特表 2024-527576 抗ＴＮＦＲ２抗体及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-25

(54)【発明の名称】抗ＴＮＦＲ２抗体及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20240718BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240718BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240718BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240718BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240718BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28

A61P35/00 ZNA

A61P37/02

A61P35/02

A61K39/395 T

C12N15/13

C12N15/63 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024500409

(86)(22)【出願日】2022-07-06

(85)【翻訳文提出日】2024-03-05

(86)【国際出願番号】 IB2022000409

(87)【国際公開番号】W WO2023281313

(87)【国際公開日】2023-01-12

(31)【優先権主張番号】63/219,175

(32)【優先日】2021-07-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522256668

【氏名又は名称】ハイファイバイオ（ホンコン）リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100107386

【弁理士】

【氏名又は名称】泉谷 玲子

(72)【発明者】

【氏名】ベルトラミネリ，ニコラ・アルトゥーロ・アルド

(72)【発明者】

【氏名】ワトキンス，ジェニファー

(72)【発明者】

【氏名】エイドリアン，フランシスコ

(72)【発明者】

【氏名】チャン，チェン

(72)【発明者】

【氏名】ラウエ，アンドレアス

(72)【発明者】

【氏名】メアリー，パスカリーヌ

(72)【発明者】

【氏名】シュバイツァー，リャン

(72)【発明者】

【氏名】ウェイ，シュオ

(72)【発明者】

【氏名】デリンス，マテュー

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC23

4C085EE01

4C085GG01

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA74

(57)【要約】

ＴＮＦＲ２に特異的なモノクローナル抗体及びその抗原結合フラグメントと、がんまたは自己免疫障害を治療するためにそれらを使用する方法であって、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントのアンタゴニストとの併用療法を含む、方法とが提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒトＴＮＦＲ２に特異的であり、前記モノクローナル抗体が、
（１ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、前記重鎖可変領域と、
（１ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、前記軽鎖可変領域とを含む、または
（２ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号１４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１５のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、前記重鎖可変領域と、
（２ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号１７のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、前記軽鎖可変領域とを含む、または
（３ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号２６のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２７のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号２８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、前記重鎖可変領域と、
（３ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号２９のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号３０のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３１のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、前記軽鎖可変領域とを含む、または
（４ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号３９のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４０のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号４１のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、前記重鎖可変領域と、
（４ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号４２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４３のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号４４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、前記軽鎖可変領域とを含む、または
（５ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号５１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号５３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、前記重鎖可変領域と、
（５ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号５４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号５６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、前記軽鎖可変領域とを含む、または
（６ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号６３のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６５のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、前記重鎖可変領域と、
（６ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号６６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６７のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、前記軽鎖可変領域とを含む、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメント。

【請求項2】

（１Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号７である、及び／または
（１Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号８である、あるいは
（２Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号２０である、及び／または
（２Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号２１である、あるいは
（３Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号３２である、及び／または
（３Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号３３である、あるいは
（４Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号４５である、及び／または
（４Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号４６である、あるいは
（５Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号５７である、及び／または
（５Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号５８である、あるいは
（６Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号６９である、及び／または
（６Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号７０である、
請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメント。

【請求項3】

前記モノクローナル抗体が、
（１ａ）配列番号９の重鎖配列、及び／または
（１ｂ）配列番号１０の軽鎖配列、あるいは
（２ａ）配列番号２２の重鎖配列、及び／または
（２ｂ）配列番号２３の軽鎖配列、あるいは
（３ａ）配列番号３４の重鎖配列、及び／または
（３ｂ）配列番号３５の軽鎖配列、あるいは
（４ａ）配列番号４７の重鎖配列、及び／または
（４ｂ）配列番号４８の軽鎖配列、あるいは
（５ａ）配列番号５９の重鎖配列、及び／または
（５ｂ）配列番号６０の軽鎖配列、あるいは
（６ａ）配列番号７１の重鎖配列、及び／または
（６ｂ）配列番号７２の軽鎖配列
を有する、請求項１または２に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメント。

【請求項4】

マウス抗体、ヒト－マウスキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、またはリサーフェスド抗体である、請求項１～３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項5】

前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ_ｄ、単鎖ＦｖもしくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆ_ｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ_２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ_２、（ｓｃＦｖ）_２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである、請求項１～４のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項6】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、アカゲザルＴＮＦＲ２と交差反応するが、マウスＴＮＦＲ２とは実質的に交差反応しない、請求項１～５のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項7】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントがＴＮＦＲ１と実質的に交差反応しない、請求項１～６のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項8】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、約２５ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＫ_ｄでＴＮＦαに結合する、請求項１～７のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項9】

Ｔｒｅｇの存在下で、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を増強し、ＴＮＦα媒介性または共刺激ＮＦκＢシグナル伝達を（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）増強し、及び／またはＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を促進する、請求項１～８のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項10】

ＴｒｅｇでのＴＮＦα媒介性ＣＤ２５発現を増強する、請求項１～９のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項11】

配列番号１３及び／または１０１のエピトープに結合する、請求項１～１０のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項12】

配列番号１３及び／または１０１の前記エピトープとの結合に関し、請求項１～１１のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項13】

配列番号１３及び／または１０１の前記エピトープに特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項14】

Ｔｒｅｇの存在下で、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を増強し、ＴＮＦα媒介性または共刺激ＮＦκＢシグナル伝達を（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）増強し、及び／またはＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を促進する、請求項１２または１３に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項15】

Ｔｒｅｇの存在下で、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を阻害し、ＴＮＦα媒介性または共刺激ＮＦκＢシグナル伝達を（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）阻害し、及び／またはＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を阻害する、請求項１～８のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項16】

Ｔｒｅｇの増殖を促進する、請求項１～８のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項17】

ナチュラルキラー細胞の活性化を促進する、請求項１～８のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項18】

同じエピトープとの結合に関し、請求項１～８及び１５～１６のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項19】

単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１０１を含む、それから本質的になる、またはそれからなるエピトープでヒトＴＮＦＲ２に特異的に結合し、任意選択で、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１３から本質的になる、またはそれからなるエピトープではヒトＴＮＦＲ２に結合しない、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項20】

（１）腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）において（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ ｈＴＮＦＲ２ノックインＭＣ３８マウス腫瘍モデルにおいて）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の活性化及び増殖を促進するが、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の活性化及び増殖を促進しない、ならびに／または（２）ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／もしくはｉｎ ｖｉｖｏでＮＫ細胞の活性化を促進する、請求項１９に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項21】

カニクイザルにおける最大耐量（ＭＴＤ）が約１５０ｍｇ／ｋｇである、請求項１～２０のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項22】

がんの治療を、それを必要とする患者において行う方法であって、前記患者に、請求項１～２１のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することを含み、前記患者（例えば、前記患者の前記がん）が、
（ａ）前立腺癌患者における平均ＴＮＦＲ２発現レベルより高いレベルのＴＮＦＲ２発現（任意選択で、前記ＴＮＦＲ２発現は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋及び／またはＣＤ８^＋Ｔ細胞）、腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫ細胞において評価される）、ならびに
（ｂ）ＡＭＬ患者における平均ＣＤ８Ａ発現レベルより高いレベルのＣＤ８Ａ発現
を有する、前記方法。

【請求項23】

前記患者（例えば、前記患者の前記がん）が、腫瘍浸潤ＣＤ８Ａ^＋（ＣＤ８α鎖陽性）Ｔ細胞において前記より高いレベルのＴＮＦＲ２発現を有する、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記患者が、ＥＢＶ^＋胃癌（例えば、胃腺癌）、明細胞腎細胞癌、腎臓明細胞癌、皮膚黒色腫（例えば、皮膚黒色腫）、精巣胚細胞腫瘍、または軟部組織肉腫を有する、請求項２２または２３に記載の方法。

【請求項25】

前記がんが「高い」レベルのＰＤ－Ｌ１を発現する、請求項２２または２３に記載の方法。

【請求項26】

前記がんが、子宮頚癌（例えば、子宮頚部扁平上皮癌もしくは子宮頚管内腺癌）、胸膜中皮腫、肺腺癌、または頭頚部扁平上皮癌である、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記患者に、
（ａ）ＰＤ－１に特異的な抗体もしくはその抗原結合フラグメント、例えば、セミプリマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、シンチリマブ、チスレリズマブ、トリパリマブ、ドスタルリマブ、及びＩＮＣＭＧＡ０００１２、
（ｂ）ＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体もしくはその抗原結合フラグメント、例えば、アベルマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、ＫＮ０３５、もしくはＣＫ－３０１、及び／または
（ｃ）ＰＤ－Ｌ２に特異的な抗体もしくはその抗原結合フラグメント
を投与することをさらに含む、請求項２２～２６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

前記患者が再発もしくは難治性のがんを有し、及び／または過去に標準治療で治療された（さらに任意選択で、これに応答しなかったもしくは再発した）ことがある、請求項２２～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

前記患者に、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を、３週間に１回（Ｑ３Ｗ）、４週間に１回（Ｑ４Ｗ）、または５週間に１回（Ｑ５Ｗ）（例えば、４週間に１回またはＱ４Ｗ）投与することを含む、請求項２２～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

前記患者に、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを４週間に１回（Ｑ４Ｗ）、約５ｍｇ、約１５ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、または約１５０ｍｇの用量で投与する（例えば、６０分かけて静脈内投与する）ことを含む、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

（１）前記投与ステップの前に、前記より高いレベルのＴＮＦＲ２発現及びＣＤ８Ａ発現を伴う患者を選択すること、または
（２）前記投与ステップの前に、前記患者が前記より高いレベルのＴＮＦＲ２発現及びＣＤ８Ａ発現を有することを確認すること
をさらに含む、請求項２２～３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

がんの治療を、それを必要とする患者において行う方法であって、前記患者に、配列番号１０１を含む、それから本質的になる、またはそれからなるエピトープでヒトＴＮＦＲ２に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することを含み、任意選択で、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１３から本質的になる、またはそれからなるエピトープではヒトＴＮＦＲ２に結合しない、前記方法。

【請求項33】

がんまたは自己免疫障害の治療を、それを必要とする患者において行う方法であって、前記患者に、請求項１～２１のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することを含む、前記方法。

【請求項34】

免疫チェックポイントのアンタゴニストを投与することをさらに含む、がんを治療するための請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記免疫チェックポイントがＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントである、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記免疫チェックポイントの前記アンタゴニストが、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３４または３５に記載の方法。

【請求項37】

前記抗体が抗ＰＤ－１抗体、例えば、セミプリマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、シンチリマブ、チスレリズマブ、トリパリマブ、ドスタルリマブ、及びＩＮＣＭＧＡ０００１２である、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記抗体が抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例えば、アベルマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、ＫＮ０３５、またはＣＫ－３０１である、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記免疫チェックポイントの前記アンタゴニストが、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の（非抗体）ペプチド阻害剤（例えば、ＡＵＮＰ１２）、ＰＤ－Ｌ１の低分子阻害剤（例えば、ＣＡ－１７０）、または大環状ペプチド（例えば、ＢＭＳ－９８６１８９）である、請求項３４または３５に記載の方法。

【請求項40】

前記がんが、黒色腫、乳癌、結腸癌、子宮頚癌、腎臓癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、皮膚癌（例えば、扁平上皮癌または基底細胞癌）、リンパ腫、または白血病である、請求項３４～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記患者に、化学療法剤、抗血管新生剤、成長阻害剤、がん免疫薬剤、及び／または抗新生物組成物を投与することをさらに含む、請求項２２～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

請求項１～２１のいずれか１項に記載の重鎖もしくは軽鎖またはその抗原結合部分をコードするポリヌクレオチド。

【請求項43】

ヒト細胞での発現のためにコドン最適化されている、請求項４２に記載のポリヌクレオチド。

【請求項44】

請求項４２または４３に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項45】

発現ベクター（例えば、哺乳類、酵母、昆虫、または細菌発現ベクター）である、請求項４４に記載のベクター。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の参照
本出願は、米国仮特許出願第６３／２１９，１７５号（２０２１年７月７日出願）の出願日の利益を主張し、その全ての内容（任意の図面及び配列表を含む）が、参照により本明細書に援用される。

【背景技術】

【0002】

腫瘍壊死因子受容体２（ＴＮＦＲ２）（別名：腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）及びＣＤ１２０ｂ）は、４つのシステインリッチドメイン（ＣＲＤ１～ＣＲＤ４）を有する細胞外ドメイン（ＥＣＤ、残基１－２５７）と、膜貫通ドメイン（ＴＭ、残基２５８－２８７）と、ＴＲＡＦ２結合ドメインを有する細胞内ドメイン（ＩＣＤ、残基２８８－４６１）とを含む７５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質である。ＴＮＦＲ２は、もう一方のＴＮＦα受容体である腫瘍壊死因子受容体１（ＴＮＦＲ１）と共有する配列同一性が比較的低く、これらの細胞外ドメイン間の相同性はわずか２８％である。

【0003】

ＴＮＦＲ２は、ＴＮＦαリガンドに３：３の三量体化様式で結合する。ＴＮＦＲ２とＴＮＦαとの共結晶構造が解明され、各ＴＮＦＲ２分子が２つのＴＮＦαリガンドに結合することが示された。さらに、ＴＮＦαは４２０ｐＭのＫ_ｄでＴＮＦＲ２に結合するが、これはＴＮＦＲ１との結合（Ｋ_ｄ＝１９ｎＭ）より約２０倍弱い。当然ながら、ＴＮＦαは、他の全てが同じであればＴＮＦＲ１に優先的に結合する。

【0004】

正常なＴ細胞においては、ＴＮＦα－ＴＮＦＲ２相互作用は、ＮＦｋＢシグナル伝達経路を介し細胞生存シグナルを誘発する。しかし、自己免疫Ｔ細胞においては、ＴＮＦα－ＴＮＦＲ２相互作用は、カスパーゼ経路を介しアポトーシスシグナルを誘発する。

【0005】

ヒトＴＮＦＲ２は、マウスＴＮＦＲ２に対し６２％のアミノ酸配列相同性を示すが、アカゲザルＴＮＦＲ２に対しては９７％同一である。

【0006】

ＴＮＦＲ１が遍在的に発現するのに対し、ＴＮＦＲ２の発現は主に免疫細胞に限定されており、腫瘍浸潤免疫抑制性ＣＤ４^＋ＦｏｘＰ３^＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）により、優勢にかつ高度に発現する。最近の研究では、ＴＮＦＲ２が、抗腫瘍免疫応答の主要なチェックポイントであるＴｒｅｇの活性化及び増殖の刺激において重要な役割を果たしていることが示されている（Ｃｈｅｎ ａｎｄ Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ，Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ １０：ｅａａｌ２３２８，２０１７）。ＴＮＦＲ２がそのリガンドのＴＮＦαを介し活性化することで、ＮＦｋＢシグナルが活性化し、ＴＮＦＲ２^＋Ｔｒｅｇが増殖する。ＴＮＦＲ２は、ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞ならびに骨髄細胞にも発現する。詳細には、ＴＮＦＲ２は、臨床的に検証された免疫チェックポイントと同様、疲弊ＣＤ８ Ｔ細胞に発現する。

【0007】

調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、多様な臨床用途を有するＴリンパ球の小さなサブセットである。その一方で、ＴＮＦＲ２^＋Ｔｒｅｇは免疫抑制性が高く、高度に抑制性のＣＤ１０３^＋Ｔｒｅｇよりも強力な抑制活性を有する（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７９：１５４－１６１，２００７；Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８０：６４６７－６４７１，２００８）。したがって、ＴＮＦＲ２^＋ Ｔｒｅｇは、Ｔｒｅｇの免疫抑制活性に依存する移植、アレルギー、喘息、感染性疾患、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、及び自己免疫などの治療に使用することができる。例えば、実験的ＧＶＨＤマウスモデルにおいては、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^ｈｉｇｈＦｏｘｐ３^＋胸腺由来Ｔｒｅｇの枯渇がＧＶＨＤを強化することができた（Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＪＥＭ ２００２）。

【0008】

ＴＮＦＲ２は、ある特定のがん（例えば、乳癌、子宮頚癌、結腸癌、及び腎臓癌）でも発現しており（Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：１１７０，２０１８）、これらのがんにおける免疫寛容に関与する可能性がある。これらのがん細胞の生存及び成長は、ＴＮＦＲ２（ＴＮＦα）のリガンドによって促進される。ＴＮＦＲ２は、腫瘍細胞内で異なるシグナル経路を用いることにより、腫瘍発生の様々なプロセスに関与することが示されている。例えば、核因子－κＢ（ＮＦκＢ）は、ＴＮＦＲ２に関連する上皮細胞の悪性転換に関与する。ＡＫＴシグナル伝達は、発がん、腫瘍成長、及び血管新生におけるＴＮＦＲ２のもう１つのメディエーターであることが示されている。一方、ミオシン軽鎖キナーゼ（ＭＬＣＫ）及び細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）も、上述のＴＮＦＲ２の機能にとって重要である。したがって、ＴＮＦＲ２の機能を阻害することにより、がん免疫におけるＴｒｅｇの機能を阻害し、抗腫瘍Ｔ細胞応答を増加させることができる。

【0009】

したがって、ＴＮＦＲ２^＋ＴｒｅｇのＴＮＦＲ２機能を刺激することによってＴｒｅｇの免疫抑制機能を増強して自己免疫障害を治療することができる、またはＴＮＦＲ２の活性化を阻害してがんなどの疾患を治療することができる治療試薬を開発する必要がある。

【発明の概要】

【0010】

１つの態様において、本発明は、単離されたモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントを提供し、当該単離されたモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントはヒトＴＮＦＲ２に特異的であり、当該単離されたモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントは、（１ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域と、（１ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域とを含む、または（２ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号１４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１５のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域と、（２ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号１７のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域とを含む、または（３ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号２６のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２７のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号２８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域と、（３ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号２９のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号３０のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３１のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域とを含む、または（４ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号３９のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４０のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号４１のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域と、（４ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号４２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４３のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号４４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域とを含む、または（５ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号５１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号５３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域と、（５ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号５４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号５６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域とを含む、または（６ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号６３のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６５のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域と、（６ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号６６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６７のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域とを含む。

【0011】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントにおいて、（１Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号７であり、及び／または（１Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号８である、あるいは（２Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号２０であり、及び／または（２Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号２１である、あるいは（３Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号３２であり、及び／または（３Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号３３である、あるいは（４Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号４５であり、及び／または（４Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号４６である、あるいは（５Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号５７であり、及び／または（５Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号５８である、あるいは（６Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号６９であり、及び／または（６Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号７０である。

【0012】

ある特定の実施形態において、モノクローナル抗体は、（１ａ）配列番号９の重鎖配列及び／または（１ｂ）配列番号１０の軽鎖配列、あるいは（２ａ）配列番号２２の重鎖配列及び／または（２ｂ）配列番号２３の軽鎖配列、あるいは（３ａ）配列番号３４の重鎖配列及び／または（３ｂ）配列番号３５の軽鎖配列、あるいは（４ａ）配列番号４７の重鎖配列及び／または（４ｂ）配列番号４８の軽鎖配列、あるいは（５ａ）配列番号５９の重鎖配列及び／または（５ｂ）配列番号６０の軽鎖配列、あるいは（６ａ）配列番号７１の重鎖配列及び／または（６ｂ）配列番号７２の軽鎖配列を有する。

【0013】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト－マウスキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、またはリサーフェスド抗体である。

【0014】

ある特定の実施形態において、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖ＦｖもしくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである。

【0015】

ある特定の実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、アカゲザルＴＮＦＲ２と交差反応するが、マウスＴＮＦＲ２とは実質的に交差反応しない。

【0016】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体の開発可能性を改善するように設計されているそのアミノ酸配列の１つ以上の点変異を含む。例えば、ある特定の実施形態において、１つ以上の点変異は、宿主細胞での発現、製造及び／または製剤化プロセスの間の精製、及び／または対象患者への投与の間、抗体をより安定にする。ある特定の実施形態において、１つ以上の点変異は、抗体を製造及び／または製剤化プロセスの間に凝集しにくくする。

【0017】

ある特定の実施形態において、本発明は、その配列（例えば、そのＣＤＲの１つ以上）内で１つ以上のアミノ酸を置換することにより、開発可能性の問題が最小化もしくは低減された（例えば、疎水性の除去もしくは低減、及び／または電荷の最適化）治療用抗体を提供する。

【0018】

ある特定の実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦＲ１と実質的に交差反応しない。

【0019】

ある特定の実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、約２５ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＫ_ｄでＴＮＦαに結合する。

【0020】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｔｒｅｇの存在下で、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を増強し、ＴＮＦα媒介性または共刺激ＮＦκＢシグナル伝達を（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）増強し、及び／またはＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を促進する。

【0021】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴｒｅｇでのＴＮＦα媒介性ＣＤ２５発現を増強する。

【0022】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３及び／または１０１のエピトープに結合する。

【0023】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を促進するか、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を阻害するか、またはＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合に明らかな影響を有しない。

【0024】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を遮断、阻害、または他の形で実質的にアンタゴナイズしない。

【0025】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントはＴＮＦＲ２のアゴニストであり、または（例えば、ＴＮＦαの存在下で）ＴＮＦＲ２シグナル伝達を刺激し、アゴニスト機能は好ましくはＦｃ非依存性である。

【0026】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＤ４^＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞、他のエフェクターＴ細胞、及び／またはＮＫ細胞を活性化する。

【0027】

本発明の別の態様は、配列番号１３及び／または１０１のエピトープとの結合に関し、主題の抗体のいずれか１つの単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0028】

本発明の別の態様は、配列番号１３及び／または１０１のエピトープに特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0029】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｔｒｅｇの存在下で、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を増強し、ＴＮＦα媒介性または共刺激ＮＦκＢシグナル伝達を（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）増強し、及び／またはＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を促進する。

【0030】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｔｒｅｇの存在下で、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を阻害し、ＴＮＦα媒介性または共刺激ＮＦκＢシグナル伝達を（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）阻害し、及び／またはＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を阻害する。

【0031】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｔｒｅｇの増殖を促進する。

【0032】

本発明の別の態様は、同じエピトープとの結合に関し、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントとが競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0033】

本発明の別の態様は、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、当該モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１０１を含む、それから本質的になる、またはそれからなるエピトープでヒトＴＮＦＲ２に特異的に結合し、任意選択で（ｏｐｔｉｎａｌｌｙ）、当該単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１３から本質的になる、またはそれからなるエピトープではヒトＴＮＦＲ２に結合しない、単離されたモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントを提供する。

【0034】

ある特定の実施形態において、（１）腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）において（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ ｈＴＮＦＲ２ノックインＭＣ３８マウス腫瘍モデルにおいて）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の活性化及び増殖を促進するが、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の活性化及び増殖を促進しない、及び／または（２）ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏでＮＫ細胞の活性化を促進する、請求項１９に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【0035】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、カニクイザルにおいて約１５０ｍｇ／ｋｇの最大耐量（ＭＴＤ）を有する。

【0036】

本発明の別の態様は、がんの治療を、それを必要とする患者において行う方法を提供し、当該方法は、患者に、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することを含み、患者（例えば、患者のがん）は、（ａ）前立腺癌患者における平均ＴＮＦＲ２発現レベルより高いレベルのＴＮＦＲ２発現（任意選択で、当該ＴＮＦＲ２発現は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋及び／またはＣＤ８^＋Ｔ細胞）、腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫ細胞において評価される）、ならびに（ｂ）ＡＭＬ患者における平均ＣＤ８Ａ発現レベルより高いレベルのＣＤ８Ａ発現を有する。

【0037】

ある特定の実施形態において、患者（例えば、患者のがん）は、腫瘍浸潤ＣＤ８Ａ＋（ＣＤ８α鎖陽性）Ｔ細胞において当該より高いレベルのＴＮＦＲ２発現を有する。

【0038】

ある特定の実施形態において、患者は、ＥＢＶ^＋胃癌（例えば、ＰＤ－Ｌ１／ＣＤ２７４発現が高い傾向にある胃腺癌）、明細胞腎細胞癌、腎臓明細胞癌（例えば、ＫＩＲＣ．２、ＫＩＲＣ．３、及びＫＩＲＣ．４サブタイプ、または明細胞Ｂタイプ（ｃｃＢ）サブタイプもしくはｃｃＡ／ｃｃＢ未分類サブタイプ）、皮膚黒色腫（例えば、皮膚黒色腫（例えば、ホットスポットＢＲＡＦ、Ｎ／Ｈ／Ｋ－ＲＡＳ、またはＮＦ１変異が欠如したいわゆるトリプルｗｔサブタイプ））、ＢＲＡＦホットスポット変異を伴うサブタイプ（Ｖ６００Ｅ、Ｖ６００Ｋ、及びＶ６００Ｒ変異、ならびにＫ６０１におけるホットスポット変異を含む）、ＲＡＳホットスポット変異を伴うサブタイプ（Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｈ、６１＿６２ＱＥ＞ＨＫ、ならびにＮＲＡＳにおけるＧ１２Ｒ／Ｄ／Ａ、Ｇ１３Ｒ／Ｄ、ならびにＨＲＡＳにおけるＧ１３Ｄ、Ｇ１３Ｓ、及びＱ６１Ｋ、ならびにＫＲＡＳにおけるＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、及びＱ６１Ｒを含む）、任意のＮＦ１変異を伴うサブタイプ、精巣胚細胞腫瘍、または軟部肉腫を有する。

【0039】

ある特定の実施形態において、がんは平均レベルより高レベルでＰＤ－Ｌ１を発現する。

【0040】

ある特定の実施形態において、がんは、子宮頚癌（例えば、子宮頚部扁平上皮癌または子宮頚部内膜腺癌）、胸膜中皮腫、肺腺癌、または頭頚部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ、例えば、非定型サブタイプ（その約４０％がＨＰＶ陽性である）及び間葉系サブタイプ（高いＰＤ－Ｌ１／ＣＤ２７４発現を有する傾向がある））である。

【0041】

ある特定の実施形態において、この方法は、患者に（ａ）ＰＤ－１に特異的な抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、セミプリマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、シンチリマブ、チスレリズマブ、トリパリマブ、ドスタルリマブ、及びＩＮＣＭＧＡ０００１２）、（ｂ）ＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、アベルマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、ＫＮ０３５、ＣＫ－３０１）、及び／または（ｃ）ＰＤ－Ｌ２に特異的な抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することをさらに含む。

【0042】

ある特定の実施形態において、患者は再発または難治性のがんを有し、及び／または過去に標準治療で治療された（さらに任意選択で、これに応答しなかったもしくは再発した）ことがある。

【0043】

ある特定の実施形態において、この方法は、患者に、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を、３週間に１回（Ｑ３Ｗ）、４週間に１回（Ｑ４Ｗ）、または５週間に１回（Ｑ５Ｗ）（例えば、４週間に１回またはＱ４Ｗ）投与することをさらに含む。

【0044】

ある特定の実施形態において、この方法は、患者に、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを４週間に１回（Ｑ４Ｗ）、約５ｍｇ、約１５ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、または約１５０ｍｇの用量で投与する（例えば、６０分かけて静脈内投与する）ことを含む。

【0045】

ある特定の実施形態において、この方法は、（１）投与ステップの前に、当該より高いレベルのＴＮＦＲ２発現及びＣＤ８Ａ発現を有する患者を選択すること、または（２）投与ステップの前に、患者が前記より高いレベルのＴＮＦＲ２発現及びＣＤ８Ａ発現を有することを確認することをさらに含む。

【0046】

本発明の別の態様は、がんの治療を、それを必要とする患者において行う方法を提供し、この方法は、患者に、配列番号１０１を含む、それから本質的になる、またはそれからなるエピトープでヒトＴＮＦＲ２に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することを含み、任意選択で、当該単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３から本質的になる、またはそれからなるエピトープではヒトＴＮＦＲ２に結合しない。

【0047】

本発明の別の態様は、がんまたは自己免疫障害（ＡＩＤ、例えば、ＧＶＨＤ（移植片対宿主病）及び関節リウマチ）の治療をそれを必要とする患者において行う方法を提供し、当該方法は、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を患者に投与することを含む。

【0048】

ある特定の実施形態において、この方法はＡＩＤを治療するためのものであり、この方法は、第２の薬剤、例えば、慢性ＧＶＨＤを治療する上での低用量抗ＩＬ２剤、または関節リウマチ、慢性斑状乾癬、クローン病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、多関節型若年性関節リウマチ、ＩＢＳ、ＥＡＥ、及び非感染性ぶどう膜炎を治療する上での抗ＴＮＦα剤（例えば、アダリムマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト、ゴリムマブなど）を投与することをさらに含む。

【0049】

ある特定の実施形態において、この方法はがんを治療するためのものであり、この方法は免疫チェックポイントのアンタゴニストを投与することをさらに含む。

【0050】

ある特定の実施形態において、免疫チェックポイントはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントである。

【0051】

ある特定の実施形態において、免疫チェックポイントのアンタゴニストは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合フラグメントである。

【0052】

ある特定の実施形態において、抗体は抗ＰＤ－１抗体、例えば、セミプリマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、シンチリマブ、チスレリズマブ、トリパリマブ、ドスタルリマブ、及びＩＮＣＭＧＡ０００１２である。

【0053】

ある特定の実施形態において、抗体は抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、アベルマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、ＫＮ０３５、またはＣＫ－３０１）である。

【0054】

ある特定の実施形態において、免疫チェックポイントのアンタゴニストは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の（非抗体）ペプチド阻害剤（例えば、ＡＵＮＰ１２）、ＰＤ－Ｌ１の低分子阻害剤（例えば、ＣＡ－１７０）、または大環状ペプチド（例えば、ＢＭＳ－９８６１８９）である。

【0055】

ある特定の実施形態において、がんは、乳癌、結腸癌、子宮頚癌、腎臓癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、黒色腫、皮膚癌（例えば、扁平上皮癌もしくは基底細胞癌）、リンパ腫、または白血病である。ある特定の実施形態において、がんは黒色腫である。

【0056】

ある特定の実施形態において、この方法は、化学療法剤、抗血管新生剤、成長阻害剤、がん免疫薬剤、及び／または抗新生物組成物を患者に投与することをさらに含む。

【0057】

本発明の別の態様は、本発明の重鎖もしくは軽鎖またはこれらの抗原結合部分をコードするポリヌクレオチドを提供する。

【0058】

ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドはヒト細胞内での発現にコドン最適化されている。

【0059】

本発明の別の態様は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。

【0060】

ある特定の実施形態において、ベクターは、発現ベクター（例えば、哺乳類発現ベクター、酵母発現ベクター、昆虫発現ベクター、または細菌発現ベクター）である。

【図面の簡単な説明】

【0061】

【図1】ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体ＨＦＢ３－１、－３、－６、－１４、－１８、－１９、－２０、－２１、－２２、－２３、－２４、及びＨＦＢ３－２５のＶＨ及びＶＬ領域における配列アラインメントならびにそのコンセンサス配列を示している。

【図2A】組換えヒトＴＮＦＲ２の細胞外ドメインに対し上昇した選択したヒト－マウスキメラモノクローナル抗体の結合親和性を示している。試験抗体及びアイソタイプマッチ陰性対照抗体のＥＣ_５０及びＥ_ｍａｘ値をヒトＴＮＦＲ２（ＣＨＯ．ｈＨＦＢ３）またはアカゲザルＴＮＦＲ２（ＣＨＯ．ｍｋＨＦＢ３）を発現するＣＨＯ細胞に対し測定した。

【図2B】異なる抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体が、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を促進（ＨＦＢ３－１）もしくは阻害（ＨＦＢ３－１８）し得る、または結合に影響を及ぼさない（ＨＦＢ３－６）ことを示している。

【図3】ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体が親ＣＨＯ細胞株に結合せず、マウスＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞にも結合しない（ただし、ＨＦＢ３－１８抗体及びＨＦＢ３－１９抗体によるわずかな結合を除く）ことを示している。

【図4A】ヒト－マウスキメラ抗体の結合特異性を示しており、具体的にはＴＮＦＲ２に対するものであり、ＴＮＦＲ１に対するものではない。

【図4B】ヒト－マウスキメラ抗体ＨＦＢ３－１、－１４、及び－１８のＨｉｓタグ化組換えヒトＴＮＦＲ２に対するＫ_ｄ、ｋ_ｏｎ、及びｋ_ｏｆｆ値を示している。

【図5】腫瘍浸潤リンパ球におけるＴ細胞サブタイプ、詳細には疲弊ＣＤ８ Ｔ細胞におけるＴＮＦＲ２の発現を示している。

【図6】ＴＣＲ活性化された（下パネル）及び非活性化された（上パネル）初代Ｔｒｅｇ、ＣＤ８、及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖでの抗ＴＮＦＲ２キメラモノクローナル抗体の細胞結合を示している。ＣＤ３／ＣＤ２８共刺激（ＴＣＲ活性化）により活性化された初代Ｔ細胞は、ＨＦＢ３抗体により優先的に認識される。

【図7】本発明のある特定のＨＦＢ３抗体（ＨＦＢ３－１、－１４、－１８、－２３、－２４、及び－２５を含む）がＮＦκＢシグナル伝達を誘発し、その効果がＴＮＦαリガンドの存在下で増強され得ることを示している。

【図8】ある特定の主題のモノクローナル抗体（ＨＦＢ３－１、－１４、－１８、及び－２５を含む）ならびにＣＤ３／ＣＤ２８による共刺激が、用量依存的にＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖの増殖をもたらしたことを示している。

【図9】本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ３－１のヒト化バージョンのＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１ＡＡ）が、Ｔｒｅｇの存在下でエフェクターＴ細胞（ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ）の細胞増殖に用量依存的に有利であったことを示している。

【図10】主題の抗ＴＮＦＲ２抗体のＡＤＣＣ効果の欠如を示している。

【図11A】ＴＮＦα結合部位を含むＴＮＦＲ２のＨｉｓタグ化細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ＨＦＢ２００３と称する）の様々な特徴、ならびにモノクローナル抗体ＨＦＢ３－１及びＨＦＢ３－１４、ならびにＨＦＢ３－１８（図１１Ａ）及びＨＦＢ３－６（図１１Ｂ）のいずれかにおけるエピトープマッピングの結果を示している。これらはヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を有するマウスキメラ抗体であるため、それぞれＨＦＢ３－１－ｈＧ１、ＨＦＢ３－１４－ｈＧ１、ＨＦＢ３－１８－ｈＧ１、またはＨＦＢ３－６－ｈＧ１とも称される。図１１Ｂには、ベンチマーク抗体ＳＢＴ－１及びＳＢＴ－４（ベンチマーク１及び２）におけるエピトープマッピングデータも含まれている。ＨＦＢ３－１抗体はＥＣＤのＣＲＤ２領域に結合し、ＨＦＢ３－１４及びＨＦＢ３－６はＥＣＤのＣＲＤ３領域に結合し、ＨＦＢ３－１８はＥＣＤのＣＲＤ１領域に結合する。

【図11B】ＴＮＦα結合部位を含むＴＮＦＲ２のＨｉｓタグ化細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ＨＦＢ２００３と称する）の様々な特徴、ならびにモノクローナル抗体ＨＦＢ３－１及びＨＦＢ３－１４、ならびにＨＦＢ３－１８（図１１Ａ）及びＨＦＢ３－６（図１１Ｂ）のいずれかにおけるエピトープマッピングの結果を示している。これらはヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を有するマウスキメラ抗体であるため、それぞれＨＦＢ３－１－ｈＧ１、ＨＦＢ３－１４－ｈＧ１、ＨＦＢ３－１８－ｈＧ１、またはＨＦＢ３－６－ｈＧ１とも称される。図１１Ｂには、ベンチマーク抗体ＳＢＴ－１及びＳＢＴ－４（ベンチマーク１及び２）におけるエピトープマッピングデータも含まれている。ＨＦＢ３－１抗体はＥＣＤのＣＲＤ２領域に結合し、ＨＦＢ３－１４及びＨＦＢ３－６はＥＣＤのＣＲＤ３領域に結合し、ＨＦＢ３－１８はＥＣＤのＣＲＤ１領域に結合する。

【図11C】より精緻化されたＨＦＢ３－１のエピトープマッピングデータを示している。潜在的なＨＦＢ３－１ｈＧ１エピトープ領域（配列番号１０１）が強調表示されており、２つの独立した実験で確認された。

【図11D】ＴＮＦＲ２－ＴＮＦα複合体におけるＨＦＢ３－１、ＨＦＢ３－１４、ＨＦＢ３－６、及びＨＦＢ－３－１８の結合部位を示す３Ｄモデルを示している。

【図12A】キメラモノクローナル抗体ＨＦＢ３－１、－１４、及び－１８のヒト化バリアントが、ヒトＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ｈＴＮＦＲ２）に結合するが、親ＣＨＯ細胞には結合しないことを示している。

【図12B】選択したヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の結合親和性を示している。試験ヒト化抗体及び親キメラ抗体におけるＥＣ_５０値を、ヒトＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ｈＨＦＢ３）に対し測定した。

【図13】選択したヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の結合親和性を示している。試験ヒト化抗体及び親キメラ抗体におけるＥＣ_５０値を、アカゲザルＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ｍｋＨＦＢ３）に対し測定した。

【図14A】ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体が組換えヒトＴＮＦＲ２及びカニクイザルＴＮＦＲ２に結合するが、組換えヒトＴＮＦＲ１には結合しないことを示している。

【図14B】ヒト化バリアントならびに親キメラモノクローナル抗体ＨＦＢ３－１及び－１４による組換えヒトＴＮＦＲ２に対する結合親和性の結果を、ＡＨＣ（抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ捕捉）バイオセンサーの測定値に基づいて示している。値は、異なる２日間で得られた２つの実験の平均とした。

【図14C】ＴＮＲＦ２発現／陽性ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ｈＴＮＦＲ２）に対する例示的なヒト化抗体ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の結合特異性を、親ＣＨＯ細胞（Ｂｍｋ １：ベンチマーク抗体１）と比較して示している。

【図15】ヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体とＴＣＲ活性化ＣＤ８ Ｔ細胞との細胞結合を示している。

【図16】ＴＣＲ活性化ＣＤ４ Ｔ細胞を増殖させるヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の共刺激効果を示している。

【図17A】ある特定のヒト化バリアント抗ＴＮＦＲ２抗体及びＴＮＦαを用いたＴｒｅｇの共刺激により、ＮＦκＢ下流シグナル伝達がもたらされたことを示している。

【図17B】組換えヒトＴＮＦαのありまたはなしでＨＦＢ３－１抗体のある特定のヒト化バリアントを用いたＣＤ８ Ｔ細胞におけるＮＦκＢシグナルの活性化を示している。「＊」は統計的有意性を示す。

【図18】主題のヒト化バリアント抗ＴＮＦＲ２抗体が保存下で安定していることを示している。

【図19】抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体ＨＦＢ３－１８（ただしＨＦＢ３－１及び－１４は該当しない）の共刺激初代Ｔ細胞に対するＦｃγＲ架橋依存性を示している。

【図20】ＴＮＦαの存在下または非存在下いずれかでのＣＤ８ Ｔ細胞の増殖における選択したヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体の確証的な共刺激効果を示している。

【図21A】ヒト化ＴＮＦＲ２ノックインＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞において、ＣＤ３／ＣＤ２８媒介性ＴＣＲ活性化及び２５ｎｇ／ｍＬ ＴＮＦαの存在下で、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体がｅｘ ｖｉｖｏで下流のＮＦκＢシグナル伝達を共刺激することを示している。

【図21B】ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６が、末梢ＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞に結合し（上パネル）、ＣＤ３／ＣＤ２８媒介性ＴＣＲ活性化の存在下で、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴ細胞増殖を用量依存的に刺激する（下パネル）ことを示している。

【図22】可溶性ＩＬ－２（１０ｎｇ／ｍＬ）及びＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍＬ）で刺激した後の、ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１抗体及び親ＨＦＢ３－１－ｈＧ１抗体による単離されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のｅｘ ｖｉｖｏ活性化を示している。実験のタイムラインは上パネルに示されている。ＣＤ１０７α及びＴＮＦＲ２の発現は、ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１及びＨＦＢ３－１－ｈＧ１によって用量依存的に上方調節されたが、アイソタイプ対照及び抗ＯＸ４０抗体（ＢＭＳ）は短期間のＮＫ活性化を誘発できなかった。

【図23】プレート結合抗ＣＤ３（１μｇ／ｍＬ）及び可溶性抗ＣＤ２８（１μｇ／ｍＬ）で刺激した後の、ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１及び親マウスＨＦＢ３－１－ｈＧ１による全末梢血単核球画分中のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のｅｘ ｖｉｖｏ活性化を示している。実験のタイムラインは上パネルに示されている。ＣＤ３^－／ＣＤ５６^＋細胞のうち、ＣＤ１０７α発現は、ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１及びＨＦＢ３－１－ｈＧ１によって用量依存的に上方調節されたが、対照の抗ＯＸ４０抗体（ＭＢＳ）は、短期間のＮＫ活性化を誘発できなかった。

【図24A】マウスＭＣ３８腫瘍モデルにおける薬力学的実験のタイムラインを示している。０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇの投与量における２回用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１、または１０ｍｇ／ｋｇにおけるアイソタイプマッチ対照抗体（ＴＴ）を３日空けて腹腔内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｏｎａｔａｌｌｙ）投与した。

【図24B】抗体の投与がＭＣ３８腫瘍における総免疫細胞カウントに及ぼすｉｎ ｖｉｖｏ効果を示している。１０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１－ｈＧ１投与により、ＣＤ４５^＋細胞の絶対細胞数が増加した。一元配置ＡＮＯＶＡ検定に基づくｐ値＜０．０５（＊）。

【図24C】ＭＣ３８腫瘍における様々な免疫細胞の細胞カウントに及ぼすｉｎ ｖｉｖｏ効果を示している。１０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１－ｈＧ１投与により、腫瘍微小環境におけるＣＤ８^＋、通常のＣＤ４^＋Ｔ及びＮＫ細胞の絶対細胞数が増加したが、調節性Ｔ細胞の数は変化しなかった。＊一元配置ＡＮＯＶＡ検定に基づくｐ値＜０．０５。

【図25A】腫瘍浸潤白血球において、注入抗体ＨＦＢ３－１－ｈＧ１（０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇの投与量）または対照抗体（１０ｍｇ／ｋｇの投与量）が占めるＴＮＦＲ２受容体のパーセンテージを示している。１０ｍｇ／ｋｇの用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１のみが薬物受容体占有をもたらした。一元配置ＡＮＯＶＡ検定に基づくｐ値＜０．０５（＊）、０．０１（＊＊）、または０．００１（＊＊＊）。

【図25B】選択した末梢血細胞において、注入抗体ＨＦＢ３－１－ｈＧ１（０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇの投与量）または対照抗体（１０ｍｇ／ｋｇの投与量）が占めるＴＮＦＲ２受容体のパーセンテージを示している。１０ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇの用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１は、同等の薬物受容体占有となった。一元配置ＡＮＯＶＡ検定に基づくｐ値＜０．０５（＊）、０．０１（＊＊）、または０．００１（＊＊＊）。

【図26A】図２４Ａにおける実験の４日目の血液中の抗体濃度を示している。１０ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇの用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１は血液中で検出可能であった。一元配置ＡＮＯＶＡ検定に基づくｐ値＜０．００１（＊＊＊）または０．０００１（＊＊＊＊）。

【図26B】図２４Ａにおける実験の４日目の血液中の可溶性ＴＮＦＲ２を示している。１０ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１－ｈＧ１投与により、血液中で検出可能なＴＮＦＲ２の量が増加した。一元配置ＡＮＯＶＡ検定に基づくｐ値＜０．００１（＊＊＊）または０．０００１（＊＊＊＊）。

【図27A】ヒト化モノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ３－１ｈｚ６及びＨＦＢ３－１８ｈｚ１）が、ラット抗ｍＰＤ－１モノクローナル抗体と比較して同様の治療有効性を有することを示している。

【図27B】ヒト化モノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ３－１ｈｚ６及びＨＦＢ３－１８ｈｚ１）が、ラット抗ｍＰＤ－１モノクローナル抗体と比較して同様の治療有効性を有することを示している。

【図28】ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６モノクローナル抗体が、マウス抗ｍＰＤ－１モノクローナル抗体と同様に、ＭＣ３８腫瘍モデルにおいて治療有効性を有することを示している。

【図29】ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６モノクローナル抗体が、２つの異なる用量（３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇ）において、腫瘍を有するマウスの腫瘍成長を阻害し、寿命を延長することと、ＨＦＢ３－１ｈｚ６及び抗ｍＰＤ－１抗体による併用治療が、抗ｍＰＤ－１単独での治療よりも良好に生存期間を延長することとを示している。

【図30A】ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６モノクローナル抗体が経時的にカニクイザルの体内から消失したこと（左パネル）と、注射から約２週間後に抗薬物抗体（ＡＤＡ）が観察されたこと（非ヒト霊長類において一般的である）（右パネル）とを示している。

【図30B】１５、５０、または１５０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１を注射した後に、３ｍｇ／ｋｇ以下のＣＤ３ｘＣＤ２０二重特異性ＩｇＧからの報告データ（点線）と比較して、サイトカインの上昇が観察されなかったことを示している。

【図31】１５、５０、または１５０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１を注射した後の細胞カウント解析を、正常なサルからの過去のデータ範囲（各パネル内の左右の線）と比較して示している。

【図32】ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６モノクローナル抗体が、Ｈｅｐａ１－６腫瘍モデルにおいて抗腫瘍有効性を有することを示している。

【図33A】ＴＮＦＲ２レベルに基づくＴＣＧＡデータベースにおける皮膚黒色腫（ＳＫＣＭ）患者のカプラン・マイヤー生存曲線を示している。

【図33B】ＴＮＦＲ２レベルに基づくＴＣＧＡデータベースにおける頭頚部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）患者のカプラン・マイヤー生存曲線を示している。

【図33C】ＴＮＦＲ２レベルに基づくＴＣＧＡデータベースにおける胸腺腫（ＴＨＹＭ）患者のカプラン・マイヤー生存曲線を示している。より高いＴＮＦＲ２の発現は、黒色腫及びＨＮＳＣの患者の生存期間改善と顕著に関連するが、ＴＨＹＭにおいては好ましいものではない。

【図34A】固形腫瘍を伴う複数のがんの患者のＴＣＧＡバルクＲＮＡ解析の例を示している。前立腺癌（ＰＲＡＤ）は低いＣＤ８Ａ及びＴＮＦＲ２の発現を有し、選択したがんタイプにおけるＴＮＦＲ２発現増加の陰性対照として使用することができる。ＡＭＬは低いＣＤ８Ａ（ただしＴＮＦＲ２は該当しない）の発現を有し、選択したがんタイプにおけるＣＤ８Ａ発現増加の陰性対照として使用することができる。

【図34B】固形腫瘍を伴う複数のがんの患者のＴＣＧＡバルクＲＮＡ解析の例を示している。前立腺癌（ＰＲＡＤ）は低いＣＤ８Ａ及びＴＮＦＲ２の発現を有し、選択したがんタイプにおけるＴＮＦＲ２発現増加の陰性対照として使用することができる。ＡＭＬは低いＣＤ８Ａ（ただしＴＮＦＲ２は該当しない）の発現を有し、選択したがんタイプにおけるＣＤ８Ａ発現増加の陰性対照として使用することができる。

【図35】高いＴＮＦＲ２発現（例えば、前立腺癌と比較して）及び高いＣＤ８Ａ発現（例えば、ＡＭＬと比較して）を伴うがんタイプのＴＣＧＡランキングを、ＴＮＦＲ２－高／ＣＤ８Ａ－高の患者試料の割合に基づいて示している。ＡＣＣ＝副腎皮質癌、ＢＬＣＡ＝膀胱尿路上皮癌、ＢＲＣＡ＝乳房浸潤癌、ＣＥＳＣ＝子宮頚部扁平上皮癌／子宮頚部内膜腺癌、ＣＨＯＬ＝胆管癌、ＣＯＡＤ＝結腸腺癌、ＥＢＶ＝エプスタイン－バーウイルス、ＥＳＣＡ＝食道癌、ＧＢＭ＝多形膠芽腫、ＨＮＳＣ＝頭頚部扁平上皮癌、ＫＩＣＨ＝腎臓嫌色素性、ＫＩＲＣ＝腎臓明細胞癌、ＫＩＲＰ＝腎臓乳頭細胞癌、ＬＧＧ＝脳低悪性度神経膠腫、ＬＩＨＣ＝肝臓肝細胞癌、ＬＵＡＤ＝肺腺癌、ＬＵＳＣ＝肺扁平上皮癌、ＭＥＳＯ＝胸膜中皮腫、ＯＶ＝卵巣漿液性嚢胞腺癌、ＰＡＡＤ＝膵臓腺癌、ＰＣＰＧ＝褐色細胞腫及び傍神経節腫、ＰＤ－Ｌ１＝プログラム死リガンド１、ＰＲＡＤ＝前立腺腺癌、ＲＥＡＤ＝直腸腺癌、ＳＡＲＣ＝肉腫、ＳＫＣＭ＝皮膚黒色腫、ＳＴＡＤ＝胃腺癌、ＴＧＣＴ＝精巣胚細胞腫瘍、ＴＨＣＡ＝甲状腺癌、ＵＣＥＣ＝子宮体部子宮内膜癌、ＵＣＳ＝子宮癌肉腫、ＵＶＭ＝ぶどう膜黒色腫。

【図36】選択した腎細胞癌（ＲＣＣ）、皮膚黒色腫（ＳＫＣＭ）、胃腺癌／胃癌（ＳＴＡＤ／ＧＩ）、肺腺癌（ＬＵＡＤ）、及び頭頚部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）についての分子サブタイプ解析を示している。

【発明を実施するための形態】

【0062】

１．概要
ＴＮＦＲ２は、がん免疫における有望な治療標的であることが最近明らかになっている。腫瘍微小環境（ＴＭＥ）における調節性及びエフェクターＴ細胞上でのＴＮＦＲ２発現は、Ｔ細胞の疲弊及び免疫チェックポイント遮断に対する抵抗性に関連している。本明細書に記載の発明は、抗がん剤として使用することができるヒトＴＮＦＲ２に対する抗体を提供する。いかなる特定の理論にも束縛されることは望まないが、エフェクターＴ細胞と主題の抗ＴＮＦＲ２抗体との共刺激は、エフェクターＴ細胞の抗腫瘍活性を増強すると考えられている。

【0063】

本明細書に記載の発明によれば、ヒトＴＮＦＲ２（ｒｈＴＮＦＲ２）の組換え細胞外ドメイン（ＥＣＤ）でマウスを免疫して、結合性、交差反応性、選択性、及び機能的活性について特性評価した一連の多様な抗体を生成した。抗体を、Ｔｒｅｇ細胞の存在下でＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋エフェクターＴ細胞の増殖を誘導する能力、ならびにＮＦｋＢシグナル伝達増加によって選択した。また、選択した抗体は、望ましくはｒｈＴＮＦＲ２のサルオルソログに対する交差反応性も示した。これは、動物におけるヒト治療薬の毒性試験にとって有益な特徴と考えられる。さらなる望ましい特徴としては、主題の抗体がヒト組換えＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を増強する能力が挙げられる。

【0064】

ヒトＴＮＦＲ２に対する結合親和性がナノモル以下または一桁ナノモルである２種のマウス抗体ＨＦＢ３－１及びＨＦＢ３－１４を、最初にさらなる特性評価及びヒト化のために選択した。エピトープマッピング実験から、これらの２種の抗体はＴＮＦＲ２の異なるドメインを認識し、ＨＦＢ３－１はＣＲＤ２ドメイン内の領域に結合し、ＨＦＢ３－１４はＣＲＤ３領域内に結合することが示された。しかし、結合部位が異なるにもかかわらず、いずれの抗体もＴＮＦＲ２に選択的であり、カニクイザル及びアカゲザルのオルソログと交差反応し、ヒト組換えＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を増強することに加えて、ＣＤ８及び通常ＣＤ４ Ｔ細胞（Ｔｃｏｎｖ）を刺激する。

【0065】

これらのマウス抗体のいくつかのヒト化バリアント（ＨＦＢ３－１ｈｚ６及びＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃを含む）は、それぞれの親抗体の結合及び交差反応性プロファイルを保持していた。ヒト化抗体は、ＴＣＲ活性化初代ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔ細胞に、非刺激Ｔ細胞に比べて優先的に結合し、Ｔ細胞のＣＤ３／ＣＤ２８誘導性活性化及び増殖を促進する。この共刺激性作用機構は架橋に依存しておらず、抗体がＮＦκＢシグナル伝達を増強し、ＮＦκＢ下流標的遺伝子の上方調節を誘導する能力と整合するものである。

【0066】

さらに、いずれのヒト化抗体（ＨＦＢ３－１ｈｚ６及びＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ）も、良好な開発可能性プロファイルを示し、高温、低ｐＨ条件下で、さらに数回の凍結融解サイクル後も安定している。リード抗体における良好な血漿曝露は、マウスモデルでも観察された。マウス腫瘍モデルにおけるこれらの抗体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性評価及び初期毒性解析が行われている。

【0067】

第３のマウスモノクローナル抗体のＨＦＢ３－１８（抗ｍＰＤ－１モノクローナル抗体よりもわずかに低い（二桁ｎＭ）結合親和性であるが、ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍成長を同じかそれ以上に阻害できる）も特定し、そのヒト化バージョンを作成した。

【0068】

これらの抗体の機能的プロファイルは、良好な開発可能性及び薬物動態学的プロファイルとともに、特にＴＮＦＲ２及びＣＤ８Ａの高い発現を示すある特定のがんタイプ及びサブタイプにおいて、がん患者に対する新規の免疫療法の選択肢として開発することを支持するものである。

【0069】

本発明の詳細な態様について、以下の各セクションでさらに個別に説明する。ただし、本発明の任意の１つの実施形態（実施例または図面でのみ説明される実施形態、及び以下の１つのセクションでのみ説明される実施形態を含む）が、本発明の任意の他の実施形態（複数可）と組み合わされてもよいことを理解されたい。

【0070】

本発明の詳細な態様について、以下の各セクションでさらに個別に説明する。ただし、本発明の任意の１つの実施形態（実施例または図面でのみ説明される実施形態、及び以下の１つのセクションでのみ説明される実施形態を含む）が、本発明の任意の他の実施形態（複数可）と組み合わされてもよいことを理解されたい。

【0071】

２．定義
「抗体」という用語は、最も広い意味では、限定されるものではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を含む様々な抗体構造を包含する。「抗体」という用語は、重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む分子も広く指すことがあり、この分子は抗原に結合可能である。また、「抗体」という用語には、限定されるものではないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、様々な種（例えば、マウス、ヒト、カニクイザルなど）の抗体も含まれる。

【0072】

ただし、狭義には、「抗体」とは、キメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、及びヒトモノクローナル抗体を含む様々なモノクローナル抗体、特に本発明のヒト化モノクローナル抗体を指す。

【0073】

いくつかの実施形態において、抗体は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１つの重鎖（ＨＣ）と、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１つの軽鎖（ＬＣ）とを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、２つの重鎖であって、各重鎖が、重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む、２つの重鎖と、２つの軽鎖であって、各軽鎖が、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む、２つの軽鎖とを含む。

【0074】

本明細書で使用する場合、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、または、例えば、６つ全てのＣＤＲ（３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲ）を含む単一のポリペプチド鎖を含む任意の他の抗体は、重鎖及び軽鎖を有するとみなされる。いくつかのこのような実施形態において、重鎖は、３つの重鎖ＣＤＲを含む抗体の領域であり、軽鎖は、３つの軽鎖ＣＤＲを含む抗体の領域である。

【0075】

本明細書で使用する場合、「重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）」という用語は、少なくとも、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）、フレームワーク２（ＨＦＲ２）、ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）、ＦＲ３（ＨＦＲ３）、及びＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む領域を指す。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域はまた、ＣＤＲ－Ｈ１に対しＮ末端側であるＦＲ１（ＨＦＲ１）の少なくとも一部（例えば、全体）、及び／またはＣＤＲ－Ｈ３に対しＣ末端側であるＦＲ４（ＨＦＲ４）の少なくとも一部（例えば、全体）も含む。

【0076】

本明細書で使用する場合、「重鎖定常領域」という用語は、少なくとも３つの重鎖定常ドメイン：ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む領域を指す。非限定的な例示的な重鎖定常領域としては、γ、δ、及びαが挙げられる。非限定的な例示的な重鎖定常領域としては、ε及びμも挙げられる。各重定常領域は、抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体はＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体はＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体はＩｇＡ抗体であり、ε定常領域を含む抗体はＩｇＥ抗体であり、μ定常領域を含む抗体はＩｇＭ抗体である。

【0077】

ある特定のアイソタイプは、さらにサブクラスに細分化され得る。例えば、ＩｇＧ抗体としては、限定されるものではないが、ＩｇＧ１抗体（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２抗体（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３抗体（γ３定常領域を含む）、及びＩｇＧ４抗体（γ４定常領域を含む）が挙げられ、ＩｇＡ抗体としては、限定されるものではないが、ＩｇＡｌ（α１定常領域を含む）抗体及びＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体が挙げられ、ＩｇＭ抗体としては、限定されるものではないが、ＩｇＭ１（μ１定常領域を含む）抗体及びＩｇＭ２（μ２定常領域を含む）抗体が挙げられる。

【0078】

本明細書で使用する場合、「重鎖」という用語は、少なくとも重鎖可変領域を含み、リーダー配列を含むまたは含まないポリペプチドを指す。いくつかの実施形態において、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書で使用する場合、「完全長重鎖」という用語は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含み、リーダー配列を含むまたは含まず、Ｃ末端リジンを含むまたは含まないポリペプチドを指す。

【0079】

本明細書で使用する場合、「軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）」という用語は、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）、フレームワーク（ＦＲ）２（ＬＦＲ２）、ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）、ＦＲ３（ＬＦＲ３）、及びＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む領域を指す。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域はまた、ＦＲ１（ＬＦＲ１）の少なくとも一部（例えば、全体）及び／またはＦＲ４（ＬＦＲ４）の少なくとも一部（例えば、全体）も含む。

【0080】

本明細書で使用する場合、「軽鎖定常領域」という用語は、軽鎖定常ドメインＣ_Ｌを含む領域を指す。非限定的な例示的な軽鎖定常領域としては、λ及びκが挙げられる。

【0081】

本明細書で使用する場合、「軽鎖」という用語は、少なくとも軽鎖可変領域を含み、リーダー配列を含むまたは含まないポリペプチドを指す。いくつかの実施形態において、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書で使用する場合、「完全長軽鎖」という用語は、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含み、リーダー配列を含むまたは含まないポリペプチドを指す。

【0082】

「抗体フラグメント」または「（抗体の）抗原結合部分」という用語は、限定されるものではないが、抗原に結合可能なフラグメント、例えば、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）_２を含む。ある特定の実施形態において、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ_ｄ、単鎖ＦｖもしくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆ_ｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ_２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ_２、（ｓｃＦｖ）_２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃを含む。

【0083】

「Ｆａｂ」という用語は、およそ５０，０００ダルトンの分子量の抗体フラグメントを指し、抗原に結合する活性を有する。これは、ジスルフィド架橋によって接続している重鎖のＮ末端側のおよそ半分及び軽鎖の全体を含む。Ｆａｂは、詳細には、免疫グロブリンをプロテアーゼのパパインで処理することにより得ることができる。

【0084】

「Ｆ（ａｂ’）_２」という用語は、およそ１００，０００ダルトンのフラグメント及び抗原に結合する活性を示す。このフラグメントは、ヒンジ領域内でジスルフィド橋を介し接続している２つのＦａｂフラグメントよりもわずかに大きい。これらのフラグメントは、免疫グロブリンをプロテアーゼのペプシンで処理することにより得られる。Ｆａｂフラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントから、ヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することにより得ることができる。

【0085】

Ｆｖ短鎖「ｓｃＦｖ」は、ＶＬ及びＶＨドメインをコードする遺伝子と、これらのドメインに結合するように意図されたペプチドをコードする配列とを用いて合成されたＶＨ：ＶＬポリペプチドに相当する。本発明によるｓｃＦｖは、例えば遺伝子組換え技法を用いて、適切な立体構造で維持されているＣＤＲを含む。

【0086】

「ｓｃＦｖ」の二量体は、ペプチド結合によって一緒に接続した２つのｓｃＦｖ分子に相当する。このＦｖ鎖はしばしば、ペプチドをコードするリンカー配列によって接続しているＶＨ及びＶＬをコードする遺伝子を含む融合遺伝子の発現の結果である。ヒトｓｃＦｖフラグメントは、好ましくは遺伝子組換え技法の使用により、適切な立体構造で維持されているＣＤＲ領域を含むことができる。

【0087】

「ｄｓＦｖ」フラグメントとは、ジスルフィド結合によって安定化されたＶＨ－ＶＬヘテロ二量体のことであり、二価（ｄｓＦＶ_２）の場合もある。二価のＳｃ（Ｆｖ）_２または多価抗体のフラグメントは、一価のｓｃＦｖの会合によって自然発生的に形成することもあれば、ペプチド結合配列によってｓｃＦｖフラグメントを接続することによって生成されることもある。

【0088】

Ｆｃフラグメントは、抗体の生物学的特性、詳細には免疫エフェクターにより認識される能力または補体を活性化する能力を支持するものである。これは、ヒンジ領域を超えた重鎖の定常フラグメントからなる。

【0089】

「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原固定部位を有する小さな抗体フラグメントを意味する。これらのフラグメントは、同じＶＨ－ＶＬポリペプチド鎖内で、可変軽鎖ドメインＶＬに接続した可変重鎖ドメインＶＨを含む。短いために同じ鎖の２つのドメインが一致しない結合配列を使用すると、
別の鎖の２つの相補的なドメインとの一致が必然的に生じるため、２つの抗原固定部位が作出される。

【0090】

参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、抗体競合アッセイによって決定することができる。これは、競合アッセイで参照抗体とその抗原との結合を５０％以上遮断する抗体を指し、逆に、参照抗体は、競合アッセイで当該抗体とその抗原との結合を５０％以上遮断する。「競合」という用語は、同じエピトープに関し競合する抗体の文脈で使用される場合、試験を行っている抗体が参照抗体と共通抗原との特異的結合を防止または阻害するアッセイにより、抗体間の競合が決定されることを意味する。

【0091】

多数のタイプの競合結合アッセイを使用することができ、例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２－２５３を参照）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４－３６１９を参照）；固相直接標識アッセイ；固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照）；Ｉ^１２５を用いた固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５を参照）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５５２を参照）；及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．を参照）を使用することができる。

【0092】

典型的には、このようなアッセイは、固体表面に結合した精製抗原か、または標識されていない試験抗原結合タンパク質及び標識された参照抗体のいずれかを有する細胞の使用を伴う。競合阻害は、試験抗体の存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を測定することによって測定される。通常、試験抗体は過剰に存在する。競合アッセイによって特定される抗体（競合抗体）としては、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、及び立体障害が生じるほど十分に近接して参照抗体が結合する隣接エピトープに結合する抗体が挙げられる。いくつかの実施形態において、競合抗体は、過剰に存在するときに、共通抗原に対する参照抗体との特異的結合を少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％阻害する。いくつかの場合において、結合は、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％、またはそれ以上阻害される。

【0093】

「抗原」という用語は、選択的結合剤（例えば、抗体またはその免疫学的に機能的なフラグメント）が結合可能であり、さらに、哺乳類に使用してその抗原に結合可能な抗体を生成可能である分子または分子の一部を指す。抗原は、抗体と相互作用可能な１つ以上のエピトープを有し得る。

【0094】

「エピトープ」という用語は、選択的結合剤（例えば、抗体またはそのフラグメント）によって結合される抗原分子の一部のことである。この用語は、抗体に特異的に結合可能な任意の決定基を含む。エピトープは、連続でも非連続でもよい（例えば、ポリペプチドの場合、アミノ酸残基は、ポリペプチド配列内で互いに連続していないが、分子の文脈内では抗原結合タンパク質によって結合している）。いくつかの実施形態において、エピトープは、抗体の生成に使用されるエピトープに類似する三次元構造を含むが、抗体の生成に使用されるエピトープに見られるアミノ酸残基を全くまたは一部しか含まないという点で模倣的であり得る。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面グルーピングを含み得、３次元構造特性及び／または特定の電荷特性を有し得る。

【0095】

いくつかの実施形態において、「エピトープ」は、その決定に使用される方法によって定義される。例えば、いくつかの実施形態において、抗体は、水素－重水素交換（ＨＤＸ）による定量において抗原の同じ領域に結合する場合、参照抗体と同じエピトープに結合する。

【0096】

ある特定の実施形態において、抗体は、Ｘ線結晶解析による定量において抗原の同じ領域に結合する場合、参照抗体と同じエピトープに結合する。

【0097】

本明細書で使用する場合、「キメラ抗体」とは、第１の種（例えば、マウス、ラット、カニクイザルなど）由来の少なくとも１つの可変領域と、第２の種（例えば、ヒト、カニクイザル、ニワトリなど）由来の少なくとも１つの定常領域とを含む抗体を指す。いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域と、少なくとも１つのヒト定常領域とを含む。いくつかの実施形態において、キメラ抗体の可変領域の全てが第１の種由来であり、キメラ抗体の定常領域の全てが第２の種由来である。

【0098】

本明細書で使用する場合、「ヒト化抗体」とは、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、カニクイザル、ニワトリなど）のフレームワーク領域内の少なくとも１つのアミノ酸が、ヒト可変領域由来の対応するアミノ酸で置き換えられた抗体を指す。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体フラグメントは、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）_２などである。

【0099】

本明細書で使用する場合、「ＣＤＲ移植抗体」とは、第１（非ヒト）の種の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）が第２（ヒト）の種のフレームワーク領域（ＦＲ）に移植されたヒト化抗体を指す。

【0100】

本明細書で使用する場合、「ヒト抗体」とは、ヒト内で生成された抗体、非ヒト動物内で生成されたヒト免疫グロブリン遺伝子を含む抗体（例えば、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標））、及びｉｎ ｖｉｔｒｏの方法（例えば、ファージディスプレイ）を用いて選択された抗体を指し、抗体レパートリーはヒト免疫グロブリン配列に基づく。

【0101】

「宿主細胞」とは、ベクターまたは単離されたポリヌクレオチドのレシピエントであり得るか、またはレシピエントであった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞であっても真核細胞であってもよい。例示的な真核細胞としては、哺乳類細胞（例えば、霊長類または非霊長類の動物細胞）、真菌細胞（例えば、酵母）、植物細胞、及び昆虫細胞が挙げられる。非限定的な例示的な哺乳類細胞としては、限定されるものではないが、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、ならびに２９３及びＣＨＯ細胞、ならびにこれらの誘導体（例えば、それぞれについて２９３－６Ｅ細胞及びＤＧ４４細胞）が挙げられる。

【0102】

本明細書で使用する場合、「単離された」という用語は、自然界で典型的に見られる構成要素の少なくとも一部から分離されたか、または典型的に生成される構成要素の少なくとも一部から分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それを生成した細胞の構成要素の少なくとも一部から分離された場合は、「単離された」と称される。ポリペプチドが発現後の細胞により分泌される場合、ポリペプチドを含む上清をそれを生成した細胞から物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離すること」とみなされる。同様に、ポリヌクレオチドは、自然界で典型的に見られるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合に、ゲノムＤＮＡまたはミトコンドリアＤＮＡ）の一部でないとき、または例えばＲＮＡポリヌクレオチドの場合に、それを生成した細胞の構成要素の少なくとも一部から分離されるとき、「単離された」と称される。したがって、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドが自然界でそのベクター内で見られない限り、「単離された」と称することができる。

【0103】

「対象」及び「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用され、ヒトなどの哺乳類を指す。いくつかの実施形態において、他の非ヒト哺乳類（限定されるものではないが、げっ歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳類実験動物、哺乳類家畜、哺乳類スポーツ動物、及び哺乳類ペットを含む）を治療する方法も提供される。いくつかの場合において、「対象」または「患者」とは、疾患または障害の治療を必要とする（ヒト）対象または患者を指す。

【0104】

本明細書で使用する場合、「試料」または「患者試料」という用語は、例えば物理的、生化学的、化学的、及び／または生理学的特徴に基づいて、特性決定及び／または特定されるべき細胞及び／または他の分子実体を含む、目的の対象から得られるか、またはそれに由来する物質を指す。例えば、「疾患試料」及びそのバリエーションという表現は、特性評価を行う細胞及び／または分子実体を含むことが予想される、またはそれが知られている目的の対象から得られる任意の試料を指す。

【0105】

「組織または細胞試料」とは、対象または患者の組織から得られた同様の細胞の集合を意味する。組織または細胞試料の供給源は、新鮮、凍結、及び／または保管された臓器もしくは組織試料または生検もしくは吸引液からの固形組織；血液または任意の血液組成成分；脳脊髄液、羊膜液、腹腔液、または組織液などの体液；対象の妊娠期間または発育における任意の時点からの細胞であり得る。また、組織試料は、初代または培養細胞であっても、細胞株であってもよい。任意選択で、組織または細胞試料は、疾患組織または臓器から得られる。組織試料は、自然界の組織とは天然には混ざり合わない化合物、例えば、防腐剤、抗凝固剤、緩衝液、固定剤、栄養素、抗生物質などを含んでもよい。

【0106】

本明細書で使用する場合、「参照試料」、「参照細胞」、または「参照組織」とは、本発明の方法または組成物がその特定を行うために使用されている疾患または状態に罹患していないことが知られている、またはそのように考えられる供給源から得られる試料、細胞、または組織を指す。１つの実施形態において、参照試料、参照細胞、または参照組織は、本発明の組成物または方法を用いて疾患または状態の特定を行っている同じ対象または患者の身体の健康な部分から得られる。１つの実施形態において、参照試料、参照細胞、または参照組織は、本発明の組成物または方法を用いて疾患または状態の特定を行っている対象でも患者でもない少なくとも１人の個体の身体の健康な部分から得られる。いくつかの実施形態において、参照試料、参照細胞、または参照組織は、疾患もしくは状態を発症する前に、または疾患もしくは状態の早期段階で、患者から以前に得られたものである。

【0107】

「障害」または「疾患」とは、本発明の１つ以上のＧａｌ－９アンタゴニストによる治療から利益を得られると考えられる任意の状態のことである。これには、慢性及び急性の障害または疾患（哺乳類を問題とされる障害に罹患しやすくする病的状態を含む）が含まれる。本明細書で治療の対象となる障害の非限定的な例としては、がんが挙げられる。

【0108】

「調節性Ｔリンパ球の抑制活性に関連する病気」とは、調節性Ｔリンパ球の抑制活性が、詳細にはその病気の発症または持続を促進することによって関与する任意の病気（自己免疫ではない）を意味する。詳細には、調節性Ｔリンパ球の抑制活性が腫瘍の発生を促進することが実証されている。そのため、本発明は、より詳細にはＴリンパ球の抑制活性が関与するがんに照準を定めている。

【0109】

「がん」という用語は、本明細書では、異常に高度の増殖及び成長を示す細胞群を指すために使用される。がんは、良性（良性腫瘍とも称される）、前悪性、または悪性であり得る。がん細胞は、固形癌細胞（すなわち、固形腫瘍を形成する細胞）または白血病癌細胞であり得る。「がん成長」という用語は、本明細書では、対応するがんのサイズまたは程度の増加をもたらすがんを構成する細胞（単数または複数）による増殖または成長を指す。

【0110】

がんの例としては、限定されるものではないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病またはリンパ系悪性腫瘍が挙げられる。このようながんのより詳細な非限定的な例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）癌、腎臓（ｒｅｎａｌ）癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、脳腫瘍、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、及び様々なタイプの頭頚部癌が挙げられる。

【0111】

ある特定の実施形態において、本明細書で使用する場合、がんは、血液癌（例えば、ＡＭＬ及びＤＬＢＣＬ）、または固形腫瘍（例えば、乳癌、頭頚部癌、肺癌、黒色腫（ぶどう膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎臓癌、卵巣癌、肝臓癌、及び前立腺癌）を含む。

【0112】

「化学療法剤」とは、がんの治療に有用であり得る化学化合物である。化学療法剤の例としては、限定されるものではないが、アルキル化剤、例えば、チオテパ及びＣｙｔｏｘａｎ（登録商標）シクロホスファミド；アルキルスルホネート、例えば、ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メツルドパ、及びウレドパ；エチレンイミン及びメチルアミン、例えば、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンエチオホスホルアミド、及びトリメチロールメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（詳細には、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９、及びＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン；抗生物質、例えば、エネジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１ｌ（ｇａｍｍａｌｌ）及びカリケアマイシンオメガ１ｌ（ｏｍｅｇａｌｌ）（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ ｌｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ，３３：１８３－１８６（１９９４）を参照））；ダイネミシン（ダイネミシンＡを含む）；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団及び関連する色素タンパク質エナジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗薬、例えば、メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗アドレナリン、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充物、例えば、フロリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルフォミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシノイド、例えば、マイタンシン及びアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、及びアンギジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、Ｔａｘｏｌ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）パクリタキセルのクレモフォールフリーアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、及びＴａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）ドセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；Ｇｅｍｚａｒ（登録商標）ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標）ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロン酸；イリノテカン（カンプトサール、ＣＰＴ－ １１）（５－ＦＵ及びロイコボリンを伴うイリノテカンの治療レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン（オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含む）；ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲの阻害剤（例えば、細胞増殖を低減するエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））及びＶＥＧＦ－Ａ阻害剤、ならびに上記のいずれかの医薬的に許容される塩、酸、または誘導体が挙げられる。

【0113】

さらに非限定的な例示的な化学療法剤としては、がんに対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、抗エストロゲン剤及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）（例えば、タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びＦａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）トレミフェン；副腎内でのエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、Ｍｅｇａｓｅ（登録商標）酢酸メゲストロール、Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）エキセメスタン、ホルメスタニー（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、Ｒｉｖｉｓｏｒ（登録商標）ボロゾール、Ｆｅｍａｒａ（登録商標）レトロゾール、及びＡｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）アナストロゾール；ならびに抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン；ならびにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、詳細には、例えば、ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｌｆ、Ｈ－Ｒａｓなどの異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの；リボザイム、例えば、ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ（登録商標）リボザイム）及びＨＥＲ２発現阻害剤；遺伝子治療ワクチンなどのワクチン、例えば、Ａｌｌｏｖｅｃｔｉｎ（登録商標）ワクチン、Ｌｅｕｖｅｃｔｉｎ（登録商標）ワクチン、及びＶａｘｉｄ（登録商標）ワクチン；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ｒＩＬ－２；Ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；Ａｂａｒｅｌｉｘ（登録商標）ｒｍＲＨ；ならびに上記のいずれかの医薬的に許容される塩、酸、または誘導体が挙げられる。

【0114】

「抗血管新生剤」または「血管新生阻害剤」とは、直接または間接のいずれかで血管新生、脈管形成、または望ましくない血管透過性を阻害する低分子量物質、ポリヌクレオチド（例えば、阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉもしくはｓｉＲＮＡ）を含む）、ポリペプチド、単離されたタンパク質、組換えタンパク質、抗体、またはこれらの結合体または融合タンパク質を指す。血管新生阻害剤には、血管新生因子またはその受容体の血管新生活性に結合し遮断する薬剤が含まれることを理解されたい。例えば、抗血管新生剤は、血管新生剤に対する抗体または他のアンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦ－Ａに対する抗体（例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）））またはＶＥＧＦ－Ａ受容体（例えば、ＫＤＲ受容体またはＦｌｔ－１受容体）に対する抗体、抗ＰＤＧＦＲ阻害剤、例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（メシル酸イマチニブ）、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を遮断する小分子（例えば、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）／ＳＵｌ１２４８（リンゴ酸スニチニブ）、ＡＭＧ７０６、または、例えば、国際特許出願第ＷＯ２００４／１１３３０４号に記載のもの）である。また抗血管新生剤には、ネイティブな血管新生阻害剤（例えば、アンジオスタチン、エンドスタチンなど）も含まれる。例えば、Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ ａｎｄ Ｄ’Ａｍｏｒｅ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３：２１７－３９；Ｓｔｒｅｉｔ ａｎｄ Ｄｅｔｍａｒ（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：３１７２－３１７９（例えば、悪性黒色腫における抗血管新生療法を列挙した表３）；Ｆｅｒｒａｒａ ＆ Ａｌｉｔａｌｏ（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５（１２）：１３５９－１３６４；Ｔｏｎｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：６５４９－６５５６（例えば、既知の抗血管新生因子を列挙した表２）；及びＳａｔｏ（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．８：２００－２０６（例えば、臨床試験に使用した抗血管新生剤を列挙した表１）を参照。

【0115】

本明細書で使用する場合、「成長阻害剤」とは、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで細胞（例えば、ＶＥＧＦを発現する細胞）の成長を阻害する化合物または組成物を指す。したがって、成長阻害剤は、Ｓ期の細胞（例えば、ＶＥＧＦを発現する細胞）のパーセンテージを顕著に低減するものであり得る。成長阻害剤の例としては、限定されるものではないが、（Ｓ期以外の段階で）細胞周期の進行を遮断する薬剤（例えば、Ｇ１停止及びＭ期停止を誘導する薬剤）が挙げられる。古典的なＭ期阻害薬としては、ビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシン）が挙げられる。Ｇ１を停止する薬剤、例えば、ＤＮＡアルキル化剤（例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、及びａｒａ－Ｃ）は、Ｓ期にも停止が及ぶ。さらなる情報は、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ａｎｄ Ｉｓｒａｅｌ，ｅｄｓ，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｃｈａｐｔｅｒ １，“Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ”（Ｍｕｒａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ．）（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）の、例えば１３ページに見出すことができる。タキサン（パクリタキセル及びドセタキセル）は、いずれもイチイの木に由来する抗がん薬物である。ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）は、ヨーロッパイチイに由来し、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成アナログである。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体からの微小管の集合を促進し、脱重合を防止することによって微小管を安定化させ、その結果、細胞内の有糸分裂を阻害する。

【0116】

「抗新生物組成物」という用語は、少なくとも１つの活性治療剤を含む、がんの治療に有用な組成物を指す。治療剤の例としては、限定されるものではないが、例えば、化学療法剤、成長阻害剤、細胞傷害剤、放射線療法に使用される薬剤、抗血管新生剤、がん免疫療法剤（がん免疫薬剤とも称される）、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、及びがんを治療するための他の薬剤、例えば、抗ＨＥＲ－２抗体、抗ＣＤ２０抗体、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、血小板由来成長因子阻害剤（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（イマチニブメシル酸塩））、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、ＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ抗体イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）））、ＰＤ－１阻害剤（例えば、抗ＰＤ１抗体、ＢＭＳ－９３６５５８）、ＰＤＬ１阻害剤（例えば、抗ＰＤＬ１抗体、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、ＰＤＬ２阻害剤（例えば、抗ＰＤＬ２抗体）、ＶＩＳＴＡ阻害剤（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）、サイトカイン、以下の標的：ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＰＤ－１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＣＴＬＡ４、ＶＩＳＴＡ、またはＶＥＧＦ受容体（複数可）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２のうちの１つ以上に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）、ならびに他の生物活性及び有機化学薬剤などが挙げられる。これらの組合せも本発明に含まれる。

【0117】

「治療」とは、例えば目的が、標的となる病的状態または障害を遅らせる（軽減する）ことである療法的治療、及び例えば目的が、病的状態または障害の再発を阻害することである療法的治療を指す。「治療」は、哺乳類（ヒトを含む）における疾患（本明細書では「障害」または「状態」とも称される）に対する治療薬の任意の投与または適用を網羅し、疾患もしくは疾患の進行を阻害すること、疾患もしくはその進行を抑制もしくは遅らせること、その発症を阻止すること、疾患を部分的もしくは完全に緩和すること、疾患の１つ以上の症状を部分的もしくは完全に緩和すること、喪失した、欠損した、もしくは不全な機能を回復もしくは修復すること、または非効率的なプロセスを刺激することを含む。また「治療」という用語は、任意の表現型特性の重症度を低減すること、及び／またはその特徴の発生率、程度、もしくは可能性を低減することも含む。治療を必要とする者には、既に障害を有する者に加えて、障害の再発のリスクがある者、または障害の再発を予防するか、もしくは遅らせるべき者も含まれる。

【0118】

「有効量」または「治療有効量」という用語は、対象における疾患または障害を治療するのに有効な薬物の量を指す。いくつかの実施形態において、有効量とは、所望の治療的または予防的結果の達成に必要な投与量及び期間における有効な量を指す。本発明の抗体の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、体重、及び個体において所望の応答を誘発するアンタゴニストの能力などの因子に応じて変化し得る。治療有効量は、主題抗体の任意の毒性または有害作用が治療的に有益な効果によって上回る量を包含する。

【0119】

「予防有効量」とは、所望の予防的結果を達成するのに必要な投与量及び期間の有効量を指す。典型的には、ただし必ずしもそうとは限らないが、予防用量は、疾患の前または疾患の早期段階の対象に使用されるため、予防有効量は、治療有効量よりも少なくなる。

【0120】

「医薬的に許容される担体」とは、対象に投与するための「医薬組成物」を一緒に構成する治療剤とともに使用するための、当技術分野で慣例的な無毒性の固体、半固体、または液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、製剤助剤、または担体を指す。医薬的に許容される担体は、用いられる投与量及び濃度においてレシピエントに無毒性であり、製剤の他の成分と適合性である。医薬的に許容される担体は、用いられる製剤に適切である。例えば、治療剤が経口投与される場合、担体はゲルカプセルとすることができる。治療剤が皮下投与される場合、担体は、理想的には皮膚に刺激性がなく、注射部位反応を引き起こさない。

【0121】

「製造品」とは、少なくとも１つの試薬（例えば、疾患もしくは障害の治療のための医薬品）、または本明細書に記載のバイオマーカーを特異的に検出するためのプローブを含む、任意の製造物（例えば、パッケージもしくは容器）またはキットのことである。いくつかの実施形態において、製造物またはキットは、本明細書に記載の方法を実施するための単位として販売促進、流通、または販売される。

【0122】

３．がんを治療する方法
本明細書に記載の発明は、ヒト及び他の非ヒト哺乳類を治療する方法に使用するための抗ＴＮＦＲ２抗体を提供する。

【0123】

病的な状況では、Ｔｒｅｇは、不適切な免疫抑制を引き起こし、それにより、例えば腫瘍の成長を促進することがある。Ｔｒｅｇは、とりわけエフェクターＴリンパ球の活性を不適切に阻害することにより、抗腫瘍免疫応答を低下させ、多数のがんタイプの発生を促進することに関係している。

【0124】

いくつかの実施形態において、がんを治療または予防するための方法であって、主題の抗ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかの有効量を、このような治療を必要とする対象に投与することを含む、方法が提供される。

【0125】

いくつかの実施形態において、がんを治療する方法であって、がんを有する対象に、主題の抗ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかを投与することを含む、方法が提供される。

【0126】

本発明の方法／使用によって治療可能ながんとしては、調節性Ｔリンパ球がその抑制活性を発揮するがん、例えば、比較的大量の調節性Ｔリンパ球が腫瘍組織または循環中に存在するがんが挙げられる。調節性Ｔリンパ球の増殖（Ｔｒｅｇの出現頻度により測定することができる）は、概してＴｒｅｇの活性化の増加と相関する。調節性Ｔリンパ球の出現頻度は、当技術分野で知られている任意の方法により（例えば、腫瘍内リンパ球もしくは循環リンパ球のフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）解析により、または腫瘍組織の免疫組織学的染色により）評価することができる。

【0127】

主題の抗ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかを用いて治療され得る非限定的な例示的ながん（癌腫、リンパ腫、胚腫、肉腫、及び白血病を含む）が本明細書で示される。このようながんのより詳細な非限定的な例としては、黒色腫、子宮頚癌、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵臓癌、膠芽腫、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）癌、腎臓（ｒｅｎａｌ）癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、脳腫瘍、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、及び様々なタイプの頭頚部癌が挙げられる。

【0128】

ある特定の実施形態において、がんは、黒色腫、乳癌、結腸癌、子宮頚癌、腎臓癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、皮膚癌（例えば、扁平上皮癌もしくは基底細胞癌）、リンパ腫、または白血病である。

【0129】

ある特定の実施形態において、がんは高いＴＮＦＲ２インデックスを有し、これは（ａ）腫瘍試料中の総ＣＤ８ Ｔ細胞数×ＣＤ８ Ｔ細胞でのＴＮＦＲ２発現、及び（ｂ）腫瘍試料中の総Ｔｒｅｇ細胞数×ＴｒｅｇでのＴＮＦＲ２発現の比として定義される。

【0130】

ある特定の実施形態において、がんは１超、例えば１．５超、２超、３超、４超、または５超のＴＮＦＲ２インデックスを有する。例えば、ある特定のがんにおける代表的なＴＮＦＲ２インデックスとしては、黒色腫における４．５７、乳癌における１．６７、ＮＳＣＬＣにおける１．０５、ＳＣＣにおける１．０３、ＢＣＣにおける０．７８、ＨＣＣにおける０．４６が挙げられる。

【0131】

ある特定の実施形態において、がんは約０．５～約１のＴＮＦＲ２インデックスを有する。

【0132】

ある特定の実施形態において、がんは、高い割合のＣＤ８ ＴＩＬ（腫瘍浸潤リンパ球）を有し、例えば、腫瘍内のＴ細胞の２０％超、２５％超、３０％超、３５％超、４０％超、４５％超、５０％超、５５％超、６０％超、またはそれ以上がＣＤ８ Ｔ細胞である。

【0133】

ある特定の実施形態において、がんは、腫瘍細胞において低いレベルのＴＮＦＲ２発現を有する。

【0134】

ある特定の実施形態において、がんは、免疫療法に感受性がある（例えば、炎症性がある）ことが知られており、例えば、黒色腫、ＮＳＣＬＣ、腎細胞癌、胃癌、大腸癌、尿路上皮癌、ＨＣＣ、頭頚部癌、及びホジキンリンパ腫がある。

【0135】

ある特定の実施形態において、がんは、腫瘍内疲弊Ｔ細胞（例えば、疲弊ＣＤ８ Ｔ細胞）において高いレベルのＴＮＦＲ２発現を有する。このようながんは、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニスト（例えば、任意の抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、本明細書に具体的に記載されている、または当技術分野で知られているもの））との併用療法により、治療することができる。

【0136】

ある特定の実施形態において、本発明の方法／使用は、高いレベルの調節性Ｔリンパ球が知られているがん、及び／またはがん／腫瘍が明らかに予後不良に関連するがん（慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸癌、黒色腫、子宮癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、中枢神経系の原発性リンパ腫、多発性骨髄腫、前立腺癌、ホジキンリンパ腫、または肝細胞癌を含む）を治療するために使用することができる。

【0137】

いくつかの実施形態において、がんは、血液癌（例えば、ＡＭＬ及びＤＬＢＣＬ）、または固形腫瘍（例えば、乳癌、頭頚部癌、肺癌、黒色腫（ぶどう膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎臓癌、卵巣癌、肝臓癌、及び前立腺癌）である。

【0138】

いくつかの実施形態において、がんはＢＣＣ、ＳＣＣ、黒色腫、大腸癌、またはＮＳＣＬＣである。

【0139】

ある特定の実施形態において、がんは、高いレベルのＴＮＦＲ２発現及びＣＤ８Ａ発現を有する。ある特定の実施形態において、高いもしくはより高いレベルのＴＮＦＲ２発現は、前立腺癌患者における平均ＴＮＦＲ２発現レベルに対する／比較したものであり、任意選択で、ＴＮＦＲ２発現は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞）、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫ細胞において評価され、及び／または高いもしくは高いレベルのＣＤ８Ａ発現は、ＡＭＬ患者における平均ＣＤ８Ａ発現レベルに対する／比較したものである。

【0140】

ある特定の実施形態において、患者（例えば、患者のがん）は、腫瘍浸潤ＣＤ８Ａ^＋（ＣＤ８α鎖陽性）Ｔ細胞において当該より高いレベルのＴＮＦＲ２発現を有する。

【0141】

ある特定の実施形態において、患者はＥＢＶ^＋胃癌を有する。

【0142】

ある特定の実施形態において、患者は胃腺癌（例えば、ＰＤ－Ｌ１／ＣＤ２７４発現が増加する／高い胃腺癌）を有する。

【0143】

ある特定の実施形態において、患者は明細胞腎細胞癌（ＲＣＣ）を有する。

【0144】

ある特定の実施形態において、患者は腎臓明細胞癌（ＫＩＲＣ）を有する。ある特定の実施形態において、患者はＫＩＲＣ．２、ＫＩＲＣ．３、またはＫＩＲＣ．４サブタイプを有する。ある特定の実施形態において、患者は明細胞Ｂタイプ（ｃｃＢ）サブタイプ、またはｃｃＡ（明細胞Ａタイプ）／ｃｃＢ未分類サブタイプを有する。

【0145】

ある特定の実施形態において、患者は皮膚黒色腫を有する。

【0146】

ある特定の実施形態において、患者は皮膚黒色腫（ＳＫＣＭ）を有する。

【0147】

ある特定の実施形態において、患者（ｐａｔｅｎｔ）は、ＢＲＡＦホットスポット変異（例えば、Ｖ６００Ｅ、Ｖ６００Ｋ、もしくはＶ６００Ｒ変異）またはＫ６０１におけるホットスポット変異を伴うサブタイプを有する。

【0148】

ある特定の実施形態において、患者はＲＡＳホットスポット変異を有する。ある特定の実施形態において、ＲＡＳホットスポット変異はＮＲＡＳホットスポット変異（例えば、Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｈ、６１＿６２ＱＥ＞ＨＫ、Ｇ１２Ｒ／Ｄ／Ａ、及びＧ１３Ｒ／Ｄ）である。ある特定の実施形態において、ＲＡＳホットスポット変異はＨＲＡＳホットスポット変異（例えば、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｓ、またはＱ６１Ｋ）である。ある特定の実施形態において、ＲＡＳホットスポット変異はＫＲＡＳホットスポット変異（例えば、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、またはＱ６１Ｒ）である。

【0149】

ある特定の実施形態において、患者は、任意のＮＦ１変異を伴うサブタイプを有する。

【0150】

ある特定の実施形態において、患者は、ホットスポットＢＲＡＦ、Ｎ／Ｈ／Ｋ－ＲＡＳ、またはＮＦ１変異が欠如したＳＫＣＭのトリプルｗｔサブタイプを有する。

【0151】

ある特定の実施形態において、患者は精巣胚細胞腫瘍を有する。

【0152】

ある特定の実施形態において、患者は軟部組織肉腫を有する。

【0153】

ある特定の実施形態において、がんは平均レベルより高レベルでＰＤ－Ｌ１を発現する。

【0154】

ある特定の実施形態において、がんは、子宮頚癌（例えば、子宮頚部扁平上皮癌もしくは子宮頚管内腺癌）、胸膜中皮腫、肺腺癌、または頭頚部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）である。

【0155】

ある特定の実施形態において、患者はＨＮＳＣサブタイプ（例えば、非定型サブタイプ）を有する。ある特定の実施形態において、非定型サブタイプＨＮＳＣはさらにＨＰＶ陽性である。

【0156】

ある特定の実施形態において、患者はＨＮＳＣ間葉系サブタイプを有する。ある特定の実施形態において、間葉系サブタイプは高いＰＤ－Ｌ１／ＣＤ２７４発現を有する。

【0157】

ある特定の実施形態において、本発明の方法／使用は、Ｃ型肝炎に起因する線維症の再発の治療に使用することができる。というのも、調節性Ｔリンパ球の出現頻度の増加が、このような線維症の再発を予測する因子であることも実証されているからである。

【0158】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体は単独で使用してもよく、あるいは疾患または適応症を治療できることが知られている他の好適な化合物と組み合わせて使用してもよい。

【0159】

したがって、本発明の特定の実施形態によれば、ＴＮＦＲ２に対し向けられ、先に定義したような調節性Ｔリンパ球のサプレッサー活性を阻害する抗体は、調節性Ｔリンパ球のサプレッサー活性に関連する疾患を治療するための第２の治療剤（例えば、抗がん剤）と組み合わせて使用される。

【0160】

すなわち、使用ががんの治療である場合、抗体は、例えば、手術、放射線療法、化学療法、またはこれらの組合せなどのがんに対する既知の療法と組み合わせて、使用することができる。例えば、この抗体は、腫瘍抗原（詳細には、ＥＢＶ抗原）に対するエフェクターリンパ球の１つ以上の注射からなる養子免疫療法と組み合わせて使用することができる。いくつかの態様によれば、がん療法のために本発明によるＴＮＦＲ２に対する抗体と組み合わせて使用される他の抗がん剤は、抗血管新生剤を含む。ある特定の態様によれば、抗体は、（サイトカイン、例えば、抗腫瘍免疫応答を刺激するサイトカイン）と同時投与することができる。

【0161】

このような併用療法において、本発明の抗体は、第２の治療剤の前、後、またはそれと同時に使用することができる。併用療法については、以下のさらなるセクションを参照されたい。

【0162】

４．投与経路及び担体
様々な実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、皮下または静脈内に投与することができる。分かりやすくするため、「主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体」とは、本発明のマウス－ヒトキメラ抗ＴＮＦＲ２抗体及びそのヒト化バリアントを指す。

【0163】

いくつかの実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏで、限定されるものではないが、経口、動脈内、非経口、鼻腔内、筋肉内、心臓内、脳室内、気管内、頬側、経直腸、腹腔内、吸入、皮内、局所、経皮、及び髄腔内、または他の方法（例えば、移植）を含む様々な経路により、投与することができる。

【0164】

いくつかの実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、静脈内または皮下により投与することができる。

【0165】

主題の抗体組成物は、固体、半固体、液体、または気体形態の調製物に製剤化することができ、このような調製物には、限定されるものではないが、錠剤、カプセル、粉末、粒剤、軟膏、溶液、坐薬、浣腸、注射液、吸入剤、及びエアロゾルが含まれる。

【0166】

様々な実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体を含む組成物は、多種多様な医薬的に許容される担体との製剤で提供される（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｗｉｔｈ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ ｅｄ．（２００３）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照）。ビヒクル、アジュバント、及び希釈剤を含む様々な医薬的に許容される担体が利用可能である。さらに、様々な医薬的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調整及び緩衝剤、張度調整剤、安定剤、湿潤剤なども利用可能である。非限定的な例示的な担体としては、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、及びこれらの組合せが挙げられる。

【0167】

様々な実施形態において、主題のＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、水性または非水性溶媒、例えば、植物油もしくは他の油、合成脂肪族酸グリセリド、より高級の脂肪族酸、またはプロピレングリコールのエステルに、所望に応じて可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、及び防腐剤とともに溶解、懸濁、または乳化することにより、注射用（皮下投与を含む）に製剤化することができる。

【0168】

様々な実施形態において、組成物は、加圧された許容される噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素など）を用いて、吸入用に製剤化することができる。

【0169】

また、組成物は、様々な実施形態において、例えば、生分解性または非生分解性ポリマーを用いて、持続放出マイクロカプセルに製剤化することもできる。非限定的な例示的な生分解性製剤としては、ポリ乳酸－グリコール酸（ＰＬＧＡ）ポリマーが挙げられる。非限定的な例示的な非生分解性製剤としては、ポリグリセリン脂肪酸エステルが挙げられる。このような製剤を作製するある特定の方法は、例えば、ＥＰ１１２５５８４Ａ１に記載されている。

【0170】

また、１つ以上の容器を含む医薬投与量パックであって、各々が主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の１つ以上の用量を含む、医薬投与量パックも提供される。いくつかの実施形態において、単位投与量であって、１つ以上のさらなる薬剤を伴ってまたは伴わずに、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体を含む組成物の所定量を含む、単位投与量が提供される。いくつかの実施形態において、このような単位投与量は、使い捨ての充填済み注射用シリンジで供給される。様々な実施形態において、単位投与量に含まれる組成物は、食塩水、スクロースなど、緩衝剤（例えば、リン酸）などを含むことができ、及び／または安定し有効なｐＨ範囲内で製剤化することができる。代替的に、いくつかの実施形態において、組成物は、適切な液体（例えば、滅菌水）を加えれば再構成することができる凍結乾燥粉末として提供することができる。いくつかの実施形態において、組成物は、タンパク質凝集を阻害する１つ以上の物質を含み、このような物質としては、限定されるものではないが、スクロース及びアルギニンが挙げられる。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ヘパリン及び／またはプロテオグリカンを含む。

【0171】

医薬組成物は、特定の適応症の治療または予防に有効な量で投与される。治療有効量は、典型的には、治療を行っている対象の体重、対象の身体または健康状態、治療を行う状態の広範さ、または治療を行っている対象の年齢に依存する。

【0172】

いくつかの実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量当たり約５０μｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量当たり約１００μｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量当たり約１００μｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量当たり約０．５ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与することができる。

【0173】

いくつかの実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量当たり約１０ｍｇ～約１，０００ｍｇの範囲の量で投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量当たり約２０ｍｇ～約５００ｍｇの範囲の量で投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量当たり約２０ｍｇ～約３００ｍｇの範囲の量で投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量当たり約２０ｍｇ～約２００ｍｇの範囲の量で投与することができる。

【0174】

主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体組成物は、必要に応じて対象に投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の有効用量は、１回以上対象に投与される。様々な実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の有効用量は、１か月に１回、１か月に１回未満、例えば、２か月ごと、３か月ごと、または６か月ごとに、対象に投与される。他の実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の有効用量は、１か月に複数回、例えば、２週間ごと、毎週、週に２回、週に３回、毎日、または１日に複数回投与される。主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の有効用量は、少なくとも１回対象に投与される。いくつかの実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の有効用量は、複数回（少なくとも１か月、少なくとも６か月、または少なくとも１年の期間を含む）投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、状態の１つ以上の症状を軽減するように必要に応じて対象に投与される。

【0175】

５．併用療法
本発明の主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体（その機能的フラグメントを含む）は、疾患の治療のために他の生物学的活性物質または他の治療手順と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することができる。例えば、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、単独で、または他の治療様式とともに投与することができる。これらは、他の治療様式（例えば、放射線療法）の前、実質的にそれと同時、またはその後に提供することができる。

【0176】

がんの治療において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、１つ以上の抗がん剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤、化学療法剤、成長阻害剤、抗血管新生剤、または抗新生物組成物）とともに投与することができる。

【0177】

ある特定の実施形態において、ＴＮＦＲ２に特異的に結合する主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体（「ＴＮＦＲ２結合アンタゴニスト」）、例えば、ＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体またはその抗原結合フラグメントは、第２のアンタゴニスト、例えば、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１経路の阻害剤）とともに、免疫系の刺激が有益と考えられる疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象に投与される。２つのアンタゴニストは、例えば、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体とがん免疫薬剤との組合せについて後述するように、同時にまたは連続して投与することができる。がんまたは自己免疫性疾患を治療するために、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体による治療に１つ以上の追加の治療薬、例えば、チェックポイントモジュレーターを加えることができる。

【0178】

ある特定の実施形態において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、別の治療と同時にまたは連続して、対象（例えば、がんを有する対象）に投与される。例えば、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、放射線療法、手術、または化学療法、例えば、標的化学療法または免疫療法のうちの１つ以上とともに投与することができる。

【0179】

ある特定の実施形態において、がんを有する対象を治療する方法は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び１つ以上のがん免疫薬剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）を対象に投与することを含む。

【0180】

免疫療法（例えば、がん免疫薬剤による療法）は、対象における免疫応答を増強、刺激、及び／または上方調節するのに有効である。１つの態様において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤）の投与は、がんの治療、例えば、腫瘍成長の阻害において、相乗効果を有する。

【0181】

１つの態様において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、がん免疫薬剤の投与前に、順次投与される。１つの態様において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、がん免疫薬剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤）と同時に投与される。また１つの態様において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、がん免疫薬剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤）の投与後に、順次投与される。２つの薬剤の投与は、例えば、３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日、もしくは１週間以上の間隔をおいた時点で開始してもよく、または第２の薬剤の投与は、例えば、第１の薬剤を投与してから３０分後、６０分後、９０分後、１２０分後、３時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、３日後、５日後、７日後、もしくは１週間後に開始してもよい。

【0182】

ある特定の態様において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤）は、同時に投与され、例えば、同時に、例えば、３０分間または６０分間にわたって患者に注入される。主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、がん免疫薬剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤）と共製剤化することができる。

【0183】

がん免疫薬剤としては、例えば、低分子薬物、抗体そのフラグメント、または他の生物製剤もしくは低分子が挙げられる。生物学的がん免疫薬剤の例としては、限定されるものではないが、抗体、抗体フラグメント、ワクチン、及びサイトカインが挙げられる。１つの態様において、抗体はモノクローナル抗体である。ある特定の態様において、モノクローナル抗体は、ヒト化またはヒト抗体である。

【0184】

１つの態様において、がん免疫薬剤は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞上の（ｉ）刺激性（共刺激性を含む）分子（例えば、受容体もしくはリガンド）のアゴニスト、または（ｉｉ）阻害性（共阻害性を含む）分子（例えば、受容体もしくはリガンド）のアンタゴニストであり、いずれも抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅をもたらす。ある特定の態様において、がん免疫薬剤は、（ｉ）自然免疫に関与する細胞（例えば、ＮＫ細胞）上の（ｉ）刺激性（共刺激性を含む）分子（例えば、受容体もしくはリガンド）のアゴニスト、または（ｉｉ）阻害性（共阻害性を含む）分子（例えば、受容体もしくはリガンド）のアンタゴニストであり、がん免疫薬剤は自然免疫を増強する。このようながん免疫薬剤は、しばしば免疫チェックポイント調節剤、例えば、免疫チェックポイント阻害剤または免疫チェックポイント刺激剤と称される。

【0185】

ある特定の実施形態において、がん免疫薬剤は、膜結合リガンドのＢ７ファミリーのメンバー（Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ１（ＰＤ－Ｌ１）、Ｂ７－ＤＣ（ＰＤ－Ｌ２）、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳ－Ｌ）、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５、及びＢ７－Ｈ６を含む）を標的とする（もしくはそれに特異的に結合する）薬剤、またはＢ７ファミリーのメンバーに特異的に結合する共刺激性もしくは共阻害性受容体であり得る。がん免疫薬剤は、膜結合リガンドのＴＮＦファミリーのメンバーを標的とする薬剤、またはそれに特異的に結合する共刺激性もしくは共阻害性受容体（例えば、ＴＮＦ受容体ファミリーのメンバー）であり得る。がん免疫薬剤によって標的とされ得る例示的なＴＮＦ及びＴＮＦＲファミリーメンバーとしては、ＣＤ４０及びＣＤ４０Ｌ、ＯＸ－４０、ＯＸ－４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２－Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎｌ４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴｆｉＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンパ毒素α／ΤΝΡβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦａ、ＬＴｆｉＲ、リンパ毒素ａ １β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ、ならびにＮＧＦＲが挙げられる。がんを治療するために主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と組み合わせて使用され得るがん免疫薬剤は、Ｂ７ファミリーメンバー、Ｂ７受容体ファミリーメンバー、ＴＮＦファミリーメンバー、またはＴＮＦＲファミリーメンバー（例えば、上述のもの）を標的とする薬剤、例えば、抗体であり得る。

【0186】

１つの態様において、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、（ｉ）Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質（例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤＩＨ、ＬＡＩＲｌ、ＴＩＭ－１、ＴＩＭ－４、及びＰＳＧＬ－１、ならびに（ｉｉ）ＰＳＧＬ－１、及びＰＳＧＬ－１）のアンタゴニスト（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）、ならびに（ｉｉ）Ｔ細胞活性化を刺激するタンパク質（例えば、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、及びＣＤ２８Ｈ）のアゴニストのうちの１つ以上とともに投与される。

【0187】

１つの態様において、がん免疫薬剤は、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－β、ＶＥＧＦ、及び他の免疫抑制性サイトカイン）を阻害する薬剤（すなわち、そのアンタゴニスト）、またはＴ細胞活性化を刺激するサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びＩＦＮα）のアゴニスト（例えば、サイトカイン自体）であり、免疫応答を刺激する。

【0188】

免疫系を刺激するために、例えば、がん及び感染性疾患の治療のために、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と組み合わせることができる他の薬剤としては、ＮＫ細胞上の阻害性受容体のアンタゴニストまたはＮＫ細胞上の活性化受容体のアゴニストが挙げられる。例えば、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、ＫＩＲのアンタゴニストと組み合わせることができる。

【0189】

併用療法のためのまた他の薬剤としては、マクロファージまたは単球を阻害するまたは枯渇させる薬剤が挙げられ、これには、限定されるものではないが、ＣＳＦ－ＩＲアンタゴニスト、例えば、ＲＧ７１５５（ＷＯ１１／７００２４、ＷＯ１１／１０７５５３、ＷＯ１１／１３１４０７、ＷＯ１３／８７６９９、ＷＯ１３／１１９７１６、ＷＯ１３／１３２０４４）またはＦＰＡ００８（ＷＯ１１／１４０２４９；ＷＯ１３１６９２６４；ＷＯ１４／０３６３５７）を含むＣＳＦ－ＩＲアンタゴニスト抗体が含まれる。

【0190】

がん免疫薬剤には、ＴＧＦ－βシグナル伝達を阻害する薬剤も含まれる。

【0191】

主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と組み合わせることができるさらなる薬剤としては、腫瘍抗原提示を増強する薬剤（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、及びＩｍｉｑｕｉｍｏｄ）、または腫瘍細胞の免疫原性を増強する療法（例えば、アントラサイクリン）が挙げられる。

【0192】

主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と組み合わせることができるまた他の療法としては、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させるまたは遮断する療法（例えば、ＣＤ２５に特異的に結合する薬剤）が挙げられる。

【0193】

主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と組み合わせることができる別の療法としては、代謝酵素（例えば、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素シンターゼ）を阻害する療法がある。

【0194】

使用され得る別のクラスの薬剤としては、アデノシンの形成を阻害する薬剤またはアデノシンＡ２Ａ受容体を阻害する薬剤が挙げられる。

【0195】

がんを治療するために主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と組み合わせることができる他の療法としては、Ｔ細胞のアレルギーまたは疲弊を回復／防止する療法、ならびに腫瘍部位での自然免疫活性化及び／または炎症を誘発する療法が挙げられる。

【0196】

主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、複数のがん免疫薬剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）と組み合わせることができ、例えば、以下のうちの１つ以上のような、免疫経路の複数のエレメントを標的とするコンビナトリアルアプローチと組み合わせることができる：腫瘍抗原提示を増強する療法（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）；例えば、ＣＴＬＡ－４及び／またはＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２経路を阻害することにより、及び／またはＴｒｅｇもしくは他の免疫抑制細胞を枯渇させるもしくは遮断することにより、負の免疫調節を阻害する療法；例えば、ＣＤ－１３７、ＯＸ－４０、及び／またはＧＩＴＲ経路を刺激する及び／またはＴ細胞のエフェクター機能を刺激するアゴニストを用いて、正の免疫調節を刺激する療法；抗腫瘍Ｔ細胞の出現頻度を全身的に増加させる療法；例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えば、ダクリズマブ）を用いて、またはｅｘ ｖｉｖｏ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって、Ｔｒｅｇ（例えば、腫瘍内のＴｒｅｇ）を枯渇させるまたは阻害する療法；腫瘍内のサプレッサー骨髄系細胞の機能に影響を及ぼす療法；腫瘍細胞の免疫原性を増強する療法（例えば、アントラサイクリン）；遺伝子修飾細胞（例えば、キメラ抗原受容体によって修飾された細胞（ＣＡＲ－Ｔ療法））を含む養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞移入；代謝酵素（例えば、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、一酸化窒素シンターゼ）を阻害する療法；Ｔ細胞のアネルギーまたは疲弊を回復／防止する療法；腫瘍部位における自然免疫活性化及び／または炎症を誘発する療法；免疫刺激性サイトカインの投与または免疫抑制性サイトカインの遮断。

【0197】

例えば、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、正の共刺激受容体をライゲーションする１つ以上のアゴニスト的薬剤；阻害性受容体を介しシグナル伝達を減弱させる１つ以上のアンタゴニスト（ブロッキング剤）（例えば、腫瘍微小環境内の独特の免疫抑制経路を克服するアンタゴニスト）（例えば、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ２相互作用の遮断）；抗腫瘍免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の出現頻度を全身的に増加させ、（例えば、ＣＤ２５を阻害することによって）Ｔｒｅｇを枯渇させるまたは阻害する１つ以上の薬剤；代謝酵素（例えば、ＩＤＯ）を阻害する１つ以上の薬剤；Ｔ細胞のアネルギーまたは疲弊を回復／防止する１つ以上の薬剤；ならびに腫瘍部位における自然免疫活性化及び／または炎症を誘発する１つ以上の薬剤、とともに使用することができる。

【0198】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＣＴＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト的ＣＴＬＡ－４抗体）である。好適なＣＴＬＡ－４抗体としては、例えば、ＹＥＲＶＯＹ（イピリムマブ）またはトレメリムマブが挙げられる。

【0199】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＰＤ－１アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト的ＰＤ－１抗体）である。好適なＰＤ－１抗体としては、例えば、ＯＰＤＩＶＯ（ニボルマブ）、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（ペムブロリズマブ）、またはＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４；ＷＯ２０１２／１４５４９３）が挙げられる。また、がん免疫薬剤にはピジリズマブ（ＣＴ－０１１）も含まれる。ＰＤ－１受容体を標的とする別のアプローチは、ＡＭＰ－２２４と呼ばれるＩｇＧｌのＦｃ部分と融合したＰＤ－Ｌ２の細胞外ドメイン（Ｂ７－ＤＣ）から構成された組換えタンパク質である。

【0200】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト的ＰＤ－Ｌ１抗体）である。好適なＰＤ－Ｌ１抗体としては、例えば、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６；ＷＯ２０１０／０７７６３４）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９（ＷＯ２００７／００５８７４）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（ＷＯ２０１３／７９１７４）、またはｒＨｉｇＭ１２Ｂ７が挙げられる。

【0201】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＬＡＧ－３アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト的ＬＡＧ－３抗体）である。好適なＬＡＧ３抗体としては、例えば、ＢＭＳ－９８６０１６（ＷＯ１０／１９５７０、ＷＯ１４／０８２１８）、またはＩＭＰ－７３１もしくはＩＭＰ－３２１（ＷＯ０８／１３２６０１、ＷＯ０９／４４２７３）が挙げられる。

【0202】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニスト（例えば、アゴニスト的ＣＤ１３７抗体）である。好適なＣＤ１３７抗体としては、例えば、ウレルマブまたはＰＦ－ ０５０８２５６６（Ｗ０１２／３２４３３）が挙げられる。

【0203】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＧＩＴＲアゴニスト（例えば、アゴニスト的ＧＩＴＲ抗体）である。好適なＧＩＴＲ抗体としては、例えば、ＴＲＸ－５１８（ＷＯ０６／１０５０２１、ＷＯ０９／００９１１６）、ＭＫ－４１６６（ＷＯ１１／０２８６８３）、またはＷＯ２０１５／０３１６６７に開示されているＧＩＴＲ抗体が挙げられる。

【0204】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＯＸ４０アゴニスト（例えば、アゴニスト的ＯＸ４０抗体）である。好適なＯＸ４０抗体としては、例えば、ＭＥＤＩ－６３８３、ＭＥＤＩ－６４６９、またはＭＯＸＲ０９１６（ＲＧ７８８８；ＷＯ０６／０２９８７９）が挙げられる。

【0205】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＣＤ４０アゴニスト（例えば、アゴニスト的ＣＤ４０抗体）である。ある特定の実施形態において、がん免疫薬剤はＣＤ４０アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト的ＣＤ４０抗体）である。好適なＣＤ４０抗体としては、例えば、ルカツムマブ（ＨＣＤ１２２）、ダセツズマブ（ＳＧＮ－４０）、ＣＰ－８７０，８９３、またはＣｈｉ Ｌｏｂ７／４が挙げられる。

【0206】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＣＤ２７アゴニスト（例えば、アゴニスト的ＣＤ２７抗体）である。好適なＣＤ２７抗体としては、例えば、バリルマブ（ＣＤＸ－１１２７）が挙げられる。

【0207】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤は（Ｂ７Ｈ３に対する）ＭＧＡ２７１である（ＷＯｌ １／１０９４００）。

【0208】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＫＩＲアンタゴニスト（例えば、リリルマブ）である。

【0209】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＩＤＯアンタゴニストである。好適なＩＤＯアンタゴニストとしては、例えば、ＩＮＣＢ－０２４３６０（ＷＯ２００６／１２２１５０、ＷＯ０７／７５５９８、ＷＯ０８／３６６５３、ＷＯ０８／３６６４２）、インドキシモド、ＮＬＧ－９１９（ＷＯ０９／７３６２０、ＷＯ０９／１１５６６５２、ＷＯｌ １／５６６５２、ＷＯ１２／１４２２３７）、またはＦ００１２８７が挙げられる。

【0210】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益を得られ得る疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することによって治療され、がん免疫薬剤は、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、例えば、ＴＬＲ２／４アゴニスト（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）；ＴＬＲ７アゴニスト（例えば、ＨｉｌｔｏｎｏｌもしくはＩｍｉｑｕｉｍｏｄ）；ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えば、Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）；またはＴＬＲ９アゴニスト（例えば、ＣｐＧ７９０９）である。

【0211】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤は、ＴＧＦ－β阻害剤、例えば、ＧＣ１００８、ＬＹ２１５７２９９、ＴＥＷ７１９７、またはＩＭＣ－ＴＲ１である。

【0212】

６．例示的な抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体
本明細書に記載の発明は、ＴＮＦＲ２に特異的なモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0213】

したがって、本発明の１つの態様は、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１３／１０１または３８のエピトープとの結合、またはＨＦＢ３－１８が結合するエピトープとの結合に関して、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかと競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0214】

例えば、ＨＦＢ３－１／ＨＦＢ３－１－ｈＧ１のエピトープは図１１Ａ～１１Ｃに示されている（図１１Ａ及び１１Ｂの配列番号１３、ならびに図１１Ｃの配列番号１０１）。

【0215】

本発明の関連する態様は、配列番号１３／１０１もしくは３８のエピトープ、またはＨＦＢ３－１８に結合されるエピトープに特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0216】

本発明の別の関連する態様は、単離されたモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントを提供し、当該単離されたモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントはヒトＴＮＦＲ２に特異的であり、当該単離されたモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントは、（１ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域と、（１ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域とを含む、または（２ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号１４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１５のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域と、（２ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号１７のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域とを含む、または（３ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号２６のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２７のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号２８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域と、（３ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号２９のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号３０のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３１のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域とを含む、または（４ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号３９のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４０のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号４１のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域と、（４ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号４２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４３のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号４４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域とを含む、または（５ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号５１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号５３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域と、（５ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号５４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号５６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域とを含む、または（６ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、配列番号６３のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６５のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域と、（６ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、配列番号６６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６７のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域とを含む。

【0217】

上記のいずれかの本発明の態様に関し、いくつかの実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントにおいて、（１Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号７であり、及び／または（１Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号８である、あるいは（２Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号２０であり、及び／または（２Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号２１である、あるいは（３Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号３２であり、及び／または（３Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号３３である、あるいは（４Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号４５であり、及び／または（４Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号４６である、あるいは（５Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号５７であり、及び／または（５Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号５８である、あるいは（６Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号６９であり、及び／または（６Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号７０である。

【0218】

いくつかの実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントは、（１ａ）配列番号９の重鎖配列及び／または（１ｂ）配列番号１０の軽鎖配列、あるいは（２ａ）配列番号２２の重鎖配列及び／または（２ｂ）配列番号２３の軽鎖配列、あるいは（３ａ）配列番号３４の重鎖配列及び／または（３ｂ）配列番号３５の軽鎖配列、あるいは（４ａ）配列番号４７の重鎖配列及び／または（４ｂ）配列番号４８の軽鎖配列、あるいは（５ａ）配列番号５９の重鎖配列及び／または（５ｂ）配列番号６０の軽鎖配列、あるいは（６ａ）配列番号７１の重鎖配列及び／または（６ｂ）配列番号７２の軽鎖配列を有する。

【0219】

本発明の抗体の配列の一部を以下に示す。
ＨＦＢ３－１－ｈＧ１（マウスモノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＳＹＳＦＴＤＹＮ（配列番号１）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＩＦＰＫＹＧＴＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号２）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＡＴＤＧＧＴＷＹＦＤＶ（配列番号３）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＳＳＶＴＹ（配列番号４）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＬＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡ（配列番号５）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＷＳＳＮＰＰＴ（配列番号６）
ＨＣＶＲは配列番号７であり、ＬＣＶＲは配列番号８である。
ＨＣ：ＥＦＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＳＹＳＦＴＤＹＮＭＮＷＶＫＱＳＮＧＫＳＬＥＷＩＧＩＩＦＰＫＹＧＴＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＱＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＴＤＧＧＴＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９）
ＬＣ：ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＬＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹＷＹＱＱＫＰＲＳＳＰＫＰＷＩＹＬＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＰＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０）
ＧＡＡＴＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＣＧＡＧＣＴＧＧＴＴＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＴＡＡＧＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＣＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＣＡＧＡＴＧＧＣＧＧＣＡＣＣＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＡＣＴＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＴＡＧＴＴＣＴＧＣＧＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号１１）
ＣＡＧＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＣＧＣＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＡＡＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＴＡＣＡＴＧＴＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＡＧＡＡＧＣＡＧＣＣＣＣＡＡＧＣＣＴＴＧＧＡＴＣＴＡＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＡＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＡＡＧＣＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＡＴＧＧＡＡＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＡＡＴＣＣＴＣＣＴＡＣＡＴＴＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号１２）
ＳＣＥＤＳＴＹＴＱＬＷＮＷＶＰＥＣＬＳ（配列番号１３）
ＳＣＥＤＳＴＹＴＱＬＷＮＷＶＰＥＣＬＳＣ（配列番号１０１）
ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１（ヒト化モノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＳＹＳＦＴＤＹＮ（配列番号１４）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＩＦＰＫＹＧＴＴＳＹＡＱＫＬＱＧ（配列番号１５）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＡＴＤＧＧＴＷＹＦＤＶ（配列番号１６）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＳＳＶＴＹ（配列番号１７）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＬＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳ（配列番号１８）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＷＳＳＮＰＰＴ（配列番号１９）
ＨＣＶＲは配列番号２０であり、ＬＣＶＲは配列番号２１である。
ＨＣ：ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＳＹＳＦＴＤＹＮＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＳＬＥＷＭＧＩＩＦＰＫＹＧＴＴＳＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＬＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＧＧＴＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２２）
ＬＣ：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＴＹＭＹＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＰＷＩＹＬＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＰＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２３）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＧＣＴＧＡＡＡＡＡＡＣＣＴＧＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＴＡＡＧＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＧＣＣＣＡＧＡＡＡＣＴＧＣＡＧＧＧＡＡＧＡＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＣＧＧＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＣＧＡＴＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＧＡＴＧＧＣＧＧＣＡＣＣＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＡＣＴＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＣＴＣＴＴＣＴＧＣＧＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号２４）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＧＣＴＴＴＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＴＡＣＡＴＧＴＡＧＡＧＣＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＴＡＴＡＴＧＴＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＣＴＴＧＧＡＴＣＴＡＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＡＡＴＣＣＴＣＣＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号２５）
ＨＦＢ３－１４－ｈＧ１（マウスモノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号２６）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＩＮＰＮＤＧＧＴＴＹＳＱＫＦＫＧ（配列番号２７）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＡＲＥＧＮＹＹＡＹＤＶＲＶＷＹＦＤＶ（配列番号２８）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＤＩＩＴＹ（配列番号２９）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＳＴＳＳＬＮＳＧＶＰＳ（配列番号３０）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＹＳＥＬＰＹＴ（配列番号３１）
ＨＣＶＲは配列番号３２であり、ＬＣＶＲは配列番号３３である。
ＨＣ：ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＲＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＤＧＧＴＴＹＳＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＥＧＮＹＹＡＹＤＶＲＶＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３４）
ＬＣ：ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＶＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＳＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＡＡＴＮＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３５）
ＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＣＧＡＧＣＴＧＧＴＴＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＣＧＡＣＡＴＣＡＡＣＣＣＣＡＡＴＧＡＴＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＴＴＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＧＧＧＣＡＡＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＧＡＣＧＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＴＡＧＴＴＣＴＧＣＧＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号３６）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＧＡＣＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＧＡＧＣＡＧＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧＴＡＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＴＣＴＴＧＣＴＧＡＴＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＡＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＣＴＴＴＴＧＧＧＧＣＡＣＣＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号３７）
ＣＡＰＬＲＫＣＲＰＧＦＧＶＡＲＰＧＴＥＴＳＤ（配列番号３８）
ＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ－ｈＧ１（ヒト化モノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号３９）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＩＮＰＮＤＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＡＲＥＧＮＹＹＡＹＤＶＲＶＷＹＦＤＶ（配列番号４１）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＤＩＩＴＹ（配列番号４２）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＳＴＳＳＬＮＳＧＶＰＳ（配列番号４３）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＹＳＥＬＰＹＴ（配列番号４４）
ＨＣＶＲは配列番号４５であり、ＬＣＶＲは配列番号４６である。
ＨＣ：ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＮＰＮＤＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＥＧＮＹＹＡＹＤＶＲＶＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４７）
ＬＣ：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＧＡＳＱＤＩＩＴＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＳＴＳＳＬＮＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＬＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４８）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＧＡＣＡＴＣＡＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＣＧＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＣＡＧＡＡＡＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＧＣＣＧＡＣＧＡＧＴＣＴＡＣＡＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＧＧＧＣＡＡＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＧＡＣＧＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＣＴＣＴＴＣＴＧＣＧＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号４９）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＡＴＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＧＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＡＣＡＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＴＧＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＴＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＣＧＧＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＣＡＡＣＴＣＣＣＡＡＧＡＧＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＴＣＴＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号５０）
ＨＦＢ３－１８－ｈＧ１（マウスモノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＧＦＴＦＳＤＡＷ（配列番号５１）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＶＲＮＫＡＮＮＨＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号５２）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＴＲＳＶＧＧＹＧＴＴＹＷＹＦＤＶ（配列番号５３）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＮＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹ（配列番号５４）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＧＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤ（配列番号５５）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＳＥＨＳＹＰＹＴ（配列番号５６）
ＨＣＶＲは配列番号５７であり、ＬＣＶＲは配列番号５８である。
ＨＣ：ＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＡＷＭＤＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＶＡＥＶＲＮＫＡＮＮＨＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＳＳＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＴＲＳＶＧＧＹＧＴＴＹＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５９）
ＬＣ：ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＳＶＳＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＮＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦＧＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＳＥＨＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号６０）
ＧＡＡＧＴＧＡＡＧＣＴＧＧＡＡＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＧＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＡＴＣＴＡＴＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＴＴＣＴＧＡＣＧＣＣＴＧＧＡＴＧＧＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＡＧＡＡＡＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＴＧＣＣＧＡＡＧＴＧＣＧＧＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＣＡＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＧＡＧＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＧＧＡＣＧＡＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＧＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＡＡＧＡＡＧＣＧＴＴＧＧＣＧＧＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＡＣＣＧＧＣＡＣＣＡＣＡＧＴＧＡＣＣＧＴＴＡＧＴＴＣＴＧＣＧＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号６１）
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＧＧＣＧＡＧＡＡＡＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＧＧＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＴＴＧＧＡＧＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＴＡＣＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＴＧＴＧＣＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＧＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＴＡＣＣＣＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号６２）
ＨＦＢ３－１８ｈｚ１－ｈＧ１（ヒト化モノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＧＦＴＦＳＤＡＷ（配列番号６３）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＶＲＮＫＡＮＮＨＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号６４）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＴＲＳＶＧＧＹＧＴＴＹＷＹＦＤＶ（配列番号６５）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＮＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹ（配列番号６６）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＧＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤ（配列番号６７）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＳＥＨＳＹＰＹＴ（配列番号６８）
ＨＣＶＲは配列番号６９であり、ＬＣＶＲは配列番号７０である。
ＨＣ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＡＷＭＤＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧＥＶＲＮＫＡＮＮＨＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＳＶＧＧＹＧＴＴＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７１）
ＬＣ：ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＮＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦＧＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＳＥＨＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号７２）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＴＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＴＴＣＣＧＡＣＧＣＴＴＧＧＡＴＧＧＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＴＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＧＴＴＧＧＡＧＡＡＧＴＧＣＧＧＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＣＡＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＧＧＡＣＧＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＴＣＴＧＴＴＧＧＣＧＧＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＴＴＣＴＴＣＴＧＣＧＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号７３）
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＴＡＧＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＧＧＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＴＴＧＧＡＧＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＴＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＧＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＴＡＣＣＣＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号７４）
ＲＰＧＷＹＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬＲＫＣＲＰＧＦＧＶＡＲＰＧＴＥＴＳＤ（配列番号７５）

【0220】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト－マウスキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、またはリサーフェスド抗体である。

【0221】

いくつかの実施形態において、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ_ｄ、単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆ_ｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ_２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ_２、（ｓｃＦｖ）_２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである。

【0222】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、免疫エフェクター機能を消失させる操作されたＦｃ領域を有する。例えば、主題の抗体の操作されたＦｃ領域は、「ＬＡＬＡ」二重変異（Ｌｅｕ２３４Ａｌａ及びＬｅｕ２３５Ａｌａ）を有するため、減弱したエフェクター機能を有し得る。

【0223】

このような抗体は、ＩｇＧ１にＬＡＬＡ二重変異を有するため、Ｇ１ＡＡという呼称を有することがある。

【0224】

Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）及び補体タンパク質Ｃ１ｑとの結合が部分的または完全に欠如しており、よって免疫エフェクター機能が消失している他の組換えヒトＩｇＧ抗体（ｈＩｇＧ）が当技術分野で知られており、ＦｃγＲ活性化及びＦｃ媒介性毒性を低減するために、様々な治療用途に使用されている。ある特定のこのようなＦｃ操作抗体／フラグメントはこの目標を部分的に達成するが、ＦｃγＲの活性化及びＦｃ媒介性毒性を完全に消失させるものもある。ある特定の実施形態において、本発明の抗体／フラグメントは、ＦｃγＲ及びＣ１ｑ相互作用が完全に消失し、ＦｃＲｎ相互作用及びＦｃ安定性が影響を受けていない、ｈＩｇＧ１－Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡまたはｈＩｇＧ４－Ｐ３２９Ｇ ＳＰＬＥ（ＩｇＧ４のヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅバリアント）変異を含む操作されたｈＩｇＧ Ｆｃドメインを有する。Ｐ３２９Ｇ Ｆｃ変異は、ＦｃγＲとのプロリンサンドイッチモチーフの形成を途絶させる。このモチーフは全てのＩｇＧ Ｆｃ／ＦｃγＲ複合体の界面に存在するため、その途絶は全てのヒト及び他のほとんどの哺乳類ＩｇＧサブクラスに適用して、エフェクターサイレントＩｇＧ分子を作出することができる。したがって、ある特定の実施形態において、主題の抗体／フラグメントは、このようなエフェクターサイレントＦｃ変異を伴ういずれか１つのＩｇＧサブクラスを有する。

【0225】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＮＦＲ２に特異的であり、例えば、ＴＮＦＲ１と実質的に交差反応しない、及び／またはマウスＴＮＦＲ２と実質的に交差反応しない。ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、サルＴＮＦＲ２（例えば、カニクイザルまたはアカゲザルＴＮＦＲ２）と交差反応する。

【0226】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントのｒｈＴＮＦＲ２に対する解離定数（Ｋ_ｄ）は、１μΜ以下、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）である。

【0227】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦＲ２のＣＲＤ２ドメイン内の領域に結合する。ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＦＢ３－１に結合されるエピトープに結合する。

【0228】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦＲ２のＣＲＤ３ドメイン内の領域に結合する。ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＦＢ３－１４に結合されるエピトープに結合する。

【0229】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＦＢ３－１８に結合されるエピトープに結合する。

【0230】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３／１０１または３８のエピトープに結合する。

【0231】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト組換えＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を増強する。

【0232】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト組換えＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を遮断する。

【0233】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト組換えＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合に実質的に影響を及ぼさない。

【0234】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦα媒介性シグナル伝達（例えば、ＮＦκＢシグナル伝達）を阻害し、及び／またはＮＦκＢ下流標的遺伝子の下方調節を誘導する。ただし、他の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦα媒介性シグナル伝達（例えば、ＮＦκＢシグナル伝達）を促進し、及び／またはＮＦκＢ下流標的遺伝子の上方調節を誘導する。

【0235】

いくつかの実施形態において、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）においてＮＦκＢシグナル伝達が刺激される。いくつかの他の実施形態において、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）においてＮＦκＢシグナル伝達が阻害される。

【0236】

いくつかの実施形態において、ＴｒｅｇにおいてＮＦκＢシグナル伝達が刺激される。いくつかの他の実施形態において、ＴｒｅｇにおいてＮＦκＢシグナル伝達が阻害される。

【0237】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、任意選択でＣＤ３／ＣＤ２８による共刺激の有無にかかわらず、及び／または任意選択でＴＮＦαによる共刺激の有無にかかわらず、ＣＤ８及び／または通常ＣＤ４ Ｔ細胞の増殖を刺激する。

【0238】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、詳細にはヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ＣＤ３／ＣＤ２８）ＴＣＲ活性化初代ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔ細胞に、非刺激初代ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔ細胞に比べて優先的に結合する。

【0239】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、詳細にはヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ３／ＣＤ２８誘導性活性化及び／または増殖（例えば、初代ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔ細胞のＣＤ３／ＣＤ２８誘導性活性化及び／または増殖（Ｔｒｅｇの存在下での初代ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔ細胞の活性化及び／または増殖を含む））を増強する。

【0240】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、詳細にはヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、架橋に非依存的に初代ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔ細胞の活性化及び／または増殖を共刺激する。

【0241】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、詳細にはヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、架橋に依存的に初代ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔ細胞の活性化及び／または増殖を共刺激する。

【0242】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｔｒｅｇの存在下で、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を増強し、ＴＮＦα媒介性または共刺激ＮＦκＢシグナル伝達を（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）増強し、及び／またはＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を促進する。

【0243】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴｒｅｇでのＴＮＦα媒介性ＣＤ２５発現を増強する。

【0244】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント（ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む）は、良好な開発可能性プロファイルを有し、これには、高温（例えば、２５℃もしくは４０℃）下で、低ｐＨ条件（例えば、およそ室温でｐＨ３．５）下で、及び／または数ラウンドの凍結／解凍サイクル後に安定であることが含まれる。

【0245】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント（ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む）は、抗体の開発可能性を改善するように設計されているアミノ酸配列の１つ以上の点変異を含む。例えば、Ｒａｙｂｏｕｌｄら（Ｆｉｖｅ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｄｅｖｅｌｏｐａｂｉｌｉｔｙ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ，ＰＮＡＳ １１６（１０）：４０２５－４０３０，０１９）は、可変ドメイン配列のダウンロード可能な相同性モデルを構築し、５つの開発可能性ガイドラインに対しこれらを試験し、有力な配列の傾向及び正準形を報告する計算ツールＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｆｉｌｅｒ（ＴＡＰ）について説明している。著者らはさらに、ＴＡＰをｏｐｉｇ．ｓｔａｔｓ．ｏｘ．ａｃ．ｕｋ／ｗｅｂａｐｐｓ／ｓａｂｄａｂ－ｓａｂｐｒｅｄ／ＴＡＰ．ｐｈｐで自由に利用できるように提供している。

【0246】

治療用ｍＡｂの開発には、抗原に対し所望される親和性を達成することの他にも多くの障壁が存在する。このような障壁としては、内在性免疫原性、化学的及び立体構造的不安定性、自己会合、高粘度、多特異性、及び発現不良が挙げられる。例えば、高レベルの疎水性は、特に高度に可変性の相補性決定領域（ＣＤＲ）において、凝集、粘度、及び多特異性に繰り返し関与している。重鎖及び軽鎖の可変ドメインの正味電荷における非対称性は、高濃度での自己会合及び粘度とも相関する。ＣＤＲの正負の電荷のパッチは、高いクリアランス率及び低い発現レベルに関連付けられる。生成物の不均一性（例えば、酸化、異性化、またはグリコシル化）は、しばしば翻訳後修飾または共翻訳修飾がされやすい特定の配列モチーフに起因する。配列傾向の特定を容易にする計算ツールが利用可能である。Ｗａｒｓｚａｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｂｙ ｔｈｅ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｒｉａｂｌｅ ｌｉｇｈｔ－ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ．ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ Ｂｉｏｌ１５（８）：ｅ１００７２０７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｃｂｉ．１００７２０７）も、可変軽鎖－重鎖界面の自動化設計により、抗体の親和性及び安定性を最適化する方法について説明している。候補抗体の潜在的な開発可能性の問題を特定するためのさらなる方法が利用可能であり、本発明の好ましい実施形態では、このような問題に対処して本発明の最適化された治療用抗体を導くために、従来の方法を介し候補抗体に１つ以上の点変異を導入することができる。

【0247】

７．ヒト化抗体
いくつかの実施形態において、本発明の抗体はヒト化抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト抗体に対するヒトの免疫応答（例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答）（これは、結果として抗体治療薬に対する免疫応答を生じ、治療薬の有効性を減少させる可能性がある）を低減または除去するため、治療用分子として有用である。

【0248】

抗体は、任意の標準的方法によりヒト化することができる。ヒト化の非限定的な例示的な方法としては、例えば、米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第６，１８０，３７０号；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－３６（１９８８）；及び米国公開第ＵＳ２００９／０１３６５００号に記載の方法が挙げられる。これらは全て、参照により援用される。

【0249】

ヒト化抗体とは、非ヒト可変領域のフレームワーク領域内の少なくとも１つのアミノ酸が、ヒトフレームワーク領域内の対応する位置に由来するアミノ酸で置き換えられた抗体のことである。いくつかの実施形態において、非ヒト可変領域のフレームワーク領域中の少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１５個、または少なくとも２０個のアミノ酸が、１つ以上のヒトフレームワーク領域内の１つ以上の対応する位置に由来するアミノ酸で置き換えられる。

【0250】

いくつかの実施形態において、置換に使用される対応するヒトアミノ酸の一部は、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子のフレームワーク領域に由来する。すなわち、いくつかのこのような実施形態において、非ヒトアミノ酸のうちの１つ以上が、第１のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの対応するアミノ酸で置き換えられても、第１のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされてもよく、非ヒトアミノ酸のうちの１つ以上が、第２のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの対応するアミノ酸で置き換えられても、第２のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされてもよく、非ヒトアミノ酸のうちの１つ以上が、第３のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの対応するアミノ酸で置き換えられても、第３のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされてもよい、などとなる。さらに、いくつかの実施形態において、単一のフレームワーク領域内、例えば、ＦＲ２内で置換に使用される対応するヒトアミノ酸の全てが、同じヒトフレームワーク由来である必要はない。ただし、いくつかの実施形態において、置換に使用される対応するヒトアミノ酸は全て、同じヒト抗体由来であるか、または同じヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされる。

【0251】

いくつかの実施形態において、抗体は、１つ以上のフレームワーク領域全体を対応するヒトフレームワーク領域で置き換えることによってヒト化される。いくつかの実施形態において、置換される非ヒトフレームワーク領域に対し最も高レベルの相同性を有するヒトフレームワーク領域が選択される。いくつかの実施形態において、このようなヒト化抗体はＣＤＲ移植抗体である。

【0252】

いくつかの実施形態において、ＣＤＲ移植に続いて、１つ以上のフレームワークアミノ酸が、マウスフレームワーク領域内の対応するアミノ酸に戻される。このような「復帰変異」は、いくつかの実施形態において、１つ以上のＣＤＲの構造に寄与すると思われる、及び／または抗原接触に関与すると思われる、及び／または抗体の全体的な構造的完全性に関与すると思われる１つ以上のマウスフレームワークアミノ酸を保持するために行われる。いくつかの実施形態において、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下、１、またはゼロの復帰変異が、ＣＤＲ移植後に抗体のフレームワーク領域に対し行われる。

【0253】

いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト重鎖定常領域及び／またはヒト軽鎖定常領域も含む。

【0254】

８．ヒト抗体
いくつかの実施形態において、本発明の抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、任意の好適な方法により作製することができる。非限定的な例示的な方法としては、ヒト免疫グロブリン座位を含むトランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を作製することが挙げられる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２５５１－５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５－８（１９９３）；ｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－９（１９９４）；ならびに米国特許第５，５４５，８０７号；同第６，７１３，６１０号；同第６，６７３，９８６号；同第６，１６２，９６３号；同第５，５４５，８０７号；同第６，３００，１２９号；同第６，２５５，４５８号；同第５，８７７，３９７号；同第５，８７４，２９９号；及び同第５，５４５，８０６号を参照。

【0255】

非限定的な例示的な方法としては、ファージディスプレイライブラリーを用いてヒト抗体を作製することも挙げられる。例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１－８（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－９７（１９９１）；及びＰＣＴ公開第ＷＯ９９／１０４９４号を参照。

【0256】

抗体定常領域
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されるアイソタイプである。いくつかの実施形態において、ヒト軽鎖定常領域は、Ｋ及びλから選択されるアイソタイプである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはＦｃ融合パートナーは、例えばＩｇＧ１定常領域内に、Ｃ２３７Ｓ変異を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。いくつかのこのような実施形態において、ＩｇＧ２定常領域は、米国特許第６，９００，２９２号に記載のようなＰ３３１Ｓ変異を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかのこのような実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域内にＳ２４１Ｐ変異を含む。例えば、Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１）：１０５－１０８（１９９３）を参照。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。

【0257】

重鎖定常領域の選択により、抗体がｉｎ ｖｉｖｏでエフェクター機能を有するか否かが決定され得る。このようなエフェクター機能は、いくつかの実施形態において、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含み、抗体が結合する細胞の殺滅をもたらし得る。典型的には、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３重鎖を含む抗体は、エフェクター機能を有する。

【0258】

いくつかの実施形態において、エフェクター機能は望ましくない。例えば、いくつかの実施形態において、炎症性疾患及び／または自己免疫性疾患の治療において、エフェクター機能は望ましくないことがある。いくつかのこのような実施形態において、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域が選択または操作される。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域は、Ｓ２４１Ｐ変異を含む。

【0259】

本明細書に記載の抗体はいずれも、任意の好適な方法により精製することができる。このような方法としては、限定されるものではないが、アフィニティーマトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が挙げられる。好適な親和性リガンドとしては、抗体が結合する抗原及び／またはエピトープ、ならびに抗体定常領域に結合するリガンドが挙げられる。例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、または抗体アフィニティーカラムを使用して定常領域に結合させ、抗体を精製することができる。

【0260】

いくつかの実施形態において、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、例えばブチルまたはフェニルカラムも、いくつかのポリペプチドを精製するために使用される。ポリペプチドを精製する多くの方法が当技術分野で知られている。

【0261】

代替的に、いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、無細胞系で生成される。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４９８：２２９－４４（２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５３８－４５（２００４）；Ｅｎｄｏ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．２１：６９５－７１３（２００３）に記載されている。

【0262】

９．本発明の抗体をコードする核酸分子
本発明は、本明細書に記載の抗体の１つ以上の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子も提供する。いくつかの実施形態において、核酸分子は、本明細書に記載の抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、核酸分子は、本明細書に記載の抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド及び軽鎖をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。いくつかの実施形態において、第１の核酸分子は、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子は、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。

【0263】

いくつかのこのような実施形態において、重鎖及び軽鎖は、１つの核酸分子から、または２つの別々の核酸分子から、２つの別々のポリペプチドとして発現する。いくつかの実施形態において、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合、単一のポリヌクレオチドが、一緒に結合した重鎖及び軽鎖の両方を含む単一のポリペプチドをコードする。

【0264】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、翻訳されたときに重鎖または軽鎖のＮ末端に位置するリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。上記で説明したように、リーダー配列は、ネイティブの重鎖または軽鎖リーダー配列であっても、別の異種リーダー配列であってもよい。

【0265】

核酸分子は、当技術分野で慣例的な組換えＤＮＡ技法を用いて構築することができる。いくつかの実施形態において、核酸分子は、選択された宿主細胞（例えば、哺乳類細胞）での発現に適した発現ベクターである。

【0266】

１０．ベクター
本明細書に記載の抗体の重鎖及び／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。このようなベクターとしては、限定されるものではないが、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが挙げられる。いくつかの実施形態において、ベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列と、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列とを含む。いくつかの実施形態において、重鎖及び軽鎖は、２つの別々のポリペプチドとしてベクターから発現する。いくつかの実施形態において、重鎖及び軽鎖は、例えば、抗体がｓｃＦｖであるとき、単一のポリペプチドの一部として発現ｓｙｒｙ。

【0267】

いくつかの実施形態において、第１のベクターは、重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは、軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、第１のベクター及び第２のベクターは、同様の量（例えば、同様のモル量または同様の質量）で宿主細胞内に形質移入される。いくつかの実施形態において、５：１～１：５の第１のベクター及び第２のベクターのモル比または質量比で、宿主細胞内に形質移入される。いくつかの実施形態において、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターに対し、１：１～１：５の質量比が使用される。いくつかの実施形態において、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターに対し、１：２の質量比が使用される。

【0268】

いくつかの実施形態において、ＣＨＯもしくはＣＨＯ由来細胞、またはＮＳＯ細胞でのポリペプチドの発現に最適化されているベクターが選択される。例示的なこのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｄｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０－８８９（２００４）に記載されている。いくつかの実施形態において、ベクターは、動物（ヒトを含む）における主題抗体のｉｎ ｖｉｖｏ発現のために選択される。いくつかのこのような実施形態において、ポリペプチド（単数または複数）の発現は、組織特異的な方式で機能するプロモーター（単数または複数）の制御下にある。例えば、肝臓特異的プロモーターについては、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ ２００６／０７６２８８号に記載されている。

【0269】

１１．宿主細胞
様々な実施形態において、本明細書に記載の抗体の重鎖及び／または軽鎖は、原核細胞（例えば、細菌細胞）、または真核細胞（例えば、真菌細胞（例えば、酵母）、植物細胞、昆虫細胞、及び哺乳類細胞）内で発現することができる。このような発現は、例えば、当技術分野で知られている手順に従って行うことができる。

【0270】

ポリペプチドを発現するために使用することができる例示的な真核細胞としては、限定されるものではないが、ＣＯＳ細胞（ＣＯＳ ７細胞を含む）、２９３細胞（２９３－６Ｅ細胞を含む）、ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｓ細胞及びＤＧ４４細胞を含む）、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、ならびにＮＳＯ細胞が挙げられる。

【0271】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体の重鎖及び／または軽鎖は、酵母内で発現することができる。例えば、米国公開第ＵＳ２００６／０２７００４５Ａ１を参照。いくつかの実施形態において、特定の真核宿主細胞は、ＴＮＦＲ２抗体の重鎖及び／または軽鎖に対し所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施形態において、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞で生成される同じポリペプチドよりも高いレベルのシアリル化を有するポリペプチドを生成する。

【0272】

１つ以上の核酸の所望の宿主細胞内への導入は、限定されるものではないが、リン酸カルシウム形質移入、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介形質移入、カチオン性脂質媒介形質移入、エレクトロポレーション、遺伝子導入、感染などを含む任意の方法によって達成することができる。非限定的な例示的な方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記載されている。核酸は、任意の好適な方法に従って、所望の宿主細胞に一過性または安定的に形質移入することができる。

【0273】

いくつかの実施形態において、１つ以上のポリペプチドは、任意の好適な方法に従って、そのポリペプチドをコードする１つ以上の核酸分子で操作または形質移入された動物において、ｉｎ ｖｉｖｏで生成することができる。

【実施例】

【0274】

実施例１：ヒト及びサルＴＮＦＲ２に特異的なモノクローナル抗体
サルのオルソログＴＮＦＲ２に対する交差反応性を有するヒトＴＮＦＲ２に特異的なモノクローナル抗体を産生するため、標準的な手順を用いてヒトＴＮＦＲ２の組換え細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ｒｈＴＮＦＲ２）でマウスを免疫して、一連の多様なヒト－マウスキメラモノクローナル抗体を作成した。

【0275】

少なくとも２５種のこのようなモノクローナル抗体を作成し、選択した抗体のＶＨ及びＶＬ配列をアラインメントし、図１に示すようなコンセンサス配列を得た。Ｈ－ＣＤＲ３及びＬ－ＣＤＲ３領域は枠で囲まれた配列により示されている。

【0276】

次に、これらのモノクローナル抗体を、ＣＨＯ細胞（それぞれＣＨＯ．ｈＨＦＢ３細胞及びＣＨＯ．ｍｋＨＦＢ３細胞）によって発現させたヒト及びサルＴＮＦＲ２に結合する能力について試験した。簡潔に説明すると、約４０，０００個のＣＨＯ．ｈＨＦＢ３細胞またはＣＨＯ．ｍｋＨＦＢ３細胞を組織培養ウェルに播種し、約６６ｎＭの開始（最高）抗体濃度を用いた各試験抗体の１：３段階希釈液を各細胞タイプに加え、約１時間インキュベートした。ＡＦ６４７（Ａｌｅｘｓａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７蛍光色素）により標識した１７ｎＭの抗ヒトＦｃ抗体を使用することにより、細胞に結合した抗体を検出した。アイソタイプマッチ陰性対照抗体もこのアッセイで使用した。各抗体におけるデータ（ＥＣ_５０値及びＥ_ｍａｘを含む）を図２Ａにまとめた。

【0277】

試験抗体のうちの１１種は、ＣＨＯ細胞で発現したｈＴＮＦＲ２に対しｎＭ以下または一桁ｎＭレベルの親和性（ＥＣ_５０）を示した。これらの抗体は、ＣＨＯ細胞で発現したアカゲザルのオルソログＴＮＦＲ２に対しても交差反応性を示し、結合親和性についてはｈＴＮＦＲ２結合と比較して実質的に同じ傾向を示した。図２Ａを参照。

【0278】

興味深いことに、一部の抗体（例えば、ＨＦＢ３－１及び－１４）はＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を促進し、他の抗体（例えば、ＨＦＢ３－１８）はＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合を阻害し、また他の抗体（例えば、ＨＦＢ３－６）はＴＮＦαとＴＮＦＲ２との結合に影響を及ぼさないように思われた。図２Ｂを参照。具体的には、２５ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαとＣＨＯ．ｈＨＦＢ３細胞との結合を、ＣＨＯ細胞をそれぞれの抗体と約１時間プレインキュベートした後に測定した。次に、ＴＮＦαに結合した細胞（ＨＦＢ２００３Ｌと表示）のパーセンテージを抗体の濃度の増加に対しプロットした。

【0279】

また、マウスＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞及び親ＣＨＯ細胞株（ハムスターＴＮＦＲ２を発現する場合も発現しない場合もある）に対する試験抗体の結合能力を試験するために、同じ実験をセットアップした。２種のモノクローナル抗体（ＨＦＢ３－１８及びＨＦＢ３－１９）は、わずかなレベルのマウスオルソログとの結合を示したが、他の抗体はいずれも、検出可能なレベルのマウスＴＮＦＲ２との結合を有しなかった。陽性対照として、マウスＴＮＦＲ２に特異的なＨＭ１０２モノクローナル抗体を使用したところ、マウスＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞に陽性結合を示したが、アイソタイプマッチ対照抗体は結合しなかった（図３）。

【0280】

親ＣＨＯ細胞株では結合が観察されなかった（図３）。

【0281】

組換えヒトＴＮＦＲ２及びＴＮＦＲ１タンパク質を用いて、ヒトＴＮＦＲ２（ｖｓ関連するＴＮＦＲ１受容体）に対する結合特異性も確認した。

【0282】

簡潔に説明すると、組織培養プレートを０．１μｇ／ｍＬのＨｉｓタグ化組換えヒトＴＮＦＲ２またはＴＮＦＲ１で４℃で一晩コーティングした。次にコーティングプレートを、約６６ｎＭの開始（最高）抗体濃度を用いた各試験抗体の１：３段階希釈液とともに氷上で約１時間インキュベートした。ＨＲＰ標識抗ヒトＦｃ抗体及びＴＭＢ基質の１：５０００希釈液を使用することにより、細胞に結合した抗体を検出した。アイソタイプマッチ陰性対照抗体Ｆ３、ｒｈＴＮＦＲ２に特異的なＭＲ２－１陽性対照抗体、及びｒｈＴＮＦＲ１に特異的な陽性対照抗体もこのアッセイで使用した。各抗体におけるデータ（ＥＣ_５０値を含む）を図４Ａにまとめた。

【0283】

試験した１１種の抗体のうちの６種、すなわちＨＦＢ３－１、－１４、－２１、－２３、－２４、及び－２５はＨｉｓタグ化単量体ｒｈＴＮＦＲ２に対しｎＭ以下の親和性（ＥＣ_５０）を示したが、追加の４種の抗体（ＨＦＢ－３、－６、－１９、及び－２２）は同じ抗原に対し一桁ｎＭの親和性を示した。ＨＦＢ３－１８は単量体ｒｈＴＮＦＲ２に対し比較的弱い結合を示し、二桁ｎＭの親和性であった。しかし、１１種の抗体のいずれも、Ｈｉｓタグ化ＴＮＦＲ１受容体に対し検出可能なレベルの結合は示さず、これによりＴＮＦＲ２に対する結合特異性が示された。

【0284】

抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｃａｐｔｕｒｅ（ＡＨＣ）バイオセンサーを用いて、ヒト－マウスキメラ抗体ＨＦＢ３－１、１４、及び１８の組換えヒトＴＮＦＲ２タンパク質に対する結合親和性を確認した。ＡＨＣバイオセンサーは、ヒトＦｃ含有タンパク質（例えば、主題の抗体）と標的分析物（例えば、組換えヒトＴＮＦＲ２）との間の高分子相互作用の動態学的特性評価を可能にする。ヒトＦｃ含有タンパク質の固定化は、工場で固定化した抗ヒトＦｃ特異的抗体によって達成され、そのヒトＦｃドメインに対する高い親和性は、要求の厳しい動態応用先に求められる安定したベースラインを提供する。この特定の実験において、試験抗体（ヒト化）をアッセイバッファー（ＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．１％ ＢＳＡ、０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０）に２０μｇ／ｍＬの濃度で装填した。分析物は、５００、１６７、または５５．７ｎＭのＨｉｓタグ化組換えヒトＴＮＦＲ２であった。捕捉アッセイを２５℃で行った。試験した抗体のＫ_ｄはｎＭの範囲内であった（図４Ｂを参照）。

【0285】

ＨＦＢ３－１－ｈＧ１、ＨＦＢ３－１４－ｈＧ１、ＨＦＢ３－６－ｈＧ１、及びＨＦＢ３－１８－ｈＧ１抗体のエピトープマッピング実験から、これらの抗体がＴＮＦＲ２の異なるドメインを認識することが示された。ＴＮＦＲスーパーファミリーのほとんどのメンバーが共有する１つの構造的特徴は、約２～４個のシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）を含むことである。ＨＦＢ３－１－ｈＧ１はＣＲＤ２ドメイン内の領域に結合し（図１１Ｃ）、ＨＦＢ３－１８－ｈＧ１はＣＤＲ１内の立体構造エピトープに結合する。ＨＦＢ３－６－ｈＧ１はＣＲＤ３内の領域に結合し、ＨＦＢ３－１４－ｈＧ１もＣＲＤ３領域内のエピトープ（ただし、ＨＦＢ３－６－ｈＧ１のエピトープよりも小さい）に結合する（図１１Ｂを参照）。ＴＮＦＲ２－ＴＮＦα複合体の３Ｄモデルにおけるエピトープの位置は、図１１Ｄで可視化することができる。

【0286】

実施例２：Ｔ細胞サブタイプにおけるＴＮＦＲ２の発現
この実験は、ＴＮＦＲ２が様々ながんタイプにおいて、ＴｒｅｇならびにＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞に優勢に発現していることを実証する。

【0287】

Ｔ細胞サブタイプ（ＴｒｅｇならびにＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む）を様々な腫瘍試料から単離し、ＲＮＡ配列解析を用いて、腫瘍試料中のＴ細胞サブタイプの相対的パーセンテージ及びＴ細胞サブタイプにおけるＴＮＲＦ２の平均相対発現レベル（２～８の尺度）を定量した。結果を図５にまとめた。

【0288】

分析した各腫瘍試料（ＢＣＣ（基底細胞癌）、ＳＣＣ（扁平上皮癌）、黒色腫、及びＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）を含む）において、ＴＮＦＲ２は、ＴｒｅｇならびにＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞で優勢かつ最も高頻度で見出された。さらに、最も高い相対発現レベルもＴｒｅｇに見出された。図５の左パネルを参照。このデータからは、ＴＮＦＲ２ががん治療における魅力的な標的であることが示唆される。

【0289】

ＳＣＣがん試料における追加のＴＮＦＲ２発現解析もいくつかの免疫チェックポイント遺伝子（例えば、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、及び４－１ＢＢ）の発現と併せて行った。疲弊ＣＤ８＋Ｔ細胞において、ＴＮＦＲ２の発現はこれらの免疫チェックポイント遺伝子の発現と整合することが分かった（図５、右パネル）。このことから、抗ＴＮＦＲ２抗体及びこれらの免疫チェックポイント遺伝子の阻害剤を用いた併用療法が治療上有益であることが示唆される。

【0290】

実施例３：抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と初代Ｔｒｅｇ、ＣＤ８、及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞との結合
Ｔ細胞サブタイプにおけるＴＮＦＲ２の発現パターン（実施例２を参照）を考慮して、この実験は、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体が、初代Ｔ細胞サブタイプに結合し、活性化Ｔ細胞に優先的に結合し得ることを実証する。

【0291】

簡潔に説明すると、平底９６ウェルプレートを１０ｎＭの抗ＣＤ３抗体で４℃で一晩コーティングした。一方、Ｔｒｅｇ、Ｔ細胞サブタイプ（ＣＤ８またはＣＤ４通常Ｔ細胞（Ｔｃｏｎｖ）を含む）をヒトＰＢＭＣから単離した。６．６ｎＭの抗ＣＤ２８抗体の存在下で、単離したＴ細胞サブタイプを約５０，０００細胞／ウェルの密度で播種して、初代Ｔ細胞を約３日間共刺激した。次に、刺激した初代Ｔ細胞を、氷上で１時間、様々な濃度（最高濃度は６６ｎＭ）の本発明の抗ＴＮＦＲ２ヒト・マウスキメラモノクローナル抗体の１：３段階希釈液で処置した。ＡＦ６４７色素により標識した１７ｎＭの抗ｈＦｃ抗体を加えて氷上で１時間インキュベートすることにより結合したキメラ抗体を検出し、次にＦＡＣＳ解析を行ってＡＦ６４７シグナルを検出した。

【0292】

図６の上パネルは、ＣＤ４ Ｔｃｏｎｖが最も豊富なＴ細胞サブタイプであり、ｈＰＢＭＣ全体の約３０％を占め、次に１０％のＣＤ８ Ｔ細胞、約１％のＴｒｅｇが続くことを示している。ただし、非ＴＣＲ活性化初代Ｔ細胞は、初代Ｔｒｅｇで比較的低レベルの結合が生じたことを除き、検出可能なレベルでは主題の抗ＴＮＦＲ２抗体に結合しなかった。全体的に見ると、受容体占有ＥｍａｘはＴｒｅｇで最も高く、次にＣＤ８、ＣＤ４ Ｔｃｏｎｖが続いた。Ｔｒｅｇの存在量がＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖと比較して相対的に低いことを考慮すると、ＴｒｅｇにおけるＴＮＦＲ２の発現は、細胞ごとに基づくとＣＤ８及びＣＤ４ Ｔ細胞よりもはるかに高い。

【0293】

しかし、ＴＣＲ活性化Ｔ細胞においては、いくつかの抗ＴＮＦＲ２抗体について、Ｔｒｅｇでは５～６倍の劇的な結合増加が観察され、ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖでは実質的により高い結合も観察された（図６、下パネル）。

【0294】

試験した抗体のうち、ＨＦＢ３－１、－６、－２４、－２５及びＳＢＴ１（陽性対照）はｎＭ以下のレベルの高い親和性を示したが、ＨＦＢ３－１４及び－１９は一桁ｎＭの親和性を示した。ＨＦＢ３－１８、－２１、及び－２２は二桁ｎＭの親和性を有した。

【0295】

実施例４：ある特定の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と初代ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞との結合がＮＦκＢシグナル伝達を共刺激した
この実験は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体が、ＮＦκＢシグナル伝達経路遺伝子のＱＰＣＲ定量化による立証において、ＴＮＦα媒介性ＮＦκＢシグナル伝達を共刺激することを実証する。

【0296】

簡潔に説明すると、標準的な技法及び市販のキットを用いて、ＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ（ＣＤ４^＋ＣＤ２５^－）またはＣＤ８^＋Ｔ細胞をｈＰＢＭＣから単離した。単離したＴ細胞を、１０μｇ／ｍＬ（６６ｎＭ）の本発明の様々な試験モノクローナル抗体または適切な陽性対照もしくは陰性対照及び２５ｎｇ／ｍＬ（１．５ｎＭ）のＴＮＦαとともに約２４時間インキュベートした。次に、刺激したＴ細胞を採取し、そのｍＲＮＡを単離し、逆転写し、ＮＦκＢシグナル伝達経路遺伝子（例えば、ＣＤ２５、Ｆｏｘｐ３、ＮＦκＢ２、ＲｅｌＢ、及びＬＴＡ）のＱＰＣＲ解析に供した。主題の抗体による共刺激の存在下及び不在下におけるこれらの遺伝子の発現レベルを、図７の棒グラフで比較した。結果を非刺激対照（１×）と比較した倍数変化として提示した。

【0297】

その結果、ある特定の主題の抗体（ＨＦＢ３－１、－１４、－２３、－２４、及び－２５を含む）がＮＦκＢシグナル伝達を誘導することが示された。注目すべきことに、ＨＦＢ３－１及び－１４（ただしＨＦＢ３－１８は該当しない）は、特にＮＦκＢ２、ＲｅｌＢ、及びＬＴＡにおいて、時々ＮＦκＢシグナル伝達を誘導した。

【0298】

実施例５：抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の共刺激効果は、単離された初代ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞の増殖と関連する
この実験において、平底９６ウェルプレートを、１０ｎＭの抗ＣＤ３モノクローナル抗体及び２０または１００ｎＭの主題の抗ＴＮＦＲ２抗体で４℃で一晩コーティングした。一方、ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞を前述のようにｈＰＢＭＣから単離し、２μＭのＣＴＶ（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ）で標識してＴ細胞増殖を追跡した。ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ色素は、容易に細胞内に拡散し、細胞内エステラーゼにより切断されて蛍光性が高い化合物を産生し、次に細胞内アミンと共有結合して、アルデヒド固定液で固定することができる安定して十分に保持された蛍光染色をもたらす。過剰な未結合試薬は受動的に細胞外培地に拡散し、そこで完全培地でクエンチし洗い流すことができる。

【0299】

次に、６．６ｎＭの抗ＣＤ２８抗体の存在下で、コーティングした９６ウェルプレートに標識Ｔ細胞を約５０，０００細胞／ウェルの密度で播種し、約３日間共刺激した。次に、細胞を蛍光シグナルのＦＡＣＳ解析のために固定した。

【0300】

図８のデータは、ある特定の主題の抗ＴＮＦＲ２抗体は、より低い２０ｎＭ濃度であってもＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ増殖を共刺激することを示している。ベンチマークの陽性対照抗体ＳＢＴ－１及び－４も同じ条件下でＴ細胞増殖を共刺激したが、ＨＦＢ３－１、－１４、－１８、及び－２５よりも低い程度での共刺激であった。

【0301】

追加の実験により、このような初代Ｔ細胞増殖の共刺激は、ある特定のモノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ３－１８）についてはＦｃγＲ架橋に依存し得ることが示され、一方、他の抗体（例えば、ＨＦＢ３－１及び－１４）については認識できる架橋依存性が認められなかった。

【0302】

具体的には、ＣＤ８及びＣＤ４ ＴｃｏｎｖをドナーＫＰ５９０９５から単離し、単離した初代Ｔ細胞を、２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＮＦα（ｒｈＴＮＦα）の存在下または非存在下で、ＣＤ３／ＣＤ２８ ＴＣＲ活性化と、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体ＨＦＢ３－１、－１４、または－１８とによって刺激した。抗ＴＮＦＲ２抗体はプレートに結合させるか、または結合混合物中に存在する可溶性抗体として供給した。

【0303】

２５ｎｇ／ｍＬのｒｈＴＮＦαの存在下で、３種全てのプレート結合抗ＴＮＦＲ２抗体（ＨＦＢ３－１、－１４、及び－１８）がＣＤ８ Ｔ細胞の増殖を刺激した（図１９、左下隅のパネルを参照）。しかし、ＣＤ８ Ｔ細胞の増殖を刺激できたのは可溶性ＨＦＢ３－１及びＨＦＢ３－１４（ただし、可溶性ＨＦＢ３－１８は該当しない）のみであった（図１９、右下隅パネル）。このことから、ＦｃγＲ架橋は、ＨＦＢ３－１８媒介性ＣＤ８ Ｔ細胞増殖には必要とされ得るものの、ＨＦＢ３－１及びＨＦＢ３－１４媒介性ＣＤ８ Ｔ細胞増殖には必要とされない（すなわち、架橋に依存しない）可能性があることが示唆される。

【0304】

同様の結果が、ＣＤ４ Ｔｃｏｎｖの増殖についても同様の条件下で得られた（データは示していない）。

【0305】

実施例６：抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体はＴｒｅｇの存在下でＴｅｆｆ細胞末端（ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ）での細胞増殖に有利である
この実験は、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体が、Ｔｒｅｇの存在下で、ＣＤ３／ＣＤ２８媒介性ＴＣＲ活性化とともにＴｅｆｆ細胞（ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ）の増殖を共刺激することができることを示している。

【0306】

簡潔に説明すると、ＣＤ３^＋ Ｔ細胞（ＣＤ８及びＣＤ４ ＴｃｏｎｖエフェクターＴ細胞、ならびにＴｒｅｇを含む）をヒトＰＢＭＣから単離し、実質的に上記のようにして、ＣＤ３／ＣＤ２８媒介性ＴＣＲ活性化及び主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体により約４日間共刺激した。ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＣＴＶ）を用いて、Ｔｒｅｇ存在下での総ＣＤ４^＋Ｔ細胞及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖を定量した。また、それぞれのＴ細胞集団におけるＣＤ２５^＋Ｔ細胞のパーセンテージを測定することにより、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の活性化も定量した。

【0307】

図９の結果から、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ３－１のヒト化バージョンのＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１ＡＡ（下記参照））が、Ｔｒｅｇの存在下でエフェクターＴ細胞（ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ）の細胞増殖に有利であることが示された。

【0308】

実施例７：抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体はＨＨリンパ腫細胞に対しごくわずかなＡＤＣＣ効果を有した
この実験は、主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体がＴ細胞リンパ腫に対しごくわずかなＡＤＣＣ効果を示すことを実証するものであり、このような抗体がＴ細胞共刺激剤としての使用に適していることが示唆される。

【0309】

抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）とは、免疫系のエフェクター細胞が、特異的抗体が膜表面抗原に結合している標的細胞を能動的に溶解する細胞媒介性免疫防御の機構のことである。これは、抗体が液性免疫応答の一部として、感染を制限し封じ込めるために作用し得る機構の１つである。ＡＤＣＣにはエフェクター細胞が必要とされ、これは古典的には、ＩｇＧ抗体と典型的に相互作用するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であることが知られている。

【0310】

この実験において、Ｊｕｒｋａｔ．ＣＤ１６Ｖ／ＮＦＡＴ／ｌｕｃ細胞をエフェクター細胞として使用し、ＨＨリンパ腫細胞を標的細胞とした。エフェクター：標的細胞の比を約６：１とした。主題の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ３－１、－１４、もしくは－１８）、またはアイソタイプマッチ対照（ｈＩｇＧ１）の存在下、０、０．００６６、０．６６、または６６ｎＭの濃度で、共培養したエフェクター及び標的細胞を一晩インキュベートした。モガヌリズマブ抗体をＡＤＣＣにおける陽性対照として使用した。

【0311】

図１０の結果から、陽性対照抗体モガヌリズマブは標的細胞に対し、試験したいずれの抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体よりも少なくとも１２０倍強力なＡＤＣＣ効果が示された。このデータにより、主題の抗ＴＮＦＲ２抗体は、Ｔ細胞に対するＡＤＣＣ効果が低い／存在しないため、Ｔ細胞共刺激剤としての使用に適していることが実証された。

【0312】

実施例８：ヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体とＴＮＦＲ２との結合
ＨＦＢ３－１、－１４、及び－１８に対する複数のヒト化モノクローナル抗体を作成し、ＨＦＢ３－１については少なくとも２０種、ＨＦＢ３－１４については１６種、ＨＦＢ３－１８については１種（選択したヒト生殖細胞系列が親ＨＦＢ３－１８モノクローナル抗体コード配列と高度に類似していることに起因）を作成した。これらのヒト化モノクローナル抗体とＣＨＯ細胞で発現するヒトＴＮＦＲ２との結合能力を、実質的に実施例１に記載のように定量した。

【0313】

図１２Ａは、ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６、ＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ、及びＨＦＢ３－１８ｈｚ１が、ヒトＴＮＦＲ２発現ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ｈＴＮＦＲ）には結合したが、親ＣＨＯ細胞には結合しなかったことを示している。図１２Ｂは、少なくとも７種のヒト化ＨＦＢ３－１抗体、すなわちＨＦＢ３－１ｈｚ６、－１ｈｚ８、－１ｈｚ９、－１ｈｚ１０、－１ｈｚ１１、－１ｈｚ１２、－及び１ｈｚ１４、ならびに少なくとも８種のヒト化ＨＦＢ３－１４抗体、すなわちＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ、－１４ｈｚ２ｃ、－１４ｈｚ３ｃ、－１４ｈｚ４ｃ、－１４ｈｚ６ｃ、－１４ｈｚ７ｃ、－１４ｈｚ１２ｃ、及び－１４ｈｚ１４ｃが、それぞれの親キメラ抗体によるＣＨＯ細胞発現ＴＮＦＲ２（ＣＨＯ．ｈＨＦＢ３）に対する結合親和性とほぼ同じかそれ以上のレベルを保持したことを示している。

【0314】

ＴＮＦＲ２のアカゲザルオルソログを発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ｍｋＨＦＢ３）を代わりに用いて、同様の実験を繰り返した。図１３は、サルＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞に対する結合の一般的傾向が、ＣＨＯ．ｈＴＮＦＲ２に対するものと一致したことを示している。ただし、ＨＦＢ３－１４に基づくヒト化のバリアントのうちの２種、すなわちＨＦＢ３－１４ｈｚ２ｃ及び－１４ｈｚ３ｃについては、多少不安定な結合が観察された。

【0315】

ヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体の結合はＴＮＦＲ２に特異的であり、ＴＮＦＲ１には結合しない。図１４ＡにおけるＥＬＩＳＡアッセイにより、ヒト化モノクローナル抗体ＨＦＢ３－１ｈｚ６、ＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ、及びＨＦＢ３－１８ｈｚ１が、組換えヒトＴＮＦＲ１（ｈＴＮＦＲ１－Ｈｉｓ）を認識せずに組換えヒト及びカニクイザルＴＮＦＲ２（それぞれｈＴＮＦＲ２－Ｈｉｓ及びｃｙｎｏＴＮＦＲ２－Ｈｉｓ）に結合することが示された。さらに、これらのヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体と組換えヒト及びカニクイザルＴＮＦＲ２との結合ＥＣ５０は、ｎＭ以下～一桁ｎＭの範囲であった。

【0316】

組換えヒトＴＮＦＲ２タンパク質及びＡＨＣバイオセンサーを用いて、ヒト化バリアントのヒトＴＮＦＲ２に対する結合親和性を確認した。抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ捕捉（ＡＨＣ）バイオセンサーは、ヒトＦｃ含有タンパク質（例えば、主題の抗体）と標的分析物（例えば、組換えヒトＴＮＦＲ２）との間の高分子相互作用の動態学的特性評価を可能にする。ヒトＦｃ含有タンパク質の固定化は、工場で固定化した抗ヒトＦｃ特異的抗体によって達成され、そのヒトＦｃドメインに対する高い親和性は、要求の厳しい動態応用先に求められる安定したベースラインを提供する。この特定の実験において、試験抗体（ヒト化抗体ｖｓ親キメラ抗体）をアッセイバッファー（ＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．１％ ＢＳＡ、０，１％ Ｔｗｅｅｎ２０）中に２０μｇ／ｍＬの濃度で装填した。分析物は、５００、１６７、または５５．７ｎＭのＨｉｓタグ化組換えヒトＴＮＦＲ２であった。捕捉アッセイを２５℃で行った。

【0317】

図１４Ｂに示すように、組換えヒトＴＮＦＲ２に対する親和性の観点では、ヒト化バリアントとそれぞれのキメラ親抗体との間に大きな違いは認められなかった。

【0318】

実施例３は、キメラ抗ＴＮＦＲ２抗体がＴＣＲ活性化Ｔ細胞に結合することを示している。実質的に同じ実験をヒト化バリアントに対し行い、結果を図１５に示した。

【0319】

具体的には、ＴＣＲ活性化ＣＤ８細胞との結合という観点では、ほとんどのヒト化ＨＦＢ３－１抗体がｎＭ以下のレベルの親和性を示したが、２種のバリアント（ＨＦＢ３－１ｈｚ５及び－１ｈｚ７）は例外であり、ＴＣＲ活性化ＣＤ８細胞に結合しなかったと思われる。一方、全てのヒト化ＨＦＢ３－１４バリアントは、ＴＣＲ活性化ＣＤ８ Ｔ細胞に対し一桁ｎＭの親和性を示した。種々のバリアントを区別する大きな相違は認められない。注目すべきことに、陽性対照抗体ＳＢＴ－２及び－３は、初代ＣＤ８細胞との結合が良好ではなかった。

【0320】

実施例９：ヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体がＴＣＲ活性化ＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞の増殖に及ぼす共刺激効果
実施例５からは、キメラ抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の共刺激作用により、単離されたヒト初代ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞が増殖することが示された。この実験は、ＨＦＢ３－１及びＨＦＢ３－１４のヒト化バリアントを用いて、ＴＣＲ活性化ＣＤ４ Ｔ細胞において同じことを実証するものである。

【0321】

具体的には、図１６は、ヒト化バリアントＨＦＢ３－１ｈｚ５、－１ｈｚ６、－１ｈｚ８、－１ｈｚ１０、－１ｈｚ１１、及び－１ｈｚ１２が、ＣＴＶ増殖アッセイ（上記参照）に基づいて、各々が親ＨＦＢ３－１キメラ抗体よりも大きな程度でＴＣＲ活性化ＣＤ４ Ｔ細胞を強力に刺激したことを示している。同じことをＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ及び－１４ｈｚ３ｃのバリアントに対し繰り返した。

【0322】

同様に、ＣＤ２５^＋Ｔ細胞集団のパーセンテージに基づくＴ細胞活性化も、上記のバリアントについて確認した。

【0323】

ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１、－１４ｈｚ１ｃ－ｈＧ１、及び－１８ｈｚ１－ｈＧ１における確証的な共刺激データも得られ、これらのバリアントが、ＴＣＲ活性化ＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ３／ＣＤ２８刺激により活性化）を増殖させる共刺激作用を有することを示した。具体的には、親キメラ抗体及び選択したヒト化バリアントのいずれも、ＣＤ３／ＣＤ２８ ＴＣＲ活性化により刺激されたＣＤ８ Ｔ細胞の増殖を増強した。さらに、ＴＮＦαの協同作用（右のパネル）により、抗ＴＮＦＲ２抗体媒介性ＣＤ８増殖がさらに増強された。図２０を参照。

【0324】

実施例１０：ある特定のヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体がＴｒｅｇにおいてＮＦκＢシグナル伝達を誘導した
実施例４からは、ある特定のキメラ抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と初代ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞との結合が、ＮＦκＢシグナル伝達を共刺激することが示された。同様の実験は、ある特定のヒト化バリアント抗ＴＮＦＲ２抗体がＴｒｅｇにおいてＮＦκＢシグナル伝達を誘導したことを示している。

【0325】

具体的には、図１７Ａは、ある特定のヒト化バリアント抗ＴＮＦＲ２抗体及びＴＮＦαを用いたＴｒｅｇの共刺激により、ＬＴＡ、ＴＮＦ、及びＴＮＦ ＡＩＰ３においてＮＦκＢ下流シグナル伝達がもたらされたことを示している。バリアントＨＦＢ３－１ｈｚ６、－１ｈｚ９、－１ｈｚ１０、及び－１ｈｚ１１は、親キメラ抗体ＨＦＢ３－１よりも大きな程度でＮＦκＢシグナル伝達を促進した。一方、バリアントＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ、－１４ｈｚ２ｃ、－１４ｈｚ３ｃ、及び－１４ｈｚ４ｃ（特にＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ及び－１４ｈｚ３ｃ）も、親キメラ抗体ＨＦＢ３－１４よりも大きな程度でＮＦκＢシグナル伝達を促進した。さらに、図１７Ｂは、ヒト組換えＴＮＦαのありまたはなしで、ＨＦＢ３－１抗体におけるある特定のヒト化バリアントを用いて、ＣＤ８ Ｔ細胞におけるＮＦκＢシグナルの活性化を示している。

【0326】

実施例１１：抗ＴＮＦＲ２抗体は安定している
主題のヒト化抗ヒトＴＮＦＲ２抗体が保存下で安定し、よって治療薬剤としてのさらなる開発に適していることを確認するため、選択したヒト化抗体について様々な開発可能性アッセイを行った。

【0327】

第１の実験において、選択した主題のヒト化抗体をＰＢＳ（ｐＨ７．４）中２５℃または４０℃で保存し、７日目及び１４日目に様々な抗体の安定性を測定した。図１８の結果は、１種のバリアントＨＦＢ３－１４ｈｚ４ｃ－ｈＧ１ＡＡを除き、全ての試験抗体が試験条件下で安定していることを示した。

【0328】

第２の実験において、同じ抗体を低ｐＨ条件下（１００ｍＭ ＡｃＨ、ｐＨ３．５、２５℃）で０、３、及び６時間、安定性について試験した。図１８の結果はまたしても、１種のバリアントＨＦＢ３－１４ｈｚ４ｃ－ｈＧ１ＡＡを除き、全ての試験抗体が試験条件下で安定していることを示した。

【0329】

第３の実験において、同じ抗体を１、２、または３回の凍結融解サイクルに供した。図１８の結果はまたしても、２種のバリアント（ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１ＡＡ及びＨＦＢ３－１ｈｚ１０－ｈＧ１ＡＡ）を除き、全ての試験抗体が、試験条件下で安定していることを示した。

【0330】

同様の実験をＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１、－１４ｈｚ１ｃ－ｈＧ１、及び－１８ｈｚ１－ｈＧ１に対しても繰り返した。ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１及び－１８ｈｚ１－ｈＧ１が１４日後に分解し始めたこと以外においては、３種全てのバリアントが、上記で概説した３つの試験において概ね安定していた。

【0331】

総合すると、このデータからは、これらの主題のバリアントヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体が大きな開発可能性の問題を有さず、治療用抗体として使用するのに適していることが示唆される。

【0332】

実施例１２：ヒト化ＴＮＦＲ２ノックイン（ＫＩ）マウスにおける抗ＴＮＦＲ２抗体、及びそれがＴ細胞に及ぼす効果
主題の抗ＴＮＦＲ２抗体の治療有効性をより十分に示すため、商業サービス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ，Ｗａｋｅｆｉｅｌｄ，ＭＡ）を利用して、ヒト化ＴＮＦＲ２ノックイン（ＫＩ）マウスをＣ５７ＢＬ／６マウスバックグラウンドで作成した。

【0333】

最初の一連の実験では、選択したヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体とＫＩマウス由来のＣＤ３ Ｔ細胞（ＴＮＦＲ２ ＫＩ ＣＤ３ Ｔ細胞）との間のｅｘ ｖｉｖｏ結合を、１μｇ／ｍＬのＣＤ２８と０．２または１μｇ／ｍＬのＣＤ３による共刺激下で解析した。その結果、１μｇ／ｍＬのＣＤ３は０．２μｇ／ｍＬのＣＤ３よりも良好にＫＩマウス由来の脾臓細胞を活性化することが示された。ヒトＴＮＦＲ２の発現はＫＩ ＣＤ３^＋Ｔ細胞で検出することができ、その発現／検出はＴＮＦαにより、及び軽度（０．２μｇ／ｍＬ）のＣＤ３刺激下で増強することができる。さらに、６種の抗ＴＮＦＲ２抗体（すなわち、ＨＦＢ３－１、－１４、及び－１８、ならびにそれらのヒト化バリアント－１ｈｚ６、－１４ｈｚ１ｃ、及び－１８ｈｚ１）の各々における２００ｎＭの単回用量は、ＴＮＦＲ２結合において認識できる差を示さなかった。これは、結合の飽和レベルによる可能性がある。データは示していない。

【0334】

同じｅｘ ｖｉｖｏ結合実験を、ｔｎｆｒ２ ＫＩマウスから単離したＣＤ８ Ｔ細胞に対しても繰り返した。ここでは、強力なＣＤ３（１μｇ／ｍＬ）刺激下で抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体（キメラ及びヒト化バージョン）とＴＮＦＲ２との結合が観察することができる。一方、ＴＮＦαは軽度のＣＤ３（０．２μｇ／ｍＬ）刺激下でＴＮＦＲ２結合を増強した。データは示していない。

【0335】

次に、主題の抗ＴＮＦＲ２抗体（キメラ抗体及びヒト化抗体）が、ＣＤ３／ＣＤ２８を介したＴＣＲ活性化の存在下で、かつＴＮＦαの存在下で、ｅｘ ｖｉｖｏでＴＮＦＲ２ ＫＩ ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｃ細胞の下流ＮＦκＢシグナルを共刺激する能力について調べた。

【0336】

ｈＴＮＦＲ２ノックイン（ＫＩ）マウスＴ細胞からのシグナル応答は、ヒトＴ細胞からのシグナル応答ほど顕著ではなかったが、ＨＦＢ３－１－ｈＧ１及びそのヒト化バリアントＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１は、他の抗体よりも大きな応答を誘導した（図２１を参照）。注目すべきことには、ＨＦＢ３－１８系列からのシグナル誘導の欠如が予想される。

【0337】

Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、主題のヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体（ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１、ＨＦＢ３－１４１ｃ－ｈＧ１、及びＨＦＢ３－１８ｈｚ１－ｈＧ１）の薬物動態（ＰＫ）プロファイルについて調べた。３種全てのヒト化モノクローナル抗体が、正常に挙動する抗体の期待値に整合するＴ_１／２を示した。下記を参照。

【表1】

【0338】

実施例１３：ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１がｅｘ ｖｉｖｏのナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性化に及ぼす効果
この実験は、ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１抗体が、ＩＬ－２／ＩＬ－１５による、またはＣＤ３／ＣＤ２８を介したＮＫ細胞活性化の存在下で、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を共刺激することを示すものである。

【0339】

１つの実験において、ＮＫ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて、２例のヒト患者により提供された末梢血単核球（ＰＢＭＣ）からＮＫ細胞を単離した。最初にＮＫ細胞を可溶性ＩＬ－２（１０ｎｇ／ｍＬ）及びＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍＬ）により２４時間刺激し、次にアイソタイプ対照抗体、マウスＨＦＢ３－１－ｈＧ１、ヒト化ＨＦＢ３－１－ｈｚ６－ｈＧ１、または抗ＯＸ４０対照抗体（ＢＭＳ）により、それぞれ２２ｎＭ、６６ｎＭ、または２００ｎＭで１６時間処置した。実験の終了時に、ＮＫ細胞の脱顆粒及び活性化を表すＮＫ細胞表面のＣＤ１０７α発現ならびにＴＮＦＲ２発現をＦＡＣＳにより測定した。

【0340】

マウスＨＦＢ３－１－ｈＧ１及びヒト化ＨＦＢ３－１－ｈｚ６－ｈＧ１はいずれも、ＮＫ細胞の活性化を用量依存的に顕著に増加させた。抗ＯＸ４０抗体はＮＫの短期活性化（ＩＬ－２／ＩＬ－１５刺激から４０時間）を促進できなかったが、これはＯＸ４０の発現が不十分であったためと考えられる。

【0341】

もう１つの実験において、２例のヒト患者により提供された全ＰＢＭＣを、プレート結合抗ＣＤ３（１μｇ／ｍＬ）及び可溶性抗ＣＤ２８（１μｇ／ｍＬ）により４８時間共刺激し、次にアイソタイプ対照抗体、マウスＨＦＢ３－１－ｈＧ１、ヒト化ＨＦＢ３－１－ｈｚ６－ｈＧ１、または抗ＯＸ４０抗体（ＢＭＳ）により、それぞれ２２ｎＭ、６６ｎＭ、または２００ｎＭで１６時間処置した。ＣＤ１０７αの発現を、ＣＤ３陰性／ＣＤ５６陽性（すなわちＮＫ細胞）について測定した。図２３を参照。

【0342】

同様に、ＨＦＢ３－１－ｈＧ１及びＨＦＢ３－１－ｈｚ６－ｈＧ１は用量依存的にＣＤ１０７αの発現を有意に増加させた。このことから、これらの抗体が全ＰＢＭＣにおいてＮＫ細胞の活性化を促進し得ることが示される。長期間の活性化（抗ＣＤ３／ＣＤ２８刺激から６４時間）下で、抗ＯＸ４０抗体はＮＫ細胞を活性化することができた。

【0343】

これらのデータは、ヒト化ＨＦＢ３－１－ｈｚ６－ｈＧ１及び親マウスＨＦＢ３－１－ｈＧ１がいずれもＮＫ細胞の活性化を促進し得ることを示している。

【0344】

実施例１４：ＭＣ３８腫瘍モデルにおけるヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の薬力学
ヒト化ＴＮＦＲ２－ＫＩマウスにおけるＭＣ３８大腸癌腫瘍モデルを用いて、ＨＦＢ－１－ｈＧ１の薬力学について調べた（図２４Ａ参照）。簡潔に説明すると、８週齢のヒト化ＴＮＦＲ２ ＫＩマウスに、マウス当たり約５×１０５個のＭＣ３８腫瘍細胞を右前側側腹に接種した。マウスをランダム化し、７日後（０日目）に、マウス（各群当たりｎ＝５）に１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、もしくは０．１ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１－ｈＧ１、または１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体を腹腔内注射した。同じ処置を３日目に再び投与した。４日目にマウスを安楽死させ、腫瘍及び血液試料に対し薬力学的読出しを行った。ＦＡＣＳを使用して腫瘍浸潤白血球及び末梢白血球を選別し、さらに抗体による受容体占有率を定量した。

【0345】

０日目及び３日目の２回用量のみの後では、まだ処置間での腫瘍の重量の有意差は認められなかった（図２４Ｂ、左上パネル）。１０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１－ｈＧ１の投与により、腫瘍中に存在するＣＤ４５＋細胞の絶対数は増加したが（図２４Ｂ、左下パネル）、腫瘍の生細胞中のＣＤ４５＋のパーセンテージは有意には上昇しなかった（図２４Ｂ、右下パネル）。また、１０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１－ｈＧ１処置により、腫瘍微小環境におけるＣＤ８＋、通常のＣＤ４＋Ｔ及びＮＫ細胞の絶対細胞数も増加したが、調節性Ｔ細胞の数は変化しなかった（図２４Ｃ）。他の低用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１投与では、いかなる観察可能な効果ももたらされなかった。

【0346】

腫瘍及び末梢血におけるＣＤ８ Ｔ細胞、従来のＣＤ４ Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、及びＮＫ細胞について、ＴＮＦＲ２受容体占有を判定した。腫瘍においては、１０ｍｇ／ｋｇの用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１のみが腫瘍内のＴ細胞に薬物受容体占有をもたらし、１及び０．１ｍｇ／ｋｇの用量では占有が観察されなかった（図２５Ａを参照）。ただし、１ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇにおいて、腫瘍ＮＫ細胞内で受容体占有が観察された。末梢血中では、１０ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇの用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１により、同等の薬物受容体占有がもたらされ、０．１ｍｇ／ｋｇの用量では顕著な占有は観察されなかった。

【0347】

ＨＦＢ３－１－ｈＧ１の薬物動態を実験終了時に定量した。１及び１０ｍｇ／ｋｇの用量でのＨＦＢ３－１－ｈＧ１投与は、４日目に血液中で検出可能であった。注目すべきことに、１０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１－ｈＧ１は、同じ用量のアイソタイプ対照よりもはるかに高いレベルで保持されていた（図２６Ａを参照）。興味深いことに、１０ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１－ｈＧ１を投与することで、血液中で検出可能なＴＮＦＲ２の量も増加した（図２６Ｂを参照）。血液中のＴＮＦＲ２は、おそらくは受容体の脱落によるものと考えられる。

【0348】

全体的に見ると、マウスに対するＨＦＢ３－１－ｈＧ１の短期間処置におけるデータからは、ＨＦＢ３－１－ｈＧ１が免疫細胞の活性化及び増殖を刺激し、免疫細胞におけるＴＮＦＲ２受容体に有効に結合し、ｉｎ ｖｉｖｏでの血液中の保持が良好である可能性が強く示唆される。

【0349】

実施例１５：抗ＰＤ－１抗体との相乗的抗腫瘍有効性
ヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体における抗腫瘍有効性を、広く使用されているマウス大腸癌モデルで、ヒト化ＴＮＦＲ２ ＫＩマウスバックグラウンドにおいて実証した。

【0350】

具体的には、８週齢のヒト化ＴＮＦＲ２ ＫＩマウスに、マウス当たり約５×１０^５個のＭＣ３８腫瘍細胞（Ｃ５７ＢＬ６マウス結腸腺癌に由来）を接種した。約７日後の０日目に、マウスにおける平均腫瘍サイズは約８９ｍｍ^３（７４～９８ｍｍ^３）に達した。次いでマウスを５つの実験群（ｎ＝８／群）にランダム化し、以下のうちの１つを投与した：（１）アイソタイプマッチ対照（ＴＴ－ｈＧ１ＡＡ）、（２）抗ｍＰＤ－１（ＲＭＰ－１－１４）、（３）ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１、（４）ＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ－ｈＧ１、及び（５）ＨＦＢ３－１８ｈｚ１－ｈＧ１。抗体を約１０ｍｇ／ｋｇの用量で、０、３、６、９、１２、１５、及び１８日目に合計７回用量（Ｑ３Ｄ、×７）腹腔内注射した。試験期間中に、実験群に対し腫瘍体積を測定した。２１日目前後に、アイソタイプ対照群の平均腫瘍体積が２０００ｍｍ^３ 以上に達したため、実験を終了し、全てのマウスを屠殺した。様々な群における経時的な腫瘍体積を図２７Ａ及び図２７Ｂにプロットした。２１日目までに、ＨＦＢ３－１ｈｚ６、ＨＦＢ３－１８ｈｚ１、及び抗ＰＤ－１（ＲＭＰ－１４）を投与したマウス群において、腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）の統計学的有意性が達成された（図２７Ｂ）。

【0351】

この結果から、ヒト化抗体ＨＦＢ３－１ｈｚ６及び－ｈＧ１、ならびにＨＦＢ３－１８ｈｚ１－ｈＧ１は、抗ｍＰＤ－１抗体と同じくらい（またはそれ以上に）強力に腫瘍成長を阻害し、一方、他のヒト化抗体は、わずかに低い程度ながら同様に有効であることが示された。実験マウスの異なる群間で明らかな体重差は観察されなかった。

【0352】

同様の結果が、抗ｍＰＤ－１及びＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１及びアイソタイプ対照のみを用いた別の実験（群当たりマウス４頭）でＱ３ｄ×３（３日に１回、合計３回用量）、１０ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射した場合でも得られた。６日目（抗体の最終投与）には、アイソタイプ対照群、抗ｍＰＤ－１群、及びＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１群の間で腫瘍体積に統計学的に有意差があった（２次元配置ＡＮＯＶＡ検定に基づく）。
図２８を参照。

【0353】

さらに、ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１及び抗ＰＤ－１抗体は、ＭＣ３８腫瘍モデルにおいて相乗的に腫瘍成長を抑制し、マウスの寿命を延長した。具体的には、ヒト化ＴＮＲＦ２ ＫＩマウスにＭＣ３８がん細胞を－７日目に接種した。０日目から、マウスにアイソタイプ対照、ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１、または抗ｍＰＤ－１抗体を、単独または組み合わせて３日ごとに腹腔内注射した（群当たりｎ＝８）。３及び１０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１で３日に１回、合計７回用量（Ｑ３ｄ×７）処置し、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１（ＲＭＰ－１４）で３日に１回、合計４回用量（Ｑ３ｄ×４）処置したところ、アイソタイプ対照で処置した場合と比較して、腫瘍成長が顕著に阻害され、マウスの寿命が延長した。さらに、ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１（１０ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３ｄ×７）及び抗ＰＤ－１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３ｄ×４）の両方による併用処置の結果、抗ＰＤ－１抗体単独による処置よりも生存期間が改善した。図２９を参照。治療群及びアイソタイプ対照を比較したＡＮＯＶＡを用いてデータを解析した。

【0354】

実施例１６：肝細胞癌マウスモデルにおけるＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の抗腫瘍有効性
Ｈｅｐａ１－６同系モデルマウスにおいて、腫瘍体積が約１００ｍｍ^３に達したら、マウスをアイソタイプ対照抗体、１０ｍｇ／ｋｇの抗ｍＰＤ－１、または０．３～１０ｍｇ／ｋｇの用量のＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１で処置した。ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１は腫瘍成長の抑制に有効であった。１０ｍｇ／ｋｇの用量では、ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１は抗ｍＰＤ－１よりも腫瘍成長の制御に有効であった（図３２を参照）。

【0355】

実施例１７：非ヒト霊長類における抗ＴＮＦＲ２抗体の毒性学的評価
非ヒト霊長類モデルを用いてヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体の毒性について調べた。群当たり２頭のカニクイザルに、単回用量の１５ｍｇ／ｋｇ（低）、５０ｍｇ／ｋｇ（中）、及び１５０ｍｇ／ｋｇ（高）のヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１モノクローナル抗体を注射し、その後３３６時間時（１４日目）まで、異なる時点で血漿を採取した。

【0356】

ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の毒物動態解析から、この抗体が経時的に消失することが示された。１５、５０、または１５０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の注射後、３ｍｇ／ｋｇ以下のＣＤ３ｘＣＤ２０二重特異性ＩｇＧから報告されたデータ（点線）と比較して、サイトカインＩＬ－６、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、及びＴＮＦ－αの上昇は観察されなかった（図３０）。

【0357】

１５、５０、または１５０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の注射後、正常なサルから得られた過去のデータ範囲と比較して、白血球、赤血球、血小板、好中球、及びリンパ球の数に異常は認められなかった（図３１）。

【0358】

これまでの毒性学的評価からは、非ヒト霊長類対象を最大１５０ｍｇ／ｋｇの用量のＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１で処置したことによる識別可能な毒性作用は示されなかった。

【0359】

カニクイザルに複数用量のＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１を投与した用量範囲設定試験（ＤＲＦ）では、最大１５０ｍｇ／ｋｇで反復投与したサルにおいてＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＴＮＦα、ＩＦＮ－γの変化は認められなかった。サルにおける週４回用量終了時に、１０ｍｇ／ｋｇ及び１５０ｍｇ／ｋｇの雄動物においてＩＬ－６レベルの変化が観察された。サルにおけるＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の投与から２週間後に、好中球及び血小板のカウントの用量依存的減少が観察された。サルにおけるＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の週１回投与後に、下痢（液状便またはゆるい便）が頻繁に観察された。

【0360】

上記の観察に基づけば、ヒトにおいて１ｍｇ／ｋｇ用量を単回注射した後の薬物半減期は２３日であると予測され、この抗体は１ｍｇ／ｋｇを４週間ごとに投与するのが適していると考えられる。

【0361】

実施例１８：ＴＮＦＲ２発現に基づく適応の選択
いかなる特定の理論にも束縛されることは望まないが、本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体の抗腫瘍有効性は、腫瘍浸潤Ｔ細胞及びＮＫ細胞におけるＴＮＦＲ２を刺激することで、ＮＫ細胞を活性化し、ＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性抗腫瘍応答を増強することに起因すると考えられる。この実施例では、本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体による治療から利益を得る可能性がある腫瘍タイプが、高いＴＮＦＲ２及び高いＣＤ８Ａを発現する腫瘍を含むという証拠を提供する。

【0362】

ＴＣＧＡデータベースを用いたがんのバルクＲＮＡ解析において、ＣＤ８Ａカットオフは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）のＣＤ８Ａレベルに基づいている（この白血病は主に骨髄細胞からなり、ＣＤ８＋Ｔ細胞はほとんどまたは全くないことが推定されている）。ＴＮＦＲ２カットオフ値は、免疫砂漠であることが想定される前立腺癌のＴＮＦＲ２レベルに基づいている。図３４Ａ～３４Ｂを参照。

【0363】

ＴＮＦＲ２／ＣＤ８Ａレベルに基づくがんタイプのランキングを図３５に示す。ＥＢＶ＋胃腺癌／胃癌、明細胞腎細胞癌、皮膚黒色腫、精巣胚細胞腫瘍、軟部組織肉腫、及び高ＰＤ－Ｌ１癌（子宮頚部扁平上皮癌、胸膜中皮腫、肺腺癌、及び頭頚部扁平上皮癌を含む）を高ＴＮＦＲ２／高ＣＤ８Ａ癌の上位として特定した。

【0364】

ＴＣＧＡデータベースを用いたがん患者の生存解析からは、遺伝子発現カットオフ値の中央値において、高いＴＮＦＲ２の発現が、皮膚黒色腫及び頭頚部扁平上皮癌においてより良好な生存期間と顕著に関連し（図３３Ａ及び３３Ｂ）、肺腺癌においてより良好な生存期間に関する傾向が示された（データは示してない）。子宮頚部扁平上皮癌／子宮頚部内膜腺癌、腎臓明細胞癌、精巣胚細胞腫瘍、肉腫、胃腺癌、中皮腫については顕著な傾向が観察されなかった。

【0365】

公開されているデータを用いて、腎細胞癌（ＲＣＣ）、皮膚黒色腫（ＳＫＣＭ）、胃腺癌／胃癌（ＳＴＡＤ／ＧＩ）、肺腺癌（ＬＵＡＤ）、及び頭頚部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）の分子サブタイプについて、ＴＮＦＲ２及びＣＤ８スコアリングをさらに決定した（図３６）。

【0366】

試験した各がんタイプにおいて、特徴的な高ＣＤ８Ａ及び高ＴＮＦＲ２発現パターンを示すがんのパーセンテージが高いサブタイプ（例えば、ＳＴＡＤ／ＧＩ－ＥＢＶ＋癌の約６０％がこの特徴的な高発現を有する）が存在する一方で、他のサブタイプ（例えば、ＥＳＣＣサブタイプ及びＨＭ－ＳＮＶサブタイプはＣＤ８Ａ^ｈｉＴＮＦＲ２^ｈｉ発現を実質的に有しない）が存在することは明らかである。

【0367】

したがって、特徴的な高ＣＤ８Ａ及び高ＴＮＦＲ２発現パターンを有する試験したがんサブタイプは、本発明の主題の抗体による有益な治療の主要な候補であり、これにはＫＩＲＣ．２、ＫＩＲＣ．３、ＫＩＲＣ．４、ＳＫＣＭ．Ｔｒｉｐｌｅ＿ＷＴ、ＳＫＣＭ．ＢＲＡＦ＿ｈｏｔｓｐｏｔ＿ｍｕｔａｎｔｓ（おそらくＳＫＣＭ．ＲＡＳ＿ｈｏｔｓｐｏｔ＿ｍｕｔａｎｔｓ及びＳＫＣＭ．ＮＦ１＿ａｎｙ＿ｍｕｔａｎｔｓも該当）、ＬＵＡＤ．６及びＬＵＡＤ．５、ＨＮＳＣ．Ａｔｙｐｉｃａｌ（ＨＰＶ陽性４０％）及びＨＮＳＣ．ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ（ＰＤ－Ｌ１／ＣＤ２７４が比較的高い傾向がある）が含まれる。

【0368】

大腸癌患者において、ミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）／高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）の腫瘍は、マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）／低頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｌ）の腫瘍と比較して、免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）に対する感受性が顕著に高く、前者の患者群は後者の患者群よりも多くの臨床的利益を免疫療法から引き出している。

【0369】

ＭＳＩスコアのデータは全てのがんの適応について直接アクセスできるわけではないため、出願人はＭＳＩスコアの代用として変異カウントというパラメーターを使用し、主題の抗体によって治療可能なＴＮＦＲ２^ｈｉ及びＣＤ８Ａ^ｈｉ腫瘍がＭＳＩまたはＭＳＳに富んでいるどうかについて調べた。この目的において、２５０超の変異カウントをＭＳＩとし、２５０未満の変異カウントをＭＳＳとした。データ（ここでは示していない）からは、ＣＯＡＤデータ（Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）－ＣＲＣ結腸腺癌（ＣＯＡＤ）コホートからのもの）におけるＴＮＦＲ２^ｈｉ及びＣＤ８Ａ^ｈｉの発現パターンは、変異カウント２５０未満に対し２５０超において強力には富んでいなかったことが示されている。ＭＳＩにおいて、ほぼ均等に分かれたＴＮＦＲ２^ｈｉ及びＴＮＦＲ２^ｌｏが認められた（４％のＣＤ８Ａ^ｈｉを除く全てにおいて）。ＭＳＳでは４５％対５５％に分かれた（全てＣＤ８Ａ^ｌｏ）。

【0370】

実施例１９：ヒトにおけるＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の投与試験
ｉｎ ｖｉｔｒｏサイトカイン放出アッセイに基づく予想される最小の生物学的作用レベル、ＭＣ３８腫瘍を有するヒトＴＮＦＲ２ノックイン（ｈＴＮＦＲ２ ＫＩ）マウスにおける最小の薬理学的活性用量、ならびにヒト及び非ヒト霊長類における重篤な毒性が発現しない最高用量からのデータに部分的に基づき、この試験におけるＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の開始用量を５ｍｇとし、４週間ごと（Ｑ４Ｗ）に６０分間の静脈内注入として投与する。

【0371】

用量漸増を１５０ｍｇまで行って最大耐量を決定する。用量拡大をＥＢＶ＋胃癌、明細胞腎細胞癌、皮膚黒色腫、軟部組織肉腫、精巣胚細胞腫瘍、及びＰＤ－Ｌ１＋癌（子宮頚癌、胸膜中皮腫、肺腺癌、頭頚部扁平上皮癌を含む）に対し行う。第Ｉ相の抗腫瘍活性／有効性に基づき、追加の患者コホートを登録する。

【表2】

【表3】

【表4】

【表5】

【表6】

【表7】

【表8】

【表9】

【表10】

【表11】

【表12】

【表13】

【表14】

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図11D】

【図12A】

【図12B】

【図13】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図15】

【図16】

【図17A】

【図17B】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21A】

【図21B】

【図22】

【図23】

【図24A】

【図24B】

【図24C】

【図25A】

【図25B】

【図26A】

【図26B】

【図27A】

【図27B】

【図28】

【図29】

【図30A】

【図30B】

【図31】

【図32】

【図33A】

【図33B】

【図33C】

【図34A】

【図34B】

【図35】

【図36】

【配列表】

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【国際調査報告】