特表 2024-527401 神経学的疾患を処置する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-24

(54)【発明の名称】神経学的疾患を処置する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20240717BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240717BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240717BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20240717BHJP

   A61P 27/06 20060101ALI20240717BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240717BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240717BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240717BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20240717BHJP

   C07K 16/46 20060101ALN20240717BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N

A61P25/28

A61P25/00

A61P25/16

A61P27/06

A61P9/00

A61K39/395 D

A61P43/00 121

A61K45/00

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024501831

(86)(22)【出願日】2022-07-12

(85)【翻訳文提出日】2024-02-27

(86)【国際出願番号】 CN2022105077

(87)【国際公開番号】W WO2023284710

(87)【国際公開日】2023-01-19

(31)【優先権主張番号】63/221,261

(32)【優先日】2021-07-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524014710

【氏名又は名称】サイノマブ バイオサイエンス リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】レオン， シュイ－オン

(72)【発明者】

【氏名】チョン， チホ

(72)【発明者】

【氏名】チュアン， チンイー

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA16

4C084MA17

4C084MA21

4C084MA22

4C084MA23

4C084MA24

4C084MA27

4C084MA31

4C084MA34

4C084MA35

4C084MA43

4C084MA44

4C084MA55

4C084MA56

4C084MA59

4C084MA60

4C084MA66

4C084NA05

4C084ZA011

4C084ZA012

4C084ZA021

4C084ZA022

4C084ZA151

4C084ZA152

4C084ZA161

4C084ZA162

4C084ZA331

4C084ZA332

4C084ZA361

4C084ZA362

4C084ZC202

4C084ZC412

4C084ZC751

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB11

4C085BB36

4C085BB41

4C085BB43

4C085CC23

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG05

4C085GG06

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA50

(57)【要約】

ある特定の抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片を用いて、ベータ－アミロイド（Ａβ）プラークの除去を促進する方法、神経炎症を低減させる方法、および神経学的障害（例えば、アルツハイマー病）を処置する方法が、本明細書で提供される。例示的な抗体、その特徴、およびさらなる治療的抗体についてスクリーニングする方法もまた、本明細書に記載される。本発明は、毒性オリゴマー性Ａβ１－４２が、ヒトミクログリア上で発現されるＣＤ２２に結合する、およびある特定の抗ＣＤ２２抗体が、ＣＤ２２の内在化を誘導することによってＡβプラークの除去を促進することができるという、本発明者らの驚くべき発見に基づく。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ベータ－アミロイド（Ａβ）プラークの除去を促進することが必要な対象においてその除去を促進する方法であって、前記対象に、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与するステップを含み、前記抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法。

【請求項2】

神経炎症を低減させることが必要な対象において神経炎症を低減させる方法であって、前記対象に、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与するステップを含み、前記抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法。

【請求項3】

前記対象が、臨床的もしくはプレクリニカルアルツハイマー病、前駆アルツハイマー病、ダウン症候群、臨床的もしくはプレクリニカルアミロイド血管症（ＣＡＡ）、パーキンソン病、多発梗塞性認知症、脳アミロイド血管症、緑内障、子癇前症、認知障害、記憶喪失、または血管中の病原性Ａβペプチドによって引き起こされる血管障害を有する、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

Ａβ関連疾患または障害を処置することが必要な対象においてそれを処置する方法であって、前記対象に、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与するステップを含み、前記抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法。

【請求項5】

神経炎症に関連する疾患または障害を処置することが必要な対象においてそれを処置する方法であって、前記対象に、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与するステップを含み、前記抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法。

【請求項6】

前記Ａβ関連または神経炎症関連の疾患または障害が、臨床的もしくはプレクリニカルアルツハイマー病、前駆アルツハイマー病、ダウン症候群、臨床的もしくはプレクリニカルアミロイド血管症（ＣＡＡ）、パーキンソン病、多発梗塞性認知症、脳アミロイド血管症、緑内障、子癇前症、認知障害、記憶喪失、または血管中の病原性Ａβペプチドによって引き起こされる血管障害である、請求項４または５に記載の方法。

【請求項7】

前記Ａβ関連疾患または障害がアルツハイマー病である、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記抗体または抗原結合性断片が、モノクローナル抗体または抗原結合性断片である、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記抗体または抗原結合性断片が、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体およびＩｇＧ４抗体からなる群から選択される抗体である、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記抗体がＩｇＧ１抗体である、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記抗体または抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）_２、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）および重鎖抗体（ＨＣＡｂ）からなる群から選択される、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記抗体または抗原結合性断片が、キメラ抗体もしくは抗原結合性断片、ヒト化抗体もしくは抗原結合性断片、またはヒト抗体もしくは抗原結合性断片である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記抗体または抗原結合性断片が、ヒトＣＤ２２のＣＬＬＮＦＳＣＹＧＹＰＩＱ（配列番号１１）およびＶＦＴＲＳＥＬＫＦＳＰＱＷＳＨＨＧＫＩＶＴＣ（配列番号１２）に特異的に結合する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記抗体または抗原結合性断片が、それぞれ配列番号１、配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；ならびにそれぞれ配列番号４、配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記抗体または抗原結合性断片が、キメラ抗体または抗原結合性断片である、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記キメラ抗体または抗原結合性断片の前記ＶＬおよびＶＨが、それぞれ配列番号７および配列番号８のアミノ酸配列を有する、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記キメラ抗体または抗原結合性断片がＳＭ０３である、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記抗体または抗原結合性断片が、ヒト抗体または抗原結合性断片である、請求項１４に記載の方法。

【請求項19】

ヒト化抗体または抗原結合性断片の前記ＶＬおよびＶＨが、それぞれ配列番号９および配列番号１０のアミノ酸配列を有する、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記ヒト化抗体または抗原結合性断片がＳＭ０６である、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記抗体または抗原結合性断片が、静脈内、筋肉内、皮下、頭蓋内、くも膜下腔内、脳室内、腹腔内、鼻腔内、非経口、外用または皮内投与される、請求項１から２０のいずれかに記載の方法。

【請求項22】

前記抗体または抗原結合性断片が、静脈内または皮下投与される、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記抗体または抗原結合性断片が、前記対象の体重１ｋｇ当たり１～５０ｍｇの範囲内の治療有効量で投与される、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記治療有効量が、前記対象の体重１ｋｇ当たり約１、約２、約３、約５、約１０、約１５または約３０ｍｇである、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記抗体または抗原結合性断片が、１用量当たり３００～１，２００ｍｇの治療有効量で投与される、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記抗体または抗原結合性断片が、２週間に１回または月に１回投与される、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記抗体または抗原結合性断片が、複数の用量で投与される、請求項１から２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記抗体または抗原結合性断片が、少なくとも３か月間、少なくとも６か月間または少なくとも１年間の期間にわたって複数の用量で投与される、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記抗体または抗原結合性断片が、第２の治療剤と組み合わせて投与される、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記第２の治療剤が、抗ベータ－アミロイド抗体、抗ＣＤ３３抗体、タウ凝集阻害剤、タウタンパク質モジュレーター、コリンエステラーゼ阻害剤、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、Ｎ－メチルＤ－アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト、β－セクレターゼ阻害剤またはインスリン感受性改善薬である、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

前記第２の治療剤が、アデュカヌマブ、ドナネマブ、ガンテネルマブ、レカネマブ、バピネウズマブおよびソラネズマブからなる群から選択される抗ベータ－アミロイド抗体である、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記第２の治療剤が、ＡＬ００３、ゲムツズマブ、リンツズマブ、オゾガマイシン、バダスツキシマブタリリンおよびＢＩ８３６８５８からなる群から選択される抗ＣＤ３３抗体である、請求項２８に記載の方法。

【請求項33】

前記対象がヒト対象である、請求項１から３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

ミクログリア細胞によるＡβの内在化を誘導する方法であって、前記ミクログリア細胞を、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の有効量と接触させるステップを含み、前記抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０２１年７月１３日出願の米国仮出願第６３／２２１，２６１号に基づく優先権を主張する。

【0002】

１． 分野
本発明は、分子生物学および神経生物学、具体的には、アミロイド－βおよび／または神経炎症に関連する種々の神経学的障害、例えば、アルツハイマー病、アミロイドーシスおよびβ－アミロイド病理の処置における抗体の同定および使用に関する。

【背景技術】

【0003】

２． 背景
アルツハイマー病（ＡＤ）は、アミロイド－β（Ａβ）含有細胞外プラークによって特徴付けられる進行性神経変性障害である。この状態をもたらす原因は、一般には未知である。Ａβプラークの除去は、ＡＤ患者において臨床的利益をもたらし得ることが示されている。しかし、脈管副作用、例えば、ＡＲＩＡ－ＥおよびＡＲＩＡ－Ｈに一般に関連するＡβプラーク除去のために利用可能な治療選択肢は、ごく限定されている。したがって、Ａβプラークをより効率的に除去する新規方法、およびより少ない副作用を有するＡＤのための治療選択肢が、大いに必要とされている。本開示で提供される方法は、この要求を満たし、関連の利点を提供する。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0004】

３． 要旨
ベータ－アミロイド（Ａβ）プラークの除去を促進することが必要な対象においてその除去を促進する方法であって、対象に、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与するステップを含み、抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法が、本明細書で提供される。

【0005】

神経炎症を低減させることが必要な対象において神経炎症を低減させる方法であって、対象に、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与するステップを含み、抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法もまた、本明細書で提供される。

【0006】

本明細書で提供される方法の一部の実施形態では、対象は、臨床的もしくはプレクリニカルアルツハイマー病、前駆アルツハイマー病、ダウン症候群、臨床的もしくはプレクリニカルアミロイド血管症（ＣＡＡ）、パーキンソン病、多発梗塞性認知症、脳アミロイド血管症、緑内障、子癇前症、認知障害、記憶喪失、または血管中の病原性Ａβペプチドによって引き起こされる血管障害を有する。

【0007】

Ａβ関連疾患または障害を処置することが必要な対象においてそれを処置する方法であって、対象に、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与するステップを含み、抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法もまた、本明細書で提供される。

【0008】

神経炎症に関連する疾患または障害を処置することが必要な対象においてそれを処置する方法であって、対象に、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与するステップを含み、抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法もまた、本明細書で提供される。

【0009】

一部の実施形態では、Ａβ関連または神経炎症関連の疾患または障害は、臨床的もしくはプレクリニカルアルツハイマー病、前駆アルツハイマー病、ダウン症候群、臨床的もしくはプレクリニカルアミロイド血管症（ＣＡＡ）、パーキンソン病、多発梗塞性認知症、脳アミロイド血管症、緑内障、子癇前症、認知障害、記憶喪失、または血管中の病原性Ａβペプチドによって引き起こされる血管障害である。一部の実施形態では、Ａβ関連疾患または障害は、アルツハイマー病である。

【0010】

一部の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用される抗体または抗原結合性断片は、モノクローナル抗体または抗原結合性断片である。

【0011】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗体または抗原結合性断片は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体およびＩｇＧ４抗体からなる群から選択される抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。

【0012】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗体または抗原結合性断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）および重鎖抗体（ＨＣＡｂ）からなる群から選択される。

【0013】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗体または抗原結合性断片は、キメラ抗体もしくは抗原結合性断片、ヒト化抗体もしくは抗原結合性断片、またはヒト抗体もしくは抗原結合性断片である。

【0014】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗体または抗原結合性断片は、ヒトＣＤ２２のＣＬＬＮＦＳＣＹＧＹＰＩＱ（配列番号１１）およびＶＦＴＲＳＥＬＫＦＳＰＱＷＳＨＨＧＫＩＶＴＣ（配列番号１２）に特異的に結合する。

【0015】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗体または抗原結合性断片は、それぞれ配列番号１、配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；ならびにそれぞれ配列番号４、配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0016】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗体または抗原結合性断片は、キメラ抗体または抗原結合性断片である。一部の実施形態では、キメラ抗体または抗原結合性断片のＶＬおよびＶＨは、それぞれ配列番号７および配列番号８のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、キメラ抗体または抗原結合性断片は、ＳＭ０３である。

【0017】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗体または抗原結合性断片は、ヒト抗体または抗原結合性断片である。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗原結合性断片のＶＬおよびＶＨは、それぞれ配列番号９および配列番号１０のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗原結合性断片は、ＳＭ０６である。

【0018】

本明細書で開示される方法の一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、静脈内、筋肉内、皮下、頭蓋内、くも膜下腔内、脳室内、腹腔内、鼻腔内、非経口、外用または皮内投与される。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、静脈内投与される。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、皮下投与される。

【0019】

本明細書で開示される方法の一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、対象の体重１ｋｇ当たり１～５０ｍｇの範囲内の治療有効量で投与される。一部の実施形態では、治療有効量は、対象の体重１ｋｇ当たり約１、約２、約３、約５、約１０、約１５または約３０ｍｇである。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、１用量当たり３００～１，２００ｍｇの治療有効量で投与される。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、２週間に１回（ｂｉｗｅｅｋｌｙ）または月に１回投与される。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、複数の用量で投与される。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、少なくとも３か月間、少なくとも６か月間または少なくとも１年間の期間にわたって複数の用量で投与される。

【0020】

本明細書で開示される方法の一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、第２の治療剤と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、第２の治療剤は、抗ベータ－アミロイド抗体、抗ＣＤ３３抗体、タウ凝集阻害剤、タウタンパク質モジュレーター、コリンエステラーゼ阻害剤、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、Ｎ－メチルＤ－アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト、β－セクレターゼ阻害剤またはインスリン感受性改善薬である。

【0021】

一部の実施形態では、第２の治療剤は、アデュカヌマブ、ドナネマブ、ガンテネルマブ、レカネマブ、バピネウズマブ（ｂａｐｉｎｅｕｚｕｍａｂ）およびソラネズマブからなる群から選択される抗ベータ－アミロイド抗体である。

【0022】

一部の実施形態では、第２の治療剤は、ＡＬ００３、ゲムツズマブ、リンツズマブ、オゾガマイシン、バダスツキシマブタリリン（ｖａｄａｓｔｕｘｉｍａｂ ｔａｌｉｒｉｎｅ）およびＢＩ８３６８５８からなる群から選択される抗ＣＤ３３抗体である。

【0023】

本明細書で開示される方法の一部の実施形態では、対象は、ヒト対象である。

【0024】

ミクログリア細胞によるＡβの内在化を誘導する方法であって、ミクログリア細胞を、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の有効量と接触させるステップを含み、抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法もまた、本明細書で提供される。
４． 図面の簡単な説明

【図面の簡単な説明】

【0025】

【図1】図１は、組換えＣＤ２２タンパク質へのＡβの結合を示すＯｃｔｅｔ ｉｎ ｖｉｔｒｏ結合データを提供する。示されるように、Ａβは、６×１０^－８ＭのＫ_ＤでＣＤ２２に結合した。

【0026】

【図2】図２は、ＣＤ２２発現細胞へのＡβの結合を示すフローサイトメトリーデータを提供する。示されるように、ＨＥＫ２９３細胞におけるヒトＣＤ２２の過剰発現は、ＨＥＫ２９３細胞の表面上へのＦＩＴＣ－Ａβの結合を増加させた。

【0027】

【図3】図３は、Ａβ処置後のＨＭＣ－３細胞の免疫細胞化学ＰＬＡ染色を提供する。示されるように、陽性シグナル（矢印）は、ＡβとＨＭＣ－３細胞の細胞表面上のＣＤ２２との間の物理的相互作用を示す。

【0028】

【図4】図４は、ＨＭＣ３細胞におけるＣＤ２２の免疫蛍光染色を提供する。示されるように、抗ＣＤ２２抗体ＳＭ０３の処置は、ＣＤ２２の迅速な内在化を誘導した。

【0029】

【図5】図５は、抗ＣＤ２２抗体の内在化を示す共焦点データを提供する。示されるように、ＦＩＴＣ－ＳＭ０３は、ＨＭＣ３細胞に添加された後３０分以内に内在化された。

【0030】

【図6】図６は、ＨＭＣ－３細胞上での、種々の抗ＣＤ２２抗体によって誘導されたＣＤ２２内在化の速度についてのフローサイトメトリーデータを提供する。示されるように、ＳＭ０３およびＳＭ０６は、最も高い速度の内在化を誘導した。

【0031】

【図7】図７は、Ａβの内在化を示すフローサイトメトリーデータを提供する。示されるように、ＳＭ０３およびＳＭ０６による処置は各々、ＦＩＴＣ－Ａβのファゴサイトーシスを増強した。

【0032】

【図8】図８は、ＮＦκＢシグナル伝達を測定するルシフェラーゼアッセイからのデータを提供する。示されるように、抗ＣＤ２２抗体ＳＭ０３ Ｆａｂの処置は、ＨＭＣ－３細胞におけるＮＦκＢシグナル伝達を低減させた。

【0033】

【図9】図９は、ＩＬ－６分泌を測定するＥＬＩＳＡからのデータを提供する。示されるように、抗ＣＤ２２抗体ＳＭ０３ Ｆａｂの処置は、ＨＭＣ－細胞によるＩＬ－６分泌を低減させた。

【0034】

【図10】図１０は、ＨＭＣ－３細胞上の２，６－シアル酸トランス結合の免疫細胞化学染色を提供する。示されるように、ＳＭ０３およびＳＭ０６は、ＨＭＣ－３細胞における２，６－シアル酸プローブのトランス結合を促進した。

【発明を実施するための形態】

【0035】

５． 詳細な説明
アルツハイマー病（ＡＤ）は、アミロイド－β（Ａβ）含有細胞外プラークによって特徴付けられる進行性神経変性障害である。有効な治療選択肢は、なおも大いに必要とされている。毒性オリゴマー性Ａβ１－４２が、ヒトミクログリア上で発現されるＣＤ２２に結合する、およびある特定の抗ＣＤ２２抗体が、ＣＤ２２の内在化を誘導することによってＡβプラークの除去を促進することができるという、本発明者らの驚くべき発見が、本明細書で開示される。さらに、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体は、中枢神経系（ＣＮＳ）における自己免疫を抑制して、さらなる治療利益を提供することもできることが見出された。したがって、一部の実施形態では、ＣＤ２２媒介性機構を介して、Ａβ蓄積および神経炎症を低減させる方法、ならびに関連の疾患または障害（例えば、ＡＤ）を処置する方法が、本明細書で提供される。

【0036】

認知症は、世界中で、２０１０年の５０００万人から、２０５０年までには１億１３００万人まで増加すると推定される。ＡＤは、認知症の主要な原因であり、他の神経変性および脳脊髄病理と合併する場合が多い。神経病理学的特色は、明らかな認知症状の１５～２０年前に始まる。ＡＤを有する個体は、それらの正常なベースライン認知能力から、プレクリニカルステージの僅かな変化を介して、前駆ＡＤと呼ばれる脳機能不全の明らかな症状へと、そして最終的には、失認のせいで以前には自力で実施していた日常生活活動（ＡＤＬ）を実施する能力を最終的に損なうＡＤ認知症へと進行する。ＡＤのプレクリニカルステージは、認知障害の臨床的診断が検討される前に生じるステージとみなされる場合が多い。ＡＤ認知症は、分子、細胞およびコネクトームレベルでの変化を包含するシナプス機能不全疾患である。ＡＤ患者の臨床的徴候には、健忘症状または非健忘症状を伴う認知症が含まれる。これは、言語、視空間処理および実行機能不全を伴う場合が多い（Scharre, Practical Neurology (2019)；Dubois et al., Alzheimers Dement (2016), 12(3): 292-323）。ＡＤの神経病理学的ホールマークは、過剰な神経炎症、細胞外Ａβ含有プラークの蓄積、および高リン酸化されたタウタンパク質によって特徴付けられる。Ａβプラークは、皮質および海馬領域に幅広く存在し、ニューロン喪失の誘発を介して神経回路網の破壊を引き起こし、ミクログリアを介した神経炎症の促進を引き起こす。

【0037】

Ａβは、ニューロン表面膜中で富化される膜貫通タンパク質であるアミロイド前駆体タンパク質によって誘導される。生理学的に、これは、α－セクレターゼによって、後にγ－セクレターゼによって切断されて、ＡＰＰｓαを形成する。これは、カルシウム流およびカリウムチャネルをモジュレートすることを介して、シナプス強度の調節において機能する。アミロイド形成経路では、Ａβは、β－セクレターゼによって、引き続いてγ－セクレターゼによって切断されて、Ａβ１－４２を形成する。Ａβ１－４２は、β－シートコンフォメーションでミスフォールドし、毒性オリゴマー性形態へと凝集する。アミロイドカスケード仮説によれば、毒性オリゴマー性Ａβ１－４２は、神経毒性および認知症をもたらすプラークへと凝集する。オリゴマー性Ａβ１－４２は、代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）、Ｎ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体、ならびに他のニューロン受容体、例えば、α－７ニコチン性アセチルコリン受容体およびインスリン受容体に直接結合して、シナプス強度および樹状突起棘の形態学における病理学的変化を誘導する。オリゴマー性Ａβ１－４２はまた、パターン認識受容体、即ち、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、Ｎｏｄ様受容体（ＮＬＲ）、ＲＩＧ様受容体（ＲＬＲ）、ＡＩＭ２様受容体（ＡＬＲ）を介してミクログリア細胞を刺激して、神経炎症を誘発することができる。Ａβ１－４２は、ミクログリアによって放出される炎症促進性サイトカイン、即ち、ＩＬ－１β、ＩＬ－８およびＴＮＦαを誘導する。また、これは、Ａβ１－４２のさらなる凝集の核生成のためのＡＳＣスペック（ｓｐｅｃｋ）タンパク質（カスパーゼ－１動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質）を分泌するように、ＮＬＲＰ３インフラマソームカスケードを活性化する。

【0038】

毒性オリゴマー性Ａβのクリアランスは、ＡＤ患者において臨床的利益を与えると提唱されている。２０２１年の時点で、第ＩＩＩ相にある１７種の疾患改変治療薬のうちで、そのうち２９％が、それらの作用機構（ＭＯＡ）としてＡβを標的にする。アデュカヌマブ、ドナネマブ、ガンテネルマブ、レカネマブ、バピネウズマブおよびソラネズマブを含む抗Ａβ抗体は、ＡβのＦｃ受容体媒介性ファゴサイトーシスおよび非Ｆｃ受容体媒介性クリアランスを介して、Ａβの種々の毒性形態を標的にする。

【0039】

アデュカヌマブは、Ａβの可溶性オリゴマーおよび不溶性細線維を選択的に標的にするＩｇＧ１ ｍＡｂである。アデュカヌマブは、アミノ酸３～６に結合し、モノマー性形態ではなく、凝集したＡβ上のコンフォメーションエピトープを認識する。Ａβ凝集物への抗体の結合は、Ｆｃガンマ受容体媒介性ファゴサイトーシスによるクリアランスを誘発し、ＡＤ患者において神経回路網のカルシウム恒常性を回復させる。臨床研究がアミロイドプラークの低減を一貫して示したので、アデュカヌマブは、ＡＤの処置のために２０２１年６月にＦＤＡによって承認された。

【0040】

ＡＤに加えて、Ａβの異常な蓄積に関連する他の疾患または障害には、例えば、ダウン症候群、臨床的もしくはプレクリニカルアミロイド血管症（ＣＡＡ）、パーキンソン病、多発梗塞性認知症、脳アミロイド血管症、緑内障、子癇前症、認知障害、記憶喪失、または血管中の病原性Ａβペプチドによって引き起こされる血管障害が含まれる。

【0041】

本開示をさらに記載する前に、本開示が本明細書に示される特定の実施形態に限定されないことを理解すべきであり、本明細書で使用される専門用語が、特定の実施形態を記載することを目的としており、限定を意図しないこともまた理解すべきである。

【0042】

本明細書で他に定義しない限り、本開示において使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有するものとする。さらに、文脈が他を要求しない限り、単数形の用語は複数を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学ならびにハイブリダイゼーションと併せて使用される命名法、ならびにそれらの技法は、当分野で周知であり一般に使用されるものである。

【0043】

用語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体は、その実体のうちの１つまたは複数を指し、例えば、「１つの（ａ）ベクター」は、１つまたは複数のベクターを示すと理解される。

【0044】

用語「および／または」は、本明細書で使用される場合、他方を伴うかまたは伴わない、２つの特定された特色または成分の各々の具体的な開示として解釈すべきである。したがって、用語「および／または」は、本明細書で「Ａおよび／またはＢ」などの語句において使用される場合、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）および「Ｂ」（単独）を含む意図である。同様に、用語「および／または」は、「Ａ、Ｂおよび／またはＣ」などの語句において使用される場合、以下の態様の各々を包含する意図である：Ａ、ＢおよびＣ；Ａ、ＢまたはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。

【0045】

範囲：本開示を通じて、本発明の種々の態様が、範囲形式で示され得る。範囲形式での記載は、単に簡便さおよび簡潔さのために過ぎず、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈すべきでないことを理解すべきである。したがって、範囲の記載は、全ての可能な部分範囲ならびにその範囲内の個々の数値を具体的に開示していると解釈すべきである。例えば、範囲の記載、例えば、１～６は、部分範囲、例えば、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６など、ならびにその範囲内の個々の数字、例えば、１、２、２．７、３、４、５、５．３および６を具体的に開示していると解釈すべきである。これは、範囲の幅に関係なく適用される。

【0046】

例示的な遺伝子およびポリペプチドは、ＧｅｎＢａｎｋ番号、ＧＩ番号および／または配列番号を参照して本明細書に記載される。当業者は、ＧｅｎＢａｎｋ（ncbi.nlm.nih.gov/genbank/）およびＥＭＢＬ（embl.org/）を含むがこれらに限定されない配列供給源への参照によって、相同な配列を容易に同定することができることが理解される。
５．１ Ａβクリアランスおよび神経炎症低減

【0047】

ＣＤ２２は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーに属するＢ細胞に制限される抗原である。ＣＤ２２は、シアル酸結合免疫グロブリン型レクチン（シグレック）としても公知の、Ｉ型膜貫通シアロ糖タンパク質である。ヒトＣＤ２２は、以下の構造に特異的に結合する：造血細胞、肝臓細胞、肺上皮細胞、脾索（spleenic cord）および脾髄（spleenic follicles）、回腸ストーマ（stoma）、心臓間質、血管、エクリン汗腺における皮膚上皮細胞分泌、結腸間質細胞、肝臓類洞および間質細胞、ならびに中枢神経系（ＣＮＳ）中の細胞、例えば、脳白質中のミクログリア細胞上で発現されることが公知のＮ－アセチルノイラミン酸α（２－６）ガラクトース（ＮｅｕＡｃ－α（２－６）Ｇａｌ）（Gagneux et al., Journal of Biological Chemistry (2003), 278(48):48245-50；Safaiyan et al., Neuron (2021), 109(7):1100-17.e10）。ＣＤ２２は、同じ細胞上（シス－結合）または異なる細胞上（トランス－結合）のいずれかに分布するその特異的リガンドに結合する。ＣＤ２２のシス－結合は、隣り合う分子間で一般に見出され、このとき、ＣＤ２２分子のグリカン結合部位は、同じ細胞上の別のＣＤ２２または糖タンパク質のグリカン分子にライゲーションされて、ホモ－オリゴマーまたはホモ－マルチマーを形成する。ＣＤ２２のシス－結合は、分子に対してマスキング効果を発揮して、シグレックが細胞－細胞ライゲーション（トランス－結合）を形成することを防止することが実証されている。休止Ｂ細胞では、ＣＤ２２は、それ自体に対する卓越したシス－リガンドであり、ＣＤ２２ホモ－オリゴマーを形成する。ＣＤ２２のトランス－結合は、阻害性の免疫学的シグナルを惹起することを介した免疫寛容のために必要とされる最大阻害応答を発揮するためのシグレックとＢ細胞受容体（ＢＣＲ）との物理的会合を生じる（Pessutto et al., 1987. J. Immunol. 138:98-103；Doody et al. 1995. Science 269:242-344；Lanoue et al. 2002. Eur. J. Immunol. 32:348-355；Courtney et al. 2009. PNAS 106:2500-2505）。その例示的なアミノ酸配列を含む、ヒトＣＤ２２についてのさらなる情報は、公的データベース、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ（ＵｎｉＰｒｏｔ ＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２０２７３）およびＧＥＮＢＡＮＫ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆ．ＮＰ＿００１１７２０２８．１、ＮＰ＿００１１７２０２９．１、ＮＰ＿００１１７２０３０．１、ＮＰ＿００１２６５３４６．１、ＮＰ＿００１７６２．２）において見出すことができる。例示的な配列は、以下にも提供される。

【化1】

【化2】

【0048】

ＣＤ２２は、ＣＮＳにおける主要な抗原提示細胞であるミクログリア細胞上で高度に発現される。提示された抗原（例えば、Ａβまたは他の自己抗原）は、ＩＬ－１０の分泌を介してミクログリアの活性化を弱める浸潤性調節性Ｔ細胞によって認識され得る。ある特定の抗ＣＤ２２抗体が、ヒトミクログリアにおいてＣＤ２２の内在化を誘導できることが、本開示の発明者らによって発見された。ＣＤ２２がオリゴマー性Ａβ１－４２に結合すること、およびＣＤ２２の内在化が、ＣＤ２２結合したＡβ１－４２のファゴサイトーシスならびに可溶性Ａβのマクロピノサイトーシスの両方を介して、Ａβのクリアランスを促進することもまた見出された。したがって、一部の実施形態では、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体を使用してＡβの除去を促進する方法が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体を使用してＡβ関連疾患または障害を処置する方法が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、Ａβ関連疾患または障害疾患は、ＡＤである。

【0049】

本明細書で使用される場合、当分野で理解されるように、ＣＤ２２の「内在化」は、細胞が陥入しＣＤ２２分子を飲み込むプロセスである、ＣＤ２２のエンドサイトーシスを指す。３つの型のエンドサイトーシスプロセスが存在する：ピノサイトーシス、ファゴサイトーシスおよび受容体媒介性エンドサイトーシス。ピノサイトーシスは、「細胞飲み作用（ｃｅｌｌ－ｄｒｉｎｋｉｎｇ）」とも呼ばれる、細胞が陥入のプロセスを介して細胞中に少量の細胞外流体を（存在し得る小さい粒子と共に）飲み込むプロセスである。ファゴサイトーシスは、比較的大きい分子または生物（例えば、細菌細胞）が細胞によって飲み込まれるプロセスである。受容体媒介性エンドサイトーシスは、陥入のプロセスならびにクラスリン－コートとして公知のタンパク質被覆層の形成を開始させる、材料が細胞膜の受容体タンパク質上に直接結合するプロセスである。受容体媒介性エンドサイトーシスにおいて形成される小胞は、このクラスリンタンパク質コーティングを含有する。細胞膜上のＣＤ２２は、構成的なクラスリン媒介性エンドサイトーシスを介して内在化される。エンドソーム区画に入ると、低ｐＨ環境が、その特異的リガンドへの結合（例えば、シスでのＣＤ２２結合）を解放し、遊離ＣＤ２２は、シス－またはトランス－リガンド結合のために細胞表面に戻る。

【0050】

ＡＤに対する現行の抗Ａβ抗体治療は、アミロイド負荷を低減させるためにＦｃγＲ媒介性ファゴサイトーシスに大きく依存しており、所望されない副作用に関連する。具体的には、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）異常、例えば、「血管原性浮腫」（ＶＥ）および微小出血（ｍＨ）を示すシグナル変化が、アミロイド改変治療剤（抗Ａβ抗体）を投与した患者において、用量依存的様式で観察されている。アミロイド関連画像異常（ＡＲＩＡ）が、血管原性浮腫（ＡＲＩＡ－Ｅ）ならびに微小出血およびヘモジデリン沈着（ＡＲＩＡ－Ｈ）を記載するために、Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｏｕｎｄｔａｂｌｅ Ｗｏｒｋｇｒｏｕｐによって提案されている。ＡＲＩＡ－Ｅは、炎症によって主に引き起こされ、細線維形態のＡβに結合するｍＡｂに緊密に結び付けられている。ミクログリアにおけるＦｃγＲ媒介性炎症は、主要な役割を担い得る。例えば、ＦｃγＲ誘導される炎症促進性サイトカイン放出によって媒介される炎症は、脈管完全性に対する損傷を悪化させる。Ａβの全ての形態を標的にするヒト化ＩｇＧ４抗体であるクレネズマブ（Crenzumab）は、より少ないＡＲＩＡ－Ｅ事象に関連するが、それは、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域が、例えば、ＩｇＧ１ Ｆｃと比較して、ミクログリアのＦｃγＲへの会合を低減させるからである。

【0051】

このように、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体は、高度に効率的なだけでなく、ＡＲＩＡ－Ｅおよび／またはＡＲＩＡ－Ｈなどの脈管副作用の低減にも関連する、Ａβクリアランスの新規機構を提供する。Ａβ標的化抗体とは異なり、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体は、治療的抗体とＦｃγＲとの架橋結合が関与しないＣＤ２２内在化を介してＡβクリアランスを促進し、それにより、引き続く炎症促進性応答を回避する。したがって、低減された脈管副作用を有する効率的なＡβクリアランスの方法が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、脈管副作用を引き起こさない。

【0052】

本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）は、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する。本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体は、Ｂ細胞またはミクログリア細胞の表面上のＣＤ２２のシス－結合を破壊すること、ならびに表面ＣＤ２２の内在化を加速させることによって、ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する。ＣＤ２２分子が、ホモ－クラスターのシス－結合を破壊する抗体と共に内在化される場合、ＣＤ２２分子は、抗体と共に細胞表面にリサイクルされ、ここで、抗体は、さらなるシス－結合を立体的に妨害し、それにより、リサイクルされたＣＤ２２のトランス－結合を促進する。このように、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体はまた、Ｂ細胞、Ｂ細胞由来細胞系およびミクログリア上のＣＤ２２のシス－結合を破壊すること、ならびに自己組織の２，６－シアル酸結合のシス－トランス変換を促進することによって、中枢免疫系および末梢免疫系の両方において免疫寛容を促進し得、これが、自己組織の免疫寛容の再獲得を可能にし、炎症促進性サイトカイン放出を弱める。ＣＤ２２のニューロン２，６－シアル酸へのトランス－結合を促進することによって、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体は、シナプスのファゴサイトーシスおよびニューロン死を阻害するだけでなく、ミクログリア細胞におけるＮＦ－κＢシグナル伝達およびインターロイキン－６（ＩＬ－６）分泌を抑制する。したがって、本明細書で開示される方法は、神経炎症を低減させるさらなる治療利益を有する。したがって、一部の実施形態では、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体を使用して神経炎症を低減させる方法が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体を使用して神経炎症関連疾患または障害を処置する方法が、本明細書で提供される。

【0053】

Ａβプラークの除去を促進することが必要な対象においてそれを促進する方法であって、対象に、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与するステップを含み、抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法が、本明細書で提供される。Ａβ関連疾患または障害を処置することが必要な対象においてそれを処置する方法であって、対象に、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与するステップを含み、抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法もまた、本明細書で提供される。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ２２に特異的に結合する。一部の実施形態では、Ａβ関連疾患または障害は、ＡＤである。一部の実施形態では、Ａβ関連疾患または障害は、プレクリニカルＡＤである。

【0054】

一部の実施形態では、Ａβプラークを除去するための、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の使用が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、Ａβプラークの除去のための医薬の調製のための、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の使用が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、Ａβ関連疾患または障害の処置における、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の使用が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、Ａβ関連疾患または障害の処置のための医薬の調製のための、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の使用が、本明細書で提供される。上記使用において、抗体または抗原結合性断片は、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する。一部の実施形態では、Ａβ関連疾患または障害は、ＡＤである。一部の実施形態では、Ａβ関連疾患または障害は、プレクリニカルＡＤである。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ２２に特異的に結合する。

【0055】

本明細書で開示されるＣＤ２２抗体の処置により、Ａβ処置されたミクログリア細胞溶解物のＥＬＩＳＡを使用して測定した場合、Ａβの内在化の速度は、５．８６×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞に達した（データ示さず）。本明細書で提供される使用または方法の一部の実施形態では、Ａβは、５．８６×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞の速度で除去される。

【0056】

本明細書で提供される方法は、Ａβ関連疾患または障害を処置することができる。Ａβ関連疾患または障害は、臨床的もしくはプレクリニカルＡＤ、前駆ＡＤ、ダウン症候群、臨床的もしくはプレクリニカルアミロイド血管症（ＣＡＡ）、パーキンソン病、多発梗塞性認知症、脳アミロイド血管症、緑内障、子癇前症、認知障害、記憶喪失、または血管中の病原性Ａβペプチドによって引き起こされる血管障害であり得る。

【0057】

一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、ＡＤを処置するために使用され得る。上記され、当分野で周知のように、オリゴマー性Ａβの除去は、ＡＤにおいて臨床的利益を提供することが公知である。ＡＤは、臨床的ＡＤ、プレクリニカルＡＤまたは前駆ＡＤであり得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、臨床的ＡＤを処置するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、プレクリニカルＡＤを処置するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、前駆ＡＤを処置するために使用され得る。

【0058】

一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、ダウン症候群を処置するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、臨床的もしくはプレクリニカルＣＡＡを処置するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、パーキンソン病を処置するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、多発梗塞性認知症を処置するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、脳アミロイド血管症を処置するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、緑内障を処置するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、子癇前症を処置するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、認知障害を処置するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、記憶喪失を処置するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、血管中の病原性Ａβペプチドによって引き起こされる血管障害を処置するために使用され得る。

【0059】

神経炎症を低減させることが必要な対象において神経炎症を低減させる方法であって、対象に、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与するステップを含み、抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法もまた、本明細書で提供される。神経炎症に関連する疾患または障害を処置することが必要な対象においてそれを処置する方法であって、対象に、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与するステップを含み、抗体または抗原結合性断片が、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、方法もまた、本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、シナプスファゴサイトーシスおよびニューロン死を予防する。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、シナプスファゴサイトーシスおよびニューロン死を、少なくとも２０％、少なくとも３０、少なくとも４０％、少なくとも５０％を超えて、ならびに少なくとも６０％を超えて、予防する。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、シナプスファゴサイトーシスおよびニューロン死を少なくとも５０％予防する。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ２２に特異的に結合する。

【0060】

一部の実施形態では、神経炎症を低減するための、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の使用が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、神経炎症の低減のための医薬の調製のための、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の使用が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、神経炎症に関連する疾患または障害の処置における、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の使用が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、神経炎症に関連する疾患または障害の処置のための医薬の調製のための、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の使用が、本明細書で提供される。上記使用において、抗体または抗原結合性断片は、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ２２に特異的に結合する。

【0061】

一部の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ２２の内在化を誘導する。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進し、ＣＤ２２の内在化を誘導する。

【0062】

本明細書で使用される場合、用語「処置する」およびその文法的等価物は、疾患もしくは状態、または疾患もしくは状態を有する対象に関連して、処置されている疾患または障害に関連する症状、症状の重症度および／または症状の頻度を抑制する、排除する、低減させる、および／または寛解させる作用を指す。例えば、ＡＤに言及して使用される場合、用語「処置する」およびその文法的等価物は、（ａ）Ａβプラークの量を低減させること、もしくは病的Ａβの蓄積の速度を緩徐化すること、または（ｂ）ＡＤに関連する１つもしくは複数の症状、例えば、認知症もしくは認知障害を遅延させる、寛解させる、もしくは最小化すること、を含むがこれらに限定されない、疾患の重症度を低減させる作用、または疾患の進行を遅らせるもしくは緩徐化する作用を指す。

【0063】

本明細書で使用される場合、用語「投与する」およびその文法的等価物は、本明細書に記載されるまたはさもなくば当分野で公知の方法によって、治療薬または医薬組成物を対象の身体に送達する作用または送達されるようにする作用を指す。治療薬は、化合物、ポリペプチドまたは細胞であり得る。治療薬または医薬組成物を投与することは、対象の身体中に送達される治療薬または医薬組成物を処方することを含む。投与の例示的な形態には、経口剤形、例えば、錠剤、カプセル剤、シロップ、懸濁物；注射可能な剤形、例えば、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）または腹腔内（ＩＰ）；クリーム、ゼリー、粉末またはパッチを含む皮下（ＳＣ）、経皮剤形；頬側剤形；吸入粉末、スプレー、懸濁物、および直腸坐剤が含まれる。

【0064】

本明細書で使用される場合、用語「有効量」、「治療有効量」およびそれらの文法的等価物は、単独でまたは医薬組成物の一部としてのいずれかの、および単一用量でまたは一連の用量の一部としてかのいずれかの、対象に投与された場合に疾患、障害または状態の任意の症状、態様または特徴に対する任意の検出可能な正の効果を有することが可能な量での、対象への薬剤の投与を指す。治療有効量は、関連する生理的効果を測定することによって、確定され得る。必要とされる正確な量は、対象の年齢、体重および全身状態、処置されている状態の重症度、臨床医の判断などに依存して、対象毎に変動する。治療有効量はまた、治療的に有益な効果が治療剤の任意の毒性のまたは有害な効果を上回るような量である。任意の個々の例における適切な「有効量」は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重などの因子に従って変動し得、慣用的な実験を使用して当業者によって決定され得る。「予防有効量」は、所望の予防結果、例えば、疾患または障害の開始の遅延または予防を達成するために必要な投薬量でのおよび必要な期間にわたる、有効な量を指す。典型的には、予防用量は、疾患のより早期のステージの前またはその時点で対象において使用されるので、予防有効量は一般に、治療有効量よりも少ない。

【0065】

用語「対象」は、本明細書で使用される場合、特定の処置のレシピエントである、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、げっ歯類などを含むがこれらに限定されない任意の動物（例えば、哺乳動物）を指す。対象は、ヒトであり得る。対象は、特定の疾患を有する患者であり得る。
５．２ ＣＤ２２抗体

【0066】

上のセクションに記載されるように、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の方法および使用が、本明細書で提供される。用語「抗体」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、少なくとも１つの抗原結合部位を介して、標的、例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または上述のいずれかの組合せを認識しそれに特異的に結合する免疫グロブリン分子を指し、抗原結合部位は通常、免疫グロブリン分子の可変領域内にある。本明細書で使用される場合、この用語は、抗体が所望の生物活性を示す限り、無傷ポリクローナル抗体、無傷モノクローナル抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ；例えば、ラクダ科動物抗体、アルパカ抗体）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体、重鎖抗体（ＨＣＡｂ）、軽鎖抗体（ＬＣＡｂ）、多特異性抗体、二特異性抗体、単一特異性抗体、一価抗体、および抗原結合部位を含む任意の他の改変された免疫グロブリン分子（例えば、二重可変ドメイン免疫グロブリン分子）を包含する。抗体には、マウス抗体、ウサギ抗体、ラクダ抗体、霊長類抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体もまた含まれるがこれらに限定されない。抗体は、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれるそれらの重鎖定常ドメインの正体に基づいて、免疫グロブリンの５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、またはそのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）のうちのいずれかであり得る。一部の実施形態では、抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含み得る。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書でＨＣＶＲまたはＶＨと短縮される）および重鎖定常領域から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書でＬＣＶＲまたはＶＬと短縮される）および軽鎖定常領域から構成される。

【0067】

他に明示的に示されない限り、用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、無傷抗体の「抗原結合性断片」を含む。用語「抗原結合性断片」は、本明細書で使用される場合、無傷抗体の抗原決定可変領域である、無傷抗体の部分または断片を指す。抗原結合性断片の例には、Ｆａｂ（ヒンジ領域なしのＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片）、Ｆａｂ’（ヒンジ領域で結合されたＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片）、Ｆ（ａｂ’）２（ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片）、Ｆｄ（ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる断片）、Ｆｖ（抗体の単一の腕のＶＬおよびＶＨドメインからなる断片）、直鎖抗体、単鎖抗体分子（例えば、組換え手段によって接続されたＶＬおよびＶＨ領域を有する単一のポリペプチド鎖であるｓｃＦｖ）、重鎖抗体（ＨＣＡｂ）、軽鎖抗体（ＬＣＡｂ）、ジスルフィド連結されたｓｃＦｖ（ｄｓｓｃＦｖ）、ディアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）（二価の二特異性抗体）、トリボディ（ｔｒｉｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、二重可変ドメイン抗体（ＤＶＤ）、単一可変ドメイン抗体（ｓｄＡｂまたはｄＡｂ；例えば、ラクダ科動物抗体、アルパカ抗体）、および重鎖抗体の単一可変ドメイン（ＶＨＨ）、ならびに抗体断片から形成される二特異性または多特異性抗体が含まれるがこれらに限定されない。「二特異性」抗体は、２つの異なる標的を認識しそれに特異的に結合する２つの異なる抗原結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。二特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’断片の連結を含む種々の方法によって産生され得る。例えば、Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990)；Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992)を参照されたい。

【0068】

抗体またはその抗原結合性断片は、抗体または抗原結合性断片と１つまたは複数の他のタンパク質またはペプチドとの共有結合的または非共有結合的会合によって形成されるより大きい免疫接着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｏｎ）分子の一部であり得る。かかる免疫接着分子の例には、テトラマー性ｓｃＦｖ分子を作製するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Kipriyanov et al. (1995) Human antibodies and Hybridomas 6:93-101）、ならびに二価およびビオチン化ｓｃＦｖ分子を作製するためのシステイン残基、マーカーペプチドおよびＣ末端ポリヒスチジンタグの使用（Kipriyanov et al. (1994) Mol. Immunol. 31:1047-1058）が含まれる。抗原結合性断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２断片は、従来の技法、例えば、抗体全体のそれぞれパパインまたはペプシン消化を使用して、抗体全体から調製することができる。さらに、抗体、抗原結合性断片および免疫接着分子は、本明細書に記載されるように、標準的な組換えＤＮＡ技法を使用して得ることができる。

【0069】

用語「ヒト化抗体」は、本明細書で使用される場合、最低限の非ヒト配列を含有する、特定の免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリンまたはそれらの断片である非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を指す。典型的には、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリンである。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域残基は、非ヒト種由来の抗体中の対応する残基で置き換えられる。一部の例では、ＣＤＲの残基は、所望の特異性、親和性および／または結合能を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ラクダ）のＣＤＲ由来の残基によって置き換えられる。ヒト化抗体は、抗体特異性、親和性および／または結合能を精緻化および最適化するために、Ｆｖフレームワーク領域中および／または置き換えられた非ヒト残基内のいずれかにおける、さらなる残基の置換によってさらに改変され得る。用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、ヒトによって産生される抗体、または当分野で公知の技法のいずれかを使用して作製される、ヒトによって産生される抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。

【0070】

用語「重鎖」は、抗体に言及して使用される場合、アミノ末端部分が、約１２０～１３０またはそれよりも多くのアミノ酸の可変領域（ＶＨ）を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含む、約５０～７０ｋＤａのポリペプチド鎖を指す。一部の実施形態では、重鎖定常領域は、３つのドメイン：ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成され、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとを接続する短い柔軟性のあるヒンジ領域が存在する。定常領域は、重鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいて、アルファ（ａ）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）およびミュー（μ）と呼ばれる５つの別個の型のうちの１つであり得る。別個の重鎖は、サイズが異なる：α、δおよびγは、およそ４５０アミノ酸を含有するが、μおよびεは、およそ５５０アミノ酸を含有する。軽鎖と組み合わされると、これらの別個の型の重鎖は、ＩｇＧの４つのサブクラス、即ち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む、抗体の５つの周知のクラス：それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭを生じる。重鎖は、ヒト重鎖であり得る。

【0071】

用語「軽鎖」は、抗体に言及して使用される場合、アミノ末端部分が、約１００～約１１０またはそれよりも多くのアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含む、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖を指す。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬから構成される。軽鎖のおおよその長さは、２１１～２１７アミノ酸である。定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）またはラムダ（λ）と呼ばれる２つの別個の型が存在する。軽鎖アミノ酸配列は、当分野で周知である。軽鎖は、ヒト軽鎖であり得る。

【0072】

用語「可変ドメイン」または「可変領域」は、軽鎖または重鎖のアミノ末端に一般に位置し、重鎖において約１２０～１３０アミノ酸の長さおよび軽鎖において約１００～１１０アミノ酸の長さを有し、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合および特異性において使用される、抗体の軽鎖または重鎖の一部分を指す。可変ドメインは、異なる抗体間で配列が大きく異なる。配列における可変性は、ＣＤＲに集中するが、可変ドメイン中のあまり可変性でない部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。軽鎖および重鎖のＣＤＲは、抗体と抗原との相互作用を主に担う。一部の実施形態では、各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で整列された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本明細書で使用されるアミノ酸位置の番号付けは、Kabat et al. (1991) Sequences of proteins of immunological interest. (U.S. Department of Health and Human Services, Washington, D.C.) 5thed中にあるような、ＥＵ Ｉｎｄｅｘに従う。

【0073】

ＣＤＲは、免疫グロブリン（Ｉｇまたは抗体）ＶＨβ－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２またはＨ３）のうちの１つ、または抗体ＶＬβ－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２またはＬ３）のうちの１つを指す。したがって、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。ＣＤＲ領域は、当業者に周知であり、種々の方法／システムによって定義されている。これらのシステムおよび／または定義は、数年間にわたって開発および精緻化されており、これには、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔが含まれる。例えば、Ｋａｂａｔは、抗体可変（Ｖ）ドメイン内の最も超可変性の領域を定義する（Kabat et al, J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977)；Kabat, Adv. Prot. Chem. 32: 1-75 (1978)）。Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造的ループ領域の位置に基づき、ＣＤＲ領域配列を、保存されたβ－シートフレームワークの一部ではない残基として定義し、したがって、異なるコンフォメーションを適合させることができる（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。両方の専門用語は、当分野で十分に認識されている。さらに、ＩＭＧＴシステムは、可変領域の構造内の配列可変性および位置に基づく。ＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの間の妥協策である。Ｃｏｎｔａｃｔ定義は、入手可能な抗体結晶構造の分析に基づく。ソフトウェアプログラム（例えば、ａｂＹｓｉｓ）が、抗体配列の分析およびＣＤＲの決定のために、当業者に入手可能であり公知である。カノニカル抗体可変ドメイン内のＣＤＲの位置は、多数の構造の比較によって決定されている（Al-Lazikani et al, J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997)；Morea et al, Methods 20:267-279 (2000)）。超可変領域内の残基の数は、異なる抗体において変動するので、カノニカル位置と比較したさらなる残基は、カノニカル可変ドメイン番号付けスキームにおける残基番号の次に、ａ、ｂ、ｃなどで慣習的に番号付けされる（Al-Lazikani et al.、上記（１９９７））。かかる命名法も同様に、当業者に周知である。

【0074】

例えば、Ｋａｂａｔ（超可変性）またはＣｈｏｔｈｉａ（構造的）指定のいずれかに従って定義されるＣＤＲが、以下の表に示される。

【表5】

¹残基番号付けは、Kabat et al., 上記の命名法に従う
²残基番号付けは、Chothia et al., 上記の命名法に従う

【0075】

１つまたは複数のＣＤＲはまた、それをイムノアドヘシンにするために、共有結合的または非共有結合的のいずれかで分子中に取り込まれ得る。イムノアドヘシンは、より大きいポリペプチド鎖の一部としてＣＤＲ（複数可）を取り込み得、ＣＤＲ（複数可）を別のポリペプチド鎖に共有結合的に連結し得、またはＣＤＲ（複数可）を非共有結合的に取り込み得る。ＣＤＲは、イムノアドヘシンを目的の特定の抗原に結合させる。

【0076】

用語「エピトープ」および「抗原決定基」は、抗体または抗原結合性断片が結合する標的分子の表面上の部位、例えば、抗原の表面上の限局化された領域を指すように本明細書で相互交換可能に使用される。標的分子は、タンパク質、ペプチド、核酸、炭水化物または脂質を含み得る。免疫原活性を有するエピトープは、動物において免疫応答を惹起する標的分子の一部分である。抗原活性を有する標的分子のエピトープは、例えば、イムノアッセイによるものを含む当分野で周知の任意の方法によって決定されるように、抗体が結合する標的分子の一部分である。抗原性エピトープは、必ずしも免疫原性である必要はない。エピトープは、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基からなる場合が多く、特定の三次元的な構造的特徴ならびに特定の電荷特徴を有する。用語「エピトープ」は、線状エピトープおよびコンフォメーションエピトープを含む。エピトープに寄与する標的分子（例えば、ポリペプチド）の領域は、ポリペプチドの連続するアミノ酸であり得、またはエピトープは、標的分子の２つまたはそれよりも多くの不連続の領域に一緒に由来し得る。エピトープは、標的分子の三次元表面特色であってもなくてもよい。連続するアミノ酸から形成されるエピトープ（線状エピトープとも呼ばれる）は、タンパク質変性の際に典型的には保持されるが、三次フォールディングによって形成されるエピトープ（コンフォメーションエピトープとも呼ばれる）は、タンパク質変性の際に典型的には喪失される。エピトープは、典型的には、独自の空間的コンフォメーション中に、少なくとも３、より通常は、少なくとも５、６、７、または８～１０アミノ酸を含む。

【0077】

用語「特異的に結合する」は、本明細書で使用される場合、ポリペプチドまたは分子が、関連するタンパク質および無関係のタンパク質を含む代替的物質とよりも、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、より高い親和性で、または上記の一部の組合せで、エピトープ、タンパク質または標的分子と相互作用することを意味する。標的分子（例えば、抗原）に特異的に結合する結合部分（例えば、抗体）は、例えば、イムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ、バイオレイヤー干渉法（「ＢＬＩ」）、ＳＰＲ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ）、または当業者に公知の他の技法によって同定され得る。典型的には、特異的反応は、バックグラウンドシグナルまたはノイズの少なくとも２倍であり、バックグラウンドの１０倍よりも大きくてもよい。例えば、抗体特異性に関する議論については、Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York at pages 332-336を参照されたい。標的分子に特異的に結合する結合部分は、異なる分子に対するその親和性よりも高い親和性で標的分子に結合することができる。一部の実施形態では、標的分子に特異的に結合する結合部分は、異なる分子に対するその親和性よりも少なくとも２０倍高い、少なくとも３０倍高い、少なくとも４０倍高い、少なくとも５０倍高い、少なくとも６０倍高い、少なくとも７０倍高い、少なくとも８０倍高い、少なくとも９０倍高い、または少なくとも１００倍高い親和性で、標的分子に結合することができる。一部の実施形態では、特定の標的分子に特異的に結合する結合部分は、本明細書に記載されるまたはさもなくば当分野で公知のアッセイを使用しては結合が検出できないような低い親和性で、異なる分子に結合する。一部の実施形態では、「特異的に結合する」は、例えば、結合部分が、約０．１ｍＭまたはそれ未満のＫ_Ｄで分子標的に結合することを意味する。一部の実施形態では、「特異的に結合する」は、ポリペプチドまたは分子が、約１０μＭもしくはそれ未満または約１μＭもしくはそれ未満のＫ_Ｄで標的に結合することを意味する。一部の実施形態では、「特異的に結合する」は、ポリペプチドまたは分子が、約０．１μＭもしくはそれ未満、約０．０１μＭもしくはそれ未満、または約１ｎＭもしくはそれ未満のＫ_Ｄで標的に結合することを意味する。異なる種における相同なタンパク質間の配列同一性に起因して、特異的結合は、１つよりも多くの種におけるタンパク質または標的を認識するポリペプチドまたは分子を含み得る。同様に、異なるタンパク質のポリペプチド配列のある特定の領域内の相同性に起因して、特異的結合は、１つよりも多くのタンパク質または標的を認識するポリペプチドまたは分子を含み得る。一部の実施形態では、第１の標的に特異的に結合する結合部分（例えば、抗体）は、第２の標的に特異的に結合してもしなくてもよいことが理解される。このように、「特異的結合」は、排他的結合、即ち、単一の標的への結合を必ずしも要求しない（排他的結合を含み得るが）。したがって、結合部分（例えば、抗体）は、一部の実施形態では、１つよりも多くの標的に特異的に結合することができる。例えば、抗体は、ある特定の例では、２つの同一な抗原結合部位を含み得、その各々が、２つまたはそれよりも多くのタンパク質上の同じエピトープに特異的に結合する。ある特定の代替的実施形態では、抗体は、二特異性であり得、異なる特異性を有する少なくとも２つの抗原結合部位を含み得る。

【0078】

用語「結合親和性」は、本明細書で使用される場合、一般に、結合部分と標的分子（例えば、抗原）との間の非共有結合的相互作用の総計の強度を指す。結合部分と標的分子との結合は、可逆的なプロセスであり、結合の親和性は、典型的には、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）として報告される。Ｋ_Ｄは、解離速度（ｋ_ｏｆｆまたはｋ_ｄ）の会合速度（ｋ_ｏｎまたはｋ_ａ）に対する比である。結合対のＫ_Ｄが低いほど、親和性は高い。Ｋ_Ａは、平衡会合定数であり、これは、平衡解離定数の逆数、即ち、＝１／Ｋ_Ｄでもある。抗体－抗原相互作用について、Ｋ_Ｄは、遊離抗体の濃度と遊離抗原の濃度との積の、抗体－抗原複合体の濃度に対する比、即ち、［抗原］×［抗体］／［抗原－抗体］として計算され得る。

【0079】

結合親和性を測定する種々の方法が当分野で公知であり、それらのいずれもが、本開示の目的のために使用され得る。具体的な事例的実施形態には、以下が含まれる。一部の実施形態では、「Ｋ_Ｄ」または「Ｋ_Ｄ値」は、当分野で公知のアッセイによって、例えば、結合アッセイによって、測定され得る。Ｋ_Ｄは、放射性標識された抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）で測定され得る（Chen, et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881）。Ｋ_ＤまたはＫ_Ｄ値は、例えば、Ｇａｔｏｒシステム（Ｐｒｏｂｅ Ｌｉｆｅ）またはＯｃｔｅｔ－９６システム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ）を使用するバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を使用することによっても測定され得る。Ｋ_ＤまたはＫ_Ｄ値は、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用することによる表面プラズモン共鳴アッセイを使用することによっても測定され得る。

【0080】

用語「バリアント」は、特定の配列特色を有するタンパク質またはポリペプチド（「参照タンパク質」または「参照ポリペプチド」）に関して本明細書で使用される場合、参照タンパク質または参照ポリペプチドと比較して１つまたは複数（例えば、約１～約２５、約１～約２０、約１～約１５、約１～約１０、または約１～約５など）のアミノ酸置換、欠失および／または付加を有する異なるタンパク質またはポリペプチドを指す。アミノ酸配列に対する変化は、アミノ酸置換であり得る。アミノ酸配列に対する変化は、保存的アミノ酸置換であり得る。タンパク質またはポリペプチドの機能的断片または機能的バリアントは、参照タンパク質またはポリペプチドの基本的な構造的および機能的特性を維持する。

【0081】

用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、「タンパク質」およびそれらの文法的等価物は、本明細書で相互交換可能に使用される場合、直鎖または分岐鎖であり得る、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。これは、非天然のもしくは改変されたアミノ酸を含み得、または非アミノ酸によって中断され得る。ポリペプチド、ペプチドまたはタンパク質はまた、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または任意の他の操作もしくは改変で改変され得る。

【0082】

用語「ポリヌクレオチド」、「核酸」およびそれらの文法的等価物は、本明細書で相互交換可能に使用される場合、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを意味し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、改変されたヌクレオチドもしくは塩基、および／またはそれらのアナログ、あるいはＤＮＡまたはＲＮＡポリメラーゼによってポリマー中に取り込まれ得る任意の基質であり得る。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であり得る。

【0083】

本明細書で使用される場合、用語「コードする」およびその文法的等価物は、ヌクレオチド（即ち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）の規定された配列またはアミノ酸の規定された配列のいずれかおよびそれから生じる生物学的特性を有する生物学的プロセス中の他のポリマーおよび高分子の合成のための鋳型として機能する、ポリヌクレオチドまたは核酸、例えば、遺伝子、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡ中のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性を指す。したがって、遺伝子は、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳がタンパク質を産生する場合、そのタンパク質をコードする。他に特定されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードする、全てのヌクレオチド配列を含む。タンパク質およびＲＮＡをコードするヌクレオチド配列には、イントロンが含まれ得る。

【0084】

「単離された」ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞または組成物は、天然に見出されない形態のポリペプチド、ペプチド、タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞または組成物である。単離されたポリペプチド、ペプチド、タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞または組成物には、天然に見出される形態ではもはや存在しない程度まで精製されたものが含まれる。一部の実施形態では、単離されたポリペプチド、ペプチド、タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞または組成物は、実質的に純粋である。一部の実施形態では、単離されたポリペプチド、ペプチド、タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞または組成物は、他の細胞性材料および／または化学物質を実質的に含まない。

【0085】

用語「同一な」、パーセント「同一性」およびそれらの文法的等価物は、２つまたはそれよりも多くのポリヌクレオチドまたはポリペプチドに関して本明細書で使用される場合、いずれの保存的アミノ酸置換も配列同一性の一部とはみなさずに、最大の対応を求めて（必要に応じてギャップを導入して）比較されアラインされた場合に同じであるか、または同じであるヌクレオチドもしくはアミノ酸残基の特定されたパーセンテージを有する、２つまたはそれよりも多くの配列または部分配列を指す。パーセント同一性は、配列比較ソフトウェアもしくはアルゴリズムを使用して、または目視検査によって、測定され得る。アミノ酸またはヌクレオチド配列のアラインメントを得るために使用され得る種々のアルゴリズムおよびソフトウェアが、当分野で周知である。これらには、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ、ＢｅｓｔＦｉｔ、ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ、およびそれらのバリアントを含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、本明細書で提供される２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、実質的に同一であり、これは、配列比較アルゴリズムを使用してまたは目視検査によって測定される場合に、最大の対応を求めて比較されアラインされた場合に、それらが、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、一部の実施形態では、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％のヌクレオチドまたはアミノ酸残基同一性を有することを意味する。一部の実施形態では、同一性は、少なくとも約１０残基、少なくとも約２０残基、少なくとも約４０～６０残基、少なくとも約６０～８０残基長、またはそれらの間の任意の整数値であるアミノ酸配列の領域にわたって存在する。一部の実施形態では、同一性は、６０～８０残基よりも長い領域、例えば、少なくとも約８０～１００残基にわたって存在し、一部の実施形態では、配列は、比較されている配列、例えば、標的タンパク質または抗体のコード領域の全長にわたって実質的に同一である。一部の実施形態では、同一性は、少なくとも約１０塩基、少なくとも約２０塩基、少なくとも約４０～６０塩基、少なくとも約６０～８０塩基長、またはそれらの間の任意の整数値であるヌクレオチド配列の領域にわたって存在する。一部の実施形態では、同一性は、６０～８０塩基よりも長い領域、例えば、少なくとも約８０～１０００塩基またはそれよりも長い領域にわたって存在し、一部の実施形態では、配列は、比較されている配列、例えば、目的のタンパク質をコードするヌクレオチド配列の全長にわたって実質的に同一である。

【0086】

「保存的アミノ酸置換」は、本明細書で使用される場合、１つのアミノ酸残基が類似の側鎖を有する別のアミノ酸残基で置き換えられた置換である。「保存的に類似の」アミノ酸または残基は、本明細書で使用される場合、類似の側鎖を有する非同一なアミノ酸残基を指す。塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ－分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当分野で定義されている。

【0087】

用語「ベクター」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、宿主細胞中に導入され得る遺伝子材料（例えば、ポリヌクレオチド配列）を運搬するために使用されるビヒクルを指し、宿主細胞中で、これは、複製および／または発現され得る。使用のために適用可能なベクターには、例えば、宿主細胞の染色体中への安定な組込みのために動作可能な選択配列またはマーカーを含み得る、発現ベクター、プラスミド、ファージベクター、ウイルスベクター、エピソームおよび人工染色体が含まれる。さらに、ベクターは、１つまたは複数の選択可能なマーカー遺伝子および適切な発現制御配列を含み得る。含まれ得る選択可能なマーカー遺伝子は、例えば、抗生物質もしくは毒素に対する耐性を提供するか、栄養要求欠損を補完するか、または培養培地中にない重要な栄養素を供給する。発現制御配列には、当分野で周知の構成的および誘導性プロモーター、転写エンハンサー、転写ターミネーターなどが含まれ得る。２つまたはそれよりも多くのポリヌクレオチドが共発現される場合、両方のポリヌクレオチドが、例えば、単一の発現ベクター中または別々の発現ベクター中に挿入され得る。単一ベクター発現のために、コードするポリヌクレオチドは、１つの共通の発現制御配列に操作可能に連結され得る、または異なる発現制御配列、例えば、１つの誘導性プロモーターおよび１つの構成的プロモーターに連結され得る。宿主細胞中へのポリヌクレオチドの導入は、当分野で周知の方法を使用して確認され得る。ポリヌクレオチドが、所望の産物（例えば、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片）を産生するのに十分な量で発現されることが当業者によって理解され、発現レベルが、当分野で周知の方法を使用して十分な発現を得るために最適化され得ることがさらに理解される。

【0088】

本明細書で使用される場合、用語「宿主細胞」は、遺伝子材料、例えば、組換え発現ベクターが導入され得るまたは導入されている細胞を指す。宿主細胞には、外因性遺伝子材料が導入された対象細胞だけでなく、かかる細胞の子孫も含まれる。ある特定の改変は、突然変異または環境的影響のいずれかに起因して、続く生成において生じ得るので、かかる子孫は、親細胞と同一でなくてもよい。

【0089】

本明細書で使用される場合、当分野で理解されるように、「ＥＣ」は、薬剤（例えば、抗体）の有効濃度を意味し、用量－応答曲線において一般に使用される。薬剤の「効果」は、正の（活性化）効果または負の効果であり得る。用語「ＥＣ５０」は、最大半量応答を与える活性薬剤（例えば、抗体）の濃度を指す。また本明細書で使用される場合、当分野で理解されるように、「ＩＣ」は、阻害効果を有する薬剤の濃度を意味し、これもまた、用量－応答曲線のために一般に使用される。用語「ＩＣ５０」は、それが阻害する活性が半分低減される薬剤（例えば、抗体）の濃度を指す。
５．２．１ 例示的なＣＤ２２抗体

【0090】

上のセクションに記載されるように、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の方法および使用が、本明細書で提供される。本明細書で提供される抗体および抗原結合性断片は、Ａβ除去、神経炎症の低減、またはその両方において使用され得る。本明細書で提供される抗体および抗原結合性断片は、Ａβおよび／または神経炎症に関連する疾患または障害の処置においても使用され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法において使用される抗体は、ヒトＣＤ２２に特異的に結合する。

【0091】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用され得る抗ＣＤ２２抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたはＩｇＭ抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＡ抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＤ抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＥ抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＭ抗体である。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体またはＩｇＧ４抗体であり得る。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ３抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、重鎖定常領域、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭもしくはＩｇＤ定常領域、またはグリコシル化部位および／もしくは改変されたグリコシル化部位におけるグリコフォームを有する上記定常領域のいずれかを含む。

【0092】

一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体の抗原結合性断片が、本明細書で開示される方法において使用される。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗原結合性断片は、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、重鎖抗体（ＨＣＡｂ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）または（ｓｃＦｖ）２であり得る。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体の抗原結合性断片は、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体の抗原結合性断片は、重鎖抗体（ＨＣＡｂ）である。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体の抗原結合性断片は、Ｆａｂである。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体の抗原結合性断片は、Ｆａｂ’である。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体の抗原結合性断片は、Ｆ（ａｂ’）２である。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体の抗原結合性断片は、Ｆｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体の抗原結合性断片は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体の抗原結合性断片は、ジスルフィド連結されたｓｃＦｖ［（ｓｃＦｖ）２］である。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体の抗原結合性断片は、ディアボディ（ｄＡｂ）である。

【0093】

一部の実施形態では、組換え抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片が、本明細書で開示される方法において使用される。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、モノクローナル抗体または抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ポリクローナル抗体または抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ラクダ科動物（例えば、ラクダ、ヒトコブラクダおよびラマ）抗体または抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、キメラ抗体または抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒト化抗体または抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒト抗体または抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２ヒト化ｓｃＦｖが、本明細書で提供される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２ヒトヒト化Ｆａｂが、本明細書で提供される。

【0094】

一部の実施形態では、本明細書で提供される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、単離される。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、実質的に純粋である。

【0095】

一部の実施形態では、本明細書で提供される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、一価抗原結合部位を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、単一特異性結合部位を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、二価結合部位を含む。

【0096】

一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、代替的抗体を生成するために組換えＤＮＡ技術を使用することによって改変される。一部の実施形態では、マウスモノクローナル抗体の軽鎖および重鎖の定常ドメインは、キメラ抗体を生成するために、ヒト抗体の定常領域で置き換えられる。一部の実施形態では、定常領域は、モノクローナル抗体の所望の抗体断片を生成するために短縮または除去される。一部の実施形態では、可変領域（複数可）の部位特異的または高密度突然変異誘発が、モノクローナル抗体の特異性および／または親和性を最適化するために使用される。

【0097】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒト化抗体または抗原結合性断片である。ヒト化抗体を生成するための種々の方法が、当分野で公知である。ヒト化抗体との高親和性結合を達成するための方法は、当分野で公知である。かかる方法の非限定的な例は、可変領域の高頻度突然変異およびかかる高親和性抗体（親和性成熟）を発現する細胞の選択である。ディスプレイライブラリーの使用に加えて、特定された抗原（例えば、組換えＣＤ２２またはそのエピトープ）が、非ヒト動物、例えば、げっ歯類を免疫化するために使用され得る。ある特定の実施形態では、げっ歯類抗原結合性断片（例えば、マウス抗原結合性断片）が、当分野で公知のおよび／または本明細書で開示される方法を使用して、生成および単離され得る。一部の実施形態では、マウスは、抗原（例えば、組換えＣＤ２２またはそのエピトープ）で免疫化され得る。

【0098】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒト抗体または抗原結合性断片である。ヒト抗体は、当分野で公知の種々の技法を使用して調製され得る。一部の実施形態では、ヒト抗体は、免疫化された不死化ヒトＢリンパ球からｉｎ ｖｉｔｒｏで生成される。一部の実施形態では、ヒト抗体は、免疫化された個体から単離されたリンパ球から生成される。いずれの場合にも、標的抗原に対する抗体を産生する細胞が、生成および単離され得る。一部の実施形態では、ヒト抗体は、そのファージライブラリーがヒト抗体を発現する場合、ファージライブラリーから選択される。あるいは、ファージディスプレイ技術が、免疫化されていないドナー由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子レパートリーからヒト抗体および抗体断片をｉｎ ｖｉｔｒｏで産生するために使用され得る。抗体ファージライブラリーの生成および使用のための技法は、当分野で周知である。抗体が同定されると、鎖シャッフリングおよび部位特異的突然変異誘発を含むがこれらに限定されない、当分野で公知の親和性成熟戦略が、より高い親和性のヒト抗体を生成するために使用され得る。一部の実施形態では、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含有するトランスジェニックマウスにおいて産生される。免疫化の際に、これらのマウスは、内因性免疫グロブリン産生の非存在下でフルレパートリーのヒト抗体を産生することが可能である。

【0099】

本明細書で定義される特定のＣＤＲ配列は、一般に、Ｋａｂａｔ定義とＣｈｏｔｈｉａ定義との組合せに基づく。しかし、特定の抗体の重鎖ＣＤＲ（単数または複数）および／または軽鎖ＣＤＲ（単数または複数）に対する言及は、当業者に公知の全てのＣＤＲ定義を包含することが理解される。本明細書で提供される方法において使用され得る抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片には、ＳＭ０３およびＳＭ０６、ならびにそれらのバリエーションおよび派生物が含まれる。

【0100】

用語「ＳＭ０３」は、ヒトＣＤ２２（ｈＣＤ２２）に対するキメラ抗体を指す。ＳＭ０３の配列特色は、以下の表に提供される。ＳＭ０３の構造的および機能的特色のさらなる記載は、例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Yang et al. (2006), Chinese J New Drug 15(3):186-92；および中国特許第ＺＬ０３１２３０５４．７号において見出すことができる。

【0101】

用語「ＳＭ０６」は、その潜在的な免疫原性を低減させるために再操作され、ｈＣＤ２２に対する親和性および特異性を示す、キメラ抗体ＳＭ０３のフレームワークパッチまたはヒト化バージョンを指す。ＳＭ０６の配列特色は、以下の表に提供される。ＳＭ０６の構造的および機能的特色のさらなる記載は、例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Liang et al. (2006) Chinese J New Drug 15(21):1832-36；中国特許第ＺＬ０１１４４８９４．６号ならびに米国特許第７，３２１，０２６号Ｂ２および同第７，３３８，６５９号Ｂ２において見出すことができる。
表1: SM03およびSM06のCDR配列

【表1】

表2: SM03およびSM06の可変領域

【表2】

【0102】

一部の実施形態では、本明細書で提供される方法において使用され得る抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＳＭ０３／ＳＭ０６の１つ、２つ、３つ、４つ、５つおよび／または６つのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、表１からの１つ、２つおよび／または３つのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、表１からの１つ、２つおよび／または３つのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、表１からの１つ、２つおよび／または３つのＶＬ ＣＤＲならびに１つ、２つおよび／または３つのＶＨ ＣＤＲを含む。

【0103】

一部の実施形態では、本明細書で提供される方法において使用され得る抗体またはその抗原結合性断片は、（１）配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＶＬ ＣＤＲ１）；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２（ＶＬ ＣＤＲ２）；もしくは（３）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３（ＶＬ ＣＤＲ３）、を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；またはＶＬ ＣＤＲ中に最大で約３つ、約５つ、約８つ、約１０個、約１２個もしくは約１５個のアミノ酸置換、付加および／もしくは欠失を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、バリアントは、ＶＬ ＣＤＲ中に約５つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を有する。一部の実施形態では、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；および（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、を含むＶＬ；またはＶＬ ＣＤＲ中に最大で約３つ、約５つ、約８つ、約１０個、約１２個もしくは約１５個のアミノ酸置換、付加および／もしくは欠失を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、バリアントは、ＶＬ ＣＤＲ中に最大で約５つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を有する。

【0104】

一部の実施形態では、（１）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＶＨ ＣＤＲ１）；（２）配列番号５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２（ＶＨ ＣＤＲ２）；もしくは（３）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３（ＶＨ ＣＤＲ３）、を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；またはＶＨ ＣＤＲ中に最大で約３つ、約５つ、約８つ、約１０個、約１２個もしくは約１５個のアミノ酸置換、付加および／もしくは欠失を有するそのバリアントを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、バリアントは、ＶＨ ＣＤＲ中に最大で約５つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を有する。一部の実施形態では、（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；および（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、を含むＶＨ；またはＶＨ ＣＤＲ中に最大で約３つ、約５つ、約８つ、約１０個、約１２個もしくは約１５個のアミノ酸置換、付加および／もしくは欠失を有するそのバリアントを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、バリアントは、ＶＨ ＣＤＲ中に最大で約５つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を有する。

【0105】

一部の実施形態では、（ａ）（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；および（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３、を含むＶＬ；またはＶＬ ＣＤＲ中に最大で約５つのアミノ酸置換、付加および／もしくは欠失を有するそのバリアント；ならびに（ｂ）（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；および（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、を含むＶＨ；またはＶＨ ＣＤＲ中に最大で約５つのアミノ酸置換、付加および／もしくは欠失を有するそのバリアント、を含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。

【0106】

ＶＨ ＣＤＲ３およびＶＬ ＣＤＲ３ドメインは、抗原に対する抗体の結合特異性／親和性において重要な役割を果たすことが、当分野で周知である。したがって、一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用され得る抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ２２との適切な会合／解離反応速度論を有し得、ＳＭ０３および／またはＳＭ０６のものと構造的に同一なまたは関連するＶＨ ＣＤＲ３およびＶＬ ＣＤＲ３を有し得る。アミノ酸配列：Ｑ－Ｑ－Ｇ－Ｎ－Ｔ－Ｌ－Ｐ－Ｗ－Ｔ（配列番号３）を含む、ＳＭ０３ ＶＬ ＣＤＲ３についてのコンセンサスモチーフは、その結合特異性を変化させることなしに抗体親和性を調整するために１つまたは複数のアミノ酸を置換することによって改変され得、またはあるいは、参照により本明細書に組み込まれる中国特許第ＺＬ２００８８００２４７８８．２号に記載される基準を使用して、ＳＭ０３ ＶＬ ＣＤＲ３に対して十分な類似性を示す無関係のヒト抗体のＶＬ ＣＤＲ３によって置き換えられ得る。同様に、アミノ酸配列：Ｈ－Ｓ－Ｇ－Ｙ－Ｇ－Ｓ－Ｓ－Ｙ－Ｇ－Ｖ－Ｌ－Ｆ－Ａ－Ｙ（配列番号６）を含む、ＳＭ０３ ＶＨ ＣＤＲ３についてのコンセンサスモチーフは、その結合特異性を変化させることなしに抗体親和性を調整するために１つまたは複数のアミノ酸を置換することによって改変され得、またはあるいは、参照により本明細書に組み込まれる中国特許第ＺＬ２００８８００２４７８８．２号に記載される基準を使用して、ＳＭ０３ ＶＨ ＣＤＲ３に対して十分な類似性を示す無関係のヒト抗体のＶＨ ＣＤＲ３によって置き換えられ得る。当業者は、ＣＤＲ３ドメイン内のアミノ酸のある特定の置換（複数可）、特に、保存的アミノ酸による置換が、抗体のエピトープ特異性を変化させないことを理解する。このように、一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）のＣＤＲ３は、結晶構造および／またはコンピュータデータベース分析によって決定される、抗ＣＤ２２抗体の結合部位構造／接触を維持するために重要であることが公知の位置において、（１）残基の数が同一であり、ＳＭ０３ ＣＤＲ３に対して５０％もしくはそれよりも高い配列相同性を示す、（２）ＳＭ０３ ＣＤＲ３中の対応する位置（複数可）における残基（複数可）に対して同一なもしくは保存的に類似の、少なくとも１つの、好ましくはより多くの芳香族残基を含有する、（３）ＳＭ０３ ＣＤＲ３中の対応する位置（複数可）における残基（複数可）に対して同一なもしくは保存的に類似の、少なくとも１つの、好ましくはより多くの荷電残基を含有する、および／または（４）ＳＭ０３ ＣＤＲ３中の対応する位置（複数可）における残基（複数可）に対して同一なもしくは保存的に類似の、少なくとも１つの、好ましくはより多くのアミノ酸残基を含有する、ヒトまたは霊長類抗体由来のＣＤＲ３で、置き換えられ得る（参照により本明細書に組み込まれる中国特許第ＺＬ２００８８００２４７８８．２号を参照されたい）。一部の実施形態では、１つ～５つ以下の保存的アミノ酸置換が、ＳＭ０３ ＶＬおよび／もしくはＶＨ ＣＤＲ３ドメイン内でなされるか、または１つ～５つ以下の保存的に類似の残基を含有する、無関係の霊長類もしくはヒト抗体由来のＶＬおよび／もしくはＶＨ ＣＤＲ３が、ＳＭ０３もしくはＳＭ０６のＶＬおよび／もしくはＶＨ ＣＤＲ３を置き換えるために使用される。一部の実施形態では、１つ～３つ以下の保存的アミノ酸置換が、ＳＭ０３ ＶＬおよび／もしくはＶＨ ＣＤＲ３ドメイン内でなされるか、または、１つ～３つ以下の保存的に類似の残基を含有する、無関係の霊長類もしくはヒト抗体由来のＶＬおよび／もしくはＶＨ ＣＤＲ３が、ＳＭ０３もしくはＳＭ０６のＶＬおよび／もしくはＶＨ ＣＤＲ３を置き換えるために使用される。

【0107】

一部の実施形態では、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するＶＨを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性配列同一性を有するＶＬ；および（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性配列同一性を有するＶＨ、を含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。

【0108】

一部の実施形態では、ＶＬを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が本明細書で提供され、ＶＬは、配列番号７に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＬを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬを有する。一部の実施形態では、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。

【0109】

一部の実施形態では、ＶＨを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号８に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＨを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨを有する。一部の実施形態では、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＨを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。

【0110】

一部の実施形態では、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するＶＨを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性配列同一性を有するＶＬ；および（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性配列同一性を有するＶＨ、を含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。

【0111】

一部の実施形態では、ＶＬを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が本明細書で提供され、ＶＬは、配列番号９に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＬを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬを有する。一部の実施形態では、配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。

【0112】

一部の実施形態では、ＶＨを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号１０に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＨを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨを有する。一部の実施形態では、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。

【0113】

一部の実施形態では、ＶＬおよびＶＨを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が本明細書で提供され、ＶＬおよびＶＨは、それぞれ配列番号７および８のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＶＬおよびＶＨは、それぞれ配列番号９および１０のアミノ酸配列を有する。

【0114】

抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書で開示される任意のＶＬと本明細書で開示される任意のＶＨとの組合せを含み得る。一部の実施形態では、ＶＬおよびＶＨは、リンカーによって接続される。リンカーは、柔軟性のあるリンカーまたは剛性のリンカーであり得る。一部の実施形態では、リンカーは、柔軟性のあるリンカーである。一部の実施形態では、リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、ｎ＝３、４または５（配列番号１９）のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、リンカーは、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号３８）のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、リンカーは、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号３９）のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、リンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳ（配列番号４０）のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、リンカーは、ＳＳＧＮＳＮＡＮＳＲＧＰＳＦＳＳＧＬＶＰＬＳＬＲＧＳＨ（配列番号４１）のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＧＧ（配列番号４２）のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、リンカーは、剛性のリンカーである。一部の実施形態では、リンカーは、（ＥＡＡＡＫ）ｎ、ｎ＝３、４または５（配列番号２０）のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、リンカーは、（ＰＡ）ｎＰ、ｎ＝１、２、３、４または５（配列番号２１）のアミノ酸配列を有する。

【0115】

一部の実施形態では、（ａ）配列番号７もしくは９のアミノ酸配列を有するＶＬ由来のＶＬ ＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ；ならびに／または（ｂ）配列番号８もしくは１０のアミノ酸配列を有するＶＨ由来のＶＨ ＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、を含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬ由来のＶＬ ＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ；ならびに／または（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ由来のＶＨ ＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、を含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。

【0116】

一部の実施形態では、ＶＬを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が本明細書で提供され、ＶＬは、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ由来のＶＬ ＣＤＲ１、２および３を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬ由来のＶＬ ＣＤＲ１、２および３を含む。

【0117】

一部の実施形態では、ＶＨを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＨ由来のＶＨ ＣＤＲ１、２および３を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ由来のＶＨ ＣＤＲ１、２および３を含む。

【0118】

一部の実施形態では、ＶＬおよびＶＨを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が本明細書で提供され、ＶＬは、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ由来のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨは、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＨ由来のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬ由来のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨは、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ由来のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。

【0119】

一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０３と示される抗体である。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０３由来のＶＬを有する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０３由来のＶＨを有する。本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０３由来のＶＬおよびＶＨの両方を有し得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０３由来のＶＬ由来のＶＬ ＣＤＲ１、２および３を含むＶＬを有する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０３由来のＶＨ由来のＶＨ ＣＤＲ１、２および３を含むＶＨを有する。本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれＳＭ０３のＶＬならびにＶＨ由来のＶＬ ＣＤＲ１、２および３を含むＶＬならびにＶＨ ＣＤＲ１、２および３を含むＶＨを有し得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０３のバリアントである。ＳＭ０３バリアントは、配列番号７中に最大で約５つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を有する、ＳＭ０３のＶＬのバリアントであるＶＬを有し得る。ＳＭ０３バリアントは、配列番号８中に最大で約５つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を有する、ＳＭ０３のＶＨのバリアントであるＶＨを有し得る。アミノ酸置換、付加および／または欠失は、ＶＨ ＣＤＲまたはＶＬ ＣＤＲ中にあり得る。一部の実施形態では、アミノ酸置換、付加および／または欠失は、ＣＤＲ中にはない。一部の実施形態では、ＳＭ０３のバリアントは、最大で約５つの保存的アミノ酸置換を有する。一部の実施形態では、ＳＭ０３のバリアントは、最大で３つの保存的アミノ酸置換を有する。

【0120】

一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０６と示される抗体である。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０６由来のＶＬを有する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０６由来のＶＨを有する。本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０６由来のＶＬおよびＶＨの両方を有し得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０６由来のＶＬ由来のＶＬ ＣＤＲ１、２および３を含むＶＬを有する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０６由来のＶＨ由来のＶＨ ＣＤＲ１、２および３を含むＶＨを有する。本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれＳＭ０６のＶＬならびにＶＨ由来のＶＬ ＣＤＲ１、２および３を含むＶＬならびにＶＨ ＣＤＲ１、２および３を含むＶＨを有し得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＭ０６のバリアントである。ＳＭ０６バリアントは、配列番号９中に最大で約５つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を有する、ＳＭ０６のＶＬのバリアントであるＶＬを有し得る。ＳＭ０６バリアントは、配列番号１０中に最大で約５つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を有する、ＳＭ０６のＶＨのバリアントであるＶＨを有し得る。アミノ酸置換、付加および／または欠失は、ＶＨ ＣＤＲまたはＶＬ ＣＤＲ中にあり得る。一部の実施形態では、アミノ酸置換、付加および／または欠失は、ＣＤＲ中にはない。一部の実施形態では、ＳＭ０６のバリアントは、最大で約５つの保存的アミノ酸置換を有する。一部の実施形態では、ＳＭ０６のバリアントは、最大で３つの保存的アミノ酸置換を有する。

【0121】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用され得る抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、少なくとも１つのフレームワーク（ＦＲ）領域を有するＶＨまたはＶＬを含む。ＶＬについてのＦＲ領域は、Ｖκ１０マウス生殖系列ファミリー由来であり得る。一部の実施形態では、ＶＬについてのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４は、それぞれ配列番号３０、３１、３２および３３のアミノ酸配列（ＳＭ０３ ＶＬフレームワーク配列）を有し得る。一部の実施形態では、ＶＨについてのＦＲ領域は、ＶＨ５マウス生殖系列ファミリー由来であり得る。一部の実施形態では、ＶＨについてのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４は、それぞれ配列番号３４、３５、３６および３７のアミノ酸配列（ＳＭ０３ ＶＨフレームワーク配列）を有し得る。一部の実施形態では、ＶＬについてのＦＲ１領域は、ＶκＩＤヒト生殖系列ファミリー由来であり得、ＶＬについてのＦＲ２領域は、Ｖκ１ヒト生殖系列ファミリー由来であり得、ＶＬについてのＦＲ３領域は、Ｖκ１ヒト生殖系列ファミリー由来であり得、ＶＬについてのＦＲ４領域は、ＶκＪ１ヒト生殖系列ファミリー由来であり得る。一部の実施形態では、ＶＬについてのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４は、それぞれ配列番号２２、２３、２４および２５のアミノ酸配列（ＳＭ０６ ＶＬフレームワーク配列）を有し得る。一部の実施形態では、ＶＨについてのＦＲ１領域は、Ｖ_Ｈ３ヒト生殖系列ファミリー由来であり得；ＶＨについてのＦＲ２領域領域は、Ｖ_Ｈ３ヒト生殖系列ファミリー由来であり得；ＶＨについてのＦＲ３領域は、Ｖ_Ｈ３ヒト生殖系列ファミリー由来であり得；ＶＨについてのＦＲ４領域領域は、Ｖ_ＨＪ５ヒト生殖系列ファミリー由来であり得る。一部の実施形態では、ＶＨについてのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４は、それぞれ配列番号２６、２７、２８および２９のアミノ酸配列（ＳＭ０６ ＶＨフレームワーク配列）を有し得る。

【0122】

本開示は、本明細書に記載される組換え、モノクローナル、キメラ、ヒト化およびヒト抗体、またはそれらの抗体断片に対して実質的に相同なさらなるバリアントおよび等価物をさらに企図する。一部の実施形態では、抗体の結合親和性を改善することが望ましい。一部の実施形態では、特異性、熱安定性、発現レベル、エフェクター機能（複数可）、グリコシル化、免疫原性および／または溶解度を含むがこれらに限定されない、抗体の生物学的特性をモジュレートすることが望ましい。当業者は、アミノ酸変化が、グリコシル化部位の数もしくは位置を変化させる、または膜アンカリング特徴を変更するなど、抗体の翻訳後プロセスを変更し得ることを理解する。

【0123】

バリエーションは、ネイティブ抗体またはポリペプチド配列と比較してアミノ酸配列中に変化を生じる、抗体またはポリペプチドをコードする１つまたは複数のヌクレオチドの置換、欠失または挿入であり得る。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、１つのアミノ酸の、類似の構造的および／または化学的特性を有する別のアミノ酸による置き換え、例えば、ロイシンのセリンによる置き換え、例えば、保存的アミノ酸置き換えの結果である。挿入または欠失は、約１～５アミノ酸の範囲であり得る。一部の実施形態では、置換、欠失または挿入は、親分子と比較して、２５個未満のアミノ酸置換、２０個未満のアミノ酸置換、１５個未満のアミノ酸置換、１０個未満のアミノ酸置換、５つ未満のアミノ酸置換、４つ未満のアミノ酸置換、３つ未満のアミノ酸置換、または２つ未満のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、生物学的に有用なおよび／または関連する、アミノ酸配列におけるバリエーションは、配列中に挿入、欠失または置換を体系的に作製すること、および得られたバリアントタンパク質を、親タンパク質と比較して活性について試験することによって、決定され得る。

【0124】

一部の実施形態では、本明細書で提供される方法において使用され得る抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、キメラ抗体または抗原結合性断片である。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法において使用され得る抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト化抗体または抗原結合性断片である。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載される抗体または抗原結合性断片由来のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２および／またはＶＨ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片のバリアントを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片のバリアントは、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片中に１～３０個のアミノ酸置換、付加および／または欠失を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片のバリアントは、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片中に１～２５個のアミノ酸置換、付加および／または欠失を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片のバリアントは、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片中に１～２０個の置換、付加および／または欠失を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片のバリアントは、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片中に１～１５個の置換、付加および／または欠失を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片のバリアントは、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片中に１～１０個の置換、付加および／または欠失を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片のバリアントは、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片中に１～５個の保存的アミノ酸置換、付加および／または欠失を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片のバリアントは、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片中に１～３個のアミノ酸置換、付加および／または欠失を含む。一部の実施形態では、アミノ酸置換、付加および／または欠失は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、保存的アミノ酸置換（複数可）は、抗体または抗原結合性断片のＣＤＲ中にある。一部の実施形態では、保存的アミノ酸置換（複数可）は、抗体または抗原結合性断片のＣＤＲ中にはない。一部の実施形態では、保存的アミノ酸置換（複数可）は、抗体または抗原結合性断片のフレームワーク領域中にある。

【0125】

抗体の定常領域（複数可）が、いくつかのエフェクター機能を媒介し、これらのエフェクター機能が、抗体のアイソタイプに依存して変動し得ることが、当分野で公知である。例えば、ＩｇＧまたはＩｇＭ抗体（抗原に結合した）のＦｃ領域への補体のＣ１成分の結合は、補体系を活性化する。補体の活性化は、細胞病原体のオプソニン化および溶解において重要である。補体の活性化は、炎症応答もまた刺激し、自己免疫過敏症に関与し得る。さらに、抗体のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する細胞に結合することができる。ＩｇＧ（ガンマ受容体）、ＩｇＥ（イプシロン受容体）、ＩｇＡ（アルファ受容体）およびＩｇＭ（ミュー受容体）を含む、抗体の異なるクラスに対して特異的ないくつかのＦｃ受容体が存在する。細胞表面上のＦｃ受容体への抗体の結合は、抗体コーティングされた粒子の飲み込みおよび破壊、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体コーティングされた標的細胞の溶解（抗体依存性細胞傷害またはＡＤＣＣと呼ばれる）、炎症メディエーターの放出、胎盤移行、ならびに免疫グロブリン産生の制御を含む、多くの重要かつ多様な生物学的応答を誘発する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒトＩｇＡ抗体の少なくとも１つの定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒトＩｇＤ抗体の少なくとも１つの定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒトＩｇＥ抗体の少なくとも１つの定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒトＩｇＧ抗体の少なくとも１つの定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒトＩｇＭ抗体の少なくとも１つの定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒトＩｇＧ１抗体の少なくとも１つの定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒトＩｇＧ２抗体の少なくとも１つの定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒトＩｇＧ３抗体の少なくとも１つの定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒトＩｇＧ４抗体の少なくとも１つの定常領域を含む。

【0126】

一部の実施形態では、定常領域のうちの少なくとも１つまたは複数は、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片において改変または欠失されている。一部の実施形態では、抗体は、３つの重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）のうちの１つもしくは複数および／または軽鎖定常領域（ＣＬ）に対する改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗体の重鎖定常領域は、少なくとも１つのヒト定常領域を含む。一部の実施形態では、改変された抗体の重鎖定常領域は、１つよりも多くのヒト定常領域を含む。一部の実施形態では、定常領域に対する改変は、１つまたは複数の領域中の１つまたは複数のアミノ酸の付加、欠失または置換を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の領域が、改変された抗体の定常領域から部分的にまたは完全に欠失される。一部の実施形態では、ＣＨ２ドメイン全体が、抗体から除去されている（ΔＣＨ２構築物）。一部の実施形態では、欠失された定常領域は、存在しない定常領域によって典型的には与えられる分子柔軟性の一部を提供する短いアミノ酸スペーサーによって置き換えられる。一部の実施形態では、改変された抗体は、抗体のヒンジ領域に直接融合されたＣＨ３ドメインを含む。一部の実施形態では、改変された抗体は、ヒンジ領域と改変されたＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインとの間に挿入されたペプチドスペーサーを含む。

【0127】

一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒンジを介して融合される。ヒンジは、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ２ヒンジまたはＩｇＧ３ヒンジであり得る。ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４のＦｃ領域のアミノ酸配列は、当業者に公知である。一部の場合には、アミノ酸バリエーションを有するＦｃ領域は、ネイティブ抗体において同定されている。一部の実施形態では、改変された抗体（例えば、改変されたＦｃ領域）は、抗体の生物学的プロファイルに次に影響する、変更されたエフェクター機能を提供する。例えば、一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片のＦｃ領域は、血液脳関門（ＢＢＢ）を横断するそれらの能力を増強するように改変される。一部の実施形態では、定常領域の欠失または不活性化（点突然変異または他の手段を介した）は、それが循環する際の改変された抗体のＦｃ受容体結合を低減させる。一部の実施形態では、定常領域改変は、抗体の免疫原性を低減させる。一部の実施形態では、定常領域改変は、抗体の血清半減期を増加させる。一部の実施形態では、定常領域改変は、抗体の血清半減期を低減させる。一部の実施形態では、定常領域改変は、抗体のＡＤＣＣおよび／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を減少させるまたは除去する。一部の実施形態では、対応するＩｇＧ２またはＩｇＧ４残基によるヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域中の特定のアミノ酸置換は、改変された抗体においてエフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣおよびＣＤＣ）を低減させる。一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数のエフェクター機能を有さない（例えば、「エフェクターなし」抗体）。一部の実施形態では、抗体は、ＡＤＣＣ活性を有さないおよび／またはＣＤＣ活性を有さない。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体および／または補体因子に結合しない。一部の実施形態では、抗体は、エフェクター機能（複数可）を有さない。一部の実施形態では、定常領域改変は、抗体のＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを増加または増強する。一部の実施形態では、定常領域は、ジスルフィド連結またはオリゴ糖部分を排除するように改変される。一部の実施形態では、定常領域は、１つまたは複数の細胞毒素、オリゴ糖または炭水化物結合部位を提供するために、１つまたは複数のアミノ酸を付加／置換するように改変される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ネイティブＦｃ領域と比較して、特定のアミノ酸位置において置換によって操作されたバリアントＦｃ領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＥＵ番号付けに従って、Ｋ２１４Ｒ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ｄ３５６ＥおよびＬ３５８Ｍからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＥＵ番号付けに従って、Ｋ２１４Ｒ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｄ３５６ＥおよびＬ３５８Ｍからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＥＵ番号付けに従って、Ｋ２１４Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９ＳおよびＰ２３８Ｓからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＥＵ番号付けに従って、Ｋ２１４Ｒ、Ｄ３５６ＥおよびＬ３５８Ｍからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＥＵ番号付けに従って、Ｓ１３１Ｃ、Ｋ１３３Ｒ、Ｇ１３７Ｅ、Ｇ１３８Ｓ、Ｑ１９６Ｋ、Ｉ１９９Ｔ、Ｎ２０３Ｄ、Ｋ２１４Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９ＳおよびＰ２３８Ｓからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。

【0128】

一部の実施形態では、バリアントは、抗体またはポリペプチドのアミノ末端および／またはカルボキシル末端においてアミノ酸残基の付加を含み得る。さらなるアミノ酸残基の長さは、１残基から１００またはそれよりも多くの残基までの範囲であり得る。一部の実施形態では、バリアントは、Ｎ末端メチオニル残基を含む。一部の実施形態では、バリアントは、融合タンパク質を創出するために、さらなるポリペプチド／タンパク質（例えば、Ｆｃ領域）を含む。一部の実施形態では、バリアントは、検出可能であるように操作され、検出可能な標識および／またはタンパク質（例えば、蛍光タグまたは酵素）を含み得る。

【0129】

治療的抗体は、例えば、受容体媒介性トランスサイトーシス、吸着性トランスサイトーシス、担体媒介性輸送、傍細胞輸送および拡散を含む種々の機構を介してＢＢＢを横断する輸送を容易にするように再操作され得る。全ての中で、受容体媒介性トランスサイトーシス（Ｒ．Ｍ．Ｔ．）が、抗体の進入を容易にするために広く探索されている。Ｒ．Ｍ．Ｔ．の使用は、結合の際にトランスサイトーシスを実施することができる、トランスフェリン受容体、インスリン受容体、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬ受容体）、ＣＤ９８、ＴＭＥＭ５０Ａ、および内皮細胞上の他の表面受容体を含む。トランスフェリン、インスリン受容体、ＣＤ９８およびＴＥＭＥ５０Ａに結合する抗体は、複合体全体のトランスサイトーシスを惹起することができる。ＬＤＬ受容体の場合、アポリポタンパク質の結合が、トランスサイトーシスプロセスを誘発し得る。したがって、抗体断片またはアポリポタンパク質に連結された治療的抗体が提案され、動物モデルにおいてＢＢＢ横断を増強することが検証される。

【0130】

このように、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＢＢＢを横断するその能力を増強するように操作され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、トランスフェリン、インスリン受容体、ＣＤ９８またはＴＥＭＥ５０Ａに結合する第２の抗体または抗原結合性断片に融合される。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、トランスフェリンに結合する第２の抗体または抗原結合性断片に融合され得る。一部の実施形態では、例えば、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、トランスフェリン受容体結合性Ｆａｂ断片に融合され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、インスリン受容体に結合する第２の抗体または抗原結合性断片に融合され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ９８に結合する第２の抗体または抗原結合性断片に融合され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＴＥＭＥ５０Ａに結合する第２の抗体または抗原結合性断片に融合され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、アポリポタンパク質に融合される。

【0131】

本明細書に記載されるバリアント抗体または抗原結合性断片は、部位特異的突然変異誘発、アラニンスキャニング突然変異誘発およびＰＣＲ突然変異誘発を含むがこれらに限定されない、当分野で公知の方法を使用して生成され得る。

【0132】

一部の実施形態では、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片のバリアントは、親抗体または抗原結合性断片と類似の程度、同じ程度またはそれよりも高い程度まで、ＣＤ２２に結合する能力を保持し得る。一部の実施形態では、バリアントは、親抗体または抗原結合性断片に対して、アミノ酸配列において、少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれよりも大きく同一であり得る。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片のバリアントは、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換を有する、親抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片のアミノ酸配列を含む。保存的アミノ酸置換は、当分野で公知であり、これには、ある特定の物理的および／または化学的特性を有する１つのアミノ酸が、同じまたは類似の化学的または物理的特性を有する別のアミノ酸に交換されるアミノ酸置換が含まれる。

【0133】

一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片のバリアントは、１つまたは複数の非保存的アミノ酸置換を有する、親抗体または抗原結合性断片のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片のバリアントは、１つまたは複数の非保存的アミノ酸置換を有する、親結合抗体または抗原結合性断片のアミノ酸配列を含み、１つまたは複数の非保存的アミノ酸置換は、バリアントの１つまたは複数の生物活性（例えば、ＣＤ２２結合）を妨害も阻害もしない。ある特定の実施形態では、１つもしくは複数の保存的アミノ酸置換および／または１つもしくは複数の非保存的アミノ酸置換は、バリアントの生物活性を増強し得、その結果、機能的バリアントの生物活性は、親結合部分と比較して増加する。

【0134】

一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、手動でまたは介入によって、化学的に改変される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質分解性切断、および／または細胞リガンドもしくは他のタンパク質への連結によって、化学的に改変されている。多数の化学的改変のいずれもが、公知の技法によって実施され得る。抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、アミノ酸の１つまたは複数のアナログ（例えば、非天然のアミノ酸が含まれる）、ならびに当分野で公知の他の改変を含み得る。

【0135】

本開示の抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、当分野で公知の種々の方法によって、それらの物理的、化学的および／または生物学的特性について分析され得る。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２（例えば、ヒトＣＤ２２）に結合するその能力について試験される。結合アッセイには、表面プラズモン共鳴（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ）、ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳが含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、ＣＤ２２に対する結合剤（例えば、抗体）の解離定数は、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ）によって決定される解離定数である。さらに、抗体は、溶解度、安定性、熱安定性、粘度、発現レベル、発現品質および／または精製効率について評価され得る。

【0136】

ＳＭ０３およびＳＭ０６は共に、約１．２ｎＭの解離定数（Ｋ_Ｄ）でヒトＣＤ２２に結合する。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１００ｎＭもしくはそれ未満、約４０ｎＭもしくはそれ未満、約２０ｎＭもしくはそれ未満、約１０ｎＭもしくはそれ未満、約１ｎＭもしくはそれ未満、約０．１ｎＭもしくはそれ未満、５０ｐＭもしくはそれ未満、１０ｐＭもしくはそれ未満、または１ｐＭもしくはそれ未満の解離定数（Ｋ_Ｄ）で、ＣＤ２２（例えば、ヒトＣＤ２２）に結合する。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、約２０ｎＭまたはそれ未満である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、約１０ｎＭまたはそれ未満である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、約５ｎＭまたはそれ未満である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、約２ｎＭまたはそれ未満である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、約１．５ｎＭまたはそれ未満である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、約１ｎＭまたはそれ未満である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、約０．５ｎＭまたはそれ未満である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、約０．１ｎＭまたはそれ未満である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、約５０ｐＭまたはそれ未満である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、約１０ｐＭまたはそれ未満である。

【0137】

一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、０．１～１ｎＭ、０．５～５ｎＭ、１～１０ｎＭ、１～５ｎＭ、５～５０ｎＭ、１０～１００ｎＭまたは５０～５００ｎＭの範囲内のＫ_Ｄで、ＣＤ２２（例えば、ヒトＣＤ２２）に結合する。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、０．１～１ｎＭの範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、０．５～５ｎＭの範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、１～１０ｎＭの範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、１～５ｎＭの範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、５～５０ｎＭの範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、１０～１００ｎＭの範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、５０～５００ｎＭの範囲内である。

【0138】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約０．８×１０^９Ｍ^－１の会合定数（Ｋ_Ａ）でＣＤ２２（例えば、ヒトＣＤ２２）に結合する。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１×１０^６Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約１×１０^７Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約１×１０^８Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約５×１０^８Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約８×１０^８Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約１×１０^９Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約５×１０^９Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約１×１０^１０Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約５×１０^１０Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約１×１０^１１Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約５×１０^１１Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、または約１×１０^１２Ｍ^－１もしくはそれよりも高いＫ_Ａで、ＣＤ２２（例えば、ヒトＣＤ２２）に結合する。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^７Ｍ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約５×１０^７Ｍ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^８Ｍ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約５×１０^８Ｍ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約８×１０^８Ｍ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^９Ｍ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約５×１０^９Ｍ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^１０Ｍ^－１またはそれよりも高い。

【0139】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１×１０^６～１×１０^７Ｍ^－１、５×１０^６～５×１０^７Ｍ^－１、１×１０^７～１×１０^８Ｍ^－１、５×１０^７～５×１０^８Ｍ^－１、１×１０^８～５×１０^８Ｍ^－１、１×１０^８～１×１０^９Ｍ^－１、５×１０^８～１×１０^９Ｍ^－１、５×１０^８～５×１０^９Ｍ^－１、１×１０^９～１×１０^１０Ｍ^－１、５×１０^９～５×１０^１０Ｍ^－１、１×１０^１０～１×１０^１１Ｍ^－１、５×１０^１０～５×１０^１１Ｍ^－１、１×１０^１１～１×１０^１２Ｍ^－１または５×１０^１１～５×１０^１２Ｍ^－１の範囲内のＫ_Ａで、ＣＤ２２（例えば、ヒトＣＤ２２）に結合する。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^６～１×１０^７Ｍ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^７～１×１０^８Ｍ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^８～１×１０^９Ｍ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約５×１０^８～１×１０^９Ｍ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約５×１０^８～５×１０^９Ｍ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^９～１×１０^１０Ｍ^－１の範囲内である。

【0140】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＳＰＲ（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ）によって決定される場合、０．０６８５ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満、または０．０１３７ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満のｋｄで、ヒトＣＤ２２から解離する。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約０．５ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満、約０．２ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満、約０．１ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満、約０．０８ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満、約０．０６ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満、約０．０５ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満、約０．０４ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満、約０．０３ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満、約０．０２ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満、約０．０１ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満、約０．００８ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満、約０．００５ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満、または約０．００１ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満のｋｄで、ヒトＣＤ２２から解離する。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約０．５ＲＵ ｓ^－１またはそれ未満のｋｄでヒトＣＤ２２から解離する。一部の実施形態では、ｋｄは、約０．２ＲＵ ｓ^－１またはそれ未満である。一部の実施形態では、ｋｄは、約０．１ＲＵ ｓ^－１またはそれ未満である。一部の実施形態では、ｋｄは、約０．０８ＲＵ ｓ^－１またはそれ未満である。一部の実施形態では、ｋｄは、約０．０６ＲＵ ｓ^－１またはそれ未満である。一部の実施形態では、ｋｄは、約０．０５ＲＵ ｓ^－１またはそれ未満である。一部の実施形態では、ｋｄは、約０．０２ＲＵ ｓ^－１またはそれ未満である。一部の実施形態では、ｋｄは、約０．０１ＲＵ ｓ^－１またはそれ未満である。一部の実施形態では、ｋｄは、約０．００５ＲＵ ｓ^－１またはそれ未満である。

【0141】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、０．００１～０．５ＲＵ ｓ^－１、０．００１～０．１ＲＵ ｓ^－１、０．００１～０．０５ＲＵ ｓ^－１、０．００５～０．５ＲＵ ｓ^－１、０．００５～０．１ＲＵ ｓ^－１、０．０１～０．５ＲＵ ｓ^－１、０．０１～０．１ＲＵ ｓ^－１または０．０１～０．０５ＲＵ ｓ^－１の範囲内のｋｄで、ヒトＣＤ２２から解離する。一部の実施形態では、ｋｄは、０．００５～０．０５ＲＵ ｓ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、ｋｄは、０．０１～０．１ＲＵ ｓ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、ｋｄは、０．００５～０．１ＲＵ ｓ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、ｋｄは、０．０１～０．５ＲＵ ｓ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、ｋｄは、０．０１～０．１ＲＵ ｓ^－１の範囲内である。

【0142】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＳＰＲ（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ）によって決定される場合、１．１３×１０^７ＲＵ Ｓ^－１またはそれよりも高いｋａでヒトＣＤ２２と会合する。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１．０×１０^５ＲＵ Ｓ^－１もしくはそれよりも高い、約５．０×１０^５ＲＵ Ｓ^－１もしくはそれよりも高い、約１．０×１０^６ＲＵ Ｓ^－１もしくはそれよりも高い、約５．０×１０^６ＲＵ Ｓ^－１もしくはそれよりも高い、約１．０×１０^７ＲＵ Ｓ^－１もしくはそれよりも高い、約２．０×１０^７ＲＵ Ｓ^－１もしくはそれよりも高い、約３×１０^７ＲＵ Ｓ^－１もしくはそれよりも高い、約４．０×１０^７ＲＵ Ｓ^－１もしくはそれよりも高い、約５．０×１０^７ＲＵ Ｓ^－１もしくはそれよりも高い、約１．０×１０^８ＲＵ Ｓ^－１もしくはそれよりも高い、約５．０×１０^８ＲＵ Ｓ^－１もしくはそれよりも高い、または約１．０×１０^９ＲＵ Ｓ^－１もしくはそれよりも高いｋａで、ヒトＣＤ２２と会合する。一部の実施形態では、ｋａは、約１．０×１０^６ＲＵ Ｓ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、ｋａは、約５．０×１０^６ＲＵ Ｓ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、ｋａは、約１．０×１０^７ＲＵ Ｓ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、ｋａは、約２．０×１０^７ＲＵ Ｓ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、ｋａは、約５．０×１０^７ＲＵ Ｓ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、ｋａは、約１．０×１０^８ＲＵ Ｓ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、ｋａは、約１．０×１０^９ＲＵ Ｓ^－１またはそれよりも高い。

【0143】

一部の実施形態では、ｋａは、１．０×１０^５～１．０×１０^６ＲＵ Ｓ^－１、１．０×１０^６～１．０×１０^７ＲＵ Ｓ^－１、５．０×１０^６～５．０×１０^７ＲＵ Ｓ^－１、１．０×１０^７～５．０×１０^７ＲＵ Ｓ^－１、１．０×１０^７～１．０×１０^８ＲＵ Ｓ^－１または１．０×１０^８～１．０×１０^９ＲＵ Ｓ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、ｋａは、１．０×１０^６～１．０×１０^７ＲＵ Ｓ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、ｋａは、５．０×１０^６～５．０×１０^７ＲＵ Ｓ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、ｋａは、１．０×１０^７～５．０×１０^７ＲＵ Ｓ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、ｋａは、１．０×１０^７～１．０×１０^８ＲＵ Ｓ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、ｋａは、１．０×１０^８～１．０×１０^９ＲＵ Ｓ^－１の範囲内である。

【0144】

エピトープマッピングは、抗体が結合する標的タンパク質上の結合部位、領域またはエピトープを同定する方法である。種々の方法が、標的タンパク質上のエピトープをマッピングために当分野で公知である。これらの方法には、ショットガン突然変異誘発、部位特異的突然変異誘発およびアラニンスキャニング；ドメインまたは断片スキャニング；ペプチドスキャニング（例えば、Ｐｅｐｓｃａｎ技術）を含むがこれらに限定されない突然変異誘発；ディスプレイ法（例えば、ファージディスプレイ、微生物ディスプレイおよびリボソーム／ｍＲＮＡディスプレイ）；タンパク質分解およびマススペクトロスコーピー（ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）が関与する方法；ならびに構造決定（例えば、Ｘ線結晶解析およびＮＭＲ）が含まれる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、Ｎ末端配列決定、アミノ酸分析、ＨＰＬＣ、質量分析、イオン交換クロマトグラフィーおよびパパイン消化を含むがこれらに限定されないアッセイによって特徴付けられる。

【0145】

それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Leung et al. (2015) Mabs 7(1):66-76；Zhao et al. (2014) PLOS ONE 9(5): e96697；米国特許第９３７１３９６号Ｂ２；および中国特許第ＺＬ２０１２１０２８６４５７．４号に記載されるように、ＳＭ０３およびＳＭ０６は、０．８２×１０^９Ｍ^－１の範囲の親和性（Ｋａ）で、配列_１６１ＣＬＬＮＦＳＣＹＧＹＰＩＱ_１７３（配列番号１７）および_１９８ＶＦＴＲＳＥＬＫＦＳＰＱＷＳＨＨＧＫＩＶＴＣ_２１９（配列番号１８）を包含する不連続のコンフォメーションエピトープにおいて特異的に、高い親和性でヒトＣＤ２２のドメイン２に結合する。このコンフォメーションエピトープの結合は、ＣＤ２２の迅速な内在化を誘導し（例えば、表面ＣＤ２２の５０％は、１０分以内に内在化され得る）、ＣＤ２２の２，６－シアル酸結合のシス－トランス変換を促進し、免疫寛容を回復させることができる。また、ＳＭ０３およびＳＭ０６は共に、７９．９±２７．６ｎｇ／ｍｌの範囲のＥＣ５０で、ＳＭ０３およびＳＭ０６の抗原結合部位（ＡＢＳ）に対する抗イディオタイプ抗体（例えば、ＬＲＩＤ）に結合する。

【0146】

したがって、本明細書で開示される方法において使用され得る抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ２２とＡβとの相互作用を立体的に妨害しないエピトープに結合することができる。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ２２とＡβとの相互作用を立体的に妨害しない特異的コンフォメーションエピトープに結合する。一部の実施形態では、エピトープは、_１６１ＣＬＬＮＦＳＣＹＧＹＰＩＱ_１７３（配列番号１７）を含む。一部の実施形態では、エピトープは、_１９８ＶＦＴＲＳＥＬＫＦＳＰＱＷＳＨＨＧＫＩＶＴＣ_２１９（配列番号１８）を含む。一部の実施形態では、エピトープは、コンフォメーションエピトープであり、_１６１ＣＬＬＮＦＳＣＹＧＹＰＩＱ_１７３（配列番号１７）および_１９８ＶＦＴＲＳＥＬＫＦＳＰＱＷＳＨＨＧＫＩＶＴＣ_２１９（配列番号１８）の両方を含む。

【0147】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用され得る抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約０．８×１０^９Ｍ^－１のＫ_Ａでこのコンフォメーションエピトープに結合することができる。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１×１０^７Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約１×１０^８Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約５×１０^８Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約１×１０^９Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約５×１０^９Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約１×１０^１０Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約５×１０^１０Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約１×１０^１１Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、約５×１０^１１Ｍ^－１もしくはそれよりも高い、または約１×１０^１２Ｍ^－１もしくはそれよりも高いＫ_Ａで、このコンフォメーションエピトープに結合する。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^７Ｍ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約５×１０^７Ｍ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^８Ｍ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約５×１０^８Ｍ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約８×１０^８Ｍ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^９Ｍ^－１またはそれよりも高い。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約５×１０^９Ｍ^－１またはそれよりも高い。

【0148】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１×１０^６～１×１０^７Ｍ^－１、５×１０^６～５×１０^７Ｍ^－１、１×１０^７～１×１０^８Ｍ^－１、５×１０^７～５×１０^８Ｍ^－１、１×１０^８～５×１０^８Ｍ^－１、１×１０^８～１×１０^９Ｍ^－１、５×１０^８～１×１０^９Ｍ^－１、５×１０^８～５×１０^９Ｍ^－１、１×１０^９～１×１０^１０Ｍ^－１、５×１０^９～５×１０^１０Ｍ^－１、１×１０^１０～１×１０^１１Ｍ^－１、５×１０^１０～５×１０^１１Ｍ^－１、１×１０^１１～１×１０^１２Ｍ^－１または５×１０^１１～５×１０^１２Ｍ^－１の範囲内のＫ_Ａで、このコンフォメーションエピトープに結合する。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^６～１×１０^７Ｍ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^６～１×１０^７Ｍ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^７～１×１０^８Ｍ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^８～１×１０^９Ｍ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約５×１０^８～１×１０^９Ｍ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約５×１０^８～５×１０^９Ｍ^－１の範囲内である。一部の実施形態では、Ｋ_Ａは、約１×１０^９～１×１０^１０Ｍ^－１の範囲内である。

【0149】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、高い親和性で抗イディオタイプ抗体に結合する（例えば、Leung 2015上記；Zhao 2014上記に記載される）。抗イディオタイプ抗体は、それぞれ配列番号１３および１４のアミノ酸配列を各々が有するＶＬおよびＶＨを有する（「ＬＲＩＤ」）。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約０．４０μｇ／ｍｌまたはそれ未満のＥＣ_５０でＬＲＩＤに結合する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約０．０８μｇ／ｍｌのＥＣ_５０でＬＲＩＤに結合することができる。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約５．０μｇ／ｍｌ、約２．０μｇ／ｍｌ、約１．０μｇ／ｍｌ、約０．８μｇ／ｍｌ、約０．５μｇ／ｍｌ、約０．２μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ、約０．０８μｇ／ｍｌ、約０．０５μｇ／ｍｌ、約０．０２μｇ／ｍｌ、約０．０１μｇ／ｍｌ、約０．００８μｇ／ｍｌ、約０．００５μｇ／ｍｌまたは約０．００１μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約２．０μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約１．０μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．８μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．５μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．２μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．１μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．０８μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．０５μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．０１μｇ／ｍｌである。

【0150】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、０．０１～５μｇ／ｍｌ、０．０１～１μｇ／ｍｌ、０．０１～０．５μｇ／ｍｌ、０．０５～５μｇ／ｍｌ、０．０５～１μｇ／ｍｌ、０．０５～０．５μｇ／ｍｌ、０．１～５μｇ／ｍｌまたは０．１～１μｇ／ｍｌの範囲内のＥＣ_５０でＬＲＩＤに結合する。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、０．０１～１μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、０．０１～０．５μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、０．０５～１μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、０．０５～０．５μｇ／ｍｌの範囲内である。

【0151】

一部の実施形態では、ＣＤ２２（例えば、ヒトＣＤ２２）への結合について、上で提供された抗体または抗原結合性断片と競合する抗体または抗原結合性断片もまた、本明細書で提供される。「標的への結合について別の抗体と競合する」抗体は、標的への他の抗体の結合を（部分的にまたは完全に）を阻害する抗体を指す。２つの抗体が標的への結合について互いに競合するかどうか、即ち、１つの抗体が標的への他の抗体の結合を阻害するかどうかおよびその程度は、公知の競合実験、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を使用して決定され得る。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％、ＣＤ２２（例えば、ヒトＣＤ２２）への別の抗体または抗原結合性断片と競合し、その結合を阻害する。競合アッセイは、例えば、Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi: l0.H0l/pdb.prot4277またはChapter 11 of "Using Antibodies" by Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA 1999に記載されるように実施され得る。

【0152】

一部の実施形態では、ヒトＣＤ２２への結合についてＳＭ０３と競合する抗体または抗原結合性断片が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、ヒトＣＤ２２への結合についてＳＭ０６と競合する抗体または抗原結合性断片が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒトバーキットリンパ腫細胞系Ｒａｍｏｓ細胞上のネイティブＣＤ２２に結合する放射性標識されたＩ^１２５－ＳＭ０３と、約５．０１μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、または約１．０２μｇ／ｍｌもしくはそれ未満のＥＣ_５０で競合する。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒトバーキットリンパ腫細胞系Ｒａｍｏｓ細胞上のネイティブＣＤ２２に結合する放射性標識されたＩ^１２５－ＳＭ０３と、約５．０１μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、または約１．０２μｇ／ｍｌのＥＣ_５０で競合する。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、Ｒａｍｏｓ細胞上のネイティブＣＤ２２に結合する放射性標識されたＩ^１２５－ＳＭ０３と、約０．１μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約０．２μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約０．５μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約０．８μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約１μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約２μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約５．０μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約８μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約１０μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、または約５０μｇ／ｍｌもしくはそれ未満のＥＣ_５０で競合する。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．１μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．５μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約１μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約２μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約５μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約１０μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、Ｒａｍｏｓ細胞上のネイティブＣＤ２２に結合する放射性標識されたＩ^１２５－ＳＭ０３と、約０．１～５０μｇ／ｍｌ、約０．１～１０μｇ／ｍｌ、約０．１～５μｇ／ｍｌ、約０．５～１０μｇ／ｍｌ、約０．５～５μｇ／ｍｌ、約１～１０μｇ／ｍｌまたは約１～５μｇ／ｍｌの範囲内のＥＣ_５０で競合する。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．１～５０μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．１～１０μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．１～５μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．５～１０μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．５～５μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約１～１０μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約１～５μｇ／ｍｌの範囲内である。

【0153】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ミクログリア細胞（例えば、ＨＭＣ－３細胞）上のネイティブＣＤ２２に結合する放射性標識されたＩ^１２５－ＳＭ０３と、約０．１μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約０．２μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約０．５μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約０．８μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約１μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約２μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約５．０μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約８μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、約１０μｇ／ｍｌもしくはそれ未満、または約５０μｇ／ｍｌもしくはそれ未満のＥＣ_５０で競合する。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．１μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．２μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．５μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約１μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約２μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約５μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約１０μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ミクログリア細胞（例えば、ＨＭＣ－３細胞）上のネイティブＣＤ２２に結合する放射性標識されたＩ^１２５－ＳＭ０３結合と、約０．１～５０μｇ／ｍｌ、約０．１～１０μｇ／ｍｌ、約０．１～５μｇ／ｍｌ、約０．５～１０μｇ／ｍｌ、約０．５～５μｇ／ｍｌ、約１～１０μｇ／ｍｌまたは約１～５μｇ／ｍｌの範囲内のＥＣ_５０で競合する。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．１～５０μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．１～１０μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．１～５μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．５～１０μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約０．５～５μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約１～１０μｇ／ｍｌの範囲内である。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、約１～５μｇ／ｍｌの範囲内である。

【0154】

一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、細胞（例えば、Ｂ細胞またはミクログリア細胞）との接触の際に、１０分以内に表面ＣＤ２２の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％の内在化を誘導することができる。一部の実施形態では、内在化速度は、１０分以内に表面ＣＤ２２の約３０％である。一部の実施形態では、内在化速度は、１０分以内に表面ＣＤ２２の約４０％である。一部の実施形態では、内在化速度は、１０分以内に表面ＣＤ２２の約５０％である。一部の実施形態では、内在化速度は、１０分以内に表面ＣＤ２２の約６０％である。一部の実施形態では、内在化速度は、１０分以内に表面ＣＤ２２の約７０％である。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、接触の際に１０分以内に表面ＣＤ２２の約２０％～７０％、約３０％～７０％、約４０％～７０％、約３０％～６０％または約４０％～６０％の内在化を誘導することができる。一部の実施形態では、内在化速度は、１０分以内に表面ＣＤ２２の約２０％～７０％である。一部の実施形態では、内在化速度は、１０分以内に表面ＣＤ２２の約４０％～７０％である。一部の実施形態では、内在化速度は、１０分以内に表面ＣＤ２２の約３０％～６０％である。一部の実施形態では、内在化速度は、１０分以内に表面ＣＤ２２の約４０％～６０％である。

【0155】

一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、細胞（例えば、Ｂ細胞またはミクログリア細胞）との接触の際に、約２分以内、約５分以内、約１０分以内、約１５分以内、約２０分以内、約３０分以内または約１時間以内に、表面ＣＤ２２の約５０％の内在化を誘導することができる。一部の実施形態では、表面ＣＤ２２の５０％は、２分以内に内在化される。一部の実施形態では、表面ＣＤ２２の５０％は、５分以内に内在化される。一部の実施形態では、表面ＣＤ２２の５０％は、１０分以内に内在化される。一部の実施形態では、表面ＣＤ２２の５０％は、１５分以内に内在化される。一部の実施形態では、表面ＣＤ２２の５０％は、２０分以内に内在化される。一部の実施形態では、表面ＣＤ２２の５０％は、３０分以内に内在化される。

【0156】

一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約０．１×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約０．２×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約０．５×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約０．８×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約１．０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約２．０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約４．０×１０^－６、約５．０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約６．０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約７．０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約８．０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約１．０×１０^－５ｐｇ／ｓ／細胞、約２．０×１０^－５ｐｇ／ｓ／細胞、約５．０×１０^－５ｐｇ／ｓ／細胞または約８．０×１０^－５ｐｇ／ｓ／細胞の速度で、Ａβの内在化を誘導することができる。一部の実施形態では、速度は、約０．２×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、速度は、約０．５×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、速度は、約０．８×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、速度は、約１．０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、速度は、約２．０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、速度は、約４．０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、速度は、約６．０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、速度は、約１．０×１０^－５ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、速度は、約５．０×１０^－５ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約０．１～５０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約０．１～２０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約０．１～１０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約０．５～５０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約０．５～２０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約０．５～１０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約１～５０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約１～２０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞、約１～１０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞または約１～６×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞の速度で、Ａβの内在化を誘導することができる。一部の実施形態では、速度は、約０．１～５０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、速度は、約０．５～５０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、速度は、約０．５～１０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、速度は、約１～５０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、速度は、約である。一部の実施形態では、速度は、約１～１０×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞である。一部の実施形態では、速度は、約である。一部の実施形態では、速度は、約１～６×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞である。

【0157】

一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、誘導体化され得または別の機能的分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）に連結され得、本明細書で開示される方法において使用され得る。したがって、一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗体および抗原結合性断片には、免疫接着分子を含む、本明細書に記載されるヒト抗ＣＤ２２抗体の誘導体化されたおよび他の方法で改変された形態が含まれる。例えば、抗体および抗原結合性断片は、１つまたは複数の他の分子実体、例えば、別の抗体（例えば、二特異性抗体またはディアボディ）、検出可能な薬剤、細胞傷害剤、医薬品剤、および／または抗体もしくは抗原結合性断片と別の分子との会合を媒介し得るタンパク質もしくはペプチド（例えば、ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグ）に、（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合的会合、または部位特異的コンジュゲート化に適切な人工アミノ酸／官能基の導入によって）機能的に連結され得る。

【0158】

誘導体化された抗体の１つの型は、２つまたはそれよりも多くの抗体（例えば、同じ型の、または二特異性抗体を創出するためには異なる型の）を架橋結合させることによって産生される。適切なクロスリンカーには、適切なスペーサーによって分離された２つの別個に反応性の基を有するヘテロ二官能的なクロスリンカー（例えば、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（m-maleimidobenzoyl-N-huydroxysuccinimide ester））、またはホモ二官能的なクロスリンカー（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル（disuccinimidyle suberate））が含まれる。かかるリンカーは、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡから入手可能である。

【0159】

一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、細胞傷害剤または細胞傷害性部分にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＡＤＣ（抗体－薬物コンジュゲート）を形成するために、細胞傷害剤にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、細胞傷害性部分は、メトトレキサート、アドリアマイシン／ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、デュオカルマイシン、ダウノルビシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、または他のインターカレート剤を含むがこれらに限定されない化学療法剤である。一部の実施形態では、細胞傷害性部分は、アウリスタチン、マイタンシノイド（例えば、ＤＭ１およびＤＭ４）およびチューブリシン（ｔｕｂｕｌｙｓｉｎ）を含むがこれらに限定されない微小管阻害剤である。一部の実施形態では、細胞傷害性部分は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖、リシン（ricin）Ａ鎖、アブリンＡ鎖、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、アルファ－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ－Ｓ）、Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、Ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）およびトリコテセン（tricothecene）を含むがこれらに限定されない、細菌、真菌、植物もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはそれらの断片である。一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数の小分子毒素、例えば、カリケアマイシン、マイタンシノイド、トリコテセン（trichothene）およびＣＣ１０６５にコンジュゲートされる。

【0160】

一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、診断および／または検出のために薬剤が使用されるのを可能にする検出可能な物質または分子にコンジュゲートされる。検出可能な物質には、酵素、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼおよびアセチルコリンエステラーゼ；補欠分子族、例えば、ビオチンおよびフラビン（類）；蛍光材料、例えば、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ローダミン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、シアニン（Ｃｙ３）、５－ジメチルアミン－１－ナフタレンスルホニルクロリド（5-dimethylamine-1-napthalenesulfonyl chloride）およびフィコエリトリン；生物発光材料、例えば、ルシフェラーゼ；放射性材料、例えば、^２１２Ｂｉ、^１４Ｃ、^５７Ｃｏ、^５１Ｃｒ、^６７Ｃｕ、^１８Ｆ、^６８Ｇａ、^６７Ｇａ、^１５３Ｇｄ、^１５９Ｇｄ、^６８Ｇｅ、^３Ｈ、^１６６Ｈｏ、^１３１Ｉ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^１２１Ｉ、^１１５Ｉｎ、^１１３Ｉｎ、^１１２Ｉｎ、^１１１Ｉｎ、^１４０Ｌａ、^１７７Ｌｕ、^５４Ｍｎ、^９９Ｍｏ、^３２Ｐ、^１０３Ｐｄ、^１４９Ｐｍ、^１４２Ｐｒ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１０５Ｒｈ、^９７Ｒｕ、^３５Ｓ、^４７Ｓｃ、^７５Ｓｅ、^１５３Ｓｍ、^１１３Ｓｎ、^１１７Ｓｎ、^８５Ｓｒ、^９９ｍＴｃ、^２０１Ｔｉ、^１３３Ｘｅ、^９０Ｙ、^６９Ｙｂ、^１７５Ｙｂ、^６５Ｚｎ；陽電子放出金属；ならびに磁性金属イオン陽電子放出金属；ならびに磁性金属イオンもまた含まれ得るがこれらに限定されない。

【0161】

本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、固体支持体に結合され得る。かかる固体支持体には、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニルまたはポリプロピレンが含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、固定化された抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、イムノアッセイにおいて使用される。一部の実施形態では、固定化された抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、標的抗原（例えば、ヒトＣＤ２２）の精製において使用される。
５．２．２ さらなるＣＤ２２抗体

【0162】

本明細書で開示される抗ＣＤ２２（例えば、ヒトＣＤ２２）抗体または抗原結合性断片、例えば、ＳＭ０３、ＳＭ０６またはそれらのバリアントもしくは等価物の治療有効量を使用する、Ａβプラークの除去を促進する方法、神経炎症を低減させる方法、シナプスファゴサイトーシスおよび／またはニューロン死を予防する方法、Ａβ関連疾患または障害を処置する方法、ならびに神経炎症に関連する疾患または障害を処置する方法が、本明細書で開示される。理論に束縛されることは望まないが、ＳＭ０３、ＳＭ０６、および本明細書で開示される他の抗ＣＤ２２抗体は、以下の機能または活性のうちの少なくとも１つを有するので、上述の治療効果を達成するために使用され得ることが理解される：（１）ＣＤ２２とＡβとの相互作用を立体的に妨害しないエピトープに結合する；（２）ヒトＣＤ２２のドメイン２に結合する；（３）配列_１６１ＣＬＬＮＦＳＣＹＧＹＰＩＱ_１７３（配列番号１７）および_１９８ＶＦＴＲＳＥＬＫＦＳＰＱＷＳＨＨＧＫＩＶＴＣ_２１９（配列番号１８）を包含するヒトＣＤ２２のコンフォメーションエピトープに結合する；（４）ＣＤ２２ホモ－クラスターのシス－結合を破壊する；（５）ＣＤ２２の２，６－シアル酸結合のシス－トランス変換を促進する；（６）ニューロン２，６－シアル酸へのＣＤ２２のトランス－結合を促進する；（７）必要に応じて、１０分以内に表面ＣＤ２２の５０％が内在化される速度で、例えば、ミクログリア細胞、Ｒａｍｏｓ細胞および／またはＢ細胞上のＣＤ２２内在化を促進する；（８）ミクログリア細胞におけるＡβの内在化を促進する；（９）炎症促進性サイトカイン、例えば、ＮＦκＢシグナル伝達およびＩＬ－６分泌を抑制する；ならびに（１０）神経炎症を低減させる。

【0163】

ヒトＣＤ２２のドメイン２ならびに／または配列_１６１ＣＬＬＮＦＳＣＹＧＹＰＩＱ_１７３（配列番号１７）および_１９８ＶＦＴＲＳＥＬＫＦＳＰＱＷＳＨＨＧＫＩＶＴＣ_２１９（配列番号１８）を包含するヒトＣＤ２２のコンフォメーションエピトープに特異的に結合する抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ２２のニューロン２，６－シアル酸結合のシス－トランス変換を促進することができ、それにより、ミクログリア細胞上のＣＤ２２の迅速な内在化を誘導することが理解される。次いで、ＣＤ２２の迅速な内在化は、細胞表面上のＦｃγＲに係合することなしに、ミクログリア細胞によるＣＤ２２結合したＡβおよび可溶性Ａβの両方の迅速な内在化をもたらし、それにより、ＦｃγＲ関与から生じるＡＲＩＡ－ＥおよびＡＲＩＡ－Ｈを回避する。さらに、ＣＤ２２の内在化およびＡβの除去は共に、炎症性サイトカイン、例えば、ＮＦκＢシグナル伝達およびＩＬ－６分泌を抑制することができ、それにより、神経炎症を低減させる。

【0164】

このように、以下の機能または活性のうちの少なくとも１つについて、ＣＤ２２（例えば、ヒトＣＤ２２）に特異的に結合する抗体または抗原結合性断片に関して選択するための方法もまた、本明細書で提供され、選択された抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、Ａβプラークの除去を促進する方法、神経炎症を低減させる方法、シナプスファゴサイトーシスおよび／もしくはニューロン死を予防する方法、Ａβ関連疾患もしくは障害を処置する方法、ならびに／または神経炎症に関連する疾患もしくは障害を処置する方法において使用され得る：（１）ＣＤ２２とＡβとの相互作用を立体的に妨害しないエピトープに結合する；（２）ヒトＣＤ２２のドメイン２に結合する；（３）配列_１６１ＣＬＬＮＦＳＣＹＧＹＰＩＱ_１７３（配列番号１７）および_１９８ＶＦＴＲＳＥＬＫＦＳＰＱＷＳＨＨＧＫＩＶＴＣ_２１９（配列番号１８）を包含するヒトＣＤ２２のコンフォメーションエピトープに結合する；（４）ＣＤ２２ホモ－クラスターのシス－結合を破壊する；（５）ＣＤ２２の２，６－シアル酸結合のシス－トランス変換を促進する；（６）ニューロン２，６－シアル酸へのＣＤ２２のトランス－結合を促進する；（７）必要に応じて、１０分までに５０％のＣＤ２２が内在化される速度で、例えば、ミクログリア細胞、Ｒａｍｏｓ細胞および／またはＢ細胞上のＣＤ２２内在化を促進する；（８）必要に応じて５．８６×１０^－６ｐｇ／ｓ／細胞の速度で、ミクログリア細胞におけるＡβの内在化を促進する；（９）神経炎症を低減させる；ならびに（１０）炎症促進性サイトカイン、例えば、ＮＦκＢシグナル伝達およびＩＬ－６分泌を抑制する。一部の実施形態では、選択された抗体または抗原結合性断片は、Ａβプラークの除去を促進する方法において使用され得る。一部の実施形態では、選択された抗体または抗原結合性断片は、神経炎症を低減させる方法において使用され得る。一部の実施形態では、選択された抗体または抗原結合性断片は、シナプスファゴサイトーシスおよび／またはニューロン死を予防する方法において使用され得る。一部の実施形態では、選択された抗体または抗原結合性断片は、Ａβ関連疾患または障害を処置する方法において使用され得る。一部の実施形態では、選択された抗体または抗原結合性断片は、神経炎症に関連する疾患または障害を処置する方法において使用され得る。

【0165】

説明目的のために、エプラツズマブ（Ｅｍａｂ）は、ＣＤ２２内在化を誘導することが可能であることが同定され、ミクログリア細胞においてＡβ除去を促進することも確認された。したがって、Ｅｍａｂおよびその機能的バリアントは、Ａβプラークの除去を促進する方法、神経炎症を低減させる方法、シナプスファゴサイトーシスおよび／もしくはニューロン死を予防する方法、Ａβ関連疾患もしくは障害を処置する方法、ならびに／または神経炎症に関連する疾患もしくは障害を処置する方法を含む、本明細書で開示される方法において使用され得る。

【0166】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ヒトＣＤ２２のドメイン２または配列_１６１ＣＬＬＮＦＳＣＹＧＹＰＩＱ_１７３（配列番号１７）および_１９８ＶＦＴＲＳＥＬＫＦＳＰＱＷＳＨＨＧＫＩＶＴＣ_２１９（配列番号１８）を包含するヒトＣＤ２２のコンフォメーションエピトープへの特異的結合について選択される。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＬＲＩＤへのその結合について選択される（例えば、米国特許第９，３７１，３９６号Ｂ２）。

【0167】

異なる抗ヒトＣＤ２２抗体の中で、その結合エピトープが細胞膜に近いほど、抗体が誘導する内在化の速度が遅くなることが、本開示の発明者によって見出された。したがって、エピトープベースの選択、即ち、細胞膜から離れたエピトープに結合する抗ＣＤ２２抗体について選択することによって、迅速な内在化を誘導する抗体を同定することができる。本明細書で開示されるまたはさもなくば当分野で公知のエピトープマッピングの任意の方法、例えば、ショットガン突然変異誘発、部位特異的突然変異誘発およびアラニンスキャニング；ドメインまたは断片スキャニング；ペプチドスキャニング（例えば、Ｐｅｐｓｃａｎ技術）を含むがこれらに限定されない突然変異誘発；ディスプレイ法（例えば、ファージディスプレイ、微生物ディスプレイおよびリボソーム／ｍＲＮＡディスプレイ）；タンパク質分解およびマススペクトロスコーピーが関与する方法；ならびに構造決定（例えば、Ｘ線結晶解析およびＮＭＲ）が使用され得る。

【0168】

一部の実施形態では、ドメイン２中の不連続のコンフォメーションエピトープに特異的に結合して、本明細書で開示されるように迅速な内在化を誘導する抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトリンパ球に由来するｍＲＮＡから調製されたヒトＶＬおよびＶＨ ｃＤＮＡを使用して調製された組換えコンビナトリアル抗体ライブラリー、好ましくは、ｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーのスクリーニングによって単離され得る。かかるライブラリーを調製およびスクリーニングするための方法論は、当分野で公知である。ファージディスプレイライブラリーを生成するための市販のキット（例えば、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｈａｇｅ Ｓｙｓｔｅｍ（ＲＡＰＳ）；およびＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂ Ｐｈ．Ｄ（商標）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｋｉｔ、カタログ番号Ｅ８１００Ｓ）に加えて、抗体ディスプレイライブラリーを生成およびスクリーニングする際の使用のために特に適した方法および試薬の例は、例えば、Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第５，２２３，４０９号；Fuchs et al. (1991) Biotechnology 9:1369-1372；Hay et al. (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85；Huse et al. (1989) Science 246:1275-1281；McCafferty et al., Nature (1990) 348:552-554；Griffiths et al. (1993) EMBO J 12:725-734；Hawkins et al. (1992) J Mol Biol 226:889-896；Clackson et al. (1991) Nature 352:624-628；Gram et al. (1992) PNAS 89:3579-3580；Garrard et al. (1991) Biotechnology 9:1373-1377；Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acid Res 19:4133-4137；およびBarbas et al. (1991) PNAS 88:7978-7982において見出すことができる。

【0169】

一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、０．８×１０^９Ｍ^－１またはそれよりも高いＫａでのヒトＣＤ２２への結合についてさらに選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１．２ｎＭまたはそれよりも低いＫ_ＤでのヒトＣＤ２２への結合について選択される。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、０．０７ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満のｋｄ、または０．０１５ＲＵ ｓ^－１もしくはそれ未満のｋｄでの、ヒトＣＤ２２からの解離について選択される。本明細書で言及される結合パラメーターは、本明細書で開示されるまたは当分野で公知の任意の方法、例えば、表面プラズモン共鳴によって決定され得る。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、０．２μｇ／ｍｌまたはそれ未満のＥＣ５０でＬＲＩＤの表面結合部分を発現する代理標的細胞に対するＣＭＣ活性を誘導するその機能について、さらに選択される。

【0170】

一部の実施形態では、ヒトＣＤ２２に対する高い親和性および低いオフ速度（ｏｆｆ ｒａｔｅ）定数を有するマウス、組換えまたはヒト抗体を単離するために、ヒトＣＤ２２に対する高い親和性および低いオフ速度定数を有する親マウスまたはキメラ抗ＣＤ２２抗体（例えば、受託番号：７６２１でＡＴＣＣに寄託されたマウス抗ＣＤ２２抗体のためのハイブリドーマ）が、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／０６２１３に記載されるエピトープインプリンティング法を使用して、ヒトＣＤ２２に対する類似の結合活性を有するヒト重鎖および軽鎖配列を選択するために最初に使用される。この方法において使用される抗体ライブラリーは、好ましくは、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０１０４７、McCafferty et al., Nature (1990) 348:552-554；およびGriffiths et al., (1993) EMBO J 12:725-734に記載されるように調製およびスクリーニングされるｓｃＦｖライブラリーである。ｓｃＦｖ抗体ライブラリーは、好ましくは、抗原として、組換えヒトＣＤ２２（２～４ドメイン）、および／または抗ＣＤ２２抗体の抗原結合部位（ＡＢＳ）に対して特異的な抗イディオタイプ抗体（例えば、米国特許第９３７１３９６号Ｂに記載されるＬＲＩＤ）を使用して、スクリーニングされる。

【0171】

最初のヒトＶＬおよびＶＨセグメントが選択されると、最初に選択されたＶＬおよびＶＨセグメントの異なる対がヒトＣＤ２２結合についてスクリーニングされる「ミックス・アンド・マッチ（ｍｉｘ ａｎｄ ｍａｔｃｈ）」実験が、好ましいＶＬ／ＶＨ対組合せを選択するために実施される。特定の抗原に対する抗体の結合の親和性および／または特異性は、その内容がそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれるWu et al., J. Mol. Biol., 294:151 (1999)に記載されるような、「定向進化」の方法を使用して増加され得る。さらに、親和性をさらに改善しおよび／またはヒトＣＤ２２（または組換えＣＤ２２（２～４）ドメイン）結合についてのオフ速度定数を低下させるために、好ましいＶＬ／ＶＨ対（複数可）のＶＬおよびＶＨセグメントが、天然の免疫応答の間の抗体の親和性成熟を担うｉｎ ｖｉｖｏ体細胞突然変異プロセスと類似のプロセスで、好ましくは、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ３領域内で、ランダムに突然変異され得る。このｉｎ ｖｉｔｒｏ親和性成熟は、それぞれＶＨ ＣＤＲ３またはＶＬ ＣＤＲ３に対して相補的なＰＣＲプライマーを使用してＶＨおよびＶＬ領域を増幅することによって達成され得、これらのプライマーは、ある特定の位置において４つのヌクレオチド塩基のランダム混合物で「スパイク」されており、その結果、得られたＰＣＲ産物は、ＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ３領域中にランダム突然変異が導入されたＶＨおよびＶＬセグメントをコードする。これらのランダムに突然変異されたＶＨおよびＶＬセグメントは、ヒトＣＤ２２、好ましくは、ＣＤ２２のドメイン２～４を含有する組換えタンパク質への結合、および／または抗ＣＤ２２抗体の抗イディオタイプ抗体（例えば、ＬＲＩＤ）への結合について再スクリーニングされ得；ヒトＣＤ２２、好ましくは、組換えＣＤ２２（２～４）ドメイン、および／またはＣＤ２２に対する抗イディオタイプ抗体（例えば、ＬＲＩＤ）結合についての高い親和性および低いオフ速度を示す配列が、選択され得る。

【0172】

ファージディスプレイに加えて、スクリーニングのための候補モノクローナル抗体は、当業者に周知のハイブリドーマ法を使用しても調製することができる。例えば、ハイブリドーマ法を使用して、マウス、ラット、ウサギ、ハムスターまたは他の適切な宿主動物が、上記のように免疫化される。一部の実施形態では、リンパ球は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫化される。一部の実施形態では、免疫化抗原は、ヒトタンパク質またはその断片である。一部の実施形態では、免疫化抗原は、ヒトタンパク質またはその断片である。

【0173】

免疫化の後、リンパ球は、単離され、例えば、ポリエチレングリコールを使用して、適切な骨髄腫細胞系と融合される。ハイブリドーマ細胞は、当分野で公知の特殊化された培地を使用して選択され、未融合のリンパ球および骨髄腫細胞は、選択プロセスを生き残らない。選択された抗原に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、免疫沈降、イムノブロッティングおよびｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイ（例えば、フローサイトメトリー、ＦＡＣＳ、ＥＬＩＳＡ、ＢＬＩ、ＳＰＲ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ）およびラジオイムノアッセイ）を含むがこれらに限定されない種々の方法によって同定され得る。所望の特異性、親和性および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定されると、クローンは、限界希釈または他の技法によってサブクローニングされ得る。ハイブリドーマは、標準的な方法を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏ培養物中で、または動物において腹水腫瘍としてｉｎ ｖｉｖｏで、増殖され得る。モノクローナル抗体は、親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動および透析を含むがこれらに限定されない当分野の標準的な方法に従って、培養培地または腹水から精製され得る。

【0174】

シスでのＣＤ２２結合を破壊する抗体または抗原結合性断片についてスクリーニングするさらなる方法は、本開示の発明者らによって以前に開示されている（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０２００７８４５３Ａ１）。一部の実施形態では、スクリーニング方法は、抗体の存在下および非存在下で、操作された細胞系への、複数の２，６－シアル酸を含有する外因性プローブの結合を比較することによって、非内在化性のヒトＣＤ２２ドメイン１～７と２，６－シアル酸リガンドを含有するドメインとを含む融合タンパク質を発現する操作された細胞系を使用することを含み、抗体は、操作された細胞系への外因性プローブの結合を回復させる場合、ＣＤ２２シス－結合を破壊することが可能であると同定される。

【0175】

一部の実施形態では、融合タンパク質は、ヒトＣＤ２２ドメイン１～７およびグリコホリンＡを含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、グリコホリンＡの膜貫通および細胞質部分に融合されたヒトＣＤ２２の細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、崩壊促進因子（ＤＡＦ）タンパク質から単離されたグリコホスファチジルイノシトールシグナル配列に融合されたヒトＣＤ２２の細胞外ドメインを含む。

【0176】

一部の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１５に対して少なくとも９５％同一であるものを含むアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１５に対して少なくとも９５、９６、９７、９８または９９％同一なアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１５のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１６に対して少なくとも９５％同一であるものを含むアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１５に対して少なくとも９５、９６、９７、９８または９９％同一なアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を有する。

【0177】

一部の実施形態では、外因性プローブは、α２－６－シアリルラクトースで置換されたビオチンコンジュゲート化ポリアクリルアミド（６’ＰＡＡ－Ｂ；Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈ）である。

【0178】

一部の実施形態では、本明細書で開示されるスクリーニング方法を介して本明細書で開示される治療的使用を有すると同定された非ヒト抗体は、ヒト化され得、このとき、抗体の特定の配列または領域は、ヒトにおいて天然に産生される抗体に対する類似性を増加させるように改変される。一部の実施形態では、抗原結合ドメイン部分は、ヒト化される。

【0179】

しばしば、フレームワーク領域中のフレームワーク残基は、抗原結合を変更、好ましくは改善するために、ＣＤＲドナー抗体由来の対応する残基で置換され得る。これらのフレームワーク置換は、当分野で周知の方法によって、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデリング、ならびに特定の位置における異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較によって、同定される（それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、例えば、Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号；およびRiechmann et al., 1988, Nature, 332:323を参照されたい）。

【0180】

ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からの、抗体中に導入された１つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、「インポート」残基と呼ばれる場合が多く、これらは、典型的には、「インポート」可変ドメインから取られる。したがって、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリン分子由来の１つまたは複数のＣＤＲおよびヒト由来のフレームワーク領域を含む。ＣＤＲ－グラフティングを含む抗体のヒト化の方法が、当分野で周知である（例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれる、Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986)；Riechmann et al., Nature, 332:323-327 (1988)；Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)；欧州特許第２３９，４００号；国際公開番号ＷＯ９１／０９９６７；ならびに米国特許第４，８１６，５６７号；同第６，３３１，４１５号；同第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；および同第６，５４８，６４０号を参照されたい）。かかるヒト化抗体では、無傷ヒト可変ドメインに実質的に満たないヒト可変ドメインが、非ヒト種由来の対応する配列によって置換されている。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、一部のＣＤＲ残基およびおそらくは一部のＦＲ残基が、げっ歯類抗体中の類似の部位由来の残基によって置換されたヒト抗体である。ヒト化抗体を産生する方法には、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれる、欧州特許第５９２，１０６号および同第５１９，５９６号；Padlan, 1991, Molecular Immunology, 28(4/5):489-498；Studnicka et al., 1994, Protein Engineering, 7(6):805-814；ならびにRoguska et al., 1994, PNAS, 91:969-973を参照されたい）、鎖シャッフリング（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，５６５，３３２号を参照されたい）、ならびに、例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２００５／００４２６６４号、米国特許出願公開第２００５／００４８６１７号、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公開番号ＷＯ９３１７１０５、Tan et al., J. Immunol., 169:1119-25 (2002)、Caldas et al., Protein Eng., 13(5):353-60 (2000)、Morea et al., Methods, 20(3):267-79 (2000)、Baca et al., J. Biol. Chem., 272(16):10678-84 (1997)、Roguska et al., Protein Eng., 9(10):895-904 (1996)、Couto et al., Cancer Res., 55 (23 Supp):5973s-5977s (1995)、Couto et al., Cancer Res., 55(8):1717-22 (1995)、Sandhu J S, Gene, 150(2):409-10 (1994)およびPedersen et al., J. Mol. Biol., 235(3):959-73 (1994)において開示される技法もまた含まれる。

【0181】

ヒト化抗体を作製する際に使用される軽鎖および重鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低減させるためのものである。いわゆる「ベストフィット」法によれば、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列は、公知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。次いで、げっ歯類の配列に最も近いヒト配列が、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク（ＦＲ）として受容される（その内容がそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993)；Chothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987)）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークが、いくつかの異なるヒト化抗体のために使用され得る（その内容がそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；Presta et al., J. Immunol., 151:2623 (1993)）。

【0182】

抗体は、標的抗原に対する高い親和性および他の好ましい生物学的特性の保持を伴って、ヒト化され得る。例えば、ヒト化抗体は、親およびヒト化配列の三次元モデルを使用する、親配列および種々の概念的ヒト化産物の分析のプロセスによって調製され得る。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能であり、当業者に知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の起こり得る三次元コンフォメーション構造を説明し示すコンピュータプログラムが、入手可能である。これらのディスプレイの検査は、候補免疫グロブリン配列の機能性における残基のあり得る役割の分析、即ち、標的抗原に結合する候補免疫グロブリンの能力に影響する残基の分析を可能にする。この方法で、ＦＲ残基は、レシピエント配列およびインポート配列から選択され組み合わされ得、そうして、所望の抗体特徴、例えば、標的抗原に対する増加した親和性が、達成される。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に、直接的かつ最も実質的に関与する。

【0183】

組換え免疫グロブリンディスプレイライブラリーからの本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体のスクリーニングおよび単離の後、選択された抗体をコードする核酸は、ディスプレイパッケージから（例えば、ファージゲノムから）回収され得、標準的な組換えＤＮＡ技法によって、他の発現ベクター中にサブクローニングされ得る。所望により、核酸は、本明細書で開示されるまたは当分野で公知の他の抗体形態を創出するためにさらに操作され得る（例えば、さらなる免疫グロブリンドメイン、例えば、さらなる定常領域をコードする核酸に連結され得る）。抗体をコードするＤＮＡを組換え発現ベクター中にクローニングすることを含む、コンビナトリアルライブラリーのスクリーニングによって単離され、哺乳動物宿主細胞中に導入された組換えヒト抗体を発現させる方法は、当分野で周知である。

【0184】

一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、（１）ＣＤ２２とＡβとの相互作用を立体的に妨害しないエピトープに結合すること、ならびに（２）ＣＤ２２ホモ－クラスターのシス－結合を破壊すること、ＣＤ２２の２，６－シアル酸結合のシス－トランス変換を促進すること、および／またはニューロン２，６－シアル酸へのＣＤ２２のトランス－結合を促進すること、について、選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ２２内在化を促進する、好ましくは細胞表面上のＦｃγＲに係合することなしに、ミクログリア細胞におけるＡβの内在化を促進する、神経炎症を低減させる、ミクログリア細胞におけるＮＦκＢシグナル伝達を抑制する、ミクログリア細胞によるＩＬ－６分泌を抑制するその機能、またはそれらの任意の組合せについて、直接選択される。

【0185】

一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ２２内在化を促進するその機能について選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、好ましくは細胞表面上のＦｃγＲに係合することなしに、ミクログリア細胞におけるＡβの内在化を促進するその機能について選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、神経炎症を低減させるその機能について選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ミクログリア細胞におけるＮＦκＢシグナル伝達を抑制するその機能について選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ミクログリア細胞によるＩＬ－６分泌を抑制するその機能について選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、神経炎症を抑制するその機能について選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、シナプスファゴサイトーシスを抑制するその機能について選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ニューロン死を抑制するその機能について選択される。

【0186】

本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、例えば、標準的なＥＬＩＳＡによって、ヒトＣＤ２２への結合について試験され得る。簡潔に述べると、マイクロタイタープレートが、精製されたＣＤ２２でコーティングされ、次いで、ウシ血清アルブミンでブロッキングされる。抗体の希釈物（例えば、ＣＤ２２で免疫化されたマウス由来の血漿の希釈物）が各ウェルに添加され、インキュベートされる。プレートは、洗浄され、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートされた二次試薬（例えば、ヒト抗体については、ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ特異的ポリクローナル試薬）と共にインキュベートされる。洗浄後、プレートは発色され得、分光光度計によって分析され得る。次いで、免疫化されたマウス由来の血清が、ヒトＣＤ２２を発現する細胞系への結合についてフローサイトメトリーによってさらにスクリーニングされ得るが、ＣＤ２２を発現しない対照細胞系への結合についてはスクリーニングされない。簡潔に述べると、抗ＣＤ２２抗体の結合は、ＣＤ２２発現ＣＨＯ細胞を抗ＣＤ２２抗体と共にインキュベートすることによって評価され得る。細胞は洗浄され得、結合は、抗ヒトＩｇＧ Ａｂを用いて検出され得る。フローサイトメトリー分析は、ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を使用して実施され得る。最も高い力価を示すマウスが、融合に使用され得る。

【0187】

上記ＥＬＩＳＡアッセイが、抗体、およびしたがって、ＣＤ２２免疫原との正の反応性を示す抗体を産生するハイブリドーマについてスクリーニングするために使用され得る。次いで、高い親和性でＣＤ２２に結合する抗体を産生するハイブリドーマがサブクローニングされ得、さらに特徴付けられ得る。次いで、（ＥＬＩＳＡによって）親細胞の反応性を保持する、各ハイブリドーマからの１つのクローンが、細胞バンクを作製するため、および抗体精製のために、選択され得る。

【0188】

抗ＣＤ２２抗体を精製するために、選択されたハイブリドーマが、モノクローナル抗体精製のために成長され得る。親和性クロマトグラフィーの前に、上清が濾過および濃縮され得る。溶出されたＩｇＧは、純度を確実にするために、ゲル電気泳動および高速液体クロマトグラフィーによってチェックされ得る。緩衝溶液は交換され得、濃度が決定され得る。モノクローナル抗体は、アリコート化され貯蔵され得る。

【0189】

抗体および抗原結合性断片の構造的および機能的特性を決定するための種々の方法およびアッセイが、当分野で公知である。例えば、選択された抗ＣＤ２２モノクローナル抗体が独自のエピトープに結合するかどうかを決定するために、各抗体は、市販の試薬（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を使用してビオチン化され得る。ビオチン化ＭＡｂ結合は、ストレプトアビジン標識されたプローブを用いて検出され得る。未標識のモノクローナル抗体およびビオチン化モノクローナル抗体を使用する競合研究が、ＣＤ２２コーティングされたＥＬＩＳＡプレートを使用して実施され得る。

【0190】

ＣＤ２２を発現する生細胞へのモノクローナル抗体の結合を試験するために、フローサイトメトリーが使用され得る。簡潔に述べると、ＣＤ２２発現細胞系（標準的な成長条件下で成長させた）が、０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ中種々の濃度のモノクローナル抗体と、４℃で１時間混合される。洗浄後、細胞は、一次抗体染色と同じ条件下で、フルオレセイン標識された抗ＩｇＧ抗体と反応させられる。試料は、単一の細胞に関してゲーティングするために光および側方散乱特性を使用するＦＡＣＳｃａｎ機器によって分析され得、標識された抗体の結合が決定される。蛍光顕微鏡を使用する代替的アッセイが、フローサイトメトリーアッセイ（に加えてまたはその代わりに）使用され得る。細胞は、正確に上記のように染色され得、蛍光顕微鏡によって試験され得る。この方法は、個々の細胞の可視化を可能にするが、抗原の密度に依存して減少した感度を有し得る。

【0191】

種々の抗ＣＤ２２抗体の結合親和性、交差反応性および結合反応速度論を分析するための方法には、当分野で公知の標準的なアッセイ、例えば、Ｇａｔｏｒシステム（Ｐｒｏｂｅ Ｌｉｆｅ）もしくはＯｃｔｅｔ－９６システム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ）などを使用するバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、またはＢＩＡＣＯＲＥ（商標）２０００ ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を使用するＢＩＡＣＯＲＥ（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析が含まれる。

【0192】

上で開示された機能的特性について抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片を試験またはスクリーニングするためのアッセイは、当分野で周知である。本明細書で開示されるまたはさもなくば当分野で公知の任意の方法が、本明細書で開示されるスクリーニングの方法において使用され得る。例えば、本明細書で開示されるスクリーニング方法において使用され得る機能的アッセイには、ＮＦκＢシグナル伝達を測定するためのルシフェラーゼアッセイ、ＩＬ－６放出を測定するためのＥＬＩＳＡアッセイ、シナプスファゴサイトーシスを測定するためのＥＬＩＳＡまたはウエスタンブロットアッセイ、およびニューロン死を測定するためのＭＴＴアッセイが含まれ、これらは全て、以下の実験のセクションで開示される。

【0193】

一部の実施形態では、本明細書に記載される方法を使用して同定または産生される抗ＣＤ２２抗体および抗原結合性断片、ならびにそれらの治療的使用もまた、本明細書で提供される。
５．３ 産生の方法

【0194】

モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体およびヒト化抗体を含むがこれらに限定されない、本明細書で開示される方法において使用され得る抗ＣＤ２２抗体およびその抗原結合性断片は、本明細書で開示されるまたはさもなくば当分野で公知の任意の方法によって調製され得る。

【0195】

抗体産生の方法は、当分野で周知である。例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれる、Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988)；Hammerling et al., in:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563, 681 (Elsevier, N.Y., 1981)を参照されたい。

【0196】

一部の実施形態では、本明細書で提供される方法において使用され得る抗体または抗原結合性断片は、組換えである、即ち、組換え手段によって調製、発現、産生または単離される。一部の実施形態では、本明細書で開示される抗体または抗原結合性断片は、例えば、宿主細胞中に組換え発現ベクターを導入すること、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリー、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Taylor, L.D., et al. (1992) Nucl. Acid Res. 20:6287-95を参照されたい）、または他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングが関与する任意の他の手段によって調製、発現、産生もしくは単離された抗体によって、調製され得る。

【0197】

一部の実施形態では、抗体および抗原結合性断片は、宿主細胞における免疫グロブリン軽鎖および重鎖遺伝子の組換え発現によって調製され得る。抗体を組換え発現させるために、宿主細胞には、抗体の免疫グロブリン軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡ断片を保有する１つまたは複数の組換え発現ベクターが導入され、その結果、軽鎖および重鎖は、宿主細胞において発現され、好ましくは、宿主細胞が培養される培地中に分泌され、その培地から抗体が回収され得る。Sambrook, Fritsch and Maniais (eds), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989)、Ausubel et al. (eds.) Current Protocols In Molecular Biology, Greene Publishing Assoviates, (1989)および米国特許第４，８１６，３９７号に記載されるものなどの、標準的な組換えＤＮＡ方法論が、抗体重鎖および軽鎖遺伝子を得るため、これらの遺伝子を組換え発現ベクター中に取り込むため、およびベクターを宿主細胞中に導入するために使用される。

【0198】

組換え抗体または抗原断片、例えば、ＳＭ０３、ＳＭ０６またはＳＭ０３／ＳＭ０６関連抗体を発現させるために、軽鎖および重鎖可変領域をコードするＤＮＡ断片が最初に得られる。これらのＤＮＡは、ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）を使用する、マウス抗体軽鎖および重鎖可変配列のためのハイブリドーマの増幅および改変によって、または当業者に公知の標準的な方法を使用する、設計された軽鎖および重鎖可変配列のコードされたアミノ酸配列に基づくオリゴ合成によって、得ることができる。コードＤＮＡ配列は、得られた抗体の哺乳動物発現を容易にするためにさらに最適化され得る。

【0199】

マウス抗体についてＶＨおよびＶＬ断片が得られると、これらの配列は、フレームワークパッチバージョンのＳＭ０３（即ち、ＳＭ０６）をコードするように突然変異され得、その方法は、中国特許第０１１４４８９４．６号および同第０３１２３０５４．７号ならびに米国特許第７，３２１，０２６号Ｂ２および同第７，３３８，６５９号Ｂ２に記載され、これらは共に、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0200】

ＳＭ０３もしくはＳＭ０６またはＳＭ０３／ＳＭ０６関連のＶＨおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片が（例えば、上記のように、元のマウスＶＨおよびＶＬ遺伝子の増幅および突然変異誘発によって）得られると、これらのＤＮＡ断片は、例えば、可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子に、Ｆａｂ断片遺伝子に、またはｓｃＦｖ遺伝子に変換するために、標準的な組換えＤＮＡ技法によってさらに操作され得る。これらの操作では、ＶＬをコードするＤＮＡ断片またはＶＨをコードするＤＮＡ断片は、別のタンパク質、例えば、抗体定常領域または柔軟性のあるリンカーをコードする別のＤＮＡ断片に動作可能に連結される。用語「動作可能に連結される」は、この文脈で使用される場合、２つのＤＮＡ断片によってコードされるアミノ酸配列がインフレームのままであるように２つのＤＮＡ断片が接続されることを意味する意図である。

【0201】

ＶＨ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に動作可能に連結することによって、全長重鎖遺伝子に変換され得る。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当分野で公知であり（例えば、Kabat, E.A., et al (1991) Sequences Of Proteins Of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、Ｉｇ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域であり得るが、最も好ましくは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常領域である。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子について、ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に動作可能に連結され得る。

【0202】

ＶＬ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＬをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に動作可能に連結することによって、全長軽鎖遺伝子（ならびにＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換され得る。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当分野で公知であり（例えば、Kabat, E.A., et al (1991) Sequences Of Proteins Of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であり得るが、最も好ましくは、カッパ定常領域である。

【0203】

ｓｃＦｖ遺伝子を調製するために、ＶＨをコードするＤＮＡ断片およびＶＬをコードするＤＮＡ断片は、柔軟性のあるリンカーをコードする、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）３をコードする別の断片に動作可能に連結され、その結果、ＶＨおよびＶＬ配列は、連続する単一鎖タンパク質として発現され得、ＶＬおよびＶＨ領域は、柔軟性のあるリンカーによって接続される（例えば、Bird et al. (1988) Science 242:423-426；Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883；McCafferty et al.(1990) Nature 348:552-554を参照されたい）。

【0204】

本明細書で開示される方法において使用され得る抗体または抗原結合性断片を発現させるために、上記のように得られた、部分的なまたは全長の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡが、発現ベクター中に挿入され、その結果、遺伝子は、転写および翻訳制御配列に動作可能に連結される。この文脈では、用語「動作可能に連結される」は、ベクター内の転写および翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写および翻訳を調節するそれらの意図した機能を果たすように、抗体遺伝子がベクター中にライゲーションされることを意味する意図である。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合性であるように選択される。抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝子は、別々のベクター中に挿入され得、またはより典型的には、両方の遺伝子が、同じ発現ベクター中に挿入される。抗体遺伝子は、標準的な方法（例えば、抗体遺伝子断片およびベクター上の相補的な制限部位のライゲーション、または制限部位が存在しない場合には平滑末端ライゲーション）によって、発現ベクター中に挿入される。一部の実施形態では、ＳＭ０３、ＳＭ０６またはＳＭ０３／ＳＭ０６関連の軽鎖または重鎖配列の挿入の前に、発現ベクターは既に、抗体定常領域配列を保有している。例えば、ＳＭ０３もしくはＳＭ０６またはＳＭ０３／ＳＭ０６関連のＶＨおよびＶＬ配列を全長抗体遺伝子に変換するための１つのアプローチは、それぞれ重鎖定常領域および軽鎖定常領域を既にコードしている発現ベクター中にそれらを挿入することであり、その結果、ＶＨセグメントは、ベクター内のＣＨセグメント（複数可）に動作可能に連結され、ＶＬセグメントは、ベクター内のＣＬセグメントに動作可能に連結される。さらにまたはあるいは、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードし得る。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレームで連結されるように、ベクター中にクローニングされ得る。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド（即ち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。

【0205】

抗体鎖遺伝子に加えて、本明細書で提供される組換え発現ベクターは、宿主細胞における抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列を保有し得る。用語「調節配列」は、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御する、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含む意図である。かかる調節配列は、例えば、Goeddel; Gene Expression Technology: Methods In Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990)に記載されている。当業者が理解するように、調節配列の選択を含む、発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現のレベルなどの因子に依存する。哺乳動物宿主細胞発現のための好ましい調節配列には、哺乳動物細胞における高レベルのタンパク質発現を指示するウイルスエレメント、例えば、免疫グロブリン重鎖（ＩｇＨ）エンハンサー（Gillies et al. (1983) Cell 33:717-728）、メタロチオネイン（ＭＴ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えば、ＣＭＶプロモーター／エンハンサー）、サルウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、ＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））およびポリオーマに由来するプロモーターおよび／またはエンハンサーが含まれる。ウイルス調節エレメントおよびその配列のさらなる記載については、例えば、米国特許第５，６６５，５７８号；同第５，１６８，０６２号；同第４，５１０，２４５号；および同第４，９６８，６１５号を参照されたい。

【0206】

抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、本明細書で提供される組換え発現ベクターは、さらなる配列、例えば、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択可能なマーカー遺伝子を保有し得る。選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号および同第５，１７９，０１７号を参照されたい）。例えば、典型的には、選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に、薬物、例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサートに対する耐性を付与する。好ましい選択可能なマーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅と併せたｄｈｆｒ－宿主細胞における使用のため）、グルタミン酸シンターゼ（ＧＳ）遺伝子およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が含まれる。

【0207】

軽鎖および重鎖の発現のために、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技法によって、宿主細胞中にトランスフェクトされる。用語「トランスフェクション」の種々の形態は、原核生物または真核生物宿主細胞中への外因性ＤＮＡの導入のために一般に使用される広範な種々の技法、例えば、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクション、リポフェクション、プロトプラスト融合などを包含する意図である。抗体および抗原結合性断片は、原核生物または真核生物のいずれかの宿主細胞において産生され得るが、真核生物細胞、特に哺乳動物宿主細胞における抗体の発現が好ましく、それは、かかる宿主細胞が、適切にフォールディングされた免疫学的に活性な抗体をアセンブルおよび分泌する可能性が原核生物細胞よりも高いからである。

【0208】

本明細書に記載される方法において使用される組換え抗体を発現させるための好ましい哺乳動物宿主細胞には、ＳＰ２／０骨髄腫細胞、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) J. Mol. Biol. 159:601-621に記載されるＤＨＦＲ選択可能マーカーと共に使用される、Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4200に記載されるｄｆｈｒ－ＣＨＯ細胞が含まれる）が含まれる。組換え抗体をコードする発現ベクターが哺乳動物宿主細胞中に導入される場合、抗体は、宿主細胞における抗体の発現、またはより好ましくは、宿主が成長される培養培地中への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間にわたって宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製方法を使用して、培養培地から回収され得る。

【0209】

宿主細胞は、無傷抗体の部分、例えば、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ分子を産生するためにも使用され得る。上記手順のバリエーションが、本明細書で明示的に企図される。例えば、宿主細胞を、本明細書で開示される方法において使用される抗体の軽鎖または重鎖のいずれか（両方ではない）をコードするＤＮＡでトランスフェクトすることが望ましい場合がある。組換えＤＮＡ技術は、ＣＤ２２への結合に必要ない軽鎖および重鎖のいずれかまたは両方をコードするＤＮＡの一部または全てを除去するためにも使用され得る。かかる短縮されたＤＮＡ分子から発現される分子もまた、本明細書で提供される抗体によって包含される。さらに、一方の重鎖および一方の軽鎖が、ヒトＣＤ２２に特異的に結合する抗体であり、他方の重鎖および軽鎖が、ＣＤ２２以外の抗原に対して特異的である、二官能性抗体は、標準的な化学的架橋結合方法によって、本発明の抗体を第２の抗体に架橋結合させることによって産生され得る。

【0210】

本明細書で開示される方法において使用され得る抗体またはその抗原結合性断片の組換え発現の系の一部の実施形態では、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターは、電気穿孔によってＳＰ２／０細胞中に導入される。発現系の一部の実施形態では、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターは、リポフェクションなどの標準的な技法によって、ＣＨＯ細胞中に導入される。

【0211】

組換え発現ベクター内で、抗体重鎖および軽鎖遺伝子は各々、遺伝子の高レベルの転写を駆動するために、マウスまたはヒト免疫グロブリン重鎖（ＩｇＨ）、ＣＭＶエンハンサー、メタロチオネインまたはＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントに動作可能に連結される。組換え発現ベクターは、メトトレキサート選択／増幅を使用した、ベクターでトランスフェクトされたＳＰ２／０細胞の選択を可能にする、ＤＨＦＲ遺伝子もまた保有する。あるいは、マウスまたはヒトＩｇＨ、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰ／メタロチオネインプロモーター調節エレメントに動作可能に連結された抗体重鎖および軽鎖遺伝子とＤＨＦＲ遺伝子とを含有する組換え発現ベクターは、ｄｈｆｒ－であるＳＰ２／０またはＣＨＯ細胞をトランスフェクトするために使用され得る。ベクターでトランスフェクトされたＳＰ２／０またはＣＨＯ細胞が選択され得、ベクター中の遺伝子発現のレベルは、培養物中のメトトレキサートのレベルを増加させることによって増幅され得る。選択された形質転換体宿主細胞は、抗体重鎖および軽鎖の発現を可能にするために培養され、無傷抗体は、培養培地から回収される。標準的な分子生物学の技法が、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体について選択し、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を回収するために、使用される。
５．４ 医薬組成物

【0212】

本明細書で開示される方法において使用され得る抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３、ＳＭ０６）を含む医薬組成物もまた、本明細書で提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片の治療有効量および薬学的に許容される担体を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、Ａβ関連疾患もしくは障害または神経炎症関連疾患もしくは障害の処置において有用である。一部の実施形態では、医薬組成物は、ＡＤを処置する際に有用である。一部の実施形態では、医薬組成物は、対象（例えば、ヒト患者）におけるＡＤ進行を阻害する際に有用である。一部の実施形態では、医薬組成物は、対象（例えば、ヒト患者）における認知障害を寛解させる際に有用である。

【0213】

本明細書で開示される医薬組成物中で担体材料と組み合わされ得る治療的抗体の量は、変動し得る。一部の実施形態では、医薬組成物中に存在する抗体の量は、治療効果を生じる量である。一般に、１００パーセントのうち、この量は、薬学的に許容される担体と組み合わせた、約０．０１パーセント～約９９パーセントの活性成分、約０．１パーセント～約７０パーセント、または約１パーセント～約３０パーセントの活性成分の範囲である。

【0214】

本明細書で提供される医薬組成物は、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体もしくは抗原結合性断片、例えば、ＳＭ０３、ＳＭ０６もしくはＳＭ０３／ＳＭ０６関連抗体、または本明細書で開示される方法によって同定される抗ＣＤ２２抗体もしくは抗原結合性断片を含む。抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、種々の濃度で存在し得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、本明細書で提供される可溶性抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片を、１～１０００ｍｇ／ｍｌで含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、本明細書で提供される可溶性抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片を、１０～５００ｍｇ／ｍｌ、１０～４００ｍｇ／ｍｌ、１０～３００ｍｇ／ｍｌ、１０～２００ｍｇ／ｍｌ、１０～１００ｍｇ／ｍｌ、２０～１００ｍｇ／ｍｌまたは５０～１００ｍｇ／ｍｌで含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片を、約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１８０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌ、約３００ｍｇ／ｍｌ、約５００ｍｇ／ｍｌ、約８００ｍｇ／ｍｌまたは約１０００ｍｇ／ｍｌで含む。投薬量は、当業者によって容易に調整され得る；例えば、純度における減少は、投薬量における増加を要求する。

【0215】

本明細書で提供される医薬組成物は、種々の形態であり得る。これらには、例えば、液体、半固体および固体剤形、例えば、液体溶液（例えば、注射可能なおよび注入可能な溶液）、分散物または懸濁物、錠剤、丸剤、粉末、リポソームおよび坐剤が含まれる。好ましい形態は、意図した投与様式および治療的適用に依存する。本明細書に記載される医薬組成物または製剤において使用され得る適切な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物、植物油、例えば、オリーブ油、ならびに注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが含まれる。

【0216】

適切な流動性は、例えば、コーティング材料、例えば、レシチンの使用によって、分散物の場合には要求される粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、注射可能なまたは注入可能な溶液の形態である。一部の実施形態では、医薬組成物は、水性製剤である。かかる製剤は、典型的には、溶液または懸濁物であるが、これには、コロイド、分散物、エマルションおよび多相材料もまた含まれ得る。用語「水性製剤」は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む製剤として定義される。同様に、用語「水溶液」は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む溶液として定義され、用語「水性懸濁物」は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む懸濁物として定義される。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬物濃度に適切な他の秩序のある構造として製剤化され得る。

【0217】

一部の実施形態では、本明細書で開示される医薬組成物は、フリーズドライされ、これに、医師または患者が、使用前に、溶媒および／または希釈剤を添加する。

【0218】

本明細書で提供される医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含み得る。薬学的に許容される担体には、生理学的に適合性の、任意のおよび全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。例には、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどのうちの１つまたは複数、ならびにそれらの組合せが含まれる。一部の実施形態では、薬学的に許容される担体には、組成物中の等張剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムが含まれる。

【0219】

一部の実施形態では、薬学的に許容される担体は、抗体または抗原結合性断片の保存期間または有効性を増強する微量の補助物質、例えば、湿潤剤もしくは乳化剤、防腐剤または緩衝液をさらに含む。一部の実施形態では、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入による）に適切である。投与の経路に依存して、活性成分（即ち、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片）は、活性成分を不活性化し得る酸および他の天然の条件の作用から活性成分を保護するための材料でコーティングされ得る。

【0220】

本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片、例えば、ＳＭ０３、ＳＭ０６またはＳＭ０３／ＳＭ０６関連抗体を有する医薬組成物の調製のためのキットもまた、本明細書で提供される。一部の実施形態では、キットは、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片および薬学的に許容される担体を、１つまたは複数の容器中に含む。別の実施形態では、キットは、対象への投与のための、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片を含み得る。具体的な実施形態では、キットは、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片の調製および／または投与に関する使用説明書を含む。

【0221】

一部の実施形態では、本明細書で開示される医薬組成物または製剤は、以下を含む：（ａ）本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体もしくは抗原結合性断片；（ｂ）緩衝剤；（ｃ）安定化剤；（ｄ）塩；（ｅ）増量剤；および／または（ｆ）界面活性剤。一部の実施形態では、医薬組成物または製剤は、少なくとも１か月間、少なくとも２か月間、少なくとも３か月間、少なくとも６か月間、少なくとも１年間、少なくとも２年間、少なくとも３年間、少なくとも５年間またはそれよりも長い期間にわたって、安定である。一部の実施形態では、医薬組成物または製剤は、４℃、２５℃または４０℃で貯蔵した場合に安定である。一部の実施形態では、それらの長期貯蔵を可能にするために、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片の安定性を改善する医薬組成物または製剤もまた、本明細書で提供される。本明細書で開示される医薬組成物は、防腐剤、等張化剤、キレート剤、安定剤および／または界面活性剤のうちの１つまたは複数、ならびにそれらの種々の組合せをさらに含み得る。医薬組成物における防腐剤、等張剤、キレート剤、安定剤および界面活性剤の使用は、当業者に周知である。Remington: The Science And Practice Of Pharmacy, 19th edition, 1995に対して参照がなされ得る。

【0222】

本明細書で開示される医薬組成物または製剤において有用な緩衝剤は、別の酸または塩基の添加後に溶液の酸性度（ｐＨ）を選択された値の近傍に維持するために使用される弱酸または弱塩基であり得る。適切な緩衝剤は、製剤のｐＨ制御を維持することによって、医薬製剤の安定性を最大化し得る。適切な緩衝剤はまた、生理的適合性を確実にし得るまたは溶解度を最適化し得る。レオロジー、粘度および他の特性もまた、製剤のｐＨに依存し得る。一般的な緩衝剤には、ヒスチジン、クエン酸塩、コハク酸塩、酢酸塩およびリン酸塩が含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、緩衝剤は、等張剤、および潜在的に、当分野で公知の酸または塩基によるｐＨ調整と共に、ヒスチジン（例えば、Ｌ－ヒスチジン）を含む。ある特定の実施形態では、緩衝剤は、Ｌ－ヒスチジンである。ある特定の実施形態では、製剤のｐＨは、約２と約１０との間または約４と約８との間で維持される。

【0223】

安定化剤は、その製品を安定化するために、医薬品製品に添加される。かかる薬剤は、異なる方法でタンパク質を安定化し得る。一般的な安定化剤には、アミノ酸、例えば、グリシン、アラニン、リシン、アルギニンもしくはスレオニン、炭水化物、例えば、グルコース、スクロース、トレハロース、ラフィノース（rafftnose）もしくはマルトース、任意の種類および分子量のポリオール、例えば、グリセロール、マンニトール、ソルビトール、シクロデキストリンもしくはデキストラン（destran）、またはＰＥＧが含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、安定化剤は、凍結乾燥された調製物中でのＦＩＸポリペプチドの安定性を最大化するように選択される。ある特定の実施形態では、安定化剤は、スクロースおよび／またはアルギニンである。

【0224】

増量剤は、製品に体積および質量を追加するために医薬組成物または製剤に添加され得、それにより、その正確な計量および取り扱いを容易にする。一般的な増量剤には、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、ソルビトール、炭酸カルシウムまたはステアリン酸マグネシウムが含まれるがこれらに限定されない。

【0225】

界面活性剤は、親液性基および疎液性基を有する両親媒性物質である。界面活性剤は、アニオン性、カチオン性、双性イオン性または非イオン性であり得る。非イオン性界面活性剤の例には、アルキルエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アミンエトキシレート、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド、脂肪アルコール、例えば、セチルアルコールもしくはオレイルアルコール、コカミドＭＥＡ、コカミドＤＥＡ、ポリソルベート、またはドデシルジメチルアミンオキシドが含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０である。

【0226】

本明細書で開示される医薬組成物は、薬学的に許容される抗酸化剤もまた含み得る。薬学的に許容される抗酸化剤の例には、以下が含まれる：（１）水可溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油可溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ－トコフェロールなど；および（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸など。

【0227】

これらの組成物は、アジュバント、例えば、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤もまた含有する。微生物の存在の防止は、上記滅菌手順によって、ならびに種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによって、その両方で確実にされ得る。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを組成物中に含めることもまた望ましい場合がある。さらに、注射可能な医薬品形態の延長された吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによってもたらされ得る。

【0228】

医薬組成物または製剤は、典型的には、製造および貯蔵の条件下で無菌かつ安定でなければならない。薬学的に許容される担体には、無菌水溶液または分散物、および無菌の注射可能な溶液または分散物の即時の調製のための無菌粉末が含まれる。無菌の注射可能な溶液は、上に列挙された成分の１つまたは組合せと共に、適切な溶媒中に必要とされる量で治療的抗体または抗原結合性断片を取り込み、その後、必要に応じて濾過滅菌することによって、調製され得る。薬学的に活性な物質のためのかかる媒体および薬剤の使用は、当分野で公知である。一般に、分散物は、基本分散媒と上に列挙したものからの必要とされる他の成分とを含有する無菌ビヒクル中に活性な化合物を取り込むことによって調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌粉末の場合、調製の一部の方法は、以前に無菌濾過されたその溶液から、活性成分＋任意のさらなる所望の成分の粉末を生じる、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。

【0229】

本明細書で開示される医薬組成物は、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系を含む徐放性製剤など、迅速な放出に対して活性成分を保護する担体を用いて調製され得る。生分解性の生体適合性のポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸が使用され得る。かかる製剤の調製のための多くの方法が、特許されているか、または当業者に一般に公知である。例えば、Sustained And Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978を参照されたい。

【0230】

一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、ｉｎ ｖｉｖｏでの適切な分布を確実にするように製剤化され得る。例えば、ＢＢＢは、多くの高度に親水性の化合物を締め出す。本明細書に記載される治療的抗体がＢＢＢを横断するのを容易にするために、これらは、例えば、リポソーム中で製剤化され得る。リポソームを製造する方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号；同第５，３７４，５４８号；および同第５，３９９，３３１号を参照されたい。リポソームは、特定の細胞または臓器中に選択的に輸送される１つまたは複数の部分を含み得、そうして、標的化された薬物送達を増強する（例えば、V.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685を参照されたい）。例示的な標的化部分には、葉酸またはビオチン（例えば、Ｌｏｗらに対する米国特許第５，４１６，０１６号を参照されたい）、マンノシド（Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153: 1038）；抗体（P.G. Bloeman et al. (1995) FEBS Lett. 357: 140；M. Owais et al. (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39: 180)；サーファクタントタンパク質Ａ受容体（Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233: 134）；ｐｌ２０（Schreier et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:9090）が含まれる；K. Keinanen；M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346: 123；J.J. Killion；I.J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273もまた参照されたい。
５．５ 処置の方法

【0231】

上のセクションに記載されるように、Ａβまたは神経炎症関連の疾患または障害を処置することにおける抗ＣＤ２２抗体および抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）の医学的使用が、本明細書で提供される。本明細書で開示される、または本明細書で開示されるスクリーニング方法を使用して同定される任意の抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、本明細書で開示される方法において使用され得る。一部の実施形態では、治療的抗体は、ＳＭ０３である。一部の実施形態では、治療的抗体は、ＳＭ０６である。一部の実施形態では、Ａβプラークの除去を促進することが必要な対象においてそれを促進する方法が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、Ａβ関連疾患または障害を処置することが必要な対象においてそれを処置する方法もまた、本明細書で提供される。一部の実施形態では、神経炎症を低減させることが必要な対象において神経炎症を低減させる方法もまた、本明細書で提供される。一部の実施形態では、神経炎症に関連する疾患または障害を処置することが必要な対象においてそれを処置する方法もまた、本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、シナプスファゴサイトーシスおよびニューロン死を予防する。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、シナプスファゴサイトーシスおよびニューロン死を、少なくとも２０％、少なくとも３０、少なくとも４０％、少なくとも５０％を超えて、または少なくとも６０％を超えて、予防する。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ２２に特異的に結合する。

【0232】

本明細書で開示される、Ａβプラークの除去を促進する方法、神経炎症を低減させる方法、Ａβ関連疾患または障害を処置する方法、および／または疾患もしくは障害を処置する方法は、対象に、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与するステップを含み、抗体または抗原結合性断片は、（ａ）ＣＤ２２のシス－トランス変換を促進する、および／または（ｂ）ＣＤ２２の内在化を誘導する。

【0233】

一部の実施形態では、Ａβ関連疾患もしくは障害および／または神経炎症関連疾患もしくは障害は、臨床的もしくはプレクリニカルＡＤ、前駆ＡＤ、ダウン症候群、臨床的もしくはプレクリニカルアミロイド血管症（ＣＡＡ）、パーキンソン病、多発梗塞性認知症、脳アミロイド血管症、緑内障、子癇前症、認知障害、記憶喪失、または血管中の病原性Ａβペプチドによって引き起こされる血管障害であり得る。

【0234】

本発明の方法に適切な対象には、Ａβプラークの除去および／または神経炎症における低減が望ましいヒト患者が含まれる。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法で処置される対象は、臨床的もしくはプレクリニカルＡＤ、前駆ＡＤ、ダウン症候群、臨床的もしくはプレクリニカルアミロイド血管症（ＣＡＡ）、パーキンソン病、多発梗塞性認知症、脳アミロイド血管症、緑内障、子癇前症、認知障害、記憶喪失、または血管中の病原性Ａβペプチドによって引き起こされる血管障害であり得る、Ａβ関連または神経炎症関連の疾患または障害と診断される。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法で処置される対象は、臨床的もしくはプレクリニカルＡＤ、前駆ＡＤ、ダウン症候群、臨床的もしくはプレクリニカルアミロイド血管症（ＣＡＡ）、パーキンソン病、多発梗塞性認知症、脳アミロイド血管症、緑内障、子癇前症、認知障害、記憶喪失、または血管中の病原性Ａβペプチドによって引き起こされる血管障害であり得る、Ａβ関連または神経炎症関連の疾患または障害を発症するリスクがある。対象は、哺乳動物であり得る。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。

【0235】

一部の実施形態では、対象は、ＡＤと診断される。一部の実施形態では、対象は、ＡＤを発症するリスクがある。一部の実施形態では、対象は、プレクリニカルＡＤを有する。一部の実施形態では、対象は、臨床的ＡＤを有する。一部の実施形態では、対象は、前駆ＡＤを有する。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法で処置される対象は、ＡＤに対する標準的な治療で されている。一部の実施形態では、対象は、以前に処置されていない。

【0236】

本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体もしくは抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）または医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、頭蓋内投与、くも膜下腔内投与、脳室内投与、腹腔内投与、脊髄投与、鼻腔内投与、胸膜内投与、外用投与または皮内投与を含むがこれらに限定されない、当分野で公知の任意の方法によって、対象に投与され得る。

【0237】

一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体もしくは抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）または医薬組成物は、非経口投与を使用して対象に投与され得る。語句「非経口投与」は、本明細書で使用される場合、通常は注射による、経腸および外用投与以外の投与の様式を意味し、これには、限定なしに、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内（ｉｎｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ）、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内（ｉｎｔｒａａｒｔｉｃｕｌａｒ）、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内（intrastemal）注射および注入が含まれる。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、静脈内注入または注射によって投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、筋肉内注射によって投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、皮下注射によって投与される。

【0238】

血液脳関門は、脳の内外への物質輸送を緊密に調節する。当分野で公知のように、ＡＤを有する患者は、脈管漏出に関連し、脳中へのＩｇＧ透過は、およそ０．２％に達し得る。このように、体系的に送達された治療的抗体は、ＢＢＢを横断でき、病変部位に到達できる。あるいは、一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片は、頭蓋内投与を使用して局所送達され得る。一部の実施形態では、脳室内投与が採用される。

【0239】

本明細書で提供される抗ＣＤ２２抗体もしくは抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）または医薬組成物は、当分野で公知の医療用デバイスを用いて投与され得る。例えば、一部の実施形態では、針なし皮下注射デバイス、例えば、米国特許第５，３９９，１６３号；同第５，３８３，８５１号；同第５，３１２，３３５号；同第５，０６４，４１３号；同第４，９４１，８８０号；同第４，７９０，８２４号；または同第４，５９６，５５６号に開示されたデバイスが使用され得る。本明細書に記載される使用のための周知のインプラントおよびモジュールの例には、以下が含まれる：制御された速度で薬物療法を分配するためのインプラント可能な微量注入ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を介して医薬を投与するための治療的デバイスを開示する米国特許第４，４８６，１９４号；正確な注入速度で薬物療法を送達するための薬物療法注入ポンプを開示する米国特許第４，４４７，２３３号；連続的な薬物送達のための変流量のインプラント可能な注入装置を開示する米国特許第４，４４７，２２４号；マルチチャンバー区画を有する浸透圧薬物送達系を開示する米国特許第４，４３９，１９６号；および浸透圧薬物送達系を開示する米国特許第４，４７５，１９６号。これらの特許は、参照により本明細書に組み込まれる。多くの他のかかるインプラント、送達系およびモジュールが、当業者に公知である。

【0240】

一部の実施形態では、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、例えば、不活性希釈剤または同化可能な可食担体と共に、経口投与され得る。治療的抗体はまた、硬もしくは軟シェルゼラチンカプセル剤中に封入され、錠剤へと圧縮され、または対象の食餌中に直接取り込まれる。経口治療的投与のために、治療的抗体は、賦形剤と共に取り込まれ得、摂取可能な錠剤、頬側錠剤、トローチ、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁物、シロップ、ウエハなどの形態で使用され得る。

【0241】

本明細書で提供される方法は、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）の治療有効量を投与するステップを含む。治療的抗体の実際の投薬量レベルは、患者にとって毒性であることなしに、特定の患者について所望の治療的応答を達成するのに有効な量を得るために、変動され得る。選択された投薬量レベルは、本明細書に記載される特定の組成物の活性、投与の経路、投与の時間、排出の速度、処置の持続時間、使用される特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または材料、処置されている患者の年齢、性別、体重、状態、相対的な健康および以前の病歴などの医学分野で周知の因子を含む、種々の薬物動態学的因子に依存する。

【0242】

一般に、投薬量は、単一用量については、例えば、宿主体重１ｋｇ当たり約０．１～１００ｍｇの範囲であり得る。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）は、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約５ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１０ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約２０ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約４０ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約６０ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１００ｍｇ／ｋｇで投与される。

【0243】

一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）は、約１～５ｍｇ／ｋｇ、約１～１０ｍｇ／ｋｇ、約１～２０ｍｇ／ｋｇ、約１～５０ｍｇ／ｋｇ、約１～１００ｍｇ／ｋｇ、約５～１０ｍｇ／ｋｇ、約５～２０ｍｇ／ｋｇ、約５～５０ｍｇ／ｋｇ、約５～１００ｍｇ／ｋｇ、約１０～５０ｍｇ／ｋｇまたは約１０～１００ｍｇ／ｋｇの範囲内の用量で投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１～５ｍｇ／ｋｇの範囲内の用量で投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内の用量で投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１～５０ｍｇ／ｋｇの範囲内の用量で投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１０～５０ｍｇ／ｋｇの範囲内の用量で投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、約１０～１００ｍｇ／ｋｇの範囲内の用量で投与される。

【0244】

一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、約１０～２０００ｍｇの用量で抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）を投与するステップを含む。一部の実施形態では、用量は、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ 約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇまたは約２０００ｍｇである。一部の実施形態では、抗体は、１００ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、抗体は、３００ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、抗体は、６００ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、抗体は、９００ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、抗体は、１２００ｍｇの用量で投与される。

【0245】

一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、約１０～５０ｍｇ、１０～１００ｍｇ、１０～２００ｍｇ、１００～３００ｍｇ、１００～５００ｍｇ、３００～６００ｍｇ、３００～９００ｍｇ、３００～１２００ｍｇ、６００～１２００ｍｇ、６００～１８００ｍｇまたは１０００～２０００ｍｇの範囲内の用量で、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）を投与するステップを含む。一部の実施形態では、抗体は、１００～５００ｍｇの範囲内の用量で投与される。一部の実施形態では、抗体は、３００～６００ｍｇの範囲内の用量で投与される。一部の実施形態では、抗体は、３００～９００ｍｇの範囲内の用量で投与される。一部の実施形態では、抗体は、６００～１２００ｍｇの範囲内の用量で投与される。

【0246】

処置の間、より低い用量で開始し、これを後に標的用量まで増やすことが一般的である。説明目的のために、一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、約１００ｍｇの用量で抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片を投与するステップを含み、この用量は、約６００ｍｇの標的用量まで徐々に増やされる。

【0247】

対象には、日に１回、１日おきに、週に１回、２週間に１回、月に１回、または経験的分析によって決定される任意の他のスケジュールに従って、かかる用量が投与され得る。例示的な処置は、延長された期間、例えば、少なくとも６か月間の期間にわたる複数の投薬量での投与を必然的に伴う。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片を週に１回投与するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、２週間に１回の投与を含む。一部の実施形態では、方法は、月に１回の投与を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）は、週に１回、２週間に１回または月に１回皮下投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）は、週に１回、２週間に１回または月に１回静脈内投与される。

【0248】

抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）は、必要に応じて、および適切な場合、最大で３か月間、６か月間、９か月間、１２か月間、１８か月間、２４か月間、３０か月間または３６か月間投与され得る。一部の実施形態では、処置は、少なくとも３か月間持続する。一部の実施形態では、処置は、少なくとも６か月間持続する。一部の実施形態では、処置は、少なくとも１２か月間持続する。一部の実施形態では、処置は、少なくとも２４か月間持続する。

【0249】

例えば、投与のラウンド、投薬量、処置頻度、および処置の長さの種々の実施形態の全ての順列および組合せが、本明細書で明示的に企図され、本明細書で開示される治療方法において採用され得る。

【0250】

説明目的のために、以下の処置レジメンが、本明細書で開示される（例えば、ＳＭ０３またはＳＭ０６）または本明細書で開示される方法において同定される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片の投与を含む本明細書で開示される方法において採用され得る。

【0251】

一部の実施形態では、治療的抗体は、４週間毎におよび少なくとも２１日間離れて、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内または皮下投与される。一部の実施形態では、以下の用量設定スケジュールが含まれる：注入１～２：１ｍｇ／ｋｇ ＩＶ；注入３～４：３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ；注入５～６：６ｍｇ／ｋｇ ＩＶ；注入７およびそれ以降：１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ。

【0252】

一部の実施形態では、治療的抗体は、１０、２０または４０ｍｇ／ｋｇの単一用量、２４週間にわたる１週間おきの１０ｍｇ／ｋｇの第２の用量、および１６か月間にわたる毎月の１０または２０ｍｇ／ｋｇの第３の用量で、静脈内または皮下投与される。

【0253】

一部の実施形態では、治療的抗体は、週に１回の約２５０ｍｇまたは２週間に１回の５００ｍｇの用量で、最大で２年間、静脈内または皮下投与される。一部の実施形態では、処置は、約１２０ｍｇの月に１回のショットで始まる。

【0254】

投薬量レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療的または予防的応答）を提供するために調整され得る。例えば、単一のボーラスが投与され得、いくつかの分割された用量が経時的に投与され得、または用量は、治療的状況の緊急要求によって示される場合、比例的に低減もしくは増加され得る。投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、単位剤形で非経口組成物を製剤化することが特に有利である。単位剤形は、本明細書で使用される場合は、処置される哺乳動物対象のための単位的投薬量として適した物理的に個別の単位を指す；各単位は、必要な医薬品担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定の量の治療的抗体を含有する。適切な投薬は、軽減される状態の型および重症度と共に変動することに留意すべきである。任意の特定の対象について、具体的な投薬量レジメンが、個々の必要性、および組成物を投与するまたはその投与を監督する人物の専門的判断に従って、経時的に調整すべきであること、ならびに本明細書に示される投薬量範囲が例示に過ぎず、特許請求された組成物の範囲も実行も限定しない意図であることを、さらに理解すべきである。

【0255】

Ａβ関連疾患もしくは障害または神経炎症関連疾患もしくは障害の処置において、時折、疾患または障害は、本明細書で提供される方法で治癒され得るが、任意の臨床的改善が、利益を構成する。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、アミロイドを、平均約５０センチロイド（ｃｅｎｔｉｌｏｉｄ）（ＣＬ）、約６０ＣＬ、約７０ＣＬ、約８０ＣＬ、約９０ＣＬ、約９５ＣＬまたは約９９ＣＬ低減させる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、アミロイドを、平均約５０ＣＬ低減させる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、アミロイドを、平均約８０ＣＬ低減させる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、アミロイドを、平均約９０ＣＬ低減させる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、アミロイドを、平均５０～１００ＣＬ、６０～１００ＣＬ、７０～１００ＣＬ、８０～１００ＣＬまたは９０～１００ＣＬ低減させる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、アミロイドを、平均５０～１００ＣＬ低減させる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、アミロイドを、平均９０～１００ＣＬ低減させる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、神経炎症を低減させる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、血管原性浮腫を低減させる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、シナプスファゴサイトーシスおよびニューロン死を予防する。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、ＡＤの開始を予防する、または進行ＡＤを遅延もしくは停止させる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、ＡＤの症状を寛解させる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、認知障害を寛解させる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、認知障害の開始を遅延させる。

【0256】

ＦｃγＲを架橋結合する治療的抗体と比較して、本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体は、脈管副作用（即ち、ＡＲＩＡ－Ｅ、ＡＲＩＡ－Ｈ）を有さないまたはかかる副作用が低減されている。さらに、一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、血管原性浮腫を低減させる。

【0257】

本明細書で開示される抗ＣＤ２２抗体または抗原結合性断片は、当分野で公知の種々の方法によって投与され得る。当業者に理解されるように、投与の経路および／または様式は、所望の結果に依存して変動する。一部の実施形態では、治療的抗体は、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系を含む徐放性製剤など、迅速な放出に対してそれを保護する担体を用いて調製され得る。生分解性の生体適合性のポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル（polyorthoesteer）およびポリ乳酸が使用され得る。かかる製剤の調製のための多くの方法が、特許されている、または当業者に一般に公知である。例えば、Sustained And Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978を参照されたい。治療的適用では、比較的短い間隔での比較的高い投薬量が、疾患の進行が低減または終結されるまで、および患者が疾患の症状の部分的または完全な寛解を示すまで、時折必要とされる。

【0258】

異なる作用機構を有する薬剤を使用する併用療法は、相加的または相乗的効果を生じ得る。併用療法は、単独療法において使用される用量よりも低い用量の各薬剤を可能にし得、それにより、毒性副作用を低減させる、および／または本明細書で開示される薬剤の治療指数を増加させる。併用療法は、薬物耐性が発生する可能性を減少させることができる。一部の実施形態では、さらなる治療は、本明細書に記載される抗体もしくは抗原結合性断片または医薬組成物の治療指数における増加を生じる。一部の実施形態では、さらなる治療は、本明細書に記載される抗体もしくは抗原結合性断片または医薬組成物の毒性および／または副作用における減少を生じる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体もしくは抗原結合性断片または医薬組成物は、さらなる治療と組み合わせて投与され得る。

【0259】

一部の実施形態では、第２の治療剤は、抗Ａβ抗体、抗ＣＤ３３抗体、タウ凝集阻害剤、タウタンパク質モジュレーター、コリンエステラーゼ阻害剤、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、Ｎ－メチルＤ－アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト、β－セクレターゼ阻害剤またはインスリン感受性改善薬である。一部の実施形態では、第２の治療剤は、炎症促進性サイトカインの放出を抑制する第２の抗体、またはミクログリア細胞ファゴサイトーシス活性を増強する薬剤であり得る。

【0260】

一部の実施形態では、第２の治療剤は、抗Ａβ抗体である。抗Ａβ抗体は、アデュカヌマブ、ドナネマブ、ガンテネルマブ、レカネマブ、バピネウズマブおよびソラネズマブからなる群から選択され得る。一部の実施形態では、第２の治療剤は、アデュカヌマブである。一部の実施形態では、第２の治療剤は、ドナネマブである。一部の実施形態では、第２の治療剤は、ガンテネルマブである。

【0261】

一部の実施形態では、第２の治療剤は、抗ＣＤ３３抗体である。一部の実施形態では、第２の治療剤は、ＡＬ００３（ＡｂｂＶｉｅ）、ゲムツズマブ、リンツズマブ、オゾガマイシン、バダスツキシマブタリリンおよびＢＩ８３６８５８からなる群から選択される。一部の実施形態では、第２の治療剤は、ＡＬ００３である。一部の実施形態では、第２の治療剤は、ゲムツズマブである。一部の実施形態では、第２の治療剤は、リンツズマブである。

【0262】

一部の実施形態では、第２の治療剤は、タウ凝集阻害剤である。一部の実施形態では、第２の治療剤は、メチレンブルー誘導体ＬＭＴＸ（ＬＭＴＭまたはＴＲｘ０２３７としても公知）またはクルクミンである。

【0263】

一部の実施形態では、第２の治療剤は、タウタンパク質モジュレーターである。一部の実施形態では、第２の治療剤は、メマンチン、セレン酸ナトリウム、アルボシジブ（ａｌｖｏｃｉｄｉｂ）、セリシクリブ（ｓｅｌｉｃｉｃｌｉｂ）、チデグルシブ、リチウム、サルサラートまたはＭＫ－８７１９である。

【0264】

一部の実施形態では、第２の治療剤は、コリンエステラーゼ阻害剤またはアセチルコリンエステラーゼ阻害剤である。一部の実施形態では、第２の治療剤は、ドネペジル、リバスチグミンまたはガランタミンである。

【0265】

一部の実施形態では、第２の治療剤は、ＮＭＤＡアンタゴニストである。一部の実施形態では、第２の治療剤は、メマンチンである。

【0266】

第２の治療剤は、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体もしくは抗原結合性断片または医薬組成物の投与の前に、それと同時発生的に、またはそれに引き続いて投与され得る。組み合わせ投与には、単一の医薬製剤での、もしくは別々の製剤を使用した共投与、またはいずれの順序であってもよいが、一般には、全ての活性薬剤がそれらの生物活性を同時に発揮することができるような期間内の連続投与が含まれ得る。当業者は、処置されている対象の必要性に基づいて、併用療法において使用されるさらなる薬剤のタイミングおよび投薬を含む、組合せ中の本明細書に記載される医薬組成物およびさらなる治療を投与するのに適切なレジメンを容易に決定することができる。

【0267】

本明細書において引用される全ての論文、刊行物および特許は、各個々の論文、刊行物または特許が参照により組み込まれると具体的かつ個々に示されたのと同様に、参照により本明細書に組み込まれ、どの刊行物が引用されたかと関連して、方法および／または材料を開示および記載するために、参照により本明細書に組み込まれる。しかし、本明細書で引用される任意の参考文献、記事、刊行物、特許、特許公報および特許出願の言及は、世界のどの国においても、それらが有効な先行技術を構成することまたは共通の一般知識の一部を形成することの承認としても任意の形態の示唆としても解釈されず、されるべきではない。

【0268】

文脈が他を示さない限り、本明細書に記載される種々の特色が任意の組合せで使用され得ることが、具体的に意図される。

【0269】

他に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。

【実施例】

【0270】

５．６ 実験
５．６．１
（実施例１）
ミクログリア細胞上のＣＤ２２発現。
免疫組織化学手順、免疫細胞化学手順およびデータベース検索を使用して、ＣＤ２２は、Ｒａｍｏｓ細胞、Ｂ細胞およびミクログリア細胞（例えば、ＨＭＣ－３細胞およびＢＶ－２細胞）を含む複数の型の細胞上で発現されることが見出された。

【表3】

Ramos:ヒトバーキットリンパ腫細胞;HMC-3:ヒトミクログリア細胞;BV-2:マウスミクログリア細胞。

【0271】

一貫して、以下の表に示されるように、ミクログリア細胞（例えば、ＨＭＣ－３細胞およびＢＶ－２細胞）を含む上記細胞系への種々の抗ＣＤ２２抗体の結合もまた検出した。

【表4】

+は陽性結合を示し、-は結合なしを示す。
５．６．２
（実施例２）
オリゴマー性Ａβ１－４２へのＣＤ２２のｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合。

【0272】

Ｏｃｔｅｔ ９６ｅ ＳＰＲシステムを使用して、Ａβ１－４２へのＣＤ２２のｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合を分析した。ストレプトアビジンバイオセンサーに、５０μｇ／ｍＬビオチン化オリゴマー性Ａβ１－４２をロードし；種々の濃度のＣＤ２２との相互作用を、バイオセンサーを用いて検出した。ステップは以下の通りであった：最初に、ストレプトアビジンバイオセンサーを、５０μｇ／ｍＬビオチン化オリゴマー性Ａβ１－４２中に４分間ロードし；第２に、バイオセンサーを、動態学的緩衝液（ＰＢＳ＋０．０２％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、０．１％ＢＳＡ）で１０秒間洗浄し；第３に、バイオセンサーを、会合のために、種々の濃度のＣＤ２２の細胞外ドメイン（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）中に２分間ロードした。図１に示されるように、ＣＤ２２は、約２．７９ｎＭのＫ_Ｄでオリゴマー性Ａβ１－４２に結合した。
５．６．３
（実施例３）
ＣＤ２２発現細胞へのオリゴマー性Ａβ１－４２の結合。

【0273】

ＨＥＫ２９３細胞を、１日目に、３１２５０細胞／ｃｍ^２の密度で６ウェルプレート上に播種した。２日目に、ＨＥＫ２９３細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でトランスフェクトして、全長ヒトＣＤ２２を２日間にわたって過剰発現させた。４日目に、トランスフェクトされた細胞を、成長培地中１μｇ／ｍＬのＦＩＴＣ－Ａβと共に氷上で１時間インキュベートした。細胞をトリプシン処理し、フローサイトメーターによって分析した。図２に示されるように、ＨＥＫ２９３細胞におけるヒトＣＤ２２の過剰発現は、ＨＥＫ２９３細胞の表面上へのＦＩＴＣ－Ａβの結合を増加させ、これは、Ａβと細胞表面上のＣＤ２２との間での結合を実証している。
５．６．４
（実施例４）
ＨＭＣ－３細胞上のオリゴマー性Ａβ１－４２へのＣＤ２２の結合

【0274】

近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）を使用して、ＨＭＣ－３細胞上のＡβ１－４２へのＣＤ２２の結合を評価した。ＨＭＣ－３細胞を、１％ゼラチンコーティングされたカバースリップ上に、２６０００細胞／ｃｍ^２の密度で播種した。細胞を、オリゴマー性Ａβで、氷上で１時間処置した。細胞を、ＰＢＳで１回洗浄し、次いで、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で５分間固定した。細胞を、抗ＣＤ２２抗体および抗Ａβ抗体と共に４℃で一晩インキュベートした。ＰＬＡアッセイを、製造業者のプロトコールに従って実施した（Ｄｕｏｌｉｎｋ（登録商標）Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ Ｌｉｇａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）。蛍光画像を、Ｚｅｉｓｓ ７１０正立顕微鏡を用いて取得した。図３に示されるように、ＨＭＣ－３細胞を点線で取り囲んだ。矢印によって示される陽性シグナルは、ＣＤ２２とＡβとの間での物理的相互作用を実証した。
５．６．５
（実施例５）
抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２の内在化を誘導した

【0275】

ＨＭＣ３細胞を、１％ゼラチンコーティングされたカバースリップ上に、２６０００細胞／ｃｍ^２の密度で播種した。細胞を、１０μｇ／ｍＬのＳＭ０３で処置し、氷上で１時間インキュベートした。次いで、細胞を３７℃でインキュベートして、内在化を誘導した。示された時点において、培地を除去し、細胞を４％ＰＦＡで固定した。表面ＣＤ２２発現を、マウス抗ヒトＣＤ２２抗体（Ａｂｃａｍ）およびＡｌｅｘａｆｌｏｕｒ４８８コンジュゲート化抗マウスＩｇＧ抗体を用いて検出した。図４に示されるように、ＨＭＣ－３細胞を、ＳＭ０３で３分間、５分間、１０分間、３０分間および６０分間処置した。ＳＭ０３は、処置後僅か３分で、表面ＣＤ２２発現を２０％低減させた。
５．６．６
（実施例６）
ヒトミクログリア細胞における抗ＣＤ２２抗体の内在化。

【0276】

ＨＭＣ－３細胞を、１％ゼラチンコーティングされたカバースリップ上に、２６０００細胞／ｃｍ^２の密度で播種し、ＦＩＴＣ－ＳＭ０３で３０分間処置した。ＨＭＣ３細胞を、ＰＢＳ中４％のパラホルムアルデヒドで固定し、共焦点画像を、Ｚｅｉｓｓ ８００顕微鏡を用いて獲得した。図５に示されるように、ＦＩＴＣ－ＳＭ０３は、ＨＭＣ３細胞において、処置後３０分以内に内在化された。

【0277】

ＨＭＣ－３細胞を、３００００細胞／ｃｍ^２の密度で６ウェルプレート上に播種した。細胞を、１０μｇ／ｍＬの示された抗ＣＤ２２抗体と共に、氷上で２時間インキュベートした。次いで、細胞を、３７℃でインキュベートして、内在化を誘導した。示された時点において、培地を除去し、細胞を４％ＰＦＡで固定した。表面抗ＣＤ２２抗体、即ち、ＳＭ０３、ＳＭ０６、ＥｍａｂまたはＭ９７１を各々、ＡｌｅｘａＦｌｏｕｒ ４８８コンジュゲート化抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて検出した。図６に示されるように、異なる抗ＣＤ２２抗体は、ＨＭＣ－３細胞による異なる速度の内在化を示した。ＳＭ０３およびＳＭ０６は、ＨＭＣ－３細胞による最も高い速度の内在化を誘導した。
５．６．７
（実施例７）
抗ＣＤ２２抗体によって増強されるオリゴマー性Ａβの内在化

【0278】

ＨＭＣ－３細胞を、６００００細胞／ｃｍ^２の密度で６ウェルプレート上に播種した。ＨＭＣ－３細胞を、成長培地中１μｇ／ｍＬのＦＩＴＣ－Ａβで、２４時間事前処置した。次いで、細胞を、１０μｇ／ｍＬのＳＭ０３、ＳＭ０６、ＥｍａｂおよびＭ９７１またはＩｇＧアイソタイプ対照で、示された時間、例えば、４時間、８時間、１６時間および２４時間にわたって処置した。細胞をトリプシン処理し、４％ＰＦＡで室温で５分間固定した。細胞をマウス抗ヒトＣＤ２２抗体（Ａｂｃａｍ）で染色し、ＦＩＴＣ－Ａβ内在化を、フローサイトメーターを用いて分析した。図７に示されるように、ＳＭ０３、ＳＭ０６およびＥｍａｂ（Ｍ９７１ではなく）は、ＦＩＴＣ－Ａβの増強されたファゴサイトーシスを示した。ＳＭ０３およびＳＭ０６は共に、試験した全ての抗体のうちで最も高いファゴサイトーシス能力を示した。
５．６．８
（実施例８）
抗ＣＤ２２抗体は、ミクログリア細胞においてＮＦκＢシグナル伝達経路を抑制した

【0279】

ＨＭＣ－３細胞を、５００００細胞／ｃｍ^２の密度で２４ウェルプレート上に播種した。細胞を、ＮＦκＢルシフェラーゼレポータープラスミドでトランスフェクトした（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００）。次いで、トランスフェクトされた細胞を、ＬＰＳで刺激し、異なる濃度のＳＭ０３ Ｆａｂ断片で共処置した。ルシフェラーゼ読み取りを、処置の２４時間後に記録した。図８に示されるように、ＳＭ０３ Ｆａｂは、ＮＦκＢシグナル伝達を用量依存的様式で低減させ、ミクログリアの活性化が、ＳＭ０３処置によって低減されたことを実証している。
５．６．９
（実施例９）
抗ＣＤ２２抗体は、ミクログリア細胞においてＩＬ－６分泌を抑制した

【0280】

ＨＭＣ－３細胞を、１２５０００細胞／ｃｍ^２の密度で９６ウェルプレート上に播種した。ＨＭＣ－３細胞をＬＰＳで刺激し、異なる濃度のＳＭ０３ Ｆａｂ断片で共処置した。処置の２４時間後、培地を収集し、製造業者のプロトコールに従ってＩＬ－６ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて試験した。図９に示されるように、ＳＭ０３ Ｆａｂは、ＩＬ－６分泌を低減させ、ミクログリアの活性化が、ＳＭ０３処置で低減されたことがさらに確認された。
５．６．１０
（実施例１０）
抗ＣＤ２２抗体は、ＨＭＣ－３細胞上の２，６シアル酸のトランス結合を促進した

【0281】

ＨＭＣ３細胞を、１％ゼラチンコーティングされたカバースリップ上に、２６０００細胞／ｃｍ^２の密度で播種した。細胞を、示された時間にわたって抗ＣＤ２２抗体で処置した。培地を除去し、細胞を、４％ＰＦＡで室温で５分間固定した。固定された細胞を、ＦＩＴＣコンジュゲート化２，６－シアル酸プローブ（ＧｌｙｃｏＴｅｃｈ）と共に４℃で一晩インキュベートした。蛍光画像を、Ｌｅｉｃａ ＤＭＩ６０００Ｂ顕微鏡を用いて取得した。図１０に示されるように、ＳＭ０３およびＳＭ０６は、ＨＭＣ－３細胞において２，６－シアル酸プローブのトランス結合を促進した。
５．６．１１
（実施例１１）
抗ＣＤ２２抗体は、シナプスファゴサイトーシスおよびニューロン死を低減させる

【0282】

ＳＭ０３およびＳＭ０６を含む抗ＣＤ２２抗体を、機能的アッセイに供して、シナプスファゴサイトーシスおよび／またはニューロン死を低減させることにおけるそれらの活性を試験する。シナプスファゴサイトーシスを評価するために、ＨＭＣ－３細胞を、分化したＳＨ－ＳＹ５Ｙニューロン細胞と共に共培養する。分化したＳＨ－ＳＹ５Ｙ上に発達したシナプスは、ＰＳＤ－９５タンパク質の発現によって示される。ＨＭＣ－３ミクログリア細胞におけるＰＳＤ－９５発現は、ミクログリア細胞によるシナプスファゴサイトーシスの速度を示すウエスタンブロットまたはＥＬＩＳＡを使用して測定することができる。ＳＭ０３および／またはＳＭ０６の処置は、ＨＭＣ－３細胞においてＰＳＤ－９５発現を低減させ、これらの抗ＣＤ２２抗体が、ミクログリア細胞によるシナプスファゴサイトーシスを阻害することができることを示している。

【0283】

ニューロン死を測定するために、分化したＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞を、示された抗ＣＤ２２抗体の存在下または非存在下で、ＬＰＳ刺激後のＨＭＣ－３細胞の培養培地で処置する。ＳＨ－ＳＹ５Ｙの死を、ＭＴＴアッセイによって測定する。ＳＭ０３および／またはＳＭ０６の処置は、ＳＨ－ＳＹ５Ｙの死を低減させる。
６． 電子的に提出された配列表に対する言及

【0284】

本出願は、２０２２年７月１日に作成され、５６，９８１バイトのサイズを有する、表題「０２２Ａ００３ＷＯ０１．ＸＭＬ」の配列表を、参照により取り込む。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【配列表】

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【国際調査報告】