特表 2024-527588 がん治療薬

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-25

(54)【発明の名称】がん治療薬

(51)【国際特許分類】

   C07K 5/023 20060101AFI20240718BHJP

   A61K 38/07 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240718BHJP

【ＦＩ】

C07K5/023

A61K38/07

A61P35/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024500634

(86)(22)【出願日】2022-07-06

(85)【翻訳文提出日】2024-03-05

(86)【国際出願番号】 EP2022068815

(87)【国際公開番号】W WO2023280960

(87)【国際公開日】2023-01-12

(31)【優先権主張番号】21382612.6

(32)【優先日】2021-07-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】22157230.8

(32)【優先日】2022-02-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】22157531.9

(32)【優先日】2022-02-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＢＲＩＪ

２．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】524008454

【氏名又は名称】ウニベルシタ デ バルセロナ

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】アゲル ジャネ，ニエベス

(72)【発明者】

【氏名】ジョモ ピジョアン，モンセラット

(72)【発明者】

【氏名】カボット ロメロ，デボラ

(72)【発明者】

【氏名】ブルン ロサーノ，ソニア

(72)【発明者】

【氏名】アブアサカー，バラー

(72)【発明者】

【氏名】ラバナル アングラーダ，フランセスク

(72)【発明者】

【氏名】パラーラ，キアラ

(72)【発明者】

【氏名】セコ モラル，ヘスース

(72)【発明者】

【氏名】リバス サントス，ジョセップ

(72)【発明者】

【氏名】プラデス コサーノ，ロジャー

(72)【発明者】

【氏名】タラゴ クルア，テレサ

【テーマコード（参考）】

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA01

4C084AA02

4C084BA01

4C084BA09

4C084BA10

4C084BA15

4C084BA23

4C084NA14

4C084ZB261

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA13

4H045EA20

4H045FA10

(57)【要約】

本発明の治療用化合物は、固相ペプチド合成を用いて調製された式（Ｉ）のペプチド模倣薬等のペプチド模倣薬を含む。本発明の治療用化合物は、膵臓がん、肺がんまたは結腸直腸がんの治療等、さらに、膵管腺がんの治療等の、がんの治療において有用である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）

【化1】

の化合物およびその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

（Ｓ）－Ｎ－（３－（（（Ｓ）－３－アミノ－１－（（Ｓ）－４－メチル－１－オキソ－１－（ピロリジン－１－イル）ペンタン－２－イルアミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）（メチル）アミノ）－３－オキソプロピル）－３－（ビフェニル－４－イル）－２－（２，２－ジフェニルアセトアミド）－Ｎ－メチルプロパンアミドの化学名を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。

【請求項3】

式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体と共に含む、医薬組成物。

【請求項4】

ヒトがんの治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項5】

前記ヒトがんが、膵臓がん、肺がんおよび結腸直腸がんからなる群から選択される、請求項４に記載の使用のための化合物。

【請求項6】

前記ヒトがんが膵臓がんである、請求項５に記載の使用のための化合物。

【請求項7】

前記膵臓がんが、膵管腺がん、ＰＤＡＣである、請求項６に記載の使用のための化合物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、２０２１年７月７日に出願された欧州特許出願第２１３８２６１２．６号の優先権を主張する。前述の出願の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は、一般に、がん治療に関し、より具体的には、がんの治療のためのペプチド模倣薬を含む新規治療用化合物に関する。

【背景技術】

【0003】

がんは、一般に、身体の他の部分に浸潤または拡散する可能性を有する異常な細胞増殖を伴う疾患の群として定義される。がんは、喫煙、肥満、不十分な食生活、運動不足およびアルコールの過剰摂取等の複数の要因に関連づけられている。他の要因としては、ある種の感染症、電離放射線および環境汚染物質への曝露が挙げられる。ある種のがんは、ヘリコバクター・ピロリ、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒトパピローマウイルス感染症、エプスタイン・バール・ウイルスおよびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）などの感染症に関連づけられている。

【0004】

従来のがん治療は、がん性組織を除去し、それが広がるのを防ぐことを対象とする。そのような治療選択肢には、手術、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、標的療法および緩和ケアが含まれる。治療は、通常、がんのタイプ、位置およびグレード、ならびに患者の健康および好みに基づいて追求される。がん細胞は、ほとんどの正常細胞よりも速く分裂するため、化学療法薬に敏感であり得る。

【0005】

ＲＡＳ遺伝子は、細胞増殖プロセスに関連するがん遺伝子のファミリー（ＨＲＡＳ、ＮＲＡＳおよびＫＲＡＳ）を含む。これらのＲＡＳ遺伝子の高度に変異した形態がいくつかのがんで見出されており、変異した形態のＫＲＡＳはＲＡＳ関連がんの約８６％で見出され、Ｎ－ＲＡＳは約１１％で見出され、最後にＨＲＡＳは約３％で見出されている。最も致命的ながんのいくつかに関連する変異ＲＡＳ遺伝子を見出すことが一般的である。これには、約９０％の膵臓がん、４５％の結腸がんおよび２５％の肺がんが含まれる。

【0006】

タンパク質間相互作用（ＰＰＩ）の調節は、細胞機構に関与する多数のＰＰＩのために、近年科学界で大きな注目を集めている。しかしながら、ＰＰＩの調節は、これらの相互作用の性質のために非常に困難である。ＰＰＩの調節のための小分子の使用の代替法は、抗体などの生物製剤の使用である。生物製剤は、小分子ではなく大きな構造体と考えられており、大きなタンパク質表面を認識して相互作用する能力を有するが、生物学的障壁を越える能力を有さず、この特性がそれらの治療的使用を制限している。したがって、本発明の１つの目的は、生物学的障壁を越える能力を有しながら、大きなタンパク質表面を認識して相互作用することができるＰＰＩを提供することである。

【0007】

変異ＲＡＳ遺伝子に関連するものを含むがんを治療する必要があるため、本発明は、治療薬、その医薬組成物、および製造品を使用して、がんなどの疾患を治療する組成物および方法を提供する。

【発明の概要】

【0008】

本明細書に記載および特許請求される発明は、この簡単な概要に記載または説明または参照されるものを含むが、これらに限定されない多くの属性および実施形態を有する。本明細書に記載され特許請求される発明は、この概要において特定される、限定ではなく例示のみを目的として含まれる、特徴または実施形態に限定されず、またはそれらによって限定されない。

【0009】

本発明の一態様では、患者に投与することができるペプチド模倣薬を含む治療用化合物が提供される。本発明の別の態様では、治療用化合物は、単独で、または１種以上の他の治療用化合物と組み合わせて投与することができる。これらのさらなる治療用化合物としては、図８に記載の抗体、生物製剤、小分子または他の治療用化合物を挙げることができる。

【0010】

本発明の一態様において、ペプチド模倣薬である治療用化合物が、図８に記載等の、１種類の、２種類の、３種類の、４種類の、５種類の、６種類の、７種類の、８種類の、９種類の、１０種類のまたはそれを超える種類の様々な治療用化合物と共に患者に投与される。

【0011】

本発明の一態様において、治療薬はペプチド模倣薬であり、これはペプチドを模倣するように設計された小さなタンパク質様鎖である。本発明の別の態様において、ペプチド模倣薬は、タンパク質パッチ（酵素経路を引き起こすことを含め、タンパク質が別のタンパク質または分子と相互作用する結合部位または部位）を特定の様式で認識して結合し、生物学的障壁を越えるように適切に作製されている。本発明の一態様において、本発明の治療用化合物は、Ｃ_４７Ｈ_５８Ｎ_６Ｏ_５の分子式を有する。これは、（Ｓ）－Ｎ－（３－（（（Ｓ）－３－アミノ－１－（（Ｓ）－４－メチル－１－オキソ－１－（ピロリジン－１－イル）ペンタン－２－イルアミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）（メチル）アミノ）－３－オキソプロピル）－３－（ビフェニル－４－イル）－２－（２，２－ジフェニルアセトアミド）－Ｎ－メチルプロパンアミドと命名することができる。

【0012】

本発明の一態様では、治療用化合物（Ｉ）は、試験管内の細胞内におけるＲＡＳ（ＲＡｔｓ Ｓａｒｃｏｍａからの頭字語）とそのエフェクター（ＲＡＳによって引き起こされるカスケード中の他のタンパク質）との相互作用を効率的に阻害する能力を有し、ＫＲＡＳの発がん形態を発現する膵臓腫瘍細胞等のがん細胞の生存率を低下させる高い選択性を示す。本発明の別の態様では、治療用化合物は、ＰＤＡＣ細胞株の生存を阻害するが、非がん性正常細胞株に対して毒性がない。本発明の一態様では、治療用化合物およびその治療的に許容される塩は、膵臓がん、肺がんまたは結腸直腸がんから選択されるがんであって、膵臓がんがＰＤＡＣである、がんの治療に有用である。

【0013】

本発明の一態様において、治療戦略は、ＲＡＳとそのエフェクターとの結合を阻害する抗がん薬の探索を含む。

【0014】

本発明の別の態様は、治療用化合物およびその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物（例えば、医薬品または薬物）、ならびに薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体に関する。

【0015】

本発明の別の態様は、ヒトがんを含むがんの治療に使用するための治療用化合物およびその薬学的に許容される塩に関する。この態様は、ヒトがんを含むがんを治療するための医薬品の製造における、治療用化合物およびその薬学的に許容される塩の使用を指し得る。あるいは、この態様は、治療有効量の治療用化合物およびその薬学的に許容される塩の投与を含む、がんを治療する方法を指し得る。

【0016】

前の段落で言及された態様の一実施形態では、ヒトがんを含むがんは、膵臓がん、肺がんまたは結腸直腸がんである。他の実施形態では、ヒトがんを含むがんは膵臓がんである。また、他の実施形態では、膵臓がんは、膵管腺がん（ＰＤＡＣ）である。

【0017】

本明細書および特許請求の範囲全体を通して、「含む」という語およびこの語の変形形態は、他の技術的特徴、要素、限定、添加剤または成分を排除することを意図しない。さらに、「含む」という用語は、「からなる」の場合を包含する。本発明のさらなる目的、利点および特徴は、当業者であれば、説明を検討すれば一目瞭然となり、あるいは本発明の実施によって習得され得る。以下の実施例および図面は例示として提供されており、本発明を限定することを意図するものではない。

【図面の簡単な説明】

【0018】

添付の図面は、本発明の態様を例示する。そのような図面において、

【0019】

【図1】は、１００μＭの式（Ｉ）の化合物と２時間インキュベートし、１０分間ＥＧＦ刺激（ＥＧＦ＝上皮成長因子）した後に、ＨＡ－ＫＲＡＳＧ１２Ｖを発現する飢餓ＨｅＬａ細胞におけるＨＡ－ＫＲＡＳＧ１２ＶとＣ－ＲＡＦまたはＰＩ３Ｋとの共免疫沈降の結果を示す図である。抗ＨＡ抗体を用いて免疫沈降を行い、結合（ＢＯ）画分およびインプット（ＩＮ）画分を抗ｐ１１０αＰＩ３Ｋおよび抗Ｃ－ＲＡＦを用いてウエスタンブロットを行った。実験は少なくとも３回繰り返した。

【0020】

【図2】６つの膵臓腺がんヒト細胞株（すべて発がん性ＫＲＡＳ変異を有する）および非形質転換細胞株（図２においてＲＰＥとして示されているｈＴＥＲＴ－ＲＰＥ）の細胞生存率（ＣＶ）に対する式（Ｉ）の化合物の効果を示す図である。１０％のＦＣＳで培養した細胞を０μＭ以上２５μＭ以下の投与量範囲の化合物（Ｉ）で処理し、２４時間インキュベートし、細胞生存率をＭＴＳアッセイによって測定した。実験は３回繰り返した。一元配置分散分析およびテューキー多重比較検定を用いて差を評価し、ｐ≦０．０５の場合に有意と見なした。

【0021】

【図3】ＲＡＳがそのタンパク質エフェクターと会合し、下流のタンパク質カスケードを開始することを可能にするグアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）タンパク質状態によるＲＡＳ ＧＴＰ結合立体配座へのＲＡＳの活性化を示す図である。さらに、活性化ＲＡＳは、ファルネシルトランスフェラーゼ酵素（ＦＴ）によって動員され、細胞膜に達するまで細胞質基質を通過することができる。

【0022】

【図4】は、ＧＰＴアーゼ－ＲＡＳタンパク質の薬理作用部位（ＰＢＤ：５Ｐ２１）を示す図であり、（Ａ）は、ＲＡＳエフェクタータンパク質内の高度に保存された複合体ＧＴＰアーゼ－ＲＡＳ残基（網掛けの棒で強調されている）を示す図である。ＲＡＳタンパク質表面は灰色に着色されており、エフェクタータンパク質内の高度に保存された残基との分子間接触に関与する残基が強調されている（Ａｓｐ３３、Ｇｌｕ３７、Ａｓｐ３８）および（Ｔｙｒ６４）。（Ｂ）ペプチド模倣薬の新しいセットの設計のためのより関連性の高い残基の計算予測を示す。

【0023】

【図5】合成された治療用化合物ＩＰ－１４－０１（Ｐ１）、ＩＰ－１４－０２（Ｐ２）ＩＰ－１４－０３（Ｐ３）、ＩＰ－１４－０４（Ｐ４）、ＩＰ－１４－０７（Ｐ７）、ＩＰ－１４－０８（Ｐ８）およびＩＰ－１４－０９（Ｐ９）を評価するためのＫＲＡＳシグナル伝達経路の様々なタンパク質のウエスタンブロットを示す図である。ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ１２０）をローディングコントロールとして使用した。試験治療用化合物をｈＴＥＲＴ－ＲＰＥ（以下、ＲＰＥ細胞株ともいう）の血清飢餓細胞培養物（０．５％のＦＣＳで２４時間）に加え、２時間後にＥＧＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）で１０分間処理した。ペプチドを希釈するための溶媒和剤はＤＭＳＯであった。次いで細胞培地で希釈後、ＤＭＳＯの最終的な割合は０．５％であった。

【0024】

【図6】ＤＭＳＯの代わりにβ－シクロデキストリンを０．５％で使用したことを除いて、図５のウエスタンブロットの同じ条件下で行われた、化合物ＩＰ－１４－０１（Ｐ１）、ＩＰ－１４－０２（Ｐ２）ＩＰ－１４－０３（Ｐ３）、ＩＰ－１４－０４（Ｐ４）、ＩＰ－１４－０７（Ｐ７）、ＩＰ－１４－０８（Ｐ８）およびＩＰ－１４－０９（Ｐ９）を評価するためのウエスタンブロットを示す図である。

【0025】

【図7】２０１８／ＩＰ－１４－０１（Ｐ１）およびその誘導されたペプチド模倣薬、例えば、ＩＰＲ－４７１（Ｐ１．１．）、ＩＰＲ－４７２（Ｐ１．２）、ＩＰＲ－４７３（Ｐ１．３）およびＩＰＲ－４７４（Ｐ１．４）を評価するためのウエスタンブロットを示す図である。この実験のために、本発明者らは、図５に示される第一世代のペプチド模倣薬に対して先に行ったＷＢアッセイに使用したのと同じプロトコル条件に従った。化合物は０．５％のＤＭＳＯにおいて５０μＭでｈＴＥＲＴ－ＲＰＥ細胞の細胞培養物に加え、２時間後に細胞をＥＧＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）で１０分間処理した。これらのペプチド模倣薬を用いた溶解性に何ら問題はなかった。

【0026】

【図8】がんの治療のための治療用化合物のリストを示す。

【発明を実施するための形態】

【0027】

定義
本明細書における「一実施形態／態様」または「実施形態／態様」への言及は、実施形態／態様に関連して説明される特定の特徴、構造、または特性が、本開示の少なくとも１つの実施形態／態様に含まれることを意味する。本明細書の様々な箇所における「一実施形態／態様において」または「別の実施形態／態様において」という語句の使用は、必ずしもすべてが同じ実施形態／態様を指しているわけではなく、他の実施形態／態様と相互排他的な別個のまたは代替の実施形態／態様でもない。さらに、一部の実施形態／態様によって示され得るが他の実施形態／態様によって示され得ない、様々な特徴が記載される。同様に、一部の実施形態／態様の要件であり得るが、他の実施形態／態様の要件ではない様々な要件が記載されている。実施形態および態様は、ある場合には交換可能に使用することができる。

【0028】

本明細書で使用される用語は、一般に、本開示の文脈内、および各用語が使用される特定の文脈内で、当技術分野における通常の意味を有する。本開示を説明するために使用される特定の用語は、本開示の説明に関して実務者にさらなるガイダンスを提供するために、以下、または本明細書の他の箇所で説明される。同じことが複数の方法で言えることが理解されよう。

【0029】

したがって、代替の言語および同義語は、本明細書で論じられる一つ以上の用語のために使用され得る。また、用語が本明細書において詳述または議論されているか否かを問わず、特別な意味を持たせてはいない。特定の用語の同義語が提供される。１つ以上の同義語の列挙は、他の同義語の使用を排除しない。本明細書で論じられる用語の例を含む、本明細書のいずれかの個所での例の使用は、例示にすぎず、本開示または例示された用語の範囲および意味をさらに限定することを意図するものではない。同様に、本開示は、本明細書で与えられる様々な実施形態に限定されない。

【0030】

本開示の範囲をさらに限定するという意図は持たずに、本開示の実施形態による機器、装置、方法およびそれらの関連結果の例を以下に示す。なお、本例では、読者の便宜のためにタイトルまたはサブタイトルを使用することがあるが、これにより本開示の範囲を限定することは決してない。別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合には、定義を含む本文書が優先される。

【0031】

適用可能な場合、本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される「約」または「一般的に」という用語は、別段の指示がない限り、±２０％の余裕を意味する。また、適用可能な場合、本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される「実質的に」という用語は、特に明記しない限り、±１０％の余裕を意味する。上記の用語のすべての使用が、参照される範囲を適用できるように定量化できるわけではないことを理解されたい。

【0032】

用語「対象」または「患者」は、治療が望まれる任意の単一の動物、より好ましくは哺乳動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウサギ、動物園の動物、ウシ、ブタ、ヒツジ、および非ヒト霊長類などの非ヒト動物を含む）を指す。最も好ましくは、本明細書の患者はヒトである。一実施形態では、診断または治療の「対象」は、原核細胞または真核細胞、組織培養物、組織または動物、例えばヒトを含む哺乳動物である。

【0033】

本明細書で使用される場合、「含む」という用語は、組成物および方法が列挙された要素を含むが、他の列挙されていない要素を除外しないことを意味することを意図している。「から本質的になる」は、組成物および方法を定義するために使用される場合、組成物および／または方法の基本的性質を変化させる他の要素を除外するが、他の列挙されていない要素を除外しない。したがって、本明細書で定義される要素から本質的になる組成物は、微量の要素、例えば、任意の単離および精製方法からの混入物、または薬学的に許容される担体、例えばリン酸緩衝生理食塩水、防腐剤等を排除するものではないが、さらなる不特定のアミノ酸は排除する。「からなる」は、他の成分の微量を超える要素および本明細書に記載の組成物を投与するための実質的な方法工程を除外する。これらの移行用語のそれぞれによって定義される実施形態は、本開示の範囲内であり、本開示で実施される発明の範囲内である。

【0034】

本明細書で使用される場合、「水和物」という用語は、化学量論量または非化学量論量のいずれかの水が結晶構造に組み込まれた結晶形態を指す。

【0035】

本明細書で使用される「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの炭素・炭素二重結合を有する不飽和の直鎖または分岐鎖炭化水素、例えば本明細書で（Ｃ２～Ｃ８）アルケニルと呼ばれる２～８個の炭素原子の直鎖または分岐鎖の基を指す。例示的なアルケニル基としては、ビニル、アリル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、ヘキサジエニル、２－エチルヘキセニル、２－プロピル－２－ブテニルおよび４－（２－メチル－３－ブテン）－ペンテニルが挙げられるが、これらに限定されない。

【0036】

本明細書で使用される「アルコキシ」という用語は、酸素に結合したアルキル基（－Ｏ－アルキル－）を指す。「アルコキシ」基はまた、酸素に結合したアルケニル基（「アルケニルオキシ」）または酸素に結合したアルキニル基（「アルキニルオキシ」）を含む。例示的なアルコキシ基としては、本明細書で（Ｃ１～Ｃ８）アルコキシと呼ばれる、１～８個の炭素原子のアルキル、アルケニルまたはアルキニル基を有する基が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なアルコキシ基としては、メトキシおよびエトキシが挙げられるが、これらに限定されない。

【0037】

本明細書で使用される「アルキル」という用語は、本明細書で（Ｃ１～Ｃ８）アルキルと呼ばれる、１～８個の炭素原子の直鎖または分岐鎖の基などの飽和直鎖または分岐鎖の炭化水素を指す。例示的なアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、２－メチル－１－プロピル、２－メチル－２－プロピル、２－メチル－１－ブチル、３－メチル－１－ブチル、２－メチル－３－ブチル、２，２－ジメチル－１－プロピル、２－メチル－１－ペンチル、３－メチル－１－ペンチル、４－メチル－１－ペンチル、２－メチル－２－ペンチル、３－メチル－２－ペンチル、４－メチル－２－ペンチル、２，２－ジメチル－１－ブチル、３，３－ジメチル－１－ブチル、２－エチル－１－ブチル、ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチルおよびオクチルが挙げられるが、これらに限定されない。

【0038】

本明細書で使用される「アルキニル」という用語は、本明細書で（Ｃ２～Ｃ８）アルキニルと呼ばれる、２～８個の炭素原子の直鎖または分岐鎖の基などの、少なくとも１つの炭素・炭素三重結合を有する不飽和直鎖または分岐鎖の炭化水素を指す。例示的なアルキニル基としては、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、メチルプロピニル、４－メチル－１－ブチニル、４－プロピル－２－ペンチニルおよび４－ブチル－２－ヘキシニルが挙げられるが、これらに限定されない。

【0039】

本明細書で使用される「アミド」という用語は、－ＮＲａＣ（Ｏ）（Ｒｂ）－または－Ｃ（Ｏ）ＮＲｂＲｃ（式中、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、それぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリルおよび水素から選択される）の形態を指す。アミドは、炭素、窒素、ＲｂまたはＲｃを介して別の基に結合することができる。アミドはまた、環状であってもよく、例えば、ＲｂおよびＲｃは、連結されて３員環～８員環、例えば５員環または６員環を形成してもよい。「アミド」という用語は、スルホンアミド、尿素、ウレイド、カルバメート、カルバミン酸、およびそれらの環状の変形などの基を包含する。「アミド」という用語はまた、カルボキシ基に結合したアミド基、例えば－アミド－ＣＯＯＨ、またはカルボキシ基に結合したアミノ基である－アミド－ＣＯＯＮａなどの塩（例えば、－アミノ－ＣＯＯＨまたは－アミノ－ＣＯＯＮａなどの塩）を包含する。

【0040】

本明細書で使用される「アミン」または「アミノ」という用語は、－ＮＲｄＲｅまたは－Ｎ（Ｒｄ）Ｒｅ－の形態を指し、式中ＲｄおよびＲｅは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、カルバメート、シクロアルキル、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、および水素から独立して選択される。アミノは、窒素を介して親分子基に結合することができる。アミノはまた、環状であってもよく、例えば、ＲｄおよびＲｅのいずれか２つが互いに結合して、またはＮと結合して３員環～１２員環（例えば、モルホリノまたはピペリジニル）を形成してもよい。また、アミノという用語は、任意のアミノ基の対応する第四級アンモニウム塩も含む。例示的なアミノ基には、ＲｄまたはＲｅの少なくとも１つがアルキル基であるアルキルアミノ基が含まれる。一部の実施形態では、ＲｄおよびＲｅはそれぞれ、ヒドロキシル、ハロゲン、アルコキシ、エステルまたはアミノで必要に応じて置換されていてもよい。

【0041】

本明細書で使用される「アリール」という用語は、単環式、二環式、または他の多環式の炭素環式芳香環系を指す。アリール基は、アリール、シクロアルキルおよびヘテロシクリルから選択される１つ以上の環に必要に応じて縮合していてもよい。本開示のアリール基は、アルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルキル、カルバメート、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシル、ケトン、ニトロ、ホスファート、スルフィド、スルフィニル、スルホニル、スルホン酸、スルホンアミドおよびチオケトンから選択される基で置換することができる。例示的なアリール基としては、フェニル、トリル、アントラセニル、フルオレニル、インデニル、アズレニルおよびナフチル、ならびにベンゾ縮合炭素環部分、例えば、５，６，７，８－テトラヒドロナフチルが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なアリール基には、本明細書で「（Ｃ６）アリール」と呼ばれる、環が６個の炭素原子を有する単環式芳香環系も含まれるが、これらに限定されない。

【0042】

本明細書で使用される用語「アリールアルキル」は、少なくとも１つのアリール置換基（例えば、－アリール－アルキル－）を有するアルキル基を指す。例示的なアリールアルキル基には、本明細書では「（Ｃ６）アリールアルキル」と呼ばれる、環が６個の炭素原子を含む単環式芳香族環系を有するアリールアルキルが含まれるが、これらに限定されない。

【0043】

本明細書で使用される「カルバメート」という用語は、－Ｒｇｏｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｈ）－、－Ｒｇｏｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｈ）Ｒｉ－、または－ｏｃ（Ｏ）ＮＲｈＲｉの形態を指し、式中、Ｒｇ、ＲｈおよびＲｉは、それぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリルおよび水素から選択される。例示的なカルバメートとしては、アリールカルバメートまたはヘテロアリールカルバメート（例えば、式中、Ｒｇ、ＲｈおよびＲｉの少なくとも１つは、アリールまたはヘテロアリール、例えばピリジン、ピリダジン、ピリミジンおよびピラジンから独立して選択される）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0044】

本明細書で使用される「カルボキシ」という用語は、－ＣＯＯＮまたはその対応するカルボキシレート塩（例えば、－ＣＯＯＮａ）を指す。カルボキシという用語は、「カルボキシカルボニル」、例えばカルボニル基に結合したカルボキシ基、例えば－Ｃ（Ｏ）－ＣＯＯＨまたは－Ｃ（Ｏ）－ＣＯＯＮａなどの塩も含む。

【0045】

本明細書で使用される「シアノ」という用語は、－ＣＮを指す。

【0046】

本明細書で使用される「シクロアルコキシ」という用語は、酸素に結合したシクロアルキル基を指す。

【0047】

本明細書で使用される「シクロアルキル」という用語は、シクロアルカンから誘導される、本明細書で「（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル」と呼ばれる、３～１２個の炭素、または３～８個の炭素の飽和または不飽和の環式、二環式、または架橋二環式炭化水素基を指す。例示的なシクロアルキル基には、シクロヘキサン、シクロヘキセン、シクロペンタンおよびシクロペンテンが含まれるが、これらに限定されない。シクロアルキル基は、アルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルキル、カルバメート、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシル、ケトン、ニトロ、ホスファート、スルフィド、スルフィニル、スルホニル、スルホン酸、スルホンアミドおよびチオケトンで置換されていてもよい。シクロアルキル基は、他のシクロアルキル基、飽和もしくは不飽和のアリール基またはヘテロシクリル基に縮合することができる。

【0048】

本明細書で使用される「ジカルボン酸」という用語は、少なくとも２つのカルボン酸基を含む基，例えば、飽和および不飽和炭化水素ジカルボン酸およびその塩を指す。例示的なジカルボン酸としては、アルキルジカルボン酸が挙げられる。ジカルボン酸は、アルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルキル、カルバメート、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、水素、ヒドロキシル、ケトン、ニトロ、ホスファート、スルフィド、スルフィニル、スルホニル、スルホン酸、スルホンアミドおよびチオケトンで置換されていてもよい。ジカルボン酸としては、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、スベリン酸、セバシン酸、アゼライン酸、マレイン酸、フタル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、マロン酸、フマル酸、（＋）／（－）－リンゴ酸、（＋）／（－）酒石酸、イソフタル酸、およびテレフタル酸が挙げられるが、これらに限定されない。ジカルボン酸としては、そのカルボン酸誘導体、例えば、無水物、イミド、ヒドラジド（例えば、無水コハク酸およびスクシンイミド）がさらに挙げられる。

【0049】

「エステル」という用語は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｒｊ－、－ＲｋＣ（Ｏ）Ｏ－Ｒｊ－、または－ＲｋＣ（Ｏ）Ｏ－の構造を指し、式中、Ｏは水素に結合しておらず、ＲｊおよびＲｋは、アルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、エーテル、ハロアルキル、ヘテロアリール、およびヘテロシクリルから独立して選択することができる。Ｒｋは水素とすることができるが、Ｒｊは水素とすることはできない。エステルは環状であってもよく、例えば、炭素原子とＲｊ、酸素原子とＲｋ、またはＲｊとＲｋが結合して３員環～１２員環を形成してもよい。例示的なエステルには、ＲｊまたはＲｋの少なくとも１つがアルキル、例えば－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－アルキル－、および－アルキル－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－アルキル－であるアルキルエステルが含まれるが、これらに限定されない。例示的なエステルには、アリールエステルまたはヘテロアリールエステルも含まれ、例えば、ＲｊまたはＲｋの少なくとも１つは、ピリジン、ピリダジン、ピリミジンおよびピラジンなどのヘテロアリール基、例えばニコチン酸エステルである。例示的なエステルには、酸素が親分子に結合している、－ＲｋＣ（Ｏ）Ｏ－構造を有するリバースエステルも含まれる。例示的なリバースエステルとしては、コハク酸エステル、Ｄ－アルギニナート、Ｌ－アルギニナート、Ｌ－リシナートおよびＤ－リシナートが挙げられる。エステルには、カルボン酸無水物および酸ハロゲン化物も含まれる。

【0050】

本明細書で使用される「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを指す。

【0051】

本明細書で使用される「ハロアルキル」という用語は、１個以上のハロゲン原子で置換されたアルキル基を指す。「ハロアルキル」はまた、１個以上のハロゲン原子で置換されたアルケニル基またはアルキニル基を包含する。

【0052】

本明細書で使用される「ヘテロアリール」という用語は、１個以上のヘテロ原子、例えば１～３個のヘテロ原子、例えば窒素、酸素および硫黄を含む単環式、二環式または多環式の芳香族環系を指す。ヘテロアリールは、アルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルキル、カルバメート、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシル、ケトン、ニトロ、ホスファート、スルフィド、スルフィニル、スルホニル、スルホン酸、スルホンアミドおよびチオケトン等の１つ以上の置換基で置換され得る。ヘテロアリールはまた、非芳香族環に縮合していてもよい。ヘテロアリール基の例示的な例としては、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジル、ピラジル、トリアジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、（１，２，３）－および（１，２，４）－トリアゾリル、ピラジニル、ピリミジリル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、フリル、フェニル、イソオキサゾリルおよびオキサゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なヘテロアリール基としては、本明細書では「（Ｃ２～Ｃ５）ヘテロアリール」と呼ばれる、２～５個の炭素原子および１～３個のヘテロ原子が環に含まれる単環式芳香環が挙げられるが、これらに限定されない。

【0053】

本明細書で使用される「複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ）」、「ヘテロシクリル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ）」または「複素環式（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ）」という用語は、窒素、酸素および硫黄から独立して選択されるヘテロ原子を１個、２個または３個含む飽和または不飽和の３員環、４員環、５員環、６員環または７員環を指す。複素環は、芳香族（ヘテロアリール）または非芳香族であり得る。複素環は、アルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルキル、カルバメート、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシル、ケトン、ニトロ、ホスファート、スルフィド、スルフィニル、スルホニル、スルホン酸、スルホンアミドおよびチオケトン等の１つ以上の置換基で置換され得る。また複素環としては、上記複素環のいずれかがアリール、シクロアルキルおよび複素環から独立して選択される１つまたは２つの環に縮合している二環式、三環式および四環式の基が挙げられる。例示的な複素環としては、アクリジニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ビオチニル、シンノリニル、ジヒドロフリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジチアゾリル、フリル、ホモピペリジニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、インドリル、イソキノリル、イソチアゾリジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリジニル、イソオキサゾリル、モルホリニル、オキサジアゾリル、オキサゾリジニル、オキサゾリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラゾリジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピリミジル、ピロリジニル、ピロリジン－２－オニル、ピロリニル、ピロリル、キノリニル、キノキサロイル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロイソキノリル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリル、テトラゾリル、チアジアゾリル、チアゾリジニル、チアゾリル、チエニル、チオモルホリニル、チオピラニルおよびトリアゾリルが挙げられる。

【0054】

本明細書で使用される「ヒドロキシ」および「ヒドロキシル」という用語は、－ＯＨを指す。

【0055】

本明細書で使用される「ヒドロキシアルキル」という用語は、アルキル基に結合したヒドロキシを指す。

【0056】

本明細書で使用される「ヒドロキシアリール」という用語は、アリール基に結合したヒドロキシを指す。

【0057】

本明細書で使用される「ケトン」という用語は、－Ｃ（Ｏ）－Ｒｎ構造（例えば、アセチル、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ３）または－Ｒｎ－Ｃ（Ｏ）－Ｒｏ－構造を指す。ケトンは、ＲｎまたはＲｏを介して別の基に結合することができる。ＲｎまたはＲｏは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリルもしくアリールとすることができ、あるいはＲｎまたはＲｏは結合して、３員環～１２員環を形成することができる。

【0058】

本明細書で使用される「モノエステル」という用語は、ジカルボン酸の類似体であって、一方のカルボン酸がエステルとして官能化されており、他方のカルボン酸が遊離カルボン酸またはカルボン酸の塩であるものを指す。モノエステルの例としては、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、スベリン酸、セバシン酸、アゼライン酸、シュウ酸およびマレイン酸のモノエステルが挙げられるが、これらに限定されない。

【0059】

「Ｎ－保護基」という用語は、合成手順中の望ましくない反応からアミノ基を保護することを意図した基を指す。一般的に使用されるＮ－保護基は、参照により本明細書に組み込まれるＧｒｅｅｎｅ著「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」第４版（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ社、ホーボーケン、ニュージャージー州、２００６年）に開示されている。Ｎ－保護基としては、アシル、アリールイルまたはカルバミル基、例えばホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ－ブチルアセチル、２－クロロアセチル、２－ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ－ニトロフェノキシアセチル、ａ－クロロブチリル、ベンゾイル、４－クロロベンゾイル、４－ブロモベンゾイル、４－ニトロベンゾイル、およびキラル助剤、例えば保護されたまたは保護されていないＤ、ＬまたはＤ、Ｌ－アミノ酸、例えばアラニン、ロイシン、フェニルアラニンなど；ベンゼンスルホニル、ｐ－トルエンスルホニル等のスルホニル含有基；カルバメート形成基、例えばベンジルオキシカルボニル、ｐ－クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ－メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ－ニトロベンジルオキシカルボニル、２－ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ－ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４－ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，５－ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２，４－ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４－メトキシベンジルオキシカルボニル、２－ニトロ－４，５－ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５－トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１－（ｐ－ビフェニリル）－１－メチルエトキシカルボニル、α，α－ジメチル－３，５－ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ－ブチルオキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４－ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル－９－メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニル等、アルカリル基、例えばベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチル等、シリル基、例えばトリメチルシリル等が挙げられる。好ましいＮ－保護基は、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ－ブチルアセチル、アラニル、フェニルスルホニル、ベンジル、ｔ－ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）である。

【0060】

本明細書で使用される「フェニル」という用語は、６員環の炭素環式芳香環を指す。フェニル基は、シクロヘキサン環またはシクロペンタン環に縮合することもできる。フェニルは、アルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルキル、カルバメート、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシル、ケトン、ホスファート、スルフィド、スルフィニル、スルホニル、スルホン酸、スルホンアミドおよびチオケトン等の１つ以上の置換基で置換され得る。

【0061】

本明細書で使用される「チオアルキル」という用語は、硫黄に結合したアルキル基（－Ｓ－アルキル－）を指す。

【0062】

「アセチル化」またはＩＵＰＡＣ命名法における「エタノイル化（ｅｔｈａｎｏｙｌａｔｉｏｎ）」という用語は、アセチル官能基を化合物に導入する反応を指す。対照的に、脱アセチル化はアセチル基の除去を指す。

【0063】

「アルキル」基、「アルケニル」基、「アルキニル」基、「アルコキシ」基、「アミノ」および「アミド」基は、必要に応じて、アルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルキル、カルバメート、カルボニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシル、ケトン、ホスファート、スルフィド、スルフィニル、スルホニル、スルホン酸、スルホンアミド、チオケトン、ウレイドおよびＮからなる群から選択される少なくとも１つの基で置換されていてもよく、またはそれによって中断されていてもよく、またはそれによって分岐していてもよい。置換基は、分岐して置換または非置換複素環またはシクロアルキルを形成していてもよい。

【0064】

本明細書で使用される場合、必要に応じて置換された置換基上の適切な置換は、本開示の化合物の合成的有用性または薬学的有用性またはそれらを調製するのに有用な中間体の合成的有用性または薬学的有用性を無効にしない基を指す。適切な置換の例としては、Ｃ１～８のアルキル、アルケニルまたはアルキニル；Ｃ１～６アリール、Ｃ７～５ヘテロアリール；Ｃ３～７シクロアルキル；Ｃ１～８アルコキシ；Ｃ６アリールオキシ；－ＣＮ；－ＯＨ；オキソ；ハロ、カルボキシ；アミノ、例えば－ＮＨ（Ｃ１～８アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～８アルキル）２、－ＮＨ（（Ｃ６）アリール）、または－Ｎ（（Ｃ６）アリール）２；ホルミル；ケトン、例えば－ＣＯ（Ｃ１～８アルキル）、－ＣＯ（（Ｃ６アリール）、エステル、例えば－ＣＯ２（Ｃ１～８アルキル）および－ＣＯ２（Ｃ６アリール）が挙げられるが、これらに限定されない。当業者は、本開示の化合物の安定性ならびに薬理学的活性および合成活性に基づいて適切な置換を容易に選択することができる。

【0065】

「活性薬剤（ａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）」または「有効成分（ａｃｔｉｖｅ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ）」という用語は、生物学的に活性であるか、そうでなければ投与される対象に対して生物学的または生理学的効果を誘導する物質、化合物または分子を指す。換言すれば、「活性薬剤」または「有効成分」は、組成物の効果の全部または一部が帰属される組成物の一成分または複数の成分を指す。活性薬剤は、一次活性薬剤、または言い換えれば、組成物の効果の全部または一部が帰属される組成物の成分であり得る。活性薬剤は、二次薬剤、または言い換えれば、組成物の追加の部分および／または他の効果が帰属される組成物の成分であり得る。

【0066】

一実施形態では、「医薬組成物」は、インビトロ、インビボまたはエクスビボでの診断的または治療的使用に適した滅菌組成物中の、活性薬剤、例えば本発明の治療用化合物と、不活性または活性な担体との組合せを含むことを意図している。一態様では、医薬組成物は、エンドトキシンを実質的に含まないか、または使用される投与量または濃度でレシピエントに対して無毒である。

【0067】

本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、薬学的投与に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、等張剤および吸収遅延剤などを指す。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野で周知である。組成物はまた、補足的、追加的、または増強された治療機能を提供する他の活性化合物を含有し得る。

【0068】

本明細書で使用される「薬学的に許容される組成物」という用語は、１つ以上の薬学的に許容される担体と共に製剤化された本明細書に開示される少なくとも１つの化合物を含む組成物を指す。

【0069】

本明細書で使用される「薬学的に許容されるプロドラッグ」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応なしにヒトおよび下等動物の組織と接触して使用するのに適しており、合理的な利益／リスク比に見合っており、それらの意図する使用に有効である本開示の化合物のプロドラッグ、ならびに可能であれば本開示の化合物の双性イオン形態を表す。論考は、Ｈｉｇｕｃｈｉら、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ」、ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ、第１４巻、およびＲｏｃｈｅ，Ｅ．Ｂ．編「Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎおよびＰｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ社、１９８７年に記述されている。いずれも参照により本明細書に組み込まれる。

【0070】

「薬学的に許容される塩」という用語は、本組成物中に使用される化合物に存在し得る酸性または塩基性の基の塩を指す。本質的に塩基性である本組成物に含まれる化合物は、様々な無機酸および有機酸と多種多様な塩を形成することができる。そのような塩基性化合物の薬学的に許容され得る酸付加塩を調製するために使用され得る酸は、非毒性の酸付加塩を形成するもの、すなわち、硫酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、過リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩（すなわち、１，１’－メチレン－ビス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトアート））塩を含むがこれらに限定されない。アミノ部分を含む本組成物に含まれる化合物は、上記の酸以外にも様々なアミノ酸と薬学的に許容される塩を形成し得る。本発明の組成物に含まれる酸性の化合物は、様々な薬理学的に許容されるカチオンと塩基性の塩を形成することができる。そのような塩の例としては、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の塩、特にカルシウム、マグネシウム、ナトリウム、リチウム、亜鉛、カリウムおよび鉄の塩が挙げられる。

【0071】

本開示の化合物は、１つ以上のキラル中心および／または二重結合を含有してもよく、したがって、幾何異性体、エナンチオマーまたはジアステレオマーなどの立体異性体として存在してもよい。本明細書で使用される場合、「立体異性体」という用語は、すべての幾何異性体、エナンチオマーまたはジアステレオマーからなる。これらの化合物は、立体中心炭素原子の周りの置換基の配置に応じて、記号「Ｒ」または「Ｓ」で示すことができる。本開示は、これらの化合物の様々な立体異性体およびそれらの混合物を包含する。立体異性体には、エナンチオマーおよびジアステレオマーが含まれる。エナンチオマーまたはジアステレオマーの混合物は、命名法において「（±）」で示され得るが、当業者は、構造がキラル中心を暗示し得ることを認識するであろう。

【0072】

本開示の化合物の個々の立体異性体は、不斉中心または立体中心を有する市販の出発物質からの合成によって、またはラセミ混合物の調製とそれに続く当業者に周知の分割方法によって調製することができる。これらの分割方法としては、（１）エナンチオマーの混合物のキラル補助剤への結合、得られたジアステレオマーの混合物の再結晶またはクロマトグラフィーによる分離および補助剤からの光学的に純粋な生成物の遊離、（２）光学活性な分割剤を用いる塩形成、または（３）光学エナンチオマーの混合物のキラルクロマトグラフィーカラムでの直接分離が例示される。立体異性体の混合物は、キラル相ガスクロマトグラフィー、キラル相高速液体クロマトグラフィー、化合物をキラル塩錯体として晶出すること、または化合物をキラル溶媒中で晶出することなどの周知の方法によって、それらの成分の立体異性体に分割することもできる。立体異性体は、立体異性的に純粋な中間体、試薬および触媒から、周知の不斉合成法によって得ることもできる。

【0073】

幾何異性体も本開示の化合物中に存在し得る。本開示は、炭素・炭素二重結合の周りの置換基の配置または炭素環の周りの置換基の配置から生じる様々な幾何異性体およびそれらの混合物を包含する。炭素・炭素二重結合の周りの置換基は、「Ｚ」または「Ｅ」配置にあることが示され、「Ｚ」および「Ｅ」という用語はＩＵＰＡＣ標準に従って使用される。別段の定めがない限り、二重結合を示す構造は、Ｅ異性体およびＺ異性体の両方を包含する。

【0074】

あるいは、炭素・炭素二重結合の周りの置換基は、「シス」または「トランス」と呼ぶことができ、「シス」は二重結合の同じ側の置換基を表し、「トランス」は二重結合の反対側の置換基を表す。炭素環の周りの置換基の配置は、「シス」または「トランス」と呼ばれる。「シス」という用語は、環の平面の同じ側の置換基を表し、「トランス」という用語は、環の平面の反対側の置換基を表す。置換基が環の平面の同じ側と反対側の両方に配置されている化合物の混合物は、「シス／トランス」と呼ばれる。

【0075】

本明細書に開示される化合物は互変異性体として存在することができ、１つの互変異性構造のみが示されているとしても、両方の互変異性形態が本開示の範囲に包含されることが意図される。

【0076】

アミノ酸またはそのフラグメントに言及する場合の「実質的な相同性」または「実質的な類似性」という用語は、別のアミノ酸（またはその相補鎖）を用いて適切なアミノ酸の挿入または欠失により最適にアライメントされた場合、アライメントされた配列の少なくとも約９５～９９％においてアミノ酸配列同一性があることを示す。好ましくは、相同性は、全長配列またはそのタンパク質、例えば少なくとも８アミノ酸長、もしくはより望ましくは少なくとも１５アミノ酸長である封鎖タンパク質、ｒｅｐタンパク質、またはそのフラグメントにわたる。適切なフラグメントの例は本明細書に記載されている。

【0077】

「高度に保存された」という用語は、少なくとも８０％の同一性、好ましくは少なくとも９０％の同一性、より好ましくは９７％を超える同一性を意味する。同一性は、当業者に公知のアルゴリズムおよびコンピュータプログラムを用いることによって、当業者によって容易に決定される。

【0078】

一実施形態では、「有効量」は、所望の治療結果を達成するのに十分な定義された化合物の量を指すが、これに限定されない。一実施形態では、その結果は有効ながん治療であり得る。

【0079】

一実施形態では、本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」などの用語は、非限定的に、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを意味するために本明細書で使用される。効果は、障害やその徴候もしくは症状を完全にまたは部分的に未然に防ぐ（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）という点で予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）であり得、ならびに／または、疾患もしくは感染の症状の改善、または障害および／もしくは障害に起因する有害作用の部分的または完全な治癒という点で治療的であり得る。

【0080】

本明細書で使用される場合、「組み換え型」という用語は、天然には存在せず、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドを通常一緒には生じない配列で組み合わせることによって作製され得るポリペプチドまたはポリヌクレオチドを指す。この用語は、哺乳動物発現系、昆虫細胞発現系、酵母発現系および細菌発現系から選択される生物学的宿主を介して産生されるポリペプチドを指すことができる。

【0081】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、１つ以上の免疫グロブリン可変領域を介して抗原を特異的に認識して結合するポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。認識された免疫グロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロンおよびミュー定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類され、これらが順に、免疫グロブリンのクラスである、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥをそれぞれ定義する。一般的には、抗体の抗原結合領域は、結合の特異性および親和性において最も重要であり、可変ドメインによってコードされる。抗体は、全抗体、抗原結合フラグメントまたはその一本鎖であり得る。

【0082】

例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は四量体を含む。各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成され、各対は、１本の「軽」鎖（約２５ｋＤ）および１本の「重」鎖（約５０～７０ｋＤ）を有する。各鎖のＮ末端は、主に抗原認識を担う約１００～１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を定める。可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）という用語は、それぞれ軽鎖および重鎖の可変ドメインを指す。

【0083】

抗体は、例えば、インタクトな免疫グロブリンとして、または様々なペプチダーゼによる消化によって産生されるいくつかの十分に特徴づけられたフラグメントとして存在する。したがって、例えば、ペプシンは、ヒンジ領域のジスルフィド結合より下方の抗体を消化して、Ｆ（ａｂ）’_２、それ自体がジスルフィド結合によってＶＨ－ＣＨ１に結合した軽鎖ＶＬ－ＣＬであるＦａｂの二量体を生成する。様々な抗体フラグメントがインタクトな抗体の消化に関して定義されているが、当業者は、そのようなフラグメントが化学的にまたは組換えＤＮＡ方法論を使用することによってデノボ合成され得ることを理解するであろう。したがって、抗体という用語は、本明細書で使用される場合、全抗体の修飾によって産生された抗体フラグメント、または組換えＤＮＡ法を使用してデノボ合成された抗体フラグメント（例えば、単鎖Ｆｖ）、またはファージディスプレイライブラリを使用して同定された抗体フラグメント（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４（１９９０）を参照のこと）も含む。

【0084】

したがって、本発明のいずれかの態様において、抗体という用語は、ミニボディ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディなども包含する。ＳｃＦｖおよびダイアボディは、高いアビディティーおよび特異性を有する二価の小さな生物特異的抗体フラグメントである。良好な特異性および速い血中クリアランスに起因して、それらの高いシグナル対ノイズ比は一般的に良好であり、特異的抗原の診断的および治療的標的化の可能性を高める（Ｓｕｎｄａｒｅｓａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ ４４：１９６２－９（２００３）。さらに、これらの抗体は、必要に応じて、小さな単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）から様々なアイソフォームを有するインタクトＩｇＧに及ぶ様々な種類の抗体フラグメントとして作製することができるので有利である（Ｗｕ＆Ｓｅｎｔｅｒ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１３７－１１４６（２００５））。一部の実施形態では、抗体フラグメントは、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖまたはダイアボディの一部である。一部の実施形態では、いずれかの態様において、本発明は、本発明に従って使用するための高アビディティー抗体を提供する。

【0085】

「抗体フラグメント」または「抗原結合フラグメント」という用語は、抗体の一部、例えば、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどに関して使用される。構造の如何にかかわらず、抗体フラグメントは、インタクトな抗体によって認識される同じ抗原と結合する。「抗体フラグメント」という用語はまた、ダイアボディ、および特異的抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように作用する免疫グロブリン可変領域を含む任意の合成されたタンパク質または遺伝子操作されたタンパク質を含む。

【0086】

「抗原結合フラグメント」または「Ｆａｂ」という用語は、抗原に結合する抗体上の領域を指す。これは、重鎖および軽鎖のそれぞれの１つの定常ドメインおよび１つの可変ドメイン（すなわち、４つのドメイン：ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬおよびＣＬ１）を含む。可変ドメインは、モノマーのアミノ末端に相補性決定領域のセットを含むパラトープ（抗原結合部位）を含有する。したがって、Ｙの各アームは抗原上のエピトープに結合する。

【0087】

「Ｆｃ領域」または「フラグメント結晶化可能領域」という用語は、Ｆｃ受容体と呼ばれる細胞表面受容体および補体系の一部のタンパク質と相互作用する抗体ＣＨ２－ＣＨ３の尾部にあたる領域を指す。この「エフェクター機能」により、抗体は免疫系を活性化することができ、細胞障害作用（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、および／または補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）をもたらす。ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰは、免疫系の細胞の表面上のＦｃ受容体へのＦｃの結合を介して媒介される。ＣＤＣは、Ｆｃと補体系のタンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）との結合を介して媒介される。

【0088】

ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤ抗体アイソタイプでは、Ｆｃ領域は、抗体の２つの重鎖の第２および第３の定常ドメインに由来する２つの同一のタンパク質フラグメントを有する。ＩｇＭおよびＩｇＥのＦｃ領域は、各ポリペプチド鎖に３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨドメイン２～４）を有するが、ＩｇＧは２つのＣＨドメイン、ＣＨドメイン２およびＣＨドメイン３から構成される。ＩｇＧのＦｃ領域は、高度に保存されたＮ－グリコシル化部位を有する。Ｆｃフラグメントのグリコシル化は、Ｆｃ受容体媒介活性に必須である。この部位に結合したＮ－グリカンは、主に複合型のコアフコシル化二分岐構造である。さらに、これらのＮ－グリカンの少量は、バイセクト型ＧｌｃＮＡｃおよびα－２，６結合シアル酸残基も有する。

【0089】

「ｓｃＦｖ」または「ｓｃＦｖフラグメント抗体」という用語は、ＶＬ－ＶＨまたはＶＨ－ＶＬのいずれかの構成のＶＨおよびＶＬドメインからなり、その間にリンカー領域を有する小分子抗体を指す。ｓｃＦｖフラグメント抗体は、血管壁および固形腫瘍をより容易に貫通することができるため、標的薬の好ましい担体となる。

【0090】

「保存的に改変された変異体」は、アミノ酸配列および核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に改変された変異体は、同一または本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸を指し、または核酸がアミノ酸配列をコードしない場合には、本質的に同一の配列を指す。遺伝暗号の縮重のために、多数の機能的に同一の核酸が任意の所与のタンパク質をコードする。例えば、ＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧおよびＧＣＵのコドンはすべて、アミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンによって指定されるあらゆる位置で、コードされたポリペプチドを改変することなく、記載されたコドンに対応するコドンのいずれかに改変することができる。そのような核酸変異は、保存的に改変された変異の一種である「サイレント変異」である。ポリペプチドをコードする本明細書のすべての核酸配列はまた、核酸のすべての可能なサイレント変異を表す。当業者は、核酸中の各コドン（通常はメチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧ、および通常はトリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧを除く）を改変して、機能的に同一の分子を得ることができることを理解するであろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異は、発現産物に関しては記載された各配列において潜在的であるが、実際のプローブ配列に関しては潜在的でない。

【0091】

本発明の治療用ペプチドは、アミノ酸の付加、欠失または置換を有し得る。改変アミノ酸配列は、１つ以上のアミノ酸残基の欠失、挿入、非保存的もしくは保存的置換またはそれらの組合せのために、天然アミノ酸配列とは異なる配列である。一実施形態では、改変は点突然変異である。一態様では、改変された治療用ペプチドは、天然に存在する配列を有さない。

【0092】

アミノ酸置換は保存的であっても非保存的であってもよい。本明細書で使用される「保存的アミノ酸置換」は、１つのアミノ酸残基が類似の側鎖を有する別のアミノ酸残基で置換されているものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。最も一般的に生じる交換は、両方向で、Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／ＧｌｕおよびＡｓｐ／Ｇｌｙである。タンパク質またはペプチドの活性を一般に変化させないタンパク質およびペプチドにおけるアミノ酸交換は、当技術分野で公知である（Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ，Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ，Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ニューヨーク，１９７９年）。

【0093】

「ペプチドの誘導体」という用語は、官能性側鎖基の反応によって化学的に誘導体化された１つ以上の残基を有するペプチドを指す。そのような誘導体化分子としては、例えば、遊離アミノ基が誘導体化されてアミン塩酸塩、ｐ－トルエンスルホニル基、カルボベンゾキシ基、ｔ－ブチルオキシカルボニル基、クロロアセチル基またはホルミル基を形成した分子が挙げられる。遊離カルボキシル基は、誘導体化され、塩、メチルエステルおよびエチルエステルまたは他の種類のエステルまたはヒドラジドを形成することができる。遊離ヒドロキシル基は、誘導体化され、Ｏ－アシル誘導体またはＯ－アルキル誘導体を形成することができる。ヒスチジンのイミダゾール窒素は、誘導体化され、Ｎ－ｉｍ－ベンジルヒスチジンを形成することができる。２０種の一般的なアミノ酸の１つまたは複数の天然アミノ酸誘導体を含有するペプチドも誘導体として含まれる。例えば、プロリンを４－ヒドロキシプロリンに置き換えてもよく、リジンを５－ヒドロキシリジンに置き換えてもよく、ヒスチジンを３－メチルヒスチジンに置き換えてもよく、セリンをホモセリンに置き換えてもよく、リジンをオルニチンに置き換えてもよい。

【0094】

あるいは、アミノ酸は、修飾アミノ酸残基であってもよく、および／または、翻訳後修飾（例えば、アセチル化、アミド化、ホルミル化、ヒドロキシル化、メチル化、リン酸化または硫酸化）によって修飾されたアミノ酸であってもよい。非天然型アミノ酸は、本発明の治療用化合物に使用することができる「人工的」アミノ酸であり得る。

【0095】

非天然型または異常アミノ酸という用語は、合成ペプチドに組み込まれ得るものを含む。これらには、Ｄ－アミノ酸、ホモアミノ酸、β－ホモアミノ酸、Ｎ－メチルアミノ酸、α－メチルアミノ酸、非天然型側鎖変異体アミノ酸および他の異常アミノ酸が含まれる。Ｄ－アミノ酸は、天然に存在するＬ－異性体の鏡像を含む。ホモアミノ酸は、アミノ酸のα－炭素へのメチレン（ＣＨ^２）基の付加を含むアミノ酸である。β－ホモアミノ酸は、酸基の直後に炭素原子を１個挿入することによって炭素骨格が長くなった標準アミノ酸の類似体である。Ｎ－メチルアミノ酸は、プロトンの代わりに窒素にメチル基を有するアミノ酸である。α－メチルアミノ酸は、天然型では本来（アミノ基とカルボキシ基との間の）ａ－炭素原子上のプロトンがメチル基によって置換されている天然アミノ酸変異体である。異常アミノ酸は、微生物のペプチドおよびタンパク質に最も頻繁に存在し、翻訳後に形成される。異常アミノ酸は、これらのペプチドの特別な生物活性に寄与することが多い。さらに、アミノ酸は、合成された非天然型であってもよい。

【0096】

２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈における、「同一（ｉｄｅｎｔｉｃａｌ）」または「同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」パーセントという用語は、２つ以上の配列または部分配列であって、以下に記載されるデフォルトパラメータを用いたＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ ２．０配列比較アルゴリズムを使用して、または手作業のアラインメントおよび目視検査によって測定した場合に、同じであるか、または同じアミノ酸残基またはヌクレオチドを指定されたパーセンテージ（すなわち、比較ウィンドウまたは指定領域にわたって最大対応で比較およびアラインメントした場合、指定領域にわたって約６０％の同一性、好ましくは６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の同一性）を有するものを指す。その場合、そのような配列は「実質的に同一」であると言われる。この定義はまた、試験配列の相補体を指すか、またはそれに適用され得る。この定義には、欠失および／または付加を有する配列、ならびに置換を有する配列も含まれる。以下に説明するように、好ましいアルゴリズムは、ギャップなどを考慮することができる。好ましくは、同一性は、少なくとも約２５アミノ酸長またはヌクレオチド長である領域にわたって、またはより好ましくは５０～１００アミノ酸長またはヌクレオチド長である領域にわたって存在する。

【0097】

「核酸」は、一本鎖または二本鎖形態のいずれかのデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよびそれらのポリマーならびにそれらの相補体を指す。この用語は、既知のヌクレオチド類似体または修飾骨格残基もしくは結合を含む核酸であって、合成の、天然に存在する、および天然に存在しない、参照核酸と同様の結合特性を有し、参照ヌクレオチドと同様の様式で代謝される核酸を包含する。そのような類似体の例としては、ホスホロチオアート、ホスホロアミダート、メチルホスホナート、キラルメチルホスホナート、２－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0098】

別段の指示がない限り、特定の核酸配列は、その保存的に改変された変異体（例えば縮重コドン置換）および相補的配列、ならびに明示的に示された配列も潜在的に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つまたは複数の選択された（またはすべての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１～９８（１９９４））。核酸という用語は、遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドと互換的に使用される。

【0099】

本明細書で使用される場合、「防止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」という用語は、疾患の発生を抑制または遅延するすべての作用を意味する。

【0100】

本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、疾患の症状を緩和、改善または軽減するすべての作用を意味する。本明細書において、「治療」とは、本明細書に開示する抗体を投与することにより、がん、神経変性または感染症の症状が緩和、改善または軽減されることを意味する。

【0101】

「投与」という用語は、ある量の所定の物質を特定の適切な方法によって患者に導入することを指す。本明細書に開示される組成物は、所望の組織に到達することができる限り、一般的な経路のいずれか、例えば、限定されないが、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、経口、局所、鼻腔内、肺内、または直腸内投与を介して投与され得る。しかしながら、ペプチドは経口投与時に消化されるので、経口投与用組成物の有効成分は、胃における分解に対する保護のためにコーティングまたは製剤化する必要がある。

【0102】

「対象」という用語は、がん、神経変性または感染性疾患に罹患していると疑われるかまたは診断された者を指す。しかし、本明細書に開示される医薬組成物で治療される任意の対象が制限なく含まれる。本明細書に開示される抗ＤＬＬ３抗体を含む医薬組成物は、がん、神経変性または感染性疾患に罹患していると疑われる対象に投与される。

【0103】

「がん」という用語は、ヒトがんおよびがん腫、肉腫、腺がんなどを指し、固形腫瘍、腎臓、乳房、肺、腎臓、膀胱、尿路、尿道、陰茎、外陰部、膣、子宮頸部、結腸、卵巣、前立腺、膵臓、胃、脳、頭頸部、皮膚、子宮、精巣、食道、および肝臓のがんを含む。さらなるがんには、例えば、ホジキン病、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、乳がん、卵巣がん、肺がん、横紋筋肉腫、原発性血小板増加症、原発性マクログロブリン血症、小細胞肺がん、原発性脳腫瘍、胃がん、結腸がん、悪性膵臓インスラノーマ、悪性カルチノイド、前悪性皮膚病変、精巣がん、甲状腺がん、神経芽細胞腫、食道がん、尿生殖路がん、悪性高カルシウム血症、子宮頸がん、子宮内膜がん、および副腎皮質がんが含まれる。

【0104】

上記の実施形態のいずれにおいても、１つまたはそれを超えるがん治療、例えば、化学療法、放射線療法、免疫療法、手術またはホルモン療法がさらに、本発明の抗体と同時投与され得る。

【0105】

一実施形態では、治療用化合物は、アルキル化剤：ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素、テトラジン、アジリジン、シスプラチンおよび誘導体、ならびに非古典的アルキル化剤である。ナイトロジェンマスタードとしては、メクロレタミン、シクロホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、イホスファミドおよびブスルファンが挙げられる。ニトロソ尿素としては、Ｎ－ニトロソ－Ｎ－メチル尿素（ＭＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）およびセムスチン（ＭｅＣＣＮＵ）、フォテムスチンおよびストレプトゾトシンが挙げられる。テトラジンとしては、ダカルバジン、ミトゾロミドおよびテモゾロミドが挙げられる。アジリジンとしては、チオテパ、マイトマイシンおよびジアジコン（ＡＺＱ）が挙げられる。シスプラチンおよび誘導体としては、シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチンが挙げられる。一実施形態では、化学療法剤は、代謝拮抗剤：葉酸代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート）、フルオロピリミジン（例えば、フルオロウラシルおよびカペシタビン）、デオキシヌクレオシド類似体およびチオプリンである。別の実施形態では、化学療法剤は、微小管阻害薬、例えばビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）およびタキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）である。別の実施形態では、化学療法剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、または細胞傷害性抗生物質、例えば、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、アクチノマイシン、およびマイトマイシンである。

【0106】

別の実施形態では、治療用化合物は、図８で特定されたものである。

【0107】

患者と治療用化合物との接触は、抗体を患者に静脈内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、または皮内投与することによるものであり得る。一部の実施形態において、治療用化合物は、がん治療剤と同時投与される。

【0108】

本明細書で使用される「製剤」という用語は、本明細書に開示される治療用化合物および賦形剤を一緒に組み合わせたものであって、投与することができ、対応する受容体に結合して所望の活性をもたらすシグナル伝達経路を開始する能力を有するものを指す。製剤は、必要に応じて他の薬剤を含むことができる。

【0109】

範囲を含むすべての数値表示（例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度および分子量）は、当技術分野における一般的慣行に従って近似値として理解されるべきである。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、記載された量の（＋）または（－）１％、５％または１０％の変動を文脈に応じて適切に意味し得る。常に明示的に述べられているわけではないが、本明細書に記載の薬剤は単なる例示であり、そのような薬剤の等価物は当技術分野で公知であることを理解されたい。

【0110】

多くの既知の有用な化合物などは、様々なタイプの投与の標準的な参考文献である「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（第１３版）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、イーストン、ペンシルベニア、に記載されている。本明細書で使用される場合、「製剤」という用語は、少なくとも１つの有効成分と、一般に賦形剤とも呼ばれ、独立して活性または不活性であり得る１つ以上の他の成分との組合せを意味する。「製剤」という用語は、ヒトまたは動物への投与のための薬学的に許容される組成物を指す場合も指さない場合もあり、貯蔵または研究目的のための有用な中間体である組成物を含む場合もある。

【0111】

本発明の方法の患者および対象はヒトに加えて獣医学的対象であるので、これらの対象に適した製剤も適切である。そのような対象としては、家畜およびペット、ならびにスポーツ動物、例えば、ウマ、グレイハウンドなどが挙げられる。

【0112】

ヒトおよび動物である対象の治療として使用するために、本発明の治療用化合物は、医薬組成物または獣医用組成物として製剤化することができる。治療される対象、投与様式、および所望の治療の種類（例えば、未然防止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）、予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）、または治療）に応じて、治療用化合物は、これらのパラメータと調和する方法で製剤化される。そのような技術の概要は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）；およびＪ．ＳｗａｒｂｒｉｃｋおよびＪ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ編、「Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、１９８８－１９９９，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ニューヨークに記載され、それぞれの内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0113】

本明細書に記載の治療用化合物は、医薬組成物の総重量に対して総量で１～９５重量％存在し得る。医薬組成物は、関節内、経口、非経口（例えば、静脈内、筋肉内）、直腸、皮膚、皮下、外用、経皮、舌下、鼻、膣、小胞内、尿道内、髄腔内、硬膜外腔、耳、もしくは眼内への投与、または注射、吸入、もしくは鼻、泌尿生殖器、胃腸、生殖、もしくは口腔の粘膜との直接接触に適した剤形で提供され得る。したがって、医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、懸濁剤、乳剤、液剤、ヒドロゲルを含むゲル、ペースト、軟膏、クリーム、絆創膏、潅注、浸透圧送達装置、坐剤、浣腸剤、注射剤、インプラント、スプレー、イオン導入送達に適した調製物、またはエアロゾルの形態であり得る。組成物は、従来の製薬の慣行に従って製剤化され得る。

【0114】

詳細な説明
本発明の実施形態は、治療用化合物、その医薬組成物、および製造品を使用して、難治性がんを含むがんを治療、監視、および未然防止する方法を含む。

【0115】

治療方法
本出願の別の態様は、細胞増殖性障害を治療する方法に関する。この方法は、本開示による治療用化合物の有効量を必要とする対象に投与することを含む。別の態様では、細胞増殖性障害を治療する方法は、本開示による治療用化合物の有効量を必要とする対象に投与することを含む。

【0116】

治療的または予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃａｌｌｙ）に有効な投与量の治療用化合物を患者に提供するために、任意の適切な投与経路または投与様式を使用することができる。例示的な投与経路または投与様式には、非経口｛例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内）、経口、局所（経鼻、経皮、皮内または眼内）、粘膜｛例えば、鼻、舌下、頬側、直腸、膣内）、吸入、リンパ内、脊髄内、頭蓋内、腹腔内、気管内、膀胱内、髄腔内、経腸、肺内、リンパ内、腔内、眼窩内、嚢内および経尿道、ならびにカテーテルまたはステントによる局所送達が含まれる。

【0117】

本開示による治療用化合物を含む医薬組成物は、任意の薬学的に許容される担体または賦形剤中に製剤化することができる。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、生理学的に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。医薬組成物は、適切な固体またはゲル相の担体または賦形剤を含むことができる。例示的な担体または賦形剤としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールなどのポリマーが挙げられる。例示的な薬学的に許容される担体としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどのうちの１種以上、およびそれらの組合せが挙げられる。多くの場合、等張剤、例えば糖、多価アルコール（例えばマンニトール、ソルビトール）または塩化ナトリウムを組成物に含めることが好ましい。薬学的に許容される担体はさらに、治療薬の保存可能期間または有効性を高める補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、保存剤または緩衝剤を少量含むことができる。

【0118】

一実施形態では、治療用化合物は、非経口投与に適した医薬組成物に組み込むことができる。適切な緩衝液としては、限定されないが、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムが挙げられる。塩化ナトリウムを使用して、０～３００ｍＭ（最適には液体剤形に対しては１５０ｍＭ）の濃度で溶液の毒性を改変することができる。凍結保護剤は、主に０～１０％のスクロース（最適には０．５～１．０％）として凍結乾燥剤形に含めることができる。他の適切な凍結保護剤としては、トレハロースおよびラクトースが挙げられる。増量剤は、主に１～１０％のマンニトール（最適には２～４％）として凍結乾燥剤形に含めることができる。安定剤は、主に１～５０ｍＭ（最適には５～１０ｍＭ）のＬ－メチオニンとして液体剤形および凍結乾燥剤形の両方に使用することができる。他の適切な増量剤としては、グリシン、アルギニンが挙げられ、０～０．０５％を超えるポリソルベート８０（最適には０．００５～０．０１％）を挙げることができる。さらなる界面活性剤としては、ポリソルベート２０およびＢＲＩＪ界面活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。

【0119】

治療用化合物を含む医薬組成物を凍結乾燥し、滅菌粉末として、好ましくは真空下で保存した後、注射前に静菌水（例えば、ベンジルアルコール防腐剤を含有する）または滅菌水で再構成することができる。医薬組成物は、注射による、例えばボーラス注射または連続注入による非経口投与のために製剤化することができる。

【0120】

医薬組成物中の治療用化合物は、「治療有効量」または「予防有効量」で製剤化され得る。「治療有効量」とは、所望の治療結果を達成するために、必要な期間および投薬において有効な量を指す。組換えベクターの治療有効量は、治療される状態、状態の重症度および経過、投与様式、抗体または薬剤が未然防止目的で投与されるか治療目的で投与されるかどうか、特定の薬剤のバイオアベイラビリティ、個体において所望の応答を誘発する三重特異性抗体の能力、患者の薬歴、年齢、体重および性別、患者の病歴および抗体に対する応答、使用された三重特異性抗体の種類、主治医の裁量などに応じて異なり得る。治療有効量はまた、治療上有益な効果が組換えベクターの毒性または有害作用を凌駕する量である。「予防有効量」とは、所望の予防結果を達成するために、必要な期間および投薬において有効な量を指す。

【0121】

治療用化合物は、単回でまたは一連の治療にわたって患者に適切に投与され、診断以降の任意の時点で患者に投与され得る。治療用化合物は、単独の治療として、または問題の状態を治療するのに有用な他の薬物もしくは療法と組み合わせて投与され得る。

【0122】

一実施形態では、本発明の治療用化合物は、以下の構造：

【化1】

を有する、以下ＩＰＲ－４７３とも称する、ペプチド模倣薬Ｐ１．３またはＰ１．３の誘導体を含み、
式中、Ｒ１は、以下のうちの１つを含む：
ＣＨ３、ＣＨ２－ＣＨ３、ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ３、ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ３またはＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ヘキシル；
Ｒ２は、以下のうちの１つを含む：
Ｄａｂ、シクロヘキシルグリシン、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、ＴｈｒまたはＬｙｓに対応する側鎖
Ｒ３は、以下のうちの１つを含む：
Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、ＴｙｒまたはＶａｌに対応する側鎖
Ｒ４は、以下のうちの１つを含む：
Ｈ、ＣＨ３またはアルキル基
Ｒ５は、以下のうちの１つを含む：
Ｈ、ＣＨ３またはアルキル基。

【0123】

一実施形態では、本発明の治療用化合物は、以下のペプチド模倣薬の１つを含み、Ｐ１．３は上記の構造であり、各ペプチド模倣薬の特異的Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は以下の表１に示され、特定のペプチド模倣薬の関連するＫＲＡＳ－ＧＴＰアーゼのドッキングスコアは以下の表１に示される（Ｐ１．３の１４０個の変異体を含む）：

【表1】

【0124】

Ｐ１．３の他の類似体または誘導体には、以下に開示されるＦｍｏｃ－Ｐ１．３が含まれる。

【化2】

Ｒ_１＝ＣＨ_３
Ｒ_２＝ＣＨ_２－ＮＨ_２（Ｄａｐ側鎖）
Ｒ_３＝ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２（Ｌ－Ｌｅｕ側鎖）

【0125】

Ｐ１．３のさらなる類似体または誘導体には、以下が含まれる。
式中、Ｒ１はＣＨ_３であり、Ｒ２は（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２（Ｌｙｓ）であり、Ｒ３はＣＨ（ＣＨ_３）_２（Ｖａｌ）であり、Ｒ５はＮＣＨ_３である。
そして、

【化3】

Ｒ_１＝Ｈ
Ｒ_２＝ＣＨ_２－ＮＨ_２（Ｄａｐ側鎖）
Ｒ_３＝ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２（Ｌ－Ｌｅｕ側鎖）

【0126】

Ｐ１．３の別の類似体または誘導体は、以下の構造を有する；

【化4】

Ｒ_１＝－ＣＨ_２ＣＨ_２－（ピロリジンに包埋）
Ｒ_２＝ＣＨ_２－ＮＨ_２（Ｄａｐ側鎖）
Ｒ_３＝ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２（Ｌ－Ｌｅｕ側鎖）

【化5】

Ｒ_１＝－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－（ピペリジンに包埋）
Ｒ_２＝ＣＨ_２－ＮＨ_２（Ｄａｐ側鎖）
Ｒ_３＝ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２（Ｌ－Ｌｅｕ側鎖）

【化6】

Ｒ_１＝－Ｈ
Ｒ_２＝ＣＨ_２－ＮＨ_２（Ｄａｐ側鎖）
Ｒ_３＝ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２（Ｌ－Ｌｅｕ側鎖）

【0127】

一般的な提案として、治療用化合物の治療有効量または予防有効量は、１回または複数回の投与によるかどうかにかかわらず、約１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内で投与される。特定の実施形態では、治療用化合物は、約１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１ｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｎｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｎｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１０ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１０ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１０ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１０ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１０ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１０ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１０ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｎｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１００ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１００ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１００ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１００ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１００ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１００ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内、約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変動する範囲内で投与される。

【0128】

他の実施形態では、治療用化合物は、３日ごとに５００ｇ以上２０ｇ以下、または３日ごとに２５ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で投与される。

【0129】

他の実施形態において、治療用化合物は、１回投与当たり約１０ｎｇから約１００ｎｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｎｇから約１ｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｎｇから約１０ｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｎｇから約１００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｎｇから約１ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｎｇから約１０ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｎｇから約１００ｍｇまで変動する範囲内、注射１回につき約１０ｎｇから約１０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｎｇから約１０，０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１００ｎｇから約１ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１００ｎｇから約１０ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１００ｎｇから約１００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１００ｎｇから約１ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１００ｎｇから約１０ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１００ｎｇから約１００ｍｇまで変動する範囲内、注射１回につき約１００ｎｇから約１０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１００ｎｇから約１０，０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１ｍｇから約１０ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１ｍｇから約１００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１ｍｇから約１ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１ｍｇから約１０ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１ｍｇから約１００ｍｇまで変動する範囲内、注射１回につき約１ｍｇから約１０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１ｍｇから約１０，０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｍｇから約１００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｍｇから約１ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｍｇから約１０ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｍｇから約１００ｍｇまで変動する範囲内、注射１回につき約１０ｍｇから約１０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｍｇから約１０，０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１００ｍｇから約１ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１００ｍｇから約１０ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１００ｍｇから約１００ｍｇまで変動する範囲内、注射１回につき約１００ｍｇから約１０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１００ｍｇから約１０，０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１ｍｇから約１０ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１ｍｇから約１００ｍｇまで変動する範囲内、注射１回につき約１ｍｇから約１０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１ｍｇから約１０，０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｍｇから約１００ｍｇまで変動する範囲内、注射１回につき約１０ｍｇから約１０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１０ｍｇから約１０，０００ｍｇまで変動する範囲内、注射１回につき約１００ｍｇから約１０００ｍｇまで変動する範囲内、１回投与当たり約１００ｍｇから約１０，０００ｍｇまで変動する範囲内、および１回投与当たり約１０００ｍｇから約１０，０００ｍｇまで変動する範囲内で投与される。三重特異性抗体は、毎日、隔日、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごともしくは７日ごと、または毎週、２週間ごと、３週間ごともしくは４週間ごとに投与され得る。

【0130】

他の特定の実施形態では、治療用化合物の量は、約０．０００６ｍｇ／日、０．００１ｍｇ／日、０．００３ｍｇ／日、０．００６ｍｇ／日、０．０１ｍｇ／日、０．０３ｍｇ／日、０．０６ｍｇ／日、０．１ｍｇ／日、０．３ｍｇ／日、０．６ｍｇ／日、１ｍｇ／日、３ｍｇ／日、６ｍｇ／日、１０ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、６０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、６００ｍｇ／日、１０００ｍｇ／日、２０００ｍｇ／日、５０００ｍｇ／日、または１００００ｍｇ／日の投与量で投与され得る。予想されるように、投与量は、患者の状態、体格、年齢および病状に依存する。

【0131】

任意の特定の細胞増殖性障害に適したいくつかの当技術分野で認められている動物モデルにおいて、投与量を試験することができる。

【0132】

この実施形態の他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、腫瘍のサイズを、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％縮小させる。

【0133】

この実施形態の他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、腫瘍のサイズを、例えば、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％縮小させる。

【0134】

この実施形態の他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、腫瘍のサイズを、例えば、１０％以下、１５％以下、２０％以下、２５％以下、３０％以下、３５％以下、４０％以下、４５％以下、５０％以下、５５％以下、６０％以下、６５％以下、７０％以下、７５％以下、８０％以下、８５％以下、９０％以下、または９５％以下縮小する。

【0135】

この実施形態のさらに他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、腫瘍のサイズを、例えば、約５％以上約１００％以下、約１０％以上約１００％以下、約２０％以上約１００％以下、約３０％以上約１００％以下、約４０％以上約１００％以下、約５０％以上約１００％以下、約６０％以上約１００％以下、約７０％以上約１００％以下、約８０％以上約１００％以下、約１０％以上約９０％以下、約２０％以上約９０％以下、約３０％以上約９０％以下、約４０％以上約９０％以下、約５０％以上約９０％以下、約６０％以上約９０％以下、約７０％以上約９０％以下、約１０％以上約８０％以下、約２０％以上約８０％以下、約３０％以上約８０％以下、約４０％以上約８０％以下、約５０％以上約８０％以下、約６０％以上約８０％以下、約１０％以上約７０％以下、約２０％以上約７０％以下、約３０％以上約７０％以下、約４０％以上約７０％以下、または約５０％以上約７０％以下縮小する。

【0136】

本明細書に開示される医薬組成物は、個体への慣習的な投与を可能にするのに十分な量である。この実施形態の様々な態様において、本明細書中に開示される医薬組成物は、例えば、少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２０ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３０ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４０ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも５５ｍｇ、少なくとも６０ｍｇ、少なくとも６５ｍｇ、少なくとも７０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、少なくとも８０ｍｇ、少なくとも８５ｍｇ、少なくとも９０ｍｇ、少なくとも９５ｍｇ、または少なくとも１００ｍｇの医薬組成物であり得る。この実施形態の他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、例えば、少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも２０ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、少なくとも１００ｍｇ、少なくとも２００ｍｇ、少なくとも３００ｍｇ、少なくとも４００ｍｇ、少なくとも５００ｍｇ、少なくとも６００ｍｇ、少なくとも７００ｍｇ、少なくとも８００ｍｇ、少なくとも９００ｍｇ、少なくとも１，０００ｍｇ、少なくとも１，１００ｍｇ、少なくとも１，２００ｍｇ、少なくとも１，３００ｍｇ、少なくとも１，４００ｍｇ、または少なくとも１，５００ｍｇの医薬組成物であり得る。この実施形態のさらに他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、例えば、約５ｍｇ以上約１００ｍｇ以下の範囲内、約１０ｍｇ以上約１００ｍｇ以下の範囲内、約５０ｍｇ以上約１５０ｍｇ以下の範囲内、約１００ｍｇ以上約２５０ｍｇ以下の範囲内、約１５０ｍｇ以上約３５０ｍｇ以下の範囲内、約２５０ｍｇ以上約５００ｍｇ以下の範囲内、約３５０ｍｇ以上約６００ｍｇ以下の範囲内、約５００ｍｇ以上約７５０ｍｇ以下の範囲内、約６００ｍｇ以上約９００ｍｇ以下の範囲内、約７５０ｍｇ以上約１，０００ｍｇ以下の範囲内、約８５０ｍｇ以上約１，２００ｍｇ以下の範囲内、または約１，０００ｍｇ以上約１，５００ｍｇの範囲内であり得る。この実施形態のさらに他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、例えば、約１０ｍｇ以上約２５０ｍｇ以下の範囲内、約１０ｍｇ以上約５００ｍｇ以下の範囲内、約１０ｍｇ以上約７５０ｍｇ以下の範囲内、約１０ｍｇ以上約１，０００ｍｇ以下の範囲内、約１０ｍｇ以上約１，５００ｍｇ以下の範囲内、約５０ｍｇ以上約２５０ｍｇ以下の範囲内、約５０ｍｇ以上約５００ｍｇ以下の範囲内、約５０ｍｇ以上約７５０ｍｇ以下の範囲内、約５０ｍｇ以上約１，０００ｍｇ以下の範囲内、約５０ｍｇ以上約１，５００ｍｇ以下の範囲内、約１００ｍｇ以上約２５０ｍｇ以下の範囲内、約１００ｍｇ以上約５００ｍｇ以下の範囲内、約１００ｍｇ以上約７５０ｍｇ以下の範囲内、約１００ｍｇ以上約１，０００ｍｇ以下の範囲内、約１００ｍｇ以上約１，５００ｍｇ以下の範囲内、約２００ｍｇ以上約５００ｍｇ以下の範囲内、約２００ｍｇ以上約７５０ｍｇ以下の範囲内、約２００ｍｇ以上約１，０００ｍｇ以下の範囲内、約２００ｍｇ以上約１，５００ｍｇ以下の範囲内、約５ｍｇ以上約１，５００ｍｇ以下の範囲内、約５ｍｇ以上約１，０００ｍｇ以下の範囲内、または約５ｍｇ以上約２５０ｍｇの範囲であり得る。

【0137】

本明細書に開示される医薬組成物は、本明細書に開示される医薬組成物を溶解するのに十分な量の溶媒、エマルジョンまたは他の希釈剤を含み得る。この実施形態の他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、溶媒、エマルジョンまたは希釈剤を、例えば、約９０％（ｖ／ｖ）未満の量、約８０％（ｖ／ｖ）未満の量、約７０％（ｖ／ｖ）未満の量、約６５％（ｖ／ｖ）未満の量、約６０％（ｖ／ｖ）未満の量、約５５％（ｖ／ｖ）未満の量、約５０％（ｖ／ｖ）未満の量、約４５％（ｖ／ｖ）未満の量、約４０％（ｖ／ｖ）未満の量、約３５％（ｖ／ｖ）未満の量、約３０％（ｖ／ｖ）未満の量、約２５％（ｖ／ｖ）未満の量、約２０％（ｖ／ｖ）未満の量、約１５％（ｖ／ｖ）未満の量、約１０％（ｖ／ｖ）未満の量、約５％（ｖ／ｖ）未満の量、または約１％（ｖ／ｖ）未満の量含み得る。この実施形態の他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、溶媒、エマルジョンまたは他の希釈剤を、例えば、約１％（ｖ／ｖ）以上９０％（ｖ／ｖ）以下の量、約１％（ｖ／ｖ）以上７０％（ｖ／ｖ）以下の量、約１％（ｖ／ｖ）以上６０％（ｖ／ｖ）以下の量、約１％（ｖ／ｖ）以上５０％（ｖ／ｖ）以下の量、約１％（ｖ／ｖ）以上４０％（ｖ／ｖ）以下の量、約１％（ｖ／ｖ）以上３０％（ｖ／ｖ）以下の量、約１％（ｖ／ｖ）以上２０％（ｖ／ｖ）以下の量、約１％（ｖ／ｖ）以上１０％（ｖ／ｖ）以下の量、約２％（ｖ／ｖ）以上５０％（ｖ／ｖ）以下の量、約２％（ｖ／ｖ）以上４０％（ｖ／ｖ）以下の量、約２％（ｖ／ｖ）以上３０％（ｖ／ｖ）以下の量、約２％（ｖ／ｖ）以上２０％（ｖ／ｖ）以下の量、約２％（ｖ／ｖ）以上１０％（ｖ／ｖ）以下の量、約４％（ｖ／ｖ）以上５０％（ｖ／ｖ）以下の量、約４％（ｖ／ｖ）以上４０％（ｖ／ｖ）以下の量、約４％（ｖ／ｖ）以上３０％（ｖ／ｖ）以下の量、約４％（ｖ／ｖ）以上２０％（ｖ／ｖ）以下の量、約４％（ｖ／ｖ）以上１０％（ｖ／ｖ）以下の量、約６％（ｖ／ｖ）以上５０％（ｖ／ｖ）以下の量、約６％（ｖ／ｖ）以上４０％（ｖ／ｖ）以下の量、約６％（ｖ／ｖ）以上３０％（ｖ／ｖ）以下の量、約６％（ｖ／ｖ）以上２０％（ｖ／ｖ）以下の量、約６％（ｖ／ｖ）以上１０％（ｖ／ｖ）以下の量、約８％（ｖ／ｖ）以上５０％（ｖ／ｖ）以下の量、約８％（ｖ／ｖ）以上４０％（ｖ／ｖ）以下の量、約８％（ｖ／ｖ）以上３０％（ｖ／ｖ）以下の量、約８％（ｖ／ｖ）以上２０％（ｖ／ｖ）以下の量、約８％（ｖ／ｖ）以上１５％（ｖ／ｖ）以下の量、または約８％（ｖ／ｖ）以上１２％（ｖ／ｖ）以下の量含み得る。

【0138】

本明細書に開示される医薬組成物中の本明細書に開示される医薬組成物の最終濃度は、所望の任意の濃度であり得る。この実施形態の一態様では、医薬組成物中の医薬組成物の最終濃度は、治療有効量であり得る。この実施形態の他の態様では、医薬組成物中の医薬組成物の最終濃度は、例えば、少なくとも０．００００１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも０．０００１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも０．００１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも０．０１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも０．１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２００ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも５００ｍｇ／ｍＬであり得る。この実施形態の他の態様では、医薬組成物中の医薬組成物の最終濃度は、例えば、約０．００００１ｍｇ／ｍＬから約３，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約０．０００１ｍｇ／ｍＬから約３，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約０．０１ｍｇ／ｍＬから約３，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約０．１ｍｇ／ｍＬから約３，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約１ｍｇ／ｍＬから約３，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約２５０ｍｇ／ｍＬから約３，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約５００ｍｇ／ｍＬから約３，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約７５０ｍｇ／ｍＬから約３，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約１，０００ｍｇ／ｍＬから約３，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約１００ｍｇ／ｍＬから約２，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約２５０ｍｇ／ｍＬから約２，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約５００ｍｇ／ｍＬから約２，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約７５０ｍｇ／ｍＬから約２，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約１，０００ｍｇ／ｍＬから約２，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約１００ｍｇ／ｍＬから約１，５００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約２５０ｍｇ／ｍＬから約１，５００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約５００ｍｇ／ｍＬから約１，５００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約７５０ｍｇ／ｍＬから約１，５００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約１，０００ｍｇ／ｍＬから約１，５００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約１００ｍｇ／ｍＬから約１，２００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約２５０ｍｇ／ｍＬから約１，２００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約５００ｍｇ／ｍＬから約１，２００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約７５０ｍｇ／ｍＬから約１，２００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約１０００ｍｇ／ｍＬから約１，２００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約１００ｍｇ／ｍＬから約１，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約２５０ｍｇ／ｍＬから約１，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約５００ｍｇ／ｍＬから約１，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約７５０ｍｇ／ｍＬから約１，０００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約１００ｍｇ／ｍＬから約７５０ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約２５０ｍｇ／ｍＬから約７５０ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約５００ｍｇ／ｍＬから約７５０ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約１００ｍｇ／ｍＬから約５００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約２５０ｍｇ／ｍＬから約５００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約０．００００１ｍｇ／ｍＬから約０．０００１ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約０．００００１ｍｇ／ｍＬから約０．００１ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約０．００００１ｍｇ／ｍＬから約０．０１ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約０．００００１ｍｇ／ｍＬから約０．１ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約０．００００１ｍｇ／ｍＬから約１ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約０．００１ｍｇ／ｍＬから約０．０１ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約０．００１ｍｇ／ｍＬから約０．１ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約０．００１ｍｇ／ｍＬから約１ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約０．００１ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内、約０．００１ｍｇ／ｍＬから約１００ｍｇ／ｍＬまで変動する範囲内であり得る。

【0139】

本明細書の態様は、がんに罹患している個体を治療することを部分的に開示する。本明細書で使用される場合、「治療すること」という用語は、個体においてがんの臨床症状を軽減または排除すること、または個体においてがんの臨床症状の発症を遅延もしくは未然防止することを指す。例えば、「治療すること」という用語は、限定するものではないが、腫瘍サイズなどの、がんによって特徴づけられる状態の症状を、例えば、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％軽減することを意味することができる。がんに関連する実際の症状は周知であり、当業者は、がんの位置、がんの原因、がんの重症度、および／またはがんに罹患した組織もしくは器官を含むがこれらに限定されない因子を考慮することによって決定することができる。当業者は、特定の種類のがんに関連づけられる適合症状または指標を知っており、個体が本明細書に開示される治療の候補であるかどうかを決定する方法を知っている。

【0140】

別の態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、がんに関連する障害の症状の重症度を低下させる。この実施形態の様々な態様において、本明細書中に開示される医薬組成物は、がんに伴う障害の症状の重症度を、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％軽減させる。この実施形態の他の態様において、本明細書中に開示される医薬組成物は、がんに関連する障害の症状の重症度を、例えば、約１０％以上約１００％以下、約２０％以上約１００％以下、約３０％以上約１００％以下、約４０％以上約１００％以下、約５０％以上約１００％以下、約６０％以上約１００％以下、約７０％以上約１００％以下、約８０％以上約１００％以下、１０％以上９０％以下、２０％以上９０％以下、３０％以上９０％以下、約４０％以上約９０％以下、約５０％以上約９０％以下、約６０％以上約９０％以下、約７０％以上約９０％以下、約１０％以上約８０％以下、約２０％以上約８０％以下、約３０％以上約８０％以下、約４０％以上約８０％以下、約５０％以上約８０％以下、約６０％以上約８０％以下、約１０％以上約７０％以下、約２０％以上約７０％以下、約３０％以上約７０％以下、約４０％以上約７０％以下、または約５０％以上約７０％以下軽減させる。

【0141】

この実施形態の様々な態様において、本明細書中に開示される医薬組成物の治療有効量は、がんに伴う症状を、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％軽減させる。この実施形態の他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物の治療有効量は、がんに関連する症状を、例えば、最大で１０％、最大で１５％、最大で２０％、最大で２５％、最大で３０％、最大で３５％、最大で４０％、最大で４５％、最大で５０％、最大で５５％、最大で６０％、最大で６５％、最大で７０％、最大で７５％、最大で８０％、最大で８５％、最大で９０％、最大で９５％、または最大で１００％軽減する。この実施形態のさらに他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物の治療有効量は、がんに関連する症状を、例えば約１０％以上約１００％以下、約１０％以上約９０％以下、約１０％以上約８０％以下、約１０％以上約７０％以下、約１０％以上約６０％以下、約１０％以上約５０％以下、約１０％以上約４０％以下、約２０％以上約１００％以下、約２０％以上約９０％以下、約２０％以上約８０％以下、約２０％以上約２０％以下、約２０％以上約６０％以下、約２０％以上約５０％以下、約２０％以上約４０％以下、約３０％以上約１００％以下、約３０％以上約９０％以下、約３０％以上約８０％以下、約３０％以上約７０％以下、約３０％以上約６０％、または約３０％以上約５０％軽減する。

【0142】

この実施形態のさらに他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物の治療有効量は、一般に、約０．００１ｍｇ／ｋｇ以上約１００ｍｇ／ｋｇ以下の範囲内であり、例えば３日ごと、５日ごと、７日ごと、１０日ごとまたは１４日ごとに投与される。この実施形態の態様では、本明細書に開示される医薬組成物の有効量は、例えば、少なくとも０．００１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも５０ｍｇ／ｋｇとすることができ、例えば３日ごと、５日ごと、７日ごと、１０日ごとまたは１４日ごとに投与することができる。この実施形態の他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物の有効量は、例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ以上約１０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日以上約１５ｍｇ／ｋｇ以下、約０．００１ｍｇ／ｋｇ以上約２０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．００１ｍｇ／ｋｇ以上約２５ｍｇ／ｋｇ以下、約０．００１ｍｇ／ｋｇ以上約３０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．００１ｍｇ／ｋｇ以上約３５ｍｇ／ｋｇ以下、約０．００１ｍｇ／ｋｇ以上約４０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．００１ｍｇ／ｋｇ以上約４５ｍｇ／ｋｇ以下、約０．００１ｍｇ／ｋｇ以上約５０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．００１ｍｇ／ｋｇ以上約７５ｍｇ／ｋｇ以下、または約０．００１ｍｇ／ｋｇ以上約１００ｍｇ／ｋｇ以下の範囲内であり得、例えば、３日ごと、５日ごと、７日ごと、１０日ごとまたは１４日ごとに投与することができる。この実施形態のさらに他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物の有効量は、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ以上約１０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．０１ｍｇ／ｋｇ以上約１５ｍｇ／ｋｇ以下、約０．０１ｍｇ／ｋｇ以上約２０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．０１ｍｇ／ｋｇ以上約２５ｍｇ／ｋｇ以下、約０．０１ｍｇ／ｋｇ以上約３０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．０１ｍｇ／ｋｇ以上約３５ｍｇ／ｋｇ以下、約０．０１ｍｇ／ｋｇ以上約４０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．０１ｍｇ／ｋｇ以上約４５ｍｇ／ｋｇ以下、約０．０１ｍｇ／ｋｇ以上約５０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．０１ｍｇ／ｋｇ以上約７５ｍｇ／ｋｇ以下、または約０．０１ｍｇ／ｋｇ以上約１００ｍｇ／ｋｇ以下の範囲内であり得、例えば、３日ごと、５日ごと、７日ごと、１０日ごとまたは１４日ごとに投与することができる。この実施形態のさらに他の態様では、本明細書に開示される医薬組成物の有効量は、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ以上約１０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．１ｍｇ／ｋｇ以上約１５ｍｇ／ｋｇ以下、約０．１ｍｇ／ｋｇ以上約２０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．１ｍｇ／ｋｇ以上約２５ｍｇ／ｋｇ以下、約０．１ｍｇ／ｋｇ以上約３０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．１ｍｇ／ｋｇ以上約３５ｍｇ／ｋｇ以下、約０．１ｍｇ／ｋｇ以上約４０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．１ｍｇ／ｋｇ以上約４５ｍｇ／ｋｇ以下、約０．１ｍｇ／ｋｇ以上約５０ｍｇ／ｋｇ以下、約０．１ｍｇ／ｋｇ以上約７５ｍｇ／ｋｇ以下、または約０．１ｍｇ／ｋｇ以上約１００ｍｇ／ｋｇ以下の範囲内であり得、例えば、３日ごと、５日ごと、７日ごと、１０日ごとまたは１４日ごとに投与することができる。

【0143】

液体製剤および半固体製剤において、本明細書に開示される治療用化合物の濃度は、一般的に、約５０ｍｇ／ｍＬ以上約１，０００ｍｇ／ｍＬ以下であり得る。この実施形態の様々な態様において、本明細書中に開示される治療用化合物の治療有効量は、例えば、約５０ｍｇ／ｍＬ以上約１００ｍｇ／ｍＬ以下、約５０ｍｇ／ｍＬ以上約２００ｍｇ／ｍＬ以下、約５０ｍｇ／ｍＬ以上約３００ｍｇ／ｍＬ以下、約５０ｍｇ／ｍＬ以上約４００ｍｇ／ｍＬ以下、約５０ｍｇ／ｍＬ以上約５００ｍｇ／ｍＬ以下、約５０ｍｇ／ｍＬ以上約６００ｍｇ／ｍＬ以下、約５０ｍｇ／ｍＬ以上約７００ｍｇ／ｍＬ以下、約５０ｍｇ／ｍＬ以上約８００ｍｇ／ｍＬ以下、約５０ｍｇ／ｍＬ以上約９００ｍｇ／ｍＬ以下、約５０ｍｇ／ｍＬ以上約１，０００ｍｇ／ｍＬ以下、約１００ｍｇ／ｍＬ以上約２００ｍｇ／ｍＬ以下、約１００ｍｇ／ｍＬ以上約３００ｍｇ／ｍＬ以下、約１００ｍｇ／ｍＬ以上約４００ｍｇ／ｍＬ以下、約１００ｍｇ／ｍＬ以上約５００ｍｇ／ｍＬ以下、約１００ｍｇ／ｍＬ以上約６００ｍｇ／ｍＬ以下、約１００ｍｇ／ｍＬ以上約７００ｍｇ／ｍＬ以下、約１００ｍｇ／ｍＬ以上約８００ｍｇ／ｍＬ以下、約１００ｍｇ／ｍＬ以上約９００ｍｇ／ｍＬ以下、約１００ｍｇ／ｍＬ以上約１，０００ｍｇ／ｍＬ以下、約２００ｍｇ／ｍＬ以上約３００ｍｇ／ｍＬ以下、約２００ｍｇ／ｍＬ以上約４００ｍｇ／ｍＬ以下、約２００ｍｇ／ｍＬ以上約５００ｍｇ／ｍＬ以下、約２００ｍｇ／ｍＬ以上約６００ｍｇ／ｍＬ以下、約２００ｍｇ／ｍＬ以上約７００ｍｇ／ｍＬ以下、約２００ｍｇ／ｍＬ以上約８００ｍｇ／ｍＬ以下、約２００ｍｇ／ｍＬ以上約９００ｍｇ／ｍＬ以下、約２００ｍｇ／ｍＬ以上約１，０００ｍｇ／ｍＬ以下、約３００ｍｇ／ｍＬ以上約４００ｍｇ／ｍＬ以下、約３００ｍｇ／ｍＬ以上約５００ｍｇ／ｍＬ以下、約３００ｍｇ／ｍＬ以上約６００ｍｇ／ｍＬ以下、約３００ｍｇ／ｍＬ以上約７００ｍｇ／ｍＬ以下、約３００ｍｇ／ｍＬ以上約８００ｍｇ／ｍＬ以下、約３００ｍｇ／ｍＬ以上約９００ｍｇ／ｍＬ以下、約３００ｍｇ／ｍＬ以上約１，０００ｍｇ／ｍＬ以下、約４００ｍｇ／ｍＬ以上約５００ｍｇ／ｍＬ以下、約４００ｍｇ／ｍＬ以上約６００ｍｇ／ｍＬ以下、約４００ｍｇ／ｍＬ以上約７００ｍｇ／ｍＬ以下、約４００ｍｇ／ｍＬ以上約８００ｍｇ／ｍＬ以下、約４００ｍｇ／ｍＬ以上約９００ｍｇ／ｍＬ以下、約４００ｍｇ／ｍＬ以上約１，０００ｍｇ／ｍＬ以下、約５００ｍｇ／ｍＬ以上約６００ｍｇ／ｍＬ以下、約５００ｍｇ／ｍＬ以上約７００ｍｇ／ｍＬ以下、約５００ｍｇ／ｍＬ以上約８００ｍｇ／ｍＬ以下、約５００ｍｇ／ｍＬ以上約９００ｍｇ／ｍＬ以下、約５００ｍｇ／ｍＬ以上約１，０００ｍｇ／ｍＬ以下、約６００ｍｇ／ｍＬ以上約７００ｍｇ／ｍＬ以下、約６００ｍｇ／ｍＬ以上約８００ｍｇ／ｍＬ以下、約６００ｍｇ／ｍＬ以上約９００ｍｇ／ｍＬ以下、または約６００ｍｇ／ｍＬ以上約１，０００ｍｇ／ｍＬ以下であり得る。

【0144】

投与は、単回投与または累積（連続投与）であり得、当業者によって容易に決定され得る。例えば、がんの治療は、本明細書中に開示される医薬組成物の有効投与量の１回投与を含み得る。あるいは、がんの治療は、例えば、１日１回、１日２回、１日３回、数日に１回、または週に１回など、ある範囲の期間にわたって行われる医薬組成物の有効投与量の複数回投与を含み得る。投与のタイミングは、個体の症状の重症度などの要因に応じて、個体ごとに異なり得る。例えば、本明細書中に開示される医薬組成物の有効投与量を、個体に１日１回、不定期間にわたって、または個体がもはや治療を必要としなくなるまで投与することができる。当業者は、個体の状態を治療の経過を通してモニタすることができ、本明細書中に開示される医薬組成物が投与される有効量を状況に応じて調整することができることを認識するであろう。

【0145】

一実施形態では、本明細書に開示される治療用化合物は、がんに罹患している個体のがん細胞の数または腫瘍サイズを、同じ治療を受けていない患者と比較して、例えば少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％軽減させることができる。

【0146】

別の実施形態では、本明細書に開示される治療用化合物は、がんに罹患している個体のがん細胞の数または腫瘍サイズを、同じ治療を受けていない患者と比較して、例えば約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％軽減させることができる。

【0147】

一実施形態では、本明細書に開示される治療用化合物は、がんに罹患している個体のがん細胞の数または腫瘍サイズを、同じ治療を受けていない患者と比較して、例えば１０％以下、１５％以下、２０％以下、２５％以下、３０％以下、３５％以下、４０％以下、４５％以下、５０％以下、５５％以下、６０％以下、６５％以下、７０％以下、７５％以下、８０％以下、８５％以下、９０％以下、または９５％以下軽減させることができる。この実施形態の他の態様では、治療用化合物は、がんに罹患している個体のがん細胞の数または腫瘍サイズを、同じ治療を受けていない患者と比較して、例えば、約１０％以上約１００％以下、約２０％以上約１００％以下、約３０％以上約１００％以下、約４０％以上約１００％以下、約５０％以上約１００％以下、約６０％以上約１００％以下、約７０％以上約１００％以下、約８０％以上約１００％以下、約１０％以上約９０％以下、約２０％以上約９０％以下、約３０％以上約９０％以下、約４０％以上約９０％以下、約５０％以上約９０％以下、約６０％以上約９０％以下、約７０％以上約９０％以下、約１０％以上約８０％以下、約２０％以上約８０％以下、約３０％以上約８０％以下、約４０％以上約８０％以下、約５０％以上約８０％、または約６０％以上約８０％以下、約１０％以上約７０％以下、約２０％以上約７０％以下、約３０％以上約７０％以下、約４０％以上約７０％、または約５０％以上約７０％以下軽減することができる。

【0148】

さらなる実施形態では、治療用化合物およびその誘導体の半減期は、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月またはそれ以上である。

【0149】

一実施形態では、治療用化合物の投与期間は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月間、またはそれ以上である。さらなる実施形態では、投与を停止する期間は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月間またはそれ以上である。

【0150】

この実施形態の様々な態様において、本明細書中に開示される治療用化合物の治療有効量は、個体におけるがん細胞集団および／または腫瘍細胞サイズを、例えば、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％低下させるか、または維持する。

【0151】

この実施形態の他の態様において、本明細書中に開示される治療用化合物の治療有効量は、個体におけるがん細胞集団および／または腫瘍細胞サイズを、例えば、最大で１０％、最大で１５％、最大で２０％、最大で２５％、最大で３０％、最大で３５％、最大で４０％、最大で４５％、最大で５０％、最大で５５％、最大で６０％、最大で６５％、最大で７０％、最大で７５％、最大で８０％、最大で８５％、最大で９０％、最大で９５％、または最大で１００％減少させるか、または維持する。

【0152】

この実施形態の他の態様では、本明細書に開示される治療用化合物の治療有効量は、個体におけるがん細胞集団および／または腫瘍細胞サイズを、例えば、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％減少させるかまたは維持する。

【0153】

この実施形態のさらに他の態様では、本明細書に開示される治療用化合物の治療有効量は、個体におけるがん細胞集団および／または腫瘍細胞サイズを、例えば、約１０％以上約１００％以下、約１０％以上約９０％以下、約１０％以上約８０％以下、約１０％以上約７０％以下、約１０％以上約６０％以下、約１０％以上約５０％以下、約１０％以上約４０％以下、約２０％以上約１００％以下、約２０％以上約９０％以下、約２０％以上約８０％以下、約２０％以上約２０％以下、約２０％以上約６０％以下、約２０％以上約５０％以下、約２０％以上約４０％以下、約３０％以上約１００％以下、約３０％以上約９０％以下、約３０％以上約８０％以下、約３０％以上約７０％以下、約３０％以上約６０％以下、または約３０％以上約５０％以下減少させるかまたは維持する。

【0154】

医薬組成物または治療用化合物は個体に投与される。個体は、通例は人間であるが、家畜化されているか否かにかかわらず、イヌ、ネコ、鳥類、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、爬虫類および他の動物を含むがこれらに限定されない動物であり得る。典型的には、治療の候補である任意の個体は、がんが良性であろうと悪性であろうと、腫瘍であろうと、固形であろうと、そうでなければ、腫瘍または何らかの他の形態のがんに位置しないがんコール（ｃａｌｌ）を有する候補である。がんの最も一般的なタイプには、膀胱がん、乳がん、結腸および直腸がん、子宮内膜がん、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）がん、腎（ｒｅｎａｌ）がん、白血病、肺がん、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、胃がんおよび甲状腺がんが含まれるが、これらに限定されない。術前評価には、通例、日常的な病歴および診察に加えて、治療に関連するすべてのリスクおよび利益を開示する徹底的なインフォームドコンセントが含まれる。

【0155】

一実施形態において、医薬組成物または治療用化合物は、肉腫を治療するために投与される。一実施形態では、肉腫は、血管肉腫、軟骨肉腫、隆起性皮膚線維肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上皮様肉腫、ユーイング肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、粘液線維肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、軟部組織肉腫、充実性線維腫瘍、滑膜肉腫および未分化多形性肉腫の１つまたは複数である。別の実施形態では、治療される肉腫は子宮肉腫である。さらなる実施形態では、医薬組成物または治療用化合物は子宮がんを治療するために投与される。子宮がんは、子宮内膜がんまたは子宮肉腫のいずれかである。

【0156】

一態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、がんに関連する障害の症状を軽減する。この実施形態の様々な態様において、本明細書中に開示される医薬組成物は、がんに伴う障害の症状を、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％軽減する。この実施形態の他の態様において、本明細書中に開示される医薬組成物は、がんに伴う障害の症候を、例えば、約１０％以上約１００％以下、約２０％以上約１００％以下、約３０％以上約１００％以下、約４０％以上約１００％以下、約５０％以上約１００％以下、約６０％以上約１００％以下、約７０％以上約１００％以下、約８０％以上約１００％以下、約１０％以上約９０％以下、約２０％以上約９０％以下、約３０％以上約９０％以下、約４０％以上約９０％以下、約５０％以上約９０％以下、約６０％以上約９０％以下、約７０％以上約９０％以下、約１０％以上約８０％以下、約２０％以上約８０％以下、約３０％以上約８０％以下、約４０％以上約８０％以下、約５０％以上約８０％、または約６０％以上約８０％以下、約１０％以上約７０％以下、約２０％以上約７０％以下、約３０％以上約７０％以下、約４０％以上約７０％以下、または約５０％以上約７０％以下軽減する。

【0157】

別の態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、所与の期間にわたって罹患したがんに関連する障害の症状の頻度を減少させる。この実施形態の様々な態様において、本明細書中に開示される医薬組成物は、所与の期間にわたって罹患したがんに伴う障害の症候の頻度を、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる。この実施形態の他の態様において、本明細書中に開示される医薬組成物は、所与の期間にわたって罹患したがんに関連する障害の症候の頻度を、例えば、約１０％以上約１００％以下、約２０％以上約１００％以下、約３０％以上約１００％以下、約４０％以上約１００％以下、約５０％以上約１００％以下、約６０％以上約１００％以下、約７０％以上約１００％以下、約８０％以上約１００％以下、約１０％以上約９０％以下、約２０％以上約９０％以下、約３０％以上約９０％以下、約４０％以上約９０％以下、約５０％以上約９０％以下、約６０％以上約９０％以下、約７０％以上約９０％以下、約１０％以上約８０％以下、約２０％以上約８０％以下、約３０％以上約８０％以下、約４０％以上約８０％以下、約５０％以上約８０％以下、約６０％以上約８０％以下、約１０％以上約７０％以下、約２０％以上約７０％以下、約３０％以上約７０％以下、約４０％以上約７０％以下、または約５０％以上約７０％以下減少させる。

【0158】

本明細書の治療方法は、治療用化合物を薬学的有効量含む医薬組成物を投与するステップを含み得る。１日当たりの総量は、医師の適切な医学的判断によって決定され、１回または複数回投与されることになる。特定の患者に対する具体的な治療有効投与量レベルは、医学分野で周知の様々な要因、例えば、達成される応答の種類および程度、他の薬剤が併用されるか併用されないかによる医薬組成物、患者の年齢、体重、健康状態、性別および食事、投与の時間および経路、医薬組成物の分泌速度、治療期間、本明細書に開示される医薬組成物と組み合わせてまたは同時に使用される他の薬物、ならびに医学分野で周知の同様の要因等に応じて変化し得る。

【0159】

さらに別の態様では、本明細書は、がん、神経変性または感染症の未然防止または治療のための薬物の調製における治療用化合物およびそれを含む医薬組成物の使用を提供する。

【0160】

一実施形態では、医薬組成物の投与量は、毎日、週に２回、毎週、隔週または毎月投与され得る。治療期間は、１週間、２週間、１ヶ月、２ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、８ヶ月、１年、またはそれ以上であり得る。初期投与量は、持続投与量よりも多くてもよい。

【0161】

一実施形態では、投与量は、毎週の投与量が、０．０１ｍｇ／ｋｇ以上、０．２５ｍｇ／ｋｇ以上、０．３ｍｇ／ｋｇ以上、０．５ｍｇ／ｋｇ以上、０．７５ｍｇ／ｋｇ以上、１ｍｇ／ｋｇ以上、２ｍｇ／ｋｇ以上、３ｍｇ／ｋｇ以上、４ｍｇ／ｋｇ以上、５ｍｇ／ｋｇ以上、６ｍｇ／ｋｇ以上、７ｍｇ／ｋｇ以上、８ｍｇ／ｋｇ以上、９ｍｇ／ｋｇ以上、１０ｍｇ／ｋｇ以上、１５ｍｇ／ｋｇ以上、２０ｍｇ／ｋｇ以上、２５ｍｇ／ｋｇ以上、または３０ｍｇ／ｋｇ以上の範囲にわたる。

【0162】

一実施形態では、毎週の投与量は、１．５ｍｇ／ｋｇ以下、２ｍｇ／ｋｇ以下、２．５ｍｇ／ｋｇ以下、３ｍｇ／ｋｇ以下、４ｍｇ／ｋｇ以下、５ｍｇ／ｋｇ以下、６ｍｇ／ｋｇ以下、７ｍｇ／ｋｇ以下、８ｍｇ／ｋｇ以下、９ｍｇ／ｋｇ以下、１０ｍｇ／ｋｇ以下、１５ｍｇ／ｋｇ以下、２０ｍｇ／ｋｇ以下、２５ｍｇ／ｋｇ以下、または３０ｍｇ／ｋｇ以下であり得る。特定の態様では、毎週の投与量は、５ｍｇ／ｋｇ以上２０ｍｇ／ｋｇ以下の範囲であり得る。代替の態様では、毎週の投与量は、１０ｍｇ／ｋｇ以上１５ｍｇ／ｋｇ以下の範囲であり得る。

【0163】

本明細書はまた、対象に投与するための医薬組成物を提供する。本明細書に開示される医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤をさらに含み得る。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、組成物が有害な副作用なしに治療効果を達成するのに十分であり、疾患の種類、患者の年齢、体重、健康状態、性別、および薬物感受性、投与経路、投与様式、投与頻度、治療期間、本明細書に開示される組成物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物、ならびに医学で公知の他の要因に応じて容易に決定され得ることを意味する。

【0164】

本明細書に開示される治療用化合物を含む医薬組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含み得る。経口投与の場合、担体としては、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定剤、懸濁化剤、着色剤および香味料を挙げ得るが、これらに限定されない。注射製剤の場合、担体は、緩衝剤、保存剤、鎮痛剤、可溶化剤、等張剤および安定剤を含み得る。局所投与のための調製物の場合、担体は、基剤、賦形剤、潤滑剤および保存剤を含み得る。

【0165】

開示される医薬組成物は、上述の薬学的に許容される担体と組み合わせて様々な剤形に製剤化され得る。例えば、経口投与の場合、医薬組成物は、錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤またはウエハー剤に製剤化され得る。注射製剤の場合、医薬組成物は、単一剤形としてのアンプルまたは複数回投与容器に製剤化され得る。医薬組成物はまた、液剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤および長時間作用型製剤に製剤化され得る。

【0166】

一方、医薬製剤に適した担体、賦形剤、希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、鉱油等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。さらに、医薬製剤は、充填剤、抗凝固剤、潤滑剤、保湿剤、香味料、および防腐剤をさらに含んでもよい。

【0167】

さらに、本明細書に開示される医薬組成物は、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、内用液、乳剤、シロップ剤、滅菌水溶液、非水溶媒、凍結乾燥製剤および坐剤からなる群から選択される任意の製剤を有し得る。

【0168】

医薬組成物は、患者の身体に適した単一剤形に製剤化されてもよく、好ましくは、経口または非経口経路、例えば、皮膚、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、髄内、脳室内、肺、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、結腸内、局所、舌下、膣または直腸投与などによって投与されるように、製薬分野における一般的な方法に従ってペプチド模倣薬に有用な製剤に製剤化されるが、これらに限定されない。

【0169】

組成物は、様々な薬学的に許容される担体、例えば、生理食塩水または有機溶媒などと調合することによって使用することができる。安定性または吸収性を高めるために、炭水化物、例えば、グルコース、スクロースもしくはデキストラン、酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸もしくはグルタチオン、キレート剤、低分子量タンパク質または他の安定剤を使用することができる。

【0170】

本明細書に開示される医薬組成物の投与量および投与頻度は、治療される疾患、投与経路、患者の年齢、性別、体重、および疾患重症度などの様々な要因と共に、有効成分の種類によって決定される。

【0171】

本明細書に開示される医薬組成物の総有効投与量は、単回投与量で患者に投与されてもよく、または分割治療プロトコルに従って複数回投与量で長期間投与されてもよい。本明細書に開示される医薬組成物において、有効成分の含有量は、疾患重症度に応じて変化し得る。好ましくは、本明細書中に開示されるペプチド模倣薬の１日当たりの総投与量は、患者の体重１ｋｇ当たり約０．０００１μｇ以上５００ｍｇ以下であり得る。ただし、ペプチド模倣薬の有効投与量は、医薬組成物の投与経路や治療頻度の他、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患重症度、食事、分泌速度等の様々な因子を考慮して決定される。これを考慮して、当業者は、本明細書に開示される医薬組成物の特定の使用に適した有効投与量を容易に決定することができる。本明細書に開示される医薬組成物は、好適な効果を奏する限り、製剤、投与経路および投与形態に特に限定されない。

【0172】

さらに、医薬組成物は、単独で、または予防有効性もしくは治療有効性を示す活性薬剤と共にもしくは活性薬剤内で他の医薬製剤と組み合わせて、または他の医薬製剤と同時投与され得る。

【0173】

さらに別の態様では、本明細書は、がん、感染症または神経変性疾患を未然防止または治療する方法であって、治療用化合物またはそれを含む医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法を提供する。

【0174】

本明細書で提供される教示および指針を考慮すると、当業者は、本明細書に記載の製剤が、例示されたものを含む多くの種類のペプチド模倣薬および他の治療用化合物、ならびに当技術分野で公知の他のものに等しく適用可能であり得ることを理解するであろう。本明細書で提供される教示および指針を考慮すると、当業者はまた、例えば、１種以上の賦形剤、界面活性剤および／または任意選択成分の種類もしくは量の選択が、製剤化される生物製剤との化学的混和性および機能的適合性、ならびに／または、投与様式や当技術分野で周知の他の化学的、機能的、生理学的および／もしくは医学的要因に基づいて行われ得ることを理解するであろう。例えば、非還元糖は、ポリペプチド生物製剤と共に使用される場合、還元糖に比べて好ましい賦形剤特性を示す。したがって、例示的な製剤は、様々なペプチド模倣薬を参照して本明細書でさらに例示される。しかしながら、ポリペプチド生物製剤に適用される適用性、化学的および物理的特性、考慮事項および方法論の範囲は、ポリペプチド生物製剤以外の生物製剤にも同様に適用可能であり得る。

【0175】

様々な実施形態では、医薬組成物は、治療用化合物（例えば、本明細書に記載のウイルス、タンパク質、抗体、ペプチドなど）の組合せを医薬組成物中に含むことができるが、これらに限定されない。例えば、本明細書に記載の医薬組成物は、疾患を含むがこれに限定されない１つまたは複数の状態を治療するための単一の治療用化合物、例えばペプチド模倣薬を含むことができる。本明細書に記載の医薬組成物はまた、一実施形態では、限定されないが、単一または複数の状態に対する２種以上の異なる治療用化合物を含むことができる。製剤における複数の治療用化合物の使用は、例えば、同一または異なる適応症を対象とすることができる。同様に、別の実施形態では、複数の治療用化合物を製剤中で使用して、例えば、病理学的状態および一次治療によって引き起こされる１つ以上の副作用の両方を治療することができる。さらなる実施形態では、例えば、同時治療および病理学的状態の進行の監視を含む異なる医療目的を達成するために、本明細書に記載の医薬組成物に複数の治療用化合物を含めることもできるが、これらに限定されない。さらなる実施形態では、本明細書に例示されるものなどの複数の同時治療、ならびに当技術分野で周知の他の組合せが患者のコンプライアンスに特に有用である。この理由は、提案される治療および／または診断の一部もしくはすべてに対して単一の医薬組成物で十分であり得るためである。当業者であれば、広範囲の併用療法のために混合することができる治療用化合物を知っている。同様に、様々な実施形態において、第１の治療用化合物は、第２の治療用化合物またはさらなる治療用化合物および１種以上の治療用化合物と小分子もしくは抗体医薬等の１種以上の他の治療用化合物との組合せと共に使用することができる。したがって、様々な実施形態において、１種、２種、３種、４種、５種または６種以上の様々な治療用化合物、ならびに１種以上の他の治療用化合物と組み合わせた１種以上の治療用化合物を含有する製剤が提供される。

【0176】

様々な実施形態では、医薬組成物は、当技術分野で公知の１種以上の保存剤および／または添加剤を含むことができる。同様に、医薬組成物は、限定されないが、様々な既知の送達製剤のいずれかにさらに製剤化することができる。例えば、一実施形態では、医薬組成物は、界面活性剤、アジュバント、生分解性ポリマー、ヒドロゲルなどを含むことができ、そのような任意選択成分、それらの化学的および機能的特性は当技術分野で公知である。同様に、投与後の生物活性剤の急速放出、持効性放出または遅延放出を容易にする医薬組成物が当技術分野で公知である。記載された製剤は、当技術分野で公知のこれらまたは他の製剤成分を含むように製造することができる。

【0177】

したがって、医薬組成物は、単回投与量として、または経時的に２回以上の投与量（所望の分子を同じ量で含有してもしなくてもよい）として、または埋め込みデバイスもしくはカテーテルを介した連続注入として投与することができる。適切な投与量のさらなる改良は、当業者によって日常的に行われ、当業者によって日常的に行われる作業の範囲内である。適切な投与量は、適切な用量反応関係データの使用によって確認され得る。様々な実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中の治療用化合物は、限定されないが、長期間にわたって、例えば、慢性疾患のための長期投与で患者に投与することができる。組成物は、固体、半固体またはエアロゾルであり得、医薬組成物は、錠剤、ゲルタブ、トローチ剤、経口溶解ストリップ、カプセル、シロップ、経口懸濁液、乳剤、顆粒剤、スプリンクル製剤または丸薬として製剤化される。

【0178】

一実施形態では、経口送達製剤、直腸送達製剤、膣送達製剤、非経口送達製剤、肺送達製剤、舌下送達製剤、および／または、鼻腔内送達製剤の場合、錠剤は、必要に応じて１つ以上の補助成分または添加剤と共に、圧縮または成型によって製造され得る。一実施形態では、圧縮錠剤は、粉末または顆粒などの自由流動形態の治療用化合物を、必要に応じて、結合剤（例えば、限定されないが、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、限定されないが、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）および／または界面活性剤もしくは分散剤と混合し、例えば、適切な打錠機で圧縮することによって調製される。

【0179】

一実施形態では、成型錠剤は、例えば、限定されないが、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を適切な打錠機で成型することによって製造される。一実施形態では、錠剤は、必要に応じてコーティングまたは割線が付けられてもよく、有効成分の徐放または制御放出を可能にするために、例えば、限定されないが、様々な割合のヒドロキシプロピルメチルセルロースを使用して所望の放出プロファイルをもたらすように製剤化されてもよい。一実施形態では、錠剤は、必要に応じてコーティング、限定されないが、例えば、薄膜、糖衣、または胃以外の腸の部分における放出をもたらすための腸溶性コーティングを備えていてもよい。一実施形態では、錠剤およびカプセルの製造のためのプロセス、機器、および委託製造業者は、当技術分野で周知である。

【0180】

一実施形態では、カプセル医薬組成物は、限定されないが、ゼラチンカプセルまたは植物性カプセル、例えばヒドロキシメチルプロピルセルロース（ＨＭＰＣ）から作製されたもの等の硬質または軟質カプセルのいずれかを利用することができる。一実施形態では、カプセルの種類はゼラチンカプセルである。一実施形態では、カプセルは、限定されないが、例えば、Ｍｉｒａｎｄａ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社などの商業的供給業者から入手可能なカプセル充填機を使用して充填してもよく、または、Ｆ．Ｐｏｄｃｚｅｃｋ ａｎｄ Ｂ．Ｊｏｎｅｓ「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃａｐｕｌｅｓ」（第２追補版）２００４に詳細に記載されているような業界で周知のカプセル製造技術を利用して充填してもよい。一実施形態では、カプセル医薬組成物は、限定されないが、Ｐｕｒｄｕｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＰａｒｋにあるＣｈａｏ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ＆Ｃｏｎｔｒａｃｔ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ社などの委託製造センターを利用して調製することができる。

【0181】

投与のための包装および器具は、様々な考慮事項、例えば、限定するものではないが、投与される物質の容積、貯蔵条件、熟練した医療従事者が投与するか否かまたは患者のセルフコンプライアンス、投与レジメン、地政学的環境（例えば、発展途上国の極端な温度条件への曝露）および他の実際的な考慮事項により決定することができる。

【0182】

注射装置には、ペンインジェクタ、自動注射器、安全シリンジ、注入ポンプ、輸液ポンプ、ガラス製のプレフィルドシリンジ、プラスチック製のプレフィルドシリンジ、および無針注射シリンジがあり、液体を予め充填してもよく、または例えば凍結乾燥材料と共に使用するために２室型であってもよい。そのような使用のためのシリンジの例は、Ｌｙｏ－Ｊｅｃｔ（商標）であり、これはＶｅｔｔｅｒ ＧｍｂＨ（ドイツ、ラーフェンスブルク郡）から入手可能な２室型プレフィルドリオシリンジである。別の例は、ＬｙｏＴｉｐ，Ｉｎｃ．社（アメリカ合衆国カリフォルニア州カマリロ）から入手可能なＬｙｏＴｉｐであり、これは凍結乾燥製剤を簡便に送達するために設計されたプレフィルドシリンジである。注射による投与は、限定されないが、適宜、静脈内、筋肉内、腹腔内または皮下とすることができる。非注射経路による投与は、限定されないが、適宜、経鼻、経口、経眼、経皮または経肺であり得る。

【0183】

特定の実施形態では、キットは、本明細書に記載の１種以上の医薬組成物を投与するための単室シリンジまたは多室シリンジ（例えば、液体シリンジおよびリオシリンジ）を１本以上含むことができるが、これらに限定されない。様々な実施形態では、キットは非経口、皮下、筋肉内または静脈内投与用の医薬組成物を、それが部分真空下でバイアルに密封され注射器に装填されて対象に投与する準備ができた形態で含むことができる。これに関して、医薬組成物は、部分真空下でその中に組み入れることができる。これらの実施形態およびその他のすべてにおいて、キットは、前述のいずれかによる１本以上のバイアルを含むことができ、各バイアルは、対象への投与のための単回の単位投与量を含む。

【0184】

キットは、本明細書のように組み入れられた凍結乾燥物であって、再構成されると、それに従って医薬組成物を提供する凍結乾燥物を含むことができる。様々な実施形態において、キットは、凍結乾燥物と、凍結乾燥物を再構成するための滅菌希釈剤とを含むことができる。

【0185】

また、本明細書には、治療を必要とする対象を治療する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む方法も記載される。医薬組成物製剤の治療有効量または投与量は、対象の疾患または状態および実際の臨床状況に依存する。

【0186】

一実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、任意の適切な経路、特に（皮下、筋肉内、静脈内および皮内等の）非経口投与によって投与することができる。好ましい経路は、レシピエントの状態および年齢、ならびに治療される疾患によって変わることも理解されよう。最も有効な投与手段および投与量を決定する方法は、当業者に公知であり、限定されないが、治療に使用される医薬組成物、治療の目的、および治療される対象によって異なる。単回投与または複数回投与を行うことができ、限定されないが、投与量レベルおよび投薬パターンは、治療を行う医師が選択する。適切な投与量の医薬組成物および薬剤を投与する方法は、当技術分野で公知である。

【0187】

本明細書に記載の医薬組成物は、医薬品の製造において、ならびに従来の手順による投与によるヒトおよび他の動物の治療に使用することができる。

【0188】

また、本明細書には、アミノ酸の組合せを賦形剤として使用して、適切な医薬組成物を開発するためのコンビナトリアル手法も提供されている。これらの方法は、安定な液体または凍結乾燥医薬組成物、そして特に１種以上の治療用化合物を含む医薬組成物を開発するのに有効である。

【0189】

本明細書に記載の実施形態による組成物は、所望の特性、例えば、所望の溶解性、粘度、シリンジ通過性および安定性を有する。本明細書に記載の実施形態による凍結乾燥物は、所望の回収、安定性および再構成などの所望の特性も有する。

【0190】

一実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約３．５以上、約３．７５以上、約４以上、約４．２５以上、約４．５以上、約４．７５以上、約５以上、約５．２５以上、約５．５以上、約５．７５以上、約６以上、約６．２５以上、約６．５以上、約６．７５以上、約７以上、約７．２５以上、約７．５以上、約７．７５以上、約８以上、約８．２５以上、約８．５以上、約８．７５以上、または約９以上である。

【0191】

一実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約３以上約９以下、約４以上約１９以下、約５以上約９以下、約６以上約８以下、約６以上約７以下、約６以上約９以下、約５以上約６以下、約５以上約７以下、約５以上約８以下、約４以上約９以下、約４以上約８以下、約４以上約７以下、約４以上約６以下、約４以上約５以下、約３以上約８以下、約３以上約７以下、約３以上約６以下、約３以上約５以下、約３以上約４以下、約７以上約８以下、約７以上約９以下、約７以上約１０以下である。

【0192】

実施例
本明細書に記載の組成物および方法は、純粋に例示的であることを意図した以下の実施例を参照することによってさらに理解されるであろう。本明細書に記載される組成物および方法は、単一の態様の例示としてのみ意図される例示された実施形態による範囲に限定されない。機能的に等価な任意の方法は、本発明の範囲内である。本明細書に明示的に記載されたものに加えて、本明細書に記載された組成物および方法の様々な変更は、前述の説明および添付の図面から当業者に明らかになるであろう。このような変更は、本発明の範囲内に含まれる。
実施例１
式（Ｉ）の化合物による処理は、発がん性ＫＲＡＳを発現する膵臓腫瘍細胞を選択的に死滅させ、正常細胞では影響は無視できる。

【0193】

図１に示される結果は、式（Ｉ）の化合物がＰＩ３Ｋおよびｃ－ＲＡＦ１とＫＲＡＳとの相互作用を減少させたことを示している。図２に示される結果は、式（Ｉ）の化合物がすべての腫瘍細胞株において約２０μＭのＩＣ_５０で細胞生存率を低下させることができたが、これらの濃度で影響を受けた正常細胞は５％未満のみであったことを示している。したがって、式（Ｉ）の化合物は膵臓腫瘍細胞を減少させるが、正常細胞を減少させない。
式（Ｉ）の化合物およびその類似化合物の一般的調製方法

【0194】

式（Ｉ）の化合物およびそのいくつかの類似化合物（後者は本明細書に開示されていない）を、Ｆｍｏｃ／ｔ－Ｂｕ戦略に従って固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によって調製した。合成は、それぞれ２－クロロトリチル樹脂を固体ポリマー支持体として使用して１００μモルスケールで行った。合成は、底部に多孔性ディスクを装着したポリプロピレン製シリンジ中で手作業にて行った。ペプチド模倣薬の鎖を成長中に、試薬の適切な混合を確実にするために間欠的な撹拌を手作業で行った。溶媒および可溶性試薬を吸引によって除去した。アミノ酸カップリング反応進行度を、カイザーテスト（第一級アミン）（Ｅ．Ｋａｉｓｅｒ ｅｔ ａｌ．；「Ｃｏｌｏｒ ｔｅｓｔ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｒｅｅ ｔｅｒｍｉｎａｌ ａｍｉｎｏ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ」；Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９７０；第３４巻；５９５～５９８ページを参照）またはクロラニルテスト（第二級アミン）（Ｔ．Ｖｏｊｋｏｖｓｋｙ；「Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ａｍｉｎｅｓ ｏｎ ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ」；Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．１９９５；第８巻；２３６～２３７ページを参照）のいずれかを用いてモニタした。カップリングが完全に達成されなかった場合、標準的なカップリング条件を使用して再カップリング工程を実施した。化合物骨格の選択的Ｎ－アルキル化は、Ｓ．Ｃ．Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（「Ｓｉｔｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｎ－ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎ ｓｏｌｉｄ ｓｕｐｐｏｒｔ」；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９７；第１１９巻；２３０１～２３０２ページを参照）によって記載された方法を使用して行った。

【0195】

２－クロロトリチルクロリド樹脂を、ポリエチレン多孔性ディスクを装着したシリンジ（反応容器）に入れた。樹脂をジクロロメタン（ＤＣＭ）およびジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄することによって膨潤させた。

【0196】

樹脂の膨潤および調製後、ＤＭＦ中のＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）をカップリング剤として使用し、合成されるペプチド模倣薬の第１のＦｍｏｃ保護アミノ酸の保護形態をそのカルボン酸部分を介して樹脂に結合させた。カップリングを実施するために、０．６当量の保護アミノ酸を数滴のＤＣＭと混合し、樹脂に添加した。その後、５当量のＤＩＥＡを２回に分けて添加した。最初に１／３部分を添加し、１０分後に残りの２／３を添加した。反応を５０分間進行させた。その後、反応混合物にメタノールを（ポリマー支持体１ｇ当たり１ｍＬ）注ぐことによって、ポリマー支持体の未反応の活性点を封鎖した。１０分後、溶媒および未反応試薬を吸引除去した。次に、２０％ピペリジンＤＭＦ溶液で樹脂を処理することによってＦｍｏｃ基を除去した。洗液を回収し、ＵＶ分光法によって測定して、ポリマー支持体への第１のアミノ酸の担持量を定量した。

【0197】

ペプチド模倣薬の次のアミノ酸を、４当量のＦｍｏｃ保護アミノ酸、４当量の２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、８当量のＤＩＥＡ、および数滴のＤＭＦを使用してカップリングさせ、これをポリマー支持体が入った反応容器に注いだ。この混合物を７５分間反応させた。カイザーテストまたはクロラニルテストを用いてカップリング反応進行度をモニタした。カップリングが完了していない場合、同じ条件を用いて反応を繰り返した。カップリング工程中に、ＤＭＦ（５回×１分）およびＤＣＭ（５回×１分）による洗浄を行った。カップリングが完了したら、ＤＭＦ中にピペリジンを２０％含む混合物（樹脂１ｇ当たり４ｍＬ、２回×１分および１回×１０分）を用いてＦｍｏｃ基を除去した。Ｆｍｏｃ基の除去はカイザーテストまたはクロラニルテストを用いてモニタした。このテストはポリマー支持体をＤＭＦ（５回×１分）およびＤＣＭ（５回×１分）で洗浄した後に行った。次のアミノ酸を同じ反応条件を使用してカップリングさせ、標的化合物の配列が完了するまで行った。

【0198】

アミノ酸のＮ－アルキル化を樹脂上で行った。アミノ酸のＮ－メチル化のために使用した樹脂上のプロセスは、以下の３工程の方法論であった（これらの工程は、ポリマー支持体上に固定されたペプチド配列上の最後にカップリングされたアミノ酸のＦｍｏｃ除去後に実施した）：
ａ）ｏ－Ｎ－ブロモスクシンイミド（ｏ－ＮＢＳ）を用いたアミノ基の保護および活性化。
ｂ）ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エンおよび硫酸ジメチルを用いた脱プロトン化およびＮ－メチル化。
ｃ）β－メルカプトエタノールおよび１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エンを用いたｏ－ＮＢＳ除去。

【0199】

ペプチド配列が完了したら、得られたペプチド（依然としてポリマー支持体上に固定されたままである）をＤＣＭ（５回×１分）で洗浄し、吸引によって乾燥させた。次いで、５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）のＤＣＭ溶液を用いて、樹脂からペプチドを分離した。処理液およびＤＣＭ洗液（５回×１分）を回収し合わせて、樹脂から分離したペプチドを得た。次いで、乾くまで、回収した溶媒を真空下で蒸発させた。アセトニトリル（ＡＣＮ）：Ｈ_２Ｏ（５０：５０）溶液を用いて、粗ペプチドを希釈し、凍結乾燥した。

【0200】

次に、ＤＣＭと、ピロリジンと、１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）と、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ・Ｃｌ）との混合物の可能な限り最小体積中にペプチド粉末を希釈することによって、Ｃ末端封鎖を付加した。Ｃ末端封鎖が完了したら、溶媒を真空下で除去し、次いで、ＡＣＮ：Ｈ_２Ｏ（５０：５０）溶液で再び希釈し、凍結乾燥した。

【0201】

側鎖保護基を、（ＴＦＡが９５％、トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）が２．５％、Ｈ_２Ｏが２．５％）の混合物を１．５時間適用することによって除去した。すべての濾液をプールし、ＴＦＡをＮ_２流下で蒸発させた。その後、粗生成物をＡＣＮ：Ｈ_２Ｏ（５０：５０）混合物で希釈し、凍結乾燥した。最後に、半分取ＲＰ－ＨＰＬＣを用いて化合物を精製した。目的の画分を回収し、凍結乾燥して、所望の化合物を得た。
式（Ｉ）の化合物の具体的な調製

【0202】

支持体およびＦｍｏｃ保護アミノ酸：２－クロロトリチルクロリド樹脂をポリマー支持体として使用した。使用したアミノ酸は、Ｆｍｏｃ－Ｂｉｐ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｎｍｅ－β－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、およびＦｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨであった。

【0203】

第１のアミノ酸の固定：２－クロロトリチルクロリド樹脂を最初に洗浄（ＤＣＭで５回×１分、ＤＭＦで５回×１分およびＤＭＣで１回×５分）してから、第１のアミノ酸を添加した。次いで、０．６当量のアミノ酸を数滴のＤＣＭと混合し、樹脂に添加した。その後、５当量のＤＩＥＡを２回に分けて添加し、最初に１／３部分を１０分間反応させ、次いで、同じ工程を残りの２／３部分を用いて５０分の反応時間で繰り返した。樹脂の未反応の活性点を、メタノールを（ポリマー支持体１ｇ当たり１ｍＬ）用いて封鎖した。その後、反応混合物を吸引により除去し、ポリマー支持体をＤＭＦで洗浄した（５回×１分）。次に、２０％ピペリジンＤＭＦ溶液で樹脂を処理（樹脂１ｇ当たり４ｍＬ、２回×１分および１回×１０分）することによってＦｍｏｃ基を除去した。洗液を回収し、ＵＶ分光法によって測定して、第１のアミノ酸の担持能力を決定した。

【0204】

ペプチド模倣薬の鎖の伸長：第１のアミノ酸のポリマー支持体へのカップリング後、（４当量のＦｍｏｃ保護アミノ酸と、４当量のＴＢＴＵと、８当量のＤＩＥＡと、数滴のＤＭＦとの）事前活性化（３分）混合物を注ぐことによってペプチド模倣鎖を伸長させ、ポリマー支持体を入れた反応容器に注いだ。混合物を断続的に手動で撹拌しながら７５分間反応させた。その後、試薬および溶媒を吸引によって除去し、ポリマー支持体をＤＭＦ（５回×１分）およびＤＣＭ（５回×１分）で洗浄した。カップリングの伸長は、カイザーテスト（第一級アミン上のカップリング）またはクロラニルテスト（第二級アミン上のカップリング）によってモニタした。反応が完了しなかった場合、同じカップリング条件（４当量のＦｍｏｃ保護アミノ酸、４当量のＴＢＴＵおよび８当量のＤＩＥＡおよび数滴のＤＭＦ、７５分間の反応）を用いてカップリング工程を繰り返した。カップリングの完全性を評価した後、２０％ピペリジンＤＭＦ溶液の処理（樹脂１ｇ当たり４ｍＬ、２回×１分および１回×１０分）でＦｍｏｃ基を除去した。Ｆｍｏｃ基の除去をカイザーテストまたはクロラニルテストを用いてモニタした。このテストはポリマー支持体をＤＭＦ（５回×１分）およびＤＣＭ（５回×１分）で洗浄した後に行った。次のアミノ酸を同じ反応条件を使用してカップリングさせ、標的化合物の配列が完了するまで行った。

【0205】

ジアミノプロピオン酸部分の選択的Ｎ－メチル化：選択的Ｎ－メチル化を以下のように行った。
ａ）ｏ－ＮＢＳによるアミノ基の保護および活性化：４当量のｏ－ＮＢＳ、３当量の２，３，５－コリジン、および数滴のＤＭＦを２回（３０分および２０分）。
ｂ）脱プロトン化およびＮ－アルキル化：ＤＭＦ中３当量の１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（５分）、および５分後、１０当量のジメチル硫酸塩を樹脂に添加した（１０分）。この処理を２回繰り返した。
ｃ）ｏ－ＮＢＳの除去：１０当量のβ－メルカプトエタノール、５当量の１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エンおよび数滴のＤＭＦを２回（１０分および４０分）。

【0206】

ポリマー支持体からのペプチドの分離：ペプチド－樹脂を５％ＴＦＡのＤＣＭ溶液（３回×１５分、６ｍＬ）で処理した。分離混合物およびその後のＤＣＭ洗液（５回×１分）を回収し合わせて、樹脂からの分離したペプチドを得た。次いで、乾くまで、回収した混合物から溶媒を真空下で蒸発させた。最後に、得られた粗ペプチドをＡＣＮ／Ｈ_２Ｏ（５０：５０）溶液で希釈し、凍結乾燥した。この酸性処理により、ペプチドの保護側鎖基を保持することができた。

【0207】

Ｃ末端封鎖：可能な最小体積のＤＣＭで凍結乾燥物粗生成物を希釈し、３当量のピロリジン、３当量のＨＯＡｔ、および３当量のＥＤＣ・Ｃｌを添加した。混合物を一定に撹拌しながら室温で３時間反応させた。その後、混合物をＮａＨＣＯ_３の飽和溶液、ＮＨ_４Ｃｌの飽和溶液およびＮａＣｌの飽和溶液（それぞれで３回）で洗浄した。有機層を回収し、真空下で乾燥させた。その後、これをＡＣＮ：Ｈ_２Ｏ（５０：５０）の混合物で希釈し、凍結乾燥した。

【0208】

側鎖保護基の除去：側鎖保護基は、ＴＦＡが９５％、ＴＩＳが２．５％、Ｈ_２Ｏが２．５％の酸性混合物を使用した処理（１．５時間）によって除去した。この開裂混合物は、Ｎ_２流を用いて蒸発させた。その後、粗生成物をＡＣＮ：Ｈ_２Ｏ（５０：５０）混合物で希釈し、凍結乾燥した。

【0209】

ペプチド精製：ペプチドを、半分取ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して精製した。粗生成物をＡＣＮ：Ｈ_２Ｏ（できるだけ少ない量のＡＣＮ：Ｈ_２Ｏを使用する）に溶解した。使用したカラムはＣ１８（１００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ、１００Å）であり、２０分で０～１００％Ｂの勾配を使用した（Ａ＝０．１％ＴＦＡのＨ_２Ｏ溶液、Ｂ＝０．１％ＴＦＡのＡＣＮ溶液）。流量＝１６ｍＬ／分。検出波長＝２２０ｎｍ。目的の画分を、分析用ＨＰＬＣとＨＰＬＣ／ＭＳとを組み合わせて分析し、凍結乾燥した。

【0210】

ペプチドの特性評価：ＨＰＬＣ－ＭＳを用いてペプチドの同一性を確認した。ＨＰＬＣ－ＭＳクロマトグラムは、ウォーターズＡｌｌｉａｎｃｅ２７９６セパレーションモジュールシステムにウォーターズ２９９６フォトダイオードアレイ検出器、四重極３１００質量検出器およびＳｕｎＦｉｒｅ Ｃ１８カラム（２．１×１００ｍｍ×３．５μｍ、１００Å、ウォーターズ社製）およびＭａｓｓｌｙｎｘソフトウェアを装着して記録した。流量：０．３ｍｌ／分、移動相：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）およびＡＣＮ（０．１％ギ酸）。ＵＶ検出波長：２２０ｎｍ。純度は分析用ＨＰＬＣによって定量した。ＨＰＬＣクロマトグラムは、ウォーターズＡｌｌｉａｎｃｅ２６９５セパレーションモジュールに２９９６フォトダイオードアレイ検出器（ＰＤＡ）およびＳｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８カラム（１００×４．６ｍｍ×５μｍ、１００Å、ウォーターズ社製）およびＥｍｐｏｗｅｒソフトウェアを装着して記録した。流量：１．６ｍＬ／分、移動相：Ｈ_２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）およびＡＣＮ（０．１％ＴＦＡ）。検出は２２０ｎｍで行った。
・分子式：Ｃ_４７Ｈ_５８Ｎ_６Ｏ_５
・算出質量：７８７．００ｇ／モル
・質量同定：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝７８７．４ Ｄａ
・勾配および保持時間（分）：３分で０～１００％Ｂの勾配の勾配（Ａ＝０．１％ＴＦＡのＨ２Ｏ溶液、Ｂ＝０．１％ＴＦＡのＡＣＮ溶液）、保持時間３．１分；２０分で４０～１００％Ｂの勾配の勾配（Ａ＝Ｈ_２Ｏ中０．１％ ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ中０．１％ ＴＦＡ）、保持時間１．９分。
・純度：９５％。

【0211】

細胞株および培養
ｈＴＥＲＴ－ＲＰＥ（不死化網膜色素上皮ヒト細胞）およびＨｅＬａ（類上皮子宮頸がん細胞）は両方ともＲＡＳ野生型を発現し、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手した。ＭＰａｎｃ－９６、ＨＰＡＦ－ＩＩ、ＰＡ－ＴＵ－８９０２、ＳＷ１９９０、ＰＡ－ＴＵ ８９８８ＴおよびＰＡＮＣ－１ ＰＤＡＣ細胞株（Ｃ．Ｂａｒｃｅｌｏ ｅｔ ａｌ．：「Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ｉｎｔｅｒａｃｔｓ ｗｉｔｈ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ＫＲＡＳ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｄｕｃｔａｌ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ」；Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２０１４ Ｏｃｔ．；１４７（４）：８８２－８９２．ｅ８．ｄｏｉ：１０．１０５３／ｊ．ｇａｓｔｒｏ．２０１４．０６．０４１．Ｅｐｕｂ ２０１４ Ｊｕｌ ３．ＰＭＩＤ：２４９９８２０３に記載通りに取得）はすべて、発がん性変異ＫＲＡＳＧ１２Ｖを発現している。

【0212】

ＨｅＬａおよびＰＤＡＣ細胞はダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）において、ｈＴＥＲＴ－ＲＰＥはＤＭＥＭ－ＨＡＭのＦ１２（１：１）培地中において増殖させ、両方に１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ；Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社製、イスラエル）、ペニシリン、ストレプトマイシン、および非必須アミノ酸を加えた。

【0213】

薬物治療およびＥＧＦ依存性シグナル伝達および活性化
細胞を、１０％ＦＢＳを含有する培地に２４時間播種し、それから２４時間血清飢餓にした。その後、細胞を異なる濃度の化合物と２時間インキュベートした。細胞シグナル伝達を活性化するために、ＥＧＦ（５０ｎｇ／ｍＬ；シグマ・アルドリッチ社製）による１０分間の連続処理を行った。

【0214】

細胞トランスフェクションおよびプラスミド
ＨｅＬａ細胞を、Ｃ．Ｌｏｐｅｚ－Ａｌｃａｌａら（「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｉｎ Ｋ－Ｒａｓ／ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ Ｋ－Ｒａｓ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ．」；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００８；Ａｐｒ １８；２８３（１６）：１０６２１－３１．ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ７０６２３８２００．Ｅｐｕｂ ２００８ Ｊａｎ ８．ＰＭＩＤ：１８１８２３９１）に記載通りにして得たｐＥＦ－ＨＡ－ＫＲＡＳＧ１２Ｖプラスミドを用いてトランスフェクションした。リポフェクタミン（登録商標）２０００トランスフェクション試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を、製造者の説明書に従ってトランスフェクション方法として使用した。

【0215】

ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ウエスタンブロットおよび抗体
タンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分離し、ＰＶＤＦメンブレン（イモビロン－Ｐ、ミリポア社製）上に転写した。メンブレンを室温で１時間、２０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のＴｗｅｅｎ ２０および５％ウシ血清アルブミンで構成される緩衝液とインキュベートすることによって、抗体の非特異的結合を評価した。タンパク質発現は、指定された抗体：抗ｃ－ＲＡＦ（ＢＤ形質導入６１０１５１、１：５００）；抗ホスホ－ｃ－ＲＡＦ Ｓ３３８（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃９４２７、１：５００）；抗ＰＩ３Ｋｐ１１０α（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃４２４９、１：１０００）；抗ＡＫＴ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃９２７２、１：１０００）；抗ホスホ－ＡＫＴ Ｓ４７３（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃４０６０、１：１０００）；抗ホスホ－ＡＫＴ Ｔｈｒ３０８（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃４０５６、１：１０００）；抗ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ（ＥＲＫ１／２）（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃９１０２、１：２０００）；抗ホスホ－ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ（ＥＲＫ１／２）Ｔ２０２／Ｙ２０４（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃４３７０、１：２０００）；抗ＧＡＰ１２０（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ社製 ＳＣ－６３、１：２００）；抗ＨＡ（シグマ・アルドリッチ社製Ｈ６９０８、１：１０００）；または抗α－チューブリン（シグマ・アルドリッチ社製Ｔ９０２６、１：２０００）を用い、４℃で一晩ブロットをプローブすることによって測定した。次に、メンブレンを洗浄した後、それらを対応するＨＲＰ結合二次抗体（ヤギ由来抗ウサギ抗体 バイオ・ラッド社製＃１７０－６５１５またはヤギ由来抗マウス抗体 バイオ・ラッド社製＃１７０－６５１６、１：３０００）と室温で６０分間インキュベートし、再び洗浄した。タンパク質検出を、増強された化学発光（ＥＺ－ＥＣＬ、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社製）によって行った。放出光をキャプションし、定量化した（ＣｈｅｍｉＤｏｃ、バイオ・ラッド社製）。

【0216】

ＲＡＳシグナル伝達の分析のために、細胞を６７ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ６．８）および２％のＳＤＳを含有する緩衝液中で溶解し、次いで試料を９７℃で１５分間加熱した。この後、溶解物のタンパク質濃度をローリー法を用いて定量した。１試料あたり１５μｇのタンパク質の一定分量をゲルに入れた。

【0217】

共免疫沈降法（Ｃｏ－ＩＰ）
細胞をｐＥＦ－ＨＡ－ＫＲＡＳＧ１２Ｖプラスミドを用いて２４時間トランスフェクションし、それから２４時間飢餓状態にした後、ペプチドおよびＥＧＦで処理した。次に、アガロースビーズに架橋した抗ＨＡ抗体を用いてＩＰを行った。簡単に言えば、細胞を、２０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．５、１００ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＥＤＴＡ、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、１％（ｖ／ｖ）のトリトンＸ－１００、１０％のグリセロール（ｖ／ｖ）、１ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ならびにプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤（１５０ｎＭのアプロチニン、２０μＭのロイペプチン、１ｍＭのフェニルメチルスルホニル、５ｍＭのフッ化ナトリウムおよび０．２ｍＭのオルトバナジン酸ナトリウム）で構成される緩衝液を用いて氷上で１０分間溶解した。遠心分離による清澄化の後、上清（５００μｇ～２０００μｇ）を、アガロースビーズに架橋した４０μＬ～５０μＬの抗ＨＡタグ抗体（クローンＨＡ－７、シグマ・アルドリッチ社製Ａ２０９５６）を用いて、回転させながら４℃で３時間インキュベートした。次に、１００００×ｇで４℃で２分間遠心後に得られた免疫複合体を洗浄し、対応する抗体を用いて免疫ブロット法を実施した

【0218】

細胞生存率アッセイ
１０％のＦＢＳ含有培地５０μＬ中の１万個の細胞を２４時間培養し、次いで、９６ウェルプレート（最終体積１００μＬ）の各ウェル中でさらに２４時間、薬物（最終体積５０μＬ）で処理した。ＭＴＳ生存率アッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ、プロメガ社製Ｇ３５８０）を製造業者の仕様書に従って実施した。各ウェルの吸光度を、マルチモードプレートリーダー（Ｓｐａｒｋ、テカン社製）を用いて４９０ｎｍで測定した。細胞生存率のパーセンテージは、各ウェルの吸光度を対照ウェルの平均吸光度（スチューデントのｔ検定を適用したところ、有意な偏差はなかった）で割ることによって計算した。

【0219】

実施例２
本発明者らは、ＲＡＳタンパク質の表面上のエフェクター結合部位の予備評価を行ったところ、ＲＡＳタンパク質とＲＡＳエフェクター結合部位で相互作用するタンパク質（ＲＡＳ活性化後のエフェクター）との相互作用を調節するためのペプチド模倣薬の使用の特定につながった（図３を参照のこと）。エフェクターは、ＲＡＦ、ＲＡＬおよびＰ１３Ｋを含む。これは、下記のように計算法を使用して行った。
計算ヒット識別
計算法を適用して、強力かつ透過性のペプチド模倣薬を薬物候補として得た。本発明者らのアプローチは、ペプチド模倣薬であって、ＲＡＳエフェクター結合部位に結合し、ＲＡＳがエフェクタータンパク質と相互作用する可能性を遮断し、したがってその腫瘍学的活性を低下させるペプチド模倣薬を設計することであった。

【0220】

ＲＡＳ－エフェクター結合部位の同定は、いくつかのエフェクタータンパク質（例えば、ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、Ｂｒｙ２ＲＢＤ、ＲａｌＧＤＳ、ホスホリパーゼＣ、ＮＯＲＥ１ＡおよびＲＡＦ）との複合体におけるＧＴＰアーゼ－ＲＡＳの構造比較および計算標準プロトコルを適用することで行った。

【0221】

１つの芳香族残基および３つの負に荷電した残基（すなわち、Ａｓｐ３３、Ｇｌｕ３７、Ａｓｐ３８およびＴｙｒ６４）の合計が、ＲＡＳエフェクタータンパク質とのＲＡＳ界面上に同定された。本発明者らは、実質的にすべてのエフェクタータンパク質の間で高度に保存されている特定の残基との分子間接触に関与する、ＲＡＳタンパク質表面上のいくつかの残基、すなわちＡｓｐ３３、Ｇｌｕ３７、Ａｓｐ３８およびＴｙｒ６４を同定した。本発明者らは、実質的にすべてのＲＡＳ結合部位エフェクタータンパク質との相互作用において、これらの残基が保存されていると判断した。本発明者らはまた、これらのＲＡＳ結合部位が一般に、Ａｓｐ３３とＡｓｐ３８との間（図４、表４）で高度に正電荷を帯び、これが可能性のある結合剤との相互作用を促進すると判断した。

【0222】

ＲＡＳタンパク質の結晶構造の分析およびＭＤシミュレーションの両方から得られた結果に基づいて、両方の分析によってＡｓｐ３３残基およびＡｓｐ３８残基が同定されたことから、基質結合部位としてこれらの残基を選択した。これらのデータは、その後、推定ＲＡＳ阻害剤の仮想スクリーニングにおいて、（例えば、ヒット同定工程において）リガンドとして使用されるペプチド模倣薬のライブラリの組成を適合させるために、ならびに（ヒット認識工程およびヒット最適化工程の両方において）ドッキングボックスの位置およびサイズを設定するために使用した。

【0223】

本発明者らは、天然アミノ酸および非天然アミノ酸の両方によって形成された８万を超えるトリペプチドおよびテトラペプチドの初期ライブラリを作成した。生成されたトリペプチドおよびテトラペプチドは、１ペプチドあたり少なくとも１つの正荷電残基を含有していた。ＳＭＩＮＡドッキングプログラムを用いてペプチド模倣薬のスクリーニングを行った。これは、Ｋ－ＲＡＳ ＧＴＰアーゼ結晶構造を受容体（ＰＤＢ ５Ｐ２１）として使用し、Ｋ－ＲＡＳ ＧＴＰアーゼの表面上の負に帯電したホットスポット残基の周りに結合部位を設定することによって達成された。

【0224】

材料および方法
ペプチド模倣薬の合成
すべての化合物は、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ戦略に従って固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によって合成した。合成は、１００μモルスケールで、それぞれ２－クロロトリチル樹脂を用いて（ただしＰ１．１にあっては、Ｈ－ＲｉｎｋアミドＣｈｅｍｍａｔｒｉｘを使用して）行った。合成は、底部に多孔性ディスクを装着したポリプロピレン製シリンジ中で手作業にて行った。ペプチド鎖を成長させている間は、試薬の適切な混合を確実にするために手動で断続的に撹拌した。溶媒および可溶性試薬を吸引によって除去した。４当量のＦｍｏｃ保護アミノ酸、４当量の２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルアミニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）および８当量のＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を含むジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を使用して、アミノ酸カップリング（Ｌ－、Ｄ－または非天然のいずれか）を行った（１×７５分）。反応進行度は、カイザーテスト（第一級アミン）またはクロラニルテスト（第二級アミン）のいずれかを用いてモニタした。カップリングが完全に達成されなかった場合、標準的なカップリング条件を使用して再カップリング工程を実施した。（カップリング反応が問題なく完了した後）、ＤＭＦ中にピペリジンを２０％含む混合物を使用して、Ｆｍｏｃ基をアミノ酸から除去した（２回×１分および１回×１０分）。

【0225】

化合物骨格の選択的Ｎ－アルキル化は、Ｍｉｌｌｅｒらによって記載された方法を使用して実施し、この方法は以下の３つのステップに分けられる（これらのステップは、Ｎ－アルキル化することになる、樹脂上に固定されたアミノ酸のＦｍｏｃ除去後に実施される）。

【0226】

オルト－ニトロベンゼンスルホネート（ｏ－ＮＢＳ）によるアミノ基の保護および活性化：４当量のｏ－ＮＢＳ、３当量の２，３，５－コリジンを含むＤＭＦ（１回×３０分および２回×２０分）、２）脱プロトン化およびＮ－アルキル化：３当量の１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エンを含むＤＭＦを樹脂に添加し（５分）、その後、１０当量の所望のアルキル硫酸塩を樹脂に添加する（１０分）。この処理を２回繰り返す。３）ｏ－ＮＢＳ除去：ＤＭＦ中に１０当量のβ－メルカプトエタノールと５当量の１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エンを含む混合物を用いて２回の処理（１回×１０分および１回×４０分）を行う。

【0227】

ＲＡＳ ＧＴＰアーゼタンパク質上の混合溶媒分子動力学（ＭｉｘＭＤ）シミュレーション

【0228】

ＲＡＳ ＧＴＰアーゼタンパク質（ＰＤＢコード５Ｐ２１）の結晶構造をＲＣＳＢ ＰＤＢデータベース（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ／）からダウンロードし、入力構造として使用して、５０ｎｓ長の明示的な混合溶媒分子動力学（ＭｉｘＭＤ）シミュレーションを実行した。

【0229】

第１の準備ステップでは、共結晶化ＧｐｐＮＨｐ分子をＧＴＰの元の補助因子で置き換え、そのパラメータファイルをＡＭＢＥＲパラメータデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｒｅｓｅａｒｃｈ．ｂｍｈ．ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ．ａｃ．ｕｋ／ｂｒｙｃｅ／ａｍｂｅｒ／）からダウンロードした。これにより、システム全体を適切にプロトン化し、ＴＩＰ３Ｐ水分子と適切に組み合わせたベンゼン、プロパン、エタノール、プロピオン酸およびエチルアミン有機プローブで構成される周期的立方体混合溶媒ボックスに入れた（タンパク質とボックスの縁部との間の最小距離は１０Åに設定した）。

【0230】

システムの全体的なプロトン化、溶媒和、およびパラメータ化は、ＡｍｂｅｒＴｏｏｌ１６のＬｅａｐモジュールを使用し、ＡＭＢＥＲのｆｆ１２力場を使用して行った。

【0231】

以下に詳述するように、二段階共役勾配に基づく最小化を実行した後、４段階平衡化および５０ｎｓ長のＭＤシミュレーションはＮＡＭＤシミュレーションパッケージ^５７を使用して実行した。ＳＨＡＫＥアルゴリズムおよび粒子・メッシュ・エバルト（ＰＭＤ）法を（それぞれ、水素原子へのすべての結合を抑制し、長距離クーロン相互作用を計算するために）すべてのシミュレーションに適用した。２ｆｓの時間ステップおよび１２Åの長距離相互作用のカットオフ距離も設定した。

【0232】

したがって、溶媒和系を最初に５００サイクル長の無拘束最小化ステップで緩和し、続いてさらに５０００サイクルの間、５ｋｃａｌ／（モルÅ^２）の力定数を用いて調和拘束をタンパク質の主鎖原子にのみ適用した。その後、ランジュバン動力学モデルを用いて系を０から３００Ｋまで徐々に加熱する４段階プロトコルでタンパク質を平衡化し、初期位置拘束を規則的に緩和した。したがって、１００ｐｓ長のＭＤシミュレーションを、ＮＶＴ条件（すなわち、一定の分子数（Ｎ）、体積（Ｖ）および温度（Ｔ））を使用し、２０ｋｃａｌ／（モルÅ^２）の調和ポテンシャルを用いて主鎖原子を拘束し、温度を１００から３００Ｋに上昇させて実行した。次いで、３００Ｋから６００Ｋまでの１２０ｐｓ長の加熱段階を、ＮＶＴ条件を使用し，１０ｋｃａｌ／（モルÅ^２）の調和ポテンシャルを用いて主鎖原子を拘束して実行した。次いで、ＮＶＴを使用し、１０ｋｃａｌ／（モルÅ^２）の調和ポテンシャルを用いて主鎖原子を拘束して、系を６００Ｋから３００Ｋまで１２０ｐｓ間冷却した。最後に、３００Ｋにおける１００ｐｓ長のシミュレーションを、ＮＰＴ条件（すなわち、一定の分子数（Ｎ）、圧力（Ｐ）および温度（Ｔ））を使用し、５ｋｃａｌ／（モルÅ^２）の調和ポテンシャルを用いて主鎖原子を拘束して実行した。

【0233】

平衡化後、ＮＶＴ条件で３００Ｋにおける５０ｎｓ長のシミュレーションを、主鎖原子のみに適用された０．５ｋｃａｌ／（モルÅ^２）の弱い調和拘束を使用して実行した。

【0234】

最後に、軌跡中の有機プローブの分布に基づいて、リガンド結合に対する高い傾向を有するタンパク質表面領域は、軌跡を使用して同定した。この理由は、所与の領域におけるプローブ占有の頻度はこの特定の領域に対するそれらの結合親和性に比例するはずだからである。したがって、各有機プローブのシミュレーションの最後の２５ｎｓに沿った位置は、ＡｍｂｅｒＴｏｏｌｓ１６のｃｐｐｔｒａｊモジュールを使用してプローブ占有マップに統合され、最終的に各有機プローブによって最も頻繁にサンプリングされる領域に対応する輪郭面として視覚化される。

【0235】

推定ＲＡＳ阻害剤の仮想スクリーニング

【0236】

ＲＡＳ界面の広域計算調査を使用することで、本発明者らは、－８．０ｋｃａｌ／モル（μＭ－ｎＭ予想実験阻害効力範囲スケール）を超える理論的効力で標的結合部位に結合することができるペプチド模倣薬のセットであって、良好なインシリコ透過性プロファイルを示し、その平均極性接近可能表面積（ＰＡＳＡ）が１５０Å^２より小さいペプチド模倣薬のセットを生成することができた。これらのパラメータは、設計されたペプチド模倣薬の潜在的な活性および透過性を表している。

【0237】

ドッキング偽陰性を同定する可能性を排除するために、本発明者らは、短い陰的ペプチド結合部位ＭＤシミュレーションを実施して、安定な結合モードを示したペプチド模倣薬を同定した（３Åより小さいＲＭＳＤシミュレーション）。この方法は、インシリコ特性およびペプチド構造における結合標的領域を維持しながら、熱力学的観点に基づいてＫＲＡＳ－ＧＴＰアーゼに結合することができる化合物の選択の質を高める。

【0238】

それに続く２つの別個のインシリコ分子ドッキング実験を、ヒット化合物を同定し、最終的に最適化する目的で、推定ＲＡＳタンパク質阻害剤の２つのデータセットのスクリーニングに適用した。

【0239】

第１の分子ドッキング実験（ヒット同定ステップ）では、天然および非天然アミノ酸を使用して、トリペプチド模倣薬およびテトラペプチド模倣薬のデータセットを構築した。化合物のＮ末端部分およびＣ末端部分は、異なるサイズおよび極性プロファイルを有する異なる封鎖部分（例えば、Ｎ末端部に対しては、ジフェニル乳酸、２－（４－ｔｅｒｔ－ブチルフェノキシ）酢酸、フェニル酢酸、９－アントラセン酸または安息香酸；Ｃ末端部分に対しては、カルボキサミド、ピロリジン、ピリジンまたは３－アゾピロ［５．５］ウンデカン）によってエンリッチメントした。基質結合部位分析の結果に基づいて、一価の正電荷をもつ化合物のみを選択し、これにより８万個の化合物のライブラリを作成した。

【0240】

分子ドッキング
同じプロトコルを使用して、ヒット同定および最適化ステップの両方で分子ドッキング実験を行った。すべての推定ＲＡＳタンパク質阻害剤三次元構造を、一次配列から出発して最初から作成し、ＡｍｂｅｒＴｏｏｌ１６のＬｅａｐモジュールおよびＡＭＢＥＲのｆｆ１２力場を使用してパラメータ化し、最終的にはＮＡＭＤシミュレーションパッケージで最小化した。非天然ペプチドの構成ブロック（存在する場合）および封鎖残基のパラメータライブラリを、ＡｍｂｅｒＴｏｏｌ１６モジュールＡｎｔｅｃｈａｍｂｅｒおよびＬｅａｐを用いて記述した。

【0241】

ＲＡＳ ＧＴＰアーゼタンパク質構造（ＰＤＢコード５Ｐ２１）の１．３５Å分解能の結晶構造を受容体として使用して、すべての推定ＲＡＳ阻害剤をドッキングした。第１の準備ステップでは、共結晶化ＧｐｐＮＨｐおよび水分子を除去した。これにより、水素原子を添加し、システム全体をデフォルトパラメータでＨ＋＋ウェブサーバー（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ．ｃｓ．ｖｔ．ｅｄｕ／Ｈ＋＋）を使用して適切にプロトン化した。

【0242】

すべてのドッキング計算は、ＡｕｔｏＤｏｃｋ Ｖｉｎａドッキングプログラム^６１のエネルギー最小化最適化フォークであるＳＭＩＮＡを用いて行った。ＡｕｔｏＤｏｃｋ Ｔｏｏｌｓによって提供されるｐｒｅｐａｒｅ＿ｌｉｇａｎｄ４．ｐｙおよびｐｒｅｐａｒｅ＿ｒｅｃｅｐｔｏｒ４．ｐｙスクリプトを使用して、すべてのリガンドおよび受容体構造をＳＭＩＮＡに適した入力ファイルに変換した。グリッド空間が０．３７５Åの６０×６０×６０サイズのほぼ立方体のグリッドボックスをＲＡＳエフェクター結合領域において調整し、Ａｓｐ３３残基およびＡｓｐ３８残基の周りにセンタリングした。網羅性、モード数およびエネルギー範囲を３２、１００および５０にそれぞれ設定した。

【0243】

すべてのドッキングシミュレーションが終了したら、すべての構成ブロックのφ／ψ二面角ラマチャンドラン分布、対応するペプチド結合の幾何学的形状、および分子間接触を、上位を占める２０個のドッキングポーズについて計算した。したがって、φ／ψ二面角ラマチャンドラン分布と適合しないドッキング立体配座であって、シスペプチド結合もしくは平面を有さないもの、または分子内接触を有するものは除外した。したがって、各化合物（もしあれば）の上位を占めるドッキングポーズを一緒にマージし、ＳＭＩＮＡドッキングエネルギーに従ってソートし、ドッキングエネルギーが－８ｋｃａｌ／モルより低いすべての化合物は除外した。次いで、結合安定性ならびに予測細胞膜透過性フィルタ（詳細は以下を参照）を順次適用し、その後、最も有望な化合物を選択し、目視検査を行った。

【0244】

ペプチド候補の最終的な選択のために、追加の因子（例えば、化学的特性および予測される基質結合部位の位置とのペプチド結合モードコンセンサス、水素結合供与体への正に帯電した残基の密接な配向の欠如、水素結合受容体への負に帯電した残基の密接な配向ならびに高度に疎水性の裂け目への極性残基の挿入）を考慮した。

【0245】

ＲＡＳ結合安定性評価
ＮＡＭＤシミュレーションパッケージを使用して、ＲＡＳタンパク質との複合体中の各化合物のドッキングモデルに、共役勾配最小化、平衡化および３ｎｓ長の陰溶媒ＭＤシミュレーションを行った。これにより、最初の準備ステップ、システムの全体的なプロトン化およびパラメータ化は、ＡｍｂｅｒＴｏｏｌ１６のＬｅａｐモジュールおよびＡＭＢＥＲのｆｆ１２力場を使用して実行された。次いで、５ｋｃａｌ／（モルÅ^２）の力定数で系のすべて（受容体とリガンドの両方）の主鎖原子に調和拘束を適用して、１０００サイクル長の最小化で系を緩和した。次いで、系を３００Ｋに徐々に加熱し、タンパク質およびリガンドの主鎖原子にそれぞれ５および２ｋｃａｌ／（モルÅ^２）の力定数で調和拘束を適用することによって、２００ｐｓ長の平衡ステップを実行した。最後に、２ｋｃａｌ／（モルÅ^２）の力定数で受容体タンパク質の主鎖原子のみに調和拘束を適用して、３ｎｓ長のＭＤシミュレーションを行った。すべてのシミュレーションにおいて、ＳＨＡＫＥ^５８を適用して水素原子とのすべての結合を拘束し、一方で２ｆｓのシミュレーション時間ステップおよび長距離相互作用の１２Åカットオフ距離を設定した。

【0246】

最後に、結合安定性評価を行い、ＭｏｌＳｏｆｔ ＩＣＭ Ｂｒｏｗｓｅｒ（ｗｗｗ．ｍｏｌｓｏｆｔ．ｃｏｍ）^６３を使用して、軌跡の最後の１．５ｎｓに沿った各化合物の平均二乗平均平方根偏差（ＬｉｇＲＭＳＤ_ａｖｇ）を計算した。３Åより低いＬｉｇＲＭＳＤ_ａｖｇ値を有する化合物を安定な結合剤として予測し、これにより細胞膜透過性評価用に選択した。

【0247】

インシリコ透過性予測
最初の準備ステップでは、各化合物の三次元構造を最初から作成し、ＡｍｂｅｒＴｏｏｌ１６のＬｅａｐモジュールおよびＡＭＢＥＲのｆｆ１２力場を使用してパラメータ化した。

【0248】

各化合物について、ＡＭＢＥＲのｆｆ１２力場およびＮＡＭＤシミュレーションパッケージを使用して、２５個の２ｎｓ長のクロロホルム陰溶媒和無拘束分子動力学（ＭＤ）シミュレーションのセットを実行した。先に生成された各３Ｄ構造を最初に使用して、合計２５個の配座異性体を含む小さな立体配座アンサンブルを得た。したがって、各化合物を短い１０００ステップの無拘束エネルギー最小化によって緩和し、次いで、システム温度を３００Ｋに設定して、１００ｐｓにわたって行われた短いＭＤシミュレーションを行った。最後に、４ｐｓごとに１つの軌跡スナップショットを抽出することによって２５個の配座異性体を得て、最終的なクロロホルム溶媒和ＭＤシミュレーションの入力として使用した。

【0249】

したがって、各シミュレーションにおいて、系は、最初に５０００の共役勾配ステップによってエネルギーを最小化した。次いで、０から３００Ｋまで１００ｐｓで徐々に加熱しながら、４つのステップに分割された平衡化プロセスを系に行い、加熱中の初期分子幾何学的形状を維持するために、０．５ｋｃａｌ／（モルÅ^２）の力定数で調和拘束をすべての重原子に適用した。平衡化中、積分時間ステップを２ｆｓに設定し、非結合カットオフ距離を１２Åに設定した。最後に、２ｎｓの間実行され、系の温度を３００Ｋに設定して、無拘束ＭＤシミュレーションからなる生成ステップを実行した。各化合物について、２５個の２ｎｓ長のＭＤ軌跡をすべて組み合わせ、ＡｍｂｅｒＴｏｏｌｓ１６のｃｐｐｔｒａｊモジュールを使用して合計１２，５００個のＭＤフレームを抽出した。

【0250】

最後に、各化合物について、全体的なシミュレーション中の溶媒への極性原子の平均曝露を、ＭｏｌＳｏｆｔ ＩＣＭ Ｂｒｏｗｓｅｒを使用してＭＤフレーム全体の平均極性接近可能溶媒面積値（ｐｏｌＡＳＡ_ａｖｇ）に関して抽出した。１５０Å^２未満のｐｏｌＡＳＡ_ａｖｇ値を有するペプチドは、受動拡散によって透過性であると予測され、したがって目視検査用に選択された。

【0251】

細胞株および培養
ＲＡＳ野生型を発現するｈＴＥＲＴ－ＲＰＥ（不死化網膜色素上皮ヒト細胞）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手した。

【0252】

両方とも１０％ウシ胎児血清（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社製）、ペニシリン、ストレプトマイシン、および非必須アミノ酸を添加した、ＤＭＥＭ－ＨＡＭのＦ１２（１：１）培地中のｈＴＥＲＴ－ＲＰＥ。

【0253】

薬物治療およびＥＧＦ依存性シグナル伝達活性化
細胞を、１０％のＦＢＳを含有する培地に２４時間播種し、それから２４時間血清飢餓（０．５％）にした。その後、それらを様々な濃度の化合物と２時間インキュベートした。細胞シグナル伝達を活性化するために、ＥＧＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）（シグマ・アルドリッチ社製）を用いて１０分間の連続処理を行った。

【0254】

ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ウエスタンブロットおよび抗体
タンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分離し、ＰＶＤＦメンブレン（イモビロン－Ｐ、ミリポア社製）上に転写した。メンブレンを室温で１時間、２０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０および５％のウシ血清アルブミンで構成される緩衝液とインキュベートすることによって、抗体の非特異的結合を評価した。タンパク質発現は、指定された抗体：抗ｃ－ＲＡＦ（ＢＤ形質導入６１０１５１、１：５００）；抗ホスホ－ｃ－ＲＡＦ Ｓ３３８（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃９４２７、１：５００）；抗ＰＩ３Ｋｐ１１０α（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃４２４９、１：１０００）；抗ＡＫＴ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃９２７２、１：１０００）；抗ホスホ－ＡＫＴ Ｓ４７３（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃４０６０、１：１０００）；抗ホスホ－ＡＫＴ Ｔｈｒ３０８（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃４０５６、１：１０００）；抗ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ（ＥＲＫ１／２）（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃９１０２、１：２０００）；抗ホスホ－ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ（ＥＲＫ１／２）Ｔ２０２／Ｙ２０４（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製＃４３７０、１：２０００）；抗ＧＡＰ１２０（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ社製 ＳＣ－６３、１：２００）；抗ＨＡ（シグマ・アルドリッチ社製Ｈ６９０８、１：１０００）；または抗α－チューブリン（シグマ・アルドリッチ社製Ｔ９０２６、１：２０００）を用い、４℃で一晩ブロットをプローブすることによって測定した。次に、メンブレンを洗浄した後、それらを対応するＨＲＰ結合二次抗体（ヤギ由来抗ウサギ抗体 バイオ・ラッド社製＃１７０－６５１５またはヤギ由来抗マウス抗体 バイオ・ラッド社製＃１７０－６５１６、１：３０００）と室温で６０分間インキュベートし、再び洗浄した。タンパク質検出を、増強された化学発光（ＥＺ－ＥＣＬ、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社製）によって行った。放出光をキャプションし、定量化した（ＣｈｅｍｉＤｏｃ、バイオ・ラッド社製）。

【0255】

ＲＡＳシグナル伝達の分析のために、６７ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ６．８）および２％のＳＤＳを含有する緩衝液中で細胞を溶解し、次いで、試料を９７℃で１５分間加熱した。この後、溶解物のタンパク質濃度を、ローリー法を用いて定量した。１試料あたり１５μｇのタンパク質の一定分量をゲルに入れた。

【0256】

ペプチド模倣薬の分析

【0257】

最終的な目視検査の後、表２に示すように９つのペプチド模倣薬配列を合成のために選択した。９つの配列は、トリペプチド模倣薬およびテトラペプチド模倣薬を含む。これらの配列はすべて、Ｃ末端が第二級アミンで封鎖され、Ｎ末端が疎水性基で封鎖されている。透過性閾値を１７０Åに設定し、この閾値未満であったすべてのペプチド模倣薬は透過性であると予測した。

【表2】

【0258】

表２の化学構造の実験的評価
ｈＴＥＲＴ－ＲＰＥ細胞におけるＲＡＳ－ＧＴＰシグナル伝達タンパク質を阻害するペプチド模倣薬の能力を試験することによって、表２のトリペプチド模倣薬およびテトラペプチド模倣薬を評価した。この作業を行うために、本発明者らは細胞を培養プレートに４８時間播種した。細胞を２４時間血清飢餓（０．５％のＦＣＳ）した。その期間後、本発明者らは、ＥＧＦを５０ｎｇ／ｍＬの濃度で１０分間細胞に添加した。ＥＧＦを培養物に添加して、ＲＡＳシグナル伝達経路を活性化した。ペプチド模倣薬の活性を評価するために、ＥＧＦの添加の２時間前に、本発明者らは、各ペプチド模倣薬が培養プレートにおいて試験されるように、培養プレートにトリペプチド模倣薬またはテトラペプチド模倣薬を（５０μＭ）の濃度で添加した。本発明者らは、２つのＲａｓシグナル伝達経路（Ｒａｆ／ＥＲＫおよびＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ）の活性化レベルを検出するためにウエスタンブロット（ＷＢ）を行った。ＧＡＰ１２０検出を対照として使用した。

【0259】

図５は、ＲＡＳエフェクターを阻害するための表２の９つのペプチド模倣薬の有効性を評価したウエスタンブロットを示す。ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ１２０）を対照として使用した。

【0260】

ペプチド模倣薬をポジティブヒットと考えると、２つのタンパク質カスケードの活性を阻害するはずであり、結果として、ＲＡＦ（Ｐ－ＲＡＦ）、ＡＫＴ（Ｐ－ＡＫＴ）およびＥＲＫ（Ｐ－ＥＲＫ）のリン酸化は観察されないはずである。

【0261】

分析を行う際に、本発明者らは、細胞培地に希釈したときに化合物ＩＰ－１４－０５およびＩＰ－１４－０６が可溶ではないことを見出した。本発明者らはまた、ペプチドＩＰ－１４－０４が凝集体を形成し、細胞上に沈殿して細胞死を引き起こすことを見出した。結果として、本発明者らは、ＩＰ－１４－０５およびＩＰ－１４－０６をＷＢから除外した（図５）。

【0262】

結果として、最終的に、本発明者らは、ＲＰＥ細胞において元の９つのペプチド模倣薬のうちの６つのみを評価した。本発明者らが評価した６つのペプチド模倣薬から、本発明者らは、それらのうちの３つ、特にＩＰ－１４－０１、ＩＰ－１４－０３およびＩＰ－１４－０８が２つのＲＡＳエフェクタータンパク質カスケードを阻害できると判断した。３つのうち、本発明者らは、ＷＢによって分析したところ、ＩＰ－１４－０１が最も強力な阻害剤であることを見出した（図５）。

【0263】

本発明者らの分析の一部として、ＩＰ－１４－０１、ＩＰ－１４－０３およびＩＰ－１４－０８ならびにそれらの生物物理学的特性を、５％ＤＭＳＯ水溶液を用いてそれらを研究することによって評価した。本発明者らは、生物学的障壁を介した透過性（ＰＡＭＰＡアッセイ）およびＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞におけるそれらの内在化を行った。

【表3】

【0264】

表３に、ペプチド模倣薬の透過性を評価するための細胞内在化率と共に、ＩＰ－１４－０１、ＩＰ－１４－０３およびＩＰ－１４－０８のＰＡＭＰＡアッセイ（Ｐｅ、輸送率％および保持率％）の結果を示す。使用される方法は周知であり、当業者には公知であろう。対照として、本発明者らは、ＤＭＳＯを５％含有する水への溶解度を評価して、低い溶解度に関連する可能性のある問題を特定した。データを平均±ＳＤとして表す。

【0265】

５％ＤＭＳＯ水溶液中で溶解度を測定したところ、３つの化合物（ＩＰ－１４－０１、ＩＰ－１４－０３およびＩＰ－１４－０８）は良好な溶解度を示し、３つの治療用化合物のいずれも溶液から沈殿するリスクなしに、１００μＭを超える濃度で実験を行うことができるという保証を提供した。ＰＡＭＰＡアッセイの結果は、３つのペプチド模倣薬のそれぞれのＰｅについて、高い保持率、無視できる輸送率およびゼロ透過性を示した。本発明者らは、ＩＰ－１４－０１をＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞と２時間６０μＭでインキュベートしたところ、ペプチド模倣薬の１３．５％が細胞に取り込まれることを見出した。本発明者らは、ＩＰ－１４－０３およびＩＰ－１４－０８を同じ細胞とインキュベートした場合、同様の結果を見出さなかった。

【0266】

ｘｘｘｘｘさらに、インビトロアッセイ条件で可溶性でなかったか、またはＲＰＥ細胞とインキュベートした場合に上記のように凝集体を形成した第１世代からのペプチド模倣薬を再評価するために、さらなる取り組みを行った。これらのペプチド模倣薬について、β－シクロデキストリンを１５％含むＰＢＳ中でそれらの溶解度を試験した（表５）。

【表4】

【0267】

表４は、これらのペプチド模倣薬のすべてが、β－シクロデキストリンを１５％含むＰＢＳ（リン酸塩－生理食塩水緩衝液）において１ｍＭに希釈され、可溶性であったことを示す。次いで、本発明者らは、これらのペプチド模倣薬を２４時間にわたって一定に撹拌した。その時間の最後に、本発明者らは、各溶液を遠心分離し、次いで、各溶液からの上清をＨＰＬＣに通して、この結果をＡＣＮ／Ｈ２Ｏ中の各化合物の１ｍＭ溶液と比較した。この対照は、β－シクロデキストリンが１５％のＰＢＳ中の実際の溶解度を測定するために使用した。データを平均±ＳＤとして表す。

【0268】

図６は、本発明者らが行ったＲＡＳのウエスタンブロットを示す。この際に本発明者らは、ＤＭＳＯの代わりに０．５％の濃度のβ－シクロデキストリンを使用したことを除いて、上記と同じ条件下で化合物ＩＰ－１４－０１（Ｐ１）、ＩＰ－１４－０２（Ｐ２）ＩＰ－１４－０３（Ｐ３）、ＩＰ－１４－０４（Ｐ４）、ＩＰ－１４－０７（Ｐ７）、ＩＰ－１４－０８（Ｐ８）およびＩＰ－１４－０９（Ｐ９）の評価を行った。本発明者らは、ＤＭＳＯを使用して、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ１２０）を可溶化し、細胞培地に０．５％の濃度に希釈した。

【0269】

ＲＡＳ－エフェクターシグナル伝達カスケードに対するＩＰ－１４－０１の阻害効果およびその高い細胞内在化値により、最適化および２回目の計算法に治療用化合物ＩＰ－１４－０１を選択した。

【0270】

実施例３
ＩＰ－１４－０１の化学構造誘導体の評価
ＩＰ－１４－０１に由来する第２世代のペプチド模倣薬を、以前に適用したのと同じインシリコプロトコルに従って設計した。これに関して、本発明者らは、計算研究が完了すると溶出する４つの新しいペプチド模倣薬を調製した。

【0271】

第２の分子ドッキング実験（ヒット最適化ステップ）では、元の化合物の膜透過性および／または受容体結合親和性のいずれかを増加させるために、慎重に選択された特定のアドホックな代替部分と元の構成ブロックとを組み合わせることで、Ｐ１一次配列から開始して新しいペプチド模倣薬のデータセットを生成した。

【0272】

本発明者らは、ペプチド模倣薬の主鎖上のアミノ酸の数を増加させるためにＩＰＲ－４７１を設計した。これに基づいて、プロリン＋カルボキサミドを封鎖するために使用された第二級アミンを除去することによって、Ｃ末端を伸長させた。

【0273】

ＩＰＲ－４７２は、ＩＰ－１４－０１とほぼ同じ構造を有していたが、β－アラニンのＮ－メチルアルキル化は、芳香族基に結合したより長い炭素鎖、プロピルベンゼンで置換されていた。本発明者らは、ｎ－アルキル遮蔽能の増加と共に化合物全体の疎水性を増加させるためにこの変更を行った。本発明者らは、メチルの代わりに炭素数４の鎖が、ある程度の柔軟性をもたらし、炭素数６の芳香環が分子の周りに巻き付くことを可能にすると考えた。これは、水性環境におけるＩＰＲ－４７２の極性を低下させるであろう。これにより、タンパク質表面との接触数が増加すると予想された。

【0274】

アラニンをイソロイシンに置換し、配列骨格の１つのアミド結合にＮ－メチル化を付加した変更のみであったので、ＩＰ－４７３はＩＰ－１４－０１由来ペプチド模倣薬の最も保存的なものとして設計された。この新しい分子は、親化合物の結合様式を完全に保存するが、その効力をわずかに最適化するためにさらに数回接触を追加すると予想された。

【0275】

ＩＰ－４７４は、ＩＰ－１４－０１と比較して２つの置換を有していた。これらは、シクロヘキシルグリシンで置換されたアラニン、および極性基を有するアミノ酸を、極性基を有する別のアミノ酸に置換することであった。この場合、新しいアミノ酸はトレオニンであった。

【0276】

最後に、本発明者らは、これらのペプチド模倣薬を３つの同じアミノ酸を同じ順序に保つことによって終わる同じ配列ならびにジフェニルＮ末端を保存するように設計した（表６）。これらの新規ペプチド模倣薬を表５に特定する。

【表5】

【0277】

表４は、以前に第１回目のペプチド模倣薬のスクリーニングに使用したのと同じドッキング方法を適用して、第２世代の新しい４つのペプチド模倣薬が生成されたことを示す。

【0278】

図７は、本発明者らによるＩＰ－１４－０１（Ｐ１）およびその誘導ペプチド模倣薬、ＩＰＲ－４７１（Ｐ１．１）、ＩＰＲ－４７２（Ｐ１．２）、ＩＰＲ－４７３（Ｐ１．３）およびＩＰＲ－４７４（Ｐ１．４）の評価からのＲＡＳシグナル伝達のウエスタンブロットである。この実験のために、本発明者らは、本明細書に開示され、以前に記載されたＷＢアッセイと同じプロトコルおよび条件を使用した（図５）。より具体的には、本発明者らは、０．５％ＤＭＳＯに溶解した５０μＭの濃度の血清飢餓ｈＴＥＲＴ－ＲＰＥ細胞を含む培養物中で各ペプチド模倣薬化合物を２時間インキュベートし、次いでＥＧＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）で１０分間処理した。これらの治療用化合物のいずれも溶解性の問題を示さなかった。

【0279】

図７に示されるように、本発明者らは、ＩＰＲ－４７１（Ｐ１．１）およびＩＰＲ－４７４（Ｐ１．４）が、それらが由来するＩＰ－１４－０１（Ｐ１）よりも良くないことを見出した。対照的に、ＩＰ－１４－０２（Ｐ１．２）は、ＲＡＦおよびＡＫＴを阻害できるがＥＲＫを阻害できないことを見出した。さらに、本発明者らは、ＩＰ－４７３（Ｐ１．３）が２つの異なるタンパク質カスケード（ＲＡＦ／ＥＲＫおよびＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ）すべてをＩＰ－１４－０１よりも効果的に阻害することができると判断した。

【0280】

図７で評価したペプチド模倣薬化合物のうち、本発明者らは、最も高いＲＡＳエフェクターの阻害度を示したのはＩＰＲ－４７３であると判断した。

【0281】

次に、ＩＰ－１４－０１を様々な濃度で異なるがん細胞株および正常細胞株（ｈＴＥＲＴ－ＲＰＥ細胞）とインキュベートした。細胞生存率をＭＴＳ細胞増殖アッセイによって測定した。親ペプチド模倣薬ＩＰ－１４－０１について同じ実験を行った。任意のインキュベート濃度でがん細胞に対して正常細胞を死滅させるＩＰ－１４－０１の能力に差はなかった、すなわち親ペプチド模倣薬は細胞株特異性を示さなかった（データは示さず）。

【0282】

次に、本発明者らは、ＩＰＲ－４７３を様々な濃度で異なるがん細胞株および正常細胞株（－ｈＴＥＲＴ－ＲＰＥ細胞）とインキュベートした。細胞生存率をＭＴＳ細胞増殖アッセイによって測定した。図８は、７つの異なる細胞株の細胞生存率を測定するために使用したＭＴＳ生存率アッセイの結果を示す。細胞を、１０％ＦＢＳ（Ｂｉｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社製）含有培地を含有する９６ウェルプレート培養物に入れた（１ウェルあたり１万細胞）。次いで、これらの細胞を２４時間培養し、次いで、１０μＭ、１５μＭ、２０μＭおよび２５μＭの濃度のＩＰＲ－４７３で処理し、さらに２４時間インキュベートした。

【0283】

使用した異なる細胞株には、ヒト膵臓がん細胞ＭＰＡＮＣ－９６、ヒト膵臓腺がん細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ、ヒト膵臓グレードＩＩ腺がんＰＡ－ＴＵ、ヒト膵管腺がんＳＷ１９９０、ヒト膵臓腺がん８９８８－Ｔおよびヒト膵管がんＰＡＮＣ－１が含まれていた。これらの各々は、膵臓腫瘍細胞株を含む。上述の対照はｈＴＥＲＴ－ＲＰＥ細胞であり、がん原性ではない。

【0284】

図８に示されるような細胞生存率アッセイにおいて得られた結果により、ＩＰＲ－４７３の潜在的治療活性が確認された。この治療用化合物は、がん性細胞に対して１５μＭを超える濃度で細胞傷害性である。同時に、ｈＴＥＲＴ－ＲＰＥ対照細胞には影響を及ぼさなかった。そのため、本発明者らは、細胞増殖アッセイにおいて、ＩＰＲ－４７３が膵臓がん細胞株に対して高い特異性を示すことを見出した。

【0285】

本発明者らに知る本発明を実施するための最良の形態を含む、本発明の特定の実施形態を本明細書に記載している。当然ながら、前述の説明を読めば、これらの記載された実施形態の変形形態が当業者には明らかになるであろう。本発明者は、当業者がそのような変形形態を適切に使用することを期待しており、本発明者らは、本明細書に具体的に記載されている以外の方法で本発明が実施されることを意図している。したがって、本発明は、適用法によって許容されるように、添付の特許請求の範囲に列挙された主題のすべての修正および均等物を含む。さらに、本明細書に別段の指示がない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、上記の実施形態のすべての可能な変形形態のあらゆる組合せが本発明に包含される。

【0286】

本発明の代替の実施形態、要素、またはステップのグループ分けは、限定として解釈されるべきではない。各グループメンバーは、個別に、または本明細書に開示される他のグループメンバーと任意に組み合わせて参照および特許請求することができる。グループの１つ以上のメンバーは、利便性および／または特許性の理由から、グループに含まれ得るか、またはグループから削除され得ることが予想される。そのような包含または削除が生じる場合、本明細書は、修正されたグループを含み、したがって添付の特許請求の範囲で使用されるすべてのマーカッシュ群の記載を満たすと見なされる。

【0287】

特に明記しない限り、本明細書および特許請求の範囲で使用される特徴、項目、量、パラメータ、特性、用語などを表すすべての数字は、すべての場合において「約」という用語によって修飾されると理解されるべきである。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、そのように条件付けられた特徴、項目、量、パラメータ、特性、または用語が、記載された特徴、項目、量、パラメータ、特性、または用語の値の上下プラスマイナス１０％の範囲を包含することを意味する。したがって、特段の記載がない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲に記載の数値パラメータは、変化し得る近似値である。最低限でも、そして特許請求の範囲に対する均等論の適用を制限する試みとしてではなく、各数値表示は、少なくとも報告された有効数字の数に照らして、そして通常の丸め技法を適用することによって解釈されるべきである。本発明の広い範囲を示す数値範囲および値は近似値であるにもかかわらず、特定の実施例において示される数値範囲および値は可能な限り正確に報告してある。しかしながら、任意の数値範囲または値は、それぞれの試験の測定値に見られる標準偏差から必然的に生じるある種の誤差を本質的に含む。本明細書における値の数値範囲の列挙は、単に、その範囲内に入るそれぞれの別個の数値を個別に参照する簡略化した方法として役立つことを意図しているにすぎない。本明細書に別段の指示がない限り、数値範囲の個々の値は、あたかもそれが本明細書に個々に列挙されているかのように本明細書に組み込まれる。

【0288】

本発明を説明する文脈（特に以下の特許請求の範囲の文脈）で使用される「一つの（ａ）」、「一つの（ａｎ）」、「前記（ｔｈｅ）」という用語および同様の指示対象は、本明細書で特に示されない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、単数および複数の両方を包含すると解釈されるべきである。本明細書に記載のすべての方法は、本明細書に別段の指示がない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実行することができる。本明細書で提示されるありとあらゆる例または例示的な文言（例えば、「など（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、単に本発明をよりよく解明することを意図しているにすぎず、特許請求される本発明の範囲を限定するものではない。本明細書におけるいかなる文言も、本発明の実施に不可欠な特許請求されていない要素を示すと解釈されるべきではない。

【0289】

本明細書に開示される特定の実施形態は、文言からなる、または本質的に文言からなることを使用して、特許請求の範囲においてさらに限定され得る。特許請求の範囲で使用される場合、出願時または補正によって追加されたかどうかにかかわらず、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という移行用語は、特許請求の範囲で指定されていない要素、ステップ、または成分を除外する。「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という移行用語は、請求項の範囲を特定の材料またはステップ、ならびに基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を及ぼさないものに限定する。そのように特許請求される本発明の実施形態は、本明細書に本質的にまたは明示的に記載され、有効化される。

【0290】

本発明の代替の実施形態、要素、またはステップのグループ分けは、限定として解釈されるべきではない。各グループメンバーは、個別に、または本明細書に開示される他のグループメンバーと任意に組み合わせて参照および特許請求することができる。グループの１つ以上のメンバーは、利便性および／または特許性の理由から、グループに含まれ得るか、またはグループから削除され得ることが予想される。そのような包含または削除が生じる場合、本明細書は、修正されたグループを含み、したがって添付の特許請求の範囲で使用されるすべてのマーカッシュ群の記載を満たすと見なされる。

【0291】

本明細書において参照および特定されるすべての特許、特許刊行物、および他の刊行物は、例えば、本発明に関連して使用され得るそのような刊行物に記載されている組成物および方法論を説明および開示する目的で、その全体が参照により個別に明示的に本明細書に組み込まれる。これらの刊行物は、本出願の出願日前のそれらの開示のためにのみ提供される。この点に関するいかなるものも、本発明者らが先行発明によって、または他の理由でそのような開示に先行する権利がないことを認めるものとして解釈されるべきではない。これらの文書の日付に関するすべての記述または内容に関する表現は、出願人が入手可能な情報に基づいており、これらの文書の日付または内容の正確さに関するいかなる承認も構成しない。

【0292】

最後に、本明細書の態様は特定の実施形態を参照することによって強調されているが、当業者は、これらの開示された実施形態が本明細書に開示された主題の原理の例示にすぎないことを容易に理解するであろうことを理解されたい。したがって、開示された主題は、本明細書に記載された、特定の方法、プロトコル、および／または試薬などに限定されることは決してないことを理解されたい。したがって、本明細書の趣旨から逸脱することなく、本明細書の教示に従って、開示された主題の様々な修正もしくは変更または代替構成を行うことができる。最後に、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、特許請求の範囲によってのみ定義される本発明の範囲を限定することを意図するものではない。したがって、本発明は、正確に図示および説明されたものに限定されない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8-1】

【図8-2】

【図8-3】

【図8-4】

【図8-5】

【図8-6】

【図8-7】

【図8-8】

【図8-9】

【図8-10】

【国際調査報告】