特表 2024-527581 抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗体組成物を生産するための製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-25

(54)【発明の名称】抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗体組成物を生産するための製造方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/24 20060101AFI20240718BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240718BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240718BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240718BHJP

【ＦＩ】

C07K16/24

A61K39/395 U ZNA

A61K39/395 D

A61P17/06

A61P25/00

A61P19/02

A61P29/00 101

A61P1/04

A61P29/00

A61P37/06

A61P3/10

A61P27/02

C12P21/08

C12N15/13

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024500473

(86)(22)【出願日】2022-07-08

(85)【翻訳文提出日】2024-03-08

(86)【国際出願番号】 IB2022056345

(87)【国際公開番号】W WO2023281466

(87)【国際公開日】2023-01-12

(31)【優先権主張番号】63/219,904

(32)【優先日】2021-07-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】509087759

【氏名又は名称】ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山 英二

(74)【代理人】

【識別番号】100093676

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 純子

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100178685

【弁理士】

【氏名又は名称】田浦 弘達

(72)【発明者】

【氏名】ドンロン，アン

(72)【発明者】

【氏名】ゴードン，ギャリー

(72)【発明者】

【氏名】グーヒー，チャールス エフ．

(72)【発明者】

【氏名】ヘイズ，ロナン

(72)【発明者】

【氏名】ジョンストン，ロビン

(72)【発明者】

【氏名】ステーンフォールデン，ウィレム

(72)【発明者】

【氏名】トゥーミー，デニス

【テーマコード（参考）】

4B064

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC03

4B064CC06

4B064CC07

4B064CC10

4B064CC12

4B064CC24

4B064CD01

4B064CE11

4B064DA01

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB17

4C085CC01

4C085DD62

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA53

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA23

(57)【要約】

本開示は、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体、例えば、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体ウステキヌマブ及び本抗体の特定の医薬組成物を生産するための製造方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）配列番号１、配列番号２、及び配列番号３の重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、（ｉｉ）配列番号４、配列番号５、及び配列番号６の軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体であって、前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体が、前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の前記オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、前記製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、前記真核細胞中で前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、前記マンガン及び銅濃度が前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の前記オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効である、抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体。

【請求項2】

（ｉ）配列番号７の重鎖可変ドメインアミノ酸配列と、（ｉｉ）配列番号８の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体であって、前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体が、前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の前記オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、前記製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、前記真核細胞中で前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、前記マンガン及び銅濃度が前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の前記オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効である、抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体。

【請求項3】

（ｉ）配列番号１０の重鎖アミノ酸配列と、（ｉｉ）配列番号１１の軽鎖アミノ酸配列と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体であって、前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体が、前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の前記オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、前記製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、前記真核細胞中で前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、前記マンガン及び銅濃度が前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の前記オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効である、抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体。

【請求項4】

前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体がバイオ後続品を含む、請求項１に記載の抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体。

【請求項5】

配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体を含む原薬（ＤＳ）又は医薬品（ＤＰ）を生産するための製造方法であって、前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが制御され、前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の前記オリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、前記方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、前記真核細胞中で前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、前記マンガン及び銅濃度が前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の前記オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効である、製造方法。

【請求項6】

前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体のキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）電気泳動図のピーク３面積％が、３９．８％以上～６４．４％以下である、請求項５に記載の製造方法。

【請求項7】

前記既知組成培地中の前記規定の微量金属マンガン及び銅濃度が、誘導結合プラズマ質量分析（ＩＣＰ－ＭＳ）を使用して決定される、請求項５に記載の製造方法。

【請求項8】

前記既知組成培地中の前記微量金属マンガン及び銅濃度が、前記既知組成培地に１つ又は２つ以上のマンガン源及び銅源を補充することによって制御され、前記１つ又は２つ以上のマンガン源が、ＭｎＣｌ_２、ＭｎＳＯ_４、ＭｎＦ_２、及びＭｎＩ_２からなる群から選択され、前記１つ又は２つ以上の銅源が、ＣｕＳＯ_４、ＣｕＣｌ_２、及びＣｕ（ＯＡｃ）_２からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。

【請求項9】

前記オリゴ糖種が、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定される、請求項５に記載の製造方法。

【請求項10】

前記真核細胞が、チャイニーズハムスター変動細胞（ＣＨＯ細胞）、ヒト網膜細胞（ＰＥＲ．Ｃ６細胞）、並びにマウス骨髄腫細胞（ＮＳ０細胞及びＳｐ２／０細胞）からなる群から選択される、請求項５に記載の製造方法。

【請求項11】

前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体がバイオ後続品を含む、請求項５に記載の製造方法。

【請求項12】

配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体を含む組成物であって、前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体が、前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の前記オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、前記製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、前記真核細胞中で前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、前記マンガン及び銅濃度が前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の前記オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効である、組成物。

【請求項13】

前記抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体のキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）電気泳動図のピーク３面積％が、３９．８％以上～６４．４％以下である、請求項１２に記載の組成物。

【請求項14】

前記既知組成培地中の前記規定の微量金属マンガン及び銅濃度が、誘導結合プラズマ質量分析（ＩＣＰ－ＭＳ）を使用して決定される、請求項１２に記載の組成物。

【請求項15】

前記既知組成培地中の前記規定の微量金属マンガン及び銅濃度が、前記既知組成培地に１つ又は２つ以上のマンガン源及び銅源を補充することによって制御され、前記１つ又は２つ以上のマンガン源が、ＭｎＣｌ_２、ＭｎＳＯ_４、ＭｎＦ_２、及びＭｎＩ_２からなる群から選択され、前記１つ又は２つ以上の銅源が、ＣｕＳＯ_４、ＣｕＣｌ_２、及びＣｕ（ＯＡｃ）_２からなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。

【請求項16】

前記オリゴ糖種が、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定される、請求項１２に記載の組成物。

【請求項17】

前記真核細胞が、チャイニーズハムスター変動細胞（ＣＨＯ細胞）、ヒト網膜細胞（ＰＥＲ．Ｃ６細胞）、並びにマウス骨髄腫細胞（ＮＳ０細胞及びＳｐ２／０細胞）からなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。

【請求項18】

前記抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体がバイオ後続品を含む、請求項１２に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、ＸＭＬ形式の配列表として電子的に提出され、ファイル名「ＪＢＩ６００５ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｘｍｌ」を有し、２０２２年６月２９日に作成され、かつ１２Ｋｂのサイズを有する配列表を含む。提出された本配列表は、本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

（発明の分野）
本発明は、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体、例えば、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体ウステキヌマブ及び本抗体の特定の医薬組成物を生産するための製造方法に関する。

【背景技術】

【0003】

インターロイキン（interleukin、ＩＬ）－１２は、２つのジスルフィド結合グリコシル化タンパク質サブユニット（それらのおよその分子量に関してｐ３５及びｐ４０と表記される）で構成された分泌型ヘテロ二量体サイトカインである。ＩＬ－１２は主に抗原提示細胞によって産生され、Ｔ細胞又はナチュラルキラー（natural killer、ＮＫ）細胞の表面上に発現される２鎖受容体複合体に結合することによって細胞性免疫を促進する。ＩＬ－１２受容体ベータ－１（IL-12 receptor beta-1、ＩＬ－１２Ｒβ１）鎖は、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットに結合し、ＩＬ－１２とその受容体との間の一次相互作用をもたらす。しかしながら、細胞内シグナル伝達（例えば、ＳＴＡＴ４リン酸化）及び受容体保有細胞の活性化を付与するのは、第２の受容体鎖であるＩＬ－１２Ｒβ２のＩＬ－１２ｐ３５ライゲーションである（Ｐｒｅｓｋｙ ｅｔ ａｌ，１９９６）。抗原提示と同時に起こるＩＬ－１２シグナル伝達は、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）産生を特徴とするＴヘルパー１（T helper 1、Ｔｈ１）表現型へのＴ細胞分化を引き起こすと考えられている（Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ，２００３）。Ｔｈ１細胞は、いくつかの細胞内病原体に対する免疫を促進し、補結抗体アイソタイプを生成し、腫瘍免疫監視に寄与すると考えられる。それ故に、ＩＬ－１２は、宿主防御免疫機構にとって重要な構成要素であると考えられる。

【0004】

ＩＬ－１２のｐ４０タンパク質サブユニットは、ｐ１９と表記される別個のタンパク質サブユニットと会合して、新規サイトカインであるＩＬ－２３を形成することもできることが発見された（Ｏｐｐｍａｎ ｅｔ ａｌ，２０００）。ＩＬ－２３も２鎖受容体複合体を介してシグナル伝達する。ｐ４０サブユニットがＩＬ－１２とＩＬ－２３との間で共有されるため、ＩＬ－１２Ｒβ１鎖もＩＬ－１２とＩＬ－２３との間で共有されることになる。しかしながら、ＩＬ－２３特異的細胞内シグナル伝達（例えば、ＳＴＡＴ３リン酸化）及びその後のＴ細胞によるＩＬ－１７産生を付与するのは、ＩＬ－２３受容体複合体であるＩＬ－２３Ｒの第２の構成要素のＩＬ－２３ｐ１９ライゲーションである（Ｐａｒｈａｍ ｅｔ ａｌ，２００２、Ａｇｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ．２００３）。最近の研究は、ＩＬ－２３の生物学的機能とＩＬ－１２の生物学的機能が、これらの２つのサイトカイン間の構造的類似性にもかかわらず、異なることを示した（Ｌａｎｇｒｉｓｈ ｅｔ ａｌ，２００５）。

【0005】

抗体によるＩＬ－１２の中和が、乾癬、多発性硬化症（multiple sclerosis、ＭＳ）、関節リウマチ、炎症性腸疾患、インスリン依存性（１型）真性糖尿病、及びブドウ膜炎の動物モデルの処置において有効であるため、ＩＬ－１２及びＴｈ１細胞集団の異常な制御は、多くの免疫媒介性疾患に関連している（Ｌｅｏｎａｒｄ ｅｔ ａｌ，１９９５、Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ，１９９９、Ｍａｌｆａｉｔ ｅｔ ａｌ，１９９８、Ｄａｖｉｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ，１９９８）。ＩＬ－１２は、全身性エリテマトーデスの２つの独立したマウスモデルにおけるＳＬＥの病因において重要な役割を果たすことも示されている（Ｋｉｋａｗａｄａ ｅｔ ａｌ．２００３、Ｄａｉ ｅｔ ａｌ．２００７）。

【0006】

全身性エリテマトーデス（systemic lupus erythematosus、ＳＬＥ）は、ほぼあらゆる器官系に影響を及ぼし得る未知の病因の複雑な異種の慢性自己免疫疾患であり、漸増及び漸減疾患経過をたどる。全身性エリテマトーデスは、男性よりも女性においてはるかに頻繁に発症し、いくつかの研究では最大９倍より頻繁に発症し、１５歳～４５歳の妊娠可能年齢で現れることが多い。この疾患は、アフリカ系カリブ人、アジア系、及びヒスパニック系集団においてより多く見られる。ＳＬＥでは、免疫系は、身体の細胞及び組織を攻撃し、結果として、心臓、関節、皮膚、肺、血管、肝臓、腎臓、及び神経系を害し得る炎症並びに組織損傷をもたらす。ＳＬＥと診断された対象の約半数が器官を脅かす疾患を呈するが、器官関与を呈しない対象を診断するのに数年を要する場合がある。新たに診断されたループス患者の主な症状のうちのいくつかは、不整脈（６２％）及び皮膚症状（新たな光過敏症；２０％）であり、持続的な発熱及び倦怠感が続く^３９。ループスの推定年間発生率は、１００，０００人当たり１．８症例から７．６症例まで幅があり、世界中の罹患率は、１００，０００人当たり１４～１７２症例の範囲である^３９。軽度疾患を有する患者は、主に皮膚発疹及び関節痛を有し、あまり積極的治療を必要とせず、レジメンとしては、非ステロイド性抗炎症薬（nonsteroidal anti-inflammatory drug、ＮＳＡＩＤ）、抗マラリア薬（例えば、ヒドロキシクロロキン、クロロキン、若しくはキナクリン）、及び／又は低用量コルチコステロイドが挙げられる。より重度の疾患を有する患者は、関与する器官系に応じて、潜在的な腎不全、心内膜炎、若しくは心筋炎を伴う可能性のあるループス腎炎、肺炎、妊娠合併症、脳卒中、神経学的合併症、血管炎、及び出血又は感染症の関連リスクを伴う血球減少症を含む様々な重篤な状態を経験し得る。より重度の疾患に対する一般的な治療としては、メトトレキサート（ＭＴＸ）、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、高用量コルチコステロイド、生物学的Ｂ細胞細胞傷害剤、又はＢ細胞調節因子、及び他の免疫調節剤が挙げられる。重篤なＳＬＥを有する患者は、平均余命が１０～３０年短縮し、主に、疾患の、標準治療療法の、及び／又は加速性アテローム性動脈硬化症の合併症に起因する。加えて、ＳＬＥは、生活の質、仕事の生産性、及び医療費にかなりの影響を及ぼす。ＳＬＥの既存の療法は、一般に、細胞毒性又は免疫調節性のいずれかであり、顕著な安全性リスクを有し得る。ＳＬＥのためのより新たな治療は、標準治療療法をわずかに超える利益しか提供していない。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

したがって、高い安全性リスクを負うことなくこの疾患において有意な利益を提供することができる新たな代替の治療に対する大きな満たされていないニーズが存在する。

【課題を解決するための手段】

【0008】

簡単にするために、参照により本明細書に組み込まれる、本明細書に添付の独立及び従属請求項によって、全般的及び好ましい実施形態がそれぞれ定義される。他の好ましい実施形態、特性、及び利点は、添付の図面と併せて、以下の発明を実施するための形態から明らかになるであろう。

【0009】

ある特定の実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号１、配列番号２、及び配列番号３の重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、（ｉｉ）配列番号４、配列番号５、及び配列番号６の軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体が、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、当該製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効である、抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を提供する。

【0010】

ある特定の実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号１、配列番号２、及び配列番号３の重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、（ｉｉ）配列番号４、配列番号５、及び配列番号６の軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体がバイオ後続品であり、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体が、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、当該製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効である、抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を提供する。

【0011】

ある特定の実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号７の重鎖可変ドメインアミノ酸配列と、（ｉｉ）配列番号８の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体が、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、当該製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効である、抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を提供する。

【0012】

ある特定の実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号１０の重鎖アミノ酸配列と、（ｉｉ）配列番号１１の軽鎖アミノ酸配列と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体が、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、当該製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効である、抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を提供する。

【0013】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む原薬（drug substance、ＤＳ）又は医薬品（drug product、ＤＰ）を生産するための製造方法であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが制御され、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含む、製造方法を提供する。

【0014】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む原薬（ＤＳ）又は医薬品（ＤＰ）を生産するための製造方法であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体がバイオ後続品であり、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが制御され、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含む、製造方法を提供する。

【0015】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む原薬（ＤＳ）又は医薬品（ＤＰ）を生産するための製造方法であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが制御され、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のキャピラリー等電点電気泳動（capillary isoelectric focusing、ｃＩＥＦ）電気泳動図のピーク３面積％が３９．８％以上～６４．４％以下であり、当該方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効である、製造方法を提供する。

【0016】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む原薬（ＤＳ）又は医薬品（ＤＰ）を生産するための製造方法であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが制御され、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効であり、当該既知組成培地中の当該規定の微量金属マンガン及び銅濃度が誘導結合プラズマ質量分析（inductively coupled plasma mass spectrometry、ＩＣＰ－ＭＳ）を使用して決定される、製造方法を提供する。

【0017】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む原薬（ＤＳ）又は医薬品（ＤＰ）を生産するための製造方法であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが制御され、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効であり、当該既知組成培地中の当該微量金属マンガン及び銅濃度が、当該既知組成培地に１つ又は２つ以上のマンガン源及び銅源を補充することによって制御され、当該１つ又は２つ以上のマンガン源が、ＭｎＣｌ_２、ＭｎＳＯ_４、ＭｎＦ_２、及びＭｎＩ_２からなる群から選択され、当該１つ又は２つ以上の銅源が、ＣｕＳＯ_４、ＣｕＣｌ_２、及びＣｕ（ＯＡｃ）_２からなる群から選択される、製造方法を提供する。

【0018】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む原薬（ＤＳ）又は医薬品（ＤＰ）を生産するための製造方法であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが制御され、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効であり、当該オリゴ糖種が高圧液体クロマトグラフィー（high pressure liquid chromatography、ＨＰＬＣ）によって決定される、製造方法を提供する。

【0019】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む原薬（ＤＳ）又は医薬品（ＤＰ）を生産するための製造方法であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが制御され、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効であり、当該真核細胞が、チャイニーズハムスター変動細胞（Chinese hamster vary cell、ＣＨＯ細胞）、ヒト網膜細胞（ＰＥＲ．Ｃ６細胞）、並びにマウス骨髄腫細胞（ＮＳ０細胞及びＳｐ２／０細胞）からなる群から選択される、製造方法を提供する。

【0020】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む組成物であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体が、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、当該製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効である、組成物を提供する。

【0021】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む組成物であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体がバイオ後続品であり、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体が、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、当該製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効である、組成物を提供する。

【0022】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む組成物であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）電気泳動図のピーク３面積％が３９．８％以上～６４．４％以下であり、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体が、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、当該製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効である、組成物を提供する。

【0023】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む組成物であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体が、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、当該製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効であり、当該既知組成培地中の当該規定の微量金属マンガン及び銅濃度が誘導結合プラズマ質量分析（ＩＣＰ－ＭＳ）を使用して決定される、組成物を提供する。

【0024】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む組成物であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体が、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、当該方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効であり、当該既知組成培地中の当該規定の微量金属マンガン及び銅濃度が、当該既知組成培地に１つ又は２つ以上のマンガン源及び銅源を補充することによって制御され、当該１つ又は２つ以上のマンガン源が、ＭｎＣｌ_２、ＭｎＳＯ_４、ＭｎＦ_２、及びＭｎＩ_２からなる群から選択され、当該１つ又は２つ以上の銅源が、ＣｕＳＯ_４、ＣｕＣｌ_２、及びＣｕ（ＯＡｃ）_２からなる群から選択される、組成物を提供する。

【0025】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む組成物であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体が、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、当該製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効であり、当該オリゴ糖種が高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定される、組成物を提供する。

【0026】

ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列の軽鎖と、を含む抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を含む組成物であって、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含み、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体が、当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御する製造方法によって生産され、当該製造方法が、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属マンガン及び銅濃度を含むように制御された既知組成培地中で真核細胞を培養することと、当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体を発現させることと、を含み、当該マンガン及び銅濃度が当該抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体の当該オリゴ糖プロファイルを制御するのに有効であり、当該真核細胞が、チャイニーズハムスター変動細胞（ＣＨＯ細胞）、ヒト網膜細胞（ＰＥＲ．Ｃ６細胞）、並びにマウス骨髄腫細胞（ＮＳ０細胞及びＳｐ２／０細胞）からなる群から選択される、組成物を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0027】

【図1】ウステキヌマブ製造プロセスの１０段階の概要を示す。

【図2】インプロセス制御及びプロセス監視試験を含む、前培養工程及び増殖工程のための段階１製造プロセスのフロー図を示す。

【図3】インプロセス制御及びプロセス監視試験を含む、段階２製造プロセス工程のフロー図を示す。

【図4】ウステキヌマブのオリゴ糖分析用の代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。

【図5】ウステキヌマブの代表的なｃＩＥＦ電気泳動図プロファイルを示す。ｃＩＥＦピークと減少する負電荷／シアリル化度との間の一般的関係を表すグラフも示す。

【図6】ウステキヌマブＩｇＧの主要なＮ結合型オリゴ糖種のうちのいくつかの図表による概要を示す。グリコシル化成熟プロセスにおけるいくつかの酵素の役割及びいくつかの二価カチオン（例えば、補因子としてのＭｎ^２＋及びＧａｌＴＩ阻害剤としてのＣｕ^２＋）の役割も示す（例えば、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．２００７ Ｆｅｂ １５；９６（３）：５３８－４９；Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ．２００８ Ａｐｒ；９（４）：２９２－３０９、Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００２ Ｍａｙ ３１；３５（３）：３３０－６を参照されたい）。末端シアル酸を含む種（Ｓ１及びＳ２）は荷電種であり、末端シアル酸を含まない種（Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、及びＧ２Ｆ）は中性種であるが、荷電種の生成は、ＧａｌＴ１酵素によって追加されたＧ１Ｆ及びＧ２Ｆ中のガラクトースの存在に依存することに留意されたい。

【図7】異なるバッチについて時系列順に提示したウステキヌマブの変更前、変更後、及びＳＵＰ－ＡＧＴ３バッチのウステキヌマブｃＩＥＦプロファイルのピーク３面積％を示す。歴史的変更前ＡＧＴバッチの平均総計％を実線で示し、規格上限値及び規格下限値を破線で示す。

【図8A】異なるバッチについて時系列順に提示したウステキヌマブの変更前、変更後、及びＳＵＰ－ＡＧＴ３バッチ中の総中性オリゴ糖種（図８Ａ）及び総荷電オリゴ糖種（図８Ｂ）を示す。歴史的変更前ＡＧＴバッチの平均総計％を実線で示し、規格上限値及び規格下限値を破線で示す。

【図8B】異なるバッチについて時系列順に提示したウステキヌマブの変更前、変更後、及びＳＵＰ－ＡＧＴ３バッチ中の総中性オリゴ糖種（図８Ａ）及び総荷電オリゴ糖種（図８Ｂ）を示す。歴史的変更前ＡＧＴバッチの平均総計％を実線で示し、規格上限値及び規格下限値を破線で示す。

【図9A】異なるバッチについて時系列順に提示したウステキヌマブの変更前、変更後、及びＳＵＰ－ＡＧＴ３バッチ中の個々の中性オリゴ糖種、Ｇ０Ｆ（図９Ａ）、Ｇ１Ｆ（図９Ｂ）、及びＧ２Ｆ（図９Ｃ）の総計％を示す。歴史的変更前ＡＧＴバッチの平均％値を実線で示し、規格上限値及び規格下限値を破線で示す。

【図9B】異なるバッチについて時系列順に提示したウステキヌマブの変更前、変更後、及びＳＵＰ－ＡＧＴ３バッチ中の個々の中性オリゴ糖種、Ｇ０Ｆ（図９Ａ）、Ｇ１Ｆ（図９Ｂ）、及びＧ２Ｆ（図９Ｃ）の総計％を示す。歴史的変更前ＡＧＴバッチの平均％値を実線で示し、規格上限値及び規格下限値を破線で示す。

【図9C】異なるバッチについて時系列順に提示したウステキヌマブの変更前、変更後、及びＳＵＰ－ＡＧＴ３バッチ中の個々の中性オリゴ糖種、Ｇ０Ｆ（図９Ａ）、Ｇ１Ｆ（図９Ｂ）、及びＧ２Ｆ（図９Ｃ）の総計％を示す。歴史的変更前ＡＧＴバッチの平均％値を実線で示し、規格上限値及び規格下限値を破線で示す。

【図10】ウステキヌマブの異なるバッチのマンガンレベルを時系列順に示す。データを、使用した培地、例えば、変更前ＡＧＴ、変更後ＡＧＴ、及びＳＵＰ－ＡＧＴ３に基づいて識別している。歴史的バッチの平均値を実線で示し、規格上限値及び規格下限値を破線で示す。

【図11】ウステキヌマブの異なるバッチのクロムレベルを時系列順に示す。データを、使用した培地、例えば、変化前ＡＧＴ、変化後ＡＧＴ、及びＳＵＰ－ＡＧＴ３に基づいて識別している。

【図12】ウステキヌマブの異なるバッチの銅レベルを時系列順に示す。データを、使用した培地、例えば、変化前ＡＧＴ、変化後ＡＧＴ、及びＳＵＰ－ＡＧＴ３に基づいて識別している。歴史的バッチの平均値を実線で示し、規格上限値及び規格下限値を破線で示す。変更後ＡＧＴバッチの多くが銅について本アッセイの下限値未満の値（１μｇ／Ｌ未満）を有し、１μｇ／Ｌとしてグラフで表しているにすぎないことに留意されたい。

【図13】ウステキヌマブの異なる５００リットルのＳＵＰ－ＡＧＴ３バッチの細胞の細胞培養（段階２）生存率（％）を示す（黒丸、黒四角、白四角、黒三角、白三角、黒ひし形、及び白ひし形）。歴史的変更前ＡＧＴバッチの平均を実線で示し、歴史的変更前ＡＧＴバッチの±３標準偏差を破線で示す。

【図14】ウステキヌマブの異なる５００リットルのＳＵＰ－ＡＧＴ３バッチの細胞培養（段階２）累積ＩｇＧ量（回収したグラム）を示す（黒丸、黒四角、白四角、黒三角、白三角、黒ひし形、及び白ひし形）。歴史的変更前ＡＧＴバッチの平均を実線で示し、歴史的変更前ＡＧＴバッチの±３標準偏差を破線で示す。

【発明を実施するための形態】

【0028】

本明細書で使用するとき、「抗ＩＬ－１２抗体」、「抗ＩＬ－２３抗体」、「抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体」、「抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体」、「ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体」、「ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体」、「抗体部分」、若しくは「抗体断片」、及び／又は「抗体変異体」などは、本発明の抗体に組み込むことができる、重鎖若しくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）若しくはそのリガンド結合部分、重鎖若しくは軽鎖可変領域、重鎖若しくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、又はこれらの任意の部分、あるいはＩＬ－１２及び／若しくはＩＬ－２３受容体又は結合タンパク質の少なくとも一部分などであるが、これらに限定されない、免疫グロブリン分子の少なくとも一部分を含む分子を含む、任意のタンパク質又はペプチド含有分子を含む。かかる抗体は、かかる抗体が、インビトロ、インサイチュ、及び／又はインビボで、少なくとも１つのＩＬ－１２／２３活性若しくは結合、又はＩＬ－１２／２３受容体活性若しくは結合を調節する、それを減少させる、それを増加させる、それと拮抗する、それを刺激する、それを軽減する、それを緩和する、それを遮断する、それを阻害する、それを抑止する、及び／又はそれを妨害する場合などであるが、これらに限定されない場合に、任意選択で、特異的リガンドに更に影響を及ぼす。非限定的な例として、本発明の好適な抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体、特定の部分、又は変異体は、少なくとも１つのＩＬ－１２／２３分子、又はその特定の部分、変異体、若しくはドメインに結合することができる。好適な抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体、特定の部分、又は変異体は、任意選択で、ＲＮＡ、ＤＮＡ、若しくはタンパク質合成、ＩＬ－１２／２３放出、ＩＬ－１２／２３受容体シグナル伝達、膜ＩＬ－１２／２３切断、ＩＬ－１２／２３活性、ＩＬ－１２／２３産生、及び／又は合成などであるが、これらに限定されない、ＩＬ－１２／２３活性又は機能のうちの少なくとも１つに影響を及ぼすこともできる。

【0029】

本明細書で使用するとき、「抗体」又は「複数の抗体」という用語は、２００９年のバイオロジクス価格競争・イノベーション法（Biologics Price Competition and Innovation Act of 2009、ＢＰＣＩ Ａｃｔ）並びに同様の世界的な法律及び規制下で承認されたバイオシミラ抗体分子を含む。ＢＰＣＩ Ａｃｔの下で、抗体は、臨床的に不活性な構成成分のわずかな違いにもかかわらず、基準品と「非常に類似」しており、安全性、純度、及び効力の点で基準品と同じ臨床結果が得られると「予想される」ことをデータが示す場合、バイオシミラであることが実証され得る（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１８，Ｖｏｌ．２４，Ｎｏ．２，ｐｐ．１９５－２０４）。これらのバイオシミラ抗体分子は、承認経路の短縮を提供し、それにより、出願人は、規制当局の承認を確保するために、イノベータ基準品の臨床データに依存している。臨床試験の成功に基づいてＦＤＡに承認されたオリジナルのイノベータ基準抗体と比較して、バイオシミラ抗体分子は、本明細書では「バイオ後続品」と称される。本明細書に提示されるように、ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）は、臨床試験の成功に基づいてＦＤＡに承認されたオリジナルのイノベータ基準である抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体である。ウステキヌマブは、２００９年から米国で販売されている。

【0030】

「抗体」という用語は、抗体模倣薬を含む、あるいは単鎖抗体及びその断片などといった抗体の構造及び／若しくは機能を模倣する抗体の部分又はその特定の断片若しくは一部分を含む、抗体、その消化断片、特定の部分、及び変異体を包含するよう更に意図されている。機能断片としては、哺乳類ＩＬ－１２／２３に結合する抗原結合断片が挙げられる。例えば、Ｆａｂ（例えば、パパイン消化による）、Ｆａｂ’（例えば、ペプシン消化及び部分的還元による）及びＦ（ａｂ’）_２（例えば、ペプシン消化による）、ｆａｃｂ（例えば、プラスミン消化による）、ｐＦｃ’（例えば、ペプシン又はプラスミン消化による）、Ｆｄ（例えば、ペプシン消化、部分的還元、及び再集合による）、Ｆｖ又はｓｃＦｖ（例えば、分子生物学的技術による）断片が挙げられるが、これらに限定されない、ＩＬ－１２／２３又はその一部分に結合することができる抗体断片が、本発明に包含される（例えば、上記のＣｏｌｌｉｇａｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙを参照されたい）。

【0031】

かかる断片は、当該技術分野において既知であり、かつ／又は本明細書に記載される、酵素による切断、合成、又は組換え技術により生成することができる。抗体はまた、１つ又は２つ以上の終止コドンが天然終止部位の上流に導入されている抗体遺伝子を使用して、種々の切断型で産生することもできる。例えば、Ｆ（ａｂ’）_２重鎖部をコードする遺伝子の組み合わせは、重鎖のＣ_Ｈ１ドメイン及び／又はヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含むように設計することができる。抗体の種々の部分を従来技術により化学的に結合することができるか、又は遺伝子工学技術を使用して切れ目なく連続するタンパク質として調製することができる。

【0032】

本明細書で使用するとき、「ヒト抗体」という用語は、タンパク質の実質的に全ての部分（例えば、ＣＤＲ、フレームワーク、Ｃ_Ｌ、Ｃ_Ｈドメイン（例えば、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３）、ヒンジ（Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ））がわずかな配列変化又は変異を有するだけでヒトにおいて実質的に非免疫原性である抗体を指す。「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系列型免疫グロブリン配列に由来する抗体又はそれに厳密に一致する抗体である場合もある。ヒト抗体は、生殖細胞系列型免疫グロブリン配列にコードされていないアミノ酸残基（例えば、インビトロにおけるランダムな若しくは部位特異的な変異の導入により、又はインビボにおける体細胞突然変異により導入された変異）を含んでもよい。多くの場合、これは、ヒト抗体がヒトにおいて実質的に非免疫原性であることを意味する。ヒト抗体は、それらのアミノ酸配列の類似性に基づいて群に分類されている。したがって、配列類似性検索を使用して、類似の直鎖配列を有する抗体を、ヒト抗体を作り出すためのテンプレートとして選択することができる。同様に、名称に霊長類（サル、ヒヒ、チンパンジーなど）、げっ歯類（マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ハムスターなど）、及び他の哺乳動物を含む抗体は、かかる種、亜属、属、亜科、及び科に特異的な抗体を指定する。更に、キメラ抗体は、上記の任意の組み合わせを含むことができる。かかる変化又は変異は、任意選択でかつ好ましくは、修飾されていない抗体に比べて、ヒト又は他の種における免疫原性を保持する又は低減させる。したがって、ヒト抗体は、キメラ抗体又はヒト化抗体とは異なる。

【0033】

ヒト抗体は、機能的に再構成されたヒト免疫グロブリン（例えば、重鎖及び／又は軽鎖）遺伝子を発現することができる非ヒト動物又は原核若しくは真核細胞により産生され得ることが指摘される。更に、ヒト抗体が単鎖抗体である場合、天然ヒト抗体では見られないリンカーペプチドを含むことができる。例えば、Ｆｖは、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域とを接続する２～約８個のグリシン又は他のアミノ酸残基などのリンカーペプチドを含むことができる。かかるリンカーペプチドは、ヒト由来のものとみなされる。

【0034】

本発明の方法及び組成物に有用な抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体（ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体とも称される）（又はＩＬ－２３に対する抗体）は、任意選択で、ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又はＩＬ－２３）への高親和性結合、及び任意選択でかつ好ましくは低毒性を有することを特徴とし得る。具体的には、可変領域、定常領域、及びフレームワークなどの個々の構成要素が、個々に及び／又は集合的に、任意選択でかつ好ましくは、低い免疫原性を有する、本発明の抗体、その特定の断片、又は変異体が本発明において有用である。本発明で使用することができる抗体は、任意選択で、症状の測定可能な緩和並びに低い及び／又は許容される毒性で、患者を長期間にわたって治療する能力を特徴とする。低い若しくは許容される免疫原性、及び／又は高い親和性、並びに他の好適な特性が、得られる治療結果に寄与することができる。「低い免疫原性」は、本明細書では、治療される患者の約７５％未満、若しくは好ましくは約５０％未満において有意なＨＡＨＡ、ＨＡＣＡ、若しくはＨＡＭＡ応答を上昇させる、及び／又は治療される患者において低い力価（二重抗原酵素免疫アッセイで測定したとき約３００未満、好ましくは約１００未満）を上昇させることとして定義される（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｅｌｌｉｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ３４４：１１２５－１１２７（１９９４））。「低い免疫原性」は、治療期間中の推奨治療過程にわたって推奨用量で治療された患者の２５％未満、好ましくは治療された患者の１０％未満で発生したとき、抗ＩＬ－１２抗体で治療された患者における抗ＩＬ－１２抗体に対する漸増可能なレベルの抗体の発生率として定義することもできる。

【0035】

本明細書で使用するとき、「ヒト抗体」という用語は、タンパク質の実質的に全ての部分（例えば、ＣＤＲ、フレームワーク、Ｃ_Ｌ、Ｃ_Ｈドメイン（例えば、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及びＣＨ３）、ヒンジ（Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ））がわずかな配列変化又は変異を有するだけでヒトにおいて実質的に非免疫原性である抗体を指す。同様に、霊長類（サル、ヒヒ、チンパンジーなど）、げっ歯類（マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ハムスターなど）、及び他の哺乳動物を指定された抗体は、かかる種、亜属、属、亜科、科に特異的な抗体を指す。更に、キメラ抗体は、上記の任意の組み合わせを含む。かかる変化又は変異は、任意選択でかつ好ましくは、修飾されていない抗体に比べて、ヒト又は他の種における免疫原性を保持する又は低減させる。したがって、ヒト抗体は、キメラ抗体又はヒト化抗体とは異なる。ヒト抗体は、機能的に再構成されたヒト免疫グロブリン（例えば、重鎖及び／又は軽鎖）遺伝子を発現することができる非ヒト動物又は原核若しくは真核細胞により産生され得ることが指摘される。更に、ヒト抗体が単鎖抗体である場合、天然ヒト抗体では見られないリンカーペプチドを含むことができる。例えば、Ｆｖは、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域とを接続する２～約８個のグリシン又は他のアミノ酸残基などのリンカーペプチドを含むことができる。かかるリンカーペプチドは、ヒト由来のものとみなされる。

【0036】

また、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナル、好ましくはヒト又はヒト化抗体である、二重特異性抗体、例えば、ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）（二重特異性抗体）、異種特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、又は類似の抗体を使用することもできる。二重特異性抗体の製造方法は、当該技術分野において既知である。従来、二重特異性抗体の組換え産生は、２種の免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の共発現に基づき、ここで、２本の重鎖は異なる特異性を有する（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３））。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の無作為な組み合わせのために、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は１０種の異なる抗体分子の可能な混合物を産生し、これらのうち１種のみが正しい二重特異的構造を有する。通常、親和性クロマトグラフィー工程によって行われる正しい分子の精製は、生成物の収率が低くて手間がかかるため、二重特異性抗体の生成を促進するための異なる手法が開発されている。

【0037】

完全長二重特異性抗体は、例えば、インビトロでの無細胞環境において又は共発現を使用して、異なる特異性を有する２つの抗体半分子のヘテロ二量体化に好都合になるように各半分子における重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することによって、２つの一特異性二価抗体間でのＦａｂアーム交換（又は半分子交換）を使用して生成され得る。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離－会合の結果である。親単一特異性抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合は減少する。親単一特異性抗体のうち１つの結果として得られた遊離システインは、第２の親単一特異性抗体分子のシステイン残基と重鎖内ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインは、解離－会合により解放及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体化よりもヘテロ二量体化に有利となるように操作され得る。結果として得られた生成物は、それぞれ異なるエピトープに結合することができる、２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異性抗体である。

【0038】

本明細書で使用するとき、「ホモ二量体化」とは、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用するとき、「ホモ二量体」とは、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。

【0039】

本明細書で使用するとき、「ヘテロ二量体化」とは、同一ではないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用するとき、「ヘテロ二量体」とは、同一ではないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。

【0040】

「ノブインホール（knob-in-hole）」戦略（例えば、国際公開第２００６／０２８９３６号を参照のこと）を使用して、完全長二重特異性抗体を生成することができる。簡潔に述べると、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸を、ヘテロ二量体化を促進するように、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置で変異させることができる。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入され、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換対は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける修飾された位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける修飾された位置として表す）。

【0041】

他の戦略、例えば、１つのＣＨ３表面における正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面における負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を使用する重鎖ヘテロ二量体化の促進が、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号、米国特許出願公開第２０１０／０２８６３７号、又は米国特許出願公開第２０１１／０１２３５３２号に記載されるように使用されてもよい。他の戦略では、ヘテロ二量体化は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は同第２０１３／０１９５８４９号に記載されるように、次の置換：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける修飾された位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける修飾された位置として表す）により促進することができる。

【0042】

上述された方法に加えて、二重特異性抗体は、国際公開第２０１１／１３１７４６号に記載される方法に従って、インビトロでの無細胞環境下で、２つの単一特異的ホモ二量体抗体のＣＨ３領域中に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化させる還元条件下で、２つの親単一特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成することにより生成され得る。本方法において、第１の単一特異性二価抗体及び第２の単一特異性二価抗体は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインにおいてある特定の置換を有するように操作されるが、これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合を異性化させるのに十分な還元条件下で一緒にインキュベートされ、それにより、Ｆａｂアーム交換により二重特異性抗体が生成される。インキュベート条件は、最適には、非還元条件に戻され得る。使用され得る例示的な還元剤は、２－メルカプトエチルアミン（２－ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ－システイン、及びベータ－メルカプトエタノールであり、好ましくは、２－メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度で、少なくとも２５ｍＭの２－ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５～８、例えば、ｐＨ７．０又はｐＨ７．４で、少なくとも９０分間のインキュベートが使用されてもよい。

【0043】

「有効性」及び「有効な」という用語は、用量、投与レジメン、治療、又は方法の文脈において本明細書で使用するとき、特定の用量、投与、又は治療レジメンの有効性を意味する。本発明の薬剤に応答した疾患の経過中の変化に基づいて、有効性を測定することができる。例えば、本発明の抗ＩＬ１２／２３ｐ４０又は抗ＩＬ２３抗体（例えば、抗ＩＬ１２／２３ｐ４０抗体ウセツキヌマブ）は、治療される障害の重篤度を反映する少なくとも１つの指標において改善、好ましくは持続的な改善を引き起こすのに十分な量及び時間で、対象に対して投与される。その治療の量及び時間が十分であるかどうかを判定するために、対象の疾病、疾患、又は状態の程度を反映する様々な指標が評価され得る。かかる指標には、例えば、疾患重篤度、症状、又は問題となっている障害の発現についての、臨床的に認識されている指標が含まれる。改善度は全体的に医師により決定され、医師はこの決定を、兆候、症状、生検、又は他の検査結果に基づいて行うことができ、また対象に対して行う質問票、例えば所与の疾患に関して開発された生活の質に関する質問票などを採用することもできる。

【0044】

「安全性」という用語は、本発明の抗ＩＬ１２／２３ｐ４０又は抗ＩＬ２３抗体（例えば、抗ＩＬ１２／２３ｐ４０抗体ウステキヌマブ）による用量、投与レジメン、治療又は方法に関する場合、標準治療又は別の比較薬と比べて、治療下で発現した有害事象（ａｄｖｅｒｓｅ ｅｖｅｎｔ、ＡＥ又はｔｒｅａｔｍｅｎｔ－ｅｍｅｒｇｅｎｔ ａｄｖｅｒｓｅ ｅｖｅｎｔ、ＴＥＡＥと称される）の許容される頻度及び／又は許容される重症度を伴う、良好なリスク：ベネフィット比を指す。有害事象は、医薬品を投与された患者における好ましくない医療上の出来事である。特に、本発明の抗ＩＬ１２／２３ｐ４０又は抗ＩＬ２３抗体による用量、投与レジメン又は治療に関連する安全性は、有害事象が抗ＩＬ１２／２３ｐ４０又は抗ＩＬ２３抗体の使用による可能性がある、可能性が高い、又は非常に高いと考えられる場合、抗体の投与に関連する有害事象の許容される頻度及び／又は許容される重症度を指す。

【0045】

有用性
本発明の単離された核酸は、細胞、組織、器官、又は動物（哺乳動物及びヒトを含む）における効果を測定して、免疫障害若しくは疾患、心血管障害若しくは疾患、感染性、悪性及び／若しくは神経性障害又は疾患、あるいは他の既知の若しくは特定のＩＬ－１２／２３関連状態のうちの少なくとも１つから選択されるが、これらに限定されない、少なくとも１つのＩＬ－１２／２３状態を診断する、監視する、調節する、治療する、緩和する、その発生を予防するのを助ける、又はその症状を軽減するために使用することができる、少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（若しくは抗ＩＬ－２３）抗体又はその特定の変異体を産生するために使用することができる。

【0046】

かかる方法は、症状、作用、又は機序のかかる調節、治療、緩和、予防、若しくは低減を必要とする細胞、組織、器官、動物、又は患者に、少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又は抗ＩＬ－２３）抗体を含む有効量の組成物又は医薬組成物を投与することを含むことができる。有効量は、本明細書に記載される、又は関連分野で既知である、既知の方法を使用して行われかつ決定される、単回（例えば、ボーラス）、複数回、若しくは持続投与当たり約０．００１～５００ｍｇ／ｋｇの量、又は単回、複数回、若しくは持続投与当たり０．０１～５０００μｇ／ｍｌの血清中濃度を達成する量、又はそれらの中の任意の有効範囲若しくは値を含むことができる。

【0047】

引用文献
本明細書で引用する全ての刊行物又は特許は、具体的な指定の有無にかかわらず、参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、本発明の時点での先行技術を示し、かつ／又は本発明の説明及び実施可能性を提供する。刊行物は、電子形式若しくは印刷形式で記録されたものを全て含む任意のメディア形式で利用可能な、任意の科学刊行物若しくは特許公報又は任意の他の情報を指す。以下の文献は、参照により全体が本明細書に組み込まれる：Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ（１９８７－２００１）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４－２００１）、Ｃｏｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ，（１９９７－２００１）。

【0048】

本発明の抗体－産生及び生成
本発明の方法において使用される少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又は抗ＩＬ－２３）は、任意選択で、当該技術分野において周知の細胞株、混合細胞株、不死化細胞、又は不死化細胞のクローン集団によって産生することができる。例えば、各々参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ（１９８７－２００１）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４－２００１）、Ｃｏｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ，（１９９７－２００１）を参照されたい。

【0049】

好ましい抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０抗体は、配列番号７の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号８の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを有し、かつ配列番号１、配列番号２、及び配列番号３の重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６の軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列とを有するウステキヌマブ（Ｓｔｅｌａｒａ（登録商標））である。好ましい抗ＩＬ－２３抗体は、グセルクマブ（ＣＮＴＯ１９５９とも称される）である。他の抗ＩＬ－２３抗体は本明細書に列挙される配列を有し、全内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，９３５，３４４号に記載されている。

【0050】

ヒトＩＬ－１２／２３ｐ４０若しくはＩＬ－２３タンパク質又はその断片に特異的なヒト抗体を、単離されたＩＬ－１２／２３ｐ４０タンパク質、ＩＬ－２３タンパク質、及び／又はそれらの一部分（合成ペプチドなどの合成分子を含む）などの適切な免疫原性抗原に対して産生させることができる。他の特異的な又は一般的な哺乳動物の抗体も同様に産生させることができる。免疫原性抗原の調製及びモノクローナル抗体の産生は、任意の好適な技術を使用して行うことができる。

【0051】

１つのアプローチでは、好適な不死細胞株（例えば、限定されるものではないが、Ｓｐ２／０、Ｓｐ２／０－ＡＧ１４、ＮＳＯ、ＮＳ１、ＮＳ２、ＡＥ－１、Ｌ．５、Ｌ２４３、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、Ｓｐ２ ＳＡ３、Ｓｐ２ ＭＡＩ、Ｓｐ２ ＳＳ１、Ｓｐ２ ＳＡ５、Ｕ９３７、ＭＬＡ １４４、ＡＣＴ ＩＶ、ＭＯＬＴ４、ＤＡ－１、ＪＵＲＫＡＴ、ＷＥＨＩ、Ｋ－５６２、ＣＯＳ、ＲＡＪＩ、ＮＩＨ ３Ｔ３、ＨＬ－６０、ＭＬＡ １４４、ＮＡＭＡＬＷＡ、ＮＥＵＲＯ ２Ａなどの骨髄腫細胞株、又は異種骨髄腫、その融合産物、又はそれに由来する任意の細胞若しくは融合細胞、又は当該技術分野において既知の任意の他の好適な細胞株）（例えば、ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ、ｗｗｗ．ｌｉｆｅｔｅｃｈ．ｃｏｍ．などを参照されたい）を、限定されるものではないが、単離された又はクローン化された脾臓、末梢血、リンパ、扁桃腺、又は他の免疫若しくはＢ細胞含有細胞などの抗体産生細胞、あるいは内因性又は異種核酸として、組換え若しくは内因性、ウイルス、細菌、藻、原核生物、両生類、昆虫、爬虫類、魚、哺乳動物、げっ歯類、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ヒツジ、霊長類、真核生物、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｒＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡ若しくはＲＮＡ、葉緑体ＤＮＡ若しくはＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、単一、二重若しくは三重鎖、ハイブリダイズなど、又はそれらの任意の組み合わせとしてのいずれかで、重鎖又は軽鎖の定常若しくは可変、又はフレームワーク若しくはＣＤＲ配列を発現する任意の他の細胞と融合することにより、ハイブリドーマを産生する。例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、上記のＡｕｓｕｂｅｌ、及び上記のＣｏｌｌｉｇａｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙの第２章を参照されたい。

【0052】

抗体産生細胞は、目的とする抗原で免疫化されたヒト又は他の好適な動物の末梢血、又は好ましくは脾臓若しくはリンパ節から得ることもできる。任意の他の好適な宿主細胞を使用して、本発明の抗体、その特定の断片又は変異体をコードする異種核酸若しくは内在核酸を発現させることもできる。融合細胞（ハイブリドーマ）又は組換え細胞は、選択的培養条件又は他の好適な既知の方法を使用して単離し、限界希釈若しくは細胞選別又は他の既知の方法によってクローニングすることができる。所望の特異性を有する抗体を産生する細胞は、好適なアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）によって選択することができる。

【0053】

ペプチド又はタンパク質ライブラリから組換え抗体を選択する方法が挙げられるが、これらに限定されない、必要とされる特異性を有する抗体を産生又は単離するのに好適な他の方法を使用することができる（例えば、バクテリオファージ、リボソーム、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡ、ｃＤＮＡなどのディスプレイライブラリであるが、これらに限定されず、例えば、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ，ＵＫ、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ，Ｍａｒｔｉｎｓｒｅｉｄ／Ｐｌａｎｅｇｇ，ＤＥ、Ｂｉｏｖａｔｉｏｎ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ，ＵＫ、ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ，Ｌｕｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ、Ｄｙａｘ Ｃｏｒｐ．，Ｅｎｚｏｎ，Ａｆｆｙｍａｘ／Ｂｉｏｓｉｔｅ、Ｘｏｍａ，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ、Ｉｘｓｙｓ．から入手可能である）。例えば、欧州特許第３６８，６８４号、国際出願第ＧＢ９１／０１１３４号、国際出願第ＧＢ９２／０１７５５号、国際出願第ＧＢ９２／００２２４０号、国際出願第ＧＢ９２／００８８３号、国際出願第ＧＢ９３／００６０５号、米国特許出願第０８／３５０２６０号（５／１２／９４）、国際出願第ＧＢ９４／０１４２２号、国際出願第ＧＢ９４／０２６６２号、国際出願第ＧＢ９７／０１８３５号、（ＣＡＴ／ＭＲＣ）、国際公開第９０／１４４４３号、国際公開第９０／１４４２４号、国際公開第９０／１４４３０号、国際出願第ＵＳ９４／１２３４号、国際公開第９２／１８６１９号、同第９６／０７７５４号（Ｓｃｒｉｐｐｓ）、国際公開第９６／１３５８３号、国際公開第９７／０８３２０号（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ）、国際公開第９５／１６０２７号（ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ）、国際公開第８８／０６６３０号、国際公開第９０／３８０９号（Ｄｙａｘ）、米国特許第４，７０４，６９２号（Ｅｎｚｏｎ）、国際出願第ＵＳ９１／０２９８９号（Ａｆｆｙｍａｘ）、国際公開第８９／０６２８３号、欧州特許第３７１９９８号、欧州特許第５５０４００号、（Ｘｏｍａ）、欧州特許第２２９０４６号、国際出願第ＵＳ９１／０７１４９号（Ｉｘｓｙｓ）、又は確率論的に生成されるペプチド若しくはタンパク質－米国特許第５７２３３２３号、同第５７６３１９２号、同第５８１４４７６号、同第５８１７４８３号、同第５８２４５１４号、同第５９７６８６２号、国際公開第８６／０５８０３号、欧州特許第５９０６８９号（Ｉｘｓｙｓ、適用された分子進化（Applied Molecular Evolution、ＡＭＥ）の前身、各々参照により全体が本明細書に組み込まれる）か、又は当該技術分野において既知であり、かつ／若しくは本明細書に記載される、ヒト抗体のレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物の免疫化に依存する（例えば、ＳＣＩＤマウス、各々参照により全体が組み込まれる、Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：９０１－９０７（１９９７）、Ｓａｎｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：９５－１１８（１９９６）；Ｅｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．９３：１５４－１６１（１９９８）、並びに関連特許及び出願）。かかる技術には、リボソームディスプレイ（Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：４９３７－４９４２（Ｍａｙ １９９７）、Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５：１４１３０－１４１３５（Ｎｏｖ．１９９８））、単一細胞抗体産生技術（例えば、選択リンパ球抗体方法（ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｅｔｈｏｄ、「ＳＬＡＭ」）（米国特許第５，６２７，０５２号、Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：８８７－８９２（１９８７）、Ｂａｂｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：７８４３－７８４８（１９９６））、ゲルマイクロドロップレット及びフローサイトメトリー（Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：３３３－３３７（１９９０）；Ｏｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ、Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．１８２：１５５－１６３（１９９５）、Ｋｅｎｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１３：７８７－７９０（１９９５））、Ｂ細胞選択物（Ｓｔｅｅｎｂａｋｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｏｒｔｓ １９：１２５－１３４（１９９４）、Ｊｏｎａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｖｏｌ．５，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，ｅｄ．，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｂ．Ｖ．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ（１９８８））が挙げられるが、これらに限定されない。

【0054】

非ヒト抗体又はヒト抗体を操作又はヒト化するための方法も使用することができ、当該技術分野において既知である。概して、ヒト化抗体又は修飾抗体は、非ヒト、例えば、限定されるものではないが、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、又は他の哺乳動物源由来の１つ又は２つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば「インポート」残基と呼ばれる残基により置き換えられるが、この「インポート」残基は、典型的には既知のヒト配列の「インポート」可変ドメイン、定常ドメイン、又は他のドメインから得られる。

【0055】

既知のヒトＩｇ配列が開示されており、例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、
ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；
ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ；
ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｍｒｃ－ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ＡＬＩＧＮＭＥＮＴＳ．ｐｈｐ；
ｗｗｗ．ｋａｂａｔｄａｔａｂａｓｅ．ｃｏｍ／ｔｏｐ．ｈｔｍｌ；
ｆｔｐ．ｎｃｂｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ／ｋａｂａｔ；
ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ；
ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ；
ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／～ｐｅｄｒｏ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＣＨ０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；
ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ；
ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／～ｍｒｃ７／ｍｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；
ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ；
ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／～ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ａｐｐｌｉｅｄｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ；
ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ；
ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ－ｕ．ａｃ．ｊｐ／～ｙａｓｕｈｉｔｏ／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ；
ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｒｅｓｅａｒｃｈｕｋ．ｏｒｇ；
ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ；
ｗｗｗ．ｉｓａｃ－ｎｅｔ．ｏｒｇ；ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／～ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓ１．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｒｅｃａｂ．ｕｎｉ－ｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ；
ｗｗｗ．ｍｒｃ－ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ；
ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／Ｖ＿ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ；ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ；
ｗｗｗ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ；
ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．ｕｋ／～ｕｂｃｇ０７ｓ；
ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／～ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ＿ａｉｍ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ；
Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ（１９８３）。

【0056】

かかるインポートされた配列を使用して、免疫原性を低減させるか、又は当該技術分野において既知であるように、結合、親和性、結合速度定数、解離速度定数、結合活性、特異性、半減期、若しくは任意の他の好適な特性を低減、増強、若しくは改変することができる。概して、ＣＤＲ残基は、抗原結合に直接的にかつほとんど実質的に影響する。したがって、非ヒトＣＤＲ配列又はヒトＣＤＲ配列の一部又は全てを維持しつつ、可変領域及び定常領域の非ヒト配列をヒトアミノ酸又は他のアミノ酸に置き換えることもできる。

【0057】

抗体は、任意選択で、ヒト化されてもよい、又はヒト抗体は、抗原に対する高い親和性及び他の有利な生物学的特性を保持させたまま修飾させることができる。本目的を達成するためには、任意選択で、親配列及びヒト化配列の三次元モデルを使用して親配列及び種々の理論上のヒト化産物を解析するプロセスによって、ヒト化（又はヒト）抗体を調製することができる。三次元の免疫グロブリンモデルが一般的に利用可能であり、当業者に周知である。選択された免疫グロブリン配列候補について確率の高い三次元立体構造を図示及び表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示を調べることにより、免疫グロブリン配列候補の機能において残基が示す可能性の高い働きの解析、すなわち免疫グロブリン候補の抗原結合能に影響する残基の解析が可能となる。このようにして、標的抗原に対する親和性の増強などといった望ましい抗体特性が達成されるように、コンセンサス配列及びインポート配列からフレームワーク（ＦＲ）残基を選択し組み合わせることができる。

【0058】

加えて、本発明の方法において使用されるヒト抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又は抗ＩＬ－２３）特異的抗体は、ヒト生殖系列軽鎖フレームワークを含み得る。特定の実施形態では、軽鎖生殖系列配列は、Ａ１、Ａ１０、Ａ１１、Ａ１４、Ａ１７、Ａ１８、Ａ１９、Ａ２、Ａ２０、Ａ２３、Ａ２６、Ａ２７、Ａ３、Ａ３０、Ａ５、Ａ７、Ｂ２、Ｂ３、Ｌ１、Ｌ１０、Ｌ１１、Ｌ１２、Ｌ１４、Ｌ１５、Ｌ１６、Ｌ１８、Ｌ１９、Ｌ２、Ｌ２０、Ｌ２２、Ｌ２３、Ｌ２４、Ｌ２５、Ｌ４／１８ａ、Ｌ５、Ｌ６、Ｌ８、Ｌ９、Ｏ１、Ｏ１１、Ｏ１２、Ｏ１４、Ｏ１８、Ｏ２、Ｏ４、及びＯ８を含むが、これらに限定されない、ヒトＶＫ配列から選択される。ある特定の実施形態では、本軽鎖ヒト生殖系列フレームワークは、Ｖ１－１１、Ｖ１－１３、Ｖ１－１６、Ｖ１－１７、Ｖ１－１８、Ｖ１－１９、Ｖ１－２、Ｖ１－２０、Ｖ１－２２、Ｖ１－３、Ｖ１－４、Ｖ１－５、Ｖ１－７、Ｖ１－９、Ｖ２－１、Ｖ２－１１、Ｖ２－１３、Ｖ２－１４、Ｖ２－１５、Ｖ２－１７、Ｖ２－１９、Ｖ２－６、Ｖ２－７、Ｖ２－８、Ｖ３－２、Ｖ３－３、Ｖ３－４、Ｖ４－１、Ｖ４－２、Ｖ４－３、Ｖ４－４、Ｖ４－６、Ｖ５－１、Ｖ５－２、Ｖ５－４、及びＶ５－６から選択される。

【0059】

他の実施形態では、本発明の方法において使用されるヒト抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又は抗ＩＬ－２３）特異的抗体は、ヒト生殖系列重鎖フレームワークを含み得る。特定の実施形態では、本重鎖ヒト生殖系列フレームワークは、ＶＨ１－１８、ＶＨ１－２、ＶＨ１－２４、ＶＨ１－３、ＶＨ１－４５、ＶＨ１－４６、ＶＨ１－５８、ＶＨ１－６９、ＶＨ１－８、ＶＨ２－２６、ＶＨ２－５、ＶＨ２－７０、ＶＨ３－１１、ＶＨ３－１３、ＶＨ３－１５、ＶＨ３－１６、ＶＨ３－２０、ＶＨ３－２１、ＶＨ３－２３、ＶＨ３－３０、ＶＨ３－３３、ＶＨ３－３５、ＶＨ３－３８、ＶＨ３－４３、ＶＨ３－４８、ＶＨ３－４９、ＶＨ３－５３、ＶＨ３－６４、ＶＨ３－６６、ＶＨ３－７、ＶＨ３－７２、ＶＨ３－７３、ＶＨ３－７４、ＶＨ３－９、ＶＨ４－２８、ＶＨ４－３１、ＶＨ４－３４、ＶＨ４－３９、ＶＨ４－４、ＶＨ４－５９、ＶＨ４－６１、ＶＨ５－５１、ＶＨ６－１、及びＶＨ７－８１から選択される。

【0060】

特定の実施形態では、軽鎖可変領域及び／又は重鎖可変領域は、フレームワーク領域、又はフレームワーク領域の少なくとも一部分（例えば、ＦＲ２及びＦＲ３などの２又は３つの小領域を含む）を含む。ある特定の実施形態では、少なくともＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、又はＦＲＬ４は、完全ヒトである。他の実施形態では、少なくともＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、又はＦＲＨ４は、完全ヒトである。いくつかの実施形態では、少なくともＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、又はＦＲＬ４は、生殖系列配列（例えば、ヒト生殖系列）であるか、又は特定のフレームワークのためのヒトコンセンサス配列（上述の既知のヒトＩｇ配列の供給源で容易に入手可能である）を含む。他の実施形態では、少なくともＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、又はＦＲＨ４は、生殖系列配列（例えば、ヒト生殖系列）であるか、又は特定のフレームワークのためのヒトコンセンサス配列を含む。好ましい実施形態では、フレームワーク領域は、完全なヒトフレームワーク領域である。

【0061】

本発明の抗体のヒト化又は操作は、Ｗｉｎｔｅｒ（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８））、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７），Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５（１９９２）、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）、米国特許第５７２３３２３号、同第５９７６８６２号、同第５８２４５１４号、同第５８１７４８３号、同第５８１４４７６号、同第５７６３１９２号、同第５７２３３２３号、同第５，７６６８８６号、同第５７１４３５２号、同第６２０４０２３号、同第６１８０３７０号、同第５６９３７６２号、同第５５３０１０１号、同第５５８５０８９号、同第５２２５５３９号、同第４８１６５６７号、国際出願第ＵＳ９８／１６２８０号、同第ＵＳ９６／１８９７８号、同第ＵＳ９１／０９６３０号、同第ＵＳ９１／０５９３９号、同第ＵＳ９４／０１２３４号、国際出願第ＧＢ８９／０１３３４号、同第ＧＢ９１／０１１３４号、同第ＧＢ９２／０１７５５号、国際公開第９０／１４４４３号、同第９０／１４４２４号、同第９０／１４４３０号、欧州特許第２２９２４６号（各々参照により全体が明細書に組み込まれ、その中で引用される文献を含む）に記載されるものなどであるが、これらに限定されない、任意の既知の方法を使用して行うことができる。

【0062】

ある特定の実施形態では、抗体は、改変された（例えば、変異を導入された）Ｆｃ領域を含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、抗体のエフェクター機能を低減又は増強するように改変されている。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、又は他のアイソタイプから選択されるアイソタイプである。あるいは、又は加えて、アミノ酸修飾と、ＩＬ－２３結合分子のＦｃ領域のＣ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害性機能を改変する１つ又は２つ以上の更なるアミノ酸修飾とを組み合わせることが有用であり得る。特に関心のある出発ポリペプチドは、Ｃ１ｑに結合するものであってもよく、補体依存性細胞毒性（complement dependent cytotoxicity、ＣＤＣ）を示すものである。既存のＣ１ｑ結合活性を有し、任意選択で、ＣＤＣを媒介する能力を更に有するポリペプチドは、これらの活性のうちの一方又は両方が増進するように修飾されてもよい。Ｃ１ｑを改変する、かつ／又はその補体依存性細胞傷害機能を修飾するアミノ酸修飾は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる国際公開特許第００４２０７２号に記載されている。

【0063】

上記に開示されるように、例えば、Ｃ１ｑ結合及び／又はＦｃγＲ結合を修飾し、それにより、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）活性及び／又は抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity、ＡＤＣＣ）活性を変化させることによって、改変されたエフェクター機能を有する本発明のヒト抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又は抗ＩＬ－２３）特異的抗体のＦｃ領域を設計することができる。「エフェクター機能」は、（例えば、対象における）生物学的活性を活性化する又は低減させる役割を果たす。エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、貪食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）のダウンレギュレーションなどが挙げられるが、これらに限定されない。かかるエフェクター機能は、Ｆｃ領域が、結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と結合することを必要とする場合があり、多種多用な試験法（例えば、Ｆｃ結合アッセイ、ＡＤＣＣアッセイ、ＣＤＣアッセイなど）を使用して評価することができる。

【0064】

例えば、改善されたＣ１ｑ結合及び改善されたＦｃγＲＩＩＩ結合を有する（例えば、改善されたＡＤＣＣ活性及び改善されたＣＤＣ活性の両方を有する）ヒト抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又は抗ＩＬ－２３）抗体の変異体Ｆｃ領域を生成することができる。あるいは、エフェクター機能を低減又は除去することが所望される場合、変異体Ｆｃ領域は、ＣＤＣ活性を低減させるよう及び／又はＡＤＣＣ活性を低減させるよう修飾することができる。他の実施形態では、これらの活性のうちの１つのみが増強されてもよく、任意選択で、同時に他の活性が低減されてもよい（例えば、改善されたＡＤＣＣ活性と低減されたＣＤＣ活性を有するＦｃ領域変異体、及びこの逆のＦｃ領域変異体を生成するため）。

【0065】

Ｆｃ変異は、胎児性Ｆｃ受容体（neonatal Fc receptor、ＦｃＲｎ）との相互作用を改変し、それらの薬物動態特性を改善するように遺伝子を操作して、導入することもできる。ＦｃＲｎへの結合を改善したヒトＦｃ変異体の収集は、説明されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，（２００１）．Ｈｉｇｈ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｏｎ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ｆｏｒ ＦｃγＲＩ，ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ，ａｎｄ ＦｃＲｎ ａｎｄ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ＩｇＧ１ ｖａｒｉａｎｔｓ ｗｉｔｈ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ＦＣγＲ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６６０４）。

【0066】

別の種類のアミノ酸置換は、ヒト抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又は抗ＩＬ－２３）特異的抗体のＦｃ領域のグリコシル化パターンを改変するのに役立つ。Ｆｃ領域のグリコシル化は、典型的に、Ｎ結合型又はＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。Ｏ結合型グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンへの糖類、Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、又はキシロースのうちの１つの結合を指すが、５－ヒドロキシプロリン又は５－ヒドロキシリジンが使用される場合もある。アスパラギン側鎖ペプチド配列への炭水化物部分の酵素的結合のための認識配列は、アスパラギン－Ｘ－セリン及びアスパラギン－Ｘ－スレオニンであり、ここで、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である。このため、ポリペプチド中にこれらのいずれかのペプチド配列が存在すると、潜在的なグリコシル化部位がもたらされる。

【0067】

グリコシル化パターンは、例えば、ポリペプチドに見出される１つ又は２つ以上のグリコシル化部位を欠失させること、及び／又はポリペプチド中に存在しない１つ又は２つ以上のグリコシル化部位を付加することによって改変され得る。ヒトＩＬ－２３特異的抗体のＦｃ領域へのグリコシル化部位の付加は、上記のトリペプチド配列のうちの１つ又は２つ以上を含むようにアミノ酸配列を改変することによって首尾よく達成される（Ｎ結合型グリコシル化部位の場合）。代表的なグリコシル化変異体は、重鎖の残基Ａｓｎ２９７のアミノ酸置換を有する。この改変は、元のポリペプチド配列への１つ又は２つ以上のセリン又はスレオニン残基の付加、又はこれらによる置換によって行われてもよい（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。加えて、Ａｓｎ ２９７をＡｌａに変更すると、グリコシル化部位の１つを除去することができる。

【0068】

ある特定の実施形態では、本発明のヒト抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又は抗ＩＬ－２３）特異的抗体は、ＧｎＴ ＩＩＩがＧｌｃＮＡｃをヒト抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又は抗ＩＬ－２３）抗体に付加するように、ベータ（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴ ＩＩＩ）を発現する細胞において発現される。かかる様式で抗体を産生するための方法は、国際公開特許第９９５４３４２号、同第０３０１１８７８号、特許公報第２００３／０００３０９７（Ａ１）号、及びＵｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１７：１７６－１８０，Ｆｅｂ．１９９９に提供されており、これらは全て、参照によりそれらの全体が本明細書に明確に組み込まれる。

【0069】

ヒト抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又は抗ＩＬ－２３）抗体はまた、任意選択で、本明細書に記載され、かつ／又は当該技術分野において既知である、ヒト抗体のレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、非ヒト霊長類など）の免疫化により生成することもできる。ヒト抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又は抗ＩＬ－２３）抗体を産生する細胞を、かかる動物から単離し、本明細書に記載される方法などの好適な方法を使用して不死化してもよい。

【0070】

ヒト抗原に結合するヒト抗体のレパートリーを産生することができるトランスジェニックマウスは、既知の方法（例えば、これらに限定されないが、各々参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｏｎｂｅｒｇらに発行された米国特許第５，７７０，４２８号、同第５，５６９，８２５号、同第５，５４５，８０６号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６２５，８２５号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、及び同第５，７８９，６５０号、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓらの国際公開第９８／５０４３３号、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓらの国際公開第９８／２４８９３号、Ｌｏｎｂｅｒｇらの国際公開第９８／２４８８４号、Ｌｏｎｂｅｒｇらの国際公開第９７／１３８５２号、Ｌｏｎｂｅｒｇらの国際公開第９４／２５５８５号、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅらの国際公開第９６／３４０９６号、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅらの欧州特許第０４６３１５１（Ｂ１）号、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅらの欧州特許０７１０７１９（Ａ１）号、Ｓｕｒａｎｉらの米国特許第５，５４５，８０７号、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎらの国際公開第９０／０４０３６号、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎらの欧州特許第０４３８４７４（Ｂ１）号、Ｌｏｎｂｅｒｇらの欧州特許第０８１４２５９（Ａ２）号、Ｌｏｎｂｅｒｇらの英国特許第２２７２４４０（Ａ）号、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９（１９９４），Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６（４）５７９－５９１（１９９４），Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３－２１（１９９４），Ｍｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６－１５６（１９９７），Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０（２３）：６２８７－６２９５（１９９２），Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０（８）３７２０－３７２４（１９９３）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３（１）：６５－９３（１９９５）、及びＦｉｓｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １４（７）：８４５－８５１（１９９６））によって生成することができる。概して、これらのマウスは、機能的に再構成された、又は機能的な再構成を受けることができる少なくとも１つのヒト免疫グロブリン遺伝子座に由来するＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を含む。かかるマウスの内因性免疫グロブリン遺伝子座を破壊又は欠失させて、マウスの、内因性遺伝子によりコードされている抗体の産生能を除去することができる。

【0071】

類似のタンパク質又は断片への特異的結合についての抗体のスクリーニングは、ペプチドディスプレイライブラリを使用して首尾よく達成することができる。本方法は、望ましい機能又は構造をもつ個々のメンバーについてペプチドの大規模コレクションをスクリーニングすることを含む。ペプチドディスプレイライブラリの抗体スクリーニングは当該技術分野において周知である。ディスプレイされたペプチド配列は、３～５０００又はそれ以上のアミノ酸長、高頻度で５～１００アミノ酸長、多くの場合、約８～２５アミノ酸長であることができる。ペプチドライブラリを作成する直接化学合成法に加えて、いくつかの組換えＤＮＡ方法も記述されている。１つのタイプは、バクテリオファージ又は細胞の表面上でのペプチド配列のディスプレイを含む。各バクテリオファージ又は細胞は、特定のディスプレイされたペプチド配列をコードするヌクレオチド配列を含有する。かかる方法は、国際出願第９１／１７２７１号、同第９１／１８９８０号、同第９１／１９８１８号、及び同第９３／０８２７８号に記載されている。

【0072】

ペプチドライブラリを作成するための他のシステムは、インビトロでの化学合成法及び組換え法の両方の態様を有する。国際出願第９２／０５２５８号、同第９２／１４８４３号、及び同第９６／１９２５６号を参照されたい。米国特許第５，６５８，７５４号及び同第５，６４３，７６８号も参照されたい。ペプチドディスプレイライブラリ、ベクター、及びスクリーニングキットは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）及びＣａｍｂｒｉｄｇｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ，ＵＫ）などの供給業者から市販されている。例えば、Ｅｎｚｏｎに譲渡された米国特許第４７０４６９２号、同第４９３９６６６号、同第４９４６７７８号、同第５２６０２０３号、同第５４５５０３０号、同第５５１８８８９号、同第５５３４６２１号、同第５６５６７３０号、同第５７６３７３３号、同第５７６７２６０号、同第５８５６４５６号、Ｄｙａｘに譲渡された米国特許第５２２３４０９号、同第５４０３４８４号、同第５５７１６９８号、同第５８３７５００号、Ａｆｆｙｍａｘに譲渡された米国特許第５４２７９０８号、同第５５８０７１７号、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓに譲渡された米国特許第５８８５７９３号、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈに譲渡された米国特許第５７５０３７３号、Ｘｏｍａに譲渡された米国特許第５６１８９２０号、同第５５９５８９８号、同第５５７６１９５号、同第５６９８４３５号、同第５６９３４９３号、同第５６９８４１７号、上記のＣｏｌｌｉｇａｎ、上記のＡｕｓｕｂｅｌ、又は上記のＳａｍｂｒｏｏｋを参照されたい。上記特許及び刊行物は各々、参照により全体が本明細書に組み込まれる。

【0073】

本発明の方法に使用される抗体は、かかる抗体を乳中に産生するヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ウサギなどのトランスジェニック動物又は哺乳動物を提供するために、核酸をコードする少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又は抗ＩＬ－２３）抗体を使用して調製することもできる。かかる動物を、既知の方法を使用して提供することができる。例えば、限定されるものではないが、各々参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８２７，６９０号、同第５，８４９，９９２号、同第４，８７３，３１６号、同第５，８４９，９９２号、同第５，９９４，６１６号、同第５，５６５，３６２号、同第５，３０４，４８９号などを参照されたい。

【0074】

本発明の方法に使用される抗体は、植物部分又はそれから培養された細胞において、かかる抗体、特定の部分、又は変異体を産生するトランスジェニック植物及び培養された植物細胞（例えば、タバコ及びトウモロコシであるが、これらに限定されない）を提供するために、核酸をコードする少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０（又は抗ＩＬ－２３）抗体を使用して更に調製することができる。非限定的な例として、例えば、誘導プロモータを用い、組換えタンパク質を発現するトランスジェニックタバコ葉をうまく使用して、大量の組換えタンパク質が提供されてきた。例えば、Ｃｒａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４０：９５～１１８（１９９９）及びその中で引用される文献を参照されたい。また、トランスジェニックトウモロコシは、他の組換え系において産生されたタンパク質又は天然源から精製されたタンパク質に等しい生物学的活性を有する哺乳動物タンパク質を、商業生産レベルで発現させるために使用されてきた。例えば、Ｈｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４６４：１２７－１４７（１９９９）及びその中で引用される文献を参照されたい。抗体は、タバコ種子及びポテト塊茎を含む、単鎖抗体（single chain antibody、ｓｃＦｖ）などの抗体断片を含むトランスジェニック植物の種子からも大量に生産されている。例えば、Ｃｏｎｒａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８：１０１－１０９（１９９８）及びその中で引用される文献を参照されたい。したがって、本発明の抗体は、既知の方法に従って、トランスジェニック植物を使用して生産することもできる。例えば、Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０：９９－１０８（Ｏｃｔ．，１９９９）、Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５２２－７（１９９５）、Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０９：３４１－６（１９９５）、Ｗｈｉｔｅｌａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２２：９４０－９４４（１９９４）、及びこれらの中で引用される文献も参照されたい。上記の文献は各々、参照により全体が本明細書に組み込まれる。

【0075】

本発明の方法において使用される抗体は、広範囲にわたる親和性（Ｋ_Ｄ）でヒトＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３に結合することができる。好ましい実施形態では、ヒトｍＡｂは、任意選択で、高い親和性でヒトＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３に結合することができる。例えば、ヒトｍＡｂは、ヒトＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３を約１０^－７Ｍ以下、例えば、限定されないが、０．１～９．９（又はその中の任意の範囲若しくは値）×１０^－７、１０^－８、１０^－９、１０^－１０、１０^－１１、１０^－１２、１０^－１３、又はその中の任意の範囲若しくは値などのＫ_Ｄで結合することができる。

【0076】

抗原に対する抗体の親和性又は結合活性は、任意の好適な方法を用いて実験により求めることができる。（例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ，ｅｔ ａｌ．，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ａｎｔｉｇｅｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，」Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９８４）、Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９９２）、及び本明細書に記載される方法を参照されたい）。特定の抗体抗原相互作用について測定される親和性は、異なる条件（例えば、塩濃度、ｐＨ）下で測定された場合に異なることができる。したがって、親和性及び他の抗原結合パラメータ（例えば、Ｋ_Ｄ、Ｋ_ａ、Ｋ_ｄ）の測定は、好ましくは、抗体及び抗原の標準化溶液、及び本明細書で記載される緩衝剤などの標準化緩衝剤を用いて行われる。

【0077】

核酸分子
本明細書に開示される他の配列の中でも、例えば、本明細書に記載される軽鎖若しくは重鎖可変又はＣＤＲ領域のうちの少なくとも１つの隣接アミノ酸の少なくとも７０～１００％をコードするヌクレオチド配列、特定の断片、変異体、若しくはそれらのコンセンサス配列、又はこれらの配列のうちの少なくとも１つを含む寄託ベクターなどの本明細書に提供される情報を使用して、少なくとも１つのＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体をコードする本発明の核酸分子は、本明細書に記載されるか又は当該技術において既知の方法を使用して得ることができる。

【0078】

本発明の核酸分子は、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡ、若しくは任意の他の形態などのＲＮＡの形態、又はクローニングにより得られる若しくは合成的に産生されるｃＤＮＡ及びゲノムＤＮＡが挙げられるが、これらに限定されないＤＮＡの形態、又はこれらの任意の組み合わせであってもよい。ＤＮＡは、３本鎖、２本鎖若しくは１本鎖、又はこれらの任意の組み合わせであってもよい。ＤＮＡ又はＲＮＡの少なくとも１本の鎖の任意の部分は、センス鎖としても知られるコード鎖であってもよいし、又はアンチセンス鎖と呼ばれる、非コード鎖であってもよい。

【0079】

本発明の方法に使用される単離された核酸分子には、任意選択で１つ又は２つ以上のイントロン、例えば、限定されないが、少なくとも１つの重鎖若しくは軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３などの少なくとも１つのＣＤＲの少なくとも１つの特定の部分を有するオープンリーディングフレーム（open reading frame、ＯＲＦ）を含む核酸分子、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体又は可変領域のコード配列を含む核酸分子、並びに上述の核酸分子とは実質的に異なるが、遺伝子コードの縮重により、本明細書に記載され、かつ／又は当該技術分野において既知である、少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体をなおコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含み得る。当然のことながら、遺伝子コードは、当該技術分野において周知である。したがって、本発明の方法で使用される特異的な抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体をコードするかかる変性核酸変異体を作製することは、当業者には日常的であるだろう。例えば、上記のＡｕｓｕｂｅｌらを参照されたい。かかる核酸変異体は、本発明に含まれる。単離された核酸分子の非限定的な例としては、それぞれ、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３をコードする核酸が挙げられる。

【0080】

本明細書に記載されるように、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体をコードする核酸を含む核酸分子としては、それ自体で抗体断片のアミノ酸配列をコードするもの、抗体の全長若しくは抗体の一部をコードする配列、抗体、断片若しくは部分のコード配列、並びに追加の配列、例えば、少なくとも１つのイントロンなど、前述の追加のコード配列を伴って、又は伴わずに、非コード５’及び３’配列、例えば、スプライシング及びポリアデニル化シグナル（例えば、ｍＲＮＡのリボソーム結合及び安定性）を含む、転写、ｍＲＮＡプロセシングにおいて役割を果たす転写された非翻訳配列を含むが、これに限定されない、追加の非コード配列と共に、少なくとも１つのシグナルリーダー若しくは融合ペプチドのコード配列、追加のアミノ酸、例えば、追加の機能を提供するアミノ酸をコードする追加のコード配列を挙げることができるが、これらに限定されない。したがって、抗体をコードする配列はマーカー配列に融合させることができ、例えば、マーカー配列は、これを融合させた抗体断片又は部分を含む抗体の精製を促進するペプチドをコードする配列である。

【0081】

本明細書に記載のポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするポリヌクレオチド
本発明の方法は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドに対して、選択的なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする単離された核酸を使用する。したがって、本実施形態のポリヌクレオチドは、かかるポリヌクレオチドを含む核酸を単離、検出、及び／又は定量するために使用することができる。例えば、本発明のポリヌクレオチドを使用して、寄託されたライブラリにおける部分長又は完全長クローンを同定、単離、又は増幅することができる。いくつかの実施形態においては、ポリヌクレオチドは、単離された、又はそうでなければヒト若しくは哺乳動物の核酸ライブラリのｃＤＮＡに相補的な、ゲノム配列又はｃＤＮＡ配列である。

【0082】

好ましくは、ｃＤＮＡライブラリは完全長配列の少なくとも８０％、好ましくは完全長配列の少なくとも８５％又は９０％、より好ましくは完全長配列の少なくとも９５％を含む。このｃＤＮＡライブラリは、稀な配列の発現量を増大させるよう正規化することができる。相補配列に対する配列同一性が低い配列を使用する、低又は中ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件が典型的なものであるが、これに限定されない。同一性がより高い配列には、任意選択で、中及び高ストリンジェンシーの条件を使用することができる。低ストリンジェンシー条件は、約７０％の配列同一性をもつ配列の選択的ハイブリダイゼーションを可能にし、オーソロガス又はパラロガス配列を特定同定するために利用できる。

【0083】

任意選択で、ポリヌクレオチドは、抗体の少なくとも一部分をコードする。ポリヌクレオチドは、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドに対する選択的ハイブリダイゼーションに利用することができる核酸配列を包含する。例えば、各々参照により全体が本明細書に組み込まれる、上記のＡｕｓｕｂｅｌ、上記のＣｏｌｌｉｇａｎを参照されたい。

【0084】

核酸の構築
単離された核酸は、当該技術分野において周知であるように、（ａ）組換え方法、（ｂ）合成技術、（ｃ）精製技術、及び／又は（ｄ）これらの組み合わせを使用して作製することができる。

【0085】

核酸には、本発明のポリヌクレオチドに加えて、都合よく配列を含ませることができる。例えば、１つ又は２つ以上のエンドヌクレアーゼ制限部位を含むマルチクローニングサイトを核酸に挿入して、ポリヌクレオチドの単離に役立てることができる。また、翻訳可能な配列を挿入して、本発明の翻訳されたポリヌクレオチドの単離に役立てることができる。例えば、ヘキサヒスチジンマーカー配列は、本発明のタンパク質を精製するのに便利な手段を提供する。本発明の核酸（コード配列を除く）は、任意選択で、本発明のポリヌクレオチドのクローニング及び／又は発現のためのベクター、アダプター、又はリンカーである。

【0086】

かかるクローニング配列及び／又は発現配列に追加の配列を付加して、クローニング及び／又は発現におけるそれらの機能を最適化すること、ポリヌクレオチドの単離に役立てること、又は細胞へのポリヌクレオチドの導入を改善することができる。クローン化ベクター、発現ベクター、アダプター、及びリンカーの使用は、当該技術分野において周知である。（例えば、上記のＡｕｓｕｂｅｌ、又は上記のＳａｍｂｒｏｏｋを参照されたい）

【0087】

核酸を構築するための組換え方法
ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、又はこれらの任意の組み合わせなどの単離された核酸組成物は、当業者に既知の任意の数のクローニング方法を用いて生物源から得ることができる。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件下で選択的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブが、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡライブラリ内の望ましい配列の同定に使用される。ＲＮＡの単離、並びにｃＤＮＡ及びゲノムライブラリの構築は、当業者には周知である。（例えば、上記のＡｕｓｕｂｅｌ、又は上記のＳａｍｂｒｏｏｋを参照されたい）

【0088】

核酸のスクリーニング及び単離方法
本明細書に開示されているものなど、本発明の方法に使用されるポリヌクレオチドの配列に基づいたプローブを使用して、ｃＤＮＡ又はゲノムライブラリをスクリーニングすることができる。プローブを使用して、ゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡ配列にハイブリダイズさせて、同じ又は異なる生体の相同遺伝子を単離することができる。当業者であれば、アッセイに様々な度合のハイブリダイゼーションストリンジェンシーを用いることができ、ハイブリダイゼーション又は洗浄媒質のいずれかをストリンジェントなものにできることを理解する。ハイブリダイゼーション条件がストリンジェントになるほど、二重鎖の形成が生じる際のプローブと標的との間の相補性の度合が大きくなるはずである。ストリンジェンシーの程度は、温度、イオン強度、ｐＨ、及びホルムアミドなどの部分的に変性する溶媒の存在のうちの１つ又は２つ以上によって制御され得る。例えば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、例えば、０％～５０％の範囲内でのホルムアミド濃度の操作により反応溶液の極性を変えることにより首尾よく変更される。検出可能な結合に必要とされる相補性（配列同一性）の程度は、ハイブリダイゼーション媒質及び／又は洗浄媒質のストリンジェンシーによって異なる。相補性の程度は、最適には１００％、又は７０～１００％、又はその中の任意の範囲若しくは値である。しかしながら、プローブ及びプライマ中の配列のわずかな違いは、ハイブリダイゼーション及び／又は洗浄媒質のストリンジェンシーを低減させることで埋め合わせることができることを理解すべきである。

【0089】

ＲＮＡ又はＤＮＡの増幅方法は当該技術分野において周知であり、本明細書に提示される教示及び指針に基づいて、過度の実験なしに、本発明に従って使用することができる。

【0090】

ＤＮＡ又はＲＮＡ増幅の既知の方法としては、ポリメラーゼ連鎖反応（polymerase chain reaction、ＰＣＲ）及び関連する増幅プロセス（例えば、Ｍｕｌｌｉｓらの米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，６８３，２０２号、同第４，８００，１５９号、同第４，９６５，１８８号、Ｔａｂｏｒらの米国特許第４，７９５，６９９号及び同第４，９２１，７９４号、Ｉｎｎｉｓの米国特許第５，１４２，０３３号、Ｗｉｌｓｏｎらの米国特許第５，１２２，４６４号、Ｉｎｎｉｓの米国特許第５，０９１，３１０号、Ｇｙｌｌｅｎｓｔｅｎらの米国特許第５，０６６，５８４号、Ｇｅｌｆａｎｄらの米国特許第４，８８９，８１８号、Ｓｉｌｖｅｒらの米国特許第４，９９４，３７０号、Ｂｉｓｗａｓの米国特許第４，７６６，０６７号、Ｒｉｎｇｏｌｄの米国特許第４，６５６，１３４号を参照されたい）、及び二本鎖ＤＮＡ合成のためのテンプレートとして標的配列に対してアンチセンスＲＮＡを使用するＲＮＡ媒介増幅（Ｍａｌｅｋらの米国特許第５，１３０，２３８号、商標名ＮＡＳＢＡ）が挙げられるが、これらに限定されず、これらの文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。（例えば、上記のＡｕｓｕｂｅｌ、又は上記のＳａｍｂｒｏｏｋを参照されたい。）

【0091】

例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を使用して、ゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡライブラリから直接、本発明の方法に使用されるポリヌクレオチド及び関連する遺伝子の配列を増幅することができる。ＰＣＲ及び他のインビトロ増幅方法はまた、例えば、発現すべきタンパク質をコードする核酸配列をクローニングすること、サンプル中の所望のｍＲＮＡの存在を検出するため、核酸の配列決定のため、又は他の目的のためのプローブとして用いる核酸を作製することに関し有用であり得る。インビトロでの増幅方法によって当業者を導くのに十分な技術の例は、上記のＢｅｒｇｅｒ、上記のＳａｍｂｒｏｏｋ、及び上記のＡｕｓｕｂｅｌ、並びにＭｕｌｌｉｓらの米国特許第４，６８３，２０２号（１９８７）、及びＩｎｎｉｓ，ｅｔ ａｌ．，ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）に見られる。ゲノムＰＣＲ増幅用の市販キットは技術分野において既知である。例えば、Ａｄｖａｎｔａｇｅ－ＧＣ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を参照されたい。加えて、例えば、Ｔ４遺伝子３２タンパク質（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用いて、長いＰＣＲ産物の収率を改善することができる。

【0092】

核酸を構築するための合成方法
本発明の方法に使用される単離された核酸は、既知の方法による直接化学合成によって調製することもできる（例えば、上記のＡｕｓｕｂｅｌらを参照されたい）。化学合成は、概して、相補的配列とのハイブリダイゼーションによって、又は１本鎖をテンプレートとして使用するＤＮＡポリメラーゼとの重合によって、２本鎖ＤＮＡに変換可能な１本鎖オリゴヌクレオチドを産生する。当業者であれば、ＤＮＡの化学合成は約１００又はそれ以上の塩基の配列に限定され得るが、より長い配列は、より短い配列のライゲーションによって得ることができることを認識する。

【0093】

組換え発現カセット
本発明は核酸を含む組換え発現カセットを使用する。核酸配列、例えば本発明の方法に使用される抗体をコードするｃＤＮＡ又はゲノム配列を使用して、少なくとも１つの所望の宿主細胞に導入することができる組換え発現カセットを構築することができる。組換え発現カセットは、典型的には、意図される宿主細胞においてポリヌクレオチドの転写を導く、転写開始調節配列に操作可能に連結される、ポリヌクレオチドを含む。異種及び非異種（すなわち、内因性）プロモータの両方を利用して、核酸の発現を導くことができる。

【0094】

いくつかの実施形態では、プロモータ、エンハンサ、又は他の要素として機能する単離された核酸を、ポリヌクレオチドの発現を上方又は下方調節するために、本発明のポリヌクレオチドの非異種形の適切な位置（上流、下流、又はイントロン内）に導入することができる。例えば、変異、欠失、及び／又は置換により、インビボ又はインビトロで内因性プロモータを変化させることができる。

【0095】

ベクター及び宿主細胞
本発明はまた、単離された核酸分子を含むベクター、組換えベクターを用いて遺伝子工学処理された宿主細胞、及び当該技術分野において周知の組換え技術による少なくとも１つの抗ＩＬ－２３抗体の産生に関する。例えば、各々参照により全体が本明細書に組み込まれる、上記のＳａｍｂｒｏｏｋら、上記のＡｕｓｕｂｅｌらを参照されたい。

【0096】

ポリヌクレオチドは、任意選択で、宿主の増殖についての選択マーカーを含有するベクターに結合することができる。概して、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈殿物などの沈殿物中に、又は荷電脂質との複合体中に導入される。ベクターがウイルスである場合は、適切なパッケージング細胞株を用いてインビトロでこれをパッケージングし、その後、宿主細胞内に形質導入することができる。

【0097】

ＤＮＡ挿入物は、適切なプロモータに機能的に連結されるべきである。発現コンストラクトは、転写開始部位、転写終結部位、及び転写された領域内では翻訳のためのリボソーム結合部位を更に含む。コンストラクトにより発現した成熟した転写産物のコード部分は、好ましくは、翻訳されるべきｍＲＮＡの最後に適切に位置する開始及び終止コドン（例えば、ＵＡＡ、ＵＧＡ、又はＵＡＧ）で始まる翻訳を含み、哺乳動物又は真核生物細胞の発現ではＵＡＡ及びＵＡＧが好ましい。

【0098】

発現ベクターが少なくとも１つの選択マーカーを含むことが好ましいが、任意選択である。かかるマーカーは、例えば、真核細胞培養のためのメトトレキサート（methotrexate、ＭＴＸ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ｄｉｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＤＨＦＲ、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号、同第４，６５６，１３４号、同第４，９５６，２８８号、同第５，１４９，６３６号、同第５，１７９，０１７号、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、ミコフェノール酸、又はグルタミンシンセターゼ（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ、ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号、同第５，７７０，３５９号、同第５，８２７，７３９号）抵抗性遺伝子、並びにＥ．ｃｏｌｉ及び他の細菌又は原核生物における培養のためのテトラサイクリン又はアンピシリン抵抗性遺伝子を含むが、これらに限定されない（上記の特許は、参照により全体が本明細書に組み込まれる）。上記の宿主細胞に対して適切な培養培地及び条件は、技術分野において既知である。好適なベクターは、当業者にとって容易に明白となる。宿主細胞へのベクターコンストラクトの導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、又は他の既知の方法により達成することができる。かかる方法については、上記のＳａｍｂｒｏｏｋ、第１～４章及び第１６～１８章、上記のＡｕｓｕｂｅｌ、第１、９、１３、１５、１６章などの当該技術分野に記載されている。

【0099】

本発明の方法に使用される少なくとも１つの抗体は、融合タンパク質などの修飾された形態で発現され得、分泌シグナルだけでなく、追加の異種機能領域も含むことができる。例えば、追加アミノ酸の領域、特に荷電アミノ酸を抗体のＮ末端に追加して、精製中又は後続の処理及び保存中に、宿主細胞における安定性及び持続性を改善することができる。また、ペプチド部分を本発明の抗体に追加して、精製を促進することもできる。抗体又は少なくとも１つのその断片の最終調製前に、かかる領域を除去することができる。かかる方法は、上記のＳａｍｂｒｏｏｋ、第１７．２９～１７．４２章及び第１８．１～１８．７４章、上記のＡｕｓｕｂｅｌ、第１６、１７、及び１８章などの多くの標準的な実験室マニュアルに記載されている。

【0100】

当業者であれば、本発明の方法に使用されるタンパク質をコードする核酸の発現に利用可能な多数の発現系について精通している。あるいは、核酸は、抗体をコードする内因性ＤＮＡを含有する宿主細胞内で、（操作により）オンに切り替えることにより、宿主細胞中で発現させることができる。かかる方法は、参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５８０，７３４号、同第５，６４１，６７０号、同第５，７３３，７４６号、及び同第５，７３３，７６１号に記載されているように、当該技術分野において周知である。

【0101】

抗体、その特定の部分又は変異体の産生に有用な細胞培養物の一例は、哺乳動物細胞である。哺乳動物細胞系は、しばしば細胞からなる単層形態を取るが、哺乳動物細胞の懸濁液又はバイオリアクターを使用することもできる。無傷なグリコシル化タンパク質を発現可能な多くの好適な宿主細胞株が当該技術分野において開発されており、これにはＣＯＳ－１（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５０）、ＣＯＳ－７（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６５１）、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ－１０）、ＣＨＯ（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ１６１０）、及びＢＳＣ－１（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ－２６）細胞株、Ｃｏｓ－７細胞、ＣＨＯ細胞、ｈｅｐ Ｇ２細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、ＳＰ２／０－Ａｇ１４、２９３細胞、ＨｅＬａ細胞などが挙げられ、これらは例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）から容易に入手可能である。好ましい宿主細胞としては、骨髄腫及びリンパ腫細胞などのリンパ系に由来する細胞が挙げられる。特に好ましい宿主細胞は、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣ寄託番号ＣＲＬ－１５８０）及びＳＰ２／０－Ａｇ１４細胞（ＡＴＣＣ寄託番号ＣＲＬ－１８５１）である。特に好ましい実施形態では、組換え細胞は、Ｐ３Ｘ６３Ａｂ８．６５３又はＳＰ２／０－Ａｇ１４細胞である。

【0102】

これらの細胞の発現ベクターは、複製起点、プロモータ（例えば、後期又は初期ＳＶ４０プロモータ、ＣＭＶプロモータ（米国特許第５，１６８，０６２号、同第５，３８５，８３９号）、ＨＳＶ ｔｋプロモータ、ｐｇｋ（ホスホグリセレートキナーゼ）プロモータ、ＥＦ－１アルファプロモータ（米国特許第５，２６６，４９１号）、少なくとも１つのヒト免疫グロブリンプロモータ、エンハンサ、及び／又はリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０ラージＴ Ａｇポリ付加部位）、並びに転写終結配列などのプロセシング情報部位などであるが、これらに限定されない、発現制御配列のうちの１つ又は２つ以上を含むことができる。例えば、上記のＡｕｓｕｂｅｌら、上記のＳａｍｂｒｏｏｋらを参照されたい。本発明の核酸又はタンパク質の産生に有用な他の細胞は既知であり、並びに／あるいは例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃａｔａｌｏｇｕｅ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ ａｎｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）又は他の既知の若しくは商業的供給源から入手可能である。

【0103】

真核宿主細胞が利用される場合、典型的には、ベクター内にポリアデニル化又は転写終結配列が組み込まれる。終結配列の一例は、ウシ成長ホルモン遺伝子からのポリアデニル化配列である。転写の正確なスプライシングのための配列も、同様に含むことができる。スプライシング配列の一例は、ＳＶ４０由来のＶＰ１イントロンである（Ｓｐｒａｇｕｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４５：７７３－７８１（１９８３））。加えて、当該技術分野において既知であるように、宿主細胞内の複製を制御するための遺伝子配列をベクター内に組み込むことができる。

【0104】

抗体の精製
抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体は、プロテインＡ精製、硫酸アンモニウム又はエタノール沈殿、酸抽出、アニオン又はカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、及びレクチンクロマトグラフィーが挙げられるが、これらに限定されない、周知の方法により、組換え細胞培養物から回収し、精製することができる。高速液体クロマトグラフィー（high performance liquid chromatography、「ＨＰＬＣ」）を精製に利用することもできる。例えば、各々参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ又はＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ（１９９７－２００１）の、例えば、第１、４、６、８、９、１０章を参照されたい。

【0105】

本発明の方法に使用される抗体には、天然に精製された産物、化学合成工程の産物、並びに例えば、酵母、高等植物、昆虫、及び哺乳動物細胞を含む、真核宿主から組換え技術により生産された産物が含まれる。組換え生産工程において利用される宿主に応じて、抗体は、グリコシル化されてもグリコシル化されなくてもよいが、グリコシル化されるのが好ましい。かかる方法は、全て参照により全体が本明細書に組み込まれる、上記のＳａｍｂｒｏｏｋ、節１７．３７～１７．４２、上記のＡｕｓｕｂｅｌ、第１０、１２、１３、１６、１８、及び２０章、上記のＣｏｌｌｉｇａｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、第１２～１４章などの多くの標準的な実験室マニュアルに記載されている。

【0106】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体
本発明による抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体は、抗体に組み込むことができる、免疫グロブリン分子の少なくとも一部、例えば、限定されないが、少なくとも１つのリガンド結合部分（ligand binding portion、ＬＢＰ）、例えば、限定されないが、重鎖若しくは軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）又はそのリガンド結合部分、重鎖又は軽鎖可変領域、フレームワーク領域（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、又はそれらの断片、更に任意選択で、少なくとも１つの置換、挿入、又は欠失を含む）、重鎖若しくは軽鎖定常領域（例えば、少なくとも１つのＣ_Ｈ１、ヒンジ１、ヒンジ２、ヒンジ３、ヒンジ４、Ｃ_Ｈ２、若しくはＣ_Ｈ３、又はそれらの断片、更に任意選択で、少なくとも１つの置換、挿入、又は欠失を含む）、又はそれらの任意の部分を含む、任意のタンパク質又はペプチド含有分子を含む。抗体は、ヒト、マウス、ウサギ、ラット、げっ歯類、霊長類、又はこれらの任意の組み合わせなどであるが、これらに限定されない、任意の哺乳動物を含むか、又はそれに由来することができる。

【0107】

本発明の方法に使用される単離された抗体は、任意の好適なポリヌクレオチドによってコードされる本明細書に開示される抗体のアミノ酸配列、又は任意の単離若しくは調製された抗体を含む。好ましくは、ヒト抗体又は抗原結合断片は、ヒトＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３に結合し、それにより、タンパク質の少なくとも１つの生物学的活性を部分的に又は実質的に中和する。少なくとも１つのＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３タンパク質又は断片の少なくとも１つの生物学的活性を部分的に又は好ましくは実質的に中和する抗体又はその特定の部分若しくは変異体は、タンパク質又は断片に結合し、それによりＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３の、ＩＬ－１２及び／若しくはＩＬ－２３受容体への結合を通して、又は他のＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０若しくはＩＬ－２３依存性若しくは媒介型機序を通して媒介される活性を阻害することができる。本明細書で使用するとき、「中和抗体」という用語は、アッセイに応じて約２０～１２０％、好ましくは少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％、又はそれ以上、ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３依存活性を阻害することができる抗体を指す。抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体がＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３依存活性を阻害する能力は、好ましくは、本明細書に記載され、かつ／又は当該技術分野において既知である、少なくとも１つの好適なＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３タンパク質又は受容体アッセイによって評価される。ヒト抗体は、任意のクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤなど）又はアイソタイプのものであってもよく、カッパ又はラムダ軽鎖を含むことができる。一実施形態では、ヒト抗体は、ＩｇＧ重鎖又は規定された断片、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４（例えば、γ１、γ２、γ３、γ４）のうちの少なくとも１つのアイソタイプを含む。このタイプの抗体は、本明細書に記載され、かつ／又は当該技術分野において既知である、少なくとも１つのヒト軽鎖（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＭ）導入遺伝子を含む、トランスジェニックマウス又は他の非ヒトトランスジェニック哺乳動物を利用することによって調製することができる。別の実施形態では、抗ＩＬ－２３ヒト抗体は、ＩｇＧ１重鎖と、ＩｇＧ１軽鎖とを含む。

【0108】

抗体は、少なくとも１つのＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３タンパク質、サブユニット、断片、部分、又はそれらの任意の組み合わせに特異的な少なくとも１つの特定のエピトープに結合する。本少なくとも１つのエピトープは、タンパク質の少なくとも一部分を含む少なくとも１つの抗体結合領域を含むことができ、このエピトープは好ましくは、タンパク質の少なくとも１つの細胞外部分、可溶性部分、親水性部分、外側部分、又は細胞質部分で構成されている。

【0109】

概して、ヒト抗体又は抗原結合断片は、少なくとも１つのヒト相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）又は少なくとも１つの重鎖可変領域の変異体、及び少なくとも１つのヒト相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）又は少なくとも１つの軽鎖可変領域の変異体を含む抗原結合領域を含む。ＣＤＲ配列は、ヒト生殖細胞系列型配列に由来するものでも、生殖細胞系列型配列に厳密に一致するものでもよい。例えば、元の非ヒトＣＤＲに由来する合成ライブラリからのＣＤＲを使用することができる。これらのＣＤＲは、元の非ヒト配列に由来する保存的置換の組込みによって形成され得る。別の特定の実施形態では、抗体又は抗原結合部分又は変異体は、対応するＣＤＲ１、２、及び／又は３のアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３）の少なくとも一部分を含む抗原結合領域を有することができる。

【0110】

かかる抗体は、組換えＤＮＡ技術に関する従来技術を使用して抗体をコードする（すなわち、１つ又は２つ以上の）核酸分子を調製して発現させることによって、又は任意の他の好適な方法を使用することによって、従来技術を使用して抗体の種々の部分（例えば、ＣＤＲ、フレームワーク）を一緒に化学的に結合させることにより調製することができる。

【0111】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３特異的抗体は、規定されたアミノ酸配列を有する重鎖又は軽鎖可変領域のうちの少なくとも１つを含むことができる。例えば、好ましい実施形態では、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体を含む。抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３特異的抗体はまた、規定されたアミノ酸配列を有する重鎖又は軽鎖のうちの少なくとも１つを含むことができる。別の好ましい実施形態では、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖とを有する抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体を含む。ヒトＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３に結合し、規定された重鎖又は軽鎖可変領域を含む抗体は、当該技術分野で既知であり、かつ／又は本明細書に記載される、ファージディスプレイ（Ｋａｔｓｕｂｅ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ，１（５）：８６３－８６８（１９９８））又はトランスジェニック動物を採用する方法など、好適な方法を使用して調製することができる。例えば、機能的に再構成されたヒト免疫グロブリン重鎖導入遺伝子と、機能的な再構成を受けることが可能なヒト免疫グロブリン軽鎖遺伝子座からのＤＮＡを含む導入遺伝子とを含むトランスジェニックマウスを、ヒトＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０若しくはＩＬ－２３又はその断片で免疫化して抗体の産生を誘発することができる。所望する場合、抗体産生細胞を単離することができ、本明細書に記載され、かつ／又は当該技術分野において既知である、ハイブリドーマ又は他の不死化抗体産生細胞を調製することができる。あるいは、抗体、特定の部分又は変異体は、好適な宿主細胞内で、コード核酸又はその一部分を使用して発現させることができる。

【0112】

本発明はまた、本明細書に記載されるアミノ酸配列と実質的に同じである配列中のアミノ酸を含む抗体、抗原結合断片、免疫グロブリン鎖及びＣＤＲに関する。好ましくは、かかる抗体又は抗原結合断片及びかかる鎖若しくはＣＤＲを含む抗体は、高い親和性（例えば、Ｋ_Ｄが約１０^－９Ｍ以下）で、ヒトＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３に結合することができる。本明細書に記載されている配列と実質的に同じであるアミノ酸配列としては、保存的アミノ酸置換並びにアミノ酸欠失及び／又は挿入を含む配列が挙げられる。保存的アミノ酸置換は、第１のアミノ酸のものに類似する化学的及び／又は物理的特性（例えば、電荷、構造、極性、疎水性／親水性）を有する第２のアミノ酸で、第１のアミノ酸を置換することを指す。保存的置換は、限定されるものではないが、１個のアミノ酸を、以下の群内の別のアミノ酸で置き換えることを含む：リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びヒスチジン（Ｈ）；アスパラギン酸塩（Ｄ）及びグルタミン酸塩（Ｅ）；アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｄ、及びＥ；アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、及びグリシン（Ｇ）；Ｆ、Ｗ、及びＹ；Ｃ、Ｓ、及びＴ。

【0113】

アミノ酸コード
本発明の抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体を構成するアミノ酸は、略されることが多い。アミノ酸表記は、その一文字コード、その三文字コード、名称、又は３つのヌクレオチドのコドンによりアミノ酸を表記することにより示すことができ、当該技術分野においてよく理解されている（Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．ら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｔｈｅ Ｃｅｌｌ」第３版、Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９４）を参照されたい）。

【0114】

【表1】

【0115】

配列
例示の抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体配列－ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）
抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体相補性決定領域重鎖１（complementarity determining region heavy chain 1、ＣＤＲＨ１）のアミノ酸配列：（配列番号１）
ＴＹＷＬＧ

【0116】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体相補性決定領域重鎖２（ＣＤＲＨ２）のアミノ酸配列：（配列番号２）
ＩＭＳＰＶＤＳＤＩＲＹＳＰＳＦＱＧ

【0117】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体相補性決定領域重鎖３（ＣＤＲＨ３）のアミノ酸配列：（配列番号３）
ＲＲＰＧＱＧＹＦＤＦ

【0118】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体相補性決定領域軽鎖１（complementarity determining region light chain 1、ＣＤＲＬ１）のアミノ酸配列：（配列番号４）
ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ

【0119】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体相補性決定領域軽鎖２（ＣＤＲＬ２）のアミノ酸配列：（配列番号５）
ＡＡＳＳＬＱＳ

【0120】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体相補性決定領域軽鎖３（ＣＤＲＬ３）のアミノ酸配列：（配列番号６）
ＱＱＹＮＩＹＰＹＴ

【0121】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体可変重鎖領域（ＣＤＲに下線が引かれている）のアミノ酸配列：（配列番号７）

【0122】

【表2】

【0123】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体可変軽鎖領域（ＣＤＲに下線が引かれている）のアミノ酸配列：（配列番号８）

【0124】

【表3】

【0125】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体重鎖（ＣＤＲに下線が引かれている）のアミノ酸配列：（配列番号１０）

【0126】

【表4】

【0127】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体軽鎖（ＣＤＲに下線が引かれている）のアミノ酸配列：（配列番号１１）

【0128】

【表5】

【0129】

アミノ酸配列ＩＬ－１２
α及びβサブユニットを有するヒトインターロイキン（ＩＬ）－１２のアミノ酸配列：（配列番号９）

【0130】

【表6】

【0131】

本発明の方法に使用される抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体は、本明細書で特定されるように、自然突然変異又はヒトによる操作のいずれかによる、１つ又は２つ以上のアミノ酸の置換、欠失、又は付加を含み得る。

【0132】

当業者が行い得るアミノ酸置換の数は、上記のものを含む多くの要因に依存する。一般的に言えば、所与の抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体、断片又は変異体のアミノ酸置換、挿入又は欠失の数は、本明細書で特定されるように、４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、例えば、１～３０又はこの中の任意の範囲若しくは値を超えない。

【0133】

機能上不可欠である抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３特異的抗体内のアミノ酸は、部位特異的突然変異誘発又はアラニンスキャニング突然変異誘発などの、当該技術分野において既知の方法により特定することができる（例えば、上記のＡｕｓｕｂｅｌ、第８，１５章；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及びＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５（１９８９））。後者の手順では、分子内の残基ごとに単個のアラニンによる変異を導入する。結果として得られた突然変異分子は、次いで、例えば、限定されないが、少なくとも１つのＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３中和活性などの生物活性について試験される。抗体結合にとって極めて重要である部位もまた、結晶化、核磁気共鳴又は光親和性標識などの構造解析によって同定することができる（Ｓｍｉｔｈら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９－９０４（１９９２）及びｄｅ Ｖｏｓら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：３０６－３１２（１９９２））。

【0134】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、１０、又は１１のうちの少なくとも１つの隣接アミノ酸のうちの５個から全てから選択される、少なくとも１つの部分、配列、又は組み合わせを含むことができるが、これらに限定されない。

【0135】

ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体又は特定の部分若しくは変異体としては、上記の配列番号の少なくとも３～５個の隣接アミノ酸、上記の配列番号の５～１７個の隣接アミノ酸、上記の配列番号の５～１０個の隣接アミノ酸、上記の配列番号の５～１１個の隣接アミノ酸、上記の配列番号の５～７個の隣接アミノ酸、上記の配列番号の５～９個の隣接アミノ酸から選択される少なくとも１つの部分、配列、又は組み合わせが挙げられ得るが、これらに限定されない。

【0136】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体は、更に任意選択で、上記の配列番号５、１７、１０、１１、７、９、１１９、１０８、４４９、又は２１４個の隣接アミノ酸の７０～１００％の少なくとも１つのポリペプチドを含むことができる。一実施形態では、免疫グロブリン鎖又はその部分（例えば、可変領域、ＣＤＲ）のアミノ酸配列は、上記の配列番号のうちの少なくとも１つの対応する鎖のアミノ酸配列と、約７０～１００％の同一性（例えば、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、又はこの中の任意の範囲若しくは値）を有する。例えば、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を、上記の配列番号の配列と比較することができ、又は重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を、上記の配列番号と比較することができる。好ましくは、７０～１００％のアミノ酸同一性（すなわち、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、又はこの中の任意の範囲若しくは値）は、当該技術分野において既知の好適なコンピュータアルゴリズムを使用して決定される。

【0137】

当該技術分野において既知の「同一性」とは、配列を比較することにより決定される、２つ若しくは３つ以上のポリペプチド配列間又は２つ若しくは３つ以上のポリヌクレオチド配列間の関係である。当該技術分野において、「同一性」とは、かかる配列のストリング間の一致によって決定される、ポリペプチド又はポリヌクレオチド配列間の配列関連性の程度も意味する。「同一性」及び「類似性」は、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８、Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３、Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ Ｉ，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７、及びＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１、並びにＣａｒｉｌｌｏ，Ｈ．，ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．，Ｓｉａｍ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない、既知の方法によって容易に算出することができる。加えて、同一性の割合に関する値は、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ Ｓｕｉｔｅ ８．０（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）の構成要素であるＡｌｉｇｎＸのデフォルト設定を用いて作成される、アミノ酸及びヌクレオチド配列アラインメントから得ることができる。

【0138】

同一性を決定する好ましい方法は、試験される配列間で最大の一致度が得られるように設計される。同一性及び類似性を決定する方法は、公的に入手可能なコンピュータプログラムにおいて成文化（codified）されている。２つの配列間の同一性及び類似性を決定するための好ましいコンピュータプログラム方法は、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．ら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２（１）：３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、及びＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０））を含むが、これらに限定されるものではない。ＢＬＡＳＴ Ｘプログラムは、ＮＣＢＩ及び他のソース（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ら，ＮＣＢＩＮＬＭ ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４：Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）から公的に入手可能である。周知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも同一性を決定するために使用され得る。

【0139】

ポリペプチド配列の比較に好ましいパラメータとしては、以下が挙げられる：
（１）アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．４８：４４３－４５３（１９７０）比較マトリックス：ＢＬＯＳＳＵＭ６２ ｆｒｏｍ Ｈｅｎｔｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅｎｔｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ．８９：１０９１５－１０９１９（１９９２）、
ギャップペナルティ：１２
ギャップ長ペナルティ：４
これらのパラメータで有用なプログラムは、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ Ｗｉｓからの「ギャップ」プログラムとして公的に入手可能である。前述のパラメータは、ペプチド配列比較のためのデフォルトパラメータ（末端ギャップに関してペナルティがないのと同様に）である。

【0140】

ポリヌクレオチド比較のための好ましいパラメータとしては、以下が挙げられる：
（１）アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．４８：４４３－４５３（１９７０）
比較マトリックス：一致＝＋１０、ミスマッチ＝０
ギャップペナルティ：５０
ギャップ長ペナルティ：３
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ Ｗｉｓからの「ギャップ」プログラムとして入手可能。これらは、核酸配列比較のデフォルトパラメータである。

【0141】

例として、ポリヌクレオチド配列は、別の配列と同一であり得る、つまり、１００％同一であるか、又は参照配列と比較してある特定の整数までのヌクレオチド改変を含み得る。かかる改変は、少なくとも１つのヌクレオチドの欠失、置換（転移及び転換を含む）、又は挿入からなる群から選択され、この改変は、参照ヌクレオチド配列の５’若しくは３’末端位置で、又はこれらの末端位置の間のどこで生じてもよく、参照配列のヌクレオチド間に個々に、又は参照配列内の１つ又は２つ以上の隣接基のいずれかに分散していてもよい。ヌクレオチド改変の数は、配列中のヌクレオチドの総数に、対応する同一性パーセントの数値パーセント（１００で割ったもの）を乗じ、その積を配列中のヌクレオチドの総数から差し引くこと、又は、
ｎ．ｓｕｂ．ｎ．ｌｔｏｒｓｉｍ．ｘ．ｓｕｂ．ｎ－（ｘ．ｓｕｂ．ｎ．ｙ）によって決定され、
式中、ｎ．ｓｕｂ．ｎはヌクレオチド改変の数であり、ｘ．ｓｕｂ．ｎは配列中のヌクレオチドの総数であり、ｙは、例えば、７０％に対しては０．７０、８０％に対しては０．８０、８５％に対しては０．８５、９０％に対しては０．９０、９５％に対しては０．９５などであり、ｘ．ｓｕｂ．ｎとｙとの任意の整数ではない積は、ｘ．ｓｕｂ．ｎから差し引く前に最も近い整数に切り捨てる。

【0142】

上記の配列番号をコードするポリヌクレオチド配列の改変は、このコード配列中にナンセンス、ミスセンス、又はフレームシフト突然変異を作り出し、それにより、かかる改変後にポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを改変してもよい。同様に、ポリペプチド配列は、上記の配列番号の参照配列と同一であってもよく、すなわち、１００％同一であるか、又は同一性パーセントが１００％未満であるように、参照配列と比較してある特定の整数までのアミノ酸改変を含んでもよい。かかる改変は、少なくとも１つのアミノ酸の欠失、置換（保存的及び非保存的置換を含む）、又は挿入からなる群から選択され、この改変は、参照ポリペプチド配列のアミノ若しくはカルボキシ末端位置で、又はこれらの末端位置の間のどこで生じてもよく、参照配列のアミノ酸間に個々に、又は参照配列内の１つ又は２つ以上の隣接基のいずれかに分散していてもよい。所与の同一性％のアミノ酸改変数は、上記の配列番号の総アミノ酸数にそれぞれの同一性パーセントの数値パーセント（１００で除す）を乗じ、その後、その積を上記の配列番号の総アミノ酸数から減算することによって、又は
ｎ．ｓｕｂ．ａ．ｌｔｏｒｓｉｍ．ｘ．ｓｕｂ．ａ－（ｘ．ｓｕｂ．ａ．ｙ）
（式中、ｎ．ｓｕｂ．ａは、アミノ酸改変数であり、ｘ．ｓｕｂ．ａは、上記の配列番号の総アミノ酸数であり、ｙは、例えば、７０％は０．７０であり、８０％は０．８０であり、８５％は０．８５であるといった具合であり、ｘ．ｓｕｂ．ａ及びｙの任意の非整数積は、ｘ．ｓｕｂ．ａからそれを減算する前に整数単位に四捨五入される）によって決定される。

【0143】

代表的な重鎖及び軽鎖可変領域の配列、並びにそれらの部分は、上記の配列番号に示される。本発明の抗体、又はその特定の変異体は、本発明の抗体から任意の数の隣接アミノ酸残基を含むことができ、その数は、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体における隣接残基数の１０～１００％からなる整数の群から選択される。任意選択で、隣接アミノ酸のこの部分配列は、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、若しくはそれ以上のアミノ酸長、又はその中の任意の範囲若しくは値である。更に、かかる部分配列の数は、少なくとも２、３、４、又は５などの、１～２０からなる群から選択される任意の整数であることができる。

【0144】

当業者が認識しているように、本発明には、本発明の少なくとも１つの生物学的活性抗体が含まれている。生物学的活性抗体は、天然（非合成）、内因性、又は関連する、及び既知の抗体のものの、少なくとも２０％、３０％、又は４０％、好ましくは少なくとも５０％、６０％、又は７０％、最も好ましくは少なくとも８０％、９０％、若しくは９５％～１００％、又はそれ以上（限定されるものではないが、比活性の最大１０倍を含む）の比活性を有する。酵素活性及び基質特異性のアッセイ及び定量測定の方法は、当業者には周知である。

【0145】

別の態様では、本発明は、有機部分の共有結合により修飾される、本明細書に記載されるヒト抗体及び抗原結合断片に関する。かかる修飾は、改善された薬物動態特性（例えば、増大したインビボでの血清半減期）を有する抗体又は抗原結合断片を産生することができる。有機部分は、直鎖又は分枝鎖親水性ポリマー基、脂肪酸基、又は脂肪酸エステル基であることができる。特定の実施形態では、親水性ポリマー基は、分子量が約８００～約１２０，０００ダルトンであって、ポリアルカングリコール（例えば、ポリエチレングリコール（polyethylene glycol、ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（polypropylene glycol、ＰＰＧ））、炭水化物ポリマー、アミノ酸ポリマー又はポリビニルピロリドンであり得、脂肪酸基又は脂肪酸エステル基は、約８～約４０個の炭素原子を含むことができる。

【0146】

修飾された抗体及び抗原結合断片は、抗体に直接的又は間接的に共有結合される、１つ又は２つ以上の有機部分を含むことができる。本発明の抗体又は抗原結合断片に結合される各有機部分は、独立して、親水性ポリマー基、脂肪酸基、又は脂肪酸エステル基であることができる。本明細書で使用するとき、「脂肪酸」という用語は、モノカルボン酸及びジカルボン酸を包含する。本明細書で使用する場合、「親水性ポリマー基」という用語は、オクタンよりも水に対する溶解度が高い有機ポリマーを意味する。例えば、ポリリシンは、オクタンよりも水に対する溶解度が高い。よって、ポリリシンの共有結合により修飾された抗体は、本発明に包含される。本発明の抗体を修飾するのに好適な親水性ポリマーは、直線状又は分岐状であることができ、例えば、ポリアルカングリコール（例えば、ＰＥＧ、モノメトキシ－ポリエチレングリコール（monomethoxy-polyethylene glycol、ｍＰＥＧ）、ＰＰＧなど）、炭水化物（例えば、デキストラン、セルロース、オリゴ糖、多糖など）、親水性アミノ酸のポリマー（例えば、ポリリシン、ポリアルギニン、ポリアスパラギン酸など）、ポリアルカンオキシド（例えば、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシドなど）、及びポリビニルピロリドンを含む。好ましくは、本発明の抗体を修飾する親水性ポリマーは、個別の分子体として、約８００～約１５０，０００ダルトンの分子量を有する。例えば、ＰＥＧ_５０００及びＰＥＧ_{２０，０００}を使用することができ、下付き文字は、ポリマーの平均分子量（ダルトン）である。親水性ポリマー基は、１～約６個のアルキル基、脂肪酸基又は脂肪酸エステル基で置換することができる。脂肪酸又は脂肪酸エステル基で置換される親水性ポリマー類は、好適な方法を利用することによって調製することができる。例えば、アミン基を含むポリマーを、脂肪酸又は脂肪酸エステルのカルボン酸塩に連結させることができ、脂肪酸又は脂肪酸エステル上の活性化カルボン酸塩（例えば、Ｎ，Ｎ－カルボニルジイミダゾールで活性化されている）をポリマー上のヒドロキシル基に連結させることができる。

【0147】

本発明の抗体を修飾するために好適な脂肪酸及び脂肪酸エステルは、飽和されてもよいし、又は１つ若しくは２つ以上の不飽和単位を含有していてもよい。本発明の抗体を修飾するのに好適な脂肪酸としては、例えば、ｎ－ドデカン酸塩（Ｃ_１２、ラウリン酸塩）、ｎ－テトラデカン酸塩（Ｃ_１４、ミリスチン酸塩）、ｎ－オクタデカン酸塩（Ｃ_１８、ステアリン酸塩）、ｎ－エイコサン酸塩（Ｃ_２０、アラキジン酸塩）、ｎ－ドコサン酸塩（Ｃ_２２、ベヘン酸）、ｎ－トリアコンタン酸塩（Ｃ_３０）、ｎ－テトラコンタン酸塩（Ｃ_４０）、シス－Δ９－オクタデカン酸塩（Ｃ_１８、オレイン酸塩）、全てのシス－Δ５，８，１１，１４－エイコサテトラエン酸塩（Ｃ_２０、アラキドン酸塩）、オクタンジオン酸、テトラデカンジオン酸、オクタデカンジオン酸、ドコサンジオン酸などが挙げられる。好適な脂肪酸エステルは、直鎖又は分枝鎖の低級アルキル基を含む、ジカルボン酸のモノエステルを含む。低級アルキル基は、１～約１２個、好ましくは１～約６個の炭素原子を含むことができる。

【0148】

修飾ヒト抗体及び抗原結合断片は、１つ又は２つ以上の修飾剤と反応させることなどによって、好適な方法を使用して調製することができる。本明細書で使用するとき、「修飾剤」という用語は、活性化基を含む好適な有機基（例えば、親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）を意味する。「活性化基」とは、適切な条件下で第２の化学基と反応し、これにより修飾剤と第２の化学基との間に共有結合を形成することのできる、化学部分又は官能基である。例えば、アミン反応性活性化基としては、トシル酸、メシル酸、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）などの求電子基、Ｎ－ヒドロキシスクシニミジルエステル（N-hydroxysuccinimidyl esters、ＮＨＳ）などが挙げられる。チオール類と反応可能な活性化基としては、例えば、マレイミド、ヨードアセチル、アクリロリル、ピリジルジスルフィド、５－チオール－２－ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ－チオール）などが挙げられる。アルデヒド官能基は、アミン又はヒドラジド含有分子と連結することができ、アジド基は、三価リン基と反応してホスホルアミデート又はホスホルイミド結合を形成することができる。分子中に活性化基を導入するための好適な方法は、当該技術分野において既知である（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９６）参照）。活性化基は、有機基（例えば、親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）に直接的に、又はリンカー部分、例えば、二価のＣ_１～Ｃ_１２基（ここで、１つ又は２つ以上の炭素原子は酸素、窒素又は硫黄などのヘテロ原子に置換できる）を介して結合することができる。好適なリンカー部分としては、例えば、テトラエチレングリコール、－（ＣＨ_２）_３－、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_６－ＮＨ－、－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－、及び－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ－ＮＨ－が挙げられる。リンカー部分を含む修飾剤は、例えば、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で、モノ－Ｂｏｃ－アルキルジアミン（例えば、モノ－Ｂｏｃ－エチレンジアミン、モノ－Ｂｏｃ－ジアミノへキサン）を脂肪酸と反応させて、遊離アミンと脂肪酸カルボキシレートとの間にアミド結合を形成することによって生産することができる。Ｂｏｃ保護基を、トリフルオロ酢酸（trifluoroacetic acid、ＴＦＡ）処理により生成物から除去し、記載されているように別のカルボン酸塩に連結し得る一級アミンを露出させることができ、又はこれを無水マレイン酸と反応させ、結果として得られた生成物を環化させて脂肪酸の活性化マレイミド誘導体を産生することができる。（例えば、国際公開第９２／１６２２１号（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら）を参照されたく、この全教示が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0149】

修飾された抗体は、ヒト抗体又は抗原結合断片を修飾剤と反応させることによって生産することができる。例えば、有機部分は、アミン反応性修飾剤、例えば、ＰＥＧのＮＨＳエステルを利用して、部位特異的なものではない方法で抗体に結合させることができる。抗体又は抗原結合断片のジスルフィド結合（例えば、鎖内ジスルフィド結合）を還元することによって、修飾されたヒト抗体又は抗原結合断片を調製することもできる。このとき、還元された抗体又は抗原結合断片をチオール反応性修飾剤と反応させて、本発明の修飾された抗体を生産することができる。本発明の抗体の特定の部位に結合される有機部分を含む修飾されたヒト抗体及び抗原結合断片は、逆タンパク質分解（Ｆｉｓｃｈら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，３：１４７－１５３（１９９２）、Ｗｅｒｌｅｎら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，５：４１１～４１７（１９９４）、Ｋｕｍａｒａｎら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．６（１０）：２２３３－２２４１（１９９７）、Ｉｔｏｈら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２４（１号）：５９～６８（１９９６）、Ｃａｐｅｌｌａｓら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，５６（４）：４５６～４６３（１９９７））、及びＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９６）に記載される方法などの好適な方法を使用して調製することができる。

【0150】

本発明の方法は、本明細書に記載され、かつ／又は当該技術分野において既知である、非自然発生組成物、混合物、又は形態で提供される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、又はそれ以上のその抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体を含む、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体組成物も使用する。かかる組成物は、上記の配列番号の隣接アミノ酸の７０～１００％、又はその特定の断片、ドメイン、若しくは変異体からなる群から選択される抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体のアミノ酸配列の、少なくとも１つ又は２つの完全長、Ｃ及び／若しくはＮ末端欠失変異体、ドメイン、断片、又は特定の変異体を含む非自然発生組成物を含む。好ましい抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体組成物は、例えば、上記の配列番号の７０～１００％の、本明細書に記載される抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体配列、又はその特定の断片、ドメイン、若しくは変異体の、少なくとも１つのＣＤＲ又はＬＢＰ含有部分として、少なくとも１つ又は２つの完全長、断片、ドメイン、又は変異体を含む。更に好ましい組成物は、例えば、上記配列番号などの７０～１００％、又はその特定の断片、ドメイン、若しくは変異体のうちの少なくとも１つを４０～９９％含む。かかる組成物の百分率は、当該技術分野において既知であるか、又は本明細書に記載されるように、重量、容量、濃度、モル濃度、あるいは液体若しくは無水溶液（dry solution）、混合物、懸濁液、エマルション、粒子、粉末、又はコロイドとしてのモル濃度によるものである。

【0151】

更なる治療活性成分を含む抗体組成物
本発明の方法に使用される抗体組成物は、任意選択で、抗感染症薬、心血管（cardiovascular、ＣＶ）系作用薬、中枢神経系（central nervous system、ＣＮＳ）薬、自律神経系（autonomic nervous system、ＡＮＳ）薬、呼吸器薬、消化（gastrointestinal、ＧＩ）管作用薬、ホルモン薬、体液又は電解質平衡薬、血液作用薬、抗腫瘍薬、免疫調節薬、眼、耳又は鼻用薬、局所作用薬、栄養薬などのうち、少なくとも１つから選択される、有効量の少なくとも１つの化合物又はタンパク質を更に含むことができる。かかる薬物は、本明細書に示される各々の製剤、適応症、投与量、及び投与を含めて、当該技術分野において周知である（例えば、各々参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｎｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ，２１^ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ Ｃｏｒｐ．，Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ，ＰＡ，２００１、Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ’ｓ Ｄｒｕｇ Ｇｕｉｄｅ ２００１，ｅｄ．，Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓｔａｎｇ，Ｐｒｅｎｔｉｃｅ－Ｈａｌｌ，Ｉｎｃ，Ｕｐｐｅｒ Ｓａｄｄｌｅ Ｒｉｖｅｒ，ＮＪ、Ｐｈａｒｍｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴを参照されたい）。

【0152】

本発明の方法の抗体と組み合わせることができる薬剤の例として、抗感染薬は、殺アメーバ薬又は少なくとも１種の抗原虫薬、駆虫薬、抗真菌薬、抗マラリア薬、抗結核薬又は少なくとも１種の抗らい菌薬、アミノグリコシド、ペニシリン、セファロスポリン、テトラサイクリン、スルホンアミド、フルオロキノロン、抗ウイルス薬、マクロライド抗感染薬、及び種々の抗感染薬から選択される少なくとも１種であることができる。ホルモン薬は、コルチコステロイド、アンドロゲン、又は少なくとも１種のアナボリックステロイド、エストロゲン、又は少なくとも１種のプロゲスチン、ゴナドトロピン、抗糖尿病薬、又は少なくとも１種のグルカゴン、甲状腺ホルモン、甲状腺ホルモン拮抗薬、下垂体ホルモン、及び副甲状腺様薬から選択される少なくとも１種であることができる。少なくとも１種のセファロスポリンは、セファクロル、セファドロキシル、セファゾリンナトリウム、セフジニル、塩酸セフェピム、セフィキシム、セフメタゾールナトリウム、セフォニシドナトリウム、セフォペラゾンナトリウム、セフォタキシムナトリウム、セフォテタン二ナトリウム、セフォキシチンナトリウム、セフポドキシムプロキセチル、セフプロジル、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシムナトリウム、セフトリアキソンナトリウム、セフロキシムアキセチル、セフロキシムナトリウム、塩酸セファレキシン、セファレキシン一水和物、セフラジン、及びロラカルベフから選択される少なくとも１種であることができる。

【0153】

少なくとも１種のコルチコステロイド（coricosteroid）は、ベタメタゾン、酢酸ベタメタゾン又はリン酸ベタメタゾンナトリウム、リン酸ベタメタゾンナトリウム、酢酸コルチゾン、デキサメサゾン、酢酸デキサメサゾン、リン酸デキサメサゾンナトリウム、酢酸フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、シピオン酸ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、テブト酸プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、及び二酢酸トリアムシノロンから選択される少なくとも１種であることができる。少なくとも１種のアンドロゲン又はタンパク質同化ステロイドは、ダナゾール、フルオキシメステロン、メチルテストステロン、デカン酸ナンドロロン、フェンプロピオン酸ナンドロロン、テストステロン、シピオン酸テストステロン、エナント酸テストステロン、プロピオン酸テストステロン、及びテストステロン経皮系から選択される少なくとも１種であることができる。

【0154】

少なくとも１種の免疫抑制剤は、アザチオプリン、バシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ、リンパ球免疫グロブリン、ムロモナブ－ＣＤ３、ミコフェノール酸モフェチル、塩酸ミコフェノール酸モフェチル、シロリムス、６－メルカプトプリン、メトトレキサート、ミゾリビン、及びタクロリムスから選択される少なくとも１種であることができる。

【0155】

少なくとも１種の局所抗感染薬は、アシクロビル、アンホテリシンＢ、アゼライン酸クリーム、バシトラシン、硝酸ブトコナゾール、リン酸クリンダマイシン、クロトリマゾール、硝酸エコナゾール、エリスロマイシン、硫酸ゲンタマイシン、ケトコナゾール、酢酸マフェニド、メトロニダゾール（局所）、硝酸ミコナゾール、ムピロシン、塩酸ナフチフィン、硫酸ネオマイシン、ニトロフラゾン、ナイスタチン、スルファジアジン銀、塩酸テルビナフィン、テルコナゾール、塩酸テトラサイクリン、チオコナゾール、及びトルナフテートから選択される少なくとも１種であることができる。少なくとも１種の疥癬殺虫剤若しくは殺シラミ薬は、クロタミトン、リンデン、ペルメトリン、及びピレトリンから選択される少なくとも１種であることができる。少なくとも１種の局所コルチコステロイドは、ジプロピオン酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメサゾン、リン酸デキサメサゾンナトリウム、二酢酸ジフロラゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルランドレノリド、プロピオン酸フルチカゾン、ハルシノニド（halcionide）、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フロ酸モメタゾン、及びトリアムシノロンアセトニドから選択される少なくとも１種であることができる。（例えば、Ｎｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの１０９８～１１３６ページを参照されたい。）

【0156】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体組成物は、かかる調節、治療、又は療法を必要とする細胞、組織、器官、動物、又は対象と接触するか又はそれに投与される少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体を含み、任意選択で、少なくとも１つのＴＮＦ拮抗薬（例えば、限定されないが、ＴＮＦ化学若しくはタンパク質拮抗薬、ＴＮＦモノクローナル若しくはポリクローナル抗体又は断片、可溶性ＴＮＦ受容体（例えば、ｐ５５、ｐ７０、又はｐ８５）又は断片、その融合ポリペプチド、又は小分子ＴＮＦ拮抗薬、例えば、ＴＮＦ結合タンパク質Ｉ若しくはＩＩ（ＴＢＰ－１又はＴＢＰ－ＩＩ）、ネレリモンマブ（nerelimonmab）、インフリキシマブ、エタナセプト（eternacept）、ＣＤＰ－５７１、ＣＤＰ－８７０、アフェリモマブ、レネルセプトなど）、抗リウマチ薬（例えば、メトトレキサート、オーラノフィン、アウロチオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト、金チオリンゴ酸ナトリウム、ヒドロキシクロロキン硫酸塩、レフルノミド、スルファサラジン）、免疫化物質、免疫グロブリン、免疫抑制薬（例えば、アザチオプリン、バシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、サイトカイン又はサイトカイン拮抗薬から選択される少なくとも１つを更に含む、任意の好適かつ有効な量の組成物又は医薬組成物のうちの少なくとも１つを更に含むことができる。かかるサイトカインの非限定的な実施例としては、ＩＬ－１～ＩＬ－２３など（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２など）のいずれかが挙げられるが、これらに限定されるものではない。好適な投与量は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ（２０００）、ＰＤＲ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｏｃｋｅｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ ２０００，Ｄｅｌｕｘｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｌｏｍａ Ｌｉｎｄａ，ＣＡ（２０００）を参照されたく、これらの文献は各々、参照により全体が本明細書に組み込まれる。

【0157】

本発明の方法に使用される抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体化合物、組成物、又は混合物は更に、希釈剤、結合剤、安定剤、緩衝剤、塩、親油性溶媒、保存剤、アジュバントなどであるが、これらに限定されない、任意の好適な助剤のうちの少なくとも１つを含み得る。医薬的に許容される助剤が好ましい。かかる滅菌溶液を調製する方法及びその非限定例は、当該技術分野において周知であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８^ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）１９９０が挙げられるが、これに限定されない。当該技術分野において周知であるか、又は本明細書に記載される、抗ＩＬ－２３抗体、断片、又は変異体組成物の投与方式、溶解度、及び／又は安定性に好適な医薬的に許容される担体は、日常的に選択することができる。

【0158】

本組成物において有用な医薬賦形剤及び添加剤は、これらに限定されるものではないが、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質及び炭水化物（例えば、単糖類、二糖、三糖、四糖、及びオリゴ糖を含む糖類、アルジトール、アルドン酸、エステル化糖などの誘導体化糖、並びに多糖類又は糖ポリマー）を含み、これらは、単独で又は組み合わせて存在してもよく、単独で又は組み合わせて１～９９．９９重量％又は容量％含まれる。代表的なタンパク質賦形剤としては、ヒト血清アルブミン（human serum albumin、ＨＳＡ）などの血清アルブミン、組換えヒトアルブミン（recombinant human albumin、ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼインなどが挙げられる。緩衝能においても機能し得る代表的なアミノ酸／抗体構成要素としては、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテームなどが挙げられる。好ましいアミノ酸の１つはグリシンである。

【0159】

本発明で使用するのに好適な炭水化物賦形剤としては、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ－マンノース、ソルボースなどの単糖類、ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなどの二糖類、ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプン類などの多糖類、マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトールソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトールなどのアルジトールが挙げられる。本発明で使用するのに好ましい炭水化物添加物は、マンニトール、トレハロース、及びラフィノースである。

【0160】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体組成物は、緩衝剤又はｐＨ調整剤も含み得、典型的には、緩衝剤は、有機酸又は塩基から調製される塩である。代表的な緩衝剤としては、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、又はフタル酸の塩などの有機酸塩、トリス、トロメタミン塩酸塩、又はリン酸緩衝剤が挙げられる。本組成物で使用するのに好ましい緩衝剤は、クエン酸などの有機酸塩である。

【0161】

加えて、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体組成物は、ポリビニルピロリドン、フィコール（ポリマー糖）、デキストレート（例えば、２－ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンなどのシクロデキストリン）、ポリエチレングリコール、着香剤、抗菌剤、甘味料、抗酸化剤、帯電防止剤、界面活性剤（例えば、「ＴＷＥＥＮ２０」及び「ＴＷＥＥＮ８０」などのポリソルベート）、脂質（例えば、リン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えば、コレステロール）、及びキレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）などのポリマー賦形剤／添加剤を含み得る。

【0162】

本発明による抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０若しくはＩＬ－２３抗体、部分、又は変異体組成物における使用に好適なこれら及び追加の既知の製薬学的添加物及び／又は添加剤は、当該技術分野において既知であり、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」、１９^ｔｈ ｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５）、及び「Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」、５２^ｎｄ ｅｄ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ（１９９８）に列挙されており、これらの開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。好ましい担体又は添加物材料は、炭水化物（例えば、単糖類及びアルジトール）及び緩衝剤（例えば、クエン酸）又はポリマー剤である。例示的な担体分子はムコ多糖、ヒアルロン酸であり、これらは関節内送達に有用であり得る。

【0163】

製剤
上述のとおり、本発明は、好ましくは、生理食塩水又は選択された塩を含むリン酸緩衝剤を含む安定した製剤、並びに保存剤を含有する保存溶液及び製剤、並びに医薬的に許容される製剤中に少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体を含む医薬的又は獣医学的用途に好適な多用途保存製剤を提供する。保存製剤は、水性希釈剤中に、少なくとも１つのフェノール、ｍ－クレゾール、ｐ－クレゾール、ｏ－クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば、六水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、及びチメロサール、又はそれらの混合物からなる群から任意選択で選択される、少なくとも１つの既知の保存剤を含む。当該技術分野において既知であるように、０．００１～５％、又はその中の任意の範囲若しくは値、例えば、０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９など、又はその中の任意の範囲若しくは値の、任意の好適な濃度又は混合物を使用することができる。非限定的な実施例としては、保存剤無添加、０．１～２％のｍ－クレゾール（例えば、０．２、０．３．０．４、０．５、０．９、１．０％）、０．１～３％のベンジルアルコール（例えば、０．５、０．９、１．１、１．５、１．９、２．０、２．５％）、０．００１～０．５％のチメロサール（例えば、０．００５、０．０１）、０．００１～２．０％のフェノール（例えば、０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０％）、０．０００５～１．０％のアルキルパラベン（例えば、０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、１．０％）などが挙げられる。

【0164】

上述のとおり、本発明の方法は、包装材と、任意選択で水性希釈剤中に処方された緩衝剤及び／又は保存剤を有する少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体の溶液を含む少なくとも１つのバイアルと、を含む製品を使用し、当該包装材は、かかる溶液を１、２、３、４、５、６、９、１２、１８、２０、２４、３０、３６、４０、４８、５４、６０、６６、７２時間以上の期間にわたり保持することができることを記すラベルを含む。本発明は、包装材と、凍結乾燥された抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体を含む第１のバイアルと、処方された緩衝剤又は保存剤の水性希釈剤を含む第２のバイアルと、を含む製品を更に使用し、当該包装材は、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体を水性希釈剤で再構成して、２４時間以上の期間にわたって保持することができる溶液を形成するように患者に指示するラベルを含む。

【0165】

本発明に従って使用される抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体は、本明細書に記載されるか、又は当該技術分野において既知である、組換え手段により、例えば、哺乳類細胞又はトランスジェニック調製物から生産することができるか、又は他の生物源から精製することができる。

【0166】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体の範囲は、湿潤／乾燥システムの場合、再構成するときに約１．０μｇ／ｍＬ～約１０００ｍｇ／ｍＬの濃度が得られる量で含まれるが、より低い濃度及び高い濃度でも作業可能であり、意図される送達ビヒクルに依存し、例えば溶液製剤は、経皮パッチ、肺、経粘膜、又は浸透圧性若しくはマイクロポンプ方法とは異なる。

【0167】

好ましくは、水性希釈剤は、任意選択で、医薬的に許容される保存剤を更に含む。好ましい保存剤には、フェノール、ｍ－クレゾール、ｐ－クレゾール、ｏ－クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、及びチメロサール、又はそれらの混合物からなる群から選択されるものが挙げられる。製剤中で使用される保存剤の濃度は、抗菌効果を生み出すのに十分な濃度である。かかる濃度は選択された保存剤によって異なり、当業者により容易に決定される。

【0168】

他の賦形剤、例えば、等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、及び保存剤エンハンサは、任意選択でかつ好ましくは希釈剤に添加することができる。グリセリンなどの等張剤が、既知の濃度で概して使用される。好ましくは、生理学的に耐性の緩衝剤を添加して、改善されたｐＨ制御を提供する。製剤は、約ｐＨ４～約ｐＨ１０、及び好ましくは約ｐＨ５～約ｐＨ９の範囲、及び最も好ましくは約６．０～約８．０の範囲などの、広範囲のｐＨ範囲を網羅とすることができる。好ましくは、本発明の製剤は、約６．８～約７．８のｐＨを有する。好適な緩衝剤には、リン酸緩衝剤、最も好ましくは、リン酸ナトリウム、特にリン酸緩衝生理食塩水（phosphate buffered saline、ＰＢＳ）が含まれる。

【0169】

他の添加剤、例えばＴｗｅｅｎ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、Ｔｗｅｅｎ４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ＋＋（ポリマー）Ｆ６８（ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー）、及びＰＥＧ（ポリエチレングリコール）などの医薬的に許容される可溶化剤、又はポリソルベート２０若しくは８０又はポロキサマー１８４若しくは１８８、ＰＬＵＲＯＮＩＣ登録商標（ポリマー）、例えば、ポリオール、非イオン性界面活性剤、他のブロックコポリマー、並びにＥＤＴＡ及びＥＧＴＡなどのキレート剤を製剤又は組成物に任意選択で添加することで、凝集を低減させることができる。これらの添加物は、製剤を投与するためにポンプ又はプラスチック容器が使用される場合に特に有用である。医薬的に許容される界面活性剤の存在により、タンパク質が凝集する傾向が軽減される。

【0170】

製剤は、少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体と、フェノール、ｍ－クレゾール、ｐ－クレゾール、ｏ－クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、及びチメロサール又はこれらの混合物からなる群から選択される保存剤と、を水性希釈剤中で混合することを含むプロセスにより調製することができる。少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３特異的抗体と保存剤との水性希釈剤中での混合は、従来の溶解及び混合手順を使用して実施される。好適な製剤を調製するために、例えば、緩衝溶液中の一定量の少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体を、所望の濃度のタンパク質及び保存剤を提供するのに十分な量の緩衝溶液中で所望の保存剤と組み合わせる。本プロセスの変化形態は、当業者によって認識される。例えば、構成成分の添加順序、追加の添加剤の使用の有無、製剤調製時の温度及びｐＨは全て、使用する投与濃度及び投与手段に関して最適化することのできる因子である。

【0171】

製剤は、透明な溶液として、又は水、保存剤及び／若しくは賦形剤、好ましくはリン酸塩緩衝剤及び／若しくは生理食塩水、並びに選択された塩を水性希釈剤中に含有する第２のバイアルで再構成される、凍結乾燥された抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３特異的抗体のバイアルを含む併用バイアル（dual vial）として患者に提供することができる。単一溶液バイアル又は再構成を必要とするデュアルバイアルはいずれも複数回再利用することができ、単一又は複数の患者治療サイクルを満たすことができ、したがって、現在使用できるよりも便利な治療レジメンを提供することができる。

【0172】

本製品は、即時から２４時間以上の範囲の期間にわたる投与に有用である。したがって、本発明により特許請求される製品は、患者に大きな利益を提供する。本発明の製剤は、任意選択で、約２℃～約４０℃の温度で安全に保存し、タンパク質の生物学的活性を長期間保持することができ、したがって、包装ラベルで、溶液を６、１２、１８、２４、３６、４８、７２、又は９６時間以上保持及び／又は使用し得ることを示すことができる。保存されている希釈剤を使用する場合には、かかるラベルは、最高１～１２か月、半年、１年半、及び／又は２年までの使用を含むことができる。

【0173】

抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３特異的抗体の溶液は、少なくとも１つの抗体を水性希釈剤中で混合することを含むプロセスにより調製することができる。混合は、従来の溶解及び混合手順を使用して実施される。好適な希釈剤を調製するために、例えば、水又は緩衝剤中の一定量の少なくとも１つの抗体を、所望の濃度のタンパク質、及び任意選択で保存剤又は緩衝剤を提供するのに十分な量で組み合わせる。本プロセスの変化形態は、当業者によって認識される。例えば、構成成分の添加順序、追加の添加剤の使用の有無、製剤調製時の温度及びｐＨは全て、使用する投与濃度及び投与手段に関して最適化することのできる因子である。

【0174】

特許請求される製品は、透明な溶液として、又は水性希釈剤を含有する第２のバイアルで再構成される、凍結乾燥された少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３特異的抗体のバイアルを含む併用バイアルとして、患者に提供することができる。単一溶液バイアル又は再構成を必要とするデュアルバイアルはいずれも複数回再利用することができ、単一又は複数の患者治療サイクルを満たすことができ、したがって、現在使用できるよりも便利な治療レジメンを提供する。

【0175】

特許請求される製品は、透明な溶液、又は水性希釈剤を含有する第２のバイアルで再構成される、凍結乾燥された少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３特異的抗体のバイアルを含む併用バイアルを、薬局、診療所、又は他のかかる機関及び施設に提供することによって、患者に対し間接的に提供することができる。この場合の透明溶液は最高１リットル又は更にはそれ以上の容量であってもよく、この大きな容器からより少量の少なくとも１つの抗体溶液を１回又は複数回取り出してより小さなバイアルに移し、かつ薬局又は診療所により顧客及び／又は患者に提供できる。

【0176】

これらの単一バイアルシステムを含む承認済みデバイスとしては、Ｂ－Ｄ（登録商標）（ペン型インジェクタデバイス）、ＮＯＶＯＰＥＮ（登録商標）（ペン型インジェクタデバイス）、ＡＵＴＯＰＥＮ（登録商標）（ペン型インジェクタデバイス）、ＯＰＴＩＰＥＮ（登録商標）（ペン型インジェクタデバイス）、ＧＥＮＯＴＲＯＰＩＮ ＰＥＮ（登録商標）（ペン型インジェクタデバイス）、ＢＩＯＪＥＣＴＯＲ（登録商標）（ペン型インジェクタデバイス）、Ｒｅｃｏ－Ｐｅｎ、Ｈｕｍａｊｅｃｔ、Ｊ－ｔｉｐ Ｎｅｅｄｌｅ－Ｆｒｅｅ Ｉｎｊｅｃｔｏｒ、Ｉｎｔｒａｊｅｃｔ、Ｍｅｄｉ－Ｊｅｃｔなどの溶液を送達するためのペン型インジェクタデバイスが挙げられ、例えば、Ｄｉｃｋｅｎｓｅｎ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ｗｗｗ．ｂｅｃｔｏｎｄｉｃｋｅｎｓｏｎ．ｃｏｍ），Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ（Ｂｕｒｇｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，ｗｗｗ．ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ．ｃｏｍ、Ｂｉｏｊｅｃｔ，Ｐｏｒｔｌａｎｄ，Ｏｒｅｇｏｎ（ｗｗｗ．ｂｉｏｊｅｃｔ．ｃｏｍ）、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｗｅｓｔｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ（Ｐｅｔｅｒｂｏｒｏｕｇｈ，ＵＫ、ｗｗｗ．ｗｅｓｔｏｎ－ｍｅｄｉｃａｌ．ｃｏｍ）、Ｍｅｄｉ－Ｊｅｃｔ Ｃｏｒｐ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ、ｗｗｗ．ｍｅｄｉｊｅｃｔ．ｃｏｍ）によって製造又は開発されたものである。併用バイアル系を含む承認済みデバイスとしては、ＨＵＭＡＴＲＯＰＥＮ（登録商標）（ペン型インジェクタデバイス）などの、再構成した溶液を送達するためのカートリッジ内で凍結乾燥された薬物を再構成するためのペン型インジェクタシステムが挙げられる。

【0177】

本製品は、包装材を含み得る。包装材は、規制当局によって必要とされる情報に加えて、本製品を使用することができる条件を提供する。本発明の包装材は、該当する場合、少なくとも１つの抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体を水性希釈剤で再構成して溶液を形成し、２～２４時間以上の期間にわたって、この溶液を湿式／乾式の２つのバイアル製品に使用する、という指示を患者に提供する。シングルバイアルの溶液製品、プレフィルドシリンジ、又は自己注射器の場合、ラベルは、かかる溶液を２～２４時間以上の期間にわたって使用することができることを示す。本製品は、ヒト用医薬製品用途に有用である。

【0178】

本発明の方法に使用される製剤は、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体と、選択された緩衝剤、好ましくは生理食塩水又は選択された塩を含有するリン酸塩緩衝剤とを混合することを含むプロセスにより調製することができる。抗ＩＬ－２３抗体と緩衝剤との水性希釈剤中での混合は、従来の溶解及び混合手順を使用して実施される。好適な製剤を調製するために、例えば、水又は緩衝剤中の一定量の少なくとも１つの抗体を、所望の濃度のタンパク質及び緩衝剤を提供するのに十分な量の水中で所望の緩衝剤と組み合わせる。本プロセスの変化形態は、当業者によって認識される。例えば、構成成分の添加順序、追加の添加剤の使用の有無、製剤調製時の温度及びｐＨは全て、使用する投与濃度及び投与手段に関して最適化することのできる因子である。

【0179】

本発明の方法は、ヒト又は動物患者に投与するのに有用であり、かつ許容される様々な製剤を含む医薬組成物を提供する。かかる医薬組成物は、希釈剤として「標準状態」の水、及び当業者に周知の日常的な方法を使用して調製される。例えば、ヒスチジン及びヒスチジン一塩酸塩水和物などの緩衝構成要素が最初に提供され、続いて適切な非最終容量の「標準状態」の水希釈剤、スクロース、及びポリソルベート８０が添加され得る。次いで、単離された抗体を添加することができる。最後に、水を希釈剤として使用して「標準状態」条件の下で、医薬組成物の容量を所望の最終容量に調整する。当業者であれば、医薬組成物の調製に好適ないくつかの他の方法を認識する。

【0180】

医薬組成物は、水の容量単位当たりの示される質量の各構成成分を含むか、又は「標準状態」の示されるｐＨを有する水溶液又は懸濁液であってもよい。本明細書で使用するとき、「標準状態」という用語は、２５℃±２℃の温度及び１気圧の圧力を意味する。「標準状態」という用語は、当該技術分野では、当該技術分野が認識する単一の温度又は圧力のセットを指すように使用されないが、代わりに参照「標準状態」条件下の特定の組成物を含む溶液又は懸濁液を説明するために使用される温度及び圧力を特定する参照状態である。これは、溶液の容量が一つには温度及び圧力の関数であるためである。当業者であれば、本明細書に開示されるものと同等の医薬組成物を他の温度及び圧力で生産することができることを認識する。かかる医薬組成物が本明細書に開示されるものと同等であるかは、上記に定義された「標準状態」条件下（例えば、２５℃±２℃及び１気圧の圧力）で決定されるべきである。

【0181】

重要なことに、かかる医薬組成物は、医薬組成物の単位容積当たり「約」ある特定の値の構成要素の質量（例えば、「約０．５３ｍｇのＬ－ヒスチジン」）を含有するか、又は約ある特定の値のｐＨ値を有し得る。医薬組成物中に存在する構成要素の質量又はｐＨ値は、単離された抗体が医薬組成物に存在するか、又は単離された抗体が医薬組成物から除去された後（例えば、希釈により）に、医薬組成物中に存在する単離された抗体がペプチド鎖に結合することができる場合の、「約」所与の数値である。つまり、構成要素の質量値又はｐＨ値などの値は、単離された抗体を医薬組成物中に入れた後に単離された抗体の結合活性が維持され、検出可能である場合の、「約」所与の数値である。

【0182】

競合結合解析を行って、ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３特異的ｍＡｂが類似の若しくは異なるエピトープに結合し、かつ／又は互いに競合するかを決定する。ＥＬＩＳＡプレート上にＡｂを個々にコーティングする。競合するｍＡｂを添加し、続いてビオチン化ｈｒＩＬ－１２又はＩＬ－２３を添加する。陽性対照には、コーティングに同じｍＡｂを競合ｍＡｂ（「自己競合」）として使用してもよい。ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３結合は、ストレプトアビジンを使用して検出される。これらの結果は、ｍＡｂがＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３上の類似の又は部分的に重複するエピトープを認識するかどうかを示す。

【0183】

本発明の方法の一態様は、医薬組成物を患者に投与する。

【0184】

医薬組成物の一実施形態では、単離された抗体濃度は、１ｍＬの医薬組成物当たり約７７～約１０４ｍｇである。医薬組成物の別の実施形態では、ｐＨは約５．５～約６．５である。

【0185】

安定又は保存製剤は、透明な溶液として、又は水性希釈剤中に保存剤若しくは緩衝剤及び添加物を含有する第２のバイアルで再構成される、凍結乾燥された少なくとも１つの抗ＩＬ－２３抗体のバイアルを含むデュアルバイアルとして、患者に提供することができる。単一溶液バイアル又は再構成を必要とするデュアルバイアルはいずれも複数回再利用することができ、単一又は複数の患者治療サイクルを満たすことができ、したがって、現在使用できるよりも便利な治療レジメンを提供する。

【0186】

抗ＩＬ－２３抗体を安定化する他の製剤又は方法は、抗体を含む凍結乾燥粉末の透明溶液以外のものであってよい。非透明溶液としては、微粒子懸濁液を含む製剤があり、かかる微粒子は、ミクロスフェア、微小粒子、ナノ粒子、ナノスフェア、又はリポソームとして様々に知られる種々の大きさの構造内に、抗ＩＬ－２３抗体を含有する組成物である。活性薬剤を含有するかかる比較的均質な本質的に球状の微粒子製剤は、米国特許第４，５８９，３３０号に教示されるとおり、活性薬剤及びポリマーを含有する水相と非水相とを接触させ、次に、非水相を蒸発させて水相からの粒子の合体を引き起こすことにより、形成することができる。多孔性微小粒子は、米国特許第４，８１８，５４２号に教示されるとおり、連続溶媒中に分散された活性薬剤とポリマーとを含有する第１相を使用し、凍結乾燥又は希釈－抽出－沈殿により懸濁液からこの溶媒を除去することで調製することができる。こうした調製に好ましいポリマーは、ゼラチン寒天、デンプン、アラビノガラクタン、アルブミン、コラーゲン、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、グリコリド－Ｌ（－）ラクチドポリ（エプシロン－カプロラクトン、ポリ（エプシロン－カプロラクトン－ＣＯ－乳酸）、ポリ（エプシロン－カプロラクトン－ＣＯ－グリコール酸）、ポリ（β－ヒドロキシ酪酸）、ポリエチレンオキシド、ポリエチレン、ポリ（アルキル－２－シアノアクリレート）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリアミド、ポリ（アミノ酸）、ポリ（２－ヒドロキシエチルＤＬ－アスパルトアミド）、ポリ（エステル尿素）、ポリ（Ｌ－フェニルアラニン／エチレングリコール／１，６－ジイソシアナトヘキサン）及びポリ（メチルメタクリレート）からなる群から選択される、天然又は合成のコポリマー又はポリマーである。特に好ましいポリマーは、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、グリコリド－Ｌ（－）ラクチドポリ（エプシロン－カプロラクトン、ポリ（エプシロン－カプロラクトン－ＣＯ－乳酸）、及びポリ（エプシロン－カプロラクトン－ＣＯ－グリコール酸）などのポリエステルである。ポリマー及び／又は活性物質を溶解させるのに有用な溶媒としては、水、ヘキサフルオロイソプロパノール、塩化メチレン、テトラヒドロフラン、ヘキサン、ベンゼン、又はヘキサフルオロアセトンセスキ水和物が挙げられる。活性物質含有相を第２相に分散させるプロセスは、ノズル内のオリフィスに当該第１相を圧力で強制的に通して液滴形成に作用させることを含むことができる。

【0187】

乾燥粉末製剤は、例えば、噴霧乾燥法、又は蒸発による溶媒抽出法、若しくは水性若しくは非水性溶媒を除去するための１つ又は２つ以上の工程が後続する結晶性組成物の沈殿による溶媒抽出法などの、凍結乾燥以外のプロセスの結果として得てもよい。噴霧乾燥抗体製剤の調製は、米国特許第６，０１９，９６８号に教示されている。抗体ベースの乾燥粉末組成物は、抗体の溶液又はスラリーを、及び任意選択で、呼吸用乾燥粉末を提供するための条件下で溶媒中の、賦形剤を、噴霧乾燥させることによって生産され得る。溶媒としては、容易に乾燥可能な、例えば水及びエタノールなどの極性化合物が挙げられる。抗体の安定性は、酸素不在下、例えば窒素ブランケット下において噴霧乾燥手順を実施すること、又は乾燥用気体として窒素を使用することにより増強され得る。別の比較的乾燥した製剤は、国際公開第９９１６４１９号に教示されている典型的にはヒドロフルオロアルカン噴射剤を含む懸濁培地中に分散した複数の有孔微細構造の分散物である。安定化された分散物は、定量吸入器を用いて患者の肺に投与できる。噴霧乾燥された薬物の商業的製造において有用な機器は、Ｂｕｃｈｉ Ｌｔｄ．又はＮｉｒｏ Ｃｏｒｐ．により製造されている。

【0188】

本明細書に記載される安定若しくは保存製剤又は溶液中のいずれかで抗ＩＬ－２３抗体は、当該技術分野において周知である、ＳＣ若しくはＩＭ注射、経皮、経肺、経粘膜、埋め込み、浸透圧ポンプ、カートリッジ、マイクロポンプ、又は当業者により理解される他の手段などの種々の送達方法を介して、本発明に従って患者に投与することができる。

【0189】

治療への応用
本発明はまた、当該技術分野において既知であるか、又は本明細書に記載される、少なくとも１つの本発明のＩＬ－２３抗体を用いて、例えば、細胞、組織、器官、動物、又は患者に、治療有効量のＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３特異的抗体を投与又は接触させて、細胞、組織、器官、動物、又は患者におけるループスを調節又は治療するための方法をも提供する。

【0190】

本発明のいずれの方法も、かかる調節、治療、又は療法を必要としている細胞、組織、器官、動物、又は患者に、抗ＩＬ－２３抗体を含む有効量の組成物又は医薬組成物を投与することを含み得る。かかる方法は、任意選択で、かかる疾患又は障害の治療のための同時投与又は併用療法を更に含むことができ、ここで、この少なくとも１つの抗ＩＬ－２３抗体、その特定の部分、又は変異体を投与することは、少なくとも１つのＴＮＦ拮抗薬（例えば、限定されないが、化学物質性若しくはタンパク質性ＴＮＦ拮抗薬、ＴＮＦモノクローナル若しくはポリクローナル抗体若しくは断片、可溶性ＴＮＦ受容体（例えば、ｐ５５、ｐ７０、又はｐ８５）若しくは断片、その融合ポリペプチド、又は低分子ＴＮＦ拮抗薬、例えば、ＴＮＦ結合タンパク質Ｉ又はＩＩ（ＴＢＰ－１又はＴＢＰ－ＩＩ）、ネレリモンマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト（eternacept）（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（商標））、ＣＤＰ－５７１、ＣＤＰ－８７０、アフェリモマブ、レネルセピトなど）、抗リウマチ薬（例えば、メトトレキサート、オーラノフィン、アウロチオグルコース、アザチオプリン、金チオリンゴ酸ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、スルファサラジン）、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（non-steroid anti-inflammatory drug、ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬（例えば、アミノグリコシド、抗真菌薬、抗寄生虫薬、抗ウイルス薬、カルバペナム、セファロスポリン、フルオロキノロン、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、他抗菌薬）、乾癬治療薬、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、糖尿病関連薬、ミネラル、栄養薬、甲状腺剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止瀉薬、鎮咳薬、制吐剤、抗腫瘍薬、緩下剤、抗凝固薬、エリスロポエチン（例えば、エポエチンアルファ）、フィルグラスチム（例えば、Ｇ－ＣＳＦ、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチム（ＧＭ－ＣＳＦ、Ｌｅｕｋｉｎｅ）、免疫付与剤、免疫グロブリン、免疫抑制剤（例えば、バシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン補充薬、エストロゲン受容体調節薬、散瞳剤、毛様体筋麻痺薬、アルキル化剤、代謝拮抗薬、分裂阻害剤、放射性医薬品、抗うつ薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、睡眠薬、交感神経刺激薬、刺激薬、ドネペジル、タクリン、ぜんそく薬、ベータ作用薬、吸入ステロイド、ロイコトリエン阻害剤、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリン若しくは類似体、ドルナーゼアルファ（Pulmozyme）、サイトカイン若しくはサイトカイン拮抗薬から選択される少なくとも１つを、前に、同時に、及び／又は後に投与することを更に含む。好適な投与量は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ（２０００）、ＰＤＲ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｏｃｋｅｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ ２０００，Ｄｅｌｕｘｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｌｏｍａ Ｌｉｎｄａ，ＣＡ（２０００）、Ｎｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ，２１^ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ Ｃｏｒｐ．，Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ，ＰＡ，２００１、Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ’ｓ Ｄｒｕｇ Ｇｕｉｄｅ ２００１，ｅｄ．，Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓｔａｎｇ，Ｐｒｅｎｔｉｃｅ－Ｈａｌｌ，Ｉｎｃ，Ｕｐｐｅｒ Ｓａｄｄｌｅ Ｒｉｖｅｒ，ＮＪを参照されたく、これらの参考文献は各々、参照により全体が本明細書に組み込まれる。

【0191】

治療処置
典型的には、ループスの治療は、有効量又は有効用量の抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０又は抗ＩＬ－２３抗体組成物を投与することによって影響を受け、これは、組成物に含まれる活性剤の特異的活性に応じて、合計で、平均して、１用量当たり、患者１キログラム当たり少なくとも約０．０１～５００ミリグラムの範囲の抗ＩＬ－１２／２３ｐ４０又は抗ＩＬ－２３抗体であり、好ましくは、単回又は複数回投与当たり、１用量当たり、患者１キログラム当たり少なくとも約０．１～１００ミリグラムの抗体である。あるいは、有効な血清濃度は、単回又は複数回投与当たり、０．１～５０００μｇ／ｍＬの血清濃度を含み得る。好適な投与量は、医療従事者には既知であり、当然のことながら、具体的な疾患状態、投与される組成物の比活性、及び治療を受けている具体的な患者に依存する。いくつかの場合では、望ましい治療量を達成するために、反復投与、すなわち特定の監視された用量又は計量された用量の反復個別投与を提供することが必要となる場合があり、この場合、個別投与は、所望の１日の投与量又は効果が得られるまで繰り返される。

【0192】

好ましい用量は、任意選択で、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９及び／若しくは１００～５００ｍｇ／ｋｇ／投与、又はその任意の範囲、値若しくは分画を含むか、あるいは単回若しくは複数回投与当たり０．１、０．５、０．９、１．０、１．１、１．２、１．５、１．９、２．０、２．５、２．９、３．０、３．５、３．９、４．０、４．５、４．９、５．０、５．５、５．９、６．０、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、２０、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４．０、１４．５、４．９、５．０、５．５．、５．９、６．０、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、１２、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４、１４．５、１５、１５．５、１５．９、１６、１６．５、１６．９、１７、１７．５、１７．９、１８、１８．５、１８．９、１９、１９．５、１９．９、２０、２０．５、２０．９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９６、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、及び／若しくは５０００μｇ／ｍＬの血清濃度、又はその任意の範囲、値若しくは分画を得るように含み得る。

【0193】

あるいは、投与される用量は、特定の薬剤の薬力学的特徴並びにその投与方法及び経路、受容者の年齢、健康状態及び体重、症状の性質及び程度、同時治療の種類、治療頻度、並びに所望の作用などの既知の因子に応じて異なり得る。活性成分の投与量は、通常、体重１キログラム当たり約０．１～１００ミリグラムであり得る。通常、０．１～５０、好ましくは０．１～１０ミリグラム／キログラム／投与、又は徐放性形態が、望ましい結果を得るために有効である。

【0194】

非限定的な例として、ヒト又は動物の治療は、単回投与、静注投与、又は反復投与を使用して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９若しくは４０日目のうちの少なくとも１日に、あるいは又は追加的に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１若しくは５２週目のうちの少なくとも１週に、あるいは又は追加的に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０年目のうちの少なくとも１年に、又はこれらの任意の組み合わせで、１日当たり０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００ｍｇ／ｋｇの、本発明の少なくとも１つの抗体の１回又は周期的な投与量として提供され得る。

【0195】

体内投与に好適な剤形（組成物）は、概して、ユニット又は容器当たり約０．００１ミリグラム～約５００ミリグラムの活性成分を含む。これらの医薬組成物において、活性成分は、通常、組成物の総重量に基づいて約０．５～９９．９９９重量％の量で存在する。

【0196】

非経口投与に関して、抗体は、医薬的に許容される非経口ビヒクルと合わせて、又は別個に提供される、溶液、懸濁液、エマルション、粒子、粉末、若しくは凍結乾燥粉末として製剤化され得る。かかるビヒクルの実施例は、水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、及び１～１０％ヒト血清アルブミンである。リポソーム及び不揮発性油などの非水性ビヒクルを使用することもできる。ビヒクル又は凍結乾燥粉末は、等張性及び化学安定性を維持する添加剤（例えば、等張性に関しては塩化ナトリウム、マンニトール、化学安定性に関しては緩衝剤及び保存剤）を含有することができる。製剤は、既知の又は好適な技術によって滅菌される。

【0197】

好適な医薬担体は、本分野での標準的参考書であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａ．Ｏｓｏｌの最新版に記載されている。

【0198】

代替的投与
医薬有効量の抗ＩＬ－２３抗体を投与するために、本発明に従って、多くの既知の及び開発された方式を使用することができる。以下の記述では経肺投与が使用されているが、本発明に従って他の投与方式を使用して、好適な結果を得てもよい。本発明のＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体は、担体中で、溶液、エマルション、コロイド、若しくは懸濁液として、又は乾燥粉末として、吸入によるか、又は本明細書に記載される若しくは当該技術分野において既知である他の方式による投与に好適な様々なデバイス及び方法のいずれかを使用して、送達することができる。

【0199】

非経口製剤及び投与
非経口投与用製剤は、一般的な賦形剤として滅菌水又は生理食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物性油、水素化ナフタレンなどを含有してもよい。注射用の水性又は油性懸濁液は、既知の方法に従って、適切な乳化剤又は加湿剤及び懸濁剤を使用することによって調製することができる。注射剤は、例えば水溶液、無菌注射液又は溶媒中懸濁液などの非毒性の非経口投与可能な希釈剤であることができる。使用可能なビヒクル又は溶媒としては、水、リンゲル液、等張生理食塩水などが許容され、通常の溶媒又は懸濁溶媒としては、無菌の不揮発性油を使用することができる。これらの目的では、天然又は合成若しくは半合成の、脂肪油又は脂肪酸、天然又は合成若しくは半合成の、モノグリセリド又はジグリセリド又はトリグリセリドを含む、あらゆる種類の不揮発性油及び脂肪酸を使用することができる。非経口投与は当該技術分野において既知であり、従来の注射手段、米国特許第５，８５１，１９８号に記載のガス加圧式無針注射デバイス、及び米国特許第５，８３９，４４６号に記載のレーザ穿孔機デバイスが挙げられるが、これらに限定されるものではなく、これらは参照により全体が本明細書に組み込まれる。

【0200】

代替的送達
本発明は更に、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、包内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頚管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液嚢内、胸郭内、子宮内、膀胱内、病巣内、ボーラス、膣内、直腸、口腔内、舌下、鼻腔内、又は経皮手段による抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体の投与に関する。抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０又はＩＬ－２３抗体組成物は、非経口（皮下、筋肉内、又は静脈内）又は任意の他の投与、特に、液体溶液若しくは懸濁液の形態で使用するために、特に、クリーム剤及び座剤などであるが、これらに限定されない半固体形態で、膣若しくは直腸投与における使用のために、錠剤若しくはカプセル剤などであるが、これらに限定されない形態で、口腔若しくは舌下投与用に、あるいは散剤、点鼻薬若しくはエアロゾル、又はある特定の薬剤などであるが、これらに限定されない形態で、鼻腔内用に、あるいは、皮膚構造を改変するか又は経皮パッチ中の薬剤濃度を増加させるかのいずれかのために、ジメチルスルホキシドなどの化学的促進剤を用いて（参照により全体が本明細書に組み込まれるＪｕｎｇｉｎｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎ「Ｄｒｕｇ Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ；」Ｈｓｉｅｈ，Ｄ．Ｓ．，Ｅｄｓ．，ｐｐ．５９－９０（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９９４）、又はタンパク質及びペプチドを含有する製剤の皮膚への適用（国際公開第９８／５３８４７号）、又は電気穿孔法などの一過性の輸送経路を作り出すための、若しくはイオントフォレシスなどの皮膚を通して荷電薬剤の移動度を増加させるための電界の適用、又は超音波導入などの超音波の適用（米国特許第４，３０９，９８９号及び同第４，７６７，４０２号）を可能にする酸化剤を用いて、限定されるものではないが、ゲル、軟膏、ローション、懸濁液若しくはパッチ送達系システムなどで、経皮用に、調製することができる（上記の刊行物及び特許は、参照により全体が本明細書に組み込まれる）。

【0201】

本発明を全般的に記述してきたが、上記と同様のことは、実例として提供されるが制限することを意図していない以下の実施例を参照することにより、より容易に理解される。更に、本発明の詳細は、以下の非限定的実施例によって例示される。本明細書の全ての引用の開示は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

【0202】

実施例：ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）を生産するための製造プロセス
背景
ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）は、ヒトインターロイキン（ＩＬ）－１２及びＩＬ－２３サイトカインの共有ｐ４０サブユニットに対して高親和性及び特異性で結合する完全ヒトＧ１κモノクローナル抗体である。ウステキヌマブは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号７の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び配列番号８の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３の重鎖ＣＤＲアミノ酸配列、並びに配列番号４、配列番号５、及び配列番号６の軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列を含む。ＩＬ－１２／２３ｐ４０サブユニットへのウステキヌマブの結合は、天然キラー及びＣＤ４^＋Ｔ細胞の表面におけるＩＬ－１２又はＩＬ－２３のＩＬ－１２Ｒβ１受容体への結合をブロックし、ＩＬ－１２及びＩＬ－２３特異的細胞内シグナル伝達及びその後の活性化及びサイトカイン産生を阻害する。ＩＬ－１２及びＩＬ－２３の異常な調節は、複数の免疫媒介性疾患に関連している。

【0203】

今日までに、ウステキヌマブは、慢性中程度から重度のプラーク乾癬及び／又は活動性乾癬性関節炎を含む成人患者の治療のために、北米、ヨーロッパ、南米、及びアジア太平洋地域の国々を含む世界中で販売承認を受けている。ウステキヌマブは、クローン病（Crohn’s disease、ＣＤ）についての第３相試験及び活動性全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の治療についての概念実証試験において評価されている。

【0204】

製造プロセスの概要
ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）を、灌流細胞培養に続いて精製を含む１０段階プロセスで製造する。本製造プロセスの概要を図１に示す。

【0205】

本明細書で使用するとき、「培養」、「培養する」、「培養される」、及び「細胞培養物」という用語は、細胞集団の生存及び／又は増殖に好適な条件下で培地中に懸濁される細胞集団を指す。当業者には文脈から明らかであるように、本明細書で使用されるこれらの用語は、細胞集団及び集団が懸濁される培地を含む組み合わせも指す。細胞培養物は、例えば、バッチ、フェドバッチ、又は灌流細胞培養法などによって増殖させた細胞を含む。ある特定の実施形態では、細胞培養物は、哺乳動物細胞培養物である。

【0206】

本発明で使用するための細胞株は、チャイニーズハムスター変動細胞（ＣＨＯ細胞）、ヒト胚性腎細胞（ＨＥＫ細胞）、ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ細胞、マウス骨髄腫細胞（例えば、ＮＳ０細胞及びＳｐ２／０細胞）、及びヒト網膜細胞（例えば、ＰＥＲ．Ｃ６細胞）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0207】

本明細書で使用するとき、「既知組成培地（medium）」、「既知組成培地（media）」、「既知組成ハイブリドーマ培地（medium）」、又は「既知組成ハイブリドーマ培地（media）」という用語は、全ての成分の同一性及び濃度が既知である合成成長培地を指す。既知組成培地は、細菌、酵母、動物、若しくは植物抽出物、動物血清又は血漿を含まないが、個々の植物又は動物由来の成分（例えば、タンパク質、ポリペプチドなど）を含んでも含まなくてもよい。既知組成培地は、成長を支援するために必要なリン酸塩、硫酸塩などの無機塩を含んでもよい。炭素源が定義されており、通常、グルコース、ラクトース、ガラクトースなどの糖、又はグリセロール、乳酸、アセテートなどの他の化合物である。ある特定の既知組成培地は緩衝剤としてリン酸塩も使用するが、クエン酸塩、トリエタノールアミンなどの他の緩衝剤が用いられてもよい。市販の既知組成培地の例としては、サーモフィッシャーのＣＤハイブリドーマ培地及びＣＤハイブリドーマＡＧＴ（商標）培地、様々なダルベッコ改変イーグル（ＤＭＥ）培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ；ＳＡＦＣ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｓｅｓ，Ｉｎｃ）、ハムの栄養混合液（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ；ＳＡＦＣ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｓｅｓ，Ｉｎｃ）、これらの組み合わせなどが挙げられる。既知組成培地を調製する方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、米国特許第６，１７１，８２５号及び同第６，９３６，４４１号、国際公開第２００７／０７７２１７号、並びに米国特許出願公開第２００８／０００９０４０号及び同第２００７／０２１２７７０号において既知である。

【0208】

本明細書で使用するとき、「バイオリアクター」という用語は、細胞培養物の増殖に有用な任意の容器を指す。バイオリアクターは、細胞の培養に有用である限り、あらゆる大きさのものとすることができる。ある特定の実施形態では、かかる細胞は、哺乳動物細胞である。典型的には、バイオリアクターは、少なくとも１リットルであり、１０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、８，０００、１０，０００、１２，０００リットル、若しくはそれ以上、又はこれらの間の任意の体積であってもよい。ｐＨ及び温度を含むが、これらに限定されないバイオリアクターの内部条件が培養期間中に任意選択で制御される。バイオリアクターは、ガラス、プラスチック、又は金属を含む、本発明の培養条件下で培地中に懸濁された哺乳動物細胞培養物を保持するのに好適な任意の材料から構成することができる。本明細書で使用するとき、「生産バイオリアクター」という用語は、目的とするポリペプチド又は糖タンパク質の生産に使用される最終バイオリアクターを指す。生産バイオリアクターの体積は、典型的には少なくとも５００リットルであり、１，０００、２，５００、５，０００、８，０００、１０，０００、１２，０００リットル、若しくはそれ以上、又はこれらの間の任意の体積であってもよい。当業者であれば、本発明を実施する際に使用するのに好適なバイオリアクターを選択することができるであろう。

【0209】

ウステキヌマブの前培養、増殖、及び生産を、段階１及び段階２で行う。段階１では、ウステキヌマブのＨＣ及びＬＣ配列を発現しているトランスフェクトされたＳｐ２／０細胞の１つ又は２つ以上のワーキングセルバンクバイアルから前培養を開始し、培養フラスコ、使い捨て培養バッグ、及び１００Ｌ播種バイオリアクター内で細胞を増殖させる。５００Ｌの生産バイオリアクターの接種に必要な細胞密度及び体積が得られるまで細胞を培養する。段階２では、細胞培養物を、交互接線方向流（ＡＴＦ）中空糸フィルタ細胞保持システムを使用して５００Ｌの生産バイオリアクター内で灌流する。細胞培養透過液（回収物）をＡＴＦシステムから回収し、細胞をバイオリアクター内に保持し、培養物に新鮮な培地を補充する。１つ又は２つ以上の５００Ｌの生産バイオリアクターからの回収物を、段階３で組み合わせてもよい。回収物を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔプロテインＡ樹脂親和性クロマトグラフィーを使用して精製する。結果として得られた直接生成物捕獲（ＤＰＣ）溶出液を、更なる処理まで凍結させる。

【0210】

ＤＣＰからのウステキヌマブの精製を、段階４～８で、イオン交換クロマトグラフィー工程並びに潜在的なウイルス汚染を不活性化又は除去する工程（溶媒／洗剤［solvent／detergent、Ｓ／Ｄ］処理及びウイルス除去濾過）により行う。段階４でＤＰＣ溶出液を解凍、プール、及び濾過し、段階５でトリ－ｎ－ブチルホスファート（ＴＮＢＰ）及びポリソルバート８０／Ｄ処理と共にインキュベートして、存在する任意の脂質エンベロープウイルスを不活性化する。段階６では、ＳＰＸＬ ＳＥＰＡＲＯＳＥ（登録商標）（樹脂）陽イオン交換クロマトグラフィーを使用して、ＴＮＢＰ及びポリソルバート８０試薬、凝集体、並びに不純物をウステキヌマブから除去する。段階７では、ＱＸＬ ＳＥＰＡＲＯＳＥ（登録商標）（樹脂）陰イオン交換クロマトグラフィーを使用して、ウステキヌマブを更に精製して、ＤＮＡ、ウイルス、及び不純物を除去する。ＳＰＸＬ樹脂及びＱＸＬ樹脂を、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）から入手した。段階８では、精製したウステキヌマブを希釈し、ウイルス保持性フィルタ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ（Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ））に通して濾過する。

【0211】

ウステキヌマブの事前製剤化バルク（pre-formulated bulk、ＰＦＢ）及び製剤化バルク（formulated bulk、ＦＢ）の調製を、それぞれ、段階９及び段階１０で行う。段階９では、限外濾過工程はウステキヌマブ生成物を濃縮し、透析濾過工程により、製剤賦形剤が添加され、プロセス中の緩衝塩が除去される。段階１０では、ポリソルバート８０をウステキヌマブＰＦＢに添加して、ＦＢを得る。凍結保存するために、ＦＢをポリカルボナート容器に濾過する。凍結したＦＢを、医療品製造現場への輸送のためにドライアイスを備えた断熱容器内に包装する。

【0212】

製造プロセスにおける細胞培養の詳細な説明
段階１
前培養及び増殖
ウステキヌマブの生産における第１の段階は、ウステキヌマブのＨＣ及びＬＣ配列を発現するトランスフェクトされたＳｐ２／０細胞のワーキングセルバンク（Working Cell Bank、ＷＣＢ）バイアルからの前培養の開始、並びに培養フラスコ、使い捨て培養バッグ、及び１００Ｌ播種バイオリアクター内での増殖である。５００Ｌの生産バイオリアクターの接種に必要な細胞密度及び体積が得られるまで細胞を培養する。前培養及び増殖プロセスを示すフロー図を図２に提供する。

【0213】

製造手順
ＷＣＢの１つ又は２つ以上の凍結保存バイアルを解凍し、６ｍＭのＬ－グルタミン、０．５ｍｇ／Ｌのミコフェノール酸、２．５ｍｇ／Ｌのヒポキサンチン、及び５０ｍｇ／Ｌキサンチンを補充したＣＤ（既知組成）ハイブリドーマ培地（ＣＤＨ－Ａ）で希釈する。培養生存率は≧４５％でなければならない。細胞を培養フラスコ内でＣＤＨ－Ａで更に希釈して、０．２～０．５×１０^６生存細胞（viable cell、ＶＣ）／ｍＬの播種密度まで更に希釈する。前培養物を、バッチ記録に定義される範囲内で温度、ＣＯ２濃度、及び撹拌を制御した加湿ＣＯ２インキュベーター内で維持する。≧０．６×１０^６ＶＣ／ｍＬの最小細胞密度及び≧５０％の培養物生存率が得られるまで前培養物を≦３日間インキュベートする。１００Ｌの播種バイオリアクターへの接種のためのスケールアップ機構として、前培養物を一連の培養フラスコ内で連続的に増殖させ、次いで、培養バッグで培養する。培養増殖期中、各インキュベーション工程は、≧０．６ ｘ １０^６ＶＣ／ｍＬの細胞密度及び≧８０％の培養物生存率を必要とする継代条件を達成するのに≦３日間かかる。各継代の播種密度は、培養フラスコ中で０．２～０．５×１０^６ＶＣ／ｍＬであり、培養バッグ中で０．２～０．６×１０^６ＶＣ／ｍＬである。各継代を、生存細胞密度（ＶＳＤ）、培養物生存率、及び顕微鏡検査のためにサンプリングする。１００Ｌの播種バイオリアクターの接種前に、前培養物をバイオバーデンのためにサンプリングする。

【0214】

前培養を解凍後最大３０日間維持してもよい。３０日以内に使用しない前培養物を廃棄する。上述のように増殖させ、一次前培養物と同じインプロセスモニタリング、制御試験、及びプロセスパラメータの対象となるバックアップ前培養物を、必要に応じて、別の１００Ｌの播種バイオリアクターに接種するために維持及び使用することができる。

【0215】

前培養物が接種基準を満たしたときに、培養バッグの内容物を、ＣＤＨ－Ａを含む１００Ｌの播種バイオリアクターに移し、≧０．３×１０^６ＶＣ／ｍＬの播種密度を目標とする。播種バイオリアクターの培養物のｐＨ、温度、及び溶存酸素濃度を、バッチ記録に定義された範囲内で制御する。≧１．５×１０^６ＶＣ／ｍＬの細胞密度及び≧８０％の培養物生存率が得られるまで培養物を増殖させる。培養物を、播種バイオリアクタープロセス全体を通して、ＶＣＤ、培養物生存率、及び顕微鏡検査のためにサンプリングする。５００Ｌの生産バイオリアクターの接種前に、前培養物をバイオバーデンのためにサンプリングする。

【0216】

播種バイオリアクター培養物のＶＣＤが≧１．５×１０^６ＶＣ／ｍＬに達した時点で、この培養物を使用して、５００Ｌの生産バイオリアクターに接種することができる。あるいは、培養物の一部を１００Ｌの播種バイオリアクターから取り出し、残りの培養物を新鮮な培地で希釈することができる。この「取り出し及び充填」プロセスに続いて、培養物を十分な細胞密度まで増殖させて、５００Ｌの生産バイオリアクターに接種する。１００Ｌの播種バイオリアクター培養物の最大持続時間は、接種から９日後である。

【0217】

段階２
バイオリアクター産生
段階２では、細胞培養物を、交互接線方向流（ＡＴＦ）中空糸フィルタ細胞保持システムを使用して５００Ｌの生産バイオリアクター内で連続的に灌流する。細胞培養透過液（回収物）をＡＴＦシステムから回収し、細胞をバイオリアクターに戻し、培養物に新鮮培地を補充する。バイオリアクター産生プロセスを示すフロー図を図３に提供する。

【0218】

製造手順
５００Ｌの生産バイオリアクターの接種を、１００Ｌの播種バイオリアクターの内容物を、６ｍＭのＬ－グルタミン、０．５ｍｇ／Ｌのミコフェノール酸、２．５ｍｇ／Ｌのヒポキサンチン、及び５０ｍｇ／Ｌのキサンチンを補充したＣＤ（既知組成）ハイブリドーマ培地（ＣＤＨ－Ａ）を含む５００Ｌの生産バイオリアクターに移すことによって行う。移す体積は、≧０．３×１０^６生存細胞（ＶＣ）／ｍＬの播種密度を目標とするのに十分でなければならない。培養物を３４～３８℃の温度、６．８～７．６のｐＨ、及び１～１００％の溶存酸素（dissolved oxygen、ＤＯ）濃度で維持する。

【0219】

連続灌流が開始され、５００ＬのバイオリアクターからＡＴＦシステムに培養物を取り出し、透過液から細胞を分離する。透過液を０．２μｍのＡＴＦフィルタに通して濾過し、バイオプロセス容器（bioprocess container、ＢＰＣ）で回収物として回収する。細胞をバイオリアクターに戻し、新鮮なＣＤＨ－Ａを供給して一定の培養体積を維持する。生存細胞（ＶＣＤ）、培養物生存率、ｐＨ、ＤＯ、温度、及び免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）含有量を、生産工程中にモニタリングする。灌流速度を、１日当たり約１バイオリアクター体積の目標速度に達するまで、ＶＣＤに比例して徐々に増加させる。灌流速度を、１日当たり１．２０バイオリアクター体積を超えないように制御する。ＡＴＦシステムの保持をモニタリングして、フィルタ全体のＩｇＧ保持が５０％を超える前に、ＡＴＦフィルタのシャットダウンを容易にする。

【0220】

５００Ｌのバイオリアクター内のＶＣＤが８．０×１０^６ＶＣ／ｍＬに達した時点又は１０日目になった時点のいずれかが先に起こった時点で、ｐＨ目標が７．２から７．１まで低下する。バイオマス除去を、２０日目になった時点又は１２．０×１０^６ＶＣ／ｍＬのＶＣＤに到達した時点のいずれかが先に起こった時点で開始する。バイオマスを、５００Ｌの生産バイオリアクターから、１日当たり最大２０％のバイオリアクター体積の速度でＢＰＣに除去する。各回収物をバイオバーデンのためにサンプリングする。

【0221】

５００Ｌの生産バイオリアクターにおける灌流細胞培養操作は、接種後最大４６日間継続する。生産の最後に、培養物をマイコプラズマ及び外膜ウイルス試験のためにサンプリングする。回収物を、バイオリアクターから切り離した後、２～８℃で３０日間以下保存することができる。

【0222】

製造管理戦略の概要
オリゴ糖プロファイルに関してウステキヌマブの一貫した原薬（ＤＳ）特性及び医薬品（ＤＰ）特性を維持するために、かつ大規模商業生産中の生存細胞生存率及び生産性を制御するために、製造管理戦略を開発した。ウステキヌマブグリコシル化を、ｃＩＥＦプロファイルにおけるピーク３面積％、総中性オリゴ糖％、総荷電オリゴ糖％、並びにＧ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、及びＧ２Ｆを含む個々の中性オリゴ糖種％の規格上限値及び規格下限値を設定した状態で、製造プロセスの段階１０で製剤化バルク（ＦＢ）についてモニタリングする。本明細書で使用するとき、「原薬」（「ＤＳ」と略される）及び「医薬品」（「ＤＰ」と略される）という用語は、例えば臨床試験における市販薬として使用するための又は市販薬として使用するための組成物を指す。ＤＳは、疾患の診断、治癒、緩和、治療、若しくは予防において薬理学的活性若しくは他の直接的な効果を提供すること、又は人体の構造若しくは機能に影響を与えることを意図した有効成分である。製造プロセスで生産された製剤化バルク（ＦＢ）が原薬（ＤＳ）である。ＤＰ（医薬品、医薬、薬物、又は薬剤とも呼ばれる）は、疾患の診断、治癒、緩和、治療、若しくは予防に使用される薬物、又は人体の構造若しくは機能に影響を及ぼす薬物である。ＤＰは、患者への販売及び／又は投与用の医薬品として調製されたＤＳである。本明細書で使用するとき、「製造管理戦略」、「製造戦略」、「管理戦略」、及び「製造方法」という用語は、例えば臨床試験における商業的使用のための、又は市販薬としてのＤＳ若しくはＤＰを生産するためのプロセスを指す。

【0223】

簡潔に述べると、本製造管理戦略は、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる規定の微量金属濃度を含むように制御された既知組成培地中で細胞を培養することによってウステキヌマブのオリゴ糖プロファイルが管理されることを確実にする。本明細書で使用するとき、「規定の」という用語は、マンガン及び銅濃度が必要条件であり、かつ既知組成培地中で上限値及び下限値以内で正確に制御されなければならないことを明確かつ確実に特定することを指す。本明細書で使用するとき、「制御される」という用語は、培地の生産中にマンガン及び銅を含む原材料を注意して調節する、試験する、検証する、例えば、注意して秤量する、及び／又は他の手段によって測定すること、誘導結合プラズマ質量分析（ＩＰＣ－ＭＳ）又は他の方法を使用して既知組成培地中の最終マンガン及び銅濃度を測定すること、並びに必要に応じて既知組成培地に適切な量のマンガン及び銅を補充することによって濃度を調整することを指す。別の制御方法は、バッチのうちの１つ又は２つ以上が規格外である場合に規定の濃度を達成するために混合することができる既知組成培地の２つ又は３つ以上のバッチを特定することである。本製造管理戦略を使用して生産されるウステキヌマブＤＳ又はＤＰは、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体を含み、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体のｃＩＥＦ電気泳動図のピーク３面積％が３９．８％以上～６４．４％以下であり、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含む。本製造管理戦略は、段階２のバイオリアクターにおける生存細胞密度（ＶＣＤ）、生存率（％）、及び生産性が歴史的値と比較して維持されている又は改善されていることも確実にする。好ましい方法では、マンガン濃度及び銅濃度は、ＩＣＰ－ＭＳを使用して決定され、オリゴ糖プロファイルは、ＨＰＬＣ法を使用して決定される。

【0224】

本管理戦略を、生産バイオリアクター性能に非典型的な傾向を認識した後に開始した。影響を受けた生産バイオリアクターバッチは、ＶＣＤプロファイルにおいて、歴史的傾向と比較して、より低いＶＣＤでショルダー化（shouldering）を呈し、その後に下落が続いた。このＶＣＤの変化は、産生されるＩｇＧの量に関して生産性にも影響を及ぼした。加えて、影響を受けたバッチのｃＩＥＦプロファイルは、歴史的傾向と比較してシフトしたことが認識された。影響を受けたバッチにおいて、ｃＩＥＦは、ピーク３面積％の増加（シアリル化グリカンを含有しない種における増加）に向かってシフトした。更なる調査により、総中性オリゴ糖レベル及び総荷電オリゴ糖レベルが、それぞれ、歴史的平均よりも高い及び低いことが見出された（例えば、図７並びに図８Ａ及び図８Ｂを参照されたい）。加えて、個々のオリゴ糖種の更なる評価により、影響を受けたバッチの大部分が、末端ガラクトース含有量の変化（増加したアガラクト（Ｇ０Ｆ）、並びに減少したモノガラクト（Ｇ１Ｆ）及びジガラクト（Ｇ２Ｆ）オリゴ糖種（例えば、それぞれ、図９Ａ～Ｃを参照されたい）を有し、負荷電シアル化種の減少をもたらすＮ結合型オリゴ糖組成物中のシアル酸含有量の付随的な減少傾向を有することが実証された。

【0225】

厳密な調査の後、既知組成培地の変更が、ｃＩＥＦピーク３面積％、オリゴ糖プロファイル、並びにＶＣＤ及び生産性のシフトの変化の根本原因であると結論付けた。より具体的には、本調査は、驚くべきことに、オリゴ糖プロファイルのシフト並びにＶＣＤ及び生産性のシフトの決定的な根本原因が細胞培養培地成分のうちの１つであるＦｅＣｌ_３・６Ｈ_２０（塩化第二鉄）のみの変更であることを実証した。具体的には、塩化第二鉄中のより低い微量金属Ｍｎ^２＋（マンガン）濃度がｃＩＥＦピーク３面積％及びオリゴ糖プロファイルの変化の主な根本原因であり、塩化第二鉄中のより低い微量金属Ｃｕ^２＋（銅）濃度がＶＣＤ及び生産性のシフトの主な根本原因であることが判明した。銅がオリゴ糖プロファイルの決定に関与し、かつオリゴ糖プロファイルが規格内であることを確実にするためにマンガン濃度及び銅濃度の両方を制御しなければならないことも判明した。

【0226】

より高純度の鉄塩を生産することを意図した塩化第二鉄を供給した供給業者による製造プロセスの変更のため、塩化第二鉄の変更を導入した。本調査は、この変更により、塩化第二鉄中に測定されない不純物として存在するマンガン、クロム、及び銅のより低い微量レベルがもたらされたことを明らかにした。Ｍｎ^２＋（マンガン）及びＣｒ^３＋（クロム）を培地に補充することによりＶＣＤプロファイルが部分的に回復したが、ＶＣＤ及び生産性を完全に回復させるためにＣｕ^２＋（銅）の補充が必要であった。当初は、Ｃｒ^３＋（クロム）のレベルが主因であり得ると推測されたが、その後の小規模研究により、マンガン濃度の変化がオリゴ糖プロファイルのシフトの主な要因であり、銅濃度も関与しており、かつ銅がＶＣＤの変化及び総生産性の関連変化の主な要因であることが判明した。

【0227】

本製造管理戦略は、既知組成培地にＭｎ^２＋（マンガン）及びＣｕ^２＋（銅）を補充することにより、ｃＩＥＦプロファイル、オリゴ糖プロファイル、ＶＣＤ、及び生産性の変化に関連する問題を改善した。本製造管理戦略を、商業規模で、２段階で行った。最初に、既知組成培地にマンガン及びクロムのみを補充して、これらの微量金属の歴史的レベルを回復させた。この培地をＳＵＰ－ＡＧＴと称した。その後の変更では、既知組成培地にマンガン、クロム、及び銅を補充して、商業規模結果及び多数の小規模研究に基づいて、３つ全ての微量金属をそれぞれの歴史的レベルに回復させた。この培地をＳＵＰ－ＡＧＴ３と称した。

【0228】

方法
生存細胞密度（ＶＣＤ）と生存率を決定する方法
総細胞数／ｍｌ、生存細胞／ｍｌ（ＶＣＤ）、及び％生存率を、典型的には、メーカー提供のプロトコル、ソフトウェア、及び試薬を使用したＢｅｃｋｍａｎ ＣｏｕｌｔｅｒＶｉ－ＣＥＬＬ－ＸＲ細胞生存率アナライザーを用いて決定する。あるいは、ＣＥＤＥＸ自動細胞カウントシステムも使用されている。しかしながら、ＶＣＤ及び％生存率を決定するための他の方法、例えば、血球計及びトリパンブルー排除の使用が当業者に周知であることにも留意されたい。

【0229】

オリゴ糖組成物を決定するための方法
ウステキヌマブのオリゴ糖組成を、Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ／Ｃｈｅｍｓｔｏｒｅを備えたＡｇｉｌｅｎｔ １１００／１２００ Ｓｅｒｉｅｓ ＨＰＬＣ Ｓｙｓｔｅｍを使用したＨＰＬＣ法を用いて決定する。グリカンの相対量を定量するために、最初に、Ｎ－グリカナーゼ（ＰＮＧａｓｅ Ｆ）を用いて、還元及び変性させた試験品からＮ－結合オリゴ糖を切断する。放出されたグリカンを、アントラニル酸を用いて標識し、０．４５μｍのナイロンフィルターを使用して濾過することにより精製し、蛍光検出を用いてＨＰＬＣにより分析する。ＨＰＬＣクロマトグラムは、サンプル中に存在するＮ－結合オリゴ糖を同定及びその相対量を定量するために使用することができるマップとして機能する。グリカンは、オリゴ糖標準との共溶出及び広範な特性評価からの歴史的結果に従う保持時間によって特定される。ウステキヌマブの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを図４に示す。

【0230】

各グリカンの量をピーク面積の積分によって定量し、全グリカンピーク面積の百分率（ピーク面積％）として表す。結果は、Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、Ｇ２Ｆ、総中性グリカン、及び総荷電グリカンについて報告する。他の中性グリカンは、Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、及びＧ２Ｆに対応するピークを除く、１７～３５分間の全ての統合ピークの合計である。全中性グリカンは、Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、Ｇ２Ｆ、及び他の中性グリカンの合計である。全荷電グリカンは、４２～５５分間で溶出する全てのモノシアリル化グリカンピークと７８～９０分間で溶出する全てのジシアリル化グリカンピークの合計である。

【0231】

オリゴ糖標準の混合物（Ｇ０Ｆ、Ｇ２Ｆ、Ｇ２Ｆ＋Ｎ－アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）、及びＧ２Ｆ＋２ＮＡＮＡ）を、標識反応の陽性対照として、ピーク同定の標準として、そして、系の適合性の尺度として、並行して分析する。Ｐｒｏｚｙｍｅ、Ｇ０Ｆ（カタログ番号ＧＫＣ－００４３０１）、Ｇ２Ｆ（カタログ番号ＧＫＣ－０２４３０１）、ＳＡ１Ｆ（カタログ番号ＧＫＣ－１２４３０１）、及びＳＡ２Ｆ（カタログ番号ＧＫＣ－２２４３０１）からの再構成オリゴ糖、又は同等のものを参照標準として使用される。方法のブランク陰性対照及び予め標識されたＧ０Ｆ標準も、系の適合性の目的で実行される。有効な結果を得るには、オリゴ糖マッピング手順の実行中に、次のシステム適合性とアッセイ（試験品）の許容基準が適用される。

【0232】

システム適合性基準：
・オリゴ糖標準のＧ０ＦピークとＧ２Ｆピークとの間の分解能（ＵＳＰ）は３．０以上でなければならない。
・オリゴ糖標準のＧ０Ｆピークの理論プレート数（接線法）は５０００以上でなければならない。
・ウステキヌマブ参照標準の総グリカンピーク面積は、事前にラベル付けされたＧ０Ｆの主グリカンピーク面積の１．５倍以上でなければならない。
・参照標準グリカンピークがスケール外である場合、参照標準により少ない注入量を再注入する。
・ウステキヌマブ参照標準のＧ０Ｆピークの保持時間は、オリゴ糖標準のＧ０Ｆ保持時間の０．４分以内でなければならない。

【0233】

アッセイの許容基準：
・方法ブランクは、ウステキヌマブ中の割り当てられたオリゴ糖ピークと共溶出する検出可能ピークを有してはならない。
・各試験品の総グリカンピーク面積は、事前にラベル付けされたＧ０Ｆ標準の主グリカンピーク面積の１．５倍以上でなければならない。
・サンプルグリカンピークがスケール外である場合、そのサンプルに、事前にラベル付けされたＧ０Ｆ、オリゴ糖標準、方法ブランク、及び通常の量の参照標準と一緒に、より少ない注入量を再注入する。
・各試験品のＧ０Ｆピークの保持時間は、オリゴ糖標準のＧ０Ｆピークの保持時間の０．４分以内でなければならない。
・本アッセイがいずれの許容基準も満たさなかった場合、本アッセイを無効とする。

【0234】

誘導結合プラズマ質量分析（ＩＣＰ－ＭＳ）
誘導結合プラズマ質量分析（ＩＣＰ－ＭＳ）を使用して、様々な抗体バッチを生成するために使用される既知組成培地中の微量金属濃度を十億分率（parts per billion、ｐｐｂ、μｇ／リットル）で定量する。簡潔に述べると、この方法は、サンプルをＮＥＸＩＯＮ（登録商標）（質量分析計）３５０Ｘ ＩＣＰ－ＭＳ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）などのＩＣＰ－ＭＳ機器に注入する前に、炭素リッチ源を消化して二酸化炭素及び水にする酸消化手順からなる。湿式化学消化は、様々な酸及び酸化剤を利用する。好ましい組み合わせとしては、硝酸（ＨＮＯ_３）、過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２）、及び塩酸（ＨＣｌ）が挙げられる。ＩＣＰ－ＭＳ以外の分析方法、例えば、フレーム原子吸光分析（flame atomic absorption spectrometry、ＦＬＡＡ）、誘導結合プラズマ原子発光分析（inductively coupled plasma atomic emission spectrometry、ＩＣＰ－ＡＥＳ）も使用することができる。分析手順、サンプル調製、及び機器による方法についての一般的な情報は、例えば、ＥＰＡ ｍｅｔｈｏｄ ３０５０Ｂ，「Ａｃｉｄ Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｄｉｍｅｎｔｓ，Ｓｌｕｄｇｅｓ，ａｎｄ Ｓｏｉｌｓ」，ＥＰＡ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １９９６、ＥＰＡ ｍｅｍｏｒａｎｄｕｍ，「ｕｓｅ ｏｆ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ Ａｃｉｄ（ＨＣＬ）ｉｎ ｄｉｇｅｓｔｓ ｆｏｒ ＩＣＰ－ＭＳ ａｎａｌｙｓｉｓ」，ＥＰＡ ｏｆｆｉｃｅ ｆｏｒ Ｓｏｌｉｄ Ｗａｓｔｅ ａｎｄ Ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ，Ｊｕｌｙ ２６，２００３、及びＵｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ（ＵＳＰ）ｃｈａｐｔｅｒ＜２３３＞，Ｅｌｅｍｅｎｔａｌ Ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ－Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓで見つけることができる。

【0235】

ＩＣＰ－ＭＳによって分析される既知組成培地中の金属濃度の決定に使用するために開発されたカスタマイズされた消化方法を以下に示す。この方法を、乾燥培地粉末又は水和培地サンプル（１ｇサンプル＝１ｍＬ水和サンプル）に適合させることができる。

【0236】

消化方法
・約１ｇの乾燥サンプル（±０．５ｇ、重量を０．００１ｇまで記録）又は約１ｍＬの溶液サンプル（±０．５ｍＬ、重量を０．００１ｇまで記録）を消化容器に添加する（適用可能なスパイク溶液もこの時点で添加する）。
・５．０ｍＬの５０ｖ／ｖ％ＨＮＯ_３及び２．５ｍＬの濃縮Ｈ_２Ｏ_２をサンプルに添加し、その後、消化容器にポリプロピレン製時計皿で直ちに蓋をし、Ｈ_２Ｏ_２を緩徐に添加して、サンプルの泡立ちを避ける。
・サンプルを９５℃（±５℃）で３０分間加熱する。
・サンプルを加熱から取り除き、放冷する。
・２．５ｍＬの濃縮ＨＮＯ_３を添加し、サンプルを９５℃（±５℃）で３０分間加熱する。ＨＮＯ_３によるサンプルの酸化を示す褐色の煙霧が生じた場合、サンプルから褐色の煙霧が出なくなるまでこの工程を何度も繰り返す。褐色の煙霧が出なくなることは、ＨＮＯ_３による完全な酸化の指標である。
・サンプルを加熱から取り除き、放冷する。
・２．５ｍＬの濃縮ＨＮＯ_３を添加し、５ｍＬの濃縮ＨＣｌを添加し、サンプルを９５℃（±５℃）で２時間加熱する。
・サンプルを加熱から取り除き、放冷する。
・サンプルの総体積を脱イオン水（deionized water、ＤＩＷ）で５０ｍＬにし、サンプルの分析準備が整う。

【0237】

^＊注記：
－９５℃（±５℃）での加熱は全て、還流下で、沸騰させることなく、サンプルにポリプロピレン製時計皿で蓋をした状態で、予熱したホットブロック、例えば、Ｈｏｔｂｌｏｃｋ（登録商標）（加熱ブロック）中で行う。
－消化バイアルを５％／５ｖ／ｖ％ＨＮＯ_３／ＨＣＬ中に一晩浸漬し、使用前にＤＩＷで３回すすぐ。
－ポリプロピレン製時計皿を５％／５ｖ／ｖ％ＨＮＯ_３／ＨＣＬ中に一晩浸漬し、使用前にＤＩＷで３回すすぐ。
－ピペッティング用のプラスチックチップを使用前に試薬で３回すすぐ。
－サンプルを消化の２週間以内にＩＣＰ－ＭＳにより分析する。
－この方法を、例えば、Ｖｕｌｃａｎ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ａｎｄ Ｗｏｒｋ－Ｕｐ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｑｕｅｓｔｒｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐ．）を使用して、自動化プロセスに適合させることもできる。

【0238】

試薬及び標準
・試験して金属を含まないと決定された脱イオン水（ＤＩＷ）、１８．０ＭΩ超、
・ＮＩＳＴ追跡可能源からの微量金属スパイク標準、
・濃縮ＨＮＯ_３、試薬グレード以上、金属について試験したもの
・５０％ＨＮＯ３溶液－５００ｍＬのＤＩＷ及び緩徐に添加した５００ｍＬのＨＮＯ_３、溶液を６ヶ月間保存することができる。
・濃縮ＨＣＬ、試薬グレード以上、金属について試験したもの
・濃縮（３０ｖ／ｖ％）Ｈ_２Ｏ_２
・全てのＤＩＷ、ＨＮＯ３、及びＨＣＬを定期的に試験して、汚染がないことを確実にする。

【0239】

キャピラリー等電点電気泳動
キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）は、全体の電荷又は等電点（ｐＩ）に基づいてタンパク質を分離する。この方法を使用して、ウステキヌマブの電荷ベースのアイソフォームの分布をモニタリングする。ゲルベースのＩＥＦ手順とは異なり、ｃＩＥＦは、存在する荷電種の定量的測定を提供する。加えて、ｃＩＥＦは、ゲルベースの方法と比較して、増加した分解能、感度、及び再現性を示す。本アッセイを、Ａｌｃｏｔｔオートサンプラー（ＧＰ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．）などの、３０℃以下の周囲環境で１０．５℃以下のサンプル温度を維持することができるオートサンプラーを備えた市販の画像化ｃＩＥＦアナライザーで行う。本分析は、外壁ポリイミドコーティングなしで内壁コーティングシリカキャピラリーを用いて、全カラム検出を可能にする。加えて、希リン酸とメチルセルロースの陽極液、水酸化ナトリウムとメチルセルロースの陰極液、及び広範囲（ｐＨ３～１０）と狭範囲（ｐＨ８～１０．５）の両性電解質の定義された混合物を使用する。本アッセイは、試験品と参照標準（Reference Standard、ＲＳ）の両方をカルボキシペプチダーゼＢ（carboxypeptidase B、ＣＰＢ）で前処理し、これにより、重鎖Ｃ末端リジンが除去され、複数のＣ末端変異体の存在によって生じる曖昧さが排除される。ウステキヌマブの代表的なｃＩＥＦ電気泳動図を図５に示す。

【0240】

各々の分析前に、オートサンプラーの温度設定値を４℃に設定し、オートサンプラーを少なくとも３０分間予冷し、ラボの周囲室温を３０℃以下に維持する。前処理した試験品及びＲＳ、サンプルバイアル、バイアルインサート、精製水を含む本アッセイで使用する試薬、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルエチレンジアミン（Tetramethylethylenediamine、ＴＥＭＥＤ）（キャピラリー内での電気泳動を最適化する）を含む親溶液、両性電解質、内部標準用のｐＩ７．６及び９．５マーカー、並びにメチルセルロース（methylcellulose、ＭＣ）を、少なくとも３０分間氷上で保持した後に、サンプル調製を開始する。サンプルを氷上で調製し、親溶液の添加時間を記録し、ＴＥＭＥＤへの露出を制御する。この添加後１８０分以内に本アッセイを完了しなければならない。システム適合性制御物を１回注入し、試験品及びＲＳを以下の順序表（表１）に従って２回注入する。

【0241】

【表7】

【0242】

サンプルをシリンジポンプでキャピラリーに注入した後、電界（３ｋＶ）をキャピラリー全体に８分間印加し、ｐＨ勾配が形成され、ウステキヌマブの電荷ベースのアイソフォームを等電点（isoelectric point、ｐＩ）に従って分離する。キャピラリー内のタンパク質アイソフォームを、キャピラリー全体を２８０ｎｍで画像化することによって検出し、データを、ｐＩ値とＡ２８０の関数として電気泳動図の形式で表示する。ｐＩ値を、機器ソフトウェアを使用して内部ｐＩ標準（ｐＩ ７．６及び９．５）と比較することによって割り当て、ピーク面積は標準データ取得ソフトウェアを使用して電気泳動図から決定する。ＬＯＱ以上の全てのピークの重複注入からの平均ｐＩ及び平均ピーク面積パーセンテージ、参照標準と比較したΔｐＩ値、並びにピーク面積パーセントを報告する。

【0243】

オリゴ糖プロファイルの逸脱
ウステキヌマブは、アスパラギン２９９の各重鎖上の単一部位でＮ－グリコシル化されている。これらのＮ結合型オリゴ糖構造は、アスパラギン残基の一級アミンを介してタンパク質に連結されたある群の二分岐オリゴ糖構造のうちのいずれかとすることができるが、ウステキヌマブでは、それらは、ガラクトース及びシアル酸の不均一性を伴うビアンテンナルコアフコシル化種から主になる。個々のオリゴ糖種は、アシアロ、アガラクトコアフコシル化二分岐グリカンである「Ｇ０Ｆ」、アシアロ、モノガラクトコアフコシル化二分岐グリカンである「Ｇ１Ｆ」、及びアシアロ、ジガラクトコアフコシル化二分岐グリカンである「Ｇ２Ｆ」を含む。

【0244】

ＨＰＬＣは、本製造方法中にウステキヌマブのグリコシル化を分析するために展開される分析手順である。ＨＰＬＣによる分析のために、グリカンを最初に重鎖から酵素的に切断し、その後、蛍光標識で標識して、検出を可能にする。この方法では、Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、及びＧ２Ｆの非荷電ピーク、並びにより小さい中性ピークのサブセットを区別することができる。更に、差次的にシアリル化された物質のピークも観察することができる（図４）。ウステキヌマブの場合、オリゴ糖構造上のシアル化の程度と、キャピラリー等電点電気泳動によって決定される電荷異質性との間にも直接的な関係がある（図５）。ウステキヌマブＩｇＧの主要なＮ結合型オリゴ糖種のうちのいくつかの概略図を図６に示す。これらの酵素プロセスにおけるいくつかの二価カチオン（例えば、Ｍｎ^２＋及びＣｕ^２＋）の役割を含む、グリコシル化成熟プロセスにおけるいくつかの酵素の役割も示している。

【0245】

培養能力の変化の影響の調査中に、ウステキヌマブ分子の総中性オリゴ糖及び総荷電オリゴ糖並びに個々のオリゴ糖のレベルの変化をＨＰＬＣによって評価した。未加工クロマトグラム及び更なるデータ分析は、バッチの大部分が、それぞれ、総中性オリゴ糖及び総荷電オリゴ糖についての規格を明らかに上回る及び下回ることを示した（図８Ａ及び図８Ｂ）。更に、規格外の個々の中性オリゴ糖のレベルのシフトがあった。実際には、ＦＢの全ての変更後バッチが、Ｇ０Ｆ種、Ｇ１Ｆ種、及びＧ２Ｆ種の規格外へのシフトを示した（それぞれ、図９Ａ～Ｃ）。

【0246】

組換えモノクローナル抗体のオリゴ糖プロファイルの変化が抗体の生物学的機能に大きな影響を及ぼす可能性があるため、オリゴ糖プロファイルの変化を減少させることも重要である。例えば、生物学的研究では、Ｆｃ領域での様々なグリコフォームの分布が、抗体の有効性、安定性、及びエフェクター機能に大きな影響を及ぼす可能性があることが示されている（Ｊ．Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｅｎｇ．２０１４ １１７（５）：６３９－６４４、Ｂｉｏ－Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔ．２０１１，９（６）：４８－５３、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０，１０（５）：３４５－３５２）。特に、アフコシル化（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６８：７６７－７７９）及びガラクトシル化（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２１：１６４４－１６５２）は、抗体が免疫機能を介して標的細胞の死滅を媒介する２つの重要な機構である、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に大きな役割を果たし得る。加えて、高いマンノースレベルが抗体のクリアランスを増加させることによって有効性に悪影響を及ぼし（Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ．２０１１，２１（７）：９４９－９５９）、シアル酸含有量が抗炎症活性に影響を及ぼし得る（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．２０１３ ２（３）：３９２－４１４）ことが示されている。オリゴ糖プロファイルの変化によるそれらの生物学的影響の結果として、規制当局は、一貫した安全かつ有効な製品のロットリリース仕様を確実に順守するために、抗体のグリコシル化パターンを制御する必要がある。

【0247】

問題の特定
厳密かつ包括的な調査の後、既知組成培地の変更が、ｃＩＥＦピーク３面積％、オリゴ糖プロファイル、ＶＣＤ、及び生産性のシフトの根本原因であると結論付けた。この既知組成培地は、先進造粒技術（advanced granulation technology、ＡＧＴ）によって生産された粉末として得られるものであり、本明細書では一般にＡＧＴと称する。より具体的には、根本原因調査は、ＡＧＴ中の９０個を超える成分のうちの１つであるＦｅＣｌ_３６Ｈ_２０（塩化第二鉄）の変更が、ｃＩＥＦピーク３面積％、オリゴ糖プロファイル、ＶＣＤ、及び生産性のシフトの決定的な根本原因であることを実証した。塩化第二鉄供給業者がより高純度の鉄塩を生産するという明言された意図でその製造プロセスを変更したと判断した。更に、本調査は、この変更により、塩化第二鉄中に測定されない不純物として存在するマンガン、クロム、及び銅のより低い微量レベルがもたらされたことを明らかにした。マンガン、クロム、及び銅を測定された成分としてＡＧＴ製剤に添加したが、塩化第二鉄と偶発的に関連する量は考慮しなかった。したがって、これらの状況により、ＡＧＴ中の総マンガン、クロム、及び銅レベルの減少がもたらされた。

【0248】

補充したＡＧＴ培地による改善
ＳＵＰ－ＡＧＴの開発
予備的小規模研究は、培地にマンガン及びクロムを補充することにより、ｃＩＥＦピーク３面積％及びオリゴ糖プロファイルがシフトさされて歴史的基準に戻すことができることを示した（データ示さず）。これらの予備的小規模研究に基づいて、ＡＧＴにマンガン及びクロムを補充することにより、マンガン及びクロムの歴史的レベルを回復させて、ウステキヌマブの商業的バッチを生産するための変更を行った。培地を補充するために使用したマンガン及びクロム塩は、すでに既存の培地製剤の一部であったが、より低い濃度で添加したため、規定の限度のＭｎ^２＋（マンガン）及びＣｒ^３＋（クロム）を含む既知組成培地を生産するためにより多くのマンガン及びクロム塩を培地に補充するかが問題であった。

【0249】

マンガン及びクロムを補充したＡＧＴ培地を、本明細書ではＳＵＰ－ＡＧＴと称する。ＳＵＰ－ＡＧＴ培地粉末を大規模生産し、その後、商業規模でウステキヌマブを生産するために使用した。ＳＵＰ－ＡＧＴ培地を使用して生産したウステキヌマブのバッチの評価は、ＳＵＰ－ＡＧＴがＶＣＤ及び生産性を完全に回復させなかったが、歴史的ｃＩＥＦピーク３面積％及びオリゴ糖プロファイル、例えば、Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、Ｇ２Ｆのレベルを回復させるのに有効であったことを示した（データ示さず）。

【0250】

Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、Ｇ２Ｆのレベルに対する効果は、β－１，４ガラクトシルトランスフェラーゼ（ＧａｌＴＩ）活性、補因子Ｍｎ^２＋、及びグリコシル化との確立された関係を示す現在の文献と一致する（図６、例えば、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．２００７ Ｆｅｂ １５；９６（３）：５３８－４９及びＣｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ．２００８ Ａｐｒ；９（４）：２９２－３０９を参照されたい）。ＧａｌＴＩは、トランスゴルジ膜に位置する膜結合酵素である。ＧａｌＴＩは、グリコシル化カスケード内で機能するため、補因子としてのＭｎ^２＋によって活性化される。このカスケードにおいて、ＧａｌＴＩは、ガラクトース残基をコアオリゴ糖構造Ｇ０Ｆに付加する。反応生成物は、Ｇ０ＦのＮ－アセチルグルコサミン（Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ、ＧｌｃＮＡｃ）末端に１つのガラクトース残基が付加された場合、Ｇ１Ｆであり、第２のガラクトース残基が付加された場合、Ｇ２Ｆである。ＳＵＰ－ＡＧＴを使用した荷電オリゴ糖群の増加は、観察されたＧ０Ｆの減少並びにＧ１Ｆ及びＧ２Ｆの増加と一致し、後者の２つが、ＳＡ１オリゴ糖及びＳＡ２オリゴ糖形成のための主な前駆体である。このシアリル化反応は、トランスゴルジにも位置する膜結合酵素であるβ－ガラクトシドα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（ＳＴ６ＧａｌＩＩ）（図６）によって触媒される。Ｍｎ^２＋がＧ１Ｆ及びＧ２Ｆ形成の主な補因子のうちの１つであり、Ｇ１Ｆ及びＧ２Ｆ形成が負に荷電したＳＡ１及びＳＡ２形成の主な前駆体であるため、Ｍｎ^２＋濃度の減少は、シアリル化の程度及び荷電種に対して付随的な効果を有し得る。ｃＩＥＦピーク３面積％結果は、荷電オリゴ糖群で観察された変化を反映している。この研究からの知見は、より純粋な形態の塩化第二鉄に関連する変化に起因したＡＧＴ中のＭｎ^２＋濃度の変化が、ｃＩＥＦピーク３面積％及びオリゴ糖性能の変化／傾向の決定的な根本原因であるという仮説を支持する。

【0251】

ＳＵＰ－ＡＧＴ３の開発
ウステキヌマブオリゴ糖プロファイルのシフトは、より高濃度のマンガン及びクロムを含むＳＵＰ－ＡＧＴ培地への変更を行うことにより首尾よく改善されたが、ＳＵＰ－ＡＧＴへの変更は、ＶＣＤ及び生産性を歴史的傾向以内には完全に回復させなかった。本調査中の分析により、Ｃｕ^２＋（銅）レベルの減少がＶＣＤのシフトの最も可能性の高い根本原因であることが示されたため、ＳＵＰ－ＡＧＴ培地に銅を補充する効果を評価するための縮小規模研究を設計した。

【0252】

銅を含む微量元素溶液を使用して、０．２ｐｐｂ（０．２μｇ／リットル）、０．５ｐｐｂ（０．５μｇ／リットル）、及び０．８ｐｐｂ（０．８μｇ／リットル）レベルで添加した銅をスパイクしたＡＧＴ３を用いた一連の縮小規模研究実験を支持した。本縮小規模研究は、用量依存的影響を実証し、銅濃度の増加はＧ１Ｆ及びＧ２Ｆレベルの減少と関連する。本縮小規模研究の結果を細胞培養性能についての歴史的基準とも比較し、試験した各々の条件について、ＶＣＤ、生存率％、及び生産性が歴史的平均に近いことが判明した。

【0253】

オリゴ糖プロファイルに対する銅濃度の影響も小規模研究で評価し、銅濃度が生成物グリコフォームプロファイルに対して有意な用量依存的影響を有し、濃度の増加がＧ０Ｆレベルの増加並びにＧ１Ｆ及びＧ２Ｆレベルの減少に関連することを示した（データ示さず）。図６に記述したように、銅が、β－１－４ガラクトシルトランスフェラーゼ活性に対して阻害効果を有し、それ故に、グリコシル化に対して阻害効果を有し得ることが知られている（例えば、Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００２ Ｍａｙ ３１；３５（３）：３３０－６を参照されたい）。これは、濃度の増加に伴ってグリコシル化を増強し、Ｇ０Ｆ及び総中性のレベルの減少をもたらすことが実証されたマンガンの効果の反対であることに留意されたい。したがって、ウステキヌマブのｃＩＥＦピーク３面積％及びオリゴ糖プロファイルが維持されることを確実にする範囲内であるが、最適な細胞成長、生存率、及び生産性を支持するのに十分な銅を用いて、銅濃度及びマンガン濃度の両方を制御しなければならないと結論付けた。

【0254】

追加の小規模研究並びにマンガン濃度及び銅濃度の両方を変化させる実験からの結果の重回帰分析を用いて、Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、及びＧ２Ｆの変動を、マンガン及び銅を変数として用いる回帰モデルによって説明することができることが判明した。その後、これらのデータを使用して、生産されたウステキヌマブが規格内のｃＩＥＦピーク３面積％及びオリゴ糖プロファイルを有することを確実にし、かつＶＣＤ、生存率％、及び生産性が歴史的基準内であることを確実にする最適マンガン及び銅濃度を見出した。既知組成培地の最適微量金属濃度は、Ｍｎ^２＋（マンガン）が１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下であり、Ｃｕ^２＋（銅）が１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下であることが判明した。

【0255】

培地の補充についての分析が完了したため、新たなバージョンのＡＧＴ培地が製造業者によって開発された。以前のバージョンの培地と比較して、新たな培地の製造プロセスは、ポリアミン及びエタノールアミン成分の添加の順序に関して最適化されており、貯蔵寿命安定性を改善する所望の効果を有することが報告された。この新たな培地を本明細書ではＡＧＴバージョン３（AGT version 3、ＡＧＴ３）と称し、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｉｎｃ．による次世代培地とみなす。しかしながら、この新たな培地は、塩化第二鉄源に関して同じ特性を有する。結果として、この新たな培地も、微量金属であるＭｎ^２＋及びＣｕ^２＋の濃度が低いという同じ問題を有する。したがって、ＳＵＰ－ＡＧＴ３を、規定の制御された濃度のＭｎ^２＋（マンガン）及びＣｕ^２＋（銅）を含むように新たなＡＧＴ３培地にそれらを補充することによって作製した。

【0256】

多くの異なるマンガン源及び銅源を使用して、規定の限界値を達成することができる。本発明における使用に適切なマンガン源としては、例えば、ＭｎＣｌ_２、ＭｎＳＯ_４、ＭｎＦ_２、及びＭｎＩ_２のうちの１つ又は２つ以上が挙げられる。本発明における使用に適切な銅源としては、例えば、ＣｕＳＯ_４、ＣｕＣｌ_２、及びＣｕ（ＯＡｃ）_２のうちの１つ又は２つ以上が挙げられる。これらのマンガン源及び銅源は、無水形態又は水和形態、例えば、二水和物、四水和物、又は五水和物形態とすることができる。好ましいマンガン源には、ＭｎＣｌ_２（塩化マンガン）とＭｎＳＯ_４（硫酸マンガン）の組み合わせが含まれる。好ましい銅源は、ＣｕＳＯ_４（硫酸銅）である。ＡＧＴ３中の補充物としてＭｎＣｌ_２、ＭｎＳＯ_４、及びＣｕＳＯ_４を使用する利点は、これらの成分がすでに低濃度でＡＧＴ３製剤の一部であるため、新たな成分又は異なる成分を実際にＳＵＰ－ＡＧＴ３製剤に添加する必要がないことである。要約すると、歴史的データ、ＳＵＰ－ＡＧＴを用いた商業規模の生産、及び多数の小規模研究に基づいて、マンガン及び銅の規定の制御限界値を確立した。Ｍｎ^２＋（マンガン）の場合、規定の制御限界値は１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下であり、Ｃｕ^２＋（銅）の場合、限界値は１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下である。

【0257】

マンガン、クロム、及び銅レベルの評価
誘導結合プラズマ質量分析アッセイ（ＩＣＰ－ＭＳ）を使用して、例えば、塩化第二鉄の変更前の歴史的「変更前」ＡＧＴ培地、ウステキヌマブの逸脱バッチの生成に使用した「変更後」ＡＧＴ培地、及びＳＵＰ－ＡＧＴ３を含む異なる培地中のマンガン、クロム、及び銅レベルを評価した。培地の異なるバッチのマンガン、クロム、及び銅レベルの微量金属濃度についてのデータを、それぞれ、図１０、図１１、及び図１２に示す。培地の個々のバッチが、ウステキヌマブの大規模生産のために培地の他の１つ又は２つ以上のバッチと組み合わせられることに留意されたい。これは、培地のバッチ間変動のいくらかを均一化する一般的効果を有するが、濃度が制御されていない場合、マンガン及び銅の規格外のより大きな変動を補正しない場合がある。

【0258】

全てのＳＵＰ－ＡＧＴ３バッチ中のマンガン濃度は、全てのＳＵＰ－ＡＧＴ３バッチに適用した１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）の十分に規定の制御限界値以内であり、歴史的変更前ＡＧＴバッチの範囲内でもあった（図１０）。したがって、ＳＵＰ－ＡＧＴ３中のマンガン濃度が十分に制御されており、かつ歴史的変更前ＡＧＴの範囲内であると結論付けた。

【0259】

ＳＵＰ－ＡＧＴ３培地の２つの初期バッチを除いて、銅濃度も、１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）の十分に規定の制御限界内であった（図１２）。ＳＵＰ－ＡＧＴ３培地の２つの影響を受けたバッチの規格外状況は、これらのバッチをＳＵＰ－ＡＧＴ３培地の他の異なるバッチと混合して、規格内のウステキヌマブの製造に使用するための培地を得ることによって容易に改善された。したがって、ＳＵＰ－ＡＧＴ３の銅濃度が十分に制御されていると結論付けた。規格外の歴史的変更前ＡＧＴ培地の２つのバッチがルーチン問題として変更前ＡＧＴ培地の他のバッチと組み合わされたため、組み合わせられたバッチも歴史的変更前ＡＧＴを有するウステキヌマブの生産中に規格内であったことに留意されたい。変更後ＡＧＴバッチの多くが銅について本アッセイの検出限界値（１μｇ／リットル）未満の値を有したことに留意されたい。これらの値を１μｇ／リットルとして図１２にグラフで表す。

【0260】

ＳＵＰ－ＡＧＴ３を用いた商業的バッチ製造
ＳＵＰ－ＡＧＴ３を使用したオリゴ糖プロファイル
微量金属分析の肯定的な結果に基づいて、ＳＵＰ－ＡＧＴ３を、５００リットル又は１０００リットルのバイオリアクターを使用して、異なる生産施設でのウステキヌマブ商業的製造プロセスに導入した。この培地を、段階１（前培養及び播種バイオリアクター）から段階２（生産バイオリアクタープロセス）までの全ての細胞培養工程に使用し、異なるバイオリアクターで生成された生成物を使用して、ウステキヌマブの異なるバッチを生成した。図７、図８Ａ及び図８Ｂ、並びに図９Ａ～Ｃに示すように、ＳＵＰ－ＡＧＴ３を用いて生産されたウステキヌマブは、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含む。更に、ＳＵＰ－ＡＧＴ３を用いて生産されたウステキヌマブのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）電気泳動図のピーク３面積％は、３９．８％以上～６４．４％以下である。

【0261】

ＳＵＰ－ＡＧＴ３を使用した細胞生存率及び生産性
商業的製造プロセスにおけるウステキヌマブを生産するためのＳＵＰ－ＡＧＴ３の使用は、歴史的基準と比較して、生存率及び生産性も回復させた又は改善した。例えば、図１３が、ウステキヌマブの異なるＳＵＰ－ＡＧＴ３バッチの細胞の段階２細胞培養生存率を示し、図１４が、ウステキヌマブの異なるＳＵＰ－ＡＧＴ３バッチの段階２細胞培養生産性を示すことを参照されたい。

【0262】

結論
したがって、上記に記載したように、オリゴ糖プロファイルに関してウステキヌマブの一貫した原薬（ＤＳ）特性及び医薬品（ＤＰ）特性を維持するために、かつ大規模生産中の細胞生存率及び生産性を制御するために、製造管理戦略を開発した。本発明の方法によって生産されたＤＳ又はＤＰは、配列番号１０を含む重鎖（heavy chain、ＨＣ）、及び配列番号１１を含む軽鎖（light chain、ＬＣ）、配列番号７の重鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び配列番号８の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３の重鎖ＣＤＲアミノ酸配列、並びに配列番号４、配列番号５、及び配列番号６の軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体を含み、この際、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体のオリゴ糖プロファイルが、６４．８％以上～８５．４％以下の総中性オリゴ糖種、１４．４％以上～３５．６％以下の総荷電オリゴ糖種、並びに個々の中性オリゴ糖種、１１．５％以上～４０．２％以下のＧ０Ｆ、２９．９％以上～４０．６％以下のＧ１Ｆ、及び４．１％以上～１１．３％以下のＧ２Ｆを含む。更に、抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体のキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）電気泳動図のピーク３面積％は、３９．８％以上～６４．４％以下である。ＤＳ及びＤＰのオリゴ糖プロファイルは、１０．０μｇ／リットル以上～３５．０μｇ／リットル以下のＭｎ^２＋（マンガン）及び１．０μｇ／リットル以上～１．８μｇ／リットル以下のＣｕ^２＋（銅）からなる微量金属濃度を含むように規定及び制御された既知組成培地中で真核細胞を培養し、かつ当該真核細胞中で当該抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０抗体を発現させることによって制御される。更に、本製造管理戦略は、歴史的基準と比較して、ウステキヌマブ生産中の細胞生存率及び細胞生産性も維持又は改善する。ウステキヌマブオリゴ糖プロファイルを、ＨＰＬＣ法を使用して決定し、培地のマンガン濃度及び銅濃度を、誘導結合プラズマ質量分析（ＩＣＰ－ＭＳ）を使用して測定した。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【配列表】

2024527581000001.xml

【国際調査報告】