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▶ ツェー・エス・エル・ベーリング・アクチエンゲゼルシャフトの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-07-26
(54)【発明の名称】免疫グロブリンＧを精製する方法およびその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/00 20060101AFI20240719BHJP
C07K 1/22 20060101ALI20240719BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240719BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240719BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240719BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240719BHJP
【ＦＩ】
C07K16/00 ZNA
C07K1/22
A61P37/02
A61P29/00
A61P25/00
A61K39/395 X
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024504997
(86)(22)【出願日】2022-07-29
(85)【翻訳文提出日】2024-02-26
(86)【国際出願番号】 IB2022057039
(87)【国際公開番号】W WO2023007445
(87)【国際公開日】2023-02-02
(31)【優先権主張番号】2021902332
(32)【優先日】2021-07-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(31)【優先権主張番号】63/227,329
(32)【優先日】2021-07-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/365,530
(32)【優先日】2022-05-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】501091604
【氏名又は名称】ツェー・エス・エル・ベーリング・アクチエンゲゼルシャフト
(74)【代理人】
【識別番号】100127926
【弁理士】
【氏名又は名称】結田 純次
(74)【代理人】
【識別番号】100216105
【弁理士】
【氏名又は名称】守安 智
(72)【発明者】
【氏名】ループシー・アナンド
(72)【発明者】
【氏名】ペーター・デリンガー
(72)【発明者】
【氏名】ラウラ・ヘラー
(72)【発明者】
【氏名】マルティン・ノイエンフェルト
(72)【発明者】
【氏名】マクダレーナ・ポラティンスカ
(72)【発明者】
【氏名】ハイケ・ニコル・ウィルカ
(72)【発明者】
【氏名】カトリン・アンデルス
(72)【発明者】
【氏名】ノルベルト・シュルツェ
(72)【発明者】
【氏名】デイヴィッド・ボァレマ
【テーマコード（参考）】
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C085AA33
4C085BB36
4C085CC14
4C085DD01
4C085DD33
4C085DD34
4C085DD37
4C085DD39
4C085DD41
4C085EE01
4C085GG02
4C085GG03
4C085GG04
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA75
4H045EA20
4H045FA71
4H045GA05
4H045GA23
4H045GA26
(57)【要約】
本開示は、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を用いて、血漿またはその画分から免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）およびアルブミンなどの他のタンパク質を精製する方法に関する。本開示はまた、本方法から産生される血漿タンパク質産物の製剤化および使用に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
連続アフィニティークロマトグラフィを用いて血漿またはその画分から免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を精製する方法であって、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂にＩｇＧを結合させ、ＩｇＧを回収することを含む方法。
【請求項2】
連続アフィニティークロマトグラフィを用いて血漿またはその画分から免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）濃縮調製物を製造する方法であって、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂にＩｇＧを結合させ、ＩｇＧを回収することを含む方法。
【請求項3】
リガンドがラクダ由来の単一ドメイン［ＶＨＨ］抗体フラグメントを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
樹脂が、架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスおよびアガロースベースのマトリクスからなる群から選択されるマトリクスを含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項5】
リガンドが、架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスにコンジュゲートしたＶＨＨ抗体フラグメントを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項6】
５～１０のｐＨ、および２５℃で６．８～８．５の解離定数（ｐＫａ）を有する洗浄緩衝液で樹脂を洗浄することをさらに含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項7】
３～５のｐＨを有する溶出緩衝液で樹脂から結合ＩｇＧを溶出することをさらに含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項8】
血漿またはその画分が０．１～５分間樹脂と接触する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項9】
血漿画分が、クライオリッチ血漿、クライオプア血漿、上清Ｉ（ＳＮ Ｉ）、コーン画分ＩＩ（ＦｒＩＩ）、コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ（Ｆｒ ＩＩ＋ＩＩＩ）、コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ（ＦｒＩ＋ＩＩ＋ＩＩＩ）、キスラー／ニッチマン沈殿物Ａ（ＫＮ Ａ）、キスラー／ニッチマン沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ）、キスラー／ニッチマン上清沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ＋１）、およびその組合せからなる群から選択される、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項10】
血漿またはその画分が少なくとも３２℃の温度で融解される、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項11】
連続アフィニティークロマトグラフィの前の血漿またはその画分が２℃～２８℃の範囲の温度である、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項12】
連続アフィニティークロマトグラフィの前の血漿またはその画分が２１℃の温度である、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
血漿またはその画分が最長４８時間、前記温度にある、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項14】
洗浄緩衝液が、リン酸二水素ナトリウム、イミダゾール、Ｔｒｉｓ、グリシルグリシン、３－モルホリノプロパン－１－スルホン酸（ＭＯＰＳ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、２－［（２－ヒドロキシ－１，１－ビス（ヒドロキシメチル）エチル）アミノ］エタンスルホン酸（ＴＥＳ）、ビス［（２－ヒドロキシエチル）アミノ］酢酸（ビシン）、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、亜硫酸、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンプロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、Ｎ－（ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、４－（Ｎ－モルホリノ）ブタンスルホン酸（ＭＯＢＳ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］－３－アミノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、トリシン、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）およびその組合せからなる群から選択される緩衝剤を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項15】
緩衝剤が５ｍＭ～２００ｍＭの濃度である、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
洗浄緩衝液が、最大１０００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムおよび／または二価塩をさらに含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項17】
洗浄緩衝液が、２０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム、５００ｍＭの塩化ナトリウムを含み、ｐＨが７．４である、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項18】
溶出緩衝液が、ｐＨが３～５のリン酸緩衝液および／または酢酸緩衝液であるか、またはこれらを含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項19】
溶出緩衝液が最長５分間樹脂と接触する、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項20】
７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で樹脂を平衡化することをさらに含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項21】
平衡化緩衝液が２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、５００ｍＭ塩化ナトリウムを含み、ｐＨが７．４である、請求項２０に記載の方法。
【請求項22】
樹脂が、ｉ）樹脂をストリッピングした後、またはｉｉ）樹脂をストリッピングすることなく平衡化される、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項23】
樹脂をストリッピングした後に、７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で樹脂を平衡化することをさらに含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項24】
連続アフィニティークロマトグラフィが、シミュレーテッドムービングベッド（ＳＭＢ）クロマトグラフィ、周期的向流クロマトグラフィ（ＰＣＣ）、連続向流タンジェンシャルクロマトグラフィ（ＣＣＴＣ）、および連続向流スパイラルクロマトグラフィ（ＣＣＳＣ）からなる群から選択される、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項25】
樹脂がスラリーの形態であるか、または樹脂が１つまたはそれ以上のカラム（複数可）に充填され、各カラムが１つまたはそれ以上のゾーンを含む、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項26】
ゾーンが、平衡化ゾーン、結合ゾーン、洗浄ゾーン、溶出ゾーン、またはその組合せからなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
カラムが、流体接続され、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離される、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項28】
樹脂が一連の３つのカラムに充填され、各カラムが別個のゾーンである、請求項２５～２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項29】
樹脂が、第１のカラムおよび１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）に充填される、請求項１～２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項30】
第１のカラムに、樹脂の動的結合容量（ＤＢＣ）を超える濃度でＩｇＧが負荷される、請求項２９に記載の方法。
【請求項31】
樹脂のＤＢＣが樹脂１ｍＬあたり少なくとも５ｍｇのＩｇＧである、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）が、樹脂のＤＢＣまでの濃度でＩｇＧが負荷される、請求項２９～３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項33】
１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）が、樹脂１ｍＬあたり最大４０ｍｇのＩｇＧ濃度でＩｇＧが負荷される、請求項２９～３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項34】
樹脂が２ｃｍ～３０ｃｍの総床高を有する、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項35】
樹脂を再生することをさらに含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項36】
樹脂を消毒することをさらに含む、請求項１～３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項37】
エタノール沈殿、オクタン酸分画、イオン交換クロマトグラフィ、ウイルス不活性化、ウイルス濾過および限外濾過／透析濾過からなる群から選択される１つまたはそれ以上の工程をさらに含む、請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項38】
イオン交換クロマトグラフィ工程が、フロースルーモードで作動する強陰イオン交換樹脂を使用する陰イオン交換クロマトグラフィ工程を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
強陰イオン交換樹脂が、ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスからなるマトリクスを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項40】
強陰イオン交換樹脂が四級化ポリエチレンイミン官能基を含む、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項41】
陰イオン交換クロマトグラフィ工程が、リン酸緩衝液、クエン酸ナトリウム緩衝液、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸緩衝液、酢酸緩衝液、Ｂｉｓ－ｔｒｉｓ緩衝液およびＬ－ヒスチジン緩衝液からなる群から選択される負荷後洗浄緩衝液を含む、請求項３８～４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項42】
負荷後洗浄緩衝液が、５．８～６．６の範囲のｐＨのリン酸緩衝液を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項43】
負荷後洗浄緩衝液が、０ｍＭ～５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムをさらに含む、請求項４１または４２に記載の方法。
【請求項44】
ＩｇＧの少なくとも７５％が血漿またはその画分から回収される、請求項１～４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項45】
溶出ＩｇＧが少なくとも９５％の純度を有する、請求項１～４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項46】
ＩｇＧを医薬組成物に製剤化することをさらに含む、請求項１～４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項47】
シミュレーテッドムービングベッド（ＳＭＢ）クロマトグラフィを用いて血漿またはその画分から免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を精製する方法であって：ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクス、およびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸塩洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩またはリン酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
工程ａ）～ｄ）が、アフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返されてもよく、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された、一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、場合により、方法が、樹脂をストリッピングすることを含まない、方法。
【請求項48】
請求項１～４７のいずれか１項に記載の方法により精製または産生されるＩｇＧを含む医薬組成物。
【請求項49】
１００ｍｇ／ｍＬの総ヒト血漿タンパク質を含む、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項50】
２０ｇ／１００ｍＬの総ヒト血漿タンパク質を含む、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項51】
少なくとも９８％の純度の免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む、請求項４８～５０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項52】
３２０ｍＯｓｍ／ｋｇの公称浸透圧を含む、請求項４８～５１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項53】
４．６～５．０のｐＨを含む、請求項４８～５２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項54】
４．８のｐＨを含む、請求項４８～５３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項55】
２５０ｍｍｏｌ／ＬのＬ－プロリンをさらに含む、請求項４８～５４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項56】
１ｍｍｏｌ／Ｌ以下のナトリウム含量を含む、請求項４８～５５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項57】
０．０５ｍｇ／ｍＬ以下のＩｇＡ含量を含む、請求項４８～５６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項58】
３５ＩＵ／ｍＬ以下のプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）レベルを含む、請求項４８～５７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項59】
対象における状態の治療、予防および／または進行遅延のための医薬の製造における、請求項１～４７のいずれか１項に記載の方法により精製または産生されるＩｇＧの使用。
【請求項60】
対象における状態の治療、予防および／または進行遅延のための使用のための、請求項４８～５８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項61】
対象における状態の治療、予防および／または進行を遅延させる方法であって、請求項４８～５８のいずれか１項に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む方法。
【請求項62】
状態が、原発性免疫不全症（ＰＩ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、および慢性免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）からなる群から選択される、請求項５９に記載の使用、または請求項６０に記載の医薬組成物、または請求項６１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願データ
本出願は、２０２１年７月２９日に出願され、名称が「Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｐｕｒｉｆｙｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ ａｎｄ ｕｓｅｓ ｔｈｅｒｅｏｆ」であるオーストラリア特許出願第２０２１９０２３３２号、２０２１年７月２９日に出願され、名称が「Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｐｕｒｉｆｙｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ ａｎｄ ｕｓｅｓ ｔｈｅｒｅｏｆ」である米国特許出願第６３／２２７，３２９号、および２０２２年５月３１日に出願され、名称が「Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｐｕｒｉｆｙｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ ａｎｄ ｕｓｅｓ ｔｈｅｒｅｏｆ」である米国特許出願第６３／３６５，５３０号からの優先権を主張する。
本出願は、２０２１年７月２９日に出願され、名称が「Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｐｕｒｉｆｙｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ ａｎｄ ｕｓｅｓ ｔｈｅｒｅｏｆ」であるオーストラリア特許出願第２０２１９０２３３２号、２０２１年７月２９日に出願され、名称が「Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｐｕｒｉｆｙｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ ａｎｄ ｕｓｅｓ ｔｈｅｒｅｏｆ」である米国特許出願第６３／２２７，３２９号、および２０２２年５月３１日に出願され、名称が「Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｐｕｒｉｆｙｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ ａｎｄ ｕｓｅｓ ｔｈｅｒｅｏｆ」である米国特許出願第６３／３６５，５３０号からの優先権を主張する。
【0002】
配列表
本出願は、電子形式の配列表とともに出願される。配列表の全内容は、本明細書中に参照によって組み入れられる。
本出願は、電子形式の配列表とともに出願される。配列表の全内容は、本明細書中に参照によって組み入れられる。
【0003】
本開示は、血漿から免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）およびアルブミンなどの他のタンパク質を精製する方法、ならびにその血漿タンパク質産物の処方物および使用に関する。
【背景技術】
【0004】
免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）は、血漿中で最も豊富なタンパク質の１つであり、例えば、毒素の中和、補体の活性化およびオプソニン化を担う。ヒト血漿から精製されたＩｇＧは、免疫不全患者における感染症の予防的予防、患者における抗体欠損の補充療法、ならびに患者における免疫不全、炎症性疾患および自己免疫疾患ならびに急性感染症に関連する状態の治療に使用される。血漿由来の免疫グロブリンは主要な血漿産物となっており、世界的に消費量が増加している。ヒト免疫グロブリン産物は、高免疫型（または「特異型」）と通常型（または「非特異型」）の双方が、主にＩｇＧで構成されている。高免疫型免疫グロブリン産物としては、Ｂ型肝炎、破傷風、水痘－帯状疱疹、および狂犬病免疫グロブリンが挙げられ；それぞれ特定の抗体を公知の濃度で含有する。正常型の多価ヒト免疫グロブリン（ＩＧ）の抗体特異性は、ドナー集団の抗体特異性を反映している。ＦＤＡ承認ＩＧのリストはｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｖａｃｃｉｎｅｓ－ｂｌｏｏｄ－ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ／ａｐｐｒｏｖｅｄ－ｂｌｏｏｄ－ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｉｍｍｕｎｅ－ｇｌｏｂｕｌｉｎｓに示される。現在、Ｐｒｉｖｉｇｅｎ（登録商標）（ＣＳＬ Ｂｅｈｒｉｎｇ）、Ｆｌｅｂｏｇａｍｍａ（登録商標）（Ｇｒｉｆｏｌｓ）、Ｇａｍｕｎｅｘ（登録商標）－Ｃ（Ｇｒｉｆｏｌｓ）、Ｇａｍｍａｇａｒｄ（登録商標）（Ｔａｋｅｄａ）、およびＯｃｔａｇａｍ（登録商標）（Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ）などの市販の静注用ＩＧ（ＩＶＩＧ）製品（通常５％または１０％（ｗ／ｖ）安定化溶液）がある。さらに最近では、皮下ＩＧ（ＳＣＩＧ）投与が利用可能になっている。市販のＳＣＩＧ製品（通常１０％、１６．５％または２０％（ｗ／ｖ）安定化溶液）としては、Ｈｉｚｅｎｔｒａ（登録商標）（ＣＳＬ Ｂｅｈｒｉｎｇ）、Ｇａｍｕｎｅｘ（登録商標）－Ｃ（Ｇｒｉｆｏｌｓ）、Ｘｅｍｂｉｆｙ（登録商標）（Ｇｒｉｆｏｌｓ）、Ｃｕｔａｑｕｉｇ（登録商標）（Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ）、およびＣｕｖｉｔｒｕ（登録商標）（Ｔａｋｅｄａ）が挙げられる。その他のＩＧ製品は筋肉内投与（ＩＭＩＧ）される。
【0005】
ＩＧ製品は主に、ＩｇＧサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の分布が規定されたＩｇＧを含有している。しかし、ＩＧ製品は様々な点：ＩｇＧ単量体、二量体および凝集体の濃度；ＩｇＡおよびＩｇＭの含量；安定化剤；添加剤；および不純物（第ＸＩ／ＸＩａ因子のようなプロテアーゼなど）のレベルで異なる可能性がある。ＩｇＡに関しては、ＩｇＡ欠損患者ではアナフィラキシー反応を引き起こす可能性があることが認識されている。このため、ＩＧ製品は低量のＩｇＡを含有することが望ましい。ＩｇＧを含有するＩＧ製品の属性は、それぞれの法域で登録されるために、地域および／または領域の薬局方の要件も満たさなければならない（例えば、非特許文献１）。
【0006】
血漿およびその画分からＩｇＧを精製する既存の方法としては、クロマトグラフィ（例えば、アフィニティークロマトグラフィ、陰イオン交換クロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、ＳＥ－ＨＰＬＣ）および非クロマトグラフィ（沈殿および液体抽出）精製法が挙げられる。既存の方法の主な障害は、ＩｇＧの精製にかかる高いコストと時間、同じ血漿または血漿画分から他のタンパク質（例えば、アルブミンおよび凝固因子）を共精製する要件、および産物が治療的使用に適した品質（例えば、純度および安定性）であることを保証する必要性である。例えば、アフィニティークロマトグラフィに使用されるアフィニティー樹脂は比較的結合容量が低く、平均的なサイズのバッチからのクロマトグラフィ精製は数百リットルの容量に達することがあり（対照的に血漿画分は通常数千リットルである）、使用される樹脂の量、クロマトグラフィカラムの取り扱いと充填のためのインフラストラクチャー、およびランニングコストに莫大な資本投資が必要となる。現在、血漿中に存在するＩｇＧの最大７０～７５％を、既存の技術を用いて血漿から回収し得る。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0007】
【非特許文献1】Ｈｕｍａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｆｏｒ Ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ、Ｐｈ． Ｅｕｒ． ｍｏｎｏｇｒａｐｈ ２７８８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
したがって、当業者には、血漿またはその画分からＩｇＧを精製する改良された方法が当技術分野では必要であることが明らかであろう。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本開示は、高収率（例えば、７５％以上）で血漿またはその画分からＩｇＧを精製する方法の本発明者らの同定に基づく。本方法はまた、ＩｇＧを血漿またはその画分から高純度（例えば、９５％以上）で回収することを可能にする。特に、本発明者らは、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を用いた連続的アフィニティークロマトグラフィ（例えば、シミュレーテッドムービングベッド（ＳＭＢ）クロマトグラフィ）の使用により、既存の製品と比較して、ＩｇＧサブクラス分布（すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）への影響を最小限に抑えながら、血漿から高収率および高純度のＩｇＧを精製できることを見出した。さらに、本発明者らは、特定の洗浄および再生緩衝液の使用により、本方法がさらに改善されることを見出した。本方法は、好都合なことに、より少量のクロマトグラフィ緩衝液を使用し、アフィニティー樹脂を複数回（少なくとも５０サイクル）再使用することを可能にし、血漿またはその画分からＩｇＧを精製するコストをさらに低減させる。
【0010】
したがって、本発明者らによる知見は、ＩｇＧ濃縮調製物を産生する方法の基礎を提供する。この知見はまた、ＩｇＧ濃縮調製物を含む医薬組成物、ならびに対象における状態（例えば、原発性免疫不全疾患、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、および慢性免疫性血小板減少性紫斑病）の治療、予防、および／または進行遅延のための組成物またはＩｇＧの使用の基礎を提供する。
【0011】
本開示は、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合することができるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を提供する。
【0012】
本開示はまた、アフィニティークロマトグラフィを用いて血漿またはその画分からＩｇＧを精製する方法であって、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂にＩｇＧを結合させること、およびＩｇＧを回収することを含む方法を提供する。
【0013】
本開示はさらに、アフィニティークロマトグラフィを用いて血漿またはその画分からＩｇＧ濃縮調製物を産生する方法であって、ＩｇＧを、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂に結合させること、およびＩｇＧを回収することを含む方法を提供する。
【0014】
本開示は、連続アフィニティークロマトグラフィを用いて血漿またはその画分からＩｇＧを精製する方法であって、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂にＩｇＧを結合させること、およびＩｇＧを回収することを含む方法を提供する。
【0015】
本開示はまた、連続アフィニティークロマトグラフィを用いて血漿またはその画分からＩｇＧ濃縮調製物を産生する方法であって、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合することができるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂にＩｇＧを結合させること、およびＩｇＧを回収することを含む方法を提供する。
【0016】
一例では、樹脂はラクダ由来の単一ドメイン［ＶＨＨ］抗体フラグメントを含むリガンドを含む。例えば、リガンドはＶＨＨ抗体フラグメントである。一例では、リガンドはＣＨ１ドメインを含まない。
【0017】
一例では、樹脂は架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスおよびアガロースベースのマトリクスからなる群から選択されるマトリクスを含む。例えば、マトリクスは架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスである。他の例では、マトリクスはアガロースベースのマトリクスである。
【0018】
一例では、樹脂はヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含み、ここで、リガンドは架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスにコンジュゲートしている。例えば、樹脂は、架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスにコンジュゲートしたＶＨＨ抗体フラグメントを含むリガンドを含む。
【0019】
一例では、樹脂はヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドおよびアガロースベースのマトリクスを含む。例えば、樹脂はアガロースベースのマトリクスにコンジュゲートしたＶＨＨ抗体フラグメントを含むリガンドを含む。
【0020】
一例では、樹脂は、配列番号１に記載のアミノ酸配列、または配列番号１に記載の配列と少なくとも５０％のアミノ酸同一性を含む配列を含むＶＨＨ抗原結合タンパク質を含む。一例では、ＶＨＨ抗原結合タンパク質は配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。一例では、ＶＨＨ抗原結合タンパク質は、配列番号１に記載の配列に対して少なくとも５０％のアミノ酸同一性を含む配列を含む。
【0021】
一例では、樹脂は、配列番号１に記載のアミノ酸配列または配列番号１に記載の配列に対して少なくとも５０％のアミノ酸同一性を含む配列を含むフレームワーク領域を含むＶＨＨ抗原結合タンパク質を含む。一例では、フレームワーク領域は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。他の例では、フレームワーク領域は、配列番号１に記載の配列に対して少なくとも５０％のアミノ酸同一性を含む配列を含む。
【0022】
一例では、樹脂は、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の順に作動可能に連結している４つのフレームワーク領域、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４、ならびに３つの相補性決定領域、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むアミノ酸配列を含むＶＨＨ抗原結合タンパク質を含み、ここで：
ａ）ＣＤＲ１は、配列番号２からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはアミノ酸残基の１つもしくは２つにおいて配列番号２と異なるアミノ酸配列を有する；
ｂ）ＣＤＲ２は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する；および
ｃ）ＣＤＲ３は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し；ここで、フレームワーク領域の各々は、配列番号１のいずれか１つのフレームワークアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸同一性を有し；
ここで、フレームワーク領域の各々は、配列番号１のフレームワークアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸同一性を有する。
ａ）ＣＤＲ１は、配列番号２からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはアミノ酸残基の１つもしくは２つにおいて配列番号２と異なるアミノ酸配列を有する；
ｂ）ＣＤＲ２は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する；および
ｃ）ＣＤＲ３は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し；ここで、フレームワーク領域の各々は、配列番号１のいずれか１つのフレームワークアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸同一性を有し；
ここで、フレームワーク領域の各々は、配列番号１のフレームワークアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸同一性を有する。
【0023】
一例では、樹脂は、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の順序で作動可能に連結している４つのフレームワーク領域、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４、ならびに３つの相補性決定領域、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むアミノ酸配列を含むＶＨＨ抗原結合タンパク質を含み、ここで；
ａ）ＣＤＲ１は、配列番号２からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはアミノ酸残基の１つもしくは２つにおいて配列番号２と異なるアミノ酸配列を有する；
ｂ）ＣＤＲ２は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する；および
ｃ）ＣＤＲ３は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し；ここで、フレームワーク領域の各々は、配列番号１のいずれか１つのフレームワークアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸同一性を有し、
ここで、フレームワーク領域の各々は、配列番号１のフレームワークアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸同一性を有し、そしてここで、抗原結合タンパク質は、ヒトＩｇＧ分子のＦｃドメインに特異的に結合し、マウス由来またはウシ由来のＩｇＧ分子には結合しない。
ａ）ＣＤＲ１は、配列番号２からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはアミノ酸残基の１つもしくは２つにおいて配列番号２と異なるアミノ酸配列を有する；
ｂ）ＣＤＲ２は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する；および
ｃ）ＣＤＲ３は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し；ここで、フレームワーク領域の各々は、配列番号１のいずれか１つのフレームワークアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸同一性を有し、
ここで、フレームワーク領域の各々は、配列番号１のフレームワークアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸同一性を有し、そしてここで、抗原結合タンパク質は、ヒトＩｇＧ分子のＦｃドメインに特異的に結合し、マウス由来またはウシ由来のＩｇＧ分子には結合しない。
【0024】
一例では、樹脂は、配列番号２からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはアミノ酸残基の１つもしくは２つにおいて配列番号２と異なるアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１を含むＶＨＨ抗原結合タンパク質を含む。
【0025】
一例では、樹脂は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ２を含むＶＨＨ抗原結合タンパク質を含む。
【0026】
一例では、樹脂は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ３を含むＶＨＨ抗原結合タンパク質を含む。
【0027】
一例では、本方法は、洗浄緩衝液で樹脂を洗浄することをさらに含む。例えば、本方法は、ＩｇＧを回収する前に、洗浄緩衝液で樹脂を洗浄することを含む。例えば、本方法は、結合したＩｇＧを回収する前に、洗浄緩衝液で樹脂を洗浄することを含む。
【0028】
一例では、本方法は、ＩｇＧを回収する一部として、洗浄緩衝液で樹脂を洗浄することをさらに含む。例えば、本方法は、結合したＩｇＧを回収する一部として、洗浄緩衝液で樹脂を洗浄することをさらに含む。このような方法では、洗浄によって樹脂から未結合または弱結合ＩｇＧが除去される可能性がある。このような未結合または弱結合ＩｇＧは、結合ＩｇＧを回収する前に廃棄される可能性がある。あるいは、未結合または弱結合ＩｇＧが回収される。一例では、結合、未結合、および弱結合のＩｇＧが回収される。一例では、結合および弱結合ＩｇＧが回収される。他の例では、未結合および弱結合ＩｇＧは回収されない。
【0029】
一例では、本方法はＩｇＧを回収する前に洗浄緩衝液で樹脂を洗浄することを含む。例えば、本方法は、洗浄緩衝液で樹脂から不純物を洗浄し、ＩｇＧを回収することを含む。一例では、本方法は、ＩｇＧを回収し、フロースルーを回収する前に洗浄緩衝液で樹脂を洗浄することを含む。一例では、フロースルーは不純物を含む。一例では、本方法は、ＩｇＧを回収し、フロースルー中の不純物を回収する前に、洗浄緩衝液で樹脂を洗浄することを含む。例えば、本方法は、洗浄緩衝液で樹脂から不純物を回収することを含む。一例では、不純物とＩｇＧが回収される。例えば、不純物とＩｇＧは共に回収される。他の例では、不純物とＩｇＧは別々に回収される。
【0030】
一例では、本方法は洗浄画分を回収することを含む。例えば、本方法は、ＩｇＧを回収する前に洗浄画分を回収することを含む。一例では、洗浄画分は不純物を含む。一例では、洗浄画分はＩｇＧを含む。例えば、洗浄画分は未結合のＩｇＧを含む。一例では、洗浄画分は弱結合ＩｇＧを含む。他の例では、洗浄画分は未結合および弱結合ＩｇＧを含む。一例では、洗浄画分は不純物およびＩｇＧを含む。
【0031】
一例では、不純物は、アルブミン（α－グロブリンおよび／またはβ－グロブリン）、血漿脂質、血漿タンパク質、プロテアーゼ（例えば、セリンプロテアーゼ、カリクレイン、プラスミンおよびＦＸａ）、セリンプロテアーゼ阻害因子（例えば、Ｃ１阻害因子、α－１－抗トリプシンおよび抗トロンビン）ＩｇＡおよびＩｇＭ、第ＶＩＩＩ因子、フィブリノゲン、フォンウィルブランド因子、活性化凝固因子（例えば、ＦＸａ、ＦＩＸａ、ＦＶＩＩａおよびトロンビン）、第ＸＩＩＩ因子、接触系因子（例えば、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩａおよび血漿カリクレイン）、ＰＫＡ、第ＩＸ因子、プロトロンビン複合体、Ｃ１エステラーゼ阻害因子、プロテインＣ、抗トロンビンＩＩＩ、ＲｈＤ免疫グロブリンおよび／または血小板膜微粒子を含む。
【0032】
一例では、血漿タンパク質産物は、本明細書に記載の方法を用いて産生される。
【0033】
一例では、血漿タンパク質産物はＩｇＧ濃縮調製物である。他の例では、血漿タンパク質産物は精製ＩｇＧを含む。
【0034】
一例では、血漿タンパク質産物は、結合、非結合および／または弱結合ＩｇＧを用いて産生される。例えば、結合、非結合および／または弱結合ＩｇＧを用いて血漿タンパク質産物が産生される。一例では、血漿タンパク質産物は結合ＩｇＧを用いて産生される。例えば、結合ＩｇＧを用いて血漿タンパク質産物を産生される。一例では、血漿タンパク質産物は非結合ＩｇＧを用いて産生される。例えば、非結合ＩｇＧを用いて血漿タンパク質産物が産生される。一例では、血漿タンパク質産物は弱結合ＩｇＧを用いて産生される。例えば、弱結合ＩｇＧを用いて血漿タンパク質産物が産生される。一例では、血漿タンパク質産物は、結合および弱結合ＩｇＧを用いて産生される。例えば、結合および弱結合ＩｇＧを用いて血漿タンパク質産物が産生される。一例では、血漿タンパク質産物は、非結合および弱結合ＩｇＧを用いて産生される。例えば、非結合および弱結合ＩｇＧを用いて血漿タンパク質産物が産生される。一例では、血漿タンパク質産物は、結合および非結合ＩｇＧを用いて産生される。例えば、結合および非結合ＩｇＧを用いて血漿タンパク質産物が産生される。一例では、血漿タンパク質産物は、結合、非結合および弱結合ＩｇＧを用いて産生される。例えば、結合、非結合および弱結合ＩｇＧを用いて血漿タンパク質産物が産生される。
【0035】
一例では、血漿タンパク質産物は不純物を用いて産生される。例えば、不純物は回収され、血漿タンパク質産物を産生するために使用される。
【0036】
一例では、血漿タンパク質産物は、アルブミン、セリンプロテアーゼ、プラスミン、ＦＸａ、α－１－抗トリプシン、ＩｇＡ、ＩｇＭ、第ＶＩＩＩ因子、フィブリノゲン、フォンウィルブランド因子、活性化凝固因子、第ＸＩＩＩ因子、接触系因子、ＰＫＡ、第ＩＸ因子、プロトロンビン複合体、Ｃ１エステラーゼ阻害因子、プロテインＣ、抗トロンビンＩＩＩ、ＲｈＤ免疫グロブリンタンパク質産物からなる群から選択される。
【0037】
一例では、活性化凝固因子は、ＦＸａ、ＦＩＸａ、ＦＶＩＩａおよびトロンビンからなる群から選択される。例えば、活性化凝固因子はＦＸａである。例えば、活性化凝固因子はＦＩＸａである。例えば、活性化血液凝固因子はＦＶＩＩａである。例えば、活性化凝固因子はトロンビンである。
【0038】
一例では、接触系因子タンパク質は、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩａおよびカリクレインからなる群から選択される。例えば、接触系因子タンパク質はＦＸＩａである。例えば、接触系因子タンパク質はＦＸＩＩである。例えば、接触系因子タンパク質はカリクレインである。
【0039】
一例では、血漿タンパク質産物はアルブミンタンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物はセリンプロテアーゼタンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物はプラスミンタンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物はＦＸａタンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物はα－１－抗トリプシンタンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物はＩｇＡタンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物はＩｇＭタンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物は第ＶＩＩＩ因子タンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物はフィブリノゲンタンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物はフォンヴィレブランド因子タンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物は活性化凝固因子タンパク質産物である。例えば、血漿タンパク質産物はＦＸａタンパク質産物である。例えば、血漿タンパク質産物はＦＩＸａタンパク質産物である。例えば、血漿タンパク質産物はＦＶＩＩａタンパク質産物である。例えば、血漿タンパク質産物はトロンビンタンパク質産物である。
【0040】
一例では、血漿タンパク質産物は第ＸＩＩＩ因子タンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物は接触系因子タンパク質産物である。例えば、血漿タンパク質産物はＦＸＩａタンパク質産物である。例えば、血漿タンパク質産物はＦＸＩＩタンパク質産物である。例えば、血漿タンパク質産物はカリクレイン血漿産物である。一例では、血漿タンパク質産物はＰＫＡタンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物は第ＩＸ因子タンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物はプロトロンビン複合体タンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物はＣ１エステラーゼ阻害因子タンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物はプロテインＣタンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物は抗トロンビンＩＩＩタンパク質産物である。一例では、血漿タンパク質産物はＲｈＤ免疫グロブリンタンパク質産物である。
【0041】
一例では、洗浄緩衝液は、５～９のｐＨおよび２５℃で６．８～８．５の解離定数（ｐＫａ）を有する。一例では、洗浄緩衝液は、５～１０のｐＨおよび２５℃で６．８～８．５の解離定数（ｐＫａ）を有する。
【0042】
一例では、洗浄緩衝液は５～１０のｐＨを有する。一例では、洗浄緩衝液は５～９のｐＨを有する。例えば、洗浄緩衝液は、ｐＨが５、または５．１、または５．２、または５．３、または５．４、または５．５、または５．６、または５．７、または５．８、または５．９、または６．０、または６．１、または６．２、または６．３、または６．４、または６．５、または６．６、または６．７、または６．８、または６．９、または７、または７．１、または７．２、または７．３、または７．４、または７．５、または７．６、または７．７、または７．８、または７．９、または８．０、または８．１、または８．２、または８．３、または８．４、または８．５、または８．６、または８．７、または８．８、または８．９、または９．０、または９．１、または９．２、または９．３、または９．４、または９．５、または９．６、または９．７、または９．８、または９．９、または１０．０である。
【0043】
一例では、洗浄緩衝液は、７～１０のｐＨおよび２５℃で６．８～８．５の解離定数（ｐＫａ）を有する。
【0044】
一例では、洗浄緩衝液は、７～８のｐＨおよび２５℃で６．８～８．５の解離定数（ｐＫａ）を有する。
【0045】
一例では、洗浄緩衝液は７～８のｐＨを有する。例えば、洗浄緩衝液は７、または７．１、または７．２、または７．３、または７．４、または７．５、または７．６、または７．７、または７．８、または７．９、または８．０のｐＨを有する。一例では、洗浄緩衝液は７．４のｐＨを有する。
【0046】
一例では、洗浄緩衝液は７．４～７．８のｐＨを有する。例えば、洗浄緩衝液は７．４、または７．５、または７．６、または７．７、または７．８のｐＨを有する。
【0047】
一例では、洗浄緩衝液は２５℃で６．８～８．５のｐＫａを有する。例えば、洗浄緩衝液は２５℃で６．８、または６．９、または７．０、または７．１、または７．２、または７．３、または７．４、または７．５、または７．６、または７．７、または７．８、または７．９、または８．０、または８．１、または８．２、または８．３、または８．４、または８．５のｐＫａを有する。
【0048】
一例では、洗浄緩衝液は２５℃で７．２１のｐＫａを有する。
【0049】
一例では、洗浄緩衝液は７．４のｐＨおよび２５℃で７．２１の解離定数（ｐＫａ）を有する。
【0050】
一例では、洗浄緩衝液は、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸ナトリウム、イミダゾール、Ｔｒｉｓ、グリシルグリシン、３－モルホリノプロパン－１－スルホン酸（ＭＯＰＳ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、２－［（２－ヒドロキシ－１，１－ビス（ヒドロキシメチル）エチル）アミノ］エタンスルホン酸（ＴＥＳ）、ビス［（２－ヒドロキシエチル）アミノ］酢酸（Ｂｉｃｉｎｅ）、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、亜硫酸、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンプロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、Ｎ－（ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、４－（Ｎ－モルホリノ）ブタンスルホン酸（ＭＯＢＳ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］－３－アミノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、Ｔｒｉｃｉｎｅ、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）およびその組合せを含む。例えば、洗浄緩衝液は、リン酸二水素ナトリウム緩衝液である。例えば、洗浄緩衝液はイミダゾール緩衝液である。他の例では、洗浄緩衝液はＴｒｉｓ緩衝液である。さらなる例では、洗浄緩衝液はグリシルグリシン緩衝液である。一例では、洗浄緩衝液はＭＯＰＳ緩衝液である。他の例では、洗浄緩衝液はＰＩＰＥＳ緩衝液である。さらなる例では、洗浄緩衝液はＴＥＳ緩衝液である。一例では、洗浄緩衝液はＢｉｃｉｎｅ緩衝液である。他の例では、洗浄緩衝液は亜硫酸緩衝液である。さらなる例では、洗浄緩衝液はＥＰＰＳ緩衝液である。一例では、洗浄緩衝液はＨＥＰＰＳＯ緩衝液である。他の例では、洗浄緩衝液はＭＯＢＳ緩衝液である。さらなる例では、洗浄緩衝液はＰＯＰＳＯ緩衝液である。一例では、洗浄緩衝液はＴＡＰＳＯ緩衝液である。他の例では、洗浄緩衝液はＴｒｉｃｉｎｅ緩衝液である。さらなる例では、洗浄緩衝液はＴＥＡ緩衝液である。一例では、洗浄緩衝液はクエン酸ナトリウム緩衝液である。
【0051】
一例では、洗浄緩衝液の緩衝剤は５ｍＭ～２００ｍＭの濃度である。例えば、洗浄緩衝液の緩衝剤は、５ｍＭ～１０ｍＭ、または５ｍＭ～２０ｍＭ、または５ｍＭ～５０ｍＭ、または５０ｍＭ～１００ｍＭ、または１００ｍＭ～１５０ｍＭ、または１５０ｍＭ～２００ｍＭの濃度である。他の例では、洗浄緩衝液の緩衝剤は、５ｍＭ、または１０ｍＭ、または１５ｍＭ、または２０ｍＭ、または２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭ、または５５ｍＭ、または６０ｍＭ、または６５ｍＭ、または７０ｍＭ、または７５ｍＭ、または８０ｍＭ、または８５ｍＭ、または９０ｍＭ、または９５ｍＭ、または１００ｍＭ、または１０５ｍＭ、または１１０ｍＭ、または１１５ｍＭ、または１２０ｍＭ、または１２５ｍＭ、または１３０ｍＭ、または１３５ｍＭ、または１４０ｍＭ、または１４５ｍＭ、または１５０ｍＭ、または１５５ｍＭ、または１６０ｍＭ、または１６５ｍＭ、または１７０ｍＭ、または１７５ｍＭ、または１８０ｍＭ、または１８５ｍＭ、または１９０ｍＭ、または１９５ｍＭ、または２００ｍＭの濃度である。
【0052】
一例では、洗浄緩衝液の緩衝剤は５ｍＭの濃度である。
【0053】
一例では、洗浄緩衝液の緩衝剤は２０ｍＭの濃度である。
【0054】
一例では、洗浄緩衝液の緩衝剤は５０ｍＭの濃度である。
【0055】
一例では、洗浄緩衝液の緩衝剤は１００ｍＭの濃度である。
【0056】
一例では、洗浄緩衝液の緩衝剤は１５０ｍＭの濃度である。
【0057】
一例では、洗浄緩衝液の緩衝剤は２００ｍＭの濃度である。
【0058】
一例では、洗浄緩衝液は塩化ナトリウムをさらに含む。例えば、洗浄緩衝液は、最大１０００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムをさらに含む。一例では、塩化ナトリウムは５ｍＭ～５０ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは、５ｍＭ、または１０ｍＭ、または１５ｍＭ、または２０ｍＭ、または２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭの濃度である。他の例では、塩化ナトリウムは５０ｍＭ～１００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは５５ｍＭ、または６０ｍＭ、または６５ｍＭ、または７０ｍＭ、または７５ｍＭ、または８０ｍＭ、または８５ｍＭ、または９０ｍＭ、または９５ｍＭ、または１００ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは１００～２００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは、１０５ｍＭ、または１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、または１２０ｍＭ、または１２５ｍＭ、または１３０ｍＭ、または１３５ｍＭ、または１４０ｍＭ、または１４５ｍＭ、または１５０ｍＭ、または１５５ｍＭ、または１６０ｍＭ、または１６５ｍＭ、または１７０ｍＭ、または１７５ｍＭ、または１８０ｍＭ、または１８５ｍＭ、または１９０ｍＭ、または１９５ｍＭ、または２００ｍＭの濃度である。他の例では、塩化ナトリウムは２００～３００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは２００ｍＭ、または２２５ｍＭ、または２５０ｍＭ、または２７５ｍＭ、または３００ｍＭの濃度である。さらなる例では、塩化ナトリウムは３００ｍＭ～４００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは３００ｍＭ、または３２５ｍＭ、または３５０ｍＭ、または３７５ｍＭ、または４００ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは４００ｍＭ～５００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは４００ｍＭ、または４２５ｍＭ、または４５０ｍＭ、または４７５ｍＭ、または４００ｍＭの濃度である。他の例では、塩化ナトリウムは５００ｍＭ～１０００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは５００ｍＭ、または５５０ｍＭ、または６００ｍＭ、または６５０ｍＭ、または７００ｍＭ、または７５０ｍＭ、または８００ｍＭ、または８５０ｍＭ、または９００ｍＭ、または９５０ｍＭ、または１０００ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは１０００ｍＭ未満の濃度である。例えば、塩化ナトリウムは５００ｍＭの濃度である。
【0059】
一例では、洗浄緩衝液は塩化ナトリウムをさらに含み、ここで、塩化ナトリウムは１４５ｍＭの濃度である。
【0060】
一例では、洗浄緩衝液は塩化ナトリウムをさらに含み、ここで、塩化ナトリウムは５００ｍＭの濃度である。
【0061】
一例では、洗浄緩衝液は２０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム、１４５ｍＭの塩化ナトリウムを含み、ｐＨが７．４である。
【0062】
一例では、洗浄緩衝液は２０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム、５００ｍＭ塩化ナトリウムを含み、ｐＨが７．４である。
【0063】
一例では、洗浄緩衝液は二価塩をさらに含む。例えば、洗浄緩衝液は、最大１０００ｍＭの濃度の二価塩をさらに含む。一例では、二価塩は５ｍＭ～５０ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は５ｍＭ、または１０ｍＭ、または１５ｍＭ、または２０ｍＭ、または２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭの濃度である。他の例では、二価塩は５０ｍＭ～１００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は５５ｍＭ、または６０ｍＭ、または６５ｍＭ、または７０ｍＭ、または７５ｍＭ、または８０ｍＭ、または８５ｍＭ、または９０ｍＭ、または９５ｍＭ、または１００ｍＭの濃度である。一例では、二価塩は１００～２００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は、１０５ｍＭ、または１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、または１２０ｍＭ、または１２５ｍＭ、または１３０ｍＭ、または１３５ｍＭ、または１４０ｍＭ、または１４５ｍＭ、または１５０ｍＭ、または１５５ｍＭ、または１６０ｍＭ、または１６５ｍＭ、または１７０ｍＭ、または１７５ｍＭ、または１８０ｍＭ、または１８５ｍＭ、または１９０ｍＭ、または１９５ｍＭ、または２００ｍＭの濃度である。他の例では、二価塩は２００ｍＭ～３００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は２００ｍＭ、または２２５ｍＭ、または２５０ｍＭ、または２７５ｍＭ、または３００ｍＭの濃度である。さらなる例では、二価塩は３００ｍＭ～４００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は３００ｍＭ、または３２５ｍＭ、または３５０ｍＭ、または３７５ｍＭ、または４００ｍＭの濃度である。一例では、二価塩は４００ｍＭ～５００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は４００ｍＭ、または４２５ｍＭ、または４５０ｍＭ、または４７５ｍＭ、または４００ｍＭの濃度である。他の例では、二価塩は５００ｍＭ～１０００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は５００ｍＭ、または５５０ｍＭ、または６００ｍＭ、または６５０ｍＭ、または７００ｍＭ、または７５０ｍＭ、または８００ｍＭ、または８５０ｍＭ、または９００ｍＭ、または９５０ｍＭ、または１０００ｍＭの濃度である。一例では、二価塩は５００ｍＭの濃度である。一例では、二価塩は１０００ｍＭ未満の濃度である。
【0064】
一例では、洗浄緩衝液は、最大１０００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムおよび／または二価塩を含む。例えば、洗浄緩衝液は、約５００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムおよび／または二価塩を含む。
【0065】
一例では、二価塩は、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、塩化バリウム、塩化銅（ＩＩ）、塩化ニッケル、塩化マンガン、およびその組合せからなる群から選択される。例えば、二価塩は塩化マグネシウムである。一例では、二価塩は塩化カルシウムである。他の例では、二価塩は塩化バリウムである。さらなる例では、二価塩は塩化銅である。一例では、二価塩は塩化ニッケルである。他の例では、二価塩は塩化マンガンである。
【0066】
一例では、本方法は、溶出緩衝液で樹脂からＩｇＧを溶出することによりＩｇＧを回収することを含む。例えば、本方法は、結合ＩｇＧを溶出緩衝液で樹脂から溶出することにより、結合ＩｇＧを回収することを含む。
【0067】
一例では、溶出緩衝液は３～５のｐＨを有する。例えば、溶出緩衝液は３、または３．１、または３．２、または３．３、または３．４、または３．５、または３．６、または３．７、または３．８、または３．９、または４、または４．１、または４．２、または４．３、または４．４、または４．５、または４．６、または４．７、または４．８、または４．９、または５のｐＨを有する。
【0068】
一例では、溶出緩衝液は４のｐＨを有する。
【0069】
一例では、溶出緩衝液は、酢酸ナトリウム、酢酸およびクエン酸ナトリウムからなる群から選択される緩衝剤を含む。一例では、溶出緩衝液は、酢酸ナトリウム、酢酸、クエン酸ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウムを含む。一例では、溶出緩衝液は、リン酸ナトリウム緩衝液および／または酢酸緩衝液であるか、またはこれらを含む。例えば、溶出緩衝液は酢酸ナトリウムを含む。例えば、溶出緩衝液は酢酸を含む。例えば、溶出緩衝液はクエン酸ナトリウムを含む。例えば、溶出緩衝液はリン酸二水素ナトリウムを含む。
【0070】
一例では、溶出緩衝液の緩衝剤は５ｍＭ～２００ｍＭの濃度である。例えば、溶出緩衝液の緩衝剤は、５ｍＭ～１０ｍＭ、または５ｍＭ～２０ｍＭ、または５ｍＭ～５０ｍＭ、または５０ｍＭ～１００ｍＭ、または１００ｍＭ～１５０ｍＭ、または１５０ｍＭ～２００ｍＭの濃度である。例えば、洗浄緩衝液の緩衝剤は、５ｍＭ、または１０ｍＭ、または１５ｍＭ、または２０ｍＭ、または２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭ、または５５ｍＭ、または６０ｍＭ、または６５ｍＭ、または７０ｍＭ、または７５ｍＭ、または８０ｍＭ、または８５ｍＭ、または９０ｍＭ、または９５ｍＭ、または１００ｍＭ、または１０５ｍＭ、または１１０ｍＭ、または１１５ｍＭ、または１２０ｍＭ、または１２５ｍＭ、または１３０ｍＭ、または１３５ｍＭ、または１４０ｍＭ、または１４５ｍＭ、または１５０ｍＭ、または１５５ｍＭ、または１６０ｍＭ、または１６５ｍＭ、または１７０ｍＭ、または１７５ｍＭ、または１８０ｍＭ、または１８５ｍＭ、または１９０ｍＭ、または１９５ｍＭ、または２００ｍＭの濃度である。
【0071】
一例では、溶出緩衝液の緩衝剤は５ｍＭの濃度である。
【0072】
一例では、溶出緩衝液の緩衝剤は２０ｍＭの濃度である。
【0073】
一例では、溶出緩衝液の緩衝剤は５０ｍＭの濃度である。
【0074】
一例では、溶出緩衝液の緩衝剤は１００ｍＭの濃度である。
【0075】
一例では、溶出緩衝液の緩衝剤は１５０ｍＭの濃度である。
【0076】
一例では、溶出緩衝液の緩衝剤は２００ｍＭの濃度である。
【0077】
一例では、溶出緩衝液は酢酸緩衝液であるか、またはこれを含む。例えば、酢酸ナトリウム緩衝液である。
【0078】
一例では、溶出緩衝液は、リン酸緩衝液および／または酢酸緩衝液であるか、またはこれらを含む。例えば、溶出緩衝液は、リン酸二水素ナトリウムおよび酢酸ナトリウム緩衝液であるか、またはこれらを含む。一例では、溶出緩衝液は、リン酸緩衝液であるか、またはリン酸緩衝液を含む。
【0079】
一例では、溶出緩衝液は、ｐＨが３～５の酢酸緩衝液であるか、またはこれを含む。例えば、溶出緩衝液は、ｐＨが３、または３．１、または３．２、または３．３、または３．４、または３．５、または３．６、または３．７、または３．８、または３．９、または４、または４．１、または４．２、または４．３、または４．４、または４．５、または４．６、または４．７、または４．８、または４．９、または５の酢酸緩衝液であるか、またはこれを含む。例えば、溶出緩衝液はｐＨが４の酢酸緩衝液であるか、またはこれを含む。例えば、溶出緩衝液はｐＨが４の酢酸ナトリウム緩衝液であるか、またはこれを含む。
【0080】
一例では、溶出緩衝液は、ｐＨが３～５のリン酸緩衝液および／または酢酸緩衝液であるか、またはこれらを含む。例えば、溶出緩衝液は、ｐＨが３、または３．１、または３．２、または３．３、または３．４、または３．５、または３．６、または３．７、または３．８、または３．９、または４、または４．１、または４．２、または４．３、または４．４、または４．５、または４．６、または４．７、または４．８、または４．９、または５のリン酸緩衝液および／または酢酸緩衝液であるか、またはこれらを含む。一例では、溶出緩衝液は、ｐＨが４のリン酸緩衝液および／または酢酸緩衝液であるか、またはこれらを含む。
【0081】
一例では、溶出緩衝液は、ｐＨが３～５のリン酸緩衝液であるか、またはこれを含む。例えば、溶出緩衝液は、ｐＨが３、または３．１、または３．２、または３．３、または３．４、または３．５、または３．６、または３．７、または３．８、または３．９、または４、または４．１、または４．２、または４．３、または４．４、または４．５、または４．６、または４．７、または４．８、または４．９、または５のリン酸緩衝液であるか、またはこれを含む。一例では、溶出緩衝液はｐＨが４のリン酸緩衝液であるか、またはこれを含む。
【0082】
一例では、溶出緩衝液は、１０ｍＭ、または１１ｍＭ、または１２ｍＭ、または１３ｍＭ、または１４ｍＭ、または１５ｍＭ、または１６ｍＭ、または１７ｍＭ、または１８ｍＭ、または１９ｍＭ、または２０ｍＭのリン酸緩衝液および／または酢酸緩衝液を含む。
【0083】
一例では、溶出緩衝液は、１０ｍＭ、または１１ｍＭ、または１２ｍＭ、または１３ｍＭ、または１４ｍＭ、または１５ｍＭ、または１６ｍＭ、または１７ｍＭ、または１８ｍＭ、または１９ｍＭ、または２０ｍＭの酢酸緩衝液を含む。例えば、溶出緩衝液は２０ｍＭの酢酸緩衝液を含む。一例では、溶出緩衝液は２０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液を含む。
【0084】
一例では、溶出緩衝液は、１０ｍＭ、または１１ｍＭ、または１２ｍＭ、または１３ｍＭ、または１４ｍＭ、または１５ｍＭ、または１６ｍＭ、または１７ｍＭ、または１８ｍＭ、または１９ｍＭ、または２０ｍＭのリン酸緩衝液を含む。例えば、溶出緩衝液は２０ｍＭのリン酸緩衝液を含む。一例では、溶出緩衝液は２０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液を含む。
【0085】
一例では、溶出緩衝液はｐＨが４の２０ｍＭ酢酸ナトリウムを含む。
【0086】
一例では、溶出緩衝液は塩化ナトリウムをさらに含む。例えば、溶出緩衝液は、最大１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムをさらに含む。一例では、塩化ナトリウムは５０～１００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、または５０ｍＭの濃度である。他の例では、塩化ナトリウムは１００～１５０ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、または１５０ｍＭの濃度である。
【0087】
一例では、溶出緩衝液は、二価塩をさらに含む。例えば、溶出緩衝液は、最大１５０ｍＭの濃度の二価塩をさらに含む。一例では、二価塩は５０～１００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、または５０ｍＭの濃度である。他の例では、二価塩の濃度は１００～１５０ｍＭである。例えば、二価塩は５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、または１５０ｍＭの濃度である。
【0088】
一例では、二価塩は、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、塩化バリウム、塩化銅（ＩＩ）、塩化ニッケル、塩化マンガン、およびその組合せからなる群から選択される。例えば、二価塩は塩化マグネシウムである。例えば、二価塩は塩化カルシウムである。一例では、二価塩は塩化バリウムである。他の例では、二価塩は塩化銅である。さらなる例では、二価塩は塩化ニッケルである。一例では、二価塩は塩化マンガンである。
【0089】
一例では、本方法は、樹脂を平衡化緩衝液で平衡化することをさらに含む。例えば、血漿またはＩｇＧを含むその画分を樹脂に負荷する前に樹脂を平衡化する。
【0090】
一例では、本方法は、５～９のｐＨを有する平衡化緩衝液で樹脂を平衡化することをさらに含む。例えば、平衡化緩衝液は、５、または５．１、または５．２、または５．３、または５．４、または５．５、または５．６、または５．７、または５．８、または５．９、または６．０、または６．１、または６．２、または６．３、または６．４、または６．５、または６．６、または６．７、または６．８、または６．９、または７、または７．１、または７．２、または７．３、または７．４、または７．５、または７．６、または７．７、または７．８、または７．９、または８．０、または８．１、または８．２、または８．３、または８．４、または８．５、または８．６、または８．７、または８．８、または８．９、または９．０のｐＨを有する。
【0091】
一例では、本方法は、７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で樹脂を平衡化することをさらに含む。例えば、平衡化緩衝液はｐＨが７、または７．１、または７．２、または７．３、または７．４、または７．５、または７．６、または７．７、または７．８、または７．９、または８である。一例では、平衡化緩衝液はｐＨが７．４である。
【0092】
一例では、平衡化緩衝液は、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸ナトリウム、イミダゾール、Ｔｒｉｓ、グリシルグリシン、ＭＯＰＳ、ＰＩＰＥＳ、ＴＥＳ、Ｂｉｃｉｎｅ、ＨＥＰＥＳ、ＥＰＰＳ、ＨＥＰＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＰＯＰＳＯ、ＴＡＰＳＯ、Ｔｒｉｃｉｎｅ、ＴＥＡおよびその組合せからなる群から選択される緩衝剤を含む。例えば、平衡化緩衝液は、リン酸二水素ナトリウム緩衝液である。他の例では、平衡化緩衝液はクエン酸ナトリウム緩衝液である。さらなる例では、平衡化緩衝液はイミダゾール緩衝液である。一例では、平衡化緩衝液はＴｒｉｓ緩衝液である。他の例では、平衡化緩衝液はグリシルグリシン緩衝液である。さらなる例では、平衡化緩衝液はＭＯＰＳ緩衝液である。一例では、平衡化緩衝液はＰＩＰＥＳ緩衝液である。他の例では、平衡化緩衝液はＴＥＳ緩衝液である。さらなる例では、平衡化緩衝液はＢｉｃｉｎｅ緩衝液である。一例では、平衡化緩衝液は亜硫酸緩衝液である。他の例では、平衡化緩衝液はＥＰＰＳ緩衝液である。さらなる例では、平衡化緩衝液はＨＥＰＰＳＯ緩衝液である。一例では、平衡化緩衝液はＭＯＢＳ緩衝液である。他の例では、平衡化緩衝液はＰＯＰＳＯ緩衝液である。さらなる例では、平衡化緩衝液はＴＡＰＳＯ緩衝液である。一例では、平衡化緩衝液はＴｒｉｃｉｎｅ緩衝液である。他の例では、平衡化緩衝剤はＴＥＡ緩衝液である。
【0093】
一例では、平衡化緩衝液の緩衝剤は、５ｍＭ～２００ｍＭの濃度である。一例では、平衡化緩衝液の緩衝剤は、５ｍＭ～５０ｍＭの濃度、例えば、５ｍＭ、または１０ｍＭ、または１５ｍＭ、または２０ｍＭ、または２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭの濃度である。他の例では、平衡化緩衝液の緩衝剤は、５０ｍＭ～１００ｍＭ、例えば、５５ｍＭ、または６０ｍＭ、または６５ｍＭ、または７０ｍＭ、または７５ｍＭ、または８０ｍＭ、または８５ｍＭ、または９０ｍＭ、または９５ｍＭ、または１００ｍＭの濃度である。さらなる例では、平衡化緩衝液は１００ｍＭ～１５０ｍＭの濃度、例えば１０５ｍＭ、または１１０ｍＭ、または１１５ｍＭ、または１２０ｍＭ、または１２５ｍＭ、または１３０ｍＭ、または１３５ｍＭ、または１４０ｍＭ、または１４５ｍＭ、または１５０ｍＭである。一例では、平衡化緩衝液は１５０ｍＭ～２００ｍＭの濃度、例えば１５５ｍＭ、または１６０ｍＭ、または１６５ｍＭ、または１７０ｍＭ、または１７５ｍＭ、または１８０ｍＭ、または１８５ｍＭ、または１９０ｍＭ、または１９５ｍＭ、または２００ｍＭである。
【0094】
一例では、平衡化緩衝液の緩衝剤は５ｍＭの濃度である。
【0095】
一例では、平衡化緩衝液の緩衝剤は２０ｍＭの濃度である。
【0096】
一例では、平衡化緩衝液の緩衝剤は５０ｍＭの濃度である。
【0097】
一例では、平衡化緩衝液の緩衝剤は１００ｍＭの濃度である。
【0098】
一例では、平衡化緩衝液の緩衝剤は１５０ｍＭの濃度である。
【0099】
一例では、平衡化緩衝液の緩衝剤は２００ｍＭの濃度である。
【0100】
一例では、平衡化緩衝液は塩化ナトリウムをさらに含む。例えば、平衡化緩衝液は、最大１０００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムをさらに含む。一例では、塩化ナトリウムは５ｍＭ～５０ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは、５ｍＭ、または１０ｍＭ、または１５ｍＭ、または２０ｍＭ、または２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭの濃度である。他の例では、塩化ナトリウムは５０ｍＭ～１００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは５５ｍＭ、または６０ｍＭ、または６５ｍＭ、または７０ｍＭ、または７５ｍＭ、または８０ｍＭ、または８５ｍＭ、または９０ｍＭ、または９５ｍＭ、または１００ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは１００～２００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは、１０５ｍＭ、または１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、または１２０ｍＭ、または１２５ｍＭ、または１３０ｍＭ、または１３５ｍＭ、または１４０ｍＭ、または１４５ｍＭ、または１５０ｍＭ、または１５５ｍＭ、または１６０ｍＭ、または１６５ｍＭ、または１７０ｍＭ、または１７５ｍＭ、または１８０ｍＭ、または１８５ｍＭ、または１９０ｍＭ、または１９５ｍＭ、または２００ｍＭの濃度である。他の例では、塩化ナトリウムは２００～３００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは２００ｍＭ、または２２５ｍＭ、または２５０ｍＭ、または２７５ｍＭ、または３００ｍＭの濃度である。さらなる例では、塩化ナトリウムは３００ｍＭ～４００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは３００ｍＭ、または３２５ｍＭ、または３５０ｍＭ、または３７５ｍＭ、または４００ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは４００ｍＭ～５００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは４００ｍＭ、または４２５ｍＭ、または４５０ｍＭ、または４７５ｍＭ、または４００ｍＭの濃度である。他の例では、塩化ナトリウムは５００ｍＭ～１０００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは５００ｍＭ、または５５０ｍＭ、または６００ｍＭ、または６５０ｍＭ、または７００ｍＭ、または７５０ｍＭ、または８００ｍＭ、または８５０ｍＭ、または９００ｍＭ、または９５０ｍＭ、または１０００ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは１０００ｍＭ未満の濃度である。例えば、塩化ナトリウムは５００ｍＭの濃度である。
【0101】
一例では、平衡化緩衝液は塩化ナトリウムをさらに含み、ここで、塩化ナトリウムは１４５ｍＭの濃度である。
【0102】
一例では、平衡化緩衝液は塩化ナトリウムをさらに含み、ここで、塩化ナトリウムは５００ｍＭの濃度である。
【0103】
一例では、平衡化緩衝液は、二価塩をさらに含む。例えば、平衡化緩衝液は、最大１０００ｍＭの濃度の二価塩をさらに含む。一例では、二価塩は５ｍＭ～５０ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は５ｍＭ、または１０ｍＭ、または１５ｍＭ、または２０ｍＭ、または２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭの濃度である。他の例では、二価塩は５０ｍＭ～１００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は５５ｍＭ、または６０ｍＭ、または６５ｍＭ、または７０ｍＭ、または７５ｍＭ、または８０ｍＭ、または８５ｍＭ、または９０ｍＭ、または９５ｍＭ、または１００ｍＭの濃度である。一例では、二価塩は１００～２００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は、１０５ｍＭ、または１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、または１２０ｍＭ、または１２５ｍＭ、または１３０ｍＭ、または１３５ｍＭ、または１４０ｍＭ、または１４５ｍＭ、または１５０ｍＭ、または１５５ｍＭ、または１６０ｍＭ、または１６５ｍＭ、または１７０ｍＭ、または１７５ｍＭ、または１８０ｍＭ、または１８５ｍＭ、または１９０ｍＭ、または１９５ｍＭ、または２００ｍＭの濃度である。他の例では、二価塩は２００ｍＭ～３００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は２００ｍＭ、または２２５ｍＭ、または２５０ｍＭ、または２７５ｍＭ、または３００ｍＭの濃度である。さらなる例では、二価塩は３００ｍＭ～４００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は３００ｍＭ、または３２５ｍＭ、または３５０ｍＭ、または３７５ｍＭ、または４００ｍＭの濃度である。一例では、二価塩は４００ｍＭ～５００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は４００ｍＭ、または４２５ｍＭ、または４５０ｍＭ、または４７５ｍＭ、または４００ｍＭの濃度である。他の例では、二価塩は５００ｍＭ～１０００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は５００ｍＭ、または５５０ｍＭ、または６００ｍＭ、または６５０ｍＭ、または７００ｍＭ、または７５０ｍＭ、または８００ｍＭ、または８５０ｍＭ、または９００ｍＭ、または９５０ｍＭ、または１０００ｍＭの濃度である。一例では、二価塩は１０００ｍＭ未満の濃度である。例えば、二価塩は５００ｍＭの濃度である。
【0104】
一例では、二価塩は、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、塩化バリウム、塩化銅（ＩＩ）、塩化ニッケル、塩化マンガン、およびその組合せからなる群から選択される。例えば、二価塩は塩化マグネシウムである。一例では、二価塩は塩化カルシウムである。他の例では、二価塩は塩化バリウムである。さらなる例では、二価塩は塩化銅である。一例では、二価塩は塩化ニッケルである。他の例では、二価塩は塩化マンガンである。
【0105】
一例では、平衡化緩衝液の組成は洗浄緩衝液と同じである。例えば、平衡化緩衝液は２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、１４５ｍＭ塩化ナトリウムを含み、ｐＨは７．４である。他の例では、平衡化緩衝液は２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、５００ｍＭ塩化ナトリウムを含み、ｐＨは７．４である。
【0106】
一例では、樹脂はｉ）樹脂をストリッピングした後、またはｉｉ）樹脂をストリッピングすることなく平衡化される。例えば、樹脂をストリッピングした後に樹脂は平衡化される。他の例では、樹脂はストリッピングすることなく平衡化される。
【0107】
一例では、本方法は、樹脂をストリッピングした後、７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で樹脂を平衡化することをさらに含む。
【0108】
一例では、本方法は、樹脂からＩｇＧを回収した後、樹脂をストリッピング緩衝液でストリッピングすることを場合により含む。例えば、本方法は、樹脂からＩｇＧを回収した後、ストリッピング緩衝液で樹脂をストリッピングすることをさらに含む。他の例では、本方法は、樹脂からＩｇＧを回収した後、樹脂をストリッピング緩衝液でストリッピングすることを含まない。例えば、樹脂からＩｇＧを回収した後、樹脂をストリッピングしない。
【0109】
一例では、ストリッピング緩衝液は２～３のｐＨを有する。例えば、ストリッピング緩衝液は２、または２．１、または２．２、または２．３、２．４、または２．５、または２．６、または２．７、または２．８、または２．９、または３のｐＨを有する。一例では、ストリッピング緩衝液のｐＨは２．５である。
【0110】
一例では、ストリッピング緩衝液は、リン酸二水素ナトリウム、グリシンおよびクエン酸ナトリウムからなる群から選択される緩衝剤を含む。例えば、ストリッピング緩衝液は、リン酸二水素ナトリウムを含む。例えば、ストリッピング緩衝液はグリシンを含む。例えば、ストリッピング緩衝液はクエン酸ナトリウムを含む。
【0111】
一例では、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は、１０ｍＭ～５００ｍＭの濃度である。例えば、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は、１０ｍＭ～２０ｍＭ、または１０ｍＭ～５０ｍＭ、または１０ｍＭ～１００ｍＭ、または１０ｍＭ～２００ｍＭ、または１０ｍＭ～３００ｍＭ、または１０ｍＭ～４００ｍＭの濃度である。例えば、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は、１０ｍＭ、または１５ｍＭ、または２０ｍＭ、または２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭ、または５５ｍＭ、または６０ｍＭ、または６５ｍＭ、または７０ｍＭ、または７５ｍＭ、または８０ｍＭ、または８５ｍＭ、または９０ｍＭ、または９５ｍＭ、または１００ｍＭ、または１０５ｍＭ、または１１０ｍＭ、または１１５ｍＭ、または１２０ｍＭ、または１２５ｍＭ、または１３０ｍＭ、または１３５ｍＭ、または１４０ｍＭ、または１４５ｍＭ、または１５０ｍＭ、または１５５ｍＭ、または１６０ｍＭ、または１６５ｍＭ、または１７０ｍＭ、または１７５ｍＭ、または１８０ｍＭ、または１８５ｍＭ、または１９０ｍＭ、または１９５ｍＭ、または２００ｍＭ、または２１０ｍＭ、または２２０ｍＭ、または２３０ｍＭ、または２４０ｍＭ、または２５０ｍＭ、または２６０ｍＭ、または２７０ｍＭ、または２８０ｍＭ、または２９０ｍＭ、または３００ｍＭ、または２１０ｍＭ、または２２０ｍＭ、または２３０ｍＭ、または２４０ｍＭ、または２５０ｍＭ、または２６０ｍＭ、または２７０ｍＭ、または２８０ｍＭ、または２９０ｍＭ、または３００ｍＭ、または３１０ｍＭ、または３２０ｍＭ、または３３０ｍＭ、または３４０ｍＭ、または３５０ｍＭ、または３６０ｍＭ、または３７０ｍＭ、または３８０ｍＭ、または３９０ｍＭ、または４００ｍＭ、または４１０ｍＭ、または４２０ｍＭ、または４３０ｍＭ、または４４０ｍＭ、または４５０ｍＭ、または４６０ｍＭ、または４７０ｍＭ、または４８０ｍＭ、または４９０ｍＭ、または５００ｍＭの濃度である。
【0112】
一例では、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は５ｍＭの濃度である。
【0113】
一例では、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は２０ｍＭの濃度である。
【0114】
一例では、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は５０ｍＭの濃度である。
【0115】
一例では、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は１００ｍＭの濃度である。
【0116】
一例では、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は１５０ｍＭの濃度である。
【0117】
一例では、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は２００ｍＭの濃度である。
【0118】
一例では、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は２５０ｍＭの濃度である。
【0119】
一例では、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は３００ｍＭの濃度である。
【0120】
一例では、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は３５０ｍＭの濃度である。
【0121】
一例では、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は４００ｍＭの濃度である。
【0122】
一例では、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は４５０ｍＭの濃度である。
【0123】
一例では、ストリッピング緩衝液の緩衝剤は５００ｍＭの濃度である。
【0124】
一例では、ストリッピング緩衝液は２０ｍＭのリン酸二水素ナトリウムを含み、ｐＨは２．５である。
【0125】
一例では、ストリッピング緩衝液は塩化ナトリウムをさらに含む。例えば、ストリッピング緩衝液は、最大１０００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムをさらに含む。一例では、塩化ナトリウムは５ｍＭ～５０ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは、５ｍＭ、または１０ｍＭ、または１５ｍＭ、または２０ｍＭ、または２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭの濃度である。他の例では、塩化ナトリウムは５０ｍＭ～１００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは５５ｍＭ、または６０ｍＭ、または６５ｍＭ、または７０ｍＭ、または７５ｍＭ、または８０ｍＭ、または８５ｍＭ、または９０ｍＭ、または９５ｍＭ、または１００ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは１００～２００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは、１０５ｍＭ、または１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、または１２０ｍＭ、または１２５ｍＭ、または１３０ｍＭ、または１３５ｍＭ、または１４０ｍＭ、または１４５ｍＭ、または１５０ｍＭ、または１５５ｍＭ、または１６０ｍＭ、または１６５ｍＭ、または１７０ｍＭ、または１７５ｍＭ、または１８０ｍＭ、または１８５ｍＭ、または１９０ｍＭ、または１９５ｍＭ、または２００ｍＭの濃度である。他の例では、塩化ナトリウムは２００～３００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは２００ｍＭ、または２２５ｍＭ、または２５０ｍＭ、または２７５ｍＭ、または３００ｍＭの濃度である。さらなる例では、塩化ナトリウムは３００ｍＭ～４００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは３００ｍＭ、または３２５ｍＭ、または３５０ｍＭ、または３７５ｍＭ、または４００ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは４００ｍＭ～５００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは４００ｍＭ、または４２５ｍＭ、または４５０ｍＭ、または４７５ｍＭ、または４００ｍＭの濃度である。他の例では、塩化ナトリウムは５００ｍＭ～１０００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは５００ｍＭ、または５５０ｍＭ、または６００ｍＭ、または６５０ｍＭ、または７００ｍＭ、または７５０ｍＭ、または８００ｍＭ、または８５０ｍＭ、または９００ｍＭ、または９５０ｍＭ、または１０００ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは１０００ｍＭ未満の濃度である。
【0126】
一例では、ストリッピング緩衝液は、二価塩をさらに含む。例えば、ストリッピング緩衝液は、最大１０００ｍＭの濃度の二価塩をさらに含む。一例では、二価塩は５ｍＭ～５０ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は５ｍＭ、または１０ｍＭ、または１５ｍＭ、または２０ｍＭ、または２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭの濃度である。他の例では、二価塩は５０ｍＭ～１００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は５５ｍＭ、または６０ｍＭ、または６５ｍＭ、または７０ｍＭ、または７５ｍＭ、または８０ｍＭ、または８５ｍＭ、または９０ｍＭ、または９５ｍＭ、または１００ｍＭの濃度である。一例では、二価塩は１００～２００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は、１０５ｍＭ、または１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、または１２０ｍＭ、または１２５ｍＭ、または１３０ｍＭ、または１３５ｍＭ、または１４０ｍＭ、または１４５ｍＭ、または１５０ｍＭ、または１５５ｍＭ、または１６０ｍＭ、または１６５ｍＭ、または１７０ｍＭ、または１７５ｍＭ、または１８０ｍＭ、または１８５ｍＭ、または１９０ｍＭ、または１９５ｍＭ、または２００ｍＭの濃度である。他の例では、二価塩は２００ｍＭ～３００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は２００ｍＭ、または２２５ｍＭ、または２５０ｍＭ、または２７５ｍＭ、または３００ｍＭの濃度である。さらなる例では、二価塩は３００ｍＭ～４００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は３００ｍＭ、または３２５ｍＭ、または３５０ｍＭ、または３７５ｍＭ、または４００ｍＭの濃度である。一例では、二価塩は４００ｍＭ～５００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は４００ｍＭ、または４２５ｍＭ、または４５０ｍＭ、または４７５ｍＭ、または４００ｍＭの濃度である。他の例では、二価塩は５００ｍＭ～１０００ｍＭの濃度である。例えば、二価塩は５００ｍＭ、または５５０ｍＭ、または６００ｍＭ、または６５０ｍＭ、または７００ｍＭ、または７５０ｍＭ、または８００ｍＭ、または８５０ｍＭ、または９００ｍＭ、または９５０ｍＭ、または１０００ｍＭの濃度である。一例では、二価塩は１０００ｍＭ未満の濃度である。
【0127】
一例では、二価塩は、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、塩化バリウム、塩化銅（ＩＩ）、塩化ニッケル、塩化マンガン、およびその組合せからなる群から選択される。例えば、二価塩は塩化マグネシウムである。例えば、二価塩は塩化カルシウムである。例えば、二価塩は塩化バリウムである。例えば、二価塩は塩化銅である。例えば、二価塩は塩化ニッケルである。例えば、二価塩は塩化マンガンである。
【0128】
一例では、樹脂は平衡化されている。一実施例では、樹脂をストリッピングした後に樹脂は平衡化される。一実施例では、本方法は、樹脂をストリッピングした後、７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で樹脂を平衡化することをさらに含む。
【0129】
一例では、本方法は：
ａ）７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で樹脂を平衡化すること；
ｂ）樹脂から結合ＩｇＧを回収した後、２～３の間のｐＨを有するストリッピング緩衝液で樹脂をストリッピングすること；および／または
ｃ）樹脂をストリッピングした後、平衡化緩衝液で樹脂を平衡化すること
を含む。
ａ）７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で樹脂を平衡化すること；
ｂ）樹脂から結合ＩｇＧを回収した後、２～３の間のｐＨを有するストリッピング緩衝液で樹脂をストリッピングすること；および／または
ｃ）樹脂をストリッピングした後、平衡化緩衝液で樹脂を平衡化すること
を含む。
【0130】
一例では、ストリッピングすることなく樹脂を平衡化する。例えば、本方法は、樹脂から結合ＩｇＧを回収した後、ストリッピング緩衝液で樹脂をストリッピングすることなく、樹脂を平衡化緩衝液で平衡化することを含む。一例では、本方法は、樹脂から結合ＩｇＧを回収した後、７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で樹脂を平衡化することを含む。
【0131】
一例では、本方法は、樹脂を再生することをさらに含む。
【0132】
一例では、本方法は樹脂を消毒することをさらに含む。
【0133】
一例では、本方法は、血漿またはその画分をアフィニティークロマトグラフィ樹脂に負荷することを含む。
【0134】
一例では、血漿またはその画分は、血漿またはその画分の負荷の間、少なくとも０．１分間樹脂と接触する。例えば、血漿またはその画分は、少なくとも０．２５分、または０．５分、または１分、または１．５分、または２分、または２．５分、または３分、または３．５分、または４分、または４．５分、または５分間樹脂と接触する。例えば、血漿またはその画分は、０．１分、０．２５分、０．３分、０．３５分、０．４分、０．４５分、０．５分、または１分、または１．５分、または２分、または２．５分、または３分、または３．５分、または４分、または４．５分、または５分間樹脂と接触する。
【0135】
一例では、血漿またはその画分は、血漿またはその画分の負荷中に最長５分間樹脂と接触する。
【0136】
一例では、血漿またはその画分は、血漿またはその画分の負荷中に０．２５～５分間樹脂と接触する。例えば、負荷中、血漿またはその画分は０．２５分、０．３分、０．３５分、０．４分、０．４５分、０．５分、または１分、または１．５分、または２分、または２．５分、または３分、または３．５分、または４分、または４．５分、または５分間樹脂と接触する。一例では、負荷の間、血漿またはその画分は少なくとも０．２５分間樹脂と接触する。
【0137】
一例では、緩衝液は、方法の１つまたはそれ以上の非負荷相（複数可）において、少なくとも０．１分間樹脂と接触する。
【0138】
一例では、連続クロマトグラフィ法の１つまたはそれ以上の非負荷相（複数可）の間、緩衝液は最長５分間樹脂と接触する。
【0139】
一例では、連続クロマトグラフィ法の１つまたはそれ以上の非負荷相（複数可）の間、緩衝液は０．１～５分間樹脂と接触する。例えば、緩衝液は少なくとも０．１分、または０．２５分、または０．５分、または１分、または１．５分、または２分、または２．５分、または３分、または３．５分、または４分、または４．５分、または５分間樹脂と接触する。
【0140】
一例では、非負荷相は、平衡化相、洗浄相、溶出相、ストリップ相、再平衡化相およびその組合せからなる群から選択される。
【0141】
一例では、非負荷相は平衡化相である。
【0142】
一例では、非負荷相は洗浄相である。
【0143】
一例では、非負荷相は溶出相である。
【0144】
一例では、非負荷相はストリップ相である。
【0145】
一例では、非負荷相は再平衡化相である。
【0146】
一例では、連続クロマトグラフィ法の１つまたはそれ以上の非負荷相（複数可）の間に樹脂と接触する緩衝液は、平衡化緩衝液、洗浄緩衝液、ストリッピング緩衝液、および再平衡化緩衝液からなる群から選択される。例えば、緩衝液は平衡化緩衝液である。他の例では、緩衝液は洗浄緩衝液である。さらなる例では、緩衝液はストリッピング緩衝液である。一例では、緩衝液は再平衡化緩衝液である。
【0147】
一例では、平衡化緩衝液は０．１～５分間樹脂と接触する。
【0148】
一例では、洗浄緩衝液は０．１～５分間樹脂と接触する。
【0149】
一例では、溶出緩衝液は０．１～５分間樹脂と接触する。
【0150】
一例では、ストリッピング緩衝液は０．１～５分間樹脂と接触する。
【0151】
一例では、本方法は、結合ＩｇＧを樹脂から回収する前に、カラム容量（ＣＶ）未満の容量の溶出緩衝液と樹脂を接触させることを含む。例えば、本方法は、樹脂から結合ＩｇＧを回収する前に、樹脂をカラム容量（ＣＶ）未満の容量の溶出緩衝液と接触させる「前溶出」相を含む。一例では、本方法は、結合ＩｇＧを樹脂から回収する前に、ＣＶ未満の容量の溶出緩衝液で樹脂を洗浄することを含む。例えば、樹脂から結合ＩｇＧを回収する前に樹脂を洗浄するために使用される溶出緩衝液の容量は、最大０．５ＣＶである。例えば、結合ＩｇＧを樹脂から回収する前に樹脂を洗浄するために使用される溶出緩衝液の容量は、０．５～１．０ＣＶである。例えば、樹脂から結合ＩｇＧを回収する前に樹脂を洗浄するために使用される溶出緩衝液の容量は、０．１ＣＶ、または０．２ＣＶ、または０．３ＣＶ、または０．４ＣＶ、または０．５ＣＶ、または０．６ＣＶ、または０．７ＣＶ、または０．８ＣＶ、または０．９ＣＶである。
【0152】
一例では、溶出緩衝液の容量は０．１ＣＶである。
【0153】
一例では、溶出緩衝液の容量は０．２ＣＶである。
【0154】
一例では、溶出緩衝液の容量は０．３ＣＶである。
【0155】
一例では、溶出緩衝液の容量は０．４ＣＶである。
【0156】
一例では、溶出緩衝液の容量は０．５ＣＶである。
【0157】
一例では、溶出緩衝液の容量は０．６ＣＶである。
【0158】
一例では、溶出緩衝液の容量は０．７ＣＶである。
【0159】
一例では、溶出緩衝液の容量は０．８ＣＶである。
【0160】
一例では、溶出緩衝液の容量は０．９ＣＶである。
【0161】
一例では、本方法は、ＣＶ未満の容量の溶出緩衝液と樹脂を接触させる工程を実施した後、結合ＩｇＧを樹脂から溶出させることを含む。
【0162】
通常、ＩｇＧは血漿中に５～１５ｇ／Ｌの濃度の血漿で存在することは、当業者には明らかであろう。
【0163】
一例では、血漿画分は、クライオリッチ血漿、クライオプア血漿、上清Ｉ（ＳＮＩ）、コーン画分ＩＩ（Ｆｒ ＩＩ）、コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ（Ｆｒ ＩＩ＋ＩＩＩ）、コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ（ＦｒＩ＋ＩＩ＋ＩＩＩ）、キスラー／ニッチマン沈殿物Ａ（ＫＮ Ａ）、キスラー／ニッチマン沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ）、キスラー／ニッチマン上清沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ＋１）、およびその組合せからなる群から選択される。一例では、血漿画分はクライオリッチ血漿である。例えば、血漿画分はクライオプア血漿である。例えば、血漿画分は上清Ｉ（ＳＮ Ｉ）である。例えば、血漿画分はコーン画分ＩＩ（Ｆｒ ＩＩ）である。例えば、血漿画分はコーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ（Ｆｒ ＩＩ＋ＩＩＩ）である。例えば、血漿画分は、コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ（ＦｒＩ＋ＩＩ＋ＩＩＩ）である。例えば、血漿画分は、キスラー／ニッチマン沈殿物Ａ（ＫＮ Ａ）である。例えば、血漿画分は、キスラー／ニッチマン沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ）である。例えば、血漿画分は、キスラー／ニッチマン上清沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ＋１）である。
【0164】
一例では、血漿画分は懸濁ペーストである。例えば、懸濁ペーストは、コーン画分ＩＩ（Ｆｒ ＩＩ）、コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ（Ｆｒ ＩＩ＋ＩＩＩ）、コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ（ＦｒＩ＋ＩＩ＋ＩＩＩ）、キスラー／ニッチマン沈殿物Ａ（ＫＮ Ａ）、キスラー／ニッチマン沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ）、キスラー／ニッチマン上清沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ＋１）、およびその組合せからなる群から選択される。例えば、懸濁ペーストはコーン画分 ＩＩ（Ｆｒ ＩＩ）ペーストである。一例では、懸濁ペーストはコーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ（Ｆｒ ＩＩ＋ＩＩＩ）ペーストである。他の例では、懸濁ペーストはコーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ（ＦｒＩ＋ＩＩ＋ＩＩＩ）ペーストである。他の例では、懸濁ペーストはキスラー／ニッチマン沈殿物Ａ（ＫＮ Ａ）ペーストである。他の例では、懸濁ペーストはキスラー／ニッチマン沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ）ペーストである。さらなる例では、懸濁ペーストはキスラー／ニッチマン上清沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ＋１）ペーストである。
【0165】
一例では、血漿画分は、哺乳動物血漿画分、ヒト血漿画分、ウマ血漿画分、およびウシ血漿画分からなる群から選択される。
【0166】
一例では、血漿画分は哺乳動物血漿画分である。
【0167】
一例では、血漿画分はヒト血漿画分である。
【0168】
一例では、血漿画分はウマ血漿画分である。
【0169】
一例では、血漿画分はウシ血漿画分である。
【0170】
一例では、血漿画分はヒトポリクローナル抗体を含むウシ血漿画分である。
【0171】
一例では、血漿またはその画分を清澄化する。血漿またはその画分を清澄化する方法は、当業者に明らかである、および／または本明細書に記載される。例えば、血漿またはその画分をフィルターに通すことにより、血漿またはその画分を清澄化する。例えば、デプスフィルターまたはメンブレンフィルターを使用することができる。例えば、血漿またはその画分は、フィルターの組合せに通される。例えば、その組合せは、１．２μｍと０．４５／０．２２μｍのメンブレンフィルターの組合せであってもよい。例えば、血漿またはその画分をデプスフィルター（例えばＢＥＣＯ（登録商標）デプスフィルター）に通すことにより、血漿またはその画分を清澄化する。一例では、血漿またはその画分を１つまたはそれ以上のデプスフィルター（複数可）を含むフィルタープレス（例えばＢＥＣＯ（登録商標）インテグラプレートまたはコンパクトプレート）に通すことにより、血漿またはその画分を清澄化する。一例では、フィルタープレスは、１つまたはそれ以上のフィルター助剤（複数可）（例えば、Ｄｉａｃｅｌ（登録商標）１５０のようなセルロースベースのフィルター助剤）をさらに含む。一例では、血漿またはその画分を脂質特異的フィルター（例えばＺｅｔａ Ｐｌｕｓ（商標）ＤＥＬシリーズフィルター）に通すことにより、血漿またはその画分を清澄化する。例えば、血漿画分は清澄化上清Ｉ（ＳＮ Ｉ）である。例えば、血漿画分は清澄化コーン画分ＩＩ（Ｆｒ ＩＩ）である。例えば、血漿画分は清澄化コーン画分 ＩＩ＋ＩＩＩ（Ｆｒ ＩＩ＋ＩＩＩ）である。例えば、血漿画分は、清澄化コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ（ＦｒＩ＋ＩＩ＋ＩＩＩ）である。例えば、血漿画分は、清澄化キスラー／ニッチマン沈殿物Ａ（ＫＮ Ａ）である。例えば、血漿画分は、清澄化キスラー／ニッチマン沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ）である。例えば、血漿画分は、清澄化キスラー／ニッチマン上清沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ＋１）である。
【0172】
一例では、血漿は清澄化クライオリッチ血漿である。
【0173】
一例では、血漿画分は、清澄化クライオプア血漿である。
【0174】
一例では、血漿またはその画分は、連続アフィニティークロマトグラフィ工程の前に、約３２℃の第１の温度に加温され、次いで約２１℃の第２の温度に冷却される。一例では、血漿またはその画分は、連続アフィニティークロマトグラフィ工程の前に、約３２℃の第１の温度にあり、次いで約２１℃の第２の温度にある。
【0175】
一例では、血漿またはその画分は、連続アフィニティークロマトグラフィ工程の前に２℃～３５℃の範囲の温度にある。一例では、血漿またはその画分は、連続アフィニティークロマトグラフィ工程の前に２℃～２８℃の範囲の温度にある。例えば、１０℃～２８℃の範囲の温度、例えば１０℃、または１１℃、または１２℃、または１３℃、または１４℃、１５℃、または１６℃、または１７℃、または１８℃、または１９℃、または２０℃、または２１℃、または２２℃、または２３℃、または２４℃、または２５℃、または２６℃、または２７℃、または２８℃である、例えば、１０℃～２８℃の範囲の温度、例えば、１０℃、または１１℃、または１２℃、または１３℃、または１４℃、１５℃、または１６℃、または１７℃、または１８℃、または１９℃、または２０℃、または２１℃、または２２℃、または２３℃、または２４℃、または２５℃、または２６℃、または２７℃、または２８℃、または２９℃、または３０℃、または３１℃、または３２℃、または３３℃、または３４℃、または３５℃である。一例では、血漿またはその画分は、連続アフィニティークロマトグラフィ樹脂に負荷する前に、２℃～３５℃の範囲の温度にある。一例では、血漿またはその画分は、連続アフィニティークロマトグラフィ樹脂に負荷する前に、２℃～２８℃の範囲の温度にある。例えば、温度は１０℃～３５℃の範囲である。例えば、血漿またはその画分は３０℃～３５℃の範囲の温度にある。例えば、血漿またはその画分は、少なくとも３２℃の温度にある。例えば、血漿またはその画分は、３２℃～３５℃の範囲の温度にある。一例では、血漿またはその画分は３２℃の温度にある。例えば、温度は１０℃～２８℃の範囲である。一例では、血漿またはその画分は２℃～２５℃の範囲の温度にある。例えば、温度は１０℃～２５℃の範囲である。一例では、血漿またはその画分は、２０℃～２５℃の範囲の温度にある。例えば、血漿またはその画分は２１℃の温度にある。一例では、血漿またはその画分は、２℃～２０℃の範囲の温度にある。例えば、温度は１０℃～２０℃の範囲である。一例では、血漿またはその画分は、２℃～１８℃の範囲の温度にある。例えば、温度は１０℃～１８℃の範囲である。一例では、血漿またはその画分は、２℃～１５℃の範囲の温度にある。例えば、温度は１０℃～１５℃の範囲である。一例では、血漿またはその画分は２℃～１０℃の範囲の温度にある。例えば、血漿またはその画分は、２℃、または３℃、または４℃、または５℃、または６℃、または７℃、または８℃、または９℃、または１０℃の温度にある。
【0176】
一例では、血漿またはその画分は２℃の温度にある。
【0177】
一例では、血漿またはその画分は１０℃の温度にある。
【0178】
一例では、血漿またはその画分は１８℃の温度にある。
【0179】
一例では、血漿またはその画分は２１℃の温度にある。
【0180】
一例では、血漿またはその画分は２８℃の温度にある。
【0181】
一例では、血漿またはその画分は３２℃の温度にある。
【0182】
一例では、血漿またはその画分は最長４８時間その温度にある。例えば、血漿またはその画分を連続アフィニティークロマトグラフィ樹脂に負荷する前に、血漿またはその画分を最長４８時間その温度に保持する。一例では、血漿またはその画分は、負荷の前に、最長２時間、または４時間、または６時間、または８時間、または１０時間、または１２時間、または１４時間、または１６時間、または１８時間、または２０時間、または２２時間、または２４時間、または２６時間、または２８時間、または３０時間、または３２時間、または３４時間、または３６時間、または３８時間、または４０時間、または４２時間、または４４時間、または４６時間、その温度に保持される。例えば、血漿またはその画分は、負荷前に０～２時間、２～２４時間、または４～２４時間、または８～２４時間、または１２～２４時間、または１８～２４時間、または２４～４８時間、または３６～４８時間、その温度に保持される。
【0183】
一例では、血漿またはその画分は、連続アフィニティークロマトグラフィ工程の前に、３０℃～３８℃の範囲の第１の温度にあり、次いで２℃～２８℃の範囲の第２の温度にある。例えば、血漿またはその画分は、連続アフィニティークロマトグラフィ工程の前に、３０℃～３８℃の範囲の第１の温度に加温され、次いで２℃～２８℃の範囲の第２の温度に冷却される。一例では、血漿またはその画分は、連続アフィニティークロマトグラフィ工程の前に、３０℃～３５℃の範囲の第１の温度に加温され、次いで１８℃～２５℃の範囲の第２の温度に冷却される。例えば、血漿またはその画分は、約３０℃、または約３１℃、または約３２℃、または約３３℃、または約３４℃、または約３５℃の第１の温度に加温される。一例では、血漿またはその画分は、約１８℃、または約１９℃、または約２０℃、または約２１℃、または約２２℃、または約２３℃、または約２４℃、または約２５℃の第２の温度まで冷却される。
【0184】
一例では、血漿またはその画分は、最長４８時間、第１および／または第２の温度にある。例えば、血漿またはその画分を連続アフィニティークロマトグラフィ樹脂に負荷する前に、血漿またはその画分を最長４８時間、第１および／または第２の温度に保持する。一例では、血漿またはその画分は、負荷前に、最長２時間、または４時間、または６時間、または８時間、または１０時間、または１２時間、または１４時間、または１６時間、または１８時間、または２０時間、または２２時間、または２４時間、または２６時間、または２８時間、または３０時間、または３２時間、または３４時間、または３６時間、または３８時間、または４０時間、または４２時間、または４４時間、または４６時間、第１および／または第２の温度に保持される。例えば、血漿またはその画分は、負荷前に０～２時間、２～２４時間、または４～２４時間、または８～２４時間、または１２～２４時間、または１８～２４時間、または２４～４８時間、または３６～４８時間、第１および／または第２の温度に保持される。
【0185】
一例では、連続アフィニティークロマトグラフィは、シミュレーテッドムービングベッド（ＳＭＢ）クロマトグラフィ、周期的向流クロマトグラフィ（ＰＣＣ）、連続向流タンジェンシャルクロマトグラフィ（ＣＣＴＣ）、および連続向流スパイラルクロマトグラフィ（ＣＣＳＣ）からなる群から選択される。
【0186】
一例では、連続アフィニティークロマトグラフィはシミュレーテッドムービングベッド（ＳＭＢ）クロマトグラフィである。他の例では、連続アフィニティークロマトグラフィは周期的向流クロマトグラフィ（ＰＣＣ）である。さらなる例では、連続アフィニティークロマトグラフィは連続向流タンジェンシャルクロマトグラフィ（ＣＣＴＣ）である。一例では、連続アフィニティークロマトグラフィは連続向流スパイラルクロマトグラフィ（ＣＣＳＣ）である。
【0187】
一例では、樹脂はスラリーの形態である。例えば、樹脂はスラリーの形態の樹脂粒子を含む。
【0188】
一例では、スラリーは１つまたはそれ以上のカラムに通され、各カラムはメンブレンを含む。例えば、メンブレンは中空糸メンブレンである。
【0189】
一例では、スラリーをメンブレンを含む一連の２つ以上のカラムに通す。例えば、スラリーは２つ、または３つ、または４つ、または５つ、または６つ、または７つ、または８つ、または９つ、または１０、または１１、または１２のカラムに通される。
【0190】
一例では、スラリーを一連の２つのカラムに通す。
【0191】
一例では、スラリーを一連の３つのカラムに通す。
【0192】
一例では、スラリーを一連の４つのカラムに通す。
【0193】
一例では、スラリーを一連の５つのカラムに通す。
【0194】
一例では、スラリーを一連の６つのカラムに通す。
【0195】
一例では、スラリーを一連の７つのカラムに通す。
【0196】
一例では、スラリーを一連の８つのカラムに通す。
【0197】
一例では、スラリーを一連の９つのカラムに通す。
【0198】
一例では、スラリーを一連の１０のカラムに通す。
【0199】
一例では、スラリーを一連の１１のカラムに通す。
【0200】
一例では、スラリーを一連の１２のカラムに通す。
【0201】
一例では、樹脂は一つまたはそれ以上のカラムに充填され、各カラムは一つまたはそれ以上のゾーンを含む。例えば、樹脂は一連の２つ以上のカラムに充填される。例えば、樹脂は一連の２つ、または３つ、または４つ、または５つ、または６つ、または７つ、または８つ、または９つ、または１０、または１１、または１２のカラムに充填される。
【0202】
一例では、樹脂は一連の２つのカラムに充填される。
【0203】
一例では、樹脂は一連の３つのカラムに充填される。
【0204】
一例では、樹脂は一連の４つのカラムに充填される。
【0205】
一例では、樹脂は一連の５つのカラムに充填される。
【0206】
一例では、樹脂は一連の６つのカラムに充填される。
【0207】
一例では、樹脂は一連の７つのカラムに充填される。
【0208】
一例では、樹脂は一連の８つのカラムに充填される。
【0209】
一例では、樹脂は一連の９つのカラムに充填される。
【0210】
一例では、樹脂は一連の１０のカラムに充填される。
【0211】
一例では、樹脂は一連の１１のカラムに充填される
【0212】
一例では、樹脂は一連の１２のカラムに充填される。
【0213】
例えば、ゾーンは、平衡化ゾーン、結合ゾーン、洗浄ゾーン、溶出ゾーン、ストリッピングゾーン、およびその組合せからなる群から選択される。他の例では、ゾーンは、平衡化ゾーン、結合ゾーン、洗浄ゾーン、溶出ゾーン、およびその組合せからなる群から選択される。一例では、ゾーンは平衡化ゾーンである。他の例では、ゾーンは結合ゾーンである。さらなる例では、ゾーンは洗浄ゾーンである。一例では、ゾーンは溶出ゾーンである。他の例では、ゾーンはストリッピングゾーンである。一例では、ストリッピングゾーンはない。さらなる例では、ゾーンは洗浄/溶出ゾーンである。一例では、ゾーンは平衡化／結合ゾーンである。他の例では、ゾーンは結合/洗浄ゾーンである。
【0214】
一例では、樹脂は１つまたはそれ以上のカラム（複数可）に充填され、各カラムは１つのゾーンを含む。
【0215】
一例では、樹脂は１つまたはそれ以上のカラム（複数可）に充填され、各カラムは２つのゾーンを含む。
【0216】
一例では、樹脂は１つまたはそれ以上のカラム（複数可）に充填され、各カラムは４つのゾーンを含む。
【0217】
一例では、２つ以上のカラムは流体接続され、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離される。
【0218】
一例では、樹脂は第１のカラムとそれに続く１つまたはそれ以上のカラム（複数可）に充填される。
【0219】
一例では、第１のカラムには樹脂の動的結合能（ＤＢＣ）を超える濃度のＩｇＧが充填される。
【0220】
樹脂のＤＢＣを決定することは、当業者には明らかであり、かつ／または本明細書に記載されている。例えば、樹脂のＤＢＣは、ＩｇＧをカラムに負荷し、未結合ＩｇＧがカラムを流れる濃度を、例えばクロマトグラフィシステムのＵＶトレースによってモニターすることによって決定することができる。例えば、樹脂のＤＢＣは樹脂１ｍＬ当たり５ｍｇ、または１０ｍｇ、または２０ｍｇ、または３０ｍｇ、または４０ｍｇ、または５０ｍｇ、または６０ｍｇ、または７０ｍｇのＩｇＧである。
【0221】
一例では、樹脂のＤＢＣは樹脂１ｍＬ当たり少なくとも５ｍｇのＩｇＧである。
【0222】
一例では、樹脂のＤＢＣは樹脂１ｍＬ当たり少なくとも１０ｍｇのＩｇＧである。
【0223】
一例では、樹脂のＤＢＣは樹脂１ｍＬ当たり少なくとも２０ｍｇのＩｇＧである。
【0224】
一例では、樹脂のＤＢＣは樹脂１ｍＬ当たり４０ｍｇのＩｇＧである。
【0225】
一例では、第１のカラムは樹脂１ｍＬ当たり５ｍｇ、または１０ｍｇ、または２０ｍｇ、または３０ｍｇ、または４０ｍｇ、または５０ｍｇ、または６０ｍｇ、または７０ｍｇ超の濃度でＩｇＧが負荷される。
【0226】
一例では、第１のカラムは樹脂のＤＢＣまでの濃度でＩｇＧが負荷される。例えば、第１のカラムには樹脂１ｍＬ当たり最大５ｍｇ、または１０ｍｇ、または２０ｍｇ、または３０ｍｇ、または４０ｍｇの濃度でＩｇＧが負荷される。
【0227】
一例では、第１のカラムは樹脂１ｍＬ当たり５ｍｇ超のＩｇＧ濃度でＩｇＧが負荷される。
【0228】
一例では、第１のカラムは樹脂１ｍＬ当たり１０ｍｇ超のＩｇＧ濃度でＩｇＧが負荷される。
【0229】
一例では、第１のカラムは樹脂１ｍＬ当たり２０ｍｇ超のＩｇＧ濃度でＩｇＧが負荷される。
【0230】
一例では、第１のカラムは樹脂１ｍＬ当たり最大４０ｍｇのＩｇＧ濃度でＩｇＧが負荷される。
【0231】
一例では、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）は樹脂のＤＢＣまでの濃度でＩｇＧが負荷される。
【0232】
一例では、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）は、樹脂１ｍＬ当たり最大５ｍｇ、または１０ｍｇ、または２０ｍｇ、または３０ｍｇ、または４０ｍｇのＩｇＧ濃度でＩｇＧが負荷される。
【0233】
一例では、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）は、樹脂１ｍＬ当たり最大２０ｍｇのＩｇＧ濃度でＩｇＧを負荷される。
【0234】
一例では、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）は、樹脂１ｍＬ当たり最大３０ｍｇのＩｇＧ濃度でＩｇＧが負荷される。
【0235】
一例では、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）は、樹脂１ｍＬ当たり最大４０ｍｇのＩｇＧ濃度でＩｇＧが負荷される。
【0236】
一例では、本方法はさらに、第１のカラムから１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）への未結合ＩｇＧを洗浄緩衝液で洗浄し、結合ＩｇＧを回収することを含む。例えば、結合ＩｇＧは第１のカラムおよび１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）から回収される。例えば、結合ＩｇＧは、洗浄工程なしで第１のカラムから回収される。例えば、結合ＩｇＧは、結合ＩｇＧを本明細書に記載の溶出緩衝液で溶出することにより、第１のカラムから回収される。例えば、結合ＩｇＧは、本明細書に記載の洗浄緩衝液で洗浄した後、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）から回収される。例えば、結合ＩｇＧは、洗浄緩衝液で樹脂を洗浄し、結合ＩｇＧを本明細書に記載の溶出緩衝液で溶出した後、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）から回収される。
【0237】
一例では、本方法はさらに、本明細書に記載の洗浄緩衝液で１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）を洗浄し、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）から結合ＩｇＧを回収することを含む。
【0238】
一例では、本方法は、結合ＩｇＧが１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）から回収される時点で、第１のカラムをストリッピングおよび／または平衡化することをさらに含む。一例では、本方法は、結合ＩｇＧが１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）から回収される時点で第１のカラムを平衡化することをさらに含む。例えば、本方法は、結合ＩｇＧが１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）から回収される時点で第１のカラムをストリッピングすることを含まない。
【0239】
一例では、本方法は、結合ＩｇＧが第１のカラムから回収された時点で、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）をストリッピングおよび／または平衡化することをさらに含む。一例では、本方法は、結合ＩｇＧが第１のカラムから回収される時点で、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）を平衡化することをさらに含む。例えば、本方法は、結合ＩｇＧが第１のカラムから回収される時点で１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）をストリッピングすることを含まない。
【0240】
一例では、本方法は、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）が本明細書に記載の洗浄緩衝液で洗浄される時点で、第１のカラムをストリッピングおよび／または平衡化することをさらに含む。一例では、本方法は、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）が本明細書に記載の洗浄緩衝液で洗浄される時点で、第１のカラムを平衡化することをさらに含む。例えば、本方法は、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）が本明細書に記載の洗浄緩衝液で洗浄される時点で、第１のカラムをストリッピングすることを含まない。
【0241】
一例では、本方法は、第１のカラムが本明細書に記載の洗浄緩衝液で洗浄される時点で１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）をストリッピングおよび／または平衡化することをさらに含む。一例では、本方法は、第１のカラムが本明細書に記載の洗浄緩衝液で洗浄される時点で、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）を平衡化することをさらに含む。例えば、本方法は、第１のカラムが本明細書に記載の洗浄緩衝液で洗浄される時点で、１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）をストリッピングすることを含まない。
【0242】
一例では、樹脂は少なくとも２ｃｍの総床高を有する。例えば、樹脂は２ｃｍ～３０ｃｍの総床高を有する。例えば、樹脂は１０ｃｍ～３０ｃｍの間の総床高を有する。例えば、樹脂は３０ｃｍ～７０ｃｍの総床高を有する。例えば、樹脂は２ｃｍ、または６ｃｍ、または１０ｃｍ、または１５ｃｍ、または２０ｃｍ、または２５ｃｍ、または３０ｃｍ、または３５ｃｍ、または４０ｃｍ、または４５ｃｍ、または５０ｃｍ、または５５ｃｍ、または６０ｃｍ、または６５ｃｍ、または７０ｃｍの総床高を有する。
【0243】
一例では、樹脂は少なくとも２ｃｍの総床高を有する。
【0244】
一例では、樹脂は６ｃｍの総床高を有する。
【0245】
一例では、樹脂は２０ｃｍの総床高を有する。
【0246】
一例では、樹脂は３０ｃｍの総床高を有する。
【0247】
一例では、樹脂は５０ｃｍの総床高を有する。
【0248】
一例では、樹脂は７０ｃｍの総床高を有する。
【0249】
一例では、カラムは５ｃｍ～２００ｃｍの直径を有する。例えば、カラムは５ｃｍ、または１０ｃｍ、または２０ｃｍ、または３０ｃｍ、または４０ｃｍ、または５０ｃｍ、または６０ｃｍ、または７０ｃｍ、または８０ｃｍ、または９０ｃｍ、または１００ｃｍ、または１１０ｃｍ、または１２０ｃｍ、または１３０ｃｍ、または１４０ｃｍ、または１５０ｃｍ、または１６０ｃｍ、または１７０ｃｍ、または１８０ｃｍ、または１９０ｃｍ、または２００ｃｍの直径を有する。
【0250】
一例では、カラムは５ｃｍの直径を有する。
【0251】
一例では、カラムは２０ｃｍの直径を有する。
【0252】
一例では、カラムは５０ｃｍの直径を有する。
【0253】
一例では、カラムは１００ｃｍの直径を有する。
【0254】
一例では、カラムは２００ｃｍの直径を有する。
【0255】
一例では、本方法は、エタノール沈殿、オクタン酸分画、メンブレンまたは樹脂クロマトグラフィ（例えば、イオン交換クロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、イソアグルチニンアフィニティークロマトグラフィ）、ウイルス不活性化、ウイルス濾過および限外濾過／透析濾過から選択される１つまたはそれ以上の工程をさらに含み、ここで、工程（複数可）は、連続アフィニティークロマトグラフィ工程の前または後に実施される。例えば、本方法は、エタノール沈殿をさらに含む。例えば、本方法はオクタン酸分画をさらに含む。例えば、本方法はメンブレンまたは樹脂クロマトグラフィをさらに含む。例えば、本方法は、イオン交換クロマトグラフィをさらに含む。例えば、本方法は、陰イオン交換クロマトグラフィをさらに含む。例えば、本方法は、陽イオン交換クロマトグラフィをさらに含む。例えば、本方法は疎水性相互作用クロマトグラフィを含む。例えば、本方法はイソアグルチニンアフィニティークロマトグラフィを含む。例えば、本方法は、ウイルス不活性化をさらに含む。例えば、本方法は、ナノ濾過をさらに含む。例えば、本方法は、限外濾過／透析濾過をさらに含む。
【0256】
一例では、本方法は、陰イオン交換クロマトグラフィおよびウイルス濾過をさらに含む。
【0257】
一例では、本方法は、低ｐＨインキュベーション、深層濾過、陰イオン交換クロマトグラフィおよびウイルス濾過をさらに含む。
【0258】
一例では、低ｐＨインキュベーションは界面活性剤の存在下で行われる。例えば、本方法は、界面活性剤の存在下での低ｐＨインキュベーションをさらに含む。
【0259】
一例では、本方法は、イオン交換クロマトグラフィをさらに含み、イオン交換クロマトグラフィ工程は、フロースルーモードで作動する陰イオン交換樹脂を使用する陰イオン交換クロマトグラフィ工程を含む。
【0260】
一例では、フロースルーおよび／または洗浄後の溶出液が回収される。例えば、フロースルーが回収される。他の例では、洗浄後溶出液が回収される。一例では、フロースルーおよび洗浄後溶出液が回収される。当業者には、フロースルーと洗浄後液のみが回収され（すなわち、プールされ）、溶出相は回収されないことは明らかであろう。
【0261】
一例では、陰イオン交換樹脂は、弱陰イオン交換体、強陰イオン交換体および混合モード陰イオン交換体からなる群から選択される。
【0262】
一例では、陰イオン交換樹脂は弱陰イオン交換体である。
【0263】
一例では、陰イオン交換樹脂は混合モード陰イオン交換体である。
【0264】
一例では、陰イオン交換樹脂は強陰イオン交換体である。一例では、イオン交換クロマトグラフィ工程は、フロースルーモードで作動する強陰イオン交換樹脂を使用する陰イオン交換クロマトグラフィ工程を含む。一例では、強陰イオン交換樹脂は、ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスからなるマトリクスを含む。一例では、強陰イオン交換樹脂は四級化ポリエチレンイミン官能基を含む。
【0265】
一例では、陰イオン交換樹脂は平衡化の前に前平衡化緩衝液で洗浄される。当業者には、前平衡化工程は、第１のランのため、および／または樹脂の保存後にのみ実行されることは明らかであろう。
【0266】
一例では、前平衡化緩衝液は、リン酸一ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４）、リン酸二ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、リン酸（Ｈ３ＰＯ４）およびその組合せからなる群から選択される。
【0267】
一例では、前平衡化緩衝液はＮａ２ＨＰＯ４を含む。
【0268】
一例では、前平衡化緩衝液はＨ３ＰＯ４を含む。
【0269】
一例では、前平衡化緩衝液はＮａＨ２ＰＯ４を含む。
【0270】
一例では、前平衡化緩衝液は、Ｎａ２ＨＰＯ４およびＮａＨ２ＰＯ４を含む。
【0271】
一例では、前平衡化緩衝液は、５０ｍＭ～１５０ｍＭの範囲の濃度の緩衝液を含む。例えば、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、または１５０ｍＭの濃度である。一例では、前平衡化緩衝液は、１００ｍＭの濃度の緩衝液を含む。
【0272】
一例では、前平衡化緩衝液は、５０ｍＭ～１５０ｍＭの範囲の濃度のＮａＨ２ＰＯ４を含む。例えば、前平衡化緩衝液は、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、または１５０ｍＭの濃度のＮａＨ２ＰＯ４を含む。一例では、前平衡化緩衝液は、１００ｍＭの濃度のＮａＨ２ＰＯ４を含む。
【0273】
一例では、前平衡化緩衝液は、５．８～６．６の範囲のｐＨである。例えば、前平衡化緩衝液は、約５．８、または約５．９、または約６．０、または約６．１、または約６．２、または約６．３、または約６．４、または約６．５、または約６．６のｐＨである。一例では、前平衡化は６．２のｐＨである。
【0274】
一例では、前平衡化緩衝液は塩をさらに含む。例えば、前平衡化緩衝液は塩化ナトリウムをさらに含む。一例では、塩化ナトリウムは１００ｍＭ～１０００ｍＭの範囲の濃度である。例えば、前平衡化緩衝液は、１００ｍＭ、２００ｍＭ、３００ｍＭ、４００ｍＭ、５００ｍＭ、６００ｍＭ、７００ｍＭ、８００ｍＭ、９００ｍＭ、または１０００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムを含む。一例では、前平衡化緩衝液は、１０００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムを含む。
【0275】
一例では、陰イオン交換樹脂は、１０００ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、および１０００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ６．２を含む前平衡化緩衝液で前平衡化される。一例では、陰イオン交換樹脂は、１００ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、および１０００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．２を含む前平衡化緩衝液で前平衡化される。
【0276】
一例では、前平衡化緩衝液の容量は少なくとも２ＣＶである。例えば、前平衡化緩衝液の容量は、２ＣＶ、または３ＣＶ、または４ＣＶ、または５ＣＶ、または６ＣＶ、または７ＣＶ、または８ＣＶ、または９ＣＶ、または１０ＣＶである。一例では、前平衡化緩衝液の容量は２ＣＶ～１０ＣＶである。
【0277】
一例では、前平衡化緩衝液の容量は少なくとも１０ＣＶである。例えば、前平衡化緩衝液の容量は、１０ＣＶ、または１１ＣＶ、または１２ＣＶ、または１３ＣＶ、または１４ＣＶ、または１５ＣＶ、または１６ＣＶ、または１７ＣＶ、または１８ＣＶ、または１９ＣＶ、または２０ＣＶである。一例では、前平衡化緩衝液の容量は１５ＣＶである。
【0278】
一例では、陰イオン交換樹脂は、リン酸一ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４）、リン酸二ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、リン酸（Ｈ３ＰＯ４）、クエン酸ナトリウム、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ、Ｌ－ヒスチジンおよびその組合せからなる群から選択される平衡化緩衝液で平衡化される。
【0279】
一例では、陰イオン交換樹脂は、Ｎａ２ＨＰＯ４を含む平衡化緩衝液で平衡化される。
【0280】
一例では、陰イオン交換樹脂は、Ｈ３ＰＯ４を含む平衡化緩衝液で平衡化される。
【0281】
一例では、陰イオン交換樹脂は、ＮａＨ２ＰＯ４を含む平衡化緩衝液で平衡化される。
【0282】
一例では、陰イオン交換樹脂は、Ｎａ２ＨＰＯ４およびＮａＨ２ＰＯ４を含む平衡化緩衝液で平衡化される。
【0283】
一例では、陰イオン交換樹脂は、ＭＥＳを含む平衡化緩衝液で平衡化される。
【0284】
一例では、陰イオン交換樹脂は、クエン酸ナトリウムを含む平衡化緩衝液で平衡化される。
【0285】
一例では、陰イオン交換樹脂は、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓを含む平衡化緩衝液で平衡化される。
【0286】
一例では、陰イオン交換樹脂は、Ｌ－ヒスチジンを含む平衡化緩衝液で平衡化される。
【0287】
一例では、平衡化緩衝液は、５ｍＭ～５０ｍＭの範囲の濃度である。例えば、平衡化緩衝液は、５ｍＭ、または１０ｍＭ、または２０ｍＭ、または３０ｍＭ、または４０ｍＭ、または５０ｍＭの濃度である。一例では、平衡化緩衝液は５ｍＭの濃度である。他の例では、平衡化緩衝液は１０ｍＭの濃度である。さらなる例では、平衡化緩衝液は２０ｍＭの濃度である。一例では、平衡化緩衝液は３０ｍＭの濃度である。他の例では、平衡化緩衝液は４０ｍＭの濃度である。さらなる例では、平衡化緩衝液は５０ｍＭの濃度である。
【0288】
一例では、平衡化緩衝液は、５ｍＭ～５０ｍＭの範囲の濃度のＮａＨ２ＰＯ４を含む。一例では、平衡化緩衝液は、１０ｍＭ～５０ｍＭの範囲の濃度のＮａＨ２ＰＯ４を含む。例えば、平衡化緩衝液は、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭの濃度のＮａＨ２ＰＯ４を含む。一例では、平衡化緩衝液は、５ｍＭの濃度のＮａＨ２ＰＯ４を含む。一例では、平衡化緩衝液は１０ｍＭの濃度のＮａＨ２ＰＯ４を含む。
【0289】
一例では、平衡化緩衝液は、５．８～６．６の範囲のｐＨである。例えば、平衡化緩衝液は、約５．８、または約５．９、または約６．０、または約６．１、または約６．２、または約６．３、または約６．４、または約６．５、または約６．６のｐＨである。一例では、平衡化は６．２のｐＨである。
【0290】
一例では、陰イオン交換樹脂は、５．８～６．６の範囲のｐＨで、リン酸緩衝液を含む平衡化緩衝液で平衡化される。一例では、平衡化緩衝液はリン酸緩衝液ｐＨ６．０を含む。一例では、平衡化緩衝液はリン酸緩衝液ｐＨ６．２を含む。一例では、平衡化緩衝液はリン酸緩衝液ｐＨ６．６を含む。一例では、陰イオン交換樹脂は、５ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ６．２を含む平衡化緩衝液で平衡化される。一例では、陰イオン交換樹脂は、１０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ６．２を含む平衡化緩衝液で平衡化される。
【0291】
一例では、陰イオン交換樹脂は、５．８～６．６の範囲のｐＨのＭＥＳ緩衝液を含む平衡化緩衝液で平衡化される。一例では、平衡化緩衝液はＭＥＳ緩衝液ｐＨ６．０を含む。一例では、平衡化緩衝液はＭＥＳ緩衝液ｐＨ６．２を含む。一例では、平衡化緩衝液はＭＥＳ緩衝液ｐＨ６．６を含む。
【0292】
一例では、陰イオン交換樹脂は、５．８～６．６の範囲のｐＨのＢｉｓ－Ｔｒｉｓ緩衝液を含む平衡化緩衝液で平衡化される。一例では、平衡化緩衝液はＢｉｓ－Ｔｒｉｓ緩衝液ｐＨ６．０を含む。一例では、平衡化緩衝液はＢｉｓ－Ｔｒｉｓ緩衝液ｐＨ６．２を含む。一例では、平衡化緩衝液は、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ緩衝液ｐＨ６．６を含む。
【0293】
一例では、陰イオン交換樹脂は、５．８～６．６の範囲のｐＨのＬ－ヒスチジン緩衝液を含む平衡化緩衝液で平衡化される。一例では、平衡化緩衝液はＬ－ヒスチジン緩衝液ｐＨ６．０を含む。一例では、平衡化緩衝液はＬ－ヒスチジン緩衝液ｐＨ６．２を含む。一例では、平衡化緩衝液はＬ－ヒスチジン緩衝液ｐＨ６．６を含む。
【0294】
一例では、平衡化緩衝液の容量は少なくとも２ＣＶである。例えば、平衡化緩衝液の容量は、２ＣＶ、または３ＣＶ、または４ＣＶ、または５ＣＶ、または６ＣＶ、または７ＣＶ、または８ＣＶ、または９ＣＶ、または１０ＣＶである。一例では、平衡化緩衝液の容量は２ＣＶ～１０ＣＶである。
【0295】
一例では、平衡化緩衝液の容量は少なくとも１０ＣＶである。例えば、平衡化緩衝液の容量は、１０ＣＶ、または１１ＣＶ、または１２ＣＶ、または１３ＣＶ、または１４ＣＶ、または１５ＣＶ、または１６ＣＶ、または１７ＣＶ、または１８ＣＶ、または１９ＣＶ、または２０ＣＶである。一例では、平衡化緩衝液の容量は１５ＣＶである。
【0296】
一例では、陰イオン交換樹脂は、樹脂１Ｌ当たり５ｇ ＩｇＧ～樹脂１Ｌ当たり１５ｇ ＩｇＧの範囲の濃度でＩｇＧが負荷される。例えば、樹脂は樹脂１Ｌ当たり５ｇ、または６ｇ、または７ｇ、または８ｇ、または９ｇ、または１０ｇ、または１１ｇ、または１２ｇ、または１３ｇ、または１４ｇ、または１５ｇのＩｇＧが負荷される。一例では、樹脂は樹脂１Ｌ当たり１５ｇのＩｇＧが負荷される。
【0297】
一例では、陰イオン交換樹脂は、負荷１Ｌ当たり５ｇ ＩｇＧ～負荷１Ｌ当たり１５ｇ ＩｇＧの範囲の濃度でＩｇＧが負荷される。例えば、樹脂は５ｇ／Ｌ、または６ｇ／Ｌ、または７ｇ／Ｌ、または８ｇ／Ｌ、または９ｇ／Ｌ、または１０ｇ／Ｌ、または１１ｇ／Ｌ、または１２ｇ／Ｌ、または１３ｇ／Ｌ、または１４ｇ／Ｌ、または１５ｇ／ＬのＩｇＧが負荷される。一例では、樹脂は負荷１Ｌ当たり１５ｇのＩｇＧが負荷される。
【0298】
一例では、陰イオン交換クロマトグラフィ工程は、リン酸緩衝液、クエン酸ナトリウム緩衝液、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸緩衝液、酢酸緩衝液、Ｂｉｓ－ｔｒｉｓ緩衝液およびＬ－ヒスチジン緩衝液からなる群から選択される負荷後洗浄緩衝液を含む。一例では、陰イオン交換クロマトグラフィ工程は、リン酸緩衝液、クエン酸ナトリウム緩衝液および酢酸緩衝液からなる群から選択される負荷後洗浄緩衝液を含む。
【0299】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、５ｍＭ～５０ｍＭの範囲の濃度である。一例では、負荷後洗浄緩衝液は１０ｍＭ～５０ｍＭの範囲の濃度である。例えば、負荷後洗浄緩衝液は１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭの濃度である。一例では、負荷後洗浄緩衝液は５ｍＭの濃度である。一例では、負荷後洗浄緩衝液は１０ｍＭの濃度である。
【0300】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はリン酸緩衝液を含む。例えば、リン酸緩衝液は、リン酸一ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４）、リン酸二ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、リン酸（Ｈ３ＰＯ４）およびその組合せからなる群から選択される。
【0301】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＮａ２ＨＰＯ４を含む。
【0302】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＨ３ＰＯ４を含む。
【0303】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＮａＨ２ＰＯ４を含む。例えば、負荷後洗浄緩衝液は５ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４を含む。他の例では、負荷後洗浄緩衝液は１０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４を含む。
【0304】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＮａ２ＨＰＯ４およびＮａＨ２ＰＯ４を含む。
【0305】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はクエン酸ナトリウム緩衝液を含む。
【0306】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は酢酸緩衝液を含む。例えば、負荷後洗浄緩衝液は酢酸ナトリウムを含む。例えば、負荷後洗浄緩衝液は５ｍＭ酢酸を含む。他の例では、負荷後洗浄緩衝液は１０ｍＭ酢酸を含む。
【0307】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はリン酸緩衝液および酢酸緩衝液を含む。例えば、負荷後洗浄緩衝液はＮａＨ２ＰＯ４および酢酸ナトリウムを含む。例えば、負荷後洗浄緩衝液は、５ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４および１０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。
【0308】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＭＥＳ緩衝液を含む。
【0309】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＢｉｓ－Ｔｒｉｓ緩衝液である。
【0310】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＬ－ヒスチジン緩衝液である。
【0311】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、５．０～約８．０の範囲のｐＨを有する。例えば、負荷後洗浄緩衝液は５．５～７．０の範囲のｐＨを有する。他の例では、負荷後洗浄緩衝液は５．８～６．６の範囲のｐＨを有する。例えば、負荷後洗浄緩衝液は、約５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５または６．６のｐＨである。一例では、負荷後洗浄緩衝液は６．０のｐＨである。一例では、負荷後洗浄緩衝液は６．２のｐＨである。他の例では、負荷後洗浄緩衝液は６．６のｐＨである。
【0312】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は塩をさらに含む。例えば、塩は塩化ナトリウムである。
【0313】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は塩を含まない。
【0314】
一例では、塩化ナトリウムは０ｍＭ～２００ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは０ｍＭ～５０ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは０ｍＭ～１００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは２０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは２０ｍＭ～８０ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは約２０ｍＭ、または３０ｍＭ、または４０ｍＭ、または５０ｍＭ、または６０ｍＭ、または７０ｍＭ、または８０ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは約２０ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは約２５ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは５０ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは約７０ｍＭの濃度である。一例では、塩化ナトリウムは１２０ｍＭ～２００ｍＭの濃度である。例えば、塩化ナトリウムは１５０ｍＭの濃度である。他の例では、塩化ナトリウムは２００ｍＭの濃度である。
【0315】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、５．８～６．６の範囲のｐＨのリン酸緩衝液を含む。
【0316】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はリン酸緩衝液ｐＨ６．０を含む。
【0317】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はリン酸緩衝液ｐＨ６．２を含む。
【0318】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はリン酸緩衝液ｐＨ６．６を含む。
【0319】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はリン酸緩衝液および０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0320】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はリン酸緩衝液および２０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0321】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はリン酸緩衝液および５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0322】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はリン酸緩衝液および０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0323】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はリン酸緩衝液および２５ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0324】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はリン酸緩衝液および５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0325】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はリン酸緩衝液および０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．２を含む。
【0326】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、５．８～６．６の範囲のｐＨのＭＥＳ緩衝液を含む。
【0327】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＭＥＳ緩衝液ｐＨ６．０を含む。
【0328】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＭＥＳ緩衝液ｐＨ６．６を含む。
【0329】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＭＥＳ緩衝液および２０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0330】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＭＥＳ緩衝液および５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0331】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＭＥＳ緩衝液および２５ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0332】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＭＥＳ緩衝液および５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0333】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、５．８～６．６の範囲のｐＨのクエン酸ナトリウム緩衝液を含む。
【0334】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はクエン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．０を含む。
【0335】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はクエン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．６を含む。
【0336】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はクエン酸ナトリウム緩衝液および２０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0337】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はクエン酸ナトリウム緩衝液および５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0338】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はクエン酸ナトリウム緩衝液および２５ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0339】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はクエン酸ナトリウム緩衝液および５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0340】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、５．８～６．６の範囲のｐＨの酢酸ナトリウム緩衝液を含む。
【0341】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．０を含む。
【0342】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．２を含む。
【0343】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．６を含む。
【0344】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は酢酸ナトリウム緩衝液および０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0345】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は酢酸ナトリウム緩衝液および２０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0346】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は酢酸ナトリウム緩衝液および５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0347】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は酢酸ナトリウム緩衝液および０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0348】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は酢酸ナトリウム緩衝液および２５ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0349】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は酢酸ナトリウム緩衝液とおよび５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0350】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は酢酸ナトリウム緩衝液および０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．２を含む。
【0351】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、５．８～６．６の範囲のｐＨのリン酸塩および酢酸ナトリウム緩衝液を含む。
【0352】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、リン酸塩および酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．０を含む。
【0353】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、リン酸塩および酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．２を含む。
【0354】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、リン酸塩および酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．６を含む。
【0355】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、リン酸塩および酢酸ナトリウム緩衝液および０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0356】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、リン酸塩および酢酸ナトリウム緩衝液および２０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0357】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、リン酸塩および酢酸ナトリウム緩衝液および５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0358】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、リン酸塩および酢酸ナトリウム緩衝液および０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0359】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、リン酸塩および酢酸ナトリウム緩衝液および２５ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0360】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、リン酸塩および酢酸ナトリウム緩衝液および５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0361】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、リン酸塩および酢酸ナトリウム緩衝液および０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．２を含む。
【0362】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、５．８～６．６の範囲のｐＨのＢｉｓ－Ｔｒｉｓ緩衝液を含む。
【0363】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ緩衝液ｐＨ６．０を含む。
【0364】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ緩衝液ｐＨ６．６を含む。
【0365】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ緩衝液および２０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0366】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ緩衝液および５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0367】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ緩衝液および２５ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0368】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ緩衝液および５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0369】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、５．８～６．６の範囲のｐＨのＬ－ヒスチジン緩衝液を含む。
【0370】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、Ｌ－ヒスチジン緩衝液ｐＨ６．０を含む。
【0371】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、Ｌ－ヒスチジン緩衝液ｐＨ６．６を含む。
【0372】
一例では、負荷後洗浄緩衝液はＬ－ヒスチジン緩衝液および２０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0373】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、Ｌ－ヒスチジン緩衝液および５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．０を含む。
【0374】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、Ｌ－ヒスチジン緩衝液および２５ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0375】
一例では、負荷後洗浄緩衝液は、Ｌ－ヒスチジン緩衝液および５０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ６．６を含む。
【0376】
一例では、負荷後洗浄緩衝液の容量は１～５ＣＶである。例えば、負荷後洗浄緩衝液の容量は１ＣＶ、または２ＣＶ、または３ＣＶ、または４ＣＶ、または５ＣＶである。一例では、負荷後洗浄緩衝液の容量は３ＣＶである。
【0377】
一例では、陰イオン交換樹脂は、塩化ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、水酸化ナトリウム、酢酸およびその組合せからなる群から選択される再生緩衝液で再生される。
【0378】
一例では、陰イオン交換樹脂は、塩化ナトリウム、リン酸緩衝液、水酸化ナトリウム緩衝液、酢酸緩衝液およびその組合せからなる群から選択される再生緩衝液で再生される。
【0379】
一例では、陰イオン交換樹脂は、リン酸緩衝液を含む再生緩衝液で再生される。例えば、リン酸緩衝液は、リン酸一ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４）、リン酸二ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、リン酸（Ｈ３ＰＯ４）およびその組合せからなる群から選択される。
【0380】
一例では、再生緩衝液はＮａ２ＨＰＯ４を含む。
【0381】
一例では、再生緩衝液はＨ３ＰＯ４を含む。
【0382】
一例では、再生緩衝液はＮａＨ２ＰＯ４を含む。
【0383】
一例では、再生緩衝液は、Ｎａ２ＨＰＯ４およびＮａＨ２ＰＯ４を含む。
【0384】
一例では、再生緩衝液は塩化ナトリウムを含む。他の例では、再生緩衝液は水酸化ナトリウムを含む。さらなる例では、再生緩衝液は酢酸を含む。
【0385】
一例では、再生緩衝液は塩化ナトリウムおよびリン酸緩衝液を含む。一例では、再生緩衝液は塩化ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４）からなる。一例では、再生緩衝液は塩化ナトリウムとＮａ２ＨＰＯ４を含む。一例では、再生緩衝液は塩化ナトリウムおよびＨ３ＰＯ４を含む。一例では、再生緩衝液は塩化ナトリウムおよびＮａ２ＨＰＯ４およびＮａＨ２ＰＯ４を含む。
【0386】
一例では、再生緩衝液は１Ｍ塩化ナトリウムと１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、ｐＨ６．２を含む。
【0387】
一例では、再生緩衝液は１Ｍ塩化ナトリウムおよび１０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、ｐＨ６．２を含む。
【0388】
一例では、再生緩衝液は１Ｍ塩化ナトリウムおよび１０ｍＭ Ｈ３ＰＯ４、ｐＨ６．２を含む。
【0389】
一例では、再生緩衝液は１Ｍ塩化ナトリウムおよび１０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４およびＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ６．２を含む。
【0390】
一例では、再生緩衝液は１Ｍ塩化ナトリウムおよび１００ｍＭリン酸二水素ナトリウム、ｐＨ６．２を含む。
【0391】
一例では、再生緩衝液は１Ｍ塩化ナトリウムおよび１００ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、ｐＨ６．２を含む。
【0392】
一例では、再生緩衝液は１Ｍ塩化ナトリウムおよび１００ｍＭ Ｈ３ＰＯ４、ｐＨ６．２を含む。
【0393】
一例では、再生緩衝液は１Ｍ塩化ナトリウムおよび１００ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４およびＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ６．２を含む。
【0394】
一例では、再生緩衝液は０．５Ｍ水酸化ナトリウムを含む。
【0395】
一例では、再生緩衝液は１Ｍ酢酸を含む。
【0396】
一例では、再生緩衝液の容量は１～１０ＣＶである。例えば、再生緩衝液の容量は１ＣＶ、または２ＣＶ、または３ＣＶ、または４ＣＶ、または５ＣＶ、または６ＣＶ、または７ＣＶ、または８ＣＶ、または９ＣＶ、または１０ＣＶである。一例では、再生緩衝液の容量は５ＣＶである。
【0397】
適切な再生方法は、当業者に明らかであり、および／または本明細書に記載されるであろう。
【0398】
一例では、ＩｇＧの少なくとも７５％が血漿またはその画分から回収される。他の例では、ＩｇＧの少なくとも７５％は連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも７５％は、さらなる精製工程なしに、連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも７５％は、さらなる精製工程を伴う連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも７５％は、イオン交換クロマトグラフィ工程後に血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの少なくとも７５％は、陰イオン交換クロマトグラフィ工程後に血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの少なくとも７５％は血漿またはその画分から回収され、ここでＩｇＧは少なくとも５００ｋｇの血漿またはその画分に由来する。例えば、ＩｇＧの少なくとも７５％は、血漿またはその画分の大規模精製から回収される。例えば、ＩｇＧの７５％、または７６％、または７７％、または７８％、または７９％は血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの７５％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの７６％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの７７％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの７８％が血漿またはその画分から回収される。他の例では、ＩｇＧの７９％が血漿またはその画分から回収される。
【0399】
一例では、ＩｇＧの少なくとも８０％は血漿またはその画分から回収される。他の例では、ＩｇＧの少なくとも８０％は連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも８０％は、さらなる精製工程なしに、連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも８０％は、さらなる精製工程を伴う連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも８０％は、イオン交換クロマトグラフィ工程後に血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの少なくとも８０％は、陰イオン交換クロマトグラフィ工程後に血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの少なくとも８０％は血漿またはその画分から回収され、ここでＩｇＧは少なくとも５００ｋｇの血漿またはその画分に由来する。例えば、ＩｇＧの少なくとも８０％は、血漿またはその画分の大規模精製から回収される。例えば、ＩｇＧの８０％、または８１％、または８２％、または８３％、または８４％は血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの８０％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの８１％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの８２％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの８３％が血漿またはその画分から回収される。他の例では、ＩｇＧの８４％が血漿またはその画分から回収される。
【0400】
一例では、ＩｇＧの少なくとも８５％は血漿またはその画分から回収される。他の例では、ＩｇＧの少なくとも８５％は連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも８５％は、さらなる精製工程なしに、連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも８５％は、さらなる精製工程を伴う連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも８５％は、イオン交換クロマトグラフィ工程後に血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの少なくとも８５％は、陰イオン交換クロマトグラフィ工程後に血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの少なくとも８５％は血漿またはその画分から回収され、ここでＩｇＧは少なくとも５００ｋｇの血漿またはその画分に由来する。例えば、ＩｇＧの少なくとも８５％は、血漿またはその画分の大規模精製から回収される。例えば、ＩｇＧの８５％、または８６％、または８７％、または８８％、または８９％は血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの８５％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの８６％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの８７％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの８８％が血漿またはその画分から回収される。他の例では、ＩｇＧの８９％が血漿またはその画分から回収される。
【0401】
一例では、ＩｇＧの少なくとも９０％は血漿またはその画分から回収される。他の例では、ＩｇＧの少なくとも９０％は連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも９０％は、さらなる精製工程なしに、連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも９０％は、さらなる精製工程を伴う連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも９０％は、イオン交換クロマトグラフィ工程後に血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの少なくとも９０％は、陰イオン交換クロマトグラフィ工程後に血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの少なくとも９０％は血漿またはその画分から回収され、ここでＩｇＧは少なくとも５００ｋｇの血漿またはその画分に由来する。例えば、ＩｇＧの少なくとも９０％は、血漿またはその画分の大規模精製から回収される。例えば、ＩｇＧの９０％、または９１％、または９２％、または９３％、または９４％は血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの９０％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの９１％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの９２％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの９３％が血漿またはその画分から回収される。他の例では、ＩｇＧの９４％が血漿またはその画分から回収される。
【0402】
一例では、ＩｇＧの少なくとも９５％は血漿またはその画分から回収される。他の例では、ＩｇＧの少なくとも９５％は連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも９５％は、さらなる精製工程なしに、連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも９５％は、さらなる精製工程を伴う連続クロマトグラフィ法に従って血漿またはその画分から回収される。例えば、ＩｇＧの少なくとも９５％は、イオン交換クロマトグラフィ工程後に血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの少なくとも９５％は、陰イオン交換クロマトグラフィ工程後に血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの少なくとも９５％は血漿またはその画分から回収され、ここでＩｇＧは少なくとも５００ｋｇの血漿またはその画分に由来する。例えば、ＩｇＧの少なくとも９５％は、血漿またはその画分の大規模精製から回収される。例えば、ＩｇＧの９５％、または９６％、または９７％、または９８％、または９９％は血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの９５％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの９６％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの９７％が血漿またはその画分から回収される。一例では、ＩｇＧの９８％が血漿またはその画分から回収される。他の例では、ＩｇＧの９９％が血漿またはその画分から回収される。
【0403】
一例では、溶出ＩｇＧは少なくとも９５％の純度を有する。他の例では、溶出ＩｇＧは、連続クロマトグラフィ法に従って少なくとも９５％の純度を有する。一例では、溶出ＩｇＧは、さらなる精製工程なしに、連続クロマトグラフィ法に従って少なくとも９５％の純度を有する。一例では、溶出ＩｇＧは、さらなる精製工程を伴う連続クロマトグラフィ法に従って少なくとも９５％の純度を有する。一例では、少なくとも９５％の純度を有する溶出ＩｇＧは、少なくとも５００ｋｇの血漿またはその画分に由来する。例えば、少なくとも９５％の純度を有する溶出ＩｇＧは、血漿またはその画分の大規模精製から回収される。例えば、溶出ＩｇＧは９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の純度を有する。一例では、溶出ＩｇＧは９５％の純度を有する。一例では、溶出ＩｇＧは９６％の純度を有する。一例では、溶出ＩｇＧは９７％の純度を有する。
【0404】
一例では、溶出ＩｇＧは少なくとも９８％の純度を有する。他の例では、溶出ＩｇＧは、連続クロマトグラフィ法に従って少なくとも９８％の純度を有する。一例では、溶出ＩｇＧは、さらなる精製工程なしに、連続クロマトグラフィ法に従って少なくとも９８％の純度を有する。一例では、溶出ＩｇＧは、さらなる精製工程を伴う連続クロマトグラフィ法に従って少なくとも９８％の純度を有する。一例では、少なくとも９８％の純度を有する溶出ＩｇＧは、少なくとも５００ｋｇの血漿またはその画分に由来する。例えば、少なくとも９８％の純度を有する溶出ＩｇＧは、血漿またはその画分の大規模精製から回収される。例えば、溶出ＩｇＧは９８％または９９％の純度を有する。
【0405】
一例では、本方法は大規模に実施される。例えば、本方法は工業的または商業的規模で実施される。工業的または商業的規模で実施する方法は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載される。例えば、工業的規模で実施される方法は、血漿またはその画分からのＩｇＧの大規模精製を含む。
【0406】
一例では、ＩｇＧの大規模精製は、少なくとも５００ｋｇの血漿またはその画分を用いて実施される。例えば、ＩｇＧの大規模精製は、５００ｋｇ～１０００ｋｇ、または１０００ｋｇ～２５００ｋｇ、または２５００ｋｇ～５０００ｋｇ、または５０００ｋｇ～７５００ｋｇ、または７５００ｋｇ、または１００００ｋｇ、または１００００ｋｇ～１２５００ｋｇ、または１２５００ｋｇ～１５０００ｋｇの血漿またはその画分を用いて実施される。一例では、ＩｇＧの大規模精製は、少なくとも１０００ｋｇ、または２５００ｋｇ、または５０００ｋｇ、または７５００ｋｇ、または１００００ｋｇ、または１２５００ｋｇ、または１５０００ｋｇのその画分の血漿を用いて実施される。一例では、ＩｇＧの大規模精製は、少なくとも１０００ｋｇのその画分の血漿を用いて実施される。一例では、ＩｇＧの大規模精製は、少なくとも２５００ｋｇのその画分の血漿を用いて実施される。一例では、ＩｇＧの大規模精製は、少なくとも５０００ｋｇのその画分の血漿を用いて実施される。一例では、ＩｇＧの大規模精製は、少なくとも７５００ｋｇのその画分の血漿を用いて実施される。一例では、ＩｇＧの大規模精製は、少なくとも１００００ｋｇのその画分の血漿を用いて実施される。一例では、ＩｇＧの大規模精製は、少なくとも１２５００ｋｇのその画分の血漿を用いて実施される。一例では、ＩｇＧの大規模精製は、少なくとも１５０００ｋｇのその画分の血漿を用いて実施される。
【0407】
一例では、本方法は、精製ＩｇＧを医薬組成物に製剤化することをさらに含む。
【0408】
本開示はさらに、ＳＭＢクロマトグラフィを用いて血漿またはその画分からＩｇＧを精製する方法であって：
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクス、およびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸塩洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）を、アフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された、一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、場合により、方法が、２～３のｐＨを有する２０ｍＭリン酸塩洗浄緩衝液で樹脂をストリッピングすることをさらに含む、方法を提供する。
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクス、およびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸塩洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）を、アフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された、一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、場合により、方法が、２～３のｐＨを有する２０ｍＭリン酸塩洗浄緩衝液で樹脂をストリッピングすることをさらに含む、方法を提供する。
【0409】
本開示はさらに、ＳＭＢクロマトグラフィを用いて血漿またはその画分からＩｇＧを精製する方法であって：
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクス、およびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、１４５ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、１４５ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨを有する洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）を、アフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された、一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、場合により、方法が、２～３のｐＨを有する２０ｍＭリン酸塩洗浄緩衝液で樹脂をストリッピングすることをさらに含む、方法を提供する。
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクス、およびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、１４５ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、１４５ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨを有する洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）を、アフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された、一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、場合により、方法が、２～３のｐＨを有する２０ｍＭリン酸塩洗浄緩衝液で樹脂をストリッピングすることをさらに含む、方法を提供する。
【0410】
本開示はさらに、ＳＭＢクロマトグラフィを用いて血漿またはその画分からＩｇＧを精製する方法であって：
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクス、およびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、５００ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、５００ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨを有する洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）をアフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、場合により、方法が、２～３のｐＨを有する２０ｍＭリン酸塩洗浄緩衝液で樹脂をストリッピングすることをさらに含む、方法を提供する。
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクス、およびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、５００ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、５００ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨを有する洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）をアフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、場合により、方法が、２～３のｐＨを有する２０ｍＭリン酸塩洗浄緩衝液で樹脂をストリッピングすることをさらに含む、方法を提供する。
【0411】
一例では、本方法は、樹脂をストリッピングすることを含まない。
【0412】
本開示はさらに、ＳＭＢクロマトグラフィを用いて血漿またはその画分からＩｇＧを精製する方法であって：
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクス、およびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸塩洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）を、アフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された、一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、方法が、樹脂をストリッピングすることを含まない、方法を提供する。
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクス、およびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸塩洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）を、アフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された、一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、方法が、樹脂をストリッピングすることを含まない、方法を提供する。
【0413】
本開示はさらに、ＳＭＢクロマトグラフィを用いて血漿またはその画分からＩｇＧを精製する方法であって：
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスおよびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合することができるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸塩洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩またはリン酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）を、アフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された、一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、方法が、場合により、樹脂をストリッピングすることを含まない、方法を提供する。
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスおよびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合することができるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）７～８のｐＨを有する２０ｍＭリン酸塩洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩またはリン酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）を、アフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された、一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、方法が、場合により、樹脂をストリッピングすることを含まない、方法を提供する。
【0414】
本開示はさらに、ＳＭＢクロマトグラフィを用いて血漿またはその画分からＩｇＧを精製する方法であって：
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクス、およびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、１４５ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、１４５ｍＭ塩化ナトリウムを含む、７～８のｐＨを有する洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）を、アフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された、一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、方法が、樹脂をストリッピングすることを含まない、方法を提供する。
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクス、およびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、１４５ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、１４５ｍＭ塩化ナトリウムを含む、７～８のｐＨを有する洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）を、アフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された、一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、方法が、樹脂をストリッピングすることを含まない、方法を提供する。
【0415】
本開示はさらに、ＳＭＢクロマトグラフィを用いて血漿またはその画分からＩｇＧを精製する方法であって：
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクス、およびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、５００ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、５００ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨWho洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）を、アフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された、一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、方法が、樹脂をストリッピングすることを含まない、方法を提供する。
ａ）架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクス、およびヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含むアフィニティークロマトグラフィ樹脂を、２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、５００ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨを有する平衡化緩衝液で平衡化する工程；
ｂ）血漿またはその画分からのＩｇＧを樹脂に結合させる工程；
ｃ）２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液、５００ｍＭ塩化ナトリウムを含み、７～８のｐＨWho洗浄緩衝液で樹脂を洗浄する工程；および
ｄ）結合ＩｇＧを、３～５のｐＨを有する２０ｍＭ酢酸塩溶出緩衝液で溶出する工程
を含み；
ここで、工程ａ）～ｄ）を、アフィニティークロマトグラフィ樹脂上で繰り返してもよく、ここで、アフィニティークロマトグラフィ樹脂が、入口および出口バルブを含む流体導管によって分離された、一連の２つ以上の流体接続されたカラムに充填され、方法が、樹脂をストリッピングすることを含まない、方法を提供する。
【0416】
一例では、本方法は樹脂上で少なくとも５０サイクル繰り返される。例えば、本方法は、血漿またはその画分のバッチ当たり少なくとも５０サイクル、樹脂上で繰り返される。一例では、本方法は、血漿またはその画分のバッチ当たり５０～８０サイクル、６０～８０サイクル、７０～８０サイクル、樹脂上で繰り返される。例えば、本方法は、血漿またはその画分のバッチ当たり少なくとも６０サイクル、または６５サイクル、または７０サイクル、または７５サイクル、または８０サイクル、樹脂上で繰り返される。
【0417】
一例では、本方法は、血漿またはその画分のバッチ当たり５０サイクル、樹脂上で繰り返される。
【0418】
一例では、本方法は、血漿またはその画分のバッチ当たり６０サイクル、樹脂上で繰り返される。
【0419】
一例では、本方法は、血漿またはその画分のバッチ当たり７０サイクル、樹脂上で繰り返される。
【0420】
一例では、本方法は、血漿またはその画分のバッチ当たり８０サイクル、樹脂上で繰り返される。
【0421】
一例では、本方法は、血漿またはその画分の複数のバッチを用いて樹脂上で繰り返される。例えば、本方法は、少なくとも２バッチの血漿またはその画分を用いて樹脂上で繰り返される。一例では、本方法は、２、または３、または４、または５、または６、または７、または８、または９、または１０バッチの血漿またはその画分を用いて樹脂上で繰り返される。一例では、本方法は、４～１０バッチの血漿またはその画分を用いて樹脂上で繰り返される。
【0422】
一例では、本方法は樹脂上で合計最大８００サイクル繰り返される。例えば、樹脂は合計最大８００サイクル再使用される。一例では、本方法は樹脂上で合計最大１００、または２００、または３００、または４００、または５００、または６００、または７００サイクル繰り返される。例えば、本方法は、樹脂上で合計最大１００サイクル繰り返される。例えば、本方法は樹脂上で合計最大２００サイクル繰り返される。例えば、本方法は樹脂上で合計最大３００サイクル繰り返される。例えば、本方法は樹脂上で合計最大４００サイクル繰り返される。例えば、本方法は樹脂上で合計最大５００サイクル繰り返される。例えば、本方法は樹脂上で合計最大６００サイクル繰り返される。例えば、本方法は樹脂上で合計最大７００サイクル繰り返される。
【0423】
一例では、本方法は樹脂上で１００～２００サイクル、または２００～３００サイクル、または２００～５００サイクル、または５００～８００サイクル繰り返される。
【0424】
一例では、本方法は樹脂上で２００サイクル繰り返される。
【0425】
一例では、本方法は樹脂上で３００サイクル繰り返される。
【0426】
一例では、本方法は樹脂上で４００サイクル繰り返される。
【0427】
一例では、本方法は樹脂上で５００サイクル繰り返される。
【0428】
一例では、本方法は樹脂上で６００サイクル繰り返される。
【0429】
一例では、本方法は樹脂上で７００サイクル繰り返される。
【0430】
一例では、本方法は樹脂上で８００サイクル繰り返される。
【0431】
一例では、本方法は樹脂上で２００～５００サイクル繰り返される。例えば、樹脂は合計最大２００～５００サイクル再使用される。一例では、樹脂は最大１０バッチの血漿またはその画分で合計最大５００サイクル再使用される。
【0432】
一例では、消毒工程は個々のサイクル後に樹脂上で実施される。他の例では、消毒工程は複数サイクル後に樹脂上で実施される。例えば、消毒工程は少なくとも５０サイクル後に樹脂上で実施される。一例では、消毒工程は少なくとも１００サイクル後に樹脂上で実施される。他の例では、消毒工程は少なくとも１５０サイクル後に樹脂上で実施される。さらなる例では、消毒工程は少なくとも２００サイクル後に樹脂上で実施される。一例では、消毒工程は、血漿またはその画分の各バッチ後に樹脂上で実施される。例えば、消毒工程は、血漿またはその画分の各バッチの間、すなわち、血漿またはその画分の各バッチを樹脂に負荷する前に樹脂上で実施される。
【0433】
適切な消毒方法は、当業者に公知である、および／または本明細書に記載されるであろう。
【0434】
一例では、本方法は樹脂のＤＢＣを低下させる。例えば、樹脂の再使用は樹脂のＤＢＣを低下させる。一例では、樹脂のＤＢＣは最大８０％低下する。例えば、樹脂のＤＢＣは最大７５％、または７０％、または６５％、または６０％、または５５％、または４０％、または４５％、または４０％、または３５％、または３０％、または２５％、または２０％、または１５％、または１０％、または５％低下する。
【0435】
一例では、樹脂のＤＢＣが最大８０％低下するまで樹脂を再使用する。
【0436】
一例では、本方法は樹脂のＤＢＣを８０％低下させる。例えば、樹脂のＤＢＣが８０％低下するまで樹脂を再使用する。
【0437】
一例では、本方法は樹脂のＤＢＣを７０％低下させる。例えば、樹脂のＤＢＣが７０％低下するまで樹脂を再使用する。
【0438】
一例では、本方法は樹脂のＤＢＣを６０％低下させる。例えば、樹脂のＤＢＣが６０％低下するまで樹脂を再使用する。
【0439】
一例では、本方法は樹脂のＤＢＣを５０％低下させる。例えば、樹脂のＤＢＣが５０％低下するまで樹脂を再使用する。
【0440】
一例では、本方法は樹脂のＤＢＣを４０％低下させる。例えば、樹脂のＤＢＣが４０％低下するまで樹脂を再使用する。
【0441】
一例では、本方法は樹脂のＤＢＣを３０％低下させる。例えば、樹脂のＤＢＣが３０％低下するまで樹脂を再使用する。
【0442】
一例では、本方法は樹脂のＤＢＣを２０％低下させる。例えば、樹脂のＤＢＣが２０％低下するまで樹脂を再使用する。
【0443】
一例では、本方法は樹脂のＤＢＣを１０％低下させる。例えば、樹脂のＤＢＣが１０％低下するまで樹脂を再使用する。
【0444】
本開示はまた、本明細書に記載の方法によって精製または産生されたＩｇＧを含む医薬組成物を提供する。例えば、医薬組成物は、本明細書に記載の方法によって精製または産生されたＩｇＧ、および薬学的に許容される担体を含む。
【0445】
一例では、医薬組成物は、少なくとも１％（ｗ／ｖ）の精製ＩｇＧを含む。例えば、医薬組成物は、１％（ｗ／ｖ）の精製ＩｇＧを含む。他の例では、医薬組成物は５％（ｗ／ｖ）の精製ＩｇＧを含む。一例では、医薬組成物は１０～３０％（ｗ／ｖ）の精製ＩｇＧを含む。例えば、医薬組成物は１０％（ｗ／ｖ）の精製ＩｇＧを含む。一例では、医薬組成物は１６．５％（ｗ／ｖ）の精製ＩｇＧを含む。他の例では、医薬組成物は２０％（ｗ／ｖ）の精製ＩｇＧを含む。一例では、医薬組成物は２５％（ｗ／ｖ）の精製ＩｇＧを含む。他の例では、医薬組成物は３０％（ｗ／ｖ）の精製ＩｇＧを含む。
【0446】
一例では、医薬組成物中のＩｇＧ含量は、組成物中のタンパク質の総量の少なくとも９５％（ｗ／ｗ）である。例えば、医薬組成物中のＩｇＧ含量は、組成物中のタンパク質の総量の９５％（ｗ／ｗ）である。他の例では、医薬組成物中のＩｇＧ含量は、組成物中のタンパク質の総量の９６％（ｗ／ｗ）である。さらなる例では、医薬組成物中のＩｇＧ含量は、組成物中のタンパク質の総量の９７％（ｗ／ｗ）である。一例では、医薬組成物中のＩｇＧ含量は、組成物中のタンパク質の総量の９８％（ｗ／ｗ）である。さらなる例では、医薬組成物中のＩｇＧ含量は、組成物中のタンパク質の総量の９９％（ｗ／ｗ）である。
【0447】
一例では、医薬組成物は、１００ｍｇ／ｍＬの総ヒト血漿タンパク質を含む。一例では、医薬組成物は、２０ｇ／１００ｍＬの総ヒト血漿タンパク質を含む。
【0448】
一例では、医薬組成物は、少なくとも９５％の純度の免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む。例えば、医薬組成物は、少なくとも９６％の純度の免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む。他の例では、医薬組成物は、少なくとも９７％の純度の免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む。他の例では、医薬組成物は、少なくとも９８％の純度の免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む。他の例では、医薬組成物は、少なくとも９９％の純度の免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む。
【0449】
一例では、医薬組成物は、少なくとも６０％のＩｇＧ１サブクラス分布を含む。例えば、医薬組成物は、少なくとも６５％のＩｇＧ１サブクラス分布を含む。
【0450】
一例では、医薬組成物は、３０％未満のＩｇＧ２サブクラス分布を含む。例えば、医薬組成物は、２８％未満のＩｇＧ２サブクラス分布を含む。
【0451】
一例では、医薬組成物は、５％未満のＩｇＧ３サブクラス分布を含む。例えば、医薬組成物は、４％未満のＩｇＧ３サブクラス分布を含む。
【0452】
一例では、医薬組成物は、５％未満のＩｇＧ４サブクラス分布を含む。例えば、医薬組成物は、３％未満のＩｇＧ４サブクラス分布を含む。
【0453】
一例では、医薬組成物は、正常ヒト血漿と類似のＩｇＧサブクラス分布、例えば、６９％のＩｇＧ１、２６％のＩｇＧ２、３％のＩｇＧ３および２％のＩｇＧ４を含む。
【0454】
一例では、医薬組成物は、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ～４００ｍＯｓｍ／ｋｇの公称浸透圧を含む。一例では、医薬組成物は、３８０ｍＯｓｍ／ｋｇの公称浸透圧を含む。例えば、医薬組成物は、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ～３５０ｍＯｓｍ／ｋｇの公称浸透圧を含む。一例では、医薬組成物は、３２０ｍＯｓｍ／ｋｇの公称浸透圧を含む。
【0455】
一例では、医薬組成物は、４～５．５のｐＨを含む。例えば、医薬組成物は、４．５～５．０のｐＨを含む。一例では、医薬組成物は、４．６～５．０のｐＨを含む。例えば、医薬組成物は４．６のｐＨを含む。一例では、医薬組成物は４．７のｐＨを含む。他の例では、医薬組成物は４．８のｐＨを含む。さらなる例では、医薬組成物は４．９のｐＨを含む。一例では、医薬組成物は５．０のｐＨを含む。
【0456】
一例では、医薬組成物は、２００ｍｍｏｌ／Ｌ～３００ｍｍｏｌ／ＬのＬ－プロリンをさらに含む。例えば、医薬組成物は、２２５ｍｍｏｌ／Ｌ～２７５ｍｍｏｌ／ＬのＬ－プロリンをさらに含む。一例では、医薬組成物は、２４０ｍｍｏｌ／Ｌ～２６０ｍｍｏｌ／ＬのＬ－プロリンをさらに含む。例えば、医薬組成物は、２５０ｍｍｏｌ／ＬのＬ－プロリンをさらに含む。
【0457】
一例では、医薬組成物は、≦１ｍｍｏｌ／Ｌのナトリウム含量を含む。
【0458】
一例では、医薬組成物は、≦０．０５ｍｇ／ｍＬのＩｇＡ含量を含む。例えば、医薬組成物は、≦０．０４ｍｇ／ｍＬ、または≦０．０３ｍｇ／ｍＬのＩｇＡ含量を含む。一例では、医薬組成物は、≦０．０２５ｍｇ／ｍＬのＩｇＡ含量を含む。一例では、医薬組成物は、≦０．０１ｍｇ／ｍＬのＩｇＡ含量を含む。例えば、医薬組成物は、≦０．００９ｍｇ／ｍＬのＩｇＡ含量を含む。
【0459】
一例では、医薬組成物は、≦０．１ｍｇ／ｇ ＩｇＧのＩｇＡ含量を含む。一例では、医薬組成物は、≦０．０９ｍｇ／ｇ ＩｇＧのＩｇＡ含量を含む。
【0460】
一例では、医薬組成物は、≦１０ｍｇ／ＬのＩｇＭ含量を含む。例えば、≦１０ｍｇ／Ｌ、≦９ｍｇ／Ｌ、≦８ｍｇ／Ｌ、≦７ｍｇ／Ｌ、≦６ｍｇ／Ｌ、≦５ｍｇ／Ｌ、≦４ｍｇ／Ｌ、≦３ｍｇ／Ｌ、≦２ｍｇ／ＬのＩｇＭ含量。一例では、医薬組成物は、≦２ｍｇ／ＬのＩｇＭ含量を含む。一例では、医薬組成物は、≦１ｍｇ／ＬのＩｇＭ含量を含む。一例では、医薬組成物は、≦０．５ｍｇ／ＬのＩｇＭ含量を含む。例えば、医薬組成物は、＜０．１７ｍｇ／ＬのＩｇＭ含量を含む。
【0461】
一例では、医薬組成物は、≦２μｇ／ｇ ＩｇＧのＩｇＭ含量を含む。一例では、医薬組成物は、≦１．９μｇ／ｇ ＩｇＧのＩｇＭ含量を含む。
【0462】
一例では、医薬組成物は、≦０．５０ｍｇ／ｍＬのアルブミン含量を含む。例えば、医薬組成物は、≦０．４０ｍｇ／ｍＬのアルブミン含量を含む。一例では、医薬組成物は、≦０．３０ｍｇ／ｍＬのアルブミン含量を含む。一例では、医薬組成物は、≦０．２０ｍｇ／ｍＬのアルブミン含量を含む。一例では、医薬組成物は、≦０．１０ｍｇ／ｍＬのアルブミン含量を含む。例えば、医薬組成物は、≦０．０９ｍｇ／ｍＬのアルブミン含量を含む。一例では、医薬組成物は、≦０．０８ｍｇ／ｍＬのアルブミン含量を含む。一例では、医薬組成物は、≦０．０７ｍｇ／ｍＬのアルブミン含量を含む。
【0463】
一例では、医薬組成物は、≦１ｍｇ／ｇ ＩｇＧのアルブミン含量を含む。一例では、医薬組成物は、≦０．８０ｍｇ／ｇ ＩｇＧのアルブミン含量を含む。
【0464】
一例では、医薬組成物は、≦３５ＩＵ／ｍＬのプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）レベルを含む。一例では、医薬組成物は、≦３０ＩＵ／ｍＬのプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）レベルを含む。一例では、医薬組成物は、≦５０ＩＵ／ｍＬのプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）レベルを含む。一例では、医薬組成物は、≦２０ＩＵ／ｍＬのプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）レベルを含む。例えば、医薬組成物は、≦１５ＩＵ／ｍＬのプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）レベルを含む。一例では、医薬組成物は、≦１０ＩＵ／ｍＬのプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）レベルを含む。
【0465】
本開示はまた、対象における状態の治療、予防および／または進行遅延における使用のための、本明細書に記載の医薬組成物を提供する。例えば、本開示は、対象における状態の治療における使用のための、本明細書に記載の医薬組成物を提供する。他の例では、本開示は、対象における状態の予防における使用のための、本明細書に記載の医薬組成物を提供する。さらなる例では、本開示は、対象における状態の進行を遅延させるために使用するための、本明細書に記載の医薬組成物を提供する。
【0466】
いくつかの例では、医薬組成物は、バイアル、プレフィルドシリンジまたは自己注射器デバイス中に存在する。
【0467】
本開示はまた、本明細書に記載の医薬組成物を含むプレフィルドシリンジを提供する。
【0468】
本開示はまた、本明細書に記載の医薬組成物を含む自己注射器デバイスを提供する。
【0469】
一例では、本開示の組成物は、それを必要とする対象に皮下投与される。他の例では、本開示の組成物は、それを必要とする対象に静脈内投与される。
【0470】
一例では、本開示の組成物は自己投与される。
【0471】
一例では、本開示の組成物は、皮下に自己投与される。
【0472】
一例では、本開示の組成物はプレフィルドシリンジで提供される。
【0473】
一例では、本開示の組成物は、プレフィルドシリンジで、皮下に自己投与される。
【0474】
本開示はさらに、対象における状態の治療、予防および／または進行遅延のための医薬の製造における、本明細書に記載の方法によって精製または産生されたＩｇＧの使用を提供する。例えば、本開示は、対象における状態を治療するための医薬の製造における、本明細書に記載の方法によって精製または産生されたＩｇＧの使用を提供する。他の例では、本開示は、対象における状態を予防するための医薬の製造における、本明細書に記載の方法によって精製または産生されたＩｇＧの使用を提供する。さらなる例では、本開示は、対象における状態の進行を遅延させるための医薬の製造における、本明細書に記載の方法によって精製または産生されたＩｇＧの使用を提供する。
【0475】
本開示はまた、対象における状態の治療、予防、および／または進行を遅延させる方法であって、本開示の医薬組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。例えば、本開示は、対象における状態を治療する方法を提供する。他の例では、本開示は、対象における状態を予防する方法を提供する。さらなる例では、本開示は、対象における状態の進行を遅延させる方法を提供する。
【0476】
本開示はまた、対象における状態の治療または予防または進行遅延に使用するためのキットであって：
（ａ）本明細書に記載の少なくとも１つの医薬組成物；
（ｂ）対象における状態の治療または予防または遅延においてキットを使用するための説明書；および
（ｃ）場合により、少なくとも１つのさらなる治療上活性な化合物または薬剤
を含むキットを提供する。
（ａ）本明細書に記載の少なくとも１つの医薬組成物；
（ｂ）対象における状態の治療または予防または遅延においてキットを使用するための説明書；および
（ｃ）場合により、少なくとも１つのさらなる治療上活性な化合物または薬剤
を含むキットを提供する。
【0477】
一例では、状態は免疫不全、自己免疫疾患または急性感染症である。例えば、状態は、同種骨髄移植、慢性リンパ性白血病、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、小児ＨＩＶ、原発性免疫不全、川崎病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、高抗体レシピエントまたはＡＢＯ不適合ドナーによる腎移植、慢性疲労症候群、クロストリジウムディフィシル大腸炎、皮膚筋炎および多発性筋炎、グレーブス眼症、ギラン－バレー症候群、筋ジストロフィー、封入体筋炎、ランバート－イートン症候群、エリテマトーデス、多巣性運動ニューロパチー、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症、新生児同種免疫性血小板減少症、パルボウイルスＢ１９感染、天疱瘡、輸血後紫斑病、腎移植拒絶反応、自然流産、流産、硬直症候群、オプソクローヌスミオクローヌス、重症成人における重症敗血症および敗血症性ショック、中毒性表皮壊死融解症、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｘ連鎖性無ガンマグロブリン血症、低ガンマグロブリン血症、原発性免疫不全、ＲＲＭＳ、アルツハイマー病、およびパーキンソン病である。
【0478】
一例では、状態は、原発性免疫不全症（ＰＩ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、および慢性免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）からなる群から選択される。
【0479】
一例では、状態は原発性免疫不全症（ＰＩ）である。
【0480】
一例では、状態は慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）である。
【0481】
一例では、状態は慢性免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）である。
【0482】
本明細書に記載の任意の方法の一例では、対象は哺乳動物、例えばヒトなどの霊長類である。
【図面の簡単な説明】
【0483】
【図1】（Ａ）還元条件下（左）および非還元条件下（右）の清澄化クライオプア血漿ＦｃＸＰ ＰＯＲＯＳ（登録商標）溶出物（ＦｃＸＰ）のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル画像、および（Ｂ）ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルランから溶出物中に同定されたタンパク質不純物の表である。
【図2】溶出物中のタンパク質の２Ｄ－ＤＩＧＥのゲル画像である。
【図3】本明細書に記載の方法で使用する前のクライオリッチ血漿（ＣＲＰ）およびクライオプア血漿（ＣＰＰ）、ＣＲＰおよびＣＰＰ溶出物（すなわち、ＦｃＸＰ樹脂からの溶出物）のＩｇＧサブクラス分布を示すグラフ表示である。
【図4】床高６ｃｍ（ＬＴＳ１）および２０ｃｍ（ＬＴＳ２）での連続ランにおけるＦｃＸＰ ＰＯＲＯＳ（登録商標）樹脂の静的結合容量を示すグラフ表示である。
【図5A】（Ａ）血漿および（Ｂ）クライオプア血漿（ＣＰＰ）の凝固促進活性を、経時的な温度、または濾過の結果としてＮａＰＴＴアッセイにより決定したものを示すグラフである。凝固時間は１５０秒超と設定した。
【図5B】（Ａ）血漿および（Ｂ）クライオプア血漿（ＣＰＰ）の凝固促進活性を、経時的な温度、または濾過の結果としてＮａＰＴＴアッセイにより決定したものを示すグラフである。凝固時間は１５０秒超と設定した。
【図6A】（Ａ）血漿および（Ｂ）クライオプア血漿（ＣＰＰ）における、経時的な温度の結果としての、トロンビン（Ｓ－２２３８）、一般的なセリンプロテアーゼ（Ｓ－２２８８）、カリクレイン（Ｓ－２３０２）、プラスミン（Ｓ－２２５１）およびＦＸａ（Ｓ－２７６５）のタンパク質分解活性を示すグラフ表示である。
【図6B】（Ａ）血漿および（Ｂ）クライオプア血漿（ＣＰＰ）における、経時的な温度の結果としての、トロンビン（Ｓ－２２３８）、一般的なセリンプロテアーゼ（Ｓ－２２８８）、カリクレイン（Ｓ－２３０２）、プラスミン（Ｓ－２２５１）およびＦＸａ（Ｓ－２７６５）のタンパク質分解活性を示すグラフ表示である。
【図7】Ｎ－オクチル－β－Ｄ－グルコピラノシドを用いたＣＲＰのウイルス不活性化を示すグラフ表示である。
【図8】（Ａ）異なる温度で融解した試料中の凍結沈殿物の温度依存容量正規化比；および（Ｂ）最適融解温度および保持時間温度をそれぞれ評価するための保持時間試験概略図を示すグラフ表示である。
【図9】（Ａ）ストリップ相あり、（Ｂ）ストリップ相なしのＳＭＢプロセス中の背圧を示す一連のグラフ表示である。
【図10】（Ａ）洗浄緩衝液の導電率の増加に伴う溶出物（すなわち、ＦｃＸＰ樹脂からの溶出物）のタンパク質分解活性の低下、および（Ｂ）洗浄緩衝液の導電率を１４５ｍＭ塩化ナトリウムから５００ｍＭ塩化ナトリウムに増加させた結果としての、正常およびクライオプア血漿（ＣＰＰ）からの溶出物（すなわち、ＦｃＸＰ樹脂からの溶出物）のタンパク質分解活性の低下を示す一連のグラフ表示である。
【図11】１４５ｍＭまたは５００ｍＭ塩化ナトリウムを含む洗浄緩衝液を用いた溶出物（すなわち、ＦｃＸＰ樹脂からの溶出物）における、（Ａ）ＩｇＧ収率、（Ｂ）Ｌａｐｃｈｉｐアッセイを用いた産物純度、および（Ｃ）正常血漿およびクライオプア血漿（ＣＰＰ）中のアルブミン、ＩｇＡおよびＩｇＭレベルを示す一連のグラフ表示である。
【0484】
配列表のキー
配列番号１はＶＨＨフラグメントのアミノ酸配列である。
配列番号２はＶＨＨフラグメントのＣＤＲ１のアミノ酸配列である。
配列番号３はＶＨＨフラグメントのＣＤＲ２のアミノ酸配列である。
配列番号４はＶＨＨフラグメントのＣＤＲ３のアミノ酸配列である。
配列番号１はＶＨＨフラグメントのアミノ酸配列である。
配列番号２はＶＨＨフラグメントのＣＤＲ１のアミノ酸配列である。
配列番号３はＶＨＨフラグメントのＣＤＲ２のアミノ酸配列である。
配列番号４はＶＨＨフラグメントのＣＤＲ３のアミノ酸配列である。
【発明を実施するための形態】
【0485】
概要
本明細書を通じて、特に別段の記載がない限り、または文脈上別段の記載が必要とされない限り、単一の工程、物質組成物、工程群または物質組成物群への言及は、その工程、物質組成物、工程群または物質組成物群の１つおよび複数（すなわち、１つまたはそれ以上）を包含するものとみなされるものとする。
本明細書を通じて、特に別段の記載がない限り、または文脈上別段の記載が必要とされない限り、単一の工程、物質組成物、工程群または物質組成物群への言及は、その工程、物質組成物、工程群または物質組成物群の１つおよび複数（すなわち、１つまたはそれ以上）を包含するものとみなされるものとする。
【0486】
当業者は、本開示が、具体的に記載されたもの以外の変形および改変の影響を受け得ることを理解するであろう。本開示は、全てのそのような変形および改変を含むことを理解されたい。本開示はまた、本明細書において、個別にまたは集合的に言及または示される全ての工程、特徴、組成物および化合物、ならびに任意のおよび全ての組合せ、または前記工程または特徴の任意の２つ以上を含む。
【0487】
本開示は、例示のみを目的とする本明細書に記載の具体例によって範囲を限定されるものではない。機能的に均等な産物、組成物および方法は、明らかに本開示の範囲内である。
【0488】
本明細書における本開示の実施例はいずれも、特に別段の記載がない限り、本開示の他の実施例にも準用されるものとみなされるものとする。
【0489】
特に別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、当業者（例えば、細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、および生化学の）により一般的に理解されるのと同じ意味を有するものとみなされるものとする。
【0490】
用語「および／または」、例えば「Ｘおよび／またはＹ」は、「ＸおよびＹ」または「ＸまたはＹ」のいずれかを意味すると理解されるものとし、両方の意味またはいずれかの意味の明示的な裏付けを提供するものとみなされるものとする。
【0491】
本明細書を通じて、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、記載された要素、整数もしくは工程、または要素、整数もしくは工程の群を含むことを意味するが、他の要素、整数もしくは工程、または要素、整数もしくは工程の群を除外することを意味しないと理解される。
【0492】
本明細書で使用される、「由来する」という用語は、指定された整数が、必ずしもその由来から直接得られるとは限らないが、特定の由来から得られる可能性があることを示すものとみなされるものとする。
【0493】
さらに、本明細書で使用される「ａ」、「ａｎｄ」および「ｔｈｅ」の単数形は、文脈上そうでないことが明らかな場合を除き、複数形も含むものとする。
【0494】
選択された定義
「精製する」または「精製すること」または「精製」という用語は、血漿またはその画分中に存在する少なくとも１つの不純物を、完全であるか部分的であるかにかかわらず除去し、それによって溶液中のＩｇＧの純度レベルを改善させることを意味するとみなされるものとする。
「精製する」または「精製すること」または「精製」という用語は、血漿またはその画分中に存在する少なくとも１つの不純物を、完全であるか部分的であるかにかかわらず除去し、それによって溶液中のＩｇＧの純度レベルを改善させることを意味するとみなされるものとする。
【0495】
「不純物（ｉｍｐｕｒｉｔｙ）」または「不純物（ｉｍｐｕｒｉｔｅｓ）」という用語は、ＩｇＧ以外の血漿またはその画分中の１つまたはそれ以上の成分を含むとみなされるものとする。例えば、不純物としては、アルブミン（α－グロブリンおよび／またはβ－グロブリン）、血漿脂質、血漿タンパク質、プロテアーゼ（例えば、セリンプロテアーゼ、カリクレイン、プラスミンおよびＦＸａ）、セリンプロテアーゼ阻害因子（例えば、Ｃ１阻害因子、α－１－抗トリプシンおよび抗トロンビン）、ＩｇＡおよびＩｇＭ、第ＶＩＩＩ因子、フィブリノゲン、フォンウィルブランド因子、活性化凝固因子（例えば、ＦＸａ、ＦＩＸａ、ＦＶＩＩａおよびトロンビン）、第ＸＩＩＩ因子、接触系因子（例えば、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩａおよび血漿カリクレイン）、ＰＫＡ、第ＩＸ因子、プロトロンビン複合体、Ｃ１エステラーゼ阻害因子、プロテインＣ、抗トロンビンＩＩＩ、ＲｈＤ免疫グロブリンおよび血小板膜微粒子が挙げられる。
【0496】
「免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）」という用語は、「ガンマグロブリン」または「免疫グロブリン」としても知られ、アイソタイプＧの抗体を意味するとみなされるものとする。いくつかのＩｇＧのサブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４が存在する。
【0497】
「血漿」という用語は、１人またはそれ以上の血液ドナー（複数可）から得られた血液の麦わら色／淡黄色成分を意味するものとする。ドナーから血漿を得る方法は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載される。例えば、血漿は、提供された血液から赤血球を除去することによって得られる。例えば、血漿はプラズマフェレーシスによって得られる。
【0498】
「血漿画分」または「その画分」という用語は、血漿から１つまたはそれ以上の望ましいタンパク質成分を単離するために分画された血漿を指すものとする。例えば、血漿を、クライオ沈殿物（新鮮凍結血漿の単位を寒冷中でゆっくり融解した際に溶液から析出するタンパク質）およびクライオ上清（クライオプア血漿としても知られる）を単離するために分画し得る。例えば、血漿をエタノール沈殿によって分画し、米国特許第３，３０１，８４２号に記載されているように、血漿からＩｇＧ含有オンクリー画分、コーン画分、硫酸アンモニウム沈殿物、または沈殿物Ａ（ＫＮ Ａ）、Ｂ（ＫＮ Ｂ）、および上清沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ＋１）を産生することができる。血漿画分には、方法６などのＣｏｈｎ法、Ｃｏｈｎら、Ｊ． Ａｍ； Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、６８（３）、４５９－４７５（１９４６）、方法９、Ｏｎｃｌｅｙら、Ｊ． Ａｍ； Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、 ７１、 ５４１－５５０ （１９４６）に従って産生されたＩＩ＋ＩＩＩ沈殿物、または方法１０、Ｃｏｈｎら、Ｊ． Ａｍ； Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、 ７２、 ４６５－４７４（１９５０）；ならびにＤｅｕｔｓｃｈら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １６４、 １０９－１１８（１９４６）のＩ＋ＩＩ＋ＩＩＩ沈殿物、またはＮｉｔｓｃｈｍａｎｎ ａｎｄ Ｋｉｓｔｌｅｒ Ｖｏｘ Ｓａｎｇ． ７、 ４１４－４２４（１９６２）； Ｈｅｌｖ． Ｃｈｉｍ． Ａｃｔａ ３７、 ８６６－８７３（１９５４）の沈殿物Ａ～Ｂおよび上清沈殿物Ｂが含まれる。例えば、欧州出願第８９３４５０号に記載されているように、血漿をオクタン酸分画により分画することができる。典型的には、コーン画分、およびキスラー／ニッチマン沈殿物Ａ（ＫＮ Ａ）、Ｂ（ＫＮ Ｂ）、および上清沈殿物Ｂ（ＫＮ Ｂ＋１）は、懸濁ペーストとして存在する。クロマトグラフィを含む他の精製技術を使用してもよい。
【0499】
「クライオ沈殿物（ｃｒｙｏ－ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅ）」または「クライオ沈殿物（ｃｒｙｏ－ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｓ）」という用語は、新鮮凍結血漿の単位を寒冷下でゆっくりと融解した際に溶液から沈殿する血漿中のタンパク質を指す。クライオ沈殿物としては、第ＶＩＩＩ因子、フィブリノゲン、フォンウィルブランド因子、第ＸＩＩＩ因子、血小板膜微粒子が挙げられる。
【0500】
「クライオプア血漿」という用語は、クライオ沈殿物を除去した血漿を意味するとみなされるものとする。
【0501】
「クライオリッチ血漿」という用語は、クライオ沈殿物に典型的に見出される成分を含む血漿を意味するとみなされるものとする。
【0502】
「清澄化された（ｃｌａｒｉｆｉｅｄ）」または「清澄化すること（ｃｌａｒｉｆｙｉｎｇ）」という用語は、本明細書に記載の方法において使用する前に、血漿またはその画分を適切なフィルター（例えば、デプスフィルターならびに／または１．２および０．４５／０．２２μｍメンブレンフィルター）に通して１つまたはそれ以上の不純物を除去するプロセスを意味するものとする。
【0503】
「解離定数」という用語は、緩衝液のｐＫａを指すものとする。ｐＫａ＝－ｌｏｇ１０（Ｋａ）であり、ここでＫａは緩衝液の緩衝剤の酸解離定数である。例えば、ｐＨが７．４の２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、４０ｍＭ塩化ナトリウムの洗浄緩衝液は、緩衝剤としてリン酸二水素ナトリウムを含む。リン酸には３つの解離定数（ｐＫａ１：２．１６、ｐＫａ２：７．２１、ｐＫａ３：１２．３２）がある。
【0504】
「アフィニティークロマトグラフィ樹脂」という用語は、例えば本明細書に記載するようなマトリクスに結合したアフィニティークロマトグラフィリガンド（例えばラクダ由来の単一ドメイン［ＶＨＨ］抗体フラグメント）を含む樹脂を意味するとみなされるものとする。本明細書に記載の方法で使用される例示的なアフィニティークロマトグラフィ樹脂としては、ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアフィニティー樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）およびＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアガロースアフィニティー樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）が挙げられる。さらに例示的なアフィニティークロマトグラフィ樹脂には、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合する、配列番号１によってコードされるアミノ酸配列またはそのバリアントを有する樹脂が含まれる。例示的なアフィニティークロマトグラフィ樹脂は米国特許第１０２５９８８６号にも記載されている。
【0505】
「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」、「特異的に結合すること（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｉｎｇ）」または「特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」という用語は、本開示のタンパク質が、特定の抗原またはそれを発現する細胞と、代替抗原または細胞と反応するよりも、より頻繁に、より迅速に、より持続的に、および／またはより高い親和性で反応または会合することを意味するとみなされるものとする。例えば、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドは、他の抗原に結合するよりも実質的に大きな親和性（例えば、１．５倍、または２倍、または５倍、または１０倍、または２０倍、または４０倍、または６０倍、または８０倍～１００倍、または１５０倍、または２００倍）で結合する。必ずしもそうではないが一般的に、結合への言及は特異的結合を意味し、各用語は他の用語を明確に支持するものと理解されるものとする。
【0506】
「リガンド」という用語は、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合するアフィニティークロマトグラフィ樹脂のマトリクスに固定化された分子を意味するとみなされるものとする。例えば、リガンドはラクダ由来の単一ドメイン［ＶＨＨ］抗体フラグメントである。
【0507】
「濃縮調製物」という用語は、本明細書に記載の溶出物、溶液または医薬組成物を含むとみなされるものとする。本開示の濃縮調製物は、血漿またはその画分中のＩｇＧと比較して、より高い純度のＩｇＧを含む。
【0508】
「ラクダ科由来単一ドメイン［ＶＨＨ］抗体フラグメント」という用語は、ラクダ科抗体のＶＨＨドメインを意味するとみなされるものとする。ラクダ科抗体は、ラクダおよびラマから産生される抗体であり、ヒト免疫グロブリンに通常存在するＣＨ１ドメインを有さず、１つのＶＨＨドメインのみを有する。ラクダ科由来［ＶＨＨ］抗体フラグメントを含む例示的なアフィニティークロマトグラフィ樹脂としては、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）抗体アフィニティークロマトグラフィ樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）が挙げられる。例えば、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＬアフィニティー樹脂、ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアフィニティー樹脂、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＩｇＧ－ＣＨ１アフィニティー樹脂、およびＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＦｃＸＰアガロースアフィニティー樹脂が挙げられる。さらに例示的なアフィニティークロマトグラフィ樹脂としては、ＩｇＳｅｌｅｃｔ（登録商標）アフィニティー樹脂（Ｃｙｔｉｖａ）、ＨｉＴｒａｐ（登録商標）ＩｇＳｅｌｅｃｔ（登録商標）アフィニティー樹脂（Ｃｙｔｉｖａ）、Ｐｉｅｒｃｅ（登録商標）プロテインＧアガロースアフィニティー樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、およびプロテインＧセファロース４ファストフローアフィニティー樹脂（Ｃｙｔｉｖａ）が挙げられる。
【0509】
「マトリクス」という用語は、リガンドが固定化された支持体を意味するとみなされるものとする。例示的なマトリクスは、架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスおよびアガロースベースのマトリクスである。
【0510】
クロマトグラフィ樹脂の「動的結合容量」または「ＤＢＣ」という用語は、非結合ＩｇＧの有意なブレークスルーが起こる前に、作動条件下で樹脂が結合するＩｇＧの最大量を指すとみなされるものとする。
【0511】
「樹脂１ｍＬ当たり」という用語は、樹脂の湿潤充填容量１ｍＬ当たりを指すとみなされるものとする。
【0512】
「床高」という用語は、アフィニティークロマトグラフィ樹脂がカラムに充填される高さを意味するとみなされるものとする。「総床高」への言及は、連続クロマトグラフィのセットアップの全てのカラムの床高をことは、当業者には明らかであろう。
【0513】
「非負荷相」という用語は、連続クロマトグラフィ法の負荷相以外の相を意味するとみなされるものとする。例えば、非負荷相は、平衡化相、洗浄相、溶出相、ストリップ相および／または再平衡化相を意味することができる。
【0514】
「サイクル」という用語は、樹脂上で行われる平衡化、ＩｇＧ負荷、結合、溶出、ストリッピング、消毒、および／または再生の１ラウンドを意味するとみなされるものとする。
【0515】
「純度」という用語は、精製ＩｇＧ、ＩｇＧ濃縮調製物および医薬組成物の全タンパク質含量に対するＩｇＧの割合を百分率で表したものを意味するとみなされるものとする。
【0516】
「工業的または商業的規模」または「大規模」または「製造規模」という用語は、臨床試験、製剤化、販売および／または公衆への配布を目的としたバッチで製造される製品の量を指すとみなされるものとする。例えば、工業的規模は、血漿タンパク質製品を製造するために、血漿またはその画分からＩｇＧを大規模に精製することを指す。
【0517】
「血漿タンパク質製品」という用語は、血漿またはその画分の精製に由来する血漿タンパク質（例えば、ＩｇＧまたはアルブミンのような不純物）を含む調製物、組成物および／またはタンパク質製品を指すとみなされるものとする。典型的には、血漿タンパク質は、血漿タンパク質製品中の優勢なタンパク質である。
【0518】
「医薬組成物」という用語は、ＩｇＧと、哺乳動物へのＩｇＧの送達のために当技術分野で一般的に認められた化合物との製剤を意味するとみなされるものとする。例示的な化合物には、その全ての薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤が含まれる。
【0519】
「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、対象における状態の１つまたはそれ以上の症状または特徴が軽減されるように、または対象がもはや臨床的に状態を有すると診断されなくなるように、治療上有効量のＩｇＧを投与することを意味するとみなされるものとする。
【0520】
「予防すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」または「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」という用語は、対象における特定の状態の発生または再発に関して予防を提供することを含む。対象は、状態を発症する素因があるか、または発症する危険性があるが、まだ上記状態を有すると診断されていない場合がある。
【0521】
本明細書で使用される場合、「の進行を遅延させる」という語句は、対象における状態および／または状態の少なくとも１つの症状の進行を低減または遅らせることが含まれる。
【0522】
「状態（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）」という用語は、ＩｇＧによる治療を必要とする対象の状態または健康状態を意味するとみなされるものとする。例示的な状態には、原発性免疫不全症（ＰＩ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、および慢性免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0523】
「対象」という用語は、ヒトを含む任意の動物、例えば哺乳動物を意味するとみなされるものとする。例示的な対象としては、ヒトおよび非ヒト霊長類が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、対象はヒトである。
【0524】
連続アフィニティークロマトグラフィ
本開示は、連続アフィニティークロマトグラフィを用いて、血漿またはその画分からＩｇＧを精製する方法を提供する。
本開示は、連続アフィニティークロマトグラフィを用いて、血漿またはその画分からＩｇＧを精製する方法を提供する。
【0525】
「連続アフィニティークロマトグラフィ」という用語は、同一のアフィニティー樹脂が充填された１つまたはそれ以上のカラム（複数可）を含むクロマトグラフィ法を意味するとみなされるものとし、ここで、各カラムは１つまたはそれ以上のゾーンを含む。ゾーンは、１つまたはそれ以上のクロマトグラフィ工程を実施することができる樹脂を含むカラム、またはカラムの領域である。例えば、ゾーンは、平衡化ゾーン、結合ゾーン、洗浄ゾーン、溶出ゾーン、ストリッピングゾーン、またはその組合せからなる群から選択される。一例では、ゾーンは、平衡化ゾーン、結合ゾーン、洗浄ゾーン、溶出ゾーン、またはその組合せからなる群から選択される。
【0526】
２つ以上のカラムを含む連続アフィニティークロマトグラフィは、直列および／または並列にカラムを作動させることができるような配置で接続されたカラムを含む。原則として、他のカラム（またはカラムの他のゾーン）が平衡化、洗浄、溶出、および／または再生を同時に行っている間に、第１のカラムおよび／または後続カラムにＩｇＧを負荷することができる。連続アフィニティークロマトグラフィの例は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載される。
【0527】
連続クロマトグラフィ法を実施するために使用し得るカラムの例は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載される。例えば、連続クロマトグラフィ法は、Ｔｒｉｃｏｒｎ ５／１００（Ｃｙｔｉｖａ）を用いて実施することができる。他の例では、連続クロマトグラフィ法は、ＢｉｏＳＭＢ ＰＤ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を用いて実施することができる。
【0528】
シミュレーテッドムービングベッド（ＳＭＢ）クロマトグラフィ
一例では、連続アフィニティークロマトグラフィはシミュレーテッドムービングベッド（ＳＭＢ）クロマトグラフィである。「シミュレーテッドムービングベッドクロマトグラフィ」または「ＳＭＢクロマトグラフィ」という用語は、米国特許第２，９８５，５８９号に最初に記載されたクロマトグラフィ法を指す。ＳＭＢクロマトグラフィのセットアップおよび／または装置の例は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載される。シミュレーテッドムービングベッドの概念は、固体吸収剤（例えば、アフィニティー樹脂）を含む（１つの大きなカラムではなく）複数の小さなカラムを使用し、連続ループ内の異なるカラムで１つまたはそれ以上の連続クロマトグラフィ工程（すなわち、平衡化、結合、洗浄、溶出またはストリッピング）を同時に行うことを含む。
一例では、連続アフィニティークロマトグラフィはシミュレーテッドムービングベッド（ＳＭＢ）クロマトグラフィである。「シミュレーテッドムービングベッドクロマトグラフィ」または「ＳＭＢクロマトグラフィ」という用語は、米国特許第２，９８５，５８９号に最初に記載されたクロマトグラフィ法を指す。ＳＭＢクロマトグラフィのセットアップおよび／または装置の例は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載される。シミュレーテッドムービングベッドの概念は、固体吸収剤（例えば、アフィニティー樹脂）を含む（１つの大きなカラムではなく）複数の小さなカラムを使用し、連続ループ内の異なるカラムで１つまたはそれ以上の連続クロマトグラフィ工程（すなわち、平衡化、結合、洗浄、溶出またはストリッピング）を同時に行うことを含む。
【0529】
ＳＭＢクロマトグラフィのセットアップの例として、カラムは４つのセクションに配置され、セクションごとに１つまたはそれ以上のカラムが配置されている。２つの入口流（供給液および溶出液）と２つの出口流（抽出液およびラフィネート）が交互にカラムリングを行き来するように方向づけられる。入口と出口の位置は、液体流方向に一定の時間間隔で切り替えることによって、カラムの向流運動をシミュレートする。ＳＭＢクロマトグラフィのセットアップの１つまたはそれ以上のカラムに供給液（吸着性成分（抽出液）を含む）が負荷され、抽出物はカラム内の樹脂に結合する。一方、供給液中の吸着性の低い成分（ラフィネート）はカラムを通過する。ラフィネートは１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）に負荷されるか、または廃液としてＳＭＢクロマトグラフィシステムから除去される。溶出物をカラムに負荷して抽出物を回収する。例えば、溶出物を第１のカラムから回収しながら、より多くの供給液を１つまたはそれ以上の後続カラム（複数可）に負荷することができる。
【0530】
本開示の特徴を有する適切な洗浄および溶出緩衝液は、当業者に明らかである、および／または本明細書に記載される。一例では、洗浄緩衝液は、２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、１４５ｍＭ塩化ナトリウムを含み、ｐＨは７．４である。一例では、洗浄緩衝液は、２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、５００ｍＭ塩化ナトリウムを含み、ｐＨは７．４である。
【0531】
ＳＭＢクロマトグラフィの樹脂は、使用する血漿またはその画分のバッチごとに、樹脂の平衡化、ＩｇＧ負荷、結合、溶出、ストリッピング、消毒、および／または再生のサイクルを複数回（例えば５０回）行ってもよい。ＳＭＢクロマトグラフィを用いて、複数のバッチラン（例えば４～１０バッチ）を実施してもよい。ＳＭＢクロマトグラフィにおける樹脂の総寿命時間は、樹脂が使用不能になるまでに２００～５００サイクル（それ以上でない場合）の範囲になることがある。一般的に、樹脂の再生は、樹脂を複数回使用できることを可能にするために行う。
【0532】
周期的向流クロマトグラフィ（ＰＣＣ）
一例では、連続アフィニティークロマトグラフィは周期的向流クロマトグラフィ（ＰＣＣ）である。ＰＣＣのセットアップおよび／または装置の例は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載されている。ＰＣＣの概念は、固体吸収剤（例えばアフィニティー樹脂）を含む複数のカラムを使用し、クロマトグラフィ工程を準連続的に並行して行うことを含む。結合、洗浄、および／または溶出工程で使用される緩衝液は、アフィニティー樹脂に対して向流で流れる。
一例では、連続アフィニティークロマトグラフィは周期的向流クロマトグラフィ（ＰＣＣ）である。ＰＣＣのセットアップおよび／または装置の例は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載されている。ＰＣＣの概念は、固体吸収剤（例えばアフィニティー樹脂）を含む複数のカラムを使用し、クロマトグラフィ工程を準連続的に並行して行うことを含む。結合、洗浄、および／または溶出工程で使用される緩衝液は、アフィニティー樹脂に対して向流で流れる。
【0533】
ＰＣＣのセットアップの例は、２つのカラムの使用を伴う。第１の工程では、試料は樹脂のＤＢＣより上の第１のカラムに負荷され、未結合産物（例えばＩｇＧ）は第１のカラムを通過し、第２のカラムで捕捉されるようになっている。第２の工程では、第２のカラムにさらなる試料が負荷されるのとは独立に、第１のカラムを洗浄、溶出、洗浄および／または再平衡化する。第３の工程では、樹脂のＤＢＣの上の第２のカラムに追加の試料を負荷し、未結合産物が第２のカラムを通過して第１のカラムに捕捉されるようにする。第４の工程では、第２のカラムは、第１のカラムがさらなる試料で負荷されるのとは独立に、洗浄、溶出、洗浄および／または再平衡化される。プロセス工程は２つのカラム間で連続的に循環される。
【0534】
ＰＣＣのセットアップの他の例は、複数のカラムの使用を伴う。例えば、上記のＰＣＣのセットアップの変形として、未結合産物を捕捉するために複数のカラムを使用し、大きいカラムの使用をシミュレートすることができる。
【0535】
連続向流タンジェンシャルクロマトグラフィ（ＣＣＴＣ）
一例では、連続アフィニティークロマトグラフィは連続向流タンジェンシャルクロマトグラフィ（ＣＣＴＣ）である。ＣＣＴＣのセットアップおよび／または装置の例は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載される。ＣＣＴＣの概念は、スラリーの形態でアフィニティー樹脂を使用することを含み、スラリーは、樹脂から流体相を分離する多数の静的ミキサーおよび中空糸メンブレンを通して連続的に導かれる。ＣＣＴＣは通常低圧で実施される。
一例では、連続アフィニティークロマトグラフィは連続向流タンジェンシャルクロマトグラフィ（ＣＣＴＣ）である。ＣＣＴＣのセットアップおよび／または装置の例は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載される。ＣＣＴＣの概念は、スラリーの形態でアフィニティー樹脂を使用することを含み、スラリーは、樹脂から流体相を分離する多数の静的ミキサーおよび中空糸メンブレンを通して連続的に導かれる。ＣＣＴＣは通常低圧で実施される。
【0536】
ＣＣＴＣプロセスの一例は、結合、第１の洗浄、第２の洗浄、溶出、ストリッピングおよび／または平衡化工程を伴う。ＣＣＴＣプロセスの他の例は、結合、第１の洗浄、第２の洗浄、溶出および／または平衡化工程を含む。例えば、ＣＣＴＣプロセスはストリッピング工程を含まない。試料（例えば血漿またはその画分）およびアフィニティー樹脂は、結合工程で静的ミキサーおよび中空糸メンブレンを通過する。不純物は洗浄工程において中空糸メンブレンのフロースルーで除去され、樹脂結合産物（すなわちＩｇＧ）はメンブレンに保持される。中空糸は樹脂を保持し、溶出工程で産物を通過させる。樹脂はストリッピングおよび／または平衡化され、プロセスが繰り返される。
【0537】
連続向流スパイラルクロマトグラフィ（ＣＣＳＣ）
一例では、連続アフィニティークロマトグラフィは連続向流スパイラルクロマトグラフィ（ＣＣＳＣ）である。ＣＣＳＣのセットアップおよび／または装置の例は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載される。ＣＣＳＣの概念は、遠心分離機の回転フレームに取り付けられたコンパクトな回転コイル分離カラムの使用を伴う。現在利用可能な分離カラムの設計には：スパイラルディスクアセンブリとスパイラルチューブサポートアセンブリの２つがある。
一例では、連続アフィニティークロマトグラフィは連続向流スパイラルクロマトグラフィ（ＣＣＳＣ）である。ＣＣＳＣのセットアップおよび／または装置の例は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載される。ＣＣＳＣの概念は、遠心分離機の回転フレームに取り付けられたコンパクトな回転コイル分離カラムの使用を伴う。現在利用可能な分離カラムの設計には：スパイラルディスクアセンブリとスパイラルチューブサポートアセンブリの２つがある。
【0538】
例示的なＣＣＳＣプロセスは、コイル状分離カラムが遠心分離機の中心軸を中心に回転しながら、自身の軸を中心に同期回転する（例えば、１，０００～１，２００ｒｐｍ）ことを伴う。移動相は回転シールなしで遠心分離機のロータに通すことができ、カラムの長さに沿って２つの相を混合しながら固定相が大量に保持され、高効率の溶質分離が行われる。
【0539】
アフィニティークロマトグラフィ樹脂
本開示は、アフィニティークロマトグラフィ樹脂を用いて、血漿またはその画分から免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を精製する方法を提供する。本開示のアフィニティー樹脂は、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含む。
本開示は、アフィニティークロマトグラフィ樹脂を用いて、血漿またはその画分から免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を精製する方法を提供する。本開示のアフィニティー樹脂は、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインに特異的に結合できるリガンドを含む。
【0540】
適切なアフィニティークロマトグラフィ樹脂は、当業者に明らかである、および／または本明細書に記載される。一例では、樹脂は、ラクダ由来の単一ドメイン［ＶＨＨ］抗体フラグメントのリガンドを含む。当業者は、ラクダ由来の単一ドメイン［ＶＨＨ］抗体フラグメントに基づくリガンドが、ＩｇＧの全てのサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）に特異的に結合できることを認識するであろう。例示的な樹脂は、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアフィニティークロマトグラフィ樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＬアフィニティー樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＩｇＧ－ＣＨ１アフィニティー樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、およびＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアガロースアフィニティー樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）である。さらに例示的なアフィニティークロマトグラフィ樹脂としては、ＩｇＳｅｌｅｃｔ（登録商標）アフィニティー樹脂（Ｃｙｔｉｖａ）、ＨｉＴｒａｐ（登録商標）ＩｇＳｅｌｅｃｔ（登録商標）アフィニティー樹脂（Ｃｙｔｉｖａ）、Ｐｉｅｒｃｅ（登録商標）プロテインＧアガロースアフィニティー樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、およびプロテインＧセファロース４ファストフローアフィニティー樹脂（Ｃｙｔｉｖａ）が挙げられる。
【0541】
一例では、アフィニティークロマトグラフィ樹脂は、ラクダ由来の単一ドメイン［ＶＨＨ］抗体フラグメントおよび架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスを含む。例えば、アフィニティークロマトグラフィ樹脂はＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアフィニティー樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）である。架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスにより、樹脂は１００ｂａｒまでの圧力に耐えることができる。
【0542】
一例では、アフィニティークロマトグラフィ樹脂はラクダ由来の単一ドメイン［ＶＨＨ］抗体フラグメントおよびアガロースベースのマトリクスを含む。例えば、アフィニティークロマトグラフィ樹脂はＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＦｃＸＰアガロースアフィニティー樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）である。
【0543】
一例では、連続アフィニティークロマトグラフィプロセスは、約２～約５ｂａｒの範囲の圧力で実施される。例えば、連続アフィニティークロマトグラフィプロセスは、約３～約４ｂａｒの範囲の圧力で実施される。一例では、連続アフィニティークロマトグラフィプロセスは、約３．２５～約３．５ｂａｒの範囲の圧力で実施される。
【0544】
緩衝液
本開示は、樹脂へのＩｇＧの効率的な結合および樹脂からの効率的な回収を可能にする緩衝液を使用する連続アフィニティークロマトグラフィ法を提供する。一般的に、血漿またはその画分は中性ｐＨ（ｐＨ約７．４）である。樹脂は平衡化緩衝液で平衡化される、および／または中性ｐＨをカバーする緩衝範囲を有する洗浄緩衝液で洗浄される。適切な洗浄緩衝液は、２５℃で６．８～８．５の解離定数（ｐＫａ）を有する緩衝剤を含む。
本開示は、樹脂へのＩｇＧの効率的な結合および樹脂からの効率的な回収を可能にする緩衝液を使用する連続アフィニティークロマトグラフィ法を提供する。一般的に、血漿またはその画分は中性ｐＨ（ｐＨ約７．４）である。樹脂は平衡化緩衝液で平衡化される、および／または中性ｐＨをカバーする緩衝範囲を有する洗浄緩衝液で洗浄される。適切な洗浄緩衝液は、２５℃で６．８～８．５の解離定数（ｐＫａ）を有する緩衝剤を含む。
【0545】
平衡化および／または洗浄緩衝液の例示的な緩衝剤は、リン酸二水素ナトリウムであり、リン酸二水素ナトリウムのリン酸成分は、３つの解離定数（ｐＫａ：２．１６、７．２１および１２．３２）を有する。リン酸は、連続アフィニティークロマトグラフィ法で使用される溶出および／またはストリッピング緩衝液のｐＨ程度で解離定数を有する。しかし、リン酸は、連続アフィニティークロマトグラフィ法で使用される平衡化および／または洗浄緩衝液のｐＨ（高ｐＨ）と溶出および／またはストリッピング緩衝液のｐＨ（低ｐＨ）の間の解離定数を有さない。これにより、洗浄工程と溶出工程、およびストリッピング工程と平衡化工程の間の迅速な切り替えが可能になり、より明確なピークが得られ、クロマトグラフィ相が短くなる。このような平衡化および／または洗浄緩衝液を使用する利点は、より少量の緩衝液を使用できることであり、それにより連続アフィニティークロマトグラフィ法の効率が向上する。
【0546】
平衡化および／または洗浄緩衝液の他の適切な緩衝剤としては、イミダゾール（ｐＫａ：７．０）、Ｔｒｉｓ（ｐＫａ：８．３０）、グリシルグリシン（ｐＫａ：８．４０）、ＭＯＰＳ（ｐＫａ：７．２）、ＰＩＰＥＳ（ｐＫａ：６．８）、ＴＥＳ（ｐＫａ：７．４０）、Ｂｉｃｉｎｅ（ｐＫａ：８．３５）、ＨＥＰＥＳ（ｐＫａ：７．５５）、ＥＰＰＳ（ｐＫａ：８．００）、ＨＥＰＰＳＯ（ｐＫａ：７．８５）、ＭＯＢＳ（ｐＫａ：７．６０）、ＰＯＰＳＯ（ｐＫａ：７．７８）、ＴＡＰＳＯ（ｐＫａ：７．６１）、Ｔｒｉｃｉｎｅ（ｐＫａ：８．０５）、ＴＥＡ（ｐＫａ：７．７６）が挙げられる。
【0547】
ＩｇＧ組成の分析
収率、純度およびＩｇＧサブクラス分布を決定する方法は、当業者に明らかである、および／または本明細書に記載される。
収率、純度およびＩｇＧサブクラス分布を決定する方法は、当業者に明らかである、および／または本明細書に記載される。
【0548】
一例では、純度は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳペプチドフィンガープリント分析によって決定される。簡単に述べると、精製ＩｇＧ、ＩｇＧ濃縮調製物または本明細書に記載のＩｇＧ含有医薬組成物を、タンパク質サイズマーカーおよびＩｇＧの陽性対照（例えば、Ｐｒｉｖｉｇｅｎ）とともに、適切なＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル（例えば、８～１６％ＴＲＩＳ－グリシン）に、還元および非還元条件下でロードする。タンパク質はサイズに基づいて分離され、目的のタンパク質バンドが単離され、処理され、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳで分析される。
【0549】
他の例では、本明細書に記載のＩｇＧ濃縮調製物またはＩｇＧ含有医薬組成物中の不純物は、不純物（例えばＩｇＡ）特異的抗体を用いた酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）で測定される。例えば、ＥＬＩＳＡは、市販の方法を用いて実施される。一例では、ＩｇＧの純度、収率および／またはサブクラス分布は、ネフェロメトリーによって決定される。一例では、ＩｇＧの純度はネフェロメトリーにより決定される。一例では、ＩｇＧの収率はネフェロメトリーにより決定される。一例では、ＩｇＧのサブクラス分布はネフェロメトリーにより決定される。例えば、精製ＩｇＧ、本明細書に記載のＩｇＧ濃縮調製物またはＩｇＧ含有医薬組成物の光散乱パターンをネフェロメトリーにより測定し、公知のＩｇＧサブクラス分布を有する組成物の光散乱プロファイルと比較する。
【0550】
血漿およびその画分の安定性
本明細書に記載のアフィニティー樹脂に負荷するための血漿またはその画分の安定性は、血漿またはその画分の血液凝固促進活性、タンパク質溶解活性および粒径を評価することによって決定することができる。血液凝固促進活性、タンパク質溶解活性および粒径を評価する方法は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載される。簡単に述べると、血漿またはその画分を１つまたはそれ以上のサイクルで凍結／融解し、２℃～３２℃（例えば、２℃、１０℃、１８℃、２１℃、２８℃または３２℃）で２４時間または最長４８時間保存し、以下に記載する１つまたはそれ以上の方法を用いて分析する。一例では、血漿またはその画分を３２℃の温度で１つまたはそれ以上のサイクルで融解し、２４時間または最長４８時間保存し、以下に記載する１つまたはそれ以上の方法を用いて分析する。他の例では、血漿またはその画分を３２℃の温度で１つまたはそれ以上のサイクルで融解し、２４時間または最長４８まで保存し、以下に記載する１つまたはそれ以上の方法を用いて分析した後、冷却して２１℃の温度で保存する。一例では、血漿またはその画分は、連続アフィニティークロマトグラフィの前に、３２℃の温度および２１℃の温度で融解される。
本明細書に記載のアフィニティー樹脂に負荷するための血漿またはその画分の安定性は、血漿またはその画分の血液凝固促進活性、タンパク質溶解活性および粒径を評価することによって決定することができる。血液凝固促進活性、タンパク質溶解活性および粒径を評価する方法は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載される。簡単に述べると、血漿またはその画分を１つまたはそれ以上のサイクルで凍結／融解し、２℃～３２℃（例えば、２℃、１０℃、１８℃、２１℃、２８℃または３２℃）で２４時間または最長４８時間保存し、以下に記載する１つまたはそれ以上の方法を用いて分析する。一例では、血漿またはその画分を３２℃の温度で１つまたはそれ以上のサイクルで融解し、２４時間または最長４８時間保存し、以下に記載する１つまたはそれ以上の方法を用いて分析する。他の例では、血漿またはその画分を３２℃の温度で１つまたはそれ以上のサイクルで融解し、２４時間または最長４８まで保存し、以下に記載する１つまたはそれ以上の方法を用いて分析した後、冷却して２１℃の温度で保存する。一例では、血漿またはその画分は、連続アフィニティークロマトグラフィの前に、３２℃の温度および２１℃の温度で融解される。
【0551】
一例では、血漿またはその画分中の血液凝固促進活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ凝固アッセイ、例えば活性化部分トロンボプラスチン時間（ＮａＰＴＴ）アッセイを用いて決定することができる。ＮａＰＴＴアッセイは、凝固活性化剤（例えば、シリカ、カオリン、エラグ酸）がアッセイに添加された場合に、１つまたはそれ以上の凝固因子（例えば、フィブリノゲン、プロトロンビン、プロアクセレリン、抗血友病因子、Ｓｔｕａｒｔ－Ｐｒｏｗｅｒ因子、血漿トロンボプラスチン前駆因子およびＨｅｇｅｍａｎ因子）が血漿またはその画分中で活性化または形成される速度を測定する。
【0552】
一例では、血漿またはその画分中のタンパク質溶解活性は、例えばトロンビン活性測定キット（Ｓ－２２３８）、一般セリンプロテアーゼ測定キット（Ｓ－２２８８）、カリクレイン活性測定キット（Ｓ－２３０２）、プラスミン活性測定キット（Ｓ－２２５１）およびＦＸａ活性キット（Ｓ－２７６５）のような市販のキットを用いて、トロンビン、一般セリンプロテアーゼ、カリクレイン、プラスミンおよびＦＸａの活性を測定することにより評価することができる。
【0553】
一例では、血漿またはその画分中の任意の粒子のサイズをマイクロフローイメージング（ＭＦＩ）により評価し、多分散性指数を算出する。多分散性指数の算出は当業者には明らかであろう。
【0554】
追加の精製工程
連続クロマトグラフィ工程の前または後に、追加の精製工程を実施することができる。一例では、追加の精製工程は連続クロマトグラフィ工程の前に実施してもよい。一例では、追加の精製工程は、連続クロマトグラフィ工程の後に実施してもよい。
連続クロマトグラフィ工程の前または後に、追加の精製工程を実施することができる。一例では、追加の精製工程は連続クロマトグラフィ工程の前に実施してもよい。一例では、追加の精製工程は、連続クロマトグラフィ工程の後に実施してもよい。
【0555】
一例では、本方法は、エタノール沈殿、オクタン酸分画、イオン交換クロマトグラフィ、ウイルス不活性化、ウイルス濾過および限外濾過／透析濾過からなる群から選択される１つまたはそれ以上の工程をさらに含む。追加の精製工程は、当業者には明らかである、および／または本明細書に記載される。
【0556】
一例では、本方法は、エタノール沈殿をさらに含む。例えば、血漿またはその画分からアルブミン、α－およびβ－グロブリンを除去することによってＩｇＧを単離および濃縮するために、冷エタノールを使用することができる。例えば、国際公開第２０１１／１４９４７２号に記載されている通りである。
【0557】
一例では、本方法はイムノアフィニティークロマトグラフィをさらに含む。例えば、本方法は、Ｅｓｈｍｕｎｏ抗Ａおよび抗Ｂ樹脂を用いるイソアグルチニンアフィニティークロマトグラフィをさらに含む。例えば、イソアグルチニンアフィニティークロマトグラフィを用いてイソアグルチニンＡおよびＢを除去することができる。
【0558】
一例では、本方法はオクタン酸分画をさらに含む。オクタン酸は、血漿脂質および血漿タンパク質（ＩｇＧ以外）の除去に使用することができる。例えば、国際公開第２０１１／１３１７８７号に記載されている通りである。
【0559】
一例では、本方法はイオン交換クロマトグラフィをさらに含む。一例では、イオン交換クロマトグラフィは陰イオン交換クロマトグラフィである。例えば、陰イオン交換クロマトグラフィは、ＩｇＡ、残存するＩｇＭおよび他の血漿成分（ＩｇＧ以外）を除去するために使用し得る。
【0560】
陰イオン交換体は、樹脂ベースの陰イオン交換体、陰イオン交換メンブレン吸着体、または負に帯電した粒子を捕捉するための正に帯電した基質を有する他の任意の形式の陰イオン交換体であり得る。一例では、陰イオン交換体は陰イオン交換メンブレン吸着剤である。他の例では、陰イオン交換体は樹脂ベースの陰イオン交換体である。さらなる例では、陰イオン交換体はモノリス陰イオン交換体である。
【0561】
一例では、本方法は、樹脂ベースの陰イオン交換体を使用する陰イオン交換クロマトグラフィをさらに含む。例えば、陰イオン交換クロマトグラフィ樹脂は強陰イオン交換体である。一例では、強陰イオン交換樹脂は、ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）マトリクスからなるマトリクスを含む。一例では、強陰イオン交換体は四級化ポリエチレンイミン官能基を含む。適切な樹脂ベースの陰イオン交換は当業者には明らかであり、例えば、ＰＯＲＯＳ（商標）ＨＱ ５０が挙げられる。
【0562】
一例では、陰イオン交換クロマトグラフィ工程はフロースルーモードで行われる。他の例では、陰イオン交換クロマトグラフィ工程は、バインドアンドエルートモードで実施される。
【0563】
一例では、陰イオン交換クロマトグラフィ工程は、クエン酸ナトリウム、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）緩衝液、リン酸二水素ナトリウム、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ、リン酸塩、Ｌ－ヒスチジンおよびその組合せからなる群から選択される緩衝液を含む。一例では、陰イオン交換クロマトグラフィ工程は、ＭＥＳ緩衝液を含む緩衝液を含む。他の例では、陰イオン交換クロマトグラフィ工程は、リン酸緩衝液を含む。
【0564】
一例では、本方法はさらにウイルス不活性化を含む。例えば、ウイルス不活性化は、溶液を低ｐＨに調整することによって行うことができる。低ｐＨは２～４のｐＨであり得る。一例では、低ｐＨウイルス不活性化はカプリレートの存在下で実施される。他の例では、血漿もしくはその画分、またはＩｇＧ濃縮調製物もしくはＩｇＧ含有医薬組成物をｎ－オクチル－β－Ｄ－グルコピラノシド（ＯＧ）と接触させ、それによってＯＧ－ＩｇＧ混合物を形成させることによってウイルス不活性化を行うことができる。さらなる例では、低ｐＨウイルス不活性化はＮ，Ｎ－ジメチルミリスチルアミンＮ－オキシド（ＴＤＡＯ）の存在下で実施される。
【0565】
さらなる例では、血漿もしくはその画分、またはＩｇＧ濃縮調製物もしくはＩｇＧ含有医薬組成物を溶媒－界面活性剤不活性化工程にさらすことにより、ウイルス不活性化を行うことができる。適切な溶媒－界面活性剤処理は当業者には明らかであり、例えば環境に優しい界面活性剤が含まれる。本開示で使用するのに適した、特に脂質エンベロープウイルスを不活性化するのに使用するための例示的な環境に優しい界面活性剤としては、Ｎ，Ｎ－ジメチルミリスチルアミンＮ－オキシド（ＴＤＡＯ）、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）、ポリオキシエチレン（１０）イソオクチルシクロヘキシルエーテル（ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ－１００－還元型）、ならびにグルコースおよびアルコールから調製された非イオン性サーファクタント（例えば、Ｓｉｍｕｌｓｏｌ（商標）製剤）が挙げられる。一例では、界面活性剤はＮ，Ｎ－ジメチルミリスチルアミンＮ－オキシド（ＴＤＡＯ）である。一例では、界面活性剤はポリソルベート８０である。他の例では、界面活性剤はポリオキシエチレン（１０）イソオクチルシクロヘキシルエーテル（ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ－１００－還元型）である。さらなる例では、界面活性剤はグルコースおよびアルコールから調製された非イオン性サーファクタントである。
【0566】
一例では、ＯＧ－ＩｇＧ混合物中のＯＧ濃度は２５ｍＭ～８０ｍＭの範囲である。例えば、ＯＧ－ＩｇＧ混合物中のＯＧ濃度は、２５ｍＭ～５０ｍＭ、または５０ｍＭ～８０ｍＭ、または３０ｍＭ～６０ｍＭの範囲である。例えば、ＯＧ－ＩｇＧ混合物中のＯＧ濃度は、２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭ、または５５ｍＭ、または６０ｍＭ、または６５ｍＭ、または７０ｍＭ、または７５ｍＭ、または８０ｍＭである。
【0567】
一例では、ＯＧ－ＩｇＧ混合物中のＯＧ濃度は３０ｍＭである。
【0568】
一例では、血漿もしくはその画分、またはＩｇＧ濃縮調製物もしくはＩｇＧ含有医薬組成物を、最長１５分間ＯＧと接触させる。例えば、血漿もしくはその画分、またはＩｇＧ濃縮調製物もしくはＩｇＧ含有医薬組成物は、最長０．５分、または１分、または１．５分、または２分、または２．５分、または３分、または３．５分、または４分、または４．５分、または５分、または５．５分、または６分、または６．５分、または７分、または７．５分、または８分、または８．５分、または９分、または９．５分、または１０分、または１０．５分、または１１分、または１１．５分、または１２分、または１２．５分、または１３分、または１３．５分、または１４分、または１４．５分、または１５分ＯＧと接触させる。
【0569】
一例では、血漿もしくはその画分、またはＩｇＧ濃縮調製物もしくはＩｇＧ含有医薬組成物は、２℃～２８℃の範囲の温度でＯＧと接触させる。例えば、血漿もしくはその画分、またはＩｇＧ濃縮調製物もしくはＩｇＧ含有医薬組成物を、２℃～８℃、または２℃～２８℃、または２℃～２５℃、または２℃～２０℃、または２℃～１８℃、または２℃～１５℃、または２℃～１０℃の範囲の温度でＯＧと接触させる。例えば、血漿もしくはその画分、またはＩｇＧ濃縮調製物もしくはＩｇＧ含有医薬組成物を、２℃、または３℃、または４℃、または５℃、または６℃、または７℃、または８℃、または９℃、または１０℃、または１１℃、または１２℃、または１３℃、または１４℃、１５℃、または１６℃、または１７℃、または１８℃、または１９℃、または２０℃、または２１℃、または２２℃、または２３℃、または２４℃、または２５℃、または２６℃、または２７℃、または２８℃の温度でＯＧと接触させる。
【0570】
一例では、血漿もしくはその画分、またはＩｇＧ濃縮調製物もしくはＩｇＧ含有医薬組成物を、２℃の温度でＯＧと接触させる。
【0571】
一例では、血漿もしくはその画分、またはＩｇＧ濃縮調製物もしくはＩｇＧ含有医薬組成物を、８℃の温度でＯＧと接触させる。
【0572】
一例では、血漿もしくはその画分、またはＩｇＧ濃縮調製物もしくはＩｇＧ含有医薬組成物を、１０℃の温度でＯＧと接触させる。
【0573】
一例では、血漿もしくはその画分、またはＩｇＧ濃縮調製物もしくはＩｇＧ含有医薬組成物を、１８℃の温度でＯＧと接触させる。
【0574】
一例では、血漿もしくはその画分、またはＩｇＧ濃縮調製物もしくはＩｇＧ含有医薬組成物を、２８℃の温度でＯＧと接触させる。
【0575】
一例では、本方法はウイルス濾過をさらに含む。例えば、孔径１５～２０ｎｍのウイルス濾過メンブレンを使用して、溶液もしくは溶出物または医薬組成物から微生物およびウイルスを除去することができる。例示的なナノフィルターとしては、Ｐｌａｎｏｖａ Ｓ２０Ｎ（Ａｓａｈｉ）、Ｖｉｒｏｓａｒｔ ＨＣ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）およびＰｌａｎｏｖａ ２０Ｎ（Ａｓａｈｉ）が挙げられる。
【0576】
一例では、本方法は、限外濾過／透析濾過をさらに含む。例示的な限外濾過／透析濾過メンブレンは、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ ２ Ｃａｓｓｅｔｔｅｓ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）またはＰｏｌｙｅｔｈｅｒｓｕｌｆｏｎｅまたはＨｙｄｒｏｓａｒｔカセット（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）である。
【0577】
医薬組成物
本開示の精製ＩｇＧ（共活性成分）は、治療および予防的治療のための、静脈内投与または皮下投与などの非経口投与のための医薬組成物への製剤化に有用である。
本開示の精製ＩｇＧ（共活性成分）は、治療および予防的治療のための、静脈内投与または皮下投与などの非経口投与のための医薬組成物への製剤化に有用である。
【0578】
投与のための組成物は、一般的に、水性担体などの薬学的に許容される担体に溶解した本開示の精製ＩｇＧの溶液を含む。種々の水性担体、例えば、緩衝化生理食塩水を使用し得る。組成物は、例えば酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどのｐＨ調整剤および緩衝剤、毒性調整剤などの生理学的条件に近似させるために薬学的に許容される担体を適宜含有し得る。
【0579】
これらの製剤中の本開示の精製ＩｇＧの濃度は広範囲に変化し得、選択された特定の投与様式および患者の必要性に応じて、主に流体体積、粘度、および体重などに基づいて選択される。ビヒクルは、等張性および化学的安定性を高める微量の添加剤、例えば緩衝液および保存剤を含有し得る。例えば、医薬組成物は安定化剤としてプロリンを含む。
【0580】
本開示による適切な医薬組成物は、一般的に、無菌水溶液のような許容される薬学的な担体と混和された一定量の本開示の精製ＩｇＧを含み、意図される使用に応じて、最終濃度の範囲がもたらされる。調製技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １６ｔｈ Ｅｄ． Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， １９８０に例示されるように当技術分野で一般的に公知である。
【0581】
例えば、医薬組成物のＩｇＧ濃度は、１～５％ｗ／ｖ、５～１５％ｗ／ｖ、または８～１２％ｗ／ｖである。例えば、医薬組成物のＩｇＧ濃度は、１％、２％、３％、４％、５％、または６％、または７％、または８％、または９％、または１０％、または１１％、または１２％、または１３％、または１４％、または１５％ｗ／ｖである。静脈内使用の場合、１％ｗ／ｖ（すなわち１０ｇ ＩｇＧ／Ｌ）を使用し得る。静脈内使用の場合、１０％ｗ／ｖ（すなわち１００ｇ ＩｇＧ／Ｌ）を使用し得る。
【0582】
皮下投与の場合、より高い濃度を使用することができる。例えば、１５～３５％ｗ／ｖ、または２０～３０％ｗ／ｖである。一例では、医薬組成物のＩｇＧ濃度は１６％、または１７％、または１８％、または１９％、または２０％、または２１％、または２２％、または２３％、または２４％、または２５％、または２６％ｗ／ｖである。
【0583】
使用方法
本明細書で議論されるように、本開示は、ＩｇＧまたは医薬製剤を対象に投与することを含む、対象における状態の治療、予防および／または進行遅延の方法を提供する。
本明細書で議論されるように、本開示は、ＩｇＧまたは医薬製剤を対象に投与することを含む、対象における状態の治療、予防および／または進行遅延の方法を提供する。
【0584】
一例では、状態は、原発性免疫不全症（ＰＩ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、および慢性免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）からなる群から選択される。
【実施例】
【0585】
実施例１：アフィニティー樹脂
アフィニティークロマトグラフィ樹脂ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアフィニティー樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）およびＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアガロースアフィニティー樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、血漿またはその画分からＩｇＧを捕捉するのに適した樹脂を評価した。いずれのアフィニティークロマトグラフィ樹脂も、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメイン、特にラクダ由来の単一ドメイン［ＶＨＨ］抗体フラグメントに結合できるリガンドと、架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）またはアガロースのいずれかのマトリクスを含有する。アフィニティークロマトグラフィ樹脂は、ＣｙｔｉｖａのＴｒｉｃｏｒｎカラム（直径５ｍｍ）に充填し、Ａｋｔａ ａｖａｎｔ ２５システム（Ｃｙｔｉｖａ）でクロマトグラフィを実施した。
アフィニティークロマトグラフィ樹脂ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアフィニティー樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）およびＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアガロースアフィニティー樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、血漿またはその画分からＩｇＧを捕捉するのに適した樹脂を評価した。いずれのアフィニティークロマトグラフィ樹脂も、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメイン、特にラクダ由来の単一ドメイン［ＶＨＨ］抗体フラグメントに結合できるリガンドと、架橋ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）またはアガロースのいずれかのマトリクスを含有する。アフィニティークロマトグラフィ樹脂は、ＣｙｔｉｖａのＴｒｉｃｏｒｎカラム（直径５ｍｍ）に充填し、Ａｋｔａ ａｖａｎｔ ２５システム（Ｃｙｔｉｖａ）でクロマトグラフィを実施した。
【0586】
クライオリッチ血漿（ＣＲＰ）とクライオプア血漿（ＣＰＰ）（ＣＳＬ Ｂｅｈｒｉｎｇ製）を３７℃に加温し、０．２２μｍのボトルトップフィルターで濾過した。アフィニティークロマトグラフィ樹脂は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒから提供されたクロマトグラフィ実行条件および緩衝液を用いて、以下の表１に示すように評価した。
【0587】
【表1】
【0588】
ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアフィニティー樹脂を用いたＣＲＰおよびＣＰＰからのＩｇＧの精製では、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアガロースアフィニティー樹脂を用いた場合と比較して、ＩｇＧの収率が高く、溶出物の純度がわずかに高くなった。これらの初期結果に基づき、ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰ アフィニティー樹脂の連続アフィニティークロマトグラフィへの使用における適合性をさらに評価した。
【0589】
実施例２：緩衝液組成
表１の洗浄緩衝液の欠点は、緩衝剤のクエン酸が３つの解離定数（ｐＫａ１：３．１３、ｐＫａ２：４．７６、ｐＫａ３：６．４）を有し、平衡化に必要な７．４のｐＨでは適切に緩衝化されないことである。さらに、クエン酸を含む緩衝液（表１に記載）を用いた洗浄と溶出、およびストリップと平衡化の間のｐＨシフトは、クロマトグラフィ中の非効率的なｐＨ変化および伸長相をもたらす。
表１の洗浄緩衝液の欠点は、緩衝剤のクエン酸が３つの解離定数（ｐＫａ１：３．１３、ｐＫａ２：４．７６、ｐＫａ３：６．４）を有し、平衡化に必要な７．４のｐＨでは適切に緩衝化されないことである。さらに、クエン酸を含む緩衝液（表１に記載）を用いた洗浄と溶出、およびストリップと平衡化の間のｐＨシフトは、クロマトグラフィ中の非効率的なｐＨ変化および伸長相をもたらす。
【0590】
連続アフィニティークロマトグラフィ中のｐＨの迅速な調整を可能にする適切な緩衝液組成を決定するために、実施例１で実施した実験を、表１の代わりに表２のクロマトグラフィ緩衝液を用いたＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアフィニティー樹脂を用いて繰り返した。
【0591】
【表2】
【0592】
洗浄緩衝液中に存在するリン酸二水素ナトリウムは３つの解離定数（ｐＫａ１：２．１６、ｐＫａ２：７．２１、およびｐＫａ３：１２．３２）を有し、樹脂の平衡化に必要な７．４のｐＨをカバーしている。リン酸二水素ナトリウムの緩衝液濃度を２０ｍＭに上げると、実験中の緩衝化が不十分であることの影響を排除できることが見出された。しかし、より低濃度のリン酸二水素ナトリウムを洗浄緩衝液に使用してもよい。
【0593】
その結果、リン酸二水素ナトリウムを使用することで、溶出およびストリッピング時の低ｐＨと、平衡化および洗浄時の高ｐＨを高速で切り替えることができ、連続アフィニティークロマトグラフィランによって、より明確なピークおよび相の短縮がもたらされることが示された。
【0594】
ｐＨ７．４と７．８ではＩｇＧの結合挙動に差は認められず、これによって、この範囲のｐＨを有するＣＲＰとＣＰＰをｐＨ調整なしで樹脂に適用できる。
【0595】
実施例３：床高および流量
負荷相と非負荷相の減少を可能にする条件を決定するため、クロマトグラフィプロセスで使用する床高および流量を評価した。実施例２に記載した実験を、樹脂の床高を変え、樹脂に適用する血漿またはその画分および溶出緩衝液の流量を変えて繰り返した。
負荷相と非負荷相の減少を可能にする条件を決定するため、クロマトグラフィプロセスで使用する床高および流量を評価した。実施例２に記載した実験を、樹脂の床高を変え、樹脂に適用する血漿またはその画分および溶出緩衝液の流量を変えて繰り返した。
【0596】
２０ｃｍの床高は、低い床高と比較して、血漿またはその画分からのＩｇＧの有意に高い精製効率を示し、これにより短い非負荷相が可能になった。溶出時の流量を１５０ｃｍ／ｈｒ（接触時間５分）に下げても、２４００ｃｍ／ｈでの溶出と比較して有意な効果は見られなかった。驚くべきことに、血漿またはその画分を樹脂に適用する負荷流量を２４００ｃｍ／ｈｒ（接触時間０．５分）まで増加させても、ＩｇＧ結合に有意な減少はないことが見出された。
【0597】
広範な実験によって決定された、血漿またはその画分からＩｇＧを精製するための最適化された条件を、以下の表３に要約する。選択された緩衝液組成、樹脂、床高、および流量の組合せにより、非負荷相（すなわち、平衡化、洗浄、溶出、ストリップ、および再平衡化）の各相で、廃液、フロースルー、および産物の量が減少した。
【0598】
【表3】
【0599】
床高２０ｃｍのカラムを用いた場合、非負荷相の合計容量は８．６ＣＶであったのに対し、清澄化ＣＰＰの負荷容量は４．３ＣＶであった。非負荷／負荷ＣＶ比は２であり、わずか３つのカラムでＳＭＢのセットアップが可能であった。約６ｃｍのカラム床高を使用しても同様の結果が認められた。約６ｃｍの床高のカラムで行った実験では、非負荷相の合計容量は７ＣＶであったのに対し、清澄化ＣＰＰの負荷容量は３．８であった。非負荷／負荷のＣＶ比は１．８であり、４つのカラムではなく、わずか３本のカラムでＳＭＢのセットアップが可能であった。この結果は、床高に関係なく、非負荷相の容量を減らすことで、精製法においてより少ないカラムの使用が可能になることを示している。
【0600】
さらに、ＩｇＧは１．８ＣＶで溶出され、濃縮倍率は２．４倍となった。サイクル時間（ポンプランプアップおよびポンプ洗浄を除く）は約６．５分であった。
【0601】
洗浄相と溶出相のように、溶出相とストリップ相を重複させることで、さらなる高濃度化が可能である。再平衡化の間に緩衝液濃度またはｐＨを増加させれば、必要な緩衝液をさらに減少させることができ、樹脂の加齢により血漿またはその画分の負荷量が減少しても、永続的に非負荷／負荷ＣＶ比を２未満にすることができる。
【0602】
実施例４：溶出液プロファイル
純度
実施例２および３の溶出物の純度を定性的に決定するために、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動を実施した。実施例２および３に従ってＦｃＸＰ樹脂（ＦｃＸＰ）を用いて清澄化ＣＰＰから精製したＩｇＧの試料（８μｇおよび１６μｇ）を、還元および非還元条件下で８～１６％ＴＲＩＳ－グリシンＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル上で行った（図１）。タンパク質マーカー（Ｍ）Ｓｅｅ Ｂｌｕｅ Ｐｌｕｓ ２ Ｍａｒｋｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）も含めた。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ゲルはクマシー染色した。ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアフィニティー樹脂を用いて精製した清澄化ＣＰＰからのＩｇＧの純度は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより９８．７％と決定された。
純度
実施例２および３の溶出物の純度を定性的に決定するために、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動を実施した。実施例２および３に従ってＦｃＸＰ樹脂（ＦｃＸＰ）を用いて清澄化ＣＰＰから精製したＩｇＧの試料（８μｇおよび１６μｇ）を、還元および非還元条件下で８～１６％ＴＲＩＳ－グリシンＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル上で行った（図１）。タンパク質マーカー（Ｍ）Ｓｅｅ Ｂｌｕｅ Ｐｌｕｓ ２ Ｍａｒｋｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）も含めた。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ゲルはクマシー染色した。ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアフィニティー樹脂を用いて精製した清澄化ＣＰＰからのＩｇＧの純度は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより９８．７％と決定された。
【0603】
実施例２および３の溶出物の不純物プロファイルを決定するために、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳペプチドマスフィンガープリントを実施した。可視バンド（図１に矢印で示す）を単離し、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳペプチドマスフィンガープリントに用いて、各バンドにおけるタンパク質の同一性を決定した。不純物はＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳペプチドマスフィンガープリントで同定し（図１の矢印Ａ～Ｆで示す）、表４に要約する。残りのバンド（図１の指定文字のない矢印）はＩｇＧと同定された。ＦｃＸＰ試料に最も多く含まれる不純物は、ＩｇＭ、アルブミン、およびアポリポタンパク質Ａ－１であった（図１の矢印Ｂ、Ｃ、およびＦ）。補体系を構成する他の３成分は微量不純物であった（図１の矢印Ａ、Ｄ、およびＥ、ならびに表４のバンドＡ、Ｄ、およびＥ）。
【0604】
【表4】
【0605】
ＳＥ－ＨＰＬＣにより、溶出液中のＩｇＧの平均単量体および二量体含量は９８．１％で、ポリマー含量は０．９％、フラグメント含量は１．０％であったことが示された。
【0606】
溶出液中の不純物の等電点（ｐＩ）をＩｇＧと比較して決定するために、２Ｄ差動ゲル電気泳動（２Ｄ ＤＩＧＥ）を実施した。清澄化ＣＰＰからの精製ＩｇＧの試料（ＦｃＸＰ ＰＯＲＯＳ（登録商標）溶出液）にそれぞれＳｃｉ５およびＳｃｉ３色素をロードし、２Ｄ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥにロードした。等電点による試料の分離はｐＨ３～１０で実施し、続いて還元条件下、ＳＤＳ存在下でサイズによる分離を行った（図２）。ＩｇＧは、ＦｃＸＰ ＰＯＲＯＳ（登録商標）溶出物試料のｐＨ７～９に等電点を有することが特定された（図２）。ＩｇＭおよびアルブミンは、溶出物中で約６．５のｐＨ（図２の円）を有し、ＩｇＧの等電点より低いことが特定された。
【0607】
この結果から、溶出物からＩｇＭおよびアルブミンを除去することは、ＩｇＧを大量に失うことなく、イオン交換ポリッシュ工程を用いて可能であることが示される。
【0608】
ＩｇＧサブクラス分布
ＩｇＧの精製に使用したアフィニティー樹脂が、実施例２および３の溶出物中のＩｇＧのサブクラス分布に影響を及ぼすかどうかを決定するために、イムノネフェロメトリーを実施した。ＣＲＰ、ＣＰＰ、ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰを用いたＣＲＰまたはＣＰＰからの精製ＩｇＧについて、ＩｇＧサブクラス分布を測定した（図３）。サブクラス分布は、全クラスの合計に対するＩｇＧクラスの相対部分（ＩｇＧｘ／（ＩｇＧ１＋ＩｇＧ２＋ＩｇＧ３＋ＩｇＧ４））で算出した。
ＩｇＧの精製に使用したアフィニティー樹脂が、実施例２および３の溶出物中のＩｇＧのサブクラス分布に影響を及ぼすかどうかを決定するために、イムノネフェロメトリーを実施した。ＣＲＰ、ＣＰＰ、ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰを用いたＣＲＰまたはＣＰＰからの精製ＩｇＧについて、ＩｇＧサブクラス分布を測定した（図３）。サブクラス分布は、全クラスの合計に対するＩｇＧクラスの相対部分（ＩｇＧｘ／（ＩｇＧ１＋ＩｇＧ２＋ＩｇＧ３＋ＩｇＧ４））で算出した。
【0609】
収率
収率はイムノネフェロメトリーを用いて測定した。実施例２および３の血漿からの溶出物において、少なくとも９５％のＩｇＧが回収され、９６％と高かった。
収率はイムノネフェロメトリーを用いて測定した。実施例２および３の血漿からの溶出物において、少なくとも９５％のＩｇＧが回収され、９６％と高かった。
【0610】
実施例５：精製サイクル
ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアフィニティー樹脂上の精製サイクルの影響を調べるため、複数の精製サイクルを連続して行い、レジンの結合容量を測定した。複数の精製サイクル中の様々な時点で、純粋なＩｇＧのブレークスルー挙動を測定し、樹脂の残りの結合容量を算出するために使用した。結合容量の喪失は樹脂の加齢に起因し得る。
ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）ＦｃＸＰアフィニティー樹脂上の精製サイクルの影響を調べるため、複数の精製サイクルを連続して行い、レジンの結合容量を測定した。複数の精製サイクル中の様々な時点で、純粋なＩｇＧのブレークスルー挙動を測定し、樹脂の残りの結合容量を算出するために使用した。結合容量の喪失は樹脂の加齢に起因し得る。
【0611】
ＣＲＰまたはＣＰＰを樹脂に適用し（６ｃｍまたは２０ｃｍの床高）、血漿を各相０．５分間樹脂に接触させ、樹脂の結合容量を経時的に測定した。図４は、６ｃｍと２０ｃｍの床高の樹脂で実施したＳＭＢクロマトグラフィ間で、樹脂の加齢に差がないことを示している。結合容量の低下は、１００回のラン当たり平均５％未満の傾きを持つ直線的な傾向に沿っており、１００回のラン後でも樹脂の加齢はわずかであることを示している。この結果は、ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＦｃＸＰ（登録商標）アフィニティー樹脂が、実施例２および３に記載した条件下でのＳＭＢ クロマトグラフィのセットアップでの使用に適していることを示している。
【0612】
実施例６：血漿およびその画分の安定性
本明細書に記載の方法で使用するためのＣＲＰおよびＣＰＰの安定性を評価した。ＣＲＰおよびＣＰＰを最大２回凍結融解、および／または０．２２μｍフィルターを用いて濾過した。処理したＣＲＰおよびＣＰＰを１０℃、１８℃、または２８℃で２４時間または４８時間保存した。試料のＩｇＧ含量およびＩｇＧサブクラス分布はイムノネフェロメトリーで測定した。表５および表６の結果から、ＣＲＰおよびＣＰＰのＩｇＧ含量およびＩｇＧサブクラス分布は、濾過、温度、時間、および凍結／融解の影響を受けないことが示される。
本明細書に記載の方法で使用するためのＣＲＰおよびＣＰＰの安定性を評価した。ＣＲＰおよびＣＰＰを最大２回凍結融解、および／または０．２２μｍフィルターを用いて濾過した。処理したＣＲＰおよびＣＰＰを１０℃、１８℃、または２８℃で２４時間または４８時間保存した。試料のＩｇＧ含量およびＩｇＧサブクラス分布はイムノネフェロメトリーで測定した。表５および表６の結果から、ＣＲＰおよびＣＰＰのＩｇＧ含量およびＩｇＧサブクラス分布は、濾過、温度、時間、および凍結／融解の影響を受けないことが示される。
【0613】
【表5】
【0614】
【表6】
【0615】
血漿およびＣＰＰ中のタンパク質の凝固を測定するため、非活性化部分トロンボプラスチン時間（ＮａＰＴＴ）アッセイを用いて血液凝固促進活性を測定した。ＮａＰＴＴアッセイでは凝固時間は１５０秒超と設定した。血液凝固促進活性は、２８℃で２４時間または４８時間の血漿およびＣＰＰで観察された（図５）。濾過、凍結／融解、または１０℃もしくは１８℃の温度において、２４時間または４８時間の間、血漿およびＣＰＰでは、血液凝固促進活性は観察されなかった。
【0616】
血漿およびＣＰＰ中のタンパク質溶解活性を測定するために、トロンビン、一般セリンプロテアーゼ、カリクレイン、プラスミン、およびＦＸａの活性を発色基質アッセイを用いて測定した（トロンビン：Ｓ－２２３８；一般セリンプロテアーゼ：Ｓ－２２８８；カリクレイン：Ｓ－２３０２；プラスミン：Ｓ－２２５１；およびＦＸａ：Ｓ－２７６５）。タンパク質溶解活性は、血漿およびＣＰＰ中において、２８℃で２４時間または４８時間で観察された（図６）。濾過、凍結／融解、または１０℃もしくは１８℃の温度では２４時間または４８時間では、血漿およびＣＰＰにおいて、タンパク質溶解活性は観察されなかった。
【0617】
ＣＲＰおよびＣＰＰの安定性は、マイクロフローイメージング（ＭＦＩ）および動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定される試料内の粒子径の変化を測定することによっても評価され、試料の多分散性指数も算出した。表８および表９は、試料が広範囲に多分散していることを示している（＞０．４）。表７および表８から、１０℃と１８℃の試料の多分散性指数には、４時間と２４時間では差がなかったが、４８時間では明らかに増加したことが示される。血漿の傾向指数は、温度および時間による有意差はなく、血漿試料はＣＰＰと比較して、時間や温度に対してより安定であることが示された。
【0618】
【表7】
【0619】
【表8】
【0620】
この結果から、ＣＲＰおよびＣＰＰは、より高い温度で、より長期間保存することにより、粒子形成が起こることが示される。血漿またはその画分を保存するのに適した温度は、１０℃～１８℃で最長４８時間であり得る。
【0621】
実施例７：ｎ－オクチル－β－Ｄ－グルコピラノシドを用いたウイルス不活性化の評価
Ｎ－オクチル－β－Ｄ－グルコピラノシド（ＯＧ）を、ＩｇＧ精製前のＣＲＰにおけるウイルス減少能を決定するために評価した。融解しホモジナイズしたＣＲＰ（５０ｍｇ／ｍｌ）とＥＭＥＭ培地（対照）に、１：２０希釈の水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を添加した。ＯＧ添加前のＶＳＶスパイクＣＲＰとＶＳＶスパイクＥＭＥＭ培地のアリコートを回収した。混合物中の最終ＯＧ濃度が３０ｍＭになるように、ＯＧをＶＳＶスパイクＣＲＰおよびＶＳＶスパイクＥＭＥＭ培地に添加し、約１０秒間ピペッティングして混合した。混合物を、ＶＳＶスパイクＥＤＥＭ培地およびＯＧをスパイクしていないＶＳＶ混入血漿とともに、５℃でインキュベートした。インキュベートした試料を１５分、３０分、６０分の時点で回収した。ＯＧの活性を中和するため、試料を培地で１０倍に希釈した。
Ｎ－オクチル－β－Ｄ－グルコピラノシド（ＯＧ）を、ＩｇＧ精製前のＣＲＰにおけるウイルス減少能を決定するために評価した。融解しホモジナイズしたＣＲＰ（５０ｍｇ／ｍｌ）とＥＭＥＭ培地（対照）に、１：２０希釈の水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を添加した。ＯＧ添加前のＶＳＶスパイクＣＲＰとＶＳＶスパイクＥＭＥＭ培地のアリコートを回収した。混合物中の最終ＯＧ濃度が３０ｍＭになるように、ＯＧをＶＳＶスパイクＣＲＰおよびＶＳＶスパイクＥＭＥＭ培地に添加し、約１０秒間ピペッティングして混合した。混合物を、ＶＳＶスパイクＥＤＥＭ培地およびＯＧをスパイクしていないＶＳＶ混入血漿とともに、５℃でインキュベートした。インキュベートした試料を１５分、３０分、６０分の時点で回収した。ＯＧの活性を中和するため、試料を培地で１０倍に希釈した。
【0622】
ＯＧ処理したＶＳＶスパイクＣＲＰ、ＯＧ処理したＶＳＶスパイクＥＤＥＭ培地、ＶＳＶスパイクＣＲＰ、ＶＳＶスパイクＥＤＥＭ培地、および対照の１００μＬのアリコートを、標準９６ウェルマイクロプレート（Ｎｕｎｃ、平底ウェル）で１５０μＬのアフリカミドリザル腎臓細胞（Ｖｅｒｏ－ＰＨ）前培養懸濁液に滴定した（１０倍連続希釈～１０－６希釈）。陰性対照にはＣＲＰおよびＥＤＥＭ培地を用いた。陽性対照には、スパイクに使用したＶＳＶストックと、ＶＳＶウイルスストックの特性決定の前結果に基づき達成された許容できるＶＳＶ力価を有する対照ウイルスストックを使用した。
【0623】
プレートは３７℃、３～５％ＣＯ２でインキュベートし、７日間にわたって顕微鏡を用いてウイルス特異的細胞病原性効果（ＣＰＥ）を調べた。陰性対照で滴定した細胞培養は、ＣＰＥがないことが必要であった。
【0624】
感染力価はＳｐｅａｒｍａｎ－Ｋａｒｂｅｒ法に従って算出し、ｌｏｇ１０ ＣＣＩＤ５０／ｍＬ（１ｍＬ当たりの５０％細胞培養感染量）で表した。例えば１：１０希釈から開始する微量滴定で感染性ウイルスが検出されなかった場合、ウイルス力価は＜１．５ ｌｏｇ１０ ＣＣＩＤ５０／ｍＬとした。検出限界を下げるため、１：１０希釈の後処理Ｖｅｒｏ－ＰＨ細胞１ｍＬを４つのＴ２５フラスコに接種した。４つのＴ２５培養物全てが感染性ウイルス陰性であった場合、得られる感染力価は＜０．５ ｌｏｇ１０ ＣＣＩＤ５０／ｍＬと記録される。
【0625】
最終ＯＧ濃度３０ｍＭが５℃でインキュベートしたＯＧ処理ＶＳＶスパイクＣＲＰに存在する場合、ＶＳＶのロバストな減少が観察された。この条件下（すなわち５℃でＯＧの最終濃度が３０ｍＭ）のｌｏｇ１０減少因子（ＬＲＦ）は５．３以上であった（図７）。ＬＲＦは、処理前の出発材料（例えばＣＲＰ）中のウイルス負荷および処理後の最終材料（例えばＯＧ処理ＣＲＰ）中のウイルス負荷の比であり、処理前後の試料体積とウイルス力価の両方を考慮する。
【0626】
実施例８：血漿融解の最適化
血漿融解の最適温度を評価するために、クライオ沈殿物が観察される温度を決定した。簡単に述べると、クライオリッチ血漿（ＣＲＰ）を融解後１５℃から３８℃まで徐々に加熱し、２０℃、２５℃、２８℃、３０℃、３２℃、および３７℃でＣＲＰの分画を遠心分離し、温度に依存したペレットを秤量した。約３０℃では、非特異的凝集体のみが存在し、クライオ沈殿物は存在しなかった。
血漿融解の最適温度を評価するために、クライオ沈殿物が観察される温度を決定した。簡単に述べると、クライオリッチ血漿（ＣＲＰ）を融解後１５℃から３８℃まで徐々に加熱し、２０℃、２５℃、２８℃、３０℃、３２℃、および３７℃でＣＲＰの分画を遠心分離し、温度に依存したペレットを秤量した。約３０℃では、非特異的凝集体のみが存在し、クライオ沈殿物は存在しなかった。
【0627】
最適温度を決定するために、各ペレットにおいて、クライオ沈殿物の主要成分の１つである、フォン－ウィルブランド因子（ｖＷＦ）の活性を測定した。図８Ａおよび表８に示すように、３２℃で融解すると、ロバストなペレット形成、および上清中のｖＷＦの活性がもたらされた。
【0628】
【表9】
【0629】
３２℃での血漿融解をさらに確認するため、図８Ｂに示したように保持時間試験を実施し、得られた溶出物についてＮａＰＴＴアッセイを用いてタンパク質溶解活性を測定した。
【0630】
表９に示すように、溶出物を３２℃で濾過した場合、最長４８時間タンパク質溶解活性は観察されなかった。
【0631】
【表10】
【0632】
試料はまた、動的光散乱法を用いて微粒子レベルについても分析した。多分散性指数（ＰＤＩ）に試料間の差は観察されず、全ての試料でＰＤＩ＜０．６であった（データは示さず）。
【0633】
濁度も経時的に評価され、４８時間後には全ての温度（すなわち１４℃、２１℃、および３２℃）で目に見える分解が観察された。２４時間時点では、１４℃では目に見える分解は観察されなかったが、３２℃ではほとんど観察された。３２℃に保たれた血漿では、クロマトグラフィ中の１サイクルごとのはっきりとした圧力上昇（ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｃｙｃｌｅ ｐｅｒ ｃｙｃｌｅ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅ）も、１４℃と比較して４８時間で観察された（データは示さず）。
【0634】
分解が目に見えるにもかかわらず、ＩｇＧ含量への影響は観察されなかった。特に、試料をより高い温度で融解および保存しても、経時的なＩｇＧ含量の減少は観察されなかった。
【0635】
実施例９：連続アフィニティークロマトグラフィ法の最適化
ストリップ相の除去
ＳＭＢプロセスにおいて、ストリップ相中に過酷な条件（すなわちｐＨ２．５）によりカラム上に蓄積したタンパク質が変性するため、単一カラムの背圧の上昇が観察された。そこで、ストリップ相を除去することで背圧の上昇が抑えられるかどうかを検討するため、ストリップ相を除去せずにＳＭＢプロセスを実行した。
ストリップ相の除去
ＳＭＢプロセスにおいて、ストリップ相中に過酷な条件（すなわちｐＨ２．５）によりカラム上に蓄積したタンパク質が変性するため、単一カラムの背圧の上昇が観察された。そこで、ストリップ相を除去することで背圧の上昇が抑えられるかどうかを検討するため、ストリップ相を除去せずにＳＭＢプロセスを実行した。
【0636】
図９に示すように、ストリップ相を除去した結果、ＳＭＢプロセス中の背圧上昇が減少し、圧力が安定した。
【0637】
洗浄相の導電率の増加
溶出物中のプロテアーゼ活性を低下できるかどうかを検討するため、洗浄相の導電率をスクリーニングした。
溶出物中のプロテアーゼ活性を低下できるかどうかを検討するため、洗浄相の導電率をスクリーニングした。
【0638】
図１０に示すように、洗浄緩衝液中の塩化ナトリウム濃度を１４５ｍＭから５００ｍＭに増加させると、溶出液中のプロテアーゼ活性は検出限界未満に低下した。洗浄緩衝液の導電率を上げると、追加のタンパク質（例えば、補体系の成分）の溶出が増加したが、導電率の高い洗浄緩衝液では、ＩｇＧ収率および／または全体的な産物の純度への影響は観察されなかった（図１１）。純度レベルは、Ｌａｂｃｈｉｐアッセイおよびネフェロメトリーによる市販のＰｒｉｖｉｇｅｎと同等であった（図１１Ｂおよび図１１Ｃ）。
【0639】
実施例１０：陰イオン交換ポリッシュ工程
ＰＯＲＯＳ（商標）ＨＱ ５０陰イオン交換樹脂のポリッシュ工程としての使用を評価した。樹脂はフロースルーモードで作動させた。
ＰＯＲＯＳ（商標）ＨＱ ５０陰イオン交換樹脂のポリッシュ工程としての使用を評価した。樹脂はフロースルーモードで作動させた。
【0640】
最初に、不純物除去への影響について、ＭＥＳおよびリン酸緩衝液を使用して樹脂をスクリーニングした。
【0641】
ＦｃＸＰ溶出物は、陰イオン交換クロマトグラフィカラムに負荷する前に、１０ｍＭ ＭＥＳまたはリン酸緩衝液ｐＨ６．０、０ｍＭ ＮａＣｌ中でＵＦ／ＤＦに供した。フロースルーと後洗浄液を別々に回収し、分析した。
【0642】
表１０に示すように、ＭＥＳ緩衝液およびリン酸緩衝液は、許容されるＩｇＧ収率および許容される不純物除去をもたらした。
【0643】
ｐＨ６．０（低導電率）のリン酸緩衝液は、不純物除去の開発目標に関して最良の結果をもたらした。
【0644】
【表11】
【0645】
実施例１１：陰イオン交換ポリッシュ工程の平衡化および負荷緩衝液の最適化試験および実験計画法（ＤｏＥ）試験
緩衝液評価試験
緩衝液評価試験
【0646】
【表12】
【0647】
上記の実施例１０に従って試料を負荷した。簡単に述べると、ＦｃＸＰ溶出物を再緩衝化し、Ｐｏｒｏｓ（商標）ＨＱ５０に負荷した。フロースルーと後洗浄液を別々に回収し、分析した。
【0648】
クエン酸緩衝液は、ＮａＣｌおよびｐＨの両方について広い範囲でＩｇＡを良好に除去した。低塩のリン酸塩では、許容されるＩｇＡ除去が達成された。
【0649】
リン酸緩衝液は、ＮａＣｌおよびｐＨの両方について広い範囲でＩｇＭを良好に除去した。
【0650】
Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓおよびヒスチジンは、ＮａＣｌおよびｐＨの両方について広い範囲でアルブミンを良好に除去した。リン酸塩では、低塩でアルブミンが良好に除去された。
【0651】
実験計画 リン酸緩衝液
【0652】
【表13】
【0653】
平衡化と負荷のための予備的推奨値には、０ｍＭ ＮａＣｌおよびｐＨ ６．２が含まれ、パイロットスケールランでの負荷物質は約９３．５％の純度、４０．４～７１．６ｍｇ／ｇ ＩｇＧの不純物濃度を有する。ＢｉｏＳＭＢランでは、負荷物質は約９７％の純度、不１２．０～２０．４ｍｇ／ｇ ＩｇＧの純物／ＩｇＧ濃度を有し、不純物除去に最適な濃度は５～１５ｇ／Ｌ ＩｇＧであった。樹脂の負荷は、樹脂１ｍＬ当たり２５～４２ｍｇの不純物であった。
【0654】
後洗浄の条件として予備的推奨値には、０ｍＭ ＮａＣｌおよびｐＨ ６．０が含まれる。
【0655】
実施例１２：陰イオン交換ポリッシュ工程
ＭＥＳおよびリン酸緩衝液を、ＰＯＲＯＳ（商標）ＨＱ ５０陰イオン交換ポリッシュ工程における不純物除去への影響についてさらにスクリーニングした。このプロセスは、２０ｍＭまたは５０ｍＭのＮａＣｌを含むＭＥＳ緩衝液ｐＨ６．０、２５ｍＭまたは５０ｍＭのＮａＣｌを含むＭＥＳ緩衝液ｐＨ６．６、および０ｍＭのＮａＣｌを含むリン酸緩衝液ｐＨ６．２を用いて、上記の実施例１０に記載したように実施した。
ＭＥＳおよびリン酸緩衝液を、ＰＯＲＯＳ（商標）ＨＱ ５０陰イオン交換ポリッシュ工程における不純物除去への影響についてさらにスクリーニングした。このプロセスは、２０ｍＭまたは５０ｍＭのＮａＣｌを含むＭＥＳ緩衝液ｐＨ６．０、２５ｍＭまたは５０ｍＭのＮａＣｌを含むＭＥＳ緩衝液ｐＨ６．６、および０ｍＭのＮａＣｌを含むリン酸緩衝液ｐＨ６．２を用いて、上記の実施例１０に記載したように実施した。
【0656】
ＭＥＳ緩衝液およびリン酸緩衝液では、ＩｇＧ収率は許容範囲内であり、フロースルー（後洗浄なし）では不純物除去は許容範囲内であった。
【0657】
【表14】
【0658】
実施例１３：ＳＭＢ ＦｃＸＰクロマトグラフィ工程のスケールアップ
内径１ｃｍのカラムを用いたＳＭＢモードでの４カラムセットアップを、樹脂ストリップ相と交互洗浄相を用いずに以下の条件を用いて実施した：
内径１ｃｍのカラムを用いたＳＭＢモードでの４カラムセットアップを、樹脂ストリップ相と交互洗浄相を用いずに以下の条件を用いて実施した：
【0659】
【表15】
【0660】
各バッチ終了後、全てのカラムを２０％ＥｔＯＨと２０ｍＭ ＮａＯＨで再生し、次のバッチ処理に使用した。
【0661】
ＦｃＸＰ溶出物のＩｇＧ収率は９８．３～９９．１％であり、全画分の総ＩｇＧ回収率は９９．４～１００．３％であった。ＦｃＸＰ溶出物の純度もＬａｂｃｈｉｐで評価され、産物の純度は９６．４～９６．９％であった。
【0662】
精製プロセスでは、９．５５～１０．４ｇ／ＬのＩｇＧが得られた。
【0663】
測定されたＦｃＸＰ溶出物中の不純物は、ＩｇＭ（４７．８５～５１．９０ｍｇ／Ｌ；４．８～５．３ｍｇ／ｇｍ ＩｇＧ）、ＩｇＡ（６８．８～７６．５５ｍｇ／Ｌ；７～８ｍｇ／ｇｍ ＩｇＧ）およびアルブミン（５５．３～７８．０５ｍｇ／Ｌ；５．８～７．６ｍｇ／ｇｍ ＩｇＧ）を含んだ。
【0664】
実施例１４：クライオリッチ血漿を用いたスケールアッププロセスラン
３０人のドナーからのプールされたクライオリッチ血漿を融解し、１．２μｍおよび０．４５μｍ＋０．２μｍのフィルターで清澄化した後、下流の処理に使用した。
３０人のドナーからのプールされたクライオリッチ血漿を融解し、１．２μｍおよび０．４５μｍ＋０．２μｍのフィルターで清澄化した後、下流の処理に使用した。
【0665】
融解および濾過した血漿は、以下のプロセスに従って精製および処理した：
１． ＦｃＸＰ ＳＭＢクロマトグラフィ
２． ＵＦ／ＤＦによる濃縮および緩衝液交換
３． ｐＨシフトおよび濾過
４． 陰イオン交換クロマトグラフィ（ＰＯＲＯＳ（商標）ＨＱ５０を使用）
５． イソアグルチニンアフィニティークロマトグラフィ
６． ウイルス不活性化
７． ＵＦ／ＤＦ
８． １００ｇ／Ｌ ＩｇＧへの製剤化
１． ＦｃＸＰ ＳＭＢクロマトグラフィ
２． ＵＦ／ＤＦによる濃縮および緩衝液交換
３． ｐＨシフトおよび濾過
４． 陰イオン交換クロマトグラフィ（ＰＯＲＯＳ（商標）ＨＱ５０を使用）
５． イソアグルチニンアフィニティークロマトグラフィ
６． ウイルス不活性化
７． ＵＦ／ＤＦ
８． １００ｇ／Ｌ ＩｇＧへの製剤化
【0666】
工程１～６からのＩｇＧ回収率は８３～９６％、全プロセス回収率は８１～９４％である、３つの個別のランを実施した。
【0667】
精製プロセスの結果、最終製剤化バルク産物のＩｇＧサブクラス分布は、ＩｇＧ１が６７～６９％、ＩｇＧ２が２４～２７％、ＩｇＧ３が３～４％、およびＩｇＧ４が２～３％であった。
【0668】
イソアグルチニンクロマトグラフィ後の産物の純度もＬａｂｃｈｉｐで評価され、産物の純度は９７～９８．５％であった。
【0669】
ＰＯＲＯＳ ５０ＨＱのフロースルーおよび後洗浄液の、ＩｇＭ（＜１．８６～＜２．５５μｇ／ｇｍ ＩｇＧ）、ＩｇＡ（０．１０９～０．１１１ｍｇ／ｇｍ ＩｇＧ）、およびアルブミン（０．５９～０．７４ｍｇ／ｇｍ ＩｇＧ）を含む不純物について評価した。収率も９３～９７％と決定された。
【0670】
製剤化したバルク産物は、ＩｇＭ（＜０．１７ｍｇ／Ｌ；＜１．７４～＜１．８６μｇ／ｇｍ ＩｇＧ）、ＩｇＡ（８．４６～８．７６ｍｇ／Ｌ；０．０８９～０．０９３ｍｇ／ｇｍ ＩｇＧ）およびアルブミン（６２．７５～６７．６０ｍｇ／Ｌ；０．６４～０．７４ｍｇ／ｇｍ ＩｇＧ）を含む不純物についても評価した。ＦｃＸＰリガンドは＜１０ｐｐｍ（検出限界未満）であった。
【0671】
ＦｃＸＰ ＳＭＢクロマトグラフィ後（Ｉｓｏ－Ａ力価１：１６；Ｉｓｏ－Ｂ力価１：３２）、ＰＯＲＯＳ ＨＱ５０クロマトグラフィ後（Ｉｓｏ－Ａ力価１：４；Ｉｓｏ－Ｂ力価１：８）、およびイソアグルチニンクロマトグラフィ後（Ｉｓｏ－Ａ力価１：０；Ｉｓｏ－Ｂ力価１：０）にも、イソアグルチニンの除去を評価した。
【0672】
配列
配列番号１ ＶＨＨフラグメントのアミノ酸配列である
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＩＳＣＲＡＳＧＬＴＶＮＤＬＹＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＧＲＶＴＰＧＤＮＴＤＹＴＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＬＥＤＴＡＶＹＬＣＡＧＲＲＦＧＳＳＥＷＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２ ＶＨＨフラグメントのＣＤＲ１のアミノ酸配列である
ＧＬＴＶＮＤＬＹＭＧ
配列番号３ ＶＨＨフラグメントのＣＤＲ２のアミノ酸配列である
ＲＶＴＰＧＤＮＴＤＹＴＹＹＶＤＳＶＫ
配列番号４ ＶＨＨフラグメントのＣＤＲ３のアミノ酸配列である
ＲＲＦＧＳＳＥＷＤＹ
配列番号１ ＶＨＨフラグメントのアミノ酸配列である
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配列番号２ ＶＨＨフラグメントのＣＤＲ１のアミノ酸配列である
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配列番号３ ＶＨＨフラグメントのＣＤＲ２のアミノ酸配列である
ＲＶＴＰＧＤＮＴＤＹＴＹＹＶＤＳＶＫ
配列番号４ ＶＨＨフラグメントのＣＤＲ３のアミノ酸配列である
ＲＲＦＧＳＳＥＷＤＹ
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図6A】
【図6B】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【配列表】
【国際調査報告】