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特表2024-528700細胞喪失を治療又は阻害するためのヒスタチンの組み合わせ及び方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-07-30
(54)【発明の名称】細胞喪失を治療又は阻害するためのヒスタチンの組み合わせ及び方法
(51)【国際特許分類】
A61K 38/17 20060101AFI20240723BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20240723BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240723BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20240723BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240723BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240723BHJP
A61K 9/06 20060101ALI20240723BHJP
A61K 9/00 20060101ALI20240723BHJP
A61P 27/10 20060101ALI20240723BHJP
A61P 27/06 20060101ALI20240723BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240723BHJP
A61K 38/20 20060101ALI20240723BHJP
C07K 14/47 20060101ALN20240723BHJP
C07K 14/52 20060101ALN20240723BHJP
【ＦＩ】
A61K38/17 ZNA
A61P27/02
A61P17/00
A61P17/02
A61P43/00 105
A61K9/08
A61K9/06
A61K9/00
A61P27/10
A61P27/06
A61K45/00
A61K38/20
C07K14/47
C07K14/52
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024503860
(86)(22)【出願日】2022-07-22
(85)【翻訳文提出日】2024-03-18
(86)【国際出願番号】 US2022038031
(87)【国際公開番号】W WO2023004124
(87)【国際公開日】2023-01-26
(31)【優先権主張番号】63/224,982
(32)【優先日】2021-07-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/238,061
(32)【優先日】2021-08-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/252,468
(32)【優先日】2021-10-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．プルロニック
(71)【出願人】
【識別番号】521539270
【氏名又は名称】ヴィーサス セラピューティクス インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100102978
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 初志
(74)【代理人】
【識別番号】100205707
【弁理士】
【氏名又は名称】小寺 秀紀
(74)【代理人】
【識別番号】100160923
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 裕孝
(74)【代理人】
【識別番号】100119507
【弁理士】
【氏名又は名称】刑部 俊
(74)【代理人】
【識別番号】100142929
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 隆一
(74)【代理人】
【識別番号】100148699
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 利光
(74)【代理人】
【識別番号】100188433
【弁理士】
【氏名又は名称】梅村 幸輔
(74)【代理人】
【識別番号】100128048
【弁理士】
【氏名又は名称】新見 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100129506
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 智彦
(74)【代理人】
【識別番号】100114340
【弁理士】
【氏名又は名称】大関 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100214396
【弁理士】
【氏名又は名称】塩田 真紀
(74)【代理人】
【識別番号】100121072
【弁理士】
【氏名又は名称】川本 和弥
(74)【代理人】
【識別番号】100221741
【弁理士】
【氏名又は名称】酒井 直子
(74)【代理人】
【識別番号】100114926
【弁理士】
【氏名又は名称】枝松 義恵
(72)【発明者】
【氏名】バーク ジェームズ アルバート
(72)【発明者】
【氏名】シフマン レット ミード
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA06
4C076AA09
4C076AA11
4C076AA99
4C076BB24
4C076BB31
4C076CC10
4C076CC18
4C076CC19
4C076FF70
4C084AA02
4C084AA22
4C084BA01
4C084BA18
4C084BA19
4C084DA18
4C084DA42
4C084MA02
4C084MA11
4C084MA17
4C084MA27
4C084MA28
4C084MA58
4C084MA63
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZA33
4C084ZA89
4C084ZB21
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA01
4H045EA20
(57)【要約】
本開示は、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失を低減又は防止する、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞を回復する、外科手技、傷害、又は疾患により引き起こされる眼又は皮膚における細胞の喪失を防止するためにアポトーシスを阻害する、屈折退行及び上皮下瘢痕を防止又は最小化する、角膜創傷を治療する、皮膚又は眼科疾患、障害、及び／又は状態を治療する、あるいは生物学的サンプルを貯蔵するための方法及び組成物を提供する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失を低減又は防止する、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞を回復する、傷害又は疾患により引き起こされる眼又は皮膚における細胞の喪失を防止するためにアポトーシスを阻害する、屈折退行及び上皮下瘢痕を防止又は最小化する、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞を動員する、あるいは角膜創傷を治療する方法であって、それを必要とする対象の眼又は皮膚に、ヒスタチンもしくはその類似体、及び／又は毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドもしくはその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項2】
前記ヒスタチン又はその類似体がヒスタチン－１（配列番号４）である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドがペプチド６（配列番号３４）である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記組成物が、約０．１μＭ～約１５０μＭの濃度で前記ヒスタチン又はその類似体を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記組成物が、約８０μＭの濃度で前記ヒスタチン又はその類似体を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
前記組成物が、約０．１μＭ～約１５０μＭの濃度で前記ＣＮＴＦペプチド又はその類似体を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記組成物が、約１００μＭの濃度で前記ＣＮＴＦペプチド又はその類似体を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
約１μＬ～約１００μＬの前記組成物が、前記対象に投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
約３５μＬの前記組成物が、前記対象に投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記組成物が、約７日間～約１８０日間にわたり毎日投与される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
前記組成物が、約２８日間にわたり毎日投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記組成物が、一日あたり一、二、三、又は四回投与される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記組成物が一日あたり三回投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記組成物が、点眼薬、ゲル、軟膏、又は組織接着剤として投与される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記組成物が、眼インサート又はコンタクトレンズ中で投与される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記対象が哺乳動物である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記組成物の投与が、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失における低減をもたらす、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失が、眼感染症、角膜傷害、眼手術、眼傷害、眼疾患、又は眼障害により引き起こされる、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記眼手術が、緑内障手術、光屈折角膜切除（ＰＲＫ）手術、又は角膜屈折手技である、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
前記眼疾患がフックス角膜ジストロフィーである、請求項１８に記載の方法。
【請求項21】
前記眼障害が円錐角膜である、請求項１８に記載の方法。
【請求項22】
角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失が、皮膚光損傷により引き起こされる、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失が、化学療法により引き起こされる、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項24】
角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失を低減又は防止する、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞を回復する、傷害又は疾患により引き起こされる眼又は皮膚における細胞の喪失を防止するためにアポトーシスを阻害する、屈折退行及び上皮下瘢痕を防止又は最小化する、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞を動員する、あるいは角膜創傷を治療する方法であって、それを必要とする対象の眼又は皮膚に、ヒスタチン又はその類似体と、第二の活性薬剤とを含む組成物の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項25】
前記ヒスタチン又はその類似体がヒスタチン－１（配列番号４）である、請求項２４に記載の方法。
【請求項26】
前記組成物が、約０．１μＭ～約１５０μＭの濃度で前記ヒスタチン又はその類似体を含む、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項27】
前記組成物が、約８０μＭの濃度で前記ヒスタチン又はその類似体を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
約１μＬ～約１００μＬの前記組成物が、前記対象に投与される、請求項２４～２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
約３５μＬの前記組成物が、前記対象に投与される、請求項２８に記載の方法。
【請求項30】
前記組成物が、約７日～約１８０日間にわたり毎日投与される、請求項２４～２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記組成物が、約２８日間にわたり毎日投与される、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
前記組成物が、一日あたり一、二、三、又は四回投与される、請求項２４～３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
前記組成物が一日あたり三回投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
前記組成物が、点眼薬、ゲル、軟膏、又は組織接着剤として投与される、請求項２４～３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項35】
前記組成物が、眼インサート又はコンタクトレンズ中で投与される、請求項２４～３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項36】
前記対象が哺乳動物である、請求項２４～３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項37】
前記組成物の投与が、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失における低減をもたらす、請求項２４～３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項38】
角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失が、眼感染症、角膜傷害、眼手術、眼傷害、眼疾患、又は眼障害により引き起こされる、請求項２４～３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項39】
前記眼手術が、緑内障手術、光屈折角膜切除（ＰＲＫ）手術、又は角膜屈折手技である、請求項３８に記載の方法。
【請求項40】
前記眼疾患がフックス角膜ジストロフィーである、請求項３８に記載の方法。
【請求項41】
前記眼障害が円錐角膜である、請求項３８に記載の方法。
【請求項42】
角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失が、皮膚光損傷により引き起こされる、請求項２４～３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項43】
角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失が、化学療法により引き起こされる、請求項２４～３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項44】
皮膚又は眼科疾患、障害、又は状態を治療する又は予防的に治療する方法であって、それを必要とする対象の眼又は皮膚に、ヒスタチンもしくはその類似体及び／又は毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドもしくはその類似体を含む組成物の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項45】
前記組成物が抗アポトーシス薬剤をさらに含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項46】
前記皮膚疾患、障害、又は状態は、ＣＯ２回復後、熱傷、褥瘡性潰瘍、脊髄傷害における自律神経反射異常、糖尿病性虚血性潰瘍、潰瘍予防、皮膚移植片回復、スキル喪失をもたらす外傷、低温／電気乾固後回復、又はモース／皮膚癌創傷治癒後である、請求項４４又は４５に記載の方法。
【請求項47】
前記眼科疾患、障害、又は状態が、光屈折角膜切除（ＰＲＫ）手術後、緑内障手術、感染性角膜潰瘍、色素眼疾患、円錐角膜に対するコラーゲン架橋（ＣＳＸ）後、神経栄養性角膜炎、フックス角膜ジストロフィー、コンタクトレンズ不耐性、ドライアイ疾患、角膜炎進行阻害、後部多形性角膜ジストロフィー（ＰＰＣＤ）、無水晶体又は偽水晶体性水疱性角膜症（ＡＢＫ／ＰＢＫ）、穿通性又は鈍的外傷により引き起こされる内皮機能障害、先天性遺伝性内皮ジストロフィー（ＣＨＥＤ）、虹彩角膜内皮（ＩＣＥ）症候群、難治性緑内障、以前の失敗した角膜移植片、又は単純ヘルペスウイルス内皮炎である、請求項４４又は４５に記載の方法。
【請求項48】
前記眼科疾患、障害、又は状態が、光屈折角膜切除手術後、緑内障手術、又はフックス角膜ジストロフィーである、請求項４７に記載の方法。
【請求項49】
前記ヒスタチン又はその類似体がヒスタチン－１（配列番号４）である、請求項４４～４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項50】
前記毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチド又はその類似体がペプチド６（配列番号３４）である、請求項４４～４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項51】
前記組成物が、約０．１μＭ～約１５０μＭの濃度で前記ヒスタチン又はその類似体を含む、請求項４４～５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項52】
前記組成物が、約８０μＭの濃度で前記ヒスタチン又はその類似体を含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項53】
前記組成物が、約０．１μＭ～約１５０μＭの濃度で前記ＣＮＴＦペプチド又はその類似体を含む、請求項４４～５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項54】
前記組成物が、約１００μＭの濃度で前記ＣＮＴＦペプチド又はその類似体を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項55】
約１μＬ～約１００μＬの前記組成物が前記対象に投与される、請求項４４～５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項56】
約３５μＬの前記組成物が前記対象に投与される、請求項５５に記載の方法。
【請求項57】
前記組成物が、約７日～約１８０日間にわたり毎日投与される、請求項４４～５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項58】
前記組成物が、約２８日間にわたり毎日投与される、請求項５７に記載の方法。
【請求項59】
前記組成物が、一日あたり一、二、三、又は四回投与される、請求項４４～５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項60】
前記組成物が一日あたり三回投与される、請求項５９に記載の方法。
【請求項61】
前記組成物が、点眼薬、ゲル、軟膏、又は組織接着剤として投与される、請求項４４～６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項62】
前記組成物が、眼インサート又はコンタクトレンズ中で投与される、請求項４４～６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項63】
前記組成物が、眼内注射、網膜下注射、硝子体内注射、眼周囲投与、結膜下注射、脈絡膜上注射、球後注射、前房内注射、又はテノン嚢下注射により投与される、請求項４４～６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項64】
前記対象が哺乳動物である、請求項４４～６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項65】
外科手技の前に生物学的サンプルを貯蔵する方法であって、前記生物学的サンプルを、ヒスタチンもしくはその類似体及び／又はＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物と接触させること、ならびに
前記生物学的サンプルを約－１０°Ｃ～約２５°Ｃの温度で貯蔵すること
を含む、方法。
【請求項66】
前記生物学的サンプルがドナー組織である、請求項６５に記載の方法。
【請求項67】
前記ドナー組織が角膜組織である、請求項６６に記載の方法。
【請求項68】
前記生物学的サンプルが、約０．５日～約９０日間にわたり生存可能なままである、請求項６５～６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項69】
前記外科手技が、光屈折角膜切除（ＰＲＫ）手術、デスメ膜ストリッピング自動内皮角膜形成術（ＤＳＡＥＫ）、又はデスメ膜内皮角膜形成術（ＤＭＥＫ）である、請求項６５～６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項70】
角膜内皮細胞の喪失を低減もしくは防止する、及び／又は角膜内皮細胞を回復する方法であって、それを必要とする対象の眼に、ヒスタチン又はその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項71】
前記ヒスタチン又はその類似体が、ヒスタチン－１（配列番号４）である、請求項７０に記載の方法。
【請求項72】
前記組成物が、約０．１μＭ～約１５０μＭの濃度で前記ヒスタチン又はその類似体を含む、請求項７０又は７１に記載の方法。
【請求項73】
前記組成物が、約８０μＭの濃度で前記ヒスタチン又はその類似体を含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項74】
約１μＬ～約１００μＬの前記組成物が前記対象に投与される、請求項７０～７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項75】
約３５μＬの前記組成物が前記対象に投与される、請求項７４に記載の方法。
【請求項76】
前記抗アポトーシス薬剤がＭＥＴ１２（配列番号３７）である、請求項７０～７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項77】
前記組成物が、約７日～約１８０日間にわたり毎日投与される、請求項７０～７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項78】
前記組成物が、約２８日間にわたり毎日投与される、請求項７７に記載の方法。
【請求項79】
前記組成物が、一日あたり一、二、三、又は四回投与される、請求項７０～７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項80】
前記組成物が一日あたり三回投与される、請求項７９に記載の方法。
【請求項81】
前記組成物が、点眼薬、ゲル、軟膏、又は組織接着剤として投与される、請求項７０～８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項82】
前記組成物が、眼インサート又はコンタクトレンズ中で投与される、請求項７０～８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項83】
前記組成物が、局所投与、眼内注射、網膜下注射、硝子体内注射、眼周囲投与、結膜下注射、脈絡膜上注射、球後注射、前房内注射、又はテノン嚢下注射により投与される、請求項７０～８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項84】
前記組成物が、局所投与により投与される、請求項８３に記載の方法。
【請求項85】
前記対象が哺乳動物である、請求項７０～８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項86】
前記組成物の投与が、治療なしと比較して、角膜内皮細胞の喪失における約２０％～約８０％の低減をもたらす、請求項７０～８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項87】
前記角膜内皮細胞の喪失が、フックス角膜内皮ジストロフィー、後部多形性角膜ジストロフィー、無水晶体又は偽水晶体性水疱性角膜症、穿通性又は鈍的外傷により引き起こされる内皮機能障害、先天性遺伝性内皮ジストロフィー、虹彩角膜内皮症候群、難治性緑内障、以前の失敗した角膜移植片、手術外傷、又は単純ヘルペスウイルス内皮炎の一つ又は複数により引き起こされる、請求項７０～８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項88】
前記角膜内皮細胞の喪失が、フックス角膜内皮ジストロフィーにより引き起こされる、請求項８７に記載の方法。
【請求項89】
前記組成物が、外科手技前に投与される、請求項７０～８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項90】
前記組成物が、外科手技中に投与される、請求項７０～８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項91】
前記組成物が、外科手技後に投与される、請求項７０～８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項92】
前記外科手技が、全層角膜形成術（ＰＫ）、デスメ膜ストリッピング自動内皮角膜形成術（ＤＳＡＥＫ）、又はデスメ膜内皮角膜形成術（ＤＭＥＫ）である、請求項７０～９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項93】
角膜神経を回復する、再生する、又はその再生を促進する方法であって、それを必要とする対象の眼に、ヒスタチンもしくはその類似体、及び／又は毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドもしくはその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項94】
前記ヒスタチン又はその類似体が、ヒスタチン－１（配列番号４）である、請求項９３に記載の方法。
【請求項95】
前記毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドが、ペプチド６（配列番号３４）である、請求項９３又は９４に記載の方法。
【請求項96】
前記組成物が、約０．１μＭ～約１５０μＭの濃度で前記ヒスタチン又はその類似体を含む、請求項９３～９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項97】
前記組成物が、約８０μＭの濃度で前記ヒスタチン又はその類似体を含む、請求項９６に記載の方法。
【請求項98】
前記組成物が、約０．１μＭ～約１５０μＭの濃度で前記ＣＮＴＦペプチド又はその類似体を含む、請求項９３～９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項99】
前記組成物が、約１００μＭの濃度で前記ＣＮＴＦペプチド又はその類似体を含む、請求項９８に記載の方法。
【請求項100】
約１μＬ～約１００μＬの前記組成物が前記対象に投与される、請求項９３～９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項101】
約３５μＬの前記組成物が前記対象に投与される、請求項１００に記載の方法。
【請求項102】
前記組成物が、約７日～約１８０日間わたり毎日投与される、請求項９３～１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項103】
前記組成物が、約２８日間にわたり毎日投与される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項104】
前記組成物が、一日あたり１回、２回、３回、又は４回投与される、請求項９３～１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項105】
前記組成物が一日あたり三回投与される、請求項１０４に記載の方法。
【請求項106】
前記組成物が、点眼薬、ゲル、軟膏、又は組織接着剤として投与される、請求項９３～１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項107】
前記組成物が、眼インサート又はコンタクトレンズ中で投与される、請求項９３～１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項108】
前記組成物が、局所投与、眼内注射、網膜下注射、硝子体内注射、眼周囲投与、結膜下注射、脈絡膜上注射、球後注射、前房内注射、又はテノン嚢下注射により投与される、請求項９３～１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項109】
前記組成物が局所投与により投与される、請求項１０８に記載の方法。
【請求項110】
前記対象が哺乳動物である、請求項９３～１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項111】
前記組成物の投与が、治療なしと比較して、角膜神経の喪失における約２０％～約８０％の低減をもたらす、請求項９３～１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項112】
前記角膜神経の喪失が、神経栄養性角膜炎、ドライアイ疾患、ヘルペス性角膜炎、ハンセン病、糖尿病、乾性角結膜炎、又は円錐角膜の一つ又は複数により引き起こされる、請求項９３～１１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項113】
前記角膜神経の喪失が、外科手技により引き起こされる、請求項１１２に記載の方法。
【請求項114】
前記組成物が、外科手技前に投与される、請求項９３～１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項115】
前記組成物が、外科手技中に投与される、請求項９３～１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項116】
前記組成物が、外科手技後に投与される、請求項９３～１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項117】
前記外科手技が、全層角膜形成術（ＰＫ）、デスメ膜ストリッピング自動内皮角膜形成術（ＤＳＡＥＫ）、デスメ膜内皮角膜形成術（ＤＭＥＫ）、光屈折角膜切除術（ＰＲＫ）、放射状角膜切開術、又はレーザー角膜内切削形成術（ＬＡＳＩＫ）である、請求項１１３～１１６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の分野
本開示は、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失を低減又は防止する、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞を回復する、外科手技、傷害、又は疾患により引き起こされる眼又は皮膚における細胞の喪失を防止するためにアポトーシスを阻害する、屈折退行及び上皮下瘢痕を防止又は最小化する、角膜創傷を治療する、皮膚又は眼科疾患、障害、及び／又は状態を治療する、あるいは生物学的サンプルを貯蔵するための、場合により、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチド及びその類似体との組み合わせにおける、ヒスタチン及びその類似体に関する。
本開示は、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失を低減又は防止する、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞を回復する、外科手技、傷害、又は疾患により引き起こされる眼又は皮膚における細胞の喪失を防止するためにアポトーシスを阻害する、屈折退行及び上皮下瘢痕を防止又は最小化する、角膜創傷を治療する、皮膚又は眼科疾患、障害、及び／又は状態を治療する、あるいは生物学的サンプルを貯蔵するための、場合により、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチド及びその類似体との組み合わせにおける、ヒスタチン及びその類似体に関する。
【背景技術】
【0002】
発明の背景
ヒスタチンは、ヒト及び非ヒト霊長類により産生される天然由来の経口及び涙液ペプチドであり、直接的な抗感染活性を示し、強力な抗炎症特性を有し、いくつかの組織及び器官培養系において上皮創傷治癒を刺激する。技術が、この天然物質を単離するために開発されており、それを、創傷のための利用可能な局所治療にしている。
ヒスタチンは、ヒト及び非ヒト霊長類により産生される天然由来の経口及び涙液ペプチドであり、直接的な抗感染活性を示し、強力な抗炎症特性を有し、いくつかの組織及び器官培養系において上皮創傷治癒を刺激する。技術が、この天然物質を単離するために開発されており、それを、創傷のための利用可能な局所治療にしている。
【0003】
毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）は、インターロイキン－６ファミリーのサイトカインであり、これは、成体グリア中に隔離され、その産生は損傷中に増加する。それは、黒質及び脊髄運動ニューロンのドーパミン作動性ニューロンの維持において必須であり；神経筋変性を伴うマウスに投与された場合、それは、神経保護効果を産生する。
【0004】
抗アポトーシス薬剤は、細胞死を阻害する化合物又はペプチドである。
【0005】
擦り傷からの、光屈折もしくは外科手技からの、又は疾患、例えば円錐角膜などからの角膜への傷害は、間質角膜実質細胞の喪失をもたらし得る。この点における細胞喪失は、アポトーシスのプロセスにより駆動されると考えられる。手術、傷害、又は疾患後の角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失を防止又は低減するための治療を開発する必要性が存在する。
【発明の概要】
【0006】
発明の簡単な概要
本開示は、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失を低減又は防止する、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞を回復する、傷害又は疾患により引き起こされる眼又は皮膚における細胞の喪失を防止するためにアポトーシスを阻害する、屈折退行及び上皮下瘢痕を防止又は最小化する、角膜実質細胞を動員する、あるいは角膜創傷を治療する方法を提供し、それを必要とする対象の眼又は皮膚に、ヒスタチンもしくはその類似体及び／又は毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドもしくはその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物の治療有効量を投与することを含む方法。
本開示は、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失を低減又は防止する、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞を回復する、傷害又は疾患により引き起こされる眼又は皮膚における細胞の喪失を防止するためにアポトーシスを阻害する、屈折退行及び上皮下瘢痕を防止又は最小化する、角膜実質細胞を動員する、あるいは角膜創傷を治療する方法を提供し、それを必要とする対象の眼又は皮膚に、ヒスタチンもしくはその類似体及び／又は毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドもしくはその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物の治療有効量を投与することを含む方法。
【0007】
一部の態様では、ヒスタチンはヒスタチン－１（配列番号４）である。
【0008】
一部の態様では、ＣＮＴＦペプチドはペプチド６（配列番号３４）である。
【0009】
一部の態様では、組成物は、約０．１μＭ～約１５０μＭの濃度でヒスタチン又はその類似体を含む。
【0010】
一部の態様では、組成物は、約８０μＭの濃度でヒスタチン又はその類似体を含む。
【0011】
一部の態様では、組成物は、約０．１μＭ～約１５０μＭの濃度でＣＮＴＦペプチド又はその類似体を含む。
【0012】
一部の態様では、組成物は、約１００μＭの濃度でＣＮＴＦペプチド又はその類似体を含む。
【0013】
一部の態様では、約１μＬ～約１００μＬの組成物が、対象の眼又は皮膚に投与される。
【0014】
一部の態様では、約３５μＬの組成物が、対象の眼又は皮膚に投与される。
【0015】
一部の態様では、組成物は、約１日～約１８０日間にわたり毎日投与される。
【0016】
一部の態様では、組成物は、約１～約２８日間にわたり毎日投与される。
【0017】
一部の態様では、組成物は、一日あたり一、二、三、又は四回投与される。
【0018】
一部の態様では、組成物は、一日あたり三回投与される。
【0019】
一部の態様では、組成物は、点眼薬、ゲル、軟膏、又は組織接着剤として投与される。
【0020】
一部の態様では、組成物は、眼インサート又はコンタクトレンズ中で投与される。
【0021】
一部の態様では、対象は哺乳動物である。
【0022】
一部の態様では、組成物の投与は、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失における低減をもたらす。
【0023】
一部の態様では、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失は、眼感染症、角膜傷害、眼手術、眼傷害、眼感染症、眼疾患、又は眼障害により引き起こされる。
【0024】
一部の態様では、眼の手術は、緑内障手術、光屈折角膜切除（ＰＲＫ）手術、又は角膜屈折手技である。
【0025】
一部の態様では、眼疾患はフックス角膜ジストロフィーである。
【0026】
一部の態様では、眼障害は円錐角膜である。
【0027】
一部の態様では、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失は、皮膚光損傷により引き起こされる。
【0028】
一部の態様では、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失は、化学療法により引き起こされる。
【0029】
本開示はまた、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失を低減又は防止する、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞を回復する、傷害又は疾患により引き起こされる眼又は皮膚における細胞の喪失を防止するためにアポトーシスを阻害する、屈折退行及び上皮下瘢痕を防止又は最小化する、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞を動員する、あるいは角膜創傷を治療する方法を提供し、それを必要とする対象の眼又は皮膚に、ヒスタチン又はその類似体と、第二の活性薬剤とを含む組成物の治療有効量を投与することを含む方法。
【0030】
本開示はまた、皮膚又は眼科疾患、障害、又は状態を治療又は予防的に治療する方法を提供し、それを必要とする対象の眼又は皮膚に、ヒスタチンもしくはその類似体及び／又は毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドもしくはその類似体を含む組成物の治療有効量を投与することを含む。
【0031】
一部の態様では、組成物は、抗アポトーシス薬剤をさらに含む。
【0032】
一部の態様では、皮膚疾患、障害、又は状態は、ＣＯ２回復後、熱傷、褥瘡性潰瘍、脊髄傷害における自律神経反射異常、糖尿病性虚血性潰瘍、潰瘍予防、皮膚移植片回復、スキル喪失をもたらす外傷、低温／電気乾固後回復、又はモース／皮膚癌創傷治癒後である。
【0033】
一部の態様では、眼科疾患、障害、又は状態が、光屈折角膜切除（ＰＲＫ）手術後、緑内障手術、感染性角膜潰瘍、色素眼疾患、円錐角膜に対するコラーゲン架橋（ＣＳＸ）後、神経栄養性角膜炎、フックス角膜ジストロフィー、コンタクトレンズ不耐性、ドライアイ疾患、角膜炎進行阻害、後部多形性角膜ジストロフィー（ＰＰＣＤ）、無水晶体又は偽水晶体性水疱性角膜症（ＡＢＫ／ＰＢＫ）、穿通性又は鈍的外傷により引き起こされる内皮機能障害、先天性遺伝性内皮ジストロフィー（ＣＨＥＤ）、虹彩角膜内皮（ＩＣＥ）症候群、難治性緑内障、以前の失敗した角膜移植片、又は単純ヘルペスウイルス内皮炎である。
【0034】
一部の態様では、眼科疾患、障害、又は状態は、光屈折角膜切除手術後、緑内障手術、又はフックス角膜ジストロフィーである。
【0035】
一部の態様では、組成物が、眼内注射、網膜下注射、硝子体内注射、眼周囲投与、結膜下注射、脈絡膜上注射、球後注射、前房内注射、又はテノン嚢下注射により投与される。
【0036】
一部の態様では、組成物は、局所投与により投与される。
【0037】
本開示はまた、外科手技の前に生物学的サンプルを貯蔵する方法を提供し、生物学的サンプルを、ヒスタチンもしくはその類似体及び／又はＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物と接触させること、及び生物学的サンプルを約－１０°Ｃ～約２５°Ｃの温度で貯蔵することを含む。
【0038】
一部の態様では、生物学的サンプルはドナー組織である。
【0039】
一部の態様では、ドナー組織は角膜組織である。
【0040】
一部の態様では、生物学的サンプルは、約０．５日～約９０日間にわたり生存可能なままである。
【0041】
一部の態様では、外科手技は、光屈折角膜切除（ＰＲＫ）手術、デスメ膜ストリッピング自動内皮角膜形成術（ＤＳＡＥＫ）、又はデスメ膜内皮角膜形成術（ＤＭＥＫ）である。
【0042】
本開示はまた、角膜内皮細胞の喪失を低減もしくは防止する、及び／又は角膜内皮細胞を回復させる方法を提供し、それを必要とする対象の眼に、ヒスタチン又はその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物の治療有効量を投与することを含む。
【0043】
一部の態様では、抗アポトーシス薬剤はＦａｓ阻害剤である。一部の態様では、Ｆａｓ阻害剤はＭＥＴ１２（配列番号３７）である。一部の態様では、抗アポトーシス薬剤は、ＭＥＴバリアント（配列番号４１）である。
【0044】
一部の態様では、組成物の投与は、治療なしと比較して、角膜内皮細胞の喪失における約２０％～約８０％の低減をもたらす。
【0045】
一部の態様では、角膜内皮細胞の喪失は、フックス角膜内皮ジストロフィー、後部多形性角膜ジストロフィー、無水晶体又は偽水晶体性水疱性角膜症、穿通性又は鈍的外傷により引き起こされる内皮機能障害、先天性遺伝性内皮ジストロフィー、虹彩角膜内皮症候群、難治性緑内障、以前の失敗した角膜移植片、手術外傷、又は単純ヘルペスウイルス内皮炎の一つ又は複数により引き起こされる。
【0046】
一部の態様では、角膜内皮細胞の喪失は、フックス角膜内皮ジストロフィーにより引き起こされる。
【0047】
一部の態様では、組成物は、外科手技前に投与される。
【0048】
一部の態様では、組成物は、外科手技中に投与される。
【0049】
一部の態様では、組成物は、外科手技後に投与される。
【0050】
一部の態様では、組成物は、外科手技前及び後に投与される。
【0051】
一部の態様では、組成物は、外科手技前、中、及び後に投与される。
【0052】
一部の態様では、外科手技は、全層角膜形成術（ＰＫ）、デスメ膜ストリッピング自動内皮角膜形成術（ＤＳＡＥＫ）、又はデスメ膜内皮角膜形成術（ＤＭＥＫ）である。
【0053】
本開示はまた、角膜神経を回復する、再生する、又はその再生を促進する方法を提供し、それを必要とする対象の眼に、ヒスタチン又はその類似体、及び／又は毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチド又はその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物の治療有効量を投与することを含む。
【0054】
一部の態様では、組成物の投与は、治療なしと比較して、角膜神経の喪失及び／又は損傷における約２０％～約８０％の低減をもたらす。
【0055】
一部の態様では、角膜神経の喪失は、神経栄養性角膜炎、ドライアイ疾患、ヘルペス性角膜炎、ハンセン病、糖尿病、乾性角結膜炎、又は円錐角膜の一つ又は複数により引き起こされる。
【0056】
一部の態様では、角膜神経の喪失又は損傷は、外科手技により引き起こされる。
【図面の簡単な説明】
【0057】
【0058】
【0059】
【0060】
【0061】
【0062】
【0063】
【0064】
【発明を実施するための形態】
【0065】
発明の詳細な説明
定義
他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野における当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾する場合は、定義を含む本出願が優先する。文脈上別段の定めがない限り、単数形の用語には複数形を含まれ、複数形の用語には単数形を含まれるものとする。本明細書で言及される全ての刊行物、特許、及びその他の参考文献は、あたかも個々の刊行物又は特許出願が、参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのように、全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれる。
定義
他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野における当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾する場合は、定義を含む本出願が優先する。文脈上別段の定めがない限り、単数形の用語には複数形を含まれ、複数形の用語には単数形を含まれるものとする。本明細書で言及される全ての刊行物、特許、及びその他の参考文献は、あたかも個々の刊行物又は特許出願が、参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのように、全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれる。
【0066】
本明細書に記載されるものと類似又は同等の方法及び材料を、本開示の実践又は試験に使用することができるが、適切な方法及び材料を以下に記載する。材料、方法及び実施例は例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。本開示の他の特徴及び利点は、詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかであろう。
【0067】
本開示をさらに定義するために、以下の用語及び定義が提供される。
【0068】
「同一性パーセント」は、二つの配列（例、アミノ酸配列又は核酸配列）間の同一性の程度を指す。同一性のパーセント（％）は、二つの配列を整列させ、配列間の同一性を最大化するためにギャップを導入することにより決定することができる。アライメントは、当技術分野において公知のプログラムを使用して生成することができる。本明細書中の目的のために、ヌクレオチド配列のアラインメントは、デフォルトパラメータで設定されたｂｌａｓｔｎプログラムを用いて実施することができ、アミノ酸配列のアラインメントは、デフォルトパラメータで設定されたｂｌａｓｔｐプログラムを用いて実施することができる（ワールドワイドウェブ上で、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照のこと）。
【0069】
用語「医薬製剤」は、活性成分の生物学的活性が効果的であることを可能にするような形態であり、製剤が投与され得る対象に対して許容不可能である毒性である追加成分を含まない調製物を指す。製剤は無菌であることができる。
【0070】
本明細書中で使用される用語「医薬的に許容可能な」は、過剰な毒性も、刺激も、アレルギー反応も、他の問題又は合併症も伴わない、合理的な利益／リスク比率に見合った、ヒト及び動物の組織と接触しての使用のために適切な、健全な医学的判断の範囲内にある化合物、材料、組成物、製剤、及び／又は投薬形態を指す。
【0071】
用語「医薬的に許容可能な塩」は、当技術分野で認識され、化合物の比較的非毒性の無機及び有機酸付加塩、ならびに化合物の比較的非毒性の無機及び有機塩基付加塩を含む。
【0072】
医薬的に許容可能な塩を調製するために使用され得る無機酸は、限定されないが、塩酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸及び同様のものを含む。医薬的に許容可能な塩を調製するために使用され得る有機酸は、限定されないが、脂肪族モノカルボン酸及びジカルボン酸、例えば酒石酸、シュウ酸、炭酸、クエン酸、コハク酸、フェニルヘテロ原子置換アルカン酸、脂肪族及び芳香族硫酸、ならびに同様のものを含む。無機酸又は有機酸から調製される医薬的に許容可能な塩は、このように、限定されないが、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、一水素リン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、ヨウ化水素酸塩、フッ化水素酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、ギ酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ｐ－トルエンスル酸塩、メタンスルホン酸塩、及びマレイン酸塩を含む。適切な医薬的に許容可能な塩はまた、活性薬剤を、有機塩基、例えばメチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、リジン、オルニチン及び同様のものと反応させることにより形成され得る。医薬的に許容可能な塩は、一部の活性薬剤で見出され得るカルボン酸基又はスルホン酸基と、無機カチオン、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、もしくはカルシウムなど、又はイソプロピルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、及びイミダゾリウムなどの有機カチオンの間で形成される塩を含む。これらの塩の全てが、例えば、適した酸又は塩基を活性薬剤と反応させることにより、活性薬剤から、従来的な手段により調製され得る。
【0073】
用語「賦形剤」は、それ自体が治療剤ではなく、対象への活性治療剤の送達のために組成物中で使用され得る、あるいはその取り扱いもしくは貯蔵特性を改善するために、又は組成物の用量単位の形成を許容もしくは促進するために活性治療剤と組み合わせられ得る（例、医薬組成物を作製するために）、任意の物質を指す。賦形剤は、限定されないが、溶媒、浸透促進剤、湿潤剤、抗酸化剤、潤滑剤、軟化剤、組成物の外観又は質感を改善するために加えられる物質、及びハイドロゲルを形成するために使用される物質を含む。任意のそのような賦形剤は、本開示に従った任意の投薬形態において使用することができる。前述のクラスの賦形剤は、網羅的であることを意味せず、しかし、当業者が、追加の種類及び賦形剤の組み合わせを使用して、薬物の送達のための所望の目標を達成することができ得ることを認識するであろうため、単に例証的である。賦形剤は、不活性（ｉｎｅｒｔ）物質、不活性（ｉｎａｃｔｉｖｅ）物質、及び／又は医薬的に活性でない物質であることができる。賦形剤は、様々な目的を果たすことができる。当業者は、ルーチン的な実験により、及び任意の過度の負担を伴うことなく、特定の所望の特性に関して一つ又は複数の賦形剤を選択することができる。使用される各賦形剤の量は、当技術分野における従来的な範囲内で変動し得る。投薬形態を製剤化するために使用され得る技術及び賦形剤は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｏｙａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｇｒｅａｔ Ｂｒｉｔａｉｎ（２００９）；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）において記載されている。
【0074】
本明細書中で使用される用語「単位投薬形態」又は「単位用量組成物」は、治療化合物の量を含むデバイスを指し、当該量は、一つ又は複数の所定の単位が、単一の治療的投与として提供され得るようにする。
【0075】
用語「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）」、「投与している（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」、「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」、及び同様のものは、本明細書中で使用される場合、薬物、例えば、ヒスタチンなどの、所望の生物学的作用部位への（例、眼又は皮膚への）送達を可能にするように使用され得る方法を指す。本明細書中に記載される薬剤及び方法と用いることができる投与技術は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．において見出される。
【0076】
本明細書中で使用される場合、用語「対象」及び「患者」は、互換的に使用される。対象は動物であることができる。一部の態様では、対象は、哺乳動物、例えば非ヒト動物など（例、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、サル、又は他の霊長類など）である。一部の態様では、対象はヒトである。
【0077】
用語「治療有効量」は、対象において疾患又は障害を治療するのに有効な治療剤、例えば、ヒスタチンの量を指す。眼への障害又は傷害の場合では、治療有効量の治療剤によって、角膜実質細胞を動員する、角膜間質角膜実質細胞の喪失を防止又は回復させ、上皮又は間質の傷害及び疾患により引き起こされる角膜間質角膜実質細胞の喪失を防止及び回復させ、アポトーシスを阻害又は防止して、傷害又は疾患により引き起こされる眼及び皮膚における細胞の喪失を防止及び回復させ、ならびに／あるいは眼科状態又は障害、例えば、眼の手術又は疾患を伴う患者における症状を改善させることができる。「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するために有効な量を指す。望ましい予防的結果は、本発明の組成物の投与を伴わない、対象に生じることが予想される眼への全量の損傷（角膜損傷、神経損傷、細胞死などを含む）の防止を含む。効果的な予防的治療は、組成物が投与される対象が、眼の疾患もしくは障害、又は外科手技後の損傷の任意の否定的な転帰はないが、しかし、（未治療の対象と比較して）比較的健康な細胞及び／又は神経の量においていくらかの利益を示すであろう、ならびに／あるいは治療された対象が、未治療の対象と比較して低下した症状を有することを意味しない。外科手技前に生物学的サンプルの貯蔵に適用される予防有効量は、生物学的サンプルが、未治療サンプルよりも手術前のより長い期間にわたって効果的に貯蔵することができることを意味する。
【0078】
用語、例えば「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療するため（ｔｏ ｔｒｅａｔ）」、「軽減する（ａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇ）」、及び「軽減するため（ｆｏｒ ａｌｌｅｖｉａｔｅ）」などは、病理学的状態又は障害を治癒する、遅らせる、その症状を減らす、及び／又はその進行の停止させる治療手段を指す。このように、治療を必要とする人々は、障害と既に診断された人々、又は障害を有する疑いがある人々を含む。特定の態様では、患者が、以下の一つ又は複数を示す場合、対象は、本発明の方法に従って、眼科及び／又は皮膚疾患又は障害について成功裏に「治療」される：角膜実質細胞の動員、角膜間質角膜実質細胞の喪失の防止又は回復、上皮又は間質の傷害及び疾患により引き起こされる角膜間質角膜実質細胞の喪失の防止及び回復、アポトーシスの阻害又は防止、眼及び皮膚における細胞の回復、ならびに／あるいは治療前に対象により発現される一つ又は複数の症状の改善。
【0079】
予防的又は防止的措置は、眼科及び／又は皮膚の状態又は障害の発生を防止する及び／又は遅らせる、あるいは、例えば、眼の手術、傷害、又は疾患からの眼科損傷に関連付けられる症状を軽くする措置を指す。このように、予防的又は防止的措置を必要とするものは、眼科及び／又は皮膚の状態又は障害を有する傾向があるもの、ならびに眼科及び／又は皮膚の状態又は障害が防止されるもの、あるいは眼手術を受ける対象を含む。
【0080】
本明細書中で使用される場合、「前治療又は予防」は、角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失の実質的な非存在、あるいは３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、又は一年の経過にわたって測定された場合、少なくとも２０％、好ましくは５０％、より好ましくは８０％だけ低減した角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失を意味する。
【0081】
本開示及び特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が他を明確に指示しない限り、複数の形態を含む。
【0082】
態様が、文言「を含む」を伴って本明細書中に記載される場合はいつでも、「からなる」及び／又は「から本質的になる」の観点において記載される、その他の点では類似の態様がまた提供されることが理解される。本開示では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」ならびに同様のものは、米国特許法においてそれらに帰する意味を有することができ、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び同様のものを意味することができ；「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」又は「本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」は、同様に、米国特許法において帰する意味を有し、この用語は無制限であり、列挙されるものの基本的又は新規の特徴が、列挙されるものよりも多いものの存在により変化しない限り、列挙されるものよりも多いものの存在を可能にするが、しかし、先行技術の実施形態は除外する。
【0083】
文脈から具体的に記述される又は明らかでない限り、本明細書中で使用される場合、用語「又は」は包括的であると理解される。本明細書中の語句、例えば「Ａ及び／又はＢ」などにおいて使用される用語「及び／又は」は、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」、ならびに「Ｂ」の両方を含むことが意図される。同様に、語句、例えば「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」などにおいて使用される用語「及び／又は」は、以下の実施形態の各々を包含することが意図される。Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。
【0084】
本明細書中で使用される場合、用語「約（ａｂｏｕｔ）」及び「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、数値又は数値範囲を修正するために使用される場合、値又は範囲の５％～１０％上方及び５％～１０％下方の偏差が、列挙される値又は範囲の意図される意味内に留まることを示す。
【0085】
本明細書中に提供される任意の組成物又は方法は、本明細書中に提供される他の組成物及び方法のいずれかの一つ又は複数と組み合わせることができる。
【0086】
説明
本開示は、角膜実質細胞の喪失を低減又は防止する、角膜実質細胞を回復する、外科手技、傷害又は疾患により引き起こされる眼又は皮膚における細胞の喪失を防止するためにアポトーシスを阻害する、屈折退行及び上皮下瘢痕を防止又は最小化する、角膜実質細胞を動員する、あるいは角膜創傷を治療する方法を提供し、それを必要とする対象に、以下を含む組成物の治療有効量を投与することを含む：（１）ヒスタチンもしくはその類似体；（２）ヒスタチンもしくはその類似体及び毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドもしくはその類似体；（３）ヒスタチンもしくはその類似体及び抗アポトーシス薬剤；あるいは（４）ヒスタチンもしくはその類似体、ＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、及び抗アポトーシス薬剤。
本開示は、角膜実質細胞の喪失を低減又は防止する、角膜実質細胞を回復する、外科手技、傷害又は疾患により引き起こされる眼又は皮膚における細胞の喪失を防止するためにアポトーシスを阻害する、屈折退行及び上皮下瘢痕を防止又は最小化する、角膜実質細胞を動員する、あるいは角膜創傷を治療する方法を提供し、それを必要とする対象に、以下を含む組成物の治療有効量を投与することを含む：（１）ヒスタチンもしくはその類似体；（２）ヒスタチンもしくはその類似体及び毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドもしくはその類似体；（３）ヒスタチンもしくはその類似体及び抗アポトーシス薬剤；あるいは（４）ヒスタチンもしくはその類似体、ＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、及び抗アポトーシス薬剤。
【0087】
本開示はまた、ケラチノサイトの喪失を低減又は防止する、ケラチノサイトを回復する、外科手技、傷害又は疾患により引き起こされる眼又は皮膚における細胞の喪失を防止するためにアポトーシスを阻害する、屈折退行及び上皮下瘢痕を防止又は最小化する、ケラチノサイトを動員する、あるいは角膜創傷を治療する方法を提供し、それを必要とする対象に、以下を含む組成物の治療有効量を投与することを含む：（１）ヒスタチンもしくはその類似体；（２）ヒスタチンもしくはその類似体及び毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドもしくはその類似体；（３）ヒスタチンもしくはその類似体及び抗アポトーシス薬剤；あるいは（４）ヒスタチンもしくはその類似体、ＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、及び抗アポトーシス薬剤。
【0088】
本開示は、角膜芽細胞の喪失を低減又は防止する、角膜芽細胞を回復する、外科手技、傷害又は疾患により引き起こされる眼又は皮膚における細胞の喪失を防止するためにアポトーシスを阻害する、屈折退行及び上皮下瘢痕を防止又は最小化する、角膜芽細胞を動員する、あるいは角膜創傷を治療する方法を提供し、それを必要とする対象に、以下を含む組成物の治療有効量を投与することを含む：（１）ヒスタチンもしくはその類似体；（２）ヒスタチンもしくはその類似体及び毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドもしくはその類似体；（３）ヒスタチンもしくはその類似体及び抗アポトーシス薬剤；あるいは（４）ヒスタチンもしくはその類似体、ＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、及び抗アポトーシス薬剤。
【0089】
本開示はまた、皮膚又は眼科疾患、障害、及び／又は状態を治療する方法を提供し、それを必要とする対象に、以下を含む組成物の治療有効量を投与することを含む：（１）ヒスタチンもしくはその類似体；（２）ヒスタチンもしくはその類似体及び毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドもしくはその類似体；（３）ヒスタチンもしくはその類似体及び抗アポトーシス薬剤；あるいは（４）ヒスタチンもしくはその類似体、ＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、及び抗アポトーシス薬剤。
【0090】
本開示はまた、外科手技の前に生物学的サンプルを貯蔵する方法を提供し、生物学的サンプルに、以下を含む組成物を接触させることを含む：（１）ヒスタチンもしくはその類似体；（２）ヒスタチンもしくはその類似体及び毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドもしくはその類似体；（３）ヒスタチンもしくはその類似体及び抗アポトーシス薬剤；あるいは（４）ヒスタチンもしくはその類似体、ＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、及び抗アポトーシス薬剤。
【0091】
任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、ヒスタチンもしくはその類似体及びＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、ならびに、場合により、抗アポトーシス薬剤は、抗アポトーシス機構を通じて対象における角膜実質細胞、ケラチノサイト、及び／又は角膜芽細胞の喪失を防止する。この効果を説明し得る他の機構は、ヒスタチン－１及びＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、ならびに、場合により、炎症性因子、例えば細胞外物質を分解するマトリックスメタロプロテイナーゼなどの阻害剤としての抗アポトーシス薬剤の公知の効果を含む。ヒスタチンもしくはその類似体及びＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、ならびに、場合により、抗アポトーシス薬剤は、傷害後の角膜において支持環境を提供する。ヒスタチンもしくはその類似体及びＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、ならびに、場合により、抗アポトーシス薬剤はまた、角膜縁幹細胞からの新たな角膜実質細胞の生成を促進することができる。ＣＮＴＦペプチド又はその類似体、及び、場合により、抗アポトーシス薬剤は、角膜実質細胞回復を促進する。
【0092】
一部の態様では、ヒスタチン又はその類似体は、ヒスタチン－１であり、それは、以下の表１中の配列番号４により表される。一部の態様では、ヒスタチン又はその類似体は、ヒスタチン－２であり、それは、以下の表１中の配列番号５により表される。一部の態様では、ヒスタチン又はその類似体は、ヒスタチン－３であり、それは、以下の表１中の配列番号６により表される。一部の態様では、ヒスタチン又はその類似体は、ヒスタチン－５であり、それは、以下の表１中の配列番号３０により表される。一部の態様では、ヒスタチン又はその類似体は、配列番号３５により表されるペプチドである。
【0093】
一部の態様では、ＣＮＴＦペプチドはペプチド６であり、それは、以下の表１中の配列番号３４により表される。一部の態様では、ＣＮＴＦペプチドはペプチド６ｃであり、それは、配列番号３６により表される。
【0094】
一部の態様では、組成物は、約０．００１μＭ～約１００ｍＭの濃度でヒスタチン又はその類似体を含む。一部の態様では、組成物は、約０．００１μＭ～約０．０１μＭ、約０．００１μＭ～約０．１μＭ、約０．００１μＭ～約１μＭ、約０．００１μＭ～約１０μＭ、約０．００１μＭ～約１００μＭ、約０．００１μＭ～約１ｍＭ、約０．００１μＭ～約１００ｍＭ、約０．０１μＭ～約０．１μＭ、約０．０１μＭ～約１μＭ、約０．０１μＭ～約１０μＭ、約０．０１μＭ～約１００μＭ、約０．０１μＭ～約１ｍＭ、約０．０１μＭ～約１０ｍＭ、約０．０１μＭ～約１００ｍＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約０．１μＭ～約１０μＭ、約０．１μＭ～約１００μＭ、約０．１μＭ～約１ｍＭ、約０．１μＭ～約１０ｍＭ、約０．１μＭ～約１００ｍＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１μＭ～約１００μＭ、約１μＭ～約１ｍＭ、約１μＭ～約１０ｍＭ、約１μＭ～約１００ｍＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１０μＭ～約１ｍＭ、約１０μＭ～約１０ｍＭ、約１０μＭ～約１００ｍＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、約１００μＭ～約１０ｍＭ、約１００μＭ～約１００ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約１ｍＭ～約１００ｍＭ、又は約１０ｍＭ～約１００ｍＭの濃度でヒスタチン又はその類似体を含む。
【0095】
一部の態様では、組成物は、約８０μＭの濃度でヒスタチン又はその類似体を含む。一部の態様では、組成物は、約０．００１μＭ、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、約１０ｍＭ、又は約１００ｍＭの濃度でヒスタチン又はその類似体を含む。
【0096】
一部の態様では、組成物は、約０．００１μＭ～約１００ｍＭの濃度でＣＮＴＦペプチド又はその類似体を含む。一部の態様では、組成物は、約０．００１μＭ～約０．０１μＭ、約０．００１μＭ～約０．１μＭ、約０．００１μＭ～約１μＭ、約０．００１μＭ～約１０μＭ、約０．００１μＭ～約１００μＭ、約０．００１μＭ～約１ｍＭ、約０．００１μＭ～約１００ｍＭ、約０．０１μＭ～約０．１μＭ、約０．０１μＭ～約１μＭ、約０．０１μＭ～約１０μＭ、約０．０１μＭ～約１００μＭ、約０．０１μＭ～約１ｍＭ、約０．０１μＭ～約１０ｍＭ、約０．０１μＭ～約１００ｍＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約０．１μＭ～約１０μＭ、約０．１μＭ～約１００μＭ、約０．１μＭ～約１ｍＭ、約０．１μＭ～約１０ｍＭ、約０．１μＭ～約１００ｍＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１μＭ～約１００μＭ、約１μＭ～約１ｍＭ、約１μＭ～約１０ｍＭ、約１μＭ～約１００ｍＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１０μＭ～約１ｍＭ、約１０μＭ～約１０ｍＭ、約１０μＭ～約１００ｍＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、約１００μＭ～約１０ｍＭ、約１００μＭ～約１００ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約１ｍＭ～約１００ｍＭ、又は約１０ｍＭ～約１００ｍＭの濃度でＣＮＴＦペプチド又はその類似体を含む。
【0097】
一部の態様では、組成物は、約１００μＭの濃度でＣＮＴＦペプチド又はその類似体を含む。一部の態様では、組成物は、約０．００１μＭ、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約５０μＭ、約５００μＭ、約１ｍＭ、約１０ｍＭ、又は約１００ｍＭの濃度でＣＮＴＦペプチド又はその類似体を含む。
【0098】
一部の態様では、組成物は、治療有効量の抗アポトーシス薬剤を含む。
【0099】
一部の態様では、組成物は、約０．００１μＭ～約１００ｍＭの濃度で抗アポトーシス薬剤を含む。一部の態様では、組成物は、約０．００１μＭ～約０．０１μＭ、約０．００１μＭ～約０．１μＭ、約０．００１μＭ～約１μＭ、約０．００１μＭ～約１０μＭ、約０．００１μＭ～約１００μＭ、約０．００１μＭ～約１ｍＭ、約０．００１μＭ～約１００ｍＭ、約０．０１μＭ～約０．１μＭ、約０．０１μＭ～約１μＭ、約０．０１μＭ～約１０μＭ、約０．０１μＭ～約１００μＭ、約０．０１μＭ～約１ｍＭ、約０．０１μＭ～約１０ｍＭ、約０．０１μＭ～約１００ｍＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約０．１μＭ～約１０μＭ、約０．１μＭ～約１００μＭ、約０．１μＭ～約１ｍＭ、約０．１μＭ～約１０ｍＭ、約０．１μＭ～約１００ｍＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１μＭ～約１００μＭ、約１μＭ～約１ｍＭ、約１μＭ～約１０ｍＭ、約１μＭ～約１００ｍＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１０μＭ～約１ｍＭ、約１０μＭ～約１０ｍＭ、約１０μＭ～約１００ｍＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、約１００μＭ～約１０ｍＭ、約１００μＭ～約１００ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約１ｍＭ～約１００ｍＭ、又は約１０ｍＭ～約１００ｍＭの濃度で抗アポトーシス薬剤を含む。
【0100】
一部の態様では、組成物は、約８０μＭの濃度で抗アポトーシス薬剤を含む。一部の態様では、組成物は、約０．００１μＭ、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、約１０ｍＭ、又は約１００ｍＭの濃度で抗アポトーシス薬剤を含む。
【0101】
一部の態様では、約１μＬ～約１００μＬの組成物が対象に投与される。一部の態様では、組成物は、対象の一方又は両方の眼に投与される。一部の態様では、約１μＬ～約１０μＬ、約１μＬ～約１００μＬ、約１μＬ～約５００μＬ、約１μＬ～約１０００μＬ、約１０μＬ～約１００μＬ、約１０μＬ～約５００μＬ、約１０μＬ～約１０００μＬ、約１００μＬ～約５００μＬ、約１００μＬ～約１０００μＬ、又は約５００μＬ～約１０００μＬの組成物が、対象の一方又は両方の眼に投与される。
【0102】
一部の態様では、約３５μＬの組成物が、対象の一方又は両方の眼に投与される。一部の態様では、組成物は、対象の眼又は皮膚に投与される。一部の態様では、約１μＬ、約１０μＬ、約５０μＬ、約１００μＬ、約５００μＬ、又は約１０００μＬの組成物が、対象の一方又は両方の眼に投与される。
【0103】
一部の態様では、約０．１ｍＬ～約１０ｍＬの組成物が、対象に投与される。一部の態様では、組成物は、対象の皮膚に投与される。一部の態様では、約０．１ｍＬ～約０．５ｍＬ、約０．１ｍＬ～約１ｍＬ、約０．１ｍＬ～約５ｍＬ、約０．５ｍＬ～約１ｍＬ、約０．５ｍＬ～約５ｍＬ、約０．５ｍＬ～約１０ｍＬ、約１ｍＬ～約５ｍＬ、約１ｍＬ～約１０ｍＬ、又は約５ｍＬ～約１０ｍＬの組成物が、対象の皮膚に投与される。
【0104】
一部の態様では、約１ｍＬの組成物が、対象の皮膚に投与される。一部の態様では、約０．１ｍＬ、約０．５ｍＬ、約５ｍＬ、又は約１０ｍＬの組成物が、対象の皮膚に投与される。
【0105】
一部の態様では、組成物は、約１日～約６ヶ月間にわたり毎日、対象に投与される。一部の態様では、組成物は、約１日～約７日、約１日～約１４日、約１日～約２１日、約１日～約１ヶ月間、約１日～約２ヶ月間、約１日～約３ヶ月間、約１日～約４ヶ月間、約１日～約５ヶ月間、約７日～約１４日、約７日～約２１日、約７日～約１ヶ月間、約７日～約２ヶ月間、約７日～約３ヶ月間、約７日～約４ヶ月間、約７日～約５ヶ月間、約７日～約６ヶ月間、約１４日～約２１日、約１４日～約１ヶ月間、約１４日～約２ヶ月間、約１４日～約３ヶ月間、約１４日～約４ヶ月間、約１４日～約５ヶ月間、約１４日～約６ヶ月間、約２１日～約１ヶ月間、約２１日～約２ヶ月間、約２１日～約３ヶ月間、約２１日～約４ヶ月間、約２１日～約５ヶ月間、約２１日～約６ヶ月間、約１ヶ月間～約２ヶ月間、約１ヶ月間～約３ヶ月間、約１ヶ月間～約４ヶ月間、約１ヶ月間～約５ヶ月間、約１ヶ月間～約６ヶ月間、約２ヶ月間～約３ヶ月間、約２ヶ月間～約４ヶ月間、約２ヶ月間～約５ヶ月間、約２ヶ月間～約６ヶ月間、約３ヶ月間～約４ヶ月間、約３ヶ月間～約５ヶ月間、約３ヶ月間～約６ヶ月間、約４ヶ月間～約５ヶ月間、約４ヶ月間～約６ヶ月間、又は約５ヶ月間～約６ヶ月間にわたり毎日、対象に投与される。
【0106】
一部の態様では、組成物は、約７日間にわたり、毎日対象に投与される。一部の態様では、組成物は、約１日、約１４日、約２１日、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間にわたり、毎日対象に投与される。
【0107】
一部の態様では、組成物は、一日あたり三回、対象に投与される。一部の態様では、組成物は、一日あたり一回、二回、四回、五回、六回、七回、八回、九回、又は十回、対象に投与される。
【0108】
一部の態様では、組成物は、２時間間隔において、対象に投与される。一部の態様では、組成物は、１時間、３時間、４時間、５時間、又は６時間間隔において、対象に投与される。
【0109】
一部の態様では、第二の活性薬剤は、医薬組成物の単位用量が、それを必要とする対象に投与される場合、標的状態、疾患又は障害、例えば本明細書中に記載されるものなどの治療のために治療的に（臨床的に）有効であることが公知である量で存在する。一部の態様では、第二の活性薬剤は、ＣＮＴＦペプチド又はその類似体である。他の態様では、第二の活性薬剤は、抗アポトーシス薬剤である。一部の態様では、一を上回る追加の活性薬剤が存在しており、例えばＣＮＴＦペプチド及び抗アポトーシス薬剤の両方などである。活性薬剤が、超加的又は相乗的な治療効果が、対象への投与時に観察されるような重量比で存在する場合、次に全体的な投与用量を低減させ、望ましくない副作用がより少なく生じるようにしてもよい。
【0110】
一部の態様では、医薬組成物は、ヒスタチンと一つ又は複数の他の活性薬剤の組み合わせを含み、過剰なヒスタチン、過剰な一つ又は複数の他の活性薬剤、あるいは等量のヒスタチン及び一つ又は複数の他の活性薬剤を含み得る。一部の態様では、一つ又は複数の活性薬剤は、ＣＮＴＦペプチド又はその類似体である。一部の態様では、一つ又は複数の活性薬剤は、抗アポトーシス薬剤である。ヒスタチンと、一つ又は複数の他の活性薬剤との重量比は、約１００：１～１：１００の範囲とすることができる。一部の態様では、一つ又は複数の他の活性薬剤は、対象が、医薬組成物中のヒスタチンの用量及び別の投薬形態中の一つ又は複数の他の活性薬剤の用量を受けるように、別の投薬形態中で連続的に又は同時に対象に投与される。一つ又は複数の他の活性薬剤の投薬レジメンは、ヒスタチンについての投薬レジメンと同じであっても、異なっていてもよい。連続投与は、数秒、数分、数時間、又は数日以内に投与される活性薬剤を含む。
【0111】
一部の態様では、ヒスタチンと、一つ又は複数の他の活性薬剤との重量比は、約８０：１～約１：１００、約６０：１～約１：１００、約４０：１～約１：１００、約２０：１～約１：１００、約１０：１～約１：１００、約５：１～約１：１００、約２：１～約１：１００、約１：１～約１：１００、約１：２～約１：１００、約１：５～約１：１００、約１：１０～約１：１００、約１：２０～約１：１００、約１：４０～約１：１００、約１：６０～約１：１００、約１：８０～約１：１００、約１００：１～約１：８０、約８０：１～約１：８０、約６０：１～約１：８０、約４０：１～約１：８０、約２０：１～約１：８０、約１０：１～約１：８０、約５：１～約１：８０、約２：１～約１：８０、約１：１～約１：８０、約１：２～約１：８０、約１：５～約１：８０、約１：１０～約１：８０、約１：２０～約１：８０、約１：４０～約１：８０、約１：６０～約１：８０、約１００：１～約１：６０、約８０：１～約１：６０、約６０：１～約１：６０、約４０：１～約１：６０、約２０：１～約１：６０、約１０：１～約１：６０、約５：１～約１：６０、約２：１～約１：６０、約１：１～約１：６０、約１：２～約１：６０、約１：５～約１：６０、約１：１０～約１：６０、約１：２０～約１：６０、約１：４０～約１：６０、約１００：１～約１：４０、約８０：１～約１：４０、約６０：１～約１：４０、約４０：１～約１：４０、約２０：１～約１：４０、約１０：１～約１：４０、約５：１～約１：４０、約２：１～約１：４０、約１：１～約１：４０、約１：２～約１：４０、約１：５～約１：４０、約１：１０～約１：４０、約１：２０～約１：４０、約１００：１～約１：２０、約８０：１～約１：２０、約６０：１～約１：２０、約４０：１～約１：２０、約２０：１～約１：２０、約１０：１～約１：２０、約５：１～約１：２０、約２：１～約１：２０、約１：１～約１：２０、約１：２～約１：２０、約１：５～約１：２０、約１：１０～約１：２０、約１００：１～約１：１０、約８０：１～約１：１０、約６０：１～約１：１０、約４０：１～約１：１０、約２０：１～約１：１０、約１０：１～約１：１０、約５：１～約１：１０、約２：１～約１：１０、約１：１～約１：１０、約１：２～約１：１０、約１：５～約１：１０、約１００：１～約１：５、約８０：１～約１：５、約６０：１～約１：５、約４０：１～約１：５、約２０：１～約１：５、約１０：１～約１：５、約５：１～約１：５、約２：１～約１：５、約１：１～約１：５、約１：２～約１：５、約１００：１～約１：２、約８０：１～約１：２、約６０：１～約１：２、約４０：１～約１：２、約２０：１～約１：２、約１０：１～約１：２、約５：１～約１：２、約２：１～約１：２、約１：１～約１：２、約１００：１～約１：１、約８０：１～約１：１、約６０：１～約１：１、約４０：１～約１：１、約２０：１～約１：１、約１０：１～約１：１、約５：１～約１：１、約２：１～約１：１、約１００：１～約２：１、約８０：１～約２：１、約６０：１～約２：１、約４０：１～約２：１、約２０：１～約２：１、約１０：１～約２：１、約５：１～約２：１、約１００：１～約５：１、約８０：１～約５：１、約６０：１～約５：１、約４０：１～約５：１、約２０：１～約５：１、約１０：１～約５：１、約５：１～約５：１、約１００：１～約５：１、約８０：１～約５：１、約６０：１～約５：１、約４０：１～約５：１、約２０：１～約５：１、約１０：１～約５：１、約１００：１～約１０：１、約８０：１～約１０：１、約６０：１～約１０：１、約４０：１～約１０：１、約２０：１～約１０：１、約１００：１～約２０：１、約８０：１～約２０：１、約６０：１～約２０：１、約４０：１～約２０：１、約１００：１～約４０：１、約８０：１～約４０：１、約６０：１～約４０：１、約１００：１～約６０：１、約８０：１～約６０：１、又は約１００：１～約８０：１の範囲であることができる。
【0112】
一部の態様では、ヒスタチンと、一つ又は複数の他の活性薬剤との重量比は、約１：１である。一部の態様では、ヒスタチンと、一つ又は複数の他の活性薬剤との重量比は、約１００：１、約８０：１、約６０：１、約４０：１、約２０：１、約１０：１、約５：１、約２：１、約１：２、約１：５、約１：１０、約１：２０、約１：４０、約１：６０、約１：８０、又は約１：１００である。
【0113】
一部の態様では、医薬組成物は、ヒスタチン類似体もしくは誘導体、及び一つ又は複数の他の活性薬剤の組み合わせを含み、過剰なヒスタチン類似体もしくは誘導体、過剰な一つ又は複数の他の活性薬剤、あるいは等量のヒスタチン類似体もしくは誘導体、及び一つ又は複数の他の活性薬剤を含み得る。一部の態様では、一つ又は複数の活性薬剤は、ＣＮＴＦペプチド又はその類似体である。一部の態様では、一つ又は複数の活性薬剤は、抗アポトーシス薬剤である。ヒスタチン類似体又は誘導体と、一つ又は複数の他の活性薬剤との重量比は、約１００：１～１：１００の範囲であることができる。一部の態様では、一つ又は複数の他の活性薬剤は、対象が、医薬組成物中のヒスタチン類似体又は誘導体の用量及び別の投薬形態中の一つ又は複数の他の活性薬剤の用量を受けるように、別の投薬形態中で連続的に又は同時に対象に投与される。一つ又は複数の他の活性薬剤のための投与レジメンは、このように、ヒスタチン類似体又は誘導体の投与レジメンと同じであってもよく、又は異なっていてもよい。連続投与は、数秒、数分、数時間、又は数日以内に投与される活性薬剤を含む。
【0114】
一部の態様では、組成物は、点眼薬、ゲル、軟膏、又は組織接着剤の形態で、あるいは対象により着用される眼デバイス又はコンタクトレンズ中に組成物を組み入れることにより投与される。
【0115】
一部の態様では、組成物は、一つ又は複数の医薬的に許容可能な賦形剤を含む。
【0116】
一部の態様では、組成物は、患者の眼への局所投与のために適切な任意の様式において、即ち、眼科組成物として製剤化されてもよい。多数の適切な局所眼科薬物形態が、周知である（例、参照により本明細書中に組み入れられる、Ｂａｒａｎｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｗｏｒｌｄ Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｖｏｌ．２０１４，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ８６１９０４を参照のこと）。様々な例では、眼科組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、軟膏、クリーム、ゲル、コンタクトレンズ、眼インサート、デポー、マトリクス、埋め込み剤、薬物送達システム、綿球、涙点プラグ、又は制御もしくは持続放出媒体もしくはシステムの形態である。一部の態様では、眼科組成物は、米国特許第７，８９７，１６６号、米国特許第６，９９１，８０２号、米国特許第７，４８５，３１８号、米国特許第１０，１４９，８２５号、米国特許第９，２２６，８９３号、米国特許公開２０１０／０１１９５００、米国特許第９，９４９，９２２号、米国特許第１０，１７２，７９２号、及び米国特許第１０，５４８，８４３号において記載されている持続放出媒体又はシステムの形態であり、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書により組み入れられる。本明細書中で使用される場合、「局所投与」は、角膜の表面及び／又は結膜の表面への眼科組成物の投与を含む。局所投与はまた、眼の嚢中での眼科組成物の配置を含む。眼科組成物は、水性又は非水性（例、鉱油系）であってもよいが、一般的に水性である。
【0117】
一部の態様では、眼科製剤は、シリカゾルから紡糸された生分解性シリカ繊維中に組み入れられる。一部の態様では、シリカ繊維は、模擬体液中での、約０．２重量％／時間～約２０重量％／時間の溶解率を有する。
【0118】
一部の態様では、眼科製剤は、ヒト及び／又は動物における医療用途のために適切な材料で作製されたデバイス中に組み入れられ、当該材料は、生物学的に活性な薬剤を担持する又は結合することが可能であり、当該材料は多層であり、以下を含む完成したデバイスの形状の本体中に形成される：
（ａ）本体中に、場合により、完成したデバイスの形状を有する本体中に形成される、コア材料、
（ｂ）第一の層が、当該コア材料上に適用され、追加の層が、先行する層の当該コーティング材料上に適用されている、コーティング材料の二つ又はそれ以上の層、及び
（ｃ）当該生物学的に活性な薬剤に結合することが可能なコーティング材料の少なくとも一つの層。
（ａ）本体中に、場合により、完成したデバイスの形状を有する本体中に形成される、コア材料、
（ｂ）第一の層が、当該コア材料上に適用され、追加の層が、先行する層の当該コーティング材料上に適用されている、コーティング材料の二つ又はそれ以上の層、及び
（ｃ）当該生物学的に活性な薬剤に結合することが可能なコーティング材料の少なくとも一つの層。
【0119】
一部の態様では、コーティング材料は、バイオポリマー、ゾルゲル産生シリカゲル、又は生物学的に活性な分子である。一部の態様では、コーティング材料の層は、異なる層が、コア材料の異なる部分を覆うように、異なる層が、異なる生物学的に活性な薬剤を含むように、又はその両方であるように、非対称である。
【0120】
一部の態様では、眼科組成物は生分解性担体を含む。一部の態様では、生分解性担体は、触媒として酸又は塩基を使用することにより、水及びシランを３５～７５の水：シラン比率範囲中で作製されるシリカキセロゲルである。一部の態様では、シランはテトラエトキシシランである。一部の態様では、生分解性担体は、モノリス、繊維、ネット、円錐体、多粒子、又はインプラント材料のための適切なコーティングの形態である。
【0121】
一部の態様では、眼科組成物は、テトラエトキシシランから調製された生体吸収性シロキサンを含む。一部の態様では、生体吸収性シロキサンはモノリスである。一部の態様では、生体吸収性シロキサンはコーティングである。一部の態様では、生体吸収性シロキサンは粒子である。
【0122】
一部の態様では、眼科組成物は、ＳｉＯ２及び／又は加水分解ＳｉＯ２からなる水溶性の未溶解シリカ系材料を含むインプラント又は送達デバイスの形態である。
【0123】
一部の態様では、組成物は、眼への活性薬剤の送達のために適切な任意の様式で投与され、一般的に「眼科投与」として言及される。眼への眼科投与は、限定されないが、眼内注射、網膜下注射、硝子体内注射、眼周囲投与、結膜下注射、脈絡膜上注射、球後注射、前房内注射（前房又は硝子体腔中を含む）、テノン嚢下注射又はインプラント、眼科溶液、眼科懸濁液、眼科軟膏、眼インプラント及び眼インサート、眼内溶液、イオン泳動の使用、外科的灌注溶液中での組み入れ、ならびにパック（例としてのみ、ホルミックス中に挿入された飽和綿球）を含む。
【0124】
一部の態様では、眼科組成物は、滅菌液体、例えば複数回使用又は単回使用の点眼薬分注ボトル又はバイアル内に含まれる溶液又は懸濁液などである。特定の実施例では、眼科組成物は、複数回使用の点眼薬分注ボトル又はバイアル内に含まれる滅菌液体として提供される。典型的には、点眼製剤は、水性の緩衝生理食塩水溶液、例えば約ｐＨ４～約８、典型的には約ｐＨ７．０～約８．０、より典型的には約ｐＨ７．２～約ｐＨ７．４のリン酸又はホウ酸緩衝生理食塩水などを含む。製剤のオスモル濃度は、典型的には、約２００、２５０、又は２７０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３１０、３５０、又は４００ｍＯｓｍ／ｋｇまでの範囲中である。複数回使用の点眼薬分注ボトル中に包装された液体製剤は、加えられた保存剤、例えば塩化ベンザルコニウムなどを含み得る。しかし、一部の実施例では、眼科組成物は保存剤を含まなくてもよい。本明細書中で使用される場合、「保存剤を含まない」は、組成物が、ヒスタチン又はその類似体、ＣＮＴＦペプチド又はその類似体、及び、場合により、抗アポトーシス薬剤に加えて、保存剤を含まないことを意味する。
【0125】
一部の態様では、組成物は、特に、液体、例えば点眼器により分注するための溶液又は懸濁液などとして製剤化される場合、組成物の用量が角膜と接触したままである期間を延長する賦形剤を含み得る。例えば、賦形剤は、粘度増加剤及び／又は粘膜接着剤であってもよい。そのような賦形剤の例は、限定されないが、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、カルボマー、ポリカルボフィル、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンブロックコポリマー（例、ポロキサマー４０７）、セルロース誘導体（例、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、及びヒドロキシエチルセルロース）、天然多糖類（例、ヒアルロン酸、デキストラン、コンドロイチン硫酸、ジェランガム、キサンタンガム、グアーガム、トレハロース、及びタマリンド種子多糖類）を含む高分子量親水性ポリマーを含む。追加の粘膜接着性ポリマーが文献中に記載されている（例、Ｙａｄａｖ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，２０１０，２（５）：４１８－４３２を参照のこと。参照により本明細書中に組み入れられる）。前述のポリマーの二つ又はそれ以上の任意の組み合わせが、組成物中に含まれてもよい。本明細書中で使用される場合、高分子量ポリマーは、少なくとも１００，０００ダルトンの分子量を有する。別の実施例では、組成物は、シクロデキストリン（例、２－ヒドロキシプロピル－ベータ－シクロデキストリン）を含む。一実施例では、組成物は、持続放出液体として製剤化される。例えば、組成物は、ヒスタチン又はその類似体の放出を持続する粘膜接着性マイクロスフェアを含む眼科懸濁液の形態であり得る。マイクロスフェアは、粘膜接着性ポリマー及びヒスタチン又はその類似体を含む。眼科懸濁液用の粘膜接着性マイクロスフェアを作製する方法が、文献中に記載されている（例、Ｄａｎｄａｇｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｐｈａｒｍ（２０１３）８１（１）：２５９－２８０を参照のこと）。
【0126】
一部の態様では、組成物は、一つ又は複数の粘性薬剤を含む。粘性薬剤の非限定的な例は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、コンドロイチン硫酸ナトリウム、及びヒアルロン酸ナトリウムを含む。他の許容可能な粘性薬剤は、限定されないが、アカシア（アラビアゴム）、寒天、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、アルギン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ブラダーラック（ｂｌａｄｄｅｒｗｒａｃｋ）、ベントナイト、カルボマー、カラギーナン、カルボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）、キサンタン、セルロース、微結晶性セルロース（ＭＣＣ）、セラトニア、キチン、カルボキシメチル化キトサン、ツノマタ属（ｃｈｏｎｄｒｕｓ）、デキストロース、ファーセレラン、ゼラチン、ガティガム、グアーガム、ヘクトライト、ラクトース、ショ糖、マルトデキストリン、マンニトール、ソルビトール、ハチミツ、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、アラヤゴム、ザンサンガム、トラガカントガム、エチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、エチルメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）、オキシポリゲラチン、ペクチン、ポリゲリン、ポビドン，プロピレンカーボネート、メチルビニルエーテル／無水マレイン酸共重合体（ＰＶＭ／ＭＡ）、ポリ（メトキシエチルメタクリレート）、ポリ（メトキシエトキシエチルメタクリレート）、二酸化ケイ素、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ：ポビドン）、Ｓｐｌｅｎｄａ（登録商標）（デキストロース、マルトデキストリン及びスクラロース）及びそれらの組み合わせを含む。
【0127】
一部の態様では、組成物は、約０．１重量％～約１重量％の一つ又は複数の粘性薬剤を含む。一部の態様では、組成物は、約０．１重量％～約０．２５重量％、約０．１重量％～約０．５重量％、約０．１重量％～約０．７５重量％、約０．２５重量％～約０．５重量％、約０．２５重量％～約０．７５重量％、約０．２５重量％～約１重量％、約０．５重量％～約０．７５重量％、約０．５重量％～約１重量％、又は約０．７５重量％～約１重量％の一つ又は複数の粘性薬剤を含む。
【0128】
一部の態様では、組成物の粘度は約１０ｃＰ～約３０ｃＰである。一部の態様では、組成物の粘度は、約１ｃＰ～約５ｃＰ、約１ｃＰ～約１０ｃＰ、約１ｃＰ～約１５ｃＰ、約１ｃＰ～約２０ｃＰ、約１ｃＰ～約３０ｃＰ、約１ｃＰ～約４０ｃＰ、約１ｃＰ～約５０ｃＰ、約１ｃＰ～約６０ｃＰ、約１ｃＰ～約８０ｃＰ、約１ｃＰ～約１００ｃＰ、約１ｃＰ～約１２５ｃＰ、約１ｃＰ～約１５０ｃＰ、約１ｃＰ～約１７５ｃＰ、約１ｃＰ～約２００ｃＰ、約１ｃＰ～約４００ｃＰ、約５ｃＰ～約１０ｃＰ、約５ｃＰ～約１５ｃＰ、約５ｃＰ～約２０ｃＰ、約５ｃＰ～約３０ｃＰ、約５ｃＰ～約４０ｃＰ、約５ｃＰ～約５０ｃＰ、約５ｃＰ～約６０ｃＰ、約５ｃＰ～約８０ｃＰ、約５ｃＰ～約１００ｃＰ、約５ｃＰ～約１２５ｃＰ、約５ｃＰ～約１５０ｃＰ、約５ｃＰ～約１７５ｃＰ、約５ｃＰ～約２００ｃＰ、約５ｃＰ～約４００ｃＰ、約１０ｃＰ～約１５ｃＰ、約１０ｃＰ～約２０ｃＰ、約１０ｃＰ～約３０ｃＰ、約１０ｃＰ～約４０ｃＰ、約１０ｃＰ～約５０ｃＰ、約１０ｃＰ～約６０ｃＰ、約１０ｃＰ～約８０ｃＰ、約１０ｃＰ～約１００ｃＰ、約１０ｃＰ～約１２５ｃＰ、約１０ｃＰ～約１５０ｃＰ、約１０ｃＰ～約１７５ｃＰ、約１０ｃＰ～約２００ｃＰ、約１０ｃＰ～約４００ｃＰ、約１５ｃＰ～約２０ｃＰ、約１５ｃＰ～約３０ｃＰ、約１５ｃＰ～約４０ｃＰ、約１５ｃＰ～約５０ｃＰ、約１５ｃＰ～約６０ｃＰ、約１５ｃＰ～約８０ｃＰ、約１５ｃＰ～約１００ｃＰ、約１５ｃＰ～約１２５ｃＰ、約１５ｃＰ～約１５０ｃＰ、約１５ｃＰ～約１７５ｃＰ、約１５ｃＰ～約２００ｃＰ、約１５ｃＰ～約４００ｃＰ、約２０ｃＰ～約３０ｃＰ、約２０ｃＰ～約４０ｃＰ、約２０ｃＰ～約５０ｃＰ、約２０ｃＰ～約６０ｃＰ、約２０ｃＰ～約８０ｃＰ、約２０ｃＰ～約１００ｃＰ、約２０ｃＰ～約１２５ｃＰ、約２０ｃＰ～約１５０ｃＰ、約２０ｃＰ～約１７５ｃＰ、約２０ｃＰ～約２００ｃＰ、約２０ｃＰ～約４００ｃＰ、約３０ｃＰ～約４０ｃＰ、約３０ｃＰ～約５０ｃＰ、約３０ｃＰ～約６０ｃＰ、約３０ｃＰ～約８０ｃＰ、約３０ｃＰ～約１００ｃＰ、約３０ｃＰ～約１２５ｃＰ、約３０ｃＰ～約１５０ｃＰ、約３０ｃＰ～約１７５ｃＰ、約３０ｃＰ～約２００ｃＰ、約３０ｃＰ～約４００ｃＰ、約４０ｃＰ～約５０ｃＰ、約４０ｃＰ～約６０ｃＰ、約４０ｃＰ～約８０ｃＰ、約４０ｃＰ～約１００ｃＰ、約４０ｃＰ～約１２５ｃＰ、約４０ｃＰ～約１５０ｃＰ、約４０ｃＰ～約１７５ｃＰ、約４０ｃＰ～約２００ｃＰ、約４０ｃＰ～約４００ｃＰ、約５０ｃＰ～約６０ｃＰ、約５０ｃＰ～約８０ｃＰ、約５０ｃＰ～約１００ｃＰ、約５０ｃＰ～約１２５ｃＰ、約５０ｃＰ～約１５０ｃＰ、約５０ｃＰ～約１７５ｃＰ、約５０ｃＰ～約２００ｃＰ、約５０ｃＰ～約４００ｃＰ、約６０ｃＰ～約８０ｃＰ、約６０ｃＰ～約１００ｃＰ、約６０ｃＰ～約１２５ｃＰ、約６０ｃＰ～約１５０ｃＰ、約６０ｃＰ～約１７５ｃＰ、約６０ｃＰ～約２００ｃＰ、約６０ｃＰ～約４００ｃＰ、約８０ｃＰ～約１００ｃＰ、約８０ｃＰ～約１２５ｃＰ、約８０ｃＰ～約１５０ｃＰ、約８０ｃＰ～約１７５ｃＰ、約８０ｃＰ～約２００ｃＰ、約８０ｃＰ～約４００ｃＰ、約１００ｃＰ～約１２５ｃＰ、約１００ｃＰ～約１５０ｃＰ、約１００ｃＰ～約１７５ｃＰ、約１００ｃＰ～約２００ｃＰ、約１００ｃＰ～約４００ｃＰ、約１２５ｃＰ～約１５０ｃＰ、約１２５ｃＰ～約１７５ｃＰ、約１２５ｃＰ～約２００ｃＰ、約１２５ｃＰ～約４００ｃＰ、約１５０ｃＰ～約１７５ｃＰ、約１５０ｃＰ～約２００ｃＰ、約１５０ｃＰ～約４００ｃＰ、約１７５ｃＰ～約２００ｃＰ、約１７５ｃＰ～約４００ｃＰ、又は約２００ｃＰ～約４００ｃＰである。
【0129】
一部の態様では、組成物は約３０ｃＰの粘度を有する。一部の態様では、組成物は、約１ｃＰ、約５ｃＰ、約１０ｃＰ、約１５ｃＰ、約２０ｃＰ、約３０ｃＰ、約４０ｃＰ、約５０ｃＰ、約６０ｃＰ、約８０ｃＰ、約１００ｃＰ、約１２５ｃＰ、約１５０ｃＰ、約１７５ｃＰ、約２００ｃＰ、又は約４００ｃＰの粘度を有する。
【0130】
一部の態様では、組成物は、約０．１重量％の一つ又は複数の粘性薬剤を含む。一部の態様では、組成物は、約０．２５重量％、約０．５重量％、約０．７５重量％、又は約１重量％の一つ又は複数の粘性薬剤を含む。
【0131】
一部の態様では、組成物は、一つ又は複数の緩衝液を含む。緩衝液の非限定的な例は、酢酸緩衝液、ホウ酸塩緩衝液、クエン酸ホウ酸塩緩衝液、クエン酸緩衝液、乳酸緩衝液、リン酸緩衝液、コハク酸塩緩衝液、ホウ酸塩－ポリオール複合体緩衝液、炭酸緩衝液、有機緩衝液、アミノ酸緩衝液、及びそれらの組み合わせを含む。
【0132】
有機緩衝液としては、限定されないが、グッドの緩衝液、例えば、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、Ｎ－（２－アセトアミド）イミノ二酢酸、Ｎ－（カルバモイルメチル）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、β－ヒドロキシ－４－モルホリンプロパンスルホン酸、３－モルホリノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、コラミンクロリド、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、２－［（２－ヒドロキシ－１，１－ビス（ヒドロキシメチル）エチル）アミノ］エタンスルホン酸（ＴＥＳ）、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３－（Ｎ，Ｎ－ビス［２－ヒドロキシエチル］アミノ）－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、アセトアミドグリシン、３－｛［１，３－ジヒドロキシ－２－（ヒドロキシメチル）－２－プロパニル］アミノ｝－２－ヒドロキシ－１－プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、ピペラジン－１，４，－ビス（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）水和物（ＨＥＰＰＳＯ）、３－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳ）、トリシン、グリシンアミド、ビシン又はＮ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸ナトリウム（ＴＡＰＳ）、グリシン、ジエタノールアミン（ＤＥＡ）；及びそれらの組み合わせを含む。
【0133】
アミノ酸緩衝液は、限定されないが、タウリン、アスパラギン酸及びその塩（例、カリウム塩など）、ε－アミノカプロン酸、ならびにそれらの組み合わせを含む。
【0134】
一部の態様では、眼科製剤のｐＨは、強酸又は強塩基により調整される。強酸及び強塩基の例は、当技術分野において周知であり、限定されないが、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＨＣｌ、及びＨ２ＳＯ４を含む。一部の態様では、強酸又は強塩基はＨＣｌ又はＮａＯＨである。
【0135】
一部の態様では、組成物は、約０．０５重量％～約１重量％の一つ又は複数の緩衝液を含む。一部の態様では、組成物は、約０．０５重量％～約０．１重量％、約０．０５重量％～約０．２５重量％、約０．０５重量％～約０．５重量％、約０．０５重量％～約０．７５重量％、約０．１重量％～約０．２５重量％、約０．１重量％～約０．５重量％、約０．１重量％～約０．７５重量％、約０．１重量％～約１重量％、約０．２５重量％～約０．５重量％、約０．２５重量％～約０．７５重量％、約０．２５重量％～約１重量％、約０．５重量％～約０．７５重量％、約０．５重量％～約１重量％、又は約０．７５重量％～約１重量％の一つ又は複数の緩衝液を含む。
【0136】
一部の態様では、組成物は、約０．５重量％の一つ又は複数の緩衝液を含む。一部の態様では、組成物は、約０．０５重量％、約０．１重量％、約０．２５重量％、約０．７５重量％、又は約１重量％の一つ又は複数の緩衝液を含む。
【0137】
一部の態様では、組成物は、約７～約７．６のｐＨを有する。一部の態様では、組成物は、約６～約６．５、約６～約７、約６～約７．２、約６～約７．４、約６～約７．６、約６～約７．８、約６～約８、約６．５～約７、約６．５～約７．２、約６．５～約７．４、約６．５～約７．６、約６．５～約７．８、約６．５～約８、約７～約７．２、約７～約７．４、約７～約７．８、約７～約８、約７．２～約７．４、約７．２～約７．６、約７．２～約７．８、約７．２～約８、約７．４～約７．６、約７．４～約７．８、約７．４～約８、又は約７．６～約７．８のｐＨを有する。
【0138】
一部の態様では、組成物は、約７．４のｐＨを有する。一部の態様では、組成物は、約６、約６．５、約７、約７．２、約７．６、又は約８のｐＨを有する。
【0139】
一部の態様では、組成物は保存剤を含む。保存剤の非限定的な例は、塩化ベンザルコニウム、安定化オキシクロロ複合体（Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標））、酢酸フェニル水銀、クロロブタノール、ベンジルアルコール、パラベン、及びチメロサールを含む。一部の態様では、組成物は塩化ベンザルコニウムを含む。
【0140】
一部の態様では、組成物は、約０．００７５重量％～約０．０１２５重量％の塩化ベンザルコニウムを含む。一部の態様では、組成物は、約０．００２５重量％～約０．００５重量％、約０．００２５重量％～約０．００７５重量％、約０．００２５重量％～約０．０１重量％、約０．００２５重量％～約０．０１２５重量％、約０．００２５重量％～約０．０２重量％、約０．００５重量％～約０．００７５重量％、約０．００５重量％～約０．０１重量％、約０．００５重量％～約０．０１２５重量％、約０．００５重量％～約０．０２重量％、約０．００７５重量％～約０．０１重量％、約０．００７５重量％～約０．０２重量％、約０．０１重量％～約０．０１２５重量％、約０．０１重量％～約０．０２重量％、又は約０．０１２５重量％～約０．０２重量％の塩化ベンザルコニウムを含む。
【0141】
一部の態様では、組成物は、約０．０１重量％の塩化ベンザルコニウムを含む。一部の態様では、組成物は、約０．００２５重量％、約０．００５重量％、約０．００７５重量％、約０．０１２５重量％、又は約０．０２重量％の塩化ベンザルコニウムを含む。
【0142】
一部の態様では、組成物は保存剤を含まない。
【0143】
一部の態様では、組成物は、一つ又は複数の安定化剤を含む。安定化剤は、限定されないが、脂肪酸、脂肪アルコール、アルコール、長鎖脂肪酸エステル、長鎖エーテル、脂肪酸の親水性誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリビニルエーテル、ポリビニルアルコール、炭化水素、疎水性ポリマー、吸湿性ポリマー、及びそれらの組み合わせを含む。一部の態様では、安定化剤のアミド類似体がまた使用される。一部の態様では、選ばれた安定化剤は、組成物の疎水性を変化させ、組成物中の様々な成分の混合を改善させ、組成物中の水分レベルを制御し、又は相の移動性を制御する。
【0144】
一部の態様では、組成物は、活性薬剤の分解を阻害するのに十分な量において一つ又は複数の安定化剤を含む。そのような安定化剤の例は、限定されないが、グリセロール、メチオニン、モノチオグリセロール、ＥＤＴＡ、アスコルビン酸、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、アルギニン、ヘパリン、デキストラン硫酸、シクロデキストリン、ペントサン多硫酸塩及び他のヘパリン類似物質、二価カチオン、例えばマグネシウム及び亜鉛など、又はそれらの組み合わせを含む。
【0145】
一部の態様では、組成物の成分の溶解度は、組成物中の界面活性薬剤又は他の適した共溶媒により増強され得る。そのような共溶媒は、ポリソルベート２０、６０、及び８０、プルロニックＦ６８、Ｆ－８４及びＰ－１０３、シクロデキストリン、又は当業者に公知の他の薬剤を含む。一部の態様では、共溶媒の濃度は、０．０１重量％～約２重量％である。
【0146】
一部の態様では、組成物は、一つ又は複数のポリオールを含む。本明細書中で使用される場合、用語「ポリオール」は、互いに対してトランス配置中にない二つの隣接する炭素原子の各々に少なくとも一つのヒドロキシル基を有する任意の化合物を含む。ポリオールは、結果としての複合体が水溶性であり、医薬的に許容可能である限り、直鎖状又は環状の、置換又は非置換の、又はそれらの混合物であり得る。そのような化合物の例は、糖、糖アルコール、糖酸、及びウロン酸を含む。好ましいポリオールは、限定されないが、マンニトール、グリセリン、キシリトール、ソルビトール、及びプロピレングリコールを含む、糖、糖アルコール、及び糖酸である。ポリオールは、二つ又はそれ以上の異なるポリオールで構成され得ることが企図される。
【0147】
一部の態様では、組成物は、一つ又は複数の抗凝集添加剤を含む。抗凝集添加剤は、タンパク質凝集の速度を低下させることにより、組成物の安定性を増強する。抗凝集添加剤は、限定されないが、尿素、塩化グアニジニウム、単純アミノ酸、例えばグリシン又はアルギニンなど、糖、ポリアルコール、ポリソルベート、ポリマー、例えばポリエチレングリコール及びデキストランスなど、アルキル糖類、例えばアルキルグリコシドなど、及び界面活性剤を含む。
【0148】
一部の態様では、組成物は、一つ又は複数の抗酸化剤を含む。抗酸化剤は、限定されないが、アスコルビン酸、メチオニン、チオ硫酸ナトリウム、メタビス硫酸ナトリウム、及びそれらの組み合わせを含む。金属キレート剤、チオール含有化合物、及び他の一般的な安定化剤は、許容可能な抗酸化剤であり得る。
【0149】
一部の態様では、組成物は、一つ又は複数のオスモル濃度薬剤（ｏｓｍｏｌａｌｉｔｙ ａｇｅｎｔ）を含む。オスモル濃度薬剤は、限定されないが、塩、特に塩化ナトリウム又は塩化カリウム、有機化合物、例えばプロピレングリコール、マンニトール、ソルビトール、デキストロース、及びグリセリンなどを含む。
【0150】
一部の態様では、組成物は、約２６０～約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する。一部の態様では、組成物は、約２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３０５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３１５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３０５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３１５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３０５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３１５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３０５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３０５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３０５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３０５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３０５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３１５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３１５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３１５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３１５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３１５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３５５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約２６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３０５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３１５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３０５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３１５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３０５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３１５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する。
【0151】
一部の態様では、組成物は、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３０５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３１５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３５５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３７０ｍＯｓｍ／ｋｇ、又は約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する。
【0152】
一部の態様では、組成物は等張性である。一部の態様では、組成物は低張性である。一部の態様では、組成物は高張性である。
【0153】
一部の態様では、眼科組成物は、眼の嚢中に配置するための単位用量の眼インサートとして製剤化される。眼インサートを作製する方法が、文献中に記載されている（例、米国特許第４，７３０，０１３号、米国特許第７，７４９，９７０号、及び米国特許第２０１２／０２１５１８４を参照のこと。これらは参照により本明細書中に組み入れられる）。眼インサートは、活性薬剤を含む生分解性マトリクスを含む固体単位投薬形態であり、それは、本眼科組成物の場合では、ヒスタチン又はその類似体、ＣＮＴＦペプチド又はその類似体、及び、場合により、抗アポトーシス薬剤である。マトリクスは、典型的には、高分子量ポリマー又は高分子量ポリマーの組み合わせ、例えば眼インサートを記載する前述の特許公開において開示される前述の親水性ポリマー及び追加のポリマーなどから作製される。眼インサートは、快適さを増強するために潤滑剤を追加的に含んでもよい。眼中への配置時に、眼インサートは数時間から一日の期間にわたって、及び、一部の場合では、数日にわたって溶解又は浸食する。
【0154】
一部の態様では、本開示は、患者における眼感染症を治療する方法を提供し、有効量のヒスタチンもしくはその類似体及び／又はＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、ならびに、場合により、抗アポトーシス薬剤を含む眼科組成物を患者の眼に局所投与することを含む。様々な特定の例では、患者はヒトもしくは獣医患者であり、及び／又は眼感染症は細菌性結膜炎もしくは細菌性角膜炎であり、及び／又は眼感染症はＭＲＳＡにより引き起こされる。
【0155】
一部の態様では、眼科組成物中のヒスタチン及び／又はＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、ならびに、場合により、抗アポトーシス薬剤の量は、眼の手術、傷害、感染症、疾患、又は障害の治療又は予防のために有効である。特定の例では、眼科組成物中のヒスタチン及び／又はＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、ならびに、場合により、抗アポトーシス薬剤の量は、眼の手術、傷害、感染症、疾患、又は障害の治療のために有効である。別の例では、眼科組成物中のヒスタチン及び／又はＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体、ならびに、場合により、抗アポトーシス薬剤の量は、眼の手術、傷害、感染症、疾患、又は障害の前治療又は予防のために有効である。本明細書中で使用される場合、「前治療又は予防」は、眼の手術、傷害、感染症、疾患又は障害が、眼に眼科組成物を（眼手術、傷害、感染症、疾患又は障害の前又は後のいずれかに）投与する場合、角膜実質細胞の喪失に導かず、又は低減した角膜実質細胞の喪失をもたらすのに対して、眼科組成物が投与されていない（又はヒスタチンを欠くが、しかし、他の点では同一である対照組成物で治療された）眼は、統計的に有意な角膜実質細胞の喪失をもたらす。
【0156】
予防は、例えば、手術、例えば、光屈折角膜切除手術又は他の眼の手術後の感染症又は傷害、あるいは傷害、感染症、疾患、又は障害からの予防であり得る。
【0157】
一部の態様では、ヒスタチンもしくはその類似体及び／又はＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体と、、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物が、対象が手術を受ける前に対象に投与される。一部の態様では、手術は光屈折角膜切除（ＰＲＫ）手術である。一部の態様では、手術は全層角膜形成術（ＰＫ）である。一部の態様では、手術は、デスメ膜ストリッピング自動内皮角膜形成術（ＤＳＡＥＫ）又はデスメ膜内皮角膜形成術（ＤＭＥＫ）である。
【0158】
一部の態様では、ヒスタチンもしくはその類似体及び／又はＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体と、、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物は、対象が手術を受けた後に対象に投与される。一部の態様では、手術は光屈折角膜切除（ＰＲＫ）手術である。一部の態様では、手術は全層角膜形成術（ＰＫ）である。一部の態様では、手術は、デスメ膜ストリッピング自動内皮角膜形成術（ＤＳＡＥＫ）又はデスメ膜内皮角膜形成術（ＤＭＥＫ）である。
【0159】
一部の態様では、対象は哺乳動物である。一部の態様では、哺乳動物は、ウサギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、又はヒツジである。一部の態様では、哺乳動物はヒトである。
【0160】
一部の態様では、組成物の投与は、傷害又は手術後の角膜実質細胞の喪失における低減をもたらす。
【0161】
一部の態様では、組成物の投与は、傷害又は手術後に喪失された角膜実質細胞の回復をもたらす。
【0162】
一部の態様では、対象における角膜実質細胞の喪失は、光屈折角膜切除、フックス角膜ジストロフィー、又は円錐角膜により引き起こされる。一部の態様では、対象における角膜実質細胞の喪失は、皮膚への光損傷により引き起こされる。一部の態様では、対象における角膜実質細胞の喪失は、化学療法により引き起こされる。
【0163】
一態様では、ヒスタチンは、８～４４のアミノ酸を含むペプチドである。一部の態様では、ペプチドはＬ－ペプチドである。他の態様では、ペプチドは環状ペプチドである。
【0164】
一部の態様では、ヒスタチンペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１～３３、及び配列番号３８～４０の一つ又は複数、又はこれらの配列の任意の組み合わせである。一部の態様では、アミノ酸配列の一つ又は複数は、３つまでのアミノ酸の置換、欠失、及び／又は挿入を有する。一部の態様では、アミノ酸配列の一つ又は複数は、二つ又はそれ以下のアミノ酸の置換、欠失、及び／又は挿入を有する。他の態様では、アミノ酸配列の一つ又は複数は、一つのアミノ酸における置換、欠失、及び／又は挿入を有する。
【0165】
配列番号４ペプチドはまた、ヒスタチン１（Ｈｓｔ－１）として公知である。一部の態様では、このアミノ酸配列中の第一のセリンは、ホスホセリンであってもよい。配列番号５ペプチドはまた、ヒスタチン２（Ｈｓｔ－２、また、Ｈｓｔ－１のアミノ酸１２～３８と等価である）として公知である。配列番号６ペプチドはまた、ヒスタチン３（Ｈｓｔ－３）として公知である。配列番号３０ペプチドはまた、ヒスタチン５（Ｈｓｔ－５）として公知である。これらのアミノ酸配列の各々の部分及び断片は、単独で又は組み合わせにおいて使用されてもよく、限定されないが、配列番号１～３、及び７～２９（ヒスタチン１、ヒスタチン２、及びヒスタチン３について）及び配列番号３２（ヒスタチン５について）を含み、本明細書中に記載される開示において創傷閉鎖を促進させる。アミノ酸のＬ立体異性体は、本明細書中に記載されるアミノ酸配列について好ましい一方で、Ｄ立体異性体は、代替的に使用されてもよい。あるいは、これらのヒスタチン及び他のアミノ酸を含むアミノ酸配列、例えば、ソーターゼ環化ヒスタチン（ヒスタチン１の全てを含む）である配列番号３３を使用してもよい。任意のヒスタチン配列を環化して使用することができる。
【0166】
一部の態様では、本明細書中に記載されるヒスタチンは、ヒスタチン１～５を含むことができる。ヒスタチンの例は、限定されないが、配列番号４において示されるアミノ酸配列を有するヒトヒスタチン－１を含む。一部の態様では、ヒスタチン類似体、誘導体、断片、又は融合物も企図される。一部の態様では、配列番号１～３３又は配列番号３８～４０において示されるヒスタチン１～５のヒスタチン類似体、誘導体、断片、又は融合物も企図される。一部の態様では、リンカーにより接続された、配列番号１～３３又は配列番号３８～４０において示されるヒスタチン１～５の二つ又はそれ以上のヒスタチン類似体、誘導体、断片、又は融合物も企図される。一部の態様では、ヒスタチンは、配列番号１～３３又は配列番号３８～４０と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８２％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有し得る。
【0167】
一部の態様では、本明細書中に記載される毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチド、ペプチド６は、配列番号３４において示されるアミノ酸配列を有する。一部の態様では、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチド、ペプチド６誘導体も企図される。一部の態様では、配列番号３４において示されるＣＮＴＦペプチドのＣＮＴＦペプチド類似体、誘導体、断片、又は融合物も企図される。一部の態様では、リンカーにより接続された、配列番号３４において示されるＣＮＴＦペプチドの二つ又はそれ以上のＣＮＴＦペプチド又は類似体、誘導体、断片、もしくは融合物も企図される。一部の態様では、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチドの誘導体、ペプチド６は、配列番号３４と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８２％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有し得る。
【0168】
ヒスタチン及びＣＮＴＦペプチドの配列は、ＵＳ２０１３／０３１０３２７、ＷＯ２０２１／１０８４８２、及びＵＳ２０２０／０１０８１１７において記載されており、それらは、参照により、それらの全体において本明細書中に組み入れられる。
【0169】
本開示は、以下の表１中の配列を提供する：
（表１）
（表１）
【0170】
一部の態様では、本開示は、皮膚又は眼科疾患、障害、又は状態を治療又は予防的に治療する方法を提供し、それを必要とする対象に、ヒスタチンもしくはその類似体及び／又はＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物を投与することを含む。
【0171】
一部の態様では、皮膚疾患、障害、又は状態は、ＣＯ２回復後、熱傷、褥瘡性潰瘍、脊髄傷害における自律神経反射異常、糖尿病性虚血性潰瘍、潰瘍予防、皮膚移植片回復、スキル喪失をもたらす外傷、低温／電気乾固後回復、又はモース／皮膚癌創傷治癒後である。一部の態様では、眼科疾患、障害、又は状態は、光屈折角膜切除（ＰＲＫ）手術後、緑内障手術、感染性角膜潰瘍、色素眼疾患、円錐角膜に対するコラーゲン架橋（ＣＳＸ）後、神経栄養性角膜炎、フックス角膜ジストロフィー、コンタクトレンズ不耐性、ドライアイ疾患、又は角膜炎進行阻害である。一部の態様では、眼科疾患、障害、又は状態は、後部多形性角膜ジストロフィー（ＰＰＣＤ）、無水晶体又は偽水晶体性水疱性角膜症（ＡＢＫ／ＰＢＫ）、穿通性又は鈍的外傷により引き起こされる内皮機能障害、先天性遺伝性内皮ジストロフィー（ＣＨＥＤ）、虹彩角膜内皮（ＩＣＥ）症候群、難治性緑内障、以前の失敗した角膜移植片、又は単純ヘルペスウイルス内皮炎である。
【0172】
一部の態様では、本開示は、外科手技の前に生物学的サンプルを処理、保存、及び／又は貯蔵する方法を提供し、当該生物学的サンプルを、ヒスタチンもしくはその類似体及び／又はＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物と接触させることを含む。一部の態様では、生物学的サンプルはドナー組織である。一部の態様では、ドナー組織は角膜組織である。一部の態様では、ドナー組織は、哺乳動物対象中への移植のために適切である。一部の態様では、ドナー組織は、ヒト対象中への移植のために適切である。一部の態様では、方法は、組成物と接触した生物学的サンプルを約－１０℃～約２５℃の温度で貯蔵することをさらに含む。
【0173】
一部の態様では、生物学的サンプルは、約０．５日、約１日、約２日、約３日、約７日、約１４日、約２１日、約３０日、約６０日、又は約９０日間にわたり、生存可能なままである。一部の態様では、生物学的サンプルは、約０．５日～約１日、約０．５日～約２日、約０．５日～約３日、約０．５日～約７日、約０．５日～約１４日、約０．５日～約２１日、約０．５日～約３０日、約０．５日～約６０日、約０．５日～約９０日、約１日～約２日、約１日～約３日、約１日～約７日、約１日～約１４日、約１日～約２１日、約１日～約３０日、約１日～約６０日、約１日～約９０日、約２日～約３日、約２日～約７日、約２日～約１４日、約２日～約２１日、約２日～約３０日、約２日～約６０日、約２日～約９０日、約３日～約７日、約３日～約１４日、約３日～約２１日、約３日～約３０日、約３日～約６０日、約３日～約９０日、約７日～約１４日、約７日～約２１日、約７日～約３０日、約７日～約６０日、約７日～約９０日、約１４日～約２１日、約１４日～約３０日、約１４日～約６０日、約１４日～約９０日、約２１日～約３０日、約２１日～約６０日、約２１日～約９０日、約３０日～約６０日、約３０日～約９０日、及び約６０日～約９０日間にわたり、生存可能なままである。
【0174】
一部の態様では、外科手技は、光屈折角膜切除（ＰＲＫ）手術、デスメ膜ストリッピング自動内皮角膜形成術（ＤＳＡＥＫ）、又はデスメ膜内皮角膜形成術（ＤＭＥＫ）である。
【0175】
一部の態様では、本開示は、角膜内皮細胞の喪失を低減もしくは防止する、及び／又は角膜内皮細胞を回復させる方法であって、それを必要とする対象の眼に、ヒスタチン又はその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物の治療有効量を投与することを含む。
【0176】
一部の態様では、抗アポトーシス薬剤はＭＥＴ１２（配列番号３７）である。一部の態様では、抗アポトーシス薬剤は、ＭＥＴバリアント（配列番号４１）である。一部の態様では、抗アポトーシス薬剤は、配列番号３７又は配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８２％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有し得る。ＭＥＴ１２の配列は、米国特許第８，３４３，９３１号において記載されており、それは、その全体において参照により本明細書中に組み入れられる。
【0177】
一部の態様では、組成物は、局所投与、眼内注射、網膜下注射、硝子体内注射、眼周囲投与、結膜下注射、脈絡膜上注射、球後注射、前房内注射、又はテノン嚢下注射により投与される。
【0178】
一部の態様では、角膜内皮細胞の喪失は、フックス角膜内皮ジストロフィー、後部多形性角膜ジストロフィー、無水晶体又は偽水晶体性水疱性角膜症、穿通性又は鈍的外傷により引き起こされる内皮機能障害、先天性遺伝性内皮ジストロフィー、虹彩角膜内皮症候群、難治性緑内障、以前の失敗した角膜移植片、又は単純ヘルペスウイルス内皮炎により引き起こされる。
【0179】
一部の態様では、角膜内皮細胞の喪失は、フックス角膜内皮ジストロフィーにより引き起こされる。
【0180】
一部の態様では、組成物は、外科手技前に投与される。一部の態様では、組成物は、外科手技中に投与される。一部の態様では、組成物は、外科手技後に投与される。一部の態様では、外科手技は、全層角膜形成術（ＰＫ）、デスメ膜ストリッピング自動内皮角膜形成術（ＤＳＡＥＫ）、又はデスメ膜内皮角膜形成術（ＤＭＥＫ）である。
【0181】
一部の態様では、組成物の投与は、治療なしと比較して、角膜内皮細胞の喪失において約２０％の低減をもたらす。一部の態様では、組成物の投与は、治療なしと比較して、角膜内皮細胞の喪失において約１％、約５％、約１０％、約１５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％の低減をもたらす。一部の態様では、組成物の投与は、治療なしと比較して、角膜内皮細胞の喪失において約１％～約５％、約１％～約１０％、約１％～約１５％、約１％～約２０％、約１％～約３０％、約１％～約４０％、約１％～約５０％、約１％～約６０％、約１％～約７０％、約１％～約８０％、約１％～約９０％、約１％～約１００％、約５％～約１０％、約５％～約１５％、約５％～約２０％、約５％～約３０％、約５％～約４０％、約５％～約５０％、約５％～約６０％、約５％～約７０％、約５％～約８０％、約５％～約９０％、約５％～約１００％、約１０％～約１５％、約１０％～約２０％、約１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約１０％～約５０％、約１０％～約６０％、約１０％～約７０％、約１０％～約８０％、約１０％～約９０％、約１０％～約１００％、約１５％～約２０％、約１５％～約３０％、約１５％～約４０％、約１５％～約５０％、約１５％～約６０％、約１５％～約７０％、約１５％～約８０％、約１５％～約９０％、約１５％～約１００％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約２０％～約６０％、約２０％～約７０％、約２０％～約８０％、約２０％～約９０％、約２０％～約１００％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約３０％～約７０％、約３０％～約８０％、約３０％～約９０％、約３０％～約１００％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約４０％～約８０％、約４０％～約９０％、約４０％～約１００％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約５０％～約９０％、約５０％～約１００％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約６０％～約１００％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％の低減をもたらす。一部の態様では、角膜内皮細胞の喪失における低減は、角膜断層撮影を使用して角膜内皮細胞密度を測定することにより決定される。
【0182】
一部の態様では、本開示はまた、角膜神経を回復する、再生する、又はその再生を促進する方法を提供し、それを必要とする対象の眼に、ヒスタチン又はその類似体、及び／又は毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチド又はその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物の治療有効量を投与することを含む。
【0183】
一部の態様では、組成物は、ヒスタチン又はその類似体を含む。
【0184】
一部の態様では、組成物は、ヒスタチン又はその類似体、及び毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチド又はその類似体を含む。
【0185】
一部の態様では、組成物は、ヒスタチン又はその類似体、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチド又はその類似体、及び抗アポトーシス薬剤を含む。
【0186】
一部の態様では、組成物は、ヒスタチン又はその類似体及び抗アポトーシス薬剤を含む。
【0187】
一部の態様では、組成物は、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチド又はその類似体及び抗アポトーシス薬剤を含む。
【0188】
一部の態様では、組成物は、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）ペプチド又はその類似体を含む。
【0189】
一部の態様では、組成物は、局所投与、眼内注射、網膜下注射、硝子体内注射、眼周囲投与、結膜下注射、脈絡膜上注射、球後注射、前房内注射、又はテノン嚢下注射により投与される。
【0190】
一部の態様では、角膜神経の喪失は、神経栄養性角膜炎、ドライアイ疾患、ヘルペス性角膜炎、ハンセン病、糖尿病、乾性角結膜炎、又は円錐角膜により引き起こされる。
【0191】
一部の態様では、角膜神経の喪失は、外科手技により引き起こされる。一部の態様では、外科手技は、全層角膜形成術（ＰＫ）、デスメ膜ストリッピング自動内皮角膜形成術（ＤＳＡＥＫ）、デスメ膜内皮角膜形成術（ＤＭＥＫ）、光屈折角膜切除術（ＰＲＫ）、放射状角膜切開術、又はレーザー角膜内切削形成術（ＬＡＳＩＫ）である。
【0192】
一部の態様では、組成物は、外科手技前に投与される。一部の態様では、組成物は、外科手技中に投与される。一部の態様では、組成物は、外科手技後に投与される。
【0193】
一部の態様では、組成物の投与は、治療なしと比較して、角膜神経の喪失における約５０％の低減をもたらす。一部の態様では、組成物の投与は、治療なしと比較して、角膜神経の喪失における約１％、約５％、約１０％、約１５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％の低減をもたらす。一部の態様では、組成物の投与は、治療なしと比較して、角膜神経の喪失における約１％～約５％、約１％～約１０％、約１％～約１５％、約１％～約２０％、約１％～約３０％、約１％～約４０％、約１％～約５０％、約１％～約６０％、約１％～約７０％、約１％～約８０％、約１％～約９０％、約１％～約１００％、約５％～約１０％、約５％～約１５％、約５％～約２０％、約５％～約３０％、約５％～約４０％、約５％～約５０％、約５％～約６０％、約５％～約７０％、約５％～約８０％、約５％～約９０％、約５％～約１００％、約１０％～約１５％、約１０％～約２０％、約１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約１０％～約５０％、約１０％～約６０％、約１０％～約７０％、約１０％～約８０％、約１０％～約９０％、約１０％～約１００％、約１５％～約２０％、約１５％～約３０％、約１５％～約４０％、約１５％～約５０％、約１５％～約６０％、約１５％～約７０％、約１５％～約８０％、約１５％～約９０％、約１５％～約１００％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約２０％～約６０％、約２０％～約７０％、約２０％～約８０％、約２０％～約９０％、約２０％～約１００％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約３０％～約７０％、約３０％～約８０％、約３０％～約９０％、約３０％～約１００％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約４０％～約８０％、約４０％～約９０％、約４０％～約１００％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約５０％～約９０％、約５０％～約１００％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約６０％～約１００％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％の低減をもたらす。一部の態様では、角膜神経の喪失における低減は、角膜病変又は創傷の面積における変化を測定することにより決定される。
【0194】
本開示はまた、皮膚の老化、セルライト、乾燥皮膚、開裂、又は創傷を治療又は防止する方法を提供し、それを必要とする対象に、ヒスタチンもしくはその類似体及び／又はＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物を投与することを含む。一部の態様では、創傷は、内部創傷、口腔創傷、皮膚創傷、外部創傷、潰瘍、及び／又は褥瘡創傷である。一部の態様では、創傷は、眼への損傷、例えば、結膜への損傷を含む。
【0195】
本開示はまた、口腔内潰瘍、口腔内アフタ性病変、口腔内灼熱症候群、舌灼熱感、乾癬、湿疹、及び脱毛を治療又は防止する方法を提供し、それを必要とする対象に、ヒスタチンもしくはその類似体及び／又はＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物を投与することを含む。
【0196】
これらの種類の皮膚損傷及び創傷は、当業者に公知である。内部創傷は、例えば、外科的切開に起因して、身体において存在する創傷である。口腔創傷は、口腔において存在する創傷である。皮膚創傷は、皮膚において存在する創傷である。外部創傷は、身体の外側から見ることができ、アクセス可能である創傷として理解されるべきである。潰瘍は、皮膚の表面又は粘膜表面上の病変である。褥瘡性創傷は、一つの位置において長期間にわたり留まる、例えば床に横たわるなどの場合での皮膚及び組織への長時間の圧力により引き起こされる創傷又は潰瘍形成である。身体の骨領域は、最も頻繁に影響を受ける部位であり、それは、持続的な及び一定の圧力下で虚血になる。皮膚の老化は、時間又は環境への曝露又は個人の健康状態に起因する皮膚の外観における変化である。セルライトは、皮膚の膨らみ又は窪みの外観に関連する化粧品において使用される定義である。
【0197】
一部の態様では、本明細書中に開示される方法は、皮膚創傷の治療のために使用される。皮膚創傷は、皮膚の表皮又は真皮における創傷であり得る。皮膚又は組織が修復を必要とし得るいくつかの種類の創傷がある：擦過傷、裂傷、切開、穿刺、ならびに剥離及び熱傷。本明細書中に開示される組成物の使用によって、皮膚の一般的な健康状態を改善させることができる。別の態様では、本明細書中に開示される方法は、口腔創傷の治療において使用される。経口創傷は、口腔粘膜が損傷している口腔の任意の部分における創傷である。別の態様では、本明細書中に記載される方法は、内部創傷の治療において使用される。内部創傷は、内胚葉又は中胚葉起源の細胞層が損傷している創傷である。例は、動脈又は静脈、腹膜又は心膜における創傷である。
【0198】
本開示はまた、眼表面疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に、ヒスタチンもしくはその類似体及び／又はＣＮＴＦペプチドもしくはその類似体と、場合により、抗アポトーシス薬剤とを含む組成物を投与することを含む。眼表面疾患は、限定されないが、ドライアイ、角膜潰瘍及びびらん、炎症性及び感染性角膜炎及び結膜炎、外科的介入、ならびに外傷を含み得る。
【0199】
以下の実施例は例証的であり、特許請求される態様の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【0200】
実施例１
間質角膜実質細胞の喪失に対するヒスタチン－１の効果。
方法
動物
約４～６ヶ月齢及び体重２～３ｋｇの２４匹のニュージーランド白色ウサギを、８匹の動物の３群に分けて、片側の外科的角膜切除手技後に、３５μｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、３５μｌの８０ｕＭヒスタチン－１（Ｈｓｔ－１）、又は３５μｌの８０ｕＭヒスタチン－１＋１００μＭペプチド６（Ｐ６）の組み合わせのいずれかを用いて、２８日間にわたり一日あたり三回（ＴＩＤ）局所投与した。
間質角膜実質細胞の喪失に対するヒスタチン－１の効果。
方法
動物
約４～６ヶ月齢及び体重２～３ｋｇの２４匹のニュージーランド白色ウサギを、８匹の動物の３群に分けて、片側の外科的角膜切除手技後に、３５μｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、３５μｌの８０ｕＭヒスタチン－１（Ｈｓｔ－１）、又は３５μｌの８０ｕＭヒスタチン－１＋１００μＭペプチド６（Ｐ６）の組み合わせのいずれかを用いて、２８日間にわたり一日あたり三回（ＴＩＤ）局所投与した。
【0201】
外科的角膜切除術
動物には、手技直前に疼痛管理のためにブプレノルフィン（０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を投与した。ブプレノルフィンの第二用量（０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を夕方に投与し、次に、必要に応じて投与した。動物を、ケタミン／キシラジンカクテル（５０ｍｇ／ｋｇケタミン及び１０ｍｇ／ｋｇキシラジンＩＭ）を用いた手術のために誘発し、麻酔を、必要に応じてマスクを通して酸素中に送達されたイソフルランを用いて維持した。麻酔の誘発後、５％のベタジン溶液をオートクレーブ滅菌ガーゼ上で使用して、術後の眼の眼周囲（眼瞼）領域を清掃した。ベタジンを次に使用して、眼表面及び結膜円蓋を灌注し、それを次に、滅菌洗眼液で完全に灌注した。０．５％プロパラカインＨＣｌ及び１０％フェニルエフリンＨＣｌの各々一滴を次に、それぞれ眼麻酔及び散瞳のために眼表面に適用した。ウサギを手術顕微鏡下に位置付け、開瞼器を取り付けた。調整可能な８ｍｍ角膜真空トレフィン（Ｍｏｒｉａ Ｓｕｒｇｉｃａｌ、フランス、アントニー）を使用して、約１０～２５％の間質深さ（約１００μｍ）の中央角膜欠損を作製した。角膜の穿孔された切片を除去し、創傷を開いたままにした。手術直後に、局所抗生物質（ネオマイシンポリミキシンＢ硫酸グラミシン眼科溶液）の単回用量を適用した。
動物には、手技直前に疼痛管理のためにブプレノルフィン（０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を投与した。ブプレノルフィンの第二用量（０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を夕方に投与し、次に、必要に応じて投与した。動物を、ケタミン／キシラジンカクテル（５０ｍｇ／ｋｇケタミン及び１０ｍｇ／ｋｇキシラジンＩＭ）を用いた手術のために誘発し、麻酔を、必要に応じてマスクを通して酸素中に送達されたイソフルランを用いて維持した。麻酔の誘発後、５％のベタジン溶液をオートクレーブ滅菌ガーゼ上で使用して、術後の眼の眼周囲（眼瞼）領域を清掃した。ベタジンを次に使用して、眼表面及び結膜円蓋を灌注し、それを次に、滅菌洗眼液で完全に灌注した。０．５％プロパラカインＨＣｌ及び１０％フェニルエフリンＨＣｌの各々一滴を次に、それぞれ眼麻酔及び散瞳のために眼表面に適用した。ウサギを手術顕微鏡下に位置付け、開瞼器を取り付けた。調整可能な８ｍｍ角膜真空トレフィン（Ｍｏｒｉａ Ｓｕｒｇｉｃａｌ、フランス、アントニー）を使用して、約１０～２５％の間質深さ（約１００μｍ）の中央角膜欠損を作製した。角膜の穿孔された切片を除去し、創傷を開いたままにした。手術直後に、局所抗生物質（ネオマイシンポリミキシンＢ硫酸グラミシン眼科溶液）の単回用量を適用した。
【0202】
角膜断層撮影
麻酔された動物の角膜を、Ｒｏｓｔｏｃｋ Ｃｏｒｎｅａｌ Ｍｏｄｕｌｅ（ＨＲＴ ＩＩＩ ＲＣＭ）を備えたＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈで撮像した。このコンパクトな眼科デバイスは、共焦点走査レーザー顕微鏡を使用して、角膜実質細胞亜集団及び角膜基底下神経叢を含む、角膜細胞及び構造の高解像度表面画像を提供する。上皮から内皮への中心角膜共焦点走査を行い、４００μｍ×４００μｍ及び２μｍ厚の光学スタックを生成し、分析のために電子的に貯蔵した。
麻酔された動物の角膜を、Ｒｏｓｔｏｃｋ Ｃｏｒｎｅａｌ Ｍｏｄｕｌｅ（ＨＲＴ ＩＩＩ ＲＣＭ）を備えたＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈで撮像した。このコンパクトな眼科デバイスは、共焦点走査レーザー顕微鏡を使用して、角膜実質細胞亜集団及び角膜基底下神経叢を含む、角膜細胞及び構造の高解像度表面画像を提供する。上皮から内皮への中心角膜共焦点走査を行い、４００μｍ×４００μｍ及び２μｍ厚の光学スタックを生成し、分析のために電子的に貯蔵した。
【0203】
サンプリングプロトコル及びデータ分析。
内皮の上の約１５０μｍに対応する光走査のスタックのサンプリング領域を選択した。これは、内皮から上の７５の画像を計数し、複製物としての役割を果たす５つの隣接画像を選択することにより行われた。反射的に別個の不規則な形状の物体として提示された角膜実質細胞。５つの画像からのカウントを次に平均化し、カウント／視野として表現し、平均値±標準偏差（ＳＤ）としてグラフで表示した。対応のないスチューデントＴ検定を使用して、ヒスタチン－１群とヒスタチン－１＋ペプチド６群を比較した；ｐ＜０．０５を統計的に有意とみなした。
内皮の上の約１５０μｍに対応する光走査のスタックのサンプリング領域を選択した。これは、内皮から上の７５の画像を計数し、複製物としての役割を果たす５つの隣接画像を選択することにより行われた。反射的に別個の不規則な形状の物体として提示された角膜実質細胞。５つの画像からのカウントを次に平均化し、カウント／視野として表現し、平均値±標準偏差（ＳＤ）としてグラフで表示した。対応のないスチューデントＴ検定を使用して、ヒスタチン－１群とヒスタチン－１＋ペプチド６群を比較した；ｐ＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【0204】
結果
図１Ａは、実験の結果を示す。外科的角膜切除術は、１０日目にピークに達し、２１日目まで比較的不変のままである間質角膜実質細胞の漸進的な喪失を誘発した。７日目、１０日目、１４日目、及び２１日目についてのＰＢＳ群中のベースラインからの低減パーセント（平均値±ＳＤ）は、それぞれ、３５．７±３、５８．６±５．５、５４．６±３．７、及び５２±２．６であった。７日目のヒスタチン－１及びヒスタチン－１＋ペプチド６の組み合わせ群における応答は、ＰＢＳ群と同様であり、それぞれ、４０．２±３．３及び４２．４±１４．２の角膜実質細胞の低減パーセントを伴った。両方の薬物群は、１０日目、１４日目、及び２１日目に角膜実質細胞の喪失において有意な低減を示した。１０日目、１４日目、及び２１日目についてのヒスタチン－１のみの群についての低減パーセントは、それぞれ、３７．５±２．４、３２．７±１５．３、及び２６．５±６．０であったが；併用群については、低減パーセントは、３２．７±９．５、２８．１±１３．７、及び３．７±４．４であった。興味深いことに、ヒスタチン－１群とヒスタチン－１＋ペプチド６併用群の間での２１日目の結果の比較は、局所用製剤中でのペプチド６の包含が、角膜実質細胞の回復の速度を増加させたように見えることを示す統計的に有意な（ｐ＝０．０００９）及び意味のある差を示す。
図１Ａは、実験の結果を示す。外科的角膜切除術は、１０日目にピークに達し、２１日目まで比較的不変のままである間質角膜実質細胞の漸進的な喪失を誘発した。７日目、１０日目、１４日目、及び２１日目についてのＰＢＳ群中のベースラインからの低減パーセント（平均値±ＳＤ）は、それぞれ、３５．７±３、５８．６±５．５、５４．６±３．７、及び５２±２．６であった。７日目のヒスタチン－１及びヒスタチン－１＋ペプチド６の組み合わせ群における応答は、ＰＢＳ群と同様であり、それぞれ、４０．２±３．３及び４２．４±１４．２の角膜実質細胞の低減パーセントを伴った。両方の薬物群は、１０日目、１４日目、及び２１日目に角膜実質細胞の喪失において有意な低減を示した。１０日目、１４日目、及び２１日目についてのヒスタチン－１のみの群についての低減パーセントは、それぞれ、３７．５±２．４、３２．７±１５．３、及び２６．５±６．０であったが；併用群については、低減パーセントは、３２．７±９．５、２８．１±１３．７、及び３．７±４．４であった。興味深いことに、ヒスタチン－１群とヒスタチン－１＋ペプチド６併用群の間での２１日目の結果の比較は、局所用製剤中でのペプチド６の包含が、角膜実質細胞の回復の速度を増加させたように見えることを示す統計的に有意な（ｐ＝０．０００９）及び意味のある差を示す。
【0205】
図１Ｂは、２８日目までの実験の結果を示す。２８日目についてのＰＢＳ群におけるベースラインからの低減パーセント（平均値±ＳＤ）は、３９．９±４．２であった。ヒスタチン－１群及びヒスタチン－１＋ペプチド６併用群の両方が、２８日目に角膜実質細胞の喪失における有意な低減を示した。２８日目についてのヒスタチン－１のみの群についての低減パーセントは、２．７±１３であったが；併用群については、低減パーセントは－８．８±４．３であった。これらのデータは、２８日目までにヒスタチン－１のみの群において及び２１日目までに併用群において完全な回復を示し、ペプチド６の補助的使用が、約７日までの回復までの時間の改善を提供したことを示唆する。
【0206】
実施例２
角膜内皮細胞密度に対するヒスタチン－１の効果。
方法
動物
約４～６ヶ月齢で体重２～３ｋｇの１６匹のニュージーランド白色ウサギを、８匹の動物の２群に分け、片側外科的角膜切除処置後に３５μｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）又は３５μｌの８０μＭのヒスタチン－１のいずれかを２８日間にわたり一日あたり三回（ＴＩＤ）局所投与した。
角膜内皮細胞密度に対するヒスタチン－１の効果。
方法
動物
約４～６ヶ月齢で体重２～３ｋｇの１６匹のニュージーランド白色ウサギを、８匹の動物の２群に分け、片側外科的角膜切除処置後に３５μｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）又は３５μｌの８０μＭのヒスタチン－１のいずれかを２８日間にわたり一日あたり三回（ＴＩＤ）局所投与した。
【0207】
外科的角膜切除術
動物には、手技直前に疼痛管理のためにブプレノルフィン（０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を投与した。ブプレノルフィンの第二用量（０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を夕方に投与し、次に、必要に応じて投与した。動物を、ケタミン／キシラジンカクテル（５０ｍｇ／ｋｇケタミン及び１０ｍｇ／ｋｇキシラジンＩＭ）を用いて手術のために誘発した；麻酔を、必要に応じてマスクを通して酸素中に送達されたイソフルランを用いて維持した。麻酔の誘発後、５％のベタジン溶液をオートクレーブ滅菌ガーゼ上で使用して、術後の眼の眼周囲（眼瞼）領域を清掃した。ベタジンを次に使用して、眼表面及び結膜円蓋を灌注し、それを次に、滅菌洗眼液で完全に灌注した。０．５％プロパラカインＨＣｌ及び１０％フェニルエフリンＨＣｌの各々一滴を次に、それぞれ眼麻酔及び散瞳のために眼表面に適用した。ウサギを手術顕微鏡下に位置付け、開瞼器を取り付けた。調整可能な８ｍｍ角膜真空トレフィン（Ｍｏｒｉａ Ｓｕｒｇｉｃａｌ、フランス、アントニー）を使用して、約１０～２５％の間質深さ（約１００μｍ）の中央角膜欠損を作製した。角膜の穿孔された切片を除去し、創傷を開いたままにした。手術直後に、局所抗生物質（ネオマイシンポリミキシンＢ硫酸グラミシン眼科溶液）の単回用量を適用した。
動物には、手技直前に疼痛管理のためにブプレノルフィン（０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を投与した。ブプレノルフィンの第二用量（０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を夕方に投与し、次に、必要に応じて投与した。動物を、ケタミン／キシラジンカクテル（５０ｍｇ／ｋｇケタミン及び１０ｍｇ／ｋｇキシラジンＩＭ）を用いて手術のために誘発した；麻酔を、必要に応じてマスクを通して酸素中に送達されたイソフルランを用いて維持した。麻酔の誘発後、５％のベタジン溶液をオートクレーブ滅菌ガーゼ上で使用して、術後の眼の眼周囲（眼瞼）領域を清掃した。ベタジンを次に使用して、眼表面及び結膜円蓋を灌注し、それを次に、滅菌洗眼液で完全に灌注した。０．５％プロパラカインＨＣｌ及び１０％フェニルエフリンＨＣｌの各々一滴を次に、それぞれ眼麻酔及び散瞳のために眼表面に適用した。ウサギを手術顕微鏡下に位置付け、開瞼器を取り付けた。調整可能な８ｍｍ角膜真空トレフィン（Ｍｏｒｉａ Ｓｕｒｇｉｃａｌ、フランス、アントニー）を使用して、約１０～２５％の間質深さ（約１００μｍ）の中央角膜欠損を作製した。角膜の穿孔された切片を除去し、創傷を開いたままにした。手術直後に、局所抗生物質（ネオマイシンポリミキシンＢ硫酸グラミシン眼科溶液）の単回用量を適用した。
【0208】
角膜断層撮影
麻酔された動物の角膜を、Ｒｏｓｔｏｃｋ Ｃｏｒｎｅａｌ Ｍｏｄｕｌｅ（ＨＲＴ ＩＩＩ ＲＣＭ）を備えたＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈで撮像した。このコンパクトな眼科デバイスは、共焦点走査レーザー顕微鏡を使用して、角膜基底下神経叢、角膜実質細胞亜集団、及び角膜内皮細胞層を含む、角膜細胞及び構造の高解像度表面画像を提供する。上皮から内皮への中心角膜共焦点走査を行い、４００×４００μｍ及び２μｍ厚の光学スタックを生成し、分析のために電子的に貯蔵した。
麻酔された動物の角膜を、Ｒｏｓｔｏｃｋ Ｃｏｒｎｅａｌ Ｍｏｄｕｌｅ（ＨＲＴ ＩＩＩ ＲＣＭ）を備えたＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈで撮像した。このコンパクトな眼科デバイスは、共焦点走査レーザー顕微鏡を使用して、角膜基底下神経叢、角膜実質細胞亜集団、及び角膜内皮細胞層を含む、角膜細胞及び構造の高解像度表面画像を提供する。上皮から内皮への中心角膜共焦点走査を行い、４００×４００μｍ及び２μｍ厚の光学スタックを生成し、分析のために電子的に貯蔵した。
【0209】
サンプリングプロトコル及びデータ分析
最良の解像度及び最大被覆度を有する内皮層を伴う光学スライスを選択した。試験中の１６匹の動物のうち、１４匹の動物のみが、１つ又は複数の時間点で使用可能な内皮細胞層を伴うスキャン、及び任意の単一の時間点で最高４つだけの使用可能なスキャンを有した。ＨＲＴ ＩＩＩ細胞計数ソフトウェアを使用して、画像のコントラスト及び輝度を調整し、選択された関心領域（ＲＯＩ）内の手動細胞計数を増強した。ＲＯＩは＞０．００５ｍｍ２であった。ＲＯＩ内の細胞数は、１１８～２８７の範囲であった。ＲＯＩの縁での部分細胞（＞１／２）を、直角の２つの側のみで計数した。ソフトウェアによって、選択されたＲＯＩにおける手動計数に基づいて、内皮細胞密度を細胞／ｍｍ２として計算した。データは、平均値±標準偏差細胞／ｍｍ２として提示される。対応のないスチューデントＴ検定を使用して、各追跡時間点でＰＢＳ群とヒスタチン－１群を比較した；ｐ＜０．０５を統計的に有意とみなした。
最良の解像度及び最大被覆度を有する内皮層を伴う光学スライスを選択した。試験中の１６匹の動物のうち、１４匹の動物のみが、１つ又は複数の時間点で使用可能な内皮細胞層を伴うスキャン、及び任意の単一の時間点で最高４つだけの使用可能なスキャンを有した。ＨＲＴ ＩＩＩ細胞計数ソフトウェアを使用して、画像のコントラスト及び輝度を調整し、選択された関心領域（ＲＯＩ）内の手動細胞計数を増強した。ＲＯＩは＞０．００５ｍｍ２であった。ＲＯＩ内の細胞数は、１１８～２８７の範囲であった。ＲＯＩの縁での部分細胞（＞１／２）を、直角の２つの側のみで計数した。ソフトウェアによって、選択されたＲＯＩにおける手動計数に基づいて、内皮細胞密度を細胞／ｍｍ２として計算した。データは、平均値±標準偏差細胞／ｍｍ２として提示される。対応のないスチューデントＴ検定を使用して、各追跡時間点でＰＢＳ群とヒスタチン－１群を比較した；ｐ＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【0210】
結果
図５は、実験の結果を示す。外科的前方角膜切除術によって、内皮細胞密度の喪失が誘発され、それは１４日目にピークに達し、２８日目まで抑制されたままであった。７日目、１０日目、１４日目、２１日目、及び２８日目についてのＰＢＳ群におけるベースラインからの低減パーセント（平均値±ＳＤ）は、それぞれ、１３．８±２．６、１９．５±９．６、２１．９±３．４、２２．５±８．４、及び２０．２±５．０であった。７日目でのヒスタチン－１群における応答は、ＰＢＳ群と同様であり、内皮細胞密度の低減パーセントは１５．１±２．８（ｐ＞０．０５）であった。１０日目、１４日目、２１日目、及び２８日目についてのヒスタチン－１群についての低減パーセントは、それぞれ、１．１±９．１、－０．２±５．９、４．５±７．８、及び７．４±２．８であった。ヒスタチン－１応答は、１４日目、２１日目、及び２８日目にＰＢＳ（Ｐ＜０．０５）とは有意に異なっていた。これらのデータは、１０日目までに開始されたヒスタチン－１群における回復及び明らかな正常化を示す。
図５は、実験の結果を示す。外科的前方角膜切除術によって、内皮細胞密度の喪失が誘発され、それは１４日目にピークに達し、２８日目まで抑制されたままであった。７日目、１０日目、１４日目、２１日目、及び２８日目についてのＰＢＳ群におけるベースラインからの低減パーセント（平均値±ＳＤ）は、それぞれ、１３．８±２．６、１９．５±９．６、２１．９±３．４、２２．５±８．４、及び２０．２±５．０であった。７日目でのヒスタチン－１群における応答は、ＰＢＳ群と同様であり、内皮細胞密度の低減パーセントは１５．１±２．８（ｐ＞０．０５）であった。１０日目、１４日目、２１日目、及び２８日目についてのヒスタチン－１群についての低減パーセントは、それぞれ、１．１±９．１、－０．２±５．９、４．５±７．８、及び７．４±２．８であった。ヒスタチン－１応答は、１４日目、２１日目、及び２８日目にＰＢＳ（Ｐ＜０．０５）とは有意に異なっていた。これらのデータは、１０日目までに開始されたヒスタチン－１群における回復及び明らかな正常化を示す。
【0211】
実施例３
角膜神経再生に対するヒスタチン－１及びペプチド６の効果。
方法
動物
約４～６ヶ月齢で体重２～３ｋｇのニュージーランド白色ウサギ１２匹を、４匹の動物の３群に分け、片側外科的角膜切除手技後に、３５μｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、３５μｌの８０μＭヒスタチン－１、又は３５μｌの８０μＭヒスタチン－１＋１００μＭペプチド６のいずれかを２８日間にわたり一日あたり三回（ＴＩＤ）局所投与した。
角膜神経再生に対するヒスタチン－１及びペプチド６の効果。
方法
動物
約４～６ヶ月齢で体重２～３ｋｇのニュージーランド白色ウサギ１２匹を、４匹の動物の３群に分け、片側外科的角膜切除手技後に、３５μｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、３５μｌの８０μＭヒスタチン－１、又は３５μｌの８０μＭヒスタチン－１＋１００μＭペプチド６のいずれかを２８日間にわたり一日あたり三回（ＴＩＤ）局所投与した。
【0212】
外科的前方角膜切除術
動物には、手技直前に疼痛管理のためにブプレノルフィン（０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を投与した。ブプレノルフィンの第二用量（０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を夕方に投与し、次に、必要に応じて投与した。動物を、ケタミン／キシラジンカクテル（５０ｍｇ／ｋｇケタミン及び１０ｍｇ／ｋｇキシラジンＩＭ）を用いて手術のために誘発した；麻酔を、必要に応じてマスクを通して酸素中に送達されたイソフルランを用いて維持した。麻酔の誘発後、５％のベタジン溶液をオートクレーブ滅菌ガーゼ上で使用して、術後の眼の眼周囲（眼瞼）領域を清掃した。ベタジンを次に使用して、眼表面及び結膜円蓋を灌注し、それを次に、滅菌洗眼液で完全に灌注した。０．５％プロパラカインＨＣｌ及び１０％フェニルエフリンＨＣｌの各々一滴を次に、それぞれ眼麻酔及び散瞳のために眼表面に適用した。ウサギを手術顕微鏡下に位置付け、開瞼器を取り付けた。調整可能な８ｍｍ角膜真空トレフィン（Ｍｏｒｉａ Ｓｕｒｇｉｃａｌ、フランス、アントニー）を使用して、約１０～２５％の間質深さ（約１００μｍ）の中央角膜欠損を作製した。角膜の穿孔された切片を除去し、創傷を開いたままにした。手術直後に、局所抗生物質（ネオマイシンポリミキシンＢ硫酸グラミシン眼科溶液）の単回用量を適用した。
動物には、手技直前に疼痛管理のためにブプレノルフィン（０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を投与した。ブプレノルフィンの第二用量（０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）を夕方に投与し、次に、必要に応じて投与した。動物を、ケタミン／キシラジンカクテル（５０ｍｇ／ｋｇケタミン及び１０ｍｇ／ｋｇキシラジンＩＭ）を用いて手術のために誘発した；麻酔を、必要に応じてマスクを通して酸素中に送達されたイソフルランを用いて維持した。麻酔の誘発後、５％のベタジン溶液をオートクレーブ滅菌ガーゼ上で使用して、術後の眼の眼周囲（眼瞼）領域を清掃した。ベタジンを次に使用して、眼表面及び結膜円蓋を灌注し、それを次に、滅菌洗眼液で完全に灌注した。０．５％プロパラカインＨＣｌ及び１０％フェニルエフリンＨＣｌの各々一滴を次に、それぞれ眼麻酔及び散瞳のために眼表面に適用した。ウサギを手術顕微鏡下に位置付け、開瞼器を取り付けた。調整可能な８ｍｍ角膜真空トレフィン（Ｍｏｒｉａ Ｓｕｒｇｉｃａｌ、フランス、アントニー）を使用して、約１０～２５％の間質深さ（約１００μｍ）の中央角膜欠損を作製した。角膜の穿孔された切片を除去し、創傷を開いたままにした。手術直後に、局所抗生物質（ネオマイシンポリミキシンＢ硫酸グラミシン眼科溶液）の単回用量を適用した。
【0213】
角膜の全載免疫組織化学
眼の調製
免疫組織化学用に指定された眼を、室温（ＲＴ）でリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に置いて、角膜縁に小さな切開を作製するために＃１０メスを使用して２～３ｍｍの強膜辺縁を伴って角膜を切除して、湾曲はさみで各角膜を分離した。二対の鉗子を使用して、虹彩及びレンズを注意深く剥がし、廃棄した。デスメ膜（ＤＭ）を、透明な角膜／強膜とメスの交点の近くに０．５～１ｍｍの切開を作製することにより除去した。逆Ｔｅｒｒｙ－Ｓｉｎｓｋｅｙフックを次に使用して、ＤＭの皮弁を掻爬させ、遊離させた。角膜を次に、ＰＢＳを含むディッシュに移し、ＤＭ皮弁を掴んで剥がした。
眼の調製
免疫組織化学用に指定された眼を、室温（ＲＴ）でリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に置いて、角膜縁に小さな切開を作製するために＃１０メスを使用して２～３ｍｍの強膜辺縁を伴って角膜を切除して、湾曲はさみで各角膜を分離した。二対の鉗子を使用して、虹彩及びレンズを注意深く剥がし、廃棄した。デスメ膜（ＤＭ）を、透明な角膜／強膜とメスの交点の近くに０．５～１ｍｍの切開を作製することにより除去した。逆Ｔｅｒｒｙ－Ｓｉｎｓｋｅｙフックを次に使用して、ＤＭの皮弁を掻爬させ、遊離させた。角膜を次に、ＰＢＳを含むディッシュに移し、ＤＭ皮弁を掴んで剥がした。
【0214】
固定
角膜を、０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．４中で製剤化された２％パラホルムアルデヒド中で２時間にわたり固定した。固定後、角膜を、１％正常ロバ血清及び０．１５％トリトンｘ－１００を含む０．１Ｍ ＰＢＳ中の１／１，０００マウス抗ＴＵＪ１抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号８０１２１３）及び１／３００ヤギ抗Ｉｂａ１中で、４８時間にわたり４°Ｃでインキュベートした。角膜を次に、ＰＢＳ中で５×５分間洗浄し、１％正常ロバ血清及び０．１５％トリトンｘ－１００を含む０．１Ｍ ＰＢＳ中の１／５００ロバ抗マウスＣｙ２、１／５００ロバ抗ヤギＣｙ３、及び１／５，０００ ＤＡＰＩを用いて、１５時間にわたり４°Ｃでインキュベートし、その後に、角膜をＰＢＳ中で５×５分間洗浄し、以下に記載されるように取り付けた。
角膜を、０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．４中で製剤化された２％パラホルムアルデヒド中で２時間にわたり固定した。固定後、角膜を、１％正常ロバ血清及び０．１５％トリトンｘ－１００を含む０．１Ｍ ＰＢＳ中の１／１，０００マウス抗ＴＵＪ１抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号８０１２１３）及び１／３００ヤギ抗Ｉｂａ１中で、４８時間にわたり４°Ｃでインキュベートした。角膜を次に、ＰＢＳ中で５×５分間洗浄し、１％正常ロバ血清及び０．１５％トリトンｘ－１００を含む０．１Ｍ ＰＢＳ中の１／５００ロバ抗マウスＣｙ２、１／５００ロバ抗ヤギＣｙ３、及び１／５，０００ ＤＡＰＩを用いて、１５時間にわたり４°Ｃでインキュベートし、その後に、角膜をＰＢＳ中で５×５分間洗浄し、以下に記載されるように取り付けた。
【0215】
スライドの調製
角膜をそれらの最終洗浄液中でインキュベートした一方で、撮像スペーサーを伴うスライドを調製した。０．３６、０．６ｍｍ、又は二つの接着撮像スペーサーの組み合わせ（Ｇｒａｃｅ Ｂｉｏｌａｂｓカタログ番号ＳＡ－Ｓ－３Ｌ；楕円形の窓切り抜きを伴う２２×４０ｍｍ長方形にカスタムカット）をガラススライドに接着させて；スペーサーの厚さを、処置した眼についての剖検の日に測定された角膜の厚さにより決定して；対照角膜は０．３６ｍｍスペーサーを利用した。
角膜をそれらの最終洗浄液中でインキュベートした一方で、撮像スペーサーを伴うスライドを調製した。０．３６、０．６ｍｍ、又は二つの接着撮像スペーサーの組み合わせ（Ｇｒａｃｅ Ｂｉｏｌａｂｓカタログ番号ＳＡ－Ｓ－３Ｌ；楕円形の窓切り抜きを伴う２２×４０ｍｍ長方形にカスタムカット）をガラススライドに接着させて；スペーサーの厚さを、処置した眼についての剖検の日に測定された角膜の厚さにより決定して；対照角膜は０．３６ｍｍスペーサーを利用した。
【0216】
取り付け
最終洗浄後、湾曲はさみを使用して、強膜辺縁のほぼ全てを除去した。次に、＃１０メスブレードを使用して、４～６の小さな切開を、外周周囲に作製して角膜を平坦化した。角膜を次に、スペーサーウィンドウ内に注意深く置き、内皮側を下向きにし、３～４滴の封入培地（９０％グリセロール、０．５％没食子酸Ｎ－プロピル、２０ｍＭトリスｐＨ８）を、２ｍＬトランスファーピペットを使用して適用した。スライドに、次に、穏やかにカバースリップして、気泡を避けるように注意した。スライドを、４Ｘ蛍光体対物レンズを使用してＯｌｙｍｐｕｓ Ｂｘ６３直立蛍光顕微鏡で撮像し、画像を、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＣｅｌｌＳｅｎｓソフトウェアを使用して取得した。中央の角膜領域を、タイリングにより撮像し、手術領域全体の合成画像を作製した。
最終洗浄後、湾曲はさみを使用して、強膜辺縁のほぼ全てを除去した。次に、＃１０メスブレードを使用して、４～６の小さな切開を、外周周囲に作製して角膜を平坦化した。角膜を次に、スペーサーウィンドウ内に注意深く置き、内皮側を下向きにし、３～４滴の封入培地（９０％グリセロール、０．５％没食子酸Ｎ－プロピル、２０ｍＭトリスｐＨ８）を、２ｍＬトランスファーピペットを使用して適用した。スライドに、次に、穏やかにカバースリップして、気泡を避けるように注意した。スライドを、４Ｘ蛍光体対物レンズを使用してＯｌｙｍｐｕｓ Ｂｘ６３直立蛍光顕微鏡で撮像し、画像を、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＣｅｌｌＳｅｎｓソフトウェアを使用して取得した。中央の角膜領域を、タイリングにより撮像し、手術領域全体の合成画像を作製した。
【0217】
データ分析
Ｏｌｙｍｐｕｓ ＣｅｌｌＳｅｎｓソフトウェアからのグレースケールＴｕｊ１画像を、Ｆｕｊｉ ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ）中にインポートした。システムを画像上のｍｍスケールに較正した。８ｍｍ円を次に作製し、画像上の中心に置き、最初の傷害を伴う領域を捕捉した。８ｍｍ円の外部領域を除去した。画像をシャープにして、神経をより良好に可視化し、分析を簡単にするために四分円に分割した。フリーハンド選択ツールを次に使用して、再生神経を含む傷害領域中の領域をマッピングした。測定ツールを使用して、面積をｍｍ２で読み取った。データを、５０．３ｍｍ２の初期８ｍｍ病変面積のパーセントとして表し、平均値±標準偏差として提示する。
Ｏｌｙｍｐｕｓ ＣｅｌｌＳｅｎｓソフトウェアからのグレースケールＴｕｊ１画像を、Ｆｕｊｉ ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ）中にインポートした。システムを画像上のｍｍスケールに較正した。８ｍｍ円を次に作製し、画像上の中心に置き、最初の傷害を伴う領域を捕捉した。８ｍｍ円の外部領域を除去した。画像をシャープにして、神経をより良好に可視化し、分析を簡単にするために四分円に分割した。フリーハンド選択ツールを次に使用して、再生神経を含む傷害領域中の領域をマッピングした。測定ツールを使用して、面積をｍｍ２で読み取った。データを、５０．３ｍｍ２の初期８ｍｍ病変面積のパーセントとして表し、平均値±標準偏差として提示する。
【0218】
結果
図６は、実験の結果を示す。外科的角膜切除術は、２８日目に角膜神経により覆われた領域の約７０％の低減をもたらした。ＰＢＳで処置された動物における神経再生の面積は１６．３±７ｍｍ２であり、それは初期病変面積の３２．４±１４％である。ヒスタチン－１で処置された眼における神経再生の面積は２６．１±７ｍｍ２であり、それは病変面積の５１．９±１４％に相当する。ペプチド６の補助的使用は、最も強い効果を産生した：神経再生の面積は、病変面積の６３．４±１１％に相当する３１．４±１２ｍｍ２であった。これらのデータは、以下のランク付けされた効力の順序を伴って、病変領域におけるより良好な神経再生を示す：ヒスタチン－１＋ペプチド６＞ヒスタチン－１。
図６は、実験の結果を示す。外科的角膜切除術は、２８日目に角膜神経により覆われた領域の約７０％の低減をもたらした。ＰＢＳで処置された動物における神経再生の面積は１６．３±７ｍｍ２であり、それは初期病変面積の３２．４±１４％である。ヒスタチン－１で処置された眼における神経再生の面積は２６．１±７ｍｍ２であり、それは病変面積の５１．９±１４％に相当する。ペプチド６の補助的使用は、最も強い効果を産生した：神経再生の面積は、病変面積の６３．４±１１％に相当する３１．４±１２ｍｍ２であった。これらのデータは、以下のランク付けされた効力の順序を伴って、病変領域におけるより良好な神経再生を示す：ヒスタチン－１＋ペプチド６＞ヒスタチン－１。
【0219】
実施例４
角膜ボタン保存に対するヒスタチン－１の効果。
方法
Ｌｉｆｅ４ｏ Ｃ（商標）又はＯｐｔｉｓｏｌ（商標）Ｃｏｒｎｅａｌ Ｓｔｏｒａｇｅ Ｍｅｄｉｕｍ中で製剤化された１μＭヒスタチン－１の効果を、ストレス条件下で貯蔵された９対のヒト非外科的角膜ボタンにおける内皮細胞の保存に対して評価した。４°Ｃで３日間にわたり貯蔵した後、組織を、室温（２４±２°Ｃ）で６～１４日間にわたり、２０ｍＬのＢａｕｓｃｈ ＆ Ｌｏｍｂ（商標）Ｃｏｒｎｅａ Ｔｉｓｓｕｅ Ｖｉｅｗｉｎｇチャンバー中に個別に貯蔵した。全てのドナーが白人／コーカサス人であった。年齢の中央値は６４歳であり、１４～７３の範囲であった。死亡の時間から角膜の保存までの時間の量は、４時間１５分～２０時間４８分の範囲であった。組織収集の時間での内皮細胞数は、２２２２±２４０細胞／ｍｍ２であった。ヒスタチン－１を、１μＭの濃度を維持するのに十分な量における２００μＬの容量で、一日毎に右目（ＯＤ）に加えた。左眼（ＯＳ）に等容量のＰＢＳを与えた。内皮細胞の生存率を、中央の角膜の８０％のパーセンテージとして表現される生育不能な領域としてトリパンブルー染色により評価した。簡単には、角膜ボタンを貯蔵チャンバーから観察ウェル（バロンパンチカッティングブロック）に、内皮側を上にして移し、内皮層の角膜縁から角膜縁までを覆うのに十分な容量で０．０６％トリパンブルーを適用して９０秒間にわたり放置し、次にＰＢＳで二回洗浄した。トリパンブルー染色の取り込みは、上皮細胞死を示したが、そのため、より少ない染色の程度が、より生存可能な組織と相関している。角膜を次に、Ｚｅｉｓｓアイピースカメラモデル＃ ＡＸＩＯＣＣＭ ２０８を備えたＺｅｉｓｓ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｓｃｏｐｅ、モデル＃ ＳＴＭＩ ５０８で撮像した。「Ｗｅｋａ Ｓｅｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ」ソフトウェアを用いたＩｍａｇｅ Ｊ （ＮＩＨ）を使用して、データを分析した。
角膜ボタン保存に対するヒスタチン－１の効果。
方法
Ｌｉｆｅ４ｏ Ｃ（商標）又はＯｐｔｉｓｏｌ（商標）Ｃｏｒｎｅａｌ Ｓｔｏｒａｇｅ Ｍｅｄｉｕｍ中で製剤化された１μＭヒスタチン－１の効果を、ストレス条件下で貯蔵された９対のヒト非外科的角膜ボタンにおける内皮細胞の保存に対して評価した。４°Ｃで３日間にわたり貯蔵した後、組織を、室温（２４±２°Ｃ）で６～１４日間にわたり、２０ｍＬのＢａｕｓｃｈ ＆ Ｌｏｍｂ（商標）Ｃｏｒｎｅａ Ｔｉｓｓｕｅ Ｖｉｅｗｉｎｇチャンバー中に個別に貯蔵した。全てのドナーが白人／コーカサス人であった。年齢の中央値は６４歳であり、１４～７３の範囲であった。死亡の時間から角膜の保存までの時間の量は、４時間１５分～２０時間４８分の範囲であった。組織収集の時間での内皮細胞数は、２２２２±２４０細胞／ｍｍ２であった。ヒスタチン－１を、１μＭの濃度を維持するのに十分な量における２００μＬの容量で、一日毎に右目（ＯＤ）に加えた。左眼（ＯＳ）に等容量のＰＢＳを与えた。内皮細胞の生存率を、中央の角膜の８０％のパーセンテージとして表現される生育不能な領域としてトリパンブルー染色により評価した。簡単には、角膜ボタンを貯蔵チャンバーから観察ウェル（バロンパンチカッティングブロック）に、内皮側を上にして移し、内皮層の角膜縁から角膜縁までを覆うのに十分な容量で０．０６％トリパンブルーを適用して９０秒間にわたり放置し、次にＰＢＳで二回洗浄した。トリパンブルー染色の取り込みは、上皮細胞死を示したが、そのため、より少ない染色の程度が、より生存可能な組織と相関している。角膜を次に、Ｚｅｉｓｓアイピースカメラモデル＃ ＡＸＩＯＣＣＭ ２０８を備えたＺｅｉｓｓ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｓｃｏｐｅ、モデル＃ ＳＴＭＩ ５０８で撮像した。「Ｗｅｋａ Ｓｅｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ」ソフトウェアを用いたＩｍａｇｅ Ｊ （ＮＩＨ）を使用して、データを分析した。
【0220】
結果
ＰＢＳ群及びヒスタチン－１群において染色された面積は、それぞれ、２２．０±５．８％及び１２．１±２．９％であった；平均値±ＳＥＭ（図７を参照のこと）。このように、角膜ボタンへのヒスタチン－１の添加は、内皮領域中の染色領域の４５％の低減をもたらした。これらのデータは、ストレス条件下で、例えば室温などで、標準的な角膜貯蔵培地中で１μＭヒスタチン－１とインキュベートされたヒト角膜ボタンが、内皮細胞の喪失の有意な保存、及び、このように、貯蔵中の角膜組織の増強された保存をもたらすことを示唆する。
ＰＢＳ群及びヒスタチン－１群において染色された面積は、それぞれ、２２．０±５．８％及び１２．１±２．９％であった；平均値±ＳＥＭ（図７を参照のこと）。このように、角膜ボタンへのヒスタチン－１の添加は、内皮領域中の染色領域の４５％の低減をもたらした。これらのデータは、ストレス条件下で、例えば室温などで、標準的な角膜貯蔵培地中で１μＭヒスタチン－１とインキュベートされたヒト角膜ボタンが、内皮細胞の喪失の有意な保存、及び、このように、貯蔵中の角膜組織の増強された保存をもたらすことを示唆する。
【図1A】
【図1B】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【手続補正書】
【提出日】2024-04-19
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】