特表 2024-527189 発毛を増強する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-22

(54)【発明の名称】発毛を増強する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/4439 20060101AFI20240712BHJP

   A61P 17/14 20060101ALI20240712BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240712BHJP

   A61K 31/404 20060101ALI20240712BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20240712BHJP

   A61K 8/49 20060101ALI20240712BHJP

   A61Q 7/00 20060101ALI20240712BHJP

【ＦＩ】

A61K31/4439

A61P17/14

A61P43/00 111

A61K31/404

A61K31/506

A61K8/49

A61Q7/00

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024501844

(86)(22)【出願日】2022-07-12

(85)【翻訳文提出日】2024-03-11

(86)【国際出願番号】 IB2022056437

(87)【国際公開番号】W WO2023285974

(87)【国際公開日】2023-01-19

(31)【優先権主張番号】17/372,649

(32)【優先日】2021-07-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ

(71)【出願人】

【識別番号】504187858

【氏名又は名称】佛教慈濟醫療財團法人

【氏名又は名称原語表記】ＢＵＤＤＨＩＳＴ ＴＺＵ ＣＨＩ ＭＥＤＩＣＡＬ ＦＯＵＮＤＡＴＩＯＮ

【住所又は居所原語表記】Ｎｏ． ７０７， Ｓｅｃ． ３， Ｃｈｕｎｇ－Ｙａｎｇ Ｒｄ． Ｈｕａｌｉｅｎ Ｔａｉｗａｎ

(71)【出願人】

【識別番号】524015382

【氏名又は名称】リン・チンロン

【氏名又は名称原語表記】ＬＩＮ， Ｃｈｉｎ－Ｌｏｎ

(74)【代理人】

【識別番号】100176072

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 功

(74)【代理人】

【識別番号】100230156

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 心

(72)【発明者】

【氏名】チャン・チュンシン

【テーマコード（参考）】

4C083

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C083AC851

4C083AC852

4C083CC37

4C083EE22

4C086BC13

4C086BC17

4C086BC42

4C086GA02

4C086GA07

4C086GA08

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA92

4C086ZC20

(57)【要約】

毛包周期を調節することによって発毛を増強する必要がある対象において、かかる増強をするための方法が提供される。この方法は、対象の皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１の阻害を含む。毛髪着色の増加を必要とする対象において、かかる増加をさせるための方法も提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

皮膚領域における発毛の増強を必要とする対象において、前記増強をする方法であって、カゼインキナーゼ１阻害剤を前記対象に投与して、前記皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１を阻害することを含む、方法。

【請求項2】

前記カゼインキナーゼ１が、休止期又は成長期に阻害される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記カゼインキナーゼ１が、皮脂腺において阻害される、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記皮膚領域における前記カゼインキナーゼ１が、カゼインキナーゼ１αである、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記対象が脱毛に罹患している、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記脱毛が、栄養欠乏によって引き起こされる脱毛、薬剤性脱毛、放射線誘導性脱毛、ストレス性脱毛、遺伝性脱毛、加齢性脱毛、又は疾患性脱毛である、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記薬剤性脱毛が、化学療法薬、リチウム、ヒ素、ビスマス、ホウ酸、タリウム、コルヒチン、レチノイド、ヘパリン、ワルファリン、β遮断薬、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ホルモン、バルプロ酸、カルバマゼピン、フェニトイン、シメチジン、抗甲状腺薬、コレステロール低下薬、インターフェロン、抗感染症薬、アンフェタミン、抗うつ薬、抗真菌剤、抗発作剤、避妊薬、ビタミンＡ系薬剤、パーキンソン病用薬剤、胃の薬、又は非ステロイド性抗炎症薬によって誘導される、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記疾患性脱毛が、自己免疫疾患、甲状腺疾患、メタボリックシンドローム、感染症、又はがんによって引き起こされる、請求項６に記載の方法。

【請求項9】

前記自己免疫疾患が、円形脱毛症、エリテマトーデス、乾燥症候群、強皮症、クローン病、炎症性腸疾患、又は乾癬である、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

前記対象が、脱毛症に罹患している、請求項１に記載の方法。

【請求項11】

前記脱毛症が、アンドロゲン性脱毛症、円形脱毛症、成長期脱毛症、外傷性脱毛症、休止期脱毛症、及び瘢痕性脱毛症からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記カゼインキナーゼ１阻害剤が、前記皮膚領域における前記カゼインキナーゼ１の遺伝子発現を阻害する、請求項１に記載の方法。

【請求項13】

前記投与することが、前記カゼインキナーゼ１阻害剤の前記皮膚領域への局所塗布である、請求項１に記載の方法。

【請求項14】

前記カゼインキナーゼ１阻害剤が、Ｄ４４７６、ＩＣ２６１、ＣＫＩ７、以下の一般式Ｉ及び式ＩＩ～ＶＩＩによって表される化合物からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法：

【化1】

（式中、
Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ独立して、Ｈ、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルコキシ、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアシル、炭素数５～１５のアリール、及び炭素数３～７のヘテロアリールからなる群から選択され、それぞれが、ハライド、ヒドロキシル、エステル、エーテル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、及びアミドの少なくとも１つによって任意に置換され；又は、Ｒ_１及びＲ_２は、それらが結合している窒素原子と共に、４～７員の飽和環、不飽和環、又は芳香族環を形成し、これらの環は、Ｎ、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｏ、及びＳＯ_２の少なくとも１つを任意に含み、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルキル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ヒドロキシル、ハライド、及びシアノの少なくとも１つで任意に置換され；
Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立して、Ｈ；ハライド、ヒドロキシル、アルコキシ、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、エステル、及びアミドの少なくとも１つによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキルからなる群から選択され；又は
Ｒ_１若しくはＲ_２は、Ｒ_３、並びにそれらがそれぞれ結合している炭素及び窒素原子と共に、４～７員の飽和環、不飽和環、又は芳香族環を形成し、これらの環は、Ｎ、ＮＨ、Ｏ、Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｏ、及びＳＯ_２の少なくとも１つを任意に含み、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルキル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ヒドロキシル、カルボニル、及びハライドの少なくとも１つで任意に置換され；
Ｒ_５及びＲ_８は、それぞれ独立して、Ｈ、ハライド、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、及び少なくとも１つのハライドによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニルからなる群から選択され；
Ｒ_６は、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニル、炭素数５～１０のシクロアルキル、及び直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、炭素数３～７のシクロアルキル、４～６員複素環、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、及び炭素数１～５のアルキルハライドの少なくとも１つによって任意に置換される飽和又は不飽和４～６員複素環から選択され；
Ｒ_７は、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、及び炭素数３～７のシクロアルキル、４～６員複素環、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、及び炭素数１～５のアルキルハライドの少なくとも１つによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニルからなる群から選択される）、

【化2】

【化3】

【請求項15】

皮膚領域における毛包周期の調節を必要とする対象において、前記調節をする方法であって、カゼインキナーゼ１阻害剤を前記対象に投与して、前記皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１を阻害することを含む、方法。

【請求項16】

前記皮膚領域における前記カゼインキナーゼ１が、カゼインキナーゼ１αである、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記調節することが、前記毛包周期を成長期に誘導することである、請求項１５に記載の方法。

【請求項18】

前記毛包周期が、前記皮膚領域における前記カゼインキナーゼ１の阻害前に休止期にある、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記調節することが、毛包の成長期を延長することである、請求項１５に記載の方法。

【請求項20】

前記毛包が、前記皮膚領域における前記カゼインキナーゼ１の阻害前に成長期にある、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

皮膚領域における毛髪着色の増加を必要とする対象において、前記増加をさせる方法であって、カゼインキナーゼ１阻害剤を前記対象に投与して、前記皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１を阻害することを含む、方法。

【請求項22】

前記皮膚領域における前記カゼインキナーゼ１が、カゼインキナーゼ１αである、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記皮膚領域が、白髪を含む、請求項２１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、カゼインキナーゼ１（ＣＫ１）を阻害することによって発毛（hair growth）を増強する方法に関する。また、カゼインキナーゼ１を阻害することによって、毛周期の段階を調節する方法及び毛髪着色（hair pigmentation）を増加させる方法も、本明細書で提供される。

【背景技術】

【0002】

毛髪は、重要な生理機能を有する。例えば、被毛は、ほとんどの哺乳動物を、温かく、乾燥した、有害な要素から保護された状態に保つ。動物の生涯にわたり、休止期（細胞周期休止期（quiescence phase）又は静止期（resting phase））、成長期（再生期（regeneration phase）又は活発な毛成長期（active hair growth phase））、及び退行期（減退期（degeneration phase）又は移行期（transitional phase））を含む毛包の様々な段階の周期的反復を通じて、毛は発毛・成長する。休止期の終わりに毛は抜け落ち、新しい毛が元の毛に置き換わり、成長サイクルが再び始まる。各毛包は、年齢、疾患、及び多種多様なその他の因子によって影響を受け得るライフサイクルをそれぞれに有する。

【0003】

しかしながら、脱毛又は不十分な発毛は、多くのヒト並びに多くの動物が抱えている共通の課題である。毛包周期は、毛包幹細胞（ＨＦＳＣ）の細胞周期休止及び活性化を制御する内因性シグナル及び外因性シグナルの両方によって制御される。ＨＦＳＣの不適切な活性化及び増殖は、加齢を含む数多くの生物学的状態及び病理学的状態での脱毛症の根底にある。ＨＦＳＣの活性化及び成長期の開始を促進することができる分子は、毛髪再生がどのように調節されているかを明らかにするのに役立つとともに、治療介入及び美容介入を提供することができるので、活発に探索されてきた。

【0004】

この問題に対するアプローチとしては、紫外線放射、マッサージ、精神療法及び運動療法などの処置があるが、一般に有効であると認められているものはない。血管再生手術及び鍼治療などのアプローチでさえ、ほとんど効果が示されていない。

【0005】

現在までのところ、脱毛を治療するための最も一般的なアプローチは薬物療法である。ビタミンからホルモンに及ぶ多くの種類の薬物が試されてきたが、有望な治療効果が認められているものは非常に少ない。例えば、アンドロゲンホルモンは、男性型脱毛症の発症に関与することが知られている。したがって、抗アンドロゲンホルモンの全身又は局所投与は、脱毛症を予防又は治療するための阻害作用を提供する。それにもかかわらず、抗アンドロゲンホルモンは、期待されるほど有効ではない。

【0006】

したがって、有効で塗布が容易である、発毛の増強を必要とする対象において発毛を増強するための組成物及び方法を提供する、アンメット・ニーズが残っている。

【発明の概要】

【0007】

本開示では、皮膚領域における発毛の増強又は刺激を必要とする対象において、かかる増強又は刺激をするための方法であって、皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１を阻害することを含む、方法が提供される。少なくとも１つの実施形態では、カゼインキナーゼ１は、毛包周期の休止期中に阻害される。いくつかの実施形態では、カゼインキナーゼ１は、毛包周期の成長期中に阻害される。いくつかの実施形態では、カゼインキナーゼ１は、皮脂腺において阻害される。いくつかの実施形態では、皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１は、カゼインキナーゼ１αである。本開示の少なくとも１つの実施形態では、対象は、脱毛に罹患している。いくつかの実施形態では、脱毛は、栄養欠乏による脱毛、薬剤性脱毛、放射線誘導性脱毛、ストレス性脱毛、遺伝性脱毛、加齢性脱毛、又は疾患性脱毛である。いくつかの実施形態では、薬剤性脱毛は、化学療法薬、リチウム、ヒ素、ビスマス、ホウ酸、タリウム、コルヒチン、レチノイド、ヘパリン、ワルファリン、β遮断薬、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ホルモン、バルプロ酸、カルバマゼピン、フェニトイン、シメチジン、抗甲状腺薬、コレステロール低下薬、インターフェロン、抗感染症薬、アンフェタミン、抗うつ薬、抗真菌剤、抗発作剤（anti-seizure agent）、避妊薬、ビタミンＡ系薬剤、パーキンソン病用薬剤、胃の薬、又は非ステロイド性抗炎症薬によって誘導される。いくつかの実施形態では、疾患性脱毛は、自己免疫疾患、甲状腺疾患、メタボリックシンドローム、感染症、又はがんによるものである。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、円形脱毛症、エリテマトーデス、乾燥症候群、強皮症、クローン病、炎症性腸疾患、又は乾癬である。

【0008】

いくつかの実施形態では、対象は、脱毛症に罹患している。いくつかの実施形態では、脱毛症は、アンドロゲン性脱毛症、円形脱毛症、成長期脱毛症、外傷性脱毛症（self-induced hair loss）、休止期脱毛症、及び瘢痕性脱毛症からなる群から選択される。

【0009】

本開示の少なくとも１つの実施形態では、カゼインキナーゼ１の阻害は、皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１の遺伝子発現を阻害することを含む。本開示の少なくとも１つの実施形態において、カゼインキナーゼ１の阻害は、皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１αの遺伝子発現を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、阻害は、皮膚領域へのカゼインキナーゼ１阻害剤の局所塗布を含む。いくつかの実施形態では、カゼインキナーゼ１阻害剤は、Ｄ４４７６、ＩＣ２６１、ＣＫＩ７、及び以下の式ＩＩ～ＶＩＩによって表される化合物からなる群から選択される：

【0010】

【化1】

【0011】

【化2】

【0012】

いくつかの実施形態では、脱毛は、毛成長の遅延若しくは緩徐化、又は早期抜け毛によって生じる。少なくとも１つの実施形態では、本開示は、毛包周期の様々な段階における脱毛を治療する方法を提供する。本願の少なくとも１つの実施形態では、皮膚領域において毛包周期を調節する必要がある対象において、かかる調節をするための方法であって、皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１を阻害することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１は、カゼインキナーゼ１αである。本開示の少なくとも１つの実施形態では、皮膚領域における毛包周期を調節する必要がある対象において、かかる調節をするための方法は、皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１αを阻害することを含む。一実施形態では、毛包周期の調節は、毛包周期を成長期に誘導することであり、毛包は、皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１の阻害前に休止期にある。いくつかの実施形態では、毛包周期の調節は、毛包の成長期を延長することであり、毛包は、皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１の阻害前に成長期にある。

【0013】

本開示は、皮膚領域における毛髪着色の増加を必要とする対象において、かかる増加をさせるための方法であって、皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１を阻害することを含む、方法も提供される。本開示の少なくとも１つの実施形態では、皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１は、カゼインキナーゼ１αである。本開示の少なくとも１つの実施形態では、皮膚領域は、白髪を含む。

【0014】

本開示は、添付の図面と併せて以下の説明を参照することによって、より容易に理解されるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1A】図１Ａ～図１Ｄは、休止期初期の７週齢Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウス（ＣＫ１αＫＯ）のケラチノサイトにおける、タモキシフェン（ＴＭＸ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によるＣＫ１α欠損誘導の結果を示す。図１Ａは、実験スキームを示す。

【図1B】図１Ａ～図１Ｄは、休止期初期の７週齢Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウス（ＣＫ１αＫＯ）のケラチノサイトにおける、タモキシフェン（ＴＭＸ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によるＣＫ１α欠損誘導の結果を示す。図１Ｂは、７週目（Ｗ７）の剃毛の前後、８週目（Ｗ８）、９週目（Ｗ９）、１０週目（Ｗ１０）、１１週目（Ｗ１１）、及び１２週目（Ｗ１２）におけるマウスの表現型を示す。

【図1C】図１Ａ～図１Ｄは、休止期初期の７週齢Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウス（ＣＫ１αＫＯ）のケラチノサイトにおける、タモキシフェン（ＴＭＸ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によるＣＫ１α欠損誘導の結果を示す。図１Ｃは、記載の各週齢で採取した皮膚サンプルのＨ＆Ｅ染色を示す。

【図1D】図１Ａ～図１Ｄは、休止期初期の７週齢Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウス（ＣＫ１αＫＯ）のケラチノサイトにおける、タモキシフェン（ＴＭＸ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によるＣＫ１α欠損誘導の結果を示す。図１Ｄは、記載の各週齢で採取した皮膚サンプルのβ－カテニン染色を示す。

【図2A】図２Ａ～図２Ｅは、休止期中期の９週齢Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウス（ＣＫ１αＫＯ）のケラチノサイトにおける、タモキシフェン（ＴＭＸ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によるＣＫ１α欠損誘導の結果を示す。図２Ａは、実験スキームを示す。

【図2B】図２Ａ～図２Ｅは、休止期中期の９週齢Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウス（ＣＫ１αＫＯ）のケラチノサイトにおける、タモキシフェン（ＴＭＸ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によるＣＫ１α欠損誘導の結果を示す。図２Ｂは、９週目（Ｗ９）の剃毛の前後、１０週目（Ｗ１０）、１２週目（Ｗ１２）、１３週目（Ｗ１３）、及び１６週目（Ｗ１６）におけるマウスの表現型を示す。

【図2C】図２Ａ～図２Ｅは、休止期中期の９週齢Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウス（ＣＫ１αＫＯ）のケラチノサイトにおける、タモキシフェン（ＴＭＸ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によるＣＫ１α欠損誘導の結果を示す。図２Ｃは、Ｈ＆Ｅ染色を示す。

【図2D】図２Ａ～図２Ｅは、休止期中期の９週齢Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウス（ＣＫ１αＫＯ）のケラチノサイトにおける、タモキシフェン（ＴＭＸ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によるＣＫ１α欠損誘導の結果を示す。図２Ｄは、採取された皮膚サンプルのβ－カテニン染色を示す。矢印は毛芽を示し、β－カテニンは、ＣＫ１αＫＯマウスにおいて増加した。

【図2E】図２Ａ～図２Ｅは、休止期中期の９週齢Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウス（ＣＫ１αＫＯ）のケラチノサイトにおける、タモキシフェン（ＴＭＸ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によるＣＫ１α欠損誘導の結果を示す。図２Ｅは、ＢｒｄＵ染色を示す。

【図3A】図３Ａ～図３Ｄは、Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウスのケラチノサイトにおける、４－ＯＨ－ＴＭＸ（ＣＫ１αＫＯ）によるＣＫ１α欠損の局所誘導の結果を示す。図３Ａは、９週目に剃毛した後のマウスの背部に、４－ＯＨ－ＴＭＸを局所塗布する実験スキームを示す。表現型を記録し、サンプルを９週目（Ｗ９）、１１週目（Ｗ１１）、及び１３週目（Ｗ１３）に得た。

【図3B】図３Ａ～図３Ｄは、Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウスのケラチノサイトにおける、４－ＯＨ－ＴＭＸ（ＣＫ１αＫＯ）によるＣＫ１α欠損の局所誘導の結果を示す。図３Ｂは、９週目（Ｗ９）、１１週目（Ｗ１１）、及び１３週目（Ｗ１３）のマウスの表現型を示す。

【図3C】図３Ａ～図３Ｄは、Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウスのケラチノサイトにおける、４－ＯＨ－ＴＭＸ（ＣＫ１αＫＯ）によるＣＫ１α欠損の局所誘導の結果を示す。図３Ｃは、記載のタイミングで採取した皮膚サンプルのＨ＆Ｅ染色を示す。「Ｄ」は、誘導後の日数を示す。

【図3D】図３Ａ～図３Ｄは、Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウスのケラチノサイトにおける、４－ＯＨ－ＴＭＸ（ＣＫ１αＫＯ）によるＣＫ１α欠損の局所誘導の結果を示す。図３Ｄは、記載のタイミングで採取した皮膚サンプルのβ－カテニン染色を示す。「Ｄ」は、誘導後の日数を示す。

【図4A】図４Ａ～図４Ｆは、８週齢のＣ５７／ＢＬ６野生型マウスにおける発毛及び毛髪着色の誘導において例示的なＣＫ１阻害剤であるＡ５１を示す。図４Ａは、８週目の間に、マウスの背部の毛を剃った後、このマウスの背部の皮膚にＡ５１を２回又は３回局所塗布する実験スキームを示す。９週目、１０週目、及び１１週目を示す矢印は、サンプリングのタイミングを示す。

【図4B】図４Ａ～図４Ｆは、８週齢のＣ５７／ＢＬ６野生型マウスにおける発毛及び毛髪着色の誘導において例示的なＣＫ１阻害剤であるＡ５１を示す。図４Ｂは、８週目（Ｗ８）、９週目（Ｗ９）、１０週目（Ｗ１０）、及び１２週目（Ｗ１２）のマウスの表現型を示す。０．１^＊２ Ｑ．Ｏ．Ｄ．：１日おきに毎回０．１ｍｇ、合計０．２ｍｇ。Ｎは各群のマウスの匹数を示す。

【図4C】図４Ａ～図４Ｆは、８週齢のＣ５７／ＢＬ６野生型マウスにおける発毛及び毛髪着色の誘導において例示的なＣＫ１阻害剤であるＡ５１を示す。図４Ｃは、採取された皮膚サンプルのＨ＆Ｅ染色を示す。

【図4D】図４Ａ～図４Ｆは、８週齢のＣ５７／ＢＬ６野生型マウスにおける発毛及び毛髪着色の誘導において例示的なＣＫ１阻害剤であるＡ５１を示す。図４Ｄは、採取された皮膚サンプルのβ－カテニン染色を示す。

【図4E】図４Ａ～図４Ｆは、８週齢のＣ５７／ＢＬ６野生型マウスにおける発毛及び毛髪着色の誘導において例示的なＣＫ１阻害剤であるＡ５１を示す。図４Ｅ及び図４Ｆはそれぞれ、毛包の着色のフォンタナ・マッソン染色を高倍率及び低倍率で示す。

【図4F】図４Ａ～図４Ｆは、８週齢のＣ５７／ＢＬ６野生型マウスにおける発毛及び毛髪着色の誘導において例示的なＣＫ１阻害剤であるＡ５１を示す。図４Ｅ及び図４Ｆはそれぞれ、毛包の着色のフォンタナ・マッソン染色を高倍率及び低倍率で示す。

【図5A】図５Ａ～図５Ｅは、８週齢のＣ５７／ＢＬ６野生型マウスにおける発毛及び毛髪着色の誘導におけるＣＫ１阻害剤Ｄ４４７６及びＩＣ２６１を示す。図５Ａは、Ｄ４４７６又はＩＣ２６１を１日おきに毎回０．０４ｍｇでマウスの背部の皮膚に局所塗布し、合計０．１２ｍｇを塗布した実験スキームを示す。９週目及び１０週目を示す矢印は、サンプリングのタイミングを示す。

【図5B】図５Ａ～図５Ｅは、８週齢のＣ５７／ＢＬ６野生型マウスにおける発毛及び毛髪着色の誘導におけるＣＫ１阻害剤Ｄ４４７６及びＩＣ２６１を示す。図５Ｂは、８週目（Ｗ８）、９週目（Ｗ９）、及び１０週目（Ｗ１０）のマウスの表現型を示す。

【図5C】図５Ａ～図５Ｅは、８週齢のＣ５７／ＢＬ６野生型マウスにおける発毛及び毛髪着色の誘導におけるＣＫ１阻害剤Ｄ４４７６及びＩＣ２６１を示す。図５Ｃは、採取された皮膚サンプルのＨ＆Ｅ染色を示す。

【図5D】図５Ａ～図５Ｅは、８週齢のＣ５７／ＢＬ６野生型マウスにおける発毛及び毛髪着色の誘導におけるＣＫ１阻害剤Ｄ４４７６及びＩＣ２６１を示す。図５Ｄは、採取された皮膚サンプルのβ－カテニン染色を示す。

【図5E】図５Ａ～図５Ｅは、８週齢のＣ５７／ＢＬ６野生型マウスにおける発毛及び毛髪着色の誘導におけるＣＫ１阻害剤Ｄ４４７６及びＩＣ２６１を示す。図５Ｅは、毛包の着色のフォンタナ・マッソン染色を示す。

【図6A】図６Ａ～図６Ｃは、ＣＫ１の阻害が、毛周期における成長期を延長することを示す。図６Ａは、４週目に剃毛した後のマウスの背部に、４－ＯＨ－ＴＭＸを局所塗布する実験スキームを示す。

【図6B】図６Ａ～図６Ｃは、ＣＫ１の阻害が、毛周期における成長期を延長することを示す。図６Ｂは、４週目（Ｗ４）、６週目（Ｗ６）、７週目（Ｗ７）、及び８週目（Ｗ８）のマウスの表現型を示す。

【図6C】図６Ａ～図６Ｃは、ＣＫ１の阻害が、毛周期における成長期を延長することを示す。図６Ｃは、８週目のＨ＆Ｅ染色及びβ－カテニン染色の結果を示す。

【図7A】図７Ａ～図７Ｉは、ケラチノサイトにおけるＣＫ１α欠損が、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスにおいて着色した毛を生成することを示す。図７Ａは、ケラチノサイトにおけるＣＫ１α欠損によりＭｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスを得るための交配のスキームを示す。被毛色が黄色のＭｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスをＫ１４－ＣｒｅＥＲ－ＣＫ１α^ｆ／ｆマウスと交配させて、Ｋ１４－ＣｒｅＥＲ－ＣＫ１α^ｆ／ｆ；Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスを作製した。

【図7B】図７Ａ～図７Ｉは、ケラチノサイトにおけるＣＫ１α欠損が、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスにおいて着色した毛を生成することを示す。図７Ｂは、Ｋ１４－ＣｒｅＥＲ－ＣＫ１α^ｆ／ｆ；Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスのケラチノサイトにおけるＣＫ１αを欠損させるための、ＴＭＸの腹腔内注射のスキームを示す。

【図7C】図７Ａ～図７Ｉは、ケラチノサイトにおけるＣＫ１α欠損が、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスにおいて着色した毛を生成することを示す。図７Ｃは、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウス及びケラチノサイトにおけるＣＫ１α欠損を有するＭｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウス（ＣＫ１α^－／－；Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}）の背部における毛の色の表現型を示す。

【図7D】図７Ａ～図７Ｉは、ケラチノサイトにおけるＣＫ１α欠損が、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスにおいて着色した毛を生成することを示す。図７Ｄは、顕微鏡下での毛幹着色を示す。

【図7E】図７Ａ～図７Ｉは、ケラチノサイトにおけるＣＫ１α欠損が、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスにおいて着色した毛を生成することを示す。図７Ｅ及び図７Ｆはそれぞれ、フォンタナ・マッソン染色による毛包着色及びフォンタナ・マッソン染色された細胞の数を示す。

【図7F】図７Ａ～図７Ｉは、ケラチノサイトにおけるＣＫ１α欠損が、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスにおいて着色した毛を生成することを示す。図７Ｅ及び図７Ｆはそれぞれ、フォンタナ・マッソン染色による毛包着色及びフォンタナ・マッソン染色された細胞の数を示す。

【図7G】図７Ａ～図７Ｉは、ケラチノサイトにおけるＣＫ１α欠損が、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスにおいて着色した毛を生成することを示す。図７Ｇ及び図７Ｈはそれぞれ、マウスの背部の皮膚におけるＫｉｔＬ／ｃ－Ｋｉｔ経路のタンパク質発現レベルのウェスタンブロット解析及びヒストグラムで定量化した発現レベルを示す。

【図7H】図７Ａ～図７Ｉは、ケラチノサイトにおけるＣＫ１α欠損が、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスにおいて着色した毛を生成することを示す。図７Ｇ及び図７Ｈはそれぞれ、マウスの背部の皮膚におけるＫｉｔＬ／ｃ－Ｋｉｔ経路のタンパク質発現レベルのウェスタンブロット解析及びヒストグラムで定量化した発現レベルを示す。

【図7I】図７Ａ～図７Ｉは、ケラチノサイトにおけるＣＫ１α欠損が、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスにおいて着色した毛を生成することを示す。図７Ｉは、１４日目及び２８日目のＭｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスとＣＫ１α^－／－；Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスの背部の皮膚を比較するユーメラニン分析を示す。

【図8A】図８Ａ～図８Ｄは、発毛を増強中の皮脂腺に対するＣＫ１阻害の効果を示す。図８Ａは、Ｋ１４－ＣｒｅＥＲ－ＣＫ１α；ＲＯＳＡ^{ｍＴ／ｍＧ}のマウスの耳における生体内多光子イメージングを示す。

【図8B】図８Ａ～図８Ｄは、発毛を増強中の皮脂腺に対するＣＫ１阻害の効果を示す。図８Ｂは、ＩＣ２６１で２４時間処理したＳＺ９５細胞（ヒト皮脂腺細胞株）を用いたＷＳＴ－１アッセイを示す。

【図8C】図８Ａ～図８Ｄは、発毛を増強中の皮脂腺に対するＣＫ１阻害の効果を示す。図８Ｃは、異なる濃度のＤＭＳＯ又はＩＣ２６１で処理したＳＺ９５細胞におけるＰＰＡＲγ（脂質生成についてのバイオマーカー）及びｃ－Ｍｙｃ（分化についてのバイオマーカー）の発現を示す。

【図8D】図８Ａ～図８Ｄは、発毛を増強中の皮脂腺に対するＣＫ１阻害の効果を示す。図８Ｃは、ＩＣ２６１が、処理されたＳＺ９５細胞においてＬＣ３Ｂを用量依存的に増加させたことを示す。この増加は、オートファジーが誘導されたことを示す。

【発明を実施するための形態】

【0016】

以下の例は、本開示を説明するために使用される。当業者であれば、本明細書の開示に基づいて、本開示の他の利点及び効果を容易に理解することができるであろう。本開示はまた、異なる例において説明されるように実装又は適用され得る。異なる態様及び用途のために、本開示の範囲に反することなく本開示を実施するために上記の例を修正又は変更することが可能である。

【0017】

全般的には、本明細書で使用される命名法、並びに本明細書に記載される有機化学、医薬品化学、生化学、生物学、及び薬理学における実験手順は、当該技術分野で周知であり、一般的に使用されるものである。他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、全般的に、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。しかしながら、これらの用語は、当該技術分野における通常の知識を有する者の意図、先例、又は新しい技術の出現によって異なる意味を有することがある。また、一部の用語は、本出願人によって任意的に選択されることがあり、この場合、選択された用語の意味は、本開示の説明において詳細に説明される。したがって、本明細書で使用される用語は、明細書全般にわたる説明と共に、用語の意味に基づいて定義されるべきものである。

【0018】

本開示で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、明示的かつ明白に１つの指示対象に限定されない限り、複数の指示対象を含むことに更に留意されたい。「又は」という用語は、文脈が明らかに別のことを示さない限り、「及び／又は」という用語と互換的に使用される。

【0019】

また、ある部分がある構成要素又は工程を「含む（include）」又は「含む（comprise）」場合、特に反対の記載がない限り、他の構成要素又は他の工程を除外するものではなく、他の構成要素又は他の工程を更に含むことができる。

【0020】

「対象」、「患者」、及び「個体」という用語は、本明細書において互換的に使用され、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、又はマウスを含むがこれらに限定されない温血動物を指す。「対象」及び「患者」という用語は、例えば、ヒト対象などの哺乳動物対象に関して、本明細書において互換的に使用される。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。

【0021】

「治療有効量」又は「有効量」という用語は、対象に投与された場合に、治療される障害、疾患、又は状態の症状のうちの１つ以上の発症を予防するか、又はある程度緩和するのに十分な化合物の量を含むことを意味する。「治療有効量」又は「有効量」という用語は、研究者、獣医、医師、又は臨床医によって求められている、生体分子（例えば、タンパク質、酵素、ＲＮＡ、又はＤＮＡ）、細胞、組織、系、動物、又はヒトの生物学的又は医学的奏功を誘導するのに十分な化合物の量も指す。

【0022】

「製薬上許容される担体」、「製薬上許容される賦形剤」、「生理学的に許容される担体」、又は「生理学的に許容される賦形剤」という用語は、美容上又は製薬上許容される材料、組成物、又はビヒクル、例えば、液体又は固体の充填剤、希釈剤、溶媒、又はカプセル内包材料を指す。いくつかの実施形態では、各成分は、化粧料又は医薬製剤の他の成分と適合性があり、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、又は他の問題若しくは合併症を伴わずに、対象（例えば、ヒト又は動物）の組織又は臓器と接触させて使用するのに適しており、妥当な利益／リスク比に見合っているという意味で「製薬上許容される」。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ ｅｄ．；Ａｌｌｅｎ Ｅｄ．：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，２０１２；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，７ｔｈ ｅｄ．；Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．；Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：２０１２；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，３ｒｄ ｅｄ．；Ａｓｈ ａｎｄ Ａｓｈ Ｅｄｓ．；Ｇｏｗｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ：２００７；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，２ｎｄ ｅｄ．；Ｇｉｂｓｏｎ Ｅｄ．；ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ ＬＬＣ：Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，２００９を参照されたい。

【0023】

「約」又は「およそ」という用語は、当業者によって決定される所与の値についての許容可能な誤差を意味し、これは、値が測定又は決定される方法に部分的に依存する。いくつかの実施形態では、「約」又は「およそ」という用語は、１、２、３、又は４標準偏差以内を意味する。いくつかの実施形態では、「約」又は「およそ」という用語は、所与の値又は範囲の５０％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、又は０．０５％以内を意味する。

【0024】

「薬／薬物」、「化粧料」、及び「治療剤」という用語は、障害、疾患、又は状態の１つ以上の症状を予防、改善、又は治療するために対象に投与される化合物又はその化粧料組成物若しくは医薬組成物を指す。

【0025】

本開示のいくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、患者の年齢に関係なく対象を治療することを含むが、いくつかの疾患又は障害は、特定の年齢群においてより一般的である。

【0026】

本開示のＣＫ１阻害剤（ＣＫＩ）は、細胞周期を調節するサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）（例えば、Ｃｄｋ２、Ｃｄｋ４、及びＣｄｋ６）などの他のキナーゼと比較して少なくとも２倍、少なくとも５倍、又は少なくとも１０倍の阻害活性を、ＣＫ１に対して有することができる。更に、ＣＫ１阻害剤は、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）、プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）、上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、ＲＡＦ－１（rapidly accelerated fibrosarcoma 1）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ１（ＭＥＫ１）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰキナーゼ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ受容体）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦ受容体）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦ受容体）、ホスホイノシチド３キナーゼ（ＰＩ３キナーゼ）、Ｗｅｅ１キナーゼ、Ｓｒｃ、及び／又はＡｂｌと比較して少なくとも２倍、少なくとも５倍、又は少なくとも１０倍の阻害活性を、ＣＫ１に対して有する。

【0027】

本開示のいくつかの実施形態では、ＣＫＩは、ＣＫ１α（ＣＳＮＫ１Ａ；ゲノムレベル、ｍＲＮＡレベル、又はタンパク質レベルで、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１０２０２７６、ＮＭ＿００１０２５１０５、及びＮＭ＿００１０２０２７６）に対して選択的である。本開示のいくつかの実施形態では、ＣＫＩは、ＣＫ１δ、ＣＫ１εなどの他のＣＫアイソザイムに対する阻害活性も有する。本開示の少なくとも１つの実施形態では、ＣＫＩは、ＣＫ１α、ＣＫ１δ、ＣＫ１ε、及びそれらの任意の組み合わせに対する阻害活性を有する。

【0028】

本開示の少なくとも１つの実施形態では、カゼインキナーゼ１阻害剤は、その任意の立体異性体又は塩を含む、以下の一般式Ｉによって表される：

【0029】

【化3】

（式中、
Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ独立して、Ｈ、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルコキシ、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアシル、炭素数５～１５のアリール、及び炭素数３～７のヘテロアリールからなる群から選択され、それぞれが、ハライド、ヒドロキシル、エステル、エーテル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、及びアミドの少なくとも１つによって任意に置換され；又は、Ｒ_１及びＲ_２は、それらが結合している窒素原子と共に、４～７員の飽和環、不飽和環、又は芳香族環を形成し、これらの環は、Ｎ、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｏ、及びＳＯ_２の少なくとも１つを任意に含み、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルキル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ヒドロキシル、ハライド、及びシアノの少なくとも１つで任意に置換され；
Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立して、Ｈ；ハライド、ヒドロキシル、アルコキシ、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、エステル、及びアミドの少なくとも１つによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキルからなる群から選択され；又は
Ｒ_１若しくはＲ_２は、Ｒ_３、並びにそれらがそれぞれ結合している炭素及び窒素原子と共に、４～７員の飽和環、不飽和環、又は芳香族環を形成し、これらの環は、Ｎ、ＮＨ、Ｏ、Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｏ、及びＳＯ_２の少なくとも１つを任意に含み、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルキル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ヒドロキシル、カルボニル、及びハライドの少なくとも１つで任意に置換され；
Ｒ_５及びＲ_８は、それぞれ独立して、Ｈ、ハライド、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、及び少なくとも１つのハライドによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニルからなる群から選択され；
Ｒ_６は、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニル、炭素数５～１０のシクロアルキル、及び直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、炭素数３～７のシクロアルキル、４～６員複素環、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、及び炭素数１～５のアルキルハライドの少なくとも１つによって任意に置換される飽和又は不飽和４～６員複素環から選択され；
Ｒ_７は、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、及び炭素数３～７のシクロアルキル、４～６員複素環、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、及び炭素数１～５のアルキルハライドの少なくとも１つによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニルからなる群から選択される）。

【0030】

更なるカゼインキナーゼＩ阻害剤としては、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１７／０２１９６９号に記載されているものが挙げられる。

【0031】

本明細書で提供される化粧料組成物又は医薬組成物は、エマルジョン、溶液、懸濁液、クリーム、ゲル、ハイドロゲル、軟膏、粉剤、ドレッシング、エリキシル剤、ローション、懸濁液、チンキ剤、ペースト、泡剤、フィルム、エアロゾル、洗腸排便剤（irrigation）、スプレー、坐剤、包帯、及び皮膚パッチを含む、局所効果又は全身効果のための局所投与に適した任意の剤形で製剤化することができる。本明細書で提供される化粧料組成物又は医薬組成物の局所製剤は、リポソーム、ミセル、マイクロスフェア、ナノシステム、及びそれらの任意の混合物も含むことができる。

【0032】

本明細書で提供される局所製剤における使用に適した美容上又は製薬上許容される担体及び賦形剤としては、水性ビヒクル、水混和性ビヒクル、非水性ビヒクル、微生物の増殖に対する抗菌剤又は防腐剤、安定剤、溶解促進剤、等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、局所麻酔剤、懸濁化剤及び分散剤、湿潤剤又は乳化剤、錯化剤、封鎖剤又はキレート剤、浸透促進剤、凍結保護剤、溶解保護剤（lyoprotectant）、増粘剤、及び不活性ガスが挙げられるが、これらに限定されない。

【0033】

化粧料組成物又は医薬組成物は、ＰｏｗｄｅｒＴｅｃｔ（Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐ．，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ）及びＢｉｏｊｅｃｔ（Ｂｉｏｊｅｃｔ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｔｕａｌａｔｉｎ，ＯＲ）等、エレクトロポレーション、イオントフォレシス、フォノフォレシス、ソノフォレシス、マイクロニードル、又は無針注射によって、局所投与することもできる。

【0034】

本明細書で提供される化粧料組成物又は医薬組成物は、軟膏、クリーム、及びゲルの形態で提供することができる。好適な軟膏ビヒクルとしては、豚脂、安息香豚脂（benzoinated lard）、白色ワセリン、オリーブ油、綿実油、及び他の油を含む、油性又は炭化水素ビヒクル；親水ワセリン、ヒドロキシステアリンサルフェート（hydroxystearin sulfate）、及び脱水ラノリン等の乳化性又は吸収性ビヒクル；親水性軟膏等の、水で除去可能なビヒクル；様々な分子量のポリエチレングリコールを含む水溶性軟膏ビヒクル；セチルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ラノリン、及びステアリン酸を含む、エマルジョンビヒクル、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルジョン又は水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョンのいずれもが挙げられる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃ参照）。これらのビヒクルは皮膚軟化剤であるが、概して抗酸化剤及び防腐剤の添加を必要とする。

【0035】

好適なクリーム基剤は、水中油型又は油中水型であり得る。好適なクリームビヒクルは、水洗可能であり得、油相、乳化剤、及び水相を含み得る。油相は「内部」相とも呼ばれ、概してワセリン及びセチルアルコール又はステアリルアルコール等の脂肪アルコールから構成される。水相は、必ずしも必要ではないが、通常、油相よりも体積が多く、概して保水剤を含む。クリーム製剤中の乳化剤は、非イオン性、アニオン性、カチオン性、又は両性界面活性剤であってもよい。

【0036】

好適なゲルは、半固体の懸濁液タイプの系であってもよい。単相ゲルは、液体担体全体に実質的に均一に分布した有機高分子を含有する。好適なゲル化剤としては、カルボマー、カルボキシポリアルキレン、及びカーボポール等の架橋アクリル酸ポリマー；ポリエチレンオキシド、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマー、及びポリビニルアルコール等の親水性ポリマー；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、及びメチルセルロース等のセルロースポリマー；トラガント及びキサンタンガム等のゴム；アルギン酸ナトリウム；並びにゼラチンが挙げられるが、これらに限定されない。均一なゲルを調製するために、アルコール又はグリセリンなどの分散剤を添加することができ、又はゲル化剤を粉砕、機械的混合、及び／若しくは撹拌によって分散させることができる。

【実施例】

【0037】

本開示の例示的な実施形態を以下の実施例において更に説明するが、これらは、本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

【0038】

全般に、本明細書で使用される命名法及び本開示において利用される実験手順は、分子技術、生化学技術、及び組換えＤＮＡ技術を含む。このような技術は、文献において十分に説明されている。例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」，Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ ＡｕｓｕｂｅｌＲ．Ｍ．，ｅｄ．（１９９４）；「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ」，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｂｉｒｒｅｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ）「Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．，ｅｄ．（１９９４）；「Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ－Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」，Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９４），Ｔｈｉｒｄ Ｅｄ．；「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」，Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｓ．Ｊ．，ｅｄｓ．（１９８４）；「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」，Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．，ｅｄ．（１９８６）；「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ」，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）；「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」，Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．，（１９８４）ａｎｄ「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」，Ｖｏｌ．１－３１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；「ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）；Ｍａｒｓｈａｋ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ」，ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）を参照されたく、これらの全てが参照により、本明細書に完全に記載されている場合と同様に組み込まれる。他の一般的な参考文献は、本開示を通して提供される。一般的な文献中の手順は、当該技術分野において周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。文献中に含まれる全ての情報は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0039】

材料及び方法
マウス
Ｋ１４－Ｃｒ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウス、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウス、及びケラチノサイトにおけるＣＫ１αを欠損したＭｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウス（ＣＫ１α^－／－Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}）は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒ（ＮＬＡＣ）（Ｔａｉｎａｎ，Ｔａｉｗａｎ）で共同で作製され、野生型Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスもＮＬＡＣから購入された。実験及び飼育は、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｔｚｕ Ｃｈｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｈｕａｌｉｅｎ，Ｔａｉｗａｎ）で行われ、法的及び倫理的基準に従ってＡｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの承認を得た。雄及び雌マウスの両方を使用した。野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける毛周期は年齢に関連し、４～６週目は成長期、６～７週目は退行期、７～１２週目は休止期である。

【0040】

標的遺伝子の活性化（ＣＫ１α欠損の誘導）
ケラチノサイトにおけるＣＫ１α発現の欠失のために、Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウスを、コーン油（Ｃ８２６７；Ｓｉｇｍａ）に溶解させた１００ｍｇ／ｋｇのタモキシフェン（ＴＭＸ）で腹腔内注射により２回処置し、又は９９．９％アルコール（３２２０５；Ｓｉｇｍａ）に溶解した４－ヒドロキシル－タモキシフェン（４－ＯＨ－ＴＭＸ）（Ｈ６２７８；Ｓｉｇｍａ）で局所的に処置した。５回／週の剃毛の後、３ｍｇ／ｍＬの濃度で２００μＬを背部の皮膚に投与した。

【0041】

ＣＫ１阻害剤（ＣＫＩ）の調製
Ａ５１は、Ｄｒ．Ｙｉｎｏｎ Ｂｅｎ－Ｎｅｒｉａｎの研究所からの寄贈品である（Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌｕｍｅ １７５，Ｉｓｓｕｅ １，２０ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１８，ｐａｇｅｓ １７１－１８５に掲載された）。マウスの皮膚への局所塗布のために、１ｍｇのＣＫＩを６μＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、６０％の白蝋及び４０％のパラフィン油を含む５４μＬのビヒクルと混合した。最終的な使用濃度は０．１ｍｇ／ｃｍ^２である。

【0042】

Ｄ４４７６は、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（＃Ｄ１９４４）から購入した。マウスの皮膚への局所塗布のために、ストックとして４ｍｇのＣＫＩを１ｍＬのＤＭＳＯに溶解した。１０μＬのストックを、６０％の白蝋及び４０％のパラフィン油を含む４０μＬのビヒクルと混合した。最終的な使用濃度は、０．０４ｍｇ／ｃｍ^２である。

【0043】

ＩＣ２６１は、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（＃４００９０）から購入した。マウスの皮膚への局所塗布のために、ストックとして４ｍｇのＣＫＩを１ｍＬのＤＭＳＯに溶解した。１０μＬのストックを、６０％の白蝋及び４０％のパラフィン油を含む４０μＬのビヒクルと混合した。最終的な使用濃度は、０．０４ｍｇ／ｃｍ^２である。

【0044】

局所薬物処置
８週齢のマウスを剃毛して、背部の皮膚の毛を除去し、７５％エタノールで洗浄した。局所ＣＫＩを背部の皮膚に１週間に３回塗布し、組織をＣＫＩの塗布後７日目、１４日目、及び２８日目に採取した。組織を以下に記載する方法により分析した。

【0045】

病理組織診断、免疫組織化学染色、及びフォンタナ・マッソン染色
皮膚サンプルを、記載のタイミングで組織分析のために採取した。パラフィン包埋標本を５μｍの切片に切断した。脱パラフィン（組織スライドをキシレンに３回、各回５分間浸漬する）及び再水和（スライドを以下の段階的な一連のエタノール：１００％、１００％、９５％、９０％、及び７０％中で、各回５分間インキュベートする）の後、スライドを蒸留水で５分間すすいだ。

【0046】

ヘマトキシリン及びエオジン（Ｈ＆Ｅ）染色及びフォンタナ・マッソン染色
フォンタナ・マッソン染色及びＨ＆Ｅ染色は、製造業者による使用説明書に従ってＳｃｙＴｅｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．製のキットを使用することによって行った。

【0047】

簡潔に述べると、フォンタナ・マッソン染色のために、新たに混合したアンモニア銀溶液を５８℃～６０℃の水浴に入れ、平衡化させた。スライドを、加温したアンモニア銀溶液中で３０～６０分間、又は組織切片の色が黄色／褐色になるまでインキュベートし、次いで蒸留水で３～５秒間すすいだ。スライドを、塩化金溶液（０．２％）中で３０秒間インキュベートし、次いで蒸留水で３～５秒間すすいだ。スライドを、チオ硫酸ナトリウム溶液（５％）中で１分間インキュベートし、次いで蒸留水で３～５秒間すすいだ。スライドをヌクレアファストレッド溶液中で５分間インキュベートし、水道流水中で１分間すすぎ、新鮮な無水アルコール（９５％、９５％、１００％、及び１００％）及びキシレンを４回交換して脱水し、Ｈｉｓｔｏｋｉｔｔ（Ａｓｓｉｓｔｅｎｔ）で封入した。

【0048】

Ｈ＆Ｅ染色による病理組織診断のために、皮膚組織を、４℃、１０％中性緩衝ホルマリン中で一晩固定し、次いで７０％エタノールに移した後、処理し、パラフィン包埋した。次いで、パラフィン切片をＨ＆Ｅで染色した。

【0049】

免疫組織化学染色
パラフィン切片を、加湿チャンバー内で、６０℃で１５分間インキュベートした。キシレンを２回交換して、切片を各回５分間脱パラフィンし、１００％エタノールを２回交換して各回５分間、次いで９５％及び８０％エタノールで各回５分間水和し、最後に蒸留水ですすいだ。スライドをクエン酸緩衝液（ＤＡＫＯ；ｐＨ６．０）中で２０分間マイクロ波処理（ｍｉｃｒｏｗａｖｉｎｇ）して抗原賦活化を増強した。内因性ペルオキシダーゼ活性を、メタノール中３％過酸化水素でクエンチした。ブロッキング後、切片をβ－カテニン抗体（１／１００；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で、４℃で一晩インキュベートした。使用した二次抗体は、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）－ポリマー抗マウス抗体（Ｎｉｃｈｉｒｅｉ）であった。３－アミノ－９－エチルカルバゾール（ＡＥＣ）色原体（ＳｃｙＴｅｋ）を検出に使用し、ヘマトキシリンを対比染色として使用した。

【0050】

５－ブロモ－２’－デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）染色
マウスにおける増殖細胞を標識するために、２００μＬのＢｒｄＵ（Ａｍｅｒｓｈａｍ；細胞増殖標識試薬，ＲＰＮ２０１，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の腹腔内注射を実施した。６時間後、パラフィン包埋のために皮膚サンプルを採取した。４μｍのパラフィン包埋切片を上記のように調製し、次いで、標的賦活液緩衝液（ｐＨ６．０）（ＤＡＫＯ、Ｓ１６９９）と共に、水浴中、９５℃～１２０℃で２０分間インキュベートした。染色皿を移して室温にし、スライドを３０℃に放冷し、続いてＰＢＳで１回すすいだ。次いで、スライドを一次抗体ＢｒｄＵ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｂ２３１５１、１：１００）と共に４℃で一晩インキュベートした。スライドをＰＢＳで３回、各回５分間すすいだ。スライドをＥｎＶｉｓｉｏｎ／ＨＲＰ，Ｒａｂｂｉｔ／Ｍｏｕｓｅ（ＥＮＶ）（ＤＡＫＯ、ｋ５００７）と共に３０分間インキュベートし、ＰＢＳで３回、各回５分間すすいだ。その後、スライドをＡＥＣ＋Ｈｉｇｈ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ Ｒｅａｄｙ－ｔｏ－Ｕｓｅ（ＤＡＫＯ、Ｋ３４６１）と共に５分間インキュベートし、流水で５分間洗浄した。その後、スライドをヘマトキシリンで３０秒～１分間対比染色し、流水で１０分間洗浄した。スライドをＡｑｕｅｏｕｓ－Ｍｏｕｎｔ（ＳcｙＴｅｋ、５１９３４）で封入した。

【0051】

ウェスタンブロット
組織を使用する実験のために、組織をホモジナイズし、プロテアーゼ阻害剤（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を含有する１×組織タンパク質抽出試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）中で溶解し、氷上で維持した。細胞を使用する実験のために、細胞ペレットを回収し、プロテアーゼ阻害剤（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を含有する１×放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）溶解緩衝液中で溶解させ、氷上で維持した。製造業者による使用説明書に従ってＰｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｄｙｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用し、マイクロプレートリーダーにより総タンパク質濃度を決定した。サンプルをＳＤＳ－ＰＡＧＥ Ｓａｍｐｌｅ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）に希釈し、９５℃で５分間加熱した。次いで、タンパク質サンプルをＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル（ＴＧＸ ＦａｓｔＣａｓｔアクリルアミド溶液、Ｂｉｏ－Ｒａｄ）上で分離させ、ポリ（フッ化ビニリデン）（ＰＶＤＦ）膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上に転写した。５％ＢＳＡを使用し、次いで、膜を一次抗体と共に４℃で一晩インキュベートした。その後、膜を、Ｔｗｅｅｎ２０を含むトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳＴ）で洗浄し、二次抗体と共に室温で１時間インキュベートした。Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のｉＢｒｉｇｈｔ ＦＬ１０００ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを使用して、シグナルを検出した。

【0052】

抗体
本開示において免疫組織化学染色（ＩＨＣ）及びウェスタンブロット（ＷＢ）において使用した抗体を以下の表１に掲載し、製造業者、カタログ番号、及び使用した希釈比を提示する。

【0053】

【表1】

【0054】

ユーメラニン分析
皮膚サンプルを測定し、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋を含まないＰＢＳ（ｐＨ ７．４）ですすいで、血液を除去した。メラニン含量のアッセイのために、組織をハサミで切り刻み、１０倍体積のＰＢＳ中、２８℃でホモジナイズした。ユーメラニンを化学分析して特異的な分解生成物であるピロール－２，３，５－トリカルボン酸（ＰＴＣＡ）を検出するために、皮膚サンプルを処理した。１ナノグラムのＰＴＣＡは、５０ｎｇのユーメラニンに相当する。ユーメラニン含量の差の統計的有意性は、サイズの等しい群を比較するスチューデントのｔ検定によって決定した。

【0055】

Ｋ１４－ＣｒｅＥＲ－ＣＫ１α；ＲＯＳＡｍＴ／ｍＧマウスの作製
Ｋ１４－ＣｒｅＥＲ－ＣＫ１α；ＲＯＳＡｍＴ／ｍＧマウスは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｔａｉｎａｎ）において、Ｋ１４－ＣｒｅＥＲ－ＣＫ１αマウスとｍＴ／ｍＧマウスとを交配させることによって作製し、ＳＰＦ（specific pathogen free）条件下で維持した。ＣＫ１αを欠損したケラチノサイトの標識のために、本発明者らは、コーン油に溶解させたＴＭＸを１ｍｇ／日の用量で５日間連続して腹腔内注射した。ＴＭＸによってＣＫ１αの欠損が誘導されると、ケラチノサイト上の赤色蛍光（ｔｄＴｏｍａｔｏ；ｍＴ）が緑色蛍光（ＥＧＦＰ；ｍＧ）に変わる。

【0056】

マウスの耳の皮膚の生体内多光子イメージング
本発明者らは、Ｄｒ．Ｐｅｉｌｉｎ Ｃｈｅｎの研究所（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ、 Ｔａｉｐｅｉ、Ｔａｉｗａｎ）でマウスの耳における生体内多光子イメージングを実施した。ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｐｒｏｔ．２０１１．４３８に従って、方法及び手順を修正した。ＥＧＦＲ（緑色蛍光）及びｔｄＴｏｍａｔｏ（ＲＯＳＡ２６）（赤色蛍光）のピーク発光波長は、それぞれ５１０ｎｍ及び５８０ｎｍである。

【0057】

ＳＺ９５細胞培養及びＷＳＴ－１アッセイ
３７℃及び５％ＣＯ２の標準的な細胞培養条件下で、１０％ＦＢＳ及び５ｎｇ／ｍＬ上皮成長因子を添加したＳｅｂｏｍｅｄ基礎培地（Ｓｉｇｍａ）中で、ＳＺ９５細胞（ヒト皮脂腺細胞株）を維持した。

【0058】

ＷＳＴ－１アッセイ ９６ウェルプレートにおいて、密度１．５×１０^４個／ウェルで細胞を播種し、一晩インキュベートする。培地を除去し、各ウェルに様々な量のＩＣ２６１（１ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、５００ｎＭ、１０００ｎＭ）を含有する１００μＬの新鮮培地を添加し、２４時間インキュベートする。１０μＬ／ウェルのＷＳＴ－１を添加し、４時間インキュベートする。ＥＬＩＳＡリーダーによりＯＤ４５０ｎｍ及びＯＤ６５５ｎｍの吸光度を測定する。

【0059】

統計解析
本開示における統計解析は、解析結果を平均±標準偏差として提示する。群間の比較にはスチューデントのｔ検定を適用した。０．０５未満のＰ値を統計的に有意であるとみなした。

【0060】

実施例１：ＣＫ１αの阻害は、毛周期における成長期を誘導する。
様々な手段によって、マウスケラチノサイトにおけるＣＫ１α阻害を行ったところ、全ての手段が、休止期、初期休止期（７週）、及び中期休止期（９週）から毛周期における成長期を誘導することが示された。

【0061】

第１の試験では、７週齢のＫ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}成体マウスを使用し、タモキシフェン（ＴＭＸ）を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射して、ケラチノサイトにおけるＣＫ１α発現の欠損を誘導した。図１Ａは、７週目にマウス背部を剃毛し、剃毛後１日目及び２日目に１００ｍｇ／ｋｇの１日用量でＴＭＸを腹腔内注射した試験デザインを示す。図１Ｂ及び図１Ｃにそれぞれ示されるように、マウス皮膚切片の表現型及び組織標本画像を７週目から１２週目まで毎週記録した。対照マウス（Ｎ＝６）では、マウスの背部の皮膚の毛包が７週目から１２週目まで休止期に維持されることが示された。しかしながら、ＣＫ１αを欠損したマウス（ＣＫ１αＫＯ、Ｎ＝６）では、８週目又は９週目には早くも毛包の初期成長期が現れ、１０週目～１２週目の間には、完全な成長期を継続的に展開した。Ｗｎｔ／β－カテニン経路は、毛包前駆細胞に作用し、休止期－成長期の移行のための近位シグナル（Proximal Signal）として働く。図１Ｄに示されるように、８週目及び９週目では、ＣＫ１αを欠損したマウスの皮膚において、対照マウスと比較して増加したβ－カテニン染色が示された。

【0062】

第２の試験では、９週齢のＫ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}成体マウスを使用し、タモキシフェン（ＴＭＸ）を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射して、ケラチノサイトにおけるＣＫ１α発現の欠損を誘導した。図２Ａは、９週目にマウス背部を剃毛し、剃毛後１日目及び２日目に１００ｍｇ／ｋｇの１日用量でＴＭＸを腹腔内注射した試験デザインを示す。それぞれ図２Ｂに示すように、マウスの表現型を９週目から１６週目まで記録した。対照マウス（Ｎ＝３）では、マウスの背部の皮膚の毛包が９週目から１２週目まで休止期に維持され、１３週目に成長期が始まることが示された。１６週目には、対照マウスの背部に目に見える毛が観察された。対照的に、ＣＫ１αを欠損したマウス（ＣＫ１αＫＯ、Ｎ＝３）では、１０週目と１１週目との間に毛包の初期成長期が現れ、目に見える毛は１３週目に成長し始めた。ＣＫ１αを欠損したマウスの背部は、１６週目には毛で完全に覆われた。図２Ｃは、Ｈ＆Ｅ染色したマウス皮膚切片の組織標本画像を示す。９週目のＴＭＸの腹腔内注射による誘導前には、正常マウス及びＣＫ１αＫＯマウスの両方が休止期の毛包を示した。そして、対照マウスでは９週目から１１週目又は１２週目まで休止期が続き、１３週目に成長期が始まり、１６週目には完全に成長期に達した（fully developed）。一方、ＣＫ１αＫＯマウスでは、１０週目に成長期が始まり、１１週目から１６週目の間、毛の成長が継続した。すなわち、休止期中のケラチノサイトにおけるＣＫ１α阻害は、毛周期の成長期を誘導し、及び早期に開始する。図２Ｄは、β－カテニンの免疫組織化学染色の結果を示す。第１の試験と同様に、１０週目では、ＣＫ１αを欠損したマウスの皮膚において、対照マウスと比較して増加したβ－カテニン染色が示された。図２Ｅは、増殖細胞を標識する５－ブロモ－２’－デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の免疫組織化学染色の結果を示す。ＣＫ１αＫＯマウスでは、対照マウスと比較して、毛包のマトリックスにおいて増加した染色が示された。

【0063】

次に、Ｋ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウスの背部の皮膚のケラチノサイトにおけるＣＫ１α欠損の局所的誘導のために、４－ＯＨ－ＴＭＸを使用した。図３Ａに示すように、９週齢のマウスを使用し、９週目に背部の毛を剃った後、剃毛した背部の皮膚に４－ＯＨ－ＴＭＸによる局所的誘導を行った。図３Ｂ及び図３Ｃは、９週目～１３週目に記録された表現型及び組織標本画像を示す。正常マウス（Ｎ＝５）では、９週目から１１週目には休止期が観察され、１３週目に成長期が始まることが認められた。ＣＫ１αを欠損したマウス（Ｎ＝１１）では、１１週目には、組織標本画像において皮膚表面上での膨隆（elevated papules）の形成を伴う成長期が認められ、１３週目に、完全に成長期に達し目に見える毛が認められた。図３Ｄは、β－カテニンの免疫組織化学染色の結果を示す。ＣＫ１αの欠損誘導後の７日目（Ｄ７）及び１４日目（Ｄ１４）となる１０週目（Ｗ１０）及び１１週目（Ｗ１１）の毛芽では、β－カテニンの発現は、ＣＫ１αＫＯマウスにおいて対照マウスと比較して増加を示した。β－カテニン核染色は、表皮の基底層、二次毛芽、及びマトリックスで示され、この染色は、休止期－成長期の移行中のＷｎｔ／β－カテニンシグナルの活性化を示す。

【0064】

更に、野生型マウスへのＣＫ１阻害剤の局所塗布を実施して、マウスの背部の皮膚におけるＣＫ１発現を阻害した。図４Ａに示されるように、８週齢のマウス背部の剃毛した皮膚に、０．１ｍｇ／ｃｍ^２の濃度で局所ＣＫ１阻害剤（例えば、Ａ５１）を２回又は３回投与した。図４Ｂは、９週目という早い時期にＣＫ１阻害剤Ａ５１で局所的に処置されたマウスの背部における発毛の開始を示す。マウスの背部の大部分は１２週目には毛で覆われた。図４Ｃは、背部の皮膚のＨ＆Ｅ染色を示す。対照群では、９週目、１０週目、及び１２週目の間、毛包が休止期のままであることが見出された。しかしながら、８週目に０．２ｍｇのＣＫＩで局所的に処置したマウスでは、９週目に成長期の誘導が観察され、０．３ｍｇのＣＫＩで局所的に処置したマウスでは、９週目に段階がより進行した成長期が誘導され、１２週目には濃く着色した毛幹が観察された。すなわち、ＣＫ１阻害剤の局所塗布は、休止期から毛包の成長期を誘導及び開始することもできる。図４Ｄは、β－カテニンの免疫組織化学染色の結果を示す。ＣＫ１阻害剤の局所塗布は、対照マウスと比較して、毛芽、外毛根鞘、及び表皮におけるβ－カテニンの発現を増加させた。図４Ｅは、フォンタナ・マッソン染色の結果を示す。この染色によると、ＣＫ１阻害剤で処置した皮膚は、発毛に加えて毛包着色を示す。したがって、ＣＫ１阻害剤の局所塗布は、毛包成長及び着色した毛の形成を誘導する。

【0065】

Ｄ４４７６及びＩＣ２６１を含むその他のＣＫ１阻害剤も試験した。図５Ａに示すように、ＣＫ１阻害剤であるＤ４４７６及びＩＣ２６１を、１ｃｍ^２の背部の皮膚当たり０．１２ｍｇの総用量で、８週齢のマウスの剃毛した背部の皮膚に１日おきに週３回局所塗布した。図５Ｂは、Ｄ４４７６又はＩＣ２６１の局所塗布が、毛周期を休止期から成長期へと移行させる結果として、処置されたマウス（Ｎ＝３）の背部の皮膚上で発毛が有意に誘導されることを示す。図５Ｃは、背部の皮膚のＨ＆Ｅ染色を示す。ＣＫ１阻害剤の局所塗布が、毛周期の成長期を誘導することが見出され、及び成長期の特徴を示す毛包の形成が観察された。図５Ｄは、β－カテニンの免疫組織化学染色の結果を示す。ＣＫ１阻害剤であるＤ４４７６及びＩＣ２６１の局所塗布は、毛包のマトリックス中のβ－カテニンの発現も増加させた。図５Ｅは、毛包成長及び着色した毛の形成を誘導するＤ４４７６及びＩＣ２６１などの更なるＣＫ１阻害剤の局所塗布についてのフォンタナ・マッソン染色の結果を示す。

【0066】

実施例２：ＣＫ１αの阻害は、毛周期における成長期を延長する。
ケラチノサイトの成長期中にＣＫ１αを欠損させると、毛周期における成長期の期間が増加することが見出された。図６Ａに示されるように、４週齢のＫ１４－Ｃｒｅ－ＥＲＴ２－ＣＫ１α^{ｆｌ／ｆｌ}マウスの背部の皮膚のケラチノサイトにおけるＣＫ１α欠損の局所的誘導のために、４－ＯＨ－ＴＭＸを使用した。表現型を４週目から８週目まで記録した。図６Ｂに示すように、対照マウス（Ｎ＝６）では、４週目から５週目まで成長期が続き、６週目に退行期となり、７週目から８週目までは休止期を維持することが分かった。Ｃｋ１α欠損マウス（Ｎ＝６）では、６～８週目に毛が現れ、剃毛した背部の皮膚を覆い始め、成長期が延長されたことを示した。図６Ｃは、８週目のマウスのＨ＆Ｅ染色及びβ－カテニン染色を示す。対照マウスは８週目には休止期にあったが、ＣＫ１αを欠損したマウスでは、８週目にも毛包のマトリックスにおけるβ－カテニン染色が増強されており、依然として成長期にあることが見出された。

【0067】

実施例３：ＣＫ１の阻害は毛の着色を増加させる。
ケラチノサイトにおけるＣＫ１の阻害は、毛の着色も増加させることが見出された。毛周期が休止期中である８週目に、マウスの剃毛した背部皮膚に、Ａ５１、Ｄ４４７６、及びＩＣ２６１を含むＣＫ１阻害剤を局所塗布した。次に、マッソン・フォンタナ染色を行い、毛の着色を評価した。図４Ｅに示すように、Ａ５１で局所的に処置したマウスの毛において、また、図５Ｅに示すように、Ｄ４４７６及びＩＣ２６１で局所的に処置したマウスの毛においても、濃く着色した毛包及び毛幹が見出された。

【0068】

野生型マウス（黒色Ｃ５７ＢＬ／６）に加えて、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスも動物モデルとして使用したところ、ＣＫ１の阻害による毛の着色の増加を示した。１２アミノ酸のフレーム外変異をもたらすＭｃ１ｒの５４９位の単一ヌクレオチドの欠失を有するＭｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスが、Ｍｏｕｎｔｊｏｙ、Ｒｏｂｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．１９９２によって報告されている。Ｍｃ１ｒ遺伝子の５４９位に単一ヌクレオチドの欠失を有するＣ５７ＢＬ／６Ｊ－Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系によって以前に作製された。図７Ａの写真に示すように、この欠失は、フレームシフト変異を引き起こし、Ｍｃ１ｒタンパク質の機能の喪失をもたらし、メラノサイトによるフェオメラニンに限った合成及びユーメラニンの合成失敗により、マウスの被毛色を黄色にする。次いで、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスをＫ１４－ＣｒｅＥＲ－ＣＫ１α^ｆ／ｆマウスと交配させて、ケラチノサイトにおいてＣＫ１αを欠損するように誘導することができるＫ１４－ＣｒｅＥＲ－ＣＫ１α^ｆ／ｆ；Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスを作製した。図７Ｂに示すように、７週齢のマウスに、１００ｍｇ／ｋｇのタモキシフェンを、１日目、２日目、５日目、６日目、８日目、及び９日目の合計６回腹腔内注射し、誘導を行った。分析のために、１４日目、２８日目、４２日目、及び５６日目に皮膚サンプルを採取した。図７Ｃに示されるように、ＣＫ１α欠損したＭｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスのケラチノサイトでは、２８日目に、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスと比較して毛の着色の増加が認められた。図７Ｄに示される解剖顕微鏡の結果は、ＣＫ１α欠損したＭｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスのケラチノサイトでは、１４日目及び２８日目に、Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスと比較して毛幹の着色が増加していることに関して、より接近した、より明確な視野を提示する。図７Ｅは、皮膚サンプルのフォンタナ・マッソン染色を示す。ＣＫ１α欠損したＭｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスのケラチノサイトにおける経時的分析により、マトリックス及び内毛根鞘においてユーメラニンの強度が増加していたことが示されたが、この増加はＭｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスでは観察されない。図７Ｆは、図７Ｅにおけるフォンタナ・マッソン染色によって染色された細胞の測定数を示す。図７Ｇ及び図７Ｈは、ウェスタンブロットの結果及び対応する定量化した発現レベルを示す。β－カテニン及びｐ５３の安定化、並びにＫｉｔＬ、ｃ－Ｋｉｔ、ＭＩＴＦ及びチロシナーゼのアップレギュレーションを明らかにする。ＫｉｔＬ／Ｃ－Ｋｉｔ経路は、毛の着色をアップレギュレーションされた。図７Ｉは、１４日目及び２８日目のＭｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスとＣＫ１α^－／－；Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスの背部の皮膚を比較するユーメラニン分析を示す。パネルａはユーメラニン分析の実験計画を示す。Ｍｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスのＣＫ１αを欠損させるためのタモキシフェンの腹腔内注射。誘導後１４日目及び２８日目に、比較する対照とＣＫ１αノックアウトの背部の皮膚を採取した。パネルｂに示されるように、データは、ＣＫ１αノックアウト後のＭｃ１ｒ^{５４９ｄｅｌ}マウスにおけるユーメラニン産生の増加を示す。マウスの背部の皮膚上のユーメラニンは主に毛包に存在することから、毛のある皮膚におけるＣＫ１α阻害が毛の色素を増加させ得ることを示している。

【0069】

実施例４：皮脂腺及び皮脂腺細胞に対するＣＫ１阻害の効果
図８Ａに示すように、Ｋ１４－ＣｒｅＥＲ－ＣＫ１α；ＲＯＳＡｍＴ／ｍＧのマウスの耳の皮膚における生体内多光子イメージングである。誘導前、皮脂腺（ＳＧ）及び毛包（ＨＦ）のケラチノサイトは赤色蛍光を示す。誘導後、ＣＫ１αを欠損したケラチノサイトは緑色蛍光を示す。３日目に、皮脂腺のＫ１４^＋基底層は緑色蛍光を示した。基底層は、誘導されたＨＦ伸長中１７日目まで増殖し、緑色蛍光を伴うＳＧに分化することができる。ＳＧ及びＨＦにおけるＣＫ１αの阻害中、ＳＧの大きさは減少したが、ＨＦの増殖は増強されたことで、ＣＫ１α阻害が、ＳＧの大きさを調節し、毛嚢脂腺単位における多能性幹細胞の運命特定に関与し得ることが示されている。図８Ｂに示すように、ＳＺ９５（ヒト皮脂腺細胞株）をＩＣ２６１で２４時間処理した。細胞数は１．５×１０^４個／ウェルであり、ＩＣ５０は約４７５．６ｎＭである。図８Ｃに示すように、ＳＺ９５細胞培養物は、様々な分化段階の脂腺細胞を提示した。ＰＰＡＲγは、脂腺細胞における脂質生成についての代表的なバイオマーカーであり、ｃ－Ｍｙｃは、未分化脂腺細胞についてのバイオマーカーである。まとめると、ＩＣ２６１処理は、ＰＰＡＲγの減少及びｃ－Ｍｙｃの増加を誘導し、ＩＣ２６１処理による、脂腺細胞における脂質生成又は分化の阻害に対するその効果を示す。図８Ｄに示されるように、ＬＣ３Ｂはオートファジーについてのマーカーである。全体として、ＳＺ９５細胞に対するＩＣ２６１処理は、用量依存的にＬＣ３Ｂ増加を誘導した。この増加は、ＩＣ２６１が脂腺細胞においてオートファジーを誘導することを示す。

【0070】

本開示は、その実施形態と共に説明されており、本開示の範囲から逸脱することなく、様々な修正が本開示の実施形態に従うことが理解される。したがって、説明される実施形態は、本開示を限定するのではなく、本開示の範囲内の修正を包含することが意図される。したがって、特許請求の範囲は、全てのそのような修正を包含するように最も広い解釈を与えられるべきである。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図4F】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図5E】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図7F】

【図7G】

【図7H】

【図7I】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【手続補正書】

【提出日】2024-03-11

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

カゼインキナーゼ１阻害剤を含む、発毛増強のために使用される組成物であって、
前記カゼインキナーゼ１阻害剤が、Ｄ４４７６、ＩＣ２６１、ＣＫＩ７、以下の一般式Ｉによって表される化合物：

【化1】

（式中、
Ｒ _１ 及びＲ _２ は、それぞれ独立して、Ｈ、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルコキシ、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアシル、炭素数５～１５のアリール、及び炭素数３～７のヘテロアリールからなる群から選択され、それぞれが、ハライド、ヒドロキシル、エステル、エーテル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、及びアミドの少なくとも１つによって任意に置換され；又は、Ｒ _１ 及びＲ _２ は、それらが結合している窒素原子と共に、４～７員の飽和環、不飽和環、又は芳香族環を形成し、これらの環は、Ｎ、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｏ、及びＳＯ _２ の少なくとも１つを任意に含み、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルキル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ヒドロキシル、ハライド、及びシアノの少なくとも１つで任意に置換され；
Ｒ _３ 及びＲ _４ は、それぞれ独立して、Ｈ；ハライド、ヒドロキシル、アルコキシ、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、エステル、及びアミドの少なくとも１つによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキルからなる群から選択され；又は
Ｒ _１ 若しくはＲ _２ は、Ｒ _３ 、並びにそれらがそれぞれ結合している炭素及び窒素原子と共に、４～７員の飽和環、不飽和環、又は芳香族環を形成し、これらの環は、Ｎ、ＮＨ、Ｏ、Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｏ、及びＳＯ _２ の少なくとも１つを任意に含み、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルキル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ヒドロキシル、カルボニル、及びハライドの少なくとも１つで任意に置換され；
Ｒ _５ 及びＲ _８ は、それぞれ独立して、Ｈ、ハライド、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、及び少なくとも１つのハライドによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニルからなる群から選択され；
Ｒ _６ は、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニル、炭素数５～１０のシクロアルキル、及び直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、炭素数３～７のシクロアルキル、４～６員複素環、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、及び炭素数１～５のアルキルハライドの少なくとも１つによって任意に置換される飽和又は不飽和４～６員複素環から選択され；
Ｒ _７ は、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、及び炭素数３～７のシクロアルキル、４～６員複素環、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、及び炭素数１～５のアルキルハライドの少なくとも１つによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニルからなる群から選択される）、
式ＩＩ～ＶＩＩによって表される化合物：

【化2】

からなる群から選択され、
それを必要とする対象の皮膚領域に局所投与される、組成物。

【請求項2】

前記対象が脱毛又は脱毛症に罹患している、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記脱毛が、栄養欠乏によって引き起こされる脱毛、薬剤性脱毛、放射線誘導性脱毛、ストレス性脱毛、遺伝性脱毛、加齢性脱毛、又は疾患性脱毛であり、
前記脱毛症が、アンドロゲン性脱毛症、円形脱毛症、成長期脱毛症、外傷性脱毛症、休止期脱毛症、及び瘢痕性脱毛症からなる群から選択される、請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

前記薬剤性脱毛が、化学療法薬、リチウム、ヒ素、ビスマス、ホウ酸、タリウム、コルヒチン、レチノイド、ヘパリン、ワルファリン、β遮断薬、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ホルモン、バルプロ酸、カルバマゼピン、フェニトイン、シメチジン、抗甲状腺薬、コレステロール低下薬、インターフェロン、抗感染症薬、アンフェタミン、抗うつ薬、抗真菌剤、抗発作剤、避妊薬、ビタミンＡ系薬剤、パーキンソン病用薬剤、胃の薬、又は非ステロイド性抗炎症薬によって誘導され、
前記疾患性脱毛が、自己免疫疾患、甲状腺疾患、メタボリックシンドローム、感染症、又はがんによって引き起こされる、請求項３に記載の組成物。

【請求項5】

前記自己免疫疾患が、円形脱毛症、エリテマトーデス、乾燥症候群、強皮症、クローン病、炎症性腸疾患、又は乾癬である、請求項４に記載の組成物。

【請求項6】

前記カゼインキナーゼ１阻害剤が、皮膚領域における毛包周期を調節する、請求項５に記載の組成物。

【請求項7】

カゼインキナーゼ１が、休止期又は成長期中に阻害される、請求項６に記載の組成物。

【請求項8】

前記調節することが、前記毛包周期を成長期に誘導することであり、
前記カゼインキナーゼ１の阻害前に、前記毛包周期が休止期にある、請求項７に記載の組成物。

【請求項9】

前記調節することが、毛包の成長期を延長することであり、
前記カゼインキナーゼ１の阻害前に、前記毛包が成長期にある、請求項７に記載の組成物。

【請求項10】

カゼインキナーゼ１阻害剤を含む、毛髪着色増加のために使用される組成物であって、
前記カゼインキナーゼ１阻害剤が、Ｄ４４７６、ＩＣ２６１、ＣＫＩ７、以下の一般式Ｉによって表される化合物：

【化1】

（式中、
Ｒ _１ 及びＲ _２ は、それぞれ独立して、Ｈ、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルコキシ、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアシル、炭素数５～１５のアリール、及び炭素数３～７のヘテロアリールからなる群から選択され、それぞれが、ハライド、ヒドロキシル、エステル、エーテル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、及びアミドの少なくとも１つによって任意に置換され；又は、Ｒ _１ 及びＲ _２ は、それらが結合している窒素原子と共に、４～７員の飽和環、不飽和環、又は芳香族環を形成し、これらの環は、Ｎ、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｏ、及びＳＯ _２ の少なくとも１つを任意に含み、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルキル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ヒドロキシル、ハライド、及びシアノの少なくとも１つで任意に置換され；
Ｒ _３ 及びＲ _４ は、それぞれ独立して、Ｈ；ハライド、ヒドロキシル、アルコキシ、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、エステル、及びアミドの少なくとも１つによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキルからなる群から選択され；又は
Ｒ _１ 若しくはＲ _２ は、Ｒ _３ 、並びにそれらがそれぞれ結合している炭素及び窒素原子と共に、４～７員の飽和環、不飽和環、又は芳香族環を形成し、これらの環は、Ｎ、ＮＨ、Ｏ、Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｏ、及びＳＯ _２ の少なくとも１つを任意に含み、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルキル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ヒドロキシル、カルボニル、及びハライドの少なくとも１つで任意に置換され；
Ｒ _５ 及びＲ _８ は、それぞれ独立して、Ｈ、ハライド、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、及び少なくとも１つのハライドによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニルからなる群から選択され；
Ｒ _６ は、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニル、炭素数５～１０のシクロアルキル、及び直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、炭素数３～７のシクロアルキル、４～６員複素環、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、及び炭素数１～５のアルキルハライドの少なくとも１つによって任意に置換される飽和又は不飽和４～６員複素環から選択され；
Ｒ _７ は、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、及び炭素数３～７のシクロアルキル、４～６員複素環、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、及び炭素数１～５のアルキルハライドの少なくとも１つによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニルからなる群から選択される）、
式ＩＩ～ＶＩＩによって表される化合物：

【化2】

からなる群から選択され、
それを必要とする対象の皮膚領域に局所投与される、組成物。

【請求項11】

前記皮膚領域が、白髪を含む、請求項１０に記載の組成物。

【請求項12】

カゼインキナーゼ１阻害剤を含む、皮脂腺を調節するために使用される組成物であって、
前記カゼインキナーゼ１阻害剤が、Ｄ４４７６、ＩＣ２６１、ＣＫＩ７、以下の一般式Ｉによって表される化合物：

【化1】

（式中、
Ｒ _１ 及びＲ _２ は、それぞれ独立して、Ｈ、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルコキシ、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアシル、炭素数５～１５のアリール、及び炭素数３～７のヘテロアリールからなる群から選択され、それぞれが、ハライド、ヒドロキシル、エステル、エーテル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、及びアミドの少なくとも１つによって任意に置換され；又は、Ｒ _１ 及びＲ _２ は、それらが結合している窒素原子と共に、４～７員の飽和環、不飽和環、又は芳香族環を形成し、これらの環は、Ｎ、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｏ、及びＳＯ _２ の少なくとも１つを任意に含み、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルキル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ヒドロキシル、ハライド、及びシアノの少なくとも１つで任意に置換され；
Ｒ _３ 及びＲ _４ は、それぞれ独立して、Ｈ；ハライド、ヒドロキシル、アルコキシ、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、エステル、及びアミドの少なくとも１つによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキルからなる群から選択され；又は
Ｒ _１ 若しくはＲ _２ は、Ｒ _３ 、並びにそれらがそれぞれ結合している炭素及び窒素原子と共に、４～７員の飽和環、不飽和環、又は芳香族環を形成し、これらの環は、Ｎ、ＮＨ、Ｏ、Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｏ、及びＳＯ _２ の少なくとも１つを任意に含み、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～５のアルキル、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ヒドロキシル、カルボニル、及びハライドの少なくとも１つで任意に置換され；
Ｒ _５ 及びＲ _８ は、それぞれ独立して、Ｈ、ハライド、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、及び少なくとも１つのハライドによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニルからなる群から選択され；
Ｒ _６ は、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニル、炭素数５～１０のシクロアルキル、及び直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、炭素数３～７のシクロアルキル、４～６員複素環、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、及び炭素数１～５のアルキルハライドの少なくとも１つによって任意に置換される飽和又は不飽和４～６員複素環から選択され；
Ｒ _７ は、直鎖又は分岐鎖の炭素数１～８のアルキル、直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルケニル、及び炭素数３～７のシクロアルキル、４～６員複素環、炭素数５～１５のアリール、炭素数３～７のヘテロアリール、ハライド、ヒドロキシル、及び炭素数１～５のアルキルハライドの少なくとも１つによって任意に置換される直鎖又は分岐鎖の炭素数２～８のアルキニルからなる群から選択される）、
式ＩＩ～ＶＩＩによって表される化合物：

【化2】

からなる群から選択され、
それを必要とする対象の皮膚領域に局所投与される、組成物。

【請求項13】

前記カゼインキナーゼ１阻害剤が、前記皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１の遺伝子発現を阻害する、請求項１乃至１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

前記皮膚領域におけるカゼインキナーゼ１が、カゼインキナーゼ１αである、請求項１乃至１２のいずれか一項に記載の組成物。

【国際調査報告】