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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-07-19
(54)【発明の名称】新規多重特異性分子
(51)【国際特許分類】
C07K 16/46 20060101AFI20240711BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240711BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240711BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240711BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240711BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20240711BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240711BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20240711BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240711BHJP
A61P 31/00 20060101ALI20240711BHJP
A61K 35/28 20150101ALI20240711BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20240711BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240711BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20240711BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240711BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240711BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20240711BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20240711BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20240711BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20240711BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240711BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240711BHJP
A61P 15/00 20060101ALI20240711BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20240711BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20240711BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240711BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240711BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20240711BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240711BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20240711BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240711BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240711BHJP
【ＦＩ】
C07K16/46
C12N1/15 ZNA
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12N15/62 Z
C12N15/63 Z
A61P37/04
A61P35/00
A61P31/00
A61K35/28
A61K35/17
A61K39/395 V
A61K39/395 N
A61K47/68
A61K39/395 L
A61P37/02
A61P11/00
A61P21/00
A61P1/04
A61P11/06
A61P19/02
A61P29/00 101
A61P25/00
A61P15/00
A61P13/12
A61P31/04
A61P3/10
A61P9/10
A61P17/06
A61P9/10 101
A61P17/00
A61P37/06
A61P35/02
A61K45/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024504950
(86)(22)【出願日】2022-07-28
(85)【翻訳文提出日】2024-03-25
(86)【国際出願番号】 US2022074284
(87)【国際公開番号】W WO2023010098
(87)【国際公開日】2023-02-02
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/109028
(32)【優先日】2021-07-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2022/103725
(32)【優先日】2022-07-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520502972
【氏名又は名称】エルピサイエンス（スーチョウ）・バイオファーマ，リミテッド
(71)【出願人】
【識別番号】520502983
【氏名又は名称】エルピサイエンス・バイオファーマ，リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100163784
【弁理士】
【氏名又は名称】武田 健志
(72)【発明者】
【氏名】ルー，ホンタオ
(72)【発明者】
【氏名】スン，ダウェイ
(72)【発明者】
【氏名】ゲン，イェナン
(72)【発明者】
【氏名】ワン，ジン
(72)【発明者】
【氏名】ジャン，ハイシア
(72)【発明者】
【氏名】ウー，ジーハオ
(72)【発明者】
【氏名】ガオ，ルイ
(72)【発明者】
【氏名】ニウ，シャオフェン
(72)【発明者】
【氏名】チウ，ヤンシェン
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C084
4C085
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065BA02
4B065CA43
4B065CA44
4C076AA95
4C076BB13
4C076BB15
4C076BB16
4C076BB22
4C076BB25
4C076CC01
4C076CC07
4C076CC11
4C076CC15
4C076CC16
4C076CC17
4C076CC18
4C076CC21
4C076CC27
4C076CC29
4C076CC32
4C076CC41
4C076EE41
4C076EE59
4C076FF34
4C084AA19
4C084MA01
4C084MA02
4C084MA52
4C084MA55
4C084MA57
4C084MA59
4C084MA65
4C084MA66
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZA01
4C084ZA36
4C084ZA45
4C084ZA59
4C084ZA68
4C084ZA81
4C084ZA89
4C084ZA94
4C084ZA96
4C084ZB07
4C084ZB08
4C084ZB09
4C084ZB15
4C084ZB26
4C084ZB27
4C084ZB32
4C084ZB35
4C084ZC35
4C085AA14
4C085AA33
4C085DD62
4C085EE01
4C085EE03
4C085GG01
4C085GG02
4C085GG03
4C085GG04
4C085GG08
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB37
4C087BB44
4C087CA12
4C087CA20
4C087MA52
4C087MA55
4C087MA57
4C087MA59
4C087MA65
4C087MA66
4C087NA13
4C087NA14
4C087ZA01
4C087ZA36
4C087ZA45
4C087ZA59
4C087ZA68
4C087ZA81
4C087ZA89
4C087ZA94
4C087ZA96
4C087ZB07
4C087ZB08
4C087ZB09
4C087ZB15
4C087ZB26
4C087ZB27
4C087ZB32
4C087ZB35
4C087ZC35
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA41
4H045DA76
4H045EA28
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】
本開示は、ＳＩＰＲ－アルファに対して特異的な多重特異性分子及び１つ又は複数の標的抗原、それをコードする単離されたポリヌクレオチド、それを含む医薬組成物、並びにその使用について提示する。本開示は、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン、Ｆｅドメインを含む活性化受容体結合ドメイン、及び標的抗原結合ドメインを含む多重特異性分子について提示する
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ａ）ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインと、（ｂ）活性化受容体結合ドメインと、
（ｃ）標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞上に発現される標的抗原と結合する、標的抗原結合ドメインと
を含む多重特異性分子であって、
該多重特異性分子が、標的抗原の存在下で、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能を選択的に誘発し、並びに該免疫エフェクター細胞がＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体を同時発現する、
上記多重特異性分子。
【請求項2】
標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞が、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能により除去される、目的とするがん細胞、感染細胞、又は疾患細胞である、請求項１に記載の多重特異性分子。
【請求項3】
標的抗原の非存在下では、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能を最低限度でしか誘発しない、請求項１に記載の多重特異性分子。
【請求項4】
標的抗原の非存在下で多重特異性分子により誘発されるエフェクター機能が、標的抗原の存在下で誘発されるエフェクター機能の１０％以下である、請求項１～３のいずれか一項に記載の多重特異性分子。
【請求項5】
免疫エフェクター細胞が骨髄細胞であり、任意選択で、該免疫エフェクター細胞が、マクロファージ細胞、単球、好中球、好酸球、食細胞、又は好塩基球であり、任意選択で該免疫エフェクター細胞がマクロファージ細胞である、請求項１～４のいずれか一項に記載の多重特異性分子。
【請求項6】
エフェクター機能が、免疫エフェクター細胞による、抗原及びＣＤ４７を同時発現する細胞のファゴサイトーシスを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性分子。
【請求項7】
活性化受容体が、結晶化可能なγ受容体断片（ＦｃγＲ）、ＴＲＥＭ２、レクチン、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＣＤ６８、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＦｃＤＲ１、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＳＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、デクチン１、ＲＡＧＥ（ＳＲ－Ｅ１）、ＬＲＰ１、ＬＲＰ２、ＡＳＧＰ、ＳＲ－ＰＳＯＸ、ＣＸＣＬ１６、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、及びＣＤ１６９受容体又は補体受容体（例えば、ＣＲ１及びＣＲ３等）、ＰＩ３Ｋ、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＢＡＨ．Ｔｙｒｏ３、Ａｘ１、Ｔｒａｆ６、Ｓｙｋ、ＭｙＤ８８、Ｚａｐ７０、ＦｃεＲ１、ＦｃαＲ１、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＤＡＰ１２、ＮＦＡＭ１、ＭＲＣ１、ＩｔｇＢ５、ＭＥＲＴＫ、ＥＬＭＯ、及びＣＤ７９ｂであり、任意選択で、該活性化受容体がＦｃγＲである、請求項１～６のいずれか一項に記載の多重特異性分子。
【請求項8】
活性化受容体結合ドメインがＦｃドメインを含み、任意選択で、該ＦｃドメインがＩｇＧ１又はＩｇＧ４に由来する、請求項１～７のいずれか一項に記載の多重特異性分子。
【請求項9】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用を実質的にブロックする能力を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の多重特異性分子。
【請求項10】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用を完全にブロックする能力を有する、請求項１～９のいずれか一項に記載の多重特異性分子。
【請求項11】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用により媒介されるＳＨＰ－１導入を実質的にブロックする能力を有する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の多重特異性分子。
【請求項12】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用により媒介されるＳＨＰ－１導入を完全にブロックする能力を有する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の多重特異性分子。
【請求項13】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能を誘発する最低限度の固有の活性を有する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の多重特異性分子。
【請求項14】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン及び活性化受容体結合ドメインが、同一の免疫エフェクター細胞上で同時発現されたＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体の両方と多重特異性分子が結合するのを可能にするために近接した位置関係にある、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多重特異性分子。
【請求項15】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン及び／又は標的抗原結合ドメインが、抗体ドメイン又は抗体模倣ドメインを含み、任意選択で該抗体模倣ドメインが、フィブロネクチンドメイン、プロテインＡのＺドメイン（アフィボディ（Ａｆｆｉｂｏｄｙ））、ガンマＢ結晶性ドメイン、ユビキチンドメイン、シスタチンドメイン、Ｓａｃ７ｄドメイン、三重へリックスコイルドコイルドメイン、リポカリンドメイン、膜受容体のＡドメイン、アンキリン反復モチーフ、ＦｙｎのＳＨ３ドメイン、プロテアーゼ阻害剤のクニッツドメイン、フィブロネクチンのＩＩＩ型ドメイン（ミニボディ）、炭水化物結合モジュール３２－２を含む、請求項１～１４のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項16】
抗体ドメインが、Ｆａｂ、ＶＨＨ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖダイマー（２価のダイアボディ）、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、テトラボディ、ドメイン抗体、又は２価ドメイン抗体を含む、請求項１５に記載の多重特異性分子。
【請求項17】
標的抗原結合抗体ドメイン、ＳＩＲＰ－ａ結合抗体ドメイン、及びＦｃドメインを含む多重特異性抗体を含む、請求項１～１６のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項18】
標的抗原結合抗体ドメインがＦｃドメインのＮ末端にリンクしている、請求項１７に記載の多重特異性分子。
【請求項19】
標的抗原結合抗体ドメインがＦａｂドメインを含み、任意選択で、該ＦａｂドメインがＦｃドメインのＮ末端のうちの１つとリンクした重鎖を含む、請求項１８に記載の多重特異性分子。
【請求項20】
多重特異性分子が２つの標的抗原結合抗体ドメインを含み、そのそれぞれがＦａｂドメインを含み、任意選択で、該Ｆａｂドメインのそれぞれが、Ｆｃドメインの各Ｎ末端とそれぞれリンクした重鎖を含む、請求項１８に記載の多重特異性分子。
【請求項21】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが、Ｆｃドメイン又は標的抗原結合抗体ドメインにリンクしている、請求項１８～２０のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項22】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが、ＦｃドメインのＣ末端にリンクしている、請求項２１に記載の多重特異性分子。
【請求項23】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインがＦｃドメインのＮ末端にリンクしているが、但し、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン及び標的抗原結合抗体ドメインが、Ｆｃドメインの同一Ｎ末端とリンクしていない、請求項２１に記載の多重特異性分子。
【請求項24】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが標的抗原結合Ｆａｂドメインの軽鎖のＣ末端にリンクしている、請求項２１に記載の多重特異性分子。
【請求項25】
ＳＩＲＰ－アルファ結合抗体ドメインがＦｃドメインのＮ末端にリンクしている、請求項１７に記載の多重特異性分子。
【請求項26】
ＳＩＲＰ－アルファ結合抗体ドメインがＦａｂドメインを含み、任意選択で、該Ｆａｂドメインが、ＦｃドメインのＮ末端のうちの１つとリンクした重鎖を含む、請求項２５に記載の多重特異性分子。
【請求項27】
前記抗体が２つのＳＩＲＰ－アルファ結合抗体ドメインを含み、そのそれぞれがＦａｂドメインを含み、任意選択で、該Ｆａｂドメインのそれぞれが、Ｆｃドメインの各Ｎ末端とそれぞれリンクした重鎖を含む、請求項２５に記載の多重特異性分子。
【請求項28】
標的抗原結合ドメインが、Ｆｃドメイン又はＳＩＲＰ－アルファ結合抗体ドメインにリンクしている、請求項２５～２７のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項29】
標的抗原結合ドメインがＦｃドメインのＮ末端にリンクしているが、但し標的抗原結合ドメイン及びＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、Ｆｃドメインの同一Ｎ末端とリンクしていない、請求項２８に記載の多重特異性分子。
【請求項30】
標的抗原結合ドメインが、ＳＩＲＰ－アルファ結合Ｆａｂドメインの軽鎖のＣ末端にリンクしている、請求項２８に記載の多重特異性分子。
【請求項31】
標的抗原が腫瘍表面抗原を含む、請求項１～３０のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項32】
腫瘍表面抗原が、ＰＤ－Ｌ１、クローディン１８．２、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＲＯＲ１、ＰＴＨＲ２、Ｂ７－Ｈ１（ＰＤ－Ｌ１）、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ７、Ｔｒｏｐ－２、ＧＰＣ－３、ＥＰＣＡＭ、ＤＬＬ－３、ネクチン－４、クローディン６、Ｍｕｃ－１、ＰＳＭＡ、ＧＤ３、ＦＡＰ、ＣＥＡ、又はＥｐｈＡ２である、請求項３１に記載の多重特異性分子。
【請求項33】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが、ａ）Ｘ１ＹＹＭＨの配列（配列番号１６１）を含むＨＣＤＲ１、ＲＩＤＰＥＤＸ２ＥＸ３ＫＹＡＰＫＦＱＧの配列（配列番号１６２）を含むＨＣＤＲ２、及びＧＸ１５Ｘ４Ｘ５Ｙの配列（配列番号１６３）を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹの配列（配列番号２６）を含むＬＣＤＲ１、ＳＴＳＮＬＡＳの配列（配列番号２７）を含むＬＣＤＲ２、及びＸ６ＱＷＳＳＹＰＹＴの配列（配列番号１６４）を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｂ）ＴＹＧＭＳの配列（配列番号３５）を含むＨＣＤＲ１、ＷＩＮＴＹＳＧＶＸ７ＴＸ８ＡＤＤＦＫＧの配列（配列番号１６５）を含むＨＣＤＲ２、及びＤＰＨＸ９ＹＧＸ１０ＳＰＡＷＦＸ１１Ｙの配列（配列番号１６６）を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＸ１２ＡＳＱＸ１３ＶＧＩＸ１４ＶＡの配列（配列番号１８８）を含むＬＣＤＲ１、ＳＡＳＮＲＹＴの配列（配列番号３９）を含むＬＣＤＲ２、及びＱＱＹＳＸ１６ＹＰＸ１７Ｔの配列（配列番号１８９）を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｃ）ＥＹＶＬＳの配列（配列番号４１）を含むＨＣＤＲ１、ＥＩＹＰＧＴＩＴＴＹＹＮＥＫＦＫＧの配列（配列番号４２）を含むＨＣＤＲ２、及びＦＹＤＹＤＧＧＷＦＡＹの配列（配列番号４３）を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＳＡＳＳＳＶＳＳＳＤＬＨの配列（配列番号４４）を含むＬＣＤＲ１、ＧＴＳＮＬＡＳの配列（配列番号４５）を含むＬＣＤＲ２、及びＱＱＷＳＧＹＰＷＴの配列（配列番号４６）を含むＬＣＤＲ３
を含み、式中、Ｘ１がＡ又はＤであり、Ｘ２がＧ又はＡであり、Ｘ３がＴ又はＳであり、Ｘ４がＬ又はＹであり、Ｘ５がＥ又はＡであり、Ｘ６がＹ又はＨであり、Ｘ７がＳ又はＰであり、Ｘ８がＹ又はＣであり、Ｘ９がＹ又はＳであり、Ｘ１０がＮ又はＳであり、Ｘ１１がＰ又はＶであり、Ｘ１２がＥ又はＫであり、Ｘ１３がＮ又はＩであり、Ｘ１４がＳ又はＡであり、Ｘ１５がＳであるか又は存在せず、Ｘ１６がＳ又はＡであり、Ｘ１７がＦ又はＬである、
請求項１～３２のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項34】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが、ａ）配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４若しくは配列番号１９８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号２５の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｂ）配列番号２９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号３１の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号３４の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｃ）配列番号３５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３６の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号３７の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号３８の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号４０の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｄ）配列番号４７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号４９の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号５０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５１の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号５２の配列を含むＬＣＤＲ３
を含む、請求項１～３３のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項35】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが、Ｃ２５、Ｃ１５、Ｃ４２、Ｃ５９、及びＣ７３からなる群から選択される抗ＳＩＲＰ－アルファ抗体と同一のＨＣＤＲ及びＬＣＤＲを含み、ａ）Ｃ２５が、配列番号１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｂ）Ｃ１５が、配列番号１１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｃ）Ｃ４２が、配列番号１３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｄ）Ｃ５９が、配列番号１５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含み、並びに
ｅ）Ｃ７３が、配列番号１７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１８の配列を含む軽鎖可変領域を含む、
請求項１～３４のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項36】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ若しくは複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、ｉ）ＨＦＲ１が、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＸ２０ＳＧＦＮＩＫ（配列番号１９０）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｊ）ＨＦＲ２が、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｋ）ＨＦＲ３配列が、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＸ２１ＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号１９２）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｌ）ＨＦＲ４が、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｍ）ＬＦＲ１が、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｎ）ＬＦＲ２が、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｏ）ＬＦＲ３が、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＸ２２ＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号１９６）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｐ）ＬＦＲ４が、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
式中、Ｘ２０がＡ又はＶであり、Ｘ２１がＮ又はＤであり、Ｘ２２がＹ又はＦである、
請求項１～３５のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項37】
ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが、ａ）配列番号１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｂ）配列番号３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｃ）配列番号５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｄ）配列番号７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号８の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｅ）配列番号９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１０の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｆ）配列番号１１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｇ）配列番号１３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｈ）配列番号１５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｉ）配列番号１７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１８の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｊ）配列番号１５９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６０の配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１～３６のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項38】
標的抗原結合ドメインが、クローディン１８．２結合ドメインを含む、請求項１～３７のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項39】
クローディン１８．２結合ドメインが、ａ）配列番号７７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７９の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号８０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８１の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号８２若しくは配列番号２２５の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｂ）配列番号８３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８４の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号８５の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号８６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８７の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号８８の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｃ）配列番号８９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号９１の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号９２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９３の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号９４の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｄ）配列番号９５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９６の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号９７の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号９８の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９９の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１００の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｅ）配列番号１０１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０２の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１０３の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号１０４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０５の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１０６の配列を含むＬＣＤＲ３
を含む、請求項１～３８のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項40】
クローディン１８．２結合ドメインが、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）、ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２、Ｃ１０、Ｃ２９、及びＣ３０からなる群から選択される抗クローディン１８．２抗体と同一のＨＣＤＲ及びＬＣＤＲを含み、ａ）ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１が、配列番号６５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６６の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｂ）ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）が、配列番号６５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２２４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｃ）ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２が、配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７０の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｄ）Ｃ１０が、配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｅ）Ｃ２９が、配列番号７３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、並びに
ｆ）Ｃ３０が、配列番号７５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７６の配列を含む軽鎖可変領域を含む、
請求項１～３９のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項41】
クローディン１８．２結合ドメインが、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、ａ）ＨＦＲ１が、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）及びＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号１６８）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２が、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＸ１８（配列番号１６９）及びＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号１７０）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列が、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＸ２３（配列番号１７１）及びＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１７２）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４が、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１が、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）及びＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣ（配列番号１７５）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２が、ＷＹＱＱＫＰＧＸ２６Ｘ２７ＰＫＸ１９ＬＩＹ（配列番号１７６）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３が、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＸ２４ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７８）及びＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＨＣ（配列番号１７９）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、並びに
ｈ）ＬＦＲ４が、ＦＧＸ２５ＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８０）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
式中、Ｘ１８がＳ又はＡであり、Ｘ１９がＬ又はＡであり、Ｘ２３がＴ又はＫであり、Ｘ２４がＹ又はＦであり、Ｘ２５がＱ又はＧであり、Ｘ２６がＱ又はＫであり、Ｘ２７がＰ又はＡである、
請求項１～４０のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項42】
クローディン１８．２結合ドメインが、ａ）配列番号６５若しくは６８の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６６若しくは６７若しくは２２４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｂ）配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７０の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｃ）配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｄ）配列番号７３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｅ）配列番号７５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７６の配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１～４１のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項43】
標的抗原結合ドメインがＰＤ－Ｌ１結合ドメインを含む、請求項１～４２のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項44】
ＰＤ－Ｌ１結合ドメインが、ａ）配列番号１１９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１２１の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｂ）配列番号１２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１２４の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｃ）配列番号１２５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２６の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１２７の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｄ）配列番号１２８の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２９の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１３０の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｅ）配列番号１３１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１３３の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｆ）配列番号１３４の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３５の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１３６の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｇ）配列番号１３７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１３９の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｈ）配列番号１４０の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４１の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１４２の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｉ）配列番号１４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４４の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１４５の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｊ）配列番号１４６の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４７の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１４８の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｋ）配列番号１４９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１５１の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
配列番号１５２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５３の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１５４の配列を含むＨＣＤＲ３
を含む、請求項１～４３のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項45】
ＰＤ－Ｌ１結合ドメインが、Ｃ７１、Ｃ７１ｖ３８、Ｃ２３９、Ｃ４９２、Ｃ５７０、５７０ｈ３、Ｃ４４６、Ｃ２８１１、Ｃ１７７８、Ｃ１７９３、Ｃ２８５５、Ｃ２７１３、及びＣ２７１９からなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体と同一のＨＣＤＲを含み、ａ）Ｃ７１が配列番号１０７の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｂ）Ｃ７１ｖ３８が配列番号１０８の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｃ）Ｃ２３９が配列番号１０９の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｄ）Ｃ４９２が配列番号１１０の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｅ）Ｃ５７０が配列番号１１１の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｆ）５７０ｈ３が配列番号２２３の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｇ）Ｃ４４６が配列番号１１２の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｈ）Ｃ２８１１が配列番号１１３の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｉ）Ｃ１７７８が配列番号１１４の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｊ）Ｃ１７９３が配列番号１１５の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｋ）Ｃ２８５５が配列番号１１６の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｌ）Ｃ２７１３が配列番号１１７の配列を含む重鎖可変領域を含み、及び
ｍ）Ｃ２７１９が配列番号１１８の配列を含む重鎖可変領域を含む、
請求項１～４４のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項46】
ＰＤ－Ｌ１結合ドメインが、配列番号１０７～１１８、及び２２３からなる群から選択される配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～４５のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項47】
ａ）ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインが、ヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合性をなおも保持しつつ、１つ若しくは複数のアミノ酸残基の置換若しくは改変を更に含み、及び／又はｂ）クローディン１８．２結合ドメインが、クローディン１８．２に対する特異的結合性をなおも保持しつつ、１つ若しくは複数のアミノ酸残基の置換若しくは改変を更に含み、及び／又は
ｃ）ＰＤ－Ｌ１結合ドメインが、ＰＤ－Ｌ１に対する特異的結合性をなおも保持しつつ、１つ若しくは複数のアミノ酸残基の置換若しくは改変を更に含む、
請求項３０～３９のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項48】
前記置換又は改変の少なくとも１つが、重鎖可変領域若しくは軽鎖可変領域のＣＤＲ配列の１つ若しくは複数の中、及び／又は非ＣＤＲ配列の１つ若しくは複数の中にある、請求項１～４７のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項49】
ヒト化されている、請求項１～４８のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項50】
１つ又は複数のコンジュゲート部分にリンクしている、請求項１～４９のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項51】
コンジュゲート部分が、クリアランス修飾剤、化学療法剤、毒素、放射性同位体、ランタニド、発光標識、蛍光標識、酵素－基質標識、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリン結合剤、精製部分、又はその他の抗がん剤を含む、請求項１～５０のいずれかに記載の多重特異性分子。
【請求項52】
請求項１～５１のいずれか一項に記載の多重特異性分子、及び１つ又は複数の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項53】
請求項１～５２のいずれか一項に記載の多重特異性分子をコードする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項54】
請求項５３に記載の単離されたポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項55】
請求項５４に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項56】
請求項１～５１のいずれか一項に記載の多重特異性分子、及び／又は請求項５２に記載の医薬組成物、及び第２の治療剤を含むキット。
【請求項57】
請求項１～５１のいずれか一項に記載の多重特異性分子を発現させる方法であって、請求項５４に記載のベクターが発現される条件下で、請求項５５に記載の宿主細胞を培養するステップを含む、上記方法。
【請求項58】
対象内で標的細胞のファゴサイトーシスを誘発することから利益を享受し得る疾患、障害、又は状態を処置する方法であって、対象に対して、請求項１～５１のいずれか一項に記載の多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む、上記方法。
【請求項59】
対象内の標的抗原に関連する疾患、障害、又は状態を処置する方法であって、対象に対して、請求項１～５１のいずれか一項に記載の多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む、上記方法。
【請求項60】
対象内のＳＩＲＰαに関連する疾患、障害、又は状態を処置する方法であって、対象に対して、請求項１～５１のいずれか一項に記載の多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む、上記方法。
【請求項61】
対象内のＣＤ４７に関連する疾患、障害、又は状態を処置する方法であって、対象に対して、請求項１～５１のいずれか一項に記載の多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む、上記方法。
【請求項62】
対象がヒトである、請求項５８～６１のいずれかに記載の方法。
【請求項63】
対象が、免疫に関連する疾患又は障害、腫瘍及びがん、自己免疫疾患、並びに感染性疾患からなる群から選択される疾患、障害、又は状態を有すると診断を下されたか、或いはそのリスクに晒されている、請求項６２に記載の方法。
【請求項64】
免疫に関連する疾患又は障害が、全身性エリテマトーデス、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、脈管炎、重症筋無力症、突発性肺線維症、クローン病、喘息、リウマチ性関節炎、移植片対宿主病、脊椎関節障害（例えば、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患と関連する孤発性急性腸炎性関節炎、反応性関節炎、ベーチェット症候群、未分化脊椎関節症、前部ブドウ膜炎、及び若年性特発性関節炎）、多発性硬化症、子宮内膜症、糸球体腎炎、敗血症、糖尿病、急性冠状動脈症候群、虚血再潅流、乾癬、進行性全身性硬化症、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、強皮症、又は炎症性自己免疫性筋炎からなる群から選択される、請求項６３に記載の方法。
【請求項65】
腫瘍及びがんが、任意選択で、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、腎細胞がん、結腸直腸がん、卵巣がん、乳がん、膵がん、胃癌、膀胱がん、食道がん、中皮腫、黒色腫、頭頸部がん、甲状腺がん、肉腫、前立腺がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、胸腺癌、白血病、リンパ腫、ミエローマ、菌状息肉腫、メルケル細胞がん、及びその他の血液悪性腫瘍、例えば古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性及び陰性ＰＴＬＤ、及びＥＢＶ関連のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫等、鼻咽頭癌、及びＨＨＶ８関連の原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、例えば原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫等、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、胆嚢がん、胃がん、肺がん、気管支がん、骨がん、肝臓及び胆管のがん、膵がん、乳がん、肝がん、卵巣がん、睾丸がん、腎がん、腎盂及び尿管がん、唾液腺がん、小腸がん、尿道がん、膀胱がん、頭頸部がん、脊椎がん、脳がん、子宮頸部がん、子宮がん、子宮内膜がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、食道がん、胃腸がん、皮膚がん、前立腺がん、脳下垂体がん、膣がん、甲状腺がん、咽頭がん、神経膠芽腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、肉腫、テラトーマ、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、Ｔ又はＢ細胞リンパ腫、消化管間質腫瘍、軟部組織腫瘍、肝細胞癌、及び腺癌、又はそれらの転移からなる群から選択される固形腫瘍又は血液悪性腫瘍である、請求項６３に記載の方法。
【請求項66】
前記投与が、口腔、鼻腔、静脈内、皮下、舌下、又は筋肉内投与を経由する、請求項５８～６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項67】
第２の治療剤の治療有効量を投与するステップを更に含む、請求項５８～６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項68】
第２の治療剤が、化学療法剤、抗がん薬、放射線療法剤、免疫療法剤、抗血管新生剤、標的療法剤、細胞療法剤、遺伝子療法剤、ホルモン療法剤、抗ウイルス剤、抗生物質、鎮痛薬、酸化防止剤、金属キレート剤、及びサイトカインからなる群から選択される、請求項６７に記載の方法。
【請求項69】
対象内で標的細胞のファゴサイトーシスを誘発することから利益を享受し得る疾患、障害、又は状態を処置、予防、又は緩和するための医薬の製造における、請求項１～５１のいずれか一項に記載の多重特異性分子、及び／又は請求項５２に記載の医薬組成物の使用。
【請求項70】
対象内で標的細胞のファゴサイトーシスを誘発する方法であって、対象に対して、標的細胞のファゴサイトーシスを誘発するのに有効な用量で、請求項１～５１のいずれか一項に記載の多重特異性分子及び／又は請求項５２に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、上記方法。
【請求項71】
対象がヒトである、請求項７０に記載の方法。
【請求項72】
対象が、免疫に関連する疾患又は障害、腫瘍及びがん、自己免疫疾患、並びに感染性疾患からなる群から選択される疾患、障害、又は状態を有すると診断を下されたか、又はそのリスクに晒されている、請求項７０又は７１に記載の方法。
【請求項73】
標的細胞のファゴサイトーシスをｉｎ ｖｉｔｒｏで誘発する方法であって、標的細胞を、請求項１～５１のいずれか一項に記載の多重特異性分子、及び／又は請求項５２に記載の医薬組成物の存在下で、ＳＩＲＰα陽性貪食性細胞サンプルと接触させ、これによりＳＩＲＰα陽性貪食性細胞による標的細胞のファゴサイトーシスを誘発するステップを含む、上記方法。
【請求項74】
標的細胞が、標的抗原を発現する細胞である、請求項７３に記載の方法。
【請求項75】
ファゴサイトーシスによる、標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞の除去を誘発する方法であって、標的細胞を、貪食性免疫細胞の存在下で、請求項１～５１のいずれかに記載の多重特異性分子と接触させるステップを含む、上記方法。
【請求項76】
対象内で標的抗原を発現しない細胞よりも、標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞に対して貪食効果を選択的に誘発する方法であって、対象に対して、請求項１～５１のいずれか一項に記載の多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む、上記方法。
【請求項77】
腫瘍微小環境内のＭ１マクロファージのレベルを増加させることを必要とする対象において、それを増加させる方法であって、対象に対して、請求項１～５１のいずれか一項に記載の多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む、上記方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
[0001]本開示は、ＳＩＲＰ－α及び腫瘍関連抗原に対して特異的な新規多重特異性分子に一般的に関する。
【背景技術】
【0002】
[0002]シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）は、骨髄細胞及び樹状細胞上で主に発現される阻害受容体である。ＳＩＲＰαは、免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）細胞質ドメインを含む。骨髄細胞上でのＳＩＲＰαの免疫調節活性は、そのリガンドＣＤ４７（ＳＩＲＰαのＩＴＩＭ細胞質ドメインのチロシンリン酸化を誘発し、後続するＳＨ２含有チロシンホスファターゼ（ＳＨＰ－１／２）の導入を伴う）と結合することにより活性化される。ＳＨＰ－１／２は、次にタンパク質の脱リン酸化を経由して阻害シグナル伝達事象に関与し、最終的にマクロファージにおけるファゴサイトーシスの阻害を引き起こす（Ｂａｒｃｌａｙ ＡＮ，Ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｒｇ ＴＫ．Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｉｇｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｌｐｈａ （ＳＩＲＰα） ａｎｄ ＣＤ４７：ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４；３２：２５－５０；Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ ＰＡ，ｅｔ ａｌ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ＣＤ４７ ａｓ ａ Ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｓｅｌｆ ｏｎ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０００；２８８（５４７３）：２０５１－２０５４）。したがって、ＳＩＲＰαにＣＤ４７が結合すると、「私を食べないで（ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ）」シグナルの送達をもたらし、ファゴサイトーシスを抑制する。
【0003】
[0003]ＣＤ４７は、正常細胞上で普遍的に発現しており、また多くのがん細胞上で上方制御される。高度のＣＤ４７発現はがん細胞により使用される免疫系回避のための機構であり、臨床転帰の不良と相関関係を有する（Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ ＳＢ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ＣＤ４７－ｓｉｇｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ－α（ＳＩＲＰα） ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｉｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１２；１０９（１７）：６６６２－６６６７；Ｚｈａｏ ＸＷ，ｅｔ ａｌ．ＣＤ４７－ｓｉｇｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ－α（ＳＩＲＰα）ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｆｏｒｍ ａ ｂａｒｒｉｅｒ ｆｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１１；１０８（４５）：１８３４２－１８３４７；Ｍａｊｅｔｉ Ｒ，ｅｔ ａｌ．ＣＤ４７ ｉｓ ａｎ ａｄｖｅｒｓｅ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔａｒｇｅｔ ｏｎ ｈｕｍａｎ ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ．２００９；１３８（２）：２８６－２９９）。ＳＩＲＰα及び第２抗原（例えば、標的抗原）に対して特異的な二重特異性マクロファージ増強性（ＢｉＭＥ）抗体が、がん細胞上でのファゴサイトーシス特性の増強を実現するように設計されており、例えば本明細書において参照により組み込まれる国際公開第２０１５１３８６００Ａ２号を参照されたい。更に、ＳＩＲＰα抗体の異なる特性及びフォーマットを用いて構築されたより多くのＢｉＭＥ分子について、より深く研究及び比較する必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
[0004]したがって、ＳＩＲＰαに対して特異的であり、副作用が抑えられ且つ安全性の高い、改善されたＢｉＭＥ抗体又は多重特異性分子を開発する必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【0005】
[0005]本開示の全体を通じて、冠詞「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」が、冠詞の文法上の目的語の１つ又は２以上（すなわち、少なくとも１つ）を指すのに、本明細書において使用される。例として、「ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ（ある抗体）」とは、１つの抗体又は２以上の抗体を意味する。
【0006】
[0006]本開示は、ＳＩＲＰ－α及び腫瘍関連抗原に対して特異的な新規多重特異性分子、そのアミノ酸及びヌクレオチド配列、及びその使用について提示する。
[0007]１つの態様では、本開示は、
（ａ）ＳＩＲＰアルファ結合ドメインと、
（ｂ）活性化受容体結合ドメインと、
（ｃ）標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞上で発現される標的抗原と結合する標的抗原結合ドメインと
を含む多重特異性分子であって、前記多重特異性分子が、標的抗原の存在下で、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能を選択的に誘発し、並びに免疫エフェクター細胞がＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体を同時発現する多重特異性分子について提示する。
[0007]１つの態様では、本開示は、
（ａ）ＳＩＲＰアルファ結合ドメインと、
（ｂ）活性化受容体結合ドメインと、
（ｃ）標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞上で発現される標的抗原と結合する標的抗原結合ドメインと
を含む多重特異性分子であって、前記多重特異性分子が、標的抗原の存在下で、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能を選択的に誘発し、並びに免疫エフェクター細胞がＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体を同時発現する多重特異性分子について提示する。
【0007】
[0008]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、本明細書に提示されるＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン、本明細書に提示されるＦｃドメインを含む活性化受容体結合ドメイン、及び本明細書に提示される標的抗原結合ドメインを含む。
【0008】
[0009]これらの実施形態のいずれかにおいて、標的結合ドメインはクローディン１８．２結合ドメイン又はＰＤ－Ｌ１結合ドメインである。
[00010]ある特定の実施形態では、標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞は、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能により除去される、目的とするがん細胞、感染細胞、又は疾患細胞である。
[00010]ある特定の実施形態では、標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞は、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能により除去される、目的とするがん細胞、感染細胞、又は疾患細胞である。
【0009】
[00011]ある特定の実施形態では、多重特異性分子は、標的抗原の非存在下では、最低限度の免疫エフェクター細胞のエフェクター機能しか誘発しない。
[00012]ある特定の実施形態では、標的抗原の非存在下で多重特異性分子により誘発されるエフェクター機能は、標的抗原の存在下で誘発されるエフェクター機能の１０％以下である。
[00012]ある特定の実施形態では、標的抗原の非存在下で多重特異性分子により誘発されるエフェクター機能は、標的抗原の存在下で誘発されるエフェクター機能の１０％以下である。
【0010】
[00013]ある特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞は骨髄細胞であり、任意選択で、免疫エフェクター細胞は、マクロファージ細胞、単球、好中球、好酸球、食細胞、又は好塩基球であり、任意選択で免疫エフェクター細胞はマクロファージ細胞である。
【0011】
[00014]ある特定の実施形態では、エフェクター機能は、抗原及びＣＤ４７を同時発現する細胞の免疫エフェクター細胞によるファゴサイトーシスを含む。
[00015]ある特定の実施形態では、活性化受容体は、結晶化可能なγ受容体断片（ＦｃγＲ）、ＴＲＥＭ２、レクチン、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＣＤ６８、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＦｃＤＲ１、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＳＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、デクチン１、ＲＡＧＥ （ＳＲ－Ｅ１）、ＬＲＰ１、ＬＲＰ２、ＡＳＧＰ、ＳＲ－ＰＳＯＸ、ＣＸＣＬ１６、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、及びＣＤ１６９受容体又は補体受容体（例えば、ＣＲ１及びＣＲ３等）、ＰＩ３Ｋ、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＢＡＨ．Ｔｙｒｏ３、Ａｘ１、Ｔｒａｆ６、Ｓｙｋ、ＭｙＤ８８、Ｚａｐ７０、ＦｃεＲ１、ＦｃαＲ１、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＤＡＰ１２、ＮＦＡＭ１、ＭＲＣ１、ＩｔｇＢ５、ＭＥＲＴＫ、ＥＬＭＯ、及びＣＤ７９ｂであり、任意選択で、活性化受容体はＦｃγＲである。
[00015]ある特定の実施形態では、活性化受容体は、結晶化可能なγ受容体断片（ＦｃγＲ）、ＴＲＥＭ２、レクチン、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＣＤ６８、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＦｃＤＲ１、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＳＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、デクチン１、ＲＡＧＥ （ＳＲ－Ｅ１）、ＬＲＰ１、ＬＲＰ２、ＡＳＧＰ、ＳＲ－ＰＳＯＸ、ＣＸＣＬ１６、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、及びＣＤ１６９受容体又は補体受容体（例えば、ＣＲ１及びＣＲ３等）、ＰＩ３Ｋ、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＢＡＨ．Ｔｙｒｏ３、Ａｘ１、Ｔｒａｆ６、Ｓｙｋ、ＭｙＤ８８、Ｚａｐ７０、ＦｃεＲ１、ＦｃαＲ１、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＤＡＰ１２、ＮＦＡＭ１、ＭＲＣ１、ＩｔｇＢ５、ＭＥＲＴＫ、ＥＬＭＯ、及びＣＤ７９ｂであり、任意選択で、活性化受容体はＦｃγＲである。
【0012】
[00016]ある特定の実施形態では、活性化受容体結合ドメインはＦｃドメインを含み、任意選択でＦｃドメインはＩｇＧ１又はＩｇＧ４に由来する。
[00017]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用を実質的にブロックする能力を有する。
[00017]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用を実質的にブロックする能力を有する。
【0013】
[00018]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用を完全にブロックする能力を有する。
[00019]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用により媒介されるＳＨＰ－１導入を実質的にブロックする能力を有する。
[00019]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用により媒介されるＳＨＰ－１導入を実質的にブロックする能力を有する。
【0014】
[00020]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用により媒介されるＳＨＰ－１導入を完全にブロックする能力を有する。
【0015】
[00021]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能を誘発する最低限度の固有の活性を有する。
[00022]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン及び活性化受容体結合ドメインは、多重特異性分子が同一の免疫エフェクター細胞上で同時発現されたＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体の両方と結合するのを可能にするために近接した位置関係にある。
[00022]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン及び活性化受容体結合ドメインは、多重特異性分子が同一の免疫エフェクター細胞上で同時発現されたＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体の両方と結合するのを可能にするために近接した位置関係にある。
【0016】
[00023]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン及び／又は標的抗原結合ドメインは、抗体ドメイン又は抗体模倣ドメインを含み、任意選択で抗体模倣ドメインは、フィブロネクチンドメイン、プロテインＡのＺドメイン（アフィボディ（Ａｆｆｉｂｏｄｙ））、ガンマＢ結晶性ドメイン、ユビキチンドメイン、シスタチンドメイン、Ｓａｃ７ｄドメイン、三重ヘリックスコイルドコイルドメイン、リポカリンドメイン、膜受容体のＡドメイン、アンキリン反復モチーフ、ＦｙｎのＳＨ３ドメイン、プロテアーゼ阻害剤のクニッツドメイン、フィブロネクチンのＩＩＩ型ドメイン（ミニボディ）、炭水化物結合モジュール３２－２を含む。
【0017】
[00024]ある特定の実施形態では、抗体ドメインは、Ｆａｂ、ＶＨＨ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖダイマー（２価のダイアボディ）、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、テトラボディ、ドメイン抗体、又は２価のドメイン抗体を含む。
【0018】
[00025]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、標的抗原結合抗体ドメイン、ＳＩＲＰ－ａ結合抗体ドメイン、及びＦｃドメインを含む多重特異性抗体を含む。
【0019】
[00026]ある特定の実施形態では、標的抗原結合抗体ドメインはＦｃドメインのＮ末端にリンクしている。
[00027]ある特定の実施形態では、標的抗原結合抗体ドメインはＦａｂドメインを含み、任意選択で、ＦａｂドメインはＦｃドメインのＮ末端のうちの１つとリンクした重鎖を含む。
[00027]ある特定の実施形態では、標的抗原結合抗体ドメインはＦａｂドメインを含み、任意選択で、ＦａｂドメインはＦｃドメインのＮ末端のうちの１つとリンクした重鎖を含む。
【0020】
[00028]ある特定の実施形態では、多重特異性分子は２つの標的抗原結合抗体ドメインを含み、そのそれぞれはＦａｂドメインを含み、任意選択で、Ｆａｂドメインのそれぞれは、Ｆｃドメインの各Ｎ末端とそれぞれリンクした重鎖を含む。
【0021】
[00029]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、Ｆｃドメイン又は標的抗原結合抗体ドメインにリンクしている。
[00030]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ＦｃドメインのＣ末端にリンクしている。
[00030]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ＦｃドメインのＣ末端にリンクしている。
【0022】
[00031]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインはＦｃドメインのＮ末端にリンクしているが、但しＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン及び標的抗原結合抗体ドメインは、Ｆｃドメインの同一のＮ末端とリンクしていない。
【0023】
[00032]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは標的抗原結合Ｆａｂドメインの軽鎖のＣ末端にリンクしている。
[00033]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合抗体ドメインはＦｃドメインのＮ末端にリンクしている。
[00033]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合抗体ドメインはＦｃドメインのＮ末端にリンクしている。
【0024】
[00034]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合抗体ドメインはＦａｂドメインを含み、任意選択で、Ｆａｂドメインは、ＦｃドメインのＮ末端のうちの１つとリンクした重鎖を含む。
【0025】
[00035]ある特定の実施形態では、抗体は２つのＳＩＲＰ－アルファ結合抗体ドメインを含み、そのそれぞれはＦａｂドメインを含み、任意選択で、Ｆａｂドメインのそれぞれは、Ｆｃドメインの各Ｎ末端とそれぞれリンクした重鎖を含む。
【0026】
[00036]ある特定の実施形態では、標的抗原結合ドメインはＦｃドメイン又はＳＩＲＰ－アルファ結合抗体ドメインにリンクしている。
[00037]ある特定の実施形態では、標的抗原結合ドメインはＦｃドメインのＮ末端にリンクしているが、但し、標的抗原結合ドメイン及びＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、Ｆｃドメインの同一のＮ末端とリンクしていない。
[00037]ある特定の実施形態では、標的抗原結合ドメインはＦｃドメインのＮ末端にリンクしているが、但し、標的抗原結合ドメイン及びＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、Ｆｃドメインの同一のＮ末端とリンクしていない。
【0027】
[00038]ある特定の実施形態では、標的抗原結合ドメインは、ＳＩＲＰ－アルファ結合Ｆａｂドメインの軽鎖のＣ末端にリンクしている。
[00039]ある特定の実施形態では、標的抗原は腫瘍表面抗原を含む。
[00039]ある特定の実施形態では、標的抗原は腫瘍表面抗原を含む。
【0028】
[00040]ある特定の実施形態では、腫瘍表面抗原は、ＰＤ－Ｌ１、クローディン１８．２、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＲＯＲ１、ＰＴＨＲ２、Ｂ７－Ｈ１（ＰＤ－Ｌ１）、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ７、Ｔｒｏｐ－２、ＧＰＣ－３、ＥＰＣＡＭ、ＤＬＬ－３、ネクチン－４、クローディン６、Ｍｕｃ－１、ＰＳＭＡ、ＧＤ３、ＦＡＰ、ＣＥＡ、又はＥｐｈＡ２である。
【0029】
[00041]本明細書に提示される多重特異性分子は、任意の適するフォーマットであり得る。例証的事例は以下のように提示される。ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む標的抗原結合抗体を含み、軽鎖のそれぞれのＣ末端は、抗ＳＩＲＰα ｓｃＦｖ（すなわち、ＳＩＲＰα結合ドメイン）に融合する。標的抗原結合抗体は標的抗原結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図２Ａに示す。
【0030】
[00042]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む標的抗原結合抗体を含み、重鎖のそれぞれのＣ末端は、抗ＳＩＲＰα ｓｃＦｖ（すなわち、ＳＩＲＰα結合ドメイン）に融合する。標的抗原結合抗体は標的抗原結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図２Ｂに示す。
【0031】
[00043]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ＳＩＲＰα抗体を含み、軽鎖のそれぞれのＣ末端は、標的抗原に結合する能力を有するｓｃＦｖ（すなわち、標的抗原結合ドメイン）に融合する。抗ＳＩＲＰα抗体はＳＩＲＰα結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図２Ｃに示す。
【0032】
[00044]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ＳＩＲＰα抗体を含み、重鎖のそれぞれのＣ末端は、標的抗原に結合する能力を有するｓｃＦｖ（すなわち、標的抗原結合ドメイン）に融合する。抗ＳＩＲＰα抗体はＳＩＲＰα結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図２Ｄに示す。
【0033】
[00045]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ＳＩＲＰα抗体を含み、軽鎖のそれぞれのＣ末端は、標的抗原に結合する能力を有する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）（すなわち、標的抗原結合ドメイン）に融合する。抗ＳＩＲＰα抗体はＳＩＲＰα結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図６Ａに示す。
【0034】
[00046]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ＳＩＲＰα抗体を含み、重鎖のそれぞれのＣ末端は、標的抗原に結合する能力を有する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）（すなわち、標的抗原結合ドメイン）に融合する。抗ＳＩＲＰα抗体は、ＳＩＲＰα結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図６Ｂに示す。
【0035】
[00047]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ＳＩＲＰα抗体を含み、重鎖のそれぞれのＮ末端は、標的抗原に結合する能力を有する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）（すなわち、標的抗原結合ドメイン）に融合する。抗ＳＩＲＰα抗体はＳＩＲＰα結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図６Ｃに示す。
【0036】
[00048]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ＳＩＲＰα抗体を含み、軽鎖のそれぞれのＮ末端は、標的抗原に結合する能力を有する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）（すなわち、標的抗原結合ドメイン）に融合する。抗ＳＩＲＰα抗体はＳＩＲＰα結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図６Ｄに示す。
【0037】
[00049]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、抗ＳＩＲＰα結合ドメイン（例えば、Ｆａｂ）及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含み、それぞれ標的抗原に結合する能力を有し、それぞれＦｃドメインのポリペプチド鎖のＮ末端に融合する。例証的事例を図６Ｅに示す。
【0038】
[00050]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は２本の重鎖を含み、それぞれＦｃドメインのポリペプチド鎖のＮ末端に融合した標的抗原に結合する能力を有する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含み、及びＦｃドメインのポリペプチド鎖のうちの１つのＣ末端に融合した少なくとも１つの抗ＳＩＲＰα結合ドメインを更に含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、Ｆｃドメインのポリペプチド鎖のうちの１つのＣ末端に融合した１つの抗ＳＩＲＰα結合ドメインを含む。例証的事例を図６Ｆに示す。
【0039】
[00051]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２つの抗ＳＩＲＰα結合ドメインを含み、それぞれＦｃドメインのポリペプチド鎖のうちの１つのＣ末端に融合している。例証的事例を図６Ｇに示す。
【0040】
[00052]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、
ａ）Ｘ１ＹＹＭＨの配列（配列番号１６１）を含むＨＣＤＲ１、ＲＩＤＰＥＤＸ２ＥＸ３ＫＹＡＰＫＦＱＧの配列（配列番号１６２）を含むＨＣＤＲ２、及びＧＸ１５Ｘ４Ｘ５Ｙの配列（配列番号１６３）を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹの配列（配列番号２６）を含むＬＣＤＲ１、ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号２７）の配列を含むＬＣＤＲ２、及びＸ６ＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号１６４）の配列を含むＬＣＤＲ３；或いは
ｂ）ＴＹＧＭＳの配列（配列番号３５）を含むＨＣＤＲ１、ＷＩＮＴＹＳＧＶＸ７ＴＸ８ＡＤＤＦＫＧの配列（配列番号１６５）を含むＨＣＤＲ２、及びＤＰＨＸ９ＹＧＸ１０ＳＰＡＷＦＸ１１Ｙの配列（配列番号１６６）を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＸ１２ＡＳＱＸ１３ＶＧＩＸ１４ＶＡの配列（配列番号１８８）を含むＬＣＤＲ１、ＳＡＳＮＲＹＴの配列（配列番号３９）を含むＬＣＤＲ２、及びＱＱＹＳＸ１６ＹＰＸ１７Ｔの配列（配列番号１８９）を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｃ）ＥＹＶＬＳの配列（配列番号４１）を含むＨＣＤＲ１、ＥＩＹＰＧＴＩＴＴＹＹＮＥＫＦＫＧの配列（配列番号４２）を含むＨＣＤＲ２、及びＦＹＤＹＤＧＧＷＦＡＹの配列（配列番号４３）を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＳＡＳＳＳＶＳＳＳＤＬＨの配列（配列番号４４）を含むＬＣＤＲ１、ＧＴＳＮＬＡＳの配列（配列番号４５）を含むＬＣＤＲ２、及びＱＱＷＳＧＹＰＷＴの配列（配列番号４６）を含むＬＣＤＲ３
を含み、式中、
Ｘ１はＡ又はＤであり、Ｘ２はＧ又はＡであり、Ｘ３はＴ又はＳであり、Ｘ４はＬ又はＹであり、Ｘ５はＥ又はＡであり、Ｘ６はＹ又はＨであり、Ｘ７はＳ又はＰであり、Ｘ８はＹ又はＣであり、Ｘ９はＹ又はＳであり、Ｘ１０はＮ又はＳであり、Ｘ１１はＰ又はＶであり、Ｘ１２はＥ又はＫであり、Ｘ１３はＮ又はＩであり、Ｘ１４はＳ又はＡであり、Ｘ１５はＳであるか又は存在せず、Ｘ１６はＳ又はＡであり、Ｘ１７はＦ又はＬである。
ａ）Ｘ１ＹＹＭＨの配列（配列番号１６１）を含むＨＣＤＲ１、ＲＩＤＰＥＤＸ２ＥＸ３ＫＹＡＰＫＦＱＧの配列（配列番号１６２）を含むＨＣＤＲ２、及びＧＸ１５Ｘ４Ｘ５Ｙの配列（配列番号１６３）を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹの配列（配列番号２６）を含むＬＣＤＲ１、ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号２７）の配列を含むＬＣＤＲ２、及びＸ６ＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号１６４）の配列を含むＬＣＤＲ３；或いは
ｂ）ＴＹＧＭＳの配列（配列番号３５）を含むＨＣＤＲ１、ＷＩＮＴＹＳＧＶＸ７ＴＸ８ＡＤＤＦＫＧの配列（配列番号１６５）を含むＨＣＤＲ２、及びＤＰＨＸ９ＹＧＸ１０ＳＰＡＷＦＸ１１Ｙの配列（配列番号１６６）を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＸ１２ＡＳＱＸ１３ＶＧＩＸ１４ＶＡの配列（配列番号１８８）を含むＬＣＤＲ１、ＳＡＳＮＲＹＴの配列（配列番号３９）を含むＬＣＤＲ２、及びＱＱＹＳＸ１６ＹＰＸ１７Ｔの配列（配列番号１８９）を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｃ）ＥＹＶＬＳの配列（配列番号４１）を含むＨＣＤＲ１、ＥＩＹＰＧＴＩＴＴＹＹＮＥＫＦＫＧの配列（配列番号４２）を含むＨＣＤＲ２、及びＦＹＤＹＤＧＧＷＦＡＹの配列（配列番号４３）を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＳＡＳＳＳＶＳＳＳＤＬＨの配列（配列番号４４）を含むＬＣＤＲ１、ＧＴＳＮＬＡＳの配列（配列番号４５）を含むＬＣＤＲ２、及びＱＱＷＳＧＹＰＷＴの配列（配列番号４６）を含むＬＣＤＲ３
を含み、式中、
Ｘ１はＡ又はＤであり、Ｘ２はＧ又はＡであり、Ｘ３はＴ又はＳであり、Ｘ４はＬ又はＹであり、Ｘ５はＥ又はＡであり、Ｘ６はＹ又はＨであり、Ｘ７はＳ又はＰであり、Ｘ８はＹ又はＣであり、Ｘ９はＹ又はＳであり、Ｘ１０はＮ又はＳであり、Ｘ１１はＰ又はＶであり、Ｘ１２はＥ又はＫであり、Ｘ１３はＮ又はＩであり、Ｘ１４はＳ又はＡであり、Ｘ１５はＳであるか又は存在せず、Ｘ１６はＳ又はＡであり、Ｘ１７はＦ又はＬである。
【0041】
[00053]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、
ａ）配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４若しくは配列番号１９８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号２５の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ３；或いは
ｂ）配列番号２９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号３１の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号３４の配列を含むＬＣＤＲ３；或いは
ｃ）配列番号３５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３６の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号３７の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号３８の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号４０の配列を含むＬＣＤＲ３；或いは
ｄ）配列番号４７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号４９の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号５０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５１の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号５２の配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
ａ）配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４若しくは配列番号１９８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号２５の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ３；或いは
ｂ）配列番号２９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号３１の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号３４の配列を含むＬＣＤＲ３；或いは
ｃ）配列番号３５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３６の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号３７の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号３８の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号４０の配列を含むＬＣＤＲ３；或いは
ｄ）配列番号４７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号４９の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号５０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５１の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号５２の配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
【0042】
[00054]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、Ｃ２５、Ｃ１５、Ｃ４２、Ｃ５９、及びＣ７３からなる群から選択される抗ＳＩＲＰ－アルファ抗体と同一のＨＣＤＲ及びＬＣＤＲを含み、
ａ）Ｃ２５は、配列番号１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｂ）Ｃ１５は、配列番号１１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｃ）Ｃ４２は、配列番号１３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｄ）Ｃ５９は、配列番号１５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含み、並びに
ｅ）Ｃ７３は、配列番号１７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１８の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ａ）Ｃ２５は、配列番号１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｂ）Ｃ１５は、配列番号１１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｃ）Ｃ４２は、配列番号１３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｄ）Ｃ５９は、配列番号１５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含み、並びに
ｅ）Ｃ７３は、配列番号１７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１８の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0043】
[00055]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＸ２０ＳＧＦＮＩＫ（配列番号１９０）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＸ２１ＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号１９２）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｅ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＸ２２ＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号１９６）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
式中、Ｘ２０はＡ又はＶであり、Ｘ２１はＮ又はＤであり、Ｘ２２はＹ又はＦである。
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＸ２０ＳＧＦＮＩＫ（配列番号１９０）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＸ２１ＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号１９２）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｅ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＸ２２ＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号１９６）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
式中、Ｘ２０はＡ又はＶであり、Ｘ２１はＮ又はＤであり、Ｘ２２はＹ又はＦである。
【0044】
[00056]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、
ｆ）配列番号１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｇ）配列番号３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｈ）配列番号５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｉ）配列番号７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号８の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｊ）配列番号９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１０の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｋ）配列番号１１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｌ）配列番号１３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｍ）配列番号１５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｎ）配列番号１７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１８の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｏ）配列番号１５９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６０の配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
ｆ）配列番号１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｇ）配列番号３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｈ）配列番号５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｉ）配列番号７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号８の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｊ）配列番号９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１０の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｋ）配列番号１１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｌ）配列番号１３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｍ）配列番号１５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｎ）配列番号１７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１８の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｏ）配列番号１５９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６０の配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
【0045】
[00057]ある特定の実施形態では、標的抗原結合ドメインはクローディン１８．２結合ドメインを含む。
[00058]ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、
ｐ）配列番号７７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７９の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号８０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８１の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号８２若しくは配列番号２２５の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｑ）配列番号８３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８４の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号８５の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号８６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８７の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号８８の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｒ）配列番号８９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号９１の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号９２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９３の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号９４の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｓ）配列番号９５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９６の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号９７の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号９８の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９９の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１００の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｔ）配列番号１０１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０２の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１０３の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号１０４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０５の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１０６の配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
[00058]ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、
ｐ）配列番号７７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７９の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号８０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８１の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号８２若しくは配列番号２２５の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｑ）配列番号８３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８４の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号８５の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号８６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８７の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号８８の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｒ）配列番号８９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号９１の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号９２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９３の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号９４の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｓ）配列番号９５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９６の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号９７の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号９８の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９９の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１００の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｔ）配列番号１０１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０２の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１０３の配列を含むＨＣＤＲ３；並びに／又は配列番号１０４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０５の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１０６の配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
【0046】
[00059]ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）、ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２、Ｃ１０、Ｃ２９、及びＣ３０からなる群から選択される抗クローディン１８．２抗体と同一のＨＣＤＲ及びＬＣＤＲを含み、
ｕ）ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１は配列番号６５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６６の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｖ）ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）は、配列番号６５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２２４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｗ）ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２は、配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７０の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｘ）Ｃ１０は、配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｙ）Ｃ２９は、配列番号７３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、並びに
ｚ）Ｃ３０は、配列番号７５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ｕ）ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１は配列番号６５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６６の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｖ）ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）は、配列番号６５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２２４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｗ）ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２は、配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７０の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｘ）Ｃ１０は、配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｙ）Ｃ２９は、配列番号７３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、並びに
ｚ）Ｃ３０は、配列番号７５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0047】
[00060]ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）及びＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号１６８）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＸ１８（配列番号１６９）及びＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号１７０）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＸ２３（配列番号１７１）及びＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１７２）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）及びＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣ（配列番号１７５）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＸ２６Ｘ２７ＰＫＸ１９ＬＩＹ（配列番号１７６）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＸ２４ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７８）及びＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＨＣ（配列番号１７９）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、並びに
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＸ２５ＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８０）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
式中、Ｘ１８はＳ又はＡであり、Ｘ１９はＬ又はＡであり、Ｘ２３はＴ又はＫであり、Ｘ２４はＹ又はＦであり、Ｘ２５はＱ又はＧであり、Ｘ２６はＱ又はＫであり、Ｘ２７はＰ又はＡである。
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）及びＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号１６８）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＸ１８（配列番号１６９）及びＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号１７０）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＸ２３（配列番号１７１）及びＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１７２）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）及びＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣ（配列番号１７５）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＸ２６Ｘ２７ＰＫＸ１９ＬＩＹ（配列番号１７６）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＸ２４ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７８）及びＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＨＣ（配列番号１７９）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、並びに
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＸ２５ＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８０）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
式中、Ｘ１８はＳ又はＡであり、Ｘ１９はＬ又はＡであり、Ｘ２３はＴ又はＫであり、Ｘ２４はＹ又はＦであり、Ｘ２５はＱ又はＧであり、Ｘ２６はＱ又はＫであり、Ｘ２７はＰ又はＡである。
【0048】
[00061]ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、
ａａ）配列番号６５若しくは６８の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６６若しくは６７若しくは２２４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｂｂ）配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７０の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｃｃ）配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｄｄ）配列番号７３の配列を含み重鎖可変領域、及び／又は配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｅｅ）配列番号７５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７６の配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
ａａ）配列番号６５若しくは６８の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６６若しくは６７若しくは２２４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｂｂ）配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７０の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｃｃ）配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｄｄ）配列番号７３の配列を含み重鎖可変領域、及び／又は配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｅｅ）配列番号７５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７６の配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
【0049】
[00062]ある特定の実施形態では、標的抗原結合ドメインはＰＤ－Ｌ１結合ドメインを含む。
[00063]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、
ｆｆ）配列番号１１９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１２１の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｇｇ）配列番号１２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１２４の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｈｈ）配列番号１２５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２６の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１２７の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｉｉ）配列番号１２８の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２９の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１３０の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｊｊ）配列番号１３１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１３３の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｋｋ）配列番号１３４の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３５の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１３６の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｌｌ）配列番号１３７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１３９の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｍｍ）配列番号１４０の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４１の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１４２の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｎｎ）配列番号１４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４４の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１４５の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｏｏ）配列番号１４６の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４７の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１４８の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｐｐ）配列番号１４９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１５１の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
配列番号１５２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５３の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１５４の配列を含むＨＣＤＲ３
を含む。
[00063]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、
ｆｆ）配列番号１１９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１２１の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｇｇ）配列番号１２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１２４の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｈｈ）配列番号１２５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２６の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１２７の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｉｉ）配列番号１２８の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２９の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１３０の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｊｊ）配列番号１３１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１３３の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｋｋ）配列番号１３４の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３５の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１３６の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｌｌ）配列番号１３７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１３９の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｍｍ）配列番号１４０の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４１の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１４２の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｎｎ）配列番号１４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４４の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１４５の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｏｏ）配列番号１４６の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４７の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１４８の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
ｐｐ）配列番号１４９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１５１の配列を含むＨＣＤＲ３、又は
配列番号１５２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５３の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１５４の配列を含むＨＣＤＲ３
を含む。
【0050】
[00064]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、Ｃ７１、Ｃ７１ｖ３８、Ｃ２３９、Ｃ４９２、Ｃ５７０、５７０ｈ３、Ｃ４４６、Ｃ２８１１、Ｃ１７７８、Ｃ１７９３、Ｃ２８５５、Ｃ２７１３、及びＣ２７１９からなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体と同一のＨＣＤＲを含み、
ｑｑ）Ｃ７１は配列番号１０７の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｒｒ）Ｃ７１ｖ３８は配列番号１０８の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｓｓ）Ｃ２３９は配列番号１０９の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｔｔ）Ｃ４９２は配列番号１１０の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｕｕ）Ｃ５７０は配列番号１１１の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｖｖ）５７０ｈ３は配列番号２２３の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｗｗ）Ｃ４４６は配列番号１１２の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｘｘ）Ｃ２８１１は配列番号１１３の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｙｙ）Ｃ１７７８は配列番号１１４の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｚｚ）Ｃ１７９３は配列番号１１５の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ａａａ）Ｃ２８５５は配列番号１１６の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｂｂｂ）Ｃ２７１３は配列番号１１７の配列を含む重鎖可変領域を含み、及び
ｃｃｃ）Ｃ２７１９は配列番号１１８の配列を含む重鎖可変領域を含む。
ｑｑ）Ｃ７１は配列番号１０７の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｒｒ）Ｃ７１ｖ３８は配列番号１０８の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｓｓ）Ｃ２３９は配列番号１０９の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｔｔ）Ｃ４９２は配列番号１１０の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｕｕ）Ｃ５７０は配列番号１１１の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｖｖ）５７０ｈ３は配列番号２２３の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｗｗ）Ｃ４４６は配列番号１１２の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｘｘ）Ｃ２８１１は配列番号１１３の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｙｙ）Ｃ１７７８は配列番号１１４の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｚｚ）Ｃ１７９３は配列番号１１５の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ａａａ）Ｃ２８５５は配列番号１１６の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ｂｂｂ）Ｃ２７１３は配列番号１１７の配列を含む重鎖可変領域を含み、及び
ｃｃｃ）Ｃ２７１９は配列番号１１８の配列を含む重鎖可変領域を含む。
【0051】
[00065]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１０７～１１８、及び２２３からなる群から選択される配列を含む重鎖可変領域を含む。
[00066]ある特定の実施形態では、
ｄｄｄ）ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合性をなおも保持しつつ、１つ若しくは複数のアミノ酸残基の置換若しくは改変を更に含み、及び／又は
ｅｅｅ）クローディン１８．２結合ドメインは、クローディン１８．２に対する特異的結合性をなおも保持しつつ、１つ若しくは複数のアミノ酸残基の置換若しくは改変を更に含み、及び／又は
ｆｆｆ）ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、ＰＤ－Ｌ１に対する特異的結合性をなおも保持しつつ、１つ若しくは複数のアミノ酸残基の置換若しくは改変を更に含む。
[00066]ある特定の実施形態では、
ｄｄｄ）ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合性をなおも保持しつつ、１つ若しくは複数のアミノ酸残基の置換若しくは改変を更に含み、及び／又は
ｅｅｅ）クローディン１８．２結合ドメインは、クローディン１８．２に対する特異的結合性をなおも保持しつつ、１つ若しくは複数のアミノ酸残基の置換若しくは改変を更に含み、及び／又は
ｆｆｆ）ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、ＰＤ－Ｌ１に対する特異的結合性をなおも保持しつつ、１つ若しくは複数のアミノ酸残基の置換若しくは改変を更に含む。
【0052】
[00067]ある特定の実施形態では、置換又は改変の少なくとも１つは、重鎖可変領域若しくは軽鎖可変領域のＣＤＲ配列の１つ若しくは複数の中、及び／又は非ＣＤＲ配列の１つ若しくは複数の中にある。
【0053】
[00068]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子はヒト化されている。
[00069]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、１つ又は複数のコンジュゲート部分とリンクしている。
[00069]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、１つ又は複数のコンジュゲート部分とリンクしている。
【0054】
[00070]ある特定の実施形態では、コンジュゲート部分は、クリアランス修飾剤、化学療法剤、毒素、放射性同位体、ランタニド、発光標識、蛍光標識、酵素－基質標識、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリン結合剤、精製部分、又はその他の抗がん剤を含む。
【0055】
[00071]別の態様では、本開示は、本明細書に提示される多重特異性分子、及び１つ又は複数の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物について提示する。
[00072]別の態様では、本開示は、本明細書に提示される多重特異性分子をコードする単離されたポリヌクレオチドについて提示する。
[00072]別の態様では、本開示は、本明細書に提示される多重特異性分子をコードする単離されたポリヌクレオチドについて提示する。
【0056】
[00073]別の態様では、本開示は、本明細書に提示される単離されたポリヌクレオチドを含むベクターについて提示する。
[00074]別の態様では、本開示は、本明細書に提示されるベクターを含む宿主細胞について提示する。
[00074]別の態様では、本開示は、本明細書に提示されるベクターを含む宿主細胞について提示する。
【0057】
[00075]別の態様では、本開示は、本明細書に提示される多重特異性分子、及び／又は本明細書に提示される医薬組成物、及び第２の治療剤を含むキットについて提示する。
[00076]別の態様では、本開示は、本明細書に提示される多重特異性分子を発現させる方法であって、本明細書に提示されるベクターが発現される条件下で、本明細書に提示される宿主細胞を培養するステップを含む方法について提示する。
[00076]別の態様では、本開示は、本明細書に提示される多重特異性分子を発現させる方法であって、本明細書に提示されるベクターが発現される条件下で、本明細書に提示される宿主細胞を培養するステップを含む方法について提示する。
【0058】
[00077]別の態様では、本開示は、対象内で標的細胞のファゴサイトーシスを誘発することから利益を享受し得る疾患、障害、又は状態を処置する方法であって、対象に対して、本明細書に提示される多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む方法について提示する。
【0059】
[00078]別の態様では、本開示は、対象内の標的抗原に関連する疾患、障害、又は状態を処置する方法であって、対象に対して、本明細書に提示される多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む方法について提示する。
【0060】
[00079]別の態様では、本開示は、対象内のＳＩＲＰαに関連する疾患、障害、又は状態を処置する方法であって、対象に対して、本明細書に提示される多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む方法について提示する。
【0061】
[00080]別の態様では、本開示は、対象内のＣＤ４７に関連する疾患、障害、又は状態を処置する方法であって、対象に対して、本明細書に提示される多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む方法について提示する。
【0062】
[00081]ある特定の実施形態では、対象はヒトである。
[00082]ある特定の実施形態では、対象は、免疫に関連する疾患又は障害、腫瘍及びがん、自己免疫疾患、並びに感染性疾患からなる群から選択される疾患、障害、又は状態を有すると診断を下されたか、或いはそのリスクに晒されている。
[00082]ある特定の実施形態では、対象は、免疫に関連する疾患又は障害、腫瘍及びがん、自己免疫疾患、並びに感染性疾患からなる群から選択される疾患、障害、又は状態を有すると診断を下されたか、或いはそのリスクに晒されている。
【0063】
[00083]ある特定の実施形態では、免疫に関連する疾患又は障害は、全身性エリテマトーデス、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、脈管炎、重症筋無力症、突発性肺線維症、クローン病、喘息、リウマチ性関節炎、移植片対宿主病、脊椎関節障害（例えば、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患と関連する孤発性急性腸炎性関節炎、反応性関節炎、ベーチェット症候群、未分化脊椎関節症、前部ブドウ膜炎、及び若年性特発性関節炎）、多発性硬化症、子宮内膜症、糸球体腎炎、敗血症、糖尿病、急性冠状動脈症候群、虚血再潅流、乾癬、進行性全身性硬化症、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、強皮症、又は炎症性自己免疫性筋炎からなる群から選択される。
【0064】
[00084]ある特定の実施形態では、腫瘍及びがんは、任意選択で非小細胞肺がん、小細胞肺がん、腎細胞がん、結腸直腸がん、卵巣がん、乳がん、膵がん、胃癌、膀胱がん、食道がん、中皮腫、黒色腫、頭頸部がん、甲状腺がん、肉腫、前立腺がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、胸腺癌、白血病、リンパ腫、ミエローマ、菌状息肉腫、メルケル細胞がん、及びその他の血液悪性腫瘍、例えば古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性及び陰性ＰＴＬＤ、及びＥＢＶ関連のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫等、鼻咽頭癌、及びＨＨＶ８関連の原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、例えば原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫等、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、胆嚢がん、胃がん、肺がん、気管支がん、骨がん、肝臓及び胆管のがん、膵がん、乳がん、肝がん、卵巣がん、睾丸がん、腎がん、腎盂及び尿管がん、唾液腺がん、小腸がん、尿道がん、膀胱がん、頭頸部がん、脊椎がん、脳がん、子宮頸部がん、子宮がん、子宮内膜がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、食道がん、胃腸がん、皮膚がん、前立腺がん、脳下垂体がん、膣がん、甲状腺がん、咽頭がん、神経膠芽腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、肉腫、テラトーマ、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、Ｔ又はＢ細胞リンパ腫、消化管間質腫瘍、軟部組織腫瘍、肝細胞癌、及び腺癌、又はそれらの転移からなる群から選択される固形腫瘍又は血液悪性腫瘍である。
【0065】
[00085]ある特定の実施形態では、投与は、口腔、鼻腔、静脈内、皮下、舌下、又は筋肉内投与を経由する。
[00086]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される方法は、第２の治療剤の治療有効量を投与するステップを更に含む。
[00086]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される方法は、第２の治療剤の治療有効量を投与するステップを更に含む。
【0066】
[00087]ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、化学療法剤、抗がん薬、放射線療法剤、免疫療法剤、抗血管新生剤、標的療法剤、細胞療法剤、遺伝子療法剤、ホルモン療法剤、抗ウイルス剤、抗生物質、鎮痛薬、酸化防止剤、金属キレート剤、及びサイトカインからなる群から選択される。
【0067】
[00088]別の態様では、本開示は、対象内で標的細胞のファゴサイトーシスを誘発することから利益を享受し得る疾患、障害、又は状態を処置、予防、又は緩和するための医薬の製造における、本明細書に提示される多重特異性分子、及び／又は本明細書に提示される医薬組成物の使用について提示する。
【0068】
[00089]別の態様では、本開示は、対象内で標的細胞のファゴサイトーシスを誘発する方法であって、対象に対して、標的細胞のファゴサイトーシスを誘発するのに有効な用量で、本明細書に提示される多重特異性分子及び／又は本明細書に提示される医薬組成物を投与するステップを含む方法について提示する。
【0069】
[00090]ある特定の実施形態では、対象はヒトである。
[00091]ある特定の実施形態では、対象は、免疫に関連する疾患又は障害、腫瘍及びがん、自己免疫疾患、並びに感染性疾患からなる群から選択される疾患、障害、又は状態を有すると診断を下されたか、或いはそのリスクに晒されている。
[00091]ある特定の実施形態では、対象は、免疫に関連する疾患又は障害、腫瘍及びがん、自己免疫疾患、並びに感染性疾患からなる群から選択される疾患、障害、又は状態を有すると診断を下されたか、或いはそのリスクに晒されている。
【0070】
[00092]別の態様では、本開示は、標的細胞のファゴサイトーシスをｉｎ ｖｉｔｒｏで誘発する方法であって、標的細胞を、本明細書に提示される多重特異性分子、及び／又は本明細書に提示される医薬組成物の存在下で、ＳＩＲＰα陽性貪食性細胞サンプルと接触させ、これによりＳＩＲＰα陽性貪食性細胞による標的細胞のファゴサイトーシスを誘発するステップを含む方法について提示する。
【0071】
[00093]ある特定の実施形態では、標的細胞は標的抗原を発現する細胞である。
[00094]別の態様では、本開示は、ファゴサイトーシスにより標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞の除去を誘発する方法であって、標的細胞を、貪食性免疫細胞の存在下で、本明細書に提示される多重特異性分子と接触させるステップを含む方法について提示する。
[00094]別の態様では、本開示は、ファゴサイトーシスにより標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞の除去を誘発する方法であって、標的細胞を、貪食性免疫細胞の存在下で、本明細書に提示される多重特異性分子と接触させるステップを含む方法について提示する。
【0072】
[00095]別の態様では、本開示は、対象内で標的抗原を発現しない細胞よりも、標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞に対して、貪食効果を選択的に誘発する方法であって、対象に対して、本明細書に提示される多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む方法について提示する。
【0073】
[00096]別の態様では、本開示は、腫瘍微小環境内のＭ１マクロファージのレベルを増加させることを必要とする対象において、それを増加させる方法であって、対象に対して、本明細書に提示される多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む方法について提示する。
【図面の簡単な説明】
【0074】
【図1】[00097]腫瘍関連の抗原（ＴＡＡ）を発現するがん細胞に対してマクロファージファゴサイトーシス活性を増強する二重特異性マクロファージエンゲイジャー（ＢｉＭＥ）抗体の概略図を示す図である。
【図2A】[00098]軽鎖（ＬＣ）のＣ末端において２つの抗ＳＩＲＰα ｓｃＦｖと融合した、クローディン１８．２を標的とする抗体を含む、抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性分子（ＥＳ０２８－００１）の概略図を示す図である。
【図2B】[00099]重鎖（ＨＣ）のＣ末端において２つの抗ＳＩＲＰα ｓｃＦｖと融合した、クローディン１８．２を標的とする抗体を含む、抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性分子（ＥＳ０２８－００５）の概略図を示す図である。
【図2C】[000100]軽鎖（ＬＣ）のＣ末端において２つの抗クローディン１８．２ｓｃＦｖと融合したＳＩＲＰαを標的とする抗体を含む、抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性分子（ＥＳ０２８－００９）の概略図を示す図である。
【図2D】[000101]重鎖（ＬＣ）のＣ末端において２つの抗クローディン１８．２ｓｃＦｖと融合したＳＩＲＰαを標的とする抗体を含む、抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性分子（ＥＳ０２８－０１３）の概略図を示す図である。
【図3A】[000102]代表的な二重特異性抗体は、ＦＡＣＳ検出によりＲａｊｉ／ｈクローディン１８．２細胞と結合することができたことを示す図である。抗クローディン１８．２抗体をコントロールとして使用した。
【図3B】[000103]代表的な二重特異性抗体は、ＦＡＣＳ検出によりＣＨＯ－Ｋ１／ＳＩＲＰα細胞と結合することができたことを示す図である。抗ＳＩＲＰα抗体をコントロールとして使用した。
【図4A】[000104]抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、ＭＣ３８／ｈＣＤ４７／ｈクローディン１８．２細胞に対して、単一又は併用処置よりも良好にマウスＢＭＤＭファゴサイトーシスを刺激することを示す図である。抗ＣＤ４７抗体をコントロールとして使用する。
【図4B】[000105]抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、Ｃｌｕａｄｉｎ１８．２を発現しないＭＣ３８／ｈＣＤ４７細胞に対して、マウスＢＭＤＭファゴサイトーシスを刺激しないことを示す図である。抗ＣＤ４７抗体をコントロールとして使用する。
【図5】[000106]いくつかの抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体アイソタイプについて、ＭＣ３８／ｈＣＤ４７／ｈクローディン１８．２細胞に対するマウスＢＭＤＭファゴサイトーシスの比較を示す図である。抗ＣＤ４７抗体をコントロールとして使用する。
【図6A】[000107]軽鎖（ＬＣ）のＣ末端において２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂと融合した、ＳＩＲＰαを標的とする１つの抗体を含む、抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性分子（ＥＳ０１９－０２０）の概略図を示す図である。
【図6B】[000108]重鎖（ＨＣ）のＣ末端において２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂと融合した、ＳＩＲＰαを標的とする１つの抗体を含む、抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性分子（ＥＳ０１９－０２４）の概略図を示す図である。
【図6C】[000109]重鎖（ＨＣ）のＮ末端において２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂと融合した、ＳＩＲＰαを標的とする１つの抗体を含む、抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性分子（ＥＳ０１９－０２５）の概略図を示す図である。
【図6D】[000110]軽鎖（ＬＣ）のＮ末端において２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂと融合した、ＳＩＲＰαを標的とする１つの抗体を含む、抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性分子（ＥＳ０１９－０２６）の概略図を示す図である。
【図6E】[000111]ＳＩＲＰαを標的とする一方のＦａｂアームと２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂを含有する他方のアームとを有する１つの非対称抗体を含む、抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性分子（ＥＳ０１９－０２９）の概略図を示す図であり、ヘテロ二量体は、Ｆｃ領域内のノブ－インホール（ｋｎｏｂ－ｉｎ ｈｏｌｅ）突然変異により連結されている。
【図6F】[000112]２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂがＦｃのＮ末端に融合し、及び１つの抗ＳＩＲＰαＦａｂがＦｃのＣ末端に融合した、１つ非対称の抗体を含む、抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性分子（ＥＳ０１９－０７２）の概略図を示す図であり、ヘテロ二量体はＦｃ領域内のノブ－インホール突然変異により連結されている。
【図6G】[000113]２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂがＦｃのＮ末端に融合し、及び２つの抗ＳＩＲＰα ＦａｂがＦｃのＣ末端に融合した、１つの非対称抗体を含む、抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性分子（ＥＳ０１９－０７３又はＥＳ０１９－０７９）の概略図を示す図である。
【図7A】[000114]代表的な二重特異性抗体ＥＳ０１９－０２０、ＥＳ０１９－０２４、ＥＳ０１９－０２５、及びＥＳ０１９－０２６は、ＦＡＣＳ検出により、Ｒａｊｉ／ｈＰＤＬ１細胞と結合することができたことを示す図である。抗ＰＤＬ１抗体をコントロールとして使用した。
【図7B】[000115]代表的な二重特異性抗体ＥＳ０１９－０２０、ＥＳ０１９－０２４、ＥＳ０１９－０２５、及びＥＳ０１９－０２６は、ＦＡＣＳ検出により、ＣＨＯ－Ｋ１／ＳＩＲＰα細胞と結合することができたことを示す図である。抗ＳＩＲＰα抗体をコントロールとして使用した。
【図8】[000116]代表的な二重特異性抗体ＥＳ０１９－０２０、ＥＳ０１９－０２４、ＥＳ０１９－０２５、及びＥＳ０１９－０２６は、Ｊｕｒａｔ／ＰＤ１レポーター細胞アッセイによりジャーカットＴ細胞を活性化させることができたことを示す図である。抗ＰＤＬ１抗体をコントロールとして使用した。
【図9A】[000117]抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体ＥＳ０１９－０２０、ＥＳ０１９－０２４、ＥＳ０１９－０２５、ＥＳ０１９－０２６、及びＥＳ０１９－０２９は、単一処置よりも良好に又は併用処置と類似して、Ｋ５６２／ｈＰＤＬ１細胞に対するヒト単球由来マクロファージのファゴサイトーシスを刺激することを示す図である。抗ＣＤ４７抗体をコントロールとして使用する。
【図9B】[000118]抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、単一又は併用処置と類似して、Ｋ５６２（ＰＤＬ１陰性）細胞に対するヒト単球由来マクロファージのファゴサイトーシスを刺激しないことを示す図である。抗ＣＤ４７抗体をコントロールとして使用する。
【図9C】[000119]抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、単一又は併用処置と類似して、ジャーカット細胞（ＳＩＲＰγ陽性）に対するヒト単球由来マクロファージのファゴサイトーシスを刺激しないことを示す図である。抗ＣＤ４７抗体をコントロールとして使用する。
【図10】[000120]ＭＣ３８／ｈクローディン１８．２／ｈＳＩＲＰαシンジェニックモデルにおけるＥＳ０２８ＢｉＭＥ（例えば、ＥＳ０２８－００１、ＥＳ０２８－００５、及びＥＳ０２８－００９）のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効力を示す図である。
【図11A】[000121]異なるＳＩＲＰα抗体に基づく組合せ又はＳＩＲＰα二重特異性抗体は、Ｒａｊｉ／ｈＰＤＬ１細胞に対するファゴサイトーシスを誘発したこと示す図である。
【図11B】[000122]異なるＳＩＲＰα抗体に基づく組合せ又はＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、Ｒａｊｉ（ＰＤＬ１陰性）細胞に対するファゴサイトーシスを誘発したことを示す図である。
【図12】[000123]ＣＨＯＫ１－ｈＳＩＲＰα ｖ１及びＣＨＯＫ１－ｈＳＩＲＰα ｖ２に対する、キメラ抗体Ｃ１５、Ｃ２５、Ｃ４２、Ｃ５９、Ｃ７３、及びｈｕ１Ｈ９Ｇ４の結合親和性を示す図である。
【図13】[000124]キメラ抗体Ｃ１５、Ｃ２５、Ｃ４２、Ｃ５９、Ｃ７３、及びｈｕ１Ｈ９Ｇ４毎に、ヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰα ｖ１相互作用及びヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰαｖ２相互作用のＩＣ５０値及びブロッキング率（％）を示す図である。
【図14】[000125]キメラ抗体Ｃ１５、Ｃ２５、Ｃ４２、Ｃ５９、Ｃ７３、及びｈｕ１Ｈ９Ｇ４毎に、ＳＨＰ－１導入のＩＣ５０値及びブロッキング率（％）を示す図である。
【図15】[000126]ＣＨＯＫ１－ｈＳＩＲＰα ｖ１及びＣＨＯＫ１－ｈＳＩＲＰαｖ２に対する、ヒト化抗体ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０５９、及びｈｕ０２５．０６０、並びにＣ２５の結合親和性を示す図である。
【図16】[000127]ヒトＳＩＲＰα ｖ１及びヒトＳＩＲＰα ｖ２に対する、ヒト化抗体ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０５９、及びｈｕ０２５．０６０、並びにＣ２５の結合動態を示す図である。
【図17】[000128]競合ＥＬＩＳＡアッセイにより測定した場合の、ヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰα ｖ１相互作用及びヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰα ｖ２相互作用のＩＣ５０値及びブロッキング率（％）を、ヒト化抗体ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０５９、及びｈｕ０２５．０６０、並びにＣ２５毎に示す図である。
【図18】[000129]競合ＦＡＣＳアッセイにより測定した場合の、ヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰα ｖ１相互作用及びヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰα ｖ２相互作用のＩＣ５０値及びブロッキング率（％）を、ヒト化抗体ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０６０、及びＣ２５毎に示す図である。
【図19】[000130]ヒト化抗体ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０５９、及びｈｕ０２５．０６０、並びにＣ２５毎に、ＳＨＰ－１導入のＩＣ５０値及びブロッキング率（％）を示す図である。
【図20A】[000131]抗ＳＩＲＰα抗体０２５ｃ、０１５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、若しくは０７３ｃ単独又はリツキシマブとの併用の存在下での、ｈＳＩＲＰα ｖ１／ｖ２を発現するヒトマクロファージによるＲａｊｉ細胞の貪食指数を示す図である。
【図20B】[000132]抗ＳＩＲＰα抗体０２５ｃ若しくは０４２ｃ単独又は濃度の異なる抗ＰＤ－Ｌ１抗体との併用の存在下での、ｈＳＩＲＰα ｖ１／ｖ１を発現するヒトマクロファージによるＲａｊｉ細胞の貪食指数を示す図である。
【図20C】[000133]抗ＳＩＲＰα抗体０２５ｃ、０４２ｃ、若しくは０７３ｃ単独又は濃度の異なる抗ＰＤ－Ｌ１抗体との併用の存在下での、ｈＳＩＲＰα ｖ２／ｖ２を発現するヒトマクロファージによるＲａｊｉ細胞の貪食指数を示す図である。
【図21A】[000134]抗ＳＩＲＰα抗体０２５ｃ、ｈｕ０２５．０２３、若しくはｈｕ０２５．０６０単独又は濃度の異なる抗ＰＤ－Ｌ１抗体との併用の存在下での、ｈＳＩＲＰα ｖ１／ｖ１を発現するヒトマクロファージによるＲａｊｉ細胞の貪食指数を示す図である。
【図21B】[000135]抗ＳＩＲＰα抗体０２５ｃ、ｈｕ０２５．０２３、若しくはｈｕ０２５．０６０単独又は濃度の異なるリツキシマブとの併用の存在下での、ｈＳＩＲＰα ｖ１／ｖ１を発現するヒトマクロファージによるＲａｊｉ細胞の貪食指数を示す図である。
【図21C】[000136]抗ＳＩＲＰα抗体０２５ｃ、ｈｕ０２５．０２３、若しくはｈｕ０２５．０６０単独又は濃度の異なる抗ＰＤ－Ｌ１抗体との併用の存在下での、ｈＳＩＲＰα ｖ２／ｖ２を発現するヒトマクロファージによるＲａｊｉ細胞の貪食指数を示す図である。
【図21D】[000137]抗ＳＩＲＰα抗体０２５ｃ、ｈｕ０２５．０２３、若しくはｈｕ０２５．０６０単独又は濃度の異なるリツキシマブとの併用の存在下での、ｈＳＩＲＰα ｖ２／ｖ２を発現するヒトマクロファージによるＲａｊｉ細胞の貪食指数を示す図である。
【図22】[000138]ＳＩＲＰαとＣＤ４７との相互作用のブロッキングについて、濃度の異なる抗ＳＩＲＰα抗体０３５、０５０、及び０２５のブロッキング率（％）（％ブロッキング）を示す図である。
【図23A】[000139]ＨＤＸ－ＭＳにより測定した場合の、抗ＳＩＲＰα抗体０２５ｃ（図２３Ａ）、０４２ｃ（図２３Ｂ）、０７３ｃ（図２３Ｃ）、ｈｕ１Ｈ９Ｇ４（図２３Ｄ）、ＨＥＦＬＢ（図２３Ｅ）のエピトープについて、その結合可能性を示す図である。すべての抗体は、Ｓ２２８Ｐ突然変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体である。
【図23B】同上。
【図23C】同上。
【図23D】同上。
【図23E】同上。
【発明を実施するための形態】
【0075】
[000140]本開示の下記の説明は、本開示の様々な実施形態を例証するように意図されているに過ぎない。したがって、議論される特別な改変は、本開示の範囲に対する制限として解釈されないものとする。本開示の範囲から逸脱せずに、様々な等価形態、変化形態、及び改変形態を生み出すことができることは当業者にとって明白であり、そしてそのような等価な実施形態は、本明細書に含まれるものと理解されよう。公開資料、特許、及び特許出願を含む、本明細書で引用されたすべての参考資料は、本明細書において参照によりそのまま組み込まれる。
【0076】
[000141]定義
[000142]用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、任意の免疫グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多価抗体、２価抗体、１価抗体、単一ドメイン抗体、多重特異性抗体、又は特定の抗原と結合する二重特異性抗体を含む。天然無変のＩｇＧ抗体は２本の重鎖（Ｈ）及び２本の軽鎖（Ｌ）を含む。哺乳動物の重鎖は、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューとして分類され、各重鎖は可変領域（ＶＨ）並びに、第１、第２、及び第３の定常領域（それぞれ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）から構成され、哺乳動物の軽鎖はλ又はκとして分類される一方、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）及び定常領域から構成される。抗体は「Ｙ字」形状を有し、Ｙ字の幹の部分は、ジスルフィド結合を介して共に結合した２本の重鎖の第２及び第３の定常領域から構成される。Ｙ字の各腕の部分は、一本鎖軽鎖の可変及び定常領域に結合した一本鎖重鎖の可変領域及び第１の定常領域を含む。軽鎖及び重鎖の可変領域は抗原結合に関与する。両鎖内の可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖ＣＤＲと、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変のループを一般的に含有する。本明細書で開示される抗体及び抗原結合ドメインに関するＣＤＲの境界は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉの規則より定義又は特定され得る（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．，Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３（４），９２７（１９９７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，ＪＭｏｌ Ｂｉｏｌ．Ｄｅｃ ５；１８６（３）：６５１－６３（１９８５）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６，９０１（１９８７）；Ｎ．Ｒ．Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｖ１３（１２），８１９－８２４（２０００）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｄｅｃ ２１－２８；３４２（６２５２）：８７７－８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２７：５５－７７（２００３）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１（３），（２００５）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌｓ（ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ），ｃｈａｐｔｅｒ ２６，４８１－５１４，（２０１５））。３つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）として知られるフランキングストレッチ間に挿入され、ＦＲはＣＤＲよりも高度に保存され、また高度可変ループを支持するスキャフォールドを形成する。重鎖及び軽鎖の定常領域は抗原結合に関与ないが、しかし様々なエフェクター機能を示す。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づき、いくつかのクラスに割り振られる。抗体の５つの主要なクラス又はアイソタイプは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭであり、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミュー重鎖の存在によりそれぞれ特徴付けられる。主要な抗体クラスのいくつかは、サブクラス、例えばＩｇＧ１（ガンマ１重鎖）、ＩｇＧ２（ガンマ２重鎖）、ＩｇＧ３（ガンマ３重鎖）、ＩｇＧ４（ガンマ４重鎖）、ＩｇＡ１（アルファ１重鎖）、又はＩｇＡ２（アルファ２重鎖）等に分割される。
[000142]用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、任意の免疫グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多価抗体、２価抗体、１価抗体、単一ドメイン抗体、多重特異性抗体、又は特定の抗原と結合する二重特異性抗体を含む。天然無変のＩｇＧ抗体は２本の重鎖（Ｈ）及び２本の軽鎖（Ｌ）を含む。哺乳動物の重鎖は、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューとして分類され、各重鎖は可変領域（ＶＨ）並びに、第１、第２、及び第３の定常領域（それぞれ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）から構成され、哺乳動物の軽鎖はλ又はκとして分類される一方、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）及び定常領域から構成される。抗体は「Ｙ字」形状を有し、Ｙ字の幹の部分は、ジスルフィド結合を介して共に結合した２本の重鎖の第２及び第３の定常領域から構成される。Ｙ字の各腕の部分は、一本鎖軽鎖の可変及び定常領域に結合した一本鎖重鎖の可変領域及び第１の定常領域を含む。軽鎖及び重鎖の可変領域は抗原結合に関与する。両鎖内の可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖ＣＤＲと、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変のループを一般的に含有する。本明細書で開示される抗体及び抗原結合ドメインに関するＣＤＲの境界は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉの規則より定義又は特定され得る（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．，Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３（４），９２７（１９９７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，ＪＭｏｌ Ｂｉｏｌ．Ｄｅｃ ５；１８６（３）：６５１－６３（１９８５）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６，９０１（１９８７）；Ｎ．Ｒ．Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｖ１３（１２），８１９－８２４（２０００）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｄｅｃ ２１－２８；３４２（６２５２）：８７７－８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２７：５５－７７（２００３）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１（３），（２００５）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌｓ（ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ），ｃｈａｐｔｅｒ ２６，４８１－５１４，（２０１５））。３つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）として知られるフランキングストレッチ間に挿入され、ＦＲはＣＤＲよりも高度に保存され、また高度可変ループを支持するスキャフォールドを形成する。重鎖及び軽鎖の定常領域は抗原結合に関与ないが、しかし様々なエフェクター機能を示す。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づき、いくつかのクラスに割り振られる。抗体の５つの主要なクラス又はアイソタイプは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭであり、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミュー重鎖の存在によりそれぞれ特徴付けられる。主要な抗体クラスのいくつかは、サブクラス、例えばＩｇＧ１（ガンマ１重鎖）、ＩｇＧ２（ガンマ２重鎖）、ＩｇＧ３（ガンマ３重鎖）、ＩｇＧ４（ガンマ４重鎖）、ＩｇＡ１（アルファ１重鎖）、又はＩｇＡ２（アルファ２重鎖）等に分割される。
【0077】
[000143]用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、単一ドメイン抗体、例えば重鎖抗体等も包含し得る。「重鎖抗体」又は「ＨＣＡｂ」とは、２つのＶＨドメインを備え、軽鎖を有さない抗体を指す（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．ａｎｄＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｄｅｃ １０；２３１（１－２）：２５－３８（１９９９）；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊｕｎ；７４（４）：２７７－３０２（２００１）；国際公開第９４／０４６７８号；同第９４／２５５９１号；米国特許第６，００５，０７９号）。重鎖抗体は、そもそもラクダ類（ラクダ、ヒトコブラクダ、及びラマ）に由来する。軽鎖を欠損しているものの、ラクダ化抗体は真正な抗原結合レパートリーを有する（Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｊｕｎ ３；３６３（６４２８）：４４６－８（１９９３）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ｅｔ ａｌ．“Ｈｅａｖｙ－ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｃａｍｅｌｉｄａｅ；ａ ｃａｓｅ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ．Ａｐｒ；５４（１）：３９－４７（２００２）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｍａｙ；１０９（１）：９３－１０１（２００３））。重鎖抗体の可変ドメイン（ＶＨＨドメイン）は、適応性免疫応答により生成される最小で公知の抗原結合ユニットを代表する（Ｋｏｃｈ－Ｎｏｌｔｅ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．Ｎｏｖ；２１（１３）：３４９０－８．Ｅｐｕｂ ２００７ Ｊｕｎ １５（２００７））。
【0078】
[000144]用語「抗原結合ドメイン」とは、本明細書で使用される場合、１つ又は複数のＣＤＲ又は任意のその他の抗体断片（抗原と結合するが、しかし無変天然の抗体構造を含まない）を含む抗体の一部分から形成された抗体断片を指す。抗原結合ドメインの例として、非限定的に、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖダイマー（２価のダイアボディ）、二重特異性抗体、多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、及び２価ドメイン抗体が挙げられる。抗原結合ドメインは、親抗体が結合する抗原と同一の抗原に結合する能力を有する。ある特定の実施形態では、抗原結合ドメインは、１つ又は複数の異なるヒト抗体から得られたフレームワーク領域にグラフト化された特定のヒト抗体に由来する１つ又は複数のＣＤＲを含み得る。抗原結合ドメインのより多くの詳細なフォーマットについては、Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ，２０１５（前出）、及びＢｒｉｎｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，９（２），ｐｐ．１８２－２１２（２０１７）に記載されており、それらは全体参照として本明細書において組み込まれる。
【0079】
[000145]本明細書で使用される場合、用語「ファゴサイトーシス」とは、原形質膜エンベロープ内での粒子状物質（＞０．５Ｄｍ）の細胞内取り込みプロセスを指す。ファゴサイトーシスは、異なるバリアント、例えばアポトーシス細胞の取り込みと関係するエフェロサイトーシス、感染症及び炎症に起因する壊死性細胞の取り込みと関係するネクロトーシス及びピロトーシス、並びに外因性粒子の取り込みと関係する異食作用等を含む。
【0080】
[000146]「抗原」とは、本明細書で使用される場合、細胞培養物又は動物において、抗体の産生又は免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又は骨髄細胞）応答を刺激することができる化合物、組成物、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、又は物質を指し、細胞培養物（例えば、ハイブリドーマ等）に添加されるか、又は動物内に注射若しくは吸収されるか、又は細胞表面上で発現される組成物（例えば、がん特異的タンパク質を含むもの等）を含む。抗原は、特異的体液性又は細胞性免疫の生成物（例えば、抗体等）と反応する。
【0081】
[000147]「Ｆａｂ」とは、抗体に関する場合、ジスルフィド結合によって一本鎖重鎖の可変領域及び第１の定常領域に結合した一本鎖軽鎖（可変領域及び定常領域の両方）から構成される抗体の部分を指す。「Ｆ（ａｂ）２」とは、Ｆａｂのダイマーを指す。
【0082】
[000148]「Ｆａｂ’」とは、ヒンジ領域の部分を含むＦａｂ断片を指す。
[000149]「Ｆ（ａｂ’）２」とは、Ｆａｂ’のダイマーを指す。
[000150]抗体に関して「フラグメントディフィカルト（ｆｒａｇｍｅｎｔ ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ）（Ｆｄ）」とは、軽鎖と組み合わされてＦａｂを形成することができる重鎖断片のアミノ末端の半分を指す。例えば、Ｆｄ断片はＶＨ及びＣＨ１ドメインから構成され得る。
[000149]「Ｆ（ａｂ’）２」とは、Ｆａｂ’のダイマーを指す。
[000150]抗体に関して「フラグメントディフィカルト（ｆｒａｇｍｅｎｔ ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ）（Ｆｄ）」とは、軽鎖と組み合わされてＦａｂを形成することができる重鎖断片のアミノ末端の半分を指す。例えば、Ｆｄ断片はＶＨ及びＣＨ１ドメインから構成され得る。
【0083】
[000151]抗体に関して「Ｆｖ」とは、完全な抗原結合部位を担持する抗体の最小断片を指す。Ｆｖ断片は、一本鎖重鎖の可変領域に結合した一本鎖軽鎖の可変領域から構成される。２ドメイン間の会合が導入されたジスルフィド結合により強化されたｄｓＦｖｓを含む、いくつかのＦｖデザインが提供されているが、またｓｃＦｖｓは、２つのドメインを単一のポリペプチドとして共に結合するペプチドリンカーを使用して形成され得る。対応する免疫グロブリン重鎖又は軽鎖の可変及び定常ドメインと関連する、免疫グロブリン重鎖又は軽鎖の可変ドメインを含有するＦｖｓコンストラクトも生成された。Ｆｖｓもダイアボディ及びトリアボディを形成するために多量体化された（Ｍａｙｎａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｍｅｄ Ｅｎｇ ２ ３３９－３７６（２０００））。
【0084】
[000152]「単鎖Ｆｖ抗体」又は「ｓｃＦｖ」とは工学操作された抗体を指し、直接又はペプチドリンカー配列を介して相互に結びついた軽鎖可変領域及び重鎖可変領域から構成される（Ｈｕｓｔｏｎ ＪＳ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，８５：５８７９（１９８８））。ＳｃＦｖは、多量体構造（二量体：「ダイアボディ」、三量体：「トリアボディ」、四量体：「テトラボディ」）を開発するための基本的モジュールとしての役目を果たし得る。
【0085】
[000153]「ダイアボディ」又は「ｄＡｂ」は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を含み、断片は、同一のポリペプチド鎖内にＶＬドメインと結びついたＶＨドメインを含む（ＶＨ－ＶＬ又はＶＬ－ＶＨ）（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．Ｊｕｌ １５；９０（１４）：６４４４－８（１９９３）；欧州特許第４０４０９７号；国際公開第９３／１１１６１号を参照されたい）。同一鎖上の２つのドメイン間で対形成するのを可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは別の鎖の相補的ドメインと強制的に対形成することとなり、これにより２つの抗原結合部位を創出する。抗原結合部位は同一又は異なる抗原（又はエピトープ）を標的とする場合がある。ある特定の実施形態では、「二重特異性ｄｓダイアボディ」は、２つの異なる抗原（又はエピトープ）を標的とするダイアボディである。
【0086】
[000154]「ｄｓＦｖ」とは、一本鎖軽鎖の可変領域と一本鎖重鎖の可変領域との間の結合がジスルフィド結合であるジスルフィド安定化Ｆｖ断片を指す。いくつかの実施形態では、「（ｄｓＦｖ）２」又は「（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）」は、ペプチドリンカー（例えば、長い可撓性リンカー）によりにリンクした２つのＶＨ部分が、ジスルフィド架橋を介して２つのＶＬ部分にそれぞれ結合した３つのペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’は、各ジスルフィドによりペア化した重鎖及び軽鎖が異なる抗原特異性を有し、二重特異性である。
【0087】
[000155]用語「価」とは、本明細書で使用される場合、所与の分子内の特定された数の抗原結合部位の存在を指す。用語「１価」とは、１つの単一抗原結合部位のみを有する抗体又は抗原結合断片を指し、及び用語「多価」とは、複数（すなわち、２以上）の抗原結合部位を有する抗体又は抗原結合断片を指す。したがって、用語「２価」、「４価」、及び「６価」は、抗原結合分子内の２つの結合部位、４つの結合部位、及び６つの結合部位の存在をそれぞれ表す。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は２価である。
【0088】
[000156]「ナノボディ」とは、重鎖抗体に由来するＶＨＨドメイン、及び２つの定常ドメインＣＨ２及びＣＨ３から構成される抗体断片を指す。
[000157]「ドメイン抗体」又は「単一ドメイン抗体」又は「ｓｄＡｂ」とは、重鎖の可変領域又は軽鎖の可変領域のみを含有する抗体断片を指す。特定の事例では、２つ以上のＶＨドメインがペプチドリンカーと共有結合的に結びついて２価又は多価ドメイン抗体を創出する。２価ドメイン抗体の２つのＶＨドメインは、同一又は異なる抗原を標的とし得る。
[000157]「ドメイン抗体」又は「単一ドメイン抗体」又は「ｓｄＡｂ」とは、重鎖の可変領域又は軽鎖の可変領域のみを含有する抗体断片を指す。特定の事例では、２つ以上のＶＨドメインがペプチドリンカーと共有結合的に結びついて２価又は多価ドメイン抗体を創出する。２価ドメイン抗体の２つのＶＨドメインは、同一又は異なる抗原を標的とし得る。
【0089】
[000158]抗体に関して「Ｆｃ」とは、ジスルフィド結合を介して、第２の重鎖の第２の及び第３の定常領域に結合した第１の重鎖の第２及び第３の定常領域から構成される抗体の部分を指す。抗体のＦｃ部分は、様々なエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、及びファゴサイトーシス等に関与する。
【0090】
[000159]用語「キメラ」とは、本明細書で使用される場合、１つの種に由来する重鎖及び／又は軽鎖の部分、並びに異なる種に由来する重鎖及び／又は軽鎖の残りの部分を有する抗体又は抗原結合ドメインを意味する。例証的事例において、キメラ抗体は、ヒトに由来する定常領域、及び非ヒト動物由来、例えばマウス由来等の可変領域を含み得る。別の例証的事例において、キメラ抗体は、ヒトに由来するＦＲ領域、及び非ヒト動物由来、例えばマウス由来等のＣＤＲ領域を含み得る。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物、例えばマウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモット、又はハムスターである。
【0091】
[000160]用語「ヒト化」とは、本明細書で使用される場合、抗体又は抗原結合ドメインが、非ヒト動物に由来するＣＤＲ、ヒトに由来するＦＲ領域、及び該当する場合には、ヒトに由来する定常領域を含むことを意味する。
【0092】
[000161]用語「作動可能にリンクしている」又は「作動可能にリンクした」とは、スペーサー又はリンカー又は中間に位置する配列の有無に関わらず、目的とする２つ以上の生物学的配列が、意図された方式でそれらが機能するのを可能にする関係にあるように並列配置されることを指す。ポリペプチドに関して使用されるとき、リンクした生成物が意図された生物学的機能を有するのを可能にする方式でポリペプチド配列がリンクしていることを意味するように意図されている。例えば、抗体可変領域は、抗原結合活性を有する安定な生成物を提供するために、定常領域と作動可能にリンクし得る。別の例では、抗原結合ドメインは、別の抗原結合ドメインと、それらの中間に位置する配列によって作動可能にリンクし得るが、そのような中間に位置する配列はスペーサーあり得るか、又はかなり長めの配列、例えば抗体の定常領域等を含み得る。該用語はポリヌクレオチドに関しても使用され得る。１つの事例では、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが、制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、サイレンサー配列等）と作動可能にリンクしているとき、ポリヌクレオチド配列は、ポリヌクレオチドからのポリペプチドの制御された発現を可能にするようにリンクされることを意味するように意図される。
【0093】
[000162]用語「融合」又は「融合した」とは、アミノ酸配列（例えば、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質）に関して使用されるとき、例えば化学結合又は組換え手段により、２つ以上のアミノ酸配列を組み合わせて一本のアミノ酸配列にすることを指す。融合アミノ酸配列は、２つのコーディングポリヌクレオチド配列の遺伝的組換えにより生成され得るが、また組換えポリヌクレオチドを含有するコンストラクトを宿主細胞内に導入する方法により発現可能である。
【0094】
[000163]「ＳＩＲＰα」は、「ＳＩＲＰアルファ」又は「ＳＩＲＰ－アルファ」と交換可能に使用され、本明細書で使用される場合、骨髄細胞（例えば、マクロファージ、果粒球、骨髄樹状細胞、マスト細胞、及びその前駆体、例えば造血幹細胞（ＨＳＣ）等）、樹状細胞により主に発現され、並びに幹細胞又はニューロンによっても発現されるシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）ファミリーに由来する制御性膜糖タンパク質を指す。ＳＩＲＰαの構造は細胞外ドメイン及び細胞質ドメインを含む。ＳＩＲＰαの細胞外ドメインは、膜遠位Ｉｇ可変様（ＩｇＶ）フォールド、及び２つの膜近位Ｉｇ定常様（ＩｇＣ）フォールドから構成される。ＳＩＲＰαのＩｇＶドメインは、ＣＤ４７の細胞外Ｉｇドメインの結合に関与する。ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰαはヒトＳＩＲＰαである。ヒトＳＩＲＰαをコードする遺伝子は多型性遺伝子であり、またいくつかのバリアントがヒト集団において記載された。最も一般的なタンパク質バリアントはＳＩＲＰα ｖ１及びＳＩＲＰα ｖ２である（受託番号ＮＰ＿５４２９７０（Ｐ７８３２４）及びＣＡＡ７１４０３）。ＳＩＲＰαは、本明細書で使用される場合、その他の動物種由来、例えばとりわけマウス及びカニクイザル由来等であり得る。Ｍｕｓ Ｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）ＳＩＲＰαタンパク質の例示的配列は、ＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ Ｎｏ．ＮＰ＿０３１５７３、又はＢＡＡ２０３７６．１、又はＢＡＡ１３５２１．１に開示されている。Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ（サル）ＳＩＲＰαタンパク質の例示的配列は、ＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ Ｎｏ．ＮＰ＿００１２７１６７９に開示されている。
【0095】
[000164]「ＰＤ－Ｌ１」とは、本明細書で使用される場合、プログラム細胞死リガンド１を指す（ＰＤ－Ｌ１、例えば、Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１０２７を参照されたい）。ヒトＰＤ－Ｌ１の代表的なアミノ酸配列が、ＮＣＢＩ受託番号：ＮＰ＿０５４８６２．１として開示され、またヒトＰＤ－Ｌ１をコードする代表的な核酸配列が、ＮＣＢＩ受託番号：ＮＭ＿０１４１４３．３として示される。ＰＤ－Ｌ１は、胎盤、脾臓、リンパ節、胸腺、心臓、胎児肝臓において発現され、また多くの腫瘍又はがん細胞上にも見出される。ＰＤ－Ｌ１は、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び骨髄細胞上で発現されるその受容体ＰＤ－１又はＢ７－１と結合する。ＰＤ－Ｌ１とその受容体とが結合すると、シグナル伝達を誘発し、サイトカイン産生及びＴ細胞増殖のＴＣＲ媒介式の活性化を抑制する。したがって、ＰＤ－Ｌ１は、特定の事象、例えば妊娠、自己免疫疾患、組織同種異系移植等の期間中に免疫系を抑制する際に重要な役割を演じており、また腫瘍又はがん細胞が免疫チェックポイントを迂回し、また免疫応答を回避するのを可能にすると考えられている。
【0096】
[000165]「ＣＬＤＮ１８」は、本明細書で使用される場合、クローディン１８を指し、また任意のそのバリアントを含む（ＣＬＤＮ１８．１及びＣＬＤＮ１８．２、細胞により天然に発現されるか又はＣＬＤＮ１８遺伝子をトランスフェクトされた細胞により発現される、ＣＬＤＮ１８のコンフォメーション、アイソフォーム、及び種間相同体を含む）。ある特定の実施形態では、ＣＬＤＮ１８はヒトＣＬＤＮ１８である。ＣＬＤＮ１８は、本明細書で使用される場合、その他の動物種由来、例えばとりわけヒト、マウス、及びカニクイザル由来等であり得る。用語「ＣＬＤＮ１８」、「ＣＬＤＮ－１８」、「ＣＬＤＮ １８」、「クローディン１８」、「クローディン－１８」、又は「クローディン１８」は、本開示において交換可能に使用され得る。別途規定されない限り、本明細書で使用されるＣＬＤＮ１８とは、ＣＬＤＮ１８タンパク質を指す。
【0097】
[000166]「ＣＬＤＮ１８．１」は、ＣＬＤＮ１８のスプライスバリアントであり、そして細胞により天然に発現されるか又はＣＬＤＮ１８．１遺伝子をトランスフェクトされた細胞上で発現される、ＣＬＤＮ１８．１の翻訳後修飾されたバリアント、アイソフォーム、及び種間相同体を含む。用語「ＣＬＤＮ１８．１」、「ＣＬＤＮ－１８．１」、「ＣＬＤＮ １８．１」、「クローディン１８．１」、「クローディン－１８．１」、又は「クローディン１８．１」は、本開示において交換可能に使用され得る。別途規定されない限り、本明細書で使用されるＣＬＤＮ１８．１とは、ＣＬＤＮ１８．１タンパク質を指す。ヒトＣＬＤＮ１８．１タンパク質の例示的配列は、ＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ Ｎｏ．ＮＰ＿０５７４５３．１に開示されている。
【0098】
[000167]「ＣＬＤＮ１８．２」はＣＬＤＮ１８のスプライスバリアントであり、そして細胞により天然に発現されるか又はＣＬＤＮ１８．２遺伝子をトランスフェクトされた細胞上で発現される、ＣＬＤＮ１８．２の翻訳後修飾されたバリアント、アイソフォーム、及び種間相同体を含む。用語「ＣＬＤＮ１８．２」、「ＣＬＤＮ－１８．２」、「ＣＬＤＮ １８．２」、「クローディン１８．２」、「クローディン－１８．２」、又は「クローディン１８．２」は、本開示において交換可能に使用され得る。別途規定されない限り、本明細書で使用されるＣＬＤＮ１８．２とは、ＣＬＤＮ１８．２タンパク質を指す。ヒトＣＬＤＮ１８．２タンパク質の例示的配列は、ＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ Ｎｏ．ＮＰ＿００１００２０２６．１に開示されている。
【0099】
[000168]用語「特異的結合」又は「～に特異的に結合する」とは、本明細書で使用される場合、２つの分子間、例えば抗体又はその抗原結合ドメインと抗原との間等の非ランダム結合反応を指す。ある特定の実施形態では、本明細書に提示される抗体分子又は抗原結合ドメインは、≦１０－６Ｍ（例えば、≦５×１０－７Ｍ、≦２×１０－７Ｍ、≦１０－７Ｍ、≦５×１０－８Ｍ、≦２×１０－８Ｍ、≦１０－８Ｍ、≦５×１０－９Ｍ、≦４×１０－９Ｍ）の結合親和性（ＫＤ）を有しながら、ヒトＳＩＲＰα、ヒトクローディン１８．２、及び／又はヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する。本明細書で使用されるＫＤとは、会合速度に対する解離速度の比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を指し、表面プラズモン共鳴法、マイクロスケールサーモフォレシス法、ＨＰＬＣ－ＭＳ法、及びフローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ等）法を含むが、これらに限定されない当技術分野において公知の任意の従来法を使用することにより決定され得る。ある特定の実施形態では、ＫＤ値は、フローサイトメトリーを使用することにより適切に決定され得る。
【0100】
[000169]用語「エピトープ」とは、本明細書で使用される場合、抗体が結合する抗原上の特定の原子又はアミノ酸の群を指す。エピトープは、連続アミノ酸（線形又は連続性エピトープとも呼ばれる）、又はタンパク質の三次フォールディングにより並置された不連続アミノ酸（コンフィギュレーション又はコンフォメーショナルエピトープとも呼ばれる）の両方から形成され得る。連続アミノ酸から形成されたエピトープは、タンパク質上の一次アミノ酸残基に沿って一般的に直線的に配置構成され、そして連続するアミノ酸の小さなセグメントは、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子により抗原結合部から消化され得るか又は変性溶媒に曝露されても保持される一方、三次フォールディングにより形成されたエピトープは、変性溶媒を用いて処理すると一般的に失われる。エピトープは、一般的に少なくとも３個、そしてより通例では少なくとも５個、約７個、又は約８～１０個のアミノ酸を、固有の空間的コンフォメーションにおいて含む。２つの抗体がある抗原に対して競合的結合性を示す場合には、それらは当該抗原内の同一のエピトープ、又は密接に関連するエピトープに結合することができる。例えば、抗体又は抗原結合ドメインが抗原に対する参照抗体の結合を少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％ブロックする場合には、抗体又は抗原結合ドメインは、参照抗体と同一のエピトープ／密接に関連するエピトープに結合すると考えられ得る。
【0101】
[000170]用語「アミノ酸」とは、本明細書で使用される場合、各アミノ酸に固有の側鎖と共に、アミン（－ＮＨ２）及びカルボキシル（－ＣＯＯＨ）官能基を備える有機化合物を指す。本開示においては、アミノ酸の名称は、標準的な１文字又は３文字コードとしても表され、以下のように要約する。
【0102】
【表1】
【0103】
[000171]「保存的置換」とは、アミノ酸配列と関連する場合、アミノ酸残基を、類似した物理化学特性を有する側鎖を有する異なるアミノ酸残基と置換することを指す。例えば、保存的置換は、疎水性側鎖（例えば、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及びＩｌｅ）を有するアミノ酸残基の間、中性の親水性側鎖（例えば、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、及びＧｌｎ）を有する残基の間、酸性側鎖を有する残基（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）の間、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＡｒｇ）の間、又は芳香族側鎖を有する残基（例えば、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＰｈｅ）の間で生じ得る。当技術分野において公知なように、保存的置換は、タンパク質のコンフォメーション構造に有意な変化を通常引き起こさず、したがってタンパク質の生物学的活性を保持し得る。
【0104】
[000172]用語「相同体」及び「相同的」は、本明細書で使用される場合、交換可能であり、そして最適にアライメントされたとき、別の配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する核酸配列（若しくはその相補鎖）又はアミノ酸配列を指す。
【0105】
[000173]「パーセント（％）配列同一性」は、アミノ酸配列（又は核酸配列）に関する場合、配列のアライメントを実施し、そして最大数の同一アミノ酸（又は核酸）を実現するために、必要な場合にはギャップを導入した後、参照配列内のアミノ酸（又は核酸）残基と同一である候補配列内のアミノ酸（又は核酸）残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸残基の保存的置換は、同一残基とみなされる場合もあれば、またみなされない場合もある。アミノ酸（又は核酸）配列同一性のパーセントの決定を目的とするアライメントは、例えば公的に利用可能なツール、例えばＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴｐ（米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のウェブサイト上で利用可能、Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３－４１０（１９９０）；Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｆ．ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９－３４０２（１９９７）も参照）、ＣｌｕｓｔａｌＷ２（欧州バイオインフォマティクス研究所のウェブサイト上で利用可能、Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ．Ｇ．ｅｔ ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：３８３－４０２（１９９６）；Ｌａｒｋｉｎ Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ），２３（２１）：２９４７－８ （２００７）も参照）、及びＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等を使用して実現可能である。当業者はツールにより提供されるデフォルトパラメーターを使用してもよく、また例えば適するアルゴリズムを選択することなどによって、アライメントするためのパラメーターを適宜カスタマイズすることができる。
【0106】
[000174]本明細書で使用される場合、用語「骨髄細胞」とは、血液、骨髄、身体のその他の造血又はその他の非造血コンパートメント中に見出される正常又は新生細胞を指す。特に、用語「骨髄細胞」は、単球（マクロファージ及び樹状細胞を誘発する）、多形核好中球、好酸球、好塩基球、及びマスト細胞、並びに単球／マクロファージ系統、及び異なる樹状細胞系統を含む、骨髄に由来する細胞系列を意味するのに、本明細書において使用される。該用語は、その分化のすべての段階において見出される骨髄細胞系列の細胞を指し、したがって、造血芽細胞、すなわち骨髄細胞系列に決定づけられているが、しかしまだ分化の初期段階にある造血細胞を含む。例として、特に骨髄芽球が挙げられる。用語「骨髄細胞」は、骨髄前駆細胞、すなわち、骨髄単球前駆細胞、前赤芽球、又は未成熟の核芽球等の細胞に分化する能力を有する、例えば骨髄内の細胞系列も含む。状態「を処置すること」又はその「処置」は、本明細書で使用される場合、状態を予防若しくは緩和すること、状態の発現若しくは状態の発症速度を低速化させること、状態を発症するリスクを低下させること、状態と関連する症状の発症を予防若しくは遅延させること、状態と関連する症状を低下若しくは終焉させること、状態の完全若しくは部分的退化を創出すること、状態を治癒させること、又はそのいくつかの組合せを含む。
【0107】
[000175]用語「対象」又は「個体」又は「動物」又は「患者」とは、本明細書で使用される場合、疾患又は障害の診断、予測、良化、予防、及び／又は処置を必要とする、哺乳動物又は霊長類を含むヒト又は非ヒト動物を指す。哺乳動物対象として、ヒト、飼育動物、家畜、及び動物園動物、競技動物、又はペット動物、例えばイヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ブタ、ウシ、クマ等が挙げられる。
【0108】
[000176]用語「ベクター」とは、本明細書で使用される場合、ある媒体を指し、その中に、タンパク質をコードするポリヌクレオチドが当該タンパク質の発現を引き起こすために作動可能に挿入され得る。ベクターは、宿主細胞を変換し、それに形質導入されるか、又はトランスフェクトするのに使用され得、宿主細胞内でそれが担持する遺伝要素の発現を引き起こす。ベクターの例として、プラスミド、ファージミド、コスミド、及び人工染色体、例えば酵母菌人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、又はＰ１由来の人工染色体（ＰＡＣ）等、バクテリオファージ、例えばラムダファージ又はＭ１３ファージ等、及び動物ウイルスが挙げられる。ベクターとして使用される動物ウイルスの分類は、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、及びパポバウイルス（例えば、ＳＶ４０）を含む。ベクターは、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択可能なエレメント、及びレポーター遺伝子を含む、発現をコントロールするための様々なエレメントを含有し得る。それに加えて、ベクターは複製開始点を含有し得る。ベクターは、ウイルス粒子、リポソーム、又はタンパク質コーティングを含むが、これらに限定されない、細胞内へのその進入を補助する物質も含み得る。ベクターは、発現ベクター又はクローニングベクターであり得る。
【0109】
[000177]慣用句「宿主細胞」とは、本明細書で使用される場合、外因性ポリヌクレオチド及び／又はベクターが導入された細胞を指す。
[000178]「がん」は、本明細書において「腫瘍」と交換可能に使用され、悪性細胞増殖又は新生物、異常な増殖、浸潤、又は転移により特徴付けられる任意の医学的状態を指し、また固形腫瘍及び非固形がん（血液悪性腫瘍）、例えば白血病等の両方を含む。本明細書で使用される場合、「固形腫瘍」とは、新生細胞及び／又は悪性細胞の固体腫瘤を指す。がん又は腫瘍の例として、造血器悪性腫瘍、口腔癌（例えば、口唇、舌、又は咽頭の癌）、消化器官（例えば、食道、胃、小腸、結腸、大腸、又は直腸）、腹膜、肝臓、及び胆汁道、膵臓、呼吸器系、例えば喉頭又は肺（小細胞及び非小細胞）等、骨、結合組織、皮膚（例えば、黒色腫）、乳房、生殖器官（卵管、子宮、子宮頸部、睾丸、卵巣、又は前立腺）、尿道（例えば、膀胱又は腎臓）、脳、及び内分泌腺、例えば甲状腺等が挙げられる。ある特定の実施形態では、がんは、卵巣がん、乳がん、頭頸部がん、腎臓がん、膀胱がん、肝細胞がん、及び結腸直腸がんから選択される。ある特定の実施形態では、がんは、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、及びＢ細胞リンパ腫から選択される。
[000178]「がん」は、本明細書において「腫瘍」と交換可能に使用され、悪性細胞増殖又は新生物、異常な増殖、浸潤、又は転移により特徴付けられる任意の医学的状態を指し、また固形腫瘍及び非固形がん（血液悪性腫瘍）、例えば白血病等の両方を含む。本明細書で使用される場合、「固形腫瘍」とは、新生細胞及び／又は悪性細胞の固体腫瘤を指す。がん又は腫瘍の例として、造血器悪性腫瘍、口腔癌（例えば、口唇、舌、又は咽頭の癌）、消化器官（例えば、食道、胃、小腸、結腸、大腸、又は直腸）、腹膜、肝臓、及び胆汁道、膵臓、呼吸器系、例えば喉頭又は肺（小細胞及び非小細胞）等、骨、結合組織、皮膚（例えば、黒色腫）、乳房、生殖器官（卵管、子宮、子宮頸部、睾丸、卵巣、又は前立腺）、尿道（例えば、膀胱又は腎臓）、脳、及び内分泌腺、例えば甲状腺等が挙げられる。ある特定の実施形態では、がんは、卵巣がん、乳がん、頭頸部がん、腎臓がん、膀胱がん、肝細胞がん、及び結腸直腸がんから選択される。ある特定の実施形態では、がんは、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、及びＢ細胞リンパ腫から選択される。
【0110】
[000179]用語「薬学的に許容される」とは、指定された担体、媒体、稀釈剤、賦形剤（複数可）、及び／又は塩が、一般的に、製剤を含むその他成分と化学的及び／又は物理的に適合すること、並びにそのレシピエントと生理学的に適合することを表す。
【0111】
[000180]Ａ．多重特異性分子
[000181]１つの態様では、本開示は、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン、活性化受容体結合ドメイン、及び標的抗原結合ドメインを含む多重特異性分子について提示する。本明細書に提示される多重特異性分子は、１）活性化受容体（例えば、貪食性細胞上で発現されるＦｃγＲ）、２）標的細胞上で発現される標的抗原、及び３）免疫エフェクター細胞（例えば、貪食性細胞、例えば単球又はマクロファージ等）上で発現されるＳＩＲＰアルファと結合することができるように構成される。標的抗原は、例えば、腫瘍表面抗原、炎症性抗原、又は感染性微生物の抗原であり得る。
[000181]１つの態様では、本開示は、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン、活性化受容体結合ドメイン、及び標的抗原結合ドメインを含む多重特異性分子について提示する。本明細書に提示される多重特異性分子は、１）活性化受容体（例えば、貪食性細胞上で発現されるＦｃγＲ）、２）標的細胞上で発現される標的抗原、及び３）免疫エフェクター細胞（例えば、貪食性細胞、例えば単球又はマクロファージ等）上で発現されるＳＩＲＰアルファと結合することができるように構成される。標的抗原は、例えば、腫瘍表面抗原、炎症性抗原、又は感染性微生物の抗原であり得る。
【0112】
[000182]いかなる理論にも拘泥するつもりもないが、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン及び活性化受容体結合ドメインは、免疫エフェクター細胞（例えば、貪食性細胞）上のＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体と架橋し、次に標的細胞上での標的抗原結合ドメインと標的抗原との間の相互作用を介して標的細胞と架橋することにより、複数の活性化シグナルに関与し、そしてそれを提供し得るものと考えられている。そのような設計は、免疫エフェクター細胞が活性化し、そして活性化した免疫エフェクター細胞が標的微環境に関与し、それに導入されるのを可能にし、標的細胞（例えば、がん細胞、感染細胞、又は損傷を受けた細胞若しくは疾患細胞）のファゴサイトーシス及び殺滅を惹起する。したがって、本開示の多重特異性分子は、多重特異性マクロファージエンゲイジャーとも呼ばれる。本明細書に提示されるエンゲイジャーは、特に、望まれない細胞（例えば、がん細胞等）を選択的に除去する際に有利である一方、正常細胞は、ＣＤ４７を発現する細胞であっても、マクロファージのファゴサイトーシスによる標的の対象にはならない。したがって、本明細書に提示される多重特異性分子は、正常細胞から異常な細胞を除去する際に高度の選択性を示し、したがって例えばがん処置において、それが有する副作用が抑えられ、毒性はより低く、及び安全性も高い。
【0113】
[000183]いかなる理論にも拘泥するつもりもないが、がん処置において、ＳＩＲＰ－アルファ及び／又は活性化受容体（例えば、ＦｃγＲ）が活性化することで、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）を腫瘍亢進状態から抗腫瘍状態にリダイレクトする。したがって、本明細書に提示される多重特異性分子又はエンゲイジャーの設計は、腫瘍微環境内にこれまでに存在し、及び／又は新規に導入された腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）のリダイレクトも可能にし、がん殺滅を増強する。換言すれば、本明細書に提示される多重特異性分子／多重特異性マクロファージエンゲイジャーは、免疫抑制性のマクロファージ及びＴＡＭとなるのではなく、がん細胞を効果的且つ特異的に殺滅することができる単球又はマクロファージを促進するか又はそれを維持することができる。したがって、本開示は、ＴＡＭを抗腫瘍マクロファージにリダイレクトしてがん細胞のファゴサイトーシスを増強する方法についても提示する。
【0114】
[000184]がん内には、免疫抑制的環境の確立に寄与する腫瘍微小環境が存在する。腫瘍微小環境は、悪性腫瘍に移行する期間中に、腫瘍細胞と共に発生し、それに対する支援を提供する細胞からなる複雑な自然環境である（Ｎｏｙ ｅｔ ａｌ．，Ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ：ｆｒｏｍ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｔｏ ｔｈｅｒａｐｙ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０１４ Ｊｕｌｙ １７；４１（１）：４９－６１）。ＩＬ－１０、グルココルチコイドホルモン、アポトーシス細胞、及び免疫複合体等の因子は、自然免疫細胞機能を妨害し得る。
【0115】
[000185]成熟したマクロファージを誘発する単球は、非常に多くの因子により誘引され、そして腫瘍微小環境中に移動し得るが、このような単球の大部分はＴＡＭに分化し得る（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，（２０２０）Ｔｕｍｏｒ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ：Ｒｅｃｅｎｔ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｆｒｏｎｔ．Ｏｎｃｏｌ．１０：１８８）。腫瘍微小環境内に存在するマクロファージは、このようなマクロファージが腫瘍促進性のＴＡＭに分化した状態となるように、腫瘍微小環境内の様々な因子により再分極することもある。
【0116】
[000186]ＴＡＭは、主に代替活性化マクロファージ（Ｍ２表現型）及び古典的活性化マクロファージ（Ｍ１表現型）の小分画を含む（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，（２０２０）Ｔｕｍｏｒ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ：Ｒｅｃｅｎｔ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｆｒｏｎｔ．Ｏｎｃｏｌ．１０：１８８）。Ｍ１表現型を有するマクロファージは強力であり、また病原体又はがん細胞を殺滅する能力を有する。Ｍ２表現型を有するマクロファージは腫瘍細胞を貪食する機能を欠き、そしてそのような腫瘍細胞が殺滅から逃れる手助けもし、またその他の組織及び臓器に拡散する手助けもする（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，（２０２０）Ｔｕｍｏｒ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ：Ｒｅｃｅｎｔ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｆｒｏｎｔ．Ｏｎｃｏｌ．１０：１８８）。
【0117】
[000187]本明細書に提示されるエンゲイジャーのＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ＣＤ４７－ＳＩＲＰアルファ軸シグナル伝達により媒介されるマクロファージのファゴサイトーシスの下方制御を阻害し得る。がん細胞はＣＤ４７を一般的に過剰発現し、ＣＤ４７は、免疫細胞（例えば、単球又はマクロファージ）上で発現されるＳＩＲＰアルファと結合して、がん細胞が免疫細胞（例えば、単球又はマクロファージ）により除去されるのを妨げる「私を食べないで」シグナルを誘発する。ＣＤ４７－ＳＩＲＰアルファ軸の阻害は、がん細胞媒介式の抗貪食活性を相殺することができる。
【0118】
[000188]本明細書に提示されるＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ＣＤ４７－ＳＩＲＰアルファ相互作用をブロックすること、及び／又はＣＤ４７－ＳＩＲＰアルファ相互作用により媒介される下流シグナル伝達（例えば、ＳＨＰ－１シグナル伝達）をブロックすることにより、ＣＤ４７－ＳＩＲＰアルファ軸シグナル伝達を阻害し得る。ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ＳＩＲＰアルファブロッカー、例えばＳＩＲＰアルファを認識し、それと結合するＣＤ４７の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、又はＳＩＲＰアルファを認識し、それと結合する抗体若しくはその抗原結合ドメイン等を含み得る。
【0119】
[000189]より好ましい実施形態では、ＳＩＲＰアルファを認識し、それと結合する抗体又はその抗原結合ドメインは、下記の特性のうちの１つ又は複数を有する：１）ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用を実質的又は完全にブロックする能力を有する；２）ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用により媒介されるＳＨＰ－１導入を実質的又は完全にブロックする能力を有する；３）単球又はマクロファージのファゴサイトーシスを誘発する固有の活性について最低限度の活性を有する；及び４）ＳＩＲＰαのＩｇＶドメイン外部のエピトープに結合する能力を有する。
【0120】
[000190]本明細書に提示される多重特異性分子は、標的抗原結合ドメインを更に含む。したがって、用語「標的抗原結合ドメイン」は、本明細書で使用される場合、標的抗原に対する任意の結合ドメインを包含する。用語「標的抗原」とは、標的抗原を発現する細胞をその他の細胞から区別することができる任意の細胞表面マーカーを指し、腫瘍抗原、又は感染細胞上に提示される抗原を含むが、これらに限定されない。
【0121】
[000191]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、標的抗原の存在下で、免疫エフェクター細胞（ＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体を同時発現する）のエフェクター機能を選択的に誘発する。
【0122】
[000192]本明細書に提示される多重特異性分子は、免疫エフェクター細胞に結合し、それを活性化させて、非標的細胞よりも標的細胞に対する選択的応答を開始する能力を有する。
【0123】
[000193]ある特定の実施形態では、標的細胞は標的抗原を発現する。ある特定の実施形態では、標的細胞は標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する。
[000194]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、標的抗原の非存在下では、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能について最低限度の機能しか誘発しない。本明細書で使用される場合、用語「最低限度の」とは、エフェクター機能に関する場合、アイソタイプコントロールにより誘発されるレベルに匹敵するエフェクター機能のレベルを指す。ある特定の実施形態では、標的抗原の非存在下で本明細書に提示される多重特異性分子により誘発されるエフェクター機能は、標的抗原の存在下で誘発されるエフェクター機能の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％以下である。
[000194]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、標的抗原の非存在下では、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能について最低限度の機能しか誘発しない。本明細書で使用される場合、用語「最低限度の」とは、エフェクター機能に関する場合、アイソタイプコントロールにより誘発されるレベルに匹敵するエフェクター機能のレベルを指す。ある特定の実施形態では、標的抗原の非存在下で本明細書に提示される多重特異性分子により誘発されるエフェクター機能は、標的抗原の存在下で誘発されるエフェクター機能の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％以下である。
【0124】
[000195]本開示の多重特異性分子又はエンゲイジャーは、エンゲイジャーが複数の標的とモジュール式に、そして同時に関与するのを支援するための追加の構造も含む。追加の構造は、２つ以上の結合ドメインがリンクしたり、また空間的な近接性及び可撓性を実現するために分離したりするための、例えば連結エレメント、例えばリンカー、コグネートペプチド等、又は化学結合である。
【0125】
[000196]上記した追加の構造を本明細書に提示されるより高次の多重特異性マクロファージエンゲイジャー内に組み込むことで、エンゲイジャーの生成、フォールディング、安定性、機能、及び組織利用能に役立つ。
【0126】
[000197]ｉ．ＳＩＲＰα結合ドメイン
[000198]本明細書に提示される多重特異性分子のＳＩＲＰα結合ドメインは、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用を実質的にブロックする能力を有する。
[000198]本明細書に提示される多重特異性分子のＳＩＲＰα結合ドメインは、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用を実質的にブロックする能力を有する。
【0127】
[000199]２つの相互作用性分子の間の「相互作用を実質的にブロックする」とは、抗体が２つの相互作用性分子の間の結合性を少なくとも５０％阻害する能力を有するか、又は２つの分子の相互作用により誘発されたシグナル伝達について少なくとも４０％を阻害する能力を有することを意味する。ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用により誘発されたシグナル伝達は、ＳＩＲＰ－アルファの細胞内部分（例えば、Ｃ末端尾部）に対するＳＨＰ１導入により特徴付けられ得る。
【0128】
[000200]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子のＳＩＲＰα結合ドメインは、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用を完全にブロックする能力を有する。慣用句「～を完全にブロックする」とは、２つの相互作用性分子に関する場合、２つの相互作用性分子の間の結合性についてその少なくとも８０％の阻害、又は２つの分子の相互作用により誘発されたシグナル伝達について、その少なくとも５０％の阻害を意味する。
【0129】
[000201]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子のＳＩＲＰα結合ドメインは、ＳＩＲＰα－ＣＤ４７相互作用を完全にブロックすること、又はそれがＳＩＲＰα－ＣＤ４７相互作用に対する効果をブロックする／しないに関わらず、ＳＩＲＰα－ＣＤ４７相互作用媒介式の下流シグナル伝達（例えば、ＳＨＰ－１導入）を完全にブロックすることのいずれかによって、ＣＤ４７がＳＩＲＰα（ファゴサイトーシスを抑制する）に結合することにより送達される「私を食べないで」シグナルを完全にブロックすることができる。ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用を完全にブロックする能力を有するＳＩＲＰ－アルファ抗体は、本明細書において完全ブロッカーとも呼ばれる。
【0130】
[000202]ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の結合相互作用のブロックは、任意の適するアッセイ、例えば競合ＥＬＩＳＡ又は競合ＦＡＣＳアッセイにより決定可能である。手短に述べると、競合ＥＬＩＳＡの場合、ＳＩＲＰ－アルファの可溶性細胞外ドメイン（ＥＣＤ）が基材上に固定することができ、テスト品ＳＩＲＰ－アルファ抗体は、ＣＤ４７のある濃度の可溶性ＥＣＤがＳＩＲＰ－アルファの固定化されたＥＣＤに結合するのをブロックするその能力について、異なる濃度でテストすることができる。ＳＩＲＰ－アルファの固定化されたＥＣＤに対するＣＤ４７のＥＣＤの結合性は、テスト品ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインの非存在下及び存在下で、それぞれ決定可能である。テスト品ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインの存在下でのＣＤ４７及びＳＩＰＲ－アルファの結合性低下が決定可能であり、したがってブロッキングのパーセンテージを決定することができる。
【0131】
[000203]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるある特定の抗ＳＩＲＰα結合ドメインは、競合ＥＬＩＳＡアッセイにより測定した場合、９０％を超える最大ブロッキング率（％）を有する。アッセイ条件は、本開示の実施例１２に提示される条件に類似し得る（ＣＤ４７の可溶性ＥＣＤの濃度は２５ｎＭであり、またＳＩＲＰαの可溶性ＥＣＤの濃度は２０ｎＭである）。本明細書に提示されるような例示的完全ブロッカーは、Ｃ１５、Ｃ２５、Ｃ４２、Ｃ５９、Ｃ７３、及びそのヒト化抗体に由来する抗ＳＩＲＰα結合ドメインである。
【0132】
[000204]用語「最大ブロッキング率（％）」は「最高ブロッキング率（％）」と交換可能に使用され、ブロッカー（例えば、ＳＩＲＰα結合ドメイン）の存在下で、濃度を漸増させたときに、２つのタンパク質（例えば、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７）間の相互作用のブロッキング率（％）の頭打ちを指す。一般的に、ブロックキングのパーセンテージは、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインの濃度増加と共に上昇する可能性があるが、しかしながらＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインの濃度を更に増加させたにも関わらず、これ以上のブロッキングは実現不可能である頭打ちに達する。最大ブロッキング率（％）は、異なるアッセイ、例えば競合ＥＬＩＳＡアッセイ及び競合ＦＡＣＳアッセイ等に応じて変化し得る。
【0133】
[000205]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるある特定の抗ＳＩＲＰα結合ドメインは、競合ＥＬＩＳＡアッセイにより測定したときの最大ブロッキング率（％）の１０％以下の最大ブロッキング率（％）を有する。アッセイ条件は、本開示の実施例１２に提示する条件に類似し得る（ＣＤ４７の可溶性ＥＣＤの濃度は２５ｎＭであり、またＳＩＲＰαの可溶性ＥＣＤの濃度は２０ｎＭである）。本明細書に提示されるような例示的非ブロッカーはＣ５０及びそのヒト化抗体である。そのようなＳＩＲＰ－アルファ抗体は、本明細書において非ブロッカーとも呼ばれる。
【0134】
[000206]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるある特定の抗ＳＩＲＰα抗体は、競合ＥＬＩＳＡアッセイにより測定したときの最大ブロッキング率（％）の５０％以下の最大ブロッキング率（％）を有する。アッセイ条件は、本開示の実施例１２に提示する条件に類似する。そのようなＳＩＲＰ－アルファ抗体は、本明細書において部分的ブロッカーとも呼ばれる。本明細書に提示されるような例示的部分的ブロッカーはＣ３５及びそのヒト化抗体である。
【0135】
[000207]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子のＳＩＲＰα結合ドメインは、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能を標的細胞に対して誘発するという固有の活性について最低限度の活性しか有さない。ある特定の実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞、又はがん性細胞、感染細胞、又はＳＩＲＰ－アルファ媒介式のエフェクター機能、例えばファゴサイトーシス等により除去される必要がある特定の疾患細胞型である。本明細書で使用される場合、用語「固有の活性」とは、ＳＩＲＰα結合ドメインに関する場合、標的抗原結合ドメインの非存在下において、ある特定の標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞上で、免疫エフェクター細胞のファゴサイトーシスを誘発するＳＩＲＰα結合ドメインの能力を指す。ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα結合ドメインは、標的細胞に対して、２０％以下、１５％以下、１０％以下のファゴサイトーシスを誘発する。本明細書で使用される場合、用語「最低限度の」とは、ファゴサイトーシスを誘発する固有の活性に関する場合、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインの固有の活性により誘発されるファゴサイトーシスのレベル（アイソタイプコントロールにより誘発されるレベルに匹敵する）を指す。ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン単独、又はＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインを含む分子単独により誘発されるファゴサイトーシスは、本明細書に提示されるエンゲイジャーにより誘発されるファゴサイトーシスの１０％、２０％、３０％、４０％、５０％以下である。
【0136】
[000208]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子のＳＩＲＰα結合ドメインは、抗体ドメイン又は抗体模倣ドメインを含む。
[000209]本明細書で使用される場合、用語「抗体ドメイン」とは、抗体に由来する抗原結合ドメインを指し、少なくとも１つの抗体断片を含む（例えば、ＣＤＲ及び／又は可変領域配列等）。抗体ドメインは、例えば、モノクローナル抗体、抗体断片又はドメイン、抗体断片又はドメインを含む融合タンパク質、抗体断片又はドメインを含むポリペプチド複合体等を含む。ある特定の実施形態では、抗体ドメインは、Ｆａｂ、ＶＨＨ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖダイマー（２価のダイアボディ）、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、テトラボディ、ドメイン抗体、又は２価ドメイン抗体を含む。
[000209]本明細書で使用される場合、用語「抗体ドメイン」とは、抗体に由来する抗原結合ドメインを指し、少なくとも１つの抗体断片を含む（例えば、ＣＤＲ及び／又は可変領域配列等）。抗体ドメインは、例えば、モノクローナル抗体、抗体断片又はドメイン、抗体断片又はドメインを含む融合タンパク質、抗体断片又はドメインを含むポリペプチド複合体等を含む。ある特定の実施形態では、抗体ドメインは、Ｆａｂ、ＶＨＨ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖダイマー（２価のダイアボディ）、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、テトラボディ、ドメイン抗体、又は２価ドメイン抗体を含む。
【0137】
[000210]本明細書で使用される場合、用語「抗体模倣ドメイン」とは、抗体と同様にふるまう（例えば、抗体と同様に抗原に特異的に結合することができる）が、しかし免疫系により生成されることはなく、また抗体とも構造的に関連しない人工的ペプチド又は化合物を指す。用語「抗体模倣ドメイン」とは、特定の標的と結合することができ、タンパク質エンジニアリング戦略を通じて新規結合部位を組み込むように設計され得る、α－へリックス、β－シート、又はランダムコイルを含む無関係のタンパク質スキャフォールドも指す場合がある。
【0138】
[000211]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα結合ドメインは、イントラボディ（例えば、フィブロネクチンドメイン）、モノボディ、直鎖ペプチド、プロテインＡのＺドメイン（アフィボディ）、ガンマＢ結晶性ドメイン、ユビキチンドメイン、シスタチンドメイン、Ｓａｃ７ｄドメイン、三重へリックスコイルドコイルドメイン、リポカリンドメイン、膜受容体のＡドメイン、アンキリン反復モチーフ、ＦｙｎのＳＨ３ドメイン、プロテアーゼ阻害剤のクニッツドメイン、フィブロネクチンのＩＩＩ型ドメイン（ミニボディ）、ＤＡＲＰｉｎドメイン、又は炭水化物結合モジュール３２－２を含む抗体模倣ドメインである。
【0139】
[000212]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα結合ドメインは、Ｃ２５、ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０５９、ｈｕ０２５．０６０、Ｃ１５、Ｃ４２、Ｃ５９、及びＣ７３からなる群から選択される抗ＳＩＲＰα抗体の１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５、又は６個）のＣＤＲ配列を含む。
【0140】
[000213]「Ｃ２５」又は「０２５ｃ」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１の重鎖可変領域、及び配列番号２の軽鎖可変領域を有するマウス抗体を指す。
[000214]「ｈｕ０２５．０２１」とは、本明細書で使用される場合、配列番号３の重鎖可変領域、及び配列番号４の軽鎖可変領域を含む、Ｃ２５に基づくヒト化抗体を指す。
[000214]「ｈｕ０２５．０２１」とは、本明細書で使用される場合、配列番号３の重鎖可変領域、及び配列番号４の軽鎖可変領域を含む、Ｃ２５に基づくヒト化抗体を指す。
【0141】
[000215]「ｈｕ０２５．０２３」とは、本明細書で使用される場合、配列番号５の重鎖可変領域、及び配列番号６の軽鎖可変領域を含む、Ｃ２５に基づくヒト化抗体を指す。
[000216]「ｈｕ０２５．０３３」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１５９の重鎖可変領域、及び配列番号１６０の軽鎖可変領域を含む、Ｃ２５に基づくヒト化抗体を指す。
[000216]「ｈｕ０２５．０３３」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１５９の重鎖可変領域、及び配列番号１６０の軽鎖可変領域を含む、Ｃ２５に基づくヒト化抗体を指す。
【0142】
[000217]「ｈｕ０２５．０５９」とは、本明細書で使用される場合、配列番号７の重鎖可変領域、及び配列番号８の軽鎖可変領域を含む、Ｃ２５に基づくヒト化抗体を指す。
[000218]「ｈｕ０２５．０６０」とは、本明細書で使用される場合、配列番号９の重鎖可変領域、及び配列番号１０の軽鎖可変領域を含む、Ｃ２５に基づくヒト化抗体を指す。
[000218]「ｈｕ０２５．０６０」とは、本明細書で使用される場合、配列番号９の重鎖可変領域、及び配列番号１０の軽鎖可変領域を含む、Ｃ２５に基づくヒト化抗体を指す。
【0143】
[000219]「Ｃ１５」又は「０１５ｃ」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１の重鎖可変領域、及び配列番号１２の軽鎖可変領域を有するマウス抗体を指す。
[000220]「Ｃ４２」又は「０４２ｃ」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１３の重鎖可変領域、及び配列番号１４の軽鎖可変領域を有するマウス抗体を指す。
[000220]「Ｃ４２」又は「０４２ｃ」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１３の重鎖可変領域、及び配列番号１４の軽鎖可変領域を有するマウス抗体を指す。
【0144】
[000221]「Ｃ５９」又は「０５９ｃ」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１５の重鎖可変領域、及び配列番号１６の軽鎖可変領域を有するマウス抗体を指す。
[000222]「Ｃ７３」又は「０７３ｃ」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１７の重鎖可変領域、及び配列番号１８の軽鎖可変領域を有するマウス抗体を指す。
[000222]「Ｃ７３」又は「０７３ｃ」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１７の重鎖可変領域、及び配列番号１８の軽鎖可変領域を有するマウス抗体を指す。
【0145】
[000223]本明細書に提示される多重特異性分子のＳＩＲＰアルファ結合ドメインは、抗ＳＩＲＰアルファ抗体から取得可能であり、その可変領域及びＣＤＲのアミノ酸配列を下記の表１～２に示す。
【0146】
[000224]
【0147】
【表2-1】
【0148】
【表2-2】
【0149】
【表2-3】
【0150】
[000225]
【0151】
【表3-1】
【0152】
【表3-2】
【0153】
[000226]Ｘ１はＡ又はＤであり、Ｘ２はＧ又はＡであり、Ｘ３はＴ又はＳであり、Ｘ４はＬ又はＹであり、Ｘ５はＥ又はＡであり、Ｘ６はＹ又はＨであり、Ｘ７はＳ又はＰであり、Ｘ８はＹ又はＣであり、Ｘ９はＹ又はＳであり、Ｘ１０はＮ又はＳであり、Ｘ１１はＰ又はＶであり、Ｘ１２はＥ又はＫであり、Ｘ１３はＮ又はＩであり、Ｘ１４はＳ又はＡであり、Ｘ１５はＳであるか又は存在せず、Ｘ１６はＳ又はＡであり、Ｘ１７はＦ又はＬである。
【0154】
[000227]ＣＤＲは抗原結合に関与することが公知であるが、しかしながら６個のＣＤＲすべてが必須又は変更不可能というわけではないことが判明した。換言すれば、ＳＩＲＰα結合ドメインについて、ＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を実質的になおも保持しつつ、本明細書に提示される１つ又は複数のＣＤＲを置換、又は変更、又は改変することが可能である。
【0155】
[000228]重鎖ＣＤＲ３領域は、抗原結合部位の中央部に位置し、したがって抗原と最も強い接触を実現し、そして抗原に対する抗体の親和性に対して最も高い自由エネルギーを提供するものと考えられている。また重鎖ＣＤＲ３は、複数の多様化機構により、長さ、アミノ酸組成、及びコンフォメーションに関して、抗原結合部位のＣＤＲにおいてその多様性は最も高く際立っていると、やはり考えられている（Ｔｏｎｅｇａｗａ Ｓ．Ｎａｔｕｒｅ．３０２：５７５－８１）。重鎖ＣＤＲ３における多様性は、抗体特異性の大部分（Ｘｕ ＪＬ，Ｄａｖｉｓ ＭＭ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１３：３７－４５）、並びに望ましい抗原結合親和性（Ｓｃｈｉｅｒ Ｒ，ｅｔｃ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２６３：５５１－６７）を生成するのに十分である。
【0156】
[000229]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、
ａ）Ｘ１ＹＹＭＨ（配列番号１６１）の配列を含むＨＣＤＲ１、ＲＩＤＰＥＤＸ２ＥＸ３ＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１６２）の配列を含むＨＣＤＲ２、及びＧＸ１５Ｘ４Ｘ５Ｙ（配列番号１６３）の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹ（配列番号２６）の配列を含むＬＣＤＲ１、ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号２７）の配列を含むＬＣＤＲ２、及びＸ６ＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号１６４）の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｂ）ＴＹＧＭＳ（配列番号３５）の配列を含むＨＣＤＲ１、ＷＩＮＴＹＳＧＶＸ７ＴＸ８ＡＤＤＦＫＧ（配列番号１６５）の配列を含むＨＣＤＲ２、及びＤＰＨＸ９ＹＧＸ１０ＳＰＡＷＦＸ１１Ｙ（配列番号１６６）の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＸ１２ＡＳＱＸ１３ＶＧＩＸ１４ＶＡ（配列番号１８８）の配列を含むＬＣＤＲ１、ＳＡＳＮＲＹＴ（配列番号３９）の配列を含むＬＣＤＲ２、及びＱＱＹＳＸ１６ＹＰＸ１７Ｔ（配列番号１８９）の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｃ）ＥＹＶＬＳ（配列番号４１）の配列を含むＨＣＤＲ１、ＥＩＹＰＧＴＩＴＴＹＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４２）の配列を含むＨＣＤＲ２、及びＦＹＤＹＤＧＧＷＦＡＹ（配列番号４３）の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＳＡＳＳＳＶＳＳＳＤＬＨ（配列番号４４）の配列を含むＬＣＤＲ１、ＧＴＳＮＬＡＳ（配列番号４５）の配列を含むＬＣＤＲ２、及びＱＱＷＳＧＹＰＷＴ（配列番号４６）の配列を含むＬＣＤＲ３、
を含み、式中、Ｘ１はＡ又はＤであり、Ｘ２はＧ又はＡであり、Ｘ３はＴ又はＳであり、Ｘ４はＬ又はＹであり、Ｘ５はＥ又はＡであり、Ｘ６はＹ又はＨであり、Ｘ７はＳ又はＰであり、Ｘ８はＹ又はＣであり、Ｘ９はＹ又はＳであり、Ｘ１０はＮ又はＳであり、Ｘ１１はＰ又はＶであり、Ｘ１２はＥ又はＫであり、Ｘ１３はＮ又はＩであり、Ｘ１４はＳ又はＡであり、Ｘ１５はＳであるか又は存在せず、Ｘ１６はＳ又はＡであり、Ｘ１７はＦ又はＬである。
ａ）Ｘ１ＹＹＭＨ（配列番号１６１）の配列を含むＨＣＤＲ１、ＲＩＤＰＥＤＸ２ＥＸ３ＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１６２）の配列を含むＨＣＤＲ２、及びＧＸ１５Ｘ４Ｘ５Ｙ（配列番号１６３）の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹ（配列番号２６）の配列を含むＬＣＤＲ１、ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号２７）の配列を含むＬＣＤＲ２、及びＸ６ＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号１６４）の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｂ）ＴＹＧＭＳ（配列番号３５）の配列を含むＨＣＤＲ１、ＷＩＮＴＹＳＧＶＸ７ＴＸ８ＡＤＤＦＫＧ（配列番号１６５）の配列を含むＨＣＤＲ２、及びＤＰＨＸ９ＹＧＸ１０ＳＰＡＷＦＸ１１Ｙ（配列番号１６６）の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＸ１２ＡＳＱＸ１３ＶＧＩＸ１４ＶＡ（配列番号１８８）の配列を含むＬＣＤＲ１、ＳＡＳＮＲＹＴ（配列番号３９）の配列を含むＬＣＤＲ２、及びＱＱＹＳＸ１６ＹＰＸ１７Ｔ（配列番号１８９）の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｃ）ＥＹＶＬＳ（配列番号４１）の配列を含むＨＣＤＲ１、ＥＩＹＰＧＴＩＴＴＹＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４２）の配列を含むＨＣＤＲ２、及びＦＹＤＹＤＧＧＷＦＡＹ（配列番号４３）の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又はＳＡＳＳＳＶＳＳＳＤＬＨ（配列番号４４）の配列を含むＬＣＤＲ１、ＧＴＳＮＬＡＳ（配列番号４５）の配列を含むＬＣＤＲ２、及びＱＱＷＳＧＹＰＷＴ（配列番号４６）の配列を含むＬＣＤＲ３、
を含み、式中、Ｘ１はＡ又はＤであり、Ｘ２はＧ又はＡであり、Ｘ３はＴ又はＳであり、Ｘ４はＬ又はＹであり、Ｘ５はＥ又はＡであり、Ｘ６はＹ又はＨであり、Ｘ７はＳ又はＰであり、Ｘ８はＹ又はＣであり、Ｘ９はＹ又はＳであり、Ｘ１０はＮ又はＳであり、Ｘ１１はＰ又はＶであり、Ｘ１２はＥ又はＫであり、Ｘ１３はＮ又はＩであり、Ｘ１４はＳ又はＡであり、Ｘ１５はＳであるか又は存在せず、Ｘ１６はＳ又はＡであり、Ｘ１７はＦ又はＬである。
【0157】
[000230]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、
ａ）配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４若しくは配列番号１９８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号２５の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｂ）配列番号２９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号３１の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号３４の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｃ）配列番号３５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３６の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号３７の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号３８の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号４０の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｄ）配列番号４７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号４９の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号５０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５１の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号５２の配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
ａ）配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４若しくは配列番号１９８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号２５の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｂ）配列番号２９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号３１の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号３４の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｃ）配列番号３５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３６の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号３７の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号３８の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号４０の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｄ）配列番号４７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号４９の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号５０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５１の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号５２の配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
【0158】
[000231]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、Ｃ２５、Ｃ１５、Ｃ４２、Ｃ５９、及びＣ７３からなる群から選択される抗ＳＩＲＰ－アルファ抗体と同一のＨＣＤＲ及びＬＣＤＲを含み、
ａ）Ｃ２５は、配列番号１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｂ）Ｃ１５は、配列番号１１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｃ）Ｃ４２は、配列番号１３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｄ）Ｃ５９は、配列番号１５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含み、並びに
ｅ）Ｃ７３は、配列番号１７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１８の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ａ）Ｃ２５は、配列番号１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｂ）Ｃ１５は、配列番号１１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｃ）Ｃ４２は、配列番号１３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｄ）Ｃ５９は、配列番号１５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含み、並びに
ｅ）Ｃ７３は、配列番号１７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１８の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0159】
[000232]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＳＩＲＰα結合ドメインは、抗原結合ドメインがＳＩＲＰαに特異的に結合することができる限り、任意の適するフレームワーク領域（ＦＲ）配列を含む。ある特定の実施形態では、ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０５９、及びｈｕ０２５．０６０のＣＤＲ配列は、マウス抗体Ｃ２５から得られるが、しかしそれらは、当技術分野において公知の適する方法、例えば組換え技術等を使用しながら、任意の適する種、例えばとりわけ、マウス、ヒト、ラット、ウサギ等の任意の適するＦＲ配列にグラフトされ得る。
【0160】
[000233]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＳＩＲＰα結合ドメインはヒト化されている。ヒト化された抗原結合ドメインは、ヒトにおいてその免疫原性が低下している点で望ましい。ヒト化された抗原結合ドメインは、非ヒトＣＤＲ配列がヒト又は実質的にヒトのＦＲ配列にグラフトされていることから、その可変領域においてキメラである。抗原結合ドメインのヒト化は、ヒト免疫グロブリン遺伝子において、非ヒト（例えば、マウス等）ＣＤＲ遺伝子を、対応するヒトＣＤＲ遺伝子に置換することにより実質的に実施され得る（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６を参照されたい）。
【0161】
[000234]適するヒト重鎖及び軽鎖可変ドメインが、当技術分野において公知の方法を使用してこの目的を実現するために選択され得る。例証的事例では、非ヒト（例えば、齧歯類）抗体可変ドメイン配列が、既知のヒト可変ドメイン配列のデータベースに対してスクリーニング又はＢＬＡＳＴ処理され、そして非ヒトクエリー配列に最も近いヒト配列が識別され、そして非ヒトＣＤＲ配列をグラフトするためのヒトスキャフォールドとして使用される場合、「最良適合」アプローチが使用可能である（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ，（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｔ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１を参照されたい）。或いは、すべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワークが非ヒトＣＤＲをグラフトするのに使用され得る（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｔ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３を参照されたい）。
【0162】
[000235]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるヒト化抗原結合ドメインは、非ヒトであるＣＤＲ配列を除き、実質的にすべてのヒト配列から構成される。いくつかの実施形態では、可変領域ＦＲ、及び定常領域（存在する場合）は、ヒト免疫グロブリン配列に完全又は実質的に由来する。ヒトＦＲ配列及びヒト定常領域配列は、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子に由来し、例えばＦＲ配列が一方のヒト抗体に由来し、及び定常領域は他方のヒト抗体に由来し得る。いくつかの実施形態では、ヒト化抗原結合ドメインはヒトＦＲ１～４を含む。
【0163】
[000236]いくつかの実施形態では、ヒトに由来するＦＲ領域は、その由来とするヒト免疫グロブリンと同一のアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態では、ヒトＦＲの１つ又は複数のアミノ酸残基が、非ヒト親抗体由来の対応する残基と置換する。これは、ヒト化抗体又はその断片を非ヒト親抗体構造に密接に近似させるために、ある特定の実施形態において望ましい場合もある。ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるヒト化されたＳＩＲＰα結合ドメインは、ヒトＦＲ配列のそれぞれにおいて、１０、９、８、７、６、５、４、３、２個以下、若しくは１個のアミノ酸残基置換、又は重鎖若しくは軽鎖可変ドメインのすべてのＦＲにおいて、１０、９、８、７、６、５、４、３、２個以下、若しくは１個のアミノ酸残基置換を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸残基内のそのような変化は、重鎖ＦＲ領域内にのみ、軽鎖ＦＲ領域内にのみ、又は両鎖内に存在し得る。表２．１は、ヒト化抗体ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０５９、及びｈｕ０２５．０６０のＦＲ配列を示す。
【0164】
[000237]
【0165】
【表4-1】
【0166】
【表4-2】
【0167】
式中、Ｘ２０はＡ又はＶであり、Ｘ２１はＮ又はＤであり、Ｘ２２はＹ又はＦである。
[000238]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＸ２０ＳＧＦＮＩＫ（配列番号１９０）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＸ２１ＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号１９２）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｅ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＸ２２ＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号１９６）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
式中、Ｘ２０はＡ又はＶであり、Ｘ２１はＮ又はＤであり、Ｘ２２はＹ又はＦである。
[000238]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＸ２０ＳＧＦＮＩＫ（配列番号１９０）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＸ２１ＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号１９２）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｅ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＸ２２ＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号１９６）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
式中、Ｘ２０はＡ又はＶであり、Ｘ２１はＮ又はＤであり、Ｘ２２はＹ又はＦである。
【0168】
[000239]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ｉ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫ（配列番号２０７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｊ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｋ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号２０８）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｌ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｍ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｎ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｏ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２０９）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｐ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
ｉ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫ（配列番号２０７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｊ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｋ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号２０８）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｌ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｍ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｎ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｏ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２０９）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｐ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
【0169】
[000240]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ｑ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫ（配列番号２０７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｒ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｓ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号２０８）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｔ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｕ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｖ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｗ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２１２）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｘ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
ｑ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫ（配列番号２０７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｒ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｓ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号２０８）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｔ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｕ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｖ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｗ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２１２）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｘ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
【0170】
[000241]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ｙ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫ（配列番号２０７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｚ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ａａ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号２１０）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｂｂ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｃｃ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｄｄ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｅｅ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２０９）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｆｆ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
ｙ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫ（配列番号２０７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｚ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ａａ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号２１０）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｂｂ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｃｃ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｄｄ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｅｅ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２０９）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｆｆ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
【0171】
[000242]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ｇｇ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫ（配列番号２１１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｈｈ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｉｉ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号２０８）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｊｊ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｋｋ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｌｌ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｍｍ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２０９）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｎｎ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
ｇｇ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫ（配列番号２１１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｈｈ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｉｉ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号２０８）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｊｊ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｋｋ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｌｌ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｍｍ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２０９）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｎｎ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
【0172】
[000243]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ｏｏ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫ（配列番号２１１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｐｐ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｑｑ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号２０８）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｒｒ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｓｓ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｔｔ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｕｕ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２１２）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｖｖ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
ｏｏ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫ（配列番号２１１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｐｐ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号１９１）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｑｑ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号２０８）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｒｒ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｓｓ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１９４）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｔｔ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号１９５）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｕｕ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２１２）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び／又は
ｖｖ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９７）、若しくはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
【0173】
[000244]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＳＩＲＰα結合ドメインは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、及び１５９からなる群から選択される重鎖可変ドメイン配列を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＳＩＲＰα結合ドメインは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１６、１８、及び１６０からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン配列を含む。
【0174】
[000245]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、
ｆ）配列番号１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｇ）配列番号３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｈ）配列番号５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｉ）配列番号７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号８の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｊ）配列番号９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１０の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｋ）配列番号１１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｌ）配列番号１３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｍ）配列番号１５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｎ）配列番号１７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１８の配列を含む軽鎖可変領域、並びに／或いは
ｏ）配列番号１５９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６０の配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
ｆ）配列番号１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｇ）配列番号３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｈ）配列番号５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｉ）配列番号７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号８の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｊ）配列番号９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１０の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｋ）配列番号１１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｌ）配列番号１３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｍ）配列番号１５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｎ）配列番号１７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１８の配列を含む軽鎖可変領域、並びに／或いは
ｏ）配列番号１５９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６０の配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
【0175】
[000246]いくつかの実施形態では、本明細書に提示されるＳＩＲＰα結合ドメインは、重鎖可変ドメインの全部若しくは一部、及び／又は軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む。１つの実施形態では、本明細書に提示されるＳＩＲＰα結合ドメインは、本明細書に提示される重鎖可変ドメインの全部又は一部から構成される単一ドメイン抗体である。そのような単一ドメイン抗体のより多くの情報が当技術分野において入手可能である（例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい）。
【0176】
[000247]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα結合ドメインは、ＳＩＲＰαに対する特異的結合性をなおも保持しつつ、１つ又は複数のアミノ酸残基置換又は改変を更に含む。ある特定の実施形態では、置換又は改変の少なくとも１つは、重鎖可変領域又は軽鎖可変領域の、ＣＤＲ配列のうちの１つ若しくは複数内、及び／又は非ＣＤＲ配列のうちの１つ若しくは複数内にある。
【0177】
[000248]ｉｉ．標的抗原結合ドメイン
[000249]本明細書で使用される場合、用語「標的抗原結合ドメイン」とは、抗原及びＣＤ４７を同時発現する細胞を標的とする抗原結合ドメインを指す。本明細書に提示される多重特異性分子の標的抗原結合ドメインは、腫瘍抗原結合ドメインであり得る。ある特定の実施形態では、標的抗原は腫瘍表面抗原を含む。本明細書で使用される場合、用語「腫瘍表面抗原」とは、非悪性組織と区別するための、腫瘍細胞により主として提示される抗原を指し、また好ましくは腫瘍細胞の細胞膜上に位置する。腫瘍表面抗原は、様々な形態、例えば、ポリペプチド（特にグリコシル化されたタンパク質）、若しくはポリペプチドのグリコシル化パターン、糖脂質（例えば、ガングリオシド、例えばＧＭ２等）を取り得るか、又はがん細胞に特徴的であり得る細胞膜の脂質の組成が変化したものでありさえし得る。腫瘍表面抗原は、がん細胞上で特異的に発現される抗原（免疫応答を誘発し、及び／又はＴ細胞受容体（例えば、ＭＨＣ分子により提示されるとき）若しくは抗体と結合する）であり得る。いくつかの実施形態では、腫瘍表面抗原は体液性応答を誘発する（例えば、抗原特異的抗体の生成を含む）。いくつかの実施形態では、腫瘍表面抗原は、細胞応答（例えば、Ｔ細胞（その受容体は腫瘍表面抗原と特異的に相互作用する）を伴う）を誘発する。いくつかの実施形態では、腫瘍表面抗原は抗体と結合し、そして生物内で特定の生理学的応答を誘発する場合もあれば、また誘発しない場合もある。
[000249]本明細書で使用される場合、用語「標的抗原結合ドメイン」とは、抗原及びＣＤ４７を同時発現する細胞を標的とする抗原結合ドメインを指す。本明細書に提示される多重特異性分子の標的抗原結合ドメインは、腫瘍抗原結合ドメインであり得る。ある特定の実施形態では、標的抗原は腫瘍表面抗原を含む。本明細書で使用される場合、用語「腫瘍表面抗原」とは、非悪性組織と区別するための、腫瘍細胞により主として提示される抗原を指し、また好ましくは腫瘍細胞の細胞膜上に位置する。腫瘍表面抗原は、様々な形態、例えば、ポリペプチド（特にグリコシル化されたタンパク質）、若しくはポリペプチドのグリコシル化パターン、糖脂質（例えば、ガングリオシド、例えばＧＭ２等）を取り得るか、又はがん細胞に特徴的であり得る細胞膜の脂質の組成が変化したものでありさえし得る。腫瘍表面抗原は、がん細胞上で特異的に発現される抗原（免疫応答を誘発し、及び／又はＴ細胞受容体（例えば、ＭＨＣ分子により提示されるとき）若しくは抗体と結合する）であり得る。いくつかの実施形態では、腫瘍表面抗原は体液性応答を誘発する（例えば、抗原特異的抗体の生成を含む）。いくつかの実施形態では、腫瘍表面抗原は、細胞応答（例えば、Ｔ細胞（その受容体は腫瘍表面抗原と特異的に相互作用する）を伴う）を誘発する。いくつかの実施形態では、腫瘍表面抗原は抗体と結合し、そして生物内で特定の生理学的応答を誘発する場合もあれば、また誘発しない場合もある。
【0178】
[000250]ある特定の実施形態では、腫瘍表面抗原は、例えば、ＰＤ－Ｌ１、クローディン１８．２、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＴＨＲ２、Ｂ７－Ｈ１（ＰＤ－Ｌ１）、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ７、Ｔｒｏｐ－２、ＧＰＣ－３、ＥＰＣＡＭ、ＤＬＬ－３、ネクチン－４、クローディン６、クローディン１８．２、Ｍｕｃ－１、ＰＳＭＡ、ＧＤ３、ＦＡＰ、ＣＥＡ、又はＥｐｈＡ２である。
【0179】
[000251]クローディン１８．２結合ドメイン
[000252]ある特定の実施形態では、腫瘍表面抗原はクローディン１８．２である。ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、クローディン１８．２（例えば、ヒトクローディン１８．２等）に特異的に結合する能力を有する。
[000252]ある特定の実施形態では、腫瘍表面抗原はクローディン１８．２である。ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、クローディン１８．２（例えば、ヒトクローディン１８．２等）に特異的に結合する能力を有する。
【0180】
[000253]ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）、ｈｕ２６．Ｈ３Ｌ１、ｈｕ２６．Ｈ３Ｌ２、ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２、Ｃ１０、Ｃ２９、及びＣ３０からなる群から選択される抗クローディン１８．２抗体の１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５、又は６個）のＣＤＲ配列を含む。
【0181】
[000254]「ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１」とは、本明細書で使用される場合、配列番号６５の重鎖可変領域、及び配列番号６６の軽鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗体を指す。
【0182】
[000255]「ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２」とは、本明細書で使用される場合、配列番号６５の重鎖可変領域、及び配列番号６７の軽鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗体を指す。
【0183】
[000256]「ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）」とは、本明細書で使用される場合、抗体配列番号６５の重鎖可変領域、及び配列番号２２４の軽鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗体を指す。
【0184】
[000257]「ｈｕ２６．Ｈ３Ｌ１」とは、本明細書で使用される場合、配列番号６８の重鎖可変領域、及び配列番号６６の軽鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗体を指す。
【0185】
[000258]「ｈｕ２６．Ｈ３Ｌ２」とは、本明細書で使用される場合、配列番号６８の重鎖可変領域、及び配列番号６７の軽鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗体を指す。
【0186】
[000259]「ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２」とは、本明細書で使用される場合、配列番号６９の重鎖可変領域、及び配列番号７０の軽鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗体を指す。
【0187】
[000260]「Ｃ１０」とは、本明細書で使用される場合、配列番号７１の重鎖可変領域、及び配列番号７２の軽鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗体を指す。
[000261]「Ｃ２９」とは、本明細書で使用される場合、配列番号７３の重鎖可変領域、及び配列番号７４の軽鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗体を指す。
[000261]「Ｃ２９」とは、本明細書で使用される場合、配列番号７３の重鎖可変領域、及び配列番号７４の軽鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗体を指す。
【0188】
[000262]「Ｃ３０」とは、本明細書で使用される場合、配列番号７５の重鎖可変領域、及び配列番号７６の軽鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗体を指す。
[000263]表３は抗クローディン１８．２抗体のＣＤＲ配列を示す。重鎖及び軽鎖可変領域配列も下記の表４及び表５に提示する。
[000263]表３は抗クローディン１８．２抗体のＣＤＲ配列を示す。重鎖及び軽鎖可変領域配列も下記の表４及び表５に提示する。
【0189】
[000264]
【0190】
【表5-1】
【0191】
【表5-2】
【0192】
[000265]
【0193】
【表6-1】
【0194】
【表6-2】
【0195】
[000266]ＣＤＲは抗原結合に関与することが公知であるが、しかしながら６個のＣＤＲすべてが必須又は変更不可能というわけではないことが判明した。換言すれば、クローディン１８．２結合ドメインについて、ＰＤ－１（例えば、ヒトクローディン１８．２）に対する特異的結合親和性をなおも実質的に保持しつつ、本明細書に提示される１つ又は複数のＣＤＲを、置換、又は変更、又は改変することが可能である。
【0196】
[000267]ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、
ａ）配列番号７７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７９の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号８０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８１の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号８２若しくは配列番号２２５の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｂ）配列番号８３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８４の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号８５の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号８６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８７の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号８８の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｃ）配列番号８９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号９１の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号９２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９３の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号９４の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｄ）配列番号９５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９６の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号９７の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号９８の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９９の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１００の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｅ）配列番号１０１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０２の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１０３の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号１０４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０５の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１０６の配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
ａ）配列番号７７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７８の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７９の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号８０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８１の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号８２若しくは配列番号２２５の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｂ）配列番号８３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８４の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号８５の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号８６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８７の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号８８の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｃ）配列番号８９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９０の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号９１の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号９２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９３の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号９４の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｄ）配列番号９５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９６の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号９７の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号９８の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９９の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１００の配列を含むＬＣＤＲ３、或いは
ｅ）配列番号１０１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０２の配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号１０３の配列を含むＨＣＤＲ３、並びに／又は配列番号１０４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０５の配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１０６の配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
【0197】
[000268]ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）、ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２、Ｃ１０、Ｃ２９、及びＣ３０からなる群から選択される抗クローディン１８．２抗体と同一のＨＣＤＲ及びＬＣＤＲを含み、
ａ）ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１は、配列番号６５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６６の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｂ）ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）は、配列番号６５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２２４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｃ）ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２は、配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７０の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｄ）Ｃ１０は、配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｅ）Ｃ２９は、配列番号７３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、並びに
ｆ）Ｃ３０は、配列番号７５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ａ）ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１は、配列番号６５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６６の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｂ）ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）は、配列番号６５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号２２４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｃ）ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２は、配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７０の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｄ）Ｃ１０は、配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７２の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ｅ）Ｃ２９は、配列番号７３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域を含み、並びに
ｆ）Ｃ３０は、配列番号７５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0198】
[000269]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子のクローディン１８．２結合ドメインは、抗原結合ドメインがクローディン１８．２に特異的に結合することができる限り、任意の適するフレームワーク領域（ＦＲ）配列を含む。
【0199】
[000270]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子のクローディン１８．２結合ドメインはヒト化されている。ヒト化された抗原結合ドメインは、ヒトにおいてその免疫原性が低下している点で望ましい。ヒト化された抗原結合ドメインは、非ヒトＣＤＲ配列がヒト又は実質的にヒトのＦＲ配列にグラフトされていることから、その可変領域においてキメラである。抗原結合ドメインのヒト化は、ヒト免疫グロブリン遺伝子において、非ヒト（例えば、マウス等）ＣＤＲ遺伝子を、対応するヒトＣＤＲ遺伝子に置換することにより実質的に実施され得る（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６を参照されたい）。上記したように、適するヒト重鎖及び軽鎖可変ドメインが、当技術分野において公知の方法を使用しながら、この目的を実現するために選択され得る。
【0200】
[000271]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるヒト化された抗原結合ドメインは、ＣＤＲ配列（非ヒトである）を除き、実質的にすべてヒト配列から構成される。いくつかの実施形態では、可変領域ＦＲ及び定常領域（存在する場合）は、完全又は実質的にヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒトＦＲ配列及びヒト定常領域配列は、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子に由来し、例えばＦＲ配列が一方のヒト抗体に由来し、及び定常領域は他方のヒト抗体に由来し得る。いくつかの実施形態では、ヒト化された抗原結合ドメインはヒトＦＲ１～４を含む。
【0201】
[000272]いくつかの実施形態では、ヒトに由来するＦＲ領域は、その由来とするヒト免疫グロブリンと同一のアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態では、ヒトＦＲの１つ又は複数のアミノ酸残基が、非ヒト親抗体由来の対応する残基と置換する。これは、ヒト化抗体又はその断片を非ヒト親抗体構造に密接に近似させるために、ある特定の実施形態において望ましい場合もある。ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるヒト化されたクローディン１８．２結合ドメインは、ヒトＦＲ配列のそれぞれにおいて、１０、９、８、７、６、５、４、３、２個以下、若しくは１個のアミノ酸残基置換、又は重鎖若しくは軽鎖可変ドメインのすべてのＦＲにおいて、１０、９、８、７、６、５、４、３、２個以下、若しくは１個のアミノ酸残基置換を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸残基内のそのような変化は、重鎖ＦＲ領域内にのみ、軽鎖ＦＲ領域内にのみ、又は両鎖内に存在し得る。表４．１は、ヒト化抗体ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２、ｈｕ２６．Ｈ３Ｌ１、ｈｕ２６．Ｈ３Ｌ２、ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２のＦＲ配列を示す。
【0202】
[000273]
【0203】
【表7-1】
【0204】
【表7-2】
【0205】
式中、Ｘ１８はＳ又はＡであり、Ｘ１９はＬ又はＡであり、Ｘ２３はＴ又はＫであり、Ｘ２４はＹ又はＦであり、Ｘ２５はＱ又はＧであり、Ｘ２６はＱ又はＫであり、Ｘ２７はＰ又はＡである。
【0206】
[000274]いくつかの実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）及びＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号１６８）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＸ１８（配列番号１６９）及びＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号１７０）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＸ２３（配列番号１７１）及びＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１７２）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）及びＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣ（配列番号１７５）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＸ２６Ｘ２７ＰＫＸ１９ＬＩＹ（配列番号１７６）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＸ２４ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７８）及びＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＨＣ（配列番号１７９）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、並びに
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＸ２５ＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８０）又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
式中、Ｘ１８はＳ又はＡであり、Ｘ１９はＬ又はＡであり、Ｘ２３はＴ又はＫであり、Ｘ２４はＹ又はＦであり、Ｘ２５はＱ又はＧであり、Ｘ２６はＱ又はＫであり、Ｘ２７はＰ又はＡである。
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）及びＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号１６８）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＸ１８（配列番号１６９）及びＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号１７０）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＸ２３（配列番号１７１）及びＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１７２）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）及びＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣ（配列番号１７５）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＸ２６Ｘ２７ＰＫＸ１９ＬＩＹ（配列番号１７６）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＸ２４ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７８）及びＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＨＣ（配列番号１７９）からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、並びに
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＸ２５ＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８０）又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
式中、Ｘ１８はＳ又はＡであり、Ｘ１９はＬ又はＡであり、Ｘ２３はＴ又はＫであり、Ｘ２４はＹ又はＦであり、Ｘ２５はＱ又はＧであり、Ｘ２６はＱ又はＫであり、Ｘ２７はＰ又はＡである。
【0207】
[000275]いくつかの実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＸ１８（配列番号１６９）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＸ２３（配列番号１７１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＸ１９ＬＩＹ（配列番号２０６）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＸ２４ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７８）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
式中、Ｘ１８はＳ又はＡであり、Ｘ１９はＬ又はＡであり、Ｘ２３はＴ又はＫであり、Ｘ２４はＹ又はＦである。
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＸ１８（配列番号１６９）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＸ２３（配列番号１７１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＸ１９ＬＩＹ（配列番号２０６）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＸ２４ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７８）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
式中、Ｘ１８はＳ又はＡであり、Ｘ１９はＬ又はＡであり、Ｘ２３はＴ又はＫであり、Ｘ２４はＹ又はＦである。
【0208】
[000276]いくつかの実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号１９９）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫ（配列番号２００）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２０１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２０２）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号１９９）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫ（配列番号２００）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２０１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２０２）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
【0209】
[000277]いくつかの実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号１９９）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫ（配列番号２００）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＡＬＩＹ（配列番号２０３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２０４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号１９９）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫ（配列番号２００）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＡＬＩＹ（配列番号２０３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２０４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
【0210】
[000278]いくつかの実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号２１３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴ（配列番号２０５）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２０１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２０２）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号２１３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴ（配列番号２０５）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２０１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２０２）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
【0211】
[000279]いくつかの実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号２１３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴ（配列番号２０５）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＡＬＩＹ（配列番号２０３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２０４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳ（配列番号１６７）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号２１３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴ（配列番号２０５）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＡＬＩＹ（配列番号２０３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２０４）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８１）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
【0212】
[000280]いくつかの実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４のうちの１つ又は複数、並びに／或いは軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４のうちの１つ又は複数を更に含み、
ａ）ＨＦＲ１は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号１６８）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号１７０）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１７２）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣ（配列番号１７５）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹ（配列番号１７７）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＨＣ（配列番号１７９）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８２）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
ａ）ＨＦＲ１は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号１６８）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号１７０）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１７２）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣ（配列番号１７５）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹ（配列番号１７７）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＨＣ（配列番号１７９）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含み、及び
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８２）、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する相同的配列を含む。
【0213】
[000281]いくつかの実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、
ａ）配列番号６５又は６８の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６６若しくは６７若しくは２２４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｂ）配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７０の配列を含む軽鎖可変領域は、或いは
ｃ）配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｄ）配列番号７３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｅ）配列番号７５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７６の配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
ａ）配列番号６５又は６８の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号６６若しくは６７若しくは２２４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｂ）配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７０の配列を含む軽鎖可変領域は、或いは
ｃ）配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７２の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｄ）配列番号７３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域、或いは
ｅ）配列番号７５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号７６の配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
【0214】
[000282]いくつかの実施形態では、本明細書に提示されるクローディン１８．２結合ドメインは、重鎖可変ドメインの全部又は一部、及び／又は軽鎖可変ドメインの全部又は一部を含む。１つの実施形態では、本明細書に提示されるクローディン１８．２結合ドメインは、本明細書に提示される重鎖可変ドメインの全部又は一部から構成される単一ドメイン抗体である。そのような単一ドメイン抗体のより多くの情報が当技術分野において入手可能である（例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい）。
【0215】
[000283]ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、クローディン１８．２に対する特異的結合性をなおも保持しつつ、１つ又は複数のアミノ酸残基の置換又は改変を更に含む。ある特定の実施形態では、置換又は改変の少なくとも１つは、重鎖可変領域又は軽鎖可変領域の、ＣＤＲ配列のうちの１つ若しくは複数内、及び／又は非ＣＤＲ配列のうちの１つ若しくは複数内にある。ある特定の実施形態では、置換又は改変の少なくとも１つは、例えばｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数内にある。
【0216】
[000284]ＰＤ－Ｌ１結合ドメイン
[000285]ある特定の実施形態では、腫瘍表面抗原はＰＤ－Ｌ１である。ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１等）に特異的に結合する能力を有する。
[000285]ある特定の実施形態では、腫瘍表面抗原はＰＤ－Ｌ１である。ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１等）に特異的に結合する能力を有する。
【0217】
[000286]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、Ｃ７１、Ｃ７１ｖ３８、Ｃ２３９、Ｃ４９２、Ｃ５７０、Ｃ４４６、Ｃ２８１１、Ｃ１７７８、Ｃ１７９３、Ｃ２８５５、Ｃ２７１３、及びＣ２７１９からなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体の１つ又は複数（例えば、１、２、又は３個）のＣＤＲ配列を含む。
【0218】
[000287]「Ｃ７１」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１０７の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
[000288]「Ｃ７１ｖ３８」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１０８の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
[000288]「Ｃ７１ｖ３８」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１０８の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
【0219】
[000289]「Ｃ２３９」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１０９の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
[000290]「Ｃ４９２」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１０の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
[000290]「Ｃ４９２」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１０の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
【0220】
[000291]「Ｃ５７０」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１１の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
[000292]「５７０ｈ３」とは、本明細書で使用される場合、配列番号２２３の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
[000292]「５７０ｈ３」とは、本明細書で使用される場合、配列番号２２３の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
【0221】
[000293]「Ｃ４４６」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１２の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
[000294]「Ｃ２８１１」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１３の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
[000294]「Ｃ２８１１」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１３の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
【0222】
[000295]「Ｃ１７７８」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１４の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
[000296]「Ｃ１７９３」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１５の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
[000296]「Ｃ１７９３」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１５の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
【0223】
[000297]「Ｃ２８５５」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１６の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
[000298]「Ｃ２７１３」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１７の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
[000298]「Ｃ２７１３」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１７の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
【0224】
[000299]「Ｃ２７１９」とは、本明細書で使用される場合、配列番号１１８の重鎖可変領域を有するヒト化された重鎖抗体を指す。
[000300]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１１９の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２０の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２１の配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
[000300]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１１９の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２０の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２１の配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0225】
[000301]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１２２の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２３の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２４の配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0226】
[000302]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１２５の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２６の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２７の配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0227】
[000303]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１２８の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２９の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３０の配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0228】
[000304]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１３１の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３２の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３３の配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0229】
[000305]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１３４の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３５の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３６の配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0230】
[000306]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１３７の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３８の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３９の配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0231】
[000307]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１４０の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４１の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１４２の配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0232】
[000308]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１４３の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４４の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１４５の配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0233】
[000309]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１４６の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４７の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１４８の配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0234】
[000310]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１４９の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１５０の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５１の配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0235】
[000311]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１５２の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１５３の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５４の配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0236】
[000312]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、Ｃ７１、Ｃ７１ｖ３８、Ｃ２３９、Ｃ４９２、Ｃ５７０、５７０ｈ３、Ｃ４４６、Ｃ２８１１、Ｃ１７７８、Ｃ１７９３、Ｃ２８５５、Ｃ２７１３、及びＣ２７１９からなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体と同一のＨＣＤＲを含む。
【0237】
[000313]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１０７～１１８及び２２３からなる群から選択される配列を含む重鎖可変領域を含む。
[000314]表５は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の重鎖可変領域配列を示す。ＣＤＲ配列も下記の表６に提示する。
[000314]表５は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の重鎖可変領域配列を示す。ＣＤＲ配列も下記の表６に提示する。
【0238】
[000315]
【0239】
【表8-1】
【0240】
【表8-2】
【0241】
[000316]
【0242】
【表9-1】
【0243】
【表9-2】
【0244】
【表9-3】
【0245】
[000317]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１０７～１１８及び２２３からなる群から選択される配列を含む重鎖可変領域を含む。
[000318]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、ＰＤ－Ｌ１に対する特異的結合性をなおも保持しつつ、１つ又は複数のアミノ酸残基の置換又は改変を更に含む。ある特定の実施形態では、置換又は改変の少なくとも１つは、重鎖可変領域又は軽鎖可変領域の、ＣＤＲ配列のうちの１つ若しくは複数内、及び／又は非ＣＤＲ配列のうちの１つ若しくは複数内にある。
[000318]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、ＰＤ－Ｌ１に対する特異的結合性をなおも保持しつつ、１つ又は複数のアミノ酸残基の置換又は改変を更に含む。ある特定の実施形態では、置換又は改変の少なくとも１つは、重鎖可変領域又は軽鎖可変領域の、ＣＤＲ配列のうちの１つ若しくは複数内、及び／又は非ＣＤＲ配列のうちの１つ若しくは複数内にある。
【0246】
[000319]ｉｖ．活性化受容体結合ドメイン
[000320]多重特異性分子は活性化受容体結合ドメインを更に含む。本明細書で使用される場合、用語「活性化受容体」とは、免疫エフェクター細胞（例えば、貪食性細胞、例えばマクロファージ等）上で発現され、例えばＦｃドメインに結合することにより活性化することで、免疫エフェクター細胞（例えば、貪食性細胞、例えばマクロファージ等）の少なくとも１つのエフェクター機能、又は炎症促進性の応答に関与する受容体（例えば、ＦｃγＲ）を指す。ある特定の実施形態では、本明細書に提示される免疫エフェクター細胞は、ＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体を同時発現する。
[000320]多重特異性分子は活性化受容体結合ドメインを更に含む。本明細書で使用される場合、用語「活性化受容体」とは、免疫エフェクター細胞（例えば、貪食性細胞、例えばマクロファージ等）上で発現され、例えばＦｃドメインに結合することにより活性化することで、免疫エフェクター細胞（例えば、貪食性細胞、例えばマクロファージ等）の少なくとも１つのエフェクター機能、又は炎症促進性の応答に関与する受容体（例えば、ＦｃγＲ）を指す。ある特定の実施形態では、本明細書に提示される免疫エフェクター細胞は、ＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体を同時発現する。
【0247】
[000321]ある特定の実施形態では、活性化受容体はＦｃγＲであり、また活性化受容体結合ドメインはＦｃドメインである。Ｆｃドメインは、マクロファージ上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）を活性化させ、受容体の免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）により伝播されたリン酸化カスケードを推進することができる。ＩＴＡＭは、免疫エフェクター細胞上のいくつかの活性化受容体、例えばＦｃＲ、Ｔ細胞受容体、及び免疫グロブリン（Ｉｇ）等の細胞質尾部中に存在する保存された配列である。ＩＴＡＭは、保存されたアミノ酸配列モチーフ（ペア化したＹＸＸＬ／Ｉモチーフ（式中、Ｙ、Ｌ、及びＩは、チロシン、リジン、及びイソロイシンをそれぞれ指す）から構成され、６～８個のアミノ酸の定義された間隔で隔てられる）を特徴とし得る。ＩＴＡＭ内のいくつかの残基がリン酸化すると、ファゴサイトーシス活性化のためのいくつかのシグナル伝達分子が導入される。したがって、活性化受容体は免疫エフェクター細胞上で発現する任意の受容体であり得、結合及び活性化し、それはＩＴＡＭを含む細胞内ファゴサイトーシスシグナル伝達ドメインを介してファゴサイトーシスを誘発することができる。
【0248】
[000322]その他の実施形態では、活性化受容体は、異なる食細胞性シグナル伝達又は機構、例えばＡｋｔ媒介式のシグナルカスケード（ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＳＦＲ、又はＰＤＧＦＲ受容体を介する）、ファゴサイトーシス（例えば、インテグリン又はセレクチンを介する）又は抗原媒介式の細胞毒性（ＦｃＤＲ１（ＣＤ８９）受容体又はＣＤ２０６を介する）を増強する免疫エフェクター細胞（例えば、マクロファージ）上での受容体群のクラスタリング等に関与する受容体である。
【0249】
[000323]例えば、エフェクター機能、例えばファゴサイトーシス等に関連する活性化受容体は、結晶化可能なγ受容体断片（ＦｃγＲ）、ＴＲＥＭ２、レクチン、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＣＤ６８、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＦｃＤＲ１、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＳＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、デクチン１、ＲＡＧＥ（ＳＲ－Ｅ１）、ＬＲＰ１、ＬＲＰ２、ＡＳＧＰ、ＳＲ－ＰＳＯＸ、ＣＸＣＬ１６、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、及びＣＤ１６９受容体、又は補体受容体、例えばＣＲ１及びＣＲ３等であり得る。ある特定の実施形態では、活性化受容体はＦｃγＲである。
【0250】
[000324]ある特定の実施形態では、活性化すると炎症促進性のシグナルを生成可能である活性化受容体として、非限定的に、ＰＩ３Ｋ、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＢＡＨ．Ｔｙｒｏ３、Ａｘ１、Ｔｒａｆ６、Ｓｙｋ、ＭｙＤ８８、Ｚａｐ７０、ＦｃεＲ１、ＦｃαＲ１、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＤＡＰ１２、ＮＦＡＭ１、ＭＲＣ１、ＩｔｇＢ５、ＭＥＲＴＫ、ＥＬＭＯ、及びＣＤ７９ｂが挙げられる。
【0251】
[000325]用語「活性化受容体結合ドメイン」とは、本明細書で使用される場合、免疫エフェクター細胞上の活性化受容体に特異的に結合する能力を有するドメイン（例えば、抗体の一部分）を指し、そのような結合が、受容体の活性化、並びに下流におけるそのシグナル伝達（例えば、免疫細胞のエフェクター機能又は炎症促進性の応答）を引き起こす。例えば、活性化受容体結合ドメインは、抗体のＦｃドメイン又はそのバリアントを含む。ある特定の実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ１又はＩｇＧ４に由来し得る。
【0252】
[000326]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子の活性化受容体結合ドメインは、結晶化可能なγ受容体断片（ＦｃγＲ）、ＴＲＥＭ２、レクチン、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＣＤ６８、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＦｃＤＲ１、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＳＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、デクチン１、ＲＡＧＥ（ＳＲ－Ｅ１）、ＬＲＰ１、ＬＲＰ２、ＡＳＧＰ、ＳＲ－ＰＳＯＸ、ＣＸＣＬ１６、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、及びＣＤ１６９受容体、又は補体受容体（例えば、ＣＲ１及びＣＲ３等）、ＰＩ３Ｋ、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＢＡＨ．Ｔｙｒｏ３、Ａｘ１、Ｔｒａｆ６、Ｓｙｋ、ＭｙＤ８８、Ｚａｐ７０、ＦｃεＲ１、ＦｃαＲ１、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＤＡＰ１２、ＮＦＡＭ１、ＭＲＣ１、ＩｔｇＢ５、ＭＥＲＴＫ、ＥＬＭＯ、及びＣＤ７９ｂからなる群から選択される活性化受容体に結合し、そしてそれらを活性化させる。
【0253】
[000327]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子の活性化受容体結合ドメインは、Ｆｃドメイン又はそのバリアント（マクロファージ上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）、例えばＦｃγＲＩＩ等を活性化させる）を含む。
【0254】
[000328]ある特定の実施形態では、活性化受容体結合ドメインは、ヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）、又はヒトＩｇＧ４（ｈＩｇＧ４）のＦｃドメインを含み、その重鎖定常領域を下記にそれぞれ示す：
ａ）重鎖定常領域（ｈＩｇＧ４．Ｓ２２８Ｐ）、配列番号１５５（ＣＨ１領域の配列（配列番号２２８）を太字・波線の下線付きで表し、ヒンジ領域の配列（配列番号２２９）をイタリック体で表し、そしてＦｃ領域の配列（配列番号２３０）に下線を付す）：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
ｂ）重鎖定常領域（ｈＩｇＧ１）、配列番号１５６（ＣＨ１領域の配列（配列番号２３１）を太字・波線の下線付きで表し、ヒンジ領域の配列（配列番号２３２）をイタリック体で表し、そしてＦｃ領域の配列（配列番号２３３）に下線を付す）：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
[000329]本明細書に提示される多重特異性分子は、ヒト軽鎖定常領域（ＣＬ）、例えばカッパ鎖及びラムダ鎖等も含むことができ、そのアミノ酸配列を下記に提示する：
[000330]軽鎖定常領域（カッパ）、配列番号１５７：
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
[000331]軽鎖定常領域（ラムダ）、配列番号１５８：
ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
[000332]ｖ．多重特異性分子のコンフィギュレーション
[000333]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるエンゲイジャーは、本明細書全体を通じて記載される複数の結合ドメインを含む組換えタンパク質であり、複数の結合ドメインのそれぞれは、ＳＩＲＰアルファ、活性化受容体、又は標的抗原に対して特異的結合親和性を有し、そして１つ又は複数のリンカーにより相互に接続する。１つ又は複数のリンカーは、相互に結合する相補的結合性を示すコグネートペプチドを有し得る。例えば、本明細書に提示されるエンゲイジャーのＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、コグネートペプチドの対の第１と融合し、本明細書に提示されるエンゲイジャーの標的抗原結合ドメインはコグネートペプチドの対の第２と融合し；したがって、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン及び標的抗原結合ドメインは、コグネートペプチドの対それぞれとの間に形成される相補的結合を通じて、コグネートペプチドの対により連結されていてもよい。
ａ）重鎖定常領域（ｈＩｇＧ４．Ｓ２２８Ｐ）、配列番号１５５（ＣＨ１領域の配列（配列番号２２８）を太字・波線の下線付きで表し、ヒンジ領域の配列（配列番号２２９）をイタリック体で表し、そしてＦｃ領域の配列（配列番号２３０）に下線を付す）：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
ｂ）重鎖定常領域（ｈＩｇＧ１）、配列番号１５６（ＣＨ１領域の配列（配列番号２３１）を太字・波線の下線付きで表し、ヒンジ領域の配列（配列番号２３２）をイタリック体で表し、そしてＦｃ領域の配列（配列番号２３３）に下線を付す）：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
[000329]本明細書に提示される多重特異性分子は、ヒト軽鎖定常領域（ＣＬ）、例えばカッパ鎖及びラムダ鎖等も含むことができ、そのアミノ酸配列を下記に提示する：
[000330]軽鎖定常領域（カッパ）、配列番号１５７：
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
[000331]軽鎖定常領域（ラムダ）、配列番号１５８：
ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
[000332]ｖ．多重特異性分子のコンフィギュレーション
[000333]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるエンゲイジャーは、本明細書全体を通じて記載される複数の結合ドメインを含む組換えタンパク質であり、複数の結合ドメインのそれぞれは、ＳＩＲＰアルファ、活性化受容体、又は標的抗原に対して特異的結合親和性を有し、そして１つ又は複数のリンカーにより相互に接続する。１つ又は複数のリンカーは、相互に結合する相補的結合性を示すコグネートペプチドを有し得る。例えば、本明細書に提示されるエンゲイジャーのＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、コグネートペプチドの対の第１と融合し、本明細書に提示されるエンゲイジャーの標的抗原結合ドメインはコグネートペプチドの対の第２と融合し；したがって、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン及び標的抗原結合ドメインは、コグネートペプチドの対それぞれとの間に形成される相補的結合を通じて、コグネートペプチドの対により連結されていてもよい。
【0255】
[000334]ある特定の実施形態では、コグネートペプチドの対は、抗体の２本の重鎖又はその任意の相補的部分、抗体の相互に相補的な軽鎖及び重鎖の対又はその任意の相補的部分、相互に結合する相補的結合性を示すロイシンジッパードメイン（例えば、ｃ－Ｆｏｓ及びｃ－Ｊｕｎｅタンパク質の結合領域内のジッパー配列）、又は合成コネクターを介して相互に特異的に結合するように設計された合成ペプチドを含む。
【0256】
[000335]本明細書に提示されるエンゲイジャーのＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン、活性化受容体結合ドメイン、及び標的抗原結合ドメインは、化学結合、例えば架橋等（例えば、ＢＳ２Ｇ架橋剤（ビス［スルホスクシンイミジル］グルタレート）、ＢＳ３架橋剤（ビス［スルホスクシンイミジル］スベレート）、スルホ－ＤＳＳ、ＤＳＴ架橋剤（ジスクシンイミジルタルタレート）、ＢＭＰＳ（Ｎ－（Ｂ－マレイミドプロピロキシ）スクシンイミドエステル；ＭＢＳ架橋剤（ｍマレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）；又はＰＤＰＨ架橋剤（３－［２－ピリジルジチオ］プロピオニルヒドラジド））を介して、やはり連結されていてもよい。
【0257】
[000336]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン及び活性化受容体結合ドメインが近接した位置関係にあって、本明細書に提示される多重特異性分子が同一の免疫エフェクター細胞上で同時発現されたＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体の両方に結合可能となるように構成される。本明細書で使用される場合、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインと活性化受容体結合ドメインとの間で「近接した位置関係にある」という用語は、三次元透視図から認められる２つのドメイン間の相対的位置関係を指し、同一の免疫エフェクター細胞上で２つのドメインが免疫エフェクター細胞上で同時発現されたＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体にそれぞれ結合するのを可能にする。ＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体（同一の免疫エフェクター細胞上で同時発現される）に対するＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン及び活性化受容体結合ドメインのそれぞれの特異的結合性は、例えば、共焦点顕微鏡検査、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）又は単一分子超高解像度顕微鏡検査により検出可能である。
【0258】
[000337]本明細書に提示される多重特異性分子の標的抗原結合ドメインは、標的抗原と結合する抗体ドメイン又は抗体模倣ドメインを含み得る。用語「抗体ドメイン」及び用語「抗体模倣ドメイン」は上記で定義される。
【0259】
[000338]ある特定の実施形態では、標的抗原結合抗体ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合抗体ドメイン）は、活性化受容体結合ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）のＮ末端にリンクしている。ある特定の実施形態では、標的抗原結合抗体ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合抗体ドメイン）は、Ｆａｂドメインを含み、任意選択で、Ｆａｂドメインは、活性化受容体結合ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）のＮ末端のうちの１つとリンクした重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２つの標的抗原結合抗体ドメインを含み、そのそれぞれはＦａｂドメインを含み、任意選択で、Ｆａｂドメインのそれぞれは、活性化受容体結合ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）の各Ｎ末端とそれぞれリンクした重鎖を含む。
【0260】
[000339]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、活性化受容体結合ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）、又は標的抗原結合抗体ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合抗体ドメイン）にリンクしている。
【0261】
[000340]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、活性化受容体結合ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）のＣ末端にリンクしている。そのような実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は標的抗原結合抗体を含み、その場合、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、標的抗原結合抗体のＦｃ領域のＣ末端にリンクしている。例証的実施形態が、例えば図２Ｂ、図６Ｆ、及び図６Ｇに見出される。
【0262】
[000341]ある特定の実施形態では、標的抗原結合抗体ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合抗体ドメイン）及びＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインの両方が、活性化受容体結合ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）のＮ末端とリンクしているが、但しＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン及び標的抗原結合抗体ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合抗体ドメイン）は、活性化受容体結合ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）の同一のＮ末端にリンクしていない。例証的実施形態が、例えば図６Ｅに見出される。
【0263】
[000342]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、標的抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合Ｆａｂドメイン）の軽鎖のＣ末端にリンクしている。例証的実施形態が、例えば図２Ａに見出される。
【0264】
[000343]本明細書に提示される多重特異性分子が２つの標的抗原結合抗体ドメインを含む場合、ＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、２つの標的抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合Ｆａｂドメイン）のうちの一方の軽鎖のＣ末端とリンクしていてもよく、またＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、２つの標的抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合Ｆａｂドメイン）の両方の軽鎖のＣ末端とやはりリンクしていてもよい。
【0265】
[000344]ある特定のその他の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合抗体ドメインは活性化受容体結合ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）のＮ末端にリンクしている。ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰ－アルファ結合抗体ドメインはＦａｂドメインを含み、任意選択で、Ｆａｂドメインは、活性化受容体結合ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）のＮ末端のうちの１つとリンクした重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は２つのＳＩＲＰ－アルファ結合抗体ドメインを含み、そのそれぞれはＦａｂドメインを含み、任意選択で、Ｆａｂドメインのそれぞれは、活性化受容体結合ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）の各Ｎ末端とそれぞれリンクした重鎖を含む。そのような実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、ＳＩＲＰ－アルファ結合抗体を含む。これらの実施形態のいずれかにおいて、標的抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合ドメイン）は、活性化受容体結合ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）、又はＳＩＲＰ－アルファ結合抗体ドメインにリンクしている。
【0266】
[000345]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、ＳＩＲＰ－アルファ結合抗体を含み、その場合標的抗原結合ドメインは、ＳＩＲＰ－アルファ結合抗体のＦｃ領域のＣ末端にリンクしているか（例えば、図２Ｄ、図６Ｂを参照されたい）、又はＳＩＲＰ－アルファ結合抗体の軽鎖のＣ末端とリンクしている（例えば、図２Ｃ及び図６Ａを参照されたい）。
【0267】
[000346]ある特定の実施形態では、標的抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合ドメイン）は、ＳＩＲＰ－アルファ結合Ｆａｂドメインの軽鎖のＣ末端にリンクしている。例証的実施形態が、例えば図６Ａに見出される。ある特定の実施形態では、標的抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合ドメイン）は、ＳＩＲＰ－アルファ結合Ｆａｂドメインの重鎖又は軽鎖のＮ末端にリンクしている。例証的実施形態が、例えば図６Ｃ及び図６Ｄに見出される。
【0268】
[000347]本明細書で使用される場合、用語「～とリンクしている」とは、２コンポーネント間の共有結合相互作用又は非共有結合相互作用（例えば、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス相互作用、及び疎水結合）を指す。
【0269】
[000348]本明細書に提示される多重特異性分子のコンフィギュレーションを、下記の表７に要約する。
[000349]
[000349]
【0270】
【表10-1】
【0271】
【表10-2】
【0272】
【表10-3】
【0273】
[000350]Ｂ．多重特異性分子
[000351]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、本明細書に提示されるＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン、Ｆｃドメインを含む本明細書に提示される活性化受容体結合ドメイン、及び本明細書に提示される標的抗原結合ドメインを含む。
[000351]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、本明細書に提示されるＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン、Ｆｃドメインを含む本明細書に提示される活性化受容体結合ドメイン、及び本明細書に提示される標的抗原結合ドメインを含む。
【0274】
[000352]本明細書に提示される多重特異性分子は、任意の適するフォーマットを取り得る。例証的事例は以下のように提示される。ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む標的抗原結合抗体を含み、その場合、軽鎖それぞれのＣ末端は、抗ＳＩＲＰα ｓｃＦｖ（すなわち、ＳＩＲＰα結合ドメイン）に融合する。標的抗原結合抗体は標的抗原結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図２Ａに示す。
【0275】
[000353]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む標的抗原結合抗体を含み、その場合、重鎖それぞれのＣ末端は抗ＳＩＲＰα ｓｃＦｖ（すなわち、ＳＩＲＰα結合ドメイン）に融合する。標的抗原結合抗体は、標的抗原結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図２Ｂに示す。
【0276】
[000354]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ＳＩＲＰα抗体を含み、その場合、軽鎖それぞれのＣ末端は、標的抗原に結合する能力を有するｓｃＦｖ（すなわち、標的抗原結合ドメイン）に融合する。抗ＳＩＲＰα抗体は、ＳＩＲＰα結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図２Ｃに示す。
【0277】
[000355]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ＳＩＲＰα抗体を含み、その場合、重鎖それぞれのＣ末端は、標的抗原に結合する能力を有するｓｃＦｖ（すなわち、標的抗原結合ドメイン）に融合する。抗ＳＩＲＰα抗体は、ＳＩＲＰα結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図２Ｄに示す。
【0278】
[000356]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ＳＩＲＰα抗体を含み、その場合、軽鎖それぞれのＣ末端は、標的抗原に結合する能力を有する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）（すなわち、標的抗原結合ドメイン）に融合する。抗ＳＩＲＰα抗体は、ＳＩＲＰα結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図６Ａに示す。
【0279】
[000357]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ＳＩＲＰα抗体を含み、その場合、重鎖それぞれのＣ末端は、標的抗原に結合する能力を有する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）（すなわち、標的抗原結合ドメイン）に融合する。抗ＳＩＲＰα抗体は、ＳＩＲＰα結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図６Ｂに示す。
【0280】
[000358]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ＳＩＲＰα抗体を含み、その場合、重鎖それぞれのＮ末端は、標的抗原に結合する能力を有する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）（すなわち、標的抗原結合ドメイン）に融合する。抗ＳＩＲＰα抗体は、ＳＩＲＰα結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図６Ｃに示す。
【0281】
[000359]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ＳＩＲＰα抗体を含み、その場合、軽鎖それぞれのＮ末端は、標的抗原に結合する能力を有する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）（すなわち、標的抗原結合ドメイン）に融合する。抗ＳＩＲＰα抗体は、ＳＩＲＰα結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。例証的事例を図６Ｄに示す。
【0282】
[000360]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、抗ＳＩＲＰα結合ドメイン（例えば、Ｆａｂ）及び標的抗原に結合する能力を有する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）をそれぞれ含み、それぞれＦｃドメインのポリペプチド鎖のＮ末端に融合する。例証的事例を図６Ｅに示す。
【0283】
[000361]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２本の重鎖を含み、それぞれ、Ｆｃドメインのポリペプチド鎖のＮ末端に融合した、標的抗原に結合する能力を有する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含み、及びＦｃドメインのポリペプチド鎖うちの１つのＣ末端に融合した少なくとも１つの抗ＳＩＲＰα結合ドメインを更に含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、Ｆｃドメインのポリペプチド鎖のうちの１つのＣ末端に融合した、１つの抗ＳＩＲＰα結合ドメインを含む。例証的事例を図６Ｆに示す。
【0284】
[000362]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、２つの抗ＳＩＲＰα結合ドメインを含み、それぞれＦｃドメインのポリペプチド鎖のうちの１つのＣ末端に融合する。例証的事例を図６Ｇに示す。
【0285】
[000363]これらの実施形態のいずれかにおいて、標的結合ドメインは、クローディン１８．２結合ドメイン又はＰＤ－Ｌ１結合ドメインである。
[000364]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、配列番号２３～６４の１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５、又は６個）のＣＤＲ配列（Ｃ２５、ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０５９、ｈｕ０２５．０６０、Ｃ１５、Ｃ４２、Ｃ５９、及びＣ７３に由来する）を含むＳＩＲＰα結合ドメイン、配列番号７７～１０６及び２２５の１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５、又は６個）のＣＤＲ配列（ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）、ｈｕ２６．Ｈ３Ｌ１、ｈｕ２６．Ｈ３Ｌ２、ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２、Ｃ１０、Ｃ２９、及びＣ３０に由来する）を含むクローディン１８．２結合ドメイン、並びに／或いは配列番号１１９～１５４及び２２３の１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５、又は６個）のＣＤＲ配列（Ｃ７１、Ｃ７１ｖ３８、Ｃ２３９、Ｃ４９２、Ｃ５７０、５７０ｈ３、Ｃ４４６、Ｃ２８１１、Ｃ１７７８、Ｃ１７９３、Ｃ２８５５、Ｃ２７１３、及びＣ２７１９に由来する）を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを含む。
[000364]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、配列番号２３～６４の１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５、又は６個）のＣＤＲ配列（Ｃ２５、ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０５９、ｈｕ０２５．０６０、Ｃ１５、Ｃ４２、Ｃ５９、及びＣ７３に由来する）を含むＳＩＲＰα結合ドメイン、配列番号７７～１０６及び２２５の１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５、又は６個）のＣＤＲ配列（ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）、ｈｕ２６．Ｈ３Ｌ１、ｈｕ２６．Ｈ３Ｌ２、ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２、Ｃ１０、Ｃ２９、及びＣ３０に由来する）を含むクローディン１８．２結合ドメイン、並びに／或いは配列番号１１９～１５４及び２２３の１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５、又は６個）のＣＤＲ配列（Ｃ７１、Ｃ７１ｖ３８、Ｃ２３９、Ｃ４９２、Ｃ５７０、５７０ｈ３、Ｃ４４６、Ｃ２８１１、Ｃ１７７８、Ｃ１７９３、Ｃ２８５５、Ｃ２７１３、及びＣ２７１９に由来する）を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを含む。
【0286】
[000365]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα／クローディン１８．２／ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、抗体ドメイン又は抗体模倣ドメインを含む。ある特定の実施形態では、抗体ドメインは、Ｆａｂ、ＶＨＨ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖダイマー（２価のダイアボディ）、ラクダ化単一ドメイン抗体（ａｄＡｂ）、ナノボディ、テトラボディ、ドメイン抗体、又は２価ドメイン抗体からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、抗体模倣ドメインは、イントラボディ（例えば、フィブロネクチンドメイン）、モノボディ、直鎖ペプチド、プロテインＡのＺドメイン（アフィボディ）、ガンマＢ結晶性ドメイン、ユビキチンドメイン、シスタチンドメイン、Ｓａｃ７ｄドメイン、三重へリックスコイルドコイルドメイン、リポカリンドメイン、膜受容体のＡドメイン、アンキリン反復モチーフ、ＦｙｎのＳＨ３ドメイン、プロテアーゼ阻害剤のクニッツドメイン、フィブロネクチンのＩＩＩ型ドメイン（ミニボディ）、ＤＡＲＰｉｎドメイン、炭水化物結合モジュール３２－２からなる群から選択される。
【0287】
[000366]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、
ａ）配列番号２３の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２４の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２５の配列を含む重鎖ＣＤＲ３、及び／又は配列番号２６の配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２７の配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号２８の配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含むＳＩＲＰα結合ドメイン、
ｂ）
ｉ）配列番号８３の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８４の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８５の配列を含む重鎖ＣＤＲ３、及び／又は配列番号８６の配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８７の配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号８８の配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、或いは
ｉｉ）配列番号７７の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７８の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号７９の配列を含む重鎖ＣＤＲ３、及び／又は配列番号８０の配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８１の配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号２２３の配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含むクローディン１８．２結合ドメイン、並びに／或いは
ｃ）
ｉ）配列番号１１９の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２０の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２１の配列を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
ｉｉ）配列番号１３１の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３２の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１３３の配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン
を含む。
ａ）配列番号２３の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２４の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２５の配列を含む重鎖ＣＤＲ３、及び／又は配列番号２６の配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２７の配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号２８の配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含むＳＩＲＰα結合ドメイン、
ｂ）
ｉ）配列番号８３の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８４の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８５の配列を含む重鎖ＣＤＲ３、及び／又は配列番号８６の配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８７の配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号８８の配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、或いは
ｉｉ）配列番号７７の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７８の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号７９の配列を含む重鎖ＣＤＲ３、及び／又は配列番号８０の配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８１の配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号２２３の配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含むクローディン１８．２結合ドメイン、並びに／或いは
ｃ）
ｉ）配列番号１１９の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２０の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２１の配列を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
ｉｉ）配列番号１３１の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３２の配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１３３の配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン
を含む。
【0288】
[000367]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα結合ドメインは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、及び２１、又はＳＩＲＰα（例えば、ヒトＳＩＲＰα）に対する特異的結合親和性をなおも保持しつつ、少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同的配列からなる群から選択される配列を含む重鎖可変領域、並びに／或いは配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、及び２２からなる群から選択される配列、又はＳＩＲＰα（例えば、ヒトＳＩＲＰα）に対する特異的結合親和性をなおも保持しつつ、少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同的配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0289】
[000368]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα結合ドメインは、抗ＳＩＲＰα ｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、任意選択でリンカー（例えば、ポリペプチドリンカー）を介して、軽鎖可変領域とリンクした重鎖可変領域を含む。或いは、ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、任意選択でリンカー（例えば、ポリペプチドリンカー）を介して、重鎖可変領域とリンクした軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰα ｓｃＦｖは配列番号２２６のアミノ酸配列を含む。
【0290】
[000369]ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、配列番号６５、６８、６９、７１、７３、及び７５からなる群から選択される配列、又はクローディン１８．２（例えば、ヒトクローディン１８．２）に対する特異的結合親和性をなおも保持しつつ、少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同的配列を含む重鎖可変領域、並びに／或いは配列番号６６、６７、７０、７２、７４、７６、及び２２４からなる群から選択される配列、又はクローディン１８．２（例えば、ヒトクローディン１８．２）に対する特異的結合親和性をなおも保持しつつ、少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同的配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0291】
[000370]ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは抗クローディン１８．２ｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、任意選択でリンカー（例えば、ポリペプチドリンカー）を介して、軽鎖可変領域とリンクした重鎖可変領域を含む。或いは、ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、任意選択でリンカー（例えば、ポリペプチドリンカー）を介して、重鎖可変領域とリンクした軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、抗クローディン１８．２ｓｃＦｖは配列番号２２７のアミノ酸配列を含む。
【0292】
[000371]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、配列番号１０７～１１８、及び２２３からなる群から選択される配列、又はＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）に対する特異的結合親和性をなおも保持しつつ、少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同的配列を含む重鎖可変領域を含む。
【0293】
[000372]様々な技術が、そのような抗原結合ドメインの生成に使用可能である。例証的方法として、無変抗体の酵素消化（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７－１１７（１９９２）；ａｎｄ Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、宿主細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）等による組換え発現（例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、及びＳｃＦｖ抗体断片について）、及び上記で議論したようなファージディスプレイライブラリーからのスクリーニング（例えば、ＳｃＦｖについて）が挙げられる。抗体断片を生成するためのその他の技術は当業者にとって明白である。
【0294】
[000373]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα結合ドメイン及び／又はクローディン１８．２結合ドメインは、ｓｃＦｖ又はＦａｂであるか又はそれを含む。ｓｃＦｖの生成は、例えば、国際公開第９３／１６１８５号、米国特許第５，５７１，８９４号、及び同第５，５８７，４５８号に記載されている。ｓｃＦｖは、アミノ末端又はカルボキシル末端のいずれかにおいてエフェクタータンパク質に融合して融合タンパク質を提供し得る（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｅｄ．Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋを参照されたい）。ｓｃＦｖは、直接又はペプチドリンカーを介してＶＬにリンクしたＶＨを含み得る。ある特定の実施形態では、ＶＨはｓｃＦｖのＮ末端に位置し得、及びＶＬはＣ末端に位置し得る。ある特定の実施形態では、ＶＬがｓｃＦｖのＮ末端に位置し得、及びＶＨがＣ末端に位置し得る。
【0295】
[000374]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰアルファ結合ドメイン、標的抗原結合ドメイン（例えば、クローディン１８．２結合ドメイン／ＰＤ－Ｌ１結合ドメイン）、及び活性化受容体結合ドメインは、ペプチドリンカーを介して接続される。ペプチドリンカーは、トレオニン／セリン及びグリシンから構成される、単一の配列又は反復した配列、例えばＴＧＧＧＧ（配列番号１８３）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１８４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１８５）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号１８６）、若しくはＳＧＧＧＧ（配列番号１８７）、又はそのタンデムリピート（例えば、２、３、４、又はより多数の反復）等を含み得る。ある特定の実施形態では、ペプチドリンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３４）を含む。ある特定の実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号１８６）を含か又はそれである。
【0296】
[000375]Ｃ．多重特異性分子の特徴付け
[000376]いくつかの実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、ヒトＳＩＲＰアルファ及びＣＤ４７発現細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ４７発現細胞の表面上で発現されるヒトクローディン１８．２又はＰＤ－Ｌ１）の両方に特異的に結合する能力を有する。本明細書に提示される多重特異性分子は、ヒトＳＩＲＰアルファ及びヒトクローディン１８．２／ヒトＰＤ－Ｌ１の両方に対する特異的結合親和性を保持し、ある特定の実施形態では、そのような側面において親抗体に少なくとも匹敵するか、又はそれより良好でさえある。
[000376]いくつかの実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、ヒトＳＩＲＰアルファ及びＣＤ４７発現細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ４７発現細胞の表面上で発現されるヒトクローディン１８．２又はＰＤ－Ｌ１）の両方に特異的に結合する能力を有する。本明細書に提示される多重特異性分子は、ヒトＳＩＲＰアルファ及びヒトクローディン１８．２／ヒトＰＤ－Ｌ１の両方に対する特異的結合親和性を保持し、ある特定の実施形態では、そのような側面において親抗体に少なくとも匹敵するか、又はそれより良好でさえある。
【0297】
[000377]多重特異性分子の結合性は、「５０％効果濃度」（ＥＣ５０）値（その最大効果（例えば、結合性又は阻害等）の５０％が観察される抗体の濃度を指す）により表すことができる。ＥＣ５０値は、当技術分野において公知の方法、例えば、サンドイッチアッセイ法、例えばＥＬＩＳＡ等、ウェスタンブロット法、フローサイトメトリーアッセイ法、及びその他の結合アッセイ法により測定可能である。
【0298】
[000378]本明細書に提示される抗原結合ドメインの結合親和性は、ＫＤ値（抗原と抗原結合分子との間の結合が平衡に到達したときの会合速度に対する解離速度の比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を表す）により表すことも可能である。抗原結合親和性（例えば、ＫＤ）は、例えばフローサイトメトリーアッセイ法を含む、当技術分野において公知の適する方法を使用して適切に決定され得る。いくつかの実施形態では、異なる濃度の抗原に対する抗原結合ドメインの結合性がフローサイトメトリーにより決定可能であり、決定された平均蛍光強度（ＭＦＩ）が抗原結合ドメインの濃度に対して最初にプロットされ得、次にＰｒｉｓｍバージョン５（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ社、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用しながら、特異的結合蛍光強度（Ｙ）及び抗体の濃度（Ｘ）の依存性を一部位飽和方程式（ｏｎｅ ｓｉｔｅ ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ）：Ｙ＝Ｂｍａｘ＊Ｘ／（ＫＤ＋Ｘ）に近似させることにより、ＫＤ値を計算することが可能であり、ここで、Ｂｍａｘは抗原に対するテスト対象の抗原結合ドメインの最大特異結合を表す。
【0299】
[000379]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、Ｏｃｔｅｔアッセイ法により測定した場合、２５×１０－８Ｍ、２０×１０－８Ｍ、１５×１０－８Ｍ、１２×１０－８Ｍ、１０×１０－８Ｍ、９×１０－８Ｍ、８×１０－８Ｍ、７×１０－８Ｍ、６×１０－８Ｍ、５×１０－８Ｍ、４×１０－８Ｍ、３×１０－８Ｍ、２×１０－８Ｍ、又は１×１０－８Ｍ以下の結合親和性（ＫＤ）を有してヒトＳＩＲＰアルファに特異的に結合する。
【0300】
[000380]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、Ｏｃｔｅｔアッセイ法により測定した場合、１×１０－１２Ｍ以下の結合親和性（ＫＤ）を有してヒトクローディン１８．２に特異的に結合する。
【0301】
[000381]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、Ｏｃｔｅｔアッセイ法により測定した場合、７０×１０－８Ｍ、６５×１０－８Ｍ、６０×１０－８Ｍ、５５×１０－８Ｍ、５０×１０－８Ｍ、４５×１０－８Ｍ、４０×１０－８Ｍ、３５×１０－８Ｍ、３０×１０－８Ｍ、２５×１０－８Ｍ、２０×１０－８Ｍ、１５×１０－８Ｍ、１２×１０－８Ｍ、１０×１０－８Ｍ、９×１０－８Ｍ、８×１０－８Ｍ、７×１０－８Ｍ、６×１０－８Ｍ、５×１０－８Ｍ、４×１０－８Ｍ、３×１０－８Ｍ、２×１０－８Ｍ、又は１×１０－８Ｍ以下の結合親和性（ＫＤ）を有してヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する。
【0302】
[000382]ＣＤ４７とＳＩＲＰアルファとの相互作用、又はＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用に対する、本明細書に提示される多重特異性分子のブロッキング効果は、様々な技術、例えばルシフェラーゼレポーターアッセイ法、競合ＥＬＩＳＡアッセイ法、及び競合ＦＡＣＳアッセイ法等により測定可能であり、ＩＣ５０として表され得る。ＣＤ４７とＳＩＲＰアルファとの相互作用をブロックする場合のＩＣ５０は、ＳＩＲＰアルファに対するＣＤ４７の結合性が本開示の多重特異性分子の存在下で５０％減少するときの、本明細書に提示される多重特異性分子の濃度を表す。ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用をブロックする場合のＩＣ５０は、ＰＤ－Ｌ１に対するＰＤ－１の結合性が本開示の多重特異性分子の存在下で５０％減少するときの、本明細書に提示される多重特異性分子の濃度を表す。ある特定の実施形態では、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用をブロックする場合の本明細書に提示される多重特異性分子のＩＣ５０は、抗ＰＤ－１ Ｃ７１のＩＣ５０に匹敵する。
【0303】
[000383]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との相互作用のブロッキングについて、競合ＥＬＩＳＡアッセイ法又は競合ＦＡＣＳアッセイ法により測定した場合、６．０ｎＭ、５．０ｎＭ、４．０ｎＭ、３．８０ｎＭ、３．６０ｎＭ、３．０ｎＭ、２．９０ｎＭ、２．８８ｎＭ、２．８６ｎＭ、２．８０ｎＭ、２．７８ｎＭ、２．７６ｎＭ、２．７４ｎＭ、２．７０ｎＭ、２．６４ｎＭ、２．４０ｎＭ、２．２０ｎＭ、２．０ｎＭ、１．０ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１８ｎＭ、０．１６ｎＭ、０．１４ｎＭ、０．１２ｎＭ以下のＩＣ５０値を有する。ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＳＩＲＰ－アルファ結合ドメインは、ＳＨＰ－１導入のブロッキングについて、競合ＥＬＩＳＡアッセイ法又は競合ＦＡＣＳアッセイ法により測定した場合、６．０ｎＭ以下、５．０ｎＭ以下、４．０ｎＭ以下、３．８０ｎＭ以下、３．６０ｎＭ以下、３．０ｎＭ以下、２．９０ｎＭ以下、２．８８ｎＭ以下、２．８６ｎＭ以下、２．８０ｎＭ以下、２．７８ｎＭ以下、２．７６ｎＭ以下、２．７４ｎＭ以下、２．７０ｎＭ以下、２．６４ｎＭ以下、２．４０ｎＭ以下、２．２０ｎＭ以下、２．０ｎＭ以下、１．０ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、０．１８ｎＭ以下、０．１６ｎＭ以下、０．１４ｎＭ以下、０．１２ｎＭ以下、０．１０ｎＭ以下、０．０９ｎＭ以下、０．０８ｎＭ、又は０．０７ｎＭ以下のＩＣ５０値を有する。
【0304】
[000384]Ｄ．バリアント
[000385]本明細書に提示される多重特異性分子は、様々なそのバリアントも包含する。ある特定の実施形態では、バリアントは、表２、表４、及び表６に提示されるような１つ又は複数のＣＤＲ配列内、表１、表３、及び表５に提示される１つ又は複数の可変領域配列内（但し、ＣＤＲ配列のいずれにも含まれない）、並びに／或いは定常領域（例えば、Ｆｃ領域）内に、１つ又は複数の改変又は置換を含む。そのようなバリアントは、その親抗体のようなＳＩＲＰα、クローディン１８．２、及び／又はＰＤ－Ｌ１に対する特異的結合親和性を保持するが、しかし改変（複数可）又は置換（複数可）により付与される１つ又は複数の望ましい特性を有する。例えば、バリアントは、抗原結合親和性の改善、生産性の向上、安定性の改善、グリコシル化パターンの改善、グリコシル化のリスク低下、脱アミノ化の低下、エフェクター機能（複数可）の低下又は枯渇、ＦｃＲｎ受容体結合性の改善、薬物動態学的半減期、ｐＨ感受性、及び／又はコンジュゲーションに対する適合性の増加（例えば、１つ又は複数の導入されたシステイン残基）を有し得る。
[000385]本明細書に提示される多重特異性分子は、様々なそのバリアントも包含する。ある特定の実施形態では、バリアントは、表２、表４、及び表６に提示されるような１つ又は複数のＣＤＲ配列内、表１、表３、及び表５に提示される１つ又は複数の可変領域配列内（但し、ＣＤＲ配列のいずれにも含まれない）、並びに／或いは定常領域（例えば、Ｆｃ領域）内に、１つ又は複数の改変又は置換を含む。そのようなバリアントは、その親抗体のようなＳＩＲＰα、クローディン１８．２、及び／又はＰＤ－Ｌ１に対する特異的結合親和性を保持するが、しかし改変（複数可）又は置換（複数可）により付与される１つ又は複数の望ましい特性を有する。例えば、バリアントは、抗原結合親和性の改善、生産性の向上、安定性の改善、グリコシル化パターンの改善、グリコシル化のリスク低下、脱アミノ化の低下、エフェクター機能（複数可）の低下又は枯渇、ＦｃＲｎ受容体結合性の改善、薬物動態学的半減期、ｐＨ感受性、及び／又はコンジュゲーションに対する適合性の増加（例えば、１つ又は複数の導入されたシステイン残基）を有し得る。
【0305】
[000386]親抗体配列は、当技術分野において公知の方法、例えば「アラニン走査式突然変異誘発」を使用して、どの残基が改変又は置換するのに適するか又は好ましいか特定するためにスクリーニングされ得る、（例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５を参照されたい）。手短に述べると、標的残基（例えば、荷電残基、例えばＡｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｕ等）が特定され、そして中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）に置換され得、そして改変された抗体が生成され、そして興味深い特性についてスクリーニングされる。特定のアミノ酸の箇所における置換が興味深い機能的変化を示す場合には、次にその位置は、改変又は置換のための有望な残基として特定され得る。有望な残基は、異なる種類の残基（例えば、システイン残基、正に荷電した残基等）に置換することにより更に評価され得る。
【0306】
[000387]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＳＩＲＰα結合ドメイン、クローディン１８．２結合ドメイン、及び／又はＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、１つ若しくは複数のＣＤＲ配列内、及び／又は１つ若しくは複数のＦＲ配列内、及び／又は１つ若しくは複数の可変領域配列内に、１つ又は複数のアミノ酸残基の置換を含む。ある特定の実施形態では、バリアントは、ＣＤＲ配列内、及び／又はＦＲ配列内、及び／又は１つ又は複数の可変領域配列内に、全部で１０、９、８、７、６、５、４、３、２個以下、又は１個の置換を含む。
【0307】
[000388]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα結合ドメインは、ＳＩＲＰαに対する結合親和性を、その親抗体と類似したレベル又はそれを凌駕するほどのレベルで保持しながら、配列番号２３～６４及び１９８から選択される１、２、３、４、５、又は６個の配列に対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１、２、３、４、５、又は６個のＣＤＲ配列を含む。
【0308】
[000389]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα結合ドメインは、ＳＩＲＰαに対する結合親和性を、その親抗体と類似したレベル又はそれを凌駕するほどのレベルで保持しながら、配列番号１～２２から選択される１つ又は複数の配列に対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１つ又は複数の可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、配列番号１～２２から選択される可変領域配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、又は削除された。いくつかの実施形態では、置換、挿入、又は欠損は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）で生ずる。
【0309】
[000390]ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、ＳＩＲＰαに対する結合親和性をその親抗体と類似したレベル又はそれを凌駕するほどのレベルで保持しながら、配列番号７７～１０６及び２２５から選択される１、２、３、４、５、又は６個の配列に対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１、２、３、４、５、又は６個のＣＤＲ配列を含む。
【0310】
[000391]ある特定の実施形態では、クローディン１８．２結合ドメインは、クローディン１８．２に対する結合親和性をその親抗体と類似したレベル又はそれを凌駕するほどのレベルで保持しながら、配列番号６５～７６及び２２４から選択される１つ又は複数の配列に対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１つ又は複数の可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、配列番号６５～７６及び２２４から選択される可変領域配列において、合計１～１０個のアミノ酸が、置換、挿入、又は削除された。いくつかの実施形態では、置換、挿入、又は欠損は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）で生ずる。
【0311】
[000392]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、ＰＤ－Ｌ１に対する結合親和性をその親抗体と類似したレベル又はそれを凌駕するほどのレベルで保持しながら、配列番号１１９～１５４から選択される１、２、又は３個の配列に対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１、２、又は３個のＣＤＲ配列を含む。
【0312】
[000393]ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、ＰＤ－Ｌ１に対する結合親和性をその親抗体と類似したレベル又はそれを凌駕するほどのレベルで保持しながら、配列番号１０７～１１８及び２２３から選択される１つ又は複数の配列に対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１つ又は複数の可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、配列番号１０７～１１８及び２２３から選択される可変領域配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、又は削除された。いくつかの実施形態では、置換、挿入、又は欠損は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）で生ずる。
【0313】
[000394]ｉ．グリコシル化バリアント
[000395]本明細書に提示される多重特異性分子は、グリコシル化バリアントも包含し、そのようなバリアントは、多重特異性分子の抗原結合ドメイン又は活性化受容体ドメインについて、そのグリコシル化の範囲を増加又は減少させることで取得され得る。
[000395]本明細書に提示される多重特異性分子は、グリコシル化バリアントも包含し、そのようなバリアントは、多重特異性分子の抗原結合ドメイン又は活性化受容体ドメインについて、そのグリコシル化の範囲を増加又は減少させることで取得され得る。
【0314】
[000396]本明細書に提示される多重特異性分子は、炭水化物部分（例えば、オリゴ糖構造）に連結し得る側鎖を有する１つ又は複数のアミノ酸残基を含み得る。抗体の抗原結合ドメインのグリコシル化は、一般的にＮ結合型又はＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型とは、アスパラギン残基、例えば、トリペプチド配列、例えばアスパラギン－Ｘ－セリンやアスパラギン－Ｘ－トレオニン（Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸である）等内のアスパラギン残基の側鎖に対する炭水化物部分の連結を指す。Ｏ結合型グリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はトレオニンに対する糖Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、又はキシロースのうちの１つの連結を指す。天然グリコシル化部位の除去は、例えば、配列中に存在する上記トリペプチド配列（Ｎ結合型グリコシル化部位の場合）、又はセリン若しくはトレオニン残基（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）のうちの１つが置換されるように、アミノ酸配列を変化させることにより好都合に実現可能である。新規グリコシル化部位は、類似した方法で、そのようなトリペプチド配列、又はセリン若しくはトレオニン残基を導入することにより創出され得る。
【0315】
[000397]ｉｉ．システイン工学操作バリアント
[000398]本明細書に提示される多重特異性分子は、１つ又は複数の導入された遊離システインアミノ酸残基を含むシステイン工学操作バリアントも包含する。
[000398]本明細書に提示される多重特異性分子は、１つ又は複数の導入された遊離システインアミノ酸残基を含むシステイン工学操作バリアントも包含する。
【0316】
[000399]遊離システイン残基とは、ジスルフィド架橋の一部をなさない残基である。システイン工学操作バリアントは、例えば、工学操作システインの部位において、例えばマレイミド又はハロアセチルを通じて、細胞毒性及び／又はイメージング化合物、ラベル、又はとりわけ放射性同位体とコンジュゲーションするのに有用である。抗体ポリペプチドを工学操作して遊離システイン残基を導入する方法は、当技術分野において公知であり、例えば国際公開第２００６／０３４４８８号を参照されたい。
【0317】
[000400]ｉｉｉ．Ｆｃバリアント
[000401]本明細書に提示される多重特異性分子はＦｃバリアントも包含し、そのようなバリアントは、そのＦｃ領域及び／又はヒンジ領域において１つ又は複数のアミノ酸残基の改変又は置換を含み、例えばエフェクター機能、例えばＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣ等に変化をもたらす。抗体エンジニアリングによりＡＤＣＣ活性を変化させる方法は当技術分野に記載されており、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１．２７６（９）：６５９１－６０４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００．１６４（８）：４１７８－８４；Ｓｔｅｕｒｅｒ Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１５５（３）：１１６５－７４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１，１６６（４）：２５７１－５；Ｌａｚａｒ ＧＡ．ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２００６，１０３（１１）：４００５－４０１０；Ｒｙａｎ ＭＣ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００７，６：３００９－３０１８；Ｒｉｃｈａｒｄｓ ＪＯ，．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００８，７（８）：２５１７－２７；Ｓｈｉｅｌｄｓ Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００２，２７７：２６７３３－２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ Ｔ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００３，２７８：３４６６－３４７３を参照されたい。
[000401]本明細書に提示される多重特異性分子はＦｃバリアントも包含し、そのようなバリアントは、そのＦｃ領域及び／又はヒンジ領域において１つ又は複数のアミノ酸残基の改変又は置換を含み、例えばエフェクター機能、例えばＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣ等に変化をもたらす。抗体エンジニアリングによりＡＤＣＣ活性を変化させる方法は当技術分野に記載されており、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１．２７６（９）：６５９１－６０４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００．１６４（８）：４１７８－８４；Ｓｔｅｕｒｅｒ Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１５５（３）：１１６５－７４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１，１６６（４）：２５７１－５；Ｌａｚａｒ ＧＡ．ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２００６，１０３（１１）：４００５－４０１０；Ｒｙａｎ ＭＣ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００７，６：３００９－３０１８；Ｒｉｃｈａｒｄｓ ＪＯ，．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００８，７（８）：２５１７－２７；Ｓｈｉｅｌｄｓ Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００２，２７７：２６７３３－２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ Ｔ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００３，２７８：３４６６－３４７３を参照されたい。
【0318】
[000402]本明細書に提示される抗体のＣＤＣ活性は、例えば、Ｃ１ｑ結合性及び／又はＣＤＣを改善するか又は減じることにより変化させることも可能である（例えば、国際公開第９９／５１６４２号；Ｄｕｎｃａｎ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号を参照されたい）；及びＦｃ領域バリアントのその他の例に関する国際公開第９４／２９３５１号。Ｆｃ領域のアミノ酸残基３２９、３３１、及び３２２から選択される１つ又は複数のアミノ酸は、Ｃｌｑ結合性を変化させ、及び／又は補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を低下させるか若しくは無効化するために異なるアミノ酸残基と置換可能である（Ｉｄｕｓｏｇｉｅらの米国特許第６，１９４，５５１号を参照されたい）。１つ又は複数のアミノ酸置換（複数可）は、抗体が相補体を固定する能力を変化させるために導入することも可能である（ＢｏｄｍｅｒらのＰＣＴ出願国際公開広報第９４／２９３５１号を参照されたい）。
【0319】
[000403]用語「抗体依存性細胞ファゴサイトーシス」及び「ＡＤＣＰ」とは、抗体がコーティングされた細胞又は粒子が、免疫グロブリンＦｃ領域と結合する貪食細胞性免疫細胞（例えば、マクロファージ、好中球、及び樹状細胞）により、全体的又は部分的に内部移行するプロセスを指す。抗体エンジニアリングにより抗体のＡＤＣＰ活性を変化させる方法は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｋｅｌｌｎｅｒ Ｃ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｆｕｓ Ｍｅｄ Ｈｅｍｏｔｈｅｒ，（２０１７）４４：３２７－３３６ ａｎｄ Ｃｈｕｎｇ ＡＷ ｅｔ ａｌ．，ＡＩＤＳ，（２０１４）２８：２５２３－２５３０を参照されたい。Ｆｃバリアントの例は当技術分野において公知であり、例えば本明細書においてその全体が組み込まれるＷａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ ２０１８，９（１）： ６３－７３ ａｎｄ Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ ＆ Ｍｏｌ．，Ｍｅｄ．（２０１９）５１：１３８を参照されたい。
【0320】
[000404]ｉ）エフェクター機能が増強したＦｃバリアント
[000405]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＦｃバリアントは、野生型Ｆｃ（例えば、ＩｇＧ１のＦｃ）と比較して、それよりも増加したＡＤＣＣ、並びに／或いはＦｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及び／又はＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６））に対して増加した親和性を有する。ある特定の実施形態では、Ｆｃバリアントは、Ｆｃ領域の下記の位置：
２３４、２３５、２３６、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６０、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、２９９、３００、３０１、３０３、３０４、３０５、３０７、３０９、３１２、３１３、３１５、３２０、３２２、３２４、３２５、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３３９、３４０、３４５、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９６、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、及び４４０のうちの１つ又は複数において、１つ又は複数のアミノ酸置換（複数可）を含み（本明細書においてその全体が組み込まれるＰｒｅｓｔａによる国際公開第００／４２０７２号、Ｌａｚａｒによる国際公開第２００６／０１９４４７号、及び国際公開第２０１６／１９６２２８号を参照されたい）、ここで、Ｆｃ領域内の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔに準ずるＥＵインデックスのそれである（Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照されたい）。エフェクター機能増加に関する例示的置換として、非限定的に、２３４Ｙ、２３５Ｑ、２３６Ａ、２３６Ｗ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２３９Ｍ、２４３Ｌ、２４７Ｉ、２６８Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、２６８Ｆ、２７０Ｅ、２８０Ｈ、２９０Ｓ、２９２Ｐ、２９８Ａ、２９８Ｄ、２９８Ｖ、３００Ｌ、３０５Ｉ、３２４Ｔ、３２６Ａ、３２６Ｄ、３２６Ｗ、３３０Ｌ、３３０Ｍ、３３３Ｓ、３３２Ｄ、３３２Ｅ、２９８Ａ、３３３Ａ、３３４Ａ、３３４Ｅ、３２６Ａ、２４７Ｉ、３３９Ｄ、３３９Ｑ、３４５Ｒ、２８０Ｈ、２９０Ｓ、２９８Ｄ、２９８Ｖ、２４３Ｌ、２９２Ｐ、３００Ｌ、３９６Ｌ、３０５Ｉ、３９６Ｌ、４３０Ｇ、４４０Ｙ、又は任意のこれらの組合せ（例えば、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｌ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３６Ａ／２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６８Ｆ／３２４Ｔ、２６７Ｅ／２６８Ｆ、２６７Ｅ／３２４Ｔ、及び２６７Ｅ／２６８Ｆ／３２４Ｔ等）が挙げられる（国際公開第２０１６／１９６２２８号；Ｒｉｃｈａｒｄｓ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐ．７：２５１７；Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）ｍＡｂｓ ２：１８１；ａｎｄ Ｓｔｒｏｈｌ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：６８５－６９１を参照されたい）。
[000405]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＦｃバリアントは、野生型Ｆｃ（例えば、ＩｇＧ１のＦｃ）と比較して、それよりも増加したＡＤＣＣ、並びに／或いはＦｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及び／又はＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６））に対して増加した親和性を有する。ある特定の実施形態では、Ｆｃバリアントは、Ｆｃ領域の下記の位置：
２３４、２３５、２３６、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６０、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、２９９、３００、３０１、３０３、３０４、３０５、３０７、３０９、３１２、３１３、３１５、３２０、３２２、３２４、３２５、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３３９、３４０、３４５、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９６、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、及び４４０のうちの１つ又は複数において、１つ又は複数のアミノ酸置換（複数可）を含み（本明細書においてその全体が組み込まれるＰｒｅｓｔａによる国際公開第００／４２０７２号、Ｌａｚａｒによる国際公開第２００６／０１９４４７号、及び国際公開第２０１６／１９６２２８号を参照されたい）、ここで、Ｆｃ領域内の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔに準ずるＥＵインデックスのそれである（Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照されたい）。エフェクター機能増加に関する例示的置換として、非限定的に、２３４Ｙ、２３５Ｑ、２３６Ａ、２３６Ｗ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２３９Ｍ、２４３Ｌ、２４７Ｉ、２６８Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、２６８Ｆ、２７０Ｅ、２８０Ｈ、２９０Ｓ、２９２Ｐ、２９８Ａ、２９８Ｄ、２９８Ｖ、３００Ｌ、３０５Ｉ、３２４Ｔ、３２６Ａ、３２６Ｄ、３２６Ｗ、３３０Ｌ、３３０Ｍ、３３３Ｓ、３３２Ｄ、３３２Ｅ、２９８Ａ、３３３Ａ、３３４Ａ、３３４Ｅ、３２６Ａ、２４７Ｉ、３３９Ｄ、３３９Ｑ、３４５Ｒ、２８０Ｈ、２９０Ｓ、２９８Ｄ、２９８Ｖ、２４３Ｌ、２９２Ｐ、３００Ｌ、３９６Ｌ、３０５Ｉ、３９６Ｌ、４３０Ｇ、４４０Ｙ、又は任意のこれらの組合せ（例えば、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｌ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３６Ａ／２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６８Ｆ／３２４Ｔ、２６７Ｅ／２６８Ｆ、２６７Ｅ／３２４Ｔ、及び２６７Ｅ／２６８Ｆ／３２４Ｔ等）が挙げられる（国際公開第２０１６／１９６２２８号；Ｒｉｃｈａｒｄｓ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐ．７：２５１７；Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）ｍＡｂｓ ２：１８１；ａｎｄ Ｓｔｒｏｈｌ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：６８５－６９１を参照されたい）。
【0321】
[000406]位置２５６、２９０、２９８、３３３、３３４、及び３３９における特異的突然変異は、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合性を改善することが明らかとなった。それに付加して、下記の複合的突然変異体は、ＦｃγＲＩＩＩの結合性を改善することが明らかとなった：一方の重鎖内のＴ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、及びＬ２３４Ｙ／Ｌ２３５Ｑ／Ｇ２３６Ｗ／Ｓ２３９Ｍ／Ｈ２６８Ｄ／Ｄ２７０Ｅ／Ｓ２９８Ａ、並びに対向する重鎖内のＤ２７０Ｅ／Ｋ３２６Ｄ／Ａ３３０Ｍ／Ｋ３３４Ｅ（ＦｃγＲＩＩＩ結合性及びＡＤＣＣ活性が増強する）。ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合性がきわめて増強したその他のＦｃバリアントとして、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ及びＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ突然変異を有するバリアント（ＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性において最大の増加、ＦｃγＲＩＩｂ結合性の減少、及び強い細胞毒性活性を示した）、並びにＬ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、及びＰ３９６Ｌ突然変異を有するバリアント（ＦｃγＲＩＩＩａ結合性の増強、同時にＡＤＣＣ活性の増強を示した）が挙げられる（Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１０３：４００５；Ａｗａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｂｌｏｏｄ １１５：１２０４；Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ ＆ Ｌａｚａｒ（２０１１）Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ，Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６７：８８８２を参照されたい）。Ｃｌｑに対する結合性を増加させる改変は、ＣＤＣ活性を増強するために導入され得る。例示的改変として、ＩｇＧ２におけるＫ３２６（例えば、Ｋ３２６Ｗ）及び／又はＥ３３３改変、或いはＩｇＧ１における、単独又は任意の組合せでのＳ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ改変が挙げられる（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２５７１，Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）ｍＡｂｓ ２：１８１を参照されたい）。その他の例示的改変として、Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ、及びＥ３４５Ｒ／Ｅ４３０Ｇ／Ｓ４４０Ｙが挙げられる。
【0322】
[000407]ｉｉ）エフェクター機能が低下したＦｃ
[000408]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＦｃバリアントは、野生型Ｆｃ（例えば、ＩｇＧ１のＦｃ）と比較して低下したエフェクター機能を有し、またＦｃ領域の２２０、２２６、２２９、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２６７、２６８、２６９、２７０、２９７、３０９、３１８、３２０、３２２、３２５、３２８、３２９、３３０、及び３３１からなる群から選択される位置において１つ又は複数のアミノ酸置換（複数可）を含み（国際公開第２０１６／１９６２２８号；Ｒｉｃｈａｒｄｓ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐ．７：２５１７；Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）ｍＡｂｓ ２：１８１；ａｎｄ Ｓｔｒｏｈｌ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：６８５－６９１を参照されたい）、ここで、Ｆｃ領域内の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔに準ずるＥＵインデックスのそれである。エフェクター機能を低下させるための例示的置換として、非限定的に、２２０Ｓ、２２６Ｓ、２２８Ｐ、２２９Ｓ、２３３Ｐ、２３４Ｖ、２３４Ｇ、２３４Ａ、２３４Ｆ、２３４Ａ、２３５Ａ、２３５Ｇ、２３５Ｅ、２３６Ｅ、２３６Ｒ、２３７Ａ、２３７Ｋ、２３８Ｓ、２６７Ｒ、２６８Ａ、２６８Ｑ、２６９Ｒ、２９７Ａ、２９７Ｑ、２９７Ｇ、３０９Ｌ、３１８Ａ、３２２Ａ、３２５Ｌ、３２８Ｒ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、又は任意のこれらの組合せが挙げられる（国際公開第２０１６／１９６２２８号、及びＳｔｒｏｈｌ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：６８５－６９１を参照されたい）。
[000408]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＦｃバリアントは、野生型Ｆｃ（例えば、ＩｇＧ１のＦｃ）と比較して低下したエフェクター機能を有し、またＦｃ領域の２２０、２２６、２２９、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２６７、２６８、２６９、２７０、２９７、３０９、３１８、３２０、３２２、３２５、３２８、３２９、３３０、及び３３１からなる群から選択される位置において１つ又は複数のアミノ酸置換（複数可）を含み（国際公開第２０１６／１９６２２８号；Ｒｉｃｈａｒｄｓ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐ．７：２５１７；Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）ｍＡｂｓ ２：１８１；ａｎｄ Ｓｔｒｏｈｌ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：６８５－６９１を参照されたい）、ここで、Ｆｃ領域内の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔに準ずるＥＵインデックスのそれである。エフェクター機能を低下させるための例示的置換として、非限定的に、２２０Ｓ、２２６Ｓ、２２８Ｐ、２２９Ｓ、２３３Ｐ、２３４Ｖ、２３４Ｇ、２３４Ａ、２３４Ｆ、２３４Ａ、２３５Ａ、２３５Ｇ、２３５Ｅ、２３６Ｅ、２３６Ｒ、２３７Ａ、２３７Ｋ、２３８Ｓ、２６７Ｒ、２６８Ａ、２６８Ｑ、２６９Ｒ、２９７Ａ、２９７Ｑ、２９７Ｇ、３０９Ｌ、３１８Ａ、３２２Ａ、３２５Ｌ、３２８Ｒ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、又は任意のこれらの組合せが挙げられる（国際公開第２０１６／１９６２２８号、及びＳｔｒｏｈｌ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：６８５－６９１を参照されたい）。
【0323】
[000409]ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＦｃバリアントは、ＩｇＧ１アイソタイプのそれであり、そしてＬ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３４Ｖ、Ｆ２３４Ａ、Ｖ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ、又は任意のこれらの組合せ（例えば、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ等）からなる群から選択される１つ又は複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＦｃバリアントは、ＩｇＧ２アイソタイプのそれであり、そしてＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、及び任意のこれらの組合せからなる群から選択される１つ又は複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提示されるＦｃバリアントは、ＩｇＧ４アイソタイプのそれであり、そしてＳ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、及び任意のこれらの組合せからなる群から選択される１つ又は複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。
【0324】
[000410]ｉｉｉ）ＦｃＲｎに対する結合性が変化したＦｃ
[000411]ある特定の実施形態では、Ｆｃバリアントは、ｐＨ６．０において新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する結合親和性を改善する一方、ｐＨ７．４においては最低限度の結合性を保持する１つ又は複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。そのようなバリアントは、それがリソゾーム内での分解から免れ、次に位置の移動がなされ、そして細胞の外部に放出されるのを可能にする酸性ｐＨにおいてＦｃＲｎに結合するので、延長した薬物動態学的半減期を有し得る。ＦｃＲｎとの結合親和性を改善するために抗体及びその抗原結合断片を工学操作する方法は当技術分野において周知されており、例えば、Ｖａｕｇｈｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，６（１）：６３－７３，１９９８；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅ１，Ｃｈａｐｔｅｒ ２７：Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｃ ｒｅｇｉｏｎ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＰＫ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２０１０；Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７０：３２６９－３２７７（２０１０）；Ｈｉｎｔｏｎ，Ｐ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７６：３４６－３５６（２００６）；Ｐｅｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：１７５９，Ｂａｌｌ Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２００２，１６９：５１７１－５１８０，Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ＷＦ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８１：２３５１４－２３５２４（２００６）；Ｚａｌｅｖｓｋｙ Ｊ，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．；２８：１５７－１５９（２０１０）；国際公開第２００９／０８６３２０号；米国特許第６，２７７，３７５号；米国特許第６，８２１，５０５号；国際公開第９７／３４６３１号；及び国際公開第２００２／０６０９１９号を参照されたい。
[000411]ある特定の実施形態では、Ｆｃバリアントは、ｐＨ６．０において新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する結合親和性を改善する一方、ｐＨ７．４においては最低限度の結合性を保持する１つ又は複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。そのようなバリアントは、それがリソゾーム内での分解から免れ、次に位置の移動がなされ、そして細胞の外部に放出されるのを可能にする酸性ｐＨにおいてＦｃＲｎに結合するので、延長した薬物動態学的半減期を有し得る。ＦｃＲｎとの結合親和性を改善するために抗体及びその抗原結合断片を工学操作する方法は当技術分野において周知されており、例えば、Ｖａｕｇｈｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，６（１）：６３－７３，１９９８；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅ１，Ｃｈａｐｔｅｒ ２７：Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｃ ｒｅｇｉｏｎ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＰＫ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２０１０；Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７０：３２６９－３２７７（２０１０）；Ｈｉｎｔｏｎ，Ｐ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７６：３４６－３５６（２００６）；Ｐｅｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：１７５９，Ｂａｌｌ Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２００２，１６９：５１７１－５１８０，Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ＷＦ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８１：２３５１４－２３５２４（２００６）；Ｚａｌｅｖｓｋｙ Ｊ，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．；２８：１５７－１５９（２０１０）；国際公開第２００９／０８６３２０号；米国特許第６，２７７，３７５号；米国特許第６，８２１，５０５号；国際公開第９７／３４６３１号；及び国際公開第２００２／０６０９１９号を参照されたい。
【0325】
[000412]投与されたときに、抗体の血清半減期の増加を引き起こす可能性があるＦｃ改変の非限定的な例として、例えば、２３４（例えば、Ｆとの）、２３５（例えば、Ｑとの）、２３８（例えば、Ｄとの）、２５０（例えば、Ｅ又はＱとの）、２５２（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／Ｗ、又はＴとの）、２５４（例えば、Ｓ又はＴとの）、２５６（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／Ｄ、又はＴとの）；２５９（例えば、Ｉとの）；２７２（例えば、Ａとの）、３０５（例えば、Ａとの）、３０７（例えば、Ａ又はＰとの）、３０８（例えば、Ｆ、Ｃ、又はＰとの）、３１１（例えば、Ａ又はＲとの）、３１２（例えば、Ａとの）、３２２（例えば、Ｑ）、３２８（例えば、Ｅ）、３３１（例えば、Ａとの）、３７８（例えば、Ａとの）、３８０（例えば、Ａとの）、３８２（例えば、Ａとの）、４２８（例えば、Ｌ又はＦとの）、４３２（例えば、Ｃとの）、４３３（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／Ｑ又はＫとの）、４３４（例えば、Ｈ／Ｆ又はＹ又はＳ又はＡ又はＷとの）、４３５（例えば、Ｈとの）、４３６（例えば、Ｌとの）、及び４３７（例えば、Ｃとの）から選択される１つ又は複数の位置における置換（複数可）が挙げられる（すべての位置はＥＵナンバリングによる）（国際公開第２０１６０４９０００Ａ２号；国際公開第２０２００５２６９２号；国際公開第２０１６１９６２２８号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、２３４Ｆ、２３５Ｑ、２３８Ｄ、２５０Ｑ、２５２Ｔ、２５２Ｙ、２５４Ｔ、２５６Ｅ、２５９Ｉ、２７２Ａ、３０５Ａ、３０７Ａ、３０８Ｆ、３１１Ａ、３２２Ｑ、３２８Ｅ、３３１Ｓ、３８０Ａ、４２８Ｌ、４３２Ｃ、４３３Ｋ、４３３Ｓ、４３４Ｓ、４３４Ｙ、４３４Ｆ、４３４Ｗ、４３４Ａ、４３５Ｈ、４３６Ｌ、４３７Ｃ及び任意のこれらの組合せからなる群から選択される１つ又は複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ改変は、ａ）４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）及び４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）置換；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、及び３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）置換；ｂ）４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）及び４３４（例えば、Ｎ４３４Ｙ又はＮ４３４Ｆ）置換；ｃ）２５２Ｙ、２５４Ｔ、及び２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ）置換；ｄ）２５０Ｑ及び４２８Ｌ置換（例えば、Ｔ２５０Ｑ及びＭ４２８Ｌ）；ｅ）３０７Ａ、３８０Ａ、及び４３４Ａ置換（例えば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、及びＮ４３４Ａ）；ｆ）Ｐ２３８Ｄ及びＬ３２８Ｅ置換；ｇ）Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｑ、Ｋ３２２Ｑ、Ｍ２５２Ｔ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ置換；並びにｈ）Ｌ４３２Ｃ、Ｈ４３３Ｓ、Ｎ４３４Ｗ、Ｙ４３６Ｌ、及びＴ４３７Ｃ置換から選択される改変の１つ又は対又は群を含む。
【0326】
[000413]いくつかの実施形態では、ハイブリッドＩｇＧアイソタイプが、ＦｃＲｎ結合性及び抗体の半減期を増加させるのに使用され得る。ハイブリッドＩｇは、２つ以上のアイソタイプから生成可能である。例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３ハイブリッドバリアントが、ＣＨ２及び／又はＣＨ３領域内のＩｇＧ１位置を、２つのアイソタイプで異なる位置においてＩｇＧ３由来のアミノ酸と置換することにより構築され得る。いくつかの実施形態では、ハイブリッドＩｇは、ここで開示される１つ又は複数の改変（例えば、置換）を含み得る。
【0327】
[000414]Ｅ．コンジュゲート
[000415]いくつかの実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子はコンジュゲート部分を更に含む。コンジュゲート部分は多重特異性分子とリンクし得る。コンジュゲート部分は、多重特異性分子に連結可能である非タンパク質部分である。様々なコンジュゲート部分が、本明細書に提示される多重特異性分子とリンクし得るものと考えられる（例えば、“Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ”，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．Ｃｒｕｓｅ ａｎｄ Ｒ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ．（ｅｄｓ．），Ｃａｒｇｅｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８９）を参照されたい）。このようなコンジュゲート部分は、いくつかの方法の中でもとりわけ、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、複合体形成、会合、混合、又は付加により多重特異性分子とリンクし得る。
[000415]いくつかの実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子はコンジュゲート部分を更に含む。コンジュゲート部分は多重特異性分子とリンクし得る。コンジュゲート部分は、多重特異性分子に連結可能である非タンパク質部分である。様々なコンジュゲート部分が、本明細書に提示される多重特異性分子とリンクし得るものと考えられる（例えば、“Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ”，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．Ｃｒｕｓｅ ａｎｄ Ｒ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ．（ｅｄｓ．），Ｃａｒｇｅｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８９）を参照されたい）。このようなコンジュゲート部分は、いくつかの方法の中でもとりわけ、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、複合体形成、会合、混合、又は付加により多重特異性分子とリンクし得る。
【0328】
[000416]ある特定の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性分子は、エピトープ結合部分の外側にある特定部位（１つ又は複数のコンジュゲートに結合するのに利用され得る）を含有するように工学操作され得る。例えば、そのような部位は、コンジュゲートとの共有結合を円滑化するための１つ又は複数の反応性アミノ酸残基、例えばシステイン又はヒスチジン残基等を含み得る。
【0329】
[000417]ある特定の実施形態では、多重特異性分子は、コンジュゲート部分と間接的に、又は別のコンジュゲート部分を通じてリンクし得る。例えば、多重特異性分子はビオチンにコンジュゲートし、次にアビジンにコンジュゲートしている第２のコンジュゲート部分に間接的にコンジュゲートし得る。コンジュゲート部分は、クリアランス修飾剤、毒素（例えば、化学療法剤）、検出可能な標識（例えば、放射性同位体、ランタニド、発光標識、蛍光標識、又は酵素－基質標識）、又は精製部分であり得る。
【0330】
[000418]「毒素」は、細胞にとって有害であるか、又は細胞に障害若しくは死をもたらし得る任意の薬剤であり得る。毒素の例として、非限定的に、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、ＤＭ１、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン及びそのアナログ、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、及びシス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ））、抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチン及びビンブラスチン）、トポイソメラーゼ阻害剤、及びチューブリン結合剤が挙げられる。
【0331】
[000419]検出可能な標識の例として、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリトリン、又はテキサスレッド）、酵素－基質標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルセリフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅ）、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカライドオキシダーゼ又はβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ）、放射性同位体（例えば、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３Ｈ、１１１Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１４Ｃ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、８６Ｙ、８８Ｙ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、２１１Ａｔ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、及び３２Ｐ、その他のランタニド類）、発光標識、発色部分、ジゴキシゲニン、ビオチン／アビジン、検出用のＤＮＡ分子又は金を挙げることができる。
【0332】
[000420]ある特定の実施形態では、コンジュゲート部分は、多重特異性分子の半減期を増加させるのに役立つクリアランス修飾剤であり得る。例証的事例として、水溶性ポリマー、例えばＰＥＧ、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー等が挙げられる。ポリマーは任意の分子量のそれであり得、また分岐状又は非分岐状であり得る。多重特異性分子に連結するポリマーの数は可変であり得、また２以上のポリマーに連結する場合には、それらは同一又は異なる分子であり得る。
【0333】
[000421]ある特定の実施形態では、コンジュゲート部分は、精製部分、例えば磁気ビーズ等であり得る。
[000422]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、コンジュゲートのための基材用として使用される。
[000422]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、コンジュゲートのための基材用として使用される。
【0334】
[000423]Ｆ．ポリヌクレオチド及び組換え方法
[000424]本開示は、本明細書に提示される多重特異性分子をコードする単離されたポリヌクレオチドについて提示する。
[000424]本開示は、本明細書に提示される多重特異性分子をコードする単離されたポリヌクレオチドについて提示する。
【0335】
[000425]用語「核酸」又は「ポリヌクレオチド」とは、本明細書で使用される場合、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）、及び単鎖又は二本鎖のいずれかの形態にあるそのポリマーを指す。特別に限定されない限り、該用語は、参照核酸と類似した結合特性を有し、また天然に存在するヌクレオチドと類似した方式で代謝される天然ヌクレオチドの公知アナログを含有するポリヌクレオチドを包含する。別途表示されない限り、特定のポリヌクレオチド配列は、保存的に改変されたそのバリアント（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ、及び相補的配列、並びに明示的に示された配列も暗黙的に包含する。特に、縮重コドン置換は、１つ又は複数の選択された（又はすべての）コドンの第３の位置が混合基及び／又はデオキシイノシン残基と置換された配列を生成することにより達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；ａｎｄ Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８（１９９４）を参照されたい）。
【0336】
[000426]多くのベクターが利用可能である。ベクターコンポーネントとして、下記事項：シグナル配列、複製開始点、１つ又は複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）、及び転写終結配列のうちの１つ又は複数が一般的に挙げられるが、これらに限定されない。
【0337】
[000427]本開示は、多重特異性分子をコードする本明細書に提示の核酸配列、該核酸配列と作動可能にリンクした少なくとも１つのプロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）、及び少なくとも１つの選択マーカーを含有するベクター（例えば、発現ベクター）について提示する。ベクターの例として、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス（例えば、ＳＶ４０）、ラムダファージ、及びＭ１３ファージ、プラスミドｐｃＤＮＡ３．３、ｐＭＤ１８－Ｔ、ｐＯｐｔｉｖｅｃ、ｐＣＭＶ、ｐＥＧＦＰ、ｐＩＲＥＳ、ｐＱＤ－Ｈｙｇ－ＧＳｅｕ、ｐＡＬＴＥＲ、ｐＢＡＤ、ｐｃＤＮＡ、ｐＣａｌ、ｐＬ、ｐＥＴ、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＧＥＸ、ｐＣＩ、ｐＥＧＦＴ、ｐＳＶ２、ｐＦＵＳＥ、ｐＶＩＴＲＯ、ｐＶＩＶＯ、ｐＭＡＬ、ｐＭＯＮＯ、ｐＳＥＬＥＣＴ、ｐＵＮＯ、ｐＤＵＯ、Ｐｓｇ５Ｌ、ｐＢＡＢＥ、ｐＷＰＸＬ、ｐＢＩ、ｐ１５ＴＶ－Ｌ、ｐＰｒｏ１８、ｐＴＤ、ｐＲＳ１０、ｐＬｅｘＡ、ｐＡＣＴ２．２、ｐＣＭＶ－ＳＣＲＩＰＴ．ＲＴＭ．、ｐＣＤＭ８、ｐＣＤＮＡ１．１／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ＰＣＲ２．１、ｐＥＦ－１、ｐＦＢ、ｐＳＧ５、ｐＸＴ１、ｐＣＤＥＦ３、ｐＳＶＳＰＯＲＴ、ｐＥＦ－Ｂｏｓ等が挙げられるが、これらに限定されない。
【0338】
[000428]多重特異性分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターが、クローニング又は遺伝子発現のために宿主細胞に導入可能である。本明細書のベクター内でＤＮＡをクローニングするか又は発現させるための適する宿主細胞は、原核生物、酵母菌、又は上記記載のより高度の真核細胞である。これを目的とした適する原核生物として、真正細菌、例えばグラム陰性又はグラム陽性生物等、例えば腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、例えば大腸菌属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）等、例えば大腸菌、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルウイニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、例えばサルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラシア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、例えば、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、及びシゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、並びに桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）、例えばＢ．サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）やＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）等、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、例えば緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）等、及びストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）が挙げられる。
【0339】
[000429]原核生物に付加して、真核生物病原菌、例えば糸状菌又は酵母菌等が、提示のベクターに対する適するクローニング又は発現宿主である。下等真核生物宿主微生物の中でもとりわけ、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、又は一般的なパン酵母が最も一般的に使用される。しかしながら、いくつかのその他の属、種、及び系統、例えばシゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）等；クルイベロミセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）宿主、例えばＫ．ラクティス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）、Ｋ．フラギリス（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）（ＡＴＣＣ１２，４２４）、Ｋ．ブルガリカス（Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）（ＡＴＣＣ１６，０４５）、Ｋ．ウィッカハミ（Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ）（ＡＴＣＣ２４，１７８）、Ｋ．ワルティ（Ｋ．ｗａｌｔｉｉ）（ＡＴＣＣ５６，５００）、Ｋ．ドロソフィラルム（Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ）（ＡＴＣＣ３６，９０６）、Ｋ．サーモトレランス（Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、及びＫ．マルキシアヌス（Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ）等；ヤロウイア属（ｙａｒｒｏｗｉａ）（欧州特許第４０２，２２６号）；ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）（欧州特許第１８３，０７０号）；カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）；トリコデルマ・リーシア（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ）（欧州特許第２４４，２３４号）；ニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）；シュワニオミセス属（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ）、例えばシュワニオミセス・オキシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）等；及び糸状菌、例えばニューロスポラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）等、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）、及びアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）宿主、例えばＡ．ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）やＡ．ニガー（ｎｉｇｅｒ）等が一般的に入手可能であり、また本明細書において有用である。
【0340】
[000430]本明細書に提示されるグリコシル化された多重特異性分子を発現させるための適する宿主細胞は多細胞生物に由来する。無脊椎細胞の例として、植物及び昆虫細胞が挙げられる。非常に多くのバキュロウイルス系統及びバリアント、並びに例えばヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（ケムシ）、ネッタイシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ）（蚊）、ヒトスジシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）（蚊）、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）（ミバエ）、及びカイコガ（ＢｏｍｂｙｘＭｏｒｉ）等の宿主に由来する、対応する許容される昆虫宿主細胞が識別されている。トランスフェクション用の様々なウイルス系統、例えばオートグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）ＮＰＶのＬ－１バリアントや、カイコガ（Ｂｏｍｂｙｘ Ｍｏｒｉ）ＮＰＶのＢｍ－５系統が公的に利用可能であり、またそのようなウイルスは、特にヨトウガ細胞にトランスフェクトするために、本発明に基づき、本明細書におけるウイルスとして使用され得る。綿、トウモロコシ、ジャガイモ、大豆、ペチュニア、トマト、及びタバコの植物細胞培養物も、宿主として利用され得る。
【0341】
[000431]しかしながら、脊椎動物細胞に対する関心が最も高まっており、また培養物（組織培養物）内での脊椎動物細胞の増殖はルーチン手順となった。有用な哺乳動物宿主細胞系統の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ１６５１）により変換されたサル腎臓ＣＶ１系統；ヒト胚腎臓系統（懸濁培養物内で増殖させるためにサブクローン化された２９３又は２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ１０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０））；サル腎細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ７０）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ２）；イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ１４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ８０６５）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２））；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；及びヒトヘパトーマ系統（Ｈｅｐ Ｇ２）である。いくつかの好ましい実施形態では、宿主細胞は２９３Ｆ細胞である。
【0342】
[000432]宿主細胞は、本明細書に提示される多重特異性分子を生成するために、上記の発現又はクローニングベクターを用いて変換され、そしてプロモーターを誘発し、形質転換体を選択し、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適宜改変された従来型の栄養培地内で培養される。別の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、当技術分野において公知の相同的組換え法により生成され得る。
【0343】
[000433]本明細書に提示される多重特異性分子を生成するのに使用される宿主細胞は、様々な培地内で培養され得る。市販の培地、例えばＨａｍのＦ１０（Ｓｉｇｍａ社）、最小必須培地（ＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ社）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ社）、及びＤｕｌｂｅｃｃｏ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ社）等が、宿主細胞を培養するのに適する。それに加えて、Ｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９），Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号；同第４，６５７，８６６号；同第４，９２７，７６２号；同第４，５６０，６５５号；又は同第５，１２２，４６９号；国際公開第９０／０３４３０号；国際公開第８７／００１９５号；又は米国特許Ｒｅ．３０，９８５号に記載されている培地のいずれかが、宿主細胞用の培養培地として使用され得る。これらの培地のいずれも、必要に応じて、ホルモン及び／又はその他の増殖因子（例えば、インスリン、トランスフェリン、又は上皮増殖因子等）、塩（例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、及びリン酸塩等）、バッファー（例えば、ＨＥＰＥＳ等）、ヌクレオチド（例えば、アデノシン及びチミジン等）、抗生物質（例えば、ゲンタマイシン（商標）薬物等）、微量元素（マイクロモルの範囲内の最終濃度で通常存在する無機化合物として定義される）、並びにグルコース又は等価なエネルギー源が補充され得る。任意のその他必要なサプリメントも、当業者にとって公知の適する濃度で含まれてもよい。培養条件、例えば温度、ｐＨ等は、発現用に選択された宿主細胞と共にこれまでに使用された条件であり、また当業者にとって明白である。
【0344】
[000434]組換え技術を使用するとき、多重特異性分子は、細胞内、細胞膜周辺腔内に生成可能、又は培地中に直接分泌可能である。抗体が細胞内に生成される場合、第１のステップとして、粒子状デブリ、すなわち宿主細胞又は溶解した断片のいずれかが、例えば、遠心分離又は限外濾過により除去される。Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２）は、大腸菌の細胞膜周辺腔に対して分泌される抗体を単離するための手順について記載する。手短に述べると、細胞ペーストが、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、及びフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で、約３０分間解凍される。細胞デブリは遠心分離によりは除去可能である。多重特異性分子が培地中に分泌される場合、そのような発現系に由来する上清は、一般的に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えばＡｍｉｃｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して最初に濃縮される。タンパク質分解を阻害するために、プロテアーゼ阻害剤、例えばＰＭＳＦ等が上記ステップのいずれかに含まれ得るが、また外来汚染物質の増殖を阻止するために、抗生物質が含まれ得る。
【0345】
[000435]細胞から調製された多重特異性分子は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、ＤＥＡＥ－セルロースイオン交換クロマトグラフィー、硫酸アンモニウム沈殿、塩析、及び親和性クロマトグラフィーを使用して精製され得るが、親和性クロマトグラフィーが好ましい精製技術である。
【0346】
[000436]ある特定の実施形態では、固相上に固定されたプロテインＡが、多重特異性分子の免疫親和性精製で使用される。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、種及び多重特異性分子内に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインのアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトガンマ１、ガンマ２、又はガンマ４重鎖に基づく抗体を精製するのに使用可能である（Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１－１３（１９８３））。すべてのマウスアイソタイプ及びヒトガンマ３に対してタンパク質Ｇが推奨される（Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．５：１５６７ １５７５（１９８６））。親和性リガンドが連結するマトリックスは、ほとんどの場合アガロースであるが、しかしその他のマトリックスも利用可能である。機械的に安定なマトリックス、例えば孔径制御型ガラス又はポリ（スチレンジビニル）ベンゼン等の方が、アガロースを用いて実現可能である場合よりも高速流速及び短時間処理を可能にする。多重特異性分子がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｎ．Ｊ．）が精製に有用である。タンパク質精製のためのその他の技術、例えばイオン交換カラム、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上でのクロマトグラフィー、陰イオン又は陽イオン交換樹脂を用いたヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィー上でのクロマトグラフィー（例えば、ポリアスパラギン酸カラム等）、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿による分画等も、回収される抗体に応じて利用可能である。
【0347】
[000437]任意の予備的精製ステップ（複数可）に後続して、目的とする抗体分子及び汚染物質を含む混合物は、ｐＨ約２．５～４．５の溶出バッファーを使用する低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィー（好ましくは低塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍの塩）において実施される）に供される。
【0348】
[000438]Ｇ．医薬組成物
[000439]本開示は、多重特異性分子及び１つ又は複数の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物について更に提示する。
[000439]本開示は、多重特異性分子及び１つ又は複数の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物について更に提示する。
【0349】
[000440]本明細書に開示される医薬組成物で使用される薬学的に許容される担体として、例えば、薬学的に許容される液体、ゲル、又は固体担体、水性媒体、非水性媒体、抗菌剤、等張化剤、バッファー、酸化防止剤、麻酔薬、懸濁化／ディスペンディング剤、封鎖又はキレート剤、稀釈剤、アジュバント、賦形剤、又は無毒性補助物質剤、当技術分野において公知のその他のコンポーネント、或いは様々なその組合せを挙げることができる。
【0350】
[000441]適するコンポーネントとして、例えば、酸化防止剤、充填剤、結合剤、崩壊剤、バッファー、防腐剤、潤滑剤、着香料、増粘剤、着色剤、乳化剤、又は安定剤、例えば糖やシクロデキストリン等を挙げることができる。適する酸化防止剤として、例えば、メチオニン、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ、チオ硫酸ナトリウム、白金、カタラーゼ、クエン酸、システイン、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオソルビトール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、及び／又は没食子酸プロピルを挙げることができる。本明細書に開示されるように、本明細書に提示されるような多重特異性分子及びコンジュゲートを含む組成物内に１つ又は複数の酸化防止剤、例えばメチオニン等を含めることで、多重特異性分子の酸化が減少する。このように酸化が抑えられることで、結合親和性の喪失が阻止又は抑制され、これにより抗体安定性が改善し、有効期間が最大化する。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるような１つ又は複数の多重特異性分子、及び１つ又は複数の酸化防止剤、例えばメチオニン等を含む組成物が提示される。多重特異性分子を１つ又は複数の酸化防止剤、例えばメチオニン等と混合することにより、本明細書に提示されるような多重特異性分子の酸化を防止し、有効期間を延長し、及び／又は有効性を改善するための方法が更に提示される。
【0351】
[000442]更に例証すると、薬学的許容される担体として、例えば水性媒体、例えば塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、等張デキストロース注射液、滅菌水注射液、又はデキストロース及び乳酸リンゲル注射液等、非水性媒体、例えば野菜起源の不揮発性油、綿実油、コーンオイル、ゴマ油、又はピーナッツ油等、静菌又は静真菌濃度の抗菌剤、等張化剤、例えば塩化ナトリウム又はデキストロース等、バッファー、例えばリン酸又はクエン酸バッファー等、酸化防止剤、例えば硫酸水素ナトリウム等、局所麻酔薬、例えばプロカインヒドロクロリド等、懸濁化及び分散剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、又はポリビニルピロリドン等、乳化剤、例えばポリソルベート８０（ツイーン－８０）等、封鎖又はキレート剤、例えばＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）又はＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）等、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、又は乳酸を挙げることができる。担体として利用される抗菌剤が複数用量コンテナー内の医薬組成物に添加され場合があり、フェノール又はクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチル及びプロピルｐ－ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウム、並びに塩化ベンゼトニウムが挙げられる。適する賦形剤として、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、又はエタノールを挙げることができる。適する無毒性補助物質として、例えば、湿潤剤若しくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定剤、溶解度増強剤、又は酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、若しくはシクロデキストリン等の薬剤を挙げることができる。
【0352】
[000443]医薬組成物は、液体溶液、懸濁物、エマルジョン、ピル、カプセル、錠剤、持続放出型製剤、又は粉末であり得る。経口製剤として、標準的な担体、例えば医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等を挙げることができる。
【0353】
[000444]ある特定の実施形態では、医薬組成物は、注射可能な組成物内に製剤化される。注射可能な医薬組成物は、任意の従来形態、例えば液体溶液、懸濁物、エマルジョン等、又は液体溶液、懸濁物、若しくはエマルジョンを生成するのに適する固体形態で調製され得る。注射用の調製物として、即時注射用の滅菌及び／又は非発熱性溶液、滅菌乾燥可溶性製品、例えば使用直前に溶媒と直ちに混合される真空凍結乾燥された粉末（皮下注射用錠剤を含む）等、即時注射用の滅菌懸濁物、使用直前に媒体と直ちに混合される滅菌乾燥不溶性製品、並びに滅菌及び／又は非発熱性エマルジョンを挙げることができる。溶液は水性又は非水性のいずれかであり得る。
【0354】
[000445]ある特定の実施形態では、単位用量の非経口調製物が、アンプル、バイアル、又はシリンジ内に、針と共にパッケージングされる。非経口投与用のすべての調製物は、当技術分野において公知でありまた実践されるように、滅菌性であるべきであり且つ発熱性であってはならない。
【0355】
[000446]ある特定の実施形態では、滅菌真空凍結乾燥粉末は、本明細書に開示されるような多重特異性分子を適する溶媒中に溶解することにより調製される。溶媒は、安定性を改善する賦形剤、又は粉末のその他の薬理学的コンポーネント、又は粉末から調製される再構成された溶液を含有し得る。使用され得る賦形剤として、水、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース、又はその他の適する薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。溶媒は、バッファー、例えばクエン酸塩、リン酸ナトリウム若しくはカリウム等、又は当業者にとって公知であり、１つの実施形態では中性ｐＨ付近のその他のそのようなバッファーを含有し得る。後続する溶液の滅菌濾過、それに続いて当業者にとって公知の標準的条件下で真空凍結乾燥を行うことにより、望ましい製剤が得られる。１つの実施形態では、得られた溶液は、真空凍結乾燥のためにバイアル中に小分けされる。各バイアルは、単回投薬量又は複数投薬量の多重特異性分子又はその組成物を含有し得る。１回用量又はセット用量に必要とされる量を上回る（例えば、約１０％）少量を用いてバイアルに過剰充填することは、正確なサンプルの取り出し及び正確な投与を円滑化するために許容される。真空凍結乾燥された粉末は、適切な条件下、例えば約４℃～室温等において保管され得る。
【0356】
[000447]注射用水を用いて真空凍結乾燥粉末を再構成すれば、非経口投与で使用するための製剤が得られる。１つの実施形態では、再構成する場合、滅菌性及び／又は非発熱性の水、或いはその他の適する液状担体が、真空凍結乾燥粉末に添加される。正確な量は、実施される選択された療法に依存し、また実験的に決定され得る。
【0357】
[000448]Ｈ．使用方法
[000449]別の態様では、本開示は、本明細書に提示される多重特異性分子についてその使用方法を提示する。本明細書に提示される多重特異性分子は、本明細書に提示されるＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン、本明細書に提示される活性化受容体結合ドメイン、及び本明細書に提示される標的抗原結合ドメインを含む。標的抗原結合ドメインは、標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞上で発現される標的抗原と結合する。本明細書に提示され多重特異性分子は、標的抗原の存在下で、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能を選択的に誘発する能力を有し、また免疫エフェクター細胞はＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体を同時発現する。
[000449]別の態様では、本開示は、本明細書に提示される多重特異性分子についてその使用方法を提示する。本明細書に提示される多重特異性分子は、本明細書に提示されるＳＩＲＰ－アルファ結合ドメイン、本明細書に提示される活性化受容体結合ドメイン、及び本明細書に提示される標的抗原結合ドメインを含む。標的抗原結合ドメインは、標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する標的細胞上で発現される標的抗原と結合する。本明細書に提示され多重特異性分子は、標的抗原の存在下で、免疫エフェクター細胞のエフェクター機能を選択的に誘発する能力を有し、また免疫エフェクター細胞はＳＩＲＰ－アルファ及び活性化受容体を同時発現する。
【0358】
[000450]１つの態様では、本開示は、ファゴサイトーシスをｉｎ ｖｉｔｒｏで誘発する方法であって、標的細胞を、本明細書に提示される多重特異性分子の存在下で、ＳＩＲＰα陽性貪食性細胞サンプルと接触させ、これによりＳＩＲＰα陽性貪食性細胞による標的細胞のファゴサイトーシスを誘発するステップを含む方法について提示する。
【0359】
[000451]１つの態様では、本開示は、対象内で標的細胞のファゴサイトーシスを誘発する方法であって、対象に対して、対象内で標的細胞のファゴサイトーシスを誘発するのに有効な用量で、本明細書に提示される多重特異性分子を投与するステップを含む方法について提示する。
【0360】
[000452]１つの態様では、本開示は、がん細胞のファゴサイトーシスを増強するために、それを必要としている対象において、腫瘍関連の単球又はマクロファージ（ＴＡＭ）を抗腫瘍マクロファージにリダイレクトする方法であって、対象に対して、本明細書に提示される多重特異性分子又はエンゲイジャーの治療有効量を投与するステップを含む方法について提示する。それに加えて、本明細書に提示されるエンゲイジャーは、マクロファージを活性化させ、そして活性化したマクロファージを腫瘍微小環境に関与させて、がん細胞に対するファゴサイトーシス効果を発揮させることもできる。
【0361】
[000453]別の態様では、本開示は、腫瘍微小環境内のＭ１マクロファージのレベルを増加させることを必要とする対象において、それを増加させる方法であって、対象に対して、本明細書に提示される多重特異性分子又はエンゲイジャーの治療有効量を投与するステップを含む方法についても提示する。本明細書で使用される場合、用語「腫瘍微小環境」とは、組織（複数可）、細胞、及びがん細胞又は腫瘍細胞を取り巻く環境を指す。腫瘍微小環境は、間質細胞、例えば線維芽細胞、周細胞、内皮細胞、脂肪細胞、及び骨髄間葉間質細胞（ＭＳＣ）等を含み得る。腫瘍微小環境は、がん細胞と関連するか又はがん細胞を取り巻く間質細胞と関連する細胞外マトリックスも含み得る。細胞外マトリックスは、細胞間物質（プロテオグリカン凝集物から主になる多孔性の水和したゲル）、及び結合組織線維から主に構成される。実験的には、特定の腫瘍に関する腫瘍微小環境は、例えば特定の腫瘍を担持する組織を切り取り、そして単離することにより取得可能である。
【0362】
[000454]Ｍ１マクロファージのレベルに関する場合、用語「～を増加させる」又は「～を増加させること」とは、本明細書に提示される場合、本明細書に提示される多重特異性分子又はエンゲイジャーが存在しない腫瘍微小環境と比較して、本明細書に提示される多重特異性分子又はエンゲイジャーが存在する腫瘍微小環境において、Ｍ１マクロファージカウント（総マクロファージカウントに対して標準化される）が上昇していることを指す。腫瘍微小環境内のＭ１マクロファージのレベル又はＭ１マクロファージカウントは、Ｍ１表現型の表面マーカープロファイルを有するマクロファージの量について、当技術分野において公知の従来技術、例えばＦＡＣＳアッセイ法等により測定可能である（ＣＤ８０ｈｉｇｈ及びＣＤ２０６ｍｉｄプロファイル、Ｚｈａｎｇ Ｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉ－ＣＤ４７ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ ｏｆ Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｂｙ Ｍ１ ａｎｄ Ｍ２ Ｐｏｌａｒｉｚｅｄ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｍ１ Ｐｏｌａｒｉｚｅｄ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ Ｉｎ Ｖｉｖｏ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ １１，ｅ０１５３５５０，１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１５３５５０（２０１６）を参照されたい）。Ｍ１マクロファージのレベル又はＭ１マクロファージカウントは、誘導型一酸化窒素合成酵素１（Ｎｏｓ１）のｍＲＮＡ発現レベル（総ｍＲＮＡ発現レベルに標準化される－Ｍ１マクロファージ内で上昇することが公知）のｑＰＣＲ分析法によっても測定可能である（Ｚｈａｎｇ Ｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉ－ＣＤ４７ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ ｏｆ Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｂｙ Ｍ１ ａｎｄ Ｍ２ Ｐｏｌａｒｉｚｅｄ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｍ１ Ｐｏｌａｒｉｚｅｄ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ Ｉｎ Ｖｉｖｏ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ １１，ｅ０１５３５５０，１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１５３５５０（２０１６））。Ｍ１表現型を有するマクロファージの数を計測することができる、又はＭ１マクロファージについて１つ又は複数の特徴的なマーカーの発現レベルを決定することができるその他の方法、例えば共焦点蛍光顕微鏡検査法又はウェスタンブロット法等は、本開示の検討範囲内にある。別の態様では、本開示は、対象内で標的細胞のファゴサイトーシスを誘発することから利益を享受し得る疾患、障害、又は状態を処置する方法であって、対象に対して、本明細書に提示される多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む方法についても提示する。
【0363】
[000455]ある特定の実施形態では、標的細胞は標的抗原及びＣＤ４７を同時発現する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、がん細胞、炎症細胞、及び／又は慢性的に感染した細胞を含む。いくつかの実施形態では、標的抗原は、腫瘍表面抗原、炎症性抗原、又は感染性微生物の抗原である。いくつかの実施形態では、標的抗原は、腫瘍抗原（例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、腫瘍特異抗原（ＴＳＡ）、例えば新生抗原等）、又は感染細胞上に提示される抗原（例えば、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ））であり得る。
【0364】
[000456]ある特定の実施形態では、標的細胞のファゴサイトーシスを誘発することから利益を享受し得る障害又は状態として、例えば、がん（例えば、固形腫瘍、血液学的悪性腫瘍）、炎症性疾患、感染性疾患（例えば、慢性感染症）、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症）、神経学的疾患、脳損傷、神経傷害、赤血球増多症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、移植機能障害、及び関節炎を挙げることができる。
【0365】
[000457]別の態様では、本開示は、対象における標的抗原に関連する疾患、障害、又は状態を処置する方法であって、対象に対して、本明細書に提示される多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む方法についても提示する。例えば、標的抗原が腫瘍抗原を含む場合、標的抗原関連疾患として腫瘍又はがんを挙げることができる。例えば、標的抗原が感染細胞上で提示される抗原を含む場合、標的抗原関連疾患として関連する感染性疾患を挙げることができる。ある特定の実施形態では、標的抗原はＰＤ－Ｌ１を含む。ある特定の実施形態では、標的抗原はクローディン１８．２を含む。
【0366】
[000458]別の態様では、本開示は、対象におけるＳＩＲＰαに関連する疾患、障害、又は状態を処置する方法であって、対象に対して、本明細書に提示される多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む方法についても提示する。
【0367】
[000459]別の態様では、本開示は、対象におけるＣＤ４７に関連する疾患、障害、又は状態を処置する方法であって、対象に対して、本明細書に提示される多重特異性分子の治療有効量を投与するステップを含む方法についても提示する。
【0368】
[000460]いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象はＳＩＲＰαｖ１についてホモ接合性である。いくつかの実施形態では、対象はＳＩＲＰαｖ２についてホモ接合性である。
【0369】
[000461]いくつかの実施形態では、対象は、がん（例えば、固形腫瘍、血液学的悪性腫瘍）、炎症性疾患、感染性疾患（例えば、慢性感染症）、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症）、神経学的疾患、脳損傷、神経傷害、赤血球増多症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、移植機能障害、及び関節炎からなる群から選択される疾患、障害、又は状態を有すると診断を下されたか又はそのリスクに晒されている。好ましい実施形態では、対象は、１つ又は複数の固形腫瘍を有すると診断を下されたか又はそのリスクに晒されている。
【0370】
[000462]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される方法により処置可能な状態又は障害は、免疫に関連する疾患又は障害、腫瘍、及びがん、自己免疫疾患、又は感染性疾患であり得る。ある特定の実施形態では、免疫に関連する疾患又は障害は、全身性エリテマトーデス、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、脈管炎、重症筋無力症、突発性肺線維症、クローン病、喘息、リウマチ性関節炎、移植片対宿主病、脊椎関節障害（例えば、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患と関連する孤発性急性腸炎性関節炎、反応性関節炎、ベーチェット症候群、未分化脊椎関節症、前部ブドウ膜炎、及び若年性特発性関節炎）、多発性硬化症、子宮内膜症、糸球体腎炎、敗血症、糖尿病、急性冠状動脈症候群、虚血再潅流、乾癬、進行性全身性硬化症、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、強皮症、又は炎症性自己免疫性筋炎からなる群から選択される。
【0371】
[000463]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される方法により処置可能な状態又は障害として、腫瘍及びがんが挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書に提示される方法により処置可能な状態又は障害として、固形腫瘍及び血液悪性腫瘍が挙げられる。がん及び腫瘍の例として、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、腎細胞がん、結腸直腸がん、卵巣がん、乳がん、膵がん、胃癌、膀胱がん、食道がん、中皮腫、黒色腫、頭頸部がん、甲状腺がん、肉腫、前立腺がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、胸腺癌、白血病、リンパ腫、ミエローマ、菌状息肉腫、メルケル細胞がん、及びその他の血液悪性腫瘍、例えば古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性及び陰性ＰＴＬＤ、及びＥＢＶ関連のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫等、鼻咽頭癌、及びＨＨＶ８関連の原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、例えば原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫等、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、胆嚢がん、胃がん、肺がん、気管支がん、骨がん、肝臓及び胆管のがん、膵がん、乳がん、肝がん、卵巣がん、睾丸がん、腎がん、腎盂及び尿管がん、唾液腺がん、小腸がん、尿道がん、膀胱がん、頭頸部がん、脊椎がん、脳がん、子宮頸部がん、子宮がん、子宮内膜がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、食道がん、胃腸がん、皮膚がん、前立腺がん、脳下垂体がん、膣がん、甲状腺がん、咽頭がん、神経膠芽腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、肉腫、テラトーマ、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、Ｔ又はＢ細胞リンパ腫、消化管間質腫瘍、軟部組織腫瘍、肝細胞癌、及び腺癌、又はそれらの転移が挙げられる。好ましい実施形態では、本明細書に提示される方法により処置可能な状態又は障害は、１つ又は複数の固形腫瘍を含む。
【0372】
[000464]いくつかの実施形態では、がんはＣＤ４７陽性がんである。いくつかの実施形態では、がんはＣＤ４７陽性及び標的抗原陽性がんある。いくつかの実施形態では、処置される対象は、ＣＤ４７陽性がん、又はＣＤ４７陽性及び標的抗原陽性がんを有するものと識別された。「ＣＤ４７陽性」がんとは、本明細書で使用される場合、がん細胞内でＣＤ４７を発現するか、又はがん細胞内でＣＤ４７を、正常な細胞において予想されるレベルよりも有意に高いレベルで発現することを特徴とするがんを指す。「標的抗原陽性」がんとは、本明細書で使用される場合、がん細胞内で標的抗原を発現するか、又はがん細胞内で標的抗原を、正常な細胞において予想されるレベルよりも有意に高いレベルで発現することを特徴とするがんを指す。
【0373】
[000465]目的とする生物学的サンプル内のＣＤ４７及び標的抗原の存在及び／又は量は、様々な適する方法を使用しながら、対象に由来する生物学的テストサンプル内で決定可能である。例えば、生物学的テストサンプルは、発現したＣＤ４７タンパク質又は標的抗原タンパク質と結合し、それを検出する抗ＣＤ４７抗体若しくは抗標的抗原抗体、又はその抗原結合断片に曝露され得る。或いは、ＣＤ４７又は標的抗原タンパク質は、ｑＰＣＲ法、逆転写酵素ＰＣＲ法、マイクロアレイ法、ＳＡＧＥ法、ＦＩＳＨ法等の方法を使用して、核酸発現レベルにおいてもやはり検出可能である。いくつかの実施形態では、テストサンプルは、がん細胞又は組織又は腫瘍浸潤性免疫細胞に由来する。ある特定の実施形態では、生物学的テストサンプル内のＣＤ４７又は標的抗原タンパク質の存在又は上方制御されたレベルは、応答の可能性を示唆する。用語「上方制御された」とは、本明細書で使用される場合、ＣＤ４７又は標的抗原の参照発現レベルと比較して、テストサンプルに含まれるＣＤ４７又は標的抗原タンパク質の発現レベルにおいて、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％以上、又はそれ超、全体的に増加することを表す。参照レベルは、同一組織型の正常細胞に見出されるＣＤ４７又は標的抗原の発現レベルであり得、任意選択で別の遺伝子（例えば、ハウスキーピング遺伝子）の発現レベルに対して標準化され得る。或いは、参照レベルは、健康な対象に見出されるＣＤ４７又は標的抗原の発現レベルであり得る。参照サンプルは、健康若しくは非疾患性の個体から取得されたコントロールサンプル、又はテストサンプルが取得される個体と同一の個体から取得された健康若しくは非疾患性のサンプルであり得る。例えば、参照サンプルは、テストサンプル（例えば、腫瘍）に隣接するか又はその近傍に位置する非疾患性のサンプルであり得る。いくつかの実施形態では、参照物質が、目的とするテスト又は決定工程と実質的に同時にテスト及び／又は決定される。いくつかの実施形態では、参照物質は、任意選択で有形的表現媒体において具体化される参照物質の履歴である。一般的に、当業者により理解されるように、参照物質は、アセスメントの対象とされる条件又は状況に匹敵する条件又は状況下で決定又は特徴付けられる。
【0374】
[000466]ある特定の実施形態では、腫瘍及びがんは転移性腫瘍、特にＣＤ４７を発現する転移性腫瘍である。
[000467]ある特定の実施形態では、腫瘍及びがんはＰＤ－Ｌ１陽性がんである。ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１陽性がんは、ＮＳＣＬＣ、ＳＣＬＣ、黒色腫、頭頸部がん、肝細胞癌、ＭＳＩ－Ｈ、又はｄＭＭＲがん、子宮頸がん、乳がん、胃癌、古典的ホジキンリンパ腫、膵がん、尿路上皮がんからなる群から選択される。
[000467]ある特定の実施形態では、腫瘍及びがんはＰＤ－Ｌ１陽性がんである。ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１陽性がんは、ＮＳＣＬＣ、ＳＣＬＣ、黒色腫、頭頸部がん、肝細胞癌、ＭＳＩ－Ｈ、又はｄＭＭＲがん、子宮頸がん、乳がん、胃癌、古典的ホジキンリンパ腫、膵がん、尿路上皮がんからなる群から選択される。
【0375】
[000468]ある特定の実施形態では、腫瘍及びがんはクローディン１８．２陽性がんである。いくつかの実施形態では、クローディン１８．２陽性がんは上皮細胞由来のがんである。いくつかの実施形態では、がんは、胃がん、膵がん、肺がん、食道がん、卵巣がん、及びその転移である。
【0376】
[000469]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される方法により処置可能な状態又は障害として、自己免疫疾患が挙げられる。自己免疫疾患として、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ、自己免疫コンポーネントを伴うウイルス疾患である）、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性アディソン病、自己免疫性糖尿病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性リンパ増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、ベーチェット病、心筋症、腹腔のスプルー・ヘルペス状皮膚炎；慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経障害（ＣＩＰＤ）、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素症、クレスト症候群、クローン病、デゴス病、皮膚筋炎－若年性、円盤状狼瘡、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症－線維筋炎、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、突発性肺線維症、突発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎障害、インスリン依存性糖尿病、若年性慢性関節炎（スチル病）、若年性リウマチ性関節炎、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、リウマチ性関節炎、サルコイドーシス、強皮症（進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、全身性硬化症（ＳＳ）としても知られている）、シェーグレン症候群、スティフ・マン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、白斑、及びヴェグナー肉芽腫症が挙げられるが、これらに限定されない。
【0377】
[000470]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される方法により処置可能な状態又は障害として、感染性疾患が挙げられる。感染性疾患として、例えば、慢性ウイルス感染症、例えば、菌類感染症、寄生虫／原生動物感染症、又は慢性ウイルス感染症、例えば、マラリア、コクシジオイドマイコシス・イミティス症（ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｏｍｙｃｏｓｉｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、ヒストプラスマ症、爪真菌症、アスペルギルス症、ブラストミセス症、カンジダ・アルビカンス（ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ ａｌｂｉｃａｎｓ）症、パラコクシジオイデス症、微胞子虫症、アカントアメーバ角膜炎、アメーバ症、回虫症、バベシア症、バランチジウム症、アライグマ回虫症、シャガス病、肝吸虫症、コクリオミイヤ症、クリプトスポリジウム症、裂頭条虫症、メジナ虫症、エキノコックス症、象皮病、腸蟯虫症、肝蛭症、肥大吸虫症、フィラリア症、ジアルジア症、顎口虫症、膜様条虫症、イソスポーラ症、片山熱、リーシュマニア症、ライム病、横川吸虫症、ハエ幼虫症、オンコセルカ症、シラミ寄生症、疥癬、住血吸虫症、睡眠病、糞線虫症、条虫症、トキソカラ症、トキソプラズマ症、旋毛虫病、鞭虫症、トリパノソーマ病、蠕虫感染症、下記ウイルス：Ｂ型肝炎（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）、ヘルペスウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、サイトメガロウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ型、単純ヘルペスウイルスＩＩ型、ヒトパピローマウイルス、アデノウイルス、カポジウエスト肉腫関連ヘルペスウイルス流行、シンリングウイルス（ｔｈｉｎ ｒｉｎｇ ｖｉｒｕｓ）（トルクテノウイルス）、ヒトＴ細胞リンパ指向性ウイルスＩ、ヒトＴ細胞リンパ指向性ウイルスＩＩ、水痘帯状疱疹（Ｖａｒｉｃｅｌｌａ Ｚｏｓｔｅｒ）、ＪＣウイルス、又はＢＫウイルスの感染症が挙げられる。
【0378】
[000471]本明細書に提示されるような多重特異性分子の治療有効量は、当技術分野において公知の様々な要因、例えば、体重、年齢、既往歴、現在の薬物治療、対象の健康状態と交差反応の可能性、アレルギー、感受性及び有害な副作用、並びに投与経路及び疾患発症の範囲等に依存する。投薬量は、このような及びその他の状況又は要求事項が示すところに従い、当業者（例えば、医師又は獣医師）により比例的に減量又は増量され得る。
【0379】
[000472]ある特定の実施形態では、本明細書に提示される多重特異性分子は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの治療上有効な用量で投与され得る。これらの実施形態のいずれかにおいて、多重特異性分子は約５０ｍｇ／ｋｇ以下の投薬量で投与され、またこれらの実施形態のいずれかにおいては、投薬量は、１０ｍｇ／ｋｇ以下、５ｍｇ／ｋｇ以下、３ｍｇ／ｋｇ以下、１ｍｇ／ｋｇ以下、０．５ｍｇ／ｋｇ以下、又は０．１ｍｇ／ｋｇ以下である。ある特定の実施形態では、投与投薬量は処置の経過に従い変化し得る。例えば、ある特定の実施形態では、初回投与投薬量は、後続する投与投薬量よりも多量であり得る。ある特定の実施形態では、投与投薬量は、対象の反応に応じて、処置の経過に従い変化し得る。
【0380】
[000473]投与レジメンが、望ましい最適な応答（例えば、治療応答）を提供するように調整され得る。例えば、単一の用量が投与され得るか、又はいくつかの分割された用量が長期的に投与され得る。
【0381】
[000474]本明細書で開示される多重特異性分子は、当技術分野において公知の任意の経路、例えば非経口（例えば、皮下、腹腔内、静脈内（静脈内輸液を含む）、筋肉内、又は皮内への注射）、又は非経口以外（例えば、口腔、鼻腔内、眼内、舌下、直腸、又は局所）の経路等により投与され得る。
【0382】
[000475]いくつかの実施形態では、本明細書で開示される多重特異性分子は、単独で又は１つ若しくは複数の追加の治療手段又は治療剤と組み合わせて投与され得る。例えば、本明細書で開示される多重特異性分子は、別の治療剤、例えば化学療法剤又は抗がん薬と組み合わせて投与され得る。
【0383】
[000476]これらの実施形態のいずれかにおいて、１つ又は複数の追加の治療剤と組み合わせて投与される、本明細書に開示されるような多重特異性分子は、１つ又は複数の追加の治療剤と同時に投与され得るが、またこれらの実施形態のいずれかにおいては、多重特異性分子及び追加の治療剤（複数可）は、同一の医薬組成物の一部として投与され得る。しかしながら、別の治療剤と「組み合わせて」投与される多重特異性分子は、薬剤と同時に投与される必要はなく、又は薬剤と同一の組成物中にある必要もない。別の薬剤の前又は後に投与される多重特異性分子は、多重特異性分子及び第２の薬剤が異なる経路を介して投与されるとしても、当該慣用句が本明細書において使用される通り、当該薬剤と「組み合わせて」投与されるものとみなされる。可能な場合には、本明細書で開示される多重特異性分子と組み合わせて投与される追加の治療剤は、追加の治療剤の製品情報シートに掲載されているスケジュールに従うか、又は米医薬品便覧（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）２００３（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７ｔｈ Ｅｄ；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；５７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２００２））、若しくは当技術分野において周知のプロトコールに従い投与される。
【0384】
[000477]本開示は、多重特異性分子を使用する方法を更に提示する。
[000478]いくつかの実施形態では、本開示は、対象内で標的細胞のファゴサイトーシスを誘発することから利益を享受し得る疾患、障害、又は状態を処置するための医薬の製造における、本明細書に提示される多重特異性分子の使用についても提示する。
[000478]いくつかの実施形態では、本開示は、対象内で標的細胞のファゴサイトーシスを誘発することから利益を享受し得る疾患、障害、又は状態を処置するための医薬の製造における、本明細書に提示される多重特異性分子の使用についても提示する。
【0385】
[000479]本開示は、例えば、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用を実質的若しくは完全にブロックし；ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との相互作用の下流に位置するＳＨＰ－１導入を実質的若しくは完全にブロックし；単独で使用したときに、特定の標的細胞のファゴサイトーシスを誘発せず、及び／又はＳＩＲＰαのＩｇＶドメインの外側にあるエピトープに結合する能力を有するといった特別な特性を有する抗ＳＩＲＰ－アルファ抗体又はその抗原結合断片からなる多重特異性分子（例えば、多重特異性抗体）の驚くべき発見に基づく。そのような多重特異性分子は、上記したように特別なコンフィギュレーションにあり得るが、その上に、得られた多重特異性分子は、望ましくない細胞に対して免疫応答（例えば、ファゴサイトーシス）を誘発して望ましくない細胞（例えば、がん性細胞や感染細胞）を除去することについて想定外の高い選択性を示す。
【0386】
[000480]したがって、本開示は、ＣＤ４７関連の状態及び障害を処置するための医薬の製造における本明細書に提示されるそのような多重特異性分子の使用についても提示する。
【0387】
[000481]下記の実施例は、請求項に係る発明をより深く例証するために提示され、また本発明の範囲を限定するものと解釈されないものとする。以下に記載するすべての特別な組成物、材料、及び方法は、全部／一部を問わず、本発明の範囲に該当する。これらの特別な組成物、材料、及び方法は本発明に制限を設けるようには意図されず、むしろ本発明の範囲内に該当する特定の実施形態を例証するに過ぎない。当業者は、発明能力を発揮せずとも、本発明の範囲から逸脱せずに、等価な組成物、材料、及び方法を開発し得る。本発明の境界内になおも留まりつつ、多くの変化形態が、本明細書に記載される手順において作成され得るものと理解される。そのような変化形態は本発明の範囲に含まれるというのが本発明者らの意図である。
【0388】
[000482]
【実施例】
【0389】
[000483]
実施例１：抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の構築及び発現
[000484]ＳＩＲＰαに基づく二重特異性マクロファージエンゲイジャー（ＢｉＭＥ）抗体の原理を図１に示す。ＢｉＭＥは、マクロファージをがん細胞と物理的に架橋することで、特異的に殺滅し、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用をブロックし、ＳＨＰ－１／２阻害を除去し、及びＦｃ受容体をマクロファージと関与させてファゴサイトーシスを活性化することができる。
実施例１：抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の構築及び発現
[000484]ＳＩＲＰαに基づく二重特異性マクロファージエンゲイジャー（ＢｉＭＥ）抗体の原理を図１に示す。ＢｉＭＥは、マクロファージをがん細胞と物理的に架橋することで、特異的に殺滅し、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用をブロックし、ＳＨＰ－１／２阻害を除去し、及びＦｃ受容体をマクロファージと関与させてファゴサイトーシスを活性化することができる。
【0390】
[000485]抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、重鎖又は軽鎖のＣ末端において抗ＳＩＲＰα Ｃ２５単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）と融合した抗クローディン１８．２抗体ｈｕ２８．Ｈ１Ｌ２として構築される（図２Ａ～図２Ｂ）。可撓性の（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３リンカーを、抗ＳＩＲＰα ｓｃＦｖのＮ末端に遺伝学的にリンクさせた。抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、重鎖又は軽鎖のＣ末端において抗クローディン１８．２単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）と融合した抗ＳＩＲＰα抗体として構築される（図２Ｃ～図２Ｄ）。可撓性の（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３リンカーを、抗クローディン１８．２ｓｃＦｖのＮ末端に遺伝学的にリンクさせた。
【0391】
[000486]１つの抗クローディン１８．２抗体、及びその軽鎖のＣ末端において２つの抗ＳＩＲＰα ｓｃＦｖを含む二重特異性タンパク質ＥＳ０２８－００１（図２Ａ、表７も参照）。
【0392】
[000487]１つの抗クローディン１８．２抗体、及びその重鎖のＣ末端において２つの抗ＳＩＲＰα ｓｃＦｖを含む二重特異性タンパク質ＥＳ０２８－００５（図２Ｂ、表７も参照）。
【0393】
[000488]１つの抗ＳＩＲＰα抗体、及びその軽鎖のＣ末端において２つの抗クローディン１８．２ｓｃＦｖを含む二重特異性タンパク質ＥＳ０２８－００９（図２Ｃ、表７も参照）。
【0394】
[000489]１つの抗ＳＩＲＰα抗体、及びその重鎖のＣ末端において２つの抗クローディン１８．２ｓｃＦｖを含む二重特異性タンパク質ＥＳ０２８－０１３（図２Ｄ、表７も参照）。
【0395】
[000490]発現では、ＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトするために、同一の発現ベクター又は別個の発現ベクター内で軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡをトランスフェクション用として使用した。培養培地を採取し、そして融合タンパク質をプロテインＡセファロースカラムにより精製した。
【0396】
[000491]
実施例２ 抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の結合親和性
[000492]抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性タンパク質を、Ｏｃｔｅｔアッセイ法（ＦｏｒｅＢｉｏ社）を使用しながら、製造業者のマニュアルに従い、ヒトクローディン１８．２又はＳＩＲＰαに対する結合親和性について個別に特徴付けた。手短に述べると、抗体をセンサー上にカップリングさせ、次にセンサーをクローディン１８．２又はＳＩＲＰαタンパク質グラジエント中に浸漬した（２００ｎＭから開始し、２倍稀釈しながら、合計８用量）。その結合応答をリアルタイムで測定し、そして結果を全体的に近似させた。テストした抗体の親和性データを表８及び表９に要約する。
実施例２ 抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の結合親和性
[000492]抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性タンパク質を、Ｏｃｔｅｔアッセイ法（ＦｏｒｅＢｉｏ社）を使用しながら、製造業者のマニュアルに従い、ヒトクローディン１８．２又はＳＩＲＰαに対する結合親和性について個別に特徴付けた。手短に述べると、抗体をセンサー上にカップリングさせ、次にセンサーをクローディン１８．２又はＳＩＲＰαタンパク質グラジエント中に浸漬した（２００ｎＭから開始し、２倍稀釈しながら、合計８用量）。その結合応答をリアルタイムで測定し、そして結果を全体的に近似させた。テストした抗体の親和性データを表８及び表９に要約する。
【0397】
[000493]
【0398】
【表11】
【0399】
[000494]
【0400】
【表12】
【0401】
[000495]
実施例３ ＦＡＣＳによるクローディン１８．２及びＳＩＲＰαに対する抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の結合性
[000496]ヒトクローディン１８．２を過剰発現するＲａｊｉリンパ腫細胞、およそ１００，０００個を洗浄バッファーで洗浄し、そしてクローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性タンパク質の連続稀釈物、１００μｌと共に氷上で３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄バッファーで２回洗浄し、そして抗ヒトＦｃ－ＰＥ、１００μｌと共に氷上で３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄バッファーで２回洗浄し、そしてＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩアナライザー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上で分析した。図３Ａに示すように、抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、用量依存性の様式でＲａｊｉ／ｈクローディン１８．２細胞に結合した。二重特異性抗体ＥＳ０２８－００１、ＥＳ０２８－００５、ＥＳ０２８－０１３は、抗クローディン１８．２モノクローナル抗体ｈｕ２８Ｈ１Ｌ２と類似して、Ｒａｊｉ／ｈクローディン１８．２に結合した一方、ＥＳ０２８－００９はＲａｊｉ／ｈクローディン１８．２に結合したが、その程度は抗クローディン１８．２，ｈｕ２８Ｈ１Ｌ２と比較してそれより低かった。
実施例３ ＦＡＣＳによるクローディン１８．２及びＳＩＲＰαに対する抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の結合性
[000496]ヒトクローディン１８．２を過剰発現するＲａｊｉリンパ腫細胞、およそ１００，０００個を洗浄バッファーで洗浄し、そしてクローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性タンパク質の連続稀釈物、１００μｌと共に氷上で３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄バッファーで２回洗浄し、そして抗ヒトＦｃ－ＰＥ、１００μｌと共に氷上で３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄バッファーで２回洗浄し、そしてＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩアナライザー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上で分析した。図３Ａに示すように、抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、用量依存性の様式でＲａｊｉ／ｈクローディン１８．２細胞に結合した。二重特異性抗体ＥＳ０２８－００１、ＥＳ０２８－００５、ＥＳ０２８－０１３は、抗クローディン１８．２モノクローナル抗体ｈｕ２８Ｈ１Ｌ２と類似して、Ｒａｊｉ／ｈクローディン１８．２に結合した一方、ＥＳ０２８－００９はＲａｊｉ／ｈクローディン１８．２に結合したが、その程度は抗クローディン１８．２，ｈｕ２８Ｈ１Ｌ２と比較してそれより低かった。
【0402】
[000497]ヒトＳＩＲＰαを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞を洗浄バッファーで洗浄し、そしてクローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性タンパク質の連続稀釈物、１００μｌと共に氷上で３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄バッファーで２回洗浄し、そして抗ヒトＦｃ－ＰＥ、１００μｌと共に氷上で３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄バッファーで２回洗浄し、そしてＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩアナライザー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上で分析した。図３Ｂに示すように、抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、用量依存性の様式でＣＨＯ－Ｋ１／ＳＩＲＰα細胞に結合した。ＥＳ０２８－００１及びＥＳ０２８－００５はＣＨＯ－Ｋ１／ｈＳＩＲＰαに結合したが、その程度は抗ＳＩＲＰα，Ｃ２５と比較してそれより低かった。
【0403】
[000498]
実施例４ 抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、クローディン１８．２＋がん細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでのマクロファージファゴサイトーシスを増強する
[000499]ヒトＣＤ４７及びヒトクローディン１８．２を発現するマウスＭＣ３８結腸腫瘍細胞を蛍光色素ＣＦＳＥで標識し、そしてアイソタイプコントロール、抗クローディン１８．２抗体、抗ＳＩＲＰα抗体、抗クローディン１８．２と抗ＳＩＲＰα抗体との組合せ、抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体のいずれかと共存させながら、Ｃ５７ＢＬ６／ｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰαノックインマウスから調製されたマウス骨髄由来のマクロファージ（ＢＭＤＭ）と共にインキュベートした。２時間後、マクロファージを採取し、蛍光標識した抗マウスマクロファージ抗体を用いて染色し、そしてフローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ１１ｂ＋ＣＦＳＥ＋二重陽性事象が、ＣＦＳＥ標識された腫瘍細胞を貪食したマクロファージを特定する。各サンプルは異なる色により表される。３つの異なるサンプルについて貪食指数を示す。
実施例４ 抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、クローディン１８．２＋がん細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでのマクロファージファゴサイトーシスを増強する
[000499]ヒトＣＤ４７及びヒトクローディン１８．２を発現するマウスＭＣ３８結腸腫瘍細胞を蛍光色素ＣＦＳＥで標識し、そしてアイソタイプコントロール、抗クローディン１８．２抗体、抗ＳＩＲＰα抗体、抗クローディン１８．２と抗ＳＩＲＰα抗体との組合せ、抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体のいずれかと共存させながら、Ｃ５７ＢＬ６／ｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰαノックインマウスから調製されたマウス骨髄由来のマクロファージ（ＢＭＤＭ）と共にインキュベートした。２時間後、マクロファージを採取し、蛍光標識した抗マウスマクロファージ抗体を用いて染色し、そしてフローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ１１ｂ＋ＣＦＳＥ＋二重陽性事象が、ＣＦＳＥ標識された腫瘍細胞を貪食したマクロファージを特定する。各サンプルは異なる色により表される。３つの異なるサンプルについて貪食指数を示す。
【0404】
[000500]図４Ａに示すように、抗クローディン１８．２抗体ｈｕ２８Ｈ１Ｌ２は、抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）により約２５％のファゴサイトーシスを誘発したが、また抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５はファゴサイトーシスをごくわずかしか誘発しない。抗クローディン１８．２と抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５との組合せは、ファゴサイトーシスを有意に改善する。抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体ＥＳ０２８－００１、ＥＳ０２８－００５、ＥＳ０２８－００９は、組み合わせた場合と比較してそれより強力なファゴサイトーシスを用量依存様式で誘発し、またＥＳ０２８－００５が最良のファゴサイトーシス効果を示す一方、ＥＳ０２８－０１３は相乗的ファゴサイトーシス効果を示さなかった。クローディン１８．２を発現しないＭＣ３８細胞の場合、抗クローディン１８．２と抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５とを組み合わせても、クローディン１８．２非発現細胞に対するファゴサイトーシスを有意に改善しない（図４Ｂ）。抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体、又は抗クローディン１８．２抗体と抗ＳＩＲＰアルファ抗体との組合せは、いずれもクローディン１８．２を発現しない細胞上ではファゴサイトーシスの改善を誘発しない（図４Ｂ）。
【0405】
[000501]
実施例５ 抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の活性なＩｇＧ１ Ｆｃは、ＦｃγＲ依存性ＡＤＣＰを活性化させ、そしてＩｇＧ４又はＩｇＧ１ＬＡＬＡアイソタイプよりも強い効力をもたらす。
実施例５ 抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の活性なＩｇＧ１ Ｆｃは、ＦｃγＲ依存性ＡＤＣＰを活性化させ、そしてＩｇＧ４又はＩｇＧ１ＬＡＬＡアイソタイプよりも強い効力をもたらす。
【0406】
[000502]ＭＣ３８／ｈＣＤ４７／ｈクローディン１８．２の別のマウスＢＭＤＭファゴサイトーシスアッセイにおいて、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４及びＩｇＧ１ＬＡＬＡの異なるアイソタイプを含む抗クローディン１８．２抗体を、単剤処置で又は抗ＳＩＲＰα抗体と組み合わせてテストした。同様に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、及びＩｇＧ１ＬＡＬＡを含む抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体ＥＳ０２８－００１、ＥＳ０２８－００５、及びＥＳ０２８－００９も、ファゴサイトーシスについてテストした。
【0407】
[000503]同時培養を２時間行った後に、マクロファージを採取し、蛍光標識した抗ヒトマクロファージ抗体を用いて染色し、そしてフローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ１１ｂ＋ＣＦＳＥ＋二重陽性事象が、ＣＦＳＥ標識された腫瘍細胞を貪食したマクロファージを特定する。各サンプルは異なる色により表される。３つの異なるサンプルについて貪食指数を示す。
【0408】
[000504]図５に示すように、抗クローディン１８．２ＩｇＧ１が、抗クローディン１８．２ ＩｇＧ４及び抗クローディン１８．２ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ突然変異体（いずれも単剤処置又は抗ＳＩＲＰα抗体との併用）と比較して、最良のファゴサイトーシスを示した。抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体ＥＳ０２８－００１ ＩｇＧ１、ＥＳ０２８－００５ ＩｇＧ１、及びＥＳ０２８－００９ ＩｇＧ１は、ＥＳ０２８－００１ ＩｇＧ４、ＥＳ０２８－００５ ＩｇＧ４、及びＥＳ０２８－００９ ＩｇＧ４と比較してそれより強いファゴサイトーシス効果を誘発する一方、抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体ＥＳ０２８－００１ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ、ＥＳ０２８－００５ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ、及びＥＳ０２８－００９ ＩｇＧ １ＬＡＬＡについては、ファゴサイトーシス有効性は認められない。データは、抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体ＩｇＧ１がＦｃγＲ依存性ＡＤＣＰを活性化させ、そしてＩｇＧ４又はＩｇＧ１ ＬＡＬＡアイソタイプより強い効力をもたらすことを示した。
【0409】
[000505]
実施例６ 抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の構築及び発現
[000506]抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体を、重鎖又は軽鎖のＮ末端又はＣ末端において抗ＰＤＬ１単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）Ｃ７１又はＣ５７０と融合した抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５として構築した（図６Ａ～図６Ｄ、表７も参照）。抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、Ｆｃ領域内でノブ－インホール（ＫｉＨ）によりリンクした、一方のアーム内の抗ＳＩＲＰα Ｆａｂ、及び他方のアーム内の２つのコピーされた抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂとしても構築可能である（図６Ｅ、表７も参照）。抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、ＦｃのＮ末端における抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂ、及びＦｃのＣ末端に融合した抗ＳＩＲＰα Ｆａｂとしても構築可能である（図６Ｆ～図６Ｇ、表７も参照）。可撓性の（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３リンカーを、抗ＳＩＲＰα ＦａｂのＮ末端と遺伝学的にリンクさせた。
実施例６ 抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の構築及び発現
[000506]抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体を、重鎖又は軽鎖のＮ末端又はＣ末端において抗ＰＤＬ１単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）Ｃ７１又はＣ５７０と融合した抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５として構築した（図６Ａ～図６Ｄ、表７も参照）。抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、Ｆｃ領域内でノブ－インホール（ＫｉＨ）によりリンクした、一方のアーム内の抗ＳＩＲＰα Ｆａｂ、及び他方のアーム内の２つのコピーされた抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂとしても構築可能である（図６Ｅ、表７も参照）。抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、ＦｃのＮ末端における抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂ、及びＦｃのＣ末端に融合した抗ＳＩＲＰα Ｆａｂとしても構築可能である（図６Ｆ～図６Ｇ、表７も参照）。可撓性の（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３リンカーを、抗ＳＩＲＰα ＦａｂのＮ末端と遺伝学的にリンクさせた。
【0410】
[000507]１つの抗ＳＩＲＰα抗体、及びその軽鎖のＣ末端において２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂを含む二重特異性タンパク質ＥＳ０１９－０２０（図６Ａ、表７も参照）。
[000508]１つの抗ＳＩＲＰα抗体、及びその重鎖のＣ末端において２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂを含む二重特異性タンパク質ＥＳ０１９－０２４（図６Ｂ、表７も参照）。
[000508]１つの抗ＳＩＲＰα抗体、及びその重鎖のＣ末端において２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂを含む二重特異性タンパク質ＥＳ０１９－０２４（図６Ｂ、表７も参照）。
【0411】
[000509]１つの抗ＳＩＲＰα抗体、及びその重鎖のＮ末端において２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂを含む二重特異性タンパク質ＥＳ０１９－０２５（図６Ｃ、表７も参照）。
[000510]１つの抗ＳＩＲＰα抗体、及びその軽鎖のＮ末端において２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂを含む二重特異性タンパク質ＥＳ０１９－０２６（図６Ｄ、表７も参照）。
[000510]１つの抗ＳＩＲＰα抗体、及びその軽鎖のＮ末端において２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂを含む二重特異性タンパク質ＥＳ０１９－０２６（図６Ｄ、表７も参照）。
【0412】
[000511]Ｆｃ領域内のノブ－インホール突然変異により形成された、１つの抗ＳＩＲＰα Ｆａｂアーム、及び２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂアームのヘテロ二量体を含む二重特異性タンパク質ＥＳ０１９－０２９（図６Ｅ、表７も参照）。
【0413】
[000512]ＦｃのＮ末端において２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂ、及びＦｃ領域のＣ末端において１コピーの抗ＳＩＲＰα Ｆａｂを含む二重特異性タンパク質ＥＳ０１９－０７２。非対称ヘテロ二量体はＦｃ領域内のノブ－インホール突然変異により形成される（図６Ｆ、表７も参照）。
【0414】
[000513]ＦｃのＮ末端において２つの抗ＰＤＬ１ ｓｄＡｂ、及びＦｃ領域のＣ末端において２つの抗ＳＩＲＰα Ｆａｂを含む二重特異性タンパク質ＥＳ０１９－０７３又はＥＳ０１９－０７９（図６Ｇ、表７も参照）。
【0415】
[000514]
実施例７：抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の結合親和性
[000515]抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性タンパク質を、Ｏｃｔｅｔアッセイ法（ＦｏｒｅＢｉｏ社）を使用しながら、製造業者のマニュアルに従い、ヒトＰＤＬ１に対する結合親和性について個別に特徴付けた。手短に述べると、抗体をセンサー上にカップリングさせ、次にセンサーをＰＤＬ１タンパク質グラジエント中に浸漬した（２００ｎＭから開始し、２倍稀釈しながら、合計８用量）。その結合応答をリアルタイムで測定し、そして結果を全体的に近似させた。テストした抗体の親和性データを表９．１に要約する。
実施例７：抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の結合親和性
[000515]抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性タンパク質を、Ｏｃｔｅｔアッセイ法（ＦｏｒｅＢｉｏ社）を使用しながら、製造業者のマニュアルに従い、ヒトＰＤＬ１に対する結合親和性について個別に特徴付けた。手短に述べると、抗体をセンサー上にカップリングさせ、次にセンサーをＰＤＬ１タンパク質グラジエント中に浸漬した（２００ｎＭから開始し、２倍稀釈しながら、合計８用量）。その結合応答をリアルタイムで測定し、そして結果を全体的に近似させた。テストした抗体の親和性データを表９．１に要約する。
【0416】
【表13】
【0417】
[000516]
実施例８：ＦＡＣＳによるＰＤＬ１及びＳＩＲＰαに対する抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の結合性
[000517]ヒトＰＤＬ１を過剰発現するＲａｊｉ細胞、およそ１００，０００個を洗浄バッファーで洗浄し、そしてＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性タンパク質の連続稀釈物、１００μｌと共に氷上で３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄バッファーで２回洗浄し、そして抗ヒトＦｃ－ＰＥ、１００μｌと共に氷上で３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄バッファーで２回洗浄し、そしてＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩアナライザー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上で分析した。図７Ａに示すように、抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、用量依存性の様式でＲａｊｉ／ｈＰＤＬ１細胞に結合した。二重特異性抗体ＥＳ０１９－０２５、ＥＳ０１９－０２６は、抗ＰＤＬ１モノクローナル抗体Ｃ７１と同様にＲａｊｉ／ｈＰＤＬ１に結合した一方、ＥＳ０１９－０２０、ＥＳ０１９－０２４はＲａｊｉ／ｈＰＤＬ１に結合したが、その程度は抗ＰＤＬ１，Ｃ７１と比較してそれより低かった。
実施例８：ＦＡＣＳによるＰＤＬ１及びＳＩＲＰαに対する抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体の結合性
[000517]ヒトＰＤＬ１を過剰発現するＲａｊｉ細胞、およそ１００，０００個を洗浄バッファーで洗浄し、そしてＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性タンパク質の連続稀釈物、１００μｌと共に氷上で３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄バッファーで２回洗浄し、そして抗ヒトＦｃ－ＰＥ、１００μｌと共に氷上で３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄バッファーで２回洗浄し、そしてＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩアナライザー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上で分析した。図７Ａに示すように、抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、用量依存性の様式でＲａｊｉ／ｈＰＤＬ１細胞に結合した。二重特異性抗体ＥＳ０１９－０２５、ＥＳ０１９－０２６は、抗ＰＤＬ１モノクローナル抗体Ｃ７１と同様にＲａｊｉ／ｈＰＤＬ１に結合した一方、ＥＳ０１９－０２０、ＥＳ０１９－０２４はＲａｊｉ／ｈＰＤＬ１に結合したが、その程度は抗ＰＤＬ１，Ｃ７１と比較してそれより低かった。
【0418】
[000518]ヒトＳＩＲＰαを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞を、洗浄バッファーで洗浄し、そしてＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性タンパク質の連続稀釈物、１００μｌと共に氷上で３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄バッファーで２回洗浄し、そして抗ヒトＦｃ－ＰＥ、１００μｌと共に氷上で３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄バッファーで２回洗浄し、そしてＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩアナライザー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上で分析した。図７Ｂに示すように、抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、用量依存性の様式でＣＨＯ－Ｋ１／ＳＩＲＰα細胞に結合した。ＥＳ０１９－０２０、ＥＳ０１９－０２４、ＥＳ０１９－０２５、及びＥＳ０１９－０２６は、抗ＳＩＲＰα，Ｃ２５と類似してＣＨＯ－Ｋ１／ｈＳＩＲＰαに結合した。
【0419】
[000519]
実施例９：ジャーカット／ＰＤ１レポーター細胞アッセイ法による抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体のＰＤＬ１ブロックキング活性
[000520]ＰＤ１－ＰＤＬ１ブロッケードレポーターアッセイ法を、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社により開発されたＰＤ１ブロッケードレポーターアッセイ法（ＰＤＬ１及び抗ＣＤ３ｓｃＦｖを発現したＣＨＯ細胞、並びにＰＤ１を過剰発現するジャーカット／ＮＦＡＴ－ＲＥレポーター細胞系統に基づく２細胞系を使用する）を使用しながら実施した。対数増殖期において増殖する細胞を採取し、そして１％の熱失活させたＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０ ２０中に、ＣＨＯにつき細胞２×１０６個／ｍｌ、及びジャーカット／ＰＤ１ ＮＦＡＴ－ＲＥ細胞につき細胞４×１０６個／ｍｌの濃度で再懸濁した。次に、アッセイ培地（１％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０）内のテスト抗体を連続稀釈して各ウェルに添加した。プレートを３７℃、５％のＣＯ２、９５％相対湿度において６時間インキュベートした。ルシフェラーゼ（Ｂｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステム）、４０μｌを翌日添加し、そしてルシフェラーゼ活性の量を、ＢｉｏＴｅｋマルチ－モードマイクロプレートリーダーを使用して測定した。
実施例９：ジャーカット／ＰＤ１レポーター細胞アッセイ法による抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体のＰＤＬ１ブロックキング活性
[000520]ＰＤ１－ＰＤＬ１ブロッケードレポーターアッセイ法を、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社により開発されたＰＤ１ブロッケードレポーターアッセイ法（ＰＤＬ１及び抗ＣＤ３ｓｃＦｖを発現したＣＨＯ細胞、並びにＰＤ１を過剰発現するジャーカット／ＮＦＡＴ－ＲＥレポーター細胞系統に基づく２細胞系を使用する）を使用しながら実施した。対数増殖期において増殖する細胞を採取し、そして１％の熱失活させたＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０ ２０中に、ＣＨＯにつき細胞２×１０６個／ｍｌ、及びジャーカット／ＰＤ１ ＮＦＡＴ－ＲＥ細胞につき細胞４×１０６個／ｍｌの濃度で再懸濁した。次に、アッセイ培地（１％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０）内のテスト抗体を連続稀釈して各ウェルに添加した。プレートを３７℃、５％のＣＯ２、９５％相対湿度において６時間インキュベートした。ルシフェラーゼ（Ｂｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステム）、４０μｌを翌日添加し、そしてルシフェラーゼ活性の量を、ＢｉｏＴｅｋマルチ－モードマイクロプレートリーダーを使用して測定した。
【0420】
[000521]図８に示すように、二重特異性抗体ＥＳ０１９－０２４、ＥＳ０１９－０２５、ＥＳ０１９－０２６は、抗ＰＤＬ１モノクローナル抗体Ｃ７１と類似してジャーカット／ＰＤ１レポーター細胞を活性化させる一方、ＥＳ０１９－０２０はジャーカット／ＰＤ１レポーター細胞を活性化させるが、その程度は抗ＰＤＬ１，Ｃ７１と比較してそれより低い。
【0421】
[000522]
実施例１０：抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、ＰＤＬ１＋がん細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでのマクロファージファゴサイトーシスを増強する
[000523]ヒトＰＤＬ１の発現を欠くヒトＫ５６２白血病腫瘍細胞又はヒトＰＤＬ１を発現するＫ５６２を蛍光色素ＣＦＳＥで標識し、そしてアイソタイプコントロール、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＳＩＲＰα抗体、抗ＰＤＬ１と抗ＳＩＲＰα抗体との組合せ、抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体のいずれかと共存させながら、ヒトマクロファージ－コロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）処置済みの単球由来マクロファージと共にインキュベートした。２時間後、マクロファージを採取し、蛍光標識した抗ヒトマクロファージ抗体を用いて染色し、そしてフローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ１１ｂ＋ＣＦＳＥ＋二重陽性事象が、ＣＦＳＥ標識された腫瘍細胞を貪食したマクロファージを特定する。各サンプルは異なる色により表される。３つの異なるサンプルについて貪食指数を示す。
実施例１０：抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、ＰＤＬ１＋がん細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでのマクロファージファゴサイトーシスを増強する
[000523]ヒトＰＤＬ１の発現を欠くヒトＫ５６２白血病腫瘍細胞又はヒトＰＤＬ１を発現するＫ５６２を蛍光色素ＣＦＳＥで標識し、そしてアイソタイプコントロール、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＳＩＲＰα抗体、抗ＰＤＬ１と抗ＳＩＲＰα抗体との組合せ、抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体のいずれかと共存させながら、ヒトマクロファージ－コロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）処置済みの単球由来マクロファージと共にインキュベートした。２時間後、マクロファージを採取し、蛍光標識した抗ヒトマクロファージ抗体を用いて染色し、そしてフローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ１１ｂ＋ＣＦＳＥ＋二重陽性事象が、ＣＦＳＥ標識された腫瘍細胞を貪食したマクロファージを特定する。各サンプルは異なる色により表される。３つの異なるサンプルについて貪食指数を示す。
【0422】
[000524]図９Ａに示すように、抗ＰＤＬ１抗体Ｃ７１は、抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）により約２０％のファゴサイトーシスを誘発したが、抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５はファゴサイトーシスをごくわずかしか誘発しない。抗ＰＤＬ１と抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５との組合せはファゴサイトーシスを有意に改善する。抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体ＥＳ０１９－０２０、ＥＳ０１９－０２９は、組み合わせた場合と同様に、用量依存様式で強力なファゴサイトーシスを誘発する一方、ＥＳ０１９－０２４、ＥＳ０１９－０２５、及びＥＳ０１９－０２６は、相乗的ファゴサイトーシス効果を示さなかった。
【0423】
[000525]図９Ｂに示すように、抗ＰＤＬ１抗体Ｃ７１単剤療法又は抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５との組合せは、ＰＤＬ１発現を欠くＫ５６２親細胞に対してファゴサイトーシスをごくわずかしか誘発しない。抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体ＥＳ０１９－０２０、ＥＳ０１９－０２４、ＥＳ０１９－０２５、ＥＳ０１９－０２６、ＥＳ０１９－０２９は、Ｋ５６２細胞（ＰＤＬ１陰性）に対してファゴサイトーシス効果を示さなかった。
【0424】
[000526]図９Ｃに示すように、抗ＰＤＬ１抗体Ｃ７１単剤療法又は抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５との組合せは、ヒトＳＩＲＰγを発現するヒトジャーカットＴ細胞系に対してファゴサイトーシスをごくわずかしか誘発しない。抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体ＥＳ０１９－０２０、ＥＳ０１９－０２４、ＥＳ０１９－０２５、ＥＳ０１９－０２６、ＥＳ０１９－０２９は、ジャーカットＴ細胞（ＳＩＲＰγ陽性）に対してファゴサイトーシス効果を示さなかった。
【0425】
[000527]
実施例１１：抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、ＰＤＬ１＋がん細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでのマクロファージファゴサイトーシスを増強する
[000528]ヒトＳＩＲＰａ／ＣＤ４７二重ＫＩマウスを、ｈＣＤ４７／ｈＣＬＤＮ１８．２過剰発現ＭＣ３８細胞でイノキュレーションした。平均腫瘍容積が約７０～１００ｍｍ３に達したときに、マウスを腫瘍容積に基づき７群にグループ化した。マウスに、同一モル濃度の１０ｍｐｋのアイソタイプ抗体、１０ｍｐｋのＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ、１０ｍｐｋのＳＩＲＰａ ｍＡｂ、１０ｍｐｋのＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ＋１０ｍｐｋのＳＩＲＰａ ｍＡｂ、又は１４ｍｐｋのＥＳ０２８－００１、ＥＳ０２８－００５、ＥＳ００９をｉ．ｐ．投与した。投与スケジュールは、ＢＩＷ、５回投与であった。腫瘍容積を１週間当たり２回測定した。５回目の投薬後３日経過してマウスを屠殺し、そして腫瘍を秤量した。統計処理を、異なる処置群の平均腫瘍容積をアイソタイプコントロール群のそれと比較する２元配置分散分析により実施した。
実施例１１：抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、ＰＤＬ１＋がん細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでのマクロファージファゴサイトーシスを増強する
[000528]ヒトＳＩＲＰａ／ＣＤ４７二重ＫＩマウスを、ｈＣＤ４７／ｈＣＬＤＮ１８．２過剰発現ＭＣ３８細胞でイノキュレーションした。平均腫瘍容積が約７０～１００ｍｍ３に達したときに、マウスを腫瘍容積に基づき７群にグループ化した。マウスに、同一モル濃度の１０ｍｐｋのアイソタイプ抗体、１０ｍｐｋのＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ、１０ｍｐｋのＳＩＲＰａ ｍＡｂ、１０ｍｐｋのＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ＋１０ｍｐｋのＳＩＲＰａ ｍＡｂ、又は１４ｍｐｋのＥＳ０２８－００１、ＥＳ０２８－００５、ＥＳ００９をｉ．ｐ．投与した。投与スケジュールは、ＢＩＷ、５回投与であった。腫瘍容積を１週間当たり２回測定した。５回目の投薬後３日経過してマウスを屠殺し、そして腫瘍を秤量した。統計処理を、異なる処置群の平均腫瘍容積をアイソタイプコントロール群のそれと比較する２元配置分散分析により実施した。
【0426】
[000529]相対的な腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）を下記のように計算した：
ＴＧＩ％＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％（Ｔ及びＣは、それぞれ、所定の時点における処置群及びコントロール群の相対的腫瘍容積（ＲＴＶ）又は腫瘍重量（ＴＷ）である）。
Ｔ／Ｃ％＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％（ＴＲＴＶ：処置群の平均ＲＴＶ；ＣＲＴＶ：媒体コントロール群の平均ＲＴＶ；
ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０、Ｖ０は、グルーピング時点の動物の腫瘍容積であり、Ｖｔは処置後の動物の腫瘍容積である）；
Ｔ／Ｃは、下記のように腫瘍重量に基づき計算可能である：
Ｔ／Ｃ％＝ＴＴＷ／ＣＴＷ×１００％（ＴＴＷ：最終時点の処置群の平均腫瘍重量；ＣＴＷ：最終時点の媒体コントロール群の平均腫瘍重量）。
ＴＧＩ％＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％（Ｔ及びＣは、それぞれ、所定の時点における処置群及びコントロール群の相対的腫瘍容積（ＲＴＶ）又は腫瘍重量（ＴＷ）である）。
Ｔ／Ｃ％＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％（ＴＲＴＶ：処置群の平均ＲＴＶ；ＣＲＴＶ：媒体コントロール群の平均ＲＴＶ；
ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０、Ｖ０は、グルーピング時点の動物の腫瘍容積であり、Ｖｔは処置後の動物の腫瘍容積である）；
Ｔ／Ｃは、下記のように腫瘍重量に基づき計算可能である：
Ｔ／Ｃ％＝ＴＴＷ／ＣＴＷ×１００％（ＴＴＷ：最終時点の処置群の平均腫瘍重量；ＣＴＷ：最終時点の媒体コントロール群の平均腫瘍重量）。
【0427】
[000530]図１０に示すように、抗クローディン１８．２抗体ｈｕ２８Ｈ１Ｌ２及び抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５単剤療法は、アイソタイプ処置と同様に腫瘍増殖を阻害しない。抗クローディン１８．２と抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５との組合せは、腫瘍の増殖を有意に低下させる。抗クローディン１８．２／ＳＩＲＰα二重特異性抗体ＥＳ０２８－００５は、組み合わせた場合と類似して強力な腫瘍増殖阻害を誘発する；ＥＳ０２８－００１はより弱い腫瘍阻害を示し、またＥＳ０２８－００９は腫瘍増殖を阻害しなかった。
【0428】
[000531]
実施例１２：抗ＳＩＲＰα完全ブロッキング抗体に基づくＢｉＭＥは、腫瘍細胞に対して選択性を有しつつ、最良の相乗的ファゴサイトーシス効果をもたらす
[000532]キメラ抗体の特徴付け
[000533]１．１ 結合特異性の検出
[000534]ヒトＳＩＲＰαバリアントに対する精製済みキメラ抗体の結合活性を、ヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定的に発現するＣＨＯＫ１細胞又は２９３Ｆ細胞、及びヒトＳＩＲＰα ｖ２を安定的に発現するＣＨＯＫ１細胞を使用して、ＦＡＣＳアッセイにより検出した。図１２に示すように、テストしたすべての抗体は、細胞表面ヒトＳＩＲＰα ｖ１及び細胞表面ヒトＳＩＲＰα ｖ２と強く結合する。ＥＣ５０及び最高シグナルを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算した。
実施例１２：抗ＳＩＲＰα完全ブロッキング抗体に基づくＢｉＭＥは、腫瘍細胞に対して選択性を有しつつ、最良の相乗的ファゴサイトーシス効果をもたらす
[000532]キメラ抗体の特徴付け
[000533]１．１ 結合特異性の検出
[000534]ヒトＳＩＲＰαバリアントに対する精製済みキメラ抗体の結合活性を、ヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定的に発現するＣＨＯＫ１細胞又は２９３Ｆ細胞、及びヒトＳＩＲＰα ｖ２を安定的に発現するＣＨＯＫ１細胞を使用して、ＦＡＣＳアッセイにより検出した。図１２に示すように、テストしたすべての抗体は、細胞表面ヒトＳＩＲＰα ｖ１及び細胞表面ヒトＳＩＲＰα ｖ２と強く結合する。ＥＣ５０及び最高シグナルを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算した。
【0429】
[000535]１．２ ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用ブロッキング活性の検出
[000536]競合ＥＬＩＳＡアッセイ法を、精製されたキメラ抗体がＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックすることができるかどうか判定するのに使用した。手短に述べると、抗体及びｍＦｃタグ化ヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングされたヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ又はヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ組換えタンパク質と共に同時インキュベートした。ＣＤ４７の可溶性ＥＣＤの濃度は２５ｎＭであり、またＳＩＲＰαの可溶性ＥＣＤの濃度は２０ｎＭである。洗浄後に、ＨＲＰ標識された抗マウスＦｃ第２抗体（Ｓｉｇｍａ社）を添加し、そして３７℃で１時間インキュベートした。次に、ＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を１００μｌ／ウェルで添加した。室温で１５分間インキュベートした後、１ＮのＨＣｌ、５０μｌを添加して反応を停止した。ＯＤ４５０ｎｍを読み取った。ブロッキング比を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングされたヒトＣＤ４７ＥＣＤ組換えタンパク質に対するヒトＳＩＲＰα ＥＣＤ組換えタンパク質の結合の遮断率により決定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０及び最高ブロッキング率（％）を図１３に要約する。テストしたすべての抗体は、ヒトＣＤ４７と異なるヒトＳＩＲＰαバリアントとの間の相互作用をブロックすることができる。
[000536]競合ＥＬＩＳＡアッセイ法を、精製されたキメラ抗体がＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックすることができるかどうか判定するのに使用した。手短に述べると、抗体及びｍＦｃタグ化ヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングされたヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ又はヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ組換えタンパク質と共に同時インキュベートした。ＣＤ４７の可溶性ＥＣＤの濃度は２５ｎＭであり、またＳＩＲＰαの可溶性ＥＣＤの濃度は２０ｎＭである。洗浄後に、ＨＲＰ標識された抗マウスＦｃ第２抗体（Ｓｉｇｍａ社）を添加し、そして３７℃で１時間インキュベートした。次に、ＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を１００μｌ／ウェルで添加した。室温で１５分間インキュベートした後、１ＮのＨＣｌ、５０μｌを添加して反応を停止した。ＯＤ４５０ｎｍを読み取った。ブロッキング比を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングされたヒトＣＤ４７ＥＣＤ組換えタンパク質に対するヒトＳＩＲＰα ＥＣＤ組換えタンパク質の結合の遮断率により決定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０及び最高ブロッキング率（％）を図１３に要約する。テストしたすべての抗体は、ヒトＣＤ４７と異なるヒトＳＩＲＰαバリアントとの間の相互作用をブロックすることができる。
【0430】
[000537]１．２．１ エピトープ分析
[000538]競合ＥＬＩＳＡアッセイ法を、精製されたキメラ抗体のエピトープビニングに対して使用した。手短に述べると、過剰の競合抗体及びｍＦｃタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングされた抗体と共に同時インキュベートした。洗浄後、ＨＲＰ標識抗マウスＦｃ第２抗体（Ｓｉｇｍａ社）を添加し、そして３７℃で１時間インキュベートした。次に、ＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を１００μｌ／ウェルで添加した。室温で１５分間インキュベートした後、１ＮのＨＣｌ、５０μｌを添加して反応を停止した。ＯＤ４５０ｎｍを読み取った。競合比を計算した。ＳＩＲＰαに対する結合について相互に競合し得る抗体は、関連する結合エピトープを有し得る。表Ｂに示すように、０２５ｃは、ヒトＳＩＲＰαに対する結合について、０４２ｃ、０７３ｃ、及びｈｕ１Ｈ９Ｇ４との競合を示すことはなく、異なるエピトープと結合し得ることを示唆する。０４２ｃ、０７３ｃ、及びｈｕ１Ｈ９Ｇ４間の競合は二方向性ではなく、それらの結合エピトープは関連し得るがしかし完全に同一ではないことを示唆する。
[000538]競合ＥＬＩＳＡアッセイ法を、精製されたキメラ抗体のエピトープビニングに対して使用した。手短に述べると、過剰の競合抗体及びｍＦｃタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングされた抗体と共に同時インキュベートした。洗浄後、ＨＲＰ標識抗マウスＦｃ第２抗体（Ｓｉｇｍａ社）を添加し、そして３７℃で１時間インキュベートした。次に、ＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を１００μｌ／ウェルで添加した。室温で１５分間インキュベートした後、１ＮのＨＣｌ、５０μｌを添加して反応を停止した。ＯＤ４５０ｎｍを読み取った。競合比を計算した。ＳＩＲＰαに対する結合について相互に競合し得る抗体は、関連する結合エピトープを有し得る。表Ｂに示すように、０２５ｃは、ヒトＳＩＲＰαに対する結合について、０４２ｃ、０７３ｃ、及びｈｕ１Ｈ９Ｇ４との競合を示すことはなく、異なるエピトープと結合し得ることを示唆する。０４２ｃ、０７３ｃ、及びｈｕ１Ｈ９Ｇ４間の競合は二方向性ではなく、それらの結合エピトープは関連し得るがしかし完全に同一ではないことを示唆する。
【0431】
[000539]０２５ｃ、０４２ｃ、０７３ｃ、ＨＥＦＬＢ、及びｈｕ１Ｈ９Ｇ４のエピトープマッピングを、水素重水素交換マススペクトロメトリー（ＨＤＸ－ＭＳ）を使用して更に実施した。図２３Ａに示すように、０２５ｃの結合性は、Ｈｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤのＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬ（配列番号２１８）の領域においてより低い水素重水素交換比をもたらし、これらのアミノ酸は、０２５ｃが結合するのにきわめて重要であり得ることを示唆する。図２３Ｂに示すように、０４２ｃの結合性は、Ｈｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤのＳＧＡＧＴＥＬ（配列番号２１９）及びＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳ（配列番号２２０）の２領域においてより低い水素重水素交換比をもたらし、これらのアミノ酸は、０４２ｃが結合するのにきわめて重要であり得ることを示唆する。図２３Ｃに示すように、０７３ｃの結合性は、Ｈｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤのＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳＹ（配列番号２２１）の領域においてより低い水素重水素交換比をもたらし、これらのアミノ酸は、０７３ｃが結合するのにきわめて重要であり得ることを示唆する。特に、これら３領域は、ＣＤ４７が結合するＳＩＲＰα ＥＣＤのＩｇＶドメインに位置せず、０４２ｃ及び０７３ｃはアロステリック抗体としての働きを有し、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックし得ること、又は０４２ｃ及び０７３ｃのブロッキング活性は立体障害効果であることを示唆する。図２３Ｄに示すように、ｈｕ１Ｈ９Ｇ４の結合性は、Ｈｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤのＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬ（配列番号２１８）の領域においてより低い水素重水素交換比をもたらし、これらのアミノ酸は、ｈｕ１Ｈ９Ｇ４が結合するのにきわめて重要であり得ることを示唆する。図２３Ｅに示すように、ＨＥＦＬＢの結合性は、ｈｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤのＶＧＰＩＱＷ（配列番号２２２）の領域においてより低い水素重水素交換比をもたらし、これらのアミノ酸は、ＨＥＦＬＢが結合するのにきわめて重要であり得ることを示唆する。
【0432】
[000540]競合ＥＬＩＳＡデータ及びＨＤＸ－ＭＳデータを共に考慮すれば、０２５ｃ、０４２ｃ、及び０７３ｃは、異なる結合エピトープ（ｈｕ１Ｈ９Ｇ４及びＨＥＦＬＢの参照抗体とも異なる）を有し得ると結論される。それに加えて、結果は、０２５ｃ、０４２ｃ、及び０７３ｃのエピトープはＩｇＶドメインの外部にあり得ることを示す。ＩｇＶドメインはＣＤ４７の細胞外Ｉｇドメインの結合性に関与する。参照抗体の配列情報を下記の表Ａに示す。
【0433】
[000541]
【0434】
【表14】
【0435】
[000542]
【0436】
【表15】
【0437】
[000543]１．３ ＳＨＰ－１導入アッセイ
[000544]精製されたキメラ抗体がＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介式の「私を食べないで」シグナル伝達をブロックすることの有効性を、細胞に基づくＳＨＰ－１導入アッセイにより評価した。完全長ヒトＳＩＲＰα ｖ１を、そのＣ末端に融合した小型のβ－ｇａｌ断片（ＥＤ）を用いて工学的に作出し、そしてＳＨＰ－１のＳＨ２－ドメインを補完性のβ－ｇａｌ断片（ＥＡ）を用いて工学的に作出した。これらのコンストラクトは、Ｋ５６２細胞内で安定的に発現された。ヒトＣＤ４７発現細胞との同時培養を通じてリガンドを関与させると、その結果ＳＩＲＰα－ＥＤ融合タンパク質がリン酸化され、活性なβ－ｇａｌ酵素を生じさせるＳＨＰ－１－ＥＡの導入を引き起こす。この活性な酵素は基質を加水分解して、レポーター活性の指標として化学発光を生成する。ＩＣ５０及び最高ブロッキング率（％）を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算した。図１４に要約するように、テストしたすべての抗体は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介式の「私を食べないで」シグナル伝達を異なるレベルにおいて破綻させることができる。
[000544]精製されたキメラ抗体がＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介式の「私を食べないで」シグナル伝達をブロックすることの有効性を、細胞に基づくＳＨＰ－１導入アッセイにより評価した。完全長ヒトＳＩＲＰα ｖ１を、そのＣ末端に融合した小型のβ－ｇａｌ断片（ＥＤ）を用いて工学的に作出し、そしてＳＨＰ－１のＳＨ２－ドメインを補完性のβ－ｇａｌ断片（ＥＡ）を用いて工学的に作出した。これらのコンストラクトは、Ｋ５６２細胞内で安定的に発現された。ヒトＣＤ４７発現細胞との同時培養を通じてリガンドを関与させると、その結果ＳＩＲＰα－ＥＤ融合タンパク質がリン酸化され、活性なβ－ｇａｌ酵素を生じさせるＳＨＰ－１－ＥＡの導入を引き起こす。この活性な酵素は基質を加水分解して、レポーター活性の指標として化学発光を生成する。ＩＣ５０及び最高ブロッキング率（％）を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算した。図１４に要約するように、テストしたすべての抗体は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介式の「私を食べないで」シグナル伝達を異なるレベルにおいて破綻させることができる。
【0438】
[000545]１．４ Ｉｎ ｖｉｔｒｏファゴサイトーシスアッセイ
[000546]精製されたキメラ抗体の機能有効性を、フローサイトメトリーに基づくファゴサイトーシスアッセイにより評価した。手短に述べると、異なるＳＩＲＰＡ遺伝子型を有するＭ０非極性化又はＭ１極性化ヒト単球由来マクロファージを、テスト対象の抗体の存在下で、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）標識されたＣＤ４７発現がん細胞と共に同時培養した。ファゴサイトーシスを、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ色素について陽性のマクロファージの割合（％）を決定することによりアッセイした。非極性化マクロファージの場合、末梢血単核球を、１０％のＦＢＳ及び５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦが補充された１６４０培地内、１０ｃｍ組織培養プレート中に７～９日間播種した。接着細胞をＭ０非極性化マクロファージとして採取した。Ｍ１極性化マクロファージの場合、末梢血単核球を、１０％のＦＢＳ及び５０ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦが補充された１６４０培地内、１０ｃｍ組織培養プレート中に５日間播種した。５０μｇ／ｍｌのＩＦＮγ及び１００μｇ／ｍｌのＬＰＳを、追加の２～４日間、培養物に添加した。接着細胞をＭ１極性化マクロファージとして採取した。
[000546]精製されたキメラ抗体の機能有効性を、フローサイトメトリーに基づくファゴサイトーシスアッセイにより評価した。手短に述べると、異なるＳＩＲＰＡ遺伝子型を有するＭ０非極性化又はＭ１極性化ヒト単球由来マクロファージを、テスト対象の抗体の存在下で、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）標識されたＣＤ４７発現がん細胞と共に同時培養した。ファゴサイトーシスを、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ色素について陽性のマクロファージの割合（％）を決定することによりアッセイした。非極性化マクロファージの場合、末梢血単核球を、１０％のＦＢＳ及び５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦが補充された１６４０培地内、１０ｃｍ組織培養プレート中に７～９日間播種した。接着細胞をＭ０非極性化マクロファージとして採取した。Ｍ１極性化マクロファージの場合、末梢血単核球を、１０％のＦＢＳ及び５０ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦが補充された１６４０培地内、１０ｃｍ組織培養プレート中に５日間播種した。５０μｇ／ｍｌのＩＦＮγ及び１００μｇ／ｍｌのＬＰＳを、追加の２～４日間、培養物に添加した。接着細胞をＭ１極性化マクロファージとして採取した。
【0439】
[000547]図２０Ａに示すように、０１５ｃ、０２５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、及び０７３ｃは、ＳＩＲＰＡヘテロ接合性ｖ１／ｖ２個体から取得されたＭ０マクロファージによるＲａｊｉ細胞の腫瘍細胞取り込みを増強するという単剤活性を示さなかった。しかしながら、リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）の存在下では、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰα ｖ２との間の相互作用をブロックする活性としてより弱い活性を有する０５９ｃ以外、テストしたすべてのその他の精製されたキメラ抗体は、Ｒａｊｉ細胞のマクロファージ媒介式の抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）を増強した。
【0440】
[000548]ＳＩＲＰα抗体及びＰＤ－Ｌ１抗体の組合せを、ＳＩＲＰＡホモ接合性ｖ１／ｖ１（図２０Ｂ）及びｖ２／ｖ２（図２０Ｃ）の個体から取得されたＭ０マクロファージを使用しながら、ファゴサイトーシスアッセイにおいてテストした。ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下では、０２５ｃ、０４２ｃ、及び０７３ｃは、ＰＤ－Ｌ１を安定的に発現するＲａｊｉ細胞のマクロファージ媒介式のＡＤＣＰを効果的に増強した。
【0441】
[000549]ヒト化抗体の特徴付け
[000550]１．５ 結合特異性の検出
[000551]テストしたすべてのヒト化抗体は、Ｃ２５の親抗体と類似した活性を保持し、ＳＩＲＰファミリーメンバーと結合することが確認された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＥＣ５０及び最大シグナルを図１５に要約する。したがって、本明細書に提示されるすべてのヒト化抗体（例えば、ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０５９、ｈｕ０２５．０６０、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）、Ｃ７１、Ｃ７１ｖ３８、Ｃ２３９、Ｃ４９２、Ｃ５７０、５７０ｈ３、Ｃ４４６、Ｃ２８１１、Ｃ１７７８、Ｃ１７９３、Ｃ２８５５、Ｃ２７１３、及びＣ２７１９）は、対応する親の抗体と類似した活性をそれぞれ有することが予測され得る。
[000550]１．５ 結合特異性の検出
[000551]テストしたすべてのヒト化抗体は、Ｃ２５の親抗体と類似した活性を保持し、ＳＩＲＰファミリーメンバーと結合することが確認された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＥＣ５０及び最大シグナルを図１５に要約する。したがって、本明細書に提示されるすべてのヒト化抗体（例えば、ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０５９、ｈｕ０２５．０６０、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２、ｈｕ２６．Ｈ１Ｌ２（Ｓ９２Ａ）、Ｃ７１、Ｃ７１ｖ３８、Ｃ２３９、Ｃ４９２、Ｃ５７０、５７０ｈ３、Ｃ４４６、Ｃ２８１１、Ｃ１７７８、Ｃ１７９３、Ｃ２８５５、Ｃ２７１３、及びＣ２７１９）は、対応する親の抗体と類似した活性をそれぞれ有することが予測され得る。
【0442】
[000552]１．５．１ 親和性の検出
[000553]ヒト化抗体を、表面プラズモン共鳴技術（Ｂｉａｃｏｒｅ ｓｙｓｔｅｍ社）を使用しながら、ヒトＳＩＲＰα ｖ１、ヒトＳＩＲＰα ｖ２に対する結合親和性について特徴付けを行った。会合及び解離曲線を１：１結合モデルに当て嵌め、そして各抗体に対するＫａ／Ｋｄ／ＫＤ値を計算した。各抗体に対するＫａ／Ｋｄ／ＫＤ値の親和性データを図１６に要約する。
[000553]ヒト化抗体を、表面プラズモン共鳴技術（Ｂｉａｃｏｒｅ ｓｙｓｔｅｍ社）を使用しながら、ヒトＳＩＲＰα ｖ１、ヒトＳＩＲＰα ｖ２に対する結合親和性について特徴付けを行った。会合及び解離曲線を１：１結合モデルに当て嵌め、そして各抗体に対するＫａ／Ｋｄ／ＫＤ値を計算した。各抗体に対するＫａ／Ｋｄ／ＫＤ値の親和性データを図１６に要約する。
【0443】
[000554]１．７ ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用ブロッキング活性の検出
[000555]ヒト化抗体を、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックする能力について、競合ＥＬＩＳＡアッセイ法を用いてテストした（上記した方法を参照されたい）。図１７に示すように、テストしたすべてのヒト化抗体はＣ２５の親抗体と類似した活性を保持し、ヒトＣＤ４７と異なるいくつかのヒトＳＩＲＰαバリアントとの間の相互作用をブロックすることが確認された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０及び最高ブロックキング率（％）を図１７に要約する。
[000555]ヒト化抗体を、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックする能力について、競合ＥＬＩＳＡアッセイ法を用いてテストした（上記した方法を参照されたい）。図１７に示すように、テストしたすべてのヒト化抗体はＣ２５の親抗体と類似した活性を保持し、ヒトＣＤ４７と異なるいくつかのヒトＳＩＲＰαバリアントとの間の相互作用をブロックすることが確認された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０及び最高ブロックキング率（％）を図１７に要約する。
【0444】
[000556]ヒト化抗体及びいくつかの公知抗ＳＩＲＰα抗体のブロッキング活性を更に比較するために、競合ＦＡＣＳアッセイも実施した。手短に述べると、抗体及びｍＦｃタグ化ヒトＣＤ４７ＥＣＤ組換えタンパク質を、ヒトＳＩＲＰα ｖ１又はヒトＳＩＲＰ αｖ２を安定的に発現するＣＨＯＫ１細胞と共に同時インキュベートした。洗浄後に、色素標識された抗マウスＦｃ第２抗体（Ｓｉｇｍａ社）を添加し、そして３７℃で１時間インキュベートした。蛍光強度を検出した。ブロッキング比を、ＣＨＯＫ１細胞により発現されたＳＩＲＰαに対するヒトＣＤ４７ＥＣＤ組換えタンパク質の結合の遮断率により決定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０及び最高ブロッキング率（％）を図１８に要約する。
【0445】
[000557]１．８ ＳＨＰ－１導入アッセイ
[000558]ＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介式の「私を食べないで」シグナル伝達をブロックするヒト化抗体の有効性を、細胞に基づくＳＨＰ－１導入アッセイ法により評価した（上記した方法を参照されたい）。テストしたすべてのヒト化抗体はＣ２５の親抗体と類似する活性を保持し、ＣＤ４７が関与することでもたらされる、ＳＩＲＰα細胞内尾部に対するＳＨＰ－１導入をブロックすることが確認された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０及び最高ブロックキング率（％）を図１９に要約する。
[000558]ＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介式の「私を食べないで」シグナル伝達をブロックするヒト化抗体の有効性を、細胞に基づくＳＨＰ－１導入アッセイ法により評価した（上記した方法を参照されたい）。テストしたすべてのヒト化抗体はＣ２５の親抗体と類似する活性を保持し、ＣＤ４７が関与することでもたらされる、ＳＩＲＰα細胞内尾部に対するＳＨＰ－１導入をブロックすることが確認された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０及び最高ブロックキング率（％）を図１９に要約する。
【0446】
[000559]１．９ Ｉｎ ｖｉｔｒｏファゴサイトーシスアッセイ
[000560]Ｉｎ ｖｉｔｒｏでの機能バリデーションでは、ＳＩＲＰα抗体とＰＤ－Ｌ１抗体又はリツキシマブとの組合せを、ＳＩＲＰＡホモ接合ｖ１／ｖ１（図２１Ａ及び図２１Ｂ）及びｖ２／ｖ２（図２１Ｃ及び図２１Ｄ）の個体から取得したＭ０マクロファージを使用するファゴサイトーシスアッセイにおいてテストした。テストしたすべてのヒト化抗体は０２５ｃの親抗体と類似する活性を保持し、ＰＤ－Ｌ１抗体又はリツキシマブの存在下で、ＰＤ－Ｌ１を安定的に発現するＲａｊｉ細胞のマクロファージ媒介式のＡＤＣＰを増強することが確認された。
[000560]Ｉｎ ｖｉｔｒｏでの機能バリデーションでは、ＳＩＲＰα抗体とＰＤ－Ｌ１抗体又はリツキシマブとの組合せを、ＳＩＲＰＡホモ接合ｖ１／ｖ１（図２１Ａ及び図２１Ｂ）及びｖ２／ｖ２（図２１Ｃ及び図２１Ｄ）の個体から取得したＭ０マクロファージを使用するファゴサイトーシスアッセイにおいてテストした。テストしたすべてのヒト化抗体は０２５ｃの親抗体と類似する活性を保持し、ＰＤ－Ｌ１抗体又はリツキシマブの存在下で、ＰＤ－Ｌ１を安定的に発現するＲａｊｉ細胞のマクロファージ媒介式のＡＤＣＰを増強することが確認された。
【0447】
[000561]２．抗ＳＩＲＰα抗体の完全ブロッカー、部分的ブロッカー、及び非ブロッカーへのカテゴリー分類
[000562]精製されたキメラ抗体がＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックすることができるかどうか判定するために、競合ＥＬＩＳＡアッセイを使用した。手短に述べると、抗体及びｍＦｃタグ化ヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングされたヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質と共に同時インキュベートした。洗浄後に、ＨＲＰ標識された抗マウスＦｃ第２抗体（Ｓｉｇｍａ社）を添加し、そして３７℃で１時間インキュベートした。次に、ＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を、１００μｌ／ウェルで添加した。室温で１５分間インキュベートした後、１ＮのＨＣｌ、５０μｌを添加して反応を停止した。ＯＤ４５０ｎｍを読み取った。ブロッキング比を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングされたヒトＣＤ４７ＥＣＤ組換えタンパク質に対するヒトＳＩＲＰαＥＣＤ組換えタンパク質の結合の遮断率により決定した。図２２は、０２５又はＣ２５は９０％を超える最大ブロッキング率（％）を有し、完全ブロッカーとして定義されること、０５０又はＣ５０はゼロに近い最大ブロッキング率（％）を有し、非ブロッカーとして定義されること、及び０３５又はＣ３５は中間の最大ブロッキング率（％）を有し、部分的ブロッカーとして定義されることを示す（表１０）。
[000562]精製されたキメラ抗体がＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックすることができるかどうか判定するために、競合ＥＬＩＳＡアッセイを使用した。手短に述べると、抗体及びｍＦｃタグ化ヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングされたヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質と共に同時インキュベートした。洗浄後に、ＨＲＰ標識された抗マウスＦｃ第２抗体（Ｓｉｇｍａ社）を添加し、そして３７℃で１時間インキュベートした。次に、ＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を、１００μｌ／ウェルで添加した。室温で１５分間インキュベートした後、１ＮのＨＣｌ、５０μｌを添加して反応を停止した。ＯＤ４５０ｎｍを読み取った。ブロッキング比を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングされたヒトＣＤ４７ＥＣＤ組換えタンパク質に対するヒトＳＩＲＰαＥＣＤ組換えタンパク質の結合の遮断率により決定した。図２２は、０２５又はＣ２５は９０％を超える最大ブロッキング率（％）を有し、完全ブロッカーとして定義されること、０５０又はＣ５０はゼロに近い最大ブロッキング率（％）を有し、非ブロッカーとして定義されること、及び０３５又はＣ３５は中間の最大ブロッキング率（％）を有し、部分的ブロッカーとして定義されることを示す（表１０）。
【0448】
[000563]
【0449】
【表16】
【0450】
[000564]３．完全ブロッカーＣ２５、Ｃ１５、Ｃ４２、Ｃ５９、及びＣ７３、部分的ブロッカーＣ３５、並びに非ブロッカーＣ５０を使用する併用療法及び二重特異性分子
[000565]異なるＣＤ４７及びＳＩＲＰαブロッキング抗体を、蛍光色素ＣＦＳＥを用いて標識され、アイソタイプコントロール、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５、Ｃ３５、Ｃ５０、抗ＰＤＬ１とＳＩＲＰα抗体との組合せ、又はＣ２５、Ｃ３５、Ｃ５０に基づく抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体のいずれかの存在下、ヒトマクロファージ－コロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）で処置した単球由来マクロファージと共にインキュベートした、ヒトＰＤＬ１発現を欠くヒトＲａｊｉリンパ腫細胞又はヒトＰＤＬ１を発現するＲａｊｉにおいてテストした。２時間後、マクロファージを採取し、蛍光標識された抗ヒトマクロファージ抗体を用いて染色し、そしてフローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ１１ｂ＋ＣＦＳＥ＋二重陽性事象が、ＣＦＳＥ標識された腫瘍細胞を貪食したマクロファージを特定する。各サンプルは異なる色により表される。３つの異なるサンプルについて貪食指数を示す。
[000565]異なるＣＤ４７及びＳＩＲＰαブロッキング抗体を、蛍光色素ＣＦＳＥを用いて標識され、アイソタイプコントロール、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５、Ｃ３５、Ｃ５０、抗ＰＤＬ１とＳＩＲＰα抗体との組合せ、又はＣ２５、Ｃ３５、Ｃ５０に基づく抗ＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体のいずれかの存在下、ヒトマクロファージ－コロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）で処置した単球由来マクロファージと共にインキュベートした、ヒトＰＤＬ１発現を欠くヒトＲａｊｉリンパ腫細胞又はヒトＰＤＬ１を発現するＲａｊｉにおいてテストした。２時間後、マクロファージを採取し、蛍光標識された抗ヒトマクロファージ抗体を用いて染色し、そしてフローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ１１ｂ＋ＣＦＳＥ＋二重陽性事象が、ＣＦＳＥ標識された腫瘍細胞を貪食したマクロファージを特定する。各サンプルは異なる色により表される。３つの異なるサンプルについて貪食指数を示す。
【0451】
[000566]図１１Ａに示すように、抗ＳＩＲＰα部分的ブロッキング抗体Ｃ３５及び非ブロッキング抗体Ｃ５０は、単剤処置により、Ｒａｊｉ／ＰＤＬ１細胞対して約４０％のファゴサイトーシスを誘発した；抗ＳＩＲＰα完全抗体Ｃ２５による単剤処置はファゴサイトーシスをごくわずかしか誘発しない。抗ＰＤＬ１と抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５又はＣ２５との組合せに基づくＢｉＭＥは、ファゴサイトーシスを有意に改善する。抗ＰＤＬ１と抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ３５、Ｃ５０との組合せ、又はそれに基づくＢｉＭＥは、相乗的ファゴサイトーシス効果を示さなかった。
【0452】
[000567]Ｒａｊｉ（ＰＤＬ１陰性）細胞に対するファゴサイトーシスアッセイにおいて（図１１Ｂ）、抗ＳＩＲＰα部分的ブロッキング抗体Ｃ３５及び非ブロッキング抗体Ｃ５０による単剤処置は、Ｒａｊｉ（ＰＤＬ１陰性）細胞に対してファゴサイトーシスをなおも誘発することができる；抗ＳＩＲＰα完全抗体Ｃ２５による単剤処置はファゴサイトーシスをごくわずかしか誘発しない。抗ＰＤＬ１と抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５又はＣ２５との組合せに基づくＰＤＬ１／ＳＩＲＰα二重特異性抗体は、腫瘍細胞上でのＰＤＬ１発現を欠くことから、ファゴサイトーシスを誘発しなかった。抗ＰＤＬ１と抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ３５又はＣ５０との組合せに基づくＢｉＭＥは、Ｃ３５又はＣ５０抗体による単剤処置と類似したファゴサイトーシス効果を示した。
【0453】
[000568]結果は、抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ３５又はＣ５０による単剤処置、併用処置、又は二重特異性抗体は、Ｃ２５抗体と比較して、標的抗原の発現とは独立して腫瘍細胞ファゴサイトーシスを誘発することができることを明らかにした。抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５に基づく二重特異性抗体の特性は、より特異的な特性及び安全特性を提供する。
【0454】
[000569]実験データを下記の表１１に要約する。
[000570]
[000570]
【0455】
【表17-1】
【0456】
【表17-2】
【0457】
[000571]実施例４に示すように、抗クローディン１８．２と抗ＳＩＲＰα抗体Ｃ２５又はＣ２５との組合せに基づくＢｉＭＥは、クローディン１８．２発現細胞に対するファゴサイトーシスについても、非クローディン１８．２発現細胞よりも有意選択的に改善する。
【0458】
[000572]それに加えて、図２０Ａ及び図２１Ａに示すように、Ｃ１５、Ｃ４２、Ｃ５９、又はＣ７３と標的抗原（例えば、ＰＤ－Ｌ１、クローディン１８．２）を標的とする抗体との組合せは、標的抗原非発現細胞よりも、標的抗原（例えば、ＰＤ－Ｌ１、クローディン１８．２）を発現する細胞に対して、選択的ファゴサイトーシスを有するものと予想される。完全ブロッカーＣ１５、Ｃ４２、Ｃ５９、及びＣ７３は、例えば、ＥＳ０２８－００１、ＥＳ０２８－００５、ＥＳ０２８－００９、ＥＳ０２８－０１３、ＥＳ０１９－０２０、ＥＳ０１９－０２４、ＥＳ０１９－０２５、ＥＳ０１９－０２６、ＥＳ０１９－０２９、ＥＳ０１９－０７２、ＥＳ０１９－０７３、及びＥＳ０１９－０７９等の形態で提供される多重特異性分子を作製するのにも使用可能であり、また標的抗原非発現細胞よりも、標的抗原（例えば、ＰＤ－Ｌ１、クローディン１８．２）を発現する細胞に対して、類似した選択的ファゴサイトーシスを有するものと予想され得る。
【0459】
[0004]マクロファージが本明細書全体を通じて例示されるが、ここに記載される多重特異性分子、組成物、及び方法は、骨髄細胞系列の細胞、例えば樹状細胞等に適用可能である。軽微な最適化及び変更は、当業者にとって公知のように、細胞毎のそれぞれの基準に基づき想定され、また本開示の範囲内にあるものとみなされる。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図6D】
【図6E】
【図6F】
【図6G】
【図7A】
【図7B】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【図10】
【図11A】
【図11B】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20A】
【図20B】
【図20C】
【図21A】
【図21B】
【図21C】
【図21D】
【図22】
【図23A】
【図23B】
【図23C】
【図23D】
【図23E】
【配列表】
【国際調査報告】