特表 2024-527610 抗血小板療法を受けている患者における残存血小板の血栓形成能を評価する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-25

(54)【発明の名称】抗血小板療法を受けている患者における残存血小板の血栓形成能を評価する方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/53 20060101AFI20240718BHJP

   G01N 33/577 20060101ALI20240718BHJP

【ＦＩ】

G01N33/53 D

G01N33/577 B

G01N33/53 K

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024501804

(86)(22)【出願日】2022-07-14

(85)【翻訳文提出日】2024-03-11

(86)【国際出願番号】 EP2022069766

(87)【国際公開番号】W WO2023285607

(87)【国際公開日】2023-01-19

(31)【優先権主張番号】102021000018803

(32)【優先日】2021-07-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】IT

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522029349

【氏名又は名称】チェントロ・カルディオロジコ・モンツィーノ・ソチエタ・ペル・アツィオーニ

【氏名又は名称原語表記】ＣＥＮＴＲＯ ＣＡＲＤＩＯＬＯＧＩＣＯ ＭＯＮＺＩＮＯ Ｓ．Ｐ．Ａ．

(71)【出願人】

【識別番号】503047641

【氏名又は名称】ウニヴェルシタ’ デリ ストゥディ ディ ミラノ

【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡ’ ＤＥＧＬＩ ＳＴＵＤＩ ＤＩ ＭＩＬＡＮＯ

(74)【代理人】

【識別番号】110001508

【氏名又は名称】弁理士法人 津国

(72)【発明者】

【氏名】カーメラ，マリナ

(72)【発明者】

【氏名】ブランビッラ，マルタ

(72)【発明者】

【氏名】カンツァーノ，パオラ

(57)【要約】

抗血小板療法を受けている患者における残存血小板血栓形成能を評価するための方法が開示され、この方法は、患者の血液試料中の血管拡張因子刺激リン酸化タンパク質のリン酸化（ＶＡＳＰ－Ｐ）状態及び血小板組織因子（ＴＦ）発現の測定を含む。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

クロピドグレル、プラスグレル又はチカグレロルから選択されるＰ２Ｙ_１２受容体阻害剤による抗血小板療法を受けている患者における残存血小板血栓形成能を評価する方法であって、患者の血液試料中の血管拡張因子刺激リン酸化タンパク質のリン酸化（ＶＡＳＰ－Ｐ）状態及び血小板組織因子（ＴＦ）の発現を測定することを含む方法。

【請求項2】

Ｐ２Ｙ_１２受容体阻害剤による処置を受けている患者における残存血小板血栓形成能を評価するための、請求項１記載の方法。

【請求項3】

Ｐ２Ｙ_１２受容体阻害剤が、クロピドグレルである、請求項２記載の方法。

【請求項4】

ＶＡＳＰ－Ｐ及びＴＦが、フローサイトメトリーによって測定される、請求項１～３のいずれか一項記載の方法。

【請求項5】

クロピドグレル、プラスグレル又はチカグレロルから選択されるＰ２Ｙ_１２受容体阻害剤による抗血小板療法を受けている患者における残存血小板血栓形成能を評価するためのキットであって、ＶＡＳＰ－Ｐに対する選択的リガンド、血小板組織因子に対する選択的リガンド、前記リガンドの検出システム、ＶＡＳＰリン酸化阻害剤、希釈剤及び固定剤を含むキット。

【請求項6】

前記リガンドが、抗ＴＦ及び抗ＶＡＳＰ－Ｐモノクローナルマウス抗体である、請求項５記載のキット。

【請求項7】

検出システムが、蛍光プローブ標識抗ＩｇＧマウス抗体を含む、請求項６記載のキット。

【請求項8】

ＶＡＳＰリン酸化阻害剤が、ＡＤＰ及びＰＧＥ１を含む、請求項５又は６記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗血小板療法を受けている患者における残存血小板の血栓形成能を評価する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

血小板は止血に大きく貢献する。血管が損傷した場合、血小板は内皮下層に付着し、急速に活性化して凝集する。血管病変部位への血小板の動員は、アデノシン５’－二リン酸（ＡＤＰ）やトロンボキサンＡ２（ＴＸＡ２）などのオートクリンメディエーターによって供給される増幅システムに大いに依存する（Sang Y et al., PG, Huskens D. Blood rev. 2021; 46:100733）。

【0003】

血小板による全体的な止血への貢献は、一次止血だけに限定されるものではない。血小板は二次止血にも関与している、即ち、凝固過程において、（ｉ）凝固因子の集合に起因してホスファチジルセリン（ＰＳ）が露出した凝固亢進表面、及び（ii）凝固を開始するために必要な主要タンパク質である組織因子（ＴＦ）を提供する（Brambilla M, et al., Thromb Haemost 2015;114:579-592）。ＡＤＰ、ＴＸＡ２又はトロンビンによる活性化の後、血小板はその表面に機能的に活性なＴＦを露出させ、これが第VIIa因子に結合し、それがトロンビン生成を引き起こす凝固過程の引き金となる（Camera M. et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol 2003;23: 1690-1696）。

【0004】

ＴＦ陽性血小板のレベルの上昇は、血小板血症、抗リン脂質症候群、癌、ウイルス感染症及び心血管疾患を含む、血栓形成性表現型を特徴とする種々の病態で報告されている（Falanga A. et al., Exp Hematol. 2007; 35:702-711; Capozzi A et al., Clin Exp Immunol. 2019; 196:59-66; Tilley RE et al., Thromb Res 2008;122:604-609; Mayne E et al., J Acquir Immune Defic Syndr.2012;59:340-346; Canzano P et al., JACC Basic Transl Sci. 2021; Brambilla M, et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol 2008;28:947-953）。

【0005】

Ｐ２Ｙ_１２受容体によるＴＦ調節の翻訳的意味は、Ｐ２Ｙ_１２アンタゴニストによる処置がアスピリンと並んで二次予防のゴールドスタンダードであることを念頭に置くと、心血管疾患において非常に重要である（Benjamin EJ et al., Circulation. 2019;139: E56-E528）。

【0006】

冠状動脈疾患（ＣＡＤ）を患う患者におけるＴＦ発現は、ＶＡＳＰ試験により評価されるとおり、クロピドグレルでの処置によって達成される血小板阻害の程度に反比例する。上記試験は、Ｐ－セレクチン、ａＧＰIIbIIIa又は血小板凝集などの他の血小板活性化マーカーの評価と同様、クロピドグレルによる処置を受けている患者の残存血小板反応性を評価するために頻繁に使用される（Gremmel T, et al., PloS one 2015;10:e0129666）。クロピドグレルによる薬物療法は、個人応答の広範な変動を受けることになるため、残存血小板反応性を評価する方法が必要である。

【0007】

一般的にはＰ２Ｙ_１２阻害剤、特にクロピドグレルによる血小板阻害を評価する方法は開発されているが、有効であると認められる薬物療法を受けているにもかかわらず、かなりの割合の患者が更なる血栓性イベントを被る。

【0008】

Brambillaら（Blood Transfusion, Vol. 18 Suppl 4, 1.11.2020, page 460s）は、クロピドグレルの薬理学的標的である、Ｐ２Ｙ_１２受容体による血小板ＴＦの発現の制御に関するデータを報告している。この証拠の裏付けとして、データは、クロピドグレルによく反応する患者（ＰＲＩ＜６０％）ではＴＦ発現血小板の数が少ない一方、この薬物に反応しない患者（ＰＲＩ＞６０％）ではＴＦ発現血小板の数が多いことを示している。

【0009】

Ｐ２Ｙ_１２受容体が、ＧＰIIbIIIa、Ｐ－セレクチン、ＣＤ４０Ｌを含む他のタンパク質の血小板表面への露出を調節することも知られており（Gachet C et al, Thromb Haemost, 1997, 78 (1): 271-275 ; Hermann A et al, Platelets, 2001, 12 (2): 74-82,）、ホスファチジルセリンなどの凝固促進性リン脂質だけでなく、より一般的には血小板顆粒放出の調節に寄与する（Leon C et al, ATVB, 23 ( 10): 1941-1947, 2003）。またこれらの場合、薬物療法は、これらの血小板活性化マーカーの発現の減少、及びＰ－セレクチンの発現に依存するヘテロ凝集体の形成の減少を確定する（Storey et al, Thromb Haemost, 2002, 88 (3): 488-94）。最後に、Van der Maijden （Thromb Haemost, 2005, 93: 1128-36）は、脳卒中患者では、トロンビン生成へのＰ２Ｙ_１２介在性の寄与がクロピドグレル処置によって減少したことを指摘している。

【0010】

多数の血小板活性化パラメーターの薬理学的調節に関する一般的な知識に基づくと、ＴＦは、抗血小板療法を受けている患者の残存血栓形成能を評価するための唯一の候補ではなく、最も有望な候補ですらない。Gurbelら（J. Am. College of Cardiology, vol. 50, no. 19, 226.6.2007, 1822-1834）は、凝固及び血小板相互作用を測定する方法が、残存血栓形成能をより適切に予測できる可能性があると仮説を立てているが、他の著者（Gremmel et al, Thromb Res, 2013, 132 (1): e24-30）は、「抗血小板療法に対する反応は内因性トロンビン生成能とは無関係である」ことを強調しており、よって前述のGurbelらによる２００７年に立てられた仮説に反する教示を提供している。

【発明の概要】

【0011】

発明の説明
クロピドグレルで処置された被験者からの血液試料中のＶＡＳＰと血小板組織因子の両方を評価すると、残存血小板反応性の評価が大幅に改善され、薬物療法の効果的なモニタリング及び有害な心血管系イベントの信頼できる予測が可能になることが今回発見された。

【0012】

実施された実験によると、Ｐ－セレクチンは、ＶＡＳＰ試験に基づいてレスポンダーとノンレスポンダーを区別できないため、不十分なマーカーであることが示されている。ａＧＰIIbIIIa発現はＰ－セレクチンよりも適切に識別するが、組織因子（ＴＦ）の評価のみが、クロピドグレルに対する良好な反応にも関わらず、血小板に結合したＴＦの量が不十分レスポンダーの群で測定された中央値を超えているので、残存血栓リスクを示す患者（約１０％）を検出することが分かっている。このことは、ＡＤＲＩＥ試験及びＧＲＡＶＩＴＡＳ試験などの種々の臨床試験の結果が、安定したＣＡＤ患者ではＧＰIIbIIIaの活性化の程度、その結果としての血小板凝集が主要な有害な心血管系イベントを予測するのにあまり役立たないことを実証している理由の一部を説明するかもしれない（Reny JL, Circulation. 2012; 125:3201; Price MJ et al., Jama. 2011; 305:1097-1105; Trenk D et al., J Am Coll Cardiol 2012;59:2159-2164; Montalescot G et al., Circulation.2014;129: 2136-2143; Cayla G et al., Lancet. 2016; 388:2015-2022）。

【0013】

したがって本発明の第１の目的は、クロピドグレル、プラスグレル又はチカグレロルなどのＰ２Ｙ_１２阻害剤による抗血小板療法を受けている患者における残存血小板血栓形成能を評価する方法であって、患者の血液試料中の血管拡張因子刺激リン酸化タンパク質のリン酸化（ＶＡＳＰ－Ｐ）状態及び血小板組織因子の発現を測定することを含む方法である。

【0014】

本発明の方法は、特に、Ｐ２Ｙ_１２受容体阻害剤、特にクロピドグレル、プラスグレル又はチカグレロルによる処置を受けている患者における残存血小板血栓形成能の評価に適用できる。

【0015】

同じ試料に対するＶＡＳＰ－Ｐ及びＴＦの同時測定は、当業者の届く範囲にある公知の方法又は従来の方法の改変によって行うことができる。フロー細胞蛍光分析は、ＶＡＳＰ－Ｐの測定に既に使用されているが、実験の項で詳しく説明されるとおり、血小板ＴＦの測定にも便利に使用できる手法である。

【0016】

その第２の態様において、本発明は、Ｐ２Ｙ_１２受容体の阻害剤、特にクロピドグレル、プラスグレル又はチカグレロルによる抗血小板療法を受けている患者における残存血小板血栓形成能を評価するためのキットであって、ＶＡＳＰ－Ｐに対する選択的リガンド、血小板組織因子に対する選択的リガンド、前記リガンドの検出システム、ＶＡＳＰリン酸化阻害剤、希釈剤及び固定剤を含むキットに関する。

【0017】

その好ましい形態において、リガンドは、抗ＴＦ及び抗ＶＡＳＰ－Ｐモノクローナルマウス抗体であり、そして検出システムは、蛍光プローブ標識抗ＩｇＧマウス抗体を含む。

【図面の簡単な説明】

【0018】

【図1】クロピドグレル処置ＣＡＤ患者の血小板でのＴＦ発現。図は、ＶＡＳＰ試験で測定された血小板反応性指数（ＰＲＩ）に基づいて２群に分けられた、クロピドグレル（７５mg/日）で処置された患者におけるＡＤＰ（１０μM、１５分）による刺激後にＴＦ（パネルＡ）、ａＧＰIIbIIIa（パネルＢ）及びＰ－セレクチン（パネルＣ）を発現する血小板の割合を示している；ＰＲＩ＜６０％の患者は「レスポンダー」（患者ｎ＝１１４）として分類され、ＰＲＩ＞６０％の患者は「不十分レスポンダー」（患者ｎ＝４９）として分類される。比較のために、クロピドグレルを投与していない患者（クロピドなし）（ｎ＝３９）で得られたデータを示している。パネルＣ、Ｄ及びＥは、それぞれＴＦ、ａＧＰIIbIIIa及びＰ－セレクチンに関連するＡＤＰ濃度反応曲線（黒い四角）及びAR-C69931MXアンタゴニスト阻害曲線（白い三角）を示す。アゴニストのＥＣ５０は、４パラメーターロジスティックモデルにより算出されたが、一方アンタゴニストのｐＡ２は「材料と方法」に記載されているとおり算出された。結果は、ベースラインと比較したタンパク質の発現割合（ｓ／ｂ）として提示される。実験は少なくとも３回行われた。^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。

【図2】クロピドグレル処置ＣＡＤ患者の血小板でのＴＦ発現。図は、ＶＡＳＰ試験で測定された血小板反応性指数（ＰＲＩ）に基づいて２群に分けられた、クロピドグレル（７５mg/日）で処置された患者におけるＡＤＰ（１０μM、１５分）による刺激後に血小板によって発現されたＴＦの量を示している；ＰＲＩ＜６０％の患者は「レスポンダー」（患者ｎ＝１４４）として分類され、ＰＲＩ＞６０％の患者は「不十分レスポンダー」（患者ｎ＝４９）として分類される。比較のために、クロピドグレルを投与していない患者（クロピドなし）（ｎ＝３９）で得られたデータを示している。結果は平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告される。^＊ｐ＜０．０５。

【発明を実施するための形態】

【0019】

次に、一例として提供される以下の実験の項において本発明を詳細に説明する。
材料と方法
調査対象母集団
インビトロ実験は、血液試料を採取する前の１０日間に抗血小板薬を服用しなかった健常ボランティア１０人（男性ｎ＝５及び女性ｎ＝５；平均年齢３９±６）に対して実施された。ＴＦ発現に及ぼすクロピドグレルの効果は、非ＳＴ上昇を伴う心筋梗塞を伴う冠動脈疾患（ＣＡＤ）を患っている患者１９３人で評価された。クロピドグレル処置を受けていない患者３９人も対照群として採用されている。登録された患者の臨床的特徴を表１に示す。

【0020】

【表1】

【0021】

全ての患者はクロピドグレル（７５mg/日）で少なくとも７日間処置されていた。除外基準は、年齢＞８０歳、心臓弁膜症、心房細動、甲状腺中毒症、出血性素因の病歴、血小板異常又は血小板減少症、抗凝固剤又は血栓溶解剤による処置であった。重度の先天性Ｐ２Ｙ_１２欠損症を持つ被験者（男性、７５歳）も試験に加えられた。

【0022】

採血及び血小板分離
全血（ＷＢ）試料を、クエン酸ナトリウム（０．１２９M、１／１０ 体積／体積）を含有するチューブ（Vacutainer、Becton Dickinson）に静脈鬱血させずに１９ゲージ針で採取し、最初の４mlを廃棄した。次いで血液試料は、試料採取後１５分以内に処理された。ＷＢを１００ｇで１０分間遠心分離（室温、遠心ブレーキなし）して、血小板を分離した。この多血小板血漿（ＰＲＰ）を新しい試験管に移し、Sysmex XE-2100自動血液分析装置で分析して、血小板数、平均血小板容積（ＭＰＶ）、血小板分布幅（ＰＤＷ）、血小板回収（ＷＢの血小板数１００％に対するＰＲＰの血小板数の百分率として定義される）、及び白血球混入を測定した。白血球混入がなく、血小板回収≧７０％である血小板調製物のみを、その後のトロンビン生成分析に使用した。

【0023】

フローサイトメトリー分析
血小板活性化マーカーの表面発現を、以前に報告されているとおりフローサイトメトリーによって分析した（Brambilla M, et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2008;28(5):947-953）。簡単に説明すると、試料を、ヒト組織因子（ＨＴＦ１；Thermo Fisher）、Ｐ－セレクチン（ＡＰＣ；Becton Dickinson）、ＰＡＣ１（ＦＩＴＣ；Becton Dickinson）、ＣＤ３６（ＰＥ；Becton Dickinson）及びＣＤ１５４（ＦＩＴＣ；Becton Dickinson）を認識する飽和濃度のマウスモノクローナル抗体によりインキュベート／標識した。）。ＴＦの細胞内発現を分析するために、細胞を１％パラホルムアルデヒドで２時間固定し、Triton X-100 ＰＢＳの０．１％溶液で１０分間透過処理し、室温、暗所で１５分間飽和濃度の抗ＴＦ及びＣＤ６１抗体（ＰｅｒＣＰ；Becton Dickinson）により標識した。非特異的抗体（Becton Dickinson）及び二次抗体による標識のみのAlexaFluor（登録商標）633 標識ＩｇＧ（Thermo Fisher）を全ての実験で対照として使用し、非特異的標識シグナルを定量した。使用前に、全ての抗体を４℃、１７，０００rpmで５分間遠心分離して、凝集物を除去した。試料あたり合計１０，０００個の血小板を、４８８nm、６３８nm、４０５nm及び５６１nmの４つの固体レーザーを備えたGalliosフロー細胞蛍光光度計（Beckman Coulter）で捕捉した。Flow-check Pro Fluorospheres（Beckman Coulter）を製造業者の取扱説明書に従って毎日使用して、細胞蛍光光度計の性能をモニターした。全てのデータは、Kaluza分析ソフトウェアv1.5（Beckman Coulter）で分析され、陽性細胞の割合又は活性化マーカーに陽性の血小板のＭＦＩ（平均蛍光強度（mean fluorescence intensity））として報告された。ＶＡＳＰタンパク質のＰ２Ｙ_１２依存性リン酸化は、製造業者の取扱説明書に従って市販のキット（PLT ＶＡＳＰ／Ｐ２Ｙ_１２試験キット、Stago）を使用して分析され、血小板反応性指数（ＰＲＩ）（百分率）として表されている。

【0024】

統計分析
結果は平均±標準偏差（ＳＤ）で表され、スチューデントｔ検定又はマンホイットニーＵ検定で分析される。連続変数は、一元配置反復測定分散分析（ＡＮＯＶＡ）とそれに続くダネット事後分析によって群間比較された。０．０５のｐ値が統計的に有意であるとみなされた。分析はＳＰＳＳ統計パッケージ（v9.4）を使用して行われた。濃度反応曲線は、GraphPad Prism 8を使用して評価された。ｐＡ２値は、Prism 8で説明されるように書かれた方程式に従って算出された。パラメーターの標準誤差は、変動係数の百分率（％ＣＶ）として表され、少なくとも３つの異なる独立した実験の分析を用いて算出される。示される全ての曲線は、情報科学的手法によって生成されている。

【0025】

クロピドグレル処置ＣＡＤ患者における血小板に結合したＴＦの露出は、Ｐ２Ｙ _１２ 阻害と負の関連がある。
クロピドグレルで処置されたＣＡＤ患者におけるＶＡＳＰリン酸化アッセイによって測定された、血小板ＴＦ発現とＰ２Ｙ_１２阻害の程度との関連性が分析された。ＶＡＳＰリン酸化の程度は、クロピドグレルの活性代謝産物のレベルと関連しており（Liang Y et al., J Thromb Thrombolysis 2012;34:429-436）、血小板反応性指数（ＰＲＩ）＜６０％である場合に患者を良好なレスポンダーとして分類することができる（Aleil B et al., J Thromb Haemost. 2005;3(1):85-92）。結果は、クロピドグレルで処置されたＣＡＤ患者におけるＡＤＰによって誘発されるＴＦの血小板露出がＰ２Ｙ_１２阻害と負の関連があることを実証している。薬物療法に対する反応が最適以下、即ち、ＰＲＩ値＞６０％である患者では、１０μM ＡＤＰによる刺激に曝露されたＴＦの阻害は、良好なレスポンダー（ＰＲＩ値＜６０％）で測定されたものよりも有意に低く、クロピドグレルで処置されなかった被験者で測定されたものと統計的に違いはなかった（図１Ａ）。予想どおり、ＰＡＣ１結合によって測定される活性化糖タンパク質IIbIIIa（ａＧＰIIbIIIa）の発現は、不十分レスポンダーで最も高かった（図１Ｂ）。逆に、クロピドグレルは、ＶＡＳＰリン酸化の程度に関係なく、全てのＣＡＤ患者において同じ程度にＰ－セレクチン発現を有意に阻害した（図１Ｃ）。これらの結果は、インビトロで推定されるAR-C69931MXのＰ－セレクチン発現を阻害する能力（ｐＡ２）が、ＴＦ及びａＧＰIIbIIIaを阻害するのに必要な能力の１５０倍及び６倍大きいという知見と一致している（ＴＦ、ａＧＰIIbIIIa及びＰ－セレクチンについて、それぞれ９．３３±２．１％ＣＶ、１０．７±０．２９％ＣＶ及び１１．５±３．１％ＣＶ；図１Ｄ～Ｆ）。

【0026】

良好なレスポンダー１４４人のうち２３人、つまりそれらの患者の１５％は、不十分レスポンダーの群で測定された平均数を超えるＴＦ陽性血小板の割合であった。血小板の表面に発現するタンパク質の平均量を考慮すると、前記の割合は実際には２倍（最高３８％）になる（図２）。この結果は、ＶＡＳＰ試験で測定したクロピドグレルに対する明らかに良好な薬理学的反応にもかかわらず、血栓形成能が増加した患者の部分群の存在を実証している。

【0027】

全体として、これらの結果は、クロピドグレルで処置された患者において、ＡＤＰによる刺激後のＴＦ及びａＧＰIIbIIIa発現の阻害は、ＶＡＳＰアッセイによって測定される血小板阻害の量と直接関連するが、Ｐ－セレクチン阻害は直接関連しないことを実証している。このことは、Ｐ－セレクチン発現を阻害するのに十分な薬剤濃度では、ＴＦ及びａＧＰIIbIIIaの露出を部分的にしか減少させることができず、したがって血小板の血栓形成能もあまり減少させられないことを示唆している。

【0028】

Ｐ２Ｙ_１２拮抗作用のみが細胞表面でのＴＦ露出を完全に阻止し、よってトロンビン生成の動態に影響を及ぼした。前記効果は、クロピドグレルで処置された患者の血小板に対するインビトロ実験及びエクスビボ実験の両方で観察された。興味深いことに、血小板に結合したＴＦの発現を阻止するために必要なＰ２Ｙ_１２阻害の程度は、Ｐ－セレクチンの発現を阻止するために必要な程度よりもはるかに高かった。

【0029】

ＶＡＳＰアッセイで評価するとき、ＣＡＤ患者におけるＴＦ発現は、クロピドグレルでの処置による血小板阻害の程度に反比例する。

【0030】

データはまた、Ｐ２Ｙ１受容体の特異的アンタゴニストではなく、特異的アンタゴニストAR-C69931MXのみが、ＡＤＰによる刺激後の血小板膜上のＴＦの移行を阻害できたため、このＴＦの移行もＰ２Ｙ_１２依存性の機序であることを実証している。

【0031】

したがって、クロピドグレルによる抗血小板療法の治療上の利点は、恐らく部分的には血小板ＴＦ発現の阻害によるものである。これに関連して、Ｐ２Ｙ_１２阻害剤で処置された患者においてＶＡＳＰ及びＴＦを同時に評価すると、残存血小板反応性の評価が向上する。

【図1】

【図2】

【国際調査報告】