特表 2024-527493 一価の抗ＭｅｒＴＫ抗体及びその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-25

(54)【発明の名称】一価の抗ＭｅｒＴＫ抗体及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/40 20060101AFI20240718BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240718BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240718BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240718BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240718BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240718BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240718BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240718BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240718BHJP

【ＦＩ】

C07K16/40

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/19

C12N1/21

C12N1/15

C12N5/10

A61K39/395 N

A61K39/395 D

A61P35/00

A61P37/04

A61P1/04

A61P15/00

A61P1/16

C07K16/46

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023577533

(86)(22)【出願日】2022-06-15

(85)【翻訳文提出日】2024-02-06

(86)【国際出願番号】 US2022033629

(87)【国際公開番号】W WO2022266221

(87)【国際公開日】2022-12-22

(31)【優先権主張番号】63/211,323

(32)【優先日】2021-06-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/365,815

(32)【優先日】2022-06-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】517041235

【氏名又は名称】アレクトル エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(74)【代理人】

【識別番号】100221741

【弁理士】

【氏名又は名称】酒井 直子

(74)【代理人】

【識別番号】100114926

【弁理士】

【氏名又は名称】枝松 義恵

(72)【発明者】

【氏名】リー スン－ジュ

(72)【発明者】

【氏名】ニヴィチャニョン タランスリ

(72)【発明者】

【氏名】ホー ウェイ－シェン

(72)【発明者】

【氏名】リー ウェイ

(72)【発明者】

【氏名】ロール マリナ ケー．

(72)【発明者】

【氏名】リャン スペンサー

【テーマコード（参考）】

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA43

4B065CA44

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB33

4C085BB36

4C085BB37

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE03

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045DA76

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は一般に、一価抗体を含む、例えば、ＭｅｒＴＫポリペプチド、例えば哺乳類ＭｅｒＴＫポリペプチドまたはヒトＭｅｒＴＫポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル一価抗体を含む、組成物、及び治療を必要とする個体の治療におけるかかる組成物の使用に関する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＭｅｒチロシンキナーゼ（ＭｅｒＴＫ）に結合する抗体であって、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメイン１つ以下を含む、前記抗体。

【請求項2】

前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインが、ＭｅｒＴＫタンパク質のＩｇ１ドメインに結合する、請求項１に記載の抗体。

【請求項3】

前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重鎖と配列番号１０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖とを含む抗体のヒトＭｅｒＴＫへの結合を競合的に阻害する、請求項１または２に記載の抗体。

【請求項4】

前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重鎖と配列番号１０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖とを含む抗体と同じ、ヒトＭｅｒＴＫのエピトープに結合する、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項5】

前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインが、配列番号９のアミノ酸３１～３５を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号９のアミノ酸５０～６６を含むＨＶＲ－Ｈ２、配列番号９のアミノ酸９９～１０９を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１０のアミノ酸２４～３４を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１０のアミノ酸５０～５６を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号１０のアミノ酸８９～９７を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項6】

前記抗体が１６．２抗体のＨＶＲを含み、任意で、前記ＨＶＲは、Ｋａｂａｔの定義によるＨＶＲ、Ｃｈｏｔｈｉａの定義によるＨＶＲ、ＡｂＭの定義によるＨＶＲ、またはｃｏｎｔａｃｔの定義によるＨＶＲである、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項7】

前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項8】

前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインが、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項9】

前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び／または配列番号１０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項10】

前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインが、配列番号１３のアミノ酸配列を含む可変重鎖と配列番号１４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖とを含む抗体のヒトＭｅｒＴＫへの結合を競合的に阻害する、請求項１または２に記載の抗体。

【請求項11】

前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインが、配列番号１３のアミノ酸配列を含む可変重鎖と配列番号１４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖とを含む抗体と同じ、ヒトＭｅｒＴＫのエピトープに結合する、請求項１、２及び１０のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項12】

前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインが、配列番号１３のアミノ酸３１～３５を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸５０～６６を含むＨＶＲ－Ｈ２、配列番号１３のアミノ酸９９～１０８を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１４のアミノ酸２４～３４を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１４のアミノ酸５０～５６を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸８９～９７を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１、２、１０、及び１１のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項13】

前記抗体が１３．１１抗体のＨＶＲを含み、任意で、前記ＨＶＲは、Ｋａｂａｔの定義によるＨＶＲ、Ｃｈｏｔｈｉａの定義によるＨＶＲ、ＡｂＭの定義によるＨＶＲ、またはｃｏｎｔａｃｔの定義によるＨＶＲである、請求項１、２、１０、及び１１のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項14】

前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインが、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む、請求項１、２、及び１０～１３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項15】

前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインが、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む、請求項１、２、及び１０～１４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項16】

前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び／または配列番号１４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む、請求項１、２、及び１０～１５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項17】

前記抗体が、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである、請求項１～１６のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項18】

前記抗体がＩｇＧクラスのものであり、任意で、前記抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項１７に記載の抗体。

【請求項19】

ＩｇＧ１抗体である、請求項１７に記載の抗体。

【請求項20】

ＩｇＧ４抗体である、請求項１７に記載の抗体。

【請求項21】

（ａ）前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインを一緒に形成する、第１の重鎖またはその断片及び第１の軽鎖またはその断片と、（ｂ）前記ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインを形成しない、第２の重鎖またはその断片及び／あるいは第２の軽鎖またはその断片とを含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項22】

前記第２の重鎖またはその断片が、可変重鎖を含まない、請求項２１に記載の抗体。

【請求項23】

前記第２の軽鎖またはその断片が、可変軽鎖を含まない、請求項２１または２２に記載の抗体。

【請求項24】

第２の軽鎖またはその断片を含まない、請求項２１～２３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項25】

前記第２の重鎖またはその断片がＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、任意で、前記第２の重鎖またはその断片がヒンジドメインをさらに含む、請求項２１～２４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項26】

第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含むＦｃ領域を含み、
（ａ）前記第１のポリペプチドがアミノ酸置換Ｔ３６６Ｙを含み、前記第２のポリペプチドがアミノ酸置換Ｙ４０７Ｔを含む、
（ｂ）前記第１のポリペプチドがアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含み、前記第２のポリペプチドがアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｗ、及びＹ４０７Ｖを含む、
（ｃ）前記第１のポリペプチドがアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含み、前記第２のポリペプチドがアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む、
（ｄ）前記第１のポリペプチドがアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ、及びＳ３５４Ｃを含み、前記第２のポリペプチドがアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃを含む、
（ｅ）前記第１のポリペプチドがアミノ酸置換Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖを含み、前記第２のポリペプチドがアミノ酸置換Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、及びＴ３９４Ｗを含む、
（ｆ）前記第１のポリペプチドがアミノ酸置換Ｋ３６０Ｄ、Ｄ３９９Ｍ、及びＹ４０７Ａを含み、前記第２のポリペプチドがアミノ酸置換Ｅ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｖ、及びＫ４０９Ｖを含む、
（ｇ）前記第１のポリペプチドがアミノ酸置換Ｋ４０９Ｄ及びＫ３９２Ｄを含み、前記第２のポリペプチドがアミノ酸置換Ｄ３９９Ｋ及びＥ３５６Ｋを含む、
（ｈ）前記第１のポリペプチドがアミノ酸置換Ｋ３６０Ｅ及びＫ４０９Ｗを含み、前記第２のポリペプチドがアミノ酸置換Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ及びＦ４０５Ｔを含む、
（ｉ）前記第１のポリペプチドがアミノ酸置換Ｌ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗ、及びＹ３４９Ｃを含み、前記第２のポリペプチドがアミノ酸置換Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔ、及びＳ３５４Ｃを含む、または
（ｊ）前記第１のポリペプチドがアミノ酸置換Ｋ３７０Ｅ及びＫ４０９Ｗを含み、前記第２のポリペプチドがアミノ酸置換Ｅ３５７Ｎ、Ｄ３９９Ｖ及びＦ４０５Ｔを含み、
ここで、前記置換はＥＵ番号付けに従っている、請求項１～２５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項27】

ノブ変異及びホール変異を含む、請求項１～２６のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項28】

前記ノブ変異が、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含む、請求項２７に記載の抗体。

【請求項29】

前記ホール変異が、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む、請求項２７または２８に記載の抗体。

【請求項30】

ヘテロ二量体化を促進するアミノ酸置換、付加、または欠失を含むＦｃ領域を含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項31】

１つ以下の軽鎖またはその断片を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項32】

１つ以下の、ＩｇＧの単一の重鎖またはその断片とＩｇＧの単一の軽鎖またはその断片とを含む、請求項１～３１のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項33】

ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含む、請求項１～１８及び２０～３２のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項34】

ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓ（ＬＡＬＡＰＳ）を含む、請求項１～３３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項35】

ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）を含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項36】

配列番号１７のアミノ酸１～４４９または配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１～９、１７～１９、２１～２５、３１、及び３２のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項37】

配列番号１８のアミノ酸１～４４９または配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１～９、１７～１９、２１～２５、３１、３２、及び３４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項38】

配列番号１９のアミノ酸１～４４９または配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１～９、１７～１９、２１～２５、３１、３２、及び３５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項39】

配列番号２０のアミノ酸１～４４６または配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１～９、１７、１８、２０～２５、３１、及び３２のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項40】

配列番号２９のアミノ酸１～４５３または配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１～９、１７～１９、及び２１～３１のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項41】

配列番号３０のアミノ酸１～４４９または配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１～９、１７～１９、２１～３１、及び３４に記載の抗体。

【請求項42】

配列番号３１のアミノ酸１～４４９または配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１～９、１７～１９、２１～３１、及び３５に記載の抗体。

【請求項43】

配列番号３２のアミノ酸１～４４６または配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１～９、１７、１８、及び２０～３１のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項44】

配列番号３３のアミノ酸１～４４７または配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１～９、１７、１８、２０～３１、及び３３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項45】

配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～９、１７～１９、及び２１～３５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項46】

配列番号２２のアミノ酸１～４４８または配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１、２、１０～１９、２１～２５、３１、及び３２のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項47】

配列番号２３のアミノ酸１～４４８または配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１、２、１０～１９、２１～２５、３１、３２、，及び３４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項48】

配列番号２４のアミノ酸１～４４８または配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１、２、１０～１９、２１～２５、３１、３２、及び３５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項49】

配列番号２５のアミノ酸１～４４５または配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１、２、１０～１８、２０～２５、３１、及び３２のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項50】

配列番号３４のアミノ酸１～４４８または配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１、２、１０～１９、及び２１～３１のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項51】

配列番号３５のアミノ酸１～４４８または配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１、２、１０～１９、２１～３１、及び３４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項52】

配列番号３６のアミノ酸１～４４８または配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１、２、１０～１９、２１～３１、及び３５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項53】

配列番号３７のアミノ酸１～４４５または配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１、２、１０～１８、及び２０～３１のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項54】

配列番号３８のアミノ酸１～４４５または配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１、２、１０～１８、２０～３１、及び３３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項55】

配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１、２、１０～１９、及び２１～３５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項56】

配列番号４０のアミノ酸１～２２６または配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項１～１９、２１～３１、３４、及び３５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項57】

配列番号４１のアミノ酸１～２２６または配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項１～１９、２１～３１、３４、及び３５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項58】

配列番号４２のアミノ酸１～２２６または配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項１～１９、２１～３１、３４、及び３５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項59】

配列番号４３のアミノ酸１～２２８または配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項１～１８、２０～３１、３４、及び３５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項60】

配列番号４４のアミノ酸１～２２８または配列番号４４のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項１～１９、２１～３１、及び３３～３５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項61】

（ｉ）配列番号２９のアミノ酸１～４５３または配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４０のアミノ酸１～２２６または配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む、請求項１～９、１７～１９、２１～３１、及び５６のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項62】

（ｉ）配列番号３０のアミノ酸１～４４９または配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸１～２２６または配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む、請求項１～９、１７～１９、２１～３１、３４、及び５７のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項63】

（ｉ）配列番号３１のアミノ酸１～４４９または配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４２のアミノ酸１～２２６または配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む、請求項１～９、１７～１９、２１～３１、３５、及び５８のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項64】

（ｉ）配列番号３２のアミノ酸１～４４６または配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４３のアミノ酸１～２２８または配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む、請求項１～９、１７、１８、２０～３１、及び５９のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項65】

（ｉ）配列番号３３のアミノ酸１～４４６または配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４４のアミノ酸１～２２８または配列番号４４のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む、請求項１～９、１７、１８、２０～３１、３３及び６０のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項66】

（ｉ）配列番号３４のアミノ酸１～４４８または配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４０のアミノ酸１～２２６または配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む、請求項１、２、１０～１９、２１～３１、及び５６のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項67】

（ｉ）配列番号３５のアミノ酸１～４４８または配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸１～２２６または配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む、請求項１、２、１０～１９、２１～３１、３４、及び５７のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項68】

（ｉ）配列番号３６のアミノ酸１～４４８または配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４２のアミノ酸１～２２６または配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む、請求項１、２、１０～１９、２１～３１、３５、及び５８のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項69】

（ｉ）配列番号３７のアミノ酸１～４４５または配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４３のアミノ酸１～２２８または配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む、請求項１、２、１０～１８、２０～３１、及び５９のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項70】

（ｉ）配列番号３８のアミノ酸１～４４５または配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４４のアミノ酸１～２２８または配列番号４４のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む、請求項１、２、１０～１８、２０～３１、３３、及び６０のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項71】

蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）によって測定した場合に１００ｎＭ以下のＫｄでＭ２ｃ分化型ヒトマクロファージに結合する、請求項１～７０のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項72】

ＦＡＣＳによって測定した場合に１０ｎＭ以下のＫｄでＭ２ｃ分化型ヒトマクロファージに結合する、請求項７１に記載の抗体。

【請求項73】

ＦＡＣＳによって測定した場合に５０ｎＭ以下のＫｄで、ヒトＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ｈｕＭｅｒＴＫ ＯＥ）に結合する、請求項１～７２のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項74】

ＦＡＣＳによって測定した場合に１０ｎＭ以下のＫｄでＣＨＯ－ｈｕＭｅｒＴＫ ＯＥに結合する、請求項７３に記載の抗体。

【請求項75】

食細胞によるエフェロサイトーシスを減少させる、請求項１～７４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項76】

５０ｎＭ以下のＩＣ５０値でエフェロサイトーシスを減少させる、請求項７５に記載の抗体。

【請求項77】

約０．１３ｎＭ～約３０ｎＭのＩＣ５０値でエフェロサイトーシスを減少させる、請求項７５に記載の抗体。

【請求項78】

約４ｎＭ～約３７ｎＭのＩＣ５０値でエフェロサイトーシスを減少させる、請求項７５に記載の抗体。

【請求項79】

５ｎＭ以下のＩＣ５０値でエフェロサイトーシスを減少させる、請求項７５に記載の抗体。

【請求項80】

前記食細胞が、マクロファージ、腫瘍関連マクロファージ、または樹状細胞である、請求項７５～７９のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項81】

前記食細胞がマクロファージである、請求項８０に記載の抗体。

【請求項82】

Ｇａｓ６の存在下でｐＡＫＴ活性を阻害する、請求項１～８１のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項83】

１００ｎＭ以下のＫｄで、任意で約５０ｎＭのＫｄでヒトＭｅｒＴＫに結合する、請求項１～８２のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項84】

５ｎＭ以下のＫｄで、任意で約２ｎＭのＫｄでヒトＭｅｒＴＫに結合する、請求項１～８３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項85】

カニクイザルＭｅｒＴＫに結合する、請求項１～８４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項86】

１００ｎＭ以下のＫｄで、任意で約６０ｎＭのＫｄでカニクイザルＭｅｒＴＫに結合する、請求項８５に記載の抗体。

【請求項87】

５ｎＭ以下のＫｄで、任意で約３ｎＭのＫｄでカニクイザルＭｅｒＴＫに結合する、請求項８５に記載の抗体。

【請求項88】

マウスＭｅｒＴＫに結合する、請求項１～８７のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項89】

５０ｎＭ以下のＫｄで、任意で約４０ｎＭのＫｄでマウスＭｅｒＴＫに結合する、請求項８８に記載の抗体。

【請求項90】

マウスＭｅｒＴＫに結合しない、請求項１～８７のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項91】

ＭｅｒＴＫへのＰｒｏＳの結合を減少させる、請求項１～９０のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項92】

ＭｅｒＴＫへのＧａｓ６の結合を減少させる、請求項１～９１のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項93】

ＭｅｒＴＫへのＰｒｏＳの結合を減少させ、かつＭｅｒＴＫへのＧａｓ６の結合を減少させる、請求項１～９２のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項94】

マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、モノクローナル抗体、コンジュゲートされた抗体、またはキメラ抗体である、請求項１～９３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項95】

請求項１～９４のいずれか１項に記載の抗体のヒト化形態。

【請求項96】

組換え抗体である、請求項１～９５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項97】

単離抗体である、請求項１～９６のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項98】

請求項１～９７のいずれか１項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む、単離核酸。

【請求項99】

請求項９８に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項100】

請求項９８に記載の核酸または請求項９９に記載のベクターを含む、単離宿主細胞。

【請求項101】

（ｉ）請求項１～９７のいずれか１項に記載の抗体のＶＨをコードする核酸配列を含む核酸、及び（ｉｉ）前記抗ＭｅｒＴＫ抗体のＶＬをコードする核酸配列を含む核酸を含む、単離宿主細胞。

【請求項102】

（ｉ）請求項１～９７のいずれか１項に記載の抗体の重鎖をコードする核酸配列を含む核酸、及び（ｉｉ）前記抗ＭｅｒＴＫ抗体の軽鎖をコードする核酸配列を含む核酸を含む、単離宿主細胞。

【請求項103】

重鎖断片をコードする核酸配列を含む核酸をさらに含み、前記重鎖断片が可変重鎖ドメインを含まない、請求項１０２に記載の単離宿主細胞。

【請求項104】

前記重鎖断片がＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、任意で、前記第２の重鎖またはその断片がヒンジドメインをさらに含む、請求項１０３に記載の単離宿主細胞。

【請求項105】

ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗体を産生する方法であって、前記抗体が産生されるように請求項１００～１０４のいずれか１項に記載の細胞を培養することを含む、前記方法。

【請求項106】

前記細胞によって産生された前記抗体を回収することをさらに含む、請求項１０５に記載の方法。

【請求項107】

請求項１０５または１０６に記載の方法により産生される抗体。

【請求項108】

請求項１～９７及び１０７のいずれか１項に記載の抗体と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。

【請求項109】

抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、または抗ＰＤ－１抗体をさらに含む、請求項１０８に記載の医薬組成物。

【請求項110】

抗ＰＤ－Ｌ１抗体をさらに含む、請求項１０８に記載の医薬組成物。

【請求項111】

前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体がアテゾリズマブである、請求項１１０に記載の医薬組成物。

【請求項112】

個体におけるがんを治療する方法であって、前記個体に、治療有効量の請求項１～９７及び１０７のいずれか１項に記載の抗体または請求項１０８～１１１のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項113】

前記がんが、結腸癌、卵巣癌、肝臓癌、または子宮体癌である、請求項１１２に記載の方法。

【請求項114】

前記投与が前記個体において網膜病理を引き起こさない、請求項１１２または１１３に記載の方法。

【請求項115】

抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、または抗ＰＤ－１抗体を前記個体に投与することをさらに含む、請求項１１２～１１４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項116】

前記個体に抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与することをさらに含む、請求項１１２～１１４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項117】

前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体がアテゾリズマブである、請求項１１６に記載の方法。

【請求項118】

試料中のＭｅｒＴＫを検出するための方法であって、前記試料を請求項１～９７及び１０７のいずれか１項に記載の抗体と接触させることを含む、前記方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年６月１６日出願の米国仮特許出願第６３／２１１，３２３号、及び同第６３／３６５，８１５号の優先権の利益を主張するものであり、それぞれの出願の全容を本明細書に参照によって援用するものである。

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルによる配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物、すなわち、配列表のコンピュータ可読形態（ＣＲＦ）（ファイル名：４５０３＿０１９ＰＣ０２＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ１３４，１８３：作成日：２０２２年６月１５日）の全容を参照によって本明細書に援用する。

【0003】

本開示の分野
本開示は、一価の抗ＭｅｒＴＫ抗体及びかかる抗体の使用（治療的使用）に関する。

【背景技術】

【0004】

Ｍｅｒチロシンキナーゼ（ＭｅｒＴＫ）は、受容体チロシンキナーゼのＴＡＭ（Ｔｙｒｏ３、Ａｘｌ、及びＭｅｒＴＫ）ファミリーに属する。ＭｅｒＴＫは、２つの免疫グロブリン（Ｉｇ）様モチーフと２つのフィブロネクチン（ＦＮ）ＩＩＩ型モチーフを有する細胞外ドメインを備えたシングルパスタイプ１膜貫通タンパク質である（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ，２０１４，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，１４：７６９－７８５（非特許文献1）、Ｒｏｔｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３３：３５５－３９１（非特許文献2））。

【0005】

ＭｅｒＴＫのいくつかのリガンドが同定されており、プロテインＳ（ＰｒｏＳまたはＰｒｏＳ１）、成長停止特異的遺伝子６（Ｇａｓ６）、Ｔｕｂｂｙ、Ｔｕｂｂｙ様タンパク質１（ＴＵＬＰ－１）、及びガレクチン－３が含まれる。ＭｅｒＴＫは、リガンド結合後の活性化を介して細胞外空間からシグナルを伝達し、ＭｅｒＴＫチロシン自己リン酸化（Ｃｕｍｍｉｎｇｓ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９：５２７５－５２８０（非特許文献3）、Ｖｅｒｍａ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ，１０：１７６３－１７７３（非特許文献4））及びその後のＥＲＫ及びＡＫＴ関連シグナル伝達を引き起こす。

【0006】

ＭｅｒＴＫは、細胞の生存、遊走、分化などのさまざまな生理学的プロセスを制御している。ＭｅｒＴＫのリガンドであるＰｒｏＳ及びＧａｓ６は、細胞の生存、浸潤、遊走、化学抵抗性、転移などのいくつかの発がんプロセスに寄与しており、その発現はしばしば臨床転帰の不良との相関が見られる。さらに、ＭｅｒＴＫは多くのがんに関与しており、ＭｅｒＴＫまたはＰｒｏＳ欠損は抗腫瘍効果と関連している（Ｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，１２３：３２３１－３２４２（非特許文献5）、Ｕｂｉｌ ｅｔ ａｌ，２０１８，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，１２８：２３５６－２３６９（非特許文献6）、Ｈｕｅｙ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｃａｎｃｅｒｓ，８：１０１（非特許文献7））。しかし、ＭｅｒＴＫは網膜色素上皮細胞にも発現しており、眼の脱落した光受容体外節を除去するのに重要な役割を果たす。ＭｅｒＴＫの機能喪失型変異は、網膜色素変性症及びその他の網膜ジストロフィーを引き起こす（例えば、Ａｌ－ｋｈｅｒｓａｎ ｅｔ ａｌ，Ｇｒａｅｆｅｓ Ａｒｃｈ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，２０１７，２５５：１６１３－１６１９（非特許文献8）、Ｌｏｒａｃｈ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１８，８：１１３１２（非特許文献9）、Ａｕｄｏ ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，２０１８，３９：９９７－９１３（非特許文献10）、ＬａＶａｉｌ ｅｔ ａｌ，Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ，２０１６，８５４：４８７－４９３（非特許文献11）を参照）。

【0007】

ＭｅｒＴＫは、食細胞によるアポトーシス細胞の貪食（エフェロサイトーシス）において重要な役割を果たし、Ｍ２様マクロファージ極性化、抗炎症性サイトカインの産生、免疫抑制性腫瘍微小環境の促進を引き起こす。食細胞によるエフェロサイトーシスが減少すると、Ｍ１様マクロファージの極性化が増加し、炎症誘発性サイトカインの産生及び免疫活性環境がもたらされる。エフェロサイトーシスを調節することによって、抗腫瘍活性の効果的な手段を提供することができる。

【0008】

抗ＭｅｒＴＫ抗体については、これまでに例えば、国際特許出願公開ＷＯ２０２０／２１４９９５（特許文献1）、ＷＯ２０２０／０７６７９９（特許文献2）、ＷＯ２０２０／１０６４６１（特許文献3）、ＷＯ２０２０／１７６４９７（特許文献4）、ＷＯ２０１９／０８４３０７（特許文献5）、ＷＯ２０１９／００５７５６（特許文献6）、ＷＯ２０１６／１０６２２１（特許文献7）、ＷＯ２０１６／００１８３０（特許文献8）、ＷＯ２００９／０６２１１２（特許文献9）、及びＷＯ２００６／０５８２０２（特許文献10）、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０６４６４０号（ＷＯ２０２１／１１９５０８）（特許文献11）、ならびに例えば、Ｄａｙｏｕｂ ａｎｄ Ｂｒｅｋｋｅｎ，２０２０，Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，１８：２９（非特許文献12）、Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ，２０２０，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，５２：１－１７（非特許文献13）、Ｋｅｄａｇｅ ｅｔ ａｌ，２０２０，ＭＡＢＳ，１２：ｅ１６８５８３２（非特許文献14）、Ｃｕｍｍｉｎｇｓ ｅｔ ａｌ，２０１４，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，５：１０４３４－１０４４５（非特許文献15）に記載されている。

【0009】

しかしながら、がんなどの状態の治療に有効なアゴニスト活性を有する新規な治療用抗ＭｅｒＴＫ抗体が必要とされている。

【0010】

特許出願及び公開公報を含む本明細書で引用するすべての参考文献は、参照によって本明細書にそれらの全容を援用するものとする。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0011】

【特許文献1】ＷＯ２０２０／２１４９９５

【特許文献2】ＷＯ２０２０／０７６７９９

【特許文献3】ＷＯ２０２０／１０６４６１

【特許文献4】ＷＯ２０２０／１７６４９７

【特許文献5】ＷＯ２０１９／０８４３０７

【特許文献6】ＷＯ２０１９／００５７５６

【特許文献7】ＷＯ２０１６／１０６２２１

【特許文献8】ＷＯ２０１６／００１８３０

【特許文献9】ＷＯ２００９／０６２１１２

【特許文献10】ＷＯ２００６／０５８２０２

【特許文献11】第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０６４６４０号（ＷＯ２０２１／１１９５０８）

【非特許文献】

【0012】

【非特許文献1】Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ，２０１４，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，１４：７６９－７８５

【非特許文献2】Ｒｏｔｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３３：３５５－３９１

【非特許文献3】Ｃｕｍｍｉｎｇｓ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９：５２７５－５２８０

【非特許文献4】Ｖｅｒｍａ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ，１０：１７６３－１７７３

【非特許文献5】Ｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，１２３：３２３１－３２４２

【非特許文献6】Ｕｂｉｌ ｅｔ ａｌ，２０１８，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，１２８：２３５６－２３６９

【非特許文献7】Ｈｕｅｙ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｃａｎｃｅｒｓ，８：１０１

【非特許文献8】Ａｌ－ｋｈｅｒｓａｎ ｅｔ ａｌ，Ｇｒａｅｆｅｓ Ａｒｃｈ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，２０１７，２５５：１６１３－１６１９

【非特許文献9】Ｌｏｒａｃｈ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１８，８：１１３１２

【非特許文献10】Ａｕｄｏ ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，２０１８，３９：９９７－９１３

【非特許文献11】ＬａＶａｉｌ ｅｔ ａｌ，Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ，２０１６，８５４：４８７－４９３

【非特許文献12】Ｄａｙｏｕｂ ａｎｄ Ｂｒｅｋｋｅｎ，２０２０，Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，１８：２９

【非特許文献13】Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ，２０２０，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，５２：１－１７

【非特許文献14】Ｋｅｄａｇｅ ｅｔ ａｌ，２０２０，ＭＡＢＳ，１２：ｅ１６８５８３２

【非特許文献15】Ｃｕｍｍｉｎｇｓ ｅｔ ａｌ，２０１４，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，５：１０４３４－１０４４５

【発明の概要】

【0013】

二価抗体は、一部において、抗体が細胞表面上で結合する標的受容体の架橋を誘導することによってアゴニスト作用を示し、受容体の活性化を引き起こすことができるが、これは、望ましい治療活性が、少なくとも一部、アンタゴニスト作用によるものである場合には、しばしば望ましくない現象である。ＦａｂまたはｓｃＦｖフラグメントなどの一価形態のアンタゴニスト抗体にはアゴニスト活性がなく、架橋及びその後の活性化を誘導することなく細胞受容体に結合する有用な治療薬となる可能性があるが、その治療用途は短いインビボ半減期のために制限されている。したがって、完全な重鎖と完全な軽鎖を含む一価抗体は、アンタゴニスト作用を有し、それらの対応するＦａｂ及びｓｃＦｖ形態と比較してより長いインビボ半減期を有する一価抗体を与えることができる。

【0014】

本開示は、抗腫瘍免疫を媒介する作用を有する一価抗ＭｅｒＴＫ抗体を提供することにより、がんなどの状態の治療に有効なアゴニスト活性を有する新規な治療用抗ＭｅｒＴＫ抗体に対するニーズを満たすものである。

【0015】

本明細書に記載されるさまざまな実施形態の特性の１つ、一部、またはすべてを組み合わせることで本開示の他の実施形態を形成し得る点は理解されよう。本開示のこれら及び他の態様は、当業者には明らかとなろう。本開示のこれら及び他の実施形態を、以下の発明を実施するための形態によってさらに説明する。

【0016】

いくつかの実施形態では、本明細書において、ヒトＭｅｒチロシンキナーゼ（ＭｅｒＴＫ）に結合する抗体であって、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメイン１つ以下を含む抗体が提供される。

【0017】

いくつかの態様では、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、ＭｅｒＴＫタンパク質のＩｇ１ドメインに結合する。

【0018】

いくつかの態様では、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重鎖と配列番号１０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖とを含む抗体のヒトＭｅｒＴＫへの結合を競合的に阻害する。

【0019】

いくつかの態様では、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重鎖と配列番号１０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖とを含む抗体と同じ、ヒトＭｅｒＴＫのエピトープに結合する。

【0020】

いくつかの態様では、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号９のアミノ酸３１～３５を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号９のアミノ酸５０～６６を含むＨＶＲ－Ｈ２、配列番号９のアミノ酸９９～１０９を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１０のアミノ酸２４～３４を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１０のアミノ酸５０～５６を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号１０のアミノ酸８９～９７を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。

【0021】

いくつかの態様では、抗体は、１６．２抗体のＨＶＲを含み、任意で、ＨＶＲは、Ｋａｂａｔの定義によるＨＶＲ、Ｃｈｏｔｈｉａの定義によるＨＶＲ、ＡｂＭの定義によるＨＶＲ、またはｃｏｎｔａｃｔの定義によるＨＶＲである。

【0022】

いくつかの態様では、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。

【0023】

いくつかの態様では、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0024】

いくつかの態様では、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び／または配列番号１０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0025】

いくつかの態様では、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む可変重鎖と配列番号１４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖とを含む抗体のヒトＭｅｒＴＫへの結合を競合的に阻害する。

【0026】

いくつかの態様では、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む可変重鎖と配列番号１４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖とを含む抗体と同じ、ヒトＭｅｒＴＫのエピトープに結合する。

【0027】

いくつかの態様では、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号１３のアミノ酸３１～３５を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸５０～６６を含むＨＶＲ－Ｈ２、配列番号１３のアミノ酸９９～１０８を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１４のアミノ酸２４～３４を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１４のアミノ酸５０～５６を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸８９～９７を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。

【0028】

いくつかの態様では、抗体は、１３．１１抗体のＨＶＲを含み、任意で、ＨＶＲは、Ｋａｂａｔの定義によるＨＶＲ、Ｃｈｏｔｈｉａの定義によるＨＶＲ、ＡｂＭの定義によるＨＶＲ、またはｃｏｎｔａｃｔの定義によるＨＶＲである。

【0029】

いくつかの態様では、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖を含む。

【0030】

いくつかの態様では、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0031】

いくつかの態様では、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び／または配列番号１４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。

【0032】

いくつかの態様では、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。

【0033】

いくつかの態様では、抗体はＩｇＧクラスのものであり、任意で抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。

【0034】

いくつかの態様では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。

【0035】

いくつかの態様では、抗体は、ＩｇＧ４抗体である。

【0036】

いくつかの態様では、抗体は、（ａ）ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインを一緒に形成する、第１の重鎖またはその断片及び第１の軽鎖またはその断片と、（ｂ）ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインを形成しない、第２の重鎖またはその断片及び／あるいは第２の軽鎖またはその断片とを含む。

【0037】

いくつかの態様では、第２の重鎖またはその断片は、可変重鎖を含まない。

【0038】

いくつかの態様では、第２の軽鎖またはその断片は、可変軽鎖を含まない。

【0039】

いくつかの態様では、抗体は、第２の軽鎖またはその断片を含まない。

【0040】

いくつかの態様では、第２の重鎖またはその断片はＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、任意で、第２の重鎖またはその断片はヒンジドメインをさらに含む。

【0041】

いくつかの態様では、抗体は、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを含むＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、第１のポリペプチドはアミノ酸置換Ｔ３６６Ｙを含み、第２のポリペプチドはアミノ酸置換Ｙ４０７Ｔを含む。いくつかの態様では、第１のポリペプチドはアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含み、第２のポリペプチドはアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｗ、及びＹ４０７Ｖを含む。いくつかの態様では、第１のポリペプチドはアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含み、第２のポリペプチドはアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。いくつかの態様では、第１のポリペプチドはアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ、及びＳ３５４Ｃを含み、第２のポリペプチドはアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃを含む。いくつかの態様では、第１のポリペプチドはアミノ酸置換Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖを含み、第２のポリペプチドはアミノ酸置換Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、及びＴ３９４Ｗを含む。いくつかの態様では、第１のポリペプチドはアミノ酸置換Ｋ３６０Ｄ、Ｄ３９９Ｍ、及びＹ４０７Ａを含み、第２のポリペプチドはアミノ酸置換Ｅ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｖ、及びＫ４０９Ｖを含む。いくつかの態様では、第１のポリペプチドはアミノ酸置換Ｋ４０９Ｄ及びＫ３９２Ｄを含み、第２のポリペプチドはアミノ酸置換Ｄ３９９Ｋ及びＥ３５６Ｋを含む。いくつかの態様では、第１のポリペプチドはアミノ酸置換Ｋ３６０Ｅ及びＫ４０９Ｗを含み、第２のポリペプチドはアミノ酸置換Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ及びＦ４０５Ｔを含む。いくつかの態様では、第１のポリペプチドはアミノ酸置換Ｌ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗ、及びＹ３４９Ｃを含み、第２のポリペプチドはアミノ酸置換Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔ、及びＳ３５４Ｃを含む。いくつかの態様では、第１のポリペプチドはアミノ酸置換Ｋ３７０Ｅ及びＫ４０９Ｗを含み、第２のポリペプチドはアミノ酸置換Ｅ３５７Ｎ、Ｄ３９９Ｖ及びＦ４０５Ｔを含む。いくつかの態様では、置換はＥＵ番号付けに従う。

【0042】

いくつかの態様では、抗体はノブ変異及びホール変異を含む。いくつかの態様では、ノブ変異は、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含む。いくつかの態様では、ホール変異は、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。

【0043】

いくつかの態様では、抗体は、ヘテロ二量体化を促進するアミノ酸置換、付加、または欠失を含むＦｃ領域を含む。

【0044】

いくつかの態様では、抗体は、１つ以下の軽鎖またはその断片を含む。

【0045】

いくつかの態様では、抗体は、１つ以下の、ＩｇＧの単一の重鎖またはその断片とＩｇＧの単一の軽鎖またはその断片とを含む。

【0046】

いくつかの態様では、抗体は、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含む。

【0047】

いくつかの態様では、抗体は、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓ（ＬＡＬＡＰＳ）を含む。

【0048】

いくつかの態様では、抗体は、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）を含む。

【0049】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号１７のアミノ酸１～４４９または配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0050】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号１８のアミノ酸１～４４９または配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0051】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号１９のアミノ酸１～４４９または配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0052】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号２０のアミノ酸１～４４６または配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0053】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号２９のアミノ酸１～４５３または配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0054】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号３０のアミノ酸１～４４９または配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0055】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号３１のアミノ酸１～４４９または配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0056】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号３２のアミノ酸１～４４６または配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0057】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸１～４４７または配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0058】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0059】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号２２のアミノ酸１～４４８または配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0060】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号２３のアミノ酸１～４４８または配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0061】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号２４のアミノ酸１～４４８または配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0062】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号２５のアミノ酸１～４４５または配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0063】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号３４のアミノ酸１～４４８または配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0064】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号３５のアミノ酸１～４４８または配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0065】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号３６のアミノ酸１～４４８または配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0066】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号３７のアミノ酸１～４４５または配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0067】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号３８のアミノ酸１～４４５または配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0068】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0069】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号４０のアミノ酸１～２２６または配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。

【0070】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号４１のアミノ酸１～２２６または配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。

【0071】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号４２のアミノ酸１～２２６または配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。

【0072】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号４３のアミノ酸１～２２８または配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。

【0073】

いくつかの態様では、抗体は、配列番号４４のアミノ酸１～２２８または配列番号４４のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。

【0074】

いくつかの態様では、抗体は、（ｉ）配列番号２９のアミノ酸１～４５３または配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４０のアミノ酸１～２２６または配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む。

【0075】

いくつかの態様では、抗体は、（ｉ）配列番号３０のアミノ酸１～４４９または配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸１～２２６または配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む。

【0076】

いくつかの態様では、抗体は、（ｉ）配列番号３１のアミノ酸１～４４９または配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４２のアミノ酸１～２２６または配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む。

【0077】

いくつかの態様では、抗体は、（ｉ）配列番号３２のアミノ酸１～４４６または配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４３のアミノ酸１～２２８または配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む。

【0078】

いくつかの態様では、抗体は、（ｉ）配列番号３３のアミノ酸１～４４６または配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４４のアミノ酸１～２２８または配列番号４４のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む。

【0079】

いくつかの態様では、抗体は、（ｉ）配列番号３４のアミノ酸１～４４８または配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４０のアミノ酸１～２２６または配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む。

【0080】

いくつかの態様では、抗体は、（ｉ）配列番号３５のアミノ酸１～４４８または配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸１～２２６または配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む。

【0081】

いくつかの態様では、抗体は、（ｉ）配列番号３６のアミノ酸１～４４８または配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４２のアミノ酸１～２２６または配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む。

【0082】

いくつかの態様では、抗体は、（ｉ）配列番号３７のアミノ酸１～４４５または配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４３のアミノ酸１～２２８または配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む。

【0083】

いくつかの態様では、抗体は、（ｉ）配列番号３８のアミノ酸１～４４５または配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、（ｉｉｉ）配列番号４４のアミノ酸１～２２８または配列番号４４のアミノ酸配列を含む重鎖の断片とを含む。

【0084】

いくつかの態様では、抗体は、蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）によって測定した場合に１００ｎＭ以下のＫｄでＭ２ｃ分化型ヒトマクロファージに結合する。

【0085】

いくつかの態様では、抗体は、ＦＡＣＳによって測定した場合に１０ｎＭ以下のＫｄでＭ２ｃ分化型ヒトマクロファージに結合する。

【0086】

いくつかの態様では、抗体は、ＦＡＣＳによって測定した場合に５０ｎＭ以下のＫｄで、ヒトＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ｈｕＭｅｒＴＫ ＯＥ）に結合する。

【0087】

いくつかの態様では、抗体は、ＦＡＣＳによって測定した場合に１０ｎＭ以下のＫｄでＣＨＯ－ｈｕＭｅｒＴＫ ＯＥに結合する。

【0088】

いくつかの態様では、抗体は、食細胞によるエフェロサイトーシスを減少させる。

【0089】

いくつかの態様では、抗体は、５０ｎＭ以下のＩＣ５０値でエフェロサイトーシスを減少させる。

【0090】

いくつかの態様では、抗体は、約０．１３ｎＭ～約３０ｎＭのＩＣ５０値でエフェロサイトーシスを減少させる。

【0091】

いくつかの態様では、抗体は、約４ｎＭ～約３７ｎＭのＩＣ５０値でエフェロサイトーシスを減少させる。

【0092】

いくつかの態様では、抗体は、５ｎＭ以下のＩＣ５０値でエフェロサイトーシスを減少させる。

【0093】

いくつかの態様では、食細胞は、マクロファージ、腫瘍関連マクロファージ、または樹状細胞である。

【0094】

いくつかの態様では、食細胞はマクロファージである。

【0095】

いくつかの態様では、抗体は、Ｇａｓ６の存在下でｐＡＫＴ活性を阻害する。

【0096】

いくつかの態様では、抗体は、１００ｎＭ以下のＫｄで、任意で約５０ｎＭのＫｄでヒトＭｅｒＴＫに結合する。

【0097】

いくつかの態様では、抗体は、５ｎＭ以下のＫｄで、任意で約２ｎＭのＫｄでヒトＭｅｒＴＫに結合する。

【0098】

いくつかの態様では、抗体はカニクイザルＭｅｒＴＫに結合する。

【0099】

いくつかの態様では、抗体は、１００ｎＭ以下のＫｄで、任意で約６０ｎＭのＫｄでカニクイザルＭｅｒＴＫに結合する。

【0100】

いくつかの態様では、抗体は、５ｎＭ以下のＫｄで、任意で約３ｎＭのＫｄでカニクイザルＭｅｒＴＫに結合する。

【0101】

いくつかの態様では、抗体はマウスＭｅｒＴＫに結合する。

【0102】

いくつかの態様では、抗体は、５０ｎＭ以下のＫｄで、任意で約４０ｎＭのＫｄでマウスＭｅｒＴＫに結合する。

【0103】

いくつかの態様では、抗体はマウスＭｅｒＴＫに結合しない。

【0104】

いくつかの態様では、抗体は、ＭｅｒＴＫへのＰｒｏＳの結合を減少させる。

【0105】

いくつかの態様では、抗体は、ＭｅｒＴＫへのＧａｓ６の結合を減少させる。

【0106】

いくつかの態様では、抗体は、ＭｅｒＴＫへのＰｒｏＳの結合を減少させ、かつＭｅｒＴＫへのＧａｓ６の結合を減少させる。

【0107】

いくつかの実施形態では、抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、モノクローナル抗体、コンジュゲートされた抗体、またはキメラ抗体である。

【0108】

いくつかの態様では、抗体は、本明細書に記載の抗体のヒト化形態である。

【0109】

いくつかの態様では、抗体は組換え抗体である。

【0110】

いくつかの態様では、抗体は、単離抗体である。

【0111】

いくつかの態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸が提供される。いくつかの態様では、本明細書において、核酸を含むベクターが提供される。いくつかの態様では、本明細書において、核酸またはベクターを含む単離宿主細胞が提供される。

【0112】

いくつかの態様では、単離宿主細胞は、（ｉ）本明細書に記載される抗体のいずれかのＶＨをコードする核酸配列を含む核酸、及び（ｉｉ）抗ＭｅｒＴＫ抗体のＶＬをコードする核酸配列を含む核酸を含む。

【0113】

いくつかの態様では、単離宿主細胞は、（ｉ）本明細書に記載される抗体のいずれかの抗体の重鎖をコードする核酸配列を含む核酸、及び（ｉｉ）抗ＭｅｒＴＫ抗体の軽鎖をコードする核酸配列を含む核酸を含む。

【0114】

いくつかの態様では、単離宿主細胞は、重鎖断片をコードする核酸配列を含む核酸をさらに含み、重鎖断片は可変重鎖ドメインを含まない。いくつかの態様では、重鎖断片はＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、任意で、第２の重鎖またはその断片はヒンジドメインをさらに含む。

【0115】

いくつかの態様では、本明細書において、ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗体を産生する方法であって、抗体が産生されるように本明細書に記載される細胞のいずれかを培養することを含む、方法が提供される。いくつかの態様では、方法は、細胞によって産生された抗体を回収することをさらに含む。

【0116】

いくつかの態様では、本明細書において、本明細書に記載の方法によって産生される抗体が提供される。

【0117】

いくつかの態様では、本明細書において、本明細書に記載される抗体と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物が提供される。いくつかの態様では、医薬組成物は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、または抗ＰＤ－１抗体をさらに含む。

【0118】

いくつかの態様では、医薬組成物は抗ＰＤ－Ｌ１抗体をさらに含む。いくつかの態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はアテゾリズマブである。

【0119】

いくつかの態様では、本明細書において、個体のがんを治療する方法であって、治療有効量の本明細書に記載の抗体のいずれかまたは本明細書に記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの態様では、がんは、結腸癌、卵巣癌、肝臓癌、または子宮体癌である。いくつかの態様では、投与は個体において網膜病理を引き起こさない。

【0120】

いくつかの態様では、方法は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、または抗ＰＤ－１抗体を個体に投与することをさらに含む。いくつかの態様では、方法は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を個体に投与することをさらに含む。いくつかの態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はアテゾリズマブである。

【0121】

いくつかの態様では、本明細書において、試料中のＭｅｒＴＫを検出する方法であって、前記試料を本明細書に記載の抗ＭｅｒＴＫ抗体のいずれかと接触させることを含む方法が提供される。

【図面の簡単な説明】

【0122】

【図1】本開示の二価及び一価抗体の各形態を示す。

【図2】図２Ａ及び図２Ｂは、本開示の一価（モノアーム）抗ＭｅｒＴＫ抗体のさまざまな細胞タイプへの結合を示すデータを示す。

【図3】本開示の二価（完全ＩｇＧ）抗ＭｅｒＴＫ抗体及び一価（モノアーム）抗ＭｅｒＴＫ抗体による、食細胞によるエフェロサイトーシスの減少を示すデータを示す。

【図4】本開示の二価（完全ＩｇＧ）抗ＭｅｒＴＫ抗体及び一価（モノアーム）抗ＭｅｒＴＫ抗体のいずれかで処理した細胞におけるｐＡＫＴ／ｔＡＫＴレベルを示すデータを示す。

【図5】ＭｅｒＴＫリガンドｈｕＧａｓ６の非存在下で本開示のさまざまな二価抗ＭｅｒＴＫ抗体または一価（モノアーム）抗ＭｅｒＴＫ抗体で処理した細胞におけるｐＡＫＴ活性の倍率変化を示すデータを示す。

【図6】二価抗ＰＤＬ１抗体と二価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２または抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１のいずれかとの組み合わせで処理した動物で観察された腫瘍体積と比較した、二価抗ＰＤＬ１抗体で処理した動物におけるインビボ腫瘍体積の減少を示すデータを示す。

【図7】二価抗ＰＤＬ１抗体と一価（モノアーム）抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１との組み合わせで処理した動物で観察された腫瘍体積と比較した、二価抗ＰＤＬ１抗体で処理した動物におけるインビボ腫瘍体積の減少を示すデータを示す。

【図8A】コントロール抗体を投与した個々のマウスにおける腫瘍体積の変化を示すデータを示す。

【図8B】二価抗ＰＤＬ１抗体を投与した個々のマウスにおける腫瘍体積の変化を示すデータを示す。

【図8C】二価抗ＰＤＬ１抗体と一価（モノアーム）抗ＭｅｒＴＫ抗体３３．１１との組み合わせを投与した個々のマウスにおける腫瘍体積の変化を示すデータを示す。

【図9】抗ＰＤＬ１単独で、または一価（モノアーム）抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１との組み合わせで処理したマウスにおける腫瘍体積の変化を示すデータを示す。

【発明を実施するための形態】

【0123】

本開示の詳細な説明
本開示は、一価の抗ＭｅｒＴＫ抗体（例えば、モノクローナル抗体）、かかる抗体を製造及び使用する方法、かかる抗体を含む医薬組成物、かかる抗体をコードする核酸、ならびにかかる抗体をコードする核酸を含有する宿主細胞に関する。

【0124】

本明細書で記載または参照される技術及び手順は一般に当業者には十分に理解されているものであり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ３ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，（２００３）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）に記載される方法などの広く用いられている方法など、当業者によって従来の方法を用いて一般的に用いられているものである。

【0125】

Ｉ．定義
「ＭｅｒＴＫ」または「ＭｅｒＴＫポリペプチド」または「ＭｅｒＴＫタンパク質」とは、本明細書では互換的に用いられ、特に断らない限り、本明細書では、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ））及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＭｅｒＴＫを指す。ＭｅｒＴＫは、ｃ－ｍｅｒ、ＭＥＲ、がん原遺伝子ｃ－Ｍｅｒ、受容体チロシンキナーゼＭｅｒＴＫ、チロシンプロテインキナーゼＭｅｒ、ＳＴＫキナーゼ、ＲＰ３８、及びＭＧＣ１３３３４９とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、この用語は、野生型配列と天然に存在するバリアント配列、例えば、スプライスバリアントまたはアレルバリアントの両方を包含する。いくつかの実施形態では、この用語は、「完全長」のプロセシングされていないＭｅｒＴＫ、ならびに細胞内でのプロセシングから生じるＭｅｒＴＫの任意の形態を包含する。いくつかの実施形態では、ＭｅｒＴＫは、ヒトＭｅｒＴＫである。本明細書で使用する場合、「ヒトＭｅｒＴＫ」という用語は、配列番号１のアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。

【0126】

「抗ＭｅｒＴＫ抗体」、「ＭｅｒＴＫに結合する抗体」、及び「ＭｅｒＴＫに特異的に結合する抗体」という用語は、抗体がＭｅｒＴＫを標的化する際に診断薬及び／または治療薬として有用であるように、十分な親和性でＭｅｒＴＫに結合することができる抗体を指す。一実施形態において、無関係の非ＭｅｒＴＫポリペプチドへの抗ＭｅｒＴＫ抗体の結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定した場合に、ＭｅｒＴＫへのこの抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施形態では、ＭｅｒＴＫに結合する抗体は、＜１μΜ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または＜０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。特定の実施形態では、抗ＭｅｒＴＫ抗体は、異なる種由来のＭｅｒＴＫ間で保存されているＭｅｒＴＫのエピトープに結合する。

【0127】

抗体の標的分子への結合に関して、「特異的結合」または特定のポリペプチド標的上の特定のポリペプチドもしくはエピトープに「特異的に結合する」または「特異的である」という用語は、非特異的相互作用とは測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、分子の結合をコントロール分子の結合と比較して決定することによって測定され得る。例えば、特異的結合は、標的、例えば、過剰な非標識標的に類似したコントロール分子との競合によって決定され得る。この場合、標識された標的の、プローブへの結合が、過剰な非標識標的によって競合的に阻害される場合に、特異的結合が示される。特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープへの「特異的結合」またはそれ「に特異的に結合する」またはそれ「に特異的」であるという用語は、本明細書で使用される場合、例えば、標的に対するＫＤが、約１０^－４Ｍ以下、１０^－５Ｍ以下、１０^－６Ｍ以下、１０^－７Ｍ以下、１０^－８Ｍ以下、１０^－９Ｍ以下、１０^－１０Ｍ以下、１０^－１１Ｍ以下、１０^－１２Ｍ以下のいずれかであるか、またはＫＤが１０^－４Ｍ～１０^－６Ｍまたは１０^－６Ｍ～１０^－１０Ｍまたは１０^－７Ｍ～１０^－９Ｍの範囲である分子によって呈され得る。当業者によって認識されるように、親和性とＫＤ値とは反比例する。抗原の高い親和性は、低いＫＤ値によって測定される。一実施形態では、「特異的結合」という用語は、ある分子がいずれの他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープにも実質的に結合することなく特定のポリペプチド上の特定のポリペプチドまたはエピトープに結合する結合を指す。

【0128】

「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書において、「抗体」と同じ意味で使用される。本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクト抗体から形成されるものを含む多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗原結合抗体断片（ただし、所望の生物活性を呈する場合に限る）を特に包含する。

【0129】

「天然抗体」とは、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１つのジスルフィド共有結合によって重鎖に連結するが、ジスルフィド連結の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖及び軽鎖は、規則的な間隔を置いた鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を有し、これにいくつかの定常ドメインが続く。各軽鎖は、一方の端に可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を有し、その他方の端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖の可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの境界部を形成すると考えられている。

【0130】

異なる抗体クラスの構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ Ｅｄ．，Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（ｅｄｓ．），Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，ｐａｇｅ ７１ ａｎｄ Ｃｈａｐｔｅｒ ６を参照されたい。

【0131】

いずれの脊椎動物種由来の軽鎖も、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）とラムダ（「λ」）と呼ばれる２つの明確に異なる型のいずれかに割り当てることができる。重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの５つのクラスがあり、それぞれ、アルファ（「α」）、デルタ（「δ」）、イプシロン（「ε」）、ガンマ（「γ」）及びミュー（「μ」）と表記される重鎖を有する。γ及びαのクラスは、ＣＨ配列及び機能の相対的にわずかな相違に基づいて、サブクラス（アイソタイプ）にさらに分類され、例えば、ヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を発現する。異なる免疫グロブリンクラスのサブユニット構造及び三次元構成は既知であり、例えば、Ａｂｂａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４^ｔｈ ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，２０００）に一般的に記載されている。

【0132】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体などの抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「Ｖ_Ｈ」及び「Ｖ_Ｌ」と呼ぶことができる。これらのドメインは、一般に、抗体の最も可変性の高い部分であり（同じクラスの他の抗体と比べて）、抗原結合部位を含有する。

【0133】

「可変」という用語は、可変ドメインの特定のセグメントが、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体などの抗体間で配列が大幅に異なるという事実を指す。可変ドメインは、抗原結合を媒介し、その特定の抗原に対する、特定の抗体の特異性を定義する。しかしながら、可変性は、可変ドメインの全範囲にわたって均一に分布していない。むしろ、それは、軽鎖と重鎖との両方の可変ドメイン内にある超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのうちより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。野生型の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ４つのＦＲ領域を含み、これらは、主にβシートの構成をとり、３つのＨＶＲで接続され、ループを形成し、βシート構造を接続し、いくつかの場合ではその一部を形成する。各鎖中のＨＶＲは、ＦＲ領域によって極めて近接して一緒に保持され、他方の鎖からのＨＶＲと共に、その抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）参照）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体の抗体依存性細胞毒性への関与などのさまざまなエフェクター機能を呈する。

【0134】

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体集団から得られる抗体、例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫモノクローナル抗体を指す。すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る可能性のある天然に存在する変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除き、同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位を標的としている。通常、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが他の免疫グロブリンが混入していないハイブリドーマ培養によって合成されるという点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質な抗体の集団から得られたものであるという抗体の特性を示し、いずれかの特定の方法による抗体の産生を要するものとして理解されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、以下の方法、すなわち、１つ以上のＤＮＡ（複数可）、ウイルス様粒子、ポリペプチド（複数可）、及び／または細胞（複数可）によるラット、マウス、ウサギ、モルモット、ハムスター及び／またはニワトリを含む（ただし、これらに限定されない）動物の免疫化法、ハイブリドーマ法、Ｂ細胞クローニング法、組換えＤＮＡ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部または全部を有する動物でヒトまたはヒト様抗体を産生するための技術のうちの１つ以上を含む（ただし、これらに限定されない）さまざまな技術によって作製することができる。

【0135】

「完全長抗体」、「インタクト抗体」、または「全抗体」という用語は、抗体断片と異なり、実質的にインタクトな形態にある抗ＭｅｒＴＫ抗体などの抗体を指して互換的に使用される。具体的には、完全長抗体は、２本の軽鎖とＦｃ領域を含む２本の重鎖とを有するものを含む。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒトの天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。場合によっては、無傷の抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。

【0136】

「一価抗体」または「モノアーム抗体」という用語は、標的抗原に特異的な単一の抗原結合認識ドメインを有する抗体を指す（すなわち、抗体は１つ以下の抗原結合ドメインを含む）。いくつかの実施形態では、単一の抗原結合ドメインは、単一の可変領域重鎖ポリペプチドと単一の可変領域軽鎖ポリペプチドとを含む。標的に対して「一価」である抗体は、その標的に対する１つ以下の抗原結合ドメインを含む。

【0137】

「抗体断片」とは、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２及びＦｖ断片、ダイアボディ、線状抗体（米国特許第５６４１８７０号、実施例２、Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５）を参照）、一本鎖抗体分子、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。

【0138】

本明細書で使用する場合、「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、「抗原結合部位」という用語、及び同様の用語は、抗体分子に抗原に対するその特異性を与えるアミノ酸残基を含む抗体分子の部分（例えば、超可変領域（ＨＶＲ））を指す。

【0139】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体などの抗体のパパイン分解により、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一な抗原結合フラグメントと、容易に結晶化する能力を反映して表記される残りの「Ｆｃ」フラグメントとが得られる。Ｆａｂ断片は、軽鎖全体に加えて、重鎖の可変領域ドメイン（Ｖ_Ｈ）、及び１本の重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関しては一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、単一の大型Ｆ（ａｂ’）_２断片をもたらし、これは、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合したＦａｂ断片にほぼ対応し、依然として抗原を架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、Ｃ_Ｈ１ドメインのカルボキシ末端に、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む、いくつかのさらなる残基を有することにより、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書における表記である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片は、元々、その間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片のペアとして生成された。抗体フラグメントの他の化学的結合もまた既知である。

【0140】

Ｆｃ断片は、ジスルフィドによって互いに保持された２本の重鎖のカルボキシ末端部分両方を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域内の配列によって決定され、この領域はまた、ある特定の型の細胞上に見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される。

【0141】

抗体（例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体）の「機能性断片」は、インタクト抗体の部分を含み、概して、インタクト抗体の抗原結合領域もしくは可変領域、またはＦｃＲ結合能力を保持するか、改変されたＦｃＲ結合能力を有する抗体のＦｃ領域を含む。抗体断片の例としては、線形抗体、一本鎖抗体分子、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。

【0142】

「ダイアボディ」という用語は、鎖内ではなく鎖間の可変ドメイン対合が得られ、それによって二価断片、すなわち、２個の抗原結合部位を有する断片が得られるように、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間に短いリンカー（約５～１０個の残基）を用いてｓｃＦｖ断片を構築することによって作製された小さな抗体断片を指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在している、２つの「交差」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。

【0143】

本明細書で使用する場合、「キメラ抗体」とは、例えば、本開示のキメラ抗ＭｅｒＴＫ抗体などの抗体（免疫グロブリン）であって、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であり、かつ、その鎖（複数可）の残りが、別の種に由来する抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同である抗体、ならびにそのような抗体の断片（ただし、所望の生物活性を呈する場合に限る）を指す。本明細書中で対象とするキメラ抗体には、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体が含まれ、この場合、その抗体の抗原結合領域は、例えば、マカクザルに目的の抗原を免疫することによって産生される抗体に由来する。本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして用いられる。

【0144】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体のヒト化形態などの非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基とヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体である。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含むことになり、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト抗体のものに対応し、そのＦＲのすべてまたは実質的にすべてが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を指す。

【0145】

「ヒト抗体」は、ヒトによって産生された抗体（例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体）のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体、及び／または本明細書に開示されるヒト抗体を作製する技法のうちのいずれかを使用して作製された抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリー及び酵母ディスプレイライブラリーを含む、当該技術分野において既知のさまざまな技術を使用して作製することができる。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してそのような抗体を産生するように改変されているが、その内因性遺伝子座が不能化されているトランスジェニック動物、例えば免疫化ｘｅｎｏｍｏｕｓｅに抗原を投与することによって調製することができ、また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法により作製することができる。

【0146】

本明細書で使用する場合、「超可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」という用語は、配列が超可変性であり、及び／または構造的に定義されたループを形成する、抗体可変ドメインの領域（例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の抗体可変ドメインの領域）を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つがＶ_Ｈ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶ_Ｌ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。天然抗体では、Ｈ３及びＬ３は、６つのＨＶＲの中で最大の多様性を示し、特にＨ３は、抗体に好適な特異性を与えることにおいて固有の役割を果たすと考えられる。重鎖のみからなる天然に存在するラクダ抗体は、軽鎖がない状態で、機能的であり、安定している。

【0147】

多くのＨＶＲ描写が用いられており、これらは本明細書に包含される。いくつかの実施形態において、ＨＶＲは、配列可変性に基づくＫａｂａｔによる相補性決定領域（ＣＤＲ）であり得、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔら、前掲）。いくつかの実施形態において、ＨＶＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲであり得る。Ｃｈｏｔｈｉａは、むしろ、構造的ループの位置に言及するものである（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。いくつかの実施形態において、ＨＶＲは、ＡｂＭ ＨＶＲであり得る。ＡｂＭ ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループとの間の妥協案を示し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている。いくつかの実施形態において、ＨＶＲは、「ｃｏｎｔａｃｔ」ＨＶＲであり得る。「ｃｏｎｔａｃｔ」ＨＶＲは、使用可能な複合結晶構造の解析に基づく。これらのＨＶＲのそれぞれに由来する残基を以下に示す。

【0148】

ＨＶＲは、次の「伸長ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬ中、２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）及び８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、ならびにＶＨ中、２６～３５（Ｈ１）、５０～６５または４９～６５（好ましい実施形態）（Ｈ２）及び９３～１０２、９４～１０２または９５～１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの伸長ＨＶＲ定義の各々に対して、Ｋａｂａｔら（上掲）に従ってナンバリングされる。

【0149】

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

【0150】

本明細書で使用される「アクセプターヒトフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶ_ＬフレームワークまたはＶ_Ｈフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに「由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含み得るか、または既存のアミノ酸配列変化を含み得る。いくつかの実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、または２個以下である。既存のアミノ酸変化がＶＨに存在する場合、それらの好ましい変化が位置７１Ｈ、７３Ｈ及び７８Ｈのうちの３つ、２つ、または１つにのみ生じ、例えば、それらの位置のアミノ酸残基は、７１Ａ、７３Ｔ、及び／または７８Ａであり得る。一実施形態において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、Ｖ_Ｌヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。

【0151】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶ_ＬまたはＶ_Ｈフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を代表するフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンのＶ_Ｌ配列またはＶ_Ｈ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからなされる。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）におけるようなサブグループである。例として、Ｖ_Ｌに関するものを挙げると、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上掲）などのサブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩまたはカッパＩＶであり得る。さらに、Ｖ_Ｈについては、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上掲）などのサブグループＩ、サブグループＩＩまたはサブグループＩＩＩであり得る。

【0152】

指定位置における「アミノ酸改変」（例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体のアミノ酸改変）は、特定残基の置換もしくは欠失、または少なくとも１つのアミノ酸残基の特定残基に隣接する挿入を指す。特定残基に「隣接した」挿入とは、その１～２残基内の挿入を意味する。この挿入は、特定の残基に対しＮ末端側またはＣ末端側であり得る。本明細書における好ましいアミノ酸改変は、置換である。

【0153】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位及び抗原結合部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインが、非共有結合で緊密に結合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みにより、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、抗原結合特異性を抗体に与える、６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（あるいは、抗原に特異的なＨＶＲを３つのみを含むＦｖの半分）でさえも、親和性は結合部位全体の親和性よりも低いが、抗原を認識して結合する能力を有する。

【0154】

「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」と短縮されることもある「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖の状態に連結された、ＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む、抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、このリンカーにより、ｓＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することが可能となっている。

【0155】

抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に帰属する生物活性を指し、抗体のアイソタイプに応じてさまざまである。

【0156】

本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義して使用され、天然配列のＦｃ領域及び変異形Ｆｃ領域が含まれる。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０からそのカルボキシル末端まで広がると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ付番システムによる残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製中に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって除去され得る。したがって、インタクト抗体の組成物は、すべてのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、及びＫ４４７残基を有する抗体と有しない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。本開示の抗体における使用に好適な天然配列Ｆｃ領域としては、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４が挙げられる。

【0157】

「天然配列Ｆｃ領域」は、天然で見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびに天然に発生するそれらの変異型が含まれる。

【0158】

「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸改変、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）により、天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異型Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域中または親ポリペプチドのＦｃ領域中に約１～約１０個のアミノ酸置換、及び好ましくは約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも８０％の相同性、最も好ましくは、それらと少なくとも９０％の相同性、より好ましくは、それらと少なくとも９５％の相同性を保有する。

【0159】

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表す。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体と結合するもの（ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩのサブクラスの受容体（これらの受容体のアレルバリアント及び選択的スプライシング形態を含む）が含まれる。ＦｃγＲＩＩ受容体には、同様のアミノ酸配列を有し、主にその細胞質ドメインが異なる、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「抑制性受容体」）が含まれる。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）を含む。抑制性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。今後特定されるものを含め、他のＦｃＲは、本明細書において「ＦｃＲ」という用語に包含される。ＦｃＲはまた、抗体の血清中半減期を延長し得る。

【0160】

本明細書で使用されるとき、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「相同性」は、配列を整列させ、必要に応じて最大配列同一性パーセントを達成するためにギャップを導入した後の、配列同一性の一部としてあらゆる保存的置換を考慮しない、特定のペプチドまたはポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージを指す。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当該技術分野の技術範囲内である種々の方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの一般に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要とされる当該技術分野において既知の任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを評価するための適切なパラメータを決定することができる。

【0161】

「競合する」という用語は、同じエピトープまたは重複するエピトープについて競合する抗体との関連で使用される場合、試験される抗体が、共通の抗原（例えば、ＭｅｒＴＫまたはその断片）に対する参照分子（例えば、リガンドまたは参照抗体）の特異的結合を阻止または阻害する（例えば、減少させる）アッセイによって決定される抗体間の競合を意味する。抗体が他の抗体と競合するか否かを決定するために多くの種類の競合結合アッセイを使用することができ、例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２－２５３を参照）、固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４－３６１９を参照）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照）、１－１２５標識を使用した固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５）、固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ ａｌ．， １９９０， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５５２を参照）、及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３２：７７－８２を参照）がある。一般にこれらのアッセイは、標識されていない試験抗体及び標識された参照抗体のいずれかを有する固相表面または細胞に結合した精製抗原の使用を伴う。競合阻害は、試験抗体の存在下で固体表面または細胞に結合する標識の量を決定することにより測定される。通常、試験抗体は過剰に存在する。競合アッセイによって同定される抗体（競合抗体）には、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、及び立体障害が生じるうえで参照抗体が結合するエピトープに十分に近い隣接エピトープに結合する抗体が含まれる。通常、競合抗体が過剰に存在すると、共通抗原に対する参照抗体の特異的結合が少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、及び／または１００％近く阻害される（例えば、減少する）。

【0162】

本明細書で使用されるとき、ＭｅｒＴＫポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の「相互作用」は、限定するものではないが、タンパク質－タンパク質相互作用、物理的相互作用、化学的相互作用、結合、共有結合及びイオン結合を包含する。本明細書で使用する場合、抗体が２つのポリペプチド間の相互作用を妨害、低減または完全に排除するとき、その抗体は、２つのポリペプチド間の「相互作用を阻害する」。本開示の抗体は、抗体が２つのポリペプチドの一方に結合する場合に２つのポリペプチド間の「相互作用を阻害する」。いくつかの実施形態では、相互作用は、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、及び／または１００％近くの少なくともいずれかで阻害され得る。

【0163】

「エピトープ」という用語には、抗体が結合できる任意の決定基が含まれる。エピトープは、その抗原を標的とする抗体が結合する抗原の領域であり、抗原がポリペプチドの場合、抗体と直接接触する特定のアミノ酸を含む。ほとんどの場合、エピトープはポリペプチド上に存在するが、場合によっては、核酸などの他の種類の分子上に存在することもある。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニル基などの化学的に活性な分子の表面基を有してよく、特定の３次元構造特性、及び／または特定の電荷特性を有してよい。一般的に、特定の標的抗原に対して特異的な抗体は、ポリペプチド及び／またはマクロ分子の複雑な混合物中の標的抗原上のエピトープを優先的に認識する。

【0164】

「単離された」抗体、例えば、本開示の単離された抗ＭｅｒＴＫ抗体は、その生成環境（例えば、天然または組換え）の成分から同定、分離及び／または回収されたものである。好ましくは、単離された抗体ペプチドは、その産生環境に由来する他のすべての夾雑成分と会合していない。その生成環境に由来する夾雑成分、例えば、組換えトランスフェクション細胞に起因するものなどは、典型的に、抗体の研究上、診断上または治療上での使用を妨げる物質であり、これらには、酵素、ホルモン及び他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質が含まれ得る。好ましい実施形態において、抗体は、（１）抗体が、例えば、ローリー法によって決定したときに、９５重量％超、いくつかの実施形態では９９重量％超になるまで、（２）スピニングカップ配列決定装置の使用により、少なくとも１５個のＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の残基を得るのに十分な程度になるまで、または（３）クマシーブルー染色もしくは好ましくはシルバー染色を使用して、非還元条件もしくは還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均質性が得られるまで、精製される。単離抗体には、その抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換えＴ細胞内のインサイチューの抗体が含まれる。しかしながら、一般的には、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製工程により調製されるであろう。

【0165】

抗体（例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体）をコードする「単離された」核酸分子は、その核酸分子が生成された環境において通常会合している少なくとも１つの夾雑核酸分子から同定及び分離された核酸分子である。好ましくは、単離された核酸は、産生環境に関連するすべての成分と会合していない。本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする単離核酸分子は、それが自然界で見出される形態または状況以外での形態である。したがって、単離核酸分子は、細胞内に天然に存在する本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする核酸とは区別される。

【0166】

本明細書で使用する場合、「ベクター」という用語は、その核酸分子に連結された別の核酸を輸送することが可能な核酸分子のことを指すものとする。１つの種類のベクターとして、さらなるＤＮＡセグメントをライゲートすることができる環状二本鎖ＤＮＡのことを指す「プラスミド」がある。別の種類のベクターにはファージベクターがある。別の種類のベクターとして、さらなるＤＮＡセグメントをウイルスゲノムにライゲートすることができるウイルスベクターがある。特定のベクターは、ベクターが導入された宿主細胞内で自律的に複製することが可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム性の哺乳動物ベクターなど）。他のベクター（例えば非エピソーム性の哺乳動物ベクター）は、宿主細胞内に導入されると宿主細胞のゲノムに組み込まれることにより、宿主ゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターはベクターが機能的に連結された遺伝子の発現を誘導することができる。そのようなベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技法において有用である発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。プラスミドは最も一般的に使用されるベクターの形態であることから、本明細書では「プラスミド」と「ベクター」とを互換可能に使用する場合がある。

【0167】

本明細書で互換的に使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、改変ヌクレオチドもしくは塩基及び／またはそれらの類似体、あるいはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによりまたは合成反応により重合体中に組み込まれ得る任意の基質であり得る。

【0168】

「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入物を組み込むためのベクター（複数可）のレシピエントになり得るか、レシピエントになっている個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれ、子孫は、天然、突然、または意図的変異のため、必ずしも元の親細胞と（形態においてまたはゲノムＤＮＡ相補体において）完全に同一である必要はない場合がある。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチド（複数可）をインビボでトランスフェクトした細胞が含まれる。

【0169】

本明細書で使用される「担体」には、使用される用量及び濃度で、その担体に曝露される細胞または哺乳動物に対して無毒である、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤が含まれる。

【0170】

本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、臨床的病理の経過中に治療されている個体の自然経過を改変するように設計された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果としては、進行速度の低減、病的状態の回復または緩和、及び特定の疾患、障害、または状態の寛解または予後の改善が挙げられる。例えば、特定の疾患、障害、または状態に関連する１つ以上の症状が軽減または消失する場合に個体は効果的に「治療される」。

【0171】

「有効量」という用語は、少なくとも所望の治療結果を得るうえで必要な用量及び期間で効果的な量のことを指す。有効量は、１回以上の投与で与えることができる。有効量はまた、治療の有益な効果が治療のいかなる毒性または有害効果をも上回る量である。治療的使用の場合、有益なまたは所望の結果には、疾患に起因する１つ以上の症状の減少、疾患に罹患している者の生活の質の向上、疾患の処置に必要な他の薬剤の用量の減少、例えば標的化による別の薬剤の効果の増強、疾患の進行の遅延、及び／または生存期間の延長などの臨床結果が含まれる。薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、直接的または間接的に治療的処置を行うのに十分な量である。臨床状況において理解されるように、有効量の薬物、化合物、または薬学的組成物は、別の薬物、化合物、または薬学的組成物と併せて達成されるか、または達成されないことがある。したがって、「有効量」は、１つ以上の治療薬の投与との関連で考慮され得、単剤は、１つ以上の他の剤と併せて、望ましい結果が達成され得るか、または達成される場合、有効量で与えられると見なされ得る。

【0172】

治療の目的のための「個体」は、ヒト、飼育動物及び家畜、ならびに動物園、競技用または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを含む、哺乳動物に分類される任意の動物を指す。いくつかの実施形態では、個体は、ヒトである。

【0173】

本明細書で使用する場合、別の化合物または組成物との「併用」または「組み合わせ」の投与は、同時投与及び／または異なる時点での投与を含む。併用または組み合わせでの投与はまた、合剤としての投与または別個の組成物としての投与を包含し、異なる投与頻度または間隔で、かつ同じ投与経路または異なる投与経路を使用することを含む。いくつかの実施形態では、併用投与は、同じ治療計画の一環としての投与である。

【0174】

本明細書で使用される「約」という用語は、本技術分野の当業者に容易に理解される、各値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（かつ説明する）。

【0175】

本明細書及び添付の特許請求の範囲に使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り、複数形を含む。例えば「ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ」と言う場合には、１つ～モル量のような多数の抗体、及び当業者には周知のその均等物のことを指す、といった具合である。

【0176】

本明細書に記載される本開示の態様及び実施形態は、態様及び実施形態を「含む」、態様及び実施形態「からなる」、ならびに態様及び実施形態「から本質的になる」を含むことを理解されたい。

【0177】

ＩＩ．抗ＭｅｒＴＫ抗体
本明細書では、一価の抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。本明細書で提供される抗体は、例えば、ＭｅｒＴＫ関連疾患の治療に有用である。

【0178】

一態様では、本開示は、本開示のＭｅｒＴＫタンパク質またはポリペプチド内のエピトープに結合する単離された（例えば、モノクローナル）一価抗体を提供する。本開示のＭｅｒＴＫタンパク質またはポリペプチドには、限定されるものではないが、哺乳動物のＭｅｒＴＫタンパク質またはポリペプチド、ヒトＭｅｒＴＫタンパク質またはポリペプチド、マウス（ネズミ科）ＭｅｒＴＫタンパク質またはポリペプチド、及びカニクイザルＭｅｒＴＫタンパク質またはポリペプチドが含まれる。本開示のＭｅｒＴＫタンパク質及びポリペプチドには、ＭｅｒＴＫの天然に存在するバリアントが含まれる。いくつかの実施形態では、本開示のＭｅｒＴＫタンパク質及びポリペプチドは膜に結合している。いくつかの実施形態では、本開示のＭｅｒＴＫタンパク質及びポリペプチドは、ＭｅｒＴＫの可溶性細胞外ドメインである。

【0179】

いくつかの実施形態では、ＭｅｒＴＫは、細胞で発現される。いくつかの実施形態では、ＭｅｒＴＫは、限定されるものではないが、マクロファージ及び樹状細胞を含む食細胞で発現される。いくつかの実施形態では、ＭｅｒＴＫは、単球、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、ミクログリア、内皮細胞、巨核球、及び血小板で発現される。いくつかの実施形態では、高レベルのＭｅｒＴＫ発現は、卵巣、前立腺、精巣、肺、網膜、及び腎臓でも見られる。さらに、ＭｅｒＴＫは、多くのがんにおいて異所性または過剰発現を示す（Ｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ａｄｖ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１００：３５－８３）。

【0180】

ＭｅｒＴＫの結合パートナー
本開示のＭｅｒＴＫタンパク質は、限定されるものではないが、プロテインＳ（ＰｒｏＳまたはＰｒｏＳ１）、成長停止特異的遺伝子６（Ｇａｓ６）、タビー、タビー様タンパク質１（ＴＵＬＰ－１）、及びガレクチン－３を含む１つ以上のリガンドまたは結合パートナーと相互作用する（例えば、結合する）。本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫとそのさまざまなリガンド及び結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用に影響を及ぼすことができる。特に、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０６４６４０号（ＷＯ２０２１／１１９５０８）に開示されるように、親マウス抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６及び親マウス抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３は、Ｇａｓ６リガンド及びＰｒｏＳリガンドの両方のＭｅｒＴＫへの結合を遮断するうえで有効である。

【0181】

ｐＡＫＴ
ＡＫＴ活性は、ＭｅｒＴＫ、Ａｘｌ、またはＴｙｒｏ－３受容体へのＧａｓ６の結合の下流の標的である。例えば、ＭｅｒＴＫのリガンドであるＧａｓ６のＭｅｒＴＫへの結合は、ＡＫＴリン酸化（ｐＡＫＴ）を誘導する（例えば、Ａｎｇｅｌｉｌｌｏ－Ｓｃｈｅｒｒｅｒ ｅｔ ａｌ，２００８，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，１１８：５８３－５９６、Ｍｏｏｄｙ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，１３９：１３４０－１３４９を参照）。本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ヒトマクロファージ（例えば、Ｍ２ｃ分化型ヒトマクロファージ）におけるＧａｓ６媒介ホスホＡＫＴ（ｐＡＫＴ）活性を用量依存的に低下させるのに有効であった。したがって、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ｐＡＫＴレベルの低下によって証明されるように、Ｇａｓ６媒介ＭｅｒＴＫシグナル伝達を低下させるのに有効であった。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、インビトロでＧａｓ６媒介ｐＡＫＴ活性を低下させる。

【0182】

細胞内のｐＡＫＴ活性を低下させる一価抗ＭｅｒＴＫ抗体の相対的な有効性は、ＩＣ５０値を測定することによって決定することができる。Ｇａｓ６媒介ｐＡＫＴ活性の低下に関するＩＣ５０値は、以下の実施例１３に記載されるような、当業者には周知の方法を使用して決定することができる。

【0183】

エフェロサイトーシス
エフェロサイトーシスとは、死にかけている細胞またはアポトーシス細胞の食作用による除去を指す。エフェロサイトーシスは、プロフェッショナル食細胞（例えば、マクロファージ、樹状細胞、ミクログリア）、ノンプロフェッショナル食細胞（例えば、上皮細胞、線維芽細胞、網膜色素上皮細胞）、または特化型食細胞によって行われ得る（Ｅｌｌｉｏｔｔ ｅｔ ａｌ，２０１７，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９８：１３８７－１３９４）。エフェロサイトーシスは、膜の完全性が損なわれて細胞内容物が周囲の組織に漏出する前に死んだ細胞または死にかけの細胞を除去することにより、有毒な酵素、酸化物質、その他の細胞内成分への組織の曝露を防止する。

【0184】

アポトーシス細胞は、その細胞表面に食細胞上の受容体によって認識されるさまざまな分子（「イートミー」シグナル）を露出させる。そのような「イートミー」シグナル伝達分子の１つに、通常は細胞膜の内葉に限定されているホスファチジルセリン（ＰｔｄＳｅｒ）がある。アポトーシスの際、ＰｔｄＳｅｒは細胞膜の外葉に露出される。ＭｅｒＴＫリガンドＰｒｏＳ及びＧａｓ６は、それらのＮ末端ドメイン近くにγカルボキシル化グルタミン酸残基を含んでおり、グルタミン酸ドメインのγカルボキシル化により、ホスファチジルセリンへの結合が可能となる。Ｇａｓ６またはＰｒｏＳはアポトーシス細胞上のＰｔｄＳｅｒに結合すると同時に食細胞上のＭｅｒＴＫに結合する。このようなリガンドとＭｅｒＴＫとの結合により、エフェロサイトーシスが活性化される。

【0185】

以下の実施例１２に示すように、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、食細胞によるエフェロサイトーシス活性を低下させるうえで有効であった。

【0186】

したがって、いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、食細胞によるエフェロサイトーシスを減少させる。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、マクロファージによるエフェロサイトーシスを減少させる。したがって、いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、樹状細胞によるエフェロサイトーシスを減少させる。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、骨髄由来マクロファージによるエフェロサイトーシスを減少させる。エフェロサイトーシスの減少は、本明細書の実施例１２に記載されているような当業者には周知の標準的な方法を使用して決定することができる。

【0187】

いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、以下の実施例１２において本明細書に記載の方法によって評価した場合に、約０．１３ｎＭ～約３０ｎＭの範囲のＩＣ５０で食細胞（例えば、ヒトマクロファージ）によるエフェロサイトーシスを減少させる。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、約４ｎＭ～約３７ｎＭの範囲のＩＣ５０値で食細胞によるエフェロサイトーシスを減少させる。

【0188】

エフェロサイトーシスを遮断すると、Ｍ１様マクロファージの分極が誘導され、その結果、炎症誘発性サイトカイン（ＴＮＦ、ＩＦＮ、ＩＬ－１２など）の産生、及び抗腫瘍免疫を媒介するＣＤ８＋Ｔ細胞及びナチュラルキラー細胞などの細胞傷害性細胞の動員の増加につながる。したがって、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、食細胞によるエフェロサイトーシスを低減することにより、Ｍ１様マクロファージの極性化を増加させるのに有効であり、また、ＴＮＦ、ＩＦＮ、ＩＬ－６、ＩＬ－１、ＩＬ－１２、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド１（ＣＸＣＬ－１、ＫＣ）、単球化学誘引タンパク質－１（ＭＣＰ１、ＣＣＬ２）、マクロファージ炎症タンパク質－１－α（ＭＩＰ－１α、ＣＣＬ３）、及び／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１－ベータ（ＭＩＰ－１β、ＣＣＬ４）を含む炎症誘発性サイトカイン／ケモカインの産生、発現、及び／または分泌の増加に有効である。

【0189】

エフェロサイトーシスとがんの進行との関連性がこれまでに記載されている。例えば、ＰｔｄＳｅｒが食細胞のエフェロサイトーシスマシナリーと相互作用することを阻止するアネキシンＶを使用したエフェロサイトーシスの遮断は、腫瘍の進行及び転移を十分に減少させる（Ｓｔａｃｈ ｅｔ ａｌ，２０００，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆ，７：９１１、Ｂｏｎｄａｎｚａ ｅｔ ａｌ，２００４，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，２００：１１５７、Ｗｅｒｆｅｌ ａｎｄ Ｃｏｏｋ，２０１８，Ｓｅｍ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，４０：５４５－５５４）。さらに、ＭｅｒＴＫは、そのＰｔｄＳｅｒ架橋リガンドＧａｓ６と同様、多くのヒトのがんにおける予後不良及び低い生存率と相関している（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ，２０１４，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，１４：７６９、Ｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１０，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｔａｒｇｅｔｓ，１４：１０７３－１０９０、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，３２：８７２、Ｊａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｊ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅｓ，１１：７２８－７３５、Ｔｗｏｒｋｏｓｋｉ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，ｐ．ｍｏｌｃａｎｒｅｓ－０５１２、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ，２００６，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１２：２６６２－２６６９、Ｋｅａｔｉｎｇ ｅｔ ａｌ，２００６，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２５：６０９２）。したがって、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、食細胞によるエフェロサイトーシスを減少させることから、腫瘍の進行及び転移を減少させるのに有効である。

【0190】

カニクイザルの研究では、Ｇａｓ６及びＰｒｏＳの両方との結合を遮断する二価抗ＭｅｒＴＫ抗体（例えば、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６）は、ＰｒｏＳのＭｅｒＴＫへの結合を遮断するがＧａｓ６のＭｅｒＴＫへの結合は遮断しない二価の抗ＭｅｒＴＫ抗体を投与したカニクイザルで観察されたインビボ毒性と比較して、場合によってはインビボ毒性（例えば、体重減少）がより低いことが示された。したがって、いくつかの実施形態では、Ｇａｓ６及びＰｒｏＳの両方とＭｅｒＴＫとの結合を遮断する本開示の一価抗ＭｅｒｔＫ抗体は、ＰｒｏＳのＭｅｒＴＫへの結合を遮断するがＧａｓ６のＭｅｒＴＫへの結合は遮断しない本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体と比較してより低い全身性インビボ毒性を示し得る。抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６及び抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３（両方とも、Ｇａｓ６とＰｒｏＳ両方のＭｅｒＴＫへの結合をブロックする）がＭｅｒＴＫタンパク質のＩｇ１ドメインに結合するのに対して、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１５（ＰｒｏＳのＭｅｒＴＫへの結合を遮断するがＧａｓ６のＭｅｒＴＫへの結合は遮断しない）は、ＭｅｒＴＫタンパク質のＩｇ２及びＦＮ１ドメインの両方に結合する（国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０６４６４０号を参照）（ＷＯ２０２１／１１９５０８）。したがって、いくつかの実施形態では、ＭｅｒＴＫのＩｇ１ドメインに結合する一価抗ＭｅｒＴＫ抗体（例えば、一価の抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６、ＭＴＫ－１６．２、ＭＴＫ－３３、及びＭＴＫ－３３．１１）は、ＭｅｒＴＫのＩｇ２ドメイン及びＦＮ１ドメインの両方に結合する抗ＭｅｒＴＫ抗体よりも低い全身性のインビボ毒性を示し得る。さらに、いくつかの実施形態では、ＭｅｒＴＫのＩｇ１ドメインに結合し、（その一価の形態に一部帰因して）ｐＡＫＴ活性が低い一価の抗ＭｅｒＴＫ抗体（例えば、一価の抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６、ＭＴＫ－１６．２、ＭＴＫ－３３、及びＭＴＫ－３３．１１）は、ＭｅｒＴＫのＩｇ２ドメイン及びＦＮ１ドメインの両方に結合する二価の抗ＭｅｒＴＫ抗体よりも低い全身性のインビボ毒性を示し得る。

【0191】

一価抗体の形態
本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体には、ＭｅｒＴＫに特異的に結合する単一の抗原結合ドメインを有する抗ＭｅｒＴＫ抗体のさまざまな形態が含まれ得る。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、単一のＩｇＧ抗体軽鎖ポリペプチドに結合した単一の（すなわち、１つ以下の）ＩｇＧ抗体重鎖ポリペプチドを含み、これらはＭｅｒＴＫに特異的に結合する単一の抗原結合ドメインを形成する。このような一価の抗ＭｅｒＴＫ抗体の形態では、重鎖ポリペプチドのＩｇＧ Ｆｃ領域は第２のＩｇＧ Ｆｃ領域と二量体化されていない。

【0192】

他の実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、単一のＩｇＧ抗体軽鎖ポリペプチドに結合した単一のＩｇＧ抗体重鎖ポリペプチドを含み、これらは、ＭｅｒＴＫに特異的に結合する単一の抗原結合ドメインを形成し、単一のＩｇＧ抗体重鎖ポリペプチドのＩｇＧ Ｆｃ領域と二量体化された改変ＩｇＧ Ｆｃ領域ポリペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、改変されたＩｇＧ Ｆｃ領域は、ＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。

【0193】

ヘテロ二量体Ｆｃ領域
いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体の二量体化Ｆｃ領域は、異なるＦｃ領域を含む異なるポリペプチド同士が二量体化してヘテロ二量体形態を与えることができるようなヘテロ二量体化を促進するアミノ酸変異、置換、付加、または欠失を含むＦｃ領域同士によって形成される。

【0194】

Ｆｃ領域同士のヘテロ二量体化を促進する方法には、例えば、一群の「ノブ・イントゥ・ホール」欠失、付加もしくは置換を含めるか、または異なるポリペプチド鎖間の誘引相互作用に有利に働くＦｃの静電的な誘導を生じるアミノ酸欠失、付加、または置換を含めることなどによる、Ｆｃ領域のアミノ酸配列のアミノ酸欠失、付加、または置換が含まれる。相補的なＦｃポリペプチド同士のヘテロ二量体化を促進するための方法については、これまでに、例えば、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ，１９９６，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ，９：６１７－６２１、Ｍｅｒｃｈａｎｔ ｅｔ ａｌ，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，１６：６７７－６８１、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ，２０１１，ＭＡｂｓ，３：５４６－５５７、Ｖｏｎ Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ，２０１３，５：６４６－６５４、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ，２０１０，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２８５：１９６３７－１９４６４、Ｌｅａｖｅｒ－Ｆａｙ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，２４：６４１－６５１、Ｈａ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７：１、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ，２０１０，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ，２３：１９５－２０２、ＷＯ１９９６／０２７０１１、ＷＯ１９９８／０５０４３１、ＷＯ２００９／０８９００４、ＷＯ２０１１／１４３５４５、ＷＯ２０１４／０６７０１１、ＷＯ２０１２／０５８７６８、ＷＯ２０１８／０２７０２５、ＵＳ２０１４／０３６３４２６、ＵＳ２０１５／０３０７６２８、ＵＳ２０１８／００１６３５４、ＵＳ２０１５／０２３９９９１、ＵＳ２０１７／００５８０５４、ＵＳＰＮ５７３１１６８、ＵＳＰＮ７１８３０７６、ＵＳＰＮ９７０１７５９、ＵＳＰＮ９６０５０８４、ＵＳＰＮ９６５０４４６、ＵＳＰＮ８２１６８０５、ＵＳＰＮ８７６５４１２、及びＵＳＰＮ８２５８２６８に記載されている。

【0195】

例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃヘテロ二量体の相補的Ｆｃポリペプチドは、Ｆｃ二量体の界面を挟んだ電荷極性を変化させるような変異を含むことで、静電的に一致したＦｃ領域の共発現が有利な誘引相互作用を支持し、それにより所望のＦｃヘテロ二量体の形成を促進する一方で、不利な反発的電荷相互作用が、望ましくないＦｃホモ二量体の形成を抑制する（Ｇｕｎｅｓｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２８５：１９６３７－１９６４６）。細胞内で共発現される際、ポリペプチド鎖間の会合は可能であるが、鎖が電荷の反発により自己会合することはほとんどない。

【0196】

さらに、Ｆｃヘテロ二量体の相補的Ｆｃポリペプチドは、２個のＦｃポリペプチド同士のヘテロ二量体化を促進する「ノブ・イントゥ・ホール」構造を含んでいる。「ノブ・イントゥ・ホール」技術については、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、同第７，６９５，９３６号、同第８，２１６，８０５号、同第８，７６５，４１２号、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ ９，６１７－６２１（１９９６）、及びＣａｒｔｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ ２４８，７－１５（２００１）に記載されている。一般的に、この方法では、第１のポリペプチドの界面に突起（「ノブ」）を、第２のポリペプチドの界面に対応した穴（「ホール」）を導入することで、突起が穴の中に位置してヘテロ二量体の形成を促し、ホモ二量体の形成を妨げることができる。突起は、第１のポリペプチドの界面の小さなアミノ酸側鎖をより大きな側鎖（例えばチロシンまたはトリプトファン）に置換することによって形成される。突起と同じ、または似通った大きさの相補的な穴が、大きなアミノ酸側鎖をより小さなもの（例えばアラニンまたはスレオニン）に置換することによって第２のポリペプチドの界面に形成される。突起及び穴は、例えば、部位特異的突然変異誘発またはペプチド合成により、ポリペプチドをコードする核酸を改変することによって形成することができる。特定の実施形態では、ノブ改変は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのうちの一方にアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含み、ホール改変は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのうちの他方にアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む。さらに特定の実施形態では、ノブ改変を含むＦｃドメインのサブユニットはアミノ酸置換Ｓ３５４Ｃをさらに含み、ホール改変を含むＦｃドメインのサブユニットはアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃをさらに含む。これら２個のシステイン残基の導入により、Ｆｃ領域の２つのサブユニット間にジスルフィド架橋が形成され、二量体がさらに安定化する（Ｃａｒｔｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８，７－１５（２００１））。したがって、そのような構成では、第１のＦｃ領域ポリペプチドは「ノブ」を形成するためのアミノ酸改変を含み、第２のＦｃ領域ポリペプチドは「ホール」を形成するためのアミノ酸改変を含み、それにより相補的なＦｃポリペプチドからなるＦｃヘテロ二量体を形成する。

【0197】

Ｆｃヘテロ二量体形態の相補的Ｆｃポリペプチドの例示的な対合アミノ酸改変を下記表Ａ（ＥＵ番号付け）に示す。
（表Ａ）

【0198】

「ノブ・イントゥ・ホール」形態の特定の一実施形態では、Ｆｃヘテロ二量体構造の第１のＦｃポリペプチドはＴ３６６Ｙアミノ酸置換を含み、Ｆｃヘテロ二量体構造の第２のＦｃポリペプチドはＹ４０７Ｔアミノ酸置換を含む（ＥＵ番号付け）。「ノブ・イントゥ・ホール」形態の別の特定の一実施形態では、Ｆｃヘテロ二量体構造の第１のＦｃポリペプチドはＴ３６６Ｗアミノ酸置換を含み、Ｆｃヘテロ二量体構造の第２のＦｃポリペプチドはＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖアミノ酸置換を含む（ＥＵ番号付け）。

【0199】

Ａ．例示的な抗体及び特定の他の抗体の実施形態
本開示は、ＭｅｒＴＫに特異的に結合する一価抗ＭｅｒＴＫ抗体を提供する。いくつかの態様では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＩｇＧの単一の重鎖及び単一の軽鎖を含むが、二量体化Ｆｃ領域を含まない。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、野生型ＩｇＧ Ｆｃのアミノ酸配列を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃのアミノ酸配列を有する野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＬＡＬＡＰＳアミノ酸置換を有するＩｇＧ Ｆｃ領域を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＬＡＬＡＰＳアミノ酸置換を有するＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＬＡＬＡＰＳアミノ酸置換を有するＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＮＳＬＦアミノ酸置換を有するＩｇＧ Ｆｃ領域を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＮＳＬＦアミノ酸置換を有するＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＮＳＬＦアミノ酸置換を有するＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、上記のアミノ酸置換のいずれかを有するＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含み、さらにＳ２２８Ｐアミノ酸置換を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、または配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0200】

いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、配列番号１７のアミノ酸１～４４９を含む重鎖及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１８のアミノ酸１～４４９を含む重鎖及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１９のアミノ酸１～４４９を含む重鎖及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号２０のアミノ酸１～４４６を含む重鎖及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号２２のアミノ酸１～４４８を含む重鎖及び配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号２３のアミノ酸１～４４８を含む重鎖及び配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号２４のアミノ酸１～４４８を含む重鎖及び配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、または配列番号２５のアミノ酸１～４４５を含む重鎖及び配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0201】

いくつかの態様では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＩｇＧの単一の重鎖及び単一の軽鎖を含み、さらにＩｇＧの二量体化Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＦｃ；配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦｃ；配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦｃ；配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４３のアミノ酸配列を含むＦｃ；配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦｃ；配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＦｃ；配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦｃ；配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦｃ；配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４３のアミノ酸配列を含むＦｃ；または配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦｃを含む。

【0202】

いくつかの態様では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＩｇＧの単一の重鎖及び単一の軽鎖を含み、さらにＩｇＧの二量体化Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、配列番号２９のアミノ酸１～４５４を含む重鎖、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４０のアミノ酸１～２２６を含むＦｃ；配列番号３０のアミノ酸１～４４９を含む重鎖、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４１のアミノ酸１～２２６を含むＦｃ；配列番号３１のアミノ酸１～４４９を含む重鎖、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４２のアミノ酸１～２２６を含むＦｃ；配列番号３２のアミノ酸１～４４６を含む重鎖、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４３のアミノ酸１～２２８を含むＦｃ；配列番号３３のアミノ酸１～４４６を含む重鎖、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４４のアミノ酸１～２２８を含むＦｃ；配列番号３４のアミノ酸１～４４８を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４０のアミノ酸１～２２６を含むＦｃ；配列番号３５のアミノ酸１～４４８を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４１のアミノ酸１～２２６を含むＦｃ；配列番号３６のアミノ酸１～４４８を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４２のアミノ酸１～２２６を含むＦｃ；配列番号３７のアミノ酸１～４４５を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４３のアミノ酸１～２２８を含むＦｃ；または配列番号３８のアミノ酸１～４４５を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４４のアミノ酸１～２２８を含むＦｃを含む。

【0203】

いくつかの実施形態では、上記の実施形態のいずれかによる一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、以下のセクション１～７に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、または組み合わせで有することができる。

【0204】

（１）抗ＭｅｒＴＫ抗体の結合親和性
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または＜０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。解離定数は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏによるＯｃｔｅｔ Ｓｙｓｔｅｍを参照）、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、円二色性（ＣＤ）、ストップト・フロー分析、及び比色分析または蛍光タンパク質融解分析などの生化学的または生物物理学的手法を含む、任意の分析法によって決定することができる。一実施形態では、Ｋｄは、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。いくつかの実施形態では、ＲＩＡは、例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）に記載されるように、目的とされる抗体のＦａｂバージョン及びその抗原で実行される。いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定され、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ－２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用したアッセイは、約１０レスポンスユニット（ＲＵ）の固定化抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃で行われる。いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは、一価抗体（例えば、Ｆａｂ）または完全長抗体を使用して決定される。いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは、一価形態の完全長抗体を使用して決定される。

【0205】

いくつかの実施形態では、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体はヒトＭｅｒＴＫに結合し、ヒトＭｅｒＴＫとの結合のＫ_Ｄは約１．４ｎＭ～約８１ｎＭである。いくつかの実施形態では、抗ＭｅｒＴＫ抗体はカニクイザルＭｅｒＴＫに結合し、カニクイザルＭｅｒＴＫとの結合のＫ_Ｄは約１．６ｎＭ～約１０７ｎＭである。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体はマウスＭｅｒＴＫに結合し、マウスＭｅｒＴＫとの結合のＫ_Ｄは約３０ｎＭ～約１８６ｎＭである。

【0206】

（２）抗体断片
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、抗体断片である。抗体断片としては、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’－ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載される他の断片が挙げられるが、これらに限定されない。特定の抗体断片の概論は、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）に記載されている。ｓｃＦｖフラグメントの概論については、例えばＷＯ９３／１６１８５、及び米国特許第５５７１８９４号及び同第５５８７４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片の考察については、米国特許第５８６９０４６号を参照されたい。

【0207】

ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディもＨｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）に記載されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部もしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全部もしくは一部を含む、抗体断片である。特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（例えば、米国特許第６２４８５１６号を参照されたい）。

【0208】

抗体断片は、本明細書に記載するように、インタクト抗体のタンパク質分解消化、ならびに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない、さまざまな技術によって作製することができる。

【0209】

（３）キメラ及びヒト化抗体
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体が、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサル等の非ヒト霊長類に由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、それらの抗原結合フラグメントが含まれる。

【0210】

本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、非ヒト親抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させるために、ヒト化される。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化抗体が由来する別の種に由来する抗体と標的に対して実質的に同じ親和性を有する。例えば、米国特許第５５３０１０１号、同第５６９３７６１号、同第５６９３７６２号及び同第５５８５０８９号を参照されたい。特定の実施形態では、抗原結合ドメインの天然の親和性を失わせることなく、その免疫原性を低下させながら、改変することができる抗体可変ドメインのアミノ酸が特定される。例えば、米国特許第５７６６８８６号及び第５８６９６１９号を参照されたい。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（またはそれらの部分）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの部分）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は任意で、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を回復または向上させるために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基の由来となった抗体）に由来する対応する残基で置換される。

【0211】

ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１ ９－１６３３（２００８）に概説されており、例えば米国特許第５８２１３３７号、同第７５２７７９１号、同第６９８２３２１号、及び同第７０８７４０９号にさらに記載されている。ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、次のものが含まれるが、これらに限定されない：「最良適合（ｂｅｓｔ－ｆｉｔ）」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の部分集団のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞株フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）参照）、及びＦＲライブラリーのスクリーニングから得られるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）参照）が含まれるが、これらに限定されない。

【0212】

（４）ヒト抗体
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野では周知の種々の技法を使用して産生することができる。ヒト抗体については、一般に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ｅｔ ａｌ． Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ５：３６８－７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０：４５０－４５９（２００８）に一般的に記載されている。

【0213】

ヒト抗体は、抗原チャレンジに応じてインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製することができる。マウス抗体の非存在下でそのようなマウスがヒト抗体を産生することを期待して、マウス抗体産生が欠損したマウス系統にヒトＩｇ遺伝子座の大きな断片を組み込むことができる。大きなヒトＩｇ断片は、抗体の産生及び発現の適切な制御だけでなく、可変遺伝子の大きな多様性を保存することができる。抗体の多様化と選択のためのマウス機構、及びヒトタンパク質に対する免疫寛容の欠如を利用することにより、これらのマウス系統で再現されたヒト抗体レパートリーは、ヒト抗原を含む任意の目的の抗原に対する高親和性の完全ヒト抗体を与えることができる。ハイブリドーマ技術を使用することで、所望の特異性を備えた抗原特異的ヒトＭＡｂを産生して選択することができる。特定の例示的な方法は、米国特許第５５４５８０７号、ＥＰ５４６０７３、及びＥＰ５４６０７３に記載されている。例えば、米国特許第６０７５１８１号及び同第６１５０５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載）、米国特許第５７７０４２９号（ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術について記載）、米国特許第７０４１８７０号（Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載）、ならびに米国特許出願公開第２００７／００６１９００号（ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載）も参照されたい。かかる動物によって産生されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに改変することができる。

【0214】

ヒト抗体はまた、ハイブリドーマに基づく方法によっても作製することができる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株について記載されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１（１９８４）及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６（１９９１）を参照）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により産生されるヒト抗体についても、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１ ０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株によるモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生について記載）に記載されるものがある。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）にも記載されている。ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。その後、そのような可変ドメインは、所望のヒト定常ドメインと組み合わせることができる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技法を、以下に記載する。

【0215】

本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、インビトロ法及び／または所望の活性を有する抗体のコンビナトリアルライブラリーのスクリーニングによって単離されたヒト抗体である。適当な例としては、ファージディスプレイ（ＣＡＴ、Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ、Ｄｙａｘ、Ｂｉｏｓｉｔｅ／Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｘｏｍａ、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ、Ａｌｅｘｉｏｎ（旧Ｐｒｏｌｉｆｅｒｏｎ）、Ａｆｆｉｍｅｄ）リボソームディスプレイ（ＣＡＴ）、酵母ディスプレイ（Ａｄｉｍａｂ）などが含まれるが、これらに限定されない。特定のファージディスプレイ法では、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されるように、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローニングし、ファージライブラリーでランダムに組み換え、次いでこれを、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてかかるライブラリーをスクリーニングするためのさまざまな方法が、当該技術分野で周知である。Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０，２００４、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３，２００４、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（－２）：１ １９－１３２（２００４）も参照されたい。ファージは通常、抗体断片を一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして提示する。免疫化源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５－７３４（１９９３）に記載されるように、ナイーブレパートリーを（例えば、ヒトから）クローニングすることで、免疫化することなく、広範な非自己抗原及び自己抗原に対する単一源の抗体を提供することもできる。最後に、ナイーブライブラリーは、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８，１９９２に記載されるように、幹細胞由来の再編成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して高度可変ＨＶＲ３領域をコードし、インビトロで再編成を実現することによって合成によって作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーについて記載した特許公開としては、例えば、米国特許第５７５０３７３号、ならびに米国特許出願公開第２００７／０２９２９３６号及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体は、本明細書ではヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。

【0216】

（５）Ｆｃ領域を含む定常領域
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体はＦｃを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び／またはＩｇＧ４アイソタイプである。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。

【0217】

本明細書で提供される抗体のいずれかの特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体への結合とは独立して、１つ以上のＭｅｒＴＫ活性を誘導する。いくつかの実施形態では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－γ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。

【0218】

本明細書で提供される抗体のいずれかの特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかの実施形態において、抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含有する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施形態において、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。

【0219】

本明細書で提供される抗体のいずれかの特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－γ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。

【0220】

本明細書で提供される抗体のいずれかの特定の実施形態では、抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８～２６０（ＥＵ番号付けによる）と、ヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１～４４７（ＥＵ番号付けによる）とを含むアミノ酸配列を含む（ＷＯ１９９７／１１９７１、ＷＯ２００７／１０６５８５）。

【0221】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、アミノ酸置換を含まないＦｃ領域を含む対応する抗体と比較して、補体を活性化することなくクラスター化を増加させる。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体が特異的に結合する標的の１つ以上の活性を誘導する。いくつかの実施形態では、抗体はＭｅｒＴＫに結合する。

【0222】

また、抗体のエフェクター機能を改変し、及び／または血清中半減期を延長するために、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を改変することが望ましい場合がある。例えば、定常領域上のＦｃ受容体結合部位を改変または変異させて、特定のＦｃ受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩに対する結合親和性を除去または低減して、抗体依存性細胞媒介細胞傷害を低減し得る。いくつかの実施形態では、エフェクター機能は、抗体のＦｃ領域（例えば、ＩｇＧのＣＨ２ドメイン内）のＮ－グリコシル化を除去することによって低下する。いくつかの実施形態では、エフェクター機能は、ＷＯ９９／５８５７２及びＡｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０：５８５－５９３（２００３）、Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １６４：１９２５－１９３３（２０００）に記載されるように、ヒトＩｇＧの２３３～２３６、２９７及び／または３２７～３３１などの領域を改変することによって低下する。他の実施形態において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を改変してエフェクター機能を改変して、ＩＴＩＭを含有するＦｃｇＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）に対する発見選択性を向上させて、抗体依存性細胞媒介細胞傷害及び抗体依存性細胞貪食を含む体液性反応を活性化することなく、隣接細胞上でＭｅｒＴＫ抗体のクラスター化を増加させることも所望であり得る。

【0223】

抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第５７３９２７７号に記載されるようなサルベージ受容体結合エピトープが抗体（特に、抗体断片）中に組み込まれ得る。本明細書で使用されるとき、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のｉｎ ｖｉｖｏ血清半減期を延長させるのに貢献するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、またはＩｇＧ_４）のＦｃ領域のエピトープを指す。他のアミノ酸配列改変。

【0224】

（６）抗体バリアント
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体のアミノ酸配列バリアントが想到される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善させることが望ましい場合がある。

【0225】

（ｉ）置換、挿入、及び欠失バリアント
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な改変を導入することによって、またはペプチド合成によって調製することができる。かかる改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列中の残基の欠失、及び／またはアミノ酸配列中への残基の挿入、及び／またはアミノ酸配列中の残基の置換が含まれる。
（表Ａ）アミノ酸置換

【0226】

抗体の生物学的性質の大幅な改変は、（ａ）置換領域におけるポリペプチド骨格の構造、例えば、シートもしくは螺旋コンフォメーション、（ｂ）標的部位の分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のかさ高さ、の維持に対する置換の影響が大きく異なる置換を選択することにより実現される。天然に存在する残基は、一般的な側鎖特性に従って分類される：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、及び
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0227】

例えば、非保存的置換は、これらのクラスのいずれかのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することを含み得る。このような置換残基は、例えば、非ヒト抗体と相同であるヒト抗体の領域、または分子の非相同領域に導入することができる。

【0228】

本明細書に記載のポリペプチドまたは抗体に変更を加える際、特定の実施形態によれば、アミノ酸のハイドロパシー指数を考慮することができる。各アミノ酸には、その疎水性及び電荷特性に基づいてハイドロパシー指数が割り当てられている。それらは以下のとおりである：イソロイシン（＋４．５）、バリン（＋４．２）、ロイシン（＋３．８）、フェニルアラニン（＋２．８）、システイン／シスチン（＋２．５）、メチオニン（＋１．９）、アラニン（＋１．８）、グリシン（－０．４）、スレオニン（－０．７）、セリン（－０．８）、トリプトファン（－０．９）、チロシン（－１．３）、プロリン（－１．６）、ヒスチジン（－３．２）、グルタミン酸（－３．５）、グルタミン（－３．５）、アスパラギン酸（－３．５）、アスパラギン（－３．５）、リジン（－３．９）、アルギニン（－４．５）。

【0229】

タンパク質に相互作用的な生物学的機能を与える際のハイドロパシーアミノ酸指数の重要性は、当該技術分野において理解されている（Ｋｙｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５－１３１（１９８２））。特定のアミノ酸を、同様のハイドロパシー指数またはスコアを有する他のアミノ酸と置換しても、依然として同様の生物学的活性を保持できることが知られている。ハイドロパシー指数に基づいて変更を加える際に、特定の実施形態では、ハイドロパシー指数が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれる。特定の実施形態では、±１以内のものが含まれ、特定の実施形態では、±０．５以内のものが含まれる。

【0230】

特に、本明細書の場合のように、類似アミノ酸置換によって形成される生物学的に機能するタンパク質またはペプチドが免疫学的実施形態における使用を意図している場合には、その置換を親水性に基づいて効果的に行うことができることも当該技術分野では理解されている。特定の実施形態では、あるタンパク質の最大の局所平均親水性はその隣接アミノ酸の親水性によって決まり、その免疫原性及び抗原性、すなわちそのタンパク質の生物学的特性と相関する。

【0231】

これらのアミノ酸残基には次の親水性値が割り当てられている：アルギニン（＋３．０）、リジン（＋３．０±１）、アスパラギン酸（＋３．０±１）、グルタミン酸（＋３．０±１）、セリン（＋０．３）、アスパラギン（＋０．２）、グルタミン（＋０．２）、グリシン（０）、スレオニン（－０．４）、プロリン（－０．５±１）、アラニン（－０．５）、ヒスチジン（－０．５）、システイン（－１．０）、メチオニン（－１．３）、バリン（－１．５）、ロイシン（－１．８）、イソロイシン（－１．８）、チロシン（－２．３）、フェニルアラニン（－２．５）及びトリプトファン（－３．４）。同様の親水性値に基づいて変更を行う場合、特定の実施形態では、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれ、特定の実施形態では、±１以内のアミノ酸の置換が含まれ、特定の実施形態では、±０．５以内のアミノ酸の置換が含まれる。親水性に基づいて一次アミノ酸配列からエピトープを特定することもできる。これらの領域は「エピトープコア領域」とも呼ばれる。

【0232】

上記のバリアントＶＨ配列及びＶＬ配列の特定の実施形態では、各ＨＶＲは変化していない。

【0233】

アミノ酸配列の挿入としては、長さが残基１個～１００個以上の残基を含むポリペプチドの範囲であるアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合体、ならびに１個または複数のアミノ酸残基からなる配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入型バリアントとしては、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ）またはポリペプチドの、抗体のＮ末端もしくはＣ末端への融合体が含まれる。

【0234】

ＨＶＲの外側の、抗体の適切なコンフォメーションの維持に関与しない任意のシステイン残基も（一般的にセリンで）置換することができ、分子の酸化的安定性を改善し、異常な架橋を防止することができる。逆に、システイン結合（複数可）を抗体に付加すると、その安定性を改善することができる（具体的には、抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合）。

【0235】

（ｉｉ）グリコシル化バリアント
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が生成されるか、または除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって、簡便に行うことができる。

【0236】

抗体のグリコシル化は典型的には、Ｎ結合またはＯ結合のいずれかである。Ｎ結合は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン－Ｘ－セリン及びアスパラギン－Ｘ－スレオニン（式中、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素結合の認識配列である。したがって、ポリペプチド内にこれらのトリペプチド配列のうちのいずれかが存在すると、潜在的なグリコシル化部位が生成される。Ｏ結合グリコシル化とは、糖類であるＮ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの結合を指すが、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリジンも使用され得る。

【0237】

抗体へのグリコシル化部位の付加は、（Ｎ結合型グリコシル化部位の場合）上述のトリペプチド配列のうちの１つ以上を含むようにアミノ酸配列を改変することにより簡便に実現される。この改変は、（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）元の抗体の配列への１つ以上のセリンまたはスレオニン残基の付加またはそれによる置換によって行うこともできる。

【0238】

抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物を改変することができる。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、一般にＮ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＫａｂａｔ番号付けによるＡｓｎ２９７に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。オリゴ糖類には、さまざまな炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖類構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、特定の特性の改善を有する抗体バリアントを作製するために行われ得る。

【0239】

一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的にまたは間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体バリアントが提供される。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号及び同第２００４／００９３６２１号を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体バリアントに関連する刊行物の例としては、ＵＳ ２００３／０１５７１０８、ＵＳ ２００３／０１１５６１４、ＵＳ ２００２／０１６４３２８、ＵＳ ２００４／００９３６２１、ＵＳ ２００４／０１３２１４０、ＵＳ ２００４／０１１０７０４、ＵＳ ２００４／０１１０２８２、ＵＳ ２００４／０１０９８６５、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ３３６：１２３９－１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することが可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｄ３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）、ＵＳ２００３／０１５７１０８）、及びα－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）及びＫａｎｄａ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９４（４）：６８０－６８８（２００６））などのノックアウト細胞株が挙げられる。

【0240】

（ｉｉｉ）改変された定常領域
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体Ｆｃは抗体Ｆｃのアイソタイプ及び／または改変体である。いくつかの実施形態では、抗体のＦｃアイソタイプ及び／または改変体は、Ｆｃγ受容体に結合することができる。

【0241】

本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、改変抗体Ｆｃは、ＩｇＧ１改変Ｆｃである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、１つ以上の改変を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つ以上のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ（Ｂｏｌｔ Ｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２３：４０３－４１１）、Ｄ２６５Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，６５９１－６６０４）、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９２：１１９８０－１１９８４、Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３．３１、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６）、Ｇ２３７Ａ（Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３．３１、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５－１１９２）、Ｐ３３１Ｓ（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２００８，１０５：２０１６７－２０１７２）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、ただし、アミノ酸の位置は、ＥＵ番号付け規則に従うものである。

【0242】

ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＮ２９７Ａ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＤ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＤ２７０Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異のうちの１つ以上（すべても含む）を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ変異のうちの１つ以上を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＣ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、及びＬ２３５Ａ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ及びＰ３３１Ｓ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＳ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＮ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＳ２６７Ｅ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＩｇＧ１の定常重鎖１（ＣＨ１）及びヒンジ領域のＣＨ１による置換、ならびにＩｇＧ２のヒンジ領域（ＥＵ番号付けによるＩｇＧ２のアミノ酸１１８～２３０）のカッパ軽鎖による置換を含む。

【0243】

ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、２個以上のアミノ酸置換を含まないＦｃ領域を有する対応する抗体と比較して、補体を活性化することなく抗体のクラスター化を増加させる２個以上のアミノ酸置換を含む。したがって、ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、Ｆｃ領域を含む抗体であり、抗体は、ＥＵ番号付けに従って、位置Ｅ４３０Ｇのアミノ酸置換と、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される残基位置でのＦｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ及びＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ及びＡ３３０Ｓのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ及びＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含む。

【0244】

ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、補体活性化をなくすために、ＥＵ番号付け規則による、Ａ３３０Ｌ変異（Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０３：４００５－４０１０（２００６））またはＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ及び／またはＰ３３１Ｓ変異のうちの１つ以上（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０５：２０１６７－２０１７２（２００８））と組み合わせることができる。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＡ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／またはＰ３３１Ｓのうちの１つ以上をさらに含み得る。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ヒト血清中での抗体の半減期を増大させるための１つ以上の変異（例えば、ＥＵ番号付け規則による、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ変異のうちの１つ以上（すべても含む））をさらに含み得る。ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及び／またはＳ４４０Ｗのうちの１つ以上をさらに含み得る。

【0245】

本開示の他の態様は、改変された定常領域（すなわち、Ｆｃ領域）を有する抗体に関する。標的受容体を活性化するためにＦｃｇＲ受容体との結合に依存する抗体は、ＦｃｇＲへの結合をなくすように操作された場合にそのアゴニスト活性を喪失し得る（例えば、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ １９：１０１－１１３（２０１１）、Ａｒｍｏｕｒ ａｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０：５８５－５９３（２００３）、及びＷｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５）を参照）。したがって、抗体がヒトＩｇＧ２アイソタイプ（ＣＨ１及びヒンジ領域）由来のＦｃドメイン、または阻害性ＦｃｇＲＩＩＢ ｒ受容体に優先的に結合することができる別のタイプのＦｃドメイン、またはそのバリアントを有する場合、適正なエピトープ特異性を有する本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、最小限の副作用で標的抗原を活性化できるものと考えられる。

【0246】

本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、改変抗体Ｆｃは、ＩｇＧ２改変Ｆｃである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２改変Ｆｃは、１つ以上の改変を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２改変Ｆｃは、１つ以上のアミノ酸置換を含む（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）。ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、ＥＵ番号付け規則による、Ｖ２３４Ａ（Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３．３１（１９９４）、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６（２０００））、Ｇ２３７Ａ（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６８：５６３－５７１（１９９９））、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（ＵＳ２００７／０１４８１６７、Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９：２６１３－２６２４（１９９９）、Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７（２０００）、Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７（２０００））、Ｃ２１９Ｓ、及び／またはＣ２２０Ｓ（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７，１３８－１４８（２０１５））、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，４５：３９２６－３９３３（２００８））、ならびにＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択される。ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｖ２３４Ａ及びＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｃ２１９ＳまたはＣ２２０Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆのアミノ酸置換を含む。

【0247】

ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付け規則によるＣ１２７Ｓアミノ酸置換を含む（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７，１３８－１４８、Ｌｉｇｈｔｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１９：７５３－７６２（２０１０）、及びＷＯ２００８／０７９２４６）。ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付け規則によるＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有する（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５）、Ｌｉｇｈｔｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１９：７５３－７６２（２０１０）、及びＷＯ２００８０７９２４６）。

【0248】

ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付け規則によるＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有する。

【0249】

ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＣ２１９Ｓアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付け規則によるＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有する。

【0250】

ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＩｇＧ２アイソタイプの重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５））。ＩｇＧ２改変Ｆｃの特定のいくつかの実施形態では、ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ＥＵ番号付けによる１１８～２３０のアミノ酸配列を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体Ｆｃ領域は、ＥＵ番号付けによるＳ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換もしくはその両方、及び／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を有する。

【0251】

ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及びＳ４４０Ｗの１つ以上のアミノ酸置換をさらに含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ヒト血清中での抗体の半減期を増大させるための１つ以上の変異（例えば、ＥＵ番号付け規則による、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ変異のうちの１つ以上（すべても含む））をさらに含み得る。ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓをさらに含み得る。

【0252】

ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃは、ＩｇＧ２のａａ１１８～２６０及びＩｇＧ４のａａ２６１～４４７を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓの１つ以上のアミノ酸置換を含む。

【0253】

ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５ＥまたはＰ３３１Ｓ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含む。

【0254】

ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかの特定の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＣ１２７Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される残基位置の１つ以上のアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ及びＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ及びＡ３３０Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ及びＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｃ１２７Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ及びＳ４４０Ｙのアミノ酸置換を含む。

【0255】

本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、改変抗体Ｆｃは、ＩｇＧ４改変Ｆｃである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４改変Ｆｃは、１つ以上の改変を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４改変Ｆｃは、１つ以上のアミノ酸置換を含む（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）。ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、ＥＵ番号付け規則によるＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２９Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６４：１９２５－１９３３（２０００））、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及び／またはＴ２５６Ｅから選択される。ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付け規則によるＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＥ３１８Ａをさらに含み得る。ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付け規則によるＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅをさらに含み得る。ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ４改変Ｆｃは、ＥＵ番号付け規則によるＳ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆをさらに含み得る。

【0256】

ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ４改変Ｆｃは、抗体の安定化を向上させるために、ＥＵ番号付け規則によるＳ２２８Ｐ変異と組み合わせることができる（Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３０：１０５－１０８（１９９３））及び／または（Ｐｅｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１３；２８７（２９）：２４５２５－３３（２０１２）） に記載される１つ以上の変異と組み合わせることができる。

【0257】

ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ４改変Ｆｃは、ヒト血清中での抗体の半減期を増大させるための１つ以上の変異（例えば、ＥＵ番号付け規則による、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ変異のうちの１つ以上（すべても含む））をさらに含み得る。

【0258】

ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＬ２３５Ｅ変異を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかの特定の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＣ１２７Ｓ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される残基位置の１つ以上のアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ及びＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０のアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｃ１２７Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによる位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、及びＳ４４０Ｙのアミノ酸置換を含む。

【0259】

（７）他の抗体改変
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、誘導体である。「誘導体」という用語は、アミノ酸（または核酸）の挿入、欠失、または置換以外の化学修飾を含む分子を指す。特定の実施形態では、誘導体は、ポリマー、脂質、または他の有機もしくは無機部分との化学結合を含むがこれらに限定されない共有結合修飾を含む。特定の実施形態では、化学修飾された抗原結合タンパク質は、化学修飾されていない抗原結合タンパク質よりも長い循環半減期を有し得る。特定の実施形態では、化学修飾された抗原結合タンパク質は、所望の細胞、組織、及び／または臓器に対する、より高い標的化能力を有し得る。いくつかの実施形態では、誘導体抗原結合タンパク質は、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、またはポリプロピレングリコールを含むがこれらに限定されない、１つ以上の水溶性ポリマー結合部を含むように共有結合修飾される。例えば、米国特許第４６４０８３５号、同第４４９６６８９号、同第４３０１１４４号、同第４６７０４１７号、同第４７９１１９２号、及び同第４１７９３３７号を参照されたい。特定の実施形態では、誘導体抗原結合タンパク質は、限定されるものではないが、モノメトキシ－ポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、及びポリビニルアルコール、ならびにこれらのポリマーの混合物を含む、１つ以上のポリマーを含む。

【0260】

特定の実施形態では、誘導体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットで共有結合的に修飾される。特定の実施形態では、１つ以上の水溶性ポリマーは、誘導体の１つ以上の特定の位置、例えばアミノ末端に結合される。特定の実施形態では、１つ以上の水溶性ポリマーは、誘導体の１つ以上の側鎖にランダムに結合される。特定の実施形態では、抗原結合タンパク質の治療能力を向上させるためにＰＥＧが使用される。特定の実施形態では、ヒト化抗体の治療能力を向上させるためにＰＥＧが使用される。特定のそのような方法は、例えば、あらゆる目的で本明細書に参照によって援用する米国特許第６１３３４２６号に記載されている。

【0261】

ペプチド類似体は一般的に、鋳型ペプチドの特性に類似した特性を有する非ペプチド薬物として製薬産業において使用される。これらの種類の非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣物」または「ペプチド模倣薬」と呼ばれる（あらゆる目的で本明細書に参照によって援用するＦａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．，１５：２９（１９８６）、及びＥｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３０：１２２９（１９８７））。こうした化合物はしばしば、コンピュータ化分子モデル化の助けを借りて開発される。治療的に有用なペプチドと構造的に類似しているペプチド模倣物を使用して、同様の治療効果を得ることができる。一般に、ペプチド模倣物は、ヒト抗体などのパラダイムポリペプチド（すなわち、生化学的特性または薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に類似しているが、当該技術分野では周知の方法によって１つ以上のペプチド結合が、－ＣＨ_２ＮＨ－、－ＣＨ_２Ｓ－、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－、－ＣＨ＝ＣＨ－（シス及びトランス）、－ＣＯＣＨ_２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２－、及び－ＣＨ_２ＳＯ－から選択される結合によって任意で置換されている。特定の実施形態では、より安定なペプチドを生成するために、コンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸の同じ種類のＤ－アミノ酸への組織的置換（例えば、Ｌ－リジンの代わりにＤ－リジン）を用いることができる。さらに、コンセンサス配列または実質的に同一のコンセンサス配列変異を含む拘束性ペプチドを、当該技術分野で周知の方法により（あらゆる目的で本明細書に参照によって援用するＲｉｚｏ ａｎｄ Ｇｉｅｒａｓｃｈ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６１：３８７（１９９２））、例えば、ペプチドを環化する分子内ジスルフィド架橋を形成できる内部システイン残基を付加することによって生成することができる。

【0262】

薬物コンジュゲーションは、生物学的活性細胞傷害性（抗がん）ペイロードまたは薬物を、特定の腫瘍マーカー（例えば、理想的には、腫瘍細胞内または腫瘍細胞上にのみ見られるポリペプチド）を特異的に標的とする抗体に結合することを伴う。抗体は、身体内でこれらのタンパク質を見つけ出し、それ自体をがん細胞の表面に結合させる。抗体と標的タンパク質（抗原）との間の生化学反応は腫瘍細胞内でシグナルを誘発し、腫瘍細胞は抗体を細胞毒素と共に吸収または内部移行させる。ＡＤＣが内部移行された後、細胞傷害性薬物が放出され、がんを殺す。この標的化のため、薬物は、他の化学療法剤よりも低い副作用を有し、より広い治療ウインドウを提供することが理想的である。抗体を結合する方法は、当該技術分野において開示されており、既知である（例えばＪａｎｅ ｄｅ Ｌａｒｔｉｇｕｅ ＯｎｃＬｉｖｅ Ｊｕｌｙ ５， ２０１２；ＡＤＣ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、及びＤｕｃｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２１（１）：５－１３（２０１０）を参照）。

【0263】

ＩＩＩ．核酸、ベクター及び宿主細胞
本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されるように、組換え法及び組成物を使用して製造することができる。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体のいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する単離された核酸が提供される。かかる核酸は、抗ＭｅｒＴＫ抗体のＶ_Ｌを含むアミノ酸配列及び／またはＶ_Ｈを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。いくつかの実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。いくつかの実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞も提供される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶ_Ｌを含むアミノ酸配列及び抗体のＶ_Ｈを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶ_Ｌを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び抗体のＶ_Ｈを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質導入される）。

【0264】

いくつかの実施形態では、宿主細胞は、（１）Ｖ_Ｌを含む抗体の軽鎖を含むアミノ酸配列をコードする核酸、及び（２）Ｖ_Ｈを含む抗体の重鎖を含むアミノ酸配列をコードする核酸を含み（例えば、それらで形質導入され）、ＶＬとＶＨとはＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインを形成する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、（１）Ｖ_Ｌを含む抗体の軽鎖を含むアミノ酸配列をコードする核酸、（２）Ｖ_Ｈを含む抗体の重鎖を含むアミノ酸配列をコードする核酸、及び（３）Ｖ_Ｈを含まない重鎖の断片（例えば、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む重鎖の断片）をコードする核酸を含み（例えば、それらで形質導入され）、Ｖ_ＬとＶ_ＨとはＭｅｒＴＫに結合する抗原結合ドメインを形成する。核酸は同じベクター内に存在しても、異なるベクター内に存在してもよい。

【0265】

いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。本開示の宿主細胞にはまた、限定するものではないが、単離された細胞、インビトロ培養細胞、及びエクスビボ培養細胞が含まれる。

【0266】

本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体の作製方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、一価抗ＭｅｒＴＫ抗体をコードする核酸を含む本開示の宿主細胞を、抗体の発現に適した条件下で培養することを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、その後、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収される。

【0267】

本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体を組換え製造するには、抗ＭｅｒＴＫ抗体をコードする核酸を単離し、宿主細胞でのさらなるクローニング及び／または発現のために１つ以上のベクターに挿入する。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定することができる。

【0268】

本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体、または細胞表面で発現されるその断片または本明細書に記載のポリペプチド（抗体を含む）のいずれかをコードする核酸配列を含む適当なベクターには、限定するものではないが、クローニングベクター及び発現ベクターが含まれる。適当なクローニングベクターは、標準的技術に従って構築することができ、あるいは当該技術分野において入手可能な多数のクローニングベクターから選択してもよい。選択されるクローニングベクターは、使用される予定の宿主細胞に応じて異なり得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製能を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼの標的を１つ有することができ、及び／またはベクターを含むクローンの選択に用いることができるマーカーの遺伝子を保有し得る。適当な例としては、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これら及び他の多くのクローニングベクターを、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商業的供給元から販売されている。

【0269】

抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に適した宿主細胞には、原核生物細胞または真核生物細胞が含まれる。例えば、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合には、細菌中で産生させることができる。細菌中での抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７号、同第５７８９１９９号、及び同第５８４０５２３号を参照されたい。発現後、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離することができ、さらに精製することができる。

【0270】

原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物もまた、抗体をコードするベクターに好適なクローニング宿主または発現宿主であり、これらには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の生成をもたらす、真菌株及び酵母株が含まれる（例えば、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６））。

【0271】

グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）から得ることもできる。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と共に、特に、ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションに使用することができる多くのバキュロウイルス株が同定されている。植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる（例えば、米国特許第５９５９１７７号、同第６０４０４９８号、同第６４２０５４８号、同第７１２５９７８号及び同第６４１７４２９号（トランスジェニック植物で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載されている））。

【0272】

脊椎動物細胞も宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳類細胞株が、有用であり得る。有用な宿主哺乳動物細胞株の他の例は、ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）、ヒト胚性腎臓株（２９３細胞または例えばＧｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されているような２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載のＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ科腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な宿主哺乳動物細胞株には、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適な特定の宿主哺乳動物細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。

【0273】

ＩＶ．医薬組成物／製剤
本明細書では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体と薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物及び／または医薬製剤が提供される。

【0274】

いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、使用される用量及び濃度においてレシピエントに対して非毒性であることが好ましい。インビボ投与で使用するための医薬組成物及び／または医薬製剤は、無菌とすることができる。これは、無菌濾過膜による濾過により容易に実現される。

【0275】

本明細書で提供される医薬組成物及び／または医薬製剤は、例えばがんを治療するための薬剤として有用である。

【0276】

Ｖ．治療用途
本明細書に開示されるように、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、疾患及び障害を治療するために使用することができる。いくつかの実施形態では、本開示は、がんを有する個体を治療する方法であって、治療有効量の本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体を個体に投与することを含む、方法を提供する。

【0277】

ＭｅｒＴＫの異所性または発現はさまざまな腫瘍で観察されており、ＭｅｒＴＫの過剰発現及び活性化は、リンパ性白血病、リンパ腫、腺腫、黒色腫、胃癌、前立腺癌、乳癌との関連が示されており、ＭｅｒＴＫの過剰発現は転移との関連が示されている（Ｓｃｈｌｅｇｅｌ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，１２３：２２５７－２２６７、Ｔｗｏｒｋｏｓｋｉ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｍｅｌａｎｏｍａ，２６：５２７－５４１、Ｙｉ ｅｔ ａｌ，２０１７，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，８：９６６５６－９６６６７、Ｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｂｌｏｏｄ，１２２：１５９９－１６０９、Ｌｅｅ－Ｓｈｅｒｉｃｋ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，３２：５３５９－５３６８、Ｂｒａｎｄａｏ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ，３：ｅ１０１、Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，６：９２０６－９２１９、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ，２０１８，Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ＆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１１：４３）。したがって、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を用いてＭｅｒＴＫの活性を調節することは、がんを治療する有効な手段である。

【0278】

特定の態様では、本明細書において、がんの治療を必要とする対象のがんを治療する方法であって、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体、または本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、方法が開示される。いくつかの実施形態では、本明細書において、がんの治療を必要とする対象のがんを治療する方法であって、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体を対象に投与することを含み、一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、食細胞によるエフェロサイトーシスを減少させる、方法が提供される。

【0279】

いくつかの実施形態では、がんは、肉腫、膀胱癌、乳癌、結腸癌、子宮体癌、腎臓癌、腎臓癌、白血病、肺癌、非小細胞肺癌、黒色腫、リンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、甲状腺癌、子宮癌、肝臓癌、子宮頸癌、精巣癌、扁平上皮癌、神経膠腫、膠芽腫、腺腫、及び神経芽腫から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、多形神経膠芽腫、膀胱癌、及び食道癌から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳癌である。いくつかの実施形態では、がんは、原発性腫瘍であってもよい。いくつかの実施形態では、がんは、上記のタイプのいずれかのがんに由来する第２の部位における転移性腫瘍であってもよい。いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫを発現するがんの治療を必要とする対象のがんの治療に有用である。

【0280】

いくつかの実施形態では、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、チェックポイント阻害剤として作用する１つ以上の治療薬と組み合わせて投与することができる。いくつかの実施形態では、方法は、抑制性免疫チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を個体に投与すること、及び／または別の標準的もしくは治験中抗がん療法を実施することをさらに含む。いくつかの実施形態では、抑制性チェックポイント分子は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、及びＰＤ－Ｌ２から選択される。いくつかの実施形態では、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体と組み合わせて投与される。

【0281】

いくつかの実施形態では、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、及び抗ＰＤ－１抗体から選択される。

【0282】

いくつかの実施形態では、対象または個体は、哺乳動物である。哺乳動物としては、限定されるものではないが、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が挙げられる。いくつかの実施形態では、対象または個体は、ヒトである。

【0283】

ＶＩ．製品
本明細書では、本明細書に記載の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体を含む製品（例えば、キット）が提供される。製品は、本明細書に記載される抗体を含む１つ以上の容器を含み得る。容器は、限定されるものではないが、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性包装（例えば、密封マイラーまたはプラスチックバッグ）を含む任意の適当なパッケージングであってよい。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）、または分割単位用量であってよい。

【0284】

いくつかの実施形態では、キットは、第２の剤を含む。いくつかの実施形態では、第２の剤は、を含む薬学的に許容される緩衝剤または希釈剤である。いくつかの実施形態では、第２のペプチドは薬学的に活性な剤である。

【0285】

製品のいずれかのいくつかの実施形態では、製品は、本開示の方法に従って使用するための説明書をさらに含む。説明書は、一般に、目的の治療のための用量、投与計画及び投与経路に関する情報を含む。いくつかの実施形態では、これらの使用説明書は、本開示の任意の方法に従って例えばがんなどの疾患、障害、または傷害を有する個体を治療するための、本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体）の投与の説明を含む。いくつかの実施形態では、説明書には、抗ＭｅｒＴＫ抗体及び第２の剤（例えば、第２の薬学的に活性な剤）の使用に関する説明書が含まれる。

【0286】

本開示は、以下の実施例を参照することによって、より十分に理解されるであろう。しかしながら、それらは、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本開示全体におけるすべての引用文献は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

【実施例】

【0287】

実施例１：Ｈｉｓとコンジュゲートされた及びマウスＦｃコンジュゲートされた、ＭｅｒＴＫポリペプチドの生成
本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の作製及び特性評価に使用するための、ポリＨｉｓまたはＴＥＶＳ／トロンビン／マウスＩｇＧ２ａ－Ｆｃタグ付き融合タンパク質を含むヒト、カニクイザル、及びマウスのＭｅｒＴＫポリペプチドを、以下のように作製した。ヒトＭｅｒＴＫ（配列番号２）、カニクイザルＭｅｒＴＫ（配列番号３）、及びマウスＭｅｒＴＫ（配列番号４）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）をコードする核酸をそれぞれ、異種シグナルペプチドをコードし、ＰｏｌｙＨｉｓ ＦｃタグまたはＴＥＶＳ／トロンビン／マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃタグのいずれかを含む核酸を含む哺乳類発現ベクターにクローニングした。

【0288】

ヒトＭｅｒＴＫ、ヒトＭｅｒＴＫ細胞外ドメイン、カニクイザルＭｅｒＴＫ細胞外ドメイン、及びマウスＭｅｒＴＫ細胞外ドメインのアミノ酸配列を以下に示す。

【0289】

ヒトＭｅｒＴＫのアミノ酸配列（配列番号１）：
ＭＧＰＡＰＬＰＬＬＬＧＬＦＬＰＡＬＷＲＲＡＩＴＥＡＲＥＥＡＫＰＹＰＬＦＰＧＰＦＰＧＳＬＱＴＤＨＴＰＬＬＳＬＰＨＡＳＧＹＱＰＡＬＭＦＳＰＴＱＰＧＲＰＨＴＧＮＶＡＩＰＱＶＴＳＶＥＳＫＰＬＰＰＬＡＦＫＨＴＶＧＨＩＩＬＳＥＨＫＧＶＫＦＮＣＳＩＳＶＰＮＩＹＱＤＴＴＩＳＷＷＫＤＧＫＥＬＬＧＡＨＨＡＩＴＱＦＹＰＤＤＥＶＴＡＩＩＡＳＦＳＩＴＳＶＱＲＳＤＮＧＳＹＩＣＫＭＫＩＮＮＥＥＩＶＳＤＰＩＹＩＥＶＱＧＬＰＨＦＴＫＱＰＥＳＭＮＶＴＲＮＴＡＦＮＬＴＣＱＡＶＧＰＰＥＰＶＮＩＦＷＶＱＮＳＳＲＶＮＥＱＰＥＫＳＰＳＶＬＴＶＰＧＬＴＥＭＡＶＦＳＣＥＡＨＮＤＫＧＬＴＶＳＫＧＶＱＩＮＩＫＡＩＰＳＰＰＴＥＶＳＩＲＮＳＴＡＨＳＩＬＩＳＷＶＰＧＦＤＧＹＳＰＦＲＮＣＳＩＱＶＫＥＡＤＰＬＳＮＧＳＶＭＩＦＮＴＳＡＬＰＨＬＹＱＩＫＱＬＱＡＬＡＮＹＳＩＧＶＳＣＭＮＥＩＧＷＳＡＶＳＰＷＩＬＡＳＴＴＥＧＡＰＳＶＡＰＬＮＶＴＶＦＬＮＥＳＳＤＮＶＤＩＲＷＭＫＰＰＴＫＱＱＤＧＥＬＶＧＹＲＩＳＨＶＷＱＳＡＧＩＳＫＥＬＬＥＥＶＧＱＮＧＳＲＡＲＩＳＶＱＶＨＮＡＴＣＴＶＲＩＡＡＶＴＲＧＧＶＧＰＦＳＤＰＶＫＩＦＩＰＡＨＧＷＶＤＹＡＰＳＳＴＰＡＰＧＮＡＤＰＶＬＩＩＦＧＣＦＣＧＦＩＬＩＧＬＩＬＹＩＳＬＡＩＲＫＲＶＱＥＴＫＦＧＮＡＦＴＥＥＤＳＥＬＶＶＮＹＩＡＫＫＳＦＣＲＲＡＩＥＬＴＬＨＳＬＧＶＳＥＥＬＱＮＫＬＥＤＶＶＩＤＲＮＬＬＩＬＧＫＩＬＧＥＧＥＦＧＳＶＭＥＧＮＬＫＱＥＤＧＴＳＬＫＶＡＶＫＴＭＫＬＤＮＳＳＱＲＥＩＥＥＦＬＳＥＡＡＣＭＫＤＦＳＨＰＮＶＩＲＬＬＧＶＣＩＥＭＳＳＱＧＩＰＫＰＭＶＩＬＰＦＭＫＹＧＤＬＨＴＹＬＬＹＳＲＬＥＴＧＰＫＨＩＰＬＱＴＬＬＫＦＭＶＤＩＡＬＧＭＥＹＬＳＮＲＮＦＬＨＲＤＬＡＡＲＮＣＭＬＲＤＤＭＴＶＣＶＡＤＦＧＬＳＫＫＩＹＳＧＤＹＹＲＱＧＲＩＡＫＭＰＶＫＷＩＡＩＥＳＬＡＤＲＶＹＴＳＫＳＤＶＷＡＦＧＶＴＭＷＥＩＡＴＲＧＭＴＰＹＰＧＶＱＮＨＥＭＹＤＹＬＬＨＧＨＲＬＫＱＰＥＤＣＬＤＥＬＹＥＩＭＹＳＣＷＲＴＤＰＬＤＲＰＴＦＳＶＬＲＬＱＬＥＫＬＬＥＳＬＰＤＶＲＮＱＡＤＶＩＹＶＮＴＱＬＬＥＳＳＥＧＬＡＱＧＳＴＬＡＰＬＤＬＮＩＤＰＤＳＩＩＡＳＣＴＰＲＡＡＩＳＶＶＴＡＥＶＨＤＳＫＰＨＥＧＲＹＩＬＮＧＧＳＥＥＷＥＤＬＴＳＡＰＳＡＡＶＴＡＥＫＮＳＶＬＰＧＥＲＬＶＲＮＧＶＳＷＳＨＳＳＭＬＰＬＧＳＳＬＰＤＥＬＬＦＡＤＤＳＳＥＧＳＥＶＬＭ

【0290】

ヒトＭｅｒＴＫ ＥＣＤのアミノ酸配列（配列番号２）：
ＭＧＰＡＰＬＰＬＬＬＧＬＦＬＰＡＬＷＲＲＡＩＴＥＡＲＥＥＡＫＰＹＰＬＦＰＧＰＦＰＧＳＬＱＴＤＨＴＰＬＬＳＬＰＨＡＳＧＹＱＰＡＬＭＦＳＰＴＱＰＧＲＰＨＴＧＮＶＡＩＰＱＶＴＳＶＥＳＫＰＬＰＰＬＡＦＫＨＴＶＧＨＩＩＬＳＥＨＫＧＶＫＦＮＣＳＩＳＶＰＮＩＹＱＤＴＴＩＳＷＷＫＤＧＫＥＬＬＧＡＨＨＡＩＴＱＦＹＰＤＤＥＶＴＡＩＩＡＳＦＳＩＴＳＶＱＲＳＤＮＧＳＹＩＣＫＭＫＩＮＮＥＥＩＶＳＤＰＩＹＩＥＶＱＧＬＰＨＦＴＫＱＰＥＳＭＮＶＴＲＮＴＡＦＮＬＴＣＱＡＶＧＰＰＥＰＶＮＩＦＷＶＱＮＳＳＲＶＮＥＱＰＥＫＳＰＳＶＬＴＶＰＧＬＴＥＭＡＶＦＳＣＥＡＨＮＤＫＧＬＴＶＳＫＧＶＱＩＮＩＫＡＩＰＳＰＰＴＥＶＳＩＲＮＳＴＡＨＳＩＬＩＳＷＶＰＧＦＤＧＹＳＰＦＲＮＣＳＩＱＶＫＥＡＤＰＬＳＮＧＳＶＭＩＦＮＴＳＡＬＰＨＬＹＱＩＫＱＬＱＡＬＡＮＹＳＩＧＶＳＣＭＮＥＩＧＷＳＡＶＳＰＷＩＬＡＳＴＴＥＧＡＰＳＶＡＰＬＮＶＴＶＦＬＮＥＳＳＤＮＶＤＩＲＷＭＫＰＰＴＫＱＱＤＧＥＬＶＧＹＲＩＳＨＶＷＱＳＡＧＩＳＫＥＬＬＥＥＶＧＱＮＧＳＲＡＲＩＳＶＱＶＨＮＡＴＣＴＶＲＩＡＡＶＴＲＧＧＶＧＰＦＳＤＰＶＫＩＦＩＰＡＨＧＷＶＤＹＡＰＳＳＴＰＡＰＧＮＡＤＰＶＬＩＩ

【0291】

カニクイザルＭｅｒＴＫ ＥＣＤのアミノ酸配列（配列番号３）：
ＭＧＬＡＰＬＰＬＰＬＬＬＧＬＦＬＰＡＬＷＳＲＡＩＴＥＡＲＥＥＡＫＰＹＰＬＦＰＧＰＬＰＧＳＬＱＴＤＨＴＳＬＬＳＬＰＨＴＳＧＹＱＰＡＬＭＦＳＰＴＱＰＧＲＰＹＴＧＮＶＡＩＰＲＶＴＳＡＧＳＫＬＬＰＰＬＡＦＫＨＴＶＧＨＩＩＬＳＥＨＫＤＶＫＦＮＣＳＩＳＶＰＮＩＹＱＤＴＴＩＳＷＷＫＤＧＫＥＬＬＧＡＨＨＡＩＴＱＦＹＰＤＤＥＶＴＡＩＩＡＳＦＳＩＴＳＶＱＲＳＤＮＧＳＹＩＣＫＭＫＩＮＮＥＥＩＶＳＤＰＩＹＩＥＶＱＧＬＰＨＦＴＫＱＰＥＳＭＮＶＴＲＮＴＡＦＮＬＴＣＱＡＶＧＰＰＥＰＶＮＩＦＷＶＱＮＳＳＲＶＮＥＱＰＥＫＳＰＳＶＬＴＶＰＧＬＴＥＭＡＶＦＳＣＥＡＨＮＤＫＧＬＴＶＳＫＧＶＱＩＮＩＫＡＩＰＳＰＰＴＥＶＳＩＨＮＳＴＡＨＳＩＬＩＳＷＶＰＧＦＤＧＹＳＰＦＲＮＣＳＶＱＶＫＥＶＤＰＬＳＮＧＳＶＭＩＦＮＴＳＡＳＰＨＭＹＱＩＫＱＬＱＡＬＡＮＹＳＩＧＶＳＣＭＮＥＩＧＷＳＡＶＳＰＷＩＬＡＳＴＴＥＧＡＰＳＶＡＰＬＮＶＴＶＦＬＮＥＳＲＤＮＶＤＩＲＷＭＫＰＬＴＫＲＱＡＧＥＬＶＧＹＲＩＳＨＶＷＱＳＡＧＩＳＫＥＬＬＥＥＶＧＱＮＮＳＲＡＱＩＳＶＱＶＨＮＡＴＣＴＶＲＩＡＡＶＴＫＧＧＶＧＰＦＳＤＰＶＫＩＦＩＰＡＨＧＷＶＤＨＡＰＳＳＴＰＡＰＧＮＡＤＰＶＬＩＩ

【0292】

マウスＭｅｒＴＫ ＥＣＤのアミノ酸配列（配列番号４）：
ＭＶＬＡＰＬＬＬＧＬＬＬＬＰＡＬＷＳＧＧＴＡＥＫＷＥＥＴＥＬＤＱＬＦＳＧＰＬＰＧＲＬＰＶＮＨＲＰＦＳＡＰＨＳＳＲＤＱＬＰＰＰＱＴＧＲＳＨＰＡＨＴＡＡＰＱＶＴＳＴＡＳＫＬＬＰＰＶＡＦＮＨＴＩＧＨＩＶＬＳＥＨＫＮＶＫＦＮＣＳＩＮＩＰＮＴＹＱＥＴＡＧＩＳＷＷＫＤＧＫＥＬＬＧＡＨＨＳＩＴＱＦＹＰＤＥＥＧＶＳＩＩＡＬＦＳＩＡＳＶＱＲＳＤＮＧＳＹＦＣＫＭＫＶＮＮＲＥＩＶＳＤＰＩＹＶＥＶＱＧＬＰＹＦＩＫＱＰＥＳＶＮＶＴＲＮＴＡＦＮＬＴＣＱＡＶＧＰＰＥＰＶＮＩＦＷＶＱＮＳＳＲＶＮＥＫＰＥＲＳＰＳＶＬＴＶＰＧＬＴＥＴＡＶＦＳＣＥＡＨＮＤＫＧＬＴＶＳＫＧＶＨＩＮＩＫＶＩＰＳＰＰＴＥＶＨＩＬＮＳＴＡＨＳＩＬＶＳＷＶＰＧＦＤＧＹＳＰＬＱＮＣＳＩＱＶＫＥＡＤＲＬＳＮＧＳＶＭＶＦＮＴＳＡＳＰＨＬＹＥＩＱＱＬＱＡＬＡＮＹＳＩＡＶＳＣＲＮＥＩＧＷＳＡＶＳＰＷＩＬＡＳＴＴＥＧＡＰＳＶＡＰＬＮＩＴＶＦＬＮＥＳＮＮＩＬＤＩＲＷＴＫＰＰＩＫＲＱＤＧＥＬＶＧＹＲＩＳＨＶＷＥＳＡＧＴＹＫＥＬＳＥＥＶＳＱＮＧＳＷＡＱＩＰＶＱＩＨＮＡＴＣＴＶＲＩＡＡＩＴＫＧＧＩＧＰＦＳＥＰＶＮＩＩＩＰＥＨＳＫＶＤＹＡＰＳＳＴＰＡＰＧＮＴＤＳＭ

【0293】

ヒト、カニクイザル、及びマウスのＭｅｒＴＫ核酸融合コンストラクトをＨＥＫ２９３細胞に一過性にトランスフェクトした。組換え融合ポリペプチドを、製造者の指示に従ってＭａｂｓｅｌｅｃｔ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７５１９９０２）を使用して細胞の上清から精製した。さらに、以下に説明するように、市販のＤＤＤＤＫタグ付きヒトＭｅｒＴＫ融合ポリペプチド（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、Ｗａｙｎｅ、ＰＡ、カタログ番号１０２９８－ＨＣＣＨ）またはヒトＩｇＧ１Ｆｃタグ付きマウスＭｅｒＴＫ融合タンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＡ、カタログ番号５９１－ＭＲ－１００））も抗ＭｅｒＴＫ抗体の特性評価に使用した。

【0294】

実施例２：ヒト及びマウスのＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ細胞株の作製
ヒトＭｅｒＴＫ及びマウスＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ細胞株を以下のように調製した。ヒトＭｅｒＴＫオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）クローンレンチウイルス粒子（カタログ番号ＲＣ２１５２８９Ｌ４Ｖ）及びマウスＭｅｒＴＫ ＯＲＦクローンレンチウイルス粒子（カタログ番号ＭＲ２２５３９２Ｌ４Ｖ）（Ｏｒｉｇｅｎｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）（いずれもｍＧＦＰタグ付けされたもの）を、ヒトＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１及びマウスＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１安定細胞株のそれぞれの作製に使用した。

【0295】

ＣＨＯ細胞を、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含むＦ１２－Ｋ培地（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＡＴＣＣ３０－２００４）中で８０％超のコンフルエンスに達するまで培養した。次に細胞をトリプシン緩衝液（０．２５％ＥＤＴＡ／トリプシン、Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号２５２０００５６）で解離させ、ヒトまたはマウスＭｅｒＴＫレンチウイルスコンストラクトのいずれかを形質導入する２４時間前に７０～８０％コンフルエンスで６ウェルプレートに播種した。翌日、細胞をレンチウイルス粒子と４℃で２時間インキュベートした後、プレートを５％ＣＯ_２中、３７℃でインキュベートした。２日後、選択を行うためにピューロマイシン（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、カタログ番号ａｎｔ－ｐｒ－１）を加えた。選択されたピューロマイシン耐性細胞を、その後の使用のためにＣｅｌｌ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ Ｆｒｅｅｚｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１２６４８０１０）中で凍結した。

【0296】

これらの細胞株のＦＡＣＳ分析を行うため、上記のようにして作製したヒトＭｅｒＴＫ過剰発現ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ｈｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞）及びマウスＭｅｒＴＫ過剰発現ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ｍｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞）を、９６ウェルＵ字底プレートにウェル当たり１～２×１０^５細胞で播種し、市販のマウス抗ヒトＭｅｒＴＫモノクローナル抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローン：５９０Ｈ１１Ｇ１Ｅ３、カタログ番号３６７６０８、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）または市販のラット抗マウスＭｅｒＴＫモノクローナル抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、クローン：ＤＳ５ＭＭＥＲ、カタログ番号１２－５７５１－８２）と氷上で３０分間インキュベートした。氷冷したＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ＋ＰＢＳ）で細胞を２回洗浄した後、ＡＰＣとコンジュゲートされたヤギ抗マウス抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ、カタログ番号１１５－６０６－０７１）またはヤギ抗ラット抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１１２－６０６－０７１）と氷上で３０分間インキュベートした。二次抗体のインキュベーション後、細胞を氷冷したＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、次いで０．２５μｌ／ウェルのヨウ化プロピジウム（ＢＤ、カタログ番号５５６４６３）を含んだ最終体積５０～２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。ＦＡＣＳ ＣａｎｔｏＩＩシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析を行った。

【0297】

得られたヒトＭｅｒＴＫ及びマウスＭｅｒＴＫ過剰発現（ＯＥ）ＣＨＯ細胞株を、以下に記載するようにその後の試験で使用して抗ＭｅｒＴＫ抗体の特性評価を行った。

【0298】

実施例３：抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマ抗体の作製
抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマを作製するために、以下の実験を行った。ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）またはＭｅｒＴＫノックアウト（ＫＯ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）を、アジュバントありまたはアジュバントなしで、ヒト、カニクイザル、及びマウスＭｅｒＴＫの精製した細胞外ドメインポリペプチド（実施例１で上述したようにして得たもの）の皮下または腹腔内注射により週に２回免疫した。４週間にわたって合計８回の注射を実施した。最後の注射の３日後、ハイブリドーマ細胞株作製のためにマウスから脾臓及びリンパ節を採取した。

【0299】

免疫化マウスの脾臓及びリンパ節からリンパ球を単離し、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（ＣＲＬ－１５８０、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）またはＳＰ２／ｍＩＬ－６（ＣＲＬ－２０１６、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）マウス骨髄腫細胞と電気融合法（Ｈｙｂｒｉｍｍｕｎｅ、ＢＴＸ、Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、ＭＡ）により融合し、Ｃｌｏｎａｃｅｌｌ－ＨＹ培地Ｃ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ、Ｃａｎａｄａ、カタログ番号０３８０３）中、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。翌日、融合細胞を遠心分離し、抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＦＩＴＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を含んだ１０ｍｌのＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ培地Ｃに再懸濁し、次いでＨＡＴ成分を含んだ９０ｍｌのメチルセルロースベースのＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ培地Ｄ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号０３８０４）と穏やかに混合した。細胞をＮｕｎｃ ＯｍｎｉＴｒａｙｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＮＹ）に播種し、３７℃、５％ＣＯ_２で７日間増殖させた。次いで、蛍光コロニーを選択し、Ｃｌｏｎｅｐｉｘ ２（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を使用して、Ｃｌｏｎａｃｅｌｌ－ＨＹ培地Ｅ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号０３８０５）を含む９６ウェルプレートに移した。６日間の培養後、ハイブリドーマからの組織培養上清を、以下に記載するようにしてヒトＭｅｒＴＫまたはマウスＭｅｒＴＫに結合する特異性についてＦＡＣＳ分析によってスクリーニングした。

【0300】

実施例４：ＦＡＣＳによる抗ＭｅｒＴＫ抗体ハイブリドーマ上清のスクリーニング
上記のように得られたハイブリドーマ培養上清を、ヒトＭｅｒＴＫを安定的に過剰発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ｈｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞）またはマウスＭｅｒＴＫを安定的に過剰発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ｍｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞）（上記に記載のようにして作製したもの）、及びＣＨＯ親細胞；Ｕ９３７細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５９３．２）、ＳＫ－ＭＥＬ－５細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－７０）（ヒトＭｅｒＴＫを内因的に発現する）、Ｊ７７４Ａ．１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－６７）（マウスＭｅｒＴＫを内因的に発現する）、及びＡ３７５細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６１９）を含む、さまざまな細胞型でＭｅｒＴＫに結合する能力についてスクリーニングした。ＭｅｒＴＫの発現がないかまたは発現が最小であるＴＨＰ－１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－２０２）を、これらの実験でＭｅｒＴＫを発現しないネガティブコントロール細胞として用いた。

【0301】

ハイブリドーマ細胞培養上清のスクリーニングを行うため、多重化ＦＡＣＳ実験計画を用いてこれらの複数の細胞株に対する抗ＭｅｒＴＫ抗体の結合を調べた。簡単に説明すると、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ細胞増殖色素ＣＦＳＥとＶｉｏｌｅｔ（それぞれＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ｃ３４５５４及びカタログ番号３４５５７）のさまざまな濃度及び組み合わせで細胞を染色し、一意的なバーコード付き細胞集団を作製した。各バーコード付き細胞タイプの７０，０００個の細胞を９６ウェルＵ底プレートに等分し、５０μｌのハイブリドーマ細胞培養上清または５μｇ／ｍｌの市販の精製マウス抗ヒトＭｅｒＴＫモノクローナル抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号３６７６０２、ポジティブな抗ＭｅｒＴＫ抗体として使用）と氷上で３０分間インキュベートした。この一次抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマ上清のさまざまなＭｅｒＴＫ発現細胞タイプとのインキュベーション後、各上清を遠心分離によって除去し、細胞を１７５μｌの氷冷したＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ＋２ｍＭ ＥＤＴＡ）で２回洗浄し、次いで、細胞を抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－アロフィコシアニン（ＡＰＣ）（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ、カタログ番号１１５－１３６－０７１）（１：１０００に希釈したもの）と氷上で２０分間さらにインキュベートした。この二次抗体のインキュベーション後、細胞を氷冷したＦＡＣＳ緩衝液で再び２回洗浄し、次いで０．２５μｌ／ウェルのヨウ化プロピジウム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５６４６３）を含んだ最終体積３０μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。細胞上での結合強度を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用し、死（すなわち、ヨウ化プロピジウム陽性）細胞を除外するために描かれたソーティングゲートを用いて分析した。各バーコード付き細胞集団におけるＡＰＣ平均蛍光強度（ＭＦＩ）の比を、試験した各抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマ上清について求めた。

【0302】

この特異的なハイブリドーマ上清スクリーニングから、親またはネガティブコントロール細胞タイプで観察された結合と比較して、ヒトまたはマウスＭｅｒＴＫを安定的に過剰発現または内因的に発現する細胞との結合において２倍を超える差（ＭＦＩによって決定）を示す抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマのクローンを特定した。このスクリーニングを使用して特定された抗ＭｅｒＴＫ抗体について、以下に記載するようにさらに特性評価を行った。

【0303】

実施例５：組換えＭｅｒＴＫタンパク質結合アッセイによる抗ＭｅｒＴＫ抗体ハイブリドーマ上清のスクリーニング
上記のようにして得られたハイブリドーマ培養上清を、無関係なＨｉｓタグ付けされたコントロールタンパク質との結合と比較して、ポリＨｉｓタグ付けされたヒト、カニクイザル、及びマウスＭｅｒＴＫ（実施例１で上記されるように調製されたもの）に結合する能力についてスクリーニングした。簡単に説明すると、９６ウェルポリスチレンプレートを、コーティング緩衝液（０．０５Ｍ炭酸緩衝液、ｐＨ９．６、Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｃ３０４１）中の１μｇ／ｍｌのヒト、カニクイザル、またはマウスポリ－Ｈｉｓタグ付きＭｅｒＴＫポリペプチドで４℃で一晩コーティングした。次いで、コーティングされたプレートをＥＬＩＳＡ希釈液（ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で１時間ブロックし、３００μｌのＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｈｅｒｍｏ ２８３５２）で３回洗浄した。ハイブリドーマ細胞培養物の上清または２つの市販の精製マウス抗ヒトＭｅｒＴＫモノクローナル抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号３６７６０２、Ｒ＆Ｄカタログ番号ＭＡＢ８９１２）を各ウェルに加えた（５０μｌ／ウェル）。３０分間のインキュベーション（室温で振盪）後、各プレートを３００μｌのＰＢＳＴで３回洗浄した。抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１１５－０３５－０７１）二次抗体をＥＬＩＳＡ希釈液で１：５０００に希釈し、５０μｌ／ウェルで各ウェルに加え、振盪しながら室温で３０分間インキュベートした。最終セットの洗浄（ＰＢＳＴ中３×３００μｌ）後、５０μｌ／ウェルのＴＭＢ基質（ＢｉｏＦｘ、カタログ番号ＴＭＢＷ－１０００－０１）を各ウェルに加えた。次いで、反応を５～１０分後に５０μｌ／ウェルの停止液（ＢｉｏＦｘ、カタログ番号ＢＳＴＰ－１０００－０１）でクエンチした。クエンチした反応ウェルを、ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ ＲｅａｄｅｒでＧＥＮ５ ２．０４ソフトウェアを使用して６５０ｎｍの吸光度について検出した。このハイブリドーマ上清スクリーニングから、組換えＭｅｒＴＫとの結合についてバックグラウンドと比較して１０倍を超える差を示す抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマクローンが特定された。このスクリーニングを使用して特定された抗ＭｅｒＴＫ抗体について、以下に記載するようにさらに特性評価を行った。

【0304】

実施例６：抗ＭｅｒＴＫ抗体の分子クローニング
上記に述べたハイブリドーマからの抗ＭｅｒＴＫ抗体を以下のようにしてサブクローニングした。５×１０^５ハイブリドーマ細胞を回収し、ＰＢＳで洗浄した後、細胞ペレットをドライアイスで瞬間凍結し、－２０℃で保存した。ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ、カタログ番号７４１０４）を製造業者のプロトコールに従って使用して全ＲＮＡを抽出した。ＣｌｏｎｔｅｃｈのＳＭＡＲＴｅｒ ＲＡＣＥ５’／３’キット（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ ＵＳＡ、カタログ番号６３４８５９）を製造業者のプロトコールに従って使用してｃＤＮＡを作製した。可変重鎖及び軽鎖の免疫グロブリン領域を、ＲＡＣＥキットに付属の５’ＵＰＭプライマーと、重鎖及び軽鎖定常領域を認識するリバースプライマーとを用いたタッチダウンＰＣＲによって別々にクローニングした。得られたＰＣＲ産物を精製し、ｐＣＲ２．１－ＴＯＰＯクローニングベクター（ＴＯＰＯ ＴＡクローニングキット、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号４５０６４１）にライゲートし、大腸菌細胞に形質転換した。形質転換されたコロニーを単離し、対応する各ハイブリドーマ細胞株の可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）の核酸をシークエンシングした。配列決定後、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を、エンドヌクレアーゼ制限部位を含むプライマーを使用したＰＣＲによって増幅し、ヒトＩｇＧ１－Ｆｃ－ＬＡＬＡＰＳ（ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）及びＩｇＧκをコードしたｐＬＥＶ－１２３（ＬａｋｅＰｈａｒｍａ，Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡ）哺乳動物発現ベクターにサブクローニングした。上記のようにして得られる本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体には、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６、ＭＴＫ－３３、ＭＴＫ－１５が含まれる。

【0305】

実施例７：マウス抗ＭＥＲＴＫ抗体のヒト化及び親和性成熟
本開示の特定の親マウス抗ＭｅｒＴＫ抗体のヒト化バリアントを以下のようにして作製した。

【0306】

非ヒト抗体をヒト化する１つの方法は、非ヒト（例えばマウス）抗体のＣＤＲをヒト抗体アクセプターフレームワークに埋め込むことである。このようなＣＤＲの埋め込みは、そのフレームワークの擾乱により、標的に対するヒト化抗体の親和性が減弱するか完全に失われる可能性がある。そのため、ヒト化の結果として減弱した、または失われた親和性を回復するため、ヒトフレームワーク内の特定のアミノ酸残基をマウス抗体フレームワークの対応する位置のアミノ酸残基で置換する必要が生じ得る（復帰突然変異と呼ばれる）。したがって、選択されたヒト抗体の生殖系列アクセプターフレームワークに関連して置換されるアミノ酸残基は、ヒト化抗体が機能及びパラトープを実質的に維持するように決定する必要がある。さらに、良好な製造性とダウンストリーム開発のためには、熱安定性と溶解性が維持または改善されることが望まれる。

【0307】

簡単に説明すると、ヒト化しようとするマウス抗ＭｅｒＴＫモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を、ＩＭＧＴ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）から取得したヒトＶＬ、ＶＨ、ＬＪ、及びＨＪの機能的生殖系列アミノ酸配列と比較した。偽遺伝子とオープンリーディングフレームはこれらの分析から除外した。１つのマウスモノクローナル抗体（クエリー）ごとに、最も類似性の高いＶＨ生殖系列アミノ酸配列のうちの１つまたは２つ、及び最も類似性の高いＶＬ生殖系列アミノ酸配列のうちの１つを選択し、最も類似性の高いＶＪ及びＨＪ遺伝子と組み合わせることで、１つまたは２つのヒト化アミノ酸配列を作製した。ヒトフレームワークに埋め込むＣＤＲは、ＡｂＭの定義に従って定義した。

【0308】

クエリー及びヒト化アミノ酸配列を使用し、ＢｉｏＭＯＥモジュールまたはＭＯＥ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｃａｎａｄａ）の抗体モデラーモジュールを使用してＦｖ相同性モデルを作成した。ＡＭＢＥＲ１０：ＥＨＴ力場解析を、抗体相同性モデリングプロセス全体を通じてエネルギーを最小化するために使用した。得られたＦｖ相同性モデルに基づいて、ＶＬとＶＨとの間の相互作用エネルギー、座標ベースの等電点（３Ｄ ｐＩ）、疎水性パッチ、荷電表面積などの分子記述子を計算、分析し、ＭＯＥにより提供されるスコアリング行列によって分別した。これらの分子記述子を用いて、タンパク質発現、精製、結合親和性試験、及び機能アッセイなどの下流の実験手順用のヒト化モノクローナル抗体の優先順位付けを行った。

【0309】

ＭＯＥのＢｉｏＭＯＥモジュールは、復帰突然変異の可能性のある残基を視覚化して分類するためのツールとしてのＭｕｔａｔｉｏｎ Ｓｉｔｅ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓを提供する。これに関連して、復帰突然変異は、元のクエリーアミノ酸配列に戻すようなアミノ酸置換として定義され、それによりヒト化アミノ酸配列を置き換える。このツールを使用して、元のクエリー（参照）を、一次アミノ酸配列と３Ｄ Ｆｖ相同性モデルの３Ｄ構造の両方について、選択されたヒト化バリアントと個々に比較した。

【0310】

参照（すなわち、親）抗体とヒト化バリアントとの間の変化を、アミノ酸の種類の違い、ＣＤＲの残基との相互作用の可能性、ＶＬ／ＶＨペアリングに対する影響の可能性、及びＣＤＲ内及びその近傍の疎水性及び荷電表面積の潜在的な変化に基づいて分類した。

【0311】

大きな電荷差を有する、または強い水素結合相互作用を含む、ＣＤＲまたはＶＬ／ＶＨ界面近くの変異を個別に評価し、顕著な破壊的変異を元のクエリー残基に戻した。

【0312】

ヒト化抗ＭｅｒＴＫ抗体であるＭＴＫ－３３及びＭＴＫ－１６の親和性成熟を行った。簡単に説明すると、重鎖または軽鎖の特定のアミノ酸残基を選択的に変異誘発させ、結合性が改善された変異体をさらなる回数のスクリーニングによって選択した。このプロセスにより、特異性、種間交差反応性、及び開発可能性のプロファイルが同時に改善された。本明細書に記載される親和性成熟された抗ＭｅｒＴＫ抗体の特性評価には、Ｃａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡに対するＳＰＲ親和性測定、及びヒトマクロファージに対するエフェロサイトーシスブロッキングアッセイが含まれた。複数回の親和性成熟の後、所望の親和性を有する抗ＭｅｒＴＫ抗体が得られた。

【0313】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）のアミノ酸配列を下記表１に示す。表１において、親マウス抗ＭｅｒＴＫ抗体にはＭＴＫ－１５、ＭＴＫ－１６、及びＭＴＫ－３３が含まれ、ＭＴＫ－１６及びＭＴＫ－３３のヒト化バリアント及び親和性成熟バリアントは、それぞれＭＴＫ－１６．２及びＭＴＫ－３３．１１である（国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０６４６４０号（ＷＯ２０２１／１１９５０８）を参照）。表１において、各抗体鎖の超可変領域（ＨＶＲ）には下線を付している。

【0314】

（表１）

【0315】

実施例８：さまざまなＦｃ領域を含む本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体
重鎖抗体可変配列をさまざまなＩｇＧのＦｃ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１、ＬＡＬＡＰＳ改変（ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３３１Ｓ）を含むヒトＩｇＧ１、ＮＳＬＦ（ＥＵ番号付けによるＮ３２５Ｓ、Ｌ３２８Ｆ）を含むヒトＩｇＧ１、及び野生型ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域に導入した。軽鎖抗体可変配列をヒトＩｇＧの軽鎖定常領域に導入した。得られた抗ＭｅｒＴＫ抗体の配列を下記表２に示す。

【0316】

（表２）

【0317】

上記表２には、本明細書ではそれぞれヒトＩｇＧ１のＦｃ ＬＡＬＡＰＳ及びヒトＩｇＧ軽鎖を含む、抗ＰＤＬ１抗体アテゾリズマブ由来の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＰＤＬ１抗体のアミノ酸配列も含まれる。

【0318】

実施例９：抗ＭｅｒＴＫ抗体の産生
抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマクローンを無血清ハイブリドーマ培地で培養し、上清中の抗ＭｅｒＴＫ抗体をＨａｍｉｌｔｏｎ ＳＴＡＲプラットフォーム（Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｅｎｏ，ＮＶ）でプロテインＡチップ（Ｐｈｙｎｅｘｕｓ Ｉｎｃ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して精製した。抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ハイブリドーマから得られた可変遺伝子領域を、ヒトＦｃドメインを含むキメラ抗体（上記のＬＡＬＡＰＳアミノ酸置換を含むヒトＩｇＧ１）の産生のための組換え発現プラスミドに、直接クローニングすることによっても産生された。Ｔｕｎａ２９３（商標）プロセス（ＬａｋｅＰｈａｒｍａ，Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡ）を使用して、ＨＥＫ２９３細胞を振盪フラスコに播種し、無血清の化学的規定培地を使用して増殖させた。発現プラスミドを細胞に一過的にトランスフェクトし、７日後に培養上清を回収した。遠心分離及び濾過による清澄化の後、上清中の抗ＭｅｒＴＫ抗体をプロテインＡクロマトグラフィーによって精製した。

【0319】

実施例１０：一価抗ＭｅｒＴＫ抗体の配列
表３に、Ｆｃ領域のヘテロ二量体化に関連するＦｃ領域内の「ノブ」アミノ酸改変を含む、本開示のさまざまな一価抗ＭｅｒＴＫ抗体重鎖アミノ酸配列を示す。表３において、「ノブ」形態のＩｇＧ１及びＩｇＧ４のＦｃ領域の改変は、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ番号付け）を含む。特定のＩｇＧ４形態は、Ｆａｂアーム交換を防ぐためのアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐ（ＥＵ番号付け）を含むＦｃ領域ヒンジ改変も含む（Ｓｉｌｖａ ｅｔ ａｌ，（２０１５），Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２９０：５４６２－５４６９を参照）。具体的には、ｈｕＩｇＧ４の野生型ヒンジ領域がアミノ酸配列

を含むのに対して、ＩｇＧ４ヒンジ領域のＳ２２８Ｐアミノ酸置換はアミノ酸配列

を含む。

【0320】

（表３）

【0321】

表４に、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体に関連するＦｃのヘテロ二量体化に使用される「ホール」アミノ酸改変を含むさまざまなＦｃ領域を示す。表４において、「ホール」形態のＩｇＧ１及びＩｇＧ４のＦｃ領域の改変は、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ番号付け）を含む。特定のＩｇＧ４形態は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐ（ＥＵ番号付け）を含むＦｃ領域ヒンジ改変も含む。

【0322】

（表４）

【0323】

実施例１１：一価抗ＭｅｒＴＫ抗体のＣＨＯ－ヒトＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞及びヒトマクロファージに対する結合活性
本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体が異なる細胞タイプに結合するかどうかを判定するために、以下の実験を行った。

【0324】

ヒトマクロファージをヒトＭ－ＣＳＦの存在下で７日間ヒト単球から分化させ、Ｍ２ｃ分化型ヒトマクロファージを得た。７日後、分化したヒトマクロファージを（掻き取ることにより）回収し、ＰＢＳに再懸濁し、９６ウェルプレートに播種して使用した。ヒトＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ｈｕＭｅｒＴＫ ＯＥ）またはＭ２ｃ分化型ヒトマクロファージを、Ｄｙｌｉｇｈｔ６５０とコンジュゲートされた一価抗ＭｅｒＴＫ抗体または二価抗ＭｅｒＴＫ抗体（すなわち、２本の完全長重鎖と２本の完全長軽鎖を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体）により、氷上で３０分間染色した。これらの実験では、広範な抗体濃度を用いて結合曲線を得た。これらの実験で試験したすべての抗体は、ＬＡＬＡＰＳ変異を含むＦｃ領域を有していた。細胞を固定した後、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩサイトメーターで取得した。平均蛍光強度（ＭＦＩ）をＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して計算し、Ｋｄ値をＰｒｉｓｍソフトウェアを使用して計算した。これらの結果におけるＫｄ値はＥＣ５０値と同様であったが、ＦＡＣＳ分析によって生成されたデータからＰｒｉｓｍソフトウェアによって計算される。Ｋｄ値が低いほど、細胞への抗体の結合性がより高いことを反映している。

【0325】

図２Ａは、ＣＨＯ－ｈｕＰＤＬ１ ＯＥに対する一価（すなわち、モノアーム）抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２、一価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１、二価（すなわち、完全ＩｇＧ）抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２、及び二価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１の結合曲線を示す。図２Ｂは、Ｍ２ｃ分化型ヒトマクロファージに対する一価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２、一価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１、二価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２、及び二価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１の結合曲線を示す。これらの実験では、一価の抗ＰＤＬ１抗体（Ｆｃ ＬＡＬＡＰＳ）をネガティブコントロールとして使用した。

【0326】

下記表５に、上記のＦＡＣＳ分析から得られたＫｄ値（ｎＭ）を要約する。図２Ａ及び２Ｂ及び表５に示されるように、一価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２及び二価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２は両方とも、約４０～４３ｎＭの範囲の同様の親和性でＣＨＯ－ｈｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞に対する結合性を示した。一価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２及び二価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２は、このアッセイで測定した場合にそれぞれ約７８ｎＭ及び５２ｎＭの親和性で、Ｍ２ｃ分化型ヒトマクロファージに対する同等の結合性を示した。これらの結果は、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２は、抗体が一価であるか二価であるかに関係なく、同様の親和性でＭｅｒＴＫに結合することを示した。

【0327】

二価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１は、一価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１と比較して、ＣＨＯ－ｈｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞及びＭ２ｃ分化型ヒトマクロファージの両方に対して高い結合親和性を示し、その一価型と比較して、ＣＨＯ－ｈｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞に対して約１０倍高い親和性を示し、Ｍ２ｃ分化型ヒトマクロファージに対して約５倍高い親和性を示した。予想されたように、コントロール抗体の一価抗ＰＤＬ１は、ＣＨＯ－ｈｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞との結合は示さなかったが、Ｍ２ｃ分化型ヒトマクロファージには結合した。

【0328】

（表５）

【0329】

実施例１２：一価抗ＭｅｒＴＫ抗体によるエフェロサイトーシスの低減
本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体が食細胞（例えば、ヒトマクロファージ）によるエフェロサイトーシスを低減する能力を以下のように評価した。上記のようにヒトマクロファージをヒトＭ－ＣＳＦの存在下で７日間ヒト単球から分化させてＭ２ｃ分化型ヒトマクロファージを得た。７日後、Ｍ２ｃ分化型ヒトマクロファージを（掻き取ることにより）回収し、ＰＢＳに再懸濁し、９６ウェルプレートに播種した。エフェロサイトーシスのＩＣ５０の測定では、細胞を１時間飢餓状態にした後、各ウェルに抗ＭｅｒＴＫ抗体を３７℃で３０分間添加した。

【0330】

Ｊｕｒｋａｔ細胞を１μＭのスタウロスポリン（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）により３７℃で３時間処理し（アポトーシスを誘導するため）、室温で３０分間、ｐＨｒｏｄｏ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で標識した。ＰＢＳで洗浄した後、ｐＨｒｏｄｏ標識したＪｕｒｋａｔ細胞を、ヒトマクロファージを含む各ウェルに１：４の比率（マクロファージ１個：ジャーカット細胞４個）で１時間加えた。各プレートをＰＢＳで洗浄した後、細胞を暗所の氷上で３０分間、ＡＰＣとコンジュゲートされた抗ヒトＣＤ１４で染色した。細胞を固定した後、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩサイトメーターで取得した。データをＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。

【0331】

これらの実験では、ｐＨｒｏｄｏとＣＤ１４の二重陽性細胞を分析ゲートとして設定し、この正確なゲートをすべての試料に適用することにより、エフェロサイトーシス陽性マクロファージを特定した。培地のみで培養したマクロファージを使用してベースラインのエフェロサイトーシスレベルを確立し、これを１００％のエフェロサイトーシス活性に設定した。相対的エフェロサイトーシスレベルは、抗ＭｅｒＴＫ抗体で処理した細胞で観察されたエフェロサイトーシスと比較した、培地のみで処理した細胞で観察されたエフェロサイトーシスの割合（％）として、計算した。これらの試験の結果を図３及び下記表６に示す。

【0332】

（表６）

【0333】

表６に示されるように、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、Ｍ２ｃ分化型ヒトマクロファージによるエフェロサイトーシスを低減することができ、一価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１及びＭＴＫ－１６．２でＩＣ５０は、それぞれ約４．４ｎＭ及び３７．９ｎＭであった。これらのデータは、一価抗ＭｅｒＴＫ抗体であるＭＴＫ－１６．２及びＭＴＫ－３３．１１が、それらの対応する二価抗体と比較して比較的弱いエフェロサイトーシス遮断活性を示すことも示しており、二価の抗ＭＴＫ－３３．１１抗体が０．３４１ｎＭのＩＣ５０値を示したのに対して、一価の抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１は約４．４ｎＭのＩＣ５０値を示し、さらに、二価の抗ＭＴＫ－１６．２抗体のＩＣ５０値が０．４３６ｎＭであったのに対して、一価の抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２のＩＣ５０値は３７．８６ｎＭであった。予想されたとおり、一価抗ＰＤＬ１抗体はエフェロサイトーシスに対する阻害活性を示さなかった（図３を参照）。

【0334】

これらのデータは、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体が、その対応する二価抗体よりもその程度は低いものの、食細胞によるエフェロサイトーシスの低減に有効であることを示した。

【0335】

実施例１３：一価抗ＭｅｒＴＫ抗体のｐＡＫＴ活性
ＭｅｒＴＫリガンドＧａｓ６の非存在下または存在下でのｐＡＫＴ活性に対する本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果を以下のようにして調べた。Ｍ２ｃ分化型ヒトマクロファージ（上記のように生成したもの）を抗ＭｅｒＴＫ抗体（１０μｇ／ｍｌ）で３７℃で３０分間処理し、続いて２００ｎＭの組換えヒトＧａｓ６またはＰＢＳを加えた。さらに３０分間インキュベートした後、細胞を溶解し、均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイを使用して、細胞内のｐＡＫＴレベルを総ＡＫＴと比較して分析した。ｐＡＫＴシグナルを総ＡＫＴシグナルに対して正規化して最終的なｐＡＫＴ活性の測定値を定量化した。これらの試験の結果を図４及び表７に示す。

【0336】

（表７）

【0337】

図４及び上記の表７に示されるように、一価ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２及びＭＴＫ－３３．１１では、対応する二価の抗体と比較して、ＭｅｒＴＫリガンドＧａｓ６の非存在下でのｐＡＫＴ／ｔＡＫＴの倍率変化が低かった。このデータは、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体が、本開示の二価抗ＭｅｒＴＫ抗体で観察されたものと比較して、ＭｅｒＴＫリガンドＧａｓ６の非存在下でヒトマクロファージ中のｐＡＫＴレベル（例えば、リガンド非依存性ｐＡＫＴ活性）を増加させる効果がより低いことを示した。抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１５を、ｐＡＫＴ活性を増加させるのに効果的なポジティブコントロール抗体として用いた。

【0338】

上記に述べたように、Ｇａｓ６はＭｅｒＴＫのリガンドであり、ＭｅｒＴＫと相互作用してｐＡＫＴを増加させる。本実験ではまた、ＭｅｒＴＫリガンドＧａｓ６の存在下におけるｐＡＫＴに対する本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体と二価抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果も比較した。下記表８は、本開示の一価及び二価抗ＭｅｒＴＫ抗体によるｈｕＧａｓ６媒介ｐＡＫＴ減少活性のＩＣ５０値を示す。表８に示されるように、一価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２及びＭＴＫ－３３．１１は、Ｇａｓ６の存在下でｐＡＫＴ活性に影響を与えるうえで二価の対応する抗体よりも高いＩＣ５０値を示した。これらのデータは、二価抗ＭｅｒＴＫ抗体が一価抗ＭｅｒＴＫ抗体と比較して、Ｇａｓ６媒介ｐＡＫＴ活性を低下させるうえでより効果的であることを示した。

【0339】

（表８）

【0340】

実施例１４：一価抗ＭｅｒＴＫ抗体の結合動態
ヒト、カニクイザル、及びマウスＭｅｒＴＫに対する本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体の結合動態を、Ｃａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡ機器を使用して評価した。簡単に説明すると、抗ＭｅｒＴＫ抗体を、１０ｍＭ酢酸塩、ｐＨ４．２５（Ｃａｒｔｅｒｒａ）中で１０μｇ／ｍｌに希釈することによって調製した。ＨＣ３０センサーチップ（Ｃａｒｔｅｒｒａ）を、シングルチャネルフローセルを使用し、１００ｍＭのＭＥＳ ｐＨ５．５、１００ｍＭのスルホ－ＮＨＳ、４００ｍＭのＥＤＣの１：１：１混合物（いずれもＭＥＳ ｐＨ５．５で再構成し；アッセイを行う直前に、それぞれ１００μｌをバイアル中で混合した）を７分間注入して活性化した。マルチチャネルアレイフローセルに切り替えた後、９６スポットアレイの活性化チップ上に各抗体を１５分間注入した。チップの２番目のブロックに抗体を二重に注入し、前と同様にスポットした。次いで、シングルチャネルフローセルを使用して、１Ｍエタノールアミン、ｐＨ８．５（Ｃａｒｔｅｒｒａ）を７分間注入することによって、チップ上の残りの非結合活性基をブロックした。

【0341】

０．５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）を含むランニングバッファー（ＨＢＳ－ＴＥ、Ｃａｒｔｅｒｒａ）でプライミングした後、固定化した抗ＭｅｒＴＫ抗体を、上記のようにヒト、カニクイザル及びマウスオルソログの細胞外ドメインを含むいくつかの組換えＭｅｒＴＫ細胞外ドメインの形態に結合する能力について試験した。シングルチャネルフローセルを使用して抗体アレイ全体に各分析物を注入することによって親和性の推定値を生成した。ＭｅｒＴＫ分析物の６つの３倍連続希釈液（ヒトＭｅｒＴＫでは１．２ｍＭ～４．９ｎＭ、カニクイザル及びマウスＭｅｒＴＫでは３～１．２ｎＭ）をランニングバッファー中で調製し、最低濃度から最高濃度まで連続して３００秒間注入した。解離を３００秒間観測し、その後、１０ｍＭグリシン、ｐＨ２．５の２×３０秒間の各注入の後に再生させた。各シリーズ間で３つのバッファーブランクを実行した（シリーズごとに１種）。３種すべてのＭｅｒＴＫのすべての濃度を注射した後、３種すべての各濃度が大きな間隔で２回ずつ注射されるように、２重の注射セットを実行した。ＮｅｘｔＧｅｎＫＩＴハイスループット反応速度解析ソフトウェア（Ｃａｒｔｅｒｒａ）を使用してデータを処理及び分析した。二重の注入はすべての試料でほぼ完全に重なっており、実行中に表面が劣化していないことを示した。

【0342】

次いで、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体について適合させた結合速度定数及び解離速度定数（ｋ－ｏｎ及びｋ－ｏｆｆ）から平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を計算した。一般に、抗体の結合プロファイルは複雑であり、１：１モデルに理想的に適合しなかったことから、以下の表９に要約されるＫ_Ｄ値は、抗体と抗原との間の比較のための推定値を表す。

【0343】

（表９）

【0344】

これらの結果は、ＭｅｒＴＫへの結合について試験した一価または二価の抗ＭｅｒＴＫ抗体では有意な親和性の差が観察されないことを示し、本開示の一価及び二価の抗ＭｅｒＴＫ抗体が一価の結合動態の特徴を示したことを示した。

【0345】

実施例１５：ＭＣ３８モデルマウス腫瘍モデルにおける一価抗ＭｅｒＴＫ抗体処理の効果
本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体がインビボでＭＣ３８腫瘍の増殖を遅らせる能力を以下のように試験した。ＭＣ３８細胞をｈｕＭｅｒＴＫノックイン（ＫＩ）マウスの皮下に移植した。腫瘍サイズが体積約８０～１００ｍｍ^３に達した時点で、マウスを１０ｍｇ／ｋｇの一価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１と３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤＬ１、３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤＬ１単独、または１０ｍｇ／ｋｇのコントロール抗体で週２回、３週間にわたって処理した。腫瘍体積を週３回測定した。

【0346】

図６は、抗ＰＤＬ１抗体と二価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－１６．２または二価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１のいずれかとの組み合わせが、抗ＰＤＬ１抗体単独の投与で観察されたものと比較して腫瘍体積のより大きな減少を示したことを示している。これらのデータは、抗ＰＤＬ１抗体と本開示の二価抗ＭｅｒＴＫ抗体との組み合わせの投与が、インビボでの腫瘍体積の減少により大きな効果を示すことを示した。

【0347】

図７は、抗ＰＤＬ１抗体と一価（すなわち、モノアーム）抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１抗体との組み合わせが、抗ＰＤＬ１抗体単独またはコントロール抗体のいずれかで処理したマウスで観察された腫瘍増殖速度と比較して、マウスの腫瘍増殖速度を低下させたことを示している。図８Ａ、８Ｂ、及び８Ｃは、各群の個々のマウスの腫瘍増殖を示す（それぞれ、コントロール抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＰＬＤ１抗体＋一価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１）。抗ＰＤＬ１抗体と一価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１の併用処理では、１０匹中５匹のマウスで腫瘍がほぼ完全に退縮したが、抗ＰＤＬ１抗体単独による処理で腫瘍が完全に退縮したのはマウス１０匹中２匹であった。これらの結果は、抗ＰＤＬ１抗体と組み合わせた本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体が、抗ＰＬＤ１抗体単独よりも腫瘍増殖の阻害においてより効果的であることを示すものである。さらに、これらの結果は、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体が、抗ＰＤＬ１抗体と併用した場合、インビボで腫瘍体積を減少させるうえでそれらの対応する二価抗体と同様に有効であることを示した。

【0348】

実施例１６：特定の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体の形態
下記表１０及び表１１に、二量体化されたＦｃ領域を含まない本開示の特定の一価抗ＭｅｔＴＫ抗体の形態を示す。

【0349】

（表１０）

【0350】

（表１１）

【0351】

下記表１２及び表１３に、二量体化されたＦｃ領域を含む本開示の特定の一価抗ＭｅｔＴＫ抗体の形態を示す。

【0352】

（表１２）

【0353】

（表１３）

【0354】

実施例１７：ＭＣ３８モデルマウス腫瘍モデルにおける一価抗ＭｅｒＴＫ抗体処理の効果
抗ＰＤＬ１と組み合わせた一価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１の効果について、Ｅ０７７１マウス腫瘍モデルでも評価を行った。ｈｕＭｅｒＴＫノックイン（ＫＩ）マウスの皮下にＥ０７７１細胞を移植した後、ＭＣ３８モデルにおいて実施例１５で上記に述べたようにして抗体で処理した。

【0355】

図９は、一価抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－３３．１１と抗ＰＤＬ１治療との併用により、抗ＰＤＬ１単独で処理したマウスで観察された腫瘍体積の減少と比較して、動物における腫瘍体積の減少がより大きかったことを示している。

【0356】

これらの結果は、本開示の一価抗ＭｅｒＴＫ抗体は、抗ＰＤＬ１抗体と併用した場合に、抗ＰＤＬ１抗体単独よりも腫瘍増殖の阻害により効果的であることを示すものである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9】

【配列表】

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【国際調査報告】