特表 2024-527220 グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有する三重活性体を含む組み合わせ物の治療学的用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-24

(54)【発明の名称】グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有する三重活性体を含む組み合わせ物の治療学的用途

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/16 20060101AFI20240717BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20240717BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240717BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240717BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240717BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240717BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240717BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240717BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20240717BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20240717BHJP

   A61K 31/351 20060101ALI20240717BHJP

   A61K 31/381 20060101ALI20240717BHJP

   A61K 31/7056 20060101ALI20240717BHJP

   A61K 31/7034 20060101ALI20240717BHJP

   A61K 31/7048 20060101ALI20240717BHJP

   A61K 31/382 20060101ALI20240717BHJP

   A61K 31/70 20060101ALI20240717BHJP

   A61K 31/7042 20060101ALI20240717BHJP

   C07K 14/605 20060101ALN20240717BHJP

   C07K 19/00 20060101ALN20240717BHJP

   C07K 16/00 20060101ALN20240717BHJP

【ＦＩ】

A61K38/16

A61P3/00 ZNA

A61P1/16

A61P11/00

A61P43/00 121

A61K45/00

A61K47/68

A61P3/10

A61P3/04

A61P3/06

A61K31/351

A61K31/381

A61K31/7056

A61K31/7034

A61K31/7048

A61K31/382

A61K31/70

A61K31/7042

C07K14/605

C07K19/00

C07K16/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023566569

(86)(22)【出願日】2022-06-30

(85)【翻訳文提出日】2023-10-27

(86)【国際出願番号】 KR2022009449

(87)【国際公開番号】W WO2023277620

(87)【国際公開日】2023-01-05

(31)【優先権主張番号】10-2021-0086014

(32)【優先日】2021-06-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】515022445

【氏名又は名称】ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100094569

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 伸一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100103610

【弁理士】

【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦

(74)【代理人】

【識別番号】100109070

【弁理士】

【氏名又は名称】須田 洋之

(74)【代理人】

【識別番号】100119013

【弁理士】

【氏名又は名称】山崎 一夫

(74)【代理人】

【識別番号】100123777

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 さつき

(74)【代理人】

【識別番号】100111796

【弁理士】

【氏名又は名称】服部 博信

(74)【代理人】

【識別番号】100123766

【弁理士】

【氏名又は名称】松田 七重

(72)【発明者】

【氏名】イ ジョンソク

(72)【発明者】

【氏名】キム ヨハン

(72)【発明者】

【氏名】キム ジョングク

(72)【発明者】

【氏名】イ サンヒョン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC15

4C076CC16

4C076CC21

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF36

4C084AA02

4C084AA19

4C084BA01

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA59

4C084ZA70

4C084ZA75

4C084ZC21

4C084ZC33

4C084ZC35

4C084ZC75

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA07

4C086BB01

4C086BB02

4C086BB03

4C086EA08

4C086EA11

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZA59

4C086ZA70

4C086ZA75

4C086ZC21

4C086ZC33

4C086ZC35

4C086ZC75

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA18

4H045BA19

4H045BA41

4H045BA57

4H045CA40

4H045DA30

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA45

(57)【要約】

本発明は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を含む組み合わせ物の用途に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

薬学的有効量の配列番号１～１０２のいずれか一つのアミノ酸配列を含むペプチド；及び
薬学的に許容される賦形剤を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療用薬学的組成物であって、
前記薬学的組成物は、ＳＧＬＴ－２（ｓｏｄｉｕｍ－ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ２）抑制剤と併用されることを特徴とする組成物。

【請求項2】

前記ペプチドは持続型結合体の形態であり、前記持続型結合体は、下記化学式（１）で示される、請求項１に記載の組成物：

【化1】

ただし、この時、Ｘは、前記配列番号１～１０２のいずれか一つのアミノ酸配列を含むペプチドであり；
Ｌは、エチレングリコール繰り返し単位を含有するリンカーであり、
Ｆは、免疫グロブリンＦｃ領域であり、
－は、ＸとＬとの間、ＬとＦとの間の共有結合連結を示す。

【請求項3】

前記代謝症候群は、糖尿病、肥満、高脂血症及び異常脂質血症からなる群から選択されるいずれか一つ以上である、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項4】

前記ＳＧＬＴ－２抑制剤は、エンパグリフロジン、ダパグリフロジン、カナグリフロジン、レモグリフロジン、エタボン酸レモグリフロジン、セルグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン、ルセオグリフロジン、ソタグリフロジン、ベキサグリフロジン、アチグリフロジン及びエルツグリフロジンで構成された群から選択されるいずれか一つ以上である、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項5】

前記組成物は、体重減少及び／又は血糖降下の効果を有するものである、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項6】

前記組成物は、過体重または肥満の糖尿病患者に投与されるものである、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項7】

前記ペプチドは、配列番号２１、２２、４２、４３、５０、７７、及び９６のいずれか一つのアミノ酸配列を含むものである、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項8】

前記ペプチドは、Ｃ末端がアミド化したものである、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項9】

前記ペプチドは、アミノ酸残基の間に環が形成されたものである、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項10】

前記免疫グロブリンＦｃ領域は、非グリコシル化されたものである、請求項２に記載の組成物。

【請求項11】

前記免疫グロブリンＦｃ領域は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域である、請求項２に記載の組成物。

【請求項12】

前記免疫グロブリンＦｃ領域は、二つのポリペプチド鎖からなる二量体であり、Ｌの一方の末端が前記二つのポリペプチド鎖中の一つのポリペプチド鎖のみに連結されている、請求項２に記載の組成物。

【請求項13】

前記結合体は、Ｌの一方の末端がＦのアミノ基またはチオール基と、Ｌの他方の末端がＸのアミノ基またはチオール基にそれぞれ反応して形成された共有結合でＦ及びＸにそれぞれ連結されている、請求項２に記載の組成物。

【請求項14】

前記Ｌは、ポリエチレングリコールである、請求項２に記載の組成物。

【請求項15】

前記Ｌ内のエチレングリコール繰り返し単位の部分の化学式量は１～１００ｋＤａの範囲にある、請求項２に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチドを含む組み合わせ物；または上記ペプチド及びＳＧＬＴ－２抑制剤を含む組み合わせ物の用途に関する。

【背景技術】

【0002】

グルカゴンは、薬物治療、疾病、ホルモンまたは酵素欠乏などのような多様な原因により血糖が低下すると、膵臓から生産されて分泌される。分泌されたグルカゴンは肝臓に作用し、グリコーゲンを分解してブドウ糖を放出するように誘導し、結局、血糖水準を正常レベルまで高める役割をすることが知られている。このようなグルカゴンは、グルカゴン受容体に作用することにより活性を示す。

【0003】

また、ＧＬＰ－１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１）及びＧＩＰ（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｏｎｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）は、代表的な胃腸ホルモンで、神経ホルモンであり、食物摂取に伴う血中糖成分の調節に関与する物質として知られている。

【0004】

最近、効能の増大や副作用の改善などのために、グルカゴン受容体に作用しながら、同時にグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１，ＧＬＰ－１）及びＧＩＰ（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）受容体にも作用できる物質の必要性が台頭し、本発明者らは、グルカゴン、ＧＬＰ－１、及びＧＩＰ受容体に作用できるペプチド及びその結合体を開発した（ＷＯ２０１７－１１６２０４；ＷＯ２０１７－１１６２０５）。

【0005】

糖尿病は、インスリンの分泌量が不足したり、正常な機能が行われない代謝疾患の一種で、血中ブドウ糖の濃度が高まる高血糖を特徴とし、高血糖により様々な症状及び兆候を起こし、尿からブドウ糖を排出する疾患である。

【0006】

このような糖尿病の主な原因の一つとして過体重または肥満が挙げられるが、肥満は、インスリン抵抗性の増加とインスリン分泌の減少を誘発し、糖尿病発病の要因になることが知られている。このような糖尿病と肥満の関連性は、アディポカイン（ａｄｉｐｏｋｉｎｅｓ）と遊離脂肪酸（ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ）の不規則的な分泌によって脂肪酸がベータ細胞や腎臓、肝臓、心臓などインスリン敏感性組織内に蓄積して脂肪毒性（ｌｉｐｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）を示すためである。

【0007】

特に、肥満は、それ自体でも代謝疾患の一つであるが、糖尿病患者の糖尿病合併症を誘発しうることが知られており、糖尿病の原因になるだけでなく、糖尿病患者の予後を深刻にする要因として知られている。肥満を伴う糖尿病患者では、脳卒中、血管合併症、心臓麻痺、糖尿病性網膜病症、腎機能障害、慢性腎疾患、神経障害、糖尿病性足部潰瘍、そして心血管系疾患のリスクが高まるため、糖尿病患者の効果的な治療のためには、体重の調節も求められる。

【0008】

現在の糖尿病の主な治療方法としては、インスリン、インスリン分泌促進剤、インスリン感受性改善剤、そして血糖降下剤などの薬物による血糖調節に依存している。

【0009】

普遍的な糖尿病治療剤であるインスリンは、経口血糖降下剤の治療にもかかわらず、血糖コントロールの目標に到達できなかったり、高血糖がひどい場合に処方される。ただし、その副作用として低血糖、体重増加などの副作用があることが知られている。

【0010】

血糖降下剤の一つであるＳＧＬＴ－２（Ｓｏｄｉｕｍ－Ｇｌｕｃｏｓｅ Ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ２）抑制剤系列の薬物は、主に、第２型糖尿病患者の血糖調節に用いられる経口用糖尿病治療剤であり、糖尿病患者で発現が増加したＳＧＬＴ－２を抑制することにより腎臓のブドウ糖再吸収を抑制し、ブドウ糖を排出させて血糖降下の効果を得ることが知られている。特に、ブドウ糖を標的に作用してインスリンとは独立して作用できるため、ベータ細胞機能やインスリン抵抗にも関係なく処方できる利点がある。

【0011】

また、糖尿病の治療には、インスリン依存度を下げ、低血糖リスクを下げ、体重増加のような副作用を抑制しようとする目的で種々の薬物を共に投与する併用治療法も多用されている。

【0012】

糖尿病の治療には、血糖調節だけでなく、体重調節が必要であるにも関わらず、糖尿病患者は、適正量の食事量を摂取することが治療のために求められ、食事療法や運動治療法を通じた体重減少が困難なだけでなく、大抵インスリン治療剤をはじめとする糖尿病治療剤の投与によりインスリン調節過程で脂肪形成が促進されて肥満を誘発したり、または血糖が調節されると、尿から栄養分が抜け出る症状が改善されて体重が増加する現象を示す。

【0013】

これに対し、糖尿病患者において血糖減少だけでなく、体重の減少効果も得ることができると、糖尿病治療のための根本的で効果的な治療方法になることが期待される。また、肥満患者も糖尿病を伴う場合が多数であるから、体重の減少及び血糖降下を同時に達成できる治療法は、肥満においても効果的な治療方法になると期待される。

【0014】

これに対し、このような治療方法を開発しようとする努力の一環として２以上の薬物を併用投与して血糖調節及び体重減少の効果を共に得ようとする治療法を開発する努力が続けられているが、まだ確立された治療剤や治療法はないことが現状である。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0015】

【特許文献1】ＷＯ２０１７－１１６２０４

【特許文献2】ＷＯ２０１７－１１６２０５

【特許文献3】国際特許公開第ＷＯ９７／３４６３１号

【特許文献4】国際特許公開第９６／３２４７８号

【0016】

【非特許文献1】Ｐｅａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ（１９８８）［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５］：２４４４

【非特許文献2】Ｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６－２７７

【非特許文献3】Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ、１９７０，Ｊ． Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３－４５３

【非特許文献4】Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２：３８７（１９８４）

【非特許文献5】Ａｔｓｃｈｕｌ，［Ｓ．］［Ｆ．，］［ＥＴ ＡＬ，Ｊ ＭＯＬＥＣ ＢＩＯＬ ２１５］：４０３（１９９０）

【非特許文献6】Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｈｕｇｅ Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ，Ｍａｒｔｉｎ Ｊ．Ｂｉｓｈｏｐ，［ＥＤ．，］Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、１９９４

【非特許文献7】［ＣＡＲＩＬＬＯ ＥＴＡ／。］（１９８８）ＳＩＡＭ Ｊ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ ４８：１０７３

【非特許文献8】Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ． Ｍａｔｈ（１９８１）２：４８２

【非特許文献9】Ｓｃｈｗａｒｔｚ ａｎｄ Ｄａｙｈｏｆｆ，ｅｄｓ．，Ａｔｌａｓ Ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，ｐｐ．３５３－３５８（１９７９）

【非特許文献10】Ｇｒｉｂｓｋｏｖ ｅｔ ａｌ（１９８６）Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：６７４５

【非特許文献11】Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ， Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ， Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７９

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0017】

血糖調節及び体重減少を達成できる治療剤または治療法の開発が求められる。

【課題を解決するための手段】

【0018】

本発明の一つの目的は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチドまたはその結合体を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療用薬学的組成物であって、ＳＧＬＴ－２（ｓｏｄｉｕｍ－ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ２）抑制剤と併用されることを特徴とする薬学的組成物を提供することにある。

【0019】

本発明のもう一つの目的は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を含む組み合わせ物を提供することにある。

【0020】

本発明のもう一つの目的は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療のための薬学的キットを提供することにある。

【0021】

本発明の他の一つの目的は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチドまたはその結合体；またはこれを含む薬学的組成物をＳＧＬＴ－２抑制剤と共にこれを必要とする個体に併用投与する段階を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療方法を提供することにある。

【0022】

本発明の他の一つの目的は、上記組み合わせ物、上記薬学的組成物、または薬学的キットをこれを必要とする個体に投与及び／又は使用する段階を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療方法を提供することにある。

【0023】

本発明のもう一つの目的は、上記組み合わせ物、薬学的組成物、または薬学的キットの代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療用途及び／又は代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療のための薬剤の製造のための用途を提供することにある。

【0024】

本発明の他の一つの目的は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供することにある。

【発明の効果】

【0025】

本発明のグルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチド；またはその結合体をＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与することは、代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療のための効果的な投与治療法として利用され得る。

【図面の簡単な説明】

【0026】

【図1】配列番号４２の持続型結合体をエンパグリフロジンと併用投与して血糖減少及び体重減少の効果を確認した図である。

【図2】配列番号４２の持続型結合体をエンパグリフロジンと併用投与して奏される血糖減少効果をＡＵＣ（ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｃｕｒｖｅ）で数値化して分析した結果を示した図である。

【発明を実施するための形態】

【0027】

本発明を具現する一態様は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチドまたはその結合体を含む組成物である。

【0028】

一つの具体例による組成物として、薬学的有効量のグルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチド；及び薬学的に許容される賦形剤を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療用薬学的組成物であって、上記薬学的組成物は、ＳＧＬＴ－２（ｓｏｄｉｕｍ－ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ２）抑制剤と併用されることを特徴とする。

【0029】

他の具体例による組成物であって、上記グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチドは配列番号１～１０２のいずれか一つのアミノ酸配列を含むペプチドであることを特徴とする。

【0030】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、前記ペプチドは、持続型結合体の形態であり、前記持続型結合体は、下記化学式（１）で表されることを特徴とする：

【0031】

Ｘ－Ｌ－Ｆ・・・（１）

【0032】

ただし、この時、Ｘは、上記配列番号１～１０２のいずれか一つのアミノ酸配列を含むペプチドであり；
Ｌは、エチレングリコール繰り返し単位を含有するリンカーであり、
Ｆは、免疫グロブリンＦｃ領域であり、
－は、ＸとＬとの間、ＬとＦとの間の共有結合連結を示す。

【0033】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、上記代謝症候群は、糖尿病、肥満、高脂血症及び異常脂質血症からなる群から選択されるいずれか一つ以上であることを特徴とする。

【0034】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、上記ＳＧＬＴ－２抑制剤は、エンパグリフロジン、ダパグリフロジン、カナグリフロジン、レモグリフロジン、エタボン酸レモグリフロジン、セルグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン、ルセオグリフロジン、ソタグリフロジン、ベキサグリフロジン、アティグリフロジン及びエルツグリフロジンで構成された群から選択されるいずれか一つ以上であることを特徴とする。

【0035】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、上記組成物は、体重減少及び／又は血糖降下の効果を有することを特徴とする。

【0036】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、上記組成物は、過体重または肥満の肥満患者において血糖降下効果を有することを特徴とする。

【0037】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、上記組成物は、高血糖または糖尿病の肥満患者で血糖降下効果を有することを特徴とする。

【0038】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、上記ペプチドは、配列番号２１、２２、４２、４３、５０、７７、及び９６のいずれか一つのアミノ酸配列を含むことを特徴とする。
前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、上記ペプチドは、Ｃ末端が変形されていないか、アミド化したことを特徴とする。

【0039】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、上記ペプチドは、アミノ酸残基の間に環が形成されたことを特徴とする。

【0040】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、前記免疫グロブリンＦｃ領域は、非グリコシル化されたことを特徴とする。

【0041】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、前記免疫グロブリンＦｃ領域は、（ａ）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメイン；（ｂ）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメイン；（ｃ）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ３ドメイン；（ｄ）ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン；（ｅ）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメイン中の１個または２個以上のドメインと免疫グロブリンヒンジ領域またはヒンジ領域の一部との組合わせ；及び（ｆ）重鎖定常領域の各ドメインと軽鎖定常領域の二量体で構成された群から選択されることを特徴とする。

【0042】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、前記免疫グロブリンＦｃ領域は、ジスルフィド結合を形成できる部位が除去されたり、天然型ＦｃでＮ末端の一部のアミノ酸が除去されたり、天然型ＦｃのＮ末端にメチオニン残基が付加されたり、補体結合部位が除去されたりまたはＡＤＣＣ（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）部位が除去されたことを特徴とする。

【0043】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、前記免疫グロブリンＦｃ領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＭに由来したことを特徴とする。

【0044】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、前記免疫グロブリンＦｃ領域はＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭからなる群から選択される免疫グロブリンに由来した相違する起源を有するドメインのハイブリッドであることを特徴とする。

【0045】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、前記免疫グロブリンＦｃ領域は、二量体形態（ｄｉｍｅｒｉｃ ｆｏｒｍ）であることを特徴とする。

【0046】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、前記免疫グロブリンＦｃ領域は、二つのポリペプチド鎖からなる二量体であり、Ｌの一方の末端が前記二つのポリペプチド鎖中の一つのポリペプチド鎖にのみ連結されていることを特徴とする。

【0047】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、前記免疫グロブリンＦｃ領域は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域であることを特徴とする。

【0048】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、前記免疫グロブリンＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４由来の非グリコシル化されたＦｃ領域であることを特徴とする。

【0049】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、上記結合体は、Ｌの一方の末端がＦのアミノ基またはチオール基と、Ｌの他方の末端がＸのアミノ基またはチオール基にそれぞれ反応して形成された共有結合でＦ及びＸにそれぞれ連結されていることを特徴とする。

【0050】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、上記Ｌは、ポリエチレングリコールであることを特徴とする。

【0051】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、上記Ｌ内のエチレングリコール繰り返し単位の部分の化学式量は１～１００ｋＤａの範囲にあることを特徴とする。

【0052】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、上記組成物は、肥満を有する個体において体重減少の効果を有することを特徴とする。

【0053】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、前記エチレングリコール繰り返し単位は［ＯＣＨ₂ＣＨ₂］_nであり、ｎは自然数で、前記ペプチド結合体内［ＯＣＨ₂ＣＨ₂］_n部位の平均分子量、例えば、数平均分子量が１～１００ｋＤａになるように定められることを特徴とする。

【0054】

前述した具体例のいずれか一つによる組成物として、前記ｎの値は、前記ペプチド結合体内［ＯＣＨ₂ＣＨ₂］_n部位の平均分子量、例えば、数平均分子量が１０ｋＤａになるように定められることを特徴とする。

【0055】

本発明の他の一態様は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を含む組み合わせ物である。

【0056】

本発明の他の一態様は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療のための薬学的キットである。

【0057】

一つの具体例として、上記代謝症候群は、糖尿病、肥満、高脂血症及び異常脂質血症からなる群から選択されるいずれか一つ以上である薬学的キットである。本発明のもう一つの態様は、上記組み合わせ物、上記薬学的組成物、または薬学的キットをこれを必要とする個体に投与及び／又は使用する段階を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療方法である。

【0058】

一つの具体例として、上記代謝症候群は、糖尿病、肥満、高脂血症及び異常脂質血症からなる群から選択されるいずれか一つ以上の方法である。

【0059】

本発明のもう一つの態様は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチドまたはその結合体；またはこれを含む薬学的組成物をＳＧＬＴ－２抑制剤と共にこれを必要とする個体に併用投与する段階を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療方法である。

【0060】

一つの具体例として、上記代謝症候群は、糖尿病、肥満、高脂血症及び異常脂質血症からなる群から選択されるいずれか一つ以上の方法である。

【0061】

本発明のもう一つの形態は、上記組み合わせ物、薬学的組成物、または薬学的キットの代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療用途及び／又は代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療のための薬剤の製造のための用途である。

【0062】

一つの具体例として、上記代謝症候群は、糖尿病、肥満、高脂血症及び異常脂質血症からなる群から選択されるいずれか一つ以上の用途である。

【0063】

本発明のもう一つの態様は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療用薬学的組成物である。

【0064】

一つの具体例として、上記代謝症候群は、糖尿病、肥満、高脂血症及び異常脂質血症からなる群から選択されるいずれか一つ以上の組成物である。

【0065】

以下では、本発明をより詳細に説明する。

【0066】

一方、本願で開示されるそれぞれの説明及び実施形態は、それぞれの異なる説明及び実施形態にも適用され得る。即ち、本願で開示された多様な要素の全ての組合わせが本発明の範疇に属する。また、下記の具体的な記述により本発明の範疇が制限されるとは見られない。

【0067】

本明細書全体を通して、天然に存在するアミノ酸に対する通常の１文字及び３文字コードが用いられるだけでなく、Ａｉｂ（２－アミノイソブチル酸、２－ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）、Ｓａｒ（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）、α－メチルグルタミン酸（α－ｍｅｔｈｙｌ－ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ）などの他のアミノ酸に対して一般に許容される３文字コードが用いられる。また、本明細書において略語で言及したアミノ酸は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ命名法に従って記載したものである。

【0068】

アラニンＡｌａ、Ａ アルギニンＡｒｇ、Ｒ
アスパラギンＡｓｎ、Ｎ アスパラギン酸Ａｓｐ、Ｄ
システインＣｙｓ、Ｃ グルタミン酸Ｇｌｕ、Ｅ
グルタミンＧｌｎ、Ｑ グリシンＧｌｙ、Ｇ
ヒスチジンＨｉｓ、Ｈ イソロイシンＩｌｅ、Ｉ
ロイシンＬｅｕ、Ｌ リシンＬｙｓ、Ｋ
メチオニンＭｅｔ、Ｍ フェニルアラニンＰｈｅ、Ｆ
プロリンＰｒｏ、Ｐ セリンＳｅｒ、Ｓ
トレオニンＴｈｒ、Ｔ トリプトファンＴｒｐ、Ｗ
チロシンＴｙｒ、Ｙ バリンＶａｌ、Ｖ

【0069】

本明細書において「Ａｉｂ」は「２－アミノイソ酪酸（２－ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）」または「アミノイソ酪酸（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）」と混用され得、２－アミノイソ酪酸（２－ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）とアミノイソ酪酸（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）は混用され得る。

【0070】

本発明を具現するための一態様は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１）受容体、及びＧＩＰ（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体を含む組成物である。具体的には、上記組成物は、上記ペプチドまたはその結合体を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療用薬学的組成物である。上記代謝症候群の具体的な例としては、糖尿病、肥満、高脂血症及び異常脂質血症などが挙げられるが、これに制限されない。

【0071】

本発明の一つの具体的な様態は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１）受容体、及びＧＩＰ（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体を含む組成物として、糖尿病及び／又は肥満の予防または治療用薬学的組成物である。

【0072】

一つの具現例として、上記ペプチドは、配列番号１～１０２のいずれか一つのアミノ酸配列を含んだり、必須的に構成されたり、または構成されるものであってもよい。

【0073】

もう一つの具現例として、上記組成物は、薬学的に許容される賦形剤と配列番号１～１０２のいずれか一つのアミノ酸配列を含むペプチドまたはその結合体を薬学的有効量で含む薬学的組成物であってもよい。

【0074】

本発明によるペプチドまたはその結合体を有効成分として含む組成物は、ＳＧＬＴ－２（ｓｏｄｉｕｍ－ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）抑制剤と併用されるものであってもよい。

【0075】

具体的には、本発明の組成物は、ＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与されることにより、血糖降下の効果だけでなく、体重減少の効果を奏するため、血糖調節及び体重調節が共に求められる糖尿病患者（例えば、過体重または肥満の糖尿病患者）または肥満患者（例えば、高血糖または糖尿病を有する肥満患者）のような代謝症候群の患者で効果的な治療剤になり得る。

【0076】

また、本発明のペプチドまたはその結合体；またはこれらを含む組成物は、抗炎及び／又は抗線維化の効果を有するため、これをＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与することにより、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患などにおいても効果を得ることができる。

【0077】

本発明において、「併用投与」、「併用される」、「併用する」とは、本発明によるペプチドまたはその結合体；またはこれを有効成分として含む組成物をＳＧＬＴ－２抑制剤と共に個体に投与することを意味し、これは、単に併用される薬物の同時の投与を意味することだけでなく、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体及びＳＧＬＴ－２抑制剤が個体に共に作用し、各物質が本来の機能と同等またはそれ以上の水準を行える投与の形態で理解されなければならない。従って、本願において、「併用」という用語が用いられる場合、これは、同時、個別、順次、または逆順の投与を示すことであり、その手順が無制限であると理解されなければならない。上記投与が順次、逆順または個別の場合、投与の手順は特に制限されず、ただし、２次成分の投与の間隔は、上記併用の有益な効果を失わないようにするものでなければならない。

【0078】

本発明において併用投与される（ｉ）グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及び（ｉｉ）ＳＧＬＴ－２抑制剤は、次のような形態で投与されてもよいが、これに制限されない：

【0079】

ａ）（ｉ）グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及び（ｉｉ）ＳＧＬＴ－２抑制剤が混合された一つの混合物（ｍｉｘｔｕｒｅ）で投与；または
ｂ）（ｉ）グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及び（ｉｉ）ＳＧＬＴ－２抑制剤が分離した形態で投与されるものであってもよいが、これに制限されない。

【0080】

グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体及びＳＧＬＴ－２抑制剤が分離した形態の場合、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有する物質またはその結合体及びＳＧＬＴ－２抑制剤が別個の製剤に製剤化されて同時、個別、順次、または逆順で投与されるものであってもよい。

【0081】

本発明は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体にＳＧＬＴ－２抑制剤をさらに含めて併用する場合、血糖降下の効果及び体重減少の効果が同時に得られ、糖尿病及び／又は肥満の予防または治療効果が画期的に改善されることを確認し、上記併用療法を提供することになった。

【0082】

また、本発明により、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体にＳＧＬＴ－２抑制剤をさらに含めて併用する場合、代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療効果を得ることができる。

【0083】

本発明において、上記血糖降下は血糖水準を下げることを意味する。インスリンとグルカゴンにより体内の血糖は恒常性を維持するが、血糖が正常範囲を超えて高い血糖水準を維持すると、糖尿病が発病する。経口用糖尿病治療剤であるＳＧＬＴ－２抑制剤は、ブドウ糖の排出を促進して血糖を下げる役割をする。本発明によるペプチドまたはその結合体とＳＧＬＴ－２抑制剤を併用投与すれば、血糖降下だけでなく、患者の体重を減少させることができ、糖尿病とともに糖尿病の原因となる肥満を治療でき、糖尿病合併症を予防できるという点で有利な治療法になる。また、高血糖または糖尿病を有する肥満患者でも血糖降下及び体重減少の効果を共に示すため、効果的な治療法になる。

【0084】

本発明の「グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチド」は、本発明において「三重活性体」または「ペプチド」という名称でも混用され得る。

【0085】

このようなペプチドには、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体に対して有意なレベルの活性を有する様々な物質、例えば様々なペプチドが含まれる。

【0086】

特にこれに制限されるものではないが、前記グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体に対して有意なレベルの活性を有するペプチドは、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体のうち１つ又はそれ以上の受容体、具体的には２つ又はそれ以上の受容体、より具体的には３つの受容体の全てに対するｉｎ ｖｉｔｒｏ活性が、当該受容体の天然リガンド（天然グルカゴン、天然ＧＬＰ－１及び天然ＧＩＰ）に比べて、約０．００１％以上、約０．０１％以上、約０．１％以上、約１％以上、約２％以上、約３％以上、約４％以上、約５％以上、約６％以上、約７％以上、約８％以上、約９％以上、約１０％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上を示すことができるが、有意に増加した範囲は制限なく含まれる。

【0087】

ここで、受容体に対する活性は、天然のものに比べて受容体に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ活性が約０．００１％以上、０．０１％以上、０．１％以上、１％以上２％以上、３％以上、４％以上、５％以上、６％以上、７％以上、８％以上、９％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、１００％以上、約２００％以上を示す場合を例として挙げることができる。しかし、これに制限されるものではない。

【0088】

本発明において用語、「約」は±０．５、±０．４、±０．３、±０．２、±０．１などを全て含む範囲であり、約という用語に続く数値と同等又は類似の範囲の数値を全て含むが、これに限定されない。

【0089】

このような三重活性体のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性を測定する方法を本願明細書の実験例１に示すが、特にこれに限定されるものではない。

【0090】

一方、前記ペプチドは、次のｉ）～ｉｉｉ）の１つ以上、２つ以上、特に３つの活性を有すること、具体的には有意な活性を有することを特徴とする：

【0091】

ｉ）ＧＬＰ－１受容体の活性化；ｉｉ）グルカゴン受容体の活性化；ｉｉｉ）ＧＩＰ受容体の活性化。

【0092】

ここで、受容体を活性化するとは、天然のものに比べて、受容体に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ活性が約０．００１％以上、約０．０１％以上、約０．１％以上、約１％以上、約２％以上、約３％以上、約４％以上、約５％以上、約６％以上、約７％以上、約８％以上、約９％以上、約１０％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上を示す場合を例として挙げることができる。しかし、これに制限されるものではない。

【0093】

また、前記ペプチドは、天然ＧＬＰ－１、天然グルカゴン及び天然ＧＩＰのいずれかに比べて、体内半減期が延長されたものであるが、特にこれらに限定されるものではない。

【0094】

例えば、本発明のペプチドは、配列番号１～１０２のいずれか一つのアミノ酸配列を含んでもよく、配列番号１～１０２のいずれか一つのアミノ酸配列で（必須に）構成されてもよく、または配列番号１～１０２のいずれか一つのアミノ酸配列と少なくとも６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、または９５％以上の配列同一性を有するペプチドも含んでもよいが、本発明の目的上、ＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与して血糖降下及び体重減少の効果を有する以上、特定配列に制限されない。

【0095】

より具体的な例として、上記ペプチドは、配列番号２１、２２、４２、４３、５０、７７、及び９６のいずれか一つのアミノ酸配列を含んだり、（必須に）構成されるものであってもよいが、これに制限されない。

【0096】

本願において特定配列番号で「構成される」ペプチドと記載されていても、当該配列番号のアミノ酸配列からなるペプチドと同一もしくは相当する活性を有する場合であれば、当該配列番号のアミノ酸配列前後の無意味な配列の追加または自然に発生し得る突然変異、あるいはそのサイレント突然変異（ｓｉｌｅｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を除外することではなく、このような配列の追加もしくは突然変異を有する場合であっても本願の範囲内に属することが自明である。即ち、一部の配列の差があるとしても、一定水準以上の相同性を示し、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及び／又はＧＩＰ受容体に対する活性を示すと、本発明の範囲に属することができる。

【0097】

例えば、本発明のペプチドにＷＯ２０１７－１１６２０４及びＷＯ２０１７－１１６２０５を参照することができる。

【0098】

本出願において、用語「相同性（ｈｏｍｏｌｏｇｙ）」または「同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」は二つの与えられたアミノ酸配列または塩基配列と相互に関連した程度を意味し、百分率で表すことができる。

【0099】

用語の相同性及び同一性はしばしば互換的に使用することができる。

【0100】

任意の２つのポリヌクレオチド配列が相同性、類似性または同一性を有するかどうかは、例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ（１９８８）［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５］：２４４４でのようなデフォルトパラメータを用いて「ＦＡＳＴＡ」プログラムなどの既知のコンピュータアルゴリズムを使用して決定することができる。または、ＥＭＢＯＳＳパッケージのニードルマンプログラム（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｏｐｅｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ． １６：２７６－２７７）（バージョン５．０．０または以降のバージョン）で行われるような、ニードルマン－ウンシュ（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈ）アルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ、１９７０，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４８：４４３－４５３）を使用して決定することができる。（ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２：３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ，ＢＬＡＳＴＮ，ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ，［Ｓ．］ ［Ｆ．，］ ［ＥＴ ＡＬ，Ｊ ＭＯＬＥＣ ＢＩＯＬ ２１５］：４０３（１９９０）；Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｈｕｇｅ Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ，Ｍａｒｔｉｎ Ｊ． Ｂｉｓｈｏｐ，［ＥＤ．，］ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、１９９４、及び［ＣＡＲＩＬＬＯ ＥＴＡ／。］（１９８８）ＳＩＡＭ Ｊ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ ４８：１０７３を含む）。例えば、国立生物工学情報データベースセンターのＢＬＡＳＴまたはＣｌｕｓｔａｌＷを用いて相同性、類似性または同一性を決定することができる。

【0101】

ペプチドの相同性、類似性または同一性は、例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ． Ａｐｐｌ． Ｍａｔｈ（１９８１）２：４８２において公知となっているように、例えば、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９７０），Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．４８：４４３のようなＧＡＰコンピュータプログラムを用いて配列情報を比較することにより決定することができる。要約すると、ＧＡＰプログラムは、２つの配列中、より短いものにおける記号の総数であり、類似の配列された記号（即ち、アミノ酸）の数を除した値と定義する。ＧＡＰプログラムのためのデフォルトパラメータは、（１）一進法比較マトリックス（同一性のために１、そして非－同一性のために０の値を含む）及びＳｃｈｗａｒｔｚ ａｎｄ Ｄａｙｈｏｆｆ，ｅｄｓ．，Ａｔｌａｓ Ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，ｐｐ． ３５３－３５８（１９７９）により開示されているように、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ ｅｔ ａｌ（１９８６）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：６７４５の加重比較マトリックス（またはＥＤＮＡＦＵＬＬ（ＮＣＢＩ ＮＵＣ４．４のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックス）；（２）各ギャップのための３．０のペナルティ及び各ギャップにおいて各記号のための追加の０．１０ペナルティ（またはギャップ開放ペナルティ１０、ギャップ延長ペナルティ０．５）；及び（３）末端ギャップのための無ペナルティを含むことができる。従って、本発明で用いられたものとして、用語「相同性」または「同一性」は配列間の関連性（ｒｅｌｅｖａｎｃｅ）を示す。

【0102】

本発明のペプチドは、分子内架橋（ｉｎｔｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｒｉｄｇｅ）を含んでもよく（例えば、共有結合的架橋又は非共有結合的架橋）、具体的には環を含む形態であってもよい。例えば、ペプチドの１６番目のアミノ酸と２０番目のアミノ酸間に環が形成された形態であってもよいが、特にこれに限定されるものではない。具体的な例として、１６番のアミノ酸はグルタミン酸、２０番のアミノ酸はリシンであってもよいが、これに制限されない。

【0103】

前記環の非制限的な例として、ラクタム架橋（又はラクタム環）を含んでもよい。

【0104】

また、前記ペプチドは、目的とする位置に環を形成するアミノ酸を含むことにより環を含むように改変されたものが全て含まれる。

【0105】

例えば、ペプチドの１６番目と２０番目のアミノ酸対がそれぞれ環を形成するグルタミン酸又はリシンに置換されたものであってもよいが、これに限定されるものではない。

【0106】

このような環は、ペプチド内のアミノ酸側鎖間に形成され、例えばリシンの側鎖とグルタミン酸の側鎖間にラクタム環が形成される形態であってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

【0107】

前記方法の組み合わせ物により作製されるペプチドの例として、天然グルカゴンとアミノ酸配列が少なくとも１つ異なり、Ｎ末端のアミノ酸残基のα炭素が除去された、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドなどが挙げられるが、これらに限定されるものではなく、アナログ作製のための様々な方法の組み合わせ物により、本発明に用いられるペプチドを作製することができる。

【0108】

また、本発明のペプチドは、活性体分解酵素の認識作用を回避して体内半減期を延長させるために、一部のアミノ酸を他のアミノ酸又は非天然化合物に置換するが、特にこれらに限定されるものではない。

【0109】

具体的には、前記ペプチドのアミノ酸配列のうち２番目のアミノ酸配列の置換により、分解酵素の認識作用を回避して体内半減期を延長させたペプチドであってもよいが、体内の分解酵素の認識作用を回避するためのアミノ酸の置換又は変更であればいかなるものでもよい。

【0110】

また、ペプチドの作製のためのこのような改変には、Ｌ型もしくはＤ型アミノ酸及び／又は非天然アミノ酸を用いた改変、並びに／又は天然配列の修飾、例えば側鎖官能基の改変、分子内の共有結合、一例として側鎖間の環形成、メチル化、アシル化、ユビキチン化、リン酸化、アミノヘキサン化、ビオチン化などの修飾による改変が全て含まれる。

【0111】

さらに、アミノ及び／又はカルボキシ末端に少なくとも１つのアミノ酸が付加されたものが全て含まれる。

【0112】

前記置換されるか、付加されるアミノ酸としては、ヒトタンパク質において通常観察される２０種のアミノ酸だけでなく、異常又は非自然発生アミノ酸を用いることができる。

【0113】

異常アミノ酸の市販元には、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＣｈｅｍＰｅｐ、Ｇｅｎｚｙｍｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓが含まれる。これらのアミノ酸が含まれるペプチドと定型的なペプチド配列は、民間のペプチド合成会社、例えば米国のＡｍｅｒｉｃａｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｍｐａｎｙやＢａｃｈｅｍ、又は韓国のＡｎｙｇｅｎにおいて合成及び購入することができる。

【0114】

アミノ酸誘導体も同じ方式で入手することができ、一例として４－イミダゾ酢酸（４－ｉｍｉｄａｚｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）などが挙げられる。

【0115】

また、本発明によるペプチドは、生体内のタンパク質切断酵素から保護して安定性を向上させるために、そのＮ末端及び／又はＣ末端などが化学的に修飾された形態、有機基により保護された形態、又はペプチド末端などにアミノ酸が付加されて改変された形態であってもよい。

【0116】

特に、化学的に合成したペプチドの場合、Ｎ及びＣ末端が電荷を帯びているので、その電荷を除去するために、Ｎ末端のアセチル化（ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ）及び／又はＣ末端のアミド化（ａｍｉｄａｔｉｏｎ）を行ってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

【0117】

具体的には、本発明のペプチドのＮ末端またはＣ末端はアミノ基（－ＮＨ₂）またはカルボキシル基（－ＣＯＯＨ）を有してもよいが、これに制限されない。

【0118】

また、本発明のペプチドは、その長さによってこの分野でよく知られている方法、例えば、自動ペプチド合成器により合成することができ、遺伝子操作技術により生産することもできる。

【0119】

具体的には、本発明のペプチドは、標準合成方法、組換え発現システム、又は任意の他の当該分野の方法により製造することができる。従って、本発明によるペプチドは、例えば、下記を含む方法を含む複数の方法で合成することができる：

【0120】

（ａ）ペプチドを固相又は液相法の手段で段階的に又は断片組立により合成し、最終ペプチド生成物を分離及び精製する方法；又は
（ｂ）ペプチドをコードする核酸作製物を宿主細胞内で発現させ、発現生成物を宿主細胞培養物から回収する方法；又は
（ｃ）ペプチドをコードする核酸作製物の無細胞試験管内の発現を行い、発現生成物を回収する方法；又は
（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の任意の組み合わせによりペプチドの断片を得、続いて、断片を連結させてペプチドを得、当該ペプチドを回収する方法。

【0121】

また、前記グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドは、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドに、その生体内半減期を延長させるための生体適合性物質が結合された持続型結合体の形態であってもよい。本発明における前記生体適合性物質は、キャリアと混用され得る。

【0122】

本発明における前記ペプチドの結合体は、キャリアが結合されていない前記ペプチドより効力の持続性が向上したものであり、本発明においては、このような結合体を「持続型結合体」という。

【0123】

本発明の用語、「持続型結合体」または「結合体」は、上記ペプチドと生体適合性物質が結合された構造を有し、上記生体適合性物質が結合されていないペプチドに比べて増加した効力の持続性を示すことができる。上記持続型結合体において生体適合性物質はペプチドに共有結合で連結されたものであってもよいが、特にこれに制限されない。本発明において、上記結合体の一構成要素であるペプチドは、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチド、具体的には、配列番号１～１０２のアミノ酸配列のいずれか一つの配列を含むペプチドまたは断片であってもよく、生体適合性物質は、上記ペプチドの半減期を延長させる物質であり、本発明の上記結合体の一部をなす一構成である。

【0124】

例えば、上記結合体に含まれるペプチドは、配列番号１～１０２のいずれか一つのアミノ酸配列を含んだり、（必須に）構成されるペプチドであってもよい。また、生体適合性物質の結合により活性を喪失せずに半減期が増加するものであってもよいが、ＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与されて血糖降下及び体重減少の効果を有する限り、制限なく本発明の結合体の一構成要素として用いられる。

【0125】

本出願において、用語「生体適合性物質」は、生理活性物質である本発明のペプチドに結合されて生体適合性物質部またはキャリアと結合されていない生理活性物質に比べて生理活性物質の効力の持続性を増加させる物質をいう。上記生体適合性物質は、生理活性物質（例えば、ペプチド）に共有結合で連結されたものであってもよいが、特にこれに制限されない。

【0126】

上記生体適合性物質は、免疫グロブリンＦｃ領域であってもよく、より具体的にはＩｇＧ Ｆｃ領域であってもよいが、特にこれに制限されない。

【0127】

本発明のペプチド内の一つ以上のアミノ酸側鎖は、生体内で可溶性及び／又は半減期を延長させて／させたり生体利用率を増加させるために、このような生体適合性物質に接合することができる。このような改変は、また、治療学的タンパク質及びペプチドのクリアランス（ｃｌｅａｒａｎｃｅ）を減少させることができる。

【0128】

上述の生体適合性物質は、水溶性（両親媒性または親水性）及び／又は無毒性及び／又は薬学的に許容可能なものであってもよい。

【0129】

なお、このような結合体は、非自然発生の（ｎｏｎ－ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ）ものであってもよい。

【0130】

本発明の一つの具体例として、前記持続型結合体又は結合体は、下記化学式（１）で表されるものであってもよいが、これに制限されるものではない：

【0131】

Ｘ－Ｌ－Ｆ・・・（１）

【0132】

ただし、この時、Ｘは配列番号１～１０２のいずれか一つのアミノ酸配列を含むペプチドであり；
Ｌは、エチレングリコール繰り返し単位を含有するリンカーであり、
Ｆは、免疫グロブリンＦｃ領域またはその誘導体であり、
－は、ＸとＬとの間、ＬとＦとの間の共有結合連結を示す。

【0133】

本発明の結合体は、結合体の形態でもグルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して有意な活性を示すことができ、従って、やはりＳＧＬＴ－２抑制剤と共に併用投与されると、血糖降下及び体重減少の効果を発揮することができる。

【0134】

具体的には、本発明の結合体は、天然のものに比べてグルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及び／又はＧＩＰ受容体に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ活性が約０．００１％以上、０．０１％以上、０．１％以上、０．１％以上、０．２％以上、０．５％以上、０．７％以上、１％以上、２％以上、３％以上、４％以上、５％以上、６％以上、７％以上、８％以上、９％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、１００％以上であってもよいが、これに制限されるものではない。

【0135】

本発明の目的上、上記ペプチドまたはその結合体は、天然型比グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及び／又はＧＩＰ受容体に対する活性が約０．００１％以上、０．０１％以上、０．１％以上、１％以上、２％以上、３％以上、４％以上、５％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、１００％以上であってもよいが、これに制限されるものではない。

【0136】

上記結合体においてＸは、配列番号１～１０２のアミノ酸配列のいずれか一つのアミノ酸配列を含んでもよく、配列番号１～１０２のアミノ酸配列のいずれか一つのアミノ酸配列で必須的に構成されてもよく、構成されたものであってもよく、具体的には、配列番号２１、２２、４２、４３、５０、７７、及び９６のいずれか一つのアミノ酸配列を含んでもよく、配列番号２１、２２、４２、４３、５０、７７、及び９６のいずれか一つのアミノ酸配列で必須的に構成されてもよく、構成されたものであってもよいが、これに制限されない。

【0137】

前記結合体において、ＦはＸ、すなわちグルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチド、具体的には、配列番号１～１０２のアミノ酸配列のいずれか一つの配列を含むペプチドの半減期を延長させることのできる物質であり、本発明の前記結合体の一部をなす一構成である。

【0138】

上記Ｆは、Ｘと共有化学結合または非共有化学結合で互いに結合されるものであってもよく、共有化学結合、非共有化学結合またはこれらの組み合わせによりＬを通じてＦとＸが互いに結合されるものであってもよい。

【0139】

より具体的には、ＸとＬ、及びＬとＦは、共有結合で互いに連結されるものであってもよく、この時、上記結合体は、化学式（１）の順に、Ｘ、Ｌ、及びＦが共有結合を通じてそれぞれ連結された結合体である。

【0140】

前記Ｆは、免疫グロブリンＦｃ領域であってもよく、より具体的には、前記免疫グロブリンＦｃ領域は、ＩｇＧ由来であってもよいが、特にこれに制限されない。

【0141】

本発明における「免疫グロブリンＦｃ領域」とは、免疫グロブリンの重鎖と軽鎖の可変領域を除いたものであり、重鎖定常領域２（ＣＨ２）及び／又は重鎖定常領域３（ＣＨ３）部分を含む部位を意味する。前記免疫グロブリンＦｃ領域は、本発明の結合体の一部をなす一構成であってもよい。

【0142】

本発明において、Ｆｃ領域と言えば、免疫グロブリンのパパイン消化から得る天然型配列だけでなくその誘導体、例えば、天然配列中の一つ以上のアミノ酸残基が欠失、挿入、非保存的もしくは保存的置換、又はそれらの組み合わせにより置換されて天然のものとは異なる配列なども含まれる。

【0143】

前記Ｆは、２つのポリペプチド鎖がジスルフィド結合で連結されている構造であり、前記２つの鎖のうち１つの鎖の窒素原子を介してのみ連結されている構造であるが、これに限定されるものではない。前記窒素原子を介する連結は、リシンのεアミノ原子やＮ末端のアミノ基に還元的アミノ化により連結されるものであってもよい。

【0144】

還元的アミノ化反応とは、反応物のアミン基又はアミノ基が他の反応物のアルデヒド（すなわち、還元的アミノ化が可能な官能基）と反応してアミンを生成し、次いで還元反応によりアミン結合を形成する反応を意味し、当該技術分野で周知の有機合成反応である。

【0145】

一つの具体例として、前記Ｆは、そのＮ末端プロリンの窒素原子を通じて連結されたものであってもよいが、これに制限されない。

【0146】

前記免疫グロブリンＦｃ領域は、本発明の化学式（１）の結合体の一部をなす一構成であり、具体的には、前記化学式（１）においてＦに該当することができる。

【0147】

このような免疫グロブリンＦｃ領域は、重鎖定常領域にヒンジ（ｈｉｎｇｅ）部分を含んでもよいが、これに限定されるものではない。

【0148】

本発明における免疫グロブリンＦｃ領域は、Ｎ末端に特定のヒンジ配列を含んでもよい。

【0149】

本発明における「ヒンジ配列」とは、重鎖に位置してジスルフィド結合（ｉｎｔｅｒ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｂｏｎｄ）により免疫グロブリンＦｃ領域の二量体を形成する部位を意味する。

【0150】

本発明における前記ヒンジ配列は、次のアミノ酸配列を有するヒンジ配列中の一部が欠失して１つのシステイン残基のみ有するように変異したものであってもよいが、これに限定されるものではない：

【0151】

Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１０３）。

【0152】

前記ヒンジ配列は、配列番号１１９のヒンジ配列中の８番目又は１１番目のシステイン残基が欠失して１つのシステイン残基のみ含むものであってもよい。本発明のヒンジ配列は、１つのシステイン残基のみ含む、３～１２個のアミノ酸からなるものであるが、これに限定されるものではない。より具体的には、本発明のヒンジ配列は次のような配列を有することができる：Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１０４）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ（配列番号１０５）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ（配列番号１０６）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ（配列番号１０７）、Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ（配列番号１０８）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（配列番号１０９）、Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（配列番号１１０）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１１１）、Ｇｌｕ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１１２）、Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１１３）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１１４）、Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１１５）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１１６）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（配列番号１１７）、Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１１８）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１１１９）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１２０）、Ｇｌｕ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ（配列番号１２１）、Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１２２）。

【0153】

より具体的には、前記ヒンジ配列は、配列番号１１３（Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ）又は配列番号１２２（Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ）のアミノ酸配列を含むものであってもよいが、これらに限定されるものではない。

【0154】

本発明の免疫グロブリンＦｃ領域は、ヒンジ配列の存在により免疫グロブリンＦｃ鎖の二つの分子が二量体を形成した形態であってもよく、また、本発明の化学式（１）の結合体はリンカーの一方の末端が二量体の免疫グロブリンＦｃ領域の一つの鎖に連結された形態であってもよいが、これに制限されるものではない。

【0155】

本発明における「Ｎ末端」とは、タンパク質又はポリペプチドのアミノ末端を意味し、アミノ末端の最末端、又は最末端から１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個もしくは１０個以上のアミノ酸が含まれる。本発明の免疫グロブリンＦｃ領域は、ヒンジ配列をＮ末端に含んでもよいが、これに限定されるものではない。

【0156】

また、本発明の免疫グロブリンＦｃ領域は、天然のものと実質的に同等又は向上した効果を有するものであれば、免疫グロブリンの重鎖と軽鎖の可変領域を除き、一部又は全部の重鎖定常領域１（ＣＨ１）及び／又は軽鎖定常領域１（ＣＬ１）を含む拡張されたＦｃ領域であってもよい。

【0157】

さらに、ＣＨ２及び／又はＣＨ３に相当する非常に長い一部のアミノ酸配列が欠失した領域であってもよい。

【0158】

例えば、本発明の免疫グロブリンＦｃ領域は、１）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメイン、２）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメイン、３）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ３ドメイン、４）ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン、５）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメインの少なくとも１つのドメインと免疫グロブリンヒンジ領域（又はヒンジ領域の一部）との組み合わせ、６）重鎖定常領域の各ドメインと軽鎖定常領域の二量体である。しかし、これに制限されるものではない。

【0159】

また、本発明の持続型結合体の一つの実施形態として、前記免疫グロブリンＦｃ領域Ｆは二つのポリペプチド鎖からなる二量体（ｄｉｍｅｒ）であり、この時、前記Ｆｃ領域二量体ＦとＸはエチレングリコール繰り返し単位を含有する一つの同一のリンカーＬを通じて共有結合的に連結されている。この実施形態の一具体例において、ＸはこのようなＦｃ領域二量体Ｆの二つのポリペプチド鎖中の一つのポリペプチド鎖にのみリンカーＬを通じて共有結合で連結されている。

【0160】

この実施形態のさらに具体的な例示において、このようなＦｃ領域二量体Ｆの両ポリペプチド鎖中、Ｘが連結された一つのポリペプチド鎖には一分子のＸのみがＬを通じて共有結合的に連結されている。この実施形態の最も具体的な例示において前記Ｆはホモ二量体（ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ）である。

【0161】

他の具体例において、前記免疫グロブリンＦｃ領域Ｆは、二つのポリペプチド鎖からなる二量体であり、Ｌの一方の末端が前記二つのポリペプチド鎖中の一つのポリペプチド鎖にのみ連結されているものであってもよいが、これに制限されない。

【0162】

本発明の持続型結合体の他の実施形態では、二量体形態の一つのＦｃ領域にＸ２分子が対称に結合することも可能である。このとき、前記免疫グロブリンＦｃとＸは非ペプチド性リンカーにより互いに連結されてもよい。しかし、上記記述された例に制限されるものではない。

【0163】

また、本発明の免疫グロブリンＦｃ領域には、天然アミノ酸配列だけでなく、その配列誘導体も含まれる。アミノ酸配列誘導体とは、天然アミノ酸配列の少なくとも１つのアミノ酸残基が欠失、挿入、非保存的もしくは保存的置換、又はそれらの組み合わせにより異なる配列を有するものを意味する。

【0164】

例えば、ＩｇＧ Ｆｃの場合、結合に重要であることが知られている２１４～２３８、２９７～２９９、３１８～３２２又は３２７～３３１番目のアミノ酸残基が修飾に適した部位として用いられてもよい。

【0165】

また、ジスルフィド結合を形成する部位が除去された誘導体、天然ＦｃからＮ末端のいくつかのアミノ酸が欠失された誘導体、天然ＦｃのＮ末端にメチオニン残基が付加された誘導体など、様々な誘導体が用いられる。さらに、エフェクター機能をなくすために、補体結合部位、例えばＣ１ｑ結合部位が除去されてもよく、ＡＤＣＣ（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）部位が除去されてもよい。このような免疫グロブリンＦｃ領域の配列誘導体を作製する技術は、国際特許公開第ＷＯ９７／３４６３１号、国際特許公開第９６／３２４７８号などに開示されている。

【0166】

分子の活性を全体的に変化させないタンパク質及びペプチドにおけるアミノ酸交換は、当該分野で公知である（Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ， Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ， Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７９）。

【0167】

最も一般的な交換は、アミノ酸残基Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｈｙ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／Ｇｌｕ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ間の交換である。場合によっては、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化（ｓｕｌｆａｔｉｏｎ）、アクリル化（ａｃｒｙｌａｔｉｏｎ）、グリコシル化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）、メチル化（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）、ファルネシル化（ｆａｒｎｅｓｙｌａｔｉｏｎ）、アセチル化（ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ）、アミド化（ａｍｉｄａｔｉｏｎ）などにより修飾（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）されてもよい。

【0168】

前述したＦｃ誘導体は、本発明のＦｃ領域と同等の生物学的活性を示し、Ｆｃ領域の熱、ｐＨなどに対する構造的安定性を向上させたものであってもよい。

【0169】

また、このようなＦｃ領域は、ヒトや、ウシ、ヤギ、ブタ、マウス、ウサギ、ハムスター、ラット、モルモットなどの動物の生体内から分離した天然のものから得てもよく、形質転換された動物細胞もしくは微生物から得られた組換えたもの又はその誘導体であってもよい。ここで、天然のものから得る方法は、全免疫グロブリンをヒト又は動物の生体から分離し、その後タンパク質分解酵素で処理することにより得る方法であってもよい。パパインを処理する場合には、Ｆａｂ及びＦｃに切断され、ペブシンを処理する場合にはｐＦ’ｃ及びＦ（ａｂ）２に切断される。これをサイズ排除クロマトグラフィー（ｓｉｚｅ－ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）などを用いてＦｃまたはｐＦ’ｃを分離することができる。より具体的な実施形態において、ヒト由来のＦｃ領域は、微生物から得られた組換え免疫グロブリンＦｃ領域である。

【0170】

また、免疫グロブリンＦｃ領域は、天然糖鎖、天然のものに比べて増加した糖鎖、天然のものに比べて減少した糖鎖、又は糖鎖が除去された形態であってもよい。このような免疫グロブリンＦｃ糖鎖の増減又は除去には、化学的方法、酵素学的方法、微生物を用いた遺伝工学的手法などの通常の方法が用いられてもよい。ここで、Ｆｃから糖鎖が除去された免疫グロブリンＦｃ領域は、補体（ｃ１ｑ）との結合力が著しく低下し、抗体依存性細胞傷害又は補体依存性細胞傷害が低減又は除去されるので、生体内で不要な免疫反応を誘発しない。このようなことから、糖鎖が除去されるか、非グリコシル化された免疫グロブリンＦｃフラグメントは、薬物のキャリアとしての本来の目的により適する。

【0171】

本発明における「糖鎖の除去（Ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）」とは、酵素で糖を除去したＦｃ領域を意味し、非グリコシル化（Ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）とは、原核生物、より具体的な実施形態においては大腸菌で産生されてグリコシル化されていないＦｃ領域を意味する。

【0172】

一方、免疫グロブリンＦｃ領域は、ヒト起源、又はウシ、ヤギ、ブタ、マウス、ウサギ、ハムスター、ラット、モルモットなどの動物起源であってもよく、より具体的な実施形態においてはヒト起源である。

【0173】

また、免疫グロブリンＦｃ領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ由来のものであってもよく、それらの組み合わせ（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）又はそれらのハイブリッド（ｈｙｂｒｉｄ）によるＦｃ領域であってもよい。より具体的な実施形態においては、ヒト血液に最も豊富なＩｇＧ又はＩｇＭ由来のものであり、さらに具体的な実施形態においては、リガンド結合タンパク質の半減期を延長させることが知られているＩｇＧ由来のものである。一層具体的な実施形態において、前記免疫グロブリンＦｃ領域はＩｇＧ４ Ｆｃ領域であり、最も具体的な実施形態において、前記免疫グロブリンＦｃ領域はヒトＩｇＧ４由来の非グリコシル化されたＦｃ領域であるが、これらに限定されるものではない。

【0174】

また、一つの具体的な実施形態において、免疫グロブリンＦｃ切片はヒトＩｇＧ４ Ｆｃの領域として、各単量体（ｍｏｎｏｍｅｒ）の３番目のアミノ酸であるシステイン間のジスルフィド結合（ｉｎｔｅｒ－ｃｈａｉｎ形態）により２個の単量体が連結されたホモ二量体（ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ）の形態であってもよく、この時、ホモ二量体の各単量体は、独立に３５番及び９５番のシステイン間の内部のジスルフィド結合及び１４１番及び１９９番のシステイン間の内部のジスルフィド結合、即ち、２つの内部のジスルフィド結合（ｉｎｔｒａ－ｃｈａｉｎ形態）を有するものである／有するものであってもよい。各単量体のアミノ酸は、２２１個のアミノ酸からなり、ホモ二量体を形成するアミノ酸は、全体で４４２個のアミノ酸からなるが、これらに限定されるものではない。具体的には、免疫グロブリンＦｃ切片は、配列番号１２３のアミノ酸配列（２２１個のアミノ酸からなる）を有する２個の単量体が各単量体の３番目のアミノ酸であるシステイン間のジスルフィド結合によりホモ二量体を形成し、前記ホモ二量体の単量体は、それぞれ独立して３５番目と９５番目のシステイン間の内部のジスルフィド結合、及び１４１番目と１９９番目のシステイン間の内部のジスルフィド結合を形成するものであるが、これに限定されるものではない。

【0175】

上記化学式（１）のＦは、配列番号１２３のアミノ酸配列である単量体を含めてもよく、上記Ｆは、配列番号１２３のアミノ酸配列の単量体のホモ二量体であってもよいが、これに制限されない

【0176】

一つの例として、免疫グロブリンＦｃ切片は、配列番号１２３のアミノ酸配列（４４２個のアミノ酸で構成される）を含むホモ二量体であってもよいが、これに制限されない。

【0177】

一方、本発明において免疫グロブリンＦｃ領域と関連した「組み合わせ（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」とは、二量体又は多量体を形成する時、同一起源の単鎖免疫グロブリンＦｃ領域をコードするポリペプチドが相違する起源の単鎖ポリペプチドと結合を形成することを意味する。即ち、ＩｇＧ Ｆｃ、ＩｇＡ Ｆｃ、ＩｇＭ Ｆｃ、ＩｇＤ Ｆｃ及びＩｇＥのＦｃ領域からなるグループから選択された２個以上の領域から二量体又は多量体の製造が可能である。

【0178】

本発明において「ハイブリッド（ｈｙｂｒｉｄ）」とは、単鎖の免疫グロブリン定常領域内に２個以上の相違する起源の免疫グロブリンＦｃ領域に該当する配列が存在することを意味する用語である。本発明の場合、種々の形態のハイブリッドが可能である。即ち、ＩｇＧ Ｆｃ、ＩｇＭ Ｆｃ、ＩｇＡ Ｆｃ、ＩｇＥ Ｆｃ及びＩｇＤ ＦｃのＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４からなるグループから１個～４個のドメインからなるドメインのハイブリッドが可能であり、ヒンジを含めてもよい。

【0179】

一方、ＩｇＧもＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のサブクラスに分けることができ、本発明ではそれらの組み合わせ又はこれらのハイブリダイゼーションも可能である。具体的には、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４サブクラスであり、最も具体的には補体依存的傷害（ＣＤＣ、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）のようなエフェクタ機能（ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）がほとんどないＩｇＧ４のＦｃ切片である。

【0180】

また、上述した結合体は、効力の持続性が天然型ＧＬＰ－１、ＧＩＰ、あるいはグルカゴンに比べて、又はＦが修飾されていないＸに比べて増加したものであってもよく、このような結合体は上述した形態だけでなく、生分解性ナノパーティクルに封入された形態などを全て含むが、これに制限されない。

【0181】

一方、上記化学式（１）において、上記Ｌは、非ペプチド性リンカー、例えば、エチレングリコール繰り返し単位を含有するリンカーであってもよい。

【0182】

本発明において「非ペプチド性リンカー」は、繰り返し単位が２個以上結合された生体適合性重合体を含む。上記繰り返し単位は、ペプチド結合ではない任意の共有結合を通じて互いに連結される。上記非ペプチド性リンカーは、本発明の結合体の一部をなす一構成であってもよく、上記化学式（１）においてＬに該当する。

【0183】

本発明で用いられる非ペプチド性リンカーは、生体内タンパク質分解酵素に抵抗性のある重合体であれば、制限なく用いられる。本発明において上記非ペプチド性リンカーは、非ペプチド性重合体と混用され得る。

【0184】

本発明において非ペプチド性リンカーは、末端に反応基を含み、結合体を構成する他の構成要素と反応を通じて結合体を形成することができる。両末端に反応性官能基を有する非ペプチド性リンカーが各反応基を通じて上記化学式（１）のＸ及びＦと結合して結合体を形成する場合、上記非ペプチド性リンカーまたは非ペプチド性重合体は、非ペプチド性重合体連結部（ｌｉｎｋｅｒ ｍｏｉｅｔｙ）または非ペプチド性リンカー連結部と命名することができる。

【0185】

特にこれに制限されないが、上記非ペプチド性リンカーは、エチレングリコール繰り返し単位を含有するリンカー、例えば、ポリエチレングリコールであってもよく、また、当該分野において既知のこれらの誘導体及び当該分野の技術水準で容易に製造できる誘導体も本発明の範囲に含まれる。

【0186】

上記非ペプチド性リンカーの繰り返し単位は、エチレングリコール繰り返し単位であってもよく、具体的には、上記非ペプチド性リンカーは、エチレングリコール繰り返し単位を含みながら、結合体の製造に用いられる官能基を末端に含むものであってもよい。本発明による持続型結合体は、上記官能基を通じてＸとＦとが連結された形態であってもよいが、これに制限されない。本発明において、上記非ペプチド性リンカーは、２個、または３個以上の官能基を含めてもよく、各官能基は、同一又は互いに異なってもよいが、これに制限されない。

【0187】

一つの具体例として、上記エチレングリコール繰り返し単位を含むリンカーであるＬは、結合体で構成される以前には結合体の製造に用いられる官能基を末端に含むものであってもよい。本発明による持続型結合体は、上記官能基を通じてＸとＦとが連結された形態であってもよいが、これに制限されない。本発明において、上記エチレングリコール繰り返し単位を含有するリンカーは、２個、または３個以上の官能基を含んでもよく、各官能基は同一又は互いに異なってもよいが、これに制限されない。

【0188】

具体的には、上記リンカーは、下記の化学式（２）で表されるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であってもよいが、これに制限されるものではない：

【0189】

・・・（２）

【0190】

ここで、ｎ＝１０～２４００、ｎ＝１０～４８０、またはｎ＝５０～２５０であるが、これに制限されない。

【0191】

上記持続型結合体においてＰＥＧ部位は、－（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n－構造だけでなく、連結要素とこの－（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n－との間に介在する酸素原子も含めてもよいが、これに制限されるものではない。

【0192】

また、一つの具体的な実施形態において上記結合体は、配列番号１～１０２のいずれか一つのアミノ酸配列を含むペプチド（Ｘ）と免疫グロブリンＦｃ領域（Ｆ）がエチレングリコール繰り返し単位を含有するリンカーを通じて共有結合で連結された構造であってもよいが、これに制限されるものではない。

【0193】

上記ポリエチレングリコールは、エチレングリコールホモ重合体、ＰＥＧ共重合体、またはモノメチル置換されたＰＥＧ重合体（ｍＰＥＧ）の形態を全部包括する用語であるが、特にこれに限定されるものではない。

【0194】

一つの具体例として上記エチレングリコール繰り返し単位は、その例として、［ＯＣＨ₂ＣＨ₂］_nと表すことができ、ｎ値は自然数で、上記ペプチド結合体内の［ＯＣＨ₂ＣＨ₂］_n部位の平均分子量、例えば、数平均分子量が０超～約１００ｋＤａになるように定められてもよいが、これに制限されない。また、一つの例として、上記ｎ値は自然数で、上記ペプチド結合体内の［ＯＣＨ₂ＣＨ₂］_n部位の平均分子量、例えば、数平均分子量が約１～約１００ｋＤａ、約１～約８０ｋＤａ、約１～約５０ｋＤａ、約１～約３０ｋＤａ、約１～約２５ｋＤａ、約１～約２０ｋＤａ、約１～約１５ｋＤａ、約１～約１３ｋＤａ、約１～約１１ｋＤａ、約１～約１０ｋＤａ、約１～約８ｋＤａ、約１～約５ｋＤａ、約１～約３．４ｋＤａ、約３～約３０ｋＤａ、約３～約２７ｋＤａ、約３～約２５ｋＤａ、約３～約２２ｋＤａ、約３～約２０ｋＤａ、約３～約１８ｋＤａ、約３～約１６ｋＤａ、約３～約１５ｋＤａ、約３～約１３ｋＤａ、約３～約１１ｋＤａ、約３～約１０ｋＤａ、約３～約８ｋＤａ、約３～約５ｋＤａ、約３～約３．４ｋＤａ、約８～約３０ｋＤａ、約８～約２７ｋＤａ、約８～約２５ｋＤａ、約８～約２２ｋＤａ、約８～約２０ｋＤａ、約８～約１８ｋＤａ、約８～約１６ｋＤａ、約８～約１５ｋＤａ、約８～約１３ｋＤａ、約８～約１１ｋＤａ、約８～約１０ｋＤａ、約９～約１５ｋＤａ、約９～約１４ｋＤａ、約９～約１３ｋＤａ、約９～約１２ｋＤａ、約９～約１１ｋＤａ、約９．５～約１０．５ｋＤａ、または約１０ｋＤａであってもよいが、これに制限されない。

【0195】

一つの具体例として、上記リンカーの両末端は、免疫グロブリンＦｃ領域のチオール基、アミノ基、ヒドロキシル基及びペプチドのチオール基、アミノ基、アジド基、ヒドロキシル基に結合してもよいが、これに制限されない。

【0196】

具体的には、上記リンカーは、両末端にそれぞれ免疫グロブリンＦｃ領域及びペプチドと結合されてもよい反応基、具体的には、免疫グロブリンＦｃ領域のシステインのチオール基；Ｎ末端、リシン、アルギニン、グルタミン及び／又はヒスチジンに位置したアミノ基；及び／又はＣ末端に位置したヒドロキシル基と結合され、ペプチドのシステインのチオール基；リシン、アルギニン、グルタミン及び／又はヒスチジンのアミノ基；アジドリシンのアジド基；及び／又はヒドロキシル基と結合される反応基を含めんでもよいが、これに制限されない。

【0197】

より具体的には、上記リンカーの反応基は、アルデヒド基、マレイミド基及びスクシンイミド誘導体からなる群から選択される一つ以上であってもよいが、これに制限されない。

【0198】

前記において、アルデヒド基としてプロピオンアルデヒド基又はブチルアルデヒド基を例として挙げることができるが、これに制限されない。

【0199】

一つの具体的な実施形態において上記非ペプチド性リンカーの両末端は、それぞれＦ、例えば、免疫グロブリンＦｃ領域のアミノ基またはチオール基及びＸのアミノ基またはチオール基に結合することができる。

【0200】

具体的には、上記非ペプチド性重合体は、両末端にそれぞれＦ（例えば、免疫グロブリンＦｃ領域）及びＸと結合されてもよい反応基、具体的には、Ｘ、あるいはＦ（例えば、免疫グロブリンＦｃ領域）のＮ末端またはリシンに位置したアミノ基、またはシステインのチオール基と結合される反応基を含んでもよいが、これに制限されない。

【0201】

また、Ｆ、例えば、免疫グロブリンＦｃ領域及びＸと結合される、上記非ペプチド性重合体の反応基は、アルデヒド基、マレイミド基及びスクシンイミド誘導体で構成された群から選択されてもよいが、これに制限されない。

【0202】

上記において、アルデヒド基としてプロピオンアルデヒド基またはブチルアルデヒド基を例として挙げられるが、これに制限されない。

【0203】

上記において、スクシンイミド誘導体としては、スクシンイミジル吉草酸、スクシンイミジルメチルブタン酸、スクシンイミジルメチルプロピオネート、スクシンイミジルブタン酸、スクシンイミジルプロピオネート、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、ヒドロキシスクシンイミジル、スクシンイミジルカルボキシメチルまたはスクシンイミジルカーボネートが用いられるが、これに制限されない。

【0204】

非ペプチド性リンカーは、このような反応基を通じてＸとＦに連結されて非ペプチド性リンカー連結部に転換されてもよいが、特にこれに限定されるものではない。

【0205】

また、アルデヒド結合による還元性アミノ化により生成された最終産物は、アミド結合により連結されたものより遥かに安定している。アルデヒド反応基は、低ｐＨでＮ末端に選択的に反応し、高ｐＨ、例えば、ｐＨ ９．０の条件ではリシン残基と共有結合を形成することができる。

【0206】

また、上記非ペプチド性リンカーの両末端の反応基は、互いに同一又は異なってもよく、例えば、両末端にアルデヒド基を有したり、または、一方の末端にはマレイミド基を、他方の末端にはアルデヒド基、プロピオンアルデヒド基、またはブチルアルデヒド基を有することができる。しかし、非ペプチド性リンカーの各末端にＦ、具体的には、免疫グロブリンＦｃ領域とＸが結合することができるのであれば、特にこれに制限されない。

【0207】

例えば、上記非ペプチド性リンカーの一方の末端には反応基としてマレイミド基を含み、他方の末端にはアルデヒド基、プロピオンアルデヒド基またはブチルアルデヒド基などを含むことができる。

【0208】

両末端にヒドロキシ反応基を有するポリエチレングリコールを非ペプチド性重合体として用いる場合には、公知の化学反応により上記ヒドロキシ基を上記多様な反応基で活性化したり、商業的に入手可能な変形された反応基を有するポリエチレングリコールを用いて本発明の持続型タンパク質結合体を製造することができる。

【0209】

一つの具体的な実施形態において、上記非ペプチド性重合体はＸのシステイン残基、より具体的にはシステインの－ＳＨ基に連結されるものであってもよいが、これに制限されない。

【0210】

例えば、上記Ｘに該当するペプチドにおいて１０番システイン残基、１３番システイン残基、１５番システイン残基、１７番システイン残基、１９番システイン残基、２１番システイン残基、２４番システイン残基、２８番システイン残基、２９番システイン残基、３０番システイン残基、３１番システイン残基、４０番システイン残基、または４１番システイン残基に上記非ペプチド性重合体が連結されたものであってもよいが、特にこれに制限されない。

【0211】

具体的には、上記システイン残基の－ＳＨ基に非ペプチド性重合体の反応基が連結されてもよく、反応基に対しては前述した内容が全部適用される。もし、マレイミド－ＰＥＧ－アルデヒドを用いる場合、マレイミド基は、Ｘの－ＳＨ基とチオエーテル（ｔｈｉｏｅｔｈｅｒ）結合で連結し、アルデヒド基はＦ、具体的には、免疫グロブリンＦｃの－ＮＨ₂基と還元的アミノ化反応を通じて連結することができるが、これらに限定されるものではなく、これは一例に該当する。

【0212】

このような還元的アルキル化を通じて非ペプチド性重合体であるＰＥＧの一方の末端に位置した酸素原子に免疫グロブリンＦｃ領域のＮ末端アミノ基が－ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂－の構造を有するリンカー官能基を通じて連結され、－ＰＥＧ－Ｏ－ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ－免疫グロブリンＦｃのような構造を形成することができ、チオエーテル結合を通じてＰＥＧの一方の末端が配列番号１～１０２のいずれか一つの配列を含むペプチドのシステインに位置した硫黄原子に連結された構造を形成することができる。上述のチオエーテル結合は

の構造を含むことができる。

【0213】

しかし、上述の例に特に制限されるものではなく、これは、一例に該当する。

【0214】

他の具体的な実施形態において上記非ペプチド性重合体は、Ｘのリシン残基、より具体的には、リシンのアミノ基に連結されるものであってもよいが、これに制限されない。

【0215】

また、上記結合体において、非ペプチド性重合体の反応基が免疫グロブリンＦｃ領域のＮ末端に位置した－ＮＨ₂と連結されたものであってもよいが、これは、一例に該当する。

【0216】

また、上記結合体において、ペプチドは、反応基を有するリンカーとＣ末端を通じて連結されてもよいが、これは、一例に該当する。

【0217】

本発明において「Ｃ末端」とは、ペプチドのカルボキシ末端を意味し、本発明の目的上、リンカーと結合できる位置をいう。その例として、これに制限されるものではないが、Ｃ末端の最末端アミノ酸残基だけでなく、Ｃ末端の周囲のアミノ酸残基を全部含むことができ、具体的には、最末端から最初～２０番目のアミノ酸残基を含んでもよいが、これに制限されない。

【0218】

Ｆは免疫グロブリンＦｃ領域として、免疫グロブリンのパパインの消化から得る天然型配列だけでなくその誘導体、置換体、例えば、天然配列中の一つ以上のアミノ酸残基が欠失、挿入、非保存的または保存的置換、又はこれらの組み合わせにより変換されて天然のものとは異なる配列など変形体も含まれる。上記誘導体、置換体、変形体はＦｃＲｎに結合する能力を有することを前提とする。

【0219】

前記Ｆは、２つのポリペプチド鎖がジスルフィド結合で連結されている構造であり、前記２つの鎖のうち１つの鎖の窒素原子を介してのみ連結されている構造であるが、これに限定されるものではない。前記窒素原子を介する連結は、リシンのεアミノ原子やＮ末端のアミノ基に還元的アミノ化により連結されるものであってもよいが、これに制限されない。

【0220】

還元的アミノ化反応とは、反応物のアミン基又はアミノ基が他の反応物のアルデヒド（すなわち、還元的アミノ化が可能な官能基）と反応してアミンを生成し、次いで還元反応によりアミン結合を形成する反応を意味し、当該技術分野で周知の有機合成反応である。

【0221】

一つの具体例として、前記Ｆは、そのＮ末端プロリンの窒素原子を通じて連結されたものであってもよいが、これに制限されない。

【0222】

本明細書において別途に指すことがなければ、本発明による「ペプチド」又はこのようなペプチドが生体適合性物質に共有結合で連結された「結合体」に関する明細書の詳細な説明や請求の範囲の技術は、当該ペプチド又は結合体はもちろん、当該ペプチド又は結合体の塩（例えば、前記ペプチドの薬学的に許容可能な塩）、又はその溶媒和物の形態を全て含む範疇にも適用される。従って、明細書に「ペプチド」又は「結合体」とだけ記載されていても当該記載内容はその特定塩、その特定溶媒和物、その特定塩の特定溶媒和物にも同様に適用される。このような塩形態は、例えば、薬学的に許容される任意の塩を用いた形態であってもよい。前記塩の種類は特に制限されない。ただし、個体、例えば、哺乳類に安全で効果的な形態であることが好ましいが、特にこれに制限されるものではない。

【0223】

前記塩の種類は特に制限されない。ただし、個体、例えば、哺乳類に安全で効果的な形態であることが好ましいが、特にこれに制限されるものではない。

【0224】

前記用語、「薬学的に許容される」とは、医薬学的判断の範囲内で、過度な毒性、刺激、又はアレルギー反応などを誘発することなく所望の用途に効果的に使用可能な物質を意味する。

【0225】

本発明において用語、「薬学的に許容される塩」とは、薬学的に許容される無機酸、有機酸、又は塩基から誘導された塩を含む。適した酸の例としては、塩酸、臭素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン－ｐ－スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などを挙げることができる。適した塩基から誘導された塩はナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属、マグネシウムなどのアルカリ土類金属、及びアンモニウムなどを含み得る。

【0226】

また、本発明で用いられた用語「溶媒和物」とは、本発明によるペプチド又はその塩が溶媒分子と複合体を形成したことをいう。

【0227】

本発明において、上記ペプチドまたはその結合体と併用投与されるＳＧＬＴ－２（ｓｏｄｉｕｍ－ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ２）抑制剤は、ナトリウム－グルコース共輸送体２ともいい、具体的には、エンパグリフロジン、ダパグリフロジン、カナグリフロジン、レモグリフロジン、エタボン酸レモグリフロジン、セルグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン、ルセオグリフロジン、ソタグリフロジン、ベキサグリフロジン、アチグリフロジン及びエルツグリフロジンで構成された群から選択されるいずれか一つ以上であってもよいが、これに制限されない。

【0228】

上記ＳＧＬＴ－２は、近位尿細管でブドウ糖の再吸収に関与し、糖尿病患者ではＳＧＬＴ－２により過剰なブドウ糖の再吸収が起きることが知られている。本発明によるペプチドまたはその結合体をＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与することにより、血糖降下の効果を得ることができる。

【0229】

本発明において、上記「糖尿病」は、インスリンの分泌量が不足したり正常な機能が行われないなどの代謝疾患の一種であり、血中ブドウ糖の濃度が高まる高血糖を特徴とし、高血糖により様々な症状及び兆候を起こし、尿からブドウ糖を排出することになる疾病を意味する。第１型糖尿病及び第２型糖尿病に区別され、血糖降下だけでなく体重減少の効果も得ることができる限り、本発明によるペプチドまたはその結合体をＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与することができる。

【0230】

本発明において、糖尿病は、肥満性糖尿病と糖尿病合併症を含むことができる。

【0231】

上記「肥満性糖尿病」は、糖尿病の原因となる肥満症状を伴う糖尿病、特に、第２型糖尿病や、または一般に第２型糖尿病患者に伴う肥満症状を意味する。第２型糖尿病患者の約８０～９０％は肥満症状を伴うことが知られている。本発明において上記肥満性糖尿病は、肥満から発生することであってもよい。

【0232】

上記「糖尿病合併症」とは、長期間高血糖状態が維持されて身体に伴う種々の病的症状を意味することであり、例えば、脳卒中、血管合併症、心臓麻痺、糖尿病性網膜病症、腎機能障害、慢性腎疾患、神経障害、糖尿病性足部潰瘍、そして心血管系疾患などが挙げられるが、これに限定されるものではない。高血糖状態が長期間維持されると、上記糖尿病合併症の危険が高くなるため、このような合併症を予防するためには、効果的な血糖管理と体重調節が不可欠である。

【0233】

本発明において、肥満は過剰な体重（体質量指数２５．０以上）の状態を意味し、糖尿病の主な原因でもある。肥満は、糖尿病と密接に関連しているため、体重の減少は、肥満に対する治療効果として意義を有するだけでなく、糖尿病の治療にも重要な意義を有する。本発明のペプチドまたはその結合体をＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与すると、血糖降下だけでなく、体重減少の効果も得るため、ＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与される、ペプチドまたはその結合体を含む組成物は、肥満の予防または治療、具体的には、高血糖または糖尿病の肥満患者の治療に用いられる。または、糖尿病患者、特に過体重または肥満の糖尿病患者で優れた予防または治療効果を得ることができる。

【0234】

これに対し、本発明のＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与される、ペプチドまたはその結合体を含む組成物は、糖尿病及び／又は肥満患者、例えば、過体重または肥満の糖尿病患者；または糖尿病を有する肥満患者に投与されて血糖降下及び体重減少の効果を示すことにより、糖尿病及び／又は肥満の予防または治療効果を有し得るが、これに制限されない。

【0235】

一方、このような併用投与による効果は、糖尿病と肥満だけでなく、体重増加及び血糖調節異常による種々の疾患、例えば、代謝症候群の患者でも発揮され得る。

【0236】

本発明において、代謝症候群は、種々の代謝関連疾患を総称し、代謝症候群の例としては、糖尿病、肥満、高脂血症及び異常脂質血症などが挙げられるが、これに制限されない。このような代謝症候群の代表的な原因としては、インスリン抵抗性、過体重などが挙げられる。

【0237】

糖尿病及び肥満は、上述した通りである。

【0238】

本発明において、高脂血症は、血液内に低密度リポ蛋白コレステロール及び／又は中性脂肪が高い疾患を意味し、例えば、低密度リポ蛋白コレステロールが１３０ｍｇ／ｄＬを超え及び／又は中性脂肪が２００ｍｇ／ｄＬを超える場合、高脂血症に該当する。

【0239】

本発明において、異常脂質血症は、血液内に低密度リポ蛋白コレステロール及び高密度リポ蛋白コレステロールと中性脂肪の数値が正常範囲から外れた状態を意味する。

【0240】

このような代謝症候群は、高血糖及び体重増加と密接に関連していることが知られているため、本発明による併用投与により血糖降下及び体重減少を達成することにより対象症候群に対する予防または治療効果を得ることができる。

【0241】

また、本発明によるＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与される、ペプチドまたはその結合体を含む組成物は、抗炎及び抗線維化の効果も有するため、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療効果を示すことができる。

【0242】

本発明において、肝臓疾患は、単純脂肪症、非アルコール性脂肪肝、肝臓炎症、非アルコール性脂肪肝炎、代謝性肝疾患、胆汁うっ滞性肝疾患、肝線維症、肝硬変、肝不全及び肝臓癌などを含むが、これに制限されない。

【0243】

本発明において、肺疾患は、間質性肺疾患、進行性線維化を伴う間質性肺疾患、特発性間質性肺炎、非特異的間質性肺炎、肺線維症、間質性肺線維症、特発性肺線維症、肺胞炎、肺炎、肺気腫、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、複合肺線維化と肺気腫（ＣＰＦＥ）、喘息などが挙げられる。

【0244】

肝臓及び肺疾患において、主要な病理学的メカニズムは、炎症の発生、及び組織損傷とそれによる線維化が挙げられる。本発明によるＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与される、ペプチドまたはその結合体を含む組成物は、抗炎症及び抗線維化の効果を有するため、肝臓疾患及び肺疾患に対する効果も示すことができる。

【0245】

本発明の呼吸器感染疾患は、病原体（ウイルス、細菌、真菌など）の感染による呼吸器疾患であり、代表的な感染原因としては、呼吸器ウイルスが挙げられる。呼吸器感染疾患中、呼吸器ウイルス感染疾患は、病原性ウイルス感染による呼吸器疾患を意味し、上記呼吸器ウイルスは、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、ワクシニアウイルス（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒｕｓ）、単純ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ）、パラインフルエンザウイルス（ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ）、ライノウイルス（ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、水痘ウイルス（ｖａｒｉｃｅｌｌａ Ｚｏｓｔｅｒ Ｖｉｒｕｓ）、麻疹ウイルス（ｍｅａｓｌｅ ｖｉｒｕｓ）、呼吸器細胞融合ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、デングウイルス（Ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ）、ＨＩＶ（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）、インフルエンザウイルス、コロナウイルス（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、重症急性呼吸器症候群ウイルス（ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ；ＳＡＲＳ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）、または中東呼吸器症候群コロナウイルス（ｍｉｄｄｌｅ ｅａｓｔ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ；ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）であってもよいが、これに制限されない。

【0246】

上記コロナウイルスの制限されない一例として、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が挙げられ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染により新型コロナウイルス感染症（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ ２０１９，ＣＯＶＩＤ－１９）が発病する。

【0247】

本出願において用語、新型コロナウイルス感染症は、コロナウイルス（２０１９－ｎＣｏＶまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の感染によるウイルス感染性疾患であり、まだ明確な感染源と感染経路は確認されていないが、伝播力が非常に強く全世界的なパンデミック事態を起こした。

【0248】

本発明の呼吸器感染疾患は、呼吸器感染疾患の後遺症を含むことができる。

【0249】

本発明の呼吸器感染疾患の後遺症は、呼吸器感染疾患患者に現れる、呼吸器感染と独立して現れる異常症状を意味する。具体的には、本発明において呼吸器感染疾患の後遺症は、呼吸器ウイルス感染疾患の後遺症、より具体的には、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の後遺症を意味し得るが、これに制限されるものではない。

【0250】

本出願において、用語「新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の後遺症（ＣＯＶＩＤ－１９ Ｓｅｑｕｅｌａｅ）」は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染後の患者に現れる後遺症を意味する。具体的には、新型コロナウイルス感染症の後遺症は、呼吸困難、咳、肺炎、肺線維症、痛み、炎症、及び神経系障害などを含むが、これに制限されない。新型コロナウイルス感染症の後遺症として現れる呼吸困難、咳、慢性疲労、痛み、肺炎、線維症などは、呼吸器、特に、肺の機能低下及び／又は損傷により現れるが、これに制限されない。

【0251】

本発明において用語「予防」とは、上記ペプチド（例えば、上記ペプチド自体またはこれに生体適合性物質が結合された持続型結合体形態）またはこれらを含む組成物とＳＧＬＴ－２抑制剤の併用投与により代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患を抑制または遅延させるあらゆる行為を意味する。本発明において用語「治療」とは、上記ペプチド（例えば、上記ペプチド自体またはこれに生体適合性物質が結合された持続型結合体形態）またはこれらを含む組成物とＳＧＬＴ－２抑制剤の併用投与により代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の症状が好転または有益になるあらゆる行為を意味する。

【0252】

本発明による組成物は、ペプチド（三重活性体）またはその結合体を含むものであってもよく、具体的には、薬理学的有効量のペプチドまたはその結合体を含むものであってもよい。また、薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含んでもよい。本発明の組成物は、代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療用途を有するものであってもよく、または、血糖降下用途を有するものであってもよいが、これに制限されない。併せて、本発明による組成物は、体重減少の用途も有することができる。

【0253】

本発明における「薬学的に許容可能な」とは、治療効果を発揮する程度の十分な量と副作用を起こさないことを意味し、疾患の種類、患者の年齢、体重、健康状態、性別、薬物に対する感受性、投与経路、投与方法、投与回数、治療期間、配合、同時用いられる薬物などの医学分野における公知の要素により当業者が容易に決定することができる。

【0254】

薬学的に許容される賦形剤は、経口投与時には、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤、色素及び香料などを用いることができ、注射剤の場合には、緩衝剤、保存剤、無痛化剤、可溶化剤、等張化剤及び安定化剤などを混合して用いることができ、局所投与用の場合には、基剤、賦形剤、潤滑剤及び保存剤などを用いることができる。本発明の組成物の剤形は、上述したような薬学的に許容される賦形剤と混合して多様に製造することができる。例えば、経口投与時には、錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、サスペンション、シロップ及びウェハーなどの形態に製造することができ、注射剤の場合には、単位投薬アンプルまたは複数回投薬形態に製造することができる。その他、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル及び徐放性製剤などに剤形化することができる。

【0255】

一方、製剤化に適した担体、賦形剤及び希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシア、アルギネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、マグネシウムステアレートまたは鉱油などが用いられる。また、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤及び防腐剤などをさらに含んでもよい。

【0256】

さらに、本発明の組成物は、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤、滅菌水溶液剤、非水性溶剤、凍結乾燥剤及び坐剤からなる群から選択されるいずれかの剤形を有してもよい。

【0257】

さらに、前記ペプチド又は結合体は、生理食塩水や有機溶媒のように薬剤に許容される様々な担体（ｃａｒｒｉｅｒ）と混合して用いることができ、安定性や吸収性を向上させるために、グルコース、スクロース、デキストランなどの炭水化物、アスコルビン酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、グルタチオンなどの抗酸化剤（ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ）、キレート剤、低分子タンパク質、他の安定化剤（ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ）などを薬剤として用いることができる。

【0258】

本発明の組成物の投与量と回数は、治療する疾患、投与経路、患者の年齢、性別及び体重、疾患の重症度などの様々な関連因子と共に、活性成分である薬物の種類により決定される。具体的には、本発明の組成物は、前記ペプチド又はその結合体を薬学的有効量として含むものであってもよいが、これに制限されない。

【0259】

上記ペプチドまたはその結合体を薬学的有効量として含むことは、ペプチドまたはその結合体による目的とする薬理活性（例えば、血糖降下及び／又は体重減少）が得られる程度を意味し、また、投与される個体において毒性または副作用が起こらなかったり僅かな水準として薬学的に許容される水準を意味しうるが、これに制限されない。このような薬学的有効量は、投与回数、患者、剤形などを総合的に考慮して決定することができる。

【0260】

特にこれに制限されないが、本発明の前記薬学的組成物は、前記成分（有効成分）を０．０１～９９％重量対体積で含有し得る。

【0261】

本発明の組成物の総有効量は、単回投与量（ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｓｅ）で患者に投与してもよく、複数回投与量（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｏｓｅ）で長期間投与する分割治療方法（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌ）により投与してもよい。本発明の組成物は、疾患の程度に応じて有効成分の含有量を変えてもよい。具体的には、本発明のペプチドまたはその持続型結合体の総用量は、１日体重１ｋｇ当たり約０．０００１ｍｇ～５００ｍｇであることが好ましい。しかし、前記ペプチドまたはその持続型結合体の用量は、薬学的組成物の投与経路及び治療回数だけでなく、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食餌、排泄率などの様々な要因を考慮して患者に対する有効投与量が決定されるので、これらを考慮すると、当該分野における通常の知識を有する者であれば、前記本発明の組成物の特定の用途に応じた適切な有効投与量を決定することができるであろう。本発明による薬学的組成物は、本発明の効果を奏するものであれば、その剤形、投与経路及び投与方法が特に限定されるものではない。

【0262】

例えば、本発明の組成物は、３日に１回、１週に１回、２週に１回、４週に１回、または１ヶ月に１回投与されるが、これに制限されない。

【0263】

本発明の組成物は、血糖降下及び／又は体重減少が必要なヒトを含むラット、家畜などを含む哺乳動物に投与されるものであってもよく、具体的には、糖尿病及び／又は肥満患者、より具体的には、過体重または肥満の糖尿病患者または高血糖または糖尿病を有する肥満患者に投与されるが、血糖降下及び体重減少により有益な効果を得ることができるのであれば、投与対象に制限がない。また、本発明の組成物は、代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の患者に投与され得るが、これに制限されない。

【0264】

本発明のペプチドまたはその持続型結合体；またはこれらを含む組成物は、ＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与されるものであり、併用投与により体重減少及び血糖降下の効果を有し、糖尿病及び／又は肥満患者、特に過体重または肥満の糖尿病患者または高血糖または糖尿病を有する肥満患者で優れた予防または治療効果を示すことができる。

【0265】

または、ＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与される本発明のペプチドまたはその持続型結合体；またはこれらを含む組成物は、抗炎症及び抗線維化の効果を有し、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患患者で優れた予防または治療効果を示すことができる。

【0266】

上記ＳＧＬＴ－２抑制剤は、併用投与に適切な形態の剤形、例えば、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、内溶液剤、乳剤、シロップ剤、滅菌水溶液、非水性溶剤、凍結乾燥製剤及び坐剤からなる群から選択されるいずれか一つの剤形を有することができるが、これに制限されない。また、上記ＳＧＬＴ－２抑制剤は、併用投与に適切な投与経路、例えば、経口、または皮膚、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、髄膜腔内、心室内、肺、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、消化管内、局所、舌下、膣内もしくは直腸経路を含む非経口投与経路により投与されるが、これらに限定されるものではない。

【0267】

本発明のペプチドまたはその持続型結合体は、ＳＧＬＴ－２抑制剤と適した割合で併用投与することができる。例えば、１回の投与量を基準として、本発明のペプチドまたはその持続型結合体は０．１～１００ｍｇ、０．５～８０ｍｇ、１～６０ｍｇ、１～２５ｍｇ、５～２０ｍｇ、または１０～１５ｍｇで投与され、ＳＧＬＴ－２抑制剤は１～５０ｍｇ、３～３０ｍｇ、または５～２５ｍｇの用量で投与されてもよいが、これに制限されない。

【0268】

本発明のペプチドまたはその持続型結合体は、ＳＧＬＴ－２抑制剤と適した割合で併用投与され、優れた血糖調節効果を示しながらも体重減少の効果を示すことができる。万が一、ペプチドまたはその持続型結合体を過量投与する場合、糖尿病患者を治療できる水準の血糖調節効果を有し得ない危険が高く、ＳＧＬＴ－２抑制剤を過量投与する場合、体重が増加する副作用が現れる危険が高い問題点がある。

【0269】

本発明のペプチドまたはその持続型結合体；またはこれらを含む組成物は、ＳＧＬＴ－２抑制剤と一定の投与間隔で共に投与されたり、または異なる頻度で個別に投与されてもよく、二成分の併用投与による効果を有する限り、投与時点に制限はない。

【0270】

これに制限されないが、本発明のペプチドまたはその持続型結合体、またはこれらを含む組成物；及びＳＧＬＴ－２抑制剤の投与頻度は、それぞれ独立して３日に１回、１週に１回、２週に１回、４週に１回、または１ヶ月に１回投与されてもよく、本発明のペプチドまたはその持続型結合体；またはこれらを含む組成物とＳＧＬＴ－２抑制剤間の投与間隔は１～１０日、１～５日または１～３日であってもよいが、これに制限されない。

【0271】

以上の内容は、本発明の他の具体例あるいは他の様態にも適用できるが、これに制限されるものではない。

【0272】

本発明を具現する他の一態様は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を含む組み合わせ物、薬学的組成物、またはキットを提供する。一つの具体例として、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療用組み合わせ物、薬学的組成物、またはキットである。他の具体例として、糖尿病及び／又は肥満の予防または治療用組み合わせ物、薬学的組成物、またはキットである。

【0273】

上記ペプチド、その結合体、組成物、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患、糖尿病、肥満、ＳＧＬＴ－２抑制剤、併用投与、予防、治療については前述した通りである。

【0274】

本発明の組成物、組み合わせ物、またはキットは、（ｉ）グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチド、または（ｉｉ）上記グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドの持続型結合体を含み、さらに／選択的にＳＧＬＴ－２抑制剤を含むものであってもよいが、これに制限されない。本発明の組成物、組み合わせ物及びキットは、代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患患者に投与／使用されて予防または治療効果を示すものであってもよいが、これに制限されない。または本発明の組成物、組み合わせ物及びキットは、糖尿病患者、肥満患者、過体重または肥満の糖尿病患者、または糖尿病の肥満患者に投与／使用されて血糖降下及び体重減少の効果を示すものであってもよいが、これに制限されない。

【0275】

本発明において用語「組み合わせ物（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤の併用投与用途を有することにより、「併用用途（ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｕｓｅｄ）」のような意味で理解できる。これは、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチド；及びＳＧＬＴ－２抑制剤が併用されることを特徴とする薬学的組成物形態を含むが、これに制限されない。

【0276】

上記組み合わせ物は
ａ）（ｉ）グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及び（ｉｉ）ＳＧＬＴ－２抑制剤が混合された一つの混合物（ｍｉｘｔｕｒｅ）で投与されるものであるか；または
ｂ）（ｉ）グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及び（ｉｉ）ＳＧＬＴ－２抑制剤が分離した形態で投与されるものであってもよいが、これに制限されない。

【0277】

グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体及びＳＧＬＴ－２抑制剤が分離した形態である場合、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有する物質またはその結合体及びＳＧＬＴ－２抑制剤が別個の製剤に製剤化されて同時、個別、順次、または逆順に投与されてもよい。

【0278】

本発明のＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与される、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体を含む組成物は、上記組み合わせ物を含むこともできる。

【0279】

本発明において用語「組み合わせ物を含む組成物（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」は、上記グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体及びＳＧＬＴ－２抑制剤を含む組み合わせ物それ自体であるか、これを含み、治療学的用途を有するものであってもよいが、これに制限されない。その例として、代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療用途を有するものであってもよいが、これに制限されない。具体的には、糖尿病及び／又は肥満の予防または治療用途を有するものであってもよいが、これに制限されない。本願において「組み合わせ物を含む組成物」は「組成物」と互換的に用いられる。

【0280】

本発明による組み合わせ物を含む組成物は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体及びＳＧＬＴ－２抑制剤を併用投与するためのものであり、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤が一つの製剤に製剤化されたものであるか、または個別的に製剤化されたものであってもよい。具体的には、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を同時、個別、順次、または逆順に投与するものであってもよいが、これに制限されない。

【0281】

本発明において用語「キット」は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を併用投与するために、本発明によるグルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を含むものであってもよい。具体的には、本発明によるキットには、一つの製剤に製剤化されたグルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を含んだり、上記ペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤の個別製剤を含んでもよく、二つの物質の併用投与に必要な物質をさらに含むものであってもよいが、これに制限されない。

【0282】

本発明の組み合わせ物、組成物、キットの投与／使用により体重減少及び血糖降下の効果を得ることができ、代謝症候群患者、具体的には、糖尿病患者、特に過体重または肥満を伴う糖尿病患者；または肥満患者、特に糖尿病の肥満患者で優れた糖尿病及び／又は肥満の予防または治療効果を得ることができる。

【0283】

また、本発明の組み合わせ物、組成物、キットの投与／使用により体重減少及び血糖降下の効果だけでなく、抗炎症及び抗線維化の効果も得ることができ、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患患者で予防または治療効果を得ることができる。

【0284】

本発明の組み合わせ物、組成物、キットは、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を併用投与するために用いるものであってもよい。

【0285】

本発明を具現する他の一態様は、ペプチド、その結合体、またはこれらを含む組成物をこれを必要とする個体に投与する段階を含む糖尿病及び／又は肥満の予防または治療方法または血糖降下方法である。

【0286】

本発明を具現する他の一態様は、ペプチド、その結合体、またはこれらを含む組成物をこれを必要とする個体に投与する段階を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療方法または血糖降下方法である。

【0287】

本発明の方法は、ＳＧＬＴ－２抑制剤をこれを必要とする個体に投与する段階をさらに含んでもよい。具体的な例として、本発明の方法は、ペプチドまたはその結合体をＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与する方法であってもよいが、これに制限されない。

【0288】

上記ペプチド、その結合体、組成物、ＳＧＬＴ－２抑制剤、併用投与、糖尿病、肥満、代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患、予防、治療、及び血糖降下については前述した通りである。

【0289】

本発明において上記個体は、血糖降下及び体重減少に有益な個体であり、ヒトを含むラット、家畜などを含む哺乳動物を意味するが、本発明のペプチドまたはその結合体、またはこれらを含む組成物による血糖降下の効果に有益な個体は、制限なく含まれる。特に、糖尿病及び／又は肥満を有する個体であってもよいが、これに制限されない。一つの具体例として、上記個体は、過体重であるか、肥満の糖尿病患者であってもよく、または肥満性糖尿病または糖尿病合併症を有したり、有する危険がある個体であってもよいが、これに制限されない。または肥満であるか、高血糖または糖尿病を有する肥満である個体であってもよいが、これに制限されない。または、代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患を有している個体であってもよいが、これに制限されない。

【0290】

本発明の用語、「投与」とは、任意の適切な方法で患者（個体）に所定の物質を導入することを意味し、上記ペプチド、その結合体、または組成物；及びＳＧＬＴ－２抑制剤の投与経路は、特にこれに制限されないが、上記ペプチド、その結合体または組成物；及びＳＧＬＴ－２抑制剤が生体内標的に到達できる任意の一般的な経路を通じて投与され得、例えば、腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、経口投与、局所投与、鼻腔内投与、肺内投与、直腸内投与などが挙げられる。

【0291】

本発明の方法において、上記ペプチドまたはその結合体；及びＳＧＬＴ－２抑制剤は同一の投与経路で投与されたり、またはそれぞれ異なる投与経路で投与されてもよく、併用投与される薬物の投与経路は、互いに独立してもよい。

【0292】

また、上記ペプチド、その結合体または組成物；及びＳＧＬＴ－２抑制剤は、薬学的分野において通常の方法により患者の身体内投与に適した単位投与形の製剤、具体的には、タンパク質医薬品の投与に有用な製剤形態に剤形化させて当業界において通常使用する投与方法を用いて経口、または皮膚、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、髄膜腔内、心室内、肺、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、消化管内、局所、舌下、膣内もしくは直腸経路を含む非経口投与経路により投与できるが、これらに限定されるものではない。

【0293】

本発明のペプチド、その結合体またはこれらを含む組成物は、３日に１回、１週に１回、２週に１回、４週に１回、または１ヶ月に１回投与できるが、これに制限されない。

【0294】

一方、ＳＧＬＴ－２抑制剤は、本発明のペプチド、その結合体またはこれらを含む組成物と併用投与されることにより血糖降下効果及び体重減少効果を同時に発揮できる限り、投与頻度は制限されないが、例えば、３日に１回、１週に１回、２週に１回、４週に１回、または１ヶ月に１回投与することができる。また、上記ペプチドまたはその結合体と同一の間隔で投与されたり、または異なる間隔、例えば１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、または１０日以上の間隔を置いて投与されるものであってもよいが、これに制限されるものではない、

【0295】

本発明の方法は、上記ペプチド、またはその結合体を含む組成物；及びＳＧＬＴ－２抑制剤を薬学的有効量で投与することを含むことができる。適した総１日使用量は正しい医学的判断の範囲内で処置医により決定され、１回又は数回に分けて投与できる。しかし、本発明の目的上、特定患者に対する具体的な治療的有効量は、達成しようとする反応の種類と程度、場合によって他の製剤が用いられるかどうかをはじめとする具体的な組成物、患者の年齢、体重、一般健康状態、性別及び食事、投与時間、投与経路及び組成物の分泌率、治療期間、具体的な組成物と共に用いられたり同時に用いられる薬物をはじめとする多様な因子と医薬分野によく知られている類似因子により異なって適用することが好ましい。

【0296】

本発明の方法において、上記ペプチドまたはその持続型結合体は、ＳＧＬＴ－２抑制剤と適した割合で併用投与することができる。例えば、１回の投与量を基準として、本発明のペプチドまたはその持続型結合体は０．１～１００ｍｇ、０．５～８０ｍｇ、１～６０ｍｇ、１～２５ｍｇ、５～２０ｍｇ、または１０～１５ｍｇで投与され、ＳＧＬＴ－２抑制剤は１～５０ｍｇ、３～３０ｍｇ、または５～２５ｍｇの用量で投与されてもよいが、これに制限されない。

【0297】

本発明を具現する他の一態様は、上記組み合わせ物、上記薬学的組成物、または薬学的キットを、これを必要とする個体に投与及び／又は使用する段階を含む糖尿病及び／又は肥満の予防または治療方法を提供することである。

【0298】

本発明を具現する他の一態様は、上記組み合わせ物、上記薬学的組成物、または薬学的キットを、これを必要とする個体に投与及び／又は使用する段階を含む代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療方法を提供することである。
上記組み合わせ物、薬学的組成物、薬学的キット、個体、投与、糖尿病、肥満、代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患、併用投与、予防、治療については前述した通りである。

【0299】

具体的な例として、上記方法は、ペプチドまたはその結合体をＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与する方法であってもよいが、これに制限されない。

【0300】

本発明を具現する他の一態様は、ペプチド、その結合体、またはこれらを含む組成物の糖尿病及び／又は肥満の予防または治療用途及び／又は糖尿病及び／又は肥満の予防または治療のための薬剤の製造のための用途を提供することである。

【0301】

本発明を具現する他の一態様は、ペプチド、その結合体、またはこれらを含む組成物の代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療用途及び／又は代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療のための薬剤の製造のための用途を提供することである。

【0302】

上記ペプチド、その結合体、組成物、糖尿病、肥満、代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患、予防、治療については前述した通りである。

【0303】

具体的には、上記用途は、ペプチドまたはその結合体をＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与するための用途であってもよい。

【0304】

本発明のもう一つの目的は、上記組み合わせ物、薬学的組成物、または薬学的キットの糖尿病及び／又は肥満の予防または治療用途及び／又は糖尿病及び／又は肥満の予防または治療のための薬剤の製造のための用途を提供することにある。

【0305】

本発明のもう一つの目的は、上記組み合わせ物、薬学的組成物、または薬学的キットの代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療用途及び／又は代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患の予防または治療のための薬剤の製造のための用途を提供することにある。

【0306】

上記組み合わせ物、薬学的組成物、薬学的キット、個体、投与、糖尿病、肥満、代謝症候群、肝臓疾患、肺疾患、または呼吸器感染疾患、予防、治療、併用投与、予防、治療については前述した通りである。

【0307】

具体的には、上記用途は、ペプチドまたはその結合体をＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投与するための用途であってもよい。

【0308】

以下、下記実施例により本発明をより詳しく説明する。ただし、下記実施例は本発明を例示するためのものであり、本発明の範囲がこれらに限定されるものではない。

【0309】

実施例１：三重活性体の製造
ＧＬＰ－１、ＧＩＰ及びグルカゴン受容体の全てに対して活性を示す三重活性体を製造し、下記表１にその配列を示した。

【0310】

【表1】

【0311】

上記の表１に記載された配列においてＸと表記されたアミノ酸は、非天然のアミノ酸であるＡｉｂ（２－ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり、下線で表されたアミノ酸は、下線及びボールドで表されたアミノ酸が互いに環を形成することを意味する。また、上記の表１においてＣＡは４－イミダゾアセチル（４－ｉｍｉｄａｚｏａｃｅｔｙｌ）を、Ｙはチロシンを意味する。

【0312】

実施例２：三重活性体の持続型結合体の製造
両末端にそれぞれマレイミド基及びアルデヒド基を有する１０ｋＤａのＰＥＧ、すなわちマレイミド－ＰＥＧ－アルデヒド（１０ｋＤａ、ＮＯＦ、日本）を実施例１の三重活性体（配列番号２１、２２、４２、４３、５０、７７及び９６）のシステイン残基にペグ化するために、三重活性体とマレイミド－ＰＥＧ－アルデヒドのモル比を１：１～３とし、タンパク質の濃度を１～５ｍｇ／ｍｌとし、低温で０．５～３時間反応させた。ここで、反応は、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．５）に２０～６０％イソプロパノールを添加した環境下で行った。反応終了後に、前記反応液をＳＰセファロースＨＰ（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、米国）に適用し、システインにモノペグ化された三重活性体を精製した。

【0313】

次に、上記精製されたモノペグ化された三重活性体と免疫グロブリンＦｃ（配列番号１２３のホモ二量体）をモル比１：１～５、タンパク質の濃度１０～５０ｍｇ／ｍｌにして４～８℃で１２～１８時間反応させた。反応は、１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．０）に還元剤である１０～５０ｍＭのシアノ水素化ホウ素ナトリウムと１０～３０％のイソプロパノールが添加された環境下で行われた。反応が終了した後、上記反応液をブチルセファロースＦＦ精製カラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、米国）とＳｏｕｒｃｅ ＩＳＯ精製カラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、米国）に適用し、三重活性体と免疫グロブリンＦｃを含む結合体を精製した。精製されたこの持続型結合体は、分子内で三重活性体ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーとＦｃ二量体が１：１：１のモル比で共有結合で連結された構造であり、ＰＥＧリンカーは、Ｆｃ二量体の両ポリペプチド鎖中の一本鎖のみに連結されている。

【0314】

一方、上記免疫グロブリンＦｃは、配列番号１２３のアミノ酸配列（２２１個のアミノ酸で構成される）を有する単量体２個が各単量体の３番のアミノ酸であるシステインの間にジスルフィド結合を通じてホモ二量体を形成し、上記ホモ二量体の単量体は、それぞれ独立して３５番及び９５番のシステイン間の内部のジスルフィド結合及び１４１番及び１９９番のシステイン間の内部のジスルフィド結合が形成されたものである。

【0315】

製造後に逆相クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー及びイオン交換クロマトグラフィーで分析した純度は９５％以上であった。

【0316】

ここで、配列番号２１の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧリンカーを通じて連結された結合体を、「配列番号２１と免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号２１の持続型結合体」と命名し、これらは本願において混用され得る。

【0317】

ここで、配列番号２２の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧリンカーを通じて連結された結合体を、「配列番号２２と免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号２２の持続型結合体」と命名し、これらは本願において混用され得る。

【0318】

ここで、配列番号４２の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを通じて連結された結合体を、「配列番号４２と免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号４２の持続型結合体」と命名し、これらは本願において混用され得る。

【0319】

ここで、配列番号４３の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを通じて連結された結合体を、「配列番号４３と免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号４３の持続型結合体」と命名し、これらは本願において混用され得る。

【0320】

ここで、配列番号５０の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを通じて連結された結合体を、「配列番号５０と免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号５０の持続型結合体」と命名し、これらは本願において混用され得る。

【0321】

ここで、配列番号７７の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを通じて連結された結合体を、「配列番号７７と免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号７７の持続型結合体」と命名し、これらは本願において混用され得る。

【0322】

ここで、配列番号９６の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを通じて連結された結合体を、「配列番号９６と免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号９６の持続型結合体」と命名し、これらは本願において混用され得る。

【0323】

実験例１：三重活性体及びその持続型結合体のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性測定
実施例１及び２で製造した三重活性体とその持続型結合体の活性を測定するために、ＧＬＰ－１受容体、グルカゴン（ＧＣＧ）受容体及びＧＩＰ受容体がそれぞれ形質転換された細胞株を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞活性を測定する方法を用いた。

【0324】

前記各細胞株は、ＣＨＯ（ｃｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｏｖａｒｙ）にヒトＧＬＰ－１受容体、ヒトＧＣＧ受容体及びヒトＧＩＰ受容体遺伝子をそれぞれ発現するように形質転換されたものであり、ＧＬＰ－１、ＧＣＧ及びＧＩＰの活性を測定するのに適している。よって、それぞれの形質転換細胞株を用いて各部分の活性を測定した。

【0325】

実施例１と２で製造した三重活性体とその持続型結合体のＧＬＰ－１活性の測定のために、ヒトＧＬＰ－１を５０ｎＭから０．００００４８ｎＭまで４倍連続希釈し、実施例１－１及び１－２で製造した三重活性体とその持続型結合体を４００ｎＭから０．０００３８ｎＭまで４倍連続希釈した。前記培養したヒトＧＬＰ－１受容体を発現するＣＨＯ細胞から培養液を除去し、連続希釈した各物質を５μｌずつ前記細胞に添加し、次いでｃＡＭＰ抗体を含む緩衝液を５μｌずつ追加し、その後常温で１５分間培養した。次に、細胞溶解緩衝液（ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）を含むｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｉｘを１０μｌずつ加えて細胞を溶解させ、常温で９０分間反応させた。前記反応が終了した細胞溶解物をＬＡＮＣＥ ｃＡＭＰ ｋｉｔ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＵＳＡ）に適用し、蓄積されたｃＡＭＰからＥＣ₅₀値を算出し、相互比較した。ヒトＧＬＰ－１に対する相対力価を下記表２と表３に示す。

【0326】

前記実施例１と２で製造した三重活性体とその持続型結合体のＧＣＧ活性の測定のために、ヒトＧＣＧを５０ｎＭから０．００００４８ｎＭまで４倍連続希釈し、実施例１と２で製造した三重活性体とその持続型結合体を４００ｎＭから０．０００３８ｎＭまで４倍連続希釈した。前記培養したヒトＧＣＧ受容体を発現するＣＨＯ細胞から培養液を除去し、連続希釈した各物質を５μｌずつ前記細胞に添加し、次いでｃＡＭＰ抗体を含む緩衝液を５μｌずつ追加し、その後常温で１５分間培養した。次に、細胞溶解緩衝液（ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）を含むｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｉｘを１０μｌずつ加えて細胞を溶解させ、常温で９０分間反応させた。前記反応が終了した細胞溶解物をＬＡＮＣＥ ｃＡＭＰ ｋｉｔ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＵＳＡ）に適用し、蓄積されたｃＡＭＰからＥＣ₅₀値を算出し、相互比較した。ヒトＧＣＧに対する相対力価を下記表２と表３に示す。

【0327】

前記実施例１と２で製造した三重活性体とその持続型結合体のＧＩＰ活性の測定のために、ヒトＧＩＰを５０ｎＭから０．００００４８ｎＭまで４倍連続希釈し、実施例１と２で製造した三重活性体とその持続型結合体を４００ｎＭから０．０００３８ｎＭまで４倍連続希釈した。前記培養したヒトＧＩＰ受容体を発現するＣＨＯ細胞から培養液を除去し、連続希釈した各物質を５μｌずつ前記細胞に添加し、次いでｃＡＭＰ抗体を含む緩衝液を５μｌずつ追加し、その後常温で１５分間培養した。次に、細胞溶解緩衝液（ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）を含むｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｉｘを１０μｌずつ加えて細胞を溶解させ、常温で９０分間反応させた。前記反応が終了した細胞溶解物をＬＡＮＣＥ ｃＡＭＰ ｋｉｔ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＵＳＡ）に適用し、蓄積されたｃＡＭＰからＥＣ₅₀値を算出し、相互比較した。ヒトＧＩＰに対する相対力価を下記表２と表３に示す。

【0328】

【表2】

【0329】

【表3】

【0330】

上記の三重活性体及びその結合体は、ＧＬＰ－１受容体、ＧＩＰ受容体及びグルカゴン受容体の全てを活性化させる三重活性体として機能を有する。

【0331】

実験例２：ＤＩＯ／ＳＴＺ ｒａｔｓにおける持続型結合体及びＳＧＬＴ－２抑制剤併用投与の血糖降下及び体重減少効果の確認
上記実施例１及び２で製造された配列番号４２の持続型結合体のＳＧＬＴ－２抑制剤との併用投与による血糖降下効果を確認するために、配列番号４２の持続型結合体をＳＧＬＴ－２抑制剤であるエンパグリフロジンと共に肥満及び糖尿病モデルとしてよく知られたＤＩＯ／ＳＴＺ ｒａｔｓに４週間併用投与した。

【0332】

併用投与による血糖降下効力を確認するために、試験は、賦形剤対照群、配列番号４２の持続型結合体単独投与群（０．１６３ｍｇ／ｋｇ，Ｑ３Ｄ）、エンパグリフロジン単独投与群（１０ｍｇ／ｋｇ，ＱＤ）、そして配列番号４２の持続型結合体（０．１６３ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ）及びエンパグリフロジン（１０ｍｇ／ｋｇ，ＱＤ）の併用投与群に分け、当該物質を４週間皮下に繰り返し投与した。４週繰り返し投与をしながら体重変化と共に各ｒａｔの血液を尾静脈から取った後、血糖測定計（ＯｎｅＴｏｕｃｈ（登録商標） Ｕｌｔｒａ（登録商標））を通じて血糖の変化程度も測定した。配列番号４２の持続型結合体及びエンパグリフロジンを併用投与した群は、体重減少及び血糖数値が効果的に減少したことを確認することができた（図１及び図２）。

【0333】

統計処理は、一元ＡＮＯＶＡを用いて賦形剤群（対照群）と試験群とを比較した。

【0334】

このような結果は、本発明の持続型三重活性体結合体をエンパグリフロジンのようなＳＧＬＴ－２抑制剤と併用投薬時に血糖減少及び体重減少の効果を共に示すため、糖尿病及び／又は肥満患者で治療効果を期待できることを示唆する。

【0335】

以上の説明から、本発明の属する技術分野の当業者であれば、本発明がその技術的思想や必須の特徴を変更することなく、他の具体的な形態で実施できることを理解するであろう。なお、前記実施例はあくまで例示的なものであり、限定的なものでないことを理解すべきである。本発明には、明細書ではなく請求の範囲の意味及び範囲とその等価概念から導かれるあらゆる変更や変形された形態が含まれるものと解釈すべきである。

【図1】

【図2】

【配列表】

2024527220000001.app

【国際調査報告】