特表 2024-527514 ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質での循環器疾患の治療

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-25

(54)【発明の名称】ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質での循環器疾患の治療

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20240718BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20240718BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240718BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240718BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N

C07K16/28 ZNA

A61P43/00 121

A61P9/00

A61P9/10 101

A61P1/16

A61P3/04

A61P9/10

A61K39/395 D

A61K45/00

C12N15/13

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023578758

(86)(22)【出願日】2022-06-24

(85)【翻訳文提出日】2024-02-19

(86)【国際出願番号】 US2022034834

(87)【国際公開番号】W WO2022272018

(87)【国際公開日】2022-12-29

(31)【優先権主張番号】63/215,260

(32)【優先日】2021-06-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/353,223

(32)【優先日】2022-06-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】500049716

【氏名又は名称】アムジエン・インコーポレーテツド

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】シェタリー，スーザン

(72)【発明者】

【氏名】ジャクソン，サイモン

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZA361

4C084ZC202

4C084ZC332

4C084ZC412

4C084ZC751

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB11

4C085BB36

4C085BB41

4C085BB43

4C085EE01

4C085GG02

4C085GG04

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA09

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、概して、ＴＲＥＭ－１に結合する抗原結合タンパク質及びその組成物を使用して、アテローム性動脈硬化症又は心筋梗塞などの循環器疾患を治療する方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

循環器疾患を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、治療有効量の、骨髄系細胞上で発現されるＴｒＩｇＧｅｒｉｎｇ受容体１（ＴＲＥＭ－１）に結合する抗原結合タンパク質を投与することを含み、前記抗原結合タンパク質が、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号１０、３０、５０、７０、９０、１１０、１３０、１５０、１７０、１９０、２１０、２３０、２５０、２７０及び５４４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１１、３１、５１、７１、９１、１１１、１３１、１５１、１７１、１９１、２１１、２３１、２５１、２７１及び５４５から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
ｉｉｉ．配列番号１２、３２、５２、７２、９２、１１２、１３２、１５２、１７２、１９２、２１２、２３２、２５２、２７２及び５４６から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号１６、３６、５６、７６、９６、１１６、１３６、１５６、１７６、１９６、２１６、２３６、２５６、２７６及び５５０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１７、３７、５７、７７、９７、１１７、１３７、１５７、１７７、１９７、２１７、２３７、２５７、２７７、２９７及び５５１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．配列番号１８、３８、５８、７８、９８、１１８、１３８、１５８、１７８、１９８、２１８、２３８、２５８、２７８、２９８及び５５２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖可変ドメインと
を含む、方法。

【請求項2】

前記抗原結合タンパク質が、
ａ．配列番号１０、３０、５０、９０、１３０、１５０又は２７０で示される軽鎖ＣＤＲ１配列と；
ｂ．配列番号１１、３１、５１、９１、１３１、１５１又は２７１で示される軽鎖ＣＤＲ２配列と；
ｃ．配列番号１２、３２、５２、９２、１３２、１５２又は２７２で示される軽鎖ＣＤＲ３配列と；
ｄ．配列番号１６、３６、５６、９６、１３６、１５６及び２７６で示される重鎖ＣＤＲ１配列と；
ｅ．配列番号１７、３７、５７、９７、１３７、１５７及び２７７で示される重鎖ＣＤＲ２配列と；
ｆ．配列番号１８、３８、５８、９８、１３８及び２７８で示される重鎖ＣＤＲ３配列と
を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記抗原結合タンパク質が、
ａ．配列番号３０又は９０で示される軽鎖ＣＤＲ１配列と；
ｂ．配列番号３１又は９１で示される軽鎖ＣＤＲ２配列と；
ｃ．配列番号３２又は９２で示される軽鎖ＣＤＲ３配列と；
ｄ．配列番号３６又は９６で示される重鎖ＣＤＲ１配列と；
ｅ．配列番号３７又は９７で示される重鎖ＣＤＲ２配列と；
ｆ．配列番号３８又は９８で示される重鎖ＣＤＲ３配列と
を含む、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

前記抗原結合タンパク質が、
ｉ）配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｉ）配列番号３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号３８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｉｉ）配列番号５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号５８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｖ）配列番号７０（ＬＣＤＲ１）、配列番号７１（ＬＣＤＲ２）、配列番号７２（ＬＣＤＲ３）、配列番号７６（ＨＣＤＲ１）、配列番号７７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号７８（ＨＣＤＲ３）；
ｖ）配列番号９０（ＬＣＤＲ１）、配列番号９１（ＬＣＤＲ２）、配列番号９２（ＬＣＤＲ３）、配列番号９６（ＨＣＤＲ１）、配列番号９７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号９８（ＨＣＤＲ３）；
ｖｉ）配列番号１１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１１２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１１６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１１７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１１８（ＨＣＤＲ３）；
ｖｉｉ）配列番号１３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１３８（ＨＣＤＲ３）；
ｖｉｉｉ）配列番号１５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１５８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｘ）配列番号１７０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１７２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１７６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１７７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１７８（ＨＣＤＲ３）；
ｘ）配列番号１９０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１９１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１９２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１９６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１９７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１９８（ＨＣＤＲ３）；
ｘｉ）配列番号２１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２１１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２１２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２１６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２１７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２１８（ＨＣＤＲ３）；
ｘｉｉ）配列番号２３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２３８（ＨＣＤＲ３）；
ｘｉｉｉ）配列番号２５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２５８（ＨＣＤＲ３）；
ｘｉｖ）配列番号２７０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２７１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２７２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２７６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２７７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２７８（ＨＣＤＲ３）；又は
ｘｖ）配列番号５４４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５４５（ＬＣＤＲ２）、配列番号５４６（ＬＣＤＲ３）、配列番号５５０（ＨＣＤＲ１）、配列番号５５１（ＨＣＤＲ２）及び配列番号５５２（ＨＣＤＲ３）
を含む、請求項１～３の何れか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記抗原結合タンパク質が、
ｉ）配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｉ）配列番号３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号３８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｉｉ）配列番号５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号５８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｖ）配列番号９０（ＬＣＤＲ１）、配列番号９１（ＬＣＤＲ２）、配列番号９２（ＬＣＤＲ３）、配列番号９６（ＨＣＤＲ１）、配列番号９７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号９８（ＨＣＤＲ３）；
ｖ）配列番号１３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１３８（ＨＣＤＲ３）；
ｖｉ）配列番号１５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１５８（ＨＣＤＲ３）；又は
ｖｉｉ）配列番号２７０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２７１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２７２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２７６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２７７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２７８（ＨＣＤＲ３）
から選択されるＣＤＲのセットを含む、請求項１～４の何れか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記抗原結合タンパク質が、
ａ．アミノ酸配列配列番号３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号３２（ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖並びにアミノ酸配列配列番号３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号３８（ＨＣＤＲ３）を含む重鎖；又は
ｂ．アミノ酸配列配列番号９０（ＬＣＤＲ１）、配列番号９１（ＬＣＤＲ２）、配列番号９２（ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖並びにアミノ酸配列配列番号９６（ＨＣＤＲ１）、配列番号９７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号９８（ＨＣＤＲ３）を含む重鎖
を含む、請求項１～５の何れか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記抗原結合タンパク質が、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列；又は
ｉｉｉ．配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、２５９、２７９及び５３７から選択される核酸配列からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列；又は
ｉｉｉ．配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０及び２１８４から選択される核酸配列からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと
を含む、請求項１～６の何れか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記抗原結合タンパク質が、配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０からなる群から選択される重鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～７の何れか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記抗原結合タンパク質が、配列番号２２、４２、６２、１０２、１４２、１６２及び２８２からなる群から選択される重鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～８の何れか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記抗原結合タンパク質が、配列番号４２及び１０２からなる群から選択される重鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～９の何れか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記抗原結合タンパク質が、配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９からなる群から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１０の何れか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記抗原結合タンパク質が、配列番号２１、４１、６１、１０１、１４１、１６１及び２８１からなる群から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１１の何れか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記抗原結合タンパク質が、配列番号４１及び１０１からなる群から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２の何れか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記抗原結合タンパク質が、
ｉ）配列番号２１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｉｉ）配列番号４１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号４２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｉｉｉ）配列番号６１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号６２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｉｖ）配列番号８１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号８２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｖ）配列番号１０１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１０２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｖｉ）配列番号１２１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１２２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｖｉｉ）配列番号１４１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１４２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｖｉｉｉ）配列番号１６１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１６２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｉｘ）配列番号１８１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１８２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｘ）配列番号２０１で示される軽鎖可変ドメイン及び配列番号２０２で示される重鎖可変ドメイン；
ｘｉ）配列番号２２１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２２２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｘｉｉ）配列番号２４１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２４２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｘｉｉｉ）配列番号２６１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２６２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｘｉｖ）配列番号２８１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２８２で示される重鎖可変ドメイン配列；又は
ｘｖ）配列番号５３９で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号５４０で示される重鎖可変ドメイン配列
を含む、請求項１～１３の何れか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記抗原結合タンパク質が、
ｉ）配列番号２１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２２で示される重鎖可変ドメイン；
ｉｉ）配列番号４１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号４２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｉｉｉ）配列番号６１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号６２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｉｖ）配列番号１０１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号８２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｖ）配列番号１４１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１４２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｖｉ）配列番号１６１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１６２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｖｉｉ）配列番号２８１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２８２で示される重鎖可変ドメイン配列
を含む、請求項１～１４の何れか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記抗原結合タンパク質が、配列番号４１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号４２で示される重鎖可変ドメイン配列；又は配列番号１０１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１０２で示される重鎖可変ドメイン配列を含む、請求項１～１５の何れか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記抗原結合タンパク質の１つ以上の重鎖フレームワークアミノ酸が、別のヒト抗体アミノ酸配列からの対応するアミノ酸で置換される、請求項１～１６の何れか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記抗原結合タンパク質の１つ以上の軽鎖フレームワークアミノ酸が、別のヒト抗体アミノ酸配列からの対応するアミノ酸で置換される、請求項１～１７の何れか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記重鎖は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥの重鎖定常領域、それらの断片、それらの組み合わせ及び１～１０個の重鎖フレームワークアミノ酸が別のヒト抗体アミノ酸配列からの対応するアミノ酸で置換されるそれらの修飾物から選択される定常領域を含む、請求項１～１８の何れか一項に記載の方法。

【請求項20】

循環器疾患を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、治療有効量の、請求項１～１９の何れか一項に記載の抗原結合タンパク質とＴＲＥＭ－１への結合について競合する抗原結合タンパク質を投与することを含む方法。

【請求項21】

前記抗原結合タンパク質が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、組み換え抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ２、一価ＩｇＧ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体及びＩｇＧ４抗体からなる群から選択される、請求項１～２０の何れか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記抗原結合タンパク質が、ＩｇＧ１抗体である、請求項１～２１の何れか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記抗原結合タンパク質が、一価ＩｇＧである、請求項１～２２の何れか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記抗原結合タンパク質が、ヒト抗体である、請求項１～２３の何れか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記抗原結合タンパク質が、配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０から選択される配列と少なくとも９０％同一である重鎖アミノ酸配列と、配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９から選択される配列と少なくとも９０％同一である軽鎖アミノ酸配列とを含む、請求項１～２４の何れか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記抗原結合タンパク質が、配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０から選択される重鎖アミノ酸配列と、配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９から選択される軽鎖アミノ酸配列とを有する、請求項１～２５の何れか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記抗原結合タンパク質が、配列番号２２、４２、６２、１０２、１４２、１６２及び２８２から選択される重鎖アミノ酸配列を有する、請求項１～２６の何れか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記抗原結合タンパク質が、配列番号４２及び１０２から選択される重鎖アミノ酸配列を有する、請求項１～２７の何れか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記抗原結合タンパク質が、配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１４１、１６１及び２８１から選択される軽鎖アミノ酸配列を有する、請求項１～２７の何れか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記抗原結合タンパク質が、配列番号４１及び１０１から選択される軽鎖アミノ酸配列を有する、請求項１～２７の何れか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記抗原結合タンパク質が、薬学的に許容可能な担体をさらに含む、請求項１～３０の何れか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記循環器疾患が、心筋梗塞、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、心不全、卒中発作（虚血性及び出血性）、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、末梢血管疾患（例えば、末梢動脈疾患）、不安定プラーク、急性冠症候群、脳血管疾患、脳血管アテローム性動脈硬化症及び肥満からなる群から選択される、請求項１～３１の何れか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記循環器疾患が、アテローム性動脈硬化症である、請求項１～３２の何れか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記循環器疾患が、心筋梗塞である、請求項１～３２の何れか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記治療が、静脈内又は皮下に投与される、請求項１～３４の何れか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記治療が、週１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月１回、３か月に１回、６か月に１回又は１年に１回投与される、請求項１～３５の何れか一項に記載の方法。

【請求項37】

１つ又は２つの追加の治療剤を投与することをさらに含む、請求項１～３６の何れか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記追加の治療剤が、１つ以上のコレステロール低下剤、ＬＤＬＲの発現を増加させる薬剤、スタチン（アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン）、ＰＣＳＫ９阻害剤（Ｒｅｐａｔｈａ（登録商標）、Ｐｒａｌｕｅｎｔ（登録商標）、Ｌｅｑｖｉｏ（登録商標））、ニコチン酸（ナイアシン）（ＮＩＡＣＯＲ（登録商標）、ＮＩＡＳＰＡＮ（登録商標）（徐放性ナイアシン）、ＳＬＯ－ＮＩＡＣＩＮ（登録商標）（徐放性ナイアシン））、フィブリン酸（ＬＯＰＩＤ（登録商標）（ゲムフィブロジル）、ＴＲＩＣＯＲ（登録商標）（フェノフィブレート））、胆汁酸吸着剤（ＱＵＥＳＴＲＡＮ（登録商標）（コレスチラミン）、コレセベラム（ＷＥＬＣＨＯＬ（登録商標））、ＣＯＬＥＳＴＩＤ（登録商標）（コレスチポール））、コレステロール吸収阻害剤（Ｚｅｔｉａ（エゼチミブ））、ニコチン酸とスタチンとの組み合わせ（ＡＤＶＩＣＯＲ（登録商標）（ロバスタチン及びＮＩＡＳＰＡＮ（登録商標）））、スタチンと吸収阻害剤との組み合わせ（ＶＹＴＯＲＩＮ（ＺＯＣＯＲ（登録商標）及びＺＥＴＩＡ（登録商標）））及び／又はＰＣＳＫ９阻害剤のような脂質修飾剤、ＰＰＡＲガンマアゴニスト、ＰＰＡＲアルファ／ガンマアゴニスト、スクアレンシンターゼ阻害剤、コレステリルエステル転移タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤、降圧剤、抗血栓薬（アスピリン）、抗糖尿病薬（スルホニル尿素、インスリン、ＧＬＰ－１類似体、ＤＤＰＩＶ阻害剤、ＳＧＬ２阻害剤など）、ＡｐｏＢ修飾薬、ＭＴＰ阻害剤、Ｃｏｒｌａｎｏｒ（登録商標）（イバブラジン）Ｉ（ｆ）電流阻害剤、オメカムチブメカルビル心筋ミオシン活性化因子、リポタンパク質（ａ）を低下させるＯＬＰＡＳＩＲＡＮ（ＡＭＧ８９０）（ｓｉＲＮＡ）、ＡＭＧ５９４心筋トロポニン活性化因子、ＡＭＧ６０９、ＡＭＧ１７１（成長分化因子１５（ＧＤＦ１５）類似体）、ＡＭＧ１３３（胃抑制ポリペプチド受容体（ＧＩＰＲ）アンタゴニスト及びグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）受容体アゴニスト）並びに／又は閉塞性動脈硬化症治療からなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記ＴＲＥＭ－１が、配列番号２で示されるヒトＴＲＥＭ－１である、請求項１～３８の何れか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記投与が、損傷部位への炎症性細胞遊走、心臓組織への骨髄系細胞の浸潤、微小環境における炎症性サイトカイン、組織損傷、泡沫細胞形成の減少、壊死コアサイズの減少、瘢痕形成の減少、内皮細胞機能不全の減少及び／又は血栓形成の減少からなる群から選択される循環器疾患の１つ以上の症状を軽減する、請求項１～３９の何れか一項に記載の方法。

【請求項41】

循環器疾患の治療における使用のための、骨髄系細胞上で発現されるＴｒＩｇＧｅｒｉｎｇ受容体１（ＴＲＥＭ－１）に結合する抗原結合タンパク質を含む組成物であって、前記抗原結合タンパク質が、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号１０、３０、５０、７０、９０、１１０、１３０、１５０、１７０、１９０、２１０、２３０、２５０、２７０及び５４４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１１、３１、５１、７１、９１、１１１、１３１、１５１、１７１、１９１、２１１、２３１、２５１、２７１及び５４５から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
ｉｉｉ．配列番号１２、３２、５２、７２、９２、１１２、１３２、１５２、１７２、１９２、２１２、２３２、２５２、２７２及び５４６から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号１６、３６、５６、７６、９６、１１６、１３６、１５６、１７６、１９６、２１６、２３６、２５６、２７６及び５５０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１７、３７、５７、７７、９７、１１７、１３７、１５７、１７７、１９７、２１７、２３７、２５７、２７７及び５５１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．配列番号１８、３８、５８、７８、９８、１１８、１３８、１５８、１７８、１９８、２１８、２３８、２５８、２７８及び５５２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖可変ドメインと
を含む、組成物。

【請求項42】

循環器疾患を治療するための薬剤の調製における、骨髄系細胞上で発現されるＴｒＩｇＧｅｒｉｎｇ受容体１（ＴＲＥＭ－１）に結合する抗原結合タンパク質を含む組成物の使用であって、前記抗原結合タンパク質が、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号１０、３０、５０、７０、９０、１１０、１３０、１５０、１７０、１９０、２１０、２３０、２５０、２７０及び５４４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１１、３１、５１、７１、９１、１１１、１３１、１５１、１７１、１９１、２１１、２３１、２５１、２７１及び５４５から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
ｉｉｉ．配列番号１２、３２、５２、７２、９２、１１２、１３２、１５２、１７２、１９２、２１２、２３２、２５２、２７２及び５４６から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号１６、３６、５６、７６、９６、１１６、１３６、１５６、１７６、１９６、２１６、２３６、２５６、２７６及び５５０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１７、３７、５７、７７、９７、１１７、１３７、１５７、１７７、１９７、２１７、２３７、２５７、２７７及び５５１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．配列番号１８、３８、５８、７８、９８、１１８、１３８、１５８、１７８、１９８、２１８、２３８、２５８、２７８及び５５２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖可変ドメインと
を含む、使用。

【請求項43】

前記循環器疾患が、心筋梗塞、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、心不全、卒中発作（虚血性及び出血性）、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、末梢血管疾患（例えば、末梢動脈疾患）、不安定プラーク、急性冠症候群、脳血管疾患、脳血管アテローム性動脈硬化症及び肥満からなる群から選択される、請求項４１又は４２に記載の使用。

【請求項44】

循環器疾患を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、治療有効量の、骨髄系細胞上で発現されるＴｒＩｇＧｅｒｉｎｇ受容体１（ＴＲＥＭ－１）に結合する抗原結合タンパク質を投与することを含み、前記抗原結合タンパク質が、ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列Ｘ_１ＡＳＱＳＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＮＬＡ（配列番号５５３）（ここで、Ｘ_１は、Ｒ又はＱであり、Ｘ_２は、Ｖ又はＩであり、Ｘ_３は、Ｎ又はＳであり、Ｘ_４は、Ｓ、Ｈ、Ｉ、Ｖ又はＡである）を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列ＧＡＸ_１Ｘ_２ＲＡＴ（配列番号５５４）（ここで、Ｘ_１は、Ｓ又はＹであり、Ｘ_２は、Ｔ又はＩである）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．アミノ酸配列ＱＸ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＰＸ_７Ｔ（配列番号５５５）（ここで、Ｘ_１は、Ｑ、Ｈ又はＥであり、Ｘ_２は、Ｆ又はＹであり、Ｘ_３は、Ｋ、Ｙ又はＩであり、Ｘ_４は、Ｎ、Ｔ、Ｌ、Ｉ又はＭであり；Ｘ_５は、Ｗ、Ｆ、Ｈ又はＹであり、Ｘ_６は、非存在又はＰであり；Ｘ_７は、Ｗ、Ｎ、Ｙ、Ｈ又はＬである）を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３ＭＸ_４（配列番号５５６）（ここで、Ｘ_１は、Ａ、Ｒ、Ｔ又はＳであり、Ｘ_２は、Ｙ又はＮであり、Ｘ_３は、Ａ又はＷであり、Ｘ_４は、Ｓ又はＮである）を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９ＹＹＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２ＶＫＧ（配列番号５５９）（ここで、Ｘ_１は、Ｔ、Ｅ又はＳであり、Ｘ_２は、非存在であるか、又はＭ、Ｖ若しくはＩであり、Ｘ_３は、Ｓ、Ｒ又はＫであり、Ｘ_４は、Ｇ又はＱであり、Ｘ_５は、Ｓ、Ｄ又はＨであり、Ｘ_６は、Ｇ、Ｓ、Ｌ又はＡであり、Ｘ_７は、Ｓ、Ｇ又はＲであり、Ｘ_８は、Ｔ、Ｓ、Ｐ又はＥであり、Ｘ_９は、Ｔ又はＩであり、Ｘ_１０は、Ａ又はＶであり、Ｘ_１１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_１２は、Ｓ又はＡである）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７ＦＸ_８ＹＹＸ_９（配列番号５５７）（ここで、Ｘ_１は、Ｖ、Ｅ、Ａ又はＧであり、Ｘ_２は、Ａ、Ｆ、Ｙ又はＧであり、Ｘ_３は、Ｇ、Ｓ、Ｙ又はＷであり、Ｘ_４は、Ｓ又はＲであり、Ｘ_５は、非存在であるか又はＮであり、Ｘ_６は、Ｆ、Ｓ、Ｙ又は非存在であり、Ｘ_７は、Ｌ若しくはＦ又は非存在であり、Ｘ_８は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_９は、Ｙ、Ｈ又はＳである）を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖可変ドメインと
を含む、方法。

【請求項45】

前記抗原結合タンパク質が、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＮＳＮＬＡ（配列番号５５６）を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号５７３）を含む軽鎖ＣＤＲ２；
ｉｉｉ．アミノ酸配列ＱＱＦＫＮＷＰＰＴ（配列番号５７６）を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列ＡＹＡＭＳ（配列番号５８１）を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列ＴＳＧＳＧＳＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５８４）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．アミノ酸配列ＶＡＧＳＮＦＬＦＤＹ（配列番号８４２）を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖可変ドメインと
を含む、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

循環器疾患を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、治療有効量の、骨髄系細胞上で発現されるＴｒＩｇＧｅｒｉｎｇ受容体１（ＴＲＥＭ－１）に結合する抗原結合タンパク質を投与することを含み、前記抗原結合タンパク質が、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列ＱＡＳＸ_１ＤＩＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＬＮ（配列番号５５８）（ここで、Ｘ_１は、Ｒ又はＱであり、Ｘ_２は、Ｒ、Ｓ、Ｎ又はＦであり、Ｘ_３は、Ｋ又はＮであり、Ｘ_４は、Ｈ、Ｙ又はＤである）を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４ＬＥＴ（配列番号５６０）（ここで、Ｘ_１は、Ｄ、Ｇ又はＨであり、Ｘ_２は、Ａ、Ｖ又はＴであり、Ｘ_３は、Ｓ、Ａ又はＹであり、Ｘ_４は、Ｔ又はＮである）を含む軽鎖ＣＤＲ２；
ｉｉｉ．アミノ酸配列ＱＸ_１ＹＸ_３Ｘ_４Ｘ_５ＰＸ_６Ｔ（配列番号５６１）（ここで、Ｘ_１は、Ｑ又はＨであり、Ｘ_２は、Ｄ、Ａ又はＧであり、Ｘ_３は、Ｎ又はＫであり；Ｘ_４は、Ｌ又はＩであり、Ｘ_５は、Ｉ又はＬである）を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列Ｘ_１ＹＤＩＮ（配列番号５６３）（ここで、Ｘ_１は、Ｒ又はＳである）を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２ＮＰＸ_３Ｘ_４ＧＸ_５Ｘ_６ＧＸ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０ＦＸ_１１Ｘ_１２（配列番号５６４）（ここで、Ｘ_１は、Ｗ又はＲであり、Ｘ_２は、Ｍ又はＬであり、Ｘ_３は、Ｎ、Ｑ又はＫであり、Ｘ_４は、Ｓ、Ａ又はＲであり、Ｘ_５は、Ｎ又はＱであり、Ｘ_６は、Ｓ、Ａ又はＴであり、Ｘ_７は、Ｓ、Ｑ又はＹであり、Ｘ_８は、Ｖ又はＴであり、Ｘ_９は、Ｑ又はＫであり、Ｘ_１０は、Ｋ又はＮであり、Ｘ_１１は、Ｒ又はＱであり、Ｘ_１２は、Ｇ又はＤである）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２ＦＸ_１３Ｘ_１４（配列番号５６５）（ここで、Ｘ_１は、Ｇ、Ｌ又はＲであり、Ｘ_２は、Ｇ、Ｉ又はＲであり、Ｘ_３は、Ｙ、Ｒ、Ｉ、Ｇ又はＡであり、Ｘ_４は、Ｔ、Ｓ、Ｙ又はＶであり、Ｘ_５は、Ｓ又はＹであり、Ｘ_６は、Ｓ、Ａ、Ｉ又はＲであり、Ｘ_７は、Ｗ、Ａ又はＳであり、Ｘ_８は、非存在であるか又はＳであり、Ｘ_９は、非存在であるか、又はＦ、Ｗ若しくはＹであり、Ｘ_１０は、Ｒ、Ｓ、Ｈ、Ｋ又はＥであり、Ｘ_１１は、Ｗ、Ｈ、Ｙ又はＦであり、Ｘ_１２は、Ｙ、Ｖ、Ａ又はＳであり、Ｘ_１３は、Ｄ又はＱであり、Ｘ_１４は、Ｌ、Ｙ、Ｉ又はＨである）を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖可変ドメインと
を含む、方法。

【請求項47】

前記抗原結合タンパク質が、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列ＱＡＳＱＤＩＲＫＨＬＮ（配列番号５６７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号５７４）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．アミノ酸配列ＱＨＹＤＮＬＰＩＴ（配列番号５７７）を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列ＲＹＤＩＮ（配列番号５８２）を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列ＷＭＮＰＮＳＧＮＳＳＶＱＫＦＲＧ（配列番号５８５）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．アミノ酸配列ＧＧＹＴＳＳＷＲＷＹＦＤＬ（配列番号８４３）又はＧＧＹＴＳＳＷＳＲＷＹＦＤＬ（配列番号８４４）を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖可変ドメインと
を含む、請求項４６に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、米国仮特許出願第６３／２１５，２６０号明細書（２０２１年６月２５日出願）及び同第６３／３５３，２２３号明細書（２０２２年６月１７日出願）の優先権の利益を主張し、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本開示は、アテローム性動脈硬化症又は心筋梗塞（ＭＩ）などの循環器系状態の治療のための、骨髄系細胞上で発現されるＴｒＩｇＧｅｒｉｎｇ受容体１（ＴＲＥＭ－１）に特異的な抗原結合部分及びその組成物に関する。

【0003】

電子的に提出された資料の参照による組み込み
本開示の一部である配列表は、テキストファイルとして本明細書と同時に提出される。配列表を含むテキストファイルの名称は、「５６９６７Ｐ２＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」であり、これは、２０２２年６月１７日に作成され、１３６８３６４バイトのサイズである。配列表の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0004】

骨髄系細胞上で発現されるトリガー受容体１（ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ－１、ＣＤ３５４）は、好中球、単球及びマクロファージ細胞において発現されるＩｇファミリーメンバーである。ＴＲＥＭ－１は、骨髄系細胞免疫反応のメディエーターであり、ＴＲＥＭ－１を通した活性化は、ＩＬ－８、ＭＣＰ／ＣＣＬ２及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）を含む炎症性サイトカインを誘導する。ＴＲＥＭ－１に対するリガンドとしてＰＧＬＹＲＰ１（ペプチドグリカン認識タンパク質１）が最近報告されており（Ｒｅａｄ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９４：１４１７－１４２１，２０１５）、可能性のある他のリガンドは、依然として特定されていない。ＴＲＥＭ－１は、敗血症における炎症反応の上方制御に関連しており（Ｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９；２１：３８－４６）、ＴＲＥＭ－１－Ｆｃ又は拮抗性ペプチド（例えば、ＬＰ１７）によるＴＲＥＭ－１活性の遮断により、敗血症動物における内毒素作用が低下した（Ｆｏｒｄ、前出、Ｑｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０１４ ７（７）：１６５０－８）。ＴＲＥＭ－１ノックアウトマウスは、生存可能であり、ＤＳＳ大腸炎及びＴ細胞移入大腸炎が防がれる（Ｗｅｂｅｒ，ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ，１０（１）：１００３９００，２０１４）。

【0005】

ＴＲＥＭ－１－Ｆｃ融合物による治療により、マウスにおけるＬＰＳ負荷後、生存が改善され、ＴＮＦα誘導が低下した（Ｂｏｕｃｈｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，４１０：１１０３－７，２００１）。抗ＴＲＥＭ－１抗体は、ＴＲＥＭ－１アゴニストＰＧＬＹＲＰ－１／ペプチドグリカンにより刺激されるＩＢＤ患者から単離された固有層細胞からの炎症性サイトカインの分泌を減少させることが報告された（Ｂｒｙｎｊｏｌｆｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｌａｍｍ Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓ ２２（８）：１８０３－１１，２０１６）。さらに、タンパク質ＴＲＥＭ様転写産物‐１（ＴＬＴ‐１）由来の化学的に合成された１２個のＬ－アミノ酸ペプチドであるナンギボチドは、敗血性ショックに対する治療として研究されてきた（Ｃｕｖｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１８ Ｏｃｔ；８４（１０）：２２７０－２２７９）。ＴＲＥＭ－１は、単球／マクロファージ及び好中球上で主に発現される一方、炎症中、これは、気管支、角膜、胃上皮細胞及び肝臓内皮細胞上でも見られる。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Ｒｅａｄ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９４：１４１７－１４２１，２０１５

【非特許文献2】Ｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９；２１：３８－４６

【非特許文献3】Ｆｏｒｄ，Ｑｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０１４ ７（７）：１６５０－８

【非特許文献4】Ｗｅｂｅｒ，ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ，１０（１）：１００３９００，２０１４

【非特許文献5】Ｂｏｕｃｈｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，４１０：１１０３－７，２００１

【非特許文献6】Ｂｒｙｎｊｏｌｆｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｌａｍｍ Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓ ２２（８）：１８０３－１１，２０１６

【非特許文献7】Ｃｕｖｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１８ Ｏｃｔ；８４（１０）：２２７０－２２７９

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

本開示は、骨髄系細胞上で発現されるヒトＴｒＩｇＧｅｒｉｎｇ受容体１（ＴＲＥＭ－１）に特異的な抗原結合タンパク質を提供し、循環器系疾患の治療において有用である。

【0008】

循環器疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症又は心筋梗塞）を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、治療有効量の、骨髄系細胞上で発現されるＴｒＩｇＧｅｒｉｎｇ受容体１（ＴＲＥＭ－１）に結合する抗原結合タンパク質を投与することを含む方法が本明細書で提供され、この抗原結合タンパク質は、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号１０、３０、５０、７０、９０、１１０、１３０、１５０、１７０、１９０、２１０、２３０、２５０、２７０及び５４４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１１、３１、５１、７１、９１、１１１、１３１、１５１、１７１、１９１、２１１、２３１、２５１、２７１及び５４５から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
ｉｉｉ．配列番号１２、３２、５２、７２、９２、１１２、１３２、１５２、１７２、１９２、２１２、２３２、２５２、２７２及び５４６から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号１６、３６、５６、７６、９６、１１６、１３６、１５６、１７６、１９６、２１６、２３６、２５６、２７６及び５５０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１７、３７、５７、７７、９７、１１７、１３７、１５７、１７７、１９７、２１７、２３７、２５７、２７７及び５５１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．配列番号１８、３８、５８、７８、９８、１１８、１３８、１５８、１７８、１９８、２１８、２３８、２５８、２７８及び５５２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖可変ドメインと
を含む。

【0009】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、
ａ．配列番号１０、３０、５０、９０、１３０、１５０又は２７０で示される軽鎖ＣＤＲ１配列；
ｂ．配列番号１１、３１、５１、９１、１３１、１５１又は２７１で示される軽鎖ＣＤＲ２配列；
ｃ．配列番号１２、３２、５２、９２、１３２、１５２又は２７２で示される軽鎖ＣＤＲ３配列；
ｄ．配列番号１６、３６、５６、９６、１３６、１５６又は２７６で示される重鎖ＣＤＲ１配列；
ｅ．配列番号１７、３７、５７、９７、１３７、１５７又は２７７で示される重鎖ＣＤＲ２配列；及び
ｆ．配列番号１８、３８、５８、９８、１３８、１５８又は２７８で示される重鎖ＣＤＲ３配列
を含む。

【0010】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、
ａ．配列番号３０又は９０で示される軽鎖ＣＤＲ１配列；
ｂ．配列番号３１又は９１で示される軽鎖ＣＤＲ２配列；
ｃ．配列番号３２又は９２で示される軽鎖ＣＤＲ３配列；
ｄ．配列番号３６又は０９６で示される重鎖ＣＤＲ１配列；
ｅ．配列番号３７又は９７で示される重鎖ＣＤＲ２配列；及び
ｆ．配列番号３８又は９８で示される重鎖ＣＤＲ３配列
を含む。

【0011】

本明細書で開示されるＴＲＥＭ－１抗体／抗原結合タンパク質重鎖及び軽鎖ＣＤＲ及び／又は可変領域配列のコンセンサス配列も企図される。例えば、様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗体は、
Ｘ_１ＡＳＱＳＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＮＬＡ（配列番号５５３）（ここで、Ｘ_１は、Ｒ又はＱであり、Ｘ_２は、Ｖ又はＩであり、Ｘ_３は、Ｎ又はＳであり、Ｘ_４は、Ｓ、Ｈ、Ｉ、Ｖ又はＡである）；
ＱＡＳＸ_１ＤＩＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＬＮ（配列番号５５８）（ここで、Ｘ_１は、Ｒ又はＱであり、Ｘ_２は、Ｒ、Ｓ、Ｎ又はＦであり、Ｘ_３は、Ｋ又はＮであり、Ｘ_４は、Ｈ、Ｙ又はＤである）；
ＲＡＳＱＳＶＮＳＮＬＡ（配列番号５６６）；
ＱＡＳＱＤＩＲＫＨＬＮ（配列番号５６７）；
ＲＡＳＱＤＩＳＳＮＬＮ（配列番号５６８）；
ＱＡＳＱＤＩＨＬＮ（配列番号５６９）；
ＲＡＳＱＧＩＲＫＷＬＡ（配列番号５７０）
ＲＡＳＱＳＶＮＳＮＬＡ（配列番号５７１）、及び
ＳＧＤＫＬＧＥＲＶＳ（配列番号５７２）
からなる群から選択されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する配列を含む抗原結合ドメインを含む。

【0012】

様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
ＧＡＸ_１Ｘ_２ＲＡＴ（配列番号５５４）（ここで、Ｘ_１は、Ｓ又はＹであり、Ｘ_２は、Ｔ又はＩである）；
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４ＬＥＴ（配列番号５６０）（ここで、Ｘ_１は、Ｄ、Ｇ又はＨであり、Ｘ_２は、Ａ、Ｖ又はＴであり、Ｘ_３は、Ｓ、Ａ又はＹであり、Ｘ_４は、Ｔ又はＮである）；
ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号５７３）；
ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号５７４）；及び
ＡＡＳＲＬＱＳ（配列番号５７５）
からなる群から選択されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する配列を含む抗原結合ドメインを含む。

【0013】

様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
ＱＸ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＰＸ_７Ｔ（配列番号５５５）（ここで、Ｘ_１は、Ｑ、Ｈ又はＥであり、Ｘ_２は、Ｆ又はＹであり、Ｘ_３は、Ｋ、Ｙ又はＩであり、Ｘ_４は、Ｎ、Ｔ、Ｌ、Ｉ又はＭであり；Ｘ_５は、Ｗ、Ｆ、Ｈ又はＹであり、Ｘ_６は、非存在又はＰであり；Ｘ_７は、Ｗ、Ｎ、Ｙ、Ｈ又はＬである）；
ＱＸ_１ＹＸ_３Ｘ_４Ｘ_５ＰＸ_６Ｔ（配列番号５６１）（ここで、Ｘ_１は、Ｑ又はＨであり、Ｘ_２は、Ｄ、Ａ又はＧであり、Ｘ_３は、Ｎ又はＫであり；Ｘ_４は、Ｌ又はＩであり、Ｘ_５は、Ｉ又はＬである）；
ＱＱＦＫＮＷＰＰＴ（配列番号５７６）；
ＱＨＹＤＮＬＰＩＴ（配列番号５７７）；
ＬＱＡＨＧＦＰＷＴ（配列番号５７８）；
ＱＱＹＤＮＬＰＬＴ（配列番号５７９）、及び
ＱＦＷＰＰＷＴ（配列番号５８０）
からなる群から選択されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する配列を含む抗原結合ドメインを含む。

【0014】

様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３ＭＸ_４（配列番号５５６）（ここで、Ｘ_１は、Ａ、Ｒ、Ｔ又はＳであり、Ｘ_２は、Ｙ又はＮであり、Ｘ_３は、Ａ又はＷであり、Ｘ_４は、Ｓ又はＮである）；
Ｘ_１ＹＤＩＮ（配列番号５６３）（ここで、Ｘ_１は、Ｒ又はＳである）；ＧＹＹＸ_１Ｈ（ここで、Ｘ_１は、Ｍ又はＩである）；
ＡＹＡＭＳ（配列番号５８１）；
ＲＹＤＩＮ（配列番号５８２）；及び
ＳＹＷＭＳ（配列番号５８３）
からなる群から選択されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する配列を含む抗原結合ドメインを含む。

【0015】

様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９ＹＹＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２ＶＫＧ（配列番号５５９）（ここで、Ｘ_１は、Ｔ、Ｅ又はＳであり、Ｘ_２は、非存在であるか、又はＭ、Ｖ若しくはＩであり、Ｘ_３は、Ｓ、Ｒ又はＫであり、Ｘ_４は、Ｇ又はＱであり、Ｘ_５は、Ｓ、Ｄ又はＨであり、Ｘ_６は、Ｇ、Ｓ、Ｌ又はＡであり、Ｘ_７は、Ｓ、Ｇ又はＲであり、Ｘ_８は、Ｔ、Ｓ、Ｐ又はＥであり、Ｘ_９は、Ｔ又はＩであり、Ｘ_１０は、Ａ又はＶであり、Ｘ_１１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_１２は、Ｓ又はＡである）；
Ｘ_１Ｘ_２ＮＰＸ_３Ｘ_４ＧＸ_５Ｘ_６ＧＸ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０ＦＸ_１１Ｘ_１２（配列番号５６４）（ここで、Ｘ_１は、Ｗ又はＲであり、Ｘ_２は、Ｍ又はＬであり、Ｘ_３は、Ｎ、Ｑ又はＫであり、Ｘ_４は、Ｓ、Ａ又はＲであり、Ｘ_５は、Ｎ又はＱであり、Ｘ_６は、Ｓ、Ａ又はＴであり、Ｘ_７は、Ｓ、Ｑ又はＹであり、Ｘ_８は、Ｖ又はＴであり、Ｘ_９は、Ｑ又はＫであり、Ｘ_１０は、Ｋ又はＮであり、Ｘ_１１は、Ｒ又はＱであり、Ｘ_１２は、Ｇ又はＤである）；
ＴＳＧＳＧＳＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５８４）；
ＷＭＮＰＮＳＧＮＳＳＶＱＫＦＲＧ（配列番号５８５）；
ＮＩＫＱＤＧＳＥＥＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号５８６）；及び
ＴＳＧＳＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８４１）
からなる群から選択されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する配列を含む抗原結合ドメインを含む。

【0016】

様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７ＦＸ_８ＹＹＸ_９（配列番号５５７）（ここで、Ｘ_１は、Ｖ、Ｅ、Ａ又はＧであり、Ｘ_２は、Ａ、Ｆ、Ｙ又はＧであり、Ｘ_３は、Ｇ、Ｓ、Ｙ又はＷであり、Ｘ_４は、Ｓ又はＲであり、Ｘ_５は、非存在であるか又はＮであり、Ｘ_６は、Ｆ、Ｓ、Ｙ又は非存在であり、Ｘ_７は、Ｌ若しくはＦ又は非存在であり、Ｘ_８は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_９は、Ｙ、Ｈ又はＳである）；
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２ＦＸ_１３Ｘ_１４（配列番号５６５）（ここで、Ｘ_１は、Ｇ、Ｌ又はＲであり、Ｘ_２は、Ｇ、Ｉ又はＲであり、Ｘ_３は、Ｙ、Ｒ、Ｉ、Ｇ又はＡであり、Ｘ_４は、Ｔ、Ｓ、Ｙ又はＶであり、Ｘ_５は、Ｓ又はＹであり、Ｘ_６は、Ｓ、Ａ、Ｉ又はＲであり、Ｘ_７は、Ｗ、Ａ又はＳであり、Ｘ_８は、非存在であるか又はＳであり、Ｘ_９は、非存在であるか、又はＦ、Ｗ若しくはＹであり、Ｘ_１０は、Ｒ、Ｓ、Ｈ、Ｋ又はＥであり、Ｘ_１１は、Ｗ、Ｈ、Ｙ又はＦであり、Ｘ_１２は、Ｙ、Ｖ、Ａ又はＳであり、Ｘ_１３は、Ｄ又はＱであり、Ｘ_１４は、Ｌ、Ｙ、Ｉ又はＨである）；
ＶＡＧＳＮＦＬＦＤＹ（配列番号８４２）；
ＧＧＹＴＳＳＷＲＷＹＦＤＬ（配列番号８４３）；
ＧＧＹＴＳＳＷＳＲＷＹＦＤＬ（配列番号８４４）；及び
ＤＹＧＤＳＦＤＹ（配列番号８４５）
からなる群から選択されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する配列を含む抗原結合ドメインを含む。

【0017】

様々な実施形態では、単離された抗原結合タンパク質が本明細書で提供され、この抗原結合タンパク質は、
ａ．抗体又は抗体断片であり；
ｂ．配列番号２で示されるアミノ酸配列を有するヒトＴＲＥＭ－１に結合し；
ｃ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列Ｘ_１ＡＳＱＳＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＮＬＡ（配列番号５５３）（ここで、Ｘ_１は、Ｒ又はＱであり、Ｘ_２は、Ｖ又はＩであり、Ｘ_３は、Ｎ又はＳであり、Ｘ_４は、Ｓ、Ｈ、Ｉ、Ｖ又はＡである）を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列ＧＡＸ_１Ｘ_２ＲＡＴ（配列番号５５４）（ここで、Ｘ_１は、Ｓ又はＹであり、Ｘ_２は、Ｔ又はＩである）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．アミノ酸配列ＱＸ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＰＸ_７Ｔ（配列番号５５５）（ここで、Ｘ_１は、Ｑ、Ｈ又はＥであり、Ｘ_２は、Ｆ又はＹであり、Ｘ_３は、Ｋ、Ｙ又はＩであり、Ｘ_４は、Ｎ、Ｔ、Ｌ、Ｉ又はＭであり；Ｘ_５は、Ｗ、Ｆ、Ｈ又はＹであり、Ｘ_６は、非存在又はＰであり；Ｘ_７は、Ｗ、Ｎ、Ｙ、Ｈ又はＬである）を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変ドメインを含み、
ｄ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３ＭＸ_４（配列番号５５６）（ここで、Ｘ_１は、Ａ、Ｒ、Ｔ又はＳであり、Ｘ_２は、Ｙ又はＮであり、Ｘ_３は、Ａ又はＷであり、Ｘ_４は、Ｓ又はＮである）を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９ＹＹＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２ＶＫＧ（配列番号５５９）（ここで、Ｘ_１は、Ｔ、Ｅ又はＳであり、Ｘ_２は、非存在であるか、又はＭ、Ｖ若しくはＩであり、Ｘ_３は、Ｓ、Ｒ又はＫであり、Ｘ_４は、Ｇ又はＱであり、Ｘ_５は、Ｓ、Ｄ又はＨであり、Ｘ_６は、Ｇ、Ｓ、Ｌ又はＡであり、Ｘ_７は、Ｓ、Ｇ又はＲであり、Ｘ_８は、Ｔ、Ｓ、Ｐ又はＥであり、Ｘ_９は、Ｔ又はＩであり、Ｘ_１０は、Ａ又はＶであり、Ｘ_１１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_１２は、Ｓ又はＡである）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７ＦＸ_８ＹＹＸ_９（配列番号５５７）（ここで、Ｘ_１は、Ｖ、Ｅ、Ａ又はＧであり、Ｘ_２は、Ａ、Ｆ、Ｙ又はＧであり、Ｘ_３は、Ｇ、Ｓ、Ｙ又はＷであり、Ｘ_４は、Ｓ又はＲであり、Ｘ_５は、非存在であるか又はＮであり、Ｘ_６は、Ｆ、Ｓ、Ｙ又は非存在であり、Ｘ_７は、Ｌ若しくはＦ又は非存在であり、Ｘ_８は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_９は、Ｙ、Ｈ又はＳである）を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖可変ドメインを含む。

【0018】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＮＳＮＬＡ（配列番号５５６）を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号５７３）を含む軽鎖ＣＤＲ２；
ｉｉｉ．アミノ酸配列ＱＱＦＫＮＷＰＰＴ（配列番号５７６）を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列ＡＹＡＭＳ（配列番号５８１）を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列ＴＳＧＳＧＳＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５８４）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．アミノ酸配列ＶＡＧＳＮＦＬＦＤＹ（配列番号８４２）を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖可変ドメインと
を含む。

【0019】

様々な実施形態では、本開示は、単離された抗原結合タンパク質を提供し、この抗原結合タンパク質は、
ａ．抗体又は抗体断片であり；
ｂ．配列番号２で示されるアミノ酸配列を有するヒトＴＲＥＭ－１に結合し；
ｃ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列ＱＡＳＸ_１ＤＩＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＬＮ（配列番号５５８）（ここで、Ｘ_１は、Ｒ又はＱであり、Ｘ_２は、Ｒ、Ｓ、Ｎ又はＦであり、Ｘ_３は、Ｋ又はＮであり、Ｘ_４は、Ｈ、Ｙ又はＤである）を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４ＬＥＴ（配列番号５６０）（ここで、Ｘ_１は、Ｄ、Ｇ又はＨであり、Ｘ_２は、Ａ、Ｖ又はＴであり、Ｘ_３は、Ｓ、Ａ又はＹであり、Ｘ_４は、Ｔ又はＮである）を含む軽鎖ＣＤＲ２；
ｉｉｉ．アミノ酸配列ＱＸ_１ＹＸ_３Ｘ_４Ｘ_５ＰＸ_６Ｔ（配列番号５６１）（ここで、Ｘ_１は、Ｑ又はＨであり、Ｘ_２は、Ｄ、Ａ又はＧであり、Ｘ_３は、Ｎ又はＫであり；Ｘ_４は、Ｌ又はＩであり、Ｘ_５は、Ｉ又はＬである）を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変ドメインを含み、
ｄ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列Ｘ_１ＹＤＩＮ（配列番号５６３）（ここで、Ｘ_１は、Ｒ又はＳである）を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２ＮＰＸ_３Ｘ_４ＧＸ_５Ｘ_６ＧＸ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０ＦＸ_１１Ｘ_１２（配列番号５６４）（ここで、Ｘ_１は、Ｗ又はＲであり、Ｘ_２は、Ｍ又はＬであり、Ｘ_３は、Ｎ、Ｑ又はＫであり、Ｘ_４は、Ｓ、Ａ又はＲであり、Ｘ_５は、Ｎ又はＱであり、Ｘ_６は、Ｓ、Ａ又はＴであり、Ｘ_７は、Ｓ、Ｑ又はＹであり、Ｘ_８は、Ｖ又はＴであり、Ｘ_９は、Ｑ又はＫであり、Ｘ_１０は、Ｋ又はＮであり、Ｘ_１１は、Ｒ又はＱであり、Ｘ_１２は、Ｇ又はＤである）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２ＦＸ_１３Ｘ_１４（配列番号５６５）（ここで、Ｘ_１は、Ｇ、Ｌ又はＲであり、Ｘ_２は、Ｇ、Ｉ又はＲであり、Ｘ_３は、Ｙ、Ｒ、Ｉ、Ｇ又はＡであり、Ｘ_４は、Ｔ、Ｓ、Ｙ又はＶであり、Ｘ_５は、Ｓ又はＹであり、Ｘ_６は、Ｓ、Ａ、Ｉ又はＲであり、Ｘ_７は、Ｗ、Ａ又はＳであり、Ｘ_８は、非存在であるか又はＳであり、Ｘ_９は、非存在であるか、又はＦ、Ｗ若しくはＹであり、Ｘ_１０は、Ｒ、Ｓ、Ｈ、Ｋ又はＥであり、Ｘ_１１は、Ｗ、Ｈ、Ｙ又はＦであり、Ｘ_１２は、Ｙ、Ｖ、Ａ又はＳであり、Ｘ_１３は、Ｄ又はＱであり、Ｘ_１４は、Ｌ、Ｙ、Ｉ又はＨである）を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖可変ドメインを含む。

【0020】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列ＱＡＳＱＤＩＲＫＨＬＮ（配列番号５６７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号５７４）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．アミノ酸配列ＱＨＹＤＮＬＰＩＴ（配列番号５７７）を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．アミノ酸配列ＲＹＤＩＮ（配列番号５８２）を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．アミノ酸配列ＷＭＮＰＮＳＧＮＳＳＶＱＫＦＲＧ（配列番号５８５）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．アミノ酸配列ＧＧＹＴＳＳＷＲＷＹＦＤＬ（配列番号８４３）又はＧＧＹＴＳＳＷＳＲＷＹＦＤＬ（配列番号８４４）を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖可変ドメインと
を含む。

【0021】

様々な実施形態では、本開示は、抗原結合タンパク質を投与することを含む、循環器疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症又は心筋梗塞）を治療する方法を提供し、この抗原結合タンパク質は、
ａ．抗体又は抗体断片であり；
ｂ．配列番号２で示されるアミノ酸配列を有する、骨髄系細胞上で発現されるヒトＴｒＩｇＧｅｒｉｎｇ受容体１（ＴＲＥＭ－１）に結合し；
ｃ．ＣＤＲ配列のセットであって、
ｉ）配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｉ）配列番号３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号３８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｉｉ）配列番号５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号５８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｖ）配列番号７０（ＬＣＤＲ１）、配列番号７１（ＬＣＤＲ２）、配列番号７２（ＬＣＤＲ３）、配列番号７６（ＨＣＤＲ１）、配列番号７７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号７８（ＨＣＤＲ３）；
ｖ）配列番号９０（ＬＣＤＲ１）、配列番号９１（ＬＣＤＲ２）、配列番号９２（ＬＣＤＲ３）、配列番号９６（ＨＣＤＲ１）、配列番号９７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号９８（ＨＣＤＲ３）；
ｖｉ）配列番号１１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１１２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１１６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１１７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１１８（ＨＣＤＲ３）；
ｖｉｉ）配列番号１３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１３８（ＨＣＤＲ３）；
ｖｉｉｉ）配列番号１５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１５８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｘ）配列番号１７０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１７２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１７６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１７７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１７８（ＨＣＤＲ３）；
ｘ）配列番号１９０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１９１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１９２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１９６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１９７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１９８（ＨＣＤＲ３）；
ｘｉ）配列番号２１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２１１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２１２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２１６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２１７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２１８（ＨＣＤＲ３）；
ｘｉｉ）配列番号２３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２３８（ＨＣＤＲ３）；
ｘｉｉｉ）配列番号２５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２５８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｘ）配列番号２７０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２７１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２７２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２７６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２７７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２７８（ＨＣＤＲ３）；及び
ｘｖ）配列番号５４４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５４５（ＬＣＤＲ２）、配列番号５４６（ＬＣＤＲ３）、配列番号５４７（ＨＣＤＲ１）、配列番号５４８（ＨＣＤＲ２）及び配列番号５４９（ＨＣＤＲ３）
から選択されるＣＤＲ配列のセットを含む。

【0022】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
ｉ）配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｉ）配列番号３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号３８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｉｉ）配列番号５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号５８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｖ）配列番号９０（ＬＣＤＲ１）、配列番号９１（ＬＣＤＲ２）、配列番号９２（ＬＣＤＲ３）、配列番号９６（ＨＣＤＲ１）、配列番号９７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号９８（ＨＣＤＲ３）；
ｖ）配列番号１３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１３８（ＨＣＤＲ３）；
ｖｉ）配列番号１５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１５８（ＨＣＤＲ３）；又は
ｖｉｉ）配列番号２７０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２７１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２７２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２７６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２７７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２７８（ＨＣＤＲ３）
から選択されるＣＤＲ配列のセットを含む。

【0023】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、配列番号３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号３８（ＨＣＤＲ３；又は配列番号９０（ＬＣＤＲ１）、配列番号９１（ＬＣＤＲ２）、配列番号９２（ＬＣＤＲ３）、配列番号９６（ＨＣＤＲ１）、配列番号９７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号９８（ＨＣＤＲ３）から選択されるＣＤＲ配列のセットを含む。

【0024】

様々な実施形態では、本開示は、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質を投与することを含む、循環器疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症又は心筋梗塞）を治療する方法を提供し、この抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、２５９、２７９及び５３７から選択される核酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列；
ｉｉｉ．配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、２５９、２７９及び５３７から選択される核酸配列からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０及び２１８４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によりコードされる配列；ｉｉｉ．配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０及び５３８から選択される核酸配列からなるポリペプチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと
を含む。

【0025】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号２１、４１、６１、１０１、１４１、１６１及び２８１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号１９、３９、５９、９９、１３９、１５９及び２７９から選択される核酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列；
ｉｉｉ．配列番号１９、３９、５９、９９、１３９、１５９及び２７９から選択される核酸配列からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号２２、４２、６２、１０２、１４２、１６２及び２８２から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号２０、４０、６０、１００、１４０、１６０及び２８０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列；
ｉｉｉ．配列番号２０、４０、６０、１００、１４０、１６０及び２８０から選択される核酸配列からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと
を含む。

【0026】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号４１及び１０１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号３９及び９９から選択される核酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列；
ｉｉｉ．配列番号３９及び９９から選択される核酸配列からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号４２及び１０２から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号４０及び１００から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列；
ｉｉｉ．配列番号４０及び１００から選択される核酸配列からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと
を含む。

【0027】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
ｉ）配列番号２１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｉ）配列番号４１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号４２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｉｉ）配列番号６１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号６２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｉｉｉ）配列番号８１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号８２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｉｖ）配列番号１０１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１０２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｖ）配列番号１２１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１２２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｖｉ）配列番号１６１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１６２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｖｉｉ）配列番号１８１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１８２で示される重鎖可変ドメイン；
ｖｉｉｉ）配列番号２０１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２０２で示される重鎖可変ドメイン；
ｘ）配列番号２２１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２２２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｘｉ）配列番号２４１で示される軽鎖可変ドメイン及び配列番号２４２で示される重鎖可変ドメイン；
ｘｉｉ）配列番号２６１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２６２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｘｉｉｉ）配列番号２８１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２８２で示される重鎖可変ドメイン配列；及び
ｘｖ）配列番号５３９で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号５４０で示される重鎖可変ドメイン配列
を含む。

【0028】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
ｉ）配列番号２１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｉｉ）配列番号４１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号４２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｉｉｉ）配列番号６１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号６２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｉｖ）配列番号１０１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１０２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｖ）配列番号１４１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１４２で示される重鎖可変ドメイン配列；
ｖｉ）配列番号１６１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１６２で示される重鎖可変ドメイン配列；又は
ｖｉｉ）配列番号２８１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号２８２で示される重鎖可変ドメイン
を含む。

【0029】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、配列番号４で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号４２で示される重鎖可変ドメイン配列；又は配列番号１０１で示される軽鎖可変ドメイン配列及び配列番号１０２で示される重鎖可変ドメイン配列を含む。

【0030】

様々な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０並びに配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９と、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であり得る。

【0031】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０から選択される重鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0032】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２２、４２、６２、１０２、１４２、１６２及び２８２から選択される重鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２１、４１、６１、１０１、１４１、１６１及び２８１から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0033】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号４２及び１０２から選択される重鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号４１及び１０１から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0034】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質の１つ以上の重鎖フレームワークアミノ酸は、別のヒト抗体アミノ酸配列からの対応するアミノ酸で置換される。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質の１つ以上の軽鎖フレームワークアミノ酸は、別のヒト抗体アミノ酸配列からの対応するアミノ酸で置換される。

【0035】

いくつかの例において、本明細書で開示される配列は、組み換え産生に有用なＮ末端シグナル配列を含有し得る。シグナル配列を欠く抗ＴＲＥＭ－１抗体の配列が本明細書で企図される。代表的なシグナル配列は、ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣ；ＭＡＷＡＬＬＬＬＴＬＬＴＱＧＴＧＳＷＡＳＹＥＬ及びこのようなシグナル配列をコードする核酸を含む。

【0036】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、前記軽鎖可変領域に連結されたヒト軽鎖定常領域をさらに含む。

【0037】

様々な実施形態では、重鎖定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥの重鎖定常領域、それらの断片、それらの組み合わせ及び１～１０個の重鎖フレームワークアミノ酸が別のヒト抗体アミノ酸配列からの対応するアミノ酸で置換されるそれらの修飾物から選択される。

【0038】

様々な実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、ＴＲＥＭ－１へのＴＲＥＭ－１リガンドの結合を阻害する。

【0039】

配列番号２の配列を有するヒトＴＲＥＭ－１タンパク質への結合について、本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質と競合する抗原結合タンパク質も企図される。

【0040】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、組み換え抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ２、一価ＩｇＧ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体及びＩｇＧ４抗体からなる群から選択される。様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ２抗体である。様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ１抗体である。様々な実施形態では、ＩｇＧ１抗体は、ＩＧｇ１ｚ又はＩｇＧ１ｚ－ＳＥＦＬ２抗体である。様々な実施形態では、抗原結合タンパク質は、一価ＩｇＧである。

【0041】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、ヒト抗体である。

【0042】

本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子、本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質の軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子並びに本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質の重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子も提供される。

【0043】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０及び５３８から選択される重鎖可変領域ポリヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、２５９、２７９及び５３７で示される軽鎖可変領域ポリヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0044】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２０、４０、６０、１００、１４０、１６０及び２８０から選択される重鎖可変領域ポリヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号１９、３９、５９、９９、１３９、１５９及び２７９から選択される軽鎖可変領域ポリヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0045】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号４０及び１００から選択される重鎖可変領域ポリヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号３９及び９９から選択される軽鎖可変領域ポリヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0046】

発現制御配列に操作可能に連結された本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質重鎖及び／又は軽鎖の核酸分子を含む発現ベクターがさらに企図される。

【0047】

本開示は、本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質又は抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子；又は本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗体の軽鎖をコードする核酸分子；又は本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗体の重鎖及び軽鎖核酸分子をコードする核酸分子；又は本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗体の重鎖及び／又は軽鎖をコードする核酸分子を含むベクターを含む組み換え宿主細胞を提供する。様々な実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。様々な実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞である。

【0048】

宿主細胞を培養し、前記抗原結合タンパク質を回収することを含む、宿主細胞を使用して抗原結合タンパク質を作製する方法及び本方法によって作製される抗原結合タンパク質がさらに提供される。

【0049】

本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む滅菌医薬組成物も提供される。

【0050】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、抗原結合タンパク質の前記重鎖可変領域に連結されたヒト重鎖定常領域をさらに含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、抗体の前記軽鎖可変領域に連結されたヒト軽鎖定常領域をさらに含む。

【0051】

様々な実施形態では、抗原結合部分は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、組み換え抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ２、一価ＩｇＧ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体及びＩｇＧ４抗体からなる群から選択される。様々な実施形態では、抗原結合部分は、ＩｇＧである。様々な実施形態では、抗原結合部分は、ＩｇＧ２抗体である。様々な実施形態では、抗原結合部分は、ＩｇＧ１抗体である。抗原結合タンパク質の様々な実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１ｚ又はＩｇＧ１ｚ－ＳＥＦＬ２抗体である。様々な実施形態では、抗原結合部分は、一価ＩｇＧである。様々な実施形態では、抗原結合部分の重鎖定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥの重鎖定常領域、その断片、それらの組み合わせ及び１～１０個の重鎖フレームワークアミノ酸が別のヒト抗体定常領域からの対応するアミノ酸で置換されるそれらの修飾物から選択される。

【0052】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、表７～８、表１１及び表１２に示されるような重鎖及び軽鎖対を有する。

【0053】

ＴＲＥＭ－１バリアント抗体重鎖可変領域の核酸配列は、配列番号２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６及び４０８で示され、配列番号４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４及び５３６でも示され；ＴＲＥＭ－１バリアント抗体軽鎖可変領域ヌクレオチド配列は、配列番号７７８、７７９、７８０、７８１、７８２、７８３、７８４、７８５、７８６、７８７、７８８、７８９、７９０、７９１、７９２、７９３、７９４、７９５、７９６、７９７、７９８、７９９、８００、８０１、８０２、８０３、８０４、８０５、８０６、８０７、８０８、８０９、８１０、８１１、８１２、８１３、８１４、８１５、８１６、８１７、８１８、８１９、８２０、８２１、８２２、８２３、８２４、８２５、８２６、８２７、８２８、８２９、８３０、８３１、８３２、８３３、８３４、８３５、８３６、８３７、８３８、８３９、８４０で示され、配列番号５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６７６、６７８、６８０、６８２、６８４、６８６、６８８、６９０、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０及び７１２でも示される。

【0054】

様々な実施形態では、抗原結合タンパク質の１つ以上の重鎖フレームワークアミノ酸は、別のヒト抗体アミノ酸配列からの対応するアミノ酸で置換される。様々な実施形態では、抗原結合タンパク質の１つ以上の軽鎖フレームワークアミノ酸は、別のヒト抗体アミノ酸配列からの対応するアミノ酸で置換される。

【0055】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、前記軽鎖可変領域に連結されたヒト軽鎖定常領域をさらに含む。

【0056】

様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗体重鎖及び／又は軽鎖可変領域のバリアントが本明細書で提供される。ＴＲＥＭ－１抗体重鎖可変領域バリアント配列は、配列番号２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、表７～８、表１１及び表１２に示される。

【0057】

ＴＲＥＭ－１抗体軽鎖可変領域バリアント配列は、配列番号７１５～７７７、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６７５、６７７、６７９、６８１、６８３、６８５、６８７、６８９、６９１、６９３、６９５、６９７、６９９、７０１、７０３、７０５、７０７、７０９、７１１、表７～８、表１１及び表１２に示される。

【0058】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、ヒト抗体である。

【0059】

本明細書に記載のような抗原結合タンパク質の重鎖領域をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸分子、本明細書に記載のような抗原結合タンパク質の軽鎖領域をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸分子も提供される。

【0060】

本開示は、核酸分子又は発現制御配列に操作可能に連結された本明細書に記載の抗原結合タンパク質をコードする分子を含む１つ又は複数の発現ベクターを提供する。

【0061】

本明細書に記載のような抗原結合タンパク質を含む核酸分子又は前記核酸を含むベクターを含む組み換え宿主細胞も企図される。様々な実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。様々な実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞である。本開示は、宿主細胞を培養し、前記抗体を回収することを含む、本明細書に記載の宿主細胞を使用して抗原結合タンパク質を作製する方法を提供し、本方法によって作製される抗原結合タンパク質を提供する。

【0062】

本開示は、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質又は抗原結合断片を含む医薬組成物を投与することを含む治療の方法を企図する。

【0063】

関連する態様では、本開示は、本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質又は本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質を含む組成物を投与することを含む、循環器疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症又は心筋梗塞）の治療を必要とする対象において循環器疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症又は心筋梗塞）を治療する方法を提供する。

【0064】

循環器疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症又は心筋梗塞）の治療での使用のための本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質又は抗原結合断片を含む組成物も企図される。様々な実施形態では、本開示は、循環器疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症又は心筋梗塞）を治療するための薬剤の調製における、本明細書に記載のような抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質又は抗原結合断片を含む組成物の使用を提供する。

【0065】

様々な実施形態では、循環器疾患は、心筋梗塞、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、心不全、卒中発作（例えば、虚血性、出血性）、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、末梢血管疾患（例えば、末梢動脈疾患）、不安定プラーク、急性冠症候群、脳血管疾患、脳血管アテローム性動脈硬化症及び肥満からなる群から選択される。様々な実施形態では、循環器疾患は、心筋梗塞である。様々な実施形態では、循環器疾患は、卒中発作（虚血性及び／又は出血性）である。様々な実施形態では、循環器疾患は、アテローム性動脈硬化症である。様々な実施形態では、循環器疾患は、ＮＡＦＬＤ又はＮＡＳＨである。様々な実施形態では、循環器疾患は、心不全である。様々な実施形態では、循環器疾患は、冠動脈疾患である。様々な実施形態では、循環器疾患は、末梢血管疾患である。様々な実施形態では、循環器疾患は、末梢動脈疾患である。様々な実施形態では、循環器疾患は、不安定プラークである。様々な実施形態では、循環器疾患は、急性冠症候群である。様々な実施形態では、循環器疾患は、脳血管疾患である。様々な実施形態では、循環器疾患は、脳血管アテローム性動脈硬化症である。様々な実施形態では、炎症性疾患は、肥満である。

【0066】

様々な実施形態では、治療は、静脈内又は皮下に投与される。様々な実施形態では、治療は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月１回、３か月に１回又は６か月に１回又は１年に１回投与される。

【0067】

様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１は、配列番号２で示されるヒトＴＲＥＭ－１である。

【0068】

様々な実施形態では、投与は、損傷部位への炎症性細胞遊走、心臓組織への骨髄系細胞の浸潤、微小環境における炎症性サイトカイン、組織損傷、泡沫細胞形成の減少、壊死コアサイズの減少、瘢痕形成の減少、内皮細胞機能不全の減少及び／又は血栓形成の減少からなる群から選択される循環器疾患の１つ以上の症状を軽減する。

【0069】

様々な実施形態では、本方法は、１つ又は２つの追加の治療剤を投与することを含む。様々な実施形態では、追加の治療剤は、コルチコステロイド、ＮＳＡＩＤ、鎮痛薬、免疫抑制剤、抗炎症薬、ＴＮＦα阻害剤、ＩＬ－１２／ＩＬ－２３阻害剤、ＩＬ－１７及びＩＦＮ－γから選択される。（本抗原結合タンパク質を別として）循環器疾患において有用な治療剤としては、少なくとも１つのコレステロール低下（血清及び／又は全身コレステロール）剤又は薬剤が挙げられるが、限定されない。いくつかの実施形態では、ＬＤＬＲの発現を増加させる薬剤は、血清ＨＤＬレベルを上昇させるか、ＬＤＬレベルを低下させるか、又はトリグリセリドレベルを低下させることが観察されている。代表的な薬剤としては、スタチン（アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン）、ＰＣＳＫ９阻害剤（Ｒｅｐａｔｈａ（登録商標）、Ｐｒａｌｕｅｎｔ（登録商標）、Ｌｅｑｖｉｏ（登録商標））、ニコチン酸（ナイアシン）（ＮＩＡＣＯＲ（登録商標）、ＮＩＡＳＰＡＮ（登録商標）（徐放性ナイアシン）、ＳＬＯ－ＮＩＡＣＩＮ（登録商標）（徐放性ナイアシン））、フィブリン酸（ＬＯＰＩＤ（登録商標）（ゲムフィブロジル）、ＴＲＩＣＯＲ（登録商標）（フェノフィブレート））、胆汁酸吸着剤（ＱＵＥＳＴＲＡＮ（登録商標）（コレスチラミン）、コレセベラム（ＷＥＬＣＨＯＬ（登録商標））、ＣＯＬＥＳＴＩＤ（登録商標）（コレスチポール））、コレステロール吸収阻害剤（Ｚｅｔｉａ（エゼチミブ））、ニコチン酸とスタチンとの組み合わせ（ＡＤＶＩＣＯＲ（登録商標）（ロバスタチン及びＮＩＡＳＰＡＮ（登録商標））)、スタチンと吸収阻害剤との組み合わせ（ＶＹＴＯＲＩＮ（登録商標）（ＺＯＣＯＲ（登録商標）及びＺＥＴＩＡ（登録商標）））及び／又はＰＣＳＫ９阻害剤のような脂質修飾剤が挙げられるが、限定されない。いくつかの実施形態では、本抗原結合タンパク質は、ＰＰＡＲガンマアゴニスト、ＰＰＡＲアルファ／ガンマアゴニスト、スクアレンシンターゼ阻害剤、コレステリルエステル転移タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤、降圧剤、抗血栓薬（アスピリン）抗糖尿病薬（スルホニル尿素、インスリン、ＧＬＰ－１類似体、ＤＤＰＩＶ阻害剤、ＳＧＬ２阻害剤など）、ＡｐｏＢ修飾薬、ＭＴＰ阻害剤、Ｃｏｒｌａｎｏｒ（登録商標）（イバブラジン）Ｉ（ｆ）電流阻害剤、オメカムチブメカルビル心筋ミオシン活性化因子、リポタンパク質（ａ）を低下させるＯＬＰＡＳＩＲＡＮ（ＡＭＧ８９０）（ｓｉＲＮＡ）、ＡＭＧ５９４心筋トロポニン活性化因子及び／又は動脈硬化症閉塞性治療と組み合わせられる。パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３（ＰＮＰＬＡ３ Ｉ１４８Ｍ）のバリアントを標的とするＡＭＧ６０９、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）との組み合わせ治療も企図される。本抗原結合タンパク質は、他の抗炎症剤とも組み合わせられ得る。

【0070】

様々な実施形態では、追加の治療剤は、１つ以上のコレステロール低下剤、ＬＤＬＲの発現を増加させる薬剤、スタチン（アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン）、ＰＣＳＫ９阻害剤（Ｒｅｐａｔｈａ（登録商標）、Ｐｒａｌｕｅｎｔ（登録商標）、Ｌｅｑｖｉｏ（登録商標））、ニコチン酸（ナイアシン）（ＮＩＡＣＯＲ（登録商標）、ＮＩＡＳＰＡＮ（登録商標）（徐放性ナイアシン）、ＳＬＯ－ＮＩＡＣＩＮ（登録商標）（徐放性ナイアシン））、フィブリン酸（ＬＯＰＩＤ（登録商標）（ゲムフィブロジル）、ＴＲＩＣＯＲ（登録商標）（フェノフィブレート））、胆汁酸吸着剤（ＱＵＥＳＴＲＡＮ（登録商標）（コレスチラミン）、コレセベラム（ＷＥＬＣＨＯＬ（登録商標））、ＣＯＬＥＳＴＩＤ（登録商標）（コレスチポール））、コレステロール吸収阻害剤（Ｚｅｔｉａ（エゼチミブ））、ニコチン酸とスタチンとの組み合わせ（ＡＤＶＩＣＯＲ（登録商標）（ロバスタチン及びＮＩＡＳＰＡＮ（登録商標）））、スタチンと吸収阻害剤との組み合わせ（ＶＹＴＯＲＩＮ（ＺＯＣＯＲ（登録商標）及びＺＥＴＩＡ（登録商標）））及び／又はＰＣＳＫ９阻害剤のような脂質修飾剤、ＰＰＡＲガンマアゴニスト、ＰＰＡＲアルファ／ガンマアゴニスト、スクアレンシンターゼ阻害剤、コレステリルエステル転移タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤、降圧剤、抗血栓薬（アスピリン）抗糖尿病薬（スルホニル尿素、インスリン、ＧＬＰ－１類似体、ＧＩＰＲアンタゴニスト、ＤＤＰＩＶ阻害剤、ＳＧＬ２阻害剤など）、ＡｐｏＢ修飾薬、ＭＴＰ阻害剤、Ｃｏｒｌａｎｏｒ（登録商標）（イバブラジン）Ｉ（ｆ）電流阻害剤、オメカムチブメカルビル心筋ミオシン活性化因子、リポタンパク質（ａ）を低下させるＯＬＰＡＳＩＲＡＮ（ＡＭＧ８９０）（ｓｉＲＮＡ）、ＡＭＧ５９４心筋トロポニン活性化因子、ＡＭＧ６０９、ＡＭＧ１７１（成長分化因子１５（ＧＤＦ１５）類似体）、ＡＭＧ１３３（胃抑制ポリペプチド受容体（ＧＩＰＲ）アンタゴニスト及びグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）受容体アゴニスト）並びに／又は閉塞性動脈硬化症治療からなる群から選択される。

【0071】

本明細書に記載のそれぞれの特性若しくは実施形態又は組み合わせは、本発明の態様の何れかの非限定的な、例示的な例であり、従って、本明細書に記載の何れかの他の特性若しくは実施形態又は組み合わせと組み合わせることが可能であると意図されることが理解される。例えば、特性が「一実施形態」、「いくつかの実施形態」、「特定の実施形態」、「さらなる実施形態」、「特定の例示的な実施形態」及び／又は「別の実施形態」などの用語を用いて記載される場合、これらのタイプの実施形態のそれぞれは、あらゆる可能な組み合わせを列挙することなく、本明細書に記載の何れかの他の特性又は特性の組み合わせと組み合わせることが意図される特性の非限定的な例である。このような特性又は特性の組み合わせは、本発明の態様の何れかに適用される。範囲内に含まれる値の例が開示される場合、これらの例の何れもが範囲の可能な端点として企図され、このような端点間のあらゆる数値が企図され、上端点及び下端点のあらゆる組み合わせが想定される。

【0072】

本明細書における見出しは、読者の便宜のためのものであり、限定することを意図するものではない。本発明のさらなる態様、実施形態及び変形形態は、詳細な説明、及び／又は図面、及び／又は特許請求の範囲から明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0073】

【図1A】ＴＮＦα放出によって測定した場合の、ヒト（図１Ｃ～１Ｄ）又はカニクイザル（図１Ａ～１Ｂ）ＰＢＭＣにおける抗ヒトＴＲＥＭ－１抗体によるリガンド（ＰＧＬＹＲＰ１／ＰＧＮ）介在性ＴＲＥＭ－１シグナル伝達の阻害を示す。

【図1B】ＴＮＦα放出によって測定した場合の、ヒト（図１Ｃ～１Ｄ）又はカニクイザル（図１Ａ～１Ｂ）ＰＢＭＣにおける抗ヒトＴＲＥＭ－１抗体によるリガンド（ＰＧＬＹＲＰ１／ＰＧＮ）介在性ＴＲＥＭ－１シグナル伝達の阻害を示す。

【図1C】ＴＮＦα放出によって測定した場合の、ヒト（図１Ｃ～１Ｄ）又はカニクイザル（図１Ａ～１Ｂ）ＰＢＭＣにおける抗ヒトＴＲＥＭ－１抗体によるリガンド（ＰＧＬＹＲＰ１／ＰＧＮ）介在性ＴＲＥＭ－１シグナル伝達の阻害を示す。

【図1D】ＴＮＦα放出によって測定した場合の、ヒト（図１Ｃ～１Ｄ）又はカニクイザル（図１Ａ～１Ｂ）ＰＢＭＣにおける抗ヒトＴＲＥＭ－１抗体によるリガンド（ＰＧＬＹＲＰ１／ＰＧＮ）介在性ＴＲＥＭ－１シグナル伝達の阻害を示す。

【図2】脾臓チロシンキナーゼ（ｐＳＹＫ）のリン酸化によって測定した場合の、ヒトＴＲＥＭ－１／ＤＡＰ１２を過剰発現する細胞株におけるリガンド（ＰＧＬＹＲＰ１／ＰＧＮ）介在性シグナル伝達の抗ヒトＴＲＥＭ－１ Ｆａｂによる阻害を示す。

【図3】ＬＰＳ注射後の野生型及びＴＲＥＭ－１ノックアウトマウスにおけるＰＧＬＹＲＰ１のレベルを示す。

【発明を実施するための形態】

【0074】

本開示は、受容体へのＴＲＥＭ－１リガンドの結合を阻止するＴＲＥＭ－１抗体を提供する。本開示による抗体は、免疫細胞に対する標的化及びアテローム性動脈硬化症、卒中発作又は心筋梗塞などの循環器系疾患を治療するために有用な細胞活性及びサイトカイン応答の調整を示す。

【0075】

定義
「ポリペプチド結合剤」又は「抗原結合タンパク質」という用語は、抗原、例えば標的又はそのシグナル伝達パートナーに特異的に結合することが可能であるか、又は測定可能な結合親和性で抗原に結合することが可能であるポリペプチドを指す。ポリペプチド結合剤の例としては、他のペプチド部分又は非ペプチド性部分に任意選択的に複合化された抗体、ペプチボディー、ポリペプチド及びペプチドが挙げられる。ポリペプチド結合剤が結合し得る抗原は、抗体応答を引き起こすことが可能であるか、又は非特異的結合より高い検出可能な結合親和性でポリペプチド結合剤に結合することが可能である、あらゆるタンパク質又は非タンパク質分子を含む。調節ポリペプチド結合剤が結合する抗原は、標的、標的のシグナル伝達パートナー及び／又は標的及びそのシグナル伝達パートナーを含む複合体を含み得る。

【0076】

「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、完全に組み立てられた抗体、四量体抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、抗原に結合し得る抗体断片（例えば、Ｆａｂ’、Ｆ’（ａｂ）２、Ｆｖ、一本鎖抗体、ダイアボディ）及びそれらが所望の生物学的活性を示す限り上記のものを含む組み換えペプチドを含む。「免疫グロブリン」又は「四量体抗体」は、可変領域及び定常領域をそれぞれ含む、２つの重鎖及び２つの軽鎖からなる四量体糖タンパク質である。抗原結合部分は、組み換えＤＮＡ技術又はインタクト抗体を酵素的若しくは化学的に切断することによって作製され得る。抗体断片又は抗原結合部分としては、特に、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、ＣＤＲ移植抗体、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体断片、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、線状抗体；キレート化組み換え抗体、トリボディ若しくはバイボディ、イントラボディ、ナノボディ、小型モジュラー免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、抗原結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質、ラクダ化抗体、ＶＨＨ含有抗体又はそれらのバリアント若しくは誘導体及び抗体が所望の生物学的活性を保持する限り、１、２、３、４、５又は６個のＣＤＲ配列など、ポリペプチドに結合する特異的抗原を与えるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドが挙げられる。

【0077】

本明細書で使用される場合、「一価ＩｇＧ」という用語は、単一の抗原結合断片（Ｆａｂ）が、Ｆｃ内のＣ_Ｈ３ドメインにおける突然変異を通してヘテロ二量体化するように改変された完全な定常ドメイン断片（Ｆｃ）に融合されるＩｇＧを指す。一価ＩｇＧは、「ワンアームド」抗体としても知られている。

【0078】

「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、即ち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る可能性のある天然の突然変異を除いて同一である。

【0079】

本明細書において使用される場合の「抗体バリアント」は、天然抗体可変領域ドメインの可変領域に少なくとも１つのアミノ酸置換、欠失又は挿入を含有する抗体ポリペプチド配列を指す。バリアントは、非修飾抗体に実質的に相同又は実質的に同一であり得る。

【0080】

「単離された」抗体は、その天然環境の構成要素から同定及び分離及び取り出されたものである。その天然環境の汚染物質構成成分は、抗体に対する診断又は治療的使用を妨げ得る物質であり、酵素、ホルモン及び他のタンパク質又は非タンパク質溶質を含み得る。好ましい実施形態では、抗体は、（１）ローリー法によって決定される場合に９５重量％超の抗体、最も好ましくは、９９重量％超まで、（２）スピニングカップシーケネーターの使用により、Ｎ末端又は内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、又は（３）クマシーブルー若しくは好ましくは銀染色又はＨＰＬＣ法を用いて、還元又は非還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均質になるまで精製される。単離された抗体には、その抗体の天然環境の少なくとも１つの構成成分が存在しないため、組み換え細胞内にインサイチューで存在する抗体が含まれる。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも１つの精製段階によって調製される。

【0081】

「重鎖可変領域」は、本明細書で使用される場合、前記抗体重鎖可変ドメインの少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗体分子の領域を指す。重鎖可変領域は、前記抗体重鎖の１、２又は３個のＣＤＲを含有し得る。

【0082】

「軽鎖可変領域」は、本明細書で使用される場合、前記抗体軽鎖可変ドメインの少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗体分子の領域を指す。軽鎖可変領域は、前記抗体軽鎖の１、２又は３個のＣＤＲを含有し得、これは、抗体に依存してカッパ又はラムダ軽鎖の何れかであり得る。

【0083】

本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」が「抗原特異的」であるか、抗原標的「に対して特異的」であるか、又は抗原と「免疫反応性」である抗体は、同様の配列の他の抗原より高い親和性で抗原に結合する本発明の抗体又はポリペプチド結合剤を指す。一態様では、本発明の抗原結合タンパク質又はその断片、バリアント若しくは誘導体は、他の、即ち非ヒト種の同様の抗原へのその結合親和性と比較してより高い親和性でヒト抗原に結合するが、標的のオルソログを認識し、結合するポリペプチド結合剤は、本発明の範囲内にある。

【0084】

「エピトープ」という用語は、抗原結合領域の１つ以上で選択的結合剤によって認識され、結合されることが可能な任意の分子のその部分を指す。エピトープは通常、アミノ酸又は炭水化物側鎖などの分子の化学的に活性な表面群からなり、特定の三次元構造の特徴並びに特定の電荷の特徴を有する。本明細書において使用される場合のエピトープは、連続的又は非連続的であり得る。

【0085】

本発明のポリペプチド結合剤及びポリペプチドに関連して使用される場合の「誘導体」という用語は、ユビキチン化、治療薬又は診断薬への複合化、標識（例えば、放射性核種又は様々な酵素を用いて）、ＰＥＧ化（ポリエチレングリコールを用いた誘導体化）などの共有結合ポリマー結合及びヒトタンパク質において通常起こらない、オルニチンなどのアミノ酸の化学合成による挿入又は置換などの技術によって化学修飾されたポリペプチドを指す。誘導体は、本発明の非誘導体化分子の結合特性を保持する。

【0086】

「リンカー」は、本明細書で使用される場合、２つのポリペプチドを連結するペプチドを指す。リンカーは、１～８０アミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、２～４０、３～４０、３～３０又は３～２０アミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４又は３アミノ酸長のペプチドであり得る。他の実施形態では、リンカーは、３～２５、３～１８、５～２０、６～１８又は１０～２０アミノ酸長であり得る。他の実施形態では、リンカーは、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０アミノ酸長であり得る。多くの場合、リンカーは、遊離システイン残基を欠き（即ち及び従ってジスルフィド結合に関与しない）、Ｎ－グリコシル化部位も含有しない（即ちＡｓｎ－Ｘｘｘ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ、ここで、Ｘは、プロリンを除いた何れかのアミノ酸であり得る）。特定の実施形態では、配列Ｇ３ＳＧ２又はＧ４Ｓを有するペプチドは、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質とＩＬ－１０突然変異タンパク質との間のリンカーである。他の適切なリンカーの例としては、とりわけ、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ３Ｓ、Ｇ３Ｐ、Ｇ３Ｑ及びＧ５が挙げられる。上記のリンカー中の各頭文字は、アミノ酸に対する従来の一文字コードを指し、各数字は、リンカー中のアミノ酸のタンデムリピートの数を指す。例えば、「Ｇ３ＳＧ２」は、配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙを有するリンカーを指す。「Ｇ４Ｓ」は、配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒを有するリンカーを指す。

【0087】

疾患を治療するために使用される薬物の「治療有効量」は、疾患の重症度を低下させ、疾患若しくはその治療に関連する１つ以上の症状の重症度を低下させるか、又は状態の治療後に一定の頻度で起こり得るより深刻な症状若しくはより深刻な疾患の発生を遅らせ得る量である。

【0088】

本明細書において言及される何れかの疾患の「治療」は、疾患の少なくとも１つの症状の緩和、疾患の重症度の低下又はいくつかの場合には疾患に伴い得るか若しくは少なくとも１つの他の疾患を引き起こし得るより深刻な症状への疾患の進行の遅延若しくは防止を包含する。治療は、疾患が全治されることを意味する必要はない。有用な治療剤は、疾患の重症度を低下させ、疾患若しくはその治療に関連する１つ以上の症状の重症度を低下させるか、又は状態の治療後に一定の頻度で起こり得るより深刻な症状若しくはより深刻な疾患の発生を遅らせることのみを必要とする。

【0089】

「対象」は、哺乳動物及び非哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、哺乳動物クラスのあらゆるメンバーが挙げられるが、限定されない：ヒト、非ヒト霊長類、例えばチンパンジー及び他の類人猿及びサル種など；家畜、例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタなど；家養動物、例えばウサギ、イヌ及びネコなど；げっ歯類、例えばラット、マウス及びモルモットなどを含む実験動物。非哺乳動物の例としては、鳥類、魚類などが挙げられるが、限定されない。この用語は、特定の年齢又は性別を示さない。

【0090】

本明細書で使用される場合、「骨髄系細胞」は、骨髄系細胞系列の血液前駆細胞に由来する免疫細胞のサブグループを指し、顆粒球、単球、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）を含む。骨髄系細胞は、多くの場合、食細胞及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）機能を有する、防御免疫における重要な機能を果たす。例えば、ｄｅ Ｋｌｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：４２３，２０１４を参照されたい。

【0091】

抗原結合タンパク質及び抗体
免疫グロブリン可変ドメインは、３つの超可変領域又はＣＤＲによって連結された比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を呈する。Ｎ末端からＣ末端に、軽鎖及び重鎖は、両方ともドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７及び１９９１））又はＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３，１９８９の定義に従う。

【0092】

抗体の超可変領域は、抗原結合に関与する抗体のＣＤＲアミノ酸残基を指す。超可変領域は、ＣＤＲからのアミノ酸残基［例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）により記載されるような軽鎖可変ドメインの残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）及び８９～９７（Ｌ３）並びに重鎖可変ドメインの３１～３５（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）及び９５～１０２（Ｈ３）］及び／又は［Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）］により記載されるような、超可変ループからの残基（例えば、軽鎖可変ドメインの残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）及び９１～９６（Ｌ３）並びに重鎖可変ドメインの２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）及び９６～１０１（Ｈ３））を含む。ＣＤＲも同定され、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）番号付けに従って番号付けされた（以下のような軽鎖及び重鎖可変ドメインにおけるＣＤＲの位置を記載するＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２－１３６（１９９９）；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７，５５－７７（２００３）：ＣＤＲ１、およそ残基２７～３８；ＣＤＲ２、およそ残基５６～６５；及びＣＤＲ３、およそ残基１０５～１１６（生殖系列）又は残基１０５～１１７（再編成））。一実施形態では、ＣＤＲは、本明細書で開示されるものとほぼ同様の長さの抗体重鎖又は軽鎖の、軽鎖可変ドメイン中のおよそ残基２６～３１（Ｌ１）、４９～５１（Ｌ２）及び８８～９８（Ｌ３）並びに重鎖可変ドメイン中のおよそ残基２６～３３（Ｈ１）、５１～５８（Ｈ２）及び９７～１１０（Ｈ３）に位置すると考えられる。しかしながら、当業者は、特定の抗体の配列が同定される場合、ＣＤＲ残基の実際の位置が、上記の予想される残基と異なり得ることを理解する。本明細書で開示される配列識別子が割り当てられるＣＤＲは、Ｋａｂａｔ法（Ｋａｂａｔ ａｎｄ Ｗｕ，１９９１）に従って定められ、Ａｍｇｅｎ参照番号付けを使用して番号付けされる。Ａｍｇｅｎ参照番号付けは、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．３０９（３）：６５７－７０、２００１）に記載される抗体可変領域のためのＨｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ番号付けシステムにおいて構築された、構造に基づく番号付けシステムである。様々な実施形態では、改変ＩｇＧ１抗体が企図される。様々な実施形態では、本抗体は、本明細書に記載のようなＩｇＧ１ｚ又はＩｇＧ１ｚ－ＳＥＦＬ２抗体である。

【0093】

さらに、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ａｎｄ Ｃｈｏｔｈｉａ，ＡｂＭ，Ｃｏｎｔａｃｔ，Ｎｏｒｔｈ，Ｍａｒｔｉｎの両方の蓄積及び／若しくはコンフォメーションによる定義又は当技術分野で周知のＣＤＲを決定する何れかの方法に従って定められ得る。ＣＤＲのＡｂＭによる定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの折衷案であり、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ａｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標））を使用する。ＣＤＲの「接触」の定義は、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２－７４５に示される、観察される抗原接触に基づく。ＣＤＲの「立体構造」の定義は、抗原結合に対するエンタルピー的な寄与を生じさせる残基に基づく（例えば、Ｍａｋａｂｅ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８３：１１５６－１１６６を参照されたい）。Ｎｏｒｔｈは、異なる好ましいＣＤＲ定義のセットを用いて、カノニカルなＣＤＲ立体構造を同定した（Ｎｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０６：２２８－２５６）。本明細書でＣＤＲの「立体構造定義」と呼ばれる別のアプローチにおいて、ＣＤＲの位置は、抗原結合に対するエンタルピー的な寄与を生じさせる残基として同定され得る（Ｍａｋａｂｅ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：１１５６－１１６６）。Ｍａｒｔｉｎの定義（ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｃｈｏｔｈｉａ定義とも呼ばれる）は、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの定義を組み合わせており、重鎖においてのみそれらと異なり、ＣＤＲ－Ｈ１はＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの全ての残基を含む一方、ＣＤＲ－Ｈ２は、Ｋａｂａｔにより定義されるものよりも７残基短い（Ｍａｒｔｉｎ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｗｅｉｎｈｅｉｍ：Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ Ｖｅｒｌａｇ ＧｍｂＨ；（２００８）．ｐ．９５－１１７；Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｔ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｌｏｎｄｏｎ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／＃ｃｄｒｉｄにより維持されるデータベースも参照されたい）。ＣＤＲ境界のさらに他の定義は、上記のアプローチの１つに厳密には従わない場合があるが、それでもなおＫａｂａｔ ＣＤＲの少なくとも一部と重なるものの、これらは、特定の残基若しくは残基群又は全ＣＤＲさえも抗原結合にさほど影響を及ぼさないという予測又は実験結果を踏まえて短縮又は伸長され得る。例えば、「合わせた」ＣＤＲも使用され得る。本明細書で使用される場合、ＣＤＲは、これらのアプローチの組み合わせを含む、当技術分野で公知の何れかのアプローチにより定められるＣＤＲを指し得る。本明細書で使用される方法は、これらのアプローチの何れかに従って定められるＣＤＲを利用し得る。複数のＣＤＲを含有する何れかの一定の実施形態に対して、ＣＤＲ（又は抗体の他の残基）は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｎｏｒｔｈ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、Ｍａｒｔｉｎ、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの組み合わせ及び／又は立体構造定義の何れかに従って定められ得る。

【0094】

例えば、以下の表は、ＣＤＲのいくつかの一般的に使用される定義を示す（便宜上、Ａｍｇｅｎ参照番号付けの代わりにＫａｂａｔ番号付けに従って残基を番号付け）。

【0095】

【表1】

【0096】

フレームワーク領域（又はＦＲ）残基は、超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。

【0097】

後述されるように、本明細書において企図される、本明細書に記載のモノクローナル、ヒト、ヒト化及び他の抗体を含む抗体は、典型的に、組み換え的に又は遺伝子コードをインビトロ若しくはインビボで操作する他の方法を通して作製され、従って、必ずしも、自然界に見られる特定の抗体を反映する必要はない。

【0098】

抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質
ＴＲＥＭ－１シグナル伝達を特性評価するための過去の研究は、受容体のリガンド活性化を模倣するためにＴＲＥＭ－１のアゴニスト抗体を用いた（Ｔｅｓｓａｒｚ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ １１６（２）：１１１－６，２００８；Ｖａｎｄｅｓｔｉｅｎｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １３１（２）：ｅ１４２４６８，２０２１）。デコイペプチドも、ＴＲＥＭ－１活性を調節するために試みられた（例えば、国際公開第２０１４０３７５６５Ａ号パンフレットを参照されたい）。

【0099】

本開示は、標的特異的抗体をコードするアミノ酸分子の使用を包含する。本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、ヒトＴＲＥＭ－１及びそのリガンドの相互作用を異なって調節する。

【0100】

いくつかの実施形態では、配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０で示される重鎖可変領域と少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上同一であるアミノ酸配列及び／又は配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９で示される軽鎖可変領域と少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む抗原結合タンパク質が提供され、抗体は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２又はＬＣＤＲ３の少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てをさらに含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域との同一性パーセンテージを有するアミノ酸配列は、軽鎖ＣＤＲの１、２又は３つを含み得る。他の実施形態では、重鎖可変領域との同一性パーセンテージを有するアミノ酸配列は、重鎖ＣＤＲの１、２又は３つを含み得る。

【0101】

別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、上に示される抗体配列の重鎖可変領域における全ての３つのＨＣＤＲ又はＣＤＲ：配列番号１６、３６、５６、７６、９６、１１６、１３６、１５６、１７６、１９６、２１６、２３６、２５６、２７６及び５５０で示される重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号１７、３７、５７、７７、９７、１１７、１３７、１５７、１７７、１９７、２１７、２３７、２５７、２７７及び５５１で示される重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号１８、３８、５８、７８、９８、１１８、１３８、１５８、１７８、１９８、２１８、２３８、２５８、２７８及び５５２で示される重鎖ＣＤＲ３配列と少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。

【0102】

関連する実施形態では、上に示される抗体配列の軽鎖可変領域の全ての３つのＬＣＤＲ又はＣＤＲ：配列番号１０、３０、５０、７０、９０、１１０、１３０、１５０、１７０、１９０、２１０、２３０、２５０、２７０及び５４４で示される軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号１１、３１、５１、７１、９１、１１１、１３１、１５１、１７１、１９１、２１１、２３１、２５１、２７１及び５４５で示される軽鎖ＣＤＲ２配列；配列番号１２、３２、５２、７２、９２、１１２、１３２、１５２、１７２、１９２、２１２、２３２、２５２、２７２及び５４６で示される軽鎖ＣＤＲ３配列と、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む抗原結合タンパク質が提供される。

【0103】

本開示の抗体は、抗体のＣＤＲ領域中の１つ又は２つ以上のアミノ酸置換、例えば非保存的又は保存的置換を有し得ることが企図される。本明細書に開示されるＴＲＥＭ－１抗体重鎖及び軽鎖ＣＤＲ及び／又は可変領域配列のコンセンサス配列も企図される。例えば、ＴＲＥＭ－１抗体は、以下の配列を含み得る。様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗体は、Ｘ_１ＡＳＱＳＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＮＬＡ（配列番号５５３）（ここで、Ｘ_１は、Ｒ又はＱであり、Ｘ_２は、Ｖ又はＩであり、Ｘ_３は、Ｎ又はＳであり、Ｘ_４は、Ｓ、Ｈ、Ｉ、Ｖ又はＡである）；ＱＡＳＸ_１ＤＩＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＬＮ（配列番号５５８）（ここで、Ｘ_１は、Ｒ又はＱであり、Ｘ_２は、Ｒ、Ｓ、Ｎ又はＦであり、Ｘ_３は、Ｋ又はＮであり、Ｘ_４は、Ｈ、Ｙ又はＤである）；ＲＡＳＱＳＶＮＳＮＬＡ（配列番号５６６）；ＱＡＳＱＤＩＲＫＨＬＮ（配列番号５６７）；ＲＡＳＱＤＩＳＳＮＬＮ（配列番号５６８）；ＱＡＳＱＤＩＨＬＮ（配列番号５６９）；ＲＡＳＱＧＩＲＫＷＬＡ（配列番号５７０）又はＲＡＳＱＳＶＮＳＮＬＡ（配列番号５７１）及びＳＧＤＫＬＧＥＲＶＳ（配列番号５７２）からなる群から選択されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する配列を含む抗原結合ドメインを含む。

【0104】

様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗体は、ＧＡＸ_１Ｘ_２ＲＡＴ（配列番号５５４）（ここで、Ｘ_１は、Ｓ又はＹであり、Ｘ_２は、Ｔ又はＩである）；アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４ＬＥＴ（配列番号５６０）（ここで、Ｘ_１は、Ｄ、Ｇ又はＨであり、Ｘ_２は、Ａ、Ｖ又はＴであり、Ｘ_３は、Ｓ、Ａ又はＹであり、Ｘ_４は、Ｔ又はＮである）；ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号５７３）；ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号５７４）；及びＡＡＳＲＬＱＳ（配列番号５７５）からなる群から選択されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する配列を含む抗原結合ドメインを含む。

【0105】

様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗体は、ＱＸ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＰＸ_７Ｔ（配列番号５５５）（ここで、Ｘ_１は、Ｑ、Ｈ又はＥであり、Ｘ_２は、Ｆ又はＹであり、Ｘ_３は、Ｋ、Ｙ又はＩであり、Ｘ_４は、Ｎ、Ｔ、Ｌ、Ｉ又はＭであり；Ｘ_５は、Ｗ、Ｆ、Ｈ又はＹであり、Ｘ_６は、非存在又はＰであり；Ｘ_７は、Ｗ、Ｎ、Ｙ、Ｈ又はＬである）；ＱＸ_１ＹＸ_３Ｘ_４Ｘ_５ＰＸ_６Ｔ（配列番号５６１）（ここで、Ｘ_１は、Ｑ又はＨであり、Ｘ_２は、Ｄ、Ａ又はＧであり、Ｘ_３は、Ｎ又はＫであり；Ｘ_４は、Ｌ又はＩであり、Ｘ_５は、Ｉ又はＬである）；ＱＱＦＫＮＷＰＰＴ（配列番号５７６）；ＱＨＹＤＮＬＰＩＴ（配列番号５７７）；ＬＱＡＨＧＦＰＷＴ（配列番号５７８）；ＱＱＹＤＮＬＰＬＴ（配列番号５７９）及びＱＦＷＰＰＷＴ（配列番号５８０）からなる群から選択されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する配列を含む抗原結合ドメインを含む。

【0106】

様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗体は、Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３ＭＸ_４（配列番号５５６）（ここで、Ｘ_１は、Ａ、Ｒ、Ｔ又はＳであり、Ｘ_２は、Ｙ又はＮであり、Ｘ_３は、Ａ又はＷであり、Ｘ_４は、Ｓ又はＮである）；配列Ｘ_１ＹＤＩＮ（配列番号５６３）（ここで、Ｘ_１は、Ｒ又はＳである）；ＧＹＹＸ_１Ｈ（ここで、Ｘ_１は、Ｍ又はＩである）；ＡＹＡＭＳ（配列番号５８１）；ＲＹＤＩＮ（配列番号５８２）；及びＳＹＷＭＳ（配列番号５８３）からなる群から選択されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する配列を含む抗原結合ドメインを含む。

【0107】

様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗体は、Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９ＹＹＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２ＶＫＧ（配列番号５５９）（ここで、Ｘ_１は、Ｔ、Ｅ又はＳであり、Ｘ_２は、非存在であるか、又はＭ、Ｖ若しくはＩであり、Ｘ_３は、Ｓ、Ｒ又はＫであり、Ｘ_４は、Ｇ又はＱであり、Ｘ_５は、Ｓ、Ｄ又はＨであり、Ｘ_６は、Ｇ、Ｓ、Ｌ又はＡであり、Ｘ_７は、Ｓ、Ｇ又はＲであり、Ｘ_８は、Ｔ、Ｓ、Ｐ又はＥであり、Ｘ_９は、Ｔ又はＩであり、Ｘ_１０は、Ａ又はＶであり、Ｘ_１１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_１２は、Ｓ又はＡである）；Ｘ_１Ｘ_２ＮＰＸ_３Ｘ_４ＧＸ_５Ｘ_６ＧＸ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０ＦＸ_１１Ｘ_１２（配列番号５６４）（ここで、Ｘ_１は、Ｗ又はＲであり、Ｘ_２は、Ｍ又はＬであり、Ｘ_３は、Ｎ、Ｑ又はＫであり、Ｘ_４は、Ｓ、Ａ又はＲであり、Ｘ_５は、Ｎ又はＱであり、Ｘ_６は、Ｓ、Ａ又はＴであり、Ｘ_７は、Ｓ、Ｑ又はＹであり、Ｘ_８は、Ｖ又はＴであり、Ｘ_９は、Ｑ又はＫであり、Ｘ_１０は、Ｋ又はＮであり、Ｘ_１１は、Ｒ又はＱであり、Ｘ_１２は、Ｇ又はＤである）；ＴＳＧＳＧＳＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５８４）；ＷＭＮＰＮＳＧＮＳＳＶＱＫＦＲＧ（配列番号５８５）；ＮＩＫＱＤＧＳＥＥＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号５８６）；及びＴＳＧＳＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８４１）からなる群から選択されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する配列を含む抗原結合ドメインを含む。

【0108】

様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗体は、Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７ＦＸ_８ＹＹＸ_９（配列番号５５７）（ここで、Ｘ_１は、Ｖ、Ｅ、Ａ又はＧであり、Ｘ_２は、Ａ、Ｆ、Ｙ又はＧであり、Ｘ_３は、Ｇ、Ｓ、Ｙ又はＷであり、Ｘ_４は、Ｓ又はＲであり、Ｘ_５は、非存在であるか又はＮであり、Ｘ_６は、Ｆ、Ｓ、Ｙ又は非存在であり、Ｘ_７は、Ｌ若しくはＦ又は非存在であり、Ｘ_８は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_９は、Ｙ、Ｈ又はＳである）；Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２ＦＸ_１３Ｘ_１４（配列番号５６５）（ここで、Ｘ_１は、Ｇ、Ｌ又はＲであり、Ｘ_２は、Ｇ、ＩはＲであり、Ｘ_３は、Ｙ、Ｒ、Ｉ、Ｇ又はＡであり、Ｘ_４は、Ｔ、Ｓ、Ｙ又はＶであり、Ｘ_５は、Ｓ又はＹであり、Ｘ_６は、Ｓ、Ａ、Ｉ又はＲであり、Ｘ_７は、Ｗ、Ａ又はＳであり、Ｘ_８は、非存在であるか又はＳであり、Ｘ_９は、非存在であるか、又はＦ、Ｗ若しくはＹであり、Ｘ_１０は、Ｒ、Ｓ、Ｈ、Ｋ又はＥであり、Ｘ_１１は、Ｗ、Ｈ、Ｙ又はＦであり、Ｘ_１２は、Ｙ、Ｖ、Ａ又はＳであり、Ｘ_１３は、Ｄ又はＱであり、Ｘ_１４は、Ｌ、Ｙ、Ｉ又はＨである）；ＶＡＧＳＮＦＬＦＤＹ（配列番号８４２）；ＧＧＹＴＳＳＷＲＷＹＦＤＬ（配列番号８４３）；ＧＧＹＴＳＳＷＳＲＷＹＦＤＬ（配列番号８４４）；及びＤＹＧＤＳＦＤＹ（配列番号８４５）からなる群から選択されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する配列を含む抗原結合ドメインを含む。

【0109】

関連する実施形態では、フレームワークの残基が改変される。改変され得る重鎖フレームワーク領域は、重鎖ＣＤＲ残基を囲む、Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３及びＨ－ＦＲ４と呼ばれる領域内にあり、改変され得る軽鎖フレームワーク領域の残基は、軽鎖ＣＤＲ残基を囲む、Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３及びＬ－ＦＲ４と呼ばれる領域内にある。フレームワーク領域内のアミノ酸は、例えば、ヒトフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークにおいて同定される何れかの適切なアミノ酸で置換され得る。フレームワーク領域が改変され得るが、本明細書に記載の抗原結合タンパク質又は抗体は、親抗体のＣＤＲ、ＬＣＤＲ１～３及び／又はＨＣＤＲ－３を保持することがさらに企図される。

【0110】

抗体断片は、無傷の完全長抗体、好ましくは、無傷の抗体の抗原結合又は可変領域の一部を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃａｂ及びＦｖ断片；ダイアボディ；線形抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；二重特異性、三重特異性抗体などの多重特異性抗体断片（例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ）；ミニボディ；キレート化組み換え抗体；トリボディ又はバイボディ；イントラボディ；ナノボディ；結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質；ラクダ化抗体；ＶＨＨ含有抗体；及び抗体断片から形成される他のポリペプチドが挙げられる。例えばＨｏｌｌｉｇｅｒ＆Ｈｕｄｓｏｎ，２００５ Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１２６－３６；Ｅｙｅｒ＆Ｈｒｕｓｋａ，Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｎｉ Ｍｅｄｉｃｉｎａ ５７：４３９－５１３，２０１２を参照されたい。

【0111】

本開示の抗原結合化合物は、好ましくは、表面プラズモン共鳴又はＫｉｎｅｘＡによって測定した場合、ＴＲＥＭ－１に対する１０^－８、１０^－９、１０^－１０、１０^－１１、１０^－１２、１０^－１３、１０^－１４、１０^－１５Ｍ以下の結合親和性を保持する。本開示の抗原結合化合物は、１０^－９～１０^－１２又は１０^－１０～１０^－１３又は１０^－１０～１０^－１５ＭのＴＲＥＭ－１からの結合親和性を有する。ＳＰＲアッセイは、例えば２５℃（室温）で標準的な方法を使用して行われる。

【0112】

様々な実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１ｚ抗体である。

【0113】

配列番号６、２６、４６、６６、８６、１０６、１２６、１４６、１６６、１８６、２０６、２２６、２４６、２６６及び５４０で示される重鎖アミノ酸配列と；配列番号５、２５、４５、６５、８５、１０５、１２５、１４５、１６５、１８５、２０５、２２５、２４５、２６５及び５３９で示される軽鎖アミノ酸配列とを有する、ＴＲＥＭ－１に結合する全長抗体の例が本明細書で提供される。

【0114】

様々な実施形態では、ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、組み換え抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ２、一価ＩｇＧ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体及びＩｇＧ４抗体からなる群から選択される。様々な実施形態では、抗原結合部分は、ＩｇＧである。様々な実施形態では、抗原結合部分は、ＩｇＧ２抗体である。様々な実施形態では、抗原結合部分は、ＩｇＧ１抗体である。様々な実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１ｚ抗体である。様々な実施形態では、抗原結合部分は、一価ＩｇＧである。様々な実施形態では、抗原結合部分の重鎖定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥの重鎖定常領域、その断片、それらの組み合わせ及び１～１０個の重鎖フレームワークアミノ酸が別のヒト抗体定常領域からの対応するアミノ酸で置換されたそれらの修飾物から選択される。

【0115】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、１０^－８Ｍ～１０^－１５Ｍ又は１０^－８Ｍ～１０^－１２Ｍ又は１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ、１０^－１２Ｍ、１０^－１３Ｍ、１０^－１４Ｍ又は１０^－１５Ｍの結合親和性でその抗原に結合する。

【0116】

様々な実施形態では、本抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号１０、３０、５０、７０、９０、１１０、１３０、１５０、１７０、１９０、２１０、２３０、２５０、２７０及び５４４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１１、３１、５１、７１、９１、１１１、１３１、１５１、１７１、１９１、２１１、２３１、２５１、２７１及び５４５から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
ｉｉｉ．配列番号１２、３２、５２、７２、９２、１１２、１３２、１５２、１７２、１９２、２１２、２３２、２５２、２７２及び５４６から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号１６、３６、５６、７６、９６、１１６、１３６、１５６、１７６、１９６、２１６、２３６、２５６、２７６及び５５０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１７、３７、５７、７７、９７、１１７、１３７、１５７、１７７、１９７、２１７、２３７、２５７、２７７及び５５１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ．配列番号１８、３８、５８、７８、９８、１１８、１３８、１５８、１７８、１９８、２１８、２３８、２５８、２７８及び５５２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖可変ドメインと
を含む。

【0117】

抗原結合タンパク質の様々な実施形態では、
ａ．軽鎖ＣＤＲ１配列は、配列番号１０、３０、５０、９０、１３０、１５０又は２７０で示され；
ｂ．軽鎖ＣＤＲ２配列は、配列番号１１、３１、５１、９１、１３１、１５１又は２７１で示され；
ｃ．軽鎖ＣＤＲ３配列は、配列番号１２、３２、５２、９２、１３２、１５２又は２７２で示され、
ｄ．重鎖ＣＤＲ１配列は、配列番号１６、３６、５６、９６、１３６、１５６又は２７６で示され；
ｅ．重鎖ＣＤＲ２配列は、配列番号１７、３７、５７、９７、１３７、１５７又は２７７で示され；
ｆ．重鎖ＣＤＲ３配列は、配列番号１８、３８、５８、９８、１３８、１５８又は２７８で示される。

【0118】

抗原結合タンパク質の様々な実施形態では、
ａ．軽鎖ＣＤＲ１配列は、配列番号３０又は９０で示され；
ｂ．軽鎖ＣＤＲ２配列は、配列番号３１又は９１で示され；
ｃ．軽鎖ＣＤＲ３配列は、配列番号３２又は９２で示され；
ｄ．重鎖ＣＤＲ１配列は、配列番号３６又は０９６で示され；
ｅ．重鎖ＣＤＲ２配列は、配列番号３７又は９７で示され；
ｆ．重鎖ＣＤＲ３配列は、配列番号３８又は９８で示される。

【0119】

様々な実施形態では、抗原結合タンパク質は、配列番号２２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号２１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0120】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号４２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号４１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0121】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号６２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号６１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0122】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号８２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号８１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0123】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号１０２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１０１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0124】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号１２２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１２１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0125】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号１４２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１４１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0126】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号１６２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１６１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0127】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号１８２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１８１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0128】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２０２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号２０１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0129】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２２２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号２２１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0130】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２４２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号２４１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0131】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２６２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号２６１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0132】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２８２の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号２８１の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0133】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号５４０の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号５３９の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３とを含む。代表的な実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ又はＩＭＧＴに従って定められる。

【0134】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、２５９、２７９及び５３７から選択される核酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列；
ｉｉｉ．配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、２５９、２７９及び５３７から選択される核酸配列からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０及び５３８から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列；及び
ｉｉｉ．配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０及び５３８から選択される核酸配列からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと
を含む。

【0135】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号２１、４１、６１、１０１、１４１、１６１及び２８１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号１９、３９、５９、９９、１３９、１５９及び２７９から選択される核酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列；
ｉｉｉ．配列番号１９、３９、５９、９９、１３９、１５９及び２７９から選択される核酸配列からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号２２、４２、６２、１０２、１４２、１６２及び２８２から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号２０、４０、６０、１００、１４０、１６０及び２８０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列；
ｉｉｉ．配列番号２０、４０、６０、１００、１４０、１６０及び２８０から選択される核酸配列からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと
を含む。

【0136】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
ａ．軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号４１及び１０１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号３９及び９９から選択される核酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列；
ｉｉｉ．配列番号３９及び９９から選択される核酸配列からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインと、
ｂ．重鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号４２及び１０２から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列；
ｉｉ．配列番号４０及び１００から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列；
ｉｉｉ．配列番号４０及び１００から選択される核酸配列からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと
を含む。

【0137】

様々な実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９及び配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０と、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であり得る。

【0138】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０から選択される重鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0139】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0140】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号２２、４２、６２、１０２、１４２、１６２及び２８２から選択される配列と少なくとも９０％同一である重鎖アミノ酸配列と、配列番号２１、４１、６１、１０１、１４１、１６１及び２８１から選択される配列と少なくとも９０％同一である軽鎖アミノ酸配列とを含む。

【0141】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、配列番号４及び１０２から選択される配列と少なくとも９０％同一である重鎖アミノ酸配列と、配列番号４１及び１０１から選択される配列と少なくとも９０％同一である軽鎖アミノ酸配列とを含む。

【0142】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２２の３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号２１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号２１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号２１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。パーセント同一性は、一緒に３個のＣＤＲ配列を組み合わせた場合の、全体的なパーセント同一性により決定され、本明細書で開示される配列に対してそれらをアラインさせる。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0143】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号４２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号４１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号４２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号４１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号４２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号４１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0144】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号６２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号６１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号６２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組みわせて配列番号６１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号６２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号６１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0145】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号８２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号８１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号８２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと、組み合わせて配列番号８１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号８２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号８１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0146】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１０２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号１０１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１０２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号１０１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１０２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号１０１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0147】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１２２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号１２１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１２２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号１２１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１２２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号１２１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0148】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１２２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号１２１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１２２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号１２１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１２２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号１２１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0149】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１４２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号１４１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１４２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号１４１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１４２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号１４１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0150】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１６２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号１６１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１６２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号１６１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１６２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号１６１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0151】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１８２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号１８１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１８２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号１８１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号１８２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号１８１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0152】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２０２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号２０１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２０２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号２０１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２０２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号２０１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0153】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２２２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号２２１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２２２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号２２１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２２２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号２２１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0154】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２４２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号２４１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２４２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号２４１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２４２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号２４１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0155】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２６２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号２６１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２６２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号２６１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２６２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号２６１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0156】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２８２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号２８１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２８２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号２８１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号２８２における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号２８１における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0157】

様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号５４０における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；組み合わせて配列番号５３９における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である３個のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号５４０における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号５３９における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９０％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。様々な実施形態では、本抗原結合タンパク質は、組み合わせて配列番号５４０における３個の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＨと；組み合わせて配列番号５３９における３個の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である３個のＣＤＲを含むＶＬとを含む。本抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ以下のＫＤ値又は５０ｎＭ以下のＫＤ値でその標的（ＴＲＥＭ－１）にさらに結合し得る。

【0158】

様々な実施形態では、本開示は、抗原結合タンパク質を投与することを含む、循環器疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症又は心筋梗塞）を治療する方法を提供し、この抗原結合タンパク質は、骨髄系細胞上で発現されるヒトＴｒＩｇＧｅｒｉｎｇ受容体１（ＴＲＥＭ－１）に結合し、
ｉ）配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｉ）配列番号３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号３８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｉｉ）配列番号５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号５８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｖ）配列番号７０（ＬＣＤＲ１）、配列番号７１（ＬＣＤＲ２）、配列番号７２（ＬＣＤＲ３）、配列番号７６（ＨＣＤＲ１）、配列番号７７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号７８（ＨＣＤＲ３）；
ｖ）配列番号９０（ＬＣＤＲ１）、配列番号９１（ＬＣＤＲ２）、配列番号９２（ＬＣＤＲ３）、配列番号９６（ＨＣＤＲ１）、配列番号９７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号９８（ＨＣＤＲ３）；
ｖｉ）配列番号１１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１１２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１１６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１１７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１１８（ＨＣＤＲ３）；
ｖｉｉ）配列番号１３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１３８（ＨＣＤＲ３）；
ｖｉｉｉ）配列番号１５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１５８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｘ）配列番号１７０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１７２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１７６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１７７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１７８（ＨＣＤＲ３）；
ｘ）配列番号１９０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１９１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１９２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１９６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１９７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１９８（ＨＣＤＲ３）；
ｘｉ）配列番号２１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２１１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２１２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２１６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２１７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２１８（ＨＣＤＲ３）；
ｘｉｉ）配列番号２３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２３８（ＨＣＤＲ３）；
ｘｉｉｉ）配列番号２５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２５８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｘ）配列番号２７０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２７１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２７２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２７６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２７７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２７８（ＨＣＤＲ３）；及び
ｘｖ）配列番号５４４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５４５（ＬＣＤＲ２）、配列番号５４６（ＬＣＤＲ３）、配列番号５４７（ＨＣＤＲ１）、配列番号５４８（ＨＣＤＲ２）及び配列番号５４９（ＨＣＤＲ３）
から選択されるＣＤＲ配列のセットを含む。

【0159】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、
ｉ）配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｉ）配列番号３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号３８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｉｉ）配列番号５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号５８（ＨＣＤＲ３）；
ｉｖ）配列番号９０（ＬＣＤＲ１）、配列番号９１（ＬＣＤＲ２）、配列番号９２（ＬＣＤＲ３）、配列番号９６（ＨＣＤＲ１）、配列番号９７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号９８（ＨＣＤＲ３）；
ｖ）配列番号１３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１３８（ＨＣＤＲ３）；
ｖｉ）配列番号１５０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１５１（ＬＣＤＲ２）、配列番号１５２（ＬＣＤＲ３）、配列番号１５６（ＨＣＤＲ１）、配列番号１５７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号１５８（ＨＣＤＲ３）；又は
ｖｉｉ）配列番号２７０（ＬＣＤＲ１）、配列番号２７１（ＬＣＤＲ２）、配列番号２７２（ＬＣＤＲ３）、配列番号２７６（ＨＣＤＲ１）、配列番号２７７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号２７８（ＨＣＤＲ３）
から選択されるＣＤＲ配列のセットを含む。

【0160】

様々な実施形態では、抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、配列番号３０（ＬＣＤＲ１）、配列番号３１（ＬＣＤＲ２）、配列番号３２（ＬＣＤＲ３）、配列番号３６（ＨＣＤＲ１）、配列番号３７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号３８（ＨＣＤＲ３）；又は配列番号９０（ＬＣＤＲ１）、配列番号９１（ＬＣＤＲ２）、配列番号９２（ＬＣＤＲ３）、配列番号９６（ＨＣＤＲ１）、配列番号９７（ＨＣＤＲ２）及び配列番号９８（ＨＣＤＲ３）から選択されるＣＤＲ配列のセットを含む。

【0161】

ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質の結合親和性は、ＫＤにより評価され得る。ＫＤは、平衡解離定数、抗原結合タンパク質とその標的又は抗原との間のｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎの比である。ＫＤとＫＡは反比例する。ＫＤ値は、本抗体の濃度（特定の実験に必要な抗体の量）に関連し、従って、ＫＤ値が低いほど（必要とされる濃度が低いほど）、本抗体の親和性が高い。代表的な態様では、ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質のその標的に対するＫＤ値は、約１０^－１Ｍ以下、約１０^－２Ｍ以下、約１０^－３Ｍ以下、約１０^－４Ｍ以下、約１０^－５Ｍ以下、約１０^－６Ｍ以下、約１０^－７Ｍ以下、約１０^－８Ｍ以下、約１０^－９Ｍ以下、約１０^－１０Ｍ以下、約１０^－１１Ｍ以下、約１０^－１２Ｍ以下、約１０^－１３Ｍ以下、約１０^－１４Ｍ以下、約１０^－５Ｍ～約１０^－１５Ｍ、約１０^－６Ｍ～約１０^－１５Ｍ、約１０^－７Ｍ～約１０^－１５Ｍ、約１０^－８Ｍ～約１０^－１５Ｍ、約１０^－９Ｍ～約１０^－１５Ｍ、約１０^－１０Ｍ～約１０^－１５Ｍ、約１０^－５Ｍ～約１０^－１４Ｍ、約１０^－６Ｍ～約１０^－１４Ｍ、約１０^－７Ｍ～約１０^－１４Ｍ、約１０^－８Ｍ～約１０^－１４Ｍ、約１０^－９Ｍ～約１０^－１４Ｍ、約１０^－１０Ｍ～約１０^－１４Ｍ、約１０^－５Ｍ～約１０^－１３Ｍ、約１０^－６Ｍ～約１０^－１３Ｍ、約１０^－７Ｍ～約１０^－１３Ｍ、約１０^－８Ｍ～約１０^－１３Ｍ、約１０^－９Ｍ～約１０^－１３Ｍ又は約１０^－１０Ｍ～約１０^－１３Ｍである。

【0162】

代表的な態様では、その標的に対するＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質のＫＤ値は、マイクロモル、ナノモル、ピコモル又はフェムトモルである。例示的な態様では、ＫＤは、１０^－４～１０^－６Ｍ又は１０^－７～１０^－９Ｍ又は１０^－１０～１０^－１２Ｍ又は１０^－１３～１０^－１５Ｍの範囲内である。代表的な態様では、ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質は、約１ｕＭ以下、約９００ｎＭ以下、約８００ｎＭ以下、約７００ｎＭ以下、約６００ｎＭ以下、約５００ｎＭ以下、約４００ｎＭ以下、約３００ｎＭ以下、約２００ｎＭ以下、約１００ｎＭ以下、約９０ｎＭ以下、約８０ｎＭ以下、約７０ｎＭ以下、約６０ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約３０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、約９００ｐＭ以下、約８００ｐＭ以下、約７００ｐＭ以下、約６００ｐＭ以下、約５００ｐＭ以下、約４００ｐＭ以下、約３００ｐＭ以下、約２５０ｐＭ以下、約２００ｐＭ以下、約１５０ｐＭ以下、約１００ｐＭ以下、約５０ｐＭ以下、約４０ｐＭ以下、約３０ｐＭ以下、約２５ｐＭ以下、約２０ｐＭ以下、約１５ｐＭ以下、約１０ｐＭ以下、約５ｐＭ以下又は約１ｐＭ以下のＫＤ値でその標的に結合する。

【0163】

ＫＤ値は、当技術分野で十分に確立された方法を使用して決定され得る。ＫＤを測定するための代表的な１つの方法は、当技術分野で周知の方法である表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である（例えば、Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｎｓｏｒｓ（Ｂａｓｅｌ）．２０１５ Ｍａｙ ５；１５（５）：１０４８１－５１０）。ＫＤ値は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用するＳＰＲによって測定され得る。ＢＩＡｃｏｒｅ動態分析は、その表面上で分子（例えば、エピトープ結合ドメインを含む分子）が固定化されたチップからの抗原の結合及び解離を分析することを含む。タンパク質のＫＤを決定するための当技術分野で周知の別の方法は、Ｂｉｏ－Ｌａｙｅｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ（例えば、Ｓｈａｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ．２０１４；（８４）：５１３８３）を使用することによる。ＫＤ値は、ＯＣＴＥＴ（登録商標）技術（Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ ｓｙｓｔｅｍ，ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して、Ｂｉｏ－Ｌａｙｅｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙにより測定され得る。代わりに又はさらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄ．）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（結合平衡除外法）アッセイも使用され得る。２つの結合パートナー間の結合親和性を評価するための当技術分野で公知のあらゆる方法が本明細書に包含される。

【0164】

いくつかの態様では、ＫＤ値は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定される。抗原（ＴＲＥＭ－１）は、例えば固体表面上に固定され得る。本抗原は、チップに、例えば共有カップリング（アミンカップリングなど）により固定され得る。このチップはＣＭ５センサーチップであり得る。検体がリガンドに結合するため、センサー面上のタンパク質の蓄積は、屈折率の上昇を引き起こす。この屈折率の変化は、リアルタイムで測定され（０．１ｓごとに動態分析実験における試験採取が行われる）、結果が時間に対する反応単位（ＲＵ）としてプロットされる（センサーグラムと呼ばれる）。応答（バックグラウンド応答）は、ランニング及び試料緩衝液の屈折率において相違がある場合にも生じる。実際の結合応答を得るために、このバックグラウンド応答をセンサーグラムから差し引かれなければならない。バックグラウンド応答は、センサー面に固定されるリガンドがないか又は無関係のリガンドがある対照又は参照フローセルを通して検体を注入することにより記録される。結合相互作用の会合及び解離のリアルタイム測定により、会合及び解離速度定数及び対応する親和性定数の計算が可能になる。１ＲＵは、１ｐｇのタンパク質／平方ｍｍの結合を表す。５０ｐｇ超／平方ｍｍの検体結合は一般に、良好な再現性のある応答を生成させるために実際に必要とされる。

【0165】

本抗原からの抗原結合タンパク質の解離を約３６００秒間、監視し得る。約１５℃～約３７℃でＳＰＲ分析を行い、データを回収し得る。約２５℃～約３７℃でＳＰＲ分析を行い、データを回収し得る。約３７℃でＳＰＲ分析を行い、データを回収し得る。３７℃でＳＰＲ分析を行い、データを回収し得る。Ｋ_Ｄ値は、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００装置を使用してＳＰＲにより測定され得る。ＳＰＲ比率及び親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン１．０において、１：１モデルに対して得られたセンサーグラムデータをフィットさせることによって決定され得る。回収速度は約１Ｈｚであり得る。

【0166】

抗体のＫＤを決定するための別の方法は、一般的にはＯＣＴＥＴ（登録商標）技術（Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅシステム、ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用する、Ｂｉｏ－Ｌａｙｅｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ（ＢＬＩ）の使用による。いくつかの実施形態では、バイオセンサー分析が使用される。一般的には、１つの反応対は、バイオセンサーの表面に固定され（「リガンド」、例えば抗原結合タンパク質など）、他方は、溶液中に残る（「検体」、例えば抗原など）。本アッセイは、アッセイ緩衝液を使用して、初めのベースライン又は平衡段階で始まる。次に、リガンド（抗原結合タンパク質など）は、直接固定又は捕捉に基づく方法の何れかにより、バイオセンサーの表面に固定（ローディング）される。リガンド固定後、ベースライン段階のためにバイオセンサーを緩衝溶液中に浸し、アッセイドリフトを評価し、リガンドのローディングレベルを決定する。ベースライン段階後、バイオセンサーをリガンドの結合パートナー、検体（会合）を含有する溶液に浸す。この段階において、固定されたリガンドへの検体の結合相互作用を測定する。検体会合後、バイオセンサーを検体なしの緩衝溶液に浸し、結合された検体をリガンドから剥がすことが可能になる（解離）。次に、試験されている各検体に対して、一連のアッセイ段階を新しいか又は再生されたバイオセンサー上で反復する。各結合反応を測定し、センサーグラムトレース上においてリアルタイムで報告する。この機器は、Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅシステム、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６システム、Ｏｃｔｅｔ ＱＫ３８４システム又はＲＥＤ３８４システムであり得る。

【0167】

核酸分子
本開示は、本明細書に記載の抗原結合タンパク質をコードする単離核酸も提供し、これは、例えば、抗原結合タンパク質軽鎖、軽鎖可変領域、軽鎖定常領域、抗原結合タンパク質重鎖、重鎖可変領域、重鎖定常領域、リンカー、融合タンパク質及びあらゆる構成成分及びそれらの組み合わせを含む。本発明の核酸は、本発明の核酸との、少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、最も好ましくは少なくとも約９８％の相同性を有する核酸を含む。特定の配列を指す場合、「類似性パーセント」、「同一性パーセント」及び「相同性パーセント」という用語は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ ＧＣＧ（登録商標）ソフトウェアプログラムに記載されるように使用される。本開示の核酸は、相補的核酸も含む。ある場合には、配列は、アラインされた際に完全に相補的であろう（ミスマッチなし）。他の例では、配列中に約２０％までのミスマッチが存在し得る。本発明のいくつかの実施形態では、本開示の抗体の重鎖及び軽鎖の両方をコードする核酸が提供される。

【0168】

本開示の核酸は、プラスミド、コスミド、バクミド、ファージ、人工染色体（ＢＡＣ、ＹＡＣ）又はウイルスなどのベクターにクローニングされ得、その中に別の遺伝子配列又は要素（ＤＮＡ又はＲＮＡの何れか）が結合された配列又は要素の複製をもたらすように挿入され得る。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、構成的に活性なプロモーターセグメント（ＣＭＶ、ＳＶ４０、伸長因子若しくはＬＴＲ配列などであるが、限定されない）又は誘導性プロモーター配列、例えばステロイド誘導性ｐＩＮＤベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有し、核酸の発現が調節され得る。本発明の発現ベクターは、調節配列、例えば、内部リボソーム侵入部位をさらに含み得る。発現ベクターは、例えば遺伝子移入によって細胞に導入され得る。

【0169】

以下の操作可能に連結されたエレメント；転写プロモーター；本開示の抗原結合タンパク質、抗体又は抗原結合断片の重鎖をコードする第１の核酸分子；本開示の抗原結合タンパク質、抗体又は抗原結合断片の軽鎖をコードする第２の核酸分子；及び転写ターミネーターを含む発現ベクターも提供される。別の実施形態では、本開示は、以下の操作可能に連結されたエレメント；第１の転写プロモーター；本開示の抗原結合タンパク質、抗体又は抗原結合断片の重鎖をコードする第１の核酸分子；第１の転写ターミネーター；第２の転写プロモーター、任意選択的に本開示の抗原結合タンパク質、抗体又は抗原結合断片の軽鎖をコードする第２の核酸分子；及び第２の転写ターミネーターを含む発現ベクターを提供する。

【0170】

分泌シグナルペプチド配列も任意選択的に発現ベクターによってコードされ得、必要に応じて、細胞から目的のポリペプチドをより容易に単離するために、組み換え宿主細胞によって発現ポリペプチドを分泌し得るように目的のコード配列に操作可能に連結され得る。例えば、いくつかの実施形態では、シグナルペプチド配列は、本明細書に記載の抗原結合タンパク質、抗体又はそれらの抗原結合断片ポリペプチド配列の何れかのアミノ末端に付加／融合され得る。

【0171】

このようなベクターを含み、本抗原結合タンパク質重鎖及び軽鎖を発現する組み換え宿主細胞も提供される。組み換え宿主細胞は、原核細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞又は真核細胞、例えば哺乳動物細胞又は酵母細胞であり得る。酵母細胞としては、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、シゾサッカロマイセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）及びピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）細胞が挙げられる。哺乳動物細胞としては、ＶＥＲＯ、ＨｅＬａ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、Ｗ１３８、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）、ＣＯＳ－７、ＭＤＣＫ、ヒト胎児腎臓細胞株２９３、正常イヌ腎臓細胞株、正常ネコ腎臓細胞株、サル腎臓細胞、アフリカミドリザル腎臓細胞、ＣＯＳ細胞及び非腫瘍性マウス筋芽細胞Ｇ８細胞、線維芽細胞株、骨髄腫細胞株、マウスＮＩＨ／３Ｔ３細胞、ＬＭＴＫ３１細胞、マウスセルトリ細胞、ヒト子宮頸癌細胞、バッファローラット肝細胞、ヒト肺細胞、ヒト肝細胞、マウス乳腺腫瘍細胞、ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞及びＦＳ４細胞が挙げられる。本開示の組み換えタンパク質産生細胞は、例えば、スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞などの公知のあらゆる昆虫発現細胞株も含む。一実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。特定の実施形態では、哺乳動物細胞は、ＣＨＯ細胞である。

【0172】

特定の実施形態では、哺乳動物細胞は、ＨＥＫ２９３細胞である。

【0173】

タンパク質精製方法は、当技術分野で公知であり、細胞培養培地からの組み換えタンパク質の回収のために本明細書において用いられる。例えば、タンパク質及び抗体精製の方法は、当技術分野において公知であり、本開示の抗体の産生に用いられ得る。いくつかの実施形態では、タンパク質及び抗体精製の方法は、ろ過、アフィニティカラムクロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー及び濃縮を含む。ろ過段階は、限外ろ過、任意選択的に限外ろ過及び透析ろ過を含み得る。ろ過は、好ましくは、少なくとも約５～５０回、より好ましくは、１０～３０回、最も好ましくは、１４～２７回行われる。アフィニティカラムクロマトグラフィーは、例えば、ＰＲＯＳＥＰ（登録商標）アフィニティクロマトグラフィー（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，Ｍａｓｓ）を用いて行われ得る。様々な実施形態では、アフィニティクロマトグラフィー段階は、ＰＲＯＳＥＰ（登録商標）－ｖＡカラムクロマトグラフィーを含む。溶出液は、溶媒洗浄剤中で洗浄され得る。陽イオン交換クロマトグラフィーには、例えば、ＳＰ－セファロース陽イオン交換クロマトグラフィーが含まれ得る。陰イオン交換クロマトグラフィーには、例えば、Ｑ－セファロースＦａｓｔ Ｆｌｏｗ陰イオン交換が含まれ得るが、限定されない。陰イオン交換段階は、好ましくは、非結合であり、これによりＤＮＡ及びＢＳＡを含む汚染物質の除去が可能になる。抗体産物は、好ましくは、例えばＰａｌｌ ＤＶ ２０ナノフィルターを用いてナノ濾過される。抗体産物は、例えば、限外濾過及び透析濾過を使用して濃縮され得る。この方法は、凝集体を除去するためにサイズ排除クロマトグラフィーの段階をさらに含み得る。

【0174】

いくつかの実施形態では、異なる核酸分子は、標的特異的抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をコードする。他の実施形態では、同じ核酸分子は、標的特異的抗体の重鎖及び軽鎖可変領域をコードする。一実施形態では、核酸は、本開示の標的特異的抗体並びに本明細書に記載の核酸によってコードされるポリペプチドの何れかをコードする。

【0175】

いくつかの実施形態では、核酸分子は、配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０で示されるＶＨアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるＶＨアミノ酸配列をコードする。本開示の核酸分子は、配列番号２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８２、２０２、２２２、２４２、２６２、２８２及び５４０の重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列又は配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０及び５３８の何れか１つの重鎖可変領域核酸配列を有する核酸配列と、非常にストリンジェンシーが高い条件下、例えば本明細書に記載の条件などでハイブリダイズする核酸をさらに含む。

【0176】

いくつかの実施形態では、本核酸分子は、配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９で示されるＶＬアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるＶＬアミノ酸配列をコードする。本開示の核酸分子は、配列番号２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、２４１、２６１、２８１及び５３９の軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列又は配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、２５９、２７９及び５３７の何れか１つの軽鎖可変領域核酸配列を有する核酸配列と、ストリンジェンシーが高い条件下、例えば本明細書に記載の条件などでハイブリダイズする核酸をさらに含む。

【0177】

一態様では、本明細書で企図される核酸分子は、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質又はその一部のＶＬアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。関連する態様では、ＶＬアミノ酸配列は、コンセンサス配列である。いくつかの実施形態では、核酸は、前記抗体の軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列をコードする。いくつかの実施形態では、前記部分は、ＬＣＤＲ１～ＣＤＲ３を含む連続部分である。関連する態様では、ＬＣＤＲ１～３アミノ酸配列は、コンセンサス配列である。一実施形態では、前記部分は、任意選択的に、異なるヒト又はヒトコンセンサスフレームワークを伴い、且つ任意選択的に集合的な３個のＣＤＲにおける１つ、又は最大で２つ、又は最大で３つの突然変異を伴う、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３領域の少なくとも１つ、２つ又は３つを含む。

【0178】

一態様では、本開示の核酸分子は、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質又はその一部のＶＨアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。関連する態様では、ＶＨアミノ酸配列は、コンセンサス配列である。いくつかの実施形態では、核酸は、前記抗体の重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列をコードする。いくつかの実施形態では、前記部分は、ＨＣＤＲ１～ＣＤＲ３を含む連続部分である。関連する態様では、ＨＣＤＲ１～３アミノ酸配列は、コンセンサス配列である。一実施形態では、前記部分は、任意選択的に、異なるヒト又はヒトコンセンサスフレームワークを伴い、且つ任意選択的に集合的な３個のＣＤＲにおける１つ、又は最大で２つ、又は最大で３つの突然変異を伴う、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３領域の少なくとも１つ、２つ又は３つを含む。

【0179】

例示的な実施形態では、本開示の抗体は、それに由来するヒトカッパ（κ）若しくはヒトラムダ（λ）軽鎖若しくはアミノ酸配列又はそれに由来するヒト重鎖若しくは配列或いは１本鎖、二量体、四量体又は他の形態で重鎖及び軽鎖の両方を一緒に含む。

【0180】

誘導体
適切な検出可能な分子は、本開示の抗原結合タンパク質に直接又は間接的に連結され得る。適切な検出可能分子は、放射性核種、酵素、基質、補因子、阻害剤、蛍光マーカー、化学発光マーカー、磁性粒子などを含む。検出可能又は細胞毒性分子の間接的な結合のために、検出可能又は細胞毒性分子は、補体／抗補体対のメンバーと複合化され得、ここで、他のメンバーは、結合ポリペプチド又は抗体部分に結合される。これらの目的のために、ビオチン／ストレプトアビジンは、例示的な補体／抗補体対である。

【0181】

本開示の抗原結合タンパク質は、例えば、共有結合が抗体のそのエピトープへの結合を妨げないように、抗体への何れかのタイプの分子の共有結合により修飾される誘導体も含む。適切な誘導体の例としては、フコシル化、グリコシル化、アセチル化、ＰＥＧ化、リン酸化又はアミド化される誘導体が挙げられるが、限定されない。本開示の抗原結合タンパク質は、それ自身、既知の保護基／ブロッキング基、タンパク質分解性切断、細胞リガンド又は他のタンパク質への連結などにより誘導体化され得る。本開示のいくつかの実施形態では、本抗原結合タンパク質の少なくとも１つの重鎖はＰＥＧ化される。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ化は、Ｎ結合されるか、又はアミノ酸（例えば、リジン）の側鎖を通して連結される。

【0182】

グリコシル化は、抗体、特にＩｇＧ１抗体のエフェクター機能に寄与し得る。従って、いくつかの実施形態では、本開示の抗原結合タンパク質は、結合タンパク質のグリコシル化のレベル又はタイプに影響する１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。ポリペプチドのグリコシル化は通常、Ｎ結合又はＯ結合の何れかである。Ｎ結合は、炭水化物部分のアスパラギン残基側鎖への結合を指す。トリペプチド配列のアスパラギン－Ｘ－セリン及びアスパラギン－Ｘ－トレオニン（ここで、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合のための認識配列である。従って、ポリペプチド中のこれらのトリペプチド配列の何れかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を生成する。Ｏ結合型グリコシル化は、Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース又はキシロースの１つの糖の、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンへの連結を指すものの、５－ヒドロキシプロリン又は５－ヒドロキシリジンも使用され得る。

【0183】

特定の実施形態では、１つ以上のグリコシル化部位を例えば結合タンパク質のＦｃ領域に付加することにより、本明細書に記載の抗原結合タンパク質のグリコシル化を増加させる。抗原結合タンパク質へのグリコシル化部位の付加は、上記のトリペプチド配列の１つ以上を含有するようにアミノ酸配列を改変することによって都合よく達成され得る（Ｎ結合型グリコシル化部位の場合）。改変は、１つ以上のセリン残基若しくはスレオニン残基の開始配列への付加又はこれによる開始配列への置換によってもなされ得る（Ｏ結合型グリコシル化部位に対して）。容易にするために、抗原結合タンパク質のアミノ酸配列は、ＤＮＡレベルでの変化により、特に、所望のアミノ酸に翻訳されることとなるコドンが生成されるように、標的ポリペプチドをコードするＤＮＡを、予め選択された塩基で変異させることによって改変され得る。

【0184】

本開示は、エフェクター活性の変化をもたらす改変炭水化物構造を有する抗原結合タンパク質、例えば、ＡＤＣＣ活性の向上を示すフコシル化が存在しないか又は減少した抗原結合タンパク質などの作製も包含する。フコシル化を減少させるか又は排除するために様々な方法が当技術分野で公知である。例えば、ＡＤＣＣエフェクター活性には、抗体分子のＦｃγＲＩＩＩ受容体への結合が介在し、これは、ＣＨ２ドメインのＮ２９７残基でのＮ結合型グリコシル化の炭水化物構造に依存することが示されている。非フコシル化抗体は、高い親和性でこの受容体に結合し、ＦｃγＲＩＩＩ介在性エフェクター機能を天然のフコシル化抗体よりも効率的に誘発する。例えば、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ酵素がノックアウトされているＣＨＯ細胞における非フコシル化抗体の組み換え産生により、ＡＤＣＣ活性が１００倍増大した抗体が生じる（Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．８７（５）：６１４－２２，２００４を参照されたい）。同様の効果は、フコシル化経路におけるアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ酵素又は他の酵素の活性を低下させることにより、例えばｓｉＲＮＡ若しくはアンチセンスＲＮＡ処理、酵素をノックアウトするような細胞株の操作又は選択的グリコシル化阻害剤を用いる培養により達成され得る（Ｒｏｔｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１２）：１１１３－２３，１９８９を参照されたい）。いくつかの宿主細胞株、例えばＬｅｃ１３又はラットハイブリドーマＹＢ２／０細胞株は、フコシル化レベルがより低い抗体を天然に産生する（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７７（３０）：２６７３３－４０，２００２及びＳｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７８（５）：３４６６－７３，２００３を参照されたい）。例えば、ＧｎＴＩＩＩ酵素を過剰発現する細胞において抗体を組み換え産生することによる、バイセクト型炭水化物レベルの上昇もＡＤＣＣ活性を向上させることが判明している（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（２）：１７６－８０，１９９９を参照されたい）。

【0185】

他の実施形態では、１つ以上のグリコシル化部位を、例えば結合タンパク質のＦｃ領域から除くことにより、本明細書に記載の抗原結合タンパク質のグリコシル化を減少させるか又は排除する。Ｎ結合型グリコシル化部位を排除又は改変するアミノ酸置換により、抗原結合タンパク質のＮ結合型グリコシル化を減少させ得るか又は排除し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗原結合タンパク質は、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ａ又はＮ２９７ＧなどのＮ２９７位（ＥＵ番号付け）での突然変異を含む。特定の一実施形態では、本発明の二重特異性抗原結合タンパク質は、Ｎ２９７Ｇ突然変異を有するヒトＩｇＧ１抗体由来のＦｃ領域を含む。Ｎ２９７突然変異を含む分子の安定性を向上させるために、分子のＦｃ領域をさらに改変し得る。例えば、いくつかの実施形態では、二量体状態でジスルフィド結合形成を促進するために、Ｆｃ領域における１つ以上のアミノ酸をシステインで置換する。従って、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＶ２５９、Ａ２８７、Ｒ２９２、Ｖ３０２、Ｌ３０６、Ｖ３２３又はＩ３３２（ＥＵ番号付け）に対応する残基は、システインで置換され得る。一実施形態では、残基の特定の対が互いにジスルフィド結合を優先的に形成するようにシステインで置換され、それによってジスルフィド結合のスクランブルを制限又は防止する。特定の実施形態では、対としては、Ａ２８７Ｃ及びＬ３０６Ｃ、Ｖ２５９Ｃ及びＬ３０６Ｃ、Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ並びにＶ３２３Ｃ及びＩ３３２Ｃが挙げられるが、限定されない。特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗原結合タンパク質は、Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃでの突然変異を有するヒトＩｇＧ１抗体由来のＦｃ領域を含む。このような実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｎ２９７Ｇ突然変異も含み得る。

【0186】

例えば、サルベージ受容体結合エピトープの組み込み又は付加（例えば、適切な領域の変異によるか、又はエピトープをペプチドタグに組み込み、続いて例えばＤＮＡ若しくはペプチド合成により、何れかの末端又は中央で抗原結合タンパク質に融合されることによる；例えば、国際公開第９６／３２４７８号パンフレットを参照されたい）又はＰＥＧ若しくは他の水溶性ポリマー、例えば多糖ポリマーなどの分子の付加による血清半減期を延長させるための本開示の抗原結合タンパク質の修飾も望ましいものであり得る。サルベージ受容体結合エピトープは、好ましくは、Ｆｃ領域の１つ又は２つのループ由来の何れか１つ以上のアミノ酸残基が抗原結合タンパク質中の類似の位置に移される領域を構成する。一実施形態では、Ｆｃ領域の１つ又は２つのループ由来の３つ以上の残基が転移される。一実施形態では、エピトープがＦｃ領域（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ領域）のＣＨ２ドメインからとられ、抗原結合タンパク質のＣＨ１、ＣＨ３若しくはＶＨ領域又は２つ以上のそのような領域に移される。代わりに、エピトープがＦｃ領域のＣＨ２ドメインからとられ、抗原結合タンパク質のＣＬ領域若しくはＶＬ領域又はその両方に移される。Ｆｃバリアント及びそのサルベージ受容体との相互作用の説明については、国際公開第９７／３４６３１号パンフレット及び国際公開第９６／３２４７８号パンフレットを参照されたい。

【0187】

本抗原結合タンパク質は、その生物学的特性を保持する、１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、付加又は置換を有するバリアントを含む。当業者は、単一若しくは複数のアミノ酸置換、欠失、付加又は置換を有するバリアントを作製し得る。これらのバリアントは、とりわけ以下を含み得る：（ａ）１つ以上のアミノ酸残基が保存的又は非保存的アミノ酸で置換されているバリアント、（ｂ）１つ以上のアミノ酸がポリペプチドに付加されるか又はポリペプチドから欠失しているバリアント、（ｃ）１つ以上のアミノ酸が置換基を含むバリアント及び（ｄ）ポリペプチドが、別のペプチド又はポリペプチド、例えば融合パートナー、タンパク質タグ又はポリペプチドに有用な特性を与え得る他の化学部分、例えば抗体のためのエピトープ、ポリヒスチジン配列、ビオチン部分などに融合されているバリアント。本発明の抗体及び二重特異性抗体は、１つの種からのアミノ酸残基が、保存的又は非保存的位置の何れかにおいて、別の種における対応する残基に置換されている変異体を含み得る。別の実施形態では、非保存的位置におけるアミノ酸残基は、保存的又は非保存的残基で置換される。遺伝的（抑制、欠失、突然変異など）、化学的及び酵素的技術を含む、これらのバリアントを得るための技術は、当業者にとって公知である。

【0188】

治療の方法
ＴＲＥＭ－１は、循環器系適応症に関わる。ＴＲＥＭ－１は、ヒトアテロームにおいて発現されることが示されており、Ａｐｏｅ^－／－マウスモデルにおける循環及び病変部浸潤骨髄系細胞上で、脂質異常状態下で上方制御される。Ｔｒｅｍ１^－／－Ａｐｏｅ^－／－マウスは、食餌誘導性アテローム発生の減弱を呈することが明らかになった。（Ｚｙｓｓｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．７：１－１６，２０１６）。Ｂｏｕｆｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．２０１５，１１６：１７７２－１７８２）は、ＴＲＥＭ１欠損が、梗塞心筋への炎症性細胞の動員及び活性化を阻害することを示し、これにより、短いペプチドを使用したＴＲＥＭ－１の阻害又は遺伝子ノックアウトが、好中球の心筋浸潤を減少させ、マウス及びラットでのＭＩ後の心臓機能及び生存を改善することが明らかになった。ヒトにおいて、ＭＩ後のｓＴＲＥＭ－１レベル上昇により明らかにされるようなＴＲＥＭ－１活性化は、死亡の予測因子である（Ｂｏｕｆｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，前出）。

【0189】

Ｌｕｉ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０：１０２３－１０３４．，２０１９）は、末梢骨髄系細胞がＴＲＥＭ１の活性化を介して卒中発作損傷を拡大させることを示した。脳に浸潤する好中球及びマクロファージは、Ｔｒｅｍ１を高発現し、免疫原性細胞構成成分、例えばデンジャー／ダメージ関連分子パターン（ＤＡＭＰ）（ＭＣＡｏマウスモデル）（Ｃｏｌｏｎｎａ，Ｍ．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎ．２０１９；４０：７８１－７８３）により活性化される。デコイペプチド又はＴｒｅｍ－１ノックアウトによるＴｒｅｍ１阻害により、損傷部位への好中球／マクロファージの浸潤が減少し、梗塞巣体積がより小さくなり、神経学的スコアが改善し、生存能が上昇した（Ｌｕｉ ｅｔ ａｌ，前出；Ｃｏｌｏｎｎａ，前出）。

【0190】

ＴＲＥＭ－１は、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの発症にも関わる。Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．，（Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ １２０：１１８６７－１１８７７，２０１９）は、マウス肝細胞におけるＴｒｅｍ１の過剰発現の結果、脂質蓄積が増加し、Ｔｒｅｍ１が過剰発現された場合に脂質取り込みに関与する遺伝子（ｅｇ ｌｄｌｒ、ｍｓｒ１）が上方制御されたことを示した。さらに、Ｔｒｅｍ１が過剰発現されたときにコレステロール排出に関与する遺伝子（例えば、ａｂｃａ１、ａｂｃｇ１）が下方制御された。Ｔｒｅｍ１を過剰発現する肝細胞（ＨｅｐＧ２、ＰＭＨ）のオレイン酸処理の結果、炎症性サイトカインの発現が上昇した。ｓｈＲＮＡを用いたＴＲＥＭ－１のノックダウンにより、高脂肪餌を与えられているマウスにおいて脂質蓄積が減少した。

【0191】

肥満は、慢性の全身性炎症を特徴とし（より高いＴＮＦα、ＩＬ６及びｈｓＣＲＰ）、ＴＲＥＭ－１は、肥満患者において上昇することが示されている。本明細書では、任意選択的に抗肥満薬と組み合わせた抗ＴＲＥＭ１での治療は、全身性炎症の大幅な軽減につながると仮定される。

【0192】

本明細書で開示されるＴＲＥＭ－１に特異的な抗原結合タンパク質は、循環器系疾患を治療するために有用であることが本明細書で企図される。代表的な循環器系疾患としては、心筋梗塞、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、心不全、卒中発作（虚血性及び出血性）、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、末梢血管疾患（例えば、末梢動脈疾患）、不安定プラーク、急性冠症候群、脳血管疾患、脳血管アテローム性動脈硬化症及び肥満が挙げられる。

【0193】

特定の実施形態では、ＴＮＦ－α抑制の測定は、単離されたＰＢＭＣを用いて行われる。ＰＢＭＣは、対象（ヒト、マウス、ラット、カニクイザルなど）の血液から単離され、ＬＰＳ又はＴＲＥＭ－１リガンド（細菌ペプチドグリカンと複合化されたペプチドグリカン認識タンパク質）によりインビトロで刺激され、刺激前後及び異なる試験分子の存在下でのＴＮＦαのレベルが、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＡＬＰＨＡＬＩＳＡ又はＭＳＤ Ｖｐｌｅｘ ＴＮＦα検出キットを用いて決定される。

【0194】

一実施形態では、本開示は、このような治療を必要とする哺乳動物における炎症性サイトカイン、例えばＴＮＦαの１つ以上を阻害する方法であって、このような治療を必要とする対象に、治療有効量の、本開示の抗原結合タンパク質又は抗体を投与することを含む方法を提供する。好ましい実施形態では、対象は、哺乳動物である。一実施形態では、対象は、ヒトである。本方法は、ＴＮＦαの発現又は活性の上昇を特徴とする障害を治療するために使用され得る。本開示の抗原結合タンパク質又は抗体は、同じ処方物中又は個別の何れかで別の医薬製剤と共に投与され得る。

【0195】

企図されるさらなるアッセイは、高感度Ｃ－反応性タンパク質の濃度、可溶性ＴＲＥＭ－１の濃度を測定すること、単離ＰＢＭＣにおけるリン酸化脾臓チロシンキナーゼのエクスビボ分析及び骨髄系細胞サブセットの分析を含む。

【0196】

治療により、対象におけるＴＮＦ－α及びＩＬ－６などの炎症性サイトカインのレベルが低下することが企図される。

【0197】

抗ＴＲＥＭ－１結合タンパク質を含む本開示の抗ＴＲＥＭ－１抗原結合タンパク質による治療が炎症性細胞でのＴＲＥＭ－１の発現を低下させることが企図される。

【0198】

投与及び投薬
本開示の方法は、本明細書に記載の抗原結合タンパク質を含む医薬組成物を投与する段階を含む。特定の実施形態では、本医薬組成物は、滅菌組成物である。

【0199】

所与の投与量中の治療用組成物の量は、治療が施されている個体のサイズ並びに治療されている障害の特徴に応じて変化し得る。

【0200】

本開示は、本開示の抗原結合タンパク質又は抗体と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物を提供する。本開示の抗原結合タンパク質又は抗体を含む医薬組成物は、薬学的に有用な組成物を調製するために既知の方法に従って処方され得、それにより、治療抗体が、薬学的に許容可能な担体と混合物中で合わせられる。組成物は、その投与がレシピエント患者によって忍容され得る場合、「薬学的に許容可能な担体」を含むと言われる。滅菌リン酸緩衝食塩水は、薬学的に許容される担体の一例である。他の適切な担体は、当業者に周知である。例えば、Ｇｅｔｍａｎ，ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９５）を参照されたい。

【0201】

医薬品用途のために、本開示のポリペプチドは、従来の方法に従う非経口、特に、静脈内又は皮下送達のために処方される。静脈内投与は、ボーラス注入法、制御放出により、例えばミニポンプ又は他の適切な技術を用いて又は１時間～数時間の典型的な期間にわたる注入によって行われ得る。一般に、医薬処方物は、食塩水、緩衝食塩水、水中の５％デキストロースなどの薬学的に許容可能な担体と組み合わせて、本開示の抗原結合タンパク質又は抗体を含む。処方物は、１つ以上の賦形剤、保存剤、可溶化剤、緩衝剤、バイアル表面などでのタンパク質損失を防ぐためのアルブミンをさらに含み得る。このような組み合わせ療法を利用する場合、本開示の抗原結合タンパク質又は抗体は、単一の処方物中で組み合わされ得るか、又は別個の処方物中で投与され得る。処方の方法は、当技術分野で周知であり、例えば参照により本明細書に組み込まれるＧｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ Ｐａ．（１９９０）で開示される。治療用量は、一般に、１日当たり０．１～１００ｍｇ／ｋｇ患者体重、好ましくは、１日当たり０．５～２０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、正確な用量は、治療しようとする状態の性質及び重症度、患者の体質などを考慮して、認められている基準に従って臨床医によって決定される。用量の決定は、当技術分野の通常の技術の範囲内である。より一般的に、本抗体は、１週間又はそれ以下にわたって、多くの場合、１～３日間の期間にわたって投与される。一般に、投与される抗体の投与量は、患者の年齢、体重、身長、性別、全身病状及び以前の病歴などの要因に応じて変化する。典型的に、約１ｐｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ（薬剤の量／患者体重）の範囲である抗体の投与量をレシピエントに提供することが望ましいが、より少ない又はより多い投与量も状況に応じて投与され得る。

【0202】

対象への本開示の抗原結合タンパク質又は抗体の投与は、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、胸膜内、くも膜下腔内、局所のカテーテルを通した灌流又は直接的な病巣内注射によるものであり得る。様々な実施形態では、投与は、静脈内又は皮下投与である。注射により抗原結合タンパク質を投与する場合、投与は、持続点滴又は単回若しくは複数回ボーラスによるものであり得る。

【0203】

さらなる投与経路は、経口、粘膜、肺及び経皮を含む。経口送達は、ポリエステルミクロスフェア、ゼインミクロスフェア、プロテイノイドミクロスフェア、ポリシアノアクリレートミクロスフェア及び脂質ベース系に適切である（例えば、ＤｉＢａｓｅ ｅｔ ａｌ．，”Ｏｒａｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，ｉｎ Ｓａｎｄｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｐｐ．２５５－２８８，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ（１９９７）を参照されたい）。鼻腔内送達の実現可能性は、インスリン投与のような方法によって例示される（例えば、Ｈｉｎｃｈｃｌｉｆｆｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．，３５：１９９（１９９９）を参照されたい）。本発明の抗体を含む乾燥又は液体粒子は、乾燥粉末分散器、液体エアロゾル発生器又は噴霧器を用いて調製され、吸入され得る（例えば、Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ．，ＴＩＢＴＥＣＨ，１６：３４３（１９９８）；Ｐａｔｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．，３５：２３５（１９９９））。このアプローチは、エアロゾル化インスリンを肺に送達させる携帯型電子式吸入器であるＡＥＲＸ（登録商標）糖尿病管理システムによって例示される。研究は、４８，０００ｋＤａもの大きさのタンパク質が、低周波超音波を用いて治療濃度で皮膚にわたって送達されたことを示しており、これは、経皮投与の実現可能性を示す（Ｍｉｔｒａｇｏｔｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６９：８５０（１９９５））。

【0204】

治療の目的のために、本開示の抗原結合タンパク質又は抗体と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物は、治療有効量で患者に投与される。本開示の抗原結合タンパク質又は抗体及び薬学的に許容可能な担体の組み合わせは、投与される量が生理学的に有意義である場合、「治療有効量」で投与されると言われる。薬剤は、その存在がレシピエント患者の生理学の検出可能な変化をもたらす場合、生理学的に意義がある。例えば、炎症を治療するために使用される薬剤は、その存在が炎症反応を軽減する場合、生理学的に意義がある。有効な治療は、様々な方法で評価され得る。一実施形態では、有効な治療は、炎症の軽減によって判断される。他の実施形態では、有効な治療は、炎症の阻害を特徴とする。さらに他の実施形態では、有効な治療は、体重増加、体力回復、疼痛の軽減、良好な発育及びより良好な健康の患者からの主観的指標のような徴候を含む、患者の健康の向上によって測定される。

【0205】

例えば抗ＴＲＥＭ－１抗体配列を含む、抗原結合タンパク質は、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ又はそれ以上の用量で投与されることが企図される。様々な実施形態では、例えば、抗ＴＲＥＭ－１抗体配列を含む抗原結合タンパク質は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．７５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．２５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

【0206】

本明細書に記載の組成物は、週１回、週２回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月１回、３か月に１回、６か月に１回又は１年に１回投与される。

【0207】

本開示の抗原結合タンパク質又は抗体を含む医薬組成物は、液体形態、エアロゾル又は固形の形態で提供され得る。液体形態は、注射可能な溶液及び経口懸濁液によって例示される。例示的な固体形態としては、カプセル剤、錠剤及び制御放出形態が挙げられる。後者の形態は、ミニ浸透圧ポンプ及び植え込み物により例示される（Ｂｒｅｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１０：２３９（１９９７）；Ｒａｎａｄｅ，“Ｉｍｐｌａｎｔｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｒａｎａｄｅ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｐｐ．９５－１２３，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（１９９５）において；Ｂｒｅｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｗｉｔｈ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ｐｕｍｐｓ”，Ｓａｎｄｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｐｐ．２３９－２５４，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ（１９９７）において；Ｙｅｗｅｙ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ａ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｉｍｐｌａｎｔ”，Ｓａｎｄｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｐｐ．９３－１１７，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ（１９９７）において）。

【0208】

本処方物は、治療されている特定の適応症に必要である場合、２つ以上の活性化合物、好ましくは、互いに悪影響を与えない補完的な活性を有するものも含有し得る。代わりに又は加えて、本組成物は、例えば、細胞毒性剤、サイトカイン、化学療法剤又は増殖阻害剤など、その機能を強化する薬剤を含み得る。このような分子は、意図される目的のために有効な量で組み合わせて適切に存在する。

【0209】

一実施形態では、本開示の抗原結合タンパク質又は抗体は、組み合わせ療法において、即ち他の薬剤、例えば循環器系疾患などの病的状態又は障害を治療するために有用である治療剤と組み合わせて投与される。これに関する「組み合わせて」という用語は、薬剤が同時に又は連続しての何れかで、実質的に同時期に投与されることを意味する。連続して投与される場合、第２の化合物の投与の開始時、２つの化合物の１つ目が好ましくは治療の部位に有効濃度で依然として検出可能である。

【0210】

本開示の治療剤は、同じ処方物中で同時に投与され得ることが企図される。薬剤が別個の処方物中で投与され、同時に投与されることがさらに企図され、同時には、薬剤が互いに３０分以内に投与されることを意味する。第２の薬剤が同時に投与され得ることがさらに企図される。

【0211】

別の態様では、本明細書に記載のような抗原結合タンパク質は、第２の組成物の投与前に投与される。事前投与は、他の薬剤による治療の１週間前から、他の薬剤の投与の３０分前までの範囲内の薬剤の投与を指す。薬剤が別の組成物又は薬剤の投与後に投与されることがさらに企図される。その後の投与とは、抗体治療の３０分後から抗体投与の１週間後まで、例えば３０分後、１時間後、２時間後、４時間後、１日後、２日後などの投与を表すことを意味する。これは、第２のものがさらに企図される。

【0212】

例えば、組み合わせ療法は、１つ以上の追加の治療剤、例えば、１つ以上のコレステロール低下（血清及び／又は全身コレステロール）剤、ＬＤＬＲの発現を増加させる薬剤、スタチン（アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン）、ＰＣＳＫ９阻害剤（Ｒｅｐａｔｈａ（登録商標）、Ｐｒａｌｕｅｎｔ（登録商標）、Ｌｅｑｖｉｏ（登録商標））、ニコチン酸（ナイアシン）（ＮＩＡＣＯＲ（登録商標）、ＮＩＡＳＰＡＮ（登録商標）（徐放性ナイアシン）、ＳＬＯ－ＮＩＡＣＩＮ（登録商標）（徐放性ナイアシン））、フィブリン酸（ＬＯＰＩＤ（登録商標）（ゲムフィブロジル）、ＴＲＩＣＯＲ（登録商標）（フェノフィブレート））、胆汁酸吸着剤（ＱＵＥＳＴＲＡＮ（登録商標）（コレスチラミン）、コレセベラム（ＷＥＬＣＨＯＬ（登録商標））、ＣＯＬＥＳＴＩＤ（登録商標）（コレスチポール））、コレステロール吸収阻害剤（Ｚｅｔｉａ（エゼチミブ））、ニコチン酸とスタチンとの組み合わせ（ＡＤＶＩＣＯＲ（登録商標）（ロバスタチン及びＮＩＡＳＰＡＮ（登録商標）））、スタチンと吸収阻害剤との組み合わせ（ＶＹＴＯＲＩＮ（ＺＯＣＯＲ（登録商標）及びＺＥＴＩＡ（登録商標）））及び／又はＰＣＳＫ９阻害剤のような脂質修飾剤、ＰＰＡＲガンマアゴニスト、ＰＰＡＲアルファ／ガンマアゴニスト、スクアレンシンターゼ阻害剤、コレステリルエステル転移タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤、降圧剤、抗血栓薬（アスピリン）抗糖尿病薬（スルホニル尿素、インスリン、ＧＬＰ－１類似体、ＤＤＰＩＶ阻害剤、ＳＧＬ２阻害剤など）、ＡｐｏＢ修飾薬、ＭＴＰ阻害剤、Ｃｏｒｌａｎｏｒ（登録商標）（イバブラジン）Ｉ（ｆ）電流阻害剤、オメカムチブメカルビル心筋ミオシン活性化因子、リポタンパク質（ａ）を低下させるＯＬＰＡＳＩＲＡＮ（ＡＭＧ８９０）（ｓｉＲＮＡ）、ＡＭＧ５９４心筋トロポニン活性化因子、ＡＭＧ６０９、ＡＭＧ１７１（成長分化因子１５（ＧＤＦ１５）類似体）、ＡＭＧ１３３（胃抑制ポリペプチド受容体（ＧＩＰＲ）アンタゴニスト及びグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）受容体アゴニスト）並びに／又は閉塞性動脈硬化症治療と同時処方される及び／又は同時投与される、１つ以上の本開示の抗原結合タンパク質又は抗体を含み得る。

【0213】

本開示の抗原結合タンパク質又は抗体と組み合わせて使用される治療剤は、炎症反応に異なるステージで介入する薬剤を含む。一実施形態では、本開示の抗原結合タンパク質又は抗体は、１つ以上のさらなる薬剤、例えば他のサイトカイン又は増殖因子アンタゴニスト（例えば、可溶性受容体、ペプチド阻害剤、低分子、リガンド融合物）；又は他の標的に結合する抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、他のサイトカイン又は増殖因子、それらの受容体又は他の細胞表面分子に結合する抗体）；及び抗炎症性サイトカイン又はそのアゴニストと同時処方及び／又は同時投与され得る。本明細書に記載の抗体と組み合わせて使用され得る薬剤の非限定的な例としては、１つ以上のインターロイキン（ＩＬ）又はそれらの受容体のアンタゴニスト、例えばＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ１７Ａ－Ｆ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２５、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２、ＩＬ－３３のアンタゴニスト；サイトカイン若しくは増殖因子又はそれらの受容体、例えばＬＴ、ＥＭＡＰ－ＩＩ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦのアンタゴニストが挙げられるが、限定されない。本発明の抗体は、例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０などの細胞表面分子に対する抗体の阻害剤（例えば、ＣＤ２０阻害剤リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０若しくはそれらのリガンド（ＣＤ１５４（ｇｐ３９若しくはＣＤ４０Ｌ）又はＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１及びＶＬＡ－４／ＶＣＡＭ－１を含む）とも組み合わせられ得る（Ｙｕｓｕｆ－Ｍａｋａｇｉａｎｓａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．，２２：１４６－１６７（２００２））。組み合わせて使用され得る例示的なアンタゴニストとしては、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＴＮＦα、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２０、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３及びＩＬ－３１のアンタゴニストが挙げられる。

【0214】

他の実施形態では、１つ以上の本開示の抗原結合タンパク質は、１つ以上の抗炎症薬、免疫抑制剤又は代謝若しくは酵素阻害剤と同時処方及び／又は同時投与され得る。本明細書に記載の抗体と組み合わせて使用され得る薬物又は阻害剤の非限定例としては、以下の１つ以上が挙げられるが、限定されない：非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えばイブプロフェン、テニダップ、ナプロキセン、メロキシカム、ピロキシカム、ジクロフェナク及びインドメタシン；スルファサラジン；プレドニゾロンなどのコルチコステロイド；サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）；ヌクレオチド生合成の阻害剤、例えばプリン生合成の阻害剤、葉酸アンタゴニスト（例えば、メトトレキサート（Ｎ－［４－［［（２，４－ジアミノ－６－プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］－グルタミン酸）；及びピリミジン生合成の阻害剤、例えばジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）阻害剤。本発明の１つ以上の抗体、例えば二重特異性抗体と組み合わせて使用するための好ましい治療剤としては、ＮＳＡＩＤ、ＣＳＡＩＤ、（ＤＨＯＤＨ）阻害剤（例えば、レフルノミド）及び葉酸アンタゴニスト（例えば、メトトレキサート）が挙げられる。

【0215】

さらなる阻害剤としては、以下の１つ以上が挙げられる：コルチコステロイド（経口、吸入及び局所注入）；免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ－５０６）；及びｍＴＯＲ阻害剤、例えばシロリムス（ラパマイシン－－ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））又はラパマイシン誘導体、例えば可溶性ラパマイシン誘導体（例えば、エステルラパマイシン誘導体、例えばＣＣＩ－７７９）；ＩＬ－１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨げる薬剤（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）；ＣＯＸ２阻害剤、例えばセレコキシブ、ロフェコキシブ及びその変異体；ホスホジエステラーゼ阻害剤、例えばＲ９７３４０１（ホスホジエステラーゼＩＶ型阻害剤）；ホスホリパーゼ阻害剤、例えば細胞質ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）の阻害剤（例えば、トリフルオロメチルケトン類似体）；血管内皮細胞増殖因子又は増殖因子受容体の阻害剤、例えばＶＥＧＦ阻害剤及び／又はＶＥＧＦ－Ｒ阻害剤；及び血管新生の阻害剤。本開示の抗原結合タンパク質又は抗体と組み合わせた使用のための好ましい治療剤は、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ－５０６）；ｍＴＯＲ阻害剤、例えばシロリムス（ラパマイシン）又はラパマイシン誘導体、例えば可溶性ラパマイシン誘導体（例えば、エステルラパマイシン誘導体、例えばＣＣＩ－７７９）；ＣＯＸ２阻害剤、例えばセレコキシブ及びそのバリアント；及びホスホリパーゼ阻害剤、例えば細胞質ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）の阻害剤、例えばトリフルオロメチルケトン類似体である。

【0216】

キット
本開示は、最適には薬学的に許容可能な担体又は組成物中に本開示の抗原結合タンパク質又は抗体を含む１つ以上の容器を含むキットも企図する。本開示の抗原結合タンパク質又は抗体は、単回若しくは複数回投与のための注射可能な溶液の形態において、単位用量として又は注射前に再構成される滅菌粉末として提供され得る。代わりに、このようなキットは、乾燥粉末分散器、液体エアロゾル発生器又は治療剤の投与のための噴霧器を含み得る。このようなキットは、適応症及び医薬組成物の使用に関する指示及び書面情報をさらに含み得る。

【0217】

任意選択的に適切な使用説明書と共に、上記の抗原結合タンパク質又は組成物の何れかを含む、シリンジ、例えば使い捨て又はプレフィルドシリンジ、滅菌密封容器、例えばバイアル、ボトル、容器及び／又はキット又はパッケージも企図される。

【0218】

さらなる実施形態では、本発明は、（ａ）本開示の抗原結合タンパク質又は抗体を含む組成物；（ｂ）前記組成物を含有する容器；及び（ｃ）免疫関連疾患の治療での前記抗体の使用に関する、前記容器に固定されるラベル又前記容器に含まれる添付文書を含む、製造品又は単位用量形態を提供する。

【0219】

別の態様では、本組成物又はキットは、さらなる有効成分を含み、これは、例えば、さらなる抗体又は抗炎症剤、細胞毒性剤又は本明細書に記載の他の薬剤であり得る。好ましくは、本組成物は、滅菌されている。

【実施例】

【0220】

実施例１ － 抗ＴＲＥＭ－１抗体
高親和性抗ＴＲＥＭ－１モノクローナル抗体を作製し、免疫細胞に標的化し、ＴＲＥＭ－１とそのリガンドとの間のシグナル伝達を調整する能力について評価した。

【0221】

ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスに免疫付与することにより、ヒトＴＲＥＭ－１に対する完全ヒト抗体を作製した。例えば、米国特許第６，１１４，５９８号明細書；同第６，１６２，９６３号明細書；同第６，８３３，２６８号明細書、同第７，０４９，４２６号明細書及び同第７，０６４，２４４号明細書を参照されたい。

【0222】

ヒト及び／又はカニクイザルＴＲＥＭ１タンパク質、ＴＲＥＭ１発現ベクター及び／又はＴＲＥＭ１発現ＣＨＯ細胞を用いてマウスに対して免疫付与を行った。遺伝学的免疫付与のために、製造業者の説明書（ＢｉｏＲａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）に従って、ＨＥＬＩＯＳ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｇｕｎシステムを用いて、８週間にわたって１６回、マウスに対して免疫付与を行った。簡潔に述べると、ヒトＴＲＥＭ－１及びＤＡＰ１２又はカニクイザルＴＲＥＭ－１及びＤＡＰ１２の何れかをコードする発現ベクターをプールし、１．６ｕｍの金ビーズ（ＢｉｏＲａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を２μｇのトータルＤＮＡでコーティングし、剃毛したマウス腹部の表皮に送達させた。可溶性タンパク質免疫付与のために、Ｎ末端細胞外ドメインに相当するヒト又はカニクイザルＴＲＥＭ－１組み換えタンパク質を用いてマウスに対して免疫付与を行った。動物に対して、Ａｌｕｍ及びＣｐＧ－ＯＤＮ又はＳｉｇｍａ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍの何れかで賦活化した組み換えタンパク質で、尾の付け根及び肩甲下領域に位置するマウスの背側正中線に沿って２カ所で送達される皮下注射を用いて、１０～１２週間にわたって１４～１７回免疫付与を行った。最初の可溶性タンパク質免疫付与は、１０μｇを送達し、その後の追加接種は５μｇであった。細胞免疫付与のために、Ａｌｕｍ及びＣｐＧ－ＯＤＮで賦活化したヒトＴＲＥＭ－１又はカニクイザルＴＲＥＭ－１の何れかを一過性に発現する２００～４００万個のＣＨＯ－Ｓ細胞を用いてマウスに対して免疫付与を行った。動物に対して、腹腔内及び尾の付け根における皮下注射を交互に行って１０週間にわたって合計１３回、週に１回又は２回、免疫付与を行った。４週間～１０週間の範囲の免疫付与試験中、様々な時点で、動物から採血し、血漿を採取して、ＴＲＥＭ１特異的力価について評価した。一過性に遺伝子移入された２９３Ｔ細胞を用いて、ＡＣＣＵＲＩ（商標）フローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）における肝細胞ＦＡＣＳ分析によってＴＲＥＭ１特異的血漿力価を監視した。ヒト及びカニクイザルＴＲＥＭ１に対する最も高い抗原特異的血漿力価を有する動物を屠殺し、ハイブリドーマ作製のために使用した（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５）。

【0223】

ハイブリドーマの作製：適切な抗原特異的血清力価を示す動物を同定し、選択されたマウスからの脾臓及び／又は流入領域リンパ節を各採取物からプールした。適切な培地中で破砕するか、又はＧＥＮＴＬＥＭＡＣＳ（商標）Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）半自動組織解離機器を用いることにより、脾細胞及びリンパ球をリンパ系組織から解離させた。ＩｇＧ発現Ｂ細胞を単離し、標準的な方法を用いて増殖させ、適切な細胞融合パートナーと融合させた。ＣＥＬＬＩＮＳＩＧＨＴ（商標）によってＨＥＫ２９３細胞上で一過性に発現されるヒトＴＲＥＭ－１への結合について、ハイブリドーマ上清を試験した。簡潔に述べると、製造業者のプロトコールに従って、２９３Ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、ヒトＴＲＥＭ－１及びＤＡＰ１２又はモックベクター及びＤＡＰ１２単独をコードする哺乳動物発現コンストラクトを１：１の比率で用いて、ＨＥＫ２９３細胞に対して一過性同時遺伝子移入を行った。翌日、遺伝子移入されたＨＥＫ２９３細胞の１５，０００個の細胞／ウェルを、等体積の使用されたハイブリドーマ培地試験試料及び１５μｇ／ｍＬの最終濃度の核染色Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（Ｐｉｅｒｃｅ）と、３８４ウェルＦＭＡＴプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中３０μＬ／ウェルの総体積で、組み合わせた。室温で１時間の温置後、ＡＱＵＡＭＡＸ（登録商標）プレートウォッシャーを用いて上清を吸引し、５０μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、ＡｑｕａＭａｘにおいて各サイクルで２％のＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ））を用いて、２サイクルにわたってウェルを洗浄した。５μｇ／ｍＬのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）二次抗体で細胞を染色し、Ｂｉｇ Ｂｅａｒプレートシェーカー上で振盪し、室温で２０分間温置した。ＡＱＵＡＭＡＸ（登録商標）プレートウォッシャーを用いて上清を吸引し、５０μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液を用いて２サイクルにわたって再度ウェルを洗浄し、マルチドロップ機器を用いて各ウェルに３０μＬのＦＡＣＳ緩衝液を添加した。Ｂｉｇ Ｂｅａｒ Ｐｌａｔｅシェーカーにプレートを置いて、細胞をウェル中に均等に分配し、次に、Ｃｅｌｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ Ｂｉｏ－Ａｐｐを用いて、ＣＥＬＬＩＮＳＩＧＨＴ（商標）ＣＸ７プラットフォームにおいて読み取りを行った。

【0224】

カニクイザルＴＲＥＭ－１との交差反応性並びにＤＡＰ１２に対する特異性ではなくＴＲＥＭ－１に対する特異性について、一次スクリーニングにおいて同定されたＴＲＥＭ－１特異的抗体を評価した。ＦＡＣＳ（採取物１～６）又はＣＥＬＬＩＮＳＩＧＨＴ（商標）（採取物８～９）により、ＨＥＫ２９３細胞上で一過性に発現されるヒト又はカニクイザルＴＲＥＭ－１への結合について、ＴＲＥＭ－１ハイブリドーマ上清を試験した。採取物１～６からのＴＲＥＭ１抗体について、２９３Ｆｅｃｔｉｎを用いて、ヒトＴＲＥＭ－１及びＤＡＰ１２、カニクイザルＴＲＥＭ－１及びＤＡＰ１２又はモックベクター及びヒトＤＡＰ１２をコードする哺乳動物発現コンストラクトを１：１の比率で用いて、ＨＥＫ２９３細胞に対して一過性同時遺伝子移入を行った。翌日、遺伝子移入したＨＥＫ２９３細胞を５０，０００個の細胞／ウェルで９６ウェルＦＡＣＳプレートに移し、４℃において１時間、２．５μｇ／ｍＬの最終濃度で正規化されたハイブリドーマ上清と共に温置した。次に、遠心分離により細胞をペレット化し、軽く叩くことによって上清を除去し、２００μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液でウェルを２回洗浄した。５μｇ／ｍＬ ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）二次検出抗体及び２．５μｇ／ｍＬ ７－アミノアクチノマイシン－Ｄ（Ｓｉｇｍａ）生存能染色を４℃で１５分間にわたり細胞と共に温置した。遠心分離により細胞をペレット化し、軽く叩くことによって上清を除去し、２００μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液でウェルをもう１回洗浄した。Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔオートサンプラーを備えたＢＤ ＡＣＣＵＲＩ（商標）Ｃ６フローサイトメーターにおいてＦＡＣＳにより、ヒトＴＲＥＭ－１－又はカニクイザルＴＲＥＭ－１特異的結合を示すＴＲＥＭ－１ハイブリドーマ上清を検出した。非関連対照抗体結合を超える幾何平均（ＧＭ）倍数としてデータを報告した。特定の抗ＴＲＥＭ－１抗体についての結合の結果を表１に示す。

【0225】

【表2】

【0226】

ＨＥＫ２９３細胞上で一過性に発現されるヒトＴＲＥＭ１／ＤＡＰ１２にリガンドＰＧＬＹＲＰ１が結合するのを阻止する能力について、高品質のＴＲＥＭ１特異的結合及びヒト／カニクイザル交差反応性を示すＴＲＥＭ１抗体を評価した。簡潔に述べると、２９３Ｆｅｃｔｉｎを使用して、ヒトＴＲＥＭ１及びＤＡＰ１２又はモックベクター及びヒトＤＡＰ１２をコードする哺乳動物発現コンストラクトを１：１の比率で用いて、ＨＥＫ２９３細胞に対して一過性同時遺伝子移入を行った。翌日、遺伝子移入したＨＥＫ２９３細胞を５０，０００個の細胞／ウェルで９６ウェルＦＡＣＳプレートに移し、４℃において１時間、２．５μｇ／ｍＬの最終濃度で正規化されたハイブリドーマ上清と共に温置した。ヒトＰＧＬＹＲＰ１－Ｈｉｓ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）をＰＧＮ－ＥＣｎｄｓｓ（ペプチドグリカン、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）と組み合わせ、室温で１５分間温置し、次いで７．５μｇ／ｍＬ ＰＧＬＹＲＰ１及び３０μｇ／ｍＬ ＰＧＮの最終濃度でウェルに添加した。次にプレートを振盪し、４℃で１５分間温置した。次に遠心分離によって細胞をペレット化し、軽く叩くことによって上清を除去し、２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液でウェルを洗浄した。５μｇ／ｍＬ ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７ヒト抗Ｈｉｓ二次検出抗体及び２．５μｇ／ｍＬ ７－アミノアクチノマイシン－Ｄ（Ｓｉｇｍａ）生存能染色液を細胞に添加し、振盪し、４℃で１５分間温置した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、遠心分離によってペレット化し、軽く叩くことによって上清を除去し、ＦＡＣＳ緩衝液でもう１回洗浄した。次に、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ ＨＹＰＥＲＣＹＴ（登録商標）オートサンプラーを備えたＢＤ ＡＣＣＵＲＩ（商標）Ｃ６フローサイトメーターにおいて細胞を操作した。合計で５１８のＴＲＥＭ１抗体が所望の特異的なＰＧＬＹＲＰ１阻止活性を示した。選択されたＴＲＥＭ－１モノクローナル抗体についての受容体－リガンド阻害を表２に要約する。

【0227】

【表3】

【0228】

制限抗原アッセイによるＴＲＥＭ－１抗体相対親和性ランキング：ＦＡＣＳでのＬＵＭＡＶＩＤＩＮ（登録商標）ビーズ（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を用いた制限抗原アッセイにおける可溶性ＴＲＥＭ－１に対するそれらの結合動態により、ＴＲＥＭ１ハイブリドーマ上清をパネル内で親和性についてランク付けした。簡潔に述べると、社内のビオチン化ヒトＴＲＥＭ－１－Ｈｉｓ抗原（ｂ－ｈｕＴＲＥＭ－１－Ｈｉｓ）をＦＡＣＳ緩衝液中で連続希釈し、等体積のＬＵＭＡＶＩＤＩＮ（登録商標）ビーズ（各抗原濃度について異なる独自にバーコード化されたビーズ）と組み合わせて、３０ｎｇ／ｍＬの最終的なｂ－ｈｕＴＲＥＭ－１－Ｈｉｓ抗原濃度から開始する５点２倍連続希釈系列を得た。抗原－ビーズ混合物を９６ウェルＦＡＣＳプレートにおいて３つのウェルにわたってプレーティングし、次に、光から保護しながら、室温で３０分間温置した。次に、ビーズを遠心分離によってペレット化し、軽く叩くことによって上清を除去し、ウェルを２００μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。次に、異なるビーズを再度懸濁し、プールし、ＳＴＡＢＩＬＧＵＡＲＤ（登録商標）免疫アッセイＳｔａｂｉｌｉｚｅｒ（ＳｕｒＭｏｄｉｃｓ）中で希釈して、非特異的結合を遮断した。ＦＡＣＳプレート中で、０．５μＬのビーズ／ウェルに対して５μｇ／ｍＬの試験抗体の最終濃度で正規化されたＴＲＥＭ－１ハイブリドーマ上清を等体積のビーズ混合物と組み合わせた。次に、プレートを振盪し、室温で約１８時間にわたって一晩温置した。次に、遠心分離によってビーズをペレット化し、軽く叩くことによって上清を除去し、２００μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液で２回、ウェルを洗浄した。ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）４８８ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次検出抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を５μｇ／ｍＬでプレートに添加し、振盪し、光から保護しながら室温で１５分間温置した。ビーズをＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、遠心分離によってペレット化し、軽く叩くことによって上清を除去し、ＦＡＣＳ緩衝液でもう１回洗浄した。次に、ビーズを再度懸濁し、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ ＨＹＰＥＲＣＹＴ（登録商標）オートサンプラーを備えたＢＤ ＡＣＣＵＲＩ（商標）Ｃ６フローサイトメーターにおいて操作した。

【0229】

対照ＩｇＧ抗体試料より少なくとも２倍以上高いシグナルを示すＴＲＥＭ－１ハイブリドーマ試料は、ＴＲＥＭ－１特異的結合プロファイルを示していると見なした。抗体結合シグナルは、抗体親和性と相関し；標的抗原ＴＲＥＭ－１への抗体結合の程度は、測定された蛍光強度と相関し、従って、パネルにわたって親和性の相対比較が可能になる。制限抗原スクリーンにおいてベンチマーク抗体１Ｂ２より良好な結合を有するＴＲＥＭ－１抗体を軽鎖シーケンシング及びヒト／カニクイザル親和性ギャップ分析に進めた。表３は、機器シグナル検出の線形範囲内に含まれた代表的な抗原コーティング濃度を用いた、選択ＴＲＥＭ－１抗体についての抗体結合データを示す。

【0230】

【表4】

【0231】

ＴＲＥＭ１相対的エピトープ結合／プロファイリング：パネルにおける様々な相対的な固有エピトープビンを決定するために、ＦＡＣＳ上でＬＵＭＡＶＩＤＩＮ（登録商標）ビーズ（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を用いて、エピトープビニングアッセイ（改変された抗体－抗体競合アッセイ）によってＴＲＥＭ１ハイブリドーマ上清を評価した。簡潔に述べると、一連の１５の異なる独自にバーコード化されたＬＵＭＡＶＩＤＩＮ（登録商標）ビーズをそれぞれ、１００ｎｇ／ｍＬの最終濃度において、ＦＡＣＳ緩衝液中で希釈された等体積の社内のビオチン化ヒトＴＲＥＭ－１－Ｈｉｓ抗原と組み合わせた。抗原－ビーズ混合物を、９６ウェルＦＡＣＳプレートにおいて３つのウェルにわたってプレーティングし、次に、光から保護しながら室温で３０分間温置した。次に、遠心分離によってビーズをペレット化し、軽く叩くことによって上清を除去し、ウェルを２００μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。ビーズをプレコーティングするための参照抗体として、制限抗原アッセイにおいて良好な結合を示した、多様なＶＤＪ再編成及び良好な定量を有する１５種類の異なるＴＲＥＭ－１抗体を選択した。ＦＡＣＳ緩衝液中で５μｇ／ｍＬの飽和濃度でこれらの１５種類の抗体を調製し、光から保護しながら、室温で１時間にわたって、１５種類の異なるＬＵＭＡＶＩＤＩＮ（登録商標）ビーズと共に温置した。遠心分離によってビーズをペレット化し、軽く叩くことによって上清を除去し、ウェルを２００μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄した。次に、異なるビーズを再懸濁し、プールし、ＳＴＡＢＩＬＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒ（ＳｕｒＭｏｄｉｃｓ）中で希釈して、非特異的結合を遮断した。ＦＡＣＳプレート中で、０．５μＬのビーズ／ウェルに対して５μｇ／ｍＬの試験抗体の最終濃度で正規化されたＴＲＥＭ－１ハイブリドーマ上清（試験抗体）を等体積のビーズ混合物と組み合わせた。次に、プレートを振盪し、光から保護しながら室温で１時間温置した。次に、ビーズを遠心分離によってペレット化し、軽く叩くことによって上清を除去し、２００μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液でウェルを２回洗浄した。ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）４８８ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次検出抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を５μｇ／ｍＬでプレートに添加し、振盪し、光から保護しながら室温で１５分間温置した。ビーズをＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、遠心分離によってペレット化し、軽く叩くことによって上清を除去し、ＦＡＣＳ緩衝液でもう１回洗浄した。次に、ビーズを再度懸濁し、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ ＨＹＰＥＲＣＹＴ（登録商標）オートサンプラーを備えたＢＤ ＡＣＣＵＲＩ（商標）Ｃ６フローサイトメーターにおいて操作した。

【0232】

参照抗体としてＴＲＥＭ－１抗原上の同様のエピトープと競合する試験抗体は、結合が防止される一方、非競合抗体は、結合して、参照抗体と共にさらなるシグナルを生じさせ得る。次に、全結合抗体が二次抗体により検出される。個々の試験抗体の抗体競合／結合プロファイルを決定するために、参照のみの抗体結合シグナルを各競合／結合反応についての参照プラス試験抗体シグナル（即ち全参照抗体セットにわたって）から差し引いた。選択ＴＲＥＭ－１抗体についての相対ピトープビニングの要約を以下の表４に示す。

【0233】

【表5】

【0234】

ＴＲＥＭ１抗体ヒト／カニクイザル親和性ギャップ決定：ベンチマーク抗体よりも制限抗原スクリーニングにおいて良好な結合も示した特有のＣＤＲ３配列があるＴＲＥＭ－１抗体を、ヒト及びカニクイザルＴＲＥＭ－１に対するそれらの親和性について分析した。ＯＣＴＥＴ（登録商標）ＨＴＸ機器（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を用いて、１１４ ＴＲＥＭ－１抗体のパネルにおいて、結合親和性Ｋ_Ｄ（Ｍ）、結合速度定数ｋ_ａ（Ｍ^－１ｓ^－１－）及び解離速度定数ｋ_ｄ（ｓ^－１）を決定した。簡潔に述べると、ＤＭＥＭヌル培地中の１０μｇ／ｍＬに対して正規化されたＴＲＥＭ－１ハイブリドーマ上清を、１μｇ／ｍＬの最終的な試験濃度になるまでＯＣＴＥＴ（登録商標）アッセイ緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＣａＣｌ_２、０．１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ、ｐＨ７．６）中で１：１０に希釈することによって調製した。使用前に室温で最低１０分間にわたって、アミン反応性第２世代ＡＲ２Ｇバイオセンサー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を２００μＬのナノポア（ｎａｎｏｐｏｒｅ）水中で予備温置した。次に、ナノポア水中で１０ｍＭのＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミド）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）と予め混合された２０ｍＭのＥＤＣ（１－エチル－３－［３－ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）の溶液中で５分間、ＡＲ２Ｇバイオセンサーを活性化した。５分間にわたってｐＨ５の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中で、社内で作製されたマウス抗ヒトＦｃモノクローナル抗体を１０μｇ／ｍＬでＡＲ２Ｇバイオセンサーにカップリングし、５分間、ｐＨ８．５の１Ｍのエタノールアミンでクエンチし、次に、それを用いて溶液から抗体を捕捉した。ＴＲＥＭ－１試験抗体を５分間にわたってバイオセンサーに充填し、ベースライン測定を１分間行った。次に、４５０ｎＭ～１．８５ｎＭ又は１５０ｎＭ～０．６２ｎＭの６点をカバーする３倍希釈系列で抗体を負荷したバイオセンサーに、組み換え可溶性ヒトＴＲＥＭ－１－Ｈｉｓタンパク質を結合させた。抗体が負荷されたセンサーとの組み換えヒトＴＲＥＭ－１の会合を５分間測定した後、ＯＣＴＥＴ（登録商標）緩衝液中で解離を１０分間測定した。次に、ｐＨ１．７の１０ｍＭのグリシンでバイオセンサーを再生し、５分間にわたって同じセンサーにおいて同じＴＲＥＭ－１抗体を再負荷し、同じ方法を用いて、カニクイザルＴＲＥＭ－１－Ｈｉｓタンパク質の結合及び解離を測定した。０ｎＭの分析物参照センサーを用いてデータを参照した。Ｇｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒソフトウェアにおいて質量移動と共に１：１のＬａｎｇｍｕｉｒモデルを用いて動態解析を行った。設計目標を満たし、ヒト及びカニクイザルＴＲＥＭ－１間で１０倍未満の親和性の相違を示したＴＲＥＭ－１抗体を同定し、それらの結合親和性を表５に示す。

【0235】

【表6】

【0236】

ヒト又はカニクイザルＴＲＥＭ－１への結合、ＴＲＥＭ２への結合の欠如及びＴＲＥＭ－１へのＰＧＬＹＲＰ１の結合を阻止するそれらの能力に基づいて抗体を選択した。表６に記載されるように、さらなる試験のために１４種類の抗体を選択した。

【0237】

【表7】

【0238】

【表8】

【0239】

【表9】

【0240】

【表10】

【0241】

【表11】

【0242】

実施例２ － 抗ＴＲＥＭ－１抗体の再フォーマット
カッパ軽鎖のＶＬドメインをＣＫドメインに、λ軽鎖のＶＬドメインをＣＬドメインに、且つＶＨドメインをＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３（２２１～４４７）配列に融合させることにより、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）キャンペーンからのリード抗ＴＲＥＭ－１抗体をＩｇＧ１ｚサブタイプの抗体フォーマットに変換した。この抗体アイソタイプのＣＨ２ドメインは、Ｎ２９７Ｇ突然変異を組み込むことによるエフェクター機能低下のために及び改変されたジスルフィド結合（Ｒ２９２Ｃ、Ｖ３０２Ｃ）を通した熱安定性改善のために改変されており；この抗体アイソタイプは、ＩｇＧ１ｚ ＳＥＦＬ２と呼ばれる。「ホットスポット」又は分子の発現、精製、熱安定性、コロイド安定性、長期の貯蔵安定性、インビボ薬物動態及び／又は免疫原性に悪影響を与えることが計算的に予測されたか若しくは経験的に決定された残基を除去するように、リード抗ＴＲＥＭ－１抗体をさらに改変した。保存、共変動、化学的類似性、構造モデリングからの予測及び他の抗体改変キャンペーンからの予備知識に基づいて、これらのホットスポットにおける様々なアミノ酸突然変異を設計した。単一の突然変異及び突然変異の組み合わせの両方を含んだ、合理的に設計された改変抗体の小さいパネルを設計した。

【0243】

１）抗体可変ドメインを含む合成ＤＮＡ断片、２）必要な定常ドメイン（即ちＣＫ又はＣＬ、ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３（１１８～４４７）（Ｒ２９２Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、Ｖ３０２Ｃ））を含有する予めクローニングされた「部分ベクター」及び３）哺乳動物発現ベクター骨格を組み立てるために、Ｇｏｌｄｅｎ Ｇａｔｅクローニングを用いて、ホットスポット改変バリアントの合理的に設計されたパネルのための組み換え発現コンストラクトを作製した。ピューロマイシン選択カセットを伴うベクター骨格に重鎖（ＨＣ）を組み立て、ハイグロマイシン選択カセットを伴うベクター骨格に軽鎖（ＬＣ）を組み立てた。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸ（Ｇｉｂｃｏ）を用いてＣＨＯ－Ｋ１細胞内で、１：１の比率を用いてＨＣ及びＬＣ発現ベクターに対して同時遺伝子移入を行い、細胞生存が＞９０％になるまで（Ｖｉ－ＣＥＬＬ ＢＬＵ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）、１０ｕｇ／ｍＬのピューロマイシン及び５００ｕｇ／ｍＬのハイグロマイシンの存在下で２～３日ごとに継代することによって安定したプールを作製した。培養物１ｍＬ当たり２ｅ６個の生存細胞で産生培地に安定したプールを播種し、６日間にわたり３６℃において５％ＣＯ_２で温置した。遠心分離によって細胞上清を回収し、ＡｍＭａｇ（商標）プロテインＡ磁気ビーズ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）又はＭＡＧ ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）ＰｒｉｓｍＡ（Ｃｙｔｉｖａ）を用いて、磁気ビーズアフィニティクロマトグラフィーによって抗体を精製した。インタクト質量分析法によって各バリアントの同一性を確認した。各バリアントについて、プロテインＡセンサーを用いてＦｏｒｔｅＢｉｏ ＯＣＴＥＴ（登録商標）（Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって馴化培地における発現力価を測定した。分析的サイズ排除クロマトグラフィーによってプロテインＡアフィニティクロマトグラフィー後に存在する高分子量（％ＨＭＷ）物質のパーセントを測定し、ＬａｂＣｈｉｐ（登録商標）ＧＸＩＩ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて、非還元性マイクロキャピラリー電気泳動（ＭＣＥ ＮＲ）により、％標的タンパク質純度を測定した。この工程により調製されるバリアントに対するデータを表１１に表す。

【0244】

【表12】

【0245】

【表13】

【0246】

【表14】

【0247】

【表15】

【0248】

ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）キャンペーンからの３つの抗ＴＲＥＭ－１リード抗体のサブセット（３０Ｈ２（１９３３０）、４９Ａ２（１９３３３）及び４６Ｈ７（１９３３２））も、ＴＲＥＭ－１への結合が保持された製造可能性改善のために酵母ディスプレイを通して改変した。各抗体について、縮重ＮＮＫコドンの使用を通して全ての６つのＣＤＲにおける残基のあらゆる可能な隣接対が全ての可能なアミノ酸に同時に突然変異されたライブラリを作製した。ライブラリは、ＢＪ５４６４の酵母誘導体の表面に提示され、ここで、Ｆｄドメインがアルファ－凝集素のＮ末端に融合され、ＬＣは酵母表面に融合されなかった。ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７複合化抗Ｆａｂ抗体の結合によってディスプレイの効率を測定した。二次蛍光としてストレプトアビジンＰＥを用いて、ビオチン複合化組み換えＴＲＥＭ－１ ＥＣＤ）への高い結合について蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いてライブラリを選別した。選別された結合／ディスプレイ二重陽性プール及びディスプレイ陽性プール中に存在する可変ドメインを、フレームワーク１（ＦＷ１）及びＨＣ及びＬＣのＦＷ４ドメインに特異的なプライマーにより増幅し、２ｘ３００ｂｐの実行についてＩｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑにおいてＮＧＳ解析に供した。一般的な周波数解析を通してデータを処理した後に突然変異を選択し、ここで、陽性結合アミノ酸頻度の比率を、陽性ディスプレイアミノ酸頻度で除し、次に、それを親配列比に対して正規化する。濃縮値が親配列以上であった配列は、有益であるか又は許容される多様性であると見なされ、親和性成熟後、さらなる合理的な抗体改変のために使用された。

【0249】

トップディスプレイ改変可変ドメインをＩｇＧ１ｚ ＳＥＦＬ２アイソタイプに変換し、１）抗体可変ドメインを含む合成ＤＮＡ断片、２）必要な定常ドメイン（即ちＣＫ又はＣＬ、ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３（１１８～４４７）を含有する予めクローニングされた「部分ベクター」（Ｒ２９２Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、Ｖ３０２Ｃ））及び３）哺乳動物発現ベクター骨格を組み立てるために、Ｇｏｌｄｅｎ Ｇａｔｅクローニングを用いてクローニングした。重鎖（ＨＣ）を、ピューロマイシン選択カセットを伴うベクター骨格に組み立て、軽鎖（ＬＣ）を、ハイグロマイシン選択カセットを伴うベクター骨格に組み立てた。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸ（Ｇｉｂｃｏ）を用いて、ＣＨＯ－Ｋ１細胞において１：１の比率で、ＨＣ及びＬＣ発現ベクターに対して同時遺伝子移入を行い、細胞生存が＞９０％になるまで（Ｖｉ－ＣＥＬＬ ＢＬＵ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）、１０ｕｇ／ｍＬのピューロマイシン及び５００ｕｇ／ｍＬのハイグロマイシンの存在下で２～３日ごとに継代することによって安定したプールを作製した。培養物１ｍＬ当たり２ｅ６個の生存細胞で産生培地に安定したプールを播種し、６日間にわたって５％ＣＯ_２、３６℃で温置した。ＡＭＭＡＧ（商標）プロテインＡ磁気ビーズ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）を用いて、磁気ビーズアフィニティクロマトグラフィーによって抗体を精製した。各分子の同一性をインタクト質量分析法によって確認した。プロテインＡアフィニティクロマトグラフィー後に存在する高分子量（％ＨＭＷ）物質のパーセントを分析的サイズ排除クロマトグラフィーによって測定し、ＬａｂＣｈｉｐ（登録商標）ＧＸＩＩ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて、非還元性マイクロキャピラリー電気泳動（ＭＣＥ ＮＲ）によって％標的タンパク質純度を測定した。酵母ディスプレイホットスポット改変によって調製されたバリアントについてのデータを表１２に示す。

【0250】

【表16】

【0251】

【表17】

【0252】

【表18】

【0253】

【表19】

【0254】

ｐ－Ｓｙｋ ＡＬＰＨＡＬＩＳＡ（登録商標）（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）を用いて、細胞におけるＳｙｋキナーゼのリン酸化レベルの分析により、ＴＲＥＭ－１／ＤＡＰ１２を発現するＨＥＫ２９３細胞における二価及び一価抗ＴＲＥＭ－１ ｍＡｂの比較を行った。簡潔に述べると、３７℃／５％ＣＯ_２で１０％透析済みＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）、２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ）、２ｍＭ Ｌ－グルタミン（Ｓｉｇｍａ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）及び０．１ｍｇ／ｍＬのゼオシン（ｚｅｏｃｉｎ）（Ｇｉｂｃｏ）が補充されたＤＭＥＭ／Ｆ１２Ｈａｍ培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中でヒトＴＲＥＭ１及びＤＡＰ１２を安定して発現するＨＥＫ２９３細胞を培養した。実験の１日前に、トリプシン－ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離し、５分間にわたって４００ｘｇで遠心分離した。５分間にわたる４００ｘｇでの２回目の遠心分離前に完全培地中で細胞ペレットを再懸濁した。遠心分離後、１ｘ１０^６個の細胞／ｍＬの濃度において、完全培地中で細胞を再懸濁し、１００μＬ／ウェルの最終体積又は５０，０００個の細胞／ウェルでＣＥＬＬＢＩＮＤ（登録商標）９６ウェル透明平底ポリスチレンプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に播種した。１８～２４時間にわたって一晩、３７℃／５％ＣＯ_２で播種したプレートを温置した。実験の当日に、７０μＬの培地を各ウェルから取り出した。アッセイ培地（１０％熱不活性化ＦＢＳが補充されたＤＭＥＭ／Ｆ１２ＨＡＭ培地）中での４倍連続希釈で、ＴＲＥＭ１抗体を最高最終濃度の３倍に希釈した。アッセイ培地を用いて架橋試薬プロテインＧ（Ｓｉｇｍａ）を最終濃度の３倍で調製した。滴定されたＴＲＥＭ１抗体をプロテインＧ又はアッセイ培地の何れかと１対１で混合し、細胞を含有する各ウェルに６０μＬの各ＴＲＥＭ１抗体＋／－架橋試薬を添加した。これらのプレートを室温で１時間温置した後、全ての培地をウェルから除去し、次に２５μＬ／ウェルの溶解緩衝液（Ｍ－Ｐｅｒ哺乳動物タンパク質抽出試薬及び１ｘＨａｌｔプロテアーゼ／ホスファターゼ阻害剤）を用いて細胞を溶解させた。１時間にわたって氷上で溶解緩衝液と共に細胞を温置した後、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）アクセプターカクテル（１ｘＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）免疫アッセイ緩衝液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）中の１ｎＭの抗ｐＳｙｋ、ウサギＩｇＧ（抗ホスホＳｙｋ（Ｔｙｒ５２５／５２６）（クローンＣ８７Ｃ１））（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、１ｎＭビオチン－抗Ｓｙｋ、マウスＩｇＧ（クローン４Ｄ１０）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、１０μｇ／ｍＬの抗ウサギ－ＩｇＧ ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）アクセプタービーズ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）及び１ｘＨａｌｔ阻害剤））を含有する３８４ウェル白色プレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）の各ウェルに５μＬの細胞溶解物を移した。２時間にわたって氷上でプレートをさらに温置した後、５μＬのＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ドナーカクテル（１ｘ免疫アッセイ緩衝液中のストレプトアビジン－アルファ－ドナービーズ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ））を４０μｇ／ｍＬの最終濃度で添加し、１時間にわたって暗所において室温で温置した。温置後、ＥＮＶＩＳＩＯＮ（登録商標）プレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて、ＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）によってホスホ－Ｓｙｋ（ｐＳｙｋ）シグナルを検出した。試料ｐＳｙｋシグナル／基底ｐＳｙｋシグナルの比率によって結果を計算し、ここで、効力及び最大シグナルを各抗体の変化の間で比較した。二価抗ＴＲＥＭ－１ ｍＡｂ処理単独は、ＴＲＥＭ－１／ＤＡＰ１２発現細胞中で弱いシグナルを誘導する。一価抗ＴＲＥＭ－１ ｍＡｂでは、ｐＳｙｋシグナルは観察されず、プロテインＧによる架橋二価及び一価抗ＴＲＥＭ－１ ｍＡｂは、ｐＳｙｋ誘導をもたらす。

【0255】

抗体配列のクレイディング及びアライメント：インプット抗体配列のＶＨ及びＶＬドメインを抽出し、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．３０９（３）：６５７－７０、２００１）に基づき、構造に基づくＩｇＧ番号付けシステムに対してアラインした。非補正モデルを用いて複合複数配列アライメントから距離行列を生成させ、ここで、２つの配列間の距離は、ＶＨ及びＶＬドメインの両方におけるミスマッチの割合である。最終的に、距離行列を使用して、ＵＰＧＭＡ（算術平均を伴う非加重結合法）法（Ｓｏｋａｌ及びＭｉｃｈｅｎｅｒ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｋａｎｓａｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ．３８：１４０９－１４３８，１９５８）を介してツリーを構築し、０．２の分枝横断限界に基づいて関連配列を群分けした。アミノ酸の化学的類似性に基づいて手作業でアライメントを精密化して、表１３に示される配列をもたらす各分岐群についてのコンセンサスＣＤＲ配列を生成させた。

【0256】

【表20】

【0257】

【表21】

【0258】

実施例３ － ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＴＲＥＭ－１抗体ブロッキングリガンド介在性シグナル伝達の有効性
ヒトＰＢＭＣにおけるＴＲＥＭ－１受容体へのリガンド結合の阻害により、シグナル伝達を阻止する能力についてＴＲＥＭ－１抗体を試験した。凍結されたヒトＰＢＭＣ（ＩＱ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を解凍し、洗浄し、完全細胞培養培地（ＲＰＭＩ／１０％ＦＢＳ／２ｍＭのＧｌｕｔａＭａｘ／１ｍＭピルビン酸ナトリウム／４４ｕＭ β－メルカプトエタノール／１ｘＤＮＡｓｅ Ｉ）中で再懸濁した。９６ウェル細胞培養プレート中で１００Ｋ／ウェルでＰＢＭＣを播種し、３７℃で少なくとも３０分間平衡化させた。ＲＰＭＩ／１０％ＦＢＳ中で１３種類の抗ＴＲＥＭ－１抗体を希釈して（３Ｘ連続希釈）、０．００００１７ｎＭ～３ｎＭの範囲の最終抗体濃度を得た。より高い濃度の抗体を用いたこのアッセイの以前の反復において、シグナル伝達の任意の阻害を実証することができなかったため、抗体５７Ｆ５をこの分析から除外した。ＴＲＥＭ－１リガンドの付加前に３０分間にわたってＰＢＭＣと共に抗体を予め温置した。ペプチドグリカン（ＰＧＮ）と複合体形成されたペプチドグリカン認識タンパク質１（ＰＧＬＹＲＰ１）は、いくつかの記載されるＴＲＥＭ－１リガンドの１つであり、ＴＲＥＭ－１受容体とのその会合が炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦα）の産生を引き起こし、これらのアッセイにおいて使用された。タンパク質を複合体化するために、ヒトＰＧＬＹＲＰ１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）由来の可溶性ＰＧＮ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）と１．２５：２の比率で組み合わせ、３７℃で４５分間温置した。複合体化したＰＧＬＹＲＰ１／ＰＧＮをＰＢＭＣ／抗体に添加し、３７℃で一晩温置した。翌日、細胞培地を回収し、ヒトＴＮＦα ＡｌｐｈａＬＩＳＡ ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ ａｓｓａｙ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によってＴＮＦαについてアッセイした。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ２１０３マルチラベルプレートリーダーにおいて６１５ｎｍにおける発光を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ｖ８．４．３）を用いてＩＣ５０値を計算し、以下の表１４において２つの別個のアッセイのために提供した。

【0259】

【表22】

【0260】

これらの結果は、ＴＲＥＭ－１抗体がヒトＴＲＥＭ－１に結合し、重要なことに、ヒト初代細胞（ＰＢＭＣ）におけるリガンド誘導性ＴＲＥＭ－１活性化の阻害を実証することを示す。

【0261】

実施例４ － カニクイザル末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＴＲＥＭ－１抗体ブロッキングリガンド介在性シグナル伝達の有効性
カニクイザルＰＢＭＣにおいてＴＲＥＭ－１受容体へのリガンド結合の阻害によってシグナル伝達を阻止することについて、ＴＲＥＭ－１抗体をアッセイした。凍結カニクイザルＰＢＭＣ（ＩＱ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を解凍し、洗浄し、完全細胞培養培地（ＲＰＭＩ／１０％ＦＢＳ／２ｍＭ ＧｌｕｔａＭａｘ／１ｍＭピルビン酸ナトリウム／４４ｕＭ β－メルカプトエタノール／１ｘＤＮＡｓｅＩ）中で再懸濁した。１００Ｋ／ウェルでＰＢＭＣを９６ウェル細胞培養プレートに播種し、３７℃で少なくとも３０分間平衡化させた。ＲＰＭＩ／１０％ＦＢＳ中で１４種類の抗ＴＲＥＭ－１抗体を希釈し（３Ｘ連続希釈）、０．０００１７ｎＭ～３０ｎＭの範囲の最終抗体濃度を生成させた。ＴＲＥＭ－１リガンドの付加前に３０分間にわたってＰＢＭＣと共に抗体を予め温置した。ペプチドグリカン（ＰＧＮ）と複合体形成されたペプチドグリカン認識タンパク質１（ＰＧＬＹＲＰ１）は、いくつかの記載されるＴＲＥＭ－１リガンドの１つであり、ＴＲＥＭ－１受容体とのその結合が炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦα）の産生を引き起こし、このアッセイにおいて使用した。タンパク質を複合化するために、１．２５：２の比で大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）由来の可溶性ＰＧＮ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）とカニクイザルＰＧＬＹＲＰ１（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｍａｒｔ）を合わせ、３７℃で４５分間温置した。複合体化させたＰＧＬＹＲＰ１／ＰＧＮをＰＢＭＣ／抗体に添加し、３７℃で一晩温置した。翌日、細胞培地を回収し、カニクイザルＴＮＦα Ａｌｐｈａｌｉｓａ ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ ａｓｓａｙ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によってＴＮＦαについてアッセイした。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ２１０３マルチラベルプレートリーダーにおいて６１５ｎｍでの発光を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ｖ８．４．３）を用いてＩＣ５０値を計算し、表１５において２つの別個のアッセイのために提供した。

【0262】

【表23】

【0263】

これらの結果は、ＴＲＥＭ－１抗体がカニクイザルＴＲＥＭ－１に結合し、重要なことに、カニクイザル初代細胞（ＰＢＭＣ）におけるリガンド誘導性ＴＲＥＭ－１活性化を阻害することを示す。さらに、図１は、カニクイザル及びヒトＰＢＭＣの両方におけるＰＧＬＹＲＰ１／ＰＧＮ介在性ＴＲＥＭ１シグナル伝達のＴＲＥＭ１抗体阻害を示す。

【0264】

実施例５ － ヒトＴＲＥＭ－１／Ｄａｐ１２－ＨＥＫ２９３過剰発現細胞株におけるＴＲＥＭ－１ Ｆａｂブロッキング脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）リン酸化の有効性
ヒトＴＲＥＭ－１／Ｄａｐ１２を過剰発現する細胞株におけるＴＲＥＭ－１受容体へのリガンド結合の阻害によってシグナル伝達を阻止する能力についてＴＲＥＭ－１ Ｆａｂをアッセイし、ＩＣ５０を決定した。脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）のリン酸化は、ＴＲＥＭ－１シグナル伝達カスケードの初期の過程であり、このアッセイにおいて、ＴＲＥＭ－１シグナル伝達の尺度として使用される。１２ｋＤａ（Ｄａｐ１２）のヒトＴＲＥＭ－１及びその必須のアダプタータンパク質ＤＮＡＸ活性化タンパク質を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞を、完全培地（ＤＭＥＭ／１０％のＦＢＳ）中、５０Ｋ／ウェルでＣｅｌｌＢＩＮＤプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に播種し、一晩付着させた。二価ＴＲＥＭ－１抗体は、この系においてシグナル伝達を阻害することができなかったが、これは、これらの細胞における多量のＴＲＥＭ－１受容体の技術的なアーチファクト及び二価抗体がそれらを架橋してリガンドとは無関係の受容体アゴニズムをもたらす能力に起因すると思われる。従って、一価Ｆａｂをこのアッセイにおいて完全抗体の代用物として使用した。０．０００１７ｎＭ～３０ｎＭの範囲の最終的な抗体濃度を生成させるために、完全培地中で１４種類の抗ＴＲＥＭ－１ Ｆａｂを希釈した（３倍連続希釈）。ＴＲＥＭ－１リガンド複合体化ヒトＰＧＬＹＲＰ１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に由来する可溶性ＰＧＮ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）の付加前に３０分間にわたって、ＴＲＥＭ－１／Ｄａｐ１２－ＨＥＫ２９３と共にＦａｂを予備温置した。ＰＧＬＹＲＰ１及びＰＧＮを複合体化するために、タンパク質を１：２の比率で組み合わせて、３７℃で４５分間温置した後、細胞／Ｆａｂに添加した。室温での１時間の温置後、細胞を溶解させ、ｐＳＹＫ ＡＬＰＨＬＩＳＡ（登録商標）ＳＵＲＥＦＩＲＥ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（商標）ｐ－ＳＹＫ（Ｔｙｒ５２５／５２６）アッセイ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて細胞溶解物中のリン酸化ＳＹＫの量を測定した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ２１０３マルチラベルプレートリーダーにおいて６１５ｎｍにおける発光を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ｖ８．４．３）を用いてＩＣ５０値を計算し、表１６に示されるように、２つの別個のアッセイに供する。

【0265】

【表24】

【0266】

図２は、抗ＴＲＥＭ１ ＦａｂがＴＲＥＭ１／ＤＡＰ１２－ＨＥＫ２９３細胞においてＰＧＬＹＲＰ１／ＰＧＮ介在性ＳＹＫリン酸化を阻害することを示すグラフである。

【0267】

実施例６ － 循環器疾患におけるＴＲＥＭ－１抗体のインビボ評価
ＴＲＥＭ－１介在性シグナル伝達の阻止が炎症促進性サイトカイン／ケモカイン放出（急性反応）を軽減し、その結果、アテローム性動脈硬化症（Ａｔｈ）及び心筋梗塞（ＭＩ）に対する疾患アウトカムの改善が起こることを裏付けるために、急性及び疾患モデルの両方を使用する。

【0268】

急性モデル：
リポ多糖（ＬＰＳ）誘導性炎症モデル
マウスＴＲＥＭ－１細胞外ドメイン／Ｆｃ（ｍｕＴＲＥＭ１－Ｆｃ）によるＴＲＥＭ－１の遮断の結果、リポ多糖（ＬＰＳ）を用いて全身的に試験負荷されたマウスにおいて炎症性サイトカインの放出が減少するか否かを決定するために、ＬＰＳ誘導性炎症モデルを使用する。簡潔に述べると、雌Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（１０～１２週間）をランダムに群分けし（ｎ＝６匹マウス／治療）、３、１０又は３０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のｍｕＴＲＥＭ１－Ｆｃ又は３０ｍｐｋのｍｕＩｇＧ１（対照）の何れかで腹腔内（ｉ．ｐ．）治療する。１時間後、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）からの１００μｇ／動物のＬＰＳ（０５５：Ｂ５）をマウスに投与（ｉ．ｐ．）する。０、１、３、６及び２４時間で血液試料を回収する。Ｖ－ＰＬＥＸ炎症促進パネル１マウスキット（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用して、炎症促進性サイトカイン及びケモカイン（ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＫＣ／ＧＲＯ、ＴＮＦ－α）の血清レベルを測定する。可溶性ＴＲＥＭ－１（ｓＴＲＥＭ－１）レベルをＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）により測定する。このモデルにおけるｍｕＴＲＥＭ１－Ｆｃ分析に加えて、抗マウスＴＲＥＭ－１抗体の特徴を調べ得る。

【0269】

ＴＲＥＭ－１リガンド介在性炎症モデル
ペプチドグリカン認識タンパク質１（ＰＧＬＹＲＰ１）がＴＲＥＭ－１リガンドとして同定された（Ｒｅａｄ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。ＰＧＬＹＲＰ１単独又はその内因性結合標的（細菌性ペプチドグリカン－ＰＧＮ）と複合体化されたＰＧＬＹＲＰ１を使用して、０．５～３ｍｐｋ（ＰＧＬＹＲＰ１）及び０．５～５ｍｐｋ（ＰＧＮ）の用量範囲でＣ５７Ｂｌ／６マウスにおいて炎症反応を惹起する。ＰＧＬＹＲＰ１又はＰＧＬＹＲＰ１／ＰＧＮの投与前に、抗マウスＴＲＥＭ－１抗体、対照抗体又はｍｕＴＲＥＭ１－Ｆｃ（用量範囲１～３０ｍｐｋ）でマウスを治療する。マウスにおけるＴＲＥＭ－１の比較的低い発現を考慮して、ＬＰＳ、ＴＲＥＭ－１の発現を上方制御することが知られるトール様受容体４リガンド（Ｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００７）を抗体／ＴＲＥＭ１－Ｆｃ及びＴＲＥＭ－１リガンドでの治療の２４時間前に投与し得る。０、１、３、６及び２４時間で血液試料を回収する。Ｖ－ＰＬＥＸ炎症促進性パネル１マウスキット（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用して炎症促進性サイトカイン及びケモカイン（ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＫＣ／ＧＲＯ、ＴＮＦ－α）の血清レベルを測定する。ｓＴＲＥＭ－１レベルは、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）により測定する。

【0270】

ＮＳＧヒト化マウスモデル
ＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）は、ヒト造血性幹細胞を容易に移植し得る重度の免疫不全マウスであり、マウスモデルでの機能的なヒト化免疫系の確立を可能にする。このヒト化マウスモデルを利用して、上記のような、ＬＰＳ治療、ＴＲＥＭ－１リガンド治療の何れか又は両方で炎症反応を開始させる。炎症反応開始前に、抗ヒトＴＲＥＭ－１又はアイソタイプ対照抗体（用量範囲１～３０ｍｐｋ）の何れかでマウスを治療する。０、１、３、６及び２４時間で血液試料を回収する。Ｖ－ＰＬＥＸ炎症促進性パネル１ヒトキット（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用して、炎症促進性サイトカイン及びケモカイン（ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１３、ＴＮＦ－α）の血清レベルを測定する。ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によってｓＴＲＥＭ－１レベルを測定する。

【0271】

カニクイザルモデル
ＬＰＳ負荷試験モデルにおいて抗ヒト（カニクイザルと交差反応）ＴＲＥＭ－１抗体でカニクイ（マカカ・ファスシキュラリス（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））ザルを治療する。成体雄カニクイザルをランダムに群分けして、ＬＰＳのｉ．ｖ．ボーラス（１０ｕｇ／ｋｇ体重）の投与後、ＴＲＥＭ－１抗体（用量範囲１～３０ｍｐｋ）又はアイソタイプ対照の何れかの静脈内（ｉ．ｖ．）又は皮下（ｓ．ｃ．）用量を与える。サルのさらなる対照群はビヒクルのみを与える（抗体なし／ＬＰＳなし）。バイタルサインを監視し、臨床化学、白血球数、凝固パラメーター、可溶性ＴＲＥＭ－１及びサイトカイン血漿濃度のために、０、１、２、４及び８時間で血液試料を回収する。

【0272】

疾患モデル：
ＡｐｏＥ－／－、ＬＤＬＲ－／－、Ａ２０ハプロ不全／ＡｐｏＥ－／－
アテローム性動脈硬化症のマウスモデル（例えば、高コレステロール高脂肪餌を１２～１６週間与えられたＡｐｏＥ－／－又はＬＤＬＲ－／－マウス）を使用して、抗マウスＴＲＥＭ－１抗体での治療により疾患アウトカムが変化するか否かを判定する。マウスをランダムに群分けし、高コレステロール餌給餌期の間毎週、対照抗体又は抗マウスＴＲＥＭ－１抗体の何れかのｓ．ｃ．用量（１～３０ｍｐｋの範囲）をコホートに投与する。様々な時点で血液を回収し、サイトカイン／ケモカインレベル、可溶性ＴＲＥＭ－１レベル及び骨髄系細胞サブセットについて分析する。実験の最後に大動脈全体を回収し、オイルレッドＯ又はスーダンＩＶを使用したｅｎ ｆａｃｅ染色によって表面の病変領域を定量する。さらに、大動脈基部での切片を得て、オイルレッドＯで染色し、病変領域を定量し、抗ＣＤ６８抗体で染色してマクロファージ含量を定量し、抗平滑筋アクチン（ＳＭＡ）抗体で染色して平滑筋細胞含量を定量し、他の染色も行った。別の有用なモデルは、ＮＦ－ｋｂにより推進されるプロアテローム動脈硬化／炎症促進性標的遺伝子のレベル上昇の結果、アテローム性動脈硬化症になり易くなることを示す、Ａ２０ハプロ不全／ＡｐｏＥ－／－マウスである（Ｗｏｌｆｒｕｍ ｅｔ ａｌ．，２００７）。適切な抗マウスＴＲＥＭ－１サロゲート抗体が同定されていない場合、ＡｐｏＥ－／－バックグラウンドにおけるヒトＴＲＥＭ－１ノックインマウスを作製する。これにより、アテローム性動脈硬化症のマウスモデルにおける抗ヒトＴＲＥＭ－１抗体の試験が可能になる。

【0273】

ＮＳＧヒト化マウスモデル
ＮＳＧマウスが急性設定で有用であることを証明する場合、これは、ＡｐｏＥ、Ｌｄｌｒ又は両方のｓｉＲＮＡノックダウンによる疾患モデルに進展させ得る。高コレステロール餌給餌期の間毎週、１２～１６週間にわたり高脂肪高コレステロール餌が与えられたＮＳＧ／ｓｉＲＮＡ治療マウスのランダム化コホートに対照抗体又は抗ヒトＴＲＥＭ－１抗体の何れかのｓ．ｃ．用量（１～３０ｍｐｋの範囲）を投与する。血液を様々な時点で回収し、サイトカイン／ケモカインレベル、可溶性ＴＲＥＭ－１レベル及び骨髄系細胞サブセットについて分析する。実験の最後に、大動脈全体を回収し、上記のように染色されるｅｎ ｆａｃｅ染色及び大動脈基部切片によって表面の病変領域を定量する。

【0274】

げっ歯類急性心筋梗塞（ＡＭＩ）モデル
ＭＩのげっ歯類モデルは、抗マウスＴＲＥＭ－１抗体及び／又はｍｕＴＲＥＭ１－Ｆｃを試験するために有用である。簡潔に述べると、左前下行冠動脈（ＬＡＤ）の永久的な結紮によってマウス又はラットの何れかにおいてＡＭＩが誘発される。この手順後、げっ歯類（ラット＝Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ、マウス＝Ｃ５７Ｂｌ／６）をランダムに群分けして、結紮手術後２～８週間、毎週、抗マウスＴＲＥＭ－１又はアイソタイプ対照抗体の何れかのｓ．ｃ．用量（１～３０ｍｐｋ）を投与する。心機能（例えば、駆出率、拡張終期容積、収縮終期容積及び心拍出量）を試験期間全体にわたり定められた時間で非侵襲的心エコーにより評価する。圧力・容積ループで末期的心機能及び収縮力を測定する。定期的な間隔で血液試料を採取して、血液細胞数、肝臓及び腎臓酵素、トロポニン、可溶性ＴＲＥＭ－１及び炎症性マーカー（サイトカイン、ｈｓＣＲＰ）を測定する。試験の最後に、げっ歯類を安楽死させ、エクスビボ組織染色により、リスク領域に対する梗塞サイズ比（ＩＳ／ＡＡＲ）を決定する。９０分間ＬＡＤの結紮を行い、その後に結紮を除去する、所謂虚血／再灌流（Ｉ／Ｒ）モデルである同様の試験を行い得る。治療スキーム及び分析は、上記と同じである。

【0275】

ミニブタＭＩモデル
ブタＴＲＥＭ－１と交差反応し得る抗体をミニブタＡＭＩモデルにおいて試験する。簡潔に述べると、１時間にわたる近位左前下行動脈（ＬＡＤ）における血管形成術バルーンの膨張によってミニブタ（サス・スクロファ・ドメスティク（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ ｄｏｍｅｓｔｉｃ））においてＡＭＩを誘導する。動物をランダムに群分けして、術後２～４週間にわたり毎週、ＴＲＥＭ－１又はアイソタイプ対照抗体の何れかのｓ．ｃ．用量（１～３０ｍｐｋ）を与える。手術時、抗体の最初の用量の投与後、血管形成術バルーンをしぼませる。試験期間全体を通して、心拍、平均動脈圧、平均肺動脈圧、心拍出量、心係数及び混合静脈酸素飽和を含む血行動態パラメーターを監視する。試験期間全体を通して、左心室の拡張終期及び収縮終期容積、駆出率、心室圧の一次導関数の最大及び最小値（ｄＰ／ｄｔｍａｘ、ｄＰ／ｄｔｍｉｎ）、左心室圧減衰の時間定数及び１回仕事量を含む血圧－コンダクタンスカテーテルに基づくパラメーターを定期的に監視する。収縮終期及び拡張終期圧力体積関係、最大心室エラスタンス、動脈エラスタンス、拡張終期容積関係に対するｄｐ／ｄｔｍａｘ、予め負荷される補充可能な１回仕事量及び圧力容積面積を含め、大静脈閉塞を伴う圧力／容積データも回収する。定期的な間隔で血液試料を採取し、血液ガス、血液細胞数、血中乳酸、肝臓及び肝臓酵素、トロポニン、可溶性ＴＲＥＭ－１及び炎症性マーカー（サイトカイン、ｈｓＣＲＰ）を測定する。試験終了時にブタを安楽死させ、エクスビボ組織染色によってリスク領域に対する梗塞サイズ比（ＩＳ／ＡＡＲ）を決定する。

【0276】

受容体を通してシグナル伝達を遮断するＴＲＥＭ－１抗体の投与が、心モデルにおいて炎症反応を下方制御し、循環器疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症又は心筋梗塞）の１つ以上の症状、例えば損傷部位への炎症性細胞遊走、心臓組織への骨髄系細胞の浸潤、微小環境における炎症性サイトカイン、組織損傷、泡沫細胞形成の減少、壊死コアサイズの減少、瘢痕形成の減少、内皮細胞機能不全の減少及び／又は血栓形成の減少などを軽減することにより、循環器疾患を治療するという仮説が立てられる。

【0277】

実施例７ － ＴＲＥＭ－１の遺伝子破壊の結果、ＬＰＳ刺激後の血清ペプチドグリカン認識タンパク質１（ＰＧＬＹＲＰ１）のレベル低下が起こった。
ＴＲＥＭ－１ノックアウト（Ｃ５７Ｂｌ／６バックグラウンド）及び週齢／バックグラウンドが一致したマウス（ｎ＝６）に、１００μｇ／動物の、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）からのリポ多糖（ＬＰＳ）（Ｏ５５：Ｂ５）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を注射（腹腔内）した。ＬＰＳ投与後０、１、３、６及び２４時間に、２０マイクロリットルの全血を採取した。２つの治療群（ＷＴ、ＴＲＥＭ－１ ＫＯ）からの血清を各時点でプールし、ＥＬＩＳＡ（ＬＳＢｉｏ）によってＰＧＬＹＲＰ１濃度を測定した。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐｌｕｓ^３８４ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ上で４５０ｎｍでの光学密度を測定した。

【0278】

図３は、ＬＰＳ投与後、野生型でＴＲＥＭ－１リガンドＰＧＬＹＲＰ１において１時間でスパイクを示すグラフであるが、ＴＲＥＭ－１ノックアウトマウスではスパイクがない。このデータは、ＴＲＥＭ－１がＰＧＬＹＲＰ１の調節に関与すること及びＴＲＥＭ－１を標的とする抗体が受容体へのリガンド結合及びＰＧＬＹＲＰ１リガンドのその後の利用可能性の両方を阻止し得ることを示唆する。ＴＲＥＭ－１抗体を用いてＰＹＧＬＹＲＰ１の上昇を阻止することは、その後のＰＹＧＬＲＰ１介在性炎症及び循環器系の事象を防ぎ得る。

【0279】

本明細書における何れかの単一の実施形態に対して、本明細書における何れか１つ以上の他の実施形態からの１つ以上の要素が追加され得る。

【0280】

従って、本発明は、開示される特定の実施形態に限定されず、添付の特許請求の範囲；上記の説明；以下の番号付けされた段落によって規定され、且つ／又は添付の図面に示されるような本発明の趣旨及び範囲内にある全ての変更形態を包含することが意図されることが理解される。

【0281】

上記の例示的な実施例に示されるような、本発明の多数の修正形態及び変形形態が当業者に想起されると予想される。従って、添付の特許請求の範囲に示されるような限定のみが本発明に課されるべきである。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図2】

【図3】

【配列表】

2024527514000001.app

【国際調査報告】