３．０３回、５．３３±２．３３回、及び４．２３±１．４４回であり、そのうち、化合物Ｉ高用量群の動物の踏み外し頻度は、モデル対照群と比較して顕著に低下しており（Ｐ＝０．０１７２）、手術後２～３週間、モデル群の動物は運動機能が徐々に回復していたため、踏み外し頻度が徐々に低下しており、化合物Ｉ高用量群の踏み外し頻度は、モデル対照群と比較して顕著な差はなかったが、依然として低下の傾向があり、モデル構築後４週間、モデル動物の踏み外し頻度は、偽手術群の動物のレベルまで低下したことが示された。以上の結果から、化合物Ｉは脳卒中動物の行動機能障害に対して改善効果を有することが示された（詳細は表５参照）。

【0041】

【表6】

【0042】

（２）治療の最終日に新規物体認識試験を行い、各群の動物の新規物体に対する認知指数（ＮＲＩ）を計算した。モデル対照群の動物の新規物体認知指数は５４．８１±２１．９４％であり、旧物体認知指数（ＦＲＩ）と顕著な差がなく、ＮＢＰ治療群、化合物Ｉ低及び高用量群の動物のＮＲＩは、それぞれ７０．９７±２２．５７％、７０．９８±２２．６０％及び７１．６６±１７．０６％であり、そのうち、ＮＢＰ治療群、化合物Ｉ低用量群及び高用量群の新規／旧物体認知指数は、何れも顕著な差があり（Ｐ＝０．００７４、Ｐ＝０．０２１２及びＰ＝０．０００９）、同時に、化合物Ｉ低用量群及び高用量群の新規物体認知指数は、偽手術群の動物の新規物体認知指数（６６．５１±１０．８０％）と同等であり、以上の結果から、化合物Ｉは脳卒中動物の認知障害を顕著に改善することが示された（詳細は表６参照）。

【0043】

【表7】

【0044】

（３）病理学的検査：１）修復範囲：修復領域範囲＞３０％の試料を回復状況良好とし、≦３０％の試料を回復不良とした。モデル対照群の回復良好な動物の割合は１７．６％であり、ＮＢＰ治療群、化合物Ｉ低用量群及び高用量群の修復領域＞３０％の割合は、それぞれ２１．４％、３３．３％及び７５．０％であり、化合物Ｉ高用量群の回復状況が最も良好で、モデル対照群と比較して顕著な差があり（Ｃｈｉ－ｓｑｕａｒｅ、Ｐ＝０．００８０）、以上の結果から、化合物Ｉは梗塞区域の修復に対して促進作用を有することが示され（詳細は表７参照）、２）梗塞修復領域の充満血管数：梗塞修復領域の赤血球を含む血管数≦１０個及び＞１０個の２つの標準を設定した。偽手術群の全ての動物における充満状態の血管数は何れも１０個より多く、割合は１００％であり、モデル対照群の動物における梗塞修復領域の赤血球を含む血管数≦１０個及び＞１０個の動物数は、それぞれ１０匹及び７匹であり、赤血球を含む血管数＞１０個の動物数の割合は４１．２％であり、ＮＢＰ治療群における梗死修復領域の赤血球を含む血管数≦及び＞１０個の動物数は、それぞれ１匹及び１４匹であり、赤血球を含む血管数＞１０個の動物数の割合は９３．３％であり、モデル対照群の動物と比較して統計学的意義（Ｃｈｉ－ｓｑｕａｒｅ、Ｐ＝０．００２８）を有し、化合物Ｉ低用量群及び高用量群における梗塞修復領域の赤血球を含む血管数≦及び＞１０個の動物数は、それぞれ０／１２匹、１／１２匹であり、赤血球を含む血管数＞１０個の動物数はモデル対照群より顕著に高かった（Ｃｈｉ－ｓｑｕａｒｅ、Ｐ＝０．００１２、Ｐ＝０．００７６）。次に、化合物Ｉ低用量群及び高用量群の動物における修復領域の赤血球を含む血管＞１０個の試料の割合は、それぞれ１００％、９２．３％であり、各治療群は何れも９０％以上であり、以上の結果から、化合物Ｉは２８日間連続の治療において脳卒中動物の脳梗塞修復領域の血管充満度を顕著に高めることが示された（詳細は表８参照）。

【0045】

【表8】

【0046】

【表9】

【図1】

【図2】

【国際調査報告】