特表 2024-527593 変異型ＩＬ－１５組成物及びその方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-25

(54)【発明の名称】変異型ＩＬ－１５組成物及びその方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/10 20060101AFI20240718BHJP

   C07K 14/54 20060101ALI20240718BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240718BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240718BHJP

   C12N 5/078 20100101ALN20240718BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20240718BHJP

   C07K 19/00 20060101ALN20240718BHJP

   C12N 15/24 20060101ALN20240718BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20240718BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20240718BHJP

   C12N 15/83 20060101ALN20240718BHJP

【ＦＩ】

C12N5/10 ZNA

C07K14/54

A61K35/17

A61P35/00

C12N5/078

C07K14/705

C07K19/00

C12N15/24

C12N15/12

C12N15/62 Z

C12N15/83 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024501098

(86)(22)【出願日】2022-07-08

(85)【翻訳文提出日】2024-01-29

(86)【国際出願番号】 CN2022104638

(87)【国際公開番号】W WO2023280307

(87)【国際公開日】2023-01-12

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/105481

(32)【優先日】2021-07-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/105484

(32)【優先日】2021-07-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】524009059

【氏名又は名称】レジェンド バイオテック アイルランド リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(74)【代理人】

【識別番号】100221741

【弁理士】

【氏名又は名称】酒井 直子

(74)【代理人】

【識別番号】100114926

【弁理士】

【氏名又は名称】枝松 義恵

(72)【発明者】

【氏名】ズン ミン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン フイフイ

(72)【発明者】

【氏名】リー ツィガン

(72)【発明者】

【氏名】ファン シャオフ

(72)【発明者】

【氏名】ヤン シュアイ

(72)【発明者】

【氏名】トゥ シャオジエ

(72)【発明者】

【氏名】ウー シュウ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB63

4C087NA14

4C087ZB26

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA02

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本出願は、変異型ＩＬ－１５ポリペプチドを発現する改変された免疫細胞を提供する。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの遺伝子操作された受容体を更に含む。本出願は、本明細書に記載される改変された免疫細胞を使用したがん治療のための方法及び医薬組成物も提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

８位及び／または６２位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞であって、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、前記改変された免疫細胞。

【請求項2】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドが６２位でのアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の改変された免疫細胞。

【請求項3】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、グリシン（Ｇ）、イソロイシン（Ｉ）、グルタミン（Ｑ）、バリン（Ｖ）、プロリン（Ｐ）、ロイシン（Ｌ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、及びチロシン（Ｙ）からなる群から選択されるアミノ酸残基を６２位で含む、請求項２に記載の改変された免疫細胞。

【請求項4】

６２位での前記アミノ酸置換が、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される、請求項２または３に記載の改変された免疫細胞。

【請求項5】

６２位での前記アミノ酸置換がＴ６２Ｇである、請求項４に記載の改変された免疫細胞。

【請求項6】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、配列番号７のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２～５のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【請求項7】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドが８位でのアミノ酸置換を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【請求項8】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドが８位でグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸残基を含む、請求項７に記載の改変された免疫細胞。

【請求項9】

８位での前記アミノ酸置換がＤ８Ｅである、請求項８に記載の改変された免疫細胞。

【請求項10】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、配列番号５のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項８または９に記載の改変された免疫細胞。

【請求項11】

３位及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞であって、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、前記改変された免疫細胞。

【請求項12】

３位での前記アミノ酸置換がＶ３Ｙであり、及び／または２５位での前記アミノ酸置換がＬ２５Ｆである、請求項１１に記載の改変された免疫細胞。

【請求項13】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、配列番号７８または７９のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の改変された免疫細胞。

【請求項14】

前記１つ以上のアミノ酸置換が、前記ＩＬ－１５ポリペプチドのＩＬ－１５Ｒβに対する親和性を、前記１つ以上のアミノ酸置換を含まないＩＬ－１５ポリペプチドと比較して低減する、先行請求項のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【請求項15】

ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞であって、前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞による炎症性サイトカインの分泌より少なくとも５０％低いレベルで、前記改変された免疫細胞による炎症性サイトカインの分泌を誘発する、前記改変された免疫細胞。

【請求項16】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドが分泌型である、先行請求項のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【請求項17】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドが膜結合型である、請求項１～１６のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【請求項18】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドがグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーペプチド配列を含む、請求項１７に記載の改変された免疫細胞。

【請求項19】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドが膜貫通ドメインを含む、請求項１７に記載の改変された免疫細胞。

【請求項20】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドが膜アンカードメインを含む、請求項１７に記載の改変された免疫細胞。

【請求項21】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、第２のポリペプチド断片に融合されたＩＬ－１５断片を含む融合タンパク質である、先行請求項のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【請求項22】

前記第２のポリペプチド断片が、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメイン、ＩＬ－１５Ｒβ、共通γ鎖（γｃ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２１に記載の改変された免疫細胞。

【請求項23】

前記第２のポリペプチド断片が、配列番号５０～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の改変された免疫細胞。

【請求項24】

前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、（ａ）抗原結合ドメイン；（ｂ）ＩＬ－１５断片；（ｃ）膜貫通ドメイン；及び（ｄ）細胞内ドメインを含む、請求項１７に記載の改変された免疫細胞。

【請求項25】

前記改変された免疫細胞が、遺伝子操作された受容体をコードする第２の異種核酸配列を含む、請求項１～２３のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【請求項26】

前記遺伝子操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項２５に記載の改変された免疫細胞。

【請求項27】

前記ＣＡＲが、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである、請求項２６に記載の改変された免疫細胞。

【請求項28】

前記遺伝子操作された受容体が、改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項２５に記載の改変された免疫細胞。

【請求項29】

前記遺伝子操作された受容体が、Ｔ細胞抗原連結体（ＴＡＣ）受容体である、請求項２５に記載の改変された免疫細胞。

【請求項30】

前記第１の核酸配列及び前記第２の核酸配列が、同じプロモーターに作動可能に連結されている、請求項２５～２９のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【請求項31】

前記第１の核酸及び前記第２の核酸が、別個のプロモーターに作動可能に連結されている、請求項２５～２９のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【請求項32】

前記改変された免疫細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、及びγδＴ細胞からなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【請求項33】

前記改変された免疫細胞がＮＫ細胞である、請求項３２に記載の改変された免疫細胞。

【請求項34】

前記改変された免疫細胞が細胞傷害性Ｔ細胞である、請求項３２に記載の改変された免疫細胞。

【請求項35】

前記改変された免疫細胞が、個体に投与される場合、前記ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする前記第１の異種核酸を含まない改変された免疫細胞と比較してインビボでの低減された毒性を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【請求項36】

改変された免疫細胞を作製する方法であって、８位及び／または６２位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の核酸配列を前駆体免疫細胞に導入することを含み、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、前記方法。

【請求項37】

前記前駆体免疫細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、及びγδＴ細胞からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記前駆体免疫細胞が遺伝子操作された受容体を含む、請求項３６または３７に記載の方法。

【請求項39】

遺伝子操作された受容体をコードする第２の核酸を前記前駆体免疫細胞に導入することを更に含む、請求項３６または３７に記載の方法。

【請求項40】

前記遺伝子操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはＴ細胞抗原連結体（ＴＡＣ）受容体である、請求項３８または３９に記載の方法。

【請求項41】

前記第１の核酸配列及び前記第２の核酸配列が同じベクターに存在する、請求項３９または４０に記載の方法。

【請求項42】

前記ベクターがウイルスベクターである、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びそれらの派生物からなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記第１の核酸配列及び／または前記第２の核酸配列を含む免疫細胞を単離または濃縮することを更に含む、請求項３６～４３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

請求項３６～４４のいずれか１項に記載の方法により作製される、改変された免疫細胞。

【請求項46】

請求項１～３５及び４５のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。

【請求項47】

個体における疾患を処置する方法であって、有効量の請求項４６に記載の医薬組成物を前記個体に投与することを含む、前記方法。

【請求項48】

前記疾患ががんである、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

前記個体が低腫瘍量を有する、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記個体におけるサイトカインストームをもたらさない、請求項４７～４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

前記個体がヒトである、請求項４７～５０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

遺伝子操作された受容体を含む免疫細胞による処置を受ける個体におけるサイトカインストームを低減する方法であって、
（ａ）８位及び／または６２位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を前記免疫細胞に導入することであって、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従い、これにより、改変された免疫細胞を提供する、前記導入すること、ならびに
（ｂ）有効量の前記改変された免疫細胞を前記個体に投与すること
を含む、前記方法。

【請求項53】

アミノ酸置換Ｄ８Ｅ、Ｔ６２Ｇ、Ｖ３Ｙ、及び／またはＬ２５Ｆを含む遺伝子操作されたＩＬ－１５ポリペプチドであって、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、前記遺伝子操作されたＩＬ－１５ポリペプチド。

【請求項54】

配列番号５、７、７８、及び７９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５３に記載の遺伝子操作されたＩＬ－１５ポリペプチド。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年７月９日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１０５４８１号及び同第ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１０５４８４号の優先権の恩典を主張し、それらの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列の記載
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：Ｐ１１２００－ＰＣＴ．２２０７０８．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｉｓｔｉｎｇ．ｘｍｌ、記録日：２０２２年７月８日、サイズ：１０２，１７６バイト）。

【0003】

分野
本出願は、ＩＬ－１５ポリペプチドを発現する改変された免疫細胞、及びがんなどの疾患または状態を処置するためのその使用方法に関する。

【背景技術】

【0004】

背景
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞は、免疫応答を誘発するために、遺伝子操作されたＴ細胞受容体を産生するように改変された細胞である。例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、がん治療の改善のために、がん細胞をより効果的に認識するように設計され得る。ＣＡＲ－Ｔ細胞治療に代わる代替的アプローチは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の使用であり、これは腫瘍抗原に依存しない自発的な細胞傷害活性により標的細胞（例えば、腫瘍細胞）を死滅させる免疫細胞である。従って、ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、多様な抗原を標的とするように、固形腫瘍への標的化を増強するように、及び全体として効果的な抗腫瘍応答を達成するように遺伝子操作されていてもよい。ＣＡＲ－ＮＫ細胞療法の成功にもかかわらず、これらの方法は、多くの場合、傷害部位での障害を引き起こし得るサイトカイン産生（例えば、サイトカインストーム）の発生率がより高いという欠点がある。非常に効果的な細胞ベースのがん免疫療法が尚も必要とされている。

【0005】

インターロイキン１５（ＩＬ－１５）は、免疫系の発達及び制御において役割を果たすサイトカインである。特に、ＩＬ－１５は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、キラーＴ細胞、Ｂ細胞、腸管上皮内リンパ球（ＩＥＬ）、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）の増殖、機能、及び発生を誘発する。研究により、ＩＬ－１５は、真核細胞の炎症誘発性シグナル伝達の強力な活性化因子であることが示されている。ＩＬ－１５は、樹状細胞（ＤＣ）、ＮＫ細胞、上皮細胞、及びリンパ節間質細胞が含まれる多数の自然免疫細胞及び非免疫細胞において、炎症誘発性サイトカイン及びケモカインの産生を刺激する。ＩＬ－１５は、リンパ区画及び非リンパ区画の両方の細胞に作用する（Ｖａｎ Ｂｅｌｌｅ ａｎｄ Ｇｒｏｏｔｅｎ，Ａｒｃｈ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｈｅｒ Ｅｘｐ（２００５） ５３：１１５（非特許文献１））。免疫系におけるその重要な役割を考慮して、ＩＬ－１５投与が免疫応答を増強するために用いられてきた。逆に、ＩＬ－１５活性の阻害剤は、自己免疫及び他の望ましくない免疫応答を減弱させることができる（Ｗａｌｄｍａｎｎ，ＴＡ，２００６，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５９５－６０１（非特許文献２））。遺伝子操作された免疫細胞、例えば、ＣＡＲを発現するＴ細胞及びＮＫ細胞は、増強された抗腫瘍活性を提供するために、ＩＬ－１５で武装化され得る。例えば、ＵＳ９，６２９，８７７（特許文献１）及びＵＳ１０，４２８，３０５（特許文献２）を参照のこと。

【0006】

本明細書において参照される全ての刊行物、特許、特許出願、及び公開特許出願の開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】ＵＳ９，６２９，８７７

【特許文献2】ＵＳ１０，４２８，３０５

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】Ｖａｎ Ｂｅｌｌｅ ａｎｄ Ｇｒｏｏｔｅｎ，Ａｒｃｈ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｈｅｒ Ｅｘｐ（２００５） ５３：１１５

【非特許文献2】Ｗａｌｄｍａｎｎ，ＴＡ，２００６，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５９５－６０１

【発明の概要】

【0009】

概要
本出願は、変異型ＩＬ－１５ポリペプチドを発現する改変された免疫細胞、及びがんなどの疾患または状態を処置するためのその使用方法を提供する。

【0010】

本出願の一態様は、８位及び／または６２位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞を提供し、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、グリシン（Ｇ）、イソロイシン（Ｉ）、グルタミン（Ｑ）、バリン（Ｖ）、プロリン（Ｐ）、ロイシン（Ｌ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、及びチロシン（Ｙ）からなる群から選択されるアミノ酸残基を６２位で含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。

【0011】

上記の改変された免疫細胞のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸残基を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。

【0012】

本出願の一態様は、３位及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞を提供し、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でチロシン（Ｙ）アミノ酸残基を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。

【0013】

上記の改変された免疫細胞のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸残基を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。

【0014】

本出願の一態様は、ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞であって、当該ＩＬ－１５ポリペプチドが、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞による炎症性サイトカインの分泌より少なくとも５０％低いレベルで、当該改変された免疫細胞による炎症性サイトカインの分泌を誘発する、当該改変された免疫細胞を提供する。幾つかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、及び／またはＧＭ－ＣＳＦである。幾つかの実施形態では、本出願は、ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞であって、当該第１の異種核酸配列が当該改変された免疫細胞の抗腫瘍活性を増強する、当該改変された免疫細胞を提供する。

【0015】

上記の改変された免疫細胞のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換が、ＩＬ－１５ポリペプチドのＩＬ－１５Ｒβに対する親和性を、１つ以上のアミノ酸置換を含まないＩＬ－１５ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１５ポリペプチド）と比較して低減する。

【0016】

上記の改変された免疫細胞のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、分泌型である。

【0017】

上記の改変された免疫細胞のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜結合型である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーペプチド配列を介して膜に結合している。幾つかの実施形態では、ＧＰＩアンカーペプチド配列は、ＧＰＩリンカーに結合している。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜貫通ドメインを介して膜に結合している。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜アンカードメインを介して膜に結合している。

【0018】

上記の改変された免疫細胞のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、第２のポリペプチド断片に融合されたＩＬ－１５断片を含む融合タンパク質である。幾つかの実施形態では、第２のポリペプチド断片は、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメイン、ＩＬ－１５Ｒβ、共通γ鎖（γｃ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、第２のポリペプチド断片は、配列番号５０～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。上記の改変された免疫細胞のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、以下を含む：（ａ）抗原結合ドメイン；（ｂ）ＩＬ－１５断片；（ｃ）膜貫通ドメイン；及び（ｄ）細胞内ドメイン。

【0019】

上記の改変された免疫細胞のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、遺伝子操作された受容体をコードする第２の異種核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、Ｔ細胞抗原連結体（ＴＡＣ）受容体である。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、第１の核酸及び第２の核酸は、別個のプロモーターに作動可能に連結されている。

【0020】

上記の改変された免疫細胞のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、及びγδＴ細胞からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、ＮＫ細胞である。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。

【0021】

上記の改変された免疫細胞のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、個体に投与される場合、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸を含む改変された免疫細胞と比較してインビボでの低減された毒性を有する。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、個体に投与される場合、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸を含む改変された免疫細胞と比較してインビボでの改善された安全性を有する。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸を含む改変された免疫細胞と比較して改善された抗腫瘍活性を有する。

【0022】

本出願の一態様は、改変された免疫細胞を作製する方法であって、８位及び／または６２位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の核酸配列を前駆体免疫細胞に導入することを含み、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、当該方法を提供する。

【0023】

本出願の一態様は、改変された免疫細胞を作製する方法であって、３位及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の核酸配列を前駆体免疫細胞に導入することを含み、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、当該方法を提供する。

【0024】

上記の作製方法のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、前駆体免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、及びγδＴ細胞からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、前駆体免疫細胞は、遺伝子操作された受容体を含む。上記の作製方法のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、本方法は、遺伝子操作された受容体をコードする第２の核酸を前駆体免疫細胞に導入することを更に含む。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはＴ細胞抗原連結体（ＴＡＣ）受容体である。

【0025】

上記の作製方法のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じベクターに存在する。幾つかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。幾つかの実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びそれらの派生物からなる群から選択される。

【0026】

上記の作製方法のいずれか１つにおける幾つかの実施形態では、本方法は、第１及び／または第２の核酸配列を含む免疫細胞を単離または濃縮することを更に含む。

【0027】

上記の作製方法のいずれか１つによる方法により作製された改変された免疫細胞も提供される。

【0028】

上記の改変された免疫細胞のいずれか１つに従った改変された免疫細胞、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も更に提供される。

【0029】

本出願の別の態様は、個体におけるがんを処置する方法であって、上記の医薬組成物のいずれか１つに従った有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、当該方法を提供する。幾つかの実施形態では、疾患は、がんである。幾つかの実施形態では、個体は、低腫瘍量を有する。幾つかの実施形態では、本方法は、個体におけるサイトカインストームをもたらさない。幾つかの実施形態では、個体はヒトである。

【0030】

本出願の別の態様は、遺伝子操作された受容体を含む免疫細胞による処置を受ける個体におけるサイトカインストームを低減する方法であって、（ａ）８位及び／または６２位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を当該免疫細胞に導入することであって、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従い、これにより、改変された免疫細胞を提供する、当該導入すること、ならびに（ｂ）有効量の当該改変された免疫細胞を当該個体に投与することを含む、当該方法を提供する。

【0031】

本出願の更なる態様は、アミノ酸置換Ｄ８Ｅ及び／またはＴ６２Ｇを含む遺伝子操作されたＩＬ－１５ポリペプチドを提供し、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、遺伝子操作されたＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５及び７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0032】

本出願の別の態様は、遺伝子操作された受容体を含む免疫細胞の抗腫瘍活性を増強する方法であって、（ａ）３位及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を当該免疫細胞に導入し、これにより、改変された免疫細胞を提供することであって、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、当該提供すること、ならびに（ｂ）有効量の当該改変された免疫細胞を当該個体に投与することを含む、当該方法を提供する。

【0033】

本出願の更なる態様は、アミノ酸置換Ｖ３Ｙ及び／またはＬ２５Ｆを含む遺伝子操作されたＩＬ－１５ポリペプチドを提供し、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、遺伝子操作されたＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８及び７９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0034】

改変された免疫細胞のいずれか１つを含む組成物、使用法、キット、及び製造物品も提供される。

【図面の簡単な説明】

【0035】

【図1A】分泌型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲの８つの選択された変異型構築物を発現するＮＫ細胞（すなわち、ｓＩＬ－１５ ｍ１～ｍ８で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ）の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビトロでの細胞傷害効果を示す。変異型ｓＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の標的細胞に対するインビトロでの短時間（４時間）の細胞傷害性を示す。非形質導入ＮＫ細胞（すなわち、「ＵｎＮＫ」）は、この実験における対照として機能した。

【図1B】分泌型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲの８つの選択された変異型構築物を発現するＮＫ細胞（すなわち、ｓＩＬ－１５ ｍ１～ｍ８で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ）の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビトロでの細胞傷害効果を示す。８回の抗原刺激実験における変異型ｓＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の標的細胞に対するインビトロでの細胞傷害性（すなわち、総細胞数に対する腫瘍細胞の画分）を示す。非形質導入ＮＫ細胞（すなわち、「ＵｎＮＫ」）は、この実験における対照として機能した。

【図1C】分泌型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲの８つの選択された変異型構築物を発現するＮＫ細胞（すなわち、ｓＩＬ－１５ ｍ１～ｍ８で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ）の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビトロでの細胞傷害効果を示す。非形質導入ＮＫ細胞（すなわち、「ＵｎＮＫ」）は、この実験における対照として機能した。腫瘍細胞による刺激の間、変異型ｓＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞を増殖倍率についても評価した。

【0036】

【図2A】多発性骨髄腫腫瘍異種移植片を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、野生型分泌型ＩＬ－１５（すなわち、「ｓＩＬ－１５ ｗｔ」）で武装化されたＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの抗腫瘍効力を示す。Ａ～Ｂは、マウスにおけるｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＮＫ細胞、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＣＤ１９ ＣＡＲ－ＮＫ細胞、及びｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置されたマウスの抗腫瘍活性（図２Ａ）及び生存（図２Ｂ）を示す。非形質導入ＮＫ細胞とｈＩＬ－１５の腹腔内投与との組み合わせ（すなわち、「ＵｎＮＫの静脈内投与＋ＩＬ－１５の腹腔内投与」）、ＨＢＳＳ（－／－）ビヒクル対照（すなわち、「ビヒクルの静脈内投与」）、及び腫瘍を有さないＮＣＧマウスは、この実験における対照として機能した。

【図2B】多発性骨髄腫腫瘍異種移植片を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、野生型分泌型ＩＬ－１５（すなわち、「ｓＩＬ－１５ ｗｔ」）で武装化されたＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの抗腫瘍効力を示す。Ａ～Ｂは、マウスにおけるｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＮＫ細胞、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＣＤ１９ ＣＡＲ－ＮＫ細胞、及びｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置されたマウスの抗腫瘍活性（図２Ａ）及び生存（図２Ｂ）を示す。非形質導入ＮＫ細胞とｈＩＬ－１５の腹腔内投与との組み合わせ（すなわち、「ＵｎＮＫの静脈内投与＋ＩＬ－１５の腹腔内投与」）、ＨＢＳＳ（－／－）ビヒクル対照（すなわち、「ビヒクルの静脈内投与」）、及び腫瘍を有さないＮＣＧマウスは、この実験における対照として機能した。

【0037】

【図3A】多発性骨髄腫腫瘍異種移植片を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、変異型分泌型ＩＬ－１５で武装化されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの評価を示す。Ａは、変異型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の抗腫瘍効力を示し、Ｂは、マウス末梢血における変異型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の抗腫瘍効力の生物発光イメージング（ＢＬＩ）による表現を示す。ＨＢＳＳ（－／－）ビヒクル対照（すなわち、「ビヒクル」）及び腫瘍を有さないＮＣＧマウスは、この実験における対照として機能した。

【図3B】多発性骨髄腫腫瘍異種移植片を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、変異型分泌型ＩＬ－１５で武装化されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの評価を示す。Ａは、変異型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の抗腫瘍効力を示し、Ｂは、マウス末梢血における変異型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の抗腫瘍効力の生物発光イメージング（ＢＬＩ）による表現を示す。ＨＢＳＳ（－／－）ビヒクル対照（すなわち、「ビヒクル」）及び腫瘍を有さないＮＣＧマウスは、この実験における対照として機能した。

【図3C】多発性骨髄腫腫瘍異種移植片を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、変異型分泌型ＩＬ－１５で武装化されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの評価を示す。マウス血漿中のＩＦＮ－γ分泌を示す。ＨＢＳＳ（－／－）ビヒクル対照（すなわち、「ビヒクル」）及び腫瘍を有さないＮＣＧマウスは、この実験における対照として機能した。

【0038】

【図4A】高腫瘍量を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、変異型分泌型ＩＬ－１５及び野生型膜結合型ＩＬ－１５で武装化されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの評価を示す。Ａは、抗腫瘍効力を示し、Ｂは、マウス末梢血中のＢＣＭＡ ＣＡＲのＰＫを示す。非形質導入ＮＫ細胞とｈＩＬ－１５の腹腔内投与との組み合わせ（すなわち、「ＵｎＮＫの静脈内投与＋ＩＬ－１５の腹腔内投与」）は、この実験における対照として機能した。

【図4B】高腫瘍量を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、変異型分泌型ＩＬ－１５及び野生型膜結合型ＩＬ－１５で武装化されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの評価を示す。Ａは、抗腫瘍効力を示し、Ｂは、マウス末梢血中のＢＣＭＡ ＣＡＲのＰＫを示す。非形質導入ＮＫ細胞とｈＩＬ－１５の腹腔内投与との組み合わせ（すなわち、「ＵｎＮＫの静脈内投与＋ＩＬ－１５の腹腔内投与」）は、この実験における対照として機能した。

【図4C】高腫瘍量を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、変異型分泌型ＩＬ－１５及び野生型膜結合型ＩＬ－１５で武装化されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの評価を示す。Ｃ～Ｄは、変異型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置されたマウスのＢＬＩ及び生存曲線を示す。非形質導入ＮＫ細胞とｈＩＬ－１５の腹腔内投与との組み合わせ（すなわち、「ＵｎＮＫの静脈内投与＋ＩＬ－１５の腹腔内投与」）は、この実験における対照として機能した。

【図4D】高腫瘍量を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、変異型分泌型ＩＬ－１５及び野生型膜結合型ＩＬ－１５で武装化されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの評価を示す。Ｃ～Ｄは、変異型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置されたマウスのＢＬＩ及び生存曲線を示す。非形質導入ＮＫ細胞とｈＩＬ－１５の腹腔内投与との組み合わせ（すなわち、「ＵｎＮＫの静脈内投与＋ＩＬ－１５の腹腔内投与」）は、この実験における対照として機能した。

【図4E】高腫瘍量を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、変異型分泌型ＩＬ－１５及び野生型膜結合型ＩＬ－１５で武装化されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの評価を示す。Ｅ～Ｇは、マウス血漿中のＩＦＮ－γ（Ｅ）、ＴＮＦ－α（Ｆ）、及びＧＭ－ＣＳＦ（Ｇ）が含まれる、マウス血漿中の炎症誘発性サイトカインレベルを示し、毒性の観察結果と一貫する。非形質導入ＮＫ細胞とｈＩＬ－１５の腹腔内投与との組み合わせ（すなわち、「ＵｎＮＫの静脈内投与＋ＩＬ－１５の腹腔内投与」）は、この実験における対照として機能した。

【図4F】高腫瘍量を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、変異型分泌型ＩＬ－１５及び野生型膜結合型ＩＬ－１５で武装化されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの評価を示す。Ｅ～Ｇは、マウス血漿中のＩＦＮ－γ（Ｅ）、ＴＮＦ－α（Ｆ）、及びＧＭ－ＣＳＦ（Ｇ）が含まれる、マウス血漿中の炎症誘発性サイトカインレベルを示し、毒性の観察結果と一貫する。非形質導入ＮＫ細胞とｈＩＬ－１５の腹腔内投与との組み合わせ（すなわち、「ＵｎＮＫの静脈内投与＋ＩＬ－１５の腹腔内投与」）は、この実験における対照として機能した。

【図4G】高腫瘍量を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、変異型分泌型ＩＬ－１５及び野生型膜結合型ＩＬ－１５で武装化されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの評価を示す。Ｅ～Ｇは、マウス血漿中のＩＦＮ－γ（Ｅ）、ＴＮＦ－α（Ｆ）、及びＧＭ－ＣＳＦ（Ｇ）が含まれる、マウス血漿中の炎症誘発性サイトカインレベルを示し、毒性の観察結果と一貫する。非形質導入ＮＫ細胞とｈＩＬ－１５の腹腔内投与との組み合わせ（すなわち、「ＵｎＮＫの静脈内投与＋ＩＬ－１５の腹腔内投与」）は、この実験における対照として機能した。

【0039】

【図5A】膜結合型変異型ＩＬ－１５（すなわち、膜結合型ＩＬ－１５ ｍ６）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビトロでの細胞傷害効果を示す。図５Ａは、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及び膜結合型ＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の標的細胞に対するインビトロでの短時間（４時間）の細胞傷害性を示す。図５Ｂは、４回の抗原刺激実験におけるｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及び膜結合型ＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の標的細胞に対するインビトロでの長時間の細胞傷害性（すなわち、総細胞数に対する腫瘍細胞の画分）を示す。非形質導入ＮＫ細胞（すなわち、「ＵｎＮＫ」）は、この実験における対照として機能した。

【図5B】膜結合型変異型ＩＬ－１５（すなわち、膜結合型ＩＬ－１５ ｍ６）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビトロでの細胞傷害効果を示す。図５Ａは、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及び膜結合型ＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の標的細胞に対するインビトロでの短時間（４時間）の細胞傷害性を示す。図５Ｂは、４回の抗原刺激実験におけるｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及び膜結合型ＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の標的細胞に対するインビトロでの長時間の細胞傷害性（すなわち、総細胞数に対する腫瘍細胞の画分）を示す。非形質導入ＮＫ細胞（すなわち、「ＵｎＮＫ」）は、この実験における対照として機能した。

【0040】

【図6A】膜結合型変異型ＩＬ－１５（すなわち、膜結合型ＩＬ－１５ ｍ４）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビトロでの細胞傷害効果を示す。ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及び膜結合型ＩＬ－１５ ｍ４で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の標的細胞に対するインビトロでの短時間（４時間）の細胞傷害性を示す。非形質導入ＮＫ細胞（すなわち、「ＵｎＮＫ」）は、この実験における対照として機能した。

【図6B】膜結合型変異型ＩＬ－１５（すなわち、膜結合型ＩＬ－１５ ｍ４）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビトロでの細胞傷害効果を示す。７回の抗原刺激実験におけるｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及び膜結合型ＩＬ－１５ ｍ４で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の標的細胞に対するインビトロでの長時間の細胞傷害性（すなわち、総細胞数に対する腫瘍細胞の画分）を示す。非形質導入ＮＫ細胞（すなわち、「ＵｎＮＫ」）は、この実験における対照として機能した。

【図6C】膜結合型変異型ＩＬ－１５（すなわち、膜結合型ＩＬ－１５ ｍ４）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビトロでの細胞傷害効果を示す。非形質導入ＮＫ細胞（すなわち、「ＵｎＮＫ」）は、この実験における対照として機能した。腫瘍細胞による刺激の間、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及び膜結合型ＩＬ－１５ ｍ４で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞を増殖倍率についても評価した。

【0041】

【図7A】高腫瘍量を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、野生型分泌型ＩＬ－１５（すなわち、「ｓＩＬ－１５ ｗｔ」）及び変異型膜結合型ＩＬ－１５で武装化されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの評価を示す。図７Ａは、マウス末梢血中のＢＣＭＡ ＣＡＲのＰＫを示す。図７Ｂは、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及び膜結合型変異型ＩＬ－１５（すなわち、ｍｂ－４ ＩＬ－１５ ｍ６及びｍｂ－５ ＩＬ－１５ ｍ６）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置されたマウスの生存曲線を示す。非形質導入ＮＫ細胞とｈＩＬ－１５の腹腔内投与との組み合わせ（すなわち、「ＵｎＮＫの静脈内投与＋ＩＬ－１５の腹腔内投与」）は、この実験における対照として機能した。

【図7B】高腫瘍量を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）における、野生型分泌型ＩＬ－１５（すなわち、「ｓＩＬ－１５ ｗｔ」）及び変異型膜結合型ＩＬ－１５で武装化されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの評価を示す。図７Ａは、マウス末梢血中のＢＣＭＡ ＣＡＲのＰＫを示す。図７Ｂは、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及び膜結合型変異型ＩＬ－１５（すなわち、ｍｂ－４ ＩＬ－１５ ｍ６及びｍｂ－５ ＩＬ－１５ ｍ６）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置されたマウスの生存曲線を示す。非形質導入ＮＫ細胞とｈＩＬ－１５の腹腔内投与との組み合わせ（すなわち、「ＵｎＮＫの静脈内投与＋ＩＬ－１５の腹腔内投与」）は、この実験における対照として機能した。

【0042】

【図8A】短時間（図８Ａ）及び長時間（図８Ｂ）細胞殺傷アッセイにおけるｓＩＬ－１５ ｍ１７で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のＨｕｈ７／Ｌｕｃ細胞に対するインビトロでの細胞傷害性を示す。ｓＩＬ－１５ ｍ１７で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、短時間殺傷アッセイ及び長時間殺傷アッセイにおいてＲ２後に、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較してＨｕｈ７／Ｌｕｃ細胞に対する強い抗腫瘍効力を示した。「ＵｎＮＫ」は、非形質導入ＮＫ細胞を意味する。図８ＢのＲ０、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ５は、標的細胞による刺激の回数を意味する。

【図8B】短時間（図８Ａ）及び長時間（図８Ｂ）細胞殺傷アッセイにおけるｓＩＬ－１５ ｍ１７で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のＨｕｈ７／Ｌｕｃ細胞に対するインビトロでの細胞傷害性を示す。ｓＩＬ－１５ ｍ１７で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、短時間殺傷アッセイ及び長時間殺傷アッセイにおいてＲ２後に、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較してＨｕｈ７／Ｌｕｃ細胞に対する強い抗腫瘍効力を示した。「ＵｎＮＫ」は、非形質導入ＮＫ細胞を意味する。図８ＢのＲ０、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ５は、標的細胞による刺激の回数を意味する。

【0043】

【図9A】短時間（図９Ａ）及び長時間（図９Ｂ）細胞殺傷アッセイにおけるｓＩＬ－１５ ｍ１８で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のＨｕｈ７／Ｌｕｃ細胞に対するインビトロでの細胞傷害性を示す。ｓＩＬ－１５ ｍ１８で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、短時間殺傷アッセイ及び長時間殺傷アッセイにおいてＲ２後に、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較してＨｕｈ７／Ｌｕｃ細胞に対する強い抗腫瘍効力を示した。「ＵｎＮＫ」は、非形質導入ＮＫ細胞を意味する。図９ＢのＲ０、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ６は、標的細胞による刺激の回数を意味する。

【図9B】短時間（図９Ａ）及び長時間（図９Ｂ）細胞殺傷アッセイにおけるｓＩＬ－１５ ｍ１８で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のＨｕｈ７／Ｌｕｃ細胞に対するインビトロでの細胞傷害性を示す。ｓＩＬ－１５ ｍ１８で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、短時間殺傷アッセイ及び長時間殺傷アッセイにおいてＲ２後に、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較してＨｕｈ７／Ｌｕｃ細胞に対する強い抗腫瘍効力を示した。「ＵｎＮＫ」は、非形質導入ＮＫ細胞を意味する。図９ＢのＲ０、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ６は、標的細胞による刺激の回数を意味する。

【発明を実施するための形態】

【0044】

詳細な説明
本出願は、変異型ＩＬ－１５ポリペプチドを発現する改変された免疫細胞を提供し、当該免疫細胞は、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドを発現する改変された免疫細胞と比較して、強力な腫瘍溶解活性及び改善された安全性プロファイルを有する。幾つかの実施形態では、変異型ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５βに対する低減された（すなわち、より弱い）結合親和性を有する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び／または６２位での１つ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜結合型分子であり得るか、または改変された免疫細胞から分泌され得る。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であり、関心対象の標的抗原を特異的に認識するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を更に発現する。

【0045】

本明細書に記載される改変された免疫細胞は、野生型ＩＬ－１５で武装化したＣＡＲ ＮＫ細胞が、ＩＬ－１５で武装化したＣＡＲ ＮＫ細胞で処置された対象に有毒な過剰なサイトカイン分泌をもたらすという発見に少なくとも部分的に基づく。野生型ＩＬ－１５と比較して、ＩＬ１５－Ｒβに対する低減された結合親和性を有する変異型ＩＬ－１５ポリペプチドは、かかるＩＬ－１５ポリペプチドで武装化した免疫細胞によるサイトカイン分泌を軽減することができるが、同時にその免疫細胞の抗腫瘍活性を減弱し得る。本明細書に記載される変異型ＩＬ－１５ポリペプチド（例えば、Ｄ８Ｅ、Ｔ６２Ｇ、Ｖ３Ｙ、及びＬ２５Ｆ変異体）を発現する改変された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ ＮＫ細胞）は、処置された対象における炎症性サイトカイン（複数可）の過剰産生、例えば、サイトカインストームを誘発することなく、強力な抗腫瘍効力を保持または増強する。

【0046】

従って、本出願の一態様は、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞）を提供し、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｄ８Ｅ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｔ６２Ｇ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｖ３Ｙ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｌ２５Ｆ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、改変された免疫細胞により分泌される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＧＰＩリンカーを介して改変された免疫細胞の細胞膜に結合している。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜貫通ドメインまたは膜アンカードメインを含む。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、遺伝子操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体、改変されたＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原連結体（ＴＡＣ）受容体を更に含む。

【0047】

改変された免疫細胞を含む組成物（例えば、医薬組成物）、キット、及び製造物品、ならびに本明細書に記載される改変された免疫細胞を使用して疾患または状態（例えば、がん）を処置する方法も提供される。

【0048】

Ｉ．定義
本明細書で使用する場合、「処置」または「処置する」とは、臨床結果が含まれる、有益な結果または所望の結果を達成するための取り組みである。本開示の主旨に沿って、有益な臨床結果または所望の臨床結果としては、限定されるものではないが、以下のうちの１つ以上が挙げられる：疾患に起因する１つ以上の症状を低減すること、疾患の程度を減弱させること、疾患を安定化させること（例えば、疾患の悪化を予防するか、または遅延させること）、疾患の広がり（例えば、転移）を予防するか、もしくは遅延させること、疾患の再発を予防するか、もしくは遅延させること、疾患の進行を遅延させるか、もしくは減速させること、疾患の状態を改善すること、疾患の（部分的または完全な）寛解をもたらすこと、疾患を処置するために必要とされる１種以上の他の薬物の用量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、生活の質を上昇させること、及び／または生存期間を延長すること。疾患（例えば、がん）の病理学的帰結の低減も「処置」に包含される。本出願の方法は、処置のこれらの側面のうちの任意の１つ以上を意図する。

【0049】

用語「予防」及び同様の語、例えば、「予防した」、「予防する」などは、疾患または状態、例えば、がんの再発を予防するか、阻害するか、またはその可能性を低減する手法を意味する。これは、疾患もしくは状態の再発を遅延させること、または疾患もしくは状態の症状の再発を遅延させることも指す。本明細書で使用する場合、「予防」及び同様の語は、疾患または状態の強度、効果、症状、及び／または負荷を、当該疾患または状態の再発前に低減することも含む。

【0050】

本明細書で使用する場合、がんの発症を「遅延させること」は、疾患の発症を延期すること、妨げること、遅らせること、阻止すること、安定化すること、及び／または延ばすことを意味する。この遅延は、病歴及び／または処置される個体に応じて時間の長さが異なり得る。がんの発症を「遅延させる」方法は、当該方法の不使用と比較した場合に、所与の時間枠内での疾患発症の確率を低減し、及び／または所与の時間枠内での疾患の程度を低減する方法である。かかる比較は、通常、統計的に有意な数の個体を使用する臨床試験に基づく。がんの発症は、限定されるものではないが、コンピュータ体軸断層撮影法（ＣＡＴスキャン）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、腹部超音波検査、凝固試験、動脈造影法、または生検が含まれる、標準的方法を使用して検出可能であり得る。発症は、最初は検出不可能であり得るがんの進行も指し得、発生、再発、及び発病を包含する。

【0051】

本明細書において使用される用語「有効量」は、特定の障害、状態、または疾患を処置するのに、例えば、その症状のうちの１つ以上を改善し、緩和し、軽減し、及び／または遅延させるのに十分な薬剤または薬剤の組み合わせの量を指す。がんに関して、有効量は、腫瘍を縮小させ、及び／または腫瘍の成長速度を減少させる（例えば、腫瘍成長を抑制する）か、または他の望ましくない細胞増殖を予防するか、もしくは遅延させるのに十分な量を含む。幾つかの実施形態では、有効量は、疾患の発症を遅延させるのに十分な量である。幾つかの実施形態では、有効量は、再発を予防するか、または遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。有効量の薬物または組成物は、（ｉ）がん細胞の数を低減し得、（ｉｉ）腫瘍サイズを低減し得、（ｉｉｉ）末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害し得、遅延させ得、ある程度遅らせ得、好ましくは、停止させ得、（ｉｖ）腫瘍転移を阻害し得（すなわち、ある程度遅延させ得、好ましくは、停止させ得）、（ｖ）腫瘍成長を阻害し得、（ｖｉ）腫瘍の発生及び／または再発を予防するか、もしくは遅延させ得、及び／または（ｖｉｉ）がんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。

【0052】

本明細書で使用する場合、「個体」または「対象」は、限定されるものではないが、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、げっ歯類、または霊長類が含まれる哺乳動物を指す。幾つかの実施形態では、個体は、ヒトである。

【0053】

「単離された」核酸は、その天然環境の構成成分から分離されている核酸分子を指す。単離核酸は、通常、核酸分子を含有するが、当該核酸分子が染色体外に存在するか、またはその本来の染色体上の位置と異なり染色体上の位置に存在する細胞に含有される当該核酸分子を包含する。

【0054】

本明細書で使用する場合、用語「ベクター」は、連結されている別の核酸を増やすことができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクターだけでなく、それが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを包含する。ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている核酸の発現を誘導することができる。かかるベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。

【0055】

本明細書で使用する場合、用語「形質移入された」または「形質転換された」または「形質導入された」は、異種核酸が宿主細胞に移されるか、または導入されるプロセスを指す。「形質移入された」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、異種核酸で形質移入、形質転換、または形質導入された細胞である。この細胞は、初代対象細胞及びその後代を包含する。

【0056】

本明細書において同定されるポリペプチド配列に関して、「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアラインメントした後の、比較されるポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の百分率と定義され、任意の保存的置換を配列同一性の一部として考慮する。アミノ酸配列同一性パーセントを決定することを目的としたアラインメントは、当該技術分野における技術の範囲内である様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）、またはＭＵＳＣＬＥソフトウェアなどの公開されているコンピュータソフトウェアを使用して達成され得る。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大限のアラインメントを得るのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントの評価のための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムであるＭＵＳＣＬＥ（Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２（５）：１７９２－１７９７，２００４、Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ５（１）：１１３，２００４）を使用して生成される。

【0057】

本明細書で使用する場合、「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、Ｔ細胞などの細胞に１つ以上の抗原特異性を移植する遺伝子操作された受容体を指す。ＣＡＲは、「人工Ｔ細胞受容体」、「キメラＴ細胞受容体」、または「キメラ免疫受容体」としても公知である。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、腫瘍抗原に特異的な抗体の細胞外可変ドメイン、及びＴ細胞受容体または他の受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、１つ以上の共刺激ドメインを含む。「ＣＡＲ－Ｔ」は、ＣＡＲを発現するＴ細胞を指す。「ＣＡＲ－ＮＫ」は、ＣＡＲを発現するＮＫ細胞を指す。本明細書で使用する場合、「ＢＣＭＡ ＣＡＲ」は、ＢＣＭＡを特異的に認識するＣＡＲを指し、「ＣＤ１９ ＣＡＲ」は、ＣＤ１９を特異的に認識するＣＡＲを指し、「ＧＰＣ３ ＣＡＲ」は、ＧＰＣ３を特異的に認識するＣＡＲを指す。

【0058】

本明細書で使用する場合、「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」は、ＭＨＣ分子に結合した特異的な抗原ペプチドに結合する細胞外抗原結合ドメインを含む内在性のＴ細胞受容体または改変されたＴ細胞受容体を指す。幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、ＴＣＲαポリペプチド鎖及びＴＣＲβポリペプチド鎖を含む。幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、ＴＣＲγポリペプチド鎖及びＴＣＲδポリペプチド鎖を含む。幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、腫瘍抗原に特異的に結合する。「ＴＣＲ－Ｔ」は、組換えＴＣＲを発現するＴ細胞を指す。

【0059】

本明細書で使用する場合、「Ｔ細胞抗原連結体受容体」または「ＴＡＣ受容体」は、特異的抗原及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）結合ドメインに結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共受容体分子の細胞内ドメインを含む遺伝子操作された受容体を指す。ＴＡＣ受容体は、ＴＡＣ受容体を発現したＴ細胞の内在性ＴＣＲを利用して、標的細胞に対する抗原特異的なＴ細胞応答を誘発する。

【0060】

本明細書において用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、限定されるものではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片が含まれる様々な抗体構造を、それらが目的の抗原結合活性を示す限り包含する。抗体という用語は、限定されるものではないが、抗原に結合することができる断片、例えば、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）_２を包含する。抗体という用語は、通常の４本鎖抗体、及び単一ドメイン抗体、例えば、重鎖のみ抗体またはその断片、例えば、Ｖ_ＨＨを包含する。

【0061】

本明細書で使用する場合、用語「結合する」、「特異的に結合する」、または「に特異的」は、測定可能かつ再現可能な相互作用、例えば、生体分子を含む分子の不均一集団の存在下での標的の存在を確定する当該標的と抗体との間の結合を指す。例えば、標的（これはエピトープであり得る）に結合するか、または特異的に結合する抗体は、これが他の標的に結合するよりも高い親和性で、結合活性で、より即座に、及び／またはより長期間、この標的と結合する抗体である。一実施形態では、抗体の無関係な標的への結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）により測定される場合、当該抗体の標的への結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、標的に特異的に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、または０．１ｎＭ以下の解離定数（Ｋｄ値）を有する。ある特定の実施形態では、抗体は、異なる種由来のタンパク質間で保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。別の実施形態では、特異的な結合は、排他的な結合を含み得るが、それを必要とはしない。

【0062】

用語「細胞」は、初代対象細胞及びその後代を包含する。

【0063】

本明細書に記載される本開示の実施形態は、「からなる」及び／または「本質的にからなる」実施形態を包含することが理解されよう。

【0064】

本明細書における、「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする変形形態を包含する（及び記載している）。例えば、「約Ｘ」に言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。

【0065】

本明細書で使用する場合、ある値またはパラメータではないという言及は、一般に、ある値またはパラメータ「以外」であることを意味し、記載している。例えば、本方法は種類Ｘのがんを処置するために使用されないとは、本方法がＸ以外の種類のがんを処置するために使用されることを意味する。

【0066】

本明細書において使用される用語「約Ｘ～Ｙ」は、「約Ｘ～約Ｙ」と同じ意味を有する。

【0067】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈で明確に指示されない限り、複数形の指示物を含む。

【0068】

明確にするために別個の実施形態において記載されている本開示のある特定の特徴は、組み合わせて単一の実施形態で提供されてもよいことが理解されよう。反対に、簡潔さのために単一の実施形態において記載されている様々な本開示の特徴は、別々にまたは任意の好適な副組合せで提供されてもよい。本明細書に記載される改変された免疫細胞及び処置方法に関する実施形態の全ての組み合わせは、あらゆる組み合わせが個別かつ明示的に開示されたかのように、本出願により具体的に包含され、本明細書において開示される。加えて、かかる可変部分を記載する実施形態において列挙される改変された免疫細胞の全ての副組合せも、タンパク質のあらゆるかかる副組合せが本明細書において個別かつ明示的に開示されたかのように、本出願により具体的に包含され、本明細書において開示される。

【0069】

ＩＩ．改変された免疫細胞
本出願の一態様は、野生型ＩＬ－１５と比較して１つ以上のアミノ酸置換を有する変異型ＩＬ－１５を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞を提供し、ここで、当該ＩＬ－１５ポリペプチドは、発現された際に、ＩＬ－１５受容体に結合することができる。幾つかの実施形態では、変異型ＩＬ－１５は、野生型ＩＬ－１５と比較してＩＬ－１５受容体に対する低減された結合親和性を有する。幾つかの実施形態では、変異型ＩＬ－１５は、ＩＬ－１５Ｒβに対する野生型ＩＬ－１５と比較して低減された結合親和性、例えば、少なくとも約１０％低減された、２０％低減された、３０％低減された、４０％低減された、５０％低減された、６０％低減された、７０％低減された、８０％低減された、９０％低減された、１２分の１に低減された、１４分の１に低減された、１６分の１に低減された、２０分の１に低減された、２５分の１に低減された、３０分の１に低減された、４０分の１に低減された、またはそれ以上に低減された結合親和性のいずれか１つを有する。幾つかの実施形態では、変異型ＩＬ－１５は、ＩＬ－１５Ｒβに対する野生型ＩＬ－１５と比較して低減された結合親和性、例えば、約１０分の１～約２０分の１に低減された結合親和性を有する。幾つかの実施形態では、変異型ＩＬ－１５は、野生型ＩＬ－１５と比較して低減されたレベル、例えば、少なくとも約１０％、２０％低減された、３０％低減された、４０％低減された、５０％低減された、６０％低減された、７０％低減された、８０％低減された、９０％低減された、２分の１に低減された、５分の１に低減された、１０分の１に低減された、２０分の１に低減された、５０分の１に低減された、１００分の１に低減された、２００分の１に低減された、５００分の１に低減された、１０００分の１に低減された、またはそれ以上に低減されたレベルのいずれか１つの炎症性サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、及び／またはＧＭ－ＣＳＦ）の改変された免疫細胞による分泌を誘発する。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、個体に投与される場合、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸を含む改変された免疫細胞と比較してインビボでの低減された毒性を有する。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、個体に投与される場合、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸を含む改変された免疫細胞と比較してインビボでの改善された安全性を有する。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞を投与された個体は、サイトカインストームを示さない。幾つかの実施形態では、野生型ＩＬ－１５と比較して１つ以上のアミノ酸置換を有する変異型ＩＬ－１５を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞は、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸を含む改変された免疫細胞と比較して増強された抗腫瘍活性を有する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、分泌型である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜結合型である。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、遺伝子操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、遺伝子操作されたＴＣＲ、またはＴ細胞抗原連結体（ＴＡＣ）受容体を更に含む。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及び樹状細胞（ＤＣ）活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0070】

幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、グリシン（Ｇ）、イソロイシン（Ｉ）、グルタミン（Ｑ）、バリン（Ｖ）、プロリン（Ｐ）、ロイシン（Ｌ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、及びチロシン（Ｙ）からなる群から選択されるアミノ酸残基を６２位で含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７～８及び１１～１７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７～８及び１１～１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0071】

幾つかの実施形態では、６２位でＧを含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｔ６２Ｇ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0072】

幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのグルタミン酸（Ｅ）を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0073】

幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのチロシン（Ｙ）を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0074】

幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのグルタミン酸（Ｅ）またはフェニルアラニン（Ｆ）を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅである。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0075】

幾つかの実施形態では、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含む分泌型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ－１５受容体（例えば、ＩＬ－１５Ｒα及び／またはＩＬ－１５Ｒβ／γｃ）に対する低減された結合親和性を有する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメインまたはＩＬ－１５Ｒαのスシドメインに融合されたＩＬ－１５断片を含む融合タンパク質である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５７または５８のアミノ酸配列を含む融合タンパク質である。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0076】

幾つかの実施形態では、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含む膜結合型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従うものであり、当該ＩＬ－１５ポリペプチドは、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーペプチド配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＧＰＩアンカーペプチド配列は、ＧＰＩリンカーに結合している。幾つかの実施形態では、ＧＰＩアンカーペプチド配列は、ＩＬ－１５ポリペプチドのＣ末端に位置する。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0077】

幾つかの実施形態では、第２のポリペプチド断片に融合されたＩＬ－１５断片を含む融合タンパク質であるＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞が提供され、ここで、当該ＩＬ－１５断片は、８位 ６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５断片は、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５断片は、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５断片は、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５断片は、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５断片は、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５断片は、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５断片は、８位及び６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、第２のポリペプチド断片は、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメイン、ＩＬ－１５Ｒβ、共通γ鎖（γｃ）、遺伝子操作された受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＡＣ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、第２のポリペプチド断片は、配列番号５０～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５断片は、ペプチドリンカーを介して第２のポリペプチド断片に融合されている。幾つかの実施形態では、本明細書において上記されたＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５７～６４、７６、及び７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0078】

幾つかの実施形態では、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含む膜結合型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従うものであり、当該ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜貫通ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメインである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、細胞内ドメインを更に含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、（ａ）抗原結合ドメイン；（ｂ）ＩＬ－１５断片；（ｃ）膜貫通ドメイン；及び（ｄ）細胞内ドメインを含む。幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＩＬ－１５断片のＮ末端に存在する。幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＩＬ－１５断片のＣ末端に存在する。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ８α、またはＣＤ２８の膜貫通ドメインである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ヒンジドメイン、例えば、ＣＤ８に由来するヒンジドメインを更に含む。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号６５、６６、または７５を含む。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0079】

幾つかの実施形態では、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含む膜結合型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従うものであり、当該ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜アンカードメインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、膜アンカードメインは、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメイン、ＩＬ－１５Ｒβ、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン、ＩＬ－１５Ｒβの細胞外ドメイン、共通γ鎖（γｃ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される分子に由来する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５９～６４、７６、及び７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0080】

幾つかの実施形態では、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列であって、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、当該第１の異種核酸配列、ならびに遺伝子操作された受容体をコードする第２の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞）が提供される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、ＣＡＲ、例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、遺伝子操作されたＴＣＲである。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、ＴＡＣ受容体である。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じベクターまたは別個のベクターに存在する。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じプロモーターまたは別個のプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0081】

幾つかの実施形態では、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列であって、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、当該第１の異種核酸配列、ならびに遺伝子操作された受容体をコードする第２の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞）が提供される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、ＣＡＲ、例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、遺伝子操作されたＴＣＲである。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、ＴＡＣ受容体である。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じベクターまたは別個のベクターに存在する。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じプロモーターまたは別個のプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、配列番号３１～３８、４２～４９、８３、及び８４からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む改変された免疫細胞。

【0082】

幾つかの実施形態では、ＧＰＩアンカーペプチド配列を含む膜結合型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列であって、当該ＩＬ－１５ポリペプチドが、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う、当該第１の異種核酸配列、ならびに遺伝子操作された受容体をコードする第２の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞）が提供される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＧＰＩアンカーペプチド配列は、ＧＰＩリンカーに結合している。幾つかの実施形態では、ＧＰＩアンカーペプチド配列は、ＩＬ－１５ポリペプチドのＣ末端に位置する。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、ＣＡＲ、例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、遺伝子操作されたＴＣＲである。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、ＴＡＣ受容体である。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じベクターまたは別個のベクターに存在する。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じプロモーターまたは別個のプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0083】

幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインを含む膜結合型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列であって、当該ＩＬ－１５ポリペプチドが、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、当該第１の異種核酸配列、ならびに遺伝子操作された受容体をコードする第２の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞）が提供される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメインである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、細胞内ドメインを更に含む。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、ＣＡＲ、例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、遺伝子操作されたＴＣＲである。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、ＴＡＣ受容体である。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じベクターまたは別個のベクターに存在する。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じプロモーターまたは別個のプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0084】

幾つかの実施形態では、（ａ）抗原結合ドメイン；（ｂ）ＩＬ－１５断片；（ｃ）膜貫通ドメイン；及び（ｄ）細胞内ドメインを含む遺伝子操作された受容体をコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞）が提供され、ここで、当該ＩＬ－１５断片は、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＩＬ－１５断片のＮ末端に存在する。幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＩＬ－１５断片のＣ末端に存在する。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ８α、またはＣＤ２８の膜貫通ドメインである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ヒンジドメイン、例えば、ＣＤ８αに由来するヒンジドメインを更に含む。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、またはＧＰＣ３に特異的に結合する。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、配列番号６５、６６、または７５を含む遺伝子操作された受容体をコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞。

【0085】

幾つかの実施形態では、膜アンカードメインを含む膜結合型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列であって、当該ＩＬ－１５ポリペプチドが、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う、当該第１の異種核酸配列、ならびに遺伝子操作された受容体をコードする第２の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞）が提供される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、膜アンカードメインは、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメイン、ＩＬ－１５Ｒβ、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン、ＩＬ－１５Ｒβの細胞外ドメイン、共通γ鎖（γｃ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される分子に由来する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５９～６４、７６、及び７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、ＣＡＲ、例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、遺伝子操作されたＴＣＲである。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、ＴＡＣ受容体である。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じベクターまたは別個のベクターに存在する。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じプロモーターまたは別個のプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0086】

幾つかの実施形態では、第２のポリペプチド断片に融合されたＩＬ－１５断片を含む融合タンパク質であるＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列であって、当該ＩＬ－１５ポリペプチドが、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う、当該第１の異種核酸配列、ならびに遺伝子操作された受容体をコードする第２の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞）が提供される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、第２のポリペプチド断片は、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメイン、ＩＬ－１５Ｒβ、共通γ鎖（γｃ）、遺伝子操作された受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＡＣ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、第２のポリペプチド断片は、配列番号５０～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５断片は、ペプチドリンカーを介して第２のポリペプチド断片に融合されている。幾つかの実施形態では、本明細書において上記されたＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５７～６４、７６、及び７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、ＣＡＲ、例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、遺伝子操作されたＴＣＲである。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、ＴＡＣ受容体である。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じベクターまたは別個のベクターに存在する。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じプロモーターまたは別個のプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0087】

幾つかの実施形態では、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含むＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－ＮＫ細胞またはＣＡＲ－Ｔ細胞）が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、分泌型である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜結合型である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＧＰＩアンカーペプチド配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜貫通ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜アンカードメインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、第２のポリペプチド断片に融合されたＩＬ－１５断片を含む融合タンパク質である。幾つかの実施形態では、第２のポリペプチド断片は、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメイン、ＩＬ－１５Ｒβ、共通γ鎖（γｃ）、遺伝子操作された受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＡＣ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0088】

幾つかの実施形態では、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含むＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－ＮＫ細胞またはＣＡＲ－Ｔ細胞）が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、分泌型である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜結合型である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＧＰＩアンカーペプチド配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜貫通ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜アンカードメインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、第２のポリペプチド断片に融合されたＩＬ－１５断片を含む融合タンパク質である。幾つかの実施形態では、第２のポリペプチド断片は、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメイン、ＩＬ－１５Ｒβ、共通γ鎖（γｃ）、遺伝子操作された受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＡＣ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0089】

幾つかの実施形態では、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含むＴＡＣ発現免疫細胞（例えば、ＴＡＣ－Ｔ細胞）が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、分泌型である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜結合型である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＧＰＩアンカーペプチド配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜貫通ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜アンカードメインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、第２のポリペプチド断片に融合されたＩＬ－１５断片を含む融合タンパク質である。幾つかの実施形態では、第２のポリペプチド断片は、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメイン、ＩＬ－１５Ｒβ、共通γ鎖（γｃ）、遺伝子操作された受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＡＣ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0090】

幾つかの実施形態では、Ｔ６２Ｇ置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含むＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－ＮＫ細胞またはＣＡＲ－Ｔ細胞）が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0091】

幾つかの実施形態では、Ｄ８Ｅ置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含むＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－ＮＫ細胞またはＣＡＲ－Ｔ細胞）が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0092】

幾つかの実施形態では、Ｖ３Ｙ置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含むＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－ＮＫ細胞またはＣＡＲ－Ｔ細胞）が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0093】

幾つかの実施形態では、Ｌ２５Ｆ置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含むＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－ＮＫ細胞またはＣＡＲ－Ｔ細胞）が提供され、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0094】

幾つかの実施形態では、配列番号５７～６６及び７５～７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸を含む改変された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞）が提供される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５断片を含むＣＡＲである。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第２の異種の核酸を更に含む。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、改変された免疫細胞から分泌される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜結合型である。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0095】

免疫細胞
改変された免疫細胞は、種々の細胞種及び細胞供給源に由来し得る。限定されるものではないが、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、サル、及びヒトが含まれる、任意の哺乳動物種由来の細胞が本明細書において意図される。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、ヒト細胞である。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、レシピエント個体と同種異系である（すなわち、同じ種であるが、異なるドナーに由来する）。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、自己由来である（すなわち、ドナー及びレシピエントは同一である）。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、同系である（すなわち、ドナー及びレシピエントは異なる個体であるが、一卵性双生児である）。

【0096】

幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、初代細胞に由来する。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、個体から単離された初代細胞である。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、個体から単離された初代細胞から増殖される（例えば、増殖及び／または分化される）。幾つかの実施形態では、初代細胞は、造血系である。幾つかの実施形態では、初代細胞は、胸腺から採取される。幾つかの実施形態では、初代細胞は、リンパ液またはリンパ節（例えば、腫瘍流入領域リンパ節）から採取される。幾つかの実施形態では、初代細胞は、脾臓から採取される。幾つかの実施形態では、初代細胞は、骨髄から採取される。幾つかの実施形態では、初代細胞は、末梢血などの血液から採取される。幾つかの実施形態では、初代細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。幾つかの実施形態では、初代細胞は、血漿に由来する。幾つかの実施形態では、初代細胞は、腫瘍に由来する。幾つかの実施形態では、初代細胞は、粘膜免疫系から採取される。幾つかの実施形態では、初代細胞は、生検試料から採取される。

【0097】

幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞株に由来する。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、市販の細胞株から採取される。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、個体から単離された初代細胞から確立された細胞株である。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞株から増殖される（例えば、増殖及び／または分化される）。幾つかの実施形態では、細胞株は、死を免れない。幾つかの実施形態では、細胞株は、不死化される。幾つかの実施形態では、細胞株は、腫瘍細胞株、例えば、白血病細胞株またはリンパ腫細胞株である。幾つかの実施形態では、細胞株は、ＰＢＭＣに由来する細胞株である。幾つかの実施形態では、細胞株は、幹細胞株である。幾つかの実施形態では、細胞株は、ＨＥＫ２９３－６Ｅ細胞、ＮＫ－９２細胞、及びＪｕｒｋａｔ細胞からなる群から選択される。

【0098】

本出願について有用である例示的な免疫細胞としては、限定されるものではないが、樹状細胞（未成熟樹状細胞及び成熟樹状細胞が含まれる）、Ｔリンパ球（例えば、ナイーブＴ細胞、エフェクターＴ細胞、メモリーＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラル－キラーＴ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、及びリンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞）、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、好中球、顆粒球、及びそれらの組み合わせが挙げられる。免疫細胞の亜集団は、当該技術分野において公知の１種以上の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ５６、ＣＤ３４、ＣＤ１４、ＣＤ３３など）の存在または非存在により定義され得る。医薬組成物が複数種の改変された免疫細胞を含む場合、改変された免疫細胞は、免疫細胞種の特定の亜集団、免疫細胞種の亜集団の組み合わせ、または２つ以上の免疫細胞種の組み合わせであり得る。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、同種細胞集団中に存在する。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、免疫細胞が増加されている異種細胞集団に存在する。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、リンパ球である。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、リンパ球ではない。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、養子免疫療法に適している。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、ＰＢＭＣである。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、ＰＢＭＣに由来する免疫細胞である。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、Ｔ細胞である。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞である。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞である。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、Ｂ細胞である。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、ＮＫ細胞である。

【0099】

幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、幹細胞に由来する。幾つかの実施形態では、幹細胞は、全能性幹細胞である。幾つかの実施形態では、幹細胞は、多能性幹細胞である。幾つかの実施形態では、幹細胞は、単能性幹細胞である。幾つかの実施形態では、幹細胞は、前駆細胞である。幾つかの実施形態では、幹細胞は、胚性幹細胞である。幾つかの実施形態では、幹細胞は、造血幹細胞である。幾つかの実施形態では、幹細胞は、間葉系幹細胞である。幾つかの実施形態では、幹細胞は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）である。

【0100】

改変された免疫細胞は、任意の数（例えば、１種、２種、３種、４種、５種、１０種、５０種、１００種、１０００種、またはそれ以上のいずれか）の異種核酸配列（第１及び第２の核酸配列が含まれる）を含み得る。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、単一コピーの第１及び／または第２の異種核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、複数コピーの第１及び／または第２の異種核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、少なくとも１種の追加の異種核酸配列、例えば、免疫調節剤、例えば、サイトカイン、ケモカイン、及び／または免疫チェックポイント阻害剤をコードする異種核酸配列を更に含む。

【0101】

本明細書に記載される異種核酸配列（複数可）を含む核酸（複数可）は、改変された免疫細胞に一過的にまたは安定的に組み込まれ得る。幾つかの実施形態では、核酸（複数可）は、改変された免疫細胞において一過性に発現される。例えば、核酸（複数可）は、染色体外アレイとして改変された免疫細胞の核に存在し得る。核酸（複数可）は、ウイルスを用いる方法またはウイルスを用いない方法が含まれる、当該技術分野において公知の任意の形質移入または形質導入法を使用して改変された免疫細胞に導入され得る。例示的なウイルスを用いない形質移入法としては、限定されるものではないが、化学物質ベースの形質移入、例えば、リン酸カルシウム、デンドリマー、リポソーム、またはカチオン性ポリマー（例えば、ＤＥＡＥ－デキストランまたはポリエチレンイミン）の使用；非化学的方法、例えば、エレクトロポレーション、細胞圧搾（ｃｅｌｌ ｓｑｕｅｅｚｉｎｇ）、ソノポレーション、光学トランスフェクション、インペールフェクション（ｉｍｐａｌｅｆｅｃｔｉｏｎ）、プロトプラスト融合、ハイドロダイナミック導入法、またはトランスポゾン；粒子ベースの方法、例えば、遺伝子銃、マグネトフェクションまたは磁性補助トランスフェクション、微粒子銃の使用；及びハイブリッド法、例えば、ヌクレオフェクションが挙げられる。

【0102】

幾つかの実施形態では、異種核酸配列（複数可）は、改変された免疫細胞のゲノムに存在する。例えば、異種核酸配列を含む核酸（複数可）は、限定されるものではないが、ウイルスにより媒介される組込み、ランダムな組込み、相同組換え法、及び部位特異的組込み法、例えば、部位特異的リコンビナーゼまたはインテグラーゼ、トランスポサーゼ、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ（登録商標））、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、及びジンクフィンガーヌクレアーゼの使用が含まれる、当該技術分野において公知の任意の方法により改変された免疫細胞のゲノムに組み込まれ得る。幾つかの実施形態では、異種核酸配列（複数可）は、改変された免疫細胞のゲノムの具体的に計画された遺伝子座に組み込まれる。幾つかの実施形態では、異種核酸配列（複数可）は、改変された免疫細胞のゲノムの組込みホットスポットに組み込まれる。幾つかの実施形態では、異種核酸（配列）は、改変された免疫細胞のゲノムのランダムな遺伝子座に組み込まれる。複数コピーの異種核酸配列（複数可）が単一の改変された免疫細胞に存在する場合、異種核酸配列は、改変された免疫細胞のゲノムの複数の遺伝子座に組み込まれていてもよい。

【0103】

ＩＬ－１５ポリペプチド
本明細書に記載される改変された免疫細胞は、変異型ＩＬ－１５ポリペプチドを発現する。本出願は、ＩＬ－１５ポリペプチド及びその組成物も提供する。幾つかの実施形態では、本明細書において提供されるＩＬ－１５ポリペプチドは、炎症性サイトカインレベルの増加（例えば、サイトカインストーム）を引き起こすことなく、強力な抗腫瘍効果を提供する。

【0104】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、全長ＩＬ－１５分子である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５分子の機能部分を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ヒトＩＬ－１５ポリペプチドである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、一本鎖を有する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２本以上の鎖を有する。

【0105】

幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドは、三量体ＩＬ－１５Ｒ（ＩＬ－１５受容体）複合体に結合することができる。ＩＬ－１５受容体は、種特異的なＩＬ－１５（「ＩＬ－１５Ｒα」）、ＩＬ－２／ＩＬ－１５Ｒβ（「ＩＬ－１５Ｒβ」）、及び様々なサイトカインと共有される共通γ鎖（「γｃ」）の３つのポリペプチドからなる。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、α鎖（「ＩＬ－１５Ｒα」）、共通β鎖（「ＩＬ－１５Ｒβ」）、及び／または共通γ鎖（「ＩＬ－１５Ｒγｃ」）に結合することができる。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒαに結合することができる。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒβに結合することができる。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒβ／γｃに結合することができる。

【0106】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドと同等のＩＬ－１５Ｒαに対する結合親和性を有する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ－１５βに対する低減された結合親和性を有する。例示的な野生型ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を有する。
配列番号１ 野生型ヒトＩＬ－１５
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

【0107】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、約１０^－９、１０^－１０、または１０^－１２のいずれか以上のＫＤでＩＬ－１５Ｒαに結合する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、約１０^－７、１０^－８、または１０^－９のいずれか以上のＫＤでＩＬ－１５Ｒβに結合する。

【0108】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒβに対する野生型ＩＬ－１５ポリペプチドと比較して低減された結合親和性、例えば、少なくとも約１０％低減された、２０％低減された、３０％低減された、４０％低減された、２分の１に低減された、４分の１に低減された、６分の１に低減された、８分の１に低減された、１０分の１に低減された、１２分の１に低減された、１４分の１に低減された、１６分の１に低減された、１８分の１に低減された、２０分の１に低減された、３０分の１に低減された、５０分の１に低減された、またはそれ以上に低減された結合親和性のいずれかを有する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒβに対する野生型ＩＬ－１５ポリペプチドと比較して低減された結合親和性、例えば、約５０分の１以上に低減された、３０分の１以上に低減された、２０分の１以上に低減された、１８分の１以上に低減された、１６分の１以上に低減された、１４分の１以上に低減された、１２分の１以上に低減された、１０分の１以上に低減された、８分の１以上に低減された、６分の１以上に低減された、４分の１以上に低減された、５０％以下低減された、４０％以下低減された、３０％以下低減された、２０％以下低減された、１０％以下低減された、またはそれ以下低減された結合親和性のいずれかを有する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒβに対する野生型ＩＬ－１５ポリペプチドと比較して低減された結合親和性、例えば、約１０％～５０％低減された、２～１０分の１に低減された、１０～２０分の１に低減された、２０～４０分の１に低減された、１０～４０分の１に低減された、１０～５０分の１に低減された、１４～４０分の１に低減された、または２～５０分の１に低減された結合親和性のいずれかを有する。

【0109】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドと比較して低減されたレベルの炎症性サイトカイン、例えば、少なくとも約１０％低減された、２０％低減された、３０％低減された、４０％低減された、２分の１に低減された、４分の１に低減された、６分の１に低減された、８分の１に低減された、１０分の１に低減された、１２分の１に低減された、１４分の１に低減された、１６分の１に低減された、１８分の１に低減された、２０分の１に低減された、３０分の１に低減された、５０分の１に低減された、１００分の１に低減された、２００分の１に低減された、５００分の１に低減された、１０００分の１に低減された、またはそれ以上に低減されたレベルの炎症性サイトカインのいずれかの、改変された免疫細胞による分泌を誘発する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドと比較して低減されたレベルの炎症性サイトカイン、例えば、約１０００分の１以上に低減された、５００分の１以上に低減された、２００分の１以上に低減された、１００分の１以上に低減された、５０分の１以上に低減された、３０分の１以上に低減された、２０分の１以上に低減された、１８分の１以上に低減された、１６分の１以上に低減された、１４分の１以上に低減された、１２分の１以上に低減された、１０分の１以上に低減された、８分の１以上に低減された、６分の１以上に低減された、４分の１以上に低減された、５０％以下低減された、４０％以下低減された、３０％以下低減された、２０％以下低減された、１０％以下低減された、またはそれ以下低減されたレベルの炎症性サイトカインのいずれかの、改変された免疫細胞による分泌を誘発する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドと比較して低減されたレベルの炎症性サイトカイン、例えば、約１０％～５０％低減された、２～１０００分の１に低減された、２～５０分の１に低減された、５０～１００分の１に低減された、１００～１０００分の１に低減された、５０～５００分の１に低減された、１０～１００分の１に低減された、１０～５０分の１に低減された、または５０～２００分の１に低減されたレベルの炎症性サイトカインのいずれかの、改変された免疫細胞による分泌を誘発する。例示的な炎症性サイトカインとしては、限定されるものではないが、例えば、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、及びＧＭ－ＣＳＦが挙げられる。幾つかの実施形態では、炎症性サイトカインの分泌レベルは、免疫血清検査法、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＩＡ）、またはフローサイトメトリーにより測定される。幾つかの実施形態では、炎症性サイトカイン分泌レベルは、細胞ベースのアッセイで測定される。幾つかの実施形態では、炎症性サイトカイン分泌レベルは、インビボで測定される。

【0110】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５ポリペプチドまたはＩＬ－１５ポリペプチドを含む改変された免疫細胞を投与された対象におけるサイトカインストームを誘発しない。「サイトカインストーム」は、多数の炎症性サイトカインが正常より高い頻度で生成される場合に発生する。幾つかの実施形態では、サイトカインの過剰産生は、他の免疫細胞の動員により細胞傷害を引き起こし得る。幾つかの実施形態では、サイトカインストームの間に産生される炎症性サイトカインとしては、ＩＬ－２０ファミリーのメンバー、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－３３ ＬＩＦ、ＩＦＮ－γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＮＦ－α、ＴＧＦ－β、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－８、及び当該技術分野において公知の他の炎症性サイトカインが挙げられる。幾つかの実施形態では、サイトカインストームの間に産生される炎症性サイトカインとしては、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、及びＧＭ－ＣＳＦが挙げられる。幾つかの実施形態では、サイトカインストームは、当該技術分野において公知の任意のサイトカイン測定技術により測定され得る。幾つかの実施形態では、サイトカインストームは、ＥＬＩＳＡ、ＣＩＡ、またはフローサイトメトリーにより測定される。

【0111】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位、８位、２３位、２５位、２６位、５８位、６１位、６２位、及び８９位からなる群から選択される１つ以上の位置でのアミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。例示的な変異型ＩＬ－１５ポリペプチド配列及びそれらの対応する変異を以下の表１に列挙する。

【0112】

【表1】

【0113】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、疎水性アミノ酸残基を６２位で含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、短い側鎖を有するアミノ酸残基を６２位で含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、グリシン（Ｇ）、イソロイシン（Ｉ）、グルタミン（Ｑ）、バリン（Ｖ）、プロリン（Ｐ）、ロイシン（Ｌ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、及びチロシン（Ｙ）からなる群から選択されるアミノ酸残基を６２位で含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｔ６２Ｇ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７、８、及び１１～１７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７、８及び、１１～１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、本明細書に記載される単一アミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、本明細書に記載される２つ以上のアミノ酸置換を含む。

【0114】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、酸性アミノ酸残基を８位で含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｅを８位で含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、非荷電アミノ酸残基を８位で含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｄ８Ｅ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、本明細書に記載される単一アミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、本明細書に記載される２つ以上のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換及び６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｄ８Ｅ及びＴ６２Ｇ置換を含む。

【0115】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｙを３位で含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｖ３Ｙ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、本明細書に記載される単一アミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、本明細書に記載される２つ以上のアミノ酸置換を含む。

【0116】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｆを２５位で含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｌ２５Ｆ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、本明細書に記載される単一アミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、本明細書に記載される２つ以上のアミノ酸置換を含む。

【0117】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｄ８Ｅ及びＴ６２Ｇ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び３位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｄ８Ｅ及びＶ３Ｙ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び２５位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｄ８Ｅ及びＬ２５Ｆ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位及び３位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｔ６２Ｇ及びＶ３Ｙ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位及び２５位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｔ６２Ｇ及びＬ２５Ｆ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位及び２５位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｖ３Ｙ及びＬ２５Ｆ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位、６２位、及び３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｄ８Ｅ、Ｔ６２Ｇ、及びＶ３Ｙ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位、６２位、及び２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｄ８Ｅ、Ｔ６２Ｇ、及びＬ２５Ｆ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位、３位、及び２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｄ８Ｅ、Ｖ３Ｙ、及びＬ２５Ｆ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位、３位、及び２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｔ６２Ｇ、Ｖ３Ｙ、及びＬ２５Ｆ置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位、６２位、３位、及び２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｄ８Ｅ、Ｔ６２Ｇ、Ｖ３Ｙ、及びＬ２５Ｆ置換を含む。

【0118】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、改変された免疫細胞から分泌される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメインに融合されたＩＬ－１５断片を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメインに融合されたＩＬ－１５断片を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、シグナルペプチド（本明細書において「ＳＰ」とも称される）を含む。シグナルペプチド（「リーダー配列」としても公知）は、通常、開始メチオニン直後のタンパク質のＮ末端に挿入される。シグナルペプチドは、改変された免疫細胞からのＩＬ－１５ポリペプチドの輸送時に切断され得、これにより、成熟タンパク質を生じる。シグナルペプチドは天然であっても合成であってもよく、それらが結合しているタンパク質にとって異種であっても同種であってもよい。シグナルペプチドの選択肢は幅広く、当業者は、例えば、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｉｎｇａｐｏｒｅにより維持されるリーダー配列オンラインデータベースにおいて入手可能である。Ｃｈｏｏ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，６：２４９（２００５）、及びＰＣＴ公開第ＷＯ２００６／０８１４３０号を参照のこと。例示的なシグナルペプチド配列としては、限定されるものではないが、配列番号７１～７４が挙げられる。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、プロペプチドを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７０を含む。

【0119】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、第２のポリペプチド断片に融合されたＩＬ－１５断片を含む融合タンパク質である。幾つかの実施形態では、第２のポリペプチド断片は、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメイン、ＩＬ－１５Ｒβ、共通γ鎖（γｃ）、遺伝子操作された受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＡＣ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0120】

例示的なＩＬ－１５融合ポリペプチドを以下の表２に列挙する。本明細書に記載されるＩＬ－１５ムテインのいずれかを含む融合タンパク質が本明細書において意図されることが理解されよう。

【0121】

【表2】

【0122】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５受容体（ＩＬ－１５Ｒ）、そのサブユニット、またはそれらの一部に融合されたＩＬ－１５断片を含む融合タンパク質である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒαに融合されたＩＬ－１５断片を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、全長ＩＬ－１５Ｒα分子である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、可溶型のＩＬ－１５Ｒα（例えば、ｓＩＬ－１５ＲまたはｓＩＬ－１５Ｒα）である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、天然に存在するＩＬ－１５Ｒα分子の細胞外ドメインである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒは、切断されたか、または欠失した細胞質ドメイン及び膜貫通ドメインを含むが、機能ドメイン（例えば、ＩＬ－１５結合活性を保持するために必要とされるＩＬ－１５Ｒの領域）を保持する。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５結合活性を保持するＩＬ－１５Ｒの最短領域は、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメインにまたがる６５アミノ酸配列である。「スシドメイン」または「短コンセンサスリピート」または「１型糖タンパク質モチーフ」は、タンパク質－タンパク質相互作用を促進する一般的な構造モチーフであり、ここで、当該モチーフは、２つのジスルフィド結合を形成する４つのシステインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、天然に存在するＩＬ－１５Ｒα分子のスシドメインである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメインに融合されたＩＬ－１５断片を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン及び膜貫通ドメインに融合されたＩＬ－１５断片を含む。

【0123】

ヒトＩＬ－１５Ｒα及びその断片を以下に示す。
配列番号５０（ＩＬ－１５Ｒα細胞外ドメイン）
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＴＴＡＧＶＴＰＱＰＥＳＬＳＰＳＧＫＥＰＡＡＳＳＰＳＳＮＮＴＡＡＴＴＡＡＩＶＰＧＳＱＬＭＰＳＫＳＰＳＴＧＴＴＥＩＳＳＨＥＳＳＨＧＴＰＳＱＴＴＡＫＮＷＥＬＴＡＳＡＳＨＱＰＰＧＶＹＰＱＧＨＳＤＴＴ

配列番号５１（ＩＬ－１５Ｒαスシドメイン）
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲ

配列番号５４（全長ＩＬ－１５Ｒα）
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＴＴＡＧＶＴＰＱＰＥＳＬＳＰＳＧＫＥＰＡＡＳＳＰＳＳＮＮＴＡＡＴＴＡＡＩＶＰＧＳＱＬＭＰＳＫＳＰＳＴＧＴＴＥＩＳＳＨＥＳＳＨＧＴＰＳＱＴＴＡＫＮＷＥＬＴＡＳＡＳＨＱＰＰＧＶＹＰＱＧＨＳＤＴＴＶＡＩＳＴＳＴＶＬＬＣＧＬＳＡＶＳＬＬＡＣＹＬＫＳＲＱＴＰＰＬＡＳＶＥＭＥＡＭＥＡＬＰＶＴＷＧＴＳＳＲＤＥＤＬＥＮＣＳＨＨＬ

配列番号５５（ＩＬ－１５Ｒα膜貫通ドメイン）
ＶＡＩＳＴＳＴＶＬＬＣＧＬＳＡＶＳＬＬＡＣＹＬ

【0124】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒβに融合されたＩＬ－１５断片を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒβは、全長ＩＬ－１５Ｒβ分子である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒβは、配列番号５２のアミノ酸配列を含む。
配列番号５２（全長ＩＬ１５Ｒβ）
ＡＶＮＧＴＳＱＦＴＣＦＹＮＳＲＡＮＩＳＣＶＷＳＱＤＧＡＬＱＤＴＳＣＱＶＨＡＷＰＤＲＲＲＷＮＱＴＣＥＬＬＰＶＳＱＡＳＷＡＣＮＬＩＬＧＡＰＤＳＱＫＬＴＴＶＤＩＶＴＬＲＶＬＣＲＥＧＶＲＷＲＶＭＡＩＱＤＦＫＰＦＥＮＬＲＬＭＡＰＩＳＬＱＶＶＨＶＥＴＨＲＣＮＩＳＷＥＩＳＱＡＳＨＹＦＥＲＨＬＥＦＥＡＲＴＬＳＰＧＨＴＷＥＥＡＰＬＬＴＬＫＱＫＱＥＷＩＣＬＥＴＬＴＰＤＴＱＹＥＦＱＶＲＶＫＰＬＱＧＥＦＴＴＷＳＰＷＳＱＰＬＡＦＲＴＫＰＡＡＬＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ

【0125】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、γｃに融合されたＩＬ－１５断片である。幾つかの実施形態では、γｃは、全長γｃ分子である。幾つかの実施形態では、γｃは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒβに融合されたＩＬ－１５断片を含み、改変された免疫細胞は、γｃをコードする異種核酸配列を更に含む。
配列番号５３（γｃ、共通γ鎖）
ＭＬＫＰＳＬＰＦＴＳＬＬＦＬＱＬＰＬＬＧＶＧＬＮＴＴＩＬＴＰＮＧＮＥＤＴＴＡＤＦＦＬＴＴＭＰＴＤＳＬＳＶＳＴＬＰＬＰＥＶＱＣＦＶＦＮＶＥＹＭＮＣＴＷＮＳＳＳＥＰＱＰＴＮＬＴＬＨＹＷＹＫＮＳＤＮＤＫＶＱＫＣＳＨＹＬＦＳＥＥＩＴＳＧＣＱＬＱＫＫＥＩＨＬＹＱＴＦＶＶＱＬＱＤＰＲＥＰＲＲＱＡＴＱＭＬＫＬＱＮＬＶＩＰＷＡＰＥＮＬＴＬＨＫＬＳＥＳＱＬＥＬＮＷＮＮＲＦＬＮＨＣＬＥＨＬＶＱＹＲＴＤＷＤＨＳＷＴＥＱＳＶＤＹＲＨＫＦＳＬＰＳＶＤＧＱＫＲＹＴＦＲＶＲＳＲＦＮＰＬＣＧＳＡＱＨＷＳＥＷＳＨＰＩＨＷＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ

【0126】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜結合型である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーペプチド配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｃ末端にＧＰＩアンカーポリペプチド配列を含む。ＧＰＩアンカーポリペプチド配列は、当技術分野において公知であり、限定されるものではないが、ヒトＬＦＡ３、ＣＤ４４、ＣＤ５９、ヒトＦｃγ受容体ＩＩＩ（ＣＤ１６ｂ）のＧＰＩアンカー配列が含まれる。Ｋｕｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ，２００７，８１（１６）：８６６６－８６７６を参照のこと。幾つかの実施形態では、ＧＰＩアンカーペプチド配列は、ＧＰＩリンカーに結合している。

【0127】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜アンカードメインに融合されたＩＬ－１５断片を含む。幾つかの実施形態では、膜アンカードメインは、リン脂質二重層に挿入され得る配列（例えば、膜リン脂質の脂肪族アシル基と相互作用する疎水性側鎖を有するアミノ酸残基）を含む。幾つかの実施形態では、膜アンカードメインは、正に荷電したアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、膜アンカードメインは、脂質を含む。

【0128】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５断片に直接または間接的に融合され得る膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、天然の供給源または合成の供給源のいずれかに由来し得る。本明細書で使用する場合、「膜貫通ドメイン」は、細胞膜内、好ましくは、真核生物の細胞膜内で熱力学的に安定している任意のタンパク質構造を指す。本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドにおける使用に適合可能な膜貫通ドメインは、天然に存在するタンパク質から得られ得る。あるいは、これは、合成の非天然タンパク質セグメント、例えば、細胞膜内で熱力学的に安定している疎水性タンパク質セグメントであり得る。

【0129】

膜貫通ドメインは、膜貫通ドメインの三次元構造に基づいて分類される。例えば、膜貫通ドメインは、αヘリックス、２つ以上のαヘリックスの複合体、βバレル、または細胞のリン脂質二重層を貫通することができる任意の他の安定な構造を形成し得る。更に、膜貫通ドメインは、膜貫通ドメインが膜を横切って通過する回数及びタンパク質の方向が含まれる、膜貫通ドメインのトポロジーに基づいて更にまたは代替的に分類され得る。例えば、１回膜貫通タンパク質は、細胞膜を１回通過し、複数回膜貫通タンパク質は、細胞膜を少なくとも２回（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、またはそれ以上）通過する。膜タンパク質は、細胞の内部及び外部に対するそれらの末端及び膜貫通セグメント（複数可）のトポロジーに応じてＩ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型と定義され得る。Ｉ型膜タンパク質は、単一の膜貫通領域を有し、タンパク質のＮ末端が細胞の脂質二重層の細胞外側に存在し、タンパク質のＣ末端が細胞質側に存在するように配向されている。ＩＩ型膜タンパク質も単一の膜貫通領域を有するが、タンパク質のＣ末端が細胞の脂質二重層の細胞外側に存在し、タンパク質のＮ末端が細胞質側に存在するように配向されている。ＩＩＩ型膜タンパク質は、複数の膜貫通セグメントを有し、膜貫通セグメントの数ならびにＮ末端及びＣ末端の位置に基づいて更に下位分類され得る。

【0130】

幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドの膜貫通ドメインは、Ｉ型１回膜貫通タンパク質に由来する。幾つかの実施形態では、複数回膜貫通タンパク質由来の膜貫通ドメインも本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドにおける使用に適合可能であり得る。複数回膜貫通タンパク質は、複合体の（少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、またはそれ以上の）αヘリックスまたはβシート構造を含み得る。好ましくは、複数回膜貫通タンパク質のＮ末端及びＣ末端は、脂質二重層の反対側に存在し、例えば、タンパク質のＮ末端は、脂質二重層の細胞質側に存在し、タンパク質のＣ末端は、細胞外側に存在する。

【0131】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β、もしくはζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－７Ｒａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、及び／またはＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメインを含む。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５２、及びＰＤ１からなる群から選択される分子に由来する。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８αに由来する。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαに由来する。

【0132】

本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドに使用される膜貫通ドメインは、非天然の合成タンパク質セグメントの少なくとも一部を含み得る。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、非天然の合成αヘリックスまたはβシートである。幾つかの実施形態では、タンパク質セグメントは、少なくとも約２０アミノ酸、例えば、少なくとも１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０アミノ酸、またはそれ以上である。合成膜貫通ドメインの例は、当技術分野において公知である（例えば、米国特許第７，０５２，９０６Ｂ１号及びＰＣＴ公開第ＷＯ２０００／０３２７７６Ａ２号（これらの関連する開示は参照により本明細書に組み込まれる））。

【0133】

膜貫通ドメインは、膜貫通領域、及び膜貫通ドメインのＣ末端側に存在する細胞質領域を含み得る。膜貫通ドメインの細胞質領域は、３アミノ酸以上を含み得、幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインを脂質二重層に配置するのに役立つ。幾つかの実施形態では、１つ以上のシステイン残基が膜貫通ドメインの膜貫通領域に存在する。幾つかの実施形態では、１つ以上のシステイン残基が膜貫通ドメインの細胞質領域に存在する。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインの細胞質領域は、正に荷電したアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインの細胞質領域は、アミノ酸のアルギニン、セリン、及びリジンを含む。

【0134】

幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインの膜貫通領域は、疎水性アミノ酸残基を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドの膜貫通ドメインは、人工の疎水性配列を含む。例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、及びバリンのトリプレットが膜貫通ドメインのＣ末端に存在し得る。幾つかの実施形態では、膜貫通領域は、主に疎水性アミノ酸残基、例えば、アラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはバリンを含む。幾つかの実施形態では、膜貫通領域は、疎水性である。幾つかの実施形態では、膜貫通領域は、ポリ－ロイシン－アラニン配列を含む。タンパク質またはタンパク質セグメントのハイドロパシーまたは疎水性もしくは親水性特性は、当該技術分野において公知の任意の方法、例えば、ＫｙｔｅーＤｏｏｌｉｔｔｌｅ法によるハイドロパシー解析により評価され得る。

【0135】

ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５断片と膜貫通ドメインとの間に存在するヒンジ領域を含み得る。ヒンジ領域は、タンパク質の２つのドメインの間に通常見出され、タンパク質に柔軟性を与え得、ドメインの一方または両方の互いに対して動くことを可能にし得るアミノ酸セグメントである。かかる柔軟性を提供し、ＩＬ－１５ポリペプチドにおけるＩＬ－１５断片の膜貫通ドメインに対する動きをもたらす任意のアミノ酸配列が使用され得る。

【0136】

ヒンジ領域は、約１０～１００アミノ酸、例えば、約１５～７５のアミノ酸、２０～５０アミノ酸、または３０～６０アミノ酸のいずれかを含み得る。幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、少なくとも約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、または７５アミノ酸長のいずれかであり得る。

【0137】

幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、天然に存在するタンパク質のヒンジ領域である。ヒンジ領域を含むことが当該技術分野において公知の任意のタンパク質のヒンジ領域が本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドにおける使用に適合可能である。幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、天然に存在するタンパク質のヒンジ領域の少なくとも一部であり、ＩＬ－１５ポリペプチドに柔軟性を付与する。幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ８αに由来する。幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ８αのヒンジ領域の一部、例えば、ＣＤ８αのヒンジ領域の少なくとも１５（例えば、２０、２５、３０、３５、または４０）連続アミノ酸を含む断片である。

【0138】

抗体、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＤ抗体のヒンジ領域も本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドにおける使用に適合可能である。幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、抗体の定常ドメインＣＨ１及びＣＨ２を連結するヒンジ領域である。幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、抗体のものであり、抗体のヒンジ領域及び抗体の１つ以上の定常領域を含む。幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、抗体のヒンジ領域及び抗体のＣＨ３定常領域を含む。幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、抗体のヒンジ領域ならびに抗体のＣＨ２及びＣＨ３定常領域を含む。幾つかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＤ抗体である。幾つかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。幾つかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４抗体である。幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＩｇＧ１抗体のヒンジ領域ならびにＣＨ２及びＣＨ３定常領域を含む。幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＩｇＧ１抗体のヒンジ領域及びＣＨ３定常領域を含む。

【0139】

非天然ペプチドもＩＬ－１５ポリペプチドのヒンジ領域として使用され得る。幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、（ＧｘＳ）ｎリンカーなどのペプチドリンカーであり、ここで、ｘ及びｎは、独立して、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはそれ以上が含まれる、３～１２の整数であり得る。

【0140】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、細胞内シグナル伝達ドメインなどの細胞内ドメインを更に含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、（ａ）ＩＬ－１５断片；（ｂ）膜貫通ドメイン；及び（ｃ）細胞内ドメインを含む。

【0141】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、（ａ）抗原結合ドメイン；（ｂ）ＩＬ－１５断片；（ｃ）膜貫通ドメイン；及び（ｄ）細胞内ドメインを含む遺伝子操作された受容体である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２つ以上の抗原結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、単一特異性の遺伝子操作された受容体である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、二重特異性の遺伝子操作された受容体である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、多重特異性の遺伝子操作された受容体である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、多価、例えば、二価の遺伝子操作された受容体である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、バイエピトープ性の遺伝子操作された受容体である。抗原結合ドメインは、ＩＬ－１５断片のＮ末端またはＣ末端に存在し得る。幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ペプチドリンカーを介してＩＬ－１５断片に融合されている。例示的な遺伝子操作された受容体としては、限定されるものではないが、ＣＡＲ、ＴＣＲ、及びＴＡＣが挙げられる。ＩＬ－１５ポリペプチドは、以下のサブセクション「遺伝子操作された受容体」に記載されている遺伝子操作された受容体の任意の構成要素を含み得る。

【0142】

幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。本明細書で使用する場合、用語「共刺激シグナル伝達ドメイン」は、細胞内でシグナル伝達を媒介して、エフェクター機能などの免疫応答を誘発するタンパク質の少なくとも一部を指す。本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドの共刺激シグナル伝達ドメインは、シグナルを伝達し、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＤＣ、リンパ節（ＬＮ）間質細胞、マクロファージ、好中球、または好酸球により媒介される応答を調節する共刺激タンパク質由来の細胞質シグナル伝達ドメインであり得る。「共刺激シグナル伝達ドメイン」は、共刺激分子の細胞質部分であり得る。用語「共刺激分子」は、共刺激リガンドに特異的に結合し、これにより、限定されるものではないが、増殖及び生存などの免疫細胞による共刺激応答を媒介する、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）上の同族結合パートナーを指す。

【0143】

幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、単一の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、２つ以上（例えば、約２つ、３つ、４つ、またはそれ以上のいずれか）の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、２つ以上の同じ共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば、２コピーのＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、異なる共刺激タンパク質、例えば、本明細書に記載される任意の２種以上の共刺激タンパク質由来の２種以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインは、任意のペプチドリンカーを介して互いに融合されている。１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインは、任意の好適な順序で配置され得る。複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、相加的または相乗的な刺激効果をもたらし得る。

【0144】

宿主細胞（例えば、免疫細胞）における共刺激シグナル伝達ドメインの活性化は、細胞におけるサイトカインの産生及び分泌の増加もしくは減少、食作用特性、増殖、分化、生存、及び／または細胞傷害性の増強もしくは減弱を誘発し得る。共刺激シグナル伝達ドメインの種類（複数可）は、ＩＬ－１５ポリペプチドが発現される免疫細胞の種類（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＤＣ、間質細胞、マクロファージ、好中球、または好酸球）及び所望の免疫エフェクター機能などの因子に基づいて選択される。ＩＬ－１５ポリペプチドに使用される共刺激シグナル伝達ドメインの例は、限定されるものではないが、Ｂ７／ＣＤ２８ファミリーのメンバー（例えば、Ｂ７－１／ＣＤ８０、Ｂ７－２／ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ１／ＰＤ－Ｌ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ７、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７－Ｈ５、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ２／Ｂ７－ＤＣ、及びＰＤＣＤ６）；ＴＮＦスーパーファミリーのメンバー（例えば、４－１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、４－１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦＲ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、リンホトキシン－α／ＴＮＦ－β、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ－α、及びＴＮＦ ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）；ＳＬＡＭファミリーのメンバー（例えば、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＣＤ２、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ５８／ＬＦＡ－３、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、及びＳＬＡＭ／ＣＤ１５０）；ならびに任意の他の共刺激分子、例えば、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ５３、ＣＤ８２／Ｋａｉ－１、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、ＣＤ２００、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｉｋａｒｏｓ、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンα４β１、インテグリンα４β７／ＬＰＡＭ－１、ＬＡＧ－３、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１２、デクチン１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－１／ＫＩＭ－１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ－４、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、及びＮＫＧ２Ｃが含まれる、共刺激タンパク質の細胞質シグナル伝達ドメインであり得る。

【0145】

幾つかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドからなる群から選択される。

【0146】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドにおける細胞内ドメインは、ＣＤ２８に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドにおける細胞内ドメインは、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドにおける細胞内ドメインは、ＯＸ４０に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドにおける細胞内ドメインは、ＤＡＰ１０に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドにおける細胞内ドメインは、ＣＤ２７に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。

【0147】

共刺激シグナル伝達ドメインが免疫細胞の免疫応答を調節することができるような、本明細書に記載される共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかのバリアントも本開示の範囲内である。幾つかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、野生型の対応物と比較して１０（例えば、１、２、３、４、５、または８）アミノ酸残基までの変異を含む。１つ以上のアミノ酸変異を含むかかる共刺激シグナル伝達ドメインは、バリアントと称され得る。共刺激シグナル伝達ドメインのアミノ酸残基の変異は、当該変異を含まない共刺激シグナル伝達ドメインと比較してシグナル伝達の増加及び免疫応答の刺激の増強をもたらし得る。共刺激シグナル伝達ドメインのアミノ酸残基の変異は、当該変異を含まない共刺激シグナル伝達ドメインと比較してシグナル伝達の減少及び免疫応答の刺激の低減をもたらし得る。

【0148】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドの細胞内ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインを更に含む。

【0149】

幾つかの実施形態では、膜結合型ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５ポリペプチドを細胞（例えば、ＥＲ）の分泌経路に標的化し、ＩＬ－１５ポリペプチドの宿主細胞の脂質二重層への組込み及び係留を可能にするシグナルペプチドを更に含む。天然に存在するタンパク質のシグナル配列または非天然の合成シグナル配列が含まれる、本明細書に記載される膜貫通ＩＬ－１５ポリペプチドにおける使用に適合可能であるシグナルペプチドは、当業者には明白であろう。幾つかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８α、ＧＭ－ＣＳＦ受容体α、ＩＬ－３、及びＩｇＧ１重鎖からなる群から選択される分子に由来する。幾つかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８αに由来する。

【0150】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５断片及びＧＰＩアンカーペプチド配列を含み、ここで、当該ＩＬ－１５断片は、８位、６２位、３位、及び／または２５位でのアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＧＰＩアンカーペプチド配列は、ＧＰＩリンカーに結合している。幾つかの実施形態では、ＧＰＩアンカーペプチド配列は、ＩＬ－１５ポリペプチドのＣ末端に位置する。

【0151】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５断片及び膜貫通ドメインを含み、ここで、当該ＩＬ－１５断片は、８位、６２位、３位、及び／または２５位でのアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメインである。

【0152】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５断片、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、ここで、当該ＩＬ－１５断片は、８位、６２位、３位、及び／または２５位でのアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ８α、またはＣＤ２８の膜貫通ドメインである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ヒンジドメイン、例えば、ＣＤ８に由来するヒンジドメインを更に含む。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0153】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５断片、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインを含み、ここで、当該ＩＬ－１５断片は、８位、６２位、３位、及び／または２５位でのアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基位置の番号付けは配列番号１に従う。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ８α、またはＣＤ２８の膜貫通ドメインである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ヒンジドメイン、例えば、ＣＤ８に由来するヒンジドメインを更に含む。幾つかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する。

【0154】

ＩＬ－１５ポリペプチドは、異なるドメインの間に配置された１つ以上のペプチドリンカーを含み得る。例えば、ＩＬ－１５断片及び第２のポリペプチド断片は、ペプチド結合またはペプチドリンカーを介して互いに融合されていてもよい。異なるドメインを連結するペプチドリンカーは、同一であっても異なっていてもよい。各ペプチドリンカーは、個別に最適化されていてもよい。ペプチドリンカーは、任意の好適な長さのものであり得る。幾つかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０アミノ酸長、またはそれ以上のいずれかである。幾つかの実施形態では、ペプチドリンカーは、約５０、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５アミノ酸長以下、またはそれ以下のいずれかである。幾つかの実施形態では、ペプチドリンカーの長さは、約１アミノ酸～約１０アミノ酸、約１アミノ酸～約２０アミノ酸、約１アミノ酸～約３０アミノ酸、約５アミノ酸～約１５アミノ酸、約１０アミノ酸～約２５アミノ酸、約５アミノ酸～約３０アミノ酸、約１０アミノ酸～約３０アミノ酸長、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸、または約１アミノ酸～約５０アミノ酸のいずれかである。

【0155】

ペプチドリンカーは、天然に存在する配列または非天然配列を有し得る。幾つかの実施形態では、ペプチドリンカーは、可動性リンカーである。例示的な可動性リンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）_ｎ、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）_ｎ（配列番号６７）、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号６８）、及び（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号６９）が含まれ、ここで、ｎは、少なくとも１の整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、及び当該技術分野において公知の他の可動性リンカーが挙げられる。幾つかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号４０または４１のアミノ酸配列を有する。

【0156】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする配列は、上流の推定開始コドンの一部または全ての配列を欠く。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５のＩＬ－１５Ｒとの結合に影響（例えば、機能的影響）を及ぼさないある特定のアミノ酸変異を含み得る。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ヌクレオチドの変化（例えば、ヌクレオチド置換、欠失、及び／または付加）を含む。幾つかの実施形態では、変異型ＩＬ－１５ポリペプチドを生じるようにヌクレオチド変化が成熟ＩＬ－１５配列において発生する。ヌクレオチドの変化は、炎症性サイトカインの過剰産生を伴うことなくＩＬ－１５ポリペプチドの基質特異性及び機能（例えば、抗腫瘍効果）の改善をもたらし得る。

【0157】

ＩＬ－１５及びＩＬ－１５の相互作用に関する更なる説明は、一般に当該技術分野において公知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ９，３８９，２３６、ＵＳ１０，４６４，９９３、ＵＳ９，６２９，８７７、ＥＰ１７７７２９４Ａ１、ＵＳ１０，４２８，３０５、ＵＳ７，９９８，７３６、ＵＳ９，３０３，０８０、及びＵＳ９，９３１，３７７を参照のこと。

【0158】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントを含む。例えば、アミノ酸配列バリアントは、ＩＬ－１５ポリペプチドの結合親和性及び／または他の生物学的性質を調節することが望ましくてもよい。ＩＬ－１５ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、ＩＬ－１５ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより、またはペプチド合成により調製され得る。かかる改変としては、例えば、ＩＬ－１５ポリペプチドのアミノ酸配列からの欠失、及び／またはＩＬ－１５ポリペプチドのアミノ酸配列への挿入、及び／またはＩＬ－１５ポリペプチドのアミノ酸配列内の残基の置換が挙げられる。最終的な構築物に到達するように、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせがなされ得、ただし、最終的な構築物は、所望の特徴、例えば、ＴＬＲ結合活性及び／または炎症促進活性を有する。

【0159】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドのいずれかの配列と比較して１つ以上（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０アミノ酸、またはそれ以上）の保存的置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドのいずれかの配列に対する少なくとも約８０％の配列同一性、例えば、少なくとも約８５％、８７％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性のいずれかを含む。本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドのように、ＩＬ－１５ポリペプチドバリアントは、同程度の抗腫瘍活性及び低毒性を有する。

【0160】

保存的置換を以下の表Ａに示す。

【表A】

【0161】

アミノ酸は、共通の側鎖特性に従って以下の異なるクラスに分類され得る。
ａ．疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｂ．中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｃ．酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｄ．塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｅ．鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
ｆ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0162】

非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを、別のクラスに交換することを伴う。

【0163】

当業者は、変異誘発、ポリメラーゼ連鎖反応、相同組換え、または当業者に公知の任意の他の遺伝子操作技術が含まれる、任意の好適な方法が関心対象の遺伝子において変異を生じさせるために使用され得ることを理解するであろう。変異は、単一のヌクレオチドが関わってもよく（例えば、ＤＮＡ配列内の単一ヌクレオチド塩基の除去、付加、または置換を伴う点変異）、または多数のヌクレオチドの挿入または欠失を伴ってもよい。変異は、ＤＮＡ複製の忠実度のエラーなどの事象の結果として自発的に発生し得るか、または化学的もしくは物理的変異誘発要因への曝露後に誘発され得る。変異は、当業者に周知の特定の標的化方法を使用することにより部位特異的であってもよい。

【0164】

変異誘発の標的とされ得るポリペプチドの残基または領域の同定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９） Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載されるように「アラニンスキャニング変異誘発」と称される。この方法では、残基または標的残基群（例えば、荷電残基、例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ）が同定され、中性アミノ酸または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）で置き換えられて、ポリペプチド薬剤のその標的との相互作用（例えば、ＩＬ－１５バリアント及びＩＬ－１５受容体）が影響を受けるかどうかが決定される。更なる置換が最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置で導入され得る。バリアントは、それらが所望の特性を有するかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。

【0165】

アミノ酸配列挿入としては、長さが１残基～１００以上の残基を含有するポリペプチドの範囲のアミノ末端融合及び／またはカルボキシ末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。

【0166】

幾つかの実施形態では、ペプチドタグ（通常、利用可能な抗血清または化合物により認識されることが可能な短いペプチド配列）がＩＬ－１５ポリペプチドの後の発現及び輸送のために含まれ得る。多種類のタグペプチド、限定されるものではないが、ＰＫタグ、ＦＬＡＧオクタペプチド、ＭＹＣタグ、ＨＩＳタグ（通常４～１０ヒスチジン残基のストレッチ）、及びＥタグ（ＵＳ６，６８６，１５２）が本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドに使用され得る。タグペプチド（複数可）は、独立して、タンパク質のＮ末端、タンパク質のＣ末端、内部、または幾つかのタグが用いられる場合、これらの位置のいずれかに配置され得る。タグペプチドは、抗タグ抗体を使用する免疫検出アッセイにより検出され得る。

【0167】

遺伝子操作された受容体
上記の改変された免疫細胞のいずれかは、遺伝子操作された受容体を更に発現し得る。例示的な遺伝子操作された受容体としては、限定されるものではないが、ＣＡＲ、遺伝子操作されたＴＣＲ、及びＴＡＣ受容体が挙げられる。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、抗原（例えば、腫瘍抗原）に特異的に結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメイン及び／または共刺激ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ共受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列によりコードされる。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、プロモーター（例えば、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーター）に作動可能に連結された第２の異種核酸によりコードされる。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、細胞をマイクロ流体システム、例えば、ＣＥＬＬ ＳＱＵＥＥＺＥ（登録商標）（例えば、米国特許出願公開第２０１４０２８７５０９号を参照のこと）に通すと同時にタンパク質を細胞膜に挿入することにより改変された免疫細胞に導入される。遺伝子操作された受容体は、例えば、改変された免疫細胞を標的化することにより、シグナルを伝達することにより、及び／または改変された免疫細胞の細胞傷害性を増強することにより、改変された免疫細胞の機能を増強し得る。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、遺伝子操作された受容体、例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＡＣ受容体を発現しない。

【0168】

幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、少なくとも１種の腫瘍抗原を標的とする１つ以上の特異的結合ドメイン、及び１つ以上の細胞内エフェクタードメイン、例えば、１つ以上の一次細胞内シグナル伝達ドメイン及び／または共刺激ドメインを含む。

【0169】

幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。多数のキメラ抗原受容体が当該技術分野において公知であり、本出願の改変された免疫細胞に好適であり得る。例えば、抗体分子の抗原結合断片または抗体可変ドメインを利用することにより、任意の細胞表面マーカーに対する特異性を有するＣＡＲも構築され得る。ＣＡＲを作製するための任意の方法が本明細書において使用され得る。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ６，４１０，３１９、ＵＳ７，４４６，１９１、ＵＳ７，５１４，５３７、ＵＳ９７６５３４２Ｂ２、ＷＯ２００２／０７７０２９、ＷＯ２０１５／１４２６７５、ＵＳ２０１０／０６５８１８、ＵＳ２０１０／０２５１７７、ＵＳ２００７／０５９２９８、ＷＯ２０１７０２５０３８Ａ１、及びＢｅｒｇｅｒ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ １１８：１ ２９４－３０８（２００８）を参照のこと。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ－Ｔ細胞である。

【0170】

本出願のＣＡＲは、少なくとも１種の腫瘍抗原に特異的に結合する少なくとも１つの標的化ドメインを含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲを有する細胞、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。「免疫エフェクター機能または免疫エフェクター応答」は、例えば、免疫エフェクター細胞の、標的細胞への免疫攻撃を増強または促進する機能または応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能または応答は、標的細胞の殺傷または成長もしくは増殖の阻害を促進するＴ細胞またはＮＫ細胞の特性を指し得る。例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞における免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解活性（例えば、抗体依存性細胞傷害またはＡＤＣＣ）及びヘルパー活性（例えば、サイトカインの分泌）が挙げられる。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、免疫エフェクター機能が減弱された細胞内シグナル伝達ドメインを有する。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、全長かつ野生型のＣＤ３ζを有するＣＡＲと比較して約９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％以下、またはそれ以下のいずれかの免疫エフェクター機能（例えば、標的細胞に対する細胞溶解機能）を有する細胞内シグナル伝達ドメイン、及び任意に１つ以上の共刺激ドメインを有する。幾つかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲを含有する細胞の増殖及び／または生存を促進するシグナルを生成する。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ３、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、及びＯＸ４０のシグナル伝達ドメインから選択される１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。天然に存在する分子のシグナル伝達ドメインは、当該分子の細胞内（すなわち、細胞質内）部分全体、または天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、またはそれらの断片もしくは誘導体を含み得る。

【0171】

幾つかの実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「一次細胞内シグナル伝達ドメイン」は、刺激的に作用して、免疫エフェクター機能を誘発する細胞質シグナル伝達配列を指す。幾つかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体活性化チロシンモチーフまたはＩＴＡＭとして公知であるシグナル伝達モチーフを含む。幾つかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃεＲｉｂ）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃγＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２からなる群から選択されるタンパク質の機能的シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃεＲｉｂ）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃγＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２からなる群から選択されるタンパク質の機能しないかまたは減弱されたシグナル伝達ドメインを含む。機能しないかまたは減弱されたシグナル伝達ドメインは、１つ以上の免疫エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）が含まれる細胞溶解活性またはヘルパー活性を減弱するか、または消失させる点変異、挿入、または欠失を有する変異型シグナル伝達ドメインであり得る。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、機能しないかまたは減弱されたＣＤ３ζ（すなわち、ＣＤ３ζまたはＣＤ３ｚ）シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。減弱された一次細胞内シグナル伝達ドメインは、同じ構造を有するが、野生型一次細胞内シグナル伝達ドメインを有するＣＡＲと比較して約９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％以下、またはそれ以下のいずれかの免疫エフェクター機能（例えば、標的細胞に対する細胞溶解機能）を誘発し得る。

【0172】

幾つかの実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つ以上の（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のいずれか）共刺激ドメインを含む。「共刺激ドメイン」は、共刺激分子の細胞内部分であり得る。用語「共刺激分子」は、共刺激リガンドに特異的に結合し、これにより、限定されるものではないが、増殖及び生存などの免疫細胞による共刺激応答を媒介する、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）上の同族結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に寄与する抗原受容体またはそれらのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリーに見受けられ得る：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、及び活性化ＮＫ細胞受容体。共刺激分子としては、限定されるものではないが、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、及びＴｏｌｌリガンド受容体、ならびにＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）が挙げられる。かかる共刺激分子の更なる例としては、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドが挙げられる。

【0173】

幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、単一の共刺激ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、２つ以上の共刺激ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、機能的な一次細胞内シグナル伝達ドメイン及び１つ以上の共刺激ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、機能的な一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）を含まない。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、１つ以上の共刺激ドメインからなるか、または本質的にそれからなる細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、機能しないかまたは減弱された一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、変異型ＣＤ３ζ）、及び１つ以上の共刺激ドメインからなるか、または本質的にそれらからなる細胞内シグナル伝達ドメインを含む。標的化ドメインの腫瘍抗原への結合時、ＣＡＲの共刺激ドメインは、ＣＡＲを有する遺伝子操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の増殖、生存、及び分化の増強のためのシグナルを伝達し得、活性化誘導細胞死を阻害し得る。幾つかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドからなる群から選択される１つ以上の分子に由来する。

【0174】

幾つかの実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、本出願のキメラ受容体における細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン及び４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。

【0175】

幾つかの実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメイン及び４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメイン、及び４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｎ末端からＣ末端までに、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。

【0176】

幾つかの実施形態では、ＣＡＲの標的化ドメインは、抗体または抗体断片、例えば、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）_２、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＶ_ＨＨドメインである。幾つかの実施形態では、ＣＡＲの標的化ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合するリガンドまたは受容体の細胞外部分である。幾つかの実施形態では、ＣＡＲの１つ以上の標的化ドメインは、単一の腫瘍抗原に特異的に結合する。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、２種以上の腫瘍抗原に結合する標的化ドメインを有する二重特異性または多重特異性ＣＡＲである。幾つかの実施形態では、腫瘍抗原は、ＧＰＣ３、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＷＴ１、及び臨床的意義のある他の腫瘍抗原、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＡＦＰ、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ７０、ＣＤ１２３、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＧＤ２、ＧＰＣ－２、ＧＰＣ３、ＣＬＤＮ１８．２、ＨＥＲ２、ＬＩＬＲＢ４、ＩＬ－１３Ｒα２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＷＴ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＬＬ１、ＴＧＦａＲＩＩ、ＴＧＦｂＲＩＩ、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ４、ＨＰＶ関連抗原、及びＥＢＶ関連抗原（例えば、ＬＭＰ１またはＬＭＰ２）からなる群から選択される標的抗原に特異的に結合する。

【0177】

幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ ＣＡＲである。ＣＤ２６９としても公知のＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーに属する（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９２（１）：１２９－１３５，２０００）。ヒトＢＣＭＡは、形質細胞において発現され、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）及び増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）に結合することができる（例えば、Ｍａｃｋａｙ ｅｔ ａｌ．，２００３及びＫａｌｌｅｄ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗ，２０４：４３－５４，２００５）。ＢＣＭＡは、様々ながんに対する免疫療法剤、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞の標的抗原として使用され得る。従って、抗ＢＣＭＡ抗体（例えば、ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体）は、腫瘍細胞に対する細胞傷害効果を増強するために、ＣＡＲ－Ｔ細胞を使用する細胞免疫療法と組み合わせて使用され得る。多種多様な抗原結合ドメイン配列がＢＣＭＡ ＣＡＲの標的化ドメインとして使用され得る。例えば、ＷＯ２０１７／０２５０３８（その全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。幾つかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端までに、ＣＤ８シグナルペプチド（ＳＰ）、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８ヒンジ、ＣＤ８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ細胞内共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端までに、ＣＤ８αシグナルペプチド、第１の抗ＢＣＭＡ ＶＨＨ、任意のリンカー、第２の抗ＢＣＭＡ ＶＨＨ、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ細胞内共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ＶＨＨ－ＶＨＨドメインは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。

【0178】

幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９ ＣＡＲである。ＣＤ１９は、Ｂ細胞発生を通して発現されるＢ細胞表面タンパク質であり、従って、幾つかの種類の白血病及び多数の非ホジキンリンパ腫が含まれる、ほとんど全てのＢ細胞悪性腫瘍に発現している（Ｓｃｈｅｕｅｒｍａｎｎ ＲＨ ａｎｄ Ｒａｃｉｌａ Ｅ．Ｌｅｕｋ Ｌｙｍｐｈｏｍａ．１９９５；１８（５－６）：３８５－３９７）。ほぼ普遍的な発現及び単一の細胞系列に対する特異性のため、ＣＤ１９は、ＣＡＲ改変Ｔ細胞療法の魅力的な標的となっている。多種多様な抗原結合ドメイン配列は、ＣＤ１９ ＣＡＲの標的化ドメインとして使用され得る。例えば、ＷＯ２０１２／０７９０００（これはその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。幾つかの実施形態では、ＣＤ１９ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端までに、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ細胞内共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。

【0179】

幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、ＧＰＣ３ ＣＡＲである。グリピカン－３（ＧＰＣ３）は、グリコシルホスファチジルイノシトールアンカーを介して細胞表面に結合しているヘパラン硫酸プロテオグリカンの一群であるグリピカンファミリーに属する。ＧＰＣ３は、大多数の肝芽腫、ウィルムス腫瘍、横紋筋腫瘍、ある特定の胚細胞腫瘍サブタイプ、及び少数の横紋筋肉腫が含まれる、種々の小児固形胚芽腫に高度に発現している。多種多様な抗原結合ドメイン配列がＧＰＣ３ ＣＡＲの標的化ドメインとして使用され得る。例えば、ＷＯ２０１６／０４９４５９（これはその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。幾つかの実施形態では、ＧＰＣ３ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端までに、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ細胞内共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖは、配列番号８０のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＧＰＣ３ ＣＡＲは、配列番号８１のアミノ酸配列を含む。

【0180】

幾つかの実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β、もしくはζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－７Ｒａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、及び／またはＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ８α、またはＣＤ２８の膜貫通ドメインである。幾つかの実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８αの膜貫通ドメインを含む。

【0181】

幾つかの実施形態では、細胞外ドメインは、ヒンジ領域により膜貫通ドメインに連結されている。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ８αのヒンジ領域を含む。

【0182】

幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８αＳＰなどのシグナルペプチドを含む。

【0183】

幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、改変されたＴ細胞受容体である。幾つかの実施形態では、遺伝子操作されたＴＣＲは、腫瘍抗原に特異的である。幾つかの実施形態では、腫瘍抗原は、ＧＰＣ３、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＷＴ１、及び臨床的意義のある他の腫瘍抗原からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍細胞の細胞内タンパク質に由来する。例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１がん精巣抗原、ｐ５３腫瘍抑制因子抗原、黒色腫（例えば、ＭＡＲＴＩ、ｇｐ１００）、白血病（例えば、ＷＴ１、非主要組織適合抗原）、及び乳癌（例えばＨＥＲ２、ＮＹ－ＢＲ１）における腫瘍抗原に対するＴＣＲが含まれる、腫瘍抗原（腫瘍関連抗原が含まれる）に特異的な多数のＴＣＲが記載されている。当該技術分野において公知のＴＣＲのいずれかが本出願において使用され得る。幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、腫瘍抗原に対する増強された親和性を有する。例示的なＴＣＲ及び免疫細胞にＴＣＲを導入するための方法は、例えば、ＵＳ５８３０７５５、及びＫｅｓｓｅｌｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ＴＣＲ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２，９５７－９６１（２００１）に記載されている。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、ＴＣＲ－Ｔ細胞である。

【0184】

ＴＣＲ受容体複合体は、可変的なＴＣＲ受容体α及びβ鎖（γδＴ細胞の場合、γ及びδ鎖）と、３つの二量体シグナル伝達モジュールであるＣＤ３δ／ε、ＣＤ３γ／ε、及びＣＤ２４７（Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ζ鎖）ζ／ζまたはζ／ηとによって形成される八量体複合体である。各サブユニットの膜貫通ドメインにおけるイオン性残基は、複合体をまとめる極性相互作用のネットワークを形成する。ＴＣＲ複合体は、Ｔ細胞におけるシグナル伝達カスケードを活性化する機能を有する。

【0185】

幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、１つ以上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）を含む遺伝子操作されたＴＣＲである。例示的なＴＦＰは、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１７０１６６６２２Ａ１に記載されている。幾つかの実施形態では、ＴＦＰは、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δＴＣＲサブユニット、それらの機能断片、及び少なくとも１つであるが、２０以下の改変を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含む、ＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＴＦＰは、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δＴＣＲサブユニット、それらの機能断片、及び少なくとも１つであるが、２０以下の改変を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む、膜貫通ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＴＦＰは、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＴＣＲζ鎖、ＣＤ３εＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δＴＣＲサブユニット、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２８、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、それらの機能断片、及び少なくとも１つであるが、２０以下の改変を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む、膜貫通ドメインを含む。

【0186】

幾つかの実施形態では、ＴＦＰは、ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、及びＣＤ３εの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲ細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに抗原結合ドメインを含み、ここで、当該ＴＣＲサブユニット及び当該抗原結合ドメインは、作動可能に連結されており、ＴＦＰは、Ｔ細胞で発現される場合、ＴＣＲに組み込まれる。

【0187】

幾つかの実施形態では、ＴＦＰは、ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、及びＣＤ３γの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲ細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに抗原結合ドメインを含み、ここで、当該ＴＣＲサブユニット及び当該抗原結合ドメインは、作動可能に連結されており、ＴＦＰは、Ｔ細胞で発現される場合、ＴＣＲに組み込まれる。

【0188】

幾つかの実施形態では、ＴＦＰは、ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、及びＣＤ３δの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲ細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに抗原結合ドメインを含み、ここで、当該ＴＣＲサブユニット及び当該抗原結合ドメインは、作動可能に連結されており、ＴＦＰは、Ｔ細胞で発現される場合、ＴＣＲに組み込まれる。

【0189】

幾つかの実施形態では、ＴＦＰは、ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、及びＴＣＲαの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲ細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに抗原結合ドメインを含み、ここで、当該ＴＣＲサブユニット及び当該抗原結合ドメインは、作動可能に連結されており、ＴＦＰは、Ｔ細胞で発現される場合、ＴＣＲに組み込まれる。

【0190】

幾つかの実施形態では、ＴＦＰは、ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、及びＴＣＲβの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲ細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに抗原結合ドメインを含み、ここで、当該ＴＣＲサブユニット及び当該抗原結合ドメインは、作動可能に連結されており、ＴＦＰは、Ｔ細胞で発現される場合、ＴＣＲに組み込まれる。

【0191】

幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、Ｔ細胞抗原連結体（ＴＡＣ）受容体である。例示的なＴＡＣ受容体は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１６０３６８９６４Ａ１に記載されている。幾つかの実施形態では、ＴＡＣは、標的化ドメイン、ＴＣＲ複合体と会合したタンパク質に特異的に結合するＴＣＲ結合ドメイン、及びＴ細胞受容体シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、標的化ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合する抗体断片、例えば、ｓｃＦｖまたはＶ_ＨＨである。幾つかの実施形態では、標的化ドメインは、設計アンキリンリピート（ＤＡＲＰｉｎ）ポリペプチドである。幾つかの実施形態では、腫瘍抗原は、ＧＰＣ３、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＷＴ１、及び臨床的意義のある他の腫瘍抗原からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合したタンパク質は、ＣＤ３、例えば、ＣＤ３εである。幾つかの実施形態では、ＴＣＲ結合ドメインは、一本鎖抗体、例えば、ｓｃＦｖまたはＶ_ＨＨである。幾つかの実施形態では、ＴＣＲ結合ドメインは、ＵＣＨＴ１に由来する。幾つかの実施形態では、ＴＡＣ受容体は、細胞質ドメイン及び膜貫通ドメインを含む。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ共受容体に由来する細胞質ドメインを含む。例示的なＴＣＲ共受容体としては、限定されるものではないが、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ １５４が挙げられる。幾つかの実施形態では、ＴＡＣ受容体は、ＣＤ４に由来する膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを含む。幾つかの実施形態では、ＴＡＣ受容体は、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）に由来する膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを含む。

【0192】

Ｔ細胞共受容体は、Ｔ細胞上の膜タンパク質として発現される。それらは、ＴＣＲ／ペプチド／ＭＨＣ複合体の安定化をもたらし得、シグナル伝達を促進し得る。Ｔ細胞共受容体の２つのサブタイプであるＣＤ４及びＣＤ８は、特定のＭＨＣクラスに対する強い特異性を示す。ＣＤ４共受容体は、ＴＣＲ／ＭＨＣＩＩ複合体のみを安定化することができる一方で、ＣＤ８共受容体は、ＴＣＲ／ＭＨＣＩ複合体のみを安定化することができる。異なるＴ細胞種上のＣＤ４及びＣＤ８の差次的発現は、異なるＴ細胞の機能的亜集団をもたらす。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。

【0193】

ＣＤ４は、ヘルパーＴ細胞、単球、マクロファージ、及び樹状細胞などの免疫細胞の表面に発現される糖タンパク質である。ＣＤ４は、細胞外細胞表面に曝露される４つの免疫グロブリンドメイン（Ｄ_１～Ｄ_４）を有する。ＣＤ４は、その短い細胞質／細胞内尾部に、ＣＤ４尾部がチロシンキナーゼＬｃｋを動員し、それと相互作用するのを可能にする特殊なアミノ酸配列を含有する。ＴＣＲ複合体及びＣＤ４がそれぞれＭＨＣＩＩ分子の異なる領域に結合する場合、ＴＣＲ複合体とＣＤ４との近接性により、ＬｃｋがＣＤ４の細胞質尾部に結合して、ＣＤ３の細胞質ドメインの免疫受容体活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）をチロシンリン酸化することが可能となり、これにより、ＴＣＲにより生成されたシグナルが増幅される。

【0194】

ＣＤ８は、それぞれが細い軸により膜に連結された免疫グロブリン可変部（ＩｇＶ）様細胞外ドメイン及び細胞内尾部を含む、２本のα鎖から構成されるホモ二量体（あまり見られない）、または１本のα及び１本のβ鎖から構成されるヘテロ二量体（より一般的）のいずれかの糖タンパク質である。ＣＤ８は、主に細胞傷害性Ｔ細胞の表面に発現されるが、ナチュラルキラー細胞、皮質胸腺細胞、及び樹状細胞にも見出され得る。ＣＤ８細胞質尾部はＬｃｋと相互作用し、Ｌｃｋは、ＴＣＲがその特異的抗原に結合すると、細胞質ＣＤ３及びＴＣＲ複合体のζ鎖をリン酸化する。細胞質ＣＤ３及びζ鎖のチロシンリン酸化は、リン酸化カスケードを惹起し、最終的に遺伝子転写をもたらす。

【0195】

幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、２種以上の遺伝子操作された受容体、例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、ＴＡＣ受容体の任意の組み合わせを発現する。

【0196】

幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞により発現される遺伝子操作された受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＡＣ）は、１種以上の腫瘍抗原を標的とする。腫瘍抗原は、免疫応答、特にＴ細胞により媒介される免疫応答を誘発することができる、腫瘍細胞により産生されるタンパク質である。本開示の標的とされる抗原の選択は、処置される特定の種類のがんに依存する。例示的な腫瘍抗原としては、例えば、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、β－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、チログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、プロスターゼ（ｐｒｏｓｔａｓｅ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、サバイビン、及びテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ｐｒｏｓｔａｔｅーｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｕｍｏｒ ａｎｔｉｇｅｎー１、ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、ＣＤ２２、インスリン成長因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、及びメソテリンが挙げられる。

【0197】

幾つかの実施形態では、腫瘍抗原は、悪性腫瘍に関連する１種以上の抗原性がんエピトープを含む。悪性腫瘍は、免疫攻撃の標的抗原として機能し得る多数のタンパク質を発現する。これらの分子としては、限定されるものではないが、黒色腫におけるＭＡＲＴ－１、チロシナーゼ、及びＧＰ１００、ならびに前立腺癌における前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）及び前立腺特異抗原（ＰＳＡ）などの組織特異抗原が挙げられる。他の標的分子は、がん遺伝子ＨＥＲ－２／Ｎｅｕ／ＥｒｂＢ－２などの形質転換関連分子群に属する。標的抗原の更に別の群は、がん胚抗原（ＣＥＡ）などのがん胎児性抗原である。Ｂ細胞リンパ腫では、腫瘍特異的イディオタイプ免疫グロブリンは、個々の腫瘍に固有の実際に腫瘍特異的な免疫グロブリン抗原となる。ＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ３７などのＢ細胞分化抗原は、Ｂ細胞リンパ腫における標的抗原の別の候補である。

【0198】

幾つかの実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍特異抗原（ＴＳＡ）または腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。ＴＳＡは腫瘍細胞に固有であり、身体内の他の細胞には発生しない。ＴＡＡ関連抗原は腫瘍細胞に固有ではなく、抗原に対する免疫寛容の状態を誘発することができない条件下では正常細胞でも発現される。腫瘍での抗原の発現は、免疫系が抗原に応答することを可能とする条件下で発生し得る。ＴＡＡは、免疫系が未成熟であり、応答できない胎児発生中に正常細胞で発現される抗原であり得るか、または正常細胞で非常に低いレベルで通常存在しているが、腫瘍細胞では非常に高いレベルで発現される抗原であり得る。

【0199】

ＴＳＡまたはＴＡＡ抗原の非限定的な例としては、以下が挙げられる：分化抗原、例えば、ＭＡＲＴ－１／ＭｅｌａｎＡ（ＭＡＲＴ－Ｉ）、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、及び腫瘍特異的多系列抗原、例えば、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐｌ５；過剰発現された胎児性抗原、例えば、ＣＥＡ；過剰発現されたがん遺伝子及び変異したがん抑制遺伝子、例えば、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ；染色体転座により生じた固有の腫瘍抗原、例えば、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ；ならびにウイルス抗原、例えば、エプスタイン・バーウイルス抗原ＥＢＶＡならびにヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６及びＥ７。他の大型のタンパク質ベースの抗原としては、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ＮＹ－ＥＳＯ、ｐｌ８５ｅｒｂＢ２、ｐｌ８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３ＨＩ、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５－３＼ＣＡ２７．２９＼ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３＼ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０＼Ｍａｃ－２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ関連タンパク質、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、及びＴＰＳが挙げられる。

【0200】

核酸
本明細書に記載される改変された免疫細胞は、本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチド及び／または遺伝子操作された受容体のいずれかをコードする１種以上の異種の核酸配列（複数可）を含む。

【0201】

本出願の別の態様は、本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドのいずれかをコードする核酸配列を含む単離核酸を提供する。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された受容体のいずれかをコードする核酸配列を含む単離核酸が提供される。幾つかの実施形態では、核酸は、ＤＮＡである。幾つかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡである。幾つかの実施形態では、核酸は、直鎖状である。幾つかの実施形態では、核酸は、環状である。

【0202】

ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする核酸配列及び／または遺伝子操作された受容体をコードする核酸は、１つ以上の調節配列に作動可能に連結され得る。コード配列の転写及び／または翻訳を制御する例示的な調節配列は、当該技術分野において公知であり、限定されるものではないが、プロモーター、転写の適切な開始、調節、及び／または終結（例えば、ポリＡ転写終結配列）、ｍＲＮＡ輸送（例えば、核局在化シグナル配列）、プロセシング（例えば、スプライシングシグナル）、安定性（例えば、イントロンならびに非コード５’及び３’配列）、翻訳（例えば、開始メチオニン、トリパータイトリーダー配列、ＩＲＥＳリボソーム結合部位、シグナルペプチドなど）のための追加のエレメント、ならびにウイルスベクターに挿入断片を導入するための挿入部位が挙げられ得る。幾つかの実施形態では、調節配列は、プロモーター、転写エンハンサー、及び／またはＩＬ－１５ポリペプチド及び／または遺伝子操作された受容体の適切な発現を可能にする配列である。

【0203】

用語「調節配列」または「制御配列」は、作動可能に連結されているコード配列の発現に影響を及ぼすＤＮＡ配列を指す。かかる調節配列の性質は、宿主生物に応じて異なる。原核生物では、調節配列としては一般に、プロモーター、リボソーム結合部位、及びターミネーターが挙げられる。真核生物では、調節配列としては、プロモーター、ターミネーター、及び場合によっては、エンハンサー、トランス活性化因子、または転写因子が挙げられる。

【0204】

用語「作動可能に連結された」とは、そのように記載された構成要素が、その意図される様式で機能するのを可能にする関係にある並置を指す。コード配列に「作動可能に連結された」調節配列は、コード配列の発現が、調節配列に適合可能な条件下で達成されるようにライゲーションされている。

【0205】

本明細書で使用する場合、「プロモーター」または「プロモーター領域」は、それが作動可能に連結されているＤＮＡまたはＲＮＡの転写を制御するＤＮＡまたはＲＮＡのセグメントを指す。プロモーター領域は、ＲＮＡポリメラーゼ認識、結合、及び転写開始に関与する特定の配列を含む。加えて、プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼの認識、結合、及び転写開始活性（すなわち、１つ以上の転写因子の結合）を調節する配列を含む。これらの配列は、シス作用性であり得るか、またはトランス作用因子に応答性であり得る。プロモーターは、制御の性質に応じて、構成的または制御性であり得る。制御プロモーターは、誘導性または環境応答性（例えば、ｐＨ、嫌気的条件、浸透圧調節物質、温度、光、または細胞密度などの合図に応答する）であり得る。多数のかかるプロモーター配列は、当該技術分野において公知である。例えば、米国特許第４，９８０，２８５号；同第５，６３１，１５０号；同第５，７０７，９２８号；同第５，７５９，８２８号；同第５，８８８，７８３号；同第５，９１９，６７０号、及びＳａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）を参照のこと。

【0206】

幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする核酸配列は、第１のプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体をコードする核酸配列は、第２のプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする核酸配列及び遺伝子操作された受容体をコードする核酸配列は、同じプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする核酸配列及び遺伝子操作された受容体をコードする核酸配列は、別個のプロモーターに作動可能に連結されている。

【0207】

幾つかの実施形態では、プロモーターは、内在性プロモーターである。例えば、ＩＬ－１５ポリペプチド及び／または遺伝子操作された受容体をコードする核酸は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９法などの当該技術分野において公知の任意の方法を使用して、改変された免疫細胞のゲノムに内在性プロモーターの下流でノックインされ得る。幾つかの実施形態では、内在性プロモーターは、β－アクチンなどの豊富に存在するタンパク質のプロモーターである。幾つかの実施形態では、内在性プロモーターは、例えば、改変された免疫細胞の内因性活性化シグナルにより誘導可能な誘導性プロモーターである。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞がＴ細胞である場合、プロモーターは、Ｔ細胞活性化依存性プロモーター（例えば、ＩＬ－２プロモーター、ＮＦＡＴプロモーター、またはＮＦκＢプロモーター）である。幾つかの実施形態では、プロモーターは、異種プロモーターである。

【0208】

哺乳動物細胞での遺伝子発現のための様々なプロモーターが探索されており、当該技術分野において公知のプロモーターのいずれかが本出願において使用され得る。プロモーターは、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターなどの制御プロモーターに大まかに分類され得る。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチド及び／または遺伝子操作された受容体をコードする異種核酸配列は、構成的プロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチド及び／または遺伝子操作された受容体をコードする異種核酸配列は、誘導性プロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、構成的プロモーターは、ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする核酸配列に作動可能に連結されており、誘導性プロモーターは、遺伝子操作された受容体をコードする核酸配列に作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、構成的プロモーターは、遺伝子操作された受容体をコードする核酸配列に作動可能に連結されており、誘導性プロモーターは、ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする核酸配列に作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、第１の誘導性プロモーターは、ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする核酸配列に作動可能に連結されており、第２の誘導性プロモーターは、遺伝子操作された受容体をコードする核酸配列に作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、第１の誘導性プロモーターは、第１の誘導条件により誘導可能であり、第２の誘導性プロモーターは、第２の誘導条件により誘導可能である。幾つかの実施形態では、第１の誘導条件は、第２の誘導条件と同じである。幾つかの実施形態では、第１の誘導性プロモーター及び第２の誘導性プロモーターは、同時に誘導される。幾つかの実施形態では、第１の誘導性プロモーター及び第２の誘導性プロモーターは、逐次的に誘導され、例えば、第１の誘導性プロモーターが第２の誘導性プロモーターの前に誘導されるか、または第１の誘導性プロモーターが第２の誘導性プロモーターの後に誘導される。

【0209】

構成的プロモーターは、異種遺伝子（導入遺伝子とも称される）が宿主細胞において構成的に発現されることを可能にする。本明細書において意図される例示的な構成的プロモーターとしては、限定されるものではないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ヒト伸長因子－１α（ｈＥＦ１α）、ユビキチンＣプロモーター（ＵｂｉＣ）、ホスホグリセロキナーゼプロモーター（ＰＧＫ）、シミアンウイルス４０初期プロモーター（ＳＶ４０）、及びＣＭＶ初期エンハンサーに連結されたニワトリβ－アクチンプロモーター（ＣＡＧＧ）が挙げられる。導入遺伝子発現の駆動におけるかかる構成的プロモーターの効率は、膨大な数の研究において広く比較されている。幾つかの実施形態では、プロモーターは、ｈＥＦ１αプロモーターである。

【0210】

幾つかの実施形態では、プロモーターは、誘導性プロモーターである。誘導性プロモーターは、制御プロモーターのカテゴリーに属する。誘導性プロモーターは、１つ以上の条件、例えば、物理的条件、改変された免疫細胞の微小環境、または改変された免疫細胞の生理的状態、誘導因子（例えば、誘導剤）、またはそれらの組み合わせにより誘導され得る。幾つかの実施形態では、誘導条件は、改変された免疫細胞における内因性遺伝子及び／または医薬組成物を投与される対象における内在性遺伝子の発現を誘発しない。幾つかの実施形態では、誘導条件は、以下からなる群から選択される：誘導因子、照射（例えば、電離放射線、光）、温度（例えば、熱）、酸化還元状態、腫瘍環境、及び改変された免疫細胞の活性化状態。

【0211】

幾つかの実施形態では、プロモーターは、誘導因子により誘導される。幾つかの実施形態では、誘導因子は、化合物などの低分子である。幾つかの実施形態では、低分子は、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、アルコール、金属、またはステロイドからなる群から選択される。化学誘導性プロモーターは、最も広く探索されている。かかるプロモーターとしては、転写活性が、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、アルコール、ステロイド、金属、及び他の化合物などの低分子化学物質の存在または非存在によって調節されるプロモーターが挙げられる。逆テトラサイクリン制御性トランス活性化因子（ｒｔＴＡ）及びテトラサイクリン応答性エレメントプロモーター（ＴＲＥ）を用いるドキシサイクリン誘導システムが、現在最も確立されたシステムである。ＷＯ９４２９４４２は、テトラサイクリン応答性プロモーターによる真核細胞における遺伝子発現の厳密な制御を記載している。ＷＯ９６０１３１３は、テトラサイクリン制御性転写モジュレーターを開示している。更に、Ｔｅｔ－ｏｎシステムなどのＴｅｔ技術が、例えば、ＴｅｔＳｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍのウェブサイト上に記載されている。公知の化学的に制御されるプロモーターのいずれかが、本出願の治療タンパク質の発現を駆動するために使用され得る。

【0212】

幾つかの実施形態では、誘導因子は、増殖因子、ホルモン、または細胞表面受容体、例えば、腫瘍抗原に特異的に結合するポリペプチドに対するリガンドなどのポリペプチドである。幾つかの実施形態では、ポリペプチドは、改変された免疫細胞により発現される。幾つかの実施形態では、ポリペプチドは、異種核酸中の核酸によりコードされる。多数のポリペプチド誘導因子も当該技術分野において公知であり、それらは本出願における使用に好適であり得る。例えば、エクジソン受容体ベースの遺伝子スイッチ、プロゲステロン受容体ベースの遺伝子スイッチ、及びエストロゲン受容体ベースの遺伝子スイッチは、ステロイド受容体由来のトランス活性化因子を用いる遺伝子スイッチに属する（ＷＯ９６３７６０９及びＷＯ９７３８１１７など）。

【0213】

幾つかの実施形態では、誘導因子は、低分子成分及び１つ以上のポリペプチドの両方を含む。例えば、ポリペプチドの二量体化に依存する誘導性プロモーターが、当該技術分野において公知であり、本出願における使用に好適であり得る。１９９３年に開発された最初の低分子ＣＩＤシステムは、ＦＫＢＰのホモ二量体化を誘導するために、薬物のＦＫ５０６の誘導体であるＦＫ１０１２を使用した。同様の戦略を用いることにより、Ｗｕらは、ラパログ／ＦＫＰＢ－ＦＲＢ＊及びジベレリン／ＧＩＤ１－ＧＡＩ二量体化依存的遺伝子スイッチを使用することによって、ＯＮスイッチ様式により用量設定可能なＣＡＲ－Ｔ細胞を成功裡に作製した（Ｃ．－Ｙ．Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５０，ａａｂ４０７７（２０１５））。他の二量体化依存的スイッチシステムとしては、クーママイシン／ＧｙｒＢ－ＧｙｒＢ（Ｎａｔｕｒｅ ３８３（６５９６）：１７８－８１）及びＨａＸＳ／Ｓｎａｐ－ｔａｇ－ＨａｌｏＴａｇ（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０（４）：５４９－５７）が挙げられる。

【0214】

幾つかの実施形態では、プロモーターは、光誘導性プロモーターであり、誘導条件は光である。哺乳動物細胞における遺伝子発現を調節するための光誘導性プロモーターも当該技術分野において周知である（例えば、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３２，１５６５－１５６８（２０１１）、Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ９，２６６－２６９（２０１２）、Ｎａｔｕｒｅ ５００：４７２－４７６（２０１３）、Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １８：１２０２－１２１２（２０１５）を参照のこと）。かかる遺伝子調節システムは、（１）ＤＮＡ結合または（２）ＤＮＡに結合したタンパク質への転写活性化ドメインの動員の調節に基づいて２つのカテゴリーに大まかに分類され得る。例えば、青色光（４８０ｎｍ）に応答して、カルシニューリンにより媒介されるＮＦＡＴの移動をもたらす細胞内カルシウム増加を誘発する、メラノプシンに基づく青色光制御合成哺乳動物転写システムが開発され、哺乳動物細胞において試験された。より最近では、Ｍｏｔｔａ－Ｍｅｎａらが、ヒト細胞株及びゼブラフィッシュ胚における転写開始の、高レベルの青色光感受性制御をもたらす天然に存在するＥＬ２２２転写因子から開発された新規の誘導性遺伝子発現システムを記載した（Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１０（３）：１９６－２０２（２０１４））。更に、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａの光受容体フィトクロムＢ（ＰｈｙＢ）とフィトクロム相互作用因子６（ＰＩＦ６）との赤色光誘導性相互作用が、赤色光誘発性遺伝子発現調節のために利用された。更に、紫外線Ｂ（ＵＶＢ）誘導性遺伝子発現システムも開発され、哺乳動物細胞における標的遺伝子転写において有効であることが証明された（Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｊａｎ．２０^ｔｈ，２０１５の第２５章）。本明細書に記載される光誘導性プロモーターのいずれかが、本出願における治療タンパク質の発現を駆動するために使用され得る。

【0215】

幾つかの実施形態では、プロモーターは、光誘導性分子及び光の組み合わせにより誘導される光誘導性プロモーターである。例えば、化学的誘導因子上の光切断性光ケージド基は、光ケージド基が照射または他の手段により除去されない限り、誘導因子を不活性に保持する。かかる光誘導性分子としては、低分子化合物、オリゴヌクレオチド、及びタンパク質が挙げられる。例えば、ケージドエクジソン、ｌａｃオペロンと共に使用するためのケージドＩＰＴＧ、リボザイムにより媒介される遺伝子発現のためのケージドトヨカマイシン、Ｔｅｔ－ｏｎシステムと共に使用するためのケージドドキシサイクリン、及び光媒介性ＦＫＢＰ／ＦＲＢ二量体化のためのケージドラパログが開発されている（例えば、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．１６（３－４）：２９２－２９９（２０１２）を参照のこと）。

【0216】

幾つかの実施形態では、プロモーターは、放射線誘導性プロモーターであり、誘導条件は、電離放射線などの放射線である。放射線誘導性プロモーターも導入遺伝子発現を制御することが当該技術分野において公知である。遺伝子発現の変化は、細胞の照射時に起こる。例えば、「最初期遺伝子」として公知の遺伝子群は、電離放射により即座に反応し得る。例示的な最初期遺伝子としては、限定されるものではないが、Ｅｒｇ－１、ｐ２１／ＷＡＦ－１、ＧＡＤＤ４５α、ｔ－ＰＡ、ｃ－Ｆｏｓ、ｃ－Ｊｕｎ、ＮＦ－κＢ、及びＡＰ１が挙げられる。最初期遺伝子は、そのプロモーター領域内に放射線応答配列を含む。コンセンサス配列ＣＣ（Ａ／Ｔ）_６ＧＧがＥｒｇ－１プロモーター内に見出されており、血清応答エレメントと称されるか、またはＣＡｒＧエレメントとして公知である。放射線誘導性プロモーター及び導入遺伝子の組み合わせが集中的に研究されており、治療効果に関して効率的であることが証明されている。例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．６（７）：１００５－１２（２００７）及びＣｈａｐｔｅｒ ２５ ｏｆ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｊａｎ．２０^ｔｈ，２０１５を参照のこと。

【0217】

幾つかの実施形態では、プロモーターは、熱誘導性プロモーターであり、誘導条件は熱である。導入遺伝子発現を駆動する熱誘導性プロモーターも当該技術分野において広く研究されている。Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ６０、Ｈｓｐ４０、Ｈｓｐ１０などが含まれる熱ショックまたはストレスタンパク質（ＨＳＰ）は、熱または他の物理的及び化学的ストレス下での細胞の保護する重要な役割を果たす。熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）プロモーターならびに増殖停止及びＤＮＡ損傷（ＧＡＤＤ）１５３プロモーターが含まれる、幾つかの熱誘導性プロモーターが前臨床試験において試みられている。１９８５年に最初に記載された、ヒトｈｓｐ７０Ｂ遺伝子のプロモーターは、最も高効率の熱誘導性プロモーターの１つであると考えられる。Ｈｕａｎｇらは、ｈｓｐ７０Ｂ－ＥＧＦＰ、ｈｓｐ７０Ｂ－ＴＮＦα、及びｈｓｐ７０Ｂ－ＩＬ１２コード配列の導入後、腫瘍細胞は熱処理時に非常に高い導入遺伝子発現を示したが、熱処理の非存在下では、導入遺伝子の発現は検出されなかったと報告した。そして、腫瘍成長は、ＩＬ１２導入遺伝子＋熱処理群のマウスにおいてインビボで有意に遅延された（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０：３４３５（２０００））。別のグループの科学者は、ＨＳＶ－ｔｋ自殺遺伝子をｈｓｐ７０Ｂプロモーターに連結し、マウス乳癌を有するヌードマウスにおいてそのシステムを試験した。腫瘍にｈｓｐ７０Ｂ－ＨＳＶｔｋコード配列を投与し、熱処理したマウスは、非熱処理対照と比較して、腫瘍退縮及び有意な生存率を示した（Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１１：２４５３（２０００））。当該技術分野において公知の更なる熱誘導性プロモーターは、例えば、Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｊａｎ．２０^ｔｈ，２０１５の第２５章に見出され得る。本明細書において検討される熱誘導性プロモーターのいずれかが、本出願の治療タンパク質の発現を駆動するために使用され得る。

【0218】

幾つかの実施形態では、プロモーターは、酸化還元状態により誘導される。酸化還元状態により誘導される例示的なプロモーターとしては、誘導性プロモーター及び低酸素誘導性プロモーターが挙げられる。例えば、Ｐｏｓｔ ＤＥらは、ＨＩＦ活性腫瘍細胞における導入遺伝子発現を特異的かつ強力に誘導する低酸素誘導性因子（ＨＩＦ）応答性プロモーターを開発した（Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．８：１８０１－１８０７（２００１）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６７：６８７２－６８８１（２００７））。

【0219】

幾つかの実施形態では、プロモーターは、改変された免疫細胞の内因性活性化シグナルなどの生理的状態により誘導される。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞がＴ細胞である場合、プロモーターは、改変されたＴ細胞の内因性活性化シグナルにより誘導されるＴ細胞活性化依存的プロモーターである。幾つかの実施形態では、改変されたＴ細胞は、ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、イオノマイシン、またはフィトヘマグルチニンなどの誘導因子により活性化される。幾つかの実施形態では、改変されたＴ細胞は、遺伝子操作された受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＡＣ）を介した腫瘍細胞上の腫瘍抗原の認識により活性化される。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞活性化依存的プロモーターは、ＩＬ－２プロモーターである。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞活性化依存的プロモーターは、ＮＦＡＴプロモーターである。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞活性化依存的プロモーターはＮＦκＢプロモーターである。

【0220】

本明細書に記載される異種核酸配列（複数可）は、１つ以上のタンパク質コード配列及び任意に１つ以上のプロモーターを含む異種遺伝子発現カセットに存在し得る。幾つかの実施形態では、異種遺伝子発現カセットは、単一のタンパク質コード配列を含む。幾つかの実施形態では、異種遺伝子発現カセットは、単一のプロモーターにより駆動される２つ以上のタンパク質コード配列を含む（すなわち、多シストロン性）。幾つかの実施形態では、異種遺伝子発現カセットは、１つ以上の調節配列（例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、エンハンサー配列、ＩＲＥＳ、転写終結配列）、組換え部位、１つ以上の選択マーカー（例えば、抗生物質耐性遺伝子、リポーター遺伝子など）、シグナル配列、またはそれらの組み合わせを更に含む。

【0221】

幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチド及び／または遺伝子操作された受容体をコードする核酸のいずれかを含むベクターが提供される。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドのいずれかをコードする第１の核酸配列、及び本明細書に記載される遺伝子操作された受容体のいずれかをコードする第２の核酸配列を含むベクターが提供される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の核酸配列は、自己切断可能なリンカー、例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、またはＦ２Ａペプチドをコードする第３の核酸配列を介して、遺伝子操作された受容体をコードする第２の核酸配列に融合されている。幾つかの実施形態では、Ｐ２Ａ配列は、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号２８）である。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドのいずれかをコードする第１の核酸配列を含む第１のベクター、及び本明細書に記載される遺伝子操作された受容体のいずれかをコードする第２の核酸配列を含む第２のベクターを含む組成物が提供される。

【0222】

幾つかの実施形態では、ＣＡＲ（例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲ）をコードする第１の核酸配列、及びＩＬ－１５ポリペプチド（例えば、分泌型または膜結合型ＩＬ－１５ポリペプチド）をコードする第２の核酸配列を含むベクターであって、当該第１の核酸配列が、Ｐ２Ａなどの自己切断可能なリンカーをコードする第３の核酸配列を介して当該第２の核酸配列に融合されている、当該ベクターが提供される。幾つかの実施形態では、ベクターは、配列番号２９～３９、４２～４９、５７～６６、７５～７７、及び８２～８４からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。

【0223】

「ベクター」は、単離された核酸を含み、当該単離された核酸を細胞の内部に送達するために使用され得る物質の組成物である。限定されるものではないが、直鎖状ポリヌクレオチド、イオン性または両親媒性化合物と会合したポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスが含まれる、多数のベクターが当該技術分野において公知である。一般に、好適なベクターは、少なくとも１種の生物において機能する複製開始点、プロモーター配列、便利な制限エンドヌクレアーゼ部位、及び１つ以上の選択マーカーを含有する。また用語「ベクター」は、細胞への核酸の導入を容易にする非プラスミド及び非ウイルスの化合物、例えば、ポリリジン化合物、リポソームなどを包含するようにも解釈されるべきである。

【0224】

幾つかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。ウイルスベクターの例としては、限定されるものではないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びそれらの誘導体が挙げられる。ウイルスベクター技術は、当該技術分野において周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、ならびに他のウイルス学及び分子生物学のマニュアルに記載されている。

【0225】

多数のウイルスベースのシステムが、哺乳動物細胞への遺伝子導入のために開発されてきた。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達システムに便利なプラットフォームを提供する。異種核酸は、当該技術分野において公知の技術を使用してベクターに挿入され得、レトロウイルス粒子にパッケージングされ得る。次いで、組換えウイルスが単離され得、インビボまたはエクスビボで改変された免疫細胞に送達され得る。多数のレトロウイルス系が当該技術分野において公知である。幾つかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。幾つかの実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。幾つかの実施形態では、自己不活性化レンチウイルスベクターが使用される。例えば、自己不活性化レンチウイルスベクターは、当該技術分野において公知のプロトコールを用いてパッケージングされ得る。得られるレンチウイルスベクターは、当該技術分野において公知の方法を使用して哺乳動物細胞（例えば、ヒトＴ細胞）に形質導入するために使用され得る。

【0226】

幾つかの実施形態では、ベクターは、プラスミドなどの非ウイルスベクター、またはエピソーム発現ベクターである。

【0227】

幾つかの実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。「発現ベクター」は、選択された宿主を形質転換するために使用され得る構築物であり、選択された宿主におけるコード配列の発現をもたらす。発現ベクターは、例えば、クローニングベクター、バイナリーベクター、または組込み型ベクターであり得る。発現は、核酸分子の、好ましくは翻訳可能なｍＲＮＡへの転写を含む。真核細胞における発現を確実にする調節エレメントが当業者に公知である。真核細胞の場合、発現ベクターは通常、転写の開始を確実にするプロモーター、ならびに所望により、転写終結及び転写物の安定化を確実にするポリＡシグナルを含む。真核宿主細胞における発現を可能にする調節エレメントの例は、酵母におけるＡＯＸ１もしくはＧＡＬ１プロモーター、または哺乳動物細胞及び他の動物細胞におけるＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーター（ラウス肉腫ウイルス）、ＣＭＶエンハンサー、ＳＶ４０エンハンサー、もしくはグロビンイントロンである。更に、使用される発現系に応じて、ポリペプチドを細胞内区画へ方向付けるか、またはそれを培地中に分泌することができるリーダー配列（すなわち、シグナルペプチド）が、記載される核酸配列のコード配列に付加され得、それらは当該技術分野において周知である。リーダー配列（複数可）は、翻訳開始及び終結配列、ならびに好ましくは、翻訳されたタンパク質またはその一部の細胞周辺腔または細胞外培地中への分泌を方向付けることができるリーダー配列と共に適切な段階でアセンブルされる。所望により、核酸配列は、所望の特性、例えば、発現された組換え産物の安定化または精製の単純化をもたらすＮ末端識別ペプチドを含む融合タンパク質をコードし得る。好適な発現ベクター、例えば、Ｏｋａｙａｍａ－Ｂｅｒｇ ｃＤＮＡ発現ベクターｐｃＤＶ１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｐＥＦ－Ｎｅｏ、ｐＣＤＭ８、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐｃＤＮＡ１、ｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＥＦ－ＤＨＦＲ及びｐＥＦ－ＡＤＡ（Ｒａｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２００１） ５０（３），１４１－１５０）、またはｐＳＰＯＲＴ１（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ）が当該技術分野において公知である。

【0228】

調製方法
本出願は、本明細書に記載される改変された免疫細胞のいずれかを調製する方法も提供する。

【0229】

幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞を作製する方法であって、本明細書に記載されるＩＬ－１５ポリペプチドのいずれかをコードする第１の核酸配列を前駆体免疫細胞に導入することを含む、当該方法が提供される。幾つかの実施形態では、前駆体免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、及びγδＴ細胞からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、前駆体免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。幾つかの実施形態では、前駆体免疫細胞は、γδＴ細胞である。幾つかの実施形態では、前駆体免疫細胞は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＤＣ活性化Ｔ細胞である。幾つかの実施形態では、前駆体免疫細胞は、本明細書に記載される遺伝子操作された受容体のいずれかを含む。幾つかの実施形態では、本方法は、本明細書に記載される遺伝子操作された受容体のいずれかをコードする第２の核酸を前駆体免疫細胞に導入することを更に含む。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。幾つかの実施形態では、遺伝子操作された受容体は、Ｔ細胞抗原連結体（ＴＡＣ）受容体である。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、別個のプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、第１の核酸及び第２の核酸は、同じベクターに存在する。幾つかの実施形態では、第１の核酸及び第２の核酸は、別個のベクターに存在する。幾つかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。幾つかの実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びそれらの派生物からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、ベクターは、非ウイルスベクターである。幾つかの実施形態では、ベクターは、エピソーム発現ベクターである。幾つかの実施形態では、本方法は、第１の核酸配列及び／または第２の核酸配列を含む免疫細胞を単離または濃縮することを更に含む。幾つかの実施形態では、本方法は、改変された免疫細胞を少なくとも１種の薬学的に許容される担体と共に製剤化することを更に含む。

【0230】

幾つかの実施形態では、本明細書に記載される核酸またはベクターのいずれかを含む単離宿主細胞が提供される。宿主細胞は、ＩＬ－１５ポリペプチド及び／または遺伝子操作された受容体、ＩＬ－１５ポリペプチド及び／または遺伝子操作された受容体をコードする核酸またはベクターの発現またはクローニングに有用であり得る。好適な宿主細胞としては、限定されるものではないが、原核細胞、真菌細胞、酵母細胞、または高等真核細胞、例えば、哺乳動物細胞が挙げられ得る。幾つかの実施形態では、宿主細胞は、第１のポリペプチドをコードする第１のベクター及び第２のポリペプチドをコードする第２のベクターを含む。幾つかの実施形態では、宿主細胞は、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードする単離された核酸を含む単一のベクターを含む。

【0231】

前駆体免疫細胞は、当該技術分野において公知の種々の方法を使用して調製され得る。例えば、Ｔ細胞などの初代免疫細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍が含まれる、多数の供給源から取得され得る。幾つかの実施形態では、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、当該技術分野において公知の多数の技術、例えば、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離を使用して、個体から採取された血液単位から取得され得る。幾つかの実施形態では、個体の循環血液由来の細胞がアフェレーシスにより取得される。アフェレーシス生成物は、通常、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞が含まれるリンパ球、他の有核白血球、赤血球、及び血小板を含有する。幾つかの実施形態では、アフェレーシスにより採取された細胞は、血漿分画を除去するために、及びその後の処理ステップのために細胞を適切な緩衝液または培地中に入れるために洗浄され得る。幾つかの実施形態では、細胞は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、またはカルシウム及びマグネシウムなどの二価カチオンを欠く洗浄溶液で洗浄される。当業者により容易に理解されるように、洗浄ステップは、当業者に公知の方法によって、例えば、半自動「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１細胞処理装置、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）を製造者の使用説明書に従って使用することによって達成され得る。洗浄後、細胞は、例えば、Ｃａ^２＋非含有、Ｍｇ^２＋非含有のＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａなどの種々の生体適合性の緩衝剤、または緩衝剤を含有もしくは非含有の他の生理食塩液中に再懸濁され得る。あるいは、アフェレーシス試料の望ましくない成分が除去され得、細胞が培養培地中に直接再懸濁され得る。

【0232】

幾つかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、単球を枯渇させることによって、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配遠心分離または向流遠心エルトリエーションによって、末梢血リンパ球から単離される。Ｔ細胞の特定の亜集団、例えば、ＣＤ３^＋、ＣＤ２８^＋、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋、ＣＤ４５ＲＡ、及びＣＤ４５ＲＯ細胞は、ポジティブまたはネガティブセレクション技術により更に単離され得る。例えば、一実施形態では、Ｔ細胞は、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）コンジュゲートビーズ、例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標） Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔと共に、所望のＴ細胞のポジティブセレクションに十分な時間にわたってインキュベートすることによって単離される。

【0233】

幾つかの実施形態では、Ｔ細胞集団は、ネガティブセレクションされる細胞に固有の表面マーカーに対して指向された抗体の組合せを使用するネガティブセレクションにより更に濃縮され得る。例えば、１つの方法は、ネガティブセレクションされる細胞に存在する細胞表面マーカーに対して指向されたモノクローナル抗体カクテルを使用するネガティブ磁気免疫付着またはフローサイトメトリーによる細胞選別及び／または細胞選択を含む。例えば、ネガティブセレクションによりＣＤ４^＋細胞を濃縮するためのモノクローナル抗体カクテルは、通常、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、及びＣＤ８に対する抗体を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ４^＋、ＣＤ２５^＋、ＣＤ６２Ｌ^ｈｉ、ＧＩＴＲ^＋、及びＦｏｘＰ３^＋を典型的に発現する制御性Ｔ細胞を濃縮するか、またはポジティブセレクションすることが望ましくてもよい。あるいは、ある特定の実施形態では、制御性Ｔ細胞は、抗ＣＤ２５コンジュゲートビーズまたは他の類似の選択方法により枯渇される。

【0234】

ベクターまたは核酸を宿主細胞（例えば、前駆体免疫細胞）に導入する方法は、当該技術分野において公知である。ベクターまたは核酸は、物理的、化学的、または生物学的方法により宿主細胞に導入され得る。

【0235】

ベクター（複数可）または核酸（複数可）を宿主細胞に導入するための物理的方法としては、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが挙げられる。ベクター及び／または外来性核酸を含む細胞を作製するための方法は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。幾つかの実施形態では、ベクターは、エレクトロポレーションにより細胞に導入される。

【0236】

ベクター（複数可）または核酸（複数可）を宿主細胞に導入するための生物学的方法としては、ＤＮＡ及びＲＮＡベクターの使用が挙げられる。ウイルスベクターは、哺乳動物、例えば、ヒト細胞に遺伝子を挿入するための最も広く使用されている方法となっている。

【0237】

ベクター（複数可）または核酸（複数可）を宿主細胞に導入するための化学的手段としては、コロイド分散系、例えば、高分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油型エマルション、ミセル、混合ミセル、及びリポソームが含まれる脂質ベースの系が挙げられる。インビトロで送達媒体として使用される例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。

【0238】

幾つかの実施形態では、形質導入または形質移入された前駆体免疫細胞は、異種核酸（複数可）の導入後にエクスビボで増殖される。幾つかの実施形態では、形質導入または形質移入された前駆体免疫細胞は、増殖させるために、少なくとも約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、または１４日のいずれかにわたって培養される。幾つかの実施形態では、形質導入または形質移入された前駆体免疫細胞は、約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、または１４日以下のいずれかにわたって培養される。幾つかの実施形態では、形質導入または形質移入された前駆体免疫細胞は、改変された免疫細胞を選択するために、更に評価またはスクリーニングされる。

【0239】

レポーター遺伝子は、遺伝子導入された可能性のある細胞を同定するため、及び調節配列の機能を評価するために使用され得る。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物または組織に存在しないか、またはそれらによって発現されない遺伝子であり、幾つかの容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によってその発現が明らかとなるポリペプチドをコードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入された後の好適な時点で試験される。好適なレポーター遺伝子としては、ルシフェラーゼ、β－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼをコードする遺伝子、または緑色蛍光タンパク質遺伝子が挙げられ得る（例えば、Ｕｉ－Ｔｅｉ ｅｔ ａｌ．， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４７９：７９－８２（２０００））。

【0240】

前駆体免疫細胞における異種核酸（複数可）の存在を確認するための他の方法としては、例えば、当業者に周知の分子生物学的アッセイ、例えば、サザンブロット及びノーザンブロット法、ＲＴ－ＰＣＲ、及びＰＣＲ；生化学アッセイ、例えば、免疫学的方法（例えば、ＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロット）による特定のペプチドの存在または非存在の検出が挙げられる。

【0241】

ＩＩＩ．処置方法
本出願の一態様は、個体の疾患または状態（例えば、がん）を処置する方法であって、有効量の本明細書に記載される改変された免疫細胞のいずれかを当該個体に投与することを含む、当該方法に関する。本出願は、単独または別の治療法との任意の組み合わせのいずれかで、かつ少なくとも幾つかの態様では、薬学的に許容される担体または賦形剤と共に投与され得る改変された免疫細胞を意図する。幾つかの実施形態では、投与前に、改変された免疫細胞は、当該技術分野において周知の好適な薬学的担体及び賦形剤と組み合わされ得る。

【0242】

幾つかの実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、固形癌）を処置する方法であって、改変された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）及び薬学的に許容される担体を含む有効量の医薬組成物を当該個体に投与することを含み、当該改変された免疫細胞が、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列を含み、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、当該方法が提供される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、分泌型である。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、膜結合型である。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、遺伝子操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、遺伝子操作されたＴＣＲ、またはＴ細胞抗原連結体（ＴＡＣ）受容体を更に含む。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じベクターまたは別個のベクターに存在する。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じプロモーターまたは別個のプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0243】

幾つかの実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、固形癌）を処置する方法であって、改変された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）及び薬学的に許容される担体を含む有効量の医薬組成物を当該個体に投与することを含み、当該改変された免疫細胞が、ＩＬ－１５断片及び第２のポリペプチド断片を含む融合タンパク質であるＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列を含み、ここで、当該ＩＬ－１５ポリペプチドが、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、当該方法が提供される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、第２のポリペプチド断片は、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメイン、ＩＬ－１５Ｒβ、共通γ鎖（γｃ）、遺伝子操作された受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＡＣ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、遺伝子操作された受容体、例えば、ＣＡＲ、遺伝子操作されたＴＣＲ、またはＴＡＣ受容体をコードする第２の異種核酸配列を更に含む。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じベクターまたは別個のベクターに存在する。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じプロモーターまたは別個のプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0244】

幾つかの実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、固形癌）を処置する方法であって、改変された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）及び薬学的に許容される担体を含む有効量の医薬組成物を当該個体に投与することを含み、当該改変された免疫細胞が、膜貫通ドメインを含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列を含み、当該ＩＬ－１５ポリペプチドが、８位、６２位、３位、及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、当該方法が提供される。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、６２位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、６２位でのアミノ酸置換は、Ｔ６２Ｇである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、８位でのアミノ酸置換は、Ｄ８Ｅである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、３位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、３位でのアミノ酸置換は、Ｖ３Ｙである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７８を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、２５位でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｅ及びＬ２５Ｆからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、２５位でのアミノ酸置換は、Ｌ２５Ｆである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９に対する少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のいずれか）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号７９を含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、８位及び６２位の両方でのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメインである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、細胞内ドメインを更に含む。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、（ａ）抗原結合ドメイン；（ｂ）ＩＬ－１５断片；（ｃ）膜貫通ドメイン；及び（ｄ）細胞内ドメインを含む。幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＩＬ－１５断片のＮ末端に存在する。幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＩＬ－１５断片のＣ末端に存在する。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ８α、またはＣＤ２８の膜貫通ドメインである。幾つかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、ヒンジドメイン、例えば、ＣＤ８に由来するヒンジドメインを更に含む。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、遺伝子操作された受容体、例えば、ＣＡＲ、遺伝子操作されたＴＣＲ、またはＴＡＣ受容体をコードする第２の異種核酸配列を更に含む。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じベクターまたは別個のベクターに存在する。幾つかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、同じプロモーターまたは別個のプロモーターに作動可能に連結されている。幾つかの実施形態では、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、及びＤＣ活性化Ｔ細胞からなる群から選択される。

【0245】

幾つかの実施形態では、がんを処置する方法は、以下の生物学的作用のうちの１つ以上を有する：（１）がん細胞の殺傷；（２）がん細胞の増殖の阻害；（３）末梢Ｔ細胞の再分布の誘発；（４）腫瘍における免疫応答の誘発；（５）腫瘍サイズの低減；（６）がんを有する個体における１つ以上の症状の軽減；（７）腫瘍転移の阻害；（８）生存の延長；（９）がん進行までの時間の延長；（１０）がん再発の可能性の予防、阻害、または低減；（１１）個体の生活の質の改善；（１２）腫瘍におけるＴ細胞浸潤の促進、及び（１３）転移（例えば、リンパ節への転移）の発生の低減または既に存在する腫瘍転移負荷の低減。幾つかの実施形態では、本方法は、少なくとも約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のいずれかの腫瘍細胞死率を達成する。幾つかの実施形態では、本方法は、腫瘍サイズを少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のいずれかが含まれる）低減する。幾つかの実施形態では、本方法は、転移を少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のいずれかが含まれる）阻害する。幾つかの実施形態では、本方法は、個体の生存を、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４ヶ月、またはより長期間のいずれかの期間延長する。幾つかの実施形態では、本方法は、がん進行までの時間を、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４ヶ月、またはより長期間のいずれかの期間延長する。

【0246】

本明細書に記載される方法は、固形がん及び液性がんの両方が含まれる、種々のがんを処置するのに好適である。本方法は、早期がん、非転移性がん、原発がん、進行がん、局部進行がん、転移性がん、または寛解状態のがんが含まれる、あらゆるステージのがんに適用可能である。本明細書に記載される方法は、第１の治療法として、第２の治療法として、第３の治療法として、または当該技術分野において公知の他の種類のがん治療、例えば、化学療法、外科手術、ホルモン療法、放射線、遺伝子治療、免疫療法（例えば、Ｔ細胞療法）、骨髄移植、幹細胞移植、標的療法、寒冷療法、超音波療法、光線力学療法、高周波アブレーションなどとの併用療法として、アジュバント療法もしくはネオアジュバント療法（すなわち、本方法は、一次／根治療法の前に実行され得る）として使用され得る。幾つかの実施形態では、本方法は、以前に処置されたことがある個体を処置するために使用される。幾つかの実施形態では、がんは、前治療に対して治療抵抗性であった。幾つかの実施形態では、本方法は、以前に処置されていない個体を処置するために使用される。

【0247】

幾つかの実施形態では、個体は、低腫瘍量を有する。固形腫瘍の腫瘍量は、固形がん効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）１．１ガイドラインに従って測定され得る。Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ４５（２００９） ２２８－２４７を参照のこと。例えば、腫瘍量は、測定可能な腫瘍について、処置のベースライン時に以下に基づいて評価され得る：（１）腫瘍性病変（例えば、ＣＴスキャン、臨床検査でのカリパス測定、及び／または胸部Ｘ線による）、及び（２）悪性リンパ節。例えば、固形がんの腫瘍量は、臓器につき最大２つでの５つの標的病変の直径の合計として定量され得る。液性がんの腫瘍量は、Ｃｈｅｓｏｎ ２００７基準に従って放射線科医により評価される最大６つの指標病変の直径の積和として測定され得る。Ｃｈｅｓｏｎ ＢＤ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２００７；２５（５）：５７９－５８６を参照のこと。幾つかの実施形態では、低腫瘍量を有する個体は、約４×１０^３、３×１０^３、２×１０^３、１×１０^３、５×１０^２、２×１０^２、１×１０^２ｍｍ^２以下、またはそれ以下のいずれかの腫瘍量を有する。

【0248】

幾つかの実施形態では、個体は、処置を受けた後にグレード３またはグレード４の有害な副作用を示さない。有害事象のグレーディングは、有害事象共通用語規準ｖ３．０（ＣＴＣＡＥ）に従う。幾つかの実施形態では、個体は、処置を受けた後にサイトカインストームを示さない。

【0249】

本明細書に記載される方法において投与される改変された免疫細胞の有効量は、処置されるがんの特定の種類及びステージ、投与経路、ＩＬ－１５ポリペプチド及び／または遺伝子操作された受容体の活性などの多数の因子に依存する。適切な投与レジメンは、患者のサイズ、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、性別、投与時間及び投与経路、健康状態、ならびに同時に投与される他の薬物が含まれる、臨床学的因子に基づいて医師により決定され得る。幾つかの実施形態では、医薬組成物の有効量は、医薬組成物が個体に投与される場合に、毒物学的効果（すなわち、臨床的に許容されるレベルの毒性を超える効果）を誘発するレベル未満であるか、または潜在的な副作用が制御され得るか、もしくは許容され得るレベルである。幾つかの実施形態では、医薬組成物の有効量は、約１０^５～約１０^１０個の改変された免疫細胞を含む。

【0250】

幾つかの実施形態では、医薬組成物は、１回投与される（例えば、ボーラス注射）。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、複数回（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、またはそれ以上のいずれか）投与される。複数回投与の場合、それらは同じ経路または異なる経路により実行され得、同じ部位または別の部位で行われ得る。医薬組成物は、毎日から年１回までなどの好適な頻度で投与され得る。特定の患者に最適な用量及び処置レジメンは、疾患の兆候について当該患者をモニタリングし、それに応じて処置を調整することによって、医薬分野の当業者により容易に決定され得る。

【0251】

幾つかの実施形態では、処置される個体は、哺乳動物である。哺乳動物の例としては、限定されるものではないが、ヒト、サル、ラット、マウス、ハムスター、モルモット、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウシなどが挙げられる。幾つかの実施形態では、個体は、ヒトである。

【0252】

医薬組成物
本明細書に記載される改変された免疫細胞のいずれか、及び任意の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が本出願により更に提供される。

【0253】

本出願の医薬組成物は、任意の数の改変された免疫細胞を含み得る。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、単一コピーの改変された免疫細胞を含む。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも約１コピー、１０コピー、１００コピー、１０００コピー、１０^４コピー、１０^５コピー、１０^６コピー、１０^７コピー、１０^８コピー、またはそれ以上のいずれかの改変された免疫細胞を含む。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、単一種類の改変された免疫細胞を含む。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも２種類の改変された免疫細胞を含み、ここで、異なる種類の改変された免疫細胞は、細胞供給源、細胞種、発現されるキメラ受容体、及び／またはプロモーターなどが異なる。

【0254】

本明細書で使用する場合、「担体」としては、用いられる投与量及び濃度で曝露される細胞または個体に対して無毒性である、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤が挙げられる。多くの場合、生理学的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。好適な薬学的担体の例は、当該技術分野において周知であり、リン酸緩衝生理食塩水、水、油／水エマルションなどのエマルション、様々な種類の湿潤剤、滅菌溶液などが挙げられる。許容可能な担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量及び濃度でレシピエントに対して無毒性である。

【0255】

かかる担体を含む医薬組成物は、周知の従来の方法により製剤化され得る。溶媒または希釈剤は、好ましくは等張性、低張性、またはわずかに高張性であり、比較的低いイオン強度を有する。代表的な例としては、滅菌水、生理的食塩水（例えば、塩化ナトリウム）、リンガー液、グルコース、トレハロース、またはサッカロース溶液、ハンク溶液、及び他の生理的に平衡化された塩水溶液が挙げられる（例えば、最新版のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓを参照のこと）。

【0256】

本明細書に記載される医薬組成物は、任意の好適な経路により投与され得る。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、非経口投与、経皮（真皮に）投与、管腔内投与、動脈内（動脈に）投与、筋肉内（筋肉に）投与、クモ膜下腔内投与、または静脈内投与され得る。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、皮下（皮膚下に）投与される。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与される。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、注入または注射により個体に投与される。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、標的部位に直接投与され、例えば、微粒子銃送達により内部もしくは外部の標的部位に、またはカテーテルにより動脈内の部位に直接投与される。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、例えば、腫瘍内に局所投与される。投与は、従来のシリンジ及び針、または対象への活性薬剤（複数可）の送達を促進もしくは改善することができる当該技術分野において利用可能な任意の化合物もしくはデバイスを使用し得る。

【0257】

非経口投与用の調製物としては、無菌の水溶液または非水溶液、懸濁液、及びエマルションが挙げられる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えば、オリーブ油、及び注射可能有機エステル、例えば、オレイン酸エチルなどである。水性担体としては、水、アルコール溶液／水溶液、エマルションまたは懸濁液が挙げられ、生理食塩水及び緩衝媒質が含まれる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液、または不揮発性油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、体液及び栄養補充液、電解質補充液（例えば、リンゲルデキストロースをベースとしたもの）などが挙げられる。防腐剤及び他の添加物、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、及び不活性ガスなども存在し得る。加えて、本開示の医薬組成物は、例えば、好ましくはヒト起源の血清アルブミンまたは免疫グロブリンのようなタンパク質性担体を含み得る。凍結形態、液体形態、または凍結乾燥形態のいずれかの様々なウイルス製剤が当該技術分野において利用可能である（例えば、ＷＯ９８／０２５２２、ＷＯ０１／６６１３７、ＷＯ０３／０５３４６３、ＷＯ２００７／０５６８４７、及びＷＯ２００８／１１４０２１など）。固体組成物（例えば、乾燥粉末組成物または凍結乾燥組成物）は、真空乾燥及び凍結乾燥を含むプロセスにより得られ得る（例えば、ＷＯ２０１４／０５３５７１を参照のこと）。本開示の医薬組成物は、本明細書に記載される改変された免疫細胞に加えて、医薬組成物の使用目的に応じて、更なる生物活性物質を含み得ることが想定される。

【0258】

幾つかの実施形態では、医薬組成物は、好適には、ヒトへの使用のために緩衝処理される。好適な緩衝液としては、限定されるものではないが、生理的ｐＨまたはわずかに塩基性のｐＨ（例えば、ｐＨ約７～ｐＨ約９）を維持することができるリン酸塩緩衝液（例えば、ＰＢＳ）、重炭酸緩衝液、及び／またはＴｒｉｓ緩衝液が挙げられる。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、グリセロールなどの好適な浸透圧調節剤の添加により血液と等張になるようにも製造され得る。

【0259】

幾つかの実施形態では、医薬組成物は、単回使用バイアル、例えば、密封された単回使用バイアルに収容される。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、複数回使用バイアルに収容される。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、まとめて容器に収容される。

【0260】

幾つかの実施形態では、医薬組成物は、個体への投与のためのある特定の基準を満たしていなければならない。例えば、米国食品医薬品局は、２１ ＣＦＲ ６１０及び２１ ＣＦＲ ６１０．１３が含まれる、細胞ベースの免疫療法製品の基準を設定する規制ガイドラインを発行している。医薬組成物の外観、同一性、純度、安全性、及び／または効力を評価するための方法は、当技術分野において公知である。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、アレルギー効果を引き起こすことができる外来性タンパク質、例えば、改変された免疫細胞以外の細胞培養に使用される動物源のタンパク質を実質的に含まない。幾つかの実施形態では、「実質的に含まない」とは、医薬組成物の総容量または総重量の約１０％未満、５％未満、１％未満、０．１％未満、０．０１％未満、０．００１％未満、１ｐｐｍ未満、またはそれ以下のいずれかである。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、ＧＭＰ水準の工場で調製される。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、非経口投与について約５ＥＵ／ｋｇ体重／ｈｒ未満のエンドトキシンを含む。幾つかの実施形態では、静脈内投与について、医薬組成物中の改変された免疫細胞の少なくとも約７０％が生存している。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、米国薬局方（ＵＳＰ）に記載されている１４日間の直接接種試験法を使用して評価される場合に、「増殖なし」の結果を示す。幾つかの実施形態では、医薬組成物の投与前に、改変された免疫細胞及び薬学的に許容される賦形剤の両方を含む試料が、最終的な回収のおよそ４８～７２時間前に（または培養物への最後のリフィードと同時に）無菌試験のために採取されなければならない。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、マイコプラズマ汚染がない。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、検出可能な微生物因子を含まない。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、感染症病原体、例えば、ＨＩＶ Ｉ型、ＨＩＶ ＩＩ型、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ヒトＴリンパ球向性ウイルスＩ型、及びヒトＴリンパ球向性ウイルスＩＩ型を含まない。

【0261】

ＩＶ．キット及び製造物品
改変された免疫細胞または本明細書に記載される組成物（例えば、医薬組成物）のいずれかを含むキット、製剤、及び製造物品も提供される。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のいずれかを含み、好ましくは、その使用のための使用説明書を提供するキットが提供される。幾つかの実施形態では、キットは、改変された免疫細胞に加えて、第２のがん治療、例えば、化学療法、ホルモン療法、及び／または免疫療法を更に含む。キット（複数可）は、個体の特定のがんに合わせて調整されてもよく、当該個体用のそれぞれの第２のがん治療を含んでもよい。

【0262】

キットは、改変された免疫細胞の増殖または誘導を可能にする１種以上の追加の成分、例えば、容器、試薬、培養培地、誘導因子、サイトカイン、緩衝剤、抗体などを含み得る。キットは、腫瘍部位への医薬組成物の局所投与（例えば、腫瘍内注射）のためのデバイスも含み得る。

【0263】

本出願のキットは、好適な包装内に存在する。好適な包装としては、限定されるものではないが、バイアル、ボトル、ジャー、軟包装（例えば、密封マイラーまたはプラスチック袋）などが挙げられる。キットは、追加の構成要素、例えば、緩衝剤及び説明情報を任意に提供し得る。従って、本出願は、バイアル（例えば、密封されたバイアル）、ボトル、ジャー、軟包装などを含む製造物品も提供する。キットの幾つかの成分は、水性媒体中または凍結乾燥形態で包装され得る。

【0264】

製造物品は、容器及び当該容器上のまたは当該容器に付随するラベルまたは添付文書を含み得る。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成されていてもよい。通常、容器は、本明細書に記載される疾患または障害（例えば、がん）を処置するのに有効な組成物を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針により貫通可能な栓を有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであり得る）。ラベルまたは添付文書は、組成物が個体における特定の状態を処置するために使用されることを示す。ラベルまたは添付文書は、組成物を個体に投与するための使用説明書を更に含む。ラベルは、再構成方法及び／または使用方法を示し得る。医薬組成物を収容する容器は、再構成された製剤の反復投与（例えば、２～６回の投与）を可能にする複数回使用バイアルであり得る。添付文書は、治療用製品の市販パッケージに慣習的に含まれる、適応症、用法、投与量、投与、禁忌に関する情報、及び／またはかかる治療用製品の使用に関する警告を含む使用説明書を指す。追加的に、製造物品は、薬学的に許容される緩衝液、例えば、注射用滅菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー液、及びデキストロース溶液を含む第２の容器を更に含み得る。製造物品またはキットは、商業的観点及び利用者の観点から、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジが含まれる、所望の他の物質を更に含み得る。

【0265】

キットまたは製造物品は、薬局、例えば、病院薬局及び調剤薬局における保存及び使用に十分な量で包装された複数の単位用量の医薬組成物及び使用説明書を含み得る。

【0266】

例示的実施形態
実施形態１．８位及び／または６２位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞であって、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、前記改変された免疫細胞。

【0267】

実施形態２．前記ＩＬ－１５ポリペプチドが６２位でのアミノ酸置換を含む、実施形態１に記載の改変された免疫細胞。

【0268】

実施形態３．前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、グリシン（Ｇ）、イソロイシン（Ｉ）、グルタミン（Ｑ）、バリン（Ｖ）、プロリン（Ｐ）、ロイシン（Ｌ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、及びチロシン（Ｙ）からなる群から選択されるアミノ酸残基を６２位で含む、実施形態２に記載の改変された免疫細胞。

【0269】

実施形態４．６２位での前記アミノ酸置換が、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｑ、Ｔ６２Ｖ、Ｔ６２Ｐ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ａ、Ｔ６２Ｓ、及びＴ６２Ｙからなる群から選択される、実施形態２または３に記載の改変された免疫細胞。

【0270】

実施形態５．６２位での前記アミノ酸置換がＴ６２Ｇである、実施形態４に記載の改変された免疫細胞。

【0271】

実施形態６．前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、配列番号７のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２～５のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【0272】

実施形態７．前記ＩＬ－１５ポリペプチドが８位でのアミノ酸置換を含む、先行実施形態のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【0273】

実施形態８．前記ＩＬ－１５ポリペプチドが８位でグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸残基を含む、実施形態７に記載の改変された免疫細胞。

【0274】

実施形態９．８位での前記アミノ酸置換がＤ８Ｅである、実施形態８に記載の改変された免疫細胞。

【0275】

実施形態１０．前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、配列番号５のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態８または９に記載の改変された免疫細胞。

【0276】

実施形態１１．３位及び／または２５位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞であって、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、当該改変された免疫細胞。

【0277】

実施形態１２．３位での前記アミノ酸置換がＶ３Ｙであり、及び／または２５位での前記アミノ酸置換がＬ２５Ｆである、実施形態１１に記載の改変された免疫細胞。

【0278】

実施形態１３．前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、配列番号７８または７９のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１２に記載の改変された免疫細胞。

【0279】

実施形態１４．前記１つ以上のアミノ酸置換が、前記ＩＬ－１５ポリペプチドのＩＬ－１５Ｒβに対する親和性を、前記１つ以上のアミノ酸置換を含まないＩＬ－１５ポリペプチドと比較して低減する、先行実施形態のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【0280】

実施形態１５．ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の異種核酸配列を含む改変された免疫細胞であって、前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を含む改変された免疫細胞による炎症性サイトカインの分泌より少なくとも５０％低いレベルで、前記改変された免疫細胞による炎症性サイトカインの分泌を誘発する、前記改変された免疫細胞。

【0281】

実施形態１６．前記ＩＬ－１５ポリペプチドが分泌型である、先行実施形態のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【0282】

実施形態１７．前記ＩＬ－１５ポリペプチドが膜結合型である、実施形態１～１６のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【0283】

実施形態１８．前記ＩＬ－１５ポリペプチドがグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーペプチド配列を含む、実施形態１７に記載の改変された免疫細胞。

【0284】

実施形態１９．前記ＩＬ－１５ポリペプチドが膜貫通ドメインを含む、実施形態１７に記載の改変された免疫細胞。

【0285】

実施形態２０．前記ＩＬ－１５ポリペプチドが膜アンカードメインを含む、実施形態１７に記載の改変された免疫細胞。

【0286】

実施形態２１．前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、第２のポリペプチド断片に融合されたＩＬ－１５断片を含む融合タンパク質である、先行実施形態のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【0287】

実施形態２２．前記第２のポリペプチド断片が、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン、ＩＬ－１５Ｒαの膜貫通ドメイン、ＩＬ－１５Ｒβ、及び共通γ鎖（γｃ）からなる群から選択される、実施形態２１に記載の改変された免疫細胞。

【0288】

実施形態２３．前記第２のポリペプチド断片が、配列番号５０～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態２２に記載の改変された免疫細胞。

【0289】

実施形態２４．前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、（ａ）抗原結合ドメイン；（ｂ）ＩＬ－１５断片；（ｃ）膜貫通ドメイン；及び（ｄ）細胞内ドメインを含む、実施形態１７に記載の改変された免疫細胞。

【0290】

実施形態２５．前記改変された免疫細胞が、遺伝子操作された受容体をコードする第２の異種核酸配列を含む、実施形態１～２３のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【0291】

実施形態２６．前記遺伝子操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態２５に記載の改変された免疫細胞。

【0292】

実施形態２７．前記ＣＡＲが、ＢＣＭＡ ＣＡＲ、ＣＤ１９ ＣＡＲ、またはＧＰＣ３ ＣＡＲである、実施形態２６に記載の改変された免疫細胞。

【0293】

実施形態２８．前記遺伝子操作された受容体が、改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態２５に記載の改変された免疫細胞。

【0294】

実施形態２９．前記遺伝子操作された受容体が、Ｔ細胞抗原連結体（ＴＡＣ）受容体である、実施形態２５に記載の改変された免疫細胞。

【0295】

実施形態３０．前記第１の核酸配列及び前記第２の核酸配列が、同じプロモーターに作動可能に連結されている、実施形態２５～２９のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【0296】

実施形態３１．前記第１の核酸及び前記第２の核酸が、別個のプロモーターに作動可能に連結されている、実施形態２５～２９のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【0297】

実施形態３２．前記改変された免疫細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、及びγδＴ細胞からなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【0298】

実施形態３３．前記改変された免疫細胞がＮＫ細胞である、実施形態３２に記載の改変された免疫細胞。

【0299】

実施形態３４．前記改変された免疫細胞が細胞傷害性Ｔ細胞である、実施形態３２に記載の改変された免疫細胞。

【0300】

実施形態３５．前記改変された免疫細胞が、個体に投与される場合、前記ＩＬ－１５ポリペプチドをコードする前記第１の異種核酸を含まない改変された免疫細胞と比較してインビボでの低減された毒性を有する、先行実施形態のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。

【0301】

実施形態３６．改変された免疫細胞を作製する方法であって、８位及び／または６２位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする第１の核酸配列を前駆体免疫細胞に導入することを含み、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、前記方法。

【0302】

実施形態３７．前記前駆体免疫細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞、及びγδＴ細胞からなる群から選択される、実施形態３６に記載の方法。

【0303】

実施形態３８．前記前駆体免疫細胞が遺伝子操作された受容体を含む、実施形態３６または３７に記載の方法。

【0304】

実施形態３９．遺伝子操作された受容体をコードする第２の核酸を前記前駆体免疫細胞に導入することを更に含む、実施形態３６または３７に記載の方法。

【0305】

実施形態４０．前記遺伝子操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはＴ細胞抗原連結体（ＴＡＣ）受容体である、実施形態３８または３９に記載の方法。

【0306】

実施形態４１．前記第１の核酸配列及び前記第２の核酸配列が同じベクターに存在する、実施形態３９または４０に記載の方法。

【0307】

実施形態４２．前記ベクターがウイルスベクターである、実施形態４１に記載の方法。

【0308】

実施形態４３．前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びそれらの派生物からなる群から選択される、実施形態４２に記載の方法。

【0309】

実施形態４４．前記第１の核酸配列及び／または前記第２の核酸配列を含む免疫細胞を単離または濃縮することを更に含む、実施形態３６～４３のいずれか１項に記載の方法。

【0310】

実施形態４５．実施形態３６～４４のいずれか１項に記載の方法により作製される、改変された免疫細胞。

【0311】

実施形態４６．実施形態１～３５及び４５に記載の改変された免疫細胞と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。

【0312】

実施形態４７．個体における疾患を処置する方法であって、有効量の実施形態４６に記載の医薬組成物を前記個体に投与することを含む、前記方法。

【0313】

実施形態４８．前記疾患ががんである、実施形態４７に記載の方法。

【0314】

実施形態４９．前記個体が低腫瘍量を有する、実施形態４８に記載の方法。

【0315】

実施形態５０．前記個体におけるサイトカインストームをもたらさない、実施形態４７～４９のいずれか１項に記載の方法。

【0316】

実施形態５１．前記個体がヒトである、実施形態４７～５０のいずれか１項に記載の方法。

【0317】

実施形態５２．遺伝子操作された受容体を含む免疫細胞による処置を受ける個体におけるサイトカインストームを低減する方法であって、
（ａ）８位及び／または６２位での１つ以上のアミノ酸置換を含むＩＬ－１５ポリペプチドをコードする異種核酸配列を前記免疫細胞に導入することであって、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従い、これにより、改変された免疫細胞を提供する、前記導入すること、ならびに
（ｂ）有効量の前記改変された免疫細胞を前記個体に投与すること
を含む、前記方法。

【0318】

実施形態５３．アミノ酸置換Ｄ８Ｅ、Ｔ６２Ｇ、Ｖ３Ｙ、及び／またはＬ２５Ｆを含む遺伝子操作されたＩＬ－１５ポリペプチドであって、アミノ酸残基位置の番号付けが配列番号１に従う、前記遺伝子操作されたＩＬ－１５ポリペプチド。

【0319】

実施形態５４．配列番号５、７、７８、及び７９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態５３に記載の遺伝子操作されたＩＬ－１５ポリペプチド。

【実施例】

【0320】

以下の実施例は、単に本開示を例示することを意図したものであり、従って、本開示を如何様にも限定するものとみなされるべきでない。以下の実施例及び詳細な説明は、例証として提供されるものであり、限定するために提供されるものではない。

【0321】

実施例１：外来性に導入された野生型または変異型ＩＬ－１５を発現するＣＡＲ－ＮＫ細胞の調製
この実施例は、外来性に導入されたＩＬ－１５を発現する例示的な武装化したＣＡＲ－ＮＫ細胞の構築を示す。具体的には、この実施例は、野生型または変異型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及び野生型または変異型ＩＬ－１５で武装化したＣＤ１９ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の構築を示す。

【0322】

１．１．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の構築
ＢＣＭＡ ＣＡＲまたはＣＤ１９ ＣＡＲを構築するために、Ｎ末端からＣ末端までに、ＣＤ８αヒンジドメイン（配列番号１８）、ＣＤ８α膜貫通ドメイン（配列番号１９）、ＣＤ１３７共刺激シグナル伝達ドメイン（配列番号２０）、ＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（配列番号２１）、及び作動可能にＩＬ－１５武装化設計配列（すなわち、配列番号２～配列番号１７、ならびに配列番号７８及び配列番号７９から選択される１つの配列）を含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を化学合成し、事前に改変されたレトロウイルスベクター（ＭＳＣＶベクター）のインビトロ転写のための構成的ｈＥＦ１αプロモーターの下流にクローニングし、これに作動可能に連結させた。レトロウイルス上清を、Ｂｌｏｏｄ（２００６） １０８（１２）：３８９０－３８９７において例示されるように一過性に産生させた。例示的なＣＡＲ構築物の配列を以下に示す。

配列番号２６ ＢＣＭＡ ＣＡＲアミノ酸配列
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＡＦＳＴＹＦＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＡＷＳＧＧＳＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＲＧＩＥＶＥＥＦＧＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＹＴＹＳＴＹＳＮＹＹＭＧＷＦＲＥＡＰＧＫＡＲＴＳＶＡＩＩＳＳＤＴＴＩＴＹＫＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＳＡＭＹＲＣＡＡＷＴＳＤＷＳＶＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号２９ ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲアミノ酸配列
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＡＦＳＴＹＦＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＡＷＳＧＧＳＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＲＧＩＥＶＥＥＦＧＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＹＴＹＳＴＹＳＮＹＹＭＧＷＦＲＥＡＰＧＫＡＲＴＳＶＡＩＩＳＳＤＴＴＩＴＹＫＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＳＡＭＹＲＣＡＡＷＴＳＤＷＳＶＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

【0323】

１．２．ＣＡＲ－ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の構築
ＮＫの増殖
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、ＨｅｍａＣａｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入した。ＰＢＭＣを解凍し、膜結合型ＩＬ－１５及び４－１ＢＢリガンドを発現するように遺伝子改変されたＫ５６２（すなわち、Ｋ５６２－ｍｂ１５－４１ＢＢＬ）と共に培養した。細胞を、５０ＩＵのＩＬ－２／１ｍＬの培養培地を補足した幹細胞増殖培地（ＳＣＧＭ；Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｉｘ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ）を使用して増殖させた。７日間の培養後に、細胞を回収し、抗ＣＤ３ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、カタログ番号：１１３６５Ｄ）を使用して精製した。得られたＮＫ細胞を、５０ＩＵのＩＬ－２／１ｍＬの培養培地を補足したＳＣＧＭ培地で培養し、増殖させた。

【0324】

ＮＫ細胞へのウイルス導入
ＮＫ細胞を回収し、０．２５×１０^６個細胞の濃度で２ｍＬのＲＰＭＩ－１６４０培地中に懸濁した。レトロウイルス上清をＮＫ細胞に添加し、細胞を３７℃で一晩インキュベートした。インキュベーション後、細胞を遠心分離によりペレット化し、２００ＩＵのＩＬ－２／ｍＬ培養培地を含有する新鮮なＳＣＧＭに培地を交換した。形質導入されたＮＫ細胞を培養し、１２～２０日間の増殖後に実験に使用した。

【0325】

実施例２：理論的根拠により設計された変異型ＩＬ－１５で武装化したＣＡＲ ＮＫ細胞のインビトロスクリーニング
この実施例は、野生型分泌型ＩＬ－１５（すなわち、「ｓＩＬ－１５ ｗｔ」）で武装化したＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較した、変異型分泌型ＩＬ－１５（すなわち、「ｓＩＬ－１５ ｍ６」または「ｓＩＬ－１５ ｍ４」）で武装化したＣＡＲ－ＮＫ細胞のインビトロでの同等の抗腫瘍活性を示す。

【0326】

ＩＬ－１５ムテインのＩＬ－１５Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する親和性測定
ＩＬ－１５受容体は、種特異的なＩＬ－１５Ｒα（「ＩＬ－１５Ｒα」）、共通のＩＬ－２Ｒβ／ＩＬ－１５Ｒβ（「ＩＬ－１５Ｒβ」または「ＩＬ－２Ｒβ」）、及び共通γ鎖（「γＣ」または「ｇＣ」）の３つのポリペプチドからなる。ＩＬ－１５のＩＬ－１５α及びβ受容体への結合を担うＩＬ－１５の結合ドメインを分析した。幾つかの単一残基変異を起こさせ、各変異型ＩＬ－１５ポリペプチドのＩＬ－１５Ｒα及びＩＬ－１５Ｒβに対するインビトロでの結合親和性を実行した。

【0327】

要約すると、ＨＥＫ２９３細胞をペレット化し、粗製のＩＬ－１５ムテインの上清を表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による親和性測定に使用した。実験をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ ＳＰＲバイオセンサー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で室温にて実行した。抗Ａｖｉタグセンサーチップを、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣＩ、３ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．００５％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ－２０のランニング緩衝液（ｐＨ７．４）を用いて２５℃で調製した。Ｂｉａｃｏｒｅ ＣＭ５センサーチップの全ての表面を、４００ｍＭのＥＤＣ及び１００ｍＭのＮＨＳの１：１（ｖ／ｖ）混合物を用いて１０μＬ／分の流速で７分間活性化した。抗Ａｖｉ試薬（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、カタログ番号：Ａ００６７４－２００）を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）中に３０μｇ／ｍＬまで希釈し、全てのフローセル上に１０μＬ／分で７分間注入した。全てのフローセルを、１Ｍのエタノールアミン・ＨＣｌ（ｐＨ８．５）を用いて１０μＬ／分で７分間ブロッキングした。

【0328】

全てのムテイン上清の親和性測定を、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣＩ、３ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．００５％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ－２０のランニング緩衝液（ｐＨ７．４）を使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で２５℃にて実行した。Ａｖｉでタグ付けされたＩＬ－１５ムテインを、フローセル２、３、及び４上に１０μＬ／分の流速で３０秒間捕捉した。フローセル１を参照表面として使用した。ＩＬ－１５ムテインの捕捉後、分析物（０．１５６２５ｎＭ～１２８０ｎＭの濃度範囲のヒトＩＬ－１５Ｒαタンパク質または０．６２５ｎＭ～１２８０ｎＭの濃度範囲のヒトＩＬ－２Ｒβ）を、全てのフローセルに３０μＬ／分の流速で１００秒間注入した。各分析物の注入後、解離を６００秒間（すなわち、分析物がヒトＩＬ－１５Ｒαタンパク質である場合）または３００秒間（すなわち、分析物がヒトＩＬ－２Ｒβタンパク質である場合）モニタリングし、続いて、１０ｍＭのグリシン・ＨＣｌ（ｐＨ２．０）の３回の１５秒の注入により全てのフローセルを再生した。二重参照のために、緩衝液サイクルのセンサーグラムを収集した（例えば、Ｍｙｓｚｋａ ＤＧ．１９９９．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ １２：２７９－２８４を参照のこと）。動態解析のために、二重参照したセンサーグラムを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ バージョン３．０を使用して単純な１：１ラングミュア結合モデルにグローバルフィッティングした。

【0329】

例示的なムテインの動態及び親和性パラメータを以下の表３～４に示す。

【0330】

【表3】

【0331】

【表4】

【0332】

ＩＬ－１５ムテインで武装化したＣＡＲ－ＮＫ細胞のスクリーニング
武装化したＣＡＲ－ＮＫ細胞での発現のために幾つかの変異型、すなわち、ヒト野生型ＩＬ－１５（配列番号１）に対してそれぞれ、アミノ酸置換Ａ２３Ｌ、Ｌ２５Ｅ、Ｙ２６Ｇ、Ｄ８Ｅ、Ｄ６１Ｅ、Ｔ６２Ｇ、Ｔ６２Ｉ、Ｅ８９Ｋ、Ｖ３Ｙ、及びＬ２５Ｆを含むｍ１、ｍ２、ｍ３、ｍ４、ｍ５、ｍ６、ｍ７、ｍ８、ｍ１７、及びｍ１８を選択した。表１は、ＩＬ－１５ムテインのアミノ酸配列を示す。表５は、野生型及び変異型ｓＩＬ－１５を発現するＩＬ－１５で武装化したＣＡＲ－ＮＫ細胞の構築を示す。ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、実施例１に記載された方法を使用して作製した。

【0333】

【表5】

【0334】

変異型ＩＬ－１５で武装化したＣＡＲ－ＮＫ細胞を、インビトロでの細胞傷害性について短時間（図１Ａ）及び長時間（図１Ｂ）細胞殺傷アッセイで試験した。図１Ａは、変異型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞による、ＢＣＭＡ陽性標的であるＮＣＩ－Ｈ９２９細胞のインビトロでの短時間（４時間）殺傷を示す（Ｅ：Ｔ＝１：１、０．２５：１、０．０６２５：１）。全ての変異型ＩＬ－１５（例えば、ｍ１～ｍ８）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、短時間殺傷アッセイにおいて、非形質導入ＮＫ細胞（すなわち、「ＵｎＮＫ」）対照と比較して強力な抗腫瘍効力を示した。標的細胞に対する細胞傷害性の百分率は、７－ＡＡＤ＋％：７－ＡＡＤ＋細胞／標的細胞×１００％により算出した。

【0335】

図１Ｂは、変異型ＩＬ－１５（例えば、ｍ４～ｍ８）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のＮＣＩ－Ｈ９２９細胞に対するインビトロでの長時間殺傷を示す（Ｅ：Ｔ＝１：４）。１回の刺激毎に、約２４時間～４８時間の共培養のために腫瘍細胞をＮＫ細胞に添加し、共培養後、フローサイトメトリーによる更なる分析のために回収した。抗原刺激を合計８回繰り返した。図１Ｂに示すように、変異型ＩＬ－１５であるｍ４、ｍ５、ｍ６、及びｍ７で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較してより良好な抗腫瘍効力を示した。腫瘍細胞による刺激の間、変異型ＩＬ－１５であるｍ４及びｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫは、より良好な増殖を更に示した（図１Ｃ）。野生型ｈＩＬ－１５（ｈＩＬ－１５－Ｐ２Ａ－ＥＧＦＰ、配列番号５６）を発現するＮＫ細胞を対照として使用した。

【0336】

実施例３：野生型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のインビボでの毒性
この実施例は、多発性骨髄腫の腫瘍異種移植片を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－ｌｕｃモデル）において、ＢＣＭＡ標的及びＣＡＲ発現とは関係なく、毒性が野生型分泌型ＩＬ－１５（すなわち、「ｓＩＬ－１５ ｗｔ」）で武装化したＣＡＲ－ＮＫ細胞において観察されることを示す。

【0337】

ＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物を実施例１に記載される通りに調製した。腫瘍異種移植片を作製するために、ＮＣＧマウスにＮＣＩ－Ｈ９２９－Ｌｕｃ細胞（１×１０^６個細胞／マウス、ＢＣＭＡ陽性多発性骨髄腫細胞株、＃ＡＴＣＣ ＣＲＬ－９０６８（商標）、ルシフェラーゼを形質導入した）を静脈内注射した。１０～１４日後、腫瘍が移植されたマウスを、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＣＤ１９ ＣＡＲ－ＮＫ細胞、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞、または０．５μｇ／マウスのヒトＩＬ－１５を含む非形質導入ＮＫ細胞（すなわち、ｈＩＬ－１５腹腔内注射または「ＵｎＮＫ細胞の静脈内投与、ＩＬ－１５の腹腔内投与」）で処置した。

【0338】

０、２、及び５日目にそれぞれ２Ｍ個のＣＡＲ^＋ＮＫ細胞をマウスに注入した。腫瘍の進行をインビボでの生物発光イメージング（ＢＬＩ）により毎週の各時点で評価した。図２Ａ～２Ｂに示すように、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＮＫ細胞、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＣＤ１９ ＣＡＲ－ＮＫ、及びｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、マウスにおける同程度の毒性を示した（１８日目～２８日目に死亡）。従って、観察された毒性は、野生型ＩＬ－１５武装によるものである。

【0339】

実施例４：変異型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のインビボでの評価
この実施例は、変異型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞が、制御不能なサイトカイン放出（例えば、サイトカインストーム）を誘発することなく強い抗腫瘍効果を示すことを示す。

【0340】

ＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物及び腫瘍異種移植マウスを実施例１及び３に記載される通りに調製した。腫瘍が移植されたＮＣＧマウスを、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞、及びｓＩＬ－１５ ｍ１～ｍ８で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置した。０、２、及び５日目にそれぞれ２Ｍ個のＣＡＲ^＋ＮＫ細胞をマウスに注入した。腫瘍の進行をインビボでの生物発光イメージング（ＢＬＩ）により評価した。

【0341】

図３Ａ～３Ｂに示すように、ｓＩＬ－１５ ｍ１、ｍ３、ｍ４、ｍ５、ｍ６、及びｍ７で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、強力な抗腫瘍効力を示した。変異型ＩＬ－１５であるｍ４及びｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置された全てのマウスは、処置を生き延びた一方で、変異型ＩＬ－１５であるｍ１、ｍ３、ｍ５、ｍ７、及びｍ８で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置されたマウスは、毒性を示し、マウスは１０日目～２０日目に死亡した。ｓＩＬ－１５ ｍ２、ｍ４、及びｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の群のマウスは、他の群のマウスより長く生存し、これらのＩＦＮ－γ放出は少なかった（図３Ｃ）。このことは、サイトカイン放出レベルがマウスにおける毒性と相関することを示す。図３Ｃに示す各マウスにおける血漿中のＩＦＮ－γ分泌レベルを表６に定量化する。

【0342】

【表6】

【0343】

実施例５：ＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＣＡＲ－ＮＫ細胞のインビボでの評価
この実施例は、分泌型変異型ＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞が、制御不能なサイトカイン放出（例えば、サイトカインストーム）を誘発することなく強い抗腫瘍効果を示すことを示す。

【0344】

ＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物及び腫瘍異種移植マウスを実施例１及び３に記載される通りに調製した。１４日後、腫瘍が移植されたＮＣＧマウス（高腫瘍量）を、膜結合型野生型ＩＬ－１５（すなわち、「ｍｂＩＬ－１５ ｗｔ」）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞、及びｓＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置した。０、２、及び５日目にそれぞれ４．５Ｍ個のＣＡＲ^＋ＮＫ細胞をマウスに注入した。腫瘍の進行をインビボでの生物発光イメージング（ＢＬＩ）により評価した。

【0345】

図４Ａ～４Ｇは、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及びｍｂＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置されたマウスが、２１日目～２７日目に死亡したことを示す。このことは、これらの構築物がマウスに対して細胞傷害性であることを示す。ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及びｍｂＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置されたマウスの高レベルの炎症誘発性サイトカイン放出（例えば、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、及びＧＭ－ＣＳＦ）は、観察された毒性と相関する（図４Ｅ～４Ｇ）。逆に、変異型ｓＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置されたマウスにおける低レベルの炎症誘発性サイトカイン放出は、より高い生存率と相関する（図４Ｄ）。変異型ｓＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置された群における４匹のマウスのうちの３匹は、強い抗腫瘍効力を示し、群における全てのマウスが処置を生き延びた。変異型ｓＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞群における１匹のマウスは、処置後であっても腫瘍量を維持した。このマウス由来の腫瘍細胞におけるＢＣＭＡ抗原の分析により、これらの腫瘍細胞においてＢＣＭＡ抗原の喪失が起きたと結論付けられた（データ非表示）。

【0346】

全体として、変異型ＩＬ－１５であるｍ４及びｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、マウスモデルにおいて、ＩＬ－１５ ｗｔまたは他の変異型ＩＬ－１５構築物を有するＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較して、改善された抗腫瘍効力及びより低い毒性を有した。

【0347】

実施例６：膜結合型変異型ＩＬ－１５で武装化したＣＡＲ－ＮＫ細胞の調製及び評価
可溶性または膜結合型ＩＬ－１５で武装化したＣＡＲの様々な構築物を発現するＮＫ細胞を調製した。以下の表７に構築物の構造を記載する。これらのＩＬ－１５で武装化したＣＡＲ－ＮＫ細胞の抗腫瘍効力及び毒性を、実施例３に記載されたマウスモデルを使用してインビボで評価した。マウスに１Ｍ個のＣＡＲ＋ ＮＫ細胞を１回注入した。本明細書に記載される他のＩＬ－１５ムテイン及びＣＡＲに基づいて同様の構築物が作製され得る。

【0348】

この実施例は、膜結合型変異型ＩＬ－１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞が、制御不能なサイトカイン放出（例えば、サイトカインストーム）を誘発することなく強い抗腫瘍効果を示すことを示す。

【0349】

【表7】

【0350】

上記のｍｂ－３ ＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲのアミノ酸配列を配列番号６６に示す。ＩＬ－１５ ｍ６の膜結合を達成するために、ｍｂ－４ ＩＬ－１５ ｍ６（配列番号６０）、ｍｂ－５ ＩＬ－１５ ｍ６（配列番号６１）、ｍｂ－６ ＩＬ－１５ ｍ６（配列番号６２）、及びｍｂ－７ ＩＬ－１５ ｍ６（配列番号６３）が含まれる、膜結合型ＩＬ－１５ ｍ６の他の例示的な発現構造も構築した。膜結合型ＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲを、表７に示すようにＰ２Ａを介して膜結合型ＩＬ－１５ ｍ６及びＢＣＭＡ ＣＡＲを融合させることにより構築した。

【0351】

上記のｍｂ－９ ＩＬ－１５ ｍ４で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲのアミノ酸配列を配列番号７５に示す。ＩＬ－１５ ｍ４の膜結合を達成するために、ｍｂ－１０ ＩＬ－１５ ｍ４（配列番号７６）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ及びｍｂ－１１ ＩＬ－１５ ｍ４（配列番号７７）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲが含まれる、膜結合型ＩＬ－１５ ｍ４の他の例示的な発現構造も構築した。膜結合型ＩＬ－１５ ｍ４で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲを、表７に示すようにＰ２Ａを介して膜結合型ＩＬ－１５ ｍ４及びＢＣＭＡ ＣＡＲを融合させることにより構築した。

【0352】

膜結合型ＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＣＡＲ－ＮＫ細胞を、インビトロでの細胞傷害性について短時間（図５Ａ）及び長時間（図５Ｂ）細胞殺傷アッセイで試験した。図５Ａは、膜結合型ＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞による、ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞のインビトロでの短時間（４時間）殺傷を示す（Ｅ：Ｔ＝１：１、０．２５：１、０．０６２５：１）。ｍ６を有する異なる膜結合型ＩＬ－１５構造では、ｍｂ－３、ｍｂ－４、ｍｂ－５、ｍｂ－６、及びｍｂ－７ ＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、短時間殺傷アッセイにおいて、ＵｎＮＫ対照と比較して強力な抗腫瘍効力を示した。標的細胞に対する細胞傷害性の百分率は、７－ＡＡＤ＋％：７－ＡＡＤ＋細胞／標的細胞×１００％により算出した。

【0353】

図５Ｂは、膜結合型変異型ＩＬ－１５ ｍ６（例えば、ｍｂ－３、ｍｂ－４、ｍｂ－５、及びｍｂ－６）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のＮＣＩ－Ｈ９２９細胞に対するインビトロでの長時間殺傷を示す（Ｅ：Ｔ＝１：４）。１回の刺激毎に、約２４時間～４８時間の共培養のために腫瘍細胞をＮＫ細胞に添加し、共培養後、フローサイトメトリーによる更なる分析のために回収した。抗原刺激を合計４回繰り返した。図５Ｂに示すように、膜結合型変異型ＩＬ－１５ ｍ６（例えば、ｍｂ－３、ｍｂ－４、ｍｂ－５、及びｍｂ－６）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較して同程度の抗腫瘍効力を示した。

【0354】

膜結合型ＩＬ－１５ ｍ４で武装化したＣＡＲ－ＮＫ細胞も、インビトロでの細胞傷害性について短時間（図６Ａ）及び長時間（図６Ｂ及び図６Ｃ）細胞殺傷アッセイで試験した。図６Ａは、膜結合型ＩＬ－１５ ｍ４（ｍｂ－９、ｍｂ－１０、及びｍｂ－１１）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞による、ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞のインビトロでの短時間（４時間）殺傷を示す（Ｅ：Ｔ＝１：１、０．２５：１、０．０６２５：１）。ｍ４を有する異なる膜結合型ＩＬ－１５構造では、ｍｂ－９、ｍｂ－１０、及びｍｂ－１１ ＩＬ－１５ ｍ４で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、短時間殺傷アッセイにおいて、ＵｎＮＫ対照と比較して強力な抗腫瘍効力を示した。標的細胞に対する細胞傷害性の百分率は、７－ＡＡＤ＋％：７－ＡＡＤ＋細胞／標的細胞×１００％により算出した。

【0355】

図６Ｂは、膜結合型変異型ＩＬ－１５ ｍ４（例えば、ｍｂ－１０及びｍｂ－１１）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のＮＣＩ－Ｈ９２９細胞に対するインビトロでの長時間殺傷を示す（Ｅ：Ｔ＝１：４）。１回の刺激毎に、約２４時間～４８時間の共培養のために腫瘍細胞をＮＫ細胞に添加し、共培養後、フローサイトメトリーによる更なる分析のために回収した。抗原刺激を合計７回繰り返した。図６Ｂに示すように、膜結合型変異型ＩＬ－１５ ｍ４（例えば、ｍｂ－１０及びｍｂ－１１）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較してより良好な抗腫瘍効力を示した。腫瘍細胞による刺激の間、ｍｂ－１０ ＩＬ－１５ ｍ４で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及びｍｂ－１１ ＩＬ－１５ ｍ４で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、より良好な増殖を更に示した（図６Ｃ）。

【0356】

図７Ａ～７Ｂは、上記のようなＮＣＧマウスモデル（ＮＣＩ－Ｈ９２９－Ｌｕｃモデル）における、ｓＩＬ－１５ ｗｔ及び膜結合型ＩＬ－１５ ｍ６で武装化されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ＢＣＭＡ陽性標的細胞であるＮＣＩ－Ｈ９２９に対するインビボでの評価を示す。図７Ａは、マウス末梢血中のＢＣＭＡ ＣＡＲのＰＫを示す。膜結合型変異型ＩＬ－１５ ｍ６（ｍｂ－４及びｍｂ－５）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、マウス末梢血における良好な増殖を示した。図７Ｂは、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞及び膜結合型変異型ＩＬ－１５（ｍｂ－４ ＩＬ－１５ ｍ６及びｍｂ－５ ＩＬ－１５ ｍ６）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置されたマウスの生存曲線を示す。ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の群におけるマウスは、ＣＡＲ－ＮＫ細胞注入後の１３日目～１７日目の間に死亡した。膜結合型変異型ＩＬ－１５（ｍｂ－４ ＩＬ－１５ ｍ６及びｍｂ－５ ＩＬ－１５ ｍ６）で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の群におけるマウスは、より長く生存した。

【0357】

実施例７：変異型ＩＬ－１５で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のインビトロ活性の評価のためのアッセイ
変異型ＩＬ－１５で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲの作製
ＧＰＣ３ ＣＡＲを調製するために、抗ＧＰＣ３抗体のｓｃｆｖ（配列番号８０）を、Ｎ末端からＣ末端までに、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζ細胞内ドメイン（配列番号８５）を含むＣＡＲ骨格と融合させた。ＣＡＲ骨格を、ＧＰＣ３ ｓｃＦｖのＮ末端に融合されたＣＤ８αシグナルペプチドに作動可能に連結した。ＧＰＣ３ ＣＡＲのアミノ酸配列を配列番号８１に示す。野生型ＩＬ－１５またはＩＬ－１５ムテイン（ｍ１７またはｍ１８）を、２Ａ自己切断型ペプチドリンカーを使用してＧＰＣ３ ＣＡＲと融合させた。以下、「ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ」、「ｓＩＬ－１５ ｍ１７で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ」、及び「ｓＩＬ－１５ ｍ１８で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ」と称する。表５も参照のこと。ポリペプチドをコードする核酸を上記のようにレトロウイルスベクターにクローニングした。変異型ＩＬ－１５で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞を実施例１に記載された方法を使用して作製した。

【0358】

細胞傷害性アッセイ（ルシフェラーゼアッセイ）
短時間細胞傷害性アッセイでは、変異型ＩＬ－１５で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞を、ルシフェラーゼを発現するＨｕｈ７細胞（ＧＰＣ３陽性、Ｈｕｈ７／Ｌｕｃ）と１：１０のエフェクター対標的比率（Ｅ：Ｔ）で３７℃にて７２時間共培養した。残存ルシフェラーゼ活性（Ｌｕｃ_ｒｅｓｉ）を、ＯＮＥ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）によりユーザーマニュアルに従って測定した。エフェクター細胞なしで培養した同数の標的細胞を対照（Ｌｕｃ_ｍａｘ）として使用した。標的細胞溶解の百分率を以下の式のように算出した：（Ｌｕｃ_ｍａｘ－Ｌｕｃ_ｒｅｓｉ）／Ｌｕｃ_ｍａｘ×１００％。

【0359】

長時間細胞傷害性アッセイでは、変異型ＩＬ－１５で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞を、Ｈｕｈ７／Ｌｕｃ細胞と６ウェルプレートで３７℃にて共培養した（Ｅ／Ｔ＝１：２）。２４時間（１回の刺激）毎に、１０％の細胞混合物を回収し、フローサイトメトリーアッセイに供して、残存標的細胞の百分率を決定すると共に、残りの細胞を、新たに添加した４×１０^５個のＨｕｈ７／Ｌｕｃ細胞と共インキュベートした。

【0360】

ｓＩＬ－１５ ｍ１７で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞を、インビトロでの細胞傷害性について短時間（図８Ａ）及び長時間（図８Ｂ）細胞殺傷アッセイで試験した。図８Ａに示すように、１：１０のＥ：Ｔ比では、より高い標的細胞溶解百分率を有するｓＩＬ－１５ ｍ１７で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、短時間（７２時間）殺傷アッセイにおいて、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較してＨｕｈ７細胞に対する強い抗腫瘍効力を示した。同じ結果が、２回の刺激（Ｒ２）後の長時間細胞殺傷アッセイでも観察された（図８Ｂ）。

【0361】

ｓＩＬ－１５ ｍ１８で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞を、インビトロでの細胞傷害性について短時間（図９Ａ）及び長時間（図９Ｂ）細胞殺傷アッセイで試験した。図９Ａに示すように、１：１０のＥ：Ｔ比では、より高い標的細胞溶解百分率を有するｓＩＬ－１５ ｍ１８で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、短時間（７２時間）殺傷アッセイにおいて、ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較してＨｕｈ７細胞に対する強い抗腫瘍効力を示した。同じ結果が、２回の刺激（Ｒ２）後の長時間細胞殺傷アッセイでも観察された（図９Ｂ）。

【0362】

配列表

配列番号１：野生型ｈＩＬ－１５
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号２：ＩＬ１５ムテイン１
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＬＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号３：ＩＬ１５ムテイン２
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＥＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号４：ＩＬ１５ムテイン３
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＧＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号５：ＩＬ１５ムテイン４
ＮＷＶＮＶＩＳＥＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号６：ＩＬ１５ムテイン５
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＥＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号７：ＩＬ１５ムテイン６
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＧＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号８：ＩＬ１５ムテイン７
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＩＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号９：ＩＬ１５ムテイン８
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＫＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号１０：ＩＬ１５ムテイン９
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＤＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号１１：ＩＬ１５ムテイン１０
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＱＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号１２：ＩＬ１５ムテイン１１
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＶＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号１３：ＩＬ１５ムテイン１２
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＰＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号１４：ＩＬ１５ムテイン１３
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＬＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号１５：ＩＬ１５ムテイン１４
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＡＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号１６：ＩＬ１５ムテイン１５
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＳＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号１７：ＩＬ１５ムテイン１６
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＹＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号１８：ＣＤ８αヒンジ
ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ

配列番号１９：ＣＤ８αＴＭ
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ

配列番号２０：４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメイン
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ

配列番号２１：ＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

配列番号２２：ＣＤ８αＳＰ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ

配列番号２３：ＢＣＭＡ ＶＨＨ１－ＶＨＨ２
ＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＡＦＳＴＹＦＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＡＷＳＧＧＳＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＲＧＩＥＶＥＥＦＧＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＹＴＹＳＴＹＳＮＹＹＭＧＷＦＲＥＡＰＧＫＡＲＴＳＶＡＩＩＳＳＤＴＴＩＴＹＫＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＳＡＭＹＲＣＡＡＷＴＳＤＷＳＶＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ

配列番号２４：ＣＤ１９ ｓｃＦｖ
ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ

配列番号２５：ｈＩＬ１５－ＩＬ１５ＲａＴＭ
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＶＡＩＳＴＳＴＶＬＬＣＧＬＳＡＶＳＬＬＡＣＹＬ

配列番号２６：ＢＣＭＡ ＣＡＲ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＡＦＳＴＹＦＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＡＷＳＧＧＳＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＲＧＩＥＶＥＥＦＧＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＹＴＹＳＴＹＳＮＹＹＭＧＷＦＲＥＡＰＧＫＡＲＴＳＶＡＩＩＳＳＤＴＴＩＴＹＫＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＳＡＭＹＲＣＡＡＷＴＳＤＷＳＶＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

配列番号２７：ＣＤ１９ ＣＡＲ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

配列番号２８：Ｐ２Ａ
ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ

配列番号２９：ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＡＦＳＴＹＦＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＡＷＳＧＧＳＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＲＧＩＥＶＥＥＦＧＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＹＴＹＳＴＹＳＮＹＹＭＧＷＦＲＥＡＰＧＫＡＲＴＳＶＡＩＩＳＳＤＴＴＩＴＹＫＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＳＡＭＹＲＣＡＡＷＴＳＤＷＳＶＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号３０：ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＣＤ１９ ＣＡＲ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号３１：ｓＩＬ－１５ ｍ１で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＡＦＳＴＹＦＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＡＷＳＧＧＳＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＲＧＩＥＶＥＥＦＧＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＹＴＹＳＴＹＳＮＹＹＭＧＷＦＲＥＡＰＧＫＡＲＴＳＶＡＩＩＳＳＤＴＴＩＴＹＫＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＳＡＭＹＲＣＡＡＷＴＳＤＷＳＶＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＬＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号３２：ｓＩＬ－１５ ｍ２で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＡＦＳＴＹＦＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＡＷＳＧＧＳＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＲＧＩＥＶＥＥＦＧＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＹＴＹＳＴＹＳＮＹＹＭＧＷＦＲＥＡＰＧＫＡＲＴＳＶＡＩＩＳＳＤＴＴＩＴＹＫＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＳＡＭＹＲＣＡＡＷＴＳＤＷＳＶＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＥＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号３３：ｓＩＬ－１５ ｍ３で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＡＦＳＴＹＦＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＡＷＳＧＧＳＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＲＧＩＥＶＥＥＦＧＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＹＴＹＳＴＹＳＮＹＹＭＧＷＦＲＥＡＰＧＫＡＲＴＳＶＡＩＩＳＳＤＴＴＩＴＹＫＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＳＡＭＹＲＣＡＡＷＴＳＤＷＳＶＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＧＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号３４：ｓＩＬ－１５ ｍ４で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
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配列番号３５：ｓＩＬ－１５ ｍ５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
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配列番号３６：ｓＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
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配列番号３７：ｓＩＬ－１５ ｍ７で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
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配列番号３８：ｓＩＬ－１５ ｍ８で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
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配列番号３９：ｍｂＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
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配列番号４０：ＧＳリンカー１
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配列番号４１：ＧＳリンカー２
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配列番号４２：ｓＩＬ－１５ ｍ９で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
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配列番号４３：ｓＩＬ－１５ ｍ１０で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
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配列番号４４：ｓＩＬ－１５ ｍ１１で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
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配列番号４５：ｓＩＬ－１５ ｍ１２で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
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配列番号４６：ｓＩＬ－１５ ｍ１３で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
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配列番号４７：ｓＩＬ－１５ ｍ１４で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
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配列番号４８：ｓＩＬ－１５ ｍ１５で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＡＦＳＴＹＦＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＡＷＳＧＧＳＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＲＧＩＥＶＥＥＦＧＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＹＴＹＳＴＹＳＮＹＹＭＧＷＦＲＥＡＰＧＫＡＲＴＳＶＡＩＩＳＳＤＴＴＩＴＹＫＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＳＡＭＹＲＣＡＡＷＴＳＤＷＳＶＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＳＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号４９：ｓＩＬ－１５ ｍ１６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＡＦＳＴＹＦＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＡＷＳＧＧＳＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＲＧＩＥＶＥＥＦＧＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＹＴＹＳＴＹＳＮＹＹＭＧＷＦＲＥＡＰＧＫＡＲＴＳＶＡＩＩＳＳＤＴＴＩＴＹＫＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＳＡＭＹＲＣＡＡＷＴＳＤＷＳＶＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＹＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号５０：ＩＬ１５ＲａＥＤ
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配列番号５１：ＩＬ１５ＲａＥＤ短縮型（ｓ）
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配列番号５２：ＩＬ１５Ｒｂ
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配列番号５３：ｇｃ、共通γ鎖
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配列番号５４：ＩＬ１５Ｒａ
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配列番号５５：ＩＬ１５ＲａＴＭ
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配列番号５６：ｈＩＬ－１５－Ｐ２Ａ－ＥＧＦＰ
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配列番号５７：ｓＩＬ－１５ ｍ６－Ｒａ
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配列番号５８：ｓＩＬ－１５ ｍ６－ｓＲａ
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配列番号５９：ｍｂ－１ ＩＬ－１５ ｍ６
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配列番号６０：ｍｂ－４ ＩＬ－１５ ｍ６
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配列番号６１：ｍｂ－５ ＩＬ－１５ ｍ６
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配列番号６２：ｍｂ－６ ＩＬ－１５ ｍ６
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配列番号６３：ｍｂ－７ ＩＬ－１５ ｍ６
ＭＬＫＰＳＬＰＦＴＳＬＬＦＬＱＬＰＬＬＧＶＧＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＧＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＮＴＴＩＬＴＰＮＧＮＥＤＴＴＡＤＦＦＬＴＴＭＰＴＤＳＬＳＶＳＴＬＰＬＰＥＶＱＣＦＶＦＮＶＥＹＭＮＣＴＷＮＳＳＳＥＰＱＰＴＮＬＴＬＨＹＷＹＫＮＳＤＮＤＫＶＱＫＣＳＨＹＬＦＳＥＥＩＴＳＧＣＱＬＱＫＫＥＩＨＬＹＱＴＦＶＶＱＬＱＤＰＲＥＰＲＲＱＡＴＱＭＬＫＬＱＮＬＶＩＰＷＡＰＥＮＬＴＬＨＫＬＳＥＳＱＬＥＬＮＷＮＮＲＦＬＮＨＣＬＥＨＬＶＱＹＲＴＤＷＤＨＳＷＴＥＱＳＶＤＹＲＨＫＦＳＬＰＳＶＤＧＱＫＲＹＴＦＲＶＲＳＲＦＮＰＬＣＧＳＡＱＨＷＳＥＷＳＨＰＩＨＷＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ

配列番号６４：ｍｂ－８ ＩＬ－１５ ｍ６
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＧＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＶＡＩＳＴＳＴＶＬＬＣＧＬＳＡＶＳＬＬＡＣＹＬ

配列番号６５：ｍｂ－２ ＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
ＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＧＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＡＦＳＴＹＦＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＡＷＳＧＧＳＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＲＧＩＥＶＥＥＦＧＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＹＴＹＳＴＹＳＮＹＹＭＧＷＦＲＥＡＰＧＫＡＲＴＳＶＡＩＩＳＳＤＴＴＩＴＹＫＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＳＡＭＹＲＣＡＡＷＴＳＤＷＳＶＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

配列番号６６：ｍｂ－３ ＩＬ－１５ ｍ６で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＡＦＳＴＹＦＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＡＷＳＧＧＳＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＲＧＩＥＶＥＥＦＧＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＹＴＹＳＴＹＳＮＹＹＭＧＷＦＲＥＡＰＧＫＡＲＴＳＶＡＩＩＳＳＤＴＴＩＴＹＫＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＳＡＭＹＲＣＡＡＷＴＳＤＷＳＶＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＧＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

配列番号６７：ＧＳリンカー３
（ＧＳ）_ｎ

配列番号６８：ＧＳリンカー４
（ＧＳＧＧＳ）_ｎ

配列番号６９：ＧＳリンカー５
（ＧＧＧＳ）_ｎ

配列番号７０：ＩＬ１５シグナルペプチド（ＳＰ）及びプロペプチド
ＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡ

配列番号７１：ＩＬ－１５ＲβＳＰ
ＭＡＡＰＡＬＳＷＲＬＰＬＬＩＬＬＬＰＬＡＴＳＷＡＳＡ

配列番号７２：ＩＬ－１５ＲαＳＰ
ＭＡＰＲＲＡＲＧＣＲＴＬＧＬＰＡＬＬＬＬＬＬＬＲＰＰＡＴＲＧ

配列番号７３：共通γ鎖のＳＰ
ＭＬＫＰＳＬＰＦＴＳＬＬＦＬＱＬＰＬＬＧＶＧ

配列番号７４：ＩＬ－２のＳＰ
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ

配列番号７５：ｍｂ－９ ＩＬ－１５ ｍ４で武装化したＢＣＭＡ ＣＡＲ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＡＦＳＴＹＦＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＡＷＳＧＧＳＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＲＧＩＥＶＥＥＦＧＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＹＴＹＳＴＹＳＮＹＹＭＧＷＦＲＥＡＰＧＫＡＲＴＳＶＡＩＩＳＳＤＴＴＩＴＹＫＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＳＡＭＹＲＣＡＡＷＴＳＤＷＳＶＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＥＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

配列番号７６：ｍｂ－１０ ＩＬ－１５ ｍ４
ＭＡＡＰＡＬＳＷＲＬＰＬＬＩＬＬＬＰＬＡＴＳＷＡＳＡＮＷＶＮＶＩＳＥＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＶＮＧＴＳＱＦＴＣＦＹＮＳＲＡＮＩＳＣＶＷＳＱＤＧＡＬＱＤＴＳＣＱＶＨＡＷＰＤＲＲＲＷＮＱＴＣＥＬＬＰＶＳＱＡＳＷＡＣＮＬＩＬＧＡＰＤＳＱＫＬＴＴＶＤＩＶＴＬＲＶＬＣＲＥＧＶＲＷＲＶＭＡＩＱＤＦＫＰＦＥＮＬＲＬＭＡＰＩＳＬＱＶＶＨＶＥＴＨＲＣＮＩＳＷＥＩＳＱＡＳＨＹＦＥＲＨＬＥＦＥＡＲＴＬＳＰＧＨＴＷＥＥＡＰＬＬＴＬＫＱＫＱＥＷＩＣＬＥＴＬＴＰＤＴＱＹＥＦＱＶＲＶＫＰＬＱＧＥＦＴＴＷＳＰＷＳＱＰＬＡＦＲＴＫＰＡＡＬＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＬＫＰＳＬＰＦＴＳＬＬＦＬＱＬＰＬＬＧＶＧＬＮＴＴＩＬＴＰＮＧＮＥＤＴＴＡＤＦＦＬＴＴＭＰＴＤＳＬＳＶＳＴＬＰＬＰＥＶＱＣＦＶＦＮＶＥＹＭＮＣＴＷＮＳＳＳＥＰＱＰＴＮＬＴＬＨＹＷＹＫＮＳＤＮＤＫＶＱＫＣＳＨＹＬＦＳＥＥＩＴＳＧＣＱＬＱＫＫＥＩＨＬＹＱＴＦＶＶＱＬＱＤＰＲＥＰＲＲＱＡＴＱＭＬＫＬＱＮＬＶＩＰＷＡＰＥＮＬＴＬＨＫＬＳＥＳＱＬＥＬＮＷＮＮＲＦＬＮＨＣＬＥＨＬＶＱＹＲＴＤＷＤＨＳＷＴＥＱＳＶＤＹＲＨＫＦＳＬＰＳＶＤＧＱＫＲＹＴＦＲＶＲＳＲＦＮＰＬＣＧＳＡＱＨＷＳＥＷＳＨＰＩＨＷＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ

配列番号７７：ｍｂ－１１ ＩＬ－１５ ｍ４
ＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＥＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＴＴＡＧＶＴＰＱＰＥＳＬＳＰＳＧＫＥＰＡＡＳＳＰＳＳＮＮＴＡＡＴＴＡＡＩＶＰＧＳＱＬＭＰＳＫＳＰＳＴＧＴＴＥＩＳＳＨＥＳＳＨＧＴＰＳＱＴＴＡＫＮＷＥＬＴＡＳＡＳＨＱＰＰＧＶＹＰＱＧＨＳＤＴＴＶＡＩＳＴＳＴＶＬＬＣＧＬＳＡＶＳＬＬＡＣＹＬＫＳＲＱＴＰＰＬＡＳＶＥＭＥＡＭＥＡＬＰＶＴＷＧＴＳＳＲＤＥＤＬＥＮＣＳＨＨＬ

配列番号７８：ＩＬ１５ムテイン１７
ＮＷＹＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号７９：ＩＬ１５ムテイン１８
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＦＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号８０：ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＴＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＶＳＨＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＥＭＨＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＤＰＥＴＧＮＴＡＹＳＱＫＦＫＧＲＶＴＭＴＲＮＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＹＳＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号８１：ＧＰＣ３ ＣＡＲ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＴＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＶＳＨＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＥＭＨＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＤＰＥＴＧＮＴＡＹＳＱＫＦＫＧＲＶＴＭＴＲＮＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＹＳＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

配列番号８２：ｓＩＬ－１５ ｗｔで武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＴＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＶＳＨＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＥＭＨＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＤＰＥＴＧＮＴＡＹＳＱＫＦＫＧＲＶＴＭＴＲＮＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＹＳＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

配列番号８３：ｓＩＬ－１５ ｍ１７で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ
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配列番号８４：ｓＩＬ－１５ ｍ１８で武装化したＧＰＣ３ ＣＡＲ
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配列番号８５：ＣＤ３ζ細胞内ドメイン
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【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図4F】

【図4G】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【配列表】

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【国際調査報告】