特表2024-527970ウイルス感染及び癌の予防及び処置のための改変Ｔ細胞受容体
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-07-26
(54)【発明の名称】ウイルス感染及び癌の予防及び処置のための改変Ｔ細胞受容体
(51)【国際特許分類】
C12N 15/62 20060101AFI20240719BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240719BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20240719BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20240719BHJP
C07K 16/00 20060101ALI20240719BHJP
C07K 14/725 20060101ALI20240719BHJP
C07K 14/705 20060101ALI20240719BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240719BHJP
C12N 5/0783 20100101ALI20240719BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240719BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240719BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20240719BHJP
A61K 38/17 20060101ALI20240719BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240719BHJP
A61K 35/12 20150101ALI20240719BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240719BHJP
A61P 31/22 20060101ALI20240719BHJP
A61P 31/20 20060101ALI20240719BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20240719BHJP
【ＦＩ】
C12N15/62 Z ZNA
C12N15/13
C12N15/12
C07K19/00
C07K16/00
C07K14/725
C07K14/705
C12N5/10
C12N5/0783
C12N15/63 Z
A61P35/00
A61P31/12
A61K38/17
A61K48/00
A61K35/12
A61P35/02
A61P31/22
A61P31/20
A61P31/14
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024504966
(86)(22)【出願日】2022-07-27
(85)【翻訳文提出日】2024-01-26
(86)【国際出願番号】 US2022074202
(87)【国際公開番号】W WO2023010047
(87)【国際公開日】2023-02-02
(31)【優先権主張番号】63/227,195
(32)【優先日】2021-07-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518419057
【氏名又は名称】ナントセル，インコーポレーテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110002572
【氏名又は名称】弁理士法人平木国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】オルソン，クリフォード，アンダーズ
(72)【発明者】
【氏名】ガーバン，エルメス
(72)【発明者】
【氏名】ネルソン，ジェイ，ガードナー
(72)【発明者】
【氏名】ニアジ，ケイバン
(72)【発明者】
【氏名】ロドリゲス，ノエ
(72)【発明者】
【氏名】シーリング，ピーター，アラン
(72)【発明者】
【氏名】シクスト，マルコス
(72)【発明者】
【氏名】ヒガシデ，ウェンディ，エム．
【テーマコード（参考）】
4B065
4C084
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA94X
4B065AA94Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA25
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4C087MA56
4C087MA66
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4C087ZB27
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4H045AA10
4H045AA11
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4H045BA10
4H045BA41
4H045CA42
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4H045DA76
4H045EA20
4H045EA22
4H045EA28
4H045FA74
(57)【要約】
改変Ｔ細胞受容体、改変Ｔ細胞受容体を含む細胞、改変Ｔ細胞受容体をコードする核酸、及び改変Ｔ細胞受容体を使用する方法が企図される。２つのペプチド鎖を含む改変Ｔ細胞受容体が本明細書に開示される。２つのペプチド鎖は、同じでも異なっていてもよく、各ペプチド鎖は、可変領域、定常領域、及び連結ペプチドを含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、並びにＣＤ２８領域及びＣＤ３ζＩＴＡＭ領域を含む細胞内ドメインを含む。改変Ｔ細胞受容体をコードする核酸、及び核酸を含むベクターも開示される。さらに、改変Ｔ細胞受容体を含む細胞を投与することを含む、癌及び／又はウイルス感染を処置する方法が開示される。
【選択図】 図１
【選択図】 図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
第１のペプチド鎖及び第２のペプチド鎖を含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、各ペプチド鎖は、細胞外ドメイン；
膜貫通ドメイン；及び
細胞内ドメイン
を含み、
前記細胞外ドメインは、可変領域、定常領域、及び連結ペプチドを含み、
前記可変領域及び前記定常領域は、リンカーを介して係合しており、
前記第１のペプチド鎖の前記定常領域は、Ｉｇ－Ｃκドメインを含み、前記第２のペプチド鎖の前記定常領域は、Ｉｇ－ＣＨ－１ドメインを含み、
１）前記第１のペプチド鎖の前記膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＡドメインを含み、前記第２のペプチド鎖の前記膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＢドメインを含むか、又は２）前記第１のペプチド鎖の前記膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＢドメインを含み、前記第２のペプチド鎖の前記膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＡドメインを含む改変ＴＣＲ。
【請求項2】
前記リンカーは、フレキシブルリンカーである、請求項１に記載のＴＣＲ。
【請求項3】
前記Ｉｇ－ＣＨ－１ドメインは、ＩｇＧ－ＣＨ－１ａ、ＩｇＧ－ＣＨ－１ｂ、又はＩｇＭ－ＣＨ－１である、請求項１又は２に記載のＴＣＲ。
【請求項4】
前記ＨＬＡ－ＤＲＢドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＢ１又はＨＬＡ－ＤＲＢ２である、請求項１～３のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
【請求項5】
前記ペプチド鎖の各々上の前記可変領域は、同じ可変領域である、請求項１～４のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
【請求項6】
各ペプチド鎖上の前記可変領域は、互いに異なる、請求項１～５のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
【請求項7】
前記細胞内ドメインは、ＣＤ２８領域及びＣＤ３ζＩＴＡＭ領域を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
【請求項8】
前記第１のペプチド鎖は、前記定常領域としてのＩｇ－Ｃκ；
前記膜貫通ドメインとしてのＨＬＡ－ＤＲＡ；並びに
前記細胞内ドメインとしてのＣＤ２８及びＣＤ３ζ
を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
【請求項9】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号３９を含む、請求項８に記載のＴＣＲ。
【請求項10】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号４３を含む、請求項８に記載のＴＣＲ。
【請求項11】
前記第２のペプチド鎖は、前記定常領域としてのＩｇ－ＣＨ－１；
前記膜貫通ドメインとしてのＨＬＡ－ＤＲＢ；並びに
前記細胞内ドメインとしてのＣＤ２８及びＣＤ３ζ
を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
【請求項12】
前記第２のペプチド鎖は、配列番号４０を含む、請求項１１に記載のＴＣＲ。
【請求項13】
前記第２のペプチド鎖は、配列番号４４を含む、請求項１１に記載のＴＣＲ。
【請求項14】
前記第２のペプチド鎖は、配列番号４５を含む、請求項１１に記載のＴＣＲ。
【請求項15】
前記第２のペプチド鎖は、配列番号４６を含む、請求項１１に記載のＴＣＲ。
【請求項16】
前記第１のペプチド鎖は、前記定常領域としてのＩｇ－Ｃκ、前記膜貫通ドメインとしてのＨＬＡ－ＤＲＡ；並びに前記細胞内ドメインとしてのＣＤ２８及びＣＤ３ζを含み；前記第２のペプチド鎖は、前記定常領域としてのＩｇ－ＣＨ－１、前記膜貫通ドメインとしてのＨＬＡ－ＤＲＢ、並びに前記細胞内ドメインとしてのＣＤ２８及びＣＤ３ζを含む、
請求項１～１５のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
【請求項17】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号３９を含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号４０を含む、請求項１６に記載のＴＣＲ。
【請求項18】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号１５をさらに含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号１６をさらに含む、請求項１７に記載のＴＣＲ。
【請求項19】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号４３を含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号４４を含む、請求項１６に記載のＴＣＲ。
【請求項20】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号３０をさらに含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号３１をさらに含む、請求項１９に記載のＴＣＲ。
【請求項21】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号４３を含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号４４を含む、請求項１６に記載のＴＣＲ。
【請求項22】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号３０をさらに含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号３１をさらに含む、請求項２１に記載のＴＣＲ。
【請求項23】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号４３を含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号４４を含む、請求項１６に記載のＴＣＲ。
【請求項24】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号３０をさらに含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号３１をさらに含む、請求項２３に記載のＴＣＲ。
【請求項25】
請求項１～２４のいずれか一項に記載のＴＣＲを含む細胞。
【請求項26】
請求項１～２４のいずれか一項に記載のＴＣＲをコードする核酸。
【請求項27】
請求項２６に記載の核酸を含むベクター。
【請求項28】
癌又はウイルス感染の出現の低減又はそれらの処置が必要とされる患者における癌又はウイルス感染の出現を低減させるか、又はそれらを処置する方法であって、医薬組成物を前記患者に投与することを含み、前記医薬組成物は、治療有効量の請求項１～２４のいずれか一項に記載の改変ＴＣＲ又は請求項１～２４のいずれか一項に記載の改変ＴＣＲをコードする核酸を含む方法。
【請求項29】
前記医薬は、前記核酸を含むベクターを含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項30】
前記医薬組成物は、前記改変ＴＣＲ又は前記改変ＴＣＲをコードする核酸を含む細胞を含む、請求項２８又は２９に記載の方法。
【請求項31】
前記癌は、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、中枢神経系の癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、胆嚢癌、頭頸部癌、胃癌、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ関連癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、多発性骨髄腫、上咽頭癌、口腔癌、神経内分泌癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽腫、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、及び膣癌からなる群から選択される、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記ウイルス感染は、ヘルペスウイルス科（ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）、アデノウイルス科（ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ポリオーマウイルス科（ｐｏｌｙｏｍａｖｉｄｉｄａｅ）、ポックスウイルス科（ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）、レオウイルス科（ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）、ピコルナウイルス科（ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）、フラビウイルス科（ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）、へぺウイルス科（ｈｅｐｅｖｉｒｉｄａｅ）、トガウイルス科（ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）、フィロウイルス科（ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）、パラミクソウイルス科（ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、ニューモウイルス科（ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ）、ラブドウイルス科（ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、ハンタウイルス科（ｈａｎｔａｖｉｒｉｄａｅ）、及びオルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）からなる群から選択されるウイルス科からのウイルスにより引き起こされる、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
癌又はウイルス感染の予防又は処置が必要とされる患者における癌又はウイルス感染を予防又は処置するための、請求項１に記載のＴＣＲ、請求項２５に記載の細胞、請求項２６に記載の核酸又は請求項２７に記載のベクターの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年７月２９日に出願された米国仮特許出願第６３／２２７，１９５号明細書の利益を主張する。上記出願の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年７月２９日に出願された米国仮特許出願第６３／２２７，１９５号明細書の利益を主張する。上記出願の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表の参照
本開示は、２０２２年７月２５日に作成されたファイルサイズ１０７キロバイト（ＫＢ）の名称「１７７６８ＩＢ－０１－ＷＯ－ＰＯＡ＿ｓｅｑ＿ｌｉｓｔｉｎｇ．ｘｍｌ」の配列表ｘｍｌファイルとして本明細書と同時に提出されたアミノ酸配列及び核酸配列の参照を含有する。上記配列表は、米国特許法施行規則第１．５２条（ｅ）（５）に従って参照により全体として本明細書に組み込まれる。
本開示は、２０２２年７月２５日に作成されたファイルサイズ１０７キロバイト（ＫＢ）の名称「１７７６８ＩＢ－０１－ＷＯ－ＰＯＡ＿ｓｅｑ＿ｌｉｓｔｉｎｇ．ｘｍｌ」の配列表ｘｍｌファイルとして本明細書と同時に提出されたアミノ酸配列及び核酸配列の参照を含有する。上記配列表は、米国特許法施行規則第１．５２条（ｅ）（５）に従って参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【0003】
本開示は、ウイルス感染及び／又は癌の予防及び／又は処置のために対象に投与され得る改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）に関する。
【背景技術】
【0004】
背景の説明は、本明細書に記載される組成物及び方法の理解において有用であり得る情報を含む。これは、本明細書に提供される情報のいずれかが従来技術であるか又は組成物及び方法に関連することを承認するものでもなく、具体的若しくは黙示的に参照される任意の刊行物が従来技術であることを承認するものでもない。
【0005】
ＴＣＲは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）からの主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）Ｉ又はＩＩ分子により提示される抗原を認識する、Ｔ細胞の表面上に位置する膜貫通タンパク質である。適切な副刺激によるＴ細胞受容体を介するシグナリングは、（例えば、ヘルパーＣＤ４＋Ｔ細胞による炎症促進性サイトカインの放出又は細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞による細胞溶解の開始を介して）Ｔ細胞が抗原に応答することを活性化するシグナリング経路を開始させる。
【0006】
癌及びウイルスは、ＴＣＲシグナリングを軽減し、それによりＴ細胞応答を下方調節することによりＴ細胞媒介免疫応答を逃れ得る。ＴＣＲをＴ細胞応答を促進するように改変することは、癌又はウイルス感染に対する宿主の免疫応答を改善し得る。
【0007】
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）分子は、細胞状況において二量体として機能する。Ｔ細胞ＴＣＲのトランスジェニック改変は、二量体中の各単量体ユニットについての遺伝子を付加することを要求する。しかしながら、Ｔ細胞は天然ＴＣＲを既に含有するため、トランスジェニックＴＣＲ単量体が天然ＴＣＲとヘテロ二量体化することが考えられる。これらのハイブリッドＴＣＲは、トランスジェニックＴ細胞においてオフターゲット効果を生じさせ得、トランスジェニック及び／又は内因性ＴＣＲの効果がそれらのそれぞれのペプチド鎖の交差結合により低減又は排除される（Ｇｏｖｅｒｓ ＆ ａｌ．（２０１０）Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１６（２）：７７－８７）。したがって、癌及び／又はウイルス感染の処置のために特異的抗原（例えば、癌細胞又はウイルスからの抗原）に対する免疫応答を向上させるための改変Ｔ細胞受容体を提供することが依然として必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0008】
ウイルス感染及び／又は癌を処置及び／又は予防するために使用され得る改変ＴＣＲが本明細書に開示される。改変ＴＣＲは、２つの異なるペプチド鎖を含むヘテロ二量体である。改変ＴＣＲの個々のペプチド鎖は、各々、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む。細胞外ドメインは、可変領域、定常領域、及び連結ペプチドを含み、可変領域及び定常領域は、リンカーを介して係合している。連結ペプチドは、定常領域と膜貫通ドメインとの間に位置する。一部の実施形態において、細胞内ドメインは、ＣＤ２８領域及びＣＤ３ζＩＴＡＭ領域を含む。
【0009】
機能性改変ＴＣＲをＴ細胞中に発現させる方法であって、改変ＴＣＲのペプチド断片は、細胞表面上で互いに自己集合し、同様にＴ細胞表面上で発現される内因性ＴＣＲペプチドとは自己集合しない方法も開示される。改変ＴＣＲは、ＨＬＡ提示されるペプチドについての特異性を有するα及びβ鎖を含む可変領域を発現するように遺伝子操作され得る。改変ＴＣＲは、腫瘍特異的抗原についての特異性を有するＩｇ可変ドメインを含む可変領域を発現するように遺伝子操作され得る。
【0010】
改変ＴＣＲを含む細胞も本明細書に開示される。
【0011】
改変ＴＣＲをコードする核酸及び改変ＴＣＲをコードする核酸を含むベクターも本明細書に開示される。
【0012】
癌又はウイルス感染の予防及び／又は処置が必要とされる患者における癌又はウイルス感染の予防及び／又は処置の方法であって、改変ＴＣＲ、改変ＴＣＲをコードする核酸、又は改変ＴＣＲを含む細胞を含む治療有効量の医薬組成物を患者に投与することを含む方法も本明細書に開示される。
【0013】
種々の目的、特徴、態様、及び利点は、添付の図面とともに、以下の好ましい実施形態の詳細な説明からより明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【図1】ペプチド鎖Ｐ－ＮＲ－０２５及びＰ－ＮＲ－０２６のヘテロ二量体を含む本開示の改変ＴＣＲの一実施形態を示す。
【図2】ペプチド鎖Ｐ－ＮＲ－０２７及びＰ－ＮＲ－０２８のヘテロ二量体を含む本開示の改変ＴＣＲの別の実施形態を示す。
【図3A】本開示の改変ＴＣＲの特定のペプチド鎖をコードするプラスミド構築物を示す。図３Ａは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２５をコードするプラスミドを示す。図３Ｂは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２６をコードするプラスミドを示す。図３Ｃは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２７をコードするプラスミドを示す。図３Ｄは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２８をコードするプラスミドを示す。
【図3B】本開示の改変ＴＣＲの特定のペプチド鎖をコードするプラスミド構築物を示す。図３Ａは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２５をコードするプラスミドを示す。図３Ｂは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２６をコードするプラスミドを示す。図３Ｃは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２７をコードするプラスミドを示す。図３Ｄは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２８をコードするプラスミドを示す。
【図3C】本開示の改変ＴＣＲの特定のペプチド鎖をコードするプラスミド構築物を示す。図３Ａは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２５をコードするプラスミドを示す。図３Ｂは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２６をコードするプラスミドを示す。図３Ｃは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２７をコードするプラスミドを示す。図３Ｄは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２８をコードするプラスミドを示す。
【図3D】本開示の改変ＴＣＲの特定のペプチド鎖をコードするプラスミド構築物を示す。図３Ａは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２５をコードするプラスミドを示す。図３Ｂは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２６をコードするプラスミドを示す。図３Ｃは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２７をコードするプラスミドを示す。図３Ｄは、ペプチド鎖ｐ－ＮＲ－０２８をコードするプラスミドを示す。
【図4-1】本開示の改変ＴＣＲのペプチド鎖をコードするプラスミド構築物で形質移入された活性化ナチュラルキラー（ａＮＫ）細胞のキリングアッセイの結果を示す。図４Ａ及び４Ｂは、改変ＴＣＲのＰ－ＮＲ－０２５＋Ｐ－ＮＲ－０２６及びＰ－ＮＲ－０２７＋Ｐ－ＮＲ－０２８で形質移入されたａＮＫ細胞による標的細胞溶解をそれぞれ示す。図４Ｃ～４Ｅは、陽性及び陰性対照ａＮＫ細胞の標的細胞溶解を示す。
【図5】キメラＴＣＲのＰ－ＮＲ－０２５＋Ｐ－ＮＲ－０２６、Ｐ－ＮＲ－０２５＋ＰＷＨ２９５、ＰＷＨ３０５＋ＰＷＨ３０８、及びＰＷＨ３０３＋ＰＷＨ３０８のペプチド鎖をコードするプラスミド構築物で形質移入されたａＮＫ（ＮＫ９２）細胞中のキメラＴＣＲ発現を示す。
【図7】キメラＴＣＲのＰＷＨ３０５＋ＰＷＨ３０８及びＰＷＨ３０３＋ＰＷＨ３０８のペプチド鎖をコードするプラスミド構築物で形質移入されたａＮＫ中のキメラＴＣＲ発現を示す。
【発明を実施するための形態】
【0015】
Ｉ．定義
以下の定義は、上記で、及び本開示の全体にわたり使用される種々の用語を指す。
以下の定義は、上記で、及び本開示の全体にわたり使用される種々の用語を指す。
【0016】
「Ｔ細胞受容体」又は「ＴＣＲ」は、典型的にはＴ細胞の表面上で見出される二量体ポリペプチドを指す。ＴＣＲの各ペプチド鎖は、一般に、可変領域及び定常領域を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、並びに細胞内ドメインを含む。可変領域は、ＭＨＣにより提示される抗原と相互作用するＴＣＲの部分である。定常領域は、２つのペプチド鎖がジスルフィド結合により共有結合的に繋がっている２つのペプチドの各々の区域である。細胞内ドメインは一般にＣＤ３ζを含み、それは１つ以上の免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。ＩＴＡＭは、適切な細胞内シグナリング経路への可変領域の結合を媒介する。
【0017】
「コードすること」は、核酸に関して使用される場合、転写が細胞中の核酸から開始される場合、産生された転写産物が所与のタンパク質に翻訳されることを表す。すなわち、核酸は、ｔＲＮＡのコドントリプレットが細胞における転写及び翻訳の通常の作動に従ってその核酸からポリペプチドを産生する場合、ペプチドを「コードする」。
【0018】
「有効量」又は「治療有効量」は、所望の結果をもたらすために必要な１つ以上の薬剤の量及び／又は投与量、及び／又は投与計画、例えば、対象におけるウイルス感染を予防するために十分な量、対象におけるウイルス感染の出現を低減させるために十分な量、及び／又は対象におけるウイルス感染を処置するために十分な量を指す。或いは、有効量又は治療有効量は、対象における癌の出現を低減させるために十分な量及び／若しくは投与量及び／若しくは投与計画、並びに／又は対象における癌を処置するために十分な量を指す。
【0019】
「癌」は、患者の身体、組織、又は器官における腫瘍、新生物、又はそうでなければ不所望な、異常な、且つ／又は無秩序な細胞増殖の発症を含む１つ以上の病態を指す。ある実施形態において、癌は、膀胱癌、骨癌、脳癌（髄芽腫、髄膜腫、神経芽腫を含む）、乳癌、中枢神経系の癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、胆嚢癌、頭頸部癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ関連癌、腎臓癌、白血病（急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｂ細胞白血病（ＢＣＬ）、慢性リンパ性癌（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び慢性Ｔ細胞性リンパ性白血病（ＣＴＬＬ）を含む）、肝臓癌、肺癌（非小細胞及び小細胞を含む）、リンパ腫（非ホジキンリンパ腫及びホジキンリンパ腫を含む）、黒色腫、多発性骨髄腫、上咽頭癌、口腔癌（口内、舌、唾液腺、又は歯茎の癌を含む）、神経内分泌癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽腫、肉腫、皮膚癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、及び膣癌からなる群から選択される。特定の実施形態において、癌は、膀胱癌、乳癌、結腸癌、又は膵臓癌である。
【0020】
２つ以上の核酸又はポリペプチド配列の文脈における「同一」又は「同一性」パーセントは、同じであるか又は比較ウィンドウにわたり比較され、最大対応についてアラインされる場合に同じであるアミノ酸残基又はヌクレオチドの規定の割合を有する２つ以上の配列又は部分配列を指す。本開示の目的のためのアミノ酸又は核酸配列の同一性の程度は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ウェブアドレスｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）により提供されるソフトウェアを介して公的に利用可能なＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０に記載されるＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して決定される。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さのワードとアラインされた場合にある正の値の閾値スコアＴに一致するか又はそれを満たす問い合わせ配列中の長さＷの短いワードを同定することにより高スコアリング配列ペア（ｈｉｇｈ ｓｃｏｒｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｐａｉｒ）（ＨＳＰ）を同定する。Ｔは、隣接ワードスコア閾値と称される（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，前掲）。初期隣接ワードヒットは、それらを含有するより長いＨＳＰを見出すための検索を開始させるためのシードとして作用する。次いで、ワードヒットは、累積アラインメントスコアが増加し得る限り各配列に沿って両方向に伸長される。累積スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメータＭ（一致残基のペアについての報酬スコア；常に＞０）及びＮ（不一致残基についてのペナルティスコア；常に＜０）を使用して計算される。アミノ酸配列については、累積スコアを計算するためにスコアリング行列が使用される。各方向におけるワードヒットの伸長は、累積アラインメントスコアがその最大達成値から量Ｘだけ下落する場合；１つ以上の負のスコアリング残基アラインメントの蓄積に起因して累積スコアがゼロ以下になる場合；又はいずれかの配列の末端に達する場合に停止される。アミノ酸配列又は核酸配列の同一性パーセントを決定するため、ＢＬＡＳＴプログラムのデフォルトパラメータが使用され得る。アミノ酸配列の分析については、ＢＬＡＳＴＰデフォルトは、ワード長（Ｗ）、３；期待値（Ｅ）、１０；及びＢＬＯＳＵＭ６２スコアリング行列である。核酸配列の分析については、ＢＬＡＳＴＮプログラムデフォルトは、ワード長（Ｗ）、１１；期待値（Ｅ）、１０；Ｍ＝５；Ｎ＝－４；及び両鎖の比較である。ＴＢＬＡＳＴＮプログラム（タンパク質配列を使用してヌクレオチド配列データベースに問い合わせを行う）は、デフォルトとしてワード長（Ｗ）３、期待値（Ｅ）１０、及びＢＬＯＳＵＭ６２スコアリング行列を使用する（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ＆ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５参照）。
【0021】
配列同一性パーセントの計算に加え、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは２つの配列間の類似性の統計分析も実行する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－８７参照）。最小和確率（ｓｍａｌｌｅｓｔ ｓｕｍ ｐｒｏｐａｂｉｌｉｔｙ）（Ｐ（Ｎ））は、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致が偶然生じる確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸との比較における最小和確率が約０．０１未満である場合、参照配列と類似するとみなされる。
【0022】
「ウイルス感染」は、ウイルスが宿主、例えば、患者に侵入し、複製する病態を指す。ウイルス感染は、宿主がウイルス感染の症状を呈することを要求しない。用語「ウイルス」は、特に限定されず、ＤＮＡ及びＲＮＡウイルスの両方を指す。ＤＮＡウイルスは、一本鎖又は二本鎖ウイルスであり得、限定されるものではないが、ヘルペスウイルス科（ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）、アデノウイルス科（ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ポリオーマウイルス科（ｐｏｌｙｏｍａｖｉｄｉｄａｅ）、及びポックスウイルス科（ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）を含むＤＮＡウイルスの任意の科に属し得る。ＤＮＡウイルスの特定の実施形態としては、ヒトヘルペスウイルス及び水痘帯状疱疹ウイルスが挙げられる。ＲＮＡウイルスも一本鎖又は二本鎖であり得、限定されるものではないが、レオウイルス科（ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）、ピコルナウイルス科（ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）、フラビウイルス科（ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）、へぺウイルス科（ｈｅｐｅｖｉｒｉｄａｅ）、トガウイルス科（ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）、フィロウイルス科（ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）、パラミクソウイルス科（ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、ニューモウイルス科（ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ）、ラブドウイルス科（ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、ハンタウイルス科（ｈａｎｔａｖｉｒｉｄａｅ）、及びオルトミクソウイルス科（ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）を含むＲＮＡウイルスの任意の科に属し得る。ＲＮＡウイルスの特定の実施形態としては、ロタウイルス、コロナウイルス、ＳＡＲＳウイルス、ポリオウイルス、ライノウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、黄熱病ウイルス、ウエストナイルウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、デング熱ウイルス、ジカウイルス、風疹ウイルス、シンドビスウイルス、チクングニアウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、狂犬病ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、Ｃ型インフルエンザウイルス、及びＤ型インフルエンザウイルスが挙げられる。一部の実施形態において、ウイルスは、ヒト免疫不全ウイルスである。
【0023】
「対象」、「個体」、及び「患者」は、互換的に哺乳類、好ましくは、ヒト又は非ヒト霊長類を指すが、家庭飼育哺乳類（例えば、イヌ又はネコ）、実験用哺乳類（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット）、及び農業用哺乳類（例えば、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ）も指す。ある実施形態において、対象は、医師又は他の医療従事者の看護下のヒト（例えば、成人男性、成人女性、若年男性、若年女性、男児、女児）であり得る。ある実施形態において、対象は、医師又は他の医療従事者の看護下でなくてよい。
【0024】
「処置する」及び「処置」は、各々、治療薬を処置が必要とされる対象に投与することにより感染を低減させるか、阻害するか、又はそうでなければ改善する方法を指す。一部の実施形態において、処置が必要とされる対象としては、感染、例えば、ウイルス感染を有するか、有すると診断されるか、又は有することが疑われる対象が挙げられ得る。特定の実施形態において、処置する又は処置は、治療剤を、疾患、障害、又は病態（例えば、癌又はウイルス感染）を有するか、有すると診断されるか、又は有することが疑われる対象に投与することを含む。一部の実施形態において、対象は、無症候性であり得る。処置は、改変ＴＣＲ、改変ＴＣＲを含む細胞、改変ＴＣＲをコードする核酸、及び／又は改変ＴＣＲをコードする核酸を含むベクターの投与を含む。
【0025】
「併用」又は「併用して」は、薬剤（例えば、改変ＴＣＲ、改変ＴＣＲを含む細胞、及び／又は改変ＴＣＲをコードする核酸）を追加の薬剤の存在下で投与することを含む。治療処置方法における併用投与としては、第１、第２、第３、又は追加の薬剤を同時投与する方法が挙げられる。併用投与としては、第１又は追加の薬剤を、第２又は追加の薬剤の存在下で投与し、第２又は追加の薬剤は、例えば、事前に投与されていてよい方法も挙げられる。併用治療処置方法は、異なる行為者により段階的に実施され得る。例えば、ある行為者が対象に第１の薬剤を投与し得、第２の行為者が対象に第２の薬剤を投与し得、投与ステップは、同時にか又はほぼ同時に実施され得る。行為者及び対象は、同じ実体（例えば、ヒト）であり得る。したがって、この用語は、同時投与及び実質的に同時の投与、すなわち、ほぼ同時の投与の両方を包含する。
【0026】
ＩＩ．改変Ｔ細胞受容体
本発明の改変ＴＣＲは、ＴＣＲ構造をベースとする二量体ペプチドに関する。特に、改変ＴＣＲは、２つのペプチド鎖を含み、その各々は、細胞外ドメイン（可変領域、定常領域、及び連結ペプチドを含む）、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む。具体的な実施形態において、可変領域及び定常領域は、リンカーを介して係合している。別の具体的な実施形態において、連結ペプチドは、定常領域と膜貫通ドメインとの間に位置する。さらなる具体的な実施形態において、２つのペプチド鎖は、各ペプチド鎖の連結ペプチド間のジスルフィド結合により互いに連結されている。
本発明の改変ＴＣＲは、ＴＣＲ構造をベースとする二量体ペプチドに関する。特に、改変ＴＣＲは、２つのペプチド鎖を含み、その各々は、細胞外ドメイン（可変領域、定常領域、及び連結ペプチドを含む）、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む。具体的な実施形態において、可変領域及び定常領域は、リンカーを介して係合している。別の具体的な実施形態において、連結ペプチドは、定常領域と膜貫通ドメインとの間に位置する。さらなる具体的な実施形態において、２つのペプチド鎖は、各ペプチド鎖の連結ペプチド間のジスルフィド結合により互いに連結されている。
【0027】
細胞外ドメインは、可変領域、定常領域、及び連結ペプチドを含む。可変領域の正確な配列は、それがＭＨＣ分子上に提示される抗原を認識し得ることを除き特に限定されない。慣例では、改変ＴＣＲペプチド鎖の一方上の可変領域は「Ｖα」と呼ばれ得、他方のペプチド鎖上の可変領域は「Ｖβ」と称され得る。一部の実施形態において、両方のペプチド鎖の可変領域は、同じである。代替的な実施形態において、ペプチド鎖の各々上の可変領域は、異なる。特定の実施形態において、Ｖαは、配列番号１５（Ｖα－１）又は配列番号３０（Ｖα－２）の配列を含む。別の実施形態において、Ｖβは、配列番号１６（Ｖβ－１）又は配列番号３１（Ｖβ－２）の配列を含む。或いは、可変領域は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号３０、又は配列番号３１と少なくとも７０％の配列同一性（すなわち、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、又は少なくとも９９％の配列同一性）を有する配列を含む。ある実施形態において、可変領域は、配列番号１５又は配列番号３０と少なくとも７０％の配列同一性（すなわち、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、又は少なくとも９９％の配列同一性）を有するが、配列番号１５又は配列番号３０の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のいずれか又は全てと１００％の同一性を有する配列を含む。ある実施形態において、可変領域は、配列番号１６又は配列番号３１と少なくとも７０％の配列同一性（すなわち、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、又は少なくとも９９％の配列同一性）を有するが、配列番号１６又は配列番号３１の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のいずれか又は全てと１００％の同一性を有する配列を含む。
【0028】
定常領域は、可変領域と連結ペプチドとの間のペプチド配列を表す。具体的な実施形態において、定常領域は、免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン又はコイルドコイルドメインを含む。一部の実施形態において、両方のペプチド鎖の定常領域は、同じである。代替的な実施形態において、ペプチド鎖の各々の定常領域は、異なる。
【0029】
特定の実施形態において、定常領域は、Ｉｇドメインである。Ｉｇドメインは、特に限定されず、それとしては、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが挙げられ得る。定常領域は、Ｉｇ－Ｃκ、ＩｇＧ－ＣＨ－１、又はＩｇＭ－ＣＨ－１を含み得る。具体的な実施形態において、Ｉｇ－Ｃκは、配列番号１７の配列を含む。別の実施形態において、ＩｇＧ－ＣＨ－１は、配列番号１８（ＩｇＧ－ＣＨ－１ａ）又は配列番号３２（ＩｇＧ－ＣＨ－１ｂ）の配列を含む。さらに別の実施形態において、ＩｇＭ－ＣＨ－１は、配列番号３３の配列を含む。特定の実施形態において、改変ＴＣＲの一方のペプチド鎖の定常領域は、Ｉｇ－Ｃκの配列を含み、改変ＴＣＲの他方のペプチド鎖の定常領域は、Ｉｇ－ＣＨ－１、例えば、ＩｇＧ－ＣＨ－１ａ、ＩｇＧ－ＣＨ－１ｂ、及びＩｇＭ－ＣＨ－１の配列を含む。或いは、定常領域は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号３２、又は配列番号３３と少なくとも７０％の配列同一性（すなわち、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、又は少なくとも９９％の配列同一性）を有する配列を含む。
【0030】
代替的な特定の実施形態において、定常領域は、コイルドコイルドメイン、例えば、ＷｉｎＺｉｐドメインである。ＷｉｎＺｉｐドメインは、記載されている。例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第６，８９７，０１７号明細書参照。具体的な実施形態において、ＷｉｎＺｉｐドメインは、ＷｉｎＺｉｐ－Ａ２（配列番号２０に対応）及びＷｉｎＺｉｐ－Ｂ１（配列番号１９に対応）からなる群から選択される。特定の実施形態において、改変ＴＣＲの一方のペプチドの定常領域は、ＷｉｎＺｉｐ－Ａ２を含み、改変ＴＣＲの他方のペプチドの定常領域は、ＷｉｎＺｉｐ－Ｂ１を含む。
【0031】
可変領域及び定常領域を繋げるリンカーは、フレキシブルリンカーであり得る。特定の実施形態において、リンカーは、ＧＧＳＧＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含む。
【0032】
連結ペプチドは、定常領域を膜貫通ドメインに連結する。一部の実施形態において、連結ペプチドは、ＧＳＧ又はＧＧＣＧＧ（配列番号１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0033】
各ペプチド鎖の細胞外ドメイン（可変領域、定常領域、及び連結ペプチドを含む）は、膜貫通ドメインに共有結合的に係合している。一部の実施形態において、膜貫通ドメインの配列は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）から選択される。一部の実施形態において、両方のペプチド鎖の膜貫通ドメインは、同じである。他の実施形態において、両方のペプチド鎖の膜貫通ドメインは、異なる。特定の実施形態において、膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－ＤＲＢ１、又はＨＬＡ－ＤＲＢ２を含む。具体的な実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号２１（ＨＬＡ－ＤＲＡ）、配列番号２２（ＨＬＡ－ＤＲＢ１）、又は配列番号３４（ＨＬＡ－ＤＲＢ２）のアミノ酸配列を含む。或いは、膜貫通ドメインは、配列番号２１、配列番号２２、又は配列番号３４と少なくとも７０％の配列同一性（すなわち、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、又は少なくとも９９％の配列同一性）を有する配列を含む。一実施形態において、一方のペプチド鎖についての膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＡを含み、改変ＴＣＲの他方のペプチド鎖についての膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＢ、例えば、ＨＬＡ－ＤＲＢ１又はＨＬＡ－ＤＲＢ２を含む。別の特定の実施形態において、改変ＴＣＲの一方のペプチド鎖についての膜貫通ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、改変ＴＣＲの他方のペプチド鎖についての膜貫通ドメインは、配列番号２２又は配列番号３４のアミノ酸配列を含む。
【0034】
改変ＴＣＲのペプチド鎖は、細胞内ドメインをさらに含み、各々は、ＣＤ２８領域及びＣＤ３ζＩＴＡＭ領域を含む。特定の実施形態において、ＣＤ２８領域は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、ＣＤ３ζＩＴＡＭ領域は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。或いは、定常領域は、配列番号２３又は配列番号２４と少なくとも７０％の配列同一性（すなわち、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、又は少なくとも９９％の配列同一性）を有する配列を含む。いっそうさらなる実施形態において、改変ＴＣＲの各ペプチド鎖の細胞内ドメインは、配列番号２３のアミノ酸配列及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む。
【0035】
一実施形態において、改変ＴＣＲのペプチド鎖の各々は、互いに同じである。別の実施形態において、改変ＴＣＲ中の２つのペプチド鎖の各々は、互いに異なる。
【0036】
表１は、二量体化して改変ＴＣＲを形成するペプチド鎖の具体的な組み合わせを説明する。
【0037】
【表1】
【0038】
表２は、細胞外ドメイン（可変領域、定常領域、及び連結ペプチドを含む）、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む、互いにホモ二量体化し得るか又は他のペプチド鎖とヘテロ二量体化し得る特定のペプチド鎖を説明する。
【0039】
【表2】
【0040】
表１又は表２のペプチド鎖は、ホモ二量体又はヘテロ二量体を形成して改変ＴＣＲを生成し得る。例えば、Ｐ－ＮＲ－０２５（配列番号５）及びＰ－ＮＲ－０２６（配列番号６）は、二量体化して改変ＴＣＲを形成し得る（図１）。或いは、Ｐ－ＮＲ－０２７（配列番号３）及びＰ－ＮＲ－０２８（配列番号４）は、二量体化して別の改変ＴＣＲを形成し得る（図２）。キメラＴＣＲを形成するための追加のペプチド鎖の組み合わせは、以下の表３に示される。
【0041】
【表3】
【0042】
配列番号１５～２４、３１～３４、及び３９～４６は、改変ＴＣＲ（すなわち、規定の可変領域、定常領域、連結ペプチド、膜貫通ドメイン、ＣＤ２８領域、及びＣＤ３ζＩＴＡＭ領域配列）を構成するペプチド鎖の好適な部分の例として提供されるにすぎないが、それらの配列の多くのバリエーションも抗ウイルス又は抗癌治療目的に有用である。例えば、配列番号１５～２４、３１～３４、及び３９～４６のいずれか１つと少なくとも７０％の配列同一性（すなわち、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、又は少なくとも９９％の配列同一性）を有するポリペプチドも治療目的に有用であり、但し、分子が個々の配列番号１５～２４、３１～３４、及び３９～４６の分子の全体的な結合部位、構造、及び／又は配向を広く保持することを条件とする。
【0043】
ＩＩＩ．ポリヌクレオチド及びベクター
現在の分子生物学者らは、本明細書に記載されるペプチド鎖を発現する核酸を作製する手法、及びそのような核酸を細胞中で発現させて関連タンパク質を得る手法を理解している。本明細書に提供されるさらなる実施形態としては、改変ＴＣＲを構成するペプチド鎖をコードする核酸又はポリヌクレオチドが挙げられる。例えば、本明細書に記載される改変ＴＣＲをコードする核酸は、配列番号７～１４及び３５～３８として本明細書に提示される。通常の分子生物学者は、配列番号８、１０、１２、１４、及び３５～３８のヌクレオチド配列を変更してそれぞれ配列番号５、６、３、４、及び２６～２９のペプチド鎖、並びにそれらの適切なバリアント（例えば、配列番号５、６、３、及び４のいずれか１つと少なくとも７０％の同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％を有するバリアント）をコードさせる手法を理解している。配列番号５、６、３、４、及び２６～２９のペプチド鎖をコードする核酸の非限定的な例は、それぞれ配列番号８、１０、１２、１４、及び３５～３８として本明細書に提供される。
現在の分子生物学者らは、本明細書に記載されるペプチド鎖を発現する核酸を作製する手法、及びそのような核酸を細胞中で発現させて関連タンパク質を得る手法を理解している。本明細書に提供されるさらなる実施形態としては、改変ＴＣＲを構成するペプチド鎖をコードする核酸又はポリヌクレオチドが挙げられる。例えば、本明細書に記載される改変ＴＣＲをコードする核酸は、配列番号７～１４及び３５～３８として本明細書に提示される。通常の分子生物学者は、配列番号８、１０、１２、１４、及び３５～３８のヌクレオチド配列を変更してそれぞれ配列番号５、６、３、４、及び２６～２９のペプチド鎖、並びにそれらの適切なバリアント（例えば、配列番号５、６、３、及び４のいずれか１つと少なくとも７０％の同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％を有するバリアント）をコードさせる手法を理解している。配列番号５、６、３、４、及び２６～２９のペプチド鎖をコードする核酸の非限定的な例は、それぞれ配列番号８、１０、１２、１４、及び３５～３８として本明細書に提供される。
【0044】
ある実施形態において、上記の核酸は、サポーター細胞系中で発現され得る。哺乳類細胞系、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は２９３Ｔ細胞がそれらの目的に特に好適である。本明細書に記載されるタンパク質は、一般に、可溶性であり、したがって、それらが細胞内保持について改変されない限り産生細胞から排出される。このように産生されたタンパク質は、培養培地から精製され得る。所望により、タンパク質は、精製を容易にするために（例えば）ポリ－ヒスチジンタグ又は他のそのような市販のタグによりタグ付けされ得る。次いで、このように産生及び精製されたタンパク質は、下記の通りそれが必要とされる対象に投与され得る。
【0045】
或いは、上記核酸は、初代Ｔ細胞、例えば、末梢血、腫瘍、及び／又はリンパ節から得られたＴ細胞中で発現され得る。初代Ｔ細胞は、当該技術分野において慣用の通り回収及び操作され得る。初代Ｔ細胞は、本明細書に記載される改変ＴＣＲにより処置可能な病態を有する対象からのものであり得る。或いは、初代Ｔ細胞は、処置されるべき対象と免疫適合性である初代Ｔ細胞を有する別の対象からのものであり得る。
【0046】
さらに又は代替的に、本明細書に記載される核酸は、ベクター（例えば、形質移入ベクター又はウイルス形質導入ベクター）中に取り込まれ得る。次いで、このようなベクターは、対象自身の細胞中に形質移入又は形質導入され得る。このように、対象自身の細胞は、改変ＴＣＲを産生する。上記核酸を含むベクターの非限定的な例は、配列番号７～１４として本明細書に提供される。ベクターと改変ＴＣＲのペプチド鎖との相互関係は、上記表２に示される。図３Ａ～３Ｄは、それぞれ配列番号８、１０、１２、及び１４の実施形態を示す。
【0047】
一部の実施形態において、改変ＴＣＲをコードする核酸は、細胞中に取り込まれる。このような細胞は、改変ＴＣＲをコードする核酸を翻訳してＴＣＲを発現し得る。細胞は、対象自身の細胞（例えば、自己細胞）又は適切なドナーからの細胞（例えば、異種細胞）であり得る。
【0048】
ＩＶ．予防又は処置の方法
上記のタンパク質、ペプチド、細胞、核酸、及びベクターは、ウイルス感染及び／又は癌を処置及び／若しくは予防し、並びに／又はそれらの出現を低減させるために使用され得る。ウイルス感染及び／又は癌を処置及び／又は予防するため、本明細書に記載される改変ＴＣＲ、改変ＴＣＲを含む細胞、改変ＴＣＲをコードする核酸、及び改変ＴＣＲをコードする核酸を含むベクターが、それが必要とされる対象に治療有効量で投与され得る。対象は、症候性又は無症候性であり得る。これらの改変ＴＣＲの治療有効量としては、限定されるものではないが、対象体重１ｋｇ当たり１μｇの改変ＴＣＲ、５μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、及び１ｍｇ／ｋｇ以上が挙げられる。
上記のタンパク質、ペプチド、細胞、核酸、及びベクターは、ウイルス感染及び／又は癌を処置及び／若しくは予防し、並びに／又はそれらの出現を低減させるために使用され得る。ウイルス感染及び／又は癌を処置及び／又は予防するため、本明細書に記載される改変ＴＣＲ、改変ＴＣＲを含む細胞、改変ＴＣＲをコードする核酸、及び改変ＴＣＲをコードする核酸を含むベクターが、それが必要とされる対象に治療有効量で投与され得る。対象は、症候性又は無症候性であり得る。これらの改変ＴＣＲの治療有効量としては、限定されるものではないが、対象体重１ｋｇ当たり１μｇの改変ＴＣＲ、５μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、及び１ｍｇ／ｋｇ以上が挙げられる。
【0049】
改変ＴＣＲ、改変ＴＣＲを含む細胞、改変ＴＣＲをコードする核酸、及び改変ＴＣＲをコードする核酸を含むベクターが投与される場合、限定されるものではないが、経口投与、静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、及び吸入（例えば、エアロゾル吸入）を含む任意の好適な投与経路が使用され得る。特定の実施形態において、ＴＣＲは、ＴＣＲを発現するようにＴ細胞又はＮＫ細胞を改変し、次いで改変された免疫細胞を患者中に注入することにより投与される。
【0050】
好ましい実施形態において、改変ＴＣＲは、感染性疾患の癌を有する患者に由来する自己Ｔ細胞中に形質移入される。Ｔ細胞は、全血、腫瘍、又は流入領域リンパ節に由来し得る。一実施形態において、ドナーＴ細胞が使用され得る。本明細書に記載される改変ＴＣＲは、初代Ｔ細胞中に核酸として形質移入され得、核酸は、任意の好適なベクターのＤＮＡ又はＲＮＡであり得る。ＤＮＡベクターは、アデノウイルスであり得る。核酸は、ＲＮＡであり得る。ＲＮＡは、ナノ粒子フォーマット、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第１１，１４１，３７７号明細書に記載のものであり得る。形質移入は、標準的技術、例えば、エレクトロポレーション（例えば、米国特許第１１，３７７，６５２号明細書及び米国特許出願公開第２０２２／００２５４０２号明細書に記載されるもの、両方とも参照により本明細書に組み込まれる）によるか、又はＭａｘＣｙｔｅ（商標）システム（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＵＳＡ）を使用することにより実施され得る。このように形質移入された自己Ｔ細胞は、エクスビボで濃縮及び拡大培養され得る。例えば、ＣＤ３濃縮Ｔ細胞は、Ｉｍｍｕｎｏｃｕｌｔ（商標）（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＳＡ）及びＩＬ－２中で拡大培養され得る。Ｔ細胞は、患者に治療有効量で投与され得る。一部の実施形態において、本明細書に記載される方法により製造されたＴ細胞を含む組成物が、１０２～１０１２個の細胞／ｋｇ体重、１０２～１０１０個の細胞／ｋｇ体重、１０５～１０９個の細胞／ｋｇ体重、１０５～１０８個の細胞／ｋｇ体重、１０５～１０７個の細胞／ｋｇ体重、１０７～１０９個の細胞／ｋｇ体重、又は１０７～１０８個の細胞／ｋｇ体重（それらの範囲内の全ての整数値を含む）の投与量で投与され得る。Ｔ細胞の数は、組成物が意図される治療使用に依存する。
【0051】
改変ＴＣＲをコードする核酸が細胞、例えば、Ｔ細胞中に形質移入されるべき場合、（限定されるものではないが）１０ｎｇ、５０ｎｇ、１００ｎｇ、５００ｎｇ、１μｇ、５μｇ、１０μｇ、５０μｇ、１００μｇ、５００μｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、及び５００ｍｇ以上を含む任意の好適な量が細胞中に形質移入され得る。対象細胞を本明細書に記載されるポリヌクレオチドで形質移入するため、対象から細胞を抽出し、それらを公知の技術に従って形質移入し、次いで形質移入された細胞を対象中に輸注して戻すことが有用である。エレクトロポレーションは、特に好適な形質移入方法である（例えば、国際公開第２０／１４２６４号パンフレット及び国際公開第２１／０７３１５号パンフレット参照、それらの各々は、参照により全体として本明細書に組み込まれる）。特に好適な細胞としては、全身を循環する細胞、例えば、循環リンパ球（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）が挙げられる。
【0052】
核酸が形質導入されるべき場合、ウイルスベクターが対象に直接投与され得るか、又は細胞が形質導入及び再輸注のために抽出され得る。ウイルスベクターは、対象に、限定されるものではないが、静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、及び吸入（例えば、エアロゾル吸入）を含む任意の好適な投与経路により投与され得る。
【0053】
治療有効ウイルス量としては、限定されるものではないが、１×１０７個のウイルス粒子（ＶＰ）、５×１０７ＶＰ、１×１０８ＶＰ、５×１０８ＶＰ、１×１０９ＶＰ、５×１０９ＶＰ、１×１０１０ＶＰ、又は１×１０１０ＶＰ超が挙げられる。アデノウイルスベクターは、アデノウイルスの大きい積荷容量のため、この目的に特に好適である。好適なアデノウイルスベクターとしては、各々が参照により全体として本明細書に組み込まれる国際公開第９８／１７７８３号パンフレット、国際公開第０２／２７００７号パンフレット、国際公開第０９／６４７９号パンフレット、及び国際公開第１４／３１１７８号パンフレットに開示されるものが挙げられる。これらのアデノウイルスベクターの投与に好適な方法は、参照により全体として本明細書に組み込まれる国際公開第１６／１１２１８８号パンフレットに開示される。
【0054】
上記のタンパク質、ペプチド、細胞、核酸、及びベクターは、患者における癌を処置及び／若しくは予防し、並びに／又はその出現を低減させるために使用され得る。癌は、膀胱癌、骨癌、脳癌（髄芽腫、髄膜腫、神経芽腫を含む）、乳癌、中枢神経系の癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、胆嚢癌、頭頸部癌、胃癌、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ関連癌、腎臓癌、白血病（急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｂ細胞白血病（ＢＣＬ）、慢性リンパ性癌（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び慢性Ｔ細胞性リンパ性白血病（ＣＴＬＬ）を含む）、肝臓癌、肺癌（非小細胞及び小細胞を含む）、リンパ腫（非ホジキンリンパ腫及びホジキンリンパ腫を含む）、黒色腫、多発性骨髄腫、上咽頭癌、口腔癌（口内、舌、唾液腺、又は歯茎の癌を含む）、神経内分泌癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽腫、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、及び膣癌であり得る。特定の実施形態において、患者は、膀胱癌、乳癌、結腸癌、又は膵臓癌を有し得る。
【0055】
上記のタンパク質、ペプチド、細胞、核酸、及びベクターは、患者におけるウイルス感染を処置及び／若しくは予防し、並びに／又はその出現を低減させるために使用され得る。ウイルスは、ＤＮＡ又はＲＮＡウイルスのいずれかであり得る。患者は、ＤＮＡウイルス、例えば、一本鎖又は二本鎖ウイルスからの感染を罹患していてよい。ＤＮＡウイルスは、限定されるものではないが、ヘルペスウイルス科（ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）、アデノウイルス科（ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ポリオーマウイルス科（ｐｏｌｙｏｍａｖｉｄｉｄａｅ）、及びポックスウイルス科（ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）を含むＤＮＡウイルスの任意の科に属し得る。或いは、患者は、ＲＮＡウイルス、例えば、一本鎖又は二本鎖ウイルスからの感染を罹患していてよい。ＲＮＡウイルスは、限定されるものではないが、レオウイルス科（ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）、ピコルナウイルス科（ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）、フラビウイルス科（ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）、へぺウイルス科（ｈｅｐｅｖｉｒｉｄａｅ）、トガウイルス科（ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）、フィロウイルス科（ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）、パラミクソウイルス科（ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、ニューモウイルス科（ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ）、ラブドウイルス科（ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、ハンタウイルス科（ｈａｎｔａｖｉｒｉｄａｅ）、及びオルトミクソウイルス科（ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）を含むＲＮＡウイルスの任意の科に属し得る。特に、患者は、ロタウイルス、コロナウイルス、ＳＡＲＳウイルス、ポリオウイルス、ライノウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、黄熱病ウイルス、ウエストナイルウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、デング熱ウイルス、ジカウイルス、風疹ウイルス、シンドビスウイルス、チクングニアウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、狂犬病ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、Ｃ型インフルエンザウイルス、Ｄ型インフルエンザウイルス、及びヒト免疫不全ウイルスに感染していてよい。
【0056】
実施形態
実施形態１：第１のペプチド鎖及び第２のペプチド鎖を含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、各ペプチド鎖は、細胞外ドメイン；膜貫通ドメイン；及び細胞内ドメインを含み、細胞外ドメインは、可変領域、定常領域、及び連結ペプチドを含み、可変領域及び定常領域は、リンカーを介して係合しており、第１のペプチド鎖の定常領域は、Ｉｇ－Ｃκドメインを含み、第２のペプチド鎖の定常領域は、Ｉｇ－ＣＨ－１ドメインを含み、１）第１のペプチド鎖の膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＡドメインを含み、第２のペプチド鎖の膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＢドメインを含むか、又は２）第１のペプチド鎖の膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＢドメインを含み、第２のペプチド鎖の膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＡドメインを含む改変ＴＣＲ。
実施形態１：第１のペプチド鎖及び第２のペプチド鎖を含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、各ペプチド鎖は、細胞外ドメイン；膜貫通ドメイン；及び細胞内ドメインを含み、細胞外ドメインは、可変領域、定常領域、及び連結ペプチドを含み、可変領域及び定常領域は、リンカーを介して係合しており、第１のペプチド鎖の定常領域は、Ｉｇ－Ｃκドメインを含み、第２のペプチド鎖の定常領域は、Ｉｇ－ＣＨ－１ドメインを含み、１）第１のペプチド鎖の膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＡドメインを含み、第２のペプチド鎖の膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＢドメインを含むか、又は２）第１のペプチド鎖の膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＢドメインを含み、第２のペプチド鎖の膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＡドメインを含む改変ＴＣＲ。
【0057】
実施形態２：リンカーは、フレキシブルリンカーである、実施形態１のＴＣＲ。
【0058】
実施形態３：Ｉｇ－ＣＨ－１ドメインは、ＩｇＧ－ＣＨ－１ａ、ＩｇＧ－ＣＨ－１ｂ、又はＩｇＭ－ＣＨ－１である、実施形態１又は２のＴＣＲ。
【0059】
実施形態４：ＨＬＡ－ＤＲＢドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＢ１又はＨＬＡ－ＤＲＢ２である、実施形態１～３のいずれか１つのＴＣＲ。
【0060】
実施形態５：ペプチド鎖の各々上の可変領域は、同じ可変領域である、実施形態１～４のいずれか１つのＴＣＲ。
【0061】
実施形態６：各ペプチド鎖上の可変領域は、互いに異なる、実施形態１～５のいずれか１つのＴＣＲ。
【0062】
実施形態７：細胞内ドメインは、ＣＤ２８領域及びＣＤ３ζＩＴＡＭ領域を含む、実施形態１～６のいずれか１つのＴＣＲ。
【0063】
実施形態８：第１のペプチド鎖は、定常領域としてのＩｇ－Ｃκ；膜貫通ドメインとしてのＨＬＡ－ＤＲＡ；並びに細胞内ドメインとしてのＣＤ２８及びＣＤ３ζを含む、実施形態１～７のいずれか１つのＴＣＲ。
【0064】
実施形態９：第１のペプチド鎖は、配列番号３９を含む、実施形態８のＴＣＲ。
【0065】
実施形態１０：第１のペプチド鎖は、配列番号５を含む、実施形態９のＴＣＲ。
【0066】
実施形態１１：第１のペプチド鎖は、配列番号４３を含む、実施形態８のＴＣＲ。
【0067】
実施形態１２：第１のペプチド鎖は、配列番号２６を含む、実施形態１１のＴＣＲ。
【0068】
実施形態１３：第２のペプチド鎖は、定常領域としてのＩｇ－ＣＨ－１；膜貫通ドメインとしてのＨＬＡ－ＤＲＢ；並びに細胞内ドメインとしてのＣＤ２８及びＣＤ３ζを含む、実施形態１～７のいずれか１つのＴＣＲ。
【0069】
実施形態１４：第２のペプチド鎖は、配列番号４０を含む、実施形態１３のＴＣＲ。
【0070】
実施形態１５：第２のペプチド鎖は、配列番号６を含む、実施形態１４のＴＣＲ。
【0071】
実施形態１６：第２のペプチド鎖は、配列番号４４を含む、実施形態１３のＴＣＲ。
【0072】
実施形態１７：第２のペプチド鎖は、配列番号２７を含む、実施形態１６のＴＣＲ。
【0073】
実施形態１８：第２のペプチド鎖は、配列番号４５を含む、実施形態１３のＴＣＲ。
【0074】
実施形態１９：第２のペプチド鎖は、配列番号２８を含む、実施形態１８のＴＣＲ。
【0075】
実施形態２０：第２のペプチド鎖は、配列番号４６を含む、実施形態１３のＴＣＲ。
【0076】
実施形態２１：第２のペプチド鎖は、配列番号２９を含む、実施形態２０のＴＣＲ。
【0077】
実施形態２２：第１のペプチド鎖は、定常領域としてのＩｇ－Ｃκ、膜貫通ドメインとしてのＨＬＡ－ＤＲＡ；並びに細胞内ドメインとしてのＣＤ２８及びＣＤ３ζを含み；第２のペプチド鎖は、定常領域としてのＩｇ－ＣＨ－１、膜貫通ドメインとしてのＨＬＡ－ＤＲＢ、並びに細胞内ドメインとしてのＣＤ２８及びＣＤ３ζを含む、実施形態１～２１のいずれか１つのＴＣＲ。
【0078】
実施形態２３：第１のペプチド鎖は、配列番号３９を含み、第２のペプチド鎖は、配列番号４０を含む、実施形態２２のＴＣＲ。
【0079】
実施形態２４：第１のペプチド鎖は、配列番号１５をさらに含み、第２のペプチド鎖は、配列番号１６をさらに含む、実施形態２３のＴＣＲ。
【0080】
実施形態２５：第１のペプチドは、配列番号５を含み、第２のペプチド鎖は、配列番号６を含む、実施形態２４のＴＣＲ。
【0081】
実施形態２６：第１のペプチド鎖は、配列番号４３を含み、第２のペプチド鎖は、配列番号４４を含む、実施形態２２のＴＣＲ。
【0082】
実施形態２７：第１のペプチド鎖は、配列番号３０をさらに含み、第２のペプチド鎖は、配列番号３１をさらに含む、実施形態２６のＴＣＲ。
【0083】
実施形態２８：第１のペプチドは、配列番号２６を含み、第２のペプチド鎖は、配列番号２７を含む、実施形態２７のＴＣＲ。
【0084】
実施形態２９：第１のペプチド鎖は、配列番号４３を含み、第２のペプチド鎖は、配列番号４４を含む、実施形態２２のＴＣＲ。
【0085】
実施形態３０：第１のペプチド鎖は、配列番号３０をさらに含み、第２のペプチド鎖は、配列番号３１をさらに含む、実施形態２９のＴＣＲ。
【0086】
実施形態３１：第１のペプチドは、配列番号２６を含み、第２のペプチド鎖は、配列番号２８を含む、実施形態３０のＴＣＲ。
【0087】
実施形態３２：第１のペプチド鎖は、配列番号４３を含み、第２のペプチド鎖は、配列番号４４を含む、実施形態２２のＴＣＲ。
【0088】
実施形態３３：第１のペプチド鎖は、配列番号３０をさらに含み、第２のペプチド鎖は、配列番号３１をさらに含む、実施形態３２のＴＣＲ。
【0089】
実施形態３４：第１のペプチドは、配列番号２６を含み、第２のペプチド鎖は、配列番号２９を含む、実施形態３３のＴＣＲ。
【0090】
実施形態３５：実施形態１～３４のいずれか１つのＴＣＲを含む細胞。
【0091】
実施形態３６：実施形態１～３４のいずれか１つのＴＣＲをコードする核酸。
【0092】
実施形態３７：実施形態３６の核酸を含むベクター
【0093】
実施形態３８：癌又はウイルス感染の出現の低減又はそれらの処置が必要とされる患者における癌又はウイルス感染の出現を低減させるか、又はそれらを処置する方法であって、医薬組成物を患者に投与することを含み、医薬組成物は、治療有効量の請求項１～３４のいずれか１つの改変ＴＣＲ又は実施形態１～３４のいずれか１つの改変ＴＣＲをコードする核酸を含む方法。
【0094】
実施形態３９：医薬は、核酸を含むベクターを含む、実施形態３８の方法。
【0095】
実施形態４０：医薬組成物は、改変ＴＣＲ又は改変ＴＣＲをコードする核酸を含む細胞を含む、実施形態３８又は３９の方法。
【0096】
実施形態４１：癌は、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、中枢神経系の癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、胆嚢癌、頭頸部癌、胃癌、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ関連癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、多発性骨髄腫、上咽頭癌、口腔癌、神経内分泌癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽腫、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、及び膣癌からなる群から選択される、請求項３８～４０のいずれか１つの方法。
【0097】
実施形態４２：ウイルス感染は、ヘルペスウイルス科（ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）、アデノウイルス科（ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ポリオーマウイルス科（ｐｏｌｙｏｍａｖｉｄｉｄａｅ）、ポックスウイルス科（ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）、レオウイルス科（ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）、ピコルナウイルス科（ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）、フラビウイルス科（ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）、へぺウイルス科（ｈｅｐｅｖｉｒｉｄａｅ）、トガウイルス科（ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）、フィロウイルス科（ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）、パラミクソウイルス科（ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、ニューモウイルス科（ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ）、ラブドウイルス科（ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、ハンタウイルス科（ｈａｎｔａｖｉｒｉｄａｅ）、及びオルトミクソウイルス科（ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）からなる群から選択されるウイルス科からのウイルスにより引き起こされる、請求項３８～４０のいずれか１つの方法。
【0098】
実施形態４３：癌又はウイルス感染の予防又は処置が必要とされる患者における癌又はウイルス感染を予防又は処置するための、請求項１のＴＣＲ、請求項３５の細胞、請求項３６の核酸又は請求項３７のベクターの使用。
【実施例】
【0099】
以下の実施例は、本明細書に開示される本発明をさらに説明するために提供されるが、決してその範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【0100】
実施例１：ＴＣＲ構築物のクローニング
ＨＬＡ－ＤＲＡ又はＨＬＡ－ＤＲＢ１連結ペプチドプラス膜貫通（ＣＰ－ＴＭ）領域ＤＮＡテンプレートを、部分的にオーバーラップする長鎖オリゴヌクレオチド（ＩＤＴ）をアニーリングすることにより構築した。これらのＣＰ－ＴＭ配列の各々を、オーバーラップ伸長ＰＣＲ（ＯＥ－ＰＣＲ）により、事前にクローニングされたテンプレートから得られたＣＤ２８細胞内（ＩＣ）プラスＣＤ３ζ（ＩＣ）配列に融合させた。Ｉｇ－Ｃκ又はＩｇ－ＣＨ－１からの細胞外定常ドメインをコードするＤＮＡテンプレートを、事前にクローニングされたｐＡＯ１５６テンプレートからＰＣＲにより得た。リンカー－ＷｉｎＺｉｐ－Ｂ１又はリンカー－ＷｉｎＺｉｐ－Ａ２コイルドコイルドメインから構成される細胞外定常ドメインを、リンカー－ＷｉｎＺｉｐ－Ｂ１又はリンカー－ＷｉｎＺｉｐ－Ａ２のいずれかをコードするｇＢｌｏｃｋ ＤＮＡ断片（ＩＤＴ）として得た。これらの細胞外定常ドメインの各々を、ＨＬＡ－ＤＲＡ又はＨＬＡ－ＤＲＢ１ ＣＰ－ＴＭプラスＣＤ２８－ＣＤ３ζ細胞内配列のいずれかにＯＥ－ＰＣＲにより融合させた。これらの不変ＣＰ－ＴＭ－ＩＣ配列を多目的発現ベクター（ｐＲＮｉ）中にクローニングした。不変ＣＰ－ＴＭ－ＩＣインサートを、５’末端における平滑ライゲーションによりクローニングしてＥｃｏＲＶ部位、及び３’末端におけるＰａｃＩオーバーラップを再生した。ｐＲＮｉ中の得られた不変ＣＰ－ＴＭ－ＩＣ構築物は、コード配列のすぐ上流にＮｃｏＩ制限部位を有する。したがって、５’末端におけるＢｓａＩ又はＥｓｐ３Ｉ制限部位及び平滑リン酸化３’末端を有する任意のＴＣＲ Ｖα又はＶβ配列を設計するか又は増幅させ、ＮｃｏＩ及びＥｃｏＲＶにより消化された不変ＣＰ－ＴＭ－ＩＣベクターの１つにクローニングすることができる。図３Ａ～３Ｄは、クローニングされた改変ＴＣＲ構築物の特定の実施形態を説明する。
ＨＬＡ－ＤＲＡ又はＨＬＡ－ＤＲＢ１連結ペプチドプラス膜貫通（ＣＰ－ＴＭ）領域ＤＮＡテンプレートを、部分的にオーバーラップする長鎖オリゴヌクレオチド（ＩＤＴ）をアニーリングすることにより構築した。これらのＣＰ－ＴＭ配列の各々を、オーバーラップ伸長ＰＣＲ（ＯＥ－ＰＣＲ）により、事前にクローニングされたテンプレートから得られたＣＤ２８細胞内（ＩＣ）プラスＣＤ３ζ（ＩＣ）配列に融合させた。Ｉｇ－Ｃκ又はＩｇ－ＣＨ－１からの細胞外定常ドメインをコードするＤＮＡテンプレートを、事前にクローニングされたｐＡＯ１５６テンプレートからＰＣＲにより得た。リンカー－ＷｉｎＺｉｐ－Ｂ１又はリンカー－ＷｉｎＺｉｐ－Ａ２コイルドコイルドメインから構成される細胞外定常ドメインを、リンカー－ＷｉｎＺｉｐ－Ｂ１又はリンカー－ＷｉｎＺｉｐ－Ａ２のいずれかをコードするｇＢｌｏｃｋ ＤＮＡ断片（ＩＤＴ）として得た。これらの細胞外定常ドメインの各々を、ＨＬＡ－ＤＲＡ又はＨＬＡ－ＤＲＢ１ ＣＰ－ＴＭプラスＣＤ２８－ＣＤ３ζ細胞内配列のいずれかにＯＥ－ＰＣＲにより融合させた。これらの不変ＣＰ－ＴＭ－ＩＣ配列を多目的発現ベクター（ｐＲＮｉ）中にクローニングした。不変ＣＰ－ＴＭ－ＩＣインサートを、５’末端における平滑ライゲーションによりクローニングしてＥｃｏＲＶ部位、及び３’末端におけるＰａｃＩオーバーラップを再生した。ｐＲＮｉ中の得られた不変ＣＰ－ＴＭ－ＩＣ構築物は、コード配列のすぐ上流にＮｃｏＩ制限部位を有する。したがって、５’末端におけるＢｓａＩ又はＥｓｐ３Ｉ制限部位及び平滑リン酸化３’末端を有する任意のＴＣＲ Ｖα又はＶβ配列を設計するか又は増幅させ、ＮｃｏＩ及びＥｃｏＲＶにより消化された不変ＣＰ－ＴＭ－ＩＣベクターの１つにクローニングすることができる。図３Ａ～３Ｄは、クローニングされた改変ＴＣＲ構築物の特定の実施形態を説明する。
【0101】
実施例２：ｍＲＮＡ合成及びエフェクター細胞エレクトロポレーション
実施例１の改変ＴＣＲ構築物を発現ベクター中に挿入した。構築物を、上流でＴ７プロモーター及び５’ＵＴＲにより、且つ下流でマウスヘモグロビンアルファから採用された３’ＵＴＲ、及び短鎖ポリ（Ａ）とそれに続くＡａｒＩ線形化部位により挟んだ。これは、ＡａｒＩによる最終ベクターＰ－ＮＲ－０２５、Ｐ－ＮＲ－０２６、Ｐ－ＮＲ－０２７、及びＰ－ＮＲ－０２８の線形化後に改変ＴＣＲのＴ７ベースのインビトロ転写を可能とする。活性化ナチュラルキラー（ａＮＫ）細胞を、インビトロ転写及びポリアデニル化されたｍＲＮＡ（ＮＥＢカタログ番号Ｅ２０４０Ｓ及びＭ０２７６Ｓ）により、２ｍｍギャップキュベットを有するＢＩＯ－ＲＡＤ Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ ＩＩを使用して５０μＬ中で３×１０６個の細胞当たり３μｇのｍＲＮＡでエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションされたａＮＫを、６ウェルＴＣ処理プレートのウェル中で完全ＲＰＭＩ培地（１０％のＦＢＳ及び１×ＰＳＡが補充されたＬ－Ｇｌｕを有するＣｏｒｎｉｎｇ ＲＰＭＩ １６４０）中で１ｍＬ当たり１×１０６個の細胞で３７℃及び５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。
実施例１の改変ＴＣＲ構築物を発現ベクター中に挿入した。構築物を、上流でＴ７プロモーター及び５’ＵＴＲにより、且つ下流でマウスヘモグロビンアルファから採用された３’ＵＴＲ、及び短鎖ポリ（Ａ）とそれに続くＡａｒＩ線形化部位により挟んだ。これは、ＡａｒＩによる最終ベクターＰ－ＮＲ－０２５、Ｐ－ＮＲ－０２６、Ｐ－ＮＲ－０２７、及びＰ－ＮＲ－０２８の線形化後に改変ＴＣＲのＴ７ベースのインビトロ転写を可能とする。活性化ナチュラルキラー（ａＮＫ）細胞を、インビトロ転写及びポリアデニル化されたｍＲＮＡ（ＮＥＢカタログ番号Ｅ２０４０Ｓ及びＭ０２７６Ｓ）により、２ｍｍギャップキュベットを有するＢＩＯ－ＲＡＤ Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ ＩＩを使用して５０μＬ中で３×１０６個の細胞当たり３μｇのｍＲＮＡでエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションされたａＮＫを、６ウェルＴＣ処理プレートのウェル中で完全ＲＰＭＩ培地（１０％のＦＢＳ及び１×ＰＳＡが補充されたＬ－Ｇｌｕを有するＣｏｒｎｉｎｇ ＲＰＭＩ １６４０）中で１ｍＬ当たり１×１０６個の細胞で３７℃及び５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。
【0102】
実施例３：キリングアッセイ
ＨＬＡ－Ａ２を安定的に発現する標的Ｄ３Ｃ６細胞（すなわち、全てのＭＨＣ－ＩアレルがノックアウトされたＫＧ－１細胞）に、４μｇ／ｍＬのｈＣＭＶ ｐｐ６５ ＮＬＶペプチド－ＨＬＡ－Ａ＊０２０１拘束性（ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ（配列番号２５）、ＤＭＳＯ中）又は等容量のＤＭＳＯのいずれかを４．４ｍＬ中で６．４×１０５個の細胞／ｍＬで各々パルスした。パルスされた標的細胞を、Ｔ－２５フラスコ中で完全ＩＭＤＭ培地（１０％のＦＢＳ及び１×ＰＳＡが補充されたＡＴＣＣイスコフＩＭＤＭ）中で３７℃及び５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。エレクトロポレーションから２０～２４時間後、実施例２のａＮＫエフェクター細胞をＰＢＳ（カルシウムもマグネシウムも有さない）中で洗浄し、完全ＲＰＭＩ １６４０培地中で再懸濁させた。次いで、エフェクターａＮＫを計数し、ウェル当たり１×１０５個から６．２５×１０４個までの生存エフェクター細胞まで段階希釈し、丸底９６ウェルプレート中に堆積させた。未結合ペプチド又はＤＭＳＯをパルスされた標的細胞から、完全ＲＰＭＩ培地により１回洗浄し、ＰＢＳにより２回洗浄することにより除去した。洗浄された標的細胞を２０μＬのカルセイン－ＡＭ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ｃ３０９９）を有する２ｍＬのＰＢＳ中で各々再懸濁させ、穏やかに振盪させながら３７℃及び５％のＣＯ２で２０分間インキュベートした。カルセインがロードされた標的細胞をＰＢＳにより洗浄し、次いで完全ＲＰＭＩにより洗浄してから１０ｍＬの完全ＲＰＭＩ中で再懸濁させ、計数した。標的細胞を９６ウェル丸底プレートのウェルにウェル当たり５×１０３個の生存標的細胞でそれらのエフェクター細胞と一緒にロードした。キリングアッセイプレートを４００×ｇで５分間遠心分離し、３７℃及び５％のＣＯ２で４時間インキュベートした。インキュベーション後、２２μＬの９％（ｖ／ｖ）のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を最大溶解対照ウェルに添加し、プレートを室温で５分間インキュベートした。キリングプレートを再度遠心分離し、４８５±２０ｎｍの波長における励起及び５２８±２０ｎｍにおける発光の読取のために１００μＬの上清を９６ウェルイムノアッセイプレートに移した。各サンプルをトリプリケートでプレーティングした。
ＨＬＡ－Ａ２を安定的に発現する標的Ｄ３Ｃ６細胞（すなわち、全てのＭＨＣ－ＩアレルがノックアウトされたＫＧ－１細胞）に、４μｇ／ｍＬのｈＣＭＶ ｐｐ６５ ＮＬＶペプチド－ＨＬＡ－Ａ＊０２０１拘束性（ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ（配列番号２５）、ＤＭＳＯ中）又は等容量のＤＭＳＯのいずれかを４．４ｍＬ中で６．４×１０５個の細胞／ｍＬで各々パルスした。パルスされた標的細胞を、Ｔ－２５フラスコ中で完全ＩＭＤＭ培地（１０％のＦＢＳ及び１×ＰＳＡが補充されたＡＴＣＣイスコフＩＭＤＭ）中で３７℃及び５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。エレクトロポレーションから２０～２４時間後、実施例２のａＮＫエフェクター細胞をＰＢＳ（カルシウムもマグネシウムも有さない）中で洗浄し、完全ＲＰＭＩ １６４０培地中で再懸濁させた。次いで、エフェクターａＮＫを計数し、ウェル当たり１×１０５個から６．２５×１０４個までの生存エフェクター細胞まで段階希釈し、丸底９６ウェルプレート中に堆積させた。未結合ペプチド又はＤＭＳＯをパルスされた標的細胞から、完全ＲＰＭＩ培地により１回洗浄し、ＰＢＳにより２回洗浄することにより除去した。洗浄された標的細胞を２０μＬのカルセイン－ＡＭ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ｃ３０９９）を有する２ｍＬのＰＢＳ中で各々再懸濁させ、穏やかに振盪させながら３７℃及び５％のＣＯ２で２０分間インキュベートした。カルセインがロードされた標的細胞をＰＢＳにより洗浄し、次いで完全ＲＰＭＩにより洗浄してから１０ｍＬの完全ＲＰＭＩ中で再懸濁させ、計数した。標的細胞を９６ウェル丸底プレートのウェルにウェル当たり５×１０３個の生存標的細胞でそれらのエフェクター細胞と一緒にロードした。キリングアッセイプレートを４００×ｇで５分間遠心分離し、３７℃及び５％のＣＯ２で４時間インキュベートした。インキュベーション後、２２μＬの９％（ｖ／ｖ）のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を最大溶解対照ウェルに添加し、プレートを室温で５分間インキュベートした。キリングプレートを再度遠心分離し、４８５±２０ｎｍの波長における励起及び５２８±２０ｎｍにおける発光の読取のために１００μＬの上清を９６ウェルイムノアッセイプレートに移した。各サンプルをトリプリケートでプレーティングした。
【0103】
図４Ａ～４Ｅは、ｐｐ６５－ＮＬＶ又はＤＭＳＯ（対照）がパルスされ、ＴＣＲαβ－ＩＴＡＭ融合物がエレクトロポレーションされたａＮＫ細胞又は対照ａＮＫ細胞のいずれかに曝露されたＨＬＡ－Ａ２陽性標的細胞の％特異的標的細胞溶解を実証する。図４Ａの「Ｐ－ＮＲ－０２５＋Ｐ－ＮＲ－０２６ ａＮＫ」は、図１に示されるＴＣＲαβ－ＩＴＡＭ融合物を示す。図４Ｂの「Ｐ－ＮＲ－０２７＋Ｐ－ＮＲ－０２８ ａＮＫ」は、図２に示されるＴＣＲαβ－ＩＴＡＭ融合物を示す。図４Ｃの「Ｐ－ＮＲ－００２＋Ｐ－ＮＲ－０１６＋ＣＤ３γδ ａＮＫ」は、他の構築物と同じ抗ｐｐ６５－ＮＬＶ－ＨＬＡ－Ａ２可変ドメインを含有し、陽性キリング対照として機能するようにＣＤ３γδにより同時エレクトロポレーションされた野生型ＴＣＲαβを示す。図４Ｄの「Ｐ－ＷＴ－１７３」も陽性キリング対照であるが、同じ野生型抗ｐｐ６５－ＮＬＶ－ＨＬＡ－Ａ２ ＴＣＲαβ及びＣＤ３γδを安定的に発現する。陰性対照は、ＧＦＰ単独によりエレクトロポレーションされたａＮＫにより示される（図４Ｅ）。Ｐ－ＮＲ－０２５＋Ｐ－ＮＲ－０２６、Ｐ－ＮＲ－０２７＋Ｐ－ＮＲ－０２８、Ｐ－ＮＲ－００２＋Ｐ－ＮＲ－０１６、及びＰ－ＷＴ－１７３は全て、ＨＬＡ－Ａ＊０２上のＮＬＶペプチドに結合することが事前に決定された同じ可変ＴＣＲαβ配列ペアを含有した。エラーバーは、技術的反復の±標準偏差を示すにすぎない。
【0104】
実施例４：活性化ＮＫ細胞中のＰ－ＮＲ－０２５＋Ｐ－ＮＲ－０２６、Ｐ－ＮＲ－０２５＋ＰＷＨ２９５、ＰＷＨ３０８＋ＰＷＨ３０５、又はＰＷＨ３０８＋ＰＷＨ３０５のキメラＴＣＲ発現及び細胞傷害性
ａＮＫ（ＮＫ９２）細胞をＲＰＭＩ緩衝液により洗浄し、ＲＰＭＩ中で１０７個の細胞／５０μＬの濃度で再懸濁させた。第１及び第２のペプチド鎖をコードする５μｇのｍＲＮＡを、２ｍｍキュベットに対して５０μＬのＲＰＭＩ中で１０７個のａＮＫ細胞と合わせた。キュベットをＢｉｏＲａｄ ＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒ ＩＩにより２００Ｖの３回の２０ｍｓパルスに供した。エレクトロポレーションされた細胞を、ＩＬ－２を含有する培養培地（１０％のＦＢＳ及び１×ＰＳＡが補充されたＬ－Ｇｌｕを有するＣｏｒｎｉｎｇ ＲＰＭＩ １６４０）に移し、一晩インキュベートした。
ａＮＫ（ＮＫ９２）細胞をＲＰＭＩ緩衝液により洗浄し、ＲＰＭＩ中で１０７個の細胞／５０μＬの濃度で再懸濁させた。第１及び第２のペプチド鎖をコードする５μｇのｍＲＮＡを、２ｍｍキュベットに対して５０μＬのＲＰＭＩ中で１０７個のａＮＫ細胞と合わせた。キュベットをＢｉｏＲａｄ ＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒ ＩＩにより２００Ｖの３回の２０ｍｓパルスに供した。エレクトロポレーションされた細胞を、ＩＬ－２を含有する培養培地（１０％のＦＢＳ及び１×ＰＳＡが補充されたＬ－Ｇｌｕを有するＣｏｒｎｉｎｇ ＲＰＭＩ １６４０）に移し、一晩インキュベートした。
【0105】
一晩のインキュベーション後、各サンプルからの２×１０５個の細胞を得、ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＥＤＴＡ緩衝液により洗浄した。細胞を１００μＬの洗浄緩衝液中で再懸濁させた。５μＬのＰＥ－ＨＬＡ－Ａ＊０２０１、ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ－ＰＥ、又はＨＬＡ－Ａ２デキストラマー陰性対照を各サンプルに添加した。サンプルを４℃で２０分間インキュベートし、ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＥＤＴＡにより洗浄し、２００μＬ中で再懸濁させた。細胞をフローサイトメトリーを介して分析した。図５は、エレクトロポレーションされたａＮＫ中の種々のキメラＴＣＲの発現を示す。
【0106】
エレクトロポレーション後の一晩のインキュベーション後、ａＮＫを３回洗浄し、カルセインＡＭにより染色されたＨＬＡ－Ａ２安定ＫＧ－１細胞と１０：１（エフェクター：標的）の比でインキュベートした。４時間のインキュベーション後、上清を得、カルセインＡＭの蛍光について分析した。図６は、本明細書に記載される改変ＴＣＲを発現するａＮＫ細胞による標的細胞の％特異的キリングを示す。
【0107】
実施例５：初代Ｔ細胞中のＰＷＨ３０８＋ＰＷＨ３０５及びＰＷＨ３０８＋ＰＷＨ３０５のキメラＴＣＲ発現及び細胞傷害性
ヒト初代Ｔ細胞をドナー由来ロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｃｋ）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＵＳＡ）から得た。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をｆｉｃｏｌｌ勾配を介して分離し、Ｋ１００緩衝液により洗浄し、Ｋ１００中で１０７個の細胞／１００μＬの濃度で再懸濁させた。次いで、ＣＤ３豊富なＴ細胞をＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（商標）（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＳＡ）及びＩＬ－２中で拡大培養した。第１及び第２のペプチド鎖をコードする１０μｇのｍＲＮＡを、２ｍｍキュベットに対して１００μＬのＫ１００緩衝液中で１０７個のＴ細胞と合わせた。細胞を、両方とも参照により本明細書に組み込まれる米国特許第１１，３７７，６５２号明細書及び米国特許出願公開第２０２２００２５４０２号明細書に記載されるエレクトロポレーションプロトコルに従ってエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションされた細胞を培養培地に移し、一晩インキュベートした。
ヒト初代Ｔ細胞をドナー由来ロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｃｋ）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＵＳＡ）から得た。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をｆｉｃｏｌｌ勾配を介して分離し、Ｋ１００緩衝液により洗浄し、Ｋ１００中で１０７個の細胞／１００μＬの濃度で再懸濁させた。次いで、ＣＤ３豊富なＴ細胞をＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（商標）（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＳＡ）及びＩＬ－２中で拡大培養した。第１及び第２のペプチド鎖をコードする１０μｇのｍＲＮＡを、２ｍｍキュベットに対して１００μＬのＫ１００緩衝液中で１０７個のＴ細胞と合わせた。細胞を、両方とも参照により本明細書に組み込まれる米国特許第１１，３７７，６５２号明細書及び米国特許出願公開第２０２２００２５４０２号明細書に記載されるエレクトロポレーションプロトコルに従ってエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションされた細胞を培養培地に移し、一晩インキュベートした。
【0108】
一晩のインキュベーション後、各サンプルからの２×１０５個の細胞を得、ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＥＤＴＡ緩衝液により洗浄した。細胞を１００μＬの洗浄緩衝液中で再懸濁させた。５μＬのＰＥ－ＨＬＡ－Ａ＊０２０１、ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ－ＰＥ、又はＨＬＡ－Ａ２デキストラマー陰性対照を各サンプルに添加した。サンプルを４℃で２０分間インキュベートし、ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＥＤＴＡにより２回洗浄し、２００μＬ中で再懸濁させた。細胞をフローサイトメトリーを介して分析した。図７は、エレクトロポレーションされた初代Ｔ細胞中の種々のキメラＴＣＲの発現を示す。
【0109】
エレクトロポレーション後の一晩のインキュベーション後、初代Ｔ細胞を３回洗浄し、カルセインＡＭにより染色されたＨＬＡ－Ａ２安定ＫＧ－１細胞と１０：１（エフェクター：標的）の比でインキュベートした。４時間のインキュベーション後、上清を得、カルセインＡＭの蛍光について分析した。図８は、本明細書に記載される改変ＴＣＲを発現する初代Ｔ細胞による標的細胞の％特異的キリングを示す。
【0110】
実施例６：改変ＴＣＲによる患者由来Ｔ細胞の形質移入
患者Ｔ細胞は全末梢血に由来するか、又は腫瘍若しくは流入領域リンパ節から単離される。Ｔ細胞を本明細書に記載される改変ＴＣＲによりエレクトロポレーションする。エレクトロポレーションされたＴ細胞をエクスビボで臨床的に有効な数の細胞まで増殖させ、治療関連数の細胞を患者に投与する。
患者Ｔ細胞は全末梢血に由来するか、又は腫瘍若しくは流入領域リンパ節から単離される。Ｔ細胞を本明細書に記載される改変ＴＣＲによりエレクトロポレーションする。エレクトロポレーションされたＴ細胞をエクスビボで臨床的に有効な数の細胞まで増殖させ、治療関連数の細胞を患者に投与する。
【0111】
本明細書に引用される刊行物、特許出願、及び特許を含む全ての参照文献は、各参照文献が個別的且つ具体的に参照により取り込まれることが示され、全体として本明細書に記載されるのと同じ程度に参照により本明細書に組み込まれる。
【0112】
本発明を説明する文脈における（特に以下の特許請求の範囲の文脈における）用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び「少なくとも１つ」並びに同様の参照対象の使用は、本明細書に特記されない限り、又は文脈と明らかに矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方をカバーすると解釈されるべきである。用語「少なくとも１つ」とそれに続く１つ以上の項目のリスト（例えば、「Ａ及びＢの少なくとも１つ」）の使用は、本明細書に特記されない限り、又は文脈と明らかに矛盾しない限り、列記される項目から選択される１つの項目（Ａ又はＢ）又は列記される項目の２つ以上の任意の組み合わせ（Ａ及びＢ）を意味すると解釈されるべきである。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含有する」は、注記されない限り、オープンエンドの用語（すなわち、「限定されるものではないが、～を含む」を意味する）と解釈されるべきである。本明細書の値の範囲の記述は、本明細書に特記されない限り、その範囲内に収まる各別個の値を個々に指す省略方法として機能すると意図されるにすぎず、各別個の値は、それが個別的に本明細書に記述されるかのように本明細書に組み込まれる。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書に特記されない限り、又は特に明らかに文脈と矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施され得る。本明細書に提供される任意の及び全ての例、又は例示的な語（例えば、「例えば」）の使用は、本発明をより良好に明らかにすることが意図されるにすぎず、特に特許請求されない限り、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書における語は、特許請求されない任意の要素を本発明の実施に不可欠として示すものと解釈されるべきでない。
【0113】
本発明を実施するための本発明者らが理解する最良の態様を含む本発明の特定の実施形態が、本明細書に記載される。それらの特定の実施形態の変法は、当業者が上記の詳細な説明を読めば明らかになり得る。本発明者らは、当業者がそのような変法を適宜用いることを予測し、本発明者らは、本明細書に具体的に記載されるもの以外で本発明が実施されることを意図する。したがって、本発明は、適用可能な法律により認められる通り、本明細書に添付される特許請求の範囲に記述される主題の全ての改変及び均等物を含む。さらに、全ての考えられるそれらの変法における上記要素の任意の組み合わせは、本明細書に特記されない限り、又は特に文脈と明らかに矛盾しない限り、本発明により包含される。
【0114】
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図4-1】
【図4-2】
【図4-3】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-01-26
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
第１のペプチド鎖及び第２のペプチド鎖を含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、各ペプチド鎖は、細胞外ドメイン；
膜貫通ドメイン；及び
細胞内ドメイン
を含み、
前記細胞外ドメインは、可変領域、定常領域、及び連結ペプチドを含み、
前記可変領域及び前記定常領域は、リンカーを介して係合しており、
前記第１のペプチド鎖の前記定常領域は、Ｉｇ－Ｃκドメインを含み、前記第２のペプチド鎖の前記定常領域は、Ｉｇ－ＣＨ－１ドメインを含み、
１）前記第１のペプチド鎖の前記膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＡドメインを含み、前記第２のペプチド鎖の前記膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＢドメインを含むか、又は２）前記第１のペプチド鎖の前記膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＢドメインを含み、前記第２のペプチド鎖の前記膜貫通ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＡドメインを含む改変ＴＣＲ。
【請求項2】
前記リンカーは、フレキシブルリンカーである、請求項１に記載のＴＣＲ。
【請求項3】
前記Ｉｇ－ＣＨ－１ドメインは、ＩｇＧ－ＣＨ－１ａ、ＩｇＧ－ＣＨ－１ｂ、又はＩｇＭ－ＣＨ－１である、請求項１に記載のＴＣＲ。
【請求項4】
前記ＨＬＡ－ＤＲＢドメインは、ＨＬＡ－ＤＲＢ１又はＨＬＡ－ＤＲＢ２である、請求項１に記載のＴＣＲ。
【請求項5】
前記ペプチド鎖の各々上の前記可変領域は、同じ可変領域である、請求項１に記載のＴＣＲ。
【請求項6】
各ペプチド鎖上の前記可変領域は、互いに異なる、請求項１に記載のＴＣＲ。
【請求項7】
前記細胞内ドメインは、ＣＤ２８領域及びＣＤ３ζＩＴＡＭ領域を含む、請求項１に記載のＴＣＲ。
【請求項8】
前記第１のペプチド鎖は、前記定常領域としてのＩｇ－Ｃκ；
前記膜貫通ドメインとしてのＨＬＡ－ＤＲＡ；並びに
前記細胞内ドメインとしてのＣＤ２８及びＣＤ３ζ
を含む、請求項１に記載のＴＣＲ。
【請求項9】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号３９を含む、請求項８に記載のＴＣＲ。
【請求項10】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号４３を含む、請求項８に記載のＴＣＲ。
【請求項11】
前記第２のペプチド鎖は、前記定常領域としてのＩｇ－ＣＨ－１；
前記膜貫通ドメインとしてのＨＬＡ－ＤＲＢ；並びに
前記細胞内ドメインとしてのＣＤ２８及びＣＤ３ζ
を含む、請求項１に記載のＴＣＲ。
【請求項12】
前記第２のペプチド鎖は、配列番号４０を含む、請求項１１に記載のＴＣＲ。
【請求項13】
前記第２のペプチド鎖は、配列番号４４を含む、請求項１１に記載のＴＣＲ。
【請求項14】
前記第２のペプチド鎖は、配列番号４５を含む、請求項１１に記載のＴＣＲ。
【請求項15】
前記第２のペプチド鎖は、配列番号４６を含む、請求項１１に記載のＴＣＲ。
【請求項16】
前記第１のペプチド鎖は、前記定常領域としてのＩｇ－Ｃκ、前記膜貫通ドメインとしてのＨＬＡ－ＤＲＡ；並びに前記細胞内ドメインとしてのＣＤ２８及びＣＤ３ζを含み；前記第２のペプチド鎖は、前記定常領域としてのＩｇ－ＣＨ－１、前記膜貫通ドメインとしてのＨＬＡ－ＤＲＢ、並びに前記細胞内ドメインとしてのＣＤ２８及びＣＤ３ζを含む、
請求項１に記載のＴＣＲ。
【請求項17】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号３９を含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号４０を含む、請求項１６に記載のＴＣＲ。
【請求項18】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号１５をさらに含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号１６をさらに含む、請求項１７に記載のＴＣＲ。
【請求項19】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号４３を含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号４４を含む、請求項１６に記載のＴＣＲ。
【請求項20】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号３０をさらに含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号３１をさらに含む、請求項１９に記載のＴＣＲ。
【請求項21】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号４３を含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号４４を含む、請求項１６に記載のＴＣＲ。
【請求項22】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号３０をさらに含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号３１をさらに含む、請求項２１に記載のＴＣＲ。
【請求項23】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号４３を含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号４４を含む、請求項１６に記載のＴＣＲ。
【請求項24】
前記第１のペプチド鎖は、配列番号３０をさらに含み、前記第２のペプチド鎖は、配列番号３１をさらに含む、請求項２３に記載のＴＣＲ。
【請求項25】
請求項１に記載のＴＣＲを含む細胞。
【請求項26】
請求項１に記載のＴＣＲをコードする核酸。
【請求項27】
請求項２６に記載の核酸を含むベクター。
【請求項28】
癌又はウイルス感染の出現の低減又はそれらの処置が必要とされる患者における癌又はウイルス感染の出現を低減させるか、又はそれらを処置する方法であって、医薬組成物を前記患者に投与することを含み、前記医薬組成物は、治療有効量の請求項１に記載の改変ＴＣＲ又は請求項１～２４のいずれか一項に記載の改変ＴＣＲをコードする核酸を含む方法。
【請求項29】
前記医薬は、前記核酸を含むベクターを含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項30】
前記医薬組成物は、前記改変ＴＣＲ又は前記改変ＴＣＲをコードする核酸を含む細胞を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項31】
前記癌は、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、中枢神経系の癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、胆嚢癌、頭頸部癌、胃癌、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ関連癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、多発性骨髄腫、上咽頭癌、口腔癌、神経内分泌癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽腫、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、及び膣癌からなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項32】
前記ウイルス感染は、ヘルペスウイルス科（ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）、アデノウイルス科（ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ポリオーマウイルス科（ｐｏｌｙｏｍａｖｉｄｉｄａｅ）、ポックスウイルス科（ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）、レオウイルス科（ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）、ピコルナウイルス科（ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）、フラビウイルス科（ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）、へぺウイルス科（ｈｅｐｅｖｉｒｉｄａｅ）、トガウイルス科（ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）、フィロウイルス科（ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）、パラミクソウイルス科（ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、ニューモウイルス科（ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ）、ラブドウイルス科（ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、ハンタウイルス科（ｈａｎｔａｖｉｒｉｄａｅ）、及びオルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）からなる群から選択されるウイルス科からのウイルスにより引き起こされる、請求項２８に記載の方法。
【請求項33】
癌又はウイルス感染の予防又は処置が必要とされる患者における癌又はウイルス感染を予防又は処置するための、請求項１に記載のＴＣＲ、請求項２５に記載の細胞、請求項２６に記載の核酸又は請求項２７に記載のベクターの使用。
【国際調査報告】