特表 2024-526914 ＴＬＲ４受容体の新しい合成アゴニスト

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-19

(54)【発明の名称】ＴＬＲ４受容体の新しい合成アゴニスト

(51)【国際特許分類】

   C07H 13/06 20060101AFI20240711BHJP

   C07F 9/655 20060101ALI20240711BHJP

   A61K 31/7024 20060101ALI20240711BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20240711BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20240711BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240711BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240711BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20240711BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240711BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240711BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20240711BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240711BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240711BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240711BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20240711BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240711BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20240711BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20240711BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20240711BHJP

   A61K 9/12 20060101ALI20240711BHJP

   A61K 9/16 20060101ALI20240711BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20240711BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20240711BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20240711BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20240711BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20240711BHJP

   C07B 61/00 20060101ALN20240711BHJP

   B01J 23/44 20060101ALN20240711BHJP

【ＦＩ】

C07H13/06 CSP

C07F9/655

A61K31/7024

A61K39/00 H

A61K39/39

A61P37/04

A61P35/00

A61P37/08

A61P31/00

A61P9/00

A61P3/04

A61P25/00

A61P43/00 105

A61P37/02

A61P31/12

A61P31/04

A61K9/10

A61K9/107

A61K9/06

A61K9/12

A61K9/16

A61K9/14

A61K9/08

A61K9/48

A61K9/20

A61K9/19

C07B61/00 300

B01J23/44 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024503698

(86)(22)【出願日】2022-07-19

(85)【翻訳文提出日】2024-03-15

(86)【国際出願番号】 IB2022056615

(87)【国際公開番号】W WO2023002354

(87)【国際公開日】2023-01-26

(31)【優先権主張番号】102021000019544

(32)【優先日】2021-07-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】IT

(31)【優先権主張番号】102022000006149

(32)【優先日】2022-03-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】IT

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524024823

【氏名又は名称】ウニベルシタ デッリ ストゥディ ディ ミラノ－ビコッカ

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100138210

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 達則

(72)【発明者】

【氏名】フランチェスコ ペーリ

(72)【発明者】

【氏名】アレッシオ ロメリオ

(72)【発明者】

【氏名】シモーナ ダマート

【テーマコード（参考）】

4C057

4C076

4C085

4C086

4G169

4H039

4H050

【Ｆターム（参考）】

4C057AA18

4C057AA19

4C057AA20

4C057CC03

4C057DD03

4C057GG03

4C057HH03

4C076AA06

4C076AA11

4C076AA17

4C076AA22

4C076AA24

4C076AA29

4C076AA31

4C076AA36

4C076AA53

4C076BB01

4C076BB11

4C076BB21

4C076BB22

4C076BB25

4C076BB27

4C076BB29

4C076CC01

4C076CC06

4C076CC07

4C076CC11

4C076CC21

4C076CC27

4C076CC31

4C076CC32

4C076CC35

4C076FF70

4C085AA03

4C085AA38

4C085CC33

4C085DD59

4C085EE01

4C085FF14

4C085FF17

4C085GG01

4C085GG08

4C085GG10

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086AA04

4C086EA03

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA13

4C086MA17

4C086MA22

4C086MA23

4C086MA28

4C086MA35

4C086MA37

4C086MA41

4C086MA43

4C086MA44

4C086MA52

4C086MA55

4C086MA57

4C086MA59

4C086MA60

4C086MA66

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZA01

4C086ZA36

4C086ZA70

4C086ZB07

4C086ZB09

4C086ZB13

4C086ZB21

4C086ZB26

4C086ZB31

4C086ZB33

4C086ZB35

4G169AA03

4G169BB02A

4G169BB02B

4G169BC72A

4G169BC72B

4G169CB02

4H039CA60

4H039CB20

4H050AA02

4H050AB20

4H050AC90

4H050WA13

4H050WA23

4H050WB12

(57)【要約】

本発明は、ヒトＴｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）のアゴニスト活性を有する新規合成分子、それらを含む組成物、及び免疫応答を誘導するか、あるいは増大させることが有用である疾患の治療のためのそれらの使用に関する。これらの新規合成分子は、式が単純であること、調製が容易で安価であること、及び物理化学的特性を改変し、他の分子（例えば、タンパク質抗原）と結合するのを可能にするためのさらなる化学処理の可能性のために、他の類似のアゴニストとは異なる。
【選択図】 図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式１の化合物であって、

【化1】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_４は、Ｃ_６及び適切な原子の間の結合によって連結され得る任意の置換基、及び／又はＣ_６に結合し得る酸素若しくは窒素原子を有する任意の置換基である、化合物。

【請求項2】

Ｒ_４鎖は、ヒドロキシル基（ＯＨ）、リン酸基（ＰＯ_４ ^２－）、アジド基（Ｎ_３）、アミン基（ＮＨ_２）、アシル基（Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ）又はアルキル基（ＯＲ）又はグリコシル基である、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３は、互いに異なる、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３の少なくとも２つは、同一である、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項5】

Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３の少なくとも１つは、２位に－ＯＨ置換基を含まない、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項6】

Ｒ_１、Ｒ_２又はＲ_３の少なくとも１つは、任意の置換基を含まない、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項7】

Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＨ、又は
Ｒ_１＝Ｒ_３＝Ｃ_１３Ｈ_２７；Ｒ_２＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＨ、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_９Ｈ_１９、及びＲ_４＝ＯＨ、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１３Ｈ_２７、及びＲ_４＝ＯＨ、又は
Ｒ_１＝Ｒ_３＝Ｃ_９Ｈ_１９；Ｒ_２＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＨ、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＰＯ_４ ^２－、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_９Ｈ_１９、及びＲ_４＝ＰＯ_４ ^２－、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１３Ｈ_２７、及びＲ_４＝ＰＯ_４ ^２－、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＣ_３Ｈ_７、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ_６Ｈ_８（ＯＨ）_３、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＮＨ_２、
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＣＨ_３（ＣＨ_２ＯＨ）_２、
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＣＨ（ＣＨＯＨ）_３ＣＨ（ＣＨ_３）Ｏ、
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＣＨ（ＣＨＯＨ）_３ＣＨ（ＣＨ_２ＯＨ）Ｏ、
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＣＨ（ＣＨＯＨ）_３（ＣＨ_２）Ｏ、
である、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項8】

前記化合物は、式１の化合物のαアノマーである、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項9】

前記化合物は、式１の化合物のβアノマーである、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項10】

ＴＬＲ４受容体を活性化することによる免疫刺激を必要とするか、あるいは免疫刺激から利益を得る疾患の治療において、有効成分又はアジュバントとして使用するための、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項11】

前記疾患は、がん、アレルギー、感染性疾患、心血管疾患、肥満依存性の代謝性疾患、神経変性、アポトーシス、自己免疫障害、ウイルス感染、細菌感染、自己免疫疾患である、請求項１０に記載の使用のための化合物。

【請求項12】

請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物からなる、ワクチンアジュバント。

【請求項13】

請求項１～１２のいずれか一項に記載の化合物、少なくとも１つの薬学的に許容される担体及び少なくとも１つの薬学的に許容される免疫原性抗原を含む、ワクチン組成物。

【請求項14】

前記化合物は、前記組成物中に存在する唯一のアジュバントである、請求項１３に記載のワクチン組成物。

【請求項15】

請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤及び／又は担体を含む、医薬組成物。

【請求項16】

少なくとも１つの追加の有効成分をさらに含む、請求項１５に記載の医薬組成物。

【請求項17】

経口、非経口、鼻腔、エアロゾル、舌下、直腸、膣内、局所又は全身投与用の形態である、請求項１５又は１６に記載の医薬組成物。

【請求項18】

懸濁液、エマルション、軟膏、クリーム、スプレー、顆粒、粉末、溶液、カプセル、丸薬、錠剤、凍結乾燥製剤、トローチ剤、エアロゾル、噴霧又は注射の形態である、請求項１５～１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項19】

ＴＬＲ４受容体を活性化することによる免疫刺激を必要とするか、あるいは免疫刺激から利益を得る疾患の治療において、有効成分又はアジュバントとして使用するための、請求項１５～１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項20】

前記疾患は、がん、アレルギー、感染性疾患、心血管疾患、肥満依存性の代謝性疾患、神経変性、アポトーシス、自己免疫障害、ウイルス感染、細菌感染、自己免疫疾患である、請求項１９に記載の使用のための医薬組成物。

【請求項21】

式１ｉの中間体であって、

【化2】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖である、中間体。

【請求項22】

式１ｉの中間体の調製方法であって、

【化3】

工程
１）炭酸水素ナトリウムの存在下におけるアシルクロリドとの反応による、グルコサミンハイドロクロリドのＣ_２位のアミノ基の選択的アシル化、
２）イミダゾールの存在下におけるｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＤＭＳＣｌ）との反応による、Ｃ_６位のヒドロキシル基の選択的シリル化による保護、
を含む、方法。

【請求項23】

式１の化合物の調製方法であって、

【化4】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_４は、Ｃ_６及び適切な原子の間の結合によって連結され得る任意の置換基及び／又はＣ_６に結合し得る酸素若しくは窒素原子を有する任意の置換基であり、
工程：
１）炭酸水素ナトリウムの存在下におけるアシルクロリドとの反応により、グルコサミンハイドロクロリドのＣ_２位のアミノ基を選択的にアシル化すること；
２）イミダゾールの存在下におけるｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＤＭＳＣｌ）との反応によって、Ｃ_６位のヒドロキシル基を選択的にシリル化することにより保護して、それによって、請求項２２に記載の中間体を得ること；
３）トリエチルアミン及びＮ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下におけるアシルクロリドとの反応により、Ｃ_１及びＣ_３位のヒドロキシル基を選択的にアシル化すること；
４）トリフラートイミダゾリウムの存在下におけるジベンジルＮ，Ｎ－ジイソプロピルホスファラミダイトとの反応により、Ｃ_４位のヒドロキシル基をリン酸化して、その後にメタクロロ過安息香酸を介したホスファイトのホスフェートへの酸化が続くこと；
５）触媒量の硫酸の存在を介して、Ｃ_６位のシランからヒドロキシル基を脱保護すること；及び
６）パラジウム炭素（Ｐｄ／Ｃ）によって触媒される水素化を介して、Ｃ_４位のベンジルからホスフェートを脱保護して、任意にＣ_６位の任意の置換基上のベンジルを脱保護すること、
を含む、方法。

【請求項24】

工程５）の後かつ工程６）の前に、工程５ｉ）：
５ｉ）トリフラートイミダゾリウムの存在下におけるジベンジルＮ，Ｎ－ジイソプロピルホスファラミダイトとの反応により、Ｃ_６位のヒドロキシル基をリン酸化して、その後にメタクロロ過安息香酸を介したホスファイトのホスフェートへの酸化が続き、前記脱保護工程６）は、Ｃ_４及びＣ_６位において実行されること、
結果として生じるＲ４は、リン酸基（ＰＯ_４ ^２－）であること、
をさらに含む、請求項２３に記載の方法

【請求項25】

式１の化合物は、
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３及びＲ_４＝ＰＯ_４ ^２－又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_９Ｈ_１９及びＲ_４＝ＰＯ_４ ^２－又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１３Ｈ_２７及びＲ_４＝ＰＯ_４ ^２－、
の１つである、請求項２３に記載の方法。

【請求項26】

工程５）の後かつ工程６）の前に、工程５ｉｉ）：
５ｉｉ）適切な縮合剤及び触媒の存在下におけるカルボン酸との反応又は適切な触媒の存在下におけるアシルクロリドとの反応により、Ｃ_６位のヒドロキシ基をアシル化することであって、前記脱保護工程６）は、Ｃ_４位において実行されること、
結果として生じるＲ_４は、アシル基であること、
をさらに含む、請求項２３に記載の方法。

【請求項27】

前記アシル化工程５ｉｉ）において、前記適切な縮合剤及び触媒は、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）である、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

工程５）の後かつ工程６）の前に、工程５ｉｉｉ）：
５ｉｉｉ）適切な活性化剤、触媒及び分子篩の存在下におけるグリコシルクロリド供与体又はグリコシドチオエチル（Ｓｅｔ）供与体の反応により、Ｃ_６位のヒドロキシル基をグリコシル化すること、
をさらに含む、請求項２３に記載の方法。

【請求項29】

工程５）の後かつ工程６）の前に、工程５ｉｖ）：
５ｉｖ）適切な活性化剤、触媒及び分子篩の存在下における安定化アルキルクロリドの反応により、Ｃ_６のヒドロキシル基をアルキル化すること、
結果として生じるＲ_４は、ｎ個のアルキル基であること、
をさらに含む、請求項２３に記載の方法。

【請求項30】

前記グリコシル化工程５ｉｉｉ）及びアルキル化工程５ｉｖ）において、前記適切な活性化剤は、酸化銀（Ｉ）又はＮＩＳ（Ｎ－ヨードスクシンイミド）であって、前記適切な触媒は、トリフルオロメタンスルホン酸又はＨＯＦｏｘ（３，３－ジフルオロオキシインドール）であり、前記適切な分子篩は、水分捕捉剤である、請求項２８及び２９に記載の方法。

【請求項31】

工程５）の後かつ工程６）の前に、工程５ｖ）及び工程５ｖｉ）：
５ｖ）塩基としてのトリエチルアミン及び適当な触媒の存在下におけるトシルクロリドの反応により、Ｃ_６位をトシル化すること、
５ｖｉ）テトラブチルアンモニウムヨージドの存在下におけるアジ化ナトリウムとの反応により、Ｃ_６位にアジドを挿入すること、
をさらに含む、請求項２３に記載の方法。

【請求項32】

前記トシル化工程５ｖ）において、前記適切な触媒は、Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）である、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

工程５）の後かつ工程６）の前に、工程５ｖｉｉ）及び工程５ｖｉｉｉ）：
５ｖｉｉ）唯一の活性化剤としてのＢｉ（ＯＴｆ）_３の存在下におけるピコロイル基を有するグリコシルクロリド供与体の反応により、Ｃ_６位のヒドロキシル基をグリコシル化すること、
結果として生じるＲ_４は、グリコシル基であること、
５ｖｉｉｉ）Ｃｕ（ＯＡｃ）_２との反応によりピコロイル基を除去すること、
をさらに含む、請求項２３に記載の方法。

【請求項34】

前記アシル化工程３）は、－７８℃～０℃の範囲の温度及び０．０５～０．２当量の範囲の触媒の量で実行され、それによって、前記式１の化合物のβ－アノマーを獲得して、好ましくは、－２０℃の温度及び０．１当量の触媒の量で実行される、請求項２４～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記アシル化工程３）は、２０℃～５０℃の範囲の温度及び２～２．５当量の範囲の触媒の量で実行され、それによって、前記式１の化合物のα－アノマーを獲得して、好ましくは３０℃の温度及び２．０２当量の触媒の量で実行される、請求項２４～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

式１の化合物の合成のための請求項２１に記載の中間化合物の使用であって、

【化5】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_４は、Ｃ_６及び適切な原子の間の結合によって連結され得る任意の置換基及び／又はＣ_６に結合し得る酸素若しくは窒素原子を有する任意の置換基である、中間化合物の使用。

【請求項37】

式Ｘの化合物の調製方法であって、

【化6】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり
Ｒ_４は、ＯＨであり、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３のそれぞれは、Ｃ_２位に－ＯＨ置換基を含まず、
工程：
１）炭酸水素ナトリウムの存在下におけるアシルクロリドとの反応により、グルコサミンハイドロクロリドのＣ２位のアミノ基を選択的にアシル化すること、
２）イミダゾールの存在下におけるｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＤＭＳＣｌ）との反応により、Ｃ_６位のヒドロキシル基を選択的にシリル化することによって保護して、請求項２１に記載の式１ｉの中間体を得ること、
３）トリエチルアミン及びＮ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下におけるアシルクロリドとの反応により、Ｃ_１、Ｃ_３及びＣ_４位のヒドロキシル基を完全にアシル化すること、
４）酢酸の存在下におけるエチレンジアミンとの反応により、Ｃ_１位を選択的にジアシル化すること、
５）トリフラートイミダゾリウムの存在下におけるジベンジルＮ，Ｎ－ジイソプロピルホスファラミダイトとの反応により、Ｃ_１位のヒドロキシル基をリン酸化して、その後にメタクロロ過安息香酸を介したホスファイトのホスフェートへの酸化が続くこと、
６）触媒量の硫酸の存在を介して、Ｃ_６位のシランからヒドロキシル基を脱保護すること、
７）パラジウム炭素（Ｐｄ／Ｃ）によって触媒される水素化を介して、Ｃ_４位のベンジルからホスフェートを脱保護して、任意にＣ_６位の任意の置換基上のベンジルを脱保護すること、
を含む、方法。

【請求項38】

式Ｘの化合物の合成のための請求項２１に記載の中間化合物の使用であって、

【化7】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_４は、ＯＨであり、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３のそれぞれは、Ｃ_２位に－ＯＨ置換基を含まない、中間化合物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

説明
本発明は、ヒトＴｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）のアゴニスト活性を有する新規合成分子、それらを含む組成物、及び特に、免疫応答を誘導するか、あるいは増大させることが有用である疾患の治療のためのそれらの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

先行技術
自然免疫は、病原体及び細胞傷害に対する高等生物の防御の第一線である。これは、特定のタンパク質受容体によって、病原体又は細胞傷害と関連している特定の分子構造（それぞれＰＡＭＰｓ及びＤＡＭＰｓ）を認識することに基づいている。かかる受容体は、パターン認識受容体（ＰＲＲｓ）として知られており、それらの細胞内、細胞質内又は膜上における局在性、及びそれらの機能によって決まる、様々な類型のものであってもよい。

【0003】

最も研究されている受容体は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ファミリーであり、その主な役割は、様々なＰＡＭＰｓを認識し、炎症を通じて病原体の存在を身体に警告し、感染と闘うために他の免疫細胞を動員して、そのような脅威に対する最も適切で特異的な防御である、獲得免疫を発達させる過程を開始することである。

【0004】

実際に、病原体に対する自然免疫反応は、獲得免疫反応の性質及び強度の両方を決定するに当たり重要であり得る。

【0005】

このような訳で、ＴＬＲ活性化剤（アゴニスト）の開発は、炎症刺激が治療の観点から有益である場合、薬学的関連性がある：例は、がん免疫治療薬及びワクチンアジュバントである。最初の事例において、炎症促進活性は、腫瘍環境における免疫系の再活性化につながり、腫瘍を破壊し得る（Ｂｈａｔｉａ Ｓ，Ｍｉｌｌｅｒ ＮＪ，Ｌｕ Ｈら、Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｇ１００，ａ ＴＬＲ４ ａｇｏｎｉｓｔ，ｉｎｄｕｃｅｓ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｍｅｒｋｅｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１９；２５（４）：１１８５－１１９５．ｄｏｉ：１０．１１５８／１０７８－０４３２．ＣＣＲ－１８－０４６９）。

【0006】

第二の事例において、現代のワクチンは、もはや不活化病原体全体ではなく、アジュバント化（ａｄｊｕｖａｔｉｏｎ）なしでは正しい炎症反応を刺激することができない、そのサブユニットを使用しているため、炎症促進活性が有利である。現在まで、ＴＬＲ受容体を結合させて活性化することができる様々な小分子が存在し、それらの一部は、アジュバントとして使用されている：例えば、イミキモド及びレジキモドなどのイミダゾキノリンＴＬＲ７／８アゴニスト、並びにＰａｍ２ＣＳ型ＴＬＲ２／ＴＬＲ６アゴニスト及び例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）及びアミノアルキルグルコサミニド－４－ホスフェート（ＡＧＰ、また、コリクサ化合物、ＣＲＸとも称される）などのＴＬＲ４アゴニストなど。

【0007】

ＴＬＲの間で、ＴＬＲ４は、高い薬理学的関心のあるものであり：その活性化は、自然免疫及び適応免疫を刺激する最も効率的な方法である。実際に、ＴＬＲ４は、２つのはっきりと異なる細胞機能機構を示し、これが炎症性サイトカインのより大量かつ不均一な放出につながり、より完全な免疫応答を引き起こす。

【0008】

ＴＬＲ４の天然アゴニストは、グラム陰性菌の外膜の主成分であるリポ多糖（ＬＰＳ）である。それは、３つの部分に分けられる：Ｏ－抗原と呼ばれる長い多糖鎖、コアと呼ばれる短いオリゴ糖、及び最後に、２つのグルコサミンによって形成され、一般に２つのホスフェート及び変数のアシル鎖が結合している、分子の免疫原性部分である、リピドＡ（ｌｐｄ Ａ）。

【0009】

リピドＡのアゴニスト活性は、ＴＬＲ４の共受容体である骨髄分化因子２、すなわち、ＭＤ－２への結合親和性（結合する能力）に基づいており、自然免疫細胞、すなわち、マクロファージ及び樹状細胞の表面に（ＴＬＲ４／ＭＤ－２／ＬＰＳ）_２複合体の形成を必然的に伴う。

【0010】

ＬＰＳによるＴＬＲ４受容体の活性化過程は、溶液中の個々のＬＰＳ分子又は凝集体が脂質結合タンパク質（ＬＢＰ）と相互作用することから始まり、ＬＰＳ分子と複合体を形成する。その後、ＬＰＳ分子は、ＬＢＰから共受容体ＣＤ１４に移行し、次にＣＤ１４はＭＤ－２からＬＰＳ分子を移行させる。

【0011】

しかしながら、Ｌｐｄ Ａは、ピコグラムの位数の量でさえ毒性があり、その結果として薬理学的に使用されることはできない（Ｍｏｌｉｎａｒｏ Ａ，Ｈｏｌｓｔ Ｏ，Ｌｏｒｅｎｚｏ Ｆ Ｄｉら、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｌｉｐｉｄ ａ：Ａｔ ｔｈｅ ｈｅａｒｔ ｏｆ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｃｈｅｍ－Ａ Ｅｕｒ Ｊ．２０１５；２１（２）：５００－５１９．ｄｏｉ：１０．１００２／ｃｈｅｍ．２０１４０３９２３）。

【0012】

リピドＡに類似した構造を有するが、内毒性（ｅｎｄｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）が弱毒化された合成分子及び天然分子は、毒性作用を排除しながら免疫刺激活性を維持するという視点において、ワクチンアジュバントとして興味深い候補である。

【0013】

モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）は、Ｃ１リン酸基がないことを除けば、リピドＡと全く一致する分子である。それほど類似しているにもかかわらず、炎症活性は、天然分子のそれの０．１％だけであり、その薬理学的プロファイルは非常に優れているため、ワクチンアジュバントとしての使用がＦＤＡから認可されている。分子は、現在、サーバリックス及びフェンドリックスのワクチンに使用されている。しかしながら、現在使用されているＭＰＬアジュバントは、天然のＬＰＳから直接製造されるため、化学的に不均一である。

【0014】

さらに、これらの二糖化合物の合成は、非常に長く複雑であり、最終価格が約２００ｅｕｒ／ｍｇという結果になる。このような訳で、単糖構造を有するリピドＡのアナログをさらに開発し、既知のアナログの有利な特徴が同じであるか、あるいはさらに改良され、好ましくは、より単純な合成経路を通じて得られることは興味深い。

【0015】

当技術分野において知られている単糖構造のリピドＡアナログの例は、アミノアルキルアグリコンＮ－アシレートのユニットとのグリコシド化によって結合した単糖ユニットを含むＡＧＰｓ（ＣＲＸアジュバントとしても知られている、Ｃｏｒｉｘａ）と名付けられた合成化合物によって示される。

【0016】

ＡＧＰは、ＴＬＲ４の強力なアゴニストであり、化学的に均一であり、化学合成によって製造される。

【0017】

さらに、ＴＬＲ４の活性化において有効である、より単純なリピドＡのアナログは、リピドＡの還元部分又は非還元部分を模倣したモノリン酸化単糖誘導体を含む（以下のスキーム）。

【化1】

【0018】

当該技術分野において知られている化合物の他の例は、Ｃ_４位でリン酸化された、グルコピラノシド骨格（ｓｋｅｌｅｔｏｎ）、Ｃ_２位の炭素数１４の直鎖及びＣ_３位の分岐鎖（ＧＬＡ６３において炭素数１４＋１４又はＧＬＡ６０において炭素数１４＋１２）を含む化合物ＧＬＡ６３及びＧＬＡ６０（上記のスキーム）によって示される（Ｍｏｔｏｈｉｒｏ Ｍａｔｓｕｕｒａ，Ｍａｋｏｔｏ Ｋｉｓｏ ａｎｄ Ａｋｉｒａ Ｈａｓｅｇａｗａ Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．１９９９，６７（１２），６２８６－６２９２）。リピドＡを部分的に模倣し、リピドＡの生合成前駆体である、単糖リピドＸを模倣するこれらの単糖は、マウス及びヒト細胞の両方において、ＴＬＲ４依存性のサイトカインＴＮＦ－α及びＩＬ－６の産生を刺激する活性がある。

【0019】

また、当技術分野において知られている、化合物ＳＤＺ ＭＲＬ ９５３は、マウスのマクロファージ及び好中性顆粒球において、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－８（ＩＬ－８）及びＴＮＦ－α因子などの炎症性サイトカインの放出を刺激する強力な活性を示し、それに付随して、ガラクトサミンで感作された（－ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ）マウスにおいて、親エンドトキシン（ｐａｒｅｎｔ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ）（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ ｅｑｕｉ）と比較して、少なくとも１０^４の倍数（ａ ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ａｔ ｌｅａｓｔ １０^４）の毒性の減少を示した。

【0020】

実験的微生物感染モデルにおいて、化合物は、骨髄抑制マウス又は免疫不全マウスに１回又は３回のいずれかを予防投与した場合、高い予防効果を有することを証明した。

【0021】

ＳＤＺ ＭＲＬ ９５３と５０％の反応に達するために有効な用量は、感染因子又は投与経路によって変わる。しかしながら、全ての場合において、得られたＥＣ_５０は、エンドトキシンであるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ ｅｑｕｉで得られたものの約１０^３倍超であった。

【0022】

しかしながら、毒性が低いおかげで、例えば、ＬＤ２５／ＥＤ７５として表される、この分子の治療指数は、エンドトキシンと比較して有意に改善され、感染因子及び投与経路に応じて、約５～＞５００の範囲である。

【0023】

化合物はまた、エンドトキシンに対する耐性を誘導する点でも効率的であることを証明した：化合物の反復投与は、エンドトキシン関連の致死リスクに対する一過性の耐性（≧１週間）を誘導する。

【0024】

また、これらの良好な結果は全て、抗生物質治療がすでに非効率的であることを証明した、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）によって引き起こされた進行性敗血症のモデルにおいても確認された：微生物接種の１日前にＳＤＺ ＭＲＬ ９５３を１回投与する前処理は、投与した抗生物質の治癒効果を劇的に増加させた。このような訳で、併用療法で免疫刺激剤の投与量を増加させると、長期生存率が有意に上昇した。

【0025】

動物及びインビボでＳＤＺ ＭＲＬ ９５３によって実証された忍容性のために、この化合物は、その後ヒトモデルで試験された。

【0026】

Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ ｅｑｕｉのエンドトキシンの既知の抗腫瘍活性及びその免疫刺激特性に基づいて、Ｋｉａｎｉら（Ａ．Ｋｉａｎｉ，Ａ．Ｔｓｃｈｉｅｒｓｃｈ，Ｅ．Ｇａｂｏｒｉａｕ，Ｆ．Ｏｔｔｏ，Ａ．Ｓｅｉｚ，Ｈ．－Ｐ．Ｋｎｏｐｆ，Ｐ．Ｓｔｕｔｚ，Ｌ．Ｆａｒｂｅｒ，Ｕ．Ｈａｕｓ，Ｃ．Ｇａｌａｎｏｓ，Ｒ．Ｍｅｒｔｅｌｓｍａｎｎ，ａｎｄ Ｒ．Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔ，Ｂｌｏｏｄ，１９９７，１６７３－１６８３）は、対照培地を用いて無作為化二重盲検第Ｉ相試験を実施し、腫瘍に罹患した患者にＳＤＺ ＭＲＬ ９５３を投与して、第一に、その生物学的効果及びそのヒトにおける投与の安全性、第二に、その後のそのエンドトキシン（ＬＰＳ）添加に対する反応への影響を評価した。

【0027】

ＳＤＺ ＭＲＬ ９５３の投与は、安全性及び優れた忍容性を証明した。同じＳＤＺ ＭＲＬ ９５３は、顆粒球数並びにＧ－ＣＳＦ及びインターロイキン－６（ＩＬ－６）の血清レベルを上昇させるが、炎症性サイトカインであるＴＮＦ－α、ＩＬ－１ｂ及びＩＬ－８の血清レベルは上昇させない。

【0028】

それ故に、ＳＤＺ ＭＲＬ ９５３は、３つの関連性のある特徴を有する、すなわち、１）高い忍容性及び低い毒性、２）Ｇ－ＣＳＦ産生を誘導する能力、その結果、３）細胞内の一次防御のグループの増加によって発現する非特異的な免疫抵抗性を刺激する能力。

【0029】

ＳＤＺ ＭＲＬ ９５３の臨床使用において、これらの良好な結果にもかかわらず、
この分子の作用機序は、まだ分子詳細に研究されていない。

【0030】

ＳＤＺ ＭＲＬ ９５３の合成は、グルコサミンのコアが純エナンチオマーとして３（Ｒ）－ヒドロキシミリスチン酸の鎖をＣ_２、Ｃ_３及びＣ_４位に結合するという事実のために、複雑である。３－ヒドロキシミリスチン酸は、ラセミ体として市販されているが、純エナンチオマー３（Ｒ）－ヒドロキシミリスチン酸は、ＳＤＺ ＭＲＬ ９５３の合成に使用する前に、ラセミ体から単離される必要がある。

【0031】

ＷＯ２０１９／０９２５７２は、トリアシル化モノホスホリルグルコサミンのコア、及び特に、ＦＰ１１２のＣ_１位に１つのリン酸基を有する、さらなる化合物のクラスを開示している。

【化2】

【0032】

ＦＰ１１２は、ｌｐｄ Ａの還元末端及びＳＤＺ ＭＲＬ ９５３に類似した化合物であるが、３つの完全に飽和した非置換のアシル鎖を有する。この化合物は、光学的に純粋なアシル鎖の生成がその合成に必要ではないため、当該技術分野において知られている化合物よりも合成が著しく容易である。

【0033】

ＦＰ１１２は、多数の炎症性サイトカインの放出を刺激することができるため、優れた薬理学的プロファイルを有しており、そのうち最も注目すべきものは、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α及びＩＦＮβである。

【0034】

ＦＰ１１２は、Ｈｅｋ－Ｂｌｕｅ、Ｒａｗ－Ｂｌｕｅ、ＴＨＰ－１細胞を用いて、インビトロで広範囲にわたって試験され、１０μＭの濃度ですでに低毒性及び良好な炎症促進活性を常に明示した。

【発明の概要】

【0035】

本発明の著者らは、ＴＬＲ４受容体の有効なアゴニストである、当該技術分野において知られているものとは異なる、トリアシル化モノホスホリルグルコサミンのコアを有する新規化合物のグループを同定した。有利には、前記新規化合物は、興味のある様々な基で官能基化され得るため、当該技術分野において記述されている化合物よりも多用途である。本発明の著者らはまた、当該技術分野において知られている他の化合物の合成方法と同様に、当該技術分野において開示されている方法よりも単純、迅速かつ安価である、前記新規化合物の新たな合成方法も開発した。

【0036】

本発明の著者らは、本明細書において、式１の新規化合物を提供し、

【化3】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、

Ｒ_４は、Ｃ_６及び適切な原子の間の結合によって連結され（ｂｅ ｌｉｎｋｅｄ ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ａ ｂｏｎｄ）得る、当業者に既知の任意の置換基及び／又はＣ_６に結合し得る酸素若しくは窒素原子を有する任意の置換基である。

【0037】

前記化合物は、ＷＯ２０１９／０９２５７２において開示された化合物と外見上は類似しているが、同じ化合物と比較していくつかの利点を有する。第一の利点は、式１の化合物の分子構造がそれらをより安定にするという事実によって示される：実際に、リン酸基が有機化学において最良の離脱基の１つであることが知られているが、式１の化合物のＣ_４位のリン酸基は、上述した先行技術の化合物中に存在する、Ｃ_１のリン酸基よりもはるかに安定であることを証明している。

【0038】

一例として、式１の化合物は、脱シリル化反応（ＦＰ２０合成の反応５及びＦＰ１１合成の反応６）においてより安定である。

【0039】

ＦＰ１１２の合成中のＣ_１のホスフェートの不安定性は大きな問題であり、ホスフェート分解が温和な条件での操作でも観察され、２つの主要な脱リン酸化副産物を形成した（実験セクションにおいて示される）。その上、ＦＰ１１の事例において、精製収率（ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ ｉｄ）は低くなり、平均すると５０％近くになる。

【0040】

ＦＰ２０において、脱シリル化は、良好な収率で、アノマーホスフェートの切断の問題なしに、９０％の収率及びごくわずかな副産物の形成で進行した（ｐｒｏｃｅｄｅｄ ｗｉｔｈ）。

【0041】

第二の利点は、本発明の化合物の化学合成のために提供されるより単純な方法であり、最終化合物を得るために、６つの合成工程しか必要としない：さらに、本発明の方法において、クロマトグラフィーカラムによる精製は、３回で十分であり、それによって、大量の精製溶媒の浪費を避けることができる。その結果として、この合成はより安価であり、それ故に、実験室レベルでより多くの量を合成することも可能であり、過程の工業的拡張可能性も容易にする（ｅａｓｙｉｎｇ）。

【0042】

最後に、本発明の化合物の大きな利点は、ベース分子をＣ_６位の様々な官能基で修飾できることであり、それによって、前記ＴＬＲ４アゴニスト及び追加機能を組み合わせることができる分子の提供を可能にする。本発明の新規化合物の異なる構造は、化合物により高い安定性をもたらし、官能基化のためにＣ_６位を提供する。ＦＰ１１において、Ｃ_６の官能基化は困難である：官能基化のためのほとんどの化学試薬は、脱シリル化の間に起こるのと同様に、Ｃ_１ホスフェートを切断する。ＦＰ２０化合物及び誘導体については、アノマーホスフェートが欠損しており、Ｃ_６の官能基化は実行可能である（ｆｅａｓｅａｂｌｅ）。これにより、当業者は、例えば、その溶解性及び／又は生物学的利用能を増加させることによって、標的特異的置換基を付加することによって、分子を他の官能性置換基と共役させることによってＣ_６の官能基を修飾することにより、特定の望ましい活性のための化合物をカスタマイズすることができる。

【0043】

したがって、本発明の目的は：
１．式１の化合物であり、

【化4】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_４は、Ｃ_６及び適切な原子の間の結合によって連結され得る任意の置換基及び／又はＣ_６に結合し得る酸素若しくは窒素原子を有する任意の置換基であり、そして、その；
式１の化合物からなるワクチンアジュバント；
式１の化合物、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、及び少なくとも１つの薬学的に許容される免疫原性抗原を含むワクチン組成物；
式１の化合物及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤及び／又は担体を含む医薬組成物、
を使用する。

【0044】

式１ｉの中間体であり、

【化5】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖である。

【0045】

式１ｉの中間体の調製方法であり、Ｒ_１が飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、

【化6】

下記の工程
１）炭酸水素ナトリウムの存在下におけるアシルクロリド（ａｃｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）との反応による、グルコサミンハイドロクロリド（ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）のＣ_２位のアミノ基の選択的アシル化、
２）イミダゾールの存在下におけるｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＤＭＳＣｌ）との反応による、Ｃ_６位のヒドロキシル基の選択的シリル化による保護、
を含む。

【0046】

式１の化合物の調製方法であり、

【化7】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_４は、Ｃ_６及び適切な原子の間の結合によって連結され得る任意の置換基及び／又はＣ_６に結合し得る酸素若しくは窒素原子を有する任意の置換基であり、下記の工程：
１）炭酸水素ナトリウムの存在下におけるアシルクロリドとの反応による、グルコサミンハイドロクロリドのＣ_２位のアミノ基の選択的アシル化；
２）イミダゾールの存在下におけるｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＤＭＳＣｌ）との反応により、Ｃ_６位のヒドロキシル基を選択的シリル化によって保護して、それによって請求項２０に記載の中間体を得ること；
３）トリエチルアミン及びＮ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下におけるアシルクロリドとの反応による、Ｃ_１及びＣ_３位のヒドロキシル基の選択的アシル化；
４）トリフラートイミダゾリウム（ｔｒｉｆｌａｔｅ ｉｍｉｄａｚｏｌｉｕｍ）の存在下におけるジベンジルＮ，Ｎ－ジイソプロピルホスファラミダイト（ｄｉｂｅｎｚｙｌ Ｎ，Ｎ－ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈａｒａｍｉｄｉｔｅ）との反応による、Ｃ_４位のヒドロキシル基のリン酸化、その後にメタクロロ過安息香酸（ｍｅｔａｃｈｌｏｒｏｐｅｒｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ）を介したホスファイトのホスフェートへの酸化が続くこと；
５）触媒量の硫酸の存在を介した、Ｃ_６位のシランからのヒドロキシル基の脱保護；及び
６）パラジウム炭素（Ｐｄ／Ｃ）によって触媒される水素化を介した、Ｃ_４位及び任意に、Ｃ_６位のベンジルからのホスフェートの脱保護、
を含む。

【0047】

式Ｘの化合物の調製方法であり、

【化8】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり
Ｒ_４は、ＯＨであり、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３のそれぞれは、Ｃ_２位に－ＯＨ置換基を含まず、
１）炭酸水素ナトリウムの存在下におけるアシルクロリドとの反応による、グルコサミンハイドロクロリドのＣ２位のアミノ基の選択的アシル化；
２）イミダゾールの存在下におけるｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＤＭＳＣｌ）との反応により、Ｃ_６位のヒドロキシル基を選択的シリル化によって保護して、それによって請求項２０に記載の式１ｉの中間体を得ること；
３）トリエチルアミン及びＮ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下におけるアシルクロリドとの反応による、Ｃ_１、Ｃ_３及びＣ_４位のヒドロキシル基の完全アシル化；
４）酢酸の存在下におけるエチレンジアミンとの反応による、Ｃ_１位の選択的ジアシル化、
５）トリフラートイミダゾリウムの存在下におけるジベンジルＮ，Ｎ－ジイソプロピルホスファラミダイトとの反応による、Ｃ_１位のヒドロキシル基のリン酸化、その後にメタクロロ過安息香酸を介したホスファイトのホスフェートへの酸化が続くこと；
６）触媒量の硫酸の存在を介した、Ｃ_６位のシランからのヒドロキシル基の脱保護；
７）パラジウム炭素（Ｐｄ／Ｃ）によって触媒される水素化を介した、Ｃ_１位及び任意に、Ｃ_６位のベンジルからのホスフェートの脱保護。

【0048】

式１の化合物の合成のための請求項２２に記載の中間化合物の使用であり、

【化9】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_４は、Ｃ_６及び適切な原子の間の結合によって連結され得る任意の置換基及び／又はＣ_６に結合し得る酸素若しくは窒素原子を有する任意の置換基である。

【0049】

そして、
式Ｘの化合物の合成のための、本明細書において開示される実施形態のいずれか１つにおいて規定される式１ｉの中間体の使用であり、

【化10】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_４は、ＯＨであり、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３のそれぞれは、Ｃ_２位に－ＯＨ置換基を含まない。

【図面の簡単な説明】

【0050】

【図1】図１ ＴＬＲ４及びＴＬＲ２に対するＦＰ化合物の活性。ＨＥＫ－ＢｌｕｅＴＭ ｈＴＬＲ４（Ａ）及びＨＥＫ－ＢｌｕｅＴＭ ＴＬＲ２（Ｂ）細胞は、指示濃度の化合物ＦＰ２０、ＦＰ２１、ＦＰ２２、ＦＰ２３及びＦＰ２４、ＭＰＬＡ、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）及びＰａｍ２ＣＳＫ４（１ｎｇ／ｍＬ）で処理され、１６～１８時間インキュベートされた。結果は、ＬＰＳ単独（Ａ）又はＰａｍ２ＣＳＫ４（Ｂ）での刺激に関しては正規化され、少なくとも３回の独立した実験の平均±ＳＥＭの百分率として表現された（処理対未処理：^＊Ｐ＜０．０５；^＊＊Ｐ＜０．０１；^＊＊＊Ｐ＜０．００１；^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。

【0051】

【図2】図２ ヒト及びマウスマクロファージに対するＦＰ化合物の活性。ＴＨＰ－１－Ｘ ＢｌｕｅＴＭ（Ａ）及びＲＡＷ－ＢｌｕｅＴＭ（Ｂ）細胞は、指示濃度の化合物ＦＰ２０、ＦＰ２１、ＦＰ２２、ＦＰ２３及びＦＰ２４、ＭＰＬＡ及びＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で処理され、１６～１８時間インキュベートされた。結果は、ＬＰＳ単独での刺激に関しては正規化され、少なくとも３回の独立した実験の平均±ＳＥＭの百分率として表現された（処理対未処理：^＊Ｐ＜０．０５；^＊＊Ｐ＜０．０１；^＊＊＊Ｐ＜０．００１；^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。

【0052】

【図3】図３ 細胞生存率（Ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）。マクロファージに分化したＴＨＰ－１細胞は、ＦＰ２０、ＦＰ２１、ＦＰ２２、ＦＰ２３及びＦＰ２４（０．１～５０μＭ）の濃度を上昇させた状態（ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ）並びにＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で処理された。溶媒の毒性を評価するため、同じ濃度（０．１～５０μＭ）でのビヒクル（ＤＭＳＯ）を加えた。データは、（未処理）コントロールに対して正規化され、少なくとも３回の独立した実験の平均±ＳＥＭの百分率として表現された（処理対未処理：^＊Ｐ＜０．０５；^＊＊Ｐ＜０．０１；^＊＊＊Ｐ＜０．００１；^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。

【0053】

【図4】図４ 細胞生存率（Ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）。ＲＡＷ－Ｂｌｕｅ細胞は、ＦＰ２０、ＦＰ２１、ＦＰ２２、ＦＰ２３、及びＦＰ２４（０．１、１、１０、２５、５０μＭ）の濃度を上昇させた状態並びにＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で処理された。溶媒の毒性を評価するために、同じ濃度（０．１、１、１０、２５、５０μＭ）でのビヒクル（ＤＭＳＯ）を加えた。データは、（未処理）コントロールに対して正規化され、少なくとも３回の独立した実験の平均±ＳＥＭの百分率として表現された（処理対未処理：^＊Ｐ＜０．０５；^＊＊Ｐ＜０．０１；^＊＊＊Ｐ＜０．００１；^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。

【0054】

【図5】図５ ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ４、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ Ｎｕｌｌ及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ２細胞は、指示されたとおりに処理され、１８時間インキュベートされた。上清を回収し、ＳＥＡＰレベルをＱＵＡＮＴＩ－ｂｌｕｅ法で定量化した。データは、Ｓ－ＬＰＳ（Ａ、Ｂ）、ＩＬ－１β（Ｃ）又はＰＡＭ２ＣＳＫ４（Ｄ）での刺激に対して正規化され、３回の独立した実験の平均百分率±ＳＤとして表現された（処理対未処理：^＊Ｐ＜０．０５；^＊＊Ｐ＜０．０１；^＊＊＊Ｐ＜０．００１；^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。

【0055】

【図6】図６ Ａ）アジュバント投与後７日間にわたるマウスの体重（処置につきｎ＝４）。Ｂ）プライム免疫化（予防接種後２２日目）及びブースター免疫化（１９日後）後のアジュバントとしてＭＰＬＡ、ＦＰ１１２及びＦＰ１１を用いる、ＯＶＡ免疫に対する抗体応答（処置につきｎ＝８）。統計比較のために、各曲線下の面積は、αを０．０５とするＢｒｏｗｎ－Ｆｏｒｓｙｔｈｅ検定及びウェルチの一元配置分散分析検定によって検査された。

【0056】

【図7】図７ 化合物２５（ＦＰ１１合成における工程６の不純物１）の^１Ｈ ＮＭＲ、これは６．０４ｐｐｍでのシグナルの多重度（ｄ）によって、Ｃ－１のホスフェートの切断を観察することができる。Ｃ－１にホスフェートが存在する場合、Ｈ－Ｐカップリングにより、Ｈ－１は、ｄｄの多重度を有する。

【0057】

【図8】図８ 化合物２６（ＦＰ１１合成における工程６の不純物２）の^１Ｈ ＮＭＲ、これは６．０１ｐｐｍでのシグナルの多重度（ｄ）によって、Ｃ－１のホスフェートの開裂を観察することができる。Ｃ－１にホスフェートが存在する場合、Ｈ－Ｐカップリングにより、Ｈ－１は、ｄｄの多重度を有する。この事例において、シランもまた、切断されており、０ｐｐｍ及び０．８５ｐｐｍでそれらのシグナルを欠いていることよって観察された。

【0058】

【図9】図９ 化合物２６（ＦＰ１１合成における反応６の不純物２）の^１３Ｃ ＮＭＲ、これは図８において観察された化合物２６の構造を確認する。

【0059】

【図10】図１０ ヒトマクロファージに対するＦＰ２００ジホスフェート化合物の活性。 分化ＴＨＰ－１－Ｘ Ｂｌｕｅ（商品商標）細胞は、指示濃度の化合物ＦＰ１１、ＦＰ１１２、ＦＰ２０、ＦＰ２００、ＦＰ２１、ＭＰＬＡ及びＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で処理され、１６～１８時間インキュベートされた。結果は、ＬＰＳ単独での刺激に関しては正規化され、少なくとも３回の独立した実験の平均±ＳＥＭの百分率として表現された（処理対未処理：^＊Ｐ＜０．０５；^＊＊Ｐ＜０．０１；^＊＊＊Ｐ＜０．００１；^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。

【0060】

【図11】図１１－ヒトマクロファージに対するＦＰ２０７の活性 分化ＴＨＰ１－ＸＢｌｕｅ（商品商標）は、指示濃度のＦＰ２０、ＦＰ２０７、ＭＰＬＡ及びＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で処理され、１６～１８時間インキュベートされた。結果は、ＬＰＳ単独での刺激に関しては正規化され、少なくとも３回の独立した実験の平均±ＳＥＭの百分率として表現された（処理対未処理：^＊Ｐ＜０．０５；^＊＊Ｐ＜０．０１；^＊＊＊Ｐ＜０．００１；^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。

【0061】

【図12】図１２－細胞生存率 分化ＴＨＰ１－ＸＢｌｕｅ（商品商標）細胞は、ＦＰ２０及びＦＰ２０７（０．１～２５μＭ）の濃度を上昇させた状態、ＭＰＬＡ並びにＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で処理された。データは、（未処理）コントロールに対して正規化され、少なくとも３回の独立した実験の平均±ＳＥＭの百分率として表現された。

【0062】

用語集
本明細書において、「ＴＬＲ４受容体アゴニスト」という用語は、ＴＬＲ４受容体に選択的に結合して、前記受容体の立体構造変化を誘導し、次に前記受容体の天然リガンドによって誘導されるものと類似する反応を誘発することにより、細胞内刺激を生成する化合物を示す。ＴＬＲ４の場合において、アゴニストとして記述されている物質は、共受容体ＭＤ－２に結合し、次にＴＬＲ４に非共有結合し、それによって、受容体（ｒｅｃｅｐｔｏｒｉａｌ）複合体（ＴＬＲ４／ＭＤ－２／アゴニスト）_２を生成して、細胞表面から核転写因子の活性化及び炎症性サイトカイン（主としてＴＮＦ－α及び様々なタイプのインターロイキン）の合成につながるシグナルカスケードを開始する。

【0063】

本明細書において、ＦＰ１１２として同定される化合物は、以下に表される式を有する化合物を指し、

【化11】

Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ＝ＯＣ_１１Ｈ_２３及びＲ_４＝Ｈであり、ＷＯ２０１９／０９２５７２においてＦＰ１１２として開示されている。

【0064】

本明細書において、以下の式１で表されるＣ_１中の結合は、有機化学において一般に意図される意味を有し、

【化12】

化合物がα又はβアノマーの立体配座（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）のいずれかにあり得るということを示す。

【0065】

本明細書において、以下の式１αで表されるＣ_１中の結合は、有機化学において一般に意図される意味を有し、

【化13】

化合物がαアノマーの立体配座にあるということを示す。

【0066】

本明細書において、以下の式１αで表されるＣ_１中の結合は、有機化学において一般に意図される意味を有し、

【化14】

化合物がβアノマーの立体配座にあるということを示す。

【0067】

本明細書において、「触媒量」という用語は、触媒効果を得るような化学反応に使用される物質の量又は濃度を意味する。特に、本明細書において、「触媒量」という用語は、「体積／体積濃度の０．５％～１％の範囲」によって置換され得る。

【発明を実施するための形態】

【0068】

発明の詳細な説明
本発明は、式１の化合物に関連しており、

【化15】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_４は、Ｃ_６及び適切な原子の間の結合によって連結され得る、当業者に既知の任意の置換基及び／又はＣ_６に結合し得る酸素若しくは窒素原子を有する任意の置換基である。

【0069】

したがって、本明細書によれば、各アルキル鎖、Ｒ_１、Ｒ_２又はＲ_３は、Ｃ_５、Ｃ_６、Ｃ_７、Ｃ_８、Ｃ_９、Ｃ_１０、Ｃ_１１、Ｃ_１２、Ｃ_１３、Ｃ_１４、Ｃ_１５アルキル鎖であり得る。

【0070】

本明細書によれば、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３のそれぞれは、上記で規定されたように、異なるか、あるいは同一のアルキル鎖であり得る。

【0071】

本発明の一実施形態において、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３の少なくとも２つは同一である。

【0072】

本発明の一実施形態によれば、前記Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３鎖は、Ｃ_２位上に－ＯＨ置換基を含まない。Ｃ_２位のヒドロキシルを欠くことは、有利には、より短く効率的な合成経路を可能にして、それによってヒドロキシル基の様々な保護及び脱保護工程を排除し、合成のコストを低減し、この合成過程を薬剤製造のために拡張可能かつ工業化可能（ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｉｚａｂｌｅ）にする。

【0073】

本発明のもう一つの実施態様によれば、前記Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３鎖は、いかなる置換基も含まない。

【0074】

上述したように、Ｃ_６位のＲ_４鎖は、ＴＬＲ４アゴニスト活性が破壊されないという条件で、任意に官能基化された目的の置換基であり得る。

【0075】

非限定的な例によれば、Ｒ_４は、ヒドロキシル基（ＯＨ）、リン酸基（ＰＯ_４ ^２－）、アジド基（Ｎ_３）、アミン基（ＮＨ_２）、アシル基（Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ）アルキル基（ＯＲ）又はグリコシル基であり得る。

【0076】

Ｃ_６位のＲ_４が官能基化に適することは、本発明の化合物の極めて有利な特徴である。上述したように、ＴＬＲ４のアゴニスト機能及び選択されたＲ_４の置換基に応じて、任意の目的の他の機能を組み合わせることができる分子を提供することが実際に可能である。例えば、驚いたことに、リン酸基（ＰＯ_４ ^２－）を用いて溶解性及び生物学的利用能の増加を得ることが可能である。実際に、当技術分野における教示（ＷＯ２０１９／０９２５７２）によれば、当該明細書において記述されたアゴニストにおいて２つのリン酸基が存在すると、結果としてＴＬＲ４アゴニスト活性が消失した。一方、本発明の新規化合物は、驚くべきことに、第２のリン酸基を有していてもＴＲＬ４アゴニスト活性を保持し、それによって化合物自体の溶解性を改善する。当業者に知られているように、溶解性の向上は、化合物の送達、生物学的利用能及びそれを含む組成物の安定性を改善するため、重要な利点である。これ故に、Ｃ_６に付加的なホスフェートが単純に存在するだけで、医薬組成物又はワクチン組成物の効率を著しく改善し得る。

【0077】

本発明の化合物のＣ_６で官能基化が可能であることのもう一つの重要な利点は、ワクチンアジュバントとして使用される場合、抗原又は抗原性エピトープと共役させるか、あるいは別のアジュバントと共役させて、その活性を改善、拡大することも可能であるということである。

【0078】

さらに、化合物は、標的特異的分子と共役して、それによって、好ましい部位への送達を改善し得る。

【0079】

その上、抗腫瘍組成物に使用される場合、本発明の化合物は、その有効性を向上させるために、追加の異なる薬剤と連結させることによって官能基化されることができる。

【0080】

例として、親油性効果を改善するために、水素結合を形成することができる水素原子を含まない置換基を使用すること、又は親油性と反比例している水への溶解度を改善するために、水素結合を形成することができる水素原子の存在を特徴とする置換基を使用することが可能である。

【0081】

Ｒ_４として多種多様の置換基を利用する可能性から派生するさらなる利点は、例えば、単純な結合の周りの自由回転を制限する傾向がある置換基を使用することによって派生し得る立体効果であり、それ故に、エネルギー的にアクセス可能な立体配座の数を減少させる。

【0082】

これらの立体配座の中に生理活性のあるものが存在する場合、「補強（ｓｔｉｆｆｅｎｉｎｇ）」効果は、受容体に対する分子の親和性を向上させる。

【0083】

もう一つの重要な例は、Ｃ_６位のリンカーを用いた官能基化によって表される。適切なリンカー（ｌｉｎｋｅｒｓ ｓｉ）の非限定的な例は、ジスルフィド（Ｒ－Ｓ－Ｓ－Ｒ’）、ヒドラゾン（Ｒ’Ｒ’’Ｃ＝Ｎ－ＮＨ_２）、ペプチド又はチオエーテル（Ｒ’－Ｓ－Ｒ’’）又は同様のものによって表される。

【0084】

上述したようなリンカーは、生物学的に活性な抗がんペイロード又は薬剤（本発明の化合物など）に連結された抗体を含む複合分子である抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の調製を可能にし、抗体及び本発明の化合物の間の組み合わせ効果を得ることを可能にする。

【0085】

さらに興味深い例は、Ｃ_６にグリコシル基を挿入する可能性であり、結果として生じる化合物は、２つの利点を有することになる：親水性グリコシル基の存在による水溶性の向上、及びＬＰＳのコア部分を模倣することによる、理論的により優れた受容体に対する親和性。

【0086】

望ましい特性に応じた適切な置換基は、当業者に知られている。

【0087】

本発明によれば、式１の化合物は、式１αを有するα－アノマー、又は式１βを有するβ－アノマーであってもよい。

【化16】

【化17】

【0088】

いくつかのあり得る非限定的な実施形態によれば、式１の化合物は、式１の化合物のα－アノマー、又はβ－アノマーの形態の化合物から選択されることができ、
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＨ、又は
Ｒ_１＝Ｒ_３＝Ｃ_１３Ｈ_２７；Ｒ_２＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＨ、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_９Ｈ_１９、及びＲ_４＝ＯＨ、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１３Ｈ_２７、及びＲ_４＝ＯＨ、又は
Ｒ_１＝Ｒ_３＝Ｃ_９Ｈ_１９；Ｒ_２＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＨ、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＰＯ_４ ^２－、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_９Ｈ_１９、及びＲ_４＝ＰＯ_４ ^２－、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１３Ｈ_２７、及びＲ_４＝ＰＯ_４ ^２－、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＣ_３Ｈ_７、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ_６Ｈ_８（ＯＨ）_３、又は
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＮＨ_２、
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＣＨ_３（ＣＨ_２ＯＨ）_２、
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＣＨ（ＣＨＯＨ）_３ＣＨ（ＣＨ_３）Ｏ、
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＣＨ（ＣＨＯＨ）_３ＣＨ（ＣＨ_２ＯＨ）Ｏ、
Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３、及びＲ_４＝ＯＣＨ（ＣＨＯＨ）_３（ＣＨ_２）Ｏ。

【0089】

好ましい実施形態において、化合物は、式１の化合物のβ－アノマーである、例えば：

【0090】

化合物ＦＰ２０：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝ＯＨを有する、

【化18】

【0091】

化合物ＦＰ２１：Ｒ_１＝Ｒ_３＝Ｃ_１３Ｈ_２７ Ｒ_２＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝ＯＨを有する、

【化19】

【0092】

化合物ＦＰ２２：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_９Ｈ_１９ Ｒ_４＝ＯＨを有する、

【化20】

【0093】

化合物ＦＰ２３：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１３Ｈ_２７ Ｒ_４＝ＯＨを有する、

【化21】

【0094】

化合物ＦＰ２４：Ｒ_１＝Ｒ_３＝Ｃ_９Ｈ_１９ Ｒ_２＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝ＯＨを有する、

【化22】

【0095】

化合物ＦＰ２００：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝ＰＯ_４ ^２－を有する、

【化23】

【0096】

化合物ＦＰ２０２：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_９Ｈ_１９ Ｒ_４＝ＰＯ_４ ^２－を有する、

【化24】

【0097】

化合物ＦＰ２０３：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１３Ｈ_２７ Ｒ_４＝ＰＯ_４ ^２－を有する。

【化25】

【0098】

本発明によるさらなる実施形態では、Ｃ_６位に追加の置換基を有する式１の化合物は、下記のものから選択されることができる：

【0099】

化合物ＦＰ２０４：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝ＯＣ_３Ｈ_７を有する、

【化26】

【0100】

化合物ＦＰ２０５：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ_６Ｈ_８（ＯＨ）_３を有する、

【化27】

【0101】

化合物ＦＰ２０６：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝ＮＨ_２を有する、

【化28】

【0102】

化合物ＦＰ２０７：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＣＨ_３（ＣＨ_２ＯＨ）_２を有する、

【化29】

【0103】

化合物ＦＰ２０Ｒｈａ：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝ＯＣＨ（ＣＨＯＨ）_３ＣＨ（ＣＨ_３）Ｏを有する、

【化30】

【0104】

化合物ＦＰ２０Ｇｌｃ：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝ＯＣＨ（ＣＨＯＨ）_３ＣＨ（ＣＨ_２ＯＨ）Ｏを有する、

【化31】

【0105】

化合物ＦＰ２０Ｍａｎ：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝ＯＣＨ（ＣＨＯＨ）_３ＣＨ（ＣＨ_２ＯＨ）Ｏを有する、

【化32】

【0106】

化合物ＦＰ２０Ｇａｌ－α：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝ＯＣＨ（ＣＨＯＨ）_３ＣＨ（ＣＨ_２ＯＨ）Ｏを有する、

【化33】

【0107】

化合物ＦＰ２０Ｇａｌ－β：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝ＯＣＨ（ＣＨＯＨ）_３ＣＨ（ＣＨ_２ＯＨ）Ｏを有する、

【化34】

【0108】

化合物ＦＰ２０Ｌｙｘ：Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ_１１Ｈ_２３ Ｒ_４＝ＯＣＨ（ＣＨＯＨ）_３ＣＨ_２Ｏを有する。

【化35】

【0109】

式１４、１５、１６又は１９を有する本発明の化合物は、Ｃ_６に結合した糖のアノマー（ジアステレオ異性体）の混合物である。

【0110】

式１７又は１８を有する本発明の化合物は、それぞれＣ_６に結合したグルコースの純粋なα及びβアノマーである。

【0111】

一実施形態において、式２を有する化合物が好ましい。

【0112】

本明細書において、そのような化合物はまた、化合物ＦＰ２０とも称され、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は－Ｃ_１１Ｈ_２３であり、Ｒ_４は－ＯＨである。

【0113】

実施例のセクションにおいて報告されたデータは、前述の化合物の特別で有利な特徴を示す。

【0114】

本明細書によれば、そして得られた実験データに基づいて、記述及び請求された化合物がＴＬＲ４受容体の有効なアゴニストであるということは明らかである。「受容体のアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ ｏｆ ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」（受容体アゴニスト（ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔ））とは、文献において一般に定義されているように、すなわち、内因性リガンドの結合部位において特定の受容体を結合させることができる物質を意味する。したがって、名称が示唆するように、前者は、前記部位との結合を後者と競合する。

【0115】

天然リガンドとの結合後、受容体は、立体構造変化に遭い、細胞レベルでのその生物学的活性を媒介する。アゴニストは、リガンド効果を模倣することができる固有の活性を有する分子である。レセプターに結合すると、内因性リガンドと結合することによって引き起こされるものと同程度の立体構造変化を引き起こす。

【0116】

本明細書の場合において、開示及び請求されている各アゴニストは、ＴＬＲ４受容体に対して選択的なアゴニストである。

【0117】

本明細書及び特許請求の範囲において規定された式（１）の化合物に観察された技術的特徴を考慮すると、前記化合物は、ＴＬＲ４受容体の活性化から利益を得る疾患、すなわち、免疫系、特に自然活動（ｉｎｎａｔｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ）の活性化が治療効果又は予防効果を有する疾患の治療における有効成分又はアジュバントとして有用である。

【0118】

それ故に、ＴＬＲ４受容体の活性化を必要とするか、あるいはＴＬＲ４受容体の活性化から利益を得る疾患には、治療又は予防が、ＴＬＲ４受容体の活性化及び前記受容体の活性化によって引き起こされる自然免疫応答により改善される全ての疾患が含まれる。

【0119】

かかる疾患の非限定的な例は、腫瘍、アレルギー、ウイルス感染などの感染性疾患（ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、心血管疾患（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、肥満依存性の代謝性疾患（ｏｂｅｓｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、神経変性（ｎｅｕｒｏｎａｌ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、アポトーシス、自己免疫障害、細菌感染、自己免疫疾患によって表される。自己免疫疾患は、ＩＢＤ、クローン病又は関節リウマチによって表される。

【0120】

本明細書において化合物ＦＰ２０としても同定される式２の化合物は、以下に表される式を有する式ＦＰ１１２の化合物と比較されることができ、

【化36】

Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｃ＝ＯＣ_１１Ｈ_２３ Ｒ４＝Ｈは、ＷＯ２０１９／０９２５７２において開示されており、同じＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４置換基を有するが、リン酸基がＦＰ１１２ではＣ_１位上にあり、ＦＰ２０ではＣ_４位上にあるという事実により、当該明細書においてＦＰ１１２と名付けられる。

【0121】

以下の実施例において簡潔に報告される細胞Ｈｅｋ－Ｂｌｕｅ、Ｒａｗ－Ｂｌｕｅ及びＴＨＰ－１を用いてＦＰ１１２についてインビトロで実施された実験は、１０μＭの濃度で低毒性及び良好な炎症促進活性（ａｃｔｉｖｙ）を明示した。さらに、ワクチンアジュバントとしての忍容性及び有効性を試験するためにＦＰ１１２を用いてインビボで実施された実験は、１０μｇのＦＰ１１２の投与による付随的損傷がないこと（ｎｏ ｃｏｌｌａｔｅｒａｌ ｄａｍａｇｅ）、及びワクチンアジュバントとしての有効性がＭＰＬＡのそれに匹敵することを明示した。実施例のセクションにおいて報告されたデータは、Ｈｅｋ－Ｂｌｕｅ、Ｒａｗ－Ｂｌｕｅ及びＴＨＰ－１細胞で実施された実験に関して、本発明の化合物の活性が、インビボで細胞毒性がなく、ワクチンアジュバントとして有効であることも証明した、ＷＯ２０１９／０９２５７２において開示されたアゴニスト化合物の活性に匹敵するということを示す。

【0122】

その上、先行技術ではＣ_１のリン酸基が、本発明ではＣ_４位に再配置され、それによって、本発明の化合物ではアルキル鎖をＣ_４位よりはむしろＣ_１に配置することを可能にして、結果的にＣ_６の置換基の活性の向上をもたらすため、本発明の化合物は、ＷＯ２０１９／０９２５７２において開示された化合物に関しては改良されている。実際に、ＷＯ２０１９／０９２５７２は、当該明細書においてＦＰ１１１と名付けられた化合物が２つのリン酸基を有するということを実験２において開示しており：Ｃ_１位のもの及びＣ_６位のもう一方のものが、ＨＥＫ－ＢｌｕｅＴＭ ｈＴＬＲ４細胞で実施された試験において、ＴＬＲ４アゴニストとして完全に不活性であることを証明した。ＷＯ２０１９／０９２５７２において、活性がないことは、分子内に２つのホスフェートが存在するためであり、分子内のホスフェートの数は、それらのＴＬＲ４アゴニスト活性を維持するために１以下でなければならないということが推測された。

【0123】

驚くべきことに、本発明の著者らは、本出願において開示及び請求される化合物、例として、式７、８及び９の化合物などが、一方がＣ_４位及びもう一方がＣ_６位に２つのリン酸基を有しており、ＷＯ２０１９／０９２５７２に開示された化合物ＦＰ１１１が完全に不活性な結果となるものと同じ試験において、ＴＬＲ４アゴニスト活性を驚くほどに維持するということを発見した。この知見は予想外であり、トリアシル化モノホスホリルグルコサミンのコアにおけるリン酸基の位置が、かかる化合物の活性を有意に変化させ得るということを実証するため、先行技術と比較した本発明の化合物の関連のある利点を証明する。

【0124】

したがって、本発明はまた、ワクチンアジュバントとして、本明細書又は特許請求の範囲に開示された実施形態のいずれか１つにおける式１の化合物も提供する。

【0125】

ワクチン組成物における免疫応答アジュバントの関連性が知られている。実際に、ワクチンアジュバントは、ワクチンの有効性及びワクチン中に存在する抗原に対する、処置された対象における免疫の発達を実質的に増加させる。

【0126】

したがって、本発明の目的はまた、本明細書若しくは特許請求の範囲のいずれか１つの実施形態において規定されるような式１の化合物又はその混合物を含むワクチン組成物でもある。

【0127】

それ故に、本発明によるワクチン組成物は、上記の実施形態のいずれか１つにおいて、本明細書中に記述されている式１の化合物又はその混合物、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、及び望ましい免疫応答、例えば、免疫原性抗原などを誘導することができる少なくとも１つの抗原化合物を含み得る。

【0128】

適切なワクチン担体は、当業者に知られている。

【0129】

医薬担体は、組成物から長期間にわたって抗原成分（複数可）の放出を補助するように選択されることができる。担体は、水溶性物質又は水不溶性物質を含むことができる。

【0130】

水溶性物質とは、薬物分散の間隙への水の浸潤を制御する役割を果たす物質である。

【0131】

１種の水溶性物質、又は２種以上の水溶性物質の組み合わせが使用されてもよい。

【0132】

水溶性物質は、具体的には、合成ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリエチレンポリプロピレングリコール）、糖類（例えば、スクロース、マンニトール、グルコース、コンドロイチン硫酸ナトリウム）、多糖類（例えば、デキストラン）、アミノ酸（例えば、グリシン及びアラニン）、無機塩類（例えば、塩化ナトリウム）、有機塩類（例えば、クエン酸ナトリウム）及びタンパク質（例えば、ゼラチン及びコラーゲン並びにそれらの混合物）からなる群の１種以上より選択されることができる。

【0133】

さらに、水溶性物質が、有機溶媒及び水の両方に溶解する両親媒性物質である場合、その溶解度を変化させることによって、例えば、親油性薬物の放出を制御する効果を有する。両親媒性物質には、ポリエチレングリコール又はその誘導体、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール又はその誘導体、糖の脂肪酸エステル及びアルキル硫酸ナトリウム（ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｅｓｔｅｒ ａｎｄ ｓｏｄｉｕｍ ａｌｋｙｌｓｕｌｆａｔｅ ｏｆ ｓｕｇａｒｓ）、並びにより具体的には、ポリエチレングリコール、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅｐｏｌｙｏｘｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ－ｇｌｙｃｏｌ）、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ－ｐｏｌｙｏｘｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ－ｇｌｙｃｏｌ）、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ－ ｐｏｌｙｏｘｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ－ｇｌｙｃｏｌ）、脂肪酸のショ糖エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、平均分子量が１５００より大きいデスオキシコール酸ナトリウム（又はデオキシコール酸ナトリウム（ＤＣＡ））からなる群より選択される１種以上が含まれるが、これらに限定されるものではない。

【0134】

加えて、水溶性物質は、薬物、ペプチド、タンパク質、糖タンパク質、多糖類又はワクチンとして使用される抗原性物質からなる群の１種以上より選択される物質を含んでもよい。

【0135】

水不溶性担体が存在する場合、薬物分散の間隙への水の浸潤を制御する役割を果たす物質を含むことができる。１種の水不溶性物質、又は２種以上の水不溶性物質の組み合わせが使用されてもよい

【0136】

水不溶性物質は、具体的には、水不溶性アクリレート、メタクリレート及び他のカルボキシポリマーを含む水不溶性ポリマー、樹脂及びラテックス、ワックス、リン脂質を含む脂質並びにリポタンパク質の群の１種以上から選択されることができる。

【0137】

当業者は、医薬組成物又はワクチン組成物において一般に使用される担体及び任意のさらなる賦形剤（ｅｃｃｉｐｉｅｎｔｓ）の量を知っている。

【0138】

一実施形態において、医薬担体は、ワクチン組成物の総重量に基づいて、約１重量％～２０重量％、好ましくは約１０重量％～２０重量％を構成することができる。

【0139】

本発明による組成物は、本明細書において規定及び請求されるような化合物の１つ又はその混合物を含んでもよい。

【0140】

本発明の組成物は、アジュバント及び抗原の単一の混合物の形態、又は成分の同時投与若しくは逐次投与のために異なる混合物の形態で調製されることができる。

【0141】

特定の実施形態において、本発明において記述されている式１の化合物は、ワクチン組成物中に存在する唯一のアジュバントである。

【0142】

本発明はまた、本明細書又は特許請求の範囲において提供される実施形態のいずれか１つに記述されている式１の化合物又はその混合物及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤及び／又は担体を含む、医薬組成物にも関連している。

【0143】

組成物は、一又は複数の追加の治療効果のある成分（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ）をさらに含むことができる。

【0144】

前記医薬組成物はまた、複数の有効成分の会合（ａｎ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）の形態でも製剤化され得る。

【0145】

本発明の医薬組成物は、本明細書又は特許請求の範囲において提供される実施形態のいずれか１つに記載の式１の一又は複数の化合物を唯一の有効成分として含むことができるか、あるいはまた、抗腫瘍有効成分、キナーゼ阻害剤、細胞毒性化合物のような追加の有効成分及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体又は賦形剤も含み得る。

【0146】

医薬組成物は、経口、非経口、鼻腔（ｎａｓａｌ）、エアロゾル、舌下、直腸、膣内（ｖａｇｉｎａｌ）、局所、静脈内又は全身投与のために処方されることができる。

【0147】

懸濁剤、エマルション、軟膏、クリーム、スプレー、顆粒（ｇｒａｎｕｌａｔｅ）、粉末、溶液、カプセル、丸薬（ｐｉｌｌ）、錠剤（ｔａｂｌｅｔ）、凍結乾燥製剤、トローチ剤、エアロゾル、噴霧（ｎｅｂｕｌｉｚａｔｉｏｎ）、注射又はその他のための適切な従来の担体及び／又は賦形剤は、当業者によって選択され得る。

【0148】

本発明のさらなる目的は、ＴＬＲ４受容体を活性化することによる免疫刺激を必要とするか、あるいは免疫刺激から利益を得る疾患の治療において、あるいは治療におけるアジュバントとして使用するための、本明細書中に開示される実施形態のいずれか１つに記載の医薬組成物である。

【0149】

ＴＬＲ４受容体を活性化することによる免疫刺激を必要とするか、あるいは免疫刺激から利益を得る疾患は当技術分野において知られており、がん、アレルギー、感染性疾患、心血管疾患、肥満依存性の代謝性疾患、神経変性、アポトーシス疾患、自己免疫障害、ウイルス感染、細菌感染、自己免疫疾患を含む。自己免疫疾患の例は、ＩＢＤ、クローン病又は関節リウマチによって表される。

【0150】

本発明によれば、組成物は、１日投与量あたり０．０１～５０ｍｇの本発明の化合物又はその混合物を含むことができ、例として、体重１Ｋｇあたり０．０１～５０ｍｇの物質を含むことができる（動物での試験）。

【0151】

本発明はまた、本明細書において規定される式１の化合物の合成及びＷＯ２０１９／０９２５７２の式Ｘにおいて開示される化合物の合成のための新規な方法を提供しており、

【化37】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_７－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_７－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_７－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_４は、ＯＨであり、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３のそれぞれは、Ｃ_２位に－ＯＨ置換基を含まず、そして式１ｉの中間体の合成に関して、

【化38】

Ｒ_１は飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖である。本発明の一実施形態によれば、前記Ｒ_１は、任意の置換基を含まない。

【0152】

式１の化合物は、ＷＯ２０１９／０９２５７２において開示された化合物と同様に、ＷＯ２０１９／０９２５７２の化合物及びＳＤＺ ＭＲＬ９５３の当技術分野における既知の合成法と比較して、より単純で、工業的に拡張可能な方法で合成することができる。後者は、３つの（Ｒ）－３－ヒドロキシミリスチン酸のアシル鎖を挿入する必要がある。光学的に純粋な化合物（Ｒ－エナンチオマー）は市販されておらず、ラセミ体混合物のみが市販される。さらに、（Ｒ）－３－ヒドロキシミリスチン酸は、糖との縮合反応の前に３位のヒドロキシル基を保護する反応を必要とする。上記で規定された式Ｘの化合物を合成するためのＷＯ２０１９／０９２５７２において開示された方法は、アシル鎖上に置換基がないため、ＳＤＺ ＭＲＬ９５３について開示された合成方法に関してはすでに単純化されているが、依然として１０工程を含む；クロマトグラフィーカラムによる多数の精製及びいくつかの重要な工程、例えば、低分子量アジドの形成など。その上、ＷＯ２０１９／０９２５７２において開示された方法は、極めて低い収率（約８～９％）を有し、このことはプロセス全体を非経済的にする。

【0153】

本発明において提供される化合物は、当技術分野の化合物より優れているとは言わないまでも、当技術分野の化合物に匹敵する生物学的活性を示し、はるかに単純で、工業的に拡張可能な方法で合成され得る。

【0154】

これ故に、本発明の目的は、式１ｉの中間体の調製方法であり、

【化39】

Ｒ_１は飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
下記の工程を含む、
１）炭酸水素ナトリウムの存在下におけるアシルクロリドとの反応による、グルコサミンハイドロクロリドのＣ_２位のアミノ基の選択的アシル化、
２）イミダゾールの存在下におけるｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＤＭＳＣｌ）との反応による、Ｃ_６位のヒドロキシル基の選択的シリル化による保護。

【0155】

したがって、本発明はまた、式１ｉの中間体にも関連しており、

【化40】

Ｒ_１は飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖である。

【0156】

本発明の一実施形態によれば、前記Ｒ_１は、いかなる置換基も含まない。

【0157】

さらに、本発明は、任意の上記実施形態及び特許請求の範囲において規定される式１の化合物の調製方法に関連しており、

【化41】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_４は、Ｃ_６及び適切な原子の間の結合によって連結され得る、当業者に既知の任意の置換基及び／又はＣ_６に結合し得る酸素若しくは窒素原子を有する任意の置換基であり、
下記の工程を含む：
１）炭酸水素ナトリウムの存在下におけるアシルクロリドとの反応による、グルコサミンハイドロクロリドのＣ_２位のアミノ基の選択的アシル化、
２）イミダゾールの存在下におけるｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＤＭＳＣｌ）との反応により、Ｃ_６位のヒドロキシル基を選択的シリル化によって保護して、前述の実施形態において規定された式１ｉの中間体を得ること、
３）トリエチルアミン及びＮ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下におけるアシルクロリドとの反応による、Ｃ_１及びＣ_３位のヒドロキシル基の選択的アシル化、
４）トリフラートイミダゾリウムの存在下におけるジベンジルＮ，Ｎ－ジイソプロピルホスファラミダイトとの反応による、Ｃ_４位のヒドロキシル基のリン酸化、その後にメタクロロ過安息香酸を介したホスファイトのホスフェートへの酸化が続くこと、
５）触媒量の硫酸の存在を介した、Ｃ_６位のシランからのヒドロキシル基の脱保護、
６）パラジウム炭素（Ｐｄ／Ｃ）によって触媒される水素化を介して、Ｃ_４位のベンジルからホスフェートを脱保護して、任意にＣ_６位の任意の置換基上のベンジルを脱保護すること。

【0158】

本方法は、代替的に、上記及び特許請求の範囲に規定されている式１ｉの中間体から開始して、工程３～６を含むことができる。

【0159】

一実施形態において、上述した合成方法は、工程５）の後かつ工程６）の前に、追加の工程５ｉ）を含むことができる、
５ｉ）トリフラートイミダゾリウムの存在下におけるジベンジルＮ，Ｎ－ジイソプロピルホスファラミダイトとの反応による、Ｃ_６位のヒドロキシル基のリン酸化、その後にメタクロロ過安息香酸を介したホスファイトのホスフェートへの酸化が続くこと、及び
結果として生じるＲ４は、リン酸基（ＰＯ_４ ^２－）である。

【0160】

実行すると、この方法は、式１の化合物をもたらして、Ｒ_４がリン酸基であり、例えば、式７、８及び９の化合物などである。

【0161】

別法として、合成方法は、工程５）の後かつ工程６）の前に、工程５ｉ）の代わりに、工程５ｉｉ）をさらに含んでもよい：
５ｉｉ）１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）などの、適切な縮合剤及び触媒の存在下におけるカルボン酸との反応又はＮ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）などの、適切な触媒の存在下におけるアシルクロリドとの反応による、Ｃ_６位のヒドロキシ基のアシル化。
結果として生じるＲ_４は、アシル基である。実行すると、この方法は、式１の化合物をもたらして、前記Ｒ_４がアシル基であり、例えば、式１０及び１１の化合物などである。

【0162】

好ましい実施形態において、前記適切な縮合剤及び触媒は、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）である。

【0163】

別法として、合成方法は、工程５）の後かつ工程６）の前に、工程５ｉ）及び５ｉｉ）の代わりに、工程５ｉｉｉ）をさらに含んでもよい：
５ｉｉｉ）活性化剤としての酸化銀（Ｉ）、触媒としてのトリフルオロメタンスルホン酸（ｔｒｉｆｌｉｃ ａｃｉｄ）及び水分捕捉剤（ｗａｔｅｒ ｓｃａｖｅｎｇｅｒ）としての分子篩（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｉｅｖｅｓ）の存在下におけるグリコシルクロリド供与体（ａ ｇｌｙｃｏｓｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｄｏｎｏｒ）の反応による、Ｃ_６位のヒドロキシル基のグリコシル化、
又は
活性化剤としてのＮＩＳ（Ｎ－ヨードスクシンイミド）及び触媒としてのＨＯＦｏｘ（３，３－ジフルオロオキシインドール）及び水分捕捉剤としての分子篩の存在下におけるグリコシルチオエチル（Ｓｅｔ）供与体（ａ ｇｌｙｃｏｓｙｌ ｔｈｉｏｅｔｈｙｌ （Ｓｅｔ） ｄｏｎｏｒ）の反応による、Ｃ_６位のヒドロキシル基のグリコシル化、
結果として生じるＲ_４は、グリコシル基である。

【0164】

別法として、合成方法は、工程５）の後かつ工程６）の前に、工程５ｉ）、５ｉｉ）及び５ｉｉｉ）の代わりに、工程５ｉｖ）をさらに含んでもよい：
５ｉｖ）活性化剤としての酸化銀（Ｉ）、触媒としてのトリフルオロメタンスルホン酸及び水分捕捉剤としての分子篩の存在下における安定化アルキルクロリドの反応による、Ｃ_６のヒドロキシル基のアルキル化、
結果として生じるＲ_４は、ｎ個のアルキル基である。

【0165】

別法として、合成方法は、工程５）の後かつ工程６）の前に、工程５ｉ）、５ｉｉ）、５ｉｉｉ）及び５ｉｖ）の代わりに、工程５ｖ）及び工程５ｖｉ）をさらに含んでいてもよい：
５ｖ）塩基としてのトリエチルアミン及び触媒としてのＤＭＡＰの存在下におけるトシルクロリドの反応による、Ｃ_６位のトシル化、
５ｖｉ）テトラブチルアンモニウムヨージドの存在下におけるアジ化ナトリウムとの反応による、Ｃ_６位のアジド挿入（ａｚｉｄｅ ｉｎｓｔｅｒｔｉｏｎ），
結果として生じるＲ_４は、アジド基である。

【0166】

別法として、合成方法は、工程５）の後かつ工程６）の前に、工程５ｉ）、５ｉｉ）、５ｉｉｉ）及び５ｉｖ）の代わりに、工程５ｖｉｉ）及び工程５ｖｉｉｉ）をさらに含んでもよい：
５ｖｉｉ）唯一の活性化剤としてのＢｉ（ＯＴｆ）_３の存在下におけるピコロイル基（ａ ｐｉｃｏｌｏｙｌ ｇｒｏｕｐ）を有するグリコシルクロリド供与体の反応による、Ｃ_６位のヒドロキシル基のグリコシル化。
結果として生じるＲ_４は、グリコシル基であること。
５ｖｉｉｉ）Ｃｕ（ＯＡｃ）_２との反応によるピコロイル基の除去。

【0167】

本明細書によれば、反応１）、３）、５ｉｉ）において記述されているアシル化は、化学分野の技術者によって一般に使用される方法に従って実行され得る。例として、アシル化は、アシルクロリド又はカルボン酸を用いて、他の一般的な縮合剤、例えば、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）又はジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などの存在下において実行され得る。

【0168】

反応１）及び３）において言及される縮合は、５～１５の炭素原子数である、異なる長さのアルキル鎖を用いて実行され、それによって、式１で記述されている分子の異なる誘導体を得ることができる。

【0169】

反応２）で記述されているＣ_６の保護は、化学分野における当業者に既知の、最も一般的な技術に従って実施されることができる。前記一般的な技術の１つは、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン又は炭酸水素ナトリウムなどの種々の非求核塩基及びＮ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）のような触媒の存在下におけるシリル化である。

【0170】

反応４）で記述されているＣ_４のリン酸化は、化学分野において当業者に既知の、最も一般的な技術、例えば、テトラゾール又は４，５－ジシアノイミダゾールなどであるが、これらに限定されない異なる酸性ｐＨ緩衝液の存在下におけるホスファイトの挿入などに従って実行され得る。その後の酸化は、例えば、ジメチルジオキシラン（ＤＭＤＯ）又はｔｅｒｔ－ブチルペルオキシド（ｔＢｕＯＯＨ）などであるが、これらに限定されない穏やかな酸化剤との反応によって実行され得る。

【0171】

反応５）で記述されているＣ_６の脱保護は、化学分野における当業者に既知の、最も一般的な技術、例えば、テトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）、酢酸（ＡｃＯＨ）又は様々なタイプの酸性樹脂、すなわち、ＩＲＡ １２０ Ｈ^＋、ＩＲＣ １２０ Ｈ^＋又はＤｏｗｅｘ（登録商標）５０Ｗの存在下における脱シリル化などに従って実行され得る。

【0172】

本発明による合成プロセスは、式１の化合物を容易で工業的に拡張可能な方法で製造することを可能にする。

【0173】

上記のように、本発明は、上記で規定された式１の化合物のα及びβアノマーの両方を包含する。本発明者らは、驚くべきことに、アシル化工程３の適当な触媒の温度及び量に依存して、α又はβアノマーが得られるということを発見した。

【0174】

したがって、βアノマーが望ましい場合、アシル化工程３）は、－７８℃～０℃の範囲の温度で、０．０５～０．２当量の範囲のＤＭＡＰ量を用いて実行される。

【0175】

好ましい実施態様において、βアノマーを合成するために、アシル化工程３は、－２０℃で、０．１当量のＤＭＡＰを用いて実行される。

【0176】

その一方で、αアノマーが望ましい場合、アシル化工程３）は、２０℃～５０℃の範囲の温度で、２当量～２．５当量の範囲のＤＭＡＰを用いて実行される。

【0177】

好ましい実施態様において、αアノマーを合成するために、アシル化工程３は、約３０℃の温度で、２．０２当量のＤＭＡＰを用いて実行される。

【0178】

本明細書において規定される方法により、本明細書中で開示される式１の化合物（式２～１２の化合物など）の各実施形態の１つを合成することができる。当業者は、有機化学における一般的な知識に基づいて、使用するための置換基を知るであろう。

【0179】

有利には、本発明はまた、式Ｘの化合物の合成方法も提供しており、

【化42】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり
Ｒ_４は、ＯＨであり、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３のそれぞれは、Ｃ_２位に－ＯＨ置換基を含まず、
下記の工程を含む：
１）炭酸水素ナトリウムの存在下におけるアシルクロリドとの反応による、グルコサミンハイドロクロリドのＣ２位のアミノ基の選択的アシル化、
２）イミダゾールの存在下におけるｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＤＭＳＣｌ）との反応により、Ｃ_６位のヒドロキシル基を選択的シリル化によって保護して、前述の実施形態において規定された式１ｉの中間体を得ること、
３）トリエチルアミン及びＮ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下におけるアシルクロリドとの反応による、Ｃ_１、Ｃ_３及びＣ_４位のヒドロキシル基の完全アシル化、
４）酢酸の存在下におけるエチレンジアミンとの反応による、Ｃ_１位の選択的ジアシル化、
５）トリフラートイミダゾリウムの存在下におけるジベンジルＮ，Ｎ－ジイソプロピルホスファラミダイトとの反応による、Ｃ_１位のヒドロキシル基のリン酸化、その後にメタクロロ過安息香酸を介したホスファイトのホスフェートへの酸化が続くこと、
６）触媒量の水中硫酸の５％溶液の存在を介した、Ｃ_６位のシランからのヒドロキシル基の脱保護、
７）パラジウム炭素（Ｐｄ／Ｃ）によって触媒される水素化を介して、Ｃ_４位のベンジルからホスフェートを脱保護して、任意にＣ_６位の任意の置換基上のベンジルを脱保護すること。

【0180】

本発明の一実施形態によれば、前記Ｒ_１ Ｒ_２及びＲ_３は、いかなる置換基も含まない。

【0181】

本発明はまた、以下の式１の化合物の合成のための、本明細書中で開示される実施形態のいずれか１つにおいて規定される式１ｉの中間化合物の使用にも関連しており、

【化43】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_４は、Ｃ_６及び適切な原子の間の結合によって連結され得る任意の置換基及び／又はＣ_６に結合し得る酸素若しくは窒素原子を有する任意の置換基である。

【0182】

本発明の一実施形態によれば、前記Ｒ_１ Ｒ_２及びＲ_３は、いかなる置換基も含まない。

【0183】

さらに、本発明は、以下の式Ｘの化合物の合成のための、本明細書中で開示される実施形態のいずれか１つにおいて規定される式１ｉの中間体の使用に関連しており、

【化44】

Ｒ_１は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_２は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_３は、飽和Ｃ_５－Ｃ_１５アルキル鎖であり、
Ｒ_４は、ＯＨであり、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３のそれぞれは、Ｃ_２位に－ＯＨ置換基を含まない。

【0184】

本発明の一実施形態によれば、前記Ｒ_１ Ｒ_２及びＲ_３は、いかなる置換基も含まない。

【0185】

本発明の目的はまた、上記プロセスの工程、及び薬学的に許容されるグレードの６）で得られた前記生成物を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤と混合する少なくとも１つの工程を含む、医薬製剤又はワクチン組成物の調製のためのプロセスでもある。

【0186】

本明細書及び特許請求の範囲のいずれの部分においても、「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語によって置換され得る。

【0187】

イタリア特許法第１７０条の２に従って、本明細書において以下のことを宣言する：
細胞に関与する全ての実験は、市販の細胞を用いて実行されたこと、
記述されている実験において使用されたモデルマウスに関しては、国内又はＥＵの規制、及び特に、２００１年４月１２日付政令第２０６号の第６項及び２００３年７月８日付政令第２２４号に言及された規定から派生する義務が履行されていること。

【実施例】

【0188】

化学
全ての試薬及び溶媒は、商業的供給源から購入され、別段の定めをした場合を除き、さらなる精製なしに使用された。反応は、Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０ Ｆ２５４プレート（Ｍｅｒｃｋ（登録商標））上で実施された薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニターされた。フラッシュクロマトグラフィーの精製は、商業的供給源からのシリカゲル６０を６０～７５μｍ用いて実施された。

【0189】

１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、ＴｏｐＳｐｉｎ（登録商標）ソフトウェアを用いるＢｒｕｋｅｒ Ａｄｖａｎｃｅ ４００又はＶｎｍｒｊソフトウェアを用いるＮＭＲ Ｖａｒｉａｎ ４００で記録された。化学シフトは、Ｍｅ４Ｓｉについてｐｐｍで表され；結合定数は、Ｈｚで表される。１３Ｃスペクトルの多重度は、ＡＰＴ実験によって差し引かれた。

【0190】

１３の合成

【化45】

グルコサミンハイドロクロリド１２（Ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ １２）（１０ｇ，４６．５ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）及びＮａＨＣＯ_３（１０．５４ｇ，１２６ｍｍｏｌ，２．７ｅｑ．）を水（１２０ｍｌ）に溶解させた。次に、ＴＨＦ（１２０ｍｌ）中の先に溶解したラウロイルクロリド（ｌａｕｒｏｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）（１１．２０ｇ，５１．２ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ．）を０℃で溶液に滴加した。反応を５時間撹拌して、その後溶液を濾過した。白色の固体が得られ、これを４℃の水及びＴＨＦで洗浄した。その後、過剰の水を減圧下でトルエンと共蒸発させ、望ましい生成物１３を白色粉末として６０％の収率で得た（１０．１０ｇ）。化合物は、さらに精製することなく使用された。

【0191】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ７．６８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，３Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），６．３７（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，３Ｈ），４．９７－４．８６（ｍ，７Ｈ），４．８１（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，３Ｈ），４．５３（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄｄ，Ｊ＝９．５，４．３Ｈｚ，４Ｈ），３．７３－３．４２（ｍ，１８Ｈ），３．３４－３．２２（ｍ，２Ｈ），３．１６－３．０９（ｍ，３Ｈ），３．０４（ｄ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ，２Ｈ），２．１３－２．０３（ｍ，８Ｈ），１．５６－１．３７（ｍ，９Ｈ），１．２６（ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ，６７Ｈ），０．８６（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１３Ｈ）。

【0192】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ１７３．３１，１７２．８２，９６．１１，９１．０５，７７．２１，７４．７４，７２．４９，７１．５９，７１．３２，７０．８３，６１．５８，５７．５７，５４．７３，４０．５９，４０．３８，４０．１７，３９．９６，３９．７５，３９．５４，３９．３３，３６．１８，３５．７４，３１．７７，２９．５３，２９．４９，２９．４３，２９．３７，２９．２３，２９．１８，２９．１４，２５．７８，２２．５６，１４．４２。

【0193】

１４の合成

【化46】

ジメチルスルホキシド（１６６ｍｌ，０．０５Ｍ）中の１３（３ｇ，８．３ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）及びイミダゾール（８５０ｍｇ，１２．４ｍｍｏｌ，１．５Ｅｑ．）の溶液に、ＤＣＭ（１５ｍｌ）中のＴＢＤＭＳＣｌ（１．４ｇ，９．１ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ．）の溶液を氷浴中、不活性雰囲気下で滴加した。その次に、溶液を室温に戻して、一晩中撹拌した。その後、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９：１）によってモニターされた反応を停止し、溶液を減圧下で濃縮した。その後、ＡｃＯＥｔで希釈し、ＮＨ_４Ｃｌで３回洗浄した。こうして得られた有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去した。こうして得られた生の生成物（Ｒａｗ ｐｒｏｄｕｃｔ）（３．６５ｇ）をＥｔＰｅｔに０℃で３０分間再懸濁した。それから、懸濁液を真空下で濾過し、望ましい化合物を白色固体として回収した。精製後、白っぽい固体（ａ ｗｈｉｔｅｉｓｈ ｓｏｌｉｄ）としての３．５ｇの化合物１４を８５％の収率で得た。

【0194】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ７．６２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），４．７７（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６６（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．６Ｈｚ，１Ｈ），３．３０（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），３．１４－２．９８（ｍ，１Ｈ），２．０６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），１．４８（ｓ，１Ｈ），１．２４（ｓ，３Ｈ），０．９４－０．７４（ｍ，２Ｈ），０．０５（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ）。

【0195】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ１７３．２１，９５．９３，７７．０９，７４．８３，７０．８２，６３．６１，５７．５４，４０．６１，４０．４０，４０．２０，３９．９９，３９．７８，３９．５７，３９．３６，３６．２０，３１．７８，２９．５４，２９．５１，２９．４５，２９．３９，２９．２０，２９．１４，２６．４１，２５．７６，２２．５７，１８．６４，１４．４１，－４．６６，－４．６７。

【0196】

１５の合成

【化47】

化合物１４（２．０ｇ，４．２ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）及び４－ジメチルアミノピリジン（２６ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ，０．０５Ｅｑ．）をＡｒ雰囲気下で、無水ＴＨＦ（８４ｍｌ，０．０５Ｍ）に溶解させた。トリエチルアミン（２．４ｍｌ，１７．２ｍｍｏｌ，４．１Ｅｑ）及びラウロイルクロリド（２．１０ｍｌ，８．５ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ．）を－２０℃で溶液に滴加した。反応を－２０℃で２時間撹拌して、その後、ＴＬＣ（ＥｔＰｅｔ／ＡｃＯＥｔ ６：４）で制御した。その次に、溶液をＡｃＯＥｔで希釈し、１Ｍ ＨＣｌで洗浄した。こうして得られた有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去した。こうして得られた生の生成物（４ｇ）をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｔｏｌ／ＡｃＯＥｔ ９：１）を用いて精製した。精製後、２．１ｇの化合物１５を５０％の収率で得た。

【0197】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ７．８０（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），５．５６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），５．３８（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９２（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，８．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，５．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７６－３．７０（ｍ，１Ｈ），３．３８（ｄｄ，Ｊ＝１４．３，８．５Ｈｚ，２Ｈ），２．３０－２．１４（ｍ，７Ｈ），１．９４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．４４（ｄｄ，Ｊ＝２５．９，６．４Ｈｚ，１０Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，７５Ｈ），０．９０－０．８１（ｍ，２４Ｈ），０．０７－－０．０１（ｍ，６Ｈ）。

【0198】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ１７４．９３，１７２．７２，１７２．３４，１７１．７４，９２．４９，７７．４８，７５．６６，６７．７３，６２．５４，５２．２６，４０．６５，４０．４４，４０．２３，４０．０２，３９．８２，３９．６１，３９．４０，３６．０８，３４．１３，３３．９４，３１．７８，３１．７４，２９．５９，２９．５２，２９．５０，２９．４４，２９．３９，２９．３５，２９．３０，２９．１９，２９．００，２８．９３，２８．７５，２６．２６，２５．７０，２４．９５，２４．７７，２２．５５，１８．５４，１４．３９，１４．３６，－４．７１，－４．７８。

【0199】

１６の合成

【化48】

化合物１５（２．１２ｇ，２．４ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）及びイミダゾールトリフラート（ｉｍｉｄａｚｏｌｅ ｔｒｉｆｌａｔｅ）（１．４ｇ，５．４ｍｍｏｌ，２．２５Ｅｑ．）を不活性雰囲気下で、ＤＣＭ（１２１ｍＬ，０．０２Ｍ）に溶解させた。ジベンジルＮ，Ｎ－ジイソプロピルホスホルアミダイト（Ｄｉｂｅｎｚｙｌ Ｎ，Ｎ－ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）（１．８３ｇ，５．３ｍｍｏｌ，２．２ｅｑ）を０℃で溶液に添加した。反応をＴＬＣ（ＥｔＰｅｔ／アセトン ９：１）でモニターした；３０分後、基質の枯渇が検出された。次に、溶液を－２０℃で冷却し、１７ｍｌのＤＣＭに溶解したメタクロロ過安息香酸（１．６６ｇ，９．７ｍｍｏｌ，４Ｅｑ）を滴加した。３０分後、反応を室温に戻して、一晩中撹拌したままにした。

【0200】

ＴＬＣ分析後、反応を１５ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で急冷し、ｒｏｔａｖａｐｏｒで濃縮した。その後、混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で３回及び１Ｍ ＨＣｌ溶液で３回洗浄した。有機相を回収し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去した。

【0201】

こうして得られた粗製物（Ｃｒｕｄｅ）をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＰｅｔ／アセトン ９：１）で精製した。２．４１ｇの純粋な化合物１６を９１％の収率で黄色油として得た。

【0202】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．３４－７．２５（ｍ，１０Ｈ），５．６１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），５．４４（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．１６（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，９．１Ｈｚ，１Ｈ），５．００（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．８Ｈｚ，２Ｈ），４．９６－４．９１（ｍ，２Ｈ），４．５３（ｑ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｄｔ，Ｊ＝１０．８，９．５Ｈｚ，１Ｈ），３．９１（ｄｄ，Ｊ＝１１．９，１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｄｄ，Ｊ＝１１．９，４．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５６（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６，４．４，１．７Ｈｚ，１Ｈ），２．３１（ｔｄ，Ｊ＝７．５，３．５Ｈｚ，２Ｈ），２．１９（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），２．０７－２．０１（ｍ，２Ｈ），１．６１－１．３７（ｍ，６Ｈ），１．３３－１．１０（ｍ，５０Ｈ），０．９２－０．８３（ｍ，１９Ｈ），０．０３－－０．０３（ｍ，６Ｈ）。

【0203】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１７４．４３，１７２．７５，１７２．４０，１３５．５２，１２８．６０，１２８．５６，１２７．８８，１２７．８３，９２．５９，７７．３１，７７．００，７６．６８，７６．２３，７６．１６，７２．９４，７２．８９，６９．５６，６９．５１，６９．４６，６１．６３，５２．７９，３６．７６，３４．０８，３３．９４，３１．８９，２９．６５，２９．６０，２９．４９，２９．４７，２９．４３，２９．３７，２９．３３，２９．２５，２９．１１，２９．０１，２５．８２，２５．５８，２４．６３，２４．５８，２２．６６，１８．３２，１４．０７，－５．１９，－５．３２。

【0204】

１７の合成

【化49】

化合物１６（２．４１ｇ，２．４ｍｍｏｌ，１Ｅｑ）をアセトン（４８ｍＬ）に溶解させ、Ｈ_２Ｏ中のＨ_２ＳＯ_４の５％ｖ／ｖ溶液をＲＴで添加した（４８０μＬ，１％ｖ／ｖ）。溶液を８時間撹拌して、ＴＬＣ（ＥｔＰｅｔ／アセトン ８：２）でモニターした。反応完了後、溶液をＡｃＯＥｔで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で３回洗浄した。こうして得られた有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去した。こうして得られた生の生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＰｅｔ／アセトン ８５：１５）で精製した。精製後、（２．１ｇ）の化合物１７を９０％の収率で白色固体として得た。

【0205】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．４０－７．２７（ｍ，１Ｈ），５．６３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．４５（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．１８（ｄｄ，Ｊ＝１０．７，９．３Ｈｚ，１Ｈ），５．０８－４．９１（ｍ，１Ｈ），４．５４（ｑ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｄｄ，Ｊ＝１９．９，９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８７－３．７４（ｍ，１Ｈ），３．４７（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），２．４０－２．２４（ｍ，１Ｈ），２．１０－１．９１（ｍ，１Ｈ），１．６１－１．４６（ｍ，１Ｈ），１．４６－１．３３（ｍ，１Ｈ），１．３３－１．０１（ｍ，５Ｈ），０．９２－０．８３（ｍ，１Ｈ）。

【0206】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１７４．１１，１７２．７７，１７２．４９，１２８．９４，１２８．８４，１２８．７２，１２８．６６，１２８．２６，１２７．９５，９２．６１，７７．３３，７７．０１，７６．６９，７５．９０，７５．８７，７２．４６，７２．４２，７２．１５，７２．１０，７０．２３，７０．１７，７０．１０，６０．２３，５２．７８，３６．７１，３４．０３，３３．７１，３１．９０，２９．６７，２９．６２，２９．４９，２９．４４，２９．３８，２９．３４，２９．３２，２９．２６，２９．２３，２９．０４，２９．０１，２５．５６，２４．５９，２４．４８，２２．６６，１４．０９。

【0207】

１の合成

【化50】

化合物１７（５０ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ，１Ｅｑ）をＤＣＭ（２．５ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、Ａｒ雰囲気下に置いた。次に、Ｐｄ／Ｃ触媒（１０ｍｇ、２０％ｍ／ｍ）を溶液に添加した。その後、続いてＨ_２雰囲気下に置いた反応環境でガスを除去した。溶液を２時間撹拌して、その後、Ｈ_２を除去し、ＴＬＣ（ＥｔＰｅｔ／アセトン ８：２）で反応をモニターした。

【0208】

それから、トリエチルアミン（１００μＬ）を反応に添加し、１５分間撹拌した。その後に、溶液をＧＦ／０．４５μｍのＮｙｌｏｎ付きシリンジフィルターＰＡＬＬ ４５４９Ｔ Ａｃｒｏｄｉｓｃ ２５ｍｍで濾過してＰｄ／Ｃ触媒を除去し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで蒸発させた。粗生成物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ溶液に再懸濁して、ＩＲＡ １２０Ｈ^＋を添加した。３０分間の撹拌後、ＩＲＡ １２０Ｈ^＋を濾過し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去し、粗製物をＤＣＭ／ＭｅＯＨに再懸濁し、ＩＲＡ １２０ Ｎａ^＋を添加した。３０分間の撹拌後、ＩＲＡ １２０ Ｎａ^＋を濾過し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去した。

【0209】

（４５ｍｇ）の１が、定量的収率で白色粉末として得られた。

【0210】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｃｄ３ｏｄ）δ５．７５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｑ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８９－３．７４（ｍ，２Ｈ），３．６２（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），２．４２－２．２５（ｍ，５Ｈ），２．０９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．５６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，７Ｈ），１．２９（ｓ，５３Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。

【0211】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ１７４．６９，１７３．３２，１７２．００，９２．１６，７６．２２，７６．１７，７２．８１，７２．７８，７２．２０，７２．１４，６０．３０，５２．８２，４８．２３，４８．０２，４７．８１，４７．５９，４７．３８，４７．１７，４６．９６，３６．０５，３３．６４，３３．５５，３１．６７，３１．６６，２９．４５，２９．３９，２９．３８，２９．３５，２９．２６，２９．２０，２９．１９，２９．１４，２９．０７，２９．０５，２９．０２，２８．９２，２８．７４，２５．５８，２４．３８，２２．３１，１３．００。

【0212】

１８の合成

【化51】

化合物１７（２．３６ｇ，２．４ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）及びイミダゾールトリフラート（１．４ｇ，５．４ｍｍｏｌ，２．２５Ｅｑ．）を不活性雰囲気下で、ＤＣＭ（１２１ｍＬ，０．０２Ｍ）に溶解させた。ジベンジルＮ，Ｎ－ジイソプロピルホスホルアミダイト（１．８３ｇ，５．３ｍｍｏｌ，２．２ｅｑ）を０℃で溶液に添加した。反応をＴＬＣ（ＥｔＰｅｔ／アセトン９：１）でモニターした；３０分後、基質の枯渇が検出された。次に、溶液を－２０℃で冷却し、１７ｍｌのＤＣＭに溶解したメタクロロ過安息香酸（１．６６ｇ，９．７ｍｍｏｌ，４Ｅｑ）を滴加した。３０分後、反応を室温に戻して、一晩中撹拌したままにした。

【0213】

ＴＬＣ分析後、反応を１５ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で急冷し、ｒｏｔａｖａｐｏｒで濃縮した。その後、混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で３回及び１Ｍ ＨＣｌ溶液で３回洗浄した。有機相を回収し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去した。

【0214】

こうして得られた粗製物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＰｅｔ／アセトン ９：１）で精製した。２．４１ｇの純粋な化合物１８を９１％の収率で黄色油として得た。

【0215】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．３３－７．１８（ｍ，２１Ｈ），５．６６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），５．１８（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，９．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，３．３Ｈｚ，４Ｈ），５．００－４．９５（ｍ，２Ｈ），４．９４－４．８８（ｍ，２Ｈ），４．４９－４．４３（ｍ，１Ｈ），４．４２－４．３６（ｍ，１Ｈ），４．２５（ｄｄ，Ｊ＝１９．８，９．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１６（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８，７．１，５．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｄｄ，Ｊ＝９．５，４．２Ｈｚ，１Ｈ），２．１９（ｄｔ，Ｊ＝１５．９，７．０Ｈｚ，５Ｈ），２．０７－２．０１（ｍ，２Ｈ），１．４９（ｄｔ，Ｊ＝１４．０，７．１Ｈｚ，４Ｈ），１．４５－１．３６（ｍ，２Ｈ），１．３４－１．１１（ｍ，５４Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１０Ｈ）。

【0216】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１７４．２２，１７２．８２，１７２．１８，１３５．７９，１３５．７２，１３５．３３，１２８．６２，１２８．５８，１２８．５２，１２８．０５，１２８．００，１２７．９６，９２．４４，７４．１１，７２．５９，７２．３９，６９．３８，６５．２５，５２．６８。

【0217】

６の合成

【化52】

化合物１８（５７ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ，１Ｅｑ）をＤＣＭ（２．５ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、Ａｒ雰囲気下に置いた。次に、Ｐｄ／Ｃ触媒（１０ｍｇ、２０％ｍ／ｍ）を溶液に添加した。その後、続いてＨ_２雰囲気下に置いた反応環境でガスを除去した。溶液を２時間撹拌して、その後、Ｈ_２を除去し、反応をＴＬＣ（ＥｔＰｅｔ／アセトン ８：２）でモニターした。

【0218】

トリエチルアミン（１００μＬ）を反応に添加し、１５分間撹拌した。溶液をＧＦ／０．４５μｍのＮｙｌｏｎ付きシリンジフィルターＰＡＬＬ ４５４９Ｔ Ａｃｒｏｄｉｓｃ ２５ｍｍで濾過してＰｄ／Ｃ触媒を除去し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで蒸発させた。粗生成物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ溶液に再懸濁し、ＩＲＡ １２０ Ｈ^＋を添加した。３０分間の撹拌後、ＩＲＡ １２０ Ｈ^＋を濾過し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去し、粗製物をＤＣＭ／ＭｅＯＨに再懸濁し、ＩＲＡ １２０ Ｎａ^＋を添加した。３０分間の撹拌後、ＩＲＡ １２０ Ｎａ^＋を濾過し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去した。

【0219】

（４５ｍｇ）の６が、定量的収率で白色粉末として得られた。

【0220】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｃｄ３ｏｄ）δ５．７７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３２－５．２３（ｍ，１Ｈ），４．３９（ｄｄ，Ｊ＝１８．９，９．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，３Ｈ），４．１０－４．００（ｍ，１Ｈ），３．８０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），２．４４－２．２４（ｍ，６Ｈ），２．０９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．５５（ｄｄ，Ｊ＝１３．５，６．９Ｈｚ，１０Ｈ），１．３９－１．２４（ｍ，７９Ｈ），０．９６－０．８２（ｍ，３３Ｈ）。

【0221】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ１７４．８７，１７３．８１，９１．２２，７２．８６，７２．８０，７１．２５，６８．９４，６８．８６，６８．８０，６４．６５，６４．６１，５２．１０，４８．２４，４８．０３，４７．８２，４７．６１，４７．３９，４７．１８，４６．９７，３６．１０，３５．６３，３３．７６，３３．６４，３３．５５，３３．４０，３１．６９，３１．６３，２９．２６，２９．２２，２９．１８，２９．１５，２９．１１，２９．０６，２９．０３，２８．９８，２８．８４，２８．７８，２５．６８，２５．６２，２４．６９，２４．６３，２４．３８，２２．３５，２２．３２，１３．０６，１３．０３，７．８２。

【0222】

１９の合成

【化53】

【0223】

化合物１７（１００ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）及び酸化銀（Ｉ）（１４０ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ，６Ｅｑ．）を不活性雰囲気下で、トルエン（１ｍＬ，０．１Ｍ）中に溶解させた。アリルブロミド（Ａｌｌｙｌ ｂｒｏｍｉｄｅ）（５１μＬ，０．６ｍｍｏｌ，６ｅｑ）を溶液にＲＴで添加した。反応は、一晩中撹拌したままにされた。

【0224】

ＴＬＣ分析（ＥｔＰｅｔ／アセトン ８：２）後、反応を停止させ、溶液をセライトパッド（ａ ｃｅｌｉｔｅ ｐａｄ）上で濾過した。有機液相を回収し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去した。

【0225】

こうして得られた粗製物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＰｅｔ／アセトン ８：２）で精製した。５０ｍｇの純粋な化合物１９を５０％の収率で黄色油として得た。

【0226】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．３８－７．２２（ｍ，１０Ｈ），５．９１－５．７７（ｍ，１Ｈ），５．６４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２５－５．０７（ｍ，３Ｈ），５．０４－４．９１（ｍ，４Ｈ），４．５６（ｑ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｄｄ，Ｊ＝１９．８，９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９９－３．９０（ｍ，２Ｈ），３．７３（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｄｄ，Ｊ＝９．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４０－２．２４（ｍ，２Ｈ），２．１８（ｄｄ，Ｊ＝１６．１，８．４Ｈｚ，２Ｈ），２．０３（ｄｄ，Ｊ＝１５．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．６２－１．５３（ｍ，２Ｈ），１．４９（ｄｄ，Ｊ＝１４．２，７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．４１（ｄｔ，Ｊ＝１３．２，６．８Ｈｚ，２Ｈ），１．３４－１．１０（ｍ，５１Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，９Ｈ）。

【0227】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１７４．３３，１７２．７７，１７２．４１，１３５．４８，１３４．４３，１２８．６４，１２８．５９，１２７．９２，１１７．２０，９２．７０，７７．３２，７７．００，７６．６８，７５．２９，７５．２３，７３．２１，７３．１５，７２．８３，７２．４７，６９．６７，６９．６３，６７．８１，５２．８３，３６．７４，３４．０５，３３．９３，３１．８９，２９．６５，２９．６２，２９．６０，２９．４９，２９．４４，２９．３６，２９．３３，２９．３１，２９．２７，２９．２３，２９．１０，２９．００，２５．５５，２４．５７，２４．５０，２２．６５，１４．０７。

【0228】

２１の合成

【化54】

化合物１７（１００ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）及び化合物２０（４８ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ，１．１Ｅｑ．）を不活性雰囲気下で、ＤＣＭ（１ｍＬ，０．１Ｍ）に溶解させた。１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）（１９２ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ）及びジメチルＮ，Ｎアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を０℃で溶液に添加した。反応を室温に戻して、一晩中撹拌したままにした。

【0229】

反応完了後、溶液をＡｃＯＥｔで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で３回洗浄した。こうして得られた有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去した。

【0230】

こうして得られた粗製物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＰｅｔ／アセトン ８５：１５）で精製した。１００ｍｇの純粋な化合物２１が、白色粉末として６５％の収率で得られた。

【0231】

２３の合成

【化55】

化合物１７（１００ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）、化合物２２（５７ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．２５ｅｑ．）及び粉末３ａの分子篩（５０ｍｇ）を不活性雰囲気下でトルエン（１ｍＬ，０．１Ｍ）に溶解させ、１時間撹拌した。次に、酸化銀（Ｉ）（４６ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ，２Ｅｑ．）を溶液にＲＴで添加し、その後、０℃に冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸（４．４μＬ，０．０５ｍｍｏｌ，０．５ｅｑ．）を添加した。その後、反応を一晩中室温で撹拌したままにした。

【0232】

ＴＬＣ分析（ＥｔＰｅｔ／アセトン ８：２）後、反応を停止させ、溶液をセライトパッド上で濾過した。有機液相を回収し、ＡｃＯＥｔで希釈し、ＮａＨＣＯ_３で３回洗浄した。有機相を回収し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発させた。

【0233】

こうして得られた粗製物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（トルエン／アセトン ８５：１５）で精製した。化合物２３のジアステレオ異性体の混合物５０ｍｇを黄色油として４０％の収率で得た。

【0234】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．４０－７．２０（ｍ，３８Ｈ），５．６５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．６１（ｓ，１Ｈ），５．４０（ｓ，１Ｈ），５．２４－５．１８（ｍ，１Ｈ），５．１４（ｓ，１Ｈ），４．９１（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，９Ｈ），４．６９（ｓ，２Ｈ），４．６２（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，４Ｈ），４．５７－４．３７（ｍ，２Ｈ），４．２３（ｓ，１Ｈ），２．４０－２．２６（ｍ，３Ｈ），２．１３（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．７，７．６，４．４Ｈｚ，３Ｈ），２．０５（ｓ，３Ｈ），１．５７（ｓ，６Ｈ），１．４７－１．３６（ｍ，３Ｈ），１．２９（ｓ，７９Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１４Ｈ）。

【0235】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１７４．２３，１７２．８１，１７２．４３，１３８．６６，１３８．６３，１３５．２４，１２８．７５，１２８．６９，１２８．６７，１２８．６２，１２８．５０，１２８．４０，１２８．３１，１２８．２７，１２８．２０，１２８．０６，１２７．９２，１２７．８８，１２７．７１，１２７．６４，１２７．５６，１２７．４１，１２７．３９，９８．５５，９２．５４，８０．３６，７９．７２，７７．３２，７７．００，７６．６８，７５．３６，７４．９９，７２．７６，７２．５１，７１．９３，６９．７２，６９．６６，６９．６３，６９．５８，６８．０９，６４．９９，５２．７４，３６．７７，３４．０３，３３．８９，３１．８９，３０．９０，２９．６６，２９．６０，２９．４９，２９．４６，２９．３６，２９．３４，２９．２２，２９．０９，２９．０２，２５．５９，２４．５８，２４．４６，２２．６６，１７．９７，１４．０９。

【0236】

２４の合成

【化56】

化合物２３（７０ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ，１Ｅｑ）をＤＣＭ（２．５ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、Ａｒ雰囲気下に置いた。次に、Ｐｄ／Ｃ触媒（１０ｍｇ、２０％ｍ／ｍ）を溶液に添加した。その後、続いてＨ_２雰囲気下に置いた反応環境でガスを除去した。溶液を２時間撹拌して、その後、Ｈ_２を除去し、反応をＴＬＣ（ＥｔＰｅｔ／アセトン ８：２）でモニターした。

【0237】

それから、トリエチルアミン（１００μＬ）を反応に添加し、１５分間撹拌した。その後に、溶液をＧＦ／０．４５μｍのＮｙｌｏｎ付きシリンジフィルターＰＡＬＬ ４５４９Ｔ Ａｃｒｏｄｉｓｃ ２５ｍｍで濾過してＰｄ／Ｃ触媒を除去し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで蒸発させた。粗生成物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ溶液に再懸濁し、ＩＲＡ １２０ Ｈ^＋を添加した。３０分間の撹拌後、ＩＲＡ １２０ Ｈ^＋を濾過し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去し、粗製物をＤＣＭ／ＭｅＯＨに再懸濁し、ＩＲＡ １２０ Ｎａ^＋を添加した。３０分間の撹拌後、ＩＲＡ １２０ Ｎａ^＋を濾過し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去した。

【0238】

（５０ｍｇ）の２４が、ジアステレオ異性体の混合物として、定量的収率で白色粉末として得られた。

【0239】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ５．７６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，４．７Ｈｚ，１Ｈ），５．２９（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．７６（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３６（ｄｄ，Ｊ＝１８．８，９．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｄｄｔ，Ｊ＝１９．６，１４．２，５．９Ｈｚ，４Ｈ），３．９１（ｄｄ，Ｊ＝３．４，１．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８３－３．７５（ｍ，２Ｈ），３．７５－３．６２（ｍ，５Ｈ），３．４４－３．３４（ｍ，３Ｈ），２．４８－２．２７（ｍ，７Ｈ），２．１４－２．０８（ｍ，２Ｈ），１．６０（ｓ，１１Ｈ），１．４０－１．２１（ｍ，９６Ｈ），０．９２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１７Ｈ）。

【0240】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ１７４．６８，１７３．３９，１７１．９９，１０１．０３，９２．１０，７５．１４，７２．９６，７２．６６，７２．３２，７０．９０，７０．５７，６８．４７，６５．７１，５２．７１，４８．２３，４８．０２，４７．８１，４７．５９，４７．３８，４７．１７，４６．９６，３６．０６，３３．６６，３３．５７，３１．６９，２９．３９，２９．３０，２９．０９，２８．９５，２８．７６，２８．４４，２５．５９，２４．４２，２２．３３，１６．６２，１３．０３。

【0241】

２９の合成

【化57】

化合物１７（１００ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）及び化合物２８（２４ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ．）をＡｒ雰囲気下で、乾燥ＤＣＭ（１ｍｌ，０．１Ｍ）に溶解させた。次に、ＥＤＣ（２３ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ．）及びＤＭＡＰ（０．１１２ｍｇ，０．０１ｍｍｏｌ，０．１ｅｑ．）を０℃で溶液に添加した。その後に、溶液を室温に戻して、一晩中撹拌した。その後、ＴＬＣ（ＥｔＰｅｔ／アセトン ８：２）によってモニターされた反応を停止し、溶液を減圧下で濃縮した。それから、ＡｃＯＥｔで希釈し、ＨＣｌで３回洗浄した。こうして得られた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去した。こうして得られた生の生成物（５５０ｍｇ）をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＰｅｔ／アセトン ８５：１５）を用いて精製した。精製後、１７ｍｇの化合物２９を４０％の収率で得た。

【0242】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．４３（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３６－７．１９（ｍ，１０Ｈ），５．６０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），５．４５（ｓ，１Ｈ），５．３６（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１５（ｄｄ，Ｊ＝１０．７，９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９７（ｔ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９３－４．８０（ｍ，１Ｈ），４．６７（ｄｄｄ，Ｊ＝１８．４，１２．５，２．３Ｈｚ，２Ｈ），４．５１（ｑ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２２（ｔｄ，Ｊ＝１２．５，７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７９（ｄｄ，Ｊ＝９．５，３．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３６－２．２３（ｍ，１Ｈ），２．２１－２．０９（ｍ，１Ｈ），２．０９－１．９９（ｍ，１Ｈ），１．０４（ｓ，２Ｈ），０．９８－０．７５（ｍ，５Ｈ）。

【0243】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１７２．８６，１３４．４４，１２９．７３，１２８．９８，１２８．６８，１２８．２７，１２８．０８，１２７．９７，１２７．８９，１２６．２２，１２６．０９，１０１．６１，９２．５５，７７．３１，７６．９９，７６．６７，７３．０９，７２．４７，７２．２７，６９．８２，６７．３４，６１．４７，５２．６７，５０．４８，４２．５４，３６．７４，３４．０２，３１．８９，２９．６０，２９．４４，２９．３３，２８．９９，２５．５７，２４．５０，２２．６６，１９．１４，１７．３９，１４．０８。

【0244】

３０の合成

【化58】

化合物２９（３０ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）をＡｒ雰囲気下で、乾燥ＤＣＭ及び乾燥ＭｅＯＨ（３ｍｌ，０．０１Ｍ）の１：１混合溶媒に溶解させた。次に、不活性雰囲気下でＰｄ／Ｃ触媒（６ｍｇ，２０％ｍ／ｍ）を常時添加した。反応を真空下で数分間放置する。その後、水素を添加し、反応を室温で一晩中撹拌した。その後、ＴＬＣ（トルエン／アセトン ８５：１５）によってモニターされた反応を停止した。水素を完全に除去し、Ａｒ雰囲気に戻した。トリエチルアミン（６０ ｌ）を溶液に添加して３０分間撹拌した。それから、ＧＦ／０．４５μｍのＮｙｌｏｎ付きシリンジフィルターＰＡＬＬ ４５４９Ｔ Ａｃｒｏｄｉｓｃ ２５ｍｍで濾過してＰｄ／Ｃ触媒を除去し、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで蒸発させた。原料化合物（Ｒａｗ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）を１：１のＤＣＭ／ＭｅｏＨで再懸濁し、ＩＲＡ １２０ Ｈ^＋を溶液に添加した。３０分後、酸樹脂を除去し、代わりにソジウム樹脂を添加した。溶液を再び３０分間撹拌した；その後、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで除去し、５２，９ｍｇの化合物３０を＞９９％の収率で得た。

【0245】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ５．７６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），５．３３－５．２４（ｍ，１Ｈ），４．５４－４．３８（ｍ，２Ｈ），４．３７－４．２９（ｍ，１Ｈ），４．１４－４．０５（ｍ，１Ｈ），３．８９（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｑ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｄｄ，Ｊ＝１６．４，１１．６Ｈｚ，４Ｈ），３．５６（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），２．４９－２．２７（ｍ，５Ｈ），２．２３－２．０８（ｍ，２Ｈ），１．５９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，７Ｈ），１．２２－１．１５（ｍ，３Ｈ）。

【0246】

３２の合成

【化59】

化合物１７（１００ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）、化合物３１（１１０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ，２ｅｑ．）及び粉末３ａの分子篩（３３０ｍｇ）を不活性雰囲気下でＤＣＭ（２ｍＬ，０．２Ｍ）に溶解させ、１時間撹拌した。次に、ＮＩＳ（４５ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ，２Ｅｑ）及びＨＯＦｏｘ（８．５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ，０．５ｅｑ．）をＲＴで溶液に添加した。その後、反応を室温で１．５時間撹拌した。

【0247】

ＴＬＣ分析（ＥｔＰｅｔ／アセトン ８：２）後、反応を停止し、溶液を綿パッド上で濾過した。有機液相を回収し、ＡｃＯＥｔで希釈し、Ｎａ_２Ｓ２Ｏ_３で３回洗浄した。有機相を回収し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発させた。

【0248】

こうして得られた粗製物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＰｅｔ／アセトン ８０：２０）で精製した。化合物３２のジアステレオ異性体の混合物１２０ｍｇを黄色油として８４％の収率で得た。

【0249】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．４０－７．２０（ｍ，３２Ｈ），７．１１（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．３，６．８，２．７Ｈｚ，２Ｈ），５．６２（ｄｄ，Ｊ＝８．８，３．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３４（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），５．２７（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，０Ｈ），５．１３（ｔｄ，Ｊ＝１０．９，８．９Ｈｚ，１Ｈ），５．００－４．８５（ｍ，６Ｈ），４．７９（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，２．５Ｈｚ，１Ｈ），４．７３（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７０－４．６４（ｍ，２Ｈ），４．６３－４．５４（ｍ，２Ｈ），４．５３－４．４５（ｍ，１Ｈ），４．４４－４．２１（ｍ，４Ｈ），３．９３（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８７－３．７５（ｍ，３Ｈ），３．７０－３．５１（ｍ，５Ｈ），３．４６－３．３３（ｍ，１Ｈ），２．２２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），２．１３（ｄｔ，Ｊ＝１７．２，７．７Ｈｚ，３Ｈ），２．０３（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．５０（ｓ，３Ｈ），１．４０（ｐ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），１．２２（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，５２Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１０Ｈ）。

【0250】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１７４．３５，１７２．７５，１７２．２２，１３８．９７，１３８．２２，１３８．０３，１２８．７４，１２８．６９，１２８．６７，１２８．５９，１２８．４５，１２８．３５，１２８．２９，１２８．２２，１２８．１２，１２８．０２，１２７．９１，１２７．８９，１２７．８３，１２７．８０，１２７．７３，１２７．６９，１２７．６３，１２７．４８，１２７．４３，１０３．８８，９７．２７，９２．６５，９２．５４，８４．４９，８１．９０，７９．７８，７７．６１，７７．５０，７７．３４，７７．０２，７６．７０，７５．５８，７４．９５，７４．６４，７３．４３，７３．３３，７３．２７，７２．８０，７２．７１，７０．１９，６９．７３，６８．４１，５２．９２，３６．８３，３４．０３，３３．９４，３１．９３，２９．６９，２９．６４，２９．５１，２９．４７，２９．３９，２９．３７，２９．３３，２９．２６，２９．１４，２９．０４，２５．６４，２４．６０，２４．５３，２４．３６，２２．６９，１４．１２。

【0251】

３４の合成

【化60】

化合物１７（１００ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）、化合物３３（１１０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ，２ｅｑ．）及び粉末３ａの分子篩（３３０ｍｇ）を不活性雰囲気下でＤＣＭ（２ｍＬ，０．２Ｍ）に溶解させ、１時間撹拌した。反応を０℃で冷却し、Ｂｉ（ＯＴｆ）_３（５０ｍｇ，０．０７５ｍｍｏｌ，０．７５Ｅｑ）を添加した。次に、反応は、ＲＴで一晩中撹拌したままにされた。

【0252】

ＴＬＣ分析（ＥｔＰｅｔ／アセトン ７：３）後、反応を停止し、溶液をセライトパッド上で濾過した。有機液相を回収し、ＡｃＯＥｔで希釈し、ＮａＨＣＯ_３で３回洗浄した。有機相を回収し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発させた。

【0253】

こうして得られた粗製物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＰｅｔ／アセトン ７０：３０）で精製し、２つのジアステレオ異性体を分離した。１２５ｍｇの全化合物（ｔｏｔａｌ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）３４（α＋β）が、黄色油として９４％の収率で得られた。

【0254】

３４α
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ８．７５（ｄｔ，Ｊ＝４．６，１．４Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｔｄ，Ｊ＝７．７，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄｄｄ，Ｊ＝７．６，４．７，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４０－７．１３（ｍ，３０Ｈ），５．５３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３２（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１０（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，８．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９９－４．９０（ｍ，５Ｈ），４．８９（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），４．８３（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．７５（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６８（ｄｄ，Ｊ＝１１．７，６．１Ｈｚ，２Ｈ），４．６１（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４０－４．３０（ｍ，２Ｈ），４．３０－４．２５（ｍ，１Ｈ），４．１６－４．０９（ｍ，１Ｈ），４．０５（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，２．９Ｈｚ，２Ｈ），３．９８（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，２．７Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｔｄ，Ｊ＝９．５，５．４Ｈｚ，３Ｈ），２．２６（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．１５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．０６－１．９９（ｍ，３Ｈ），１．４９（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，４Ｈ），１．４１（ｐ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），１．２３（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，６１Ｈ），０．８８（ｑｔ，Ｊ＝３．８，１．８Ｈｚ，１２Ｈ）。

【0255】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１７４．２４，１７２．５５，１７２．３０，１６４．６２，１４９．９３，１４７．８９，１３８．４６，１３８．２９，１３７．１４，１２８．６６，１２８．３９，１２８．３０，１２８．０７，１２７．８７，１２７．６９，１２７．６３，１２７．４６，１２６．９２，１２５．４０，９７．２９，９２．６１，７９．００，７６．３４，７５．１６，７４．５７，７３．５９，７３．１９，７２．８１，６９．７０，６８．８０，６５．１８，６５．０３，５２．８２，３６．８２，３３．９７，３１．９２，２９．６４，２９．５２，２９．３６，２９．３０，２９．１４，２９．０６，２５．６３，２４．６０，２２．６９，１４．１１。

【0256】

３４β
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ８．７３（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｔｄ，Ｊ＝７．８，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４６－７．４１（ｍ，１Ｈ），７．２９（ｄｄｄｄｄ，Ｊ＝２１．３，１６．３，１３．５，８．４，４．４Ｈｚ，２７Ｈ），５．６３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３６（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．１２（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，８．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９７（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．９５－４．８６（ｍ，５Ｈ），４．８１（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７１（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，５．６Ｈｚ，２Ｈ），４．３９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４８－４．３４（ｍ，２Ｈ），４．３４－４．２２（ｍ，２Ｈ），３．９０－３．８２（ｍ，３Ｈ），３．６８（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝９．２，５．７Ｈｚ，１Ｈ），３．５１（ｄｄ，Ｊ＝９．８，２．９Ｈｚ，１Ｈ），２．１９－２．０６（ｍ，３Ｈ），２．０２（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），１．４９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．４０（ｐ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），１．３５－１．０４（ｍ，５５Ｈ），０．８８（ｔｄ，Ｊ＝６．８，２．１Ｈｚ，１０Ｈ）。

【0257】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１７４．２４，１７２．７５，１７２．１６，１６４．５３，１４９．９１，１４７．６７，１３８．７８，１３８．５３，１３８．２０，１３７．００，１２８．６５，１２８．６２，１２８．５１，１２８．３６，１２８．２８，１２８．２５，１２８．０４，１２７．９８，１２７．６２，１２７．５７，１２７．５１，１２６．９０，１２５．３５，１０４．０８，９２．５４，８１．８８，７９．１６，７４．４１，７３．２５，７２．８５，７２．１１，６９．７７，６８．４６，６４．１９，５２．８７，３６．７７，３３．８９，３１．９２，２９．６９，２９．６３，２９．３６，２９．３４，２９．２２，２９．１２，２８．９９，２５．５９，２４．６０，２４．３４，２２．６９，１４．１２。

【0258】

３５の合成

【化61】

不活性雰囲気下で、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（５ｍＬ，０．１Ｍ）の３：１混合溶液中の３４（７５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ，０．５ｅｑ）の溶液に、Ｃｕ（ＯＡｃ）_２（１５ｍｇ，０．７５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑ．）をＲＴで添加した。

【0259】

溶液をおよそ（ｃ．ａ．）２時間撹拌したままにして、その後、ＴＬＣ（ＥｔＰｅｔ／ＡｃＯＥｔ ６：４）でモニターした。

【0260】

溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒで蒸発させ、溶液をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＰｅｔ／ＡｃＯＥｔ ６：４）でさらなる精製なしに精製する。

【0261】

５５ｍｇの化合物３５を８０％の収率で回収した。

【0262】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．４０－７．２２（ｍ，２９Ｈ），５．６２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），５．３８（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．１２（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，８．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９７－４．８８（ｍ，６Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７１（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｄｄ，Ｊ＝１３．１，１１．３Ｈｚ，２Ｈ），４．３９－４．３６（ｍ，１Ｈ），４．３５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３３（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｄｔ，Ｊ＝１０．８，７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８６－３．８０（ｍ，２Ｈ），３．７２（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，２Ｈ），３．７２－３．６３（ｍ，２Ｈ），３．４７（ｄｄ，Ｊ＝９．７，２．９Ｈｚ，１Ｈ），３．３９（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｄｄ，Ｊ＝７．２，４．９Ｈｚ，１Ｈ），２．１６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．０９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．７，７．２，５．１Ｈｚ，２Ｈ），２．０３（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），１．５１（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．４１（ｄｑ，Ｊ＝１４．９，７．０Ｈｚ，４Ｈ），１．３３－１．０９（ｍ，５５Ｈ），０．８８（ｔｄ，Ｊ＝６．９，２．０Ｈｚ，１０Ｈ）。

【0263】

１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１７４．２１，１７２．８０，１７２．２４，１３８．７９，１３８．５２，１３８．２７，１３５．３４，１２８．７２，１２８．６６，１２８．６４，１２８．５３，１２８．４０，１２８．２６，１２８．１０，１２８．０６，１２７．８９，１２７．６４，１２７．５９，１２７．５１，１０３．８２，９２．５２，８２．１２，７９．１５，７５．１８，７５．０９，７４．９４，７４．２０，７３．７５，７３．６９，７３．４４，７３．２４，７２．７９，６９．８７，６９．８１，６７．９４，６２．１６，５２．７４，３６．７７，３３．９１，３３．８６，３１．９３，２９．６９，２９．６４，２９．５１，２９．４７，２９．３６，２９．３３，２９．２９，２９．２３，２９．１１，２９．００，２５．５９，２４．５９，２４．３９，２２．７０，１４．１２。

【0264】

生物学（Ｂｉｏｌｏｇｙ）
化合物ＦＰ２０、ＦＰ２１、ＦＰ２２、ＦＰ２３及びＦＰ２４がＴＬＲ４を選択的に活性化する能力は、最初に特定のＨＥＫレポーター細胞株で調査された。ＨＥＫ－ＢｌｕｅＴＭ ｈＴＬＲ４及びＨＥＫ－ＢｌｕｅＴＭ ｈＴＬＲ２（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）は、転写因子ＮＦ－κＢ及びＡＰ－１の活性化をモニターすることによって、それぞれヒトＴＬＲ４及びＴＬＲ２受容体の活性化を研究するために設計された細胞株である。ＴＬＲ４リガンド（ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ４の場合）又はＴＬＲ２リガンド（ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ２の場合）を用いた刺激は、ＮＦ－κＢ及びＡＰ－１を活性化して、ＳＥＡＰレポーター遺伝子（分泌胚アルカリ性ホスファターゼ（ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｌｋａｌｉｎｅ））の産生及び細胞外環境への放出を誘導する。レポーター遺伝子の分析は、吸光度が６３０ｎｍで読み取られる発色産物を生成する、ＳＥＡＰの基質であるＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ（商標）比色分析（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を用いて実施された。分子のアゴニスト活性は、化合物の濃度を上昇させた状態で（０．１－１－１０－２５μＭ）ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ４細胞を１８時間処理し、ＭＰＬＡ（０．１－１－１０μＭ）及びＳ－ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）をそれぞれ、参照対照及び陽性受容体活性化対照（ａ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ）として使用することによって試験された。得られた結果は、分子ＦＰ２０、ＦＰ２１、ＦＰ２２、ＦＰ２３及びＦＰ２４が、用量依存的にＴＬＲ４の活性化を誘導することができるということを示す（図１ａ）。続いて、この受容体の活性化を除外することを目的として、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ２細胞株を用いて分子を試験した。この関連で、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ２細胞は、以前に実施された試験と同じ化合物を用いて、かつ同じ濃度で処理され、化合物ＰＡＭ２ＣＳＫ４をＴＬＲ２活性化の陽性対照として使用した。予想どおり、ＰＡＭ２ＣＳＫ４を用いた刺激は、ＴＬＲ２の強力な活性化が誘導したが、化合物ＦＰ２０、ＦＰ２１、ＦＰ２２、ＦＰ２３及びＦＰ２４で処理すると、いかなる活性化も生じなかった（図１ｂ）。

【0265】

ＨＥＫ細胞を用いたスクリーニング試験から得られた結果に続いて、化合物ＦＰ２０、ＦＰ２１、ＦＰ２２、ＦＰ２３及びＦＰ２４の生物学的活性をヒト及びマウスのマクロファージ細胞株で調査した。ＴＨＰ－１－Ｘ ＢｌｕｅＴＭ細胞株、１００ｎｇ／ｍＬのＰＭＡで処理した後にマクロファージに分化した単球及びＲＡＷ－ＢｌｕｅＴＭを使用した。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ細胞と同様に、ＴＨＰ－１ Ｘ－Ｂｌｕｅ及びＲＡＷ－Ｏｘは、転写因子ＮＦ－κＢ及びＡＰ－１の制御下で、ＳＥＡＰレポーター遺伝子を安定に発現させる。細胞は、前述のように処理された。結果は、全ての化合物が、ヒトマクロファージ（図２ａ）及びマウスマクロファージ（図２ｂ）の両方で、ＮＦ－κＢの活性化を誘導するということを示す；ＦＰ２３化合物は、ヒトマクロファージで唯一統計的に有意でなかった。さらに、ＲＡＷ－ｂｌｕｅ株では、化合物は、試験した最低濃度（０．１μｍ）で活性化するが、ＴＨＰ－１－Ｘ－Ｂｌｕｅでは、１００倍高い濃度（１０μｍ）から有意に活性化する。

【0266】

化合物ＦＰ２０、ＦＰ２１、ＦＰ２２、ＦＰ２３及びＦＰ２４の細胞毒性を評価するため、マクロファージに分化したＴＨＰ－１－Ｘ－Ｂｌｕｅ細胞（図３）及びＲＡＷ－Ｂｌｕｅ細胞（図４）を試験化合物（０．１、１、１０、２５、５０μＭ）の濃度を上昇させた状態で処理した。化合物の毒性は、ＭＴＴ生存率アッセイ（３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド）によって評価された。得られた結果は、化合物がＴＨＰ－１－Ｘ－Ｂｌｕｅ細胞株に対して無毒性であるということを示すが、試験された最高濃度（５０μｍ）では、ＦＰ２０及びＦＰ２３での処理の後に細胞生存率が低下する（図３）。マウスマクロファージ株の結果は、５０μｍの濃度で化合物の毒性が増加することを示すが、２５μｍの濃度で毒性を示したのは化合物ＦＰ２３だけであった。

【0267】

次に、ＦＰ２００活性は、前述のヒト単球細胞株ＴＨＰ－１－Ｘ－Ｂｌｕｅｓで評価された。細胞は、濃度を上昇させながら（ｉｎ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ）（０．１、１、１０、２０μＭ）化合物ＦＰ１１、ＦＰ１１２、ＦＰ２０、ＦＰ２００、ＦＰ２１で、ＭＰＬＡ（０．１－１－１０μＭ）及びＳ－ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）をそれぞれ参照対照及び陽性受容体活性化対照として用いて、処理された。結果は、全ての化合物が用量依存的にＮＦ－κＢの活性化を誘導することを示す。

【0268】

ＭＰＡで機能化された化合物ＦＰ２０７は、ヒトＴＨＰ－１－ＸＢｌｕｅ細胞を用いてインビトロで試験され、ＮＦ－κＢ活性化を評価した。分子は、ＦＰ２２及びＦＰ２３に使用されたものと同じ濃度で試験された。

【0269】

この場合もまた、結果は、化合物ＦＰ２０７がＴＬＲ４で活性化して、転写因子の産生を誘導するということを明らかにした。そのアゴニスト活性は、以前の事例のような濃度依存性を有する。驚くべきことに、それは、ＦＰ２０よりも活性が高く、２５μＭでＬＰＳにも匹敵する。ＦＰ２０と比較して、同じ炎症効果を得るために、より少ない量の製品を使用することが可能になるため、これは素晴らしい結果であり、このことは２つの点で有利である：薬理学的には、任意の起こり得る副作用が減少する；一方、経済的には、より良い結果及びより大規模な公開（ｌａｒｇｅｒ ｐｕｂｌｉｃ）を達成するために必要な費用がより少ないということを意味する。

【0270】

この官能基化化合物の毒性を調べるための予備試験が、３重試験（ａ ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）なしで実施された。いかに予備的であろうとも、これらのデータは、分子が１～２５ｍＭの濃度範囲では無毒性であるということを示唆している。

【0271】

ＷＯ２０１９／０９２５７２において開示された化合物に関するインビトロ及びインビボでのデータを以下に提供する。

【0272】

合成アゴニストによるＴＬＲ４活性化
ヒトＴＬＲ４を活性化するＦＰ分子の能力は、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ４細胞を用いて評価された。これらは、ＬＰＳ受容体ＣＤ１４、ＴＬＲ４及びＭＤ－２並びに２つのＴＬＲ４依存性転写因子（ＮＦ－κＢ及びＡＰ－１）の制御下に置かれたレポーター遺伝子である、分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）（ＳＥＡＰ）で安定的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３由来の細胞株である。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ４細胞をＦＰ１１、ＦＰ１１２及びＦＰ１１１の濃度を上昇させた状態で（０．１～２５μＭ）１８時間にわたって処理した。平らなケモタイプ（ｓｍｏｏｔｈ ｃｈｅｍｏｔｙｐｅ）のＬＰＳ（Ｓ－ＬＰＳ）を用いた刺激は、ＴＬＲ４介在経路の活性化に関するポジティブコントロールとして機能した。

【0273】

分子ＦＰ１１及びＦＰ１１２は、濃度依存的に培地中のＳＥＡＰレポータータンパク質の放出を誘導し、両化合物がＮＦ－κＢ及びＡＰ－１を活性化するということを示したが、ＦＰ１１１は不活性であった（図５Ａ）。３種の化合物は、ＬＰＳ誘発性のＳＥＡＰ産生を阻害せず、ＴＬＲ４拮抗作用を欠いているということを示唆した（図５Ｂ）。同じＳＥＡＰレポーター遺伝子を有するが、ＬＰＳ受容体を欠いている、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ Ｎｕｌｌ細胞で活性を欠くことは、ＦＰ１１及びＦＰ１１２が、両方ともＴＬＲ４を介して作用するということを確認した（図５Ｃ）。ＴＬＲ２と比較したＴＬＲ４に対する選択性を確認するため、分子はまた、ヒトＴｏｌｌ様受容体２（ｈＴＬＲ２）を発現させるＨＥＫ－Ｂｌｕｅ細胞でも試験されたが、結果的にアゴニスト活性をもたらさなかった（図５Ｄ）。これらのデータは、インビトロでの結合結果と一致しており、ＦＰ１１及びＦＰ１１２が、共受容体ＭＤ－２と直接相互作用する特異的なＴＬＲ４アゴニストであるということを示唆している。

【0274】

ＦＰ１１及びＦＰ１１２のアジュバント活性並びにインビボでの毒性：ＯＶＡ免疫実験
モデル抗原としてニワトリのオボアルブミン（ＯＶＡ）の免疫があるＣ５７Ｂｌ／６マウスにおける抗体産生を評価することによって、インビボでの免疫応答を誘導するためのＦＰ１１及びＦＰ１１２の能力をＭＰＬＡと比較した。まず、マウスに１０μｇのＦＰ１１及びＦＰ１１２を皮下注射するパイロット実験でＦＰの毒性を評価した。結果は、２つの試験アジュバントが、注射部位での局所反応並びに７日間にわたる動物の体重及び覚醒（ａｌｅｒｔｎｅｓｓ）の状態を測定することによって評価されるように、マウスに明らかな悪影響を及ぼさないということを示した（図６Ａ）。次に、試験されたアジュバントをオボアルブミン（ＯＶＡ）と混合してマウスに免疫を与えた。免疫付与後２１日目に抗体の誘導を評価した。その結果、試験アジュバントの免疫があるマウスは、プライム免疫化後、ＯＶＡ免疫対照と比較してわずかに高いレベルの抗ＯＶＡ総ＩｇＧを示し、ＭＰＬＡ－ＯＶＡ免疫動物と比較して有意に低いレベルを示した（図６Ｂ、プライム免疫化）。対照的に、２２日目にブースト免疫化を受けて、１４日後にｏｖａ特異的抗体価を検査された後、ＦＰ１１２免疫マウスのＩｇＧレベルは、ＦＰ１１免疫群のそれよりも高かった（図６Ｂ、ブースター免疫化）。これらのデータは、インビトロ及び細胞内での結果に一致して、ＦＰ１１２が、インビボでＦＰ１１よりも効果的なアジュバントであり、ＭＰＬＡに匹敵するか、あるいはそれよりさらに高い効力を有するということを示している。

【0275】

ＦＰ１１合成における工程６の不純物１、参考図７

【化62】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ６．０４（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．６３（ｄｄ，Ｊ＝９．７，７．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｄｔ，Ｊ＝７．５，３．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７７－３．７０（ｍ，３Ｈ），３．６８（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，４．３Ｈｚ，１Ｈ），２．３６（ｄｄ，Ｊ＝１４．７，６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．３２－２．２６（ｍ，３Ｈ），１．６７（ｄｔ，Ｊ＝１５．３，７．７Ｈｚ，２Ｈ），１．５９（ｄｔ，Ｊ＝２０．５，７．１Ｈｚ，４Ｈ），１．２７（ｄ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ，６２Ｈ），０．９１－０．８４（ｍ，２０Ｈ），０．０５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，７Ｈ）。

【0276】

ＦＰ１１合成における工程６の不純物２、参考図８（^１Ｈ ＮＭＲ）及び９（^１３Ｃ ＮＭＲ）

【化63】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ６．０１（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），５．４０－５．３０（ｍ，１Ｈ），５．２１（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１０－４．９９（ｍ，２Ｈ），４．２２（ｔｄ，Ｊ＝１０．７，３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．２，４．３，２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），３．６１－３．５３（ｍ，１Ｈ），２．３２－２．１９（ｍ，５Ｈ），２．１８－２．０６（ｍ，３Ｈ），１．６２－１．４６（ｍ，８Ｈ），１．３４－１．１８（ｍ，６２Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１１Ｈ）。

【0277】

^１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１７４．１４，１７３．６５，１７３．１２，９１．４０，７７．３２，７７．０１，７６．６９，７０．３７，６９．６７，６８．５４，６１．１９，５２．４９，３６．６８，３４．１９，３４．１３，３１．９０，２９．６６，２９．６３，２９．６０，２９．５４，２９．５２，２９．４６，２９．３９，２９．３４，２９．３３，２９．２９，２９．２７，２９．１９，２９．１５，２５．６０，２４．９２，２３．８２，２２．６６，１４．０８。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【国際調査報告】